BR112020012650A2

BR112020012650A2 - anticorpos para lilrb2

Info

Publication number: BR112020012650A2
Application number: BR112020012650-0A
Authority: BR
Inventors: Heather B. COHEN; Lauren Pepper MacKenzie; Yasmin RAMSAY; Donald Raymond SHAFFER; Jeffrey Yan-Fei SMITH; Kristin Shanea O'MALLEY; Kevin Patrick GUAY
Original assignee: Jounce Therapeutics, Inc.
Priority date: 2017-12-22
Filing date: 2018-12-20
Publication date: 2020-12-01
Also published as: JP2024026140A; JP7391868B2; US20230053631A1; EA202091540A1; WO2019126514A2; TW201930357A; IL275268A; CA3087166A1; EP3728318A2; US20190194327A1; EP4219559A3; AU2018389111A1; MX2020006668A; US10723798B2; EP4219559A2; CN111699196A; KR20200103706A; US11359019B2; US20200339690A1; SG11202004806SA

Abstract

Trata-se de várias modalidades que se referem a anticorpos que se ligam a LILRB2. Os anticorpos anti-LILRB2 podem ser usados em métodos para tratar doença, por exemplo, câncer.

Description

ANTICORPOS PARA LILRB2

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[001] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências que foi submetida eletronicamente em formato ASCII e é incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade. A dita cópia ASCII, criada em 13 de dezembro de 2018 é nomeada 51266- 002WO2_Sequence_Listing_12.13.18_ST25 e tem 206026 bytes de tamanho.

ANTECEDENTES

[002] Células mieloides, tais como macrófagos e células dendríticas, podem instruir o sistema imunológico adaptativo para montar uma resposta contra células tumorais e patógenos apresentando antígenos peptídicos a células T ao mesmo tempo que expressam citocinas imunogênicas e sinais coestimuladores, promovendo, assim, a ativação e a proliferação de células T citotóxicas. Por outro lado, numa condição de estado estacionário, as células mieloides mantêm a tolerância a proteínas endógenas, apresentando autoantígenos para células T no contexto de sinais não imunogênicos, tais como citocinas reguladoras, que podem promover células T reguladoras e suprimir a imunogenicidade.

[003] As células cancerosas podem evadir o sistema imunológico por trajetórias de sinalização de engate associadas à apresentação de antígeno imunossupressora ou imunorreguladora. Tais eventos de evasão representam um grande obstáculo para estratégias terapêuticas que dependem da promoção de imunidade antitumoral. Portanto, há uma necessidade de composições terapêuticas e métodos que impeçam a imunossupressão induzida por tumor e promovam a apresentação imunogênica de antígenos tumorais por células mieloides.

SUMÁRIO

[004] A presente invenção apresenta anticorpos que se ligam especificamente a LILRB2 humano. São também fornecidos composições dos anticorpos anti-LILRB2 e métodos para usar os anticorpos anti-LILRB2 e composições dos mesmos.

[005] Em um aspecto, a invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a LILRB2 humano, em que o anticorpo compreende as seguintes regiões determinantes de complementaridade (CDR): (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de JY(J)2G(J)2 (SEQ ID NO: 171); (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)2W(J)11KJ (SEQ ID NO: 172); (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)2I(J)3TDYV(J)3 (SEQ ID NO: 173); (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)8DLJ (SEQ ID NO: 174); (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)7 (SEQ ID NO: 175); e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)3YJYPLJ (SEQ ID NO: 176); em que cada J é, independentemente, um aminoácido de ocorrência natural (consultar, por exemplo, a Tabela 1, abaixo).

[006] Em algumas modalidades, a CDR-H2 compreende a sequência de aminoácidos de SJW(J)11KJ (SEQ ID NO: 177) e/ou a CDR-L3 compreende a sequência de aminoácidos de (J)3YDYPLJ (SEQ ID NO: 178).

[007] Em algumas modalidades, a CDR-H1 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) TYAMGVS (SEQ ID NO: 15); (ii) JYAMGVS (SEQ ID NO: 179); (iii) TYJMGVS (SEQ ID NO: 180); (iv) TYAJGVS (SEQ ID NO: 181); (V) TYAMGJS (SEQ ID NO: 182); (Vi) TYAMGVJ (SEQ ID NO: 183); ou (vii) uma variante de qualquer um de (ii) a (vi) que compreende um aminoácido adicional J em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 171. Assim, quando uma sequência variante é alinhada com a SEQ ID NO: 171, a mesma mantém os aminoácidos não J que são apresentados na SEQ ID NO: 171. O aminoácido J adicional na variante se alinha, assim, com um aminoácido que é um J na SEQ ID NO: 171.

[008] Em algumas modalidades, a CDR-H2 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) SIWWNGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 16); (ii) SJWWNGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 184); (iii) SIWJNGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 185); (iv) SIWWJGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 186); (v) SIWWNJNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 187); (vi) SIWWNGJKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 188); (vii) SIWWNGNJYNNPSLKS (SEQ ID NO: 189); (viii) SIWWNGNKJNNPSLKS (SEQ ID NO: 190); (ix) SIWWNGNKYJNPSLKS (SEQ ID NO: 191); (x) SIWWNGNKYNJPSLKS (SEQ ID NO: 192); (xi) SIWWNGNKYNNJSLKS (SEQ ID NO: 193); (xii) SIWWNGNKYNNPJLKS (SEQ ID NO: 194); (xiii) SIWWNGNKYNNPSJKS (SEQ ID NO: 195); (xiv) SIWWNGNKYNNPSLKJ (SEQ ID NO: 196); ou (xv) uma variante de qualquer um de (ii) a (xiv) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 172. Assim, quando uma sequência variante é alinhada com a SEQ ID NO: 172, a mesma mantém os aminoácidos não J que são apresentados na SEQ ID NO: 172. O aminoácido J adicional na variante se alinha, assim, com um aminoácido que é um J na SEQ ID NO: 172.

[009] Em algumas modalidades, a CDR-H3 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) SRIIRFTDYVMDA (SEQ ID NO: 17); (ii) JRIIRFTDYVMDA (SEQ ID NO: 197); (iii) SJIIRFTDYVMDA (SEQ ID NO: 198); (iv) SRIJRFTDYVMDA (SEQ ID NO: 199); (v) SRIIJFTDYVMDA (SEQ ID NO: 200); (vi) SRIIRJTDYVMDA (SEQ ID NO: 201); (vii) SRIIRFTDYVJDA (SEQ ID NO: 202); (viii) SRIIRFTDYVMJA (SEQ ID NO: 203); (ix) SRIIRFTDYVMDJ (SEQ ID NO: 204); ou (x) uma variante de qualquer um de (ii) a (ix) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 173. Assim, quando uma sequência variante é alinhada com a SEQ ID NO: 173, a mesma mantém os aminoácidos não J que são apresentados na SEQ ID NO: 173. O aminoácido J adicional na variante se alinha, assim, com um aminoácido que é um J na SEQ ID NO: 173.

[010] Em algumas modalidades, a CDR-L1 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) RASEDIYNDLA (SEQ ID NO: 18); (ii) JASEDIYNDLA (SEQ ID NO: 205); (iii) RJSEDIYNDLA (SEQ ID NO: 206); (iv) RAJEDIYNDLA (SEQ ID NO: 207); (v) RASJDIYNDLA (SEQ ID NO: 208); (vi) RASEJIYNDLA (SEQ ID NO: 209); (vii) RASEDJYNDLA (SEQ ID NO: 210); (viii) RASEDIJNDLA (SEQ ID NO: 211); (ix) RASEDIYJDLA (SEQ ID NO: 212); (x) RASEDIYNDLJ (SEQ ID NO: 213); ou (xi) uma variante de qualquer um de (ii) a (x) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO:

174. Assim, quando uma sequência variante é alinhada com a SEQ ID NO: 174, a mesma mantém os aminoácidos não J que são apresentados na SEQ ID NO: 174. O aminoácido J adicional na variante se alinha, assim, com um aminoácido que é um J na SEQ ID NO: 174.

[011] Em algumas modalidades, a CDR-L2 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) NANSLHT (SEQ ID NO: 19); (ii) JANSLHT (SEQ ID NO: 214); (iii) NJNSLHT (SEQ ID NO: 215); (iv) NAJSLHT (SEQ ID NO: 216); (v) NANJLHT (SEQ ID NO: 217); (vi) NANSJHT (SEQ ID NO: 218); (vii) NANSLJT (SEQ ID NO: 219); (viii) NANSLHJ (SEQ ID NO: 220); ou (ix) uma variante de qualquer um de (ii) a (viii) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 175. Assim, quando uma sequência variante é alinhada com a SEQ ID NO: 175, a mesma mantém os aminoácidos não J que são apresentados na SEQ ID NO: 175. O aminoácido J adicional na variante se alinha, assim, com um aminoácido que é um J na SEQ ID NO: 175.

[012] Em algumas modalidades, a CDR-L3 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) QQYYDYPLT (SEQ ID NO: 20); (ii) JQYYDYPLT (SEQ ID NO: 221); (iii) QJYYDYPLT (SEQ ID NO: 222); (iv) QQJYDYPLT (SEQ ID NO: 223); (v)

QQYYDYPLJ (SEQ ID NO: 224); ou (vi) uma variante de qualquer um de (ii) a (v) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 176. Assim, quando uma sequência variante é alinhada com a SEQ ID NO: 176, a mesma mantém os aminoácidos não J que são apresentados na SEQ ID NO: 176. O aminoácido J adicional na variante se alinha, assim, com um aminoácido que é um J na SEQ ID NO: 176.

[013] Em algumas modalidades, a CDR-H2 compreende a sequência de aminoácidos de JIWWNGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 225), ou uma variante da mesma que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 172, e/ou a CDR-L3 compreende a sequência de aminoácidos de QQYYJYPLT (SEQ ID NO: 226), ou uma variante da mesma que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 176. Assim, quando uma sequência variante é alinhada com a SEQ ID NO: 176, a mesma mantém os aminoácidos não J que são apresentados na SEQ ID NO: 176. O aminoácido J adicional na variante se alinha, assim, com um aminoácido que é um J na SEQ ID NO: 176.

[014] Em várias modalidades acima, uma ou mais das CDRs compreendem o dito aminoácido J adicional. Em modalidades adicionais, uma ou mais das CDRs compreendem 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais aminoácidos J adicionais. Nestas modalidades adicionais, cada um dos aminoácidos J adicionais se alinha com um aminoácido que é um J na respectiva fórmula genérica para a CDR. Os aminoácidos especificamente recitados de uma fórmula genérica são mantidos.

[015] Em algumas modalidades, a CDR-H3 compreende a sequência de aminoácidos de (J)2IJXJTDYV(J)3 (SEQ ID NO: 227), em que X não é arginina. Em algumas modalidades, X é selecionado do grupo que consiste em aspartato, glutamato e alanina. Em algumas modalidades, a CDR-H3 compreende a sequência de: (i) JRIIXFTDYVMDA (SEQ ID NO: 228); (ii) SJIIXFTDYVMDA (SEQ ID NO: 229); (iii) SRIJXFTDYVMDA (SEQ ID NO: 230); (iv) SRIIXFTDYVMDA (SEQ ID NO: 231); (v) SRIIXJTDYVMDA (SEQ ID NO: 232); (vi) SRIIXFTDYVJDA (SEQ ID NO: 233); (vii) SRIIXFTDYVMJA (SEQ ID NO: 234); (viii) SRIIXFTDYVMDJ (SEQ ID NO: 235); ou (ix) uma variante de qualquer um de (ii) a (iii) ou (v) a (viii) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 173.

[016] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, ou 113, e/ou uma região de cadeia leve variável (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, 14, 24, 34, 44, 54, 64, 74, 84, 94, 104 ou 114. Deve ser entendido no presente documento que, se uma sequência for exigida numa reivindicação independente e uma reivindicação dependente permite variabilidade numa sequência maior que abrange a sequência da reivindicação independente, a variabilidade não é aplicável à sequência exigida na reivindicação independente.

[017] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 ou 113, e/ou uma região de cadeia leve variável (VL) que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, 14, 24, 34, 44, 54, 64, 74, 84, 94, 104 ou 114.

[018] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101 ou 111, e/ou uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, 22, 32, 42, 52, 62, 72, 82, 92, 102 ou 112.

[019] Em outro aspecto, a invenção fornece um anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano em que o anticorpo compreende as seguintes seis regiões determinantes de complementaridade (CDRs): (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17; (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19; e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20.

[020] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 e uma região de cadeia leve variável (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15-17, e a região VL compreende três CDRs que compreende as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18-

20. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12.

[021] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20. Em modalidades particulares, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53 e uma região de cadeia leve variável VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 51 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52.

[022] Em outras modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 63 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 63 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62.

[023] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 73 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 74, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20. Em modalidades particulares, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 73 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 71 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 72.

[024] Em outras modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 83 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 84, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 83 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 84. Em modalidades particulares, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 81 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 82.

[025] Em outras modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 93 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 94, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 93 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 94. Em modalidades particulares, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 91 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 92.

[026] Em outras modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 104, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 104. Em modalidades particulares, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 101 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 102.

[027] Em outras modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 114, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 114. Em modalidades particulares, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 111 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 112.

[028] Em outro aspecto, a invenção fornece um anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano em que o anticorpo compreende as seguintes seis CDRs: (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8; (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10.

[029] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 5 a 7, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 8 a 10. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4. Em modalidades particulares, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2.

[030] Em outro aspecto, a invenção apresenta um anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano em que o anticorpo compreende as seguintes seis CDRs: (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26; (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27; (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28; (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 29; e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30.

[031] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 25 a 27, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 28 a 30. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 22.

[032] Em outro aspecto, a invenção apresenta um anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano em que o anticorpo compreende as seguintes seis CDRs: (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36; (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37; (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38; (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39; e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40.

[033] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 35 a 37, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 38 a 40. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 32.

[034] Em outro aspecto, a invenção apresenta um anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano em que o anticorpo compreende as seguintes seis CDRs: (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 45; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 46; (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47; (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48; (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 49; e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50.

[035] Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 45 a 47, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 48 a 50. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42.

[036] Em algumas modalidades de qualquer um dos anticorpos descritos no presente documento, por exemplo, aqueles descritos acima, a cadeia pesada do anticorpo compreende adicionalmente uma lisina C-terminal.

[037] Em relação a todos os aspectos e modalidades resumidos acima, quando uma sequência específica é referenciada, a invenção também inclui variantes das sequências. Em diversas modalidades, uma variante pode ser especificada como incluindo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais substituições de uma sequência recitada.

[038] Em outro aspecto, a invenção apresenta um anticorpo que compete de modo cruzado pela ligação a LILRB2 humano com um anticorpo dos aspectos anteriores.

[039] Em outro aspecto, a invenção apresenta um anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano e bloqueia a ligação de HLA-G e/ou HLA-A2 a LILRB2 humano. Em algumas modalidades, o bloqueio é determinado num ensaio de bloqueio de tetrâmero HLA-G com o uso de macrófagos derivados de monócitos humanos, células mieloides humanas e/ou uma linhagem celular que expressa LILRB2. Em algumas modalidades, o ensaio inclui o uso de microesferas conjugadas de HLA-G. Em algumas modalidades, o anticorpo bloqueia o tetrâmero HLA-G com uma EC50 menor do que 20 nM (por exemplo, menor do que 10 nM, menor do que 5 nM, menor do que 2 nM, menor do que 1,0 nM, menor do que 0,5 nM ou menor do que 0,2 nM). Em algumas modalidades, o anticorpo bloqueia o tetrâmero HLA-G com uma EC50 menor do que 0,2 nM. Em algumas modalidades, o bloqueio é determinado num ensaio de bloqueio de tetrâmero HLA-A2 com o uso de macrófagos derivados de monócito humano. Em algumas modalidades, o anticorpo bloqueia o tetrâmero HLA-A2 com uma EC50 menor do que 20 nM (por exemplo, menor do que 10 nM, menor do que 5 nM, menor do que 2 nM, menor do que 1,0 nM, menor do que 0,5 nM ou menor do que 0,2 nM). Em algumas modalidades, o anticorpo bloqueia o tetrâmero HLA-A2 com uma EC50 menor do que 0,2 nM. Em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo se liga especificamente a LILRB2 humano e bloqueia a ligação de HLA-G e/ou HLA-A2 a LILRB2 humano, o anticorpo pode ser qualquer um dos anticorpos de qualquer um ou mais outros aspectos da invenção.

[040] Em outro aspecto, a invenção fornece um anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano, em que o dito anticorpo tem capacidade para converter um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1. Em algumas modalidades, a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão aumentada de um ou mais genes (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco ou todos os seis genes) selecionados do grupo que consiste em CXCL9, CXCL11, IRF1, TAP1, IL6R e IL15. Adicional ou alternativamente, em algumas modalidades, a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão diminuída de um ou mais genes (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou novo genes) selecionados do grupo que consiste em IL-10, CCL2, TGFBR2, CXCL13, IL21R, CD36, CR1, C1QB e TGFBI. Em algumas modalidades, a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é detectada com o uso de um ensaio de histocultura de tumor. Em algumas modalidades, a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é detectada com o uso de um ensaio de macrófago humano primário com o uso de macrófagos derivados de monócito humano. Em algumas modalidades, a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão aumentada de uma, duas ou todas as três citocinas selecionadas do grupo que consiste em TNFα, IL-1β, e IL-6, e/ou a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada pela expressão diminuída de uma ou ambas as citocinas selecionadas do grupo que consiste em IL-10 e CCL-2. Em qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo tem a capacidade para converter um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1, o anticorpo pode ser qualquer um dos anticorpos de qualquer outro um ou mais aspectos da invenção.

[041] Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos anteriores, o anticorpo se liga a LILRB2 com uma constante de dissociação (KD) menor do que 3,0 nM (por exemplo, menor do que 1,5 nM, menor do que 1,0 nM ou menor do que 750 pM).

[042] Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos anteriores, o anticorpo é um anticorpo monoclonal. Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos anteriores, o anticorpo é um anticorpo quimérico, um anticorpo humanizado, um anticorpo enxertado por CDR, ou um anticorpo humano. Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos anteriores, o anticorpo inclui uma região Fc selecionada do grupo que consiste numa região Fc nativa, uma região Fc variante e uma região Fc funcional. Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos anteriores, o anticorpo é um anticorpo conjugado ou é identificado de modo detectável. Em algumas modalidades de qualquer um dos aspectos anteriores, o anticorpo é um anticorpo IgG1, um anticorpo IgG2, um anticorpo IgG3 ou um anticorpo IgG4.

[043] Em todos os aspectos da invenção, se uma modalidade opcional mais específica não for consistente com uma modalidade mais geral, então, a mesma pode ser considerada excluída da modalidade geral.

[044] Em outro aspecto, a invenção fornece uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo do anticorpo de qualquer um dos aspectos anteriores.

[045] Em outro aspecto, a invenção fornece uma célula hospedeira ou vetor incluindo uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo do anticorpo de qualquer um dos aspectos anteriores.

[046] Em outro aspecto, a invenção apresenta uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo de qualquer um dos aspectos anteriores ou uma molécula de ácido nucleico que codifica o anticorpo de qualquer um dos aspectos anteriores.

[047] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar uma doença num indivíduo que precisa do mesmo, sendo que o método inclui administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo de qualquer um dos aspectos anteriores. Em algumas modalidades, a doença é um câncer (consultar, por exemplo, os exemplos de tipos de câncer listados no presente documento em outra parte). Em algumas modalidades, o método inclui ainda a administração do anticorpo em combinação com um segundo agente terapêutico (por exemplo, uma imunoterapia ou uma vacina contra o câncer). Em algumas modalidades, o segundo agente terapêutico é uma imunoterapia que compreende uma terapia PD-1 e/ou uma terapia ICOS.

[048] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para melhorar a resposta imunológica antitumoral num indivíduo que precisa do mesmo, sendo que o método inclui administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um dos aspectos anteriores. Em algumas modalidades, o método inclui ainda a administração do anticorpo em combinação com um segundo agente terapêutico (por exemplo, uma imunoterapia ou uma vacina contra o câncer). Em algumas modalidades, o segundo agente terapêutico é uma imunoterapia que compreende uma terapia PD-1 e/ou uma terapia ICOS.

[049] Em outros aspectos, a invenção inclui o uso dos anticorpos, composições farmacêuticas e combinações para prevenir, tratar, atenuar um ou mais sintomas de uma doença ou afecção (por exemplo, conforme descrito no presente documento, por exemplo, câncer) ou o uso destes agentes para a preparação de um medicamento para estes propósitos.

[050] Em outro aspecto, a invenção fornece um kit que inclui uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo de qualquer um dos aspectos anteriores ou uma molécula de ácido nucleico que codifica o anticorpo de qualquer um dos aspectos anteriores e instruções para uso.

[051] Em outro aspecto, a invenção fornece um oligonucleotídeo que compreende um fragmento de ácido nucleico, em que o fragmento de ácido nucleico compreende pelo menos 16 resíduos de ácido nucleico consecutivos da sequência de oligonucleotídeo de CGTCACCCTCAGTTGTCAG (SEQ ID NO: 143) ou TCCGTGTAATCCAAGATGCTG (SEQ ID NO: 158). Em algumas modalidades, o fragmento de ácido nucleico compreende pelo menos 16 resíduos de ácido nucleico consecutivos da sequência de oligonucleotídeo de AGTCCCGTCACCCTCAGTTGTCAGGGGAG (SEQ ID NO: 169) ou TCGTATCCGTGTAATCCAAGATGCTGATTTT (SEQ ID NO: 170).

[052] A invenção também inclui um conjunto iniciador qPCR que compreende um iniciador direto e um iniciador reverso, em que o iniciador direto compreende um fragmento de ácido nucleico que compreende pelo menos 16 resíduos de ácido nucleico consecutivos da sequência de oligonucleotídeo da SEQ ID NO: 143 ou 169, e o iniciador reverso compreende um fragmento de ácido nucleico que compreende pelo menos 16 resíduos de ácido nucleico consecutivos da sequência de oligonucleotídeo da SEQ ID NO: 158 ou 170, em que o conjunto iniciador qPCR é opcionalmente compreendido num kit que compreende adicionalmente uma sonda que compreende pelo menos 16 resíduos consecutivos da SEQ ID NO: 167.

[053] Adicionalmente, a invenção inclui um método para quantificar um nível de expressão de LILRB2 numa amostra biológica, sendo que o método compreende: (a) obter de cDNA derivado de uma amostra biológica; (b) realizar qPCR no cDNA com o uso de um oligonucleotídeo da reivindicação 87 ou 88, ou um conjunto iniciador qPCR ou kit da reivindicação 89, para produzir um produto de amplificação, em que a qPCR é específico para LILRB2; e (c) quantificar o produto de amplificação para determinar o nível de expressão de LILRB2.

[054] Em outro aspecto, a invenção fornece o uso de um anticorpo conforme descrito no presente documento (por exemplo, acima e em outra parte no presente documento) para tratar ou prevenir uma doença (por exemplo, câncer, consultar, por exemplo, abaixo) num indivíduo que precisa do mesmo pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo ao indivíduo.

[055] Num aspecto adicional, a invenção inclui o uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo conforme descrito no presente documento (por exemplo, acima e em outra parte no presente documento) para intensificar uma resposta imune antitumoral num indivíduo que necessita do mesmo administrando-se uma quantidade eficaz do anticorpo ao indivíduo.

[056] Em qualquer um dos aspectos acima, o uso pode incluir ainda administrar o anticorpo em combinação com um segundo agente terapêutico (por exemplo, uma imunoterapia (por exemplo, uma terapia de PD-1 e/ou uma terapia de ICOS) ou uma vacina contra câncer).

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[057] A Figura 1 é um desenho representando um modelo de uma célula mieloide que expressa LILRB2 e uma célula tumoral que expressa HLA-G. Um anticorpo anti-LILRB2 de bloqueio é mostrado entre o LILRB2 expresso na célula mieloide e o HLA-G expresso na célula tumoral.

[058] As Figuras 2A a 2L são plotagens de citometria de fluxo mostrando regulação decrescente de marcadores de maturação em DCs por tetrâmeros HLA-G. A expressão de marcadores de maturação foi avaliada por citometria de fluxo em células dendríticas imaturas (IDCs) de doador de LILRB2 alto/pos (Figuras 2A a 2F) e doador LILRB2 baixo/neg (Figuras 2G a 2L) cultivadas em meio sozinho (histogramas abertos, linha pontilhada), ou maturado com um coquetel de citocinas na ausência (histogramas abertos, linhas a cheio) ou presença (histogramas a cheio) de HLA-G tetrâmero. Os histogramas são células vivas acionadas, conforme mostrado nas Figuras 2A e 2G. As Figuras 2B e 2H mostram a expressão de LILRB2; as Figuras 2C e 2I mostram a expressão de CD11c; as Figuras 2D e 2J mostram a expressão de HLA-DR; as Figuras 2E e 2K mostram a expressão de CD86; e as Figuras 2F e 2L mostram a expressão de CD80.

[059] As Figuras 3A e 3B são tabelas que mostram os resultados de uma triagem anti-LILRB2 quimérica. As caixas sombreadas indicam os resultados que satisfazem os critérios de limite para cada ensaio de triagem.

[060] A Figura 4 é um gráfico que mostra os resultados de uma triagem de reatividade cruzada da família LILR baseada em célula de mAbs quiméricos anti- LILRB2. Anticorpos específicos para hLILRB2 (símbolos preenchidos) e com reatividade cruzada (símbolos abertos) da triagem são mostrados. Os anticorpos detectados com ligação maior do que duas vezes em relação ao mAb de controle de isotipo foram identificados como anticorpos com reatividade cruzada de hLILR (a linha pontilhada representa este limite).

[061] A Figura 5 é um gráfico mostrando os resultados do bloqueio de HLA- G baseado em célula por mAbs anti-LILRB2. Os mAbs quiméricos anti-LILRB2 de bloqueio HLA-G são mostrados em barras brancas e foram identificados como mAbs com a capacidade para bloquear pelo menos 50% da ligação de HLA-G a células hLILRB2+ (linha pontilhada). mAbs quiméricos de LILRB2 de não bloqueio são representados em barras pretas, e um mAb de controle de isotipo está numa barra cinza.

[062] A Figura 6 é um gráfico mostrando os resultados do bloqueio de HLA- A2 baseado em célula por mAbs anti-LILRB2. Os mAbs quiméricos anti-LILRB2 de bloqueio HLA-A2 são mostrados em barras brancas e foram identificados como mAbs com a capacidade para bloquear pelo menos 50% da ligação de HLA-A2 a células hLILRB2+ (linha pontilhada). mAbs quiméricos de LILRB2 de não bloqueio são representados em barras pretas, e um mAb de controle de isotipo está numa barra cinza.

[063] As Figuras 7A e 7B são gráficos que mostram os resultados de ensaios funcionais baseados em célula de mAbs anti-LILRB2. A Figura 7A mostra a produção de TNFα em relação ao isotipo. A Figura 7B mostra a produção de IL- 10 em relação ao isotipo. Os controles de isotipo são mostrados em linhas cinzas/tracejadas cinzas.

[064] As Figuras 8A e 8B são gráficos que mostram a correlação do bloqueio de ligante versus citocinas promotoras de M1 por mAbs anti-LILRB2. Uma correlação positiva entre o bloqueio de HLA-G (Figura 8A) e o bloqueio de HLA- A2 (Figura 8B) e TNFα produzida em resposta a mAbs anti-LILRB2 (círculos pretos) foi observada em ensaios de células primárias. mAbs de controle negativo são mostrados em cinza.

[065] As Figuras 9A a 9C são gráficos que mostram a avaliação de reatividade cruzada de ser humano-NHP de célula primária de mAbs anti-LILRB2. Os anticorpos foram incubados com sangue total de ser humano (Figura 9A), cino (Figura 9B) e reso (Figura 9C). mAbs anti-LILRB2 mostraram maiores populações LILRB2+ de ligação incluindo monócitos (círculos) e de neutrófilos (quadrados) em relação aos linfócitos (triângulos). Todos os mAbs anti-LILRB2 se ligaram a monócitos e neutrófilos humanos, e um único mAb anti-LILRB2 revelou exibir ligação entre espécies a monócitos e neutrófilos de cino e reso. As barras indicam a média de dois doadores por espécie.

[066] As Figuras 10A e 10B são gráficos que mostram a avaliação de ligação em célula para LILRB2 de reso putativo expresso em CHO (LILRBb). Selecionar mAb quimérico anti-hLILRB2 (preto) ligado seletivamente a LILRBb de reso putativo (Figura 10A) de uma maneira específica e dependente de dose. Este mAb anti-hLILRB2 não se ligou à proteína estreitamente relacionada em reso, LILRBa (Figura 10B). O mAb de controle de isotipo (cinza) não se ligou a nenhuma das linhagens de células.

[067] As Figuras 11A e 11B são tabelas que mostram os resultados da caracterização de anti-LILRB2 humanizado.

[068] A Figura 12 é um gráfico que mostra os resultados de uma triagem de reatividade cruzada da família LILR baseada em célula de mAbs humanizados anti-LILRB2. Os anticorpos específicos para hLILRB2 (símbolos preenchidos) da triagem são mostrados. Nenhum anticorpo com reatividade cruzada de LILR foi identificado.

[069] A Figura 13 é um gráfico que mostra a determinação de afinidade baseada em célula de mAbs anti-hLILRB2 humanizados. Todos os mAbs anti- hLILRB2 testados exibiram ligação específica dependente de dose a hLILRB2 expresso em célula (preto), ao mesmo tempo que o mAb de controle de isotipo não se ligou a hLILRB2 (cinza).

[070] A Figura 14 é um gráfico que mostra o bloqueio de HLA-G baseado em célula por mAbs humanizados anti-LILRB2. mAbs anti-hLILRB2 humanizados (círculos preenchidos pretos) bloqueiam interações de HLA-G:hLILRB2 em macrófagos humanos primários dentro da faixa subnanomolar. mAb de controle do isotipo (cinza) e mAb anti-hLILRB2 quimérico de não bloqueio (círculos abertos) não perturbaram a interação entre HLA-G e hLILRB2 expresso em célula.

[071] A Figura 15 é um gráfico que mostra o bloqueio de HLA-A2 baseado em célula por mAbs humanizados anti-LILRB2. mAbs anti-hLILRB2 humanizados (círculos preenchidos pretos) bloqueiam interações de HLA-A2:hLILRB2 em macrófagos humanos primários dentro da faixa subnanomolar. mAb de controle do isotipo (cinza) e mAb anti-hLILRB2 quimérico de não bloqueio (círculos abertos) não perturbaram a interação entre HLA-A2 e hLILRB2 expresso em célula.

[072] As Figuras 16A e 16B são gráficos que mostram os resultados do ensaio funcional baseado em célula de mAbs humanizados anti-LILRB2. mAbs anti-hLILRB2 humanizados (círculos preenchidos pretos) exibem atividade promotora de M1 conforme medido pela produção de TNFα (Figura 16A) e atividade supressora de M2 conforme medido por uma redução na produção de IL-10 (Figura 16B) pela HMDMs estimulados por LPS. mAbs de controle negativo incluindo mAb de controle de isotipo (cinza) e quimérico anti-hLILRB2 de bloqueio de não ligante (círculos abertos) não exibiram atividade neste ensaio.

[073] As Figuras 17A e 17B são gráficos que mostram os resultados de uma avaliação de ligação em célula para LILRB2 de reso expresso em CHO (LILRBb). Selecionar mAb humanizado anti-hLILRB2 (preto) ligado seletivamente a LILRBb de reso (Figura 17A) de uma maneira específica e dependente de dose. Este mAb anti-hLILRB2 não se ligou à proteína estreitamente relacionada em reso, LILRBa (Figura 17B). O mAb de controle de isotipo (cinza) não se ligou a nenhuma das linhagens de células.

[074] A Figura 18 é um gráfico de plotagem em vulcão que mostra log2 (fold change) na expressão gênica em resposta ao tratamento em relação a controle de palivizumab versus -log10 (valor p nominal). Cada ponto representa a alteração normalizada média na expressão gênica através de todas as amostras que receberam o mesmo tratamento. Os cálculos foram realizados em MATLAB®, e os valores p foram calculados através da realização usando a função de teste t (a hipótese nula é que o log2 normalizado médio (fold change) na expressão gênica através de todas as amostras para um tratamento particular é 0).

[075] A Figura 19 é um mapa de calor de agrupamento hierárquico que mostra o log2 (fold change) na expressão gênica de cada gene (linha) em cada amostra tratada (coluna) normalizado a um controle de IgG4 para cada amostra de histocultura de rim. Cada gene na lista mostrou expressão diferencial a pelo menos dois tratamentos com um valor p nominal menor do que 0,055 (consultar a Tabela 7). A expressão dos genes do Conjunto 1 é geralmente regulada decrescentemente em resposta ao tratamento (caixas cinzas), e a expressão dos genes do Conjunto 2 é geralmente regulada ascendentemente em resposta ao tratamento (caixas pretas). O limite de ruído é definido a 0,3 com base na distribuição de expressão gênica de manutenção. Uma métrica de distância Euclidiana foi usada no agrupamento de ligação completa, que foi realizada em

Spotfire.

[076] A Figura 20 é um gráfico que mostra a pontuação de resposta para cada dador a cada anticorpo anti-LILRB2 de bloqueio de ligante.

[077] As Figuras 21A e 21B são gráficos que mostram pontuações de assinatura de monocultura para cada um dos três anticorpos anti-LILRB2 para cada não respondedor, respondedor parcial e respondedor total.

[078] A Figura 22 é um gráfico que mostra a ligação da proteína sérica a anticorpos através da concentração de anticorpo. Nenhuma ligação de proteína sérica a anticorpos LILRB2 foi observada.

[079] As Figuras 23A a 23D são gráficos que mostram os resultados de um ensaio de liberação de citocina de sangue total. A Figura 23A mostra a secreção de IL-4, a Figura 23B mostra a secreção de IL-6, a Figura 23C mostra a secreção de IL-8, e a Figura 23D mostra a secreção de TNFα. O ensaio foi incubado por 24 horas a 37°C. O plasma foi, então, isolado com citocinas e medido com o uso de um painel de 10-citocina MSD. Os dados são média +/- desvio padrão de três doadores.

[080] As Figuras 24A a 24D são gráficos que mostram os resultados de um ensaio de ativação de neutrófilos. A Figura 24A mostra a expressão de CD11b (como intensidade de fluorescência média geométrica), a Figura 24B mostra a percentagem de células de alto teor de CD11b, a Figura 24C mostra a expressão de CD62L (como intensidade de fluorescência média geométrica), e a Figura 24D mostra a percentagem de células de baixo teor de CD62L, cada uma em resposta a várias concentrações de anticorpos. O ensaio foi incubado por 2 horas a 37°C. As alterações nos marcadores de ativação de neutrófilos (aumento em CD11b e diminuição em CD62L) foram avaliadas por citometria de fluxo. Os dados são média +/- desvio padrão de dois doadores.

[081] A Figura 25 é um gráfico que mostra a concentração sérica de anticorpo anti-LILBR2 em macacos cinomolgos ao longo do tempo, depois de uma dose de 30 mg/kg ou uma dose de três mg/kg. Os dados são a média +/- desvio padrão de três macacos individuais.

[082] As Figura 26A e 26B são gráficos que mostram as populações de neutrófilos de sangue periférico medidas por ensaio de contagem de sangue completo (CBC) no estudo de macacos cinomolgos e após a dosagem de anticorpos anti-LILRB2. Os dados são apresentados como número absoluto de células (Figura 26A) e como uma percentagem do total (Figura 26B).

[083] As Figuras 27A e 27B são gráficos que mostram o crescimento de tumores em camundongos ao longo do tempo após a inoculação com células B16.SIY. A Figura 27A mostra o crescimento tumoral em camundongos do tipo selvagem (WT), e a Figura 27B mostra o crescimento tumoral em camundongos PirB knockout (Pirb-/-).

[084] As Figuras 28A e 28B são gráficos que mostram o crescimento de tumores em camundongos ao longo do tempo após a inoculação com células LLC. A Figura 28A mostra o crescimento tumoral em camundongos WT, e a Figura 28B mostra o crescimento tumoral em camundongos Pirb-/-.

[085] As Figuras 29A e 29B são gráficos que mostram o crescimento de tumores em camundongos ao longo do tempo após a inoculação com células MC38. A Figura 29A mostra o crescimento tumoral em camundongos WT, e a Figura 29B mostra o crescimento tumoral em camundongos Pirb-/-.

[086] A Figura 30 mostra as sequências das regiões variáveis de cadeia pesada (SEQ ID NO: 53) e cadeia leve (SEQ ID NO: 54) de J-19.h1.

[087] A Figura 31 é um histograma das pontuações de resposta de PD de IFNγ de 173 amostras de tumor de 80 tumores tratados com palivizumab por 24 horas.

[088] A Figura 32 é um gráfico e diagrama de Venn descrevendo as taxas de resposta de PD a J-19.h1 através de 3 indicações: carcinoma de células renais, câncer de cabeça e pescoço e câncer de pulmão.

[089] A Figura 33 é uma série de gráficos mostrando pontuações de assinatura de Keytruda calculadas para amostras não tratadas, com base na expressão gênica normalizada (a expressão gênica em bruto é normalizada a genes de manutenção e sondas de controle negativo, então, log2 transformado).

[090] A Figura 34, painel esquerdo, é uma tabela que mostra as pontuações médias de assinatura de PD de IFNγ calculadas para 18 tumores de cabeça e pescoço em resposta a J-19.h1, pembrolizumab ou J-19.h1 combinado com pembrolizumab.

DESCRIÇÃO DETALHADA DE ALGUMAS MODALIDADES

[091] Em geral, a presente invenção apresenta anticorpos contra receptor B2 do tipo imunoglobulina de leucócito (LILRB2), por exemplo, anticorpos úteis para o tratamento de doença (por exemplo, câncer).Esta invenção é baseada, em parte, na descoberta de que é possível gerar anticorpos que são, simultaneamente, (1) específicos para LILRB2 (por exemplo, na medida em que os mesmos não se ligam a outros membros da família LILRA e LILRB), (2) têm capacidade para bloquear a ligação de HLA-G e/ou HLA-A2 a LILRB2 em macrófagos e (3) têm capacidade para promover um fenótipo pró-inflamatório em macrófagos contatados.De fato, o presente pedido divulga a identificação de três famílias independentes de tais anticorpos e divulga que os anticorpos com as propriedades acima têm a capacidade para induzir macrófagos associados a tumor a exibir propriedades anticâncer.Com base, em parte, nestas propriedades, assim como propriedades de segurança e farmacocinéticas favoráveis em modelos animais relevantes para a fisiologia humana, os anticorpos divulgados são candidatos para uso terapêutico em seres humanos.

[092] Anticorpos que se ligam especificamente a LILRB2 (por exemplo,

LILRB2 humano) são fornecidos. São também fornecidas cadeias pesadas e cadeias leves de anticorpo que são capazes de formar anticorpos que se ligam a LILRB2 (por exemplo, LILRB2 humano). Adicionalmente, são fornecidos anticorpos, cadeias pesadas e cadeias leves que compreendem uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs). Também são fornecidos anticorpos que competem de modo cruzado pela ligação a LILRB2 (por exemplo, LILRB2 humano) com qualquer um dos anticorpos descritos no presente documento. Em alguns aspectos, a presente invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a LILRB2 (por exemplo, LILRB2 humano) e bloqueia a ligação de HLA-G e/ou HLA-A2 a LILRB2 humano. Também são fornecidos anticorpos que se ligam especificamente a LILRB2 (por exemplo, LILRB2 humano) e têm a capacidade para converter um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1. Polinucleotídeos que codificam anticorpos a LILRB2 (por exemplo, qualquer um dos anticorpos de LILRB2 fornecidos no presente documento) são fornecidos. São também fornecidos polinucleotídeos que codificam cadeias pesadas ou cadeias leves de anticorpo dos mesmos. Células hospedeiras que contêm os polinucleotídeos descritos no presente documento são também fornecidas. Adicionalmente, as composições farmacêuticas incluindo qualquer um dos anticorpos ou polinucleotídeos fornecidos no presente documento são fornecidas. São fornecidos métodos de tratamento que usam anticorpos para LILRB2. Os métodos incluem, porém sem limitação, métodos para tratar câncer.

[093] Os cabeçalhos de seção usados no presente documento são para propósitos de organização apenas e não devem ser interpretados como limitantes à matéria descrita.

[094] Todas as referências citadas no presente documento, incluindo pedidos de patente, publicações de patente e números de acesso ao Genbank, são incorporadas no presente documento a título de referência como se cada referência individual fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada a título de referência em sua totalidade.

[095] As técnicas e procedimentos descritos ou referidos no presente documento são, de modo geral, bem entendidos e comumente empregados com o uso de metodologia convencional por aqueles versados na técnica, tal como, por exemplo, as metodologias amplamente utilizadas descritas em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3ª edição (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel, et al. eds., (2003)); na série Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M. J. MacPherson, B. D. Hames e G. R. Taylor eds. (1995)), Harlow e Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R. I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell e Tissue Culture (J. P. Mather e P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell e Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths, e D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley e Sons; Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir e C. C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller e M. P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley e Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway e P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd e C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow e D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti e J. D. Capra, eds., Harwood

Academic Publishers, 1995); e Cancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993); e versões atualizadas dos mesmos. I. DEFINIÇÕES

[096] A não ser que definido de outro modo, os termos científicos e técnicos usados em conexão com a presente divulgação terão os significados que são comumente entendidos por aqueles com habilidade comum na técnica. Além disso, salvo requerido pelo contexto ou expressamente indicado, os termos no singular incluirão o plural e os termos no plural incluirão o singular. Para qualquer conflito em definições entre várias fontes ou referências, a definição fornecida no presente documento prevalecerá.

[097] Deve ser entendido que as modalidades da invenção descrita no presente documento incluem "consistir" e/ou "consistir essencialmente" nas modalidades. Conforme usado no presente documento, as formas singulares “um”, “uma”, "o" e “a" incluem referências plurais a não ser que indicado de outra maneira. O uso do termo “ou” no presente documento não se destina a implicar que as alternativas são mutualmente exclusivas.

[098] Neste pedido, o uso de “ou” significa “e/ou”, a não ser que expressamente determinado ou entendido por um versado na técnica. No contexto de uma reivindicação de dependência múltipla, o uso de “ou” se refere novamente a mais de uma reivindicação independente ou dependente anterior.

[099] Os termos “molécula de ácido nucleico”, “ácido nucleico” e “polinucleotídeo” podem ser usados intercambiavelmente e se referem a um polímero de nucleotídeos. Tais polímeros de nucleotídeos podem conter nucleotídeos naturais e/ou não naturais e incluem, porém sem limitação, DNA, RNA e PNA. “Sequência de ácidos nucleicos” se refere à sequência linear de nucleotídeos que compreende a molécula de ácido nucleico ou polinucleotídeo.

[0100] Os termos “polipeptídeo” e “proteína” são usados intercambiavelmente para referência a um polímero de resíduos de aminoácidos e não se limitam a um comprimento mínimo. Tais polímeros de resíduos de aminoácidos podem conter resíduos de aminoácidos naturais ou não naturais e incluem, porém sem limitação, peptídeos, oligopeptídeos, dímeros, trímeros e multímeros de resíduos de aminoácidos. Tanto proteínas de comprimento completo quanto fragmentos da mesma são abrangidos pela definição. Os termos também incluem modificações pós-expressão do polipeptídeo, por exemplo, glicosilação, sialilação, acetilação, fosforilação e similares. Além disso, para propósitos da presente divulgação, um “polipeptídeo” se refere a uma proteína que inclui modificações, tais como deleções, adições e substituições (de modo geral, conservadores em natureza), à sequência nativa, contanto que a proteína mantenha a atividade desejada. Estas modificações podem ser deliberadas, como através de mutagênese sítio-dirigida, ou podem ser acidentais, tal como através de mutações de hospedeiros que produzem as proteínas ou erros devido à amplificação por PCR.

[0101] O termo “se liga especificamente” a um antígeno ou epítopo é um termo que é bem entendido na arte, e os métodos para determinar tal ligação específica são também bem conhecidos na técnica. Diz-se que uma molécula exibe “ligação específica” ou “ligação preferencial” se a mesma reagir ou se associar mais frequentemente, mais rapidamente, com maior duração e/ou com maior afinidade com uma célula ou substância particular do que com células ou substâncias alternativas. Um anticorpo “se liga especificamente” ou “se liga preferencialmente” a um alvo se o mesmo se ligar com maior afinidade, avidez, mais facilidade e/ou com maior duração do que se liga a outras substâncias. Por exemplo, um anticorpo que se liga específica ou preferencialmente a um epítopo de LILRB2 é um anticorpo que se liga a este epítopo com maior afinidade, avidez,

mais facilidade e/ou maior duração do que se liga a outros epítopos de LILRB2 ou epítopos de não LILRB2. É entendido também lendo-se esta definição que, por exemplo, um anticorpo (ou porção química ou epítopo) que se liga específica ou preferencialmente a um primeiro alvo pode ou não se ligar específica ou preferencialmente a um segundo alvo. Deste modo, “ligação específica” ou “ligação preferencial” não exige necessariamente (embora possa incluir) ligação exclusiva. De modo geral, porém, não necessariamente, a referência à ligação significa ligação preferencial. "Especificidade" se refere à capacidade de uma proteína de ligação de se ligar seletivamente a um antígeno.

[0102] Conforme usado no presente documento, “substancialmente puro” se refere a material que é pelo menos 50% puro (ou seja, isento de contaminantes), por exemplo, pelo menos 90% puro, pelo menos 95% puro, pelo menos 98% puro ou pelo menos 99% puro.

[0103] O termo “compete de modo cruzado” se refere à ligação competitiva de uma molécula com outra, por exemplo, ligando-se a todo ou parte do mesmo epítopo. A competição cruzada pode ser determinada com o uso dos experimentos descritos no presente documento (por exemplo, interferometria de biocamada), por exemplo, não detectando nenhum sinal de resposta positivo mediante a adição de um segundo anticorpo a um sensor após um primeiro anticorpo ser ligado ao sinal. Em modalidades particulares, um anticorpo LILRB2 compete de modo cruzado com outro anticorpo LILRB2 pela ligação a LILRB2. A caracterização de tal competição cruzada entre os anticorpos LILRB2 é descrita, por exemplo, no Exemplo 3.

[0104] O termo “anticorpo” no presente documento é usado no sentido mais amplo e abrange várias estruturas de anticorpo, incluindo, porém sem limitação, anticorpo monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos (tais como engatadores de células T biespecíficos) e triespecíficos) e fragmentos de anticorpo contanto que exibam a atividade de ligação a antígeno desejada.

[0105] O termo anticorpo inclui, porém sem limitação, fragmentos que são capazes de ligação a um antígeno, tal como Fv, Fv de cadeia única (scFv), Fab, Fab’, di-scFv, sdAb (anticorpo de domínio único) e (Fab’)2 (incluindo F(ab’)2 quimicamente ligado). A digestão de papaína de anticorpos produz dois fragmentos de ligação a antígeno idênticos, chamados fragmentos “Fab”, cada um com um único sítio de ligação a antígeno e um fragmento de “Fc” residual, cujo nome reflete sua capacidade para cristalizar prontamente. O tratamento com pepsina produz um fragmento F(ab')2 que tem dois sítios de combinação de antígeno e tem ainda capacidade para reticular o antígeno. O termo anticorpo também inclui, porém sem limitação, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados e anticorpos de várias espécies, tais como camundongo, ser humano, macaco cinomolgos, etc. Além disso, para todos os construtos de anticorpo fornecidos no presente documento, são também contempladas variantes que têm as sequências de outros organismos. Assim, se uma versão humana de um anticorpo for divulgada, aquele versado na técnica perceberá como transformar o anticorpo à base de sequência humana numa sequência de camundongo, rato, gato, cão, cavalo, etc. Os fragmentos de anticorpo também incluem qualquer orientação de scFvs de cadeia única, di-scFv em tandem, diacorpos, tri-sdcFv em tandem, minicorpos, etc. Os fragmentos de anticorpo também incluem nanocorpos (sdAb, um anticorpo que tem domínio monomérico único, tal como um par de domínios variáveis de cadeias pesadas, sem uma cadeia leve). Um fragmento de anticorpo pode ser denominado como sendo uma espécie específica em algumas modalidades (por exemplo, scFv humano ou um scFv de camundongo). Isto denota as sequências de pelo menos parte das regiões não CDR, em vez da fonte do construto.

[0106] O termo “anticorpo monoclonal” se refere a um anticorpo de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, ou seja, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos, exceto por mutações de ocorrência natural possíveis que podem estar presentes em quantidades pequenas. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo diretamente contra a um sítio antigênico único. Além disso, em contraste às preparações de anticorpo policlonal que incluem tipicamente anticorpos diferentes direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante no antígeno. Assim, uma amostra de anticorpos monoclonais pode se ligar ao mesmo epítopo no antígeno. O modificador “monoclonal” indica o caráter do anticorpo como sendo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais podem ser produzidos pelo método de hibridoma primeiramente descrito por Kohler e Milstein, 1975, Nature 256:495, ou podem ser produzidos por métodos de DNA recombinante, tal como descrito na Patente nº U.S. 4.816.567. Os anticorpos monoclonais podem ser também isolados de bibliotecas de fago geradas com o uso das técnicas descritas em McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554, por exemplo.

[0107] O termo “CDR” denota uma região determinante de complementaridade conforme definido pelo esquema de numeração de Kabat. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Edição. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). As CDRs exemplificativas (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3) ocorrem nos resíduos de aminoácido 24 a 34 de L1, 50 a 56 de L2, 89 a 97 de L3, 31 a 35B de H1, 50 a 65 de H2 e 95 a 102 de H3. As CDRs podem ser também fornecidas conforme mostrado em qualquer uma ou mais das figuras anexas. Com exceção de CDR1 numa região de cadeia pesada variável (VH), as CDRs compreendem, de modo geral, os resíduos de aminoácido que formam os laços hipervariáveis. As várias CDRs dentro de um anticorpo podem ser designadas por seu número adequado e tipo de cadeia, incluindo, sem limitação: a) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, e CDR-H3; b) CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 e CDRH3; c) LCDR-1, LCDR-2, LCDR-3, HCDR-1, HCDR-2 e HCDR-3; ou d) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 e HCDR3; etc. O termo “CDR” é usado no presente documento para abranger também HVR ou uma “região hipervariável”, incluindo laços hipervariáveis. Os laços hipervariáveis exemplificativos ocorrem nos resíduos de aminoácido 26 a 32 (L1), 50 a 52 (L2), 91 a 96 (L3), 26 a 32 (H1), 53 a 55 (H2) e 96 a 101 (H3). (Chothia e Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917.)

[0108] O termo “região variável de cadeia pesada” ou V H conforme usado no presente documento, se refere a uma região que compreende pelo menos três CDRs de cadeia pesada. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada inclui as três CDRs e pelo menos FR2 e FR3. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada inclui pelo menos HCDR1 de cadeia pesada, framework (FR) 2, HCDR2, FR3 e HCDR3. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia pesada também compreende pelo menos uma porção de um FR1 e/ou pelo menos uma porção de um FR4.

[0109] O termo “região constante de cadeia pesada”, conforme usado no presente documento, se refere a uma região que compreende pelo menos três domínios constantes de cadeia pesada, CH1, CH2 e CH3. Obviamente, deleções e alterações sem alteração de função dentro dos domínios estão abrangidas dentro do escopo do termo “região constante de cadeia pesada”, a não ser que designado de outro modo. As regiões constantes de cadeia pesada exemplificativas não limitantes incluem γ, δ e α. As regiões constantes de cadeia pesada exemplificativas não limitantes também incluem ε e μ. Cada região constante pesada corresponde a um isotipo de anticorpo. Por exemplo, um anticorpo que compreende uma região constante de γ é um anticorpo IgG, um anticorpo que compreende uma região constante de δ é um anticorpo IgD, e um anticorpo que compreende uma região constante de α é um anticorpo IgA. Ademais, um anticorpo que compreende uma região constante de μ é um anticorpo IgM, e um anticorpo que compreende uma região constante de ε é um anticorpo IgE. Certos isotipos podem ser, ainda, subdivididos em subclasses. Por exemplo, os anticorpos IgG incluem, porém sem limitação, anticorpo IgG1 (que compreende uma região constante de γ1), IgG2 (que compreende uma região constante de γ2), IgG3 (que compreende uma região constante de γ3) e IgG4 (que compreende uma região constante de γ4); Os anticorpos IgA incluem, porém sem limitação, anticorpos IgA1 (que compreende uma região constante de α1) e IgA2 (que compreende uma região constante de α2); e os anticorpos IgM incluem, porém sem limitação, IgM1 e IgM2.

[0110] O termo “cadeia pesada”, conforme usado no presente documento, se refere a um polipeptídeo que compreende pelo menos uma região variável de cadeia pesada, com ou sem uma sequência líder. Em algumas modalidades, uma cadeia pesada compreende pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia pesada. O termo “cadeia pesada de comprimento completo”, conforme usado no presente documento, se refere a um polipeptídeo que compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região constante de cadeia pesada, com ou sem uma sequência líder.

[0111] O termo “região variável de cadeia leve” ou VL, conforme usado no presente documento, se refere a uma região que compreende pelo menos três CDRs de cadeia leve. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve inclui as três CDRs e pelo menos FR2 e FR3. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve inclui pelo menos LCDR1 de cadeia leve, framework (FR) 2, LCDR2, FR3 e LCDR3. Por exemplo, uma região variável de cadeia leve pode compreender CDR1 de cadeia leve, framework (FR) 2, CDR2, FR3 e CDR3. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia leve também compreende pelo menos uma porção de um FR1 e/ou pelo menos uma porção de um FR4.

[0112] O termo “região constante de cadeia leve”, conforme usado no presente documento, se refere a uma região que compreende um domínio constante de cadeia leve, CL. As regiões constantes de cadeia leve exemplificativas não limitantes incluem λ e κ. Obviamente, deleções e alterações sem alteração de função dentro dos domínios estão abrangidas dentro do escopo do termo “região constante de cadeia leve”, a não ser que designado de outro modo.

[0113] O termo “cadeia leve”, conforme usado no presente documento, se refere a um polipeptídeo que compreende pelo menos uma região variável de cadeia leve, com ou sem uma sequência líder. Em algumas modalidades, uma cadeia leve compreende pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia leve. O termo “cadeia leve de comprimento completo”, conforme usado no presente documento, se refere a um polipeptídeo que compreende uma região variável de cadeia leve e uma região constante de cadeia leve, com ou sem uma sequência líder.

[0114] Um “framework humano aceitante” para os propósitos no presente documento é um framework que compreende a sequência de aminoácidos de um framework de domínio variável de cadeia leve (VL) ou um framework de domínio variável de cadeia pesada (VH) derivado de um framework de imunoglobulina humana ou um framework consenso humano, conforme definido abaixo. Um framework humano aceito derivado de um framework de imunoglobulina humana ou um framework consenso humano pode compreender a mesma sequência de aminoácidos do mesmo ou pode conter alterações de sequência de aminoácidos. Em algumas modalidades, o número de alterações de aminoácidos são 10 ou menos, 9 ou menos, 8 ou menos, 7 ou menos, 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos ou 2 ou menos. Em algumas modalidades, o framework humano aceitante de VL é idêntico em sequência à sequência de framework de imunoglobulina humana de VL ou sequência de framework consenso humano.

[0115] “Afinidade” se refere, de modo geral, à intensidade do total de soma de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A afinidade de uma molécula X por seu parceiro Y pode ser, de modo geral, representada pela constante de dissociação de equilíbrio (KD). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica (tal como, por exemplo, ELISA KD, KinExA, interferometria de biocamada (BLI) e/ou dispositivos de ressonância plasmônica de superfície (tal como um dispositivo BIACORE®), incluindo aqueles descritos no presente documento).

[0116] O termo “KD”, conforme usado no presente documento, se refere à constante de dissociação de equilíbrio de uma interação entre anticorpo e antígeno.

[0117] Em algumas modalidades, a “KD” do anticorpo é medido com o uso de ensaios de ressonância plasmônica de superfície com o uso de um BIACORE®- 2000 ou um BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, N.J.) a 25°C com chips CM5 de antígeno imobilizado a ~10 unidades de resposta (RU). Em resumo, chips de biossensor de dextrano carboximetilado (CM5, BIACORE, Inc.) são ativados com cloridrato de N-etil-N’-(3-dimetilaminopropil)-carbodi-imida (EDC) e N- hidroxissuccinimida (NHS) de acordo com as instruções do fornecedor. O antígeno é diluído com acetato de sódio 10 mM, pH 4,8, a 5 μg/ml (~0,2 µM),

antes da injeção a uma taxa de fluxo de 5 µl/minuto para atingir aproximadamente 10 unidades de resposta (RU) de proteína acoplada. Após a injeção de antígeno, etanolamina 1 M é injetada para bloquear grupos não reagidos. Para medições de cinética, diluições em série de polipeptídeo, por exemplo, anticorpo de comprimento total, são injetadas em PBS com 0,05% de tensoativo TWEEN-20TM (PBST) a 25°C a uma taxa de fluxo de aproximadamente 25 µl/min. As taxas de associação (kon) e as taxas de dissociação (koff) são calculadas com o uso de um modelo de ligação de Langmuir um a um simples (Software de Avaliação BIACORE® versão 3.2) ajustando-se simultaneamente os sensogramas de associação e dissociação. A constante de dissociação de equilíbrio (KD) é calculada como a razão koff/kon. Consultar, por exemplo, Chen et al., 1999, J. Mol. Biol. 293:865-881. Se a taxa de associação exceder 106 M-1s-1 pelo ensaio de ressonância plasmônica de superfície acima, então, a taxa de associação pode ser determinada com o uso de uma técnica de arrefecimento brusco fluorescente que mede o aumento ou a diminuição em intensidade de emissão de fluorescência (excitação=295 nm; emissão=340 nm, 16 nm de passagem de banda) a 25°C de um anticorpo antiantígeno 20 nM em PBS, pH 7,2, na presença de concentrações crescentes de antígeno conforme medido num espectrômetro, tal como um espectrofotômetro equipado com fluxo de parada (Aviv Instruments) ou um espectrofotômetro SLM-AMINCOTM série 8000 (ThermoSpectronic) com um cadinho agitado.

[0118] Em algumas modalidades, a diferença entre os referidos dois valores (por exemplo, valores de KD) é substancialmente a mesma, por exemplo, menor que cerca de 50%, menor que cerca de 40%, menor que cerca de 30%, menor que cerca de 20% e/ou menor que cerca de 10% como uma função do valor de referência/comparador.

[0119] Em algumas modalidades, a diferença entre os referidos dois valores

(por exemplo, valores de KD) é substancialmente diferente, por exemplo, maior que cerca de 10%, maior que cerca de 20%, maior que cerca de 30%, maior que cerca de 40% e/ou maior que cerca de 50% como uma função do valor para a molécula de referência/comparadora.

[0120] “Ressonância de plásmon de superfície” denota um fenômeno óptico que permite a análise de interações bioespecíficas em tempo real por detecção de alterações em concentrações de proteína dentro de uma matriz de biossensor, por exemplo, com o uso do sistema BIAcoreTM (BIAcore International AB, uma empresa da GE Healthcare, Uppsala, Suécia e Piscataway, N.J.). Para outras descrições, consultar Jonsson et al., 1993, Ann. Biol. Clin . 51:19-26.

[0121] “Interferometria de biocamada” se refere a uma técnica analítica óptica que analisa o padrão de interferência de luz refletida a partir de uma camada de proteína imobilizada numa ponta de biossensor e uma camada de referência interna. As alterações no número de moléculas ligadas à ponta de biossensor causam deslocamentos do padrão de interferência que podem ser medidos em tempo real. Um dispositivo exemplificativo não limitante para interferometria de biocamada é o sistema FORTEBIO® OCTET® RED96 (Pall Corporation). Consultar, por exemplo, Abdiche et al., 2008, Anal. Biochem. 377: 209-277.

[0122] O termo “kon”, conforme usado no presente documento, se refere à constante de taxa para associação de um anticorpo a um antígeno. Especificamente, as constantes de taxa (kon e koff) e a constante de dissociação de equilíbrio (KD) são medidas com o uso de IgGs (bivalentes) com antígeno monovalente (por exemplo, antígeno de LILRB2). “Kon”, “kon”, “constante de taxa de associação” ou “ka” são usados intercambiavelmente no presente documento. O valor indica a taxa de ligação de uma proteína de ligação a seu antígeno alvo ou a taxa de formação de complexo entre um anticorpo e o antígeno mostrado pela equação: Anticorpo(“Ab”)+Antígeno(“Ag”)Ab-Ag.

[0123] O termo “koff”, conforme usado no presente documento, se refere à constante de taxa para dissociação de um anticorpo do complexo de anticorpo/antígeno. koff é também denotado como “Koff” ou a “constante de taxa de dissociação”. Este valor indica a taxa de dissociação de um anticorpo de seu antígeno alvo ou a separação do complexo Ab-Ag ao longo do tempo em anticorpo e antígeno livres, conforme mostrado pela equação: AB+AGAB-AG.

[0124] O termo "atividade biológica" se refere a qualquer uma ou mais propriedades biológicas de uma molécula (esteja presente naturalmente conforme encontrada in vivo, ou fornecida ou habilitada por meios recombinantes). As propriedades biológicas incluem, porém sem limitação, ligar um receptor, induzir a proliferação de células, inibir o crescimento celular, induzir maturação ou ativação (por exemplo, maturação ou ativação de células mieloides), inibir a maturação ou ativação (por exemplo, maturação ou ativação de células mieloides), induzir a expressão ou secreção de citocinas (por exemplo, citocinas inflamatórias ou citocinas imunossupressoras), induzir apoptose, e atividade enzimática. Em algumas modalidades, a atividade biológica de uma proteína LILRB2 inclui, por exemplo, a conversão de macrófagos de tipo M2 em macrófagos de tipo M1.

[0125] Um “macrófago de tipo M2”, conforme usado no presente documento, se refere a um macrófago caracterizado por uma ou mais características imunossupressoras, em relação a uma referência. As características imunossupressoras incluem expressão de marcador de maturação ou marcador de ativação diminuída (por exemplo, expressão diminuída de um ou mais marcadores coestimuladores (por exemplo, CD80 ou

CD86), apresentação de antígeno diminuída (por exemplo, pela expressão de HLA), expressão diminuída de citocinas inflamatórias (por exemplo, TNFα, IL-6 ou IL-1β) e expressão aumentada de marcador regulador ou supressor (por exemplo, expressão ou secreção de IL-10 ou CCL-2 aumentada). As características imunossupressoras podem ser adicional ou alternativamente caracterizadas pela diminuição na expressão de gene imunogênico ou inflamatório, ou aumento na expressão de gene imunossupressor ou imunorregulador, de acordo com os métodos conhecidos na técnica. As características imunossupressoras podem ser adicional ou alternativamente caracterizadas por uma ou mais qualidades funcionais, tais como a capacidade para inibir a ativação e/ou expansão de outras células imunes. Ensaios adequados para identificar um macrófago como um macrófago de tipo M2 são conhecidos na técnica e descritos no presente documento. Por exemplo, um ensaio de macrófagos humanos primários pode ser usado para determinar se um macrófago é um macrófago de tipo M2 ou um macrófago de tipo M1. Em alguns casos, um macrófago de tipo M2 é um macrófago associado a tumor. No contexto de se determinar se um macrófago é um macrófago de tipo M2, uma referência pode ser fornecida por um macrófago de controle de origem igual ou diferente (por exemplo, um controle não tratado ou um controle tratado com LPS). Nas modalidades em que um macrófago candidato é um macrófago associado a tumor, um controle pode ser um macrófago não associado a tumor (por exemplo, de um dador saudável). Alternativamente, uma referência pode ser um limite predeterminado, por exemplo, um parâmetro derivado de um limite imunossupressor conhecido na técnica.

[0126] Um “macrófago de tipo M1”, conforme usado no presente documento, se refere a um macrófago caracterizado por uma ou mais características imunogênicas (por exemplo, imunoestimuladoras ou ativadoras),

em relação a uma referência.

As características imunogênicas incluem expressão de marcador de maturação ou marcador de ativação aumentada (por exemplo, expressão aumentada de um ou mais marcadores coestimuladores (por exemplo, CD80 ou CD86), apresentação de antígeno aumentada (por exemplo, pela expressão de HLA), expressão aumentada de citocinas ativadoras (por exemplo, TNFα, IL-6 ou IL-1β), expressão diminuída de marcador regulador ou supressor (por exemplo, expressão ou secreção de IL-10 ou CCL-2 diminuída). As características imunogênicas podem ser adicional ou alternativamente caracterizadas pelo aumento na expressão de gene imunogênico inflamatório ou diminuição na expressão de gene imunossupressor ou imunorregulador, de acordo com os métodos conhecidos na técnica.

As características imunogênicas podem ser adicional ou alternativamente caracterizadas por uma ou mais qualidades funcionais, tais como a capacidade para ativar e/ou expandir outras células imunes.

Ensaios adequados para identificar um macrófago como um macrófago de tipo M1 são conhecidos na técnica e descritos no presente documento.

Por exemplo, um ensaio de macrófagos humanos primários pode ser usado para determinar se um macrófago é um macrófago de tipo M2 ou um macrófago de tipo M1. Em alguns casos, um macrófago de tipo M1 é um macrófago associado a tumor (por exemplo, um macrófago associado a tumor que foi exposto a um anticorpo para LILRB2). No contexto de se determinar se um macrófago é um macrófago de tipo M1, uma referência pode ser fornecida por um macrófago de controle de origem igual ou diferente (por exemplo, um controle não tratado ou um controle imunossuprimido). Nas modalidades em que um macrófago candidato é um macrófago associado a tumor, um controle pode ser um macrófago não associado a tumor (por exemplo, de um dador saudável). Alternativamente, uma referência pode ser um limite predeterminado, por exemplo, um parâmetro derivado de um limite imunogênico conhecido na técnica.

[0127] “A conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1” pode ser identificada mediante a detecção de um aumento em qualquer uma ou mais características de um macrófago de tipo M1, uma diminuição em qualquer uma ou mais características de um macrófago de tipo M2 ou qualquer combinação dos mesmos.

[0128] Conforme usado no presente documento, um “macrófago derivado de monócito humano”, um “macrófago diferenciado de monócito humano” ou um “HMDM” se refere a um macrófago que foi derivado de um monócito humano primário. Em algumas modalidades, o macrófago humano primário é derivado de monócitos do sangue total (por exemplo, de uma população de PBMC). Em algumas modalidades, os monócitos humanos primários são incubados na presença de M-CSF por sete dias. Um macrófago derivado de monócito humano pode ser obtido com o uso dos métodos descritos no Exemplo

6.

[0129] Conforme usado no presente documento, o termo “ensaio de bloqueio de tetrâmero” se refere a um ensaio que inclui as seguintes etapas:

[0130] (1) colocar 1 × 105 macrófagos (por exemplo, macrófagos diferenciados de monócitos humanos (HMDMs)) num poço de uma placa de cultura de tecido de fundo redondo de 96 poços;

[0131] (2) adicionar 50 µl do anticorpo de teste (por exemplo, controle de isotipo ou anticorpo de LILRB2) em tampão (por exemplo, tampão FACS (1xDPBS contendo HI-FBS 2% (Sigma)+Azida de Sódio 0,05%));

[0132] (3) incubar 30 minutos a 4°C;

[0133] (4) lavar as células em tampão (por exemplo, tampão FACS) e ressuspender em 50 µl de tampão (por exemplo, tampão FACS) contendo 1 µg/ml de tetrâmero (por exemplo, tetrâmero identificado com fluorocromo, por exemplo, tetrâmero HLA-G ou HLA-A2);

[0134] (5) incubar protegendo da luz por 30 a 60 minutos a 4°C;

[0135] (6) lavar as células em tampão (por exemplo, tampão FACS); e

[0136] (7) quantificar a ligação de tetrâmero (por exemplo, com o uso de citometria de fluxo).

[0137] Um “anticorpo quimérico”, conforme usado no presente documento, se refere a um anticorpo em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é derivada de uma fonte ou espécie particular, enquanto pelo menos uma parte do restante da cadeia pesada e/ou leve é derivada de uma fonte ou espécie diferente. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico se refere a um anticorpo que compreende pelo menos uma região variável de uma primeira espécie (tal como camundongo, rato, macaco cinomolgos, etc.) e pelo menos uma região constante de uma segunda espécie (tal como ser humano, macaco cinomolgos, etc.). Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico compreende pelo menos uma região variável de camundongo e pelo menos uma região constante humana. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico compreende pelo menos uma região variável de cinomolgos e pelo menos uma região constante humana. Em algumas modalidades, todas dentre as regiões variáveis de um anticorpo quimérico são de uma primeira espécie e todas dentre as regiões constante do anticorpo quimérico são de uma segunda espécie. O construto quimérico pode também ser um fragmento funcional, conforme indicado acima.

[0138] Um “anticorpo humanizado”, conforme usado no presente documento, se refere a um anticorpo em que pelo menos um aminoácido numa região de framework de uma região variável não humana foi substituída pelo aminoácido correspondente de uma região variável humana. Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado compreende pelo menos uma região constante humana ou fragmento da mesma.

Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado é um fragmento de anticorpo, tal como Fab, um scFv, um (Fab')2, etc.

O termo humanizado também denota formas de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) que são imunoglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulina ou fragmentos das mesmas (tais como Fv, Fab, Fab’, F(ab’)2 ou outras subsequências de ligação a antígeno de anticorpos) que contêm sequência mínima de imunoglobulina não humana.

Os anticorpos humanizados podem incluir imunoglobulinas humanas (anticorpo receptor) em que os resíduos de uma região determinante de complementaridade (CDR) do receptor são substituídos por resíduos de uma CDR de uma espécie não humana (anticorpo doador), tais como camundongo, rato ou coelho que tem a especificidade, afinidade e capacidade desejadas.

Em alguns casos, resíduos de framework (FR) de Fv da imunoglobulina humana são substituídos por resíduos não humanos correspondentes.

Além disso, o anticorpo humanizado pode compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor nem nas sequências de CDR ou framework importadas, mas estão incluídos para refinar e otimizar ainda mais o desempenho do anticorpo.

Geralmente, o anticorpo humanizado pode compreender substancialmente todos dentre pelo menos um e tipicamente dois domínios variáveis, em que todos ou substancialmente todas as regiões CDR correspondem àqueles de uma imunoglobulina não humana, e todas ou substancialmente todas as regiões FR são aqueles de uma sequência consenso de imunoglobulina humana.

Em algumas modalidades, o anticorpo humanizado pode também compreender pelo menos uma porção de uma região ou domínio constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquele de uma imunoglobulina humana.

Outras formas de anticorpos humanizados têm uma ou mais CDRs (CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 e/ou CDR H3) que são alteradas em relação ao anticorpo original, que são também denominadas uma ou mais CDRs “derivadas de” uma ou mais CDRs do anticorpo original. Conforme será entendido, uma sequência humanizada pode ser identificada por sua sequência primária e não denota necessariamente o processo pelo qual o anticorpo foi criado.

[0139] Um “anticorpo enxertado com CDR”, conforme usado no presente documento, se refere a um anticorpo humanizado em que uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de uma primeira espécie (não humana) foram enxertadas nas regiões de framework (FRs) de uma segunda espécie (humana).

[0140] Um “anticorpo humano” conforme usado no presente documento abrange anticorpos produzidos em seres humanos, anticorpos produzidos em animais não humanos que compreendem genes de imunoglobulina humana, tais como camundongos XENOMOUSE®, e anticorpos selecionados com o uso de métodos in vitro, tais como apresentação em fago (Vaughan et al., 1996, Nat. Biotechnol., 14:309-314; Sheets et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 95:6157- 6162; Hoogenboom e Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581), em que o repertório de anticorpos se baseia numa sequência de imunoglobulina humana. O termo “anticorpo humano” denota o gênero de sequências que são sequências humanas. Assim, o termo não designa o processo pelo qual o anticorpo foi criado, porém o gênero de sequências que são relevantes.

[0141] Uma “região Fc funcional” possui uma “função efetora” de uma região Fc de sequência nativa. As “funções efetoras” exemplificativas incluem ligação de receptor Fc; ligação de C1q; CDC; ADCC; fagocitose; regulação decrescente de receptores de superfície celular (por exemplo, receptor de célula B; BCR), etc. Tais funções efetoras exigem, de modo geral, que a região Fc seja combinada com um domínio de ligação (por exemplo, um domínio variável de anticorpo) e podem ser avaliadas com o uso de vários ensaios.

[0142] Uma “região Fc de sequência nativa” compreende uma sequência de aminoácidos idêntica à sequência de aminoácidos de uma região Fc encontrada na natureza. As regiões Fc humanas de sequência nativa incluem uma região Fc de IgG1 humana de sequência nativa (alótipos não A e A); região Fc de IgG2 humana de sequência nativa; região Fc de IgG3 humana de sequência nativa; e região Fc de IgG4 humana de sequência nativa assim como variantes de ocorrência natural das mesmas.

[0143] Uma “região Fc variante” compreende uma sequência de aminoácidos que difere daquela de uma região Fc de sequência nativa em virtude de pelo menos uma modificação de aminoácido. Em algumas modalidades, uma “região Fc variante” compreende uma sequência de aminoácidos que difere daquela de uma região Fc de sequência nativa em virtude de pelo menos uma modificação de aminoácido, ainda retém pelo menos uma função efetora da região Fc de sequência nativa. Em algumas modalidades, a região Fc variante tem pelo menos uma substituição de aminoácido em comparação com uma região Fc de sequência nativa ou a região Fc de um polipeptídeo original, por exemplo, de cerca de uma a cerca de dez substituições de aminoácido e, de preferência, de cerca de uma a cerca de cinco substituições de aminoácido numa região Fc de sequência nativa ou na região Fc do polipeptídeo original. Em algumas modalidades, a região Fc variante no presente documento possuirá pelo menos cerca de 80% de identidade de sequência com uma região Fc de sequência nativa e/ou com uma região Fc de um polipeptídeo original, pelo menos cerca de 90% de identidade de sequência com a mesma, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98% ou pelo menos cerca de 99% de identidade de sequência com a mesma.

[0144] “Receptor Fc” ou “FcR” descreve um receptor que se liga à região Fc de um anticorpo. Em algumas modalidades, um FcγR é um FcR humano nativo. Em algumas modalidades, um FcR é aquele que se liga a um anticorpo IgG (um receptor gama) e inclui receptores das subclasses FcγRI, FcγRII e FcγRIII, incluindo variantes alélicas e, alternativamente, formas submetidas a splicing destes receptores. Os receptores FcγRII incluem FcγRIIA (um “receptor de ativação”) e FcγRIIB (um “receptor de inibição”), que têm sequências de aminoácidos similares que diferem principalmente nos domínios citoplasmáticos dos mesmos. O receptor FcγRIIA de ativação contém um motivo de ativação â base de tirosina imunorreceptora (ITAM) em seu domínio citoplasmático, O receptor FcγRIIB de inibição contém um motivo de inibição à base de tirosina imunorreceptora (ITIM) em seu domínio citoplasmático. Consultar, por exemplo, Daeron, 1997, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234. FcRs são analisados, por exemplo, em Ravetch e Kinet, 1991, Annu. Rev. Immunol 9:457-92; Capel et al., 1994, Immunomethods, 4:25-34; e de Haas et al., 1995, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41. Outros FcRs, incluindo aqueles a serem identificados no futuro, são abrangidos pelo termo "FcR" no presente documento.

[0145] O termo “receptor Fc” ou “FcR” também inclui o receptor neonatal, FcRn, que é responsável pela transferência de IgGs maternas ao feto (Guyer et al., 1976, J. Immunol. 117:587 e Kim et al., 1994, J. Immunol. 24:249) e regulação de homeostase de imunoglobulinas. Os métodos para medir a ligação a FcRn são conhecidos. Consultar, por exemplo, Ghetie e Ward, 1997, Immunol. Today, 18(12):592-598; Ghetie et al., 1997, Nat. Biotechnol., 15(7):637-640; Hinton et al., 2004, J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216; e o documento WO 2004/92219 (Hinton et al.).

[0146] “Funções efetoras” se referem a atividades biológicas atribuíveis à região Fc de um anticorpo, que variam com o isotipo de anticorpo. Os exemplos de funções efetoras de anticorpo incluem: ligação a Clq e citotoxicidade dependente de complemento (CDC); ligação a receptor Fc; citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpo (ADCC); fagocitose; regulação decrescente de receptores de superfície celular (por exemplo, receptor de células B); e ativação de células B.

[0147] "Citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpo" ou "ADCC" se refere a uma forma de citotoxicidade em que a Ig secretada ligada em receptores de Fc (FcRs) presente em determinadas células citotóxicas (por exemplo, células NK, neutrófilos e macrófagos) possibilita que estas células efetoras citotóxicas se liguem especificamente a uma célula-alvo que porta antígeno e subsequentemente exterminar a célula-alvo com citotoxinas. As células primárias para mediar ADCC, células NK, expressam FcγRIII apenas, enquanto monócitos expressam FcγRI, FcγRII e FcγRIII. A expressão de FcR em células hematopoiéticas é sumarizada na Tabela 3 na página 464 de Ravetch e Kinet, 1991, Annu. Rev. Immunol 9:457-92. Para avaliar a atividade de ADCC de uma molécula de interesse, um ensaio de ADCC in vitro, tal como aquele descrito na Patente nº U.S. 5.500.362, 5.821.337 ou 6.737.056 (Presta), pode ser realizado. As células efetoras úteis para tais ensaios incluem células PBMC e NK. Alternativa ou adicionalmente, a atividade de ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, num modelo animal, tal como aquele divulgado em Clynes et al, 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. (EUA) 95:652-656. As variantes de polipeptídeo adicionais com sequências de aminoácidos de região Fc alterada (polipeptídeos com uma região Fc variante) e atividade de ADCC aumentada ou diminuída são descritas, por exemplo, na Patente nº U.S.

7.923.538 e na Patente nº U.S. 7.994.290.

[0148] "Citotoxicidade dependente de complemento" ou "CDC" se refere à lise de uma célula-alvo na presença de complemento. A ativação da trajetória de complemento clássico é iniciada pela ligação do primeiro componente do sistema complementar (C1q) a anticorpos (da subclasse adequada), que são ligados a seu antígeno cognato. Para avaliar a ativação de complemento, um ensaio de CDC, por exemplo, conforme descrito em Gazzano-Santoro et al., 1996, J. Immunol. Methods 202:163, pode ser realizado. As variantes de polipeptídeo com sequências de aminoácidos de região Fc alterada (polipeptídeos com uma região Fc variante) e capacidade de ligação a C1q aumentada ou diminuída são descritas, por exemplo, na Patente nº U.S.

6.194.551 B1, Patente nº U.S. 7.923.538, Patente nº U.S. 7.994.290 e documento nº WO 1999/51642. Consultar também, por exemplo, Idusogie et al., 2000, J. Immunol. 164: 4178-4184.

[0149] Uma variante de polipeptídeo com afinidade de ligação a FcR ou atividade de ADCC “alterada” é aquela que tem atividade de ligação a FcR e/ou de ADCC aumentada ou diminuída em comparação com um polipeptídeo original ou com um polipeptídeo que compreende uma região Fc de sequência nativa. A variante de polipeptídeo que “exibe ligação aumentada” a um FcR que se liga a pelo menos um FcR com afinidade melhor que o polipeptídeo original. A variante de polipeptídeo que “exibe ligação diminuída” a um FcR que se liga a pelo menos um FcR com afinidade menor que um polipeptídeo original. Tais variantes que exibem ligação diminuída a um FcR podem possuir pouca ou nenhuma ligação perceptível a um FcR, por exemplo, 0 a 20% de ligação ao FcR em comparação com uma região Fc de IgG de sequência nativa.

[0150] A variante de polipeptídeo que “media citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpo (ADCC) na presença de células efetoras humanas mais efetivamente” que um anticorpo original é aquele que in vitro ou in vivo é mais efetivo para mediar ADCC, quando as quantidades de variante de polipeptídeo e anticorpo original usadas no ensaio são essencialmente as mesmas. Geralmente, tais variantes serão identificadas com o uso do ensaio ADCC in vitro conforme revelado no presente documento, mas outros ensaios ou métodos para determinar a atividade de ADCC, por exemplo, em um modelo animal etc. são contemplados.

[0151] O termo “substancialmente similar” ou “substancialmente o mesmo”, conforme usado no presente documento, denota um grau suficientemente alto de similaridade entre dois ou mais valores numéricos de modo que um versado na técnica consideraria a diferença entre os dois ou mais como sendo de pouca ou nenhuma significância biológica e/ou estatística dentro do contexto da característica biológica medida pelo referido valor. Em algumas modalidades, os dois ou mais valores substancialmente similares diferem em no máximo cerca de qualquer um dentre 5%, 10%, 15%, 20%, 25% ou 50%.

[0152] O sintagma “substancialmente diferente”, conforme usado no presente documento, denota um grau suficientemente alto de diferença entre dois valores numéricos de modo que um versado na técnica consideraria a diferença entre os dois como sendo de significância biológica e/ou estatística dentro do contexto da característica biológica medida pelos referidos valores. Em algumas modalidades, os dois valores numéricos substancialmente diferentes diferem em mais de cerca de qualquer um dentre 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100%.

[0153] O sintagma “substancialmente reduzido”, conforme usado no presente documento, denota um grau suficientemente alto de redução entre um valor numérico e um valor numérico de referência de modo que um versado na técnica consideraria a diferença entre os dois como sendo de significância biológica e/ou estatística dentro do contexto da característica biológica medida pelos referidos valores. Em algumas modalidades, os valores numéricos substancialmente reduzidos são reduzidos em mais de cerca de qualquer um dentre 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100% em comparação com o valor de referência.

[0154] O termo “sequência líder” se refere a uma sequência de resíduos de aminoácido localizada na terminação N de um polipeptídeo que facilita a secreção de um polipeptídeo de uma célula de mamífero. Uma sequência líder pode ser clivada mediante exportação do polipeptídeo da célula de mamífero, formando uma proteína madura. As sequências líder podem ser naturais ou sintéticas, e podem ser heterólogas ou homólogas à proteína a qual são fixadas.

[0155] Um polipeptídeo de “sequência nativa” compreende um polipeptídeo que tem a mesma sequência de aminoácidos que um polipeptídeo encontrado na natureza. Assim, um polipeptídeo de sequência nativa pode ter a sequência de aminoácidos de um polipeptídeo de ocorrência natural de qualquer mamífero. Tal polipeptídeo de sequência nativa pode ser isolado da natureza ou pode ser produzido por meios recombinantes ou sintéticos. O termo polipeptídeo de “sequência nativa” abrange especificamente formas secretadas ou truncadas de ocorrência natural do polipeptídeo (por exemplo, uma sequência de domínio extracelular), formas variantes de ocorrência natural (por exemplo, formas alternativamente submetidas a splicing) e variantes alélicas de ocorrência natural do polipeptídeo.

[0156] Uma “variante” de polipeptídeo significa um polipeptídeo biologicamente ativo que tem pelo menos cerca de 80% identidade de sequência de aminoácidos com o polipeptídeo de sequência nativa após alinhar as sequências e introduzir lacunas, se necessário, para atingir a identidade de sequência percentual máxima, e não considerando quaisquer substituições conservadoras como parte da identidade de sequência. Tais variantes incluem, por exemplo, polipeptídeos em que um ou mais resíduos de aminoácido são adicionados, ou deletados, na terminação N ou C do polipeptídeo. Em algumas modalidades, uma variante terá pelo menos cerca de 80% de identidade de sequência de aminoácidos. Em algumas modalidades, uma variante terá pelo menos cerca de 90% de identidade de sequência de aminoácidos. Em algumas modalidades, uma variante terá pelo menos cerca de 95% de identidade de sequência de aminoácidos com o polipeptídeo de sequência nativa.

[0157] Conforme usado no presente documento, “percentagem (%) de identidade de sequência de aminoácidos” e “homologia”, no que diz respeito a uma sequência de peptídeos, polipeptídeos ou anticorpo, são definidas como a percentagem de resíduos de aminoácidos numa sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência de peptídeo ou polipeptídeo específica, após alinhamento das sequências e introdução de intervalos, se necessário, para se alcançar a máxima identidade de percentagem de sequência, e não considerando quaisquer substituições conservativas como parte da identidade de sequência. O alinhamento para propósitos de determinação da porcentagem de identidade de sequência de aminoácidos pode ser alcançado de vários modos que estão dentro da habilidade na técnica, por exemplo, usando um software de computador comercialmente disponível tal como o software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou MEGALIGNTM (DNASTAR). Os versados na técnica conseguem determinar parâmetros apropriados para medição do alinhamento, incluindo quaisquer algoritmos necessários para alcançar alinhamento máximo ao longo de todo o comprimento das sequências sendo comparadas.

[0158] Uma substituição de aminoácido pode incluir, porém sem limitação, a substituição de um aminoácido num polipeptídeo por outro aminoácido. As substituições exemplificativas são mostradas na Tabela 1. As substituições de aminoácido podem ser introduzidas num anticorpo de interesse e os produtos triados quanto à atividade desejada, por exemplo, ligação a antígeno mantida/aprimorada, imunogenicidade diminuída ou ADCC ou CDC aprimorado.

TABELA 1.

Resíduo Original Substituições exemplificativas Ala (A) Val; Leu; Ile Arg (R) Lys; Gln; Asn Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Asp (D) Glu; Asn Cys (C) Ser; Ala Gln (Q) Asn; Glu Glu (E) Asp; Gln Gly (G) Ala His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; Norleucina Leu (L) Norleucina; Ile; Val; Met; Ala; Phe Lys (K) Arg; Gln; Asn Met (M) Leu; Phe; Ile Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Pro (P) Ala Ser (S) Thr Thr (T) Val; Ser Trp (W) Tyr; Phe Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Norleucina

[0159] Os aminoácidos podem ser agrupados de acordo com propriedades de cadeia lateral comuns:

[0160] (1) hidrofóbicos: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

[0161] (2) hidrofílicos neutros: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

[0162] (3) ácidos: Asp, Glu;

[0163] (4) básicos: His, Lys, Arg;

[0164] (5) resíduos que influenciam a orientação de cadeia: Gly, Pro;

[0165] (6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe.

[0166] As substituições não conservativas implicarão a troca de um membro de uma dentre estas classes por outra classe.

[0167] O termo “vetor” é usado para descrever um polinucleotídeo que pode ser geneticamente modificado para conter um polinucleotídeo ou polinucleotídeos clonados que podem ser propagados numa célula hospedeira. Um vetor pode incluir um ou mais dos seguintes elementos: uma origem de replicação, uma ou mais sequências reguladoras (tais como, por exemplo, promotores e/ou intensificadores) que regulam a expressão do polipeptídeo de interesse e/ou um ou mais genes marcadores selecionáveis (tais como, por exemplo, genes de resistência a antibióticos e genes que podem ser usados em ensaios colorimétricos, por exemplo, β-galactosidase). O termo “expressão vetor” se refere a um vetor que é usado para expressar um polipeptídeo de interesse numa célula hospedeira.

[0168] Uma “célula hospedeira” se refere a uma célula que pode ser ou foi uma receptora de um vetor ou polinucleotídeo isolado. As células hospedeiras podem ser células procarióticas ou células eucarióticas. As células eucarióticas exemplificativas incluem células de mamífero, tais células de animais primatas ou não primatas; células fúngicas, tal como levedura; células vegetais; e células de inseto. As células de mamífero exemplificativas não limitantes incluem,

porém sem limitação, células NSO, células PER.C6® (Crucell) e células 293 e CHO, e seus derivados, tais como células 293-6E e DG44, respectivamente. As células hospedeiras incluem a progênie de uma célula hospedeira única, e a progênie pode não ser necessariamente idêntica por completo (em morfologia ou em complemento de DNA genômico) à célula progenitora original devido a mutação natural, acidental ou deliberada. Uma célula hospedeira inclui células transfectadas in vivo com um polinucleotídeo (ou polinucleotídeos) fornecidas no presente documento.

[0169] O termo “isolado”, conforme usado no presente documento, se refere a uma molécula que foi separada de pelo menos alguns dos componentes com os quais a mesma é tipicamente encontrada a natureza ou produzida. Por exemplo, um polipeptídeo é denominado “isolado” quando é separado de pelo menos algum dos componentes da célula em que foi produzido. Quando um polipeptídeo é secretado por uma célula após expressão, separar fisicamente o sobrenadante contendo o polipeptídeo da célula que produziu o mesmo é considerado como “isolar” o polipeptídeo. Similarmente, um polinucleotídeo é denominado “isolado” quando não é parte do polinucleotídeo maior (tal como, por exemplo, DNA genômico ou DNA mitocondrial, no caso de um polinucleotídeo de DNA) em que o mesmo é tipicamente encontrado na natureza, ou é separado de pelo menos algum dos componentes da célula em que o mesmo foi produzido, por exemplo, no caso de um polinucleotídeo de RNA. Assim, um polinucleotídeo de DNA que está contido num vetor dentro de uma célula hospedeira pode ser denominado “isolado”.

[0170] Os termos “indivíduo” ou “sujeito” são usados no presente documento de maneira intercambiável para se referir a um animal; por exemplo, um mamífero. Em algumas modalidades, são fornecidos métodos para tratar mamíferos, incluindo, porém sem limitação, seres humanos, roedores, símios,

felinos, caninos, equinos, bovinos, porcinos, ovinos, caprinos, animais de laboratório mamíferos, animais de fazenda mamíferos, animais de esporte mamíferos e animais de estimação mamíferos. Em alguns exemplos, um “indivíduo” ou “sujeito” se refere a um indivíduo ou sujeito que precisa de tratamento para uma doença ou distúrbio. Em algumas modalidades, o sujeito que receberá o tratamento pode ser um paciente, designando o fato de que o sujeito foi identificado como tendo um distúrbio de relevância ao tratamento, ou que está em risco adequado de contrair o distúrbio.

[0171] Uma “doença” ou “distúrbio”, conforme usado no presente documento, se refere a uma afecção em que o tratamento é necessário e/ou desejado.

[0172] “Câncer” e “tumor”, conforme usado no presente documento, são termos intercambiáveis que se referem a qualquer crescimento ou proliferação anormal de células ou tecidos num animal. Conforme usado no presente documento, os termos “câncer” e “tumor” abrangem cânceres sólidos e hematológicos/linfáticos e também abrangem crescimento maligno, pré- maligno e benigno, tal como displasia. Os exemplos de câncer incluem, porém sem limitação, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia. Os exemplos não limitantes mais particulares de tais cânceres incluem câncer do rim (por exemplo, carcinoma de células renais, por exemplo, carcinoma de células renais papilares), câncer de células escamosas, mesotelioma, teratoma, câncer de pulmão de células pequenas, câncer da pituitária, câncer esofágico, astrocitoma, sarcoma de tecido mole, câncer de pulmão (por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas, adenocarcinoma do pulmão, carcinoma escamoso do pulmão), câncer do peritôneo, câncer hepatocelular, câncer gastrointestinal (por exemplo, câncer de estômago), câncer pancreático, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer retal, carcinoma endometrial ou uterino, carcinoma de glândula salivar, câncer de fígado, câncer de próstata, câncer vulval, câncer de tireoide, timoma, carcinoma hepático, câncer do cérebro, glioma, glioblastoma, câncer endometrial, câncer de testículo, colangiocarcinoma, colangiossarcoma, carcinoma de vesícula biliar, câncer gástrico, melanoma (por exemplo, melanoma uveal), feocromocitoma, paraganglioma, carcinoma cístico adenoide e vários tipos de câncer de cabeça e pescoço (por exemplo, câncer de cabeça e pescoço escamoso).

[0173] Conforme usado no presente documento, “tratamento” é uma abordagem para obter resultados clínicos benéficos ou desejados. “Tratamento”, conforme usado no presente documento, abrange qualquer administração ou aplicação de um agente terapêutico para doença num mamífero, incluindo um ser humano. Para os propósitos desta divulgação, os resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, porém sem limitação, qualquer uma ou mais dentre: alívio de um ou mais sintomas, diminuição de extensão da doença, prevenção ou atraso de espalhamento (por exemplo, metástase, por exemplo, metástase ao pulmão ou ao nódulo linfático) da doença, prevenção ou atraso de recaída da doença, atraso ou retardamento de progressão da doença, atenuação do estado doentio, inibição da doença ou progressão da doença, inibição ou retardamento da doença ou sua progressão, parada de seu desenvolvimento e remissão (seja parcial ou total). É também abrangida por “tratamento” uma redução de consequência patológica de uma doença proliferativa. Os métodos fornecidos no presente documento contemplam qualquer um ou mais destes aspectos do tratamento. Em linha com o anterior, o termo tratamento não exige cem porcento de remoção de todos os aspectos do distúrbio.

[0174] “Atenuação” significa uma redução ou melhora de um ou mais sintomas em comparação com não administrar um anticorpo anti-LILRB2. “Atenuação” também inclui encurtamento ou redução na duração de um sintoma.

[0175] No contexto de câncer, o termo “tratar” inclui qualquer um ou todos dentre: inibição do crescimento de células de câncer, inibição da replicação de células de câncer, redução de carga tumoral geral e atenuação de um ou mais sintomas associados à doença.

[0176] O termo "amostra biológica” significa uma quantidade de uma substância de um ser vivo ou ser recentemente vivo. Tais substâncias incluem, porém, sem limitação, sangue (por exemplo, sangue total), plasma, soro, urina, fluido amniótico, fluido sinovial, células endoteliais, leucócitos, monócitos, outras células, órgãos, tecidos, medula óssea, nodos linfáticos e baço.

[0177] O termo "controle" se refere a uma composição que se sabe não conter um analito ("controle negativo") ou que contém analito ("controle positivo"). Um controle positivo pode compreender uma concentração conhecida de analito. "Controle", "controle positivo" e "calibrador" podem ser usados intercambiavelmente no presente documento para referência a uma composição que compreende uma concentração conhecida de analito. Um "controle positivo" pode ser usado para estabelecer características de desempenho de ensaio e é um indicador útil da integridade dos reagentes (por exemplo, analitos).

[0178] “Corte predeterminado” e “nível predeterminado” se referem, de modo geral, a um valor de corte de ensaio que é usado para avaliar os resultados de eficácia diagnóstica/prognóstica/terapêutica comparando-se os resultados de ensaio contra o corte/nível predeterminado, em que o corte/nível predeterminado já foi ligado ou associado a vários parâmetros clínicos (por exemplo, gravidade da doença, progressão, não progressão, melhora, etc.).

Embora a presente divulgação possa fornecer níveis predeterminados exemplificativos, é bem conhecido que os valores de corte podem variar dependendo da natureza do imunoensaio (por exemplo, anticorpos empregados, etc.). Está, ainda, bem dentro da habilidade de uma pessoa de habilidade comum na técnica adaptar a divulgação no presente documento a outros imunoensaios para obter valores de corte específicos para imunoensaio para estes outros imunoensaios baseados nesta divulgação. Embora o valor exato do corte/nível predeterminado possa variar entre ensaios, correlações, conforme descrito no presente documento (caso haja), podem ser aplicáveis, de modo geral.

[0179] Os termos “inibição” ou “inibir” se referem a uma diminuição ou cessação de qualquer característica fenotípica ou à diminuição ou cessação na incidência, grau ou probabilidade desta característica. “Reduzir” ou “inibir” é diminuir, reduzir ou parar uma atividade, função e/ou quantidade em comparação com uma referência. Em algumas modalidades, “reduzir” ou “inibir” significa a capacidade de causar uma diminuição geral de 20% ou mais. Em algumas modalidades, “reduzir” ou “inibir” significa a capacidade de causar uma diminuição geral de 50% ou mais. Em algumas modalidades, “reduzir” ou “inibir” significa a capacidade de causar uma diminuição geral de 75%, 85%, 90%, 95% ou mais. Em algumas modalidades, a quantidade indicada acima é inibida ou diminuída durante um período de tempo, em relação a uma dose de controle (tal como um placebo) durante o mesmo período de tempo. Uma “referência”, conforme usado no presente documento, se refere a qualquer amostra, padrão ou nível que é usado para propósitos de comparação. Uma referência pode ser obtida a partir de uma amostra saudável e/ou sem doença. Em alguns exemplos, uma referência pode ser obtida a partir de uma amostra não tratada. Em alguns exemplos, uma referência é obtida a partir de uma amostra não doente ou não tratada de um indivíduo em questão. Em alguns exemplos, uma referência é obtida a partir de um ou mais indivíduos saudáveis que não são o sujeito ou paciente.

[0180] Conforme usado no presente documento, “atrasar o desenvolvimento de uma doença” significa protelar, impedir, desacelerar, retardar, estabilizar, suprimir e/ou postergar o desenvolvimento da doença (tal como câncer). Este atraso pode ser de extensões de tempo variáveis, dependendo do histórico da doença e/ou indivíduo sendo tratados. Como fica evidente para uma pessoa versada na técnica, um atraso suficiente ou significativo pode, em efeito, abranger a prevenção, em que o indivíduo não desenvolve a doença. Por exemplo, um câncer em estágio tardio, tal como desenvolvimento de metástase, pode ser atrasado.

[0181] “Prevenir”, conforme usado no presente documento, inclui fornecer profilaxia em relação à ocorrência ou reincidência de uma doença num indivíduo que pode ser predisposto à doença, mas não foi ainda diagnosticado com a doença. A não ser que especificado de outro modo, os termos “reduzir”, “inibir” ou “prevenir” não denotam ou exigem prevenção completa durante todo o tempo.

[0182] Conforme usado no presente documento, “suprimir” uma função ou atividade é reduzir a função ou a atividade em comparação com condições de outro modo iguais, exceto por uma condição ou parâmetro de interesse ou, alternativamente, em comparação com outra condição. Por exemplo, um anticorpo que suprime o crescimento tumoral reduz a taxa de crescimento do tumor em comparação com a taxa de crescimento do tumor na ausência do anticorpo.

[0183] Uma “quantidade terapeuticamente eficaz” de uma substância/molécula, agonista ou antagonista pode variar de acordo com fatores, tais como o estado doentio, idade, sexo e peso do indivíduo, e a capacidade da substância/molécula, agonista ou antagonista de elicitar a resposta desejada no indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é também uma em que quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais da substância/molécula, agonista ou antagonista são compensados pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser distribuída numa ou mais administrações. Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para atingir o resultado terapêutico e/ou profilático desejado.

[0184] Uma "quantidade profilaticamente eficaz" se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para atingir o resultado profilático desejado. Tipicamente, porém não necessariamente, como uma dose profilática é usada em indivíduos antes ou em estágios precoces da doença, a quantidade profilaticamente eficaz será menor que a quantidade terapeuticamente eficaz.

[0185] Os termos “formulação farmacêutica” e "composição farmacêutica" se referem a uma preparação que está em tal forma para permitir que a atividade biológica do ingrediente (ou ingredientes) ativo seja eficaz e que não contém nenhum componente adicional que seja inaceitavelmente tóxico a um indivíduo ao qual a formulação seria administrada. Tais formulações podem ser estéreis.

[0186] Um “carreador farmaceuticamente aceitável” se refere a uma carga não tóxica sólida, semissólida ou líquida, diluente, material de encapsulação, auxiliar de formulação ou carreador convencional na técnica para uso com um agente terapêutico que, em conjunto, compreendem uma “composição farmacêutica” para administração a um sujeito. Um carreador farmaceuticamente aceitável é não tóxico a receptores nas dosagens e concentrações empregadas e é compatível com outros ingredientes da formulação. O carreador farmaceuticamente aceitável é adequado para a formulação empregada.

[0187] Uma formulação “estéril” é asséptica ou essencialmente isenta de todos os micro-organismos vivos e seus esporos.

[0188] Uma “terapia de PD-1” inclui qualquer terapia que modula a ligação de PD-1 a PD-L1 e/ou PD-L2.As terapias de PD-1 podem, por exemplo, interagir diretamente com PD-1 e/ou PD-L1.Em algumas modalidades, uma terapia de PD- 1 inclui uma molécula que se liga diretamente a e/ou influencia a atividade de PD-1. Em algumas modalidades, uma terapia de PD-1 inclui uma molécula que se liga diretamente a e/ou influencia a atividade de PD-L1.Assim, um anticorpo que se liga à PD-1 ou PD-L1 e bloqueia a interação de PD-1 a PD-L1 é um produto terapêutico de PD-1.Quando um subtipo desejado de terapia de PD-1 é pretendido, o mesmo será designado pelo sintagma “específico para PD-1” para uma terapia envolvendo uma molécula que interage diretamente com PD-1, ou “específico para PD-L1” para uma molécula que interage diretamente com PD- L1, conforme for apropriado.A não ser que designado de outro modo, toda divulgação contida no presente documento relacionada à terapia de PD-1 se aplica a terapia de PD-1 em geral, assim como terapias específicas para PD-1 e/ou específicas para PD-L1.As terapias de PD-1 exemplificativas não limitantes incluem nivolumab (BMS-936558, MDX-1106, ONO-4538); pidilizumab, lambrolizumab/pembrolizumab (KEYTRUDA®, MK-3475); durvalumab; RG-7446; MSB-0010718C; AMP-224; BMS-936559 (um anticorpo anti-PD-L1); AMP-514; MDX-1105; ANB-011; anti-LAG-3/PD-1; Ab anti-PD-1 (CoStim); Ab anti-PD-1 (Kadmon Pharm.); Ab anti-PD-1 (Immunovo); Ab anti-TIM-3/PD-1 (AnaptysBio); Ab anti-PD-L1 (CoStim/Novartis); MEDI-4736 (um anticorpo anti-PD-L1, Medimmune/AstraZeneca); RG7446/MPDL3280A (um anticorpo anti-PD-L1,

Genentech/Roche); KD-033, antagonista de PD-1 (Agenus); STI-A1010; STI- A1110; TSR-042; e outros anticorpos que são dirigidos contra morte programada-1 (PD-1) ou ligante de morte programada 1 (PD-L1).

[0189] A administração “em combinação com” um ou mais agentes terapêuticos adicionais inclui a administração simultânea (concomitante) e consecutiva ou sequencial em qualquer ordem.

[0190] O termo “concomitantemente” é usado no presente documento para referência à administração de dois ou mais agentes terapêuticos, em que pelo menos parte da administração é sobreposta em tempo ou em que a administração de um agente terapêutico esteja dentro de um período curto de tempo em relação à administração do outro agente terapêutico. Por exemplo, os dois ou mais agentes terapêuticos são administrados com uma separação de tempo de no máximo cerca de um número especificado de minutos.

[0191] O termo “sequencialmente” é usado no presente documento para referência à administração de dois ou mais agentes terapêuticos em que a administração de um ou mais agentes continua após descontinuar a administração de um ou mais outros agentes. Por exemplo, a administração dos dois ou mais agentes terapêuticos é realizada com uma separação em tempo de mais de cerca de um número especificado de minutos.

[0192] Conforme usado no presente documento, “em conjunto com” se refere à administração de uma modalidade de tratamento adicionalmente a outra modalidade de tratamento. Desse modo, “em conjunto com” se refere à administração de uma modalidade de tratamento antes, durante ou após a administração da outra modalidade de tratamento ao indivíduo.

[0193] O termo “bula” é usado para se referir a instruções costumeiramente incluídas em embalagens comerciais de produtos terapêuticos que contêm informações sobre as indicações, uso, dosagem, administração,

terapias de combinação, contraindicações e/ou avisos em relação ao uso de tais produtos terapêuticos.

[0194] Um “artigo de manufatura” é qualquer manufatura (por exemplo, um pacote ou recipiente) ou kit que compreende pelo menos um reagente, por exemplo, um medicamento para o tratamento de uma doença ou distúrbio (por exemplo, câncer) ou uma sonda para detectar especificamente um biomarcador descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a fabricação ou kit é promovido, distribuído ou vendido como uma unidade para realizar os métodos descritos no presente documento.

[0195] Os termos "identificação" e "identificação detectável" significam uma porção química ligada a um anticorpo ou seu analito, para tornar detectável uma reação (por exemplo, ligação) entre os membros do par de ligação específica. O membro identificado do par de ligação específica é denominado "identificado de modo detectável". Assim, o termo "proteína de ligação identificada" se refere a uma proteína com uma identificação incorporada que fornece a identificação da proteína de ligação. Em algumas modalidades, a identificação é um marcador detectável que pode produzir um sinal que é detectável por meio visual ou instrumental, por exemplo, incorporação de um aminoácido radioidentificado ou ligação a um polipeptídeo de porções químicas de biotinila que podem ser detectadas por avidina marcada (por exemplo, estreptavidina contendo um marcador fluorescente ou atividade enzimática que pode ser detectada por métodos ópticos ou colorimétricos). Os exemplos de identificações para polipeptídeos incluem, porém sem limitação, os seguintes: radioisótopos ou radionuclídeos (por exemplo, 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177 Lu, 166Ho ou 153Sm); cromogênios, identificações fluorescentes (por exemplo, FITC, rodamina, fosfatos de lantanídeo), identificações enzimáticas (por exemplo, peroxidase de rábano silvestre, luciferase, fosfatase alcalina);

marcadores quimioluminescentes; grupos biotinila; epítopos de polipeptídeo predeterminados reconhecidos por um segundo repórter (por exemplo, sequências de par de zíperes de leucina, sítios de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metal, etiquetas de epítopo); e agentes magnéticos, tais como quelatos de gadolínio. Os exemplos representativos de identificações comumente empregadas para imunoensaios incluem porções químicas que produzem luz, por exemplo, compostos de acridínio, e porções químicas que produzem fluorescência, por exemplo, fluoresceína. Nesse sentido, a própria porção química pode não ser identificada de modo detectável, mas pode se tornar detectável mediante reação com ainda outra porção química.

[0196] O termo “conjugado” se refere a um anticorpo que está quimicamente ligado a uma segunda porção química, tal como um agente terapêutico ou citotóxico. O termo "agente" inclui um composto químico, uma mistura de compostos químicos, uma macromolécula biológica ou um extrato feito de materiais biológicos. Em algumas modalidades, os agentes citotóxicos ou terapêuticos incluem, porém sem limitação, toxina pertússica, taxol, citocalasina B, gramicidina D, brometo de etídio, emetina, mitomicina, etoposídeo, tenoposídeo, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorubicina, daunorubicina, di-hidróxi antracina diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1-desidrotestosterona, glicocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol e puromicina e análogos ou homólogos dos mesmos. Quando empregado no contexto de um imunoensaio, o anticorpo conjugado pode ser um anticorpo identificado de modo detectável usado como o anticorpo de detecção. II. ANTICORPOS ANTI-LILRB2

[0197] São fornecidos anticorpos inovadores direcionados contra LILRB2.

Os anticorpos anti-LILRB2 incluem, porém sem limitação, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, anticorpos de camundongo, anticorpos humanos e anticorpos que compreendem as CDRs de cadeia pesada e/ou cadeia leve discutidas no presente documento. Em algumas modalidades, é fornecido um anticorpo isolado que se liga a LILRB2. Em algumas modalidades, é fornecido um anticorpo monoclonal que se liga a LILRB2.

[0198] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis CDRs selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 15; (b) CDR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17; (d) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; (e) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19; e (f) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20.

[0199] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis CDRs selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 95; (b) CDR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96; (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97; (d) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98; (e) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99; e (f) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 100.

[0200] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis CDRs selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 105; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 106; (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 107; (d)

CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108; (e) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109; e (f) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110.

[0201] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis CDRs selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 115; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 116; (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 117; (d) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 118; (e) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 119; e (f) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 120.

[0202] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido que compete com um anticorpo anti-LILRB2 descrito no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo que compete pela ligação (isto é, compete de modo cruzado) com qualquer um dos anticorpos fornecidos no presente documento pode ser produzido e/ou usado.

[0203] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia pesada selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 15; (B) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; e (C) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17.

[0204] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia leve selecionadas dentre (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID

NO: 20.

[0205] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia pesada selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 95; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97.

[0206] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia leve selecionadas dentre (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 100.

[0207] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia pesada selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 105; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 106; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 107.

[0208] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia leve selecionadas dentre (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 108; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110.

[0209] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia pesada selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 115; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 116; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 117.

[0210] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia leve selecionadas dentre (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 118; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 119; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 120.

[0211] Em algumas modalidades, qualquer uma das seis CDRs fornecidas no presente documento pode ser combinada como subpartes com qualquer uma das outras CDRs fornecidas no presente documento, para um total de seis CDRs em um constructo. Assim, em algumas modalidades, duas CDR de um primeiro anticorpo (por exemplo, CDR-H1 e CDR-H2) podem ser combinadas com quatro CDRs de um segundo anticorpo (CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3). Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos numa ou mais das CDRs podem ser substituídos para obter uma variante das mesmas. Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos podem ser substituídos em 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 das CDRs.

[0212] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 13, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0213] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17.

[0214] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 14, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0215] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20.

[0216] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 13 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 13 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 14, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0217] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 13 e da SEQ ID NO: 14, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0218] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12.

[0219] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 53. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 53, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0220] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17.

[0221] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 54, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0222] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20.

[0223] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 53. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 53 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 54, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0224] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 53 e da SEQ ID NO: 54, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0225] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 51 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52.

[0226] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 63, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0227] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17.

[0228] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 64, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0229] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20.

[0230] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 63 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 63 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 64, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0231] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 63 e da SEQ ID NO: 64, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0232] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62.

[0233] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 73. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 73. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 73, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0234] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17.

[0235] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 74, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0236] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20.

[0237] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 73 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 73. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 73 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 74, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0238] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 73 e da SEQ ID NO: 74, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0239] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 71 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 72.

[0240] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 83. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 83. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 83, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0241] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17.

[0242] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 84. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 84. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 84, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0243] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20.

[0244] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 83 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 84. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 83. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 84. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 83 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 84, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0245] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 83 e da SEQ ID NO: 84, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0246] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 81 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 82.

[0247] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 93. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 93. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 93, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0248] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 95; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97.

[0249] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 94. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 94. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 94, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0250] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 98; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 100.

[0251] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 93 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 94. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%,

94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 93. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 94. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 93 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 94, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0252] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 93 e da SEQ ID NO: 94, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0253] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 91 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 92.

[0254] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%,

92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 103. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 103, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0255] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 105; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 106; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 107.

[0256] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 104. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 104. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 104, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0257] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 108; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 109; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 110.

[0258] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 104. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 103. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 104. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 103 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 104, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0259] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 103 e da SEQ ID NO: 104, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0260] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 101 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

102.

[0261] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 113. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 113, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0262] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 115; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 116; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 117.

[0263] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 114. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 114. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 114, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0264] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 118; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 119; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 120.

[0265] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 114. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo,

substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 113. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 114. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 113 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 114, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0266] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 113 e da SEQ ID NO: 114, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0267] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 111 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

112.

[0268] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis CDRs selecionadas dentre (a)

CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5; (b) CDR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (d) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8; (e) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; e (f) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10.

[0269] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido que compete com um anticorpo anti-LILRB2 descrito no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo que compete pela ligação (isto é, compete de modo cruzado) com qualquer um dos anticorpos fornecidos no presente documento pode ser produzido e/ou usado.

[0270] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia pesada selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7.

[0271] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia leve selecionadas dentre (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10.

[0272] Em algumas modalidades, qualquer uma das seis CDRs fornecidas no presente documento pode ser combinada como subpartes com qualquer uma das outras CDRs fornecidas no presente documento, para um total de seis CDRs em um constructo. Assim, em algumas modalidades, duas CDR de um primeiro anticorpo (por exemplo, CDR-H1 e CDR-H2) podem ser combinadas com quatro CDRs de um segundo anticorpo (CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3). Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos numa ou mais das CDRs podem ser substituídos para obter uma variante das mesmas. Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos podem ser substituídos em 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 das CDRs.

[0273] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 3, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0274] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7.

[0275] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 4, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0276] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10.

[0277] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 3 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 4, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0278] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 3 e da SEQ ID NO: 4, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0279] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2.

[0280] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis CDRs selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; (b) CDR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26; (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27; (d) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28; (e) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 29; e (f) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30.

[0281] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido que compete com um anticorpo anti-LILRB2 descrito no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo que compete pela ligação (isto é, compete de modo cruzado) com qualquer um dos anticorpos fornecidos no presente documento pode ser produzido e/ou usado.

[0282] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia pesada selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27.

[0283] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia leve selecionadas dentre (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 29; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30.

[0284] Em algumas modalidades, qualquer uma das seis CDRs fornecidas no presente documento pode ser combinada como subpartes com qualquer uma das outras CDRs fornecidas no presente documento, para um total de seis CDRs em um constructo. Assim, em algumas modalidades, duas CDR de um primeiro anticorpo (por exemplo, CDR-H1 e CDR-H2) podem ser combinadas com quatro CDRs de um segundo anticorpo (CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3). Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos numa ou mais das CDRs podem ser substituídos para obter uma variante das mesmas. Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos podem ser substituídos em 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 das CDRs.

[0285] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 23. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 23, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0286] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27.

[0287] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 24, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0288] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 28; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 29; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30.

[0289] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 23. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 23 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 24, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0290] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 23 e da SEQ ID NO: 24, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0291] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 22.

[0292] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis CDRs selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35; (b) CDR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36; (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37; (d) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38; (e) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39; e (f) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40.

[0293] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido que compete com um anticorpo anti-LILRB2 descrito no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo que compete pela ligação (isto é, compete de modo cruzado) com qualquer um dos anticorpos fornecidos no presente documento pode ser produzido e/ou usado.

[0294] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia pesada selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37.

[0295] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia leve selecionadas dentre (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40.

[0296] Em algumas modalidades, qualquer uma das seis CDRs fornecidas no presente documento pode ser combinada como subpartes com qualquer uma das outras CDRs fornecidas no presente documento, para um total de seis CDRs em um constructo. Assim, em algumas modalidades, duas CDR de um primeiro anticorpo (por exemplo, CDR-H1 e CDR-H2) podem ser combinadas com quatro CDRs de um segundo anticorpo (CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3). Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos numa ou mais das CDRs podem ser substituídos para obter uma variante das mesmas. Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos podem ser substituídos em 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 das CDRs.

[0297] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 33. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 33, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0298] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37.

[0299] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 34. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 34, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0300] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40.

[0301] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 33. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 34. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 33 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 34, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0302] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 33 e da SEQ ID NO: 34, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0303] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 32.

[0304] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco ou seis CDRs selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 45; (b) CDR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 46; (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47; (d) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48; (e) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 49; e (f) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50.

[0305] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido que compete com um anticorpo anti-LILRB2 descrito no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo que compete pela ligação (isto é, compete de modo cruzado) com qualquer um dos anticorpos fornecidos no presente documento pode ser produzido e/ou usado.

[0306] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia pesada selecionadas dentre (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 45; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 46; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47.

[0307] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências de CDR de cadeia leve selecionadas dentre (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 49; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50.

[0308] Em algumas modalidades, qualquer uma das seis CDRs fornecidas no presente documento pode ser combinada como subpartes com qualquer uma das outras CDRs fornecidas no presente documento, para um total de seis CDRs em um constructo. Assim, em algumas modalidades, duas CDR de um primeiro anticorpo (por exemplo, CDR-H1 e CDR-H2) podem ser combinadas com quatro CDRs de um segundo anticorpo (CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3). Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos numa ou mais das CDRs podem ser substituídos para obter uma variante das mesmas. Em algumas modalidades, dois ou menos resíduos podem ser substituídos em 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 das CDRs.

[0309] Em modalidades particulares, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de cadeia pesada variável (VH) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43. Em algumas modalidades, uma sequência de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 43. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VH da SEQ ID NO: 43,

incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0310] Em algumas modalidades, a VH compreende: (a) CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 45; (b) CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 46; e (c) CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47.

[0311] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio de cadeia leve variável (VL) que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, uma sequência VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência mantém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, as substituições, as inserções ou as deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de VL da SEQ ID NO: 44, incluindo modificações pós-traducionais desta sequência.

[0312] Em algumas modalidades, a VL compreende: (a) CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 48; (b) CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 49; e (c) CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50.

[0313] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 e uma VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%,

93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, uma sequência de domínio de VH que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, e uma sequência de VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservativas), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-LILRB2 que compreende esta sequência retém a capacidade para se ligar a LILRB2. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 43. Em algumas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das CDRs (isto é, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-LILRB2 compreende a sequência de domínio de VH na SEQ ID NO: 43 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO: 44, incluindo modificações pós-traducionais de uma ou ambas as sequências.

[0314] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende um domínio de VH como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e um domínio de VL como em qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende as sequências de domínio de VH e VL da SEQ ID NO: 43 e da SEQ ID NO: 44, respectivamente, incluindo modificações pós-traducionais destas sequências.

[0315] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42.

[0316] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende as seis CDRs conforme descrito em qualquer uma das modalidades acima e se liga especificamente a LILRB2 (por exemplo, LILRB2 humano). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende as seis CDRs de qualquer uma das modalidades descritas acima, se liga especificamente a LILRB2 e bloqueia a ligação de HLA-G e/ou HLA-A2 a LILRB2 (por exemplo, LILRB2 humano). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 compreende as seis CDRs conforme descrito em qualquer uma das modalidades acima, se liga especificamente a LILRB2 (por exemplo, LILRB2 humano) e causa a conversão de macrófagos de tipo M2 em macrófagos de tipo M1.

[0317] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma região de cadeia pesada variável e uma região de cadeia leve variável. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende pelo menos uma cadeia pesada que compreende uma região de cadeia pesada variável e pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia pesada e pelo menos uma cadeia leve que compreende uma região de cadeia leve variável e pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia leve. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 compreende duas cadeias pesadas, em que cada cadeia pesada compreende uma região de cadeia pesada variável e pelo menos uma porção de uma região de cadeia pesada constante, e duas cadeias leves, em que cada cadeia leve compreende uma região de cadeia leve variável e pelo menos uma porção de uma região de cadeia leve constante. Conforme usado no presente documento, um Fv de cadeia única (scFv) ou qualquer outro anticorpo que compreende, por exemplo, uma cadeia de polipeptídeo única que compreende todas as seis CDRs (três CDRs de cadeia pesada e três CDRs de cadeia leve) é considerado como tendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve.

Em algumas modalidades, a cadeia pesada é a região do anticorpo anti-LILRB2 que compreende as três CDRs de cadeia pesada. Em algumas modalidades, a cadeia leve é a região do anticorpo anti-LILRB2 que compreende as três CDRs de cadeia leve.

[0318] Em algumas modalidades, os anticorpos que competem com os anticorpos anti-LILRB2 fornecidos no presente documento para ligação a LILRB2 são fornecidos. Em algumas modalidades, anticorpos competem de modo cruzado com os anticorpos anti-LILRB2 fornecidos no presente documento para ligação a um epítopo em LILRB2.

[0319] Em algumas modalidades, os ensaios de competição podem ser usados para identificar um anticorpo monoclonal que compete com um anticorpo anti-LILRB2 descrito no presente documento para ligação a LILRB2. Ensaios de competição podem ser usados para determinar se dois anticorpos se ligam ao mesmo epítopo reconhecendo-se epítopos idênticos ou estericamente sobrepostos ou um anticorpo inibe competitivamente a ligação de outro anticorpo ao antígeno. Em algumas modalidades, tal anticorpo competitivo se liga ao mesmo epítopo que é ligado por um anticorpo descrito no presente documento. Os ensaios de competição exemplificativos incluem, porém sem limitação, ensaios de rotina, tais como aqueles fornecidos em Harlow e Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual capítulo 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.). Os métodos exemplificativos detalhados para mapear um epítopo ao qual um anticorpo se liga são fornecidos em Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols”, em Methods in Molecular Biology volume 66 (Humana Press, Totowa, N.J.). Em algumas modalidades, é dito que dois anticorpos se ligam ao mesmo epítopo se cada um bloquear a ligação do outro em 50% ou mais. Em algumas modalidades, o anticorpo que compete com um anticorpo anti-LILRB2 descrito no presente documento é um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em algumas modalidades, um anticorpo que compete com um anticorpo anti-LILRB2 quimérico, humanizado ou humano conforme descrito no presente documento é fornecido.

[0320] Em algumas modalidades, anticorpos que se ligam a qualquer um ou mais dos epítopos dos anticorpos fornecidos no presente documento são fornecidos. Em algumas modalidades, os anticorpos que se ligam e sobrepõem um epítopo ao qual os presentes anticorpos se ligam são fornecidos. Em algumas modalidades, um anticorpo é fornecido que compete com pelo menos um dos anticorpos fornecidos no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo é fornecido que compete com pelo menos dois dos anticorpos fornecidos no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo é fornecido que compete com pelo menos três dos anticorpos fornecidos no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um epítopo sobreposto como um anticorpo descrito nos exemplos no presente documento. Em algumas modalidades, o epítopo inteiro é ligado e/ou obstruído pelo anticorpo de competição. Em algumas modalidades, uma parte do epítopo é ligada e/ou obstruída pelo anticorpo de competição. Em algumas modalidades, o parátopo do anticorpo de competição se liga a pelo menos uma parte do epítopo de um anticorpo fornecido no presente documento. Em algumas modalidades, o parátopo do anticorpo de competição se liga ao alvo, e uma seção diferente da estrutura do anticorpo de competição obstrui pelo menos uma parte do epítopo de um anticorpo fornecido no presente documento.

ANTICORPOS QUIMÉRICOS EXEMPLIFICATIVOS

[0321] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido no presente documento é um anticorpo quimérico. Certos anticorpos quiméricos são descritos, por exemplo, na Patente nº U.S. 4.816.567; e Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855. Num exemplo, um anticorpo quimérico compreende uma região variável não humana (por exemplo, uma região variável derivada de um camundongo, rato, hamster, coelho ou primata não humano, tal como um macaco) e uma região constante humana. Num exemplo adicional, um anticorpo quimérico é um anticorpo de “classe comutada” em que a classe ou subclasse foi alterada desta do anticorpo progenitor. Os anticorpos quiméricos incluem fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos.

[0322] Os anticorpos quiméricos exemplificativos não limitantes incluem anticorpos quiméricos que compreendem as regiões variáveis de cadeia pesada e/ou leve de qualquer um dos anticorpos anti-LILRB2 descritos no presente documento. Os anticorpos quiméricos exemplificativos não limitantes incluem anticorpos quiméricos que compreendem uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 e/ou uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 de qualquer um dos anticorpos anti-LILRB2 descritos no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- LILRB2 quimérico compreende as regiões variáveis descritas acima e se liga a LILRB2. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 quimérico compreende as regiões variáveis descritas acima, se liga a LILRB2 e causa a conversão de macrófagos de tipo M2 em macrófagos de tipo M1.

[0323] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 quimérico compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de região variável que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência selecionado dentre SEQ ID NOs: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 e 113, em que o anticorpo se liga a LILRB2. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 quimérico compreende uma cadeia leve que compreende uma sequência de região variável que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos

98%, ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência selecionado dentre SEQ ID NOs: 4, 14, 24, 34, 44, 54, 64, 74, 84, 94, 104 e 114 em que o anticorpo se liga a LILRB2. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 quimérico compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de região variável que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência selecionado dentre SEQ ID NOs: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 e 113; e uma cadeia leve que compreende uma sequência de região variável que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência selecionado dentre SEQ ID NOs: 4, 14, 24, 34, 44, 54, 64, 74, 84, 94, 104 e 114; em que o anticorpo se liga a LILRB2.

[0324] Os anticorpos anti-LILRB2 quiméricos exemplificativos também incluem anticorpos quiméricos que competem pela ligação a LILRB2 com um anticorpo ou fragmento do mesmo descrito no presente documento. Assim, em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 quimérico é fornecido que compete pela ligação a LILRB2 com qualquer um dos anticorpos LILRB2 descritos no presente documento ou fragmento dos mesmos. Em algumas modalidades, o anticorpo compete pela ligação a LILRB2 e causa a conversão de macrófagos de tipo M2 a macrófago de tipo M1.

[0325] Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico descrito no presente documento compreende uma ou mais regiões constantes humanas. Em algumas modalidades, a região constante de cadeia pesada humana é de um isotipo selecionado dentre IgA, IgG e IgD. Em algumas modalidades, a região constante de cadeia leve humana é de um isotipo selecionado dentre κ e λ. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico descrito no presente documento compreende uma região constante de IgG humana. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico descrito no presente documento compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico descrito no presente documento compreende uma região constante de IgG4 humana e uma cadeia leve de κ humana.

[0326] Conforme observado acima, se a função efetora é desejável ou não pode depender do método particular do tratamento pretendido para um anticorpo. Assim, em algumas modalidades, quando a função efetora é desejável, um anticorpo anti-LILRB2 quimérico que compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana ou uma região constante de cadeia pesada de IgG3 humana é selecionado. Em algumas modalidades, quando a função efetora não é desejável, um anticorpo anti-LILRB2 quimérico que compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 ou IgG2 humana é selecionado.

ANTICORPOS HUMANIZADOS EXEMPLIFICATIVOS

[0327] Em algumas modalidades, anticorpos humanizados que se ligam a LILRB2 são fornecidos. Os anticorpos humanizados são úteis como moléculas terapêuticas devido ao fato de que os anticorpos humanizados reduzem ou eliminam a resposta imune humana em comparação a anticorpos não humanos, o que pode resultar numa resposta imune a um composto terapêutico de anticorpo (tal como a resposta a anticorpo anticamundongo humano (HAMA)) e eficiência diminuída do produto terapêutico.

[0328] Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico é um anticorpo humanizado. Tipicamente, um anticorpo não humano é humanizado para reduzir a imunogenicidade para humanos, ao mesmo tempo que retém a especificidade e a afinidade do anticorpo não humano parental. Geralmente, um anticorpo humanizado compreende um ou mais domínios variáveis em que CDRs

(ou porções das mesmas) são derivadas de um anticorpo não humano e FRs (ou porções da mesma) são derivadas de sequências de anticorpo humano. Um anticorpo humanizado compreenderá também opcionalmente pelo menos uma porção de uma região constante humana. Em algumas modalidades, alguns resíduos de FR num anticorpo humanizado são substituídos por resíduos correspondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo do qual os resíduos de CDR são derivados), por exemplo, para restaurar ou melhorar a especificidade ou afinidade de anticorpo.

[0329] Os anticorpos humanizados e métodos para produzir os mesmos são analisados, por exemplo, em Almagro e Fransson, 2008, Front. Biosci., 13: 1619- 1633, e são adicionalmente descritos, por exemplo, em Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323-329; Queen et al., 1989, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 86: 10029- 10033; Patentes nº U.S. 5.821.337, 7.527.791, 6.982.321 e 7.087.409; Kashmiri et al., 2005, Methods, 36:25-34; Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498 (que descreve a “recomposição”); Dall'Acqua et al., 2005, Methods, 36:43-60 (que descreve o “embaralhamento de FR”); e Osbourn et al., 2005, Methods, 36:61- 68 e Klimka et al., 2000, Br. J. Cancer, 83:252-260 (que descreve a abordagem de “seleção guiada” ao embaralhamento de FR).

[0330] As regiões de framework humanas que podem ser usadas para a humanização incluem, porém sem limitação: regiões de framework selecionadas com o uso do método “mais adequado” (consultar, por exemplo, Sims et al., 1993, J. Immunol. 151 :2296); regiões de framework derivadas da sequência consenso de anticorpos humanos de um subgrupo particular de regiões variáveis de cadeia pesada ou leve (consultar, por exemplo, Carter et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; e Presta et al., 1993, J. Immunol., 151:2623); regiões de framework maduras humanas (que sofreram mutação somática) ou regiões de framework de linhagem germinativa humana (consultar, por exemplo, Almagro e Fransson, 2008, Front. Biosci., 13:1619-1633); e regiões de framework derivadas da triagem de bibliotecas de FR (consultar, por exemplo, Baca et al., 1997, J. Biol. Chem., 272: 10678-10684 e Rosok et al., 1996, J. Biol. Chem., 271 :22611-22618).

[0331] Os anticorpos humanizados exemplificativos não limitantes incluem anticorpos que compreendem um domínio de VH selecionado dentre as SEQ ID NOs: 53, 63, 73, 83, 93, 103 e 113 e/ou um domínio de VL selecionado dentre as SEQ ID NOs: 54, 64, 74, 84, 94, 104 e 114, ou qualquer uma, duas, três, quatro, cinco ou seis CDR das mesmas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 humanizado compreende as CDRs descritas acima e se liga a LILRB2. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 humanizado compreende as CDRs descritas acima, se liga a LILRB2 e causa a conversão de macrófagos de tipo M2 em macrófagos de tipo M1.

[0332] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humanizado compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de região variável que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência selecionado dentre SEQ ID NOs: 53, 63, 73, 83, 93, 103 e 113 e em que o anticorpo se liga a LILRB2. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humanizado compreende uma cadeia leve que compreende uma sequência de região variável que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência selecionado dentre SEQ ID NOs: 54, 64, 74, 84, 94, 104 e 114, em que o anticorpo se liga a LILRB2. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humanizado compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de região variável que é pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência selecionado dentre SEQ ID NOs: 53, 63, 73, 83, 93, e 113 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de região variável que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência selecionado dentre SEQ ID NOs: 54, 64, 74, 84, 94, 104 e 114 em que o anticorpo se liga a LILRB2.

[0333] Em algumas modalidades, qualquer uma ou mais das sequências de CDR fornecidas no presente documento são mantidas, ao mesmo tempo a região de cadeia pesada e/ou leve restante (isto é, FR1, FR2, FR3 e FR4) é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica a uma sequência selecionado dentre SEQ ID NOs: 53, 54, 63, 64, 73, 74, 83, 84, 93, 94, 103, 104, 113 e 114.

[0334] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humanizado compreende pelo menos uma das CDRs discutidas no presente documento. Isto é, em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humanizado compreende pelo menos uma CDR selecionada a partir de uma CDR-H1 discutida no presente documento, uma CDR-H2 discutida no presente documento, uma CDR-H3 discutida no presente documento, uma CDR-L1 discutida no presente documento, uma CDR-L2 discutida no presente documento e uma CDR-L3 discutida no presente documento. Além disso, em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humanizado compreende pelo menos uma CDR com mutação com base numa CDR discutida no presente documento, em que a CDR com mutação compreende 1, 2, 3 ou 4 substituições de aminoácidos em relação à CDR discutida no presente documento. Em algumas modalidades, uma ou mais das substituições de aminoácidos são substituições conservativas de aminoácidos. Uma pessoa versada na técnica apode selecionar uma ou mais substituições conservativas de aminoácidos adequadas para uma sequência de CDR particular, em que não é previsto que as substituições conservativas de aminoácidos adequadas alterarem significativamente as propriedades de ligação do anticorpo que compreende a CDR com mutação.

[0335] Os anticorpos anti-LILRB2 humanizados exemplificativos também incluem anticorpos que competem pela ligação a LILRB2 com um anticorpo ou fragmento do mesmo descrito no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humanizado é fornecido que compete pela ligação a LILRB2 com qualquer anticorpo anti-LILRB2 descrito no presente documento ou fragmento do mesmo e causa a conversão de macrófagos de tipo M2 em macrófagos de tipo M1.

ANTICORPOS HUMANOS EXEMPLIFICATIVOS

[0336] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento é um anticorpo humano. Os anticorpos humanos podem ser produzidos com o uso de várias técnicas conhecidas na arte. Os anticorpos humanos são descritos, de modo geral, em van Dijk e van de Winkel, 2001, Curr. Opin. Pharmacol., 5:368-374 e Lonberg, 2008, Curr. Opin. Immunol., 20:450-459. Em algumas modalidades, o anticorpo humano não é um anticorpo de ocorrência natural. Em algumas modalidades, o anticorpo humano é um anticorpo monoclonal; assim, em algumas modalidades, cada um dos anticorpos humanos em um conjunto pode se ligar ao mesmo epítopo no antígeno.

[0337] Os anticorpos humanos podem ser preparados administrando-se um imunógeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir anticorpos humanos intactos ou anticorpos intactos com regiões variáveis humanas em resposta a estímulo antigênico. Tais animais tipicamente contêm todo ou uma porção dos loci de imunoglobulina humana, que substituem os loci de imunoglobulina endógena, ou que estão presentes extracromossomicamente ou integrados aleatoriamente nos cromossomos do animal. Em tais camundongos transgênicos, os loci de imunoglobulina endógena foram geralmente inativados. Para análise dos métodos para obter anticorpos humanos a partir de animais transgênicos, consultar Lonberg, 2005, Nat. Biotech., 23: 1117-1125. Consultar também, por exemplo, as Patentes no U.S.

6.075.181 e 6.150.584 que descrevem a tecnologia XENOMOUSE™; Patente nº U.S. 5.770.429 que descreve a tecnologia HUMAB®; Patente nº U.S. 7.041.870 que descreve a tecnologia K-M MOUSE® e a Publicação de Pedido de Patente nº U.S. 2007/0061900, que descreve a tecnologia VELOCIMOUSE®). As regiões variáveis humanas de anticorpos intactos gerados por tais animais podem ser adicionalmente modificadas, por exemplo, combinando-se com uma região constante humana diferente.

[0338] Os anticorpos humanos podem também ser feitos por métodos com base em hibridoma. As linhagens de células de mieloma de ser humano e heteromieloma de camundongo-ser humano para a produção de anticorpos monoclonais humanos foram descritas. (Consultar, por exemplo, Kozbor, 1984, J. Immunol., 133: 3001; Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, páginas 51-63 (Marcel Dekker, Inc., Nova York, 1987); e Boerner et al., 1991, J. Immunol., 147:86). Os anticorpos humanos gerados por meio da tecnologia de hibridoma de célula B humana são também descritos em Li et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562. Os métodos adicionais incluem aqueles descritos, por exemplo, na Patente no U.S.

7.189.826 (que descreve a produção de anticorpos IgM humanos monoclonais a partir de linhas de células de hibridoma) e Ni, 2006, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (que descreve hibridomas humano-humano). A tecnologia de hibridoma humano (tecnologia Trioma) é também descrita em Vollmers e Brandlein, 2005, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 e Vollmers e Brandlein, 2005, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3): 185-191.

[0339] Os anticorpos humanos podem também ser gerados isolando-se sequências de domínio variável de clone de Fv selecionadas dentre bibliotecas de apresentação em fago derivadas de ser humano. Tais sequências de domínio variável podem, então, ser combinadas com um domínio constante humano desejado. As técnicas para selecionar anticorpos humanos a partir de bibliotecas de anticorpos são descritas abaixo.

[0340] Os anticorpos podem ser isolados pela triagem de bibliotecas combinatórias por anticorpos com a atividade ou atividades desejadas. Por exemplo, uma variedade de métodos é conhecida na técnica para gerar bibliotecas de apresentação em fago e triar tais bibliotecas por anticorpos que possuem as características de ligação desejadas. Tais métodos são analisados, por exemplo, em Hoogenboom et al. Em Methods in Molecular Biology 178: 1- 37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) e adicionalmente descritos, por exemplo, em McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554; Clackson et al., 1991, Nature, 352: 624-628; Marks et al., 1992, J. Mol. Biol., 222: 581-597; Marks e Bradbury, em Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., 2004 J. Mol. Biol., 338(2): 299- 310; Lee et al., 2004, J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093; Fellouse, 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(34): 12467-12472; e Lee et al., 2004, J. Immunol. Methods, 284(1-2): 119-132 e na publicação PCT WO 99/10494.

[0341] Em certos métodos de apresentação em fago, os repertórios de genes de VH e VL são separadamente clonados por reação em cadeia de polimerase (PCR) e recombinados aleatoriamente em bibliotecas de fago, que podem, então, ser triadas por fago de ligação a antígeno conforme descrito em Winter et al., 1994, Ann. Rev. Immunol., 12:433-455. O fago exibe tipicamente fragmentos de anticorpo, ou como fragmentos Fv de cadeia única (scFv) ou como fragmentos Fab. As bibliotecas de fontes imunizadas fornecem anticorpos de alta afinidade ao imunógeno sem a exigência de construir hibridomas. Alternativamente, o repertório virgem pode ser clonado (por exemplo, de um ser humano) para fornecer uma fonte única de anticorpos a uma ampla faixa de não autoantígenos e também autoantígenos sem qualquer imunização conforme descrito por Griffiths et al., 1993, EMBO J, 12:725-734. Finalmente, as bibliotecas virgens podem também ser feitas sinteticamente clonando-se segmentos de gene V não reorganizados de células-tronco e usando iniciadores de PCR contendo uma sequência aleatória para codificar as regiões CDR3 altamente variáveis e realizar a reorganização in vitro, conforme descrito por Hoogenboom e Winter 1992, J. Mol. Biol., 227:381-388. As publicações de patente que descrevem bibliotecas de fago de anticorpo humano incluem, por exemplo: a Patente nº 5.750.373 e as Publicações de Patente nº U.S. 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 e 2009/0002360.

[0342] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humano quimérico é fornecido, em que o anticorpo compreende a região variável de um anticorpo humano que se liga a LILRB2 e a região constante de um anticorpo humano diferente. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humano quimérico, em que o anticorpo compreende as CDRs de um anticorpo humano que se liga a LILRB2 e um framework de um anticorpo humano diferente é fornecido. Em algumas modalidades, o anticorpo não é um anticorpo humano de ocorrência natural.

[0343] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 humano compreende uma ou mais regiões constantes humanas. Em algumas modalidades, a região constante de cadeia pesada humana é de um isotipo selecionado dentre IgA, IgG e IgD. Em algumas modalidades, a região constante de cadeia leve humana é de um isotipo selecionado dentre κ e λ. Em algumas modalidades, um anticorpo humano descrito no presente documento compreende uma região constante de IgG humana. Em algumas modalidades, um anticorpo humano descrito no presente documento compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana. Em algumas modalidades, um anticorpo humano descrito no presente documento compreende uma região constante de IgG4 humana e uma cadeia leve de κ humana.

[0344] Em algumas modalidades, quando a função efetora é desejável, um anticorpo anti-LILRB2 humano que compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana ou uma região constante de cadeia pesada de IgG3 humana é selecionado. Em algumas modalidades, quando a função efetora não é desejável, um anticorpo anti-LILRB2 humano que compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 ou IgG2 humana é selecionado.

[0345] Conforme notado no presente documento, o termo “anticorpo humano” denota o gênero de sequências possíveis para o construto de anticorpo, em vez de uma fonte do anticorpo.

REGIÕES CONSTANTES DE ANTICORPO EXEMPLIFICATIVAS

[0346] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito no presente documento compreende uma ou mais regiões constantes humanas. Em algumas modalidades, a região constante de cadeia pesada humana é de um isotipo selecionado dentre IgA, IgG e IgD. Em algumas modalidades, a região constante de cadeia leve humana é de um isotipo selecionado dentre κ e λ. Em algumas modalidades, um anticorpo descrito no presente documento compreende uma região constante de IgG humana. Em algumas modalidades, um anticorpo descrito no presente documento compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana. Em algumas modalidades, um anticorpo descrito no presente documento compreende uma região constante de IgG4 humana e uma cadeia leve de κ humana.

[0347] Por todo o presente relatório descritivo e reivindicações a não ser que explicitamente determinado ou conhecido por uma pessoa versada na técnica, a numeração dos resíduos numa cadeia pesada de imunoglobulina é esta do índice EU como em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Edição. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), expressamente incorporado ao presente documento a título de referência. O “índice EU como em Kabat” se refere à numeração de resíduo do anticorpo IgG1 EU humano.

[0348] Conforme observado acima, se a função efetora é desejável ou não pode depender do método particular do tratamento pretendido para um anticorpo. Assim, em algumas modalidades, quando a função efetora é desejável, um anticorpo anti-LILRB2 que compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana ou uma região constante de cadeia pesada de IgG3 humana é selecionado. Em algumas modalidades, quando a função efetora não é desejável, um anticorpo anti-LILRB2 que compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 ou IgG2 humana é selecionado.

[0349] Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma região Fc variante tem pelo menos uma substituição de aminoácido em comparação à região Fc de uma IgG do tipo selvagem ou um anticorpo do tipo selvagem. Em algumas modalidades, a região Fc variante tem duas ou mais substituições de aminoácido na região Fc do anticorpo do tipo selvagem. Em algumas modalidades, a região Fc variante tem três ou mais substituições de aminoácido na região Fc do anticorpo do tipo selvagem. Em algumas modalidades, a região

Fc variante tem pelo menos uma, duas ou três ou mais substituições de aminoácido de região Fc descritas no presente documento. Em algumas modalidades, a região Fc variante no presente documento possuirá pelo menos cerca de 80% de homologia com uma região Fc de sequência nativa e/ou com uma região Fc de um polipeptídeo progenitor. Em algumas modalidades, a região Fc variante no presente documento possuirá pelo menos cerca de 90% de homologia com uma região Fc de sequência nativa e/ou com uma região Fc de um polipeptídeo progenitor. Em algumas modalidades, a região Fc variante no presente documento possuirá pelo menos cerca de 95% de homologia com uma região Fc de sequência nativa e/ou com uma região Fc de um polipeptídeo progenitor.

[0350] Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido no presente documento é alterado para aumentar ou diminuir a extensão em que o anticorpo é glicolisado. A adição ou a deleção de sítios de glicosilação a um anticorpo podem ser convenientemente realizadas alterando-se a sequência de aminoácidos de modo que um ou mais sítios de glicosilação sejam criados ou removidos.

[0351] Quando o anticorpo compreende uma região Fc, o carboidrato ligado ao mesmo pode ser alterado. Os anticorpos produzidos por células de mamífero tipicamente compreendem um oligossacarídeo biantenário ramificado que está, de modo geral, ligado por uma ligação N a Asn297 do domínio CH2 da região Fc. Consultar, por exemplo, Wright et al., 1997, TIBTECH, 15:26-32. O oligossacarídeo pode incluir vários carboidratos, por exemplo, manose, N-acetil glucosamina (GlcNAc), galactose e ácido siálico, assim como uma fucose fixada a um GlcNAc no “tronco” da estrutura de oligossacarídeo biantenária. Em algumas modalidades, as modificações do oligossacarídeo em um anticorpo podem ser realizadas a fim de criar variantes de anticorpo com certas propriedades aprimoradas.

[0352] Em algumas modalidades, são fornecidas variantes do anticorpo que têm uma estrutura de carboidrato que carece de fucose ligada (direta ou indiretamente) a uma região Fc. Por exemplo, a quantidade de fucose em tal anticorpo pode ser de 1% a 80%, de 1% a 65%, de 5% a 65% ou de 20% a 40%. A quantidade de fucose é determinada calculando-se a quantidade média de fucose dentro da cadeia de açúcar em Asn297, em relação à soma de todas as glicoestruturas ligadas a Asn 297 (por exemplo, estruturas complexas, híbridas e com alto teor de manose) conforme medido por espectrometria de massa MALDI-TOF, conforme descrito no documento nº WO 2008/077546, por exemplo. Asn297 se refere ao resíduo asparagina localizado em cerca da posição 297 na região Fc (numeração de EU de resíduos da região Fc); entretanto, Asn297 pode também estar localizado cerca de ± 3 aminoácidos a montante ou a jusante da posição 297, isto é, entre as posições 294 e 300, devido às variações de sequência menores em anticorpos. Tais variantes de fucosilação podem ter função de ADCC aprimorada. Consultar, por exemplo, as Publicações de Patente nº U.S. 2003/0157108 (Presta, L.); U.S. 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Os exemplos de publicações relacionadas a variantes de anticorpo "desfucosiladas" ou "com deficiência de fucose" incluem: U.S. 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; U.S. 2003/0115614; U.S. 2002/0164328; U.S. 2004/0093621; U.S. 2004/0132140; U.S. 2004/0110704; U.S. 2004/0110282; U.S. 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al., 2004, Biotech. Bioeng. 87:

614. Os exemplos de linhagens celulares com capacidade de produzir anticorpos desfucosilados incluem células CHO Lec13 com deficiência de fucosilação de proteína (Ripka et al., 1986, Arch. Biochem. Biophys. 249: 533-545; no Pedido de

Patente nº U.S. 2003/0157108 A1 (Presta, L); e no documento WO 2004/056312 A1, (Adams et al., especialmente no Exemplo 11), e linhagens celulares com knockout, tais como o gene de alfa-1,6-fucosiltransferase, FUT8, células CHO com knockout (consultar, por exemplo, Yamane-Ohnuki et al., 2004, Biotech. Bioeng. 87: 614; Kanda, Y. et al., 2006, Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688; e o documento nº WO 2003/085107).

[0353] São, ainda, fornecidas variantes de anticorpo com oligossacarídeos bisseccionados, por exemplo, em que um oligossacarídeo biantenário ligado à região Fc do anticorpo é bisseccionado por GlcNAc. Tais variantes de anticorpo podem ter fucosilação reduzida e/ou função de ADCC aprimorada. Os exemplos de tais variantes de anticorpo são descritos, por exemplo, no documento WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); na Patente nº U.S. 6.602.684 (Umana et al.); e U.S. 2005/0123546 (Umana et al.). São também fornecidas variantes de anticorpo com pelo menos um resíduo de galactose no oligossacarídeo ligado à região Fc. Tais variantes de anticorpo podem ter função de CDC aprimorada. Tais variantes de anticorpo são descritas, por exemplo, nos documentos nº WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); e WO 1999/22764 (Raju, S.).

[0354] As variantes de anticorpo são também dotadas de extensões líder amino-terminais. Por exemplo, um ou mais resíduos de aminoácidos da sequência líder amino-terminal estão presentes na terminação amino de qualquer uma ou mais cadeias pesadas ou leves de um anticorpo. Uma extensão líder amino-terminal exemplificativa compreende ou consiste em três resíduos de aminoácidos, VHS, presentes em uma ou ambas as cadeias leves de uma variante de anticorpo.

[0355] A meia-vida in vivo ou sérica de polipeptídeos de ligação com alta afinidade a FcRn humanos pode ser avaliada, por exemplo, em camundongos transgênicos, em seres humanos ou em primatas não humanos aos quais os polipeptídeos com uma região Fc variante são administrados. Consultar também, por exemplo, Petkova et al., 2006, International Immunology 18(12):1759-1769.

[0356] Em algumas modalidades, a variante de anticorpo media ADCC na presença de células efetoras humanas mais eficazmente do que um anticorpo progenitor. Em algumas modalidades, a variante de anticorpo é substancialmente mais eficaz na mediação de ADCC in vitro, quando as quantidades da variante de polipeptídeo e do anticorpo progenitor usadas no ensaio são essencialmente iguais. Em algumas modalidades, a variante de anticorpo é substancialmente mais eficaz na mediação de ADCC in vivo, quando as quantidades da variante de polipeptídeo e do anticorpo progenitor usadas no ensaio são essencialmente iguais. Geralmente, tais variantes serão identificadas com o uso do ensaio ADCC in vitro conforme revelado no presente documento, mas outros ensaios ou métodos para determinar a atividade de ADCC, por exemplo, em um modelo animal etc. são contemplados.

CONJUGADOS DE ANTICORPO EXEMPLIFICATIVOS

[0357] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é conjugado a outra molécula. Em algumas modalidades, a molécula adicional pode ser um marcador detectável, tal como uma identificação. Em algumas modalidades, a molécula adicional pode ser uma molécula terapêutica, tal como um agente citotóxico. Em algumas modalidades, uma identificação e/ou um agente citotóxico podem ser conjugados ao anticorpo. Conforme usado no presente documento, uma identificação é uma porção química que facilita a detecção do anticorpo e/ou facilita a detecção de uma molécula a qual o anticorpo se liga. As identificações exemplificativas não limitantes incluem, porém sem limitação, radioisótopos, grupos fluorescentes, grupos enzimáticos, grupos quimioluminescentes, biotina, etiquetas de epítopo, etiquetas de ligação a metal, etc. Uma pessoa versada na técnica pode selecionar uma identificação adequada de acordo com a aplicação específica.

[0358] Conforme usado no presente documento, um agente citotóxico é uma porção química que reduz a capacidade proliferativa de uma ou mais células. Uma célula tem capacidade proliferativa reduzida quando a célula se torna menos capaz de proliferar, por exemplo, como a célula passa por apoptose ou morre de outro modo, a célula falha em proceder através do ciclo celular e/ou falha em dividir, a célula se diferencia, etc. Os agentes citotóxicos exemplificativos não limitantes incluem, porém sem limitação, radioisótopos, toxinas e agentes quimioterápicos. Uma pessoa versada na técnica pode selecionar um agente citotóxico adequado de acordo com a aplicação pretendida. Em algumas modalidades, o agente citotóxico é pelo menos um dentre um antimetabólito, um agente alquilante, um antibiótico, um fator de crescimento, uma citocina, um agente antiangiogênico, um agente antimicótico, uma antraciclina, uma toxina ou um agente apoptótico.

[0359] Em algumas modalidades, uma identificação e/ou um agente citotóxico são conjugados a um anticorpo com o uso de métodos químicos in vitro. Os métodos químicos de conjugação exemplificativos não limitantes são conhecidos na técnica e incluem serviços, métodos e/ou reagentes comercialmente disponíveis junto à, por exemplo, Thermo Scientific Life Science Research Produces (anteriormente Pierce; Rockford, Ill.), Prozyme (Hayward, Calif.), SACRI Antibody Services (Calgary, Canadá), AbD Serotec (Raleigh, N.C.), etc. Em algumas modalidades, quando uma identificação e/ou agente citotóxico é um polipeptídeo, a identificação e/ou agente citotóxico podem ser expressos a partir do mesmo vetor de expressão com pelo menos uma cadeia de anticorpo para produzir um polipeptídeo que compreende a identificação e/ou agente citotóxico fundidos a uma cadeia de anticorpo. Uma pessoa versada na técnica pode selecionar um método adequado para conjugar uma identificação e/ou agente citotóxico a um anticorpo de acordo com a aplicação pretendida.

[0360] Em algumas modalidades, a conjugação pode ser covalente. Em algumas modalidades, a conjugação pode ser não covalente. Em algumas modalidades, a conjugação pode ser por meio de uma interação de ligação específica, por exemplo, através da ligação de um anticorpo secundário.

SEQUÊNCIAS LÍDER EXEMPLIFICATIVAS

[0361] A fim de algumas proteínas secretadas expressarem e secretarem em grandes quantidades, uma sequência líder de uma proteína heteróloga pode ser desejável. Em algumas modalidades, empregar sequências líder heterólogas pode ser vantajoso em que um polipeptídeo maduro resultante pode permanecer inalterado na medida em que a sequência líder é removida no ER durante o processo de secreção. A adição de uma sequência líder heteróloga pode ser útil para expressar e secretar algumas proteínas.

[0362] Certas sequências líder exemplificativas são descritas, por exemplo, no Banco de Dados de Sequência Líder mantido pelo Departamento de Bioquímica, Universidade Nacional de Singapura. Consultar Choo et al., 2005, BMC Bioinformatics, 6: 249; e a Publicação PCT nº WO 2006/081430. III. ATIVIDADE DE ANTICORPO

[0363] São fornecidos no presente documento anticorpos anti-LILRB2 que fornecem características funcionais específicas. Em aspectos particulares da invenção, anticorpos anti-LILRB2 promovem a imunogenicidade (por exemplo, conforme exibido pelos macrófagos de tipo M1) para responder a uma patologia, por exemplo, câncer. Adicional ou alternativamente, os anticorpos anti-LILRB2 da invenção podem inibir uma imunorreguladora (por exemplo, imunossupressora), por exemplo, conforme pelos macrófagos de tipo M2.

[0364] O bloqueio de HLA-A2 pode ser um modelo para interromper a ligação entre LILRB2 e moléculas de classe I de MHC clássicas. Assim, em algumas modalidades da invenção, anticorpos anti-LILRB2 bloqueiam a ligação de HLA-G ou HLA-A2 a LILRB2 (por exemplo, LILRB2 humano). O bloqueio pode ser detectado e/ou quantificado por quaisquer meios adequados conhecidos na técnica ou descritos no presente documento. Por exemplo, o bloqueio de HLA-G ou HLA-A2 pode ser detectado e/ou quantificado com o uso de um ensaio de bloqueio de tetrâmero (por exemplo, com o uso de monócitos humanos), conforme descrito, por exemplo, no Exemplo 10.

[0365] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 que bloqueia a ligação de HLA-G a LILRB2 se liga ao mesmo epítopo (isto é, completa ou parcialmente) de LILRB2 que HLA-G. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 que bloqueia a ligação de HLA-G a LILRB2 se liga a pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete ou pelo menos oito resíduos do epítopo de LILRB2 ligado por HLA-G. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 bloqueia pelo menos 50% (por exemplo, de 50 a 100%, de 55 a 95%, de 60 a 90%, de 65 a 85% ou de 70 a 80%, por exemplo, de 50 a 60%, de 60 a 70%, de 70 a 80%, de 80 a 90% ou de 90 a 100%, por exemplo, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou cerca de 100%) do tetrâmero HLA-G num ensaio de ligação a tetrâmero. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 bloqueia o tetrâmero HLA-G a uma EC50 menor do que 1,0 nM (por exemplo, menor do que 0,9 nM, menor do que 0,8 nM, menor do que 0,7 nM, menor do que 0,6 nM, menor do que 0,5 nM, menor do que 0,4 nM, menor do que 0,3 nM, menor do que 0,2 nM, menor do que 0,15 nM, menor do que 0,14 nM, menor do que 0,13 nM, menor do que 0,12 nM, menor do que 0,11 nM, menor do que 0,1 nM,

menor do que 0,09 nM ou menor do que 0,08 nM) num ensaio de ligação a tetrâmero.

[0366] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 que bloqueia a ligação de HLA-A2 a LILRB2 se liga ao mesmo epítopo (isto é, completa ou parcialmente) de LILRB2 que HLA-A2. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 que bloqueia a ligação de HLA-A2 a LILRB2 se liga a pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete ou pelo menos oito resíduos do epítopo de LILRB2 ligado por HLA-A2. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 bloqueia pelo menos 50% (por exemplo, de 50 a 100%, de 55 a 95%, de 60 a 90%, de 65 a 85% ou de 70 a 80%, por exemplo, de 50 a 60%, de 60 a 70%, de 70 a 80%, de 80 a 90% ou de 90 a 100%, por exemplo, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95% ou cerca de 100%) do tetrâmero HLA-A2 num ensaio de ligação a tetrâmero. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 bloqueia o tetrâmero HLA-A2 a uma EC50 menor do que 1,0 nM (por exemplo, menor do que 0,9 nM, menor do que 0,8 nM, menor do que 0,7 nM, menor do que 0,6 nM, menor do que 0,5 nM, menor do que 0,4 nM, menor do que 0,3 nM, menor do que 0,2 nM, menor do que 0,15 nM, menor do que 0,14 nM, menor do que 0,13 nM, menor do que 0,12 nM, menor do que 0,11 nM, menor do que 0,1 nM, menor do que 0,09 nM ou menor do que 0,08 nM) num ensaio de ligação a tetrâmero.

[0367] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB2 fornecidos no presente documento têm a capacidade para converter uma população de macrófagos de tipo M2 em uma população de macrófagos de tipo M1. A conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 pode ser detectada ou quantificada com o uso de qualquer método adequado conhecido na técnica ou descrito no presente documento, por exemplo, um ensaio de macrófago derivado de monócito humano, conforme descrito no Exemplo 6, ou um ensaio de histocultura conforme descrito no Exemplo 13.

[0368] Em algumas modalidades, a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão aumentada de um ou mais genes selecionados a partir do grupo que consiste em CXCL9, CXCL11, IRF1, TAP1, IL6R e IL15, por exemplo, um aumento de expressão de pelo menos 1% (por exemplo, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 1 vez, pelo menos 2 vezes, pelo menos 3 vezes, pelo menos 4 vezes, pelo menos 5 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 30 vezes, pelo menos 40 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 100 vezes ou mais) de qualquer um ou mais genes selecionados a partir do grupo que consiste em CXCL9, CXCL11, IRF1, TAP1, IL6R e IL15. Em algumas modalidades, a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão diminuída de um ou mais genes selecionados a partir do grupo que consiste em CCL2, PTPN22, KLRC3, IL10, IL18R1, G6PD, CD68 e BAT3, por exemplo, uma diminuição da expressão de pelo menos 1% (por exemplo, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou 100%) de qualquer um ou mais genes selecionados a partir do grupo que consiste em CCL2, PTPN22, KLRC3, IL10, IL18R1, G6PD, CD68 e BAT3.

[0369] Em algumas modalidades, a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão aumentada de uma,

duas ou todas as três citocinas selecionadas a partir do grupo que consiste em TNFα, IL-1β, IL-6, CCL3, EGR2, TRAF1, IL1A, IRAK2, TNFalfa, IL7R, CCL2, IL8, CCL4, CXCL1, BCL2, EGR1, IL1RN, TNFSF15, DUSP4, ICAM1, TNFAIP3, TNFRSF9, CD83, TNFAIP6, CCL20, NFKB1, TNFRSF4, CXCL2, PTGS2, NFKBIA, NFKB2, CLEC4E, NFKBIZ, CCL5, CCL7, CLEC5A, CEBPB, TLR2, SRC, RELB, PLAUR, SOCS3, GBP1, CCL18, CSF1, CD40, NT5E, CCL23, CCL8, GBP5, ITGAX, C3, TNFSF15, ICAM5, DPP4, ZEB1, SPP1, IL23A, CD123, e IL6, por exemplo, um aumento da expressão de pelo menos 1% (por exemplo, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 1 vez, pelo menos 1,5 vez, pelo menos 2 vezes, pelo menos 3 vezes, pelo menos 4 vezes, pelo menos 5 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 30 vezes, pelo menos 40 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 100 vezes ou mais) de qualquer um ou mais genes selecionados a partir do grupo que consiste em TNFα, IL-1β, IL-6, CCL3, EGR2, TRAF1, IL1A, IRAK2, TNF, IL7R, CCL2, IL8, CCL4, CXCL1, BCL2, EGR1, IL1RN, TNFSF15, DUSP4, ICAM1, TNFAIP3, TNFRSF9, CD83, TNFAIP6, CCL20, NFKB1, TNFRSF4, CXCL2, PTGS2, NFKBIA, NFKB2, CLEC4E, NFKBIZ, CCL5, CCL7, CLEC5A, CEBPB, TLR2, SRC, RELB, PLAUR, SOCS3, GBP1, CCL18, CSF1, CD40, NT5E, CCL23, CCL8, GBP5, ITGAX, C3, TNFSF15, ICAM5, DPP4, ZEB1, SPP1, IL23A, CD123 e IL6. Em algumas modalidades, a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão diminuída de IL-10, CCL2, TGFBR2, CXCL13, IL21R, CD36, CR1, C1QB e TGFBI, por exemplo, uma diminuição da expressão de pelo menos 1% (por exemplo, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou 100%) de qualquer um ou mais genes selecionados a partir do grupo que consiste em IL-10, CCL2, TGFBR2, CXCL13, IL21R, CD36, CR1, C1QB e TGFBI.

[0370] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento se liga a LILRB2 humano com uma afinidade maior do que a qualquer um ou mais dentre LILRB1 humano, LILRB3 humano, LILRB4 humano, LILRB5 humano, LILRA1 humano, LILRA2 humano, LILRA3 humano, LILRA4 humano, LILRA5 humano ou LILRA6 humano. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 da invenção se liga a LILRB2 humano com afinidade pelo menos 2 vezes maior (por exemplo, pelo menos 3 vezes, pelo menos 4 vezes, pelo menos 5 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 30 vezes, pelo menos 40 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 100 vezes ou mais) em relação a qualquer um ou mais dentre LILRB1 humano, LILRB3 humano, LILRB4 humano, LILRB5 humano, LILRA1 humano, LILRA2 humano, LILRA3 humano, LILRA4 humano, LILRA5 humano ou LILRA6 humano. Em algumas modalidades, a ligação do anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento a qualquer um ou mais dentre LILRB1 humano, LILRB3 humano, LILRB4 humano, LILRB5 humano, LILRA1 humano, LILRA2 humano, LILRA3 humano, LILRA4 humano, LILRA5 humano ou LILRA6 humano é indetectável, por exemplo, interferometria de biocamada (por exemplo, menor do que 0,08 nm por OCTET®). Em algumas modalidades, a KD do anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento para qualquer um ou mais dentre LILRB1, LILRB3 humano, LILRB4 humano, LILRB5 humano, LILRA1 humano, LILRA2 humano, LILRA3 humano, LILRA4 humano, LILRA5 humano ou LILRA6 humano é maior do que 10 nM (por exemplo, maior do que 15 nM , maior do que 20 nM, maior do que 25 nM, maior do que 30 nM, maior do que 35 nm, maior do que 40 nM, maior do que 45 nM, mais do que 50 nM, mais do que 60 nM, mais do que 70 nM, mais do que 80 nM , maior do que 90 nM, maior do que 100 nM, maior do que 500 nM, mais do que 1 µM, maior do que 10 µM ou maior do que 100 µM). IV. EXPRESSÃO E PRODUÇÃO DE ANTICORPOS MOLÉCULAS DE ÁCIDO NUCLEICO QUE CODIFICAM ANTICORPOS ANTI- LILRB2

[0371] Moléculas de ácido nucleico que compreendem polinucleotídeos que codificam uma ou mais cadeias de um anticorpo anti-LILRB2 são fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, uma molécula de ácido nucleico compreende um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada ou uma cadeia leve de um anticorpo anti-LILRB2. Em algumas modalidades, uma molécula de ácido nucleico compreende tanto um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada e um polinucleotídeo que codifica uma cadeia leve de um anticorpo anti-LILRB2. Em algumas modalidades, uma primeira molécula de ácido nucleico compreende um primeiro polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada e uma segunda molécula de ácido nucleico compreende um segundo polinucleotídeo que codifica uma cadeia leve.

[0372] Em algumas modalidades, a cadeia pesada e a cadeia leve são expressas a partir de uma molécula de ácido nucleico ou de duas moléculas de ácido nucleico separadas, como dois polipeptídeos separados. Em algumas modalidades, tal como quando um anticorpo é um scFv, um único polinucleotídeo codifica um único polipeptídeo que compreende tanto uma cadeia pesada quanto uma cadeia leve ligadas uma à outra.

[0373] Em algumas modalidades, um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada ou cadeia leve de um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica pelo menos uma das CDRs fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada ou cadeia leve de um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica pelo menos 3 das CDRs fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada ou cadeia leve de um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica pelo menos 6 das CDRs fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada ou cadeia leve de um anticorpo anti-LILRB2 compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência líder, que, quando traduzida, é localizada na terminação N da cadeia pesada ou cadeia leve. Conforme discutido acima, a sequência líder pode ser a sequência líder de cadeia pesada ou leve nativa ou pode ser outra sequência líder heteróloga.

[0374] Em algumas modalidades, o ácido nucleico é um que codifica qualquer uma das sequências de aminoácidos para os anticorpos na Tabela de Sequências no presente documento. Em algumas modalidades, o ácido nucleico é um que é pelo menos 80% idêntico a um ácido nucleico que codifica qualquer uma das sequências de aminoácidos para os anticorpos na Tabela de Sequências no presente documento, por exemplo, pelo menos 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99% idêntico. Em algumas modalidades, o ácido nucleico é um que hibridiza a qualquer uma ou mais das sequências de ácidos nucleicos fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, a hibridização está sob condições moderadas. Em algumas modalidades, a hibridização está sob condições altamente estringentes, tais como: pelo menos cerca de 6X SSC e 1% de SDS a 65 °C, com uma primeira lavagem por 10 minutos a cerca de 42 °C com cerca de 20% (em v/v) de formamida em 0,1X SSC e com uma lavagem subsequente com 0,2 X SSC e 0,1% de SDS a 65 °C.

[0375] As moléculas de ácido nucleico podem ser construídas com o uso de técnicas de DNA recombinante convencionais na arte. Em algumas modalidades,

uma molécula de ácido nucleico é um vetor de expressão que é adequado para a expressão numa célula hospedeira selecionada.

VETORES

[0376] Vetores que compreendem polinucleotídeos que codificam cadeias pesadas anti-LILRB2 e/ou cadeias leves anti-LILRB2 são fornecidos. Vetores que compreendem polinucleotídeos que codificam cadeias pesadas anti-LILRB2 e/ou cadeias leves anti-LILRB2 são também fornecidos. Tais vetores incluem, porém sem limitação, vetores de DNA, vetores de fago, vetores virais, vetores retrovirais etc. Em algumas modalidades, um vetor compreende uma primeira sequência de polinucleotídeos que codifica uma cadeia pesada e uma segunda sequência de polinucleotídeos que codifica uma cadeia leve. Em algumas modalidades, a cadeia pesada e a cadeia leve são expressas a partir do vetor como dois polipeptídeos separados. Em algumas modalidades, a cadeia pesada e a cadeia leve são expressas como parte de um único polipeptídeo, tal como, por exemplo, quando o anticorpo é um scFv.

[0377] Em algumas modalidades, um primeiro vetor compreende um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada e um segundo compreende um polinucleotídeo que codifica uma cadeia leve. Em algumas modalidades, o primeiro vetor e o segundo vetor são transfectados em células hospedeiras em quantidades similares (tais como quantidades molares similares ou quantidades de massa similares). Em algumas modalidades, uma razão molar ou de massa dentre 5:1 e 1:5 do primeiro vetor e do segundo vetor é transfectada para células hospedeiras. Em algumas modalidades, uma razão de massa dentre 1:1 e 1:5 para o vetor que codifica a cadeia pesada e o vetor que codifica a cadeia leve é usada. Em algumas modalidades, uma razão de massa de 1:2 para o vetor que codifica a cadeia pesada e o vetor que codifica a cadeia leve é usada.

[0378] Em algumas modalidades, um vetor é selecionado que é otimizado para a expressão de polipeptídeos em CHO ou células derivadas de CHO ou em células NSO. Tais vetores exemplificativos são descritos, por exemplo, em Running Deer et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:880-889.

CÉLULAS HOSPEDEIRAS

[0379] Em algumas modalidades, as cadeias pesadas de anticorpo anti- LILRB2 e/ou cadeias leves de anticorpo anti-LILRB2 podem ser expressas em células procarióticas, tais como células bacterianas; ou em células eucarióticas, tais como células fúngicas (tais como levedura), células vegetais, células de inseto e células de mamífero. Tal expressão pode ser executada, por exemplo, de acordo com procedimentos conhecidos na técnica. As células eucarióticas exemplificativas que podem ser usadas para expressar polipeptídeos incluem, porém sem limitação, COS, incluindo células COS 7; células 293, incluindo células 293-6E; células CHO, incluindo CHO-S, DG44. Células Lec13 CHO e células FUT8 CHO; células PER.C6® (Crucell); e células NSO. Em algumas modalidades, as cadeias pesadas de anticorpo anti-LILRB2 e/ou cadeias leves de anticorpo anti- LILRB2 podem ser expressas em levedura. Consultar, por exemplo, a Publicação nº U.S. 2006/0270045 A1. Em algumas modalidades, uma célula hospedeira eucariótica particular é selecionada com base em sua capacidade para fazer modificações pós-traducionais desejadas às cadeias pesadas de anticorpo anti- LILRB2 e/ou cadeias leves de anticorpo anti-LILRB2. Por exemplo, em algumas modalidades, as células CHO produzem polipeptídeos que têm um nível mais alto de sialilação do que o mesmo polipeptídeo produzido em 293 células.

[0380] A introdução de um ou mais ácidos nucleicos numa célula hospedeira desejada pode ser realizada por qualquer método, incluindo, porém sem limitação, transfecção de fosfato de cálcio, transfecção mediada por DEAE- dextrano, transfecção mediada por lipídio catiônico, eletroporação, transdução, infecção, etc. Os métodos exemplificativos não limitantes são descritos, por exemplo, em Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3ª edição. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001). Os ácidos nucleicos podem ser temporária ou estavelmente transfectados nas células hospedeiras desejadas, de acordo com qualquer método adequado.

[0381] Células hospedeiras que compreendem qualquer um dos polinucleotídeos ou vetores descritos no presente documento são também fornecidas. Em algumas modalidades, uma célula hospedeira que compreende um anticorpo anti-LILRB2 é fornecida. Quaisquer células hospedeiras com a capacidade para superexpressar DNAs heterólogos podem ser usadas para o propósito de isolar os genes que codificam o anticorpo, polipeptídeo ou proteína de interesse. Os exemplos não limitantes de células hospedeiras de mamíferos, porém sem limitação, células COS, HeLa e CHO. Consultar também a Publicação PCT no WO 87/04462. As células hospedeiras de não mamíferos adequadas incluem procariontes (tais como E. coli ou B. subtillis) e levedura (tais como S. cerevisae, S. pombe; ou K. lactis).

PURIFICAÇÃO DE ANTICORPOS

[0382] Os anticorpos anti-LILRB2 podem ser purificados por qualquer método adequado. Tais métodos incluem, porém sem limitação, o uso de matrizes de afinidade ou cromatografia de interação hidrofóbica. Os ligantes de afinidade adequados incluem ROR1 ECD e ligantes que ligam regiões constantes de anticorpo. Por exemplo, uma Proteína A, Proteína G, Proteína A/G ou uma coluna de afinidade de anticorpo pode ser usada para ligar a região constante e purificar um anticorpo anti-LILRB2. A cromatografia interativa hidrofóbica, por exemplo, uma coluna de butila ou fenila, pode também ser adequada para purificar alguns polipeptídeos, tais como anticorpos. A cromatografia de troca iônica (por exemplo, cromatografia de troca aniônica e/ou cromatografia de troca catiônica) pode também ser adequada para purificar alguns polipeptídeos,

tais como anticorpos. A cromatografia de modo misto (por exemplo, fase reversa/troca aniônica, fase reversa/troca catiônica, interação hidrofílica/troca aniônica, interação hidrofílica/troca catiônica, etc.) pode também ser adequada para purificar alguns polipeptídeos, tais como anticorpos. Muitos métodos para purificar polipeptídeos são conhecidos na técnica.

PRODUÇÃO DE ANTICORPOS ISENTA DE CÉLULAS

[0383] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 é produzido num sistema isento de células. Os sistemas isentos de células exemplificativos não limitantes são descritos, por exemplo, em Sitaraman et al., 2009, Methods Mol. Biol. 498: 229-44; Spirin, 2004, Trends Biotechnol. 22: 538-45; Endo et al., 2003, Biotechnol. Adv. 21: 695-713.

COMPOSIÇÕES

[0384] Em algumas modalidades, os anticorpos preparados pelos métodos descritos acima são fornecidos. Em algumas modalidades, o anticorpo é preparado numa célula hospedeira. Em algumas modalidades, o anticorpo é preparado num sistema isento de células. Em algumas modalidades, o anticorpo é purificado. Em algumas modalidades, o anticorpo preparado numa célula hospedeira ou num sistema isento de células é um anticorpo quimérico. Em algumas modalidades, o anticorpo preparado numa célula hospedeira ou num sistema isento de células é um anticorpo humanizado. Em algumas modalidades, o anticorpo preparado numa célula hospedeira ou num sistema isento de células é um anticorpo humanizado. Em algumas modalidades, um meio de cultura celular que compreende um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido. Em algumas modalidades, um fluido de cultura de célula hospedeira que compreende um anticorpo anti-LILRB2 é fornecido.

[0385] Em algumas modalidades, composições que compreendem os anticorpos preparados pelos métodos descritos acima são fornecidas. Em algumas modalidades, a composição compreende um anticorpo preparado numa célula hospedeira. Em algumas modalidades, a composição compreende um anticorpo preparado num sistema isento de células. Em algumas modalidades, a composição compreende um anticorpo purificado. Em algumas modalidades, a composição compreende um anticorpo quimérico preparado numa célula hospedeira ou num sistema isento de células. Em algumas modalidades, a composição compreende um anticorpo humanizado preparado numa célula hospedeira ou num sistema isento de células. Em algumas modalidades, a composição compreende um anticorpo humano preparado numa célula hospedeira ou num sistema isento de células.

[0386] Em algumas modalidades, uma composição que compreende anticorpo anti-LILRB2 a uma concentração de mais do que cerca de qualquer um dentre 10 mg/ml, 20 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml, 50 mg/ml, 60 mg/ml, 70 mg/ml, 80 mg/ml, 90 mg/ml, 100 mg/ml, 125 mg/ml, 150 mg/ml, 175 mg/ml, 200 mg/ml, 225 mg/ml ou 250 mg/ml é fornecida. Em algumas modalidades, a composição compreende um anticorpo quimérico preparado numa célula hospedeira ou num sistema isento de células. Em algumas modalidades, a composição compreende um anticorpo humanizado preparado numa célula hospedeira ou num sistema isento de células. Em algumas modalidades, a composição compreende um anticorpo humano preparado numa célula hospedeira ou num sistema isento de células. V. COMPOSIÇÕES TERAPÊUTICAS E MÉTODOS MÉTODOS PARA TRATAR DOENÇAS QUE USAM ANTICORPOS ANTI-LILRB2

[0387] Anticorpos e composições que compreendem anticorpos são fornecidos para uso em métodos de tratamento para seres humanos ou animais. Métodos para tratar doenças que compreendem administrar anticorpos anti- LILRB2 são fornecidos. As doenças exemplificativas não limitantes que podem ser tratadas com anticorpos anti-LILRB2 incluem, porém sem limitação, câncer.

[0388] Em mais detalhes, os exemplos de doenças, tais como câncer, que podem ser tratadas de acordo com os métodos da invenção incluem cânceres sólidos e hematológicos/linfáticos e também crescimento maligno, pré-maligno e benigno, tal como displasia.Os exemplos de câncer incluem, porém sem limitação, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia. Os exemplos não limitantes mais particulares de tais cânceres incluem câncer do rim (por exemplo, carcinoma de células renais, por exemplo, carcinoma de células renais papilares), câncer de células escamosas, mesotelioma, teratoma, câncer de pulmão de células pequenas, câncer da pituitária, câncer esofágico, astrocitoma, sarcoma de tecido mole, câncer de pulmão (por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas, adenocarcinoma do pulmão, carcinoma escamoso do pulmão), câncer do peritôneo, câncer hepatocelular, câncer gastrointestinal (por exemplo, câncer de estômago), câncer pancreático, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer retal, carcinoma endometrial ou uterino, carcinoma de glândula salivar, câncer de fígado, câncer de próstata, câncer vulval, câncer de tireoide, timoma, carcinoma hepático, câncer do cérebro, glioma, glioblastoma, câncer endometrial, câncer de testículo, colangiocarcinoma, colangiossarcoma, carcinoma de vesícula biliar, câncer gástrico, melanoma (por exemplo, melanoma uveal), feocromocitoma, paraganglioma, carcinoma cístico adenoide e vários tipos de câncer de cabeça e pescoço (por exemplo, câncer de cabeça e pescoço escamoso).

[0389] O anticorpo anti-LILRB2 pode ser administrado conforme necessário aos indivíduos. A determinação da frequência de administração pode ser feita por pessoas versadas na técnica, tal como um médico responsável com base nas considerações da afecção sendo tratada, idade do indivíduo sendo tratado,

gravidade da afecção sendo tratada, estado geral de saúde do indivíduo sendo tratado e similares. Em algumas modalidades, uma dose eficaz de um anticorpo anti-LILRB2 é administrada a um indivíduo uma ou mais vezes. Em algumas modalidades, uma dose de um anticorpo anti-LILRB2 é administrada ao indivíduo uma vez por mês, menos do que uma vez por mês, tal como, por exemplo, a cada dois meses ou a cada três meses. Em algumas modalidades, uma dose eficaz de um anticorpo anti-LILRB2 é administrada menos do que uma vez por mês, tal como, por exemplo, a cada duas semanas ou a cada semana. Uma dose eficaz de um anticorpo anti-LILRB2 é administrada ao indivíduo pelo menos uma vez. Em algumas modalidades, a dose eficaz de um anticorpo anti-LILRB2 pode ser administrada múltiplas vezes, incluindo por períodos de pelo menos um mês, pelo menos seis meses ou pelo menos um ano.

[0390] Em algumas modalidades, composições farmacêuticas são administradas numa quantidade eficaz para o tratamento (incluindo a profilaxia) de câncer. A quantidade terapeuticamente eficaz é tipicamente dependendo do peso do sujeito sendo tratado, de sua condição física ou de saúde, da extensão da afecção a ser tratada ou da idade do sujeito sendo tratado. Em geral, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 10 μg/kg de peso corporal a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 50 μg/kg de peso corporal a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 10 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades,

anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dose.

[0391] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas são administradas numa quantidade eficaz para causar a conversão macrófagos de tipo M2 em macrófagos de tipo M1.

[0392] A quantidade terapeuticamente eficaz é tipicamente dependendo do peso do sujeito sendo tratado, de sua condição física ou de saúde, da extensão da afecção a ser tratada ou da idade do sujeito sendo tratado. Em geral, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 10 μg/kg de peso corporal a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 50 μg/kg de peso corporal a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 10 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dose.

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

[0393] Em algumas modalidades, composições que compreendem anticorpos anti-LILRB2 são fornecidas em formulações com uma ampla variedade de carreadores farmaceuticamente aceitáveis (consultar, por exemplo, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20ª edição (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7ª edição, Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3ª edição, Pharmaceutical Press (2000)). Vários carreadores farmaceuticamente aceitáveis, que incluem veículos, adjuvantes e diluentes estão disponíveis. Além disso, várias substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, tais como agentes de ajuste de pH e tamponamento, agentes de ajuste de tonicidade, estabilizantes, agentes umectantes e similares, estão também disponíveis. Os carreadores exemplificativos não limitantes incluem solução salina, solução salina tamponada, dextrose, água, glicerol, etanol e combinações dos mesmos.

[0394] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo anti-LILRB2 é fornecida. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um anticorpo quimérico. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um anticorpo humanizado. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um anticorpo preparado numa célula hospedeira ou sistema isento de células conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0395] Em algumas modalidades, composições farmacêuticas são administradas numa quantidade eficaz para o tratamento (incluindo a profilaxia) de câncer. A quantidade terapeuticamente eficaz é tipicamente dependendo do peso do indivíduo sendo tratado, de sua condição física ou de saúde, da extensão da afecção a ser tratada ou da idade do indivíduo sendo tratado. Em geral, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 0,05 mg/kg de peso corporal a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 10 μg/kg de peso corporal a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 50 μg/kg de peso corporal a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 10 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal a cerca de 10 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 0,05 mg/kg de peso corporal a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 0,05 mg/kg de peso corporal a cerca de 10 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados numa quantidade na faixa de cerca de 5 mg/kg de peso corporal ou menos, por exemplo, menos do que 4, menos do que 3, menos do que 2 ou menos do que 1 mg/kg do anticorpo.

[0396] Em algumas modalidades, anticorpos anti-LILRB2 podem estar presentes numa quantidade na faixa de cerca de 50 μg/kg de peso corporal a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dose. Por exemplo, em algumas modalidades, uma dose para uma pessoa de 20 kg pode estar dentro de uma faixa de cerca de 1 mg a cerca de 100 mg. Em algumas modalidades, a dose pode estar dentro de uma faixa de 2 mg a 200 mg do anticorpo anti-LILRB2. Em algumas modalidades, a dose pode estar dentro de uma faixa de 10 mg a 400 mg do anticorpo anti-LILRB2.

VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

[0397] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados in vivo por várias vias, incluindo, porém sem limitação, intravenosa, intra-arterial, parenteral, intratumoral, intraperitoneal ou subcutânea. A formulação e via de administração apropriadas podem ser selecionadas de acordo com a aplicação pretendida.

TERAPIA DE COMBINAÇÃO

[0398] Anticorpos anti-LILRB2 podem ser administrados sozinhos ou com outros modos de tratamento, por exemplo, com um agente terapêutico adicional. Os mesmos podem ser fornecidos antes, substancialmente contemporâneos ou após outros modos de tratamento, por exemplo, cirurgia, quimioterapia, radioterapia, ou a administração de um anticorpo biológico, tal como outro anticorpo terapêutico. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- LILRB2 é administrado em conjunto com outro agente anticâncer.

[0399] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento é administrado com uma terapia de PD-1. As terapias de PD-1 exemplificativas incluem, porém sem limitação, nivolumab (BMS-936558, MDX-1106, ONO-4538); pidilizumab, lambrolizumab/pembrolizumab (KEYTRUDA, MK-3475); durvalumab; RG-7446; avelumab (MSB-0010718C); AMP-224; BMS-936559 (um anticorpo anti-PD-L1); AMP-514; MDX-1105; ANB- 011; anti-LAG-3/PD-1; Ab anti-PD-1 (CoStim); Ab anti-PD-1 (Kadmon Pharm.); Ab anti-PD-1 (Immunovo); Ab anti-TIM-3/PD-1 (AnaptysBio); Ab anti-PD-L1 (CoStim/Novartis); MEDI-4736 (um anticorpo anti-PD-L1,

Medimmune/AstraZeneca); RG7446/MPDL3280A (um anticorpo anti-PD-L1, Genentech/Roche); KD-033, antagonista de PD-1 (Agenus); STI-A1010; STI- A1110; TSR-042; e outros anticorpos e outros agentes que são dirigidos contra morte programada-1 (PD-1) ou ligante de morte programada 1 (PD-L1) (por exemplo, JTX-4014, US 2018/0118829).

[0400] Em algumas modalidades, um indivíduo é selecionado para o tratamento com um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento e uma terapia de PD-1 se o tumor do indivíduo for PD-L1ALTO. A determinação do nível de PD-L1 pode ser determinada, por exemplo, com o uso de IHC. Em algumas modalidades, um indivíduo é tratado em primeiro lugar com uma terapia de PD-1 e é tratado posteriormente com um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento, com ou sem continuar a terapia de PD-1. Assim, os métodos fornecidos no presente documento incluem o tratamento de um indivíduo com um anticorpo anti-LILRB2, em que o indivíduo foi anteriormente tratado com uma terapia de PD-1.

[0401] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento é administrado a pacientes que mostram a presença de macrófagos num ou mais tumores. A presença de macrófagos pode ser determinada, por exemplo, por assinatura de mRNA ou IHC.

[0402] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento é administrado com uma ou mais terapias selecionadas dentre: um anticorpo anti-CD47 (por exemplo, CC90002 (Celgene) ou Hu5F9-G4 (Forty Seven, Inc.)); um anticorpo anti-SIRP alfa (por exemplo, OSE-172 (OSE Immunotherapuetics)); IL-2 peguilada (por exemplo, NKTR-214 (Nektar Therapeutics)); um anticorpo anti-VEGF (por exemplo, bevacizumab (AVASTIN ® )); TTI-621 ou TTI-624 (Trillium Therapeutics SIRPa-Fc); ALX148 (Alexo, SIRPa-Fc) e um inibidor de IDO (por exemplo, epacadostat (Incyte)).

[0403] Em algumas modalidades, um indivíduo é selecionado para o tratamento com um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento e uma terapia ICOS (por exemplo, JTX-2011, por exemplo, conforme descrito na Publicação de Patente nº U.S. 2016/0304610, incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade). Em algumas modalidades, um indivíduo é tratado em primeiro lugar com uma terapia de ICOS e é tratado posteriormente com um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento, com ou sem continuar a terapia de ICOS. Assim, os métodos fornecidos no presente documento incluem o tratamento de um indivíduo com um anticorpo anti-LILRB2, em que o indivíduo foi anteriormente tratado com uma terapia de ICOS.

[0404] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento é administrado com um anticorpo anti-OX40 agonista (tal como Medi6469, MedImmune; MOXR0916/RG7888, Roche). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento é administrado com um anticorpo anti-CTLA4 (tal como ipilimumab, YERVOY®, BMS-734016; MDX-101).

[0405] Em algumas modalidades, um agente terapêutico adicional é um agente quimioterápico. Os agentes quimioterápicos exemplificativos que podem ser combinados com os anticorpos anti-LILRB2 fornecidos no presente documento incluem, porém sem limitação, capectiabina, ciclofosfamida, dacarbazina, temozolomida, ciclofosfamida, docetaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, cisplatina, carboplatina, epirubicina, eribulina, 5-FU, gemcitabina, irinotecano, ixabepilona, metotrexato, mitoxantrona, oxaliplatina, paclitaxel, nab-paclitaxel, ABRAXANE® (paclitaxel ligado à proteína), pemetrexed, vinorelbina e vincristina. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento é administrado com pelo menos um inibidor de quinase. Os inibidores da quinase exemplificativos não limitantes incluem erlotinibe, afatinibe, gefitinibe, crizotinibe, dabrafenibe, trametinibe, vemurafenibe e cobimetanibe.

[0406] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um inibidor de IDO. Os inibidores de IDO exemplificativos não limitantes são descritos, por exemplo, nos documentos nº US 2016/0060237; e US 2015/0352206. Os inibidores de IDO exemplificativos não limitantes incluem Indoximod (New Link Genetics), INCB024360 (Incyte Corp), 1-metil-D-triptofano (New Link Genetics) e GDC-0919 (Genentech).

[0407] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento é administrado em combinação com um fármaco de modificação imunológica (IMiD). Os IMiDs exemplificativos não limitantes incluem talidomida, lenalidomida e pomalidomida.

[0408] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LILRB2 é administrado com um segundo método terapêutico para tratamento. Assim, a administração de um anticorpo fornecido no presente documento pode ser em combinação com outro sistema de tratamento.

[0409] Em algumas modalidades, um agente terapêutico adicional é uma vacina contra câncer. Vacinas contra câncer foram investigadas como uma abordagem potencial para a transferência de antígeno e ativação de células dendríticas. Em particular, vacinação em combinação com pontos de verificação imunológicos ou agonistas para trajetórias coestimulatórias mostrou evidência de superar a tolerância e gerar resposta antitumoral aumentada. Uma gama de vacinas contra câncer foi testada que emprega diferentes abordagens para promover uma resposta imune contra o tumor (consultar, por exemplo, Emens, 2008, Expert Opin. Emerg. Drugs, 13(2): 295–308). Abordagens foram projetadas para acentuar a resposta de células B, células T ou células de apresentação de antígeno profissionais contra tumores. Os tipos exemplificativos de vacinas contra câncer incluem, porém sem limitação, vacinas à base de peptídeo que empregam antígenos de tumor distintos de alvejamento, que podem ser entregues como peptídeos/proteínas ou como vetores de DNA geneticamente modificados, vírus, bactérias ou similares; e abordagens de biologia de células, por exemplo, para desenvolvimento de vacina contra câncer contra alvos menos bem definidos, incluindo, porém sem limitação, vacinas desenvolvidas a partir de células dendríticas derivadas de paciente, células de tumor autólogas ou lisatos celulares de tumor, células de tumor alogênicas e similares.

[0410] As vacinas contra câncer exemplificativas não limitantes incluem Sipuleucel-T, que é derivado de células mononucleares de sangue periférico autólogas (PBMCs) que incluem células de apresentação de antígeno (consultar, por exemplo, Kantoff PW et al., 2010, N Engl J Med 363:411-22). Na geração de Sipuleucel-T, as PBMCs do paciente são ativadas ex vivo com PA2024, uma proteína de fusão recombinante de ácido prostático fosfatase (um antígeno da próstata) e fator estimulante de colônia de granulócitos e macrófagos (um ativador de célula imune). Outra abordagem para uma vacina contra câncer candidata é para gerar uma resposta imune contra peptídeos específicos com mutação no tecido tumoral, tal como melanoma (consultar, por exemplo, Carreno et al., 2015, Science 348:6236). Tais peptídeos com mutação podem, em algumas modalidades, ser denominados neoantígenos. Como um exemplo não limitante do uso de neoantígenos em vacinas contra tumor, neoantígenos no tumor previstos para se ligarem à proteína de complexo de histocompatibilidade principal HLA-A*02:01 são identificados para pacientes individuais com um câncer, tal como melanoma. As células dendríticas do paciente são maturadas ex vivo, então, incubadas com neoantígenos. As células dendríticas ativadas são, então, administradas ao paciente. Em algumas modalidades, após a administração da vacina contra câncer, a imunidade de célula T robusta contra o neoantígeno é detectável.

[0411] Em algumas tais modalidades, a vacina contra câncer é desenvolvida com o uso de um neoantígeno. Em algumas modalidades, a vacina contra o câncer é uma vacina de DNA, tal como uma vacina de DNA de mamaglobina-A (consultar, por exemplo, Gillanders et al., 2014, Clin. Canc. Res., 20: 5964-75). Em algumas modalidades, a vacina contra câncer é um vírus geneticamente modificado que compreende um antígeno de câncer, tal como PROSTVAC (rilimogene galvacirepvec/rilimogene glafolivec). Em algumas modalidades, a vacina contra câncer compreende células tumorais geneticamente modificadas, tais como GVAX, que é uma vacina de célula tumoral transfectada por gene de fator estimulante de colônia de granulócitos e macrófagos (GM-CSF) (consultar, por exemplo, Nemunaitis, 2005, Expert Rev Vaccines, 4: 259-74).

[0412] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 descrito no presente documento é administrado antes, concomitantemente ou após uma vacina contra câncer. Em algumas modalidades, as vacinas contra câncer desenvolvidas com o uso de neoantígenos são usadas em combinação com os anticorpos anti-LILRB2 descritos no presente documento. Em algumas tais modalidades, a combinação é usada para tratar um câncer com uma carga de mutação alta, tal como melanoma, câncer de pulmão, bexiga ou colorretal.

[0413] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LILRB2 fornecido no presente documento é administrado em combinação com uma terapia de célula T receptora de antígeno quimérico (terapia com CAR-T). A célula CAR-T pode ser geneticamente modificada para expressar um receptor que reconhece um antígeno expresso por célula tumoral. O antígeno pode ser um antígeno especificamente expresso pelo tumor ou um antígeno expresso tanto por células cancerosas quanto por tecido saudável. Em algumas modalidades, a célula CAR-

T é uma célula CAR-T anti-BCMA. Em algumas modalidades, a terapia com CAR- T é terapia com CAR-T adoptiva, em que as células T de um paciente são removidas e modificadas para expressar o receptor de antígeno quimérico e, então, retornadas ao paciente. Consultar, por exemplo, Dai et al., 2016, J Natl Cancer Inst, 108 (7): djv439, doi: 10.1093/jnci/djv439; Gill et al., 2015, Blood Rev, pii: S0268-960X(15)00080-6, doi: 10.1016/j.blre.2015.10.003; Gill et al., 2015, Immunol. Rev, 263(1):68-89. doi: 10.1111/imr.12243. KITS/ARTIGOS DE FABRICAÇÃO

[0414] São também fornecidos no presente documento kits, medicamentos, composições e formas de dosagem unitárias para uso em qualquer um dos métodos descritos no presente documento.

[0415] Os kits podem incluir um ou mais recipientes que compreendem um anticorpo anti-LILRB2 (ou formas de dosagem unitárias e/ou artigos de fabricação). Em algumas modalidades, uma dosagem unitária é fornecida em que a dosagem unitária contém uma quantidade predeterminada de uma composição que compreende um anticorpo anti-LILRB2, com ou sem um ou mais agentes adicionais. Em algumas modalidades, tal dosagem unitária é fornecida em uma seringa para injeção pré-carregada de uso. Em algumas modalidades, a composição contida na dosagem unitária pode compreender solução salina, sacarose ou similares; um tampão, tal como fosfato, ou similares; e/ou ser formulada dentro de uma faixa de pH estável e efetiva. Em algumas modalidades, a composição pode ser fornecida como um pó liofilizado que pode ser reconstituído mediante a adição de um líquido apropriado, por exemplo, água estéril. Em algumas modalidades, a composição compreende uma ou mais substâncias que inibem a agregação de proteína, incluindo, porém sem limitação, sacarose e arginina. Em algumas modalidades, uma composição compreende heparina e/ou um proteoglicano.

[0416] Em algumas modalidades, a quantidade do anticorpo anti-LILRB2 usada na dose unitária pode ser qualquer uma das quantidades fornecidas no presente documento para os vários métodos e/ou composições descritos.

[0417] Em algumas modalidades, os kits compreendem adicionalmente instruções para uso no tratamento de câncer em conformidade com qualquer um dos métodos descritos no presente documento. O kit pode compreender, ainda, uma descrição de seleção de indivíduo adequado para tratamento. As instruções fornecidas nos kits são, tipicamente, instruções escritas numa identificação ou bula (por exemplo, uma folha de papel incluída no kit), mas instruções legíveis por máquina (por exemplo, instruções carregadas num disco de armazenamento magnético ou óptico) são também aceitáveis. Em algumas modalidades, o kit compreende adicionalmente outro agente terapêutico.

[0418] Os kits estão em embalagem adequada. A embalagem adequada inclui, porém, sem limitação, frascos, garrafas, jarras, embalagem flexível (por exemplo, bolsas de plástico ou Mylar vedadas) e similares. Os kits podem fornecer opcionalmente componentes tais como tampões e informações interpretativas. O presente pedido, assim, também fornece artigos de manufatura, que incluem frascos (tal como frascos vedados), garrafas, jarros, embalagem flexível e similares.

EXEMPLOS

[0419] Os exemplos discutidos abaixo são destinados a serem simplesmente exemplificativos da invenção e não devem ser considerados limitantes da invenção de qualquer modo. Os exemplos não se destinam a representar que os experimentos abaixo são todos ou os únicos experimentos realizados. Foram feitos esforços para garantir a precisão em relação aos números usados (por exemplo, quantidades, temperatura, etc.), mas alguns erros experimentais e desvios devem ser levados em consideração. A não ser que indicado de outro modo, a temperatura está em graus Centígrados, e a pressão está na ou próxima à pressão atmosférica. EXEMPLO 1. EXPERIMENTOS DE CULTURA CELULAR DE HLA-G

[0420] O exemplo a seguir investiga o papel de HLA-G na supressão da função de células mieloides. A Figura 1 mostra um modelo de uma célula mieloide que expressa LILRB2 e uma célula tumoral que expressa HLA-G. Um anticorpo anti-LILRB2 de bloqueio é representado entre o LILRB2 expresso na célula mieloide e o HLA-G expresso na célula tumoral. HLA-G multiméricos expressos como tetrâmeros foram usados em ensaios de células mieloides humanas primárias para investigar o papel de HLA-G na supressão da função de células dendríticas.

[0421] Células dendríticas imaturas não aderentes (IDC) foram coletadas e lavadas duas vezes em 1xDPBS (Gibco) e, então, foram colocadas a 1 x 105 células por poço numa placa tratada de cultura de tecido de fundo redondo de 96 poços em RPMI1640 suplementado com GLUTAMAXTM (Gibco) e HI-FBS 10% (Sigma). iDCs foram plaqueadas em meio sozinho ou maturadas em meio contendo PGE2, IL-1β e TNFα na presença ou ausência do tetrâmero HLA-G (Fred Hutchinson Cancer Research Center) e incubadas a 37°C CO2 +5%. Após 24 horas, os sobrenadantes foram coletados para análise de citocina por meio de arranjo de microesferas citométricas (CBA) de acordo com o protocolo do fabricante (BD) e analisados com o uso de um analisador Accuri C6 (BD). As células foram manchadas com anticorpos específicos para moléculas de apresentação de antígeno importantes, e a expressão de células destes marcadores foi avaliada com o uso de um analisador de citômetro de fluxo FACSCELESTATM (BD).

[0422] As DCs amadurecidas na presença do tetrâmero HLA-G exibiram uma diminuição na expressão dos marcadores de maturação CD80 e CD86 (Figuras 2A a 2F). Este efeito inibidor foi suprimido quando os tetrâmeros HLA-G foram incubados com células dendríticas doadoras de LILRB2baixo (Figuras 2G a 2L). Estes resultados demonstram que HLA-G solúvel bloqueia a maturação e a capacidade de células dendríticas se desenvolverem em células apresentadoras de antígeno potentes, e que supressão mediada por HLA-G é dependente do LILRB2 expresso em células dendríticas. EXEMPLO 2. GERAÇÃO DE ANTICORPOS

[0423] Os camundongos e ratos foram imunizados com a proteína de LILRB2 humana ou células que superexpressam LILRB2 humano com um plasmídeo de DNA que codifica LILRB2 humano. Todos os anticorpos exceto J-16 e J-18 a J-20 são de origem murina; J-16 e J-18 a J-20 são derivados de imunizações de ratos. Sobrenadantes de clone de hibridoma foram triados quanto à especificidade para LILRB2 humano em relação a outros membros da família LILR com o uso de linhagens de células que superexpressam proteínas de LILR de comprimento completo. Os clones de hibridoma de interesse foram ampliados, e o sobrenadante foi purificado para triagem de anticorpos mais extensa antes de os clones de interesse terem sido sequenciados e produzidos de forma recombinante como quimeras de IgG4 humana. (Consultar as Figuras 3A e 3B). EXEMPLO 3. TRIAGEM DE ANTICORPOS QUIMÉRICOS: CONFIGURAÇÃO DE TRIAGEM DE ANTI-LILRB2 INICIAL

[0424] Devido ao alto grau de similaridade de sequência dentre os onze membros da família LILR humana relatada, os anticorpos foram triados quanto à especificidade contra todos os membros da família nos estágios de clone de hibridoma, ampliação de hibridoma, anticorpo quimérico e humanizado. A especificidade foi verificada tanto em células quando com a proteína recombinante com o uso do o FORTEBIO® OCTET® no estágio de anticorpo quimérico.

[0425] Nas células, a especificidade foi definida pela ligação de anticorpo abaixo de duas vezes um corte de controle de isotipo. Os anticorpos de controle positivo foram usados para estabelecer a expressão de membros da família na superfície celular, e os anticorpos também foram avaliados em comparação com o controle positivo.

[0426] Para os ensaios de proteínas recombinantes solúveis, proteínas da família LILR recombinantes foram expressas como proteínas de fusão Fc1 humanas e/ou 6xHis. Os anticorpos foram carregados em sensores de captura anti-humana (AHC) a 10 µg/ml, e sensores foram tornados linha de base em tampão de cinética. Os anticorpos de controle foram similarmente carregados no sensor. Se proteínas de fusão Fc humanas tiverem sido usadas, os sensores foram bloqueados com proteína Fc humana e tornados linha de base em tampão de cinética. Os sensores foram, então, testados quanto à associação a proteínas de membro da família a 300 nM. A ligação é considerada uma resposta acima do corte de 0,08 nm no instrumento OCTET®.

[0427] Anticorpos anti-LILRB2 quiméricos (hIgG4) foram selecionados com base na especificidade a hLILRB2 expresso em célula ao longo dos dez outros membros da família LILR humana, capacidade para bloquear as interações de ligante a LILRB2 expresso em célula e capacidade para converter macrófagos de tipo M2 em macrófagos de tipo M1 que têm uma situação de ativação inflamatória num ensaio de macrófago humano primário. Os anticorpos de bloqueio de ligante específicos para LILRB2 selecionados foram adicionalmente triados quanto à ligação a monócitos de primata não humano (NHP). Um anticorpo de controle de isotipo foi incluído em todas as triagens para determinar sinais de fundo. São descritos abaixo os critérios e a estratégia realizada para identificar anticorpos quiméricos específicos para hLILRB2 de bloqueio de ligante. Os resultados estão resumidos nas Figuras 3A e 3B e descritos em detalhes abaixo.

SUMÁRIO DE BINAGEM DE ANTICORPO

[0428] Um subconjunto de anticorpos contra LILRB2 foi binado com o uso do OCTET® Red96 em formato de sanduíche. Resumidamente, o anticorpo nº 1 (indicada na coluna 1) foi carregado num sensor AHC a 10 µg/ml. Pontas foram tornadas linha de base em tampão de cinética, bloqueadas com hFc1, tornadas linha de base em tampão de cinética, então, carregadas com LILRB2 humano. As pontas foram novamente tornadas linha de base em tampão de cinética e carregadas com 10 µg/ml do anticorpo nº 2 (indicado na linha 1). Os valores de resposta mostrados na Tabela 2, abaixo, são a ligação do anticorpo nº 2 no formato de sanduíche descrito. TABELA 2. RESULTADOS DE ENSAIO DE LIGAÇÃO COMPETITIVA J-17 J-19 J-11 J-03 J-16 J-07 J-04 J-17 -0,11 -0,10 -0,27 0,43 0,52 0,40 0,46 J-19 -0,21 -0,21 0,28 0,54 0,63 0,45 0,54 J-11 -0,39 0,71 -0,24 0,51 0,65 0,47 0,54 J-03 0,05 0,15 0,01 -0,08 -0,08 -0,07 -0,07 J-16 0,09 0,47 0,30 -0,28 -0,36 -0,26 -0,31 J-07 0,04 0,27 0,10 -0,29 -0,30 -0,28 -0,30 J-04 0,42 0,67 0,51 -0,10 -0,10 -0,10 -0,10

[0429] Os anticorpos identificados como ligantes específicos a LILRB2 e bloqueadores potentes de ligação de HLA-G a LILRB2 (J-19, J-11 e J-17) caem em compartimentos de epítopos próximos, mas não totalmente sobrepostos. J-11 e J-19 não bloquearam a ligação um do outro a LILRB2, mas ambos foram bloqueados por J-17. Anticorpos que são específicos para LILRB2, mas não bloqueiam HLA-G, J-04, J-03 e J-07, se ligam num compartimento separado dos três anticorpos que são específicos e bloqueiam HLA-G, mas o mesmo compartimento que um anticorpo que bloqueia a ligação de HLA-G a LILRB2, mas é reativo de modo cruzado a LILRA1, J-16. Os resultados são mostrados na Tabela 3, abaixo. TABELA 3. RESULTADOS DE BINAGEM DE ANTICORPO mAb1 J-17 J-19 J-11 J-03 J-16 J-07 J-04 mAb J-19 J-17 J-17 J-16 J-03 J-16 J-16 bloqueado mAb J-11 J-07 J-07 J-03 J-03 bloqueado mAb J-04 J-04 J-04 J-07 bloqueado compartimento A/B A B C C C C EXEMPLO 4. TRIAGEM DE ANTICORPOS QUIMÉRICOS: TRIAGEM CONTRA

REATIVIDADE CRUZADA COM MEMBROS DA FAMÍLIA LILR

[0430] O propósito desta triagem foi identificar anticorpos com ligação específica a hLILRB2 expresso em célula, com uma contratriagem contra hLILRB1, hLILRB3, hLILRB4, hLILRB5, hLILRA1, hLILRA2, hLILRA3, hLILRA4, hLILRA5 e hLILRA6 expressos em célula. 25 anticorpos quiméricos (hIgG4) foram triados quanto à especificidade de hLILRB2 celular. Acertos positivos para ligação de hLILRB2 foram identificados como anticorpos que se ligam a hLILRB2-CHO-s mais do que duas vezes através da ligação de mAb de controle de isotipo. Os anticorpos que também se ligam a células que expressam não LILRB2 mais do que duas vezes em relação à ligação de mAb de controle de isotipo foram designados como específicos para não LILRB2 ou com reatividade cruzada.

[0431] Conforme mostrado na Figura 4, confirmou-se que 76% dos anticorpos quiméricos se ligam a LILRB2 humano expresso em célula. 78% destes anticorpos de ligação a hLILRB2 exibiram ligação específica a hLILRB2 em relação aos outros dez membros da família hLILR superexpressos em CHO-s. Verificou- se que os anticorpos detectados com uma ligação 2 vezes maior do que o controle de isotipo para outra linhagem celular que superexpressa LILR adicionalmente a CHO-s hLILRB2 têm reatividade cruzada para hLILRB3, hLILRA1, hLILRA2 e/ou hLILRA3. Nenhum anticorpo com reatividade cruzada de hLILRB1, hLILRB4, hLILRA4, hLILRA5 ou hLILRA6 foi identificado nesta triagem. EXEMPLO 5. TRIAGEM DE ANTICORPO QUIMÉRICO: TRIAGEM PRA MABS QUIMÉRICOS ANTI-LILRB2 DE BLOQUEIO DE HLA-G E MABS QUIMÉRICOS ANTI- LILRB2 DE BLOQUEIO DE HLA-A2

[0432] Os anticorpos foram adicionalmente triados quanto à capacidade para bloquear interações de ligante-receptor num ensaio baseado em célula. Mediante a HLA-G se ligando a LILRB2, as células mieloides são tornadas imunossupressoras. Assim, foi previsto que a identificação de anticorpos anti- LILRB2 que têm a capacidade para bloquear interações de HLA-G:LILRB2 é benéfica na promoção respostas antitumorais. Adicionalmente a HLA-G, outro ligante de LILRB2 com a capacidade para suprimir células mieloides são moléculas de classe I de complexo de histocompatibilidade principal (MHC) clássicas, tais como HLA-A2.

[0433] Na triagem secundária, 1×105 células CHO-s que superexpressam LILRB2 humano foram colocadas em placa tratada com cultura de tecido de fundo redondo de 96 poços e lavadas duas vezes com 1xDPBS (Gibco) e incubadas com 10 µg/ml de anticorpo primário (mAbs anti-LILRB2 ou controle) preparados em 50 µl de tampão FACS (1xDPBS contendo HI-FBS 2% (Sigma)+Azida de Sódio 0,05%). Após incubação com mAbs por 30 minutos a 4°C,

as células foram lavadas duas vezes em tampão FACS e, então, ressuspensas em 50 µl de tampão FACS contendo 5 µg/ml de tetrâmero HLA-A2 ou HLA-G conjugado a APC (Fred Hutch). As células foram incubadas protegidas da luz por 30 a 60 minutos a 4°C. Após a incubação com tetrâmero, as células foram lavadas em tampão FACS e ressuspensas em tampão de correção (paraformaldeído 1,5% diluído em 1xDPBS). As amostras foram analisadas com o uso do analisador de citômetro de fluxo Celesta (BD Biosciences). Os dados representam a percentagem de tetrâmero bloqueado por mAbs em relação ao tetrâmero sozinho, calculada de acordo com a seguinte equação: (𝑀𝑀𝑀𝑀𝑀𝑀𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇â𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚+𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 ) % 𝑑𝑑𝑑𝑑 𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡â𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑑𝑑𝑜𝑜 = 100 − � 100� 𝑀𝑀𝑀𝑀𝑀𝑀𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇𝑇â𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚

[0434] Os resultados de um estudo distinguindo anticorpos de bloqueio de HLA-G de anticorpos de não bloqueio de HLA-G são mostrados na Figura 5. Os anticorpos com capacidade para bloquear interações de HLA-G:LILRB2 em células são identificados como a percentagem de tetrâmero ligado a células LILRB2+ na presença de anticorpo em comparação ao tetrâmero ligado a células na ausência de anticorpo. Sete dentre os 25 anticorpos anti-LILRB2 bloquearam a ligação de tetâmero HLA-G a CHO-s hLILRB2+ em pelo menos 50%. Nenhum dos anticorpos de controle de isotipo impediu HLA-G de se ligar a células LILRB2+.

[0435] Os resultados de um estudo que distingue anticorpos de bloqueio de HLA-A2 de anticorpos de não bloqueio de HLA-A2 são mostrados na Figura 6. Os anticorpos com capacidade para bloquear interações de HLA-A2:LILRB2 em células são identificados como a percentagem de tetrâmero ligado a células LILRB2+ na presença de anticorpo em comparação ao tetrâmero ligado a células na ausência de anticorpo. Seis dentre os 25 anticorpos anti-LILRB2 bloquearam a ligação de tetâmero HLA-A2 a CHO-s hLILRB2+ em pelo menos 50%. Nenhum dos anticorpos de controle de isotipo impediu HLA-A2 de se ligar a células

LILRB2+. EXEMPLO 6. TRIAGEM DE ANTICORPOS QUIMÉRICOS: TRIAGEM DE mAbs QUIMÉRICOS ANTI-LILRB2 QUANDO À ATIVIDADE BIOLÓGICA EM CULTURA

CELULAR ENSAIO DE LIBERAÇÃO DE CITOCINA DE MONOCULTURA DE MACRÓFAGOS HUMANOS

[0436] Monócitos humanos primários de sangue periférico de doadores saudáveis foram diferenciados em macrófagos na presença de M-CSF. Após sete dias de diferenciação, 1 × 105 macrófagos diferenciados de monócitos humanos (HMDMs) foram plaqueados por poço numa placa tratada com cultura de tecido de fundo redondo de 96 poços num volume final de 200 µl contendo 100 ng/ml de LPS na ausência ou presença de 1 µg/ml de mAbs solúveis em meios de cultura celular (RPMI (Gibco) + FBS 10% (Sigma)). Após incubação por 24 horas a 37°C com CO2 5%, o sobrenadante foi coletado, o arranjo de microesferas de citocina (CBA) foi realizado de acordo com o protocolo do fabricante (BD Biosciences) para medir citocinas produzidas em resposta a mAbs. As amostras foram analisadas com o uso do analisador de citômetro Accuri C6 (BD Biosciences). Os dados representam a média de dois a quatro doadores.

[0437] A produção de citocinas M1/inflamatórias e M2/anti-inflamatórias por HMDMs primários foi detectada mediante o tratamento com mAb anti- LILRB2 solúvel, conforme mostrado nas Figuras 7A e 7B. As citocinas M1/inflamatórias medidas incluíram TNFα, assim como IL-6 e IL-1β (dados não mostrados). As citocinas M2/anti-inflamatórias medidas incluíram IL-10, assim como CCL-2 (dados não mostrados). A produção de citocinas é descrita como níveis normalizados em relação ao tratamento com LPS sozinho.

[0438] Uma correlação positiva entre a atividade de promoção de M1 (conforme medida por aumento de TNFα) e a capacidade para mAbs anti-LILRB2 bloquearem interações de HLA-G/A:LILRB2 foi observada (Figuras 8A e 8B).

ENSAIO DE NANOSTRING DE MONOCULTURA DE MACRÓFAGOS HUMANOS

[0439] Monócitos humanos primários foram diferenciados em macrófagos na presença de M-CSF. Após sete dias de diferenciação, 1 × 105 HMDMs foram plaqueados por poço numa placa tratada com cultura de tecido de fundo redondo de 96 poços num volume final de 200 µl contendo 100 ng/ml de LPS na ausência ou presença de 10 µg/ml de mAbs anti-hLILRB2 solúveis em meios de cultura celular (RPMI (Gibco) + FBS 10% (Sigma)). Condições similares foram preparadas para avaliar a atividade de mAb na ausência de LPS. As células foram incubadas a 37°C com CO2 5%, e poços separados foram plaqueados para avaliar alterações genéticas em quatro e 24 horas pós-tratamento. Em cada ponto de tempo, o sobrenadante foi coletado e o RNA foi extraído das células, quantificados com o uso de Quibit, e submetidos a QC com o uso do Analisador de Fragmento de AATI. Se RNA suficiente tiver sido extraído da amostra, a expressão gênica foi realizada com o uso de NanoString nCounter com o uso do painel de Imunologia Humana V2 assim como uma incorporação específica para macrófago customizada. A expressão gênica foi normalizada à expressão de genes de manutenção, então, a limitação de ruído foi realizada com o uso dos dados de sondas negativas. A expressão gênica foi transformada no espaço log2, e os dados das amostras que foram tratadas com ligantes de LILRB2 foram normalizados aos dados da amostra tratada com palivizumab do mesmo doador. Os dados representam resultados de quatro doadores.

[0440] Log2(expressão gênica) para cada dador e cada tratamento foram normalizados ao log2(expressão gênica) em resposta ao controle de palivizumab. As Tabelas 4 e 5 listam os genes expressos diferencialmente, na presença ou na ausência de LPS, respectivamente, calculados com o uso da função de teste t em MATLAB.Os genes que tinham log2(fold change) médio através de todos os doadores maior do que 1 (isto é, aumento de 2 vezes) ou menor do que -1 (isto é, diminuição de duas vezes) com p<0,05 em resposta a todos os anticorpos anti-LILRB2 na ausência de LPS após quatro horas de exposição aos fármacos (Tabela 4) e genes que foram diferencialmente expressos em resposta a todos os anticorpos anti-LILRB2 na presença de LPS após 24 horas de exposição aos fármacos (Tabela 5).Estas mudanças foram consistentes através de doadores e são a base para a pontuação de assinatura de monocultura definidas na seção de Histocultura. TABELA 4. EXPRESSÃO DE GENE DIFERENCIAL ANTI-LILRB2 DE

MONOCULTURA EM QUATRO HORAS SEM LPS CCL4 CCL2 TNFAIP6 CLEC4E CCL18 CASP10 CIITA IL8 IL7R BCL2 NFKB2 GBP1 CASP2 CCL3 DUSP4 CXCL2 CCL5 SOCS3 TLR7 IL1B TNFSF15 CCL20 CCL7 CSF1 MAF CXCL1 IL1RN NFKB1 SRC CD40 IFI16 TRAF1 ICAM1 NFKBIA CEBPB CCL23 IL16 IL1A TNFAIP3 TNFRSF4 TLR2 NTSE KLRC4 TNF CCL8 EGR1 CLEC5A MBP KLRK1 IRAK2 CD83 NFKBIZ RELB TGFBR2 TLR8 EGR2 TNFRSF9 PTGS2 PLAUR BLNK TNFSF10 TABELA 5. EXPRESSÃO DE GENE DIFERENCIAL ANTI-LILRB2 DE MONOCULTURA EM 24 HORAS COM LPS IL6 IL23A C3 IL21R NTSE CXCL2 CCL4 CXCL13

IL1A ZEB1 GBP5 CD123 PTGS2 SRC IL8 TNFSF15 CCL2 CCL20 TNF TGFBI IL1RN DPP4 CR1 CXCL1 ICAM5 C1QB IL1B ITGAX CD36 SPP1 CCL3 TRAF5 EXEMPLO 7. TRIAGEM DE ANTICORPOS QUIMÉRICOS: TRIAGEM DE MABS QUIMÉRICOS ANTI-LILRB2 QUANTO À REATIVIDADE CRUZADA PARA

PRIMATAS NÃO HUMANOS MÉTODOS LIGAÇÃO DE CÉLULA PRIMÁRIA

[0441] A expressão LILRB2 em seres humanos é restrita a tipos de células imunitárias inatas incluindo monócitos e neutrófilos. Os mAbs anti-LILRB2 de bloqueio de HLA-G/A selecionados com capacidade para promover a conversão de M2 em macrófagos de tipo M1 foram testados quanto ao potencial para se ligar a monócitos de ser humano, cino e reso em sangue total. O sangue total obtido a partir de doadores humanos, cino e reso saudáveis foi obtido em tubos de heparina sódica. Após a recepção, 100 µl de sangue total não diluído foram incubados com reagente de bloqueio de receptor Fc (TruStain, Biologend) de acordo com o protocolo do fabricante. Após uma incubação de 15 minutos, mAbs biotinilados foram adicionados ao sangue a 25 µg/ml e incubados à temperatura ambiente. Após 20 minutos, estreptavidina-APC diluído (BioLegend) e o clone M5E2 humano/NHP com reatividade cruzada anti-CD14-

BV421 (BioLegend) foram adicionados e incubados por 20 minutos à temperatura ambiente. Os glóbulos vermelhos foram lisados, e as amostras corrigidas com solução de 1x Lise/Correção (BD Biosciences) de acordo com o protocolo do fabricante. As amostras foram analisadas com o uso de um analisador de citômetro de fluxo Celesta (BD Biosciences). Os monócitos foram identificados através de espécies como células de dispersão lateral (SSC)hiCD14hi, os neutrófilos foram identificados como célula de SSChiCD14lo, e os linfócitos foram identificados como células de SSCloCD14neg. LIGAÇÃO EM CÉLULA A LILRB2 DE RESO SUPEREXPRESSO

[0442] A ligação de mAb anti-hLILRB2 à proteína de LILRB2 de reso (LILRBb) foi avaliada incubando-se células LILRBb-CHOs com mAbs anti-hLILRB2 selecionados por 30 minutos. Após a incubação, as células foram lavadas e incubadas com anti-hIgG-APC (Jackson Labs) de acordo com o protocolo do fabricante. A ligação celular foi avaliada por citometria de fluxo com o uso de um analisador de citômetro de fluxo Celesta (BD Biosciences).

RESULTADOS

[0443] Todos os mAbs anti-LILRB2 testados neste ensaio se ligaram, preferencialmente, a monócitos e neutrófilos em vez de linfócitos no sangue total humano (Figuras 9A a 9C). Um único mAb anti-LILRB2 exibiu reatividade de espécie cruzada a cino e ser humano, com uma ligação preferencial similar a monócitos e neutrófilos em vez de linfócitos. Anticorpos de controle de isotipo não se ligaram significativamente a quaisquer tipos de células no sangue de ser humano ou NHP. As Figuras 10A e 10B confirmam que estes resultados traduzem-se em células que superexpressam LILRB2 de NHP (LILRBb), de modo que o mesmo anti-hLILRB2 que preferencialmente se liga de modo cruzado a monócitos e neutrófilos de NHP também se ligue especificamente a CHO-s superexpressas de LILRB2 de reso (LILRBb) de uma maneira dependente de dose e não tenha reatividade cruzada aos membros da família estreitamente relacionados em reso incluindo LILRBa. EXEMPLO 8. HUMANIZAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO DE AFINIDADE E

ESTRATÉGIA DE AVALIAÇÃO PARA ANTICORPOS QUIMÉRICOS PRINCIPAIS

[0444] Quimeras principais foram humanizadas por enxerto de CDRs de anticorpos principais em frameworks humanos, enquanto se mantém certos aminoácidos para sustentar a estrutura de laço e a interface de cadeia. Um total de cinco regiões variáveis de cadeia pesada e cinco regiões variáveis de cadeia leve foi produzido e expresso em combinação para criar um total de 25 variantes humanizadas na cadeia principal de IgG4 humana. Estas variantes foram expressas como proteína recombinante e filtradas com base no título de proteína e afinidade ao alvo de LILRB2 humano. Os anticorpos foram ainda caracterizados por propriedades funcionais e biofísicas para diminuir o painel e selecionar os principais humanizados.

[0445] Usando um chip de amina de alta capacidade Mass-2 (Sierra Sensors) pré-imobilizado com IgG Anti-humana de Cabra AffiniPure, anticorpo Específico para Fragmento Fcγ, os anticorpos humanizados foram capturados na superfície anti-humana e, então, a ligação a LILRB2-His humano foi medida fluindo-se seis concentrações diferentes 65 a 0,27 nM do analito através da superfície do anticorpo. A superfície anti-LILRB2 foi removida (Glicina 10 mM, pH 2,0) e recapturada entre todas as concentrações ou ciclos de apenas tampão. Os dados foram analisados com o uso do software Serra Analyzer (versão 3.1.14). Todas as curvas foram duplo subtraídas e ajustadas a um Ajuste de Langmuir de 1:1. Os resultados são mostrados na Tabela 6, abaixo. TABELA 6. CINÉTICA DE LIGAÇÃO DE ANTICORPOS Referência de ka [1/(M·s)] kd [1/s] KD [M] Anticorpo

J-19.h 5,15 × 105 1,35 × 10-3 2,62 × 10-9 J-11.h 3,70 × 105 9,13 × 10-4 2,47 × 10-9 J-17.h 1,56 × 106 4,43 × 10-4 2,85 × 10-9 J-19.h1 3,91 × 105 1,07 × 10-3 2,73 × 10-9 J-19.h2 5,21 × 105 2,38 × 10-3 4,58 × 10-9 J-19.h3 5,18 × 105 1,01 × 10-3 1,96 × 10-9 J19.h4 5,13 × 105 1,20 × 10-3 2,33 × 10-9

[0446] Anticorpos anti-LILRB2 humanizados (hIgG4) foram adicionalmente caracterizados com base na especificidade a hLILRB2 expresso em célula ao longo dos dez outros membros da família LILR humana, capacidade para bloquear as interações de ligante a LILRB2 expresso em célula e capacidade para converter macrófagos de tipo M2 numa situação de ativação inflamatória de tipo M1 num ensaio de macrófago humano primário. Os anticorpos foram adicionalmente triados quanto à ligação a monócitos de primata não humano (NHP). Variantes humanizadas foram adicionalmente avaliadas quanto a EC/IC50’s específicas para afinidade a LILRB2 expresso em célula, bloqueio de ligante e produção de citocinas num ensaio funcional de macrófagos humanos primários. Um anticorpo de controle de isotipo foi incluído em todas as triagens para determinar sinais de fundo. EC/IC50’s foram calculadas com base em dados transformados não normalizados com o uso do software GraphPad Prism. Os resultados são resumidos nas Figuras 11A e 11B e descritos em detalhes abaixo. EXEMPLO 9. CARACTERIZAÇÃO DE ANTICORPO HUMANIZADO: TRIAGEM

DE REATIVIDADE CRUZADA DA FAMÍLIA LILR

[0447] O objetivo desta avaliação foi verificar se anticorpos anti-LILRB2 mantêm especificidade para hLILRB2 expresso em células pós-humanização, sem ligação a outros membros da família LILR relacionados incluindo hLILRB1, hLILRB3, hLILRB4, hLILRB5, hLILRA1, hLILRA2, hLILRA3, hLILRA4, hLILRA5 e hLILRA6. Acertos positivos para ligação de hLILRB2 foram identificados como anticorpos que se ligam maior ou igual a três vezes em relação à ligação de anticorpo de controle de isotipo. Nenhuma das variantes testadas excedeu ligação não específica maior que três vezes em relação ao isotipo. Além disso, medições de afinidade baseadas em células de EC50 foram determinadas.

MÉTODOS

[0448] Para testar a especificidade para hLILRB2 e não para qualquer um dos dez membros da família LILR, uma abordagem de código de barras baseada em célula multiplexada foi usada manchando-se células com corantes Far Red e/ou Violet Trace Cell (Thermo Scientific) de acordo com o protocolo do fabricante ou deixadas não manchadas. Em resumo, as células foram lavadas duas vezes com 1xDPBS e, então, incubadas com corante diluído em 1xDPBS por 20 minutos a 37°C, misturando suavemente a cada 5 a 10 minutos. A identificação de corante foi extinguida adicionando-se volume igual de HI-FBS 100% (Sigma) às células. Note que as linhagens celulares LILRB1 LILRB2, LILRB3, LILRB4 e LILRB5 são também positivas para GFP, ao mesmo tempo que as linhagens celulares LILRA1, LILRA2, LILRA3, LILRA4, LILRA5 e LILRA6 são negativas para GFP. As células foram, então, lavadas duas vezes em 1xDPBS e, então, todas as 11 linhagens de células foram combinadas por poço numa placa tratada com cultura de tecido de fundo redondo de 96 poços. Pelo menos 25 × 103 células de cada linhagem de células foram plaqueadas por poço. As células foram, então, ressuspensas em anticorpo primário (mAbs anti-LILRB2 ou controle) preparado em tampão FACS (1xDPBS contendo HI-FBS 2% (Sigma) +Azida de Sódio 0,05%). Após incubação a 4°C por 30 minutos, as células foram lavadas duas vezes com 1xDPBS e ressuspensas em IgG-PE anti-humano (BioLegend) diluído 1:200 em tampão FACS. Após uma incubação de 30 minutos a 4°C, protegida da luz, as células foram lavadas em 1xDPBS e ressuspensas em tampão de correção (paraformaldeído 1,5% diluído em 1xDPBS). As amostras foram analisadas com o uso do analisador de citômetro de fluxo Celesta (BD Biosciences). A intensidade de fluorescência de média geométrica (gMFI) de PE foi determinada para cada anticorpo através de linhagem de células. A MFI antecedente foi detectada com o controle de isotipo, e a ligação relativa de anticorpos testados foi medida como vezes em relação a isotipo.

RESULTADOS

[0449] Dentre os anticorpos humanizados anti-hLILRB2 testados quanto à ligação e especificidade para hLILRB2, todos os anticorpos se ligaram altamente a hLILRB2 e não se ligaram de modo cruzado a qualquer um dos dez membros da família hLILR adicionais num ensaio de ligação baseado em célula (Figura 12). A EC50 de cada anticorpo a CHO-s que expressam LILRB2 estava dentro da faixa subnanomolar (Figura 13). EXEMPLO 10. CARACTERIZAÇÃO DE ANTICORPO HUMANIZADO: BLOQUEIO DE HLA-G E HLA-A2 A CÉLULAS HLILRB2+

[0450] A potência de selecionar variantes humanizadas no bloqueio da interação de HLA-G e HLA-A2 com hLILRB2 expresso em macrófago humano primário foi avaliada. Monócitos humanos primários foram diferenciados em macrófagos na presença de M-CSF. Após sete dias de diferenciação, 1×105 HMDMs foram colocados em placa tratada com cultura de tecido de fundo redondo de 96 poços e lavados duas vezes com 1xDPBS (Gibco) e, então, incubados com 50 µl de anticorpo primário (mAbs anti-LILRB2 ou controle) preparados em tampão FACS (1xDPBS contendo HI-FBS 2% (Sigma)+Azida de Sódio 0,05%). Após incubação com mAbs por 30 minutos a 4°C, as células foram lavadas duas vezes em tampão FACS e, então, ressuspensas em 50 µl de tampão

FACS contendo 5 µg/ml de tetrâmero HLA-A2 ou HLA-G conjugado a APC (Fred Hutch). As células foram incubadas protegidas da luz por 30 a 60 minutos a 4°C. Após a incubação com tetrâmero, as células foram lavadas em tampão FACS e ressuspensas em tampão de correção (paraformaldeído 1,5% diluído em 1xDPBS). As amostras foram analisadas com o uso do analisador de citômetro de fluxo Celesta (BD Biosciences).

[0451] Conforme mostrado na Figura 14, todos os anticorpos humanizados anti-hLILRB2 testados bloquearam a interação de HLA-G a hLILRB2 expresso em célula com uma EC50 na faixa nanomolar. Os valores de EC50 para cada uma das variantes testadas são mostrados na Figura 11B. Os anticorpos de controle incluindo controles de isotipo e anticorpos quiméricos anti-hLILRB2 de bloqueio de não ligante não exibiram qualquer atividade neste ensaio.

[0452] Conforme mostrado na Figura 15, todos os anticorpos humanizados anti-hLILRB2 testados bloquearam a interação de HLA-A2 a hLILRB2 expresso em célula com uma EC50 na faixa nanomolar. Os valores de EC50 para cada uma das variantes testadas são mostrados na Figura 11B. EXEMPLO 11. CARACTERIZAÇÃO DE ANTICORPO HUMANIZADO: ATIVIDADE BIOLÓGICA DE mAbs ANTI-LILRB2 HUMANIZADOS EM CULTURA DE

CÉLULAS

[0453] Macrófagos associados a tumor (MAT) exibem uma situação de ativação funcional consistente com um macrófago imunossupressor de tipo M2. Sem ater-se à teoria, é hipotetizado que antagonizar o receptor inibitório, LILRB2, em macrófagos evita a indução de macrófagos imunossupressores e promove respostas hiperinflamatória. Para caracterizar a atividade funcional de anticorpos anti-LILRB2, EC/IC50's foram determinadas como uma medida de potência de mAbs anti-LILRB2 que têm capacidade para converter macrófagos de tipo M2 em M1 num ensaio de liberação de citocina de macrófago derivado de monócito humano (HMDM). Os anticorpos com atividade sub-nM (EC50) neste ensaio foram designados como mAbs de promoção de M1.

MÉTODOS

[0454] Após sete dias de diferenciação, 1 × 105 HMDMs foram plaqueados por poço numa placa tratada com cultura de tecido de fundo redondo de 96 poços num volume final de 200 µl contendo 100 ng/ml de LPS na ausência ou presença de mAbs em meios de cultura celular (RPMI (Gibco) + FBS 10% (Sigma)). Após incubação por 24 horas a 37°C com CO2 5%, o sobrenadante foi coletado, e CBA foi realizado de acordo com o protocolo do fabricante (BD Biosciences) para medir citocinas produzidas em resposta a mAbs. As amostras foram analisadas com o uso do analisador de citômetro Accuri C6 (BD Biosciences).

RESULTADOS

[0455] Conforme mostrado nas Figuras 16A e 16B, todos os mAbs anti- hLILRB2 humanizados exibiram atividade de promoção de M1, ao mesmo tempo que suprimem a produção de citocinas associadas a M2, incluindo IL-10 e CCL-2. 67% dos mAbs anti-hLILRB2 humanizados testados mostraram ter atividade subnanomolar neste ensaio. Os valores de EC50 para cada uma das variantes testadas são mostrados na Figura 10B. EXEMPLO 12. CARACTERIZAÇÃO DE ANTICORPO HUMANIZADO: LIGAÇÃO SELETIVA A LILRB2 DE PRIMATA NÃO HUMANO (LILRBB)

[0456] Para avaliar mAbs humanizados quanto à reatividade de espécie cruzada, mAbs de bloqueio de ligante específicos para hLILRB2 foram avaliados quanto à ligação seletiva adicional a células superexpressas de LILRB2 de reso putativo (LILRBb) e não aos membros da família LILR de NHP estreitamente relacionados.

MÉTODOS

[0457] A ligação de mAb anti-hLILRB2 à proteína de LILRB2 de reso (LILRBb)

foi avaliada incubando-se células LILRBb-CHOs com mAbs anti-hLILRB2 selecionados por 30 minutos. Após a incubação, as células foram lavadas e incubadas com anti-hIgG-APC (Jackson Labs) de acordo com o protocolo do fabricante. A ligação celular foi avaliada por citometria de fluxo com o uso de um analisador de citômetro de fluxo Celesta (BD Biosciences).

RESULTADOS

[0458] Todos os mAbs humanizados anti-hLILRB2 se ligaram a LILRB2 de reso (LILRBb) de maneira dependente de dose e específica (Figura 17A). Estes mAbs anti-hLILRB2 não se ligaram à proteína de LILRBa de reso estreitamente relacionada expressa em células (Figura 17B). EXEMPLO 13. ANÁLISE DE EXPRESSÃO GÊNICA: EXPERIMENTOS DE

HISTOCULTURA

[0459] Amostras de tumor de rim humanas frescas foram obtidas pós- cirurgia. Uma seção de cada tumor foi cortada e corrigida para IHC. Fatias de aproximadamente 300 µM do tumor restante foram colocadas numa placa de seis poços. Os tratamentos indicados foram adicionados ao meio, e as placas foram incubadas a 37°C. Cada fatia foi tratada com 10 µg/ml de um dos seis fármacos por 24 horas. Os seis tratamentos incluídos no experimento são J-19, J-17 e J-11 (todos os ligantes de LILRB2 e bloqueadores de ligante), J-04 (um ligante de LILRB2 que não bloqueia a ligação de ligante), um anticorpo anti-TIM3 e palivizumab, que foi usado como um controle negativo.

[0460] Fatias do tumor foram lisadas usando o processador TissueLyser da Qiagen, e amostras fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE) foram desparafinadas. O RNA foi extraído de amostras FFPE e de tumor fresco, quantificado com o uso de Quibit, e, em certos casos, submetido a QC usando o Analisador de Fragmento de AATI. Se RNA suficiente tiver sido extraído da amostra, a expressão gênica foi realizada com o uso de NanoString nCounter com o uso do painel de Imunologia Humana V2 assim como uma incorporação específica para macrófago customizada.

A expressão gênica foi normalizada à expressão de genes de manutenção, e a limitação de ruído foi realizada com o uso dos dados de sondas negativas.

A expressão gênica foi transformada no espaço log2, e os dados das amostras que foram tratadas com ligantes de LILRB2 ou anti-TIM3 foram normalizados aos dados da amostra tratada com palivizumab do mesmo paciente.

A Figura 18 mostra a alteração na expressão gênica em resposta a um tratamento em relação ao controle de palivizumab.

A expressão gênica diferencial em relação ao controle de palivizumab é quantificada na Tabela 7, abaixo.

Cada gene na lista mostrou expressão diferencial a pelo menos dois tratamentos com um valor p nominal menor do que 0,055. O fold change na expressão de genes foi ou positivo para todos os tratamentos ou negativo para todos os tratamentos.

TABELA 7. EXPRESSÃO GÊNICA DIFERENCIAL DE HISTOCULTURA

Gene J-04 J-17 J-11 J-19 TIM3

CD68 -0,29 -0,20 -0,24 -0,31

CXCL9 0,98 0,80 0,72 0,67

G6PD -0,21 -0,26 -0,25 -0,17

IL10 -0,41 -0,40 -0,37 -0,38

IL6R 0,33 0,45 0,36 0,31

ETS1 0,31 0,34 0,14

KCNJ2 0,55 0,49 0,82

MASP1 0,46 0,36 0,32

ZEB1 0,33 0,41 0,21

Gene J-04 J-17 J-11 J-19 TIM3 BAT3 -0,15 -0,12 CCL2 -0,50 -0,57 CLEC4A 0,28 0,29 CXCL11 0,93 0,78 GUSB 0,15 0,11 IFITM1 0,48 0,42 IL15 0,35 0,22 IL18R1 -0,22 -0,30 IRF1 0,47 0,39 ITGA6 0,39 0,29 KLRC3 -0,44 -0,24 PIGR 0,58 0,71 PTPN22 -0,62 -0,21 SdhA 0,25 0,20 SLC2A1 0,27 0,45 TAP1 0,24 0,24

[0461] Um mapa de calor de agrupamento hierárquico que mostra o log2 (fold change) na expressão de cada (linha) em cada amostra tratada (coluna) é mostrado na Figura 19. Cada gene na lista mostrou expressão diferencial a pelo menos dois tratamentos com um valor p nominal menor do que 0,055. A expressão dos genes do Conjunto 1 é geralmente regulada decrescentemente em resposta ao tratamento (caixas cinzas), e a expressão dos genes do Conjunto

2 é geralmente regulada ascendentemente em resposta ao tratamento (caixas pretas).

[0462] Uma pontuação de resposta para cada amostra foi calculada adicionando-se a soma do log2(fold change) de um subconjunto de genes no Conjunto 2 à soma negativa do log2(fold change) de um subconjunto de genes no Conjunto 1 e dividindo pelo número de genes incluídos, de acordo com a seguinte equação: 𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃çã𝑜𝑜 𝑑𝑑𝑑𝑑 𝑃𝑃𝑃𝑃 1 = �� 𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙2(𝑓𝑓𝑓𝑓𝑓𝑓𝑓𝑓 𝑐𝑐ℎ𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎) 𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔 𝑑𝑑𝑑𝑑 #𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶1 + 𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔 𝑑𝑑𝑑𝑑 #𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶2 𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶2 − � 𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙𝑙2(𝑓𝑓𝑓𝑓𝑓𝑓𝑓𝑓 𝑐𝑐ℎ𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎)� 𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶𝐶1

[0463] A pontuação de resposta para cada doador a cada fármaco anti- LILRB2 de bloqueio de ligante é mostrada na Figura 20. A resposta ao tratamento é consistente através dos tratamentos dentro do doador, permitindo, assim, a classificação de doadores por sua resposta ao tratamento anti-LILRB2. Os doadores com uma pontuação média de resposta maior do que 0,5 são classificados como “respondedores totais”; aqueles com uma pontuação média de resposta entre 0,3 e 0,5 são classificados como “respondedores parciais”; aqueles com pontuações abaixo de 0,3 são classificados como “não respondedores”.

[0464] As assinaturas de monocultura foram derivadas com base no log2(fold change) médio na expressão gênica através de doadores em resposta a fármacos de bloqueio de ligante anti-LILRB2 na ausência de LPS após 4 horas e na presença de LPS após 24 horas (Figuras 21A e 21B). As pontuações de assinatura de monocultura foram calculadas para cada amostra de histocultura tratada com um fármaco de bloqueio de ligante anti-LILRB2 pela projeção do log2(fold change) na expressão gênica para o vetor definido pela assinatura de monocultura. As pontuações de assinatura de monocultura (quatro horas na ausência de LPS e 24 horas na presença de LPS) são significativamente mais altas (p < 0,01) em respondedores totais em comparação a respondedores parciais e não respondedores.

[0465] Em suma, os resultados de monocultura mostrou que fármacos de ligação de LILRB2 fazem com que macrófagos expressem diferencialmente vários genes consistentemente através dos doadores.O conjunto de genes que foi modulado neste sistema constitui uma assinatura de monocultura que incorpora tanto a magnitude quanto a direcionalidade.Para confirmar que estas trajetórias também seriam moduladas em sistemas mais complexos, foram realizados experimentos de histocultura. A análise dos dados de histocultura mostra que a exposição de fatias de tumor renal a fármacos de ligação de LILRB2 resulta na regulação crescente da expressão de quimiocina inflamatória, assim como a expressão diferencial de genes específicos mieloide conhecidos. Os genes são corregulados e são apenas diferencialmente expressos num subconjunto de amostras. Este subconjunto de genes constitui a assinatura de resposta de PD, que é usada para calcular as pontuações de resposta e classificar amostras com base na resposta a fármacos. Note que os doadores que respondem a um fármaco anti-LILRB2 geralmente respondem a todos os mesmos. Adicionalmente, quando os dados de histocultura foram projetados na assinatura de monocultura, os respondedores mostraram pontuações de monoculturas estatisticamente significativas. Assim, a modulação de genes específicos para mieloide foi consistente com as constatações em experimentos in vitro, sugerindo que as mesmas trajetórias biológicas estão sendo afetadas. EXEMPLO 14. TOXICOLOGIA

[0466] A especificidade de anticorpos anti-LILRB2 foi determinada avaliando-se a ligação dos anticorpos a glóbulos vermelhos e plaquetas por citometria de fluxo ou a proteínas séricas por ELISA. Nenhuma ligação fora de alvo foi observada nestes ensaios (Figura 22).

[0467] O potencial para anticorpos anti-LILRB2 para elicitar tempestade de citocinas foi avaliado num ensaio de liberação de citocinas em sangue total humano com o uso de titulações de anticorpos solúveis. O ensaio foi incubado por 24 horas a 37°C. O plasma foi, então, isolado, e as citocinas foram medidas com o uso de um painel de 10-citocina MSD. Os dados são média +/- desvio padrão de três doadores. Conforme mostrado nas Figuras 23A a 23D, os anticorpos anti-LILRB2 não exibiram indução de citocinas associadas à tempestade de citocinas (por exemplo, IL-4, IL-6, IL-18 ou TNFα) neste ensaio.

[0468] O potencial para anticorpos anti-LILRB2 para induzir a ativação de neutrófilos foi avaliado em sangue total humano com o uso de titulações de anticorpos solúveis. O ensaio foi incubado por duas horas a 37°C. As alterações nos marcadores de ativação de neutrófilos (aumento em CD11b e diminuição em CD62L) foram avaliadas por citometria de fluxo. Os dados são média +/- desvio padrão de 2 doadores. Os anticorpos anti-LILRB2 não induziram a ativação de neutrófilos, conforme indicado por uma baixa expressão de CD11b (Figuras 24A e 24B) e retenção de CD62L (Figuras 24C e 24D). EXEMPLO 15. FARMACOCINÉTICA

[0469] Macacos cinomolgos (n=3 por grupo) receberam uma única infusão intravenosa da concentração indicada de anticorpo anti-LILRB2. As concentrações séricas de fármaco foram medidas com o uso de um ensaio de eletroquimioluminescência, e os resultados, mostrados na Figura 25, indicam que farmacocinética de dose única em macacos cinomolgos exibe uma meia-vida típica de anticorpos IgG4 humanos.

[0470] Para avaliar o efeito da anti-LILRB2 em populações de neutrófilos, um ensaio de CBC foi conduzido realizado em macacos cinomolgos pré-estudo e após a dosagem de anticorpos anti-LILRB2. Conforme mostrado nas Figuras 26A e 26B, os neutrófilos de sangue periférico permaneceram dentro da faixa normal e exibiram uma tendência para baixo não significativa. EXEMPLO 16. EXPERIMENTO DE CAMUNDONGOS PIRB KNOCKOUT

[0471] Camundongos knockout homozigóticos Pirb com oito a doze semanas de idade ou controles da mesma ninhada do tipo selvagem foram inoculados subcutaneamente com B16.SIY (1 × 106 ), LLC (2 × 105 ) ou MC38 (5 × 105 ) células tumorais. Uma vez que os tumores palpáveis foram sentidos, os camundongos foram monitorados, e as medições de tumor registradas pelo menos duas vezes por semana até os tumores excederem 2000 mm3 ou até que os camundongos tivessem uma diminuição de peso corporal acima de 20%. Alguns camundongos foram sacrificados precocemente para a análise de células infiltrantes de tumor. Todos os experimentos foram conduzidos de acordo com as diretrizes institucionais para uso e cuidados com animais.

[0472] Os tumores foram detectados em todos os camundongos do tipo selvagem e em conformidade com uma cinética de crescimento histórica em Jounce Therapeutics. Embora não tenha sido observada nenhuma diferença significativa no crescimento de tumores B16.SIY ou LLC entre camundongos do tipo selvagem e Pirb knockout (Figuras 27A, 27B, 28A e 28B), uma diminuição significativa no crescimento de tumores MC38 foi constatada em Pirb knockout em comparação a camundongos do tipo selvagem (Figuras 29A e 29B). A análise das células infiltrantes de tumor MC38 foi consistente com um fenótipo de macrófagos associados a tumor que exibiram características menos imunossupressoras (IL-4R inferior) e capacidade de apresentação de antígeno aumentada (MHC de classe II maior) em camundongos Pirb knockout em comparação a controles do tipo selvagem (dados não mostrados). EXEMPLO 17. ANÁLISE DE VARREDURA DE ALANINA

[0473] As regiões variáveis de cadeia leve e cadeia pesada de J-19.h1 são apresentadas na Figura 30. A região determinante de complementaridade (CDR) das cadeias pesada e leve de J-19.h1 conforme definido pela definição de CDR de Kabat é indicada na Figura 30 por sublinhado. Os resíduos de ligação chave de J-19.h1 necessários para a ligação do alvo, LILRB2, foram identificados pela mutação de resíduos individuais nas CDRs. A varredura foi conduzida pela mutação de 34 resíduos de cadeia pesada e 18 resíduos de cadeia leve nas CDRs individualmente para alanina. As mutações para CDRL2 não foram incluídas na medida em que esta região de J-19.h1 não foi determinada para contribuir para a ligação de LILRB2. Uma mutação completa de J-19.h1 para a sequência de CDRL2 de linhagem germinativa não alterou a afinidade de ligação para o alvo.

[0474] Todas as variantes foram produzidas de modo temporário numa linhagem de células de ovário de hamster chinês e purificadas com o uso de tampão de citrato num manipulador de líquido automatizado. As afinidades foram determinadas com o uso de um ForteBio Octet Red96. As variantes J-19.h1 foram normalizadas a 10 ug/ml e carregadas em sensores de captura anti- humana. O sensores carregados foram, então, embebidos em tampão de cinética para estabelecer uma linha de base e mergulhado em poços contendo LILRB2 a duas concentrações de 50 nM e 5 nM, seguido por uma etapa de dissociação em tampão. Os dados de cinética foram calculados usando o software de análise de dados ForteBio.

[0475] As afinidades resultantes de variantes J-19.h1 a LILRB2 mostraram que resíduos chave, destacados em cinza, são críticos para a ligação de LILRB2. A mutação para alanina resultou nas afinidades que eram 5 vezes menores do que o controle ou resultaram na anulação completa da ligação. Os resíduos com um sublinhado pontilhado tinham afinidades entre 2 e 5 vezes o controle. Todos os outros resíduos na CDR mantiveram afinidade similar a LILRB2 quando sofreram mutação para alanina. EXEMPLO 18. OS INICIADORES qPCR

[0476] Os ensaios de qPCR comercialmente disponíveis para LILRB2 da Applied Biosystems (TaqMan) e Biorad (PrimePCR) não mostraram especificidade para seu alvo quando executados em cDNA derivado do RNA de um membro da família LILR que superexpressa linhagens de células. Os membros da família LILR têm alta homologia entre si, e os conjuntos de iniciadores, portanto, podem produzir efeitos fora de alvo durante PCR.

[0477] Os conjuntos de iniciadores a seguir foram testados nas linhas celulares de superexpressão e um conjunto de iniciadores mostrou especificidade sob certas condições de PCR. As bibliotecas de cDNA foram geradas com o uso da BioRad iScript Reverse Transcription Supermix e da mistura mestre Fluidigm Reverse Transcription. Os conjuntos de iniciadores, quando não acompanhados com uma sonda, foram executados com o uso da BioRad SsoFast EvaGreen Supermix com mistura mestre Low ROX. Os conjuntos de iniciadores com sondas foram executados usando a Mistura mestre Applied Biosystems TaqMan Fast Advanced. Os iniciadores foram encomendados de IDT como oligos e as sondas foram identificadas com FAM. TABELA 8. SEQUÊNCIAS DE SONDAS E INICIADORES Iniciador Direto Iniciador Reverso Sonda (se houver) Conjunt CACACAGCTCAACCT TGGGTAGGCTCCTGT o1 GGACA CATCA Conjunt AGCTCAACCTGGACA CTTGGGGATGGTCCC o2 GCAC TGTCT Conjunt ACACACAGCTCAACC CAGGCAGACTCAGAT o3 TGGAC CAGCA

Iniciador Direto Iniciador Reverso Sonda (se houver)

Conjunt CACACAGCTCAACCT CTGCAGGCAGACTCA o4 GGACA GATCA

Conjunt CCTGCATTTCTCCTCT CTGTCCAGGTTGAGC o5 GTGC TGTGT

Conjunt TCGCACAGGTGCTAT GCACTGAGAGTGATG o6 GGTTA GCTTCTTA

Conjunt AGTAGAAGGAGACTC TCCCAAAGTTCCCAG AGCCTGGACCCCTAACA o7 AGGACTG CATC AAGACC

Conjunt TTCCACACTTTCCTTC GGGAATTCAGCCTGG TGCCCCACTCCGTCTAAG o8 TGACC TACTTAG ATCAATACA

Conjunt CGTCACCCTCAGTTGT TCCGTGTAATCCAAG CCTTGAAGCCCAGGAGT o9 CAG ATGCTG ACCGTCTA

Conjunt CCTACTTCCCTGCATT CAGGCAGACTCAGAT AGCTCAACCTGGACGGC o 10 TCTCC CAGC ACA

Conjunt TTCTTCCCCTACTTCC CTTCAAGGCTCCCCT o 11 CTGCATTTC GACAAC

Conjunt GAAGTCAACTTTTCTT CAAGGCTCCCCTGAC o 12 CCCCTAC AACT

Conjunt CACACAGCTCAACCT AGACTCAGCCCGAGA o 13 GGACA CAGAT

Conjunt GTCAACTTTTCTTCCC AAGGCTCCCCTGACA o 14 CTACTTC ACTG

Conjunt AAGAAGCCATCACTC GTAGGAGCGGCTCAC

Iniciador Direto Iniciador Reverso Sonda (se houver) o 15 TCAGTGC AGG

[0478] Os iniciadores diretos para os conjuntos 1 a 15 são as SEQ ID NOs: 135 a 149; os iniciadores reversos para os conjuntos 1 a 15 são as SEQ ID NOs: 150 a 164; as sondas para os conjuntos 7 a 10 são as SEQ ID NOs: 165 a 168; cada um em ordem conforme apresentado na Tabela 8.

[0479] O Conjunto 9 listado acima provou ser específico para LILRB2 quando avaliado através das inúmeras linhagens de células que superexpressam membro da família LILR quando executado como um ensaio TaqMan (tanto a mistura mestre Applied Biosystems quanto a mistura mestre IDT GE), assim como um ensaio EvaGreen de conjunto de iniciadores (mistura mestre BioRad). As seguintes condições de ciclagem de PCR foram seguidas: Ciclo 1: 95°C por 60 segundos; Ciclo 2: 96°C por 5 segundos; Ciclo 3: 65°C por 20 segundos; Ciclos de repetição 2 a 3 por 40 ciclos no total; Curva de fusão para química EvaGreen de 60 a 95°C. Sequências de iniciador e sonda: Direto: CGTCACCCTCAGTTGTCAG (SEQ ID NO: 143); Reverso: TCCGTGTAATCCAAGATGCTG (SEQ ID NO: 158); Sonda: CCTTGAAGCCCAGGAGTACCGTCTA (SEQ ID NO: 167).

[0480] A adição de até 5 nucleotídeos a qualquer uma das extremidades dos iniciadores não deve afetar a especificidade de PCR pela ferramenta de PCR UCSC In-Silico (está em negrito o conjunto de iniciadores validado a úmido). https://genome.ucsc.edu/cgi- bin/hgPcr?hgsid=693240227_npi8w0U7mF4EWHuVaOYA4nIqdtsZ AGTCC- CGTCACCCTCAGTTGTCAG-GGGAG (SEQ ID NO: 169); TCGTA- TCCGTGTAATCCAAGATGCTG-ATTTT (SEQ ID NO: 170). EXEMPLO 19. ANÁLISE DE PONTUAÇÃO DE ASSINATURA DE PD DE

AMOSTRAS DE TUMOR FRESCAS

[0481] Amostras de tumor humanas frescas foram obtidas pós-cirurgia.

Uma seção de cada tumor foi cortada e corrigida para IHC. Fatias de 300 µM de tumor restante foram colocadas numa placa de 6 poços. Tratamentos foram adicionados ao meio, e as placas foram incubadas a 37°C. As fatias de tumor foram armazenadas em RNA posteriormente após incubação. Cada fatia foi tratada com 10 µg/ml de fármaco por 24 horas; nos casos em que as amostras foram tratadas com mais do que um fármaco, 10 µg/ml de cada fármaco foram usados.

[0482] Fatias do tumor foram lisadas usando o processador TissueLyser da Qiagen, e amostras FFPE foram desparafinadas. O RNA foi extraído de amostras FFPE e de tumor fresco, quantificado com o uso de Quibit, e submetido a QC usando o Analisador de Fragmento de AATI. Se RNA suficiente tiver sido extraído da amostra, a expressão gênica foi realizada com o uso de NanoString nCounter com o uso do painel de Imunologia Humana V2 assim como uma incorporação específica para macrófago customizada. A expressão gênica foi normalizada à expressão de genes de manutenção, então, a limitação de ruído foi realizada com o uso dos dados de sondas negativas, e os dados foram transformados no espaço log2. Estes dados serão doravante denominados “expressão gênica normalizada”. Os dados de expressão gênica normalizados foram, então, adicionalmente normalizados aos dados médios das amostras tratadas com palivizumab do mesmo paciente. Estes dados serão doravante denominados “expressão gênica normalizada a palivizumab”.

[0483] As pontuações de assinatura farmacodinâmica (PD) foram calculadas para cada amostra. As assinaturas de monocultura são derivadas do log2 médio (fold change em comparação às amostras tratadas com palivizumab) na expressão gênica através de macrófagos derivados de monócito de 4 doadores em resposta a fármacos de bloqueio de ligante anti-LILRB2 na ausência de LPS após 4 horas. As “pontuações de assinatura de monocultura” foram calculadas para cada amostra de histocultura tratada projetando-se a expressão gênica normalizada a palivizumab no vetor definido pela assinatura de monocultura. As “pontuações de assinatura de IFNγ” foram calculadas promediando-se a expressão gênica normalizada a palivizumab dos 6 genes identificados por Hirsch et al. (32nd Annual Meeting and Pre-Conference Programs of the Society for Immunotherapy of Cancer (SITC 2017): Parte Um, P39; J. Immunother. Cancer 5 (Suppl. 2):86, 2017) que exibe expressão modulada em resposta ao tratamento anti-PD1. As “pontuações de assinatura de Keytruda” foram calculadas promediando-se a expressão gênica normalizada a palivizumab dos 18 genes identificados por Ayers et al. (J. Clin. Invest. 127:2930-2940, 2017) como sendo preditivas da resposta clínica ao pembrolizumab.

[0484] Para avaliar o ruído no sistema e determinar cortes de resposta, 173 fatias de tumor (amostras) de 80 tumores renais, pulmonares e de cabeça e pescoço foram tratados com o anticorpo de controle palivizumab por 24 horas. Pelo menos duas amostras de cada tumor foram tratadas com palivizumab. O limite de ruído para cada assinatura de resposta PD foi definido como o 95º percentil da distribuição das pontuações de assinatura através das 173 amostras. Os tumores são classificados como “respondedores” para um fármaco particular se a pontuação de assinatura PD média através de todas as amostras deste tumor tratado com este fármaco for maior do que o limite de ruído para esta assinatura.

[0485] As amostras de linha de base (não tratadas) da maioria dos tumores foram caracterizadas. As assinaturas específicas para tipo de célula foram calculadas promediando-se a expressão gênica normalizada de genes que estão associados a tipos de células particulares. A assinatura de Keytruda foi calculada para cada amostra de linha de base promediando-se a expressão de gene normalizada dos 18 genes identificados por Ayers et al. (supra) como sendo preditivos da resposta clínica a pembrolizumab.

[0486] Os resultados dos experimentos descritos acima são mostrados nas Figuras 31 a 34.

[0487] A Figura 31 é um histograma das pontuações de resposta de PD de IFNγ de 173 amostras de tumor de 80 tumores tratados com palivizumab por 24 horas. Em cada tumor, pelo menos duas amostras foram tratadas com palivizumab. O limite de ruído para a assinatura é definido como o 95º percentil da distribuição. Para a assinatura de IFNγ, o limite de ruído é 0,43.

[0488] A Figura 32 é um gráfico e diagrama de Venn descrevendo as taxas de resposta de PD a J-19.h1 através de 3 indicações: carcinoma de células renais, câncer de cabeça e pescoço e câncer de pulmão. Os tumores são classificados como “respondedores” se a pontuação de resposta PD média através de todas as fatias tratadas com J-19.H1 para este tumor for maior do que o limite de ruído. Conforme observado acima, o limite de ruído para cada assinatura PD é definido como o 95º percentil da distribuição de pontuações de respostas PD das amostras tratadas com palivizumab através de tumores com mais do que uma amostra tratada com palivizumab. Na histocultura, J-19.H1 induz respostas PD diferentes através das indicações, sugerindo múltiplos mecanismos de ação: a assinatura de monocultura indica polarização de macrófagos; a assinatura de IFN gama sugere resposta similar a inibidores de ponto de verificação; a assinatura de Keytruda é um sinal de preparação de tumor para resposta aos inibidores de ponto de verificação.

[0489] A Figura 33 é uma série de gráficos mostrando pontuações de assinatura de Keytruda calculadas para amostras não tratadas, com base na expressão gênica normalizada (a expressão gênica em bruto é normalizada a genes de manutenção e sondas de controle negativo, então, log2 transformado). Os tumores são classificados como respondedores PD de IFNγ se a resposta média de todas as amostras neste tumor tratado com J-19.H1 for maior do que o limite de ruído da assinatura de IFNγ. Cada ponto representa a pontuação de assinatura de Keytruda de uma amostra de tumor não tratada. As linhas pontilhadas mostram a pontuação de assinatura de Keytruda de linha de base média para as amostras perfiladas em cada indicação. A pontuação de assinatura de Keytruda de linha de base é uma condição necessária, mas insuficiente para a resposta PD de IFN gama a pembrolizumab na histocultura, que é consistente com as observações clínicas relatados por outros, sugerindo, assim, a relevância do modelo de histocultura para os resultados clínicos.

[0490] A Figura 34, painel esquerdo, é uma tabela que mostra as pontuações médias de assinatura de PD de IFNγ calculadas para 18 tumores de cabeça e pescoço em resposta a J-19.h1, pembrolizumab ou J-19.H1 combinado com pembrolizumab. As células destacadas em cinza indicam os tumores para os quais a resposta ao tratamento é maior do que o limite de ruído. As linhas com um asterisco ao lado das mesmas denotam tumores para os quais J-19.h1 potencializa a resposta; isto é, a pontuação de assinatura PD de IFNγ em resposta a pembrolizumab J-19.H1+ é maior ou igual à pontuação em resposta a pembrolizumab sozinho + 0,43 (o limite de ruído para a assinatura PD de IFNγ). Os tumores que têm resposta potencializada com J-19.H1 são referidos como tendo um “efeito combinado” no painel direito. A Figura 34, painel direito, é um gráfico que mostra uma comparação do conteúdo de macrófago normalizado à indicação de tumores antes do tratamento. O gráfico mostra o conteúdo de macrófago de linha de base de tumores que exibem um efeito de combinação em resposta a pembrolizumab J-19.H1+ em comparação àqueles que não mostram qualquer potencialização devido a J-19.H1. A comparação é feita por tumores através de 3 indicações: carcinoma de células renais, câncer de pulmão e câncer de cabeça e pescoço. O conteúdo de macrófago de tumor é calculado promediando-se a expressão de genes associados a macrófagos em amostras não tratadas e é normalizado dentro de cada indicação. A resposta de PD de IFN gama para pembrolizumab na histocultura é potencializada por J-19.H1 em amostras enriquecidas com macrófagos. EXEMPLO 20. MUTANTES DE ANTICORPOS

[0491] A região variável de cadeia pesada de J-19.h1 é apresentada abaixo:

QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMGVSWIRQPPGKALEWLASIWWN GNKYNNPSLKSRLTVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRIIR⃰⃰FTDYVMDAWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 53)

[0492] CDRH1, CDRH2, e CDRH3 são indicadas por sublinhado, em ordem. R* denota um resíduo em CDRH3 que, quando sofre mutação para alanina (J-

19.h5), mediu maior afinidade para LILRB2 em comparação a J-19.h1. Esta medição foi determinada usando um ForteBio Octeto Red96. A variante foi normalizada a 10 ug/ml e carregada num sensor de captura anti-humana. O sensor carregado foi, então, embebido em tampão de cinética para estabelecer uma linha de base e mergulhado em poços contendo LILRB2 a duas concentrações de 50 nM e 5 nM, seguido por uma etapa de dissociação em tampão. Os dados de cinética foram calculados usando o software de análise de dados ForteBio. Os resultados mostraram J-19.h5 tendo uma afinidade duas vezes maior para LILRB2 em comparação com a versão sem mutação de J-19.h1.

[0493] Variantes adicionais foram produzidas a partir de J-19.h1, em que a arginina sofreu mutação para aspartato (J-19.h6) e glutamato (J-19.h7). Todas as variantes foram produzidas de modo temporário numa linhagem de células de ovário de hamster chinês e purificadas com o uso de tampão de citrato num manipulador de líquido automatizado. A afinidade para LILRB2 foi medida exatamente como era anteriormente a J-19.h5. Os dados indicaram que estas duas variantes têm afinidade ainda maior para LILRB2 em comparação a J-19.h1 e J-19.h5.

[0494] As afinidades para os quatro anticorpos (J-19.h1, J-19.h5, J-19.h6 e J-19.h7) foram confirmadas através de ressonância plasmônica de superfície (SPR) com o uso de um SierraSensor Mass-2. Os anticorpos foram capturados com o uso de um chip Fc anti-humano a uma concentração de 2 ug/ml. LILRB2 foi fluído através dos anticorpos capturados em sete concentrações (65, 21,67, 7,22, 2,41, 0,802, 0,267, 0,089 nM). J-19.h5 e J-19.h6 foram executados em triplicata, ao mesmo tempo que J-19.h7 e J-19.h1 foram executados em duplicata. Abaixo encontra-se uma tabela que descreve a associação, dissociação e Kd dos quatro anticorpos. TABELA 9. MEDIÇÕES CINÉTICAS DE J-19.h1 E MUTANTES DE MAIOR

AFINIDADE Diferença em vezes Analito Ligante Ka (1/Ms) Kd (1/s) KD (M) Réplicas em relação a J-19.h1 J-19.h5 8,76E+05 1,15E-03 1,31E-09 3 1,91 J-19.h6 8,25E+05 5,92E-04 7,18E-10 3 3,47 LILRB2 J-19.h7 8,65E+05 7,88E-04 9,12E-10 2 2,73 J-19.h1 7,05E+05 1,76E-03 2,49E-09 2 1 TABELA 10. TABELA DE SEQUÊNCIAS

SEQ ID Descrição Sequência NO: 1 Cadeia pesada de QVQLQQSGAELMKPGASVKLSCKATGYILTGYWI

SEQ ID Descrição Sequência NO: J-11.h EWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTNYNENFKGKA

TFTADTSSNTAYMQLSSLTTEDSAIYYCARAVLGYF DYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSEST AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNT KVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWL NGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYT LPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQ EGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVSTAVA WYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGS

GTDYTLTISSVQAEDLALYYCHQHYSTYTFGGGTK Cadeia leve de J- 2 LEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY

11.h

PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC QVQLQQSGAELMKPGASVKLSCKATGYILTGYWI

EWVKQRPGHGLEWIGEILPGSGSTNYNENFKGKA 3 VH de J-11.h

TFTADTSSNTAYMQLSSLTTEDSAIYYCARAVLGYF

DYWGQGTTLTVSS 4 VL de J-11.h DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVSTAVA

SEQ ID Descrição Sequência NO:

WYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGS GTDYTLTISSVQAEDLALYYCHQHYSTYTFGGGTK

LEIK 5 CDR-H1 de J-11.h GYWIE 6 CDR-H2 de J-11.h EILPGSGSTNYNENFKG 7 CDR-H3 de J-11.h AVLGYFDY 8 CDR-L1 de J-11.h KASQDVSTAVA 9 CDR-L2 de J-11.h WASTRHT 10 CDR-L3 de J-11.h HQHYSTYT

QVTLKESGPGILQPSHTLSLTCSFSGFSLNTYAMG VSWIRQPSGKGLEWLASIWWNGNKYNNPSLKSR LTVSKDTSNNQAFLKVTSVDTADTATYYCAHSRIIR FTDYVMDAWGQGASVTVSSASTKGPSVFPLAPC SRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNV Cadeia pesada de 11 DHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV J-19.h

FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVD KSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID Descrição Sequência NO:

DIQMTQSPASLSTFLGEPVTIECRASEDIYNDLAW YQQKPGKSPQLLIYNANSLHTGVPSRFSGSGSGTQ

YSLKINSLQSEDVASYFCQQYYDYPLTFGSGTKLEIK Cadeia leve de J- 12 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE

19.h

AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRG EC QVTLKESGPGILQPSHTLSLTCSFSGFSLNTYAMG

VSWIRQPSGKGLEWLASIWWNGNKYNNPSLKSR 13 VH de J-19.h

LTVSKDTSNNQAFLKVTSVDTADTATYYCAHSRIIR FTDYVMDAWGQGASVTVSS

DIQMTQSPASLSTFLGEPVTIECRASEDIYNDLAW 14 VL de J-19.h YQQKPGKSPQLLIYNANSLHTGVPSRFSGSGSGTQ

YSLKINSLQSEDVASYFCQQYYDYPLTFGSGTKLEIK 15 CDR-H1 de J-19.h TYAMGVS 16 CDR-H2 de J-19.h SIWWNGNKYNNPSLKS 17 CDR-H3 de J-19.h SRIIRFTDYVMDA 18 CDR-L1 de J-19.h RASEDIYNDLA 19 CDR-L2 de J-19.h NANSLHT 20 CDR-L3 de J-19.h QQYYDYPLT Cadeia pesada de QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTTYGLS 21 J-17.h WVKQTPGKGLKWMGWINTYSGVPTYTDDFKGR

SEQ ID Descrição Sequência NO:

FAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARPYDFD QVGFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRS TSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNW YVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SIVMTQTPKFLLVSAGDRVSITCKASQTVSSDVAW YQQKAGQSPKLLIYYASNRYTGVPDRFTGSGYGT

DFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPFTFGGGSKL Cadeia leve de J- 22 EIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY

17.h

PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTTYGLS

WVKQTPGKGLKWMGWINTYSGVPTYTDDFKGR 23 VH de J-17.h

FAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARPYDFD QVGFAYWGQGTLVTVSA

SIVMTQTPKFLLVSAGDRVSITCKASQTVSSDVAW 24 VL de J-17.h

YQQKAGQSPKLLIYYASNRYTGVPDRFTGSGYGT

SEQ ID Descrição Sequência NO:

DFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPFTFGGGSKL

EIK 25 CDR-H1 de J-17.h TYGLS 26 CDR-H2 de J-17.h WINTYSGVPTYTDDFKG 27 CDR-H3 de J-17.h PYDFDQVGFAY 28 CDR-L1 de J-17.h KASQTVSSDVA 29 CDR-L2 de J-17.h YASNRYT 30 CDR-L3 de J-17.h QQDYSSPFT

QVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFADYEIH WVKQTPVHGLEWIGAIDPETGGTAYNQKFKGKAI LTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRYYDYDD AMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTS ESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP

AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPS Cadeia pesada de 31 NTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPP J-04

KPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQ VYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSR

WQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 32 Cadeia leve de J- QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSFMHW

SEQ ID Descrição Sequência NO: 04 YQQKSGTSPKRWIYGTSKLASGVPARFSGSGSGTS

YSLTISSMEAEDAATYYCQQWNGNPFTFGSGTKL ETKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC QVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFADYEIH

WVKQTPVHGLEWIGAIDPETGGTAYNQKFKGKAI 33 VH de J-04

LTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRYYDYDD AMDYWGQGTSVTVSS QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSFMHW

YQQKSGTSPKRWIYGTSKLASGVPARFSGSGSGTS 34 VL de J-04

YSLTISSMEAEDAATYYCQQWNGNPFTFGSGTKL

ETK 35 CDR-H1 de J-04 DYEIH 36 CDR-H2 de J-04 AIDPETGGTAYNQKFKG 37 CDR-H3 de J-04 YYDYDDAMDY 38 CDR-L1 de J-04 SASSSVSFMH 39 CDR-L2 de J-04 GTSKLAS 40 CDR-L3 de J-04 QQWNGNPFT Cadeia pesada de QVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYKFTDYEM 41 J-03 HWVKQTPVHGLEWIGAIDPETNGTAYNKKFKGK

SEQ ID Descrição Sequência NO:

AILTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGDYDF SAWFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRS TSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHK PSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNW YVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYDISF MHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSG

SRTDFTLTINPVETDDVATYYCQQSNKDPRTFGG Cadeia leve de J- 42 GTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL 03

NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPV TKSFNRGEC QVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYKFTDYEM

HWVKQTPVHGLEWIGAIDPETNGTAYNKKFKGK 43 VH de J-03

AILTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGDYDF SAWFAYWGQGTLVTVSA

DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYDISF 44 VL de J-03

MHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSG

SEQ ID Descrição Sequência NO:

SRTDFTLTINPVETDDVATYYCQQSNKDPRTFGG

GTKLEIK 45 CDR-H1 de J-03 DYEMH 46 CDR-H2 de J-03 AIDPETNGTAYNKKFKG 47 CDR-H3 de J-03 GDYDFSAWFAY 48 CDR-L1 de J-03 RASESVDNYDISFMH 49 CDR-L2 de J-03 RASNLES 50 CDR-L3 de J-03 QQSNKDPRT

QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMGV SWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRL TVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRII RFTDYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPC SRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNV Cadeia pesada de 51 DHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV J-19.h1

FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVD

KSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 52 Cadeia leve de J- DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCRASEDIYNDLAW

SEQ ID Descrição Sequência NO:

19.h1 YQQKPGKAPKLLIYNANSLHTGVASRFSGSGSGTD

FTFTISSLQPEDVATYFCQQYYDYPLTFGQGTKLEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMGV

SWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRL 53 VH de J-19.h1

TVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRII RFTDYVMDAWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCRASEDIYNDLAW

YQQKPGKAPKLLIYNANSLHTGVASRFSGSGSGTD 54 VL de J-19.h1

FTFTISSLQPEDVATYFCQQYYDYPLTFGQGTKLEI

K CDR-H1 de J- 55 TYAMGVS

19.h1 CDR-H2 de J- 56 SIWWNGNKYNNPSLKS

19.h1 CDR-H3 de J- 57 SRIIRFTDYVMDA

19.h1 58 CDR-L1 de J-19.h1 RASEDIYNDLA 59 CDR-L2 de J-19.h1 NANSLHT

SEQ ID Descrição Sequência NO: 60 CDR-L3 de J-19.h1 QQYYDYPLT

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNV Cadeia pesada de 61 DHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV J-19.h2

FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVD KSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK DIVMTQSPSSLSASVGDTVTITCRASEDIYNDLAW YQQKPGKAPQLLLYNANSLHTGVPSRFSGSGSGT

DYTLTISTLQPEDFATYYCQQYYDYPLTFGPGTKVH Cadeia leve de J- 62 IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP

19.h2

REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC

QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMGV 63 VH de J-19.h2 SWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRL

TVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRII

SEQ ID Descrição Sequência NO:

RFTDYVMDAWGQGTLVTVSS DIVMTQSPSSLSASVGDTVTITCRASEDIYNDLAW

YQQKPGKAPQLLLYNANSLHTGVPSRFSGSGSGT 64 VL de J-19.h2

DYTLTISTLQPEDFATYYCQQYYDYPLTFGPGTKVH

IK CDR-H1 de J- 65 TYAMGVS

19.h2 CDR-H2 de J- 66 SIWWNGNKYNNPSLKS

19.h2 CDR-H3 de J- 67 SRIIRFTDYVMDA

19.h2 68 CDR-L1 de J-19.h2 RASEDIYNDLA 69 CDR-L2 de J-19.h2 NANSLHT 70 CDR-L3 de J-19.h2 QQYYDYPLT

QVTLKESGPSLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMG VSWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSR

LTITKDTSKNQVVLKVTNMDPADTATYYCAHSRII Cadeia pesada de RFTDYVMDAWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAP 71 J-19.h3 CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS

GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQ

SEQ ID Descrição Sequência NO:

FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQP REPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV DKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSL GK DIVMTQSPSSLSASVGDTVTITCRASEDIYNDLAW YQQKPGKAPQLLLYNANSLHTGVPSRFSGSGSGT

DYTLTISTLQPEDFATYYCQQYYDYPLTFGPGTKVH Cadeia leve de J- 72 IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP

19.h3

REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC QVTLKESGPSLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMG

VSWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSR 73 VH de J-19.h3

LTITKDTSKNQVVLKVTNMDPADTATYYCAHSRII RFTDYVMDAWGQGTTVTVSS DIVMTQSPSSLSASVGDTVTITCRASEDIYNDLAW

YQQKPGKAPQLLLYNANSLHTGVPSRFSGSGSGT 74 VL de J-19.h3

DYTLTISTLQPEDFATYYCQQYYDYPLTFGPGTKVH

IK CDR-H1 de J- 75 TYAMGVS

19.h3

SEQ ID Descrição Sequência NO: CDR-H2 de J- 76 SIWWNGNKYNNPSLKS

19.h3 CDR-H3 de J- 77 SRIIRFTDYVMDA

19.h3 78 CDR-L1 de J-19.h3 RASEDIYNDLA 79 CDR-L2 de J-19.h3 NANSLHT 80 CDR-L3 de J-19.h3 QQYYDYPLT

QVTLKESGPALVKPTHTLTLTCTFSGFSLNTYAMG VSWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSR LTISKDTSKNQVVLTMTNMDPEDTATFYCAHSRII RFTDYVMDAWGRGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPC SRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNV Cadeia pesada de 81 DHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV J-19.h4

DIVMTQSPSSLSASVGDTVTITCRASEDIYNDLAW Cadeia leve de J- 82 YQQKPGKAPQLLLYNANSLHTGVPSRFSGSGSGT

19.h4

DYTLTISTLQPEDFATYYCQQYYDYPLTFGPGTKVH

SEQ ID Descrição Sequência NO:

IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC QVTLKESGPALVKPTHTLTLTCTFSGFSLNTYAMG

VSWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSR 83 VH de J-19.h4

LTISKDTSKNQVVLTMTNMDPEDTATFYCAHSRII RFTDYVMDAWGRGTTVTVSS DIVMTQSPSSLSASVGDTVTITCRASEDIYNDLAW

YQQKPGKAPQLLLYNANSLHTGVPSRFSGSGSGT 84 VL de J-19.h4

DYTLTISTLQPEDFATYYCQQYYDYPLTFGPGTKVH

IK CDR-H1 de J- 85 TYAMGVS

19.h4 CDR-H2 de J- 86 SIWWNGNKYNNPSLKS

19.h4 CDR-H3 de J- 87 SRIIRFTDYVMDA

19.h4 88 CDR-L1 de J-19.h4 RASEDIYNDLA 89 CDR-L2 de J-19.h4 NANSLHT 90 CDR-L3 de J-19.h4 QQYYDYPLT 91 Cadeia pesada de QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMGV

SEQ ID Descrição Sequência NO: J-19.h5 SWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRL

TVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRII AFTDYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCN VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQ FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQP REPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV DKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSL GK DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCRASEDIYNDLAW YQQKPGKAPKLLIYNANSLHTGVASRFSGSGSGTD

FTFTISSLQPEDVATYFCQQYYDYPLTFGQGTKLEI Cadeia leve de J- 92 KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR

19.h5

EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMGV

SWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRL 93 VH de J-19.h5

TVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRII AFTDYVMDAWGQGTLVTVSS

SEQ ID Descrição Sequência NO:

DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCRASEDIYNDLAW

YQQKPGKAPKLLIYNANSLHTGVASRFSGSGSGTD 94 VL de J-19.h5

FTFTISSLQPEDVATYFCQQYYDYPLTFGQGTKLEI

K CDR-H1 de J- 95 TYAMGVS

19.h5 CDR-H2 de J- 96 SIWWNGNKYNNPSLKS

19.h5 CDR-H3 de J- 97 SRIIAFTDYVMDA

19.h5 98 CDR-L1 de J-19.h5 RASEDIYNDLA 99 CDR-L2 de J-19.h5 NANSLHT 100 CDR-L3 de J-19.h5 QQYYDYPLT

QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMGV SWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRL TVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRII

DFTDYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP Cadeia pesada de CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS 101 J-19.h6 GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCN

VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQ FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQP

SEQ ID Descrição Sequência NO:

REPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV DKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSL GK DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCRASEDIYNDLAW YQQKPGKAPKLLIYNANSLHTGVASRFSGSGSGTD

FTFTISSLQPEDVATYFCQQYYDYPLTFGQGTKLEI Cadeia leve de J- 102 KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR

19.h6

SWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRL 103 VH de J-19.h6

TVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRII DFTDYVMDAWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCRASEDIYNDLAW

YQQKPGKAPKLLIYNANSLHTGVASRFSGSGSGTD 104 VL de J-19.h6

FTFTISSLQPEDVATYFCQQYYDYPLTFGQGTKLEI

K CDR-H1 de J- 105 TYAMGVS

19.h6 CDR-H2 de J- 106 SIWWNGNKYNNPSLKS

19.h6

SEQ ID Descrição Sequência NO: CDR-H3 de J- 107 SRIIDFTDYVMDA

19.h6 108 CDR-L1 de J-19.h6 RASEDIYNDLA 109 CDR-L2 de J-19.h6 NANSLHT 110 CDR-L3 de J-19.h6 QQYYDYPLT

QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMGV SWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRL TVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRII EFTDYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPC SRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNV Cadeia pesada de 111 DHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV J-19.h7

FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVD KSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCRASEDIYNDLAW

YQQKPGKAPKLLIYNANSLHTGVASRFSGSGSGTD Cadeia leve de J- 112 FTFTISSLQPEDVATYFCQQYYDYPLTFGQGTKLEI

19.h7

KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL

SEQ ID Descrição Sequência NO:

SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLNTYAMGV

SWIRQPPGKALEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRL 113 VH de J-19.h7

TVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSRII EFTDYVMDAWGQGTLVTVSS DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCRASEDIYNDLAW

YQQKPGKAPKLLIYNANSLHTGVASRFSGSGSGTD 114 VL de J-19.h7

FTFTISSLQPEDVATYFCQQYYDYPLTFGQGTKLEI

K CDR-H1 de J- 115 TYAMGVS

19.h7 CDR-H2 de J- 116 SIWWNGNKYNNPSLKS

19.h7 CDR-H3 de J- 117 SRIIEFTDYVMDA

19.h7 118 CDR-L1 de J-19.h7 RASEDIYNDLA 119 CDR-L2 de J-19.h7 NANSLHT 120 CDR-L3 de J-19.h7 QQYYDYPLT SEQ ID Nº de Proteína Sequência NO: Acesso

SEQ ID Descrição Sequência NO:

MTPIVTVLICLRLSLGPRTHVQAGTLPKPTLWAEP GSVITQGSPVTLWCQGILETQEYRLYREKKTAPWI TRIPQEIVKKGQFPIPSITWEHTGRYRCFYGSHTAG WSEPSDPLELVVTGAYIKPTLSALPSPVVTSGGNV TLHCVSQVAFGSFILCKEGEDEHPQCLNSQPRTHG WSRAIFSVGPVSPSRRWSYRCYAYDSNSPHVWSL

PSDLLELLVLGVSKKPSLSVQPGPIVAPGESLTLQC 121 LILRA1 O75019

VSDVSYDRFVLYKEGERDFLQLPGPQPQAGLSQA NFTLGPVSRSYGGQYRCSGAYNLSSEWSAPSDPL DILIAGQFRGRPFISVHPGPTVASGENVTLLCQSW GPFHTFLLTKAGAADAPLRLRSIHEYPKYQAEFPM SPVTSAHSGTYRCYGSLSSNPYLLSHPSDSLELMVS GAAETLSPPQNKSDSKAGAANTLSPSQNKTASHP QDYTVENLIRMGIAGLVLVVLGILLFEAQHSQRSL MTPILTVLICLGLSLGPRTHVQAGHLPKPTLWAEP GSVIIQGSPVTLRCQGSLQAEEYHLYRENKSASWV RRIQEPGKNGQFPIPSITWEHAGRYHCQYYSHNH SSEYSDPLELVVTGAYSKPTLSALPSPVVTLGGNVT

LQCVSQVAFDGFILCKEGEDEHPQRLNSHSHARG 122 LILRA2 Q8N149

WSWAIFSVGPVSPSRRWSYRCYAYDSNSPYVWS LPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPMVAPGESLTL QCVSDVGYDRFVLYKEGERDFLQRPGWQPQAGL SQANFTLGPVSPSHGGQYRCYSAHNLSSEWSAPS DPLDILITGQFYDRPSLSVQPVPTVAPGKNVTLLCQ

SEQ ID Descrição Sequência NO:

SRGQFHTFLLTKEGAGHPPLHLRSEHQAQQNQAE FRMGPVTSAHVGTYRCYSSLSSNPYLLSLPSDPLEL VVSEAAETLSPSQNKTDSTTTSLGQHPQDYTVENL IRMGVAGLVLVVLGILLFEAQHSQRSLQDAAGR MTPILTVLICLGLSLDPRTHVQAGPLPKPTLWAEP GSVITQGSPVTLRCQGSLETQEYHLYREKKTALWI TRIPQELVKKGQFPILSITWEHAGRYCCIYGSHTAG LSESSDPLELVVTGAYSKPTLSALPSPVVTSGGNVTI QCDSQVAFDGFILCKEGEDEHPQCLNSHSHARGS

SRAIFSVGPVSPSRRWSYRCYGYDSRAPYVWSLPS 123 LILRA3 Q8N6C8 DLLGLLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGEKLTFQCG

SDAGYDRFVLYKEWGRDFLQRPGRQPQAGLSQA NFTLGPVSRSYGGQYTCSGAYNLSSEWSAPSDPL DILITGQIRARPFLSVRPGPTVASGENVTLLCQSQG GMHTFLLTKEGAADSPLRLKSKRQSHKYQAEFPM SPVTSAHAGTYRCYGSLSSNPYLLTHPSDPLELVVS GAAETLSPPQNKSDSKAGE MTLILTSLLFFGLSLGPRTRVQAENLPKPILWAEPG PVITWHNPVTIWCQGTLEAQGYRLDKEGNSMSR

HILKTLESENKVKLSIPSMMWEHAGRYHCYYQSP 124 LILRA4 P59901 AGWSEPSDPLELVVTAYSRPTLSALPSPVVTSGVN

VTLRCASRLGLGRFTLIEEGDHRLSWTLNSHQHN HGKFQALFPMGPLTFSNRGTFRCYGYENNTPYV WSEPSDPLQLLVSGVSRKPSLLTLQGPVVTPGENL

SEQ ID Descrição Sequência NO:

TLQCGSDVGYIRYTLYKEGADGLPQRPGRQPQAG LSQANFTLSPVSRSYGGQYRCYGAHNVSSEWSAP SDPLDILIAGQISDRPSLSVQPGPTVTSGEKVTLLC QSWDPMFTFLLTKEGAAHPPLRLRSMYGAHKYQ AEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSRSSNPYLLSHPSEP LELVVSGATETLNPAQKKSDSKTAPHLQDYTVENL IRMGVAGLVLLFLGILLFEAQHSQRSPPRCSQEAN SRKDNAPFRVVEPWEQI MAPWSHPSAQLQPVGGDAVSPALMVLLCLGLSL GPRTHVQAGNLSKATLWAEPGSVISRGNSVTIRC QGTLEAQEYRLVKEGSPEPWDTQNPLEPKNKARF

SIPSMTEHHAGRYRCYYYSPAGWSEPSDPLELVVT 125 LILRA5 A6NI73 GFYNKPTLSALPSPVVTSGENVTLQCGSRLRFDRFI

LTEEGDHKLSWTLDSQLTPSGQFQALFPVGPVTPS HRWMLRCYGSRRHILQVWSEPSDLLEIPVSGAAD NLSPSQNKSDSGTASHLQDYAVENLIRMGMAGLI LVVLGILIFQDWHSQRSPQAAAGR MTPALTALLCLGLSLGPRTRVQAGPFPKPTLWAEP GSVISWGSPVTIWCQGSLEAQEYQLDKEGSPEPL

DRNNPLEPKNKARFSIPSMTQHHAGRYRCHYYSS 126 LILRA6 Q6PI73 AGWSEPSDPLELVMTGFYNKPTLSALPSPVVASG

GNMTLRCGSQKGYHHFVLMKEGEHQLPRTLDSQ QLHSGGFQALFPVGPVTPSHRWRFTCYYYYTNTP RVWSHPSDPLEILPSGVSRKPSLLTLQGPVLAPGQ

SEQ ID Descrição Sequência NO:

SLTLQCGSDVGYDRFVLYKEGERDFLQRPGQQPQ AGLSQANFTLGPVSPSHGGQYRCYGAHNLSSEW SAPSDPLNILMAGQIYDTVSLSAQPGPTVASGENV TLLCQSRGYFDTFLLTKEGAAHPPLRLRSMYGAHK YQAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSYSSNPHLLSFPS EPLELMVSGHSGGSSLPPTGPPSTPASHAKDYTVE NLIRMGMAGLVLVFLGILLFEAQHSQRNPQDAAG R MTPILTVLICLGLSLGPRTHVQAGHLPKPTLWAEP GSVITQGSPVTLRCQGGQETQEYRLYREKKTALWI TRIPQELVKKGQFPIPSITWEHAGRYRCYYGSDTA GRSESSDPLELVVTGAYIKPTLSAQPSPVVNSGGN VILQCDSQVAFDGFSLCKEGEDEHPQCLNSQPHA RGSSRAIFSVGPVSPSRRWWYRCYAYDSNSPYEW SLPSDLLELLVLGVSKKPSLSVQPGPIVAPEETLTLQ

CGSDAGYNRFVLYKDGERDFLQLAGAQPQAGLS 127 LILRB1 Q8NHL6

QANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSEWSAPSD PLDILIAGQFYDRVSLSVQPGPTVASGENVTLLCQS QGWMQTFLLTKEGAADDPWRLRSTYQSQKYQA EFPMGPVTSAHAGTYRCYGSQSSKPYLLTHPSDPL ELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTSGPEDQPLTPTGSD PQSGLGRHLGVVIGILVAVILLLLLLLLLFLILRHRRQ GKHWTSTQRKADFQHPAGAVGPEPTDRGLQWR SSPAADAQEENLYAAVKHTQPEDGVEMDTRSPH

SEQ ID Descrição Sequência NO:

DEDPQAVTYAEVKHSRPRREMASPPSPLSGEFLD TKDRQAEEDRQMDTEAAASEAPQDVTYAQLHSL TLRREATEPPPSQEGPSPAVPSIYATLAIH MTPIVTVLICLGLSLGPRTHVQTGTIPKPTLWAEPD SVITQGSPVTLSCQGSLEAQEYRLYREKKSASWITR IRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQYYSRARWS ELSDPLVLVMTGAYPKPTLSAQPSPVVTSGGRVTL QCESQVAFGGFILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGS SRAIFSVGPVSPNRRWSHRCYGYDLNSPYVWSSP SDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGESLTLQCV SDVGYDRFVLYKEGERDLRQLPGRQPQAGLSQAN

FTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSECSAPSDPLDIL 128 LILRB2 Q8N423

ITGQIRGTPFISVQPGPTVASGENVTLLCQSWRQF HTFLLTKAGAADAPLRLRSIHEYPKYQAEFPMSPV TSAHAGTYRCYGSLNSDPYLLSHPSEPLELVVSGPS MGSSPPPTGPISTPAGPEDQPLTPTGSDPQSGLG RHLGVVIGILVAVVLLLLLLLLLFLILRHRRQGKHWT STQRKADFQHPAGAVGPEPTDRGLQWRSSPAAD AQEENLYAAVKDTQPEDGVEMDTRAAASEAPQD VTYAQLHSLTLRRKATEPPPSQEREPPAEPSIYATL AIH

MTPIVTVLICLGLSLGPRTRVQTGTIPKPTLWAEPD NP_005 129 LILRB2 SVITQGSPVTLSCQGSLEAQEYRLYREKKSASWITR

865.3

IRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQYYSRARWS

SEQ ID Descrição Sequência NO:

ELSDPLVLVMTGAYPKPTLSAQPSPVVTSGGRVTL QCESQVAFGGFILCKEGEDEHPQCLNSQPHARGS SRAIFSVGPVSPNRRWSHRCYGYDLNSPYVWSSP SDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVMAPGESLTLQC VSDVGYDRFVLYKEGERDLRQLPGRQPQAGLSQA NFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSECSAPSDPLD ILITGQIRGTPFISVQPGPTVASGENVTLLCQSWR QFHTFLLTKAGAADAPLRLRSIHEYPKYQAEFPMS PVTSAHAGTYRCYGSLNSDPYLLSHPSEPLELVVSG PSMGSSPPPTGPISTPAGPEDQPLTPTGSDPQSGL GRHLGVVIGILVAVVLLLLLLLLLFLILRHRRQGKHW TSTQRKADFQHPAGAVGPEPTDRGLQWRSSPAA DAQEENLYAAVKDTQPEDGVEMDTRAAASEAPQ DVTYAQLHSLTLRRKATEPPPSQEREPPAEPSIYAT LAIH MTPALTALLCLGLSLGPRTRVQAGPFPKPTLWAEP GSVISWGSPVTIWCQGSQEAQEYRLHKEGSPEPL DRNNPLEPKNKARFSIPSMTEHHAGRYRCHYYSS

AGWSEPSDPLEMVMTGAYSKPTLSALPSPVVASG 130 LILRB3 O75022 GNMTLRCGSQKGYHHFVLMKEGEHQLPRTLDSQ

QLHSRGFQALFPVGPVTPSHRWRFTCYYYYTNTP WVWSHPSDPLEILPSGVSRKPSLLTLQGPVLAPG QSLTLQCGSDVGYNRFVLYKEGERDFLQRPGQQP QAGLSQANFTLGPVSPSNGGQYRCYGAHNLSSE

SEQ ID Descrição Sequência NO:

WSAPSDPLNILMAGQIYDTVSLSAQPGPTVASGE NVTLLCQSWWQFDTFLLTKEGAAHPPLRLRSMY GAHKYQAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSYSSNPHL LSHPSEPLELVVSGHSGGSSLPPTGPPSTPGLGRYL EVLIGVSVAFVLLLFLLLFLLLRRQRHSKHRTSDQRK TDFQRPAGAAETEPKDRGLLRRSSPAADVQEENL YAAVKDTQSEDRVELDSQSPHDEDPQAVTYAPVK HSSPRREMASPPSSLSGEFLDTKDRQVEEDRQMD TEAAASEASQDVTYAQLHSLTLRRKATEPPPSQEG EPPAEPSIYATLAIH MIPTFTALLCLGLSLGPRTHMQAGPLPKPTLWAE PGSVISWGNSVTIWCQGTLEAREYRLDKEESPAP WDRQNPLEPKNKARFSIPSMTEDYAGRYRCYYRS PVGWSQPSDPLELVMTGAYSKPTLSALPSPLVTSG KSVTLLCQSRSPMDTFLLIKERAAHPLLHLRSEHGA QQHQAEFPMSPVTSVHGGTYRCFSSHGFSHYLLS

HPSDPLELIVSGSLEDPRPSPTRSVSTAAGPEDQPL 131 LILRB4 Q8NHJ6

MPTGSVPHSGLRRHWEVLIGVLVVSILLLSLLLFLLL QHWRQGKHRTLAQRQADFQRPPGAAEPEPKDG GLQRRSSPAADVQGENFCAAVKNTQPEDGVEM DTRQSPHDEDPQAVTYAKVKHSRPRREMASPPS PLSGEFLDTKDRQAEEDRQMDTEAAASEAPQDV TYAQLHSFTLRQKATEPPPSQEGASPAEPSVYATL AIH

SEQ ID Descrição Sequência NO:

MTLTLSVLICLGLSVGPRTCVQAGTLPKPTLWAEP ASVIARGKPVTLWCQGPLETEEYRLDKEGLPWAR KRQNPLEPGAKAKFHIPSTVYDSAGRYRCYYETPA GWSEPSDPLELVATGFYAEPTLLALPSPVVASGGN VTLQCDTLDGLLTFVLVEEEQKLPRTLYSQKLPKGP SQALFPVGPVTPSCRWRFRCYYYYRKNPQVWSN PSDLLEILVPGVSRKPSLLIPQGSVVARGGSLTLQC

RSDVGYDIFVLYKEGEHDLVQGSGQQPQAGLSQA 132 LILRB5 O75023 NFTLGPVSRSHGGQYRCYGAHNLSPRWSAPSDPL

DILIAGLIPDIPALSVQPGPKVASGENVTLLCQSWH QIDTFFLTKEGAAHPPLCLKSKYQSYRHQAEFSMS PVTSAQGGTYRCYSAIRSYPYLLSSPSYPQELVVSG PSGDPSLSPTGSTPTPGPEDQPLTPTGLDPQSGLG RHLGVVTGVSVAFVLLLFLLLFLLLRHRHQSKHRTS AHFYRPAGAAGPEPKDQGLQKRASPVADIQEEIL NAAVKDTQPKDGVEMDARAAASEAPQDVTYAQ

LHSLTLRREATEPPPSQEREPPAEPSIYAPLAIH LILRB2 MTPILMVLICLGLSLGPRTHVQAGILPKPTLWAEP de GSVISEGSPVTLRCQGSLQVQEYHLYREKNPASW Macaca VRQIRQELVKKGYFAIGFITWEHTGQYRCQYYSHS XP_015 133 fascicul WWSEPSDPLELVVTGAYSKPTLSALPSPVVASGG 297203 aris NVTLQCDSQVAFDSFTLCKEGEDEHPQRLNCQSH (putativ ARGWSWAVFSVGPVSPSRRWSYRCYGYISSAPN o) VWSLPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGDK

SEQ ID Descrição Sequência NO:

LTLQCGSDAGYDRFALYKEGEGDFLQRPVRQPQA GLSQANFLLGPVSRSHGGQYRCSGAHNLSSEWSA PSDPLDILIAGQIRGRPFLSVQPGPKVVSGENVTLL CQSSWQFHAFLLTQAGAADAHLHLRSMYKYPKY QAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSRSSNPYLLSVPSD PLELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTCAGPEDQPLTPT GSAPQSGLGRHLGVVTGVLVAFVLLLFLLLLLFLVL RYRRQGKRWTSAQRKADFQHPAGAVEPEPRDR GLQRRSSPAADTQEENLYAAVKDTQPEDGVELDS RAAASEDPQDVTYAQLQSLTLRREATEPPPSQERA PPVESSIYATLTIH GLSLGSRTRVQAGTLPKPTLWAEPDSVITQGSPVT LRCQGSLQVQEYRLYRERKPASWVRRIRQELVKK GYFAIGFITWEHTGQYHCQYYSHSWWPEPSDPLE

LVMTGAYSKPTLSALPSPMVASGGNVTLQCDSQ LILRBb

VAFDGFILCKEGEDEHPQRLNSHFHAYGWSRAVF de

SVGPVSPSRRWSYRCYGYDSRSPYVWSLPSDLLEL Macaca Q1I0P6_ 134 LVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGDKLTLQCGSDAG mulatta MACMU

YNRFALYKEGEGNFLQHPGRQRQAGLSQANFLLG (putativ

PVSRSHGGQYRCYGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAG o)

QIRGRPSLLVQPGRTVASGENVTLLCQSSWQFHV FLLTQAGAADAHLHLRSMYKYPKYQAEFPMSPVT SAHAGTYRCYGSHSSDSYLLSVPSDPLELVVSGPSG GPSSPTTGPTSTCGPEDQPLTPTGSAPQSGLGRHL

SEQ ID Descrição Sequência NO:

GVVTGVLVAFVLLLFLLLLLFLVLRHRRQGKRWTS AQRKADFQHPAGAVEPEPRDRGLQRRSSPAANT QEENLYAAMKDTQPEDGVELDSQAAASEDPQDV TYAQLQSLTLRRETTEPPPSQERAPPVESSIY OUTRAS MODALIDADES

[0495] A divulgação pode ser incorporada em outras formas específicas sem se afastar do espírito ou das características essenciais da mesma. As modalidades anteriores devem ser, portanto, consideradas em todos os aspectos como ilustrativas em vez de limitantes à divulgação. O escopo da revelação é, assim, indicado pelas reivindicações anexas em vez de pela descrição anterior, e todas as mudanças que estejam dentro do significado e abrangência de equivalência das reivindicações, são, portanto, destinadas a serem abrangidas no presente documento. Todas as referências citadas no presente documento são incorporadas a título de referência.

[0496] No caso de uma inconsistência entre uma sequência na listagem de sequências e uma sequência no relatório descritivo, a sequência no relatório descritivo deve ser considerada como dominante.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende as seguintes regiões determinantes de complementaridade (CDRs): (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos de JY(J)2G(J)2 (SEQ ID NO: 171); (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)2W(J)11KJ (SEQ ID NO: 172); (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)2I(J)3TDYV(J)3 (SEQ ID NO: 173); (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)8DLJ (SEQ ID NO: 174); (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)7 (SEQ ID NO: 175); e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos de (J)3YJYPLJ (SEQ ID NO: 176), em que cada J é independentemente um aminoácido de ocorrência natural.

2. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a CDR-H2 compreende a sequência de aminoácidos de SJW(J)11KJ (SEQ ID NO: 177) e/ou a CDR-L3 compreende a sequência de aminoácidos de (J)3YDYPLJ (SEQ ID NO: 178).

3. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a CDR-H1 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) TYAMGVS (SEQ ID NO: 15); (ii) JYAMGVS (SEQ ID NO: 179); (iii) TYJMGVS (SEQ ID NO: 180); (iv) TYAJGVS (SEQ ID NO: 181);

(v) TYAMGJS (SEQ ID NO: 182); (vi) TYAMGVJ (SEQ ID NO: 183); ou (vii) uma variante de qualquer um de (ii) a (vi) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 171.

4. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a CDR-H2 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) SIWWNGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 16); (ii) SJWWNGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 184); (iii) SIWJNGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 185); (iv) SIWWJGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 186); (v) SIWWNJNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 187); (vi) SIWWNGJKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 188); (vii) SIWWNGNJYNNPSLKS (SEQ ID NO: 189); (viii) SIWWNGNKJNNPSLKS (SEQ ID NO: 190); (ix) SIWWNGNKYJNPSLKS (SEQ ID NO: 191); (x) SIWWNGNKYNJPSLKS (SEQ ID NO: 192); (xi) SIWWNGNKYNNJSLKS (SEQ ID NO: 193); (xii) SIWWNGNKYNNPJLKS (SEQ ID NO: 194); (xiii) SIWWNGNKYNNPSJKS (SEQ ID NO: 195); (xiv) SIWWNGNKYNNPSLKJ (SEQ ID NO: 196); ou (xv) uma variante de qualquer um de (ii) a (xiv) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 172.

5. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a CDR-H3 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) SRIIRFTDYVMDA (SEQ ID NO: 17); (ii) JRIIRFTDYVMDA (SEQ ID NO: 197); (iii) SJIIRFTDYVMDA (SEQ ID NO: 198); (iv) SRIJRFTDYVMDA (SEQ ID NO: 199); (v) SRIIJFTDYVMDA (SEQ ID NO: 200); (vi) SRIIRJTDYVMDA (SEQ ID NO: 201); (vii) SRIIRFTDYVJDA (SEQ ID NO: 202); (viii) SRIIRFTDYVMJA (SEQ ID NO: 203); (ix) SRIIRFTDYVMDJ (SEQ ID NO: 204); ou (x) uma variante de qualquer um de (ii) a (ix) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 173.

6. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a CDR-L1 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) RASEDIYNDLA (SEQ ID NO: 18); (ii) JASEDIYNDLA (SEQ ID NO: 205); (iii) RJSEDIYNDLA (SEQ ID NO: 206); (iv) RAJEDIYNDLA (SEQ ID NO: 207); (v) RASJDIYNDLA (SEQ ID NO: 208); (vi) RASEJIYNDLA (SEQ ID NO: 209); (vii) RASEDJYNDLA (SEQ ID NO: 210); (viii) RASEDIJNDLA (SEQ ID NO: 211); (ix) RASEDIYJDLA (SEQ ID NO: 212); (x) RASEDIYNDLJ (SEQ ID NO: 213); ou (xi) uma variante de qualquer um de (ii) a (x) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 174.

7. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a CDR-L2 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) NANSLHT (SEQ ID NO: 19); (ii) JANSLHT (SEQ ID NO: 214); (iii) NJNSLHT (SEQ ID NO: 215); (iv) NAJSLHT (SEQ ID NO: 216); (v) NANJLHT (SEQ ID NO: 217); (vi) NANSJHT (SEQ ID NO: 218); (vii) NANSLJT (SEQ ID NO: 219); (viii) NANSLHJ (SEQ ID NO: 220); ou (ix) uma variante de qualquer um de (ii) a (viii) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 175.

8. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a CDR-L3 compreende a sequência de aminoácidos de: (i) QQYYDYPLT (SEQ ID NO: 20); (ii) JQYYDYPLT (SEQ ID NO: 221); (iii) QJYYDYPLT (SEQ ID NO: 222); (iv) QQJYDYPLT (SEQ ID NO: 223); (v) QQYYDYPLJ (SEQ ID NO: 224); ou (vi) uma variante de qualquer um de (ii) a (v) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 176.

9. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a CDR-H2 compreende a sequência de aminoácidos de JIWWNGNKYNNPSLKS (SEQ ID NO: 225), ou uma variante da mesma que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 172, e/ou a CDR-L3 compreende a sequência de aminoácidos de QQYYJYPLT (SEQ ID NO: 226), ou uma variante da mesma que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 176.

10. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 9, caracterizado pelo fato de que uma ou mais das CDRs compreendem o dito aminoácido J adicional.

11. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que a CDR-H3 compreende a sequência de aminoácidos de (J)2IJXJTDYV(J)3 (SEQ ID NO: 227), em que X não é arginina.

12. Anticorpo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que X é selecionado do grupo que consiste em aspartato, glutamato e alanina.

13. Anticorpo de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizado pelo fato de que a CDR-H3 compreende a sequência de: (i) JRIIXFTDYVMDA (SEQ ID NO: 228); (ii) SJIIXFTDYVMDA (SEQ ID NO: 229); (iii) SRIJXFTDYVMDA (SEQ ID NO: 230); (iv) SRIIXFTDYVMDA (SEQ ID NO: 231); (v) SRIIXJTDYVMDA (SEQ ID NO: 232); (vi) SRIIXFTDYVJDA (SEQ ID NO: 233); (vii) SRIIXFTDYVMJA (SEQ ID NO: 234); (viii) SRIIXFTDYVMDJ (SEQ ID NO: 235); ou (ix) uma variante de qualquer um de (ii) a (iii) ou (v) a (viii) que compreende um aminoácido J adicional em vez de um aminoácido recitado que é representado por um J na SEQ ID NO: 173.

14. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, ou 113, e/ou uma região de cadeia leve variável (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, 14, 24, 34, 44, 54, 64, 74, 84, 94, 104 ou 114.

15. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, ou 113, e/ou uma região de cadeia leve variável (VL) que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, 14, 24, 34, 44, 54, 64, 74, 84, 94, 104 ou 114.

16. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101 ou 111, e/ou uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, 22, 32, 42, 52, 62, 72, 82, 92, 102 ou 112.

17. Anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende as seguintes seis regiões determinantes de complementaridade (CDRs): (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID

NO: 15; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16; (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17; (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18; (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19; e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

20.

18. Anticorpo de acordo a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 e uma região de cadeia leve variável (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20.

19. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17 ou 18, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14.

20. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 19, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12.

21. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20.

22. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17 ou 21, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53 e uma região de cadeia leve variável VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54.

23. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 17, 21 e 22, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 51 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52.

24. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 63 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20.

25. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17 ou 24, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 63 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64.

26. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 17, 24 e 25, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62.

27. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 73 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 74, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20.

28. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17 ou 27, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 73 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 74.

29. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 17, 27 e 28, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 71 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 72.

30. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 83 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 84, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 15 a 17, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 18 a 20.

31. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17 ou 30, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 83 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 84.

32. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 17, 30 e 31, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 81 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 82.

33. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 93 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 94, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 95 a 97, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 98 a 100.

34. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17 ou 33, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 93 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 94.

35. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 17, 33 e 34, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 91 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 92.

36. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 104, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 105 a 107, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 108 a 110.

37. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17 ou 36, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 104.

38. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 17, 36 e 37, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 101 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 102.

39. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 114, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 115 a 117, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 118 a 120.

40. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17 ou 39, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 114.

41. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 17, 39 e 40, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 111 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 112.

42. Anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende as seguintes seis CDRs: (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6; (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8; (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

10.

43. Anticorpo de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 5 a 7, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 8 a 10.

44. Anticorpo de acordo com a reivindicação 42 ou 43, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4.

45. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 42 a 44, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2.

46. Anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende as seguintes seis CDRs: (a) uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 26; (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27; (d) uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 28; (e) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 29; e (f) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

30.

47. Anticorpo de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23 e uma região VL que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24, em que a região VH compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 25 a 27, e a região VL compreende três CDRs que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs: 28 a 30.

48. Anticorpo de acordo com a reivindicação 46 ou 47, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23 e uma região VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24.

49. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 48, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 22.

50. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada compreende adicionalmente uma lisina C-terminal.

51. Anticorpo, caracterizado pelo fato de que compete de modo cruzado para se ligar a LILRB2 humano com um anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 50.

52. Anticorpo, caracterizado pelo fato de que se liga especificamente a LILRB2 humano e bloqueia a ligação de HLA-G e/ou HLA-A2 a LILRB2 humano.

53. Anticorpo de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que o bloqueio é determinado em um ensaio de bloqueio de tetrâmero HLA-G com o uso de macrófagos derivados de monócitos humanos, células mieloides humanas e/ou uma linhagem celular que expressa LILRB2.

54. Anticorpo de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que o ensaio compreende o uso de esferas conjugadas de HLA-G.

55. Anticorpo de acordo com a reivindicação 53 ou 54, caracterizado pelo fato de que o anticorpo bloqueia o tetrâmero HLA-G com uma EC50 de menos do que 20 nM, menos do que 2 nM ou menos do que 0,2 nM.

56. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 55, caracterizado pelo fato de que o bloqueio é determinado em um ensaio de bloqueio de tetrâmero HLA-A2 com o uso de macrófagos derivados de monócito humano.

57. Anticorpo de acordo com a reivindicação 56, caracterizado pelo fato de que o anticorpo bloqueia o tetrâmero HLA-A2 com uma EC50 de menos do que 20 nM, menos do que 2 nM ou menos do que 0,2 nM.

58. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 57, caracterizado pelo fato de que é o anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 51.

59. Anticorpo que se liga especificamente a LILRB2 humano, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo tem capacidade para converter um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1.

60. Anticorpo de acordo com a reivindicação 59, caracterizado pelo fato de que a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão aumentada de um ou mais genes selecionados do grupo que consiste em CXCL9, CXCL11, IRF1, TAP1, IL6R e IL15.

61. Anticorpo de acordo com a reivindicação 59 ou 60, caracterizado pelo fato de que a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão diminuída de um ou mais genes selecionados do grupo que consiste em IL-10, CCL2, TGFBR2, CXCL13, IL21R, CD36, CR1, C1QB e TGFBI.

62. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 59 a 61, caracterizado pelo fato de que a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é detectada com o uso de um ensaio de histocultura de tumor.

63. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 59 a 62, caracterizado pelo fato de que a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é detectada com o uso de um ensaio de macrófago humano primário com o uso de macrófagos derivados de monócito humano.

64. Anticorpo de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada por uma expressão aumentada de uma, duas ou todas as três citocinas selecionadas do grupo que consiste em TNFα, IL-1β e IL-6, e/ou a conversão de um macrófago de tipo M2 em um macrófago de tipo M1 é indicada pela expressão diminuída de uma ou ambas as citocinas selecionadas do grupo que consiste em IL-10 e CCL-2.

65. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 58 a 64, caracterizado pelo fato de que é o anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 51.

66. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 58 a 64, caracterizado pelo fato de que é o anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 52 a 57.

67. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 66, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a LILRB2 com uma constante de dissociação (KD) de menos do que 3,0 nM.

68. Anticorpo de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a LILRB2 com uma KD de menos do que 1,5 nM.

69. Anticorpo de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a LILRB2 com uma KD de menos do que 1,0 nM.

70. Anticorpo de acordo com a reivindicação 69, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a LILRB2 com uma constante de dissociação (KD) de menos do que 750 pM.

71. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 66, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

72. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 71, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo quimérico, um anticorpo humanizado, um anticorpo enxertado por CDR, ou um anticorpo humano.

73. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 72, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região Fc selecionada do grupo que consiste em uma região Fc nativa, uma região Fc variante e uma região Fc funcional.

74. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 73, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo conjugado ou é identificado de modo detectável.

75. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 74, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo de IgG1, um anticorpo de IgG2, um anticorpo de IgG3 ou um anticorpo de IgG4.

76. Anticorpo de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que é um anticorpo de IgG4.

77. Molécula de ácido nucleico, caracterizada pelo fato de que codifica um polipeptídeo do anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 76.

78. Célula hospedeira ou vetor, caracterizado(a) pelo fato de que compreende a molécula de ácido nucleico definida na reivindicação 77.

79. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 76 ou a molécula de ácido nucleico definida na reivindicação 77.

80. Método para tratar uma doença em um indivíduo que necessita do mesmo, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 76.

81. Método de acordo com a reivindicação 80, caracterizado pelo fato de que a doença é um câncer.

82. Método para intensificar uma resposta imune antitumoral em um indivíduo que necessita do mesmo, caracterizado pelo fato de que o método que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 76.

83. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 80 a 82, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar o anticorpo em combinação com um segundo agente terapêutico.

84. Método de acordo com a reivindicação 83, caracterizado pelo fato de que o segundo agente terapêutico é uma imunoterapia ou uma vacina contra câncer.

85. Método de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o segundo agente terapêutico é uma imunoterapia que compreende uma terapia PD-1 e/ou uma terapia ICOS.

86. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende a composição farmacêutica definida na reivindicação 79 e instruções para uso.

87. Oligonucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compreende um fragmento de ácido nucleico, em que o fragmento de ácido nucleico compreende pelo menos 16 resíduos de ácido nucleico consecutivos da sequência de oligonucleotídeos de CGTCACCCTCAGTTGTCAG (SEQ ID NO: 143) ou TCCGTGTAATCCAAGATGCTG (SEQ ID NO: 158).

88. Oligonucleotídeo de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que o fragmento de ácido nucleico compreende pelo menos 16 resíduos de ácido nucleico consecutivos da sequência de oligonucleotídeo de

AGTCCCGTCACCCTCAGTTGTCAGGGGAG (SEQ ID NO: 169) ou TCGTATCCGTGTAATCCAAGATGCTGATTTT (SEQ ID NO: 170).

89. Conjunto iniciador qPCR, caracterizado pelo fato de que compreende um iniciador direto e um iniciador reverso, em que o iniciador direto compreende um fragmento de ácido nucleico que compreende pelo menos 16 resíduos de ácido nucleico consecutivos da sequência de oligonucleotídeo da SEQ ID NO: 143 ou 169, e o iniciador reverso compreende um fragmento de ácido nucleico que compreende pelo menos 16 resíduos de ácido nucleico consecutivos da sequência de oligonucleotídeo da SEQ ID NO: 158 ou 170, em que o conjunto iniciador qPCR é opcionalmente compreendido em um kit que compreende adicionalmente uma sonda que compreende pelo menos 16 resíduos consecutivos da SEQ ID NO: 167.

90. Método para quantificar um nível de expressão de LILRB2 em uma amostra biológica, caracterizado pelo fato de que o método compreende: (a) obter cDNA derivado de uma amostra biológica; (b) realizar qPCR no cDNA com o uso de um oligonucleotídeo definido na reivindicação 87 ou 88, ou um conjunto iniciador qPCR ou kit definido na reivindicação 89, para produzir um produto de amplificação, em que o qPCR é específico para LILRB2; e (c) quantificar o produto de amplificação para determinar o nível de expressão de LILRB2.

91. Uso de um anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 76, caracterizado pelo fato de que se destina a tratar ou prevenir uma doença em um indivíduo que necessita do mesmo por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo ao indivíduo.

92. Uso de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que a doença é um câncer.

93. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 76, caracterizado pelo fato de que se destina a intensificar uma resposta imune antitumoral em um indivíduo que necessita do mesmo administrando-se uma quantidade eficaz do anticorpo ao indivíduo.

94. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 91 a 93, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar o anticorpo em combinação com um segundo agente terapêutico.

95. Uso de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o segundo agente terapêutico é uma imunoterapia ou uma vacina contra câncer.

96. Uso de acordo com a reivindicação 95, caracterizado pelo fato de que o segundo agente terapêutico é uma imunoterapia que compreende uma terapia PD-1 e/ou uma terapia ICOS.