BR112020024376A2

BR112020024376A2 - composições e métodos esporicidas

Info

Publication number: BR112020024376A2
Application number: BR112020024376-0A
Authority: BR
Inventors: Weidong An; Coryn MITTIGA; Ricky Mittiga
Original assignee: Peroxychem Llc
Priority date: 2018-05-31
Filing date: 2019-05-31
Publication date: 2021-03-02
Also published as: EP3801021A4; IL279059A; KR20210003950A; CA3101615A1; US11570988B2; MX2020012803A; AU2019277675A1; US20190364892A1; EP3801021A1; KR102658089B1; WO2019232385A1; CN112384067A; RU2768279C1; PH12020552046A1

Abstract

composições e métodos esporicidas. são fornecidos no presente documento métodos e composições para a redução de contaminação por endósporos de um substrato com composições à base de ácido percarboxílico. os métodos podem incluir a etapa de monitorar continuamente o potencial de redução de oxidação das composições à base de ácido percarboxílico.

Description

“COMPOSIÇÕES E MÉTODOS ESPORICIDAS” Referência Cruzada a Pedidos Relacionados

[0001] Este pedido reivindica prioridade conforme disposto no título 35 do U.S.C. S$119(e)(1) do Pedido Provisório nº de série US 62/678.562, depositado em 31 de maio de 2018, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento por referência. Campo da Invenção

[0002] A presente invenção se refere a composições à base de ácido percarboxílico para reduzir a contaminação por endósporos. Antecedentes da Invenção

[0003] Certas espécies de bactérias podem formar endósporos em resposta a condições adversas ou privação de nutrientes. Os endósporos são estruturas não reprodutivas de múltiplas camadas dormentes que contêm DNA microbiano altamente compactado. Os endósporos são resistentes a agressões ambientais, por exemplo, temperatura elevada, irradiação UV, dessecação, exposição enzimática e química que normalmente matariam a bactéria. Como resultado, endósporos não são prontamente mortos por tratamentos antimicrobianos padrão. Mediante exposição a condições adequadas como calor e meio nutriente, os endósporos podem germinar para produzir bactérias viáveis. Os endósporos podem permanecer dormentes por longos períodos. Patógenos humanos como Bacillis anthracis e Clostridium botulinum são bactérias formadoras de esporos. A contaminação por endósporos, por exemplo, a contaminação de equipamentos médicos, equipamentos usados na fabricação de produtos farmacêuticos e embalagens de alimentos, bem como dos próprios gêneros alimentícios, pode representar um risco significativo para a saúde humana. Há a necessidade contínua de métodos que eliminem de modo seguro e eficaz a contaminação com endósporos e micróbios formadores de endósporos.

Sumário da Invenção

[0004] São fornecidos no presente documento métodos de redução de contaminação de um substrato por endósporos ou microrganismos esporulantes, sendo que o método inclui colocar o substrato em contato com uma composição que compreende um ácido percarboxílico e peróxido de hidrogênio a uma razão de porcentagem de peso entre cerca de 1,2 e 30,0 na ausência de uma enzima de decomposição de peróxido, por um tempo suficiente para reduzir a contaminação. Os endósporos podem ser produzidos por um micróbio selecionado a partir do grupo que consiste em Paenibacillus chibensis, Paenibacillus favisporus, Bacillus cereus, Bacillus atrophaeus, Bacillus subtilis e Geobacillus stearothermophilus ou uma combinação dos mesmos. O ácido percarboxílico pode incluir um ácido C1i-Cio percarboxílico, por exemplo, ácido peracético. A razão de porcentagem de peso de ácido percarboxílico para peróxido de hidrogênio pode ser de cerca de 1,2, 1,6, 1,8, 2,0, 2,2, 2,4, 2,5, 2,6, 2,8, 3,0, 3,2, 3,4, 3,6, 3,8, 4,0, 4,2, 4,4, 4,6, 4,8, 5,0, 5,2, 5,4, 5,6, 5,8 ou 6,0. Também são fornecidos métodos de redução de contaminação de um substrato por endósporos ou microrganismos esporulantes, sendo que o método inclui colocar o substrato em contato com uma composição que compreende um ácido percarboxílico e peróxido de hidrogênio com um potencial de redução de oxidação (ORP) de mais de cerca de 500 mV, na ausência de uma enzima de decomposição de peróxido, por um tempo suficiente para reduzir a contaminação. Também é fornecido um método de tratamento de um substrato contaminado com, ou em risco de, contaminação por endósporos, sendo que o método inclui a etapa de preparação de uma solução que compreende ácido percarboxílico e peróxido de hidrogênio; ajustar a concentração do ácido percarboxílico e peróxido de hidrogênio para fornecer um potencial de redução de oxidação (ORP) de mais de 500 mV; e colocar o substrato em contato com a solução ajustada na ausência de uma enzima de decomposição de peróxido por um tempo suficiente para reduzir a contaminação por endósporos, em que o ORP é continuamente monitorado durante a etapa de contato. Breve Descrição dos Desenhos

[0005] Esses e outros recursos e vantagens da presente invenção serão mais completamente revelados ou tornados óbvios pela descrição detalhada a seguir da modalidade preferencial da invenção, a qual deve ser considerada junto com os desenhos anexos, em que números semelhantes se referem a partes semelhantes e, adicionalmente, em que:

[0006] a Fig. 1 é um gráfico que mostra o valor D como uma função da razão PAA/H;O0r para P. chibensis BAA-725 em

2.900 ppm de PAA a 55 ºC.

[0007] A Fig. 2 é um gráfico que mostra o valor D como uma função da razão PAA/H2O02 para P. favisporus em 2.900 ppm de PAA a 55 ºC.

[0008] A Fig. 3 é um gráfico que mostra o valor D como uma função da razão PAA/H20, para P. favisporus em 6.000 ppm de PAA a 65 “ºC.

[0009] A Fig. 4 é um gráfico que mostra o potencial de redução de oxidação (ORP) como uma função da concentração de PAA de várias formulações de PAA.

[0010] A Fig. 5 é um gráfico que mostra o potencial de redução de oxidação (ORP) como uma função da concentração de PAA na presença do adjuvante H2SO.s.

[0011] A Fig. 6 é um esquema que ilustra uma modalidade do sistema de tratamento. Descrição Detalhada da Modalidade Preferencial

[0012] Esta descrição de modalidades preferenciais se destina a ser lida em conjunto com os desenhos anexos, os quais devem ser considerados parte da descrição escrita inteira desta invenção. As figuras de desenhos não estão necessariamente em escala, e certos recursos da invenção podem ser mostrados em escala exagerada ou de alguma forma esquemática com o propósito de clareza e concisão. Na descrição, termos relativos como "horizontal", "vertical", "superior", "inferior", "topo" e "fundo", bem como derivados dos mesmos (por exemplo, "horizontalmente", "para baixo", "para cima" etc.) devem ser interpretados como se referindo à orientação como então descrito ou como mostrado na figura de desenho em discussão. Esses termos relativos são para conveniência de descrição e normalmente não se destinam exigir uma orientação particular. Termos incluindo "para dentro" versus "para fora", "longitudinal" versus "lateral" e similares devem ser interpretados um em relação ao outro ou em relação a um eixo geométrico de alongamento, ou a um eixo geométrico ou centro de rotação, como apropriado. Termos relativos a fixações, acoplamentos e similares, como

"conectado" e "interconectado", se referem a uma relação em que estruturas são presas ou fixadas uma à outra, direta ou indiretamente, através de estruturas intervenientes, bem como relações ou fixações móveis ou rígidas, a menos que seja expressamente descrito de outro modo. O termo "conectado de modo operacional" se refere a tal fixação, acoplamento ou conexão que permite que as estruturas pertinentes operem como pretendido em virtude de tal relação. Quando apenas uma única máquina é ilustrada, o termo "máquina" também deve ser considerado como incluindo qualquer coleção de máquinas que individual ou coletivamente executam um conjunto (ou múltiplos conjuntos) de instruções para realizar qualquer uma ou mais das metodologias discutidas no presente documento. Nas reivindicações, as frases de meio mais função, se forem usadas, se destinam a cobrir as estruturas descritas, sugeridas ou tornadas óbvias pela descrição escrita ou desenhos para realizar a função citada, incluindo não apenas equivalentes estruturais, mas também estruturas equivalentes.

[0013] A presente invenção se refere a métodos e composições para reduzir a contaminação por endósporos de um substrato. Os inventores constataram que uma composição que compreende um ácido percarboxílico e peróxido de hidrogênio a uma razão de porcentagem de peso entre cerca de 1,2 e 6,0 na ausência de uma enzima de decomposição de peróxido reduziu efetivamente a contaminação por endósporos. Mais especificamente, a razão de porcentagem de peso entre cerca de 1,2 e 6,0 na ausência de uma enzima de decomposição de peróxido forneceu uma redução substancial no nível de micróbios formadores de endósporos em tempos de contato menores do que aqueles obtidos com uma razão de porcentagem de peso abaixo de cerca de 1,2. As composições mostraram atividade esporicida contra micróbios que são geralmente resistentes a tratamento antimicrobiano padrão.

[0014] Os inventores também constataram que o potencial de redução de oxidação (ORP) das soluções de ácido peracético/peróxido de hidrogênio (PAA/H202) aumentaram com o aumento da concentração de PAA. Inesperadamente, o ORP e, assim, o poder de oxidação da solução aumentou à medida que a razão PAA/H202 aumentou, até mesmo quando a concentração de PAA se manteve constante. Por outro lado, o aumento da quantidade de H207r quando a concentração de PAA se manteve constante reduziu o ORP e, assim, o poder de oxidação da solução, muito embora o HO, seja geralmente considerado como sendo um oxidante forte. Consequentemente, são fornecidos sistemas para tratamento esporicida com base no monitoramento contínuo do ORP.

[0015] Sem se limitar a qualquer teoria particular, parece que a relação entre as razões PAA/H;O0; e ORP se refere à dupla função desempenhada pelo H20;, em formulações à base de perácido nas quais o H7O07 pode servir como um oxidante ou um redutor. Composições

[0016] As composições reveladas no presente documento incluem um ácido percarboxílico. Os ácidos percarboxílicos podem incluir perácidos alifáticos orgânicos com 2 ou 3 átomos de carbono, por exemplo, ácido peracético e ácido peroxipropanoico. Os ácidos percarboxílicos podem incluir os perácidos C1i-Cio carboxílicos. Outros ácidos percarboxílicos podem incluir os perácidos C7-Cs dicarboxílicos ou perácidos

C6-C12 monocarboxílicos. Perácidos adicionais são ácido monocarboxílico alifático orgânico inferior com 2-5 átomos de carbono, como ácido acético (ácido etanoico), ácido propiônico (ácido —“propanoico), ácido butírico (ácido butanoico), ácido iso-butírico (ácido 2-metil-propanoico), ácido valérico (ácido pentanoico), ácido 2-metil-butanoico, ácido iso-valérico (3-metil-butanoico) e ácido 2,2-dimetil- propanoico.

[0017] Perácidos úteis para os métodos revelados no presente documento são ácido peracético (ácido peroxiacético ou PAA) ou ácido perfórmico, ou uma combinação dos mesmos. Soluções de ácido percarboxílico, por exemplo, soluções de ácido peracético, tipicamente são misturas de equilíbrio dinâmico de ácido peracético, água, peróxido de hidrogênio, ácido acético e água. As razões de peso desses compostos podem variar. Razões de peso úteis de ácido peracético/peróxido de hidrogênio (PAA/H202) podem estar na faixa de cerca de 1,2 a cerca de 30,0. Assim, a razão de peso de PAA/H;0, pode ser de cerca de 1,2, cerca de 1,6, cerca de 1,8, cerca de 2,0, cerca de 2,2, cerca de 2,4, cerca de 2,5, cerca de 2,6, cerca de 2,8, cerca de 3,0, cerca de 3,2, cerca de 3,4, cerca de 3,6, cerca de 3,8, cerca de 4,0, cerca de 4,2, cerca de 4,4, cerca de 4,6, cerca de 4,8, cerca de 5,0, cerca de 5,2, cerca de 5,4, cerca de 5,6, cerca de 5,8, cerca de 6,0, cerca de 6,5, cerca de 7,0, cerca de 7,5, cerca de 8,0, cerca de 8,5, cerca de 9,0, cerca de 9,5, cerca de 10,0, cerca de 12,0, cerca de 14,0, cerca de 16,0, cerca de 18,0, cerca de 20,0, cerca de 22,0, cerca de 24,0, cerca de 26,0, cerca de 28,0 ou cerca de 30,0. Em algumas modalidades, a razão de peso de PAA/H;0, pode ser de cerca de 1,5, cerca de 2,2, cerca de 5,0 ou cerca de 5,5.

[0018] As soluções de ácido peracético podem ser identificadas pela concentração de ácido peracético e peróxido de hidrogênio. As soluções de ácido peracético disponíveis comercialmente têm formulações típicas contendo de 2-35 % de ácido peracético e de 5-30 % de peróxido de hidrogênio, sendo que o restante é ácido acético e água. As soluções de ácido peracético exemplificativas podem incluir % de ácido peracético com 10 % de peróxido de hidrogênio; 22 % de ácido peracético com 10 % de peróxido de hidrogênio; 35 % de ácido peracético com 7 % de peróxido de hidrogênio; 15 % de ácido peracético com 3 % de peróxido de hidrogênio; 22 % de ácido peracético com 4 % de peróxido de hidrogênio. As soluções de PAA exemplificativas são aquelas com razões de peso de PAA:peróxido de hidrogênio:ácido acético de 15:10:36; 15:10:35; 35:10:15; 20-23:5-10:30-45 e 35:10:15.

[0019] A concentração do ácido peracético nas composições podem estar na faixa de cerca de 1 ppm à cerca de 10.000 ppm. Assim, a concentração do ácido peracético pode ser de cerca de 1 ppm, cerca de 2 ppm, cerca de 3 ppm, cerca de 4 ppm, cerca de 5 ppm, cerca de 6 ppm, cerca de 7 ppm, cerca de 8 ppm, cerca de 9 ppm, cerca de 10 ppm, cerca de 12 ppm, cerca de 15 ppm, cerca de 18 ppm, cerca de 20 ppm, cerca de ppm, cerca de 30 ppm, cerca de 35 ppm, cerca de 40 ppm, cerca de 45 ppm, cerca de 50 ppm, cerca de 60 ppm, cerca de 75 ppm, cerca de 100 ppm, cerca de 125 ppm, cerca de 150 ppm, cerca de 200 ppm, cerca de 250 ppm, cerca de 300 ppm, cerca de 350 ppm, cerca de 400 ppm, cerca de 450 ppm, cerca de 500 ppm, cerca de 1.000 ppm, cerca de 1.500 ppm, cerca de

2.000 ppm, cerca de 2.200 ppm, cerca de 2.500 ppm, cerca de

2.900 ppm, cerca de 3.000 ppm, cerca de 3.500 ppm, cerca de 4,000 ppm, cerca de 4.500 ppm, cerca de 5.000 ppm, cerca de

6.000 ppm, cerca de 7.500 ppm, ou cerca de 10.000 ppm.

[0020] Os peróxidos podem ser obtidos como soluções estoque aquosas e diluídos para uso. As soluções estoque aquosas de peróxido de hidrogênio podem conter pelo menos cerca de 8 % em peso de H;07, pelo menos cerca de 15 % em peso de H70,, pelo menos cerca de 20 % em peso de H;07, pelo menos cerca de 27 % de H707, pelo menos cerca de 35 % em peso de H02. As soluções estoque aquosas de peróxido de hidrogênio com essas concentrações, adequadas para uso na invenção, estão prontamente disponíveis a partir de fornecedores comerciais como soluções de H;O0; estabilizadas. As soluções estoque aquosas de peróxido de hidrogênio altamente concentradas (significativamente acima de 50 % em peso de H20:) também podem ser usadas. As soluções estoque aquosas de H;O0,r acima de cerca de 50 % em peso de HO, geralmente requerem medidas de segurança e manuseio rigorosas. Assim, as soluções estoque aquosas de peróxido de hidrogênio podem ter uma concentração na faixa de cerca de 8 % em peso de H707 a cerca de 70 % em peso de H707, cerca de % em peso de H2707r a cerca de 50 % em peso de H207, cerca de 25 % em peso de H70;, à cerca de 40 % em peso de H7O07, As soluções estoque úteis podem ter uma concentração na faixa cerca de 30 % em peso de H;O0; à cerca de 40 % em peso de H7O>,

[0021] As composições reveladas no presente documento excluem uma enzima de decomposição de peróxido, por exemplo, uma catalase. Tais enzimas catalisam a decomposição de peróxido em água e oxigênio. Os inventores constataram que, ao contrário dos ensinamentos anteriores, que dependiam do tratamento de catalase para reduzir os níveis de peróxido em PAA/H202 composições para aumentar a eficácia, as composições de PAA/H202 a uma razão de porcentagem de peso entre cerca de 1,2 e 6,0 forneceram atividade esporicida eficaz na ausência de catalase. Assim, a omissão de catalase fornece atividade esporicida eficaz sem o custo e sem a necessidade de tratar adicionalmente as amostras para remover enzimas residuais.

[0022] As composições reveladas no presente documento excluem um agente sequestrante de peróxido, ou seja, um agente que pode formar um complexo com peróxido, de modo que a atividade do peróxido seja anulada. Um agente sequestrante de peróxido pode ser, por exemplo, um sal de titânio (IV) como acetato de titânio.

[0023] As composições podem incluir ou excluir um adjuvante. Um adjuvante pode ser um estabilizante, um agente umectante, ou um reagente que aumenta a atividade biocida da composição. Em algumas modalidades, o adjuvante pode ser um ácido, por exemplo, ácido sulfúrico (H;SO0s). Em algumas modalidades, um adjuvante pode ser um hidroxiácido, como ácido cítrico, ácido isocítrico, ácido lático, ácido glucônico e ácido málico. Em algumas modalidades, um adjuvante é a quelante de metal, por exemplo ácido etilenodiaminatetra-acético (EDTA). Em algumas modalidades, um adjuvante pode ser um estabilizante, por exemplo, um ácido fosfônico ou fosfonato, por exemplo, DeQuest 2010. Em algumas modalidades, um adjuvante pode ser um sequestrante, por exemplo, ácido dipicolínico. Em algumas modalidades, um adjuvante pode ser um tensoativo, por exemplo, um laurilato aniônico, um sorbitano e seus respectivos ésteres, isto é,

monolaurilato de sorbitano polietileno; e um éster graxo de cadeia curta (C6-C1l2).

[0024] As composições reveladas no presente documento são geralmente, e de várias maneiras, úteis para o tratamento de substratos que estão contaminados com um microrganismo esporulante ou estão em risco de contaminação ou suspeitos de estarem contaminados com um microrganismo esporulante. As composições podem ser formuladas em uma variedade de maneiras. Em uma modalidade, o ácido percarboxílico e o peróxido de hidrogênio podem ser combinados antes do uso para formar uma solução aquosa concentrada. A solução aquosa concentrada pode ser diluída logo antes do uso da concentração apropriada. O poder de oxidação da solução pode ser monitorado continuamente avaliando-se o potencial de redução de oxidação. O potencial de redução de oxidação pode ser monitorado com o uso de uma ou mais sondas de ORP. Em geral, valores de ORP úteis serão de cerca de 450 mV, cerca de 480 mV, cerca de 500 mV, cerca de 520 mV, cerca de 540 mV, cerca de 560 MV, cerca de 580 mV, cerca de 600 mV, cerca de 620 mV, cerca de 640 mV, cerca de 660 mV, cerca de 680 mV, cerca de 700 mV, cerca de 720 mV, cerca de 740 mV, cerca de 760 mV, cerca de 780 mV, cerca de 800 mV, cerca de 820 mV, cerca de 840 mV, cerca de 860 mV, cerca de 880 mV, cerca de 900 mV, cerca de 920 mV, cerca de 940 mV, cerca de 960 mV, cerca de 980 mV, ou cerca de 1.000 mV.

[0025] A solução aquosa diluída pode ser aplicada ao substrato como um líquido ou gelo, névoa, neblina, vapor ou fluido supercrítico. O substrato pode ser colocado em contato com as composições de uma variedade de maneiras, incluindo, por exemplo, por mergulho, inundação, imersão ou aspersão como uma névoa ou uma neblina. Alternativamente, as composições podem ser evaporadas em um vapor gasoso e aplicadas como um vapor. Em algumas modalidades, uma solução aquosa concentrada pode ser adicionada à água em um tanque para chegar a uma concentração final adequada para tratamento antimicrobiano.

[0026] O tempo de contato entre as composições e o substrato pode variar dependendo da temperatura, da natureza do substrato, do método de aplicação e do microrganismo particular que está sendo visado. O tempo de contato entre as composições e o substrato pode estar na faixa de poucos segundos a mais de uma hora. Os tempos de contato exemplificativos incluem cerca de 1 segundo, cerca de 2 segundos, cerca de 3 segundos, cerca de 4 segundos, cerca de segundos, cerca de 6 segundos, cerca de 7 segundos, cerca de 8 segundos, cerca de 9 segundos, cerca de 10 segundos, cerca de 15 segundos, cerca de 20 segundos, cerca de 25 segundos, cerca de 30 segundos, cerca de 40 segundos, cerca de 45 segundos, cerca de 50 segundos, cerca de 60 segundos, cerca de 90 segundos, cerca de 120 segundos, cerca de 3 minutos, cerca de 5 minutos, cerca de 8 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 45 minutos ou cerca de 60 minutos.

[0027] Em geral, uma redução de contaminação microbiana pode ser testada determinando-se o nível de micróbios viáveis no substrato tratado. Em algumas modalidades, uma redução de contaminação microbiana pode ser uma redução de cerca de 50 %, cerca de 80 % cerca de 90 %, cerca de 95 %, cerca de 99 % ou cerca de 99,9% da contaminação do produto alimentício tratado em comparação com um substrato de controle não tratado. Alternativamente, ou adicionalmente, a redução pode ser especificada como uma redução de Logio. Assim, em algumas modalidades, uma redução de contaminação microbiana pode ser uma redução de Log 1, 2, 3, 4, 5, 6, OU 7 em relação a um substrato de controle não tratado. Os níveis de contaminação microbiana podem ser determinados, por exemplo, por métodos culturais padrão envolvendo formação e crescimento microbiano, técnicas de amplificação de ácido nucleico como reação em cadeia da polimerase e imunoensaios.

[0028] Em algumas modalidades, a eficácia do tratamento pode ser expressa como o “valor D”. O valor D é o tempo (por exemplo, segundos) necessário para alcançar uma redução de 1 Logio (ou 90 %) do organismo alvo à dada temperatura e concentração de PAA. Então, quanto menor o valor D, maior a eficácia antimicrobiana.

[0029] Os métodos e composições revelados no presente documento são úteis para reduzir a contaminação por bactérias formadoras de esporos, incluindo organismos formadores de esporos tanto anaeróbicos quanto aeróbicos. Os organismos anaeróbicos exemplificativos incluem Clostridium spp., por exemplo, Clostridium botulinum e Clostridium perfringens. Os organismos aeróbicos exemplificativos incluem Paenibacillus spp, por exemplo, Paenibacillus chibensis e Paenibacillus favisporus; Geobacillus spp., por exemplo Geobacillus stearothermophilus; Bacillus spp., por exemplo, Bacillus cereus, Bacillus atrophaeus, Bacillus subtilis; Brevibacillus spp., por exemplo, Brevibacillus agri e Brevibacillus borstelensis; Sporosarcina spp., por exemplo, Sporosarcina ureae; e Paenisporosarcina.

[0030] As composições podem ser usadas aplicadas a uma variedade de substratos compreendendo uma variedade de materiais incluindo, médico, plástico, vidro, cerâmica, madeira, borracha, compósito ou uma combinação dos mesmos. O substrato pode ser um substrato contaminado com um micróbio formador de esporos ou um substrato que é vulnerável ou em risco de contaminação por um micróbio formador de esporos. Por exemplo, as composições podem ser aplicadas a um substrato compreendendo um dispositivo médico, equipamento de preparação de bebidas ou alimentos, equipamento de fabricação de produtos farmacêuticos ou um gênero alimentício. os substratos exemplificativos incluem equipamento e embalagem usados na processamento e preparação de alimentos, por exemplo, recipientes de bebidas, máquinas de enchimento assépticas, equipamento de laticínios; equipamento e recipientes usados na embalagem e preparação de produtos farmacêuticos, dispositivos e equipamento médico, como instrumentos cirúrgicos ou outros instrumentos usados em diagnóstico, por exemplo, endoscópios, ferramentas dentais e outros equipamentos e equipamento veterinário.

[0031] As composições podem ser aplicadas a uma ampla variedade de objetos, incluindo edifícios e seu conteúdo. Assim, as composições podem ser aplicadas a pisos, paredes, portas, maçanetas de portas e acessórios em qualquer uma das instalações descritas acima. As composições também podem ser aplicadas a objetos existentes nessas instalações. As composições são particularmente úteis para objetos existentes em instalações de cuidados com a saúde, incluindo, mas sem limitação, equipamentos e dispositivos médicos, por exemplo, mesas de operação e outros acessórios em salas de operação, leitos de hospitais, mesas, macas, cadeiras de rodas, andadores, acessórios e dispositivos médicos reutilizáveis, por exemplo, bandejas de instrumentos, tesouras, estetoscópios, cateteres, bisturis, lancetas, estetoscópios, marca-passos, cabos de marca-passos, tubos de traqueostomia, termômetros, suturas ou grampos cirúrgicos. Outros objetos exemplificativos incluem, mas sem limitação, superfícies e objetos de banheiro (por exemplo, pisos, banheiras, chuveiros, espelhos, privadas, bidês e acessórios de banheiro), superfícies de cozinha (por exemplo, bancadas, fogões, fornos, fogareiros, pias, refrigeradores, freezers, micro-ondas, eletrodomésticos, mesas, cadeiras, armários, gavetas e pisos).

[0032] As composições e métodos fornecidos no presente documento são aplicáveis a uma ampla gama ou materiais incluindo, mas sem limitação, cerâmicas, vinil, vinil sem cera, linóleo, melamina, vidro, esmalte, plástico, madeira plastificada, metal (por exemplo, aço inoxidável, ou superfícies cromadas) qualquer borracha, produto têxtil ou superfície vedada, envernizada ou pintada.

[0033] As composições também podem ser aplicadas a superfícies de objetos que entram em contato com alimentos. Esses objetos podem incluir equipamentos de processamento e preparação de alimentos, por exemplo, utensílios, talheres, aparelhos de mistura, moedores, por exemplo, moedores de carne, copos, misturadores, liquidificadores, tanques de fermentação, tanques de armazenamento ou equipamento de refrigeração. As composições também podem ser aplicadas a superfícies usadas para preparação de alimentos incluindo bancadas, tábuas de corte, pias e outras superfícies de trabalho.

[0034] As composições e métodos descritos no presente documento também podem ser usados para o tratamento de superfícies de produtos alimentícios, por exemplo, plantas e partes de plantas (por exemplo sementes, vegetais e frutas). As plantas e partes de plantas adequadas incluem mercadorias agrícolas em bruto (isto é, produtos não processados) e produtos processados, bem como produtos alimentícios contendo proteína animal, por exemplo, carne, peixe ou marisco.

[0035] Também são fornecidos sistemas de redução de contaminação por endósporos de um material com base na constatação da Requerente de que a eficácia antimicrobiana de sistemas à base de perácido é uma função do poder de oxidação como indicado pelo ORP. Um sistema exemplificativo para realizar o método das reivindicações é mostrado na Figura 6. Monitorando-se o ORP, tanto a concentração de PAA quanto a razão PAA/H;0, ideal podem ser mantidas.

[0036] O sistema fornece um ou mais tanques de Composição 1 para diluir PAA concentrado que é fornecido a partir de um reservatório de PAA 6 através de uma entrada de PAA 8, com água a partir de uma entrada de água 7, uma sonda de PAA 2 e uma sonda de ORP 3 para monitorar a descarga a partir do tanque de Composição 1, e um tanque de tratamento esporicida 4 em que o PAA diluído é fornecido. O sistema pode incluir uma linha de Reciclagem Opcional 5 para permitir o uso do PAA após o tratamento. Espera-se que, devido à degradação de PAA em H7O7,, que a concentração de H;O0, seja mais elevada na solução reciclada do que na solução estoque. Para manter uma razão PAA/H707 ideal, a sonda de ORP monitora continuamente o ORP da solução de alimentação. A purga 9 pode ser ajustada em conformidade. A sonda de PAA é usada para monitorar e controlar a entrada de concentrado de PAA e água em um nível alvo de PAA. Alternativamente, uma sonda de H;O; pode ser usada em lugar ou além da sonda de ORP para monitorar a razão PAA/H202. Exemplos Exemplo 1

[0037] Microrganismos. Todos os microrganismos foram adquiridos junto a fabricantes certificados em forma de esporo. Os organismos e fabricantes são listados abaixo.

Paenibacillus chibensis - American Type Culture Collection (ATCC); Paenibacillus favisporus - DSMZ; Bacillus cereus 14579 - Presque Isle Cultures; Bacillus atrophaeus 9372 - Mesa Labs; Bacillus subtilis 6633 - Presque Isle Cultures; Bacillus subtilis 19659 - Presque Isle Cultures.

[0038] Após o recebimento, o título da cultura de esporos foi testado por diluição em série em tampão de Butterfield seguido por plaqueamento em 3M AC Petrifilm". O Petrifilm" foi, então, incubado a 35 “*C por cerca de 48 horas e enumerado. As culturas foram armazenadas em um refrigerador específico. Antes de cada uso, o título da cultura de esporos foi novamente testado para confirmar que a cultura permaneceu viável e não contaminada. Exemplo 2

[0039] Paenibacillus chibensis BAA-725 foram tratados com formulações de PAA com razões de PAA/H20r como mostrado na Tabela 1.

Tabela 1: Formulações de PAA/H2O, sas — Tre Ts TT TT [ssa cep [3 [5 5 [7131] psmans — e eeF

[0040] As formulações de PAA foram diluídas a cerca de

2.900 ppm em água desionizada antes do uso. A temperatura das formulações foi elevada para 55 ºC, e as concentrações de PAA e HO, reais foram medidas em um autotitulador imediatamente antes do uso.

[0041] P. chibensis BAA-725 foram inoculados em tiras de aço inoxidável. O P. chibensis BAA-725 foi contatado submergindo-se as tiras na formulação de PAA por 10, 20 ou segundos. Quaisquer organismos sobreviventes foram recuperados, incubados e contados. Os microrganismos foram recuperados através da suspensão da cultura em caldo Letheen contendo 0,5 % de tiossulfato de sódio, sonicação por 5 minutos e vórtex por 30 segundos. As amostras foram, então, diluídas em série em tampão de Butterfield, plaqueadas em 3M AC Petrifilm" e incubadas a 35 ºC por cerca de 48 horas. Após a incubação, os microrganismos sobreviventes no Petrifilm foram contados.

[0042] A eficácia de eliminação de esporos foi expressa como o valor D. O valor D é o tempo (por exemplo, segundos) necessário para alcançar uma redução de 1 Logio (ou 90 %) do organismo alvo à dada temperatura e concentração de PAA. Assim, quanto menor o valor D, maior a eficácia de eliminação de esporos.

[0043] Como mostrado na Figura l1, o valor D diminuiu de cerca de 16-18 segundos para cerca de 4 segundos à medida que a razão PAA/H;0, aumentou de 0,2 para 1,2. O valor D permaneceu relativamente constante em razões PAA/H;0, de cerca de 1,8 a cerca de 5,0. Esses dados sugeriram que uma razão PAA/H2O0, útil para eliminar esporos de P. chibensis BAA-725 estava acima de cerca de 1,2. Exemplo 3

[0044] Paenibacillus chibensis BAA-725 foram tratados com formulações de PAA na presença e ausência de catalase, uma enzima que hidrolisa H2O2.

[0045] Uma solução de equilíbrio de PAA/H202 com 35 % em peso de PAA e 7 % em peso de HO, foi diluída com água desionizada (DI) a uma concentração de PAA de cerca de

2.900 ppm. Para o tratamento de catalase, 1 microlitro de catalase (Sigma-Aldrich, Catalase de Aspergillus, 2 4.000 unidades/mg de proteína, cerca de 14,4 mg/ml de proteína) foi adicionado a 200 ml de solução e incubado em temperatura por 45 minutos. Então, a solução foi aquecida a 55 *C em um banho-maria. A etapa de aquecimento levou cerca de 38 minutos. Uma vez que a temperatura desejada foi alcançada, as concentrações de PAA e H;O0; reais foram medidas com um autotitulador.

[0046] P. chibensis BAA-725 foram inoculados em tiras de aço inoxidável, de acordo com o método descrito no Exemplo 1, e colocados em contato com a solução de PAA digerida com catalase e uma solução de PAA de controle que não foi digerida com catalase. As amostras foram tratadas com as soluções de PAA por 10, 20 e 30 segundos.

[0047] Os valores D foram calculados como descrito acima. Os resultados dessa análise são mostrados na Tabela 2.

Tabela 2. Comparação de valor D de solução de PAA com e sem enzima catalase Catalase/Razão PAA/H20, (P. Chibensis BAA-725) Fr E

[0048] Como mostrado na Tabela 2, o valor D obtido com a solução de PAA a uma razão PAA/H;0; de 4,7 foi muito similar àquele obtido com a mesma solução de PAA que havia sido tratada com catalase para reduzir o teor de Hr0r para menos de 100 ppm. Esses dados sugeriram que a solução de PAA a uma razão PAA/H707 de 4,7 foi pelo menos tão eficaz na eliminação de P. chibensis BAA-725 quanto as amostras de PAA que foram submetidas a um tratamento enzimático mais demorado. Esses dados também sugeriram que tal tratamento enzimático não foi necessário para eliminação eficaz de esporos.

Exemplo 4

[0049] Paenibacillus favisporus foram tratados com formulações de PAA com razões de PAA/H20, como mostrado na Tabela 3.

Tabela 2 Formulações de PAA/H2O, ns — TT TT pEPAÇÇS eee)

[0050] As formulações de PAA foram diluídas a cerca de

2.900 ppm em água desionizada antes do uso. A temperatura das formulações foi elevada para 55 ºC, e as concentrações de PAA e H 0, reais foram medidas em um autotitulador imediatamente antes do uso.

[0051] P. favisporus foram inoculados em tiras de aço inoxidável. As amostras de P. favisporus foram contatadas submergindo-se as tiras na formulação de PAA por 10, 20 ou segundos. Quaisquer organismos sobreviventes foram recuperados, incubados e contados. A eficácia de eliminação de esporos foi expressa como o valor D.

[0052] Como mostrado na Figura 2, o valor D diminuiu de cerca de 120 segundos para cerca de 20 segundos à medida que a razão PAA/H;0r aumentou de 0,2 para cerca de 3,5. O valor D permaneceu relativamente constante em razões PAA/H;0, de cerca de 3,5 a cerca de 4,5. Esses dados sugeriram que uma razão útil para eliminar P. favisporus foi de cerca de 3,5. Esses dados também indicaram que P. favisporus foi mais desafiador para eliminar do que P. chibensis BAA-725. Exemplo 5

[0053] Avaliou-se o efeito da temperatura de incubação e concentração de PAA quanto à eficácia de PAA/Hx0r contra esporos de P. favisporus.

[0054] Alíquotas de uma solução de equilíbrio de PAA/H2O2 com 35 % em peso de PAA e 7 % em peso H70; foram diluídas com água desionizada (DI) à concentração de PAA de cerca de

2.900 ppm, 4,500 ppm ou 6.000 ppm. A temperatura das formulações foi elevada para 55 ºC ou 65º ºC e as concentrações de PAA e HO, reais foram medidas em um autotitulador imediatamente antes do uso.

[0055] P. favisporus foram inoculados em tiras de aço inoxidável. Os P. favisporus foram contatados submergindo-

se as tiras na formulação de PAA por 10, 20 ou 30 segundos. Quaisquer organismos sobreviventes foram recuperados, incubados e contados. A eficácia de eliminação de esporos foi expressa como o valor D. Os resultados desse experimento são mostrados na Tabela 3. Tabela 3: Efeito de temperatura e concentração de PAA em valores D para P. favisporus Temperatura,| Concentração Razão Valor D, segundos Fo RR

E ER E ELE EE

[0056] Como mostrado na Tabela 3, o valor D diminuiu de cerca de 38 segundos para cerca de 14 segundos à medida que a concentração de PAA aumentou de 2.900 ppm para 6.000 ppm de PAA a uma razão PAA/H2O0r entre cerca de 4,7 e cerca de 4,6 a temperaturas de 55 ºC. Quando a temperatura foi elevada para 65 ºC, o valor D a 6.000 ppm de PAA a uma razão de cerca de 4,6 diminuiu para 6. Exemplo 6

[0057] P. favisporus foram tratados com formulações de PAA na presença e ausência de catalase, uma enzima que hidrolisa H202. As formulações são mostradas na Tabela 4. Tabela 4: Formulações de PAA/H72O, ps Tr a TT esmas — [1 27 3 15) H202 Nominal, % em 23 10 10 7 3 Ee a e e cds

[0058] A solução de PAA foi diluída com água desionizada (DI) à concentração de PAA de cerca de 6.000 ppm. Para o tratamento de catalase, entre 1 e 15 microlitros de catalase (Sigma-Aldrich, Catalase de Aspergillus, > 4.000 unidades/mg de proteína) foram adicionados a 200 ml de soluções de PAA e incubados à temperatura ambiente por 45 minutos. Então, as soluções foram incubadas em um banho-maria de 65 ºC por cerca de 40 a cerca de 70 minutos para alcançar a temperatura desejada.

[0059] Uma vez que a temperatura desejada foi alcançada, as concentrações de PAA e HO, reais foram medidas com um autotitulador.

[0060] P. favisporus foram inoculados em tiras de aço inoxidável, de acordo com o método descrito no Exemplo 1, e colocados em contato com a solução de PAA digerida com catalase e uma solução de PAA que não foi digerida com catalase. As amostras de P. favisporus foram contatadas com PAA submergindo-se as tiras nas formulações de PAA por 10, ou 30 segundos. Quaisquer organismos sobreviventes foram recuperados, incubados e contados. A eficácia de eliminação de esporos foi expressa como o valor D. Os resultados dessa análise são mostrados na Figura 3.

[0061] Como mostrado na Figura 3, os valores D para a solução de PAA a 6.000 ppm de PAA a 65 ºC diminuiu de cerca de 40 segundos para cerca de 5 segundos à medida que a razão

PAA/H202 aumentou de 0,2 para cerca de 5,0. Os valores D para as mesmas soluções que foram tratadas com catalase mostraram uma tendência semelhante, com uma diminuição de mais de 40 segundos a cerca de 6 segundos à medida que a razão PAA/H72O, nominal aumentou de 0,2 para cerca de 5,0. Esses dados sugeriram que o tratamento de catalase não aumentou a eficácia da atividade esporicida de PAA. Exemplo 7

[0062] Avaliou-se o efeito de formulações de PAA/H20, em esporos de Bacillus cereus 14579, Bacillus atrophaeus 9372, Bacillus subtilis 6633 e Bacillus subtilis 19659. As formulações são mostradas na Tabela 5. Tabela 5: Formulações de PAA/H2O, pes —

[0063] As formulações de PAA foram diluídas a cerca de 1500 ppm em água desionizada antes do uso. A temperatura das formulações foi elevada para 50 ºC, e as concentrações de PAA e HO; reais foram medidas em um autotitulador imediatamente antes do uso.

[0064] Os esporos de Bacillus cereus 14579, Bacillus atrophaeus 9372, Bacillus subtilis 6633 e Bacillus subtilis 19659 foram inoculados em tiras de aço inoxidável. As amostras de P. favisporus foram contatadas submergindo-se as tiras na formulação de PAA por 10, 20 ou 30 segundos. Quaisquer organismos sobreviventes foram recuperados, incubados e contados. A eficácia de eliminação de esporos foi expressa como o valor D. Os resultados dessa análise são mostrados na Tabela 6.

Tabela 6: Efeito da concentração de PAA em valores D para espécies de Bacillus PAA/Hz02 B. B. B. subtilis B. subtilis [Te ER [ET TE

FEI EFE E

[0065] Como mostrado na Tabela 6, ambas as formulações mostraram atividade esporicida em 1.500 ppm de PAA a 50 “ºC contra todas as espécies de Bacillus testadas.

Exemplo 8

[0066] Analisou-se o potencial de redução de oxidação (ORP) de soluções de PAA aquosas. As soluções são mostradas na Tabela 7.

Tabela 7: Formulações de PAA/H2O, Formulação 1 2

[0067] Para a análise, as formulações de PAA foram diluídas em série até cerca de 6.000 ppm em água DI. O ORP foi medido com uma sonda de ORP Accumet com uma ponta de Pt e um eletrodo de referência de Ag/AgCl Accument. As concentrações de PAA e HO, reais foram medidas em um autotitulador. Todas as soluções estavam à temperatura ambiente.

[0068] A relação entre o ORP e a concentração de PAA para as formulações de PAA é mostrada na Figura 4. Como mostrado na Figura 4, o ORP aumentou com o aumento concentração de PAA para cada uma das formulações. Surpreendentemente, o ORP também aumentou à medida que a razão PAA/H;0, aumentou, até mesmo quando a concentração de PAA se manteve constante. Por exemplo, em cerca de 90 ppm de PAA, o ORP foi de cerca de 420 mV para uma razão PAA/H20, de 0,2 (Formulação 4 na Tabela 7). O ORP aumentou para cerca de 480 mV para uma razão PAA/H202 de 0,6 (Formulação 3 na Tabela 7). O ORP aumentou para cerca de 520 mV para uma razão PAA/H;O0,r de 1,5 (Formulação 2 na Tabela 7). Finalmente, o ORP aumentou para cerca de 540 mV para uma razão PAA/H7;0, de 2,5 (Formulação 1 na Tabela 7). Essa relação se manteve uniforme para as concentrações de PAA mais elevadas analisadas (500 ppm). Em 500 ppm de PAA, o ORP foi de 440 mV, 500 mV, 540 mV e 580 mV em razões PAA/H20r de 0,2, 0,6, 1,5 e 2,5, respectivamente. Esses dados sugeriram que o aumento da concentração de H2O, em uma solução de PAA impactaria adversamente o ORP e, assim, o poder de oxidação da solução. Esses dados são consistentes com aqueles nos exemplos anteriores, em que formulações de PAA com razões PAA/H;70r mais altas tiveram eficácias esporicidas melhores do que as formulações de PAA com razões PAA/H202 mais baixas.

[0069] sem se limitar a qualquer teoria particular, parece que a relação entre as razões PAA/H70, e ORP se refere à dupla função desempenhada pelo H20r nas formulações. Exemplo 9

[0070] Avaliou-se o efeito de um adjuvante no ORP de soluções de PAA aquosas. As soluções são mostradas na Tabela

8.

Tabela 8 Formulações de Adjuvante PAA/H2O2z

[0071] Para a análise, as formulações de PAA foram diluídas em série até cerca de 1000 ppm em água DI. O ORP foi medido com uma sonda de ORP Accumet com uma ponta de Pt e um eletrodo de referência de Ag/AgCcl Accument. As concentrações de PAA e HO; reais foram medidas em um autotitulador. Todas as soluções estavam à temperatura ambiente.

[0072] A relação entre o ORP e a concentração de PAA para as formulações de PAA é mostrada na Figura 5. Como mostrado na Figura 5, o ORP aumentou com o aumento concentração de PAA para cada uma das formulações. O ORP também aumentou na presença de adjuvante H>SOs. Exemplo 10

[0073] Analisou-se o efeito da razão PAA/H20: na eficácia antimicrobiana contra as bactérias não formadoras de esporos, E. coli e Salmonella.

[0074] Escherichia coli 8739 e Salmonella enterica 14028 foram usadas nos experimentos. 10 pl de suspensão inoculada foram colocados, com o uso de uma pipeta, em tiras de folha metálica de aço inoxidável estéril e permitiu-se que secasse completamente. Soluções de teste de perácido foram diluídas em concentrações especificadas. 50 ml de soluções de PAA foram adicionados a cada tubo de centrífuga estéril respectivamente. As tiras secas foram mergulhadas nas soluções de perácido como descrito acima. Salmonella foram tratadas a 22 “ºC.

[0075] As tiras foram, então, neutralizadas em 10 ml de caldo Letheen mais 0,5 % de tiossulfato de sódio. Os tubos da centrífuga foram tampados e agitados. Os tubos neutralizados foram sonicados por 5 minutos e, então, submetidos a vórtex por 30 segundos. As amostras foram diluídas em série em tampão de Butterfield, plaqueadas em Petrifilm APC e incubadas a 35 ºC por 48 horas.

[0076] Como mostrado na Tabela 9, razões de PAA/H202 mais elevadas com uma eficácia melhor resultaram em uma diminuição nos valores D para E. coli e Salmonella. Tabela 9: Efeito da razão PAA/H20, em valores D para espécies de E. coli e Salmonella mão | EE PAR , de teste ' ' . é Exemplo 11

[0077] Avaliou-se o efeito da razão PAA/H20r no uso de PAA. Bacillus atrophaeus 9372 tratados com formulações de PAA como descrito acima.

[0078] Como mostrado na Tabela 8, a formulação de PAA 22/10 em 1.000 pom de PAA e 55 ºC teve um valor D (1,9 segundo) próximo ao valor D (1,4 segundo) da formulação de PAA 5/15 em 1.500 ppm a 60 “C. Em contrapartida, o valor D para a formulação de PAA 5/15 em 1.500 ppm e 50 ºC foi de

4,6 segundos. Assim, a quantidade de PAA usada pode ser reduzida em um terço, ao passo que se mantém a eficácia antimicrobiana, substituindo-se a formulação de PAA 5/15 a uma baixa razão PAA/H;70, com uma formulação de PAA 22/10 a uma alta razão PAA/H2O>. Tabela 10: Efeito da razão PAA/H202r no uso de PAA Contagens de PAA de remanescentes após o Graus de PAA e Controle, Valores solução de tempo de tratamento, razão PAA/H,0, Logio D,s teste, ppm Logo [TE] [ss | rm es e e e Lo ss pesso PAA 22/10; 2,2 1.000 55º

[0079] A partir do que foi exposto, será observado pelos versados na técnica que, embora exemplos específicos tenham sido descritos no presente documento com o propósito de ilustração, várias modificações podem ser feitas sem se afastar do espírito ou escopo desta revelação. Portanto, pretende-se que a descrição detalhada acima seja considerada ilustrativa e não limitante, e que seja entendido que são as reivindicações a seguir, incluindo todos os equivalentes, que se destinam a apontar particularmente e reivindicar distintamente a matéria reivindicada.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de redução de contaminação de um substrato por endósporos ou microrganismos esporulantes, sendo o método caracterizado por compreender colocar o substrato em contato com uma composição compreendendo um ácido percarboxílico e peróxido de hidrogênio a uma razão de porcentagem de peso entre cerca de 1,2 e 30,0 na ausência de uma enzima de decomposição de peróxido, por um tempo suficiente para reduzir a contaminação.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os endósporos são produzidos por um micróbio selecionado a partir do grupo que consiste em Paenibacillus chibensis, Paenibacillus favisporus, Bacillus cereus, Bacillus atrophaeus, Bacillus subtilis e Geobacillus stearothermophilus ou uma combinação dos mesmos.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o microrganismo esporulante é selecionado a partir do grupo que consiste em Paenibacillus chibensis, Paenibacillus favisporus, Bacillus cereus, Bacillus atrophaeus, Bacillus subtilis e Geobacillus stearothermophilus ou uma combinação dos mesmos.

4, Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o substrato compreende um material selecionado a partir do grupo que consiste em metal, plástico, cerâmica, vidro, madeira, borracha, compósito ou uma combinação dos mesmos.

5. Método, de acordo com àa reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o substrato compreende um dispositivo médico, equipamento de preparação de bebidas ou alimentos, equipamento de fabricação de produtos farmacêuticos ou um gênero alimentício.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o ácido percarboxílico é ácido C1-C10 percarboxílico.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o ácido percarboxílico é ácido peracético.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a razão de porcentagem de peso de ácido percarboxílico para peróxido de hidrogênio é de cerca de 1,2, 1,6, 1,8, 2,0, 2,2, 2,4, 2,5, 2,6, 2,8, 3,0, 3,2, 3,4, 3,6, 3,8, 4,0, 4,2, 4,4, 4,6, 4,8, 5,0, 5,2, 5,4, 5,6, 5,8 ou 6,0.

9. Método, de acordo com àa reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a razão de porcentagem de peso de ácido percarboxílico para peróxido de hidrogênio é de cerca de 1,2, 1,8, 2,4, 3,0, 3,4, 4,0, 4,6, 4,8 ou 5,0.

10. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a enzima de decomposição de peróxido é uma catalase.

11. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato que a etapa de contato compreende mergulho, aspersão, imersão ou encharcamento.

12. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o potencial de redução de oxidação (ORP) da composição é de cerca de 500 mV a cerca de

1.000 mv.

13. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa de contato é de cerca de 3 segundos a cerca de 60 segundos.

14. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a contaminação por endósporos é reduzida em cerca de 1 Logo.

15. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a contaminação por endósporos é reduzida em cerca de 90 %.

16. Método de redução de contaminação de um substrato por endósporos ou microrganismos esporulantes, sendo o método caracterizado por compreender colocar o substrato em contato com uma composição que compreende um ácido percarboxílico e peróxido de hidrogênio com um potencial de redução de oxidação (ORP) de mais de cerca de 500 mV, na ausência de uma enzima de decomposição de peróxido, por um tempo suficiente para reduzir a contaminação.

17. Método de tratamento de um substrato contaminado ou em risco de contaminação por endósporos, sendo o método caracterizado por compreender: a) preparar uma solução compreendendo ácido percarboxílico e peróxido de hidrogênio; b) ajustar a concentração do ácido percarboxílico e peróxido de hidrogênio para fornecer um potencial de redução de oxidação (ORP) de mais de 500 MV; e c) colocar o substrato em contato com a solução da etapa b na ausência de uma enzima de decomposição de peróxido por um tempo suficiente para reduzir a contaminação por endósporos, em que o ORP é continuamente monitorado durante a etapa de contato.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que os endósporos são produzidos por um micróbio selecionado a partir do grupo que consiste em Paenibacillus chibensis, Paenibacillus favisporus, Bacillus cereus, Bacillus atrophaeus, Bacillus subtilis e Geobacillus stearothermophilus ou uma combinação dos mesmos.

19. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o substrato compreende um material selecionado a partir do grupo que consiste em metal, plástico, cerâmica, vidro, madeira, borracha, compósito ou uma combinação dos mesmos.

20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o substrato compreende um dispositivo médico, equipamento de preparação de bebidas ou alimentos, “equipamento de fabricação de produtos farmacêuticos ou um gênero alimentício.

21. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o ácido percarboxílico é ácido C1-C16 percarboxílico.

22. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o ácido percarboxílico é ácido peracético.

23. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a razão de porcentagem de peso de ácido percarboxílico para peróxido de hidrogênio é de cerca de 1,2, 1,6, 1,8, 2,0, 2,2, 2,4, 2,5, 2,6, 2,8, 3,0, 3,2, 3,4, 3,6, 3,8, 4,0, 4,2, 4,4, 4,6, 4,8, 5,0, 5,2, 5,4, 5,6, 5,8 ou 6,0.

24. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a razão de porcentagem de peso de ácido percarboxílico para peróxido de hidrogênio é de cerca de 1,2, 1,8, 2,4, 3,0, 3,4, 4,0, 4,6, 4,8 ou 5,0.

25. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a enzima de decomposição de peróxido é uma catalase.

26. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato que a etapa de contato compreende mergulho, aspersão, imersão ou encharcamento.

27. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o potencial de redução de oxidação (ORP) da composição é de cerca de 500 mV a cerca de

1.000 mv.

28. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a etapa de contato é de cerca de 3 segundos a cerca de 60 segundos.

29. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a contaminação por endósporos é reduzida em cerca de 1 Logio.

30. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a contaminação por endósporos é reduzida em cerca de 90 %.