BR112020021094A2 - redução da viscosidade de formulações de proteínas altamente concentradas - Google Patents
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Abstract
A presente invenção refere-se a
composições de formulações de proteínas altamente concentradas
apresentando viscosidade reduzida. As proteínas contidas nas formulações
preparadas são estabilizadas contra agregação e desnaturação e são,
portanto, suficientemente estáveis em armazenamento até a administração
ao paciente.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "REDUÇÃO DA VISCOSIDADE DE FORMULAÇÕES DE PROTEÍNAS ALTAMENTE CONCENTRADAS".
[001] A presente invenção refere-se a composições de formulações de proteínas altamente concentradas apresentando viscosidade reduzida. As proteínas contidas nas formulações preparadas são estabilizadas contra agregação e desnaturação e são, portanto, suficientemente estáveis em armazenamento até a administração ao paciente. Estado da Técnica
[002] A maioria dos produtos proteicos bioterapêuticos em desenvolvimento são anticorpos monoclonais (mAb) ou formatos relacionados, como anticorpos biespecíficos ou fragmentos de anticorpos. As doses terapêuticas de tais produtos em uma ampla gama de indicações clinicamente importantes são frequentemente altas.
[003] Mas os peptídeos e as proteínas são maiores e mais complexos do que os fármacos orgânicos e inorgânicos tradicionais (ou seja, possuindo vários grupos funcionais, além de estruturas tridimensionais complexas), a formulação de tais proteínas apresenta problemas especiais. Um desses problemas é o aumento da viscosidade das formulações de proteínas, especialmente em altas concentrações.
[004] Este último, no entanto, é um problema particular porque é altamente desejável do ponto de vista da conveniência do paciente, conformidade e custo geral de saúde que os produtos resultantes sejam liberados por meio de uma injeção subcutânea de baixo volume.
[005] Mas uma combinação da alta dose terapêutica e do baixo volume de injeção altamente desejável muitas vezes leva à necessidade de formulações altamente concentradas do ingrediente ativo. É bem conhecido que alcançar formulações aquosas estáveis de bioterapêuticos em alta concentração pode ser excepcionalmente desafiador, muitas vezes levando a um aumento considerável na taxa de agregação, formação de partículas e na viscosidade. A alta viscosidade é inaceitável, pois limita significativamente a injetabilidade do produto.
[006] O anticorpo e outras proteínas terapêuticas podem ser administrados por via parenteral, como por via intravenosa (IV), intramuscular (IM) ou subcutânea (SC). A injeção subcutânea tem ganhado cada vez mais atenção para a liberação de proteínas terapêuticas devido ao seu potencial de simplificar a administração ao paciente (injeção rápida e de baixo volume) e reduzir os custos do tratamento (redução da assistência médica). Para garantir a adesão do paciente, é desejável que as formas de dosagem de injeção subcutânea sejam isotônicas e incluam pequenos volumes de injeção (< 2,0 ml por sítio de injeção). Para reduzir o volume da injeção, as proteínas são frequentemente administradas na faixa de 1 mg/ml a 150 mg/ml.
[007] Assim, principalmente o desenvolvimento de formulações de proteínas para administração subcutânea é frequentemente associado a desafios de viscosidade. As limitações de volume (< 2 ml) e os requisitos de dose (geralmente administração de > 100 mg) geralmente exigem formulações de proteínas altamente concentradas. Mas em altas concentrações, como já foi dito, as proteínas tendem a formar soluções altamente viscosas e a estabilidade pode se tornar problemática devido à formação de agregados proteína-proteína solúveis e insolúveis. Como tal viscosidade é um grande desafio para a) o processo de fabricação e b) a administração ao paciente.
[008] No processo de fabricação, as formulações de proteínas altamente concentradas e altamente viscosas apresentam dificuldades no processamento, principalmente na ultrafiltração e na filtração estéril.
[009] As terapias baseadas em mAb são geralmente administradas repetidamente por um longo período de tempo e requerem várias doses de mg/kg. As soluções ou suspensões de anticorpos podem ser administradas por via parenteral, como por infusão intravenosa (IV) e injeções subcutâneas (SC) ou intramusculares (IM). Aqui, em soluções de injeção, a alta viscosidade é um problema. Para resolver este problema e melhorar a estabilidade da solução, normalmente também são adicionados aditivos e excipientes em concentrações mais altas. Em concentrações de proteínas que são desejáveis para formulações destinadas à administração intramuscular ou subcutânea, altas concentrações de estabilizadores, como sacarose e cloreto de sódio, são necessárias para alcançar a estabilidade da proteína a longo prazo. As soluções resultantes geralmente causam dor de injeção devido a altas forças de injeção e danos aos tecidos. Portanto, é fundamental equilibrar as quantidades necessárias de estabilizantes para estabilidade e osmolaridade das formulações de alta concentração de proteína.
[0010] Como consequência, os obstáculos técnicos atribuídos à viscosidade muitas vezes levam ao fracasso no desenvolvimento de formulações de proteínas para liberação subcutânea.
[0011] A fim de aumentar as taxas de sucesso no desenvolvimento de formulações subcutâneas, a redução e o controle da viscosidade por meios químicos têm recebido considerável atenção nos últimos anos.
[0012] Um grande número de publicações e pedidos de patentes referem-se a excipientes da família de sais (principalmente NaCl) e de aminoácidos especiais, de preferência arginina, histidina e prolina, que se mostraram eficientes na redução da viscosidade de certas proteínas terapêuticas de alta concentração.
[0013] Infelizmente, essas abordagens bem conhecidas para diminuir a viscosidade não são universalmente aplicáveis, provavelmente devido ao fato de que a viscosidade das formulações de proteínas é o resultado de várias forças intermoleculares. Dependendo da molécula de proteína e suas condições de formulação, diferentes interações podem afetar a viscosidade, como aglomeração molecular, ou interações dipolo ou interações entre grupos hidrofóbicos ou carregados. Consequentemente, a indústria farmacêutica tem uma grande necessidade de excipientes redutores de viscosidade, especialmente como uma opção alternativa quando as soluções padrão baseadas em NaCl e aminoácidos mencionados acima falham.
[0014] Um grande número de aditivos e excipientes de redução da viscosidade foi pesquisado no passado. Hoje, um dos mais proeminentes é a arginina, além da histidina, lisina e ácido canfor-10- sulfônico. Em um artigo de pesquisa de Zheng Guo et al., ("Structure- Activity Relationship for Hydrophobic Salts as Viscosity-Lowering Excipients for Concentrated Solutions of Monoclonal Antibodies", Pharmaceutical Research, vol. 29, no. 11, 13 de junho de 2012, p. 3182-3189) muitas outras moléculas exclusivas são descritas exibindo propriedades de redução da viscosidade. No momento, ainda nem todas as soluções de proteínas terapêuticas exibindo problemas de viscosidade em alta concentração podem ser tratadas adequadamente pelos excipientes redutores de viscosidade conhecidos. Objetivo da Presente Invenção
[0015] As formulações de proteínas (por exemplo, anticorpos monoclonais, proteínas de fusão, etc.) destinadas a aplicações farmacêuticas geralmente requerem estabilizadores contra agregação indesejada e para prevenir a degradação física ou química. Esses problemas são agravados em altas concentrações de proteínas, que são frequentemente desejáveis para a administração terapêutica desta classe de moléculas.
[0016] Em altas concentrações, as proteínas tendem a se autoassociar, resultando em formulações de alta viscosidade e complicando, por exemplo, a administração dessas soluções de proteína por injeção, mas também de processos de fabricação, nos quais uma filtração de fluxo tangencial é frequentemente usada para a troca de tampão e para o aumento da concentração de proteína. Ao aumentar a contrapressão e o estresse de cisalhamento durante a injeção e filtração, a proteína terapêutica é potencialmente desestabilizada ou os tempos de processo são prolongados. Consequentemente, existe uma grande necessidade na indústria biofarmacêutica de aditivos e excipientes de formulação, ou combinações dos mesmos, com características de redução da viscosidade. No entanto, a formulação de proteínas como anticorpos monoclonais requer uma seleção cuidadosa de aditivos e/ou excipientes de formulação para evitar a desnaturação da proteína e perda de atividade biológica.
[0017] Mas ainda um grande número de novos anticorpos emergentes e formatos de anticorpos requerem o desenvolvimento de aditivos e/ou excipientes de redução de viscosidade inovadores ou de combinações específicas de aditivo/excipiente ou de estratégias de formulação direcionadas. Estes aditivos/excipientes têm que ser farmaceuticamente seguros porque as formulações de proteínas são administradas por via parentérica, que inclui a via intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intradérmica ou subcutânea. Consequentemente, os aditivos que podem ser usados nestas formulações devem ser fisiologicamente compatíveis e não devem ter quaisquer efeitos colaterais indesejáveis e em nenhuma circunstância devem causar reações alérgicas; em particular, eles não devem causar efeitos colaterais anafilactoides. Objeto da invenção
[0018] O assunto da presente invenção é um método para reduzir a viscosidade de uma formulação líquida altamente concentrada de uma proteína farmaceuticamente ativa que compreende a etapa de combinação da solução de proteína com uma concentração redutora de viscosidade de um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato ou suas misturas. Em particular, a presente invenção se refere a formulações em que a concentração da proteína está na faixa de pelo menos 50 mg/ml até 300 mg/ml e em que a proteína terapêutica é selecionada a partir do grupo de anticorpos, fragmentos de anticorpo, minicorpo, um anticorpo modificado, molécula semelhante a anticorpo e proteína de fusão.
[0019] Efeitos de redução de viscosidade particularmente bons são alcançados em um método da reivindicação 1 ou qualquer uma das reivindicações 2 a 10, quando meglumina é adicionada juntamente com ácido benzenossulfônico como contra-íon ou ácido p- toluenossulfônico de sódio como contra-íon, mas também se ornitina e ácido benzenossulfônico como contra-íons são adicionados ou ornitina ou p-toluenossulfônico de sódio como contra-íon, ou de outras combinações adequadas, que são eficazes. Este efeito é alcançado em particular quando essas combinações são adicionadas em quantidades equimolares. Especialmente adicionando os referidos excipientes mencionados, uma redução da viscosidade de pelo menos 12% pode ser alcançada e em condições ideais de até 80%.
[0020] Uma formulação farmacêutica concentrada de uma proteína ou peptídeo farmaceuticamente ativo com sua modalidade específica de acordo com as reivindicações 11 a 21 também é um objeto da presente invenção. A proteína terapêutica pode ser selecionada a partir do grupo de anticorpos, fragmentos de anticorpos, minicorpo, molécula semelhante a anticorpo e proteínas de fusão. Além disso, o método das reivindicações 22 a 29 para a produção de pós-liofilizados a partir das composições das reivindicações 11 a 21 é um objeto desta invenção. No entanto, um kit contendo as composições reivindicadas também está dentro do escopo desta invenção, bem como um kit contendo as composições reivindicadas das reivindicações 30-34 e sua aplicação também está dentro do escopo desta invenção. Descrição Detalhada da Invenção
[0021] Conforme descrito acima, altas concentrações de proteína representam desafios relacionados à estabilidade física e química da proteína, bem como dificuldades com a fabricação, armazenamento e administração da formulação de proteína. Um grande problema é a tendência das proteínas de se agregar e formar partículas durante o processamento e/ou armazenamento, o que torna as manipulações durante o processamento e/ou administração difícil. A degradação e/ou agregação dependente da concentração são os principais desafios no desenvolvimento de formulações de proteínas em concentrações mais elevadas. Além do potencial de agregação de proteínas não nativas e formação de partículas, pode ocorrer auto- associação reversível em soluções aquosas, o que contribui, entre outras coisas, para o aumento da viscosidade que complica a liberação por injeção. Definições
[0022] O termo "proteína", quando geralmente aqui usado, refere- se a um polímero de aminoácidos ligados uns aos outros por ligações peptídicas para formar um polipeptídeo para o qual o comprimento da cadeia é suficiente para produzir pelo menos uma estrutura terciária detectável. Proteínas com peso molecular (expressas em kDa, em que "Da" representa "Daltons" e 1 kDa = 1.000 Da) maior que cerca de 100 kDa podem ser designadas como "proteínas de alto peso molecular", enquanto as proteínas com peso molecular menor que cerca de 100 kDa podem ser designados "proteínas de baixo peso molecular". O termo "proteína de baixo peso molecular" exclui pequenos peptídeos que carecem do requisito de pelo menos uma estrutura terciária necessária para ser considerada uma proteína. O peso molecular da proteína pode ser determinado usando métodos padrão conhecidos por alguém versado na técnica, incluindo, mas não se limitando a, espectrometria de massa (por exemplo, ESI, MALDI) ou cálculo a partir de sequências de aminoácidos conhecidas e glicosilação. As proteínas podem ser de ocorrência natural ou não natural, sintéticas ou semissintéticas.
[0023] "Proteína (s) essencialmente pura (s)" e "proteína (s) substancialmente pura (s)" são usadas indistintamente neste documento e referem-se a uma composição que compreende pelo menos cerca de 90% em peso de proteína pura, de preferência pelo menos cerca de 95% de proteína pura em peso. "Essencialmente homogêneo" e "substancialmente homogêneo" são usados indistintamente neste documento e se referem a uma composição em que pelo menos cerca de 90% em peso da proteína presente é uma combinação do monômero e associados di- e oligoméricos reversíveis (agregados não irreversíveis), de preferência pelo menos cerca de 95%.
[0024] O termo "anticorpo", quando geralmente aqui usado, abrange amplamente mAbs (incluindo anticorpos de comprimento total que têm uma região Fc de imunoglobulina), composições de anticorpos com especificidade poliepitópica, anticorpos biespecíficos, diacorpos e moléculas de anticorpos de cadeia única, bem como anticorpos fragmentos (por exemplo, Fab, Fab', F(ab')2 e Fv), anticorpos de domínio único, anticorpos de domínio único multivalentes, proteínas de fusão Fab e suas fusões.
[0025] O termo "anticorpo monoclonal" ou "mAb", quando geralmente aqui usado, refere-se a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos, exceto para possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em pequenas quantidades. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo dirigidos contra um único epítopo. Estes são tipicamente sintetizados por cultura de células de hibridoma, conforme descrito por Kohler et al. (Nature 256: 495, 1975), ou pode ser feito por métodos de DNA recombinante (ver, por exemplo, Patente Norte-americana Nº. 4.816.567), ou isolado de bibliotecas de anticorpos de fago usando as técnicas descritas em Clackson et al. (Nature 352: 624-628, 1991) e Marks et al. (J. Mol. Biol. 222: 581-597, 1991), por exemplo. Quando aqui usado, "mAbs" incluem especificamente anticorpos derivados, conjugados anticorpo- fármaco e anticorpos "quiméricos" em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é idêntica ou homóloga às sequências correspondentes em anticorpos derivados de uma espécie particular ou pertencente a uma classe ou subclasse de anticorpo particular, enquanto o restante da(s) cadeia(s) é(são) idêntica(s) ou homóloga a sequências correspondentes em anticorpos derivados de outra espécie ou pertencentes a outra classe ou subclasse de anticorpo, bem como fragmentos de tais anticorpos, desde que exibam a atividade biológica desejada (Patente US Nº. 4.816.567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855, 1984).
[0026] Um "fragmento de anticorpo" compreende uma porção de um anticorpo intacto, incluindo a ligação ao antígeno e/ou a região variável do anticorpo intacto. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem fragmentos Fab, Fab' F(ab')2 e Fv; diacorpos; anticorpos lineares (veja a Patente Norte-americana Nº. 5.641.870; Zapata et al., Protein Eng. 8: 1057-1062, 1995); moléculas de anticorpos de cadeia única; anticorpos multivalentes de domínio único; e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos.
[0027] As formas "humanizadas" de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) são imunoglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulinas ou fragmentos das mesmas (como Fv, Fab, Fab′, F (ab′)2 ou outras subsequências de ligação ao antígeno de anticorpos) de sequências principalmente humanas, que contêm sequências mínimas derivadas de imunoglobulina não humana. (Veja, por exemplo, Jones et al., Nature 321: 522-525, 1986; Reichmann et al., Nature 332: 323-329, 1988; e Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593- 596, 1992.)
[0028] Neste contexto, o termo "proteína terapeuticamente ativa" é entendido como significando, em termos simples, que é uma proteína ou peptídeo que é selecionado a partir do grupo de anticorpos, fragmentos de anticorpo, minicorpo, um anticorpo modificado, molécula semelhante a anticorpo e proteína de fusão e que é definida como descrito acima.
[0029] "Reologia" se refere ao estudo da deformação e fluxo da matéria e "viscosidade" se refere à resistência de uma substância (normalmente um líquido) ao fluxo. A viscosidade está relacionada ao conceito de força de cisalhamento; pode ser entendido como o efeito de diferentes camadas do fluido exercendo força de cisalhamento umas sobre as outras, ou sobre outras superfícies, conforme se movem umas contra as outras. Existem várias medidas de viscosidade. As unidades de viscosidade são Ns/m2, conhecidas como Pascal-segundos (Pa-s). A viscosidade pode ser "cinemática" ou "absoluta". A viscosidade cinemática é uma medida da taxa na qual o momento é transferido através de um fluido. É medido em Stokes (St). A viscosidade cinemática é uma medida do fluxo resistivo de um fluido sob a influência da gravidade. Quando dois fluidos de igual volume e viscosidade diferente são colocados em viscosímetros capilares idênticos e deixados fluir por gravidade, o fluido mais viscoso leva mais tempo do que o fluido menos viscoso para fluir através do capilar. Se, por exemplo, um fluido leva 200 segundos (s) para completar seu fluxo e outro fluido leva 400 s, o segundo fluido é chamado de duas vezes mais viscoso que o primeiro em uma escala de viscosidade cinemática. A dimensão da viscosidade cinemática é comprimento2/tempo. Normalmente, a viscosidade cinemática é expressa em centiStokes (cSt). A unidade SI de viscosidade cinemática é mm2/s, que é igual a 1 cSt. A "viscosidade absoluta", às vezes chamada de "viscosidade dinâmica" ou "viscosidade simples", é o produto da viscosidade cinemática e da densidade do fluido. A viscosidade absoluta é expressa em unidades de centipoise (cP). A unidade SI de viscosidade absoluta é o miliPascal-segundo (mPa-s), onde 1 cP = 1 mPa-s.
[0030] A viscosidade pode ser medida usando, por exemplo, um viscosímetro a uma determinada taxa de cisalhamento ou múltiplas taxas de cisalhamento. Uma viscosidade de "cisalhamento zero extrapolado" pode ser determinada criando uma linha de melhor ajuste dos quatro pontos de cisalhamento mais alto em um gráfico de viscosidade absoluta versus taxa de cisalhamento e extrapolando linearmente a viscosidade de volta ao cisalhamento zero. Alternativamente, para um fluido newtoniano, a viscosidade pode ser determinada calculando a média dos valores de viscosidade em múltiplas taxas de cisalhamento. A viscosidade também pode ser medida usando um viscosímetro microfluídico em taxas de cisalhamento simples ou múltiplas (também chamadas de taxas de fluxo), em que a viscosidade absoluta é derivada de uma mudança na pressão conforme um líquido flui através de um canal. A viscosidade é igual à tensão de cisalhamento sobre a taxa de cisalhamento. Viscosidades medidas com viscosidades microfluídicas podem, em algumas modalidades, ser comparadas diretamente às viscosidades de cisalhamento zero extrapoladas, por exemplo, aquelas extrapoladas de viscosidades medidas em taxas de cisalhamento múltiplas usando um viscosímetro de cone e placa.
[0031] "Taxa de cisalhamento" refere-se à taxa de mudança de velocidade na qual uma camada de fluido passa sobre uma camada adjacente. O gradiente de velocidade é a taxa de variação da velocidade com a distância das placas. Este caso simples mostra o gradiente de velocidade uniforme com taxa de cisalhamento (v1 − v2)/h em unidades de (cm/seg)/(cm) = 1/seg. Portanto, as unidades de taxa de cisalhamento são segundos recíprocos ou, em geral, tempo recíproco. Para um viscosímetro microfluídico, a mudança na pressão e na taxa de fluxo estão relacionadas à taxa de cisalhamento. "Taxa de cisalhamento" é a velocidade com a qual um material é deformado. As formulações contendo proteínas e agentes de redução da viscosidade são tipicamente medidas em taxas de cisalhamento que variam de cerca de 0,5 s−1 a cerca de 200 s−1 quando medidas usando um cone e viscosímetro de placa e um fuso apropriadamente escolhido por alguém versado na técnica para medir com precisão as viscosidades na faixa de viscosidade da amostra de interesse (ou seja, uma amostra de 20 cP é medida com mais precisão em um fuso CPE40 afixado a um viscosímetro DV2T (Brookfield)); maior do que cerca de 20 s−1 a cerca de 3.000 s−1 quando medido usando um viscosímetro microfluídico.
[0032] Para fluidos "Newtonianos" clássicos, quando geralmente aqui usados, a viscosidade é essencialmente independente da taxa de cisalhamento. Para "fluidos não newtonianos", no entanto, a viscosidade diminui ou aumenta com o aumento da taxa de cisalhamento, por exemplo, os fluidos são "Diluição por cisalhamento" ou "espessamento por cisalhamento", respectivamente. No caso de soluções de proteína concentradas (ou seja, alta concentração), isso pode se manifestar como um comportamento de diluição de cisalhamento pseudoplástico, ou seja, uma diminuição da viscosidade com a taxa de cisalhamento.
[0033] O termo "estabilidade química", quando geralmente aqui usado, refere-se à capacidade dos componentes da proteína em uma formulação de resistir à degradação por meio de vias químicas, como oxidação, desamidação ou hidrólise. Uma formulação de proteína é tipicamente considerada quimicamente estável se menos de cerca de 5% dos componentes forem degradados após 24 meses a 4°C.
[0034] O termo "estabilidade física", quando geralmente aqui usado, refere-se à capacidade de uma formulação de proteína para resistir à deterioração física, como agregação. Uma formulação que é fisicamente estável forma apenas uma porcentagem aceitável de agregados irreversíveis (por exemplo, dímeros, trímeros ou outros agregados) do agente de proteína bioativa. A presença de agregados pode ser avaliada de várias maneiras, incluindo medindo o tamanho médio das partículas das proteínas na formulação por meio de dispersão de luz dinâmico. Uma formulação é considerada fisicamente estável se menos do que cerca de 5% de agregados irreversíveis são formados após 24 meses a 4°C. Os níveis aceitáveis de contaminantes agregados idealmente seriam menos do que cerca de 2%. Níveis tão baixos quanto cerca de 0,2% são alcançáveis, embora aproximadamente 1% seja o mais típico.
[0035] O termo "formulação estável", quando geralmente aqui usado, significa que uma formulação é quimicamente estável e fisicamente estável. Uma formulação estável pode ser aquela em que mais de cerca de 95% das moléculas de proteína bioativa retêm bioatividade em uma formulação após 24 meses de armazenamento a 4°C, ou em condições de solução equivalentes a uma temperatura elevada, como um mês de armazenamento a 40°C. Várias técnicas analíticas para medir a estabilidade da proteína estão disponíveis na técnica e são revistas, por exemplo, em Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, NY (1991) e Jones, A., Adv. Drug Delivery Revs. 10: 29-90, 1993. A estabilidade pode ser medida a uma temperatura selecionada por um determinado período de tempo. Para triagem rápida, por exemplo, a formulação pode ser mantida a 40°C, por duas semanas a um mês, momento em que a atividade biológica residual é medida e comparada com a condição inicial para avaliar a estabilidade. Quando a formulação deve ser armazenada a 2°C-8°C, geralmente a formulação deve ser estável a 30°C ou 40°C por pelo menos um mês e/ou estável a 2°C-8°C por pelo menos 2 anos. Quando a formulação é para ser armazenada em temperatura ambiente, cerca de 25°C, geralmente a formulação deve ser estável por pelo menos 2 anos a cerca de 25°C e/ou estável a 40°C por pelo menos cerca de 6 meses. A extensão da agregação após a liofilização e armazenamento pode ser usada como um indicador da estabilidade da proteína. Em algumas modalidades, a estabilidade é avaliada medindo o tamanho de partícula das proteínas na formulação. Em algumas modalidades, a estabilidade pode ser avaliada medindo a atividade de uma formulação usando atividade biológica padrão ou ensaios de ligação bem dentro das habilidades de alguém versado na técnica.
[0036] O termo proteína "tamanho de partícula", quando geralmente aqui usado, significa o diâmetro médio da população predominante de partículas de moléculas bioativas, ou suas distribuições de tamanho de partícula, em uma formulação determinada pelo uso de instrumentos de dimensionamento de partícula bem conhecidos, por exemplo, luz dinâmica dispersão, SEC (cromatografia de exclusão por tamanho), ou outros métodos conhecidos por alguém versado na técnica.
[0037] O termo "concentrado" ou "alta concentração", quando geralmente aqui usado, descreve formulações de proteínas líquidas com uma concentração final de proteína de pelo menos 1 mg/ml, especialmente maior do que cerca de 10 mg/ml, de preferência maior do que cerca de 50 mg/mL, mais preferencialmente superior a cerca de 100 mg/mL, ainda mais preferencialmente superior a cerca de 200 mg/mL, ou mais preferencialmente superior a cerca de 250 mg/mL.
[0038] Uma "formulação reconstituída", quando geralmente aqui usada, refere-se a uma formulação que foi preparada pela dissolução de um pó seco, liofilizado, proteína secada por spray ou precipitada com solvente em um diluente, de modo que a proteína seja dissolvida ou dispersa em solução aquosa para administração.
[0039] Um "lioprotetor" é uma substância que, quando combinada com uma proteína, reduz significativamente a instabilidade química e/ou física da proteína após a liofilização e/ou armazenamento subsequente. O lioprotetor é geralmente adicionado à formulação pré- liofilizada em uma "quantidade lioprotetora". Isto significa que, após a liofilização da proteína na presença da quantidade lioprotetor do lioprotetor, a proteína retém essencialmente a sua estabilidade e integridade física e química.
[0040] Um "diluente" ou "veículo", quando geralmente aqui usado, é um ingrediente farmaceuticamente aceitável (isto é, seguro e não tóxico para administração a um humano ou outro mamífero) e ingrediente útil para preparação de uma formulação líquida, tal como uma formulação aquosa reconstituída após a liofilização. Diluentes exemplares incluem água estéril, água bacteriostática para injeção (BWFI), uma solução tamponada de pH (por exemplo, solução salina tamponada com fosfato), solução salina estéril, solução de Ringer ou solução de dextrose e suas combinações.
[0041] Um "conservante" é um composto que pode ser adicionado às formulações deste documento para reduzir a contaminação por e/ou ação de bactérias, fungos ou outro agente infeccioso. A adição de um conservante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação multiuso (dose múltipla).
[0042] Um "agente de volume", quando geralmente aqui usado, é um composto que adiciona massa a uma mistura liofilizada e contribui para a estrutura física da massa liofilizada (por exemplo, facilita a produção de uma massa liofilizada essencialmente uniforme que mantém uma estrutura de poro aberta).
[0043] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" é a menor concentração necessária para efetuar uma melhoria mensurável ou prevenção de qualquer sintoma ou uma condição ou distúrbio particular, para efetuar um aumento mensurável da expectativa de vida ou para melhorar geralmente a qualidade de vida do paciente. A quantidade terapeuticamente eficaz depende da molécula biologicamente ativa específica e da condição ou distúrbio específico a ser tratado. Quantidades terapeuticamente eficazes de muitas proteínas, tais como os mAbs aqui descritos, são bem conhecidos na técnica. As quantidades terapeuticamente eficazes de proteínas ainda não estabelecidas ou para o tratamento de distúrbios específicos com proteínas conhecidas, tais como mAbs, a serem clinicamente aplicadas para tratar distúrbios adicionais podem ser determinadas por técnicas padrão que estão bem dentro da habilidade de alguém versado na técnica, como um médico.
[0044] O termo "injetabilidade" ou "seringabilidade", quando geralmente aqui usado, refere-se ao desempenho de injeção de uma formulação farmacêutica através de uma seringa equipada com uma agulha de calibre 18-32, opcionalmente de parede fina. A injetabilidade depende de fatores como pressão ou força necessária para a injeção, regularidade do fluxo, qualidades de aspiração e ausência de entupimento. A injetabilidade das formulações farmacêuticas líquidas pode ser avaliada comparando a força de injeção de uma formulação de viscosidade reduzida com uma formulação padrão sem adição de agentes redutores de viscosidade. A redução na força de injeção da formulação contendo um agente de redução da viscosidade reflete a injetabilidade melhorada dessa formulação. As formulações de viscosidade reduzida têm injetabilidade melhorada quando a força de injeção é reduzida em pelo menos 10%, de preferência em pelo menos 30%, mais preferencialmente em pelo menos 50% e mais preferencialmente em pelo menos 75% em comparação com uma formulação padrão com mesma concentração de proteína sob as mesmas condições, exceto para substituição do agente de redução da viscosidade por um tampão apropriado de aproximadamente a mesma concentração. Alternativamente, a injetabilidade das formulações farmacêuticas líquidas pode ser avaliada comparando o tempo necessário para injetar o mesmo volume, tal como 0,5 mL, ou mais preferencialmente cerca de 1 mL, de diferentes formulações de proteínas líquidas quando a seringa é pressionada com a mesma força.
[0045] O termo "força de injeção", quando geralmente aqui usado, refere-se à força necessária para empurrar uma determinada formulação líquida através de uma determinada seringa equipada com um determinado medidor de agulha a uma determinada velocidade de injeção. A força de injeção é normalmente relatada em Newtons. Por exemplo, a força de injeção pode ser medida como a força necessária para empurrar uma formulação líquida através de uma seringa de plástico de 1 mL com um diâmetro interno de 0,25 polegadas, equipada com uma agulha de calibre 27 de 0,50 polegadas a uma velocidade de injeção de 250 mm/min. Equipamentos de teste podem ser usados para medir a força de injeção. Quando medida nas mesmas condições, uma formulação com viscosidade mais baixa geralmente exigirá uma força de injeção geral mais baixa.
[0046] O termo "formulação de viscosidade reduzida", quando geralmente aqui usado, refere-se a uma formulação líquida com uma alta concentração de uma proteína de alto peso molecular, como um mAb, ou uma proteína de baixo peso molecular que é modificada pela presença de um ou mais aditivos para diminuir a viscosidade, em comparação com uma formulação correspondente que não contém o(s) aditivo(s) ou agente(s) de redução da viscosidade.
[0047] O termo "agente redutor de viscosidade", quando aqui usado, refere-se a um composto que atua para reduzir a viscosidade de uma solução em relação à viscosidade da solução na ausência do agente redutor de viscosidade. O agente de redução da viscosidade pode ser um único composto ou pode ser uma mistura de um ou mais compostos. Quando o agente de redução da viscosidade é uma mistura de dois ou mais compostos, a concentração listada refere-se a cada agente individual, a menos que especificado de outra forma. A título de exemplo, uma formulação contendo cerca de 0,25 M de benzenossulfonato de meglumina como o agente de redução da viscosidade é uma solução com ácido benzenossulfônico a uma concentração de 0,25 M e meglumina a uma concentração de 0,25 M.
[0048] Certos agentes de redução da viscosidade contêm grupos funcionais ácidos ou básicos e podem mostrar regiões hidrofílicas e hidrofóbicas, que, em conjunto, influenciam as características de interação com proteínas compreendendo da solução. Se os grupos funcionais estão total ou parcialmente ionizados depende do pH da formulação em que estão. A menos que especificado de outra forma, a referência a uma formulação contendo um agente redutor de viscosidade com um grupo funcional ionizável inclui tanto o composto original quanto quaisquer estados ionizados possíveis.
[0049] O termo "formulação líquida", quando aqui usado, é uma proteína que é fornecida em um diluente farmacêutico aceitável ou uma que é reconstituída em um diluente farmacêutico aceitável antes da administração ao paciente.
[0050] Os biossimilares podem ser produzidos por células microbianas (procarióticas, eucarióticas), linhagens celulares de origem humana ou animal (por exemplo, mamífero, ave, inseto) ou tecidos derivados de animais ou plantas. A construção de expressão para um produto biossimilar proposto geralmente codificará a mesma sequência de aminoácidos primária que seu produto de referência. Podem estar presentes pequenas modificações, como truncamentos de terminais N ou C que não afetarão a segurança, pureza ou potência.
[0051] Um mAb biossimilar é semelhante ao mAb de referência fisioquímica ou biologicamente, em termos de segurança e eficácia. O mAb biossimilar pode ser avaliado contra um mAb de referência usando um ou mais estudos in vitro, incluindo ensaios detalhando a ligação ao(s) antígeno(s) alvo; ligação a isoformas dos receptores Fc gama (FcγRI, FcγRII e FcγRIII), FcRn e complemento (C1q); Funções associadas a Fab (por exemplo, neutralização de um ligando solúvel, ativação ou bloqueio do receptor); ou funções associadas a Fc (por exemplo, citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos, citotoxicidade dependente do complemento, ativação do complemento). As comparações in vitro podem ser combinadas com dados in vivo que demonstram similaridade de farmacocinética, farmacodinâmica e/ou segurança. As avaliações clínicas de um mAb biossimilar contra um mAb de referência podem incluir comparações de propriedades farmacocinéticas (por exemplo, AUC 0-inf, AUC0-t, Cmax, tmax, Ctrough); metas farmacodinâmicas; ou similaridade de eficácia clínica (por exemplo, usando ensaios clínicos comparativos de grupos paralelos, randomizados). A comparação de qualidade entre um mAb biossimilar e um mAb de referência pode ser avaliada usando procedimentos estabelecidos, incluindo aqueles descritos em "Guideline on similar biological medicinal products containing biotechnology-derived proteins as active substance: Quality issues" (EMEA/CHMP/BWP/49348/2005), e em "Guideline on development, production, characterization and specifications for monoclonal antibodies and related substances" (EMEA/CHMP/BWP/157653/2007).
[0052] As diferenças entre um mAb biossimilar e um mAb de referência podem incluir modificação pós-tradução, por exemplo, ligando-se ao mAb outros grupos bioquímicos, como um fosfato, vários lipídeos e hidratos de carbono; por clivagem proteolítica após tradução; alterando a natureza química de um aminoácido (por exemplo, formilação); ou por muitos outros mecanismos. Outras modificações pós- translacionais podem ser uma consequência das operações do processo de fabricação - por exemplo, a glicação pode ocorrer com a exposição do produto a açúcares redutores. Em outros casos, as condições de armazenamento podem ser permissivas para certas vias de degradação, como oxidação, desamidação ou agregação, uma vez que todas essas variantes relacionadas ao produto podem ser incluídas em um mAb biossimilar.
[0053] Quando aqui usado, o termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a sais preparados a partir de ácidos e bases não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos e bases inorgânicos e ácidos e bases orgânicos.
[0054] Quando aqui usado, o termo "grupo alquila" refere-se a grupos hidrocarbonetos de cadeia linear, cadeia ramificada e cíclicos. A menos que especificado de outra forma, o termo grupo alquila abrange grupos hidrocarbonetos contendo uma ou mais ligações duplas ou triplas. Um grupo alquila contendo pelo menos um sistema de anel é um grupo "cicloalquila". Um grupo alquila contendo pelo menos uma ligação dupla é um "grupo alquenila" e um grupo alquila contendo pelo menos uma ligação tripla é um "grupo alquinila".
[0055] Quando aqui usado, o termo "Arila" refere-se a sistemas de anéis de carbono aromáticos, incluindo sistemas de anéis fundidos. Em um grupo "arila", cada um dos átomos que formam o anel são átomos de carbono.
[0056] Quando aqui usado, "Heteroarila" refere-se a sistemas de anéis aromáticos, incluindo sistemas de anéis fundidos, em que pelo menos um dos átomos que formam o anel é um heteroátomo. Além disso, quando aqui usado, o termo "Heterociclo" refere-se a sistemas de anéis que, incluindo sistemas de anéis fundidos, que não são aromáticos, em que pelo menos um dos átomos que formam o anel é um heteroátomo.
[0057] Quando aqui usado, o termo "heteroátomo" é qualquer átomo que não seja de carbono ou de hidrogênio. Os heteroátomos preferidos incluem oxigênio, enxofre e nitrogênio. Formulações
[0058] Soluções de proteína biocompatíveis de baixa viscosidade, como as de mAbs, podem ser usadas para fornecer quantidades terapeuticamente eficazes de proteínas em volumes úteis para injeções subcutâneas (SC) e intramusculares (IM), tipicamente menos que ou cerca de 2 ml para SC e menos que ou cerca de 5 ml para IM, mais preferencialmente menos que ou cerca de 1 ml para SC e menos que ou cerca de 3 ml para IM. As proteínas podem geralmente ter qualquer peso molecular, embora em algumas modalidades sejam preferidas proteínas de alto peso molecular. Em outras modalidades, as proteínas são proteínas de baixo peso molecular.
[0059] Agora, a presente invenção fornece um método para reduzir a viscosidade e/ou melhorar a estabilidade de uma formulação farmacêutica líquida de uma proteína terapêutica, combinando a proteína terapêutica e uma quantidade redutora de viscosidade de um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato ou suas misturas em quantidades equimolares às soluções de proteína. Dependendo do valor de pH da solução, a concentração da solução de proteína, a natureza da proteína, a concentração resultante do (s) excipiente (s) adicionado (s) e sua natureza química, o efeito de redução da viscosidade varia.
[0060] Em particular, quando misturas de meglumina e ornitina juntamente com um dos contraíons selecionados a partir de sulfonato de tolueno e ácido benzenossulfônico são adicionados em quantidades equimolares à solução de proteína concentrada, por exemplo, a soluções de (mAbA e mAbB), uma redução de viscosidade particularmente boa é alcançada.
[0061] Inesperadamente, foi descoberto por experimentos que misturas do aminoaçúcar catiônico meglumina em combinação com o aminoácido ornitina e um contraíon carregado negativamente, selecionado a partir de p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico, como misturas equimolares específicas reduzem significativamente a viscosidade de formulações líquidas de proteínas altamente concentradas de anticorpos monoclonais ou de proteínas de fusão.
[0062] Em modalidades exemplares, a proteína terapêutica está em uma alta concentração de proteína, conforme descrito acima. Em algumas modalidades, a redução da viscosidade é de pelo menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% ou 70% em comparação com as formulações controle nas quais a solução tampão foi adicionada à solução de proteína na mesma quantidade em vez da solução do agente redutor de viscosidade.
[0063] Em modalidades exemplares, a proteína terapêutica está em uma alta concentração de proteína, conforme descrito acima, de pelo menos 50 mg/ml, de preferência mais de 75 mg/ml, mais preferencialmente mais de 100 mg/ml. As formulações testadas e descritas aqui têm concentrações de proteínas na faixa de 150 -280 mg/ml. Em algumas modalidades, a redução da viscosidade é de pelo menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ou 75% em comparação com as formulações controle ou mais.
[0064] Em outro aspecto, a invenção fornece soluções líquidas compreendendo uma proteína terapêutica e um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, p- toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico ou misturas dos mesmos em que as formulações exibem viscosidade reduzida em relação às formulações controle. Em modalidades exemplares, a proteína terapêutica está em uma alta concentração de proteína, conforme descrito acima, e o (s) excipiente (s) aqui descrito (s) está (ão) presente (s) em uma concentração de redutor de viscosidade (peso: volume). Qualquer um desses excipientes pode ser usado em concentrações até seu limite de solubilidade. Essas soluções podem compreender ainda outros aditivos em uma quantidade eficaz para melhorar ainda mais a estabilidade, reduzir a agregação e/ou tornar a formulação isotônica, sem aumentar significativamente a viscosidade.
[0065] Em outras modalidades, a concentração do excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato ou suas misturas é de pelo menos cerca de 50 mM a cerca de 300 mM, ou pelo menos cerca de 100 mM a cerca de 250 mM, ou pelo menos cerca de 140 mM a cerca de 200 mM. Em modalidades exemplares, a concentração do excipiente é de pelo menos cerca de 50, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, 220, 250 ou 300 mM ou superior. Outras modalidades exemplares incluem concentrações de excipientes eficazes para tornar a formulação isotônica, sem aumentar significativamente a viscosidade. Concentrações exemplares incluem aquelas de pelo menos cerca de 150 mM ou mais, em outras modalidades, as quantidades são de pelo menos cerca de 170 mM ou mais.
[0066] Em outro aspecto, a invenção fornece formulações de proteínas liofilizadas compreendendo uma proteína terapêutica e um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato ou misturas dos mesmos, em que após a reconstituição com a quantidade recomendada de diluente, as formulações exibem viscosidade reduzida em relação às formulações controle. Em modalidades exemplares, a proteína terapêutica está em uma alta concentração de proteína, conforme descrito acima. Em algumas modalidades, o excipiente está presente em uma quantidade eficaz para reduzir a viscosidade após a reconstituição com diluente (peso: concentração em peso). Tais formulações podem compreender ainda outros aditivos, em uma quantidade eficaz para melhorar ainda mais a estabilidade, reduzir a agregação e/ou tornar a formulação isotônica, sem aumentar significativamente a viscosidade.
[0067] Em modalidades exemplares, a concentração do excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato ou misturas dos mesmos é de pelo menos cerca de 1 μg por mg de proteína terapêutica, até cerca de 1,0 mg por mg de proteína terapêutica. Em algumas modalidades, a concentração de excipiente é de pelo menos cerca de 1, 10, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 ou 550 μg por mg de proteína terapêutica. Em outras modalidades exemplares, a concentração de excipiente é de até cerca de 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 ou 1000 μg por mg de proteína terapêutica.
[0068] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um método de prevenção da autoassociação de proteínas em formulações líquidas usando meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato ou misturas dos mesmos como um excipiente em qualquer uma das quantidades ou concentrações aqui descritas. Formulações com estabilidade melhorada (por exemplo, agregação reduzida) e prazo de validade também são fornecidas.
[0069] A invenção também fornece um kit que compreende uma formulação de proteína líquida da invenção e instruções para sua administração, opcionalmente com um recipiente, seringa e/ou outro dispositivo de administração. A invenção fornece ainda um kit que compreende uma formulação de proteína liofilizada da invenção, opcionalmente em um recipiente, e instruções para sua reconstituição e administração, opcionalmente com um frasco de diluente estéril e,
opcionalmente, com uma seringa ou outro dispositivo de administração. Recipientes exemplares incluem frascos, tubos, garrafas, seringas pré-carregadas de uma ou várias câmaras ou cartuchos, mas também uma placa de 96 cavidades compreendendo formulações liofilizadas ou secas por pulverização prontas para uso que ficam nas cavidades. Dispositivos de administração exemplares incluem seringas, com ou sem agulhas, bombas de infusão, injetores de jato, dispositivos de caneta, injetores transdérmicos ou outros injetores sem agulha.
[0070] Outro aspecto da presente invenção é fornecer um método para rastrear uma concentração redutora de viscosidade de um excipiente compreendendo as etapas de: (1) avaliar a viscosidade de uma primeira solução compreendendo uma primeira concentração de um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, p-toluenossulfonato de sódio, ácido benzenossulfônico, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico, carnitina e succinato ou suas misturas e uma proteína terapêutica, como um anticorpo, (2) avaliando a viscosidade de uma segunda solução compreendendo uma segunda concentração diferente do excipiente e da proteína terapêutica, e (3) determinar que a primeira concentração de excipiente é mais redutora de viscosidade do que a segunda concentração de excipiente se a primeira solução for menos viscosa. A viscosidade pode ser determinada, por exemplo, usando um reômetro de tecnologia m-VROCTM (RheoSense, San Ramon, California, USA) ou um Reômetro Aries ARG2 ou um Reômetro Brookfield RV-DVIII.
[0071] Métodos semelhantes são fornecidos para o rastreio de uma redução da agregação ou concentração de estabilização de um excipiente.
[0072] A estabilidade pode ser avaliada de muitas maneiras,
incluindo o monitoramento da mudança conformacional ao longo de uma faixa de temperaturas (termoestabilidade) e/ou períodos de tempo (vida útil) e/ou após a exposição a situações de manuseio estressantes (por exemplo, agitação física). A estabilidade de formulações contendo concentrações variáveis de componentes de formulação pode ser medida usando uma variedade de métodos. Por exemplo, a quantidade de agregação de proteína pode ser medida por observação visual de turbidez, medindo a absorbância em um comprimento de onda específico, por cromatografia de exclusão por tamanho (na qual os agregados de uma proteína eluirão em diferentes frações em comparação com a proteína em seu estado ativo nativo), HPLC ou outros métodos cromatográficos. Outros métodos de medição de mudança conformacional podem ser usados, incluindo o uso de calorimetria de varredura diferencial (DSC), por exemplo, para determinar a temperatura de desnaturação, ou dicroísmo circular (CD), que mede a elipticidade molar da proteína. Fluorescência também pode ser usada para analisar a composição. A fluorescência engloba a liberação ou absorção de energia na forma de luz ou calor e mudanças nas propriedades polares da luz. A emissão de fluorescência pode ser intrínseca a uma proteína ou pode ser devido a uma molécula repórter de fluorescência, que, por exemplo, se liga a bolsas de proteína de proteínas parcialmente desdobradas. Um aumento na ligação de moléculas repórter pode ser monitorado pela detecção do sinal de fluorescência de uma amostra de proteína. Outros meios para medir a estabilidade podem ser usados e são bem conhecidos dos versados na técnica.
[0073] Em experimentos realizados, primeiro, o potencial de redução da viscosidade de meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato sozinho são testados em combinação com seis tipos de anticorpos (mAbA, mAbB mAbC (IgG2), mAbD, mAbE, mAbF) e uma proteína de fusão (FusãoA). As concentrações das proteínas são ajustadas a 98 mg/ml ou 99 mg/ml ou 173 mg/ml ou 177 mg/ml ou 200 mg/ml ou 220 mg/ml ou 260 mg/ml ou 270 mg/ml para criar altos níveis de viscosidade.
[0074] Conforme já descrito acima, o valor de pH dessas formulações é de particular importância para a sua eficácia e a usabilidade da respectiva proteína farmaceuticamente ativa. É, portanto, desejável que o pH das formulações de proteína investigadas seja ajustado na faixa de entre cerca de 4,5 a cerca de 8,0. Dependendo da natureza da proteína ou peptídeo contendo o valor de pH é ajustado preferencialmente em uma faixa entre cerca de 4,6 a cerca de 5,4 ou em uma faixa entre cerca de 5,4 a cerca de 7,9. Os tampões usados para ajustar o pH são de preferência um tampão de acetato (25 mM) a pH 5 e solução salina tamponada com fosfato (10 mM) a pH 7. Se necessário, no entanto, outro tampão pode ser usado, que é compatível com a proteína farmaceuticamente ativa e fisiologicamente aceitável contida.
[0075] As concentrações dos agentes de redução da viscosidade são ajustadas em uma faixa de 50 mM a 500 mM (Exemplos 1 A-E). Um reômetro capilar baseado em chip (sistema microeletromecânico), m-VROC™ (RheoSence, San Ramon, CA), foi empregado para medir a viscosidade dinâmica. Em geral, a viscosidade dinâmica, que também é conhecida como viscosidade absoluta (coeficiente de viscosidade absoluta), é uma medida de resistência interna que pode ser determinada pela autoassociação das moléculas de proteína em uma solução altamente concentrada.
[0076] As viscosidades determinadas indicam claramente que a aplicação apenas de meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato em uma determinada concentração junto com um anticorpo específico ou proteína de fusão resulta em um resultado mensurável redução significativa da viscosidade de soluções de proteína altamente concentradas.
[0077] No entanto, de forma particularmente inesperada, os experimentos mostraram que a adição combinada de meglumina, ornitina ou carnitina e de um contraíon selecionado a partir de sulfonato de tolueno, ácido benzenossulfônico, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato leva a uma redução de viscosidade significativamente maior.
[0078] Como já apontado, especialmente se misturas de meglumina ou de ornitina juntamente com um dos contraíons selecionados de sulfonato de tolueno e ácido benzenossulfônico, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato são adicionados em quantidades equimolares à solução de proteína concentrada, por exemplo, para soluções de (mAbA e mAbB), uma redução de viscosidade particularmente boa é alcançada.
[0079] Em outros experimentos, o potencial de misturas do aminoaçúcar catiônico meglumina ou do aminoácido ornitina ou de carnitina em combinação com p-toluenossulfonato de sódio, ácido benzenossulfônico, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico ou succinato como um contraíon negativo para reduzir a viscosidade de soluções de anticorpos altamente concentradas (mAbA e mAbB).
[0080] Em outros experimentos, o potencial de misturas do aminoaçúcar catiônico meglumina ou do aminoácido ornitina em combinação com p-toluenossulfonato de sódio ou ácido benzenossulfônico como um contra-íon com carga negativa para reduzir a viscosidade de soluções de anticorpo altamente concentradas (mAbA & mAbB) foi investigado. Para cada um desses estudos, foram adicionadas misturas de quantidades equimolares desses excipientes. Resultados particularmente bons foram encontrados aqui para concentrações de 150 mM (Exemplos 2 A-C).
[0081] Todos os modelos de anticorpos foram formulados em concentrações bastante elevadas de cerca de 100 mg/ml, alguns de cerca de 150 mg/ml, especialmente de mais de 200 mg/ml, e em particular de 220 mg/ml (mAbB) e 270 mg/ml (mAbA) em solução salina tampão de fosfato 10 mM a pH 7. Um reômetro capilar baseado em chip (sistema microeletromecânico), m-VROC™ (RheoSence, San Ramon, CA), foi empregado para medir a viscosidade.
[0082] Em todos os casos, as misturas equimolares específicas a uma concentração de 150 mM do aminoaçúcar catiônico meglumina ou do aminoácido ornitina e um contraíon carregado negativamente como p-toluenossulfonato de sódio ou ácido benzenossulfônico mostram uma redução significativa da viscosidade medida nas soluções de anticorpos altamente concentradas.
[0083] O potencial de redução da viscosidade de meglumina e cloridrato de L-ornitina é testado em soluções concentradas compreendendo três tipos diferentes de anticorpos (IgG1 quimérica, IgG2 humana, IgG4 humanizada). As concentrações médias dessas soluções foram de 99 mg/ml, 173 mg/ml ou 177 mg/ml.
[0084] Nas experiências, verificou-se que ambos os excipientes podem reduzir significativamente a viscosidade das formulações de anticorpos quando adicionados à solução de proteína a uma concentração de 150 mM, respectivamente.
[0085] Também em soluções nas quais mAbD está contido como uma proteína, a adição de cada 150 mM de p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico causa uma redução significativa na viscosidade.
[0086] Além disso, a adição de sal de sódio de ácido D-glicônico 150 mM a uma solução contendo mAbD leva a uma redução da viscosidade.
[0087] O uso de uma combinação equimolar de cloridrato de L- ornitina ou meglumina com p-toluenossulfonato de sódio ou ácido benzenossulfônico também diminuiu a viscosidade de soluções de anticorpos altamente concentradas (mAbD e mAbE) marcadamente. Além disso, como mostrado pelas experiências realizadas, várias outras combinações dos auxiliares mencionados aqui reduzem a viscosidade de soluções de anticorpos de alta concentração.
[0088] Portanto, as combinações de excipientes aqui mencionadas não são exaustivas e existem outras combinações possíveis que levam aos resultados correspondentes.
[0089] As experiências também mostraram um outro efeito vantajoso, que resulta da adição dos excipientes aqui mencionados. Uma vez que normalmente utilizado em formulações farmacêuticas para efeito confiável, mesmo após várias semanas o tempo de armazenamento ainda não teve sua atividade, foram realizados experimentos de armazenamento adequados e, em seguida, verificada a estabilidade das proteínas.
[0090] Por exemplo, a estabilidade de mAbD, indicada pela quantidade de monômero, pode ser melhorada durante um estudo de estabilidade acelerado pela adição de meglumina 150 mM, cloridrato de L-ornitina 150 mM ou uma combinação equimolar de cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio, cada 75 mM.
[0091] A este respeito, as tentativas de reduzir a viscosidade das várias soluções de proteína mostraram que, dependendo da proteína contida na solução particular, diferentes aditivos resultam nas melhores estabilizações e reduções nas viscosidades.
[0092] Neste contexto, a melhor formulação para a proteína mAbD é uma composição compreendendo tampão de fosfato 5 mM, sacarose 146 mM, Polysorbat 80 0,05 g/L, cloridrato de L-ornitina 75 mM e p- toluenossulfonato de sódio 75 mM dissolvido em Milli-Q-Water e ajustado para pH 7,2.
[0093] Para MAbE, por sua vez, a melhor formulação é uma composição que compreende tampão de acetato 20 mM, Polissorbato 80 0,1 g/L, Meglumina 150 mM dissolvida em Milli-Q-Water e ajustada para pH 5,0, e para MAbF a melhor formulação é uma composição que compreende tampão de acetato 20 mM, sacarose 205 mM, meglumina 75 mM, sal de sódio do ácido D-glicônico 75 mM dissolvido em Milli-Q- Water e ajustado para pH 5,5. Modalidades Preferidas:
[0094] As modalidades particularmente preferidas da presente invenção consistem na adição de excipientes selecionados do grupo que consiste em meglumina, ornitina, p-toluenossulfonato de sódio, ácido benzenossulfônico, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico, carnitina e succinato, sozinho ou em combinação, para soluções de proteína altamente concentradas como descrito acima para redução da viscosidade. Particularmente preferível, a adição de meglumina em combinação com ácido benzenossulfônico ou com ácido p-toluenossulfônico de sódio como contraíon leva a boas reduções de viscosidade. Em outra forma de realização preferida da presente invenção, a ornitina em combinação com ácido benzenossulfônico ou com ácido p-toluenossulfônico de sódio como contra-íon conduz também a boas reduções de viscosidade. Consequentemente, a redução da viscosidade em soluções concentradas de proteína por Meg > Meg-p-toluenossulfonato de sódio > p-toluenossulfonato de sódio > ácido benzenossulfônico > ornitina > todas as outras combinações destes excipientes são preferidas.
[0095] A formulação de preparações de solução e liofilização pode ser realizada pelos métodos descritos acima e descritos nos exemplos seguintes.
[0096] A presente descrição permite que alguém versado na técnica pratique a presente invenção de forma abrangente. Mesmo sem comentários adicionais, presume-se, portanto, que uma pessoa versada na técnica será capaz de utilizar a descrição acima no escopo mais amplo.
[0097] Embora a invenção tenha sido descrita em conexão com modalidades preferidas, deve ser entendido que várias modificações, adições e alterações podem ser feitas à invenção por alguém versado na técnica sem se afastar do espírito e escopo da invenção conforme definido nas reivindicações anexas.
[0098] Se algo não estiver claro, entende-se que as publicações e literatura de patentes citadas e conhecidas do artesão devem ser consultadas. Consequentemente, os documentos citados são considerados como parte do conteúdo de descrição da presente descrição e são incorporados neste documento por referência.
[0099] Para melhor compreensão e a fim de ilustrar a invenção, exemplos estão presentes abaixo, os quais estão dentro do escopo de proteção da presente invenção. Esses exemplos também servem para ilustrar possíveis variantes.
[00100] Além disso, é desnecessário dizer para alguém versado na técnica que, tanto nos exemplos dados como também no restante da descrição, as quantidades de componentes presentes nas composições sempre somam apenas 100% em peso ou % em mol, com base na composição como um todo, e não pode exceder esta porcentagem, mesmo que valores mais elevados possam surgir das faixas percentuais indicadas. A menos que indicado de outra forma, os dados % são, portanto, % em peso ou % molar, com exceção das relações, que são mostradas nos dados de volume.
Exemplos Exemplo 1: Efeito de redução da viscosidade de meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico em soluções de proteína altamente concentradas - Exemplo 1A) A viscosidade de mAbA a uma concentração de proteína de 260 mg/ml é significativamente reduzida por meglumina, cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio, mas não por ácido benzenossulfônico a 50 mM. - Exemplo 1B) Devido à mudança ambiental do tampão e do pH, a viscosidade do mAbA também é significativamente reduzida pelo ácido benzenossulfônico como excipiente (a 150 mM). - Exemplo 1C) A viscosidade de mAbB a uma concentração de proteína de 200 mg/ml mostra uma viscosidade significativamente reduzida por meglumina, cloridrato de L-ornitina e p- toluenossulfonato de sódio a 500 mM. - Exemplo 1D) para mAbC, o excipiente ácido benzenossulfônico exibe um claro efeito de redução da viscosidade a 150 mM.
Para os outros excipientes investigados, também foi encontrado um efeito redutor. - Exemplo 1E) para a proteína de fusão 'FusãoA' apenas um efeito ligeiramente redutor de viscosidade foi encontrado para todos os excipientes.
Apenas o ácido benzenossulfônico em uma concentração de 50 mM mostra uma redução mais forte.
Exemplo 1 A) Efeito de redução da viscosidade de meglumina, cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio em solução de mAbA altamente concentrada (260 mg/ml) formulado em um tampão de acetato 25 mM pH 5,0 mostrado na Figura 1. Preparação do tampão: - Tri-hidrato de Acetato de Sódio 25 mM e Ácido Glacial 25 mM foram dissolvidos em Milli-Q-Water e o pH foi ajustado para 5,0 (± 0,1) usando HCl ou NaOH, se necessário.
Preparação da amostra: - Soluções de excipiente de 50 mM de meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico foram preparadas em tampão Acetato 25 mM pH 5,0. O pH foi ajustado usando HCl ou NaOH, se necessário. - Uma solução concentrada de mAbA contendo o excipiente relevante foi preparada com filtros ultracentrífugos (30 kDa de MWCO) trocando o tampão pela solução de excipiente relevante acima e concentrando a proteína reduzindo o volume da solução. Posteriormente, a solução concentrada de proteína foi diluída para 260 mg/ml usando a solução de excipiente apropriada acima. Medições de Viscosidade: - A tecnologia m-VROCTM (RheoSense, San Ramon, California, USA) foi usada para medições de viscosidade.
[00101] As medidas foram realizadas com seringa de 500 µl e taxa de cisalhamento de 5000 s-1. O volume de amostra necessário foi de 200 µl e as amostras foram testadas em triplicata. Exemplo 1 B) Efeito de redução da viscosidade de meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico em uma solução de mAbA altamente concentrada (260 mg/mL) formulada em solução salina tamponada com fosfato (PBS) pH 7,0 mostrado na Figura 2 . Preparação do tampão: - O tampão continha 0,01 M de tampão de fosfato, 0,0027 M de cloreto de potássio e 0,137 M de cloreto de sódio dissolvido em Milli-Q-Water. O pH foi ajustado para 7,0 (± 0,1) usando HCl ou NaOH, se necessário. Preparação da amostra: - Soluções de excipiente de 150 mM de meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico foram preparadas em PBS pH 7,0. O pH foi ajustado usando HCl ou NaOH, se necessário. - Uma solução concentrada de mAbA contendo o excipiente relevante foi preparada com filtros ultracentrífugos (30 kDa de MWCO) trocando o tampão pela solução de excipiente relevante acima e concentrando a proteína reduzindo o volume da solução. Posteriormente, a solução concentrada de proteína foi diluída para 260 mg/mL usando a solução de excipiente apropriada acima.
[00102] A medição da viscosidade foi realizada conforme descrito no Exemplo 1 A). Exemplo 1 C) efeito de redução da viscosidade de meglumina, cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio em uma solução de mAbB altamente concentrada (200 mg/mL) formulada em PBS pH 7,0 mostrado na Figura 3. Preparação do tampão: - A preparação do tampão foi realizada conforme descrito no Exemplo 1 B). Preparação da amostra: - Soluções de excipiente de 500 mM de meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico foram preparadas em PBS pH 7,0. O pH foi ajustado usando HCl ou NaOH, se necessário. - Uma solução concentrada de mAbB contendo o excipiente relevante foi preparada com filtros ultracentrífugos (30 kDa de MWCO) trocando o tampão pela solução de excipiente relevante acima e concentrando a proteína por reduzindo o volume da solução. Em seguida, a solução concentrada de proteína foi diluída para 200 mg/mL usando a solução de excipiente apropriada acima.
[00103] A medição da viscosidade foi realizada conforme descrito no Exemplo 1 A).
Exemplo 1 D) Efeito de redução da viscosidade de meglumina, L- ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico para mAbC formulado a 260 mg/mL (+/- 2,7 %) em tampão de fosfato pH 7 mostrado na Figura 4. Preparação do tampão: - Foi preparado um tampão de fosfato contendo fosfato de sódio 100 mM, cloreto de potássio 2,7 mM e cloreto de sódio 137 mM. Preparação da amostra: - Soluções de excipiente de 150 mM de meglumina, L- ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico foram preparadas no tampão de fosfato. O valor do pH foi verificado e ajustado para 7,0 (+/- 0,1) usando ácido clorídrico ou hidróxido de sódio, se necessário. - Uma solução de proteína de mAbC (aprox. 147 kDa) a 71 mg/ml foi lavada e concentrada em tampão de fosfato pH 7 contendo 150 mM do excipiente correspondente. - A lavagem e concentração de mAbC para 260 mg/ml foram feitas usando unidades de filtro ultracentrífugo com MWCO de 30 kDa.
[00104] O método mVROC foi realizado conforme descrito no Exemplo 1 A). Exemplo 1 E) Efeito de redução da viscosidade de meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico para fusão A formulado a 200 mg/ml (+/- 5,0%) em tampão de fosfato pH 7 mostrado na Figura 5. Preparação do tampão: - Foi preparado um tampão de fosfato contendo fosfato de sódio 100 mM, cloreto de potássio 2,7 mM e cloreto de sódio 137 mM.
Preparação da amostra: - Soluções de excipiente de 50 mM de meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico foram preparadas em tampão de fosfato. O valor do pH foi verificado e ajustado para 7,0 (+/- 0,1) usando ácido clorídrico ou hidróxido de sódio, se necessário. - Uma solução proteica de FusãoA (aprox. 51 kDa) a 50 mg/ml foi lavada e concentrada em tampão de fosfato pH 7 contendo 300 mM do excipiente correspondente. - A lavagem e concentração de mAbD para 200 mg/ml foram feitas usando unidades de filtro ultracentrífugo com MWCO de 30 kDa a 2.000 x g.
[00105] O método mVROC foi realizado conforme descrito no Exemplo 1 A). Exemplo 2: Efeito de redução da viscosidade da combinação de dois excipientes (meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico) em soluções de proteína altamente concentradas - Exemplo 2 A) mostra uma redução da viscosidade de mAbA a uma concentração de 270 mg/ml (+/- 2,6 %) usando combinações de meglumina e ácido benzenossulfônico ou meglumina e p-toluenossulfonato de sódio (cada um presente a 75 mM na PBS pH7). - Exemplo 2 B) exibe um efeito de redução da viscosidade mais forte em mAbA usando a combinação de excipiente de cloridrato de L-ornitina com ácido benzenossulfônico (ambos presentes a 75 mM no tampão). A combinação de cloridrato de L- ornitina e p-toluenossulfonato de sódio também tem um efeito redutor. - Exemplo 2 C) mostra uma redução clara da viscosidade de mAbB a uma concentração de 220 mg/ml em um tampão PBS a pH 7 para todas as combinações de excipientes investigadas. A maior influência foi causada pela combinação de meglumina e p-toluenossulfonato de sódio (ambos 75 mM) reduzindo a viscosidade do mAbB puro em PBS de 125 mPa*s para 37,7 mPa*s. Exemplo 2 A) Efeito de redução da viscosidade da combinação dos excipientes Meglumina e ácido benzenossulfônico (1:1), Meglumina e p-toluenossulfonato de sódio (1:1) a uma concentração cumulativa de 150 mM em uma solução de mAbA altamente concentrada (270 mg/ml) formulado em PBS pH 7,0 mostrado na Figura 6. Preparação do tampão: - A preparação do tampão foi realizada conforme descrito no Exemplo 1 B). Preparação da amostra: - Soluções de excipiente contendo meglumina 75 mM e ácido benzenossulfônico 75 mM ou p-toluenossulfonato de sódio 75 mM foram preparadas em PBS pH 7,0. O pH foi ajustado com ácido clorídrico ou hidróxido de sódio, se necessário. - Uma solução concentrada de mAbA contendo a combinação de excipiente relevante foi preparada com filtros ultracentrífugos (30 kDa de MWCO) trocando o tampão pela solução de combinação de excipiente relevante acima e concentrando a proteína reduzindo o volume da solução. Posteriormente, a solução concentrada de proteína foi diluída para 270 mg/ml usando a solução de combinação de excipiente apropriada acima.
[00106] A medição da viscosidade foi realizada conforme descrito no Exemplo 1 A). Exemplo 2 B) Efeito de redução da viscosidade da combinação dos excipientes cloridrato de L-ornitina e ácido benzenossulfônico (1: 1), cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio (1:1) a uma concentração cumulativa de 150 mM em uma solução de mAbA altamente concentrada (270 mg/ml) formulada em PBS pH 7,0 mostrado na Figura 7. Preparação do tampão: - A preparação do tampão foi realizada conforme descrito no Exemplo 1 B). Preparação da amostra: - Soluções de excipientes contendo cloridrato de L- ornitina 75 mM e ácido benzenossulfônico 75 mM ou p- toluenossulfonato de sódio 75 mM foram preparados em PBS pH 7,0. O pH foi ajustado com ácido clorídrico ou hidróxido de sódio, se necessário. - A preparação da amostra restante foi realizada conforme descrito no Exemplo 2 A).
[00107] A medição da viscosidade foi realizada conforme descrito no Exemplo 1 A). Exemplo 2 C) Efeito de redução da viscosidade da combinação dos excipientes cloridrato de L-ornitina e ácido benzenossulfônico (1:1), cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio (1:1), meglumina e ácido benzenossulfônico (1:1), meglumina e p- toluenossulfonato de sódio (1:1) em uma solução de mAbB altamente concentrada (220 mg/mL) formulada em PBS pH 7,0 mostrado nas Figuras 8 a 10. Preparação do tampão: - A preparação do tampão foi realizada conforme descrito no Exemplo 1 B). Preparação da amostra: - Soluções de excipiente de cloridrato de L-ornitina 75 mM e ácido benzenossulfônico 75 mM, cloridrato de L-ornitina 75 mM e p-toluenossulfonato de sódio 75 mM, meglumina 75 mM e ácido benzenossulfônico 75 mM, meglumina 75 mM e p-toluenossulfonato de sódio 75 mM foram preparados em PBS pH 7,0. O pH foi ajustado com ácido clorídrico ou hidróxido de sódio, se necessário. - Uma solução concentrada de mAbB contendo a combinação de excipiente relevante foi preparada com filtros ultracentrífugos (30 kDa de MWCO) trocando o tampão pela solução de combinação de excipiente relevante acima e concentrando a proteína reduzindo o volume da solução. Em seguida, a solução concentrada de proteína foi diluída para 220 mg/mL usando a solução de combinação de excipiente apropriada acima.
[00108] A medição da viscosidade foi realizada conforme descrito no Exemplo 1 A). Exemplo 3 Preparação do tampão:
[00109] O tampão contém tampão de fosfato 5 mM, sacarose 146 mM, Polysorbat 80 0,05 g/L dissolvido em Milli-Q-Water. O pH é ajustado para pH 7,2 (± 0,05) usando HCl ou NaOH, se necessário. Preparação da amostra:
[00110] As soluções de excipiente são preparadas com uma concentração de 150 mM no tampão de fosfato mencionado acima.
[00111] As combinações de dois excipientes são preparadas com uma concentração equimolar de 75 mM para cada excipiente no tampão de fosfato.
[00112] Uma solução concentrada de MAbD é preparada usando um filtro ultracentrífugo (30 kDa de MWCO) por troca de tampão com a respectiva solução de excipiente. A solução concentrada de proteína é diluída para 100 mg/mL com a solução de excipiente correspondente acima.
[00113] A medição da viscosidade é realizada conforme descrito no Exemplo 1 A).
Exemplo 4 Preparação do tampão:
[00114] A solução tampão contendo tampão de acetato 20 mM, Polysorbat 80 0,1 g/L é preparada por dissolução em Milli-Q-Water. O pH é ajustado para pH 5,0 (± 0,05) usando HCl ou NaOH, se necessário. Preparação da amostra:
[00115] As soluções de excipiente são preparadas com uma concentração de 150 mM no tampão de acetato como mencionado acima.
[00116] As combinações de dois excipientes são preparadas com uma concentração equimolar de 75 mM de cada excipiente no referido tampão de acetato.
[00117] Uma solução concentrada de MAbE é preparada usando um filtro ultracentrífugo (30 kDa de MWCO) por troca de tampão com a respectiva solução de excipiente. A solução concentrada de proteína é diluída para uma concentração de 170 mg/mL com a solução de excipiente correspondente mencionada acima.
[00118] A medição da viscosidade é realizada conforme descrito no Exemplo 1 A). Exemplo 5 Preparação do tampão:
[00119] O tampão continha tampão de acetato 20 mM, sacarose 205 mM dissolvida em Milli-Q-Water. O pH foi ajustado para pH 5,5 (± 0,05) usando HCl ou NaOH, se necessário. Preparação da amostra:
[00120] As soluções de excipiente são preparadas com uma concentração de 150 mM no tampão de acetato mencionado acima.
[00121] As combinações de dois excipientes foram preparadas com uma concentração equimolar de 75 mM para cada excipiente no tampão de acetato.
[00122] Uma solução concentrada de MAbF é preparada usando um filtro ultracentrífugo (30 kDa de MWCO) por troca de tampão com a respectiva solução de excipiente. A solução concentrada de proteína é diluída para 180 mg/mL com a solução de excipiente correspondente acima.
[00123] A medição da viscosidade é realizada conforme descrito no Exemplo 1 A).
[00124] Lista de Figuras:
[00125] Figura 1 Exemplo 1 A) Efeito de redução da viscosidade de meglumina, cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio em solução de mAbA altamente concentrada (260 mg/ml) formulado em um tampão de acetato 25 mM pH 5,0.
[00126] Figura 2 Exemplo 1 B) Efeito de redução da viscosidade de meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico em uma solução de mAbA altamente concentrada (260 mg/mL) formulada em solução salina tamponada com fosfato (PBS) pH 7,0.
[00127] Figura 3 Exemplo 1 C) Efeito de redução da viscosidade de meglumina, cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio em uma solução de mAbB altamente concentrada (200 mg/mL) formulada em PBS pH 7,0.
[00128] Figura 4 Exemplo 1 D) Efeito de redução da viscosidade de meglumina, L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico para mAbC formulado a 260 mg/mL (+/- 2,7 %) em tampão de fosfato pH 7.
[00129] Figura 5 Exemplo 1 E) Efeito de redução da viscosidade de meglumina, cloridrato de L-ornitina, p-toluenossulfonato de sódio e ácido benzenossulfônico para fusão A formulado a 200 mg/ml (+/- 5,0%) em tampão de fosfato pH 7.
[00130] Figura 6 Exemplo 2 A) Efeito de redução da viscosidade da combinação dos excipientes Meglumina e ácido benzenossulfônico (1:1), Meglumina e p-toluenossulfonato de sódio (1:1) a uma concentração cumulativa de 150 mM em uma solução de mAbA altamente concentrada (270 mg/ml) formulada em PBS pH 7,0.
[00131] Figura 7 Exemplo 2 B) Efeito de redução da viscosidade da combinação dos excipientes cloridrato de L-ornitina e ácido benzenossulfônico (1:1), cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio (1:1) a uma concentração cumulativa de 150 mM em uma solução de mAbA altamente concentrada (270 mg/ml) formulada em PBS pH 7,0.
[00132] Figura 8 Exemplo 2 C) Efeito de redução da viscosidade da combinação dos excipientes cloridrato de L-ornitina e ácido benzenossulfônico (1:1), cloridrato de L-ornitina e p-toluenossulfonato de sódio (1:1), meglumina e ácido benzenossulfônico (1:1), meglumina e p-toluenossulfonato de sódio (1:1) em uma solução de mAbB altamente concentrada (220 mg/mL) formulada em PBS pH 7,0.
[00133] Figura 9: Exemplo 3) Efeito de redução da viscosidade da combinação dos excipientes meglumina e ácido glicônico (1:1), meglumina e ácido glicurônico (1:1), ornitina e ácido glicônico (1:1), ornitina e ácido glicurônico (1:1), em uma solução de mAbD altamente concentrada (100 mg/ml) formulada em um tampão de fosfato pH 7,2.
[00134] Figura 10: Efeito de redução da viscosidade de uma solução concentrada de proteína de mAbE que é diluída a uma concentração de 170 mg/mL com uma solução compreendendo uma combinação de dois excipientes com uma concentração equimolar de 75 mM para cada excipiente em um tampão de acetato (pH 5.0) compreendendo Polysorbat 80 como descrito no Exemplo 4.
[00135] Figura 11 Efeito de redução da viscosidade de uma solução concentrada de proteína de mAbD que é diluída para uma concentração de 100 mg/mL com uma solução compreendendo uma combinação de dois excipientes com uma concentração equimolar de 75 mM para cada excipiente no tampão de fosfato (pH 7, 2) compreendendo sacarose e Polysorbat 80 como descrito no Exemplo
3.
[00136] Figura 12 Efeito de redução da viscosidade de uma solução concentrada de proteína de mAbE que é diluída a uma concentração de 170 mg/mL com uma solução compreendendo uma combinação de dois excipientes com uma concentração equimolar de 75 mM para cada excipiente em um tampão de acetato (pH 5,0) compreendendo Polysorbat 80 como descrito no Exemplo 4.
[00137] Figura 13 Efeito de redução da viscosidade de uma solução concentrada de proteína de mAbF que é diluída a uma concentração de cerca de 180 mg/ml com uma solução compreendendo uma combinação de dois excipientes com uma concentração equimolar de 75 mM para cada excipiente em uma solução tampão de acetato (pH 5.5) compreendendo sacarose conforme descrito no Exemplo 5.
[00138] Figura 14 Estudo de estabilidade para mAbD a 25°C e 60% de UR na presença de vários excipientes ao longo de 12 semanas. (Abreviaturas: MG = meglumina; OM = monocloridrato de L-ornitina; NTS = p-toluenossulfonato de sódio; w/o = sem, isso significa formulação de mercado sem excipiente).
Claims (33)
1. Método para reduzir a viscosidade de uma formulação líquida, caracterizado pelo fato de que compreende uma proteína farmaceuticamente ativa em uma concentração na faixa de pelo menos 50 mg/ml até 300 mg/ml, compreendendo a etapa de combinar a solução de proteína com uma concentração de redutor de viscosidade de um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato ou suas misturas.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a proteína terapêutica é selecionada a partir do grupo de anticorpos, fragmentos de anticorpos, minicorpo, um anticorpo modificado, molécula semelhante a anticorpo e proteína de fusão.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que meglumina e ácido benzenossulfônico como contraíon ou meglumina e p-toluenossulfônico de sódio como contraíon são adicionados como excipientes redutores de viscosidade.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que ornitina e ácido benzenossulfônico como contraíon ou ornitina e ácido p-toluenossulfônico de sódio como contraíon são adicionados como excipientes redutores de viscosidade.
5. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que meglumina e ornitina são adicionadas como excipiente redutor de viscosidade.
6. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que meglumina ou ornitina ou carnitina e um contraíon selecionado a partir do grupo ácido benzenossulfônico, ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato são adicionados como excipientes redutores de viscosidade.
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 6, caracterizado pelo fato de que os excipientes redutores de viscosidade são adicionados em quantidades equimolares.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a viscosidade da formulação é reduzida em pelo menos 12%.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a viscosidade da formulação é reduzida em pelo menos 50%.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a viscosidade da formulação é reduzida em pelo menos 75%.
11. Formulação farmacêutica, produzida pelo método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que tem uma viscosidade reduzida.
12. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que compreende uma proteína terapêutica em uma concentração de pelo menos 50 mg/ml até 300 mg/ml e um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p-toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato ou suas misturas.
13. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizada pelo fato de que meglumina e ácido benzenossulfônico como contraíon são compreendidos como excipientes redutores de viscosidade.
14. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizada pelo fato de que meglumina e ácido p-toluenossulfônico de sódio como contraíon são adicionados como excipientes redutores de viscosidade.
15. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizada pelo fato de que ornitina e ácido benzenossulfônico como contra-íon são adicionados como excipiente redutor de viscosidade.
16. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizada pelo fato de que ornitina e ácido p-toluenossulfônico de sódio como contraíon são adicionados como excipientes redutores de viscosidade.
17. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 16, caracterizada pelo fato de que os excipientes redutores de viscosidade são adicionados em quantidades equimolares.
18. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 17, caracterizada pelo fato de que a concentração dos excipientes é inferior a cerca de 500 mM, especialmente inferior a 200 mM.
19. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 18, caracterizada pelo fato de que possui um pH na faixa entre cerca de 4,5 a cerca de 8,0.
20. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 18, caracterizada pelo fato de que possui um pH na faixa entre cerca de 5,4 a cerca de 7,9.
21. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 18, caracterizada pelo fato de que possui um pH de cerca de 4,6 a cerca de 5,4.
22. Método de preparação de um pó liofilizado, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de liofilizar a composição farmacêutica, como definida em qualquer uma das reivindicações 11 a 21.
23. Pó liofilizado, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que compreende uma proteína terapêutica e um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em meglumina, ornitina, carnitina, ácido benzenossulfônico e ácido p- toluenossulfônico de sódio, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido aminocaproico e succinato ou suas misturas, em que o excipiente está presente em uma concentração peso:peso eficaz para reduzir a viscosidade após a reconstituição com um diluente.
24. Pó liofilizado, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, caracterizado pelo fato de que o excipiente está presente em uma concentração entre cerca de 100 μg por mg de proteína terapêutica a cerca de 1 mg por mg de proteína terapêutica.
25. Pó liofilizado, de acordo com a reivindicação 22, 23 ou 24, caracterizado pelo fato de que o excipiente está presente em uma concentração entre cerca de 200 μg a cerca de 500 μg por mg de proteína terapêutica a cerca de 1 mg por mg de proteína terapêutica.
26. Método para reconstituir um pó liofilizado, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de adicionar um diluente aquoso estéril.
27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, 22 ou 26, caracterizado pelo fato de que a proteína terapêutica é selecionada a partir do grupo de anticorpos, fragmentos de anticorpo, minicorpo, um anticorpo modificado, molécula semelhante a anticorpo e proteína de fusão.
28. Formulação farmacêutica ou composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 18, caracterizada pelo fato de que a proteína terapêutica é selecionada a partir do grupo de anticorpos, fragmentos de anticorpos, minicorpo, um anticorpo modificado, molécula semelhante a anticorpo e proteína de fusão.
29. Pó liofilizado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 26, caracterizado pelo fato de que a proteína terapêutica é selecionada a partir do grupo de anticorpos, fragmentos de anticorpo, minicorpo, um anticorpo modificado, molécula semelhante a anticorpo e proteína de fusão.
30. Kit caracterizado pelo fato de que compreende uma formulação farmacêutica, como definida na reivindicação 28, ou um pó liofilizado, como definido na reivindicação 29.
31. Kit, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que compreende preparações liofilizadas ou secas por pulverização de uma composição farmacêutica, obtenível por um método como definido em uma ou mais das reivindicações 1 a 9, que podem ser feitas em preparações de solução antes do uso.
32. Kit, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que compreende formulações liofilizadas ou secas por pulverização prontas para uso em uma placa de 96 cavidades.
33. Kit, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, para administração a pacientes, incluindo um recipiente, seringa e/ou outro dispositivo de administração com ou sem agulhas, bombas de infusão, injetores a jato, dispositivos de caneta, injetores transdérmicos ou outro injetor sem agulha e instruções.
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