BR112020016923A2 - Método para reverter ou atenuar lesão, ou fraqueza ou perda óssea, ou para evitar fraturas em um indivíduo, e, composição - Google Patents

Abstract

a presente invenção se refere a compostos e composições e suas aplicações como fármacos para atenuar lesão, ou fraqueza ou perda óssea ou para evitar fraturas ósseas. é exemplificado na presente invenção a administração, a um indivíduo, de uma dose terapeuticamente eficaz de (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina, ou um derivado de epicatequina, para atenuar lesão, ou fraqueza ou perda óssea ou para evitar fraturas ósseas.

Description

1 / 58 MÉTODO PARA REVERTER OU ATENUAR LESÃO, OU FRAQUEZA OU PERDA ÓSSEA, OU PARA EVITAR FRATURAS EM UM INDIVÍDUO, E, COMPOSIÇÃO

[001] São revelados na presente invenção compostos e composições e sua aplicação como fármacos para o tratamento, a prevenção ou a reversão de lesão em músculos esqueléticos ou cardíacos, para tratar ou evitar doenças relacionadas à estrutura e função do músculo esquelético ou cardíaco, e para induzir a regeneração ou reestruturação do músculo esquelético ou cardíaco como um meio de tratar doenças relacionadas a anormalidades na estrutura e função do músculo esquelético ou cardíaco em um indivíduo humano ou animal. Também são aqui revelados métodos para diagnosticar lesão ao músculo cardíaco ou esquelético e para diagnosticar o sucesso ou o fracasso de terapias concebidas para tratar, evitar, ou reverter lesões ao músculo esquelético ou cardíaco.

[002] A força e a resistência do músculo esquelético são essenciais para agarrar, transportar, andar, correr, carregar ou permitir inúmeras funções da vida cotidiana. A força e a resistência do músculo cardíaco são essenciais para a liberação ideal de oxigênio e de nutrientes a todos os tecidos contendo vasos sanguíneos e para a retirada de produtos residuais do metabolismo celular. A lesão ao músculo esquelético ou cardíaco ou doenças relacionadas à estrutura ou função anormal do músculo esquelético ou cardíaco, podem tornar as atividades normais da vida cotidiana difíceis ou impossíveis.

[003] Além disso, lesão a, ou a fraqueza do, músculo esquelético resulta, em geral, em uma perda de densidade óssea nos ossos aos quais aquele músculo é fixado. No caso de fraqueza muscular generalizada, a redução na densidade óssea pode ser generalizada, uma das causas da doença óssea conhecida como osteoporose. A formação óssea ou manutenção da densidade óssea saudável é o resultado líquido de dois processos celulares opostos. Os osteoblastos formam o osso; eles são derivados de células

2 / 58 precursoras de células mesenquimais. Os osteoclastos degradam o osso; eles são formados a partir de precursores de macrófagos. As doenças ósseas surgem quando estes dois componentes celulares de remodelagem óssea ficam em desequilíbrio. A ativação excessiva de osteoclastos ou a geração prejudicada de osteoblastos resulta em osteoporose, um estado no qual o osso é excessivamente suscetível a fraturas (Raggatt, L et al, 2010, Cellular and molecular mechanisms of bone remodeling, J Biol Chem 285: 25103-25108). Outra causa da osteoporose é a terapia anti-inflamatória crônica com glicocorticoides, que também enfraquece os músculos. Os corticosteróides induzem a ativação dos osteoclastos e estimulam a apoptose dos osteoblastos, alterando o equilíbrio da remodelação óssea para um estado de maior incidência de fraturas patológicas. As terapias atuais são limitadas no que diz respeito à eficácia, e consistem principalmente em agentes anabólicos e bisfosfonatos, como teriparatida. Ambas as classes de fármacos têm efeitos colaterais significativos e riscos de segurança, resultando em adesão insatisfatória dos pacientes a esses agentes. Existe uma necessidade significativa por agentes adicionais para tratar de forma segura e eficaz a osteoporose.

[004] Além dos glicocorticoides, outros fatores conhecidos para ativar os osteoclastos incluem membros da família do fator de crescimento transformante β, incluindo Ativina A e miostatina. A folistatina é uma proteína que serve como um inibidor de ocorrência natural de miostatina e Ativina A no que diz respeito a sua estimulação da regeneração muscular e, assim, evita ou reverte a atrofia muscular associada à miostatina e à Ativina A. Tem-se mostrado que a folistatina suprime a estimulação mediada por Ativina A do NFATc1, um regulador de osteoclastogênese (Kajita, T et al, 2018, Mechanisms involved in enhancement of osteoclast formation by activin-A, J Cell Biochem 119:6974-6985; Kawao, N et al, 2018 Role of follistatin in muscle and bone alterations induced by gravity change in mice, J

3 / 58 cell Physiol 233:1191-1201)

[005] A lesão ao músculo esquelético ou cardíaco pode ocorrer como resultado de mutações genéticas em proteínas que são críticas para a estrutura e função do músculo esquelético ou músculo cardíaco, fluxo sanguíneo inadequado ou interrompido, inatividade devido a lesões ou inflamação nas articulações, como é visto com a artrite, exposição excessiva à lesão por oxidação como resultado de metabolismo celular defeituoso ou fluxo sanguíneo inadequado, exposição a substâncias orgânicas ou inorgânicas tóxicas, como glicose elevada, metais pesados, produtos inflamatórios, trauma devido a lesão ou atividade excessiva, ou exposição a certos medicamentos como estatinas, corticoesteroides, ou quimioterapia, entre outras causas. Exemplos de doenças inflamatórias associadas a distúrbios musculares incluem polimiosite, polimialgia reumática e lupus eritematoso sistêmico.

[006] A lesão ao músculo esquelético, e a consequente fraqueza ou atrofia, pode ocorrer como resultado de lesão ou doenças dos neurônios que subservem a função muscular. A inervação adequada é essencial para a saúde e a função muscular esquelética. As doenças neurodegenerativas sensíveis ao tratamento com agentes estimulantes da força muscular e saúde neuromuscular incluem esclerose lateral amiotrófica (ALS - amyotrophic lateral sclerosis), doença de Parkinson, doença de Huntington, lesão ou anormalidade da medula espinhal, e neuropatias periféricas e centrais.

[007] Atualmente, as terapias dão ênfase à prevenção, com o uso de stents para melhorar o fluxo sanguíneo através de áreas de estreitamento vascular. Existem intervenções gerais de suporte para ajudar a auto-reparação do músculo, como a provisão nutricional de precursores de proteína muscular como aminoácidos ou creatina. As terapias atuais podem tratar a doença subjacente associada à disfunção do músculo esquelético ou cardíaco sem tratar diretamente as células musculares em si. A única terapia aceita direcionada aos próprios músculos é o exercício. Demonstrou-se que a

4 / 58 ativação regular e moderada das células musculares pode melhorar a estrutura e a função das células musculares cardíacas e esqueléticas. No entanto, com frequência isso é inadequado na restauração da saúde ou função da célula muscular.

[008] O que complica as terapias potenciais é o fato de que nem as células do músculo esquelético nem as células do músculo cardíaco são capazes de proliferar suficientemente para substituir as células musculares que já foram danificadas ou destruídas. Pode haver alguma capacidade limitada das células-tronco para proliferar, mas em geral, isso não é suficiente para regenerar o músculo de substituição de forma funcionalmente significativa. O músculo esquelético é conhecido por conter células satélite primitivas, que podem ativar, ampliar e se diferenciar em tecido muscular esquelético. O papel das células satélites em substituir células cardíacas atualmente não é bem compreendido. A reparação dos músculos é intensificada pela expressão celular muscular da folistatina, o que permite a ativação e diferenciação de células precursoras musculares em células de músculo esquelético diferenciadas e maduras. A reparação de células musculares ou a geração de células musculares novas e diferenciadas é inibida pela expressão de um fator regulador negativo conhecido como miostatina.

[009] São revelados na presente invenção métodos para o tratamento profilático e/ou terapêutico de disfunção, lesão ou doenças do músculo esquelético ou cardíaco em um paciente pela administração de epicatequina, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró- fármaco do mesmo, ou combinações dos mesmos. Os métodos e composições aqui descritos podem auxiliar na prevenção da diminuição da função do músculo esquelético e cardíaco, recuperação da saúde ou função muscular esquelética ou cardíaca, ou regeneração funcionalmente significativa das células ou funções do músculo esquelético ou cardíaco.

[0010] Em certas modalidades, a presente invenção compreende a

5 / 58 administração de um composto ou composição aqui revelada em quantidade eficaz para estimular a função, recuperação, ou regeneração de células musculares esqueléticas ou cardíacas. A estimulação da função, recuperação ou regeneração de células musculares pode compreender expressão aumentada de uma ou mais das proteínas que têm funções contráteis, regulatórias, transcricionais ou de fixação. A estimulação da função, recuperação, ou regeneração da função da célula muscular pode compreender aumento do número e da função mitocondrial. Em certas modalidades, o composto ou a composição compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró- fármaco do mesmo.

[0011] Em modalidades adicionais, a presente invenção fornece métodos e composições para a prevenção ou tratamento de eventos adversos ou doenças associadas ao número ou à função insuficiente de células musculares cardíacas ou musculares esqueléticas. Os métodos compreendem a administração a um indivíduo que precise do mesmo, de um ou mais compostos ou composições aqui revelados. Em modalidades adicionais o método reduz os sintomas da insuficiência de número ou função das células musculares cardíacas ou esqueléticas. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

[0012] Em certas modalidades, são aqui revelados métodos e composições para o tratamento de doenças associadas à perda de número, função, ou correta organização interna otimamente eficiente de células musculares cardíacas ou células musculares esqueléticas. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição

6 / 58 compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

[0013] Em modalidades adicionais, são aqui revelados métodos e composições para o tratamento da função prejudicada do músculo esquelético ou cardíaco devido ao envelhecimento, obesidade, desuso ou inatividade, exposição a agentes nutricionais potencialmente tóxicos como frutose, ou exposição à nutrição inadequada como fome ou desnutrição. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

[0014] Em modalidades adicionais, são revelados na presente invenção métodos e composições para o tratamento de efeitos colaterais relacionados ao músculo de treinamento ou competição atlética incluindo dor, câimbras, fraqueza, dor ou lesão. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

[0015] Em modalidades adicionais, são aqui revelados métodos e composições para o tratamento de doenças musculares esqueléticas ou cardíacas associadas à isquemia, ao fluxo sanguíneo inadequado ou prejudicado. Exemplos de tais estados incluem, mas não se limitam a, ateroesclerose, traumas, diabetes, estenose vascular, doença arterial periférica, vasculopatia e vasculite. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade

7 / 58 terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

[0016] Em modalidades adicionais, são aqui revelados métodos e composições para o tratamento de doenças associadas a distúrbios genéticos que afetam direta ou indiretamente o número, a estrutura ou a função das células do músculo cardíaco ou células do músculo esquelético. Exemplos de tais estados incluem, mas não se limitam ao conjunto de doenças amplamente classificadas como distrofias musculares e ataxia de Friedreich. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

[0017] Em modalidades adicionais, são aqui revelados métodos e composições para o tratamento terapêutico de doenças associadas ao controle neurológico prejudicado de atividade muscular resultando em anormalidades na estrutura e função de músculos esqueléticos devido à inatividade, contratilidade aberrante ou estados contraídos. Estes incluem, mas não se limitam aos estados associados à atividade neurológica ausente, diminuída ou anormal, incluindo síndromes de denervação periférica, trauma, esclerose lateral amiotrófica, meningite e anormalidades estruturais da coluna vertebral, quer sejam congênitas ou adquiridas. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

[0018] Em certas modalidades, são aqui revelados métodos e composições para o tratamento de doenças associadas à perda de número,

8 / 58 perda de função, ou perda da organização interna correta e otimamente eficiente de células musculares esqueléticas ou células musculares cardíacas. Tais doenças podem ocorrer em um estado de debilidade muscular funcionalmente significativa, o que, em sua forma mais pronunciada, é denominado sarcopenia. A sarcopenia pode ser secundária a uma série de doenças, incluindo envelhecimento, diabetes ou outras condições metabólicas anormais, infecção, inflamação, doença autoimune, disfunção cardíaca, ou síndromes graves de desuso ou inatividade associadas à artrite. Exemplos destas doenças incluem, mas não se limitam à insuficiência cardíaca congestiva, envelhecimento, miocardite, miosite, polimialgia reumática, polimiosite, HIV, câncer e/ou os efeitos colaterais da quimioterapia para atacar o câncer, desnutrição, envelhecimento, erros inatos do metabolismo, trauma, e acidente vascular cerebral ou outros tipos de problemas neurológicos. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró- fármaco do mesmo.

[0019] Em certas modalidades, são revelados na presente invenção métodos e composições para uso em combinação com exercícios ou sequências programáticas ou intensidades de exercício para otimizar os métodos para o tratamento profilático ou terapêutico de doenças ou distúrbios associados à perda de número, perda de função ou perda da organização interna correta e otimamente eficiente de células de músculo esquelético ou de músculo cardíaco. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

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[0020] Em certas modalidades, são aqui revelados métodos e composições para uso para melhorar o desempenho e a resistência desportiva, para construir formato e resistência muscular e facilitar a recuperação dos efeitos colaterais de treinamento ou competição relacionados ao músculo, como dor, fraqueza, câimbra ou lesão. Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

[0021] Em certas modalidades, são aqui revelados métodos e composições para uso para evitar, melhorar, ou reverter lesão, fraqueza ou dor associada à administração de certos medicamentos, incluindo, mas não se limitando a, corticoesteroides, como prednisona, metil prednisona, ou derivados halogenados dessas substâncias, agentes quimioterápicos, como doxorubicina ou metotrexato, e inibidores de HMG co-redutase, conhecidos como estatinas, que são frequentemente associados a doenças musculares ou miopatia, inclusive: Advicor'" (liberação prolongada de niacina/lovastatina), Altoprev'" (liberação prolongada de lovastatina), Caduet'" (amlodipina e atorvastatina), Crestor'" (rosuvastatina), Juvisync'" (sitagliptina/sinvastatina), Lescol'" (fluvastatina), Lescol XL (liberação prolongada de fluvastatina), Lipitor'" (atorvastatina), Compactin (mevastatina), Livalo® (pitavastatina), Mevacor'" (lovastatina), Pravachol'" (pravastatina), Simcor'" (liberação prolongada de niacina/sinvastatina), Vytorin'" (ezetimibe/sinvastatina), e Zocor" (sinvastatina). Em certas modalidades, o método compreende a administração, ou a composição compreende, uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo.

[0022] Em certas modalidades, são aqui revelados métodos e

10 / 58 composições para uso para evitar, melhorar, ou reverter lesões musculares associadas a medicamentos que danifiquem a mitocôndria e/ou causem miopatia como uma consequência secundária.

[0023] Em certas modalidades, um indivíduo é selecionado para tratamento com um composto ou composição aqui revelada com base na ocorrência de uma ou mais manifestações fisiológicas de lesão ou disfunção do músculo esquelético ou cardíaco no indivíduo. Tais manifestações incluem elevações em biomarcadores conhecidos por estarem relacionados a uma lesão no ao músculo esquelético ou cardíaco. Exemplos destes biomarcadores incluem, mas não se limitam a, níveis plasmáticos elevados de enzimas ou proteínas do músculo cardíaco ou esquelético, como mioglobina, troponina ou creatina fosfoquinase, acidose láctica e creatinina sérica elevada.

[0024] Em certas modalidades, um composto ou uma composição, conforme aqui revelado, é administrado em uma quantidade que estimula o número ou função aumentada de células musculares esqueléticas ou células musculares contráteis. Esse estímulo das células musculares pode compreender a estimulação de um ou mais aspectos da função da célula muscular, incluindo a divisão celular, regeneração de células musculares, ativação de células satélites musculares e sua diferenciação em células musculares adultas, recuperação da lesão, número ou função aumentada de mitocôndrias ou processos que servem à função mitocondrial, aumento da expressão de proteínas que contribuem para contratilidade, regulação de processos bioquímicos ou translacionais, mitoses, ou transdução de energia mecânica através de distrofina ou outros processos de fixação. Os métodos e composições aqui descritos podem auxiliar na prevenção das consequências das lesões ou disfunções musculares que ainda não tenham ocorrido, bem como fornecer terapia ativa de lesões, disfunção ou doenças musculares que já tenham ocorrido.

[0025] Em certas modalidades, são aqui revelados métodos para

11 / 58 utilizar proteínas do músculo cuja expressão seja estimulada pela administração de compostos ou composições aqui revelados como biomarcadores de diagnóstico, por meio dos quais se determine o tempo e o grau de resposta muscular aos métodos terapêuticos e composições aqui reveladas. Tais biomarcadores podem ser determinados pela medição no tecido, plasma, sangue, ou urina, das próprias proteínas ou de nucleotídeos de RNA ou DNA que codificam as proteínas. Em uma modalidade, uma diminuição no corpo de proteínas musculares úteis, como distrofina, ou a presença de proteínas inibitórias, como trombospondina, podem ser usadas para diagnosticar a gravidade da anormalidade da estrutura ou função do músculo cardíaco ou a probabilidade de resposta aos métodos terapêuticos e composições aqui descritas. Em outra modalidade, alterações nos níveis destes biomarcadores podem ser usadas para avaliar o êxito ou o fracasso de certas modalidades terapêuticas, incluindo aquelas aqui reveladas, a fim de otimizar a dose e decidir a manutenção ou alteração de métodos e composições terapêuticas.

[0026] Em outra modalidade, um aumento na concentração plasmática de folistatina, ou uma diminuição na miostatina, ou um aumento na razão entre folistatina plasmática e miostatina plasmática, pode ser usado como um método diagnóstico para diagnosticar o grau de severidade de uma doença muscular ou a extensão da resposta à terapia.

[0027] Em certas modalidades, os métodos aqui revelados compreendem a administração às células de pelo menos 0,1) lM epicatequina ou um derivado de epicatequina, pelo menos 0,25) lM epicatequina ou um derivado de epicatequina, pelo menos 0,5) lM de epicatequina ou um derivado de epicatequina, e ao menos 1) lM de epicatequina ou um derivado de epicatequina.

[0028] Em modalidades adicionais, os métodos revelados na presente invenção compreendem a administração de compostos da revelação em uma

12 / 58 dose diária total de cerca de 0,1 mg/kg/dose a cerca de 100 mg/kg/dose, alternativamente de cerca de 0,3 mg/kg/dose a cerca de 30 mg/kg/dose. Em uma outra modalidade, o intervalo de dosagem é de cerca de 0,5 a cerca de 10 mg/kg/dia. Alternativamente, cerca de 0,5 a cerca de 1 mg/kg/dia é administrado. Geralmente, pode-se administrar entre cerca de 25 mg e cerca de 1 grama por dia; alternativamente, pode-se administrar entre cerca de 25 mg e cerca de 200 mg. A dose pode ser administrada em quantas doses divididas forem convenientes.

[0029] Em modalidades adicionais, os métodos revelados na presente invenção compreendem a administração de epicatequina, um derivado de epicatequina ou uma mistura dos mesmos em uma faixa de cerca de 1 cerca de 1000 mg por kg de peso corporal, cerca de 1 cerca de 50 mg por kg de peso corporal, ou cerca de 10 cerca de 100 mg por kg de peso corporal do dito indivíduo.

[0030] Em modalidades adicionais, a concentração desejada é mantida por ao menos 30 minutos, 1 hora, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas ou mais. Ainda em outras modalidades adicionais, a concentração desejada é obtida pelo menos uma vez durante cada período de 12 horas durante ao menos 24 horas, 48 horas, 72 horas, 1 semana, um mês, ou mais; ou pelo menos uma vez durante cada período de 24 horas ao longo de pelo menos 48 horas, 72 horas, 1 semana, 1 mês, ou mais. Para manter uma concentração desejada por um tempo desejado, múltiplas doses de um ou mais compostos podem ser empregadas. O intervalo de dosagem pode ser determinado com base na meia-vida de depuração do corpo para cada composto de interesse.

[0031] Em certas modalidades, a epicatequina ou o derivado de epicatequina administrado em um método aqui revelado é ao menos 90% puro em relação a outros compostos selecionados do grupo que consiste em epicatequina, um derivado de epicatequina, catequina, ou um derivado de

13 / 58 catequina. Por exemplo, se o composto for epicatequina, ele contém não mais que 10% de contaminação com derivados de epicatequina, catequina e derivados de catequina. Em modalidades adicionais, a epicatequina ou o derivado de epicatequina selecionado é pelo menos 95% puro em relação a outros compostos selecionados do grupo que consiste em epicatequina, derivado de epicatequina, catequina ou derivado de epicatequina. Deve-se observar que isto não exclui a combinação com um agente terapêutico adicional em concentração substancial.

[0032] Em modalidades adicionais, a dita epicatequina é (-)- epicatequina.

[0033] Em modalidades adicionais, a dita epicatequina é (+)- epicatequina.

[0034] Em modalidades adicionais, a dita epicatequina é uma mistura racêmica de (-)-epicatequina e (+)-epicatequina.

[0035] Também é revelada na presente invenção uma nova classe de compostos que são os únicos agentes conhecidos que, quando administrados, induzem a produção de folistatina circulante no corpo de animais e seres humanos. A folistatina e sua família estreitamente homóloga (80% homologia de sequência) de proteínas semelhantes à folistatina são produzidas por vários tipos de células no corpo, incluindo células musculares e células ósseas. A folistatina é conhecida por induzir a regeneração muscular em vários estados da doença. Recentemente, a proteína 3 semelhante a folistatina mostrou estimular a regeneração óssea e aumentar a resistência mecânica óssea durante o exercício. Consulte J Nam et. A Al. Follistatin-like 3 is a mediator of exercise-driven bone formation and strengthening. Bone 2015 78:62-70 doi:10.1016/j.bone.2015.04.038. O exercício, que reforça tanto o músculo quanto o osso, induz um aumento dos níveis plasmáticos de folistatina e suas proteínas semelhantes a folistatina relacionadas. Ver Hansen J et al. Exercise induces a marked increase in plasma follistatin: evidence that follistatin is a

14 / 58 contraction-induced hepatokine. 2011 Endocrinology 152:164-171 Pub Med

21068158. Animais sem folistatina apresentam fraca formação de músculo esquelético e profunda fraqueza muscular. Ver Matzuk, MM et al. Multuple defects and perinatal death in mice deficient in follistatin. Nature 1995 374: 360-3. PubMed 7885475. A produção de matriz extracellular e sua mineralização são os componentes essenciais da formação de osso novo pelos osteoblastos. A folistatina estimula ambas as atividades em culturas de osteoblastos humanos. Ver Eijken et al The activin A-follistatin system: potent regulator of human extracellular matrix mineralization Faseb J 2007 21:2949-60. Durante a cura de fraturas ósseas, a expressão de folistatina e seus receptores é fortemente aumentada no periósteo próximo às extremidades das fraturas ósseas, indicando que a folistatina está contribuindo para a formação e remodelagem do osso durante a consolidação da fratura. Ver Nagame T et al Immunochemical detection of activin A, follistatin, and activin receptors during fracture healing in the rat J Orthop Res 1998 16:314-

21. Dessa forma, qualquer agente que estimule a produção de folistatina deve ser terapêutico no contexto das várias doenças, condições, efeitos colaterais de fármacos, e defeitos genéticos que contribuem para o desenvolvimento da osteoporose e seus próprios riscos aumentados de fraturas ósseas.

[0036] Algumas modalidades referem-se a um método para induzir a produção aumentada celular ou muscular ou corporal de folistatina e proteínas similares a folistatina de modo a reverter ou melhorar lesões, ou fraqueza de, ou perda de, osso, ou impedir fraturas, em um indivíduo que esteja em necessidade disso, compreendendo a administração a um indivíduo de uma dose terapeuticamente eficaz de (+)-epicatequina e/ou (-)- epicatequina ou um derivado de epicatequina de (+)-epicatequina ou (-)-epicatequina. Em modalidades adicionais, a (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina ou um derivado de epicatequina, é administrada por via oral, intravenosa ou intramuscular, a 5 mg a 2 gramas por dia, em uma dose única ou em doses

15 / 58 divididas. Em outras modalidades, a (+)-epicatequina e/ou a (-)-epicatequina ou um derivado de epicatequina é administrada em uma dose entre 0,1 mg/kg de peso corporal por dia a 10 mg/kg de peso corporal por dia, por via oral ou intravenosa ou intramuscular, em uma dose única ou em doses divididas. Ainda em outras modalidades, o método induz nova formação óssea ou formação óssea adicional ou formação óssea mais forte ou regeneração óssea de modo a impedir fraturas ósseas.

[0037] As modalidades adicionais aqui reveladas se referem a um método para induzir o aumento da produção de folistatina ou proteínas similares a folistatina celular, muscular ou óssea a fim de reverter ou melhorar a fragilidade óssea, impedindo assim fraturas ósseas causadas pela administração de compostos conhecidos por induzirem fragilidade ou danos aos ossos, prejudicarem a geração óssea, ou prejudicarem o crescimento ósseo, incluindo, mas não se limitando a, corticoesteroides como prednisona, ou deflazacort, anticonvulsivos, como fenitoina e fenobarbital, quimioterápicos como inibidores de aromatase e progestinas. Aspectos adicionais do método se referem à indução de maior produção celular ou muscular ou corporal de folistatina ou de proteínas similares à folistatina a fim de reverter ou melhorar a fragilidade de resistência óssea, impedindo assim fraturas ósseas associadas à predisposição genética, ao envelhecimento, ao estilo de vida sedentário, ou estados de baixos teores de estrogênio, como menopausa ou pós-ooforectomia; um método para induzir o aumento da produção celular ou muscular ou corporal de folistatina ou proteínas similares à folistatina a fim de reverter ou melhorar a fragilidade óssea causada por condições médicas conhecidas por estarem associadas à fragilidade de, ou danos ao, osso, por prejudicarem a geração óssea, ou prejudicarem o crescimento ósseo, como doença celíaca, doença renal ou hepática, e doenças inflamatórias como lupus eritematoso sistêmico e artrite reumatoide; um método para induzir o aumento da produção celular ou muscular ou corporal

16 / 58 de folistatina ou proteínas similares a folistatina a fim de reverter ou melhorar a fragilidade óssea em conjunto com a administração de outros agentes usados para tratar osteoporose, incluindo cálcio, vitamina D, e calcitonina, a fim de evitar fraturas ósseas; um método para induzir o aumento da produção celular ou muscular ou corporal de folistatina ou proteínas similares a folistatina como um agente terapêutico para acelerar a cura de fraturas ósseas ou aumentar o grau de recuperação de uma fratura óssea, como aquelas experimentadas em acidentes, ao se praticar esportes ou em combate; e um método para induzir o aumento da produção celular ou muscular ou corporal de folistatina ou proteínas similares à folistatina a fim de evitar a perda sistêmica de densidade óssea e, dessa forma, impedir fraturas ósseas subsequentes, durante o período de recuperação após a cirurgia ortopédica ou após o início de uma doença ou condição que necessite de longos períodos de repouso ou de inatividade física, o que é sabido que resulta em menor densidade óssea e fraqueza muscular.

[0038] Em qualquer uma das modalidades anteriormente mencionadas do método, contempla-se que a (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina ou um derivado de epicatequina pode, opcionalmente, ser administrada por via oral ou intravenosa ou intramuscular; de 5 mg a 2 gramas por dia; e/ou em uma dose única ou em doses divididas.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0039] A figura 1 mostra imagens de camundongos nos vários grupos de tratamento.

[0040] A figura 2 mostra imagens adicionais de camundongos nos vários grupos de tratamento.

[0041] A figura 3 representa um gráfico de comprimento de osso em quatro grupos de tratamento diferentes.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0042] Consequentemente, é fornecido aqui um método de

17 / 58 tratamento, prevenção, ou reversão de uma lesão aos músculos esqueléticos ou cardíacos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações do mesmo, a um paciente em necessidade disso. É fornecida também uma composição para tratamento, prevenção, ou reversão de uma lesão aos músculos esqueléticos ou cardíacos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações do mesmo, a um paciente em necessidade disso.

[0043] Também é fornecido um método de tratamento de uma doença relacionada a uma estrutura ou função muscular esquelética ou cardíaca prejudicada que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação tanto de um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos a um paciente que necessita do mesmo. É fornecida também uma composição para tratamento, prevenção, ou reversão de uma lesão aos músculos esqueléticos ou cardíacos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações do mesmo, a um paciente em necessidade disso.

[0044] Em certas modalidades, a dita disfunção se deve ao envelhecimento, obesidade, desuso ou inatividade, exposição a agentes nutricionais potencialmente tóxicos como frutose, ou a exposição a nutrição inadequada como fome ou desnutrição.

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[0045] Também é fornecido aqui um método para induzir a regeneração ou restruturação de músculo cardíaco ou esquelético, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz terapeuticamente de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações dos mesmos, a um paciente em necessidade disso. Também é fornecida uma composição para induzir a regeneração ou restruturação de músculo cardíaco ou esquelético, compreendendo uma quantidade eficaz terapeuticamente de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações dos mesmos, a um paciente em necessidade disso.

[0046] Também é fornecido aqui um método para diagnosticar lesão ao músculo cardíaco ou esquelético e para diagnosticar o sucesso ou o fracasso de terapias concebidas para tratar, evitar, ou reverter lesões ao músculo esquelético ou cardíaco, compreendendo: a. observar uma ou mais manifestações fisiológicas de lesão ou disfunção do músculo esquelético ou cardíaco no indivíduo; b. administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações dos mesmos a um paciente que precisa do mesmo; e c. observar uma alteração ou falta da mesma nas ditas manifestações fisiológicas de lesão ou disfunção do músculo esquelético ou cardíaco.

[0047] Também é fornecido aqui um método para melhorar a função, a recuperação ou a regeneração da célula muscular, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina,

19 / 58 enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações dos mesmos, a um paciente em necessidade disso. Também é fornecida uma composição para melhorar a função, recuperação ou regeneração da célula muscular, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações dos mesmos, a um paciente em necessidade disso.

[0048] Em certas modalidades, melhorar a função, recuperação ou regeneração muscular compreende maior número e função de mitocôndrias.

[0049] Também é aqui fornecido um método de tratamento de efeitos colaterais relacionados aos músculos de treinamento ou competição esportiva incluindo dores, câimbras, fraqueza, ou lesão, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos para um paciente que necessita do mesmo. Também é fornecida uma composição para tratamento de efeitos colaterais relacionados ao músculo de treinamento ou competição desportiva, incluindo dores, câimbras, fraqueza, ou lesão, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos para um paciente que necessita do mesmo.

[0050] Também é aqui fornecido um método de tratamento de doenças do músculo cardíaco ou esquelético associadas a isquemia ou fluxo sanguíneo prejudicado ou inadequado, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou

20 / 58 (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos para um paciente que necessita do mesmo. Também é fornecida uma composição de tratamento de doenças do músculo cardíaco ou esquelético associadas a isquemia ou fluxo sanguíneo prejudicado ou inadequado, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos para um paciente que necessita do mesmo.

[0051] Em certas modalidades, as ditas doenças são selecionadas do grupo que consiste em ateroesclerose, trauma, diabetes, estenose vascular, doença arterial periférica, vasculopatia e vasculite.

[0052] Também é aqui fornecido um método de tratamento de uma doença associada a distúrbios genéticos que afetam direta ou indiretamente o número, estrutura ou função das células de músculo cardíaco ou células de músculo esquelético, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um epicatequina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinações dos mesmos a um paciente que precise disso. Também é fornecida uma composição para tratamento de doenças associadas a distúrbios genéticos que afetam direta ou indiretamente o número, estrutura ou função das células de músculo cardíaco ou células de músculo esquelético, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um epicatequina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinações dos mesmos a um paciente que precise disso.

[0053] Em certas modalidades, as ditas doenças são selecionadas do grupo que consiste em distrofias musculares e ataxia de Friedreich.

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[0054] Também é aqui fornecido um método de tratamento de doenças associadas ao controle neurológico prejudicado da atividade muscular, resultando em consequentes anormalidades na estrutura e na função dos músculos esqueléticos devido à inatividade, contratilidade aberrante ou estados contraídos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações dos mesmos a um paciente que precisa do mesmo. Também é fornecida uma composição para o tratamento de doenças associadas ao controle neurológico prejudicado da atividade muscular, resultando em consequentes anormalidades na estrutura e na função dos músculos esqueléticos devido à inatividade, contratilidade aberrante ou estados contraídos, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, ou combinações dos mesmos a um paciente que precisa do mesmo.

[0055] Em certas modalidades, as ditas doenças são selecionadas do grupo que consiste em síndromes de denervação periférica, trauma, esclerose lateral amiotrófica, meningite e anormalidades estruturais da coluna vertebral.

[0056] Também é fornecido aqui um método de tratamento de doenças associadas à perda de número, perda de função, ou perda de correta organização interna otimamente eficiente de células musculares esqueléticas ou células musculares cardíacas, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos para um paciente que necessita do mesmo. Também é fornecida uma composição para o tratamento de doenças associadas à perda de número,

22 / 58 perda de função, ou perda de correta organização interna otimamente eficiente de células musculares esqueléticas ou células musculares cardíacas, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos para um paciente que necessita do mesmo.

[0057] Em certas modalidades, a dita doença é debilitação muscular.

[0058] Em certas modalidades, a dita doença é a sarcopenia.

[0059] Em certas modalidades, a dita sarcopenia está associada ao envelhecimento, diabetes, condições metabólicas anormais, infecção, inflamação, doença autoimune, disfunção cardíaca, artrite congestiva, insuficiência cardíaca, envelhecimento, miocardite, miosite, polimialgia reumática, polimiosite, HIV, câncer, efeitos secundários da quimioterapia, desnutrição, envelhecimento, erros inatos do metabolismo, traumas, acidente vascular cerebral e problemas neurológicos.

[0060] Em certas modalidades, o método de tratamento de doenças associadas à perda de número, perda de função ou perda de uma organização interna correta e otimamente eficiente de células de músculo esquelético ou células de músculo cardíaco compreende adicionalmente sequências ou intensidades de exercício físico ou programático.

[0061] Também é fornecido aqui um método para melhorar o desempenho esportivo, resistência, construção de formato ou força muscular, ou facilitar a recuperação dos efeitos de treino ou competição, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos, a um paciente que necessita do mesmo. Também é fornecida uma composição para melhorar o desempenho esportivo, resistência, construção de formato ou força muscular, ou facilitar a

23 / 58 recuperação dos efeitos de treino ou competição, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos, a um paciente que necessita do mesmo.

[0062] Também é fornecido aqui um método de tratamento de lesões musculares, fraqueza, ou dor associada à administração de medicamentos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, ou enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos para um paciente que necessita do mesmo. Também é fornecida uma composição para o tratamento de lesões musculares, fraqueza, ou dor associada à administração de medicamentos, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de epicatequina, ou enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco dos mesmos, ou combinações dos mesmos a um paciente que necessite do mesmo.

[0063] Em certas modalidades, o dito medicamento é selecionado do grupo que consiste em corticoesteroides como a prednisona, metil prednisona, ou derivados halogenados dos mesmos, quimioterápicos como doxorrubicina ou metotrexato, e inibidores da HMG co-redutase, conhecidos como estatinas, que são frequentemente associados com distúrbios musculares ou miopatia, incluindo: Advicor'" (liberação prolongada de niacina/lovastatina), Altoprev'" (liberação prolongada de lovastatina), Caduet'" (amlodipina e atorvastatina), Crestor'" (rosuvastatina), Juvisync'" (sitagliptina/sinvastatina), Lescol® (fluvastatin), Lescol XL (liberação prolongada de fluvastatina), Lipitor'" (atorvastatina), Compactin (mevastatina), Livalo® (pitavastatina), Mevacor'" (lovastatina), Pravachol'" (pravastatina), Simcor'" (liberação prolongada de

24 / 58 niacina/sinvastatina), Vytorin'" (ezetimibe/sinvastatina) e Zocor® (sinvastatina).

[0064] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das modalidades reveladas acima, a dita epicatequina é substancialmente (-)- epicatequina.

[0065] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das modalidades reveladas acima, a dita epicatequina é substancialmente (+)- epicatequina.

[0066] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das modalidades apresentadas acima, a dita epicatequina é uma mistura racêmica de (-)-epicatequina e (+)- epicatequina.

[0067] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das modalidades apresentadas acima, o dito paciente é selecionado para tratamento com base na ocorrência de uma ou mais manifestações fisiológicas de lesão ou disfunção do músculo cardíaco ou esquelético no indivíduo.

[0068] Em modalidades adicionais, a dita manifestação é a elevação em um biomarcador selecionado do grupo que consiste em níveis plasmáticos elevados de mioglobina, troponina, ou creatina fosfoquinase, acidose lática e creatinina.

[0069] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das modalidades apresentadas acima, um biomarcador de diagnóstico é usado para determinar o tempo e o grau da reação muscular.

[0070] Em modalidades adicionais, o dito biomarcador de diagnóstico é distrofina ou trombospondina.

[0071] Em certas modalidades de qualquer uma das modalidades apresentadas acima, a epicatequina é administrada.

[0072] Em certas modalidades de qualquer uma das modalidades apresentadas acima, é administrado um derivado de epicatequina.

[0073] Em modalidades adicionais, a dita epicatequina, derivado de

25 / 58 epicatequina, seus sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-fármacos, ou combinações dos mesmos, são administrados por via oral.

[0074] Em outras modalidades adicionais, a dita epicatequina, derivado de epicatequina, seus sais farmaceuticamente aceitáveis e pró- fármacos, ou combinações dos mesmos, são administrados por via parenteral.

[0075] Em outras modalidades adicionais, a dita epicatequina, derivado de epicatequina, seus sais farmaceuticamente aceitáveis e pró- fármacos, ou combinações dos mesmos, são administrados como um nutracêutico.

[0076] Em modalidades adicionais, a epicatequina, derivados de epicatequina, sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-fármacos dos mesmos, ou combinações dos mesmos, são administrados em combinação com um agente terapêutico adicional. O dito agente terapêutico adicional é selecionado a partir do grupo que consiste em hormônios que estimulam o crescimento de células musculares, ácido gama-amino butírico ou seus derivados, suplementos dietários de proteína, esteroides anabólicos, fatores biológicos conhecidos por melhorarem o crescimento, a força, a resistência ou o metabolismo do músculo esquelético ou cardíaco, ou a recuperação do músculo esquelético ou músculo cardíaco de lesão ou fragilidade, compostos conhecidos por estarem associados à produção aumentada de óxido nítrico, que promove o fluxo sanguíneo através dos músculos, extratos de produtos naturais conhecidos por promoverem a força ou a resistência muscular, inibidores de miostatina, e estimulantes da expressão de folistatina.

[0077] Também é fornecido aqui um método de diagnóstico do grau de severidade de uma doença muscular, compreendendo a etapa de medição dos níveis plasmáticos de folistatina, miostatina ou a razão entre folistatina e miostatina.

[0078] Também é fornecido aqui um método para determinar a extensão da resposta à terapia para um distúrbio muscular, que compreende as

26 / 58 etapas de: a) medir os níveis plasmáticos pré-tratamento de folistatina, miostatina ou a razão entre folistatina e miostatina; b) medir os níveis plasmáticos pós-tratamento de folistatina, miostatina ou a razão entre folistatina e miostatina; e c) comparar os níveis pré- e pós-tratamento de folistatina, miostatina ou a razão entre a folistatina e a miostatina.

[0079] Também é fornecido aqui um método de tratamento de um distúrbio muscular, que compreende as etapas de: a) medir os níveis plasmáticos de folistatina, miostatina, ou a razão entre folistatina e miostatina uma primeira vez; b) administrar uma primeira quantidade de epicatequina (enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos), um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo; c) medir os níveis plasmáticos pós-tratamento de folistatina, miostatina ou a razão entre folistatina e miostatina; d) comparar os níveis pré- e pós-tratamento de folistatina, miostatina ou a razão entre a folistatina e a miostatina; e e) ou: i) aumentar a dose de epicatequina (enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos), um derivado de epicatequina, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, administrada na etapa b quando a concentração de folistatina medida tiver aumentado no indivíduo, quando a concentração de miostatina medida no indivíduo tiver diminuído, ou quando a razão entre a folistatina plasmática e a miostatina plasmática tiver aumentado; ou ii) reduzir ou manter a dose de epicatequina (enantiômeros (+) ou (-) ou uma combinação de ambos), um derivado de epicatequina, ou um sal

27 / 58 farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco do mesmo, administrada na etapa b quando a concentração de folistatina medida no indivíduo tiver diminuído, quando a concentração de miostatina medida no indivíduo tiver aumentado, ou quando a razão entre a folistatina plasmática e a miostatina plasmática tiver diminuído.

[0080] Em certas modalidades de qualquer uma das modalidades reveladas acima, a dita epicatequina é uma mistura racêmica de mais de 50% de (-)- epicatequina e menor de 50% de (+)-epicatequina.

[0081] Em certas modalidades de qualquer uma das modalidades reveladas acima, a dita mistura racêmica é maior que 75% de (-)-epicatequina.

[0082] Em certas modalidades de qualquer uma das modalidades reveladas acima, a dita mistura racêmica é maior que 90% de (-)-epicatequina.

[0083] Em certas modalidades de qualquer uma das modalidades reveladas acima, a dita mistura racêmica é maior que 75% de (+)- epicatequina.

[0084] Em certas modalidades de qualquer uma das modalidades reveladas acima, a dita mistura racêmica é maior que 90% de (+)- epicatequina.

[0085] Também é fornecido aqui o uso de epicatequina, (+)- epicatequina, (-)-epicatequina, uma combinação de (+)- e (-)-epicatequina, um derivado de epicatequina, um sal farmaceuticamente aceitável ou profármaco de qualquer um dos anteriormente mencionados, ou uma combinação de qualquer um dos anteriormente mencionados, na fabricação de um medicamento para o tratamento de qualquer uma das doenças, ou para a obtenção de qualquer objetivo terapêutico ou funcional, conforme revelado aqui.

[0086] Como usado aqui, os termos abaixo têm os significados indicados.

[0087] Quando faixas de valores são reveladas, e a notação "de n, … a

28 / 58 n", ou "entre n, … e n", é usada, onde n, e n2 são os números, então, exceto onde especificado em contrário, essa notação se destina a incluir os próprios números e a faixa entre eles. Essa faixa pode ser integral ou contínua entre e incluindo os valores finais. A título de exemplo, a faixa "de 2 a 6 carbonos" destina-se a incluir dois, três, quatro, cinco e seis carbonos, uma vez que os carbonos vêm em unidades de números inteiros. Comparar, a título de exemplo, a faixa "de 1 a 3 uM (micromolar)," que se destina a incluir 1 uM, 3 uM, e tudo entre eles a qualquer número de números significativos (por exemplo, 1,255 uM, 2,1 uM, 2,9999 uM, etc.).

[0088] O termo "cerca de," para uso na presente invenção, se destina a qualificar os valores numéricos que ele modifica, denotando um tal valor como variável dentro de uma margem de erro. Quando nenhuma margem de erro específica é referida, como um desvio padrão para um valor médio dado em um gráfico ou tabela de dados, o termo "cerca de" deve ser entendido como significando aquela faixa que abrangeria o valor mencionado e a faixa que seria incluída também pelo arredondamento para cima ou para baixo para aquele número, levando-se em conta números significativos.

[0089] O termo "doença" para uso na presente invenção, se destina a ser geralmente sinônimo, e é utilizado de forma intercambiável com os termos "distúrbio", "síndrome", e "condição" (como em condição médica), sendo que todos refletem uma condição anormal do corpo do ser humano ou do animal ou de uma de suas partes que prejudica o funcionamento normal, é tipicamente manifestado distinguindo-se sinais e sintomas, e faz com que o ser humano ou o animal tenha uma duração ou qualidade de vida menor.

[0090] O termo "doenças musculares" se refere a doenças associadas ao número ou função prejudicada da célula muscular esquelética ou muscular cardíaca.

[0091] O termo "terapia de combinação" significa a administração de dois ou mais agentes terapêuticos para tratar uma condição ou distúrbio

29 / 58 terapêutico descrito na presente revelação. Tal administração abrange a co- administração desses agentes terapêuticos de uma maneira substancialmente simultânea, como em uma única cápsula que tem uma razão fixa de ingredientes ativos ou em múltiplas cápsulas separadas para cada ingrediente ativo. Além disso, essa administração também abrange o uso de cada tipo de agente terapêutico em uma maneira sequencial. Em todo caso, o regime de tratamento fornecerá efeitos benéficos da combinação de fármacos no tratamento das condições ou distúrbios aqui descritos. Em certas modalidades, é administrada uma combinação de compostos de modo que a meia-vida de depuração de cada composto do corpo se sobreponha ao menos parcialmente a do outro. Por exemplo, um primeiro fármaco tem uma meia-vida de depuração de 1 hora e é administrado no tempo = 0, e um segundo fármaco tem uma meia-vida de depuração de 1 hora e é administrado no tempo = 45 minutos.

[0092] A frase "terapeuticamente eficaz" se destina a qualificar a quantidade de ingredientes ativos usados no tratamento de uma doença ou distúrbio ou na realização de um ponto final do teste clínico.

[0093] O termo "terapeuticamente aceitável" refere-se àqueles compostos (ou sais, pró-fármacos, tautômeros, formas zwiteriônicas etc.) que são adequados para uso em contato com os tecidos de pacientes sem toxicidade, irritação e resposta alérgica indevidas, são proporcionais a uma relação benefício/risco razoável, e são eficazes para seu uso pretendido.

[0094] Como usado aqui, a referência ao "tratamento" de um paciente se destina a incluir profilaxia. O tratamento pode também ser de natureza preventiva, isto é, pode incluir prevenção de doença. A prevenção de uma doença pode envolver a proteção completa contra a doença, por exemplo, como é o caso da prevenção de infecção por um patógeno, ou pode envolver a prevenção da progressão da doença. Por exemplo, a prevenção de uma doença pode não significar o encerramento completo de qualquer efeito relacionado

30 / 58 às doenças em qualquer nível, mas, ao invés disso, pode significar a prevenção dos sintomas de uma doença a um nível clinicamente significativo ou detectável. A prevenção de doenças pode também significar a prevenção da progressão de uma doença até um estágio posterior da doença.

[0095] O termo "paciente" é geralmente sinônimo do termo "indivíduo" e inclui todos os mamíferos, inclusive seres humanos. Exemplos de pacientes incluem seres humanos, animais de criação como vacas, cabras, ovelhas, porcos, e coelhos, e animais de estimação como cães, gatos, coelhos e cavalos. De preferência, o paciente é um ser humano.

[0096] O termo "epicatequina" como usado aqui, se refere a (+)- epicatequina (2R-3R), (-)-epicatequina(2S-3S), ou misturas dos mesmos. Em certas modalidades, "epicatequina" refere-se a (+)-epicatequina. Em modalidades adicionais, "epicatequina" se refere a (-)-epicatequina. Em modalidades adicionais, "epicatequina" se refere a uma mistura racêmica de (+)-epicatequina e (-)-epicatequina.

[0097] O termo "derivado de epicatequina", como usado aqui, se refere a qualquer composto que retenha a estrutura de anel e estereoquímica da epicatequina em si, mas que contenha um ou mais grupos substituintes em relação à epicatequina. Certos derivados de epicatequina de ocorrência natural são conhecidos, como (-)-epigalocatequina (EGC), (-)-epicatequina-3-galato (ECG), (-)-epigalocatequina-3-galato (EGCG), (+)- epigalocatequina (EGC), (+)-epicatequina-3-galato (ECG), e (+)-epigalocatequina- 3-galato (EGCG). O termo também inclui uma combinação de moléculas ou pró-fármacos que liberam epicatequina ou um derivado do mesmo quando da administração a um indivíduo. Tal molécula de combinação pode incluir, por exemplo, epicatequina e um agente unido por um grupo ligante hidrolisável.

[0098] A epicatequina e seus derivados podem ser produzidos sinteticamente ou podem ser isolados a partir de fontes naturais que contenham esses compostos, como chocolate, chá e nozes. O termo

31 / 58 "chocolate", para uso na presente invenção, refere-se a um alimento sólido ou semi-plástico e se destina a se referir a todas as composições semelhantes a chocolate ou chocolate contendo uma dispersão de sólidos em uma fase de gordura. O termo se destina a incluir composições que estão de acordo com o padrão americano de identidade (U.S. Standards of Identity (SOl)), CODEX Alimentarius e/ou outros padrões internacionais e a composições que não estão de acordo com os padrões americanos de identidade (U.S. Standards of Identity) ou outros padrões internacionais. O termo "chocolate" abrange chocolate doce, chocolate amargo ou meio amargo, chocolate ao leite, chocolate de leitelho, chocolate de leite desnatado, achocolatados para mistura ao leite, cobertura de cacau doce e gordura vegetal, cobertura de chocolate doce e gordura vegetal, cobertura de chocolate ao leite e gordura vegetal, cobertura à base de gordura vegetal, pastéis incluindo chocolate branco ou coberturas feitas com manteiga de cacau ou gordura vegetal ou uma combinação dos mesmos, composições semelhantes a chocolate nutricionalmente modificadas (chocolates ou coberturas feitas com ingredientes com valor calórico reduzido), e chocolates com baixo teor de gordura, a menos que seja especificamente identificado o contrário. Consulte, por exemplo, a patente US 6.312.753, a qual está aqui incorporada a título de referência. A título de exemplo, a epicatequina e seus derivados podem ser entregues mediante a administração de extratos de chá, componentes de cacau, sólidos de cacau parcial e totalmente sem gordura, flocos e frações de cacau, extratos de polifenol de cacau, manteiga de cacau, líquidos de chocolate e misturas dos mesmos.

[0099] O termo "pró-fármaco" refere-se a um composto que é tornado mais ativo in vivo. Determinados compostos aqui revelados também existem como pró-fármacos, conforme descrito em Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism: Chemistry, Biochemistry, and Enzymology (Testa, Bernard and Mayer, Joachim M. Wiley- VHCA, Zurique, Suíça 2003). Pró-fármacos dos

32 / 58 compostos aqui descritos são formas estruturalmente modificadas do composto que prontamente sofrem alterações químicas sob condições fisiológicas para fornecer o composto. Adicionalmente, os pró-fármacos podem ser convertidos no composto por métodos químicos ou bioquímicos em um ambiente ex vivo. Por exemplo, os pró-fármacos podem ser lentamente convertidos em um composto quando colocados em um reservatório de emplastro transdérmico com uma enzima ou reagente químico adequado. Os pró-fármacos são frequentemente úteis pois em algumas situações pode ser mais fácil administrá-los do que administrar o composto ou fármaco inicial. Por exemplo, eles podem estar biodisponíveis por administração oral, enquanto o fármaco inicial não. O profármaco pode também ter solubilidade aprimorada em composições farmacêuticas em relação ao fármaco inicial. Uma ampla variedade de derivados de profármacos são conhecidos na técnica, como aqueles que dependem de clivagem hidrolítica ou ativação oxidativa do pró-fármaco. Um exemplo, sem limitação, de um profármaco, seria um composto que é administrado como um éster (o "pró-fármaco"), mas então é metabolicamente hidrolisado para o ácido carboxílico, a entidade ativa. Exemplos adicionais incluem derivados de peptidila de um composto.

[00100] Os compostos revelados na presente invenção podem existir como sais terapeuticamente aceitáveis. A presente invenção inclui os compostos listados acima sob a forma de sais, incluindo sais de adição de ácido. Os sais adequados incluem aqueles formados tanto com ácidos orgânicos quanto inorgânicos. Tais sais de adição de ácido serão normalmente farmaceuticamente aceitáveis. No entanto, os sais de sais não farmaceuticamente aceitáveis podem ter utilidade na preparação e purificação do composto em questão. Os sais de adição básicos podem também ser formados e podem ser farmaceuticamente aceitáveis. Para uma discussão mais completa sobre a preparação e seleção de sais, consulte Pharmaceutical Salts: Propriedades, seleção e uso (Stahl, p. Heinrich. Wiley - VCHA, Zurique,

33 / 58 Suíça, 2002).

[00101] O termo "sal terapeuticamente aceitável", para uso na presente invenção, representa sais ou formas zwiteriônicas dos compostos aqui revelados que sejam dispersíveis e solúveis em óleo ou água e terapeuticamente aceitáveis, conforme definido aqui. Os sais podem ser preparados durante o isolamento e purificação finais dos compostos ou separadamente mediante a reação do composto adequado sob a forma de base livre com um ácido adequado. Os sais de adição de ácido representativos incluem acetato, adipato, alginato, L-ascorbato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato (besilato), bissulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, digluconato, formato, fumarato, gentisato, glutarato, glicerofosfato, glicolato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, hipurato, clorídrico, hidrobrometo, hidroiodeto, 2-hidroxietanosulfonato (isetionato), lactato, maleato, malonato, DL-mandelato, mesitilenosulfonato, metano sulfonato, nafti lenosulfonato, nicotinato, 2-naftalenosulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, fosfonato, picrato, pivalato, propionato, piroglutamato, succinato, sulfonato, tartrato, L-tartrato, tricloroacetato, trifluoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, para-tolueno sulfonato (p-tosilato), e undecanoato. Além disso, os grupos básicos nos compostos apresentados na presente invenção podem ser quaternizados com cloretos, brometos e iodetos de metila, etila, propila e butila; sulfatos de dimetila, dietila, dibutila e diamila; cloretos, brometos e iodetos de decila, laurila, miristila e esterila; e brometos de benzila e fenetila. Exemplos de ácidos que podem ser empregados para formar sais de adição terapeuticamente aceitáveis incluem ácidos inorgânicos como ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico e fosfórico, e ácidos orgânicos como oxálico, maléico, succínico e cítrico. Sais também podem ser formadas pela coordenação dos compostos com um íon de metal alcalino ou alcalino terroso. Portanto, a presente invenção contempla sais de sódio, potássio, magnésio e

34 / 58 cálcio dos compostos aqui revelados, e similares.

[00102] Sais de adição básicos podem ser preparados durante o isolamento e purificação finais dos compostos mediante a reação de um grupo carboxila com uma base adequada como hidróxido, carbonato, bicarbonato de um cátion de metal ou com amônia ou uma amina orgânica primária, secundária ou terciária. Os cátions dos sais terapeuticamente aceitáveis incluem lítio, sódio, potássio, cálcio, magnésio, e alumínio, bem como cátions de amina quaternária não tóxicos como amônio, tetralmetilamônio, tetraetil amônio, metilamina, dimetilamino, trimetilamino, trietilamina, dietilamina, etilamino, tributil amina piridina, N,N-dimetil anilina, N-metil piperidina, N- metilmorfolina, diciclohexilamina, procaína, dibenzilamina, N,N- dibenzilfenetilamina, 1-efenamina e N,N-dibenziletilenediamina. Outras aminas orgânicas úteis representativas para a formação de sais de adição básicos incluem etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina e piperazina.

[00103] Um sal de um composto pode ser feito pela reação do composto adequado sob a forma da base livre com o ácido adequado.

[00104] Embora possa ser possível que os compostos da presente invenção sejam administrados como o produto químico bruto, também é possível apresentá-los como uma formulação farmacêutica. Consequentemente, são fornecidas aqui formulações farmacêuticas que compreendem um ou mais de certos compostos revelados no presente documento, ou um ou mais sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres, pró- fármacos, amidas ou solvatos, junto com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos e, opcionalmente, um ou mais outros ingredientes terapêuticos. Os carreadores têm que ser "aceitáveis" no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não prejudiciais ao seu receptor. A formulação adequada depende da via de administração escolhida. Qualquer uma das técnicas bem conhecidas,

35 / 58 carreadores, e excipientes, pode ser usado conforme for adequado e compreendido na técnica; Por exemplo, em Remington's Pharmaceutical Sciences. As composições farmacêuticas aqui reveladas podem ser fabricadas de qualquer maneira conhecida na técnica, por exemplo, por meio de mistura convencional, dissolução, granulação, produção de drágeas, levigação, emulsificação, encapsulação, aprisionamento ou compressão.

[00105] As formulações incluem aquelas adequadas para administração oral, parenteral (incluindo subcutânea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intra-articular e intramedular), intraperitoneal, transmucosal, transdérmica, retal e tópica (incluindo administração dérmica, bucal, sublingual e intraocular), embora a rota mais adequada possa depender, por exemplo, da condição e do distúrbio do receptor. As formulações podem ser convenientemente apresentadas sob a forma de dosagem única e podem ser preparadas por meio de qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Tipicamente, esses métodos incluem a etapa de colocar um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster, amida, pró-fármaco ou solvato do mesmo ("ingrediente ativo") com o carreador que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas colocando-se em associação, de modo uniforme e próximo, o ingrediente ativo com os carreadores líquidos ou carreadores sólidos finamente divididos ou ambos e, então, se necessário, conformando o produto na formulação desejada.

[00106] As formulações dos compostos aqui reveladas adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades discretas como cápsulas, drágeas ou comprimidos, cada um contendo uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou uma suspensão em um líquido aquoso ou um líquido não aquoso; ou como uma emulsão líquida de óleo em água ou uma emulsão de água em óleo. O ingrediente ativo pode também ser apresentado como um bolus,

36 / 58 eletuário ou pasta.

[00107] As preparações farmacêuticas que podem ser usadas oralmente incluem comprimidos, cápsulas do tipo de encaixe por pressão feitas de gelatina, bem como cápsulas vedadas macias feitas de gelatina e um plastificante, como glicerol ou sorbitol. Os comprimidos podem ser feitos por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Comprimidos compactados podem ser preparados mediante compressão em uma máquina adequada do ingrediente ativo em uma forma de fluxo livre como um pó ou grânulos;, opcionalmente misturado com aglutinantes, diluentes inertes, ou lubrificantes, agentes dispersantes ou ativos de superfície. Comprimidos moldados podem ser fabricados por moldagem em uma máquina adequada de uma mistura do composto umedecido pulverizado com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem ser opcionalmente revestidos ou marcados e podem ser formulados de modo a fornecerem liberação controlada ou lenta do ingrediente ativo ali contido. Todas as formulações para administração oral devem estar em dosagens adequadas para tal administração. As cápsulas de encaixe por pressão podem conter os ingredientes ativos em misturas com cargas como lactose, aglutinantes como amidos, e/ou lubrificantes como talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizantes. Em cápsulas macias, os compostos ativos podem estar dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados como óleos graxos, parafina líquida, ou polietileno glicóis líquidos. Além disso, estabilizantes podem ser adicionados. Núcleos de drágeas são dotados de revestimentos adequados. Para esse propósito, podem ser usadas soluções concentradas de açúcar, que podem conter opcionalmente goma arábica, talco, polivinila pirrolidona, carbopol gel, polietileno glicol, e/ou dióxido de titânio, soluções de laca e solventes orgânicos adequados ou misturas de solventes. Podem ser adicionados corantes ou pigmentos aos comprimidos ou revestimentos de drágeas para identificação ou para caracterizar diferentes

37 / 58 combinações de doses de compostos ativos.

[00108] As formulações de liberação sustentada específicas dos compostos revelados aqui são descritas na patente US 6.410.052, aqui incorporada a título de referência.

[00109] Os compostos podem ser formulados para administração parenteral por injeção, por exemplo, por injeção de bolus ou infusão contínua. As formulações para injeção podem ser apresentadas sob a forma de dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou em recipientes de dose múltipla, com um conservante adicionado. As composições podem assumir formas como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes de formulação como agentes de suspensão, estabilização e/ou de dispersão. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou de múltiplas doses, por exemplo, ampolas e frascos selados, e podem ser armazenadas sob a forma de pó ou em uma condição seca por congelamento (liofilizada) que exige apenas a adição do carreador líquido estéril, por exemplo, solução salina ou água estéril isenta de pirogênio, imediatamente antes do uso. Suspensões e soluções de injeção extemporâneas podem ser preparadas a partir de pós estéreis, grânulos e comprimidos do tipo anteriormente descrito.

[00110] As formulações para administração parenteral incluem soluções de injeção estéreis aquosas e não aquosas (oleosas) dos compostos ativos que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes de espessamento. Os carreadores ou solventes lipofílicos adequados incluem óleos graxos como óleo de gergelim, como oleato de etila ou triglicerídeos ou lipossomas. As suspensões de injeção aquosa podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão, como carboximetil celulose sódica, sorbitol ou dextrano. Opcionalmente, a

38 / 58 suspensão pode conter também estabilizantes ou agentes adequados que aumentem a solubilidade dos compostos a fim de permitir a preparação de soluções altamente concentradas.

[00111] Além das formulações anteriormente descritas, os compostos podem também ser formulados como uma preparação de depósito. Tais formulações de ação longa podem ser administradas mediante implante (por exemplo, subcutâneo ou intramuscular) ou por injeção intramuscular. Dessa forma, por exemplo, os compostos podem ser formulados com materiais hidrofóbicos ou poliméricos adequados (por exemplo como uma emulsão em um óleo aceitável) ou resinas de troca iônica, ou como derivados moderadamente solúveis, por exemplo, como um sal moderadamente solúvel.

[00112] Para administração bucal ou sublingual, as composições podem assumir a forma de comprimidos, pastilhas, pílulas ou géis formulados de maneira convencional. Tais composições podem compreender o ingrediente ativo em uma base flavorizada como sacarose e acácia ou tragacanto.

[00113] Os compostos podem também ser formulados em composições retais como supositórios ou enemas de retenção, por exemplo, contendo bases convencionais de supositório como manteiga de cacau, poli(glicol etilênico) ou outros glicerídeos.

[00114] Certos compostos aqui revelados podem ser administrados topicamente, ou seja, por administração não sistêmica. Isso inclui a aplicação de um composto aqui revelado externamente à epiderme ou cavidade bucal e a instilação desse composto no interior da orelha, olhos e nariz, de modo que o composto não entre significativamente na corrente sanguínea. Em contrapartida, a administração sistêmica se refere à administração oral, intravenosa, intraperitoneal e intramuscular.

[00115] As formulações adequadas para administração tópica incluem preparações líquidas ou semi-líquidas adequadas para penetração através da

39 / 58 pele até o local de inflamação como géis, unguentos, loções, cremes, pomadas ou pastas, e gotas adequadas para administração ao olho, orelha ou nariz. O ingrediente ativo para administração tópica pode compreender, por exemplo, de 0,001% a 10% p/p (em peso) da formulação. Em determinadas modalidades, o ingrediente ativo pode compreender até 10% p/p. Em outras modalidades, pode compreender menos que 5% em peso. Em determinadas modalidades, o ingrediente ativo pode compreender de 2%, em peso, a 5%, em peso. Em outras modalidades, pode compreender de 0,1% a 1%, em peso, da formulação.

[00116] Para administração por inalação, os compostos podem ser convenientemente fornecidos a partir de um insuflador, embalagens de nebulizador pressurizado ou outros meios convenientes de aplicar uma aspersão em aerossol. Embalagens pressurizadas podem compreender um propelente adequado como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, dicloro tetrafluoroetano, dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser determinada mediante o fornecimento de uma válvula para aplicar uma quantidade medida. Alternativamente, para administração por inalação ou insuflação, os compostos de acordo com a invenção podem assumir a forma de uma composição em pó seca, por exemplo, uma mistura em pó do composto e uma base em pó adequada, como lactose ou amido. A composição em pó pode ser apresentada sob a forma de dosagem unitária, por exemplo, em cápsulas, cartuchos, gelatina ou embalagens blister, a partir das quais o pó pode ser administrado com o auxílio de um inalador ou insuflador.

[00117] As formulações de dosagem unitária preferenciais são aquelas contendo uma dose eficaz, conforme mencionado mais adiante neste documento, ou uma fração adequada do mesmo, do ingrediente ativo.

[00118] Deve ser entendido que em adição aos ingredientes especificamente mencionados acima, as formulações descritas acima podem

40 / 58 incluir outros agentes convencionais na técnica levando em conta o tipo de formulação em questão, por exemplo, aquelas adequadas para administração oral podem incluir agentes flavorizantes.

[00119] Os compostos podem ser administrados por via oral ou por injeção em uma dose de 0,1 a 500 mg/kg por dia. O intervalo posológico para humanos adultos é de 5 mg a 2 g/dia, em geral. Comprimidos ou outras formas de apresentação fornecidas em unidades distintas podem conter, convenientemente, uma quantidade de um ou mais compostos que seja eficaz em tal dosagem ou como um múltiplo da mesma, por exemplo, unidades contendo 5 mg a 500 mg, usualmente em torno de 10 mg a 200 mg.

[00120] A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com os materiais carreadores para produzir uma forma de dosagem única variará dependendo do hospedeiro tratado e do modo específico de administração.

[00121] Os compostos podem ser administrados em vários modos, por exemplo, por via oral, tópica ou por injeção. A quantidade precisa do composto administrado a um paciente será de responsabilidade do médico assistente. O nível de dose específico para qualquer paciente específico dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, o peso corporal, a saúde geral, sexo, dietas, o tempo de administração, via de administração, a taxa de excreção, combinação de fármacos, o distúrbio exato que está sendo tratado, e a gravidade da indicação ou condição que está sendo tratada. Além disso, a via de administração pode variar dependendo da condição e de sua gravidade.

[00122] Em certos casos, pode ser adequado administrar ao menos um dos compostos aqui descritos (ou um sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo) em combinação com outro agente terapêutico. Somente a título de exemplo, se um dos efeitos colaterais experimentados por um paciente ao receber um dos compostos for

41 / 58 hipertensão, então pode ser adequado administrar um agente anti-hipertensivo em combinação com o agente terapêutico inicial. Ou, a título de exemplo apenas, a eficácia terapêutica de um dos compostos aqui descritos pode ser melhorada pela administração de um adjuvante (isto é, por si só, o adjuvante pode ter apenas um benefício terapêutico mínimo, mas em combinação com outro agente terapêutico, o benefício terapêutico total ao paciente é intensificado). Ou, a título de exemplo apenas, o benefício experimentado por um paciente pode ser aumentado por meio da administração de um dos compostos descritos na presente invenção com outro agente terapêutico (que também inclui um regime terapêutico) que também tem benefício terapêutico. Somente a título de exemplo, em um tratamento para diabetes envolvendo a administração de um dos compostos aqui descritos, pode resultar benefício terapêutico intensificado ao se fornecer também ao paciente outro agente terapêutico para diabetes. Em qualquer caso, independentemente da doença, distúrbio ou condição que está sendo tratada, o benefício geral experimentado pelo paciente pode simplesmente ser aditivo dos dois agentes terapêuticos ou o paciente pode experimentar um benefício sinérgico.

[00123] Exemplos específicos não limitadores de possíveis terapias de combinação incluem o uso de certos compostos da invenção com agentes que permitem ou intensificam as melhoras no número, estrutura ou função de células do músculo esquelético ou células do músculo cardíaco.

[00124] Em modalidades adicionais, esses agentes terapêuticos incluem hormônios que estimulam o crescimento de células musculares, ácido butírico ou seus derivados, suplementos proteicos dietários, esteroides anabolizantes, fatores biológicos conhecidos por melhorarem o crescimento, força, resistência ou metabolismo de músculo esquelético ou cardíaco, ou recuperação do músculo esquelético ou músculo cardíaco de lesão ou fragilidade, compostos conhecidos por estarem associados à produção aumentada de óxido nítrico, o que promove o fluxo sanguíneo através dos

42 / 58 músculos, extratos de produtos naturais conhecidos por promoverem a força ou resistência muscular, inibidores de miostatina, e estimulantes de expressão de folistatina.

[00125] Em modalidades adicionais, os hormônios que estimulam o crescimento de células musculares incluem, mas não se limitam ao hormônio do crescimento, análogos de hormônios do crescimento, peptídeos de liberação de hormônio do crescimento ou seus análogos, secretagogues de hormônio do crescimento, ou outros hormônios como somatatropina ou fator de crescimento mecano.

[00126] Em modalidades adicionais, derivados de ácido butírico incluem neurotransmissores que beneficiam os músculos ao modularem a glândula pituitária.

[00127] Em modalidades adicionais, os suplementos dietários proteicos incluem, mas não se limitam a, proteínas como caseína, precursores de aminoácidos ou seus derivados com atributos conhecidos de potenciadores de crescimento de músculo, como leucina, valina, isovalina, beta alanina, glutamina, dipeptídeo de glutamina, ou glicociamina.

[00128] Em modalidades adicionais, os esteroides anabolizantes incluem, mas não se limitam a, testosterona ou compostos esteroides relacionados a propriedades indutoras do crescimento muscular, como ciclostanazol ou metadrostenol, pró-hormônios ou derivados dessas substâncias, moduladores de estrogênio e moduladores seletivos do receptor de androgênio (SARMS - selective androgen receptor modulators).

[00129] Em modalidades adicionais, os fatores biológicos que sabidamente acentuam o crescimento, força, resistência ou metabolismo do músculo cardíaco ou esquelético, ou recuperação do músculo esquelético ou do músculo cardíaco de lesão ou fragilidade, incluem, mas não se limitam a, ácido alfa-lipóico, taurina, cafeína, magnésio, niacina, ácido fólico, ornitina, vitamina B6, B12 ou D, aspartato, creatina e seus diversos sais como mono-

43 / 58 hidrato de creatina, betaína, N acetil cisteína, beta de hidroxil metil butirato, lecitina, colina, misturas de fosfolipídeo, fosfatidil serina, carnitina, L carnitina, e glicina proprionil L carnitina.

[00130] Em modalidades adicionais, os compostos conhecidos por estarem associados a uma maior produção de óxido nítrico, que promove fluxo sanguíneo através dos músculos, incluem, mas não se limitam a, arginina e citrulina.

[00131] Em modalidades adicionais, extratos de produtos naturais conhecidos por promoverem força ou resistência muscular incluem, mas não se limitam a, guaraná, gerânio Robertianum, Cirsium ologophyllum, Bauhinia purpureae, Yohimbe, Bacopa monniera, beterraba em pó, rhodiola ou extratos de chá.

[00132] Em modalidades adicionais, os inibidores da miostatina são proteínas, anticorpos, peptídeos ou moléculas pequenas.

[00133] Em modalidades adicionais, os estimuladores da expressão ou função de folistatina são proteínas, peptídeos ou moléculas pequenas.

[00134] Em todo caso, os múltiplos agentes terapêuticos (pelo menos um dos quais é um composto revelado na presente invenção) podem ser administrados em qualquer ordem ou mesmo simultaneamente. Se simultaneamente, os múltiplos agentes terapêuticos podem ser fornecidos em uma forma única, unificada, ou em múltiplas formas (somente a título de exemplo, ou como uma única pílula ou como duas pílulas separadas). Um dos agentes terapêuticos pode ser administrado em doses múltiplas, ou ambos podem ser administrados em múltiplas doses. Se não for simultaneamente, a temporização entre as múltiplas doses pode ser qualquer duração de tempo variando desde alguns minutos a quatro semanas.

[00135] Dessa forma, em um outro aspecto, certas modalidades fornecem métodos para tratar doenças musculares em um indivíduo humano ou animal em necessidade de tal tratamento que compreende administrar ao

44 / 58 dito indivíduo uma quantidade de um composto revelado na presente invenção eficaz para reduzir ou evitar o dito distúrbio no indivíduo, em combinação com ao menos um agente adicional para o tratamento do dito distúrbio que é conhecido na técnica. Em um aspecto relacionado, certas modalidades fornecem composições terapêuticas que compreendem pelo menos um composto revelado na presente invenção em combinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de doenças musculares.

[00136] As composições da presente invenção podem também ser formuladas como composições nutracêuticas. O termo "composição nutracêutica", como usado aqui, refere-se a um produto alimentício, gênero alimentício, suplemento dietário, suplemento nutricional ou uma composição de suplemento para um produto alimentício ou um alimento que compreende catequina e/ou epicatequina adicionada exogenamente. Detalhes sobre técnicas para a formulação e administração destas composições podem ser encontradas em Remington, The Science and Practice of Pharmacy 21a edição (Mack Publishing Co., Easton, PA) e Nielloud and Marti-Mestres, Pharmaceutical Emulsions and Suspensions: 2a. Edição (Marcel Dekker, Inc, New York, EUA).

[00137] Como usado aqui, o termo produto alimentício se refere a qualquer alimento ou ração adequado para o consumo por seres humanos ou animais. O produto alimentício pode ser um alimento preparado e embalado (por exemplo, maionese, molho de salada, pão, barra de cereais, bebida, etc.) ou uma ração animal (por exemplo, ração animal extrudada e peletizada, ração animal grosseira ou composições alimentícias para animais de estimação). Como usado aqui, o termo produto alimentar se refere a qualquer substância adequada para consumo humano ou animal.

[00138] Os produtos alimentícios ou alimentares são, por exemplo, bebidas alcoólicas e não alcoólicas, bem como uma preparação líquida para ser adicionada a água potável e alimentos líquidos, bebidas não alcoólicas

45 / 58 são, por exemplo, refrigerantes, bebidas esportivas, sucos de frutas, como por exemplo suco de laranja, suco de maçã e suco de toronja; limonadas, chás, bebidas similares a água e leite e outras bebidas lácteas como, por exemplo, bebidas à base de iogurte e bebidas para dieta. Em outra modalidade, os produtos alimentícios ou alimentares referem-se a alimentos sólidos ou semi- sólidos compreendendo a composição de acordo com a invenção. Estas formas podem incluir, mas não se limitam a, produtos assados, como bolos e biscoitos, pudins, produtos lácteos, produtos de confeitaria, petiscos, ou doces congelados (por exemplo, sorvete, sorvete batido (milk shake), refeições congeladas preparadas, doces, petiscos (por exemplo, batata frita), alimentos líquidos como sopas, pastas, molhos, molhos para saladas, preparados de carne, queijo, iogurte e qualquer outro alimento contendo gordura ou óleo, e ingredientes alimentícios (por exemplo, farinha de trigo).

[00139] Alimentos para animais incluindo composições alimentícias para animais incluem alimentos vantajosamente destinados a suprir os requisitos dietários necessários, bem como petiscos (por exemplo, biscoitos caninos) ou outros suplementos alimentares. A ração animal que compreende a composição de acordo com a invenção pode estar sob a forma de uma composição seca (por exemplo, ração), composição semiúmida, composição úmida, ou qualquer mistura dos mesmos. Alternativamente ou adicionalmente, a ração animal é um suplemento, como um caldo de carne, água potável, iogurte, pó, suspensão, item mastigável, um petisco (por exemplo, biscoito), ou qualquer outra forma de liberação.

[00140] O termo "suplemento dietário" se refere a uma pequena quantidade de um composto para a suplementação dietária de um ser humano ou animal, embalada em unidades de dose única ou múltipla.

[00141] Os suplementos alimentares geralmente não fornecem quantidades significativas de calorias, mas podem conter outros micronutrientes (por exemplo, vitaminas ou minerais). O termo produtos

46 / 58 alimentícios ou gêneros alimentícios também inclui alimentos funcionais e produtos alimentícios preparados pré-embalados para consumo humano.

[00142] O termo suplemento nutricional refere-se a uma composição que compreende um suplemento dietário em combinação com uma fonte de calorias. Em algumas modalidades, os suplementos nutricionais são substitutos de refeições ou suplementos (por exemplo, barras energéticas ou de nutrientes ou bebidas de nutrientes ou concentrados).

[00143] Os suplementos dietários da presente invenção podem ser fornecidos em qualquer formato adequado. Em certas modalidades, os suplementos dietários são formulados para aplicação oral. Os ingredientes do suplemento dietário desta invenção estão contidos em excipientes e/ou veículos aceitáveis para o consumo oral. A forma real do veículo e, dessa forma, o suplemento dietário em si, não é de importância crítica. O veículo pode ser um líquido, um gel, cápsula de gel, cápsula, pó, comprimido sólido (revestido ou não revestido), chá, ou similares.

[00144] Em certas modalidades, o suplemento dietário está sob a forma de um comprimido ou cápsula e, em modalidades adicionais, está sob a forma de uma cápsula dura (envoltório). O excipiente e/ou os veículos adequados incluem maltodextrina, carbonato de cálcio, fosfato dicálcico, fosfato tricálcico, celulose microcristalina, dextrose, farinha de arroz, estearato de magnésio, ácido esteárico, croscarmelose sódica, glicolato de amido sódico, crospovidona, sacarose, gomas de origem vegetal, lactose, metil celulose, povidona, carbóxi metil celulose, amido de milho, e similares (incluindo misturas dos mesmos). Em certas modalidades, os veículos incluem carbonato de cálcio, estearato de magnésio, maltodextrina, e misturas dos mesmos. Os vários ingredientes e o excipiente e/ou veículo são misturados e formados na forma desejada com o uso de técnicas convencionais. O comprimido ou cápsula da presente invenção pode ser revestido com um revestimento entérico que dissolve a um pH de cerca de 6,0 a 7,0. Um revestimento

47 / 58 entérico adequado que dissolve no intestino delgado, mas não no estômago, é ftalato acetato de celulose.

[00145] Em outras modalidades, o suplemento dietário é oferecido como um pó ou líquido adequado a ser adicionado pelo consumidor a um alimento ou bebida. Por exemplo, em algumas modalidades, o suplemento dietário pode ser administrado a um indivíduo sob a forma de um pó, por exemplo, a ser usado misturado em uma bebida, ou agitando em um alimento semi-sólido, como pudim, cobertura, molho, purê, cereal cozido, molho de salada, por exemplo, ou, de outra maneira, mediante adição a um alimento ou suplemento dietário, por exemplo, encerrado em cápsulas de alimento ou recipiente de bebida para liberação imediatamente antes do consumo. O suplemento dietário pode compreender um ou mais ingredientes inertes, especialmente se for desejável limitar o número de calorias adicionadas à dieta pelo suplemento dietário. Por exemplo, o suplemento dietário da presente invenção pode conter também ingredientes opcionais que incluem, por exemplo, ervas, vitaminas, minerais, intensificadores, corantes, adoçantes, flavorizantes, ingredientes inertes e similares.

[00146] Em algumas modalidades, os suplementos dietários compreendem adicionalmente vitaminas e minerais incluindo, mas não se limitando a, acetato ou fosfato de cálcio, tribásico; fosfato de potássio, dibásico; óxido ou sulfato de magnésio; sal (cloreto de sódio); acetato ou cloreto de potássio; ácido ascórbico; ortofosfato férrico; niacinamida; óxido ou sulfato de zinco; pantotenato de cálcio; gluconato de cobre; riboflavina; beta caroteno; cloridrato de piridoxina; mononitrato de tiamina; ácido fólico; biotina; picolonato ou cloreto de cromo; iodeto de potássio; selenato de sódio; molibdato de sódio; filoquinona; vitamina D3; cianocobalamina; selenito de sódio; sulfato de cobre; vitamina A; vitamina C; inositol; iodeto de potássio. As dosagens adequadas para as vitaminas e os minerais podem ser obtidas, por exemplo, mediante consulta a orientações da RDA norte-americana.

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[00147] Em outras modalidades, a presente invenção fornece suplementos nutricionais (por exemplo, barrinhas energéticas ou barras ou bebidas substituintes de refeições) que compreendem a composição, de acordo com a invenção. O suplemento nutricional pode servir como substituto de refeição ou petisco e geralmente fornece calorias nutricionais. Em certas modalidades, os suplementos nutricionais fornecem carboidratos, proteínas, e gorduras em quantidades equilibradas. O suplemento nutricional pode compreender adicionalmente carboidratos, simples com comprimento médio de cadeia, ou polissacarídeos, ou uma combinação dos mesmos. Um açúcar simples pode ser escolhido para propriedades organolépticas desejáveis. O amido de milho não cozido é um exemplo de um carboidrato complexo. Caso se deseje a manutenção de estrutura com alto peso molecular, deve-se fazer sua inclusão apenas em formulações alimentícias ou porções das mesmas que não sejam cozidas ou processadas em calor, já que o calor quebrará o carboidrato complexo em carboidratos simples, sendo que os carboidratos simples são mono ou dissacarídeos. O suplemento nutricional contém, em uma modalidade, combinações de fontes de carboidrato de três níveis de comprimento de cadeia (simples, médio e complexo; por exemplo, sacarose, maltodextrinas e amido de milho não cozido).

[00148] Fontes de proteína a serem incorporadas ao suplemento nutricional da invenção podem ser qualquer proteína adequada utilizada em formulações nutricionais, podendo incluir proteína de soro de leite, concentrado de proteína de soro de leite, soro de leite em pó, ovo, farinha de soja, leite de soja, proteína de soja, proteína de soja isolada, caseinato (por exemplo, caseinato de sódio, caseinato de cálcio sódico, caseinato de cálcio, caseinato de potássio), proteína animal e vegetal e hidrolisados ou misturas dos mesmos. Ao escolher uma fonte de proteína, o valor biológico da proteína deve ser considerado primeiro, com os mais altos valores biológicos sendo encontrados no caseinato, soro de leite, lactalbumina, albumina de ovo e

49 / 58 proteínas de ovos inteiros. Em uma modalidade, a proteína é uma combinação de concentrado de proteína de soro de leite e caseinato de cálcio. Estas proteínas têm alto valor biológico; ou seja, elas têm uma alta proporção dos aminoácidos essenciais. Consulte Modern Nutrition in Health and Disease, 8a ed., Lea & Febiger, 1986, especialmente Volume 1, páginas 30 a 32.

[00149] O suplemento nutricional pode conter também outros ingredientes, como uma ou uma combinação de outras vitaminas, minerais, antioxidantes, fibras e outros suplementos dietários (por exemplo, proteína, aminoácidos, colina, lecitina). A seleção de um ou vários desses ingredientes é uma questão de formulação, design, preferências do consumidor e usuário final. As quantidades destes ingredientes adicionados aos suplementos dietários da presente invenção, são prontamente conhecidos pelo versado na técnica. A orientação para tais quantidades pode ser fornecida por doses U.S. RDA para crianças e adultos. Adicionalmente vitaminas e minerais que podem ser adicionadas incluem, mas não se limitam a, Fosfato de cálcio ou acetato, tribásico; fosfato de potássio, dibásico; óxido ou sulfato de magnésio; sal (cloreto de sódio); acetato ou cloreto de potássio; ácido ascórbico; ortofosfato férrico; niacinamida; óxido ou sulfato de zinco; pantotenato de cálcio; gluconato de cobre; riboflavina; beta caroteno; cloridrato de piridoxina; mononitrato de tiamina; ácido fólico; biotina; picolonato ou cloreto de cromo; iodeto de potássio; selenato de sódio; molibdato de sódio; filoquinona; vitamina D3; cianocobalamina; selenito de sódio; sulfato de cobre; vitamina A; vitamina C; inositol; iodeto de potássio.

[00150] O suplemento nutricional pode ser fornecido sob uma variedade de formas, e por uma variedade de métodos de produção. Em uma modalidade, para fabricar uma barra alimentícia, os ingredientes líquidos são cozidos; os ingredientes secos são adicionados com os ingredientes líquidos em um misturador e misturados até que seja obtida a fase de massa; a massa é colocada em uma extrusora, e extrudada; a massa extrudada é cortada em

50 / 58 comprimentos adequados; e o produto é resfriado. As barras podem conter outros nutrientes e cargas para melhorar o sabor, em adição aos ingredientes especificamente mencionados na presente invenção.

[00151] É entendido pelos versados na técnica que outros ingredientes podem ser adicionados àqueles aqui descritos, por exemplo, cargas, emulsificantes, conservantes, etc. para o processamento ou fabricação de um suplemento nutricional.

[00152] Adicionalmente, podem ser incorporados flavorizantes, agentes corantes, especiarias, nozes e similares à composição nutracêutica. Os flavorizantes podem estar sob a forma de extratos aromatizados, óleos voláteis, flavorizantes de chocolate, flavorizante de manteiga de amendoim, pedaços de biscoitos, crocante de arroz, baunilha ou qualquer flavorizante disponível comercialmente. Exemplos de flavorizantes úteis incluem, mas não se limitam a, extrato de anis puro, extrato imitação de banana, extrato imitação de cereja, extrato de chocolate, extrato puro de limão, extrato puro de laranja, extrato puro de menta, extrato imitação de abacaxi, extrato imitação de rum, extrato imitação de morango ou extrato puro de baunilha; ou óleos voláteis, como óleo de bálsamo, óleo de louro, óleo de bergamota, óleo de cedro, óleo de amêndoas, óleo de cereja, óleo de canela, óleo de cravo ou óleo de menta; manteiga de amendoim, flavorizante de chocolate, crocante de biscoito de baunilha, caramelo tipo "toffee" ou caramelo de manteiga. Em uma modalidade, o suplemento dietário contém cacau ou chocolate.

[00153] Os emulsificantes podem ser adicionados para estabilidade das composições nutracêuticas. Exemplos de emulsificantes adequados incluem, mas não se limitam a, lecitina (por exemplo, de ovo ou soja), e/ou mono e diglicerídeos. Outros emulsificantes são prontamente evidentes para o versado na técnica e a seleção de emulsificante(s) adequado(s) dependerá, em parte, da formulação e do produto final. Também podem ser adicionados conservantes ao suplemento nutricional para estender a vida em prateleira do

51 / 58 produto. Em certas modalidades, são usados conservantes como sorbato de potássio, sorbato de sódio, benzoato de potássio, benzoato de sódio ou cálcio EDTA dissódico.

[00154] Além dos carboidratos descritos acima, a composição nutracêutica pode conter adoçantes naturais ou artificiais (de preferência, de baixa caloria), por exemplo, sacarídeos, ciclamatos, aspartamina, aspartame, acessulfame-K e/ou sorbitol. Tais adoçantes artificiais podem ser desejáveis se o suplemento nutricional for destinado a ser consumido por um indivíduo com sobrepeso ou obeso, ou um indivíduo com diabetes tipo II, que tenha propensão á hiperglicemia.

[00155] Além disso, um suplemento mineral e com múltiplas vitaminas pode ser adicionado às composições nutracêuticas da presente invenção para obter uma quantidade adequada de um nutriente essencial, que esteja faltando em algumas dietas. O suplemento de minerais multivitamínico pode também ser útil para a prevenção de doenças e proteção contra perdas e deficiências nutricionais devido a padrões de estilo de vida.

[00156] A dosagem e as razões de catequina e/ou epicatequina e componentes adicionais administrados através de um nutracêutico irá variar dependendo de fatores conhecidos, como características farmacêuticas da composição específica e seu modo e via de administração; a idade, saúde e peso do receptor; a natureza e extensão dos sintomas; o tipo de tratamento concomitante; a frequência do tratamento; e o efeito desejado que pode ser determinado por meio do especialista na área com ensaios normais, ou com a habitual consideração sobre a formulação de uma composição nutracêutica.

[00157] Será entendido, entretanto, que o nível de dose específico para qualquer paciente específico dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, o peso corporal, a saúde geral, sexo e dieta do indivíduo que está sendo tratado; o tempo e a via de administração; a taxa de excreção; outros fármacos que tenham sido

52 / 58 administrados anteriormente; e a gravidade da doença específica sendo submetido à terapia, como é bem entendido pelos versados na técnica.

[00158] Doenças específicas a serem tratadas pelos compostos, composições, e métodos aqui revelados incluem: função prejudicada do músculo esquelético e cardíaco, recuperação da saúde ou função do músculo esquelético ou cardíaco, regeneração funcionalmente significativa de células ou função do músculo esquelético ou cardíaco, e quaisquer outras doenças reveladas na presente invenção.

[00159] Além de ser útil para o tratamento de seres humanos, certos compostos e formulações reveladas na presente invenção podem também ser úteis para o tratamento veterinário de animais de companhia, animais exóticos e animais de fazenda, incluindo mamíferos, roedores e similares. Mais animais preferenciais incluem cavalos, cães e gatos. Ensaios de atividade biológica Ensaios Western Blot:

[00160] Células ou amostras de tecido do músculo esquelético foram homogeneizadas em 50 ul de tampão lise (1% triton X-100, 20 mmol/L Tris, 140 mmol/L NaCI, 2 mmol/L EDTA, e 0,1 % SDS) com coquetéis inibidores de fosfatase e protease suplementados por 1 mmol/L PMSF, 2 mmol/L Na3V04 e 1 mmol/L NaP. Os homogenatos foram passados através de uma seringa de insulina cinco vezes, sonicados por 30 minutos a 4DC e centrifugados (12.000 X g) por 10 minutos. O teor de proteína total foi medido no sobrenadante. Um total de 40)lg foi carregado em um SDS-PAGE a 5% ou 10%, eletrotransferido, incubado por 1 hora em solução de bloqueio (5% leite em pó desnatado em TBS mais 0,1 % Tween 20 [TBS-T]), seguido por uma incubação por 3 horas a temperatura ambiente ou incubação de um dia para outro em 4DC com anticorpos primários. Os anticorpos primários foram tipicamente diluídos 1:1000 ou 1:2000 em TBS-T mais albumina sérica bovina a 5%. As membranas foram lavadas (3X por 5 minutos) em TBS-T e

53 / 58 incubadas por 1 h à temperatura ambiente na presença de anticorpos secundários conjugados com HRP diluídos 1:10.000 em solução de bloqueio. As membranas foram novamente lavadas 3 vezes em TBS-T e os imunoblots foram revelados com o uso de um kit de detecção por quimioluminescência aperfeiçoado. As intensidades de banda foram quantificadas digitalmente. Todos os anticorpos primários estão disponíveis comercialmente. Ensaio de mioblasto de camundongo

[00161] A epicatequina induz a expressão da folistatina, suprime a expressão da miostatina e acelera a diferenciação de mioblastos de rato cultivados em miotubos. Estes fenômenos estão associados ao aumento da expressão de biomarcadores de diferenciação muscular, como miogenina e mioD. A linhagem de células de mioblasto de camundongos, C2C12, foi cultivada em semi-confluência em placas de cultura de tecido de 6 poços e então expostas à epicatequina (100 nM) por três dias usando meios de indução de diferenciação padronizadas pela literatura: DMEM suplementado com soro de cavalo a 2%. As proteínas foram extraídas, separadas por eletroforese em gel e coradas como Western blots mediante a reação com anticorpos disponíveis comercialmente específicos para marcadores de crescimento e diferenciação de crescimento de célula muscular. Em experimentos que examinam os efeitos comparativos de (-) e (+) enantiômeros de epicatequina em células musculares, as células foram cultivadas até a semi-confluência em placas de 6 poços, colocadas em meio de diferenciação padronizado pela literatura contendo soro de cavalo, e então, estimuladas por 24 horas com (-) ou (+) enantiômeros de epicatequina, em concentrações variando de 10 nM a 1000 nM. As células foram então cultivadas como acima, e Western blots foram preparados para determinar a expressão relativa de PGC1a e folistatina, usando anticorpos primários específicos disponíveis comercialmente. Tratamento de pacientes diabéticos com produtos de cacau ricos em epicatequina

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[00162] Cinco pacientes com diabetes tipo 2 e insuficiência cardíaca receberam produtos de cacau ricos em epicatequina (fornecendo 100 mg de epicatequina por dia), todos os dias, por três meses.

[00163] O cacau rico em epicatequina aumentou os níveis de proteína do estimulante do crescimento do músculo esquelético, de folistatina, de marcadores de diferenciação muscular, (miogenina, mioD) e suprimiu a expressão da proteína inibitória, miostatina, em amostras de biópsia de músculo esquelético humano após três meses de tratamento. Os pacientes foram submetidos a biópsias do músculo quadríceps antes e após terminar o tratamento. O material da biópsia foi analisado por Western blots para a análise de teor de proteína muscular.

[00164] Micrografias eletrônicas de amostras de biópsia de músculo quadríceps obtidas antes e após os três meses de tratamento mostram uma grave ruptura e distorção da ultraestrutura de sarcômero no músculo esquelético humano de pacientes diabéticos com insuficiência cardíaca, consistente com sarcopenia. O tratamento restaurou significativamente a organização do sarcômero do músculo esquelético para quase normal. Esse fenômeno foi evidenciado em todos os cinco pacientes visto que o escore histológico médio melhorou de modo significativo.

[00165] O tratamento com epicatequina induziu expressão aumentada da forma ativada (desacetilada) de PGC 1a, um regulador transcricional de reparo e regeneração muscular, bem como biogênese mitocondrial, no músculo quadríceps dos pacientes. O tratamento também aumentou a expressão de elementos da família de proteína de sarcoglicano, incluindo distrofina, disferlina e utrogina, consistente com a melhora observada na morfologia do sarcômero. O tratamento também aumentou a biogênese mitocondrial, conforme evidenciado pelo aumento de proteínas do Complexo de Transporte de Elétrons por mg de tecido de quadríceps.

[00166] Os tioníveis de músculo esquelético de linha de base (com o

55 / 58 uso de um kit de ensaio de glutationa Cayman Inc.) em pacientes diabéticos com insuficiência cardíaca manifestaram notável diminuição, evidenciando significativo estresse oxidativo do tecido em comparação ao músculo normal. O tratamento com cacau rico em epicatequina restaurou os tioníveis totais, uma indicação de uma normalização de níveis de estresse oxidativo do tecido. O tratamento com epicatequina também aumentou a expressão de superóxido dismutase e catalase do quadríceps, importantes enzimas que protegem contra lesão muscular oxidativa. Estudos in vivo em camundongos selvagens e um modelo de camundongo de distrofia muscular

[00167] Camundongos do tipo selvagem (isto é, normais) e nulos para delta sarcoglicano (8-SG) que desenvolvem distrofia muscular, foram tratados por gavagem oral por 30 dias com epicatequina a 1 mg/kg, duas vezes ao dia, obtida junto a Sigma-Aldrich, ou com água apenas (Controle). Amostras de proteína do músculo quadríceps foram analisadas por Western blots para avaliar alterações nos níveis de proteínas mitocondriais, porina, mitofilina, complexo V (CV), superóxido dismutase 2 (SOD2) e catalase. Em camundongos do tipo selvagem, o tratamento com epicatequina aumenta e em camundongos nulos para 8-SG, impede a perda de proteínas mitocondriais. Em camundongos com distrofia muscular, a epicatequina aumentou a expressão proteica tanto de catalase quanto de superóxido dismutase 2 no músculo do coração e no quadríceps, importantes enzimas que vão contra o efeito deletério de lesão por oxidação ao diminuir a gravidade da lesão por oxidação.

[00168] Os camundongos com distrofia muscular delta sarcoglicano (8- SG) apresentam reduzido teor de glutationa (GSH, usando um kit de ensaio de glutationa da Cayman Inc.) no músculo quadríceps, evidenciando estresse oxidativo tecidual melhorado. O tratamento com epicatequina aumentou de modo notável os níveis de GSH muscular em ambos os tipos de

56 / 58 camundongos, selvagem e sem delta sarcoglicano.

[00169] Os camundongos com distrofia muscular que não possuem delta sarcoglicano demonstraram um notável aumento em PGC 1a, um fator transcricional que regula o reparo e a regeneração muscular, e regula a biogênese mitocondrial no músculo esquelético após tratamento com epicatequina oral, 1 mg/kg duas vezes por dia durante 4 semanas.

[00170] Em um experimento, camundongos idosos do tipo selvagem (26 meses) com deficiência muscular dos idosos, foram tratados por 2 semanas com epicatequina, 1 mg/kg duas vezes por dia durante duas semanas. Eles também demonstraram um aumento significativo em PGC1u no músculo esquelético, com um aumento correlacionado na expressão de proteína mitocondrial.

[00171] Em um experimento, camundongos mdx, caracterizados pela mesma mutação de distrofina que a vista na distrofia muscular de Duchenne, foram tratados oralmente com epicatequina, 1 mg/kg duas vezes por dia durante 4 semanas. Eles demonstraram um aumento na força muscular em comparação com os controles tratados com água, conforme determinado por um teste padrão temporizado de Cabeça para Baixo.

[00172] Na linhagem de células miócitos do rato, C2C12, (-) e (+) enantiômeros de epicatequina estimularam a expressão de PGC1u e folistatina dentro de 24 horas, de forma consistente com a ativação de rotas transcricionais que regulam a regeneração muscular e a expressão do hormônio trófico muscular, a folistatina. Biomarcadores

[00173] A indução de folistatina, um hormônio do crescimento muscular, e supressão de miostatina, um inibidor do crescimento muscular, pela epicatequina, in vitro e in vivo, sugere que essas proteínas podem ser biomarcadores úteis no monitoramento dos efeitos da epicatequina in vivo. Em pacientes diabéticos com insuficiência cardíaca, a razão entre folistatina e

57 / 58 miostatina foi medida e calculada antes e após o tratamento com cacau rico em epicatequina. Houve um aumento estatisticamente significativo na razão entre folistatina e miostatina associada ao tratamento, o que indica um aumento na folistatina e uma diminuição em seu antagonista natural, a miostatina. Efeito sobre o crescimento do corpo

[00174] Camundongos SD com peso corporal entre 50 e 60 g e com idade de 3 a 4 semanas foram divididos em 4 grupos. Os animais do grupo A foram parte de um grupo de controle de veículo, aos animais do grupo B, foi administrada dexametasona diariamente; Os animais do grupo C receberam epicatequina 3 mg/kg seguido de dosagem de dexametasona; Os animais do grupo D receberam 10 mg/kg de Epicatequina seguido de dexametasona. Toda a administração foi por via subcutânea (SC). O tratamento dos animais continuou por 36 dias. O peso corporal foi medido em dias alternados, o comprimento total foi medido semanalmente. Os animais foram fotografados periodicamente para dados de suporte adicionais. A ingestão de ração, saúde geral e o movimento foram avaliados rotineiramente. No 37° dia, os animais foram sacrificados e o comprimento do fêmur e da tíbia foi medido com o uso de compassos de calibre Vernier. O sangue foi coletado e armazenado.

[00175] Foi confirmado que a folistatina pode ter um efeito benéfico de melhoria sobre a redução no crescimento corporal associado à inibição da formação óssea secundária à toxicidade de corticoesteroides, conforme mostrado na Tabela 1 abaixo. TABELAS 1 A 3 Dados sobre o crescimento de taxas de 4 semanas em dexametasona com ou sem tratamento concorrente adicional com epicatequina Dex=1,5 mpk Dex=1 mpk Dex=0,5 mpk PESO (g) Dia 1 Dia 11 Dia 23 Dia 35 Rato nº Grupo Ind Média Ind Média Ind Média Ind Média 1 CONTROLE 58,2 61,2 123,9 132,3 211,2 220,7 302,8 318,4 2 64,2 140,7 230,2 333,9 3 DEX 55,4 59,3 91,1 89,1 88,0 85,7 103,9 96,1 4 57,7 84,3 80,0 93,1

58 / 58 Dex=1,5 mpk Dex=1 mpk Dex=0,5 mpk PESO (g) Dia 1 Dia 11 Dia 23 Dia 35 Rato nº Grupo Ind Média Ind Média Ind Média Ind Média 5 64,8 91,9 89,0 91,5 6 DEX + EPI (3) 59,9 59,2 85,6 84,8 104,0 103,5 185,1 183,3 7 55,4 81,2 105,2 181,7 8 62,2 87,6 101,3 183,1 9 DEX + EPI (10) 54,6 60,3 76,9 86,1 93,3 103,8 189,4 199,3 10 65,9 95,3 114,3 209,1 Dex=1,5 mpk Dex=1 mpk Dex=0,5 mpk Comprimento (cm) Dia 1 Dia 11 Dia 23 Dia 35 Rato nº Grupo Ind Média Ind Média Ind Média Ind Média 1 CONTROLE #DIV/0! 17,4 17,1 18,0 18,3 21,5 20,8 2 16,7 18,5 20 3 DEX #DIV/0! 15,4 15,3 14,5 14,2 14,5 14,2 4 15,1 14,0 14 5 15,3 14,0 14 6 DEX + EPI (3) #DIV/0! 15,2 15,1 15,0 14,8 17,5 17,7 7 15,1 15,0 17,5 8 15,1 14,5 18 9 DEX + EPI (10) #DIV/0! 14,5 14,9 15,5 15,5 18,5 18,8 10 15,2 15,5 19 Comprimento do osso (mm) Grupos Comprimento do fêmur (mm) Comprimento da tíbia (mm) Grupo 1 - Controle de Veículo 32,30 40,89 Grupo 2 - Dexas/c 22,68 28,67 Grupo 3 - Epi 1-3 MPK s/c 29,57 34,91 Grupo 4 - Epi 1-10 MPK s/c 31,30 35,37

Claims (22)

REIVINDICAÇÕES

1. Método para reverter ou atenuar lesão, ou fraqueza ou perda óssea, ou para evitar fraturas em um indivíduo em necessidade disso, caracterizado por compreender administrar, a um indivíduo, uma dose terapeuticamente eficaz de (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina, ou um derivado de epicatequina.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina ou um derivado de epicatequina ser administrado por via oral, ou intravenosa ou intramuscular, a 5 mg a 2 gramas por dia, em uma dose única ou em doses divididas.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a (+)-epicatequina e/ou a (-)-epicatequina ou um derivado de epicatequina ser administrado em uma dose entre 0,1 mg/kg de peso corporal por dia a 10 mg/kg de peso corporal por dia, por via oral, ou intravenosa ou intramuscular, em uma dose única ou em doses divididas.

4. Método de acordo com a reivindicação 1, sendo o método caracterizado por induzir nova formação óssea, ou formação óssea adicional, ou formação óssea mais forte ou regeneração óssea a fim de evitar fraturas ósseas.

5. Método de acordo com a reivindicação 1, sendo o método caracterizado por reverter ou atenuar a fraqueza óssea, evitando, assim, fraturas ósseas causadas pela administração de um composto conhecido por induzir a fraqueza ou o dano ósseo, comprometer a geração óssea ou comprometer o crescimento ósseo, sendo que o composto é selecionado do grupo que consiste em corticoesteroides, anticonvulsivos, quimioterápicos.

6. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fraqueza óssea ser causada por condições médicas conhecidas por estarem associadas à fraqueza ou ao dano ósseo, ao comprometimento da geração óssea ou ao comprometimento do crescimento ósseo.

7. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina ser coadministrada com cálcio, vitamina D ou calcitonina.

8. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por a (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina ou um derivado de epicatequina ser administrado por via oral, ou intravenosa ou intramuscular, a 5 mg a 2 gramas por dia, em uma dose única ou em doses divididas.

9. Método de acordo com a reivindicação 5 caracterizado por a (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina ou um derivado de epicatequina ser administrado por via oral, ou intravenosa ou intramuscular, a 5 mg a 2 gramas por dia, em uma dose única ou em doses divididas.

10. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por a (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina ou um derivado de epicatequina ser administrado por via oral, ou intravenosa ou intramuscular, a 5 mg a 2 gramas em por dia, em uma dose única ou em doses divididas.

11. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por a (+)-epicatequina e/ou (-)-epicatequina ou um derivado de epicatequina ser administrado por via oral, ou intravenosa ou intramuscular, a 5 mg a 2 gramas por dia, em uma dose única ou em doses divididas.

12. Composição caracterizada por compreender ou consistir em (+)-epicatequina, (-)-epicatequina ou uma mistura de ambas ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco delas, para uso como um medicamento para: (a) reverter ou atenuar lesão, ou fraqueza ou perda óssea, ou para evitar fraturas, e/ou (b) evitar, tratar ou curar osteoporose.

13. Composição de acordo com a reivindicação 12, caracterizada por a (+)-epicatequina, a (-)-epicatequina ou uma mistura de ambas ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco delas ser administrado por via oral, ou intravenosa ou intramuscular.

14. Composição de acordo com a reivindicação 12 e/ou 13, caracterizada por a (+)-epicatequina, a (-)-epicatequina ou uma mistura de ambas ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco delas ser administrado a 5 mg a 2 gramas por dia, em uma dose única ou em doses divididas.

15. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14, caracterizada por a (+)-epicatequina, a (-)- epicatequina ou uma mistura de ambas ou um sal farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco delas ser administrado a uma dose entre 0,1 mg/kg de peso corporal por dia a 10 mg/kg de peso corporal por dia, por via oral, ou intravenosa ou intramuscular, em uma dose única ou em doses divididas.

16. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15, sendo a dita composição caracterizada por induzir nova formação óssea, ou formação óssea adicional, ou formação óssea mais forte ou regeneração óssea a fim evitar fraturas ósseas.

17. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 16, caracterizada por a fraqueza ou perda óssea ser causada pela administração de um composto conhecido por induzir a fraqueza ou o dano ósseo, comprometer a geração óssea ou comprometer o crescimento ósseo, sendo que o composto é selecionado do grupo que consiste em corticoesteroides, anticonvulsivos e quimioterápicos, ou misturas desses.

18. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 17, caracterizada por a fraqueza óssea ser causada por condições médicas conhecidas por estarem associadas à fraqueza ou ao dano ósseo, ao comprometimento da geração óssea ou ao comprometimento do crescimento ósseo.

19. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 18, sendo a dita composição caracterizada por compreender adicionalmente cálcio, vitamina D ou calcitonina, ou misturas desses.

20. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 19, sendo a dita composição caracterizada por compreender adicionalmente corticoesteroides, anticonvulsivos, quimioterápicos ou misturas desses.

21. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores 12 a 20, sendo a dita composição caracterizada por aumentar a produção celular, ou muscular ou corporal de folistatina e proteínas semelhantes à folistatina.

22. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a dose terapêutica aumentar a produção celular, ou muscular ou corporal de folistatina e proteínas semelhantes à folistatina.