BR112020003458A2

BR112020003458A2 - agente terapêutico contendo antagonistas il-33 para endometriose

Info

Publication number: BR112020003458A2
Application number: BR112020003458-4A
Authority: BR
Inventors: Tomohiro Yoshimoto; Joseph M. Palumbo; I. Violetta Stone; Toru Kato; Koubun YASUDA
Original assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation; Hyogo College Of Medicine
Priority date: 2017-08-31
Filing date: 2018-08-31
Publication date: 2020-08-25
Also published as: US11492398B2; MX2020002086A; TW202306586A; CN115920031A; ZA202001256B; EP3677281A1; RU2020108574A3; IL272864A; CN115920041A; US20220372130A1; CN115920032A; US20200190182A1; JP7177446B2; JPWO2019045075A1; JP7441473B2; CA3074421A1; WO2019045075A1; SG11202001786PA; CN111107875A; PH12020500400A1

Abstract

A presente invenção refere-se ao fornecimento de um agente terapêutico para endometriose e adenomiose uterina. A IL-33 foi identificada como um fator exacerbador da endometriose e da adenomiose uterina, e um antagonista de IL-33, que foi capaz de inibir a função de IL-33, mostrou-se útil no tratamento, prevenção ou alívio da endometriose e adenomiose uterina.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "AGENTE TERAPÊUTICO CONTENDO ANTAGONISTAS IL-33 PARA ENDOMETRIOSE".

CAMPO

[001] A presente invenção refere-se a um agente terapêutico para endometriose compreendendo um antagonista da interleucina-33 (IL- 33) como ingrediente ativo.

ANTECEDENTES

[002] A endometriose é uma doença benigna (não maligna) na qual o tecido endometrial prolifera-se em um sítio distante da cavidade uterina e afeta aproximadamente 10% de todas as mulheres em idade reprodutiva. A endometriose afeta 25-50% das mulheres inférteis.

[003] Embora existam várias teorias relativas à causa da endometriose, acredita-se que uma das causas seja a de que as células endometriais atinjam outro tecido via sangue menstrual, fazendo com que o tecido endometrial se forme e se prolifere ectopicamente.

[004] A adenomiose uterina é uma doença na qual uma lesão similar ao endométrio é observada no miométrio. Embora esta doença seja histologicamente similar à endometriose, é tratada como uma doença diferente, pois o mecanismo de ocorrência e o quadro clínico são diferentes. Esta doença tem um pico de idade de início aos 40 anos, e está associada à observação de dismenorreia, dor abdominal inferior, dor lombar, infertilidade e hipermenorréia. O sintoma clínico típico é a dor menstrual e há muitos pacientes que se queixam de dor intensa a um grau que prejudica a vida diária. Pacientes com adenomiose uterina também podem ser complicados com endometriose e mioma uterino.

[005] Embora os métodos para o tratamento da endometriose ou da adenomiose uterina consistam em cirurgia e tratamento fármaco, ambas as abordagens são tratamentos sintomáticos e não existe um método de tratamento fundamental para essas doenças. Mesmo nos casos em que a cirurgia é selecionada, não é possível obter uma cura completa devido à necessidade de preservar a fertilidade, e o tratamento é frequentemente combinado com a terapia de fármacos pós-cirúrgica para evitar a recorrência. Exemplos de terapia de fármacos incluem contraceptivos orais de baixa dose, antagonistas do hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH) (como Leuplin), androgênio (como Danazol) e progesterona (como Dienogest). No entanto, todos esses fármacos têm efeitos colaterais adversos devido a afetar o equilíbrio hormonal. Sabe-se que o Dienogest causa um aumento na taxa de mortalidade embrionária após a administração em ratos prenhes. Consequentemente, o uso durante a gravidez é proibido para todos esses fármacos. Como muitos desses fármacos estão associadas a sintomas de pseudomenopausa e pseudogravidez, elas têm efeitos colaterais similares aos distúrbios da menopausa, como infertilidade, ondas de calor ou osteoporose. Assim, antecipou-se o desenvolvimento de um agente preventivo ou terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina que seja altamente seguro e não afete a gravidez.

[006] A interleucina-33 (IL-33) é uma citocina pertencente à família das interleucinas-1 que supostamente desempenha um papel em uma condição inflamatória. A IL-33 é constantemente expressa nos núcleos das células epiteliais e endoteliais vasculares e funciona como um alarme que é liberado em conjunto com a destruição celular devido a danos nos tecidos atribuíveis à infecção ou estresse físico ou químico. Pensa-se também que a expressão da IL-33 tenha um mecanismo pelo qual é aumentada e secretada em resposta à estimulação de substâncias como lipopolissacarídeos. A IL-33 liberada fora das células se liga aos receptores de IL-33 expressos nas células, desse modo um sinal intracelular é ativado. Os receptores de IL-33 são expressos em várias células do sistema imunológico e células epiteliais e a transdução de sinal intracelular induzida por IL-33 ocorre nessas células.

[007] Pensa-se que a IL-33 induz inflamação alérgica (como asma, dermatite atópica, febre do feno ou choque anafilático), induzindo a produção de citocinas Th2 (como IL-4, Il-5, IL-6 ou IL-13) de células Th2, mastócitos, eosinófilos, basófilos, células T assassinas naturais (NK) e células linfoides inatas do grupo 2 entre células do sistema imunológico que expressam receptores de IL-33 (NPL1: Tatsukuni Ohno et al., Allergy, 2012, Vol. 67, 1203). Recentemente, foram realizados estudos clínicos sobre asma, dermatite atópica e alergias ao amendoim como indicações para anticorpos anti-IL-33 e anticorpos de receptor de anti- IL-33, que são antagonistas de IL-33.

[008] Mbarik et al. (NPL2: Maruoa Mbarik et al., Immunol. Lett., 2015, Vol. 166, pl) relataram que, como resultado da análise do soro e ascites de pacientes com endometriose, a IL-33 aumenta as ascites etc. na endometriose, conforme a condição do paciente (estágio) progride, o que torna possível usá-la como um marcador substituto. A IL-33 foi relatada por. De acordo com o relatório de Mbarik et al., a concentração de receptor de IL-33 solúvel (sST2), que funciona como um antagonista de IL-33, em ascites é aproximadamente 100 vezes maior que a de IL- 33 e aumenta juntamente com a progressão da endometriose da mesma maneira que a IL-33. Assim, se o aumento da expressão de IL-33 durante a endometriose é uma causa da doença ou não, ou um resultado dela, e qual tipo de patologia ela atua em resposta a isso, ainda não está claro.

[009] Foi relatado que os antagonistas de IL-33 são usados no tratamento da fibrose local (PTL1: WO 2016/140921). Embora PTL1 mencione a endometriose como um caso de fibrose local, o efeito terapêutico contra a endometriose não é investigado nos exemplos. PTL1 apenas lista a endometriose como uma forma de fibrose e nada é encontrado sobre o papel da IL-33 na endometriose, etc.

[010] LISTA DE CITAÇÕES

[011] LITERATURA DE PATENTES

[012] PTL1: WO 2016/140921

[013] PTL2: WO 2014/164959

[014] PTL3: WO 2015/099175

[015] LITERATURA SEM PATENTE

[016] NPL1: Tatsukuni Ohno et al., Allergy, 2012, vol. 67, p.1203

[017] NPL2: Maruoa Mbarik et ai., Immunol. Lett., 2015, vol. 166, p.

SUMÁRIO [PROBLEMA TÉCNICO]

[018] Um agente é procurado para o tratamento de endometriose ou adenomiose uterina que é altamente seguro e não afeta a gravidez. SOLUÇÃO PARA PROBLEMAS]

[019] Como um resultado da realização de extensos estudos para resolver os problemas acima mencionados, os inventores da presente invenção identificaram a IL-33 como um fator exacerbador da endometriose ou adenomiose uterina. Os inventores da presente invenção descobriram que um antagonista de IL-33 capaz de inibir a ação da IL-33 é útil no tratamento, prevenção ou alívio da endometriose ou adenomiose uterina, levando assim à conclusão da presente invenção.

[020] A presente invenção refere-se à indicada abaixo.

[021] [1] Agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina compreendendo um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo.

[022] [2] O agente terapêutico descrito no item 1, que alivia a dor da endometriose ou adenomiose uterina.

[023] [3] O agente terapêutico descrito no item 1 ou 2, que inibe o crescimento de tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na endometriose ou na adenomiose uterina.

[024] [4] O agente terapêutico descrito em qualquer um dos itens 1 a 3, que inibe a angiogênese no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) de endometriose ou adenomiose uterina.

[025] [5] O agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina descrito em qualquer um dos itens 1 a 4, que inibe a fibrose ou a proliferação no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos).

[026] [6] O agente terapêutico descrito em qualquer um dos itens 1 a 5, que inibe a adesão do tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na endometriose a vários órgãos.

[027] [7] O agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina descrito em qualquer um dos itens 1 a 6, em que o antagonista de IL-33 é um anticorpo anti-IL-33, anticorpo de receptor de anti-IL-33 ou receptor IL-33 solúvel.

[028] [8] O agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina descrito no item 7, em que o anticorpo IL-33 é A10-1C04, A23- 1A05, A25-2C02, A25-3H04 ou A26-1F02.

[029] [9] O agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina descrito no item 7, em que o receptor de IL-33 solúvel é sST2-Fc.

[030] [10] Um método terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina compreendendo a administração de um antagonista de IL-33.

[031] [11] Uso de um antagonista de IL-33 na produção de um agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina.

[032] [12] Antagonista de IL-33 para uso no tratamento de endometriose ou adenomiose uterina.

[033] [13] O método terapêutico, uso ou antagonista de IL-33 descrito em qualquer um dos itens 10 a 12, que alivia a dor da endometriose ou adenomiose uterina.

[034] [14] O método terapêutico, uso ou antagonista de IL-33 descrito em qualquer um dos itens 10 a 12, que inibe o crescimento de tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) de endometriose ou adenomiose uterina.

[035] [15] O método terapêutico, uso ou antagonista de IL-33 descrito em qualquer um dos itens 10 a 12, que inibe a angiogênese no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) da endometriose ou adenomiose uterina.

[036] [16] O método terapêutico, uso ou antagonista de IL-33 descrito em qualquer um dos itens 10 a 12, que inibe a fibrose ou a proliferação no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos).

[037] [17] O método terapêutico, uso ou antagonista de IL-33 descrito em qualquer um dos itens 10 a 16, em que o antagonista de IL- 33 é um anticorpo anti-IL-33, anticorpo de receptor anti-IL-33 ou receptor de IL-33 solúvel. [EFEITOS VANTAJOSOS DA INVENÇÃO]

[038] O agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina da presente invenção tem um efeito terapêutico sobre endometriose ou adenomiose uterina. O agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina da presente invenção demonstra pelo menos uma ação selecionada a partir do grupo que consiste em alívio da dor, inibição do crescimento do tecido endometrial ectópico (incluindo cistos), inibição da angiogênese no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) e inibição da fibrose ou proliferação no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) associadas à endometriose ou adenomiose uterina.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[039] FIGURA 1 é um gráfico indicando inibição do crescimento de uma lesão cística, que é tecido endometrial ectópico, em camundongos knockout para o gene IL-33 (IL-33KO) em comparação com camundongos de controle do tipo selvagem (controle) em um modelo de endometriose.

[040] FIGURA 2 é um gráfico que indica a promoção do crescimento de uma lesão cística, que é tecido endometrial ectópico, em camundongos dosados com IL-33 (IL-33 ip) em comparação com camundongos de controle (controle) em um modelo de endometriose.

[041] FIGURA 3 é um gráfico indicando a inibição do crescimento de uma lesão cística, que é tecido endometrial ectópico, em camundongos tratados com antagonistas de IL-33 (sST2-Fc) em comparação com camundongos de controle (cont Fc) em um modelo de endometriose.

[042] FIGURA 4 representa imagens coradas com azan indicando inibição da fibrose de uma lesão cística, que é tecido endometrial ectópico, em um camundongo administrado por antagonista de IL-33 (sST2-Fc) em comparação com um camundongo de controle (cont Fc) em um modelo de endometriose.

[043] FIGURA 5 é um gráfico indicando a inibição do crescimento de uma lesão cística pela administração de anticorpo anti-IL-33 (anti-IL- 33) em comparação com o anticorpo de controle (controle Ab) em um modelo de endometriose com dosagem de IL-33.

[044] FIGURA 6 é um gráfico indicando a inibição da proliferação celular (porcentagem de células positivas para Ki-67) em uma lesão cística por administração de anticorpo anti-IL-33 (Anti-IL-33 Ab) em comparação com o anticorpo de controle (Controle Ab) em um modelo de endometriose com dosagem de IL-33.

MODO DE REALIZAR A INVENÇÃO

[045] O que se segue fornece uma explicação dos termos usados na presente invenção, a fim de facilitar a compreensão da presente invenção. [IL-33]

[046] IL-33 é uma citocina pertencente à família IL-1. A IL-33 humana é composta por 270 aminoácidos, como mostrado na SEQ ID NO: 1 das listagens de sequências, e a sequência de mRNA da mesma é mostrada na SEQ ID NO: 2. A IL-33 tem um domínio de ligação à cromatina em seu lado N-terminal, tem um domínio de citocina do tipo IL-1 com um peso molecular de 18 kD que tem 12 β filamentos no lado C-terminal e tem sítios de clivagem com catepsina G nas posições 95 e 109, um sítio de clivagem com elastalase na posição 99 e um sítio de clivagem da caspase na posição 178. Durante o curso pelo qual as células sofrem necrose, a IL-33 é clivada por enzimas como elastalase, catepsina G ou proteinase 3 originárias de lisossomos, resultando na formação de vários fragmentos contendo formas maduras de IL-33 tal como IL-33 (resíduo 95 ao resíduo 270) (IL-33 representada com a sequência de aminoácidos do resíduo 95 ao resíduo 270 do N-terminal na SEQ ID NO: 1 das listagens de sequência é denotada como "IL-33 (resíduo 95 ao resíduo 270)" e para aplicar similarmente a seguir), IL-33 (resíduo 99 ao resíduo 270), IL-33 (resíduo 109 ao resíduo 270) ou IL- 33 (resíduo 112 ao resíduo 270), e acredita-se que estes funcionem como citocinas. Por outro lado, no caso de morte celular ser apoptose, acredita-se que a IL-33 seja clivada na posição 178 pela caspase, que foi ativada durante o curso da apoptose, e forma uma forma inativa de IL-33, como IL- 33 (resíduo 179 ao resíduo 270).

[047] Quando liberada do lado de fora da célula como citocina, a IL-33 se liga ao receptor de IL-33 e tem a função de iniciar a transdução de sinal intracelular na célula que expressa o referido receptor de IL-33. A transdução de sinal induzida por IL-33 inclui de maneira não restritiva uma via de NF-ߢB e via de MAPKKs, dando origem à produção de vários tipos de citocinas, quimiocinas e mediadores inflamatórios. Exemplos de citocinas induzidas por IL-33 incluem TNF-α, IL-1β, IFN-γ, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6 e IL-13, etc. Exemplos de quimiocinas induzidas por IL-33 incluem CXCL2, CCL2, CCL3, CCL6, CCL17 e CCL24, etc. Exemplos de mediadores inflamatórios induzidos por IL-33 incluem PGD2 e LTB4, etc. As citocinas, quimiocinas e mediadores inflamatórios induzidos por IL-33 estão relacionados à migração de células do sistema, produção de citocinas e degranulação, causando inflamação. Na presente invenção, IL-33 refere-se a IL-33 de comprimento completo ou a um fragmento ativo da mesma no caso de atuar por ligação ao receptor de IL-33 a ser subsequentemente descrito e pode ser um derivado ou mutante da mesma. Na presente invenção, a IL-33 pode ser IL-33 humana ou IL-33 de outra origem biológica. Na presente invenção, a IL- 33 é preferivelmente a IL-33 humana representada pela sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 da listagem de sequências.

[048] O receptor de IL-33 ligado a IL-33 é composto por um heterodímero da proteína acessória do receptor ST2 e IL-1 (IL-1RAcP). Em um receptor de IL-33, o sítio que especificamente reconhece IL-33 e se liga a ela está presente na região extracelular de ST2. Os receptores de IL-33 são expressos em várias células do sistema imunológico (como células Th2, mastócitos, eosinófilos, basófilos, macrófagos, células dendríticas, células NK, células NKT, células linfoides inatas do grupo 2 (células auxiliares naturais), nuócitos ou células auxiliares inatas do tipo 2 (Ih2)) e células epiteliais, embora não limitadas a elas. [Antagonista de IL-33]

[049] Na presente invenção, um "antagonista" refere-se ao termo geral para uma substância que age diretamente sobre um alvo desejado, seu ligando, seu receptor ou seu gene (incluindo o mRNA) e tem uma ação neutralizadora nessa função. Assim, os antagonistas não apenas incluem substâncias com uma ação que neutraliza diretamente uma função alvo, mas também substâncias com uma ação que neutraliza uma função alvo indiretamente ao neutralizar a função de uma substância que interage com uma proteína alvo ou ao suprimir a expressão gênica de uma proteína alvo. Ou seja, um "antagonista de IL- 33" pode ser uma substância capaz de inibir qualquer função de IL-33 por ligação a IL-33 ou uma substância capaz de inibir a função de IL-33 por ligação a um receptor de IL-33. Além disso, antissentido e siRNA que suprimem a expressão gênica de IL-33 ou receptor de IL-33 também estão incluídos nos antagonistas de IL-33. Os antagonistas de IL-33 incluem, por exemplo, mas não se destinam a ser limitados a, anticorpo anti-IL-33, anticorpo de receptor anti-IL-33, receptor de IL-33 solúvel e aptâmeros para IL-33 e receptor de IL-33. Anticorpo anti-IL-33, anticorpo de receptor anti-IL-33 e aptâmeros para IL-33 e receptor de IL-33 são capazes de impedir a associação entre o IL-33 e receptor de IL-33 pela ligação a IL-33 e receptor de IL-33, que são respectivamente moléculas alvo. Por outro lado, os receptores de IL-33 solúveis são capazes de impedir a associação entre IL-33 e receptores de IL-33 na superfície celular, ligando-se a IL-33 livre. [Receptor de IL-33]

[050] Embora o gene ST2 que codifica uma subunidade do receptor de IL-33 codifique uma proteína transmembranar (ST2L), ele também codifica uma proteína secretora que carece de uma região transmembranar e região intracelular devido ao processamento seletivo. A sequência de aminoácidos completa de ST2L humano é representada pela SEQ ID NO: 3 das listagens de sequência. Entre a sequência completa de aminoácidos, um sistema de transdução de sinal intracelular é ativado através da ligação de IL-33 a um receptor de IL-33 (heterodímero) formado pela associação de ST2L com outra subunidade do receptor de IL-33, como IL-1RAcP. IL-33 se liga à região extracelular de ST2L. Assim, ST2L também é simplesmente referido como um receptor de IL-33. [Receptor IL-33 Solúvel]

[051] O receptor de IL-33 solúvel na presente invenção é uma proteína que compreende toda ou parte da região extracelular da proteína ST2L (resíduo 19 ao resíduo 328 de SEQ ID NO: 3 das listagens de sequência) e funciona como um antagonista de IL-33 como resultado da ligação com IL-33. O receptor de IL-33 solúvel pode opcionalmente ser modificado, por exemplo, com polietilenoglicol ou região constante de anticorpo. Em particular, o receptor de IL-33 solúvel com a região constante de uma imunoglobulina ligada a ele é referido como sST2-Fc. Um exemplo preferível de sST2-Fc é a proteína de fusão compreendida na região extracelular da proteína ST2L humana e na região constante do anticorpo IgG humano, que é representada pela SEQ ID NO: 5 das listagens de sequência. [Anticorpo]

[052] Na presente invenção, o termo "anticorpo" é usado no sentido mais amplo e refere-se ao que inclui anticorpo monoclonal e anticorpo policlonal, desde que exiba uma ligabilidade específica desejada. Na presente invenção, o anticorpo pode ser qualquer anticorpo animal arbitrário, como anticorpo de camundongo, anticorpo humano, anticorpo de rato, anticorpo de coelho, anticorpo de cabra ou anticorpo de camelo. [Anticorpo Monoclonal]

[053] Entre os anticorpos da presente invenção, anticorpo monoclonal refere-se a um anticorpo dentro de uma população de anticorpos composta por um único clone (espécie molecular única) em termos de uma sequência de aminoácidos projetada. Os anticorpos monoclonais incluem anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos humanos, anticorpos multiespecíficos e anticorpos artificiais, bem como anticorpos funcionalmente modificados dos mesmos, anticorpos conjugados dos mesmos e fragmentos dos mesmos. O anticorpo monoclonal da presente invenção pode ser produzido usando qualquer técnica conhecida, como o método de hibridoma, método de exibição de fagos ou uma técnica de engenharia genética. [Anticorpo Quimérico]

[054] Anticorpo quimérico refere-se a um anticorpo da cadeia leve, cadeia pesada ou ambos, composto por uma região variável derivada de imunoglobulina não humana e uma região constante derivada de imunoglobulina humana. [Anticorpo Humanizado]

[055] Anticorpo humanizado refere-se a um anticorpo composta por uma região determinante de complementaridade derivada de imunoglobulina não humana, uma região variável composta por uma região estrutural derivada de imunoglobulina humana e uma região constante derivada de imunoglobulina humana. [Anticorpo Humano]

[056] Anticorpo humano refere-se a um anticorpo derivado da imunoglobulina humana para a cadeia leve e a cadeia pesada. O anticorpo humano é classificado como, dependendo da diferença na região constante da cadeia pesada, IgG (incluindo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) tendo uma cadeia pesada de cadeia γ, IgM tendo uma cadeia pesada de cadeia µ, IgA (incluindo IgA1 e IgA2) tendo uma cadeia pesada de cadeia α, IgD tendo uma cadeia pesada de cadeia δ e IgE tendo uma cadeia pesada de cadeia ε. A cadeia leve compreende que uma cadeia κ ou uma cadeia λ em geral. [Anticorpo Multiespecífico]

[057] Anticorpo multiespecífico refere-se a um anticorpo capaz de ser assimétrico que tem dois ou mais sítios de reconhecimento de anticorpos independentes com duas ou mais especificidades de antígeno diferentes, e exemplos dos mesmos incluem anticorpo biespecífico com duas especificidades de anticorpo e anticorpo triespecífico com três especificidades de anticorpo. Um ou mais antígenos reconhecidos pelo anticorpo multiespecífico da presente invenção são uma molécula de IL-33 ou molécula de receptor de IL-33. [Anticorpo Artificial]

[058] Anticorpos artificiais referem-se, por exemplo, a scaffolds de proteínas, que embora não possuam a estrutura de imunoglobulina, têm uma função similar à da imunoglobulina. O domínio inibidor da serina- protease humana de Kunitz, o domínio extracelular da fibronectina humana, a anquirina e a lipocalina são usados como estruturas proteicas, e uma estrutura protéica que se liga a um epítopo na presente invenção pode ser produzida se a sequência no sítio de ligação ao alvo na estrutura for modificada (Clifford Mintz et al., BioProcess International, 2013, Vol. 11 (2), pp40-48). [Anticorpo Funcionalmente Modificado]

[059] Um anticorpo funcionalmente modificado no presente pedido refere-se a um anticorpo em que outra função que não a função de ligação de antígeno de anticorpo, como uma função de morte celular, função de ativação do complemento ou meia-vida do sangue, foi ajustada modificando um aminoácido ou cadeia de açúcar principalmente da região constante de uma imunoglobulina. [Anticorpo Conjugado]

[060] Um anticorpo conjugado no presente pedido refere-se a um anticorpo no qual uma molécula funcional diferente de anticorpo, como um polímero não peptídico, como polietilenoglicol (PEG), substância radioativa, toxina, composto de baixo peso molecular, citocina, albumina ou enzima, foi quimicamente, ou usando uma técnica de engenharia genética, ligado ao anticorpo. [Fragmento]

[061] Um fragmento de anticorpo no presente pedido refere-se a uma proteína contendo uma porção de um anticorpo que é capaz de se ligar a um antígeno. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem fragmento Fab, fragmento Fv, fragmento F(ab)'2, fragmento Fab' e scFv.

[062] Esses fragmentos de anticorpos podem quimicamente, ou usando uma técnica de engenharia genética, ligarem uma molécula funcional que não seja anticorpo, como um polímero não peptídico, como polietilenoglicol (PEG), substância radioativa, toxina, composto de baixo peso molecular, citocina, albumina ou enzima. [Anticorpo Monoclonal Humano]

[063] Anticorpo monoclonal humano refere-se a um anticorpo monoclonal tendo uma região variável e uma região constante derivada da sequência de uma imunoglobulina de uma linhagem germinativa humana. Estes incluem um anticorpo monoclonal derivado de um camundongo transgênico introduzido com um gene de anticorpo humano e um anticorpo derivado de uma biblioteca de genes de anticorpos humanos. [Neutralização]

[064] No presente pedido, "neutralização" refere-se a uma ação capaz de inibir qualquer função alvo. A inibição da função (atividade biológica) de IL-33 inclui, mas não está limitada à inibição da produção de citocinas induzidas por IL-33, tal como IL-6. Uma indicação da atividade biológica de IL-33 pode ser avaliada por uma ou mais análises in vitro ou in vivo conhecidas na técnica. [Região Determinante da Complementaridade]

[065] Uma região determinante de complementaridade refere-se a uma região variável de uma molécula de imunoglobulina que forma um sítio de ligação de antígeno, também é referida como uma região hipervariável e exibe uma grande alteração na sequência de aminoácidos, em particular para cada molécula de imunoglobulina. Uma região determinante de complementaridade tem três regiões determinantes de complementaridade para cada cadeia leve e cadeia pesada (região determinante de complementaridade 1, região determinante de complementaridade 2 e região determinante de complementaridade 3). No presente pedido, a região determinante da complementaridade de uma molécula de imunoglobulina é determinada de acordo com o esquema de numeração de Kabat (Kabat et al., 1987, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA, NIH, EUA). [Aptâmero]

[066] Um aptâmero refere-se a uma molécula de ácido nucleico que se liga especificamente a uma substância específica e, no presente pedido, refere-se a uma molécula que funciona como antagonista pela ligação ao receptor de IL-33 ou IL-33. Um aptâmero no presente pedido pode incluir uma molécula de ácido nucleico artificial diferente de moléculas de ácido nucleico de ocorrência natural. [Antissentido]

[067] Antissentido refere-se a um ácido nucleico antissentido (como RNA ou DNA) que é capaz de hibridar com o RNA de um gene alvo e tem uma função que suprime a expressão da função do gene. No presente pedido, antissentido refere-se a uma molécula que funciona como um antagonista que suprime a expressão de um gene pela ligação ao mRNA de IL-33 ou receptor de IL-33. O antissentido no presente pedido também pode incluir uma molécula de ácido nucleico artificial que não seja moléculas de ácido nucleico de ocorrência natural. [siRNA]

[068] O RNA interferente pequeno (siRNA) refere-se ao RNA de filamento duplo de baixo peso molecular composto por 15 a 30 pares de bases. O siRNA está envolvido em um fenômeno conhecido como interferência de RNA e, especificamente, suprime a expressão de um gene, destruindo o mRNA de um gene alvo. No presente pedido, siRNA refere-se a uma molécula que funciona como um antagonista que suprime a expressão de um gene destruindo o mRNA de IL-33 ou receptor de IL-33. O siRNA no presente pedido pode incluir uma molécula de ácido nucleico artificial diferente de moléculas de ácido nucleico de ocorrência natural. [Endometriose]

[069] A endometriose é uma doença benigna (não cancerígena) na qual o tecido endometrial se propaga em um sítio distante da cavidade uterina (ectopicamente), e exemplos desses sítios incluem os ovários, cavidade abdominal, peritônio, bolsa de Douglas, cólon sigmoide, reto, uterossacro ligamento, vagina, vulva, bexiga urinária, parede abdominal e umbigo. O tecido endometrial ectópico pode sofrer adesão com vários órgãos. Um hematoma de tecido endometrial formado nos ovários pode ser chamado de cisto de chocolate. Uma laparoscopia é realizada para fazer um diagnóstico definitivo de endometriose e o tecido endometrial ectópico é observado diretamente. A classificação Re-ASRM é usada para classificar o estágio clínico da endometriose e classifica a endometriose de Estágio 1 a Estágio 4, pontuando de acordo com o sítio da lesão, se a lesão é superficial ou profunda e o grau de adesão a outros órgãos. A classificação de Beecham é usada para monitorar o progresso da endometriose e o progresso é classificado entre os estágios 1 e 4, correspondentes à progressão da condição. [Adenomiose uterina]

[070] A adenomiose uterina é uma doença na qual o tecido endometrial é observado na camada muscular do útero e é classificada pelo diagnóstico por ressonância magnética como adenomiose uterina focal, limitada a uma porção do útero, e adenomiose uterina difusa, que se estende por todo o útero.

[071] A seguir, é fornecida uma explicação das modalidades da presente invenção. As modalidades a seguir são exemplares para explicar a presente invenção e a presente invenção não se limita apenas a essas modalidades.

[072] A presente invenção refere-se a um agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina compreendendo um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo do mesmo. O agente terapêutico é capaz de curar completamente, aliviar os sintomas ou prevenir a exacerbação, sendo administrado a um paciente que sofre de endometriose ou adenomiose uterina. Exemplos de antagonistas de IL- 33 incluem anticorpo anti-IL-33, anticorpo de receptor anti-IL-33, aptâmero de ligação ao receptor de IL-33 e receptor de IL-33 solúvel.

[073] Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica para tratamento, prevenção ou alívio de endometriose ou adenomiose uterina compreendendo um antagonista de IL-33. Ainda em outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método para tratar, prevenir ou aliviar a endometriose ou adenomiose uterina que inclui a administração de um antagonista de IL-33. A presente invenção também se refere a um uso do antagonista de IL-33 da presente invenção, a fim de produzir uma droga para o tratamento, prevenção ou alívio da endometriose ou adenomiose uterina. A presente invenção também se refere a um antagonista de IL-33 para uso no tratamento, prevenção ou alívio de endometriose ou adenomiose uterina.

[074] A endometriose é uma doença na qual o tecido endometrial se desenvolve em uma localização diferente do endométrio. A doença na qual o tecido endometrial está presente na camada muscular do útero é chamada de adenomiose uterina. Embora esse tecido endometrial ectópico sofra desenvolvimento e sangramento repetidos em coordenação com o ciclo menstrual da mesma maneira que o endométrio, um hematoma pode se formar, uma vez que não há saída, como no caso do sangue menstrual. Um hematoma formado dessa maneira é chamado de cisto de chocolate. Como resultado da formação de um cisto, o tecido sofre fibrose e pode resultar na formação de adesão e endurecimento. Quando o tecido endometrial ectópico acaba aderindo a outros órgãos (como o peritônio, intestino ou ovário), ele causa dor. A adesão das trompas de falópio causa infertilidade. A terapia hormonal e a ressecção por um procedimento cirúrgico geralmente são realizadas para endometriose. Pelo menos uma ação selecionada a partir do grupo que consiste em aliviar a dor associada à endometriose ou adenomiose uterina, inibição do crescimento de tecido endometrial ectópico (incluindo cistos), inibição da angiogênese no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos), inibição da adesão entre vários órgãos e tecido endometrial ectópico (incluindo cistos), e a inibição da fibrose ou proliferação celular é demonstrada pelo tratamento, prevenção ou alívio da endometriose ou adenomiose uterina.

[075] Pacientes que sofrem endometriose ou adenomiose uterina apresentam sintomas como aumento do volume menstrual e dor menstrual mais intensa, acompanhando as flutuações no ciclo menstrual. Assim, um agente terapêutico contendo um antagonista de IL-33 ou uma composição farmacêutica para tratamento, prevenção ou alívio pode ser administrado ao objeto com alterações nos sintomas que acompanham as flutuações no ciclo menstrual e nos objetos que apresentam reclamações acompanhando as flutuações no ciclo menstrual. Tais objetos podem ser diferenciados dos objetos que possuem fibrose local.

[076] Em outro aspecto da presente invenção, a presente invenção também se refere a um alívio da dor associada à endometriose ou adenomiose uterina compreendendo um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo, um inibidor da adesão de vários órgãos ao tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na endometriose compreendendo um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo, um inibidor do crescimento de tecido endometrial ectópico (incluindo cistos)

na endometriose ou na adenomiose uterina compreendendo um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo do mesmo, um inibidor da angiogênese no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) de endometriose ou adenomiose uterina compreendendo um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo, um inibidor de fibrose de células estromais do endométrio em tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) de endometriose ou adenomiose uterina compreendendo um antagonista de IL-33 como um ingrediente ativo do mesmo, um inibidor da proliferação celular no tecido endometrial (incluindo cistos) de endometriose ou adenomiose uterina compreendendo um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo, um agente terapêutico de endometriose superficial compreendendo um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo, um agente terapêutico de endometriose profunda compreendendo um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo, um agente terapêutico da adenomiose uterina focal compreendendo um antagonista de IL-33 como um ingrediente ativo ou um agente terapêutico da adenomiose uterina focal compreendendo um antagonista de IL-33 como um ingrediente ativo do mesmo.

[077] O antagonista de IL-33 da presente invenção, de preferência, alivia dor lombar, dor abdominal inferior ou dor de defecação durante a menstruação em pacientes com endometriose ou adenomiose uterina, ou dor lombar, dor abdominal inferior ou dor de defecação em momentos diferentes da menstruação e mais preferivelmente elimina essa dor.

[078] O antagonista de IL-33 da presente invenção alivia preferivelmente a dor na pelve, ovários, cavidade abdominal, peritônio, bolsa de Douglas, cólon sigmoide, reto, ligamento uterossacro, vagina, vulva, bexiga, parede abdominal e/ou umbigo de pacientes com endometriose e, mais preferivelmente, elimina essa dor.

[079] O alívio da dor pelo antagonista de IL-33 da presente invenção pode ser avaliado com, por exemplo, a escala de Biberoglu & Behrman que pontua a QOL associada à dor (Biberoglu, KO e Behrman, SJ, Am. J. Obstet. Gynecol., 139: 645 (1981)). De acordo com essa escala, dor tais como dor pélvica, dor dismenorreal ou coital que não sejam durante a menstruação, é avaliada como sintoma subjetivo.

[080] O alívio da dor pelo antagonista de IL-33 da presente invenção pode ser avaliado por uma redução no número de vezes que um analgésico é tomado ou na sua dosagem. O analgésico é preferivelmente um analgésico anti-inflamatório não baseado em esteroides, exemplos dos quais incluem hidróxido de loxoprofeno de sódio, diclofenaco de sódio e aspirina.

[081] O antagonista de IL-33 da presente invenção inibe preferivelmente a adesão do tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na pelve, ovários, cavidade abdominal, peritônio, bolsa de Douglas, cólon sigmoide, reto, ligamento uterossacro, vagina, vulva, bexiga urinária, abdominal parede e/ou umbigo de pacientes com endometriose e, mais preferivelmente, elimina essa adesão. O antagonista de IL-33 da presente invenção inibe a adesão do útero e a restrição da mobilidade do útero é preferivelmente aliviada.

[082] O antagonista de IL-33 da presente invenção inibe preferivelmente o crescimento de tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na pelve, ovários, cavidade abdominal, peritônio, bolsa de Douglas, cólon sigmoide, reto, ligamento uterossacro, vagina, vulva, bexiga urinária, parede abdominal e/ou umbigo de pacientes com endometriose e, mais preferivelmente, reduz esse tecido endometrial ectópico (incluindo cistos).

[083] O antagonista de IL-33 da presente invenção inibe preferivelmente a angiogênese no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na pelve, ovários, cavidade abdominal, peritônio, bolsa de Douglas, cólon sigmoide, reto, ligamento uterossacro, vagina, vulva,

bexiga urinária, abdominal parede e/ou umbigo de pacientes com endometriose.

[084] O antagonista de IL-33 da presente invenção inibe preferivelmente fibrose ou proliferação celular no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na pelve, ovários, cavidade abdominal, peritônio, bolsa de Douglas, cólon sigmoide, reto, ligamento uterossacro, vagina, vulva, bexiga urinária, parede abdominal e/ou umbigo de pacientes com endometriose.

[085] O antagonista de IL-33 da presente invenção inibe preferivelmente a produção de citocinas e/ou mediadores no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na pelve, ovários, cavidade abdominal, peritônio, bolsa de Douglas, bolsa de Douglas, cólon sigmoide, reto, ligamento uterossacro, vagina, vulva, bexiga urinária, parede abdominal e/ou umbigo de pacientes com endometriose, e mais preferivelmente inibe a produção de IL-6, TNF-α e/ou prostaglandinas.

[086] O antagonista de IL-33 da presente invenção cura preferivelmente pacientes que sofrem de endometriose nos estágios 1, 2, 3 e/ou 4 de acordo com um exame baseado na classificação de Beecham e, de preferência, cura pacientes com endometriose no estágio 1, estágio 2, estágio 3 e/ou estágio 4, avaliando uma pontuação determinada de acordo com a classificação Re-ASRM.

[087] O antagonista de IL-33 da presente invenção melhora preferivelmente a QOL associada à endometriose. A melhoria da QOL pode ser avaliada por meio de entrevistas usando, por exemplo, o Endometriosis Health Profile-30 (EHP-30) (Jones, G. et al., Obstet. Gynecol., 98: 258 (2001)), o EQD-5D (Brooks, R. et al., Health Policy, 37: 53 (1997), ou o Endometriosis Treatment Satisfaction Questionnaire (ETSQ) (Deal, LS et al., Qual. Life Res., 19 (6), 899 (2010) Exemplos de melhoria da QOL, incluindo melhoria da dificuldade em ficar em pé, dificuldade em sentar, dificuldade em andar, apetite, insônia, frustração,

depressão, choro, tristeza, depressão maníaca, temperamento irritadiço, violência, solidão, perda de confiança e dificuldade coital.

[088] Um agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina que usa um antagonista de IL-33 difere da terapia de fármacos comumente usada com reguladores hormonais, pois alivia a infertilidade e os efeitos colaterais adversos similares aos do distúrbio da menopausa. Assim, o antagonista de IL-33 da presente invenção é preferivelmente um agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina que mantém um estado fértil e está livre de toxicidade fetal durante a gravidez e é preferivelmente um agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina que não é acompanhado por efeitos colaterais adversos similares ao distúrbio da menopausa. Exemplos de efeitos colaterais adversos similares aos do distúrbio da menopausa incluem, entre outros, infertilidade, ondas de calor, osteoporose e depressão.

[089] O anticorpo anti-IL-33 e o anticorpo de receptor anti-IL-33 incluem anticorpos monoclonais e anticorpos policlonais. Um anticorpo na presente invenção pode ser um anticorpo derivado de qualquer espécie animal, como anticorpo de camundongo, anticorpo humano, anticorpo de rato, anticorpo de coelho, anticorpo de cabra ou anticorpo de camelo. O anticorpo IL-33 e o anticorpo de receptor anti-IL-33 da presente invenção são preferivelmente anticorpos monoclonais e mais preferivelmente, o anticorpo anti-IL-33 e o anticorpo de receptor anti-IL- 33 da presente invenção são anticorpos monoclonais que são anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados ou anticorpos humanos.

[090] O anticorpo anti-IL-33 e o anticorpo de receptor anti-IL-33 da presente invenção podem ser adquiridos por qualquer método arbitrário conhecido na técnica. No caso de anticorpos monoclonais, os anticorpos podem ser adquiridos usando uma técnica arbitrária, como o método de hibridoma, método de exibição de fagos ou uma técnica de engenharia genética.

[091] No método do hibridoma, um hibridoma é produzido pela fusão de células B adquiridas no baço ou nos gânglios linfáticos de um animal, como um rato ou camundongo imunizado usando um imunógeno com células imortalizadas, como células de mieloma, seguido pelo rastreamento de um hibridoma que produz anticorpos tendo uma ligabilidade desejada e produzindo esse anticorpo usando o hibridoma rastreado. O anticorpo humano pode ser adquirido usando um camundongo introduzido com um gene de anticorpo humano. No caso de aquisição de anticorpo monoclonal a partir de um hibridoma, é usado um método no qual o hibridoma é cultivado de acordo com métodos comuns, seguido pela obtenção do anticorpo no sobrenadante de cultura do mesmo, ou é usado um método no qual o hibridoma pode proliferar-se administrando a um mamífero tendo compatibilidade com o mesmo seguido pela obtenção do anticorpo em ascites do mesmo. O primeiro método é adequado para a obtenção de anticorpos altamente puros, enquanto o último método é adequado para a produção de anticorpos em grande volume. Uma tecnologia conhecida é usada para a tecnologia para produzir o anticorpo monoclonal e esse anticorpo monoclonal pode ser produzido de acordo com a descrição, por exemplo, no Capítulo 2 de Current Protocols em Immunology, Wiley e Sons Inc..

[092] No método de exibição de fagos, os fagos selecionados a partir de uma biblioteca de anticorpos de fagos arbitrários são rastreados usando um antígeno alvo (receptor de IL-33 ou IL-33 no presente pedido) seguido de seleção de um fago com a capacidade de ligação desejada para esse antígeno. A seguir, a sequência correspondente do anticorpo contida no fago é isolada ou determinada e um vetor de expressão contendo uma molécula de ácido nucleico que codifica um anticorpo monoclonal é construído com base nas informações de sequência isoladas ou determinadas. Uma linhagem celular transfectada com este vetor de expressão é então cultivada para produzir anticorpo monoclonal. O anticorpo humano tendo uma ligabilidade desejada pode ser produzido usando uma biblioteca de anticorpos humanos para a biblioteca de anticorpos de fagos.

[093] Em uma técnica de engenharia genética, um anticorpo com afinidade aprimorada para anticorpo e/ou uma função modificada pode ser produzido através da introdução de uma mutação em uma sequência correspondente a uma região determinante de complementaridade (CDR) ou outra sequência em uma sequência genética que codifica um anticorpo, incorporando essa sequência em um vetor de expressão e usando esse vetor para transformar uma célula hospedeira (vide, por exemplo, Borrebaeck, C.A.K. e Larrick, J.W., Therapeutic Monoclonal Antibodies, Publicado no Reino Unido por MacMillan Publishers, Ltd., 1990).

[094] Na presente invenção, anticorpo quimérico, anticorpo humanizado, anticorpo multiespecífico ou anticorpo artificial, por exemplo, pode ser usado com a finalidade de reduzir a xenoantigenicidade para seres humanos ou adicionar uma função diferente, e esses anticorpos podem ser produzidos usando um método conhecido tal como uma técnica de engenharia genética.

[095] O anticorpo quimérico é obtido pela ligação do DNA que codifica a região variável de uma imunoglobulina não humana ao DNA que codifica a região constante de uma imunoglobulina humana, incorporando esse DNA em um vetor de expressão e introduzindo o vetor de expressão em um hospedeiro para produzir anticorpo quimérico (vide EP 125023, WO 92/19759). O anticorpo quimérico útil na presente invenção pode ser obtido usando este método conhecido.

[096] O anticorpo humanizado é obtido pela ligação de regiões determinantes de complementaridade (CDR) derivadas de uma imunoglobulina não humana com DNA que codifica a outra parte das regiões de uma imunoglobulina humana, incorporando esse DNA em um vetor de expressão e introduzindo o vetor de expressão em um hospedeiro para produzir anticorpo humanizado.

[097] O anticorpo humano é preparado usando, por exemplo, o procedimento descrito nos Exemplos fornecidos abaixo. O anticorpo humano também pode ser preparado usando a tecnologia de trioma, a tecnologia de hibridoma de células B humanas (Kozbor, et al., 1983, Immunol. Today, 4, p.72) ou a tecnologia de hibridoma EBV para a produção de anticorpo monoclonal humano (Cole, et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., p.77). O anticorpo humano também pode ser produzido através da preparação de um hibridoma imunizando um camundongo transgênico introduzido com um gene de anticorpo humano com uma proteína antigênica (IL-33 ou receptor IL-33 no presente pedido). Exemplos de camundongos transgênicos incluem um camundongo HuMab® (Medarex), camundongo KMTM (Kirin Pharma), camundongo KM (FCγRIIb-KO) e camundongo VelocImmune (Regeneron).

[098] O anticorpo multiespecífico pode ser produzido por uma técnica de engenharia genética usando as regiões de ligação de antígeno de dois ou mais tipos de anticorpos monoclonais. As técnicas de engenharia genética já foram estabelecidas na área. Por exemplo, um anticorpo biespecífico desejado pode ser adquirido usando uma tecnologia que usa DVD-Ig, na qual as regiões de ligação de antígeno de dois tipos de anticorpos monoclonais estão diretamente ligadas (Wu, et al., Nature Biotechnology, 25 (11), 1290 (2007)) ou tecnologia usando ART-Ig, na qual as cadeias pesadas de dois tipos de anticorpos que se ligam a antígenos diferentes são combinadas modificando as regiões constantes da imunoglobulina (Kitazawa, et al., Nature Medicine, 18

(10), 1570 (2012)).

[099] O anticorpo artificial pode ser adquirido para uso como anticorpo artificial que se liga a um alvo desejado usando, por exemplo, a 10ª unidade do domínio de fibronectina humana tipo III (FNfn10) e introduzindo uma mutação no loop BC, DE e/ou FG dessa unidade. Além do domínio extracelular da fibronectina, peptídeos como o domínio Kunitz do inibidor da serina protease, anquirina ou lipocalina podem ser usados como anticorpos artificiais. Esses anticorpos artificiais podem ser produzidos usando uma técnica de engenharia genética, introduzindo um vetor contendo uma molécula de ácido nucleico que codifica o peptídeo em Escherichia coli, levedura ou células animais, cultivando as células hospedeiras e purificando-as a partir do sobrenadante de cultura (PTL4, Clifford Mintz, et al., BioProcesses International, 2013, Vol. 11 (2), pp.40-48).

[100] Os anticorpos artificiais também podem ser encontrados como moléculas peptídicas de baixo peso molecular que se ligam especificamente a um epítopo da presente invenção da maneira similar ao anticorpo da biblioteca de sequências aleatórias na qual aminoácidos são combinados aleatoriamente, em vez de usar uma proteína específica como descrito acima ou uma porção da sequência de aminoácidos da mesma (vide, por exemplo, Hipolito, et al., Current Opinion in Chemical Biology, 2012, Vol. 16, 196; Yamagishi, et al., Chemistry & Biology, 2011, Vol. 18, 1562). Além das técnicas de engenharia genética, esses peptídeos também podem ser produzidos por um método de síntese química tal como o método fluorenil metilóxi carbonila ou método t-butiloxicarbonila.

[101] O anticorpo monoclonal usado na presente invenção pode ser, por exemplo, um anticorpo conjugado ligado a vários tipos de moléculas, como um polímero não peptídico, como polietilenoglicol (PEG), substância radioativa ou toxina. Tais anticorpos conjugados podem ser obtidos realizando modificações químicas no anticorpo resultante. Os métodos de modificação química já foram estabelecidos na técnica. O anticorpo monoclonal na presente invenção incorpora esses anticorpos conjugados (King, DJ, Applications and Engineering of Monoclonal Antibodies, 1998, TJ International Ltd; Monoclonal-Based Antibody-Based Therapy of Cancer, 1998, Marcel Dekker Inc..; Chari, et al., Cancer Res., 1992, Vol. 152, 127; Liu, et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1996, Vol. 93, 8681).

[102] Na presente invenção, separados dos anticorpos completos descritos acima, fragmentos de anticorpos monoclonais e formas modificadas dos mesmos também podem ser usados, desde que tenham ligabilidade de antígeno e demonstrem atividade antagonista. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem fragmentos Fab, fragmentos Fv, fragmentos F(ab')2, fragmentos Fab' e fragmentos Fv de cadeia única (scFv) nos quais os Fvs da cadeia H e da cadeia L estão ligados a um ligante adequado. Esses fragmentos de anticorpo também podem ser ligados a uma outra molécula funcional diferente do anticorpo, tal como um polímero não peptídico, como polietilenoglicol (PEG), substância radioativa, toxina, composto de baixo peso molecular, citocina, albumina ou enzima por meio de uma técnica química ou técnica de engenharia genética.

[103] Os sistemas de produção para a produção de anticorpo monoclonal são amplamente conhecidos na área e podem ser adequadamente selecionados, correspondendo à qualidade da formulação alvo. Por exemplo, um sistema de produção in vitro ou in vivo pode ser usado. Exemplos de sistemas de produção in vitro incluem sistemas de produção usando células eucarióticas, como células animais, células vegetais ou células fúngicas, e sistemas de produção usando células procarióticas, como células bacterianas de Escherichia coli ou Bacillus subtilis. Células de mamíferos, por exemplo células comumente usadas, tais como células CHO, COS, mieloma, BHK, HeLa e Vero, células de insetos ou células de plantas podem ser usadas. Exemplos de sistemas de produção in vivo incluem sistemas de produção usando animais e sistemas de produção usando plantas. No caso de usar um animal, exemplos incluem sistemas de produção usando mamíferos e insetos. Cabras, porcos, ovelhas, camundongos ou vacas, por exemplo, podem ser usados como mamíferos (Vicki Glaser, Spectrum Biotechnology Applications, 1993). Bichos-da-seda, por exemplo, podem ser usados como insetos. Uma planta de tabaco, por exemplo, pode ser usada no caso de usar uma planta.

[104] No caso de produzir anticorpo monoclonal com um sistema de produção in vitro ou in vivo como descrito acima, o DNA que codifica a cadeia pesada (cadeia H) ou a cadeia leve (cadeia L) de uma imunoglobulina pode ser incorporado separadamente em vetores de expressão para transformar simultaneamente um hospedeiro ou DNA que codifica uma cadeia H e uma cadeia L pode ser incorporado em um único vetor de expressão para transformar um hospedeiro (vide WO 94/11523).

[105] O anticorpo monoclonal resultante pode ser purificado até uniformidade. Os métodos de separação e purificação usados com proteínas comuns podem ser usados para separar e purificar o anticorpo monoclonal. Por exemplo, o anticorpo monoclonal pode ser separado e purificado ao selecionar e combinar adequadamente uma coluna de cromatografia como aquela para cromatografia de afinidade, filtração, ultrafiltração, salga, diálise, eletroforese em gel de poliacrilamida SDS ou foco isoelétrico (Antibodies: A Laboratory Manual, Ed Harlow e David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988), embora não limitado a isso. Exemplos de colunas usadas para cromatografia de afinidade incluem uma coluna de proteína A e uma coluna de proteína G. Exemplos de colunas usadas em uma coluna de proteína A incluem Hyper D, POROS e Sepharose F.F. (Amersham Biosciences).

[106] As moléculas de ácido nucleico da presente invenção, como um aptâmero, antissentido ou siRNA, podem ser sintetizadas por, por exemplo, o método de fosforamidita usando uma molécula de ácido nucleico de um monômero para o material. O método de fosforamidita pode ser realizado de acordo com um método que se conforma com, por exemplo, o método descrito em WO 2014/046212. O aptâmero da presente invenção se liga preferivelmente à proteína IL-33 (SEQ ID NO: 1 das listagens de sequências) ou à proteína do receptor de IL-33 humana (SEQ ID NO: 3 das listagens de sequências) e o antissentido ou siRNA se liga preferivelmente ao mRNA da IL-33 humana (SEQ ID NO: 2 das listagens de sequência) ou ao mRNA do receptor de IL-33 humana (SEQ ID NO: 4 das listagens de sequência). As moléculas de ácido nucleico da presente invenção consistindo em aptâmero, antissentido e siRNA podem incluir ácidos nucleicos artificiais, e exemplos de ácidos nucleicos artificiais incluem oligonucleotídeos (S- oligo) do tipo (S-PO3) fosforotioato e ácidos nucleicos 2',4'-em ponte (BNA)/ácidos nucleicos 2',4'-boqueados (LNA) (WO 98/39352, WO 2005/021570, WO 2003/068795, WO 2011/052436).

[107] Um aspecto preferível do antagonista de IL-33 da presente invenção é, por exemplo, um aptâmero que é capaz de neutralizar a ação da IL-33 por ligação ao receptor de IL-33 humano, e um exemplo disso é RBM-009.

[108] O agente terapêutico ou composição farmacêutica compreendendo o antagonista de IL-33 da presente invenção pode ainda compreender um veículo, diluente ou veículo farmacologicamente aceitável, além do anticorpo IL-33, anticorpo de receptor anti-IL-33 ou receptor de IL-33 solúvel, ou seus sais, todos relacionados ao antagonista de IL-33 humana como ingrediente ativo. Um ingrediente ativo que não seja o antagonista de IL-33 da presente invenção, como um agente anti-inflamatório ou imunossupressor, também pode estar contido. Embora essa composição seja fornecida como Uma forma de fármaco adequada para administração parentérica ou administração oral, é preferível a administração parentérica. Exemplos de administração parentérica incluem, mas não estão limitados a, administração intravenosa, intra-arterial, subcutânea, local, intraperitoneal, intramuscular, transnasal, instilação, transdérmica, transmucosa, intramedular, retal, intramuscular e intravaginal.

[109] Uma forma de fármaco adequada pode ser selecionada para o agente terapêutico ou composição farmacêutica da presente invenção correspondente à via de administração, e qualquer forma de droga pode ser usada, como uma injeção, pó ou preparação para infusão. Do ponto de vista da administração parentérica, é preferível uma injeção, preparação para infusão ou pó dissolvido no momento do uso. Estas formulações podem também conter vários adjuvantes usados para produtos farmacêuticos, nomeadamente veículos e outros agentes auxiliares, tais como estabilizadores, conservantes, analgésicos, emulsionantes e outros aditivos.

[110] O antagonista de IL-33 da presente invenção pode ser introduzido, por exemplo, por infusão contínua ou por administração em bolus em um intervalo de uma vez por dia, uma vez por semana, uma vez por mês ou 1 a 7 vezes em um ano. O antagonista de IL-33 pode ser introduzido por administração intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, local, transnasal, retal, intramuscular ou intravaginal. O protocolo de dosagem preferível inclui a dose máxima ou a frequência de dosagem que evita efeitos colaterais adversos graves. A dosagem por administração é geralmente pelo menos cerca de 0,05 µg/kg de peso corporal, mais geralmente pelo menos cerca de 0,2 µg/kg, mais geralmente pelo menos cerca de 0,5 µg/kg, tipicamente pelo menos cerca de 1 µg/kg, mais tipicamente pelo menos cerca de 10 µg/kg, mais tipicamente pelo menos cerca de 100 µg/kg, preferivelmente pelo menos cerca de 0,2 mg/kg, mais preferivelmente pelo menos cerca de 1,0 mg/kg, mais preferivelmente pelo menos cerca de 2,0 mg/kg, mais adequadamente pelo menos cerca de 10 mg/kg, ainda mais adequadamente pelo menos cerca de 25 mg/kg e opticamente pelo menos cerca de 50 mg/kg.

[111] Exemplos de aspectos preferíveis do antagonista de IL-33 da presente invenção incluem os anticorpos monoclonais de IL-33 humana de A10-1C04, A23-1A05, A25-2C02, A25-3H04 e A26-1F02. As respectivas sequências de aminoácidos das cadeias leves e cadeias pesadas desses anticorpos monoclonais são SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8 das listagens de sequência (A10-1C04), SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 10 (A23-1A05), SEQ ID NO: 11 e SEQ ID NO: 12 (A25-2C02), SEQ ID NO: 13 e SEQ ID NO: 14 (A25-3H04) e SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16 (A26-1F02). As regiões constantes destes anticorpos são preferivelmente regiões constantes de anticorpo humano e mais preferivelmente a região constante de IgG1 humana.

[112] Outro aspecto do antagonista de IL-33 da presente invenção é, por exemplo, um anticorpo que é capaz de neutralizar a ação de IL- 33 através da ligação à IL-33 humana, e seus exemplos incluem etokimab (também conhecido como ANB-020), REGN-3500 (também conhecido como SAR-440340), MEDI-3506, PF-06817024 e CBP-233.

[113] Outro aspecto do antagonista de IL-33 da presente invenção é, por exemplo, um anticorpo que é capaz de neutralizar a IL-33 por ligação ao receptor de IL-33 humano, e exemplos dos mesmos incluem RG-6149 (também conhecido como AMG- 282, MSTT1041A ou RO- 7187807), GSK-3772847 (também conhecido como CNTO-7160) e LY-

3375880.

[114] Embora o receptor de IL-33 solúvel seja uma proteína com toda ou uma porção da região extracelular (resíduo 19 ao resíduo 328)

de ST2L de SEQ ID NO: 3 das listagens de sequência, uma substituição, deleção ou inserção de aminoácidos pode estar contida, desde que o receptor de IL-33 solúvel demonstre ação antagonista de IL-33. Do ponto de vista de não prejudicar a ação antagonista de IL-33, o número de aminoácidos substituídos, deletados ou inseridos é preferivelmente um ou vários, e qualquer número arbitrário de 1 a 9 aminoácidos pode ser substituído, deletado ou inserido. Em outro aspecto, o receptor de IL-33 solúvel pode ter identidade de pelo menos 80%, mais preferivelmente pelo menos 90%, ainda mais preferivelmente pelo menos 95% e ainda mais preferivelmente pelo menos 98% com relação à sequência de aminoácidos da região extracelular (resíduo 19 ao resíduo 328) de ST2L de SEQ ID NO: 3 da listagem de sequências, desde que demonstre ação antagonista de IL-33. Do ponto de vista de melhoria da farmacocinética, uma região constante de uma imunoglobulina e polietilenoglicol, por exemplo, pode ser fundida ao receptor de IL-33 solúvel. O receptor de IL-33 solúvel tendo uma região constante de anticorpo fundida a ele pode ser referido como sST2-Fc. Embora a região constante de uma imunoglobulina capaz de ser ligada possa ser uma região constante derivada de qualquer espécie arbitrária, do ponto de vista de garantir baixa antigenicidade, é preferível uma região constante humana. Um exemplo preferível de sST2-Fc humano é a proteína de fusão representada pela SEQ ID NO: 5 das listagens de sequência.

[115] O sST2-Fc pode formar um dímero da mesma maneira que uma imunoglobulina. Um aminoácido de sST2-Fc pode ser substituído, excluído ou inserido na sequência de aminoácidos original, como a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 ou 6, desde que demonstre ação antagonista de IL-33. Do ponto de vista de não prejudicar a ação antagonista de IL-33, o número de aminoácidos substituídos, excluídos ou inseridos é de um a vários, e qualquer número arbitrário de 1 a 9 aminoácidos pode ser substituído, excluído ou inserido. Em outro aspecto, sST2-Fc pode ter identidade de pelo menos 80%, mais preferivelmente pelo menos 90%, ainda mais preferivelmente pelo menos 95% e ainda mais preferivelmente pelo menos 98% em relação à sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 5 ou 6 das listagens de sequência, desde que demonstre ação antagônica à IL-33. Estes sST2- Fc mantêm preferivelmente a capacidade de formar um dímero.

[116] Um receptor de IL-33 solúvel como sST2-Fc pode ser produzido usando um sistema de produção in vitro usando um vetor contendo um ácido nucleico que codifica a proteína do receptor de IL- 33 solúvel. Exemplos de sistemas de produção in vitro incluem sistemas de produção usando células eucarióticas, como células animais, células vegetais ou células fúngicas, e sistemas de produção usando células procarióticas, por exemplo, células bacterianas, como Escherichia coli ou Bacillus subtilis. Células de mamíferos, por exemplo, células comumente usadas, como CHO, COS, mieloma, BHK, HeLa, Vero, 293, NSO, Namaiwa ou células YB2/0, células de inseto ou células vegetais podem ser usadas como células animais. O receptor de IL-33 solúvel pode ser isolado por purificação adicional da proteína produzida desta maneira.

[117] Embora o que se segue forneça uma explicação mais detalhada da presente invenção através de exemplos da mesma, a presente invenção não se limita aos exemplos seguintes, a menos que especificamente mencionado de outra forma. Todas as referências mencionadas na presente descrição são incorporadas na presente descrição na sua totalidade por referência. Exemplo 1: Efeito de Deficiência Genética de IL-33 em Modelo de Endometriose

[118] Camundongos uterinos transplantados que receberam estrogênio foram usados como modelo animal de endometriose (Ricci,

et al., Reprod.

Sci., 2011, Vol. 18, p614). Após submeter camundongos fêmeas Balb/c de 6 semanas de idade do tipo selvagem, (Charles River Laboratories, Japão) ou camundongos knockout para IL-33 Balb/c- background (Yasuda, et al., PNAS, 2012, Vol. 130, p184) (a ser indicado como "camundongos IL-33KO") à anestesia por inalação com isoflurano (anestesia mantida a uma concentração de isoflurano de 3,0% e taxa de fluxo de ar ambiente ou 300-400), uma pequena incisão foi feita um pouco à esquerda da linha média dos camundongos, seguido pela extração do útero esquerdo e direito da abertura da laparotomia, em ordem e excisão dos ovários aderidos ao final do útero.

Esses camundongos foram injetados subcutaneamente com uma solução de injeção de valerato de estradiol (Fuji Pharma) (Estrogênio) dissolvida a 5 µg/mL com óleo de milho (Wako Pure Chemical Industries) sob a pele da parte posterior do pescoço usando uma seringa 22G na taxa de 0,5 µg / 100 µL / corpo por 2 semanas (uma vez por semana) para produzir camundongos doadores e camundongos receptores.

Duas semanas depois, os camundongos doadores foram sacrificados por deslocamento cervical e laparotomizados, seguido de excisão do útero.

O útero excisado foi cortado uniformemente até um peso de 40 g em uma placa de Petri.

Posteriormente, o útero excisado foi colocado em um tubo Spitz de boca larga e fundo redondo de 25 mL, juntamente com 400 µL de PBS, no qual foi dissolvido antibiótico de ampicilina (1 mg/mL) seguido de esmagamento fino na forma de uma folha de medição 2 de mm de lado com uma tesoura Cooper.

O útero esmagado foi aspirado com uma seringa de 2,5 mL.

Uma pequena incisão foi adicionada na linha média dos camundongos receptores submetidos à anestesia por inalação da mesma maneira que durante a ovariectomia, o tecido uterino da seringa foi disperso na cavidade abdominal e a incisão foi suturada com sutura Monocril 3-0. Após o transplante do fragmento uterino, os camundongos receptores receberam subcutaneamente mais estrogênio por injeção subcutânea por 2 semanas (uma vez / semana). Os camundongos foram sacrificados e laparotomizados duas semanas após o transplante. As lesões do tecido endometrial ectópico (cístico) formadas na cavidade abdominal foram excisadas, evitando tanto quanto possíveis danos à mesma, seguido, respectivamente, pela medição do peso e volume da mesma. O volume das lesões císticas foi calculado usando V = (4/3) ߨb2A (b: diâmetro pequeno, A: diâmetro grande).

[119] Como mostrado na FIGURA 1, no caso do uso de camundongos IL-33KO tanto para o doador quanto para o receptor, o volume da lesão cística diminuiu significativamente em comparação com o caso do uso de camundongos do tipo selvagem. A adesão das lesões císticas nos camundongos IL-33 KO a tecidos como a cavidade abdominal foi inibida durante a excisão em comparação com as lesões císticas dos camundongos de controle. O número de vasos sanguíneos das lesões císticas dos camundongos IL-33 KO parecia ter diminuído em comparação com as lesões císticas dos camundongos de controle. Esse resultado indica que a IL-33 está envolvida no crescimento de lesões císticas e adesão a vários órgãos (e a adesão a vários órgãos é causa de dor), além da angiogênese em um modelo de endometriose, e que a inibição da IL-33 torna possível inibir o crescimento de lesões císticas e sua adesão a vários órgãos (dor), bem como inibir a angiogênese. Exemplo 2: Efeito de Administração de IL-33 em Modelo de Endometriose

[120] Um modelo de endometriose foi preparado de acordo com o método descrito no Exemplo 1 usando camundongos Balb/c fêmeas de 6 semanas de idade do tipo selvagem. O grupo de dose de IL-33 foi administrado por via intraperitoneal com proteína IL-33 humana recombinante (resíduo 112 ao resíduo 270) (Kondo, et al., Int. Immunol.,

2008, Vol. 20, p791) dissolvida com PBS a partir do momento de transplante a uma taxa de 100 ng / 200 µL / corpo por administração, três vezes por semana, durante 2 semanas, em um total de 6 administrações. Os camundongos foram sacrificados e laparotomizados duas semanas após o transplante, seguido da excisão das lesões císticas que se formaram na cavidade abdominal e medição do volume de cada lesão. Como mostrado na FIGURA 2, o volume das lesões císticas aumentou significativamente no grupo de dose de IL-33 em comparação com o grupo de dose média. Este resultado indica que a IL-33 está envolvida no crescimento de lesões císticas. Como a concentração de IL-33 aumenta na ascite e no soro de pacientes com endometriose (NPL2), um modelo de endometriose humano com dosagem de IL-33 é considerado um modelo de doença útil que reflete a patologia da endometriose. Exemplo 3: Antagonistas de IL-33

[121] Cinco tipos de anticorpos IL-33 humana (A10-1C04, A23- 1A05, A25-2C02, A25-3H04 e A26-1F02) juntamente com o sST2-Fc de camundongo, que é uma proteína de fusão do ST2 de camundongo e região constante de IgG1 humana, foram preparados com células CHO recombinantes (WO 2015/099175). As sequências de aminoácidos são mostradas na tabela abaixo e, quando a afinidade dos cinco tipos de anticorpos IL-33 humana para a proteína IL-33 humana (resíduo 112 ao resíduo 270) (ATGen, ILC070) foi medida com KinExA, os valores de Kd foram 100,3 pM para A10-1C04, 195,3 pM para A23-1A05, 700 fM para A25-2C02, 7,7 pM para A25-3H04 e 5,3 pM para A26-1F02. [Tabela 1] Antagonista de IL-33 Sequência de Cadeia Sequência de Cadeia leve Pesada A10-1C04 SEQ ID NO: 7 SEQ ID NO: 8 A23-1A05 SEQ ID NO: 9 SEQ ID NO: 10 A25-2C02 SEQ ID NO: 11 SEQ ID NO: 12

Antagonista de IL-33 Sequência de Cadeia Sequência de Cadeia leve Pesada A25-3H04 SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 14 A26-1F02 SEQ ID NO: 15 SEQ ID NO: 16 Camundongo sST2-Fc SEQ ID NO: 6 Exemplo 4: Efeito de Antagonista de IL-33 sST2-Fc no Crescimento de Tecido Endometrial Ectópico

[122] Como IL-33 está envolvida na proliferação de lesões císticas em um modelo de endometriose, foi indicado que a endometriose pode ser tratada com a inibição de IL-33. A endometriose foi, portanto, tratada com a administração de antagonista de IL-33. O sST2-Fc de camundongo preparado no Exemplo 3 foi usado para o antagonista de IL-33. O sST2-Fc de camundongo foi administrado por via intravenosa ao longo de 2 semanas a cada 3 dias à taxa de 20 mg/kg após o transplante de um fragmento uterino usando um modelo de endometriose em grupos de 6 camundongos, cada um preparado de acordo com o método indicado no Exemplo 1. Um controle Fc (Fc-G1 Recombinante Humano InVivoMab (Bio X Cell, Cat. Be0096) foi administrado para controlar camundongos em vez do camundongo sST2-Fc. Os camundongos foram sacrificados e laparotomizados após serem tratados com sST2-Fc de camundongo, as lesões císticas que se formaram na cavidade abdominal foram excisadas, e o grau de adesão das lesões císticas após a excisão, o volume das lesões císticas, e os vasos sanguíneos presentes nas lesões císticas foram analisados. Como mostrado na FIGURA 3, o volume das lesões císticas no grupo de doses de sST2-Fc de camundongo diminuiu significativamente em comparação com o grupo de doses de controle de Fc. Acompanhando essa diminuição no volume da lesão cística, a adesão de lesões císticas nos camundongos doseados com sST2-Fc de camundongo no peritônio e outro tecido foi inibida no momento da excisão em comparação com lesões císticas dos camundongos de controle. As lesões císticas nos camundongos doseados com sST2-Fc de camundongo demonstraram uma aparente diminuição no número de vasos sanguíneos em comparação com as lesões císticas dos camundongos de controle.

[123] Com base nos resultados acima, a endometriose foi capaz de ser tratada pela administração de sST2-Fc de camundongo, e o crescimento, a adesão (a adesão a vários órgãos é uma causa de dor) e a angiogênese do tecido endometrial ectópico da endometriose foram inibidos. Exemplo 5: Efeito de Antagonista de IL-33 sST2-Fc na Fibrose de Tecido Endometrial Ectópico

[124] As lesões císticas excisadas no Exemplo 4 foram fixadas com paraformaldeído seguido de incorporação em parafina e preparação de seções de parafina com uma espessura de 8 µm. O tecido fibrótico foi corado em azul usando uma solução de coloração G azul/laranja de anilina de Mallory (Muto Pure Chemicals) de acordo com o protocolo recomendado pela Muto Pure Chemicals. O grau de fibrose foi avaliado de acordo com a profundidade da cor azul da coloração azan com base em uma pontuação de 1 (claro) a 3 (escuro). Como mostrado na Tabela 2, a fibrose das lesões císticas foi inibida no grupo de doses de sST2-Fc de camundongo em comparação com o grupo de doses de controle de Fc. FIGURA 4 representa imagens coradas médias em cada grupo (número individual D do grupo de dose Fc de controle e número individual C do grupo de dose de sST2-Fc de camundongo). [Tabela 2]

A B C D E F G Grupo de Dose Fc de 2 3 3 2 2 3 2,5 Controle Grupo de Dose sST2-Fc 1 2 1 3 3 1 1,8 de camundongo

[125] Com base nos resultados acima, a endometriose pode ser tratada pela administração de sST2-Fc de camundongo e a fibrose do tecido endometrial ectópico da endometriose pode ser inibida. Exemplo 6: Efeito de Anticorpo Monoclonal Anti-IL-33 no Crescimento de Tecido Endometrial Ectópico

[126] Foi demonstrado que as lesões císticas aumentam devido à administração de IL-33 humana recombinante em um modelo de endometriose preparado em camundongos IL-33 KO (Exemplo 2). O efeito dos anticorpos monoclonais anti-IL-33 humana preparados no Exemplo 3 (A10-1C04, A23-1A05, A25-2C02, A25-3H04 e A26-1F02) foi investigado usando este modelo. Anticorpo humano anti-IL-33 foi administrado por via intravenosa a cada semana na taxa de 10 mg/kg após o transplante de um fragmento uterino usando o modelo de endometriose doseado por IL-33 preparado de acordo com o método indicado no Exemplo 2. Anticorpo de controle (grau PC de controle isótipo IgG1 totalmente humano (Eureka, Cat. No. ET901)) foi administrado aos camundongos de um grupo de controle em vez de anticorpo humano anti-IL-33. Os camundongos foram sacrificados e laparotomizados após o tratamento com o anticorpo humano anti-IL-33, as lesões císticas formadas na cavidade abdominal foram excisadas e o grau de adesão das lesões císticas após a excisão, o volume das lesões císticas e os vasos sanguíneos presentes nas lesões císticas foram analisados. Como mostrado na FIGURA 5 (mostrando os resultados de A10-1C04), o volume das lesões císticas aumentou no grupo de dose de IL-33 humana em comparação com o grupo de dose de PBS, e o volume das lesões císticas aumentou significativamente mesmo após a administração do anticorpo de controle. Aumentos no volume das lesões císticas foram inibidos significativamente pela administração de anticorpo anti-IL-33. Acompanhando uma diminuição no volume das lesões císticas, a adesão de lesões císticas nos camundongos tratados com anticorpo anti-IL-33 ao peritônio e outro tecido foi inibida no momento da excisão em comparação com as lesões císticas dos camundongos de controle. As lesões císticas nos camundongos tratados com sST2-Fc de camundongo demonstraram uma aparente diminuição no número de vasos sanguíneos em comparação com as lesões císticas dos camundongos controlados com anticorpos. Lesões císticas em camundongos doseados com anti-IL-33 demonstraram uma diminuição aparente no número de vasos sanguíneos em comparação com lesões císticas dos camundongos de controle.

[127] Com base nos resultados acima, a endometriose pode ser tratada pela administração de anticorpo anti-IL-33 e o crescimento, adesão (adesão a vários órgãos é causa de dor) e angiogênese do tecido endometrial ectópico da endometriose são capazes de ser inibido. Exemplo 7: Efeito de Anticorpo Monoclonal Anti-IL-33 na Proliferação Celular de Tecido Endometrial Ectópico

[128] As lesões císticas excisadas no Exemplo 6 foram fixadas com paraformaldeído seguido de incorporação em parafina e preparação de seções de parafina tendo uma espessura de 8 µm. A imunoistoquímica do marcador de proliferação celular, antígeno Ki-67, foi realizada usando o anticorpo anti-Ki-67 ("SP6", Abcam, ab16667) e Dako Envision + Dual Link (Agilent, K4063), de acordo com o protocolo recomendado pela Abcam a fim de investigar a proliferação de lesões císticas. A taxa positiva de Ki-67 nos núcleos celulares por um campo microscópico de uma seção foi calculada. A taxa positiva de Ki-67 em três locais por slide também foi calculada e a média foi determinada. Como mostrado na FIGURA 6 (indicando os resultados para A10-1C04), a administração de IL-33 humana causa um aumento na porcentagem de células positivas para Ki-67, servindo como marcador de proliferação celular nas células de lesões císticas associadas à endometriose em comparação com o grupo de dose PBS e, embora o aumento na porcentagem de células positivas de Ki-67 tenha aumentado mesmo após a administração de anticorpo de controle, esse aumento foi inibido pela administração de anticorpo anti-IL-33.

[129] Com base nos resultados acima, a endometriose pode ser tratada pela administração de anticorpo anti-IL-33 e a proliferação celular do tecido endometrial ectópico da endometriose pode ser inibida. Exemplo 8: Efeito de Anticorpo Monoclonal Anti-IL-33 na Dor Associada à Endometriose

[130] A endometriose e a adenomiose uterina podem ser tratadas através da administração de anticorpo monoclonal anti-IL-33 a pacientes com endometriose e adenomiose uterina. Podem ser aliviadas dores como dor pélvica, dor dismenorreal ou coital associada à endometriose e adenomiose uterina. A QOL relacionada à dificuldade de caminhar e à dor no coito associada à endometriose e adenomiose uterina pode ser melhorada.

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

[131] O agente terapêutico da presente invenção tendo um antagonista anti-IL-33 como ingrediente ativo do mesmo pode ser usado como uma composição farmacêutica para tratar, prevenir ou aliviar endometriose ou adenomiose uterina.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina, caracterizado pelo fato de que compreende um antagonista de IL-33 como ingrediente ativo.

2. Agente terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido agente alivia a dor da endometriose ou da adenomiose uterina.

3. Agente terapêutico, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o referido agente inibe o crescimento de tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na endometriose ou na adenomiose uterina.

4. Agente terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o referido agente inibe a angiogênese no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) da endometriose ou adenomiose uterina.

5. Agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o referido agente inibe a fibrose ou a proliferação celular no tecido endometrial ectópico (incluindo cistos).

6. Agente terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o referido agente inibe a adesão do tecido endometrial ectópico (incluindo cistos) na endometriose a vários órgãos.

7. Agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o antagonista de IL-33 é um anticorpo anti-IL-33, anticorpo de receptor anti-IL-33 ou receptor de IL-33 solúvel.

8. Agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o anticorpo IL-33 é A10-1C04, A23-1A05, A25-2C02, A25-3H04 ou A26-1F02.

9. Agente terapêutico para endometriose ou adenomiose uterina, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o receptor de IL-33 solúvel é sST2-Fc.