BR112020016016A2 - Composições e métodos para aprimorar rendimentos de cultura através do empilhamento de traços - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se a plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma que são semianãs e têm um ou mais traços de espiga aprimorados com relação a uma planta de controle, tal como aumento na área de espiga, peso de caroço único aumentado, peso fresco da espiga aumentado, número de floretes aumentado e atraso de floração mitigado. as plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma compreendem um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos constans (co) ou semelhantes a constans (col), e têm uma expressão reduzida de um ou mais genes da ga20 ou ga3 oxidase. também são fornecidos métodos para produzir as plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “COMPO- SIÇÕES E MÉTODOS PARA APRIMORAR RENDIMENTOS DE CUL- TURA ATRAVÉS DO EMPILHAMENTO DE TRAÇOS”.

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO

[001] Este pedido reivindica o benefício disposto no Título 35 do U.S.C. § 119(e) do Pedido Provisório Nº U.S. 62/631.344, depositado em quinta-feira, 15 de fevereiro de 2018, incorporado ao presente docu- mento a título de referência, em sua totalidade.

INCORPORAÇÃO DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[002] Uma listagem de sequências contida no arquivo chamado "SequenceListing_P34583WO00.txt" que tem 1.220.506 bytes (medido em MS-Windows®) e foi criada em 13 de fevereiro de 2019, é depositada eletronicamente e é incorporada a título de referência em sua totalidade.

CAMPO

[003] A presente invenção refere-se a plantas de milho transgêni- cas e/ou editadas ou mutadas por genoma que são semianãs e têm um ou mais traços de espiga aprimorados em relação a uma planta controle, bem como métodos para produzir plantas de milho transgênicas e/ou editadas ou mutadas por genoma através de empilhamento.

ANTECEDENTES

[004] Os rendimentos de cultura de cereais têm aumentado cons- tantemente nas últimas décadas devido a práticas agronômicas e traços aprimorados. No entanto, continua a haver uma necessidade na técnica de rendimento de milho aprimorado através de ganhos intrínsecos de rendimento e/ou perdas de rendimento reduzidas devido à resistência ao acamamento aprimorada, tolerâncias ao estresse e outros traços.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[005] A FIG. 1 mostra as alturas de planta das plantas de milho transgênicas empilhadas (“pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL”) que com- preendem um transgene que codifica o polipeptídeo de Physcomitrella patens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1) e uma sequência de DNA que codifica um miRNA para a supressão da GA20 oxidase (GA20Ox_SUP) através de quatro eventos de transformação, em rela- ção a plantas controle.

[006] A FIG. 2 mostra os traços de espiga das plantas de GA20Ox_SUP / PpCOL empilhadas através de quatro eventos de trans- formação incluindo área de espiga, estimativa do rendimento de grãos e peso de único caroço, em relação a plantas controle.

[007] A FIG. 3 mostra a área de espiga e o peso de único caroço de plantas de GA20Ox_SUP /PpCOL empilhadas em relação a plantas controle.

[008] A FIG. 4 mostra o peso fresco de espiga das plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL em três estações de cultivo consecutivas em relação a plantas controle.

[009] A FIG. 5 mostra o número de flósculos em plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL em relação a plantas controle.

[010] A FIG. 6 mostra a média da parcela do número de folhas verdes de 0, 7 e 14 dias após o início do estágio R5 para plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL em relação a plantas controle.

[011] A FIG. 7 mostra os dias para 50% de desprendimento de pó- len, dias para 50% de empalhamento visível e medições de intervalo de antese-empalhamento (ASI) para plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL em uma estação de cultivo em relação a plantas controle.

[012] A FIG. 8 mostra os traços de espiga das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL através de dois eventos de transfor- mação incluindo área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, grãos por espiga e peso de único caroço, em relação a plantas controle.

[013] A FIG. 9 mostra a estimativa do rendimento de grãos das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL através de dois eventos de transformação em relação a plantas controle.

[014] A FIG. 10 mostra os traços de espiga das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL através de dois eventos de transfor- mação incluindo área de espiga, volume de espiga, comprimento de es- piga, grãos por espiga e peso de único caroço, em relação a plantas de unidade de GA20Ox_SUP ou unidade de PpCOL.

[015] As FIGs. 11A e 11B mostram o amplo rendimento de super- fície cultivada das plantas de pilha de vetores de _GA20Ox_SUP / PpCOL para dois vetores diferentes, respectivamente, através de quatro eventos de transformação para cada vetor e dois testadores em relação a plantas controle.

[016] A FIG. 12 mostra o amplo rendimento de superfície cultivada das plantas de pilha de vetores de _GA20Ox_SUP / PpCOL para dois vetores diferentes através de quatro eventos de transformação em rela- ção a plantas de unidade de GA20Ox_SUP.

[017] A FIG. 13 mostra a estimativa do rendimento de grãos das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL através de dois eventos de transformação e cinco testadores em relação a plantas de unidade de GA20Ox_SUP.

[018] A FIG. 14 mostra os traços de área de espiga e comprimento de espiga das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL através de dois eventos de transformação e cinco testadores em relação a plantas de unidade de GA20Ox_SUP.

[019] A FIG. 15 mostra os traços de peso de único caroço e grãos por espiga das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL através de dois eventos de transformação e cinco testadores em relação a plantas de unidade de GA20Ox_SUP.

SUMÁRIO

[020] O presente relatório descritivo fornece uma planta de milho modificada ou uma parte de planta da mesma que compreende 1) um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma se- quência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes de ácido giberélico 20 (GA20) oxi- dase e/ou um ou mais genes de ácido giberélico 3 (GA3) oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CONSTANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL).

[021] O presente relatório descritivo fornece também uma plurali- dade de plantas de milho modificadas em um campo, sendo que cada planta de milho modificada compreende 1) um primeiro cassete de ex- pressão recombinante que compreende uma sequência de DNA trans- critível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes de ácido giberélico 20 (GA20) oxidase e/ou um ou mais ge- nes de ácido giberélico 3 (GA3) oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL.

[022] Também é fornecido pelo presente relatório descritivo um método para produzir uma planta de milho modificada, sendo que o mé- todo compreende: a) introduzir em uma célula de milho de um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a célula de milho compreende um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para supressão de um ou mais genes da GA3 oxi- dase e/ou um ou mais genes da GA20 oxidase; e b) regenerar ou de- senvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o se- gundo cassetes de expressão recombinante.

[023] É fornecido adicionalmente pelo presente relatório descritivo um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende: a) introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a su- pressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase em que a célula de milho compreende um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO e/ou COL; e b) regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo casse- tes de expressão recombinante.

[024] Em um aspecto, o presente relatório descritivo fornece um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende a) introduzir em uma célula de milho 1) um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a su- pressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase e 2) um segundo cassete de expressão recombinante que com- preende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; e b) regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compre- ende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

[025] Em um outro aspecto, o presente relatório descritivo fornece um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende a) introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a su- pressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase; b) introduzir na célula de milho da etapa (a) um segundo cas- sete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL para criar uma célula de milho modificada; e c) regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho modificada da etapa (b), em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cas- setes de expressão recombinante.

[026] Ainda em um outro aspecto, o presente relatório descritivo fornece um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende a) introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; b) introdu- zir na célula de milho da etapa (a) um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase para criar uma célula de milho modificada; e c) regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho modificada da etapa (b), em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cas- setes de expressão recombinante.

[027] O presente relatório descritivo fornece um método de produ- ção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compre- ende: a) cruzar uma primeira planta de milho modificada com uma se- gunda planta de milho modificada, em que a expressão ou a atividade de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase é reduzida na primeira planta de milho modificada em relação a um controle do tipo selvagem e em que a segunda planta de milho mo- dificada compreende um cassete de expressão recombinante que com- preende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; e b) produzir uma planta de milho descendente que compreende o cassete de expressão recombinante e tem a expressão reduzida do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

[028] O presente relatório descritivo fornece também um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende: a) introduzir em uma célula de milho um cassete de ex- pressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que co- difica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas, e em que a célula de milho compreende uma ou mais mutações e/ou edi- ções em um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes en- dógenos da GA20 oxidase; e b) regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o cassete de expressão recombinante e as uma ou mais mutações e/ou edições, e em que o nível de expressão ou ati- vidade do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase na planta de milho modificada é reduzido em relação a uma planta controle que não tem uma ou mais mutações e/ou edições.

[029] Também é fornecido pelo presente relatório descritivo um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende: a) mutar ou editar um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou um ou mais genes da GA20 oxidase em uma cé- lula de milho, em que a célula de milho compreende um cassete de ex- pressão recombinante que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas; e b) regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o cassete de expressão recombinante e as uma ou mais mutações e/ou edições, e em que o nível de expressão ou ati- vidade do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes endógenos da GA20 oxidase na planta de milho modificada é reduzido em relação a uma planta controle que não tem uma ou mais mutações e/ou edições.

[030] É adicionalmente fornecida pelo presente relatório descritivo uma planta de milho modificada que compreende 1) uma ou mais mu- tações ou edições em ou próximo a um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase, em que a expressão ou ati- vidade de um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase é reduzida em relação a uma planta controle do tipo selvagem e 2) um cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo de CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional um pro- motor expressável em plantas.

[031] Em um aspecto, o presente relatório descritivo fornece uma pluralidade de plantas de milho modificadas em um campo, sendo que cada planta de milho modificada compreende 1) uma ou mais mutações ou edições em ou próximas a um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase, em que a expressão dos um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase é reduzida em relação a uma planta controle do tipo selvagem, e 2) um cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas.

[032] Em um outro aspecto, o presente relatório descritivo fornece um construto de DNA recombinante que compreende 1) um primeiro cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA trans- critível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA20 oxidase ou um ou mais genes da GA3 oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas.

[033] Ainda em um outro aspecto, o presente relatório descritivo fornece uma molécula modelo doadora de DNA recombinante para in- tegração sítio-dirigida de uma sequência de inserção no genoma de uma planta de milho que compreende uma sequência de inserção e pelo menos uma sequência de homologia, em que a sequência de homologia é pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos pelo menos 90, pelo menos 100, pelo menos 150, pelo menos 200, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 2500 ou pelo menos 5000 nucleotídeos consecutivos de uma sequência de DNA alvo no genoma de uma célula de planta de milho, e em que a sequência de inserção compreende um cassete de expressão que com- preende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas.

DESCRIÇÃO DEFINIÇÕES

[034] A menos que definido de outro modo, os termos devem ser entendidos de acordo com o uso convencional por indivíduos de habili- dade comum na técnica relevante. Exemplos de recursos que descre- vem muitos dos termos relacionados à biologia molecular usados no presente documento podem ser encontrados em Alberts et al., Molecu- lar Biology of The Cell, 5ª Edição, Garland Science Publishing, Inc.: Nova Iorque, 2007; Rieger et al., Glossary of Genetics: Classical and Molecular, 5ª edição, Springer-Verlag: Nova Iorque, 1991; King et al, A Dictionary of Genetics, 6ª edição, Oxford University Press: Nova Iorque, 2002; e Lewin, Genes IX, Oxford University Press: Nova Iorque, 2007.

[035] Quaisquer referências citadas no presente documento, inclu- indo, por exemplo, todos os pacientes, pedidos de patente publicados, e pedidos de não patente são incorporados a título de referência, em sua totalidade. Para facilitar o entendimento da divulgação, vários ter- mos e abreviações, conforme usados no presente documento, são de- finidos a seguir:

[036] O termo “e/ou” quando usado em uma lista de dois ou mais itens, significa que qualquer um dos itens listados pode ser usado em si ou em combinação com quaisquer um ou mais dos itens listados. Por exemplo, a expressão “A e/ou B” é destinada a significar qualquer dentre um ou tanto A quanto B – isto é, A sozinho, B sozinho, ou A e B em combinação. A expressão “A, B e/ou C” é destinada a significar A sozi- nho, B sozinho, C sozinho, A e B em combinação, A e C em combina- ção, B e C em combinação, ou A, B, e C em combinação.

[037] O termo “cerca de” conforme usado no presente documento, é destinado a qualificar os valores numéricos que modifica, denotando tal valor como variável dentro de uma margem de erro. Quando ne- nhuma margem particular de erro, como um desvio padrão para um va- lor médio, é declarada, o termo “cerca de” deve ser entendido por signi- ficar que a faixa que abrangeria o valor declarado e a faixa que seria incluída arredondando-se de modo crescente ou decrescente para aquela figura, considerando as figuras significativas.

[038] Como usado no presente documento, uma "planta" inclui um explante, parte da planta, muda, plântula ou planta inteira em qualquer estágio de regeneração ou desenvolvimento. O termo "planta de cereal", conforme usado no presente documento, se refere a uma planta de cul- tura monocotiledônea (monocotiledônea) que pertence à família das gramíneas Poaceae ou Gramineae e é tipicamente colhida por suas se- mentes, incluindo, por exemplo, trigo, milho, arroz, painço, cevada, sorgo, aveia e centeio. Conforme usado no presente documento, uma

“planta de milho” ou “planta de maís” se refere a uma planta da espécie Zea mays e inclui todas as variedades de planta que podem ser melho- radas geneticamente com milho, incluindo espécies de maís selvagem.

[039] Como usado no presente documento, uma "parte de planta" pode se referir a qualquer órgão ou tecido intacto de uma planta, como um meristema, órgão/estrutura de broto (por exemplo,, folha, caule ou nódulo), raiz, flor ou órgão/estrutura floral (por exemplo, bráctea, sépala, pétala, estame, carpelo, antera e óvulo), semente (por exemplo, em- brião, endosperma e revestimento de semente), frutos (por exemplo, o ovário maduro), propágulo ou outros tecidos vegetais (por exemplo, te- cido vascular, tecido dérmico, tecido do solo, e similares), ou qualquer porção dos mesmos. Partes de planta da presente divulgação podem ser viáveis, não viáveis, regeneráveis e/ou não regeneráveis. Um "pro- págulo" pode incluir qualquer parte de planta que possa se desenvolver se transformando em uma planta inteira.

[040] Como usado no presente documento, uma "planta transgê- nica" se refere a uma planta cujo genoma foi alterado pela integração ou inserção de uma molécula, construto, cassete ou sequência de DNA recombinante para a expressão de uma molécula de RNA não codifi- cante, mRNA e/ou proteína na planta. Uma planta transgênica inclui uma planta R0 desenvolvida ou regenerada a partir de uma célula (ou células) de planta originalmente transformada, bem como plantas trans- gênicas descendentes em gerações posteriores ou cruzamentos da planta transgênica R0 que compreendem a molécula, construto, cassete ou sequência de DNA recombinante, Uma planta que tem uma molé- cula, construto, cassete ou sequência de DNA recombinante integrado ou inserido é considerada uma planta transgênica, mesmo que a planta tenha também outra mutação (ou mutações) ou edição (ou edições) que por si só não seria considerada transgênica.

[041] Uma célula vegetal é uma célula biológica de uma planta,

tomada a partir de uma planta ou derivada através da cultura de uma célula tomada a partir de uma planta. Como usado no presente docu- mento, uma "célula vegetal transgênica" se refere a qualquer célula ve- getal que é transformada com uma molécula, construto, cassete ou se- quência de DNA recombinante estavelmente integrado. Uma célula ve- getal transgênica pode incluir uma célula vegetal originalmente transfor- mada, uma célula vegetal transgênica de uma planta R0 regenerada ou desenvolvida, uma célula vegetal cultivada de outra planta transgênica, ou uma planta transgênica de qualquer planta de progênie ou descen- dente da planta R0 transformada, incluindo célula (ou células) de uma semente de planta ou embrião, ou uma célula vegetal cultivada, célula de calo, etc.

[042] Como usado no presente documento, o termo "sequência de DNA transcritível" se refere a uma sequência de DNA que pode ser transcrita em uma molécula de RNA. A molécula de RNA pode ser co- dificante ou não codificante e pode ou não estar ligada de maneira fun- cional a um promotor e/ou outras sequências reguladoras.

[043] Com os propósitos da presente divulgação, uma "molécula de RNA não codificante" é uma molécula de RNA que não codifica uma proteína. Exemplos não limitadores de uma molécula de RNA não codi- ficante incluem um microRNA (miRNA), um precursor de miRNA, um pequeno RNA interferente (siRNA), um precursor de siRNA, um pe- queno RNA (18 a 26 nt de comprimento) e precursores que codificam o mesmo, um siRNA heterocromático (hc-siRNA), um RNA de interação com Piwi (piRNA), um RNA de fita dupla em forma de grampo (dsRNA em forma de grampo), um siRNA de ação trans (ta-siRNA), um siRNA antissenso de ocorrência natural (nat-siRNA) , um RNA CRISPR (crRNA), um RNA traçador (tracrRNA), um RNA guia (gRNA) e um RNA guia único (sgRNA).

[044] Os termos “suprimindo”/“supressão” ou “reduzido”/”redução”

quando usados em referência a um gene (ou genes), se referem a uma diminuição, redução ou eliminação do nível de expressão de um mRNA e/ou proteína codificada pelo gene (ou genes), e/ou diminuição, redução ou eliminação da atividade de uma proteína codificada pelo gene (ou genes) em uma planta, célula vegetal ou tecido vegetal em um ou mais estágios do desenvolvimento da planta, em comparação com o nível de expressão de tal mRNA alvo e/ou proteína, e/ou a atividade de tal pro- teína codificada em uma planta , célula ou tecido do tipo selvagem ou controle no mesmo estágio (ou estágios) de desenvolvimento da planta.

[045] Como usado no presente documento, o termo "consecutivo" em referência a uma sequência polinucleotídica ou proteica significa sem deleções ou lacunas na sequência.

[046] Como comumente entendido na técnica, uma "mutação" se refere a qualquer alteração da sequência nucleotídica do genoma, DNA extracromossômico ou outro elemento genético de um organismo (por exemplo, um gene ou elemento regulador ligado de maneira funcional a um gene em uma planta), como uma inserção, uma deleção, uma inver- são, uma substituição, uma duplicação de nucleotídeos, etc.

[047] Os termos “porcentagem de identidade” ou “porcentagem idêntica” conforme usado no presente documento em referência a duas ou mais sequências de nucleotídeo ou proteína são calculados por (i) comparação de duas sequências alinhadas de modo otimizado (nucle- otídeo ou proteína) por um intervalo de comparação, (ii) determinação do número de posições nas quais a base de ácido nucleico idêntica (para sequências de nucleotídeo) ou resíduo de aminoácido (para pro- teínas) ocorre em ambas as sequências para render o número de posi- ções correspondidas, (iii) divisão do número de posições correspondi- das pelo número total de posições no intervalo de comparação, e então (iv) multiplicação deste quociente por 100% para render a porcentagem de identidade. Com propósitos de calcular a "porcentagem de identi- dade" entre as sequências de DNA e RNA, uma uracila (U) de uma se- quência de RNA é considerada idêntica a uma timina (T) de uma se- quência de DNA. Se a janela de comparação for definida como uma região de alinhamento entre duas ou mais sequências (ou seja, exclu- indo nucleotídeos nas extremidades 5’ e 3' das sequências polinucleo- tídicas alinhadas ou aminoácidos na terminação N e na terminação C de sequências de proteínas alinhadas, que não são idênticas entre as sequências comparadas), então a "porcentagem de identidade" pode também ser chamada de "porcentagem de identidade de alinhamento". Se a “porcentagem de identidade” for calculada em relação a uma se- quência de referência sem um intervalo de comparação particular espe- cificado, então, a porcentagem de identidade é determinada dividindo- se o número de posições correspondidas pela região de alinhamento pelo comprimento total da sequência de referência. Consequentemente, com propósitos da presente divulgação, quando duas sequências (con- sulta e sujeito) são alinhadas de modo otimizado (com permissão para lacunas em seu alinhamento), a “porcentagem de identidade” para a se- quência de consulta é igual ao número de posições idênticas entre as duas sequências dividido pelo número total de posições na sequência de consulta por seu comprimento (ou uma janela de comparação), que é, então, multiplicada por 100%.

[048] É reconhecido que as posições de resíduos de proteínas que não são idênticas geralmente diferem por substituições conservativas de aminoácidos, em que os resíduos de aminoácidos são substituídos por outros resíduos de aminoácidos com tamanho e propriedades quí- micas similares (por exemplo, carga, hidrofobicidade, polaridade, etc.) e, portanto, não alteram as propriedades funcionais da molécula. Quando as sequências diferem em substituições conservativas, a por- centagem de similaridade de sequência pode ser ajustada para cima para corrigir a natureza conservativa da substituição (ou substituições) não idêntica. É dito que as sequências que se diferem por tais substitui- ções conservativas têm “similaridade de sequências” ou “similaridade”. Portanto, “porcentagem de identidade”, ou “porcentagem similar”, como usada no presente documento em referência a duas ou mais sequências de proteína é calculada (i) comparando-se duas sequências de proteí- nas idealmente alinhadas em uma janela de comparação, (ii) determi- nando-se o número de posições nas quais ocorre um resíduo de amino- ácidos igual ou similar em ambas as sequências para produzir o número de posições correlacionadas, (iii) dividindo-se o número de posições correlacionadas pelo número total de posições na janela de comparação (ou o comprimento total da proteína de referência ou de consulta se uma janela de comparação não for especificada), e, então, (iv) multiplicando- se este quociente por 100% para produzir a porcentagem de similari- dade. As substituições conservativas de aminoácidos por proteínas são conhecidas na técnica.

[049] Para o alinhamento ideal de sequências para calcular sua porcentagem de identidade ou de similaridade, vários algoritmos e pro- gramas de alinhamento de sequências em pares ou múltiplo são conhe- cidos na técnica, como ClustalW, ou Basic Local Alignment Search Tool® (BLAST®), etc., que podem ser usados para comparar a identi- dade ou a similaridade da sequência entre duas ou mais sequências de nucleotídeos ou de proteínas. Embora outros métodos de alinhamento e comparação sejam conhecidos na técnica, o alinhamento entre duas sequências (incluindo as faixas de porcentagem de identidade descritas acima) pode ser conforme determinado pelo algoritmo ClustalW ou BLAST®, consultar, por exemplo, Chenna R. et al., “Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs”, Nucleic Acids Research 31: 3497-3500 (2003); Thompson JD et al., “Clustal W: Improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through se- quence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice,” Nucleic Acids Research 22: 4673-4680 (1994); e Larkin MA et al., “Clustal W and Clustal X version 2.0,” Bioinformatics 23: 2947-48 (2007); e Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W. & Lipman, D.J. (1990) “Basic local alignment search tool.” J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990), cujos conteúdos e divulgações totais são incorporados ao pre- sente documento a título de referência.

[050] Os termos "porcentagem de complementaridade" ou "por- centagem complementar", conforme usados no presente documento em referência a duas sequências de nucleotídeos, são similares ao conceito de porcentagem de identidade, porém se referem à porcentagem de nu- cleotídeos de uma sequência de consulta que pareia as bases ou hibrida idealmente com nucleotídeos de uma sequência em questão quando as sequências de consulta e em questão são dispostas linearmente e com bases idealmente pareadas sem estruturas de enovelamento secundá- rias, como alças, hastes ou grampos. Tal porcentagem de complemen- taridade pode estar entre duas fitas de DNA, duas fitas de RNA ou uma fita de DNA e uma fita de RNA. A "porcentagem de complementaridade" é calculada (i) pareando-se idealmente as bases ou hibridizando-se as duas sequências de nucleotídeos em uma disposição linear e totalmente estendida (ou seja, sem enovelamento ou estruturas secundárias) em uma janela de comparação, (ii) determinando-se o número de posições que pareiam as bases entre as duas sequências na janela de compara- ção para produzir o número de posições complementares, (iii) dividindo- se o número de posições complementares pelo número total de posi- ções na janela de comparação e (iv) multiplicando-se este quociente por 100% para produzir a porcentagem de complementaridade das duas se- quências. O pareamento de bases ideal de duas sequências pode ser determinado com base nos pareamentos conhecidos de bases nucleo- tídicas, como G-C, A-T e A-U, através de ligação de hidrogênio. Se a “porcentagem de complementaridade” estiver sendo calculada em rela- ção a uma sequência de referência, sem que uma janela de comparação específica seja especificada, então a porcentagem de identidade é de- terminada dividindo-se o número de posições complementares entre as duas sequências lineares pelo comprimento total da sequência de refe- rência. Portanto, com os propósitos da presente divulgação, quando duas sequências (consulta e em questão) têm as bases idealmente pa- readas (com tolerância para incompatibilidades ou nucleotídeos com bases não pareadas, porém sem enovelamento ou estruturas secundá- rias), a “porcentagem de complementaridade” para a sequência de con- sulta é igual ao número de posições com bases pareadas entre as duas sequências dividido pelo número total de posições na sequência de con- sulta ao longo de seu comprimento (ou pelo número de posições na se- quência de consulta em uma janela de comparação), que é então mul- tiplicado por 100%.

[051] O termo "ligado de maneira funcional" se refere a uma liga- ção funcional entre um promotor ou outro elemento regulador e uma sequência de DNA ou sequência de codificação transcritível associada (ou transgene), de modo que o promotor, etc., opere ou atue para iniciar, auxiliar, afetar, causar e/ou promover a transcrição e a expressão da sequência de DNA ou sequência de codificação transcritível associada, pelo menos em uma certa célula (ou células), tecido (ou tecidos), está- gio (ou estágios) de desenvolvimento e/ou condição (ou condições).

[052] Conforme comumente entendido na técnica, o termo "promo- tor" pode geralmente se referir a uma sequência de DNA que contém um sítio de ligação à RNA polimerase, um sítio de início da transcrição e/ou TATA box e auxilia ou promove a transcrição e a expressão de uma sequência polinucleotídica transcritível associada e/ou de um gene (ou transgene). Um promotor pode ser sinteticamente produzido, variado ou derivado de uma sequência promotora conhecida ou de ocorrência na- tural ou de outra sequência promotora.

Um promotor pode também in- cluir um promotor quimérico que compreende uma combinação de duas ou mais sequências heterólogas.

Portanto, um promotor da presente di- vulgação pode incluir variantes de sequências promotoras que são si- milares em composição, porém não idênticas a, outra sequência (ou se- quências) promotora conhecida ou fornecida no presente documento.

Um promotor pode ser classificado de acordo com uma variedade de critérios relacionados ao padrão de expressão de uma sequência de co- dificação ou transcritível ou gene associado (incluindo um transgene) ligada de maneira funcional ao promotor, como constitutivo, de desen- volvimento, tecido-específico, induzível, etc.

Os promotores que dirigem a expressão em todos ou na maior parte dos tecidos da planta são cha- mados de promotores “constitutivos”. Os promotores que acionam a ex- pressão durante certos períodos ou estágios de desenvolvimento são denominados como promotores “de desenvolvimento”. Os promotores que acionam a expressão intensificada em certos tecidos da planta em relação a outros tecidos de planta são denominados como promotores “intensificados em tecido” ou “preferenciais em tecido”. Deste modo, um promotor “preferencial em tecido” causa expressão relativamente mais alta ou preferencial em um tecido específico (ou tecidos específicos) da planta, mas com níveis mais baixos de expressão em outro tecido (ou tecidos) da planta.

Os promotores que se expressam dentro de um te- cido específico (ou tecidos específicos) da planta, com pouca ou ne- nhuma expressão em outros tecidos de planta, são denominados como promotores “específicos de tecido”. Um promotor “induzível” é um pro- motor que inicia a transcrição em resposta a um estímulo ambiental, como frio, seca ou luz, ou outros estímulos, como lesão ou aplicação de produtos químicos. Um promotor pode também ser classificado em ter- mos de sua origem, como sendo heterólogo, homólogo, quimérico, sin- tético, etc.

[053] Conforme usado no presente documento, um "promotor ex- pressável em plantas" se refere a um promotor que pode iniciar, auxiliar, afetar, causar e/ou promover a transcrição e a expressão de sua se- quência de DNA transcritível associada, sequência de codificação ou gene em uma célula ou tecido vegetal de milho.

[054] Como usado no presente documento, um "promotor heteró- logo expressável em plantas" se refere a um promotor expressável em plantas que não ocorre naturalmente adjacente ou associado ao gene ou sequência de ácidos nucleicos referenciado em seu ambiente natu- ral, porém que é posicionado por manipulação laboratorial.

[055] Conforme usado no presente documento, um "promotor vas- cular" se refere a um promotor expressável em plantas que dirige, causa ou inicia a expressão de uma sequência de DNA transcritível ou trans- gene ligado de maneira funcional a tal promotor em um ou mais tecidos vasculares da planta, mesmo que o promotor também seja expresso em outra célula (ou células) ou tecido (ou tecidos) vegetal não vascular. Tal tecido (ou tecidos) vascular pode compreender uma ou mais dentre a célula (ou células) ou tecido (ou tecidos) do floema, parenquimal vascu- lar e/ou da bainha de feixes da planta. Um "promotor vascular" é distin- guido de um promotor constitutivo pelo fato de que tem um padrão de expressão regulado e relativamente mais limitado que inclui um ou mais tecidos vasculares da planta. Um promotor vascular inclui tanto promo- tores vascular-específicos como promotores vascular-preferenciais.

[056] Conforme usado no presente documento, um "promotor fo- liar" se refere a um promotor expressável em plantas que dirige, causa ou inicia a expressão de uma sequência de DNA transcritível ou trans- gene ligado de maneira funcional a tal promotor em um ou mais tecidos foliares da planta, mesmo que o promotor também seja expresso em outra célula (ou células) ou tecido (ou tecidos) vegetal não foliar. Um promotor foliar inclui tanto promotores folha-específicos como promoto- res folha-preferenciais. Um "promotor foliar" é distinguido de um promo- tor vascular pelo fato de que é expresso mais predominante ou exclusi- vamente no tecido (ou tecidos) foliar da planta em relação a outros teci- dos vegetais, enquanto que um promotor vascular é expresso no tecido (ou tecidos) vascular mais geralmente incluindo tecido (ou tecidos) vas- cular fora da folha, como o tecido (ou tecidos) vascular do caule ou caule e folhas da planta.

[057] O termo "heterólogo" em referência a uma sequência promo- tora ou outra reguladora em relação a uma sequência polinucleotídica associada (por exemplo, uma sequência de DNA transcritível ou se- quência ou gene de codificação) é uma sequência promotora ou regu- ladora que não está ligada de maneira funcional a tal sequência polinu- cleotídica associada na natureza - por exemplo, a sequência promotora ou reguladora tem uma origem diferente em relação à sequência poli- nucleotídica associada e/ou a sequência promotora ou reguladora não ocorre naturalmente em uma espécie de planta que será transformada com a sequência promotora ou reguladora.

[058] O termo "recombinante", em referência a uma molécula de polinucleotídeo (DNA ou RNA), proteína, construto, vetor, etc., se refere a uma molécula de polinucleotídeo ou proteína ou sequência que é ar- tificial e normalmente não encontrada na natureza e/ou está presente em um contexto em que não se encontra normalmente na natureza, in- cluindo uma molécula de polinucleotídeo (DNA ou RNA), proteína, cons- truto, etc., que compreende uma combinação de duas ou mais sequên- cias de polinucleotídeos ou de proteínas que poderiam não ocorrer na- turalmente da mesma maneira sem intervenção humana, como uma molécula de polinucleotídeo, proteína, construto, etc., que compreende pelo menos duas sequências de polinucleotídeos ou de proteínas que são ligadas de maneira funcional, porém heterólogas entre si. Por exem- plo, o termo "recombinante" pode se referir a qualquer combinação de duas ou mais sequências de DNA ou de proteína na mesma molécula (por exemplo, um plasmídeo, construto, vetor, cromossomo, proteína, etc.) em que tal combinação é artificial e normalmente não encontrada na natureza. Conforme usado nesta definição, a frase “normalmente não encontrada na natureza” significa não encontrada na natureza sem a introdução humana. Uma molécula de polinucleotídeo ou proteína re- combinante, construto, etc., pode compreender uma sequência (ou se- quências) de polinucleotídeos ou de proteínas que é (i) separada de ou- tra sequência (ou sequências) de polinucleotídeos ou de proteínas que há em proximidade entre si na natureza e/ou (ii) adjacente a (ou contí- gua a) outra sequência (ou sequências) de polinucleotídeos ou de pro- teínas que não estão naturalmente em proximidade entre si. Tal molé- cula, proteína, construto de DNA recombinante, etc., pode também se referir a uma molécula ou sequência de polinucleotídeos ou de proteínas que foi geneticamente modificada e/ou construída fora de uma célula. Por exemplo, uma molécula de DNA recombinante pode compreender qualquer plasmídeo, vetor manipulado ou artificial, etc., e pode incluir uma molécula de DNA linear ou circular. Tais plasmídeos, vetores, etc., podem conter vários elementos de manutenção, incluindo uma origem procariótica de replicação e um marcador selecionável, bem como um ou mais transgenes ou cassetes de expressão, talvez além de um gene marcador selecionável de planta, etc.

[059] Tal como aqui usado, o termo "isolado" se refere a separar pelo menos parcialmente uma molécula de outras moléculas tipica- mente associadas a mesma no seu estado natural. Em um aspecto, o termo "isolado" se refere a uma molécula de DNA que é separada dos ácidos nucleicos que normalmente flanqueiam a molécula de DNA no seu estado natural. Por exemplo, uma molécula de DNA que codifica uma proteína que está naturalmente presente em uma bactéria seria uma molécula de DNA isolada se não estivesse dentro do DNA da bac- téria da qual a molécula de DNA que codifica a proteína é naturalmente encontrada. Assim, uma molécula de DNA fundida ou operativamente ligada a uma ou mais moléculas de DNA com as quais não estaria as- sociada na natureza, por exemplo, como resultado de técnicas de trans- formação de DNA recombinante ou de plantas, é considerada isolada aqui. Tais moléculas são consideradas isoladas mesmo quando integra- das ao cromossomo de uma célula hospedeira ou presentes em uma solução de ácido nucleico com outras moléculas de DNA.

[060] Como usado no presente documento, uma "região de codifi- cação" ou "região codificante" se refere a uma porção de um polinucle- otídeo que codifica uma unidade ou molécula funcional (por exemplo, sem limitação, uma sequência ou molécula de mRNA, de proteína ou de sequência de RNA não codificante).

[061] Conforme usado no presente documento, "modificado" no contexto de uma planta, semente de planta, parte de planta, célula ve- getal e/ou genoma de planta, se refere a uma planta, semente de planta, parte de planta, célula vegetal e/ou genoma de planta que compreende uma alteração manipulada no nível de expressão e/ou na sequência de codificação de um ou mais genes em relação a uma planta do tipo sel- vagem ou controle, semente de planta, parte de planta, célula vegetal e/ou genoma de planta, como através de um evento transgênico ou um evento de edição ou de mutação de genoma que afeta o nível de ex- pressão ou a atividade de um ou mais genes. Plantas modificadas, par- tes de plantas, sementes, etc., podem ser submetidas ou criadas por mutagênese, edição de genoma ou integração sítio-dirigida (por exem- plo, sem limitação, por métodos que usam nucleases sítio-específicas), transformação genética (por exemplo, sem limitação, por métodos de transformação de Agrobacterium ou bombardeamento de microprojé- teis) ou uma combinação dos mesmos. Tais plantas "modificadas", se- mentes de plantas, partes de plantas e células vegetais incluem plantas, sementes de plantas, partes de plantas e células vegetais que são des- cendentes ou derivadas de plantas "modificadas", sementes de plantas, partes de plantas e células vegetais que mantêm a alteração molecular (por exemplo, mudança no nível de expressão e/ou atividade) para os um ou mais genes. Uma semente modificada fornecida no presente do- cumento pode dar origem a uma planta modificada fornecida no pre- sente documento. Uma planta modificada, semente de planta, parte de planta, célula vegetal ou genoma de planta fornecido no presente docu- mento pode compreender um construto de DNA recombinante ou um vetor ou uma edição de genoma conforme fornecido no presente docu- mento. Um "produto vegetal modificado" pode ser qualquer produto fa- bricado a partir de uma planta modificada, parte da planta, célula vegetal ou cromossomo vegetal fornecido no presente documento, ou qualquer porção ou componente do mesmo.

[062] Conforme usado no presente documento, o termo "planta controle" (ou de modo semelhante uma semente de planta "controle", parte da planta, célula vegetal e/ou genoma da planta) se refere a uma planta (ou semente da planta, parte da planta, célula vegetal e/ou ge- noma da planta) que é usada para comparação com uma planta modifi- cada (ou semente de planta modificada, parte da planta, célula vegetal e/ou genoma da planta) e tem um background genético igual ou similar (por exemplo, as mesmas linhagens parentais, cruzamento híbrido, li- nhagem endogâmica, testadores etc.) da planta modificada (ou semente de planta, parte da planta, célula vegetal e/ou genoma vegetal), exceto para um transgene, um cassete de expressão, uma mutação e/ou edi- ção do genoma que afeta um ou mais genes. Com propósitos de com- paração com uma planta modificada, semente de planta, parte de planta, célula vegetal e/ou genoma da planta, uma "planta do tipo sel- vagem" (ou de modo semelhante uma semente da planta "do tipo sel- vagem", parte da planta, célula vegetal e/ou genoma da planta) se refere a uma planta controle editada não transgênica, não mutada e não ge- nômica, semente de planta, parte de planta, célula vegetal e/ou genoma da planta.

Alternativamente, como pode ser especificado no presente documento, tal "planta controle" (ou de modo semelhante uma semente de planta "controle", parte da planta, célula vegetal e/ou genoma da planta) pode se referir a uma planta (ou semente da planta, parte da planta, célula vegetal e/ou genoma da planta) que (i) é usada para com- paração com uma planta modificada (ou semente de planta modificada, parte da planta, célula vegetal e/ou genoma da planta) que tem uma pilha de dois ou mais transgenes, cassetes de expressão, mutações e/ou edições de genoma, (ii) que tem um background genético igual ou similar (por exemplo, as mesmas linhagens parentais, cruzamento hí- brido, linhagem endogâmica, testadores etc.) da planta modificada (ou semente de planta, parte da planta, célula vegetal e/ou genoma vege- tal), porém (iii) é desprovida de pelo menos um dentre os dois ou mais transgenes, cassetes de expressão, mutações e/ou edições do genoma da planta modificada (por exemplo, uma pilha em comparação com um único de um dos membros da pilha). Conforme usado no presente do- cumento, uma planta "controle", uma semente de planta, uma parte de planta, célula vegetal e/ou o genoma de planta pode também ser uma planta, semente de planta, parte de planta, célula vegetal e/ou genoma de planta que tem um background genético similar (porém não igual ou idêntico) a uma planta modificada, semente de planta, parte de planta, célula vegetal e/ou genoma da planta, se considerado suficientemente similar para comparação das características ou traços que serão anali- sados.

[063] Conforme usado no presente documento, “cruzado” ou “cru- zar” significa produzir progênie por meio de uma fertilização (por exem- plo, células, sementes ou plantas) e inclui cruzamentos entre plantas (sexual) e autofertilização (autocruzamento).

[064] Como usado no presente documento, "traço de espiga" de uma planta de milho se refere a um traço de uma espiga de uma planta de milho. Em um aspecto, um traço de espiga pode incluir, porém sem limitação, área de espiga, peso de único caroço, peso fresco de espiga e/ou número de flósculos. Em um outro aspecto, um traço de espiga pode incluir, porém sem limitação, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, vazio de ponta de espiga, vazio de espiga, volume de espiga, número de caroços, número de caroços por fileira, número de caroços por espiga, caroços por área de campo, classificação de caroço, número da fileira de caroços, peso de caroço, peso de único caroço, rendimento e/ou estimativa do rendimento de grãos. Ainda em um outro aspecto, um traço de espiga pode incluir, porém sem limitação, postura de es- piga, cor do sabugo da espiga, diâmetro de sabugo de espiga, resistên- cia do sabugo de espiga, cor da casca seca da espiga, cor da casca fresca da espiga, bráctea da casca da espiga, cobertura da casca da espiga, abertura da casca da espiga, número de espigas por talo, com- primento da haste da espiga, porcentagem de descascamento da es- piga, cor do empalhamento de espiga, afilamento de espiga, peso de espiga, classificação da podridão da espiga, cor aleurona do caroço, cor da cobertura do caroço, cor do endosperma do caroço, tipo de endos- perma do caroço, grau do caroço, comprimento do caroço, cor do peri- carpo do caroço, direção da fileira do caroço, cor lateral do caroço, es- pessura do caroço, tipo do caroço, largura do caroço, peso do sabugo e/ou prolificidade. Uma planta de milho modificada ou editada/mutada por genoma da presente divulgação exibe um ou mais traços de espiga aprimorados em comparação com uma planta de milho controle. Em um aspecto, uma planta de milho modificada ou editada/mutada por ge- noma exibe uma área de espiga aumentada em relação a uma planta de milho controle. Em um aspecto, uma planta de milho modificada ou editada/mutada por genoma exibe um peso de caroço aumentado em relação a uma planta de milho controle. Em um aspecto, uma planta de milho modificada ou editada/mutada por genoma exibe um peso fresco de espiga aumentado em relação a uma planta de milho controle.

[065] Conforme usado no presente documento, "rendimento" se refere à quantidade total de um produto agrícola (por exemplo, semen- tes, frutas, etc.) produzido ou colhido a partir de uma pluralidade de plantas de cultivo por unidade de área de cultivo em terra (por exemplo, um campo de plantas de cultivo) como entendido na técnica. O rendi- mento pode ser medido ou estimado em uma estufa, em um campo ou sob condições de ambiente, de tratamento e/ou de estresse específicas. Por exemplo, como conhecido e entendido na técnica, o rendimento pode ser medido em unidades de quilogramas por hectare, bushels por acre, ou similares. De fato, o rendimento pode ser medido em termos de "amplo rendimento da superfície cultivada" ou "BAY", como conhe- cido e entendido na técnica.

[066] Conforme usado no presente documento, "condições com- paráveis" para plantas se refere a condições ambientais e práticas agro- nômicas iguais ou similares para cultivar e fazer comparações significa- tivas entre dois ou mais genótipos de plantas, de modo que nem as con- dições ambientais nem as práticas agronômicas contribuam significati- vamente para, ou expliquem, quaisquer diferenças observadas entre os dois ou mais genótipos de plantas. As condições ambientais incluem, por exemplo, luz, temperatura, água, umidade, solo e nutrição (por exemplo, nitrogênio e fósforo).

[067] Conforme usado no presente documento, uma "técnica de edição de genoma alvejada" se refere a qualquer método, protocolo ou técnica que permita a edição precisa e/ou alvejada de um local especí- fico em um genoma de uma planta (ou seja, a edição é ampla ou com- pletamente não aleatória) usando uma nuclease sítio-específica, como uma meganuclease, uma nuclease de dedo de zinco (ZFN), uma endo- nuclease guiada por RNA (por exemplo, o sistema CRISPR/Cas9), uma endonuclease TALE (TALEN), uma recombinase ou uma transposase.

[068] Como usado no presente documento, “edição” ou “edição de genoma” se refere à geração de uma mutação, deleção, inversão ou substituição alvejada de pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 75, pelo menos 100, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 2500, pelo menos 5000, pelo menos 10000 ou pelo menos 25000 nucleotídeos de uma sequên- cia de ácidos nucleicos de genoma vegetal endógeno usando uma téc- nica de edição de genoma alvejada. Como usado no presente docu- mento, “edição” ou “edição de genoma” abrange também a inserção al- vejada ou integração sítio-dirigida de pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo me- nos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 75, pelo menos 100, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 750, pelo menos 1000, pelo menos 1500, pelo menos 2000, pelo menos 2500, pelo menos 3000, pelo menos 4000, pelo menos 5000, pelo menos 10000 ou pelo menos 25000 nucleotídeos no genoma endógeno de uma planta usando uma técnica de edição de genoma alvejada.

[069] Como usado no presente documento, um "sítio alvo" para edição de genoma se refere à localização de uma sequência polinucle- otídica dentro de um genoma de planta que é alvejada e clivada por uma nuclease sítio-específica introduzindo uma quebra de fita dupla (ou des- continuidade (nick) de fita simples) na cadeia principal de ácido nucleico da sequência polinucleotídica e/ou sua fita de DNA complementar. Uma nuclease sítio-específica pode se ligar a um sítio alvo, como por meio de um RNA guia não codificante (por exemplo, sem limitação, um RNA CRISPR (crRNA) ou um RNA guia único (sgRNA), como descrito adici- onalmente abaixo). Um RNA guia não codificante fornecido no presente documento pode ser complementar a um sítio alvo (por exemplo, com- plementar à fita de uma molécula de ácido nucleico de fita dupla ou cro- mossomo no sítio alvo). Um "sítio alvo" também se refere à localização de uma sequência polinucleotídica dentro de um genoma vegetal que é ligado e clivado por outra nuclease sítio-específica que pode não ser guiada por uma molécula de RNA não codificante, como uma meganu- clease, nuclease de dedo de zinco (ZFN), ou uma nuclease efetora se- melhante a ativador de transcrição (TALEN), para introduzir uma quebra de fita dupla (ou nick de fita simples) na sequência polinucleotídica e/ou em sua fita de DNA complementar. Como usado no presente docu- mento, uma "região alvo" ou uma "região alvejada" se refere a uma se- quência ou região polinucleotídica que é flanqueada por dois ou mais sítios alvo. Sem limitação, em alguns aspectos, uma região alvo pode ser submetida a uma mutação, uma deleção, uma inserção ou uma in- versão. Como usado no presente documento, "flanqueado" quando usado para descrever uma região alvo de uma sequência ou molécula polinucleotídica, se refere a dois ou mais sítios alvo da sequência ou molécula polinucleotídica que circunda a região alvo, com um sítio alvo em cada lado da região alvo.

[070] Além da edição do genoma, o termo "sítio alvo” pode tam- bém ser usado no contexto de supressão de genes para se referir a uma porção de uma molécula de mRNA (por exemplo, um "sítio de reconhe- cimento") que é complementar a pelo menos uma porção de uma molé- cula de RNA não codificante (por exemplo, um miRNA, siRNA, etc.) co- dificada por um construto de supressão. Como usado no presente do- cumento, um "sítio alvo" para uma nuclease guiada por RNA pode com- preender a sequência de uma fita complementar de uma molécula de ácido nucleico (DNA) de fita dupla ou de um cromossomo no sítio alvo. Será entendido que uma identidade ou complementaridade perfeita pode não ser necessária para que um RNA guia não codificante se ligue ou hibridize a um sítio alvo. Por exemplo, pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7 ou pelo menos 8 incompatibilidades (ou mais) entre um sítio alvo e um RNA não codificante podem ser toleradas.

[071] Como usado no presente documento, uma “molécula doa- dora", "modelo doador" ou "molécula modelo doadora" (coletivamente um "modelo doador"), que pode ser um modelo doador de DNA recom- binante, é definida como uma molécula de ácido nucleico que tem um modelo de ácido nucleico ou sequência de inserção para inserção ou recombinação sítio-dirigida e alvejada no genoma de uma célula vegetal através do reparo de uma descontinuidade ou quebra de DNA de fita dupla no genoma de uma célula vegetal. Por exemplo, um "modelo do- ador" pode ser usado para integração sítio-dirigida de um transgene ou construto de supressão, ou como um modelo para introduzir uma muta- ção, como uma inserção, uma deleção, etc., em um sítio alvo dentro do genoma de uma planta. Uma técnica de edição de genoma alvejada for- necida no presente documento pode compreender o uso de uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais mo- léculas ou modelos doadores. Um modelo doador pode ser uma molé- cula ou plasmídeo de DNA ou RNA de fita simples ou de fita dupla. Um modelo doador também pode ter pelo menos uma sequência de homo- logia ou braço de homologia, como dois braços de homologia, para diri- gir a integração de uma sequência de mutação ou inserção em um sítio alvo no genoma de uma planta através de recombinação homóloga, em que a sequência de homologia ou o braço (ou braços) de homologia é idêntico ou complementar, ou tem uma porcentagem de identidade ou porcentagem de complementaridade, com uma sequência no ou pró- ximo ao sítio alvo dentro do genoma da planta. Quando um modelo do- ador compreende braço (ou braços) de homologia e uma sequência de inserção, o (ou braços) de homologia flanqueia ou circunda a sequência de inserção do modelo doador. Além disto, o modelo doador pode ser linear ou circular e pode ser de fita simples ou de fita dupla. Um modelo doador pode ser entregue à célula como um ácido nucleico nu (por exemplo, através de bombardeamento de partículas), como um com- plexo com um ou mais agentes de entrega (por exemplo, lipossomas, proteínas, poloxâmeros, fita T encapsulada com proteínas, etc.), ou con- tido em um veículo de entrega bacteriano ou viral, como, por exemplo, Agrobacterium tumefaciens ou um geminivírus, respectivamente.

[072] Uma sequência de inserção de um modelo doador pode compreender um ou mais genes ou sequências que codificam uma se- quência de RNA não codificante ou mRNA transcrita e/ou uma sequên- cia proteica traduzida. Uma sequência ou gene transcrito de um modelo doador pode codificar uma proteína ou uma molécula de RNA não codi- ficante. Uma sequência de inserção de um modelo doador pode com- preender uma sequência polinucleotídica que não compreende um gene funcional ou uma sequência de genes inteira (por exemplo, o modelo doador pode simplesmente compreender sequências reguladoras, como uma sequência promotora, ou apenas uma porção de um gene ou uma sequência de codificação) ou pode não conter nenhum elemento de expressão gênica identificável ou qualquer sequência gênica trans- crita ativamente. Uma sequência de inserção de um modelo doador for- necida no presente documento pode compreender uma sequência de DNA transcritível que pode ser transcrita em uma molécula de RNA, que pode ser não codificante e pode ou não estar ligada de maneira funcio- nal a uma sequência promotora e/ou a outra reguladora.

[073] Conforme usado no presente documento, o termo "RNA guia" ou "gRNA" é uma sequência curta de RNA que compreende (1) uma sequência de RNA estrutural ou de arcabouço necessária para a ligação ou a interação com uma nuclease guiada por RNA e/ou com outras moléculas de RNA (por exemplo, tracrRNA) e (2) uma sequência de RNA (chamada no presente documento de uma "sequência guia") que é idêntica ou complementar a uma sequência alvo ou a um sítio alvo. Um "RNA guia de cadeia única" (ou "sgRNA") é uma molécula de RNA que compreende um crRNA ligado covalentemente a um tracrRNA por uma sequência de ligação, que pode ser expressa como uma única transcrição ou molécula de RNA. O RNA guia compreende uma sequên- cia guia ou alvo (uma "sequência guia") que é idêntica ou complementar a um sítio alvo dentro do genoma da planta, como no ou próximo a um gene da GA oxidase. Um motivo adjacente ao protoespaçador (PAM) pode estar presente no genoma imediatamente adjacente e a montante da extremidade 5 'da sequência de sítio alvo genômico complementar à sequência de alvejamento do RNA guia - ou seja, imediatamente a ju- sante (3') à fita senso (+) do sítio alvo genômico (em relação à sequên- cia de alvejamento do RNA guia) como conhecido na técnica. A sequên- cia genômica de PAM na fita senso (+) adjacente ao sítio alvo (em rela- ção à sequência alvo do RNA guia) pode compreender 5'-NGG-3'. No entanto, a sequência correspondente do RNA guia (ou seja, imediata- mente a jusante (3 ') da sequência alvo do RNA guia) geralmente não pode ser complementar à sequência genômica de PAM. O RNA guia tipicamente pode ser uma molécula de RNA não codificante que não codifica uma proteína.

[074] Conforme usado no presente documento, uma “nuclease guiada por RNA” se refere a uma DNA endonuclease guiada por RNA associada ao sistema CRISPR. Os exemplos não limitantes de nuclea- ses guiadas por RNA incluem Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9 (também conhecido como Csn1 e Csx12), Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, homólogos das mesmas, ou versões mo- dificadas das mesmas. Em um aspecto, a nuclease guiada por RNA é Cas9. Em um aspecto, a nuclease guiada por RNA compreende as se- quências de localização nuclear (NLS) N e C terminal.

DESCRIÇÃO

[075] A presente divulgação fornece certas combinações empilha- das de transgenes e/ou de mutações ou de edições em plantas de mi- lho, partes de plantas etc., que compreendem um transgene que codi- fica um ou mais polipeptídeos CONTANS (CO) ou semelhantes a CONSTANS (COL), tais como semelhante a CONSTANS 1 de Physco- mitrella patens (PpCOL1), além de uma redução no nível de expressão de um ou mais genes da GA20 e/ou genes da oxidase GA3 através de supressão, de mutação e/ou de edição dos genes da GA oxidase, em que as plantas de milho têm um fenótipo semianão e um ou mais traços aprimorados relacionados ao rendimento, resistência ao acamamento e/ou tolerância ao estresse. Conforme descrito no Pedido PCT copen- dente nº PCT/US2017/047405, cujo conteúdo e divulgação estão incor- porados no presente documento a título de referência, a redução do ní- vel de GAs ativos em milho ou em outras plantas de cereais, como atra- vés da supressão, da mutação ou da edição de um ou mais genes da

GA20 e/ou genes da GA3 oxidase pode resultar em um fenótipo semia- não com traços agronômicos aprimorados, como resistência ao acama- mento e/ou rendimento aumentado. No entanto, aqui é proposto que níveis mais baixos de GA ativo possam ser combinados com um cassete de expressão ou transgene que codifique uma proteína CONTANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL), como PpCOL1, para produzir uma planta de milho semianã com traços de espiga positivos, levando a um aumento ainda maior do rendimento, fornecendo assim maiores benefí- cios agronômicos do que a expressão do gene de CO/COL ou níveis mais baixos de GA ativo individualmente.

[076] As giberelinas (ácidos giberélicos ou GAs) são hormônios vegetais que regulam vários dos principais processos de crescimento e desenvolvimento vegetal. A manipulação dos níveis de GA em varieda- des semianãs de plantas de trigo, arroz e sorgo levou a uma produtivi- dade aumentada e acamamento reduzido nestas culturas de cereais du- rante o século 20, que foi em grande parte responsável pela Revolução Verde. No entanto, ganhos de rendimento bem-sucedidos em outras culturas de cereais, como o milho, não foram alcançados através da manipulação da via de GA. O milho ou o maís são exclusivos entre as gramíneas produtoras de grãos, na medida que formam inflorescências separadas masculinas (borla) e femininas (espiga), e as mutações na via de GA no milho têm demonstrado impactar negativamente o desen- volvimento reprodutivo. De fato, algumas mutações nos genes da via de GA no milho têm sido associadas a várias plantas fora do padrão que são incompatíveis com o rendimento, o que levou os pesquisadores a não encontrar variedades de milho semianãs e de alto rendimento atra- vés da manipulação da via de GA.

[077] Apesar destas dificuldades anteriores em alcançar maiores rendimentos de grãos no milho através da manipulação da via de GA, o pedido PCT copendente nº PCT/US2017/047405 descreve uma ma- neira de manipular os níveis de GA ativo em plantas de milho de uma maneira que reduz a altura total da planta e o comprimento dos entrenós do caule e aumenta a resistência ao acamamento, porém não gera as plantas fora do padrão de reprodução anteriormente associadas a mu- tações da via de GA no milho. Evidências adicionais indicam que estas plantas de milho de baixa estatura ou semianãs com níveis reduzidos de GA podem também ter um ou mais traços adicionais de rendimento e/ou tolerância ao estresse, incluindo aumento do diâmetro do caule, redução do quebramento verde, raízes mais profundas, aumento da área foliar, fechamento mais precoce da copa, maior condutância esto- mática, menor altura de espiga, maior teor de água foliar, maior tolerân- cia à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, maior eficiência no uso de água, teor e área de antocianina reduzidos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do número de caroços, aumento de peso de caroço, aumento do rendimento e/ou aumento do índice de colheita.

[078] Os ácidos giberélicos ativos ou bioativos (isto é, "giberelinas ativas" ou "GAs ativos") são conhecidos na técnica para uma determi- nada espécie de planta, diferentemente de GAs inativos. Por exemplo, os GAs ativos em plantas de milho e superiores incluem os seguintes: GA1, GA3, GA4 e GA7. Portanto, um "tecido produtor de GA ativo" é um tecido vegetal que produz um ou mais GAs ativos.

[079] Certas enzimas biossintéticas (por exemplo, GA20 oxidase e GA3 oxidase) e enzimas catabólicas (por exemplo, GA2 oxidase) na via de GA participam da síntese e da degradação de GA, respectivamente, para afetar os níveis de GA ativo nos tecidos vegetais. Portanto, além da supressão de certos genes da GA20 oxidase, propõe-se ainda que a supressão de um gene da GA3 oxidase de maneira constitutiva ou te- cido-específica ou tecido-preferencial possa também produzir plantas de milho com um fenótipo de baixa estatura e maior resistência ao aca- mamento, com possível aumento do rendimento, porém sem plantas fora do padrão na espiga.

[080] Sem se ater a qualquer teoria, propõe-se que a supressão incompleta de gene (ou genes) da oxidase GA20 ou da GA3 e/ou o al- vejamento de um subconjunto de um ou mais genes da GA oxidase pode ser eficaz para obter um fenótipo de baixa estatura, semianão com maior resistência ao acamamento, porém sem plantas fora do padrão de reprodução na espiga. Propõe-se ainda, sem se ater à teoria, que restringir a supressão de gene (ou genes) da GA20 e/ou gene (ou ge- nes) da oxidase GA3 a certos tecidos produtores de GA ativo, como os tecidos vasculares e/ou foliares da planta, pode ser suficiente para pro- duzir uma planta de baixa estatura com maior resistência ao acama- mento, porém sem plantas fora do padrão significativas nos tecidos re- produtivos. A expressão de um elemento de supressão de oxidase GA20 ou GA3 de uma maneira tecido-específica ou tecido-preferencial pode ser suficiente e eficaz na produção de plantas com o fenótipo de baixa estatura, evitando potenciais plantas fora do padrão em tecidos reprodutivos que eram anteriormente observadas com mutantes de GA em milho (por exemplo, evitando ou limitando a supressão do gene (ou genes) da GA20 oxidase nestes tecidos reprodutivos). Por exemplo, o gene (ou genes) da GA20 e/ou da GA3 oxidase podem ser alvejados para a supressão usando um promotor vascular, como um promotor do vírus baciliforme do arroz tungro (RTBV), que dirige a expressão nos tecidos vasculares de plantas. O padrão de expressão do promotor de RTBV é enriquecido em tecidos vasculares de plantas de milho em re- lação a tecidos não vasculares, o que é suficiente para produzir um fe- nótipo semianão em plantas de milho quando ligado de maneira funcio- nal a um elemento de supressão que alveja o gene (ou genes) da GA20 e da GA3 oxidase. A redução dos níveis de GA ativo no tecido (ou teci- dos) de uma planta de milho que produz GAs ativos pode reduzir a altura da planta e aumentar a resistência ao acamamento, e plantas fora do padrão podem ser evitadas nestas plantas se os níveis de GA ativo tam- bém não forem significativamente afetados ou reduzidos em tecidos re- produtivos, como o órgão feminino ou a espiga em desenvolvimento da planta. Se os níveis de GA ativo puderem ser reduzidos no talo, caule ou entrenó (ou entrenós) de plantas de milho ou de cereais sem afetar significativamente os níveis de GA nos tecidos reprodutivos (por exem- plo, órgãos reprodutivos femininos ou masculinos ou inflorescências), então as plantas de milho ou de cereais que têm altura de planta redu- zida e resistência ao acamamento aumentada poderiam ser criadas sem plantas fora do padrão nos tecidos reprodutivos da planta.

[081] Sem se ater à teoria, propõe-se ainda que fenótipos de baixa estatura e semianões em plantas de milho podem resultar de um nível suficiente de expressão de um construto de supressão que alveja certo gene (ou genes) da GA oxidase em tecido (ou tecidos) produtor de GA ativo da planta. Para a supressão alvejada de certos genes da GA20 oxidase no milho, a restrição do padrão de expressão para evitar tecidos reprodutivos de espiga pode não ser necessária para evitar plantas fora do padrão de reprodução na espiga em desenvolvimento. Entretanto, a expressão de um construto de supressão da GA20 oxidase em níveis baixos, e/ou em um número limitado de tecidos vegetais, pode ser insu- ficiente para causar um fenótipo significativo de baixa estatura e semia- não. Dado que o fenótipo semianão observado com a supressão alve- jada da GA20 oxidase é o resultado do encurtamento dos entrenós de caule da planta, surpreendentemente, verificou-se que a supressão de genes da GA20 oxidase em pelo menos alguns tecidos não era sufici- ente para causar encurtamento dos entrenós e altura de planta redu- zida. Sem se ater à teoria, propõe-se que a supressão de certo gene

(ou genes) da GA oxidase no tecido (ou tecidos) e/ou na célula (ou cé- lulas) da planta em que os GAs ativos são produzidos, e não necessa- riamente no tecido (ou tecidos) do caule ou do entrenó, pode ser sufici- ente para produzir plantas semianãs, mesmo que o traço de baixa esta- tura se deva ao encurtamento dos entrenós do caule. Dado que os GAs podem migrar através da vasculatura da planta, a manipulação de ge- nes da GA oxidase no tecido (ou tecidos) da planta em que os GAs ati- vos são produzidos pode resultar em uma planta de baixa estatura, se- mianã, mesmo que isto possa ser alcançado em grande parte pela su- pressão do nível de GAs ativos produzidos em tecidos de não caule (ou seja, longe do local de ação no caule, em que o alongamento reduzido de entrenó leva ao fenótipo semianão). De fato, a supressão de certos genes da oxidase GA20 nos tecidos foliares causa um fenótipo semia- não moderado em plantas de milho. Dado que a expressão de um cons- truto de supressão da GA20 oxidase com vários promotores diferentes do "caule" não produziu o fenótipo semianão no milho, é notável que a expressão do mesmo construto de supressão da GA20 oxidase com um promotor vascular foi eficaz na produção consistente do fenótipo semi- anão com um alto grau de penetrância através de eventos e germoplas- mas. Também foi observado um fenótipo semianão com expressão do mesmo construto de supressão da GA20 oxidase usando outros promo- tores vasculares e com vários promotores constitutivos sem quaisquer plantas fora do padrão observáveis.

[082] Com o alvejamento de um subconjunto de um ou mais genes endógenos da GA3 ou da GA20 oxidase para supressão dentro de uma planta, um padrão de expressão mais difundido (por exemplo, com um promotor constitutivo) pode ser usado para produzir plantas semianãs sem plantas fora do padrão de reprodução significativas e/ou outros tra- ços indesejáveis na planta, mesmo com a expressão do construto de supressão no tecido (ou tecidos) reprodutivo. De fato, são fornecidos no presente documento elementos e construtos de supressão que alvejam seletivamente os genes da GA20 oxidase_3 e/ou genes da GA20 oxi- dase_5 para supressão, que podem estar ligados de maneira funcional a um promotor vascular, foliar e/ou constitutivo.

[083] Portanto, são fornecidos no presente documento construtos de DNA recombinante e plantas de milho modificadas que compreen- dem um elemento ou uma sequência de supressão da GA20 ou da GA3 oxidase ligado de maneira funcional a um promotor expressável em plantas, que pode ser um promotor constitutivo ou tecido-específico ou tecido-preferencial. Tal promotor tecido-específico ou tecido-preferen- cial pode dirigir a expressão de seu elemento ou sequência de supres- são de GA oxidase de GA associado em um ou mais tecidos produtores de GA ativo da planta para suprimir ou reduzir o nível de GAs ativos produzidos neste tecido (ou tecidos). Tal promotor tecido-específico ou tecido-preferencial pode conduzir a expressão de seu construto ou transgene de supressão da GA oxidase associado durante um ou mais estágios vegetativos de desenvolvimento. Tal promotor tecido-especí- fico ou tecido-preferencial pode também ter pouca ou nenhuma expres- são em uma ou mais células ou tecidos do órgão feminino ou espiga em desenvolvimento da planta para evitar a possibilidade de plantas fora do padrão naqueles tecidos reprodutivos. De acordo com um aspecto, o promotor tecido-específico ou tecido-preferencial é um promotor vascu- lar, como o promotor RTBV. A sequência do promotor RTBV é fornecida no presente documento como a SEQ ID NO: 65, e uma versão truncada do promotor RTBV é ainda fornecida no presente documento como a SEQ ID NO: 66. No entanto, outros tipos de promotores tecido-especí- ficos ou tecido-preferenciais podem potencialmente ser utilizados para a supressão de GA3 oxidase em tecidos de GA ativo de uma planta de milho ou de cereal para produzir um fenótipo semianão sem plantas fora do padrão significativas. Conforme apresentado acima, em vez de su- primir um ou mais genes da GA oxidase, os níveis de GA ativo podem também ser reduzidos em uma planta de milho por mutação ou edição de um ou mais genes da GA20 e/ou genes da GA3 oxidase.

[084] O milho tem uma família de pelo menos nove genes da oxi- dase GA20 que incluem GA20 oxidase_1, GA20 oxidase_2, GA20 oxi- dase_3, GA20 oxidase_4, GA20 oxidase_5, GA20 oxidase_6, GA20 oxi- dase_7, GA20 oxidase_8, e GA20 oxidase_9. No entanto, existem ape- nas duas GA3 oxidases no milho, GA3 oxidase_1 e GA3 oxidase_2. As sequências de DNA e de proteína pelas SEQ ID NOs para cada um destes genes da GA20 oxidase são fornecidas na Tabela 1 e as sequên- cias de DNA e de proteína pelas SEQ ID NOs para cada um destes genes da GA3 oxidase são fornecidas na Tabela 2. TABELA 1. SEQUÊNCIAS DE DNA E DE PROTEÍNA POR IDENTIFI- CADOR DE SEQUÊNCIA PARA GENES DA GA20 OXIDASE EM MI- LHO. Sequência de Codifica- Gene da GA20 oxidase cDNA Proteína ção (CDS) GA20 oxidase_1 SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 3 GA20 oxidase_2 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 5 SEQ ID NO: 6 GA20 oxidase_3 SEQ ID NO: 7 SEQ ID NO: 8 SEQ ID NO: 9 GA20 oxidase_4 SEQ ID NO: 10 SEQ ID NO: 11 SEQ ID NO: 12 GA20 oxidase_5 SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 14 SEQ ID NO: 15 GA20 oxidase_6 SEQ ID NO: 16 SEQ ID NO: 17 SEQ ID NO: 18 GA20 oxidase_7 SEQ ID NO: 19 SEQ ID NO: 20 SEQ ID NO: 21 GA20 oxidase_8 SEQ ID NO: 22 SEQ ID NO: 23 SEQ ID NO: 24 GA20 oxidase_9 SEQ ID NO: 25 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 27 TABELA 2. SEQUÊNCIAS DE DNA E DE PROTEÍNAS POR IDENTI- FICADOR DE SEQUÊNCIA PARA GENES DA GA3 OXIDASE EM MI- LHO.

Sequência de Codifica- Gene da GA3 oxidase cDNA Proteína ção (CDS) GA3 oxidase_1 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 29 SEQ ID NO: 30 GA3 oxidase_2 SEQ ID NO: 31 SEQ ID NO: 32 SEQ ID NO: 33

[085] Além de reduzir os níveis de GA ativo em plantas de milho através da supressão, da mutação ou da edição do gene (ou genes) de GA oxidase, tais plantas de milho, como fornecidas no presente docu- mento, podem compreender ainda um transgene CONSTANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL) expresso ectopicamente. CONS- TANS (CO) e seus polipeptídeos semelhantes a CONSTANS (COL) pa- rálogos são reguladores transcricionais do controle fotoperiódico de flo- rescimento em plantas. Em Arabidopsis, o gene CO, quando mutado, atrasou o florescimento sob dias longos, o que é a condição indutiva para o florescimento nesta espécie. Consultar Putterill et al., “The CO gene of Arabidopsis promotes flowering and encodes a protein showing similarities to zinc finger transcription factors”, Cell, 80: 847-857 (1995). Embora sem limitação por qualquer teoria científica, acredita-se que a expressão de proteína CO é modulada pelo relógio circadiano e duração do dia para controlar o florescimento. Consultar Suarez-Lopez et al., “CONSTANS mediates between the circadian clock and the control of flowering in Arabidopsis”, Nature, 410:1116-1120 (2001).

[086] CO e COL são, ambos, fatores de transcrição de dedo de zinco com domínios característicos e são encontrados em espécies de plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas. A parte N-terminal das pro- teínas CO e COL contêm tipicamente um ou dois domínios de dedo de Zn em tandem, que são também chamados de B-boxes envolvidas na interação de proteína-proteína, e um domínio CCT C-terminal (CO, se- melhante a CO, TOC1), que pode também incluir um sinal de importa- ção nuclear. Consultar Khanna et al., “The Arabidopsis B-box zinc finger family”, Plant Cell, 21:3416-3420 (2009); consultar também Robson et al., “Functional importance of conserved domains in the flowering-time gene CONSTANS demonstrated by analysis of mutant alleles and trans- genic plants”, Plant J., 28:619-631 (2001). Adicionalmente a uma ou duas B-boxes e ao domínio CCT, as proteínas CO e COL podem tam- bém conter um motivo de seis aminoácidos conservados (G-I/V-V-P- S/T-F) em suas terminações C. Consultar Datta et al., “Arabidopsis CONSTANS-LIKE3 is a positive regulator of red light signaling and root growth”, Plant Cell, 18: 70-84 (2006).

[087] O semelhante a CONSTANS 1 de Physcomitrella patens (PpCOL1) é um fator de transcrição de dedo de zinco derivado da es- pécie de musgo Physcomitrella patens. A expressão de PpCOL1 mostra ser fotoperiodicamente regulada nesta espécie de musgo, sugerindo um papel para PpCOL1 no controle de reprodução fotoperiódico. Consultar Shimizu et al., “Photoperiod-regulated expression of the PpCOL1 gene encoding a homolog of CO/COL protein in the moss Physcomitrella pat- ens”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 324:1296-1301 (2004). A ex- pressão transgênica de PpCOL1 em plantas de milho mostrou aprimorar a tolerância à seca, sal e/ou frio. Consultar a Patente no U.S. 7.439.417. A expressão transgênica do gene PpCOL1 em plantas de milho também aprimora os traços ou métricas de espiga, como peso de único caroço, área de espiga, tamanho de espiga, peso de espiga e estimativa do ren- dimento de grãos.

[088] O transgene CONSTANS (CO) ou semelhante a CONS- TANS (COL) pode compreender uma sequência de codificação de qual- quer gene CO ou COL conhecido que se espera que tenha uma função similar a PpCOL1. O transgene CO/COL pode ser um gene CONSTANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL) do Grupo I, Grupo II ou Grupo III. Consultar, por exemplo, Cai, D et al., “Identification and characteri- zation of CONSTANS-like (COL) gene family in upland cotton (Gos- sypium hirsutum)”, PLOS ONE 12(6): e0179038, cujo conteúdo e divul- gação estão incorporados a título de referência. O transgene CO/COL pode compreender um ou dois domínios B-box, um domínio CCT e pos- sivelmente um motivo VP adicional e/ou um dedo de zinco divergido. Consultar também, por exemplo, Khanna et al., “The Arabidopsis B-Box Zinc Finger Family”, Plant Cell 21(11): 3416-3420 (2009), cujo conteúdo e divulgação totais estão incorporados a título de referência.

[089] Em um aspecto, um polipeptídeo CO ou COL da presente divulgação é um polipeptídeo de Physcomitrella patens COL (PpCOL) ou homólogos, ortólogos e/ou parálogos dos mesmos. Em um aspecto, um polinucleotídeo CO ou COL fornecido no presente documento com- preende uma sequência de aminoácidos que compreende a SEQ ID NO: 168 e homólogos, ortólogos e parálogos dos mesmos. Em um outro aspecto, um polinucleotídeo CO ou COL fornecido no presente docu- mento compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 176 a 452 e homólogos, ortólogos e parálogos dos mesmos.

[090] De acordo com um aspecto, é fornecida uma planta de milho modificada ou parte de planta que compreende (1) um primeiro cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes de GA20 oxidase e/ou um ou mais genes de GA3 oxidase, e (2) um segundo cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CONSTANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL). Alternativamente, uma planta de milho modificada ou parte de planta é fornecida que compreende (1) um ou mais genes de GA20 oxidase mutados ou editados e/ou um ou mais genes de GA3 oxidase mutados ou editados e (2) um cassete de expressão que com- preende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CONS- TANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL).

[091] De acordo com um outro aspecto, é fornecida uma planta de milho modificada ou uma parte de planta da mesma que compreende 1)

um primeiro cassete de expressão recombinante (ou um construto) que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes de ácido gibe- rélico 20 (GA20) oxidase e/ou um ou mais genes de ácido giberélico 3 (GA3) oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão recombinante (ou um construto) que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CONSTANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL).

[092] De acordo com um outro aspecto, uma pluralidade de plan- tas de milho modificadas em um campo, sendo que cada planta de milho modificada compreende 1) um primeiro cassete de expressão recombi- nante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes de ácido giberélico 20 (GA20) oxidase e/ou um ou mais genes de ácido giberélico 3 (GA3) oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão re- combinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CONSTANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL). Em um aspecto, as plantas de milho modificadas têm rendimento au- mentado em relação a plantas de milho controle. Em um outro aspecto, as plantas de milho modificadas têm um aumento no rendimento que é pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo me- nos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo me- nos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, ou pelo menos 25% maior que as plantas de milho controle.

[093] Tais plantas de milho modificadas podem ter altura de planta semianã, além de um ou mais traços relacionados ao rendimento apri- morados, conforme descrito no presente documento mais adiante, em relação à planta (ou plantas) de milho controle que não tem o primeiro e o segundo cassetes de expressão ou a combinação de transgene

CO/COL e gene (ou genes) da GA oxidase editado/mutado. Plantas de milho modificadas que compreendem uma combinação do primeiro e do segundo cassetes de expressão ou uma combinação de um cassete de expressão que compreende um transgene CO ou COL e um ou mais genes da GA oxidase GA mutados ou editados, cada um podem ser chamadas de uma "pilha" ou "combinação empilhada”. Tais combina- ções empilhadas para a redução dos níveis de GA ativos e a expressão de um transgene CO/COL podem ser reunidas na mesma planta de mi- lho ou população de plantas de milho, (1) cruzando uma primeira planta que compreende um elemento (ou elementos) de supressão da GA oxi- dase, edição (ou edições) e/ou mutação (ou mutações) para uma se- gunda planta que compreende um transgene de CO/COL, (2) cotrans- formação de uma planta ou parte de planta com um elemento (ou ele- mentos) de supressão da GA oxidase e um transgene de CO/COL, (3) transformação de uma planta ou parte de planta que já tenha um ele- mento (ou elementos) de supressão de GA oxidase, edição (ou edições) e/ou mutação (mutações) com um transgene de CO/COL, (4) transfor- mação de uma planta ou parte de planta que já tenha um transgene de CO/COL com um elemento (ou elementos) de supressão da GA oxi- dase, ou (5) edição ou mutação de um gene (ou genes) da GA oxidase em uma planta ou parte de planta que já tenha um transgene de CO/COL, cada uma das quais pode ser seguida por cruzamentos adici- onais para obter o genótipo desejado, as partes da planta podem ser regeneradas, cultivadas ou desenvolvidas em plantas, e as partes da planta podem ser coletadas de qualquer uma das plantas anteriores.

[094] Como fornecido acima, uma planta de milho ou parte de planta pode compreender um primeiro cassete de expressão que com- preende uma primeira sequência que codifica uma molécula de RNA não codificante que alveja um ou mais genes da oxidase GA20 ou GA3 para supressão. Em um aspecto, a molécula de RNA não codificante pode alvejar um ou mais genes da GA20 oxidase para supressão, como um gene da GA20 oxidase_3, um gene da GA20 oxidase_4, um gene da GA20 oxidase_5 ou qualquer combinação dos mesmos. De acordo com um aspecto, o primeiro cassete de expressão compreende uma primeira sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codi- ficante que alveja um gene da GA20 oxidase_3 para supressão. De acordo com um outro aspecto, o primeiro cassete de expressão com- preende uma primeira sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante que alveja um gene da GA20 oxidase_5 para su- pressão. De acordo com um outro aspecto, o primeiro cassete de ex- pressão compreende uma primeira sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante que alveja tanto o gene da GA20 oxi- dase_3 como o gene da GA20 oxidase_5 para supressão. Além de al- vejar uma sequência de mRNA madura (incluindo cada uma ou ambas as sequências não traduzidas ou exônicas), uma molécula de RNA não codificante pode também alvejar as sequências intrônicas de um gene ou transcrição da GA20 oxidase.

[095] Uma sequência de DNA genômico de GA20 oxidase_3 é for- necida na SEQ ID NO: 34, e a sequência de DNA genômico de GA20 oxidase_5 é fornecida na SEQ ID NO: 35. Para o gene da GA20 oxi- dase_3, a SEQ ID NO: 34 fornece 3000 nucleotídeos a montante da GA20 oxidase_3 5'-UTR; os nucleotídeos 3001 a 3096 correspondem à 5'-UTR; os nucleotídeos 3097 a 3665 correspondem ao primeiro éxon; os nucleotídeos 3666 a 3775 correspondem ao primeiro íntron; os nu- cleotídeos 3776 a 4097 correspondem ao segundo éxon; os nucleotí- deos 4098 a 5314 correspondem ao segundo íntron; os nucleotídeos 5315 a 5584 correspondem ao terceiro éxon; e os nucleotídeos 5585 a 5800 correspondem à 3'-UTR. A SEQ ID NO: 34 também fornece 3000 nucleotídeos a jusante da extremidade da 3'-UTR (nucleotídeos 5801 a 8800). Para o gene da GA20 oxidase_5, a SEQ ID NO: 35 fornece 3000 nucleotídeos a montante do códon inicial da GA20 oxidase_5 (nucleotí- deos 1 a 3000); os nucleotídeos 3001 a 3791 correspondem ao primeiro éxon; os nucleotídeos 3792 a 3906 correspondem ao primeiro íntron; os nucleotídeos 3907 a 4475 correspondem ao segundo éxon; os nucleo- tídeos 4476 a 5197 correspondem ao segundo íntron; os nucleotídeos 5198 a 5473 correspondem ao terceiro éxon; e os nucleotídeos 5474 a 5859 correspondem à 3'-UTR. A SEQ ID NO: 35 também fornece 3000 nucleotídeos a jusante da extremidade da 3'-UTR (nucleotídeos 5860 a 8859).

[096] Uma sequência de DNA genômico de GA20 oxidase_4 é for- necida na SEQ ID NO: 38. Para o gene da GA oxidase_4, a SEQ ID NO: 38 fornece os nucleotídeos 1 a 1416 a montante da 5'-UTR; os nucleo- tídeos 1417 a 1543 da SEQ ID NO: 38 correspondem à 5'-UTR; os nu- cleotídeos 1544 a 1995 da SEQ ID NO: 38 correspondem ao primeiro éxon; os nucleotídeos 1996 a 2083 da SEQ ID NO: 38 correspondem ao primeiro íntron; os nucleotídeos 2084 a 2411 da SEQ ID NO: 38 cor- respondem ao segundo éxon; os nucleotídeos 2412 a 2516 da SEQ ID NO: 38 correspondem ao segundo íntron; os nucleotídeos 2517 a 2852 da SEQ ID NO: 38 correspondem ao terceiro éxon; os nucleotídeos 2853 a 3066 da SEQ ID NO: 38 correspondem à 3'-UTR; e os nucleotí- deos 3067 a 4465 da SEQ ID NO: 38 correspondem à sequência genô- mica a jusante da 3'-UTR.

[097] Para o gene da GA20 oxidase_5, a SEQ ID NO: 35 fornece 3000 nucleotídeos a montante do códon inicial da GA20 oxidase_5 (nu- cleotídeos 1 a 3000); os nucleotídeos 3001 a 3791 correspondem ao primeiro éxon; os nucleotídeos 3792 a 3906 correspondem ao primeiro íntron; os nucleotídeos 3907 a 4475 correspondem ao segundo éxon; os nucleotídeos 4476 a 5197 correspondem ao segundo íntron; os nu- cleotídeos 5198 a 5473 correspondem ao terceiro éxon; e os nucleotí- deos 5474 a 5859 correspondem à 3'-UTR. A SEQ ID NO: 35 também fornece 3000 nucleotídeos a jusante da extremidade da 3'-UTR (nucle- otídeos 5860 a 8859).

[098] Para a supressão de um gene da GA20 oxidase_3, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência como apresentada nas SEQ ID NOs: 7 e 8.

[099] Para a supressão de um gene da GA20 oxidase_4, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos

63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência como apresentada nas SEQ ID NOs: 10 e 11.

[0100] Para a supressão de um gene da GA20 oxidase_5, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos

83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência como apresentada nas SEQ ID NOs: 13 e 14.

[0101] Para a supressão de um gene de GA20 oxidase_3 e um gene de GA20 oxidase_5, uma primeira sequência de DNA transcritível com- preende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência como apresentada nas SEQ ID NOs: 7 e 8; e a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos

43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotí- deos consecutivos de uma sequência como apresentada nas SEQ ID NOs: 13 e 14.

[0102] Em um aspecto, uma molécula de RNA não codificante codi- ficada por uma sequência de DNA transcritível compreende (i) uma se- quência que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% com- plementar à SEQ ID NO: 39, 41, 43 ou 45, e/ou (ii) um elemento de sequência ou de supressão que codifica uma molécula de RNA não co- dificante que compreende uma sequência que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 40, 42, 44 ou 46. De acordo com um aspecto, a molécula de RNA não codificante codificada por uma sequência de DNA transcritível pode compreender uma se- quência com um ou mais erros de pareamento, como 1, 2, 3, 4, 5 ou mais incompatibilidades complementares, em relação à sequência de um sítio alvo ou de reconhecimento de um mRNA do gene da GA20 oxidase alvejado, como uma sequência que é quase complementar à SEQ ID NO: 40, porém com uma ou mais incompatibilidades comple- mentares em relação à SEQ ID NO: 40. De acordo com um aspecto específico, a molécula de RNA não codificante codificada pela sequên- cia de DNA transcritível compreende uma sequência que é 100% idên- tica à SEQ ID NO: 40, que é 100% complementar a uma sequência alvo dentro do cDNA e das sequências de codificação da GA20 oxidase_3 (ou seja, SEQ ID NOs: 7 e 8, respectivamente), e/ou a uma sequência correspondente de um mRNA codificado por um gene endógeno da GA20 oxidase_3. Entretanto, a sequência de uma molécula de RNA não codificante codificada por uma sequência de DNA transcritível que é 100% idêntica à SEQ ID NO: 40, 42, 44 ou 46 pode não ser perfeita- mente complementar a uma sequência alvo dentro do cDNA e das se- quências de codificação do gene da GA20 oxidase_5 (ou seja, SEQ ID NOs: 13 e 14, respectivamente), e/ou a uma sequência correspondente de um mRNA codificado por um gene endógeno da GA20 oxidase_5. Por exemplo, a correspondência complementar mais próxima entre a molécula de RNA não codificante ou a sequência miRNA na SEQ ID NO: 40 e as sequências de cDNA e de codificação do gene da GA20 oxidase_5 podem incluir uma incompatibilidade na primeira posição da SEQ ID NO: 39 (isto é, a "C" na primeira posição da SEQ ID NO: 39 é substituída por uma "G"; isto é, GTCCATCATGCGGTGCAACTA). En- tretanto, a molécula de RNA não codificante ou a sequência de miRNA na SEQ ID NO: 40 ainda pode se ligar e hibridizar com o mRNA codifi- cado pelo gene endógeno da GA20 oxidase_5 apesar desta ligeira in- compatibilidade.

[0103] Para a supressão de um gene de GA20 oxidase_1, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19,

pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência conforme apresentado nas SEQ ID NOs: 1 e 2.

[0104] Para a supressão de um gene de GA20 oxidase_2, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência conforme apresentado nas SEQ ID NOs: 4 e 5.

[0105] Para a supressão de uma GA2 oxidase 6, uma primeira se- quência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência conforme apresentado nas SEQ ID NOs: 16 e 17.

[0106] Para a supressão de um gene de GA20 oxidase 7, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência conforme apresentado nas SEQ ID NOs: 19 e 20.

[0107] Para a supressão de um gene de GA20 oxidase_8, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos

67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5%, ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59, ou pelo me- nos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência conforme apresen- tado nas SEQ ID NOs: 22 e 23.

[0108] Para a supressão de um gene de GA20 oxidase_9, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos

87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência conforme apresentado nas SEQ ID NOs: 25 e 26.

[0109] Um RNA não codificador pode ter como alvo uma sequência de íntrons de um gene da GA20 oxidase em vez de, ou além de, uma UTR 5 'ou exônica UTR 3' do gene GA20 oxidase. Desta forma, um RNA não codificante que alveja o gene da GA20 oxidase_3 para supressão pode compreender uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos

97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34 e/ou de nucleotídeos 3666 a 3775 ou 4098 a 5314 da SEQ ID NO: 34.

[0110] Em um outro aspecto, uma molécula de RNA não codificante que alveja o gene da GA20 oxidase_5 para supressão pode compreen- der uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo me- nos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complemen- tar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo me- nos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 35, e/ou de nucleotí- deos 3792 a 3906 ou 4476 a 5197 da SEQ ID NO: 35.

[0111] Em um outro aspecto, uma molécula de RNA não codificante que alveja o gene da GA20 oxidase_4 para supressão pode compreen- der uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo me- nos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 38, e/ou de nucleotídeos 1996 a 2083 ou 2412 a 2516 da SEQ ID NO: 38.

[0112] Em um outro aspecto, um primeiro cassete de expressão compreende uma primeira sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante que alveja um gene (ou genes) da GA3 oxidase para supressão em milho, como um gene da GA3 oxidase_1 ou um gene da GA3 oxidase_2. Em um outro aspecto, uma primeira sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante alveja tanto o gene da GA3 oxidase_1 como o gene da GA3 oxidase_2 para supres- são. Além de alvejar uma sequência de mRNA madura (incluindo cada uma ou ambas as sequências não traduzidas ou exônicas), uma molé- cula de RNA não codificante pode também alvejar as sequências intrô- nicas de um gene ou transcrição da GA3 oxidase.

[0113] A sequência de DNA genômico de GA3 oxidase_1 é forne- cida na SEQ ID NO: 36, e a sequência de DNA genômico de GA3 oxi- dase_2 é fornecida na SEQ ID NO: 37. Para o gene da GA3 oxidase_1, os nucleotídeos 1 a 29 da SEQ ID NO: 36 correspondem à 5'-UTR; os nucleotídeos 30 a 514 da SEQ ID NO: 36 correspondem ao primeiro éxon; os nucleotídeos 515 a 879 da SEQ ID NO: 36 correspondem ao primeiro íntron; os nucleotídeos 880 a 1038 da SEQ ID NO: 36 corres- pondem ao segundo éxon; os nucleotídeos 1039 a 1158 da SEQ ID NO: 36 correspondem ao segundo íntron; os nucleotídeos 1159 a 1663 da SEQ ID NO: 36 correspondem ao terceiro éxon; e os nucleotídeos 1664 a 1788 da SEQ ID NO: 36 correspondem à 3'-UTR. Para o gene da GA3 oxidase_2, os nucleotídeos 1 a 38 da SEQ ID NO: 37 correspondem à 5'-UTR; os nucleotídeos 39 a 532 da SEQ ID NO: 37 correspondem ao primeiro éxon; os nucleotídeos 533 a 692 da SEQ ID NO: 37 correspon- dem ao primeiro íntron; os nucleotídeos 693 a 851 da SEQ ID NO: 37 correspondem ao segundo éxon; os nucleotídeos 852 a 982 da SEQ ID NO: 37 correspondem ao segundo íntron; os nucleotídeos 983 a 1445 da SEQ ID NO: 37 correspondem ao terceiro éxon; os nucleotídeos 1446 a 1698 da SEQ ID NO: 37 correspondem à 3'-UTR.

[0114] Para a supressão de um gene da GA3 oxidase_1, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência como apresentada nas SEQ ID NOs: 28 e 29.

[0115] Como mencionado acima, uma molécula de RNA não codifi- cante pode alvejar uma sequência de íntron de um gene da GA3 oxidase em vez de, ou além de, um exônico, uma 5’ UTR ou uma 3’ UTR do gene da GA oxidase. Assim, uma molécula de RNA não codificante que alveja o gene da GA3 oxidase_1 para supressão pode compreender uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou comple- mentar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo me- nos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 36, e/ou de nucleotí- deos 515 a 879 ou 1039 a 1158 da SEQ ID NO: 36.

[0116] Para a supressão de um gene da GA3 oxidase_2, uma pri- meira sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo me- nos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequência como apresentada nas SEQ ID NOs: 31 e 32.

[0117] Como mencionado acima, uma molécula de RNA não codifi- cante pode alvejar uma sequência de íntron de um gene da GA3 oxidase em vez de, ou além de, um exônico, 5’ UTR ou 3’ UTR do gene da GA3 oxidase. Assim, uma molécula de RNA não codificante que alveja o gene da GA3 oxidase_2 para supressão pode compreender uma se- quência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 37, e/ou de nucleotídeos 533 a 692 ou 852 a 982 da SEQ ID NO: 37.

[0118] Para a supressão de um gene de GA3 oxidase_1 e um gene de GA3 oxidase_2, uma sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos

98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou comple- mentar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos consecutivos de uma sequên- cia como apresentada nas SEQ ID NOs: 28 e 29; e a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos

39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59 ou pelo menos 60 nucleotídeos con- secutivos de uma sequência como apresentada nas SEQ ID NOs: 31 e

32.

[0119] Em um aspecto, uma sequência de DNA transcritível para a supressão de um gene da oxidase GA20 e/ou uma GA3 oxidase com- preende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 e 63. Em um outro aspecto, uma sequência de DNA transcritível para a supressão de um gene da oxi- dase GA20 e/ou uma GA3 oxidase codifica uma sequência de RNA não codificante, em que a sequência de RNA não codificante compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 e 64.

[0120] Em um aspecto, é fornecido um cassete de expressão que compreende uma segunda sequência de DNA que codifica um polipep- tídeo CO ou COL. Em um outro aspecto, a segunda sequência de DNA codifica uma proteína que compreende uma sequência que é pelo me- nos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos sele- cionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 176 a 397. Em um outro aspecto, a segunda sequência de DNA codifica uma proteína que compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%,

pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 398 a 452. A segunda sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL é ligada de maneira funcional a um promo- tor constitutivo ou específico para tecido.

[0121] Em um aspecto, é fornecido um cassete de expressão que compreende uma segunda sequência de DNA que codifica PpCOL1. Em um outro aspecto, a segunda sequência de DNA compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma sequência selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO: 169. Em um outro aspecto, a segunda sequência de DNA compreende uma sequência que codifica um polipeptídeo que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 168 ou um fragmento funcional da mesma.

[0122] Além de alvejar uma sequência de mRNA madura, uma mo- lécula de RNA não codificante pode, em vez disto, alvejar uma sequên- cia intrônica de um gene da GA oxidase ou transcrição de mRNA, ou uma sequência de mRNA da GA oxidase sobrepondo as sequências codificantes e não codificantes. De acordo com outros aspectos, é for- necida uma molécula, um vetor ou um construto de DNA recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica uma molécula de RNA (precursor) não codificante que é clivada ou proces- sada em uma molécula de RNA não codificante madura que se liga ou hibridiza com um mRNA alvo em uma célula vegetal, em que a molécula de mRNA alvo codifica uma proteína da GA20 ou GA3 oxidase e em que a sequência de DNA transcritível está ligada de maneira funcional a um promotor constitutivo ou tecido-específico ou tecido-preferencial.

[0123] Qualquer método conhecido na técnica para supressão de um gene alvo pode ser usado para suprimir o gene (ou genes) da GA oxidase de acordo com aspectos da presente divulgação incluindo a ex- pressão de RNAs antissenso, RNAs de fita dupla (dsRNAs) ou sequên- cias de RNA de repetição invertidas ou através de cossupressão ou in- terferência de RNA (RNAi) através da expressão de pequenos RNAs interferentes (siRNAs), pequenos RNAs de grampo (shRNAs), siRNAs de ação trans (ta-siRNAs) ou micro RNAs (miRNAs). Além disto, as mo- léculas de RNA senso e/ou antissenso podem ser usadas para alvejar as sequências genômicas não codificantes ou regiões dentro ou próxi- mas a um gene para causar o silenciamento do gene. Consequente- mente, qualquer um destes métodos pode ser usado para a supressão alvejada de um gene (ou genes) endógeno da GA oxidase de maneira tecido-específica ou tecido-preferencial. Consultar, por exemplo, as Pu- blicações de Pedido de Patente nº U.S. 2009/0070898, 2011/0296555, e 2011/0035839, cujos conteúdos e divulgações são incorporados ao presente documento a título de referência.

[0124] Em um aspecto, um nível (ou níveis) de expressão de um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase é reduzido ou eliminado na planta de milho modificada, suprimindo assim o gene (ou genes) endógeno da GA20 oxidase e/ou da GA3 oxidase.

[0125] De acordo com um aspecto, é fornecida uma planta modifi- cada ou transgênica que tem o nível (ou níveis) de expressão de um ou mais genes da GA20 oxidase reduzido em pelo menos um tecido vege- tal em pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, ou 100%, em comparação com uma planta controle.

[0126] De acordo com um aspecto, é fornecida uma planta modifi- cada ou transgênica que tem o nível (ou níveis) de expressão de um ou mais genes da GA3 oxidase reduzido em pelo menos um tecido vegetal em pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, ou 100%, em comparação com uma planta controle.

[0127] De acordo com um aspecto, é fornecida uma planta modifi- cada ou transgênica com o (s) nível (s) de expressão de um ou mais genes da GA20 oxidase reduzidos em pelo menos um tecido da planta por 5% a 20%, 5% a 25%, 5% a 30%, 5% a 40%, 5% a 50%, 5% a 60%, 5% a 70%, 5% a 75%, 5% a 80%, 5% a 90%, 5% a 100%, 75% a 100%, 50% a 100%, 50% a 90%, 50% a 75%, 25% a 75%, 30% a 80%, ou 10% a 75%, em comparação com uma planta controle.

[0128] De acordo com um aspecto, é fornecida uma planta modifi- cada ou transgênica que tem o nível (ou níveis) de expressão de um ou mais genes da GA3 oxidase reduzido em pelo menos um tecido vegetal em 5% a 20%, 5% a 25%, 5% a 30%, 5% a 40%, 5% a 50%, 5% a 60%, 5% a 70%, 5% a 75%, 5% a 80%, 5% a 90%, 5% a 100%, 75% a 100%,

50% a 100%, 50% a 90%, 50% a 75%, 25% a 75%, 30% a 80% ou 10% a 75%, em comparação com uma planta controle.

[0129] De acordo com um aspecto, pelo menos um tecido de uma planta modificada ou transgênica que tem um nível de expressão redu- zido de um gene (ou genes) da GA20 oxidase e/ou gene (ou genes) da GA3 oxidase inclui um ou mais tecidos produtores de GA ativo da planta, como o tecido (ou tecidos) vascular e/ou foliar da planta, durante um ou mais estágios vegetativos de desenvolvimento.

[0130] Em um aspecto, o RNA não codificante é um miRNA ou siRNA precursor capaz de ser processado ou clivado para formar um miRNA ou siRNA maduro.

[0131] Em um aspecto, a supressão de um gene endógeno da GA20 oxidase ou de um gene GA3 oxidase é específica para tecido (por exemplo, apenas no tecido foliar e/ou vascular). A supressão de um gene da oxidase GA20 pode ser constitutiva e/ou vascular ou foliar te- cido-específica ou tecido-preferencial. Em outros aspectos, a supressão de um gene da GA20 oxidase ou de um gene da GA3 oxidase é consti- tutiva e não tecido-específica. De acordo com um aspecto, a expressão de um gene endógeno da GA20 oxidase e/ou de um gene da oxidase GA3 é reduzida em um ou mais tipos de tecido (por exemplo, no tecido (ou tecidos)) foliar e/ou vascular de uma planta modificada ou transgê- nica em comparação com o mesmo tecido (ou tecidos) de uma planta controle.

[0132] Os miRNAs manipulados podem ser úteis para a supressão de genes alvejada com especificidade aumentada. Consultar, por exem- plo, Parizotto et al., Genes Dev. 18:2237-2242 (2004) e Publicações de Pedido de Patente US Nos. 2004/0053411, 2004/0268441, 2005/0144669 e 2005/0037988, cujo conteúdo e divulgações estão in- corporados no presente documento a título de referência. Os miRNAs são RNAs que não codificam proteínas. Quando uma molécula precur- sora de miRNA é clivada, um miRNA maduro é formado, tipicamente de cerca de 19 a cerca de 25 nucleotídeos de comprimento (comumente de cerca de 20 a cerca de 24 nucleotídeos de comprimento em plantas), como 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 nucleotídeos de comprimento e tem uma sequência correspondente ao gene alvejado para a supressão e/ou seu complemento. O miRNA maduro hibridiza para alvejar as transcri- ções de mRNA e guia a ligação de um complexo de proteínas às trans- crições alvo, que podem funcionar para inibir a tradução e/ou resultar em degradação da transcrição, regulando ou suprimindo negativamente assim a expressão do gene alvejado. Os precursores de miRNA tam- bém são úteis em plantas para dirigir a produção em fase de siRNAs, siRNAs de ação trans (ta-siRNAs), em um processo que exige uma RNA polimerase dependente de RNA para causar a supressão de um gene alvo. Consultar, por exemplo, Allen et al., Cell, 121:207-221 (2005), Vaucheret, Science STKE, 2005:pe43 (2005) e Yoshikawa et al. Genes Dev., 19:2164-2175 (2005), cujos conteúdos e divulgações estão incor- porados no presente documento a título de referência.

[0133] Sem se ater a qualquer teoria científica, os miRNAs vegetais regulam seus genes-alvo reconhecendo e se ligando a uma sequência complementar ou quase perfeitamente complementar (sítio de reconhe- cimento de miRNA) na transcrição de mRNA alvo, seguido de clivagem da transcrição por enzimas RNase III, como ARGONAUTE1. Nas plan- tas, certas incompatibilidades entre um determinado sítio de reconheci- mento de miRNA e o miRNA maduro correspondente tipicamente não são toleradas, particularmente nucleotídeos incompatíveis nas posições 10 e 11 do miRNA maduro. As posições dentro do miRNA maduro são dadas na direção 5 'a 3'. A complementaridade perfeita entre um deter- minado sítio de reconhecimento de miRNA e o miRNA maduro corres-

pondente é geralmente necessária nas posições 10 e 11 do miRNA ma- duro. Consultar, por exemplo, Franco-Zorrilla et al. (2007) Nature Gene- tics, 39:1033-1037; e Axtell et al. (2006) Cell, 127:565-577.

[0134] Muitos genes microRNA (genes MIR) foram identificados e se tornaram publicamente disponíveis em um banco de dados (“miR- Base”, disponível on-line em microrna.sanger.ac.uk/sequences; consul- tar também Griffiths-Jones et al. (2003) Nucleic Acids Res., 31:439-441). Foi relatado que os genes MIR ocorrem em regiões intergênicas, tanto isoladas como em aglomerados no genoma, mas também podem ser localizados total ou parcialmente dentro de íntrons de outros genes (tanto codificantes de proteínas como não codificantes de proteína). Para uma análise da biogênese do miRNA, consultar Kim (2005) Nature Rev. Mol. Cell. Biol., 6:376-385. A transcrição de genes MIR pode estar, pelo menos em alguns casos, sob controle promocional do promotor do próprio gene MIR. A transcrição primária, denominada “pri-miRNA”, pode ser bastante grande (vários quilobases) e pode ser policistrônica, contendo um ou mais pré-miRNAs (estruturas enoveladas que contêm uma disposição de haste-alça que é processada no miRNA maduro), bem como o cap 5’ normal e a cauda poliadenilada de um mRNA. Con- sultar, por exemplo, a FIG. 1 em Kim (2005) Nature Rev. Mol. Cell. Biol., 6:376-385.

[0135] A expressão transgênica de miRNAs (seja uma sequência de ocorrência natural ou uma sequência artificial) pode ser usada para regular a expressão do gene ou genes alvo do miRNA. Os sítios de re- conhecimento de miRNAs foram validados em todas as regiões de um mRNA, incluindo a região não traduzida 5 ', região de codificação, região de íntron e região não traduzida 3', indicando que a posição do alvo de miRNA ou do sítio de reconhecimento em relação à sequência de codi- ficação pode não necessariamente afetar a supressão (consultar, por exemplo, Jones-Rhoades e Bartel (2004). Mol. Cell, 14:787-799,

Rhoades et al. (2002) Cell, 110:513-520, Allen et al. (2004) Nat. Genet., 36:1282-1290, Sunkar e Zhu (2004) Plant Cell, 16:2001-2019). Os miR- NAs são elementos reguladores importantes em eucariotos, e a supres- são transgênica com miRNAs é uma ferramenta útil para manipular vias e respostas biológicas. Uma descrição dos miRNAs nativos, seus pre- cursores, sítios de reconhecimento e promotores é fornecida na Publi- cação do Pedido de Patente US No. 2006/0200878, cujos conteúdos e divulgações estão incorporados no presente documento a título de refe- rência.

[0136] A concepção de uma sequência artificial de miRNA pode ser obtida pela substituição de nucleotídeos na região do caule de um pre- cursor de miRNA com uma sequência que é complementar ao alvo pre- tendido, como demonstrado, por exemplo, por Zeng et al. (2002) Mol. Cell, 9:1327-1333. De acordo com muitos aspectos, o alvo pode ser uma sequência de um gene da GA20 oxidase ou um gene da GA3 oxidase. Um exemplo não-limitador de um método geral para determinar altera- ções de nucleotídeos em uma sequência nativa de miRNA para produzir um precursor de miRNA manipulado para um alvo de interesse inclui as seguintes etapas: (a) selecionar uma sequência alvo exclusiva de pelo menos 18 nucleotídeos específicos para o gene alvo, por exemplo, usando ferramentas de alinhamento de sequência como BLAST (con- sultar, por exemplo, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol., 215:403-410; Al- tschul et al. (1997) Nucleic Acids Res., 25:3389-3402); sequências de cDNA e/ou de DNA genômico podem ser usadas para identificar ortólo- gos de transcrição alvo e quaisquer possíveis correspondências com genes não relacionados, evitando assim o silenciamento ou supressão não intencional de sequências não alvo; (b) analisar o gene alvo quanto a sequências indesejáveis (por exemplo, correspondências com se- quências de espécies não-alvo) e pontuar cada sequência alvo poten- cial para o teor de GC, pontuação de Reynolds (consultar Reynolds et al. (2004) Nature Biotechnol., 22:326-330), e assimetria funcional carac- terizada por uma diferença negativa na energia livre ("ΔΔG") (consultar Khvorova et al. (2003) Cell, 115:209-216). De preferência, as sequên- cias alvo (por exemplo, 19 mers) podem ser selecionadas com todas ou a maria das seguintes características: (1) uma pontuação de Reynolds > 4, (2) um teor de GC entre cerca de 40% a cerca de 60%, (3) um ΔΔG negativo, (4) uma adenosina terminal, (5) falta de uma rodada consecu- tiva de 4 ou mais do mesmo nucleotídeo; (6) um local próximo à termi- nação 3’ do gene alvo; (7) diferenças mínimas da transcrição do precur- sor de miRNA. Em um aspecto, uma molécula de RNA não codificante usada aqui para suprimir um gene alvo (por exemplo, um gene da GA20 ou GA3 oxidase) é projetado para ter uma sequência alvo exibindo uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais das características anteriores. As posições em cada terceiro nucleotí- deo de um elemento de supressão podem ser importantes para influen- ciar a eficácia do RNAi; por exemplo, um algoritmo "siExplorer" está dis- ponível publicamente em rna.chem.t.u-tokyo.ac.jp/siexplorer.htm (con- sultar Katoh e Suzuki (2007) Nucleic Acids Res., 10.1093/nar/gkl1120); (c) determinar um complemento reverso da sequência alvo selecionada (por exemplo, 19-mer) para uso na produção de um miRNA maduro mo- dificado. Em relação a uma sequência de 19-mer, um nucleotídeo adici- onal na posição 20 pode estar correlacionado ao alvo selecionado ou sequência de reconhecimento e o nucleotídeo na posição 21 pode ser escolhido para ser não pareado para impedir a propagação do silencia- mento na transcrição do alvo ou pareado para a sequência alvo para promover a propagação do silenciamento na transcrição alvo; e (d) transformar o miRNA artificial em uma planta.

[0137] Múltiplos elementos de supressão senso e/ou antissenso para mais de um alvo da GA oxidase podem ser dispostos serialmente em tandem ou em segmentos ou repetições em tandem, como repeti- ções tandem invertidas, que podem também ser interrompidas por uma ou mais sequências espaçadoras e a sequência de cada elemento de supressão pode alvejar um ou mais genes da GA oxidase. Além disto, uma sequência sendo ou antissenso do elemento de supressão pode não ser perfeitamente correlacionada ou complementar à sequência do gene da GA oxidase alvo, dependendo da sequência e do comprimento do elemento de supressão. Elementos de supressão de RNAi ainda mais curtos de cerca de 19 nucleotídeos a cerca de 27 nucleotídeos de comprimento podem ter uma ou mais incompatibilidades ou bases não complementares, ainda assim, são eficazes na supressão do gene da GA oxidase alvo. Consequentemente, uma sequência de elementos de supressão senso ou antissenso pode ser pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma sequência correspondente de pelo menos um segmento ou porção do gene da GA oxidase alvejado, ou sua sequência comple- mentar, respectivamente.

[0138] Para a supressão do gene (ou genes) de GA oxidase usando uma repetição invertida ou um dsRNA transcrito, uma sequência de DNA ou elemento de supressão transcritível pode compreender uma se- quência senso que compreende um segmento ou uma porção de um gene da GA oxidase alvejado e uma sequência antissenso que é com- plementar a um segmento ou uma porção do gene da GA oxidase alve- jado, em que as sequências de DNA senso e antissenso são dispostas em tandem. As sequências senso e/ou antissenso, respectivamente, podem ser menos de 100% idênticas ou complementares a um seg- mento ou uma porção do gene da GA oxidase alvejado, como descrito acima. As sequências senso e antissenso podem ser separadas por uma sequência espaçadora, de modo que a molécula de RNA transcrita a partir do elemento de supressão forme uma estrutura de haste, alça ou haste-alça entre as sequências senso e antissenso. Um elemento de supressão pode, em vez disto, compreender várias sequências senso e antissenso que são dispostas em tandem, que também podem ser se- paradas por uma ou mais sequências espaçadoras. Os elementos de supressão que compreendem múltiplas sequências senso e antissenso podem ser dispostos como uma série de sequências senso seguido de uma série de sequências antissenso ou como uma série de sequências senso e antissenso dispostas em tandem. Alternativamente, uma ou mais sequências de DNA senso podem ser expressas separadamente da uma ou mais sequências antissenso (ou seja, uma ou mais sequên- cias de DNA senso podem ser expressas a partir de uma primeira se- quência de DNA transcritível e uma ou mais sequências de DNA antis- senso podem ser expressas a partir de uma segunda sequência de DNA transcritível, em que a primeira e a segunda sequências de DNA trans- critíveis são expressas como transcrições separadas).

[0139] Para a supressão do gene (ou genes) da GA oxidase usando um microRNA (miRNA), a sequência de DNA ou elemento de supressão transcritível pode compreender uma sequência de DNA derivada de uma sequência de miRNA nativa de um vírus ou eucarionte, como um animal ou planta, ou modificada ou derivada de uma sequência de miRNA nativa. Estas sequências de miRNA nativas ou derivadas de na- tivas podem formar uma estrutura enovelada e servir como um arca- bouço para o miRNA precursor (pré-miRNA), e podem corresponder à região do caule de uma sequência precursora de miRNA nativa, como de uma sequência de miRNA primário nativa (pri-miRNA) (ou derivada nativa) ou de pré-miRNA. No entanto, além destas sequências de miR- NAs nativas ou derivadas de miRNAs ou sequências pré-processadas, miRNAs manipulados ou sintéticos dos presentes aspectos compreen-

dem ainda uma sequência correspondente a um segmento ou uma por- ção do gene (ou genes) da GA oxidase alvejado. Portanto, além das sequências de miRNA pré-processadas ou de arcabouço, o elemento de supressão pode compreender ainda uma sequência senso e/ou an- tissenso que corresponde a um segmento ou a uma porção de um gene da GA oxidase alvejado e/ou uma sequência que é complementar a ela, embora uma ou mais incompatibilidades de sequência possam ser tole- radas.

[0140] Os genes da GA oxidase podem também ser suprimidos usando um ou mais pequenos RNAs interferentes (siRNAs). A via de siRNA envolve a clivagem não-faseada de um intermediário de RNA de fita dupla mais longo ("RNA duplex") em pequenos RNAs interferentes (siRNAs). O tamanho ou o comprimento dos siRNAs está na faixa de cerca de 19 a cerca de 25 nucleotídeos ou pares de bases, porém as classes comuns de siRNAs incluem aqueles que contêm 21 ou 24 pares de bases. Desta forma, uma sequência de DNA transcritível ou ele- mento de supressão pode codificar uma molécula de RNA que tem pelo menos cerca de 19 a cerca de 25 nucleotídeos (ou mais) de compri- mento, como pelo menos 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 nucleotídeos de comprimento. Para supressão de siRNA, uma molécula, construto ou vetor de DNA recombinante pode ser fornecido compreendendo uma sequência de DNA transcritível e elemento de supressão que codifica uma molécula de siRNA para a supressão alvejada de um gene (ou ge- nes) da GA oxidase. Uma sequência de DNA transcritível e elemento de supressão podem ter pelo menos 19 nucleotídeos de comprimento e ter uma sequência correspondente a um ou mais gene da GA oxidase e/ou uma sequência complementar a um ou mais genes da GA oxidase.

[0141] Os genes da GA oxidase podem também ser suprimidos usando um ou mais pequenos RNAs interferentes de ação trans (ta-siR-

NAs). Na via de ta-siRNA, os miRNAs servem para orientar o processa- mento em fase de transcrições primárias de siRNA em um processo que exige uma RNA polimerase dependente de RNA para a produção de um precursor de RNA de fita dupla. Os ta-siRNAs são definidos pela falta de estrutura secundária, um sítio alvo de miRNA que inicia a produção de RNA de fita dupla, requisitos de DCL4 e uma RNA polimerase de- pendente de RNA (RDR6) e produção de múltiplos RNAs pequenos ~21-nt perfeitamente faseados com duplexes perfeitamente correlacio- nados com saliências 3’ de 2 nucleotídeos (consultar Allen et al. (2005) Cell, 121:207-221). O tamanho ou o comprimento dos ta-siRNAs está na faixa de cerca de 20 a cerca de 22 nucleotídeos ou pares de bases, porém têm mais comumente 21 pares de bases. Uma sequência de DNA transcritível ou elemento de supressão da presente invenção pode codificar uma molécula de RNA que tem pelo menos cerca de 20 a cerca de 22 nucleotídeos de comprimento, como 20, 21 ou 22 nucleotídeos de comprimento. Para supressão de siRNA, uma molécula, construto ou vetor de DNA recombinante é, desta forma, fornecido compreendendo uma sequência de DNA transcritível ou elemento de supressão que co- difica uma molécula de ta-siRNA para a supressão alvejada de um gene (ou genes) da GA oxidase. Tal sequência de DNA transcritível e ele- mento de supressão podem ter pelo menos 20 nucleotídeos de compri- mento e ter uma sequência correspondente a um ou mais gene da GA oxidase e/ou uma sequência complementar a um ou mais genes da GA oxidase. Para métodos de construção de arcabouços de ta-siRNA ade- quados, consultar, por exemplo, Patente US nº 9.309.512, a qual está incorporada no presente documento a título de referência em sua totali- dade.

[0142] De acordo com um aspecto da presente divulgação, é pro- duzida uma semente da planta de milho modificada, em que a semente compreende um primeiro cassete de expressão e uma sequência de

DNA que codifica um RNA não codificante para a supressão de mais um genes da GA20 oxidase e/ou um ou mais genes da oxidase GA3 ou um ou mais genes da GA20 e/ou genes da oxidase GA3 mutados ou editados e um segundo cassete de expressão e uma sequência de DNA que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL. Em um aspecto, uma planta descendente cultivada a partir da semente é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem o elemento de supressão, de mutação ou de edição e o transgene CO/COL. Em um outro aspecto, uma mercado- ria ou produto de consumo é produzido a partir da semente da planta de milho modificada que compreende a primeira sequência de DNA trans- critível que codifica um RNA não codificante para a supressão de mais um genes da GA20 oxidase e/ou um ou mais genes da oxidase GA3 ou um ou mais genes da GA20 e/ou genes da oxidase GA3 mutados ou editados e a segunda sequência de DNA que codifica um ou mais poli- peptídeos CO ou COL.

[0143] Uma planta transgênica pode ser produzida por qualquer método de transformação adequado como fornecido no presente docu- mento para produzir uma planta transgênica R0, que pode então ser au- topolinizadas ou cruzadas com outras plantas para gerar a semente R 1 e gerações descendentes subsequentes e sementes através de cruza- mentos adicionais, etc. Aspectos da presente divulgação incluem ainda uma célula vegetal, tecido, explante, parte de planta, etc., que compre- ende uma ou mais células transgênicas com um evento de transforma- ção ou inserção genômica de uma sequência de DNA recombinante ou de polinucleotídeo que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica uma molécula de RNA não codificante que alveja um gene endógeno da GA3 ou da GA20 oxidase para supressão e um transgene que codifica um polipeptídeo CO ou COL.

[0144] Plantas transgênicas, células vegetais, sementes e partes de planta da presente divulgação podem ser homozigotas ou hemizigotas para um evento ou inserção transgênico em pelo menos uma célula ve- getal das mesmas, ou um evento de edição de genoma ou mutação al- vejada e plantas, células vegetais, sementes, e as partes de planta da presente divulgação podem conter qualquer número de cópias de tal evento (ou eventos) transgênico, de inserção (ou inserções), de muta- ção (ou mutações) e/ou de edição (ou edições). A dosagem ou a quan- tidade de expressão de um transgene ou sequência de DNA transcritível pode ser alterada por sua zigosidade e/ou número de cópias, o que pode afetar o grau ou extensão de alterações fenotípicas na planta transgênica, etc.

[0145] As plantas transgênicas fornecidas no presente documento podem incluir uma variedade de plantas de cereais monocotiledôneas, incluindo plantas de cultura, como milho, trigo, arroz e sorgo. De fato, moléculas ou construtos de DNA recombinante da presente divulgação podem ser usados para criar traços benéficos em plantas de cereais, como milho sem plantas fora do padrão, usando apenas uma única có- pia do evento transgênico, inserção ou construto.

[0146] Os aspectos da presente divulgação podem incluir ainda mé- todos para fabricar ou produzir plantas transgênicas, como por transfor- mação, cruzamento, etc., em que o método compreende introduzir uma molécula, um construto ou uma sequência de DNA recombinante em uma célula vegetal e, então regenerar ou desenvolver a planta transgê- nica da célula vegetal transformada ou editada, o que pode ser realizado sob pressão de seleção favorecendo um evento transgênico.

[0147] É fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende: a introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a célula de milho compreende um se- gundo cassete de expressão recombinante que compreende uma se- quência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da oxidase GA3 e/ou um ou mais genes da oxidase GA20; e regenerar ou desenvolver uma planta de mi- lho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

[0148] É também fornecido na presente divulgação um método para produzir uma planta de milho transgênica, sendo que o método compre- ende: (a) introduzir em uma primeira célula de milho um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL para criar uma célula de milho transgênica, em que a primeiro célula de milho compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase; e (b) gerar uma planta de milho transgênica a partir da célula de milho transgênica. Em um aspecto, o método compreende adi- cionalmente identificar uma planta de milho transgênica com um traço desejado. Em um outro aspecto, a planta de milho transgênica identifi- cada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem tanto o transgene quanto a sequência de DNA.

[0149] Também é fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método com- preende: introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de ex- pressão recombinante que compreende uma sequência de DNA trans- critível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase em que a célula de milho compreende um segundo cassete de expressão recom-

binante que compreende uma sequência de DNA que codifica um poli- peptídeo CO e/ou COL; e regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modifi- cada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão re- combinante.

[0150] É também fornecido na presente divulgação um método para produzir uma planta de milho transgênica, sendo que o método compre- ende: (a) introduzir em uma primeira célula de milho uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase para criar uma célula de milho transgênica, em que a primeira célula de milho compreende um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL; e (b) gerar uma planta de milho transgênica a partir da célula de milho transgênica. Em um aspecto, o método compreende adicional- mente identificar uma planta de milho transgênica com um traço dese- jado. Em um outro aspecto, a planta de milho transgênica identificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem tanto o transgene quanto a sequência de DNA.

[0151] Também é fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método com- preende introduzir em uma célula de milho 1) um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase e 2) um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; e regene- rar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

[0152] Também é fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho transgênica, sendo que o método compreende (a) introduzir em uma primeira célula de milho 1) uma se- quência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase e 2) um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL, para criar uma célula de milho transgênica; e (b) gerar uma planta de milho transgênica a partir da célula de milho transgênica. Em um aspecto, o método compreende adicionalmente identificar uma planta de milho transgênica com um traço desejado. Em um outro as- pecto, a planta de milho transgênica identificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de mi- lho controle que não tem tanto o transgene quanto a sequência de DNA.

[0153] Também é fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método com- preende introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de ex- pressão recombinante que compreende uma sequência de DNA trans- critível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase; introduzir na célula de milho da etapa (a) um segundo cassete de expressão recom- binante que compreende uma sequência de DNA que codifica um poli- peptídeo CO ou COL para criar uma célula de milho modificada; e rege- nerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho modificada da etapa (b), em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombi- nante.

[0154] Também é fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método com- preende introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de ex-

pressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que co- difica um polipeptídeo CO ou COL; introduzir na célula de milho da etapa (a) um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codifi- cante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou ge- nes da GA20 oxidase para criar uma célula de milho modificada; e re- generar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da cé- lula de milho modificada da etapa (b), em que a planta de milho modifi- cada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão re- combinante.

[0155] Também é fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho transgênica, sendo que o método compreende: (a) introduzir em uma primeira célula de milho uma se- quência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou um ou mais ou genes da GA20 oxidase para criar uma célula de milho transgênica, em que a primeira célula de milho é editada ou mutada por genoma e com- preende um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL; e (b) gerar uma planta de milho transgênica a partir da célula de milho transgênica. Em um aspecto, o método compreende adicional- mente identificar uma planta de milho transgênica com um traço dese- jado. Em um outro aspecto, a planta de milho transgênica identificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem tanto a sequência de DNA quanto o transgene.

[0156] Também é fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho transgênica, sendo que o método compreende (a) introduzir em uma primeira célula de milho uma sequên- cia de DNA que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL para criar uma célula de milho transgênica, em que a primeira célula de milho é editada ou mutada por genoma e tem uma expressão reduzida de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou um ou mais genes da GA20 oxidase; e (b) gerar uma planta de milho transgênica a partir da célula de milho transgênica. Em um aspecto, a primeira célula de milho compreende uma ou mais mutações ou edições em ou próximas a um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase (por exemplo, uma mutação ou edição em dois ou mais genes endóge- nos da GA20 oxidase endógenos e/ou genes da GA3 oxidase, em que a expressão do gene (ou genes) endógeno da GA20 oxidase e/ou genes da oxidase GA3 é reduzida em relação a um controle do tipo selvagem. Em um aspecto, o método compreende ainda identificar uma planta de milho transgênica com um traço desejado. Em um outro aspecto, a planta de milho transgênica identificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho con- trole que não tem tanto a sequência de DNA quanto a expressão redu- zida do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

[0157] Também é fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método com- preende: cruzar uma primeira planta de milho modificada com uma se- gunda planta de milho modificada, em que a expressão ou a atividade de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase é reduzida na primeira planta de milho modificada em relação a um controle do tipo selvagem e em que a segunda planta de milho mo- dificada compreende um cassete de expressão recombinante que com- preende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; e produzir uma planta de milho descendente que compreende o cassete de expressão recombinante e tem a expressão reduzida do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxi- dase.

[0158] Também é fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho transgênica, sendo que o método compreende (a) cruzar uma primeira planta de milho com uma segunda planta de milho para criar uma planta de milho modificada, em que a expressão de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou um ou mais genes da GA20 oxidase é reduzida na primeira planta de milho em relação a um controle do tipo selvagem, e em que a segunda planta de milho compreende um transgene que codifica um ou mais polipeptí- deos CO ou COL; e (b) produzir uma descendência da planta de milho transgênica da etapa (a). Em um aspecto, o método compreende ainda identificar uma planta de milho modificada com um traço desejado. Em um outro aspecto, a planta de milho modificada identificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem tanto o transgene quanto uma ex- pressão reduzida do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou da GA20 oxidase.

[0159] De acordo com um aspecto da presente divulgação, são for- necidos métodos para transformar uma célula, um tecido ou um ex- plante com uma molécula ou construto de DNA recombinante que com- preende sequências ou transgenes de DNA ligados de maneira funcio- nal a um ou mais promotores para produzir uma célula transgênica ou editada por genoma. De acordo com outros aspectos da presente divul- gação, são fornecidos métodos para transformar uma célula, tecido ou explante vegetal com uma molécula ou um construto de DNA recombi- nante que compreende sequências de DNA transcritíveis ou transgenes ligados de maneira funcional a um ou mais promotores expressáveis por plantas para produzir uma planta ou célula vegetal transgênica ou edi- tada por genoma.

[0160] Vários métodos para transformar cromossomos ou plastí- deos em uma célula vegetal com uma molécula ou um construto de DNA recombinante são conhecidos na técnica, o quais podem ser usados de acordo com os métodos da presente divulgação para produzir uma cé- lula vegetal e uma planta transgênica. Qualquer método ou técnica ade- quada para a transformação de uma célula vegetal conhecida na técnica pode ser usada de acordo com os presentes métodos.

[0161] Os métodos eficazes para a transformação de plantas in- cluem uma transformação bacterialmente mediada, como uma transfor- mação mediada por Agrobacterium ou mediada por Rhizobiume uma transformação mediada por bombardeamento de partículas de micro- projéteis. Uma variedade de métodos é conhecida na técnica para trans- formar explantes com um vetor de transformação através de transfor- mação bacterialmente mediada ou bombardeamento de partículas de microprojéteis e, então, subsequentemente de uma cultura, etc., destes explantes para regenerar ou desenvolver plantas transgênicas.

[0162] Em um aspecto, os métodos de produção de uma planta de milho transgênica ou modificada divulgada na presente divulgação com- preendem obter a primeira célula de milho e a célula de milho transgê- nica através da transformação mediada por Agrobacterium.

[0163] Em um outro aspecto, os métodos de produção de uma planta de milho transgênica ou modificada divulgada na presente divul- gação compreendem obter a primeira célula de milho e a célula de milho transgênica através da transformação mediada por bombardeamento de partículas de microprojéteis.

[0164] Ainda em um outro aspecto, os métodos de produção de uma planta de milho transgênica divulgada na presente divulgação compre- endem (1) introduzir em uma primeira célula de milho um transgene através de integração sítio-dirigida para criar uma célula de milho modi- ficada ou mutada, em que o transgene codifica um ou mais polipeptí- deos CO ou COL, e (2) introduzir na célula de milho modificada ou mu- tada uma sequência de DNA transcritível através de transformação para criar uma célula de milho transgênica, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou um ou mais genes da GA20 oxi- dase. Em um aspecto, a transformação pode ser transformação medi- ada por Agrobacterium ou transformação mediada por bombardea- mento de partículas de microprojéteis.

[0165] Ainda em um outro aspecto, os métodos de produção de uma planta de milho transgênica revelados na presente divulgação compre- endem (1) obter uma célula de milho modificada através de edição de genoma, em que a célula de milho modificada tem uma expressão re- duzida de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou um ou mais genes da GA20; e (2) introduzir na célula de milho modificada um transgene através de transformação para criar uma célula de milho transgênica, em que o transgene codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL. Em um aspecto, a transformação pode ser transformação mediada por Agrobacterium ou transformação mediada por bombardeamento de par- tículas de microprojéteis.

[0166] Outros métodos para transformação de planta, como micro- injeção, eletroporação, infiltração a vácuo, pressão, sonicação, agitação de fibra de carbeto de silício, transformação mediada por PEG, etc., também são conhecidos na técnica. As plantas transgênicas produzidas por estes métodos de transformação podem ser quiméricas ou não qui- méricas para o evento de transformação dependendo dos métodos e explantes usados.

[0167] Os métodos para transformar células vegetais são bem co- nhecidos por pessoas de habilidade comum na técnica. Por exemplo, instruções específicas de transformação de células vegetais por bom- bardeamento de partículas de microprojéteis com partículas revestidas com DNA recombinante são encontradas nas Patentes US nº

5.550.318; nº 5.538.880, nº 6.160.208; nº 6.399.861; e nº 6.153.812 e a transformação mediada por Agrobacterium é descrita nas Patentes US nº 5.159.135; nº 5.824.877; nº 5.591.616; nº 6.384.301; nº 5.750.871; nº

5.463.174; e nº 5.188.958, todas as quais estão incorporadas no pre- sente documento a título de referência. Os métodos adicionais para transformar plantas podem ser encontrados em, por exemplo, Compen- dium of Transgenic Crop Plants (2009) Blackwell Publishing. Qualquer método apropriado conhecido por aqueles versados na técnica pode ser usado para transformar uma célula vegetal com qualquer uma das mo- léculas de ácido nucleico fornecidas no presente documento.

[0168] Em um aspecto, são descritos no presente documento mé- todos para integrar uma sequência de inserção que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL no genoma de uma célula vegetal através de integração sítio-dirigida. Tais métodos compreendem a criação de uma quebra de fita dupla (DSB) no genoma da célula vegetal, de modo que a sequência de inserção seja integrada no sítio da DSB. Em um aspecto, a sequência de inserção/doadora que codifica um ou mais polipeptídeos de CO ou COL pode ser integrada de maneira alvejada no genoma de uma célula no local de uma DSB. As DSBs podem ser criadas por qual- quer mecanismo, incluindo, porém sem limitação, nucleases de dedo de zinco (ZFN), nuclease efetora semelhante a ativador de transcrição (TA- LEN), meganucleases, recombinases, transposases e nucleases guia- das por RNA (por exemplo, Cas9 e Cpf1) em um sistema de edição de genoma baseado em CRISPR.

[0169] Quando Cas9 cliva o DNA alvo, os mecanismos de reparo endógenos de quebra de fita dupla (DSB) são ativados. As DSBs podem ser reparadas através de união de extremidade não homóloga (NHEJ), que pode incorporar inserções ou deleções (indels) no locus alvejado. Se duas DSBs que flanqueiam uma região alvo são criadas, as quebras podem ser reparadas invertendo-se a orientação do DNA alvejado. Al- ternativamente, se uma sequência de inserção de um modelo doador com homologia à sequência de DNA alvo for fornecida, a DSB pode ser reparada através de reparo dirigido à homologia ou recombinação ho- móloga (HR). Este mecanismo de reparo permite a integração precisa de uma sequência de inserção na sequência de DNA alvejada.

[0170] Como usado no presente documento, uma "sequência de in- serção" de um modelo doador é uma sequência projetada para inserção alvejada no genoma de uma célula vegetal, que pode ter qualquer com- primento adequado. Por exemplo, uma sequência de inserção pode ter entre 2 e 50000, entre 2 e 10000, entre 2 e 5000, entre 2 e 1000, entre 2 e 500, entre 2 e 250, entre 2 e 100, entre 2 e 50, entre 2 e 30, entre 15 e 50, entre 15 e 100, entre 15 e 500, entre 15 e 1000, entre 15 e 5000, entre 18 e 30, entre 18 e 26, entre 20 e 26, entre 20 e 50, entre 20 e 100, entre 20 e 250, entre 20 e 500, entre 20 e 1000, entre 20 e 5000, entre 20 e 10,000, entre 50 e 250, entre 50 e 500, entre 50 e 1000, entre 50 e 5000, entre 50 e 10,000, entre 100 e 250, entre 100 e 500, entre 100 e 1000, entre 100 e 5000, entre 100 e 10000, entre 250 e 500, entre 250 e 1000, entre 250 e 5000 ou entre 250 e 10000 nucleotídeos ou pares de bases de comprimento.

[0171] De acordo com alguns aspectos, um modelo doador pode não compreender uma sequência para inserção em um genoma e, em vez disto, compreender uma ou mais sequências de homologia que in- cluem uma ou mais mutações, como uma inserção, uma deleção, uma substituição etc. em relação à sequência genômica em um sítio alvo dentro do genoma de uma planta. Alternativamente, um modelo doador pode compreender uma sequência que não compreende uma sequên- cia de codificação ou de DNA transcritível, em que a sequência de in- serção é usada para introduzir uma ou mais mutações em um sítio alvo dentro do genoma de uma planta.

[0172] Um modelo doador fornecido no presente documento pode compreender pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete, pelo menos oito, pelo menos nove ou pelo menos dez genes ou sequên- cias de DNA transcritíveis. Alternativamente, um modelo doador pode não compreender genes. Sem limitação, um gene ou uma sequência de DNA transcritível de um modelo doador pode incluir, por exemplo, um gene de resistência a inseticidas, um gene de tolerância a herbicidas, um gene de eficiência no uso de nitrogênio, um gene de eficiência no uso da água, um gene de qualidade nutricional, um gene de ligação ao DNA, um gene marcador selecionável, um RNAi ou construto de supres- são, um gene da enzima de modificação do genoma sítio-específico, um único RNA guia de um sistema CRISPR/Cas9, um cassete de expres- são baseado em geminivírus ou um sistema de vetor de expressão viral da planta. Um modelo doador pode compreender um promotor, como um promotor tecido-específico ou tecido-preferencial, um promotor constitutivo ou um promotor induzível. Um modelo doador pode compre- ender um líder, um intensificador, um promotor, um sítio de início trans- cricional, uma 5'-UTR, um ou mais éxons, um ou mais íntrons, um sítio de terminação transcricional, uma região ou sequência, uma 3'-UTR, e/ou um sinal de poliadenilação. O líder, o intensificador e/ou o promotor pode estar ligado de maneira funcional a um gene ou a uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante, um RNA guia, um mRNA e/ou uma proteína.

[0173] Em um aspecto, uma sequência de inserção de um modelo doador da presente divulgação compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que o polipeptídeo CO ou COL é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos

79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntico a uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 176 a 452 e um fragmento funcional das mesmas.

[0174] Em um aspecto, uma sequência de inserção de um modelo doador da presente divulgação compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo PpCOL, em que a sequência de DNA é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169.

[0175] Em um aspecto, uma "planta (ou plantas) modificada", "uma planta (ou plantas) de milho modificada", "uma planta (ou plantas) trans- gênica" ou "uma planta (ou plantas) de milho transgênica" produzida de acordo com um método divulgado na presente divulgação compreende (1) uma primeira sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA20 oxi- dase e/ou um ou mais genes da GA3 oxidase e (2) uma segunda se- quência de DNA que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL.

[0176] Em um outro aspecto, uma “planta (ou plantas) modificada”, “uma planta (ou plantas) de milho modificada”, “uma planta (ou plantas) transgênica” ou “uma planta (ou plantas) de milho transgênica” produ- zida de acordo com um método divulgado na presente divulgação com- preende (1) uma sequência de DNA que codifica um ou mais polipeptí- deos CO ou COL, e (2) uma expressão reduzida de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase em relação a um controle do tipo selvagem. Em um aspecto, a expressão reduzida de um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase ou genes da GA3 oxi- dase é causada por uma mutação ou edição no ou próximo a um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase ou genes da GA3 oxidase.

[0177] As plantas transgênicas produzidas por estes métodos de transformação podem ser quiméricas ou não quiméricas para o evento de transformação, dependendo dos métodos e explantes usados. Os métodos são ainda fornecidos para expressar uma molécula de RNA não codificante que alveja um gene endógeno da GA oxidase para a supressão em uma ou mais células ou tecidos vegetais, sob o controle de um promotor expressável em plantas, como um promotor vascular e/ou foliar constitutivo, tecido-específico, tecido-preferencial como for- necido no presente documento. Tais métodos podem ser usados para criar plantas transgênicas de cereais ou de milho com uma estatura mais baixa semianã, comprimento reduzido de entrenós, aumento do diâmetro de talo/caule e/ou resistência ao acamamento aprimorada. Tais plantas transgênicas de cereal ou de milho podem ter ainda outros traços que podem ser benéficos para o rendimento, como quebramento verde reduzido, raízes mais profundas, maior área foliar, fechamento mais precoce de copa, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, maior eficiência no uso de água, maior condutância esto- mática, menor altura da espiga, maior teor de água foliar, menor teor de antocianina e/ou área em folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do número de sementes ou caroços, aumento do peso de se- mentes ou caroços, aumento do rendimento, aumento do índice de co- lheita em relação a um planta do tipo selvagem ou controle. Conforme usado no presente documento, “índice de colheita” se refere à massa do grão colhido dividida pela massa total da biomassa acima do solo da planta por uma área colhida.

[0178] Alternativamente, as sequências nucleotídicas da divulgação podem ser introduzidas em um organismo e podem sofrer recombina- ção com regiões homólogas do genoma do organismo. Tais abordagens de recombinação homóloga são bem conhecidas por aqueles de habili- dade comum na técnica e podem ser usadas para incorporar sequên- cias de modo estável da divulgação em um organismo. Em um aspecto, as sequências nucleotídicas da divulgação podem ser usadas para in- troduzir "mutações knockout" em um gene específico de um organismo que compartilha homologia substancial com as sequências da divulga- ção. Uma mutação knockout é qualquer mutação na sequência de um gene que elimina ou reduz substancialmente a função ou o nível do pro- duto codificado pelo gene. Os métodos que envolvem a transformação de um organismo seguido por recombinação homóloga para integrar de modo estável as sequências da divulgação no organismo de genoma são abrangidos pela divulgação. A divulgação é particularmente direci- onada a métodos em que as sequências da divulgação são utilizadas para alterar o crescimento de um organismo. Tais métodos abrangem o uso das sequências da divulgação para interferir na função de um ou mais genes da GA20 oxidase ou genes da GA3 oxidase. Em um as- pecto, uma mutação knockout de um ou mais genes da GA20 oxidase ou genes da GA3 oxidase ser introduzida em uma célula de milho por meio de recombinação para reduzir a expressão de um ou mais genes da GA20 oxidase ou genes da GA3 na célula de milho.

[0179] As células que foram transformadas podem ser cultivadas em plantas de acordo com as formas convencionais. Consultar, por exemplo, McCormick et al. (1986) Plant Cell Reports 5:81-84. Estas plantas podem, então, ser cultivadas e ser polinizadas com a mesma cepa transformada ou com cepas diferentes, e o híbrido resultante que tem expressão constitutiva da característica fenotípica desejada pode ser identificado. Duas ou mais gerações podem ser cultivadas para as- segurar que a expressão constitutiva da característica fenotípica dese- jada seja mantida de forma estável e herdada e, então, as sementes são colhidas para assegurar que a expressão constitutiva da caracterís- tica fenotípica desejada tenha sido obtida.

[0180] Em um aspecto, os métodos de produção de uma planta de milho transgênica ou modificada compreendem ainda cultivar a planta de milho transgênica da etapa (b) ou uma parte da planta na presença de um agente de seleção. Em um outro aspecto, o agente de seleção é a canamicina.

[0181] A célula recipiente ou alvos de explante para transformação incluem, mas sem limitação, uma célula de semente, uma célula de fruta, uma célula de folha, uma célula de cotiledônea, uma célula de hipocótilo, uma célula de meristema, uma célula de embrião, uma célula de endosperma, uma célula de raiz, uma célula de broto, uma célula de caule, uma célula de vagem, uma célula de flor, uma célula de inflores- cência, uma célula de talo, uma célula de pedicelo, uma célula de pistilo, uma célula de estigma, uma célula de receptáculo, uma célula de pétala, uma célula de sépala, uma célula de pólen, uma célula de antera, uma célula de filamento, uma célula de ovário, uma célula de óvulo, uma cé- lula de pericarpo, uma célula de floema, uma célula de botão, ou uma célula de tecido vascular. Em outro aspecto, esta divulgação fornece um cloroplasto de planta. Em um aspecto adicional, esta divulgação fornece uma célula epidérmica, uma célula estomática, uma célula de tricoma,

uma célula de pelo de raiz, uma célula de raiz de armazenamento, ou uma célula de tubérculo. Em outro aspecto, esta divulgação fornece um protoplasto. Em outro aspecto, esta divulgação fornece uma célula de calo de planta.

[0182] A transformação de um material vegetal ou explante alvo pode ser praticada na cultura de tecidos em meio nutriente, por exem- plo, uma mistura de nutrientes que permite que as células cresçam in vitro. Os explantes, células ou tecidos transformados podem ser subme- tidos às etapas de cultura adicionais, como indução, seleção, regenera- ção de calo, etc., conforme conhecido na técnica. A transformação pode também ser executada sem a criação ou uso de um tecido de calo. As células, tecidos ou explantes transformados que contêm um evento ou inserção de sequência de DNA recombinante podem ser cultivados, de- senvolvidos ou regenerados em plantas transgênicas em cultura, plu- gues ou solo de acordo com métodos conhecidos na técnica. As plantas transgênicas podem ser ainda cruzadas entre si ou com outras plantas para produzir sementes e progênie transgênicas. Uma planta transgê- nica pode também ser preparada pelo cruzamento de uma primeira planta que compreende uma sequência de DNA recombinante ou um evento de transformação com uma segunda planta desprovida da inser- ção. Por exemplo, uma sequência de DNA recombinante pode ser intro- duzida em uma primeira linhagem da planta que é passível de transfor- mação, que pode então ser cruzada com uma segunda linhagem da planta para introgressão do construto ou da sequência de DNA recom- binante na segunda linhagem da planta. A progênie destes cruzamentos pode ser ainda retrocruzada com a linhagem mais desejável várias ve- zes, como através de 6 a 8 gerações ou de retrocruzamentos, para pro- duzir uma planta descendente com substancialmente o mesmo genótipo que a linhagem parental original, porém para a introdução do construto ou da sequência de DNA recombinante.

[0183] Qualquer célula a partir da qual uma planta fértil pode ser regenerada é contemplada como uma célula recipiente útil para prática desta divulgação. O calo pode ser iniciado a partir de várias fontes de tecido, incluindo, mas sem limitação, embriões imaturos ou partes de embriões, meristemas apicais de semeadura, microesporos e seme- lhantes. Estas células que têm capacidade para proliferar como calo po- dem servir como células recipientes para transformação. Métodos e ma- teriais práticos de transformação para a produção de plantas transgêni- cas desta divulgação (por exemplo, vários meios e células alvo recep- toras, transformação de embriões imaturos, e regeneração subsequente de plantas transgênicas férteis) são divulgados, por exemplo, nas Pa- tentes US nº 6.194.636 e nº 6.232.526 e Publicação de Pedido de Pa- tente nº US 2004/0216189, todas as quais estão incorporadas no pre- sente documento a título de referência.

[0184] Os explantes, células ou tecidos transformados podem ser submetidos às etapas de cultura adicionais, como indução, seleção, re- generação de calo, etc., conforme conhecido na técnica. As células, te- cidos ou explantes transformados que contêm uma inserção de DNA recombinante podem ser cultivados, desenvolvidos ou regenerados em plantas transgênicas em cultura, plugues ou solo de acordo com méto- dos conhecidos na técnica. Em um aspecto, esta divulgação fornece células vegetais que não são material reprodutor e não mediam a repro- dução natural da planta. Em outro aspecto, esta divulgação também for- nece células vegetais que são material reprodutor e mediam a reprodu- ção natural da planta. Em outro aspecto, esta divulgação fornece células vegetais que não podem se manter por meio de fotossíntese. Em outro aspecto, esta divulgação fornece células vegetais somáticas. As células somáticas, contrárias às células de linhagem germinativa, não mediam a reprodução de planta.

[0185] As plantas transgênicas podem ser ainda cruzadas entre si ou com outras plantas para produzir sementes e progênie transgênicas. Uma planta transgênica pode também ser preparada pelo cruzamento de uma primeira planta que compreende uma sequência de DNA recom- binante ou um evento de transformação com uma segunda planta des- provida da inserção. Por exemplo, uma sequência de DNA recombi- nante pode ser introduzida em uma primeira linhagem da planta que é passível de transformação, que pode então ser cruzada com uma se- gunda linhagem da planta para introgressão do construto ou da sequên- cia de DNA recombinante na segunda linhagem da planta. A progênie destes cruzamentos pode ser adicionalmente retrocruzada na linhagem mais desejável múltiplas vezes, como de 6 a 8 gerações ou retrocruza- mentos, para produzir uma planta de progênie com substancialmente o mesmo genótipo que a linhagem parental original, mas para a introdu- ção do construto ou sequência de DNA recombinante.

[0186] Uma planta, célula ou explante fornecido no presente docu- mento pode ser de uma variedade elite ou linhagem elite. Uma varie- dade de elite ou uma linhagem de elite se refere a qualquer variedade que foi resultante da reprodução e seleção para desempenho agronô- mico superior. Uma planta, uma célula ou um explante fornecido no pre- sente documento pode ser uma planta, uma célula ou um explante hí- brido. Conforme usado no presente documento, um “híbrido” é criado cruzando-se duas plantas de variedades, linhagens ou espécies dife- rentes, de modo que a progênie compreenda o material genético de cada parente. Os artesãos versados na técnica reconhecem que os hí- bridos de ordem superior também podem ser gerados. Por exemplo, um primeiro híbrido pode ser feito reproduzindo-se a Variedade C com a Variedade D para criar um híbrido C x D, e um segundo híbrido pode ser feito cruzando-se a Variedade E com a Variedade F para criar um híbrido E x F. O primeiro e o segundo híbridos podem ser adicional- mente cruzados para criar o híbrido de ordem mais alta (C x D) x (E x

F) que compreende informações genéticas de todas as quatro varieda- des parentais.

[0187] Para a transformação mediada por Agrobacterium, o vetor de transformação pode compreender um segmento de DNA de transfe- rência manipulado (ou T-DNA) ou região com duas sequências de borda, uma borda esquerda (LB) e uma borda direita (RB), flanqueando pelo menos uma sequência de DNA transcritível ou transgene, de modo que a inserção do T-DNA no genoma do vegetal crie um evento de trans- formação para a sequência de DNA transcritível, transgene ou cassete de expressão. Em outras palavras, o transgene, uma sequência de DNA transcritível, transgene ou cassete de expressão que codificam a nu- clease (ou nucleases) sítio-específica e/ou sgRNA(s) ou crRNA(s) po- deriam estar localizados entre as bordas esquerda e direita do T-DNA, talvez juntamente com um transgene (ou transgenes) ou cassete (ou cassetes) de expressão adicional, como um transgene marcador seleci- onável vegetal e/ou outro gene (ou genes) de interesse agronômico que possam conferir um traço ou fenótipo de interesse agronômico a uma planta.

[0188] Um transgene marcador selecionável vegetal em um vetor ou construto de transformação da presente divulgação pode ser usado para auxiliar na seleção de células ou de tecido transformados devido à presença de um agente de seleção, como um antibiótico ou um herbi- cida, em que o transgene marcador selecionável vegetal fornece tole- rância ou resistência ao agente de seleção. Portanto, o agente de sele- ção pode propagar ou favorecer a sobrevivência, o desenvolvimento, o crescimento, a proliferação, etc., de células transformadas que expres- sam o gene marcador selecionável vegetal, para aumentar a proporção de células ou de tecidos transformados na planta R0.

[0189] Um transgene marcador selecionável vegetal em um vetor ou construto de transformação da presente divulgação pode ser usado para auxiliar na seleção de células ou de tecido transformados devido à presença de um agente de seleção, como um antibiótico ou um herbi- cida, em que o transgene marcador selecionável vegetal fornece tole- rância ou resistência ao agente de seleção. Portanto, o agente de sele- ção pode propagar ou favorecer a sobrevivência, o desenvolvimento, o crescimento, a proliferação, etc., de células transformadas que expres- sam o gene marcador selecionável vegetal, para aumentar a proporção de células ou de tecidos transformados na planta R0. Os genes marca- dores selecionáveis por plantas comumente usados incluem, por exem- plo, aqueles que conferem tolerância ou resistência a antibióticos, como canamicina e paromomicina (nptII), higromicina B (aph IV), estreptomi- cina ou espectinomicina (aadA) e gentamicina (aac3 e aacC4), ou aque- les que conferem tolerância ou resistência a herbicidas como glufosinato (bar ou pat), dicamba (DMO) e glifosato (aroA ou EPSPS). Também po- dem ser usados genes marcadores selecionáveis vegetais, os quais for- necem uma capacidade de selecionar visualmente os transformantes, como a luciferase ou a proteína verde fluorescente (GFP), ou um gene que expressa uma beta glucuronidase ou um gene uidA (GUS) para o qual são conhecidos vários substratos cromogênicos. Em alguns aspec- tos, um vector ou polinucleotídeo fornecido no presente documento compreende pelo menos um gene marcador selecionável selecionado do grupo que consiste em nptII, aph IV, aadA, aac3, aacC4, bar, pat, DMO, EPSPS, aroA, GFP e GUS. A transformação de plantas pode tam- bém ser realizada na ausência de seleção durante uma ou mais etapas ou estágios de cultivo, de desenvolvimento ou de regeneração de ex- plantes, tecidos, plantas e/ou partes de plantas transformados.

[0190] Um aspecto da presente divulgação se refere à triagem de células, de tecidos ou de plantas quanto a mutações, edições alvejadas ou transgenes e à seleção de células ou plantas que compreendem edi- ções alvejadas ou transgenes. Os ácidos nucleicos podem ser isolados com o uso de rotina de técnicas na arte. Por exemplo, os ácidos nuclei- cos podem ser isolados com o uso de qualquer método incluindo, sem limitação, tecnologia de ácido nucleico recombinante, e/ou a reação em cadeia da polimerase (PCR). As técnicas de PCR gerais são descritas, por exemplo, em PCR Primer: A Laboratory Manual, Dieffenbach & Dveksler, Eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995. As técnicas de ácido nucleico recombinantes incluem, por exemplo, digestão e liga- ção de enzima de restrição, as quais podem ser usadas para isolar um ácido nucleico. Os ácidos nucleicos isolados também podem ser quimi- camente sintetizados, como uma molécula de ácido nucleico única ou como uma série de oligonucleotídeos. Os polipeptídeos podem ser pu- rificados a partir de fontes naturais (por exemplo, uma amostra bioló- gica) por métodos conhecidos, como troca iônica de DEAE, filtração de gel, e cromatografia de hidroxiapatita. Um polipeptídeo também pode ser purificado, por exemplo, expressando-se um ácido nucleico em um vetor de expressão. Além disto, um polipeptídeo purificado pode ser ob- tido por síntese química. O grau de pureza de um polipeptídeo pode ser medido com o uso de qualquer método apropriado, por exemplo, cro- matografia de coluna, eletroforese de gel de poliacrilamida, ou análise de HPLC.

[0191] Em um aspecto, esta divulgação fornece métodos para de- tectar ácidos nucleicos e polipeptídeos recombinantes em células vege- tais. Sem limitação, os ácidos nucleicos também podem ser detectados com o uso de hibridização. A hibridização entre os ácidos nucleicos é discutida em detalhes em Sambrook et al. (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2ª Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY).

[0192] Os polipeptídeos podem ser detectados com o uso de anti- corpos. As técnicas para detectar polipeptídeos com o uso de anticorpos incluem ensaios imunossorbentes ligados à enzima (ELISAs), Western blots, imunoprecipitações e imunofluorescência. Um anticorpo fornecido no presente documento pode ser um anticorpo policlonal ou um anti- corpo monoclonal. Um anticorpo que tem afinidade de ligação especí- fica por um polipeptídeo fornecido no presente documento pode ser ge- rado com o uso de métodos bem conhecidos na técnica. Um anticorpo fornecido no presente documento pode ser fixado a um suporte sólido, como uma placa de microtítulo com o uso de métodos conhecidos na técnica.

[0193] A detecção (por exemplo, de um produto de amplificação, de um complexo de hibridização, de um polipeptídeo) pode ser alcançada com o uso de identificações detectáveis. O termo “identificação” é des- tinado a abranger o uso de identificações diretas, assim como identifi- cações indiretas. As identificações detectáveis incluem enzimas, grupos prostéticos, materiais fluorescentes, materiais luminescentes, materiais bioluminescentes, e materiais radioativos.

[0194] A triagem e a seleção de plantas modificadas ou transgêni- cas ou células vegetais pode ser através de quaisquer metodologias co- nhecidas por aqueles que têm habilidade comum na técnica. Os exem- plos de metodologias de triagem e seleção incluem, mas sem limitação, análise Southern, amplificação de PCR para detecção de um polinucle- otídeo, Northern blots, proteção de RNase, extensão de iniciador, am- plificação de RT-PCR para detectar transcrições de RNA, sequencia- mento de Sanger, tecnologias de sequenciamento de Próxima Geração (por exemplo, Illumina, PacBio, Ion Torrent, 454) ensaios enzimáticos para detectar enzima ou atividade de ribozima de polipeptídeos e poli- nucleotídeos, genotipagem de marcadores e eletroforese de gel de pro- teína, Western blots, imunoprecipitação, e imunoensaios ligados à en- zima para detectar polipeptídeos. Outras técnicas, como hibridização in situ, coloração de enzima, e imunocoloração também podem ser usadas para detectar a presença ou expressão de polipeptídeos e/ou polinucle- otídeos. Os métodos para realizar todas as técnicas referenciadas são conhecidos.

[0195] As plantas de milho modificadas da presente divulgação que têm uma altura de planta reduzida e traços de espiga aprimorados em relação a uma planta do tipo selvagem ou controle podem compreender uma mutação (por exemplo, uma inserção, uma deleção, uma substitui- ção, etc.) introduzida através de outra técnica de mutagênese vegetal ou edição de genoma, em que a expressão de um ou mais genes da oxidase GA20 ou genes da GA3 é reduzida ou eliminada em um ou mais tecidos da planta modificada. As plantas de milho modificadas da pre- sente divulgação que têm uma altura reduzida e traços de espiga apri- morados em relação a uma planta do tipo selvagem ou controle podem compreender um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL. O transgene pode ser introduzido através de outra técnica de mutagênese vegetal ou edição de genoma.

[0196] As técnicas de mutagênese vegetal (excluindo a edição do genoma) podem incluir mutagênese química (ou seja, tratamento com um mutágeno químico, como azida, hidroxilamina, ácido nitroso, acri- dina, análogo de base nucleotídica ou agente alquilante - por exemplo, EMS (etilmetano sulfonato), MNU (N-metil-N-nitrosoureia), etc.), muta- gênese física (por exemplo, raios gama, raios X, UV, feixe de íons, ou- tras formas de radiação etc.) e mutagênese de inserção (por exemplo, transpóson ou inserção de T-DNA). Plantas ou várias partes de plantas, tecidos ou células vegetais podem ser submetidos à mutagênese. As plantas tratadas podem ser reproduzidas para coletar sementes ou pro- duzir uma planta descendente e as partes de planta, tecidos ou células vegetais tratadas podem ser desenvolvidas ou regeneradas formando plantas ou outros tecidos vegetais. Mutações geradas com técnicas de mutagênese química ou física podem incluir uma mutação por mudança da matriz de leitura (frameshif), com troca de sentido (missense) ou sem sentido (nonsense) levando à perda de função ou de expressão de um gene alvejado, como um gene da GA3 ou gene da GA20 oxidase.

[0197] Um método de mutagênese de um gene é chamado de "TIL- LING" (para alvejar lesões locais induzidas em genomas), em que as mutações são criadas em uma célula ou tecido vegetal, de preferência, na semente, tecido reprodutivo ou linha germinativa de uma planta, por exemplo, usando um mutágeno, como um tratamento EMS. As plantas resultantes são cultivadas e autofertilizadas, e a progênie é usada para preparar amostras de DNA. A amplificação por PCR e o sequencia- mento de uma sequência de ácido nucleico de um gene da oxidase GA20 ou GA3 podem ser usados para identificar se uma planta mutada tem uma mutação no gene da GA oxidase. As plantas com mutações no gene da oxidase GA20 ou GA3 podem ser testadas quanto a um traço alterado, como altura de planta reduzida. Alternativamente, as plantas mutagenizadas podem ser testadas quanto a um traço alterado, como altura de planta reduzida, e então a amplificação por PCR e o sequenciamento de uma sequência de ácidos nucleicos de um gene da GA20 ou da GA3 oxidase pode ser usado para determinar se uma planta que tem o traço alterado tem também uma mutação no gene da GA oxidase. Consultar, por exemplo, Colbert et al., 2001, Plant Physiol 126:480-484; e McCallum et al.2000, Nat. Biotechnol., 18:455-457. TIL- LING pode ser usado para identificar mutações que alteram a expressão de um gene ou a atividade de proteínas codificadas por um gene, que podem ser usadas para introduzir e selecionar uma mutação alvejada em um gene da GA20 ou da GA3 oxidase de uma planta de milho ou de cereal.

[0198] É fornecido na presente divulgação um construto de DNA re- combinante que compreende 1) um primeiro cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA20 oxi- dase ou um ou mais genes da GA3 oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas. Em um as- pecto, o primeiro e o segundo cassetes de expressão estão em um único segmento de T-DNA de um vetor de transformação. Em um outro aspecto, o primeiro e o segundo cassetes de expressão estão em dois segmentos de T-DNA diferentes de um vetor de transformação.

[0199] Em um aspecto, a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA3 oxi- dase_1, um gene da GA3 oxidase_2, ou ambos. Em um outro aspecto, a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo me- nos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37. Em um outro aspecto, a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codifi- cante que compreende uma sequência que é 80% complementar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos de um ou mais dos SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0200] Em um outro aspecto, a sequência de DNA transcritível co- difica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA20 oxidase_3, um gene da GA20 oxidase_4, um gene da GA20 oxidase_5, ou uma combinação dos mesmos. Em um outro aspecto, a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 80% complementar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 39, 53 ou 55. Em um outro aspecto, a sequência de DNA transcri- tível codifica uma sequência que é pelo menos 80% complementar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 40, 54 ou 56.

[0201] Em um aspecto, o RNA não codificante compreende uma se- quência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotí- deos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma prote- ína endógena da GA oxidase em uma planta de milho ou célula vegetal, sendo que a proteína endógena da GA oxidase é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 ou 33.

[0202] Em um outro aspecto, o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 7, 8, 10, 11, 13, 14, 28, 29, 31 ou 32.

[0203] Em um aspecto, a sequência de DNA compreendida no se- gundo cassete de expressão compreende uma sequência que codifica uma proteína que tem uma sequência de aminoácidos que é pelo menos

60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais SEQ ID NOs: 176-397. Em um outro aspecto, a sequência de DNA compreendida no segundo cassete de expressão compreende uma sequência que codifica uma proteína que tem uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais SEQ ID NOs: 398-452.

[0204] Em um aspecto, a sequência de DNA compreendida no se- gundo cassete de expressão codifica um polipeptídeo de Physcomitrella patens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1). Em um outro aspecto, o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60% idêntica à SEQ ID NO: 168 ou um fragmento funcional da mesma. Em um outro aspecto, a sequência de DNA com- preende uma sequência que é pelo menos 60% idêntica à SEQ ID NO:

169.

[0205] É fornecido no presente documento um construto de DNA recombinante que compreende 1) uma primeira sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA20 oxidase ou um ou mais genes da GA3 oxi- dase, e 2) uma segunda sequência de DNA que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL.

[0206] Em um aspecto, um construto de DNA recombinante da pre- sente divulgação compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA20 oxidase e/ou um ou mais genes da GA3 oxidase, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor ex- pressável em plantas. Tal construto de DNA recombinante pode ser usado para transformar uma célula de planta de milho que expressa um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL para criar uma planta de milho transgênica com os traços desejados. Em um outro aspecto, os traços desejados compreendem traços de espiga semianã e aprimorados em comparação com uma planta de milho controle que não tem o transgene e a sequência de DNA.

[0207] Em um aspecto, um construto de DNA recombinante da pre- sente divulgação compreende uma sequência de DNA que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas. Tal construto de DNA recombinante pode ser usado para transformar uma célula de planta de milho que tem uma expressão reduzida de um ou mais genes da GA20 oxidase e/ou um ou mais genes da GA3 oxidase para criar uma planta de milho transgênica com traços desejados. Em um outro aspecto, os traços desejados compreendem traços de espiga semianã e aprimorados em comparação com uma planta de milho con- trole que não tem a sequência de DNA e a expressão reduzida do um ou mais genes da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase.

[0208] Também é fornecido na presente divulgação algumas plan- tas de milho transgênicas que compreendem o construto de DNA re- combinante. Em um aspecto, a primeira e a segunda sequências de DNA estão em uma única molécula de T-DNA. Em um outro aspecto, a primeira e a segunda sequências de DNA estão em duas moléculas de

T-DNA diferentes. Em um aspecto, a primeira sequência de DNA trans- critível está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas.

[0209] Em um aspecto, um construto de DNA recombinante da pre- sente divulgação compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica uma molécula de RNA não codificante, em que o RNA não co- dificante compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo me- nos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA oxidase, sendo que a proteína endógena da GA oxidase é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos

89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 ou 33, e em que a sequência de DNA transcritível está ligada de maneira funcional a um promotor ex- pressável em plantas. Em um outro aspecto, o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% com- plementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo me- nos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 7, 8, 10, 11, 13, 14, 28, 29, 31 ou 32.

[0210] Em um outro aspecto, o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molé- cula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA20 oxidase,

sendo que a proteína endógena da GA20 oxidase é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 15. Ainda em um outro aspecto, o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotí- deos consecutivos da SEQ ID NO: 13 ou SEQ ID NO: 14.

[0211] Em um outro aspecto, a molécula de RNA não codificante compreende uma sequência que é (i) pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA20 oxidase, sendo que a proteína endógena da GA20 oxidase é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9; e/ou (ii) pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA20 oxidase, sendo que a proteína endógena da GA20 oxidase é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 15.

[0212] Em um outro aspecto, a molécula de RNA não codificante compreende uma sequência que é (i) pelo menos 90%, pelo menos

95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 7 ou 8; e/ou (ii) pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 13 ou 14.

[0213] Em um outro aspecto, o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molé- cula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA20 oxidase, sendo que a proteína endógena da GA20 oxidase é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 12.

[0214] Em um outro aspecto, o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 10 ou 11.

[0215] Em um outro aspecto, o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molé- cula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA3 oxidase, sendo que a proteína endógena da GA3 oxidase é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 30 ou 33.

[0216] Em um outro aspecto, o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 28, 29, 31 ou 32.

[0217] Em um aspecto, o RNA não codificante compreende uma se- quência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotí- deos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma prote- ína endógena da GA oxidase em uma planta de milho ou célula vegetal, sendo que a proteína endógena da GA oxidase é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma ou mais das SEQ ID NOs: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30 e 33.

[0218] Em um outro aspecto, a molécula de RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% com- plementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo me- nos 27 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 1, 2, 4, 5, 7, 8, 10, 11, 13, 14, 16, 17, 19, 20, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31 e

32.

[0219] Em um aspecto, é fornecida uma molécula de DNA recombi- nante, um vetor ou um construto para a supressão de um gene endó- geno da GA oxidase (ou semelhante à GA oxidase) em uma planta de milho ou de cereal, sendo que a molécula de DNA recombinante, o vetor ou o construto compreende uma sequência de DNA transcritível que co- difica uma molécula de RNA não codificante, em que a molécula de RNA não codificante compreende uma sequência que é (i) pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de qualquer uma dentre uma ou mais SEQ ID NO: 84, 85, 87, 88, 89, 91, 92, 93, 95, 96, 98, 99, 100, 102, 103, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 113, 114, 115, 117, 119, 120, 122, 123, 124, 126, 127, 128, 130, 131, 132, 134, 135, e/ou 137, e/ou (ii) pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo me- nos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos con- secutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma proteína na planta de cereal que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a qualquer uma dentre uma ou mais SEQ ID NO: 86, 90, 94, 97, 101, 104, 108, 112, 116, 118, 121, 125, 129, 133 e/ou 136. De modo semelhante, uma mo- lécula de RNA não codificante pode alvejar um gene endógeno da GA oxidase (ou semelhante à GA oxidase) em uma planta de cereal que tem uma porcentagem de identidade ao gene (ou genes) da GA oxidase mostrado que afeta a altura da planta no milho.

Portanto, é ainda forne- cida uma molécula de RNA não codificante que compreende uma se- quência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%,

pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotí- deos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma prote- ína endógena em uma planta de cereal que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a qualquer uma ou mais SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 e/ou

33. Conforme mencionado acima, a molécula de RNA não codificante pode alvejar um éxon, um íntron e/ou uma sequência de UTR de um gene da GA oxidase (ou semelhante à GA oxidase).

[0220] Uma molécula ou um construto de DNA recombinante da presente invenção pode ser incluído dentro de um vetor de transforma- ção de DNA para utilização na transformação de uma célula, tecido ou explante vegetal alvo. Tal vetor de transformação da presente divulga- ção pode geralmente compreender sequências ou elementos necessá- rios ou benéficos para a transformação eficaz, além de pelo menos um gene marcador selecionável, pelo menos um cassete de expressão e/ou uma sequência de DNA transcritível que codifica uma ou mais nuclea- ses sítio-específicas e, opcionalmente, um ou mais sgRNAs ou crRNAs.

[0221] De acordo com um aspecto da presente divulgação, promo- tores tecido-específicos ou tecido-preferenciais adequados podem in- cluir aqueles promotores que dirigem ou causam a expressão de seu elemento ou sequência de supressão associado, pelo menos no tecido (ou tecidos) vascular e/ou foliar de uma planta de milho ou de cereal ou possivelmente outros tecidos.

[0222] A expressão do elemento ou do construto de supressão da GA oxidase com um promotor tecido-específico ou tecido-preferencial pode também ocorrer em outros tecidos da planta de cereal ou de milho fora dos tecidos vasculares e foliares, porém os níveis de GA ativo nos tecidos reprodutivos em desenvolvimento da planta (particularmente no órgão reprodutor feminino ou espiga) não são, de preferência, significa- tivamente reduzidos ou impactados (em relação às plantas do tipo sel- vagem ou controle), de modo que o desenvolvimento do órgão feminino ou da espiga possa prosseguir normalmente na planta transgênica sem plantas fora do padrão na espiga e uma perda no potencial de rendi- mento.

[0223] De acordo com alguns aspectos, são fornecidos construtos e transgenes que compreendem a primeira sequência de DNA transcri- tível e a segunda sequência de DNA que está a um promotor constitutivo ou tecido-específico ou tecido-preferencial, como um promotor vascular ou foliar.

[0224] Em um aspecto, o promotor expressável em plantas é um promotor vascular. Quaisquer promotores vasculares conhecidos na técnica podem ser potencialmente utilizados como o promotor tecido- específico ou tecido-preferencial. Exemplos de promotores vasculares incluem o promotor RTBV, um promotor de sacarose sintase, como um promotor de sacarose sintase-1 de milho (Sus1 ou Sh1), um promotor de parálogo de gene Sh1 de milho, um promotor de sacarose sintase de cevada (Ss1), um promotor da sacarose sintase-1 de arroz (RSs1) ou um promotor da sacarose sintase-2 de arroz (Rss2), um promotor de gene transportador de sacarose conhecido, como um promotor de trans- portador de sacarose de arroz (STU1), ou vários promotores virais co- nhecidos, como um promotor do vírus do mosqueado amarelo de Com- melina (CoYMV), um promotor de grande região intergênica (LIR) de geminivírus anão do trigo (WDV), um promotor (CP) de proteína de re- vestimento de geminivírus das estrias do milho (MSV) ou um promotor semelhante à faixa amarela do arroz 1 (YS1) ou OsYSL2, e qualquer porção de sequência funcional ou truncamento de qualquer um dos pro- motores anteriores com um padrão de expressão similar, como um pro- motor RTBV truncado.

[0225] Em um outro aspecto, o promotor vascular compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo me- nos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma ou mais dentre SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 ou SEQ ID NO: 71 ou uma porção funcional das mes- mas.

[0226] Em um outro aspecto, o promotor expressável em plantas é um promotor do vírus baciliforme do arroz tungro (RTBV). Em um as- pecto, o promotor RTBV compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma ou mais dentre SEQ ID NO: 65 ou SEQ ID NO: 66 ou uma porção funcional das mesmas.

[0227] Em um outro aspecto, o promotor expressável em plantas é um promotor foliar. Quaisquer promotores foliares conhecidos na téc- nica podem ser potencialmente usados como o promotor tecido-especí- fico ou tecido-preferencial. Exemplos de promotores foliares incluem um promotor de piruvato de fosfato diquinase ou PPDK, um promotor de 1,6-bifosfato aldolase de frutose de milho ou FDA e um promotor de Nadh-Gogat de arroz e qualquer porção de sequência funcional ou trun- camento de qualquer um dos promotores anteriores com um padrão de expressão similar. Outros exemplos de promotores foliares de genes de monocotiledôneas incluem um promotor de ribulose bifosfato carboxi- lase (RuBisCO) ou de subunidade pequena RuBisCO (RBCS), um pro- motor do gene da proteína de ligação à clorofila a/b, um promotor de fosfoenolpiruvato carboxilase (PEPC) e um promotor do gene Myb e qualquer porção da sequência funcional ou truncamento de qualquer um destes promotores com um padrão de expressão similar.

[0228] Em um outro aspecto, o promotor foliar compreende uma se- quência de DNA que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma ou mais dentre SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73 ou SEQ ID NO: 74 ou uma porção funcional das mesmas.

[0229] Em um outro aspecto, o promotor expressável em plantas é um promotor constitutivo. Exemplos de promotores constitutivos que po- dem ser usados em plantas monocotiledôneas, como plantas de cereal ou de milho, incluem, por exemplo, vários promotores do gene da actina, como um promotor de Actina 1 de arroz (consultar, por exemplo, Patente US nº 5.641.876) e um promotor de Actina 2 de arroz (consultar, por exemplo, a Patente US nº 6.429.357), um promotora CaMV 35S ou 19S (consultar, por exemplo, a Patente US nº 5.352.605), um promotor de ubiquitina de maís (consultar, por exemplo, a Patente US nº 5.510.474), um promotor de poliubiquitina Coix lacryma-jobi , um promotor Gos2 de arroz ou de maís (consultar, por exemplo, Pater et al., Plant J., 2(6): 837- 44 1992), um promotor FMV 35S (consultar, por exemplo, a Patente US nº 6.372.211), um promotor CMV intensificado duplo (consultar, por exemplo, a Patente US nº 5.322.938), um promotor MMV (consultar, por exemplo, a Patente US nº 6.420.547), um promotor PCLSV (consultar, por exemplo, a Patente US nº 5.850.019), um promotor Emu (consultar,

por exemplo, Last et al., Theor. Appl. Genet., 81:581 (1991); e Mcelroy et al., Mol. Gen. Genet., 231:150 (1991)), um promotor de tubulina do milho, arroz ou outras espécies, um promotor da nopalina sintase (nos), um promotor da octopina sintase (ocs), um promotor da manopina sin- tase (mas) ou uma desidrogenase de álcool vegetal (por exemplo, milho Adh1 ), quaisquer outros promotores, incluindo promotores virais conhe- cidos ou identificados posteriormente na técnica para fornecer expres- são constitutiva em uma planta de cereais ou milho, quaisquer outros promotores constitutivos conhecidos na técnica que possam ser utiliza- dos em monocotiledôneas ou em plantas de cereais e qualquer sequên- cia funcional porção ou truncamento de qualquer um dos promotores anteriores.

[0230] Em um outro aspecto, o promotor constitutivo compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma ou mais dentre SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82 ou SEQ ID NO: 83 ou uma porção funcional das mesmas.

[0231] Podem ser preferidos os promotores tecido-específicos e te- cido-preferenciais que dirigem, etc., um nível de expressão moderado ou forte de sua sequência de DNA transcritível associada em tecido (ou tecidos) produtor de GA ativo de uma planta. Além disto, tais promotores tecido-específicos e tecido-preferenciais devem dirigir, etc., a expressão de sua sequência de DNA transcritível associada durante um ou mais estágios vegetativos do desenvolvimento da planta quando a planta está crescendo e/ou se alongando, incluindo um ou mais dos seguintes es- tágios vegetativos: VE, V1, V2, V3, V4, V5, V6, V7, V8, V9, V10, V11, V12, V13, V14, Vn, VT, como expressão pelo menos durante V3-V12, V4-V12, V5-V12, V6-V12, V7-V12, V8-V12, V3-V14, V5-V14, V6-V14, V7-V14, V8-V14, V9-V14, V10-V14, etc., ou durante qualquer outra faixa de estágios vegetativos quando está ocorrendo o crescimento e/ou o alongamento da planta.

[0232] De acordo com um aspecto, o promotor expressável em plantas pode, de preferência, dirigir a expressão constitutivamente ou pelo menos em uma porção dos tecidos vasculares e/ou foliares da planta. Diferentes promotores que dirigem a expressão de um elemento de supressão que alveja o gene (ou genes) da GA20 oxidase_3 e/ou da GA20 oxidase_5, o gene da GA20 oxidase_4, o gene (ou genes) da GA3 oxidase_1 e/ou da GA3 oxidase_2 no milho, ou genes e homólogos si- milares em outras plantas de cereais, podem ser eficazes na redução da altura de planta e no aumento da resistência ao acamamento em graus variados, dependendo de seu padrão específico e intensidade de expressão na planta. No entanto, alguns promotores tecido-específicos e tecido-preferenciais que dirigem a expressão de um elemento de su- pressão da GA20 ou da GA3 oxidase em uma planta podem não produ- zir fenótipos de baixa estatura ou antiacamamento devido ao padrão espaço-temporal de expressão do promotor durante o desenvolvimento da planta e/ou a quantidade ou intensidade de expressão do promotor sendo muito baixa ou fraca. Além disto, alguns construtos de supressão podem apenas reduzir e não eliminar a expressão do gene (ou genes) da GA20 ou da GA3 oxidase alvejada quando expressos em uma planta e, portanto, dependendo do padrão e da intensidade da expressão com um determinado promotor, o padrão e o nível de expressão do construto de supressão da GA20 ou da GA3 oxidase com tal promotor pode não ser suficiente para produzir um fenótipo com altura de planta observável e resistência ao acamamento nas plantas.

[0233] Quaisquer outros promotores vasculares e/ou foliares conhe- cidos na técnica, incluindo sequências promotoras de genes relaciona- dos (por exemplo, sacarose sintase, transportador de sacarose e se- quência promotora de genes virais) de espécies de plantas ou de vírus iguais ou diferentes que têm um padrão de expressão similar. São ainda fornecidas sequências promotoras com um alto grau de homologia a qualquer uma das anteriores. Exemplos de promotores vasculares e/ou foliares podem incluir ainda outras sequências promotoras manipuladas e/ou identificadas posteriormente que mostraram ter um padrão de ex- pressão em tecido (ou tecidos) vasculares e/ou foliares de uma planta de cereal ou de milho. Além disto, qualquer promotor constitutivo conhe- cido ou identificado posteriormente pode também ser utilizado para a expressão de um elemento de supressão de GA20 oxidase ou GA3 oxi- dase.

[0234] Além de seu promotor associado, uma sequência de DNA transcritível ou um transgene pode também estar ligado de maneira fun- cional a um ou mais elementos reguladores adicionais, como um inten- sificador (ou intensificadores), líder, sítio de início de transcrição (TSS), ligante, região (ou regiões) não traduzida 5' e 3’ (UTR), íntron (íntrons), sinal de poliadenilação, região ou sequência de terminação, etc., que são adequados, necessários ou preferenciais para reforçar, regular ou permitir a expressão da sequência de DNA transcritível em uma célula vegetal. Tal elemento (ou elementos) regulador pode ser opcional e/ou usado para intensificar ou otimizar a expressão do transgene ou se- quência de DNA transcritível. Como fornecido no presente documento,

um "intensificador" pode ser distinguido de um "promotor" pelo fato de que um intensificador geralmente é desprovido de um sítio de início de transcrição, TATA box, ou sequência equivalente e, portanto, é insufici- ente para dirigir a transcrição individualmente. Como usado no presente documento, um "líder" pode ser definido geralmente como a sequência de DNA da 5’-UTR de um gene (ou transgene) entre o sítio de início de transcrição (TSS) e a extremidade 5’ do sítio de início de sequência de DNA transcritível ou da sequência de codificação de proteína do trans- gene.

[0235] Em um aspecto, a segunda sequência de DNA que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL compreendidos em um construto de DNA recombinante do presente pedido está ligada de maneira funci- onal a um promotor expressável em plantas, como um promotor consti- tutivo ou tecido-específico. De acordo com um aspecto, o promotor ex- pressável em plantas é um promotor médio ou alto constitutivo com um promotor alto constitutivo que tem uma expressão constitutiva relativa- mente mais robusta ou forte. Em um aspecto, o promotor expressável em plantas é um promotor constitutivo, que pode ser selecionado do grupo que consiste em um promotor de actina, um promotor 35S ou 19S do vírus do mosaico da couve-flor (CaMV), um promotor de ubiquitina vegetal, um promotor Gos2 vegetal, um promotor do vírus do mosaico da escrofulária (FMV), um promotor de citomegalovírus (CMV), um pro- motor do vírus do mosaico mirabilis (MMV), um promotor de caulimoví- rus das estrias cloróticas de amendoim (PCLSV), um promotor Emu, um promotor de tubulina, um promotor de nopalina sintase, um promotor de octopina sintase, um promotor de manopina sintase ou uma álcool de- sidrogenase de maís, uma porção funcional dos mesmos, e uma com- binação dos mesmos.

[0236] Em um aspecto, é produzido um vetor de transformação que compreende o construto de DNA recombinante. Em um outro aspecto,

é produzida uma planta de milho transgênica ou uma parte da planta da mesma que compreende o construto de DNA recombinante. Ainda em um outro aspecto, a planta de milho transgênica é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem tanto a primeira sequência de DNA transcritível quanto a segunda sequência de DNA.

[0237] Uma molécula ou um construto de DNA recombinante da presente invenção pode estar incluído dentro de um vetor de transfor- mação de DNA para utilização na transformação de uma célula, tecido ou explante vegetal alvo. Tal vetor de transformação pode geralmente compreender sequências ou elementos necessários ou benéficos para a transformação eficaz além de pelo menos um transgene, cassete de expressão e/ou sequência de DNA transcritível.

[0238] Para a transformação mediada por Agrobacterium, mediada por Rhizobia ou outra mediada por bactérias, o vetor de transformação pode compreender um segmento de DNA de transferência manipulado (ou T-DNA) ou região com duas sequências de borda, uma borda es- querda (LB) e uma borda direita (RB), flanqueando pelo menos uma se- quência de DNA transcritível ou transgene, de modo que a inserção do T-DNA no genoma do vegetal crie um evento de transformação para a sequência de DNA transcritível, transgene ou cassete de expressão. Portanto, uma sequência de DNA transcritível, um transgene ou um cas- sete de expressão poderia estar localizados entre as bordas esquerda e direita do T-DNA, talvez juntamente com um transgene (ou transge- nes) ou cassete (ou cassetes) de expressão adicional, como um trans- gene marcador selecionável vegetal e/ou outro gene (ou genes) de in- teresse agronômico que possam conferir um traço ou fenótipo de inte- resse agronômico a uma planta. De acordo com aspectos alternativos, a sequência de DNA transcritível, o transgene ou o cassete de expres- são que codifica uma molécula de RNA não codificante que alveja um gene endógeno da GA oxidase para supressão e o transgene de mar- cador selecionável vegetal (ou outro gene de interesse agronômico) po- dem estar presentes em segmentos de T-DNA separados em uma mo- lécula (ou moléculas) de DNA recombinante igual ou diferente, como para cotransformação. Um vetor ou um construto de transformação pode ainda compreender elementos de manutenção procarióticos, que podem estar localizados no vetor fora da região (ou regiões) do T-DNA.

[0239] A presente divulgação fornece uma planta de milho modifi- cada com um fenótipo semianão e um ou mais traços de espiga aprimo- rados em relação a uma planta controle. A planta de milho modificada tem sua expressão de um ou mais genes da oxidase GA20 e/ou um ou mais genes da GA3 oxidase reduzida e compreende um transgene que expressa um ou mais polipeptídeos CO ou COL. Em um aspecto, a ex- pressão reduzida dos um ou mais genes da GA20 oxidase e/ou um ou mais genes da GA3 oxidase é causada por uma mutação ou edição no ou próximo aos um ou mais genes da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase introduzidos através de edição de genoma. Em um outro as- pecto, a expressão reduzida de um ou mais genes da oxidase GA20 e/ou um ou mais genes oxidase GA3 é causada por uma integração sítio-dirigida de uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão dos um ou mais genes da oxi- dase GA20 e/ou um ou mais genes da GA3 oxidase. Em um aspecto, a integração sítio-dirigida é mediada pela edição do genoma. Em um as- pecto, a introdução do transgene que expressa um ou mais polipeptí- deos CO ou COL é causada por uma integração sítio-dirigida de uma sequência que compreende o transgene. Em um outro aspecto, a inte- gração sítio-dirigida é mediada por edição de genoma.

[0240] Em um aspecto, um sistema de edição de genoma fornecido no presente documento compreende um sistema CRISPR. Os sistemas CRISPR têm base em nucleases manipuladas guiadas RNA que usam pareamento de base complementar para reconhecer sequências de DNA em sítios alvo. Em um aspecto, um vetor fornecido no presente documento pode compreender qualquer combinação de uma sequência de ácido nucleico que codifica uma nuclease guiada por RNA.

[0241] Em um aspecto, um método e/ou composição fornecido no presente documento compreende uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais nucleases Cas9. Em um aspecto, um método e/ou composição fornecido no presente documento compre- ende um ou mais polinucleotídeos que codificam uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais nucleases Cas9. Em outro aspecto, uma Cas9 nuclease fornecida no presente docu- mento tem capacidade para gerar uma DSB alvejada. Em um aspecto, um método e/ou composição fornecido no presente documento compre- ende uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais nucleases Cpf1. Em um aspecto, um método e/ou composição fornecido no presente documento compreende um ou mais polinucleo- tídeos que codificam uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais nucleases Cpf1. Em outro aspecto, uma Cpf1 nuclease fornecida no presente documento tem capacidade para gerar uma DSB alvejada.

[0242] Em um aspecto, um vetor ou construto fornecido no presente documento compreende polinucleotídeos que codificam pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, ou pelo menos 10 nu- cleases específicas de sítio. Em outro aspecto, uma célula fornecida no presente documento já compreende uma nuclease específica de sítio. Em um aspecto, um polinucleotídeo que codifica uma nuclease especí- fica de sítio fornecida no presente documento é transformada de modo estável em uma célula. Em outro aspecto, um polinucleotídeo que codi- fica uma nuclease específica de sítio fornecida no presente documento é transformada de modo transiente em uma célula. Em outro aspecto, um polinucleotídeo que codifica uma nuclease específica de sítio está sob o controle de um promotor regulável, um promotor constitutivo, um promotor específico de tecido, ou qualquer promotor útil para expressão da nuclease específica de sítio.

[0243] Em um aspecto, vetores que compreendem polinucleotídeos que codificam uma nuclease sítio-específica, e opcionalmente um ou mais, dois ou mais, três ou mais ou quatro ou mais sgRNAs são forne- cidos a uma célula vegetal por métodos de transformação conhecidos na técnica (por exemplo, sem limitação, bombardeamento de partículas, transfecção de protoplastos mediada por PEG ou transformação medi- ada por Agrobacterium). Em um aspecto, vetores que compreendem polinucleotídeos que codificam uma Cas9 nuclease, e opcionalmente um ou mais, dois ou mais, três ou mais ou quatro ou mais sgRNAs são fornecidos a uma célula vegetal por métodos de transformação conhe- cidos na técnica (por exemplo, sem limitação, bombardeamento de par- tículas, transfecção de protoplastos mediada por PEG ou transformação mediada por Agrobacterium). Em outro aspecto, os vetores que com- preendem polinucleotídeos que codificam uma Cpf1 e, opcionalmente, um ou mais, dois ou mais, três ou mais, ou quatro ou mais crRNAs são fornecidos a uma célula por métodos de transformação conhecidos na técnica (por exemplo, sem limitação, transfecção viral, bombardeio de partículas, transfecção de protoplasto mediada por PEG ou transforma- ção mediada por Agrobacterium).

[0244] Em um aspecto, um vetor compreende em cis um cassete que codifica uma nuclease sítio-específica e uma sequência de inserção de modo que, quando colocada em contato com o genoma de uma cé- lula, a nuclease sítio-específica permita a integração sítio-específica da sequência de inserção. Em um aspecto, um primeiro vetor compreende um cassete que codifica uma nuclease sítio-específica e um segundo vetor compreende uma sequência de inserção de modo que quando co- locada em contato com o genoma de uma célula, a nuclease sítio-espe- cífica fornecida em trans permite a integração sítio-específica da se- quência de inserção.

[0245] As nucleases específicas de sítio fornecidas no presente do- cumento podem ser usadas como parte de uma técnica de edição alve- jada. Os exemplos não limitantes de nucleases específicas de sítio usa- dos em métodos e/ou composições fornecidas no presente documento incluem meganucleases, nucleases de dedo de zinco (ZFNs), nucleases efetoras semelhantes a ativador de transcrição (TALENs), nucleases guiadas por RNA (por exemplo, Cas9 e Cpf1), uma recombinase (sem limitação, por exemplo, a uma serina recombinase fixada a um motivo de reconhecimento de DNA, uma tirosina recombinase fixada a um mo- tivo de reconhecimento de DNA), uma transposase (sem limitação, por exemplo, uma DNA transposase fixada a um domínio de ligação de DNA), ou qualquer combinação dos mesmos. Em um aspecto, um mé- todo fornecido no presente documento compreende o uso de uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais nu- cleases sítio-específicas para induzir uma, duas, três, quatro, cinco ou mais de cinco DSBs em um, dois, três, quatro, cinco ou mais de cinco sítios alvo.

[0246] Em um aspecto, um sistema de edição de genoma fornecido no presente documento (por exemplo, uma meganuclease, uma ZFN, uma TALEN, um sistema CRISPR/Cas9, um sistema CRISPR/Cpf1, uma recombinase, uma transposase) ou uma combinação de sistemas de edição de genoma fornecida no presente documento, é usado em um método para introduzir uma ou mais inserções, deleções, substitui- ções ou inversões em um locus da célula para introduzir uma mutação ou gerar um alelo negativo dominante ou um alelo positivo dominante.

[0247] Nucleases sítio-específicas, como meganucleases, ZFNs,

TALENs, proteínas Argonaute (exemplos não limitantes de proteínas Ar- gonaute incluem Argonaute Thermus thermophilus (TtAgo), Argonaute Pyrococcus furiosus (PfAgo), Argonaute Natronobacterium gregoryi (NgAgo) ou homólogos modificados versões), nucleases Cas9 (exem- plos não limitantes de nucleases guiadas por RNA incluem Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9 (também co- nhecido como Csn1 e Csx12), Cas10, Csy1, Csy2 , Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, seus homólogos ou versões modificadas dos mesmos), induzem uma quebra de DNA de fita dupla no sítio alvo de uma sequência genômica que é, então, reparada pelos processos naturais de HR ou NHEJ. Modificações de sequência que ocorrem nos sítios clivados, que podem incluir inver- sões, deleções ou inserções que resultam em ruptura de genes no caso de NHEJ ou integração de sequências de ácidos nucleicos por HR.

[0248] Em um aspecto, uma nuclease específica de sítio fornecida no presente documento é selecionada do grupo que consiste em uma nuclease de dedo de zinco, uma meganuclease, uma nuclease guiada por RNA, uma TALE-nuclease, uma recombinase, uma transposase, ou qualquer combinação dos mesmos. Em outro aspecto, uma nuclease específica de sítio fornecida no presente documento é selecionada do grupo que consiste em um Cas9 ou em um Cpf1.

[0249] Em outro aspecto, uma nuclease específica de sítio forne- cida no presente documento é selecionados do grupo que consiste em um Cas1, um Cas1B, um Cas2, um Cas3, um Cas4, um Cas5, um Cas6, um Cas7, um Cas8, um Cas9, um Cas10, um Csy1, um Csy2, um Csy3, um Cse1, um Cse2, um Csc1, um Csc2, um Csa5, um Csn2, um Csm2, um Csm3, um Csm4, um Csm5, um Csm6, um Cmr1, um Cmr3, um Cmr4, um Cmr5, um Cmr6, um Csb1, um Csb2, um Csb3, um Csx17,

um Csx14, um Csx10, um Csx16, um CsaX, um Csx3, um Csx1, um Csx15, um Csf1, um Csf2, um Csf3, um Csf4, um Cpf1, um homólogo dos mesmos, ou uma versão modificada dos mesmos. Em outro as- pecto, uma nuclease guiada por RNA fornecida no presente documento é selecionada do grupo que consiste em um Cas9 ou em um Cpf1.

[0250] Em outro aspecto, uma nuclease guiada por RNA fornecida no presente documento é selecionados do grupo que consiste em um Cas1, um Cas1B, um Cas2, um Cas3, um Cas4, um Cas5, um Cas6, um Cas7, um Cas8, um Cas9, um Cas10, um Csy1, um Csy2, um Csy3, um Cse1, um Cse2, um Csc1, um Csc2, um Csa5, um Csn2, um Csm2, um Csm3, um Csm4, um Csm5, um Csm6, um Cmr1, um Cmr3, um Cmr4, um Cmr5, um Cmr6, um Csb1, um Csb2, um Csb3, um Csx17, um Csx14, um Csx10, um Csx16, um CsaX, um Csx3, um Csx1, um Csx15, um Csf1, um Csf2, um Csf3, um Csf4, um Cpf1, um homólogo dos mesmos, ou uma versão modificada dos mesmos.

[0251] Em outro aspecto, um método e/ou uma composição forne- cidos no presente documento compreendem pelo menos um, pelo me- nos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete, pelo menos oito, pelo menos nove, ou pelo menos dez nucleases específicas de sítio. Em ainda outro aspecto, um método e/ou uma composição fornecidos no presente documento compreendem pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete, pelo menos oito, pelo menos nove, ou pelo menos dez polinucleotídeos que codificam pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete, pelo menos oito, pelo menos nove, ou pelo menos dez nucleases espe- cíficas de sítio.

[0252] Em um aspecto, uma nuclease guiada por RNA fornecida no presente documento é selecionada do grupo que consiste em Cas1,

Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9 (também co- nhecida como Csn1 e Csx12), Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, homó- logos das mesmas, ou versões modificadas das mesmas, uma Argo- naute (exemplos não limitantes de proteínas Argonaute incluem Ther- mus thermophilus Argonaute (TtAgo), Pyrococcus furiosus Argonaute (PfAgo), Natronobacterium gregoryi Argonaute (NgAgo), homólogos das mesmas, versões modificadas das mesmas), um guia de DNA para uma proteína Argonaute, e qualquer combinação dos mesmos. Em outro as- pecto, uma nuclease guiada por RNA fornecida no presente documento é selecionada do grupo que consiste em Cas9 e Cpf1.

[0253] Em outro aspecto, uma nuclease guiada por RNA fornecida no presente documento compreende Cas9. Em um aspecto, uma nu- clease guiada por RNA fornecida no presente documento é selecionada do grupo que consiste em Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9 (também conhecida como Csn1 e Csx12), Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, homólogos das mesmas, ou versões mo- dificadas das mesmas. Em um aspecto, uma nuclease sítio-específica é selecionada do grupo que consiste em Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9, Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, TtAgo, PfAgo e NgAgo. Em outro aspecto, uma nuclease guiada por RNA é selecionada do grupo que consiste em Cas1, Cas1B, Cas2,

Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9, Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, TtAgo, PfAgo e NgAgo.

[0254] Um sítio alvo pode ser posicionado em uma sequência de polinucleotídeo que codifica um líder, um intensificador, um sítio de iní- cio de transcrição, um promotor, uma UTR 5’, um éxon, um íntron, uma UTR 3’, um sítio de poliadenilação, ou uma sequência de terminação. Será evidenciado que um sítio alvo também pode ser posicionado a montante ou a jusante de uma sequência que codifica um líder, um in- tensificador, um sítio de início de transcrição, um promotor, uma UTR 5’, um éxon, um íntron, uma UTR 3’, um sítio de poliadenilação, ou uma sequência de terminação. Em um aspecto, um sítio alvo é posicionado dentro de 10, dentro de 20, dentro de 30, dentro de 40, dentro de 50, dentro de 75, dentro de 100, dentro de 125, dentro de 150, dentro de 200, dentro de 250, dentro de 300, dentro de 400, dentro de 500, dentro de 600, dentro de 700, dentro de 800, dentro de 900, dentro de 1000, dentro de 1250, dentro de 1500, dentro de 2000, dentro de 2500, dentro de 5000, dentro de 10000 ou dentro de 25000 nucleotídeos de um poli- nucleotídeo que codifica um líder, um intensificador, um sítio inicial transcricional, um promotor, uma 5’-UTR, um éxon, um íntron, uma 3’- UTR, um sítio de poliadenilação, um gene ou uma sequência de termi- nação.

[0255] Em um aspecto, um sítio alvo ligado por uma nuclease gui- ada por RNA é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%,

pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntico ou complementar a pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos 90, pelo menos 100, pelo menos 150, pelo menos 200, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 2500 ou pelo menos 5000 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37 ou 38, ou uma sequência complementar à mesma.

[0256] Em um aspecto, uma técnica de edição de genoma alvejada descrita no presente documento pode compreender o uso de uma re- combinase. Em um aspecto, uma tirosina recombinase fixada a um mo- tivo de reconhecimento de DNA é selecionada do grupo que consiste em uma Cre recombinase, em uma Gin recombinase, em uma Flp re- combinase e em uma Tnp1 recombinase. Em um aspecto, uma Cre re- combinase ou uma Gin recombinase fornecidas no presente documento é ligada a um domínio de ligação de DNA de dedo de zinco. O sistema de recombinação direcionado por sítio de Flp-FRT é proveniente do plasmídeo 2µ de fermento biológico Saccharomyces cerevisiae. Neste sistema, Flp recombinase (flippase) recombina sequências entre sítios- alvo de reconhecimento de flippase (FRT). Os sítios de FRT compreen- dem 34 nucleotídeos. Flp se liga aos “braços” dos sítios de FRT (um braço está em orientação inversa) e cliva o sítio de FRT em qualquer extremidade de uma sequência de ácido nucleico interveniente. Após a clivagem, Flp recombina sequências de ácido nucleico entre dois sítios de FRT. Cre-lox é um sistema de recombinação direcionado por sítio derivado do bacteriófago P1 que é similar ao sistema de recombinação Flp-FRT. Cre-lox pode ser usado para inverter uma sequência de ácido nucleico, deletar uma sequência de ácido nucleico, ou translocar uma sequência de ácido nucleico. Neste sistema, a Cre recombinase recom- bina um par de sequências de ácidos nucleicos lox. Os sítios lox com- preendem 34 nucleotídeos, com os primeiros e os últimos 13 nucleotí- deos (braços) sendo palindrômicos. Durante a recombinação, a proteína Cre recombinase se liga a dois sítios lox em ácidos nucleicos diferentes e cliva nos sítios lox. Os ácidos nucleicos clivados são submetidos a splicing juntos (reciprocamente translocados) e a recombinação é com- pleta. Em um outro aspecto, um sítio lox fornecido no presente docu- mento é um sítio loxP, lox 2272, loxN, lox 511, lox 5171, lox71, lox66, M2, M3, M7 ou M11.

[0257] Em outro aspecto, uma serina recombinase fixada a um mo- tivo de reconhecimento de DNA fornecido no presente documento é se- lecionada do grupo consistindo em uma PhiC31 integrase, uma R4 in- tegrase e uma TP-901 integrase. Em outro aspecto, uma DNA transpo- sase fixada a um domínio de ligação de DNA fornecido aqui é selecio- nada do grupo consistindo em um TALE-piggyBac e TALE-Mutator.

[0258] Várias nucleases sítio-específicas, como recombinases, nu- cleases de dedo de zinco (ZFNs), meganucleases e TALENs, não são guiadas por RNA e, em vez disto, dependem de sua estrutura de prote- ínas para determinar seu sítio alvo para causar a DSB ou a descontinui- dade, ou elas são fundidas, ancoradas ou ligadas a um domínio ou mo- tivo de proteína de ligação ao DNA.

[0259] ZFNs são proteínas sintéticas que consistem em um domínio de ligação de DNA de dedo de zinco ao domínio de clivagem da nu- clease de restrição FokI. ZFNs podem ser projetadas para clivar quase todo um longo estiramento de DNA de fita dupla para modificação do domínio de ligação de DNA de dedo de zinco. ZFNs formam dímeros de monômeros compostos por um domínio de clivagem de DNA não espe- cífico de nuclease FokI fundido a um arranjo de dedo de zinco modifi- cado para se ligar a uma sequência-alvo de DNA.

[0260] O domínio de ligação ao DNA de uma ZFN é tipicamente composto de 3 a 4 matrizes de dedos de zinco. Os aminoácidos nas posições -1, +2, +3 e +6 em relação ao início da ∞-hélice de dedo de zinco, que contribui para a ligação específica de sítio ao DNA-alvo, po- dem ser mudados e personalizados para se adaptar a sequências-alvo específicas. Os outros aminoácidos formam a cadeia principal de con- senso para gerar ZFNs com diferentes especificidades de sequência. As regras para selecionar sequências alvo para ZFNs são conhecidas na técnica.

[0261] O domínio da nuclease FokI exige dimerização para clivar o DNA e, portanto, são necessárias duas ZFNs com suas regiões C-ter- minais para ligar fitas de DNA opostas do sítio de clivagem (separadas por 5 a 7 pb). O monômero de ZFN pode cortar o sítio-alvo se os sítios de ligação de dois ZF forem palindrômicos. O termo ZFN, como usado no presente documento, é amplo e inclui uma ZFN monomérica que pode clivar o DNA de fita dupla sem assistência de outra ZFN. O termo ZFN também é utilizado para se referir a um ou ambos membros de um par de ZFNs que são modificadas para trabalhar juntas para clivar DNA no mesmo sítio.

[0262] Sem se ater a qualquer teoria científica, devido ao fato de as especificidades de ligação ao DNA dos domínios de dedo de zinco po- derem ser remanipuladas usando um dentre vários métodos, teorica- mente, ZFNs personalizados podem ser construídos para alvejar quase qualquer sequência alvo (por exemplo, em ou próximo a um gene da GA oxidase em um genoma vegetal). Métodos publicamente disponíveis para modificar domínios de dedo de zinco incluem Conjunto dependente de Contexto (CoDA), Modificação de Agrupamento Oligomerizado

(OPEN) e Conjunto Modular. Em um aspecto, um método e/ou compo- sição fornecido no presente documento compreende uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais ZFNs. Em um outro aspecto, uma ZFN fornecida no presente documento é capaz de gerar uma DSB alvejada ou uma descontinuidade. Em um aspecto, ve- tores que compreendem polinucleotídeos que codificam uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais ZFNs são fornecidas a uma célula por métodos de transformação conhecidos na técnica (por exemplo, sem limitação, transfecção viral, bombardea- mento de partículas, transfecção de protoplasto mediada por PEG ou transformação mediada por Agrobacterium). As ZFNs podem ser intro- duzidas como proteínas ZFN, como polinucleotídeos que codificam pro- teínas ZFN e/ou como combinações de proteínas e polinucleotídeos de codificação de proteína.

[0263] Em um aspecto, um método e/ou composição fornecido no presente documento compreende uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais ZFNs. Em outro aspecto, uma ZFN fornecida no presente documento tem capacidade para gerar uma DSB alvejada. Em um aspecto, vetores que compreendem polinucleotí- deos que codificam uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais ZFNs são fornecidas a uma célula por métodos de transformação conhecidos na técnica (por exemplo, sem limitação, transfecção viral, bombardeamento de partículas, transfecção de proto- plasto mediada por PEG ou transformação mediada por Agrobacte- rium).

[0264] As meganucleases, comumente identificadas em micróbios, como a família LAGLIDADG de endonucleases locais, são enzimas ex- clusivas com alta atividade e longas sequências de reconhecimento (> 14 pb) resultando na digestão sítio-específica de DNA alvo. As versões modificadas de meganucleases de ocorrência natural têm tipicamente sequências de reconhecimento de DNA estendidas (por exemplo, 14 a 40 bp). De acordo com alguns aspectos, uma meganuclease pode com- preender uma enzima de andaime ou base selecionada do grupo que consiste em I-CreI, I-CeuI, I-MsoI, I-SceI, I-AniIe I-DmoI. A engenharia de meganucleases pode ser mais desafiadora que as ZFNs e TALENs, pois as funções de reconhecimento e de clivagem de DNA das meganu- cleases estão entrelaçadas em um único domínio. Métodos especializa- dos de mutagênese e varredura de alto rendimento foram utilizados para criar variantes de meganuclease inovadoras que reconhecem sequên- cias exclusivas e possuem atividade de nuclease melhorada. Desta forma, uma meganuclease pode ser selecionada ou manipulada para se ligar a uma sequência alvo genômica em uma planta, como no ou pró- ximo ao locus genômico de um gene da GA oxidase. Em um aspecto, um método e/ou composição fornecido no presente documento compre- ende uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais meganucleases. Em outro aspecto, uma meganuclease forne- cida no presente documento tem capacidade para gerar uma DSB alve- jada. Em um aspecto, vetores que compreendem polinucleotídeos que codificam uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais meganucleases são fornecidos a uma célula por métodos de transformação conhecidos na técnica (por exemplo, sem limitação, transfecção viral, bombardeamento de partículas, transfecção de proto- plasto mediada por PEG ou transformação mediada por Agrobacte- rium).

[0265] TALENs são enzimas de restrição artificial geradas fundindo- se o domínio de ligação de DNA de efetor do tipo ativador de transcrição (TALE) a um domínio de nuclease FokI. Quando cada membro de um par TALEN se liga aos sítios de DNA que flanqueiam um sítio alvo, os monômeros FokI dimerizam e causam uma quebra de DNA de fita dupla no sítio alvo. Além do domínio de clivagem FokI de tipo selvagem, vari- antes do domínio de clivagem FokI com mutações foram projetadas para melhorar a especificidade de clivagem e atividade de clivagem. O domínio FokI funciona como um dímero que necessita de dois constru- tos com domínios de ligação de DNA exclusivos para sítios no genoma- alvo com orientação e espaçamento apropriados. Tanto o número de resíduos de aminoácido entre o domínio de ligação de DNA de TALEN e o domínio de clivagem de FokI quanto o número de bases entre os dois sítios de ligação TALEN individuais são parâmetros para alcançar altos níveis de atividade.

[0266] TALENs são enzimas de restrição artificial geradas fundindo- se o domínio de ligação de DNA de efetor do tipo ativador de transcrição (TALE) a um domínio de nuclease. Em alguns aspectos, a nuclease é selecionada de um grupo que consiste em PvuII, MutH, TevI e FokI, AlwI, MlyI, SbfI, SdaI, StsI, CleDORF, Clo051, Pept071. Quando cada membro de um par TALEN se liga aos sítios de DNA que flanqueiam um sítio alvo, os monômeros FokI dimerizam e causam uma quebra de DNA de fita dupla no sítio alvo.

[0267] O termo TALEN, conforme usado no presente documento, é amplo e inclui uma TALEN monomérica que pode clivar DNA de fita du- pla sem a assistência de outra TALEN. O termo TALEN também é usado para se referir a um ou ambos os membros de um par de TALENs que trabalham juntas para clivar DNA ao mesmo tempo.

[0268] Efetores do tipo ativador de transcrição (TALEs) podem ser modificados para se ligar a praticamente qualquer sequência de DNA. Proteínas TALE são domínios de ligação de DNA derivados de vários patógenos bacterianos de planta do gênero Xanthomonas. Os patóge- nos X secretam TALEs na célula de planta hospedeira durante a infec- ção. A TALE se move para o núcleo, onde a mesma reconhece e se liga a uma sequência de DNA específica na região de promotor de uma se- quência de DNA específica na região de promotor de um gene especí- fico no genoma hospedeiro. TALE tem um domínio central de ligação ao DNA composto por 13 a 28 monômeros repetidos de 33 a 34 aminoáci- dos. Os aminoácidos de cada monômero são altamente conservados, exceto pelos resíduos de aminoácidos hipervariáveis nas posições 12 e

13. Os dois aminoácidos variáveis são chamados de dirresíduos variá- veis de repetição (RVDs). Os pares de aminoácidos NI, NG, HD e NN de RVDs preferencialmente reconhecem adenina, timina, citosina e guanina/adenina, respectivamente, e a modulação de RVDs pode reco- nhecer bases consecutivas de DNA. Esta simples relação entre sequên- cia de aminoácidos e reconhecimento de DNA permitiu a modificação de domínios de ligação de DNA específicos selecionando uma combi- nação de segmentos de repetição contendo os RVDs apropriados.

[0269] Além do domínio de clivagem FokI de tipo selvagem, varian- tes do domínio de clivagem FokI com mutações foram projetadas para melhorar a especificidade de clivagem e atividade de clivagem. O domí- nio FokI funciona como um dímero que necessita de dois construtos com domínios de ligação de DNA exclusivos para sítios no genoma-alvo com orientação e espaçamento apropriados. Tanto o número de resí- duos de aminoácido entre o domínio de ligação de DNA de TALEN e o domínio de clivagem de FokI quanto o número de bases entre os dois sítios de ligação TALEN individuais são parâmetros para alcançar altos níveis de atividade. Os domínios de clivagem PvuII, MutH e TevI são alternativas úteis a variantes de FokI e FokI para utilização com TALEs. PvuII funciona como um domínio de clivagem altamente específico quando acoplado a um TALE (consulte Yank et al. 2013. PLoS One. 8: e82539). O MutH é capaz de introduzir descontinuidades fita-específi- cas no DNA (consultar Gabsalilow et al. 2013. Nucleic Acids Research. 41: e83). TevI introduz quebras de fita dupla em DNA em sítios-alvo

(consulte Beurdeley et al., 2013. Nature Communications. 4: 1762).

[0270] A relação entre sequência de aminoácidos e reconhecimento de DNA do domínio de ligação de TALE permite proteínas projetáveis. Programas de software como o DNA Works podem ser usados para pro- jetar construtos de TALE. Outros métodos para projetar construtos de TALE são conhecidos pelos versados na técnica. Consultar Doyle et al., Nucleic Acids Research (2012) 40: W117-122.; Cermak et al., Nucleic Acids Research (2011). 39:e82; e tale-nt.cac.cornell.edu/about.

[0271] Em um aspecto, um método e/ou composição fornecido no presente documento compreende uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais TALENs. Em outro aspecto, uma TALEN fornecida no presente documento tem capacidade para gerar uma DSB alvejada. Em um aspecto, vetores que compreendem polinu- cleotídeos que codificam uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, qua- tro ou mais ou cinco ou mais TALENs são fornecidas a uma célula por métodos de transformação conhecidos na técnica (por exemplo, sem limitação, transfecção viral, bombardeamento de partículas, transfecção de protoplasto mediada por PEG ou transformação mediada por Agrobacterium).

[0272] Conforme usado no presente documento, uma "técnica de edição de genoma alvejada" se refere a qualquer método, protocolo ou técnica que permita a edição precisa e/ou alvejada de um local especí- fico em um genoma de uma planta (ou seja, a edição é ampla ou com- pletamente não aleatória) usando uma nuclease sítio-específica, como uma meganuclease, uma nuclease de dedo de zinco (ZFN), uma endo- nuclease guiada por RNA (por exemplo, o sistema CRISPR/Cas9), uma endonuclease TALE (TALEN), uma recombinase ou uma transposase.

[0273] É fornecida pela presente divulgação uma planta de milho modificada que compreende 1) uma ou mais mutações ou edições em ou próximo as uma ou mais GA20 oxidase endógena e/ou Genes da

GA3 oxidase, em que a expressão ou atividade de uma ou mais GA20 oxidase endógena e/ou Os genes da GA3 oxidase são reduzidos em relação a uma planta de controle do tipo selvagem e 2) um cassete de expressão recombinante compreendendo uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está operacionalmente ligada a um promotor expressável em plantas. Em um aspecto, a planta de milho modificada é semianã e tem um ou mais tra- ços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não compreende a uma ou mais mutações ou edições e o cassete de expressão recombinante. Em um outro aspecto, as uma ou mais mu- tações ou edições são selecionadas do grupo que consiste em uma in- serção, uma substituição, uma inversão, uma deleção, uma duplicação e uma combinação das mesmas. Ainda em um outro aspecto, as uma ou mais mutações ou edições são introduzidas usando uma meganu- clease, uma nuclease de dedo de zinco (ZFN), uma endonuclease gui- ada por RNA, uma endonuclease TALE (TALEN), uma recombinase ou uma transposase.

[0274] Também é fornecida uma pluralidade de plantas de milho modificadas em um campo, sendo que cada planta de milho modificada compreende uma ou mais mutações ou edições em ou próximas a um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxi- dase, em que a expressão do um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase é reduzida em relação a uma planta controle do tipo selvagem, e um cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funci- onal a um promotor expressável em plantas. Em um aspecto, as plantas de milho modificadas têm rendimento aumentado em relação a plantas de milho controle. Em um outro aspecto, as plantas de milho modifica- das têm um aumento no rendimento que é pelo menos 1%, pelo menos

2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, ou pelo menos 25% maior que as plantas de milho controle.

[0275] Também é fornecida uma planta de milho editada ou mutada por genoma que compreende (1) uma mutação ou uma edição no ou próximo a um gene endógeno da GA20 oxidase ou gene da GA3 oxi- dase, em que a expressão do gene endógeno da GA20 oxidase ou gene da GA3 oxidase é reduzida em relação a um controle do tipo selvagem, e (2) uma sequência de DNA heteróloga que codifica um polipeptídeo CO ou COL. Em um aspecto, a planta de milho editada ou mutada por genoma é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não compreende tanto a mutação como a sequência de DNA heteróloga. Em um aspecto, uma célula de milho editada ou mutada por genoma é obtida por meio de um sistema de edição de genoma baseado em CRISPR.

[0276] Aspectos da presente divulgação incluem, ainda, métodos de fabricação ou produção de plantas modificadas, como edição de ge- noma, cruzamento, etc., em que o método compreende editar o locus genômico de um gene endógeno da GA3 ou GA20 oxidase e introduzir um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL e, en- tão, regenerar ou desenvolver a planta modificada a partir da célula ve- getal editada.

[0277] Em um aspecto, um método compreende introduzir uma mu- tação ou edição através de edição de genoma baseada em CRISPR no ou próximo a um ou mais genes endógenos da GA3 ou GA20 oxidase para reduzir a expressão do um ou mais genes endógenos da GA3 ou GA20 oxidase. O método compreende a criação de uma quebra de fita dupla (DSB) no genoma da célula vegetal, em que uma mutação ou edição é introduzida no mesmo, reduzindo assim a expressão do um ou mais genes endógenos da GA3 ou GA20 oxidase. Em um aspecto, a mutação ou edição pode ser criada (ou integrada a um modelo doador) de maneira alvejada no genoma de uma célula no local de uma DSB através de nucleases guiadas por RNA (por exemplo, Cas9 e Cpf1). Em um outro aspecto, um RNA guia reconhece um sítio de alvo e atua em associação com uma nuclease guiada por RNA que cria uma DSB no sítio alvo, em que uma mutação ou edição é criada (ou integrada a um modelo doador) no sítio alvo. Em um outro aspecto, o sítio alvo está próximo ou em um ou mais genes endógenos da GA3 ou da GA20 oxi- dase.

[0278] Em um aspecto, um método compreende introduzir uma se- quência de inserção que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL no genoma de uma célula vegetal através de integração sítio-dirigida. Tal método compreende criar uma DSB no genoma da célula vegetal de modo que a sequência de inserção seja integrada no sítio da DSB. Em um aspecto, a sequência de inserção que codifica um ou mais polipep- tídeos CO ou COL pode ser inserida ou integrada de maneira alvejada no genoma de uma célula no local de uma DSB através de nucleases guiadas por RNA (por exemplo, Cas9 e Cpf1) em um sistema de edição de genoma baseado em CRISPR. Em um outro aspecto, um RNA guia reconhece um sítio alvo e atua em associação com um uma nuclease guiada por RNA que cria uma quebra de fita dupla no sítio alvo, em que a sequência de inserção que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL se insere ou se integra ao sítio alvo.

[0279] Em um aspecto, uma sequência de inserção de um modelo doador da presente divulgação compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de poli- peptídeo CO ou COL é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos

62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma se- quência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 176 a 452 e um fragmento funcional das mesmas.

[0280] Em um aspecto, uma sequência de inserção de um modelo doador da presente divulgação compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo PpCOL1, em que a sequência de DNA é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169. Em um outro aspecto, uma sequência de inserção da presente divulgação compre- ende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo que compre- ende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo me- nos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma sequência de polipeptídeos ou aminoácidos sele- cionada do grupo que consiste na SEQ ID NO: 168 ou um fragmento funcional da mesma.

[0281] É fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende introduzir em uma célula de milho um cassete de expressão recombi- nante que compreende uma sequência de DNA que codifica um poli- peptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de ma- neira funcional a um promotor expressável em plantas, e em que a cé- lula de milho compreende uma ou mais mutações e/ou edições em um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes endógenos da GA20 oxidase; e regenerar ou desenvolver uma planta de milho modifi- cada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o cassete de expressão recombinante e as uma ou mais mutações e/ou edições, e em que o nível de expressão ou atividade do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase na planta de milho modificada é reduzido em relação a uma planta controle que não tem uma ou mais mutações e/ou edições. Em um aspecto, o método compreende ainda introduzir um construto de DNA recombinante que codifica um RNA guia que alveja um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da oxidase GA20.

[0282] Em um outro aspecto, o RNA guia compreende uma sequên- cia guia que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24 ou pelo menos 25 nucleotídeos consecutivos de uma sequência de DNA alvo no ou próximo ao locus genômico de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase. Em um outro aspecto, o RNA guia compreende uma sequência guia que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24 ou pelo menos 25 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37 ou 38, ou uma sequência complementar à mesma. Em um aspecto, o RNA guia é um RNA de CRISPR (crRNA) ou um RNA guia de cadeia única (sgRNA), ou o RNA guia compreende uma sequência complementar a uma sequência de motivo adjacente ao protoespaçador (PAM) presente no genoma da célula de milho imedia- tamente adjacente a uma sequência de DNA alvo no ou próximo ao lo- cus genômico do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

[0283] Também é fornecido um método de produção de uma planta de milho editada ou mutada por genoma, sendo que o método compre- ende: (a) introduzir em uma primeira célula de milho um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL para criar uma célula de milho editada ou mutada por genoma, em que a primeira célula de milho tem sua expressão de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase reduzida em relação a um controle do tipo selvagem; e (b) gerar uma planta de milho editada ou mutada por ge- noma a partir da célula de milho editada ou mutada por genoma. Em um aspecto, o método compreende adicionalmente identificar uma planta de milho editada ou mutada por genoma com um traço desejado. Em um outro aspecto, a planta de milho editada ou mutada por genoma identificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem tanto o trans- gene como uma expressão reduzida de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase.

[0284] Em um outro aspecto, a primeira célula de milho da etapa (a) é obtida sendo fornecida com um primeiro RNA guia e uma primeira nuclease guiada por RNA, e em que a célula de milho editada ou mutada do genoma da etapa (b) é obtida sendo fornecida com um segundo RNA guia, uma sequência de inserção e uma segunda nuclease guiada por RNA.

[0285] Em um outro aspecto, o primeiro RNA guia reconhece um sítio alvo em uma GA20 oxidase, em que o primeiro RNA guia atua em associação com a primeira nuclease guiada por RNA que cria uma que- bra de fita dupla no sítio alvo e, com isto, a expressão da GA20 oxidase endógena é reduzida.

[0286] Em um outro aspecto, o método compreende ainda integrar na quebra de fita dupla pelo menos uma inserção, pelo menos uma substituição, pelo menos uma inversão, pelo menos uma deleção, pelo menos uma duplicação ou uma combinação das mesmas.

[0287] Ainda em um outro aspecto, o segundo RNA guia reconhece um sítio alvo e atua em associação com a segunda nuclease guiada por RNA que cria uma quebra de fita dupla no sítio alvo, em que a sequência de inserção se integra ao sítio alvo, e em que a sequência de doador/in- serção codifica um polipeptídeo CO ou COL, como polipeptídeo de PpCOL1.

[0288] É fornecido na presente divulgação um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende: mutar ou editar um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou um ou mais genes da GA20 oxidase em uma célula de milho, em que a célula de milho compreende um cassete de expressão recombinante que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas; e regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o cassete de expressão recombinante e as uma ou mais mutações e/ou edições, e em que o nível de expressão ou atividade do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes endógenos da GA20 oxi- dase na planta de milho modificada é reduzido em relação a uma planta controle que não tem uma ou mais mutações e/ou edições.

[0289] Em um aspecto, a mutação ou edição é obtida usando uma nuclease sítio-específica selecionada do grupo que consiste em uma endonuclease guiada por RNA, uma meganuclease, uma nuclease de dedo de zinco (ZFN), uma endonuclease TALE (TALEN), uma recombi- nase e uma transposase. Em um outro aspecto, um método compre- ende ainda introduzir um construto de DNA recombinante que codifica um RNA guia que alveja um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da oxidase GA20. Em um outro aspecto, o RNA guia com- preende uma sequência guia que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo me- nos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24 ou pelo menos 25 nucleotídeos consecutivos de uma sequência de DNA alvo no ou próximo ao locus genômico de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

[0290] Em um outro aspecto, o RNA guia compreende uma sequên- cia guia que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24 ou pelo menos 25 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37 ou 38, ou uma sequência complementar à mesma. Em um outro as- pecto, o RNA guia é um RNA CRISPR (crRNA) ou um RNA guia de cadeia única (sgRNA). Ainda em um outro aspecto, o RNA guia com- preende uma sequência complementar a uma sequência de motivo ad- jacente ao protoespaçador (PAM) presente no genoma da célula de mi- lho imediatamente adjacente a uma sequência de DNA alvo no ou pró- ximo ao locus genômico do um ou mais genes endógenos da GA3 oxi- dase e/ou genes da oxidase GA20.

[0291] Também é fornecido um método de produção de uma planta de milho editada ou mutada por genoma, sendo que o método compre- ende: (a) reduzir a expressão de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase em uma primeira célula de milho para criar uma célula de milho editada ou mutada por genoma, em que a primeira célula de milho compreende um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL; e (b) gerar uma planta de milho edi- tada ou mutada por genoma a partir da célula de milho editada ou mu- tada por genoma. Em um aspecto, o método compreende adicional- mente identificar uma planta de milho editada ou mutada por genoma com um traço desejado. Em um outro aspecto, a planta de milho editada ou mutada por genoma identificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem tanto o transgene como uma expressão reduzida de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase.

[0292] Em um aspecto, a primeira célula de milho da etapa (a) é obtida sendo fornecida com um primeiro RNA guia, uma sequência de inserção e uma primeira nuclease guiada por RNA, e em que a célula de milho editada ou mutada do genoma da etapa (b) é obtida sendo fornecida com um segundo RNA guia e uma segunda nuclease guiada por RNA.

[0293] Em um outro aspecto, o primeiro RNA guia reconhece um sítio alvo e atua em associação com a primeira nuclease guiada por RNA que cria uma quebra de fita dupla no sítio alvo, em que a sequência de inserção se integra ao sítio alvo, e em que a sequência de inserção codifica um polipeptídeo de PpCOL1.

[0294] Em um outro aspecto, o segundo RNA guia reconhece um sítio alvo em uma GA20 oxidase, em que o segundo RNA guia atua em associação com a segunda nuclease guiada por RNA que cria uma que- bra de fita dupla no sítio alvo e, com isto, o nível de expressão da GA20 oxidase endógena é reduzido.

[0295] O gRNA pode ser transformado ou introduzido em uma cé- lula ou tecido vegetal (talvez juntamente com uma nuclease ou molécula de DNA de codificação de nuclease, construto ou vetor) como uma mo- lécula de gRNA ou como uma molécula de DNA recombinante, cons- truto ou vetor que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica o RNA guia ligado de maneira funcional a um promotor expres- sável em plantas. A sequência guia do RNA guia pode ter pelo menos 10 nucleotídeos de comprimento, como 12 a 40 nucleotídeos, 12 a 30 nucleotídeos, 12 a 20 nucleotídeos, 12 a 35 nucleotídeos, 12 a 30 nu- cleotídeos, 15 a 30 nucleotídeos, 17 a 30 nucleotídeos ou 17 a 25 nu- cleotídeos de comprimento, ou cerca de 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais nucleotídeos de comprimento. A sequên- cia guia pode ser pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 10,

pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25 ou mais nucleotídeos consecutivos de uma sequência de DNA no sítio alvo genômico.

[0296] Para a edição de genoma no ou próximo ao gene da GA20 oxidase_3 com uma endonuclease guiada por RNA, um RNA guia pode ser usado compreendendo uma sequência guia que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34 ou uma sequência complementar à mesma (por exemplo, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34 ou uma sequência complementar à mesma).

[0297] Para a edição de genoma no ou próximo ao gene da GA20 oxidase_4 com uma endonuclease guiada por RNA, um RNA guia pode ser usado compreendendo uma sequência guia que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 38 ou uma sequência complementar à mesma (por exemplo, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 38 ou uma sequência complementar à mesma).

[0298] Para a edição de genoma no ou próximo ao gene da GA20 oxidase_5 com uma endonuclease guiada por RNA, um RNA guia pode ser usado compreendendo uma sequência guia que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 35 ou uma sequência complementar à mesma (por exemplo, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 35 ou uma sequência complementar à mesma).

[0299] Em um aspecto, um RNA guia para alvejar um gene endó- geno da GA20 oxidase_3 e/ou gene da GA20 oxidase_5 é fornecido compreendendo uma sequência guia que é pelo menos 90%, pelo me- nos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20 ou pelo me- nos 21 nucleotídeos consecutivos de qualquer uma ou mais das SEQ ID NOs: 138 a 167.

[0300] Para a edição de genoma no ou próximo ao gene da GA3 oxidase_1 com uma endonuclease guiada por RNA, um RNA guia pode ser usado compreendendo uma sequência guia que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 36 ou uma sequência complementar à mesma (por exemplo, 10, 11, 12, 13, 14, 15,

16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 36 ou uma sequência complementar à mesma).

[0301] Para a edição de genoma no ou próximo ao gene da GA3 oxidase_2 com uma endonuclease guiada por RNA, um RNA guia pode ser usado compreendendo uma sequência guia que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 37 ou uma sequência complementar à mesma (por exemplo, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 37 ou uma sequência complementar à mesma).

[0302] Em um aspecto, um RNA guia compreende uma sequência guia que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24 ou pelo menos 25 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 87, 91, 95, 98, 105, 109, 113, 117, 122, 126, 130 ou 137, ou uma sequência com- plementar à mesma.

[0303] Em um aspecto, um RNA guia compreende uma sequência complementar a uma sequência de motivo adjacente ao protoespaçador (PAM) presente no genoma de uma planta de milho imediatamente ad- jacente a uma sequência de DNA alvo no ou próximo ao locus genômico de um ou mais genes endógenos da GA20 ou GA3 oxidase.

[0304] Além da sequência guia, um RNA guia pode compreender ainda uma ou mais outras sequências estruturais ou de arcabouço, que podem se ligar ou interagir com uma endonuclease guiada por RNA. Tais estruturas de suporte ou sequências estruturais podem interagir ainda mais com outras moléculas de RNA (por exemplo, tracrRNA). Os métodos e técnicas para projetar construtos de alvejamento e RNAs guia para edição de genoma e integração sítio-dirigida em um sítio alvo no genoma de uma planta usando uma endonuclease guiada por RNA são conhecidos na técnica.

[0305] Mutações como deleções, inserções, inversões e/ou substi- tuições podem ser introduzidas em um sítio alvo por meio de reparo im- perfeito da DSB ou descontinuidade para produzir um knock-out ou knock-down de um gene da GA oxidase. Tais mutações podem ser ge- radas por reparo imperfeito do sítio alvo, mesmo sem o uso de uma molécula modelo doadora. Um "knockout" de um gene da GA oxidase pode ser realizado pela indução de uma DSB ou uma descontinuidade no ou próximo ao locus endógeno do gene da GA oxidase que resulta na não expressão da proteína GA oxidase ou na expressão de uma pro- teína não funcional, enquanto que um "knock-down" de um gene da GA oxidase pode ser realizado de maneira similar, induzindo uma DSB ou uma descontinuidade no ou próximo ao locus endógeno do gene da GA oxidase que é reparado imperfeitamente em um sítio que não afeta a sequência de codificação do gene da GA oxidase de maneira que po- deria eliminar a função da proteína GA oxidase codificada.

[0306] Por exemplo, o sítio da DSB ou da descontinuidade dentro do locus endógeno pode estar na região a montante ou 5’ do gene da GA oxidase (por exemplo, um promotor e/ou intensificador) para afetar ou reduzir seu nível de expressão. De modo similar, estas mutações de knock-out ou knock-down alvejadas de um gene da GA oxidase podem ser geradas com uma molécula de modelo doador para dirigir uma mu- tação específica ou desejada no ou próximo ao sítio alvo através do re- paro da DSB ou da descontinuidade.

[0307] A molécula modelo doadora pode compreender uma se- quência homóloga com ou sem uma sequência de inserção e compre- ender uma ou mais mutações, como uma ou mais deleções, inserções, inversões e/ou substituições, em relação à sequência genômica alve- jada no ou próximo ao sítio da DSB ou da descontinuidade. Por exem- plo, as mutações knock-out alvejadas de um gene da GA oxidase po- dem ser realizadas pela deleção ou inversão de pelo menos uma porção do gene ou pela introdução de uma mutação por mudança da matriz de leitura ou de um códon de parada prematuro na sequência de codifica- ção do gene. Uma deleção de uma porção de um gene da GA oxidase também pode ser introduzida gerando DSBs ou de descontinuidades em dois sítios alvo e causando uma deleção da região alvo flanqueada pelos sítios alvo.

[0308] É fornecida no presente documento uma molécula modelo doadora de DNA recombinante para integração sítio-dirigida de uma se- quência de inserção no genoma de uma planta de milho que compre- ende uma sequência de inserção e pelo menos uma sequência de ho- mologia, em que a sequência de homologia é pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos pelo menos 90, pelo menos 100, pelo menos 150, pelo menos 200, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 2500 ou pelo menos 5000 nucleotídeos consecutivos de uma sequência de DNA alvo no ge- noma de uma célula de planta de milho, e em que a sequência de inser- ção compreende um cassete de expressão que compreende uma se- quência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor ex- pressável em plantas.

[0309] Em um aspecto, a molécula modelo doadora de DNA com- preende duas das sequências de homologia, em que as duas sequên- cias de homologia flanqueiam a sequência de inserção. Em um outro aspecto, o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma ou mais das SEQ ID NOs: 176 a 397. Em um outro aspecto, o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma ou mais das SEQ ID NOs: 398 a

452.

[0310] Em outro aspecto, o polipeptídeo CO ou COL compreende um polipeptídeo de Physcomitrella patens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1). Em um outro aspecto, a sequência de DNA compreendida no cassete de expressão compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169. Em um outro aspecto, o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 168 ou um fragmento funcional da mesma. Em outro aspecto, um promotor expres-

sável em plantas compreende uma sequência de DNA que é pelo me- nos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma ou mais das SEQ ID NOs: 170 a 172 ou uma porção funcional das mesmas.

[0311] Em um outro aspecto, uma molécula modelo doadora de DNA compreende ainda uma sequência de DNA transcritível que codi- fica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA20 oxidase e/ou um ou mais genes da GA3 oxidase, em que a se- quência de DNA transcritível está ligada de maneira funcional a um pro- motor.

[0312] Em um aspecto, um modelo doador que compreende pelo menos uma sequência de homologia ou braço de homologia, em que a pelo menos uma sequência de homologia ou braço de homologia é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos 90, pelo menos 100, pelo menos 150, pelo menos 200, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 2500 ou pelo menos 5000 nucleotídeos consecutivos de uma sequência de DNA alvo, em que a sequência de DNA alvo é uma sequência genômica no ou próximo ao locus genômico de um gene endógeno da GA oxidase de uma planta de milho ou de cereal.

[0313] Em um outro aspecto, a pelo menos uma sequência de ho- mologia é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos 90, pelo menos 100, pelo menos 150, pelo menos 200, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 2500 ou pelo menos 5000 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37 ou 38, ou uma sequência complementar à mesma.

[0314] Em um aspecto, um modelo doador que compreende dois braços de homologia incluindo um primeiro braço de homologia e um segundo braço de homologia, em que o primeiro braço de homologia compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%,

pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% com- plementar a pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos 90, pelo menos 100, pelo menos 150, pelo menos 200, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 2500 ou pelo menos 5000 nucleotídeos consecutivos de uma primeira sequência de DNA de flanqueamento, em que o se- gundo braço de homologia compreende uma sequência que é pelo me- nos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos 90, pelo menos 100, pelo menos 150, pelo menos 200, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 2500 ou pelo menos 5000 nucleotídeos consecutivos de uma segunda sequência de DNA de flanqueamento, e em que a primeira sequência de DNA de flanquea- mento e a segunda sequência de DNA de flanqueamento são sequên- cias genômicas no ou próximo ao locus genômico de um gene endó- geno da GA oxidase de uma planta de milho ou de cereal.

[0315] Em um outro aspecto, cada um dos dois braços de homolo- gia é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos 90, pelo menos 100, pelo menos 150, pelo me- nos 200, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo me- nos 2500 ou pelo menos 5000 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37 ou 38, ou uma sequência complementar à mesma.

[0316] Em um outro aspecto, o método compreende ainda integrar na quebra de fita dupla pelo menos uma inserção, pelo menos uma substituição, pelo menos uma inversão, pelo menos uma deleção, pelo menos uma duplicação ou uma combinação das mesmas.

[0317] Ainda em um outro aspecto, uma sequência de inserção de um modelo doador compreende uma sequência que codifica uma pro- teína que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma sequência se- lecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 168 e 176 a 452 e um fragmento funcional das mesmas.

[0318] É adicionalmente fornecido um método de produção de uma planta de milho modificada, sendo que o método compreende: (a) cruzar uma primeira planta de milho com uma segunda planta de milho para criar uma planta de milho modificada, em que a expressão de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase é reduzida na primeira planta de milho em relação a um controle do tipo selvagem, e em que a segunda planta de milho compreende um trans- gene que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL; e (b) produzir uma descendência da planta de milho modificada da etapa (a). Em um aspecto, o método compreende ainda identificar uma planta de milho modificada com um traço desejado. Em um outro aspecto, a planta de milho modificada identificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem tanto o transgene quanto uma expressão reduzida de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase.

[0319] Em um aspecto, o sítio alvo pode compreender pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, ou pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos

23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 29 ou pelo menos 30 nucleotídeos consecutivos.

[0320] Em um aspecto, o sítio alvo é um gene da GA3 oxidase_1. Em um outro aspecto, o sítio alvo é um gene da GA3 oxidase_2. Em ainda em um outro aspecto, o sítio alvo é uma combinação dos genes da GA3 oxidase_1 e genes da GA3 oxidase_2. Ainda em um outro as- pecto, o sítio alvo está dentro do quadro de leitura aberto do gene da GA3 oxidase_1 ou gene da GA3 oxidase_2. Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo está dentro do promotor/intensificador do gene da GA3 oxi- dase_1 ou gene da GA3 oxidase_2. Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo está dentro do íntron do gene da GA3 oxidase_1 ou gene da GA3 oxidase_2. Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo está dentro da 5’UTR do gene da GA3 oxidase_1 ou gene da GA3 oxidase_2. Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo está dentro da 3’UTR do gene da GA3 oxidase_1 ou gene da GA3 oxidase_2.

[0321] Em um aspecto, o sítio alvo é um gene da GA20 oxidase_3. Em um outro aspecto, o sítio alvo é um gene da GA20 oxidase_4. Em um outro aspecto, o sítio alvo é um gene da GA20 oxidase_5. Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo é uma combinação do gene da GA20 oxi- dase_3, do gene da GA20 oxidase_4 e do gene da GA20 oxidase_5. Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo está dentro do quadro de leitura aberto do gene da GA20 oxidase_3, do gene da GA20 oxidase_4 ou do gene da GA20 oxidase_5. Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo está dentro do promotor/intensificador do gene da GA20 oxidase_3, do gene da GA20 oxidase_4 ou do gene da GA20 oxidase_5 Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo está dentro do íntron do gene da GA20 oxidase_3, do gene da GA20 oxidase_4 ou do gene da GA20 oxidase_5. Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo está dentro da 5’UTR do gene da GA20 oxidase_3, do gene da GA20 oxidase_4 ou do gene da GA20 oxi- dase_5. Ainda em um outro aspecto, o sítio alvo está dentro da 3’UTR do gene da GA20 oxidase_3, do gene da GA20 oxidase_4 ou do gene da GA20 oxidase_5.

[0322] Em um aspecto, o sítio alvo compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 34, 35 e 38.

[0323] Uma técnica de edição de genoma alvejada fornecida no pre- sente documento pode compreender o uso de uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais moléculas ou mo- delos doadores. Um “modelo doador” pode ser uma molécula ou plas- mídeo de DNA ou RNA de fita simples ou de fita dupla.

[0324] De acordo com outros aspectos, uma sequência de inserção de um modelo doador pode compreender uma sequência de DNA trans- critível que codifica uma molécula de RNA não codificante, que alveja um ou mais genes da GA oxidase, como um gene (ou genes) da GA3 oxidase ou gene (ou genes) da GA20 oxidase, para supressão. Em um aspecto, uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão do gene (ou genes) da GA3 oxidase e/ou gene (ou genes) da GA20 oxidase é selecionado do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 35-38. Em um outro aspecto, uma sequência de in- serção de um modelo doador pode compreender uma sequência de DNA que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL, em que a se- quência de DNA codifica uma proteína que é pelo menos 60%, pelo me- nos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 168 e um fragmento funcional da mesma.

Em um outro aspecto, uma sequência de inserção de um modelo doador pode com- preender uma sequência de DNA que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL, em que a sequência de DNA codifica uma proteína que é pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 176 a 452 e um fragmento funci- onal das mesmas.

Ainda em um outro aspecto, uma sequência de in- serção de um modelo doador pode compreender uma primeira sequên- cia de DNA transcritível que codifica uma molécula de RNA não codifi- cante para a supressão do um ou mais genes de GA3 oxidase ou GA20 oxidase, em que a primeira sequência de DNA transcritível é selecio- nada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 35-38; e uma sequência de inserção de um modelo doador pode compreender uma segunda se- quência de DNA que codifica um ou mais polipeptídeos CO ou COL, em que a segunda sequência de DNA codifica uma proteína que é pelo me- nos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a uma sequência selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 168, 176 a 452 e um fragmento funcional das mesmas.

[0325] Uma sequência de inserção fornecida no presente docu- mento pode ter qualquer comprimento. Por exemplo, uma sequência doadora e de inserção fornecida no presente documento tem entre 2 e 50000, entre 2 e 10000, entre 2 e 5000, entre 2 e 1000, entre 2 e 500, entre 2 e 250, entre 2 e 100, entre 2 e 50, entre 2 e 30, entre 15 e 50, entre 15 e 100, entre 15 e 500, entre 15 e 1000, entre 15 e 5000, entre 18 e 30, entre 18 e 26, entre 20 e 26, entre 20 e 50, entre 20 e 100, entre 20 e 250, entre 20 e 500, entre 20 e 1000, entre 20 e 5000 ou entre 20 e 10000 nucleotídeos de comprimento.

[0326] Em um aspecto, uma sequência pode ser inserida em uma quebra de fita dupla criada por um sistema de edição de genoma base- ado em CRISPR sem a presença de um modelo doador. Em um as- pecto, pelo menos uma inserção, pelo menos uma substituição, pelo menos uma exclusão, pelo menos uma duplicação, e/ou pelo menos uma inversão pode ser inserida/introduzida em uma quebra de fita dupla criada por um sistema de edição de genoma baseado em CRISPR atra- vés de união de extremidade não homóloga (NHEJ) sem um modelo doador. Em um aspecto, pelo menos uma inserção, pelo menos uma substituição, pelo menos uma exclusão, pelo menos uma duplicação,

e/ou pelo menos uma inversão pode ser inserida/introduzida em uma quebra de fita dupla criada por um sistema de edição de genoma base- ado em CRISPR através de recombinação homóloga (HR) com um mo- delo doador.

[0327] De acordo com outros aspectos, pelo menos uma inserção é integrada à quebra de fita dupla no locus da GA3 oxidase ou da GA20 oxidase e introduz um códon de parada prematuro no mesmo, o que leva ao truncamento das proteínas da GA3 oxidase ou da GA20 oxidase e supressão subsequente dos genes da GA3 oxidase ou genes da GA20 oxidase. Em um aspecto, a pelo menos uma inserção é uma única in- serção de nucleobase. Em um outro aspecto, a inserção de uma única nucleobase é selecionada do grupo que consiste em guanina, citosina, adenina, timina e uracila. Em um aspecto, a pelo menos uma inserção é inserida dentro do quadro de leitura aberto do gene da GA3 oxidase ou gene da GA20 oxidase. Em um outro aspecto, a pelo menos uma inserção é inserida dentro do promotor/intensificador, íntron, 5'UTR, 3'UTR ou uma combinação dos mesmos.

[0328] Em um outro aspecto, a pelo menos uma inserção no locus da GA3 oxidase ou da GA20 oxidase compreende pelo menos 2 nucle- otídeos, pelo menos 3 nucleotídeos, pelo menos 4 nucleotídeos, pelo menos 5 nucleotídeos, pelo menos 6 nucleotídeos, pelo menos 7 nucle- otídeos, pelo menos 8 nucleotídeos, pelo menos 9 nucleotídeos, pelo menos 10 nucleotídeos, pelo menos 11 nucleotídeos, pelo menos 12 nucleotídeos, pelo menos 13 nucleotídeos, pelo menos 14 nucleotídeos, pelo menos 15 nucleotídeos, pelo menos 16 nucleotídeos, pelo menos 17 nucleotídeos, pelo menos 18 nucleotídeos, pelo menos 19 nucleotí- deos ou pelo menos 20 nucleotídeos.

[0329] De acordo com um aspecto, pelo menos uma substituição é integrada na quebra de fita dupla no locus da GA3 oxidase ou da GA20 oxidase que leva à supressão do gene da GA3 oxidase ou gene da

GA20 oxidase. Em um aspecto, a pelo menos uma substituição é inte- grada dentro do quadro de leitura aberto do gene da GA3 oxidase ou gene da GA20 oxidase. Em um outro aspecto, a pelo menos uma subs- tituição é integrada dentro do promotor/intensificador, íntron, 5’UTR, 3’UTR, ou uma combinação dos mesmos.

[0330] De acordo com um aspecto, pelo menos uma deleção é in- troduzida na quebra de fita dupla no locus da GA3 oxidase ou da GA20 oxidase que leva à supressão do gene da GA3 oxidase ou gene da GA20 oxidase. Em um aspecto, a pelo menos uma deleção é introduzida dentro do quadro de leitura aberto do gene da GA3 oxidase ou gene da GA20 oxidase. Em um outro aspecto, a pelo menos uma deleção é in- troduzida dentro do promotor/intensificador, íntron, 5'UTR, 3'UTR ou uma combinação dos mesmos.

[0331] De acordo com um aspecto, pelo menos uma duplicação é introduzida na quebra de fita dupla no locus da GA3 oxidase ou da GA20 oxidase que leva à supressão do gene da GA3 oxidase ou gene da GA20 oxidase. Em um aspecto, a pelo menos uma duplicação é intro- duzida dentro do quadro de leitura aberto do gene da GA3 oxidase ou gene da GA20 oxidase. Em um outro aspecto, a pelo menos uma dupli- cação é introduzida dentro do promotor/intensificador, íntron, 5'UTR, 3'UTR ou uma combinação dos mesmos.

[0332] De acordo com um aspecto, pelo menos uma inversão é in- tegrada na quebra de fita dupla no locus da GA3 oxidase ou da GA20 oxidase que leva à supressão do gene da GA3 oxidase ou gene da GA20 oxidase. Em um aspecto, a pelo menos uma inversão é integrada dentro do quadro de leitura aberto do gene da GA3 oxidase ou gene da GA20 oxidase. Em um outro aspecto, a pelo menos uma inversão é in- tegrada dentro do promotor/intensificador, íntron, 5’UTR, 3’UTR, ou uma combinação dos mesmos.

[0333] De acordo com um aspecto, um construto ou vetor de DNA recombinante pode compreender uma primeira sequência de polinucle- otídeos que codifica uma nuclease sítio-específica e uma segunda se- quência de polinucleotídeos que codifica um RNA guia que pode ser introduzido em uma célula vegetal através de técnicas de transformação de planta. Alternativamente, dois construtos ou vetores de DNA recom- binante podem ser fornecidos, incluindo um primeiro construto ou vetor de DNA recombinante e um segundo construto ou vetor de DNA que pode ser introduzido em uma célula vegetal em conjunto ou sequencial- mente através de técnicas de transformação de planta, em que o pri- meiro construto ou vetor de DNA recombinante compreende uma se- quência de polinucleotídeos que codifica uma nuclease sítio-específica e o segundo construto ou vetor de DNA recombinante compreende uma sequência de polinucleotídeos que codifica um RNA guia.

[0334] De acordo com um aspecto, um construto ou vetor de DNA recombinante que compreende uma sequência de polinucleotídeos que codifica uma nuclease sítio-específica pode ser introduzido através de técnicas de transformação de planta em uma célula vegetal que já com- preende (ou é transformada com) um construto ou vetor de DNA recom- binante que compreende uma sequência de polinucleotídeos que codi- fica um RNA guia. Alternativamente, um construto ou vetor de DNA re- combinante que compreende uma sequência de polinucleotídeos que codifica um RNA guia pode ser introduzido através de técnicas de trans- formação de planta em uma célula vegetal que já compreende (ou é transformada com) um construto ou vetor de DNA recombinante que compreende uma sequência de polinucleotídeos que codifica uma nu- clease sítio-específica. De acordo com ainda outros aspectos, uma pri- meira planta que compreende (ou é transformada com) um construto ou vetor de DNA recombinante que compreende uma sequência de polinu- cleotídeos que codifica uma nuclease sítio-específica pode ser cruzado com uma segunda planta que compreende (ou é transformada com) um construto ou vetor de DNA recombinante que compreende uma sequên- cia de polinucleotídeos que codifica um RNA guia. Tais construtos ou vetores de DNA recombinante podem ser transitoriamente transforma- dos em uma célula vegetal ou estavelmente transformados ou integra- dos no genoma de uma célula vegetal.

[0335] Em um aspecto, vetores que compreendem polinucleotídeos que codificam uma nuclease sítio-específica, e opcionalmente um ou mais, dois ou mais, três ou mais ou quatro ou mais gRNAs são forneci- dos a uma célula vegetal por métodos de transformação conhecidos na técnica (por exemplo, sem limitação, bombardeamento de partículas, transfecção de protoplastos mediada por PEG ou transformação medi- ada por Agrobacterium). Em um aspecto, vetores que compreendem polinucleotídeos que codificam uma Cas9 nuclease, e opcionalmente um ou mais, dois ou mais, três ou mais ou quatro ou mais gRNAs são fornecidos a uma célula vegetal por métodos de transformação conhe- cidos na técnica (por exemplo, sem limitação, bombardeamento de par- tículas, transfecção de protoplastos mediada por PEG ou transformação mediada por Agrobacterium). Em outro aspecto, os vetores que com- preendem polinucleotídeos que codificam uma Cpf1 e, opcionalmente, um ou mais, dois ou mais, três ou mais, ou quatro ou mais crRNAs são fornecidos a uma célula por métodos de transformação conhecidos na técnica (por exemplo, sem limitação, transfecção viral, bombardeio de partículas, transfecção de protoplasto mediada por PEG ou transforma- ção mediada por Agrobacterium).

[0336] O milho anão ou semianão divulgado no presente docu- mento pode ter características que o torna adequado para produção de grãos e forragem, especialmente, para a produção em ambientes de período de safra curta. Em particular, as unidades de calor limitadas em ambientes de período de safra curta reduzem o rendimento de grãos e diminuem a probabilidade de a safra alcançar a maturidade fisiológica em um dado ano. As plantas de milho anãs ou semianãs divulgadas exigem um número menor de unidades de calor (por exemplo, 10% ne- cessário) do que híbridos convencionais para alcançar a antese e, ge- ralmente, alcançam a maturidade fisiológica mais cedo do que cultivares convencionais. As plantas de milho semianãs divulgadas no presente documento são menos propensas ao acamamento de talo e raiz devido aos talos mais curtos e colocação de espiga mais baixa. Plantas de mi- lho divulgadas no presente documento também têm o potencial para produzir forragem de alta qualidade devido a sua alta razão entre espiga e restolho.

[0337] As plantas de milho de baixa estatura ou semianãs podem também ter um ou mais traços adicionais, incluindo, porém sem limita- ção, aumento do diâmetro do caule, redução do quebramento verde, raízes mais profundas, aumento da área foliar, fechamento mais pre- coce da copa, maior condutância estomática, menor altura da espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, maior eficiência no uso de água, teor e área de anto- cianina reduzidos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou água, aumento do peso da espiga, aumento do número de caroços, aumento de peso de caroço, aumento do rendi- mento, aumento do número de sementes, aumento do peso de semente e aumento de prolificidade e/ou aumento do índice de colheita.

[0338] De acordo com aspectos da presente divulgação, as plantas de cereal ou de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma são fornecidas com pelo menos um traço agronômico e pelo menos um órgão reprodutor feminino ou espiga que é substancial ou completamente isento de plantas fora do padrão. O traço agronômico benéfico pode incluir, porém sem limitação, menor altura de planta, me- nor comprimento de entrenós em um ou mais entrenós, maior diâmetro (mais espesso) de caule ou de talo, maior resistência ao acamamento,

maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, maior efi- ciência no uso de água, raízes mais profundas, maior área folia, fecha- mento da copa mais precoce e/ou aumento do rendimento colhível. Con- forme usado no presente documento, “índice de colheita” se refere à massa do grão colhido dividida pela massa total da biomassa acima do solo da planta por uma área colhida.

[0339] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe maior resistência ao acama- mento, redução do quebramento verde ou ambos, em relação a uma planta de milho controle.

[0340] Em um aspecto, a altura na maturidade de uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma que exibe fenótipo semianão é reduzida em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, ou pelo menos 75%, em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0341] De acordo com outro aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma fornecida no presente documento compreende uma altura que é entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 15%, entre 1% e 10%, entre 1% e 5%, ou entre 1% e 2%, daquela de uma planta controle cultivada sob condições comparáveis.

[0342] De acordo com um outro aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma fornecida no presente documento compreende uma altura que é entre 2% e 75%, entre 5% e 75%, entre 10% e 75%, entre 15% e 75%,

entre 20% e 75%, entre 25% e 75%, entre 30% e 75%, entre 35% e 75%, entre 40% e 75%, entre 45% e 75%, entre 50% e 75%, entre 55% e 75%, entre 60% e 75%, entre 65% e 75% ou entre 70% e 75%, aquela de uma planta controle cultivada sob condições comparáveis.

[0343] De acordo com um outro aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma fornecida no presente documento compreende uma altura que é entre 2% e 70%, entre 5% e 65%, entre 10% e 60%, entre 15% e 55%, entre 20% e 50%, entre 25% e 45% ou entre 30% e 40%, daquela de uma planta controle cultivada sob condições comparáveis.

[0344] De acordo com um outro aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma fornecida no presente documento compreende uma altura que é entre 1% e 10%, entre 10% e 20%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70% ou entre 70% e 80%, daquela de uma planta controle cultivada sob condições compa- ráveis.

[0345] Em um aspecto, o diâmetro do talo ou do caule de uma planta de milho transgênica ou de uma planta de milho editada/mutada por genoma é aumentado em pelo menos 0,1%, pelo menos 0,2%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 1,5%, pelo menos 2%, pelo menos 2,5%, pelo menos 3%, pelo menos 3,5%, pelo menos 4%, pelo menos 4,5%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0346] De acordo com um outro aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma fornecida no presente documento compreende um diâmetro de talo ou de caule que é entre 0,1% e 100%, entre 0,2% e 100%, entre 0,5% e 100%, entre 1% e 100%, entre 1,5% e 100%, entre 2% e 100%, entre 2,5% e 100%, entre 3% e 100%, entre 3,5% e 100%, entre 4% e 100%, entre 4,5% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 15% e 100%, entre 20% e 100%, entre 25% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100%, maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0347] De acordo com um outro aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma fornecida no presente documento compreende um diâmetro de talo ou caule que é entre 0,1% e 95%, entre 0,1% e 90%, entre 0,1% e 85%, entre 0,1% e 80%, entre 0,1% e 75%, entre 0,1% e 70%, entre 0,1% e 65%, entre 0,1% e 60%, entre 0,1% e 55%, entre 0,1% e 50%, entre 0,1% e 45%, entre 0,1% e 40%, entre 0,1% e 35%, entre 0,1% e 30%, entre 0,1% e 25%, entre 0,1% e 20%, entre 0,1% e 15%, entre 0,1% e 10%, entre 0,1% e 9%, entre 0,1% e 8%, entre 0,1% e 7%, entre 0,1% e 6%, entre 0,1% e 5%, entre 0,1% e 4,5%, entre 0,1% e 4%, entre 0,1% e 3,5%, entre 0,1% e 3%, entre 0,1% e 2,5%, entre 0,1% e 2%, entre 0,1% e 1,5%, entre 0,1% e 1%, entre 0,1% e 0,5% ou entre 0,1% e 0,2%, maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0348] De acordo com um outro aspecto da presente divulgação,

uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma fornecida no presente documento compreende um diâmetro de talo ou de caule que é entre 0,2% e 95%, entre 0,5% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1,5% e 80%, entre 2% e 75%, entre 2,5% e 70%, entre 3% e 65%, entre 3,5% e 60%, entre 4% e 55%, entre 4,5% e 50%, entre 5% e 45%, entre 6% e 40%, entre 7% e 35%, entre 8% e 30%, entre 9% e 25% ou entre 10% e 20%, maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0349] De acordo com um outro aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma fornecida no presente documento compreende um diâmetro de talo ou de caule que é entre 0,1% e 1%, entre 1% e 5%, entre 6% e 10%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90%, entre 90% e 100%, maior que aquele de uma planta de milho controle culti- vada sob condições comparáveis.

[0350] Em um outro aspecto, o rendimento de uma planta modifi- cada, transgênica ou editada/mutada por genoma que exibe fenótipo semianão é igual ou maior que o rendimento de uma planta controle cultivada sob condições comparáveis.

[0351] Em outro aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibindo fenótipo semianão exige cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, ou 25% menos unidades de calor do que uma planta controle para atingir a antese.

[0352] Em ainda outro aspecto, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibindo fenótipo semianão tem uma maturidade relativa de cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, ou 45% menos dias que a maturidade relativa de uma planta controle cultivada sob condições comparáveis.

[0353] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma fornecida no presente documento compreende uma altura menor que 2000 mm, menor que 1950 mm, menor que 1900 mm, menor que 1850 mm, menor que 1800 mm, menor que 1750 mm, menor que 1700 mm, menor que 1650 mm, menor que 1600 mm, menor que 1550 mm, menor que 1500 mm, menor que 1450 mm, menor que 1400 mm, menor que 1350 mm, menor que 1300 mm, menor que 1250 mm, menor que 1200 mm, menor que 1150 mm, menor que 1100 mm, menor que 1050 mm ou menor que 1000 mm e um diâmetro de caule médio de pelo menos 17,5 mm, pelo menos 18 mm, pelo menos 18,5 mm, pelo menos 19 mm, pelo menos 19,5 mm, pelo menos 20 mm, pelo menos 20,5 mm, pelo menos 21 mm, pelo menos 21,5 mm ou pelo menos 22 mm. De acordo com outro aspecto, a planta de milho modificada compreende ainda pelo menos uma espiga que é substancialmente livre de tecido reprodutor masculino maduro.

[0354] De acordo com os aspectos da presente divulgação, são for- necidas plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/muta- das por genoma que compreendem uma altura de planta durante está- gios de desenvolvimento vegetativo e/ou reprodutivo tardios (por exem- plo, no estágio R3) entre 1000 mm e 1800 mm, entre 1000 mm e 1700 mm, entre 1050 mm e 1700 mm, entre 1100 mm e 1700 mm, entre 1150 mm e 1700 mm, entre 1200 mm e 1700 mm, entre 1250 mm e 1700 mm, entre 1300 mm e 1700 mm, entre 1350 mm e 1700 mm, entre 1400 mm e 1700 mm, entre 1450 mm e 1700 mm, entre 1000 mm e 1500 mm, entre 1050 mm e 1500 mm, entre 1100 mm e 1500 mm, entre 1150 mm e 1500 mm, entre 1200 mm e 1500 mm, entre 1250 mm e 1500 mm, entre 1300 mm e 1500 mm, entre 1350 mm e 1500 mm, entre 1400 mm e 1500 mm, entre 1450 mm e 1500 mm, entre 1000 mm e 1600 mm, entre 1100 mm e 1600 mm, entre 1200 mm e 1600 mm, entre 1300 mm e 1600 mm, entre 1350 mm e 1600 mm, entre 1400 mm e 1600 mm,

entre 1450 mm e 1600 mm, entre 1000 mm e 2000 mm, entre 1200 mm e 2000 mm, entre 1200 mm e 1800 mm, entre 1300 mm e 1700 mm, entre 1400 mm e 1700 mm, entre 1400 mm e 1600 mm, entre 1400 mm e 1700 mm, entre 1400 mm e 1800 mm, entre 1400 mm e 1900 mm, entre 1400 mm e 2000 mm ou entre 1200 mm e 2500 mm, e/ou um diâmetro médio de caule entre 17,5 mm e 22 mm, entre 18 mm e 22 mm, entre 18,5 e 22 mm, entre 19 mm e 22 mm, entre 19,5 mm e 22 mm, entre 20 mm e 22 mm, entre 20,5 mm e 22 mm, entre 21 mm e 22 mm, entre 21,5 mm e 22 mm, entre 17,5 mm e 21 mm, entre 17,5 mm e 20 mm, entre 17,5 mm e 19 mm, entre 17,5 mm e 18 mm, entre 18 mm e 21 mm, entre 18 mm e 20 mm ou entre 18 mm e 19 mm. Uma planta de milho modificada pode estar substancialmente livre de tipos estra- nhos, como tecidos ou estruturas reprodutivas masculinas em uma ou mais espigas da planta de milho modificada.

[0355] De acordo com um aspecto da presente divulgação uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma fornecida no presente documento compreende uma altura entre 1000 mm e 1600 mm, 1000 mm e 1500 mm, entre 1050 mm e 1500 mm, entre 1100 mm e 1500 mm, entre 1150 mm e 1500 mm, entre 1200 mm e 1500 mm, entre 1250 mm e 1500 mm, entre 1300 mm e 1500 mm, entre 1350 mm e 1500 mm, entre 1400 mm e 1500 mm, entre 1450 mm e 1500 mm, entre 1000 mm e 1600 mm, entre 1100 mm e 1600 mm, entre 1200 mm e 1600 mm, entre 1300 mm e 1600 mm ou entre 1000 mm e 1300 mm, e um diâmetro médio de caule entre 17,5 mm e 22 mm, entre 18 mm e 22 mm, entre 18,5 e 22 mm, entre 19 mm e 22 mm, entre 19,5 mm e 22 mm, entre 20 mm e 22 mm, entre 20,5 mm e 22 mm, entre 21 mm e 22 mm, entre 21,5 mm e 22 mm, entre 17,5 mm e 21 mm, entre 17,5 mm e 20 mm, entre 17,5 mm e 19 mm, entre 17,5 mm e 18 mm, entre 18 mm e 21 mm, entre 18 mm e 20 mm ou entre 18 mm e 19 mm.

De acordo com um outro aspecto, a planta de milho modificada compre- ende ainda pelo menos uma espiga que é substancialmente isenta de tecido reprodutivo masculino maduro.

[0356] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma fornecida no presente documento compreende uma altura que é pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75% menor que a altura de uma planta controle e um diâmetro de talo ou de caule que é pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 100% maior que o diâmetro de caule de uma planta controle.

[0357] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma fornecida no presente documento compreende um peso fresco de es- piga que é pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 100% maior que o peso fresco de espiga de uma planta controle.

[0358] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma po- pulação de plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mu- tadas por genoma fornecida no presente documento compreende uma frequência de acamamento que é pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou 100% menor em comparação com uma população de plantas controle não modificadas. De acordo com outro aspecto da presente divulgação, uma população de plantas de milho modificadas aqui fornecidas compreende uma frequência de alojamento que está entre 5% e 100%, entre 5% e 95%, entre 5% e 90%, entre 5% e 85%, entre 5% e 80%, entre 5% e 75%, entre 5% e 70%, entre 5% e 65%, entre 5% e 60%, entre 5% e 55%, entre 5% e 50%, entre 5% e 45%, entre 5% e 40%, entre 5% e 35%, entre 5% e 30%, entre 5% e 25%, entre 5% e 20%, entre 5% e 15%, entre 5% e 10%, entre 10% e 100%, entre 10% e 75%, entre 10% e 50%, entre 25% e 75%, entre 25% e 50%, ou entre 50% e 75% menor em comparação com uma população de plantas de controle.

[0359] De acordo com um aspecto da presente divulgação, são for- necidas plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/muta- das por genoma que compreendem um comprimento médio de entrenó (ou um comprimento de entrenó de menos 2 e/ou um comprimento de entrenó de menos 4 em relação à posição da espiga) que é pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70% ou pelo menos 75% menor que o comprimento igual ou médio de entrenó de uma planta controle.

[0360] O "entrenó menos 2" de uma planta de milho se refere ao segundo entrenó abaixo da espiga da planta e o "entrenó menos 4" de uma planta de milho se refere ao quarto entrenó abaixo da espiga da planta. De acordo com muitos aspectos, são fornecidas plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma que têm um comprimento médio de entrenó (ou um comprimento de menos 2 e/ou um comprimento de entrenó de menos 4 em relação à posição da espiga) que é entre 5% e 75%, entre 5% e 50%, entre 10% e 70%, entre 10% e 65%, entre 10% e 60%, entre 10% e 55%, entre 10% e 50%, entre 10% e 45%, entre 10% e 40%, entre 10% e 35%, entre 10% e 30%, entre 10% e 25%, entre 10% e 20%, entre 10% e 15%, entre 10% e 10%, entre 10% e 75%, entre 25% e 75%, entre 10% e 50%, entre 20% e 50%, entre 25% e 50%, entre 30% e 75%, entre 30% e 50%, entre 25% e 50%, entre 15% e 50%, entre 20% e 50%, entre 25% e 45%, ou entre 30% e 45% menor que o comprimento igual ou médio de entrenó de uma planta controle.

[0361] Uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mu- tada por genoma pode ter um índice de colheita que é pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo me- nos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45% ou pelo menos 50% maior que o índice de colheita de uma planta do tipo selvagem ou controle. Uma planta de milho modificada pode ter um ín- dice de colheita entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3%, entre 1% e 2%, entre 5% e 15%, entre 5% e 20%, entre 5% e 30%, ou entre 5% e 40% maior que o índice de colheita de uma planta de controle.

[0362] De acordo com um aspecto da presente divulgação, são for- necidas plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/muta- das por genoma que têm um aumento no rendimento colhível de pelo menos 1 bushel por acre, pelo menos 2 bushels por acre, pelo menos 3 bushels por acre, pelo menos 4 bushels por acre, pelo menos 5 bushels por acre, pelo menos 6 bushels por acre, pelo menos 7 bushels por acre, pelo menos 8 bushels por acre, pelo menos 9 bushels por acre ou pelo menos 10 bushels por acre, em relação a uma planta do tipo selvagem ou controle. Uma planta de milho modificada pode ter um aumento no rendimento colhível entre 1 e 10, entre 1 e 8, entre 2 e 8, entre 2 e 6, entre 2 e 5, entre 2,5 e 4.5 ou entre 3 e 4 bushels por acre. Uma planta de milho modificada pode ter um aumento no rendimento colhível que é pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo me- nos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo me- nos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 20% ou pelo menos 25% maior que o rendimento colhível de uma planta do tipo sel- vagem ou controle. Uma planta de milho modificada pode ter um rendi- mento colhível que é entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3%, entre 1% e 2%, entre 5% e 15%, entre 5% e 20%, entre 5% e 25%, entre 2% e 10%, entre 2% e 9%, entre 2% e 8%, entre 2% e 7%, entre 2% e 6%, entre 2% e 5% ou entre 2% e 4% maior que o rendimento colhível de uma planta controle.

[0363] De acordo com um aspecto, a presente divulgação fornece uma população de plantas de milho modificadas, transgênicas ou edita- das/mutadas por genoma, em que a população de plantas de milho mo- dificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma compartilham ancestralidade com uma única planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma, em que a população de plantas de mi- lho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma com- preende uma altura média de 1500 mm ou menos, em que a população de plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma compreende um diâmetro médio de talo ou de caule de 18 mm ou mais, em que menos de 5%, menos de 10%, menos de 15%, menos de 20%, ou menos de 25% da população de plantas de milho modifica- das, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma compreende uma altura maior que 1500 mm e, em que menos de 5%, menos de 10%, menos de 15%, menos de 20%, ou menos de 25% da população de plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por ge- noma compreende pelo menos uma espiga que compreende tecido re- produtivo masculino maduro. Em um outro aspecto, a população de plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por ge- noma compreende uma altura média de 1200 mm ou menos.

[0364] De acordo com um aspecto, a presente divulgação fornece uma população de plantas de milho modificadas, transgênicas ou edita- das/mutadas por genoma, em que a população de plantas de milho mo- dificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma compartilha ascendência com uma única planta de milho modificada, em que a po- pulação de plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mu- tadas por genoma compreende uma altura média de 1500 mm ou me- nos, em que menos de 5%, menos de 10%, menos de 15%, menos de 20% ou menos de 25% da população de plantas de milho modificadas compreende uma altura maior que 1500 mm, e em que a população de plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por ge- noma compreende uma frequência acamamento que é pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70% pelo menos 80%,

pelo menos 90% ou 100% menor em comparação com uma população de plantas de milho controle.

[0365] De acordo com um aspecto, a presente divulgação fornece um uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma que compreende uma altura de 1500 mm ou menos, em que uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma compreende ainda um diâmetro de talo ou de caule de 18 mm ou mais e onde pelo menos uma espiga de uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma é substancialmente isenta de tecido reprodutivo masculino maduro.

[0366] De acordo com um aspecto, a presente divulgação fornece uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma que compreende uma altura de 1500 mm ou menos, em que a uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma compreende ainda um índice de colheita de pelo menos 0,58, e em que a uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mu- tada por genoma compreende ainda pelo menos uma espiga que é substancialmente isenta de tecido reprodutivo masculino maduro.

[0367] De acordo com um aspecto da presente divulgação, são for- necidas plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/muta- das por genoma com um nível de expressão significativamente reduzido ou eliminado de uma ou mais transcrições e/ou proteínas do gene da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase em um ou mais tecidos, como um ou mais tecidos de caule, de entrenó, foliares e/ou vasculares, das plantas modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por ge- noma, em comparação com os mesmos tecidos de plantas do tipo sel- vagem ou controle. Em um aspecto, o nível de uma ou mais transcrições e/ou proteínas do gene da GA3 oxidase e/ou do gene da oxidase GA20, ou uma ou mais transcrições e/ou proteínas do gene da GA oxidase (ou semelhante à GA oxidase), em um ou mais tecidos de caule, de entrenó,

foliares e/ou vasculares de uma planta de milho modificada pode ser pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100% menor ou mais baixo que no mesmo tecido (ou tecidos) de uma planta de milho ou de cereal controle.

[0368] De acordo com um aspecto da presente divulgação, as plan- tas de cereal ou de milho modificadas, transgênicas ou editadas/muta- das por genoma são fornecidas com pelo menos um traço agronômico e pelo menos um órgão reprodutor feminino ou espiga que é substancial ou completamente isento de plantas fora do padrão. O traço agronômico benéfico pode incluir, por exemplo, menor altura de planta, menor com- primento de entrenós em um ou mais entrenós, maior diâmetro (mais espesso) do caule ou do talo, maior resistência ao acamamento, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, maior eficiência no uso de água, raízes mais profundas, maior área folia, fechamento do dossel mais precoce e/ou aumento do rendimento colhível. Uma planta de cereal ou de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma pode ter um órgão reprodutor feminino ou espiga que pareça normal em relação a uma planta controle ou do tipo selvagem. De fato, são fornecidas plantas de cereal ou de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma que compreendem pelo menos um órgão reprodutor ou espiga que não tem ou exibe, ou é substancial ou completamente isento de plantas fora do padrão, incluindo esterilidade masculina, número reduzido de caroços ou de sementes, e/ou estrutura (ou estruturas) masculinizada em um ou mais órgãos femininos ou es- pigas.

[0369] É fornecida uma planta de cereal ou de milho modificada,

transgênica ou editada/mutada por genoma no presente documento sig- nificativamente desprovida de plantas fora do padrão nos tecidos repro- dutivos da planta. As plantas fora do padrão podem incluir esterilidade masculina (copa ou antera), número reduzido de caroços ou de semen- tes, e/ou a presença de uma ou mais estruturas reprodutivas masculini- zadas ou masculinas (ou do tipo masculina) no órgão feminino ou na espiga (por exemplo, espiga antera) da planta.

[0370] Conforme usado neste documento, um órgão ou espiga fe- minino de uma planta, como o milho, é "substancialmente livre" das es- truturas reprodutivas masculinas se as estruturas reprodutivas masculi- nas estiverem ausentes ou quase ausentes no órgão feminino ou espiga da planta com base na inspeção visual do órgão ou ouvido feminino em estágios reprodutivos posteriores. Um órgão feminino ou espiga de uma planta, como milho, é “completamente isento” de estruturas reprodutivas masculinas maduras se estruturas reprodutivas masculinas estiverem ausentes ou não observadas ou observáveis no órgão feminino ou es- piga da planta, como uma planta de milho, por inspeção visual do órgão feminino ou da espiga em estágios reprodutivos posteriores.

[0371] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe área de espiga aumentada em relação a uma planta de milho controle.

[0372] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um aumento na área da espiga de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a uma planta de milho con- trole cultivada sob condições comparáveis.

[0373] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe uma área de espiga que é entre 1% e 100%, entre 2% e 100%, entre 3% e 100%, entre 4% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 11% e 100%, entre 12% e 100%, entre 13% e 100%, entre 14% e 100%, entre 15% e 100%, entre 16% e 100%, entre 17% e 100%, entre 18% e 100%, entre 19% e 100%, entre 20% e 100%, entre 25% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100% maior que aquela de uma planta de milho controle cultivada sob condi- ções comparáveis.

[0374] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe uma área de espiga que é entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 19%, entre 1% e 18%, entre 1% e 17%, entre 1% e 16%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3% ou entre 1% e 2% maior que aquela de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0375] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe uma área de espiga que é entre 2% e 90%, entre 3% e 85%, entre 4% e 80%, entre 5% e 75%, entre 6% e 70%, entre 7% e 65%, entre 8% e 60%, entre 9% e 55%, entre 10% e 50%, entre 11% e 45%, entre 12% e 40%, entre 13% e 35%, entre 14% e 30% ou entre 15% e 25% maior que aquela de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0376] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe uma área de espiga que é entre 1% e 5%, entre 5% e 10%, entre 10% e 20%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90% ou entre 90% e 100% maior que aquela de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0377] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe volume de espiga aumentado em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições com- paráveis.

[0378] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um aumento no volume de espiga de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a uma planta de milho con- trole cultivada sob condições comparáveis.

[0379] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um volume de espiga que é entre 1% e 100%, entre 2% e 100%, entre 3% e 100%, entre 4% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 11% e 100%, entre 12% e 100%, entre 13% e 100%, entre 14% e 100%, entre 15% e 100%, entre 16% e 100%, entre 17% e 100%, entre 18% e 100%, entre 19% e 100%, entre 20% e 100%, entre 25% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condi- ções comparáveis.

[0380] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um volume de espiga que é entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 19%, entre 1% e 18%, entre 1% e 17%, entre 1% e 16%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3% ou entre 1% e 2% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições com- paráveis.

[0381] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um volume de espiga que é entre 2% e 90%, entre 3% e 85%, entre 4% e 80%, entre 5% e 75%, entre 6% e 70%, entre 7% e 65%, entre 8% e 60%, entre 9% e 55%, entre 10% e 50%, entre 11% e 45%, entre 12% e 40%, entre 13% e 35%, entre 14% e 30% ou entre 15% e 25% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0382] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um volume de espiga que é entre 1% e 5%, entre 5% e 10%, entre 10% e 20%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90% ou entre 90% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0383] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe diâmetro de espiga aumen- tado em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0384] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um diâmetro de espiga que é pelo menos 0,2%, pelo menos 0,4%, pelo menos 0,6%, pelo menos 0,8%, pelo menos 1,0%, pelo menos 1,2%, pelo menos 1,4%, pelo menos 1,6%, pelo menos 1,8%, pelo me- nos 2,0%, pelo menos 2,2%, pelo menos 2,4%, pelo menos 2,6%, pelo menos 2,8%, pelo menos 3,0%, pelo menos 3,2%, pelo menos 3,4%, pelo menos 3,6%, pelo menos 3,8%, pelo menos 4,0%, pelo menos 4,5%, pelo menos 5,0%, pelo menos 5,5%, pelo menos 6,0%, pelo me- nos 6,5%, pelo menos 7,0%, pelo menos 7,5%, pelo menos 8,0%, pelo menos 8,5%, pelo menos 9,0%, pelo menos 9,5%, pelo menos 10,0%, em relação a uma planta de milho controle.

[0385] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um diâmetro de espiga que é entre 0,2% e 10,0%, entre 0,4% e 10,0%, entre 0,6% e 10,0%, entre 0,8% e 10,0%, entre 1,0% e 10,0%, entre 1,2% e 10,0%, entre 1,4% e 10,0%, entre 1,6% e 10,0%, entre 1,8% e 10,0%, entre 2,0% e 10,0%, entre 2,2% e 10,0%, entre 2,4% e 10,0%, entre 2,6% e 10,0%, entre 2,8% e 10,0%, entre 3,0% e 10,0%, entre 3,2% e 10,0%, entre 3,4% e 10,0%, entre 3,6% e 10,0%, entre 3,8% e 10,0%, entre 4,0% e 10,0%, entre 4,5% e 10,0%, entre 5,0% e 10,0%, entre 5,5% e 10,0%, entre 6,0% e 10,0%, entre 6,5% e 10,0%, entre 7,0% e 10,0%, entre 7,5% e 10,0%, entre 8,0% e 10,0%, entre 8,5% e 10,0%, entre 9,0% e 10,0% ou entre 9,5% e 10,0% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições com- paráveis.

[0386] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um diâmetro de espiga que é entre 0,2% e 9,5%, entre 0,2% e 9,0%, entre 0,2% e 8,5%, entre 0,2% e 8,0%, entre 0,2% e 7,5%, entre 0,2% e 7,0%, entre 0,2% e 6,5%, entre 0,2% e 6,0%, entre 0,2% e 5,5%, entre 0,2% e 5,0%, entre 0,2% e 4,5%, entre 0,2% e 4,0%, entre 0,2% e 3,8%, entre 0,2% e 3,6%, entre 0,2% e 3,4%, entre 0,2% e 3,2%, entre 0,2% e 3,0%, entre 0,2% e 2,8%, entre 0,2% e 2,6%, entre 0,2% e 2,4%, entre 0,2% e 2,2%, entre 0,2% e 2,0%, entre 0,2% e 1,8%, entre 0,2% e 1,6%, entre 0,2% e 1,4%, entre 0,2% e 1,2%, entre 0,2% e 1,0%, entre 0,2% e 0,8%, entre 0,2% e 0,6% ou entre 0,2% e 0,4%, maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições com- paráveis.

[0387] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um diâmetro de espiga que é entre 0,4% e 9,5%, entre 0,6% e

9,0%, entre 0,8% e 8,5%, entre 1,0% e 8,0%, entre 1,2% e 7,5%, entre 1,4% e 7,0%, entre 1,6% e 6,5%, entre 1,8% e 6,0%, entre 2,0% e 5,5%, entre 2,2% e 5,0%, entre 2,4% e 4,5%, entre 2,6% e 4,0%, entre 2,8% e 3,8%, entre 3,0% e 3,6% ou entre 3,2% e 3,4%, maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0388] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um diâmetro de espiga que é entre 0,2% e 0,6%, entre 0,6% e 1,0%, entre 1,0% e 1,4%, entre 1,4% e 1,8%, entre 1,8% e 2,2%, entre 2,2% e 2,6%, entre 2,6% e 3,0%, entre 3,0% e 3,5%, entre 3,5% e 4,0%, entre 4,0% e 4,5%, entre 4,5% e 5,0%, entre 5,0% e 5,5%, entre 5,5% e 6,0%, entre 6,0% e 6,5%, entre 6,5% e 7,0%, entre 7,0% e 7,5%, entre 7,5% e 8,0%, entre 8,0% e 8,5%, entre 8,5% e 9,0%, entre 9,0% e 9,5% ou entre 9,5% e 10,0%, maior que aquele de uma planta de milho con- trole cultivada sob condições comparáveis.

[0389] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe comprimento de espiga au- mentado em relação a uma planta de milho controle cultivada sob con- dições comparáveis.

[0390] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um aumento no comprimento de espiga de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo me- nos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos

90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0391] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um comprimento de espiga que é entre 1% e 100%, entre 2% e 100%, entre 3% e 100%, entre 4% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 11% e 100%, entre 12% e 100%, entre 13% e 100%, entre 14% e 100%, entre 15% e 100%, entre 16% e 100%, entre 17% e 100%, entre 18% e 100%, entre 19% e 100%, entre 20% e 100%, entre 25% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100% maior que aquele de uma planta de milho cultivada sob condições comparáveis.

[0392] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um comprimento de espiga que é entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 19%, entre 1% e 18%, entre 1% e 17%, entre 1% e 16%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3% ou entre 1% e 2% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0393] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um comprimento de espiga que é entre 2% e 90%, entre 3% e 85%, entre 4% e 80%, entre 5% e 75%, entre 6% e 70%, entre 7% e 65%, entre 8% e 60%, entre 9% e 55%, entre 10% e 50%, entre 11% e 45%, entre 12% e 40%, entre 13% e 35%, entre 14% e 30% ou entre 15% e 25% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0394] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um comprimento de espiga que é entre 1% e 5%, entre 5% e 10%, entre 10% e 20%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90% ou entre 90% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0395] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe vazio de ponta de espiga re- duzido em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condi- ções comparáveis.

[0396] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe uma redução no vazio de ponta de espiga de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo me- nos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0397] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um vazio de ponta de espiga que é entre 1% e 100%, entre 2% e 100%, entre 3% e 100%, entre 4% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 11% e 100%, entre 12% e 100%, entre 13% e 100%, entre 14% e 100%, entre 15% e 100%, entre 16% e 100%, entre 17% e 100%, entre 18% e 100%, entre 19% e 100%, entre 20% e 100%, entre 25% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100% menor que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0398] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um vazio de ponta de espiga que é entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 19%, entre 1% e 18%, entre 1% e 17%, entre 1% e 16%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3% ou entre 1% e 2% menor que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0399] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um vazio de ponta de espiga que é entre 2% e 90%, entre 3% e 85%, entre 4% e 80%, entre 5% e 75%, entre 6% e 70%, entre 7% e 65%, entre 8% e 60%, entre 9% e 55%, entre 10% e 50%, entre 11% e 45%, entre 12% e 40%, entre 13% e 35%, entre 14% e 30% ou entre 15% e 25% menor que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0400] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um vazio de ponta de espiga que é entre 1% e 5%, entre 5% e 10%, entre 10% e 20%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90% ou entre 90% e 100% menor que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0401] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe um número aumentado de caroços por espiga em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0402] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um aumento no número de caroços por espiga de pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo me- nos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0403] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe caroços por espiga que são entre 1% e 100%, entre 2% e 100%, entre 3% e 100%, entre 4% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 11% e 100%, entre 12% e 100%, entre 13% e 100%, entre 14% e 100%, entre 15% e 100%, entre 16% e 100%, entre 17% e 100%, entre 18% e 100%, entre 19% e 100%, entre 20% e 100%, entre 25% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100% maiores que aqueles de uma planta de milho controle cultivada sob con- dições comparáveis.

[0404] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe caroços por espiga que são entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 19%, entre 1% e 18%, entre 1% e 17%, entre 1% e 16%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3% ou entre 1% e 2% maiores que aqueles de uma planta de milho controle cultivada sob condições com- paráveis.

[0405] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe caroços por espiga que são entre 2% e 90%, entre 3% e 85%,

entre 4% e 80%, entre 5% e 75%, entre 6% e 70%, entre 7% e 65%, entre 8% e 60%, entre 9% e 55%, entre 10% e 50%, entre 11% e 45%, entre 12% e 40%, entre 13% e 35%, entre 14% e 30% ou entre 15% e 25% maiores que aqueles de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0406] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe caroços por espiga que são entre 1% e 5%, entre 5% e 10%, entre 10% e 20%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90% ou entre 90% e 100% maiores que aqueles de uma planta de milho con- trole cultivada sob condições comparáveis.

[0407] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe peso de único caroço aumen- tado em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0408] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um aumento no peso de único caroço em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo me- nos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0409] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso de único caroço que é entre 1% e 100%, entre 2% e 100%, entre 3% e 100%, entre 4% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 11% e 100%, entre 12% e 100%, entre 13% e 100%, entre 14% e 100%, entre 15% e 100%, entre 16% e 100%, entre 17% e 100%, entre 18% e 100%, entre 19% e 100%, entre 20% e 100%, entre 25% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0410] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso de único caroço que é entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 19%, entre 1% e 18%, entre 1% e 17%, entre 1% e 16%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3% ou entre 1% e 2% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições com- paráveis.

[0411] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso de único caroço que é entre 2% e 90%, entre 3% e 85%, entre 4% e 80%, entre 5% e 75%, entre 6% e 70%, entre 7% e 65%,

entre 8% e 60%, entre 9% e 55%, entre 10% e 50%, entre 11% e 45%, entre 12% e 40%, entre 13% e 35%, entre 14% e 30% ou entre 15% e 25% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0412] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso de único caroço que é entre 1% e 5%, entre 5% e 10%, entre 10% e 20%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90% ou entre 90% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0413] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso de único caroço que é entre 1% e 2%, entre 2% e 3%, entre 3% e 4%, entre 4% e 5%, entre 5% e 6%, entre 6% e 7%, entre 7% e 8%, entre 8% e 9% ou entre 9% e 10% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0414] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe peso fresco de espiga au- mentado em relação a uma planta de milho controle.

[0415] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso fresco de espiga aumentado em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo me- nos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 21%, pelo menos 22%, pelo menos 23%, pelo menos 24%, pelo menos 25%, pelo menos 26%, pelo menos 27%, pelo menos 28%, pelo menos 29%, pelo menos

30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 100% em relação a uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0416] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso fresco de espiga que é entre 1% e 100%, entre 2% e 100%, entre 3% e 100%, entre 4% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 11% e 100%, entre 12% e 100%, entre 13% e 100%, entre 14% e 100%, entre 15% e 100%, entre 16% e 100%, entre 17% e 100%, entre 18% e 100%, entre 19% e 100%, entre 20% e 100%, entre 21% e 100%, entre 22% e 100%, entre 23% e 100%, entre 24% e 100%, entre 25% e 100%, entre 26% e 100%, entre 27% e 100%, entre 28% e 100%, entre 29% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0417] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso fresco de espiga que é entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 29%, entre 1% e 28%, entre 1% e 27%, entre 1% e 26%, entre 1% e 25%, entre 1% e 24%, entre 1% e 23%, entre 1% e 22%, entre 1% e 21%, entre 1% e 20%, entre 1% e 19%, entre 1% e 18%,

entre 1% e 17%, entre 1% e 16%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3% ou entre 1% e 2% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições com- paráveis.

[0418] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso fresco de espiga que é entre 2% e 90%, entre 3% e 85%, entre 4% e 80%, entre 5% e 75%, entre 6% e 70%, entre 7% e 65%, entre 8% e 60%, entre 9% e 55%, entre 10% e 50%, entre 11% e 45%, entre 12% e 40%, entre 13% e 35%, entre 14% e 30% ou entre 15% e 25% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0419] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso fresco de espiga que é entre 1% e 5%, entre 5% e 10%, entre 10% e 15%, entre 15% e 20%, entre 20% e 25%, entre 25% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90% ou entre 90% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0420] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um peso fresco de espiga que é entre 1% e 2%, entre 2% e 3%, entre 3% e 4%, entre 4% e 5%, entre 5% e 6%, entre 6% e 7%, entre 7% e 8%, entre 8% e 9%, entre 9% e 10%, entre 10% e 11%, entre 11% e 12%, entre 12% e 13%, entre 13% e 14%, entre 14% e 15%, entre 15% e 16%, entre 16% e 17%, entre 17% e 18%, entre 18% e 19%, entre 19% e 20%, entre 20% e 21%, entre 21% e 22%, entre 22% e

23%, entre 23% e 24%, entre 24% e 25%, entre 25% e 26%, entre 26% e 27%, entre 27% e 28%, entre 28% e 29%, entre 29% e 30%, maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0421] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe um rendimento aumentado em relação a uma planta de milho controle.

[0422] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um rendimento aumentado em pelo menos 1%, pelo menos 3%, pelo menos 5%, pelo menos 7%, pelo menos 9%, pelo menos 11%, pelo menos 13%, pelo menos 15%, pelo menos 17%, pelo menos 19%, pelo menos 21%, pelo menos 23%, pelo menos 25%, pelo menos 27%, pelo menos 29%, pelo menos 31%, pelo menos 33%, pelo menos 35%, pelo menos 37%, pelo menos 39%, pelo menos 41%, pelo menos 43%, pelo menos 45%, pelo menos 47%, pelo menos 49%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a uma planta de milho con- trole cultivada sob condições comparáveis.

[0423] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um rendimento que é entre 1% e 100%, entre 3% e 100%, entre 5% e 100%, entre 7% e 100%, entre 9% e 100%, entre 11% e 100%, entre 13% e 100%, entre 15% e 100%, entre 17% e 100%, entre 19% e 100%, entre 21% e 100%, entre 23% e 100%, entre 25% e 100%, entre 27% e 100%, entre 29% e 100%, entre 31% e 100%, entre 33% e 100%, entre 35% e 100%, entre 37% e 100%, entre 39% e 100%, entre 41% e 100%, entre 43% e 100%, entre 45% e 100%, entre 47% e 100%, entre 49% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%,

entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100%, entre 95% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0424] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um rendimento que é entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 49%, entre 1% e 47%, entre 1% e 45%, entre 1% e 43%, entre 1% e 41%, entre 1% e 39%, entre 1% e 37%, entre 1% e 35%, entre 1% e 33%, entre 1% e 31%, entre 1% e 29%, entre 1% e 27%, entre 1% e 25%, entre 1% e 23%, entre 1% e 21%, entre 1% e 19%, entre 1% e 17%, entre 1% e 15%, entre 1% e 13%, entre 1% e 11%, entre 1% e 9%, entre 1% e 7%, entre 1% e 5% ou entre 1% e 3% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0425] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um rendimento que é entre 3% e 95%, entre 5% e 90%, entre 7% e 85%, entre 9% e 80%, entre 11% e 75%, entre 13% e 70%, entre 15% e 65%, entre 17% e 60%, entre 19% e 55%, entre 21% e 50%, entre 23% e 49%, entre 25% e 47%, entre 27% e 45%, entre 29% e 43%, entre 31% e 41%, entre 33% e 39% ou entre 35% e 37%, maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições com- paráveis.

[0426] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um rendimento que é entre 1% e 7%, entre 7% e 13%, entre 13% e 19%, entre 19% e 25%, entre 25% e 31%, entre 31% e 37%, entre 37% e 43%, entre 43% e 49%, entre 49% e 55%, entre 55% e 60%,

entre 60% e 65%, entre 65% e 70%, entre 70% e 75%, entre 75% e 80%, entre 80% e 85%, entre 85% e 90%, entre 90% e 95% ou entre 95% e 100%, maior que aquele de uma planta de milho controle culti- vada sob condições comparáveis.

[0427] Em um aspecto, as plantas de milho modificadas, transgêni- cas ou editadas/mutadas por genoma exibem caroços aumentados por área de campo em relação a plantas de milho controle.

[0428] De acordo com um aspecto da presente divulgação, as plan- tas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por ge- noma exibem caroços aumentados por área de campo em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 21%, pelo menos 22%, pelo menos 23%, pelo menos 24%, pelo menos 25%, pelo menos 26%, pelo menos 27%, pelo menos 28%, pelo menos 29%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a plantas de milho controle.

[0429] De acordo com um aspecto da presente divulgação, plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma exibem caroços por área de campo que são entre 1% e 100%, entre 2% e 100%, entre 3% e 100%, entre 4% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 11% e 100%, entre 12% e 100%, entre 13% e 100%, entre 14% e 100%, entre 15% e 100%, entre 16% e 100%, entre 17% e 100%, entre 18% e 100%, entre 19% e 100%, entre 20% e 100%,

entre 21% e 100%, entre 22% e 100%, entre 23% e 100%, entre 24% e 100%, entre 25% e 100%, entre 26% e 100%, entre 27% e 100%, entre 28% e 100%, entre 29% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100% maiores que aqueles de plantas de milho controle cultivadas sob condições comparáveis.

[0430] De acordo com um aspecto da presente divulgação, plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma exibem caroços por área de campo que são entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 29%, entre 1% e 28%, entre 1% e 27%, entre 1% e 26%, entre 1% e 25%, entre 1% e 24%, entre 1% e 23%, entre 1% e 22%, entre 1% e 21%, entre 1% e 20%, entre 1% e 19%, entre 1% e 18%, entre 1% e 17%, entre 1% e 16%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3% ou entre 1% e 2% maio- res que aqueles de plantas de milho controle cultivadas sob condições comparáveis.

[0431] De acordo com um aspecto da presente divulgação, plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma exibem caroços por área de campo que são entre 2% e 90%, entre 3% e 85%, entre 4% e 80%, entre 5% e 75%, entre 6% e 70%, entre 7% e 65%, entre 8% e 60%, entre 9% e 55%, entre 10% e 50%, entre 11% e 45%, entre 12% e 40%, entre 13% e 35%, entre 14% e 30% ou entre 15% e 25% maiores que aqueles de plantas de milho controle cultivadas sob condições comparáveis.

[0432] De acordo com um aspecto da presente divulgação, plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma exibem caroços por área de campo que são entre 1% e 5%, entre 5% e 10%, entre 10% e 20%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90% ou entre 90% e 100% maiores que aqueles de plantas de milho controles cultivadas sob condições comparáveis.

[0433] De acordo com um aspecto da presente divulgação, plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma exibem caroços por área de campo que são entre 1% e 3%, entre 3% e 5%, entre 5% e 7%, entre 7% e 9%, entre 9% e 11%, entre 11% e 13%, entre 13% e 15%, entre 15% e 17%, entre 17% e 19%, entre 19% e 21%, entre 21% e 23%, entre 23% e 25%, entre 25% e 27%, entre 27% e 29% ou entre 29% e 30% maiores que aqueles de plantas de milho controle cultivadas sob condições comparáveis.

[0434] Em um aspecto, uma planta de milho modificada, transgê- nica ou editada/mutada por genoma exibe um número aumentado de flósculos em relação a uma planta de milho controle.

[0435] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe número aumentado de flósculos em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 21%, pelo menos 22%, pelo menos 23%, pelo menos 24%, pelo menos 25%, pelo menos 26%, pelo menos 27%, pelo menos 28%, pelo menos 29%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, em relação a uma planta de milho con- trole.

[0436] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um número de flósculos que é entre 1% e 100%, entre 2% e 100%, entre 3% e 100%, entre 4% e 100%, entre 5% e 100%, entre 6% e 100%, entre 7% e 100%, entre 8% e 100%, entre 9% e 100%, entre 10% e 100%, entre 11% e 100%, entre 12% e 100%, entre 13% e 100%, entre 14% e 100%, entre 15% e 100%, entre 16% e 100%, entre 17% e 100%, entre 18% e 100%, entre 19% e 100%, entre 20% e 100%, entre 21% e 100%, entre 22% e 100%, entre 23% e 100%, entre 24% e 100%, entre 25% e 100%, entre 26% e 100%, entre 27% e 100%, entre 28% e 100%, entre 29% e 100%, entre 30% e 100%, entre 35% e 100%, entre 40% e 100%, entre 45% e 100%, entre 50% e 100%, entre 55% e 100%, entre 60% e 100%, entre 65% e 100%, entre 70% e 100%, entre 75% e 100%, entre 80% e 100%, entre 85% e 100%, entre 90% e 100% ou entre 95% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0437] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um número de flósculos que é entre 1% e 95%, entre 1% e 90%, entre 1% e 85%, entre 1% e 80%, entre 1% e 75%, entre 1% e 70%, entre 1% e 65%, entre 1% e 60%, entre 1% e 55%, entre 1% e 50%, entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 29%, entre 1% e 28%, entre 1% e 27%, entre 1% e 26%, entre 1% e 25%, entre 1% e 24%, entre 1% e 23%, entre 1% e 22%, entre 1% e 21%, entre 1% e 20%, entre 1% e 19%, entre 1% e 18%, entre 1% e 17%, entre 1% e 16%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%,

entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3% ou entre 1% e 2% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições com- paráveis.

[0438] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um número de flósculos que é entre 2% e 90%, entre 3% e 85%, entre 4% e 80%, entre 5% e 75%, entre 6% e 70%, entre 7% e 65%, entre 8% e 60%, entre 9% e 55%, entre 10% e 50%, entre 11% e 45%, entre 12% e 40%, entre 13% e 35%, entre 14% e 30% ou entre 15% e 25% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0439] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um número de flósculos que é entre 1% e 5%, entre 5% e 10%, entre 10% e 20%, entre 20% e 30%, entre 30% e 40%, entre 40% e 50%, entre 50% e 60%, entre 60% e 70%, entre 70% e 80%, entre 80% e 90% ou entre 90% e 100% maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0440] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma exibe um número de flósculos que é entre 1% e 3%, entre 3% e 5%, entre 5% e 7%, entre 7% e 9%, entre 9% e 11%, entre 11% e 13%, entre 13% e 15%, entre 15% e 17%, entre 17% e 19%, entre 19% e 21%, entre 21% e 23%, entre 23% e 25%, entre 25% e 27%, entre 27% e 29% ou entre 29% e 30%, maior que aquele de uma planta de milho controle cultivada sob condições comparáveis.

[0441] Uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mu-

tada por genoma divulgada na presente divulgação pode exibir uma in- teração de traço positivo em que um traço, como um traço positivo ou negativo, atribuível a um transgene (ou mutação ou edição) pode ser aprimorado, superado, neutralizado, compensado ou mitigado devido a à presença de um segundo transgene (ou mutação ou edição). Uma planta de milho transgênica e/ou editada/mutada por genoma pode exi- bir traços de espiga aprimorados em comparação com uma planta de milho controle que compreende apenas um transgene (ou mutação ou edição). Por exemplo, as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL podem ter traços aprimorados e/ou interações de traços positivas em relação a plantas de unidade de PpCOL e/ou unidade de GA20Ox_SUP, em termos de aumento de área de espiga, número de flósculos por es- piga, peso de único caroço, peso fresco de espiga e/ou rendimento.

[0442] Em um outro aspecto, uma planta de milho modificada, trans- gênica ou editada/mutada por genoma da presente divulgação exibe um traço selecionado do grupo que consiste em raízes mais profundas, au- mento da área foliar, fechamento mais precoce da copa, maior condu- tância estomática, menor altura de espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, teor e área de antocianina reduzidos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do índice de colheita, aumento do número de semente, aumento de peso de semente, aumento de prolificidade, e uma combi- nação dos mesmos, em relação a uma planta de milho controle.

[0443] Ainda em um outro aspecto, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma da presente divulgação não tem quaisquer plantas fora do padrão significativas em pelo menos um órgão feminino ou espiga.

[0444] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma não tem ou reduziu efeito adverso sobre um traço ou um fenótipo sele- cionado do grupo que consiste em senescência, floração retardada, in- fecção por fungos e uma combinação dos mesmos, em relação a uma planta de milho controle.

[0445] As plantas de milho de baixa estatura ou semianãs podem também ter um ou mais traços adicionais, incluindo aumento do diâme- tro do caule, redução do quebramento verde, raízes mais profundas, aumento da área foliar, fechamento mais precoce da copa, maior con- dutância estomática, menor altura da espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, maior efi- ciência no uso de água, teor e área de antocianina reduzidos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do número de caroços, au- mento de peso de caroço, aumento do rendimento e/ou aumento do ín- dice de colheita.

[0446] De acordo com um aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma aqui fornecida compreende um índice de colheita de pelo menos 0,57, pelo menos 0,58, pelo menos 0,59, pelo menos 0,60, pelo menos 0,61, pelo menos 0,62, pelo menos 0,63, pelo menos 0,64 ou pelo menos 0,65. De acordo com um outro aspecto da presente divulgação uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por genoma fornecida no presente documento compreende um índice de colheita entre 0,57 e 0,65, entre 0,57 e 0,64, entre 0,57 e 0,63, entre 0,57 e 0,62, entre 0,57 e 0,61, entre 0,57 e 0,60, entre 0,57 e 0,59, entre 0,57 e 0,58, entre 0,58 e 0,65, entre 0,59 e 0,65 ou entre 0,60 e 0,65. De acordo com ainda outro aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modi- ficada, transgênica ou editada/mutada por genoma fornecida no pre- sente documento compreende um índice de colheita que é pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%,

pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45% ou pelo menos 50% maior em comparação com uma planta controle não modificada. De acordo com ainda outro aspecto da presente divulgação, uma planta de milho modificada, transgênica ou editada/mutada por ge- noma fornecida no presente documento compreende um índice de co- lheita que é entre 1% e 45%, entre 1% e 40%, entre 1% e 35%, entre 1% e 30%, entre 1% e 25%, entre 1% e 20%, entre 1% e 15%, entre 1% e 14%, entre 1% e 13%, entre 1% e 12%, entre 1% e 11%, entre 1% e 10%, entre 1% e 9%, entre 1% e 8%, entre 1% e 7%, entre 1% e 6%, entre 1% e 5%, entre 1% e 4%, entre 1% e 3%, entre 1% e 2%, entre 5% e 15%, entre 5% e 20%, entre 5% e 30% ou entre 5% e 40% maior em comparação com uma planta controle.

[0447] De acordo com um outro aspecto da presente divulgação, são fornecidos no presente documento métodos de plantio de uma planta (ou plantas) transgênica em uma densidade normal/padrão ou elevada em campo. De acordo com alguns aspectos, o rendimento de uma planta de cultura por acre (ou por área de terra) pode ser aumen- tado plantando uma planta (ou plantas) transgênica da presente divul- gação a uma densidade mais alta no campo. Como descrito no presente documento, plantas modificadas ou transgênicas que expressam uma sequência de DNA transcritível que codifica uma molécula de RNA não codificante que alveja um ou mais genes endógenos da GA20 e/ou da GA3 oxidase para a supressão e um transgene que codifica um ou mais polipeptídeos de CO ou COL, podem ter altura de planta reduzida, en- trenó (ou entrenós) mais curto, aumento de diâmetro de talo/caule e/ou aumento da resistência ao acamamento. As plantas modificadas ou transgênicas descritas neste documento podem tolerar condições de plantio de alta densidade, uma vez que um aumento no diâmetro do caule pode resistir ao acamamento e a menor altura da planta pode per- mitir maior penetração da luz nas folhas inferiores sob condições de plantio de alta densidade. Portanto, as plantas modificadas ou transgê- nicas fornecidas no presente documento podem ser plantadas em uma densidade mais alta para aumentar o rendimento por acre (ou área de terra) no campo. Para culturas em fileiras, densidade mais alta pode ser obtida plantando um número maior de sementes/plantas por largura de fileira e/ou diminuindo o espaçamento entre as fileiras. Em um aspecto, o espaçamento entre as fileiras para o plantio de alta densidade das plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por ge- noma é menor ou igual a 101,6 cm (40 polegadas). Em um aspecto, o espaçamento entre fileiras para o plantio de alta densidade das plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma é menor ou igual a 76,2 cm (30 polegadas). Em um outro aspecto, o es- paçamento entre fileiras para o plantio de alta densidade das plantas de milho modificadas, transgênicas ou editadas/mutadas por genoma é menor ou igual a 50,8 cm (20 polegadas).

[0448] De acordo com um aspecto, plantas de cultivo modificadas ou transgênicas podem ser plantadas a uma densidade no campo (plan- tas por área de terra/campo) que é pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 50 %, 75%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 225% ou 250% maior do que a densidade de plantio normal para aquela planta de cul- tivo de acordo com as práticas agronômicas padrão. Uma planta de cul- tivo modificada ou transgênica pode ser plantada a uma densidade no campo de pelo menos 38000 plantas por acre, pelo menos 40000 plan- tas por acre, pelo menos 42000 plantas por acre, pelo menos 44000 plantas por acre, pelo menos 45000 plantas por acre, pelo menos 46000 plantas por acre, pelo menos 48000 plantas por acre, 50000 plantas por acre, pelo menos 52000 plantas por acre, pelo menos 54000 per acre ou pelo menos 56000 plantas por acre.

[0449] Como um exemplo, sementes de plantas de milho podem ser plantadas a uma densidade maior, como em uma faixa de cerca de 38000 plantas por acre a cerca de 60000 plantas por acre, ou cerca de 40000 plantas por acre a cerca de 58000 plantas por acre, ou cerca de 42000 plantas por acre a cerca de 58000 plantas por acre, ou cerca de 40000 plantas por acre a cerca de 45000 plantas por acre, ou cerca de 45000 plantas por acre a cerca de 50000 plantas por acre, ou cerca de 50000 plantas por acre a cerca de 58000 plantas por acre, ou cerca de 52000 plantas por acre a cerca de 56000 plantas por acre, ou cerca de 38000 plantas por acre, cerca de 42000 plantas por acre, cerca de 46000 plantas por acre, ou cerca de 48000 plantas por acre, cerca de 50000 plantas por acre, ou cerca de 52000 plantas por acre, ou cerca de 54000 plantas por acre, ao contrário de uma faixa de densidade pa- drão, como cerca de 18000 plantas por acre a cerca de 38000 plantas por acre.

MODALIDADES EXEMPLIFICATIVAS

[0450] A seguir estão as modalidades exemplificas do presente re- latório descritivo.

[0451] 1. Uma planta de milho modificada ou uma parte de planta da mesma que compreende 1) um primeiro cassete de expressão re- combinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes de ácido giberélico 20 (GA20) oxidase e/ou um ou mais genes de ácido giberélico 3 (GA3) oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão re- combinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CONSTANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL).

[0452] 2. A planta de milho modificada da modalidade 1, em que o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante são estavel- mente integrados no genoma da planta de milho ou parte de planta da mesma.

[0453] 3. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 1, em que a planta de milho modificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem o primeiro ou o segundo cassetes de ex- pressão recombinante.

[0454] 4. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 1, 2 ou 3, em que a sequência de DNA transcritível co- difica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA3 oxidase.

[0455] 5. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 4, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA3 oxidase_1, um gene da GA3 oxidase_2, ou ambos.

[0456] 6. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 5, em que a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou comple- mentar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo me- nos 27 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0457] 7. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 5, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante que compreende uma sequência que é 80% com- plementar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0458] 8. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 1, 2 ou 3, em que a sequência de DNA transcritível co- difica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA20 oxidase.

[0459] 9. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 8, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA20 oxidase_3, um gene da GA20 oxidase_4, um gene da GA20 oxidase_5, ou uma combinação dos mesmos.

[0460] 10. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 8, em que a sequência de DNA transcritível co- difica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA20 oxidase_3, um gene da GA20 oxidase_5, ou ambos.

[0461] 11. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 10, em que a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 60% idêntica ou com- plementar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 39, 53 ou 55.

[0462] 12. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 10, em que a sequência de DNA transcritível co- difica uma sequência que é pelo menos 60% idêntica ou complementar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 40, 54 ou

56.

[0463] 13. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 4 a 10, em que o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos

26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA oxidase em uma planta de milho ou célula vegetal, sendo que a proteína endógena da GA oxidase é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 ou 33.

[0464] 14. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 4 a 10, em que o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 7, 8, 10, 11, 13, 14, 28, 29, 31 ou 32.

[0465] 15. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 1, 2 ou 3, em que o segundo cassete de expres- são recombinante compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL.

[0466] 16. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 15, em que o polipeptídeo CO ou COL compre- ende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo me- nos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou

100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 176 a 397.

[0467] 17. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 15, em que o polipeptídeo CO ou COL compre- ende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo me- nos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 398 a 452.

[0468] 18. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 3, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende um polipeptídeo de Physcomitrella patens se- melhante a CONSTANS 1 (PpCOL1).

[0469] 19. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 17, em que a sequência de DNA compreendida no segundo cassete de expressão recombinante compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169.

[0470] 20. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 17, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 168

[0471] 21. A planta de milho modificada ou parte da planta da mo- dalidade 1 ou 3, em que o nível de expressão de um gene endógeno da GA20 oxidase ou gene da GA3 oxidase é reduzido ou eliminado na planta de milho modificada ou em parte da planta da mesma.

[0472] 22. A planta de milho modificada ou parte da planta da mo- dalidade 1 ou 3, em que a sequência de DNA transcritível está ligada de maneira funcional a um promotor heterólogo expressável em plantas.

[0473] 23. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 22, em que o promotor heterólogo expressável em plantas é um promotor vascular.

[0474] 24. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 23, em que o promotor vascular é selecionado do grupo que consiste em um promotor de sacarose sintase, um promo- tor de transporte de sacarose, um promotor Sh1, promotor do vírus do mosqueado amarelo de Commelina (CoYMV), um promotor de grande região intergênica (LIR) de geminivírus anão do trigo (WDV), um promo- tor de polipeptídeo de revestimento (CP) de geminivírus das estrias do milho (MSV), um promotor semelhante à faixa amarela do arroz 1 (YS1), um promotor de faixa amarela do arroz 2 (OsYSL2), e uma combinação dos mesmos.

[0475] 25. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 24, em que o promotor vascular compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais dentre a SEQ ID NO: 67, a SEQ ID NO: 68, a SEQ ID NO: 69, a SEQ ID NO: 70 ou a SEQ ID NO: 71, ou uma porção funcional da mesma.

[0476] 26. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 22, em que o promotor heterólogo expressável em plantas é um promotor do vírus baciliforme do arroz tungro (RTBV).

[0477] 27. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 26, em que o promotor de RTBV compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a um ou mais dentre a SEQ ID NO: 65 ou a SEQ ID NO: 66, ou uma por- ção funcional da mesma.

[0478] 28. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 22, em que o promotor heterólogo expressável em plantas é um promotor foliar.

[0479] 29. A planta de milho modificada ou parte da planta da mo- dalidade 28, em que o promotor foliar é selecionado do grupo que con- siste em um promotor RuBisCO, um promotor de piruvato fosfato diqui- nase (PPDK), um promotor de frutose 1-6 bisfosfato aldolase (FDA), um promotor Nadh-Gogat, promotor do gene polipeptídico de ligação à clo- rofila a/b, um promotor da fosfoenolpiruvato carboxilase (PEPC), um promotor do gene Myb, e uma combinação dos mesmos.

[0480] 30. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 29, em que o promotor foliar compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo me- nos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais dentre a SEQ ID NO: 72, a SEQ ID NO: 73 ou a SEQ ID

NO: 74, ou uma porção funcional da mesma.

[0481] 31. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 22, em que o promotor heterólogo expressável em plantas é um promotor constitutivo.

[0482] 32. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 31, em que o promotor constitutivo é selecionado do grupo que consiste em um promotor de actina, um promotor 35S ou 19S do vírus do mosaico da couve-flor (CaMV), um promotor de ubiqui- tina vegetal, um promotor Gos2 vegetal, um promotor do vírus do mo- saico da escrofulária (FMV), um promotor de citomegalovírus (CMV), um promotor do vírus do mosaico mirabilis (MMV), um promotor de cau- limovírus das estrias cloróticas de amendoim (PCLSV), um promotor Emu, um promotor de tubulina, um promotor de nopalina sintase, um promotor de octopina sintase, um promotor de manopina sintase ou uma álcool desidrogenase de maís, uma porção funcional dos mesmos, e uma combinação dos mesmos.

[0483] 33. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 32, em que o promotor constitutivo compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82 ou SEQ ID NO: 83, ou uma porção funcional da mesma

[0484] 34. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 1 ou 3, em que o RNA não codificante é um miRNA ou um siRNA precursor capaz de ser processado ou clivado para formar um miRNA ou um siRNA maduro.

[0485] 35. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 1 ou 3, em que a sequência de DNA compreen- dida no segundo cassete de expressão recombinante está ligada de ma- neira funcional a um promotor heterólogo expressável em plantas.

[0486] 36. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 35, em que o promotor heterólogo expressável em plantas é um promotor constitutivo.

[0487] 37. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 36, em que o promotor constitutivo é selecionado do grupo que consiste em um promotor de actina, um promotor 35S ou 19S do vírus do mosaico da couve-flor (CaMV), um promotor de ubiqui- tina vegetal, um promotor Gos2 vegetal, um promotor do vírus do mo- saico da escrofulária (FMV), um promotor de citomegalovírus (CMV), um promotor do vírus do mosaico mirabilis (MMV), um promotor de cau- limovírus das estrias cloróticas de amendoim (PCLSV), um promotor Emu, um promotor de tubulina, um promotor de nopalina sintase, um promotor de octopina sintase, um promotor de manopina sintase ou uma álcool desidrogenase de maís, uma porção funcional dos mesmos, e uma combinação dos mesmos.

[0488] 38. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma da modalidade 35, em que o promotor heterólogo expressável em plantas compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 172 ou uma porção funcional da mesma.

[0489] 39. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 38, em que a altura na maturidade da planta de milho modificada é reduzida em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos

35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65% ou pelo menos 70%, em rela- ção a uma planta de milho controle.

[0490] 40. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 39, em que o diâmetro de talo ou de caule da planta de milho modificada é aumentado em pelo menos 0,1%, pelo menos 0,2%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 1,5%, pelo menos 2%, pelo menos 2,5%, pelo menos 3%, pelo menos 3,5%, pelo menos 4%, pelo menos 4,5%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo me- nos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45% ou pelo menos 50%, em relação a uma planta de milho controle.

[0491] 41. A planta de milho modificada ou parte da planta da mesma das modalidades 1 a 40, em que a planta de milho modificada exibe resistência ao acamamento aprimorada, quebramento verde re- duzido, ou ambos, em relação a uma planta de milho controle.

[0492] 42. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 41, em que a planta de milho modificada exibe área de espiga aumentada em relação a uma planta de milho controle.

[0493] 43. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 42, em que a planta de milho modificada exibe um aumento na área de espiga em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19% ou pelo menos 20%, em relação a uma planta de milho controle.

[0494] 44. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 43, em que a planta de milho modificada exibe peso de único caroço aumentado em relação a uma planta de milho controle.

[0495] 45. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 44, em que a planta de milho modificada exibe um aumento no peso de único caroço de pelo menos pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9% ou pelo menos 10%, em relação a uma planta de milho de controle.

[0496] 46. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 45, em que a planta de milho modificada exibe peso fresco de espiga aumentado em relação a uma planta de milho controle.

[0497] 47. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 46, em que a planta de milho modificada exibe peso fresco de espiga aumentado em pelo me- nos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19% ou pelo menos 20%, em relação a uma planta de milho controle.

[0498] 48. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 47, em que a planta de milho modificada exibe número aumentado de flósculos em relação a uma planta de milho controle.

[0499] 49. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 48, em que a planta de milho modificada exibe número aumentado de flósculos em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 21%, pelo menos 22%, pelo menos 23%, pelo menos 24%, pelo menos 25%, pelo menos 26%, pelo menos 27%, pelo menos 28%, pelo menos 29% ou pelo menos 30%, em relação a uma planta de milho controle.

[0500] 50. A planta de milho modificada ou parte de planta da mesma de qualquer uma das modalidades 1 a 49, em que a planta de milho modificada exibe um traço selecionado do grupo que consiste em raízes mais profundas, aumento da área foliar, fechamento mais pre- coce da copa, maior condutância estomática, menor altura de espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, teor e área de antocianina reduzidos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do índice de colheita, au- mento do rendimento, aumento do número de semente, aumento de peso de semente, aumento de prolificidade, e uma combinação dos mesmos, em relação à planta de milho controle.

[0501] 51. A planta de milho modificada ou parte da planta da mesma de qualquer uma das modalidades de 1 a 50, em que a planta de milho modificada não tem plantas fora do padrão significativas em pelo menos um órgão feminino ou espiga.

[0502] 52. Uma semente da planta de milho modificada de qualquer uma das modalidades 1 a 51, em que a semente compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

[0503] 53. A semente da modalidade 52, em que uma planta des- cendente cultivada a partir da semente é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho con- trole que não compreende o primeiro ou o segundo cassetes de expres- são recombinante.

[0504] 54. Uma mercadoria ou produto de consumo produzido a partir da semente da modalidade 52, que compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante de sequência de DNA.

[0505] 55. Um método que compreende o plantio da semente da modalidade 52 em um meio de crescimento ou solo.

[0506] 56. O método da modalidade 55, que compreende ainda o plantio de uma pluralidade das sementes com um espaçamento entre fileiras menor ou igual a 101,6 cm (40 polegadas).

[0507] 57. O método da modalidade 55, que compreende ainda o plantio de uma pluralidade das sementes com um espaçamento entre fileiras menor ou igual a 76,2 cm (30 polegadas).

[0508] 58. O método da modalidade 57, em que o espaçamento en- tre fileiras é menor ou igual a 50,8 cm (20 polegadas).

[0509] 59. O método da modalidade 55, que compreende ainda o cultivo de uma planta de milho a partir da semente.

[0510] 60. O método da modalidade 59, que compreende ainda co- lher uma semente da planta de milho.

[0511] 61. O método de qualquer uma das modalidades 57 a 60, em que a semente é plantada a uma densidade selecionada do grupo que consiste em pelo menos 38000 plantas por acre, pelo menos 40000 plantas por acre, pelo menos 42000 plantas por acre, pelo menos 44000 plantas por acre, pelo menos 45000 plantas por acre, pelo menos 46000 plantas por acre, pelo menos 48000 plantas por acre, 50000 plantas por acre, pelo menos 52000 plantas por acre, pelo menos 54000 plantas por acre e pelo menos 56000 plantas por acre.

[0512] 62. Uma pluralidade de plantas de milho modificadas em um campo, sendo que cada planta de milho modificada compreende a. um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codifi- cante para a supressão de um ou mais genes de ácido giberélico 20 (GA20) oxidase e/ou um ou mais genes de ácido giberélico 3 (GA3) oxi- dase, e b. um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL.

[0513] 63. A pluralidade de plantas de milho modificadas da moda- lidade 62, em que as plantas de milho modificadas têm rendimento au- mentado em relação a plantas de milho controle.

[0514] 64. A pluralidade de plantas de milho modificadas da moda- lidade 62 ou 63, em que as plantas de milho modificadas têm um au- mento no rendimento que é pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo me- nos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, ou pelo menos 25% maior que as plantas de milho controle.

[0515] 65. Um método de produção de uma planta de milho modifi- cada, sendo que o método compreende: A. introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a célula de milho compreende um se- gundo cassete de expressão recombinante que compreende uma se- quência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou um ou mais genes da GA20 oxidase; e b. regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

[0516] 66. O método da modalidade 65, em que a introdução ocorre através de integração sítio-dirigida usando uma nuclease sítio-especí- fica.

[0517] 67. O método da modalidade 66, em que a nuclease sítio- específica é selecionada do grupo que consiste em uma endonuclease guiada por RNA, uma meganuclease, uma nuclease de dedo de zinco (ZFN), uma endonuclease TALE (TALEN), uma recombinase e uma transposase.

[0518] 68. O método da modalidade 65, em que a introdução ocorre através de transformação mediada por Agrobacterium.

[0519] 69. O método da modalidade 65, em que a introdução ocorre através de bombardeamento de partículas.

[0520] 70. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 69, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA3 oxidase_1, um gene da GA3 oxi- dase_2, ou ambos.

[0521] 71. O método da modalidade 70, em que a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0522] 72. O método da modalidade 70, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante que compreende uma sequência que é 80% complementar a pelo menos 15 nucleotídeos con- secutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0523] 73. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 69, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA20 oxidase.

[0524] 74. O método da modalidade 73, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA20 oxidase_3, um gene da GA20 oxidase_4, um gene da GA20 oxidase_5, ou uma combinação dos mesmos.

[0525] 75. O método da modalidade 74, em que o RNA não codifi- cante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA oxidase em uma planta de milho ou célula vegetal, sendo que a proteína endógena da GA oxidase é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 ou 33.

[0526] 76. O método da modalidade 74, em que o RNA não codifi- cante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 7, 8, 10, 11, 13, 14, 28, 29, 31 ou 32.

[0527] 77. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 76, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de amino- ácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 176 a 397.

[0528] 78. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 76, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de amino- ácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 398 a 452.

[0529] 79. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 76, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende um polipeptídeo de Phys- comitrella patens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1).

[0530] 80. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 76, em que a sequência de DNA compreendida no primeiro cassete de expres- são recombinante compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%,

pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169.

[0531] 81. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 76, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de amino- ácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 168.

[0532] 82. A planta de milho modificada da modalidade 65, em que o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante são esta- velmente integrados no genoma da célula de milho.

[0533] 83. O método da modalidade 65, que compreende ainda se- lecionar uma planta de milho modificada com um traço desejado.

[0534] 84. O método da modalidade 83, em que a planta de milho modificada selecionada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem o primeiro ou o segundo cassetes de expressão recombinante.

[0535] 85. O método da modalidade 83 ou 84, em que a seleção de uma planta de milho modificada com um traço desejado compreende o uso de uma ou mais técnicas moleculares.

[0536] 86. O método da modalidade 85, em que as uma ou mais técnicas moleculares são selecionadas do grupo que consiste em aná- lise Southern, amplificação por reação em cadeia da polimerase (PCR), Northern blots, proteção RNase, extensão do iniciador, PCR de trans- crição reversa (RT-PCR) , sequenciamento de Sanger, tecnologias de sequenciamento de Próxima Geração, ensaios enzimáticos, eletrofo- rese em gel de proteínas, Western blots, imunoprecipitação, imunoen- saios ligados a enzimas, hibridização in situ, coloração enzimática, imu- nocoloração, genotipagem de marcadores, e uma combinação dos mes- mos.

[0537] 87. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 86, em que a altura na maturidade da planta de milho modificada é reduzida em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65% ou pelo menos 70%, em relação a uma planta de milho controle.

[0538] 88. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 87, em que o diâmetro de talo ou de caule da planta de milho modificada é au- mentado em pelo menos 0,1%, pelo menos 0,2%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 1,5%, pelo menos 2%, pelo menos 2,5%, pelo menos 3%, pelo menos 3,5%, pelo menos 4%, pelo menos 4,5%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45% ou pelo menos 50%, em relação a uma planta de milho controle.

[0539] 89. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 88, em que a planta de milho modificada exibe um traço de espiga selecionado do grupo que consiste em aumento do diâmetro da espiga, aumento do peso de único caroço, aumento do peso fresco da espiga, aumento do número de flósculos e uma combinação dos mesmos, em relação a uma planta de milho controle.

[0540] 90. O método de qualquer uma das modalidades 65 a 88, em que a planta de milho modificada exibe um traço selecionado do grupo que consiste em raízes mais profundas, aumento da área foliar, fecha- mento mais precoce da copa, maior condutância estomática, menor al- tura de espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, teor e área de antocianina reduzidos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do índice de colheita, aumento de rendimento, aumento do número de semente, aumento de peso de semente, aumento de prolificidade, e uma combinação dos mesmos, em relação a uma planta de milho controle.

[0541] 91. Um método de produção de uma planta de milho modifi- cada, sendo que o método compreende: a. introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase em que a célula de milho compreende um segundo cassete de expressão recombinante que com- preende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO e/ou COL; e b. regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

[0542] 92. O método da modalidade 91, em que a introdução ocorre através de integração sítio-dirigida usando uma nuclease sítio-especí- fica.

[0543] 93. O método da modalidade 92, em que a nuclease sítio- específica é selecionada do grupo que consiste em uma endonuclease guiada por RNA, uma meganuclease, uma nuclease de dedo de zinco (ZFN), uma endonuclease TALE (TALEN), uma recombinase e uma transposase.

[0544] 94. O método da modalidade 91, em que a introdução ocorre através de transformação mediada por Agrobacterium.

[0545] 95. O método da modalidade 91, em que a introdução ocorre através de bombardeamento de partículas.

[0546] 96. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 95, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA3 oxidase_1, um gene da GA3 oxi- dase_2, ou ambos.

[0547] 97. O método da modalidade 96, em que a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0548] 98. O método da modalidade 96, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante que compreende uma sequência que é 80% complementar a pelo menos 15 nucleotídeos con- secutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0549] 99. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 95, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA20 oxidase.

[0550] 100. O método da modalidade 99, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA20 oxidase_3, um gene da GA20 oxidase_4, um gene da GA20 oxidase_5, ou uma combinação dos mesmos.

[0551] 101. O método da modalidade 100, em que o RNA não codi- ficante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos

97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA oxidase em uma planta de milho ou célula vegetal, sendo que a proteína endógena da GA oxidase é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 ou 33.

[0552] 102. O método da modalidade 100, em que o RNA não codi- ficante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 7, 8, 10, 11, 13, 14, 28, 29, 31 ou 32.

[0553] 103. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 102, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de ami- noácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 176 a 397.

[0554] 104. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 102, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de ami- noácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 398-452.

[0555] 105. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 102, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende um polipeptídeo de Physcomitrella patens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1).

[0556] 106. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 102, em que a sequência de DNA compreendida no segundo cassete de ex- pressão recombinante compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169.

[0557] 107. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 102, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de ami- noácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%,

pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO:

168.

[0558] 108. A planta de milho modificada da modalidade 91, em que o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante são esta- velmente integrados no genoma da célula de milho.

[0559] 109. O método da modalidade 91, que compreende ainda selecionar uma planta de milho modificada com um traço desejado.

[0560] 110. O método da modalidade 109, em que a planta de milho modificada selecionada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem o primeiro ou o segundo cassete de expressão recombinante.

[0561] 111. O método da modalidade 109 ou 110, em que a seleção de uma planta de milho modificada com um traço desejado compreende o uso de uma ou mais técnicas moleculares.

[0562] 112. O método da modalidade 111, em que as uma ou mais técnicas moleculares são selecionadas do grupo que consiste em aná- lise Southern, amplificação por PCR, Northern blots, proteção RNase, extensão do iniciador, RT-PCR , sequenciamento de Sanger, tecnolo- gias de sequenciamento de Próxima Geração, ensaios enzimáticos, ele- troforese em gel de proteínas, Western blots, imunoprecipitação, imu- noensaios ligados a enzimas, hibridização in situ, coloração enzimática, imunocoloração, genotipagem de marcadores, e uma combinação dos mesmos.

[0563] 113. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 112, em que a altura na maturidade da planta de milho modificada é reduzida em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65% ou pelo menos

70%, em relação a uma planta de milho controle.

[0564] 114. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 113, em que o diâmetro de talo ou de caule da planta de milho modificada é aumentado em pelo menos 0,1%, pelo menos 0,2%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 1,5%, pelo menos 2%, pelo menos 2,5%, pelo menos 3%, pelo menos 3,5%, pelo menos 4%, pelo menos 4,5%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45% ou pelo menos 50%, em relação a uma planta de milho controle.

[0565] 115. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 114, em que a planta de milho modificada exibe um traço de espiga selecio- nado do grupo que consiste em aumento do diâmetro da espiga, au- mento do peso de único caroço, aumento do peso fresco da espiga, au- mento do número de flósculos e uma combinação dos mesmos, em re- lação a uma planta de milho controle.

[0566] 116. O método de qualquer uma das modalidades 91 a 115, em que a planta de milho modificada exibe um traço selecionado do grupo que consiste em raízes mais profundas, aumento da área foliar, fechamento mais precoce da copa, maior condutância estomática, me- nor altura de espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, teor e área de antocianina reduzi- dos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do índice de colheita, aumento de rendimento, aumento do número de semente, aumento de peso de semente, aumento de prolificidade, e uma combi- nação dos mesmos, em relação a uma planta de milho controle.

[0567] 117. Um método de produção de uma planta de milho modi- ficada, sendo que o método compreende a. introduzir em uma célula de milho 1) um primeiro cassete de expres- são recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; e b. regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

[0568] 118. Um método de produção de uma planta de milho modi- ficada, sendo que o método compreende a. introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase; b. introduzir na célula de milho da etapa (a) um segundo cassete de expressão recombinante compreendendo uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL para criar uma célula de milho mo- dificada; e c. regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

[0569] 119. Um método de produção de uma planta de milho modi- ficada, sendo que o método compreende a. introduzir em uma célula de milho um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; b. introduzir na célula de milho da etapa (a) um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase para criar uma célula de milho modificada; c. regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

[0570] 120. Um método de produção de uma planta de milho modi- ficada, sendo que o método compreende: a. cruzar uma primeira planta de milho modificada com uma segunda planta de milho modificada, em que a expressão ou a atividade de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase é reduzida na primeira planta de milho modificada em relação a um con- trole do tipo selvagem, e em que a segunda planta de milho modificada compreende um cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; e b. produzir uma planta de milho descendente que compreende o cas- sete de expressão recombinante e tem a expressão reduzida do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

[0571] 121. O método da modalidade 120, em que a primeira e a segunda plantas de milho modificadas são obtidas através de integra- ção sítio-dirigida usando uma nuclease sítio-específica.

[0572] 122. O método da modalidade 121, em que a nuclease sítio- específica é selecionada do grupo que consiste em uma endonuclease guiada por RNA, uma meganuclease, uma nuclease de dedo de zinco (ZFN), uma endonuclease TALE (TALEN), uma recombinase e uma transposase.

[0573] 123. O método da modalidade 120, em que a primeira e a segunda plantas de milho modificadas são obtidas por transformação mediada por Agrobacterium.

[0574] 124. O método da modalidade 120, em que a primeira e a segunda plantas de milho modificadas são obtidas através de bombar- deamento de partículas.

[0575] 125. O método da modalidade 120 a 124, em que a primeira planta de milho modificada e a planta de milho descendente compre- ende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não co- dificante para a supressão de um gene da GA3 oxidase_1, um gene da GA3 oxidase_2, ou ambos.

[0576] 126. O método da modalidade 125, em que a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0577] 127. O método da modalidade 125, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante que compreende uma sequência que é 80% complementar a pelo menos 15 nucleotídeos con- secutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0578] 128. O método de qualquer uma das modalidades 120 a 124, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codifi- cante para a supressão de um gene da GA20 oxidase.

[0579] 129. O método da modalidade 128, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA20 oxidase_3, um gene da GA20 oxidase_4, um gene da GA20 oxidase_5, ou uma combinação dos mesmos.

[0580] 130. O método da modalidade 129, em que o RNA não codi- ficante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos

97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA oxidase em uma planta de milho ou célula vegetal, sendo que a proteína endógena da GA oxidase é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 ou 33.

[0581] 131. O método da modalidade 129, em que o RNA não codi- ficante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 7, 8, 10, 11, 13, 14, 28, 29, 31 ou 32.

[0582] 132. O método de qualquer uma das modalidades 120 a 131, em que a segunda planta de milho modificada e a planta de milho des- cendente compreendem um cassete de expressão recombinante com- preendendo uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL.

[0583] 133. O método da modalidade 132, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 176-

397.

[0584] 134. O método da modalidade 132, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 398 a 452.

[0585] 135. O método de qualquer uma das modalidades 120 a 131, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende um polipeptídeo de Physcomitrella patens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1).

[0586] 136. O método de qualquer uma das modalidades 120 a 131, em que a sequência de DNA compreendida na segunda planta de milho modificada compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169.

[0587] 137. O método de qualquer uma das modalidades 120 a 131,

em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de ami- noácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO:

168.

[0588] 138. O método da modalidade 120 que compreende ainda selecionar uma planta de milho descendente que tem um traço dese- jado.

[0589] 139. O método da modalidade 138, em que a planta de milho descendente selecionada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle.

[0590] 140. O método da modalidade 138 ou 139, em que a seleção de uma planta de milho descendente que tem um traço desejado com- preende o uso de uma ou mais técnicas moleculares.

[0591] 141. O método da modalidade 140, em que as uma ou mais técnicas moleculares são selecionadas do grupo que consiste em aná- lise Southern, amplificação por PCR, Northern blots, proteção RNase, extensão do iniciador, RT-PCR , sequenciamento de Sanger, tecnolo- gias de sequenciamento de Próxima Geração, ensaios enzimáticos, ele- troforese em gel de proteínas, Western blots, imunoprecipitação, imu- noensaios ligados a enzimas, hibridização in situ, coloração enzimática, imunocoloração, genotipagem de marcadores, e uma combinação dos mesmos.

[0592] 142. O método de qualquer uma das modalidades 120 a 141, em que a altura na maturidade da planta de milho descendente é redu- zida em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 5%, pelo menos

10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65% ou pelo me- nos 70%, em relação a uma planta de milho controle.

[0593] 143. O método de qualquer uma das modalidades 120 a 142, em que o diâmetro de talo ou de caule da planta de milho descendente é aumentado em pelo menos 0,1%, pelo menos 0,2%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 1,5%, pelo menos 2%, pelo menos 2,5%, pelo menos 3%, pelo menos 3,5%, pelo menos 4%, pelo menos 4,5%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45% ou pelo menos 50%, em relação a uma planta de milho controle.

[0594] 144. O método de qualquer uma das modalidades 120 a 143, em que a planta de milho descendente exibe um traço de espiga seleci- onado do grupo que consiste em aumento do diâmetro da espiga, au- mento do peso de único caroço, aumento do peso fresco da espiga, au- mento do número de flósculos e uma combinação dos mesmos, em re- lação a uma planta de milho controle.

[0595] 145. O método de qualquer uma das modalidades 120 a 144, em que a planta de milho descendente exibe um traço selecionado do grupo que consiste em raízes mais profundas, aumento da área foliar, fechamento mais precoce da copa, maior condutância estomática, me- nor altura de espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, teor e área de antocianina reduzi- dos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do índice de colheita, aumento de rendimento, aumento do número de semente,

aumento de peso de semente, aumento de prolificidade, e uma combi- nação dos mesmos, em relação a uma planta de milho controle.

[0596] 146. Um método de produção de uma planta de milho modi- ficada, sendo que o método compreende: a. introduzir em uma célula de milho um cassete de expressão recom- binante que compreende uma sequência de DNA que codifica um poli- peptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de ma- neira funcional a um promotor expressável em plantas, e em que a cé- lula de milho compreende uma ou mais mutações e/ou edições em um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou GA20 oxidase; e b. regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, c. em que a planta de milho modificada compreende o cassete de ex- pressão recombinante e uma ou mais mutações e/ou edições, e em que o nível de expressão ou atividade do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da oxidase GA20 na planta de milho modifi- cada é reduzido em relação a uma planta controle que não tem uma ou mais mutações e/ou edições.

[0597] 147. O método da modalidade 146, que compreende ainda introduzir um construto de DNA recombinante que codifica um RNA guia que alveja os um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

[0598] 148. O método da modalidade 147, em que o RNA guia com- preende uma sequência guia que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo me- nos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24 ou pelo menos 25 nucleotídeos consecutivos de uma sequência de DNA alvo no ou próximo ao locus genômico de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

[0599] 149. O método da modalidade 148, em que o RNA guia com- preende uma sequência guia que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo me- nos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24 ou pelo menos 25 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37 ou 38, ou uma sequência complementar à mesma.

[0600] 150. O método de qualquer uma das modalidades 147 a 149, em que o RNA guia é um RNA CRISPR (crRNA) ou um RNA guia de cadeia única (sgRNA).

[0601] 151. O método de qualquer uma das modalidades 147 a 150, em que o RNA guia compreende uma sequência complementar a uma sequência de motivo adjacente ao protoespaçador (PAM) presente no genoma da célula de milho imediatamente adjacente a uma sequência de DNA alvo no ou próximo ao locus genômico do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da oxidase GA20.

[0602] 152. O método de qualquer uma das modalidades 147 a 151, em que os um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase codificam uma proteína que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 ou 33.

[0603] 153. O método da modalidade 146, em que a introdução ocorre através de transformação mediada por Agrobacterium ou bom- bardeamento de partículas.

[0604] 154. O método da modalidade 153, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 176-

397.

[0605] 155. O método da modalidade 153, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 398-

452.

[0606] 156. O método da modalidade 153, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende um polipeptídeo de Physcomitrella patens se- melhante a CONSTANS 1 (PpCOL1).

[0607] 157. O método de qualquer uma das modalidades 146 a 156, em que a sequência de DNA compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169.

[0608] 158. O método de qualquer uma das modalidades 146 a 156,

em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de ami- noácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO:

168.

[0609] 159. Um método de produção de uma planta de milho modi- ficada, sendo que o método compreende: a. mutar ou editar um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou um ou mais genes da GA20 oxidase em uma célula de milho, em que a célula de milho compreende um cassete de expressão recombinante que codifica um polipeptídeo de CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas; e b. regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho,em que a planta de milho modificada compreende o cas- sete de expressão recombinante e uma ou mais mutações e/ou edições, e em que o nível de expressão ou atividade do um ou mais genes en- dógenos da GA3 oxidase e/ou genes da oxidase GA20 na planta de milho modificada é reduzido em relação a uma planta controle que não tem uma ou mais mutações e/ou edições.

[0610] 160. O método da modalidade 159, em que a mutação ou edição é obtida usando uma nuclease sítio-específica selecionada do grupo que consiste em uma endonuclease guiada por RNA, uma me- ganuclease, uma nuclease de dedo de zinco (ZFN), uma endonuclease TALE (TALEN), uma recombinase e uma transposase.

[0611] 161. O método da modalidade 159 ou 160, que compreende ainda introduzir um construto de DNA recombinante que codifica um RNA guia que alveja os um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

[0612] 162. O método da modalidade 161, em que o RNA guia com- preende uma sequência guia que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo me- nos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24 ou pelo menos 25 nucleotídeos consecutivos de uma sequência de DNA alvo no ou próximo ao locus genômico de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

[0613] 163. O método da modalidade 162, em que o RNA guia com- preende uma sequência guia que é pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo me- nos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24 ou pelo menos 25 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 34, 35, 36, 37 ou 38, ou uma sequência complementar à mesma.

[0614] 164. O método de qualquer uma das modalidades 161 a 163, em que o RNA guia é um RNA CRISPR (crRNA) ou um RNA guia de cadeia única (sgRNA).

[0615] 165. O método de qualquer uma das modalidades 161 a 164, em que o RNA guia compreende uma sequência complementar a uma sequência de motivo adjacente ao protoespaçador (PAM) presente no genoma da célula de milho imediatamente adjacente a uma sequência de DNA alvo no ou próximo ao locus genômico do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da oxidase GA20.

[0616] 166. O método de qualquer uma das modalidades 161 a 165,

em que os um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase codificam uma proteína que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 ou 33.

[0617] 167. O método da modalidade 159, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 176-

397.

[0618] 168. O método da modalidade 159, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 398-

452.

[0619] 169. O método da modalidade 159, em que o cassete de ex- pressão recombinante codifica um polipeptídeo de Physcomitrella pa- tens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1).

[0620] 170. O método da modalidade 159, em que o cassete de ex- pressão recombinante compreende uma sequência que é pelo menos

60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169.

[0621] 171. O método da modalidade 159, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 168.

[0622] 172. O método de qualquer uma das modalidades 159 a 171 que compreende ainda selecionar uma planta de milho modificada com um traço desejado.

[0623] 173. O método da modalidade 172, em que a altura na ma- turidade da planta de milho modificada é reduzida em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65% ou pelo menos 70%, em relação a uma planta de milho controle.

[0624] 174. O método da modalidade 173, em que o diâmetro de talo ou de caule da planta de milho modificada é aumentado em pelo menos 0,1%, pelo menos 0,2%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 1,5%, pelo menos 2%, pelo menos 2,5%, pelo menos 3%, pelo menos 3,5%, pelo menos 4%, pelo menos 4,5%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo me- nos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45% ou pelo menos 50%, em relação a uma planta de milho controle.

[0625] 175. O método de qualquer uma das modalidades 172 a 174, em que a planta de milho modificada exibe um traço de espiga selecio- nado do grupo que consiste em aumento do diâmetro da espiga, au- mento do peso de único caroço, aumento do peso fresco da espiga, au- mento do número de flósculos e uma combinação dos mesmos, em re- lação a uma planta de milho controle.

[0626] 176. O método de qualquer uma das modalidades 172 a 175, em que a planta de milho modificada exibe um traço selecionado do grupo que consiste em raízes mais profundas, aumento da área foliar, fechamento mais precoce da copa, maior condutância estomática, me- nor altura de espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, teor e área de antocianina reduzi- dos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do índice de colheita, aumento de rendimento, aumento do número de semente, aumento de peso de semente, aumento de prolificidade, e uma combi- nação dos mesmos, em relação a uma planta de milho controle.

[0627] 177. Uma planta de milho modificada que compreende 1) uma ou mais mutações ou edições em ou próximo as uma ou mais GA20 oxidase endógena e/ou Genes da GA3 oxidase, em que a expressão ou atividade de uma ou mais GA20 oxidase endógena e/ou Os genes da GA3 oxidase são reduzidos em relação a uma planta de controle do tipo selvagem e 2) um cassete de expressão recombinante compreendendo uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está operacionalmente ligada a um promotor expressável em planta.

[0628] 178. A planta de milho modificada da modalidade 177, em que a planta de milho modificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não compreende as uma ou mais mutações ou edições e o cassete de expressão recombinante.

[0629] 179. A planta de milho modificada da modalidade 177 ou 178, em que as uma ou mais mutações ou edições são selecionadas do grupo que consiste em uma inserção, uma substituição, uma inversão, uma deleção, uma duplicação, e uma combinação das mesmas.

[0630] 180. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 179, em que as uma ou mais mutações ou edições são introduzidas usando uma meganuclease, uma nuclease de dedo de zinco (ZFN), uma endonuclease guiada por RNA, uma TALE-endonu- clease (TALEN), uma recombinase ou uma transposase.

[0631] 181. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 180, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 176 a 397.

[0632] 182. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 180, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos

85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 398 a 452.

[0633] 183. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 180, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende um polipeptídeo de Physcomitrella patens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1).

[0634] 184. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 180, em que a sequência de DNA compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO:

169.

[0635] 185. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 180, o polipeptídeo CO ou COL compreende uma se- quência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 168.

[0636] 186. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 185, em que o cassete de expressão recombinante é estavelmente integrado no genoma da planta de milho modificada.

[0637] 187. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 186, em que a altura na maturidade da planta de milho modificada é reduzida em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65% ou pelo menos 70%, em relação a uma planta de milho controle.

[0638] 188. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 187, em que o diâmetro de talo ou de caule da planta de milho modificada é aumentado em pelo menos 0,1%, pelo menos 0,2%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 1,5%, pelo menos 2%, pelo menos 2,5%, pelo menos 3%, pelo menos 3,5%, pelo menos 4%, pelo menos 4,5%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45% ou pelo menos 50%, em rela- ção a uma planta de milho controle.

[0639] 189. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 188, em que a planta de milho modificada exibe resis- tência ao acamamento aprimorada, quebramento verde reduzido, ou ambos, em relação à planta de milho controle.

[0640] 190. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 189, em que a planta de milho modificada exibe área de espiga aumentada em relação a uma planta de milho controle.

[0641] 191. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 190, em que a planta de milho modificada exibe peso de único caroço aumentado em relação a uma planta de milho controle.

[0642] 192. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 191, em que a planta de milho modificada exibe peso fresco de espiga aumentado em relação a uma planta de milho controle.

[0643] 193. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 192, em que a planta de milho modificada exibe número aumentado de flósculos em relação a uma planta de milho controle.

[0644] 194. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades 177 a 193, em que a planta de milho modificada exibe um traço selecionado do grupo que consiste em raízes mais profundas, au- mento da área foliar, fechamento mais precoce da copa, maior condu- tância estomática, menor altura de espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, teor e área de antocianina reduzidos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do índice de colheita, aumento de rendimento, au- mento do número de semente, aumento de peso de semente, aumento de prolificidade, e uma combinação dos mesmos, em relação a uma planta de milho controle.

[0645] 195. A planta de milho modificada de qualquer uma das mo- dalidades de 177 a 194, em que a planta de milho modificada não tem plantas fora do padrão significativas em pelo menos um órgão feminino ou espiga.

[0646] 196. Uma pluralidade de plantas de milho modificadas em um campo, sendo que cada planta de milho modificada compreende a. uma ou mais mutações ou edições em ou próximo a um ou mais ge- nes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase, em que a expressão do um ou mais genes endógenos da GA20 oxidase e/ou genes da GA3 oxidase é reduzida em relação a uma planta controle do tipo selvagem, e b. um cassete de expressão recombinante que compreende uma se- quência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor ex- pressável em plantas.

[0647] 197. A pluralidade de plantas de milho modificadas da mo- dalidade 196, em que as plantas de milho modificadas têm rendimento aumentado em relação a plantas de milho controle.

[0648] 198. A pluralidade de plantas de milho modificadas da mo- dalidade 196 ou 197, em que as plantas de milho modificadas têm um aumento no rendimento que é pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo me- nos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, ou pelo menos 25% maior que as plantas de milho controle.

[0649] 199. Um construto de DNA recombinante que compreende 1) um primeiro cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a su- pressão de um ou mais genes da GA20 oxidase ou um ou mais genes da GA3 oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão que compre- ende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo de CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas.

[0650] 200. O construto de DNA recombinante da modalidade 199, em que o primeiro e o segundo cassetes de expressão estão em um único segmento de T-DNA de um vetor de transformação.

[0651] 201. O construto de DNA recombinante da modalidade 199, em que o primeiro e o segundo cassetes de expressão estão em dois segmentos de T-DNA diferentes de um vetor de transformação.

[0652] 202. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 201, em que a sequência de DNA transcritível codi- fica um RNA não codificante para a supressão de um gene da GA3 oxi- dase.

[0653] 203. O construto de DNA recombinante da modalidade 202, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codifi- cante para a supressão de um gene da GA3 oxidase_1, um gene da GA3 oxidase_2, ou ambos.

[0654] 204. O construto de DNA recombinante da modalidade 203, em que a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica ou complementar a pelo me- nos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotí- deos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0655] 205. O construto de DNA recombinante da modalidade 203, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codifi- cante que compreende uma sequência que é 80% complementar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36 e 37.

[0656] 206. O construto de DNA recombinante da modalidade 202, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codifi- cante para a supressão de um gene da GA20 oxidase.

[0657] 207. O construto de DNA recombinante da modalidade 206, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codifi- cante para a supressão de um gene da GA20 oxidase_3, um gene da GA20 oxidase_4, um gene da GA20 oxidase_5, ou uma combinação dos mesmos.

[0658] 208. O construto de DNA recombinante da modalidade 206, em que a sequência de DNA transcritível codifica um RNA não codifi- cante para a supressão de um gene da GA20 oxidase_3, um gene da GA20 oxidase_5, ou ambos.

[0659] 209. O construto de DNA recombinante da modalidade 208, em que a sequência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 80% idêntica ou complementar a pelo menos 15 nu- cleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 39, 53 ou 55.

[0660] 210. O construto de DNA recombinante da modalidade 209, em que a sequência de DNA transcritível codifica uma sequência que é pelo menos 80% idêntica ou complementar a pelo menos 15 nucleotí- deos consecutivos da SEQ ID NO: 40, 54 ou 56.

[0661] 211. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 210, em que o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos de uma molécula de mRNA que codifica uma proteína endógena da GA oxidase em uma planta de milho ou célula vegetal, sendo que a proteína endógena da GA oxidase é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 ou 33.

[0662] 212. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 211, em que o RNA não codificante compreende uma sequência que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos

90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% complementar a pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26 ou pelo menos 27 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID NO: 7, 8, 10, 11, 13, 14, 28, 29, 31 ou 32.

[0663] 213. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 212, em que a sequência de DNA compreendida no segundo cassete de expressão compreende uma sequência que codi- fica uma proteína que tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo me- nos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 176 a 397.

[0664] 214. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 212, em que a sequência de DNA compreendida no segundo cassete de expressão compreende uma sequência que codi- fica uma proteína que tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo me- nos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 398 a 452.

[0665] 215. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 212, em que a sequência de DNA compreendida no segundo cassete de expressão codifica um polipeptídeo de Physcomi- trella patens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1).

[0666] 216. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 212, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 168.

[0667] 217. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 212, em que a sequência de DNA compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO:

169.

[0668] 218. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 215, o promotor expressável em planta é um promo- tor vascular.

[0669] 219. O construto de DNA recombinante da modalidade 218, em que o promotor vascular é selecionado do grupo que consiste em um promotor de sacarose sintase, um promotor de transporte de saca- rose, um promotor Sh1, um promotor CoYMV, um promotor de grande região intergênica (LIR) de WDV, um promotor de polipeptídeo de re- vestimento (CP) de MSV, um promotor semelhante à faixa amarela do arroz 1 (YS1), um promotor de faixa amarela do arroz 2 (OsYSL2), e uma combinação dos mesmos.

[0670] 220. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 215, em que o promotor expressável em plantas é um promotor de RTBV.

[0671] 221. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 215, em que o promotor expressável em plantas é um promotor foliar.

[0672] 222. O construto de DNA recombinante da modalidade 221, em que o promotor foliar é selecionado do grupo que consiste em um promotor de RuBisCO, um promotor de PPDK, um promotor de FDA, um promotor de Nadh-Gogat, um promotor do gene polipeptídico de li- gação à clorofila a/b, um promotor da PEPC, um promotor do gene Myb, e uma combinação dos mesmos.

[0673] 223. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 215, em que o promotor expressável em plantas é um promotor constitutivo.

[0674] 224. O construto de DNA recombinante da modalidade 223, em que o promotor constitutivo é selecionado do grupo que consiste em um promotor de actina, um promotor CaMV 35S ou 19S, um promotor de ubiquitina vegetal, um promotor Gos2 vegetal, um promotor FMV, um promotor CMV, um promotor MMV, um promotor PCLSV, um promotor Emu, um promotor de tubulina, um promotor de nopalina sintase, um promotor de octopina sintase, um promotor de manopina sintase ou uma álcool desidrogenase de maís, uma porção funcional dos mesmos, e uma combinação dos mesmos.

[0675] 225. O construto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a 215, em que o promotor expressável em plantas compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 80%, pelo me- nos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 172 ou uma porção funcional da mesma.

[0676] 226. O construto de DNA recombinante da modalidade 199, em que o RNA não codificante é um miRNA ou um siRNA precursor capaz de ser processado ou clivado para formar um miRNA ou um siRNA maduro.

[0677] 227. Um vetor de transformação que compreende o cons- truto de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 199 a

226.

[0678] 228. Uma planta de milho modificada ou uma parte de planta da mesma que compreende o construto de DNA recombinante da mo- dalidade 227.

[0679] 229. A planta de milho modificada da modalidade 228, em que a planta de milho modificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem tanto o primeiro como o segundo cassetes de expressão.

[0680] 230. A planta de milho modificada da modalidade 229, em que a altura na maturidade da planta de milho modificada é reduzida em pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65% ou pelo menos 70%, em relação à planta de milho controle.

[0681] 231. A planta de milho modificada da modalidade 229, em que o diâmetro de talo ou de caule da planta de milho modificada é au- mentado em pelo menos 0,1%, pelo menos 0,2%, pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 1,5%, pelo menos 2%, pelo menos 2,5%, pelo menos 3%, pelo menos 3,5%, pelo menos 4%, pelo menos 4,5%,

pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45% ou pelo menos 50%, em relação a uma planta de milho controle.

[0682] 232. A planta de milho modificada da modalidade 229, em que a planta de milho modificada exibe resistência ao acamamento apri- morada, quebramento verde reduzido, ou ambos, em relação à planta de milho controle.

[0683] 233. A planta de milho modificada da modalidade 229, em que a planta de milho modificada exibe área de espiga aumentada em relação a uma planta de milho controle.

[0684] 234. A planta de milho modificada da modalidade 229, em que a planta de milho modificada exibe peso de único caroço em relação a uma planta de milho controle.

[0685] 235. A planta de milho modificada da modalidade 229, em que a planta de milho modificada exibe peso fresco de espiga aumen- tado em relação a uma planta de milho controle.

[0686] 236. A planta de milho modificada da modalidade 229, em que a planta de milho modificada exibe número aumentado de flósculos em relação a uma planta de milho controle.

[0687] 237. A planta de milho modificada da modalidade 229, em que a planta de milho modificada exibe um traço selecionado do grupo que consiste em raízes mais profundas, aumento da área foliar, fecha- mento mais precoce da copa, maior condutância estomática, menor al- tura de espiga, maior teor de água foliar, maior tolerância à seca, maior eficiência no uso de nitrogênio, teor e área de antocianina reduzidos nas folhas sob condições normais ou de estresse por limitação de nitrogênio ou de água, aumento do peso da espiga, aumento do índice de colheita, aumento de rendimento, aumento do número de semente, aumento de peso de semente, aumento de prolificidade, e uma combinação dos mesmos, em relação à planta de milho controle.

[0688] 238. A planta de milho modificada da modalidade 229, em que a planta de milho modificada não tem plantas fora do padrão signi- ficativas em pelo menos um órgão feminino ou espiga.

[0689] 239. Uma molécula modelo doadora de DNA recombinante para integração sítio-dirigida de uma sequência de inserção no genoma de uma planta de milho que compreende uma sequência de inserção e pelo menos uma sequência de homologia, em que a sequência de ho- mologia é pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 99% ou 100% complementar a pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 70, pelo menos 80, pelo menos pelo menos 90, pelo menos 100, pelo menos 150, pelo menos 200, pelo menos 250, pelo menos 500, pelo menos 1000, pelo menos 2500 ou pelo menos 5000 nucleotídeos consecutivos de uma sequência de DNA alvo no genoma de uma célula de planta de milho, e em que a sequência de inserção compreende um cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funci- onal a um promotor expressável em plantas.

[0690] 240. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 239, que compreende duas das sequências de homologia, em que as duas sequências de homologia flanqueiam a sequência de inserção.

[0691] 241. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 239 ou 240, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos

81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 176 a 397.

[0692] 242. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 239 ou 240, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 398 a 452.

[0693] 243. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 239 ou 240, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende um polipeptídeo de Physcomitrella patens semelhante a CONSTANS 1 (PpCOL1).

[0694] 244. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 239 ou 240, em que sequência de DNA compreendida no cassete de expressão compreende uma sequência que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 169.

[0695] 245. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 239 ou 240, em que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 168.

[0696] 246. A molécula de modelo de doador de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 239 a 245, em que o promotor ex- pressável em plantas compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 172 ou uma porção fun- cional da mesma.

[0697] 247. A molécula modelo doadora de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 239 a 246, que compreende ainda uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA20 oxidase e/ou um ou mais genes da GA3 oxidase, em que a sequência de DNA transcritível está ligada de maneira funcional a um promotor.

[0698] 248. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 247, em que o promotor é um promotor vascular.

[0699] 249. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 248, em que o promotor vascular é selecionado do grupo que consiste em um promotor de sacarose sintase, um promotor de transporte de sacarose, um promotor Sh1, promotor do vírus do mos-

queado amarelo de Commelina (CoYMV), um promotor de grande re- gião intergênica (LIR) de geminivírus anão do trigo (WDV), um promotor de polipeptídeo de revestimento (CP) de geminivírus das estrias de maís (MSV), um promotor semelhante à faixa amarela do arroz 1 (YS1), um promotor de faixa amarela do arroz 2 (OsYSL2), e uma combinação dos mesmos.

[0700] 250. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 249, em que o promotor vascular compreende uma sequên- cia de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais dentre a SEQ ID NO: 67, a SEQ ID NO: 68, a SEQ ID NO: 69, a SEQ ID NO: 70 ou a SEQ ID NO: 71, ou uma porção funcional da mesma.

[0701] 251. A molécula modelo doadora de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 239 a 245, em que o promotor é um promotor do vírus baciliforme do arroz tungro (RTBV).

[0702] 252. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 251, em que o promotor de RTBV compreende uma se- quência de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a um ou mais dentre a SEQ ID NO: 65 ou a SEQ ID NO: 66, ou uma porção funcional da mesma.

[0703] 253. A molécula modelo doadora de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 239 a 245, em que o promotor é um promotor foliar.

[0704] 254. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 253, em que o promotor foliar é selecionado do grupo que consiste em um promotor de RuBisCO, um promotor de piruvato fosfato diquinase (PPDK), um promotor de frutose 1-6 bisfosfato aldolase

(FDA), um promotor de Nadh-Gogat, promotor do gene polipeptídico de ligação à clorofila a/b, um promotor de fosfoenolpiruvato carboxilase (PEPC), um promotor de gene Myb, e uma combinação dos mesmos.

[0705] 255. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 254, em que o promotor foliar compreende uma sequência de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica a um ou mais dentre a SEQ ID NO: 72, a SEQ ID NO: 73 ou a SEQ ID NO: 74, ou uma porção funcional da mesma.

[0706] 256. A molécula modelo doadora de DNA recombinante de qualquer uma das modalidades 239 a 245, em que o promotor é um promotor constitutivo.

[0707] 257. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 256, em que o promotor constitutivo é selecionado do grupo que consiste em um promotor de actina, um promotor 35S ou 19S do vírus do mosaico da couve-flor (CaMV), um promotor de ubiquitina ve- getal, um promotor Gos2 vegetal, um promotor do vírus do mosaico da escrofulária (FMV), um promotor de citomegalovírus (CMV), um promo- tor do vírus do mosaico mirabilis (MMV), um promotor de caulimovírus das estrias cloróticas de amendoim (PCLSV), um promotor Emu, um promotor de tubulina, um promotor de nopalina sintase, um promotor de octopina sintase, um promotor de manopina sintase ou uma álcool de- sidrogenase de maís, uma porção funcional dos mesmos, e uma com- binação dos mesmos.

[0708] 258. A molécula modelo doadora de DNA recombinante da modalidade 257, em que o promotor constitutivo compreende uma se- quência de DNA que é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica as uma ou mais das SEQ ID NOs: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82 ou SEQ ID NO: 83, ou uma porção funcional da mesma

[0709] 259. A planta de milho modificada da modalidade 1, em que o primeiro cassete de expressão recombinante compreende a SEQ ID NO: 39 e o segundo cassete de expressão recombinante compreende a SEQ ID NO: 169.

[0710] 260. A planta de milho modificada da modalidade 259, em que a planta de milho modificada é semianã e exibe um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta controle que não com- preende o primeiro ou o segundo cassete de expressão recombinante.

[0711] 261. A planta de milho modificada da modalidade 260, em que o um ou mais traços de espiga aprimorados são selecionados do grupo que consiste em área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, caroços por espiga, peso de caroço único, estimativa de rendimento de grãos, amplo rendimento de super- fície cultivada e uma combinação dos mesmos.

[0712] 262. Uma planta de milho modificada ou uma parte de planta da mesma que compreende 1) uma primeira sequência de DNA trans- critível que compreende SEQ ID NO: 39, e 2) uma segunda sequência de DNA transcritível que compreende SEQ ID NO: 169.

[0713] 263. A planta de milho modificada da modalidade 262, em que a planta de milho modificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem a primeira ou a segunda sequência de DNA transcritível.

[0714] 264. A planta de milho modificada da modalidade 263, em que o um ou mais traços de espiga aprimorados são selecionados do grupo que consiste em área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, caroços por espiga, peso de caroço único, estimativa de rendimento de grãos, amplo rendimento de super- fície cultivada e uma combinação dos mesmos.

[0715] 265. Um método de produção de uma planta de milho modi- ficada, sendo que o método compreende a. introduzir em uma célula de milho um cassete de expressão recom- binante que compreende uma primeira sequência de DNA transcritível que compreende a SEQ ID NO: 39 e uma segunda sequência de DNA transcritível que compreende a SEQ ID NO: 169; b. regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada compreende a primeira e a segunda sequências de DNA transcritíveis.

[0716] 266. O método da modalidade 265, em que a planta de milho modificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem a primeira ou a segunda sequência de DNA transcritível.

[0717] 267. O método da modalidade 266, em que o um ou mais traços de espiga aprimorados são selecionados do grupo que consiste em área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, caroços por espiga, peso de caroço único, estimativa de ren- dimento de grãos, amplo rendimento de superfície cultivada e uma com- binação dos mesmos.

[0718] 268. Um cassete de expressão recombinante que compre- ende 1) uma primeira sequência de DNA transcritível compreendendo SEQ ID NO: 39 e 2) uma segunda sequência de DNA transcritível com- preendendo SEQ ID NO: 169. EXEMPLOS: EXEMPLO 1. GERAÇÃO DAS PLANTAS DE PILHA DE GA20Ox_SUP / PpCOL

[0719] Uma linhagem de milho endogâmica foi transformada atra- vés de transformação mediada por Agrobacterium com um vetor de transformação que tem um construto de expressão que compreende uma sequência de DNA que codifica miRNA (SEQ ID NO: 39) que codi- fica uma sequência alvo (SEQ ID NO: 40) sob o controle de um promotor do vírus baciliforme de arroz tungro (RTBV) (SEQ ID NO: 65) conhecido por causar a expressão em tecidos vasculares de plantas. O miRNA codificado pelo construto compreende uma sequência de RNA que al- veja os genes da GA20 oxidase_3 e os genes da GA20 oxidase_5 em plantas de milho. Vários eventos de transformação foram gerados a par- tir disto. A linhagem endogâmica transformada/transgênica resultante é chamada no presente documento de GA20Ox_SUP ou unidade de GA20Ox_SUP.

[0720] Similarmente, uma linhagem de milho endogâmica foi trans- formada através de transformação mediada por Agrobacterium com um vetor de transformação que tem um construto de expressão que com- preende um transgene (SEQ ID NO: 169) que codifica o polipeptídeo de Physcomitrella patens semelhante a CONSTANS (PpCOL) (SEQ ID NO: 168). O construto de expressão compreende um intensificador de Oryza sativa (SEQ ID NO: 170), um intensificador de CaMV 35S (SEQ ID NO: 171), um promotor de Oryza sativa (SEQ ID NO: 172), uma sequência líder (SEQ ID NO: 173), uma sequência de íntron (SEQ ID NO: 174) e uma sequência terminadora (SEQ ID NO: 175). Diversos eventos de transformação foram gerados a partir dos mesmos. A linhagem endogâ- mica transformada/transgênica resultante é chamada no presente docu- mento de PpCOL, planta transgênica de PpCOL ou unidade de PpCOL. PpCOL1 e PpCOL são usados de forma intercambiável.

[0721] As unidades de GA20Ox_SUP e PpCOL parentais foram cru- zados para criar uma planta descendente transgênica empilhada que compreende o transgene PpCOL e a sequência de DNA que codifica miRNA para a supressão de genes da GA20 oxidase_3 e GA20 oxi-

dase_5. A linha transgênica empilhada resultante é chamada no pre- sente documento de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL. A pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL pode ser uma pilha endogâmica, se as linha- gens parentais forem da mesma origem da linha endogâmica ou um hí- brido quando as linhagens parentais forem de endogamias diferentes.

[0722] Para cada tipo de plantas transgênicas de unidade e pilha, as plantas controle correspondentes também foram produzidas para comparação com a mesma linhagem endogâmica ou a mesma combi- nação de linhagem parental, porém sem os construtos transgênicos GA20Ox_SUP e PpCOL. EXEMPLO 2. ALTURA REDUZIDA DAS PLANTAS DE PILHA DE GA20Ox_SUP / PpCOL

[0723] As plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL foram cultiva- das até a maturidade em um campo sob a prática agronômica padrão e suas alturas são medidas. A altura da planta foi medida como a média da parcela da linha do solo até a base da folha de coleira mais alta no estágio R3. Um número suficiente de plantas foi medido para atingir a significância estatística com valor de p <0,2. As plantas controle das mesmas linhagens parentais, porém sem os construtos transgênicos GA20Ox_SUP e PpCOL também foram cultivadas sob condições simi- lares.

[0724] A redução de altura de planta média para cada uma das qua- tro combinações de eventos de pilha de reprodução ou cruzamento dos transgenes GA20Ox_SUP / PpCOL (“Pilha 1” à “Pilha 4”) é mostrada na FIG. 1 em relação a plantas controle. Conforme mostrado na FIG. 1, uma redução estatisticamente significativa na altura de planta com uma média entre 30 a 35% foi consistentemente observada em plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL em relação a plantas controle. EXEMPLO 3. TRAÇOS DE ESPIGA APRIMORADOS DE PLANTAS DE UNIDADE DE PpCOL

[0725] As plantas transgênicas de unidade e pilha, juntamente com as plantas controle conforme descrito no Exemplo 1, foram cultivadas sob a prática agronômica padrão. Para unidades de GA20Ox_SUP e PpCOL, plantas de dois a quatro eventos de transformação foram esco- lhidas, com combinações de eventos correspondentes na pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL. Diversos traços de espiga de milho foram me- didos no estágio R6.

[0726] A área de espiga é medida como a média da parcela do ta- manho da área de uma espiga a partir de uma vista bidimensional. A medição é conduzida por meio da imaginologia da espiga, incluindo ca- roços e vazio. Tipicamente, 10 espigas representativas são medidas por parcela. O peso fresco de espiga é medido como a média da parcela do peso de espiga de uma planta no estágio R6.

[0727] A estimativa do rendimento de grãos é medida como a con- versão do peso dos grãos colhidos à mão por área, coletada em uma pequena seção de uma parcela, no equivalente de bushels por acre, incluindo o ajuste para um nível de umidade padrão.

[0728] O peso de único caroço é medido como a média de parcela de peso por caroço, calculado como a razão entre (peso do caroço da amostra ajustado para um nível de umidade padrão)/(número de caroço de amostra). O número de caroços de amostra varia de 350 a 850.

[0729] A FIG. 2 mostra resultados de traço de espiga para plantas de unidade de PpCOL de quatro eventos de transformação em uma es- tação de cultivo. Os resultados foram mostrados como a porcentagem de diferença (delta) entre as plantas de unidade de PpCOL e as plantas controle da mesma endogamia sem o construto transgênico PpCOL. As barras cinza escuro na FIG. 2 são indicativas de uma diferença estatis- ticamente significativa na área de espiga, estimativa do rendimento de grãos e peso de único caroço em relação a plantas controle (valor p ≤ 0,2). A barra cinza claro é indicativa de aprimoramento numericamente positivo na estimativa do rendimento de grãos.

[0730] Como mostrado na FIG. 2, aprimoramentos ou aumentos es- tatisticamente significativos na área de espiga, estimativa do rendimento de grãos e peso de único caroço em relação a plantas controle foram observados em todos os quatro eventos de transformação de unidade de PpCOL (“Evento 1” a “Evento 4”), com a exceção de que o Evento 2 mostrou uma tendência ou aumento não estatisticamente significativo na estimativa do rendimento de grãos. EXEMPLO 4. ÁREA DE ESPIGA E PESO DE ÚNICO CAROÇO APRI- MORADOS DAS PLANTAS DE PILHA DE GA20Ox_SUP / PpCOL

[0731] Os traços de espiga foram medidos com plantas de unidade de GA20Ox_SUP, unidade de PpCOL e pilha de GA20Ox_SUP/PpCOL, e efeitos ou traços positivos foram observados quanto os construtos GA20Ox_SUP e PpCOL estavam presentes em uma planta. Como mos- trado na FIG. 3, a área de espiga e o peso de único caroço foram medi- dos em dois eventos da unidade de GA20OX_SUP, dois eventos da unidade de PpCOL e quatro combinações de eventos de pilha de repro- dução dos transgenes GA20Ox_SUP / PpCOL cultivados em uma única estação de cultivo, com cada barra indicando um evento de transforma- ção. As barras cinza escuro na FIG. 3 são indicativas de alterações po- sitivas estatisticamente significativas (valor p ≤ 0,2), e as barras cinza claro são indicativas de alterações numericamente positivas ou negati- vas, mas não estatisticamente significativas. O asterisco (*) indica alte- rações significativas (valor p ≤ 0,2).

[0732] Os efeitos positivos foram observados nas plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL. Como mostrado na FIG. 3, eventos de uni- dade de PpCOL demonstraram área de espiga e peso de único caroço aprimorados em relação a plantas controle. As plantas de unidade de PpCOL e unidade de GA20Ox_SUP mostraram, cada uma, uma área de espiga significativamente aumentada em relação a plantas controle,

e as plantas de unidade de PpCOL mostraram peso de único caroço aumentado em relação a plantas controle. As plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL também demostraram um aumento estatistica- mente significativo na área de espiga em relação a plantas controle. Além disto, o aumento médio na área de espiga com as quatro combi- nações de evento de pilha de reprodução nas plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL foi maior do que este das plantas de unidade de PpCOL ou unidade de GA20Ox_SUP. Similarmente, as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL tiveram um peso de único caroço au- mentado em relação ao controle, em comparação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP.

[0733] Estes resultados mostram que as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL têm traços de espiga aprimorados, tais como área de espiga e peso de único caroço aumentados, em comparação às plantas controle, plantas de unidade de PpCOL e/ou plantas de unidade de GA20Ox_SUP. EXEMPLO 5. PESO FRESCO DE ESPIGA AUMENTADO DAS PLAN- TAS DE PILHA DE GA20Ox_SUP / PpCOL

[0734] A FIG. 4 fornece a diferença percentual no peso fresco de espiga de plantas de unidade de PpCOL, unidade de GA20Ox_SUP e pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL em relação a plantas controle através de três estações de cultivo consecutivas. Cada barra na FIG. 4 é para um evento único ou uma combinação empilhada de eventos de trans- formação. As barras cinza escuro ou aquelas com um asterisco (*) são indicativas de diferenças positivas ou negativas estatisticamente signifi- cativas (valor p ≤ 0,2), e as barras cinza são indicativas de aprimora- mentos ou diferenças numericamente positivas ou negativas, mas não estatisticamente significativas (aumento ou diminuição).

[0735] Embora as plantas de unidade de PpCOL e unidade de GA20Ox_SUP tenham mostrado variação no peso fresco de espiga ao longo de três anos, as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL mos- traram aprimoramento consistente e significativo do peso fresco de es- piga em relação às plantas controle, ao longo de anos e combinações de eventos. O aumento no peso fresco de espiga com plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL sugere que as plantas contendo a combina- ção de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL poderia ter rendimento aprimo- rado e/ou estabilizado através de estações de cultivo e ambientes. EXEMPLO 6. NÚMERO AUMENTADO DE FLÓSCULOS NAS PLAN- TAS DE PILHA DE GA20Ox_SUP / PpCOL

[0736] Uma análise fenotípica foi conduzida em espigas de estágio R1 coletadas de plantas de unidade de GA20Ox_SUP, unidade de PpCOL e pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL, juntamente com as plantas controle. O número de flósculos é um indicador precoce do número de caroços de milho potenciais. Cinco plantas e espigas por genó- tipo/evento foram usadas para amostrar o número total de flósculos de espiga não polinizados no estágio R1. Para calcular os números de flós- culos totais, as espigas R1 foram dissecadas de cada planta, e, para cada espiga, o número de flósculos longitudinais (número de classifica- ção) foi multiplicado pelo número de flósculos através do diâmetro da espiga (número de fileira). Um teste t de Student foi, então, conduzido para analisar e agrupar os resultados.

[0737] Como mostrado na FIG. 5, todas as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL (e uma planta de unidade de PpCOL) mostra- ram um aumento estatisticamente significativo no número de flósculos por espiga em relação às plantas controle e/ou plantas de unidade de GA20Ox_SUP. EXEMPLO 7. IDENTIFICAÇÃO DE HOMÓLOGOS DE GENE CONS- TANS (CO) E SEMELHANTE A CONSTANS (COL).

[0738] Sessenta e oito homólogos de CONSTANS (CO) e seme- lhante a CONSTANS (COL) foram identificados a partir de Arabidopsis,

arroz, soja e cevada, e as sequências de proteína CO/COL foram adici- onalmente pesquisadas no Genbank® para identificar homólogos adici- onais de CO/COL de várias espécies de planta usando BlastP (corte de valor e de 1e-10). Os resultados de pesquisa preliminares foram, então, filtrados para identificar aqueles que têm uma sequência de aminoáci- dos completa com uma metionina inicial e um domínio CCT (HMMSE- ARCH vs. CCT Pfam, usando corte de limite de coleta) e um ou dois domínios de B-box de dedo de zinco (HMMERSEARCH vs. zf-B_box Pfam, usando corte de limite de coleta). Os resultados compilados des- tas pesquisas incluem proteínas que têm as seguintes sequências de aminoácidos: SEQ ID NOs: 176 a 397 (domínio de B-box único) e SEQ ID NOs: 398 a 452 (dois domínios de B-box). EXEMPLO 8. NÚMERO DE FOLHAS VERDES PARA PLANTAS DE PILHA DE GA20OX_SUP/PpCOL DURANTE O ESTÁGIO REPRODU-

TIVO POSTERIOR

[0739] O número de folhas verdes durante os estágios reprodutivos pode ter um impacto no rendimento de milho. A FIG. 6 mostra a média da parcela do número de folhas verdes em 0, 7 e 14 dias após o início do estágio R5 para plantas de unidade de GA20Ox_SUP, unidade de PpCOL e pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL. Os dados na FIG. 6 são apresentados como a diferença (ou delta) entre as plantas transgênicas e o controle.

[0740] Como mostrado na FIG. 6, o número de folhas verdes das plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL foi similar ao número de folhas verdes nas plantas de controle durante o estágio R5 no dia 0 e no dia 7, com uma ligeira redução no número de folhas verdes durante o estágio R5 no dia 14 em relação a plantas controle, e o número de folhas verdes em plantas de unidade de GA20Ox_SUP foi ligeiramente menor do que as plantas controle durante o estágio de desenvolvimento R5.

EXEMPLO 9. FLORESCIMENTO E DESPRENDIMENTO DE PÓLEN NAS PLANTAS DE PILHA DE GA20Ox_SUP / PpCOL

[0741] A variação no tempo de fluidez e diferenças na temporização entre desprendimento de pólen e emergência de empalhamento podem impactar os rendimentos de milho.

[0742] Como usado no presente documento, os dias para 50% de desprendimento de pólen (ou dias para pólen) medem o número de dias entre o plantio e o dia quando 50% das plantas atingem o estágio de desprendimento de pólen. Os dias para 50% de empalhamento visível (ou dias para empalhamento) medem o número de dias entre o plantio e o dia quando 50% das plantas atingem empalhamento visível no es- tágio R1. O intervalo de antese-empalhamento (ASI) mede os dias entre a polinização e o empalhamento para 50% das plantas. Um ASI menor (isto é, mais próximo a zero) tende a ter um efeito relativamente positivo no rendimento de milho.

[0743] O intervalo de antese-empalhamento (ASI), número de dias para pólen desprendido e número de dias para empalhamento de plan- tas de unidade de GA20Ox_SUP (um evento), plantas de unidade de PpCOL (dois eventos) e plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL (duas combinações de eventos) foram medidos e comparados a plantas controle. Os resultados são mostrados na FIG. 7 como a diferença (em dias) em ASI, dias para pólen ou dias para empalhamento, para cada uma das plantas de unidade ou pilha em relação a plantas controle. As barras com um asterisco (*) são indicativas de uma diferença estatisti- camente significativa em relação às plantas controle não transgênicas (valor p ≤ 0,2).

[0744] Como mostrado na FIG. 7, as plantas de unidade de PpCOL levam mais dias para pólen e mais dias para empalhamento do que as plantas controle, e as plantas de unidade de GA20Ox_SUP levam me- nos dias para pólen e empalhamento em relação às plantas controle

(embora as diferenças em ambos os casos sejam relativamente peque- nas). Entretanto, a temporização para empalhamento visível e pólen desprendido para as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL foi mais similar ou mais próxima do que esta das plantas controle em compara- ção às plantas de unidade de GA20Ox_SUP e unidade de PpCOL, com um valor delta de ASI relativamente neutro (em relação a plantas con- trole) do que as plantas de unidade de GA20Ox_SUP. EXEMPLO 10. TRAÇOS DE ESPIGA APRIMORADOS NAS PLANTAS DE PILHA DE GA20Ox_SUP / PpCOL

[0745] Os traços de espiga incluindo área de espiga, volume de es- piga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, grãos por espiga e peso de único caroço foram medidos em uma única estação de cultivo para plantas de unidade de GA20Ox_SUP, unidade de PpCOL e pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL, adicionalmente às plantas controle.

[0746] A FIG. 8 fornece os resultados de traço de espiga deste ex- perimento como a diferença (delta) destes traços para plantas de uni- dade de PpCOL (dois eventos), plantas de unidade de GA20Ox_SUP (um evento) e plantas de pilha de reprodução de GA20Ox_SUP / PpCOL (duas combinações de eventos), em relação a plantas controle (que não contêm os transgenes), com cada barra indicando um evento de transformação (unidade) ou combinação de eventos (pilha). As bar- ras cinza escuro na FIG. 8 são indicativas de alterações significativa- mente positivas ou negativas (valor p ≤ 0,2), e as barras cinza claro são indicativas de alterações numericamente positivas ou negativas, todas comparadas a plantas controle que não contêm os transgenes.

[0747] Como mostrado na FIG. 8, os eventos de unidade de PpCOL demonstraram área de espiga, volume de espiga (um evento) e compri- mento de espiga estatisticamente significativos aprimorados ou aumen- tados, com um aumento numericamente positivo em peso de único ca- roço, em relação a plantas controle, e um efeito negativo potencial no número de grãos por espiga, em relação a plantas controle. As plantas de unidade de GA20Ox_SUP mostraram um uma área de espiga, vo- lume de espiga, diâmetro de espiga e comprimento de espiga aumenta- dos estatisticamente significativos, em relação a plantas controle. En- tretanto, as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL demonstraram um aumento estatisticamente significativo na área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga e peso de único caroço, em relação a plantas controle. As plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL também mostraram um aumento numérico nos grãos por espiga, em relação a plantas controle. Além disto, o aumento médio na área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, com- primento de espiga, grãos por espiga e peso de único caroço das plan- tas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL em relação a plantas controle foi maior do que este das plantas de unidade de PpCOL ou unidade de GA20Ox_SUP.

[0748] Estes resultados demonstram que as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL têm traços de espiga aprimorados, como área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, comprimento de es- piga, grãos por espiga e peso de único caroço aumentados, em compa- ração a plantas controle, plantas de unidade de PpCOL e/ou plantas de unidade de GA20Ox_SUP. EXEMPLO 11. ESTIMATIVA DO RENDIMENTO DE GRÃOS AUMEN- TADA NAS PLANTAS DE PILHA DE GA20Ox_SUP / PpCOL

[0749] A estimativa do rendimento de grãos foi medida para plantas de unidade de GA20Ox_SUP, unidade de PpCOL e pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL, adicionalmente às plantas controle.

[0750] A estimativa do rendimento de grãos foi medida (libras/acre) para plantas de unidade de GA20Ox_SUP (um evento), plantas de uni- dade de PpCOL (dois eventos) e plantas de pilha de GA20Ox_SUP /

PpCOL (duas combinações de eventos) cultivadas em uma única esta- ção de cultivo, com cada barra indicando um evento de transformação ou combinação de eventos. Os resultados são mostrados na FIG. 9 como uma porcentagem de diferença na estimativa do rendimento de grãos em comparação a plantas controle do tipo selvagem. As barras cinza escuro na FIG. 9 são indicativas de alterações estatisticamente significativas (valor p ≤ 0,2), e as barras cinza claro são indicativas de alterações numericamente positivas ou negativas, todas comparadas a plantas controle do tipo selvagem.

[0751] Como mostrado na FIG. 9, embora as plantas de unidade de PpCOL para pelo menos um evento tenham demonstrado uma estima- tiva do rendimento de grãos negativo neste experimento, em relação a plantas controle, as plantas de unidade de GA20Ox_SUP mostraram uma estimativa do rendimento de grãos aumentada, em relação a plan- tas controle. As plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL demonstra- ram um aumento estatisticamente significativo na estimativa do rendi- mento de grãos, em relação a plantas controle, com um aumento médio que foi maior do que este das plantas de unidade de PpCOL ou unidade de GA20Ox_SUP.

[0752] Estes resultados indicam que as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL têm estimativa do rendimento de grãos aprimo- rada, em comparação a plantas controle, plantas de unidade de PpCOL e/ou plantas de unidade de GA20Ox_SUP. EXEMPLO 12. TRAÇOS DE ESPIGA APRIMORADOS NAS PLANTAS DE PILHA DE GA20Ox_SUP / PpCOL

[0753] Os traços de espiga foram medidos com plantas de unidade de GA20Ox_SUP, unidade de PpCOL e pilha de GA20Ox_SUP/PpCOL. Os traços de espiga incluindo área de espiga, volume de espiga, com- primento de espiga, grãos por espiga e peso de único caroço foram me- didos em duas combinações de eventos de pilha de reprodução das plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL cultivadas em uma única estação de cultivo, com cada barra representando uma combinação de eventos de transformação. As barras cinza escuro na FIG. 10 são indi- cativas de alterações estatisticamente significativas (valor p ≤ 0,2), e as barras cinza claro são indicativas de alterações numericamente positi- vas ou negativas, em comparação a plantas de unidade de GA20Ox_SUP ou unidade de PpCOL.

[0754] Como mostrado na FIG. 10, as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL demonstraram um aumento estatisticamente significativo na área de espiga, volume de espiga, comprimento de es- piga, e peso de único caroço e um aumento numérico nos grãos por espiga, em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP. Adicional- mente, as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL mostraram um aumento estatisticamente significativo na área de espiga, volume de es- piga e grãos por espiga, e um aumento numérico no comprimento de espiga e peso de único caroço, em relação às plantas de unidade de PpCOL.

[0755] Estes resultados indicam que as plantas de pilha de GA20Ox_SUP / PpCOL têm traços de espiga aprimorados, como área de espiga, volume de espiga, comprimento de espiga, grãos por espiga e peso de único caroço aumentados, em comparação às plantas de uni- dade de PpCOL e/ou plantas de unidade de GA20Ox_SUP. EXEMPLO 13. GERAÇÃO DE PLANTAS DE PILHA DE VETORES GA20Ox_SUP / PpCOL USANDO UM ÚNICO VETOR

[0756] Construtos e vetores únicos foram criados através de clona- gem molecular que têm um cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA que codifica um miRNA que alveja os genes da GA20 oxidase_3 e GA20 oxidase_5 em plantas de milho e outro cassete de expressão que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo PpCOL. Um primeiro vetor (Vetor 1) foi construído compre- endendo em ordem uma sequência de genes que codifica um polipeptí- deo PpCOL maís (SEQ ID NO: 169) e uma sequência de DNA que co- difica miRNA (SEQ ID NO: 39) que codifica um miRNA que tem uma sequência de alvejamento (SEQ ID NO: 40) para os genes da GA20 oxidase_3 e GA20 oxidase_5, em que as duas sequências de codifica- ção são, cada uma, ligadas de maneira funcional a uma sequência pro- motora e uma terminadora e são separadas uma da outra por uma se- quência intergênica. Um segundo vetor (Vetor 2) foi construído que com- preende em ordem uma sequência de DNA de codificação de miRNA (SEQ ID NO: 39) que codifica um miRNA que tem uma sequência de alvejamento (SEQ ID NO: 40) para os genes da GA20 oxidase_3 e GA20 oxidase_5 e uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo PpCOL (SEQ ID NO: 169), em que as duas sequências de codificação estão ligadas de maneira funcional a um promotor e a uma sequência terminadora e são separadas uma da outra por uma sequência intergê- nica. A ordem dos elementos para cada cassete de expressão é a for- necida acima no Exemplo 1.

[0757] As plantas de milho foram transformadas através de trans- formação mediada por Agrobacterium com cada um dentre o Vetor 1 e o Vetor 2 para criar plantas de milho transgênicas. As plantas de milho transgênicas contendo um evento de transformação do Vetor 1 ou Vetor 2 foram, então, cruzadas como fêmeas com diferentes linhagens de mi- lho masculinas para criar plantas descendentes que compreendem, a partir do progenitor feminino, o transgene PpCOL e a sequência de DNA de codificação de miRNA para supressão de GA20 oxidase. As plantas descendentes transgênica empilhadas resultantes são chamadas no presente documento de plantas de pilha de vetores GA20Ox_SUP / PpCOL, em vez de melhorar geneticamente ou cruzar plantas de pilhas, em que os transgenes são de progenitores diferentes e são reunidos em plantas descendentes pelo cruzamento dos progenitores. Assim, as pi- lhas de vetor compreenderão um único evento, ao mesmo tempo que plantas de pilha de reprodução ou cruzamento compreenderão uma combinação de dois eventos no caso de uma pilha de dois transgenes. O Vetor 1 e Vetor 2 se diferem em suas regiões intergênicas e na ordem de disposição do cassete de expressão de PpCOL e do cassete de ex- pressão de GA20Ox3/5-miRNA, embora os próprios cassetes sejam iguais. EXEMPLO 14. RENDIMENTO AUMENTADO DAS PLANTAS DE PI- LHA DE VETORES DE GA20Ox_SUP / PpCOL EM COMPARAÇÃO

AO CONTROLE

[0758] Plantas de milho transgênicas contendo o Vetor 1 ou Vetor 2 foram cruzadas como um progenitor feminino com duas linhagens de milho testadoras masculinas (“Testador 1” e “Testador 2”) para produzir plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL descendentes. Quatro eventos de transformação para cada construto de vetor foram testados quanto a amplo rendimento por acre (BAY).

[0759] A FIG. 11A mostra o BAY em uma estação de cultivo através de 15 locais de quatro eventos de plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL contendo um evento de transformação do Vetor

1. A FIG. 11B mostra o BAY em uma estação de cultivo através de 15 locais de quatro eventos de plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL contendo um evento de transformação do Vetor

2. Os resultados são mostrados como a diferença média em bushels/acre entre o BAY de plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL em relação às plantas controle do tipo selva- gem. Cada barra na FIG. 11 representa um único evento de transforma- ção de pilha de vetores cruzado com a linhagem de milho masculina “Testador 1” ou “Testador 2”. As barras cinza escuro nas FIGS. 11A e

11B são indicativas de alterações positivas estatisticamente significati- vas (valor p ≤ 0,1), e as barras cinza claro são indicativas de alterações numericamente positivas.

[0760] Como mostrado na FIG. 11A, três dentre quatro eventos das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL contendo um evento de transformação do Vetor 1 mostraram aumento estatistica- mente significativo em BAY em relação às plantas controle do tipo sel- vagem, e um evento das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL contendo um evento de transformação do Vetor 1 mostrou au- mento numérico em BAY em relação às plantas controle do tipo selva- gem. Como mostrado na FIG. 11B, dois dentre quatro eventos das plan- tas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL contendo um evento de transformação do Vetor 2 mostraram aumento estatisticamente sig- nificativo em BAY em relação às plantas controle do tipo selvagem atra- vés de ambos os testadores, e os outros dois eventos das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL transformadas com o Vetor 2 mostraram aumento estatisticamente significativo em BAY para um dos testadores e um aumento numérico em BAY para o outro testador. EXEMPLO 15. RENDIMENTO AUMENTADO DAS PLANTAS DE PI- LHA DE VETORES DE GA20Ox_SUP / PpCOL EM COMPARAÇÃO À UNIDADE DE GA20Ox_SUP

[0761] A FIG. 12 mostra o BAY em uma estação de cultivo através de 15 locais para quatro eventos de plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL contendo o Vetor 1 ou Vetor 2. Os resultados de BAY são mostrados como a diferença média em bushels/acre entre as plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL e plantas de unidade de GA20Ox_SUP. Cada barra na FIG. 12 representa um único evento de transformação. As barras cinza escuro na FIG. 12 são indica- tivas de alterações positivas estatisticamente significativas (valor p ≤

0,1), e as barras cinza claro são indicativas de alterações numerica- mente positivas ou negativas.

[0762] Como mostrado na FIG. 12, um dentre quatro eventos das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL contendo um evento de transformação do Vetor 1 mostrou um aumento estatistica- mente significativo em BAY em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP; e três dentre quatro eventos das plantas de pilha de ve- tores de GA20Ox_SUP / PpCOL contendo um evento de transformação do Vetor 2 mostraram um aumento numérico em BAY em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP. EXEMPLO 16. ESTIMATIVA DO RENDIMENTO DE GRÃOS AUMEN- TADA DAS PLANTAS DE PILHA DE VETORES DE GA20Ox_SUP / PpCOL EM COMPARAÇÃO À UNIDADE DE GA20Ox_SUP

[0763] Plantas de milho fêmeas com um dos dois eventos de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL produzidas pela transformação com o Vetor 2 foram cruzadas com cinco linhagens de milho testadoras masculinas diferentes (“Testador 1” a “Testador 5”) para criar plantas descendentes de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL. A FIG. 13 mostra a estimativa do rendimento de grãos medida das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL de cada um dos dois eventos de transformação. Os resultados são mostrados como a porcentagem de diferença entre a estimativa do rendimento de grãos das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL e esta das plantas de unidade de GA20Ox_SUP. Cada barra na FIG. 13 é para um único evento de trans- formação. As barras cinza escuro na FIG. 13 são indicativas de altera- ções positivas estatisticamente significativas (valor p ≤ 0,2), e as barras cinza claro são indicativas de alterações numericamente positivas.

[0764] Como mostrado na FIG. 13, a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem um evento da pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 1) mostrou aumentos estatisticamente significativos na estimativa do rendimento de grãos em relação às plan- tas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com dois dentre cinco testadores masculinos e aumentos numéricos na estimativa do rendi- mento de grãos em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com as outras três linhas testadoras masculinas.

[0765] Como mostrado adicionalmente na FIG. 13, a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem outro evento da pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 2) mostrou um aumento es- tatisticamente significativo na estimativa do rendimento de grãos em re- lação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com um dos cinco testadores masculinos e aumentos numéricos na estimativa do rendimento de grãos em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com os outros quatro testadores mas- culinos. EXEMPLO 17. ÁREA DE ESPIGA E COMPRIMENTO DE ESPIGA

APRIMORADOS DAS PLANTAS DE PILHA DE VETORES DE GA20Ox_SUP / PpCOL EM COMPARAÇÃO À UNIDADE DE GA20Ox_SUP

[0766] Plantas de milho fêmeas com um dos dois eventos de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL produzidas pela transformação com o Vetor 2 foram cruzadas com cinco linhagens de milho testadoras masculinas diferentes (“Testador 1” a “Testador 5”) para criar plantas descendentes de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL. A FIG. 14 mostra os traços de área de espiga e comprimento de espiga das plan- tas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL de cada um dos dois eventos de transformação. Os resultados são mostrados como a por- centagem de diferença entre a área de espiga ou comprimento de es- piga das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL e esta das plantas de unidade de GA20Ox_SUP. Cada barra na FIG. 14 é para um único evento de transformação. As barras cinza escuro na FIG. 14 são indicativas de alterações positivas estatisticamente significativas (valor p ≤ 0,2), e as barras cinza claro são indicativas de alterações nu- mericamente positivas ou negativas.

[0767] Como mostrado no painel esquerdo da FIG. 14, a descen- dência de plantas de milho fêmeas que compreendem um dos eventos de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 1) mostrou au- mentos estatisticamente significativos na área de espiga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com três dentre cinco linhagens testadoras masculinas, e a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem o Evento 1 da pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL mostrou aumentos numéricos na área de es- piga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cru- zada com as outras duas linhagens testadoras masculinas. Adicional- mente, a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem o outro evento de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 2) mostrou aumentos estatisticamente significativos na área de espiga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com duas dentre cinco linhagens testadoras masculinas; e a descen- dência de plantas de milho fêmeas que compreendem o Evento 2 da pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL mostrou aumento ou dimi- nuição numérica na área de espiga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com as outras três linhagens testa- doras masculinas.

[0768] Como mostrado adicionalmente no painel direito da FIG. 14, a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem um dos eventos de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 1) mos- trou um aumento estatisticamente significativo no comprimento de es- piga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cru- zada com uma dentre cinco linhagens testadoras masculinas, e a des- cendência de plantas de milho fêmeas que compreendem o Evento 1 da pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL mostrou aumentos nu- méricos no comprimento de espiga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com as outras três linhagens testa- doras masculinas. Adicionalmente, a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem o outro evento de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 2) mostrou aumentos estatisticamente significativos no comprimento de espiga em relação às plantas de uni- dade de GA20Ox_SUP quando cruzada com três dentre cinco linhagens testadoras masculinas, e a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem o Evento 2 da pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL mostrou aumentos numéricos no comprimento de espiga em re- lação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com as outras duas linhagens testadoras masculinas. EXEMPLO 18. PESO DE ÚNICO CAROÇO E GRÃOS POR ESPIGA

APRIMORADOS DAS PLANTAS DE PILHA DE VETORES DE GA20Ox_SUP / PpCOL EM COMPARAÇÃO À UNIDADE DE GA20Ox_SUP

[0769] Plantas de milho fêmeas com um dos dois eventos de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL de plantas de milho produzidas pela transformação com o Vetor 2 foram cruzadas com cinco linhagens de milho testadoras masculinas diferentes (“Testador 1” a “Testador 5”) para criar plantas descendentes de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL. A FIG. 15 mostra o peso de único caroço e grãos por espiga das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL de cada um dos dois eventos de transformação. Os resultados são mostrados como a porcentagem de diferença entre o peso de único caroço ou grãos por espiga das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL e esta das plantas de unidade de GA20Ox_SUP. Cada barra na FIG. 15 é para um único evento de transformação. As barras cinza escuro na FIG. 15 são indicativas de alterações positivas estatisticamente significativas

(valor p ≤ 0,2), e as barras cinza claro são indicativas de alterações nu- mericamente positivas ou negativas.

[0770] Como mostrado no painel esquerdo da FIG. 15, a descen- dência de plantas de milho fêmeas que compreendem um dos eventos de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 1) mostrou au- mentos estatisticamente significativos no peso de único caroço em rela- ção às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com três dentre cinco linhagens testadoras masculinas, e a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem o Evento 1 da pilha de ve- tores de GA20Ox_SUP / PpCOL mostrou aumentos numéricos no peso de único caroço em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com as outras duas linhagens testadoras masculinas. Adicionalmente, a descendência de plantas de milho fêmeas que com- preendem o outro evento de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 2) mostrou aumento estatisticamente significativo no peso de único caroço em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com três dentre cinco linhagens testadoras masculinas, e a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem o Evento 2 das plantas de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL do Evento 2 mostrou aumentos numéricos no peso de único caroço em re- lação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com as outras três linhagens testadoras masculinas.

[0771] Como mostrado adicionalmente no painel direito da FIG. 15, a descendência de plantas de milho fêmeas que compreendem um dos eventos de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 1) mos- trou aumentos numéricos em grãos por espiga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com duas ou três dentre cinco linhagens testadoras masculinas, embora a descendência das plantas de milho fêmeas que compreendem o Evento 1 da pilha de ve- tores de GA20Ox_SUP / PpCOL tenha mostrado aumentos numéricos em grãos por espiga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com duas outras linhagens testadoras masculinas. Adicionalmente, a descendência de plantas de milho fê- meas que compreendem o outro evento de pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL (Evento 2) mostrou um aumento estatistica- mente significativo em grãos por espiga em relação às plantas de uni- dade de GA20Ox_SUP quando cruzada com uma dentre cinco linha- gens testadoras masculinas, e a descendência de plantas de milho fê- meas que compreendem o Evento 2 da pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL mostrou aumentos numéricos em grãos por es- piga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cru- zada com duas outras linhagens testadoras masculinas, embora a des- cendência das plantas de milho fêmeas que compreendem o Evento 2 da pilha de vetores de GA20Ox_SUP / PpCOL tenha mostrado um au- mento numérico em grãos por espiga em relação às plantas de unidade de GA20Ox_SUP quando cruzada com outra linhagem testadora mas- culina.

[0772] Tendo descrito a presente divulgação em detalhe, será evi- dente que modificações, variações e aspectos equivalentes são possí- veis sem se afastar da essência e do escopo da presente divulgação como descritos no presente documento e nas reivindicações anexas. Além disto, deve ser apreciado que todos os exemplos na presente des- crição são fornecidos como exemplos não limitativos.

Claims (20)

REIVINDICAÇÕES

1. Planta de milho modificada ou uma parte de planta da mesma, caracterizada pelo fato de que compreende 1) um primeiro cas- sete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes de ácido giberélico 20 (GA20) oxidase e/ou um ou mais genes de ácido giberélico 3 (GA3) oxidase, e 2) um segundo cas- sete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CONSTANS (CO) ou semelhante a CONSTANS (COL).

2. Planta de milho modificada ou parte de planta da mesma, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a se- quência de DNA transcritível compreende uma sequência que é pelo menos 80% idêntica ou complementar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36, 37, 39, 40 e 53 a 56.

3. Planta de milho modificada ou parte de planta da mesma, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o poli- peptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60% idêntica a uma ou mais das SEQ ID NOs: 168 e 176 a 452.

4. Planta de milho modificada ou parte de planta da mesma, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a se- quência de DNA compreendida no segundo cassete de expressão re- combinante compreende uma sequência que é pelo menos 60% idên- tica à SEQ ID NO: 169.

5. Planta de milho modificada ou parte de planta da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a sequência de DNA transcritível compreendida no pri-

meiro cassete de expressão recombinante ou a sequência de DNA com- preendida no segundo cassete de expressão recombinante está opera- cionalmente ligada a um promotor heterólogo expressável por plantas selecionado a partir do grupo que consiste em um promotor vascular, um promotor do vírus baciliforme do arroz tungro (RTBV), um promotor de folha, um promotor constitutivo e combinações dos mesmos.

6. Planta de milho modificada ou parte de planta da mesma, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a planta de milho modificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho controle que não tem o primeiro ou o segundo cassetes de expressão recombinante.

7. Planta de milho modificada ou parte de planta da mesma, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o um ou mais traços de espiga aprimorados são selecionados do grupo que consiste em área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, caroços por espiga, peso de caroço único, es- timativa de rendimento de grãos, amplo rendimento de superfície culti- vada, altura em maturidade, diâmetro de caule ou tronco, peso fresco da espiga, número de floretes, número de folhas verdes no estágio R5, intervalo entre antese e espigamento, dias até pólen, dias até seda e combinações dos mesmos.

8. Planta de milho modificada ou uma parte de planta da mesma, caracterizada pelo fato de que compreende 1) uma primeira sequência de DNA transcritível que compreende SEQ ID NO: 39, e 2) uma segunda sequência de DNA transcritível que compreende SEQ ID NO: 169, em que a planta de milho modificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados, em relação a uma planta de milho de controle que não tem a primeira ou a segunda sequência de DNA transcritível.

9. Planta de milho modificada ou parte de planta da mesma, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que o um ou mais traços de espiga aprimorados são selecionados do grupo que consiste em área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, caroços por espiga, peso de caroço único, es- timativa de rendimento de grãos, amplo rendimento de superfície culti- vada, altura em maturidade, diâmetro de caule ou tronco, peso fresco da espiga, número de floretes, número de folhas verdes no estágio R5, intervalo entre antese e espigamento, dias até pólen, dias até seda e combinações dos mesmos.

10. Construto de DNA recombinante, caracterizado pelo fato de que compreende 1) um primeiro cassete de expressão que compre- ende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não co- dificante para a supressão de um ou mais genes da GA20 oxidase ou um ou mais genes da GA3 oxidase, e 2) um segundo cassete de ex- pressão que compreende uma sequência de DNA que codifica um poli- peptídeo de CO ou COL, em que a sequência de DNA está ligada de maneira funcional a um promotor expressável em plantas.

11. Construto de DNA recombinante, de acordo com a reivin- dicação 10, caracterizado pelo fato de que a sequência de DNA trans- critível compreende SEQ ID NO: 39, e a sequência de DNA compreen- dida no segundo cassete de expressão compreende SEQ ID NO: 169.

12. Semente ou um produto de consumo da planta de milho modificada, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a semente ou o produto de consumo compreende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombi- nante.

13. Método de produção de uma planta de milho modificada, caracterizado pelo fato de que compreende a. introduzir em uma célula de milho 1) um primeiro cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA transcritível que codifica um RNA não codificante para a supressão de um ou mais genes da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase, e 2) um segundo cassete de expressão recombinante que compreende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; e b. regenerar ou desenvolver uma planta de milho modificada a partir da célula de milho, em que a planta de milho modificada com- preende o primeiro e o segundo cassetes de expressão recombinante.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a sequência de DNA transcritível compreende uma se- quência que é pelo menos 80% idêntica ou complementar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36, 37, 39, 40 e 53 a 56.

15. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60% idêntica a uma ou mais das SEQ ID NOs: 168 e 176 a 452.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 15, caracterizado pelo fato de que a planta de milho modificada é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados selecionados do grupo que consiste em área de espiga, volume de espiga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, caroços por espiga, peso de caroço único, estimativa de rendimento de grãos, amplo rendimento de super- fície cultivada, altura em maturidade, diâmetro de caule ou tronco, peso fresco da espiga, número de floretes, número de folhas verdes no está- gio R5, intervalo entre antese e espigamento, dias até pólen, dias até seda e combinações dos mesmos, com relação a uma planta de milho de controle que não tem o primeiro ou o segundo cassetes de expressão recombinantes.

17. Método de produção de uma planta de milho modificada,

caracterizado pelo fato de que compreende: a. cruzar uma primeira planta de milho modificada com uma segunda planta de milho modificada, em que a expressão ou a atividade de um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase é reduzida na primeira planta de milho modificada em relação a um controle do tipo selvagem, e em que a segunda planta de milho mo- dificada compreende um cassete de expressão recombinante que com- preende uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo CO ou COL; e b. produzir uma planta de milho descendente que compre- ende o cassete de expressão recombinante e tem a expressão reduzida do um ou mais genes endógenos da GA3 oxidase e/ou genes da GA20 oxidase.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a planta de milho modificada e a planta de milho des- cendente compreendem uma sequência de DNA transcritível que com- preende uma sequência que é pelo menos 80% idêntica ou complemen- tar a pelo menos 15 nucleotídeos consecutivos de uma ou mais das SEQ ID NOs: 28, 29, 31, 32, 36, 37, 39, 40 e 53 a 56.

19. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo CO ou COL compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 60% idêntica a uma ou mais das SEQ ID NOs: 168 e 176 a 452.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 19, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente se- lecionar uma planta de milho descendente que é semianã e tem um ou mais traços de espiga aprimorados com relação a uma planta de milho de controle, em que o um ou mais traços de espiga aprimorados são selecionados do grupo que consiste em área de espiga, volume de es- piga, diâmetro de espiga, comprimento de espiga, caroços por espiga,

peso de caroço único, estimativa de rendimento de grãos, amplo rendi- mento de superfície cultivada, altura em maturidade, diâmetro de caule ou tronco, peso fresco da espiga, número de floretes, número de folhas verdes no estágio R5, intervalo entre antese e espigamento, dias até pólen, dias até seda e combinações dos mesmos.