BR112020000180A2 - agonista do receptor fxr - Google Patents

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BR112020000180A2
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alkoxy
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Wenkui Ken Fang
Bo Chen
Tingzhong Wang
Jing Cheng
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Xuanzhu (Hainan) Biopharmaceutical Co., Ltd.
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Abstract

A presente invenção pertence à área técnica dos produtos farmacêuticos, e refere-se particularmente a um composto de fórmula (I), seu sal farmaceuticamente aceitável, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1, X1, X2, M, Ar, anel A, anel B e L são como definido na especificação. A presente invenção também refere-se a: um método de preparação para o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster; uma composição farmacêutica e formulação farmacêutica contendo o composto, o sal farmaceuticamente aceitável, o éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster; e uma utilização do composto, do sal farmaceuticamente aceitável, do éster ou do estereoisômero do composto, o sal ou o éster na preparação de um medicamento para tratamento e/ou prevenção de doenças mediadas por FXR.

Description

“AGONISTA DO RECEPTOR FXR” CAMPO DA INVENÇÃO
[001]A presente invenção pertence à área técnica da farmacêutica e se relaciona particularmente a um agonista FXR, um método de preparação do agonista FXR, uma formulação farmacêutica contendo o agonista FXR e um uso do agonista FXR.
CONTEXTO DA INVENÇÃO
[002]O receptor farnesoide X (FXR) é um membro da família de receptores nucleares de fatores de transcrição ativados por ligantes e tem uma estrutura típica de receptores nucleares, a saber, um domínio de ligação ao DNA (DBD) amino- terminal altamente conservado, um domínio de ligação ao ligante (LBD) do carboxiterminal, um domínio da função de ativação (AF1) transcricional independente do ligante do amino-terminal, um domínio da função de ativação transcricional dependente do ligante do carboxiterminal (AF2) e uma região dobradiça. O FXR e um receptor retinoide X (RXR) podem formar um heterodímero. Depois que um ligante se liga à região LBD do FXR, a conformação do FXR pode ser alterada e o domínio de ligação ao DNA do FXR liga-se ao elemento de resposta ao FXR (IR-1) de um promotor de gene alvo para liberar correpressores (por exemplo, NCOR) e recrutar coativadores, desempenhando, assim, o papel de regulação transcricional.
[003]O FXR é expresso em vários tecidos e órgãos, incluindo tecido adiposo, fígado, trato gastrointestinal e rins; destes, o fígado tem a expressão de FXR mais abundante. A via de sinalização do FXR pode regular a expressão de vários genes a jusante, como BSEP, SHP, CYP7A1, FGFR4, OSTα/β e SREBP-1C, de modo a regular diversas vias metabólicas, como o metabolismo de triglicerídeos, colesterol, açúcar no sangue e ácido cólico para estabilidade de energia do metabolismo, e, portanto, o FXR tem a função de tratar cânceres, doenças hepáticas gordurosas não alcoólicas (DHGNA), distúrbios metabólicos, inflamações e outras doenças. Como principal regulador da homeostase do ácido cólico, o FXR pode regular o metabolismo do ácido cólico ao inibir sua síntese, ligação e transporte.
[004]Alguns compostos naturais de ácido cólico, como o ácido quenodesoxicólico (CDCA), ácido desoxicólico (DCA) e ácido litocólico (LCA), bem como seus conjugados de taurina e glicina, podem ativar o FXR. Além de compostos naturais, os agonistas FXR atualmente desenvolvidos no mundo podem ser divididos em duas categorias principais. Uma categoria é composta por esteroides representados pelo ácido obeticólico (OCA) da Intercept, que foi aprovado em maio de 2016 para o tratamento de cirrose colangética primária e doença hepática gordurosa não alcoólica e está em Fase III de testes clínicos. No entanto, prurido e outras reações adversas foram observadas nos estudos clínicos de esteroides. A outra categoria são as novas entidades moleculares, incluindo compostos desenvolvidos inicialmente, como o GW4604 (WO2000/037077). Enquanto o GW4604 tem forte atividade agonista, ele apresenta fotolabilidade e baixa biodisponibilidade. O PX-104 (WO2011020615A1) da Phenex foi transferido para a Gilead e está em Fase II de testes clínicos.
GW4064PX-104
[005]Além disso, o GS-9674, desenvolvido pela Gilead, e o LJN-452, desenvolvido pela Novartis, cujas estruturas são desconhecidas, estão em Fase II de testes clínicos, e suas indicações incluem cirrose colangética primária, colangite esclerosante primária e doença hepática gordurosa não alcoólica.
[006]Uma categoria de agonistas FXR (ver solicitação de patente WO2012087519A1) foi revelada por Tully et al e, especificamente os compostos 30- 70, foram divulgados.
Composto 30-70
[007]Atualmente, é de grande relevância clínica o desenvolvimento de novos agonistas FXR que tenham alta eficiência, baixa toxicidade e boa estabilidade, enriquecendo, assim, as variedades de fármacos.
RESUMO DA INVENÇÃO
[008]A presente invenção refere-se a um composto com uma nova entidade molecular, que pode efetivamente agitar o FXR, aumentar os níveis de expressão dos genes BSEP e SHP e, ao mesmo tempo, suprimir eficientemente a expressão do gene CYP7A1.
[009]Em um aspecto, a presente invenção fornece um composto na forma de um agonista FXR.
[010]A presente invenção fornece um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é selecionado a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, hidróxi C1-6 alquila, amino C1-6 alquila, alcóxi C1-6, alquilamina C1-6, alquilcarbonila C1-6, alcóxi C1-6 alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros alcóxi C1-6, heterocíclila de 3-8 membros, heterocíclila de 3-8 membros alquila C1-6, ou heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6;
X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NR2, O, S ou CR3R4; R2, R3 e R4 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, alcóxi C1-6 ou alquilamina C1-6;
M é selecionado a partir de alquileno C1-6, em que um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-6 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, CO, S, SO ou SO2; o anel A é selecionado entre ciclila de 7 membros em ponte ou heterocíclila de 7 membros em ponte;
o anel B é selecionado a partir de um grupo que consiste em arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-10 membros, heterocíclila de 3-14 membros e cicloalquila de 3-8 membros que são opcionalmente substituídas por um Q1 ou mais;
cada Q1 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, hidróxi C1-6 alquila,
amino C1-6 alquila, alcóxi C1-6, alquilamina C1-6, alquilcarbonila C1-6, alquilsulfonila C1-6, alquilsulfinila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-
6, cicloalquila de 3-8 membros alcóxi C1-6, heterocíclila de 3-8 membros alquila C1-6, ou heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6;
L está ausente ou é alquileno C1-6, em que um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-6 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH,
O, CO, S, SO ou SO2;
Ar é selecionado a partir de um grupo que consiste em arila de 6-10 membros,
arila de 6-10 membros alquila C1-6, arila de 6-10 membros alcóxi C1-6, heteroarila de
5-10 membros, heteroarila de 5-10 membros alquila C1-6, heteroarila de 5-10 membros alcóxi C1-6, cicloalquila de 3-8 membros e heterocíclila de 3-8 membros que são opcionalmente substituídas por um ou mais Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, hidróxi C1-6 alquila, amino C1-6 alquila, alcóxi C1-6, alcóxi C1-6 alquila, alquilamina C1-6, alquilcarbonila C1-6, alquilsulfonila C1-6, alquilsulfinila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros alcóxi C1-6, heterocíclila de 3-8 membros, heterocíclila de 3-8 membros alquila C1-6, ou heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6.
[011]Em algumas formas de realização, R1 é selecionado a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi C1-4, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1- 4, alcóxi C1-4 alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3- 6 membros alcóxi C1-4.
[012]Em algumas formas de realização, X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NR2, O, S ou CR3R4; R2, R3 e R4 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, alcóxi C1-4 ou alquilamina C1-4.
[013]Em algumas formas de realização, M é alquileno C1-4, um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-4 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, CO, S, SO ou SO2.
[014]Em algumas formas de realização, o anel A é selecionado entre ciclila de 7 membros em ponte ou heterocíclila nitrogenada de 7 membros em ponte.
[015]Em algumas formas de realização, o anel B é selecionado entre heteroarila fundida de 8-10 membros e heterocíclila fundida de 7-14 membros que são opcionalmente substituídas por 1 a 2 Q1 e contêm 1 a 3 heteroátomos ou grupos, e o heteroátomo ou grupo é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, S, SO ou SO2.
[016]Em algumas formas de realização, cada Q1 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi C1-4, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alquilsulfonila C1-4, alquilsulfinila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4.
[017]Em algumas formas de realização, L está ausente ou é alquileno C1-4, em que um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-4 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em NH, O, CO, S, SO ou SO2.
[018]Em algumas formas de realização, Ar é selecionado a partir de um grupo que consiste em monocicloarila de 6-8 membros, arila fundida de 8-10 membros, monocicloarila de 6-8 membros C1-4 alquila, arila fundida de 8-10 membros C1-4 alquila, monocicloarila de 6-8 membros C1-4 alcóxi, arila fundida de 8-10 membros C1-4 alcóxi, monociclo-heteroarila de 5-7 membros, heteroarila fundida de 8-10 membros, monociclo-heteroarila de 5-7 membros C1-4 alquila, heteroarila fundida de 8-10 membros C1-4 alquila, monociclo-heteroarila de 5-7 membros C1-4 alcóxi, heteroarila fundida de 8-10 membros C1-4 alcóxi, cicloalquila de 3-8 membros e heterocíclila de 3- 8 membros, que são opcionalmente substituídas por 1 a 3 Q2.
[019]Em algumas formas de realização cada Q2 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina,
ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi C1-4, alcóxi C1-4 alquila, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alquilsulfonila C1-4, alquilsulfinila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4, ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4.
[020]A presente invenção fornece ainda um composto de fórmula geral (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1, X1, X2, Q1 e Ar são como descrito em qualquer uma das formas de realização mencionadas acima.
[021]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I) ou (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é selecionado a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi C1-4, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alcóxi C1-4 alquila C1-4, cicloalquila de 3-4 membros, cicloalquila de 3-4 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-4 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-4 membros, mono-heterocíclila de 3-4 membros alquila C1- 4 ou mono-heterocíclila de 3-4 membros alcóxi C1-4.
[022]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I) ou (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é selecionado de um grupo que consiste em halogênio, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, trifluoroetila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, metilamina, etilamina, metoximetila, metoxietila, etoximetila, ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutilmetila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila ou azaciclobutila.
[023]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I) ou (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é selecionado de um grupo que consiste em ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutilmetila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila ou azaciclobutila; e preferencialmente, R1 é selecionado entre ciclopropila ou ciclobutila.
[024]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I) ou (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NR2, O ou S; R2 é selecionado de um grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amina, metila, etila, propila, isopropila ou trifluorometila; preferencialmente, X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NH, O e S; e mais preferencialmente, X1 e X2 são ambos O.
[025]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que M é selecionado de um grupo que consiste em -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-CH2- CH2-, -CH2-NH-, -CH2-CH2-O- ou -CH2-NH-CO-; e preferencialmente, M é selecionado de um grupo que consiste em -CH2-, - CH2-CH2- ou -CH2-CH2-CH2-.
[026]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que o anel A é selecionado entre ciclila saturada de 7 membros em ponte ou heterocíclila nitrogenada saturada de 7 membros em ponte, e, se o anel A for uma heterocíclila nitrogenada saturada em ponte, o anel A será preferencialmente ligado a L ou ao anel B por um átomo de nitrogênio do anel.
[027]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que o anel A é selecionado a partir de uma ciclila saturada de 7 membros em ponte ou heterocíclila saturada de 7 membros em ponte contendo 1 átomo de nitrogênio e 0 a 1 heteroátomo ou grupo adicional, o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, S, CO, SO ou SO2, e, quando o anel A é uma heterocíclila saturada de 7 membros em ponte contendo um átomo de nitrogênio e 0 a 1 heteroátomo ou grupo adicional, o anel A é preferencialmente ligado a L ou ao anel B por um átomo de nitrogênio do anel; preferencialmente, o anel A é selecionado entre os grupos a seguir: , , , , , , ,
, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , e , e quando o anel A é selecionado de heterocíclilas nitrogenadas saturadas entre esses grupos, o anel A é preferencialmente ligado a L ou ao anel B por um átomo de nitrogênio do anel; mais preferencialmente, o anel A é selecionado entre os grupos a seguir: , , , , , , , , , , , , , e , e o anel A é preferencialmente ligado a L ou ao anel B por um átomo de nitrogênio do anel; mais preferencialmente, o anel A é selecionado entre os grupos a seguir: , e , e o anel A é preferencialmente ligado a L ou ao anel B por um átomo de nitrogênio do anel.
[028]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que o anel B é heteroarila fundida de 9-10 membros que contém 1 a 2 heteroátomos ou grupos e é opcionalmente substituída por 1 a 2 Q1, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado independentemente de um grupo que consiste em N, NH, O, S, SO ou SO2; o anel B é preferencialmente ligado a L ou ao anel A por um átomo de carbono do anel; cada Q1 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, alcóxi C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4; L está ausente ou é alquileno C1-2, em que um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-2 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em NH, O, S ou CO.
[029]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que o anel B é selecionado entre os grupos a seguir, substituídos opcionalmente por 1 Q1: , , , , , ,
N N , S , e ; o anel B é preferencialmente ligado a L ou ao anel A por um átomo de carbono do anel; preferencialmente, o anel B é selecionado entre os grupos a seguir, substituídos opcionalmente por 1 Q1: , e ; o anel B é preferencialmente ligado a L ou ao anel A por um átomo de carbono do anel;
Q1 é selecionado de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, hidroxila, amina, ciano, metila, etila, propila, isopropila, fluorometila, difluorometila, trifluorometila, 1-fluoroetila, 2-fluoroetila, 1,1-difluoroetila, 1,2-difluoroetila, 2,2- difluoroetila, 2,2,2-trifluoroetila, 3,3,3-trifluoropropila, 1-trifluorometiletila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, ciclopentila, ciclo-hexila, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila, azaciclobutila, tetraidrofurila, pirrolidila, imidazolidinila, pirazolidinila, tiazolidinila, tetraidropiranila, tetraidropiridinila, piperazinila ou morfolinila; preferencialmente, Q1 é selecionado de um grupo que consiste em hidrogênio, flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi; mais preferencialmente, Q1 está na posição meta do grupo carboxila na estrutura da fórmula geral; e L está ausente.
[030]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que Q1 é selecionado de um grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, alcóxi C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4; preferencialmente, Q1 é selecionado de um grupo que consiste em hidrogênio, flúor, cloro, bromo, hidroxila, amina, ciano, metila, etila, propila, isopropila, fluorometila, difluorometila, trifluorometila, 1-fluoroetila, 2-fluoroetila, 1,1-difluoroetila, 1,2- difluoroetila, 2,2-difluoroetila, 2,2,2-trifluoroetila, 3,3,3-trifluoropropila, 1-
trifluorometiletila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, ciclopentila, ciclo-hexila, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila, azaciclobutila, tetraidrofurila, pirrolidila, imidazolidinila, pirazolidinila, tiazolidinila, tetraidropiranila, tetraidropiridinila, piperazinila ou morfolinila; mais preferencialmente, Q1 é selecionado de um grupo que consiste em hidrogênio, flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi; e mais preferencialmente, o Q1 está na posição meta do grupo carboxila na estrutura da fórmula geral.
[031]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I) ou (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, fenila C1-4 alquila, fenila C1-4 alcóxi, monociclo-heteroarila de 5-6 membros, monociclo-heteroarila de 5-6 membros C1-4 alquila e monociclo-heteroarila de 5-6 membros C1-4 alcóxi que são opcionalmente substituídos por 1 a 2 Q2, e cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, C1-4 alquila, haloC1-4 alquila, hidróxiC1-4 alquila, aminoC1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 alcóxi C1-4 alquila ou C1-4 alquilamina; e, preferencialmente, Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, fenilmetila, feniletila, fenilmetóxi, furila, pirrila, tienila, pirazolila, imidazolila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2, e cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, hidroxila, amina, ciano, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, trifluoroetila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, metilamina, etilamina, metoximetila, metoxietila ou etoximetila.
[032]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I) ou (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que Ar é selecionado entre fenila e monociclo-heteroarila de 6 membros, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; preferencialmente, Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; em que cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, hidroxila, amina, ciano, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, trifluoroetila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, metilamina, etilamina, metoximetila, metoxietila ou etoximetila, e preferencialmente, cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, metóxi ou etóxi.
[033]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é selecionado entre ciclopropila ou ciclobutila; X1 e X2 são ambos O; Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; em que cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, metóxi ou etóxi; e Q1 é selecionado de um grupo que consiste em hidrogênio, flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi.
[034]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é selecionado de um grupo que consiste em ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutilmetila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila ou azaciclobutila; X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NH, O ou S; Q1 é selecionado de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi; Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em metila, etila, propila, isopropila, etóxi ou trifluorometóxi.
[035]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é ciclopropila; X1 e X2 são ambos O; Ar é fenila substituída opcionalmente por 1 a 2 Q2; cada Q2 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em cloro, metóxi e trifluorometóxi; e Q1 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, flúor, metila e metóxi.
[036]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é selecionado de um grupo que consiste em ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutilmetila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila ou azaciclobutila; X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NH, O ou S; M é -CH2-; o anel A é ; o anel B é selecionado entre os seguintes grupos: , e ; L está ausente; Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, metóxi, etóxi, trifluorometila ou trifluorometóxi.
[037]Em algumas formas de realização, um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é ciclopropila; X1 e X2 são ambos O; M é -CH2-; o anel A é ;
o anel B é ; L está ausente; Ar é fenila substituída opcionalmente por 1 a 2 Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente entre cloro e metóxi.
[038]Qualquer combinação pode ser alcançada entre as formas de realização mencionadas acima e entre as características envolvidas nas formas de realização, e todas as soluções técnicas resultantes são enumeradas aqui e pertencem às soluções técnicas da presente invenção.
[039]Alguns compostos da presente invenção são os seguintes: Nº Fórmula Estrutural Nº Fórmula Estrutural 1 2 2- 2-1 2 3 4
Nº Fórmula Estrutural Nº Fórmula Estrutural 5 6 7 8
[040]Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica contendo um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster.
[041]Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma formulação farmacêutica que contém um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, além de um ou mais veículos e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, e a formulação farmacêutica pode ser de qualquer forma de dosagem farmaceuticamente aceitável. A formulação farmacêutica pode ser administrada a um paciente necessitado de tal tratamento via administração oral, parentérica, retal ou pulmonar.
Para administração oral, a formulação farmacêutica pode ser preparada em uma formulação sólida convencional, como comprimido, cápsula, pílula, granulado, ou pode ser preparada em uma formulação líquida oral, como solução oral, suspensão oral ou xarope. Quando a formulação farmacêutica é preparada em uma formulação oral, podem-se adicionar filler, aglutinante, desintegrante, lubrificante etc adequados.
Para administração parentérica, a formulação farmacêutica pode ser preparada em uma formulação de injeção, incluindo injeção, pó estéril para injeção e solução concentrada para injeção. A formulação de injeção pode ser preparada por um método convencional conhecido na área farmacêutica e, durante a preparação, aditivos não podem ser adicionados ou aditivos adequados podem ser adicionados de acordo com as propriedades do fármaco. Para administração retal, a formulação farmacêutica pode ser preparada em um supositório e assim por diante. Para administração pulmonar, a formulação farmacêutica pode ser preparada em um inalante ou spray e assim por diante.
[042]Em outro aspecto, a presente invenção refere-se ainda à utilização de um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, na preparação de medicamentos para prevenção e/ou tratamento de doenças mediadas por FXR e doenças relacionadas em sujeitos.
[043]A presente invenção proporciona, ainda, um método para o tratamento e/ou prevenção de doenças mediadas por FXR e doenças relacionadas em sujeitos, e os método compreende a administração a um sujeito que precisa do mesmo em uma quantidade terapeuticamente e/ou quantidade preventivamente eficaz do composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, na presente invenção ou uma composição farmacêutica na presente invenção.
[044]Como aqui utilizado, o termo "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade suficiente para alcançar total ou pelo menos parcialmente o efeito desejado. Por exemplo, uma quantidade preventivamente eficaz para uma doença refere-se a uma quantidade suficiente para prevenir, deter ou atrasar a ocorrência de uma doença; e uma quantidade terapeuticamente eficaz para uma doença refere-se a uma quantidade suficiente para curar ou pelo menos parcialmente deter uma doença e suas complicações em um paciente que sofre da doença. Determinar tal quantidade eficaz está completamente dentro da capacidade dos especialistas na técnica. Por exemplo, uma quantidade eficaz para tratamento depende da gravidade de uma doença a ser tratada, do estado geral do sistema imunológico de um paciente, do perfil do paciente (como idade, peso corporal e sexo), do método de administração do medicamento, outras terapias administradas simultaneamente e assim por diante.
[045]Em outro aspecto, a presente invenção refere-se ainda à utilização de um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, para prevenção e/ou tratamento de doenças mediadas por FXR e doenças relacionadas em sujeitos.
[046]Na presente invenção, as doenças mediadas por FXR e doenças relacionadas incluem, entre outros: (1) distúrbios do metabolismo lipídico ou lipoproteico, como aterosclerose, distúrbio do metabolismo dos ácidos biliares, colangite esclerosante primária, cálculo de colesterol, doenças relacionadas à fibrose, gordura no fígado (doença hepática gordurosa alcoólica, doença hepática gordurosa não alcoólica etc.), cirrose (cirrose biliar primária, cirrose colangética primária etc.), hepatite (hepatite crônica, hepatite não viral, esteato-hepatite alcoólica, esteato-hepatite não alcoólica etc.), insuficiência hepática, colestase (colestase intra-hepática benigna, colestase intra-hepática familiar progressiva, colestase extra-hepática etc.), colelitíase, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, trombo etc., insuficiência hepática aguda, colelitíase e/ou doenças inflamatórias intestinais.
(2) complicações clínicas do diabetes tipo I ou tipo II, incluindo nefropatia diabética, neuropatia diabética, retinopatia diabética e outros resultados observados de diabetes manifesto crônico clínico.
(3) doenças hiperproliferativas, incluindo doenças hiperproliferativas não malignas e doenças hiperproliferativas malignas, como carcinoma hepatocelular, adenoma colônico, polipose, adenocarcinoma colônico, câncer de mama, câncer de pâncreas, carcinoma de esôfago e outras formas de doenças neoplásicas gastrointestinais e hepáticas.
[047]Na presente invenção, sujeitos ou pacientes podem ser quaisquer animais e, de preferência, mamíferos, como bovinos, equídeos, suídeos, canídeos, felídeos, roedores e primatas. Em particular, os sujeitos são preferencialmente humanos.
[048]A presente invenção também fornece um kit que é usado para agitar o FXR nas células, aumentar a expressão de BSEP e a expressão de SHP nas células e/ou suprimir a expressão de CYP7A1 nas células. O kit compreende o composto da presente invenção, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster e, opcionalmente, inclui um manual.
[049]A presente invenção também fornece uma utilização do composto da presente invenção, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, na preparação de uma formulação para agitar o FXR em células, aumentando a expressão de BSEP e expressão de SHP nas células e/ou suprimindo a expressão de CYP7A1 nas células. Em algumas formas de realização, a formulação é usada para administração in vivo ou in vitro. Por exemplo, a formulação pode ser administrada no corpo de um sujeito (por exemplo, um mamífero, como bovinos, equídeos, suídeos, canídeos, felídeos, roedores e primatas (como humanos)); ou a formulação pode ser administrada a células in vitro (por exemplo, linhas celulares ou células derivadas de um sujeito).
[050]A presente invenção também fornece um método para agitar FXR nas células, aumentando a expressão de BSEP e expressão de PCH em células e/ou suprimindo a expressão de CYP7A1 nas células, e o método compreende a administração às células de uma quantidade eficaz do composto da presente invenção, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster. Em algumas formas de realização, o método é adotado in vivo, por exemplo, as células são células in vivo de um sujeito (por exemplo, um mamífero, como bovinos, equídeos, suídeos, canídeos, felinos, roedores e primatas (como um humano)); ou o método é adotado in vitro, por exemplo, as células são células in vitro (por exemplo, linhas celulares ou células derivadas de um sujeito).
[051]A presente invenção também fornece o composto da presente invenção, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, usado para agitar o FXR em células, aumentando a expressão de BSEP e expressão de SHP nas células e/ou suprimindo a expressão de CYP7A1 nas células.
[052]Em algumas formas de realização, as células são células derivadas do fígado (por exemplo, células hepáticas derivadas de um sujeito). Em algumas formas de realização, as células são células de câncer de fígado ou hepatócitos. Em algumas formas de realização, as células são células HepG2 ou células AML12.
[053]Nas especificações e reivindicações da presente solicitação, todos os compostos são nomeados de acordo com suas fórmulas químicas estruturais e, se um nome de composto não for consistente com sua fórmula química estrutural para o mesmo composto, a fórmula química estrutural ou uma equação química prevalecerá. Definições de Termos
[054]Na presente solicitação, a menos que especificado de outra forma, os termos científicos e tecnológicos aqui utilizados têm significados geralmente entendidos pelos especialistas na técnica. No entanto, definições e explicações para alguns dos termos relacionados são fornecidas abaixo para melhor compreensão da presente invenção. Além disso, se as definições e explicações dos termos fornecidos na presente solicitação não forem consistentes com os significados geralmente entendidos pelos especialistas na técnica, as definições e explicações dos termos fornecidos na presente solicitação deverão prevalecer.
[055]"Halo-", descrito na presente invenção, refere-se a ser substituído por um "átomo halogênio", e o "átomo halogênio", descrito na presente invenção, inclui átomos de flúor, cloro, bromo e iodo.
[056]"Alquila C1-6", descrito na presente invenção, refere-se a um alquila linear ou ramificada que contém 1 a 6 átomos de carbono, incluindo, por exemplo, "alquila C1-5", " alquila C1-4", "alquila C1-3", "alquila C1-2", "alquila C2-4", "alquila C2-3" e "alquila C3-4", e exemplos e específicos incluem, entre outros, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, n-pentila, isopentila, 2-metilbutila, neo-pentila, 1-etilpropila, n-hexila, iso-hexila, 3-metilpentila, 2-metilpentila, 1-metilpentila, 3,3- dimetilbutila, 2,2-dimetilbutila, 1,1-dimetilbutila, 1,2-dimetilbutila, 1,3-dimetilbutila, 2,3- dimetilbutila, 2-etilbutila, 1,2-dimetilpropila etc. "Alquila C1-4", descrito na presente invenção, refere-se a um exemplo específico contendo 1 a 4 átomos de carbono para o alquila C1-6.
[057]"HaloC1-6 alquila", descrito na presente invenção, refere-se a um grupo derivado da substituição de um ou mais átomos de hidrogênio em um alquila C1-6 por um ou mais átomos de halogênio e o "átomo de halogênio" e o "alquila C1-6" são como definidos acima. "HaloC1-4 alquila", descrito na presente invenção, refere-se a um exemplo específico, contendo 1 a 4 átomos de carbono para a haloC1-6 alquila.
[058]"HidróxiC1-6 alquila", descrito na presente invenção, refere-se a um grupo derivado da substituição de um ou mais átomos de hidrogênio em um alquila C1-6, por uma ou mais hidroxilas, e o "alquila C1-6" é como definido acima. "HidróxiC1-4 alquila", descrito na presente invenção, refere-se a um exemplo específico, contendo 1 a 4 átomos de carbono para o hidróxiC1-6 alquila.
[059]"AminoC1-6 alquila", descrito na presente invenção, refere-se a um grupo derivado da substituição de um ou mais átomos de hidrogênio em um alquila C1-6 por um ou mais grupos amino e o "alquila C1-6" é como definido acima. "AminoC1-4 alquila",
descrito na presente invenção, refere-se a um exemplo específico, contendo 1 a 4 átomos de carbono para o aminoC1-6 alquila.
[060]"C1-6 alcóxi, C1-6 alquilamina, C1-6 alquilcarbonila, C1-6 alquilsulfonila e C1- 6 alquilsulfinila" descritos na presente invenção referem-se a grupos que têm alquila C1-6-O-, alquila C1-6-NH-, alquila C1-6 -C(O)-, alquila C1-6-S(O)2- e alquila C1-6-S(O)-, em que o "alquila C1-6" é como definido acima. "Alcóxi C1-4 alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alquilsulfonila C1-4 e alquilsulfinila C1-4" descritos na presente invenção referem-se a exemplos específicos que contêm 1 a 4 átomos de carbono nos grupos alquila para os exemplos acima.
[061]"Alcóxi C1-6 alquila C1-6", descrito na presente invenção, refere-se a um grupo derivado da substituição de um ou mais átomos de hidrogênio em um alquila C1-6 por um ou mais grupos alcóxi C1-6 e o "alquila C1-6" é como definido acima. "Alcóxi C1-4 alquila C1-4", descrito na presente invenção, refere-se a um exemplo específico, contendo 1 a 4 átomos de carbono para o alcóxi C1-6 alquila C1-6.
[062]"CR3R4", descrito na presente invenção, refere-se a um grupo formado pela substituição de dois átomos de hidrogênio de um grupo metileno por R3 e R4, respectivamente, e a forma de ligação específica é como .
[063]"Alquileno C1-6", descrito na presente invenção, refere-se a um grupo derivado da remoção de dois átomos de hidrogênio em átomos de carbono diferentes de um grupo alcano linear contendo 1 a 6 átomos de carbono, incluindo "alquileno C1- 5", "alquileno C1-4", "alquileno C1-3" e "alquileno C1-2" e exemplos específicos incluem, entre outros, -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, - CH2CH2CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2CH2CH2- etc.
[064]"Qualquer um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-6 é opcionalmente reposto por um heteroátomo ou um grupo", descrito na presente invenção, significa que qualquer um ou mais átomos de carbono no "alquileno C1-6" pode ser opcionalmente reposto por um ou mais heteroátomos ou grupos, ou seja, os átomos de carbono no alquileno C1-6 não podem ser repostos por qualquer heteroátomo ou grupo, um átomo de carbono no alquileno C1-6 pode ser reposto por um heteroátomo ou um grupo ou quaisquer dois átomos de carbono no alquileno C1-6 podem ser repostos por dois heteroátomos ou grupos iguais ou diferentes, ou quaisquer átomos de carbono múltiplos no alquileno C1-6 podem ser repostos pelos heteroátomos múltiplos correspondentes ou grupos iguais ou diferentes; e o heteroátomo ou grupo selecionado de um grupo que consiste em N, NH, O, CO, S, SO ou SO2.
[065]"Cicloalquila de 3-8 membros", descrito na presente invenção, refere-se a um grupo alquila monocíclico saturado que contém 3 a 8 átomos de carbono, incluindo, por exemplo, "cicloalquila de 3-6 membros", "cicloalquila de 3-5 membros", "cicloalquila de 3-4 membros", "cicloalquila de 4-5 membros", "cicloalquila de 4-6 membros", "cicloalquila de 4-7 membros", "cicloalquila de 4-8 membros" etc.
Exemplos específicos incluem, entre outros, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo- hexila, ciclo-heptila, ciclo-octila e semelhantes. "Cicloalquila de 3-6 membros" refere- se a um alquila cíclico saturado contendo 3 a 6 átomos de carbono. "Cicloalquila de 3-4 membros" refere-se a um alquila cíclico saturado contendo 3 a 4 átomos de carbono.
[066]"Heterocíclila de 3-14 membros", descrito na presente invenção, refere- se a um grupo obtido pela remoção de um átomo de hidrogênio de um composto monocíclico ou um composto cíclico fundido que é saturado ou parcialmente saturado e contém 3 a 14 átomos no anel e pelo menos um heteroátomo (por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou 5 heteroátomos). Os "anéis fundidos" referem-se a um grupo formado por duas ou mais estruturas cíclicas que compartilham dois átomos adjacentes entre si. O "heterocíclila de 3-14 membros" inclui, por exemplo, "heterocíclila de 3-12 membros", "heterocíclila de 3-10 membros", "heterocíclila de 3-8 membros", "heterocíclila de 3-7 membros", "mono-heterocíclila de 3-6 membros", "mono-heterocíclila de 3-4 membros", "mono-heterocíclila de 4-7 membros", "mono-heterocíclila de 4-6 membros", "mono-heterocíclila de 5-6 membros", "heterocíclila fundida de 7 a 10 membros" e "heterocíclila fundida de 7 a 14 membros". "Heterocíclila parcialmente saturada de 3-14 membros" refere-se a um grupo cíclico contendo ligações duplas e heteroátomos. "Heterocíclila saturada de 3-14 membros" refere-se a um grupo cíclico contendo heteroátomos e nenhuma ligação insaturada. Entre os exemplos específicos estão epoxietila, azaciclopropila, diazaciclopropila, oxaciclobutila, azaciclobutila, 1,4- dioxaciclo-hexila, 1,3-dioxaciclo-hexila, 1,3-dioxaciclopentila, tetraidrofurila, tetraidrotienila, pirrolidila, imidazolidinila, pirazolidinila, piperazinila, morfolinila, benzodiidrofurila, benzodiidropiranila, benzo1,4-dioxaciclo-hexenila, benzo1,3- dioxaciclo-hexenila, benzotetraidropiridila, benzodiidrooxazinila, benzotetraidropirazinila, 1,2,3,4-tetraidroquinazolinila, 1,2,3,4-tetraidrocinolinila ou tetraidronaftila. "Heterocíclila de 3-6 membros" refere-se a um exemplo específico contendo 3 a 6 átomos no anel para a heterocíclila de 3-14 membros. "Mono- heterocíclila de 3-4 membros" refere-se a um exemplo específico de uma heterocíclila monocíclica contendo 3 a 4 átomos no anel para a heterocíclila de 3-14 membros.
[067]"Cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-6" e "cicloalquila de 3-8 membros alcóxi C1-6" descritos na presente invenção referem-se a grupos obtidos substituindo átomos de hidrogênio em um grupo alquila C1-6 e um grupo alcóxi C1-6 por grupos cicloalquila de 3-8 membros, e o "cicloalquila de 3-8 membros", "alquila C1-6" e "alcóxi C1-6" são como definidos acima.
[068]"Heterocíclila de 3-8 membros alquila C1-6" e "heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6" descritos na presente invenção referem-se a grupos obtidos substituindo átomos de hidrogênio em um grupo alquila C1-6 e um grupo alcóxi C1-6 por grupos heterocíclila de 3-8 membros, e o "heterocíclila de 3-8 membros", "alquila C1-6" e "alcóxi C1-6" são como definidos acima.
[069]"Cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4", "cicloalquila de 3-4 membros alquila C1-4", " mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4" e "mono-heterocíclila de 3-4 membros alquila C1-4" descritos na presente invenção referem-se a grupos obtidos substituindo um átomo de hidrogênio em um grupo alquila C1-4 por um grupo cicloalquila de 3-6 membros, um grupo cicloalquila de 3-4 membros, um grupo mono- heterocíclila de 3-6 membros e um grupo mono-heterocíclila de 3-4 membros, respectivamente, e o "cicloalquila de 3-6 membros", "cicloalquila de 3-4 membros", "mono-heterocíclila de 3-6 membros", "mono-heterocíclila de 3-4 membros" e "alquila C1-4" são como definidos acima.
[070]"Cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4", "cicloalquila de 3-4 membros alcóxi C1-4", " mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4" e "mono-heterocíclila de 3-4 membros alcóxi C1-4" descritos na presente invenção referem-se a grupos obtidos substituindo um átomo de hidrogênio em um grupo alcóxi C1-4 por um grupo cicloalquila de 3-6 membros, um grupo cicloalquila de 3-4 membros, um grupo mono- heterocíclila de 3-6 membros e um grupo mono-heterocíclila de 3-4 membros, e o "cicloalquila de 3-6 membros", "cicloalquila de 3-4 membros", "mono-heterocíclila de 3-6 membros", "mono-heterocíclila de 3-4 membros" e "alcóxi C1-4" são como definidos acima.
[071]"Arila de 6 a 10 membros", descrito na presente invenção, refere-se a um grupo monocíclico ou policíclico aromático contendo 6 a 10 átomos de carbono no anel. Por exemplo, "arila de 6 a 10 membros" inclui " monocicloarila de 6 a 8 membros", "monocicloarila de 6 a 7 membros", "arila fundida de 8-10 membros" etc. Exemplos específicos incluem, entre outros, fenila, ciclooctanotetraenila, naftila etc.
"Monocicloarila de 6-8 membros" refere-se a um exemplo específico de um grupo monocíclico contendo 6 a 8 átomos de carbono no anel para o grupo arila de 6-10 membros. "Monocicloarila de 6-7 membros" refere-se a um exemplo específico de um grupo monocíclico contendo 6 a 7 átomos no anel para a arila de 6-10 membros. "Arila fundida de 8 a 10 membros" refere-se a um exemplo específico de um grupo policíclico contendo 8 a 10 átomos de carbono no anel para a arila de 6 a 10 membros.
[072]"Heteroarila de 5-10 membros", descrito na presente invenção, refere-se a um grupo aromático monocíclico ou policíclico que contém 5 a 10 átomos no anel, em que pelo menos um dos átomos do anel é um heteroátomo, e o heteroátomo é um átomo de nitrogênio, um átomo de oxigênio e/ou um átomo de enxofre. "Heteroarila de 5 a 10 membros" inclui, por exemplo, "monociclo-heteroarila de 5-7 membros", "monociclo-heteroarila de 5-6 membros", "mono-heteroarila de 6 membros", "heteroarila fundida de 7 a 10 membros", "heteroarila fundida de 8-10 membros" e "heteroarila fundida de 9-10 membros". Entre os exemplos específicos estão furila, pirrila, tienila, pirazolila, imidazolila, tiazolila, isotiazolila, tiadiazolila, oxazolila, isooxazolila, oxadiazolila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4-triazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,4- oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,3,4-oxadiazolila, piridila, pirimidinila, piridazinila, pirazinila, benzofurila, benzoisofurila, benzotienila, indolila, isoindolila, benzooxazolila, benzoimidazolila, benzoimidazolila indazolila, benzotriazoila, quinolila, isoquinolila etc.
"Monociclo-heteroarila de 5-6 membros" refere-se a um exemplo específico de um grupo monocíclico contendo 5 a 6 átomos no anel para a heteroarila de 5-10 membros.
"Heteroarila fundida de 7-10 membros", "heteroarila fundida de 8-10 membros" e "heteroarila fundida de 9 a 10 membros" referem-se a exemplos específicos de grupos policíclicos contendo 7 a 10 átomos no anel, 8 a 10 átomos no anel e 9 a 10 anéis átomos, respectivamente, para a heteroarila de 5-10 membros.
[073]"Arila de 6-10 membros, alquila C1-6" e "heteroarila de 5-10 membros alquila C1-6" descritos na presente invenção referem-se a grupos obtidos por substituição de um átomo de hidrogênio em um grupo alquila C1-6 por um grupo arila de 6-10 membros e um grupo heteroarila de 5-10 membros, respectivamente. "Arila de 6-10 membros", "heteroarila de 5-10 membros" e " alquila C1-6 " são como descritos acima.
[074]"Arila de 6-10 membros, alcóxi C1-6" e "heteroarila de 5-10 membros alcóxi C1-6" descritos na presente invenção referem-se a grupos obtidos por substituição de um átomo de hidrogênio em um grupo alcóxi C1-6 por um grupo arila de 6-10 membros e um grupo heteroarila de 5-10 membros, respectivamente. "Arila de 6-10 membros", "heteroarila de 5-10 membros" e " alcóxi C1-6 " são como descritos acima.
[075]"Monocicloarila de 6-8 membros alquila C1-4", "arila fundida de 8-10 membros alquila C1-4", "monocicloarila de 6 membros alquila C1-4", "monociclo- heteroarila de 5-7 membros alquila C1-4" e "heteroarila fundida de 8-10 membros alquila C1-4" descritos na presente invenção referem-se a grupos obtidos pela substituição de um átomo de hidrogênio em um grupo alquila C1-4 por um grupo monocicloarila de 6-8 membros, um grupo arila fundida de 8-10 membros arilo fundido, um grupo monocicloarila de 6 membros, um grupo monociclo-heteroarila de 5-7 membros e um grupo heteroarila fundida de 8-10 membros, respectivamente.
"Monocicloarila de 6-8 membros", "arila fundida de 8-10 membros", "monocicloarila de 6 membros", "monociclo- heteroarila de 5-7 membros", "heteroarila fundida de 8-10 membros" e "alquila C1-4" são como definidos acima.
[076]"Monocicloarila de 6-8 membros alcóxi C1-4", "arila fundida de 8-10 membros alcóxi C1-4", "monocicloarila de 6 membros alcóxi C1-4", "monociclo- heteroarila de 5-7 membros alcóxi C1-4" e "heteroarila fundida de 8-10 membros alcóxi C1-4" descritos na presente invenção referem-se a grupos obtidos pela substituição de um átomo de hidrogênio em um grupo alcóxi C1-4 por um grupo monocicloarila de 6-8 membros, um grupo arila fundida de 8-10 membros arilo fundido, um grupo monocicloarila de 6 membros, um grupo monociclo-heteroarila de 5-7 membros e um grupo heteroarila fundida de 8-10 membros, respectivamente. "Monocicloarila de 6-8 membros", "arila fundida de 8-10 membros", "monocicloarila de 6 membros",
"monociclo-heteroarila de 5-7 membros", "heteroarila fundida de 8-10 membros" e "alcóxi C1-4" são como definidos acima.
[077]"L está ausente", descrito na presente invenção, significa que o anel A e o anel B são ligados diretamente por meio de uma ligação química quando L está ausente.
[078]Uma ligação tracejada em uma fórmula estrutural ou um grupo da presente invenção representa presença ou ausência, por exemplo, para o grupo , ela abrange e .
[079]"Ciclila de 7 membros em ponte", descrito na presente invenção, refere- se a uma estrutura cíclica de anel saturado ou parcialmente saturado que contém 7 átomos de carbono no anel e é formada por duas ou mais estruturas cíclicas que partilham dois átomos não adjacentes do anel. Por exemplo, "ciclila de 7 membros em ponte" inclui "ciclila saturada de 7 membros em ponte" e exemplos específicos incluem, entre outros, , , , etc. "Ciclila saturada de 7 membros em ponte" refere-se a um exemplo específico de uma ciclila saturada de 7 membros em ponte.
[080]"Heterocíclila de 7 membros em ponte", descrito na presente invenção, refere-se a uma estrutura cíclica saturada ou parcialmente saturada que contém 7 átomos no anel (em que pelo menos um dos átomos no anel é um heteroátomo ou grupo, como N, NH, O, S, CO, SO, SO2) e é formado por duas ou mais estruturas cíclicas partilhando dois átomos não adjacentes do anel, e o número de heteroátomos ou grupos é preferencialmente 1, 2, 3, 4 ou 5, e mais preferencialmente 1 ou 2. Por exemplo, "heterocíclila de 7 membros em ponte" inclui "heterocíclila saturada de 7 membros em ponte", "heterocíclila nitrogenada saturada de 7 membros em ponte" e semelhantes. Exemplos específicos incluem, entre outros, , ,
, , , , , , , , , , , , , , etc.
"Heterocíclila nitrogenada saturada de 7 membros em ponte" refere-se a um exemplo específico de uma ciclila saturada em ponte contendo pelo menos um átomo de nitrogênio para a heterocíclila de 7 membros em ponte.
[081]"Cis" ou "trans" mostrado na fórmula estrutural do composto da presente invenção significa a relação posicionai entre a ponte principal (uma ponte tendo os átomos de carbono mínimos) no anel em ponte A e o substituinte correspondente na estrutura. Tomando o composto 1 como exemplo, o composto 1 tem uma estrutura cis e tem uma fórmula estrutural específica mostrada da seguinte forma: Cis- em que a fórmula estrutural significa que o composto 1 é um racemato contendo dois enantiômeros com as seguintes fórmulas estruturais, respectivamente: e .
[082]No nome estrutural do composto da presente invenção, "(1RS, 4RS, 5SR)" representa que o composto é um racemato que compreende dois enantiômeros, em que as configurações absolutas dos dois enantiômeros são "1R, 4R, 5S" e "1S, 4S, 5R", respectivamente.
[083]"Opcionalmente", descrito na presente invenção, significa que pode ou não existir. Por exemplo, "anel B é selecionado entre... opcionalmente substituído por um ou mais Q1", descrito na presente invenção, inclui o caso em que o anel B não é substituído por nenhum Q1, e o caso em que o anel B é substituído por um ou mais Q1.
[084]"Parcialmente saturado", descrito na presente invenção, significa que o grupo relacionado contém pelo menos uma ligação dupla ou ligação tripla.
[085]A presente invenção também fornece um método de preparação para o composto de fórmula (I), compreendendo, mas não limitado, à rota de processo a seguir.
[086]Cada acrônimo é definido da seguinte forma: DMA: N,N-dimetilacetamida; THF: tetraidrofurano; DCM: diclorometano; TFA: ácido trifluoroacético; EA: acetato de etila; PE: éter de petróleo; MeOH: metanol.
Matéria-prima 1 Matéria-prima 2 Intermediário 1 Intermediário 2 Intermediário 3 Intermediário 4 Composto de fórmula (I) em que R1, X1, X2, L, M, anel A, anel B e Ar são descritos acima, e X3 e X4 representam Cl ou Br, respectivamente.
[087]As etapas exemplares específicas são as seguintes: (1) preparação do intermediário 1
[088]A matéria-prima 2, terc-butóxido de potássio, 18-coroa-6 e KI são adicionadas a um solvente orgânico, e a matéria-prima 1 é adicionada em seguida; a solução de mistura reage a 25-60 °C; e após a reação estar completa, a solução reacional é concentrada e purificada por cromatografia em coluna para obter o intermediário 1. O solvente orgânico é, preferencialmente, tetraidrofurano.
(2) preparação do intermediário 2
[089]O intermediário 1 é adicionado lentamente a uma solução contendo uma substância ácida para reação; após a reação estar completa, o pH da solução reacional é ajustado para 7 a 8 com uma solução alcalina; e o sistema é seco por centrifugação e concentrado para obter o intermediário 2. A solução que contém uma substância ácida é preferencialmente uma solução de ácido clorídrico em etanol, uma solução de ácido trifluoroacético em diclorometano etc., e a solução alcalina é preferencialmente uma solução saturada de bicarbonato de sódio.
(3) preparação do intermediário 4
[090]O intermediário 2, o intermediário 3 e o carbonato de césio são adicionados a um solvente orgânico para reação em microondas ou reação de aquecimento; e após a reação estar completa, a solução reacional é purificada por cromatografia em coluna para obter o intermediário 4. O solvente orgânico é, preferencialmente, DMA.
(4) preparação do composto de fórmula (I)
[091]O intermediário 4 é adicionado a um solvente orgânico, e depois uma solução aquosa contendo uma substância alcalina é adicionada para reação de aquecimento; após a reação estar completa, o pH da solução reacional é ajustado para 4 a 6 com uma solução de substância ácida; e a solução reacional é seca por centrifugação e purificada por cromatografia em coluna para obter um composto de fórmula (I). O solvente orgânico é, preferencialmente, uma solução mista de metanol e tetraidrofurano; a substância alcalina é preferencialmente hidróxido de lítio, hidróxido de sódio etc.; e a solução ácida é preferencialmente ácido clorídrico.
[092]A matéria-prima 1 e a matéria-prima 2 da presente invenção podem ser caseiras ou compradas.
[093]O "sal farmaceuticamente aceitável" do composto de fórmula (I) na presente invenção refere-se a: um sal obtido por um grupo funcional ácido no composto de fórmula (I) que liga um cátion inorgânico ou orgânico adequado (alcalino), como um sal obtido pelo grupo funcional ácido que liga um metal alcalino ou um metal alcalino-terroso, um sal de amônio, um sal obtido pelo grupo funcional ácido que liga uma base orgânica nitrogenada; e um sal obtido por um grupo funcional alcalino (como -NH2) no composto de fórmula (I) ligando um ânion inorgânico ou orgânico adequado (ácido) incluindo um ácido inorgânico e ácido carboxílico orgânico.
[094]O "éster" do composto de fórmula (I) na presente invenção refere-se a: um éster formado pela reação de esterificação entre um composto de fórmula (I) e álcool quando existe um grupo carboxila no composto de fórmula (I); e um éster formado pela reação de esterificação entre o composto de fórmula (I) e um ácido orgânico, um ácido inorgânico, um sal de ácido orgânico ou semelhante quando existe um grupo hidroxila no composto de fórmula (I). Na presença de ácido ou alcali, o éster pode ser hidrolisado para produzir um ácido ou álcool correspondente. Ele pode servir como um éster farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula geral (I), como éster de alquilaciloxialquila, éster de alcoxicarboniloxialquila, éster de alcoximetila, éster de alquilacilaminametila, éster de cicloalquilaciloxialquila e éster de cicloalcoxiaciloxialquila.
[095]"Estereoisomerismo" é dividido em isomerismo conformacional e isomerismo de configuração, e o isomerismo de configuração pode, ainda, ser dividido em isomerismo cis-trans e isomerismo ótico. O isomerismo conformacional refere-se a um fenômeno em que átomos ou radicais de uma molécula orgânica com determinada configuração são organizados espacialmente de uma maneira diferente devido à rotação ou distorção das ligações simples carbono-carbono, e é comum nas estruturas de compostos alcano e cicloalcano, como a conformação em cadeira e conformação em barco, apareceram na estrutura do ciclo-hexano. Um "isômero cis-
trans" refere-se a um isômero cis ou trans formado quando um composto contém um grupo funcional (como uma ligação dupla C=C, uma ligação tripla C≡C, uma ligação dupla C=N, uma ligação dupla N=N ou um anel alicíclico) que não consegue girar livremente. De acordo com a "regra de sequência" internacionalmente unificada, se dois grupos superiores no composto estão do mesmo lado de uma ligação π ou de um anel alicíclico, o composto é definido como um isômero cis, e se dois grupos superiores no composto estão nos diferentes lados de uma ligação π ou de um anel alicíclico, o composto é definido como um isômero trans. Especificamente na presente invenção, quando o composto contém ciclila em ponte ou heterocíclila em ponte e a forma cis ou a forma trans significa que a ponte principal da ciclila em ponte ou heterocíclila em ponte e os grupos ligados a X2 estão do mesmo lado ou de lados diferentes da ciclila em ponte ou heterocíclila em ponte. Um "isômero ótico" significa que o composto da presente invenção pode ser um racemato ou uma mistura racêmica, um único enantiômero, uma mistura de diastereoisômero ou um único diastereoisômero, pois o composto contém um ou mais centros assimétricos. Como o composto da presente invenção contém centros assimétricos e cada centro assimétrico pode resultar em dois isômeros óticos, o escopo da presente invenção abrange todos os possíveis isômeros óticos, misturas de diastereoisômeros e compostos puros ou parcialmente puros. O composto da presente invenção pode existir na forma de um tautômero e tem diferentes pontos de conexão de hidrogênio por um ou mais turnos de ligação dupla. Por exemplo, a cetona e sua forma enólica são tautômeros um do outro, conhecido como tautomerismo ceto-enol. Todos os tautômeros e sua mistura estão incluídos nos compostos da presente invenção. Todos os enantiômeros, diastereoisômeros, racematos, mesômeros, isômeros cis-trans, tautômeros, isômeros geométricos e epímeros do composto de fórmula geral (I) ou (II), assim como sua mistura, estão incluídos no âmbito da presente invenção.
[096]A presente invenção também se refere às seguintes formas de realização:
[097]Forma de realização 1: um composto de fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster,
em que
R1 é selecionado a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, hidróxi C1-6 alquila, amino C1-6 alquila, alcóxi
C1-6, alquilamina C1-6, alquilcarbonila C1-6, alcóxi C1-6 alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros alcóxi
C1-6, heterocíclila de 3-8 membros, heterocíclila de 3-8 membros alquila C1-6, ou heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6;
X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NR2, O, S ou CR3R4; R2, R3 e R4 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, alcóxi C1-6 ou alquilamina C1-6;
M é alquileno C1-6, em que um dos átomos de carbono no alquileno C1-6 é opcionalmente reposto por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, CO, S, SO ou SO2;
o anel A é selecionado entre ciclila de 7 membros em ponte ou heterocíclila de 7 membros em ponte;
o anel B é selecionado a partir de um grupo que consiste em arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-10 membros, heterocíclila de 3-14 membros e cicloalquila de 3-8 membros que são opcionalmente substituídas por um Q1 ou mais;
cada Q1 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, hidróxi C1-6 alquila, amino C1-6 alquila, alcóxi C1-6, alquilamina C1-6, alquilcarbonila C1-6, alquilsulfonila C1- 6, alquilsulfinila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros alcóxi C1-6, heterocíclila de 3-8 membros alquila C1- 6, ou heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6; L está ausente ou é alquileno C1-6, em que um ou dos átomos de carbono no alquileno C1-6 é opcionalmente reposto por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, CO, S, SO ou SO2; Ar é selecionado a partir de um grupo que consiste em arila de 6-10 membros, arila de 6-10 membros alquila C1-6, arila de 6-10 membros alcóxi C1-6, heteroarila de 5-10 membros, heteroarila de 5-10 membros alquila C1-6, heteroarila de 5-10 membros alcóxi C1-6, cicloalquila de 3-8 membros e heterocíclila de 3-8 membros que são opcionalmente substituídas por um ou mais Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, hidróxi C1-6 alquila, amino C1-6 alquila, alcóxi C1-6, alcóxi C1-6 alquila, alquilamina C1-6, alquilcarbonila C1-6, alquilsulfonila C1-6, alquilsulfinila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros alcóxi C1-6, heterocíclila de 3-8 membros, heterocíclila de 3-8 membros alquila C1-6, ou heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6.
[098]Forma de realização 2: o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, seu éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster da forma de realização 1, em que R1 é selecionado a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi
C1-4, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alcóxi C1-4 alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi
C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-
4 ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4;
X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NR2, O, S ou CR3R4; R2, R3 e R4 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, alcóxi C1-4 ou alquilamina C1-4; M é alquileno C1-4, em que um dos átomos de carbono no alquileno C1-4 é opcionalmente reposto por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, CO, S, SO ou SO2;
o anel A é selecionado entre ciclila de 7 membros em ponte ou heterocíclila de 7 membros em ponte nitrogenosa;
o anel B é selecionado entre heteroarila fundida de 8-10 membros e heterocíclila fundida de 7-14 membros que contêm 1 a 3 heteroátomos ou grupos e são substituídos opcionalmente por 1 ou 2 Q1, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, S,
SO ou SO2;
cada Q1 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila,
aminoC1-4 alquila, alcóxi C1-4, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alquilsulfonila C1-4,
alquilsulfinila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila
C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros,
mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4;
L está ausente ou é alquileno C1-4, em que um ou dos átomos de carbono no alquileno C1-4 é opcionalmente reposto por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em NH, O, CO, S, SO ou SO2; Ar é selecionado a partir de um grupo que consiste em monocicloarila de 6-8 membros, arila fundida de 8-10 membros, monocicloarila de 6-8 membros C1-4 alquila, arila fundida de 8-10 membros C1-4 alquila, monocicloarila de 6-8 membros C1-4 alcóxi, arila fundida de 8-10 membros C1-4 alcóxi, monociclo-heteroarila de 5-7 membros, heteroarila fundida de 8-10 membros, monociclo-heteroarila de 5-7 membros C1-4 alquila, heteroarila fundida de 8-10 membros C1-4 alquila, monociclo-heteroarila de 5- 7 membros C1-4 alcóxi, heteroarila fundida de 8-10 membros C1-4 alcóxi, cicloalquila de 3-8 membros e heterocíclila de 3-8 membros, que são opcionalmente substituídas por 1 a 3 Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi C1-4, alcóxi C1-4 alquila, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alquilsulfonila C1-4, alquilsulfinila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4, ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4.
[099]Forma de realização 3: o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, seu éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster das formas de realização 1 a 2, em que M é selecionado de um grupo que consiste em -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-CH2- CH2-, -CH2-NH-, -CH2-CH2-O- e -CH2-NH-CO-; o anel A é selecionado entre ciclila saturada de 7 membros em ponte ou heterocíclila nitrogenada saturada de 7 membros em ponte, e quando o anel A for uma heterocíclila nitrogenada saturada de 7 membros em ponte, preferencialmente o anel
A é ligado a L ou ao anel B por um átomo de nitrogênio do anel.
[0100]Forma de realização 4: o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, seu éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster das formas de realização 1 a 3, em que R1 é selecionado a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi C1-4, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alcóxi C1-4 alquila C1-4, cicloalquila de 3-4 membros, cicloalquila de 3-4 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-4 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-4 membros, mono-heterocíclila de 3-4 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-4 membros alcóxi C1-4; o anel A é selecionado entre os seguintes grupos: , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , e .
[0101]Forma de realização 5: o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, seu éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster das formas de realização 1 a 4, em que o anel B é selecionado entre heteroarila fundida de 9-10 membros que contém 1 a 2 heteroátomos ou grupos e é opcionalmente substituída por 1 a 2 Q1, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado independentemente de um grupo que consiste em N, NH, O, S, SO ou SO2; preferencialmente, o anel B é ligado a L ou ao anel A por um átomo de carbono do anel; cada Q1 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, alcóxi C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4; L está ausente ou é alquileno C1-2, em que um dos átomos de carbono no alquileno C1-2 é opcionalmente reposto por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em NH, O, S ou CO.
[0102]Forma de realização 6: o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, seu éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster das formas de realização 1 a 5, em que Ar é selecionado a partir de um grupo consistindo em fenil, fenilC1-4 alquila, fenilC1-4 alcóxi, monociclo-heteroarila de 5-6 membros, monociclo-heteroarila de 5-6 membros alquila C1-4 e monociclo-heteroarila 5-6 membros alcóxi C1-4 que são opcionalmente substituídos por 1 a 2 Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente a partir de um grupo consistindo em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxiC1-4 alquila, aminoC1-4 alquila, alcóxi C1-4, alcóxi C1-4 alquila ou alquilamina C1-4.
[0103]Forma de realização 7: o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, seu éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster das formas de realização 1 a 6, em que R1 é selecionado de um grupo que consiste em halogênio, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, trifluoroetila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, metilamina, etilamina, metoximetila, metoxietila, etoximetila, ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutilmetila, ciclobutiletila,
ciclobutilmetóxi, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila ou azaciclobutila;
X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NH, O ou S;
M é selecionado entre -CH2-, -CH2-CH2- ou -CH2-CH2-CH2-;
o anel A é selecionado entre os seguintes grupos:
, , , , , , ,
, , , , , , e
;
o anel B é selecionado entre os grupos a seguir, substituídos opcionalmente por 1 Q1:
, , , , , ,
, , e ; Q1 é selecionado de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, hidroxila,
amina, ciano, metila, etila, propila, isopropila, fluorometila, difluorometila, trifluorometila, 1-fluoroetila, 2-fluoroetila, 1,1-difluoroetila, 1,2-difluoroetila, 2,2-
difluoroetila, 2,2,2-trifluoroetila, 3,3,3-trifluoropropila, 1-trifluorometiletila, metóxi, etóxi,
propóxi, isopropóxi, ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi,
ciclobutila, ciclobutila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, ciclopentila, ciclo-hexila,
epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila,
azaciclobutila, tetraidrofurila, pirrolidila, imidazolidinila, pirazolidinila, tiazolidinila,
tetraidropiranila, tetraidropiridinila, piperazinila ou morfolinila;
L está ausente; Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, fenilmetila, feniletila, fenilmetóxi, furila, pirrila, tienila, pirazolila, imidazolila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, hidroxila, amina, ciano, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, trifluoroetila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, metilamina, etilamina, metoximetila, metoxietila ou etoximetila.
[0104]Forma de realização 8: o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, seu éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster da forma de realização 7, em que R1 é selecionado de um grupo que consiste em ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutilmetila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila ou azaciclobutila; o anel A é selecionado de um grupo que consiste em , e ; o anel B é selecionado entre os grupos a seguir, substituídos opcionalmente por 1 Q1: , e ; Q1 é selecionado de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi; Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, metóxi ou etóxi.
[0105]Forma de realização 9: o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, seu éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster das formas de realização 1 a 8, tendo a estrutura a seguir mostrada como fórmula geral (II), .
[0106]Forma de realização 10: o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, seu éster ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster da forma de realização 1, em que o composto é selecionado entre:
O
O N Cl O N N Cl
S HOOC Cis- 顺式 , Cis- , , , Trans- Cis- , ,
, ou .
[0107]Forma de realização 11: uma formulação farmacêutica contendo o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou éster de qualquer uma das formas de realização 1 a 10, em que a formulação farmacêutica contém um ou mais veículos e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis e podem ser de qualquer forma de dosagem farmaceuticamente aceitável.
[0108]Forma de realização 12: uma utilização do composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster de qualquer uma das formas de realização 1-10 na preparação de medicamentos para a prevenção e/ou tratamento de doenças mediadas por FXR, em que as doenças compreendem aterosclerose, distúrbio do metabolismo dos ácidos biliares, colangite esclerosante primária, cálculo de colesterol, doenças relacionadas à fibrose, doença hepática gordurosa, cirrose, hepatite, insuficiência hepática, colestase, colelitíase, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, trombo, complicações clínicas do diabetes tipo I ou II, doenças hiperproliferativas e doenças inflamatórias intestinais.
[0109]Forma de realização 13: a utilização da forma de realização 12, em que as doenças são selecionadas entre doença hepática gordurosa alcoólica, doença hepática gordurosa não-alcoólica, cirrose biliar primária, cirrose colangética primária, hepatite crônica, hepatite não-viral, esteato-hepatite alcoólica, esteato-hepatite não alcoólica, colestase intra-hepática benigna, colestase intra-hepática familiar progressiva, colestase induzida por drogas, colestase gestacional, colestase relacionada à nutrição gastrointestinal, colestase extra-hepática, hipercolesterolemia, icterícia neonatal, kernicterus, nefropatia diabética, neuropatia diabética, retinopatia diabética, outros resultados observados do diabetes manifesto crônico clínico, carcinoma hepatocelular, adenoma do cólon, polipose, adenocarcinoma do cólon, câncer de mama, câncer de pâncreas, carcinoma de esôfago e outras formas de doenças neoplásicas gastrointestinais e hepáticas.
[0110]O composto da presente invenção possui uma ou mais das seguintes vantagens: (1) O composto da presente invenção, um sal farmaceuticamente aceitável, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, tem uma excelente atividade agitadora do FXR e pode ser usado com segurança para tratar uma/ou prevenir doença hepática gordurosa não alcoólica, cirrose biliar primária, distúrbio do metabolismo lipídico, complicações diabéticas, tumores malignos e doenças relacionadas.
(2) O composto da presente invenção, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, exibe boa estabilidade metabólica, efeito mais longo e alta biodisponibilidade.
(3) O composto da presente invenção, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster,exibe baixa toxicidade, boa tolerância ao medicamento e alta segurança.
Esquemas Experimentais
[0111]Esquemas experimentais exemplificativos para alguns compostos da presente invenção são fornecidos a seguir para mostrar a atividade benéfica e o efeito técnico benéfico do composto da presente invenção. No entanto, deve-se entender que os esquemas experimentais a seguir são apenas ilustrações para a presente invenção, e não limitam o escopo da presente invenção. De acordo com os ensinamentos da especificação, os especialistas na técnica podem modificar ou alterar adequadamente as soluções técnicas da presente invenção sem se afastar do espírito e do escopo da presente invenção.
Exemplo experimental 1: influência de compostos da presente invenção na expressão relativa de mRNA de BSEP em células HepG2
1. Amostras de teste: compostos da presente invenção (para seus nomes químicos e métodos de preparação, veja o exemplo de preparação de cada composto); composto PX-104 e composto 30-70 (para suas estruturas, veja o contexto da invenção e, para seus métodos de preparação, veja as solicitações de patente WO2011020615A1 e WO2012087519A1).
PBS representa solução tampão de fosfato.
2. Método experimental: (1) Plaqueamento de células, adição do composto e coleta celular
[0112]As células foram digeridas com pancreatina e coletadas, e a concentração de células foi determinada; de acordo com o resultado da contagem, as células foram ressuspensas para uma densidade de 7,5 105 células/mL; 2 mL da suspensão de células foram inoculados em cada poço de uma placa de cultura celular de 6 poços; a placa de cultura foi colocada numa incubadora e cultivada sob as condições de 37 °C e 5% de CO2 durante 24 horas.
[0113]Os compostos a serem testados foram diluídos para 0,3 mM e 3 mM com DMSO; 5 μL de cada solução estoque diluída na etapa anterior foram adicionados a 5 mL de meio individualmente. As concentrações das soluções de trabalho obtidas foram de 0,3 μM e 3 μM, respectivamente. No grupo controle, o meio foi preparado usando DMSO equivolumétrico em vez das soluções estoque; a placa de cultura celular foi retirada da incubadora; o meio foi removido da placa de cultura celular e as soluções de trabalho e o meio de controle foram adicionados correspondentemente; em seguida, a placa de cultura foi colocada de volta na incubadora e cultivada sob as condições de 37 °C e 5% de CO2 durante 24 horas.
[0114]após tratamento por 24 horas, a placa de cultura celular foi retirada, e o meio foi removido da placa; as células foram lavadas três vezes com PBS pré- resfriado (4 °C); 200 μL de pancreatina (pré-aquecida a 37 °C) foram adicionados a cada poço, e a placa foi agitada suavemente para que a pancreatina pudesse cobrir uniformemente o fundo da placa. Em seguida, a placa de cultura foi colocada de volta na incubadora e incubada até as células se separarem do fundo da placa. Foi adicionado 1 mL de meio para interromper a digestão. A solução foi pipetada suavemente e soprada por várias vezes com um pipetador, todas as substâncias em cada poço foram pipetadas em um tubo de centrífuga de 1,5 mL sem RNAse e centrifugadas a 200 × g por 5 minutos; os sobrenadantes foram removidos para coletar amostras de células.
(2) Extração e purificação de RNA a partir de amostras de células
[0115]Lise celular: Foi preparado tampão fresco de lise de RNA (ao qual foram adicionados 10 μL de 2-mercaptoetanol a 1 mL de tampão de lise); 600 μL de tampão de lise foram adicionados a cada amostra de célula; as células foram lisadas completamente por vórtice vigoroso de 1 a 2 minutos; os lisados celulares foram centrifugados a 12.000 × g por 5 minutos; e os sobrenadantes foram transferidos para tubos de centrífuga de 1,5 mL sem RNAse.
[0116]Extração e purificação de RNA: Uma quantidade igual de etanol a 70% foi adicionada a cada lisado celular; em seguida, os tubos de centrífuga foram agitados vigorosamente, e o tampão foi misturado suficientemente, de modo que os precipitados particulados que pudessem se formar após a adição de etanol fossem dispersos da maneira mais uniforme possível; colunas de adsorção foram colocadas em tubos coletores e as misturas foram transferidas para as colunas de adsorção. No máximo, 700 μL foram transferidos de cada vez; e as soluções foram centrifugadas a
12.000 × g sob temperatura ambiente por 15 seg. As soluções nos tubos coletores foram descartadas e as colunas de adsorção foram recolocadas nos tubos coletores; e todas as misturas restantes foram então transferidas para as colunas de adsorção.
700 μL de eluente I foram adicionados à coluna de adsorção; e as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente por 15 seg. As colunas de adsorção foram colocadas em novos tubos de coleta; 500 μL de eluente II foram adicionados à coluna de adsorção; e as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente por 15 segundos. As soluções nos tubos coletores foram descartadas e as colunas de adsorção foram colocadas novamente nos tubos coletores; 500 μL de eluente II foram adicionados à coluna de adsorção; as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente durante 1 a 2 minutos, e as colunas de adsorção foram colocadas em tubos coletores de RNA; 50 μL de água sem RNAse foram adicionados ao centro da coluna de adsorção, e a solução resultante foi incubada à temperatura ambiente durante 1 min; o RNA foi eluído nos tubos coletores por centrifugação a 14.000 × g sob temperatura ambiente durante 2 minutos.
[0117]A concentração e o peso do RNA extraído foram medidos. O RNA foi armazenado a -80 °C.
(3) Transcrição reversa de RNA em cDNA
[0118]O RNA extraído na segunda etapa foi incubado a 70 °C durante 5 minutos, de modo que o RNA foi desnaturado. A amostra tratada foi colocada em gelo;
[0119]A amostra de RNA foi diluída para 200 ng/mL com água sem RNAse; e 10 μL da solução de transcrição reversa foram preparados de acordo com a tabela a seguir e foram misturados com 10 μL de RNA desnaturado. Na reação de transcrição reversa, a quantidade total de RNA foi de 2 μg. No processo do experimento, todos os reagentes foram colocados em gelo.
Reagente Volume (μL) 10 × Tampão RT 2 25 × dNTP Mix 0,8 10 × RT Primer Aleatório 2 Transcriptase Reversa MultiScribe 1 RNA Total 10 H2O 4,2 Volume total 20
[0120]A transcrição reversa for realizada em um ciclador térmico G-Storm GS1 PCR. O processo de transcrição reversa foi definido da seguinte forma: 25 °C, 10 min→37 °C, 120 min→85 °C, 5 min→4 °C, ∞. O produto da transcrição reversa (cDNA) foi armazenado a -20 °C.
(4) Experimento de qPCR para uma amostra
[0121]De acordo com a eficiência de amplificação qPCR, uma concentração adequada de cDNA foi selecionada para o experimento de qPCR para uma amostra.
10 μL da amostra de cDNA obtida por transcrição reversa na terceira etapa foram diluídos em 7 vezes com 60 μL de água sem RNAse.
[0122]80 μL de mistura de reação foram preparados de acordo com a tabela a seguir, e 20 μL da mistura de reação foram pipetados para uma placa de reação de PCR de 96 poços, na qual havia três repetições para a amostra de cDNA (7 μL de 100 ng foram adicionados a cada poço de reação).
Reagente Volume (μL) 2 × TaqMan® Universal PCR Master Mix 10 20 × sonda/primer GAPDH TaqMan 1
20 × sonda/primers BSEP TaqMan (FAM-MGB) 1 Modelo de cDNA 7 Água sem nuclease 1 Volume total 20
[0123]qPCR foi realizada em um amplificador de PCR quantitativa em tempo real ABI7500, e o procedimento foi definido da seguinte forma: 50 °C, 2 min→95 °C, 10 min→95 °C, 15 s→60 °C, 60 s, em que 40 ciclos foram determinados entre 95 °C, 15 s e 60 °C, 60 s.
(5) Resultado experimental e conclusão: Tabela 1: Resultado de ensaio da expressão relativa de mRNA de BSEP em células HepG2 tratadas por composto da presente invenção Amostra de Composto 30- PX-104 Composto 2 Composto 2-1 Teste 70 % 0,3 μM 60 105 145 166 % 3 μM 100 146 179 185 Tabela 2: Resultado de ensaio da expressão relativa de mRNA de BSEP em células HepG2 tratadas por composto da presente invenção Amostra de PX-104 Composto 1 Composto 5 Composto 4 Teste % 0,3 μM 45 121 103 97 % 3 μM 100 102 123 96
[0124]Observação: os dados de expressão relativa na tabela 1 e tabela 2 são mostrados com a expressão abaixo de 3 μM de PX-104A como 100%, em que a expressão relativa (%) sob uma concentração de um composto é mostrada como a razão da expressão sob a concentração do composto para a expressão abaixo de 3 μM de PX-104A.
[0125]Ela pode ser conhecida a partir dos resultados estatísticos da tabela 1 e tabela 2, os compostos da presente invenção têm um bom efeito agitador no mRNA de BSEP em células HepG2. O BSEP é um gene direto a jusante do FXR e regula a descarga de ácido biliar do fígado. O BSEP é um bom índice para a triagem preliminar das atividades agitadoras de FXR dos compostos, e tem um grande significado no tratamento da doença hepática gordurosa não alcoólica.
Exemplo experimental 2: experimento para a estabilidade do metabolismo do microssomo hepático de compostos da presente invenção em diferentes espécies
[0126]Amostras de teste: os compostos caseiros 1, 2, 4 e 5 da presente invenção (para seus nomes químicos e métodos de preparação, veja o exemplo de preparação para cada composto).
[0127]Materiais experimentais: um microssomo hepático misto de rato SD e humano, ambos adquiridos da XenoTech, com os números de lote: 1410271 (rato SD) e 1410013 (humano), respectivamente, em que ambas as concentrações de proteína microssômica foram de 20 mg·mL-1; Promotor experimental β-NADPH comprado da Roche (lote Nº: 524F0231); e uma solução de tampão de fosfato (pH 7,4) feita no laboratório.
[0128]Preparação de soluções de amostra de teste: Uma quantidade adequada do pó da amostra de teste foi pesada com precisão e dissolvida em uma quantidade apropriada de dimetilsulfóxido (DMSO) até uma concentração de 1 mM; em seguida, a solução foi diluída 20 vezes com metanol para produzir uma solução de trabalho de 50 μM.
[0129]Método experimental: Tabela 3: Composição do sistema de incubação para o experimento de estabilidade do metabolismo de microssomos hepáticos Materiais Concentração Inicial Proporção (%) Concentração Final Necessários Solução tampão de 100 μM 50 50 μM fosfato Cloreto de magnésio 20 μM 5 1 μM anidro Microssomo hepático 20 mg proteína/mL 2,5 0,5 mg proteína/mL Água necessária —— 30,5 —— adicionalmente Amostra de teste 50 μM 2 1 μM β-NADPH 10 μM 10 1 μM
[0130]Etapas operacionais para o experimento: (1) De acordo com as proporções na tabela 3 "Composição do sistema de incubação para o experimento de estabilidade do metabolismo dos microssomos hepáticos" acima, para cada composto, 6 mL de PBS (100 mM), 0,6 mL de solução de MgCl2 (20 mM) e 3,66 mL de H2O foram feitos em uma solução mista 1 para o sistema de incubação (não contendo os microssomos, a amostra de teste e β-NADPH).
(2) Os microssomos hepáticos (20 mg de proteína/mL) foram retirados de uma geladeira (-80 °C) e colocados em um oscilador de banho-maria termostático (37 °C) e pré-incubados por 3 minutos.
(3) Para cada composto, 1,88 mL da solução mista 1 para o sistema de incubação foram adicionados com 55 μL de microssomos para obter uma solução mista 2 para o sistema de incubação (sem a amostra de teste e β-NADPH). (4) Grupo de amostras (contendo os microssomos e β-NADPH): foram adicionados 616 µL de solução mista 2 para o sistema de incubação com 14 µL da solução de trabalho da amostra de teste (com uma concentração de 50 µM) e com 70 µL de solução de trabalho β-NADPH (10 mM). A solução resultante foi bem misturada e, em seguida, a solução resultante foi duplicada. Os pontos de amostragem foram 0 min, 5º min, 10º min, 20º min, 30º min e 60º min.
(5) Grupo controle (contendo os microssomos e água em vez de β-NADPH): 264 µL de solução mista 2 para o sistema de incubação foram adicionados com 6 µL da solução de trabalho da amostra de teste (50 µM) e com 30 µL de água. A solução resultante foi bem misturada e, em seguida, a solução resultante foi duplicada. Os pontos de amostragem foram 0 min e 60º min.
(6) 50 µL da amostra foram coletados de um tubo de amostra de incubação em cada momento predeterminado, adicionados a um tubo de amostra finalizadora (contendo 300 µL de finalizador frio) e agitados em vórtex; e a reação foi encerrada.
(7) após 10 minutos de vórtice, a solução foi centrifugada durante 5 minutos (12.000 rpm). (8) 100 µL de sobrenadante foram tirados e adicionados com 100 µL de água, e a solução de mistura passou completamente por vórtice; e a solução foi então analisada por LC-MS/MS.
[0131]Análise de dados: Percentagens de conteúdos residuais foram calculadas de acordo com a fórmula a seguir.
Relação da área de pico da amostra de teste para o padrão interno a qualquer momento % conteúdo Relação da área de pico da amostra de teste para o 100% residual = padrão interno no momento 0
[0132]Resultado experimental: Tabela 4: Estabilidades de compostos da presente invenção no metabolismo de microssomo hepático in vitro Conteúdo residual (%) após 60 minutos de incubação Compo Compos Compo Compos Compos Compo Compo sto 30- to 1 sto 2 to 4 to 5 sto 8 sto 2-1 Espécie 70 Microssomo hepático 49 55 54 31 96 69 20 humano Microssomo hepático 53 94 69 49 73 77 -- de rato
[0133]Conclusão experimental: Os compostos da presente invenção têm uma boa estabilidade no metabolismo dos microssomos hepáticos, facilitando o melhor efeito farmacológico in vivo, e têm um alto valor de teste clínico e uma boa capacidade de drenagem.
Exemplo experimental 3: influência de compostos da presente invenção nas expressões relativas de mRNA de BSEP, mRNA de SHP e mRNA de CYP7A1 em células HepG2
1. Amostras de teste: os compostos da presente invenção (para seus nomes químicos e métodos de preparação, veja o exemplo de preparação para cada composto).
Célula HepG2: célula de câncer hepático humano; BSEP: bomba de exportação de sal biliar; SHP: parceiro heterodímero pequeno;
CYP7A1: colesterol 7-alfa hidroxilase; Controle: composto 1-1B com uma estrutura mostrada a seguir, preparada de acordo com um método da técnica anterior (para informações detalhadas, consulte a solicitação de patente WO2012087519A1).
2. Método experimental: (1) Cultura de células, composto de tratamento e coleta celular
[0134]As células foram digeridas com pancreatina e coletadas, e foi determinada a concentração das células; de acordo com o resultado da contagem, as células foram ressuspensas a uma densidade de 7,5 105 células/mL; 2 mL da suspensão celular foram inoculados em cada poço de uma placa de cultura celular de 6 poços; e a placa de cultura foi colocada numa incubadora e cultivada sob as condições de 37 °C e 5% de CO2 durante 24 horas.
[0135]Os compostos foram diluídos para 3000, 1000, 200, 8, 1,6, 0,32, 0,0128, 0,00256 e 0,000512 μM com DMSO. As soluções compostas de diferentes concentrações obtidas na etapa anterior foram posteriormente diluídas em 1.000 vezes com o meio para obter soluções de trabalho, e um meio contendo 0,1% de DMSO foi adotado como um grupo de controle. A placa de cultura de células foi retirada da incubadora, o meio foi removido e as soluções de trabalho e o meio de controle foram adicionados. A placa de cultura foi recolocada na incubadora e cultivada sob as condições de 37 °C e 5% de CO2 durante 24 horas.
[0136]após tratamento por 24 horas, a placa de cultura celular foi retirada do incubador, e o meio foi removido da placa; as células foram lavadas três vezes com PBS (solução tampão de fosfato) pré-resfriado (4 °C); 200 μL de pancreatina (pré- aquecida a 37 °C) foram adicionados a cada poço, e a placa foi agitada suavemente para que a pancreatina pudesse cobrir uniformemente o fundo da placa. Em seguida, a placa de cultura foi colocada de volta na incubadora e incubada até as células se separarem do fundo da placa. Foi adicionado 1 mL de meio para interromper a digestão. A solução foi pipetada suavemente e soprada por várias vezes com um pipetador, todas as substâncias em cada poço foram pipetadas em um tubo de centrífuga de 1,5 mL sem RNAse e centrifugadas a 200 × g por 5 minutos; os sobrenadantes foram removidos para coletar amostras de células.
(2) Extração e purificação de amostras de RNA celular
[0137]Lise celular: Foi preparado tampão fresco de lise de RNA (ao qual foram adicionados 10 μL de 2-mercaptoetanol a 1 mL de tampão de lise); 600 μL de tampão de lise foram adicionados a cada amostra de célula; as células foram lisadas completamente por vórtice vigoroso de 1 a 2 minutos; os lisados celulares foram centrifugados a 12.000 × g por 5 minutos; e os sobrenadantes foram transferidos para tubos de centrífuga de 1,5 mL sem RNAse.
[0138]Extração e purificação de RNA: Uma quantidade igual de etanol a 70% foi adicionada a cada lisado celular; em seguida, os tubos de centrífuga foram agitados vigorosamente, e o tampão foi misturado suficientemente, de modo que os precipitados particulados que pudessem se formar após a adição de etanol fossem dispersos da maneira mais uniforme possível; colunas de adsorção foram colocadas em tubos coletores e as misturas foram transferidas para as colunas de adsorção. No máximo, 700 μL foram transferidos de cada vez; e as soluções foram centrifugadas a
12.000 × g sob temperatura ambiente por 15 seg. As soluções nos tubos coletores foram descartadas e as colunas de adsorção foram recolocadas nos tubos coletores; e todas as misturas restantes foram então transferidas para as colunas de adsorção.
700 μL de eluente I foram adicionados à coluna de adsorção; e as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente por 15 seg. As colunas de adsorção foram colocadas em novos tubos de coleta; 500 μL de eluente II foram adicionados à coluna de adsorção; e as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente por 15 segundos. As soluções nos tubos coletores foram descartadas e as colunas de adsorção foram colocadas novamente nos tubos coletores; 500 μL de eluente II foram adicionados à coluna de adsorção; as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente durante 1 a 2 minutos, e as colunas de adsorção foram colocadas em tubos coletores de RNA; 50 μL de água sem RNAse foram adicionados ao centro da coluna de adsorção, e a solução resultante foi incubada à temperatura ambiente durante 1 min; o RNA foi eluído nos tubos coletores por centrifugação a 14.000 × g sob temperatura ambiente durante 2 minutos.
[0139]A concentração e o peso do RNA extraído foram medidos. O RNA foi armazenado a -80 °C.
(3) Transcrição reversa de RNA em cDNA
[0140]O RNA extraído na última etapa foi incubado a 70 °C durante 5 minutos, de modo que o RNA foi desnaturado. A amostra tratada foi colocada em gelo; a amostra de RNA foi diluída para 200 ng/μL com água sem RNAse; e 10 μL da solução de transcrição reversa foram preparados de acordo com a tabela a seguir e foram misturados com 10 μL de RNA desnaturado. Na reação de transcrição reversa, a quantidade total de RNA foi de 2 μg. No processo do experimento, todos os reagentes foram colocados em gelo.
Reagente Volume (μL) 10 × Tampão RT 2 25 × dNTP Mix 0,8 10 × RT Primer Aleatório 2 Transcriptase Reversa MultiScribe 1 RNA Total 10
H2O 4,2 Volume total 20
[0141]A transcrição reversa for realizada em um ciclador térmico G-Storm GS1 PCR. O processo de transcrição reversa foi definido da seguinte forma: 25 °C, 10 min→37 °C, 120 min→85 °C, 5 min→4 °C, ∞. O produto da transcrição reversa (cDNA) foi armazenado a -20 °C.
(4) Experimento de qPCR para uma amostra
[0142]De acordo com a eficiência de amplificação qPCR, uma concentração adequada de cDNA foi selecionada para o experimento de qPCR para uma amostra.
10 μL da amostra de cDNA obtida por transcrição reversa na terceira etapa foram diluídos em 7 vezes com 60 μL de água sem RNAse.
[0143]80 μL de mistura de reação foram preparados de acordo com a tabela a seguir, e 20 μL da mistura de reação foram pipetados para uma placa de reação de PCR de 96 poços, na qual havia três repetições para a amostra de cDNA (7 μL de 100 ng foram adicionados a cada poço de reação).
Reagente Volume (μL) 2 ×TaqMan® Universal PCR Master Mix 10 20 × sonda/primer GAPDH TaqMan 1 20 × sonda/primers BSEP/SHP/CYP7A1 TaqMan (FAM-MGB) 1 Modelo de cDNA 7 Água sem nuclease 1 Volume total 20
[0144]qPCR foi realizada em um amplificador de PCR quantitativa em tempo real ABI7500, e o procedimento foi definido da seguinte forma: 50 °C, 2 min→95 °C, 10 min→95 °C, 15 s→60 °C, 60 s, em que 40 ciclos foram determinados entre 95 °C,
15 s e 60 °C, 60 s.
3. Resultado experimental: Composto 1-1B Composto 8 EC50 (nM) de BSEP 0,75 0,35 EC50 (nM) de SHP 0,26 0,09 IC50 (nM) de CYP7A1-IC 0,10 0,02
[0145]Observação: EC50 refere-se à concentração efetiva mediana, e IC50 refere-se à concentração inibitória mediana.
4. Conclusão experimental:
[0146]Pode ser sabido, a partir do resultado experimental, que os compostos da presente invenção têm um bom efeito agitador no mRNA de BSEP e mRNA de SHP nas células HepG2, e os valores correspondentes de EC50 são significativamente menores que os do composto de controle 1-1B; e os compostos da presente invenção têm um bom efeito de supressão de CYP7A1 no mRNA, e os valores correspondentes de IC50 são significativamente menores que os do composto de controle 1-1B. Como o BSEP e o SHP são os genes diretos a jusante do FXR, seus efeitos de agitação da expressão refletem diretamente a atividade de agitação do FXR; e como CYP7A1 é o gene secundário a jusante do FXR, seu efeito de supressão da expressão reflete indiretamente a atividade agitadora do FXR. BSEP, SHP e CYP7A1 são bons índices para a triagem preliminar das atividades agitadoras de FXR dos compostos.
Exemplo experimental 4: influência de compostos da presente invenção na expressão relativa de mRNA de SHP em células AML12
1. Amostras de teste: os compostos da presente invenção (para seus nomes químicos e métodos de preparação, veja o exemplo de preparação para cada composto).
Células AML12: células hepáticas de camundongo.
Controle: composto 1-1B com uma estrutura mostrada a seguir, preparada de acordo com um método da técnica anterior (para informações detalhadas, consulte a solicitação de patente WO2012087519A1).
2. Método experimental: (1) Cultura de células, composto de tratamento e coleta celular
[0147]As células foram digeridas com pancreatina e coletadas, e foi determinada a concentração das células; de acordo com o resultado da contagem, as células foram ressuspensas a uma densidade de 7,5 × 104 células/mL; 1 mL da suspensão celular foram inoculados em cada poço de uma placa de cultura celular de 12 poços; e a placa de cultura foi colocada numa incubadora e cultivada sob as condições de 37 °C e 5% de CO2 durante 24 horas.
[0148]Os compostos foram diluídos para 1000, 200, 8, 1,6, 0,32, 0,128, 0,0256 e 0,00512 μM com DMSO. As soluções compostas de diferentes concentrações obtidas na etapa anterior foram posteriormente diluídas em 1000 vezes com o meio para obter soluções de trabalho, e um meio contendo 0,1% de DMSO foi adotado como um grupo de controle. A placa de cultura de células foi retirada da incubadora, o meio foi removido e as soluções de trabalho e o meio de controle foram adicionados. A placa de cultura foi recolocada na incubadora e cultivada sob as condições de 37 °C e 5% de CO2 durante 24 horas.
[0149]após tratamento por 24 horas, a placa de cultura celular foi retirada do incubador, e o meio foi removido da placa; as células foram lavadas três vezes com PBS (solução tampão de fosfato) pré-resfriado (4 °C); 200 μL de pancreatina (pré- aquecida a 37 °C) foram adicionados a cada poço, e a placa foi agitada suavemente para que a pancreatina pudesse cobrir uniformemente o fundo da placa. Em seguida, a placa de cultura foi colocada de volta na incubadora e incubada até as células se separarem do fundo da placa. Foi adicionado 1 mL de meio para interromper a digestão. A solução foi pipetada suavemente e soprada por várias vezes com um pipetador, todas as substâncias em cada poço foram pipetadas em um tubo de centrífuga de 1,5 mL sem RNAse e centrifugadas a 200 × g por 5 minutos; os sobrenadantes foram removidos para coletar amostras de células.
(2) Extração e purificação de amostras de RNA celular
[0150]Lise celular: Foi preparado tampão fresco de lise de RNA (ao qual foram adicionados 10 μL de 2-mercaptoetanol a 1 mL de tampão de lise); 600 μL de tampão de lise foram adicionados a cada amostra de célula; as células foram lisadas completamente por vórtice vigoroso de 1 a 2 minutos; os lisados celulares foram centrifugados a 12.000 × g por 5 minutos; e os sobrenadantes foram transferidos para tubos de centrífuga de 1,5 mL sem RNAse.
[0151]Extração e purificação de RNA: Uma quantidade igual de etanol a 70% foi adicionada ao lisado celular; em seguida, os tubos de centrífuga foram agitados vigorosamente, o tampão foi misturado suficientemente, de modo que os precipitados de partículas que podem se formar após a adição de etanol foram dispersos da maneira mais uniforme possível; colunas de adsorção foram colocadas em tubos coletores e as misturas foram transferidas para as colunas de adsorção. No máximo, 700 μL foram transferidos de cada vez; e as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente por 15 seg. As soluções nos tubos coletores foram descartadas e as colunas de adsorção foram recolocadas nos tubos coletores; e todas as misturas restantes foram então transferidas para as colunas de adsorção. 700 μL de eluente I foram adicionados à coluna de adsorção; e as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente por 15 seg. As colunas de adsorção foram colocadas em novos tubos de coleta; 500 μL de eluente II foram adicionados à coluna de adsorção; e as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente por 15 segundos. As soluções nos tubos coletores foram descartadas e as colunas de adsorção foram colocadas novamente nos tubos coletores; 500 μL de eluente II foram adicionados à coluna de adsorção; as soluções foram centrifugadas a 12.000 × g sob temperatura ambiente durante 1 a 2 minutos, e as colunas de adsorção foram colocadas em tubos coletores de RNA; 50 μL de água sem RNAse foram adicionados ao centro da coluna de adsorção, e a solução resultante foi incubada à temperatura ambiente durante 1 min; o RNA foi eluído nos tubos coletores por centrifugação a 14.000 × g sob temperatura ambiente durante 2 minutos.
[0152]A concentração e o peso do RNA extraído foram medidos. O RNA foi armazenado a -80 °C.
(3) Transcrição reversa de RNA em cDNA
[0153]O RNA extraído na última etapa foi incubado a 70 °C durante 5 minutos, de modo que o RNA foi desnaturado. A amostra tratada foi colocada em gelo; a amostra de RNA foi diluída para 100 ng/μL com água sem RNAse; e 10 μL da solução de transcrição reversa foram preparados de acordo com a tabela a seguir e foram misturados com 10 μL de RNA desnaturado. Na reação de transcrição reversa, a quantidade total de RNA foi de 1 μg. No processo do experimento, todos os reagentes foram colocados em gelo.
Reagente Volume (μL) 10 × Tampão RT 2 25 × dNTP Mix 0,8 10 × RT Primer Aleatório 2 Transcriptase Reversa MultiScribe 1 RNA Total 10 H2O 4,2
Volume total 20
[0154]A transcrição reversa for realizada em um ciclador térmico G-Storm GS1 PCR. O processo de transcrição reversa foi definido da seguinte forma: 25 °C, 10 min→37 °C, 120 min→85 °C, 5 min→4 °C, ∞. O produto da transcrição reversa (cDNA) foi armazenado a -20 °C.
(4) Experimento de qPCR para uma amostra
[0155]De acordo com a eficiência de amplificação qPCR, uma concentração adequada de cDNA foi selecionada para o experimento de qPCR para uma amostra.
20 μL de solução reacional foram preparados com a amostra de cDNA obtida por transcrição reversa na terceira etapa, de acordo com a tabela a seguir, e foram adicionados a uma placa de reação de 96 poços para PCR, com 4 μL de amostra de cDNA em cada poço de reação.
Reagente Volume (μL) 2 × TaqMan® Universal PCR Master Mix 10 20 × sonda/primer GAPDH TaqMan 0,3 20 × SHP sonda/primers SHP TaqMan (FAM-MGB) 1 Modelo de cDNA 4 Água sem nuclease 4,7 Volume total 20
[0156]qPCR foi realizada em um amplificador de PCR quantitativa em tempo real ABI7500, e o procedimento foi definido da seguinte forma: 50 °C, 2 min→95 °C, 10 min→95 °C, 15 s→60 °C, 60 s, em que 45 ciclos foram determinados entre 95 °C, 15 s e 60 °C, 60 s.
3. Resultado experimental:
[0157]Resultados do ensaio EC50 para a influência de compostos da presente invenção na expressão relativa de mRNA de SHP em células AML12 Composto 1-1B Composto 2-1 Composto 8 EC50 (nM) 1,51 0,76 0,89
4. Conclusão experimental:
[0158]Pode ser sabido, a partir do resultado experimental, que os compostos da presente invenção têm um bom efeito de agitação no mRNA de SHP nas células AML12, e os valores EC50 correspondentes são significativamente menores que os do composto de controle 1-1B. Como o SHP é um gene direto a jusante do FXR, a expressão do mRNA do SHP reflete diretamente a atividade agitadora do FXR. SHP é um bom índice para a triagem preliminar das atividades agitadoras de FXR dos compostos, e espera-se que o agonista FXR se torne uma preferência para o tratamento da doença hepática gordurosa não alcoólica.
[0159]Exemplo experimental 5: influência de compostos da presente invenção em camundongos com DHGNA induzida por alto teor de gordura
1.Método experimental
1.1 Modelagem animal
[0160]Construção de modelos de camundongos com DHGNA/EHNA (doença hepática gordurosa não-alcoólica/esteato-hepatite não alcoólica): camundongos machos C57BL/6J com seis semanas de idade foram alimentados com ração rica em gordura, e foram pesados semanalmente para registrar os pesos corporais dos camundongos; e após uma alimentação rica em gordura por 8 semanas, os camundongos foram pesados para determinar se a modelagem é bem-sucedida.
1.2 Administração em grupos e tratamento final
[0161]De acordo com os valores de peso corporal (40 g foi considerado geralmente como um ponto crítico de triagem), os camundongos modelados com sucesso foram divididos em um grupo de controle em branco, um grupo de controle modelo e o grupo do composto 2-1 (1 mg/kg), em que os pesos corporais médios de todos os grupos foram consistentes, sem nenhuma diferença significativa. Os camundongos foram administrados uma vez ao dia (QD) (seringa intragástrica nº 8) por 3 semanas.
[0162]24 horas após a última administração, o sangue foi amostrado a partir do canto interno; o sangue amostrado permaneceu em temperatura ambiente por 1 a 2 horas e foi centrifugado a 4.000 rpm durante 15 minutos, e o soro foi coletado; os camundongos foram eutanasiados em seguida, e um grande lobo hepático e um pequeno lobo hepático foram cortados e colocados em formalina neutra a 10%, e os restos foram armazenados em um refrigerador a -80 °C. Para o método de administração detalhado, dosagem e via de administração, consulte a tabela abaixo.
[0163]Via, dosagem e o regime de administração em experimentos para a influência dos compostos da presente invenção em camundongos com DHGNA/EHNA induzida por alto teor de gordura Grupo de Volume administrado Via de Grupo Dosagem (mg/kg) administração (mL/10 g) administração Grupo de 1 controle em -- 0,1* p.o.
branco Grupo de 2 controle -- 0,1* p.o.
modelo 3 Composto 2-1 1 0,1 p.o.
*: 2% HPC + 0,1% polissorbato 80 foram usados para substituir os compostos de teste.
2Índice de avaliação experimental
2.1 Índice de observação experimental 1)Peso corporal: A pesagem foi realizada uma vez por semana a partir do início da modelagem. A pesagem foi realizada uma vez por semana após a administração.
2)Análise das alterações morfológicas e patológicas de fígados: Os tecidos hepáticos foram separados, coletados e fotografados. Os fígados foram pesados e as proporções de peso do fígado/peso corporal foram calculadas. O tecido foi cortado e corado por H&E (escore DHGNA, NAS).
3)Ensaio de índices bioquímicos de fígados: o TG nos fígados foi extraído de acordo com o manual de um kit de ensaio de triglicerídeos de células de tecidos (adquirido da Applygen Technologies Inc. E1013) e testado.
4)Ensaio de índices bioquímicos de soros: o LDL nos soros foi testado com um analisador bioquímico totalmente automático (Hitachi 7180, modelo: X594).
2.2 Tratamento estatístico
[0164]Os dados foram representados por média ± S.E.M., e a análise de variância unidirecional (ANOVA), seguida de LSD ou teste T de amostra independente, foi realizada nos dados estatísticos com o software estatístico SPSS 16.0. As diferenças estatísticas foram testadas, e p <0,05 foi definido como uma diferença significativa.
3Resultado experimental
[0165]Resultado experimental da influência de compostos da presente invenção em camundongos com DHGNA/EHNA induzida por alto teor de gordura Peso do Scorep2 de LDLp1 TG fígado/Peso atividade corporal DHGNA Grupo modelo 0,31 -- -- 3 Composto 2-1 0,21 -53%* -9%* 1
*: uma proporção aumentada ou diminuída do grupo experimental para o grupo modelo, em que o valor negativo representa uma diminuição e o valor positivo representa um aumento.
[0166]LDL representa a lipoproteína de baixa densidade; TG representa triglicerídeos; e valor p tem um significado estatístico, em que p1 ﹤ 0,01 e p2 ﹤ 0,001.
4Conclusão
[0167]O composto 2-1 da presente invenção exibe um bom efeito de melhoria no sintoma de DHGNA dos camundongos com a dose de administração. Um aumento no peso do fígado é um efeito colateral comum causado pelo agonista FXR. Pode ser sabido, a partir do resultado experimental, que os compostos da presente invenção não causam um aumento óbvio na proporção peso do fígado/peso corporal do animal experimental, ou seja, não mostram efeitos colaterais óbvios e, portanto, os compostos da presente invenção são de alta segurança.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0168]O conteúdo acima mencionado da presente invenção é, ainda, descrito em detalhes abaixo pela descrição detalhada na forma de exemplos. No entanto, o escopo do objeto da presente invenção acima não deve ser interpretado como sendo limitado aos exemplos a seguir. Qualquer técnica alcançada com base no conteúdo acima mencionado da presente invenção deve estar dentro do escopo da presente invenção.
Exemplo 1: preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-metoxibenzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico (composto 1)
Cis-
1. Preparação de (1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila Cis- Cis-
[0169](1RS, 4RS, 5Sr)-5-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (700 mg; 3,3 mol), terc-butóxido de potássio (560 mg; 5,0 mmol), 18-coroa- 6 (1,32 g; 5,0 mmol) e KI (830 mg; 5,0 mmol) foram adicionados a THF (15 mL); em seguida, 4-(clorometil)-5-ciclopropil- 3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (1,20 g; 4,0 mmol) foi adicionado, e a solução de mistura reagiu a 50 °C durante 6 horas. Foram adicionados água (100 mL) e acetato de etila (100 mL) para extração e a fase orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 8: 1) para obter o composto título (1,38 g; rendimento 87,3%).
2. Preparação de 4-((((1RS, 4RS, 5SR)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5- il)oxi)metil)- 5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol Cis- Cis-
[0170](1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4-il)
metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (1,18 g; 2.5 mmol) foi adicionado a DCM (15 mL) e, em seguida, TFA (8 mL) foi adicionado. A solução de mistura reagiu sob um banho de água gelada durante 2 horas. O pH da solução reacional foi ajustado para 8 com uma solução saturada de bicarbonato de sódio sob um banho de água gelada, e foram adicionados água (100 mL) e DCM (100 mL) para extração. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada para obter o composto do título (900 mg; rendimento 96,4%).
3. Preparação de 2-amino-4-metoxibenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
[0171]4-amino-3-metoxibenzoato de metila (1,81 g; 10,0 mmol) e KSCN (3,88 g; 40,0 mmol) foram adicionados a ácido acético glacial (10 ml) e, 15 minutos depois, bromo (1,60 g; 10,0 mmol) foi adicionado. A solução de mistura reagiu a 25 °C durante 16 horas. O pH da solução reacional foi ajustado para 8 com hidróxido de amônia.
Após filtração por sucção, o sólido foi seco para se obter um composto bruto do título (2,40 g), o qual seria utilizado diretamente na etapa seguinte sem ser purificado.
4. Preparação de 2-bromo-4-metoxibenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
[0172]O 2-amino-4-metoxibenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila bruto (2,40 g; 10,0 mmol) e brometo de cobre (3,35 g; 15,0 mmol) foram adicionados a acetonitrila (20 mL). Nitrito de terc-butila (1,55 g; 15,0 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °C e, após a adição estar completa, a solução de mistura foi agitada e reagiu a 25 °C durante 0,5 hora. Foram adicionados água (100 mL) e acetato de etila (100 mL) para extração, e a fase orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 10: 1) para obter o composto título (1,21 g; rendimento total em duas etapas: 40,1%).
5. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-metoxibenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
[0173]2-bromo-4-metoxibenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (157 mg; 0,52 mmol), 4-((((1RS, 4RS, 5SR)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il) oxi)metil)-5-ciclopropil-3- (2,6-diclorofenil) isoxazol (100 mg; 0,26 mmol) e carbonato de césio (254 mg; 0,78 mol) foram adicionados a DMA (2 mL), e a solução de mistura reagiu a 110 °C durante 16 horas.
Água (50 mL) e acetato de etila (50 mL) foram adicionados para extração, e a fase orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 5: 1) para obter o composto título (80 mg; rendimento: 50,4%).
6. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-metoxibenzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico Cis- Cis-
[0174]2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-
4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-metoxibenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (80 mg; 0,13 mmol) foi dissolvido na solução mista de THF (1,5 mL) e metanol (1,5 mL) e, depois hidróxido de lítio 2M (0,65 mL) foi adicionado. A solução de mistura foi agitada e reagiu a 40 °C durante 1 hora. O pH da solução reacional foi ajustado para 6 com ácido clorídrico 1M, e acetato de etila (30 mL) foram adicionados para extração. A fase orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (diclorometano: metanol = 15:1) para obter o composto título (40 mg, rendimento 51,3%).
[0175]Fórmula molecular: C28H25Cl2N3O5S Peso molecular: 585,1 LC-MS(m/z): 586,2 (M+H+)
[0176]1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : 7,95 (s, 1H); 7,72-7,52 (m, 3H); 7,40- 7,35 (m, 1H); 4,35-4,45 (m, 2H); 3,87 (s, 3H); 3,65-3,55 (m, 1H); 2,95-2,85 (m, 1H); 2,40-2,30 (m, 1H); 1,92-1,81 (m, 1H), 1,63-1,52 (m, 1H); 1,50-1,40 (m, 1H); 1,28-1,02 (m, 4H); 0,90-0,80 (m, 2H) Exemplo 2: Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico (composto 2) Cis-
1. Preparação de (1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila
Cis- Cis-
[0177](1RS, 4RS, 5Sr)-5-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (213 mg; 1,0 mmol), terc-butóxido de potássio (168 mg; 1,5 mmol) e 18- coroa-6 (396 mg; 1,5 mmol) foram adicionados a THF (20 mL) e, 25 minutos mais tarde, 4-(bromometil) -5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (416 mg; 1,2 mmol) foi adicionado. A solução de mistura reagiu a 25 ºC durante 16 horas. Foram adicionados água (100 mL) e acetato de etila (100 mL) para extração, e a fase orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 3: 1) para obter o composto título (367 mg; rendimento: 76,7%).
2. Preparação de 4-((((1RS, 4RS, 5SR)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5- il)oxi)metil)- 5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol Cis- Cis-
[0178](1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (360 mg; 0,75 mmol) foi adicionado a DCM (10 mL) e, em seguida, TFA (3 mL) foi adicionado. A solução de mistura reagiu sob um banho de água gelada durante 2 horas. O pH da solução reacional foi ajustado para 8 com uma solução saturada de bicarbonato de sódio sob um banho de água gelada, e foram adicionados água (100 mL) e DCM (100 mL) para extração. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada para obter o composto do título (280 mg; rendimento: 98,3%).
3. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila Cis- Cis-
[0179]4-((((1RS, 4RS, 5SR)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)oxi)metil)-5- ciclopropil- 3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (280 mg; 0,74 mmol), 2-bromobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (403 mg; 1,48 mmol) e carbonato de césio (724 mg; 2,22 mmol) foram adicionados a DMA (6 mL), e a solução de mistura reagiu a 100 °C sob microondas durante 1 hora. Foram adicionados água (100 mL) e acetato de etila (100 mL) para extração, e a fase orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 10: 1) para obter o composto título (305 mg; rendimento: 72,6%).
4. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico Cis- Cis-
[0180]2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (300 mg;
0,53 mmol) e hidróxido de lítio monoidratado (111 mg; 2,64 mmol) foram adicionados à solução mista de metanol (6 mL), THF (6 mL) e água (3 mL), e a mistura resultante foi agitada e reagiu a 55 °C durante 3 horas. O pH da solução reacional foi ajustado para 2 com ácido clorídrico 1M, e água (100 mL) e acetato de etila (100 mL) foram então adicionados para extração. A fase orgânica foi lavada com uma solução saturada de cloreto de sódio (100 mL), concentrada e purificada por cromatografia preparativa de fase reversa (metanol/água = 70%) para obter o composto título (78 mg, rendimento: 26,7%).
[0181]Fórmula molecular: C27H23Cl2N3O4S Peso molecular: 555,1 LC-MS(m/z): 556,2 (M+H+)
[0182]1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : 8,31 (s, 1H); 7,90-7,82 (m, 1H); 7,75- 7,55 (m, 3H); 7,56-7,35 (m, 1H); 4,32-4,25 (m, 2H); 3,62-3,58 (m, 1H); 2,98-2,88 (m, 1H); 2,55-2,52 (m, 2H); 2,40-2,30 (m, 1H); 2,10-1,99 (m,1H); 1,98-1,85 (m, 1H); 1,65- 1,54 (m, 1H); 1,52-1,42 (m, 1H); 1,30-1,25 (m, 1H); 1,20-1,10 (m, 2H); 1,10-1,05 (m, 2H).
Exemplo 2-1: Preparação de 2-((1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico (composto 2-1)
1. Preparação de (1S, 4R)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-2-carboxilato de terc- butila
[0183](1S, 4R)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-en-3-ona (3,0 g; 27,5 mmol) foi dissolvido em THF (80 mL), e LiAlH4 (1,36 g; 35,8 mmol) foi adicionado a 0 °C. A solução reacional reagiu a 25 °C durante 3 horas e depois reagiu a uma temperatura elevada de 60 °C durante 4 horas. Em seguida, foi adicionada água (2 mL) a 0 °C para cessar a reação. A solução reacional foi filtrada através de celite, o bolo do filtro foi lavado com acetato de etila (50 mL) e o filtrado foi concentrado para 50 mL. Boc2O (9,0 g; 41,2 mmol) foi adicionado ao filtrado concentrado e a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 16 horas. A solução reacional foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 10:1) para obter o produto (3,0 mg; rendimento em duas etapas: 55,9%).
2. Preparação de (1S, 4S, 5R)-5-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano- 2-carboxilato de terc-butila
[0184](1S, 4R)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-eno-2-carboxilato de terc-butila (1,5 g; 7,68 mmol) e NaBH4 (0,24 g; 6,3 mmol) foram adicionados a THF (20 mL), e a solução da mistura reagiu a 25 °C e sob uma atmosfera de nitrogênio durante 0,5 hora.
Em seguida, a solução de sulfato de dimetila (0,57 ml; 6,3 mmol) em THF (2 mL) foi adicionada, e a solução de mistura reagiu a 35 °C durante 4 horas. A solução reacional foi arrefecida a 0 °C e água (5 mL) foi adicionada para cessar a reação. H2O2 (0,96 mL; 30%) e, em seguida, uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M (15 mL, 15 mmol) foi adicionada gota a gota, e a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 1 hora. Foi adicionado acetato de etila (100 mL) para extração e a camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 2:1) para obter o produto (700 mg, rendimento: 42,7%).
3. Preparação de (1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila
[0185](1S, 4S, 5R)-5-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc- butila (0,2 g; 0,94 mmol) foi dissolvido em THF (30 mL), e terc-butóxido de potássio (158 mg; 1,4 mmol) e 18-coroa-6-éter (248 mg; 0,94 mmol) foram adicionados e, em seguida, a solução da mistura reagiu a 25 °C durante 0,5 hora. 4-(clorometil)-5- ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (427 mg; 1,4 mmol) e KI (232,4 mg; 1,4 mmol) foram adicionados, e a solução de mistura reagiu a 40 °C durante 2 horas. A solução reacional foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 2:1) para obter um produto (300 mg; rendimento: 66,6%).
4. Preparação de trifluoroacetato de 4-((((1S, 4S, 5R)-2- azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)oxi)metil)-5- ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol
[0186](1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3- (2,6-diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)- 2-azabiciclo[2.2.1] heptano-2-carboxilato de terc-butila (0,25 g; 0,52 mmol) foi adicionado a DCM (8 mL), TFA (2 mL) foi adicionado e a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 2 horas. A solução reacional foi concentrada para obter um produto bruto (400 mg), que seria usado diretamente na próxima etapa sem ser purificado.
5. Preparação de 2-((1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
[0187]Trifluoroacetato de 4-((((1S, 4S, 5R)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5- il)oxi)metil)-5- ciclopropil--3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (400 mg; produto bruto), 2- bromobenzo[d]tiazol-6- carboxilato de metila (212 mg, 0,78 mmol) e carbonato de césio (508 mg, 1,56 mmol) foram adicionados a dimetil adipato (8 mL), e a solução de mistura reagiu a 120 °C sob microondas durante 0,5 hora. Em seguida, a solução reacional foi vertida em água (20 mL) e filtrada. O bolo do filtro foi purificado por cromatografia em coluna de sílica- gel (diclorometano : metanol = 20:1) para obter um produto (200 mg; rendimento em duas etapas: 67,4%).
6. Preparação de 2-((1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico
[0188]2-((1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4-il)metóxi)- 2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (200 mg; 0,35 mmol) e hidróxido de lítio monohidratado (103 mg; 2,45 mmol) foram dissolvidos no solvente misto de metanol (8 mL), tetraidrofurano (8 mL) e água (8 mL), e a mistura resultante foi agitada e reagiu a 40 °C durante 2 horas. A solução reacional foi concentrada, e água (20 mL) foi adicionada ao resíduo. Em seguida, o pH da solução reacional foi ajustado para 2 com ácido hidroclorídrico diluído 1M, e acetato de etila (50 mL x 2) foi adicionado para extração. As fases orgânicas foram combinadas e concentradas e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel em fase reversa C18 (metanol : água = 0% -70%) para obter um produto (70 mg; rendimento: 35,9%).
[0189]Fórmula molecular: C27H23Cl2N3O4S Peso molecular: 555,1 LC-MS(m/z): 556,1 (M+H+)
[0190][α]20 D = -84,97 (C=1,0; CH3OH)
[0191]1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8,34 (s, 1H); 8,05 (dd, J=1,6 Hz; J=8,4 Hz, 1H); 7,55 (d, J=8,8 Hz; 1H); 7,32-7,45 (m, 3H), 4,26-4,33 (m, 2H); 3,61 (d, J=7,2 Hz, 1H); 3,50 (s, 2H), 3,03 (s, 1H), 2,60 (s, 1H), 2,10-2,15 (m, 1H), 2,01-2,10 (m, 1H); 1,65-1,69 (m, 2H); 1,44 (d, J=13,6 Hz, 1H); 1,26-1,30 (m, 2H); 1,11-1,17 (m, 2H).
Exemplo 2-2: Preparação de 2-((1R, 4R, 5S)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico (composto 2-2)
1. Preparação de (1R, 4S)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno
[0192]Adicionou-se (1R, 4S)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-en-3-ona (5,0 g; 45,8 mmol) a THF anidro (100 mL) e hidreto de alumínio e lítio (2,26 g; 59,5 mol) foram adicionados em lotes a 0 °C. A solução de mistura reagiu a 25 °C durante 3 horas.
Depois, a solução foi aquecida a 60 °C e reagiu durante 4 horas. A solução reacional foi cessada com água a 0 °C. EA (100 mL) e solução aquosa de cloreto de sódio (80 mL) foram adicionados para extração, e a fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro para obter um produto bruto que seria usado diretamente na próxima etapa sem ser purificado.
2. Preparação de (1R, 4S)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno-2-carboxilato de terc- butila
[0193](1R, 4S)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-eno (4,35 g; 45,8 mmol) foi adicionado ao THF 100 mL), depois, (Boc)2O (15,0 g; 68,7 mmol) foi adicionado, e a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 1 hora. O sistema foi seco por centrifugação diretamente e purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (PE : EA = 10:1) para obter um produto (7,0 g; rendimento em duas etapas: 78,4%).
3. Preparação de (1R, 4R, 5S)-5-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano- 2-carboxilato de terc-butila
[0194](1R, 4S)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-eno-2-carboxilato de terc-butila (1,5 g; 7,68 mmol) e tetraidroborato de sódio (0,24 g; 6,30 mmol) foram adicionados a THF (9 mL), e a solução de mistura foi agitada e reagiu a 23 °C e sob uma atmosfera de nitrogênio durante 0,5 hora. A solução de dimetil sulfato (0,57 mL; 6,30 mmol) em THF (2 mL) foi adicionada a 35 °C, e a solução de mistura reagiu a 35 °C durante 4 horas com agitação vigorosa. A solução reacional foi resfriada para 0 °C, e cessada com água (5,0 mL). Depois, NaOH a 1M (15 mL) e peróxido de hidrogênio (30% em peso em H2O; 0,96 mL) foram adicionados em sequência, e a solução de mistura reagiu a 23 °C durante 1 hora. EA (100 mL) e água (50 mL) foram adicionados para extração. A fase orgânica foi seca por centrifugação e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (PE : EA = 2:1) para obter um produto (600 mg; rendimento: 36,7%).
4. Preparação de (1R, 4R, 5S)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila
[0195](1R, 4R, 5S)-5-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc- butila (600 mg; 2,8 mmol), 18-coroa-6-éter (739 mg; 2,8 mmol) e terc-butóxido de potássio (627 mg; 5,6 mmol) foram adicionado a THF (80 mL), e a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 0,5 hora. Em seguida, 4-(clorometil)-5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol (1,28 g; 4,2 mmol) e iodeto de potássio (697 mg, 4,2 mmol) foram adicionados e a solução de mistura reagiu a 50 °C durante 4 horas. EA (100 mL) e água (50 mL) foram adicionados para extração. A fase orgânica foi seca por centrifugação e purificada por cromatografia em coluna (PE : EA = 2:1) para obter um produto (700 mg; rendimento: 52,2%).
5. Preparação de 4-((((1R, 4R, 5S)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)oxi)metil)- 5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol
[0196](1R, 4R, 5S)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4-il)metóxi)-2-
azabiciclo [2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (700 mg; 1,46 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução de etanol (6 mL) contendo HCl a 4M a 0 °C, e a solução da mistura reagiu a 0 °C durante 4 horas. Após a reação estar completa, o pH da solução reacional foi ajustado para 8 com uma solução saturada de bicarbonato de sódio a 0 °C. O solvente orgânico no sistema foi destilado na forma de centrifugação. Acetato de etila (100 mL) e água (50 mL) foram adicionados para extração. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e seca por centrifugação para obter um produto (400 mg; rendimento: 72,3%).
6. Preparação de 2-((1R, 4R, 5S)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
[0197]4-((((1R, 4R, 5S)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)oxi)metil)-5-ciclopropil- 3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (400 mg; 1,06 mmol), 2-bromobenzo[d]tiazol-6-formato de metila (431 mg; 1,58 mmol) e carbonato de césio (691 mg; 2,12 mmol) foram adicionados a DMA (10 mL), e a solução de mistura reagiu a 110 °C sob microondas durante 0,5 hora. Após a reação estar completa, a solução reacional foi resfriada para 25 °C. Acetato de etila (100 mL) e água (50 mL) foram então adicionados para extração. A fase orgânica foi seca por centrifugação e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (PE : EA = 5:1) para obter um produto (450 mg; rendimento: 74,5%).
7. Preparação de 2-((1R, 4R, 5S)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico
O O N N
O O Cl Cl N N Cl N N Cl
S S MeO2C HOOC
[0198]2-((1R, 4R, 5S)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (450 mg; 0,79 mmol) foi adicionado à solução mista de metanol (5 mL) e THF (5 mL), a solução de mistura foi então adicionada a uma solução aquosa (2 mL) contendo hidróxido de lítio monohidratado (133 mg; 3,2 mmol), e o sistema foi aquecido a 50 °C e reagiu durante 12 horas. Depois que a reação foi concluída, a solução reacional foi resfriada para 25 °C e o pH do sistema foi ajustado para 4 com HCl 1N. O solvente foi destilado por meio de centrifugação. Adicionou-se acetato de etila (100 mL) e uma solução aquosa de cloreto de sódio (50 mL) para extração. A fase orgânica foi seca por centrifugação e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (DCM : MeOH = 40:1) para obter um produto (390 mg; rendimento: 89,1%).
[0199]Fórmula molecular: C27H23Cl2N3O4S Peso molecular: 555,1 LC-MS(m/z): 556,1 (M+H)+
[0200][α]20 D = +76,2 (C=1,0; CH3OH)
[0201]1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8,25 (s, 1H); 8,08-8,04 (m, 1H); 7,62 (m, 1H); 7,47-7,34 (m, 3H); 4,35-4,28 (m, 2H); 3,71-3,68 (m, 2H); 2,68 (s, 1H); 2,15-2,08 (m, 2H); 1,85-1,70 (m, 2H); 1,55-1,48 (m, 1H); 1,30-1,21 (m, 3H); 1,20-1,09 (m, 2H).
Exemplo 3: Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5RS)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico (composto 3)
Trans-
1. Preparação de (1RS, 4RS, 5RS)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila Trans- Trans-
[0202]Tert-butil (1RS, 4RS, 5Rs)-5-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2- carboxilato de terc-butila (0,25 g; 1,17 mmol) foi dissolvido em THF (30 mL), terc- butóxido de potássio (196 mg; 1,75 mmol) e 18-coroa-6-éter (310 mg; 1,17 mmol) foram adicionados e a solução da mistura reagiu a 25 °C durante 0,5 hora. Em seguida, 4-(clorometil)-5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (530 mg; 1,75 mmol) e KI (290 mg; 1,75 mmol) foram adicionados, e a solução de mistura reagiu a 30 °C durante 4 horas. A solução reacional foi concentrada e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 3:1) para obter o produto-alvo (450 mg; rendimento: 80%).
2. Preparação de trifluoroacetato de 4-((((1RS, 4RS, 5RS)-2-azabiciclo[2.2.1] heptan-5-il)oxi)metil)-5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol Trans- Trans-
[0203](1RS, 4RS, 5RS)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (0,4 g; 0,83 mmol) foi adicionado a diclorometano (10 mL), ácido trifluoroacético (4 mL) foi adicionado e a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 2 horas. A solução reacional foi concentrada para obter um produto bruto (500 mg), que seria usado diretamente na próxima etapa.
3. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5RS)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila Trans- Trans-
[0204]Trifluoroacetato de 4-((((1RS, 4RS, 5RS)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5- il)oxi)metil)- 5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (500 mg; produto bruto), 2- bromobenzo[d]tiazol-6- carboxilato de metila (338 mg, 1,24 mmol) e carbonato de césio (811 mg, 2,49 mmol) foram adicionados a DMA (6 mL), e a solução de mistura reagiu a 120 °C sob microondas durante 0,5 hora. Em seguida, a solução reacional foi vertida em água (20 mL) e filtrada. O bolo do filtro foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (diclorometano : metanol = 20:1) para obter o produto-alvo (400 mg; rendimento em duas etapas: 84,5%).
4. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5RS)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico
Trans- Trans-
[0205]2-((1RS, 4RS, 5RS)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (200 mg; 0,35 mmol) e hidróxido de lítio monoidratado (80 mg; 1,9 mmol) foram dissolvidos no solvente misto de metanol (10 mL), tetraidrofurano (10 mL) e água (10 mL), e a mistura resultante foi agitada e reagiu a 40 °C durante 2 horas. A solução reacional foi concentrada, e água (10 mL) foi adicionada ao resíduo. Em seguida, o pH da solução foi ajustado para 2 com ácido clorídrico diluído a 1M e foi adicionado acetato de etila para extração (100 mL x 2). As fases orgânicas foram combinadas e concentradas e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel em fase reversa C18 (metanol : água = 0% -70%) para obter o produto-alvo (50 mg; rendimento: 25,7%).
[0206]Fórmula molecular: C27H23Cl2N3O4S Peso molecular: 555,1 LC-MS(m/z): 556,1 (M+H+)
[0207]1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8,39 (s, 1H); 8,08 (d, J=8,0 Hz, 1H); 7,57 (d, J=8,4 Hz, 1H); 7,35 (d, J=8,0 Hz, 1H); 7,10-7,19 (m, 2H); 4,22-4,33 (m, 2H); 4,00- 4,03 (m, 1H); 3,64 (s, 1H); 3,36 (s, 1H); 2,76 (s, 1H); 2,06-2,13 (m, 1H); 1,86-1,99 (m, 2H); 1,62 (d, J=10,0 Hz, 1H); 1,20-1,47 (m, 4H); 1,07-1,12 (m, 2H). Exemplo 4: Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico (composto 4)
Cis-
1. Preparação de 4-amino-3-fluorobenzoato de metila
[0208]3-fluoro-4-nitrobenzoato de metila (1,99 g; 10,0 mol) foi adicionado a metanol (200 mL), Pd/C (200 mg) foi adicionado e a solução de mistura foi submetida a hidrogenação durante 16 horas. Após filtração por sucção da solução reacional, o filtrado foi concentrado para obter o composto título (1,68 g; rendimento: 99,4%).
2. Preparação de 2-amino-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
[0209]4-amino-3-fluorobenzoato de metila (1,68 g; 9,9 mmol) e KSCN (3,84 g; 39,6 mmol) foram adicionados a ácido acético glacial (20 ml) e, 15 minutos depois, bromo (1,58 g; 9,9 mmol) foi adicionado. A solução de mistura reagiu a 25 °C durante 16 horas. Água (100 mL) foi adicionada e o pH da solução reacional foi ajustado para 8 com hidróxido de amônia. Após filtração por sucção, o sólido foi seco para se obter um composto título bruto (2,30 g), o qual seria utilizado diretamente na etapa seguinte.
3. Preparação de 2-bromo-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
[0210]O 2-amino-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila bruto (2,30 g; 9,9 mmol) e brometo de cobre (3,31 g; 14,9 mmol) foram adicionados a acetonitrila (20 mL). Nitrito de terc-butila (1,53 g; 14,9 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °C e, após a adição estar completa, a solução de mistura foi agitada e reagiu a 25 °C durante 1 hora. A solução reacional foi concentrada diretamente e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 10: 1) para obter o composto título (480 mg; rendimento total em duas etapas: 16,7%).
4. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila Cis- Cis-
[0211]2-bromo-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (151 mg; 0,52 mmol), 4-((((1RS, 4RS, 5SR)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il) oxi)metil)-5-ciclopropil-3- (2,6-diclorofenil) isoxazol (100 mg; 0,26 mmol) e carbonato de césio (254 mg; 0,78 mmol) foram adicionados a DMA (2 mL), e a solução de mistura reagiu a 110 °C durante 16 horas.
Água (50 mL) e acetato de etila (50 mL) foram adicionados para extração, e a fase orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 8: 1) para obter o composto título (50 mg; rendimento:
32,3%).
5. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico Cis- Cis-
[0212]2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (50 mg; 0,09 mmol) foi dissolvido na solução mista de THF (2 mL) e metanol (2 mL) e, em seguida, hidróxido de lítio a 1M (0,9 mL) foi adicionado. A solução de mistura reagiu a 40 °C durante 1 hora e, em seguida, o pH da solução reacional foi ajustado para 4 com ácido clorídrico a 1M. Foi adicionado acetato de etila (30 mL) para extração e a fase orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (diclorometano : metanol = 15:1) para obter o composto (30 mg; rendimento: 61,5%).
[0213]Fórmula molecular: C27H22Cl2FN3O4S Peso molecular: 573,1 LC-MS(m/z): 574,1 (M+H+)
[0214]1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,18 (s, 1H); 7,76-7,48 (m, 4H); 4,32- 4,20 (m, 2H); 3,65-3,58 (m, 1H); 3,45-3,40 (m, 2H); 2,58-2,52 (m, 1H); 2,40-2,28 (m, 1H); 1,95-1,85 (m, 1H); 1,65-1,55 (m, 1H); 1,53-1,42 (m,1H); 1,20-1,13 (m, 2H); 1,13- 1,09 (m, 2H); 0,90-0,78 (m, 2H). Exemplo 5: Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)
isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-metilbenzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico (composto 5)
1. Preparação de 2-amino-4-metilbenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
[0215]4-amino-3-metilbenzoato de metila (33,0 g; 0,2 mol) e KSCN (68,0 g; 0,7 mol) foram adicionados a ácido acético glacial (200 mL) a 0 °C e bromo (31,9 g; 0,2 mol) foi adicionado lentamente gota a gota a 0 °C. Após concluída a adição gota a gota, a solução de mistura foi aquecida a 25 °C e reagiu durante 10 horas. Em seguida, a solução reacional foi vertida numa água gelada e o pH da solução foi ajustado para 8 com hidróxido de amônia. Um sólido foi precipitado, filtrado sob pressão reduzida e seco. O sólido resultante seria usado diretamente na próxima etapa.
2. Preparação de 2-bromo-4-metilbenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
[0216]2-Amino-4-metilbenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (44,5 g, 0,20 mol) e brometo de cobre (75,9 g, 0,34 mol) foram dissolvidos em acetonitrila (300 mL) a 0 °C, e nitrito de terc-butila (24,7 g, 0,24 mol) foram adicionados lentamente gota a gota. Depois de concluída a adição gota a gota, a solução de mistura foi agitada e reagiu a 25 °C durante 3 horas. A solução reacional foi vertida sobre uma água gelada e o sólido foi precipitado e filtrado sob pressão reduzida. O bolo do filtro foi lavado com um solvente misto (PE : EA = 5:1, 600 mL), e o filtrado foi concentrado para obter o produto-alvo (34,3 g; rendimento em duas etapas: 60,0%).
3. Preparação de 4-((((1RS, 4RS, 5SR)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5- il)oxi)metil)- 5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol Cis- Cis-
[0217](1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (200 mg; 0,42 mmol) foi adicionado a diclorometano (20 mL) e, em seguida, ácido trifluoroacético (10 mL) foi adicionado. A solução de mistura reagiu a 25 °C durante 2 horas e, em seguida, a solução reacional foi concentrada e usada diretamente na próxima etapa.
4. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-metilbenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila Cis- Cis-
[0218]2-bromo-4-metilbenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (120 mg; 0,42 mmol), 4-((((1RS, 4RS, 5SR)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il) oxi)metil)-5-ciclopropil-3- (2,6-diclorofenil)
isoxazol (160 mg; 0,42 mmol) e carbonato de césio (410 mg; 1,26 mmol) foram adicionados a acetonitrila (30 mL), e a solução de mistura reagiu a 90 °C durante 10 horas. A solução reacional foi resfriada e filtrada, e o filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (PE : EA = 3:1) para obter o composto título (45 mg; rendimento em duas etapas: 18,4%).
5. Preparação de 2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-metilbenzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico Cis- Cis-
[0219]2-((1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-metilbenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (45 mg; 0,077 mmol) e hidróxido de lítio monoidratado (16 mg; 0,38 mmol) foram adicionados à solução mista de metanol (8 mL), THF (8 mL) e água (4 mL), e a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 5 horas. O pH da solução reacional foi ajustado para 5 com ácido hidroclorídrico, e a solução resultante foi então concentrada para obter o produto-alvo (34 mg; rendimento: 77,4%).
[0220]Fórmula molecular: C28H25Cl2N3O4S Peso molecular: 569,1 LC- MS(m/z): 570,2 (M+H)+
[0221]1H NMR (400 MHz, CDCl3) : 8,19 (s, 1H); 7,84 (s, 1H); 7,56-7,50 (m,3H); 4,36 (s, 2H); 3,63-3,48 (m, 2H); 3,17-3,08 (m,1H); 2,69-2,62 (m,1H); 2,55 (s, 3H); 2,48-2,35 (m, 1H); 2,15-2,03 (m, 2H); 1,75-1,68 (m,1H); 1,49-1,46 (m, 1H); 1,40- 1,32 (m, 2H); 1,18-1,21 (m, 2H) Exemplo 6: Preparação de 2-((1RS, 4SR, 6RS)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)
isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico (composto 6)
1. Preparação de (1RS, 4SR, 6RS)-6-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano -2-carboxilato de terc-butila Cis- Cis-
[0222](1RS, 4SR, 6RS)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-6-ol (0,5 g; 3,3 mmol) foi dissolvido em diclorometano (20 mL), e di-terc-dicarbonato de butila (0,73 g; 3,3 mmol) e trietilamina (0,37 g; 3,7 mmol) foram adicionados. A solução de mistura reagiu a 25 °C durante 3 horas. O solvente foi destilado por centrifugação e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo : acetato de etila = 2:1) para obter o composto-alvo (0,65 g; rendimento: 91,5%).
2. Preparação de (1RS, 4SR, 6RS)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila Cis- Cis-
[0223](1RS, 4SR, 6Rs)-6-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (0,1 g; 0,47 mmol), 4-(clorometil)-5- ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (0,21 g, 0,69 mmol), terc-butóxido de potássio (79 mg; 0,70 mmol), 18-coroa-6 (0,15 g; 0,57 mmol) e iodeto de potássio (0,12 g; 0,72 mmol) foram dissolvidos em tetraidrofurano (10 mL), e a solução de mistura foi aquecida a 60 °C e reagiu durante 3 horas com agitação. Água (20 mL) e acetato de etila (20 mL) foram adicionados para extração e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (20 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 5:1) para obter o composto (0,2 g; rendimento: 90,9%).
3. Preparação de 4-((((1RS, 4SR, 6RS)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-6- il)oxi)metil)- 5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol Cis- Cis-
[0224](1RS, 4SR, 6Rs)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (0,20 g; 0,42 mmol) foi dissolvido em diclorometano (2 mL) e uma solução (2 mL) de ácido clorídrico em etanol foi adicionada após a solução da mistura ter sido resfriada a 0 °C. A solução de mistura resultante reagiu durante 3 horas. O pH do sistema de reação foi ajustado para 7 a 8 com uma solução saturada de bicarbonato de sódio e, em seguida, a solução reacional foi extraída com diclorometano (10 mL x 2). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada, e o filtrado foi concentrado para obter um composto bruto (0,158 g; rendimento: 100%) que seria usado diretamente na próxima etapa.
4. Preparação de 2-((1RS, 4SR, 6RS)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila
Cis- Cis-
[0225]4-((((1RS, 4SR, 6RS)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-6-il)oxi)metil)-5- ciclopropil- 3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (0,158 g; 0,42 mmol) foi dissolvido em N,N- dimetilacetamida (3 mL) e, em seguida, 2-bromobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (0,23 g; 0,84 mmol) e carbonato de césio (0,41 g; 1,3 mmol) foram adicionados. A solução de mistura foi aquecida a 100 °C sob microondas e reagiu durante 30 minutos.
Água (30 mL) foi adicionada, e a solução foi extraída com acetato de etila (20 mL x 2).
As fases orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio anidro e filtradas.
O filtrado foi concentrado e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 2:1) para obter o composto (0,15 g; rendimento: 62,5%).
5. Preparação de 2-((1RS, 4SR, 6RS)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico Cis- Cis-
[0226]2-((1RS, 4SR, 6RS)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (0,15 g; 0,26 mmol) foi dissolvido na solução mista de tetraidrofurano (2 mL) e metanol (2 mL), e uma solução de hidróxido de sódio (52 mg; 1,3 mmol) em água (1 mL) foi adicionada. A solução de mistura foi agitada e reagiu a 60 °C durante 3 horas. O pH da solução reacional foi ajustado para 3 a 4 com ácido hidroclorídrico 1N. Água (10 mL) foi adicionada, e a solução foi extraída com acetato de etila (10 mL x 2). As fases orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (diclorometano : metanol = 20:1) para obter o composto (0,11 g; rendimento: 73,3%).
[0227]Fórmula molecular: C27H23Cl2N3O4S Peso molecular: 555,1 LC-MS(m/z): 556,1 (M+H+)
[0228]1H-NMR (400 MHz, MeOD) δ: 8,33 (s, 1H); 7,98 (dd, J1=8,8 Hz, J2=1,6 Hz, 1H); 7,49-7,51 (m, 2H); 7,41-7,46 (m, 2H); 4,38-4,47 (m, 2H); 3,57-3,58 (m, 1H); 3,42-3,44 (m, 1H); 2,95-3,01 (m, 1H); 2,62-2,65 (m, 1H); 2,32-2,36 (m, 1H); 1,75-1,79 (m, 1H); 1,61-1,69 (m, 2H); 1,33-1,36 (m, 1H); 1,07-1,19 (m, 4H) Exemplo 7: Preparação de 2-((1RS, 4SR, 6SR)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico (composto 7)
1. Preparação de (1RS, 4SR, 6SR)-6-((4-nitrobenzoil)oxi-2- azabiciclo[2.2.1]heptano -2-carboxilato de terc-butila
Cis- Trans-
[0229](1RS, 4SR, 6Rs)-6-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (0,2 g; 0,94 mmol), ácido p-nitrobenzóico (0,172 g; 1,03 mmol), azodicarboxilato de dietila (0,24 g; 1,38 mmol) e trifenilfosfina (0,37 g; 1,41 mmol) foram dissolvidos em tetraidrofurano (10 mL), e a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 3 horas. O solvente foi destilado por centrifugação e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 5:1) para obter o produto-alvo (0,32 g; rendimento: 94,1%).
2. Preparação de (1RS, 4SR, 6SR)-6-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2- carboxilato de terc-butila Trans- Trans-
[0230](1RS, 4SR, 6Sr)-6-((4-nitrobenzoil)oxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2- carboxilato de terc-butila (0,32 g; 0,88 mmol) e hidróxido de potássio (0,5 g; 8,9 mmol) foi dissolvido no solvente misto de tetraidrofurano (30 mL) e água (3 mL), e a solução da mistura foi agitada e reagiu a 25 °C durante 16 horas. O solvente foi destilado por centrifugação e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 2:1) para obter o produto-alvo (0,13 g; rendimento: 68,4%).
3. Preparação de (1RS, 4SR, 6SR)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila
Trans- Trans-
[0231](1RS, 4SR, 6SR)-6-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (0,13 g; 0,61 mmol), 4-(clorometil)-5- ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (0,28 g, 0,92 mmol), terc-butóxido de potássio (0,1 g; 0,89 mmol), 18-coroa-6 (0,2 g; 0,76 mmol) e iodeto de potássio (0,15 g; 0,90 mmol) foram dissolvidos em tetraidrofurano (20 mL), e a solução de mistura foi aquecida a 60 °C e reagiu durante 3 horas com agitação. Água (20 mL) e acetato de etila (20 mL) foram adicionados para extração e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (20 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 5:1) para obter o produto-alvo (0,25 g; rendimento: 86,2%).
4. Preparação de 4-((((1RS, 4RS, 6SR)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-6- il)oxi)metil)- 5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol Trans- Trans-
[0232](1RS, 4SR, 6SR)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (0,25 g; 0,52 mmol) foi dissolvido em diclorometano (2 mL) e uma solução (2 mL) de ácido clorídrico em etanol foi adicionada após a solução da mistura ter sido resfriada a 0 °C. A solução de mistura resultante reagiu durante 3 horas. O pH do sistema de reação foi ajustado para 7 a 8 com uma solução saturada de bicarbonato de sódio e, em seguida, a solução reacional foi extraída com diclorometano (10 mL x 2). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada, e o filtrado foi concentrado. O resíduo seria usado diretamente na próxima etapa.
5. Preparação de 2-((1RS, 4SR, 6SR)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6- diclorofenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila Trans- Trans-
[0233]4-((((1RS, 4SR, 6SR)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-6-il)oxi)metil)-5- ciclopropil- 3-(2,6-diclorofenil)isoxazol (produto cru da última etapa; 0,52 mmol) foi dissolvido em N,N-dimetilacetamida (3 mL) e, em seguida, 2-bromobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (0,28 g; 1,0 mmol) e carbonato de césio (0,51 g; 1,6 mmol) foram adicionados.
A solução de mistura foi aquecida a 100 °C sob microondas e reagiu durante 30 minutos. Água (30 mL) foi adicionada, e a solução foi extraída com acetato de etila (20 mL x 2). As fases orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 2:1) para obter o produto-alvo (0,24 g; rendimento: 80,0%).
6. Preparação de 2-((1RS, 4SR, 6SR)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)benzo[d]tiazol-6-ácido carboxílico
Trans- Trans-
[0234]2-((1RS, 4SR, 6SR)-6-((5-ciclopropil-3-(2,6-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (0,24 g; 0,42 mmol) foi dissolvido na solução mista de tetraidrofurano (2 mL) e metanol (2 mL), e uma solução de hidróxido de sódio (80 mg; 2,0 mmol) em água foi adicionada. A solução de mistura foi agitada e reagiu a 60 °C durante 3 horas. O pH da solução reacional foi ajustado para 3 a 4 com ácido hidroclorídrico 1N, e água (10 mL) foi adicionada. A solução foi extraída com acetato de etila (10 mL x 2). As fases orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado e o produto bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (diclorometano : metanol = 20:1) para obter o produto-alvo (0,13 g; rendimento: 56,5%).
[0235]Fórmula molecular: C27H23Cl2N3O4S Peso molecular: 555,1 LC-MS(m/z): 556,1 (M+H+)
[0236]1H-NMR (400 MHz, MeOD) δ: 8,33 (s, 1H); 7,98 (dd, J1=8,8 Hz, J2=1,6 Hz, 1H); 7,49-7,51 (m, 2H); 7,41-7,46 (m, 2H); 4,39-4,47 (m, 2H); 3,57-3,59 (m, 1H); 3,43-3,45 (m, 1H); 2,95-3,01 (m, 1H); 2,62-2,65 (m, 1H); 2,32-2,36 (m, 1H); 1,75-1,79 (m, 1H); 1,61-1,69 (m, 2H); 1,33-1,36 (m, 1H); 1,07-1,20 (m, 4H) Exemplo 8: Preparação de 2-((1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2- trifluorometóxi)fenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-ácido fórmico (composto 8)
1. Preparação de 4-amino-3-fluorobenzoato de metila
[0237]3-fluoro-4-nitrobenzoato de metila (3,0 g; 15,1 mmol) foi dissolvido em MeOH (50 mL), e Pd/C (1,2 g) foi adicionado a uma atmosfera de N2. A solução de mistura foi submetida a hidrogenação a 25 °C durante 3 horas. O Pd/C foi separado por filtração através de celite e o resíduo foi concentrado para obter o produto (2,5 g; rendimento: 98,0%).
2. Preparação de 2-amino-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-formato de metila
[0238]4-amino-3-fluorobenzoato de metila (2,5 g; 14,8 mmol) e KSCN (5,7 g; 59,1 mmol) foram adicionados a ácido acético glacial (50 ml) e a solução foi agitada a 25 °C durante 15 minutos. Em seguida, bromo (2,4 g; 14,9 mmol) foi adicionado gota a gota, e a solução de mistura continuou a reagir a 25 °C durante 16 horas. A solução reacional foi filtrada e o filtrado foi diluído com água (50 mL). O pH do filtrado foi ajustado para 8 com hidróxido de amônia. Em seguida, a solução resultante foi filtrada e o bolo do filtro foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo: acetato de etila = 5: 1) para obter o produto (200 mg, rendimento: 6,0%).
3. Preparação de 2-bromo-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-formato de metila
[0239]2-Amino-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-formato de metila (200 mg; 0,88 mmol)
e CuBr2 (395 mg; 1,77 mmol) foram dissolvidos em acetonitrila (10 mL), e nitrito de terc-butila (182 mg; 1,77 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °C. Depois de concluída a adição, a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 1 hora. A solução reacional foi diluída com EA (50 mL), lavada com água (50 mL x 3), seca e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 5:1) para obter um produto (230 mg; rendimento: 89,7%).
4. Preparação de (E)-2-trifluorometoxibenzaldoxima
[0240]Cloridrato de hidroxilamina (5,88 g; 84,7 mmol) foi dissolvido em água (60 mL), e a solução foi agitada a 0 °C. NaOH (3,5 g; 87,6 mmol) foi dissolvido em água (60 mL) e, em seguida, adicionado gota a gota ao balão de reação. 2- trifluorometoxibenzaldeído (14 g; 73,6 mmol) foi dissolvido em uma solução de etanol anidro (60 mL) e, em seguida, adicionado gota a gota ao balão de reação. Depois de concluída a adição, a solução da mistura reagiu a 25 °C durante 1 hora. A solução reacional foi diluída com água (300 mL) e extraída com acetato de etila (500 mL x 3).
As fases orgânicas foram combinadas, secas e concentradas para obter o produto bruto (15,4 g).
5. Preparação de N-hidroxi-2-(trifluorometóxi)cloreto de benzimidoila
[0241](E)-2-trifluorometoxibenzaldoxima (15,4 g; produto bruto) foi dissolvido em DMF (150 mL), e depois adicionou-se NCS (11,23 g; 84,1 mmol) em lotes a uma temperatura não superior a 25 °C. Depois de concluída a adição, a solução da mistura reagiu a 25 °C durante 1 hora. A solução reacional foi diluída com água (150 mL) e extraída com acetato de etila (500 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas,
secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas para obter o produto bruto (16,6 g).
6. Preparação de 5-ciclopropil-3-(2-(trifluorometóxi)fenil)isoxazol-4-formato de metila
[0242]Carbonato de potássio (10,44 g; 75,52 mmol) foi adicionado a THF (100 mL), e a solução de cloridrato de 3-ciclopropil-3-oxopropionato de etila (10,44 g; 73,4 mmol) em THF (50 mL) foi adicionada ao sistema de reação. O sistema foi agitado a -10 °C durante 30 min. Em seguida, a solução de cloreto de N-hidroxi-2- trifluorometóxi)benzimidoíla (16,6 g; produto bruto) em THF (50 mL) foi adicionada ao sistema de reação a -5 °C, e o sistema reagiu a 35 °C durante 6 horas. A solução reacional foi diluída com água (200 mL) e extraída com acetato de etila (500 mL x 3).
A fase orgânica foi seca, concentrada e purificada por uma coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 5:1) para obter um produto (11,3 g; rendimento: 47,1%).
7. Preparação de (5-ciclopropil-3-(2-(trifluorometóxi)fenil)isoxazol-4-il)- metanol
[0243]5-ciclopropil-3-(2-(trifluorometóxi)fenil)isoxazol-4-formiato de metila (2,4 g; 7,33 mmol) foi dissolvido em THF anidro (50 mL), e DIBAL-H (solução de metilbenzeno 1,5 M; 15 mL) foi adicionada gota a gota a 0 °C. Após concluída a adição, a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 2 horas. MeOH (2 mL) foi adicionado gota a gota ao sistema de reação a 0 °C para cessar a reação e, em seguida, água (50 mL) e acetato de etila (100 mL) foram adicionados. A solução resultante foi filtrada através de celite; depois, o filtrado foi separado por repouso e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (100 mL x 2). As fases orgânicas foram combinadas, secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 5:1) para obter um produto (1,0 g; rendimento: 45,6%).
8. Preparação de 4-bromometil)-5-ciclopropil-3-(2- (trifluorometóxi)fenil)isoxazol
[0244](5-ciclopropil-3-(2-(trifluorometóxi)fenil)isoxazol-4-il)-metanol (1 g; 3,34 mmol) foi dissolvido em diclorometano (20 mL) e trifenilfosfina (1,31 g; 5,01 mmol) foi adicionada. Tetrabrometo de carbono (1,66 g; 5,07 mmol) foi adicionado em lotes a 0 °C e, após a conclusão da adição, a solução de mistura reagiu a 25 °C durante 2 horas. A solução reacional foi concentrada e purificada por uma coluna de sílica-gel (éter de petróleo:acetato de etila = 10:1) para obter um produto (860 mg; rendimento: 72,0%).
9. Preparação de (1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2- (trifluorometóxi)fenil)isoxazol-4-il) metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-formato de terc-butila
[0245](1RS, 4RS, 5Rs)-5-hidroxi-2-azabiciclo[2.2.1]heptano-2-formato (0,15 g, 0,7 mmol), terc-butóxido de potássio (118 mg; 1,05 mmol) e 18-coroa-6 (93 mg; 0,35 mmol) foram adicionados em THF (20 mL) e a solução da mistura reagiu a 25 °C durante 5 minutos. Em seguida, 4-(bromometil)-5-ciclopropil-3-(2-
trifluorometóxi)fenil)isoxazol (280 mg; 0,77 mmol) foi adicionado, e a solução resultante reagiu a 25 °C durante 3 horas. A solução reacional foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 10:1) para obter o produto (200 mg; rendimento: 57,7%).
10. Preparação de trifluoroacetato de 4-((((1S, 4S, 5R)-2- azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il) oxi)metil)-5-ciclopropil-3-(2-(trifluorometóxi)fenil)isoxazol
[0246](1RS, 4RS, 5SR)-5-((5-ciclopropil-3-(2-diclorofenil)isoxazol-4- il)metóxi)-2- azabiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de terc-butila (0,2 g; 0.4 mmol) foi adicionado a DCM (10 mL) e, em seguida, TFA (4 mL) foi adicionado. A solução de mistura reagiu a 25 °C durante 2 horas e a solução reacional foi concentrada para obter o produto bruto (300 mg).
11. Preparação de 2-((1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2- (trifluorometóxi)fenil)isoxazol- 4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-formato de metila
[0247]Trifluoroacetato de 4-((((1S, 4S, 5R)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-5- il)oxi)metil)-5- ciclopropil-3-(2-trifluorometóxi)fenil)isoxazol (300 mg; produto bruto), 2-bromo-4- fluorobenzo
[d]tiazol-6-formato de metila (256 mg; 0,88 mmol) e carbonato de césio (600 mg; 1,84 mmol) foram adicionados a DMA (6 mL), e a solução de mistura reagiu a 110 °C sob microondas durante 0,5 hora. A solução reacional foi vertida em água (30 mL) e depois filtrada. O bolo do filtro foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (éter de petróleo : acetato de etila = 2:1) para obter o produto (200 mg; rendimento em duas etapas: 82,8%).
12. Preparação de 2-((1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2-trifluorometóxi)fenil) isoxazol-4-il)metóxi)-2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-ácido fórmico
[0248]2-((1S, 4S, 5R)-5-((5-ciclopropil-3-(2-(trifluorometóxi)fenil)isoxazol-4- il)metóxi) -2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)-4-fluorobenzo[d]tiazol-6-formato de metila (200 mg; 0,33 mmol) e hidróxido de lítio monohidratado (70 mg; 1,65 mmol) foram dissolvidos na solução mista de metanol (10 mL), tetraidrofurano (10 mL) e água (10 mL), e a solução de mistura foi agitada a 25 °C durante 4,6 horas. A solução reacional foi concentrada e o pH da fase aquosa foi ajustado para 2 com ácido clorídrico diluído (1M) e, em seguida, a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (50 mL x 3). As fases orgânicas foram combinadas e concentradas e o resíduo foi purificado por CCF (diclorometano : metanol = 10:1) para obter o produto (120 mg; rendimento 61,7%).
[0249]Fórmula molecular: C28H23F4N3O5S Peso molecular: 589,56 LC-MS(M/e): 590,2 (M+H)+
[0250]1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8,09 (s, 1H); 7,72 (d, J=6,0 Hz, 1H); 7,52 (s, 2H); 7,35-7,38 (m, 2H); 4,29-4,35(m, 2H); 3,59 (s, 1H); 3,49 (s, 1H); 3,00 (s, 1H);
2,63 (s, 1H); 2,07 (s, 2H); 1,69 (s, 2H); 1,47-1,50 (m, 1H); 1,21 (s, 2H); 1,10 (m, 2H).

Claims (16)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que tem a fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster, em que R1 é selecionado a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, hidróxi C1-6 alquila, amino C1-6 alquila, alcóxi C1-6, alquilamina C1-6, alquilcarbonila C1-6, alcóxi C1-6 alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros alcóxi C1-6, heterocíclila de 3-8 membros, heterocíclila de 3-8 membros alquila C1-6, ou heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6; X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NR2, O, S ou CR3R4; R2, R3 e R4 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, alcóxi C1-6 ou alquilamina C1-6; M é alquileno C1-6, em que um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-6 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, CO, S, SO ou SO2; o anel A é selecionado entre ciclila de 7 membros em ponte ou heterocíclila de 7 membros em ponte; o anel B é selecionado a partir de um grupo que consiste em arila de 6-10 membros, heteroarila de 5-10 membros, heterocíclila de 3-14 membros e cicloalquila de 3-8 membros que são opcionalmente substituídas por um Q1 ou mais; cada Q1 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, hidróxi C1-6 alquila, amino C1-6 alquila, alcóxi C1-6, alquilamina C1-6, alquilcarbonila C1-6, alquilsulfonila C1- 6, alquilsulfinila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros alcóxi C1-6, heterocíclila de 3-8 membros alquila C1- 6, ou heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6; L está ausente ou é alquileno C1-6, em que um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-6 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH, O, CO, S, SO ou SO2; Ar é selecionado a partir de um grupo que consiste em arila de 6-10 membros, arila de 6-10 membros alquila C1-6, arila de 6-10 membros alcóxi C1-6, heteroarila de 5-10 membros, heteroarila de 5-10 membros alquila C1-6, heteroarila de 5-10 membros alcóxi C1-6, cicloalquila de 3-8 membros e heterocíclila de 3-8 membros que são opcionalmente substituídas por um ou mais Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-6, haloC1-6 alquila, hidróxi C1-6 alquila, amino C1-6 alquila, alcóxi C1-6, alcóxi C1-6 alquila, alquilamina C1-6, alquilcarbonila C1-6, alquilsulfonila C1-6, alquilsulfinila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros, cicloalquila de 3-8 membros alquila C1-6, cicloalquila de 3-8 membros alcóxi C1-6, heterocíclila de 3-8 membros, heterocíclila de 3-8 membros alquila C1-6, ou heterocíclila de 3-8 membros alcóxi C1-6.
2. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que
R1 é selecionado a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi
C1-4, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alcóxi C1-4 alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi
C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila
C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4;
Preferencialmente, X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NR2, O, S ou CR3R4; R2, R3 e
R4 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, alcóxi C1-4 ou alquilamina C1-4;
preferencialmente, M é alquileno C1-4, em que um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-4 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em N, NH,
O, CO, S, SO ou SO2;
preferencialmente, o anel A é selecionado entre ciclila de 7 membros em ponte ou heterocíclila nitrogenada de 7 membros em ponte; preferencialmente, o anel B é selecionado entre heteroarila fundida de 8-10 membros e heterocíclila fundida de 7-14 membros que são opcionalmente substituídas por 1 a 2 Q1 e contêm 1 a 3 heteroátomos ou grupos, e o heteroátomo ou grupo é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em N, NH,
O, S, SO ou SO2;
preferencialmente, cada Q1 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila,
hidróxi C1-4 alquila, aminoC1-4 alquila, alcóxi C1-4, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4,
alquilsulfonila C1-4, alquilsulfinila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de
3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4; preferencialmente, L está ausente ou é alquileno C1-4, em que um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-4 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em NH, O, CO, S, SO ou SO2; preferencialmente, Ar é selecionado a partir de um grupo que consiste em monocicloarila de 6-8 membros, arila fundida de 8-10 membros, monocicloarila de 6- 8 membros C1-4 alquila, arila fundida de 8-10 membros C1-4 alquila, monocicloarila de 6-8 membros C1-4 alcóxi, arila fundida de 8-10 membros C1-4 alcóxi, monociclo- heteroarila de 5-7 membros, heteroarila fundida de 8-10 membros, monociclo- heteroarila de 5-7 membros C1-4 alquila, heteroarila fundida de 8-10 membros C1-4 alquila, monociclo-heteroarila de 5-7 membros C1-4 alcóxi, heteroarila fundida de 8-10 membros C1-4 alcóxi, cicloalquila de 3-8 membros e heterocíclila de 3-8 membros, que são opcionalmente substituídas por 1 a 3 Q2; e preferencialmente, cada Q2 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi C1-4, alcóxi C1-4 alquila, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alquilsulfonila C1-4, alquilsulfinila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono-heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4, ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4.
3. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, CARACTERIZADO pelo fato de que M é selecionado de um grupo que consiste em -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-CH2- CH2-, -CH2-NH-, -CH2-CH2-O- e -CH2-NH-CO-;
preferencialmente, o anel A é selecionado entre ciclila saturada de 7 membros em ponte ou heterocíclila nitrogenada saturada de 7 membros em ponte, e quando o anel A for uma heterocíclila nitrogenada saturada em ponte, preferencialmente, o anel A é ligado a L ou ao anel B por um átomo de nitrogênio do anel; preferencialmente, X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NR2, O ou S; R2 é selecionado de um grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, hidroxila, amina, metila, etila, propila, isopropila ou trifluorometila.
4. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é selecionado a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxi C1-4 alquila, amino C1-4 alquila, alcóxi C1-4, alquilamina C1-4, alquilcarbonila C1-4, alcóxi C1-4 alquila C1-4, cicloalquila de 3-4 membros, cicloalquila de 3-4 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-4 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-4 membros, mono-heterocíclila de 3-4 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-4 membros alcóxi C1-4; e, preferencialmente, o anel A é selecionado entre os grupos a seguir: , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , e .
5. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADO pelo fato de que o anel B é selecionado entre heteroarila fundida de 9-10 membros que contém 1 a 2 heteroátomos ou grupos e é opcionalmente substituída por 1 a 2 Q1, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado independentemente de um grupo que consiste em N, NH, O, S, SO ou SO2; preferencialmente, o anel B é ligado a L ou ao anel A por um átomo de carbono do anel; preferencialmente, cada Q1 é selecionado independentemente a partir de um grupo que consiste em halogênio, hidroxila, amina, ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, alcóxi C1-4, cicloalquila de 3-6 membros, cicloalquila de 3-6 membros alquila C1-4, cicloalquila de 3-6 membros alcóxi C1-4, mono-heterocíclila de 3-6 membros, mono- heterocíclila de 3-6 membros alquila C1-4 ou mono-heterocíclila de 3-6 membros alcóxi C1-4; e, preferencialmente, L está ausente ou é alquileno C1-2, em que um ou mais átomos de carbono no alquileno C1-2 são opcionalmente repostos por um heteroátomo ou um grupo, e o heteroátomo ou o grupo é selecionado a partir de um grupo que consiste em NH, O, S ou CO.
6. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que Ar é selecionado a partir de um grupo consistindo em fenil, fenilC1-4 alquila, fenilC1-4 alcóxi, monociclo-heteroarila de 5-6 membros, monociclo-heteroarila de 5-6 membros alquila C1-4 e monociclo-heteroarila 5-6 membros alcóxi C1-4 que são opcionalmente substituídos por 1 a 2 Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente a partir de um grupo consistindo em halogênio, hidroxila, amina,
ciano, alquila C1-4, haloC1-4 alquila, hidróxiC1-4 alquila, aminoC1-4 alquila, alcóxi C1-4, alcóxi C1-4 alquila ou alquilamina C1-4.
7. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou o estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é selecionado de um grupo que consiste em halogênio, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, trifluoroetila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, metilamina, etilamina, metoximetila, metoxietila, etoximetila, ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutilmetila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila ou azaciclobutila; X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NH, O ou S; M é selecionado entre -CH2-, -CH2-CH2- ou -CH2-CH2-CH2-; o anel A é selecionado entre os seguintes grupos: , , , , , , , , , , , , , e ; o anel B é selecionado entre os grupos a seguir, substituídos opcionalmente por 1 Q1: , , , , , , , , e ;
Q1 é selecionado de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, hidroxila, amina, ciano, metila, etila, propila, isopropila, fluorometila, difluorometila, trifluorometila, 1-fluoroetila, 2-fluoroetila, 1,1-difluoroetila, 1,2-difluoroetila, 2,2- difluoroetila, 2,2,2-trifluoroetila, 3,3,3-trifluoropropila, 1-trifluorometiletila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, ciclopentila, ciclo-hexila, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila, azaciclobutila, tetraidrofurila, pirrolidila, imidazolidinila, pirazolidinila, tiazolidinila, tetraidropiranila, tetraidropiridinila, piperazinila ou morfolinila; L está ausente; Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, fenilmetila, feniletila, fenilmetóxi, furila, pirrila, tienila, pirazolila, imidazolila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; e cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, hidroxila, amina, ciano, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, trifluoroetila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, metilamina, etilamina, metoximetila, metoxietila ou etoximetila.
8. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é selecionado de um grupo que consiste em ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutilmetila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila ou azaciclobutila; o anel A é selecionado de um grupo que consiste em , e ;
o anel B é selecionado entre os grupos a seguir, substituídos opcionalmente por 1 Q1: , e ; Q1 é selecionado de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi; Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, metóxi ou etóxi; e preferencialmente, X1 e X2 são ambos O.
9. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de que tendo a estrutura a seguir mostrada como fórmula geral (II): .
10. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é selecionado entre: Cis- Cis- , ,
, , Trans- , Cis- , Cis- Cis- , e Trans- .
11. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que tem a fórmula geral (II), um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster,
em que X1, X2, R1, Q1 e Ar são como descrito em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em, metila, etila, propila, isopropila, etóxi ou trifluorometóxi.
12. Ccomposto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é selecionado de um grupo que consiste em ciclopropila, ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclopropilmetóxi, ciclobutila, ciclobutilmetila, ciclobutiletila, ciclobutilmetóxi, epoxietila, epoxietilmetila, azaciclopropila, azaciclopropilmetila, oxaciclobutila ou azaciclobutila; X1 e X2 são selecionados individualmente e de forma independente a partir de um grupo que consiste em N, NH, O ou S; Q1 é selecionado de um grupo que consiste em flúor, cloro, bromo, metila, etila, propila, isopropila, trifluorometila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi; Ar é selecionado de um grupo que consiste em fenila, piridila e pirimidinila, que são substituídas opcionalmente por 1 a 2 Q2; cada Q2 é selecionado independentemente de um grupo que consiste em metila, etila, propila, isopropila, etóxi ou trifluorometóxi; preferencialmente, R1 é selecionado entre ciclopropila e ciclobutila; e preferencialmente, Ar é fenil opcionalmente substituído por 1 a 2 Q2.
13. Composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster de acordo com a reivindicação 12, CARACTERIZADO pelo fato de que
.
14. Formulação farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que contém o composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou éster como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, em que a formulação farmacêutica contém um ou mais veículos e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis e podem ser de qualquer forma de dosagem farmaceuticamente aceitável.
15. Uso do composto, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um éster seu ou um estereoisômero do composto, o sal ou o éster como definido em qualquer uma das reivindicações 1-13, CARACTERIZADO pelo fato de que é na preparação de um medicamento para prevenir e/ou tratar doenças mediadas por FXR, preferencialmente, as doenças são selecionadas entre aterosclerose, distúrbio do metabolismo dos ácidos biliares, colangite esclerosante primária, cálculo de colesterol, doenças relacionadas à fibrose, fígado gorduroso, cirrose, hepatite, insuficiência hepática, colestase, colelitíase, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, trombo, complicações clínicas do diabetes tipo I ou tipo II, doenças hiperproliferativas e doenças inflamatórias intestinais.
16. Uso de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que as doenças são selecionadas entre doença hepática gordurosa alcoólica, doença hepática gordurosa não-alcoólica, cirrose biliar primária, cirrose colangética primária, hepatite crônica, hepatite não-viral, esteato-hepatite alcoólica, esteato-hepatite não alcoólica, colestase intra-hepática benigna, colestase intra-hepática familiar progressiva, colestase induzida por drogas, colestase gestacional, colestase relacionada à nutrição gastrointestinal, colestase extra-hepática, hipercolesterolemia,
icterícia neonatal, kernicterus, nefropatia diabética, neuropatia diabética, retinopatia diabética, outros resultados observados do diabetes manifesto crônico clínico,
carcinoma hepatocelular, adenoma do cólon, polipose, adenocarcinoma do cólon,
câncer de mama, câncer de pâncreas, carcinoma de esôfago e outras formas de doenças neoplásicas gastrointestinais e hepáticas.
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