BR112020014046A2 - enchimento de microesfera de policaprolactona que contém vitamina c e método de preparação para o mesmo - Google Patents

Abstract

A presente descrição se refere a uma microesfera de policaprolactona contendo vitamina C, um enchimento que inclui o mesmo e um método de preparação para o mesmo. É fornecido um enchimento de microesfera de policaprolactona obtido por encapsulação de vitamina C em microesferas de policaprolactona, que, quando injetadas em um corpo vivo, exibem um rápido efeito de formação de colágeno, bem como uma alta propriedade de restauração tecidual e mantêm os efeitos por um longo período de tempo, mostrando assim excelentes propriedades de restauração ou expansão de volume ou melhoria das rugas dos tecidos moles, tais como, bochechas, seios, nariz, lábios e nádegas e redução de rugas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: “ENCHIMENTO DE MICROESFERA DE POLICAPROLACTONA QUE CONTÉM VITAMINA C E MÉTODO DE PREPARAÇÃO PARA O MESMO” [Campo Técnico]

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Esse pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Coreano N° 10-2018-0003584 depositado em 10 de janeiro de 2018 no Escritório Coreano de Propriedade Intelectual, cuja descrição é incorporada nesse documento por referência na sua totalidade.

[002] A presente descrição se refere a um enchimento de microesferas de policaprolactona que contêm vitamina C e a um método para prepará-lo, e mais particularmente, a um enchimento de microesferas de policaprolactona que contêm vitamina C que não apenas resolveu os problemas de estabilidade in vivo da vitamina C contendo vitamina C nas mesmas, mas também quando aplicado a um corpo vivo, exibe efeitos rápidos de regeneração de colágeno e aumento de volume após o tratamento, além de manter os efeitos por um longo período de tempo, e um método para preparar o mesmo.

[Fundamentos da Técnica]

[003] Os enchimentos dérmicos são um instrumento médico do tipo injeção que injeta materiais seguros para o corpo humano em uma camada dérmica do rosto para reabastecer os tecidos dérmicos, tal como melhorar rugas e volume na aparência estética, e são usados nos chamados tratamentos antienvelhecimento, incluindo toxina botulínica (Botox®), transplante autólogo de gordura, levantamento de linhas de expressão, microagulhamento, tratamento a laser, dermoabrasão e semelhantes.

[004] O enchimento dérmico de primeira geração que foi desenvolvido pela primeira vez é um enchimento de colágeno derivado de animais e raramente é usado nos últimos anos porque a duração do efeito após o tratamento é curta de 2 a 4 meses e é problemático que os testes de reação de hipersensibilidade dérmica devam ser realizados um mês antes do tratamento.

[005] O enchimento dérmico de segunda geração é um enchimento com ácido hialurônico e atualmente é o enchimento mais frequentemente usado, pois tem um efeito de duração mais longo que o enchimento com colágeno, e tem significativamente menos efeitos colaterais como reações de hipersensibilidade dérmica, pois é composto de polissacarídeos semelhantes aos componentes do corpo humano e, portanto, não requerem testes de reação dérmica, tais como enchimentos de colágeno. Em particular, o ácido hialurônico é fácil de tratar e remover, tem excelente viscoelasticidade, mantém a umidade, o volume e a elasticidade da pele, o que é, portanto, muito adequado como matéria-prima para enchimentos dérmicos. Recentemente,

estudos foram ativamente conduzidos para prolongar a duração do efeito, induzindo a reticulação do ácido hialurônico para aumentar o tamanho das partículas e o peso molecular, mas como a duração do efeito é relativamente curta de 6 a 12 meses, é um problema que os tratamentos devam ser repetidos a cada 6 a 12 meses.

[006] O enchimento dérmico de terceira geração, que é um enchimento de polímero sintético, tal como ácido polilático (PLA) ou policaprolactona (PCL), é decomposto muito gradualmente no corpo humano e, portanto, é usado com a finalidade de exibir uma maior duração do efeito em comparação com os enchimentos de colágeno e ácido hialurônico que são enchimentos absorventes. Em particular, a policaprolactona é 100% absorvida pelo corpo humano e, portanto, é um componente seguro e é vantajosa, pois é absorvida mais lentamente que o ácido polilático após ser implantada na pele, promove a produção de colágeno e dura o efeito de 1 a 4 anos como um tecido macio, sem sensação de matéria estranha. No entanto, o enchimento de policaprolactona é um enchimento na forma de uma microesfera e deve ser administrado suspendendo-o em um carreador de gel, tal como a carboximetilcelulose (CMC), e mostra os efeitos somente após 6-8 semanas após a injeção na pele.

Assim, isso é desvantajoso, pois a satisfação do tratamento é menor que a do enchimento de ácido hialurônico, mostrando um efeito imediato após o tratamento.

[007] Enquanto isso, sabe-se que a vitamina C ou ácido L-ascórbico, seus derivados e sais intensificam a função imunológica do corpo humano, promovem a produção de colágeno, e exibem o efeito de manter ou intensificar a produção de ácido hialurônico, pelo qual eles exibem um efeito antienvelhecimento que previne ou melhora as rugas da pele, linhas finas, sardas e flacidez com o envelhecimento. No entanto, existe um problema em que a vitamina C é muito instável, tanto dentro como fora do corpo vivo, reage com sensibilidade ao ambiente externo, tal como o ar, especialmente o oxigênio, calor ou luz, e é facilmente decomposta por oxidação. Assim, é fato que a vitamina C é usada restritamente em cosméticos e semelhantes com o objetivo de formar colágeno e melhorar rugas, utilizando formas estabilizadas, tais como vários derivados.

[008] Portanto, há uma necessidade de desenvolver um novo enchimento de micropartículas de policaprolactona com eficácia aprimorada, resolvendo o problema de estabilidade in vivo da vitamina C, utilizando as propriedades do enchimento de micropartículas de policaprolactona existente e encapsulando a vitamina C com microesferas de policaprolactona.

[DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO]

[Problema Técnico]

[009] A presente descrição foi planejada para resolver os problemas de estabilidade in vivo acima mencionados da vitamina C e melhorar a eficácia do enchimento de microesferas de policaprolactona, e é um objetivo da presente descrição fornecer uma microesfera de policaprolactona contendo vitamina C que, quando aplicada a um corpo vivo, exibe rapidamente efeitos após o tratamento e mantém os efeitos por um longo período de tempo, e um enchimento que compreende a mesma e um método para prepará-la.

[Solução Técnica]

[0010] Para alcançar os objetos acima, um aspecto da presente descrição fornece uma microesfera de policaprolactona que compreende 0,01 a 6,5% em peso de vitamina C com base no total de 100% em peso da microesfera de policaprolactona contendo vitamina C e tendo um tamanho médio de partícula de 10 a 100 µm.

[0011] Em outro aspecto da presente descrição, é fornecido um método para preparar uma microesfera de policaprolactona contendo vitamina C, que compreende as etapas de: (a) preparar uma fase dispersa dissolvendo policaprolactona em um primeiro solvente e dissolver vitamina C em um segundo solvente preparar cada solução e, em seguida, misturar uniformemente as duas soluções para preparar uma única solução; (b) preparar uma emulsão misturando a fase dispersa com uma solução aquosa (fase contínua) contendo um tensoativo; (c) formar uma microesfera extraindo e evaporando solventes orgânicos da fase dispersa em uma fase contínua na emulsão preparada na etapa (b); e (d) recuperar a microesfera da fase contínua da etapa (c).

[0012] De acordo com ainda outro aspecto da presente descrição, é fornecido um enchimento que compreende a microesfera de policaprolactona contendo vitamina C da presente descrição; e um carreador aquoso farmaceuticamente aceitável e uma microesfera de policaprolactona.

[EFEITOS VANTAJOSOS]

[0013] O enchimento que compreende a microesfera de policaprolactona contendo vitamina C, de acordo com a presente descrição, não apenas exibe um rápido efeito de formação de colágeno quando aplicado a um corpo vivo e exibe uma alta propriedade de restauração de tecidos, mas também mantém os efeitos por um longo período de tempo, desse modo mostrando excelentes propriedades de restauração ou expansão de volume dos tecidos moles, tais como, bochechas, seios, nariz, lábios e nádegas ou melhoria das rugas.

[BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS]

[0014] A FIG. 1a é uma fotografia da forma da microesfera de policaprolactona contendo ácido ascórbico preparada de acordo com o Exemplo 1-1, tirada por um microscópio óptico. Como pode ser visto na fotografia, pode ser confirmado que as microesferas produzidas mantêm uma forma esférica, mesmo tendo uma característica morfológica porosa na superfície.

[0015] A FIG. 1b é uma fotografia da forma da microesfera de policaprolactona contendo ácido ascórbico preparada usando excesso de ácido ascórbico de acordo com o Exemplo Comparativo 1-4, tirada por um microscópio óptico.

As microesferas produzidas não mantêm uma forma esférica e exibem uma característica morfológica para que as microesferas sejas aglomeradas ou quebradas.

[DESCRIÇÃO DETALHADA DAS FORMAS DE REALIZAÇÃO]

[0016] A seguir, a presente descrição será descrita em mais detalhes.

[0017] Como usado nesse documento, a “vitamina C” é usada como termo genérico que coletivamente se refere não apenas ao ácido L-ascórbico, mas também a seus derivados e sais. A vitamina C pode ser selecionada do grupo que consiste em ácido L-ascórbico, ascorbilfosfato de sódio, ascorbilfosfato de magnésio, ascorbilfosfato de cálcio, polipeptídeo de ácido ascórbico, éter etil ascorbílico, ascorbil dipalmitato, ascorbil dipalmitato, ascorbil palmitato, ascorbil glucosídeo e ascorbil etilsilanol pectinato, não limitado aos mesmos. De preferência, o ácido L-ascórbico pode ser usado.

[0018] Em uma modalidade, a quantidade de vitamina C encapsulada na microesfera de policaprolactona contendo vitamina C da presente descrição pode ser de 0,01 a 6,5% em peso, de preferência de 0,02 a 6,0% em peso, com base no total de 100% em peso da microesfera. Essa quantidade de encapsulamento é otimizada de modo que a atividade fisiológica característica da vitamina C possa exibir um efeito sinergístico no sítio injetado, garantindo a estabilidade in vivo da vitamina C.

[0019] A presente descrição é caracterizada por essa vitamina C ser encapsulada nas microesferas de policaprolactona e usada em conjunto como enchimento, promovendo assim várias funções biológicas, tal como produção de ácido hialurônico e síntese de colágeno.

[0020] A microesfera de policaprolactona contendo vitamina C da presente descrição é preparada usando policaprolactona na qual uma viscosidade inerente da policaprolactona, que é um polímero biodegradável, é de 0,16 a 1,90 dL/g. A viscosidade inerente da policaprolactona usada nesse documento se refere à viscosidade inerente medida em clorofórmio a 25 °C usando um viscosímetro Ubbelohde.

Exemplos do polímero de policaprolactona acima incluem o Resormer C209, C212 e C217 disponível na Evonik, Purasorb PC02, PC04, PC08, PC12 e PC17 disponível na Corbion e semelhantes.

[0021] A microesfera de policaprolactona contendo vitamina C, de acordo com a presente descrição, tem um tamanho médio de partícula de 10 µm ou mais e 100 µm ou menos, por exemplo, de preferência 10 a 30 µm, 10 a 50 µm ou 10 a 100 µm, 20 a 50 µm, 30 a 60 µm ou 40 a 70 µm. O tamanho médio de partícula usados nesse documento se refere a um diâmetro mediano como o tamanho de partícula correspondente a 50% do volume na curva de distribuição de tamanho de partícula, e é representado por D50 ou D (v, 0,5).

[0022] Quando o tamanho médio de partícula da microesfera de policaprolactona contendo vitamina C é menor que 10 µm, ele pode ser fagocitado por macrófagos quando administrado no corpo vivo. Quando o tamanho médio das partículas é maior que 100 µm, a injetabilidade diminui quando injetada com uma seringa, e a agulha da injeção se torna mais espessa, causando mais dor durante a injeção, o que não é preferível.

[0023] De preferência, a microesfera de policaprolactona contendo vitamina C de acordo com a presente descrição tem uma distribuição uniforme de partículas. A microesfera tendo uma distribuição uniforme de partículas tem menos desvio na quantidade residual durante a injeção e menos fenômeno de entupimento em comparação com uma microesfera não uniforme e, portanto, uma agulha de injeção fina pode ser usada. De preferência, o grau de distribuição de tamanho ou valor de amplitude das microesferas de policaprolactona da presente descrição é de 1,0 ou menos.

Mais de preferência, a distribuição de tamanho é 0 ou mais e 0,8 ou menos. A distribuição de tamanho ou valor de amplitude usados nesse documento é um índice que indica a uniformidade do tamanho de partícula da microesfera, e significa um valor determinado pela fórmula da distribuição de tamanho (valor de amplitude) = (Dv0,9-Dv0,1)/Dv0,5. Nesse documento, Dv0,1 significa um tamanho de partícula correspondente a 10% do volume na curva de distribuição de tamanho de partícula da microesfera, Dv0,5 significa um tamanho de partícula correspondente a 50% do volume na curva de distribuição de tamanho de partícula da microesfera, e Dv0,9 significa um tamanho de partícula correspondente a 90% do volume na curva de distribuição de tamanho de partícula da microesfera. A microesfera de policaprolactona contendo vitamina C de acordo com a presente descrição é caracterizada por exibir uma distribuição de tamanho uniforme enquanto exibe um tamanho de partícula de 10 µm ou mais e 100 µm ou menos, reduzindo assim o entupimento da agulha e melhorando a injetabilidade. A faixa de tamanho de partícula e os valores de amplitude, como descrito acima, são otimizados de modo a incluir a quantidade de encapsulamento que permite que a vitamina C na microesfera de policaprolactona seja eluída em uma quantidade apropriada por um longo período de tempo.

[0024] A microesfera de policaprolactona contendo vitamina C de acordo com a presente descrição pode ser preparada, por exemplo, usando o “método de evaporação/extração por solvente”, sem estar limitado ao mesmo.

[0025] Como um exemplo específico de um método para preparar a microesfera de policaprolactona contendo vitamina C de acordo com a presente descrição, esse método de preparação compreende as etapas de: (a) preparar uma fase dispersada dissolvendo policaprolactona em um primeiro solvente e dissolvendo vitamina C em um segundo solvente para preparar cada solução e, em seguida, misturar uniformemente as duas soluções para preparar uma única solução, preparando assim uma fase dispersa; (b) preparar uma emulsão misturando a fase dispersa com uma solução aquosa (fase contínua) contendo um tensoativo; (c) formar uma microesfera extraindo e evaporando o solvente orgânico da fase dispersa em uma fase contínua na emulsão preparada na etapa (b); e (d) recuperar a microesfera da fase contínua da etapa (c) para preparar uma microesfera de policaprolactona contendo vitamina C.

[0026] Na etapa (a), a viscosidade inerente da policaprolactona é, de preferência, na faixa de 0,16 a 1,90 dL/g.

[0027] O primeiro solvente usado para dissolver a policaprolactona na etapa (a) tem, de preferência, propriedades que são imiscíveis com a água. Utilizando as propriedades do solvente orgânico que são imiscíveis com água, a fase dispersa pode ser homogeneamente misturada e dispersa em uma solução aquosa contendo um tensoativo que é uma fase contínua na etapa (b) descrita abaixo, formando assim uma emulsão. O tipo de solvente que dissolve a policaprolactona não é particularmente limitado e, de preferência, pode ser selecionado do grupo que consiste em diclorometano, clorofórmio, acetato de etila, metiletilcetona e um solvente misturado dos mesmos. Mais de preferência, pode ser usado diclorometano, acetato de etila ou um solvente misturado dos mesmos.

[0028] O segundo solvente para dissolver a vitamina C na etapa (a) pode ser selecionado do grupo que consiste em dimetilssulfóxido, álcool metílico, álcool etílico, acetona, acetonitrila, dimetilformamida, N-metilpirrolidona, ácido acético e uma mistura dos mesmos. De preferência, podem ser usados dimetilssulfóxido, álcool metílico ou um solvente misturado.

[0029] Na etapa (a), uma policaprolactona e uma solução de vitamina C são misturadas para preparar uma solução misturada uniforme, preparando assim uma fase dispersa. De preferência, a solução misturada de policaprolactona e vitamina C é dissolvida homogeneamente. Como exemplo, ao usar diclorometano como solvente para policaprolactona e usar dimetilssulfóxido como solvente para vitamina C, a quantidade de dimetilssulfóxido usada é, de preferência, de 3% em peso a 40% em peso em relação ao peso de diclorometano.

Quando a quantidade de dimetilssulfóxido é menor que 3% em peso, é altamente provável que a vitamina C seja precipitada devido à diminuição da solubilidade pelo diclorometano.

Quando excede 40% em peso, a propriedade hidrofóbica da fase dispersa é reduzida e uma quantidade excessiva de dimetilssulfóxido é rapidamente liberada na fase contínua, dificultando a formação de uma fase dispersa na forma de gotículas que não são misturadas com a fase contínua, o que não é preferível.

[0030] Na etapa (b), o método para misturar homogeneamente a fase de dispersão e a solução aquosa contendo o tensoativo não é particularmente limitado e, de preferência, a mistura pode ser realizada usando um agitador de alta velocidade, um misturador em linha, um método de emulsificação por membrana, um método de emulsificação microfluídica ou semelhantes. Como exemplo, ao realizar a mistura usando um método de emulsificação por membrana, a fase dispersa preparada na etapa (a) é passada através de uma membrana tendo microporos de tamanho uniforme e transferida para uma fase contínua contendo um tensoativo para preparar uma emulsão.

[0031] O tipo de tensoativo usado na etapa (b) não é particularmente limitado, e o tensoativo pode ser usado sem limitação, desde que ajude a fase de dispersão a formar uma emulsão em gotas estável dentro da fase contínua. De preferência, o tensoativo pode ser selecionado do grupo que consiste em metilcelulose, polivinilpirrolidona, carboximetilcelulose, lecitina, gelatina, álcool polivinílico, éster de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, derivados de polioxietileno óleo de rícino e misturas dos mesmos. Mais de preferência, pode ser usado álcool polivinílico.

[0032] Na etapa (b), o conteúdo do tensoativo na fase contínua contendo o tensoativo pode ser de 0,01% p/v a 20% p/v, de preferência 0,1% p/v a 5% p/v com base no volume total da fase contínua contendo o tensoativo. Quando o teor de tensoativo é menor que 0,01% p/v, uma fase dispersa ou emulsão na forma de gotículas não pode ser formada na fase contínua. Quando o conteúdo do tensoativo excede 20% p/v, pode ser difícil remover o tensoativo após a formação de partículas finas na fase contínua devido ao excesso de tensoativo. Em uma modalidade da presente descrição, a microesfera de policaprolactona contendo vitamina C é preparada usando 1 a 5% p/v de álcool polivinílico.

[0033] Na etapa (c), quando a emulsão que compreende uma fase dispersa na forma de gotículas e uma fase contínua contendo um tensoativo é mantida ou agitada a uma temperatura abaixo do ponto de ebulição do solvente orgânico por um determinado período de tempo, por exemplo, 2 a 48 horas, o solvente orgânico pode ser extraído para uma fase contínua a partir de uma solução de policaprolactona-vitamina C na forma de uma gota que é a fase dispersa. Uma parte do solvente orgânico extraído na fase contínua pode ser evaporada da superfície da fase contínua. À medida que o solvente orgânico é removido da solução na forma de gotículas, a fase dispersa na forma de gotículas é solidificada para formar microesferas e, desse modo, é obtida a forma de uma suspensão contendo microesferas (suspensão de microesferas).

[0034] Na etapa (c), de modo a remover com mais eficiência o solvente orgânico, a temperatura da fase contínua pode ser aquecida por um determinado período de tempo. Por exemplo, a agitação pode ser realizada, por exemplo, mas não limitada à mesma, por 48 horas ou menos, de preferência 1 a 36 horas, mais de preferência por 3 a 24 horas, mantendo a temperatura 5 a 39,6 °C, de preferência 10 a 35 °C, mais de preferência 15 a 30 °C, removendo assim o solvente orgânico.

[0035] Na etapa (d), o método para recuperar microesferas de policaprolactona pode ser realizado usando várias técnicas conhecidas e, por exemplo, um método, tal como filtração ou centrifugação, pode ser usado.

[0036] Entre as etapas (c) e (d), o tensoativo residual pode ser removido por filtração e lavagem e, em seguida, a filtração pode ser realizada novamente para recuperar as microesferas.

[0037] A etapa de lavagem para remover o tensoativo residual geralmente pode ser realizada com água, e a etapa de lavagem pode ser repetida várias vezes.

[0038] Além disso, como descrito acima, quando a emulsão é formada usando o agitador de alta velocidade e o misturador em linha na etapa (b), uma microesfera uniforme pode ser obtida usando adicionalmente um processo de peneiração entre as etapas (c) e (d). O processo de peneiração pode ser realizado usando uma técnica conhecida, e as microesferas de pequenas partículas e partículas grandes podem ser filtradas usando uma membrana de peneira tendo tamanhos diferentes para obter microesferas de tamanho uniforme.

[0039] De acordo com outro aspecto da presente descrição, é fornecido um enchimento que compreende a microesfera de policaprolactona contendo vitamina C da presente descrição; e um carreador aquoso farmaceuticamente aceitável e uma microesfera de policaprolactona contendo vitamina C.

[0040] Como carreador aquoso farmaceuticamente aceitável, por exemplo, uma solução aquosa para injeção, tal como água purificada, solução salina fisiológica ou tampão fosfato, pode ser usada. Além disso, o enchimento pode, juntamente com a microesfera de policaprolactona contendo vitamina C e o carreador aquoso farmaceuticamente aceitável, incluir pelo menos um selecionado do grupo que consiste em derivados de celulose, tais como, carboximetilcelulose (CMC) e hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), solutos, tais como, ácido hialurônico, lidocaína, polidesoxirribonucleotídeo (PDRN), polinucleotídeo (PN) e lubrificantes, tal como glicerina, se necessário, mas não são limitados aos mesmos.

O ácido hialurônico é preferido. Quando o ácido hialurônico é adicionalmente incluído e combinado, o volume durante a administração inicial pode ser mantido por mais tempo.

[0041] Em uma modalidade, o conteúdo de cada componente incluído no enchimento que compreende a microesfera de policaprolactona contendo vitamina C da presente descrição pode ser de 2 a 50% em peso da microesfera de policaprolactona contendo vitamina C (o conteúdo de vitamina C nas micropartículas de policaprolactona é de 0,01 a 6% em peso), 15 a 97,9% em peso do carreador aquoso farmaceuticamente aceitável, 0,1 a 5% em peso do soluto e 0 a 48% em peso do lubrificante, com base no total de 100% em peso da formulação de enchimento, mas não está limitado aos mesmos. Quando o ácido hialurônico é adicionado como um soluto, o ácido hialurônico tendo uma taxa de reticulação de 0 a 5% pode ser usado.

[0042] O enchimento que compreende a microesfera de policaprolactona contendo vitamina C, de acordo com a presente descrição, não apenas exibe um rápido efeito de formação de colágeno no sítio tratado imediatamente após o tratamento, como exibe uma propriedade de reparo do tecido que mostra uma sensação de volume natural e ideal, mas também mantém a estabilidade in vivo da vitamina C, tem boa capacidade de injeção e exibe excelentes efeitos por um longo período de tempo e, portanto, pode ser muito útil para fins cosméticos ou terapêuticos.

[0043] Como exemplo específico, o enchimento, incluindo essas microesferas de policaprolactona, pode ser usado para enchimento de tecidos biológicos, melhoria das rugas por enchimentos das rugas, remodelação do rosto, ou restauração ou aumento do volume de tecidos moles, tais como, lábios, nariz, nádegas, bochechas ou nos seios. O enchimento incluindo as microesferas de policaprolactona pode ser administrado em uma forma de dosagem adequada para esse uso, e de preferência, pode ser uma injeção.

[0044] Em outro aspecto, a presente descrição fornece uma seringa preenchida cheia com um enchimento que compreende as microesferas de policaprolactona.

[0045] A seguir, a presente descrição será descrita em mais detalhes a título de exemplos. No entanto, esses exemplos são apenas para fins ilustrativos, e o escopo da presente descrição não é limitado aos mesmos.

Exemplo 1: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0046] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,9975 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,0025 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 19,99 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 1,70 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0047] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa a 1% p/v de álcool polivinílico (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1200 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0048] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 1-1: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0049] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,985 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,015 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 19,94 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 1,70 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0050] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa a 1% p/v de álcool polivinílico (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1200 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0051] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 1-2: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0052] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,85 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,15 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 19,4 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 1,76 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0053] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa a 1% p/v de álcool polivinílico (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1200 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0054] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 1-3: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0055] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 18 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 2,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0056] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1100 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0057] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 1-4: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0058] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,0 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 1,0 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 16 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 5,23 mL de dimetilssulfóxido

(fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0059] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa a 3% p/v de álcool polivinílico (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1100 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0060] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 2: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0061] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 02 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ácido ascórbico (fabricante:

Tokyo Chemical Industries, Japão) em 12,85 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 2,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0062] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1200 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0063] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 2-1: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0064] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 12 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 25 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 2,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0065] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1500 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0066] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 2-2: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0067] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 17 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 37,5 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 2,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0068] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 5% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 2250 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0069] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 3: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado usando agitador de alta velocidade

[0070] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 18 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 2,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0071] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1100 mL da fase contínua foram colocados em um recipiente de preparação e enquanto se agitava o misturador de alta velocidade equipado a uma velocidade de 4500 rpm, a fase dispersa foi injetada a uma vazão de 7 mL por minuto.

A suspensão de microesferas foi agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0072] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 4: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0073] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 18 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 2,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0074] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1100 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa tendo um diâmetro de 5 µm e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0075] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 4-1: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0076] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 18 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 2,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0077] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1100 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa tendo um diâmetro de 30 µm e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0078] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 4-2: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0079] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 18 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 2,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0080] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1100 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa tendo um diâmetro de 50 µm e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0081] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 5: Preparação da microesfera de policaprolactona com ascorbil fosfato de sódio encapsulado

[0082] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ascorbil fosfato de sódio (fabricante: BASF Care Creations, Alemanha) em 18 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 3,15 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0083] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1100 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0084] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada terciária várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 5-1: Preparação da microesfera de policaprolactona com ascorbil palmitato encapsulado

[0085] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ascorbil palmitato (fabricante: Thermo Fisher Scientific, EUA) em 18 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 1,6 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0086] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1100 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0087] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo 6: Preparação do enchimento de microesferas de policaprolactona usando carboximetilcelulose como um soluto

[0088] O enchimento de microesferas de policaprolactona foi preparado preparando uma solução para a suspensão de microesferas e depois misturando as microesferas. 2 g de carboximetilcelulose (fabricante: Ashland, EUA) foram adicionados a um tampão de fosfato a 75 °C, dissolvidos e resfriados com agitação a 100 rpm durante 3 horas. Quando a temperatura da solução atingiu 25 °C, foram adicionados 18 g de glicerina e as microesferas preparadas no Exemplo 1-3 foram misturadas a 30% (p/p) para completar a preparação de um enchimento de microesferas de policaprolactona.

Exemplo 6-1: Preparação do enchimento de microesferas de policaprolactona usando ácido hialurônico como um soluto

[0089] O enchimento de microesferas de policaprolactona foi preparado preparando uma solução para a suspensão de microesferas e depois misturando as microesferas. Foi adicionado 1 g de ácido hialurônico (fabricante: Bloomage Freda Biopharm, China) a um tampão de fosfato a 55 °C, dissolvido e resfriado. Quando a temperatura da solução atingiu 25 °C, foram adicionados 18 g de glicerina e as microesferas preparadas no Exemplo 1-3 foram misturadas a 30% (p/p) para completar a preparação de um enchimento de microesferas de policaprolactona.

Exemplo Comparativo 1: Preparação de Microesferas de Policaprolactona

[0090] A fase dispersa foi preparada misturando 5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Países Baixos) com 20 g de diclorometano (fabricante: J. T.

Baker, EUA).

[0091] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa a 1% p/v de álcool polivinílico (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1200 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa tendo um diâmetro de 10 µm e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0092] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada terciária várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo Comparativo 1-1: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado

[0093] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 3,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 1,5 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 14 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 9,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0094] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa a 3% p/v de álcool polivinílico (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1000 mL da fase contínua foram fornecidos a um aparelho de emulsificação equipado com uma membrana porosa de 10 µm de diâmetro e, ao mesmo tempo, a fase dispersa preparada foi injetada para preparar uma microesfera. A suspensão de microesferas preparada foi colocada em um recipiente de preparação e agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do aparelho de emulsificação por membrana e do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0095] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo Comparativo 2: Preparação da microesfera de policaprolactona com ácido ascórbico encapsulado usando agitador de alta velocidade

[0096] A fase dispersa foi preparada dissolvendo 4,5 g de polímero biocompatível Purasorb PC 04 (fabricante: Corbion, Holanda) e 0,5 g de ácido ascórbico (fabricante: Tokyo Chemical Industries, Japão) em 18 g de diclorometano (fabricante: JT Baker, EUA) e 2,95 mL de dimetilssulfóxido (fabricante: Sigma Aldrich, EUA), respectivamente, e misturando as duas soluções.

[0097] Como fase contínua, foi usada uma solução aquosa de álcool polivinílico a 2% p/v (viscosidade: 4,8 a 5,8 mPa·s) e 1100 mL da fase contínua foram colocados em um recipiente de preparação e enquanto se agitava o misturador de alta velocidade a uma velocidade de 4500 rpm, a fase dispersa foi injetada a uma vazão de 7 mL por minuto. A suspensão de microesferas foi agitada a uma velocidade de 150 rpm. A temperatura do recipiente de preparação foi mantida a 25 °C.

[0098] Quando a injeção da fase dispersa foi completada, a suspensão de microesferas foi agitada a 25 °C por 12 horas a uma velocidade de 150 rpm para remover o solvente orgânico. Quando a remoção do solvente orgânico foi concluída, a suspensão de microesferas foi repetidamente lavada com água destilada várias vezes para remover e obter álcool polivinílico residual, e as microesferas obtidas foram liofilizadas.

Exemplo Comparativo 3: Preparação de enchimento de microesferas de policaprolactona usando carboximetilcelulose como um soluto

[0099] O enchimento de microesferas de policaprolactona foi preparado preparando uma solução para a suspensão de microesferas e depois misturando as microesferas. 2 g de carboximetilcelulose (fabricante: Ashland, EUA) foram adicionados a um tampão de fosfato a 75 °C, dissolvidos e resfriados com agitação a 100 rpm durante 3 horas. Quando a temperatura da solução atingiu 25 °C, foram adicionados 18 g de glicerina e as microesferas preparadas nos Exemplos Comparativos 1 foram misturadas a 30% (p/p) para completar a preparação de um enchimento de microesferas de policaprolactona.

Exemplo Comparativo 3-1: Preparação do enchimento de microesferas de policaprolactona usando ácido hialurônico como um soluto

[00100] O enchimento de microesferas de policaprolactona foi preparado preparando uma solução para a suspensão de microesferas e depois misturando as microesferas. Foi adicionado 1 g de ácido hialurônico (fabricante: Bloomage Freda Biopharm, China) a um tampão de fosfato a 55 °C, dissolvido e resfriado. Quando a temperatura da solução atingiu 25 °C, foram adicionados 18 g de glicerina e as microesferas preparadas no Exemplo Comparativo 1 foram misturadas a 30% (p/p) para completar a preparação de um enchimento de microesferas de policaprolactona.

Exemplo experimental 1: Observação da morfologia das microesferas usando o microscópio óptico

[00101] Para análise morfológica das microesferas, a morfologia das microesferas preparadas no Exemplo 1-4 e no Exemplo Comparativo 1-1 foi observada usando um microscópio óptico. Especificamente, a suspensão de microesferas foi gotejada em uma lâmina de vidro e a lâmina de vidro foi colocada em um estágio de microscópio óptico (fabricante: Olympus BH-2, Japão), e a morfologia da microesfera foi observada com ampliação de 100 x (lente objetiva x 10, lente ocular) x 10).

[00102] Como mostrado nas FIGS. 1A e 1B, a microesfera do Exemplo 1-4 manteve uma forma esférica enquanto possuía uma característica morfológica porosa na superfície da microesfera, enquanto a microesfera do Exemplo Comparativo 1-1 não mantinha uma forma esférica e podia observar as características morfológicas de aglomerados ou microesferas quebradas. Foi previsto que o excesso de dimetilssulfóxido usado no Exemplo Comparativo 1-1 foi rapidamente liberado na fase contínua para assim reduzir as propriedades da fase dispersa que não eram misturáveis com a fase contínua, dificultando a manutenção de microesferas intactas.

Exemplo experimental 2: Análise do tamanho de partículas da microesfera usando um método de difração a laser

[00103] Esse experimento foi realizado para medir quantitativamente o tamanho médio das partículas e a distribuição das microesferas e confirmar a uniformidade das partículas. O procedimento experimental é como a seguir.

[00104] 50 mg de microesferas foram misturadas com 1 mL de água ultrapura, misturadas com um misturador de vórtice por 20 segundos, depois colocadas em um gerador ultrassônico por 1 minuto e dispersadas. A dispersão da microesfera foi colocada em um analisador de tamanho de partículas (Microtrac Bluewave, Japão) e medida por 20 segundos. Como um índice de uniformidade de tamanho de partícula, o valor de amplitude foi determinado pela seguinte fórmula.

[Fórmula 1] Valor de amplitude = (Dv,0,9 – Dv,0,1)/Dv,0,5 [Tabela 1] Dv,0,5 (µm) Valor de amplitude Exemplo 1 36,7 0,61 Exemplo 1-1 36,2 0,60 Exemplo 1-2 36,8 0,62 Exemplo 1-3 35,6 0,66 Exemplo 1-4 35,4 0,73 Exemplo 2 34,8 0,62 Exemplo 2-1 35,1 0,65 Exemplo 2-2 37,3 0,64 Exemplo 3 32,7 0,92 Exemplo 4 13,9 0,59 Exemplo 4-1 62,8 0,69 Exemplo 4-2 101,8 0,73 Exemplo 5 36,2 0,61 Exemplo 5-1 36,4 0,63 Exemplo Comparativo 1 35,2 0,58 Exemplo Comparativo 2 30,1 1,43

[00105] Como mostrado na Tabela 1, as microesferas de Exemplo 1, Exemplo 1-1, Exemplo 1-2, Exemplo 1-3, Exemplo 1- 4 e Exemplo Comparativo 1 foram respectivamente preparadas usando várias quantidades de ácido ascórbico, mas tinham o tamanho médio de partículas de cerca de 35 µm, que era um tamanho de partícula similar. Portanto, foi confirmado que o ácido ascórbico usado na preparação da fase dispersa não afetou significativamente o tamanho das partículas.

[00106] No Exemplo 4, no Exemplo 4-1 e no Exemplo 4- 2, foi confirmado que o tamanho das partículas poderia ser ajustado de acordo com a mudança na membrana porosa equipada com o aparelho de emulsificação.

[00107] Os Exemplos 1 a 3 e o Exemplo Comparativo 2 tinham uma diferença no método de mistura homogênea da fase dispersa e da solução aquosa contendo o tensoativo no processo de preparação das microesferas, e as microesferas preparadas a partir da mesma mostraram diferentes tamanhos médios de partículas e valores de amplitude. Mais detalhadamente, a microesfera do Exemplo Comparativo 2 foi a microesfera preparada usando um agitador de alta velocidade, confirmando que o tamanho médio de partícula foi relativamente reduzido em comparação com o Exemplo 1-3 e o valor de amplitude foi de 1,43 tendo uma ampla distribuição de tamanho de partícula.

Exemplo Experimental 3: Análise do ácido ascórbico encapsulado em microesferas de policaprolactona

[00108] Esse experimento foi realizado usando cromatografia líquida de alta eficiência para análise quantitativa de ácido ascórbico encapsulado em microesferas de policaprolactona. O procedimento experimental detalhado é como a seguir.

[00109] A fase móvel usada na cromatografia líquida de alta eficiência permitiu que uma solução de acetonitrila a 40% v/v contendo ácido tricloroacético a 0,1% v/v% escoasse a uma vazão de 0,5 mL/min, e uma coluna enchida com enchimento de C18 (Inertsil ODS-3, 5 um, 4,5 x 150 mm, fabricado por GL Science, Japão). 10 mg de microesferas foram diluídas em uma mistura de N-metilpirrolidona e acetonitrila (8:2, v/v), injetadas em cromatografia líquida de alta eficiência e medidas usando um detector de absorbância UV no comprimento de onda de 245 nm.

[Tabela 2] Quantidade de encapsulação (% em peso) Exemplo 1 0,02 Exemplo 1-1 0,13 Exemplo 1-2 1,02 Exemplo 1-3 3,24 Exemplo 1-4 5,60 Exemplo Comparativo 1-1 7,54

[00110] Como mostrado na Tabela 2 acima, foi confirmado que no Exemplo 1, no Exemplo 1-1, no Exemplo 1- 2, no Exemplo 1-3 e no Exemplo 1-4, o conteúdo também aumentou proporcionalmente ao aumento na quantidade de ácido ascórbico usado na preparação da fase dispersa. Em particular, o Exemplo 1-4 mostrou que a quantidade máxima de encapsulação de ácido ascórbico era de 5,60% em peso, mantendo a forma das microesferas intactas.

[00111] Por outro lado, o Exemplo Comparativo 1-1 mostrou 7,54% em peso, uma quantidade de encapsulamento relativamente maior de ácido ascórbico, mas foi confirmado que havia um fenômeno em que o formato das microesferas não é uniforme e é emaranhado/aderido, e, portanto, eles não são adequados como agente de encapsulação e dispensação de ácido ascórbico.

Exemplo experimental 4: Avaliação da persistência do enchimento de microesferas de policaprolactona

[00112] Nesse experimento, o volume foi analisado após a administração de enchimento em animais experimentais para avaliar a persistência de enchimentos de microesferas de policaprolactona.

[00113] Os enchimentos de microesferas de policaprolactona foram preparados como no Exemplo 6, no Exemplo 6-1, no Exemplo Comparativo 3 e no Exemplo Comparativo 3-1, e injetados por via subcutânea em incrementos de 100 µL em camundongos sem pelo SKH1-Hrhr 6 semanas após o nascimento, e a análise de volume do sítio administrado foi realizado por um período predeterminado (1 semana, 4 semanas e 8 semanas imediatamente após a administração). O PRIMOSLITE (GFMesstechnikGmbH, Alemanha)

foi usado para a medição do volume e PRIMOS 5.6 foi usado como programa de análise.

[Tabela 3] Imediatamente após 1 semana 4 semanas 8 semanas administração Exemplo 6 100 94 88 79 Exemplo 6-1 101 114 106 100 Exemplo Comparativo 100 % 64 % 62 % 58 % 3 Exemplo Comparativo 102 % 86 % 83 81 3-1

[00114] Como mostrado na Tabela 3 acima, foi confirmado que no Exemplo 6 e no Exemplo 6-1, havia uma diferença na mudança de volume dependendo da composição de enchimento para uma injeção. Foi confirmado que o ácido hialurônico usado no Exemplo 6-1 era relativamente mais eficaz na manutenção do volume do que a carboximetilcelulose.

[00115] Como mostrado nos resultados do Exemplo 6-1 e do Exemplo Comparativo 3-1, foi confirmado que, no caso do Exemplo 6-1, em que as microesferas com ácido ascórbico encapsulado foram usadas, a redução de volume foi relativamente pequena por 8 semanas após a administração, e o fenômeno de aumento do volume inicial foi observado. Isso foi previsto para permitir que o ácido ascórbico encapsulado nas microesferas promova várias funções biológicas, tal como a produção de ácido hialurônico e a síntese de colágeno.

Claims (19)

REIVINDICAÇÕES

1. Microesfera de policaprolactona caracterizada pelo fato de que compreende 0,01 a 6,5% em peso de vitamina C com base no total de 100% em peso da microesfera de policaprolactona contendo vitamina C, e tendo um tamanho médio de partícula de 10 a 100 µm.

2. Microesfera de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a policaprolactona tem uma viscosidade inerente de 0,16 a 1,90 dL/g.

3. Microesfera de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a microesfera tem um valor de amplitude de 1,0 ou menos.

4. Microesfera de policaprolactona, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a vitamina C é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em ácido L-ascórbico, ascorbilfosfato de sódio, ascorbilfosfato de magnésio, ascorbilfosfato de cálcio, polipeptídeo de ácido ascórbico, éter etil ascorbílico, ascorbil dipalmitato, ascorbil palmitato, ascorbil glucosídeo e ascorbil etilsilanol pectinato.

5. Método para preparar uma microesfera de policaprolactona contendo vitamina C caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (a) preparar uma fase dispersa dissolvendo policaprolactona em um primeiro solvente e dissolvendo vitamina C em um segundo solvente para preparar cada solução e, em seguida, misturando uniformemente as duas soluções para preparar uma única solução; (b) preparar uma emulsão misturando a fase dispersa com uma solução aquosa (fase contínua) contendo um tensoativo; (c) formar uma microesfera extraindo e evaporando o solvente orgânico da fase dispersa em uma fase contínua na emulsão preparada na etapa (b); e (d) recuperar a microesfera da fase contínua da etapa (c) para preparar uma microesfera de policaprolactona.

6. Método para preparar uma microesfera de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a policaprolactona tem uma viscosidade inerente de 0,16 a 1,90 dL/g.

7. Método para preparar uma microesfera de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a vitamina C é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em ácido L-ascórbico, ascorbilfosfato de sódio, ascorbilfosfato de magnésio, ascorbilfosfato de magnésio, ascorbilfosfato de cálcio, polipeptídeo de ácido ascórbico, éter etil ascorbílico, ascorbil dipalmitato, ascorbil palmitato, ascorbil glicosídeo e ascorbil etilsilanol pectinato.

8. Método para preparar uma microesfera de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o primeiro solvente da etapa (a) é pelo menos um selecionado do grupo que consiste em diclorometano, clorofórmio, acetato de etila, metiletilcetona e um solvente misturado dos mesmos.

9. Método para preparar uma microesfera de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o segundo solvente da etapa (a) é pelo menos um selecionado do grupo que consiste em dimetilssulfóxido, álcool metílico, álcool etílico, acetona, acetonitrila, dimetilformamida, N-metilpirrolidona, ácido acético e uma mistura dos mesmos.

10. Método para preparar uma microesfera de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o tensoativo da etapa (b) é pelo menos um selecionado do grupo que consiste em metilcelulose, polivinilpirrolidona, carboximetilcelulose, lecitina, gelatina, álcool polivinílico, éster de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, derivados de polioxietileno óleo de rícino e misturas dos mesmos.

11. Método para preparar uma microesfera de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o tensoativo da etapa (b) está contido em uma quantidade de 0,01% p/v a 20% p/v com base no volume total da solução aquosa que contém o tensoativo.

12. Enchimento de microesferas de policaprolactona caracterizado pelo fato de que compreende 2 a 50% em peso de uma microesfera de policaprolactona contendo vitamina C que compreende 0,01 a 6,5% em peso de vitamina C com base no peso total da microesfera e tem um tamanho médio de partícula de 10 a 100 µm; 0,1 a 5% em peso de um soluto; 0 a 48% em peso de um lubrificante; e 15 a 97,9% em peso de um carreador aquoso farmaceuticamente aceitável, com base no total de 100% em peso do enchimento de microesferas de policaprolactona.

13. Enchimento de microesferas de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a vitamina C é pelo menos um selecionado do grupo que consiste em ácido L-ascórbico, ascorbilfosfato de sódio, ascorbilfosfato de magnésio, ascorbilfosfato de magnésio, ascorbilfosfato de cálcio, polipeptídeo de ácido ascórbico, éter etil ascorbílico, ascorbil dipalmitato, ascorbil palmitato, ascorbil glucosídeo e ascorbil etilsilanol pectinato.

14. Enchimento de microesferas de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o soluto é pelo menos um selecionado do grupo que consiste em carboximetilcelulose (CMC),

hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), ácido hialurônico, lidocaína, polidesoxirribonucleotídeo (PDRN), polinucleotídeo (PN) e uma mistura dos mesmos.

15. Enchimento de microesferas de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o lubrificante é glicerina.

16. Enchimento de microesferas de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o carreador aquoso farmaceuticamente aceitável é água destilada, solução salina fisiológica ou tampão fosfato.

17. Enchimento de microesferas de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o enchimento é para melhorar rugas, reparar tecidos moles ou expandir o volume ou corrigir contornos.

18. Enchimento de microesferas de policaprolactona, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o enchimento é para uma injeção.

19. Seringa carregada, caracterizada pelo fato de que é enchida com o enchimento de microesferas de policaprolactona, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 12 a 18.