BR112019020049A2 - Composto conjungado, célula tumoral, composição farmacêutica, e, agentes sinérgicos. - Google Patents

Composto conjungado, célula tumoral, composição farmacêutica, e, agentes sinérgicos. Download PDF

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Abstract

é provida a conjugação de citotóxico a uma molécula de ligação celular com um bis-ligante (ligante duplo) como mostrado na fórmula (i). são providos métodos de bis-acoplamento de preparação de um conjugado de uma molécula de fármaco citotóxico a um agente de ligação celular de uma maneira específica. também se refere à aplicação dos conjugados para o tratamento de um câncer, ou uma doença autoimune, ou uma doença infecciosa.

Description

COMPOSTO CONJUNGADO, CÉLULA TUMORAL, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, AGENTES SINÉRGICOS
CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se à conjugação de citotóxico a uma molécula de ligação celular com um bis-ligante (ligante duplo). Ela refere-se a um método de bis-acoplamento de conjugação de um fármaco/molécula citotóxica, particularmente quando o fármaco possui grupos funcionais duplos de amino, hidroxil, diamino, amino-hidroxil, dihidroxil, carboxil, hidrazina, aldeído e tiol. A presente invenção também se refere a métodos de preparação de conjugados agente de ligação celular fármaco (agente citotóxico) com o bis-ligante de uma forma específica. FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[002] Os conjugados anticorpo-fármaco (ADCs) tomaram-se uma das terapias de direcionamento promissoras para o câncer, como evidenciado pelo sucesso clínico de brentuximabe vedotina (Adcetris) para linfoma de Hodgkin recidivado/refratário (Okeley, N. et al., Hematol Oncol. Clin. North. Am, 2014, 28, 13-25; Gopal, A., et al, Blood 2015, 125, 1236-43) e e adotrastuzumabe emtansina para câncer de mama HER2+ recidivado (Peddi, P. e Hurvitz, S., Ther. Adv. Med. Oncol. 2014, 6(5), 202-9; Lambert, J. e Chari, R., J. Med. Chem. 2014, 57, 6949-64). Os três componentes importantes, anticorpo monoclonal, carga citotóxica e ligante condicional de ADCs, além dos sítios onde acoplar os componentes de carga do ligante, são fatores importantes para o sucesso do ADC. Foram três décadas estudando cada fator dos componentes de ADCs. No entanto, as tecnologias de ligante permanecem limitadas em escopo, uma vez que os fármacos que são conjugados devem conter certos grupos funcionais reativos, garantir a estabilidade da circulação e a liberação fácil de fármaco após a ligação ao antígeno e a captação intracelular, e de maneira importante não prejudicar os tecidos normais depois que os componentes de carga do ligante estiverem fora
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 23/626
2/310 do alvo durante a circulação (Ponte, J. et al., Bioconj. Chem., 2016, 27(7), 1588-98; Dovgan, 1., et al. Sci. Rep. 2016, 6, 30835; Ross, P. L. e Wolfe, J. L. J. Pharm. Sci. 105(2), 391-7; Chen, T. et al. J. Pharm. Biomed. Anal., 2016, 117, 304-10).
[003] Nos ADCs iniciais, os ligantes que eram particularmente utilizados para direcionamento de ADCs de tumores líquidos eram muito instáveis e levaram à liberação de fármaco livre na circulação e consequente toxicidade fora do alvo (Bander, N.H. et al., Clin. Adv. Hematol. Oncol., 2012, 10, 1-16). Na geração atual de ADCs, os ligantes são mais estáveis e os agentes citotóxicos são significativamente mais potentes (Behrens, C.R. e Liu, B., mAbs, 2014. 6, 46-53). No entanto, a toxicidade fora do alvo até o momento ainda é o grande desafio no desenvolvimento de fármacos de ADC (Roberts, S. A. et al., Regul. Toxicol. Pharmacol. 2013, 67, 382-91). Por exemplo, na prática clínica, o ado-trastuzumabe emtansina (T-DM1, Kadcyla®), que é usado como um ligante de MCC estável (não clivável), mostrou grande benefício em pacientes que têm câncer de mama metastático (MBC) positivo para HER2 ou que já tenham sido tratados para mBC ou desenvolveram recorrência de tumor HER2 dentro de seis meses da terapia adjuvante (Peddi, P. e Hurvitz, S., Ther. Adv. Med. Oncol. 2014, 6(5), 202 209; Piwko C, et al, Clin Drug Investig. 2015, 35(8), 487-93; Lambert, J. e Chari, R., J. Med. Chem. 2014, 57, 6949-64). Porém, o T-DM1 falhou no ensaio clínico como tratamento de primeira linha para pacientes com câncer de mama localmente avançado ou metastático irressecável HER2 positivo e como tratamento de segunda linha de câncer gástrico avançado HER2 positivo devido a poucos benefícios para os pacientes quando comparada a toxicidade colateral à eficácia (Ellis, PA, et al., J. Clin. Oncol. 2015, 33, (supl.; resumo 507 de 2015 ASCO Annual Meeting); Shen, K. et al, Sci Rep. 2016; 6: 23262; de Goeij, B. E. e Lambert, J. M. Curr Opin Immunol 2016, 40, 14-23; Barrios, C. H. et al, J Clin Oncol 2016, 34, (supl.; resumo 593 de
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3/310
2016 ASCO Annual Meeting).
[004] Para abordar questões de toxicidade fora do alvo, a pesquisa e o desenvolvimento da química e do design do ADC estão agora expandindo os escopos dos compartimentos de carga do ligante e a química dos conjugados além das únicas cargas potentes, e especialmente para abordar a atividade da carga do ligante de ADCs em direção a alvos/doenças alvo (Lambert, JM Ther Deliv 2016, 7, 279-82; Zhao, RY et al, 2011, J. Med. Chem. 54, 3606-23). Atualmente, muitos criadores de fármacos e instituições acadêmicas concentram-se altamente no estabelecimento de novos ligantes de conjugação específicos confiáveis e métodos para conjugação de ADC sítioespecífica, que parecem ter meia-vida de circulação mais longa, maior eficácia, toxicidade fora do alvo potencialmente diminuída e uma faixa estreita das propriedades farmacocinéticas (PK) in vivo dos ADCs, bem como uma melhor consistência lote a lote na produção de ADC (Hamblett, KJ et al., Clin. Cancer Res. 2004, 10, 7063-70; Adem, Y. T. et al, Bioconjugate Chem. 2014, 25, 656-664; Boylan, N. J. Bioconjugate Chem. 2013, 24, 1008-1016; Strop, P., et al 2013 Chem. Biol. 20, 161-67; Wakankar, A. mAbs, 2011, 3, 161-172). Estes métodos de conjugação específicos relatados até agora incluem a incorporação de cisteínas manipuladas (Junutula, J. R. et al. Nat. Biotechnol. 2008, 26, 925-32; Junutula, J. R., et al 2010 Clin. Cancer Res. 16, 4769; Patentes dos EUA 8.309.300; 7.855.275; 7.521.541; 7.723.485, W02008/141044), selenocisteínas (Hofer, T., et al. Biochemistry 2009, 48, 12047-57; Li, X., et al. Methods 2014, 65, 133-8; Patente dos EUA 8.916.159 para o US National Cancer Institute), cisteína contendo etiqueta com reagentes perfluoroaromáticos (Zhang, C. et al. Nat. Chem. 2015, 8, ΙΟ), thiolfucose (Okeley, N. M., et al 2013 Bioconjugate Chem. 24, 1650), aminoácidos não naturais (Axup, J. Y., et al, Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 2012, 109, 16101-6; Zimmerman, E.S., et al., 2014, Bioconjug. Chem. 25, 351-361; Wu, P., et al, 2009 Proc. Natl. Acad. Sei. 106, 3000-5; Rabuka, D.,
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4/310 et al, Nat. Protoc. 2012, 7, 1052-67; e Patente dos EUA 8.778.631 e Pedido de Pat. dos EUA 20100184135, W02010/081110 for Sutro Biopharma; W02006/069246, 2007/059312, Patentes dos EUA 7.332.571, 7.696.312, e 7.638.299 para Ambrx; W02007/130453, Patentes dos EUA 7.632.492 e 7.829.659 para Allozyne), conjugação a dissulfetos intermoleculares reduzidos por re-formação de pontes de dibromomalemidas (Jones, M. W. et al. J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 1847-52), reagentes de bis-sulfonas (Badescu, G. et al. Bioconjug. Chem. 2014, 25, 1124-36; WO2013/190272, WO2014/064424 paraPolyTherics Ltd), dibromopiridazinadionas (Maruani, A. et al. Nat. Commun. 2015, 6, 6645), galactosil- e sialiltransferases (Zhou, Q. et al. Bioconjug. Chem. 2014, 25, 510-520; Ped. de Pat. dos EUA 20140294867 para Sanofi-Genzyme), enzima geradora de formilglicina (FGE) (Drake, P. M. et al. Bioconj. Chem. 2014, 25, 1331-41; Carrico, I. S. et al Ped. de Pat. dos EUA 7.985.783; 8.097.701; 8.349.910, e US Pat Appl 20140141025, 20100210543 para Redwood Bioscience), fosfopanteteinil transferases (PPTases) (Grünewald, J. et al. Bioconjug. Chem. 2015, 26, 2554-62), sortase A (Beerli, R. R., et al. PLoS One 2015, 10, e0131177), etiqueta de glutamina geneticamente introduzida com Streptoverticillium mobaraense transglutaminase (mTG) (Strop, P., Bioconj. Chem., 2014, 25, 855-62; Strop, P., et al., Chem. Biol. 2013, 20, 161-7; patente dos EUA 8.871.908 para Rinat-Pfizer) ou com transglutaminase microbiana (MTGase) (Dennler, P., et al, 2014, Bioconjug. Chem. 25, 569-78; Siegmund, V. et al. Angew. Chemie - Int. Ed. 2015, 54, 13420-4; Ped. de Pat. dos EUA 20130189287 para Innate Pharma; Pat. dos EUA 7.893.019 para Bio-Ker S.r.l. (IT)), uma enzima/bactéria que forma ligações peptídicaligaçãoisopeptídica que se forma fora da cadeia principal da proteína (Kang, H. J., et al. Science 2007, 318, 1625-8; Zakeri, B. et al. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 2012, 109, E690-7; Zakeri, B. & Howarth, M. J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 4526-7).
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[005] Nós descrevemos vários métodos de conjugação de reformação de ponte de um par de tióis das ligações dissulfeto inter-cadeia reduzidas de um anticorpo nativo, como o uso de ligantes de bromo maleimida e dibromomaleimida (W02014/009774), ligantes maleicos ou fumárico 2,3-dissubstituídos/2-monossubstituído/succínico 2,3dissubstituídos (WO2015/155753, WO20160596228), ligantes acetilenodicarboxílicos (W02015/151080, WO20160596228) ou ligantes de hidrazina (W02015/151081). Os ADCs feitos com esses ligantes e métodos demonstraram melhores janelas de índice terapêutico do que a conjugação tradicionalmente não seletiva através dos resíduos de cisteína ou lisina em um anticorpo. Aqui descrevemos a invenção de bis-ligantes e métodos para conjugação de uma molécula citotóxica, particularmente quando o agente citotóxico tendo grupos duplos de diamino, amino-hidroxil, di-hidroxil, carboxil, aldeído e tióis. Os imunoconjugados feitos com o bis-acoplamento prolongaram a meia-vida durante a entrega direcionada e minimizaram a exposição a células, tecidos ou órgãos não-alvo durante a circulação sanguínea, resultando em menor toxicidade fora do alvo.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[006] A presente invenção provê bis-acoplamento de um anticorpo com um agente citotóxico, particularmente quando o agente citotóxico possui dois grupos funcionais de um amino, hidroxil, diamino, amino-hidroxil, dihidroxil, carboxil, hidrazina ou tiol. Ela também provê um bis-ligante para conjugação da molécula de ligação celular a uma molécula citotóxica de uma maneira específica.
[007] Em um aspecto da presente invenção, o bis-acoplamento é representado pela Fórmula (I):
I Molecuia l citotóxica ¥ — «η '-i agente/molêcula ; de ligação celular (I)
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6/310 em que “—” representa uma ligação simples;
“-----” é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou opcionalmente pode estar ausente;
n e mi são 1 a 20 independentemente;
um agente/molécula de ligação celular na estrutura que se acopla a Zi e Z2 pode ser qualquer tipo atualmente conhecido, ou que se toma conhecido, de uma molécula que se liga a, complexa com, ou reage com uma porção de uma população de células que se pretende ser terapeuticamente ou de outro modo biologicamente modificada. Preferencialmente, o agente/molécula de ligação celular é uma proteína imunoterapêutica, um anticorpo, um fragmento de anticorpo ou peptídeos com mais de quatro aminoácidos;
uma molécula/agente citotóxico na estrutura é um fármaco terapêutico, ou uma proteína/molécula imunoterapêutica, ou uma molécula de função para melhoramento da ligação ou estabilização do agente de ligação celular, ou um ligante de ligação ao receptor de superfície celular, ou para inibição de proliferação celular;
X e Y representam o mesmo ou diferente, e independentemente, um grupo funcional que acopla um fármaco citotóxico por meio de uma ligação de dissulfeto, tioéter, tioéster, peptídeo, hidrazona, éter, éster, carbamato, carbonato, carbonato, amina (secundária, terciária ou quartária), imina, ciclo-heteroalcana, heteroaromática, alcoxima ou amida; preferencialmente X e Y são selecionados independentemente a partir de NH; NHNH; N(Ri); N(Ri)N(R2); O; S; S-S, O-NH. O-N(Ri), CH2-NH. CH2N(Ri), CH=NH. CH=N(RI). S(O), S(O2), P(O)(OH), S(O)NH, S(O2)NH, P(O)(OH)NH, NHS(O)NH, NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH, N(Ri)S(O)N(R2), N(Ri)S(O2)N(R2), N(Ri)P(O)(OH)N(R2), OS(O)NH, OS(O2)NH,
OP(O)(OH)NH, C(O), C(NH), C(NRi), C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH,
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7/310
OC(O)NH, OC(NH)NH; OC(NRi)NH, NHC(O)NH; NHC(NH)NH; NHC(NRi)NH, C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH, OC(O)N(Ri), OC(NH)N(Ri), OC(NRi)N(Ri), NHC(O)N(Ri), NHC(NH)N(Ri), NHC(NRi)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), N(Ri)C(NH)N(Ri), N(Ri)C(NRi)N(Ri); ou alquila Ci-Cô; alquenila C2-C8, heteroalquila, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila, Ar-alquila C3-C8, heterociclico, carbociclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila;
Zi e Z2 são iguais ou diferentes e independentemente um grupo funcional que se acopla a uma molécula de ligação celular, para formar uma ligação de dissulfeto, éter, éster, tioéter, tioéster, peptídeo, hidrazona, carbamato, carbonato, amina (secundária, terciária, ou quaternária), imina, ciclo-heteroalcana, heteroaromática, alquiloxima ou amida; preferencialmente, Zi e Z2 têm independentemente as seguintes estruturas: C(O)CH, C(O)C, C(O)CH2, ArCH2, C(O), NH; NHNH; N(Ri); N(Ri)N(R2); O; S; S-S, O-NH. O-N(Ri), CH2-NH. CH2-N(Ri), CH=NH. CH=N(RI). S(O), S(O2), P(O)(OH), S(O)NH, S(O2)NH, P(O)(OH)NH, NHS(O)NH, NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH, N(Ri)S(O)N(R2), N(Ri)S(O2)N(R2),
N(R1)P(O)(OH)N(R2), OS(O)NH, OS(O2)NH, OP(O)(OH)NH, C(O), C(NH), C(NRi), C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH, OC(O)NH, OC(NH)NH; OC(NRi)NH, NHC(O)NH; NHC(NH)NH; NHC(NRi)NH, C(O)NH, C(NRi)NH, OC(O)N(Ri), OC(NH)N(Ri), OC(NRi)N(Ri), NHC(O)N(Ri), NHC(NH)N(Ri), NHC(NRi)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), N(Ri)C(NH)N(Ri), N(Ri)C(NRi)N(Ri); ou alquila Ci-Cs, heteroalquila C2-C8, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterociclico, carbociclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila;
Preferencialmente, Zi e Z2 estão acoplados a pares de tióis de um agente/molécula de ligação celular. Os tióis são, preferencialmente, pares de átomos de enxofre reduzidos a partir das ligações dissulfeto inter-cadeia do agente de ligação celular por um agente de redução selecionado a partir de
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8/310 ditiotreitol (DTT), ditioeritritol (DTE), L-glutationa (GSH), tris(2carboxietil)fosfina (TCEP), 2-mercaptoetilamina (β-ΜΕΑ) ou/e betamercaptoetanol (β-ΜΕ, 2-ME);
Li e L2 são uma cadeia de átomos selecionados a partir de C, N, O, S, Si e P, preferencialmente com 0 ~ 500 átomos, que se conectam covalentemente a X e Zi,e Y e Z2. Os átomos usados na formação de Li e L2 podem ser combinados em todas as formas quimicamente relevantes, como formação de alquileno, alquenileno e alquinileno, éteres, polioxialquileno, ésteres, aminas, iminas, poliaminas, hidrazinas, hidrazonas, amidas, ureias, semicarbazidas, carbazidas, alcoxiaminas, alcoxilaminas, uretanos, aminoácidos, peptídeos, aciloxilaminas, ácidos hidroxâmicos ou combinação dos mesmos acima. Preferencialmente Li e L2 são iguais ou diferentes, selecionados independentemente de O, NH, S, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3’), unidade de polietilenoxi da fórmula (OCH2CH2)POR3, ou (OCH2CH(CH3))POR3, ou NH(CH2CH2O)pR3, ou NH(CH2CH(CH3)O)PR3, ou N[(CH2CH2O)pR3]-[(CH2CH2O)p’R3’], ou (OCH2CH2)pCOOR3, ou
CH2CH2(OCH2CH2)PCOOR3, em que p e p’ são independentemente um número inteiro selecionado a partir de 0 a cerca de 1000, ou uma combinação dos mesmos; alquila Ci-Cs; heteroalquila C2-C8, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila, Ar-alquila C3-Cs, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila;
em que Ri, R2, R3, R4, e R3’ são independentemente H; alquila Ci-Cs; heteroalquila C2-C8, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3Cs, Ar-alquila, heterocíclico, carbocíclico, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroaril; ésteres, éter ou amida de átomos de carbono CiCs; ou 1~8 aminoácidos; ou polietilenoxi com a fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 0 a cerca de 5000 ou uma combinação dos mesmos acima;
Li ou L2 pode opcionalmente ser composto de um ou mais
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9/310 componentes ligantes de 6-maleimidocaproil (MC), maleimidopropanoil (MP), valina-citrulina (val-cit ou ve), alanina-fenilalanina (ala-phe ou af), p-aminobenziloxicarbonil (PAB), 4-tiopentanoato (SPP), 4-(Nmaleimidometil)ciclo-hexano-lcarboxilato (MCC), (4-acetil)aminobenzoato (SIAB), 4-tio-butirato (SPDB), 4-tio-2-hidroxissulfonil-butirato (2-Sulfo-SPDB) ou peptídeos naturais ou não naturais com 1 a 8 aminoácidos naturais ou não naturais. O aminoácido natural é preferencialmente selecionado a partir de ácido aspártico, ácido glutâmico, arginina, histidina, lisina, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteína, tirosina, fenilalanina, glicina, prolina, triptofano e alanina;
Além disso, Li e L2 podem conter independentemente uma das seguintes estruturas hidrofílicas:
Figure BR112019020049A2_D0001
x4 x5^
Figure BR112019020049A2_D0002
Figure BR112019020049A2_D0003
Figure BR112019020049A2_D0004
Figure BR112019020049A2_D0005
Figure BR112019020049A2_D0006
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Figure BR112019020049A2_D0007
da acoplamento; X2, X3, X4, X5, e Xó, são independentemente selecionados a partir de NH; NHNH; N(R3); N(R3)N(R3 ); O; S; alquila Ci-C6; heteroalquila, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila Cz-Có; arila C3-Cs, Ar-alquila, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil, heteroaril; ou 1 ~ 8 aminoácidos; em que R3 e R3 são independentemente H; alquila Ci-Cs; heteroalquila C2-C8, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila C2-C8; arila, Ar-alquila C3-Cs, heterocíclico, carbocíclico, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila; ésteres Ci-Cs, éter, ou amida; ou polietilenoxi com a fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 0 a cerca de 5000 ou uma combinação dos mesmos acima;
Xi, e Yi, é independentemente O, NH, CH2, N(CH3), NHNH,
S, C(O)O, C(O)NH; nu=l-20;
Além disso, Li, L2, X, Y, Zi, e Z2 podem estar ausentes independentemente, mas Li e Zi, ou L2 e Z2 podem não estar ausentes ao mesmo tempo.
[008] Em outro aspecto, esta invenção provê um bis-ligante prontamente reativo da Fórmula (II) abaixo, em que dois ou mais resíduos da molécula de ligação celular podem reagir simultânea ou sequencialmente para formar a Fórmula (I).
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11/310 / X«* f i Molécula i dtotóxfca \ ’.........................r-·· JL «««frJLi* \ ‘/ηυ (ΪΪ) em que:
“—” representa uma ligação simples; “-----” é opcionalmente uma ligação simples, ou uma ligação dupla, ou uma ligação tripla, ou opcionalmente pode estar ausente;
Desde que, quando-----representa uma ligação tripla, Lvi e
Lv2 estejam ausentes;
Molécula citotóxica na estrutura, mb X, Y, Lb L2, Zb e Z2 são definidos da mesma forma que na Fórmula (I);
Lvi e Lv2 representam o mesmo grupo de saída ou diferente que pode ser reagido com um grupo tiol, amina, ácido carboxílico, selenol, fenol ou hidroxil em uma molécula de ligação celular. Esses grupos de saída são, mas não estão limitados a, um haleto (por exemplo, fluoreto, cloreto, brometo e iodeto), metanos sulfonil (mesil), toluenossulfonil (tosil), trifluorometil-sulfonil (triflato), trifluorometilsulfonato, nitrofenoxil, Nsuccinimidil (NHS), fenoxil; dinitrofenoxil; pentafluorofenoxil, tetrafluorofenoxil, trifluorofenoxil, difluorofenoxil, monofluorofenoxil, pentaclorofenoxil, IH-imidazol-l-il, clorofenoxil, diclorofenoxil, triclorofenoxil, tetraclorofenoxil, N-(benzotriazol-il)oxil, 2-etil-5fenilisoxazólio-3-sulfonil, feniloxadiazol-sulfonil (-sulfona-ODA), 2-etil-5fenilisoxazólio-il, feniloxadiazol-il (ODA), oxadiazol -il, carbono insaturado (uma ligação dupla ou tripla entre carbono-carbono, carbono-nitrogênio, carbono-enxofre, carbono-fósforo, enxofre-nitrogênio, fósforo-nitrogênio, oxigênio-nitrogênio ou carbono-oxigênio) ou uma molécula intermediária gerada com um reagente de condensação para reações de Mitsunobu ou uma das seguintes estruturas:
OO t» /¾ X’lUCX ' K3 S cdissulfeto; A2 maloacetil; 1$
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Figure BR112019020049A2_D0008
haleto de acil (haleto
O
Ester N-hidroxissuccinimida;
θ maleimida; τ Ο
Lv3_U/ Lv3\\ θ maleimida
Lv3
Lv3 ácido); θ
Ο
Figure BR112019020049A2_D0009
O maleimida monossubstituída;
Ο dissubstituida;
o Lv3^í monossubstituída; θ
Ο succinimida
Lv3
Figure BR112019020049A2_D0010
O dissubstituida;
succinimida aldeido
CHO; θ
Ο
Ts-°--etenossulfonil;
acril (acriloil);
ο
2-(tosiloxi)acetil;
c 2-(mesiloxi)acetil;
O
Figure BR112019020049A2_D0011
2'^*2-(nitrofenoxi)acetil; θ2Ν
F
OiN
Figure BR112019020049A2_D0012
1 2(dinitrofenoxi)acetil;
F
Figure BR112019020049A2_D0013
acetil; F
Figure BR112019020049A2_D0014
2-(fluorofenoxi)O 2 2-(difluorofenoxi)-acetil; Tf
2'^2-
Figure BR112019020049A2_D0015
cetona, ou (((trifluorometil)-sulfonil)oxi)acetil;
Figure BR112019020049A2_D0016
metilsulfonefeniloxadiazol
Figure BR112019020049A2_D0017
2-(pentafluorofenoxi)acetil;
(0DA);°
Figure BR112019020049A2_D0018
Figure BR112019020049A2_D0019
anidrido ácido,
Figure BR112019020049A2_D0020
alquiloxiamino; N3 azido,
Figure BR112019020049A2_D0021
alquinila, ou h2nhn· hidrazida. Em que Xf é F, Cl, Br, I ou
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Lvs; X2’ é Ο, ΝΗ, N(Ri), ou CH2; R3 é independentemente H, grupo aromático, heteroaromático ou aromático, em que um ou vários átomos de H são substituídos independentemente por -Ri, -halogênio, -ORi, -SRi, -NR1R2, - NO2, -S(O)Ri,-S(O)2Ri, ou -COORi; LV3 é um grupo de saída selecionado a partir de F, Cl, Br, I, nitrofenol; N-hidroxissuccinimida (NHS); fenol; dinitrofenol; pentafluorofenol; tetrafluorofenol; difluorofenol; monofluorofenol; pentaclorofenol; triflato; imidazol; diclorofenol; tetraclorofenol; 1-hidroxibenzotriazol; tosilato; mesilato; 2-etil-5 fenilisoxazólio-3'-sulfonato, anidridos que se autoformaram ou foram formados com o outro anidrido, por exemplo anidrido de acetil, anidrido de formil; ou uma molécula intermediária gerada com um reagente de condensação para reações de conjugação peptídica ou reações de Mitsunobu;
Ri e R2 são selecionados independentemente a partir de H, alquila Ci-Cs, alquenila C2-C8, heteroalquila, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila, ésteres C2Cs, éter ou amida; ou peptídeos contendo 1-8 aminoácidos; ou polietilenoxi com a fórmula (OCFFCFFjp ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 0 a cerca de 1000, ou combinação dos grupos dos mesmos acima. [009] Em outro aspecto, esta invenção provê um bis-ligante prontamente reativo da Fórmula (III) a seguir, em que dois ou mais grupos funcionais de uma molécula citotóxica podem reagir simultaneamente ou sequencialmente para formar a Fórmula (I).
agente/molécula de Hgsção cekdsr (III) em que:
mi, n, agente/molécula de ligação celular, Li, L2, Zb e Z2 são definidos da mesma forma que na Fórmula (I);
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X’ e Y' são um grupo funcional que pode reagir independentemente com grupos de resíduos de um fármaco citotóxico simultaneamente ou sequencialmente para formar X e Y, respectivamente, em que X e Y são definidos na Fórmula (I);
X’ e Y' são preferencialmente ésteres de Nhidroxissuccinimida, ésteres de p-nitrofenil, ésteres de dinitrofenil, ésteres de pentafluorofenil, piridildissulfetos, nitropiridildissulfetos, maleimidas, hidrazina, haloacetatos, grupo acetilenodicarboxílico, cloretos de ácido carboxílico. Preferencialmente X e Y têm uma das seguintes estruturas:
Figure BR112019020049A2_D0022
N-hidroxissuccinimida;
θ maleimida; S dissulfeto;
haloacetil;
Figure BR112019020049A2_D0023
Figure BR112019020049A2_D0024
haleto de acil (haleto
O
Figure BR112019020049A2_D0025
etenossulfonil;
Figure BR112019020049A2_D0026
acril (acriloil);
ácido),
Figure BR112019020049A2_D0027
Figure BR112019020049A2_D0028
2-(tosiloxi)acetil;
Figure BR112019020049A2_D0029
Figure BR112019020049A2_D0030
(nitrofenoxi)acetil;
Figure BR112019020049A2_D0031
2- (dinitrofenoxi) acetil;
Figure BR112019020049A2_D0032
(difluorofenoxi)-acetil;
Figure BR112019020049A2_D0033
sulfonil)oxi)acetil;
Figure BR112019020049A2_D0034
2-(((trifluorometil)-
Figure BR112019020049A2_D0035
2-(pentafluorofenoxi)acetil;
cetona, ou aldeído,
Figure BR112019020049A2_D0036
metilsulfonaPetição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 36/626
15/310 feniloxadiazol (ODA);°
Figure BR112019020049A2_D0037
Figure BR112019020049A2_D0038
anidrido ácido, alquiloxiamino;
Figure BR112019020049A2_D0039
azido,
Figure BR112019020049A2_D0040
alquinil, ou o
Η2ΝΗΝ^ hidrazida. Em que Xf é F, Cl, Br, I ou Lv3; X2’ é Ο, NH, N(Ri), ou CH2; R3 e R5 são H, R|, grupo aromático, heteroaromático ou aromático, em que um ou vários átomos de H são substituídos independentemente por Ri, -halogênio, -ORi, -SRi, -NRiR2, - NO2, -S(O)Ri, -S(O)2Ri, ou -COORi;
Lv3 é um grupo de saída selecionado a partir de metanossulfonil (mesil), toluenossulfonil (tosil), trifluorometil-sulfonil (triflato), trifluorometilsulfonato, nitrofenoxil, N-succinimidiloxil (NHS), fenoxil; dinitrofenoxil; pentafluorofenoxil, tetrafluoro-fenoxil, trifluorofenoxil, difluorofenoxil, monofluoro-fenoxil, pentaclorofenoxil, IH-imidazol-l-il, clorofenoxil, diclorofenoxil, triclorofenoxil, fenoxil-benzotil), feniloxadiazol il (ODA), oxadiazol-il ou uma molécula intermediária gerada com um reagente de condensação para reações de Mitsunobu, em que Ri e R2 são definidos acima.
[0010] Em outro aspecto, esta invenção provê um bis-ligante prontamente reativo da Fórmula (IV) abaixo, em que uma molécula citotóxica e uma molécula de ligação celular podem reagir independentemente, ou simultaneamente ou sequencialmente para formar a Fórmula (I).
X'—L]·
Z]—Lv|
Figure BR112019020049A2_D0041
(IV).
[0011] em que mb Lb L2, Zb e Z2 são definidos da mesma forma que na Fórmula (I); Lvi e Lv2 são definidos na Fórmula (II) e X’ e Y' são definidos na Fórmula (III);
n é 1 ~ 20; e T são descritos da mesma forma anteriormente na
Fórmula (I).
[0012] A presente invenção refere-se adicionalmente a um método de
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16/310 produção de um conjugado molécula de ligação celular-fármaco de Fórmula (I).
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0013] A Figura 1 mostra a síntese geral de conjugados bis-acoplados do pedido de patente através do acoplamento duplo de um grupo fenil diamina, fenil diol ou aminofenol de um fármaco em uma extremidade e um par de tióis em uma molécula de ligação celular na outra extremidade, em que a linha ondulada é a parte restante de um fármaco ou um componente acoplado de um fármaco que está ausente (não mostrado aqui).
[0014] A Figura 2 mostra a síntese de análogos de tirosina (Tyr) e tubutirosina (Tut) que possuem um grupo amino ou nitro no anel benzeno para bis-acoplamento a uma molécula de ligação celular.
[0015] A Figura 3 mostra a síntese de componentes de análogos de tubulisina.
[0016] A Figura 4 mostra a síntese de componentes de análogos de tubulisina.
[0017] A Figura 5 mostra a síntese de um análogo de tubulisina contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0018] A Figura 6 mostra a síntese de análogos de tubulisina contendo um bis-ligante e suas conjugações a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0019] A Figura 7 mostra a síntese de análogos de tubulisina contendo um bis-ligante e suas conjugações a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0020] A Figura 8 mostra a síntese de análogos de tubulisina contendo um bis-ligante e suas conjugações a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0021] A Figura 9 mostra a síntese de análogos de tubulisina contendo
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17/310 um bis-ligante e suas conjugações a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0022] A Figura 10 mostra a síntese de análogos de tubulisina contendo um bis-ligante e suas conjugações a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0023] A Figura 11 mostra a síntese de análogos de tubulisina contendo um bis-ligante e suas conjugações a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0024] A Figura 12 mostra a síntese de componentes de bis-ligantes e um bis-acoplamento a um análogo de tubutirosina (Tup), um componente de tubulisina.
[0025] A Figura 13 mostra a síntese de análogos de tubulisina contendo um bis-ligante e suas conjugações a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0026] A Figura 14 mostra a síntese de um análogo de tubulisina contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0027] A Figura 15 mostra a síntese de um análogo de tubulisina contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0028] A Figura 16 mostra a síntese de um análogo de tubulisina contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0029] A Figura 17 mostra a síntese da conjugação do análogo da tubulisina contendo um bis-ligante a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo e a síntese de um análogo da tubufenilalaína (Tup) com um bisligante com acoplamento de amida duplo.
[0030] A Figura 18 mostra a síntese de um análogo de tubulisina contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par
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18/310 de tióis no anticorpo.
[0031] A Figura 19 mostra a síntese da conjugação do análogo da tubulisina contendo um bis-ligante a um anticorpo através de um par de tióis em um anticorpo e a síntese de um análogo da tubufenilalaína (Tup) com um bis-ligante com acoplamento de amida duplo.
[0032] A Figura 20 mostra a síntese de um análogo de tubulisina contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0033] A Figura 21 mostra a síntese de um análogo de tubulisina contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0034] A Figura 22 mostra a síntese de um componente do análogo de dimetil auristatina.
[0035] A Figura 23 mostra a síntese de análogos de dimetil auristatina F contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0036] A Figura 24 mostra a síntese de análogos de dimetil auristatina F contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0037] A Figura 25 mostra a síntese de análogos de dimetil auristatina F contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0038] A Figura 26 mostra a síntese de análogos de dimetil auristatina F contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0039] A Figura 27 mostra a síntese de análogos de dimetil auristatina F contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0040] A Figura 28 mostra a síntese de análogos de dimetil auristatina
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F contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0041] A Figura 29 mostra a síntese de um análogo da amatoxina com um grupo diamino no seu anel aromático.
[0042] A Figura 30 mostra a síntese de um análogo de amatoxina contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0043] A Figura 31 mostra a síntese de um bis-ligante e sua ligação a um análogo de amatoxina.
[0044] A Figura 32 mostra a síntese de análogos da amatoxina contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0045] A Figura 33 mostra a síntese de análogos da amatoxina contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0046] A Figura 34 mostra a síntese de análogos da amatoxina contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0047] A Figura 35 mostra a síntese de análogos de amatoxina e análogos de dimetil auristatina F contendo um bis-ligante e sua conjugação com um anticorpo através de um par de tióis a um anticorpo.
[0048] A Figura 36 mostra a síntese de análogos de tubulisina e análogos de dímeros de CBI contendo um bis-ligante e sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0049] A Figura 37 mostra a síntese de análogos de dímeros de CBI contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0050] A Figura 38 mostra a síntese de análogos de dímeros de CBI contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par
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20/310 de tióis no anticorpo.
[0051] A Figura 39 mostra a síntese de análogos de dímeros de CBI contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0052] A Figura 40 mostra a síntese de análogos de dímeros de CBI contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0053] A Figura 41 mostra a síntese de análogos de dímeros de PBD contendo um bis-linker.
[0054] A Figura 42 mostra a síntese de análogos de dímeros de PBD contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0055] A Figura 43 mostra a síntese de análogos de dímeros de PBD contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0056] A Figura 44 mostra a síntese de análogos de dímeros de PBD contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0057] A Figura 45 mostra a síntese de análogos de dímeros de PBD contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0058] A Figura 46 mostra a síntese de análogos de dímeros de PBD contendo um bis-ligante e a sua conjugação a um anticorpo através de um par de tióis no anticorpo.
[0059] A Figura 47 mostra a comparação do efeito antitumoral dos compostos conjugados A-3a, B-6a, B-12a, B-15a, B-18a, B-20a, B-21a, B24a, B-28a, C-3a, D-2a juntamente com T-DM1 e PBS (controle), usando modelo de célula N87 de tumor gástrico humano, i.v., uma injeção a uma dosagem de 3 mg/kg para os conjugados A-3a, B-6a, B-12a, B-15a, B-18a,
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21/310
B-20a, B-21a, B-24a, B-28a, T-DM1 e a uma dosagem de 1 mg/kg para os conjugados C-3a e D-la. Todos os 12 conjugados testados aqui demonstraram atividade antitumoral. Os animais dos grupos de compostos conjugados B-24a, C-3a, B-20a, B-21a e D-20a demonstraram melhor atividade antitumoral que T-DM1. No entanto, os animais dos grupos dos compostos conjugados B-18a, B-15a, A-3a, B-6a, B-28a e B-12a apresentaram pior atividade antitumoral que T-DM1. O T-DM1 na dose de 3 mg kg inibiu o crescimento do tumor por 28 dias, mas não foi capaz de eliminar os tumores em nenhum momento durante o teste. Em contraste, os compostos conjugados B-20a, B-21a e D-20a erradicam os tumores de alguns animais do dia 15 ao dia 43.
[0060] A Fig. 48 mostra as fotos dos animais testados in vivo sozinhos com seus tumores descascados dos grupos de PBS, conjugados A-3a, B-15a, B-21a e T-DM1 após o sacrifício dos animais. Não foi encontrado tumor em cinco dos oito animais do grupo do conjugado B-21a (marcado como ^c). Cinco dos oito animais do grupo do conjugado B-15a morreram (marcados como #ÍL‘) no dia 43 devido ao seu tumor ser muito grande.
[0061] A Fig. 49 mostra um estudo de estabilidade do conjugado B21a no soro de camundongo em comparação com o conjugado regular monoacoplado T-la e T-DM1. Isso indica que o conjugado com o bis-acoplamento é mais estável do que os conjugados regulares contendo mono-acoplamento no soro do camundongo.
DESCRIÇÃO DETAFHADA DA INVENÇÃO
DEFINIÇÕES
[0062] Alquila refere-se a um grupo hidrocarboneto alifático ou grupos univalentes derivados de alcano pela remoção de um ou dois átomos de hidrogênio dos átomos de carbono. Pode ser linear ou ramificado com CiCs (1 a 8 átomos de carbono) na cadeia. Ramificado significa que um ou mais números de C inferiores de grupos alquila, como metil, etil ou propil,
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22/310 estão ligados a uma cadeia alquila linear. Grupos alquila exemplificativos incluem metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, t-butil, n-pentil, 3-pentil, octil, nonil, decil, ciclopentil, ciclo-hexil, 2,2-dimetilbutil, 2, 3-dimetilbutil, 2,2dimetilpentil, 2,3-dimetilpentil, 3,3-dimetilpentil, 2,3,4-trimetilpentil, 3-metilhexil, 2,2-dimetil-hexil, 2,4-dimetil-hexil, 2,5-dimetil-hexil, 3,5-dimetil-hexil, 2,4-dimetilpentil, 2-metil-heptil, 3-metil-heptil, n-heptil, iso-heptil, n-octil e iso-octil. Um grupo alquila Ci-C8 pode ser não substituído ou substituído por um ou mais grupos, incluindo, mas não limitados a, -alquila Ci-Cs,-O-(alquila Ci-C8), -arila, -C(O)R’, -OC(O)R’, -C(O)OR’, -C(O)NH2, -C(O)NHR’, C(O)N(R’)2, -NHC(O)R’, -SR’, -S(O)2R, -S(O)R’, -OH, -halogênio, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R') 2 e -CN; em que cada R' é independente selecionado a partir de alquila -Ci-C8 e aril.
[0063] Halogênio refere-se ao átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo; preferencialmente átomo de flúor e cloro.
[0064] Heteroalquila refere-se à alquila C2-C8 na qual um a quatro átomos de carbono são substituídos independentemente por um heteroátomo do grupo que consiste em O, S e N.
[0065] Carbociclo refere-se a um anel saturado ou insaturado com 3 a 8 átomos de carbono como um monociclo ou 7 a 13 átomos de carbono como biciclo. Os carbociclos monocíclicos têm 3 a 6 átomos no anel, mais tipicamente 5 ou 6 átomos no anel. Os carbociclos bicíclicos têm de 7 a 12 átomos no anel, dispostos como um sistema [4,5], [5,5], [5,6] ou [6,6] de biciclo ou 9 ou 10 átomos no anel dispostos como um sistema [5,6] ou [6,6] de biciclo. Os carbociclos C3-C8 representativos incluem, mas não estão limitados a, -ciclopropil, -ciclobutil, -ciclopentil, -ciclopentadienil, -ciclohexil, -ciclo-hexenil, -1,3-ciclo-hexadienil, -1,4-ciclo-hexadienil, -cicloheptil, -1, 3-ciclo-heptadienil, -1,3,5-ciclo-heptatrienil, -ciclo-octil e -ciclooctadienil.
[0066] Um carbociclo Cs-Cs refere-se a um anel carbocíclico não
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23/310 aromático saturado ou insaturado de 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 membros. Um grupo carbociclo Ci-Cs pode ser não substituído ou substituído por um ou mais grupos, incluindo, mas não limitados a, -alquila Ci-Cs,-O-(alquila Ci-Cs), arila, -C(O)R’, -OC(O)R’, -C(O)OR’, -C(O)NH2, -C(O)NHR’, -C(O)N(R’)2, NHC(O)R', -SR’, -S(O)R’,-S(O)2R’, -OH, -halogênio, -N3, -NH2, -NH(R'), N(R') 2 e -CN; em que cada R' é independente selecionado a partir de alquila Ci-Cs e aril.
[0067] Alquenila refere-se a um grupo hidrocarboneto alifático contendo uma ligação dupla carbono-carbono que pode ser linear ou ramificada com 2 a 8 átomos de carbono na cadeia. Grupos alquenila exemplificativos incluem etenil, propenil, n-butenil, i-butenil, 3-metilbut-2enil, n-pentenil, hexilenil, heptenil, octenil.
[0068] Alquinila refere-se a um grupo hidrocarboneto alifático contendo uma ligação tripla carbono-carbono que pode ser linear ou ramificada com 2 a 8 átomos de carbono na cadeia. Grupos alquinila exemplificativos incluem etinil, propinil, n-butinil, 2-butinil, 3-metilbutinil, 5pentinil, n-pentinil, hexinil, heptilnil e octilnil.
[0069] Alquileno refere-se a um radical hidrocarboneto cíclico ou de cadeia linear, ramificada ou saturada, com 1 a 18 átomos de carbono e com dois centros radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogênio dos mesmos ou dois átomos de carbono diferentes de um alcano precursor. Os radicais alquileno típicos incluem, mas não estão limitados a: (CH2-), 1,2-etil (-CH2CH2-), 1,3-propil (-CH2CH2CH2-), 1,4-butil (CH2CH2CH2CH2-), e semelhantes.
[0070] Alquenileno refere-se a um radical hidrocarboneto cíclico ou de cadeia linear, ramificada ou insaturada, com 1 a 18 átomos de carbono e com dois centros radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogênio dos mesmos ou dois átomos de carbono diferentes de um alqueno precursor. Os radicais alquenileno típicos incluem, mas não estão
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24/310 limitados a: 1,2-etileno (-CH=CH-).
[0071] Alquinileno refere-se a um radical hidrocarboneto cíclico ou de cadeia linear, ramificada ou insaturada, com 1 a 18 átomos de carbono e com dois centros radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogênio dos mesmos ou dois átomos de carbono diferentes de um alquino precursor. Os radicais alquinileno típicos incluem, mas não estão limitados a: acetileno, propargil e 4-pentinil.
[0072] Arila ou Ar refere-se a um grupo aromático ou heteromomático, composto por um ou vários anéis, compreendendo três a catorze átomos de carbono, preferencialmente seis a dez átomos de carbono. O termo grupo hetero aromático refere-se a um ou vários átomos de carbono no grupo aromático, preferencialmente um, dois, três ou quatro átomos de carbono são substituídos por O, N, Si, Se, P ou S, preferencialmente por O, S e N O termo arila ou Ar também se refere a um grupo aromático, em que um ou vários átomos de H são substituídos independentemente por -R', -halogênio, -OR’, ou -SR’, -NR’R”, -N=NR’, N=R·. -NR’R”,-NO2, -S(O)R’, -S(O)2R’, -S(O)2OR’, -OS(O)2OR’, -PR’R”, P(O)R’R”, -P(OR’)(OR”), -P(O)(OR’)(OR”) ou -OP(O)(OR’)(OR”) em que R’, R” são independentemente H, alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, arila, arilalquila, carbonil ou sais farmacêuticos.
[0073] Heterociclo refere-se a um sistema de anel no qual um a quatro dos átomos de carbono do anel são substituídos independentemente por um heteroátomo do grupo de O, N, S, Se, B, Si e P. Heteroátomos preferidos são O, N e S. Os heterociclos também são descritos em The Handbook of Chemistry e Physics, 78a edição, CRC Press, Inc., 1997-1998, p. 225 a 226, cuja descrição é aqui incorporada por referência. Os heterocíclicos não aromáticos preferidos incluem epóxi, aziridinil, tiiranil, pirrolidinil, pirazolidinil, imidazolidinil, oxiranil, tetra-hidrofuranil, dioxolanil, tetrahidropiranil, dioxanil, dioxolanil, piperidil, piperazinil, pirolidinil, pirolidinil,
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25/310 pirolinol di-hidropiranil, tetra-hidropiranil, di-hidropiranil, tetra-hidropiridil, di-hidropiridil, tetra-hidropirimidinil, di-hidrotiopiranil, azepanil, bem como os sistemas fundidos resultantes da condensação com um grupo fenil.
[0074] O termo heteroaril ou heterociclos aromáticos refere-se a um anel hetero, mono, bi ou multicíclico aromático de 3 a 14, preferencialmente 5 a 10 membros. Os exemplos incluem pirrolil, piridil, pirazolil, tienil, pirimidinil, pirazinil, tetrazolil, indolil, quinolinil, purinil, imidazolil, tienil, tiazolil, benzotiazolil, furanil, benzofuranil, 1,2,4-tiadiazolil, isotiazolil, isotiazolil, benzotienil, isobenzofuril, pirazolil, carbazolil, benzimidazolil, isoxazolil, piridil-N-óxido, bem como os sistemas fundidos resultantes da condensação com um grupo fenil.
[0075] Alquila, cicloalquila, alquenila, alquinila, arila, heteroarila, heterocíclico e similares também se referem aos alquileno, cicloalquileno, alquenileno, alquinileno, arileno, heteroarileno, heterocicleno correspondentes e similares, que são formados pela remoção de dois átomos de hidrogênio.
[0076] Arilalquila refere-se a um radical alquila acíclico no qual um dos átomos de hidrogênio ligado a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp3, é substituído por um radical arila. Grupos arilalquila típicos incluem, benzil, 2-feniletan-l-il, 2-fenileten-l-il, naftilmetil, 2-naftiletan-l-il, 2-naftileten-l-il, naftobenzil, 2-naftofeniletan-lil e similares.
[0077] Heteroarilalquila refere-se a um radical alquila acíclico no qual um dos átomos de hidrogênio ligado a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp3, é substituído por um radical heteroarila. Exemplos de grupos heteroarilalquila são 2-benzimidazolilmetil, 2-furiletil.
[0078] Exemplos de um grupo protetor de hidroxil incluem, éter metoximetílico, éter 2-metoxietoximetílico, éter tetra-hidropiranílico, éter
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26/310 benzílico, éter p-metoxibenzílico, éter trimetilsilílico, éter trietilsilílico, éter tri-isopropilsilílico, éter t-butildimetilsilílico, éter trifenilmetilsilílico, éster de acetato, ésteres de acetato substituído, pivaloato, benzoato, metanossulfonato e p-toluenossulfonato.
[0079] Grupo de saída refere-se a um grupo funcional que pode ser substituído por outro grupo funcional. Tais grupos de saída são bem conhecidos na técnica, e exemplos incluem um haleto (por exemplo, cloreto, brometo e iodeto), metanossulfonil (mesil), p-toluenossulfonil (tosil), trifluorometilsulfonil (triflato) e trifluorometilsulfonato. Um grupo de saída preferido é selecionado a partir de nitrofenol; N-hidroxissuccinimida (NHS); fenol; dinitrofenol; pentafluorofenol; tetrafluorofenol; difluorofenol; monofluorofenol; pentaclorofenol; triflato; imidazol; diclorofenol; tetraclorofenol; 1-hidroxibenzotriazol; tosilato; mesilato; 2-etil-5fenilisoxazólio-3'-sulfonato, anidridos que se autoformaram ou foram formados com o outro anidrido, por exemplo, anidrido de acetil, anidrido de formil; ou uma molécula intermediária gerada com um reagente de condensação para reações de conjugação peptídica ou reações de Mitsunobu.
[0080] As seguintes abreviações podem ser usadas aqui e têm as definições indicadas: Boc, terc-butoxi carbonil; BroP, hexafluorofosfato de bromotrispirrolidinofosfônio; CDI, Ι,Γ-carbonildi-imidazol; DCC, diciclohexilcarbodi-imida; DCE, dicloroetano; DCM, diclorometano; DIAD, diisopropilazodicarboxilato; DIBAL-H, hidreto de di-isobutil-alumínio; DIPEA, di-isopropiletilamina; DEPC, fosforocianidato de dietil; DMA, N, N-dimetil acetamida; DMAP, 4-(N,N-dimetilamino)piridina; DMF, N,Ndimetilformamida; DMSO, dimetilsulfóxido; DTT, ditiotreitol; EDC, cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida; ESI-MS, espectrometria de massa por eletropulverização; HATU, hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N’-tetrametilurônio; HOBt, 1hidroxibenzotriazol; HPLC, cromatografia líquida de alta pressão; NHS, N
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27/310 hidroxisuccinimida; MMP, 4-metilmorfolina; PAB, p-aminobenzil; PBS, solução salina tamponada com fosfato (pH 7,0 ~ 7,5); PEG, polietilenoglicol; SEC, cromatografia de exclusão por tamanho; TCEP, tris(2carboxietil)fosfina; TFA, ácido trifluoroacético; THF, tetra-hidrofurano; Vai, valina.
[0081] O(s) aminoácido(s) pode ser aminoácido natural e/ou não natural, preferencialmente alfa-aminoácidos. Os aminoácidos naturais são aqueles codificados pelo código genético, que são alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, tirosina, triptofano e valina. Os aminoácidos não naturais são formas derivadas de aminoácidos proteinogênicos. Exemplos incluem hidroxiprolina, lantionina, ácido 2-aminoisobutírico, desidroalanina, ácido gamaaminobutírico (o neurotransmissor), omitina, citrulina, beta alanina (ácido 3aminopropanoico), gama-carboxiglutamato, selenocisteína (presente em muitos não eucariotas bem como a maioria dos eucariotas, mas não codificados diretamente pelo DNA), pirrolisina (encontrada apenas em algumas arqueias e uma bactéria), N-formilmetionina (que geralmente é o aminoácido inicial de proteínas em bactérias, mitocôndrias e cloroplastos), 5hidroxitriptofano, L-di-hidroxifenilalanina, tri-iodotironina, L-3,4-dihidroxifenilalanina (DOPA) e O-fosfoserina. O termo aminoácido também inclui análogos e miméticos de aminoácidos. Análogos são compostos que possuem a mesma estrutura geral de H2N(R)CHCO2H de um aminoácido natural, exceto que o grupo R não é encontrado entre os aminoácidos naturais. Exemplos de análogos incluem homosserina, norleucina, metionina-sulfóxido e metionina-metilsulfônio. Preferencialmente, um aminoácido mimético é um composto que possui uma estrutura diferente da estrutura química geral de um alfa-aminoácido, mas funciona de maneira semelhante a um. O termo aminoácido não natural pretende representar a forma estereoquímica D,
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28/310 os aminoácidos naturais sendo da forma L. Quando são utilizados 1 ~ 8 aminoácidos neste pedido de patente, a sequência de aminoácidos é então preferencialmente uma sequência de reconhecimento de divagem para uma protease. Muitas sequências de reconhecimento de divagem são conhecidas na técnica. Ver, por exemplo, Matayoshi et al. Science 247: 954 (1990); Dunn et al. Meth. Enzymol. 241: 254 (1994); Seidah et al. Meth. Enzymol. 244: 175 (1994); Thomberry, Meth. Enzymol. 244: 615 (1994); Weber et al. Meth. Enzymol. 244: 595 (1994); Smith et al. Meth. Enzymol. 244: 412 (1994); e Bouvier et al. Meth. Enzymol. 248: 614 (1995); cuja descrição é aqui incorporada por referência. Em particular, a sequência é selecionada a partir do grupo que consiste em Val-Cit, Ala-Vai, Ala-Ala, Vai-Vai, Vai-Ala-Vai, Lys-Lys, Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Cit-Cit, Val-Lys, Ala-Ala-Asn, Lys, Cit, Ser, e Glu.
[0082] O glicosídeo é uma molécula na qual um grupo açúcar é ligado através de seu carbono anomérico a outro grupo através de uma ligação glicosídica. Os glicosídeos podem ser acoplados por uma ligação glicosídica O- (um O-glicosídeo), N- (uma glicosilamina), S- (um tioglicosídeo) ou C(um C-glicosídeo). Seu núcleo, a fórmula empírica é Cm(H2O)n (onde m pode ser diferente de n e m e n são <36), o glicosídeo inclui glicose (dextrose), alose de frutose (levulose), altrose, manose, gulose, iodose, galactose, talose, galactosamina, glucosamina, ácido siálico, N-acetilglucosamina, sulfoquinovose (6-desoxi-6-sulfo-D-glucopiranose), ribose, arabinose, xilose, lipose, sorbitol, manitol, sacarose, lactose, maltose, trealose maltodextrinas, rafinose, ácido glucurônico (glucuronídeo) e estaquiose. Pode estar na forma D ou na forma L, 5 átomos em forma de furanose cíclica, 6 átomos em forma de piranose cíclica ou em forma acíclica, isômero α (o -OH do carbono anomérico abaixo do plano dos átomos de carbono da projeção de Haworth) ou um isômero β (o -OH do carbono anomérico acima do plano de projeção de Haworth). E aqui utilizado como monossacarídeo, dissacarídeo, polióis ou
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29/310 oligossacarídeos contendo 3-6 unidades de açúcar.
[0083] Farmaceuticamente ou farmaceuticamente aceitável referese a entidades e composições moleculares que não produzem uma reação adversa, alérgica ou outra reação desagradável quando administradas a um animal ou humano, conforme apropriado.
[0084] Solvato farmaceuticamente aceitável ou solvato refere-se a uma associação de uma ou mais moléculas de solvente e um composto descrito. Exemplos de solventes que formam solvatos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, água, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etila, ácido acético e etanolamina.
[0085] Excipiente farmaceuticamente aceitável inclui quaisquer veículos, diluentes, adjuvantes ou carreadores, como agentes conservantes ou antioxidantes, agentes de enchimento, agentes desintegrantes, agentes molhantes, agentes emulsificantes, agentes de suspensão, solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, isotônicos e agentes retardadores de absorção e similares. O uso de tais meios e agentes para substâncias farmacêuticas ativas é bem conhecido na técnica. Exceto quando qualquer meio ou agente convencional é incompatível com o ingrediente ativo, seu uso nas composições terapêuticas é contemplado. Os ingredientes ativos suplementares também podem ser incorporados nas composições como combinações terapêuticas adequadas.
[0086] Como aqui utilizado, sais farmacêuticos refere-se a derivados dos compostos descritos em que o composto precursor é modificado produzindo sais ácidos ou básicos dos mesmos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos convencionais ou os sais de amônio quaternário do composto precursor formado, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, esses sais não tóxicos convencionais incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos, tais como clorídrico, bromídrico, sulfúrico, sulfâmico, fosfórico, nítrico e
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30/310 similares; e os sais preparados a partir de ácidos orgânicos tais como acético, propiônico, succínico, tartárico, cítrico, metanossulfônico, benzenossulfônico, glucurônico, glutâmico, benzoico, salicrlico, toluenossulfônico, oxálico, fumárico, maleico, lático e similares. Outros sais de adição incluem sais de amônio, como trometamina, meglumina, epolamina, etc., sais metálicos como sódio, potássio, cálcio, zinco ou magnésio.
[0087] Os sais farmacêuticos da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto precursor que contém uma porção básica ou ácida por métodos químicos convencionais. Geralmente, esses sais podem ser preparados por reação das formas ácidas ou básicas livres desses compostos com uma quantidade estequiométrica da base ou ácido apropriado em água ou em um solvente orgânico ou em uma mistura dos dois. Geralmente, meios não aquosos como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila são preferidos. Listas de sais adequados são encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418, cuja descrição é aqui incorporada por referência.
[0088] Administrar ou administração refere-se a qualquer modo de transferência, entrega, introdução ou transporte de um fármaco ou outro agente farmacêutico a um indivíduo. Tais modos incluem administração oral, contato tópico, administração intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intralesional, intranasal, subcutânea ou intratecal. Também contemplada pela presente invenção é a utilização de um dispositivo ou instrumento na administração de um agente. Esse dispositivo pode utilizar transporte ativo ou passivo e pode ser um dispositivo de entrega de liberação lenta ou liberação rápida.
[0089] Os novos conjugados aqui descritos usam os ligantes de ponte. Exemplos de alguns ligantes adequados e sua síntese são mostrados nas Figuras 1 a 34.
UM CONJUGADO DE UM AGENTE DE LIGAÇÃO CELULAR-UMA
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MOLÉCULA CITÓXICA ATRAVÉS DO BIS-ACOPLAMENTO
[0090] (I):
O bis-acoplamento do conjugado é representado pela Fórmula
Zri j Molécula
I dtotóxka agente/molécula de ligação celular
J.l (I) em que “—” representa uma ligação simples;
“-----” é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou opcionalmente pode estar ausente;
n e mi são 1 a 20 independentemente;
Um agente/molécula de ligação celular na estrutura que se acopla a Z| e Z2 pode ser qualquer tipo atualmente conhecido, ou que se toma conhecido, de uma molécula que se liga a, complexa com, ou reage com uma porção de uma população de células que se pretende ser terapeuticamente ou de outro modo biologicamente modificada. Preferencialmente, o agente molécula de ligação celular é uma proteína imunoterapêutica, um anticorpo, um anticorpo de cadeia única; um fragmento de anticorpo que se liga à célula alvo; um anticorpo monoclonal; um anticorpo monoclonal de cadeia única; ou um fragmento de anticorpo monoclonal que se liga à célula alvo; um anticorpo quimérico; um fragmento de anticorpo quimérico que se liga à célula alvo; um anticorpo de domínio; um fragmento de anticorpo de domínio que se liga à célula alvo; adnectinas que imitam anticorpos; DARPins; uma linfocina; um hormônio; uma vitamina; um fator de crescimento; um fator estimulador de colônia; ou uma molécula de transporte de nutrientes (uma transferrina); peptídeos de ligação com mais de quatro aminoácidos, proteína ou anticorpo, ou molécula ou ligando de ligação celular pequeno anexado à albumina, polímeros, dendrímeros, lipossomas, nanopartículas, vesículas ou
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32/310 capsídeos (virais);
Uma molécula/agente citotóxico na estrutura é um fármaco/molécula/agente terapêutico, ou uma proteína/molécula imunoterapêutica, ou uma molécula de função para melhoramento da ligação ou estabilização do agente de ligação celular, ou um ligante de ligação ao receptor de superfície celular, ou para inibição de proliferação celular, ou para monitorar, detectar ou estudar uma ação de molécula de ligação celular. Também pode ser um análogo, ou pró-fármaco, ou um sal, hidrato ou sal hidratado farmaceuticamente aceitável, ou uma estrutura cristalina, ou um isômero óptico, racemato, diastereômero ou enantiômero, de composto imunoterapêutico, composto quimioterapêutico, um anticorpo (probody) ou um fragmento de anticorpo (probody), ou molécula de siRNA ou DNA, ou um ligando de ligação à superfície celular;
Preferencialmente, uma molécula citotóxica é qualquer um de muitos fármacos de moléculas pequenas, incluindo, mas não limitado a, tubulisinas, caliqueamicinas, auristatinas, maitansinoides, análogos de CC1065, morfolinos doxorrubicina, taxanos, criptoficinas, amatoxinas (por exemplo, amanitinas), epotilonas, eribulinas, geldanamina, duocarmicinas, daunomicinas, metotrexatos, vindesinas, vincristinas e dímeros de benzodiazepina (por exemplo, dímeros de pirrolobenzodiazepina (PBD), tomaimicina, indolinobenzodiazepinas, imidazobenzotiadiazepinas ou oxazolidinobenzodiazepinas);
X e Y representam o mesmo ou diferente, e independentemente, um grupo funcional que acopla um fármaco citotóxico por meio de uma ligação de dissulfeto, tioéter, tioéster, peptídeo, hidrazona, éter, éster, carbamato, carbonato, carbonato, amina (secundária, terciária ou quartária), imina, ciclo-heteroalcana, heteroaromática, alcoxima ou amida; preferencialmente X e Y são selecionados independentemente a partir de NH; NHNH; N(Ri); N(Ri)N(R2); O; S; S-S, O-NH. O-N(Ri), CH2-NH. CH2Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 54/626
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N(Ri), CH=NH. CH=N(Ri), S(O), S(O2), P(O)(OH), S(O)NH, S(O2)NH, P(O)(OH)NH, NHS(O)NH, NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH, N(Ri)S(O)N(R2), N(Ri)S(O2)N(R2), N(Ri)P(O)(OH)N(R2), OS(O)NH, OS(O2)NH,
OP(O)(OH)NH, C(O), C(NH), C(NRi), C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH, OC(O)NH, OC(NH)NH; OC(NRi)NH, NHC(O)NH; NHC(NH)NH; NHC(NRi)NH, C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH, OC(O)N(Ri), OC(NH)N(Ri), OC(NRi)N(Ri), NHC(O)N(Ri), NHC(NH)N(Ri), NHC(NRi)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), N(Ri)C(NH)N(Ri), N(Ri)C(NRi)N(Ri); ou alquila Ci-Ce; alquenila C2-C8, heteroalquila, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterociclico, carbociclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila;
Zi e Z2 são iguais ou diferentes e independentemente um grupo funcional que se acoplou a uma molécula de ligação celular, para formar uma ligação de dissulfeto, éter, éster, tioéter, tioéster, peptídeo, hidrazona, carbamato, carbonato, amina (secundária, terciária, ou quaternária), imina, ciclo-heteroalcana, heteroaromática, alquiloxima ou amida; preferencialmente, Zi e Z2 têm independentemente as seguintes estruturas: C(O)CH, C(O)C, C(O)CH2, ArCH2, C(O), NH; NHNH; N(Ri); N(Ri)N(R2); O; S; S-S, O-NH. O-N(Ri), CH2-NH. CH2-N(Ri), CH=NH. CH=N(Ri), S(O), S(O2), P(O)(OH), S(O)NH, S(O2)NH, P(O)(OH)NH, NHS(O)NH, NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH, N(Ri)S(O)N(R2), N(Ri)S(O2)N(R2),
N(R1)P(O)(OH)N(R2), OS(O)NH, OS(O2)NH, OP(O)(OH)NH, C(O), C(NH), C(NRi), C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH, OC(O)NH, OC(NH)NH; OC(NRi)NH, NHC(O)NH; NHC(NH)NH; NHC(NRi)NH, C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH, OC(O)N(Ri), OC(NH)N(Ri), OC(NRi)N(Ri), NHC(O)N(Ri), NHC(NH)N(Ri), NHC(NRi)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), N(Ri)C(NH)N(Ri), N(Ri)C(NRi)N(Ri); ou alquila Ci-C8; heteroalquila C2C8, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterociclico, carbociclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila,
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34/310 alquilcarbonil ou heteroarila;
Preferencialmente, Zi e Z2 estão acoplados a pares de tióis de um agente/molécula de ligação celular. Os tióis são, preferencialmente, pares de átomos de enxofre reduzidos a partir das ligações dissulfeto inter-cadeia do agente de ligação celular por um agente de redução selecionado a partir de ditiotreitol (DTT), ditioeritritol (DTE), L-glutationa (GSH), tris(2carboxietil)fosfina (TCEP), 2-mercaptoetilamina (β-ΜΕΑ) ou/e betamercaptoetanol (β-ΜΕ, 2-ME);
Li e L2 são uma cadeia de átomos selecionados a partir de C, N, O, S, Si e P, com 0 ~ 500 átomos, que se conectam covalentemente a X e Zi, e Y e Z2. Os átomos usados na formação de Li e L2 podem ser combinados de todas as formas quimicamente relevantes, são preferencialmente alquileno, alquenileno e alquinileno Ci -C2o, éteres, polioxialquileno, ésteres, aminas, iminas, poliaminas, hidrazinas, hidrazonas, amidas, ureias, semicarbazidas, carbazidas, alcoxiaminas, alcoxilaminas, uretanos, aminoácidos, peptídeos, aciloxilaminas, ácidos hidroxâmicos ou combinação dos mesmos acima. Mais preferencialmente, Li e L2 são iguais ou diferentes, selecionados independentemente a partir de O, NH, S, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3’), alquila Ci-Cs, amida, aminas, iminas, hidrazinas hidrazonas; heteroalquila C2-Cs, alquilcicloalquila, éteres, ésteres, hidrazonas, ureias, semicarbazidas, carbazidas, alcoxiaminas, alcoxilaminas, uretanos, aminoácidos, peptídeos, aciloxilaminas, ácidos hidroxâmicos ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Aralquila, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroaril; unidade de polietilenoxi de fórmula (OCH2CH2)POR3, ou (OCH2.CH(CH3))pOR3, ou NH(CH2CH2O)PR3, ou NH(CH2CH(CH3)O)PR3, ou N[(CH2CH2O)pR3]-[(CH2CH2O)p’R3], ou (OCH2CH2)PCOOR3, ou CH2CH2(OCH2CH2)PCOOR3, em que p e p’ são independentemente um número inteiro selecionado a partir de 0 a cerca de 5000, ou uma combinação dos mesmos; em que R3 e R3 são
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35/310 independentemente H; alquila Ci-C8; heteroalquila, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila C2-C8; arila, Ar-alquila, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila C3-C8; ou ésteres, éter ou amida C2-C8; ou 1 ~ 8 aminoácidos; ou polietilenoxi com a fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 0 a cerca de 5000 ou uma combinação dos mesmos acima;
Opcionalmente, Li e L2 podem independentemente ser composto de um ou mais componentes ligantes de 6-maleimidocaproil (MC), maleimidopropanoil (MP), valina-citrulina (val-cit ou vc), alanina-fenilalanina (ala-phe ou af), p-aminobenziloxicarbonil (PAB), 4-tiopentanoato (SPP), 4-(N-maleimidometil)ciclo-hexano- Icarboxilato (MCC), (4-acetil)amino-benzoato (SLAB), 4-tio-butirato (SPDB), 4-tio-2hidroxissulfonil-butirato (2-Sulfo-SPDB) ou peptídeos naturais ou não naturais com 1 a 8 aminoácidos naturais ou não naturais. O aminoácido natural é preferencialmente selecionado a partir de ácido aspártico, ácido glutâmico, arginina, histidina, lisina, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteína, tirosina, fenilalanina, glicina, prolina, triptofano, alanina;
Li e L2 também podem conter independentemente um componente autoimolativo ou não autoimolativo, unidades peptídicas, uma ligação hidrazona, um dissulfeto, um éster, uma oxima, uma amida ou uma ligação tioéter. A unidade autoimolativa inclui, mas não se limita a, compostos aromáticos eletronicamente semelhantes aos grupos paraaminobenzilcarbamoil (PAB), como derivados de 2-aminoimidazol-5metanol, análogos heterocíclicos de PAB, beta-glucuronídeo e orto ou paraaminobenzilacetais;
Preferencialmente, o componente de ligante autoimolativo tem uma das seguintes estruturas:
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em que o átomo (*) é o ponto de anexação de unidades espaçadoras adicionais ou unidades de ligante liberáveis, ou o agente citotóxico e/ou a molécula de ligação (CBA); X1, Y1, Z2 e Z3 são independentemente NH, O ou S; Z1 é independentemente H, NHRi, ORi, SRi, COXiRi, em que X1 e R1 são definidos acima; v é 0 ou 1; U1 é independentemente H, OH, alquila Ci~Cô, (OCHiCHijn, F, Cl, Br, I, OR5, SR5, NR5R5’, N=NR5, N=R5, NR5R5’, NO2, SOR5R5’, SO2R5, SO3R5, OSO3R5, PR5R5’, POR5R5’, PO2R5R5’, OPO(OR5)(OR5’), ou OCH2PO(OR5(OR5’), em que R5 e R5’ são selecionados independentemente a partir de H, alquila Ci~Cs; alquenila C2~Cs, alquinila, heteroalquila ou aminoácido; arila Cs-Cs, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heterocicloalquila, heteroaralquila, alquilcarbonil ou glicosídeo; ou sais catiônicos farmacêuticos;
O componente de ligante não autoimolativo tem uma das seguintes estruturas:
(CH2)nCO(OCH2CH2)rOCH3 (CH2)nCON(CH2CH2O)rCOCH3 *(CH2CH2O)r* *£Η* . *^H* (CH2)n(OCH2CH2)rOCOCH3 (CH2)nCO(OCH2CH2)rOCOCH3 ; *£h*
Figure BR112019020049A2_D0043
Figure BR112019020049A2_D0044
Figure BR112019020049A2_D0045
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Rs Rs
Figure BR112019020049A2_D0046
Figure BR112019020049A2_D0047
Ar
Figure BR112019020049A2_D0048
Figure BR112019020049A2_D0049
HOOC Rs Rs
Figure BR112019020049A2_D0050
XS*
Figure BR112019020049A2_D0051
Figure BR112019020049A2_D0052
Figure BR112019020049A2_D0053
Figure BR112019020049A2_D0054
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 59/626
38/310
Figure BR112019020049A2_D0055
Figure BR112019020049A2_D0056
Ο Ο ο
9 9 em que ο átomo (*) é ο ponto de anexação de espaçadores adicionais ou ligantes liberáveis, os agentes citotóxicos e/ou as moléculas de ligação; X1, Y1, U1, R5, R5’ são definidos como acima; r é 0 ~ 100; men são 0 ~ 6 independentemente;
Além disso, preferencialmente, Li e L2 podem ser independentemente um ligante liberável. O termo ligante liberável refere-se a um ligante que inclui pelo menos uma ligação que pode ser quebrada sob condições fisiológicas, como uma ligação lábil ao pH, lábil ao ácido, lábil à base, lábil à oxidação, metabolicamente lábil, bioquimicamente lábil ou lábil às enzimas. E apreciado que tais condições fisiológicas que resultam em quebra de ligação não necessariamente incluem um processo biológico ou metabólico e, em vez disso, podem incluir uma reação química padrão, como uma reação de hidrólise ou substituição, por exemplo, um endossoma com pH mais baixo que o pH citosólico e/ou reação de troca de ligação dissulfeto com um tiol intracelular, tal como uma faixa milimolar de glutationa abundante no interior das células malignas;
Exemplos dos ligantes liberáveis Li ou L2 incluem, mas não limitados:
-(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r-(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -(CR5R6)m.(CR7=CR8)(CR9Rio)n(Aa) t(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NRiiCO)(Aa)t(CR9Rio)n-(OCH2CH2)r-,
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39/310 (CR5R6)m(Aa)t(NRnCO)(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9Ri0)n-(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-,
-(CR5R6)m(CO)(Aa)t.
(CR9Ri0)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NRnCO)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9Rio)n-(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9Rio)n-(OCH2CH2)r-,
-(CRsRejmfenil-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-furil-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m oxazolil-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-tiazolil-CO(Aa)t(CCR7R8)n-, (CR5R6)t-tienil-CO(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-imidazolil-CO-(CR7R8)n-, -(CRsRójt morfolino-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R6)tpiperazino-CO(Aa)t.(CR7R8)n-, (CR5R6)t-N-metilpiperazin-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R)m-(Aa)tfenil-, (CRsRójm-CAajtfuril-, -(CR5R6)m-oxazolil(Aa)t-, -(CR5R6)m-tiazolil(Aa)t-, (CR5R6)m-tienil- (Aa)t-,
-(CR5R6)m-irnidazolil(Aa)t-,
-(C
RsRójmmorfolino-(Aa)t-,
- (CRsRó) m-pi perazi no-( Aa)t-,
-(CRsRejmN-metilpiperazino- (Aa)t-,
-K(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-,
-K(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-,
-K(Aa)r(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-,
-K(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-,
-K(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9Ri0)n(Aa)t(OCH2CH2)r-,
-K(CR5R6)m(NRnCO)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-,
-K(CR5R6)m(Aa)t(NRnCO)(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-,
-K(CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9Rio)n-(OCH2CH2)r-,
-K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(CO)(Aa)t.
(CR9Ri0)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(NRnCO)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-,
-K(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-,
-K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9Ri0)n(OCH2CH2)r-,
-K(CR5R6)mfenil-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K-(CR5R6)m-furil-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)mPetição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 61/626
40/310 oxazolil-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-tiazolil-CO(Aa)t.(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-tienil-CO(CR7R8)n-, -K(CR5R6)timidazolil-CO-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)tmorfolino-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)tpiperazino-CO(Aa)t(CR7Rs)n-, -K(CR5R6)t-N-metilpiperazinCO(Aa)t(CR7R8)n-,
-K(CR5R)m(Aa)tfenil, -K-(CR5R6)m-(Aa)tfuril-, -K(CR5R6)m-oxazolil(Aa)t-, -K(CR5R6)m-tiazolil(Aa)t-, -K(CR5R6)m-tienil-(Aa)t-, -K(CR5R6)mimidazolil(Aa)t-, -K(CR5R6)m-morfolino(Aa)t-, -K(CR5R6)mpiperazino-(Aa)tG, -K(CR5R6)mN-metilpiperazino(Aa)t-; em que m, Aa, m, e n são descritos acima; ter são 0 - 100 independentemente; R3, R4, R5, Ró, R7, e Rs são independentemente escolhidos a partir de H; haleto; alquila Ci~Cs; arila Cz-Cs, alquenila, alquinila, éter, éster, amina ou amida, que opcionalmente substitui um ou mais haletos, CN, NR1R2, CF3, ORi, Arila, heterociclo, S(O)Ri, SO2R1, -CO2H, -SO3H, -ORi, -CO2R1, -CONRi, PO2R1R2, -PO3H ou P(O)RiR2R3; K é NRi, -SS-, -C(=O)-. -C(=O)NH-. C(=O)O-. -C=NH-O-. -C=N-NH-, -C(=O)NH-NH-. O, S, Se, B, Het (anel heterocíclico ou heteroaromático com C3-Cs) ou peptídeos contendo 1-20 aminoácidos;
Além disso, Li e L2 podem conter independentemente uma das seguintes estruturas hidrofílicas:
Figure BR112019020049A2_D0057
Figure BR112019020049A2_D0058
Figure BR112019020049A2_D0059
Figure BR112019020049A2_D0060
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Figure BR112019020049A2_D0061
de acoplamento; X2, X3, X4, X5, on Xó, são independentemente selecionados a partir de NH; NHNH; N(R3); N(R3)N(R3 ); O; S; alquila Ci-C6; heteroalquila C2-C6, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterociclico, carbociclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila; ou 1 ~ 8 aminoácidos; em que R3 e R3’ são independentemente H; alquila Ci-Cs; heteroalquila C2-C8, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterociclico, carbociclico, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila; ésteres Ci-Cs, éter, ou amida; ou unidade de polietilenoxi com a fórmula (OCH2CH2)p ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 0 a cerca de 5000 ou uma combinação dos mesmos acima;
Mais preferencialmente, Ri, Li, ou L2 são alquila independentemente linear tendo de 1 a 6 átomos de carbono, ou unidade de polietilenoxi com a fórmula (OCH2CH2)p, p = 1 a 5000 ou um peptídeo
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42/310 contendo 1 a 4 unidades de aminoácidos (forma L ou D) ou combinação acima.
[0091] Além disso, X, Y, Lb L2, Zi ou Z2 podem ser independentemente compostos por um ou mais componentes a seguir, como mostrado abaixo:
Figure BR112019020049A2_D0062
6-maleimidocaproil (MC),
Figure BR112019020049A2_D0063
Figure BR112019020049A2_D0064
maleido,
Figure BR112019020049A2_D0065
tio-amino-oxobutanoico,
Figure BR112019020049A2_D0066
Figure BR112019020049A2_D0067
Figure BR112019020049A2_D0068
p-aminobenziloxicarbonil (PAB),
Figure BR112019020049A2_D0069
θ 4-tio-pentanoato (SPP),
S
Figure BR112019020049A2_D0070
θ 4-tio-butirato(SPDB),
Figure BR112019020049A2_D0071
O
4-(NPetição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 64/626
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Figure BR112019020049A2_D0072
maleimidometil)ciclo-hexano-l-carboxilato (MCC), θ
Figure BR112019020049A2_D0073
maleimidoetil (ME), θ 4-tio-2-hidroxissulfonil-butirato (2Sulfo-SPDB),
Figure BR112019020049A2_D0074
acetil)aminobenzoato (SIAB), oxilbenziltio,
Figure BR112019020049A2_D0075
aril-tiol (PiSS),
Figure BR112019020049A2_D0076
dioxilbenziltio,
Figure BR112019020049A2_D0077
diaminobenziltio,
Figure BR112019020049A2_D0078
amino-oxilbenziltio, etileneoxi (EO),
Figure BR112019020049A2_D0079
alcoxiamino (AOA),
Figure BR112019020049A2_D0080
Figure BR112019020049A2_D0081
Figure BR112019020049A2_D0082
4-metil-4-ditio-pentanoico (MPDP),
O
Figure BR112019020049A2_D0083
θ alquilsulfonamida, ditio,
Figure BR112019020049A2_D0084
alquilsulfonil, sulfon-bisamida,
OH fosfondiamida,
Figure BR112019020049A2_D0085
alkilfosfonamida,
O O I ii ii I
OH ácido fosfínico, OH ácido N-metilfosfonamfdico,
Figure BR112019020049A2_D0086
Figure BR112019020049A2_D0087
OH ácido
Ν,Ν’-dimetilfosfon-amídico,
Figure BR112019020049A2_D0088
N,N’dimetilfosfondiamida,
Figure BR112019020049A2_D0089
Figure BR112019020049A2_D0090
acetimidamida;
Figure BR112019020049A2_D0091
oxima, hidrazina,
Figure BR112019020049A2_D0092
acetilacetohidrazida,
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Figure BR112019020049A2_D0093
aminoetil-amina,
Figure BR112019020049A2_D0094
aminoetil-aminoetilamina, e peptídeos naturais ou não naturais L- ou D- contendo 1 a 20 aminoácidos; em que uma ligação de conexão no meio de átomos significa que ela pode conectar ligações de átomos de carbono vizinhos; a linha ondulada é o sítio a qual outra ligação pode ser conectada;
Altemativamente, X, Y, Li, L2, Zi, ou Z2, podem estar independentemente ausentes, mas Li e Zi, ou L2 e Z2 podem não estar ausentes ao mesmo tempo.
[0092] Preferencialmente, o bis-acoplamento do conjugado é adicionalmente representado pela fórmula (I-a), (I-b), (I-c), (I-d), (I-e), (I-f), (I-g), (I-h), (I-i), (I-j), (I-k), (I-m), (I-n), (I-o), (I-p), (I-q), (I-r), (I-s), (I-t), (I-
Figure BR112019020049A2_D0095
u), (I-v), e (I-w) abaixo:
Iuma molécula de ligação celular
J ·* (I-a),
Figure BR112019020049A2_D0096
(I-b),
Figure BR112019020049A2_D0097
(I-c)
Figure BR112019020049A2_D0098
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Figure BR112019020049A2_D0099
Figure BR112019020049A2_D0100
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Figure BR112019020049A2_D0101
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Figure BR112019020049A2_D0102
Figure BR112019020049A2_D0103
Figure BR112019020049A2_D0104
Figure BR112019020049A2_D0105
Figure BR112019020049A2_D0106
em que X7 e Y7 são independentemente CH, CH2, NH, O, S,
NHNH, N(Ri) e N; uma ligação química no meio de dois átomos significa que ela pode acoplar dois átomos adjacentes; “-----”, X, Y, Ri, n, Li e L2 são os mesmos descritos acima; o agente citotóxico é a mesma molécula citotóxica descrita acima.
[0093] Em um aspecto mais preferível, X e Y são independentemente
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Mciéoila J | dtotóxsca \ í ,· .<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<< I ^*·ν· τ ..1___Z um grupo de amino, hidroxil, diamino, amino-hidroxil, di-hidroxil, carboxil, aldeído, hidrazina, tiol, fosfato ou sulfonil em um anel aromático.
A PREPARAÇÃO DOS CONJUGADOS DE FÁRMACOS A MOLÉCULAS DE LIGAÇÃO CELULAR ATRAVÉS DE UM BISACOPLAMENTO
[0094] A preparação dos conjugados de fármacos às moléculas de ligação celular da presente invenção e as vias sintéticas para produzir os conjugados através do bis-acoplamento são mostradas nas Figuras 1-46.
[0095] Em um aspecto, esta invenção provê um bis-ligante prontamente reativo contendo uma molécula citotóxica da Fórmula (II) abaixo, em que dois ou mais resíduos da molécula de ligação celular podem reagir simultânea ou sequencialmente para formar a Fórmula (I).
í i
- ' /«‘i “ ' (Π) em que:
“—” representa uma ligação simples;
“-----” é opcionalmente uma ligação simples, ou uma ligação dupla, ou uma ligação tripla, ou opcionalmente pode estar ausente;
Desde que, quando-----representa uma ligação tripla, Lvi e
Lv2 estejam ausentes;
A molécula citotóxica na estrutura, mb X, Y, Lb L2, Zb e Z2 são definidos da mesma forma que na Fórmula (I);
Lvi e Lv2 representam o mesmo grupo de saída ou diferente que pode ser reagido com um grupo tiol, amina, ácido carboxílico, selenol, fenol ou hidroxil em uma molécula de ligação celular. Lvi e Lv2 são selecionados independentemente a partir de OH; F; Cl; Br; I; nitrofenol; Nhidroxissuccinimida (NHS); fenol; dinitrofenol; pentafluorofenol; tetrafluorofenol; difluorofenol; monofluorofenol; pentaclorofenol; triflato;
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49/310 imidazol; diclorofenol; tetraclorofenol; 1-hidroxibenzotriazol; tosilato; mesilato; 2-etil-5-fenilisoxazólio-3'-sulfonato, anidridos que se autoformaram ou foram formados com o outro anidrido, por exemplo, anidrido de acetil, anidrido de formil; ou uma molécula intermediária gerada com um reagente de condensação para reações de conjugação peptídica ou reações de Mitsunobu. Os exemplos de reagentes de condensação são: EDC (N-(3dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodi-imida), DCC (diciclo-hexil-carbodiimida), N,N'-di-isopropilcarbodi-imida (DIC), meto-p-toluenossulfonato de N-ciclo-hexil-N'-(2-morfolino-etil)carbodi-imida (CMC ou CME-CDI), 1,1'carbonildi-imi-dazol (CDI), TBTU (tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-lil)-N,N,N',N'-tetrametilurônio), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O(IH-benzotriazol-l-il)-urônio (HBTU), hexafluorofosfato de (benzotriazol-1iloxi)tris(dimetilamino)-fosfônio (BOP), hexafluorofosfato de (benzotriazoll-iloxi)tripirrolidinofosfônio (PyBOP), cianofosfonato de dietil (DEPC), cloro-N,N,N',N'-tetrametilformamidínio-hexafluorofosfato, 3-oxid. 1hexafluorofosfosfato de l-[bis(dimetilamino)metileno]- 1H-1,2,3-triazol[4,5b]piridínio (HATU), 3-óxido de hexafluorofosfato de 1[(dimetilamino)(morfolino)metileno] -1H- [l,2,3]triazol[4,5-b]piridin-l-ío (HDMA), hexafluorofosfato de 2-cloro-l,3-dimetil-imidazolidínio (CIP), hexafluorofosfato de clorotripirrolidinofosfônio (PyCloP), hexafluorofosfato de fluoro-N,N,N',N'-bis(tetrametileno)formamidínio (BTFFH), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-S-(l-oxido-2-piridil)tiurônio, tetrafluoroborato de O-(2-Oxo-1 (2H)piridil)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TPTU), tetrafluoroborato de S-(l-Oxido-2-piridil)-N,N,N ',N'tetrametiltiurônio, hexafluorofosfato de O[(etoxicarbonil)cianometilenamino]-N,N,N',N'-N'-tetrametilurônio (HOTU), hexafluorofosfato de (1 -ciano-2-etoxi-2-oxoetilamino-oxi)dimetilaminomorfolino-carbênio (COMU), hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-l-il)N,N,N',N'-bis(tetrametileno)urônio (HBPyU), N-benzil-N'-ciclo-hexil
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50/310 carbodi-imida (com ou sem ligação ao polímero), hexafluorofosfato de dipirrolidino(N-succinimidil-oxi)carbênio (HSPyU), hexafluorofosfato de clorodipirrolidinocarbênio (PyClU), tetrafluoroborato de 2-cloro-l,3dimetilimidazolidínio (CIB), hexafluorofosfato de (benzotriazol-1iloxi)dipiperidino-carbênio (HBPipU), tetrafluoroborato de 0-(6clorobenzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TCTU), hexafluorofosfato de bromotris(dimetilamino)-fosfônio (BroP), anidrido propilfosfônico (PPACA, T3P®), isocianeto de 2-morfolinoetil (MEI), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(N-succinimidil)urônio (HSTU), tetrafluoroborato de 2-bromo-l-etil-piridinio (BEP), tetrafluoroborato de O-[(etoxicarbonil)cianometilenamino]-N,N,N',N'-tetra-metilurônio (TOTU), 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5triazin-2-il)-4-metilmorfolínio cloreto (MMTM, DMTMM), Tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(N-succinimidil)urônio (TSTU), tetrafluoroborato de O-(3,4-Di-hidro-4-oxo-l,2,3-benzotriazin-3-il) Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilurônio (TDBTU), 1,1 '-(Azodicarbonil)-dipiperidina (ADD), di- (4-clorobenzil) azodicarboxilato (DCAD), azodicarboxilato de diterc-butil (DBAD), azodicarboxilato de di-isopropil (DIAD), azodicarboxilato de dietil (DEAD). Além disso, Lvi e Lv2 podem ser um anidrido, formado pelo próprio ácido ou formado com outros anidridos de ácido Ci~C8;
Preferencialmente, Lvi e Lv2 são selecionados independentemente a partir de, um haleto (por exemplo, fluoreto, cloreto, brometo e iodeto), metanos sulfonil (mesil), toluenos sulfonil (tosil), trifluorometil-sulfonil (triflato), trifluorometilsulfonato, nitrofenoxil, Nsuccinimidil (NHS), fenoxil; dinitrofenoxil; pentafluorofenoxil, tetrafluorofenoxil, trifluorofenoxil, difluorofenoxil, monofluorofenoxil, pentaclorofenoxil, IH-imidazol-l-il, clorofenoxil, diclorofenoxil, triclorofenoxil, tetraclorofenoxil, N-(benzotriazol-il)oxil, 2-etil-5fenilisoxazólio-3'-sulfonil, feniloxadiazol-sulfonil (-sulfona-ODA), 2-etil-5fenilisoxazólio-il, feniloxadiazol-il (ODA), oxadiazol-il, carbono insaturado
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51/310 (uma ligação dupla ou tripla entre carbono-carbono, carbono-nitrogênio, carbono-enxofre, carbono-fósforo, enxofre-nitrogênio, fósforo-nitrogênio, oxigênio-nitrogênio ou carbono-oxigênio), ou uma das seguintes estruturas:
Figure BR112019020049A2_D0107
dissulfeto;
Figure BR112019020049A2_D0108
O haloacetil;
Figure BR112019020049A2_D0109
haleto de acil ácido);
o
Figure BR112019020049A2_D0110
Ester
N-hidroxissuccinimida;
(haleto
Figure BR112019020049A2_D0111
O
Lv3
Figure BR112019020049A2_D0112
O maleimida monossubstituída;
θ maleimida;
Figure BR112019020049A2_D0113
maleimida
Figure BR112019020049A2_D0114
succinimida dissubstituida;
Figure BR112019020049A2_D0115
dissubstituida;
aldeído monossubstituída;
Figure BR112019020049A2_D0116
etenesulfonil;
Figure BR112019020049A2_D0117
Figure BR112019020049A2_D0118
(acriloil);
CHO;
Figure BR112019020049A2_D0119
Figure BR112019020049A2_D0120
Figure BR112019020049A2_D0121
2- (mesiloxi)acetil;
Figure BR112019020049A2_D0122
Figure BR112019020049A2_D0123
(dinitrofenoxi)acetil;
Figure BR112019020049A2_D0124
2- (difluorofenoxi)- acetil;
2-(fluorofenoxi)O
Figure BR112019020049A2_D0125
aldeído, (((trifluorometil)-sulfonil)oxi)acetil;
Figure BR112019020049A2_D0126
Figure BR112019020049A2_D0127
cetona, ou
2-(pentafluorofenoxi)acetil;
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metilsulfonefeniloxadiazol (ODA);°
Figure BR112019020049A2_D0129
Figure BR112019020049A2_D0130
R3 anidrido ácido,
II2X^()xx^ alquiloxiamino;
azido, alquinila, ou hidrazida, em que Xf é F, Cl, Br, I ou
Lv3; X2’ é Ο, NH, N(Ri), ou CH2; R3 é independentemente H, grupo aromático, heteroaromático ou aromático, em que um ou vários átomos de H são substituídos independentemente por -R1, -halogênio, -ORi, -SRi, -NRiR2, - NO2, -S(O)Ri,-S(O)2Ri, ou -COORi; Lv3 é um grupo de saída selecionado a partir de F, Cl, Br, I, nitrofenol; N-hidroxissuccinimida (NHS); fenol; dinitrofenol; pentafluorofenol; tetrafluorofenol; difluorofenol; monofluorofenol; pentaclorofenol; triflato; imidazol; diclorofenol; tetraclorofenol; 1-hidroxibenzotriazol; tosilato; mesilato; 2-etil-5 fenilisoxazólio-3'-sulfonato, anidridos que se autoformaram ou foram formados com o outro anidrido, por exemplo, anidrido de acetil, anidrido de formil; ou uma molécula intermediária gerada com um reagente de condensação para reações de conjugação peptídica ou para reações de Mitsunobu;
Ri e R2 são selecionados independentemente a partir de H, alquila Ci-Cs, alquenila C2-Cs, heteroalquila, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-Cs, Ar-alquila, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila, ésteres C2Cs, éter ou amida; ou peptídeos contendo 1-8 aminoácidos; ou unidade de polietilenoxi com a fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 0 a cerca de 5000, ou combinação dos grupos dos mesmos acima.
[0096] Além disso, os grupos funcionais, X ou Y, que permitem o acoplamento de um fármaco ou agente citotóxico, incluem preferencialmente grupos que permitem o acoplamento por meio de uma ligação de dissulfeto,
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53/310 tioéter, tioéster, peptídeo, hidrazona, éster, carbamato, carbonato, alcóxido ou amida. Tais grupos funcionais incluem, mas não estão limitados a, tiol, dissulfeto, amino, carboxil, aldeídos, cetona, maleimido, haloacetil, hidrazinas, alcoxiamino e/ou hidroxi;
Preferencialmente, o bis-acoplamento do conjugado é adicionalmente representado pela fórmula (Il-a), (ΙΙ-b), (II-c), (ΙΙ-d), (Il-e), (Π-f), (ΙΙ-g), (Il-h), (Π-i), (Il-j), (ΙΙ-k), (Il-m), (Π-n), (II-o), (Il-q), (ΙΙ-r), (II-s), (ΙΙ-t), (II-u), (II-v), (II-w), (II-x), (ΙΙ-y), (II-z), (Π-al), (II-a2), (II-a3), e (II-
Figure BR112019020049A2_D0131
Figure BR112019020049A2_D0132
(Π-b), (Π-d),
Figure BR112019020049A2_D0133
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(II-j),
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(Π-l);
Figure BR112019020049A2_D0139
Figure BR112019020049A2_D0140
(II-o),
Figure BR112019020049A2_D0141
Figure BR112019020049A2_D0142
(Π-s)
Figure BR112019020049A2_D0143
Figure BR112019020049A2_D0144
Figure BR112019020049A2_D0145
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(Π-y),
Figure BR112019020049A2_D0148
Figure BR112019020049A2_D0149
Figure BR112019020049A2_D0150
a2),
Figure BR112019020049A2_D0151
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Figure BR112019020049A2_D0152
(II-a4), em que X7 e Y7 são independentemente CH, CH2, NH, O, S, NHNH, N(Ri), e N; X, Y, Ri, n, “-----”, Li e L2 são os mesmos descritos acima; uma ligação química no meio de dois átomos significa que ela pode acoplar dois átomos adjacentes; Ri, X, Y, n, Li, L2, Lvi e Lv2 são os mesmos descritos acima. Preferencialmente, Lvl e Lv2 são selecionados independentemente a partir de Cl, Br, I, metanossulfonil (mesil), toluenossulfonil (tosil), trifluorometil-sulfonil (triflato), trifluorometilsulfonato e nitrofenoxil.
[0097] Em outro aspecto, esta invenção provê um bis-ligante prontamente reativo que está conjugado a um agente/molécula de ligação celular de Fórmula (III) abaixo, em que dois ou mais grupos funcionais de uma molécula citotóxica podem reagir simultaneamente ou sequencialmente para formar a Fórmula (I):
/ X’—L J-γ—Zj 1 y i. j p^agente/molécula | ; i 1 Ide ligação celular I
J· (III) em que:
mi, n, “-----”, agente/molécula de ligação celular, Li, L2, Zi, e
Z2 são definidos da mesma forma que na Fórmula (I);
X’ e Y' são um grupo funcional que pode reagir independentemente com grupos de resíduos de um fármaco citotóxico simultaneamente ou sequencialmente para formar X e Y, respectivamente, em que X e Y são definidos na Fórmula (I);
X’ e Y' são preferencialmente independentemente um substituinte de dissulfeto, maleimido, haloacetil, alcoxiamina, azido, cetona,
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57/310 aldeído, hidrazina, amino, hidroxil, carboxilato, imidazol, tiol ou alquino; ou um éster de N-hidroxissuccinimida, éster p-nitrofenílico, éster dinitrofenílico, éster pentafluorofenílico, éster pentaclorofenílico; éster tetrafluorofenrlico; éster difluorofenrlico; éster monofluorofenrlico; ou éster pentaclorofenílico, éster diclorofenrlico, éster tetraclorofenrlico ou éster 1-hidroxibenzotriazol; um triflato, mesilato ou tosilato; 2-etil-5-fenilisoxa-zólio-3'-sulfonato; um piridildissulfeto ou nitropiridildissulfeto; um grupo maleimida, haloacetato, acetilenodicarboxrlico ou haleto de ácido carboxílico (fluoreto, cloreto, brometo ou iodeto). Preferencialmente X e Y têm uma das seguintes estruturas:
θ Éster N-hidroxissuccinimida; θ maleimida; S dissulfeto;
Figure BR112019020049A2_D0153
haloacetil;
Figure BR112019020049A2_D0154
haleto de acil (haleto
Figure BR112019020049A2_D0155
Figure BR112019020049A2_D0156
ácido), etenossulfonil;
acril (acriloil);
Figure BR112019020049A2_D0157
(dinitrofenoxi)acetil;
Figure BR112019020049A2_D0158
acetil; F
F
Figure BR112019020049A2_D0159
Figure BR112019020049A2_D0160
2- (difluorofenoxi)-acetil;
2-(fluorofenoxi)-
Figure BR112019020049A2_D0161
Figure BR112019020049A2_D0162
aldeído,
2-(((trifhiorometil)-sulfonil)oxi)acetil;
Figure BR112019020049A2_D0163
2-(pentafluorofenoxi)acetil;
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, metilsulfona-feniloxadiazol (ODA);°
Figure BR112019020049A2_D0165
anidrido ácido, ll2X^()xx^ alquiloxiamino; N3 azido,
Figure BR112019020049A2_D0166
alquinil, on
H2NHN‘ hidrazida. Em que Xf é F, Cl, Br, I on Lv3;
X2’ é Ο, NH, N(Ri), ou CH2; R3 e R5 são H, Ri, grupo aromático, heteroaromático ou aromático, em que um ou vários átomos de H são substituídos independentemente por -Ri, -halogênio, -ORi, -SRi, -NRiR2, NO2, -S(O)Ri, -S(O)2Ri, ou -COORi; Lv3 é um grupo de saída selecionado a partir de metanossulfonil (mesil), toluenossulfonil (tosil), trifluorometil sulfonil (triflato), trifluorometilsulfonato, nitrofenoxil, N-succinimidiloxil (NHS), fenoxil; dinitrofenoxil; pentafluorofenoxil, tetrafluoro-fenoxil, trifluorofenoxil, difluorofenoxil, monofluoro-fenoxil, pentaclorofenoxil, 1Himidazol-l-il, clorofenoxil, diclorofenoxil, triclorofenoxil, fenoxil-benzotil), feniloxadiazol-il (ODA), oxadiazol-il ou uma molécula intermediária gerada com um reagente de condensação para reações de Mitsunobu, em que Ri e R2 são definidos acima;
Preferencialmente, um composto de bis-ligante para a preparação do conjugado é adicionalmente representado pela Fórmula (IlI-a), (IlI-b), (III-c), (IlI-d), (ΠΙ-e), (ΠΙ-f), (IlI-g), (ΠΙ-h), (ΙΙΙ-i), (Ill-j), (Ill-k), (III1), (IlI-m), (ΠΙ-n), (III-o), (III-p), (IlI-r), (III-s), (IlI-t), (III-u), (III-v), e (III-w) abaixo:
Figure BR112019020049A2_D0167
(IH-a),
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Figure BR112019020049A2_D0172
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em que X7 e Y7 são independentemente CH, CH2, NH, O, S,
NHNH, N(Ri) e N; uma ligação química no meio de dois átomos significa que ela pode acoplar dois átomos adjacentes; Ri, X’, Y’, n, Li e L2 são os
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62/310 mesmos descritos acima.
[0098] Em outro aspecto, esta invenção provê um bis-ligante prontamente reativo da Fórmula (IV) abaixo, em que uma molécula citotóxica e uma molécula de ligação celular podem reagir independentemente, ou simultaneamente ou sequencialmente para formar a Fórmula (I):
—'Z2'----mi (IV).
em que “-----”, mi, Li, L2, Zi, e Z2 são definidos da mesma forma que na Fórmula (I); Lvi e LV2 são definidos na Fórmula (II) e X’ e Y' são definidos na Fórmula (III);
Preferencialmente, o bis-ligante para a preparação do conjugado é adicionalmente representado pela Fórmula (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (IV-i), (IV-j), (IV-k), (IV-m), (IV-n), (IV-o), (IV-p), (IV-q), (IV-r), e (IV-s):
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Figure BR112019020049A2_D0183
Figure BR112019020049A2_D0184
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em que X7 e Y7 são independentemente CH, CH2, NH, O, S,
NHNH, N(Ri) e N; uma ligação química no meio de dois átomos significa que ela pode acoplar dois átomos adjacentes; “-----”, Rb X’, Y’, n, Li e L2 são os mesmos descritos acima.
[0099] Exemplos dos grupos funcionais, X’ ou Y', que permitem a reação com o terminal do grupo amina ou hidroxil de um fármaco/agente citotóxico, podem ser, mas não limitados a, ésteres de N-hidroxissuccinimida, ésteres p-nitrofenílicos, ésteres dinitrofenílicos, ésteres pentafluorofenílicos, cloretos de ácido carboxílico ou anidrido de ácido carboxílico; com o terminal de tiol de um agente citotóxico, podem ser, mas não limitados a, piridildissulfetos, nitropiridildissulfetos, maleimidas, haloacetatos, metilsulfonafeniloxadiazol (ODA), cloretos de ácido carboxílico e anidrido de ácido carboxílico; com o terminal de cetona ou aldeído, pode ser, mas não limitado a, aminas, alcoxiaminas, hidrazinas, aciloxilamina ou hidrazida; com o terminal da azida, pode ser, mas não limitado a, alquino.
PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS
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[00100] Os conjugados de Fórmula (I) podem ser preparados através dos compostos intermediários de Fórmula (II), (III) ou (IV), respectivamente. Algumas preparações de Fórmula (II) são mostradas estruturalmente nas Figuras 1 a 40. Para sintetizar o conjugado da Fórmula (I), em geral, dois grupos funcionais em um fármaco ou em uma molécula de toxicidade celular reagem primeiro sequencialmente ou simultaneamente ao grupo X’ e ao grupo Y' do ligante da Fórmula (IV) em um solvente químico ou em um meio aquoso contendo 0,1% -99,5% de solventes orgânicos ou em 100% de meio aquoso para formar um composto de Fórmula (II). Então o composto de Fórmula (II) pode ser opcionalmente isolado primeiro, ou pode reagir imediatamente, simultaneamente ou sequencialmente a dois ou mais resíduos de uma molécula de ligação celular, preferencialmente um par de tióis livres gerados através da redução de ligações dissulfeto da molécula de ligação celular a 0-60°C, meio aquoso de pH 5 ~ 9 com ou sem adição de 0 ~ 30% de solventes orgânicos misturáveis (miscíveis) em água, como DMA, DMF, etanol, metanol, acetona, acetonitrila, THF, isopropanol, dioxano, propilenoglicol ou etilenodiol para formar um composto conjugado da Fórmula (I).
[00101] Altemativamente, os conjugados da Fórmula (I) também podem ser obtidos através da primeira reação dos ligantes da Fórmula (IV) a dois ou mais resíduos de uma molécula de ligação celular, preferencialmente um par de tióis livres gerados pela redução das ligações dissulfeto da molécula de ligação celular a 0-60°C, meio aquoso de pH 5 ~ 9 com ou sem adição de 0 ~ 30% de solventes orgânicos misturáveis (miscíveis) em água, para formar a molécula de ligação celular modificada da Fórmula (III). Os pares de tióis são pares preferidas de ligações de dissulfeto reduzidos a partir das ligações dissulfeto inter-cadeia do agente de ligação celular por um agente de redução que pode ser selecionado a partir de ditiotreitol (DTT), ditioeritritol (DTE), L-glutationa (GSH), tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP), 2
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66/310 mercaptoetilamina (β-ΜΕΑ) ou/e beta-mercaptoetanol (β-ΜΕ, 2-ME) em meio aquoso de pH 4 ~ 9 com ou sem adição de 0 ~ 30% de solventes orgânicos misturáveis (miscíveis) em água. Os grupos reativos de X’ e Y' na Fórmula (III), que podem ser independentemente dissulfeto, tiol, tioéster, maleimido, haloacetil, azida, 1-ina, cetona, aldeído, alcoxiamino, triflato, carbonilimidazol, tosilato, mesilato, 2 -etil-5-fenilisoxazólio-3'-sulfonato ou ésteres de ácido carboxílico de nitrofenol, N-hidroxissuccinimida (NHS), fenol; dinitrofenol, pentafluorofenol, tetrafluorofenol, difluorofenol, monofluorofenol, pentaclorofenol, diclorofenol, tetraclorofenol, 1hidroxibenzotriazol, anidridos ou grupos hidrazida ou outros derivados de ésteres ácidos, podem reagir a dois grupos de fármaco/agente citotóxico, simultaneamente ou sequencialmente a -60°C, meio aquoso de pH 4 ~ 9,5 com ou sem adição de 0 ~ 30% de solventes orgânicos misturáveis (miscíveis) em água, para produzir um conjugado da Fórmula (I), após purificação em coluna ou diálise. Os grupos reativos de um fármaco/agente citotóxico reagem à molécula de ligação celular modificada da Fórmula (III) de diferentes maneiras em conformidade. Por exemplo, um acoplamento contendo ligações dissulfeto nos conjugados agente de ligação celular-fármaco da Fórmula (I) é alcançado por uma troca de dissulfeto entre a ligação dissulfeto no agente de ligação celular modificado da Fórmula (III) e um fármaco tendo um grupo tiol livre; Um acoplamento contendo ligações tioéter nos conjugados agente de ligação celular-fármaco da Fórmula (I) é alcançado por reação do agente de ligação celular modificado por maleimido ou haloacetil ou etilsulfonil da Fórmula (III) e um fármaco com um grupo tiol livre; Um acoplamento contendo uma ligação de uma hidrazona lábil aos ácidos nos conjugados pode ser alcançado por reação de um grupo carbonil do fármaco ou composto de Fórmula (III) com a porção de hidrazida no composto de Fórmula (III) ou o fármaco em conformidade, por métodos conhecidos na técnica (ver, por exemplo, P. Hamann et al., Cancer Res. 53, 3336-34, 1993; B. Laguzza et al.,
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J. Med. Chem., 32; 548-55, 1959; P. Trail et al., Cancer Res., 57; 100-5, 1997); Um acoplamento contendo uma ligação de triazol nos conjugados pode ser alcançada por reação de um grupo de 1-ina do fármaco ou composto de Fórmula (III) com a porção azido no outro equivalente, por meio da química de clique (cicloadição de Huisgen) (Lutz, J-F. et al, 2008, Adv. Drug Del. Rev.60, 958-70; Sletten, E. M. et al 2011, AccChem. Research 44, 666-76). Um acoplamento contendo uma ligação de oxima nos conjugados agente de ligação celular-fármaco acoplada via oxima é obtido pela reação de um grupo de uma cetona ou aldeído no agente de ligação celular modificado da Fórmula (III) ou um fármaco com um grupo de oxiamina em um fármaco ou no agente de ligação celular modificado de Fórmula (III), respectivamente. Um fármaco contendo tiol pode reagir com o ligante da molécula de ligação celular modificada da Fórmula (III) portando um substituinte de maleimido, haloacetil ou etilsulfonil a pH 5,5 ~ 9,0 em tampão aquoso para dar um acoplamento de tioéter no conjugado molécula de ligação celular-fármaco de Fórmula (I). Um fármaco contendo tiol pode sofrer troca de dissulfeto com um ligante modificado de Fórmula (III) portando uma fração piridilditio para dar um conjugado tendo um acoplamento com ligação dissulfeto. Um fármaco portando um grupo hidroxil ou um grupo tiol pode reagir com um ligante de ponte modificada de Fórmula (III) portando um halogênio, particularmente o haleto alfa de carboxilatos, na presença de uma base leve, por exemplo, pH 8,0 ~ 9,5, para dar um fármaco modificado portando um acoplamento de éter ou tiol éter. Um grupo hidroxil em um fármaco pode ser condensado com um ligante cruzado de Fórmula (IV) portando um grupo carboxil, na presença de um agente desidratante, como EDC ou DCC, para fornecer acoplamento de éster, então o ligante em ponte modificado pelo fármaco em questão de fórmula (III) sofre a conjugação com uma molécula de ligação celular. Um fármaco contendo um grupo amino pode condensar com um grupo de éster carboxílico de NHS, imidazol, nitrofenol; N-hidroxissuccinimida (NHS);
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68/310 fenol; dinitrofenol; pentafluorofenol; tetrafluorofenol; difluorofenol; monofluorofenol; pentaclorofenol; triflato; imidazol; diclorofenol, tetraclorofenol, 1-hidroxiben-zotriazol; tosilato; mesilato; 2-etil-5fenilisoxazólio-3'-sulfonato na molécula de ligação celular-ligante da Fórmula (III) para dar um conjugado através do acoplamento da ligação amida.
[00102] O conjugado sintético pode ser purificado por meios bioquímicos padrão, como filtração em gel em uma coluna Sephadex G25 ou Sephacryl S300, cromatografia de adsorção e troca iônica ou por diálise. Em alguns casos, uma molécula pequena como agente de ligação celular (por exemplo, ácido fólico, hormônio estimulador de melanócitos, EGF etc.) conjugada com fármacos moleculares pequenos pode ser purificada por cromatografia, como por HPLC, cromatografia em coluna de média pressão ou cromatografia de troca iônica.
[00103] A fim de alcançar um maior rendimento da reação de conjugação do complexo molécula citotóxica-bis ligante da Fórmula (II) com um par de tióis livres na molécula de ligação celular, preferencialmente em um anticorpo, pode ser necessária a adição de uma pequena porcentagem de solventes orgânicos miscíveis em água, ou agentes de transferência de fase, à mistura reacional. Para reticulação, o reagente (ligante) da Fórmula (II) pode ser primeiro dissolvido em um solvente orgânico polar que é miscível com água, por exemplo em diferentes álcoois, como metanol, etanol e propanol, acetona, acetonitrila, tetra-hidrofurano (THF), 1,4-dioxano, dimetil formamida (DMF), dimetil acetamida (DMA) ou dimetilsulfóxido (DMSO) em uma alta concentração, por exemplo 1-500 mM. Enquanto isso, a molécula de ligação celular, como o anticorpo dissolvido em um tampão aquoso de pH 4 ~ 9,5, preferencialmente pH 6 ~ 8,5, na concentração de 1 ~ 50 mg/ml, foi tratada com 0,5 ~ 20 equivalentes de TCEP ou DTT por 20 minutos a 48 horas. Após a redução, o DTT pode ser removido por purificação cromatográfica SEC. O TCEP também pode ser opcionalmente
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69/310 removido por cromatografia SEC ou permanecer na mistura reacional para a próxima etapa da reação sem purificação adicional. Além disso, a redução de anticorpos ou de outros agentes de ligação celular com TCEP pode ser realizada juntamente com uma molécula de fármaco-ligante da Fórmula (II), para a qual a conjugação de reticulação das moléculas de ligação celular pode ser alcançada simultaneamente junto com a redução de TCEP.
[00104] As soluções aquosas para a modificação de agentes de ligação celular são tamponadas entre pH 4 e 9, preferencialmente entre 6,0 e 7,5 e podem conter quaisquer sais tampão não nucleofílicos úteis para essas faixas de pH. Os tampões típicos incluem os tampões fosfato, acetato, trietanolamina HC1, HEPES e MOPS, que podem conter componentes adicionais, como ciclodextrinas, hidroxipropil-P-ciclodextrina, polietilenoglicóis, sacarose e sais, por exemplo, NaCl e KC1. Após a adição do fármaco-ligante de Fórmula (II) à solução contendo as moléculas de ligação celular reduzidas, a mistura reacional é incubada a uma temperatura de 4 °C a 45 °C, preferencialmente a 15°C - temperatura ambiente. O progresso da reação pode ser monitorado medindo a diminuição na absorção em um determinado comprimento de onda UV, como a 254 nm, ou o aumento na absorção em um determinado comprimento de onda UV, como 280 nm, ou outro comprimento de onda apropriado. Após a conclusão da reação, o isolamento do agente de ligação celular modificado pode ser realizado de maneira rotineira, utilizando, por exemplo, uma cromatografia de filtração em gel, uma cromatografia de troca iônica, uma cromatografia adsortiva ou cromatografia em coluna sobre silica gel ou alumina, cristalização, cromatografia em camada fina preparatória, cromatografia de troca iônica ou HPLC.
[00105] A extensão da modificação pode ser avaliada medindo a absorbância do grupo nitropiridina tiona, dinitropiridina diona, piridina tiona, carboxilamidopiridina ditiona e dicarboxil-amidopiridina ditiona liberada através de espectros de UV. Para a conjugação sem um grupo cromóforo, a
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70/310 reação de modificação ou conjugação pode ser monitorada por LC-MS, preferencialmente por espectrometria de massa UPLC-QTOF, ou eletroforese capilar-espectrometria de massa (CE-MS). Os reticuladores em ponte aqui descritos possuem diversos grupos funcionais que podem reagir com quaisquer fármacos, preferencialmente agentes citotóxicos que possuem um substituinte adequado. Por exemplo, as moléculas de ligação celular modificadas portando um substituinte amino ou hidroxil podem reagir com fármacos portando um éster de N-hidroxissuccinimida (NHS), as moléculas de ligação celular modificadas portando um substituinte tiol podem reagir com os fármacos portando um grupo maleimido ou haloacetil. Além disso, as moléculas de ligação celular modificadas portando um substituinte carbonil (cetona ou aldeído) podem reagir com fármacos portando uma hidrazida ou alcoxiamina. Um especialista na técnica pode determinar rapidamente qual ligante usar com base na reatividade conhecida do grupo funcional disponível nos ligantes.
AGENTES DE LIGAÇÃO CELULAR
[00106] A molécula de ligação celular, Cb, que compreende os conjugados e os agentes de ligação celular modificados da presente invenção pode ser de qualquer tipo atualmente conhecido, ou que se toma conhecido, molécula que se liga a, complexa com, ou reage com uma porção de uma população de células que se pretende ser terapeuticamente ou de outro modo biologicamente modificada.
[00107] Os agentes de ligação celular incluem, mas não estão limitados a, proteínas de grande peso molecular, como, por exemplo, anticorpo, uma proteína semelhante a um anticorpo, anticorpos de comprimento total (anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, dímeros, multímeros, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, um anticorpo biespecífico, anticorpo triespecífico ou anticorpo tetraespecífico); anticorpos de cadeia única; fragmentos de anticorpos como Fab, Fab', F(ab')2, Fv, [Parham, J.
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Immunol. 131, 2895-902 (1983)], fragmentos produzidos por uma biblioteca de expressão de Fab, anticorpos (anti-Id) anti-idiotípicos, CDR, diacorpo, triacorpo, tetracorpo, minianticorpo, um probody, um fragmento de probody, pequenas proteínas imunes (SIP) e fragmentos de ligação a epítopos de qualquer dos itens acima, que se ligam imunoespecificamente a antígenos de células cancerígenas, antígenos virais, antígenos microbianos ou uma proteína gerada pelo sistema imunológico capaz de reconhecer, se ligar a um antígeno específico ou exibir a desejada atividade biológica (Miller et al. (2003) J. of Immunology 170: 4854-61); interferons (como tipo I, II, III); peptídeos; linfocinas como IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, GM-CSF, interferongama (IFN-γ); hormônios como insulina, TRH (hormônios liberadores de tireotropina), MSH (hormônio estimulador de melanócitos), hormônios esteroides, como andrógenos e estrógenos, hormônio estimulador de melanócitos (MSH); fatores de crescimento e fatores estimuladores de colônias, como fatores de crescimento epidérmico (EGF), fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF), fator de crescimento transformante, como TGFa, TGFp, insulina e fatores de crescimento semelhantes à insulina (IGF-I, IGF-II) G-CSF, M-CSF e GM-CSF [Burgess, Immunology Today, 5, 155-8 (1984)]; fatores de crescimento de vaccinia (VGF); fatores de crescimento de fibroblastos (FGFs); proteínas de menor peso molecular, polipeptídeos, peptídeos e hormônios peptídicos, como bombesina, gastrina, peptídeo liberador de gastrina; fatores de crescimento derivados de plaquetas; interleucina e citocinas, como interleucina-2 (IL-2), interleucina-6 (IL-6), fatores inibidores da leucemia, fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF); vitaminas, como folato; apoproteínas e glicoproteínas, tais como transferrina [O'Keefe et al, 260 J. Biol. Chem. 932-7 (1985)]; proteínas ou lipoproteínas de ligação a açúcar, como lectinas; moléculas de transporte de nutrientes celular; e pequenos inibidores moleculares, como inibidores de antígeno da membrana específica
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72/310 da próstata (PSMA) e pequenos inibidores de tirosina quinase molecular (TKI), não peptídeos ou qualquer outra molécula ou substância de ligação celular, como polímeros bioativos (Dhar, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 2008, 105, 17356-61); dendrímeros bioativos (Lee, et al, Nat. Biotechnol. 2005, 23, 1517-26; Almutairi, et al; Proc. Natl. Acad. Sci. 2009, 106, 685-90); nanopartículas (Liong, et al, ACS Nano, 2008, 2, 1309-12; Medarova, et al, Nat. Med. 2007, 13, 372-7; Javier, et al, Bioconjugate Chem. 2008, 19, 130912); lipossomas (Medinai, et al, Curr. Phar. Des. 2004, 10, 2981-9); capsídeos virais (Flenniken et al., Viruses Nanotechnol. 2009, 327, 71-93).
[00108] Em geral, um anticorpo monoclonal é preferido como um agente de ligação à superfície celular, se houver um anticorpo adequado disponível. E o anticorpo pode ser murino, humano, humanizado, quimérico ou derivado de outras espécies.
[00109] A produção de anticorpos utilizados na presente invenção envolve procedimentos in vivo ou in vitro ou combinações dos mesmos. Os métodos para a produção de anticorpos peptídicos antirreceptor policlonais são bem conhecidos na técnica, como na Pat. dos EUA No. 4,493,795 (Nestor et al). Um anticorpo monoclonal é tipicamente produzido pela fusão de células de mieloma com células de baço de um camundongo que foi imunizado com o antígeno desejado (Kõhler, G.; Milstein, C. (1975). Nature 256: 495-7). Os procedimentos detalhados estão descritos em Antibodies—A Laboratory Manual, Harlow e Lane, eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nova York (1988), que é aqui incorporado por referência. Anticorpos particularmente monoclonais são produzidos pela imunização de camundongos, ratos, hamsters ou qualquer outro mamífero com o antígeno de interesse, como a célula alvo intacta, antígenos isolados a partir da célulaalvo, vírus inteiro, vírus inteiro atenuado e proteínas virais. Os esplenócitos são tipicamente fundidos com células de mieloma usando polietilenoglicol (PEG) 6000. Os híbridos fundidos são selecionados por sua sensibilidade à
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HAT (hipoxantina-aminopterina-timina). Os hibridomas que produzem um anticorpo monoclonal útil na prática desta invenção são identificados por sua capacidade de imunorreagir receptores especificados ou inibir a atividade do receptor nas células alvo.
[00110] Um anticorpo monoclonal usado na presente invenção pode ser produzido iniciando uma cultura de hibridoma monoclonal compreendendo um meio nutriente contendo um hibridoma que secreta moléculas de anticorpo da especificidade de antígeno apropriada. A cultura é mantida sob condições e por um período de tempo suficiente para o hibridoma secretar as moléculas de anticorpo no meio. O meio contendo anticorpo é então coletado. As moléculas de anticorpo podem então ser adicionalmente isoladas por técnicas bem conhecidas, tais como o uso de cromatografia de afinidade de proteína A; cromatografias exclusivas de tamanho, aniônica, catiônica ou hidrofóbica (particularmente por afinidade pelo antígeno específico após a proteína A e cromatografia em coluna de dimensionamento); centrifugação, solubilidade diferencial ou por qualquer outra técnica padrão para a purificação de proteínas.
[00111] Os meios úteis para a preparação destas composições são bem conhecidos na técnica e estão disponíveis comercialmente e incluem meios de cultura sintéticos. Um meio sintético exemplificativo é o meio essencial mínimo de Dulbecco (DMEM; Dulbecco et al., Virol. 8, 396 (1959)) suplementado com 4,5 gm/1 de glicose, glutamina 0 ~ 20 rnM, soro fetal de bezerro 0 ~ 20%, quantidade de vários ppm de metais pesados, como Cu, Mn, Fe ou Zn, etc., ou/e os outros metais pesados adicionados em suas formas de sal e com um agente antiespumante, como copolímero em bloco de polioxietileno-polioxipropileno.
[00112] Além disso, as linhas celulares produtoras de anticorpos também podem ser criadas por outras técnicas além da fusão, como transformação direta de linfócitos B com DNA oncogênico ou transfecção
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74/310 com oncovirus, como o virus Epstein-Barr (EBV, também chamado de herpesvirus humano 4 ( HHV-4)) ou herpesvirus associado ao sarcoma de Kaposi (KSHV). Ver Pat. dos EUA N°s 4.341.761; 4.399.121; 4.427.783; 4.444.887; 4.451.570; 4.466.917; 4.472.500; 4.491.632; 4.493.890. Um anticorpo monoclonal também pode ser produzido através de um peptídeo antirreceptor ou peptídeos contendo o terminal carboxil, como descrito bem conhecido na técnica. Ver Niman et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 80: 494953 (1983); Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 82: 178-82 (1985); Lei et al. Biochemistry 34(20): 6675-88, (1995). Tipicamente, o peptídeo antirreceptor ou um análogo peptídico é utilizado sozinho ou conjugado com um veículo imunogênico, como imunogênio para a produção de anticorpos monoclonais do peptídeo antirreceptor.
[00113] Existem também várias outras técnicas bem conhecidas para produzir anticorpos monoclonais como moléculas de ligação nesta invenção. Particularmente úteis são métodos para produzir anticorpos totalmente humanos. Um método é a tecnologia de exibição de fagos que pode ser usada para selecionar uma gama de anticorpos humanos que se ligam especificamente ao antígeno usando métodos de enriquecimento por afinidade. A exibição de fagos foi descrita detalhadamente na literatura e a construção e o rastreamento de bibliotecas de exibição de fagos são bem conhecidos na técnica, ver, por exemplo, Dente et al., Gene. 148(1):7-13 (1994); Little et al, Biotechnol Adv. 12(3): 539-55 (1994); Clackson et al., Nature 352: 264-8 (1991); Huse et al., Science 246: 1275-81 (1989).
[00114] Os anticorpos monoclonais derivados pela técnica de hibridoma a partir de outras espécies que não as humanas, como o camundongo, podem ser humanizados para evitar anticorpos humanos anticamundongo quando infundidos em humanos. Entre os métodos mais comuns de humanização de anticorpos estão a região determinante da complementaridade, enxerto e resurfacing. Estes métodos foram descritos
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75/310 extensivamente, ver por exemplo, Pat. dos EUA N°s 5.859.205 e 6,797,492; Liu et al, Immunol Rev. 222: 9-27 (2008); Almagro et al, Front Biosci. 13: 1619-33 (2008); Lazar et al, Mol Immunol. 44(8): 1986-98 (2007); Li et al, Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 103(10): 3557-62 (2006), cada um aqui incorporado por referência. Os anticorpos totalmente humanos também podem ser preparados imunizando camundongos, coelhos, macacos ou outros mamíferos transgênicos, transportando grandes porções das cadeias pesada e leve da imunoglobulina humana, com um imunogênio. Exemplos de tais camundongos são: o Xenomouse. (Abgenix/Amgen), o HuMAb-Mouse (Medarex/BMS), o VelociMouse (Regeneron), ver também, Pat. dos EUA N°s. 6.596.541. 6.207.418. 6.150.584. 6.111.166. 6.075.181. 5.922.545. 5.661.016. 5.545.806. 5.436.149 e 5.569.825. Na terapia humana, regiões variáveis murinas e regiões constantes humanas também podem ser fundidas para construir os chamados “anticorpos quiméricos” que são consideravelmente menos imunogênicos nos mAbs de homem do que de murinos (Kipriyanov et al, Mol Biotechnol. 26: 39-60 (2004); Houdebine, Curr Opin Biotechnol. 13: 625-9 (2002), cada um aqui incorporado por referência). Além disso, a mutagênese sítio dirigida na região variável de um anticorpo pode resultar em um anticorpo com maior afinidade e especificidade pelo seu antígeno (Brannigan et al., Nat Rev Mol Cell Biol. 3: 964-70, (2002)); Adams et al, J Immunol Methods. 231: 249-60 (1999)) e a troca de regiões constantes de um mAb pode melhorar sua capacidade de mediar funções efetoras de ligação e citotoxicidade.
[00115] Anticorpos imunoespecíficos para um antígeno celular maligno também podem ser obtidos comercialmente ou produzidos por qualquer método conhecido por um especialista na técnica, como por exemplo, síntese química ou técnicas de expressão recombinante. A sequência nucleotídica que codifica anticorpos imunoespecíficos para um antígeno celular maligno pode ser obtida comercialmente, por exemplo, no banco de
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76/310 dados GenBank ou em um banco de dados como esse, nas publicações da literatura ou por clonagem e sequenciamento de rotina.
[00116] Além de um anticorpo, um peptídeo ou proteína que se liga/bloqueia/direciona ou de alguma outra maneira interage com os epítopos ou receptores correspondentes em uma célula alvo pode ser usado como uma molécula de ligação. Esses peptídeos ou proteínas podem ser qualquer peptídeo ou proteína aleatória que tenham afinidade pelos epítopos ou receptores correspondentes e não precisam necessariamente pertencer à família das imunoglobulinas. Esses peptídeos podem ser isolados por técnicas semelhantes às dos anticorpos de exibição de fagos (Szardenings, J Recept Signal Transduct Res. 2003, 23(4): 307-49). A utilização de peptídeos dessas bibliotecas aleatórias de peptídeos pode ser semelhante a anticorpos e fragmentos de anticorpos. As moléculas de ligação de peptídeos ou proteínas podem ser conjugadas ou ligadas a grandes moléculas ou materiais, como, entre outros, uma albumina, um polímero, um lipossoma, uma nanopartícula, um dendrímero, desde que essa conexão permita que o peptídeo ou proteína retenha sua especificidade de ligação ao antígeno.
[00117] Exemplos de anticorpos utilizados para a conjugação de fármacos por meio dos ligantes desta prevenção para o tratamento de câncer, doença autoimune e/ou doença infecciosa incluem, mas não estão limitados a, 3F8 (anti-GD2), Abagovomabe (anti CA-125), Abciximabe (anti CD41 (integrina alfa-IIb), Adalimumabe (anti-TNF-α), Adecatumumabe (antiEpCAM, CD326), Afelimomabe (anti-TNF-α); Afutuzumabe (anti-CD20), Alacizumabe pegol (anti-VEGFR2 ), ALD518 (anti-IL-6), Alemtuzumabe (Campath, MabCampath, anti-CD52), Altumomabe (anti-CEA), Anatumomabe (anti-TAG-72), Anrukinzumabe (IMA-638, anti-IL-13), Apolizumabe (anti-HLA-DR), Arcitumomabe (anti-CEA), Aselizumabe (antiL-selectina (CD62L), Atlizumabe (tocilizumabe, Actemra, RoActemra, receptor anti-IL-6), Atorolimumabe (fator anti-Rhesus), Bapineuzumabe
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77/310 (anti-beta-amiloide), Basiliximabe (Simulect, antiCD25 (cadeia a do receptor de IL-2), Bavituximabe (anti-fosfatidilserina), Bectumomabe (LymphoScan, anti-CD22), Belimumabe (Benlysta, LymphoStat-B, anti-BAFF), Benralizumabe (anti-CD125), Bertilimumabe (anti-CCLll (eotaxina-1)), Besilesomabe (Scintimun, antígeno relacionado ao anti-CEA), Bevacizumabe (Avastin, anti-VEGF-A), Biciromabe (FibriScint, cadeia beta anti-fibrina II), Bivatuzumabe (anti-CD44 v6), Blinatumomabe (BiTE, anti-CD19), Brentuximabe (cAClO, anti-CD30 TNFRSF8), Briakinumabe (anti-IL-12, IL23) Canakinumabe (Haris, anti-IL-1), Cantuzumabe (C242, anti-CanAg), Capromabe, Catumaxomabe (Removabe, anti-EpCAM, anti-CD3), CC49 (anti-TAG-72), Cedelizumabe (anti-CD4), Certolizumabe pegol (Cimzia antiTNF-α), Cetuximabe (Erbitux, IMC-C225, anti-EGFR), Citatuzumabe bogatox (anti-EpCAM), Cixutumumabe (anti-IGF-1), Clenoliximabe (antiCD4), Clivatuzumabe (anti-MUCl), Conatumumabe (anti-TRAIL-R2), CR6261 (hemaglutinina anti-influenza A), Dacetuzumabe (anti-CD40), Daclizumabe (Zenapax, anti-CD25 (cadeia a do receptor de IL-2)), Daratumumabe (anti-CD38 (ADP ribose hidrolase cíclica), Denosumabe (Prolia, anti-RANKL), Detumomabe (anti-célula de linfoma B), Dorlimomabe, Dorlixizumabe, Ecromeximabe (gangliosideo anti-GD3), Eculizumabe (Soliris, anti-C5), Edobacomabe (anti-endotoxina), Edrecolomabe (Panorex, MAbl7-lA, anti-EpCAM), Efalizumabe (Raptiva, anti-LFA-1 (CDIla), Efungumabe (Mycograb, anti-Hsp90), Elotuzumabe (anti-SLAMF7), Elsilimomabe (anti-IL-6), Enlimomabe pegol (anti-ICAM-1 (CD54)) Epitumomabe (anti-episialina), Epratuzumabe (anti-CD22), Erlizumabe (anti-ITGB2 (CD 18)), Ertumaxomabe (Rexomun, anti-HER2/neu, CD3), Etaracizumabec (Abegrin, anti-integrina ανβ3), Exbivirumabe (antígeno de superfície anti-hepatite B), Fanolesomab (NeutroSpec, anti-CD15), Faralimomabe (receptor anti-interferon), Farletuzumabe (receptor anti-folato 1), Felvizumabe (anti-virus sincicial respiratório), Fezakinumabe (anti-IL-22),
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Figitumumabe (receptor anti-IGF-1), Fontolizumabe (anti-IFN-γ), Foravirumabe (anti-glicoproteina do vírus raiva), Fresolimumabe (anti-TGFβ), Galiximabe (anti-CD80), Gantenerumabe (anti-beta amiloide), Gavilimomabe (anti-CD147 (basigin)), Gemtuzumabe (anti-CD33), Girentuximabe (anti-anidrase carbônica 9), Glembatumumabe (CR011, antiGPNMB), Golimumabe (Simponi, anti-TNF-α), Gomiliximabe (anti-CD23 (receptor IgE)), Ibalizumabe (anti-CD4), Ibritumomabe (anti-CD20), Igovomabe (Indimacis-125, anti-CA-125), Imciromabe (Myoscint, antimiosina cardíaca), Infliximabe (Remicade, anti-TNF-α), Intetumumabe (antiCD51), Inolimomabe (anti-CD25 (cadeia a do receptor de IL-2)), Inotuzumabe (anti-CD22), Ipilimumab (anti-CD152), Iratumumabe (antiCD30 (TNFRSF8)), Keliximabe (anti-CD4), Labetuzumabe (CEA-Cide, antiCEA), Lebrikizumabe (anti-IL-13), Lemalesomabe (anti-NCA-90 (antigeno de granulócitos)), Lerdelimumabe (anti-TGF beta 2), Lexatumumabe (antiTRAIL-R2), Libivirumabe (antigeno de superfície anti-hepatite B), Lintuzumabe (anti-CD33), Lucatumumabe (anti-CD40), Lumiliximabe (antiCD23 (receptor IgE), Mapatumumabe (anti-TRAIL-Rl), Maslimomabe (receptor de células T), Matuzumabe (anti-EGFR), Mepolizumabe (Bosatria, anti-IL-5), Metelimumabe (anti-TGF beta 1), Milatuzumabe (anti-CD74), Minretumomabe (anti-TAG-72), Mitumomabe (BEC-2, anti-gangliosideo GD3), Morolimumabe (anti-fator rhesus), Motavizumabe (Numax, anti-virus sincicial respiratório), Muromonabe-CD3 (Orthoclone OKT3, anti-CD3), Nacolomabe (anti-C242), Naptumomabe (anti-5T4), Natalizumabe (Tysabri, anti-integrina ou), Nebacumabe (anti-endotoxina), Necitumumabe (antiEGFR), Nerelimomabe (anti-TNF-α), Nimotuzumabe (Theracim, Theraloc, anti-EGFR), Nofetumomabe, Ocrelizumabe (anti-CD20), Odulimomabe (Afolimomabe, anti-LFA-1 (CDIla)), Ofatumumabe (Arzerra, anti-CD20), Olaratumabe (anti-PDGF-R a), Omalizumabe (Xolair, região de Fc anti-IgE), Oportuzumabe (anti-EpCAM), Oregovomabe (OvaRex, anti-CA-125),
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Otelixizumabe (anti-CD3), Pagibaximab (anti-ácido lipoteicoico), Palivizumabe (Synagis, Abbosynagis, vírus sincicial anti-respiratório), Panitumumabe (Vectibix, ABX-EGF, anti-EGFR), Panobacumabe (antiPseudomonas aeruginosa), Pascolizumab (anti-IL-4), Pemtumoma (Theragyn, anti-MUCl), Pertuzumabe (Omnitarg, 2C4, anti-HER2/neu), Pexelizumabe (anti-C5), Pintumomabe (antigeno anti-adenocarcinoma), Priliximabe (antiCD4), Pritumumabe (anti-vimentina), PRO 140 (anti-CCR5), Racotumomab (1E10, anti-(ácido N-glicolilneurammico (NeuGc, NGNA)-gangliosideos GM3)), Rafivirumabe (anti-glicoproteina do vírus raiva), Ramucirumabe (anti-VEGFR2), Ranibizumabe (Lucentis, anti-VEGF-A), Raxibumabe (antitoxina antraz, antigeno protetor), Regavirumabe (anti-glicoproteina B de citomegalovirus), Reslizumabe (anti-IL-5), Rilotumumabe (anti-HGF), Rituximabe (MabThera, Rituxanmabe, anti-CD20), Robatumumabe (antiReceptor IGF-1), rontalizumabe (anti-IFN-α), rovelizumabe (LeukArrest, anti-CDll, CD18), ruplizumabe (Antova, anti-CD154 (CD40L)), satumomabe (anti-TAG-72), sevirumabe (anti-citomegalo virus), sibrotuzumabe (anti-FAP), sifalimumabe (anti-IFN-α), siltuximabe (anti-IL6), siplizumabe (anti-CD2), (Smart) MI95 (anti-CD33), solanezumabe (antibeta amilóide), Sonepcizumabe (anti-esfingosina-1-fosfato), Sontuzumabe anti-episialina), Stamulumabe (anti-miostatina), Sulesomabe (LeukoScan, (anti-NCA-90 (antigeno de granulócitos), Tacatuzumabe (anti-alfafetoproteína), Tadocizumabe (anti-integrina αιπ,ββ), Talizumabe (anti-IgE), Tanezumabe (anti-NGF), Taplitumomabe (anti-CD19), Tefibazumabe (Aurexis, (fator anti-fator de agrupamento A), Telimomabe, Tenatumomabe (anti-tenascina C), Teneliximabe (anti-CD40), Teplizumabe (anti-CD3), TGN1412 (anti-CD28), Ticilimumabe (Tremelimumabe, (anti-CTLA -4), Tigatuzumab (anti-TRAIL-R2), TNX-650 (anti-IL-13), Tocilizumab (Atlizumabe, Actemra, RoActemra ( anti-receptor de IL-6), Toralizumabe (anti-CD154 (CD40L)), Tositumomabe (anti-CD20), Trastuzumabe
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80/310 (Herceptin, (anti-HER2/neu), Tremelimumabe (anti-CTLA-4), Tucotuzumabe celmoleucina (anti-EpCAM), Tuvirumabe (anti-virus hepatite B), Urtoxazumabe (anti-Escherichia coli), Ustekinumabe (Stelara, anti-IL-12, IL23), Vapaliximabe (anti-AOC3 (VAP-1)), Vedolizumabe, (anti-integrina ο^β?), Veltuzumabe (anti-CD20), Vepalimomabe (anti-AOC3 (VAP-1), Visilizumabe (Nuvion, anti-CD3), Vitaxin ( integrina anti-vascular avb3), Volociximabe (anti-integrina α.^βι), Votumumabe (HumaSPECT, antigeno antitumoral CTAA16.88), Zalutumumabe (HuMax-EGFr, (anti-EGFR), Zanolimumabe (HuMax-CD4, anti-CD4), Ziralimumab (anti-CD147 (basigin)), Zolimomab (anti-CD5), Etanercept (Enbrel®), Alefacept (Amevive®), Abatacept (Orencia®), Rilonacept (Arcalyst), 14F7 [anti-IRP-2 (Proteína Reguladora de Ferro 2)], 14G2a (anti-gangliosídeo GD2, da Nat. Cancer Inst, para melanoma e tumores sólidos), J591 (anti-PSMA, Weill Cornell Medical School para câncer de próstata), 225.28S [anti-HMW-MAA (Antigeno associado ao melanoma de alto peso molecular), Sorin Radiofarmaci SRL (Milan, Italy) para melanoma], COL-1 (anti-CEACAM3, CGM1, do Nat. Cancer Inst. EUA para câncer colorretal e gástrico), CYT-356 (Oncoltad®, para câncer de próstata), HNK20 (OraVax Inc. para virus sincicial respiratório), ImmuRAIT (da Immunomedics para NHL), Lym-1 (anti-HLA-DR10, Peregrine Pharm. para Cânceres), MAK-195F [anti-TNF (fator de necrose tumoral; TNFA, TNF-alfa; TNFSF2), da Abbott / Knoll para choque tóxico de sepse], MEDI-500 [T10B9, anti-CD3, ΤΡαβ (receptor de células T alfa/beta), complexo, da Medlmmune Inc para doença do enxerto versus hospedeiro], RING SCAN [anti-TAG 72 (glicoproteina 72 associada ao tumor), da Neoprobe Corp, para câncer de mama, cólon e retal], Avicidin (anti-EPCAM (molécula de adesão de células epiteliais), anti-TACSTDl (transdutor 1 de sinal de cálcio associado ao tumor), anti-GA733-2 (proteína 2 associada a tumor gastrointestinal), anti-EGP-2 (glicoproteina epitelial 2); anti-KSA; antigeno KS1/4; M4S; antigeno tumoral 17-1 A; CD326, da NeoRx
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Corp, para câncer de cólon, ovário, próstata e NHL]; LymphoCide (Immunomedics, NJ), Smart ID 10 (Protein Design Labs), Oncolym (Techniclone Inc, CA), Allomune (BioTransplant, CA), anti-VEGF (Genentech, CA); CEAcide (Immunomedics, NJ), IMC-1C11 (ImClone, NJ) e Cetuximab (ImClone, NJ).
[00118] Outros anticorpos como moléculas/ligandos de ligação celular incluem, mas não estão limitados a, são anticorpos contra os seguintes antígenos: Aminopeptidase N (CD 13), anexina Al, B7-H3 (CD276, vários tipos de câncer), CA 125 (ovário), CA 15-3 (carcinomas), CA 19-9 (carcinomas), L6 (carcinomas), Lewis Y (carcinomas), Lewis X (carcinomas), alfa-fetoproteina (carcinomas), CA242 (colorretal), fosfatase alcalina da placenta (carcinomas), antígeno específico da próstata (próstata), fosfatase ácida prostática (próstata), fator de crescimento epidérmico (carcinomas), CD2 (doença de Hodgkin, NHL linfoma, mieloma múltiplo), CD3 epsilon (linfoma de células T, pulmão, mama, câncer gástrico, ovário, doenças autoimunes, ascites malignas), CD 19 (malignidades de células B), CD20 (linfoma não-Hodgkin), CD20 (leucemia, linfoma, mieloma múltiplo, LES), CD30 (linfoma de Hodgkin), CD33 (leucemia, doenças autoimunes), CD38 (mieloma múltiplo), CD40 (linfoma, mieloma múltiplo, leucemia (CLL)), CD51 (melanoma metastático, sarcoma), CD52 (leucemia), CD56 (câncer de pulmão de pequenas células, câncer de ovário, carcinoma de células de Merkel e tumor líquido, mieloma múltiplo), CD66e (câncer), CD70 (carcinoma de células renais metastático e linfoma não-Hodgkin), CD74 (mieloma múltiplo), CD80 (linfoma), CD98 (câncer), mucina (carcinomas), CD221 (tumores sólidos), CD227 (câncer de mama, ovário), CD262 (NSCLC e outros cânceres), CD309 (ovário) cânceres), CD326 (tumores sólidos), CEACAM3 (câncer colorretal gástrico), CEACAM5 (antígeno carcinoembrionário; CEA, CD66e) (câncer de mama, colorretal e pulmão), DLL3 (delta-tipo-3), DLL4 (delta-tipo-4), EGFR (receptor do fator de
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82/310 crescimento epidérmico, vários cânceres), CTLA4 (melanoma), CXCR4 (CD184, heme-oncologia, tumores sólidos), endoglina (CD105, tumores sólidos), EPCAM (molécula de adesão celular epitelial, bexiga, cabeça, câncer de pescoço, cólon, próstata NHL e ovário), ERBB2 (Receptor 2 do Fator de Crescimento Epidérmico; câncer de pulmão, mama, próstata), FCGR1 (doenças autoimunes), FOLR (receptor de folato, câncer de ovário), gangliosídeo GD2 (câncer), G-28 (glicolipídio de antígeno da superfície celular, melanoma), idiotipo GD3 (câncer), proteínas de choque térmico (câncer), HER1 (pulmão, câncer de estômago), HER2 (câncer de mama, pulmão e ovário), HLA-DR10 (NHL), HLA-DRB (NHL, leucemia de células B), gonadotrofina coriônica humana (carcinoma), IGF1R (receptor 1 de fator de crescimento semelhante à insulina, tumores sólidos, câncer de sangue), receptor de IL-2 (receptor de interleucina 2, leucemia de células T e linfomas), IL-6R (receptor de interleucina 6, mieloma múltiplo, AR, doença de Castleman, tumores dependentes de IL6), Integrinas (ανβ3, α5β1, α6β4, α11β3, α5β5, ανβ5, para vários tipos de câncer), MAGE-1 (carcinomas), MAGE-2 (carcinomas), MAGE-3 (carcinomas), MAGE 4 (carcinomas), antireceptor de transferrina (carcinomas), p97 (melanoma), MS4A1 (membro 1 da subfamilia A com 4 doínios transmembranários, linfoma de células B nãoHodgkin, leucemia), MUC1 ou MUC1-KLH (câncer de mama, ovário, colo do útero, brônquio e gastrointestinal), MUC16 (CA125) (Câncer de ovário), CEA (colorretal), gplOO (melanoma), MARTI (melanoma), MPG (melanoma), MS4A1 (subfamilia A com 4 domínios transmembranários, câncer de pulmão de pequenas células, NHL), Nucleolin, produto de oncogene Neu (carcinomas), P21 (carcinomas), Paratópio de anti-ácido (Nglicolilneuraminico, Mama, Câncer de melanoma), fosfatase alcalina testicular do tipo PLAP (ovário, câncer de testículo), PSMA (tumores de próstata), PSA (próstata), ROBO4, TAG 72 (glicoproteina 72 associada a tumor, câncer de mama, gástrica, colorretal, câncer de ovário), proteína
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83/310 transmembranar de células T (cânceres), Tie (CD202b), TNFRSF10B (membro 10B da superfamrlia do receptor de fator de necrose tumoral, cânceres), TNFRSF13B (membro 13B da superfamília do receptor de fator de necrose tumoral, mieloma múltiplo, NHL, outros cânceres, AR e LES), TPBG (glicoproteína de trofoblastos, carcinoma de células renais), TRAIL-R1 (Receptor 1 de ligando indutor de apoptose de necrose tumoral, linfoma, NHL, câncer colorretal, câncer de pulmão), VCAM-1 (CD106, melanoma), VEGF, VEGF-A, VEGF-2 (CD309) (vários cânceres). Alguns outros antígenos associados a tumores reconhecidos por anticorpos foram revisados (Gerber, et al, mAbs 1:3, 247-53 (2009); Novellino et al, Cancer Immunol Immunother. 54(3), 187-207 (2005). Franke, et al, Cancer Biother Radiopharm. 2000, 15, 459-76).
[00119] Os agentes de ligação celular, anticorpos mais preferidos, podem ser quaisquer agentes capazes de combater células tumorais, células infectadas por vírus, células infectadas por microrganismos, células infectadas por parasitas, células autoimunes, células ativadas, células mieloides, células T ativadas, células B ou melanócitos. Mais especificamente, os agentes de ligação celular podem ser qualquer agente/molécula capaz de combater qualquer um dos seguintes antígenos ou receptores: CD2, CD2R, CD3, CD3gd, CD3e, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD8a, CD8b, CD9, CD 10, CDlla, CDllb, CDllc, CD12, CD12w, CD13, CD14, CD15, CD15s, CD15u, CD16, CD16a, CD16b, CD17, CDwl7, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31, CD32, CD33, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD39, CD40, CD41, CD42, CD42a, CD42b, CD42c, CD42d, CD43, CD44, CD44R, CD45, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD46, CD47, CD47R, CD48, CD49a, CD49b, CD49c, CD49e, CD49f, CD50, CD51, CD52, CD53, CD54, CD55,CD56, CD57, CD58, CD59, CD60, CD60a, CD60b, CD60c, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD65, CD65s, CD66, CD66a,
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CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, CD67, CD68, CD69, CD70, CD71,
CD72, CD73, CD74, CD74, CD75, CD75s, CD76, CD77, CD78, CD79,
CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CDw84, CD85, CD86,
CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD92, CDw92, CD93, CD94, CD95,
CD96, CD97, CD98, CD99, CD99R, CD100, CD101, CD102, CD103,
CD104, CD105, CD106, CD107, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD110,
CD111, CD112, CD113, CDwll3, CD114, CD115, CD116, CD117, CD118,
CD119, CDwll9, CD120a, CD120b, CD121a, CD121b, CDwl21b, CD122,
CD123, CDwl23, CD124, CD125, CDwl25, CD126, CD127, CD128,
CDwl28, CD129, CD130, CD131, CDwl31, CD132, CD133, CD134,
CD135, CD136, CDwl36, CD137, CDwl37, CD138, CD139, CD140a,
CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD145, CDwl45, CD146,
CD147, CD148, CD149, CD150, CD151, CD152, CD153, CD154, CD155,
CD156a, CD156b, CDwl56c, CD157, CD158a, CD158b, CD159a, CD159b,
CD159c, CD160, CD161, CD162, CD162R, CD163, CD164, CD165, CD166,
CD167, CD167a, CD168, CD169, CD170, CD171, CD172a, CD172b,
CD172g, CD173, CD174, CD175, CD175s, CD176, CD177, CD178, CD179,
CD180, CD181, CD182, CD183, CD184, CD185, CD186, CDwl86, CD187,
CD188, CD189, CD190, Cdl91, CD192, CD193, CD194, CD195, CD196,
CD197, CD198, CDwl98, CD199, CDwl99, CD200, CD200a, CD200b,
CD201, CD202, CD202b, CD203, CD203c, CD204, CD205, CD206, CD207,
CD208, CD209, CD210, CDw210, CD212, CD213al, CD213a2, CDw217,
CDw218a, CDw218b, CD220, CD221, CD222, CD223, CD224, CD225,
CD226, CD227, CD228, CD229, CD230, CD231, CD232, CD233, CD234,
CD235a, CD235ab, CD235b, CD236, CD236R, CD238, CD239, CD240,
CD240CE, CD240D, CD241, CD242, CD243, CD244, CD245, CD246,
CD247, CD248, CD249, CD252, CD253, CD254, CD256, CD257, CD258,
CD261, CD262, CD263, CD265, CD266, CD267, CD268, CD269, CD271,
CD273, CD274, CD275, CD276 (B7-H3), CD277, CD278, CD279, CD280,
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CD281, CD282, CD283, CD284, CD289, CD292, CDw293, CD294, CD295, CD296, CD297, CD298, CD299, CD300a, CD300c, CD300e, CD301, CD302, CD3O3, CD304, CD305, CD306, CD309, CD312, CD314, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD320, CD321, CD322, CD324, CDw325, CD326, CDw327, CDw328, CDw329, CD331, CD332, CD333, CD334, CD335, CD336, CD337, CDw338, CD339, 4-1BB, 5AC, 5T4 (Glicoproteina de trofoblastos, TPBG, 5T4, fator inibidor ativado por Wnt 1 ou WAIF1), antígeno de adenocarcinoma, AGS-5, AGS-22M6, quinase semelhante ao receptor de ativina 1, AFP, AKAP-4, ALK, alfa integrina, alfa v betaó, Amino-peptidase N, beta amiloide, receptor de andrógeno, angiopoietina 2, angiopoietina 3, anexina Al, antígeno protetor da toxina antraz, anti-receptor de transferrina, AOC3 (VAP-1), B7-H3, Bacillus anthracis anthrax, BAFF (fator ativador de célula B), célula de linfoma B, bcr-abl, Bombesin, BORIS, C5, C242, antígeno CA125 (antígeno de carboidrato 125, MUC16), CA-IX (ou CAIX, anidrase carbônica 9), CALLA, CanAg, Canis lupus familiaris IL31, Anidrase carbônica IX, Miosina cardíaca, CCL11 (quimiocina de motivo C-C 11), CCR4 (receptor de quimiocina C-C tipo 4, CD194), CCR5, CD3E (epsilon), CEA (antígeno carcinoembrionário), CEACAM3, CEACAM5 (antígeno carcinoembrionário), CFD (Fator D), Ch4D5, Colecistocinina 2 (CCK2R), CLDN18 (Claudin-18), Fator de agrupamento A, CRIPTO, FCSF1R (Receptor do fator 1 estimulador de colônias, CD115), CSF2 (fator 2 estimulador de colônias, fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF)), CTLA4 (proteína associada a linfócitos T citotóxicos 4), antígeno tumoral CTAA16.88, CXCR4 (CD184), receptor de quimiocina C-X-C tipo 4, ADP ribose hidrolase cíclica, Ciclina Bl, CYP1B1, Citomegalovírus, Glicoproteina B do citomegalovírus, Dabigatran, DLL3 (ligando do tipo delta 3), DLL4 (ligando do tipo delta 4), DPP4 (dipeptidil-peptidase 4), DR5 (receptor da morte 5), toxina do tipo E. coli shiga-1, toxina do tipo E. coli shiga-2, ED-B, EGFL7 (proteína 7
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86/310 contendo domínio semelhante ao EGF), EGFR, EGFRII, EGFRvIII, Endoglina (CD 105), receptor de endotelina B, endotoxina, EpCAM (molécula de adesão de células epiteliais), EphA2, Episialina, ERBB2 (Receptor do fator de crescimento epidérmico 2), ERBB3, ERG (gene de fusão TMPRSS2 ETS), Escherichia coli, ETV6-AML, FAP (Proteína alfa de ativação de fibroblastos), FCGR1, alfa-fetoproteína, fibrina II, cadeia beta, domínio extra de fibronectina-B, FOLR (receptor de folato), receptor de folato alfa, folato hidrolase, antígeno 1 relacionado ao Fos, proteína F do vírus respiratório sincicial, receptor de Frizzled, Fucosil GM1, gangliosídeo GD2, G-28 (glicolipídio de antígeno da superfície celular), idiotipo GD3, GloboH, glipicano 3, ácido N-glicolilneurâmico, GM3, cadeia α do receptor GMCSF, fator de diferenciação de crescimento 8, GP100, GPNMB (glicoproteína transmembranar NMB), GUCY2C (Guanilato ciclase 2C, guanilil ciclase C (GC-C), guanilato ciclase intestinal, receptor de guanilato ciclase-C, receptor de enterotoxina estável ao calor (hSTAR)), proteínas de choque térmico, hemaglutinina, antígeno da hepatite B, vírus da hepatite B, HER1 (receptor 1 do fator de crescimento epidérmico humano), HER2, HER2/neu, HER3 (ERBB-3), IgG4, HGF/SF (fator de crescimento/fator de dispersão de hepatócitos), HHGFR, HIV -1, complexo de histona, HLA-DR (antígeno leucocitário humano), HLA-DR 10, HLA-DRB, HMWMAA, gonadotrofina coriônica humana, HNGF, receptor quinase do fator de dispersão humano, HPV E6 / E7, Hsp90, hTERT, ICAM -1 (molécula de adesão intercelular 1), idiotipo, IGF1R (IGF -1, receptor de fator de crescimento semelhante à insulina 1), IGHE, IFN- □, hemaglutinina da influenza, IgE, região Fc de IgE, IGHE, interleucinas (por exemplo, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-6R, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL- 11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-17 A, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27 ou IL-28), IL31RA, ILGF2 (fator de crescimento semelhante à insulina 2), Integrinas (α4, αιπ,ββ, ανβ3, ο^β?, α5β1, α6β4, α7β7, αΙΙβ3, α5β5, ανβ5), proteína induzida por interferon gama,
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ITGA2, ITGB2, KIR2D, LCK, Le, Legumaina, antigeno Lewis-Y, LFA-1 (antígeno 1 associado à função linfocitária), CD Ila), LHRH, LINGO-1, ácido lipoteicoico, LIV1A, LMP2, LTA, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE Al, MAGE A3, MAGE 4, MARTI, MCP-1, MIF (fator inibidor de migração de macrófagos ou fator inibidor de glicosilação (GIF)), MS4A1 (membro 1 da subfamrlia A de 4 domínios transmembranares), MSLN (mesotelina), MUC1 (mucina 1, célula associada à superfície (MUC1) ou mucina epitelial polimórfica (PEM)), MUC1-KLH, MUC16 (CA 125), MCP1 (proteína quimiotática monocítica 1), MelanA/MARTl, ML-IAP, MPG, MS4A1 (subfamília A de 4 domínios transmembranares), MYCN, mielina glicoproteína associada a miostatina, NA 17, NARP-1, NCA-90 (antígeno de granulócitos), Nectina-4 (ASG22ME), NGF, proteinase 1 regulada por apoptose neural, NOGO-A, receptor de Notch, Nucleolina, produto de oncogene Neu, NY-BR-1, NY-ESO-1, OX40, OxLDL (lipoproteína de baixa densidade oxidada), OY-TES1, P21, p53 não-mutante, P97, Page4, PAP, Paratópio de anti-(ácido Nglicolilneuramínico), PAX3, PAX5, PCSK9, PDCD1 (PD-1, proteína de morte celular programada 1, CD279), PDGF-Ra (receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas do tipo alfa), PDGFR-β, PDL-1, PLAC1, fosfatase alcalina testicular do tipo PLAP, receptor beta do fator de crescimento derivado de plaquetas, co-transportador de fosfato de sódio, PMEL 17, ácido polissiálico, proteinase3 (PR1), carcinoma prostático, PS (fosfatidilserina), células de carcinoma prostático, Pseudomonas aeruginosa, PSMA, PSA, PSCA, glicoproteína do vírus da raiva, RHD (polipeptídeo Rh 1 (RhPI), CD240), fator de Rhesus, RANKL, receptores RANTES (CCR1, CCR3, CCR5), RhoC, Ras mutante, RGS5, ROBO4, vírus sincicial respiratório, RON, pontos de ruptura da translocação do sarcoma, SART3, Esclerostina, SLAMF7 (membro da família SLAM 7), Selectina P, SDC1 (Sindecano 1), sLe (a), Somatomedina C, SIP (Esfingosina-1-fosfato),
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Somatostatina, proteína do esperma 17, SSX2, STEAP1 (antígeno epitelial 6 transmembranar da próstata 1), STEAP2, STn, TAG-72 (glicoproteina associada ao tumor 72), Survivin, receptor de células T, proteína transmembrana de células T, TEMÍ (marcador endotelial tumoral 1), TENB2, Tenascina C (TN-C), TGF-a, TGF-β (fator de crescimento transformador beta), TGF-β 1, ΤΟΕ-β2 (fator de crescimento transformador-beta 2), Tie (CD202b), Tie2, TIM-1 (CDX-014), Tn, TNF, TNF-α, TNFRSF8, TNFRSF10B (membro da família 10B da superfamilia do receptor de fator de necrose tumoral), TNFRSF13B (membro 13B da superfamilia do receptor de fator de necrose tumoral 13B ), TPBG (glicoproteina de trofoblastos), TRAIL-R1 (receptor 1 do ligando indutor de apoptose de necrose tumoral), TRAILR2 (receptor de morte 5 (DR5)), transdutor de sinal de cálcio associado a tumor 2, glicosilação específica de tumor de MUC1, receptor de TWEAK, TYRP1 (glicoproteina 75), TROP-2, TRP-2, Tirosinase, VCAM-1 (CD 106), VEGF, VEGF-A, VEGF-2 (CD309), VEGFR-1, VEGFR2 ou vimentina, WT1, XAGE 1 ou células que expressam qualquer receptor de fator de crescimento de insulina ou qualquer receptor de fator de crescimento epidérmico.
[00120] Em outra modalidade específica, os conjugados ligando de ligação celular-fármaco através dos ligandos de ponte desta invenção são utilizados para o tratamento direcionado de cânceres. Os cânceres alvos incluem, entre outros, Carcinoma Adrenocortical, Câncer Anal, Câncer de Bexiga, Tumor Cerebral (Adulto, Glioma de Tronco Cerebral, Infância, Astrocitoma Cerebelar, Astrocitoma Cerebral, Ependimoma, Meduloblastoma, Tumores Neuroectodérmicos e Pineais Primitivos Supratentoriais, Via Visual e Glioma Hipotalâmico), Câncer de Mama, Tumor Carcinoide, Gastrointestinal, Carcinoma de Primário Desconhecido, Câncer Cervical, Câncer de Cólon, Câncer Endometrial, Câncer de esôfago, Câncer de Dueto biliar Extra-hepático, Família de tumores de Ewings (PNET),
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Tumor de células germinativas extracranianas, Câncer ocular, Melanoma intraocular, Câncer da vesícula biliar, Câncer gástrico (estômago), Tumor de células germinativas, Extragonadal, Tumor trofoblástico gestacional, Câncer de cabeça e pescoço, Câncer hipofaringeo, Carcinoma de células das ilhotas, Câncer renal (câncer de células renais), Câncer de laringe, Leucemia (linfoblástica aguda, mieloide aguda, linfocítica crônica, mieloide crônica, células pilosas), Câncer de lábio e cavidade oral, Câncer de fígado, Câncer de pulmão (Células Não Pequenas, Células Pequenas, linfoma (relacionado à AIDS, sistema nervoso central, célula T cutânea, doença de Hodgkin, doença não-Hodgkin, mesotelioma maligno, melanoma, carcinoma de células Merkel, Câncer de Pescoço Escamoso metastático com primário oculto, mieloma múltiplo e outras neoplasias das células plasmáticas, micose fungoide, síndrome mielodisplásica, distúrbios mieloproliferativos, câncer nasofaríngeo, neuroblastoma, câncer bucal, câncer orofaríngeo, osteossarcoma, câncer de ovário (Epitelial, Tumor de Células Germinativas, Tumor Maligno de Baixo Potencial), Câncer de Pâncreas (Exócrino, Carcinoma de Células de Ilhotas), Câncer de Seio Paranasal e Cavidade Nasal, Câncer de Paratireoide, Câncer de Pênis, Câncer de Feocromocitoma, Câncer da Hipófise, Neoplasia de Células Plasmáticas, Câncer de Próstata, Rabdomiossarcoma, câncer retal, câncer de células renais (câncer renal), pelve renal e ureter (células de transição), câncer de glândulas salivares, síndrome de Sezary, câncer de pele, câncer de pele (linfoma de células T cutânceas, sarcoma de Kaposi, melanoma), câncer de intestino delgado, Sarcoma de Tecidos Moles, Câncer de Estômago, Câncer de Testículo, Timoma (Maligno), Câncer de Tireoide, Câncer Uretral, Câncer Uterino (Sarcoma), Câncer Incomum da Infância, Câncer Vaginal, Câncer Vulvar, Tumor de Wilms.
[00121] Em outra modalidade específica, os conjugados de fármacoligação celular desta invenção são utilizados de acordo com as composições e métodos para o tratamento ou prevenção de uma doença autoimune. As
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90/310 doenças autoimunes incluem, entre outras, hepatite crônica ativa autoimune com acloridria, encefalomielite aguda disseminada, leucoencefalite hemorrágica aguda, doença de Addison, agamaglobulinemia, alopecia areata, esclerose lateral amiotrófica, espondilite anquilosante, nefrite antiGBM/TBM, síndrome antifosfolipídica, síndrome anti-sintetase, artrite, alergia atópica, dermatite atópica, anemia aplástica autoimune, cardiomiopatia autoimune, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, doença do ouvido interno autoimune, síndrome linfoproliferativa autoimune, neuropatia periférica autoimune, pancreatite autoimune, pancreatite autoimune, síndrome polendócrina autoimune Tipos I, II e III, dermatite de progesterona autoimune, púrpura trombocitopênica autoimune, uveíte autoimune, doença de Balo/esclerose concêntrica de Balo, síndrome de Bechets, doença de Berger, encefalite de Bickerstaff, síndrome de Blau, Penfigoide Bolhoso, doença de Castleman, doença de Castleman, doença de Balman síndrome da disfunção imune de fadiga crônica, polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, ostomielite multifocal recorrente crônica, doença de Lyme crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica, síndrome de ChurgStrauss, penfigoide cicatricial, doença celíaca, síndrome de Cogan, doença de aglutininas frias, deficiência do componente complementar 2, arterite craniana, síndrome de CREST, doença de Crohn (um tipo de doença inflamatória intestinal idiopática), síndrome de Cushing, Angiite leucocitoclástica cutânea, doença de Dego, doença de Dercum, dermatite herpetiforme, dermatomiosite, diabetes mellitus tipo 1, esclerose sistêmica cutânea difusa, síndrome de Dressier, lúpus eritematoso discoide, eczema, endometriose, artrite relacionada à entesite, fasciíte eosinofílica, epidermólise bolhosa adquirida, eritema nodoso, crioglobulinemia mista essencial, síndrome de Evan, fibrodisplasia ossificante progressiva, fibromialgia, fibromiosite, aveolite fibrosante, gastrite, penfigoide gastrintestinal, arterite de células gigantes, síndrome de Goodpasture, doença de Graves, síndrome de
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Guillain-Barré, encefalite de Hashimoto, tireoidite de Hashimoto, anemia hemolítica, púrpura de Henoch-Schonlein, herpes gestacional, hidradenite supurativa, síndrome de Hughes (ver síndrome antifosfolipídica), Hipogamaglobulinemia, doenças desmielinizantes inflamatórias idiopáticas, fibrose pulmonar idiopática, púrpura trombocitopênica idiopática (Ver púrpura trombocitopênica autoimune), nefropatia de IgA (também doença de Berger), miosite do corpo de inclusão, polineuropatia desmielinizante inflamatória, cistite intersticial, síndrome do intestino irritável, artrite idiopática juvenil, artrite reumatoide juvenil, doença de Kawasaki, síndrome miastênica de Lambert-Eaton, vasculite leucocitoclástica, Líquen plano, doença de IgA linear (LAD), doença de Lou Gehrig (também esclerose lateral amiotrófica), hepatite lupóide, lúpus eritematoso, síndrome de Majeed, doença de Ménière, polangiite microscópica, síndrome de Miller-Fisher, doença mista do tecido conjuntivo, morfea, doença de Mucha-Habermann, síndrome de Muckle-Wells, mieloma múltiplo, esclerose múltipla, Miastenia gravis, miosite, narcolepsia, neuromielite óptica (Doença de Devic), neuromiotonia, penfigoide cicatricial ocular, síndrome do Opsoclonus mioclonus, tireoidite comum, reumatismo palindrômico, PANDAS (Distúrbios Neuropsiquiátricos Autoimunes Pediátricos Associados ao Estreptococo), degeneração cerebelar paraneoplásica, hemoglobinúria paroxística noturna, síndrome de Parry Romberg, síndrome de ParsonnageTurner, Pars planitis, pênfigo, pênfigo vulgar, anemia perniciosa, encefalomielite perivenosa, síndrome de POEMS, poliarterite nodosa, polimialgia reumática, polimiosite, cirrose biliar primária, colangite esclerosante primária, neuropatia inflamatória progressiva, psoríase, artrite psoriática, pioderma gangrenoso, fenômeno de Raynaud, policondrite recidivante, síndrome de Reiter, síndrome das pernas inquietas, fibrose retroperitoneal, artrite reumatoide, febre reumatoide, sarcoidose, esquizofrenia, síndrome de Schmidt, síndrome de Schnitzler, esclerite,
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92/310 escleroderma, sindrome de Sjogren, espondiloartropatia, sindrome do sangue pegajoso, doença de Still, sindrome da pessoa rígida, endocardite bacteriana subaguda, sindrome de Susac, sindrome de Sweet, coreia de Sydenham, oftalmia simpática, arterite de Takayasu, arterite temporal (arterite de células gigantes), sindrome de Tolosa-Hunt, mielite transversa, colite ulcerativa (um tipo de doença inflamatória intestinal idiopática), doença indiferenciada do tecido conjuntivo, espondiloartropatia indiferenciada, vasculite, vitiligo, granulomatose de Wegener, sindrome de Wilson, sindrome de WiskottAldrich.
[00122] Em outra modalidade específica, uma molécula de ligação utilizada para o conjugado através dos bis-ligantes da presente invenção para o tratamento ou prevenção de uma doença autoimune pode ser, mas não está limitada a, anticorpo anti-elastina; anticorpos contra anticorpo de células epiteliais; anticorpo anti-proteína do tipo IV de colágeno de membrana basal; anticorpo Anti-Nuclear; anti-DNA ds; anti-DNA ss, anticorpo anticardiolipina IgM, IgG; anticorpo anti-celíaco; anticorpo anti-fosfolipídio IgK, IgG; anticorpo anti-SM; anticorpo anti-mitocondrial; anticorpo de tiroide; anticorpo microssomal, anticorpo de células T; anticorpo de tiroglobulina, Anti SCL-70; Anti-Jo; Anti-U.sub.IRNP; Anti-La/SSB; Anti SSA; Anti SSB; anticorpo anti-células peritais; anti-histonas; anti-RNP; C-ANCA; P-ANCA; anti-centrômero; anticorpo anti-Fibrilarina e anticorpo anti-GBM, anticorpo anti-gangliosídeo; anticorpo anti-Desmogleína 3; anticorpo anti-p62; anticorpo anti-splOO; anticorpo anti-mitocondrial (M2); anticorpo de fator reumatoide; anticorpo anti-MCV; anticorpo anti-topoisomerase; anticorpo anti-citoplasma de neutrófilos (cANCA).
[00123] Em certas modalidades preferidas, a molécula de ligação para o conjugado na presente invenção, pode se ligar a um receptor e a um complexo receptor expresso em um linfócito ativado que está associado a uma doença autoimune. O receptor ou complexo receptor pode compreender um
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93/310 membro da superfamrlia do gene da imunoglobulina (por exemplo, CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD28, CD30, CD30, CD33, CD37, CD38, CD56, CD70, CD79, CD79b, CD90, CD125, CD137, CD138, CD147, CD152/CTLA-4, PD-1 ou ICOS) um membro da superfamrlia do receptor de TNF (por exemplo, CD27, CD40, CD95/Fas, CD 134/0X40, CD 137/4-IBB, INF-R1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA, osteoprotegerina, Apo2/TRAILRl, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4, e APO-3), uma integrina, um receptor de citocina, um receptor de quimiocina, uma proteína de histocompatibilidade principal, uma lectina (tipo C, tipo S ou tipo I) ou uma proteína de controle do complemento.
[00124] Em outra modalidade específica, os ligandos de ligação celular úteis que são imunoespecíficos para um antigeno viral ou microbiano são anticorpos humanizados ou monoclonais humanos. Como usado aqui, o termo antigeno viral inclui, mas não está limitado a, qualquer peptídeo viral, proteína polipeptídica (por exemplo, HIV gpl20, HIV nef, glicoproteína RSV F, vírus da influenza neuraminidase, hemaglutinina do vírus da influenza, HTLV tax, glicoproteína do vírus da herpes simples (por exemplo, gB, gC, gD e gE) e antigeno de superfície da hepatite B) capaz de provocar uma resposta imune. Como aqui utilizado, o termo antigeno microbiano inclui, mas não se limita a, qualquer peptídeo microbiano, polipeptídeo, proteína, sacarídeo, polissacarídeo ou molécula lipídica (por exemplo, bactérias, fungos, protozoários patogênicos ou polipeptídeos de levedura, incluindo, por exemplo, LPS e polissacarídeo capsular 5/8) que é capaz de provocar uma resposta imune. Exemplos de anticorpos disponíveis 1 para a infecção viral ou microbiana incluem, mas não estão limitados a, Palivizumabe, que é um anticorpo monoclonal humanizado anti-vírus sincicial respiratório para o tratamento da infecção por RSV; PRO542 que é um anticorpo de fusão de CD4 para o tratamento de infecção por HIV; Ostavir, que é um anticorpo humano para o tratamento do vírus da hepatite B; PROTVIR, que é um
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94/310 anticorpo IgG.sub.l humanizado para o tratamento de citomegalovírus; e anticorpos anti-LPS.
[00125] Os conjugados moléculas de ligação celular-fármaco através dos bis-ligantes desta invenção podem ser utilizados no tratamento de doenças infecciosas. Essas doenças infecciosas incluem, entre outras, infecções por Acinetobacter, Actinomicose, doença do sono africana (tripanossomíase africana), AIDS (síndrome da imunodeficiência adquirida), amebíase, anaplasmose, antraz, infecção por Arcanobacterium haemolyticum, febre hemorrágica argentina, ascaridíase, Aspergilose, infecção por astrovírus, babesiose, infecção por Bacillus cereus, pneumonia bacteriana, vaginose bacteriana, infecção por Bacteroides, balantidíase, infecção por Baylisascaris, infecção por vírus BK, piedra preta, infecção por Blastocystis hominis, blastomicose, febre hemorrágica boliviana, infecção por Borrelia e botulismo (botulismo infantil), febre hemorrágica brasileira, brucelose, infecção por Burkholderia, úlcera de Buruli, infecção por Calicivirus (Norovirus e Sapovirus), Campilobacteriose, candidíase (Monilíase; candidíase), doença por arranhadura do gato, celulite, doença de Chagas (tripanossomíase americana), cancroide, varicela, clamídia, infecção por Chlamydophila pneumoniae, cólera, cromoblastomicose, clonorquíase, infecção por Clostridium difficile, Coccidioidomicose, febre do carrapato do Colorado, Resfriado comum (rinofaringite viral aguda; Coriza aguda), doença de Creutzfeldt-Jakob, febre hemorrágica do Congo-Crimeia, criptococose, criptosporidiose, larva migrans cutânea, ciclosporíase, cisticercose, infecção por citomegalovírus, dengue, dientamoebíase, difteria, difilobotríase, dracunculíase, febre hemorrágica do ébola, equinococose, erliquiose, enterobíase (infecção por oxiúro), infecção por enterococos, infecção por enterovirus, tifo epidêmico, eritema infeccioso (Quinta doença), exantema subitum, fasciolopsíase, fasciolose, insônia familiar fatal, filariose, intoxicação alimentar por Clostridium perfringens, infecção amebiana de vida
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95/310 livre, infecção por Fusobacterium, gangrena gasosa (mionecrose clostridial), geotricose, síndrome de Gerstmann-Strãussler-Scheinker, giardíase, mormo, gnatostomíase, gonorreia, granuloma inguinal (Donovanosis), infecção estreptocócica do grupo A, infecção estreptocócica do grupo A, infecção estreptocócica do grupo B, infecção por Haemophilus influenzae, infecção por Haemophilus influenzae. (HFMD), Síndrome Pulmonar por Hantavirus, Infecção por Helicobacter pylori, síndrome Hemolítico-Urêmica, Febre Hemorrágica com Síndrome Renal, Hepatite A, Hepatite B, Hepatite C, Hepatite D, Hepatite E, Herpes simples, Histoplasmose, Infecção por ancilostomíase, Infecção por bocavírus humano, Erliquiose ewingii humana, Anaplasmose granulocítica humana, Infecção por metapneumovírus humano, Erliquiose monocítica humana, Infecção por papilomavírus humano, Infecção pelo vírus parainfluenza humano, Himenolepíase, Mononucleose Infecciosa do Vírus Epstein-Barr (Mono), Gripe, Isosporíase, Doença de Kawasaki, Queratite, Infecção por Kingella kingae, Kuru, Febre de Lassa, Legionelose (Doença dos Legionários), Legionelose (Febre de Pontiac), Leishmaniose, Lepra, Leptospirose, Listeriose, Doença de Lyme (Borreliose de Lyme), Filariose linfática (Elefantíase), Coriomeningite linfocítica, Malária, febre hemorrágica de Marburg, sarampo, melioidose (doença de Whitmore), meningite, doença meningocócica, metagonimíase, microsporidiose, molusco contagioso, caxumba, tifo murino (tifo endêmico), pneumonia por micoplasma, micetoma, miíase, conjuntivite neonatal (oftalmia neonatal), doença variante (nova) de Creutzfeldt-Jakob (vCJD, nvCJD), Nocardiose, Oncocercose (cegueira dos rios), paracoccidioidomicose (blastomicose da América do Sul), Paragonimíase, Pasteurelose, Pediculosis capitis (piolho da cabeça), Pediculosis corporis (Piolho do corpo), Pediculose pubiana (Piolho púbico, Piolho caranguejo), Doença inflamatória pélvica, Coqueluche (Tosse convulsa), Peste, Infecção pneumocócica, pneumonia por Pneumocystis, pneumonia, poliomielite, infecção por Prevotella, meningoencefalite
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96/310 amebiana primária, leucoencefalopatia multifocal progressiva, Psittacosis, febre Q, raiva, febre de mordida de rato, infecção por vírus sincicial respiratório, rinosporidiose, infecção por rinovírus, infecção por rickettsia, varíola de Rickettsial, febre de Vale do Rift, febre maculosa, infecção por rotavirus, rubéola, salmonelose, SARS (Síndrome Respiratória Aguda Grave), Escabiose, Esquistossomose, Sepse, Shigelose (disenteria Bacilar), Herpes zoster, Varíola, Esporotricose, Intoxicação alimentar por estafilococos, Infecção estafilocócica, Estrongiloidíase, Sífilis, taeníase, tétano (Lockjaw), Tinea barbae (coceira do barbeiro), Tinea capitis (dermatofitose do couro cabeludo), Tinea corporis (dermatofitose do corpo), tinea cruris (Jock coceira), tinea manuum (dermatofitose da mão), tinea nigra, Tinea pedis (pé de atleta), Tinea unguium (Onicomicose), Tinea versicolor (Pitiriase versicolor), Toxocariase (Larva Migrans Ocular), Toxocariase (Larva Migrans Visceral), Toxoplasmose, Triquinelose, Tricomoniase, Tricuriase (infecção por verme do chicote), Tuberculose, Tularemia, Infecção por Ureaplasma urealyticum, Encefalite equina venezuelana, Febre hemorrágica venezuelana, Pneumonia viral, Febre do Nilo Ocidental, Piedra branca (Tinea blanca), Infecção por Yersinia pseudotuberculosis, yersiniose, febre amarela, zigomicose.
[00126] A molécula de ligação celular, que é mais preferida por ser um anticorpo descrito nesta patente que é contra cepas patogênicas, inclui, mas não se limita a, Acinetobacter baumannii, Actinomyces israelii, Actinomyces gerencseriae e Propionibacterium propionicus, Trypanosoma brucei, HIV (vírus da imunodeficiência humana), Entamoeba histolytica, Anaplasma genus, Bacillus anthracis, Arcanobacterium haemolyticum, Junin virus, Ascaris lumbricoides, Aspergillus genus, Astroviridae family, Babesia genus, Bacillus cereus, multiple bacteria, Bacteroides genus, Balantidium coli, Baylisascaris genus, vírus BK, Piedraia hortae, Blastocystis hominis, Blastomyces dermatitides, Machupo virus, Borrelia genus, Clostridium
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97/310 botulinum, Sabia, Brucella genus, usually Burkholderia cepacia e outras espécies de Burkholderia, Mycobacterium ulcerans, Caliciviridae family, Campylobacter genus, comumente Candida albicans e outras espécies de Candida, Bartonella henselae, Streptococcus do grupo A e Staphylococcus, Trypanosoma cruzi, Haemophilus ducreyi, virus Varicella zoster (VZV), Chlamydia trachomatis, Chlamydophila pneumoniae, Vibrio cholerae, Fonsecaea pedrosoi, Clonorchis sinensis, Clostridium difficile, Coccidioides immitis e Coccidioides posadasii, vírus da febre do carrapato do Colorado, rinovirus, coronavirus, prion CJD, vírus da febre hemorrágica da CrimeiaCongo, Cryptococcus neoformans, gênero Cryptosporidium, Ancylostoma braziliense; parasitas múltiplos, Cyclospora cayetanensis, Taenia solium, citomegalovirus, virus da dengue (DEN-1, DEN-2, DEN-3 e DEN-4) flavivirus, Dientamoeba fragilis, Corynebacterium diphtheriae, Diphyllobothrium, Dracunculus medinensis, Ebolavirus, Echinococcus genus, Ehrlichia genus, Enterobius vermicularis, Enterococcus genus, Enterovirus genus, Rickettsia prowazekii, Parvovirus Bl9, Herpesvirus Humano 6 e Herpesvirus Humano 7, Fasciolopsis buski, Fasciola hepatica e Fasciola gigantica, prion FFI, superfamilia de Filarioidea, Clostridium perfringens, Fusobacterium genus, Clostridium perfringens; outras espécies de Clostridium, Geotrichum candidum, prion GSS, Giardia intestinalis, Burkholderia mallei, Gnathostoma spinigerum e Gnathostoma hispidum, Neisseria gonorrhoeae, Klebsiella granulomatis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Haemophilus influenzae, Enterovirus, principalmente virus Coxsackie A e Enterovirus 71, virus Sin Nombre, Helicobacter pylori, Escherichia coli O157:H7, família de Bunyaviridae, virus da hepatite A, virus da hepatite B, virus da hepatite C, virus da hepatite D, virus da hepatite E, virus do herpes simples 1, virus do herpes simples 2, Histoplasma capsulatum, Ancylostoma duodenale e Necator americanus, Hemophilus influenzae, Bocavírus humano, Ehrlichia ewingii, Anaplasma
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98/310 phagocy tophilum, Metapneumo vírus humano, Ehrlichia chaffeensis, Papilomavírus humano, virus da parainfluenza humana, Hymenolepis nana e Hymenolepis diminuta, virus Epstein-Barr, família de Orthomy-xoviridae, Isospora belli, Kingella kingae, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenas, Klebsiella rhinoscleromotis, prion Kuru, vírus Lassa, Legionella pneumophila, Legionella pneumophila, Leishmania genus, Mycobacterium leprae e Mycobacterium lepromatosis, Leptospira genus, Listeria monocytogenes, Borrelia burgdorferi e outras espécies de Borrelia, Wuchereria bancrofti e Brugia malayi, virus da coriomeningite linfocitica (LCMV), gênero Plasmodium, virus de Marburg, virus do sarampo, Burkholderia pseudomallei, Neisseria meningitides, Metagonimus yokagawai, Microsporidia phylum, virus do molusco contagioso (MCV), virus da caxumba, Rickettsia typhi, Mycoplasma pneumoniae, numerosas espécies de bactérias (Actinomycetoma) e fungos (Eumycetoma), larvas de moscas dípticas parasitárias, Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae, prion vCJD, Nocardia asteroides e outras espécies de Nocardia, Onchocerca volvulus, Paracoccidioides brasiliensis, Paragonimus westermani e outras espécies de Paragonimus, gênero Pasteurella, Pediculus humanus capitis, Pediculus humanus corporis, Phthirus pubis, Bordetella pertussis, Yersinia pestis, Streptococcus pneumoniae, Pneumocystis jirovecii, Poliovirus, gênero Prevotella, Naegleria fowleri, vírus JC, Chlamydophila psittaci, Coxiella burnetii, vírus da raiva, Streptobacillus moniliformis e Spirillum minus, virus sincicial respiratório, Rhinosporidium seeberi, Rhinovirus, gênero Rickettsia, Rickettsia akari, vírus da febre do vale do Rift, Rickettsia rickettsii, Rotavirus, vírus da rubéola, gênero Salmonella, coronavirus SARS, Sarcoptes scabiei, gênero Schistosoma, gênero Shigella, virus Varicella zoster, Variola major ou Variola minor, Sporothrix schenckii, gênero Staphylococcus, gênero Staphylococcus, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Strongyloides stercoralis, Treponema pallidum, gênero Taenia, Clostridium
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99/310 tetani, gênero Trichophyton, Trichophyton tonsurans, gênero Trichophyton, Epidermophyton floccosum, Trichophyton rubrum, e Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton rubrum, Hortaea wemeckii, Trichophyton genus, Malassezia genus, Toxocara canis ou Toxocara cati, Toxoplasma gondii, Trichinella spiralis, Trichomonas vaginalis, Trichuris trichiura, Mycobacterium tuberculosis, Francisella tularensis, Ureaplasma urealyticum, virus da encefalite equina venezuelana, Vibrio colerae, virus Guanarito, virus do Nilo Ocidental, Trichosporon beigelii, Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, vírus da febre amarela, vírus da febre amarela, ordem Mucorales (mucormicose) e ordem Entomophthorales (Entomoftoramicose), Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter (Vibrio) fetus, Aeromonas hydrophila, Edwardsiella tarda, Yersinia pestis, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella sonnei, Salmonella typhimurium, Treponema pertenue, Treponema carateneum, Borrelia vincentii, Borrelia burgdorferi, Leptospira icterohemorrhagiae, Pneumocystis carinii, Brucella abortus, Brucella suis, Brucella melitensis, Mycoplasma spp., Rickettsia prowazeki, Rickettsia tsutsugumushi, Clamydia spp.; fungos patogênicos (Aspergillus fumigatus, Candida albicans, Histoplasma capsulatum); protozoários (Entomoeba histolytica, Trichomonas tenas, Trichomonas hominis, Tryoanosoma gambiense, Trypanosoma rhodesiense, Leishmania donovani, Leishmania tropica, Leishmania braziliensis, Pneumocystis pneumonia, Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum, Plasmodium malaria); ou helmintos (Schistosoma japonicum, Schistosoma mansoni, Schistosoma haematobium, e ancilostomideos).
[00127] Outros anticorpos como ligandos de ligação celular usados nesta invenção para tratamento de doença viral incluem, mas não estão limitados a, anticorpos contra antígenos de vírus patogênicos, incluindo como exemplos e não por limitação: Poxyiridae, Herpesviridae, Adenoviridae, Papovaviridae, Enteroviridae, Picomaviridae, Parvoviridae, Reoviridae,
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Retroviridae, virus da influenza, virus da parainfluenza, caxumba, sarampo, vírus sincicial respiratório, rubéola, Nonboviridae, Arboviridae, Rhab Rhinoviridae, Coronaviridae, Rotoviridae, Oncovirus [como HBV (carcinoma hepatocelular), HPV (câncer do colo do útero, câncer anal), herpesvirus associado ao sarcoma de Kaposi (sarcoma de Kaposi), virus Epstein-Barr (carcinoma nasofarihgeo, linfoma de Burkitt, linfoma primário do sistema nervoso central), MCPyV (câncer de célula de Merkel), SV40 (virus Simian 40), HCV (carcinoma hepatocelular), HTLV-I (linfoma/leucemia de células T de adulto)], vírus que causam distúrbios imunológicos: [como o vírus da imunodeficiência humana (AIDS)]; Vírus do sistema nervoso central: [como JCV (leucoencefalopatia multifocal progressiva), MeV (panencefalite esclerosante subaguda), LCV (coriomeningite linfocítica), encefalite por arbovirus, Orthomyxoviridae (provável) (encefalite letárgica), RV (raiva), vírus Chandipura, meningite herpesviral, síndrome Ramsay Hunt tipo II; Poliovirus (Poliomielite, síndrome pós-poliomielite), HTLV-I (paraparesia espástica tropical)]; Citomegalovírus (retinite por citomegalovírus, HSV (queratite herpética)); vírus cardiovascular [como CBV (pericardite, miocardite)]; Sistema respiratório/nasofaringite viral aguda/pneumonia viral: [Vírus Epstein-Barr (infecção por EBV/mononucleose infecciosa), Citomegalovírus; Coronavirus SARS (síndrome respiratória aguda grave) Orthomyxoviridae: Influenzavirus A/B/C (influenza/influenza aviária), paramixovírus: Vírus de parainfluenza humano (Parainfluenza), RSV (vírus sincicial respiratório humano), hMPV]; Vírus do sistema digestivo [MuV (Caxumba), citomegalovírus (esofagite por citomegalovírus); Adenovirus (infecção por adenovirus); Rotavirus, Norovirus, Astro vírus, Coronavirus; HBV (vírus da hepatite B), CBV, HAV (vírus da hepatite A), HCV (vírus da hepatite C), HDV (vírus da hepatite D), HEV (vírus da hepatite E), HGV (vírus da hepatite G)]; Vírus urogenital [como vírus BK, MuV (Caxumba)]. [00128] De acordo com outro objetivo, a presente invenção também se
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101/310 refere a composições farmacêuticas compreendendo o conjugado da invenção juntamente com um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável para o tratamento de cânceres, infecções ou distúrbios autoimunes. O método para o tratamento de cânceres, infecções e distúrbios autoimunes pode ser praticado in vitro, in vivo ou ex vivo. Exemplos de usos in vitro incluem tratamentos de culturas de células para matar todas as células, exceto as variantes desejadas que não expressam o antígeno alvo; ou matar variantes que expressam antígenos indesejados. Exemplos de usos ex vivo incluem tratamentos de células-tronco hematopoiéticas (HSC) antes da realização do transplante (HSCT) no mesmo paciente para matar células doentes ou malignas. Por exemplo, o tratamento clínico ex vivo para remover células tumorais ou células linfoides da medula óssea antes do transplante autólogo no tratamento do câncer ou no tratamento de doenças autoimunes, ou remover células T e outras células linfoides da medula óssea ou tecido alogênico antes do transplante para prevenir a doença do enxerto contra o hospedeiro, pode ser realizada do seguinte maneira. A medula óssea é extraída do paciente ou de outro indivíduo e depois incubada em meio contendo soro ao qual é adicionado o conjugado da invenção, as concentrações variam de cerca de 1 pM a 0,1 mM, por cerca de 30 minutos a cerca de 48 horas a cerca de 37 °C. As condições exatas de concentração e tempo de incubação (= dose) são prontamente determinadas pelos médicos especializados. Após a incubação, as células da medula óssea são lavadas com meio contendo soro e devolvidas ao paciente por infusão i.v. de acordo com métodos conhecidos. Em circunstâncias em que o paciente recebe outro tratamento, como um curso de quimioterapia ablativa ou irradiação total do corpo entre o momento da extração da medula e a reinfusão das células tratadas, as células da medula tratadas são armazenadas congeladas em nitrogênio líquido usando equipamento médico padrão.
FÁRMACOS/AGENTES CITOTÓXICOS PARA CONJUGAÇÃO
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[00129] Os fármacos que podem ser conjugados a uma molécula de ligação celular na presente invenção são fármacos de moléculas pequenas, incluindo agentes citotóxicos, que podem ser ligados a, ou após serem modificados para acoplamento ao, agente de ligação celular. Um fármaco de molécula pequena é amplamente utilizado aqui para se referir a um composto orgânico, inorgânico ou organometálico que pode ter um peso molecular de, por exemplo, 100 a 2500, mais adequadamente de 200 a 2000. Os fármacos de moléculas pequenas são bem caracterizados na técnica, como em WO05058367A2 e na patente dos EUA N° 4.956.303, entre outros, e são incorporados na sua totalidade por referência. Os fármacos incluem fármacos conhecidos e aqueles que podem se tornar fármacos conhecidos.
[00130] Os fármacos conhecidos incluem, mas não limitados a,
1). Agentes quimioterapêuticos: a). Agentes alquilantes: como mostardas de nitrogênio: clorambucil, clornafazina, ciclofosfamida, dacarbazina, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, mannomustina, mitobronitol, melfalano, mitolactol, pipobromana, novembichin, fenesterina, prednimustina, tiotepa, trofosfamida, mostarda de uracil; CC-1065 (incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina); Duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos, KW-2189, CBI-TMI e dímeros de CBI); Dímeros de benzodiazepina (por exemplo, dímeros de pirrolobenzodiazepina (PBD) ou tomaimicina, indolinobenzodiazepinas, imidazobenzotiadiazepinas ou oxazolidinobenzodiazepinas); Nitrosoureas: (carmustina, lomustina, clorozotocina, fotemustina, nimustina, ranimustina); Alquilsulfonatos: (bussulfano, treossulfano, improssulfano e pipossulfano); Triazenos: (dacarbazina); Compostos contendo platina: (carboplatina, cisplatina, oxaliplatina); aziridinas, como benzodopa, carboquona, meturedopa e uredopa; etileniminas e metilamelaminas, incluindo altretamina, trietilenemel-amina, trietilenofosforamida, trietilenotio-fosforamida e trimetilolomel-amina]; b).
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Alcalóides vegetais: como alcalóides da vinca: (vincristina, vinblastina, vindesina, vinorelbina, navelbin); Taxoides: (paclitaxel, docetaxol) e seus análogos, Maitansinoides (DM1, DM2, DM3, DM4, maitansina e ansamitocinas) e seus análogos, criptoficinas (particularmente criptoficina 1 e criptoficina 8); epotilonas, eleuterobina, discodermolida, briostatinas, dolostatinas, auristatinas, tubulisinas, cefalostatinas; pancratistatina; uma sarcodictin; espongistatina; c) Inibidores da DNA Topoisomerase: como [Epipodofilinas: (9-aminocamptotecina, camptotecina, crisnatol, daunomicina, etoposídeo, fosfato de etoposídeo, irinotecano, mitoxantrona, novantrona, novantrona, ácidos retinoicos (retinóis), teniposídeo, topotecano, 9-nitrocamptotecina (RFS 2000)); mitomicinas: (mitomicina C) e seus análogos]; d). Anti-metabólitos: como {[Anti-folato: Inibidores de DHFR: (metotrexato, trimetrexato, denopterina, pteropterina, aminopterina (ácido 4aminopteroico) ou outros análogos do ácido fólico); Inibidores de IMP desidrogenase: (ácido micofenólico, tiazofurina, ribavirina, EICAR); Inibidores da ribonucleotídeo redutase: (hidroxiureia, deferoxamina)]; [Análogos de pirimidina: Análogos de Uracil: (ancitabina, azacitidina, 6azauridina, capecitabina (Xeloda), carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, 5-fluorouracil, floxuridina, ratitrexed (Tomudex)); Análogos de citosina: (citarabina, citosina arabinosídeo, fludarabina); Análogos da purina: (azatioprina, fludarabina, mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina)]; repositor de ácido fólico, como ácido frolínico}; e) Terapias hormonais: como {Antagonistas dos receptores: [Antiestrogênio: (megestrol, raloxifeno, tamoxifeno); agonistas de LHRH: (Goscrclina, acetato de leuprolida); Anti-andrógenos: (bicalutamida, flutamida, calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, goserelina, leuprolida, mepitiostano, nilutamida, testolactona, trilostane e outros inibidores de andrógenos)]; Retinoides/Deltoides: [Análogos da vitamina D3: (CB 1093, EB 1089 KH 1060, colecalciferol, ergocalciferol); Terapias fotodinâmicas:
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104/310 (verteporfina, ftalocianina, fotossensibilizador Pc4, desmetoxi-hipocrelina A); Citocinas: (Interferon-alfa, Interferon-gama, fator de necrose tumoral (TNFs), proteínas humanas contendo um domínio TNF)]}; f). Inibidores de quinase, como BIBW 2992 (anti-EGFR/Erb2), imatinibe, gefitinibe, pegaptanibe, sorafenibe, dasatinibe, sunitinibe, erlotinibe, nilotinibe, lapatinibe, axitinibe, pazopanibe. vandetanibe, E7080 (anti-VEGFR2), mubritinibe, ponatinibe (AP24534), bafetinibe (INNO-406), bosutinibe (SKI-606), cabozantinibe, vismodegibe, iniparibe, ruxolitinibe, CYT387, axitinibe, tibetano, Trastuzumabe, ranibizumabe, panitumumabe, ispinesibe; g) Inibidores de poli (ADP-ribose) polimerase (PARP), como olaparibe, niraparibe, iniparibe, talazoparibe, veliparibe, veliparibe, CEP 9722 (Cephalon), E7016 (Eisai), BGB-290 (BeiGene), 3-aminobenzamida.
[00131] h). antibióticos, tais como os antibióticos de enedina (por exemplo, caliqueamicina, especialmente caliqueamicina γΐ, δΐ, al e βΐ, ver, por exemplo, J. Med. Chem., 39 (11), 2103-2117 (1996), Angew Chem Intl. Ed. Engl. 33: 183-186 (1994); dinemicina, incluindo dinemicina A e desoxidinemicina; esperamicina, kedarcidina, C-1027, maduropeptina, bem como cromóforo de neocarzinostatina e cromóforos antiobióticos de enedina relacionados com cromoproteína), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carabicina, carabicina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina, morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina e desoxidoxorrubicina, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, nitomicinas, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; i). Outros: como policetídeos (acetogeninas), especialmente bulatacina e bulatacinona; gemcitabina, epoxomicinas (por exemplo, carfilzomibe), bortezomibe,
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105/310 talidomida, lenalidomida, pomalidomida, tosedostate, zybrestat, PLX4032, STA-9090, Stimuvax, alovectina-7, Xegeva, Provenge, Yervoy, inibidores da isoprenilação (como Lovastatina), neurotoxinas dopaminérgicas (como ion 1metil-4-fenilpiridínio), inibidores do ciclo celular (como estaurosporina), actinomicinas (como actinomicina D, dactinomicina), bleomicinas (como bleomicina A2, bleomicina) B2, peplomicina), antraciclinas (como daunorrubicina, doxorrubicina (adriamicina), idarrubicina, epirrubicina, eribulina, pirarrubicina, zorubicina, mitoxantrona, inibidores de MDR (como verapamil), inibidores de Ca2+ ATPase (como tapsigargina), inibidores da histona deacetilase (Vorinostate, Romidepsina, Panobinostate, Acido valproico, Mocetinostate, (MGCD0102), Belonostate, PCI-24781, Entinostate, SB939, Resminostate, Givinostate, AR-42, CUDC-101, sulforafano, Tricostatina A); Tapsigargina, Celecoxibe, glitazonas, epigalocatequina galato, Disulfiram, Salinosporamida A Antiadrenais, tais como aminoglutotimida, mitotano, trilostano; aceglatone; glicosideo de aldofosfamida; ácido aminolevulinico; amsacrina; arabinosideo, bestrabucil; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; eflomitina (DFMO), elfomitina; acetato de eliptínio, etoglucida; nitrato de gálio; gacitosina, hidroxiureia; ibandronato, lentinano; lonidamina; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; phenamet; pirarrubicina; ácido podofilinico; 2-etil-hidrazida; procarbazina; PSK®; razoxano; rizoxina; sizofirana; espirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2',2triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verrucarina A, roridina A e anguidina); uretano, siRNA, fármacos antissentido e uma enzima nucleolitica.
[00132] 2). Um agente antidoença autoimune inclui, mas não está limitado a, ciclosporina, ciclosporina A, ácido aminocaproico, azatioprina, bromocriptina, clorambucil, cloroquina, ciclofosfamida, corticosteroides (por exemplo, amcinonida, betametasona, budesonida, hidrocortisona, flunisolida,
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106/310 propionato de fluticasona, fluocortolona danazol, dexametasona, acetonida de triancinolona, dipropionato de beclometasona), DHEA, enanercept, hidroxicloroquina, infliximabe, meloxicam, metotrexato, mofetil, micofenolato, prednisona, sirolimus, tacrolimus.
[00133] 3). Um agente de antidoença infecciosa inclui, mas não está limitado a, a). Aminoglicosídeos: amicacina, astromicina, gentamicina (netilmicina, sisomicina, isepamicina), higromicina B, canamicina (amicacina, arbecacina, becanamicina, dibecacina, tobramicina), neomicina (framicetina, paromomicina, ribostamicina), netilmicina, espectinomicina, estreptomicina, tobramicina, verdamicina; b). Amfenicóis: azidamfenicol, cloranfenicol, florfenicol, tiamfenicol; c) Ansamicinas: geldanamicina, herbimicina; d). Carbapenens: biapenem, doripenem, ertapenem, imipenem/cilastatina, meropenem, panipenem; e) Cefens: carbacefem (loracarbef), cefacetrila, cefaclor, cefradina, cefadroxil, cefalônio, cefaloridina, cefalotina ou cefalotina, cefalexina, cefaloglicina, cefamandol, cefapirina, cefatrizina, cefazaflur, cefazedona, cefazolina, cefbuperazona, cefcapeno, cefdaloxima, cefepima, cefminox, cefoxitina, cefprozil, cefroxadina, ceftezol, cefuroxima, cefixima, cefdinir, cefditoreno, cefepima, cefetamet, cefmenoxima, cefodizima, cefonicida, cefoperazona, ceforanida, cefotaxima, cefotiam, cefozopran, cefalexina, cefpimizol, cefpiramida, cefpiroma, cefpodoxima, cefprozil, cefquinoma, cefsulodina, ceftazidima, cefteram, ceftibuten, ceftioleno, ceftizoxima, ceftobiprol, ceftriaxona, cefuroxima, cefuzonam, cefamicina (cefoxitina, cefotetan, cefmetazol), oxacefema (flomoxefe, latamoxefe); f). Glicopeptídeos: bleomicina, vancomicina (oritavancina, telavancina), teicoplanina (dalbavancina), ramoplanina; g). Glicilciclinas: por exemplo tigeciclina; g) Inibidores da βlactamase: penam (sulbactam, tazobactam), ciavam (ácido clavulânico); i). Lincosamidas: clindamicina, lincomicina; j). Lipopeptídeos: daptomicina, A54145, antibióticos dependentes de cálcio (CDA); k). Macrolídeos:
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107/310 azitromicina, cetromicina, claritromicina, diritromicina, eritromicina, fluritromicina, josamicina, cetolideo (telitromicina, cetromicina), midecamicina, miocamicina, oleandomicina, rifamicinas (rifampicina, rifampicina, rifabutina, rifapentina), roquitamicina, roxitromicina, espectinomicina, espiramicina, tacrolimus (FK506), troleandomicina, telitromicina; 1). Monobactamas: aztreonam, tigemonam; m). Oxazolidinonas: linezolida; n). Penicilinas: amoxicilina, ampicilina (pivampicilina, hetacilina, bacampicilina, metampicilina, talampicilina), azidocilina, azlocilina, benzilpenicilina, benzatina benzilpenicilina, benzatina fenoximetil-penicilina, clometocilina, benzilpenicilina procaina, carbenicilina (carindacillin), cloxacilina, dicloxacilina, epicilina, flucloxacilina, mecilinam (pivmecilinam), mezlocilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, penamecilina, penicilina, feneticilina, fenoximetilpenicilina, piperacilina, propicilina, sulbenicilina, temocilina, ticarcilina; o). Polipeptídeos: bacitracina, colistina, polimixina B; p). Quinolonas: alatrofloxacina, balofloxacin, ciprofloxacina, clinafloxacina, danofloxacina, difloxacina, enoxacina, enrofloxacina, floxina, garenoxacina, gatifloxacina, gemifloxacinaa, grepafloxacina, kano trovafloxacina, levofloxacina, lomefloxacina, marbofloxacina, moxifloxacina, nadifloxacina, norfloxacina, orbifloxacina, ofloxacina, pefloxacina, trovafloxacina grepafloxacina, sitafloxacina, sparfloxacina, temafloxacina, tosufloxacina, trovafloxacina; q). Estreptograminas: pristinamicina, quinupristina/dalfopristina); r). Sulfonamidas: mafenida, prontoil, sulfacetamida, sulfametizol, sulfanilimida, sulfassalazina, sulfisoxazol, trimetoprim, trimetoprim-sulfametoxazol (co-trimoxazol); s). Antibacterianos esteroides: por exemplo, ácido fusidico; t). Tetraciclinas: doxiciclina, clortetraciclina, clomociclina, demeclociclina, limeciclina, meclociclina, metaciclina, minociclina, oxitetraciclina, penimepiciclina, rolitetraciclina, tetraciclina, glicilciclinas (por exemplo, tigeciclina); u). Outros tipos de antibióticos: annonacina, arsfenamina, inibidores de bactoprenol
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108/310 (Bacitracina), inibidores de DADAL/AR (cicloserina), dicostostatina, discodermolida, eleuterobina, epotilona, etambutol, etoposideo, faropenem, ácido fusidico, furidolida, furazolidona, isoniazid, laulimalida, metronidazol, mupirocina, micolactona, inibidores da síntese de NAM (por exemplo, fosfomicina), nitrofurantoina, paclitaxel, platensimicina, pirazinamida, quinupristina/dalfopristina, rifampicina (rifampicina), tazobactam tinidazol, uvaricina;
4). Fármacos antivirais: a). Inibidores da entrada/fusão: aplaviroc, maraviroc, vicriviroc, gp41 (enfuvirtida), PRO 140, CD4 (ibalizumabe); b). Inibidores de integrase: raltegravir, elvitegravir, globoidnan A; c). Inibidores da maturação: bevirimate, vivecon; d). Inibidores da neuraminidase: oseltamivir, zanamivir, peramivir; e) Nucleosideos e nucleotideos: abacavir, aciclovir, adefovir, amdoxovir, apricitabina, brivudina, cidofovir, clevudina, dexelvucitabina, didanosina (ddl), elvucitabina, emtricitabina (FTC), entecavir, famaciclovir, análogos de fluorouracil (5-FU), 2',3'-didesoxinucleosideo 3'-fluoro-substituido (por exemplo, 3'-fluoro-2',3'-didesoxitimidina (FLT) e 3’-fluoro-2’,3’didesoxiganosina (FLG), fomivirsen, ganciclovir, idoxuridina, lamivudina (3TC), 1-nucleosideos (por exemplo, β-1-timidina e β-Ι-2Ά68θχΐω^ΐηη), penciclovir, racivir, ribavirina, stampidina, estavudina (d4T), taribavirina (viramidina), telbivudina, tenofovir, trifluridina valaciclovir, valganciclovir, zalcitabina (ddC), zidovudina (AZT); f). Não nucleosideos: amantadina, ateviridina, capravirina, diarilpirimidinas (etravirina, rilpivirina), delavirdina, docosanol, emivirina, efavirenz, foscamet (ácido fosfonofórmico), imiquimode, interferon alfa, lovirida, lodenosina, metisazona, nevirapina, NOV-205, peginterferon alfa, podofilotoxina, rifampicina, rimantadina, resiquimode (R-848), tromantadina; g). Inibidores de protease: amprenavir, atazanavir, boceprevir, darunavir, fosamprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, pleconarila, ritonavir, saquinavir, telaprevir (VX-950), tipranavir;
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h). Outros tipos de fármacos antivírus: abzima, arbidol, calanolídeo a, ceragenina, cianovirina-n, diarilpirimidinas, epigalocatequina gaiato (EGCG), foscamet, grifitsina, taribavirina (viramidina), hidroxiureia, KP-1461, miltefosina, pleconarila, inibidores de portmanteau, ribavirina, seliciclibe. [00134] 5). Os fármacos utilizados para conjugados através de um bisligante da presente invenção também incluem radioisótopos. Exemplos de radioisótopos (radionuclídeos) são 3H, nC, 14C, 18F, 32P, 35S, MCu, 68Ga, 86Y, Tc, inIn, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At, ou 213Bi. Os anticorpos marcados com radioisótopos são úteis em experimentos de imagem direcionados a receptores ou podem ser para tratamento direcionado, como com os conjugados anticorpo-fármaco da invenção (Wu et al (2005) Nature Biotechnology 23(9): 1137-46). As moléculas de ligação celular, por exemplo, um anticorpo pode ser marcado com reagentes de ligandos através dos ligandos de ponte da presente patente que ligam, quelam ou de outro modo complexam um metal radioisótopo, usando as técnicas descritas em Current Protocols in Immunology, Volumes 1 e 2, Coligen et al, Ed. WileyInterscience, New York, Pubs. (1991). Os ligandos quelantes que podem complexar um ion metálico incluem DOTA, DOTP, DOTMA, DTP A e TETA (Macrocyclics, Dallas, Tex. EUA).
[00135] 6). Os sais, ácidos, derivados, hidrato ou sal hidratado farmaceuticamente aceitáveis; ou uma estrutura cristalina; ou um isômero óptico, racemato, diastereômero ou enantiômero de qualquer um dos fármacos acima.
[00136] Em outra modalidade, o fármaco/molécula citotóxica na Fórmula (I) e/ou (II) pode ser uma molécula de cromóforo, para a qual o conjugado pode ser usado para detecção, monitoramento ou estudo da interação da molécula de ligação celular com uma célula alvo. As moléculas de cromóforo são um composto que tem a capacidade de absorver um tipo de luz, como luz UV, luz fluorescente, luz infravermelha, luz próxima à
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110/310 infravermelha, luz visual; Uma molécula de cromatóforo inclui uma classe ou subclasse de xantóforos, eritróforos, iridóforos, leucóforos, melanóforos e cianóforos; uma classe ou subclasse de moléculas de fluoróforo que são compostos químicos fluorescentes que re-emitem luz sobre luz; uma classe ou subclasse de moléculas de fototransdução visual; uma classe ou subclasse de moléculas de fotóforo; uma classe ou subclasse de moléculas de luminescência; e uma classe ou subclasse de compostos de luciferina.
[00137] A molécula de cromóforo pode ser selecionada a partir de fluoróforos orgânicos não proteicos, mas não limitados, como: Derivados de xanteno (fluoresceína, rodamina, verde de Oregon, eosina e vermelho do Texas); Derivados de cianina: (cianina, indocarbocianina, oxacarbocianina, tiacarbocianina e merocianina); Derivados de esquaraína e esquaraínas substituídas no anel, incluindo corantes Seta, SeTau e Square; Derivados de naftaleno (derivados de dansil e prodan); Derivados de cumarina; Derivados de oxadiazol (piridiloxazol, nitrobenzoxadiazol e benzoxadiazol); derivados de antraceno (antraquinonas, incluindo DRAQ5, DRAQ7 e CyTRAK Orange); Derivados de pireno (azul cascata, etc.); Derivados de oxazina (vermelho do Nilo, azul do Nilo, violeta de cresil, oxazina 170, etc.). Derivados de acridina (proflavina, laranja de acridina, amarelo de acridina, etc.). Derivados de arilmetina (auramina, violeta cristal, verde malaquita). Derivados de tetrapirrol (porfina, ftalocianina, bilirrubina).
[00138] Ou uma molécula de cromóforo pode ser selecionada a partir de quaisquer análogos e derivados dos seguintes compostos de fluoróforo: Corantes CF (Biotium), sondas DRAQ e CyTRAK (BioStatus), BODIPY (Invitrogen), Alexa Fluor (Invitrogen), DyLight Fluor (Thermo Scientific, Pierce), Atto e Tracy (Sigma Aldrich), FluoProbes (Interchim), Abberior Dyes (Abberior), DY e MegaStokes (Dyomics), Sulfo Cy (Cyandye), HiLyte Fluor (AnaSpec), Seta, SeTau e Square (SETA BioMedicals), Quasar e Cal Fluor (Biosearch Technologies), SureLight (APC, RPEPerCP,
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Ficobilissomas) (Columbia Biosciences), APC, APCXL, RPE, BPE (PhycoBiotech).
[00139] Exemplos dos compostos fluoróforos amplamente utilizados que são reativos ou conjugáveis com os ligantes da invenção são: Aloficocianina (APC), Aminocumarina, conjugados de APC-Cy7, BODIPYFL, Azul de Cascata, Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy5, Cy5.5, Cy7, Fluoresceína, FluorX, Hidroxicumarina, IR-783, Lissamina Rododamina B, Amarelo lúcifer, metoxicumarina, NBD, azul do Pacífico, laranja do Pacífico, conjugados de PE-Cy5, conjugados de PE-Cy7, PerCP, R-fitoeritrina (PE), Red 613, Seta-555-azida, Seta-555-DBCO, Seta-555-NHS, Seta-580-NHS, Seta-680-NHS, Seta-780-NHS, Seta-APC-780, Seta-PerCP-680, Seta-R-PE670, SeTau-380-NHS, SeTau-405-Maleimida, SeTau-405-NHS, SeTau-425NHS, SeTau-647-NHS, Vermelho do Texas, TRITC, TruRed, X-Rodamina.
[00140] Os compostos fluoróforo que podem ser acoplados aos ligantes da invenção para estudo de ácidos nucleicos ou proteínas são selecionados a partir dos seguintes compostos ou seus derivados: 7-AAD (7aminoactinomicina D, CG-seletivo), laranja de acridina, cromomicina A3, laranja de CyTRAK (Biostatus, excitação vermelha escura), DAPI, DRAQ5, DRAQ7, brometo de etídio, Hoechst33258, Hoechst33342, LDS 751, mitramicina, iodeto de propídio (PI), azul SYTOX, verde SYTOX, laranja SYTOX, laranja de tiazol, TO-PRO: monômero de cianina, TOTO-1, TOPRO-1, TOTO-3, TO-PRO-3, YOSeta-1, YOYO-1. Os compostos fluoróforo que podem ser acoplados aos ligantes da invenção para estudo de células são selecionados a partir dos seguintes compostos ou seus derivados: DCFH (2'7'Dicorodi-hidro-fluoresceína, forma oxidada), DHR (Di-hidrorrodamina 123, forma oxidada, a luz catalisa a oxidação), Fluo-3 (éster AM. pH> 6), Fluo-4 (éster AM. pH 7,2), Indo-1 (éster AM, cálcio baixo/alto (Ca2+)) e SNARF (pH 6/9). Os compostos fluoróforo preferidos que podem ser acoplados aos ligantes da invenção para estudo de proteínas/anticorpos são
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112/310 selecionados a partir dos seguintes compostos ou seus derivados: Aloficocianina (APC), AmCyanl (tetrâmero, Clontech), AsRed2 (tetrâmero, Clontech), Verde de Azami (monômero, MBL), Azurita, B-fitoeritrina (BPE), Cerulean, CyPet, monômero DsRed (Clontech), DsRed2 (RFP, Clontech), EBFP, EBFP2, ECFP, EGFP (dímero fraco, Clontech), Emerald (dímero fraco, Invitrogen), EYFP (dímero fraco, Clontech), GFP (mutação S65A), GFP (mutação S65C), GFP (mutação S65L), GFP (mutação S65T), GFP (mutação Y66F), GFP (mutação Y66H), GFP (mutação Y66W), GFPuv, HcRedl, J-Red, Katusha, Kusabira Orange (monômero, MBL), mCFP, mCherry, mCitrine, Midoriishi Ciano (dímero, MBL), mKate (TagFP635, monômero, Evrogen), mKeima-Red (monômero, MBL), mKO, mOrange, mPlum, mRaspberry, mRFPl (monômero, laboratório de Tsien), mStrawberry, mTFl, mTurquoise2, P3 (complexo de ficobilissoma), peridinina clorofila (PerCP), R-fitoeritrina (RPE), T-Sapphire, TagCFP (dímero, Evrogen), TagGFP (dímero, Evrogen), TagRFP (dímero, Evrogen), TagYFP (dímero, Evrogen), tdTomato (dímero em tandem), Topázio, TurboFP602 (dímero, Evrogen), TurboFP635 (dímero, Evrogen), TurboGFP (dímero, Evrogen), TurboRFP (dímero, Evrogen), TurboYFP (dímero, Evrogen), Venus, GFP de tipo selvagem, YPet, ZsGreenl (tetrâmero, Clontech), ZsYellow 1 (tetrâmero, Clontech).
[00141] Os exemplos da estrutura dos conjugados das moléculas de cromóforo-anticorpo através do ligante de ponte são os seguintes AcOl, Ac02, Ac03, Ac04, Ac05, Ac06 e Ac07:
Figure BR112019020049A2_D0187
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Figure BR112019020049A2_D0188
Ac06 (conjugado de IR800CW)
Figure BR112019020049A2_D0189
Figure BR112019020049A2_D0190
Ac07
[00142] Em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou dupla ligação, ou opcionalmente pode estar ausente; Xi e Yi são independentemente
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Ο, ΝΗ, ΝΗΝΗ, NR5, S, C(0)0, C(O)NH, OC(O)NH, 0C(0)0, NHC(0)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; R12 e R12’ são independentemente OH, NH2, NHRi, NHNH2, NHNHCOOH, O-R1-COOH, NH-Ri-COOH, NH-(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)PCH2CH2OH, O(CH2CH2O)PCH2CH2NH2,
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH,
NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H,
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, Ri-NHSO3H, NH-Ri-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, RiNHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2,
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, ORi-NHPO3H2, NH-Ri-NHPO3H2, nhAr-COOH, NH-Ar-NH2, em que p=0 -5000, Aa é um aminoácido, Ri, mi, n, Li, e L2 são os mesmos definidos na Fórmula (I).
[00143] Em outra modalidade, o fármaco na Fórmula (I) e (II) pode ser polialquilenoglicóis que são utilizados para prolongar a meia-vida da molécula de ligação celular quando administrado a um mamífero. Os polialquilenoglicóis incluem, mas não estão limitados a, poli(etileno glicóis) (PEGs), poli(propileno glicol) e copolímeros de óxido de etileno e óxido de propileno; particularmente preferidos são os PEGs, e mais particularmente preferidos são os hidroxiPEGs ativados monofuncionalmente (por exemplo, PEGs de hidroxil ativados em um único terminal, incluindo ésteres reativos de ácidos hidroxiPEG-monocarboxílicos, hidroxiPEG-monoaldeídos, hidroxiPEG-monoaminas, hidroxiPEG-mono-hidrazidas, hidroxiPEGmonocarbazatos, hidroxil-PEG-monoiodoacetamidas, hidroxil-PEGmonomaleimidas, dissulfetos de hidroxil-PEG-mono-ortopiridil, hidroxiPEGmono-oximas, carbonatos de hidroxiPEG-monofenil, hidroxil-PEGmonofenil-glioxais, hidroxil-PEG-monotiazolidina-2-tionas, hidroxil-PEGmonotioésteres, hidroxil-PEG-monotióis, hidroxil-PEG-monotriazinas e
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115/310 hidroxil-PEG-monovinilsulfonas).
[00144] Em certas de tais modalidades, o polialquilenoglicol tem um peso molecular de cerca de 10 Daltons a cerca de 200 kDa, preferencialmente cerca de 88 Da a cerca de 40 kDa; dois ramos, cada um com um peso molecular de cerca de 88 Da a cerca de 40 kDa; e mais preferencialmente duas ramificações, cada uma com cerca de 88 Da a cerca de 20 kDa. Em uma modalidade particular, o polialquilenoglicol é poli(etileno)glicol e tem um peso molecular de cerca de 10 kDa; cerca de 20 kDa ou cerca de 40 kDa. Em modalidades específicas, o PEG é um PEG 10 kDa (linear ou ramificado), um PEG 20 kDa (linear ou ramificado) ou um PEG 40 kDa (linear ou ramificado). Um número de patentes dos EUA descreveu a preparação de polímeros de PEG não antigênicos lineares ou ramificados e seus derivados ou conjugados, por exemplo, as Pat. dos EUA N°s 5.428.128; 5.621.039; 5.622.986; 5.643.575; 5.728.560; 5.730.990; 5.738.846; 5.811.076;
5.824.701; 5.840.900; 5.880.131; 5.900.402; 5.902.588; 5.919.455;
5.951.974; 5.965.119; 5.965.566; 5.969.040; 5.981.709; 6.011.042;
6.042.822; 6.113.906; 6.127.355; 6.132.713; 6.177.087, e 6.180.095. A estrutura dos conjugados de anticorpo-polialquilenoglicóis através do ligante
Figure BR112019020049A2_D0191
em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma
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116/310 ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi, e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Ri, Li, e L2 são os mesmos definidos na Fórmula (I). Preferencialmente Ri e R3 são H, OH, OCH3, CH3, ou OC2H5 independentemente.
[00145] Em ainda outra modalidade, os agentes citotóxicos preferidos que se conjugam a uma molécula de ligação celular por meio de um ligante de ponte desta patente são tubulisinas, maitansinoides, taxanoides (taxanos), análogos de CC-1065, compostos de daunorrubicina e doxorrubicina, amatoxinas (incluindo amanitinas), indolcarboxamida, dímeros de benzodiazepina (por exemplo, dímeros de pirrolbenzodiazepina (PBD), tomaimicina, antramicina, indolinobenzodiazepinas, imidazobenzotiadiazepinas ou oxazolidinobenzodiazepinas), caliqueamicina e antibióticos de enedina, actinomicina, azaserinas, bleomicinas, epirrubicina, eribulina, tamoxifeno, idarrubicina, dolastatinas, auristatinas (por exemplo, monometil auristatina E, MMAE, MMAF, auristatina PYE, auristatina TP, Auristatinas 2-AQ, 6-AQ, EB (AEB) e EFP (AEFP) e seus análogos), duocarmicinas, geldanamicinas ou outros inibidores de HSP90, centanamicina, metotrexatos, tiotepa, vindesinas, vincristinas, hemiasterinas, nazumamidas, microgininas, radiosuminas, estreptonigtina, SN38 ou outros análogos ou metabólitos de camptotecina, alterobactinas, microsclerodermina, teonelamidas, esperamicinas, PNU-159682; e seus análogos ou derivados, sais, ácidos, derivados, hidrato ou sal hidratado farmaceuticamente aceitáveis; ou uma estrutura cristalina; ou um isômero óptico, racemato, diastereômero ou enantiômero de qualquer um dos fármacos acima mencionados.
[00146] As tubulisinas que são preferidas para conjugação na presente invenção são bem conhecidas na técnica e podem ser isoladas de fontes
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117/310 naturais de acordo com métodos conhecidos ou preparadas sinteticamente de acordo com métodos conhecidos (por exemplo, Balasubramanian, R., et al. J. Med. Chem., 2009, 52, 238-40; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2004, 6, 4057-60; Pando, O., et al. J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 7692-5; Reddy, J. A., et al. Mol. Pharmaceutics, 2009, 6, 1518-25; Raghavan, B., et al. J. Med. Chem., 2008, 51, 1530-33; Patterson, A. W., et al. J. Org. Chem., 2008, 73, 4362-9; Pando, O., et al. Org. Lett., 2009, 11 (24), 5567-9; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2007, 9 (8), 1605-7; Friestad, G. K., Org. Lett.,2004, 6, 3249-52; Peltier, Η. M., et al. J. Am. Chem. Soc., 2006, 128, 16018-9; Chandrasekhar, S., et al J. Org. Chem., 2009, 74, 9531-4; Liu, Y., et al. Mol. Pharmaceutics, 2012, 9, 168-75; Friestad, G. K., et al. Org. Lett., 2009, 11, 1095-8; Kubicek, K., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2010.49: 4809-12; Chai, Y., et al., Chem Biol, 2010, 17: 296-309; Ullrich, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2009, 48, 4422-5; Sani, M., et al. Angew Chem Int Ed Engl, 2007, 46, 3526-9; Domling, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2006, 45, 7235-9; Patent applications: Zanda, M., et al, Can. Ped. de Pat. CA 2710693 (2011); Chai, Y., et al. Ped. de Pat. Eur. 2174947 (2010), WO 2010034724; Leamon, C. et al, W02010033733, WO 2009002993; Ellman, J., et al, PCT WO2009134279; WO 2009012958, US appl. 20110263650, 20110021568; Matschiner, G., et al, W02009095447; Vlahov, 1., et al, W02009055562, WO 2008112873; Low, P., et al, W02009026177; Richter, W., WO2008138561; Kjems, J., et al, WO 2008125116; Davis, M.; et al, W02008076333; Diener, J.; et al, Ped. de Pat. dos EUA 20070041901, W02006096754; Matschiner, G., et al, W02006056464; Vaghefi, F., et al, W02006033913; Doemling, A., Ger. Offen. DE102004030227, W02004005327, W02004005326, W02004005269; Stanton, M., et al, U.S. Pat. Appl. Publ. 20040249130; Hoefle, G., et al, Ger. Offen. DE10254439, DE10241152, DE10008089; Leung, D., et al, W02002077036; Reichenbach, H., et al, Ger. Offen. DE19638870; Wolfgang, R., US20120129779; Chen,
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H., US appl. 20110027274. As estruturas preferidas de tubulisinas para conjugação de moléculas de ligação celular são descritas no pedido de patente de PCT/IB2012/053554.
[00147] Exemplos das estruturas dos conjugados dos análogos anticorpo-tubulisina por meio de um bis-ligante são T01, T02, T03, T04, T05, T06 T07, T08, T09, T10 e Tl 1 da seguinte forma:
Figure BR112019020049A2_D0192
Figure BR112019020049A2_D0193
Figure BR112019020049A2_D0194
Figure BR112019020049A2_D0195
Figure BR112019020049A2_D0196
Figure BR112019020049A2_D0197
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Figure BR112019020049A2_D0198
Figure BR112019020049A2_D0199
T08
Figure BR112019020049A2_D0200
em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi, e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; Rí2 é OH, NH2, NHRb NHNH2, NHNHCOOH, O-Ri-COOH, NH-Ri-COOH, NH-(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)PCH2CH2OH, O(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NRiRf, NHOH, NHORi, O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NHAr-COOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H,
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, Ri-NHSO3H, NH-Ri-NHSO3H,
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O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, ORb Ri-NHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, ORi-NHPO3H2, NH-Ri-NHPO3H2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2NH2,
NH(CH2CH2S)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2NH)PCH2CH2OH,
NH(CH2CH2S)PCH2CH2OH NH-Ri-NH2, ou
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, em que Aa é 1-8 aminoácidos; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Preferencialmente Rb Rf, R2, R3, e R4 são independentemente H, alquila Ci-C8 linear ou ramificada, amida, ou aminas; arila C2-C8, alquenila, alquinila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila, éster, éter, heterocicloalquila ou aciloxilaminas; ou peptídeos contendo 1-8 aminoácidos, ou unidade de polietilenoxi com fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 1 a cerca de 5000; Os dois Rs: RiR2, R2R3, RiR3 ou R3R4 pode formar um anel cíclico de 3 a 8 membros do grupo alquila, arila, heteroarila, heteroalquila ou alquilcicloalquila; X3 é H, CH3, CH2CH3,03Ηγ, ou Xi’Ri’, em que Xi’ é NH, N(CH3), NHNH, O, ou S; Rf é H ou alquila Ci-C8 linear ou ramificada, arila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila ou aciloxilaminas; R3’ é H ou alquila Ci-Cólinear ou ramificada; Z3é H, COORb NH2, NHRi, ORi, CONHRbNHCORb OCORb OP(O)(OMi)(OM2), OCH2OP(O)(OMi)(OM2), OSO3Mb Rb O-glicosídeo (glicosídeo, galactosídeo, manosídeo, glucuronosídeo/glucuronídeo, alosídeo, frutosídeo, etc.), NH-glicosídeo, S-glicosídeo ou CH2-glicosídeo; Mi e M2 são independentemente H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NRiR2R3; Lb e L2 são definidos da mesma forma na Fórmula (I).
[00148] As caliqueamicinas e seus antibióticos de enedina relacionados que são preferidos para conjugados de molécula de ligação celular-fármaco desta patente são descritos em: Nicolaou, K. C. et al, Science 1992, 256, 1172-1178; Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1993, 90, 5881-8), Patente dos EUA N°s 4.970.198; 5.053.394; 5.108.912; 5.264.586; 5.384.412; 5.606.040;
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5.712.374; 5.714.586; 5.739.116; 5.770.701; 5.770.710; 5.773.001;
5.877.296; 6.015.562; 6.124.310; 8.153.768. Exemplos da estrutura do conjugado do análogo anticorpo-caliqueamicina através do ligante de ponte são C01 e C02 como a seguir:
Figure BR112019020049A2_D0201
Figure BR112019020049A2_D0202
em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xb e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Rb Lb e L2 são os mesmos definidos na Fórmula (I).
[00149] Os maitansinoides que são preferidos para serem utilizados na presente invenção, incluindo o maitansinol e seus análogos, são descritos nas Patentes dos EUA N°s 4.256.746, 4.361.650, 4.307.016, 4.294.757, 4.294.757, 4.371.533, 4.424.219, 4.331.598, 4.450.254, 4.364.866, 4.313.946, 4.315.929 4.362.663, 4.322.348,4.371.533,4.424.219, 5.208.020, 5.416.064, 5.208.020; 5.416.064; 6.333.410; 6.441.163; 6.716.821, 7.276.497, 7.301.019,7.303.749, 7.368.565, 7.411.063, 7.851.432, e 8.163.888. Um exemplo da estrutura do conjugado do anticorpo-maitansinoides através do ligante da patente é o seguinte MyOl, My02, My03, My04, My05 e My06:
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Figure BR112019020049A2_D0203
Figure BR112019020049A2_D0204
Figure BR112019020049A2_D0205
Figure BR112019020049A2_D0206
Figure BR112019020049A2_D0207
em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou
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123/310 ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi, e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Ri, Li, e L2 são os mesmos definidos na Fórmula (I).
[00150] Os taxanos, que incluem o Paclitaxel (Taxol), um produto natural citotóxico, e o docetaxel (Taxotere), um derivado semissintético, e seus análogos preferidos para conjugação são examinados em: K C. Nicolaou et al., J. Am. Chem. Soc. 117, 2409-20, (1995); Ojima et al, J. Med. Chem. 39:3889-3896 (1996); 40:267-78 (1997); 45, 5620-3 (2002); Ojima et al., Proc. Natl. Acad. Sei., 96:4256-61 (1999); Kim et al., Bull. Korean Chem. Soc., 20, 1389-90 (1999); Miller, et al. J. Med. Chem., 47, 4802-5(2004); Patente dos EUA N° 5.475.011 5.728.849. 5.811.452; 6.340.701; 6.372.738; 6.391.913. 6.436.931; 6.589.979; 6.596.757; 6.706.708; 7.008.942; 7.186.851; 7.217.819; 7.276.499; 7.598.290; e 7.667.054.
[00151] Exemplos das estruturas do conjugado do anticorpo-taxanos através do ligante da patente são os seguintes TxOl, Tx02 e Tx03.
Figure BR112019020049A2_D0208
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em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi, e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; Ri, Li, e L2 são os mesmos definidos na Fórmula (I).
[00152] Análogos de CC-1065 e análogos de doucarmicina também são preferidos para serem utilizados para um conjugado contendo bisacoplamento de ponte da presente patente. Os exemplos dos análogos de CC1065 e análogos de doucarmicina, bem como a sua síntese, são descritos em: por exemplo, Warpehoski, et al, J. Med. Chem. 31:590-603 (1988); D. Boger et al., J. Org. Chem; 66; 6654-61, 2001; Patente dos EUA N°s: 4169888,
4391904, 4671958, 4816567, 4912227, 4923990, 4952394, 4975278,
4978757, 4994578, 5037993, 5070092, 5084468, 5101038, 5117006,
5137877, 5138059, 5147786, 5187186, 5223409, 5225539, 5288514,
5324483, 5332740, 5332837, 5334528, 5403484, 5427908, 5475092,
5495009, 5530101, 5545806, 5547667, 5569825, 5571698, 5573922,
5580717, 5585089, 5585499, 5587161, 5595499, 5606017, 5622929,
5625126, 5629430, 5633425, 5641780, 5660829, 5661016, 5686237,
5693762, 5703080, 5712374, 5714586, 5739116, 5739350, 5770429,
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5773001, 5773435, 5786377 5786486, 5789650, 5814318, 5846545,
5874299, 5877296, 5877397, 5885793, 5939598, 5962216, 5969108,
5985908, 6060608, 6066742, 6075181, 6103236, 6114598, 6130237,
6132722, 6143901, 6150584, 6162963, 6172197, 6180370, 6194612,
6214345, 6262271, 6281354, 6310209, 6329497, 6342480, 6486326,
6512101, 6521404, 6534660, 6544731, 6548530, 6555313, 6555693,
6566336, 6,586,618, 6593081, 6630579, 6,756,397, 6759509, 6762179,
6884869, 6897034, 6946455, 7,049,316, 7087600, 7091186, 7115573,
7129261, 7214663, 7223837, 7304032, 7329507, 7.329.760, 7.388.026,
7.655.660, 7.655.661, 7.906.545, e 8.012.978. Exemplos das estruturas do conjugado do anticorpo-análogos de CC-1065 através do ligante da patente são os seguintes CC01, CC02, CC03 e CC04.
Figure BR112019020049A2_D0210
Figure BR112019020049A2_D0211
Figure BR112019020049A2_D0212
Figure BR112019020049A2_D0213
CC04
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[00153] Em que mAb é um anticorpo; Z3 é Η, P0(0Mi)(0M2), SO3M1, CH2PO(OM1)(OM2), CH3N(CH2CH2)2NC(O)-, O(CH2CH2)2NC(O)-, Ri, ou glicosídeo; em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi,Xs, Yi e Y5 são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; Ri, Lb e L2 são os mesmos definidos na Fórmula (I).
[00154] Os análogos de daunorrubicina/doxorrubicina são também preferidos para conjugação com o bis-acoplamento da presente patente. As estruturas preferidas e sua síntese são examinadas em: Hurwitz, E., et al., Cancer Res. 35, 1175-81 (1975). Yang, Η. Μ., e Reisfeld, R. A., Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 1189-93 (1988); Pietersz, C. A., E., et al., E., et al., Cancer Res. 48, 926-311 (1988); Trouet, et al., 79, 626-29 (1982); Z. Brich et al., J. Controlled Release, 19, 245-58 (1992); Chen et al., Syn. Comm., 33, 2377-90, 2003; King et al., Bioconj. Chem., 10, 279-88, 1999; King et al., J. Med. Chem., 45, 4336-43, 2002; Kratz et al., J Med Chem. 45, 5523-33, 2002; Kratz et al., Biol Pharm Bull. Jan. 21, 56-61, 1998; Lau et al., Bioorg. Med. Chem. 3, 1305-12, 1995; Scott et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 6, 1491-6, 1996; Watanabe et al., Tokai J. Experimental Clin. Med. 15, 327-34, 1990; Zhou et al., J. Am. Chem. Soc. 126, 15656-7, 2004; WO 01/38318; Patente dos EUA N°s 5.106.951; 5.122.368; 5.146.064; 5.177.016; 5.208.323; 5.824.805; 6.146.658; 6.214.345; 7569358; 7.803.903; 8.084.586; 8.053.205.Exemplos das estruturas do conjugado do anticorpo-análogos de CC-1065 através do ligante da patente são os seguintes DaOl, Da02, Da03, Da04, Da05, Da06, Da07 e Da08.
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Figure BR112019020049A2_D0218
em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi, e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; Rí2 é OH, NH2, NHRb NHNH2, NHNHCOOH, O-Ri-COOH, NH-Ri-COOH, NH(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)PCH2CH2OH, O(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NRiRf, NHOH, NHORi, O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NHAr-COOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H,
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH-SO3H, Ri-NHSO3H, NH-Ri-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2.CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, ORi-NHPO3H2, NH-Ri-NHPO3H2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2NH2,
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NH(CH2CH2S)PCH2CH2NH2, NH(CH2CH2NH)PCH2CH2OH,
NH(CH2CH2S)PCH2CH2OH NH-Ri-NH2, ou
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, em que Aa é 1-8 aminoácidos; p é 15000; mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; Ri, Lb e L2 são os mesmos definidos na Fórmula (I).
[00155] Auristatinas e dolastatinas são preferidas em conjugação contendo os bis-ligantes desta patente. As auristatinas (por exemplo, auristatina E (AE), auristatina EB (AEB), auristatina EFP (AEFP), monometil auristatina E (MMAE), monometilauristatina (MMAF), auristatina F fenileno diamina (AFP) e uma variante fenilalanina de MMAE) que são análogos sintéticos de dolastatinas, são descritas em Int. J. Oncol. 15: 367-72 (1999); Molecular Cancer Therapeutics, vol. 3, No. 8, pp. 921-32 (2004); U.S. Application Nos. 11134826, 20060074008, 2006022925. Patente dos EUA N°s 4414205, 4753894, 4764368, 4816444, 4879278, 4943628, 4978744,
5122368, 5165923, 5169774, 5286637, 5410024, 5521284, 5530097,
5554725, 5585089, 5599902, 5629197, 5635483, 5654399, 5663149,
5665860, 5708146, 5714586, 5741892, 5767236, 5767237, 5780588,
5821337, 5840699, 5965537, 6004934, 6033876, 6034065, 6048720,
6054297, 6054561, 6124431, 6143721, 6162930, 6214345, 6239104,
6323315, 6342219, 6342221, 6407213, 6569834, 6620911, 6639055,
6884869, 6913748, 7090843, 7091186, 7097840, 7098305, 7098308,
7498298, 7375078, 7462352, 7553816, 7659241, 7662387, 7745394,
7754681, 7829531, 7837980, 7837995, 7902338, 7964566, 7964567,
7851437, 7994135. Exemplos das estruturas do conjugado de anticorpoauristatinas através do ligante da patente são os seguintes AuOl, Au02, Au03, Au04, Au05, Au06, Au07, Au08, Au09, AulO, Aull, Aul2 e Aul3
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130/310 / R3 zR4 H O feAV/ (R3 R4 η O
Aíjô mÁb
L ^2 is-1 m\b n AuOl mAb
Au02 mÃb
.....
/mj s J n
OW WKío.11 yWfcall.....
Lí
Figure BR112019020049A2_D0219
Figure BR112019020049A2_D0220
Figure BR112019020049A2_D0221
Figure BR112019020049A2_D0222
Figure BR112019020049A2_D0223
Au09 ^mAb n AulO
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Figure BR112019020049A2_D0224
em que “-----” é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; Rí2 é OH, NH2, NHRb NHNH2, NHNHCOOH, O-Ri-COOH, NH-Ri-COOH, NH-(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)PCH2CH2OH, O(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NRiRf, NHOH, NHORi, O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NHAr-COOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H,
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, Ri-NHSO3H, NH-Ri-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, ORi-NHPO3H2, NH-Ri-NHPO3H2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2NH2,
NH(CH2CH2S)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2OH,
NH(CH2CH2S)pCH2CH2OH NH-Ri-NH2, ou
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, em que Aa é 1-8 aminoácidos; p é 15000; mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Preferencialmente Ri, R2, R3, e R4 são independentemente H; alquila Ci-Cs linear ou ramificada, arila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila, éster, éter, amida, aminas, heterocicloalquila
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132/310 ou aciloxilaminas; ou peptídeos contendo 1-8 aminoácidos, ou unidade de polietilenoxi com fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 1 a cerca de 5000. Os dois Rs: RiR2, R2R3, RiR3 ou R3R4 pode formar um anel cíclico de 3 a 8 membros do grupo alquila, arila, heteroarila, heteroalquila ou alquilcicloalquila; X3 é H, CH3 ou Xi’Ri’, em que Xi’ é NH, N(CH3), NHNH, O, ou S, e Rf é H ou alquila Ci-Cs linear ou ramificada, arila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila ou aciloxilaminas; R3’ é H ou alquila Ci-Có linear ou ramificada; Z3 é H, COORi, NH2, NHRi, ORi, CONHRi,NHCORi, OCORi, OP(O)(OMi)(OM2), OCH2OP(O)(OMi)(OM2), OSO3Mi, Ri ou O-glicosídeo (glicosídeo, galactosídeo, manosídeo, glucuronosídeo/glucuronídeo, alosídeo, frutosídeo, etc.), NH-glicosídeo, S-glicosídeo ou CH2-glicosídeo; Mi e M2 são independentemente H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NRiR2R3; Zi, Z2, Li, e L2 são definidos da mesma forma na Fórmula (I).
[00156] Os dímeros de benzodiazepina (por exemplo, dímeros de pirrolbenzodiazepina (PBD) ou (tomaimicina), indolinobenzodiazepinas, imidazobenzotiadiazepinas ou oxazolidinobenzodiazepinas) que são agentes citotóxicos preferidos de acordo com a presente invenção são examinados na técnica: Patente dos EUA N°s: 8.163.736; 8.153.627; 8.034.808; 7.834.005;
7.741.319; 7.704.924; 7.691.848; 7.678.787; 7.612.062; 7.608.615;
7.557.099; 7.528.128; 7.528.126; 7.511.032; 7.429.658; 7.407.951;
7.326.700; 7.312.210; 7.265.105; 7.202.239; 7.189.710; 7.173.026;
7.109.193; 7.067.511; 7.064.120; 7.056.913; 7.049.311; 7.022.699;
7.015.215; 6.979.684; 6.951.853; 6.884.799; 6.800.622; 6.747.144;
6.660.856; 6.608.192; 6.562.806; 6.977.254; 6.951.853; 6.909.006;
6.344.451; 5.880.122; 4.935.362; 4.764.616; 4.761.412; 4.723.007;
4.723,003; 4.683.230; 4.663.453; 4.508.647; 4.464.467; 4.427.587;
4.000.304; Pedido de Patente dos EUA 20100203007, 20100316656,
20030195196. Exemplos das estruturas do conjugado dos dímeros anticorpoPetição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 154/626
133/310 benzodiazepina através do ligante de ponte são os seguintes PB01, PB02,
PB03, PB04, PB05, PB06, PB07, PB08, PB09, PB 10, PB 11, PB 12, PB 13,
PB14, PB15, PB16, PB17, PB18, PB19, PB20, PB21 e PB22.
Figure BR112019020049A2_D0225
Figure BR112019020049A2_D0226
Figure BR112019020049A2_D0227
Figure BR112019020049A2_D0228
Figure BR112019020049A2_D0229
Figure BR112019020049A2_D0230
PB06
Figure BR112019020049A2_D0231
PB07
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PB 12
Figure BR112019020049A2_D0234
Figure BR112019020049A2_D0235
PB 14
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Figure BR112019020049A2_D0236
Figure BR112019020049A2_D0237
Figure BR112019020049A2_D0238
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em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi, e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; Li, L2, Zi, e Z2 são os mesmos definidos na Fórmula (I). Ri, R2, R3, Rf, R2’, e R3’ são independentemente H; F; Cl; = O; = S; OH; SH; alquila Ci-C8 linear ou ramidificada, arila, alquenila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila, éster (COOR5 ou -OC(O)Rs), éter (OR5), amida (CONR5), carbamato (OCONR5), aminas (NHR5, NR5R5’), heterocicloalquila ou aciloxilaminas (C(O)NHOH, -ONHC(O)R5); ou peptídeos contendo 1-8 aminoácidos naturais ou não naturais, ou unidade de polietilenoxi de fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))p, em que p é um número inteiro de 1 a cerca de 5000. Os dois Rs: RiR2, R2R3, RiR3. Ri’R2’, R2’R3’, ou Ri’R3’ podem formar independentemente um anel cíclico de 3 a 8 membros do grupo alquila, arila, heteroarila, heteroalquila ou alquilcicloalquila; X2 e Y2 são independentemente N, CH2 ou CR5, em que R5 é H, OH, NH2, NH(CH3), NHNH2, COOH, SH, OZ3, SZ3, ou alquila Ci-C8 linear ou ramificada, arila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila, aciloxilaminas; Z3 é H,
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OP(O)(OM1)(OM2), OCH2OP(O)(OMi)(OM2), OSO3M1, OU O-glicosideo (glicosídeo, galactosídeo, manosídeo, glucuronosideo/glucuronideo, alosideo, frutosideo, etc.), NH-glicosídeo, S-glicosídeo ou CH2-glicosídeo; Mi e M2 são independentemente H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NRiR2R3.
[00157] As amatoxinas, que são um subgrupo de pelo menos dez compostos tóxicos originalmente encontrados em vários gêneros de cogumelos venenosos, mais notavelmente Amanita phalloides e várias outras espécies de cogumelos, também são preferidas para conjugação da presente patente. Essas dez amatoxinas, denominadas a-Amanitina, β-Amanitina, γAmanitina, ε-Amanitina, Amanulina, Ácido amanulínico, Amaninamida, Amanina, Proamanulina, são peptídeos bicíclicos rígidos que são sintetizados como proproteínas de 35 aminoácidos, dos quais os oito aminoácidos finais são clivados por uma prolil oligopeptidase (Litten, W. 1975 Scientific American232 (3): 90-101 ;H. E. Hallen, et al 2007 Proc. Nat. Aca. Sei. USA 104, 19097-101; . K. Baumann, et al, 1993 Biochemistry 32 (15): 4043-50; Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42 (4): 339-49; Horgen, P. A. et al. 1978 Arch. Microbio. 118 (3): 317-9). As amatoxinas matam células inibindo a RNA polimerase II (Pol II), interrompendo a transcrição de genes e a biossíntese de proteínas (Brodner, O. G. e Wieland, T. 1976 Biochemistry, 15(16): 3480-4; Fiume, L., Curr Probl Clin Biochem, 1977, 7: 23-8; Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42(4): 339-49; Chafin, D. R., Guo, H. & Price, D. H. 1995 J. Biol. Chem. 270 (32): 19114-19; Wieland (1983) Int. J. Pept. Protein Res. 22(3): 257-76.). Amatoxinas podem ser produzidas a partir de cogumelos Amanita phalloides coletados (Yocum, R. R. 1978 Biochemistry 17(18): 3786-9; Zhang, P. et al, 2005, FEMS Microbiol. Lett.252 (2), 223-8) ou a partir de fermentação utilizando um basidiomiceto (Muraoka, S. e Shinozawa T., 2000 J. Biosci. Bioeng. 89(1): 73-6) ou a partir de fermentação usando A. fissa (Guo, X. W., et al, 2006 Wei Sheng Wu Xue Bao 46(3): 373-8), ou a partir de cultivo de Galerina
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138/310 fasciculata ou Galerina helvoliceps, uma cepa pertencente ao gênero (WO/1990/009799, JP11137291). No entanto, os rendimentos deste isolamento e fermentação foram bastante baixos (menos de 5 mg/L de cultura). Várias preparações de amatoxinas e seus análogos foram relatadas nas últimas três décadas (W. E. Savige, A. Fontana, Chem. Commun. 1976, 600-1; Zanotti, G., et al, Int J Pept Protein Res, 1981. 18(2): 162-8; Wieland, T., et al, Eur. J. Biochem. 1981, 117, 161-4; P. A. Bartlett, et al, Tetrahedron Lett. 1982, 23, 619-22; Zanotti, G., et al., Biochim Biophys Acta, 1986. 870(3): 454-62; Zanotti, G., et al., Int. J. Peptide Protein Res. 1987, 30, 3239; Zanotti, G., et al., Int. J. Peptide Protein Res. 1987, 30, 450-9; Zanotti, G., et al., Int J Pept Protein Res, 1988. 32(1): 9-20; G. Zanotti, T. et al, Int. J. Peptide Protein Res. 1989, 34, 222-8; Zanotti, G., et al., Int J Pept Protein Res, 1990. 35(3): 263-70; Mullersman, J. E. e J. F. Preston, 3rd, Int J Pept Protein Res, 1991. 37(6): 544-51; Mullersman, J.E., et al, Int J Pept Protein Res, 1991. 38(5): 409-16; Zanotti, G., et al, Int J Pept Protein Res, 1992. 40(6): 551-8; Schmitt, W. et al, J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 4380-7; Anderson, M.O., et al, J. Org. Chem., 2005, 70(12): 4578-84; J. P. May, et al, J. Org. Chem. 2005, 70, 8424-30; F. Brueckner, P. Cramer, Nat. Struct. Mol. Biol. 2008, 15, 811-8; J. P. May, D. M. Perrin, Chem. Eur. J. 2008, 14, 34049; J. P. May, et al, Chem. Eur. J. 2008, 14, 3410-17; Q. Wang, et al, Eur. J. Org. Chem. 2002, 834-9; May, J. P. e D. M. Perrin, Biopolymers, 2007. 88(5): 714-24; May, J. P., et al., Chemistry, 2008. 14(11): 3410-7; S. De Lamo Marin, et al, Eur. J. Org. Chem. 2010, 3985-9; Pousse, G., et al., Org Lett, 2010. 12(16): 3582-5; Luo, H., et al., Chem Biol, 2014. 21(12): 1610-7; Zhao, L., et al., Chembiochem, 2015. 16(10): 1420-5) e a maioria dessas preparações foi realizada por síntese parcial. Devido à sua extrema potência e mecanismo único de citotoxicidade, as amatoxinas têm sido utilizadas como cargas para conjugações (Fiume, L., Lancet, 1969. 2 (7625): 853-4; BarbantiBrodano, G. e L. Fiume, Nat New Biol, 1973. 243(130): 281-3; Bonetti, E.,
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M. et al, Arch Toxicol, 1976. 35(1): p. 69-73; Davis, Μ. T., Preston, J. F. Science 1981, 213, 1385-1388; Preston, J.F., et al, Arch Biochem Biophys, 1981. 209(1): 63-71; H. Faulstich, et al, Biochemistry 1981, 20, 6498-504; Barak, L.S., et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1981. 78(5): 3034-8; Faulstich, H. e L. Fiume, Methods Enzymol, 1985. 112: 225-37; Zhelev, Z., A. et al, Toxicon, 1987. 25(9): 981-7; Khalacheva, K., et al, Eksp Med Morfol, 1990. 29(3): 26-30; U. Bermbach, H. Faulstich, Biochemistry 1990, 29, 6839-45; Mullersman, J. E. e J. F. Preston, Int. J. Peptide Protein Res. 1991, 37, 54451; Mullersman, J.E. e J.F. Preston, Biochem Cell Biol, 1991. 69(7): 418-27; J. Anderl, H. Echner, H. Faulstich, Beilstein J. Org. Chem. 2012, 8, 2072-84; Moldenhauer, G., et al, J. Natl. Cancer Inst. 2012, 104, 622-34; A.
Moshnikova, et al; Biochemistry 2013, 52, 1171-8; Zhao, L., et al.,
Chembiochem, 2015. 16(10): 1420-5; Zhou, B., et al., Biosens Bioelectron, 2015. 68: 189-96; WO2014/043403, US20150218220, EP 1661584). Estamos trabalhando na conjugação de amatoxinas há um tempo. Exemplos das estruturas do conjugado de anticorpo-amatoxina através do ligante de ponte são preferidos como as seguintes estruturas de AmOl, Am02, Am03 e Am04.
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em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xb e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; R7, R8, e R9 são independentemente H, OH, ORi, NH2, NHRb alquila Ci-Cô ou ausente; Y2 é O, O2, NRi, NH, ou ausente; Rw é CH2, O, NH, NRi, NHC(O), NHC(O)NH, NHC(O)O, OC(O)O, C(O), OC(O), OC(O)(NRi), (NRi)C(O)(NRi), C(O)Ri ou ausente; Rn é OH, NH2, NHRb NHNH2, NHNHCOOH, O-Ri-COOH,
NH-Ri-COOH, NH-(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)PCH2CH2OH, O(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NR1R1’, O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH-ArCOOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H,
NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, Ri-NHSO3H, NH-Ri-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, ORi, Ri-NHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, ORi-NHPO3H2,
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NH-R1-NHPO3H2, ou NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, em que Aa é 1-8 aminoácidos; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Rb Lb e L2 são os mesmos definidos na Fórmula (I). Lb L2, Rb Zb e Z2, são os mesmos definidos na Fórmula (I).
[00158] Em ainda outra modalidade, uma imunotoxina pode ser conjugada com uma molécula de ligação celular através de um bis-ligante da patente. Uma imunotoxina aqui é um fármaco macromolecular que geralmente é uma proteína citotóxica derivada de uma proteína bacteriana ou vegetal, como a toxina da Difteria (DT), a toxina da cólera (CT), a tricosantina (TCS), a diantina, a exotoxina A de Pseudomonas (ETA'), Toxinas eritrogênicas, toxina da difteria, toxinas AB, exotoxinas do tipo III, etc. Ela também pode ser uma protoxina bacteriana altamente tóxica formadora de poros que requer processamento proteolítico para ativação. Um exemplo dessa protoxina é a proaerolisina e sua forma geneticamente modificada, a topsalisina. A topsalisina é uma proteína recombinante modificada que foi manipulada para ser ativada seletivamente por uma enzima na próstata, levando à morte celular localizada e à ruptura do tecido sem danificar os tecidos e nervos vizinhos.
[00159] Em ainda outra modalidade, ligantes de ligação celular ou agonistas de receptores celulares podem ser conjugados a uma molécula de ligação celular através de um bis-ligante desta patente. Esses ligandos de ligação celular conjugados ou agonistas de receptores celulares, em particular conjugados anticorpo-receptor, podem funcionar não apenas como um condutor/diretor de direcionamento para entregar o conjugado a células malignas, mas também podem ser usados para modular ou coestimular uma resposta imune desejada ou alteração das vias de sinalização.
[00160] Na imunoterapia, os ligandos de ligação celular ou agonistas de receptores são preferidos para se conjugarem a um anticorpo de células T de TCR (receptores de células T) ou de células T de CARs (receptores de
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142/310 antígenos quiméricos) ou de receptor de células B (BCR), células exterminadoras naturais (NK) ou as células citotóxicas. Tal anticorpo é preferencialmente anti- CD3, CD4, CD8, CD 16 (FcyRIII), CD27, CD40, CD40L, CD45RA, CD45RO, CD56, CD57, CD57brisht, ΤΝΡβ, ligando Fas, moléculas de MHC de classe I (HLA-A, B, C), ou NKR-P1. Os ligandos de ligação celular ou agonistas do receptor são selecionados, mas não limitados, a partir de: Derivados de folato (ligação ao receptor de folato, uma proteína superexpressa no câncer de ovário e em outras neoplasias) (Low, P. S. et al. 2008, Acc. Chem. Res. 41, 120-9); Derivados da ureia do ácido glutâmico (ligação ao antigeno de membrana específico da próstata, um marcador de superfície das células cancerígenas da próstata) (Hillier, S. M.et al, 2009, Cancer Res. 69, 6932-40); Somatostatina (também conhecida como hormônio inibidor do hormônio do crescimento (GHIH) ou fator inibidor da liberação de somatotropina (SRIF)) ou hormônio inibidor da liberação de somatotropina) e seus análogos, como octreotida (Sandostatina) e lanreotida (Somatulina) (particularmente para tumores neuroendócrinos, adenoma pituitário produtor de GH, paraganglioma, adenoma pituitário não funcional, feocromocitomas) (Ginj, M., et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 16436-41). Em geral, a somatostatina e seus subtipos de receptores (sstl, sst2, sst3, sst4 e sst5) foram encontrados em muitos tipos de tumores, como tumores neuroendócrinos, em particular nos adenomas pituitários secretores de GH (Reubi J. C., Landolt, A. M. 1984 J. Clin. Endocrinol Metab 59: 1148— 51; Reubi J. C., Landolt A. M. 1987 J Clin Endocrinol Metab 65: 65-73; Moyse E, et al, J Clin Endocrinol Metab 61: 98-103) e tumores gastroenteropancreáticos (Reubi J. C., et al., 1987 J Clin Endocrinol Metab 65: 1127-34; Reubi, J. C, et al, 1990 Cancer Res 50: 5969-77), feocromocitomas (Epel-baum J, et al 1995 J Clin Endocrinol Metab 80:183744; Reubi J. C., et al, 1992 J Clin Endocrinol Metab 74: 1082-9), neuroblastomas (Prevost G, 1996 Neuroendocrinology 63:188-197; Moertel,
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C. L, et al 1994 Am J Clin Path 102:752-756), cânceres medulares da tireoide (Reubi, J. C, et al 1991 Lab Invest 64:567-573) cânceres do pulmão de pequenas células (Sagman U, et al, 1990 Cancer 66:2129-2133), tumores não neuroendócrinos incluindo tumores cerebrais como meningiomas, meduloblastomas ou gliomas (Reubi J. C., et al 1986 J Clin Endocrinol Metab 63: 433-8; Reubi J. C., et al 1987 Cancer Res 47: 5758-64; Fruhwald, M. C, et al 1999 Pediatr Res 45: 697-708), carcinomas de mama (Reubi J. C., et al 1990 Int J Cancer 46: 416-20; Srkalovic G, et al 1990 J Clin Endocrinol Metab 70: 661-669), linfomas (Reubi J. C., et al 1992, Int J Cancer50: 895900), cânceres de células renais (Reubi J. C., et al 1992, Cancer Res 52: 6074-6078), tumores mesenquimais (Reubi J. C., et al 1996 Cancer Res 56: 1922-31), carcinomas de próstata (Reubi J. C., et al 1995, J. Clin. Endocrinol Metab 80: 2806-14; et al 1989, Prostate 14:191-208; Halmos G, et al J. Clin. Endo-crinol Metab 85: 2564-71), ovário (Halmos, G, et al, 2000 J Clin Endocrinol Metab 85: 3509-12; Reubi J. C., et al 1991 Am J Pathol 138:1267-72), gástrico (Reubi J. C., et al 1999, Int J Cancer 81: 376-86; Miller, G. V, 1992 Br J Cancer 66: 391-95), hepatocelular (Kouroumalis E, et al 1998 Gut 42: 442-7; Reubi J. C., et al 1999 Gut 45: 66-774) e carcinomas nasofaringeos (Loh K. S, et al., 2002 Virchows Arch 441: 444-8); certas sulfonamidas aromáticas, específicasda anidrase carbônica IX (um marcador de hipóxia e de carcinoma de células renais) (Neri, D., et al, Nat. Rev. Drug Discov. 2011, 10, 767-7); Peptídeo hipofisário ativador de adenilato ciclase (PACAP) (PAC1) para feocromocitomas e paragangliomas; Peptideos intestinais vasoativos (VIP) e seus sub tipos de receptores (VPAC1, VPAC2) para cânceres de pulmão, estômago, cólon, reto, mama, próstata, dutos pancreáticos, fígado, bexiga e tumores epiteliais; receptores do hormônio estimulador de a-melanócitos (α-MSH) para vários tumores; Colecistocinina (CCK)/receptores de gastrina e seus subtipos de receptores (CCK1 (anteriormente CCK-A) e CCK2 para cânceres de pulmão de pequenas
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144/310 células, carcinomas medulares da tireoide, astrocitomas, insulinomas e câncer de ovário; Bombesina (Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-HisLeu-Met-NHzj/peptídeo liberador de gastrina (GRP) e seus subtipos de receptores (BB1, subtipo de receptor de GRP (BB2), BB3 e BB4) para carcinomas de células renais, mama, pulmão, gástricos e de próstata e neuroblastoma (e neuroblastoma (Ohlsson, B., et al., 1999, Scand. J. Gastroenterology 34 (12): 1224-9; Weber, H. C., 2009, Cur. Opin. Endocri. Diab. Obesity 16(1): 66-71, Gonzalez N, et al, 2008, Cur. Opin. Endocri. Diab. Obesity 15 (1), 58-64); receptores de neurotensina e seus subtipos de receptores (NTR1, NTR2, NTR3) para câncer de pulmão de pequenas células, neuroblastoma, câncer de pâncreas, câncer de cólon e sarcoma de Ewing; Receptores da substância P e seus subtipos de receptores (como o receptor NK1 para tumores Glial, Hennig I. M., et al. 1995 Int. J. Cancer 61, 786792); receptores de neuropeptídeo Y (NPY) e seus subtipos de receptor (YlY6) para carcinomas de mama; peptídeos de endereçamento incluem RGD (Arg-Gly-Asp), NGR (Asn-Gly-Arg), os peptídeos RGD cíclicos diméricos e multiméricos (por exemplo, cRGDfV) que reconhecem receptores (integrinas) nas superfícies do tumor (Laakkonen P, Vuorinen K. 2010, Integr Biol (Camb). 2(7-8): 326-337; Chen K, Chen X. 2011, Theranostics. 1:189-200; Garanger E, et al, Anti-Cancer Agents Med Chem. 7 (5): 552-558; Kerr, J. S. et al, Anticancer Research, 19(2A), 959-968; Thumshim, G, et al, 2003 Chem. Eur. J. 9, 2717- 2725), e TAASGVRSMH ou LTLRWVGLMS (receptor do proteoglicano sulfato de condroitina NG2) e peptídeos F3 (peptídeo de 31 aminoácidos que se liga ao receptor de nucleolina expressa na superfície celular) (Zitzmann, S., 2002 Cancer Res., 62, 18, pp. 5139-5143, Temminga, K., 2005, Drug Resistance Updates, 8, 381-402; P. Laakkonen e K. Vuorinen, 2010 Integrative Biol, 2(7-8), 326-337; M. A. Burg, 1999 Cancer Res., 59(12), 2869-2874; K. Porkka, et al 2002, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99(11), 7444-9); peptídeos de penetração celular (CPPs) (Nakase I, et al,
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2012, J. Control Release. 159 (2), 181-188); os hormônios peptídicos, como agonistas e antagonistas do hormônio liberador de hormônio luteinizante (LHRH) e agonista do hormônio liberador de gonadotropina (GnRH), atuam visando o hormônio folículo estimulante (FSH) e o hormônio luteinizante (LH), bem como a produção de testosterona, por exemplo, buserelina (PyrHis-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt), Gonadorelina (Pyr-HisTrp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHi), Goserelina (Pyr-His-Trp-Ser-TyrD-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2), Histrelina (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-DHis(N-benzyl)-Leu-Arg-Pro-NHEt), leuprolida (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-LeuLeu-Arg-Pro-NHEt), Nafarelina (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-ProGly-NHi), Triptorelina (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), Nafarelina, Deslorelina, Abarelix (Ac-D-2Nal-D-4-cloroPhe-D-3-(3pyridyl)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-isopropilLys-Pro-DAla-NH2), Cetrorelix (Ac-D-2Nal-D-4-cloro-Phe-D-3-(3-piridil)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-LeuArg-Pro-D-Ala-NH2), Degarelix (Ac-D-2Nal-D-4-cloroPhe-D-3-(3piridil)Ala-Ser-4-aminoPhe(L-hidro-orotil)-D-4-aminoPhe(carba-moil)-LeuisopropilLys-Pro-D-Ala-NH2), e Ganirelix (Ac-D-2Nal-D-4-cloroPhe-D-3-(3piridil)Ala-Ser-Tyr-D-(N9,N 10-dietil)-homoArg-Leu-(N9, N10-dietil)homoArg-Pro-D-Ala-NH2) (Thundimadathil, J., J. Amino Acids, 2012, 967347, doi: 10.1155/2012/967347; Boccon-Gibod, L.; et al, 2011, Therapeutic Advances in Urology 3(3): 127-140; Debruyne, F., 2006, Future Oncology, 2(6), 677-696; Schally A. V; Nagy, A. 1999 Eur J Endocrinol 141:1-14; Koppan M, et al 1999 Prostate 38:151-158); e receptores de reconhecimento de padrões (PRRs), como receptores do tipo Toll (TLRs), lectinas do tipo C e receptores do tipo NOD (NLRs) (Fukata, M., et al, 2009, Semin. Immunol. 21, 242-253; Maisonneuve, C., et al, 2014, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. Ill, 1-6; Botos, I., et al, 2011, Structure 19, 447-459; Means, T. K., et al, 2000, Life Sci. 68, 241-258) que variam em tamanho, desde pequenas moléculas (análogos de imiquimode, guanisina e adenosina) a
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146/310 grandes e biomacromoléculas complexas como lipopolissacarídeo (LPS), ácidos nucléicos (CpG DNA, poliLC) e lipopeptídeos (Pam3CSK4) (Kasturi, S. P., et al, 2011, Nature 470, 543-547; Lane, T., 2001, J. R. Soc. Med. 94, 316; Hotz, C., e Bourquin, C., 2012, Oncoimmunology 1, 227-228; Dudek, A. Z., et al, 2007, Clin. Cancer Res. 13, 7119-25); Receptores de calcitonina que é um neuropeptídeo de 32 aminoácidos, envolvidos na regulação dos níveis de cálcio, em grande parte por seus efeitos nos osteoclastos e nos rins (Zaidi M, et al, 1990 Crit Rev Clin Lab Sei 28, 109-174; Gom, A. H., et al 1995 J Clin Invest 95:2680-91); E os receptores de integrina e seus subtipos de receptores (como ανβι, ανβ3, ανβί, ανβό, αόβ4, αγβι, αρβ2. αζπ,β3, etc.) que geralmente desempenham papéis importantes na angiogênese são expressos nas superfícies de uma variedade de células, em particular, de osteoclastos, células endoteliais e células tumorais (Ruoslahti, E. et al, 1994 Cell 77, 477-8; Albelda, S. M. et al, 1990 Cancer Res., 50, 6757-64). Peptídeos curtos, GRGDSPK e pentapeptídeos RGD cíclicos, como ciclo(RGDfV) (Ll) e seus derivados [ciclo(-N(Me)R-GDfV), ciclo(R-Sar-DfV), ciclo-(RG-N(Me)DfV), ciclo(RGD-N(Me)f-V), ciclo(RGDf-N(Me)V-)(Cilengitida)] mostraram altas afinidades de ligação dos receptores de integrina (Dechantsreiter, Μ. A. et al, 1999 J. Med. Chem. 42, 3033-40, Goodman, S. L., et al, 2002 J. Med. Chem. 45, 1045-51).
[00161] Os ligandos de ligação celular ou agonistas de receptor celular podem ser moléculas de esqueleto proteico à base de Ig e não à base de Ig. Os esqueletos à base de Ig podem ser selecionados, mas não limitados, a partir de Nanocor (um derivado de VHH (Ig de camelídeo)) (Muyldermans S., 2013 Annu Rev Biochem. 82, 775-97); Anticorpos de domínio (dAb, um derivado do domínio VH ou VL) (Holt, L. J, et al, 2003, Trends Biotechnol. 21, 48490); Engager de células T biespecíficas (BiTE, um diacorpo biespecífico) (Baeuerle, P. A, et al, 2009, Curr. Opin. Mol. Ther. 11, 22-30); Redirecionamento de afinidade dupla (DART, um diacorpo biespecífico)
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147/310 (Moore P. A. P, et al. 2011, Blood 117(17), 4542-51); Anticorpos tetravalentes em tandem (TandAb, um diacorpo biespecifico dimerizado) (Cochlovius, B, et al. 2000, Cancer Res. 60(16):4336-4341). Os esqueletos não Ig podem ser selecionados, mas não limitados, a partir de Anticalina (um derivado das lipocalinas) (Skerra A. 2008, FEBS J., 275 (11): 2677-83; Beste G, et al, 1999 Proc. Nat. Acad. USA. 96(5): 1898-903; Skerra, A. 2000 Biochim Biophys Acta, 1482(1-2): 337-50; Skerra, A. 2007, Curr Opin Biotechnol. 18(4): 295-304; Skerra, A. 2008, FEBS J. 275(11):2677-83); Adnectinas (10a FN3 (Fibronectina)) (Koide, A, et al, 1998 J. Mol. Biol., 284(4): 1141-51; Batori V, 2002, Protein Eng. 15(12): 1015-20; Tolcher, A. W, 2011, Clin. Cancer Res. 17(2): 363-71; Hackel, B. J, 2010, Protein Eng. Des. Sei. 23(4): 211-19); proteínas de repetição de anquirina projetadas (DARPins) (um derivado de proteínas de repetição anquirina (AR)) (Boersma, Y.L, et al, 2011 Curr Opin Biotechnol. 22(6): 849-57), por exemplo, DARPin C9, DARPin Ec4 e DARPin E69_LZ3_E01 (Winkler J, et al, 2009 Mol Cancer Ther. 8(9), 2674-83; Patricia M-K. M., et al, Clin Cancer Res. 2011; 17(1): 100-10; Boersma Y. L, et al, 2011 J. Biol. Chem. 286(48), 41273-85); Avímeros (um receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDL)/domínio A) (Boersma Y. L, 2011 J. Biol. Chem. 286(48): 41273-41285; Silverman J, et al, 2005 Nat. Biotechnol., 23(12):1556-61).
[00162] Exemplos das estruturas do conjugado dos anticorpo-ligandos de ligação celular ou agonistas de receptor celular ou fármacos através do bisligante do pedido de patente estão listados a seguir: LB01 (conjugado de folato), LB02 (conjugado de ligando de PMSA), LB03 (conjugado de ligando de PMSA), LB04 (conjugado de ligando de PMSA), LB05 (conjugado de somatostatina), LB06 (conjugado de somatostatina), LB06 (conjugado de somatostatina), LB07 (octreotida, um conjugado de somatostatina), L08 (Lanreotida, um conjugado de análogo da somatostatina), LB09 (Vapreotida (Sanvar), um conjugado de análogo de somatostatina), LB10 (conjugado de
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148/310 ligando de CAIX), LB 11 (conjugado de ligando de CAIX), LB 12 (receptor de peptídeo liberador de gastrina (GRPr), conjugado de MB A), LB13 (ligando de hormônio liberador de hormônio luteinizante (LH-RH) e conjugado de GnRH), LB14 (hormônio liberador de hormônio luteinizante (LH-RH) e conjugado de ligando de GnRH), LB15 (antagonista de GnRH, conjugado de Abarelix), LB16 (cobalamina, conjugado de análogo de vitamina B12), LB17 (cobalamina, conjugado de análogo de vitamina Bl2), LB18 (para receptor de integrina ανβ3, conjugado de pentapeptídeo cíclico de RGD), LB19 (conjugado de ligando peptídico heterobivalente para receptor de VEGF), LB20 (conjugado de Neuromedina B), LB21 (conjugado de bombesina para um receptor de junção à proteína G), LB22 (conjugado de TLR2 para um receptor tipo Toll), LB23 (para um receptor de androgênio), LB24 (Conjugado Cilengitida/ciclo(-RGDfV-) para um receptor de integrina av, LB23 (conjugado de fludrocortisona), LB25 (conjugado de análogo de rifabutina), LB26 (conjugado de análogo de rifabutina), LB27 (conjugado de análogo de rifabutina), LB28 (conjugado de fludrocortisona), LB29 (conjugado de dexametasona), LB30 (conjugado de propionato de fluticasona), LB31 (conjugado de dipropionato de beclometasona), LB32 (conjugado de acetonida de triancinolona), LB33 (conjugado de prednisona), LB34 (conjugado de prednisolona), LB35 (conjugado de metilprednisolona), LB36 (conjugado de betametasona), LB37 (conjugado de análogo de irinotecano), LB38 (conjugado de análogo de crizotinibe), LB39 (conjugado de análogo de Bortezomibe), LB40 (conjugado de análogo de carfilzomibe), LB41 (conjugado de análogo de carfilzomibe), LB42 (conjugado de análogo de leuprolida), LB43 (conjugado de análogo de triptorelina), LB44 (conjugado de clindamicina), LB45 (conjugado de análogo de liraglutida), LB46 (conjugado de análogo de semaglutida), LB47 (conjugado de análogo da retapamulina), LB48 (conjugado análogo da indibulina), LB49 (conjugado análogo da vinblastina), LB50 (conjugado análogo do lixisenatida), LB51
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149/310 (conjugado análogo do osimertinibe), LB52 (um conjugado de análogo de neucleosídeo), LB53 (conjugado de análogo de Erlotinibe) e LB54 (conjugado de análogo de Lapatinibe), que são mostrados nas seguintes estruturas:
Figure BR112019020049A2_D0244
Figure BR112019020049A2_D0245
LB02 (conjugado de ligando de PMSA),
Figure BR112019020049A2_D0246
LB03 (conjugado de ligando de PMSA),
Figure BR112019020049A2_D0247
LB04 (conjugado de ligando de PMSA),
Figure BR112019020049A2_D0248
LB05 (conjugado de Somatostatina),
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150/310
Figure BR112019020049A2_D0249
LB06 (conjugado de Somatostatina),
Figure BR112019020049A2_D0250
LB07 (Octreotida, um conjugado de somatostatina)
Figure BR112019020049A2_D0251
L08 (Lanreotida, um conjugado de análogo da somatostatina),
Figure BR112019020049A2_D0252
LB09 (Vapreotida (Sanvar), um conjugado de análogo de somatostatina),
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151/310
Figure BR112019020049A2_D0253
LB 10 (conjugado de ligando de CAIX),
Figure BR112019020049A2_D0254
LB11 (conjugado de ligando de CAIX),
Figure BR112019020049A2_D0255
LB 12 (receptor de peptídeo liberador de gastrina (GRPr), conjugado de
MBA),
Figure BR112019020049A2_D0256
LB 13 (ligando de hormônio liberador de hormônio luteinizante (LH-RH) e conjugado de GnRH),
Figure BR112019020049A2_D0257
LB 14 (hormônio liberador de hormônio luteinizante (LH-RH) e conjugado de ligando de GnRH),
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152/310
Figure BR112019020049A2_D0258
LB 15 (antagonista de GnRH, conjugado de Abarelix),
Figure BR112019020049A2_D0259
LB 16 (cobalamina, conjugado de análogo de vitamina Bl2),
Figure BR112019020049A2_D0260
LB 17 (cobalamina, conjugado de análogo de vitamina B12),
Figure BR112019020049A2_D0261
LB 18 (para receptor de integrina ανβ3, conjugado de pentapeptídeo cíclico de RGD),
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153/310 'mAb rz2—s mi
LB 19 (conjugado de ligando peptidico heterobivalente para receptor de VEGF),
Ο H
T I X|~J^N^(I-N-l -W-A-T-(, n-l-VI-Nn2\ mAb
LB20 (conjugado de Neuromedina B), < Ο Ι-Γ
H U /
Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met—N— < HO L2- mAb n
rz2-s ml
LB21 (conjugado de bombesina para um receptor de junção à proteína G),
Figure BR112019020049A2_D0262
LB22 (conjugado de TLR2 para um receptor tipo Toll),
Figure BR112019020049A2_D0263
LB23 (um receptor de androgênio),
Figure BR112019020049A2_D0264
LB24 (Conjugado Cilengitida/ciclo(-RGDfV-) para um receptor de integrina 0tv)
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154/310
Figure BR112019020049A2_D0265
LB25 (conjugado de análogo de rifabutina),
Figure BR112019020049A2_D0266
LB26 (conjugado de análogo de rifabutina),
Figure BR112019020049A2_D0267
LB27 (conjugado de análogo de rifabutina),
Figure BR112019020049A2_D0268
LB28 (conjugado de fludrocortisona),
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155/310
Figure BR112019020049A2_D0269
Figure BR112019020049A2_D0270
LB29 (conjugado de dexametasona),
Figure BR112019020049A2_D0271
LB31 (conjugado de dipropionato de beclometasona),
Figure BR112019020049A2_D0272
LB32 (conjugado de acetonida de triancinolona),
Figure BR112019020049A2_D0273
LB33 (conjugado de prednisona),
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156/310
Figure BR112019020049A2_D0274
LB34 (conjugado de prednisolona),
Figure BR112019020049A2_D0275
LB35 (conjugado de metilprednisolona),
Figure BR112019020049A2_D0276
LB36 (conjugado de betametasona)
Figure BR112019020049A2_D0277
LB37 (conjugado de análogo de irinotecano),
Figure BR112019020049A2_D0278
LB38 (conjugado de análogo de crizotinibe),
Figure BR112019020049A2_D0279
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157/310
LB39 (conjugado de análogo de Bortezomibe), em que Y5, é N, CH, C(C1),
C(CH3), ou C(COORi); Ri é H, alquila Ci-Cô, Ar C3-Cs;
Figure BR112019020049A2_D0280
LB40 (conjugado de análogo de carfilzomibe),
Figure BR112019020049A2_D0281
LB41 (conjugado de análogo de carfilzomibe),
Figure BR112019020049A2_D0282
LB42 (conjugado de análogo de leuprolida),
Figure BR112019020049A2_D0283
LB43 (conjugado de análogo de triptorelina),
Figure BR112019020049A2_D0284
HO
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LB44 (conjugado de clindamicina),
Figure BR112019020049A2_D0285
—hn-h-a-q-g-t-f-t-s-d ( ! 1 N^V^-A-A-Q-G-Q-L-Y-S-S-V
S-L^2_£2 Q-F-I-A-W-L-V-R-G-R-G-COOH
Figure BR112019020049A2_D0286
n
LB45 (conjugado de análogo de liraglutida), s
mAb s
Figure BR112019020049A2_D0287
Z2· n
1 ^HN-H-AIB-Q-G-T-F-T-S-D,
H
N.
Q-F-I-A-W-L-V-R-G-R-G-COOH/m1
LB46 (conjugado de análogo de semaglutida),
Figure BR112019020049A2_D0288
LB47 (conjugado de análogo da retapamulina),
Figure BR112019020049A2_D0289
LB49 (conjugado análogo da vinblastina),
HOOC-H-G-E-G-T-F-T-S-D-L-S-K-
Figure BR112019020049A2_D0290
Figure BR112019020049A2_D0291
N H
Figure BR112019020049A2_D0292
Z2 1,11
Figure BR112019020049A2_D0293
mAb
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LB50 (conjugado análogo do lixisenatida),
Figure BR112019020049A2_D0294
Figure BR112019020049A2_D0295
LB53 (conjugado de análogo de Erlotinibe)
Figure BR112019020049A2_D0296
LB54 (conjugado de análogo de Lapatinibe), em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi, e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi;
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160/310 mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; Lb L2, Rb Ri’, R2, Zb e Z2, são os mesmos definidos na Fórmula (I). X3 é CH2, O, NH, NHC(O), NHC(O)NH, C(O), OC(O), OC(O)(NR3), Ri, NHRi, NRi, C(O)Ri ou ausente; X4 é H, CH2, OH, O, C(O), C(O)NH, C(O)N(Ri), Ri, NHRb NRi, C(O)Ri ou C(O)O; X5 é H, CH3, F, ou Cl; Mi e M2 são independentemente H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NRiR2R3; Rô é 5'-desoxiadenosil, Me, OH, ou CN;
Em ainda outra modalidade, um, dois ou mais DNA, RNA, mRNA, RNA interferente pequeno (siRNA), microRNA (miRNA) e RNAs que interagem com PIWI (piRNA) são preferidos conjugados a uma molécula de ligação celular através de um bis-ligante desta patente. Sabe-se que pequenos RNAs (siRNA, miRNA, piRNA) e RNAs antissentidos não codificante longos são responsáveis por alterações epigenéticas nas células (Goodchild, J (2011), Methods in molecular biology (Clifton, N.J.). 764: 115). DNA, RNA, mRNA, siRNA, miRNA ou piRNA aqui podem ser fitas simples ou duplas com unidades de nucleotídeos de 3 a 1 milhão e alguns de seus nucleotídeos podem não ter formas naturais (sintéticas), como oligonucleotídeo com acoplamento de fosforotioato, como exemplo de Fomivirsen, ou os nucleotídeos estão acoplados a acoplamentos de fosforotioato em vez dos acoplamentos de fosfodiéster de RNA e DNA natural e as partes de açúcar são desoxirribose na parte central da molécula e ribose modificada com 2'-O-metoxietil nas duas extremidades, como exemplo Mipomersen, ou oligonucleotídeo produzido com ácido peptonucleico (PNA), morfolino, fosforotioato, tiofosforamidato ou com 2'-O-metoxietil (MOE), 2'O-metil, 2'-Fluoro, ácido nucléico bloqueado (LNA) ou ácido nucleico bicíclico (BNA) de açúcar ribose ou ácidos nucleicos são modificados para remover a ligação de carbono 2’ -3’ no anel do açúcar (Whitehead, K. A.; et al (2011), Annual Review of Chemical e Biomolecular Engineering 2: 77-96; Bennett, C.F.; Swayze, E.E. (2010), Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 50: 259Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 182/626
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29). Preferencialmente, o comprimento dos oligonucleotídeos é de aproximadamente 8 a mais de 100 nucleotídeos. Um exemplo da estrutura dos conjugados é exibido abaixo:
Figure BR112019020049A2_D0297
em que mAb, mb n, Xb Lb L2, Zi, Z2, “-----” são os mesmos definidos na Fórmula (I) ou acima; são fitas simples ou duplas de
DNA, RNA, mRNA, siRNA, miRNA ou piRNA; Y é preferencialmente O, S, NH ou CH2.
[00163] Em ainda outra modalidade, os conjugados de anticorpo IgG conjugados com uma, duas ou mais moléculas ou fármacos de funções diferentes são preferidos para serem conjugados especificamente a um par de tióis (através da redução das ligações dissulfeto) entre a cadeia leve e a cadeia pesada, as ligações dissulfeto superiores entre as duas cadeias pesadas, e ligações dissulfeto inferiores entre as duas cadeias pesadas, como mostrado na seguinte estrutura, STI, ST2, ST3, ST4, ST4, ST5 ou ST6:
Figure BR112019020049A2_D0298
Figure BR112019020049A2_D0299
ST2,
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Figure BR112019020049A2_D0300
ST3,
Figure BR112019020049A2_D0301
Figure BR112019020049A2_D0302
ST5
Figure BR112019020049A2_D0303
ST6
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163/310 em que Zi, Z2, X, Y, Li, L2, “-----”, mi, e molécula citotóxica são definidas da mesma forma que Xi na Fórmula (I) acima;
Além disso, as moléculas citotóxicas e mi em sítio de conjugação diferente da molécula de ligação celular podem ser diferentes quando as moléculas citotóxicas contendo bis-ligantes iguais ou diferentes são conjugadas sequencialmente a uma molécula de ligação celular, ou quando diferentes moléculas citotóxicas contendo bis-ligantes iguais ou diferentes são adicionados passo a passo em uma mistura reacional de conjugação contendo uma molécula de ligação celular.
FORMULAÇÃO E APLICAÇÃO
[00164] Os conjugados do pedido de patente são formulados para líquidos ou adequados para serem liofilizados e subsequentemente reconstituídos para uma formulação líquida. Uma formulação líquida compreendendo 0,1 g/L ~ 300 g/L de concentração do ingrediente ativo conjugado para entrega a um paciente sem altos níveis de agregação de anticorpos pode incluir um ou mais polióis (por exemplo, açúcares), um agente tampão com pH 4,5 a 7,5, um tensoativo (por exemplo, polissorbato 20 ou 80), um antioxidante (por exemplo, ácido ascórbico e/ou metionina), um agente de tonicidade (por exemplo, manitol, sorbitol ou NaCl), agentes quelantes como EDTA; complexos metálicos (por exemplo, complexos de Zn-proteína); polímeros biodegradáveis tais como poliésteres; um conservante (por exemplo, álcool benzílico) e/ou um aminoácido livre.
[00165] Os agentes tamponantes adequados para uso nas formulações incluem, mas não estão limitados a, sais de ácidos orgânicos, tais como sais de ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido glucônico, ácido carbônico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético ou ácido ftálico; Tris, cloridrato de (tris(hidroximetil)-aminometano) de trometamina ou tampão fosfato. Além disso, os componentes de aminoácidos também podem ser usados como agente tampão. Esse componente de aminoácido inclui, sem limitação,
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164/310 arginina, glicina, glicilglicina e histidina. Os tampões de arginina incluem acetato de arginina, cloreto de arginina, fosfato de arginina, sulfato de arginina, succinato de arginina, etc. Em uma modalidade, o tampão de arginina é acetato de arginina. Exemplos de tampões de histidina incluem cloreto de histidina-cloreto de arginina, acetato de histidina-acetato de arginina, fosfato de histidina-fosfato de arginina, sulfato de histidina-sulfato de arginina, sulfato de histidina-succinato de argina, etc. As formulações dos tampões têm um pH de 4,5 a pH 7,5, preferencialmente de cerca de 4,5 a cerca de 6,5, mais preferencialmente de cerca de 5,0 a cerca de 6,2. Em algumas modalidades, a concentração dos sais de ácido orgânico no tampão é de cerca de 10 mM a cerca de 500 mM.
[00166] Um poliol que pode opcionalmente ser incluído na formulação é uma substância com vários grupos hidroxila. Os polióis podem ser utilizados como excipientes estabilizadores e/ou agentes de isotonicidade em formulações líquidas e liofilizadas. Os polióis podem proteger os produtos biofarmacêuticos das vias de degradação física e química. Os cossolventes preferencialmente excluídos aumentam a tensão superficial efetiva do solvente na interface da proteína, pelo qual as conformações estruturais mais favoráveis em termos energéticos são aquelas com as menores áreas superficiais. Os polióis incluem açúcares (açúcares redutores e não redutores), álcoois de açúcar e ácidos de açúcar. Um açúcar redutor é aquele que contém um grupo hemiacetal que pode reduzir íons metálicos ou reagir covalentemente com lisina e outros grupos amino nas proteínas e um açúcar não redutor é aquele que não possui essas propriedades de um açúcar redutor. Exemplos de açúcares redutores são frutose, manose, maltose, lactose, arabinose, xilose, ribose, ramnose, galactose e glicose. Os açúcares não redutores incluem sacarose, trealose, sorbose, melezitose e rafinose. Álcoois de açúcar são selecionados a partir de manitol, xilitol, eritritol, maltitol, lactitol, eritritol, treitol, sorbitol e glicerol. Os ácidos de açúcar
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165/310 incluem L-gluconato e seus sais metálicos. Preferencialmente, um açúcar não redutor: sacarose ou trealose a uma concentração de cerca de 0,01% a 15% é escolhido na formulação, em que a trealose é preferida em relação à sacarose, devido à estabilidade da solução de trealose.
[00167] Um tensoativo opcionalmente nas formulações é selecionado a partir de polissorbato (polissorbato 20, polissorbato 40, polissorbato 65, polissorbato 80, polissorbato 81, polissorbato 85, polissorbato 85 e similares); poloxâmero (por exemplo, poloxâmero 188, poli(óxido de etileno)-poli(óxido de propileno), poloxâmero 407 ou polietileno-polipropileno glicol e similares); Triton; dodecilsulfato de sódio (SDS); lauril sulfato de sódio; octil glicosídeo de sódio; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sulfobetaína; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sarcosina; linoleil-, miristil- ou cetil-betaína; lauroamidopropil-, cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopropil- ou isoestearamidopropil-betaína (por exemplo, lauroamidopropil); miristamidopropil-, palmidopropil- ou isoestearamidopropil-dimetilamina; metilcocoil- sódico, ou metil oleil-taurato dissódico; dodecil betaína, óxido de dodecil dimetilamina, cocamidopropil betaína e cocoanfoglicinato; e a série MONAQUAT™ (por exemplo, etossulfato de isoestearila etilimidônio); polietilglicol, polipropilglicol e copolímeros de etileno e propileno glicol (por exemplo, Pluronics, PF68 etc.); etc. Os tensoativos preferidos são os ésteres de ácidos graxos de polioxietileno sorbitano, por exemplo, polissorbato 20, 40, 60 ou 80 (Tween 20, 40, 60 ou 80). A concentração de um tensoativo varia de 0,0001% a cerca de 1,0%. Em certas modalidades, a concentração de tensoativo é de cerca de 0,01% a cerca de 0,1%. Em uma modalidade, a concentração de tensoativo é de cerca de 0,02%.
[00168] Um conservante opcionalmente nas formulações é um composto que reduz essencialmente a ação bacteriana nas mesmas. Exemplos de conservantes em potencial incluem cloreto de
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166/310 octadecildimetilbenzilamônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio (uma mistura de cloretos de alquilbenzildimetilamônio nos quais os grupos alquila são compostos de cadeia longa) e cloreto de benzetônio. Outros tipos de conservantes incluem álcoois aromáticos como fenol, álcool butílico e benzílico, alquila parabenos como metil ou propil parabeno, catecol, resorcinol, ciclo-hexanol, 3-pentanol e m-cresol. O conservante é inferior a 5% na formulação. Preferencialmente, 0,01% a 1%. Em uma modalidade, o conservante aqui é álcool benzílico.
[00169] Aminoácidos livres adequados, opcionalmente para uso na formulação, mas não estão limitados a, são arginina, lisina, histidina, omitina, isoleucina, leucina, alanina, ácido glutâmico glicina ou ácido aspártico. E preferida a inclusão de um aminoácido básico, isto é, arginina, lisina e/ou histidina. Se uma composição inclui histidina, essa pode atuar tanto como um agente tampão quanto como um aminoácido livre, mas quando um tampão de histidina é usado, é típico incluir um aminoácido livre não histidina, por exemplo, para incluir tampão histidina e lisina. Um aminoácido pode estar presente em sua forma D e/ou L, mas a forma L é típica. O aminoácido pode estar presente como qualquer sal adequado, por exemplo, um sal cloridrato, tal como arginina-HCl. A concentração de um aminoácido varia de 0,0001% a cerca de 15,0%. Preferencialmente, 0,01% a 5%.
[00170] As formulações podem opcionalmente compreender metionina ou ácido ascórbico como um antioxidante a uma concentração de cerca de 0,01 mg/ml a 5 mg/ml; As formulações podem opcionalmente compreender agente quelante, por exemplo, EDTA, EGTA, etc., a uma concentração de cerca de 0,01 mM a 2 mM.
[00171] A formulação final pode ser ajustada ao pH preferido com um agente de ajuste (por exemplo, um ácido, como HC1, H2SO4, ácido acético, H3PO4, ácido cítrico, etc. ou uma base, como NaOH, KOH, NH3OH, etanolamina, dietanolamina ou trietanolamina, fosfato de sódio, fosfato de
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167/310 potássio, citrato trissódico, trometamina etc.) e a formulação deve ser controlada isotônica, o que significa que a formulação de interesse tem essencialmente a mesma pressão osmótica do sangue humano. As formulações isotônicas geralmente terão uma pressão osmótica de cerca de 250 a 350 mOsm. A isotonicidade pode ser medida usando um osmômetro do tipo pressão de vapor ou ponto de congelamento, por exemplo.
[00172] Outros excipientes que podem ser úteis em uma formulação líquida ou liofilizada do pedido de patente incluem, por exemplo, fucose, celobiose, maltotriose, melibiose, octulose, ribose, xilitol, arginina, histidina, glicina, alanina, metionina, ácido glutâmico, lisina, imidazol, glicilglicina, manosilglicerato, Triton X-100, Pluoronic F-127, celulose, ciclodextrina, dextrano (10, 40 e/ou 70 kD), polidextrose, maltodextrina, ficol, gelatina, hidroxipropilmetil, fosfato de sódio, fosfato de potássio, ZnCl2, zinco, óxido de zinco, citrato de sódio, citrato trissódico, trometamina, cobre, fibronectina, heparina, albumina sérica humana, protamina, glicerina, glicerol, EDTA, metacresol, álcool benzílico, fenol, álcoois poli-hídricos, ou poliálcoois, formas hidrogenadas de carboidratos com um grupo carbonil reduzido a um grupo hidroxil primário ou secundário.
[00173] Outros excipientes contemplados, que podem ser utilizados nas composições farmacêuticas aquosas do pedido de patente incluem, por exemplo, agentes aromatizantes, agentes antimicrobianos, adoçantes, antioxidantes, agentes antiestáticos, lipídios como fosfolipídios ou ácidos graxos, esteróides como colesterol, excipientes de proteínas tais como albumina sérica (albumina sérica humana), albumina humana recombinante, gelatina, caseína, contraíons formadores de sal, tais como sódio e semelhantes. Estes e excipientes farmacêuticos conhecidos adicionais e/ou aditivos adequados para uso nas formulações da invenção são conhecidos na técnica, por exemplo, conforme listado em The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4a edição, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals
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Association (2003); e Remington: the Science e Practice of Pharmacy, 21a edição, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005).
[00174] Em uma modalidade adicional, a invenção provê um método para preparar uma formulação compreendendo as etapas de: (a) liofilizar a formulação compreendendo os conjugados, excipientes e um sistema tampão a um pó; e (b) reconstituir a mistura liofilizada da etapa (a) em um meio de reconstituição de modo a que a formulação reconstituída seja estável. A formulação da etapa (a) pode compreender adicionalmente um estabilizante e um ou mais excipientes selecionados a partir de um grupo que compreende agente de volume, sal, tensoativo e conservante, como descrito acima. Como meio de reconstituição, vários ácidos orgânicos diluídos ou água, isto é, água estéril, água bacteriostática para injeção (BWFI) ou podem ser usados. O meio de reconstituição pode ser selecionado a partir de água, isto é, água estéril, água bacteriostática para injeção (BWFI) ou o grupo que consiste em ácido acético, ácido propiônico, ácido succínico, cloreto de sódio, cloreto de magnésio, solução ácida de cloreto de sódio, solução ácida de cloreto de magnésio e solução ácida de arginina, em uma quantidade de cerca de 10 a cerca de 250 mM.
[00175] Uma formulação farmacêutica líquida dos conjugados do pedido de patente deve exibir uma variedade de características predefinidas. Uma das principais preocupações em relação aos produtos de fármacos líquidos é a estabilidade, pois as proteínas/anticorpos tendem a formar agregados solúveis e insolúveis durante a fabricação e o armazenamento. Além disso, várias reações químicas podem ocorrer na solução (desamidação, oxidação, recorte, isomerização etc.), levando a um aumento nos níveis do produto de degradação e/ou perda de bioatividade. Preferencialmente, um conjugado na formulação líquida ou de liofilizado deve exibir um prazo de validade de mais de 18 meses a 25°C. Mais preferido, um conjugado na formulação líquida ou de liofilizado deve exibir um prazo de validade de mais
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169/310 de 24 meses a 25°C. A formulação líquida mais preferida deve exibir um prazo de validade de cerca de 24 a 36 meses a 2-8°C e a formulação de liofilizado deve exibir um prazo de validade de cerca de, preferencialmente, até 60 meses a 2-8°C. Ambas as formulações líquidas e de liofilizado devem exibir um prazo de validade por pelo menos dois anos a -20°C ou -70°C.
[00176] Em certas modalidades, a formulação é estável após congelamento (por exemplo, -20°C ou -70°C) e descongelamento da formulação, por exemplo, após 1, 2 ou 3 ciclos de congelamento e descongelamento. A estabilidade pode ser avaliada qualitativa e/ou quantitativamente de várias maneiras diferentes, incluindo avaliação da razão de fármaco/anticorpo(proteína) e formação de agregados (por exemplo, usando UV, cromatografia de exclusão por tamanho, medindo a turbidez e/ou por inspeção visual); avaliando a heterogeneidade da carga usando cromatografia de troca catiônica, focalização isoelétrica capilar de imagens (icIEF) ou eletroforese de zona capilar; análise de sequência amino-terminal ou carboxi-terminal; análise espectrométrica de massa ou espectrometria de massa de ionização e dessorção a laser assistida por matriz por tempo de voo (MALDI/TOF MS) ou HPLC-MS/MS; análise SDS-PAGE para comparar anticorpo reduzido e intacto; análise do mapa peptídico (por exemplo, tríptico ou LYS-C); avaliar a atividade biológica ou a função de ligação ao antigeno do anticorpo; etc. A instabilidade pode envolver qualquer um ou mais dentre: agregação, desamidação (por exemplo, desamidação de Asn), oxidação (por exemplo, oxidação de Met), isomerização (por exemplo, isomerização de Asp), recorte/hidrólise/fragmentação (por exemplo, fragmentação da região de dobradiça), formação de succinimida, cisteína(s) não pareada(s), extensão de N-terminal, processamento de C-terminal, diferenças de glicosilação, etc.
[00177] Um conjugado estável também deve reter sua atividade biológica em uma formulação farmacêutica, se a atividade biológica do conjugado em um dado momento, por exemplo, 12 meses, dentro de cerca de
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20%, preferencialmente cerca de 10% (dentro dos erros do ensaio) da atividade biológica exibida no momento em que a formulação farmacêutica foi preparada conforme determinada em um ensaio de ligação ao antígeno e/ou ensaio in vitro, citotóxico, por exemplo.
[00178] Um recipiente ou vaso farmacêutico é usado para manter a formulação farmacêutica de qualquer um dos conjugados do pedido de patente. O vaso é um frasco, garrafa, seringa pré-cheia ou seringa autoinjetora pré-cheia.
[00179] Para uso clínico in vivo, o conjugado através do bisacoplamento da invenção será provido como soluções ou como um sólido liofilizado que pode ser redissolvido em água estéril para injeção. Exemplos de protocolos adequados de administração de conjugados são os seguintes. Os conjugados são administrados diariamente, semanalmente, quinzenalmente, a cada três semanas, uma vez a cada quatro semanas ou mensalmente durante 8 a 54 semanas como um bolus i.v. As doses em bolus são administradas em 50 a 1000 ml de solução salina normal à qual a albumina sérica humana (por exemplo, 0,5 a 1 mL de uma solução concentrada de albumina sérica humana, 100 mg/mL) pode opcionalmente ser adicionada. As dosagens serão de cerca de 50 pg a 20 mg/kg de peso corporal por semana, i.v. (faixa de 10 pg a 200 mg/kg por injeção). 4 a 54 semanas após o tratamento, o paciente pode receber um segundo curso de tratamento. Protocolos clínicos específicos em relação à via de administração, excipientes, diluentes, dosagens, tempos, etc., podem ser determinados pelos médicos especializados.
[00180] Exemplos de condições médicas que podem ser tratadas de acordo com os métodos in vivo ou ex vivo de matar populações celulares selecionadas incluem malignidade de qualquer tipo de câncer, doenças autoimunes, rejeições de enxertos e infecções (virais, bacterianas ou parasitas).
[00181] A quantidade de um conjugado necessária para alcançar o
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171/310 efeito biológico desejado variará dependendo de vários fatores, incluindo as características químicas, a potência e a biodisponibilidade dos conjugados, o tipo de doença e as espécies para as quais o paciente pertence, o estado patológico do paciente, a via de administração, todos os fatores que determinam as quantidades de dose, entrega e regime a serem administrados. [00182] Em termos gerais, os conjugados através dos bis-ligantes desta invenção podem ser providos em uma solução tampão fisiológica aquosa contendo 0,1 a 10% p/v de conjugados para administração parentérica. As doses típicas variam de 1 pg/kg a 0,1 g/kg de peso corporal diariamente; semanalmente, quinzenalmente, a cada três semanas ou mensalmente, uma faixa de doses preferidas é de 0,01 mg/kg a 20 mg/kg de peso corporal semanalmente, quinzenalmente, a cada três semanas ou mensalmente, uma dose equivalente em um humano. A dosagem preferida do fármaco a ser administrado provavelmente dependerá de variáveis como o tipo e extensão da progressão da doença ou distúrbio, o estado geral de saúde do paciente em particular, a eficácia biológica relativa do composto selecionado, a formulação do composto, a via de administração (intravenosa, intramuscular ou outra), as propriedades farmacocinéticas dos conjugados pela via de entrega escolhida e a velocidade (bolus ou infusão contínua) e o horário das administrações (número de repetições em um determinado período de tempo). [00183] Os conjugados através dos ligantes da presente invenção também são capazes de serem administrados em formas de dose unitária, em que o termo dose unitária significa uma dose única que é capaz de ser administrada a um paciente e que pode ser facilmente manipulada e embalada, permanecendo como uma dose unitária fisicamente e quimicamente estável compreendendo o próprio conjugado ativo ou como uma composição farmaceuticamente aceitável, como descrito a seguir. Como tal, as doses totais diárias/semanais/quinzenais/mensais típicas variam de 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal. Como orientação geral, as doses unitárias para humanos variam
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172/310 de 1 mg a 3000 mg por dia ou por semana, por duas semanas (quinzenalmente), a cada três semanas ou por mês. Preferencialmente, a faixa de doses unitárias é de 1 a 500 mg, administradas uma a quatro vezes por mês, e ainda mais preferencialmente de 1 mg a 100 mg, uma vez por semana, ou uma vez a cada duas semanas, ou uma vez a cada três semanas. Os conjugados aqui providos podem ser formulados em composições farmacêuticas por mistura com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Tais composições de dose unitária podem ser preparadas para uso por administração oral, particularmente na forma de comprimidos, cápsulas simples ou cápsulas de gelatinosas moles; ou intranasal, particularmente na forma de pós, gotas nasais ou aerossóis; ou por via cutânea, por exemplo, topicamente em pomadas, cremes, loções, géis ou sprays, ou através de adesivos transdérmicos.
[00184] Em ainda outra modalidade, uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do conjugado de Fórmula (II) ou qualquer conjugado descrito através da presente patente pode ser administrada concomitantemente com outros agentes terapêuticos, tais como o agente quimioterapêutico, a radioterapia, agentes de imunoterapia, agentes de distúrbios autoimunes, agentes anti-infecciosos ou outros conjugados para tratamento sinergisticamente eficaz ou prevenção de um câncer, ou uma doença autoimune, ou uma doença infecciosa. Os agentes sinérgicos são preferencialmente selecionados a partir de um ou vários dos seguintes fármacos: Abatacepte (Orencia), Acetato de abiraterona (Zytiga®), Abraxane, Acetaminofeno hidrocodona, Adalimumabe, dimaleato de afatinibe (Gilotrif®), Alectinibe (Alecensa), Alemtuzumabe (Campath®), Alitretinoína (Panretin®), ado-trastuzumabe entansina (Kadcyla™), sais mistos de anfetamina (Anfetamina/dextroanfetamina ou Adderall XR), anastrozol (Arimidex®), Aripiprazol, Atazanavir, Atezolizumabe (Tecentriq, MPDL3280A), Atorvastatina, axitinibe (Inlyta®), AZD9291, belinostato
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173/310 (Beleodaq™), Bevacizumabe (Avastin®), Bortezomibe (PS-341; Velcade, Neomibe, Bortecad), Cabazitaxel (Jevtana®), Cabozantinibe (Cometriq™), bexaroteno (Targratin®), Blinatumomabe (Blincyto™), Bortezomibe (Velcade®), Bosutinibe (Bosulif®), brentuximabe vedotina (Adcetris®), Budesonida, Budesonida/formoterol, Buprenorfina, Capecitabina, carfilzomibe (Kyprolis®), Celecoxibe, ceritinibe (LDK378/Zykadia), Cetuximabe (Erbitux®), Ciclosporina, Cinacalcet, Crizotinibe (Xalkori®), Cobimetinibe (Cotellic), DabigatranA, dabrafenibe (Tafinlar®), Daratumumabe (Darzalex), Darbepoetina alfa, Darunavir, mesilato de imatinibe (Gleevec®), dasatinibe (Sprycel®), denileucina diftitox (Ontak®), Denosumabe (Xgeva®), Depakote, Dexametasona, Dexlansoprazol, Dexmetilfenidato, Dinutuximabe (Unituxin™), Doxiciclina, Duloxetina, Durvalumabe (MEDI4736), Elotuzumabe (Empliciti), Emtricitabina/Rilpivirina/Tenofovir disoproxil fumarato,
Emtricitbina/tenofovir/efavirenz, Enoxaparina, Enzalutamida (Xtandi®), Epoetina alfa, erlotinibe (Tarceva®), Esomeprazol, Eszopiclona, Etanercepte, Everolimus (Afinitor®), exemestano (Aromasin®), everolimus (Afinitor®), Ezetimiba, Ezetimiba/sinvastatina, Fenofibrato, Filgrastim, fingolimode, Propionato de fluticasona, Fluticasona/salmeterol, fulvestrante (Faslodex®), gefitinibe (Iressa®), Glatirâmer, acetato de gosserrelina (Zoladex), Icotinibe, Imatinibe (Gleevec), Ibritumomabe tiuxetana (Zevalin®), ibrutinibe (Imbruvica ™), idelalisibe (Zeladex), Insulina asparte, Insulina detemir, Insulina glargina, Insulina lispro, Interferon beta la, Interferon beta lb, lapatinibe (Tykerb®), Ipilimumabe (Yervoy®), Brometo de ipratrópio/salbutamol, Ixazomibe (Ninlaro), acetato de lanreotida (Somatuline® Depot), Lenaliomida (Revlimid®), Lenvatinibe (Lenvima™), letrozol (Femara®), Levotiroxina, Levotiroxina, Lidocaina, Linezolida, Liraglutida, Lisdexamfetamina, MEDI4736 (AstraZeneca, Celgene), Memantina, Metilfenidato, Metoprolol, Modafinil, Mometasona,
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Necitumumabe (Portrazza), Nilotinibe (Tasigna®), Niraparibe, Nivolumabe (Opdivo®), Ofatumumabe (Arzerra®), Obinutuzumabe (Gazyva™), Olaparibe (Lynparza™), Olmesartana, Olmesartana/hidroclorotiazida, Omalizumabe, ésteres etílicos de ácidos graxos ômega-3, Oseltamivir, Osimertinibe (ou mereletinibe, Tagrisso), Oxicodona, Palbociclibe (Ibrance®), Palivizumabe, panitumumabe (Vectibix®), panobinostate (Farydak®), Pembrolizumabe (Keytruda®), pemetrexede (Alimta), pertuzumabe (Perjeta™), vacina pneumocócica conjugada, Pomalidomida (Pomalyst®), Pregabalina, Propranolol, Quetiapina, Rabeprazol, cloreto de rádio 223 (Xofigo®), Raloxifeno, Raltegravir, Ramucirumabe (Cyramza®), Ranibiz®, Ranibiz®, Ranibiz®) Rituximabe (Rituxan®), Rivaroxaban, Ranibizumabe, regorafenibe (Stivarga®), Rituximabe (Rituxan®), RivaroxabanA, romidepsina (Istodax®), Rosuvastatina, fosfato de ruxolitinibe (Jakafi™), Salbutamol, Sevelâmer, Sildenafil, siltuximabe (Sylvant ™), Sitagliptina, Sitagliptina/metformina, Solifenacina, Sonidegibe (LDE225, Odomzo), Sorafenibe (Nexavar®), Sunitinibe (Sutent®), Tadalafil, tamoxifeno, Telaprevir, talazoparibe, temsirolimus (Torisel®), Tenofovir/emtricitabina, Gel de testosterona, Talidomida (Imunoprin, Talidex), Brometo de tiotrópio, toremifeno (Fareston®), trametinibe (Mekinist®), Trastuzumabe, Trabectedina (ecteinascidina 743, Yondelis), Trifluridina/tipiracil (Lonsurf, TAS-102), Tretinoina (Vesanoid®), Ustequinumabe, Valsartana, veliparibe, vandetanibe (Caprelsa®), Vemurafenibe (Zelboraf®), Venetoclax (Venclexta), vorinostate (Zolinza®), ziv-aflibercepte (Zaltrap®), Zostavax., e seus análogos, derivados, sais, veículos, diluentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, ou uma combinação acima dos mesmos.
[00185] Os fármacos/agentes citotóxicos utilizados para conjugação através de um ligante de ponte da presente patente podem ser quaisquer análogos e/ou derivados de fármacos/moléculas descritos na presente patente.
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Um especialista na técnica de fármacos/agentes citotóxicos entenderá prontamente que cada um dos fármacos/agentes citotóxicos aqui descritos pode ser modificado de tal maneira que o composto resultante ainda retenha a especificidade e/ou atividade do composto de partida. O especialista na técnica também entenderá que muitos desses compostos podem ser utilizados no lugar dos fármacos/agentes citotóxicos aqui descritos. Assim, os fármacos/agentes citotóxicos da presente invenção incluem análogos e derivados dos compostos aqui descritos.
[00186] Todas as referências citadas aqui e nos exemplos a seguir são expressamente incorporadas por referência em sua totalidade.
EXEMPLOS
[00187] A invenção é descrita adicionalmente nos exemplos a seguir, que não se destinam a limitar o escopo da invenção. As linhas celulares descritas nos exemplos a seguir foram mantidas em cultura de acordo com as condições especificadas pela American Type Culture Collection (ATCC) ou Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemanha (DMSZ) ou The Shanghai Cell Culture Institute of Chinese Acadmy of Science, a menos que especificado de outra forma. Os reagentes de cultura celular foram obtidos da Invitrogen Corp., a menos que especificado de outra forma. Todos os solventes anidros foram obtidos comercialmente e armazenados em garrafas Sure-seal sob nitrogênio. Todos os outros reagentes e solventes foram adquiridos como o mais alto grau disponível e utilizados sem purificação adicional. As separações por HPLC preparativa foram realizadas com Varain PreStar HPLC. Os espectros de RMN foram registrados no instrumento Varian Mercury 400 MHz. Os deslocamentos químicos (.delta) são relatados em partes por milhão (ppm) com referência ao tetrametilsilano a 0,00 e as constantes de acoplamento (J) são relatadas em Hz. Os dados espectrais de massa foram adquiridos em um espectro de massa Waters Xevo QTOF equipado com o módulo de separações
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Waters Acquity UPLC e o detector Acquity TUV.
Exemplo 1. Síntese de l,2-bis(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)hidrazina-l,2dicarboxilato de di-terc-butil.
o ?0C?0Co ^n-n^o
[00188] Ao hidrazina-l,2-dicarboxilato de di-terc-butil (8,01 g, 34,4 mmol) em DMF (150 ml) foi adicionado NaH (60% em óleo, 2,76 g, 68,8 mmol). Após agitação à TA por 30 min, foi adicionado 2-bromoacetato de terc-butil (14,01 g, 72,1 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, resfriada bruscamente com adição de metanol (3 ml), concentrada, diluída com EtOAc (100 ml) e água (100 ml), separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 50 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre MgSO4, filtradas, evaporadas e purificadas por cromatografia em coluna de SiO2 (EtOAc/Hexano 1:5 a 1:3) para prover o composto do título (12,98 g, 82% de rendimento) como um óleo incolor. MS ESI m/z calculado para C22H4iN20s [M+H]+ 461,28, encontrado 461,40.
Exemplo 2. Síntese do ácido 2,2'-(hidrazina-l,2-di-il)diacético.
HO
OH
[00189] 1,2-Bis(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)hidrazina-1,2-dicarboxilato de di-terc-butil (6,51 g, 14,14 mmol) em 1,4-dioxano (40 ml) foi adicionado HC1 (12 M, 10 ml). A mistura foi agitada por 30 min, diluída com dioxano (20 ml) e tolueno (40 ml), evaporada e coevaporada com dioxano (20 ml) e tolueno (40 ml) até a secura para prover o produto do título bruto para a próxima etapa sem produção adicional (2,15 g, 103% de rendimento, -93% puro). MS ESI m/z calculado para C4H9N2O4 [M+H]+ 149 ,05, encontrado 149,40.
Exemplo 3. Síntese do ácido 2,2'-(l,2-bis((benziloxi)carbonil)hidrazina-l,2di-il)diacético.
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Cbz Cbz
N
HO I)H
[00190] A uma solução de ácido 2,2'-(hidrazina-l,2-di-il)diacético (1,10 g, 7,43 mmol) na mistura de THF (200 ml) e NaH2PO4 (0,1 M, 250 ml, pH 8,0) foi adicionado carbonocloridato de benzil (5,01 g, 29,47 mmol) em 4 porções em 2 h. A mistura foi agitada por mais 6 h, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com H2O/CH3CN (1:9) contendo 1% de ácido fórmico para dar o composto do título (2,26 g, 73% de rendimento, -95% puro). MS ESI m/z calculado para C2oH2iN2Os [M+H]+ 417,12, encontrado 417,40.
Exemplo 4. Síntese de l,2-bis(2-cloro-2-oxoetil)hidrazina-l,2-dicarboxilato de dibenzil.
Cbz
N—N
Cbz .O cr
Cl
Ácido
[00191] Ácido 2,2'-( 1,2-bis((benziloxi)carbonil)hidrazina-1,2-diil)diacético (350 mg, 0,841 mmol) em dicloroetano (30 ml) foi adicionado (COC1)2 (905 mg, 7,13 mmol), seguido pela adição de 0,030 ml de DMF. Após agitação à TA por 2 h, a mistura foi diluída com tolueno, concentrada e coevaporada com dicloroetano (2 x 20 ml) e tolueno (2x15 ml) até a secura para prover o produto bruto do título (que não é estável) para a próxima etapa sem purificação adicional (365 mg, 96% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C2oH19C12N206 [M+H]+ 453,05, encontrado 453,50.
Exemplo 5. Síntese de l,2-bis(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)hidrazina-l,2dicarboxilato de di-terc-butil.
O Boc i II / X
Boc O ·
[00192] A uma suspensão de NaH (0,259 g, 6,48 mmol, 3,0 eq.) em DMF anidro (2 mL) à temperatura ambiente foi adicionado hidrazina-1,2dicarboxilato de di-terc-butil 0,50 g, 2,16 mmol, 1,0 eq.) em DMF anidro (8
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178/310 mL) em 10 minutos sob nitrogênio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos e depois resfriada a 0oC. Ao qual foi adicionado 2-bromoacetato de terc-butil (1,4 mL, 8,61 mmol, 4,0 eq.) gota a gota. A mistura resultante foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e a agitada durante a noite. Foi adicionada uma solução saturada de cloreto de amônio (100 mL). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 50 mL). A solução orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de SiO2 (10:1 hexanos/EtOAc) para dar o composto do título como um óleo incolor (0,94 g, 99,6% de rendimento). ESI MS m/z [M+Na]+ 483,4.
Exemplo 6. Síntese do composto ácido 2,2'-(hidrazina-l,2-di-il)diacético.
H H H s
[00193] A uma solução de l,2-bis(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)hidrazina1,2-dicarboxilato de di-terc-butil (0,94 g, 2,04 mmol) em DCM (4 mL) a 0°C foi adicionado TFA (4 mL). A reação foi agitada por 30 minutos e depois aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi concentrada, diluída com DCM e concentrada. Esta operação foi repetida por três vezes para dar um sólido branco. A trituração com DCM e um sólido branco foi coletada por filtração (0,232 g, 76,8% de rendimento). ESI MS m/z [M+H]+ 149,2.
Exemplo 7. Síntese do ácido 2,2'-(l,2-bis(2-cloroacetil)hidrazina-l,2-diil)diacético.
Cl O OH
Q N-N O
HO O Cl
[00194] A uma solução de ácido 2,2'-(hidrazina-l,2-di-il)diacético (0,232 g, 1,57 mmol, 1,0 eq.) em THF anidro (10 mL) a 0°C foi adicionado
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179/310 cloreto de 2-cloroacetil (0,38 mL, 4,70 mmol, 3,0 eq.) em 10 minutos. A reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite e concentrada. O resíduo foi coevaporado com THF por três vezes para dar um sólido branco (0,472 g, rendimento teórico). ESI MS m/z [M+H]+ 301,1. Exemplo 8. Síntese de 2,8-dioxo-l,5-oxazocano-5-carboxilato de terc-butil.
HOOC---Boc2O/THF HOOC____ P2O5_
HOOC^^NH H2O/NaOH * HOOC^^NBoc CH2cÍT o
[00195] A uma solução de ácido 3,3'-azanodi-ildipropanoico (10,00 g, 62,08 mmol) em NaOH 1,0 M (300 ml) a 4°C foi adicionado dicarbonato de di-terc-butil (22,10 g, 101,3 mmol) em 200 ml de THF em 1 h. Após a adição, a mistura foi mantida em agitação por 2 h a 4 °C. A mistura foi cuidadosamente acidificada a pH ~ 4 com H3PO4 0,2 M, concentrada a vácuo, extraída com CH2C12, seca sobre Na2SO4, evaporada e purificada com cromatografia flash de SiO2 eluída com AcOH/MeOH/CH2Cl2 (0,01:1:5) para prover ácido 3,3'- ((terc-butoxicarbonil)azanodi-il)dipropanoico (13,62 g, 84% de rendimento). ESI MS m/z C11H19NO6 [M+H] +, calculado 262,27, encontrado 262,40.
[00196] A uma solução de ácido 3,3'-((terc-butoxicarbonil)azanodiil)dipropanoico (8,0 g, 30,6 mmol) em CH2C12 (500 ml) a 0 °C foi adicionado pentóxido de fósforo (8,70 g, 61,30 mmol). A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h e depois à t.a. por 1 h, filtrada através da coluna curta de SiO2 e a coluna foi enxaguada com EtOAc/CH2Cl2 (1:6). O filtrado foi concentrado e triturado com EtOAc/hexano para prover o composto do título (5,64 g, 74% de rendimento). ESI MS m/z C11H17NO5 [M+H] +, calculado 244,11, encontrado 244,30.
Exemplo 9. Síntese de 3-((benziloxi)amino)propanoato de terc-butil.
o'N 2 xz í? . _ X/ 2
Figure BR112019020049A2_D0304
O‘ o 'N H
Figure BR112019020049A2_D0305
[00197]
Sal de cloridrato de O-benzil-hidroxilamina (10,0 g, 62,7
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180/310 mmol) em THF (100 ml) foi adicionado Et3N (15 ml) e acrilato de terc-butil (12,1 g, 94,5 mmol). A mistura foi submetida a refluxo durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/Hexano (1:4) para prover o composto do título 3 (13,08 g, 83% de rendimento). RMN 1H (CDC13) 7,49-7,25 (m, 5H), 4,75 (s, 2H), 3,20 (t, J=6,4Hz, 2H), 2,54 (t, J=6,4Hz, 2H), 1,49 (s, 9H); ESI MS m/z+ Ci4H2iNNaO3 (M+Na), calculado 274,15, encontrado 274,20.
Exemplo 10. Síntese de 3-(hidroxiamino)propanoato de terc-butil.
V 1L yx ζθκ Jx // -----> V JL yx OH
O N O X
Η H
[00198] 3-((benziloxi)amino)propanoato de terc-butil (13,0 g, 51,76 mmol) em metanol (100 ml) foi adicionado Pd/C (0,85 g, 10% Pd, 50% de umidade) em um vaso de hidrogenação. Após o sistema ter sido evacuado sob vácuo e colocado sob 2 atm de gás hidrogênio, a mistura reacional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A reação bruta foi passada através de uma pequena membrana de Celite enxaguando com etanol, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com MeOH/DCM (1: 10 - 1: 5) para prover o composto do título (7,25 g, 87% de rendimento). RMN 1H (CDC13) 3,22 (t, J=6,4Hz, 2H), 2,55 (t, J=6,4Hz, 2H), 1,49 (s, 9H); ESI MS m/z+ C7Hi5NNaO3 (M+Na), calculado 184,10, encontrado 184,30.
Exemplo 11. Síntese de 3-((tosiloxi)amino)propanoato de terc-butil.
X ZOH ____► V Ã yx OTs
Η H
[00199] 3-(Hidroxiamino)propanoato de terc-butil (5,10 g, 31,65 mmol) na mistura de DCM (50 ml) e piridina (20 ml) foi adicionado cloreto de tosilato (12,05 g, 63,42) a 4°C. Após adição, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/DCM (1:10 - 1:6) para prover o composto do título (8,58 g, 86% de rendimento). RMN 1H (CDC13) 7,81 (s, 2H), 7,46 (s, 2H),
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3,22 (t, J=6,4Hz, 2H), 2,55 (t, J=6,4Hz, 2H), 2,41 (s, 3H), 1,49 (s, 9H); ESI
MS m/z+ CuHziNNaOsS (M+Na), calculado 338,11, encontrado 338,30.
Exemplo 12. Síntese de 3,3'-(hidrazina-l,2-di-il)dipropanoato de di-terc-butil.
k / Ο θ \ ✓
Ν—Ν
Η Η
[00200] 3-aminopropanoato de terc-butil (3,05 g, 21,01 mmol) em THF (80 ml) foi adicionado 3-((tosiloxi)amino)propanoato de terc-butil (5,10 g, 16,18 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por lhe depois a 45 °C por 6 h. A mistura foi concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com CHSOH/DCM/EtsN (1:12:0,01 ~ 1:8:0,01) para prover o composto do título (2,89 g, 62% de rendimento). ESI MS m/z-i- Ci4H28N2NaO4 (M+Na), calculado 311,20, encontrado 311,40.
o
N — OH
Exemplo 13. Síntese de 3,3'-(l,2-bis(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-lil)propanoil)hidrazina-l,2-di-il)dipropanoato de di-terc-butil.
' 2 . '1 ' L
O, o
[00201] Ácido 3-maleido-propanoico (1,00 g, 5,91 mmol) em DCM (50 ml) foi adicionado dicloreto de oxalil (2,70 g, 21,25 mmol) e DMF (50 pL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, evaporada e coevaporada com DCM/tolueno para obter cloreto de ácido 3-maleidopropanóico bruto. Ao composto 3,3'-(hidrazina-l,2-di-il)dipropanoato de diterc-butil (0,51 g, 1,76 mmol) na mistura de DCM (35 ml) foi adicionado o cloreto de ácido 3-maleido-propanoico bruto. A mistura foi agitada durante a noite, evaporada, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/DCM (1:15 ~ 1:8) para prover o composto do título (738 mg, 71% de rendimento). ESI MS m/z-i- C28H38N4NaOio (M+Na), calculado 613,26, encontrado 613,40.
Exemplo 14. Síntese do ácido 3,3'-(l,2-bis(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH
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182/310 pirrol-1 -il)propanoil)-hidrazina-1,2-di-il)dipropanoico.
V J? θ 9 ° Q.
\/ O I O )r A -----► ° I o
X X/xlJL O Jj JI O /
() ()z
[00202] O composto 14 (700 mg, 1,18 mmol) em dioxano (4 ml) foi adicionado HC1 (cone. 1 ml). A mistura foi agitada por 30 min., diluída com EtOH (10 mL) e tolueno (10 mL), evaporada e coevaporada com EtOH (10 mL) e tolueno (10 mL) para pro ver o produto do título bruto (560 mg) para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI MS m/z- C20H21N4O10 (M-H), calculado 477,13, encontrado 477,20.
Exemplo 15. Síntese de Bis(2,5-dioxopirrolidin-l-il)-3,3’-(l,2-bis(3-(2,5dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il))propanoil)hidrazina-l,2-di-il)dipropanoato.
Figure BR112019020049A2_D0306
Figure BR112019020049A2_D0307
[00203] Ao composto bruto ácido 3,3’-(l,2-bis(3-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-lH-pirrol-l-il)propanoil)-hidrazina-l,2-di-il)dipropanoico (~ 560 mg, ~ 1,17 mmol) em DMA (8 ml) foi adicionado NHS (400 mg, 3,47 mmol) e EDC (1,01 g, 5,26 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, evaporada, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/DCM (1:12 ~ 1:7) para prover o composto do título (520 mg, 65% de rendimento em 2 etapas). ESI MS m/z+ C28H28N6NaOi4 (M+Na), calculado 695,17, encontrado 695,40.
Exemplo 16. Síntese de 3-(2-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
Figure BR112019020049A2_D0308
Figure BR112019020049A2_D0309
Na/THF
Figure BR112019020049A2_D0310
[00204] A 350 mL de THF anidro foram adicionados 80 mg (0,0025
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183/310 mol) de metal de sódio e trietilenoglicol 150,1 g, 1,00 mol) com agitação. Após a dissolução completa do sódio, foi adicionado acrilato de terc-butil (24 mL, 0,33 mol). A solução foi agitada durante 20 h à temperatura ambiente e neutralizada com 8 mL de HC1 1,0 Μ. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi suspenso em salmoura (250 mL) e extraído com acetato de etila (3 x 125 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL) e depois com água (100 mL), secas sobre sulfato de sódio e o solvente foi removido. O óleo incolor resultante foi seco a vácuo para dar 69,78 g (rendimento de 76%) do produto do título. RMN XH: 1,41 (s, 9H), 2,49 (t, 2H, 1=6,4 Hz), 3,59-3,72 (m, 14H). ESI MS m/z- C13H25O6 (M-H), calculado 277,17, encontrado 277,20.
Exemplo 17. Síntese de 3-(2-(2-(2-(tosiloxi)etoxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
Figure BR112019020049A2_D0311
[00205] Uma solução de 3-(2-(2-(2hidroxietoxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (10,0 g, 35,95 mmol) em acetonitrila (50,0 mL) foi tratada com piridina (20,0 mL). Uma solução de cloreto de tosil (7,12 g, 37,3 mmol) em 50 mL de acetonitrila foi adicionada gota a gota através de um funil de adição por 30 minutos. Após 5 h, a análise por TLC revelou que a reação estava completa. O cloridrato de piridina que se formou foi removido por filtração e o solvente foi removido. O resíduo foi purificado em silica gel eluindo com acetato de etila 20% em hexano até acetato de etila puro para dar 11,2 g (76% de rendimento) do composto do título. RMN XH: 1,40 (s, 9H), 2,40 (s, 3H), 2,45 (t, 2H, J=6,4 Hz), 3,52-3,68 (m, 14H), 4,11 (t, 2H, J=4,8 Hz), 7,30 (d, 2H, J=8,0 Hz), 7,75 (d, 2H, J=8,0 Hz); ESI MS m/z-ι- C20H33O8S (M+H), calculado 433,18, encontrado 433,30.
Exemplo 18. Síntese de 3-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)propanoato de tercbutil.
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184/310
ΡχΧ)
TsO\ .ο.
NaN3
DMF ν3·
O-U h
.ο.
mL de DMF foi adicionado 3-(2-(2-(2[00206] (tosiloxi)etoxi)etoxi)etoxi)-propanoato de terc-butil (4,0 g, 9,25 mmol) e azida de sódio (0,737 g, 11,3 mmol) com agitação. A reação foi aquecida a 80 °C. Após 4 h, a análise por TLC revelou que a reação estava completa. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente e resfriada bruscamente com água (25 mL). A camada aquosa foi separada e extraída em acetato de etila (3 x 35 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro, filtradas e o solvente foi removido a vácuo. O produto de azida bruto (2,24 g, 98% de rendimento, cerca de 93% puro por HPLC) foi utilizado para a próxima etapa sem purificação adicional. RMN ’H (CDCI3): 1,40 (s, 9H), 2,45 (t, 2H, J=6,4 Hz), 3,33 (t, 2H, 1=5,2 Hz), 3,53-3,66 (m, 12H). ESI MS m/z-i- C13H26N3O8 (M+H), calculado 304,18, encontrado
304,20.
Exemplo 19. Síntese do ácido 3-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)propanoico.
Figure BR112019020049A2_D0312
HClíl)
Dioxano
Figure BR112019020049A2_D0313
[00207] 3-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (2,20 g, 7,25 mmol) em 1,4-dioxano (40 ml) foi adicionado HC1 (12 M, 10 ml). A mistura foi agitada por 40 min, diluída com dioxano (20 ml) e tolueno (40 ml), evaporada e coevaporada com dioxano (20 ml) e tolueno (40 ml) até a secura para prover o produto do título bruto para a próxima etapa sem produção adicional (l,88g, 105% de rendimento, -92% puro por HPLC). MS ESI m/z calculado para C9H18N3O5 [M+H]+ 248,12, encontrado 248,40.
[00208] Exemplo 20. Síntese do éster terc-butílico de ácido 13-amino4,7,10-trioxadodecanoico e 13-amino-bis(éster terc-butílico de ácido 4,7,10trioxadodecanoico).
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Figure BR112019020049A2_D0314
[00209] O material de azida bruto de ácido 3-(2-(2-(2azidoetoxi)etoxi)etoxi)propanoico (5,0 g, ~ 14,84 mmol) foi dissolvido em etanol (80 mL) e foram adicionados 300 mg de Pd/C 10%. O sistema foi evacuado a vácuo e colocado sob 2 atm de gás hidrogênio através do reator de hidrogenação com agitação vigorosa. A reação foi então agitada durante a noite à temperatura ambiente e TLC mostrou que os materiais de partida desapareceram. A reação bruta foi passada através de uma pequena membrana de Celite enxaguando com etanol. O solvente foi removido e a amina foi purificada em silica gel usando uma mistura de metanol (de 5% a 15%) e trietilamina a 1% em cloreto de metileno como eluente para dar o éster butrlico de ácido 13-amino-4,7,10-trioxadodecanoico (1,83 g, 44% de rendimento, ESI MS m/z-i- C13H27NO5 (M+H), calculado 278,19, found 278,30) e 13-amino-bis(éster terc-butílico de ácido 4,7,10-trioxadodecanoico) (2,58 g, 32% de rendimento, ESI MS m/z-i- C26H52NO10 (M+H), calculado 538,35, encontrado 538,40).
Exemplo 21. Síntese de sal de cloridrato de ácido 3-(2-(2-(2aminoetoxi)etoxi)etoxi)propanoico.
Figure BR112019020049A2_D0315
[00210] Ao éster terc-butílico de ácido 13-amino-4,7,10trioxadodecanoico (0,80 g, 2,89 mmol) em 30 mL de dioxano foi 10 mL de HC1 (36%) com agitação. Após 0,5 h, a análise por TLC revelou que a reação estava completa, a mistura reacional foi evaporada e coevaporada com EtOH e EtOH/Tolueno para formar o produto do título em sal de cloridrato (> 90% puro, 0,640 g, 86% de rendimento) sem purificação adicional. ESI MS m/z+ C9H20NO5 (M+H), calculado 222,12, encontrado 222,20.
Exemplo 22. Sal de cloridrato de 13-amino-bis(ácido 4,7,10
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186/310 trioxadodecanoico.
Figure BR112019020049A2_D0316
[00211] Ao 13-amino-bis(éster terc-butílico de ácido 4,7,10trioxadodecanoico) (1,00 g, 1,85 mmol) em 30 mL de dioxano foi 10 mL de HC1 (36%) com agitação. Após 0,5 h, a análise por TLC revelou que a reação estava completa, a mistura reacional foi evaporada e coevaporada com EtOH e EtOH/Tolueno para formar o produto do título em sal de cloridrato (> 90% puro, 0,71 g, 91% de rendimento) sem purificação adicional. ESI MS m/z+ CisFLôNOio (M+H), calculado 426,22, encontrado 426,20.
Exemplo 23. Síntese de 3-(2-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
___O^^Q^^CO2 zBu
[00212] A uma solução de 2,2'-(etano-l,2-di-ilbis(oxi))dietanol (55,0 mL, 410,75 mmol, 3,0 eq.) em THF anidro (200 mL) foi adicionado sódio (0,1 g). A mistura foi agitada até Na desaparecer e depois foi adicionado gota a gota acrilato de terc-butil (20,0 mL, 137,79 mmol, 1,0 eq.) A mistura foi agitada durante a noite e depois resfriada bruscamente por solução de HC1 (20,0 mL, 1 N) a 0°C. O THF foi removido por evaporação rotativa, foi adicionada salmoura (300 mL) e a mistura resultante foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura (3 x 300 mL), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas para prover um óleo incolor (30,20 g, 79,0% de rendimento), que foi utilizado sem purificação adicional. MS ESI m/z calculado para CnH^Oô [M + H]+ 278,1729, encontrado 278,1730.
Exemplo 24. Síntese de 3-(2-(2-(2-(tosiloxi)etoxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
TsO.______CO/Bu
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187/310
[00213] A uma solução de 3-(2-(2-(2hidroxietoxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (30,20 g, 108,5 mmol, 1,0 eq.) e TsCl (41,37 g, 217,0 mmol, 2,0 eq.) em DCM anidro (220 mL) a 0°C foi adicionado TEA (30,0 mL, 217,0 mmol, 2,0 eq.). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e depois lavada com água (3 x 300 mL) e salmoura (300 mL), seca sobre NazSCU anidro, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de SiO2 (3:1 hexanos/EtOAc) para dar um óleo incolor (39,4 g, 84,0% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C20H33O8S [M + H]+ 433,1818, encontrado 433,2838.
Exemplo 25. Síntese de 3-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)propanoato de tercbutil.
N3 ___O___)2'Bu
[00214] A uma solução de 3-(2-(2-(2-(tosiloxi)etoxi)etoxi)etoxi) propanoato de terc-butil (39,4 g, 91,1 mmol, 1,0 eq.) em DMF anidro (100 mL) foi adicionado NaN3 ( 20,67 g, 316,6 mmol, 3,5 eq.). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Agua (500 mL) foi adicionada e extraída com EtOAc (3 x 300 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (3x900 mL) e salmoura (900 mL), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de SiO2 (5:1 hexanos/EtOAc) para dar um óleo amarelo claro (23,8 g, 85,53% de rendimento). MS ESI m/z calculado para Ci3H25O3N5Na [M + Na]+ 326,2, encontrado 326,2.
Exemplo 26. Síntese de 3-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etoxi)propanoato de tercbutil.
Η2Νχ^θχχ___^OxX^oxXxCO2 zBu
[00215] Níquel Raney (7,5 g, suspenso em água) foi lavado com água (três vezes) e álcool isopropílico (três vezes) e misturado com 3-(2-(2-(2-(2azidoetoxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (5,0 g, 16,5 mmol) em álcool isopropílico. A mistura foi agitada sob um balão de H2 à t.a. por 16 h e depois
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188/310 filtrada em uma membrana de Celite, com lavagem da membrana com álcool isopropílico. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna (5-25% de MeOH / DCM) para dar um óleo amarelo claro (2,60 g, 57% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C13H28 NO5 [M+H]+ 279,19; encontrado 279,19.
Exemplo 27. Síntese de 2-(2-(dibenzilamino)etoxi)etanol
Bn2N^—°^^OH
[00216] 2-(2-Aminoetoxi)etanol (21,00 g, 200 mmol, 1,0 eq.) e K2CO3 (83,00 g, 600 mmol, 3,0 eq.) em acetonitrila (350 mL) foi adicionado BnBr (57,0 mL, 480 mmol, 2,4 eq.). A mistura foi submetida a refluxo durante a noite. Agua (1 mL) foi adicionada e extraída com EtOAc (3 x 300 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1000 mL), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de SiO2 (4:1 hexanos/EtOAc) para dar um óleo incolor (50,97 g, 89,2% de rendimento). MS ESI m/z calculado para Ci8H23NO2Na [M + Na]+ 309,1729, encontrado 309,1967.
Exemplo 28. Síntese de 3-(2-(2-(dibenzilamino)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
„ ______CO/Bu
[00217] A uma mistura de 2-(2-(dibenzilamino)etoxi)etanol (47,17 g, 165,3 mmol, 1,0 eq.), acrilato de terc-butil (72,0 mL, 495,9 mmol, 3,0 eq.) e /2-BU4NI (6,10 g, 16,53 mmol, 0,1 eq.) em DCM (560 mL) foi adicionada solução de hidróxido de sódio (300 mL, 50%). A mistura foi agitada durante a noite. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com água (3x900 mL) e salmoura (300 mL), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de SiO2 (7:1 hexanos/EtOAc) para dar um óleo incolor (61,08 g, 89,4% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C25H36NO4 [M + H]+ 414,2566, encontrado 414,2384.
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189/310
Exemplo 29. Síntese de 3-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
h2n O 2
[00218] A uma solução de 3-(2-(2(dibenzilamino)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (20,00 g, 48,36 mmol, 1,0 eq.) em THF (30 mL) e MeOH (60 mL) foi adicionado Pd/C (2,00 g, 10% em peso, 50% úmido) em uma garrafa de hidrogenação. A mistura foi agitada a pressão de 1 átomo de H2 durante a noite, filtrada através de Celite (auxiliar de filtração), e o filtrado foi concentrado para prover um óleo incolor (10,58 g, 93,8% de rendimento). MS ESI m/z calculado para CnH^NCU [M + H]+ 234,1627, encontrado 234,1810.
Exemplo 30. Síntese de 3-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
_______O,___z^qxXxCO2 ,Bu
[00219] A uma solução de 2,2'-oxidietanol (19,7 mL, 206,7 mmol, 3,0 eq.) em THF anidro (100 mL) foi adicionado sódio (0,1 g). A mistura foi agitada até Na desaparecer e depois foi adicionado gota a gota acrilato de terc-butil (10,0 mL, 68,9 mmol, 1,0 eq.) A mistura foi agitada durante a noite e foi adicionada salmoura (200 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura (3 x 300 mL), secas sobre Na2SÜ4 anidro, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de SiO2 (1:1 hexanos/EtOAc) para dar um óleo incolor (8,10 g, 49,4% de rendimento). MS ESI m/z calculado para CnH23O5 [M +H]+ 235,1467, encontrado 235,1667.
Exemplo 31. Síntese de 3-(2-(2-(tosiloxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
___>CO2TJu
[00220] A uma solução de 3-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (6,24 g, 26,63 mmol, 1,0 eq.) e TsCl (10,15 g, 53,27 mmol, 2,0 eq.) em DCM anidro (50 mL ) a 0°C foi adicionada piridina (4,3 mL, 53,27 mmol, 2,0 eq.). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e depois lavada com água (100 mL) e a camada aquosa foi extraída com DCM (3 x 50
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190/310 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (300 mL), secas sobre NazSCU anidro, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de S1O2 (5:1 hexanos/EtOAc) para dar um óleo incolor (6,33 g, 61,3% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C18H27O7S [M + H]+ 389,1556, encontrado 389,2809.
Exemplo 32. Síntese de 3-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
x. _____OCO?Bu o 2
[00221] A uma solução de 3-(2-(2-(tosiloxi)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (5,80 g, 14,93 mmol, 1,0 eq.) em DMF anidro (20 mL) foi adicionado (5,02 g, 77,22 mmol, 5,0 eq.). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Agua (120 mL) foi adicionada e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (3x900 mL) e salmoura (150 mL), secas sobre Na3SO4 anidro, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de S1O2 (5:1 hexanos/EtOAc) para dar um óleo incolor (3,73 g, 69,6% de rendimento). MS ESI m/z calculado para CnH22O3N4Na[M + H]+ 260,1532, encontrado 260,2259.
Exemplo 33. Síntese de 3-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)propanoato de terc-butil.
H2n^0—o—CO:'b
[00222] O 3-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (0,18 g,
0,69 mmol) foi dissolvido em MeOH (3,0 mL, com 60 pL de HC1 concentrado) e hidrogenado com Pd/C (10% em peso, 20 mg sob um balão de H2 por 30 min. O catalisador foi filtrado através de uma membrana de Celite, com lavagem da membrana com MeOH. O filtrado foi concentrado para dar um óleo incolor (0,15 g, 93% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C11H24NO4 [M+H]+ 234,16; encontrado 234,14.
Exemplo 34. Síntese do ácido 3-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanoico.
x. ______CO2h
N< O 2
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191/310
[00223] O 3-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (2,51 g, 9,68 mmol) dissolvido em 1,4-dioxano (30 mL) foi tratado com 10 ml de HC1 (cone.) à t.a. A mistura foi agitada durante 35 min, diluída com EtOH (30 ml) e tolueno (30 ml) e concentrada a vácuo. A mistura bruta foi purificada em silica gel usando uma mistura de metanol (de 5% a 10%) e ácido fórmico a 1% em cloreto de metileno como eluente para dar o composto do título (1,63 g, 83% de rendimento), ESI MS m/z C7H12N3O4 [M-H]’, calculado 202,06, encontrado 202,30.
Exemplo 35. Síntese de 3-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanoato de 2,5dioxopirrolidin-1 -il.
Figure BR112019020049A2_D0317
O
[00224] Ao ácido 3-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanoico (1,60 g, 7,87 mmol) em 30 mL de diclorometano foi adicionado NHS (1,08 g, 9,39 mmol) e EDC (3,60 g, 18,75 mmol) com agitação. Após 8 h, a análise por TLC revelou que a reação estava completa, a mistura reacional foi concentrada e purificada em silica gel usando uma mistura de acetato de etila (de 5% a 10%) em cloreto de metileno como eluente para dar o composto do título (1,93 g, 82% de rendimento). ESI MS m/z C11H17N4O6 [M+H]+, calculado 301,11, encontrado 301,20.
Exemplo 36. Síntese de 3-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)etoxi)propanoato de 2,5 -dioxopirrolidin-1 -il.
Figure BR112019020049A2_D0318
[00225] Ao ácido 3-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)propanoico (4,50 g, 18,21 mmol) em 80 mL de diclorometano foi adicionado NHS (3,0 g, 26,08 mmol) e EDC (7,60 g, 39,58 mmol) com agitação. Após 8 h, a análise por TLC revelou que a reação estava completa, a mistura reacional foi
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192/310 concentrada e purificada em silica gel usando uma mistura de acetato de etila (de 5% a 10%) em cloreto de metileno como eluente para dar o composto do título (5,38 g, 86% de rendimento). ESI MS m/z C13H20N4O7 [M+H]+, calculado 345,13, encontrado 345,30.
Exemplo 37. Síntese de ácido (14S,17S)-l-azido-17-(2-(terc-butoxi)-2oxoetil)-14-(4-((terc-butoxicarbonil)-amino)butil)-12,15-dioxo-3,6,9-trioxa13,16-diazaoctadecan-18-oico
Figure BR112019020049A2_D0319
[00226] A uma solução de ácido (S)-2-((S)-2-amino-6-((tercbutoxicarbonil)amino)hexanamido)-4-(terc-butoxi)-4-oxobutanoico (2,81 g, 6,73 mmol) na mistura de DMA (70 ml) e NaH2PO4 0,1 M (50 ml, pH 7,5) foi adicionado 3-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)-etoxi)propanoato de 2,5dioxopirrolidin-l-il (3,50 g, 10,17). A mistura foi agitada por 4 h, evaporada a vácuo, purificada sobre silica gel usando uma mistura de metanol (de 5% a 15%) em cloreto de metileno contendo 0,5% de ácido acético como eluente para dar o composto do título (3,35 g, 77% de rendimento). ESI MS m/z CigHsiNôOn [M+H]+, calculado 647,35, encontrado 647,80.
Exemplo 38. Síntese de l-azido-14-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)butil)-17((4-(hidroximetil)fenil)carbamoil)-12,15-dioxo-3,6,9-trioxa-13,16diazanonadecan-19-oato de (14S,17S)-terc-butil
Figure BR112019020049A2_D0320
[00227] Ácido (14S,17S)-1 -azido-17-(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)-14-(4((terc-butoxicarbonil)-amino)butil)-12,15-dioxo-3,6,9-trioxa-13,16diazaoctadecan-18-oico (3,30 g, 5,10 mmol) e (4-aminofenil)metanol (0,75 g, 6,09) em DMA (25 ml) foi adicionado EDC (2,30 g, 11,97 mmol). A mistura
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193/310 foi agitada durante a noite, evaporada a vácuo, purificada sobre silica gel usando uma mistura de metanol (de 5% a 8%) em cloreto de metileno para dar o composto do título (3,18 g, 83% de m/z C35H58N70ii [M+H]+, calculado 752,41, contendo como eluente rendimento). ESI MS encontrado 752,85.
Exemplo 39. Síntese de l-amino-14-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)butil)-17((4-(hidroximetil)fenil)carbamoil)-12,15-dioxo-3,6,9-trioxa-13,16diazanonadecan-19-oato de (14S,17S)-terc-butil ο z2X^NHBoc
H = O
CCVBu ο^νη2
HN
HO
Figure BR112019020049A2_D0321
A uma solução de
-azido-14-(4-((terc[00228] butoxicarbonil)amino)butil)-17-((4-(hidroximetil)fenil)carbamoil)-12,15dioxo-3,6,9-trioxa-13,16-diazanonadecan-19-oato de (14S, 17S)-terc-butil (1,50 g, 1,99 mmol) em THF (35 mL) foi adicionado Pd/C (200 mg, 10% Pd, 50% de umidade) em uma garrafa de hidrogenação. A mistura foi agitada a pressão de 1 átomo de H2 durante a noite, filtrada através de Celite (auxiliar de filtração), e o filtrado foi concentrado para prover o composto do título (1,43 g, 99% de rendimento) que foi utilizado imediatamente na etapa seguinte sem purificação adicional. ESI MS m/z C35H60N5O11 [M+H]+, calculado 726,42, encontrado 726,70.
Exemplo 40. Síntese de ácido dioxa-3,6-diazapentadecan-1 -oico (S)-15-azido-5-isopropil-4,7-dioxo-10,13n3()'
T Η θ
A
Η δ °
[00229] A uma solução de ácido (S)-2-(2-amino-3metilbutanamido)acético (Val-Gly) (1,01 g, 5,80 mmol) na mistura de DMA (50 ml) e NaH2PO4 0,1 M (50 ml, pH 7,5) foi adicionado 3-(2-(2azidoetoxi)etoxi)propanoato de 2,5-dioxopirrolidin-l-il (1,90 g, 6,33). A
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194/310 mistura foi agitada por 4 h, evaporada a vácuo, purificada sobre silica gel usando uma mistura de metanol (de 5% a 15%) em cloreto de metileno contendo 0,5% de ácido acético como eluente para dar o composto do título (1,52 g, 73% de rendimento). ESI MS m/z C14H26N5O6 [M+H]+, calculado 360,18, encontrado 360,40.
Exemplo 41. Síntese de 15-azido-5-isopropil-4,7-dioxo-10,13-dioxa-3,6diazapentadecan-l-oato de (S)-2,5-dioxopirrolidin-l-il
Figure BR112019020049A2_D0322
[00230] A uma solução de ácido (S)-15-azido-5-isopropil-4,7-dioxo10,13-dioxa-3,6-diazapentadecan-l-oico (1,50 g, 4,17 mmol) em 40 mL de diclorometano foram adicionados NHS (0,88 g, 7,65 mmol) e EDC (2,60 g, 13,54 mmol) com agitação. Após 8 h, a análise por TLC revelou que a reação estava completa, a mistura reacional foi concentrada e purificada em silica gel usando uma mistura de acetato de etila (de 5% a 20%) em cloreto de metileno como eluente para dar o composto do título (1,48 g, 78% de rendimento). ESI MS m/z CisHiçNôOs [M+H]+, calculado 457,20, encontrado 457,50.
Exemplo 42. Síntese do ácido 4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanoico.
CbzHNx^\xCO2H
[00231] Uma solução de ácido 4-aminobutírico (7,5 g, 75 mmol) e NaOH (6 g, 150 mmol) em H2O (40 mL) foi resfriada a 0°C e tratada com uma solução de CbzCl (16,1 g, 95 mmol) em THF (32 ml) gota a gota. Após 1 h, a reação foi deixada aquecendo até a t.a. e foi agitada por 3 h. O THF foi removido a vácuo, o pH da solução aquosa foi ajustado para 1,5 por adição de HC1 6N. Extraída com acetato de etila, e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca e concentrada para dar o composto do título (16,4 g, 92% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C12H16NO5 [M+H]+ 238,10, encontrado 238,08.
Exemplo 43. Síntese de 4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanoato de terc-butil.
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195/310
CbzHN^^^CO/Bu
[00232] DMAP (0,8 g, 6,56 mmol) e DCC (17,1 g, 83 mmol) foram adicionados a uma solução de ácido 4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanoico (16,4 g, 69,2 mmol) e t-BuOH (15,4 g 208 mmol) em DCM (100 mL). Após agitação à t.a. durante a noite, a reação foi filtrada e o filtrado concentrado. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila e lavado com HC1 IN, solução salina e seco sobre Na2SO4. A concentração e purificação por cromatografia em coluna (10 a 50% de EtOAc/hexanos) produziu o composto do título (7,5 g, 37% de rendimento). MS ESI m/z calculado para Ci6H23NO4Na [M+Na]+ 316,16, encontrado 316,13.
Exemplo 44. Síntese de 4-aminobutanoato de terc-butil.
[00233] O 4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanoato de terc-butil (560 mg, 1,91 mmol) foi dissolvido em MeOH (50 mL) e misturado com catalisador Pd/C (10% em peso, 100 mg) e depois hidrogenado (1 atm) à temperatura ambiente por 3 h. O catalisador foi removido por filtração e todos os voláteis foram removidos a vácuo para prover o composto do título (272 mg ~ 90% de rendimento). MS ESI m/z calculado para CsHisNCE [M+H]+ 160,13, encontrado 160,13.
Exemplo 45. Síntese de 3,3'-(benzilazanodi-il)dipropanoato de di-terc-butil.
o o /BuOxW^^Nx^^UsOíBu
Bn
[00234] Uma mistura de fenilmetanamina (2,0 mL, 18,29 mmol, 1,0 eq) e acrilato de terc-butil (13,3 mL, 91,46 mmol, 5,0 eq) foi submetida a refluxo a 80° C durante a noite e depois concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de SiO2 (20:1 hexanos/EtOAc) para dar o composto do título como um óleo incolor (5,10 g, 77% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C21H34NO4 [M+H]+ 364,2, encontrado 364,2. RMN Ή (400 MHz, CDC13) δ 7,38 - 7,21 (m, 5H), 3,58 (s, 2H), 2,76 (t, J =
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196/310
7,0 Hz, 4Η), 2,38 (t, J= 7,0 Hz, 4H), 1,43 (s, 17H).
Exemplo 46. Síntese de 3,3'-azanodi-ildipropanoato de di-terc-butil.
o o 'Ν' Η
[00235] A uma solução de 3,3'-(benzilazanodi-il)dipropanoato de diterc-butil (1,37 g, 3,77 mmol, 1,0 equiv) em MeOH (10 mL) foi adicionado Pd/C (0,20 g, 10% Pd/C, 50 % de umidade) em uma garrafa de hidrogenação. A mistura foi agitada durante a noite sob atmosfera de H2 e depois filtrada através de uma membrana de Celite. O filtrado foi concentrado para dar o composto do título como um óleo incolor (1,22 g, 89% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C14H28NO4 [M+H]+ 274,19, encontrado 274,20.
Exemplo 47. Síntese de 4-(2-(((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)butanoato de terc-butil.
Figure BR112019020049A2_D0323
[00236] A uma solução de 4-aminobutanoato de terc-butil (1,00 g, 6,28 mmol, 1,0 eq.) e Z-L-alanina (2,10 g, 9,42 mmol, 1,5 eq.) em DCM anidro (50 mL) a 0°C foram adicionados HATU (3,10 g, 8,164 mmol, 1,3 eq.) e TEA (2,6 mL, 18,8 mmol, 3,0 eq.). A reação foi agitada a 0°C por 10 min., e depois aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi diluída com DCM e lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de SiO2 (10:3 éter de petróleo/acetato de etila) para dar o composto do título como um óleo incolor (1,39 g, 61% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para Ciç^NzOsNa [M+H]+ 387,2, encontrado 387,2.
Exemplo 48. Síntese de 4-(2-aminopropanamido)butanoato de terc-butil.
O nh2 'N H
Figure BR112019020049A2_D0324
'BuO,
[00237] uma solução de
4-(2Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 218/626
197/310 (((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)butanoato de terc-butil (1,39 g, 3,808 mmol, 1,0 eq.) em MeOH (12 mL) foi adicionado Pd/C (0,20 g, 10% em peso, 10% de umidade) em uma garrafa de hidrogenação. A mistura foi agitada durante 2 h e depois filtrada através de Celite (auxiliar de filtração), concentrada para dar o composto do título como um óleo amarelo claro (0,838 g, 95% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C11H23N2O3 [M+H]+ 231,16, encontrado 231,15.
Exemplo 49. Síntese do ácido 3-(2-(2-(dibenzilamino)etoxi)etoxi)propanoico.
ΗΟ^^^Ο^^θ^^ΝΒη2
O
[00238] A uma solução de 3-(2-(2(dibenzilamino)etoxi)etoxi)propanoato de terc-butil (2,3 g, 5,59 mmol, 1,0 eq) em DCM (10 mL) à temperatura ambiente foi adicionado TFA (5 mL). Após agitação durante 90 minutos, a mistura reacional foi diluída com tolueno anidro e concentrada, esta operação foi repetida três vezes para dar o composto do título como um óleo amarelo claro (2,0 g, rendimento teórico), que foi usado diretamente na próxima etapa. ESI MS m/z calculado para C2iH28NO4 [M+H]+ 358,19, encontrado 358,19.
Exemplo 50. Síntese de 3-(2-(2-(dibenzilamino)etoxi)etoxi)-propanoato de perfluorofenil.
CôFgO^x^O___ζχθχχχΝΒη2
O
[00239] A uma solução de ácido 3-(2-(2(dibenzilamino)etoxi)etoxi)propanoico (2,00 g, 5,59 mmol, 1,0 eq.) em DCM anidro (30 mL) a 0°C foi adicionado DIPEA até o pH ficar neutro e, em seguida, foram adicionados PFP (1,54 g, 8,38 mmol, 1,5 eq.) e DIC (1,04 mL, 6,70 mmol, 1,2 eq.). Após 10 min., a reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi filtrada, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de SiO2 (15:1 éter de petróleo/acetato de etila) para dar o composto do título como um óleo incolor (2,10 g, 72% de
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198/310 rendimento). ESI MS m/z: calculado para C27H27F5NO4 [M+H]+ 524,2, encontrado 524,2.
Exemplo 51. Síntese de 2-benzil-13-metil-ll,14-dioxo-l-fenil-5,8-dioxa2,12,15-triazanonadecan-19-oato de terc-butil.
O ..
Figure BR112019020049A2_D0325
[00240] A uma solução de 4-(2-aminopropanamido)butanoato de tercbutil (0,736 g, 3,2 mmol, 1,0 eq.) e 3-(2-(2(dibenzilamino)etoxi)etoxi)propanoato de perfluorofenil (2,01 g, 3,84 mmol), 1,2 eq.) em DMA anidro (20 mL) a 0°C foi adicionado DIPEA (1,7 mL, 9,6 mmol, 3,0 eq.). Após agitação a 0°C por 10 min., a reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. Adicionou-se água (100 mL) e a mistura foi extraída com EtOAc (3x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (3 x 200 mL) e salmoura (200 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de SiO2 (25:2 DCM/MeOH) para dar o composto do título como um incolor óleo (1,46 g, 80% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C32H48N3O6 [M+H]+ 570,34, encontrado 570,33.
Exemplo 52. Síntese do ácido 2-benzil-13-metil-ll,14-dioxo-l-fenil-5,8dioxa-2,12,15 -triazanonadecan-19-oico.
Figure BR112019020049A2_D0326
[00241] A uma solução de 2-benzil-13-metil-ll,14-dioxo-l-fenil-5,8dioxa-2,12,15-triazanonadecan-19-oato de terc-butil (0,057 g, 0,101 mmol, 1,0 eq) em DCM (3 mL) à temperatura ambiente foi adicionado TFA (1 mL) e agitado por 40 min. A reação foi diluída com tolueno anidro e depois concentrada. Esta operação foi repetida três vezes para dar o composto do título como um óleo incolor (0,052 g, rendimento teórico), o qual foi utilizado diretamente na próxima etapa. ESI MS m/z: calculado para C28H4oN306
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199/310
[M+H]+ 514,28, encontrado 514,28.
Exemplo 53. Síntese do ácido 4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanoico
CbzHN^^CO2H
[00242] Uma solução de ácido 4-aminobutírico (7,5 g, 75 mmol) e NaOH (6 g, 150 mmol) em H2O (40 mL) foi resfriada a 0°C e tratada com uma solução de CbzCl (16,1 g, 95 mmol) em THF (32 ml) gota a gota. Após 1 h, a reação foi deixada aquecendo até a t.a. e foi agitada por 3 h. O THF foi removido a vácuo, o pH da solução aquosa foi ajustado para 1,5 por adição de HC1 6N. Extraída com acetato de etila, e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca e concentrada para dar o composto do título (16,4 g, 92% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C12H16NO5 [M+H]+238,10, encontrado 238,08.
Exemplo 54. Síntese de 4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanoato de terc-butil.
CbzHN^^^CO2'Bu
[00243] DMAP (0,8 g, 6,56 mmol) e DCC (17,1 g, 83 mmol) foram adicionados a uma solução de ácido 4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanoico (16,4 g, 69,2 mmol) e t-BuOH (15,4 g 208 mmol) em DCM (100 mL). Após agitação à t.a. durante a noite, a reação foi filtrada e o filtrado concentrado. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila e lavado com HC1 IN, solução salina e seco sobre NazSCU. A concentração e purificação por cromatografia em coluna (10 a 50% de EtOAc/hexanos) produziu o composto do título (7,5 g, 37% de rendimento). MS ESI m/z calculado para CiôHzsNCUNa [M+Na]+316,16, encontrado 316,13.
Exemplo 55. Síntese de 4-aminobutanoato de terc-butil.
I^N^^CO/Bu
[00244] O 4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanoato de terc-butil (560 mg, 1,91 mmol) foi dissolvido em MeOH (50 mL) e misturado com catalisador Pd/C (10% em peso, 100 mg) e depois hidrogenado (1 atm) à temperatura ambiente por 3 h. O catalisador foi removido por filtração e todos
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200/310 os voláteis foram removidos a vácuo para prover o composto do título (272 mg ~ 90% de rendimento). MS ESI m/z calculado para CsHisNCE [M+H]+ 160,13, encontrado 160,13.
Exemplo 56.
(((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)acetato de terc-butil.
Síntese de
2-(2NHCbz
Figure BR112019020049A2_D0327
OH < if NH2 1 O
HOBt/EDC
DIPEA/DCM
Figure BR112019020049A2_D0328
NHCbz
O H
Ácido
2-(((benziloxi)carbonil)amino)propanoico (0,84 g, 5
2-aminoacetato de terc-butil (0,66 g, 5 mmol), HOBt (0,68 g, 5 EDC (1,44 g, 7,5 mmol) foram dissolvidos em DCM (20 mL),
[00245] mmol), mmol), seguido pela adição de DIPEA (1,7 mL, 10 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, lavada com H2O (100 mL) e a camada aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre MgSCU, filtradas, evaporadas sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado na coluna de SiO2 para dar o produto do título 1 (0,87 g, 52%). ESI: m/z: calculado para Ci7H25N2O5 [M+H]+: 337,17, encontrado 337,17.
Exemplo 57. Síntese do ácido 2-(2(((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)acético.
Figure BR112019020049A2_D0329
[00246] Dissolveu-se
2-(2(((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)acetato de terc-butil (0,25 g, 0,74 mmol) em DCM (30 ml), seguido de adição de TFA (10 ml). A mistura foi agitada à TA durante a noite, concentrada para dar o composto do título utilizado para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para CnHnbEOs [M+H]+: 281,11, encontrado 281,60.
Exemplo 58. Síntese de ácido 2,2-dipropiolamidoacético.
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201/310 θ Η θ —Νν V θ > Η
Η
Ácido 2,2-diaminoacético (2,0 g, 22,2 mmol) na mistura de foi adicionado
A mistura foi
[00247]
EtOH (15 ml) e tampão NaH2PO4 50 mM pH 7,5 (25 ml) propiolato de 2,5-dioxopirrolidin-l-il (9,0 g. 53,8 mmol).
agitada durante 8 h, concentrada, acidificada a pH 3,0 com HC1 0,1 M, extraída com EtOAc (3 x 30 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas e purificadas na coluna de SiO2 eluídas com MeOH/CH2Cl2 (1:10 a 1:6) para prover o composto do título (3,27 g, 76% de rendimento). RMN 1H (CDC13) 11,8 (br, 1H), 8,12 (d, 2H), 6,66 (m, 1H), 2,66 (s, 2H). ESI MS m/z: calculado para C8H6N2O4 [M+H]+ 195,03, encontrado 195,20.
Exemplo 59. Síntese de 2,2-dipropiolamidoacetato de perfluorofenil.
jLsj o f r =<o NvA n-F Η / θ Aa _χΑ-Ν /1 — Η I
[00248] Ácido 2,2-dipropiolamidoacético (2,01 g, 10,31 mmol), pentafluorofenol (2,08 g, 11,30 mmol), DIPEA (1,00 ml, 5,73 mmol) e EDC (4,01 g, 20,88 mmol) em CH2C12 (100 ml) foram agitados à TA durante a noite, concentrados e purificados na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/CH2Cl2 (1:15 a 1:8) para prover o composto do título (3,08 g, 83% de rendimento). RMN 1H (CDC13) 8,10 (d, 2H), 6,61 (m, 1H), 2,67 (s, 2H). ESI MS m/z: calculado para CuHóFsN^ [M+H]+ 361,02, encontrado 361,20. Exemplo 60. Síntese do ácido (S)-2-((S)-2-(2,2dipropiolamidoacetamido)propanamido)-propanoico.
H o . .. o ~^Χ H 6 =
II
Ácido (S)-2-((S)-2-aminopropanamido)propanoico (422) (1,10
[00249]
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202/310 g, 6,87 mmol) na mistura de DMA (18 ml) e tampão NaH2PO4 50 mM pH 7,5 (30 ml) foi adicionado 2,2-dipropiolamidoacetato de perfluorofenil (3,00 g, 8,33 mmol). A mistura foi agitada durante 14 h, concentrada, acidificada a pH 3,0 com HC1 0,1 M, extraída com EtOAc (3 x 40 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas e purificadas na coluna de SiO2 eluída com MeOH/CH2Cl2 (1:10 a 1:5) para prover o composto do título (1,80 g, 78% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C14H17N4O6 [M+H]+ 337,11, encontrado 337,30.
Exemplo 61. Síntese de 2-((S)-2-(2,2-dipropiolamidoacetamido)propanamido)propanoato de (S)-2,5-dioxopirrolidin-l-il
Figure BR112019020049A2_D0330
[00250] Ácido (S)-2-((S)-2-(2,2dipropiolamidoacetamido)propanamido)-propanoico (1,01 g, 3,00 mmol), NHS (0,41g, 3,56 mmol), DIPEA (0,40 ml, 2,29 mmol) e EDC (1,51 g, 7,86 mmol) em CH2C12 (50 ml) foram agitados à TA durante a noite, concentrados e purificados na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/CH2Cl2 (1:15 a 1:7) para prover o composto do título (1,05 g, 81% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para CisH^NsOs [M+H]+ 434,12, encontrado 434,40.
Exemplo 62. Síntese de 14,17-dioxo-4,7,10,21,24,27-hexaoxa-13,18diazatriacont-15-ina-l,30-dioato de di-terc-butil.
Figure BR112019020049A2_D0331
[00251] O ácido acetilenodicarboxílico (0,35 g, 3,09 mmol, 1,0 eq.) foi dissolvido em NMP (10 mL) e resfriado a 0°C, ao qual o composto 3-(2-(2(2-(2-aminoetoxi)etoxi)-etoxi)propanoato de terc-butil (2,06 g, 7,43 mmol, 2,4 eq.) foi adicionado, seguido por DMTMM (2,39 g, 8,65 mmol, 2,8 eq.) em porções. A reação foi agitada a 0°C por 6 h e depois diluída com acetato de
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203/310 etila e lavada com água e salmoura. A solução orgânica foi concentrada e triturada com um solvente de mistura de acetato de etila e éter de petróleo. O sólido foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna (80-90% EA/PE) para dar um óleo amarelo claro (2,26 g, >100% de rendimento), que foi utilizado sem purificação adicional. MS ESI m/z [M+H]+ 633,30.
Exemplo 63. Síntese de ácido 14,17-dioxo-4,7,10,21,24,27-hexaoxa-13,18diaza triacont-15-ina-1,30-dioico.
Figure BR112019020049A2_D0332
[00252] O composto 14,17-dioxo-4,7,10,21,24-hexaoxa-13,18diazatriacont-15-in-l,30-dioato de di-terc-butil (2,26 g) foi dissolvido em diclorometano (15 mL) e resfriado a 0°C e depois tratado com TFA (15 mL). A reação foi aquecida à t.a. e agitada durante 45 min e, em seguida, o solvente e o TFA residual foram removidos no evaporador rotativo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (0-15% de MeOH/DCM) para dar um óleo amarelo claro (1,39 g, 86% de rendimento para duas etapas). MS ESI m/z [M+H]+521,24.
Exemplo 64. Síntese de 2,5,38,41-tetrametil-4,7,20,23,36,39-hexaoxo-
10,13,16,27,30,33-hexaoxa-3,6,19,24,37,40-hexa-azadotetracont-21-ina-l,42dioato de di-terc-butil
Figure BR112019020049A2_D0333
[00253] A uma solução de ácido 14,17-dioxo-4,7,10,21,24,27-hexaoxa13,18-diaza triacont-15-ina-1,30-dioico (1,38 g, 2,65 mmol), 2-(2aminopropanamido)propanoato de terc-butil (0,75 g, 3,47 mmol) na mistura de DMA (40 ml) foi adicionado EDC (2,05 g, 10,67 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída
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204/310 com EtOAc/CHzCh (1:5 a 1:1) para prover o composto do título (2,01 g, 82% de rendimento, -95% puro por HPLC). MS ESI m/z calculado para C42H73N6O16 [M+H]+ 917,50, encontrado 917,90.
Exemplo 65. Síntese de ácido 2,5,38,41-tetrametil-4,7,20,23,36,39-hexaoxo-
10,13,16,27,30,33-hexaoxa-3,6,19,24,37,40-hexa-azadotetracont-21-ina-l,42dioico
Figure BR112019020049A2_D0334
[00254] 2,5,38,41-tetrametil-4,7,20,23,36,39-hexaoxo-
10,13,16,27,30,33-hexaoxa-3,6,19,24,37,40-hexa-azadotetracont-21-ina-l,42dioato de di-di-terc-butil (1,50 g, 1,63 mmol) foi dissolvido na mistura de CH2CI2 (10 ml) e TFA (10 ml). A mistura foi agitada durante a noite, diluída com tolueno (20 ml), concentrada para prover o composto do título (1,33 g, rendimento de 101%, - 92% puro por HPLC) que foi utilizado para a próxima etapa sem purificação adicional. MS ESI m/z calculado para C34H56N6O16 [M+H]+ 805,37, encontrado 805,85.
Exemplo 66. Síntese de 2,5,38,41-tetrametil-4,7,20,23,36,39-hexaoxo10,13,16,27,30,33- hexaoxa-3,6,19,24,37,40-hexa-azadotetracont-21 -ina1,42-dioato de bis(2,5-dioxopirrolidin-l-il)
Figure BR112019020049A2_D0335
[00255] A uma solução de ácido 2,5,38,41-tetrametil-4,7,20,23,36,39hexaoxo-10,13,16,27,30,33-hexaoxa-3,6,19,24,37,40-hexaazadotetracont-21ina-l,42-dioico (1,30 g, 1,61 mmol) na mistura de DMA (10 ml) foram
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205/310 adicionados NHS (0,60 g, 5,21 mmol) e EDC (1,95 g, 10,15 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de S1O2 eluída com EtOAc/CHzCL (1:4 a 2:1) para prover o composto do título (1,33 g, 83% de rendimento, -95% puro por HPLC). MS ESI m/z calculado para C42H63N8O20 [M+H]+ 999,40, encontrado 999,95.
Exemplo 67. Síntese de dicloreto de 2,3-bis(2-bromoacetamido)succinil.
o h 9 Cl_ O Ο II 9 „
2 ^lÍBr ho-JC^n—
Η(Α_ΛθΗ Br 156 T o
II 1VT \iu -------------► HO-XvNv- ΈΓ
H2N NH2 163 THF/H2O b H (COC1)2
THF/DCM/DMF -Bl
167 ° H
168
[00256] Ácido 2,3-diaminossuccínico (5,00 g, 33,77 mmol) na mistura de THF/H2O/DIPEA (125 ml/125 ml/8 ml) foi adicionado brometo de 2bromoacetil (25,0 g, 125,09 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, evaporada e purificada por cromatografia em coluna de S1O2 (H2O/CH3CN 5:95) para prover ácido 2,3-bis (2-bromoacetamido)succínico (9,95 g, 76% de rendimento) como um óleo amarelo claro. MS ESI m/z calculado para C8HiiBr2N2O6 [M+H]+ 388,89, encontrado 388,68.
[00257] Ácido 2,3-bis(2-bromoacetamido)succínico (3,50 g, 9,02 mmol) em diclorometano (80 ml) foi adicionado dicloreto de oxalil (5,80 g, 46,05 mmol) e DMF (0,01 ml). A mistura foi agitada por 2,5 h, diluída com tolueno, concentrada e coevaporada com dicloroetano (2 x 20 ml) e tolueno (2 x 15 ml) até a secura para prover dicloreto de 2,3-bis(2bromoacetamido)succinil como produto bruto (que não é estável) para a próxima etapa sem purificação adicional (3,90 g, rendimento de 102%). MS ESI m/z calculado para CsHçB^CL^CU [M+H]+ 424,82, encontrado 424,90. Exemplo 68. Síntese do ácido 2,3-bis(((benziloxi)carbonil)amino)succínico.
O O ΗθΑ^^ΟΗ CbzHN NHCbz
[00258] A uma solução de ácido 2,3-diaminosuccínico (4,05 g, 27,35 mmol) na mistura de THF (250 ml) e NaH2PO4 (0,1 M, 250 ml, pH 8,0) foi adicionado carbonocloridato de benzil (15,0 g, 88,23 mmol) em 4 porções em
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h. A mistura foi agitada por mais 6 h, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com H2O/CH3CN (1:9) contendo 1% de ácido fórmico para dar o composto do título (8,65 g, 76% de rendimento, -95% puro). MS ESI m/z calculado para C20H21N2O8 [M+H]+ 417,12, encontrado 417,60.
Exemplo 69. Síntese de 2,3-bis(((benziloxi)carbonil)-amino)succinato de bis (2,5 -dioxopirrolidin-1 -il)
Figure BR112019020049A2_D0336
[00259] A uma solução de ácido 2,3bis(((benziloxi)carbonil)amino)succínico (4,25 g, 10,21 mmol) na mistura de DMA (70 ml) foram adicionados NHS (3,60 g, 31,30 mmol) e EDC (7,05 g, 36,72 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/CH2C12 (1:6) para prover o composto do título (5,42 g, 87% de rendimento, - 95% puro). MS ESI m/z calculado para C28H27N4O12 [M+H]+ 611,15, encontrado 611,60
Exemplo 70. Síntese de ácido 2,3-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-lil)succínico.
Figure BR112019020049A2_D0337
[00260] Ácido 2,3-diaminossuccínico (5,00 g, 33,77 mmol) na mistura de THF/H2O/DIPEA (125 ml/125 ml/2 ml) foi adicionado anidrido maleico (6,68 g, 68,21 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, evaporada para prover ácido 2,3-bis((Z)-3-carboxiacrilamido)succínico (11,05 g, 99% de rendimento) como um sólido branco. MS ESI m/z calculado para C12H13N2O10 [M+H]+ 345,05, encontrado 345,35.
[00261] Ácido 2,3-bis((Z)-3-carboxiacrilamido)succínico (11,05 g, 33,43 mmol) em uma solução de mistura de HOAc (70 ml), DMF (10 ml) e
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207/310 tolueno (50 ml) foi adicionado anidrido acético (30 ml). A mistura foi agitada por 2 h, refluxo com receptor de Dean-Stark a 100 °C por 6 h, concentrada, coevaporada com EtOH (2 x 40 ml) e tolueno (2 x 40 ml) e purificada na coluna de SiO2 eluída com IUO/CH3CN (1:10) para prover o composto do título (7,90 g, 76% de rendimento, -95% puro). MS ESI m/z calculado para C12H9N2O8 [M+H]+ 309,03, encontrado 309,30.
Exemplo 71. Síntese de 2,3-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-lil)succinato de bis(2,5-dioxopirrolidin-l-il)
Figure BR112019020049A2_D0338
[00262] A uma solução de ácido 2,3-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lHpirrol-l-il)succínico (4,00 g, 12,98 mmol) na mistura de DMF (70 ml) foram adicionados NHS (3,60 g, 31,30 mmol) e EDC (7,05 g, 36,72 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/CH2Cl2 (1:6) para prover o composto do título (5,73 g, 88% de rendimento, - 96% puro por HPLC). MS ESI m/z calculado para C20Hi5N4Oi2 [M+H]+ 503,06, encontrado 503,45.
Exemplo 72. Síntese de 6,39-bis(4-((terc-butoxicarbonl)amino)butil)-22,23bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il) -3,4,2-bis((4(hidroximetil)fenil)carbamoil)-5,8,21,24,37,40-hexaoxo-11,14,17,28,31,34hexaoxa-4,7,20,25,38,41-hexa-azatotratetracontano-l,44-dioato de (3S,6S,39S,42S)-di-terc-butil
Figure BR112019020049A2_D0339
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[00263] l-amino-14-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)butil)-17-((4(hidroximetil)fenil)carbamoil)-12,15 -dioxo-3,6,9-trioxa-13,16diazanonadecan-19-oato de (14S,17S)-terc-butil (1,43 g, 1,97 mmol) e ácido 2,3-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)succinico (0,30 g, 0,97 mmol) em DMA (25 ml) foi adicionado EDC (1,30 g, 6,77 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, evaporada a vácuo, purificada sobre silica gel usando uma mistura de metanol (de 5% a 8%) em cloreto de metileno contendo como eluente para dar o composto do título (1,33 g, 80% de rendimento). ESI MS m/z C82H123N12O28 [M+H]+, calculado 1722,85, encontrado 1722,98.
Exemplo 73. Síntese de l-azido-14,17-dimetil-12,15-dioxo-3,6,9-trioxa13,16-diazaoctadecan-18-oato de terc-butil
Figure BR112019020049A2_D0340
[00264] A uma solução de ácido 3-(2-(2-(2azidoetoxi)etoxi)etoxi)propanoico (1,55 g, 6,27 mmol), 2-(2aminopropanamido)propanoato de terc-butil (1,35 g, 6,27 mmol) na mistura de DMA (60 ml) foi adicionado EDC (3,05 g, 15,88 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/CH2C12 (1:3) para prover o composto do título (2,42 g, 86% de rendimento, ~ 95% puro por HPLC). MS ESI m/z calculado para C19H36N5O7 [M+H]+ 446,25, encontrado 446,60
Exemplo 74. Síntese de ácido l-azido-14,17-dimetil-12,15-dioxo-3,6,9-trioxa
13,16-diazaoctadecan-18-oico
Figure BR112019020049A2_D0341
[00265] 1 - Azido-14,17-dimetil-12,15 -dioxo-3,6,9-trioxa-13,16diazaoctadecan-18-oato de terc-butil (2,20 g, 4,94 mmol) em 1,4-dioxano (40 ml) foi adicionado HC1 (12 M, 10 ml). A mistura foi agitada por 40 min, diluída com dioxano (20 ml) e tolueno (40 ml), evaporada e coevaporada com
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209/310 dioxano (20 ml) e tolueno (40 ml) até a secura para pro ver o produto do título bruto para a próxima etapa sem produção adicional (l,92g, 100% de rendimento, -94% puro por HPLC). MS ESI m/z calculado para C15H28N5O7 [M+H]+ 390,19, encontrado 390,45.
Exemplo 75. Síntese de ácido 21,22-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-lil)-2,5,38,41-tetrametil-4,7,20,23,36,39-hexaoxo-10,13,16,27,30,33-hexaoxa-
Figure BR112019020049A2_D0342
[00266] Ácido 1 -azido-14,17-dimetil-12,15 -dioxo-3,6,9-trioxa-13,16 diazaoctadecan-18-oico (1,90 g, 4,88 mmol) em DMA (40 ml) foi adicionado Pd/C (0,20 g, 50% de umidade). O sistema foi evacuado a vácuo e colocado sob 2 atm de gás hidrogênio através do reator de hidrogenação com agitação vigorosa. A reação foi então agitada durante 6 h à temperatura ambiente e TLC mostrou que os materiais de partida desapareceram. A reação bruta foi passada através de uma pequena membrana de Celite enxaguando com etanol. O solvente foi concentrado sob pressão reduzida para prover o produto bruto, ácido l-amino-14,17-dimetil-12,15-dioxo-3,6,9-trioxa-13,16-diazaoctadecan
18-oico em DMA, que foi usado diretamente para a próxima etapa. ESI MS m/z+ C15H30N3O7 (M+H), calculado 364,20, encontrado 364,30.
[00267] Ao composto amino em DMA (~ 30 ml) foi adicionado NaH2PO4 0,1 M, pH 7,5 (20 ml), seguido pela adição de 2,3-bis(2,5-dioxo2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)succinato de bis(2,5-dioxopirrolidin-l-il) (1,30 g, 2,59 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com 8% de água em CH3CN para prover o composto do título (1,97 g, 81% de rendimento). ESI MS m/z+ C^HôsNsOio (M+H),
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210/310 caculado 999,41, encontrado 999,95.
Exemplo 76. Síntese de 21,22-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)2,5,38,41-tetrametil-4,7,20,23,36,39-hexaoxo-10,13,16,27,30,33-hexaoxa3,6,19,24,37,40-hexa-azadotetracontano-l,42-dioato de bis(2,5dioxopirrolidin-1 -il)
Figure BR112019020049A2_D0343
[00268] A uma solução de ácido 21,22-bis (2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lHpirrol-l-il)-2,5,38,41-tetrametil-4,7,20,23,36,39-hexaoxo-10,13,16,27,30,33hexaoxa-3,6,19,24,37,40-hexa-azadotetracontano-l,42-dioico (1,50 g, 1,50 mmol) na mistura de DMA (10 ml) foram adicionados NHS (0,60 g, 5,21 mmol) e EDC (1,95 g, 10,15 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com EtOAc/CH2Cl2 (1:4 a 2:1) para prover o composto do título (1,50 g, 83% de rendimento, -95% puro por HPLC). MS ESI m/z calculado para C5oH69Nio024 [M+H]+ 1193,44, encontrado 1193,95.
Exemplo 77. Síntese de 2-(hidroximetil)pirrolidina-l-carboxilato de (S)-tercbutil.
Figure BR112019020049A2_D0344
[00269] Boc-L-prolina (10,0 g, 46,4 mmol) dissolvido em 50 mL de THF foi resfriada a 0 °C, ao qual BH3 em THF (1,0 M, 46,4 mL) foi adicionado cuidadosamente. A mistura foi agitada a 0°C por 1,5 h, depois foi vertida em água gelada e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura (50 mL), seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob
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211/310 pressão reduzida para dar o composto do título (8,50 g, 91% de rendimento) como um sólido branco. RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 3,94 (dd, J = 4,9, 2,7 Hz, 2H), 3,60 (ddd, J = 18,7, 11,9, 9,3 Hz, 2H), 3,49-3,37 (m, 1H), 3,34-3,23 (m, 1H), 2,06-1,91 (m, 1H), 1,89-1,69 (m, 2H), 1,65-1,51 (m, 1H), 1,49-,40 (m, 9H).
Exemplo 78. Síntese de 2-formilpirrolidina-l-carboxilato de (S)-terc-butil
Uv
Boc
[00270] A uma solução de 2-(hidroximetil)pirrolidina-l-carboxilato de (S)-terc-butil (13,0 g, 64,6 mmol) em dimetilsulfóxido (90 mL) foi adicionada trietilamina (40 mL) e a agitação continuou por 15 min . A mistura foi resfriada sobre banho de gelo e o complexo trióxido de enxofre-piridina (35,98 g, 226 mmol) foi adicionado em porções durante um período de 40 minutos. A reação foi aquecida à t.a. e agitada durante 2,5 h. Após adição de gelo (250 g), a mistura foi extraída com diclorometano (150 mL x 3). A fase orgânica foi lavada com solução de ácido cítrico a 50% (150 mL), água (150 mL), solução saturada de bicarbonate de sódio (150 mL) e salmoura (150 mL), seca sobre Na2SÜ4 anidro. A remoção do solvente a vácuo produziu o aldeído do título (10,4 g, 81% de rendimento) como um óleo denso que foi utilizado sem purificação adicional. RMN ’H (500 MHz, CDCI3) δ 9,45 (s, 1H), 4,04 (s, 1H), 3,53 (dd, J = 14,4, 8,0 Hz, 2H), 2,00 - 1,82 (m, 4H), 1,44 (d, J = 22,6 Hz, 9H).
Exemplo 79. Síntese de (4R,5S)-4-metil-5-fenil-3-propioniloxazolidin-2-ona.
o 2 o
Ph
[00271] Foi adicionado n-butil-lítio em hexano (21,6 mL, 2,2 M, 47,43 mmol) gota a gota a -78°C a uma solução agitada de 4-metil-5feniloxazolidin-2-ona (8,0 g, 45,17 mmol) em THF (100 mL) sob N2. A solução foi mantida a -78 0 C por 1 h, em seguida, foi adicionado lentamente
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212/310 cloreto de propionil (4,4 mL, 50,59 mmol). A mistura reacional foi aquecida a -50°C, agitada por 2 h e depois resfriada bruscamente por adição de uma solução saturada de cloreto de amônio (100 mL). O solvente orgânico foi removido a vácuo e a solução resultante foi extraída com acetato de etila (3 x 100 mL). A camada orgânica foi lavada com solução saturada de bicarbonate de sódio (100 mL) e salmoura (100 mL), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila/hexanos 20%) para prover o composto do título como um óleo denso (10,5 g, 98% de rendimento). RMN 1H (500 MHz, CDC13) δ 7,45 - 7,34 (m, 3H), 7,30 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 5,67 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,82 - 4,70 (m, 1H), 2,97 (dd, J= 19,0, 7,4 Hz, 2H), 1,19 (t, J= 7,4 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,6 Hz, 3H).
Exemplo 80. Síntese de 2-((lR,2R)-l-hidroxi-2-metil-3-((4R,5S)-4-metil-2oxo-5-feniloxazolidin-3-il)-3-oxopropil)pirrolidina-l-carboxilato de (S)-tercbutil
Figure BR112019020049A2_D0345
[00272] A uma solução de (4R,5S)-4-metil-5-fenil-3propioniloxazolidin-2-ona (9,40 g, 40,4 mmol) em diclorometano (60 mL) foi adicionado Et3N (6,45 mL, 46,64 mmol) a 0°C, seguido de triflato de dibutilboro 1M em diclorometano (42 mL, 42 mmol). A mistura foi agitada a 0°C por 45 min, resfriada a -70°C, 2-formilpirrolidina-l-carboxilato de -tercbutil (4,58 g, 22,97 mmol) em diclorometano (40 mL) foi então adicionado lentamente durante um período de 30 minutos. A reação foi agitada a -70°C por 2 h, 0°C 1 h, e à t.a. 15 min e depois resfriada bruscamente com solução tampão de fosfato (pH 7, 38 mL). Após a adição de MeOH-30% H2O2 (2:1, 100 mL) a menos de 10 0 C e agitação durante 20 min, foi adicionada água (100 mL) e a mistura foi concentrada a vácuo. Foi adicionada mais água (200 mL) ao resíduo e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 100 mL). A
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213/310 camada orgânica foi lavada com KHSO4 IN (100 mL), solução de bicarbonato de sódio (100 mL) e salmoura (100 mL), seca sobre Na2SÜ4 anidro e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (acetato de etila/hexanos 10% - 50%) para prover o composto do título como um sólido branco (7,10 g, 71% de rendimento). RMN ’H (500 MHz, CDCI3) δ 7,39 (dt, J= 23,4, 7,1 Hz, 3H), 7,30 (d, J= 7,5 Hz, 2H), 5,67 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,84 - 4,67 (m, 1H), 4,08 - 3,93 (m, 3H), 3,92 - 3,84 (m, 1H), 3,50 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,24 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 2,15 (s, 1H), 1,89 (dd, J = 22,4, 14,8 Hz, 3H), 1,48 (d, J = 21,5 Hz, 9H), 1,33 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,88 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
Exemplo 81. Síntese de 2-((lR,2R)-l-metoxi-2-metil-3-((4R,5S)-4-metil-2oxo-5-feniloxazolidin-3-il)-3-oxopropil)pirrolidina-1 -carboxilato de (S)-tercbutil
Ph
[00273] A uma mistura de 2-((1 R,2R)-l-hidroxi-2-metil-3-((4R, 5S)-4metil-2-oxo-5-feniloxazolidin-3-il)-3-oxopropil)pirrolidina-1 -carboxilato de o
(S)-terc-butil (5,1 g 11,9 mmol) e peneiras moleculares (4 A, 5 g) foi adicionado dicloroetano anidro (30 mL) sob N2. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 min e resfriada a 0°C. Esponja de próton (6,62 g, 30,9 mmol) foi adicionada, seguida por tetrafluoroborato de trimetiloxônio (4,40 g, 29,7 mmol). A agitação continuou durante 2 h a 0°C e 48 h à t.a. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila/hexanos 20-70%) para prover o composto do título como um sólido branco (1,80 g, 35% de rendimento). RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 7,46 - 7,27 (m, 5H), 5,65 (s, 1H),
4,69 (s, 1H), 3,92 (s, 1H), 3,83 (s, 1H), 3,48 (s, 3H), 3,17 (s, 2H), 2,02 - 1,68 (m, 5H), 1,48 (d, J = 22,3 Hz, 9H), 1,32 (t, J = 6,0 Hz, 3H), 0,91 - 0,84 (m,
3H).
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214/310
Exemplo 82. Síntese de ácido (2R,3R)-3-((S)-l-(tercbutoxicarbonil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoico.
Figure BR112019020049A2_D0346
[00274] A uma solução de 2-((lR,2R)-l-metoxi-2-metil-3-((4R,5S)-4metil-2-oxo-5-feniloxazolidin-3-il)-3-oxopropil)pirrolidina-1 -carboxilato de (S)-terc-butil (1,80 g, 4,03 mmol) em THF (30 mL) e H2O (7,5 mL), foi adicionado H2O2 a 30% (1,44 mL, 14,4 mmol) durante um período de 5 min a 0°C, seguido por uma solução de LiOH (0,27 g, 6,45 mmol) em água (5 mL). Após agitação a 0°C durante 3 h, foi adicionado sulfito de sódio 1 N (15,7 mL) e a mistura foi deixada aquecendo até a t.a. e agitada durante a noite. O THF foi removido a vácuo e a fase aquosa foi lavada com diclorometano (3 x 50 mL) para remover o auxiliar de oxazolidinona. A fase aquosa foi acidificada a pH 3 com HC1 IN e extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (50 mL), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada a vácuo para dar o composto do título como um óleo incolor (1,15 g, 98% de rendimento). RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 3,99 3,74 (m, 2H), 3,44 (d, J = 2,6 Hz, 3H), 3,23 (s, 1H), 2,60 - 2,45 (m, 1H), 1,92 (tt, J = 56,0, 31,5 Hz, 3H), 1,79 - 1,69 (m, 1H), 1,58 - 1,39 (m, 9H), 1,30 1,24 (m, 3H).
Exemplo 83. Síntese de 3-metoxi-2-metil-3-((S)-pirrolidin-2-il)propanoato de
Figure BR112019020049A2_D0347
[00275]
Figure BR112019020049A2_D0348
A uma solução de ácido (2R,3R)-3-((S)-l-(tercbutoxicarbonil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoico. (0,86g, 2,99 mmol) em MeOH (10 mL) foi adicionado cloreto de tionil (1,08 mL, 14,95 mmol) lentamente a 0°C. A reação foi então aquecida à temperatura ambiente
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215/310 e agitada durante a noite. A mistura foi concentrada a vácuo e coevaporação com tolueno dando o composto do título (0,71 g, 100% de rendimento) como um sólido branco, o qual foi imediatamente utilizado na próxima etapa sem purificação adicional. HRMS (ESI) m/z calculado para C10H20NO3 [M+H]+: 202,14, encontrado: 202,14.
Exemplo 84. Síntese de 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-metil-3-oxoheptanoato de (4S,5S)-etil
Figure BR112019020049A2_D0349
[00276] A uma solução de N-Boc-L-isoleucina resfriada em gelo (4,55 g, 19,67 mmol) em THF (20 mL) foi adicionado Ι,Γ-carbonildiimidazol (3,51 g, 21,63 mmol). Após cessada a evolução do gás, a mistura resultante foi agitada à t.a. por 3,5 h.
[00277] Uma solução de brometo de isopropilmagnésio recémpreparada em THF (123 mmol, 30 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução pré-resfriada (0°C) de hidrogenomalonato de etila (6,50 g, 49,2 mmol) a uma taxa para manter a temperatura interna abaixo de 5°C. A mistura foi agitada à t.a. por 1,5 h. Esta solução do enolato de magnésio foi então resfriada sobre um banho de água gelada, seguida pela adição gradual da solução de imidazolida durante um período de 1 h através de uma agulha de ponta dupla a 0°C. A mistura resultante foi agitada a 0°C durante 30 min e depois à t.a. 64 h. A mistura reacional foi resfriada bruscamente por adição de ácido cítrico aquoso a 10% (5 mL) e acidificada a pH 3 com um ácido cítrico aquoso 10% adicional (110 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 150 ml). Os extratos orgânicos foram lavados com água (50 mL), hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (50 mL), secos sobre Na2SO4 e concentrados a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel usando acetato de etila/hexano (1: 4) como eluente para dar o composto do título
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216/310 (5,50 g, 93% de rendimento). RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 5,04 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,20 (p, J = 7,0 Hz, 3H), 3,52 (t, J = 10,7 Hz, 2H), 1,96 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 1,69 (s, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,28 (dd, J = 7,1, 2,9 Hz, 3H), 0,98 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 0,92 - 0,86 (m, 3H).
Exemplo 85. Síntese de 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidroxi-5-metilheptanoato de (3R,4S,5S)-etil
Figure BR112019020049A2_D0350
[00278] A uma solução de 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-metil-3oxo-heptanoato de (4S,5S)-etil (5,90 g, 19,83 mmol) em etanol (6 mL) a 60°C foi adicionado boro-hidreto de sódio (3,77 g, 99,2 mmol) em uma porção. A mistura reacional foi agitada por 5,5 h abaixo de -55°C e então resfriada bruscamente com ácido cítrico aquoso a 10% (100 mL). A solução resultante foi acidificada a pH 2 com um ácido cítrico aquoso adicional a 10%, seguido de extração com acetato de etila (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos foram lavados com cloreto de sódio aquoso saturado (100 mL), secos sobre Na2SO4 e concentrados a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (10-50% de acetato de etila/hexano) para prover puro o composto do título como diastereômero (2,20 g, 37% de rendimento) e uma mistura de dois diastereômeros (2,0 g, 34% de rendimento, razão de cerca de 9:1). RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 4,41 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 4,17 (tt, J= 7,1, 3,6 Hz, 2H), 4,00 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 3,55 (dd, J= 11,7, 9,3 Hz, 1H), 2,56 - 2,51 (m, 2H), 2,44 (dd, J= 16,4, 9,0 Hz, 1H), 1,79 (d, J= 3,8 Hz, 1H), 1,60 - 1,53 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,27 (dd, J = 9,3, 5,0 Hz, 3H), 1,03 - 0,91 (m, 7H).
Exemplo 86. Síntese do ácido (3R,4S,5S)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-3hidroxi-5-metil-heptanoico.
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217/310
Figure BR112019020049A2_D0351
[00279] A uma solução de 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidroxi-5metil-heptanoato de (3R,4S,5S)-etil (2,20 g, 7,20 mmol) em etanol (22 mL) foi adicionado hidróxido de sódio aquoso 1 N (7,57 mL, 7,57 mmol). A mistura foi agitada a 0°C durante 30 min e depois à t.a. 2 h. A solução resultante foi acidificada até pH 4 por adição de ácido clorídrico aquoso 1 N, que foi então extraído com acetato de etila (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos foram lavados com hidrogenossulfato de potássio aquoso 1 N (50 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (50 mL), secos sobre Na2SÜ4 e concentrados a vácuo para dar o composto (1,90 g, 95% de rendimento). RMN ’H (500 MHz, CDC13) δ 4,50 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 3,59 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,56 - 2,45 (m, 2H), 1,76 - 1,65 (m, 1H), 1,56 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,26 (t, J= 7,1 Hz, 3H), 0,93 (dd, J= 14,4, 7,1 Hz, 6H).
Exemplo 87. Síntese do ácido (3R,4S,5S)-4-((tercbutoxicarbonil)(metil)amino)-3-metoxi-5-metil-heptanoico.
Figure BR112019020049A2_D0352
[00280] A uma solução de ácido (3R,4S,5S)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-hidroxi-5-metil-heptanoico (1,90 g, 6,9 mmol) em THF (40 mL) foi adicionado hidreto de sódio (suspensão de óleo a 60%, 1,93 g, 48,3 mmol) a 0°C. Após agitação durante 1 h, foi adicionado iodeto de metila (6,6 mL, 103,5 mmol). A agitação continuou a 0°C durante 40 h antes da adição de hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL), seguido por água (100 mL). A mistura foi lavada com éter dietílico (2 x 50 mL) e a camada aquosa foi acidificada a pH 3 por hidrogenossulfato de potássio aquoso a 1 N, depois extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com tiossulfato de sódio aquoso a 5% (50 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (50 mL), secos sobre Na2SO4 e
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218/310 concentrados a vácuo para dar o composto do título (1,00 g, 48% de rendimento). RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 3,95 (d, J = 75,4 Hz, 2H), 3,42 (d, 7 = 4,4 Hz, 3H), 2,71 (s, 3H), 2,62 (s, 1H), 2,56 - 2,47 (m, 2H), 1,79 (s, 1H), 1,47 (s, 1H), 1,45 (d, J = 3,3 Hz, 9H), 1,13 - 1,05 (m, 1H), 0,96 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,89 (td, 7 = 7,2, 2,5 Hz, 3H).
Exemplo 88. Síntese de Boc-N-Me-L-Val-OH.
Figure BR112019020049A2_D0353
[00281] A uma solução de Boc-L-Val-OH (2,00 g, 9,2 mmol) e iodeto de metila (5,74 mL, 92 mmol) em THF anidro (40 mL) foi adicionado hidreto de sódio (3,68 g, 92 mmol) a 0°C. A mistura reacional foi agitada a 0°C por 1,5 h, depois aquecida à t.a. e agitada por 24 h. A reação foi resfriada bruscamente com água gelada (50 mL). Após adição de água (100 mL), a mistura reacional foi lavada com acetato de etila (3 x 50 mL) e a solução aquosa foi acidificada até pH 3 e depois extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). A fase orgânica combinada foi seca sobre Na2SÜ4 e concentrada para prover Boc-N-Me-Val-OH (2,00 g, 94% de rendimento) como um sólido branco. RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 4,10 (d, 7 = 10,0 Hz, 1H), 2,87 (s, 3H), 2,37 - 2,13 (m, 1H), 1,44 (d, 7 = 26,7 Hz, 9H), 1,02 (d, 7 = 6,5 Hz, 3H), 0,90 (t, 7=8,6 Hz, 3H).
Exemplo 89. Síntese de 3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-3-metoxi-5-metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanoato de (2R,3R)-metil
Figure BR112019020049A2_D0354
v l... a La.
[00282] A uma solução de 3-metoxi-2-metil-3-((S)-pirrolidin-2 il)propanoato de (2R,3R)-metil (0,71 g, 2,99 mmol) e ácido (3R,4S,5S)-4
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219/310 ((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-3-metoxi-5-metil-heptanoico (1 g, 3,29 mmol) em DMF (10 mL) a 0°C foi adicionado cianofosfonato de dietila (545 pL, 3,59 mmol), seguido por adição de Et3N (1,25 mL, 8,99 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0°C por 2 h, depois aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (50 mL), lavada com hidrogênio sulfato de potássio aquoso 1 N (20 mL), água (20 mL), hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (20 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (20 mL), seca sobre sulfato de sódio e concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de silica gel eluída com acetato de etila/hexano (1:5 a 2:1) para prover o título (0,9 g, 62% de rendimento) como um sólido branco. HRMS (ESI) m/z calculado para C25H46N2O7 [M+H]+: 487,33, encontrado: 487,32.
Exemplo 90. Síntese de 2-((1 R,2R)-l-metoxi-3-(((S)-l-metoxi-l-oxo-3fenilpropan-2-il)amino)-2-metil-3-oxopropil)pirrolidina- 1-carboxilato de (S)terc-butil
Figure BR112019020049A2_D0355
/() O CO2Me
[00283] A uma solução de ácido (2R,3R)-3-((S)-l-(tercbutoxicarbonil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoico (100 mg, 0,347 mmol) e cloridrato de éster metílico de L-fenilalanina (107,8 mg, 0,500 mmol) em DMF (5 mL) a 0°C foi adicionado cianofosfonato de dietila (75,6 pL, 0,451 mmol), seguido por Et3N (131 pL, 0,94 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0°C por 2 h, depois aquecida à t.a. e agitada durante a noite. A mistura reacional foi então diluída com acetato de etila (80 mL), lavada com hidrogenossulfato de potássio aquoso 1 N (40 mL), água (40 mL), hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (40 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (40 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (15-75% de acetato de etila/hexanos) para prover o composto do título (130 mg, 83% de rendimento)
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220/310 como um sólido branco. RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 7,28 (dd, J = 7,9, 6,5 Hz, 2H), 7,23 (t,/=7,3 Hz, 1H), 7,16 (s, 2H), 4,81 (s, 1H), 3,98 - 3,56 (m, 5H), 3,50 (s, 1H), 3,37 (d, J = 2,9 Hz, 3H), 3,17 (dd, J = 13,9, 5,4 Hz, 2H), 3,04 (dd, J = 14,0, 7,7 Hz, 1H), 2,34 (s, 1H), 1,81 - 1,69 (m, 2H), 1,65 (s, 3H), 1,51 - 1,40 (m, 9H), 1,16 (d, / = 7,0 Hz, 3H).
Exemplo 91. Procedimento geral para a remoção da função Boc com ácido trifluoroacético.
[00284] A uma solução do aminoácido N-Boc (1,0 mmol) em cloreto de metileno (2,5 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (1,0 mL). Depois de ser agitada à temperatura ambiente durante 1-3 h, a mistura reacional foi concentrada a vácuo. A coevaporação com tolueno deu o produto desprotegido, o qual foi utilizado sem qualquer purificação adicional.
Exemplo 92. Síntese de 3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoato de (2R,3R)-metil
ZX . Boc-Val-OH O ΖΛ .
hn Vv Vz zzf* 1 O /0 Ο 1 O /0 0
[00285] A uma solução do produto desprotegido de 3-metoxi-3-((S)-l((3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-(metilamino)heptanoil)pirrolidin-2-il)-2metilpropanoato de (2R,3R)-metil (715 mg, 1,85 mmol) e Boc-Val-OH (1,2 g, 5,56 mmol) em DCM (20 mL) a 0°C foi adicionado BroP (1,08 g, 2,78 mmol), seguido pela adição de di-isopropiletilamina (1,13 mL, 6,48 mmol). A mistura foi protegida da luz e agitada a 0°C por 30 min e depois à t.a. por 48h. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (50 mL), lavada com hidrogênio sulfato de potássio aquoso 1 N (20 mL), água (20 mL), hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (20 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (20 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de silica gel eluída com acetato de etila/hexano (1:5 a 4:1) para prover o composto do título (0,92 g,
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221/310
85% de rendimento) como um sólido branco. HRMS (ESI) m/z calculado para
C30H55N3O8 [M+H]+: 586,40, encontrado: 586,37.
Exemplo 93. Síntese de 3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-(2-(dimetilamino)-2metilpropanamido)-N, 3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoato de (2R, 3R)-metil
F
Figure BR112019020049A2_D0356
[00286] A uma solução do produto desprotegido de 3-((S)-l((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-N,3-dimetilbutanamido)-3 metoxi-5-metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoato de (2R, 3R)-metil (50 mg, 0,085 mmol) e 2-(dimetilamino)-2-metilpropanoato de perfluorofenil (74,5 mg, 0,25 mmol) em DMF (2 ml) a 0 °C foi adicionado DIPEA (44 pL, 0,255 mmol). A mistura reacional foi aquecida até a Ta e agitada por 2 h. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (30 mL), lavada com água (10 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (10 mL), seca sobre sulfato de sódio e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado em cromatografia em coluna de silica gel eluída com acetato de etila/hexano (1:5 a 5:1) para prover o composto do título (50 mg, 100% de rendimento). HRMS (ESI) m/z calculado para C31H58N4O7 [M+H]+: 599, encontrado: 599.
Exemplo 94. Síntese de (2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-(2(dimetilamino)-2-metilpropanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoico
Figure BR112019020049A2_D0357
[00287] A uma solução de 3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-(2(dimetilamino)-2-metilpropanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoato de (2R,3R)-metil
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222/310 (50 mg, 0,0836 mmol) em 1,4-dioxano (3 mL) a 0-4°C foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio (14 mg, 0,334 mmol) em água (3 mL) gota a gota em 5 minutos. A mistura reacional foi aquecida à TA e agitada por 2 h. A mistura foi acidificada a pH 7 com HC1 IN e concentrada a vácuo, e depois utilizada na etapa seguinte sem purificação adicional. HRMS (ESI) m/z calculado para C30H57N4O7 [M+H]+: 585,41, encontrado: 585,80.
Exemplo 95. Síntese de 3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-(2-(dimetilamino)-2metilpropanamido)-N, 3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoato de (2R,3R)perfluorofenil
Figure BR112019020049A2_D0358
[00288] A uma solução de ácido (2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)2-(2-(dimetilamino)-2-metilpropanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi5-metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoico (0,0836 mmol) e PFP (18,5 mg, 0,1 mmol) em DCM (2 mL) foram adicionados DIC (12,7 mg, 0,1 mmol) a 0 °C. A mistura foi aquecida até a TA e agitada durante a noite. A mistura reacional foi concentrada a vácuo e utilizada na etapa seguinte sem purificação adicional. HRMS (ESI) m/z calculado para C36H56F5N4O7 [M+H]+: 751,40, encontrado: 751,70.
Exemplo 96. Síntese de 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(4-hidroxi-3nitrofenil)propanoato de (S)-metil
Figure BR112019020049A2_D0359
Figure BR112019020049A2_D0360
[00289] A uma solução de éster metílico de Boc-L-tirosina (5 g, 16,9 mmol) em THF (50 mL) foi adicionado nitrito de terc-butil (10 mL, 84,6 mmol), depois a mistura reacional foi agitada por 5 h à TA. A mistura reacional foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de silica
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223/310 gel usando acetato de etila/hexano (1:10 a 1:5) para prover o composto (4,5 g, 78% de rendimento) como um sólido amarelo. HRMS (ESI) m/z calculado para C15H21N2O7 [M+H]+: 341,13, encontrado: 341,30.
Exemplo 97. Síntese de 3-(3-amino-4-hidroxifenil)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)propanoato de (S)-metil
OH
[00290] uma solução de 3-(3-amino-4-hidroxifenil)-2-(terc butoxicarbonilamino)propanoato de (S)-metil (2 g, 6,44 mmol) em acetato de etila (20 mL) foi adicionado Pd/C (0,2 g) e agitado por 2 h sob atmosfera de hidrogênio. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado a vácuo para prover o composto do título (1,7 g, 95% de rendimento) como um sólido branco. HRMS (ESI) m/z calculado para C15H23N2O5 [M+H]+: 311,15, encontrado: 311,30.
Exemplo 98. Síntese do Composto A-l
A-l
[00291]
A uma solução de ácido 14,17-dioxo-4,7,10,21,24,27-hexaoxa
13,18-diazatriacont-15-ina-l,30-dioico (95 mg, 0,182 mmol) e 3-(3-amino-4hidroxifenil)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoato de (S)-metil (56,6 mg, 0,182 mmol) em DMF (5 mL) a 0°C foi adicionado EDC (128,5 mg, 0,338 mmol), seguido pela adição de DIPEA (64pL, 0,3365 mmol). A mistura reacional foi aquecida até ta e agitada durante a noite. A mistura foi diluída com acetato de etila (30 mL), lavada com água (10 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (10 mL), seca sobre sulfato de sódio e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado em cromatografia em coluna de silica gel eluída com
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224/310
DCM/MeOH (20:1 a 10:1) para pro ver o composto A-l (68 mg, 47% de rendimento). HRMS (ESI) m/z calculado para C37H55N4O15 [M+H]+: 795,36, encontrado: 795,30.
Exemplo 99. Síntese do Composto A-2
A uma solução de composto A-l (32 mg, 0,04 mmol) em
[00292]
DCM (2 mL) adicionou-se TFA (2 mL) a 0°C. A mistura reacional foi aquecida à TA e agitada por 30 minutos, diluída com tolueno, concentrada, coevaporada com tolueno e depois usada para a próxima etapa sem purificação adicional. HRMS (ESI) m/z calculado para C33H47N4O15 [M+H]+: 795,36, encontrado: 795,30.
Exemplo 100. Síntese do Composto A-3
DMA/DIPEA
A-3
[00293] A uma solução de 3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-(2(dimetilamino)-2-metilpropanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoato de (2R,3R)perfluorofenil (20 mg, 0,027 mmol) e composto A-2 (31,7 mg, 0,04 mmol) em DMA (2 mL) foi adicionado DIPEA (9 pL, 0,053 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida à TA e agitada por 30 min. A mistura foi concentrada a vácuo e purificada por HPLC preparativa (C-18, 250 mm x 10 mm, eluída com H2O/CH3CN (9 ml/min, de 90% de água a 40% de água em
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225/310 min) para produzir o composto A-3 (14 mg, 42% de rendimento). HRMS (ESI) m/z calculado para CózHioiNsOiç [M+H]+: 1261,71 encontrado: 1261,30.
Exemplo 101. Síntese de 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((tercbutoxicarbonil)(metil)amino)-3-metoxi-5-metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil
Figure BR112019020049A2_D0361
[00294] A uma solução do produto desprotegido com Boc de 2-((lR, 2R)-1 -metoxi-3-(((S)-1 -metoxi-1 -oxo-3-fenilpropano-2-il)amino)-2-metil-3oxopropil)pirrolidina-l-carboxilato de (S)-terc-butil (0,29 mmol) e ácido (3R,4S,5S)-4-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-3-metoxi-5-metilheptanoico (96,6 mg, 0,318 mmol) em DMF (5 mL) a 0°C foi adicionado cianofosfonato de dietila (58 mL, 0,347 mmol), seguido por EtsN (109 mL, 0,78 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0°C por 2 h, depois aquecida à t.a. e agitada durante a noite. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (80 mL), lavada com hidrogênio sulfato de potássio aquoso 1 N (40 mL), água (40 mL), hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (40 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (40 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (15-75% de acetato de etila/hexanos) para prover o composto do título (150 mg, 81% de rendimento) como um sólido branco. LC-MS (ESI) m/z calculado para C34H55N3O8 [M+H]+: 634,40, encontrado: 634,40.
Exemplo 102. Síntese de 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil
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Figure BR112019020049A2_D0362
[00295] A uma solução do produto desprotegido com Boc de 2((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((terc-butoxicarbonil))(metil)amino)-3metoxi-5-metil-heptanoil)-pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3fenilpropanoato de (S)-metil(0,118 mmol) e Boc-Val-OH (51,8 mg, 0,236 mmol) em DCM (5 mL) a 0°C foi adicionado BroP (70,1 mg, 0,184 mmol), seguido por di-isopropiletilamina (70 pL, 0,425 mmol). A mistura foi protegida da luz e agitada a 0°C durante 30 min e depois à t.a. por 2 dias. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (80 mL), lavada com hidrogenossulfato de potássio aquoso 1 N (40 mL), água (40 mL), hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (40 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (40 mL), seca sobre Na2SÜ4 e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (20-100% de acetato de etila/hexanos) para prover o composto do título (67 mg, 77% de rendimento) como um sólido branco. LC-MS (ESI) m/z calculado para C39H64N4O9 [M+H]+: 733,47, encontrado: 733,46.
Exemplo 103. Síntese de 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((6S,9S,12S,13R)-12-((S)-secbutil)-6,9-di-isopropil-13-metoxi-2,2,5,ll-tetrametil-4,7,10-trioxo-3-oxa5,8,1 l-triazapentadecan-15-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil.
Figure BR112019020049A2_D0363
[00296] A uma solução do produto desprotegido com Boc de 2((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-N,3dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil (0,091 mmol) e Boc-ValOH (127 mg, 0,548 mmol) em DCM (5 mL) a 0°C foi adicionado BroP (18,2,
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0,114 mmol), seguido por di-isopropiletilamina (59 pL, 0,548 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0°C por 2 h, depois aquecida à t.a. e agitada durante a noite. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (80 mL), lavada com hidrogênio sulfato de potássio aquoso 1 N (40 mL), água (40 mL), hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (40 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (40 mL), seca sobre sulfato de sódio e concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (20-100% de acetato de etila/hexanos) para prover o composto do título (30 mg, 39% de rendimento) como um sólido branco. LC-MS (ESI) m/z calculado para C45H75N5Oio [M+H]+: 846,55, encontrado: 846,56.
Exemplo 104. Síntese de 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-dimetil2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil
Figure BR112019020049A2_D0364
[00297] A uma solução de 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((6S,9S,12S,13R)-12((S)-sec-butil)-6,9-di-isopropil-13-metoxi-2,2,5,ll-tetrametil-4,7,10-trioxo-3oxa-5,8,1 l-triazapentadecan-15-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil (75,0 mg, 0,0886 mmol) em cloreto de metileno (5 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (2 mL) à temperatura ambiente. Depois de ser agitada à temperatura ambiente durante 1 h, a mistura reacional foi concentrada a vácuo. A coevaporação com tolueno deu o produto do título desprotegido, o qual foi utilizado sem purificação adicional.
Exemplo 105. Síntese de ácido (S) 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi5-metilheptanoil)-pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3fenilpropanoico
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Figure BR112019020049A2_D0365
Figure BR112019020049A2_D0366
[00298] 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-dimetil-2-((S)-3metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil (25 mg, 0,030 mmol) na mistura de HC1 cone. (0,3 ml) e 1,4dioxano (0,9 ml) foi agitado à t.a. por 35 min. A mistura foi diluída com EtOH (1,0 ml) e tolueno (1,0 ml), concentrada e coevaporada com EtOH/tolueno (2:1) para pro ver o composto do título como um sólido branco (22 mg, ~ 100% de rendimento), que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. LC-MS (ESI) m/z calculado para C39H66N5O8 [M+H]+: 732,48, encontrado: 732,60.
Exemplo 106. Síntese de ácido (2S)-2-((2R,3R)-3-((2S)-l-((llS,14S,17S)-lazido- 17-((R)-sec-butil)-11,14-di-isopropil-18-metoxi-10,16-dimetil-9,12,15trioxo-3,6-dioxa-10,13,16-triazai-cosan-20-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoico.
Figure BR112019020049A2_D0367
[00299] Ao ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5metil-heptanoil)-pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3fenilpropanoico bruto (22 mg, 0,030 mmol) em uma mistura de DMA (0,8 ml) e solução tampão de NaH2PO4 (pH 7,5, 1,0 M, 0,7 ml) foi adicionado 3(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanoato de 2,5-dioxopirrolidin-l-il (18,0 mg, 0,060 mmol) em quatro porções em 2 h. A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada em cromatografia em coluna de SiO2 (CH3OH/CH2C12/HOAc 1:8:0,01) para prover o composto do título (22,5 mg, 82% de rendimento). LC-MS (ESI) m/z calculado para C46H77N8O11 [M+H]+:
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917,56, encontrado: 917,60.
Exemplo 107. Síntese de ácido (2S)-2-((2R,3R)-3-((2S)-l-((llS,14S,17S)-lamino-17-((R)-sec-butil)-ll,14-di-isopropil-18-metoxi-10,16-dimetil-9,12,15trioxo-3,6-dioxa-10,13,16-triazaicosan-20-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoico.
[00300] Ao ácido (2S)-2-((2R,3R)-3-((2S)-l-((llS,14S,17S)-l-azido17-((R)-sec-butil)-11,14-di-isopropil-18-metoxi-10,16-dimetil-9,12,15 -trioxo-
3,6-dioxa-10,13,16-triazai-cosan-20-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoico (22,0 mg, 0,024 mmol) em metanol (5 ml) em uma garrafa de hidrogenação foi adicionado Pd/C (5 mg, 10% Pd, 50% de umidade). Depois de aspirado o ar e ser aplicado 25 psi de H2, a mistura foi agitada por 4 h, filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado para prover o produto do título bruto (~ 20 mg, 92% de rendimento), o qual foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. ESI MS m/z+ C46H79N6O11 (M+H), caculado para 891,.57, encontrado 891,60.
Exemplo 108. Síntese de ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-l-((6S,9S,12S,13R)-12((S)-sec-butil)-6,9-di-isopropil-13-metoxi-2,2,5,ll-tetrametil-4,7,10-trioxo-3oxa-5,8,11 -triazapenta-decan-15 -oil)pirrolidin-2-il)-3 -metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoico.
BocN Tf 1 O
Figure BR112019020049A2_D0368
[00301] A uma solução de 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((6S,9S,12S,13R)-12((S)-sec-butil)-6,9-di-isopropil-13-metoxi-2,2,5,ll-tetrametil-4,7,10-trioxo-3oxa-5,8,1 l-triazapentadecan-15-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil (30 mg, 0,035 mmol) em
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THF (1,0 ml) foi adicionado LiOH em água (Ι,ΟΜ, 0,8 ml). A mistura foi agitada à t.a. por 35 min, neutralizada com H3PO4 0,5 M até pH 6, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de S1O2 (CH3OH/CH2CI2/HOAC 1:10:0,01) para prover o composto do título (25,0 mg, 85% de rendimento). LC-MS (ESI) m/z calculado para C44H74N5O10 [M+H]+: 832,54, encontrado: 832,60.
Exemplo 109. Síntese de ácido (S) 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi5-metilheptanoil)-pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3fenilpropanoico
Figure BR112019020049A2_D0369
[00302] A uma solução de ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-l((6S,9S, 12S, 13R)-12-((S)-sec-butil)-6,9-di-isopropil-13-metoxi-2,2,5,11tetrametil-4,7,10-trioxo-3 -oxa-5,8,11 -triazapenta-decan-15 -oil)pirrolidin-2il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico (25 mg, 0,030 mmol) em dioxano (2,0 ml) foi adicionado HC1 (12,0M, 0,6 ml). A mistura foi agitada à t.a. por 30 min, diluída com dioxano (4 ml) e tolueno (4 ml), concentrada e purificada em cromatografia em coluna C-18 HPLC eluída com MeOH e água (L200 mm x Φ20 mm, v = 9 ml/min, de 5% metanol a 40% de metanol em 40 min) para prover o composto do título (20,0 mg, 90% de rendimento). LC-MS (ESI) m/z calculado para C39H66N5O8 [M+H]+: 732,48, encontrado: 732,90.
Exemplo 110. Síntese de 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((5S,8S,llS,14S,14S,15R)-14((S)-sec-butil)-8,11 -di-isopropil-15-metoxi-5,7,13-trimetil-3,6,9,12-tetraoxo1 -fenil-2-oxa-4,7,10,13 -tetra-aza-heptadecan-17 -oil) pirrolidin-2-il)-3 -metoxi2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil
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Figure BR112019020049A2_D0370
[00303] A uma solução de MMAF-OMe (0,132 g, 0,178 mmol, 1,0 eq.) e Z-L-Alanina (0,119 g, 0,533 mmol, 3,0 eq.) em DCM anidro (10 mL) a 0 °C foi adicionado HATU (0,135 g, 0,356 mmol, 2,0 eq.) e NMM (0,12 mL, 1,07 mmol, 6,0 eq.) em sequência. A reação foi agitada a 0°C por 10 minutos, e depois aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi diluída com DCM e lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SÜ4 anidro, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de SiO2(DCM/MeOH 20:1) para dar o composto do título como um sólido espumoso branco (0,148 g, 88% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C5iH79N60ii [M+H]+ 951,6, encontrado 951,6.
Exemplo 111. Síntese de 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2((S)-2-amino-N-metilpropanamido)-3-metilbutanamido)-N,3dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de (S)-metil.
Figure BR112019020049A2_D0371
[00304] A uma solução de 2-((2R,3R)-3-((S)-l((5S,8S,llS,14S,14S,15R)-14-((S)-sec-butil)-8,ll-di-isopropil-15-metoxi5,7,13-trimetil-3,6,9,12-tetraoxo-l-fenil-2-oxa-4,7,10,13-tetra-azaheptadecan-17-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3fenilpropanoato de (S)-metil (0,148 g, 0,156 mmol, 1,0 equiv) em MeOH (5 mL) foi adicionado Pd/C (0,100 g, 10% Pd/C, 50% umidade) em uma garrafa de hidrogenação. A mistura foi agitada durante 5 h e depois filtrada através de uma membrana de Celite. O filtrado foi concentrado para dar o composto do título como um sólido espumoso branco (0,122 g, 96% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C43H73N6O9 [M+H]+ 817,5, encontrado 817,5.
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Exemplo 112. Síntese de ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-l((8S,llS,14S,17S,20S,21R)-20-((S)-sec-butil)-14,17-di-isopropil-21-metoxi8,11, 13,19-tetrametil-3,6,9,12,15,18-hexaoxo-5-propiolamido4,7,10,13,16,19-hexa-azatricos- l-in-23-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoico (A-4).
Figure BR112019020049A2_D0372
[00305] Ao Composto 2-((2R,3R)-3-((S)-l-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)2-((S)-2-amino-N-metilpropanamido)-3-metilbutanamido)-N,3dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metil-heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoato de S) -metil (20 mg, 0,027 mmol) na mistura de DMA (2 ml) e NaiHPCh 0,1 M, pH 8,0 (1 ml) foi adicionado 2((S)-2-(2,2-dipropiolamido-acetamido)propanamido)propanoato de (S)-2,5dioxopirrolidin-l-il (20,1 mg, 0,046 mmol) em três porções em 3 h e a mistura foi então agitada por mais 12 horas. A mistura foi concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (200 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Cis, 10-100% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do título (22,1 mg, 78% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C53H80N9O13 [M+H]+ 1050,58, encontrado 1050,96.
Exemplo 113. Síntese de sal de cloridrato do ácido (Z)-4-hidrazinil-4-oxobut2-enoico.
NH2NH2*HC1 ο θ \=/ DMA * HO?\=/ NHNH2
[00306] Cloridrato de hidrazina (7,00 g, 102,1 mmol) em DMA (100 ml) foi adicionado anidrido maleico (10,01 g). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e recristalizada em EtOH para formar o composto do título (12,22 g, 92% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C4H7N2O3 [M+H]+ 131,04, encontrado 131,20.
Exemplo 114. Síntese de ácido (2S)-2-((2R,3R)-3-((2S)-l
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233 /310 ((11S, 14S, 17 S, 18R)-17-((S)-sec-butil)-11,14-di-isopropil-18-metoxi-10,16dimetil-9,12,15-trioxo- l-((bis(2-(Z)-3-carboxiacril-hidrazinil)fosfc>ril)amino)-
3,6-dioxa-10,13,16-triazaicosan-20-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoico (A-5).
2 I o = I (X o no co2h
Ο O a-5
[00307] Ao composto de sal de cloridrato de ácido (Z)-4-hidrazinil-4oxobut-2-enoico (22,0 mg, 0,132 mmol) na mistura de THF (5 ml) e DIPEA (10 pl, 0,057 mmol) a 0°C foi adicionado POCI3 (10,1 mg, 0,0665 mmol). Após agitação a 0°C por 20 min, a mistura foi aquecida à temperatura ambiente e mantida em agitação por mais 4 h. Em seguida, à mistura foi adicionado ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-l-((llS,14S,17S,18R)-l-amino-17 ((S)-sec-butil)-11,14-di-isopropil-18-metoxi-10,16-dimetil-9,12,15 -trioxo-
3,6-dioxa-10,13,16-triazaicosan-20-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2metilpropanamido)-3-fenilpropanoico (60 mg, 0,067 mmol) e DIPEA (20 pl, 0,114 mmol). A mistura foi agitada a 50°C durante a noite, concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (200 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Cis, 10-100% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do título (25,6 mg, 31% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para Cs^^NssOisP [M+H]+ 1195,59, encontrado 1196,10.
Exemplo 115. Síntese de (S,E)-2-metil-N-(3-metilbutan-2-ilideno)propano-2sulfonamida.
'Bu^s—
II
Figure BR112019020049A2_D0373
[00308] A uma solução de (S)-2-metilpropano-2-sulfinamida (100 g, 0,825 mol, 1,0 eq.) em 1 L de THF foi adicionado Ti(OEt)4 (345 mL, 1,82 mol, 2,2 eq.) e 3-metil-2-butanona (81 mL, 0,825 mol, 1,0 eq.) sob N2 à t.a. A mistura reacional foi submetida a refluxo durante 16 h, depois foi resfriada até a t.a. e vertida em água gelada. A mistura foi filtrada e a torta de filtração foi
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234/310 lavada com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada para dar um resíduo que foi purificado por destilação a vácuo (15-20 torr, 95°C) para dar o produto do título (141 g, 90% de rendimento) como um óleo amarelo. RMN 1H (500 MHz, CDCI3) δ 2,54 2,44 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 1,17 (s, 9H), 1,06 (dd, J = 6,9, 5,1 Hz, 6H). MS ESI m/z calculado para CçHiçNaNOS [M+Na]+ 212,12; encontrado 212,11. Exemplo 116. Síntese de ácido (2S,3S)-2-azido-3-metilpentanoico.
—^co2h
[00309] A uma solução de NaN3 (20,0 g, 308 mmol) em uma mistura de água (50 mL) e diclorometano (80 mL), resfriada a 0°C, Tf2O (10 mL, 59,2 mmol, 2,0 eq.) foi adicionado lentamente. Após adição, a reação foi agitada a 0°C por 2 h, em seguida a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 40 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de NaHCCE e utilizadas sem alteração. A solução de diclorometano de triflilazida foi adicionada a uma mistura de (L)isoleucina (4,04 g, 30,8 mmol, 1,0 eq.), K2COs (6,39 g, 46,2 mmol, 1,5 eq.), CuSO4‘5H2O (77,4 mg, 0,31 mmol, 0,01 eq.) em água (100 ml) e metanol (200 ml). A mistura foi agitada à t.a. por 16 h. Os solventes orgânicos foram removidos sob pressão reduzida e a fase aquosa foi diluída com água (250 mL) e acidificada a pH 6 com HC1 concentrado e diluída com tampão fosfato (0,25 M, pH 6,2, 250 mL). A camada aquosa foi lavada com EtOAc (5 x 100 mL) para remover o subproduto de sulfonamida e depois acidificada a pH 2 com HC1 concentrado, extraída com EtOAc (3 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas para dar o produto do título (4,90 g, 99% de rendimento) como um óleo incolor. RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 12,01 (s, 1H), 3,82 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 2,00 (ddd, J = 10,6, 8,6, 5,5 Hz, 1H), 1,54 (dqd, J = 14,8, 7,5, 4,4 Hz, 1H), 1,36 - 1,24 (m, 1H), 1,08 - 0,99 (m, 3H), 0,97 - 0,87 (m, 3H). Exemplo 117. Síntese de ácido D-N-metil-pipecolínico.
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235 /310
Y 'co2h
[00310]
A uma solução de ácido D-pipecolínico (10,0 g, 77,4 mmol,
1,0 eq.) em metanol (100 mL) foi adicionado formaldeído (solução aquosa a 37%, 30,8 mL, 154,8 mmol, 2,0 eq.), seguido de Pd/C (10% em peso, 1,0 g). A mistura reacional foi agitada sob H2 (1 atm) durante a noite e depois filtrada através de Celite, com lavagem da membrana do filtro com metanol. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para prover o composto do título (10,0 g, 90% de rendimento) como um sólido branco.
Exemplo 118. Síntese de l-metilpiperidina-2-carboxilato de (R)perfluorofenil.
Figure BR112019020049A2_D0374
[00311]
A uma solução de ácido D-N-metil-pipecolínico (2,65 g, 18,5 mmol) em EtOAc (50 mL) foram adicionados pentafluorofenol (3,75 g, 20,4 mmol) e DCC (4,21 g, 20,4 mmol). A mistura reacional foi agitada à t.a. por 16 h e depois filtrada sobre Celite. A membrana de filtro foi lavada com 10 mL de EtOAc. O filtrado foi utilizado na próxima etapa sem purificação ou concentração adicional. MS ESI m/z calculado para C13H13F5NO2 [M+H]+ 309,08; encontrado 309,60.
Exemplo 119. Síntese de 2-(dimetilamino)-2-metilpropanoato de perfluorofenil
[00312]
A uma solução de ácido 2-(dimetilamino)-2-metilpropanoico (5,00 g, 38,10 mmol) em acetato de etila (200 ml) a 0°C foi adicionado
2,3,4,5,6-pentafluorofenol (10,4 g, 57,0 mmol) seguido pela adição de DIC (8,8 mL, 57,0 mmol). A mistura reacional foi aquecida até TA, agitada
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236/310 durante a noite e filtrada. O filtrado foi concentrado para prover o composto do título (12,0 g, > 100% de rendimento), o qual foi utilizado para a etapa seguinte sem purificação adicional. MS ESI m/z calculado para C12H13F5NO2 [M+H]+ 298,08; encontrado 298,60.
Exemplo 120. Síntese de 2,2-dietoxietanotioamida.
OEt
Figure BR112019020049A2_D0375
[00313] Misturou-se 2,2-dietoxiacetonitrila (100 g, 0,774 mol, 1,0 eq.) com solução aquosa de (NH4)2S (48%, 143 mL, 1,05 mol, 1,36 eq.) em metanol (1,5 L) à temperatura ambiente. Após agitação durante 16 h, a mistura reacional foi concentrada e o resíduo foi absorvido em diclorometano, lavado com solução saturada de NaHCCb e salmoura, seco sobre Na2SO4 anidro e concentrado. O resíduo foi triturado com uma mistura de solvente de éter de petróleo e diclorometano. Após filtração, o produto do título desejado como um sólido branco foi coletado (100 g, 79% de rendimento). RMN ’H (500 MHz, CDCI3) δ 7,81 (d, J = 71,1 Hz, 2H), 5,03 (s, 1H), 3,73 (dq, J= 9,4, 7,1 Hz, 2H), 3,64 (dq, J= 9,4, 7,0 Hz, 2H), 1,25 (t, J= 7,1 Hz, 6H).
Exemplo 121. Síntese de 2-(dietoximetil)tiazol-4-carboxilato de etil.
OEt
Figure BR112019020049A2_D0376
o
[00314] 90 g de peneiras moleculares (3 A) foram adicionadas a uma mistura de 2,2-dietoxietanotioamida (100 g, 0,61 mol, 1,0 eq.) e bromopiruvato de etil (142 mL, 1,1 mol, 1,8 eq.) em 1 L de EtOH. A mistura foi submetida a refluxo (temperatura interna de cerca de 60° C) durante 1 h, depois o etanol foi removido em evaporador rotativo e o resíduo foi absorvido em diclorometano. O sólido foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna (PE/EtOAc 5:1-3:1) para dar o composto do título (carboxilato de tiazol) (130 g, 82% de rendimento) como um óleo amarelo.
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237/310
Exemplo 122. Síntese de 2-formiltiazol-4-carboxilato de etil.
O
II \ H N—CO2Et
Figure BR112019020049A2_D0377
[00315] A uma solução de 2-(dietoximetil)tiazol-4-carboxilato (130 g, 0,50 mol) em acetona (1,3 L) foi adicionado HC1 2 N (85 mL, 0,165 mol, 0,33 eq.). A mistura reacional foi submetida a refluxo (temperatura interna de cerca de 60°C), monitorada por análise por TLC até o material de partida ter sido completamente consumido (cerca de 1-2 h). A acetona foi removida sob pressão reduzida e o resíduo foi absorvido em diclorometano (1,3 L), lavado com solução saturada de NaHCCE, água e salmoura, e depois seco sobre Na2SO4 anidro. A solução foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por recristalização a partir de éter de petróleo e éter dietílico para prover o composto do título como um sólido branco (40 g, 43% de rendimento). RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 10,08 - 10,06 (m, 1H), 8,53 - 8,50 (m, 1H), 4,49 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,44 (t, J = 7,1 Hz, 3H). MS ESI m/z calculado para C7H8NO3S [M+H]+ 186,01; encontrado 186,01.
Exemplo 123. Síntese de 2-((R,E)-3-(((S)-terc-butilsulfinil)imino)-l-hidroxi4- metilpentil)tiazol-4-carboxilato de etil.
OH
N
CO2I.t 'BiXo
Figure BR112019020049A2_D0378
[00316] A uma solução de di-isopropilamina (121 mL, 0,86 mol, 4,0 eq.) em THF seco (300 mL) foi adicionado n-butil-lítio (2,5 M, 302 mL, 0,76 mol 3,5 eq.) a -78°C sob N2. A mistura reacional foi aquecida a 0°C durante 30 min e depois resfriada de volta para -78°C. Foi adicionado (S,E)-2-metilN-(3-metilbutan-2-ilideno)propano-2-sulfonamida (57 g, 0,3 mol, 1,4 eq.) em THF (200 mL). A mistura reacional foi agitada por 1 h antes de CITi(O'Pr)3 (168,5 g, 0,645 mol, 3,0 eq.) em THF (350 mL) ser adicionado gota a gota. Após agitação durante 1 h, 2-formiltiazol-4-carboxilato de etil (40 g, 0,215
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238/310 mol, 1,0 eq.) dissolvido em THF (175 mL) foi adicionado gota a gota e a mistura reacional resultante foi agitada por 2 h. A conclusão da reação foi indicada por análise por TLC. A reação foi resfriada bruscamente por uma mistura de ácido acético e THF (v/v 1:4, 200 mL), depois vertida sobre água gelada, extraída com EtOAc (4 x 500 mL). A fase orgânica foi lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (DCM/EtOAc/PE 2:1:2) para prover o composto do título (60 g, 74% de rendimento) como um óleo incolor. RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 8,13 (s, 1H), 6,63 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 5,20 - 5,11 (m, 1H), 4,43 (q, J= 7,0 Hz, 2H), 3,42 - 3,28 (m, 2H), 2,89 (dt, J = 13,1, 6,5 Hz, 1H), 1,42 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,33 (s, 9H), 1,25 - 1,22 (m, 6H). MS ESI m/z calculado para Ci6H26NaN2O4S2 [M+Na]+ 397,13, encontrado 397,11.
Exemplo 124. Síntese de 2-((lR,3R)-3-((S)-l,l-dimetiletilsulfinamido)-lhidroxi-4-metilpentil) tiazol-4-carboxilato de etil.
Figure BR112019020049A2_D0379
[00317] Uma solução de 2-((R,E)-3-(((S) -terc-butilsulfinil)imino)-lhidroxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxilato de etil (23,5 g, 62,7 mmol) dissolvido em THF (200 mL) foi resfriado a -45°C. Ti(OEt)4 (42,9 mL, 188 mmol, 3,0 eq.) foi adicionado lentamente. Após a conclusão da adição, a mistura foi agitada por 1 h, antes de NaBH4 (4,75 g, 126 mmol, 2,0 eq.) ser adicionado em porções. A mistura reacional foi agitada a -45°C por 3 h. A análise por TLC mostrou que ainda havia algum material de partida. A reação foi resfriada bruscamente com HOAc/THF (v/v 1: 4,25 mL), seguido por EtOH (25 mL). A mistura reacional foi vertida sobre gelo (100 g) e aquecida até a t.a. Após filtração sobre Celite, a fase orgânica foi separada e lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (EtOAc/PE 1:1) para
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239/310 entregar o produto do título (16,7 g, 71% de rendimento) como um sólido branco. RMN Ή (500 MHz, CDC13) δ 8,10 (s, 1H), 5,51 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 5,23 - 5,15 (m, 1H), 4,41 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,48 - 3,40 (m, 1H), 3,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 2,29 (t, J= 13,0 Hz, 1H), 1,95 - 1,87 (m, 1H), 1,73 - 1,67 (m, 1H), 1,40 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,29 (s, 9H), 0,93 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 7,2 Hz, 3H). MS ESI m/z calculado para Ciô^NaNzCtó [M+Na]+ 399,15, encontrado 399,14.
Exemplo 125. Síntese de cloridrato de 2-((lR,3R)-3-amino-l-hidroxi-4metilpentil)tiazol-4-carboxilato de etil.
Figure BR112019020049A2_D0380
[00318] A uma solução de 2-((lR,3R)-3-((S)-l,ldimetiletilsulfinamido)-l-hidroxi-4-metilpentil) tiazol-4-carboxilato de etil (6,00 g, 16,0 mmol, 1,0 eq .) em etanol (40 mL) foi adicionado HC1 4 N em dioxano (40 mL) lentamente a 0°C. A reação foi deixada aquecendo até a t.a. e agitada durante 2,5 h e depois concentrada e triturada com éter de petróleo. Um composto do título sólido branco (4,54 g, 92% de rendimento) foi coletado e utilizado na próxima etapa.
Exemplo 126. Síntese de 2-((lR,3R)-3-((2S, 3S)-2-azido-3metilpentanamido)- l-hidroxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxilato de etil
Figure BR112019020049A2_D0381
[00319] (2S,3S)-2-azido-3-metilpentanoico (5,03g, 28,8 mmol, 2,0 eq.) foi dissolvido em THF (120 mL) e resfriado a 0°C, ao qual NMM (6,2 mL, 56,0 mmol, 4,0 eq.) e cloroformato de isobutil (3,7 mL, 28,8 mmol, 2,0 eq.) foram adicionados em sequência. A reação foi agitada a 0°C durante 30 min e à t.a. 1,0 h, e depois resfriada de volta para 0°C. Cloridrato de 2-((1 R,3R)-3amino-l-hidroxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxilato de etil (4,54 g, 14,7 mmol,
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1,0 eq.) foi adicionado em porções. Após agitação a 0°C durante 30 min, a reação foi aquecida até a t.a. e agitada durante 2 h. Foi adicionada água a 0°C para resfriar bruscamente a reação e a mistura resultante foi extraída com acetato de etila três vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com HC1 IN, NaHCCb saturado e salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (0-30% de EtOAc/ΡΕ) para dar um composto do título sólido branco (4,55 g, 74% de rendimento).
Exemplo 127. Síntese de 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-2-azido-3metilpentanamido)-4-metil-1 -((trietilsilil)oxi)pentil)tiazol-4-carboxilato de etil
Figure BR112019020049A2_D0382
[00320] A uma solução de 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-2-azido-3metilpentanamido)-l-hidroxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxilato de etil (5,30 g,
12.8 mmol, 1,0 eq.) em CH2C12 (50 mL) foi adicionado imidazol (1,75 g, 25,6 mmol, 2,0 eq.), seguido por clorotrietilsilano (4,3 mL, 25,6 mmol, 2,0 eq.) a 0°C. A mistura reacional foi deixada aquecendo até a t.a. mais de 1 hora e agitada por mais uma hora. Foi adicionada salmoura à mistura reacional, a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram secas, filtradas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna com um gradiente de 1535% de EtOAc em éter de petróleo para dar o produto do título (6,70 g, 99% de rendimento) como um sólido branco. RMN ’H (500 MHz, CDCI3) δ 8,12 (s, 1H), 6,75 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,20 - 5,12 (m, 1H), 4,44 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 4,06 - 3,97 (m, 1H), 3,87 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 2,14 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 2,01 - 1,91 (m, 3H), 1,42 (t, 7 = 7,1 Hz, 3H), 1,34- 1,25 (m, 2H), 1,06 (d, J =
6.8 Hz, 3H), 1,00 - 0,93 (m, 18H), 0,88 (dd, J = 19,1, 6,8 Hz, 6H). MS ESI
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241/310 m/z calculado para C24H44N5O4SS1 [M+H]+ 526,8, encontrado 526,28. Exemplo 128. Síntese de 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-2-azido-N,3-dimetil pentanamido)-4-metil- l-((trietilsilil)oxi)pentil)tiazol-4-carboxilato de etil
Figure BR112019020049A2_D0383
[00321] Uma solução de 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-2-azido-3metilpentanamido)-4-metil-1 -((trietilsilil)oxi)pentil)tiazol-4-carboxilato de etil (5,20 g, 9,9 mmol, 1,0 eq.) em THF (50 mL) foi resfriada a -45°C e KHMDS (1M em tolueno, 23,8 mL, 23,8 mmol, 2,4 eq.) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada a -45°C por 20 min, seguida pela adição de iodeto de metila (1,85 mL, 29,7 mmol, 3,0 eq.). A mistura reacional foi aquecida à t.a. durante 4,5 h, em seguida a reação foi resfriada bruscamente com EtOH (10 mL). O produto bruto foi diluído com EtOAc (250 mL) e lavado com salmoura (100 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 50 ml). As camadas orgânicas foram secas, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna com um gradiente de 15-35% de EtOAc em éter de petróleo para prover o produto do título (3,33 g, 63% de rendimento) como um óleo amarelo claro. RMN ’H (500 MHz, CDCI3) δ 8,09 (s, 1H), 4,95 (d, J = 6,6 Hz, 1H),4,41 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,56 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,27 - 2,06 (m, 4H), 1,83 - 1,70 (m, 2H), 1,41 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,29 (ddd, J = 8,9, 6,8, 1,6 Hz, 3H), 1,01 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,96 (dt, J = 8,0, 2,9 Hz, 15H), 0,92 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,7 Hz,3H). MS ESI m/z calculado para C25H46N5O4SS1 [M+H]+ 540,30, encontrado 540,30.
Exemplo 129. Síntese de 2-((3S,6R,8R)-3-((S)-sec-butil)-10,10-dietil-6isopropil-5-metil-1 -((R)- l-metilpiperidina-2-il)-1,4-dioxo-9-oxa-2,5-diaza10-siladodecan-8-il)tiazol-4-carboxilato de etil
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Figure BR112019020049A2_D0384
[00322] Pd/C seco (10% em peso, 300 mg) e 2-((lR,3R)-3-((2S, 3S)-2azido-N,3-dimetilpentanamido)-4-metil-l-((trietilsilil)oxi)pentil)tiazol-4carboxilato de etil (3,33 g, 6,61 mmol) foram adicionados ao 1metilpiperidina-2-carboxilato de (R)-perfluorofenil-2-carboxilato em EtOAc. A mistura reacional foi agitada sob atmosfera de hidrogênio por 27 h e depois filtrada através de um tampão de Celite, com lavagem da membrana de filtro com EtOAc. As porções orgânicas combinadas foram concentradas e purificadas por cromatografia em coluna com um gradiente de 0-5% de metanol em EtOAc para entregar o produto do título (3,90 g, 86% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C32H59N4O5SS1 [M+H]+ 639,39, encontrado 639,39.
Exemplo 130. Síntese de 2-((lR,3R)-3-((2S, 3S)-N,3-dimetil-2-((R)-l-metil piperidina-2-carboxamido)pentanamido)-l-hidroxi-4-metilpentil)tiazol-4carboxilato de etil
Figure BR112019020049A2_D0385
[00323] 2-((3S,6R,8R)-3-((S)-sec-butil)-10,10-dietil-6-isopropil-5metil-1 -((R)-1 -metilpiperidin-2-il)-1,4-dioxo-9-oxa-2,5-diaza- 10-siladodecan8-il)tiazol-4-carboxilato de etil (3,90 g, 6,1 mmol) foi dissolvido em AcOH desoxigenado/água/THF (v/v/v 3:1:1, 100 mL) e agitado à t.a. por 48 h. A reação foi então concentrada e purificada em cromatografia em coluna de S1O2 (2:98 a 15:85 MeOH EtOAc) para prover o composto do título (2,50 g, 72% de rendimento ao longo de 2 etapas). MS ESI m/z calculado para C26H45N4O5S [M+H]+ 525,30, encontrado 525,33.
Exemplo 131. Síntese de ácido 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-lmetilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-l-hidroxi-4-metilpentil)tiazolPetição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 264/626
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4-carboxílico.
Figure BR112019020049A2_D0386
[00324] Uma solução aquosa de LiOH (0,4 N, 47,7 mL, 19,1 mmol, 4,0 eq.) foi adicionada a uma solução de 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil2-((R)-1 -metilpiperidina-2-carboxamido)-pentanamido)-1 -hidroxi-4metilpentil)tiazol-4-carboxilato de etil (2,50 g, 4,76 mmol, 1,0 eq.) em dioxano (47,7 mL) a 0oC. A mistura reacional foi agitada à t.a. por 2 h e depois concentrada. A purificação cromatográfica em coluna de SiO2 (CH2C12 100% e depois CH2Cl2/MeOH/NH4OH 80:20:1) produziu o composto do título (2,36 g, 99% de rendimento) como um sólido amorfo. MS ESI m/z calculado para C^fLuN^S [M+H]+ 497,27, encontrado 497,28.
Exemplo 132. Síntese de ácido 2-((lR,3R)-l-acetoxi-3-((2S,3S)-N,3-dimetil2-((R)-l-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4-metilpentil)tiazol-4carboxílico.
Figure BR112019020049A2_D0387
[00325] A uma solução de ácido 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2((R)-1 -metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-1 -hidroxi-4metilpentil)tiazol-4-carboxílico (2,36 g, 4,75 mmol) em piridina (50 mL) a 0°C, foi adicionado lentamente anidrido acético (2,25 mL, 24 mmol). A mistura reacional foi aquecida à t.a. durante 2 h e agitada à t.a. por 24 h. A reação foi concentrada e o resíduo foi purificado em HPLC de fase reversa (coluna Cis, 50 mm (d) x 250 (mm), 50 ml/min, 10-90% de acetonitrila/água em 45 min) para prover o composto do título (2,25 g, 88% de rendimento) como um sólido branco amorfo. MS ESI m/z calculado para C^IL^N^S [M+H]+ 539,28, encontrado 539,28.
Exemplo 133. Síntese de acetato de (lR,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-l
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244/310 metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4-metil-1-(4(perfluorobenzoil)tiazol-2-il)pentil.
Figure BR112019020049A2_D0388
[00326] A uma solução de ácido 2-((lR,3R)-l-acetoxi-3-((2S,3S)-N,3dimetil-2-((R)-1 -metil-piperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4metilpentil)tiazol-4-carboxilico (860 mg, 1,60 mmol, 1,0 eq.) em diclorometano (20 mL) foi adicionado pentafluorofenol (440 mg, 2,40 mmol, 1,5 eq.) e N,N'-di-isopropilcarbodi-imida (220 mg, 1,75 mmol, 1,1 eq.) a 0°C. A mistura reacional foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. Após a remoção do solvente sob pressão reduzida, a mistura reacional foi diluída com EtOAc (20 mL) e depois filtrada sobre Celite. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de SiO2 (1:10 a 1:3 EtOAc/DCM) para prover o composto do título (935,3 mg, 82% de rendimento), que foi usado diretamente para a próxima etapa. MS ESI m/z calculado para C32H42F5N4O6S [M+H]+ 704,28, encontrado 704,60.
Exemplo 134. Síntese de 2-((6S,9R,llR)-6-((S)-sec-butil)-13,13-dietil-9isopropil-2,3,3,8-tetrametil-4,7-dioxo-12-oxa-2,5,8-triaza-13-silapentadecan1 l-il)tiazol-4-carboxilato de etil.
Figure BR112019020049A2_D0389
[00327] Pd/C seco (10% em peso, 300 mg) e 2-((lR,3R)-3-((2S, 3S)-2azido-N,3-dimetilpentanamido)-4-metil-l-((trietilsilil)oxi)pentil)tiazol-4carboxilato de etil (3,33 g, 6,16 mmol) foram adicionados ao 2(dimetilamino)-2-metilpropanoato de perfluorofenil (~ 2,75 g, 1,5 eq bruto) em EtOAc. A mistura reacional foi agitada sob atmosfera de hidrogênio por 27 h e depois filtrada através de um tampão de Celite, com lavagem da membrana de filtro com EtOAc. As porções orgânicas combinadas foram
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245/310 concentradas e purificadas por cromatografia em coluna com um gradiente de 0-5% de metanol em EtOAc para entregar o produto do título (3,24 g, 84% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C31H59N4O5SS1 [M+H]+ 626,39, encontrado 626,95.
Exemplo 135. Síntese de 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-2-(2-(dimetilamino)-2metilpropanamido)-N,3-dimetilpentanamido)-l-hidroxi-4-metilpentil)tiazol4-carboxilato de etil.
Figure BR112019020049A2_D0390
[00328] 2-((6S,9R,llR)-6-((S)-sec-butil)-13,13-dietil-9-isopropil2,3,3,8-tetrametil-4,7-dioxo-12-oxa-2,5,8-triaza-13-silapentadecan-llil)tiazol-4-carboxilato de etil (3,20 g, 5,11 mmol) foi dissolvido em AcOH desoxigenado/água/THF (v/v/v 3:1:1, 100 mL) e agitado à t.a. por 48 h. A reação foi então concentrada e purificada em cromatografia em coluna de S1O2 (2:98 a 15:85 MeOH EtOAc) para prover o composto do título (2,33 g, 89% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C25H45N4O5S [M+H]+ 512,30, encontrado 512,45.
Exemplo 136. Síntese de ácido 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-2-(2-(dimetilamino)-2metilpropanamido)-N,3-dimetilpentanamido)-l-hidroxi-4-metilpentil)tiazol4-carboxílico.
Figure BR112019020049A2_D0391
[00329] Uma solução aquosa de LiOH (0,4 N, 47,7 mL, 19,1 mmol, 4,0 eq.) foi adicionada a uma solução de 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-2-(2(dimetilamino)-2-metilpropanamido)-N,3-dimetilpentanamido)-l-hidroxi-4metilpentil)tiazol-4-carboxilato de etil (2,30 g, 4,50 mmol, 1,0 eq.) em dioxano (50 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada à t.a. por 2 h e depois concentrada. A purificação cromatográfica em coluna de SiO2 (CH2CI2 100%
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246/310 e depois CHiCIt/McOH/NILOH 80:20:1) produziu o composto do título (2,13 g, 98% de rendimento) como um sólido amorfo. MS ESI m/z calculado para C23H4iN4O5S [M+H]+ 485,27, encontrado 485,55.
Exemplo 137. Síntese de ácido 2-((6S,9R,llR)-6-((S)-sec-butil)-9-isopropil2,3,3,8-tetrametil-4,7,13-trioxo-12-oxa-2,5,8-triazatetradecan-1 l-il)tiazol-4carboxílico.
Figure BR112019020049A2_D0392
[00330] A uma solução de ácido 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-2-(2(dimetilamino)-2-metilpropanamido)-N,3-dimetilpentanamido)-l-hidroxi-4metilpentil)tiazol-4-carboxílico (2,10 g, 4,33 mmol) em piridina (50 mL) a 0oC, foi adicionado lentamente anidrido acético (2,25 mL, 24 mmol). A mistura reacional foi aquecida à t.a. durante 2 h e agitada à t.a. por 24 h. A reação foi concentrada e o resíduo foi purificado em HPLC de fase reversa (coluna Cis, 50 mm (d) x 250 (mm), 50 ml/min, 10-90% de acetonitrila/água em 45 min) para prover o composto do título (1,95 g, 86% de rendimento) como um sólido branco amorfo. MS ESI m/z calculado para C25H43N4O6S [M+H]+ 526,28, encontrado 526,80.
Exemplo 138. Síntese de 2-((6S,9R,llR)-6-((S)-sec-butil)-9-isopropil-2,3,3,8tetrametil-4,7,13-trioxo- 12-oxa-2,5,8-triazatetradecan-11 -il)tiazol-4carboxilato de perfluorofenil.
Figure BR112019020049A2_D0393
[00331] A uma solução de ácido 2-((6S,9R,llR)-6-((S)-sec-butil)-9isopropil-2,3,3,8-tetrametil-4,7,13-trioxo- 12-oxa-2,5,8-triazatetradecan-11i)tiazol-4-carboxílico (1,90 g, 3,61 mmol, 1,0 eq.) em diclorometano (70 mL) foi adicionado pentafluorofenol (1,00 g, 5,43 mmol, 1,5 eq.) e N,N'-diisopropilcarbodi-imida (512 mg, 3,96 mmol, 1,1 eq.) a 0°C. A mistura
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247/310 reacional foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. Após a remoção do solvente sob pressão reduzida, a mistura reacional foi diluída com EtOAc (80 mL) e depois filtrada sobre Celite. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de SiO2 (1:10 a 1:3 EtOAc/DCM) para prover o composto do título (2,09 g, 84% de rendimento), que foi usado diretamente para a próxima etapa. MS ESI m/z calculado para CsiILeFs^OôS [M+H]+ 693,27, encontrado 693,60.
Exemplo 139. Síntese de 2-(trifenilfosforanilideno)propanoato de terc-butil.
Ph3P^
CCVBu
[00332] Uma mistura de terc-butil-2-bromopropanoato (15,5 g, 74,1 mmol, 1,0 eq.) e trifenil fosfina (19,4 g, 74,1 mmol, 1,0 eq.) em acetonitrila seca (45 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 18 h. A acetonitrila foi removida sob pressão reduzida e foi adicionado tolueno para precipitar um precipitado branco. O tolueno foi então removido por decantação e o sólido branco foi dissolvido em diclorometano (100 mL) e transferido para um funil de separação. Foi adicionado NaOH a 10% (100 mL) ao funil e a camada orgânica imediatamente ficou amarela após agitação. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (30 mL) uma vez. As camadas de diclorometano foram combinadas e lavadas com salmoura (50 mL) uma vez, depois secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas, dando o ileto como um sólido amarelo (16,8 g, 58%).
Exemplo 140. Síntese de 3-(4-(benziloxi)fenil)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)propanoato de (S)-metil.
BocHN^s^^
MeO2C UfOB„
[00333] A uma mistura de Boc-L-Tyr-OMe (20,0 g, 67,7 mmol, 1,0 eq.), K2CO3 (14,0 g, 101,6 mmol, 1,5 eq.) e Kl (1,12 g, 6,77 mmol, 0,1 eq.) em acetona (100 mL) foi adicionado BnBr (10,5 mL, 81,3 mmol, 1,2 eq.)
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248/310
Figure BR112019020049A2_D0394
lentamente. A mistura foi então submetida a refluxo durante a noite. Foi adicionada água (250 mL) e a mistura reacional foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (300 mL), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de SiO2 (4:1 hexanos/EtOAc) para dar um composto do título sólido branco (26,12 g, 99% de rendimento). RMN ’H (500 MHz, CDC13) δ 7,44 - 7,41 (m, 2H), 7,41 - 7,36 (m, 2H), 7,35 - 7,30 (m, 1H), 7,04 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 6,93 - 6,89 (m, 2H), 5,04 (s, 2H), 4,97 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,03 (dd, J = 14,4, 5,7 Hz, 2H), 1,44 (d, J = 18,6 Hz, 10H). MS ESI m/z calculado para C22H27NO5Na [M+Na]+408,18, encontrado 408,11.
Exemplo 141. Síntese de (l-(4-(benziloxi)fenil)-3-oxopropan-2-il)carbamato de (S)-terc-butil
BocHN
[00334] A uma solução de 3-(4-(benziloxi)fenil)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-propanoato de (S)-metil (26,1 g, 67,8 mmol, 1,0 eq.) em diclorometano anidro (450 mL ) a -78°C foi adicionado DIBAL (1,0 M em hexanos, 163 mL, 2,2 eq. ) em 1 h. A mistura foi agitada a -78°C durante 3 h e depois resfriada bruscamente com 50 mL de etanol. Foi adicionado HC1 1 N gota a gota até atingir o pH 4. A mistura resultante foi deixada aquecendo até 0°C. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). A solução orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. A trituração com ΡΕ/EtOAc e filtração deu um composto do título sólido branco (18,3 g, 76% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C22H27NO5Na [M+Na]+ 378,11, encontrado 378,11.
Exemplo 142. Síntese de 5-(4-(benziloxi)fenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpent-2-enoato de (S,Z)-terc-butil.
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249/310
BocHN ‘BuCÇC^
Figure BR112019020049A2_D0395
OBn
[00335] (l-(4-(benziloxi)fenil)-3-oxopropan-2-il)carbamato de (S)terc-butil (0,84 g, 2 mmol, 1,0 eq.) em diclorometano seco (50 mL), ao qual 2- trifenil-fosforanilideno)propanoato de terc-butil (1,6 g, 4 mmol, 2,0 eq.) foi adicionado e a solução foi agitada à temperatura ambiente por 1,5 h até a conclusão ser determinada por TLC. A purificação por cromatografia em coluna (10-50% de EtOAc/hexanos) proveu o composto do título (1,16g, 98% de rendimento).
Exemplo 143. Síntese de 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(4-hidroxifenil)-2metilpentanoato de (4R)-terc-butil t
Figure BR112019020049A2_D0396
OH
[00336] 5-(4-(benziloxi)fenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2 metilpent-2-enoato de (S,Z)-terc-butil (467 mg ± 1 mmol) foi dissolvido em metanol (30 mL) e hidrogenado (1 atm) com catalisador Pd/C (10% em peso, 250 mg) à t.a. durante a noite. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para prover o composto do título (379 mg ~ 99% de rendimento).
Exemplo 144. Síntese de 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(4-hidroxi-3 nitrofenil)-2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil
BocHN^^/“VOH tBuO2C>^' NO2
[00337] 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(4-hidroxifenil)-2metilpentanoato de (4R)-terc-butil (379 mg ± 1 mmol, 1,0 eq.) foi dissolvido em THF (20 mL), para à qual foi adicionada uma solução de nitrito de tercbutil (315 mg, 3 mmol, 3,0 eq.) em THF (2 mL). A reação foi agitada à t.a. por 3 h e depois vertida em água, extraída com EtOAc (2 x 50 mL) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre
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250/310
Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas. A purificação por cromatografia em coluna (10-50% de EtOAc/hexanos) proveu o composto do título (300 mg, 71% de rendimento).
Exemplo 145. Síntese de 5-(3-amino-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil.
BocHN tBuO2C
Figure BR112019020049A2_D0397
OH
NH2
[00338] 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(4-hidroxi-3-nitrofenil)-2metil-pentanoato de (4R)-terc-butil (200 mg, 0,47 mmol) foi dissolvido em EtOAc (30 mL) e misturado com catalisador de paládio (10% em carbono, 100 mg), depois hidrogenado (1 atm) à t.a. por 2 h. O catalisador foi removido por filtração e todos os voláteis foram removidos a vácuo que proveu o composto do título (185 mg, 99%).
[00339] Altemativamente, 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(4hidroxi-3-nitrofenil)-2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil (56 mg ± 0,132 mmol) foi dissolvido em EtOAc (20 mL) e misturado com catalisador Pd/C (10% em peso, 50 mg) e hidrogenado (1 atm) à t.a. por 3 h. O catalisador foi removido por filtração e todos os voláteis foram removidos a vácuo para prover o composto do título (52 mg, 99% de rendimento). MS ESI m/z calculado para C2iH35N2O5 [M+H]+395,25, encontrado 395,26.
Exemplo 146. Síntese de 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(4-((íercbutildimetilsilil)oxi)3-nitrofenil)-2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil.
Figure BR112019020049A2_D0398
[00340] A uma solução de 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(4hidroxi-3-nitrofenil)-2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil (424 mg, 1 mmol) em DCM (20 mL) foram adicionados imidazol (408 mg, 6 mmol) e tercbutilclorodimetilsilano (602 mg, 4 mmol). A solução resultante foi agitada à t.a. por 3 h. Posteriormente, a mistura reacional foi lavada com salmoura (50
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251/310 mL), seca sobre Na2SÜ4 anidro, concentrada e purificada por cromatografia em coluna (10% a 30% de EtOAc/hexanos) para produzir o composto do título (344 mg, 64% de rendimento).
Exemplo 147. Síntese de 5-(3-amino-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)fenil)-4 ((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoateno de (4R)-terc-butil.
qtbs tBuO2C^^ 1NH2
[00341] 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-3-nitrofenil)-2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil (200 mg ± 0,37 mmol) foi dissolvido em EtOAc (30 mL), misturado com catalisador de paládio (10% em peso em carbono, 100 mg) e hidrogenado (1 atm) à t.a. por 2 h. O catalisador foi removido por filtração e todos os voláteis foram removidos a vácuo para prover o composto do título (187 mg, 99% de rendimento).
Exemplo 148. Síntese de l-azido-14,17-dimetil-12,15-dioxo-3,6,9-trioxa13,16-diazaoctadecano-18 -oato de 2-( 1 -azido-14,17-dimetil-12,15 -dioxo3,6,9-trioxa-13,16-diazaoctadecanamido)-4-((2R)-5-(terc-butoxi)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-4-metil-5-oxopentil)fenil
WO .
fW’
Figure BR112019020049A2_D0399
OH
MI,
EDC/DMA/DIPEA
BocHN lBuO2C
Figure BR112019020049A2_D0400
[00342] A uma solução de ácido 1-azido-14,17-dimetil-12,15-dioxo3,6,9-trioxa-13,16-diazaoctadecan-18-oico (1,50 g, 3,85 mmol) e 5-(3-amino4-hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato de (4R)terc-butil (0,75 g, 1,90 mmol) em DMA (40 ml) foram adicionados EDC (2,05 g, 10,67 mmol) e DIPEA (0,70 ml, 4,0 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com
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252/310
EtOAc/CH2Cl2 (1:5 a 1:1) para prover o composto do título (2,01 g, 82% de rendimento, -95% puro por HPLC). MS ESI m/z calculado para C5iH85Ni20i7 [M+H]+ 1137,61, encontrado 1137,90.
Exemplo 149. Síntese de 5-(22,23-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)3,6,39,42-tetrametil-2,5,8,21,24,37,40,43-octaoxo3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,15,16,18,19,20,21,22,23,
24,25,26,27,29,30,32,33,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44-hexatriaconta-hidro2H-benzo[b][l,14,17,20,31,34,37,4,7,10,23,28,41,44]heptaoxa-heptaazaciclo-hexatetracontin-46-il)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2metilpentanoato de (4R)-terc-butil
Figure BR112019020049A2_D0401
[00343] 1 - Azido-14,17-dimetil-12,15 -dioxo-3,6,9-trioxa-13,16diazaoctadecan-18-oato de 2-( 1 -azido-14,17-dimetil-12,15-dioxo-3,6,9-trioxa13,16-diazaoctadecanamido)-4-((2R)-5-(terc-butoxi)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-4-metil-5-oxopentil)fenil (900 mg, 0,79 mmol) foi dissolvido em EtOAc (30 mL), misturado com catalisador de paládio (10% em peso em carbono, 100 mg) e hidrogenado (1 atm) à temperatura ambiente por 4 h. O catalisador foi removido por filtração e todos os voláteis foram removidos a vácuo para prover l-amino-14,17-dimetil-12,15-dioxo-3 6,9trioxa-13,16-diazaoctadecan-18-oato de 2-( 1 -amino-14,17-dimetil-12,15dioxo-3,6,9-trioxa-13,16-diazaoctadecanamido)-4-((2R)-5-(terc-butoxi)-2
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253 /310 ((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metil-5-oxopentil)fenil (815 mg, 96% de rendimento) que foi utilizado imediatamente sem purificação adicional. MS ESI m/z calculado para CsiHssNsOn [M+H]+ 1085,62, encontrado 1085,95. [00344] O composto de diamino (810 mg, 0,75 mmol) e ácido 2,3bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)succínico (231 mg, 0,75 mmol) em DMA (10 ml) foi adicionado EDC (1,25 g, 6,51 mmol) e DIPEA (0,35 ml, 2,0 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de SiCE eluída com EtOAc/CHiCE (1:5 a 1:1) para prover o composto do título (844 mg, 83% de rendimento, -95% puro por HPLC). MS ESI m/z calculado para C63H92N10O23 [M+H]+ 1357,63, encontrado 1357,95.
Exemplo 150. Síntese de (2R)-l-(22,23-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirroll-il)-3,6,39,42-tetrametil-2,5,8,21,24,37,40,43-octaoxo3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,15,16,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,29, 30,32,33,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44-hexatriaconta-hidro-2Hbenzo[b] [1,14,17,20,31,34,37,4,7,10,23,28,41,44]heptaoxahepta-azaciclohexatetracontin-46-il)-4-carboxipentan-2-amínio
Figure BR112019020049A2_D0402
[00345] 5-(22,23-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)-3,6,39,42tetrametil-2,5,8,21,24,37,40,43-octaoxo-3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,15,16,18,19, 20,21,22,23, 24,25,26,27,29,30,32,33,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44hexatriaconta-hidro-2Hbenzo[b] [1,14,17,20,31,34,37,4,7,10,23,28,41,44]heptaoxa-hepta-azaciclohexatetracontin-46-il)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil (840 mg, 0,62 mmol) foi dissolvido na mistura de CH2CI2 (6 ml) e TFA (4 ml). A mistura foi agitada durante a noite, diluída com tolueno (10 ml), concentrada para prover o composto do título (7,43 g, rendimento de
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100%, -91% puro por HPLC) que foi utilizado para a próxima etapa sem purificação adicional. MS ESI m/z calculado para C54H76N10O21 [M+H]+ 1200,51, encontrado 1200,95.
Exemplo 151. Síntese de ácido (4R)-4-(2-((lR,3R)-l-acetoxi-3-((2S, 3S)-N,3dimetil-2-((R)-1 -metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-5 - (3 - (3 -(2- (2azidoetoxi)etoxi)propanamido)-4-hidroxifenil)-2-metilpentanoico.
[00346] A uma solução de ácido (4R)-4-(2-((lR,3R)-l-acetoxi-3((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-l-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-5-(3-amino-4-hidroxifenil)-2metilpentanoico (Huang Y. et al, Med Chem. #44, 249th ACS National Meeting, Denver, CO, Mar. 22-26, 2015; W02014009774) (100 mg, 0,131 mmol) na mistura de DMA (10 ml) e solução tampão de NaH2PO4 (pH 7,5, 1,0 M, 0,7 ml) foi adicionado 3-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanoato de 2,5dioxopirrolidin-l-il (80,0 mg, 0,266 mmol) em quatro porções em 2 h. A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada em HPLC preparativa em Cis (3,0 x 25 cm, 25 ml/min), eluida com água/metanol 80% a água/metanol 10% em 45 minutos para pro ver o composto do título (101,5 mg, 82% de rendimento). LC-MS (ESI) m/z calculado para C45H70N9O11S [M+H]+: 944,48, encontrado: 944,70.
Exemplo 152. Síntese de ácido (4R)-4-(2-((lR,3R)-l-acetoxi-3-((2S, 3S)-N,3dimetil-2-((R)-1 -metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-5 - (3 - (3 -(2- (2aminoetoxi)etoxi)propanamido)-4-hidroxifenil)-2-metilpentanoico.
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Figure BR112019020049A2_D0403
[00347] A uma solução de ácido (4R)-4-(2-((lR,3R)-l-acetoxi-3-((2S, 3S)-N,3-dimetil-2-((R)-l-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-5 - (3 - (3 -(2- (2azidoetoxi)etoxi)propanamido)-4-hidroxifenil)-2-metilpentanoico (100,0 mg, 0,106 mmol) em metanol (25 ml) contendo HC1 a 0,1% em uma garrafa de hidrogenação foi adicionado Pd/C (25 mg, 10% Pd, 50% de umidade). Depois de aspirado o ar no vaso e ser aplicado 35 psi de H2, a mistura foi agitada por 4 h, filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado e purificado em HPLC preparativa em Cis (3,0 x 25 cm, 25 ml/min), eluído com água/metanol 85% a água/metanol 15% em 45 minutos para prover o composto do título (77,5 mg, 79% produção). LC-MS (ESI) m/z calculado para C45H72N7O11S [M+H]+: 918,49, encontrado: 918,60.
Exemplo 153. Síntese de 5-(4-acetoxi-3-nitrofenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil.
Figure BR112019020049A2_D0404
[00348] A uma solução do composto 190 (107,1 mg, 0,252 mmol) em diclorometano (4,0 mL) a 0°C foi adicionado anidrido acético (0,11 mL, 1,17 mmol) e trietilamina (0,16 mL) em sequência. A reação foi então aquecida à t.a. e agitada durante 1 h, diluída com diclorometano e lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro, filtrado e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (0-15% de EA/PE) para dar um óleo incolor (120,3 mg, rendimento teórico). MS ESI m/z calculado para C23H35N2O8 [M+H]+ 467,23, encontrado 467,23.
Exemplo 154. Síntese de 5-(4-acetoxi-3-aminofenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil.
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256/310
Figure BR112019020049A2_D0405
[00349] 5-(4-acetoxi-3-nitrofenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2metilpentanoato de (4R)-terc-butil (120,3 mg, 0,258 mmol) foi dissolvido em acetato de etila (5 mL) e ácido acético (0,5 mL). Ao qual foi adicionado Pd/C (10% em peso, 10 mg) e a mistura foi agitada sob balão de H2 à t.a. durante 30 minutos antes da filtração através de uma membrana de Celite com lavagem da membrana com acetato de etila. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna (0-25% EA/DCM) para dar um óleo amarelo (120,9 mg, rendimento teórico). MS ESI m/z calculado para C23H37N2O6 [M+H]+ 437,26, encontrado 437,28.
Exemplo 155. Síntese de 5-(3-(4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanamido)-4((terc-butildimetilsilil)oxi)fenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2metilpentanoato de (4R)-etil.
Figure BR112019020049A2_D0406
[00350] 4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanoato de 2,5dioxopirrolidin-l-il (0,396 g, 1,2 mmol) e 5-(3-amino-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato de 5-(3R)-etil (0,44 g, 1,2 mmol) foram dissolvidos em EtOH (10 mL) e adicionou-se uma solução tampão de fosfato (pH = 7,5, 0,lM, 2 mL). A mistura reacional foi agitada à t.a. durante a noite e depois o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de S1O2 para dar o produto do título (0,485 g, 70%). ESI: m/z: calculado para C3iH44N3O8 [M+H]+:586,31, encontrado 586,31.
Exemplo 156. Síntese de 5-(3-(4-aminobutanamido)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)fenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato de (4R)-etil
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BocHNEtO2C
7_VOTBS ζθ
HN-\ NH2
[00351]
5-(3- (4- (((benziloxi)carbonil)amino)butanamido)-4- ((terc butildimetil-silil)oxi)fenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato de (4R)-etil (0,35 g, 0,5 mmol) foi dissolvido em MeOH (5 ml) e adicionou-se Pd/C (10% em peso, 35 mg). A mistura reacional foi agitada à t.a. sob balão de H2 durante a noite, depois filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar o produto do título (0,22 g, 79% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para CioHsoNsOôSí [M+H]+:566,35, encontrado 566,35.
Exemplo 157. Síntese de ácido 2-((6S,9S,12R,14R)-9-((S)-sec-butil)-14hidroxi-6,12-diisopropil-2,2,5,1 l-tetrametil-4,7,10-trioxo-3-oxa-5,8,11triazatetradecan-14-il)tiazol-4-carboxílico.
Η O OH
Figure BR112019020049A2_D0407
[00352]
A uma solução de Boc-N-Me-L-Val-OH (33 mg, 0,14 mmol) em EtOAc foi adicionado pentafluorofenol (39 mg, 0,21 mmol) e DCC (32 mg, 0,154 mmol). A mistura reacional foi agitada à t.a. durante 16 h e depois filtrada sobre uma membrana de Celite, com lavagem da membrana com EtOAc. O filtrado foi concentrado e redissolvido em DMA (2 mL) e depois ácido 2-((lR,3R)-3-((2S,3S)-2-amino-N,3-dimetilpentanamido)-l-hidroxi-4metilpentil)tiazol-4-carboxílico (52 mg, 0,14 mmol) e DIPEA (48,5 pL, 0,28 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada à t.a. durante 24 h e depois concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (coluna Ci8, ΙΟΙ 00% de acetonitrila/água) para prover o composto do título (40,2 mg, 49% de rendimento). ESI MS m/z: calculado C^PLo^CUS [M+H]+: 585,32, encontrado 585,32.
Exemplo 158. Síntese de ácido 2-((6S,9S,12R,14R)-9-((S)-sec-butil)-6,12-di
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258/310 isopropil-2,2,5,1 l-tetrametil-4,7,10,16-tetraoxo-3,15-dioxa-5,8,11-triazaheptadecan-14-il)tiazol-4-carboxilico.
Figure BR112019020049A2_D0408
[00353] Ácido 2-((6S,9S,12R,14R)-9-((S)-sec-butil)-14-hidroxi-6,12diisopropil-2,2,5,1 l-tetrametil-4,7,10-trioxo-3-oxa-5,8,11-triazatetradecan14-il)tiazol-4-carboxrlico (40 mg, 0,069 mmol) foi dissolvido em piridina (8 mL), ao qual anidrido acético (20,4 mg, 0,2 mmol) foi adicionado a 0°C e a reação foi deixada aquecendo até a t.a. e agitada durante a noite. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de SiO2 com um gradiente de DCM/MeOH para dar o produto do título (48,1 mg, ~ 100% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C30H51N4O8S [M+H]+ 627,33, encontrado 627,33.
Exemplo 159. Síntese de ácido (4R)-4-(2-((6S,9S,12R,14R)-9-((S)-sec-butil)6,12-diisopropil-2,2,5,1 l-tetrametil-4,7,10,16-tetraoxo-3,15-dioxa-5,8,11triazaheptadecan-14-il)tiazole-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico.
Figure BR112019020049A2_D0409
[00354] A uma solução de ácido 2-((6S,9S,12R,14R)-9-((S)-sec-butil)6,12-di-isopropil-2,2,5,1 l-tetrametil-4,7,10,16-tetraoxo-3,15-dioxa-5,8,11triaza-heptadecan-14-il)tiazol-4-carboxílico (48,1 mg, 0,077 mmol) em EtOAc foi adicionado pentafluorofenol (21,2 mg, 0,115 mmol) e DCC (17,4 mg, 0,085 mmol). A mistura reacional foi agitada à t.a. durante 16 h e depois filtrada sobre uma membrana de Celite, com lavagem da membrana com EtOAc. O filtrado foi concentrado e redissolvido em DMA (4 mL) e depois ácido (4R)-4-amino-2-metil-5-fenilpentanoico (20,7 mg, 0,1 mmol) e DIPEA (26,8 pL, 0,154 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada à
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t.a. durante 24 h e depois concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (coluna Cis, 10-100% de acetonitrila/água) para prover o composto do título (63 mg, ~ 100% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C42H66N5O9S [M+H]+ 816,45, encontrado 816,45.
Exemplo 160. Síntese de sal de cloridrato de ácido (4R)-4-(2((3S,6S,9R,llR)-6-((S)-sec-butil)-3,9-di-isopropil-8-metil-4,7,13-trioxo-12oxa-2,5,8-triazatetradecan-ll-il)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-
Figure BR112019020049A2_D0410
[00355] Ácido (4R)-4-(2-((6S,9S,12R,14R)-9-((S)-sec-butil)-6,12diisopropil-2,2,5,1 l-tetrametil-4,7,10,16-tetraoxo-3,15-dioxa-5,8,11triazaheptadecan-14-il)tiazole-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (60 mg, 0,073 mmol) em acetato de etila (3 ml) e cloreto de hidrogênio (0,8 ml, 12 M). A mistura foi agitada durante 30 min. e diluída com tolueno (5 ml) e dioxano (5 ml). A mistura foi evaporada e coevaporada com dioxano (5 ml) e tolueno (5 ml) até a secura. O produto do título bruto produzido (57,1 mg, 103% de rendimento) foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. ESI MS m/z: calculado para CsjHssNsChS [M+H]+ 716,40, encontrado 716,60.
Exemplo 161. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2(((benziloxi)carbonil)amino)-propanamido)acetamido)-4-hidroxifenil)-4((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato
Figure BR112019020049A2_D0411
[00356] Ácido 2-(2-(((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)acético (0,2 g, 0,7 mmol), (4R)-terc-butil-5-(3-amino-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,19 g, 0,48 mmol) e HATU (0,18
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260/310 g, 0,48 mmol) foram dissolvidos em DCM (20 mL), seguido pela adição de TEA (134 ul, 0,96 mmol). A mistura reacional foi agitada à TA durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado na coluna de S1O2 para dar o produto do título (0,3 g, 95%). ESI: m/z: calculado para C34H49N4O9 [M+H]+:657,34, encontrado 657,34.
Exemplo 162. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2aminopropanamido)acetamido)-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato
Figure BR112019020049A2_D0412
[00357] Em uma garrafa de hidrogenação, Pd/C (0,1 g, 33% em peso, 50% de umidade) foi adicionado a uma solução de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2(((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)acetamido)-4-hidroxifenil)-4((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,3 g, 0,46 mmol) em MeOH (10 mL). A mistura foi agitada durante a noite sob 1 atm de H2 depois filtrada através de Celite (auxiliar de filtração), e o filtrado foi concentrado para prover o composto do título (0,2Ig, 87%) utilizado para a etapa seguinte sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C26H43N4O7 [M+H]+:523,31, encontrado 523,31.
Exemplo 163. Síntese de B-l (um fragmento de tubulisina tendo um bis-
Figure BR112019020049A2_D0413
[00358] 5-(3-(2-(2-Aminopropanamido)acetamido)-4-hidroxifenil)-4((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,11 g, 0,2 mmol), ácido
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4,17-dioxo-4,7,10,21,24,27-hexaoxa-13,18-diazatriacont-15-in-l,30-dioico (0,104 g, 0,2 mmol), HATU (0,07 g, 0,2 mmol) foram dissolvidos em DCM ( 10 ml), seguido pela adição de TEA (55 ul, 0,4 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de SiO2 para dar o produto B-l (0,046 g, 23%). ESI: m/z: calculado para C48H75N6O17 [M+H]+: 1007,51, encontrado 1007,52.
Exemplo 164. Síntese de B-2 (um fragmento de tubulisina tendo um bisligante).
BocHN •O
[00359] O composto B-l (0,046 g, 0,045 mmol) dissolvido em DCM (1 ml) foi adicionado TFA (1 ml) e a mistura reacional foi agitada à TA por 2 h, concentrada e coevaporada com DCM/tolueno para prover o composto bruto B-2 (38,6 mg, 100% de rendimento) utilizado para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C39H59N6O15 [M+H]+: 851,40, encontrado 851,95.
Exemplo 165. Síntese de B-3 (um análogo de tubulisina com um bis-ligante).
Figure BR112019020049A2_D0414
[00360] À solução do composto B-2 (38,6 mg, 0,045 mmol) em DMA
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262/310 (4 mL) foi adicionado 2-((6S,9R,llR)-6-((S)-sec-butil)-9-isopropil-2,3,3,8tetrametil-4,7,13-trioxo- 12-oxa-2,5,8-triazatetradecan-11 -il)tiazol-4carboxilato de perfluorofenil (31,14 mg, 0,045 mmol) e depois DIPEA ( 28 ul, 0,159 mmol) foi adicionado, a reação foi agitada durante a noite. Em seguida, a solução foi concentrada e purificada por HPLC com um gradiente de MeCN/H2O (MeCN 10% a MeCN 70% em 45 min, coluna C-18, 10 mm (d) x 250 mm (1), 9 ml/min) para dar o produto do título (7,9 mg, 13%). ESI: m/z: calculado para C64H99N10O20S [M+H]+: 1359,67, encontrado 1359,62.
Exemplo 166. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(((benziloxi)carbonil)amino)3-metilbutanamido)-4-hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2 metilpentanoato.
Figure BR112019020049A2_D0415
[00361] (4R)-terc-butil-5-(3-amino-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,2 g, 0,51 mmol), ácido 2(((benziloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanoico (0,13 g, 0,51 mmol), HATU (0,2 g, 0,51 mmol) foram dissolvidos em DCM (20 ml), seguido de TEA (110 ul, 0,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à TA durante a noite. Em seguida, o solvente foi removido sob pressão reduzida e purificado pela coluna de S1O2 para dar o produto do título 12 (0,29 g, 90%). ESI: m/z: calculado para C34H50N3O8 [M+H]+: 628,35, encontrado 628,35.
Exemplo 167. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-amino-3-metilbutanamido)4-hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato.
Figure BR112019020049A2_D0416
[00362] Em uma garrafa de hidrogenação, Pd/C (0,1 g, 33% em peso, 50% de umidade) foi adicionado a uma solução (4R)-terc-butil-5-(3-(2(((benziloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)-4-hidroxifenil)-4-((terc
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263/310 butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,29 g, 0,46 mmol) em MeOH (10 mL). A mistura foi agitada durante a noite sob 1 atm de H2, e depois filtrada através de Celite (auxiliar de filtração). O filtrado foi concentrado para prover o composto do título (0,23 g, 100%) e utilizado na próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C26H44N3O6 [M+H]+:494,64, encontrado 494,64.
Exemplo 168. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2 (((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)-3-metilbutanamido)-4hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonilil))amino)-2-metilpentanoato.
Figure BR112019020049A2_D0417
CbzHN
HATU, TEA, DCM
HOOC.
BocHN ‘BuO2C
Figure BR112019020049A2_D0418
NHCbz
[00363] (4R)-terc-butil-5-(3-(2-amino-3-metilbutanamido)-4hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,23 g, 0,46 mmol), ácido 2-(((benziloxi)carbonil)aminopropanoico (0,10 g, 0,46 mmol) e o HATU (0,18 g, 0,46 mmol) foram dissolvidos em DCM (20 ml), seguido pela adição de TEA (110 ul, 0,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de S1O2 para dar o produto do título (0,3g, 95%). ESI: m/z: calculado para C37H55N4O9 [M+H]+: 699,39, encontrado 699,35.
Exemplo 169. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2-aminopropanamido)-3metilbutanamido)-4-hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2metilpentanoato
Figure BR112019020049A2_D0419
[00364] Em uma garrafa de hidrogenação, Pd/C (0,1 g, 33% em peso, 50% de umidade) foi adicionado a uma solução de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2(((benziloxi))carbonil)amino)propanamido)-3-metilbutanamido)-4
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 285/626
264/310 hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,3 g,0,43 mmol) em MeOH (10 mL). A mistura foi agitada durante a noite sob 1 atm de H2 e depois filtrada através de Celite (auxiliar de filtração), o filtrado foi concentrado para prover o composto do título (0,22 g, 93%) que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C29H49N4O7 [M+H]+:565,35, encontrado 565,31.
Exemplo 170. Síntese de B-4 (um fragmento de tubulisina tendo um bisligante).
Figure BR112019020049A2_D0420
Figure BR112019020049A2_D0421
BocHN
[00365]
COOtBu B-4 (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2-aminopropanamido)-3metilbutanamido)-4-hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2metilpentanoato (0,05 g, 0,09 mmol), ácido ll,14-dioxo-4,7,18,21-tetraoxa10,15-diazatetracos-12-ina-l,24-dioico (0,038 g, 0,09 mmol), HATU (0,067 g, 0,18 mmol) foram dissolvidos em DCM (10 ml), seguido pela adição de TEA (55ul, 0,4 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de SiO2 para dar o produto B-4 (0,01g, 12%). ESI: m/z: calculado para C47H73N6Oi5 [M+H]+: 961,51, encontrado 961,52.
Exemplo 171. Síntese de B-5 (um fragmento de tubulisina tendo um bisligante).
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 286/626
265/310
Figure BR112019020049A2_D0422
[00366] O composto Β-4 (0,01 g, 0,01 mmol) foi dissolvido em DCM (1 ml), seguido pela adição de TFA (0,8 ml). A mistura reacional foi agitada à TA por 2 h, concentrada para prover o composto B-5 (10 mg) para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para CssHsôNóOn [M+H]+: 804,39, encontrado 804,65.
Exemplo 172. Síntese de B-6 (um análogo de tubulisina com um bis-ligante).
Figure BR112019020049A2_D0423
[00367] À solução do composto B-5 (~10 mg) em DMA (4 mL) foi adicionado composto ácido ativado por pentaflúor (6,92mg, 0,01 mmol) e DIPEA (3,4ul, 0,02 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite, concentrada e purificada em HPLC com um gradiente de MeCN/lLO (MeCN 10% a MeCN 70% em 45 min, coluna C-18, 10 mm (d) x 250 mm (1), 9 ml/min) para dar o produto B-6 (8,1 mg, 62%). ESI: m/z: calculado para C63H97NioOi8S [M+H]+: 1313,66, encontrado 1313,66.
Exemplo 173. Síntese de B-7 (um fragmento de tubulisina tendo um bisligante).
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 287/626
266/310
Figure BR112019020049A2_D0424
[00368] (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2-aminopropanamido)acetamido)-4hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,21 g, 0,4 mmol), ácido 11,14-dioxo-4,7,18,21-tetraoxa-10,15-diazatetracos-12-ina1,24-dioico (0,17 g, 0,4 mmol), HATU (0,15 g, 0,4 mmol) foram dissolvidos em DCM (10 ml), seguido pela adição de TEA (110ul, 0,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à TA durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de S1O2 para dar o produto B-7 (0,126g, 34%) ESI: m/z: calculado para C44H67N6O15 [M+H]+: 919,46, encontrado 919,46.
Exemplo 174. Síntese de B-8 (um fragmento de tubulisina tendo um bisligante).
Figure BR112019020049A2_D0425
[00369] O composto B-7 (0,04 Ig, 0,045mmol) foi dissolvido em DCM (1 ml), seguido pela adição de TFA (1ml). A mistura reacional foi agitada à TA por 2 h, concentrada para prover o composto B-8 que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C35H5iN60i3 [M+H]+: 763,35, encontrado 763,80.
Exemplo 175. Síntese de B-9 (um análogo de tubulisina com um bis-ligante).
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 288/626
267/310
Figure BR112019020049A2_D0426
(1 mL) foi adicionado composto ácido ativado por pentaflúor (8,3mg, 0,012mmol) e DIPEA (l,4ul, 0,008mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite, concentrada e purificada em HPLC com um gradiente de MeCN/H2O (MeCN 10% a MeCN 70% em 45 min, coluna C-18, 10 mm (d) x 250 mm (1), 9 ml/min) para dar o título B-9 (4,7mg, 31%). ESI: m/z: calculado para CôoHçiNioOisS [M+H]+: 1271,62, encontrado 1271,62.
Exemplo 176. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)-4-hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-
Figure BR112019020049A2_D0427
[00371] (4R)-terc-butil-5-(3-amino-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,3g, 0,76mmol), ácido 2(((benziloxi)carbonil)aminopropanoico (0,17g, 0,76mmol), HATU (0,29g, 0,76mmol) foram dissolvidos em DCM (20 ml), seguido pela adição de TEA (110 ul, 0,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de SiO2 para dar o produto do título (0,43g, 95%). ESI: m/z: calculado para C32H46N3O8 [M+H]+: 600,32, encontrado 600,32.
Exemplo 177. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-aminopropanamido)-4hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato.
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 289/626
268/310
Figure BR112019020049A2_D0428
[00372] Em uma garrafa de hidrogenação, Pd/C (0,1 g, 33% em peso, 50% de umidade) foi adicionado a uma solução de (4R)-terc-butil-5-(3-(2(((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,3 g, 0,5 mmol) em MeOH (10 mL). A mistura foi agitada durante a noite sob 1 atm de H2 e depois filtrada através de Celite (auxiliar de filtração). O filtrado foi concentrado para prover o composto do título (0,24g, 100%) que foi utilizado na próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C24H40N3O6 [M+H]+:466,28, encontrado 466,28.
Exemplo 178. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2(((benziloxi)carbonil)amino)-propanamido)propanamido)-4-hidroxifenil)-4((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato
Figure BR112019020049A2_D0429
[00373] (4R)-Terc-butil-5-(3-(2-aminopropanamido)-4-hidroxifenil)-4((terc-butoxi-carbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,24 g, 0,5 mmol), ácido 2(((benziloxi)carbonil)amino)-propanoico (0,1 Ig, 0,5mmol) e o HATU (0,2g, 0,5mmol) foram dissolvidos em DCM (20 ml), seguido pela adição de TEA (110 ul, 0,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de S1O2 para dar o produto do título (0,28g, 85%). ESI: m/z: calculado para C35H5iN4O9 [M+H]+: 671,36, encontrado 671,35.
Exemplo 179. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2aminopropanamido)propanamido)-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato.
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 290/626
269/310
Figure BR112019020049A2_D0430
BuOtOC
OH
BocHN
Figure BR112019020049A2_D0431
NH2
[00374] Em uma garrafa de hidrogenação, Pd/C (0,028 g, 10% em peso, 50% de umidade) foi adicionado a uma solução de (4R)-terc-butil-5-(3(2-(2-(((benziloxi)carbonil)amino)propanamido)propanamido)-4hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,28 g, 0,42mmol) em MeOH (10 mL). A mistura foi agitada durante a noite sob 1 atm de H2 e depois filtrada através de Celite (auxiliar de filtração). O filtrado foi concentrado para prover o composto do título (0,18g, 100%) que foi utilizado na próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C27H45N4O7 [M+H]+:437,32, encontrado 437,31.
Exemplo 180. Síntese de B-10 (um fragmento de tubulisina tendo um bis-
Figure BR112019020049A2_D0432
[00375] (4R)-terc-butil-5-(3-(2-(2-aminopropanamido)propanamido)4-hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,064g,
0,09 mmol), ácido ll,14-dioxo-4,7,18,21-tetraoxa-10,15-diazatetracos-12 ina-l,24-dioico (0,042g, 0,097 mmol) e HATU (0,073g, 0,194mmol) foram dissolvidos em DCM (10 ml), seguido pela adição de TEA (27.5ul, 0,2mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de SiO2 para dar o produto do título B-10 (0,074g, 82%). ESI: m/z: calculado para C45H69N6O15
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 291/626
270/310
[M+H]+: 933,47, encontrado 933,46.
Exemplo 181. Síntese de B-ll (um fragmento de tubulisina tendo um bis-
Figure BR112019020049A2_D0433
[00376] O composto B-10 (0,074g, 0,08mmol) foi dissolvido em DCM (1 ml), seguido pela adição de TFA (1 ml). A reação foi agitada à TA por 2 h, concentrada para prover o composto B-ll que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional.
Exemplo 182. Síntese de B-12 (um análogo de tubulisina com um bis ligante).
Figure BR112019020049A2_D0434
[00377] À solução do composto B-ll (62,08mg, 0,08mmol) em DMA (1 mL) foi adicionado composto ácido ativado por pentaflúor (55,36mg, 0,08mmol), depois foi adicionado DIPEA (27 ul, 0,16 mmol), a reação foi agitada durante a noite. Em seguida, a solução foi concentrada e purificada por HPLC com um gradiente de MeCN/H2O (MeCN 10% a MeCN 70% em 45 min, coluna C-18, 10 mm (d) x 250 mm (1), 9 ml/min) para dar o produto do título B-12 (20mg, 20%). ESI: m/z: calculado para CôoHçiNiqOisS
[M+H]+: 1285,63, encontrado 1285,63.
Exemplo 183. Síntese de B-13 (um fragmento de tubulisina tendo um bisPetição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 292/626
271/310
Figure BR112019020049A2_D0435
[00378] (4R)-terc-butil-5-(3-amino-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,19g, 0,48 mmol), ácido 11,14dioxo-4,7,18,21 -tetraoxa-10,15-diazatetracos- 12-ina-1,24-dioico (0,173g,
0,4mmol) e HATU (0,3g, 0,8mmol) foram dissolvidos em DCM (50 ml), seguido pela adição de TEA (110ul, 0,8mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de S1O2 para dar o produto do título B-13 (0,25g, 80%). ESI: m/z: calculado para C39H59N4Oi3 [M+H]+: 791,40, encontrado 791,40.
Exemplo 184. Síntese de B-14 (um fragmento de tubulisina tendo um bisligante).
Figure BR112019020049A2_D0436
[00379] O composto B-13 (0,lg, 0,14mmol) foi dissolvido em DCM (1 ml), seguido pela adição de TFA (0,8 ml). A mistura reacional foi agitada à TA por 2 h, e depois concentrada para prover o composto B-14 que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional.
Exemplo 185. Síntese de B-15 (um análogo de tubulisina com um bisligante).
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 293/626
272/310
Figure BR112019020049A2_D0437
[00380] À solução do composto B-14 (88,76mg, 0,14mmol) em DMA (1 mL) foi adicionado composto ácido ativado por pentaflúor (96,88mg, 0,14mmol), depois foi adicionado DIPEA (47,5 ul, 0,28mmol), a reação foi agitada durante a noite. Em seguida, a solução foi concentrada e purificada por HPLC com um gradiente de MeCN/H2O (MeCN 10% a MeCN 70% em 45 min, coluna C-18, 10 mm (d) x 250 mm (1), 9 ml/min) para dar o produto do título B-15 (40mg, 25%). ESI: m/z: calculado para CssHssNsOiôS [M+H]+: 1143,56, encontrado 1143,56.
Exemplo 186. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanamido)-4-hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2 metilpentanoato.
Figure BR112019020049A2_D0438
[00381] (4R)-terc-butil-5-(3-amino-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,2g, 0,5mmol), ácido 4(((benziloxi)carbonil)amino)butanoico (0,12g, 0,5mmol) e HATU (0,2g, 0,5mmol) foram dissolvidos em DCM (50 ml), seguido pela adição de TEA (110 ul, 0,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de SiO2 para dar o produto do título (0,26g, 85%). ESI: m/z: calculado para C33H48N3O8 [M+H]+: 614,34, encontrado 614,34.
Exemplo 187. Síntese de (4R)-terc-butil-5-(3-(4-aminobutanamido)-4hidroxifenil)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato.
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 294/626
273/310
[00382]
Figure BR112019020049A2_D0439
Ο .OH
Figure BR112019020049A2_D0440
nh2
Em uma garrafa de hidrogenação, Pd/C (0,028 g, 10% em peso, 50% de umidade) foi adicionado a uma solução de (4R)-terc-butil-5-(3(4-(((benziloxi)carbonil)amino)butanamido)-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (0,09g, 0,15mmol) em MeOH (10 mL). A mistura foi agitada durante a noite sob 1 atm de H2 e depois filtrada através de Celite (auxiliar de filtração). O filtrado foi concentrado para prover o composto do título (0,07g, 100%) que foi utilizado para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C25H42N3O6 [M+H]+:480,30, encontrado 480,31.
Exemplo 188. Síntese de B-16 (um fragmento de tubulisina tendo um bisligante).
COOtBu
[00383] (4R)-terc-butil-5-(3-(4-aminobutanamido)-4-hidroxifenil)-4 ((terc-butoxicarbonil)-amino)-2-metilpentanoato (39mg, 0,08mmol), ácido
11,14-dioxo-4,7,18,21 -tetraoxa-10,15-diazatetracos-12-ina-1,24-dioico (43mg, 0,lmmol) e HATU (30,4mg, 0,08mmol) foram dissolvidos em DCM (20 ml), seguido pela adição de TEA (22ul, 0,16mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada na coluna de S1O2 para dar o produto do título B-16 (42mg, 60%). ESI: m/z: calculado para C43H66N5Oi4 [M+H]+: 876,45, encontrado 876,40.
Exemplo 189. Síntese de B-17 (um fragmento de tubulisina tendo um bis
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 295/626
274/310 ligante).
Figure BR112019020049A2_D0441
[00384] O composto B-16 (17mg, 0,019mmol) foi dissolvido em DCM (0,8 ml), seguido pela adição de TFA (0,5 ml). A mistura reacional foi agitada à TA por 2 h, e depois concentrada para prover o composto B-17 (17 mg, >100%) que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C34H50N5O12 [M+H]+: 720,34, encontrado 720,70.
Exemplo 190. Síntese de B-18 (um análogo de tubulisina com um bis ligante).
Figure BR112019020049A2_D0442
[00385] À solução do composto B-17 (13,6mg, 0,019mmol) em DMA (1 mL) foi adicionado composto ácido ativado por pentaflúor (13mg, 0,019mmol) e DIPEA (6,4ul, 0,038mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite, concentrada e purificada em HPLC com um gradiente de MeCN/H2O (MeCN 10% a MeCN 70% em 45 min, coluna C-18, 10 mm (d) x 250 mm (1), 9 ml/min) para dar o produto do título B-18 (9,9mg, 42%). ESI: m/z: calculado para C59H90N9O17S [M+H]+: 1228,61, encontrado 1228. 60.
Exemplo 191. Síntese de (4R)terc-butil-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(3(4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il))butanamido)-4-((4-(2,5-dioxo-2,5di-hidro-1 H-pirrol-1 -il)butanoil)oxi)fenil)-2-metilpentanoato.
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 296/626
275/310
BocHN
Figure BR112019020049A2_D0443
[00386] (4R)-terc-butil-5-(3-amino-4-hidroxifenil)-4-((terc butoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (68 mg, 0,17 mmol), ácido 4-(2,5dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)butanoico (94,5 mg, 0,52 mmol) e o HATU (161,5 mg, 0,425 mmol) foram dissolvidos em DCM (50 ml), seguido pela adição de TEA (73ul, 0,52 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada por coluna de SiO2 eluída com EtOAc/DCM (1:10) para dar o produto do título (98mg, 80%). ESI: m/z: calculado para C37H49N4O11 [M+H]+: 725,33, encontrado 725,34.
Exemplo 192. Síntese de sal de TFA de (2R)-4-carboxi-l-(3-(4-(2,5-dioxo-
2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)butanamido)-4-((4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lHpirrol-1 -il)butanoil)oxi)fenil)pentan-2-amínio.
Figure BR112019020049A2_D0444
[00387] (4R)terc-butil-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(3-(4-(2,5 dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il))butanamido)-4-((4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidrolH-pirrol-l-il)butanoil)oxi)fenil)-2-metilpentanoato (98 mg, 0,135 mmol) foi dissolvido em DCM (5 ml), seguido pela adição de TFA (3 ml). A mistura reacional foi agitada à TA por 2 h, e depois concentrada para prover o composto do título (95 mg, >100% de rendimento) que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C28H33N4O9 [M+H]+: 569,22, encontrado 569,60.
Exemplo 193. Síntese de ácido (4R)-4-(2-((6S,9R,llR)-6-((S)-sec-butil)-9isopropil-2,3,3,8-tetrametil-4,7,13-trioxo- 12-oxa-2,5,8-triazatetradecan-11
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 297/626
276/310 il)tiazol-4-carboxamido)-5-(3-(4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-lil)butanamido)-4-((4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1 H-pirrol-1 il)butanoil)oxi)fenil)-2-metilpentanoico(B-19).
Figure BR112019020049A2_D0445
[00388] À solução de sal de TFA de (2R)-4-carboxi-l-(3-(4-(2,5dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)-butanamido)-4-((4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro1 H-pirrol-l-il)butanoil)oxi)fenil)pentan-2-aminio (76,9 mg, 0,135 mmol) em DMA (1 ml) foi adicionado composto ácido ativado por pentaflúor (44 mg, 0,06 mmol) e DIPEA (45,8 ul, 0,27 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite, concentrada e purificada em HPLC com um gradiente de MeCN/H2O (MeCN 10% a MeCN 70% em 45 min, coluna C-18, 10 mm (d) x 250 mm (1), 9 ml/min) para dar o produto do título B-19 (37mg, 55%). ESI: m/z: calculado para C53H73N8O14S [M+H]+: 1077,49, encontrado 1077. 50.
Exemplo 194. Síntese de 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(3-(3-(2-(2-(2(2,5(dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)etoxi)etoxi)etoxi)propanamido)-4-((3(2-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1 H-pirrol-1 ilo)etoxi)etoxi)etoxi)propanoil)oxi)fenil)-2-metilpentanoato de (4R)-tercbutil.
Figure BR112019020049A2_D0446
[00389] (4R)-terc-butil-5-(3-amino-4-hidroxifenil)-4-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-metilpentanoato (100 mg, 0,25 mmol), ácido 3-(2
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277/310 (2- (2- (2,5 -dioxo-2,5 -di-hidro-1 H-pirrol-1 -il)etoxi)etoxi) etoxi)propanoico (75 mg, 0,25 mmol) e HATU (190mg, 0,5mmol) foram dissolvidos em DCM (50 ml), seguido pela adição de TEA (73 ul, 0,5 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida e purificada em coluna de SiO2 eluída com EtOAc/DCM (1:3) para dar o produto do título (180,05 mg, 75%). ESI: m/z: calculado para C47H69N4O17 [M+H]+: 961,45, encontrado 961,81.
Exemplo 195. Síntese de sal de TFA de (2R)-4-carboxi-1-(3-(3-(2-(2-(2-(2,5dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)etoxi)etoxi)etoxi)propanamido)-4-((3-(2-(2(2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1 H-pirrol-1 il)etoxi)etoxi)etoxi)propanoil)oxi)fenil)pentan-2-amínio / \ o 9 / \ o
BocHN
O1
COOH
O‘
[00390] 4-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-(3-(3-(2-(2-(2-(2,5-dioxo-
2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)etoxi)etoxi)etoxi)propanamido)-4-((3-(2-(2-(2(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-ilo)etoxi)etoxi)etoxi)propanoil)oxi)fenil)2-metilpentanoato de (4R)-terc-butil (180,0mg,0,187mmol) foi dissolvido em DCM (12ml), seguido pela adição de TFA (6ml). A mistura reacional foi agitada à TA por 2 h, depois concentrada e coevaporada com DCM/tolueno até a secura para prover o composto do título (155 mg, >100% de rendimento) que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI: m/z: calculado para C38H54N4O15 [M+H]+: 805,35, encontrado 805,60.
Exemplo 196. Síntese de ácido (4R)-4-(2-((6S,9R,llR)-6-((S)-sec-butil)-9isopropil-2,3,3,8-tetrametil-4,7,13-trioxo-12-oxa-2,5,8-triazatetradecan-llil)tiazole-4-carboxamido)-5-(3-(3-(2-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirroll-il)etoxi)etoxi)etoxi)propanamido)-4-((3-(2-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro1 H-pirrol-1 -il)etoxi)etoxi)etoxi)propanoil)oxi)fenil)-2-metilpentanoico (B20).
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278/310
Figure BR112019020049A2_D0447
[00391] À solução de sal de TFA de (2R)-4-carboxi-1-(3-(3-(2-(2-(2 (2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il))etoxi)etoxi)etoxi)propanamido)-4-((3 (2-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1 H-pirrol-1 il)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)propanoil)oxi)fenil)pentan-2-amínio (43mg,0,06mmol) em DMA (ImL) foi adicionado composto ácido ativado por pentaflúor (48,5 mg, 0,06 mmol) e DIPEA (34ul, 0,2 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite, concentrada e purificada em HPLC com um gradiente de MeCN/ILO (MeCN 10% a MeCN 70% em 45 min, coluna
C-18, 10 mm (d) x 250 mm (1), 9 ml/min) para dar o produto do título B-20 (35 mg, 45%). ESI: m/z: calculado para C59H85N8Oi8S [M+H]+: 1313,61, encontrado 1313. 85.
Exemplo 197. Síntese de ácido (4R)-5-(22,23-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lHpirrol-l-il)-3,6,39,42-tetrametil-2,5,8,21,24,37,40,43-octaoxo3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,15,16,18,19,20,2122,23,24,25,26,27,29,30,32,33,35,36,
37,38,39,40,41,42,43,44-hexatriaconta-hidro-2H- benzo[b] [1,14,17,20,31,34,37,4,7,10,23,28,41,44]heptaoxa-hepta-azaciclohexatetracontin-46-il)-4-(2-((6S,9R,HR)-6-((S)-seg)-butil)-9-isopropil2,3,3,8-tetrametil-4,7,13-trioxo-12-oxa-2,5,8-triazatetradecan-1 l-il)tiazol-4carboxamido)-2-metilpentanoico (B -21).
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279/310
Figure BR112019020049A2_D0448
Figure BR112019020049A2_D0449
B-21
[00392] À essa solução de sal de TFA de (2R)-l-(22,23-bis(2,5-dioxo-
2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)-3,6,39,42-tetrametil-2,5,8,21,24,37,40,43octaoxo-3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,15,16,18,19,20,21, 22,23,24,25,26,27,29,
30,32,33,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44-hexatriaconta-hidro-2H- benzo[b] [1,14,17,20,31,34,37, 4,7,10,23,28,41,44]heptaoxahepta-azaciclohexatetracontin-46-il)-4-carboxipentan-2-amínio(60 mg, 0,050 mmol) em DMA (1,5 ml) foi adicionado composto ácido ativado por pentaflúor (44 mg, 0,06 mmol) e NaH2PO4 0,1 M, pH 7,5, 0,8 ml. A mistura reacional foi agitada durante a noite, concentrada e purificada em HPLC com um gradiente de MeCN/H2O (MeCN 10% a MeCN 70% em 45 min, coluna C-18, 10 mm (d) x 250 mm (1), 8 ml/min) para dar o produto do título B-21 (44 mg, 52% de rendimento). ESI: m/z: calculado para C79H117N14O26S [M+H]+: 1709,79, encontrado 1709,55.
Exemplo 198. Síntese de ácido (4R)-4-(2-((4R,6R,9S,12S,15S,18S)-9-((S)sec-butil)-6,12-diisopropil-7,13,15,18-tetrametil-2,8,ll,14,17,20,23heptaoxo-21-propiolamido-3-oxa-7,10,13,16,19,22-hexaazapentacos-24-in-4il)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (B-22).
Figure BR112019020049A2_D0450
[00393] Ao sal de cloridrato de ácido (4R)-4-(2-((3S,6S,9R,llR)-6 ((S)-sec-butil)-3,9-diisopropil-8-metil-4,7,13-trioxo-12-oxa-2,5,8triazatetradecan-11 -il)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (25
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280/310 mg, 0,034 mmol) na mistura de DMA (2 ml) e Na2HPO4 0,1 M, pH 8,0 (1 ml), foi adicionado 2-((S)-2-(2,2-dipropiolamidoacetamido)propanamido)propanoato de (S)-2,5-dioxopirrolidin-l-il (23,1 mg 0,053 mmol) em três porções em 3 h e a mistura foi então agitada por mais 12 horas. A mistura foi concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (200 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Ci8, 10-100% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do título (30,0 mg, 85% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C51H71N9O12S [M+H]+ 1034,49, encontrado 1034,90.
Exemplo 199. Síntese de ácido (4R)-4-(2-((lR,3R)-l-acetoxi-3-((2S,3S)-N,3dimetil-2-((R)-1 -metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-5-(4-hidroxi-3-(3-(2-(2-((bis((Z)-3carboxiacril-hidrazinil)fosforil)amino)etoxi) etoxi)-propanamido)fenil)-2metilpentanoico (B-23).
Figure BR112019020049A2_D0451
[00394] Ao composto de sal de cloridrato de (Z)-3-carboxiacrilhidrazida (22,0 mg, 0,132 mmol) na mistura de THF (5 ml) e DIPEA (10 pl, 0,057 mmol) a 0°C foi adicionado POCI3 (10,1 mg, 0,0665 mmol). Após agitação a 0°C por 20 min, a mistura foi aquecida à temperatura ambiente e mantida em agitação por mais 4 h. Em seguida, à mistura foi adicionado o composto ácido (4R)-4-(2-((lR,3R)-l-acetoxi-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-
1- metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4-metilpentil)tiazol-4carboxamido)-5-(3-(3-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)propanamido)-4-hidroxifenil)-
2- metilpentanoico (60 mg, 0,065 mmol) e DIPEA (20 μΐ, 0,114 mmol). A mistura foi agitada a 50°C durante a noite, concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (250 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Ci8, 10-100% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 302/626
281/310 título (23,1 mg, 32% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C53H8iNiiOi8PS [M+H]+ 1222,51, encontrado 1222,80.
Exemplo 200. Síntese de acetato de (lR,3R)-l-(4-((2R)-5-((2aminoetil)amino)-l-(22,23-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)3,6,39,42-tetrametil-2,5,8,21,24,37,40,43-octaoxo3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,15,16,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,29,30,32,33,35,36 ,37,38,39,40,41,42,43,44-hexatriaconta-hidro-2Hbenzo[b] [1,14,17,20,31,34,37,4,7,10,23,28,41,44]heptaoxa-hepta-aza-ciclohexatetracontin-46-il)-4-metil-5-oxopentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-3-((2S, 3S)-2-(2-(dimetilamino)-2-metilpropanamido)-N,3-dimetilpentanamido)-4metilpentil (B-24).
[00395] O composto B-21 (22,0 mg, 0,0129 mmol) em DMA (1 ml) foi adicionado EDC (15,0 mg, 0,078 mmol), sal cloridrato de etano-l,2-diamina (8,0 mg, 0,060 mmol) e DIPEA (0,010 ml, 0,060 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (250 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Ci8, 10-100% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do título (14,0 mg, 62% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C81H123N16O25S [M+H]+ 1751,85, encontrado 1751,20.
Exemplo 201. Síntese de acetato de (lR,3R)-l-(4-((28R)-l-amino-29-(22,23bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)-3,6,39,42-tetrametil2,5,8,21,24,37,40,43-octaoxo-3,4,5,6,7,8,9,10,
12,13,15,16,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,29,30,32,33,35,36,37,38,39,40,41,
42,43,44-hexatriaconta-hidro-2H- benzo[b] [1,14,17,20,31,34,37,4,7,10,23,28,41,44]heptaoxa-hepta-aza-cicloPetição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 303/626
282/310 hexatetracontin-46-il)-26-metil-25-oxo-3,6,9,12,15,18,21-heptaoxa-24azanonacosan-28-il)carbamoil)tiazol-2-il)-3-((2S,3S)-2-(2-(dimetilamino)-2metilpropanamido)-N,3-dimetilpentanamido)-4-metilpentil (B-25)
[00396] O composto B-21 (22,0 mg, 0,0129 mmol) em DMA (1 ml) foi adicionado EDC (15,0 mg, 0,078 mmol), sal cloridrato de 3,6,9,12,15,18,21heptaoxatricosano-l,23-diamina (26,0 mg, 0,059 mmol) e DIPEA (0,010 ml, 0,060 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (250 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Cis, 10-100% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do título (14,5 mg, 55% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C95Hi5iNi6O32S [M+H]+ 2060,03, encontrado 2060,80.
Exemplo 202. Síntese de acetato de (lR,3R)-l-(4-(((28R)-29-(22,23-bis(2,5dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-1-11)-3,6)39,42-tetrametil-2,5,8,21,24,37,40,43 octaoxo
3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,15,16,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,29,30,32,33,35,36 ,37,38,39,40,41,42,43,44-hexatriaconta-hidro-2Hbenzo[b] [1,14,17,20,31,34,37,4,7,10,23,28,41,44]heptaoxa-hepta-aza-ciclohexatetracontin-46-il)-1 -hidroxi-26-metil-25 -oxo-3,6,9,12,15,18,21 -heptaoxa24-azanonacosan-28-il)carbamoil)tiazol-2-il)-3-((2S,3S)-2-(2-(dimetilamino)2-metilpropanamido)-N,3-dimetilpentanamido)-4-metilpentil (B-26)
[00397] O composto B-21 (22,0 mg, 0,0129 mmol) em DMA (1 ml) foi
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283 /310 adicionado EDC (15,0 mg, 0,078 mmol) e 23-amino-3,6,9,12,15,18,21heptaoxatricosan-l-ol (22,0 mg, 0,059 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (250 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Cis, 10-100% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do título (14,1 mg, 53% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C95H150N15O33S [M+H]+ 2061,02, encontrado 2061,74.
Exemplo 203. Síntese de 2-((4R)-5-(22,23-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lHpirrol-l-il)-3,6,39,42-tetrametil-2,58,21,24,37,40,43-octaoxo3,4,5,6,7,8,9,10,12,1315,16,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,29,30,32,33,35,36,
37,38,39,40,41,42,43,44-hexatriaconta-hidro-2H- benzo[b] [1,14,17,20,31,34,37,4,7,10,23,28,41,44]heptaoxa-hepta-azaciclohexatetracontin-46-il)-4-(2-((6S,9R,HR)-6-((S)-sec-butil)-9-isopropil2,3,3,8-tetrametil-4,7,13-trioxo-12-oxa-2,5,8-triazatetradecan-1 l-il)tiazol-4 carboxamido)-2-metilpentanamido)-6-((terc-butoxicarbonil)amino)hexanoato de (2S)-terc-butil (B-27).
Figure BR112019020049A2_D0452
[00398] O composto B-21 (25,0 mg, 0,0146 mmol) em DMA (1 ml) foi adicionado EDC (15,0 mg, 0,078 mmol) e 2-amino-6-((tercbutoxicarbonil)amino)hexanoato de (S)-terc-butil (9,0 mg, 0,030 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (250 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Cis, 10-100% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do título (20,5 mg, 71% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C94H144N16O29S [M+H]+ 1994,00, encontrado 1994,85.
Exemplo 204. Síntese de ácido (2S)-6-amino-2-((4R)-5-(22,23-bis(2,5-dioxo
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 305/626
284/310
2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)-3,6,3942-tetrametil-2,5,8,21,24,37,40,43-octaoxo3,4,5,6,7,8,9,10,12,1315,16,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,29,30,32,33,35,36,
37,38,39,40,41,42,43,44-hexatriacontahidro-2H- benzo[b] [1,14,17,20,31,34,37,4,7,10,23,28,41,44]heptaoxaheptaazaciclohexatetracontin-46-il)-4-(2-((6S,9R,HR)-6-((S)-sec-butil)-9-isopropil2,3,3,8-tetrametil-4,7,13-trioxo-12-oxa-2,5,8-triazatetradecano-1 l-il)tiazol-4carboxamido)-2-metilpentanamido)hexanoico (B-28).
Figure BR112019020049A2_D0453
[00399] O composto B-27 (20,0 mg, 0,010 mmol) foi dissolvido em DCM (1 ml), seguido pela adição de TFA (1 ml). A mistura reacional foi agitada à TA por 2 h, depois concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (250 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Ci8, 10-100% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do título (13,5 mg, 73% de rendimento). ESI: m/z: calculado para CssHnoNióCEvS [M+H]+: 1837,89, encontrado 1838,20.
Exemplo 205. Síntese de 4-hidroxipirrolidina-2-carboxilato de (2S,4R)-metil clorídrico.
€XO2Vle /
NH
[00400] A uma solução de trans-4-hidroxi-L-prolina (15,0 g, 114,3 mmol) em metanol seco (250 mL) foi adicionado cloreto de tionil (17 mL, 231 mmol) gota a gota de 0 a 4°C. A mistura resultante foi agitada à t.a. durante a noite, concentrada, cristalizada com EtOH/hexano para prover o composto do título (18,0 g, 87% de rendimento). ESI MS m/z 168,2 ([M+Na]+).
Exemplo 206. Síntese de 2-metil 4-hidroxipirrolidina-l,2-dicarboxilato de (2S,4R)-l-terc-butil.
Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 306/626
285/310 kCO2Me
HO'·· ^Boc
[00401] A uma solução de éster metílico de trans-4-hidroxi-L-prolina (18,0 g, 107,0 mmol) na mistura de MeOH (150 ml) e solução de bicarbonato de sódio (2,0 M, 350 ml) foi adicionado BociO (30,0 g, 137,6 mmol) em três porções em 4 h. Após agitação por mais 4 h, a reação foi concentrada a ~ 350 ml e extraída com EtOAc (4 x 80 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL), secas (MgSO4), filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de S1O2 (hexanos/EtOAc 1:1) para dar o composto do título (22,54 g, 86% de rendimento). ESI MS m/z 268,2 ([M+Na]+).
Exemplo 207. Síntese de 2-metil 4-oxopirrolidina-l,2-dicarboxilato de (S)-lterc-butil.
^CO2Me
Ν'-Boc
[00402] O composto do título preparado através da oxidação de DessMartin foi descrito em: Franco Manfre et al. J. Org. Chem. 1992, 57, 20602065. Altemativamente, o procedimento de oxidação de Swem é o seguinte: A uma solução de (COC1)2 (13,0 ml, 74,38 mmol) em CH2CI2 (350 ml) resfriado a -78°C foi adicionado DMSO seco (26,0 ml). A solução foi agitada a -78°C por 15 min e depois 2-metil 4-hidroxipirrolidina-l,2-dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butil (8,0 g, 32,63 mmol) em CH2CI2 (100 ml) foi adicionado. Após agitação a -78°C durante 2 h, trietilamina (50 ml, 180,3 mmol) foi adicionada gota a gota e a solução de reação foi aquecida à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com solução aquosa de NaH2PO4 (1,0 M, 400 ml) e fases separadas. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (2 x 60 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre MgSO4, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de S1O2 (hexanos/EtOAc 7:3) para dar o composto do título (6,73 g, 85% de rendimento). ESI MS m/z 266,2 ([M+Na]+).
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286/310
Exemplo 208. Síntese de 2-metil 4-metilenopirrolidina-l,2-dicarboxilato de (S)-l-terc-butil.
/()2VIe
[00403] A uma suspensão de brometo de metiltrifenilfosfônio (19,62 g, 55,11 mmol) em THF (150 mL) a 0°C foi adicionado t-butóxido de potássio (6,20 g, 55,30 mmol) em THF anidro (80 mL). Após agitação a 0°C por 2 h, o ileto amarelo resultante foi adicionado a uma solução de 2-metil 4oxopirrolidina-l,2-dicarboxilato de (S)-l-terc-butil(6,70 g, 27,55 mmol) em THF (40 mL). Após agitação à t.a. por 1 h, a mistura reacional foi concentrada, diluída com EtOAc (200 mL), lavada com H2O (150 mL), salmoura (150 mL), seca sobre MgSCU, concentrada e purificada em cromatografia em coluna de SiO2 (hexanos/EtOAc 9:1) para produzir o composto do título (5,77 g, 87% de rendimento). EI MS m/z 264 ([M+Na]+).
Exemplo 209. Síntese de cloridrato de 4-metilenopirrolidina-2-carboxilato de (S)-metil
^.CO2Me = \^ΧΊ Γ HC1
[00404] A uma solução de 2-metil 4-metilenopirrolidina-l,2dicarboxilato de (S)-l-terc-butil (5,70 g, 23,63 mmol) em EtOAc (40 ml) a 4°C foi adicionado HC1 (12 M, 10 ml). A mistura foi agitada durante 1 h, diluída com tolueno (50 ml), concentrada e cristalizada com EtOH/hexano para produzir o composto do título como sal de HC1 (3,85 g, 92% de rendimento). EI MS m/z 142,2 ([M+H]+).
Exemplo 210. Síntese de 2-(hidroximetil)-4-metilenopirrolidina-l-carboxilato de (S)-terc-butil.
[00405]
Figure BR112019020049A2_D0454
LiAlH4
----►
THF
Figure BR112019020049A2_D0455
uma solução de 2-metil
4-metilenopirrolidina-1,2Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 308/626
287/310 dicarboxilato de (S)-l-terc-butil. (5,20 g, 21,56 mmol) em THF anidro (100 mL) a 0°C foi adicionado L1AIH4 (15 ml, 2M em THF). Após agitação a 0°C durante 4 h, a reação foi resfriada bruscamente por adição de metanol (5 ml) e água (20 ml). A mistura reacional foi neutralizada com HC1 1 M até pH 7, diluída com EtOAc (80 ml), filtrada através de Celite, separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2SO4, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna de S1O2 (EtOAc/DCM 1:5) para produzir o composto do título (3,77 g, 82% de rendimento). EI MS m/z 236,40 ([M+Na]+).
Exemplo 211. Síntese de sal de cloridrato de (S)-(4-metilenopirrolidin-2il)metanol.
OH
VNHHCI
[00406] A uma solução de 2-(hidroximetil)-4-metilenopirrolidina-lcarboxilato de (S)-terc-butil (3,70 g, 17,36 mmol) em EtOAc (30 ml) a 4°C foi adicionado HC1 (12 M, 10 ml). A mistura foi agitada durante 1 h, diluída com tolueno (50 ml), concentrada e cristalizada com EtOH/hexano para produzir o composto do título como sal de HC1 (2,43 g, 94% de rendimento). EI MS m/z 115,1 ([M+H]+).
Exemplo 212. Síntese do ácido 4-(benziloxi)-3-metoxibenzoico.
BnO^z^ MeOx^s^CO2H
[00407] A uma mistura de ácido 4-hidroxi-3-metoxibenzoico (50,0 g, 297,5 mmol) em etanol (350 ml) e solução aq. de NaOH (2,0 M, 350 ml) foi adicionado BnBr (140,0 g, 823,5 mmol). A mistura foi agitada a 65°C durante 8 h, concentrada, coevaporada com água (2 x 400 ml) e concentrada até ~ 400 ml, acidificada a pH 3,0 com HC1 6N. O sólido foi coletado por filtração, cristalizado com EtOH, seco a 45 °C a vácuo para dar o composto do título (63,6 g, 83% de rendimento). ESI MS m/z 281,2 ([M+Na]+).
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Figure BR112019020049A2_D0456
Exemplo 213. Síntese do ácido 4-(benziloxi)-5-metoxi-2-nitrobenzoico.
MeOx^^^CO2H
[00408] A uma solução de ácido 4-(benziloxi)-3-metoxibenzoico (63,5 g, 246,0 mmol) em CH2CI2 (400 ml) e HOAc (100 ml) foi adicionado HNO3 (fumegante, 25,0 ml, 528,5 mmol). A mistura foi agitada durante 6 h, concentrada, cristalizada com EtOH, seca a 40° C a vácuo para prover o composto do título (63,3 g, 85% de rendimento). ESI MS m/z 326,1 ([M+Na]+).
Exemplo 214. Síntese de (S)-(4-(benziloxi)-5-metoxi-2-nitrofenil)(2(hidroximetil)-4-metilenopirrolidin-1 -il)metanona.
BnO
MeO
[00409] Uma quantidade catalítica de DMF (30 μΐ) foi adicionada a uma solução de ácido 4-(benziloxi)-5-metoxi-2-nitrobenzoico (2,70 g, 8,91 mmol) e cloreto de oxalil (2,0 mL, 22,50 mmol) em CH2CI2 anidro ( 70 mL) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. O excesso de CH2CI2 e cloreto de oxalilo foi removido com evaporador rotativo. O cloreto de acetil foi res suspenso em CH2CI2 fresco (70 mL) e foi adicionado lentamente a uma solução pré-misturada de sal cloridrato de (S)-(4metilenopirrolidin-2-il)metanol (1,32 g, 8,91 mmol) e EtsN (6 mL) em CH2CI2 a 0°C sob atmosfera de N2. A mistura reacional foi deixada aquecendo até a t.a. e a agitação continuou por 8 h. Após a remoção de CH2CI2 e EtsN, o resíduo foi dividido entre H2O e EtOAc (70/70 mL). A camada aquosa foi adicionalmente extraída com EtOAc (2 x 60 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (40 mL), secas (MgSO4) e concentradas. A purificação do resíduo com cromatografia flash (silica gel, hexanos/EtOAc 2:8) produziu o composto do título (2,80 g, 79% de rendimento). EI MS m/z 421,2 ([M+Na]+).
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Exemplo 215. Síntese de (S)-(4-(benziloxi)-5-metoxi-2-nitrofenil)(2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)-4-metilenopirrolidin-l-il)metanona.
Figure BR112019020049A2_D0457
[00410] (S)-(4-(Benziloxi)-5-metoxi-2-nitrofenil)(2-(hidroximetil)-4metilenopirrolidin-l-il)metanona (2,78 g, 8,52 mmol) na mistura de DCM (10 ml) e piridina (10 ml) foi adicionado terc-butilclorodimetilsilano (2,50 g, 16,66 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, concentrada e purificada na coluna de S1O2 eluída com EtOAc/CH2C12 (1:6) para prover o composto do título (3,62 g, 83% de rendimento, -95% puro). MS ESI m/z calculado para C27H37N2O6S1 [M+H]+ 513,23, encontrado 513,65.
Exemplo 216. Síntese de (S)-(4-hidroxi-5-metoxi-2-nitrofenil)(2(hidroximetil)-4-metilenopirrolidin-1 -il)metanona.
Figure BR112019020049A2_D0458
[00411] (S)-(4-(Benziloxi)-5-metoxi-2-nitrofenil)(2-(hidroximetil)-4metilenopirrolidin-l-il)metanona (2,80 g, 7,03 mmol) na mistura de DCM (10 ml) e CH3SO3H (8 ml) foi adicionado PhSCHs (2,00 g, 14,06 mmol). A mistura foi agitada durante 0,5 h, diluída com DCM (40 ml), neutralizada com adição cuidadosa de solução de Na2COs 0,1 Μ. A mistura foi separada e a solução aquosa foi extraída com DCM (2 x 10 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2SO4, concentradas e purificadas na coluna de S1O2 eluída com MeOH/CIUCh (01:15 a 1:6) para prover o composto do título (1,84 g, 85% de rendimento, -95% puro). MS ESI m/z calculado para Ci4Hi7N2O6 [M+H]+ 309,10, encontrado 309,30.
Exemplo 217. Síntese de (S)-((pentano-l,5-di-ilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitro4,l-fenileno))bis(((S)-2-(hidroximetil)-4 -metilenopirrolidin-l-il)metanona)
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Ηθζΐ £^ΟΗ
N-^^víMe Me(KSs;íí*>-Nj^ O O \^5s?
[00412] (S)-(4-hidroxi-5-metoxi-2-nitrofenil)(2-(hidroximetil)-4metilenepirrolidin-l-il)metanona (0,801 g, 2,60 mmol) em butanona (10 ml) foi adicionado CS2CO3, (2,50 g, 7,67 mmol), seguido pela adição de 1,5-diiodopentano (415 mmol, 1,28 mmol). A mistura foi agitada durante 26 h, concentrada e purificada na coluna de SiO2 eluída com MeOH/CH2Cl2 (1:15 a 1:5) para prover o composto do título (0,675 g, 77% de rendimento, ~ 95% puro). MS ESI m/z calculado para CsslLu^On [M+H]+ 685,26, encontrado 685,60.
Exemplo 218. Síntese de (S)-((pentano-l,5-di-ilbis(oxi))bis(2-amino-5metoxi-4,1-fenileno))bis(((S)-2-(hidroximetil)-4-metilenopirrolidin-1il)metanona)
Figure BR112019020049A2_D0459
[00413] (S)-((pentano-l,5-di-ilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitro-4,lfenileno))bis(((S)-2-(hidroximetil)-4-metilenopirrolidina)-l-il)metanona) (0,670 g, 0,98 mmol) em CH3OH (10 ml) foi adicionado Na2S2O4 (1,01 g, 5,80 mmol) em H2O (8 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 h. A mistura reacional foi evaporada e coevaporada com DMA (2 x 10 mL) e EtOH (2 x 10 mL) sob alto vácuo até a secura para prover o composto do título (peso total 1,63 g) contendo sais inorgânicos que foram usados diretamente para a reação da próxima etapa (sem separação adicional). EIMS m/z 647,32 ([M+Na]+).
Exemplo 219. Síntese de C-l (um análogo do dímero de PBD com um bisligante).
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Figure BR112019020049A2_D0460
[00414] 6,39-bis(4-((terc-butoxicarbonil)amino)butil)-22,23-bis(2,5dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)-3,42-bis((4-(hidroximetil)fenil)carbamoil)5,8,21,24,37,40-hexaoxo-ll,14,17,28,31,34-hexaoxa-4,7,20,25,38,41hexaazatetratetracontano-l,44-dioato de (3S,6S,39S,42S)-di-terc-butil (0,840 g, 0,488 mmol) em THF (8 mL) contendo piridina (0,100 ml, 1,24 mmol) a 0°C foi adicionado gota a gota de uma solução de trifosgênio (0,290 mg, 0,977 mmol) em THF (3,0 mL). A mistura reacional foi agitada a 0°C por 15 min e depois foi usada diretamente na próxima etapa.
[00415] Sais inorgânicos contendo (S)-((pentano-l,5-diilbis(oxi))bis(2-amino-5-metoxi-4,l-fenileno))bis(((S)-2-(hidroximetil)-4metilenopirrolidina)-l-il)metanona) (0,842 mg, ~ 0,49 mmol) foram suspensos em EtOH (10 ml) a 0°C foi adicionado o tricloreto em THF preparado acima. A mistura foi agitada a 0°C durante 4 h, e depois aquecida à TA durante 1 h, concentrada e purificada por HPLC de fase reversa (250 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Cis, 10-80% de acetonitrila/água em 40 minutos, v = 8 ml/min) para prover o composto do título (561,1 mg, 48% de rendimento em três etapas). ESI MS m/z: calculado para C117H163N16O38 [M+H]+ 2400,12, encontrado 2400,90.
Exemplo 220. Síntese de C-2 (um análogo do dímero de PBD com um bisligante).
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Figure BR112019020049A2_D0461
[00416] Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (138,0 mg, 0,329 mmol) a uma solução do composto C-l (132,0 mg, 0,055 mmol) em DCM (5,0 mL) a 0°C. A mistura reacional foi aquecida à TA e foi agitada por 2 h. Uma solução saturada de NaHCOs/NazSOs (5,0 mL/5,0 mL) foi então adicionada e a mistura foi extraída com DCM (3 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCOs/NazSOs (5,0 mL/5,0 mL), salmoura (10 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas e purificadas por HPLC de fase reversa (250 (L) mm x 10 (d) mm), coluna Ci8, acetonitrila/água 10-80% em 40 min, v = 8 ml / min) para prover o composto do título (103,1 mg, 78% de rendimento) como uma espuma. ESI MS m/z: calculado para CinHissNiôOss [M+H]+ 2396,09, encontrado 2396,65.
Exemplo 221. Síntese de C-3 (um análogo do dímero de PBD com um bis-
Figure BR112019020049A2_D0462
[00417] O composto C-2 (55,0 mg, 0,023 mmol) foi dissolvido em DCM (3 ml), seguido pela adição de TFA (3 ml). A mistura reacional foi
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293/310 agitada à TA por 2 h, depois concentrada e coevaporada com DCM/tolueno até a secura para prover o produto bruto C-3 (48,0 mg, 100% de rendimento, 92% puro por HPLC) que foi posteriormente purificado por HPLC de fase reversa (250 (L) mm x 10 (d) mm, coluna Cis, acetonitrila/água 5-60% em 40 min, v = 8 ml/min) para prover o produto puro C-3 (42,1 mg, 88% de rendimento, 96% puro) como uma espuma. ESI MS m/z: calculado para C99H126N16O34 [M+H]+ 2083,86, encontrado 2084,35.
Exemplo 222. Síntese de l-(4-(benziloxi)-5-metoxi-2-nitrobenzoil)-4metilenopirrolidina-2-carboxilato de (S)-metil.
Figure BR112019020049A2_D0463
[00418] Uma quantidade catalítica de DMF (30 pl) foi adicionada a uma solução de ácido 4-(benziloxi)-5-metoxi-2-nitrobenzoico (2,70 g, 8,91 mmol) e cloreto de oxalil (2,0 mL, 22,50 mmol) em CH2Q2 anidro ( 70 mL) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. O excesso de CH2CI2 e cloreto de oxalilo foi removido com evaporador rotativo. O cloreto de acetil foi res suspenso em CH2CI2 fresco (70 mL) e foi adicionado lentamente a uma solução pré-misturada de cloridrato de 4metilenopirrolidina-2-carboxilato de (S)-metil (1,58 g, 8,91 mmol) e Et3N (6 mL) em CH2CI2 a 0°C sob atmosfera de N2. A mistura reacional foi deixada aquecendo até a t.a. e a agitação continuou por 8 h. Após a remoção de CH2CI2 e Et3N, o resíduo foi dividido entre H2O e EtOAc (70/70 mL). A camada aquosa foi adicionalmente extraída com EtOAc (2 x 60 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (40 mL), secas (MgSO4) e concentradas. A purificação do resíduo com cromatografia flash (silica gel, hexanos/EtOAc 2:8) produziu o composto do título (2,88 g, 76% de rendimento). EI MS m/z 449,1 ([M+Na]+).
Exemplo 223. Síntese de (S)-l-(4-(benziloxi)-5-metoxi-2-nitrobenzoil)-4metilenopirrolidina-2-carbaldeído.
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294/310
BnO
MeO
Figure BR112019020049A2_D0464
NO2 CHO
Figure BR112019020049A2_D0465
[00419] A uma solução vigorosamente agitada de l-(4-(benziloxi)-5metoxi-2-nitrobenzoil)-4-metilenopirrolidina-2-carboxilato de (S)-metil (2,80 g, 6,57 mmol) em CH2CI2 anidro (60 mL ) foi adicionado DIBAL-H (IN em CH2CI2, 10 mL) gota a gota a -78°C sob atmosfera de N2. Depois da mistura ter sido agitada durante mais 90 minutos, o excesso de reagente foi decomposto por adição de 2 ml de metanol, seguido por 5% de HC1 (10 ml). A mistura resultante foi deixada aquecendo até 0°C. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída adicionalmente com CH2Q2 (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (MgSO4) e concentradas. A purificação do resíduo com cromatografia flash (silica gel, CHCh/MeOH 95:5) produziu o composto do título (2,19 g, 84% de rendimento). EIMS m/z 419,1 ([M+Na]+)·
Exemplo 224. Síntese de (S)-8-(benziloxi)-7-metoxi-2-metileno-2,3-di-hidro1 H-benzo [e] -pirrol [ 1,2-a] azepin-5 (11 aH)-ona.
O
[00420] Uma mistura de (S)-l-(4-(benziloxi)-5-metoxi-2-nitrobenzoil)4-metilenopirrolidina-2-carbaldeido (2,18 g, 5,50 mmol) e Na2S2O4 (8,0 g, 45,97 mmol) em THF (60 ml) e H2O (40 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. Os solventes foram removidos sob alto vácuo. O resíduo foi ressuspenso em MeOH (60 mL) e HC1 (6M) foi adicionado gota a gota até que o pH ~ 2 fosse atingido. A mistura resultante foi agitada à t.a. por 1 h. A reação foi processada removendo a maior parte do MeOH e depois diluída com EtOAc (100 mL). A solução EtOAc foi lavada com solução sat. de NaHCOs, salmoura, seca (MgSO4) e concentrada. A purificação do resíduo com cromatografia flash (silica gel, CHCh/MeOH 97:3) produziu o composto do título (1,52 g, 80%). EIMS m/z 372,1 ([M+Na]+).
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Exemplo 225. Síntese de (S)-8-hidroxi-7-metoxi-2-metileno-2,3-di-hidro-lHbenzo [e] -pirrol [ 1,2-a] azepin-5 (11 aH)-ona.
Figure BR112019020049A2_D0466
[00421] A uma solução de (S)-8-(benziloxi)-7-metoxi-2-metileno-2,3di-hidro-lH-benzo[e]-pirrol[l,2-a]azepin-5(llaH)-ona (1,50 g, 4,32 mmol) em 70 ml de CH2CI2 foram adicionados 25 ml de CH3SO3H a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 10 min e depois à t.a. por 2 h, diluída com CH2CI2, pH ajustado com NaHCCE 1,0 N frio para 4 e filtrada. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 x 60 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2SO4, filtradas, evaporadas e purificadas por cromatografia em coluna de S1O2 (CH3OH/CH2CI2 1:15) para prover 811 mg (73% de rendimento) do produto do título. EIMS m/z 281,1 ([M+Na]+).
Exemplo 226. Síntese de (llaS,lla'S)-8,8'-(pentano-l,5-di-ilbis(oxi))bis(7metoxi-2-metileno-2,3-di-hidro- lH-benzo[e]pirrol[l ,2-a] [ 1,4]diazepin5(llaH)-ona).
Figure BR112019020049A2_D0467
[00422] A uma solução suspensa agitada de CS2CO3 (0,761 g, 2,33 mmol) em butanona (8 ml) foram adicionados (S)-8-hidroxi-7-metoxi-2metileno-2,3-di-hidro-lH-benzo[e]-pirrol[l,2-a]azepin-5 (1 laH)-ona (401 mg, 1,55 mmol) e 1,5-di-iodopentano (240 mg, 0,740 mmol). A mistura foi agitada à t.a. durante a noite, concentrada e purificada por cromatografia de S1O2 (EtOAc/CFECh 1:10) para prover 337 mg (78% de rendimento) do produto do título. EIMS m/z 607,2 ([M+Na]+).
Exemplo 227. Síntese de (S)-7-metoxi-8-((5-(((S)-7-metoxi-2-metileno-5oxo-2,3,5,10,11,11 a-hexa-hidro-1 H-benzo[e]pirrol [ 1,2-a] [1,4] diazepin-8il)oxi)pentil)oxi)-2-metileno-2,3-di-hidro- lH-benzo[e]pirrol[ 1,2
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a] [ 1,4]diazepin-5( 11 aH)-ona.
H
Figure BR112019020049A2_D0468
[00423] A uma solução de (llaS,lla'S)-8,8'-(pentano-l,5diilbis(oxi))bis(7-metoxi-2-metileno-2,3-di-hidro-1 H-benzo[e]pirrol[ 1,2a][l,4]diazepin-5(llaH)-ona) (150 mg, 0,256 mmol) em diclorometano anidro (1 mL) e etanol absoluto (1,5 mL) foi adicionado boro-hidreto de sódio em éter metoxietilico ( 85 pL, 0,5 M, 0,042 mmol) a 0°C. O banho de gelo foi removido após 5 minutos e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas, depois foi resfriada a 0°C, resfriada bruscamente com cloreto de amônio saturado, diluída com diclorometano e as fases separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada através de Celite e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa (coluna Ci8, acetonitrila/água). As frações correspondentes foram extraídas com diclorometano e concentradas para prover o composto do título (64,7 mg, 43%), MS m/z 609,2 ([M+Na]+), 625,3 ([M+K]+) e 627,2 ([M+Na+H2O]+); o composto completamente reduzido foi obtido (16,5 mg, 11%), MS m/z 611,2 ([M+Na]+), 627,2 ([M+K]+), 629,2 ([M+Na+H2O]+); e o material de partida não reagido também foi recuperado (10,2 mg, 7%), MS m/z 607,2 ([M+Na]+), 625,2 ([M+Na+H2O]+).
Exemplo 228. Síntese de (S)-8-((5-(((S)-10-(3-(2-(2azidoetoxi)etoxi)propanoil))-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11ahexa-hidro-lH-benzo[e]pirrolo[l,2-a][l,4]diazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-7metoxi-2-metileno-2,3-di-hidro-lH-benzo[e]pirrolo[l,2-a][l,4]diazepin5(llaH)-ona.
Figure BR112019020049A2_D0469
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[00424] À mistura de (S)-7-metoxi-8-((5-(((S)-7-metoxi-2-metileno-5oxo-2,3,5,10,11,11 a-hexa-hidro-1 H-benzo[e]pirrol [ 1,2-a] [1,4] diazepin-8il)oxi)pentil)oxi)-2-metileno-2,3-di-hidro- lH-benzo[e]pirrol[ 1,2a][l,4]diazepin-5(llaH)-ona (60,0 mg, 0,102 mmol) e 3-(2-(2azidoetoxi)etoxi)propanoato de 2,5-dioxopirrolidin-l-il (40,5 mg, 0,134 mmol) em diclorometano (5 ml) foi adicionado EDC (100,5 mg, 0,520 mmol). A mistura foi agitada à t.a. durante a noite, concentrado e purificado por cromatografia em coluna de SiO2 (EtOAc/CH2Cl2, 1:6) para prover 63,1 mg (81% de rendimento) do produto do título. ESI MS m/z C40H50N7O9 [M+H] +, calculado 772,36, encontrado 772,30.
Exemplo 229. Síntese de (S)-8-((5-(((S)-10-(3-(2-(2aminoetoxi)etoxi)propanoil))-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11ahexa-hidro-lH-benzo[e]pirrolo[l,2-a][l,4]diazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-7metoxi-2-metileno-2,3-di-hidro-lH-benzo[e]pirrolo[l ,2-a] [1,4]diazepin5(llaH)-ona.
Figure BR112019020049A2_D0470
[00425] A uma solução de (S)-8-((5-(((S)-10-(3-(2-(2azidoetoxi)etoxi)propanoil))-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11ahexa-hidro-lH-benzo[e]pirrolo[l,2-a][l,4]diazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-7metoxi-2-metileno-2,3-di-hidro-lH-benzo[e]pirrolo[l ,2-a] [1,4]diazepin5(llaH)-ona (60 mg, 0,078 mmol) na mistura de THF (5 mL) e solução tampão de NaH2PO4 (pH 7,5, 1,0 M, 0,7 mL) foi adicionado PPh3 (70 mg, 0,267 mmol). A mistura foi agitada à t.a. durante a noite, concentrada e purificada em HPLC preparativa em Ci8, eluída com água/CH3CN (de 90% de água a 35% de água em 35 min) para prover 45,1 mg (79% de rendimento) do produto do título após secagem sob alto vácuo. ESI MS m/z C4oH52N509 [M+H]+, calculado 746,37, encontrado 746,50.
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Exemplo 230. Síntese de (S)-N-(2-((S)-8-((5-(((lIS, 1 laS)-10-(S)-15-azido-5isopropil-4,7-dioxo-10), 13-dioxa-3,6-diazapentadecan-1 -oil)-11 -hidroxi-7metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11, 1 la-hexa-hidro- lH-benzo[e]pirrol[l ,2a] [l,4]diazepin-8-il)oxi)pentil)-oxi)-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,11,11atetra-hidro-1 H-benzo[e]pirrol[ 1,2-a] [ 1,4]diazepin-10(5H)-il)-2-oxoetil)-2-(3(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanamido)-3-metilbutanamida.
N[00426] À mistura de (S)-7-metoxi-8-((5-(((S)-7-metoxi-2-metileno-5 oxo-2,3,5,10,11,11 a-hexa-hidro-1 H-benzo[e]pirrol [ 1,2-a] [1,4] diazepin-8il)oxi)pentil)oxi)-2-metileno-2,3-di-hidro- lH-benzo[e]pirrol[ 1,2a][l,4]diazepin-5(llaH)-ona (60,0 mg, 0,102 mmol) e ácido (S)-15-azido-5isopropil-4,7-dioxo-10,13-dioxa-3,6-diazapentadecan-l-oico (90,2 mg, 0,25 mmol) em DMA (8 ml) foi adicionado BrOP (240,2 mg, 0,618 mmol). A mistura foi agitada à t.a. durante a noite, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de S1O2 (CH3OH/CH2CI2, 1:10 a 1:5) para prover 97,1 mg (74% de rendimento) do produto do título. ESI MS m/z CôiHsjNuOh [M+H] +, calculado 1287,63, encontrado 1287,95.
Exemplo 231. Síntese de (S)-N-(2-((S)-8-((5-(((llS,llaS)-10-(S)-15-amino5-isopropil-4,7-dioxo-10),13-dioxa-3,6-diazapentadecan-l-oil)-ll-hidroxi-7metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11, 1 la-hexa-hidro- lH-benzo[e]pirrol[l ,2a] [l,4]diazepin-8-il)oxi)pentil)-oxi)-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,11,11atetra-hidro-1 H-benzo[e]pirrol[ 1,2-a] [ 1,4]diazepin-10(5H)-il)-2-oxoetil)-2-(3(2-(2-aminoetoxi)etoxi)-propanamido)-3-metilbutanamida (C-4).
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Figure BR112019020049A2_D0471
[00427] A uma solução de (S)-N-(2-((S)-8-((5-(((lIS, 1 laS)-10-(S)-15azido-5-isopropil-4,7-dioxo-10), 13-dioxa-3,6-diazapentadecan-1 -oil)-11hidroxi-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,11 a-hexa-hidro-lHbenzo[e]pirrol[l,2-a][l,4]diazepin-8-il)oxi)pentil)-oxi)-7-metoxi-2-metileno5 -oxo-2,3,11,11 a-tetra-hidro-1 H-benzo [e]pirrol [ 1,2-a] [ 1,4] diazepin-10(5H)il)-2-oxoetil)-2-(3-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)propanamido)-3-metilbutanamida (85 mg, 0,066 mmol) na mistura de THF (5 ml) e solução tampão de NaH2PO4 (pH 7,5, 1,0 M, 0,7 ml) foi adicionado PPh3 (100 mg, 0,381 mmol). A mistura foi agitada à t.a. durante a noite. Depois de confirmado por LC-MS a formação de (S)-N-(2-((S)-8-((5-(((llS,llaS)-10-(S)-15-amino-5-isopropil4,7-dioxo-10),13-dioxa-3,6-diazapentadecan-1 -oil)-11 -hidroxi-7-metoxi-2metileno-5-oxo-2,3,5,10,11,1 la-hexa-hidro-lH-benzo[e]pirrol[l ,2a] [l,4]diazepin-8-il)oxi)pentil)-oxi)-7-metoxi-2-metileno-5-oxo-2,3,11,11atetra-hidro-1 H-benzo[e]pirrol[ 1,2-a] [ 1,4]diazepin-10(5H)-il)-2-oxoetil)-2-(3(2-(2-aminoetoxi)etoxi)-propanamido)-3-metilbutanamida (ESI MS m/z C6iH9oNioOi7 [M+Na]+, calculado 1257,66, encontrado 1257,90), 2,3-bis(2,5dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)succinato de bis(2,5-dioxopyrrolidin-l-il) (33 mg, 0,066 mmol) foi adicionado. A agitação continuou sendo agitada à t.a. durante 4 h, foi concentrada e purificada em HPLC preparativa em Ci8, eluída com água/CH3CN (de 90% de água a 30% de água em 35 min) para prover 40,1 mg (40% de rendimento) do produto do título C-4 após secagem sob alto vácuo. ESI MS m/z C73H95Ni2O23 [M+H]+, calculado 1507,66, encontrado 1507,90.
Exemplo 232. Síntese de nitro-a-amanitina.
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Figure BR112019020049A2_D0472
[00428] A uma solução de α-amanitina (15,0 mg, 0,0163 mmol) em ácido acético (0,5 mL) e CH2CI2 (1 mL) foi adicionado HNO3 70% (0,3 mL) a 0°C. A reação foi agitada a 0 0 C por lhe depois à temperatura ambiente 2 h. Após água (5 mL) e DMA (4 mL), a mistura reacional foi concentrada e purificada por HPLC preparativa (H2O/MeCN) para dar um sólido amarelo claro (9,8 mg, 62% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C39H54NiiOi6S [M+H]+ 963,34, encontrado 964,95.
Exemplo 233. Síntese de nitro-P-amanitina
Figure BR112019020049A2_D0473
[00429] A uma solução de β-amanitina (15,0 mg, 0,0163 mmol) em ácido acético (0,5 mL) e CH2C12 (1 mL) foi adicionado HNO3 70% (0,3 mL) a 0°C. A reação foi agitada a 0 0 C por lhe depois à temperatura ambiente 2 h. Após água (5 mL) e DMA (4 mL), a mistura reacional foi concentrada e purificada por HPLC preparativa (H2O/MeCN) para dar um sólido amarelo claro (9,8 mg, 62% de rendimento). ESI MS m/z: calculado para C39H53NioOi7S [M+H]+ 965,32, encontrado 965,86.
Exemplo 234. Síntese de um análogo de α-amanitina conjugável (D-l) com um bis-ligante.
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Figure BR112019020049A2_D0474
[00430] A uma solução de nitro-a-amanitina (9,0 mg, 0,0093 mmol) em DMA (1 ml)) foi adicionado Pd/C (3 mg, 50% úmido), depois hidrogenado (1 atm) à temperatura ambiente por 6 h. O catalisador foi removido por filtração, seguido pela adição de 0,5 ml, NaH2PO4 0,1 M, pH
7,5 e 21,22-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-lH-pirrol-l-il)-2,5,38,41-tetrametil
4,7,20,23,36,39-hexaoxo-10,13,16,27,30,33-hexaoxa-3,6,19,24,37,40-hexa azadotetracontano-l,42-dioato de bis(2,5-dioxopirrolidin-l-il) (11,0 mg, 0,0092 mmol). A mistura foi agitada à t.a. durante a noite, concentrada e purificada em HPLC preparativa em Cis, eluída com água/CH3CN (de 90% de água a 30% de água em 35 min) para prover 6,1 mg (35% de rendimento) do produto do título D-l após secagem sob alto vácuo. ESI MS m/z C81H116N19O31S [M+H]+, calculado 1882,77, encontrado 1882,20.
Exemplo 235. Síntese de um análogo de a-amanitina conjugável (D-l) com um bis-ligante.
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Figure BR112019020049A2_D0475
[00431] A uma solução de nitro-P-amanitina (9,0 mg, 0,0093 mmol) em DMA (1 ml)) foi adicionado Pd/C (3 mg, 50% úmido), depois hidrogenado (1 atm) à temperatura ambiente por 6 h. O catalisador foi removido por filtração, seguido pela adição de 0,5 ml, NaH2PO4 0,1 M, pH
7,5 e 21,22-bis(2,5-dioxo-2,5-di-hidro- lH-pirrol-l-il)-2,5,38,41-tetrametil4,7,20,23,36,39-hexaoxo-10,13,16,27,30,33-hexaoxa-3,6,19,24,37,40-hexaazadotetracontano-l,42-dioato de bis(2,5-dioxopirrolidin-l-il) (11,0 mg, 0,0092 mmol). A mistura foi agitada à t.a. durante a noite, concentrada e purificada em HPLC preparativa em Ci8, eluída com água/CH3CN (de 90% de água a 30% de água em 35 min) para prover (7,0 mg 40% de rendimento) do produto do título D-2 após secagem sob alto vácuo. ESI MS m/z C8iHh5Ni8O32S [M+H]+, calculado 1883,76, encontrado 1884,10.
Exemplo 236. Método geral de preparação do Conjugado.
[00432] A uma mistura de 2,0 mL de 10 mg/mL de anticorpo her2 em pH 6,0-8,0, foram adicionados 0,70-2,0 mL de tampão PBS de NaFEPCE 100 mM, tampões de pH 6,5 - 8,5, TCEP (16-20 pL, 20 mM em água) e o composto A-3, A-4, A-5, B-3, B-6, B-9, B-12, B-15, B-18, B-19, B-20, B -21, B-22, B-23, B-24, B-25, B-26, B-28, C-3, C-4, D-l ou D-2 (28-32 pL, 20 mM em DMA) independentemente. A mistura foi incubada à TA por 4-18 h e, em seguida, foi adicionado DHAA (135 pL, 50 mM). Após incubação contínua à TA durante a noite, a mistura foi purificada na coluna G-25 eluída com
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303 /310 tampão NaHzPCU 100 mM, NaCl 50 mM pH 6,0-7,5 para prover 12,8-18,1 mg do composto conjugado A-3a, A-4a, A-5a, B-3a, B-6a, B-9a, B-12a, B15a, B-18a, B-19a, B-20a, B-21a, B-22a, B-23a, B-24a, B-25a, B-26a, B-28a,
C-3a, C-4a, D-la ou D-2a (75% - 90% de rendimento) em conformidade em
14,4-15,5 ml de tampão. A razão fármaco/anticorpo (DAR) foi de 3,1-4,2 para o conjugado, que foi determinada via espectro de massa UPLC-QTOF. Foi um monômero 94-99% analisado por SEC HPLC (Tosoh Bioscience, Tskgel G3000SW, Dl 7,8 mm x 30 cm, 0,5 ml/min, 100 min) e uma única banda medida pelo gel SDS-PAGE. As estruturas conjugadas são exibidas abaixo:
Figure BR112019020049A2_D0476
Figure BR112019020049A2_D0477
Figure BR112019020049A2_D0478
Figure BR112019020049A2_D0479
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Figure BR112019020049A2_D0480
Figure BR112019020049A2_D0481
Figure BR112019020049A2_D0482
Figure BR112019020049A2_D0483
Figure BR112019020049A2_D0484
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Figure BR112019020049A2_D0485
Figure BR112019020049A2_D0486
Figure BR112019020049A2_D0487
Figure BR112019020049A2_D0488
Figure BR112019020049A2_D0489
Figure BR112019020049A2_D0490
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Figure BR112019020049A2_D0491
Figure BR112019020049A2_D0492
em que η = 2,0 ~ 4,5
Exemplo 237. Avaliação da citotoxicidade in vitro do conjugado A-3a, A-4a, A-5a, B-3a, B-6a, B-9a, B-12a, B-15a, B-18a, B-19a, B-20a, B-21a, B-22a, B-23a, B-24, B-25, B-26, B-28, C-3a, C-4a, D-la ou D-2a em comparação com T-DM1:
[00433] A linha celular utilizada nos ensaios de citotoxicidade foi NCIN87, uma linha celular de carcinoma gástrico humano; As células foram cultivadas em RPMI-1640 com FBS 10%. Para executar o ensaio, as células (180 pl, 6000 células) foram adicionadas a cada poço em uma placa de 96 poços e incubadas por 24 horas a 37°C com CO2 5%. Em seguida, as células foram tratadas com compostos de teste (20 μΐ) em várias concentrações no meio de cultura de células apropriado (volume total, 0,2 mL). Os poços de controle contêm células e o meio, mas não possuem os compostos de teste. As placas foram incubadas durante 120 horas a 37°C com CO2 5%. Adicionou-se então MTT (5 mg/ml) aos poços (20 μΐ) e as placas foram incubadas durante
1,5 h a 37°C. O meio foi cuidadosamente removido e DMSO (180 pL) foi adicionado posteriormente. Após agitação por 15 minutos, a absorbância foi medida a 490nm e 570nm com um filtro de referência de 620nm. A % de inibição foi calculado de acordo com a seguinte equação: % de inibição = [1(ensaio com branco)/(controle branco)] x 100.
[00434] Os resultados de citotoxicidade de IC50:
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DAR (razão de fármacos) célula N87 (Ag+) IC50 (nM) célula N87 (Ag+) IC90 (nM)
Conjugado A-3a 3,5 0,32 nM 0,91 nM
Conjugado A-4a 3,8 0,17 nM 0,87 nM
Conjugado A-5a 4,1 0,094 nM 0,31 nM
Conjugado B-3a 3,8 0,14 nM 0,28
Conjugado B-6a 3,8 0,21 nM 0,62
Conjugado B-9a 3,6 0,17 nM 0,67
Conjugado B-12a 3,8 0,13 nM 0,06
Conjugado B-15a 3,6 0,29 nM 0,92
Conjugado B-18a 3,6 0,46 nM 1,20
Conjugado B-19a 3,5 0,12 nM 0,63
Conjugado B-20a 3,8 0,33 nM 0,96
Conjugado B-21a 3,8 0,42 nM 1,10
Conjugado B-22a 3,6 0,13 nM 0,33
Conjugado B-23a 3,6 0,18 nM 0,38
Conjugado B-24a 3,8 0,83 nM 1,46
Conjugado B-25a 3,8 0,72 nM 1,82
Conjugado B-26a 3,7 0,93 nM 1,93
Conjugado B-28a 3,6 0,45 nM 0,78
Conjugado C-3a 3,6 0,09 nM 0,17
Conjugado C-4a 3,7 0,26 nM 0,48
Conjugado D-la 3,8 0,041 nM 0,087
Conjugado D-2a 3,9 0,033 nM 0,072
Conjugado T-la 3,8 0,25 nM 0,51
T-DM1 3,5 0,12 nM 0,26
Exemplo 238. Atividade antitumoral in vivo (camundongos nus BALB/c portadores de tumor de xenoenxerto NCI-N87).
[00435] A eficácia in vivo dos conjugados A-3a, B-6a, B-12a, B-15a, B-18a, B-20a, B-21a, B-24a, B-28a, C-3a e D-2a juntamente com T-DM1 foram avaliados em modelos de xenoenxerto de tumor de linha celular de carcinoma gástrico humano N-87. Camundongos BALB/c fêmeas nus com cinco semanas de idade (104 animais) foram inoculados por via subcutânea na área sob o ombro direito com células de carcinoma N-87 (5 x 106 células/camundongo) em 0,1 mL de meio isento de soro. Os tumores foram cultivados por 8 dias para um tamanho médio de 110 mm3. Os animais foram então divididos aleatoriamente em 13 grupos (8 animais por grupo). O primeiro grupo de camundongos serviu como grupo controle e foi tratado com o veículo de solução salina tamponada com fosfato (PBS). 10 grupos foram tratados com os conjugados A-3a, B-6a, B-12a, B-15a, B-18a, B-20a, B-21a, B-24a, B-28a e T-DM1 respectivamente na dose de 3 mg/kg administrados por via intravenosa. Os 2 grupos restantes foram tratados com conjugado C-3a
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308/310 e D-la, respectivamente, na dose de 1 mg/kg administrada por via intravenosa. Três dimensões do tumor foram medidas a cada 4 dias e os volumes do tumor foram calculados usando a fórmula volume do tumor =1/2 (comprimento x largura x altura). O peso dos animais também foi medido ao mesmo tempo. Um camundongo foi sacrificado quando qualquer um dos seguintes critérios foi atendido: (1) perda de peso corporal superior a 20% em relação ao peso pré-tratamento, (2) volume de tumor maior que 2000 mm3, (3) muito doente para alcançar comida e água ou (4) necrose da pele. Um camundongo foi considerado livre de tumor se nenhum tumor fosse palpável. [00436] Os resultados foram plotados nas Figuras 47. Todos os 13 conjugados não causaram a perda de peso corporal do animal. E os animais do grupo controle foram sacrificados no dia 50 devido ao volume do tumor maior que 1800 mm3 e estavam muito doentes. Todos os 12 conjugados testados demonstraram atividade antitumoral. Os animais dos grupos de compostos conjugados B-24a, C-3a, B-20a, B-21a e D-20a demonstraram melhor atividade antitumoral que T-DM1. Mas os animais dos grupos dos compostos conjugados B-18a, B-15a, A-3a, B-6a, B-28a e B-12a apresentaram pior atividade antitumoral que T-DM1. O T-DM1 na dose de 3 mg kg inibiu o crescimento do tumor por 28 dias, mas não foi capaz de eliminar os tumores durante o teste. Em contraste, os compostos conjugados B-20a, B-21a e D20a erradicam os tumores de alguns animais do dia 15 ao dia 43. As inibições do crescimento do tumor nessas doses estão listadas abaixo:
conjugado Atraso no crescimento do tumor
T-DM1 28 dias
B-18a 3 dias
B-15a 5 dias
A-3a 7 dias
B-6a 8 dias
B-28a 10 dias
B-12a 19 dias
B-24a 33 dias
C-3a 39 dias
B-20a >45 dias
B-21a >45 dias
D-2a >45 dias
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309/310
[00437] No final do experimento (dia 50), os animais do grupo PBS, A-3a, B-2la, T-DM1 e B-l5a foram sacrificados e os tumores foram retirados e são mostrados na figura da Fig. 48.
Exemplo 239. Estudo de estabilidade do conjugado com um bis-acoplamento em comparação com os conjugados regulares com um mono-acoplamento no soro do rato.
[00438] Quarenta e cinco camundongos ICR fêmeas, com 6-7 semanas de idade, foram separadas em 3 grupos. Cada grupo incluiu 15 ratos para o estudo PK de um em cada três ADCs. Esses 15 camundongos foram divididos aleatoriamente em três grupos (n = 5). Cada camundongo recebeu conjugados T-DM1, B-21a e T-la (Huang Y. et al., Med Chem. #44, 249th ACS National Meeting, Denver, CO, Mar. 22-26, 2015; WO2014009774), respectivamente, na dose de 10 mg/kg/por rato, bolus i.v. A coleta de sangue foi seguida pelas Diretrizes para Coleta de Sangue de Roedores (Guidelines for Rodent Blood Collection) da NCI. Basicamente, os ratos de cada grupo foram submetidos a sangramento, a fim de evitar mais do que o dobro de sangramentos em um período de 24 horas. O sangue foi retirado do seio retro-orbital com um capilar de 70 uL no tempo 0 (pré-dosagem), 0,083, 0,25, 0,5, 1, 4, 8, 24, 48, 96, 168, 312 e 504 horas após a dosagem. As amostras de plasma foram analisadas com relação a anticorpos totais e anticorpos conjugados a fármacos por técnicas específicas de ELISA. Em resumo, o anticorpo conjugado ou a concentração total de anticorpos no soro do rato foram medidos da seguinte forma: placas ELISA de 96 poços foram revestidas respectivamente durante a noite a 4 °C com anticorpo anti-DMl, anticorpo anti-tubulisina ou anticorpo Fab anti-Her-2 (lug/mL em 10 mM de PBS, pH 7,2). As placas foram então lavadas três vezes com um tampão de lavagem PBS-T (PBS/0,02% Tween20) e depois bloqueadas com um tampão de diluição BSA/PBS-T a 1% (p/v) por 1 hora a 37°C. Após a remoção do tampão de bloqueio, as amostras padrão ou de soro de camundongo, cada uma com três repetições, foram diluídas em
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310/310 tampão BSA/PBS-T 1%, incubadas a 37°C por 1 hora; em seguida, o anticorpo anti-humano de burro conjugado com AP foi adicionado para 30 minutos a 37°C após a lavagem das placas. As placas foram lavadas novamente, seguidas pela adição de substrato de pNPP para o desenvolvimento da cor e depois lidas em um leitor de microplacas a 405 nm de comprimento de onda, uma vez que a reação de desenvolvimento da cor foi resfriada bruscamente com o hidróxido de sódio a 1 mol/L. A concentração do anticorpo conjugado ou do anticorpo total foi obtida a partir de um ajuste de curva de quatro parâmetros da curva padrão.
[00439] O resultado, como mostrado na Figura 49, os comportamentos farmacocinéticos dos anticorpos totais e anticorpos conjugados ao fármaco após a administração de três ADCs, apresentaram-se como curvas de depuração bifásica típicas. As equivalências entre o plasma e os tecidos periféricos foram alcançadas 8 horas após a administração. A fase de eliminação emergiu 24 horas após a dosagem e continuou até o último ponto de amostragem. Em resumo, os valores das exposições do conjugado (Auciast) para esses três ADCs são 14981, 14713 e 16981 hr*ug/kg para T-DM1, T-la e B-21a, respectivamente. Os volumes de distribuição para todos esses três conjugados são o dobro dos volumes totais de sangue. As depurações (CL) dos conjugados são 0,59, 0,57 e 0,47 mL/h/kg, que são quase a metade das dos anticorpos totais. A depuração de B-21a, tanto o conjugado como o total de anticorpos, é menor que a dos outros dois ADCs, o que indica que o conjugado tendo o bis-acoplamento é mais estável do que os conjugados mono-acoplados regulares no soro de camundongo.

Claims (8)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composto conjungado bis-acoplado da Fórmula (I):
    1' Moiécula i citotóxka
    L-Zagente/msléajtfô |de ligação celular (D caracterizado pelo fato de que “—” representa uma ligação simples; “-----” é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou opcionalmente pode estar ausente; n e mi são 1 a 20 independentemente;
    Uma molécula de ligação celular na estrutura que se acopla a Zi e Z2 é uma molécula/agente que se liga a, complexa com, ou reage com uma porção de uma população de células que se pretende ser terapeuticamente ou de outro modo biologicamente modificada. O agente/molécula de ligação celular é uma proteína imunoterapêutica, um anticorpo, um anticorpo de cadeia única; um fragmento de anticorpo que se liga à célula alvo; um anticorpo monoclonal; um anticorpo monoclonal de cadeia única; ou um fragmento de anticorpo monoclonal que se liga à célula alvo; um anticorpo quimérico; um fragmento de anticorpo quimérico que se liga à célula alvo; um anticorpo de domínio; um fragmento de anticorpo de domínio que se liga à célula alvo; adnectinas que imitam anticorpos; DARPins; uma linfocina; um hormônio; uma vitamina; um fator de crescimento; um fator estimulador de colônia; ou uma molécula de transporte de nutrientes; uma transferrina; peptídeos de ligação com mais de quatro aminoácidos, ou um anticorpo, uma proteína, uma molécula de ligação celular ou ligando de ligação pequenos anexados na albumina, polímeros, dendrímeros, lipossomas, nanopartículas, vesículas ou em capsídeos (virais);
    Uma molécula citotóxica na estrutura é um fármaco/molécula/agente terapêutico, ou uma proteína/molécula
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    2/122 imunoterapêutica, ou uma molécula de função para melhoramento da ligação ou estabilização do agente de ligação celular, ou um ligando de ligação ao receptor de superfície celular, ou para inibição de proliferação celular, ou para monitorar, detectar ou estudar uma ação de molécula de ligação celular; ou um análogo, ou pró-fármaco, ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou sal hidratado, ou uma estrutura cristalina, ou um isômero óptico, racemato, diastereômero ou enantiômero, de composto imunoterapêutico, um composto quimioterapêutico, um anticorpo (probody) ou um fragmento de anticorpo (probody), ou siRNA ou molécula de DNA; ou um ligando de ligação à superfície celular; ou um análogo ou pró-fármaco de um fármaco terapêutico compreendendo tubulisinas, caliqueamicinas, auristatinas, maitansinoides, análogos de CC-1065, morfolinos doxorrubicinas, taxanos, criptoficinas, amatoxinas, epotilonas, eribulinas, geldanaminas, duocarmicinas, daunomicinas, metotrexatos, vindesinas, vincristinas e dímeros de benzodiazepina (incluindo dímeros de pirrolobenzodiazepina (PBD), tomaimicina, indolinobenzodiazepinas, imidazobenzotiadiazepinas ou oxazolidinobenzodiazepinas).
    X e Y representam o mesmo ou diferente, e independentemente, um grupo funcional que acopla um fármaco citotóxico por meio de uma ligação de dissulfeto, tioéter, tioéster, peptídeo, hidrazona, éter, éster, carbamato, carbonato, carbonato, amina (secundária, terciária ou quartária), imina, ciclo-heteroalcana, heteroaromática, alcoxima ou amida; X e Y são selecionados independentemente a partir de NH; NHNH; N(Ri); N(Ri)N(R2); O; S; S-S, O-NH. O-N(Ri), CH2-NH. CH2-N(Ri), CH=NH. CH=N(Ri), S(O), S(O2), P(O)(OH), S(O)NH, S(O2)NH, P(O)(OH)NH, NHS(O)NH, NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH, N(Ri)S(O)N(R2), N(Ri)S(O2)N(R2), N(Ri)P(O)(OH)N(R2), OS(O)NH, OS(O2)NH,
    OP(O)(OH)NH, C(O), C(NH), C(NRi), C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH, OC(O)NH, OC(NH)NH; OC(NRi)NH, NHC(O)NH; NHC(NH)NH;
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    3/122
    NHC(NRi)NH, C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH, OC(O)N(Ri), OC(NH)N(Ri), OC(NRi)N(Ri), NHC(O)N(Ri), NHC(NH)N(Ri), NHC(NRi)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), N(Ri)C(NH)N(Ri), N(Ri)C(NRi)N(Ri); ou alquila Ci-Cô; alquenila C2-C8, heteroalquila, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterociclico, carbociclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila;
    Zi e Z2 são iguais ou diferentes e independentemente um grupo funcional que se acoplou a uma molécula de ligação celular, para formar uma ligação de dissulfeto, éter, éster, tioéter, tioéster, peptídeo, hidrazona, carbamato, carbonato, amina (secundária, terciária, ou quaternária), imina, ciclo-heteroalcana, heteroaromática, alquiloxima ou amida; Zi e Z2 têm independentemente as seguintes estruturas: C(O)CH, C(O)C, C(O)CH2, ArCH2, C(O), NH; NHNH; N(Ri); N(Ri)N(R2); O; S; S-S, O-NH. O-N(Ri), CH2-NH. CH2-N(Ri), CH=NH. CH=N(Ri), S(O), S(O2), P(O)(OH), S(O)NH, S(O2)NH, P(O)(OH)NH, NHS(O)NH, NHS(O2)NH, NHP(O)(OH)NH, N(Ri)S(O)N(R2), N(Ri)S(O2)N(R2), N(Ri)P(O)(OH)N(R2), OS(O)NH, OS(O2)NH, OP(O)(OH)NH, C(O), C(NH), C(NR1), C(O)NH, C(NH)NH, C(NR1)NH, OC(O)NH, OC(NH)NH; OC(NRi)NH, NHC(O)NH; NHC(NH)NH; NHC(NRi)NH, C(O)NH, C(NH)NH, C(NRi)NH, OC(O)N(Ri), OC(NH)N(Ri), OC(NRi)N(Ri), NHC(O)N(Ri), NHC(NH)N(Ri), NHC(NRi)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), N(Ri)C(NH)N(Ri), N(Ri)C(NRi)N(Ri); ou alquila Ci-Cs; heteroalquila C2-C8, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterociclico, carbociclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila;
    Li e L2 são iguais ou diferentes, selecionados independentemente a partir de O; NH; S; NHNH; N(Rs); N(Rs)N(R3’); alquila Ci-Cs, amida, aminas, iminas, hidrazinas, ou hidrazonas; heteroalquila C2-C8, alquilcicloalquila, éteres, ésteres, hidrazonas, ureias, semicarbazidas, carbazidas, alcoxiaminas, alcoxilaminas, uretanos, aminoácidos, peptídeos,
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    4/122 aciloxilaminas, ácidos hidroxâmicos ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Aralquila, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroaril; 1~8 aminoácidos; unidade de polietilenoxi de fórmula (OCH2CH2)POR3, ou (OCH2.CH(CH3))pOR3, ou NH(CH2CH2O)PR3, ou NH(CH2CH(CH3)O)PR3, ou N[(CH2CH2O)pR3]-[(CH2CH2O)p’R3’], ou (OCH2CH2)PCOOR3, ou CH2CH2(OCH2CH2)PCOOR3, em que p e p’ são independentemente um número inteiro selecionado a partir de 0 a cerca de 5000, ou uma combinação dos mesmos; R3 e R3 são independentemente H; alquila Ci-C8; heteroalquila C2-C8, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila; ou ésteres C2-C8, éter ou amida; ou 1 ~ 8 aminoácidos; ou polietilenoxi com a fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2- CH(CH3))p, em que p é um número inteiro de 0 a cerca de 5000 ou uma combinação dos mesmos acima;
    ou Li e L2 têm independentemente um ou mais componentes de ligantes de 6-maleimidocaproil (MC), maleimidopropanoil (MP), valina-citrulina (val-cit ou vc), alanina-fenilalanina (ala-phe ou af), paminobenziloxicarbonil (PAB), 4-tiopentanoato (SPP), 4-(Nmaleimidometil)ciclo-hexano-l carboxilato (MCC), (4-acetil)aminobenzoato (SLAB), 4-tio-butirato (SPDB), 4-tio-2-hidroxissulfonil-butirato (2-Sulfo-SPDB) ou peptídeos naturais ou não naturais com 1 a 8 aminoácidos naturais ou não naturais;
    ou Li e L2 contém independentemente um componente autoimolativo, unidades peptídicas, uma ligação hidrazona, um dissulfeto, um éster, uma oxima, uma amida ou uma ligação tioéter. A unidade autoimolativa inclui compostos aromáticos que são eletronicamente semelhantes aos grupos para-aminobenzilcarbamoil (PAB), derivados de 2-aminoimidazol-5-metanol, análogos heterocíclicos de PAB, beta-glucuronídeo e orto ou paraaminobenzilacetais; ou uma das seguintes estruturas:
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    5/122
    Figure BR112019020049A2_C0001
    em que o átomo (*) é o ponto de anexação de unidades espaçadoras adicionais ou de ligante liberáveis, ou o agente citotóxico e/ou a molécula de ligação (CBA); X1, Y1, Z2 e Z3 são independentemente NH, O ou S; Z1 é independentemente H, NHRb ORi, SRi, COX1R1, em que X1 e R1 são definidos acima; v é 0 ou 1; U1 é independentemente H, OH, alquila Ci~Cô, (OCH2CH2)n, F, Cl, Br, I, OR5, SR5, NR5R5’, N=NR5, N=R5, NR5R5’, NO2, SOR5R5’, SO2R5, SO3R5, OSO3R5, PR5R5’, POR5R5’, PO2R5R5’, OPOCORsXORs’), ou OCH2PO(OR5(OR5’), em que R5 e R5’ são selecionados independentemente a partir de H, alquila Ci~Cs; alquenila C2~Cs, alquinila, heteroalquila ou aminoácido; arila C3~Cs, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heterocicloalquila, heteroaralquila, alquilcarbonil ou glicosídeo; ou sais catiônicos farmacêuticos;
    ou Li e L2 têm independentemente um componente de ligante não autoimolativo contendo uma das seguintes estruturas:
    (CH2)nCO(OCH2CH2)rOCH3 (CH2)nCON(CH2CH2O)rCOCH3 *(CH2CH2O)r* . *^H* (CH2)n(OCH2CH2)rOCOCH3 (CH2)nCO(OCH2CH2)rOCOCH3 ; *£h*
    Figure BR112019020049A2_C0002
    Figure BR112019020049A2_C0003
    Figure BR112019020049A2_C0004
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 509/626 emi
    Figure BR112019020049A2_C0005
    Figure BR112019020049A2_C0006
    Figure BR112019020049A2_C0007
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    Figure BR112019020049A2_C0008
    Ο Ο Ο
    9 9 9 em que ο átomo (*) é ο ponto de anexação de espaçadores adicionais ou de ligantes liberáveis, os agentes citotóxicos e/ou as moléculas de ligação; X1, Y1, U1, R5, R5’ são definidos como acima; r é 0 ~ 100; men são 0 ~ 6 independentemente;
    ou Li e L2 são independetemente um ligante liberável que pelo menos uma ligação que pode ser quebrada sob condições fisiológicas: ligação lábil ao pH, lábil ao ácido, lábil à base, lábil à oxidação, metabolicamente lábil, bioquimicamente lábil ou lábil às enzimas que tem uma das seguintes estruturas:
    -(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r-(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -(CR5R6)m.(CR7=CR8)(CR9Rio)n(Aa) t(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NRiiCO)(Aa)t(CR9Rio)n-(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(Aa)t(NRnCO)(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9Rio)n-(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(CO)(Aa)t. (CR9Ri0)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NRnCO)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9Rio)n-(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, (CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9Rio)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)mphenyl-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-furyl-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CRsRóV oxazolil-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CRsRójm-tiazolilPetição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 511/626
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    C0(Aa)t(CCR7Rs)n-, -(CR5R6)t-tienil-CO(CR7R8)n-, -(CRsRôjtimidazolil-CO-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-morfolino-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, (CR5R6)tpiperazino-CO(Aa)t-(CR7Rs)n-, -(CRsRójt-N-metilpiperazin-COCAajt(CR7R8)n-, -(CR5R)m-(Aa)tfenil-, -(CR5R6)m-(Aa)tfuril-, -(CR5R6)moxazolil(Aa)t-, -(CR5R6)m-tiazolil(Aa)t-, -(CR5R6)m-tienil-(Aa)t-, -(CRsRójmimidazolil(Aa)t-, -(C RsRójm-morfolino-CAajt-, -(CRsRójm-piperazino-CAajt-, (CR.sRó/m-N-rnet i I pi perazi no-( Aa)t-,
    -K(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -K(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(Aa)r(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-,-K(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -K(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9Rio)n(Aa)t(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(NRiiCO)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(Aa)t(NRiiCO)(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9Rio)n-(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(CO)(Aa)t. (CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(NRnCO)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9Rio)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)mfenil-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K-(CR5R6)m-furil-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)moxazolil-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-tiazolil-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-tienil-CO(CR7R8)n-, -K(CR5R6)timidazolil-CO-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)tmorfolino-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5Ró)tpiperazino-CO(Aa)t(CR7Rs)n-, -K(CR5R6)t-N-metilpiperazinCO(Aa)t(CR7R8)n-,
    -K(CR5R)m(Aa)tfenil, -K-(CR5R6)m-(Aa)tfuril-, -K(CR5R6)m-oxazolil(Aa)t-, -K(CR5R6)m-tiazolil(Aa)t-, -K(CR5R6)m-tienil-(Aa)t-, -K(CR5R6)mimidazolil(Aa)t-, -K(CR5R6)m-morfolino(Aa)t-, -K(CR5R6)mpiperazino-(Aa)tG, -K(CR5R6)mN-metilpiperazino(Aa)t-; em que m, Aa, men são descritos acima; ter são 0 - 100 independentemente; R3, R4, R5, Ró, R7, e
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    Rs são escolhidos independentemente a partir de H; haleto; alquila Ci~Cs; arila Cz-Cs, alquenila, alquinila, éter, éster, amina ou amida, que é opcionalmente substituído por um ou mais haletos, CN, NR1R2, CF3, ORi, Arila, heterociclo, S(O)Ri, SO2R1, -CO2H, -SO3H, -ORi, -CO2R1, -CONRi, PO2R1R2, -PO3H ou P(O)RiR2R3; K é NRi, -SS-, -C(=O)-. -C(=O)NH-. C(=O)O-. -C=NH-O-. -C=N-NH-, -C(=O)NH-NH-. O, S, Se, B, Het (anel heterocíclico ou heteroaromático tendo Cs-Cs) ou peptídeos contendo 1-20 aminoácidos;
    ou Li e L2 contém independentemente uma das seguintes estruturas hidrofílicas:
    Figure BR112019020049A2_C0009
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    10/122
    Figure BR112019020049A2_C0010
    do acoplamento; X2, X3, X4, X5, ou Xó, são independentemente selecionados a partir de NH; NHNH; N(R3); N(R3)N(R3 ); O; S; alquila Ci-C6; heteroalquila C2-Có, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila; ou 1 ~ 8 aminoácidos; em que R3 e R3’ são independentemente H; alquila Ci-C8; heteroalquila C2-C8, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila C3-C8, Ar-alquila, heterocíclico, carbocíclico, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila; ou ésteres C2-C8, éter, ou amida; ou unidade de polietilenoxi com a fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 0 a cerca de 5000 ou uma combinação dos mesmos acima;
    Além disso, em que X, Y, Li, L2, Zi ou Z2 podem ser independentemente compostos por um ou mais componentes a seguir, como mostrado abaixo:
    Figure BR112019020049A2_C0011
    6-maleimidocaproil (MC),
    Figure BR112019020049A2_C0012
    maleido,
    Figure BR112019020049A2_C0013
    tio-amino-oxobutanoico,
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    11/122
    Figure BR112019020049A2_C0014
    ácido tio-amino-oxobutenoico,
    Figure BR112019020049A2_C0015
    alanina-fenilalanina (ala-
    Figure BR112019020049A2_C0016
    Figure BR112019020049A2_C0017
    p-aminobenziloxicarbonil (PAB), θ 4-tio-pentanoato (SPP),
    Figure BR112019020049A2_C0018
    θ 4-tio-butirato(SPDB), θ 4-(N-
    Figure BR112019020049A2_C0019
    maleimidometil)ciclo-hexano-l-carboxilato (MCC), θ maleimidoetil (ME),
    Sulfo-SPDB),
    Figure BR112019020049A2_C0020
    Figure BR112019020049A2_C0021
    acetil)aminobenzoato θ 4-tio-2-hidroxissulfonil-butirato (2(SIAB), oxilbenziltio,
    Figure BR112019020049A2_C0022
    aril-tiol (PiSS),
    Figure BR112019020049A2_C0023
    dioxilbenziltio,
    Figure BR112019020049A2_C0024
    diaminobenziltio,
    Figure BR112019020049A2_C0025
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 515/626
    12/122 amino-oxilbenziltio, etileneoxi (EO),
    Figure BR112019020049A2_C0026
    Figure BR112019020049A2_C0027
    alcoxiamino (AOA),
    Figure BR112019020049A2_C0028
    4-metil-4-ditio-pentanoico (MPDP),
    Figure BR112019020049A2_C0029
    Figure BR112019020049A2_C0030
    Figure BR112019020049A2_C0031
    θ alquilsulfonamida, ditio,
    Figure BR112019020049A2_C0032
    alquilsulfonil, sulfon-bisamida,
    OH fosfondiamida,
    Figure BR112019020049A2_C0033
    alquilfosfonamida,
    O O I ii ii I /—P-— P-N·^
    OH ácido fosfínico, OH ácido N-metilfosfonamfdico,
    Figure BR112019020049A2_C0034
    Figure BR112019020049A2_C0035
    OH ácido
    Ν,Ν’-dimetilfosfonamídico,
    Figure BR112019020049A2_C0036
    N,N’dimetilfosfondiamida,
    Figure BR112019020049A2_C0037
    Figure BR112019020049A2_C0038
    acetimidamida;
    Figure BR112019020049A2_C0039
    oxima, hidrazina,
    Figure BR112019020049A2_C0040
    acetilacetohidrazida,
    Figure BR112019020049A2_C0041
    aminoetil-amina,
    Figure BR112019020049A2_C0042
    aminoetil-aminoetilamina, e, peptídeos L- ou D-, naturais ou não naturais contendo 1 a 20 aminoácidos; em que a ligação de conexão no meio de átomos significa que ela pode conectar ligações de átomos de carbono vizinhos; a linha ondulada é o sítio ao qual outra ligação pode ser conectada;
    Altemativamente, X, Y, Lb L2, Zb ou Z2, podem estar independentemente ausentes, mas Li e Zb ou L2 e Z2 não estão ausentes ao mesmo tempo;
    Em que o dito conjugado da Fórmula (I) da invenção especificamente exclui as seguintes estruturas:
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 516/626
    13/122
    Figure BR112019020049A2_C0043
    em que η = 1-30; m” = 1 -3; R”’ = H, CH3 or C2H5.
    2. Composto conjugado de Fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é feito a partir de um composto de bis-ligante prontamente reativo contendo uma molécula citotóxica da Fórmula (II) abaixo, em que dois ou mais resíduos da molécula de ligação celular podem reagir simultânea ou sequencialmente para formar a Fórmula (I):
    Molécula citotóxica
    Figure BR112019020049A2_C0044
    Figure BR112019020049A2_C0045
    (II) em que:
    “—” representa uma ligação simples; “ ” é opcionalmente uma ligação simples, ou uma ligação dupla, ou uma ligação tripla, ou opcionalmente pode estar ausente;
    Desde que, quando-----representa uma ligação tripla, Lvi e
    Lv2 estejam ausentes;
    Molécula citotóxica na estrutura, mb X, Y, Lb L2, Zb e Z2 são definidos da mesma forma que na reivindicação 1;
    Lvi e Lv2 representam o mesmo grupo de saída ou diferente que pode ser reagido com um grupo tiol, amina, ácido carboxílico, selenol, fenol ou hidroxil em uma molécula de ligação celular. Lvi e Lv2 são selecionados independentemente a partir de OH; F; Cl; Br; I; nitrofenol; Nhidroxissuccinimida (NHS); fenol; dinitrofenol; pentafluorofenol; tetrafluorofenol; difluorofenol; monofluorofenol; pentaclorofenol; triflato; imidazol; diclorofenol; tetraclorofenol; 1-hidroxibenzotriazol; tosilato; mesilato; 2-etil-5-fenilisoxazólio-3'-sulfonato, anidridos que se autoformaram
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 517/626
    14/122 ou foram formados com o outro anidrido: anidrido de acetil, ou anidrido de formil; ou uma molécula intermediária gerada com um reagente de condensação para reações de junção peptídica ou reações de Mitsunobu, que são selecionados a partir de: EDC (N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida), DCC (diciclo-hexil-carbodi-imida), N,N'-di-isopropilcarbodi-imida (DIC), meto p-toluenossulfonato de N-ciclo-hexil-N'-(2-morfolinoetil)carbodi-imida (CMC ou CME-CDI), 1, Γ-carbonildi-imidazol (CDI), TBTU (tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-l-il)-N,N,N',N'tetrametilurônio), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(lHbenzotriazol-l-il)-urônio (HBTU), hexafluorofosfato de (benzotriazol-1iloxi)tris(dimetilamino)-fosfônio (BOP), hexafluorofosfato de (benzotriazoll-iloxi)tripirrolidinofosfônio (PyBOP), cianofosfonato de dietil (DEPC), cloro-N,N,N',N'-tetrametilformamidínio-hexafluorofosfato, 3-oxid. 1hexafluorofosfosfato de l-[bis(dimetilamino)metileno]- 1H-1,2,3-triazol[4,5b]piridínio (HATU), 3-óxido de hexafluorofosfato de 1[(dimetilamino)(morfolino)metileno]-lH-[l,2,3]triazol[4,5-b]piridin-l-ío (HDMA), hexafluorofosfato de 2-cloro-l,3-dimetil-imidazolidínio (CIP), hexafluorofosfato de clorotripirrolidinofosfônio (PyCloP), hexafluorofosfato de fluoro-N,N,N',N'-bis(tetrametileno)formamidínio (BTFFH), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-S-(l-oxido-2-piridil)tiurônio, tetrafluoroborato de O-(2-Oxo-1 (2H)piridil)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TPTU), tetrafluoroborato de S-(l-Oxido-2-piridil)-N,N,N',N'tetrametiltiurônio, hexafluorofosfato de O[(etoxicarbonil)cianometilenamino]-N,N,N',N'-N'-tetrametilurônio (HOTU), hexafluorofosfato de (l-ciano-2-etoxi-2-oxoetilaminooxi)dimetilaminomorfolinocarbênio (COMU), hexafluorofosfato de O(benzotriazol- l-il)-N,N,N',N'-bis(tetrametileno)urônio (HBPyU), N-benzilN'-ciclo-hexil-carbodi-imida (com ou sem ligação ao polímero), hexafluorofosfato de dipirrolidino(N-succinimidil-oxi)carbênio (HSPyU),
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 518/626
    15/122 hexafluorofosfato de clorodipirrolidinocarbênio (PyClU), tetrafluoroborato de 2-cloro-l,3-dimetilimidazolidínio (CIB), hexafluorofosfato de (benzotriazol-
    1- iloxi)dipiperidino-carbênio (HBPipU), tetrafluoroborato de 0-(6clorobenzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TCTU), hexafluorofosfato de bromotris(dimetilamino)-fosfônio (BroP), anidrido propilfosfônico (PPACA, T3P®), isocianeto de 2-morfolinoetil (MEI), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(N-succinimidil)urônio (HSTU), tetrafluoroborato de
    2- bromo-l-etil-piridinio (BEP), tetrafluoroborato de O-[(etoxicarbonil)cianometilenamino]-N,N,N',N'-tetra-metilurônio (TOTU), 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5triazin-2-il)-4-metilmorfolíniocloreto (MMTM, DMTMM), Tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(N-succinimidil)urônio (TSTU), tetrafluoroborato de O-(3,4-Di-hidro-4-oxo-l,2,3-benzotriazin-3-il) -Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilurônio (TDBTU), 1, r-(Azodicarbonil)-dipiperidina (ADD), di-(4-clorobenzil) azodicarboxilato (DCAD), azodicarboxilato de di-terc-butil (DBAD), azodicarboxilato de di-isopropil (DIAD), azodicarboxilato de dietil (DEAD). Além disso, Lvi e Lv2 podem ser um anidrido, formado pelo próprio ácido ou formado com outros anidridos de ácido Ci~C8;
    ou Lvi e Lv2 podem ser selecionados independentemente a partir de, um haleto (fluoreto, cloreto, brometo e iodeto), metanos sulfonil (mesil), toluenossulfonil (tosil), trifluorometil-sulfonil (triflato), trifluorometilsulfonato, nitrofenoxil, N-succinimidil (NHS), fenoxil; dinitrofenoxil; pentafluorofenoxil, tetrafluorofenoxil, trifluorofenoxil, difluorofenoxil, monofluorofenoxil, pentaclorofenoxil, IH-imidazol-l-il, clorofenoxil, diclorofenoxil, triclorofenoxil, tetraclorofenoxil, N(benzotriazol-il)oxil, 2-etil-5-fenilisoxazólio-3 '-sulfonil, feniloxadiazolsulfonil (-sulfona-ODA), 2-etil-5-fenilisoxazólio-il, feniloxadiazol-il (ODA), oxadiazol -il, carbono insaturado (uma ligação dupla ou tripla entre carbonocarbono, carbono-nitrogênio, carbono-enxofre, carbono-fósforo, enxofrenitrogênio, fósforo-nitrogênio, oxigênio-nitrogênio ou carbono-oxigênio), ou
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    16/122 uma das seguintes estruturas:
    Figure BR112019020049A2_C0046
    Figure BR112019020049A2_C0047
    O
    Figure BR112019020049A2_C0048
    haleto de acil dissulfeto;
    haloacetil;
    (haleto ácido);
    Figure BR112019020049A2_C0049
    θ éster N-hidroxissuccinimida; θ maleimida;
    Figure BR112019020049A2_C0050
    θ maleimida monossubstituída; θ maleimida
    Figure BR112019020049A2_C0051
    dis substituída; θ succinimida monossubstituída;
    o
    Figure BR112019020049A2_C0052
    θ succinimida dissubstituída; aldeído -CHO;
    Figure BR112019020049A2_C0053
    etenossulfonil;
    Figure BR112019020049A2_C0054
    (acriloil);
    Figure BR112019020049A2_C0055
    Figure BR112019020049A2_C0056
    Figure BR112019020049A2_C0057
    2- (mesiloxi)acetil;
    Figure BR112019020049A2_C0058
    Figure BR112019020049A2_C0059
    (dinitrofenoxi)acetil;
    Figure BR112019020049A2_C0060
    2-(difluorofenoxi)-acetil;
    Figure BR112019020049A2_C0061
    Figure BR112019020049A2_C0062
    ou aldeído, (((trifluorometil)-sulfonil)oxi)acetil;
    Figure BR112019020049A2_C0063
    metilsulfona-feniloxadiazol (ODA);
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    17/122
    oí<x2.- \ O /2R2 o x2 anidrido ácido, η2ν^ο^ o H2NHN''xj alquiloxiamino; azido, alquinil, ou ^hidrazida, em que Xf é F, Cl, Br, I ou Lv8; X2’ é O, NH, N(Ri),
    ou CH2; R3 é independentemente H, grupo aromático, heteroaromático ou aromático, em que um ou vários átomos de H são substituídos independentemente por -Rb -halogênio, -ORi, -SRi, -NR1R2, - NO2, -S(O)Ri,S(O)2Ri, ou -COORi; LV3 é um grupo de saída selecionado a partir de F, Cl,
    Br, I, nitrofenol; N-hidroxissuccinimida (NHS); fenol; dinitrofenol;
    pentafluorofenol; tetrafluorofenol; difluorofenol; monofluorofenol; pentaclorofenol; triflato; imidazol; diclorofenol; tetraclorofenol; 1hidroxibenzotriazol; tosilato; mesilato; 2-etil-5-fenilisoxazólio-3'-sulfonato,
    Ri e R2 são selecionados independentemente a partir de H, alquila Ci-C8, alquenila C2-C8, heteroalquila, alquilcicloalquila ou heterocicloalquila; arila, Ar-alquila C3-C8, heterocíclico, carbocíclico, cicloalquila, heteroalquilcicloalquila, alquilcarbonil ou heteroarila, ésteres C2-C8, éter ou amida; ou peptídeos contendo 1-8 aminoácidos; ou unidade de polietilenoxi com a fórmula (OCI-hCI-híp ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 0 a cerca de 5000, ou combinação dos grupos dos mesmos acima;
    Em que o dito conjugado da Fórmula (II) da invenção especificamente exclui as seguintes estruturas:
    Figure BR112019020049A2_C0064
    em que m” = 1 -3; R”’ = H, CH3 ou C2H5.
    3. Composto conjugado de Fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é feito a partir de um bisligante prontamente reativo conjugado a uma molécula de ligação celular de
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    18/122
    Fórmula (III) abaixo, em que dois ou mais grupos funcionais de uma molécula citotóxica podem reagir simultânea ou sequencialmente para formar a Fórmula (I):
    ^agente/molécula
    Me ligação celular lí (III) em que:
    mi, n, , agente/molécula de ligação celular, Li, L2, Zb e Z2 são definidos da mesma forma que na reivindicação 1;
    X' e Y' são um grupo funcional que pode reagir independentemente com grupos de resíduos de um fármaco citotóxico simultaneamente ou sequencialmente para formar X e Y, respectivamente, em que X e Y são definidos na Fórmula (I);
    X’ e Y' são independentemente selecionados a partir de um substituinte de dissulfeto, maleimido, haloacetil, alcoxiamina, azido, cetona, aldeído, hidrazina, amino, hidroxil, carboxilato, imidazol, tiol ou alquino; ou um éster de N-hidroxissuccinimida, éster p-nitrofenílico, éster dinitrofenílico, éster pentafluorofenílico, éster pentaclorofenílico; éster tetrafluorofenílico; éster difluorofenílico; éster monofluorofenílico; ou éster pentaclorofenílico, éster diclorofenílico, éster tetraclorofenílico ou éster de 1-hidroxibenzotriazol; um triflato, mesilato ou tosilato; 2-etil-5-fenilisoxa-zólio-3'-sulfonato; um piridildissulfeto ou nitropiridildissulfeto; um grupo maleimida, haloacetato, acetilenodicarboxílico ou haleto de ácido carboxílico (fluoreto, cloreto, brometo ou iodeto) ou uma das seguintes estruturas:
    ,9 o θ éster ,9 o
    N-hidroxissuccinimida;
    θ maleimida;
    dis sulf eto;
    o haloacetil;
    haleto de
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    19/122 acil (haleto ácido),
    Ο
    Figure BR112019020049A2_C0065
    etenossulfonil;
    Figure BR112019020049A2_C0066
    acril
    O O (acriloil); Ts 2-(tosiloxi)acetil; Ms 2-
    Figure BR112019020049A2_C0067
    o
    Figure BR112019020049A2_C0068
    2- (difluorofenoxi)-acetil;
    F-^λ (fluorofenoxi)-acetil; F
    Figure BR112019020049A2_C0069
    2-(((trifluorometil)-sulfonil)oxi)acetil;
    Figure BR112019020049A2_C0070
    cetona, ou aldeido,
    N-N (pentafluorofenoxi)acetil;
    feniloxadiazol (0DA);°
    Figure BR112019020049A2_C0071
    I θ 2' 2 R^^O' a2 azido, metilsulfonaanidrido ácido, alquinil, ou O
    H2NHN-^s$s hidrazida. Em que Xf é F, Cl, Br, I ou Lv3; X2’ é O, NH, N(Ri), ou CH2; R3 e R5 são H, Ri, grupo aromático, heteroaromático ou aromático, em que um ou vários átomos de H são substituídos independentemente por Ri, -halogênio, -ORi, -SRi, -NRiR2, - N02, -S(O)Ri, -S(O)2Ri, ou -COORi; Lv3 é um grupo de saída selecionado a partir de metanossulfonil (mesil), toluenossulfonil (tosil), trifluorometil-sulfonil (triflato), trifluorometilsulfonato, nitrofenoxil, N-succinimidiloxil (NHS), fenoxil; dinitrofenoxil; pentafluorofenoxil, tetrafluorofenoxil, trifluorofenoxil, difluorofenoxil, monofluorofenoxil, pentaclorofenoxil, IH-imidazol-l-il, clorofenoxil, diclorofenoxil, triclorofenoxil, fenoxil-benzotil), feniloxadiazol il (ODA), oxadiazol-il ou uma molécula intermediária gerada com um
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    20/122 reagente de condensação para reações de Mitsunobu, em que Ri e R2 são definidos acima;
    4. Composto conjugado de Fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato que é feito a partir de uma molécula de bis-ligante prontamente reativa da Fórmula (IV) abaixo, em que uma molécula citotóxica e uma molécula de ligação celular podem reagir independentemente, ou simultaneamente ou sequencialmente para formar a Fórmula (I):
    Zj—Lvx
    Figure BR112019020049A2_C0072
    em que “ ”, mi, Li, L2, Zi, e Z2 são definidos da mesma forma que na reivindicação 1; Lvi e Lv2 são definidos como na reivindicação 2, e X’ e Y' são definidos como na reivindicação 3;
    em que o ditto componente da Fórmula (IV) da invenção especificamente exclui as seguintes estruturas:
    H ° m δ θχΗ—co2c6F5 m
    , em que m” = 1 -3.
    5. Composto conjugado de Fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura representada pela fórmula (I-a), (I-b), (I-c), (I-d), (I-e), (I-f), (I-g), (I-h), (I-i), (I-j), (I-k), (I-m), (I-n), (I-o), (I-p), (I-q), (I-r), (I-s), (I-t), (I-u), (I-v), e (I-w) abaixo:
    m» ageiste EítOtÓXKO
    Figure BR112019020049A2_C0073
    uma molécula de ligação cetulaí (I-a),
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    21 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0074
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 525/626
    22/122
    Figure BR112019020049A2_C0075
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 526/626
    23 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0076
    (I-P)
    Figure BR112019020049A2_C0077
    Figure BR112019020049A2_C0078
    Figure BR112019020049A2_C0079
    Figure BR112019020049A2_C0080
    (I-t)
    Figure BR112019020049A2_C0081
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 527/626
    24/122
    Figure BR112019020049A2_C0082
    Figure BR112019020049A2_C0083
    em que X7 e Y7 são independentemente CH, CH2, NH, O, S,
    NHNH, N(Ri) e N; uma ligação química no meio de dois átomos significa que ela pode acoplar dois átomos adjacentes; “-----”, X, Y, Rb n, Li e L2 são os mesmos descritos na reivindicação 1; o agente citotóxico é a mesma molécula citotóxica descrita na reivindicação 1.
    6. Composto de Fórmula (II) de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura representada pela fórmula (Π-a), (ΙΙ-b), (II-c), (Il-d), (Π-e), (Il-f), (ΙΙ-g), (Il-h), (Π-i), (Il-j), (ΙΙ-k), (Il-m), (Π-n), (II-o), (Il-q), (ΙΙ-r), (II-s), (ΙΙ-t), (II-u), (II-v), (II-w), (II-x), (ΙΙ-y), (IIz), (Π-al), (II-a2), (II-a3), e (II-a4):
    Figure BR112019020049A2_C0084
    Figure BR112019020049A2_C0085
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    Figure BR112019020049A2_C0086
    um agente citotóxico
    Figure BR112019020049A2_C0087
    Figure BR112019020049A2_C0088
    Figure BR112019020049A2_C0089
    Figure BR112019020049A2_C0090
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    Figure BR112019020049A2_C0091
    Figure BR112019020049A2_C0092
    Figure BR112019020049A2_C0093
    Figure BR112019020049A2_C0094
    Figure BR112019020049A2_C0095
    (Π-y),
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    Figure BR112019020049A2_C0096
    Figure BR112019020049A2_C0097
    Figure BR112019020049A2_C0098
    0 (II-a2),
    Figure BR112019020049A2_C0099
    em que X? e Y? são independentemente CH, CH2, NH, 0, S, NHNH, N(Ri) e N; a ligação química no meio de dois átomos significa que ela pode acoplar dois átomos adjacentes; “-----”, agente citotóxico, Ri, X, Y, n, Li, L2, Lvi e LV2 são os mesmos descritos na reivindicação 1 e 2.
    7. Composto de Fórmula (III) de acordo com a reivindicação
    3, caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura representada pela Fórmula (IlI-a), (ΠΙ-b), (III-c), (ΠΙ-d), (ΠΙ-e), (IlI-f), (ΠΙ-g), (ΠΙ-h), (IlI-i), (ΠΙ-j), (III
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    k), (III-l), (III-m), (ΠΙ-n), (III-o), (III-p), (ΠΙ-r), (III-s), (Ill-t), (III-u), (III-v), e (III-w) abaixo:
    Figure BR112019020049A2_C0100
    Figure BR112019020049A2_C0101
    (ΠΙ-b),
    Figure BR112019020049A2_C0102
    Figure BR112019020049A2_C0103
    Figure BR112019020049A2_C0104
    (Ill-e),
    Figure BR112019020049A2_C0105
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    Figure BR112019020049A2_C0106
    (ΠΙ-g),
    Figure BR112019020049A2_C0107
    Figure BR112019020049A2_C0108
    Figure BR112019020049A2_C0109
    Figure BR112019020049A2_C0110
    Figure BR112019020049A2_C0111
    Figure BR112019020049A2_C0112
    (III-l),
    Figure BR112019020049A2_C0113
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    Figure BR112019020049A2_C0114
    Figure BR112019020049A2_C0115
    üíwa mofé-EOÍa de Jtgação celular (III-o).
    Figure BR112019020049A2_C0116
    Figure BR112019020049A2_C0117
    Figure BR112019020049A2_C0118
    Ô (IlI-r),
    Figure BR112019020049A2_C0119
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 534/626
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    Figure BR112019020049A2_C0120
    em que X7 e Y7 são independentemente CH, CH2, NH, O, S, NHNH, N(Ri) e N; a ligação química no meio de dois átomos significa que ela pode acoplar dois átomos adjacentes; uma molécula de ligação celular, Ri, X’, Y’, n, Li e L2 são os mesmos descritos na reivindicação 1 e 2.
    8. Composto de Fórmula (IV) de acordo com a reivindicação
    4, caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura representada pela fórmula (IV-a), (IV-b), (IV-c), (IV-d), (IV-e), (IV-f), (IV-g), (IV-h), (IV-i), (IV-j), (IV-k), (IV-m), (IV-n), (IV-o), (IV-p), (IV-q), (IV-r), (IV-s), (IV-t), (IV-u), (IV-v), (IV-w), (IV-x), (IV-y), (IV-z), (IV-al), (IV-a2), (IV-a3), e (IV-a4) abaixo:
    Figure BR112019020049A2_C0121
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    Figure BR112019020049A2_C0122
    Figure BR112019020049A2_C0123
    (IV-s), (IV-u),
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    Figure BR112019020049A2_C0124
    Figure BR112019020049A2_C0125
    Figure BR112019020049A2_C0126
    Figure BR112019020049A2_C0127
    Figure BR112019020049A2_C0128
    em que X7 e Y7 são independentemente CH, CH2, NH, O, S, NHNH, N(Ri) e N; a ligação química no meio de dois átomos significa que ela pode acoplar dois átomos adjacentes; “-----”, Ri, X’, Y’, n, Li e L2 são os mesmos descritos na reivindicação 1 e 2.
    9. Conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um par de tióis de átomos de dissulfeto inter-cadeia do agente de ligação celular são reduzidos por um agente de redução selecionado a partir de ditiotreitol (DTT), ditioeritritol (DTE), ditiolbutilamina (DTBA), L
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    34/122 glutationa (GSH), tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP), 2-mercaptoetilamina (βMEA) ou/e beta-mercaptoetanol (β-ΜΕ, 2-ME).
    10. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é selecionada a partir de de:
    (1). Um agente terapêutico selecionado a partir do grupo que consiste em:
    a) um agente alquilante: selecionado a partir do grupo que consiste em mostardas de nitrogênio: clorambucil, clomafazina, ciclofosfamida, dacarbazina, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, mannomustina, mitobronitol, melfalano, mitolactol, pipobromana, novembichin, fenesterina, prednimustina, tiotepa, trofosfamida, mostarda de uracil; CC-1065 e adozelesina, carzelesina e bizelesina ou seus análogos sintéticos; duocarmicina e seus análogos sintéticos, KW-2189, CBI-TMI e dímeros de CBI; dímeros de benzodiazepina ou dímeros de pirrolobenzodiazepina (PBD), dímeros de tomaimicina, dímeros de indolinobenzodiazepinas, dímeros de imidazobenzotiadiazepinas ou dímeros de oxazolidinobenzodiazepinas; Nitrosoureas: compreendendo carmustina, lomustina, clorozotocina, fotemustina, nimustina, ranimustina; Alquilsulfonatos: bussulfano, treossulfano, improssulfano e pipossulfano); Triazenos ou dacarbazina; compostos contendo platina: carboplatina, cisplatina e oxaliplatina; aziridinas, benzodopa, carboquona, meturedopa ou uredopa; etileniminas e metilamelaminas, incluindo altretamina, trietilenemelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimetilolomelamina];
    b) . Um alcalóide vegetal: selecionado a partir do grupo que consiste em alcalóides da vinca: vincristina, vinblastina, vindesina, vinorelbina, e navelbin, Taxoides: compeendendo paclitaxel, docetaxol e seus análogos, Maitansinoides compreendendo DM1, DM2, DM3, DM4, DM5,
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    DM6, DM7, maitansina, ansamitocinas e seus análogos, criptoficinas (incluindo o grupo que consiste em criptoficina 1 e criptoficina 8); epotilonas, eleuterobina, discodermolida, briostatinas, dolostatinas, auristatinas, tubulisinas, cefalostatinas; pancratistatina; uma sarcodictin; espongistatina;
    c) . Um Inibidor da DNA Topoisomerase: selecionado a partir dos grupos de Epipodofilinas: 9-aminocamptotecina, camptotecina, crisnatol, daunomicina, etoposídeo, fosfato de etoposideo, irinotecano, mitoxantrona, novantrona, novantrona, ácidos retinoicos (ou retinóis), teniposideo, topotecano, 9-nitrocamptotecina ou RFS 2000; e mitomicinas e seus análogos;
    d) . Um antimetabólito: selecionado do grupo que consiste em {[Anti-folato: (Inibidores de DHFR: compreendendo metotrexato, trimetrexato, denopterina, pteropterina, aminopterina (ácido 4-aminopteroico) ou análogos do ácido fólico); Inibidores de IMP desidrogenase: (compreendendo ácido micofenólico, tiazofurina, ribavirina, EICAR); Inibidores da ribonucleotídeo redutase: (compreendendo hidroxiureia, deferoxamina)]; [Análogos de pirimidina: Análogos de Uracil: (compreendendo ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, capecitabina (Xeloda), carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, 5fluorouracil, floxuridina, ratitrexed (Tomudex)); Análogos de citosina: (compreendendo citarabina, citosina arabinosídeo, fludarabina); Análogos da purina: (compreendendo azatioprina, fludarabina, mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina)]; repositor de ácido fólico, ácido frolínico};
    e) . Uma terapia hormonal: selecionada a partir do grupo que consiste em {Antagonistas dos receptores: [Antiestrogênio: (compreendendo megestrol, raloxifeno, tamoxifeno); agonistas de LHRH: (compreendendo Goserelina, acetato de leuprolida); Anti-andrógenos: (compreendendo bicalutamida, flutamida, calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, goserelina, leuprolida, mepitiostano, nilutamida, testolactona,
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    36 m2 trilostane e outros inibidores de andrógenos)]; Retinoides/Deltoides: [Análogos da vitamina D3: (compreendendo CB 1093, EB 1089 KH 1060, colecalciferol, ergocalciferol); Terapias fotodinâmicas: (compreendendo verteporfina, ftalocianina, fotossensibilizador Pc4, desmetoxi-hipocrelina A); Citocinas: (compreendendo Interferon-alfa, Interferon-gama, fator de necrose tumoral (TNFs), proteínas humanas contendo um domínio TNF)]};
    f) . Um Inibidor de quinase, selecionado a partir do grupo que consiste em BIBW 2992 (anti-EGFR/Erb2), imatinibe, gefitinibe, pegaptanibe, sorafenibe, dasatinibe, sunitinibe, erlotinibe, nilotinibe, lapatinibe, axitinibe, pazopanibe. vandetanibe, E7080 (anti-VEGFR2), mubritinibe, ponatinibe (AP24534), bafetinibe (INNO-406), bosutinibe (SKI606), cabozantinibe, vismodegibe, iniparibe, ruxolitinibe, CYT387, axitinibe, tibetano, Trastuzumabe, ranibizumabe, panitumumabe, ispinesibe;
    g) . Uns inibidores de poli (ADP-ribose) polimerase (PARP) selecionados a partir do grupo que consiste em olaparibe, niraparibe, iniparibe, talazoparibe, veliparibe, CEP 9722 (Cephalon’s), E7016 (Eisai’s), BGB-290 (BeiGene’s) ou 3-aminobenzamida.
    h) . Um antibiótico, selecionado a partir do grupo que consiste em um antibiótico de enedina (selecionado a partir do grupo que consiste em caliqueamicina, caliqueamicina γΐ, δΐ, al ou βΐ; dinemicina, incluindo dinemicina A e desoxidinemicina; esperamicina, kedarcidina, C-1027, maduropeptina, ou cromóforo de neocarzinostatina e cromóforos antiobióticos de enedina relacionados com cromoproteína), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carabicina, carabicina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina, morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina e desoxidoxorrubicina, epirrubicina, eribulina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, nitomicinas, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas,
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    37 / 122 peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina;
    i). Um policetideo (acetogenina), bulatacina e bulatacinona; gemcitabina, epoxomicinas e carfilzomibe, bortezomibe, talidomida, lenalidomida, pomalidomida, tosedostate, zybrestat, PLX4032, STA-9090, Stimuvax, alovectina-7, Xegeva, Provenge, Yervoy, inibidores da isoprenilação e Lovastatina), neurotoxinas dopaminérgicas e ion l-metil-4fenilpiridínio, inibidores do ciclo celular (selecionado a partir de estaurosporina), actinomicinas (compreendendo actinomicina D, dactinomicina), amanitinas, bleomicinas (compreendendo bleomicina A2, bleomicina) B2, peplomicina), antraciclinas (compreendendo daunorrubicina, doxorrubicina (adriamicina), idarrubicina, epirrubicina, pirarrubicina, zorubicina, mitoxantrona, inibidores de MDR ou verapamil, inibidores de Ca2+ ATPase ou tapsigargina, inibidores da histona deacetilase (compreendendo Vorinostate, Romidepsina, Panobinostate, Acido valproico, Mocetinostate, (MGCD0102), Belonostate, PCI-24781, Entinostate, SB939, Resminostate, Givinostate, AR-42, CUDC-101, sulforafano, Tricostatina A); Tapsigargina, Celecoxibe, glitazonas, epigalocatequina galato, Disulfiram, Salinosporamida A.; Antiadrenais selecionados a partir do grupo que consiste em aminoglutotimida, mitotano, trilostano; aceglatone; glicosideo de aldofosfamida; ácido aminolevulinico; amsacrina; arabinosideo, bestrabucil; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; eflomitina (DFMO), elfomitina; acetato de eliptínio, etoglucida; nitrato de gálio; gacitosina, hidroxiureia; ibandronato, lentinano; lonidamina; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; phenamet; pirarrubicina; ácido podofilínico; 2-etil-hidrazida; procarbazina; PSK®; razoxano; rizoxina; sizofirana; espirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2' ,2triclorotrietilamina; tricotecenos (incluindo o grupo que consiste em toxina T
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    2, verrucarina A, roridina A e anguidina); uretano, siRNA, fármacos antis sentido;
  2. (2) . Um agente antidoença autoimune: ciclosporina, ciclosporina A, ácido aminocaproico, azatioprina, bromocriptina, clorambucil, cloroquina, ciclofosfamida, corticosteroides (incluindo o grupo que consiste em amcinonida, betametasona, budesonida, hidrocortisona, flunisolida, propionato de fluticasona, fluocortolona danazol, dexametasona, acetonida de triancinolona, dipropionato de beclometasona), DHEA, enanercept, hidroxicloroquina, infliximabe, meloxicam, metotrexato, mofetil, micofenolato, prednisona, sirolimus, tacrolimus.
  3. (3) . Uns agentes antidoenças infecciosas compreendendo:
    a) . Aminoglicosídeos: amicacina, astromicina, gentamicina (netilmicina, sisomicina, isepamicina), higromicina B, canamicina (amicacina, arbecacina, becanamicina, dibecacina, tobramicina), neomicina (framicetina, paromomicina, ribostamicina), netilmicina, espectinomicina, estreptomicina, tobramicina, verdamicina;
    b) . Amfenicóis: azidamfenicol, cloranfenicol, florfenicol, tiamfenicol;
    c) . Ansamicinas: geldanamicina, herbimicina;
    d) . Carbapenens: biapenem, doripenem, ertapenem, imipenem/cilastatina, meropenem, panipenem;
    e) . Cefens: carbacefem (loracarbef), cefacetrila, cefaclor, cefradina, cefadroxil, cefalônio, cefaloridina, cefalotina ou cefalotina, cefalexina, cefaloglicina, cefamandol, cefapirina, cefatrizina, cefazaflur, cefazedona, cefazolina, cefbuperazona, cefcapeno, cefdaloxima, cefepima, cefminox, cefoxitina, cefprozil, cefroxadina, ceftezol, cefuroxima, cefixima, cefdinir, cefditoreno, cefepima, cefetamet, cefmenoxima, cefodizima, cefonicida, cefoperazona, ceforanida, cefotaxima, cefotiam, cefozopran, cefalexina, cefpimizol, cefpiramida, cefpiroma, cefpodoxima, cefprozil,
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    39/122 cefquinoma, cefsulodina, ceftazidima, cefteram, ceftibuten, ceftioleno, ceftizoxima, ceftobiprol, ceftriaxona, cefuroxima, cefuzonam, cefamicina (cefoxitina, cefotetan, cefmetazol), oxacefema (flomoxefe, latamoxefe);
    f) . Glicopeptideos: bleomicina, vancomicina (oritavancina, telavancina), teicoplanina (dalbavancina), ramoplanina;
    g) . Glicilciclinas: tigeciclina;
    h) . Inibidores de β-Lactamase: penam (sulbactam, tazobactam), ciavam (ácido clavulânico);
    i) . Lincosamidas: clindamicina, lincomicina;
    j) . Lipopeptídeos: daptomicina, A54145, antibióticos dependentes de cálcio (CDA);
    k) . Macrolideos: azitromicina, cetromicina, claritromicina, diritromicina, eritromicina, fluritromicina, josamicina, cetolideo (telitromicina, cetromicina), midecamicina, miocamicina, oleandomicina, rifamicinas (rifampicina, rifampicina, rifabutina, rifapentina), roquitamicina, roxitromicina, espectinomicina, espiramicina, tacrolimus (FK506), troleandomicina, telitromicina;
    l) . Monobactamas: aztreonam, tigemonam;
    m) . Oxazolidinonas: linezolida;
    n) . Penicilinas: amoxicilina, ampicilina pivampicilina, hetacilina, bacampicilina, metampicilina, talampicilina, azidocilina, azlocilina, benzilpenicilina, benzatina benzilpenicilina, benzatina fenoximetilpenicilina, clometocilina, benzilpenicilina procaina, carbenicilina (carindacillin), cloxacilina, dicloxacilina, epicilina, flucloxacilina, mecilinam (pivmecilinam), mezlocilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, penamecilina, penicilina, feneticilina, fenoximetilpenicilina, piperacilina, propicilina, sulbenicilina, temocilina, ticarcilina;
    o) . Polipeptídeos: bacitracina, colistina, polimixina B;
    p) . Quinolonas: alatrofloxacina, balofloxacin, ciprofloxacina,
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    40/122 clinafloxacina, danofloxacina, difloxacina, enoxacina, enrofloxacina, floxina, garenoxacina, gatifloxacina, gemifloxacinaa, grepafloxacina, kano trovafloxacina, levofloxacina, lomefloxacina, marbofloxacina, moxifloxacina, nadifloxacina, norfloxacina, orbifloxacina, ofloxacina, pefloxacina, trovafloxacina grepafloxacina, sitafloxacina, sparfloxacina, temafloxacina, tosufloxacina, trovafloxacina;
    q) .Estreptograminas: pristinamicina, quinupristina/dalfopristina;
    r) . Sulfonamidas: mafenida, prontoil, sulfacetamida, sulfametizol, sulfanilimida, sulfassalazina, sulfisoxazol, trimetoprim, trimetoprim-sulfametoxazol (co-trimoxazol);
    s) . Antibacterianos esteroides: selecionados a partir de ácido fusidico;
    t) . Tetraciclinas: doxiciclina, clortetraciclina, clomociclina, demeclociclina, limeciclina, meclociclina, metaciclina, minociclina, oxitetraciclina, penimepiciclina, rolitetraciclina, tetraciclina, glicilciclinas (incluindo tigeciclina);
    u) . Outros antibióticos: selecionados a partir do grupo que consiste em annonacina, arsfenamina, inibidores de bactoprenol (Bacitracina), inibidores de DADAL/AR (cicloserina), dicostostatina, discodermolida, eleuterobina, epotilona, etambutol, etoposídeo, faropenem, ácido fusídico, furidolida, furazolidona, isoniazida, laulimalida, metronidazol, mupirocina, micolactona, inibidores da síntese de NAM (fosfomicina), nitrofurantoína, paclitaxel, platensimicina, pirazinamida, quinupristina/dalfopristina, rifampicina (rifampicina), tazobactam tinidazol, uvaricina;
  4. (4). Fármacos antivirais compreendendo:
    a) . Inibidores da entrada/fusão: aplaviroc, maraviroc, vicriviroc, gp41 (enfuvirtida), PRO 140, CD4 (ibalizumabe);
    b) . Inibidores de integrase: raltegravir, elvitegravir, globoidnan
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    A;
    c) . Inibidores da maturação: bevirimate, vivecon;
    d) . Inibidores da neuraminidase: oseltamivir, zanamivir, peramivir;
    e) . Nucleosideos e nucleotideos: abacavir, aciclovir, adefovir, amdoxovir, apricitabina, brivudina, cidofovir, clevudina, dexelvucitabina, didanosina (ddl), elvucitabina, emtricitabina (FTC), entecavir, famaciclovir, análogos de fluorouracil (5-FU), 2',3'-didesoxinucleosideo 3'-fluorosubstituído (incluindo o grupo que consiste em 3'-fluoro-2',3'didesoxitimidina (FLT) e 3’-fluoro-2’,3’-didesoxiganosina (FLG), fomivirsen, ganciclovir, idoxuridina, lamivudina (3TC), 1-nucleosideos (incluindo o grupo que consiste em β-1-timidina e 3-l-2’-desoxicitidina), penciclovir, racivir, ribavirina, stampidina, estavudina (d4T), taribavirina (viramidina), telbivudina, tenofovir, trifluridina valaciclovir, valganciclovir, zalcitabina (ddC), zidovudina (AZT);
    f) . Não nucleosideos: amantadina, ateviridina, capravirina, diarilpirimidinas (etravirina, rilpivirina), delavirdina, docosanol, emivirina, efavirenz, foscamet (ácido fosfonofórmico), imiquimode, interferon alfa, lovirida, lodenosina, metisazona, nevirapina, NOV-205, peginterferon alfa, podofilotoxina, rifampicina, rimantadina, resiquimode (R-848), tromantadina;
    g) . Inibidores de protease: amprenavir, atazanavir, boceprevir, darunavir, fosamprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, pleconarila, ritonavir, saquinavir, telaprevir (VX-950), tipranavir;
    h) . Outros tipos de fármacos antivirus: abzima, arbidol, calanolideo a, ceragenina, cianovirina-n, diarilpirimidinas, epigalocatequina gaiato (EGCG), foscamet, grifitsina, taribavirina (viramidina), hidroxiureia, KP-1461, miltefosina, pleconarila, inibidores de portmanteau, ribavirina, seliciclibe.
  5. (5). Um radioisótopo que pode ser selecionado a partir do
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    42/122 grupo que consiste em (radionuclídeos) 3H, nC, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, Tc, mIn, 123I, 124I, 1251,131I, 133Xe, 177Lu, 211At, ou 213Bi.
  6. (6). Uma molécula de cromóforo, que é capaz de absorver luz UV, luz fluorescente, luz infravermelha, luz próxima à infravermelha, luz visual; Uma classe ou subclasse de xantóforos, eritróforos, iridóforos, leucóforos, melanóforos, cianóforos, moléculas de fluoróforo que são compostos químicos fluorescentes que re-emitem luz sobre luz, moléculas de fototransdução visual, moléculas de fotóforo, moléculas de luminescência, compostos de luciferina; Fluoróforos orgânicos não proteicos, selecionados a partir de: Derivados de xanteno (compreendendo fluoresceína, rodamina, verde de Oregon, eosina e vermelho do Texas); Derivados de cianina: (compreendendo cianina, indocarbocianina, oxacarbocianina, tiacarbocianina e merocianina); Derivados de esquaraína e esquaraínas substituídas no anel, incluindo corantes Seta, SeTau e Square; Derivados de naftaleno (compreendendo derivados de dansil e prodan); Derivados de cumarina; Derivados de oxadiazol (compreendendo piridiloxazol, nitrobenzoxadiazol e benzoxadiazol); derivados de antraceno (compreendendo antraquinonas, incluindo DRAQ5, DRAQ7 e CyTRAK Orange); Derivados de pireno (azul cascata, etc.); Derivados de oxazina (compreendendo vermelho do Nilo, azul do Nilo, violeta de cresil, oxazina 170). Derivados de acridina (compreendendo proflavina, laranja de acridina, amarelo de acridina, etc.). Derivados de arilmetina (compreendendo auramina, violeta cristal, verde malaquita). Derivados de tetrapirrol (compreendendo porfina, ftalocianina, bilirrubina); Quaisquer análogos e derivados dos seguintes compostos fluoróforos compreendendo corante CF, sondas DRAQ e CyTRAK, BODIPY, Alexa Fluor, DyLight Fluor, Atto e Tracy, FluoProbes, corantes Abberior, corantes DY e MegaStokes, corantes Sulfo Cy, HiLyte Fluor, Seta, corantes SeTau e Square, corantes Quasar e Cal Fluor, corantes SureLight (APC, RPEPerCP, Ficobilissomas), APC, APCXL, RPE, BPE, Aloficocianina
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    43 / 122 (APC), Aminocumarina, conjugados de APC-Cy7, BODIPY-FL, Azul de Cascata, Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy5, Cy5.5, Cy7, Fluoresceina, FluorX, Hidroxicumarina, Lissamina Rododamina B, Amarelo lúcifer, metoxicumarina, NBD, azul do Pacífico, laranja do Pacífico, conjugados de PE-Cy5, conjugados de PE-Cy7, PerCP, R-fitoeritrina (PE), Red 613, Seta555-azida, Seta-555-DBCO, Seta-555-NHS, Seta-580-NHS, Seta-680-NHS, Seta-780-NHS, Seta-APC-780, Seta-PerCP-680, Seta-R-PE-670, SeTau-380NHS, SeTau-405-Maleimida, SeTau-405-NHS, SeTau-425-NHS, SeTau-647NHS, Vermelho do Texas, TRITC, TruRed, X-Rodamina, 7-AAD (7aminoactinomicina D, CG-seletivo), laranja de acridina, cromomicina A3, laranja de CyTRAK (excitação vermelha escura), DAPI, DRAQ5, DRAQ7, brometo de etídio, Hoechst33258, Hoechst33342, LDS 751, mitramicina, iodeto de propídio (PI), azul SYTOX, verde SYTOX, laranja SYTOX, laranja de tiazol, TO-PRO: Monômero de cianina, TOTO-1, TO-PRO-1, TOTO-3, TO-PRO-3, YOSeta-1, Y0Y0-1; Um composto de fluoróforo: compreendendo DCFH (2'7'Dicorodi-hidro-fluoresceína, forma oxidada), DHR (Di-hidrorrodamina 123, forma oxidada, a luz catalisa a oxidação), Fluo-3 (éster AM. pH> 6), Fluo-4 (éster AM. pH 7,2), Indo-1 (éster AM, cálcio baixo/alto (Ca2+)), SNARF (pH 6/9), Aloficocianina (APC), AmCyanl (tetrâmero, Clontech), AsRed2 (tetrâmero, Clontech), Verde de Azami (monômero), Azurita, B-fitoeritrina (BPE), Cerulean, CyPet, monômero DsRed (Clontech), DsRed2 (RFP), EBFP, EBFP2, ECFP, EGFP (dímero fraco), Emerald (dímero fraco), EYFP (dímero fraco), GFP (mutação S65A), GFP (mutação S65C), GFP (mutação S65L), GFP (mutação S65T), GFP (mutação Y66F), GFP (mutação Y66H), GFP (mutação Y66W), GFPuv, HcRedl, J-Red, Katusha, Kusabira Orange (monômero, MBL), mCFP, mCherry, mCitrine, Midoriishi Ciano (dímero, MBL), mKate (TagFP635, monômero), mKeima-Red (monômero), mKO, mOrange, mPlum, mRaspberry, mRFPl (monômero), mStrawberry, mTFl, mTurquoise2, P3
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    44/122 (complexo de ficobilissoma), peridinina clorofila (PerCP), R-fitoeritrina (RPE), T-Sapphire, TagCFP (dímero), TagGFP (dímero), TagRFP (dímero), TagYFP (dímero), tdTomato (dímero em tandem), Topázio, TurboFP602 (dímero), TurboFP635 (dímero), TurboGFP (dímero), TurboRFP (dímero), TurboYFP (dímero), Venus, GFP de tipo selvagem, YPet, ZsGreenl (tetrâmero), ZsYellowl (tetrâmero) e seus derivados.
  7. (7). Os ligandos de ligação celular ou agonistas de receptores, que podem ser selecionados a partir de: Derivados de folato; Derivados da ureia do ácido glutâmico; Somatostatina e seus análogos (selecionados a partir do grupo que consiste em octreotida (Sandostatina) e lanreotida (Somatulina)); Sulfonamidas aromáticas; Peptídeo hipofisário ativador de adenilato ciclase (PACAP) (PAC1); Peptídeos intestinais vasoativos (VIP/PACAP) (VPAC1, VPAC2); hormônio estimulador de melanócitos (aMSH); Colecistocinina (CCK)/agonistas de receptores de gastrina; Bombesinas (selecionadas a partir do grupo que consiste em Pyr-Gln-ArgLeu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)/peptídeo liberador de gastrina (GRP); ligandos de receptores de neurotensina (NTR1, NTR2, NTR3); ligandos da substância P (receptor NK1); neuropeptídeo Y (Y1-Y6); peptídeos de endereçamento incluem RGD (Arg-Gly-Asp), NGR (Asn-GlyArg), peptídeos RGD cíclicos diméricos e multiméricos (selecionados a partir de cRGDfV), TAASGVRSMH e LTLRWVGLMS (receptor do proteoglicano sulfato de condroitina NG2) e peptídeos F3; peptídeos de penetração celular (CPP); hormônios peptídicos, selecionados a partir do grupo que consiste em agonistas e antagonistas do hormônio liberador de hormônio luteinizante (LHRH) e agonista do hormônio liberador de gonadotropina (GnRH), atuam visando o hormônio folículo estimulante (FSH) e o hormônio luteinizante (LH), bem como a produção de testosterona, selecionados a partir do grupo que consiste em buserelina (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-ProNHEt), Gonadorelina (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHi),
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    Goserelina (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2),
    Histrelina (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-benzyl)-Leu-Arg-Pro-NHEt), leuprolida (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt), Nafarelina (Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), Triptorelina (Pyr-HisTrp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NHi), Nafarelina, Deslorelina, Abarelix (Ac-D-2Nal-D-4-cloroPhe-D-3-(3-piridil)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-LeuisopropilLys-Pro-DAla-NHi), Cetrorelix (Ac-D-2Nal-D-4-cloro-Phe-D-3-(3piridil)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2), Degarelix (Ac-D-2NalD-4-cloroPhe-D-3-(3-piridil)Ala-Ser-4-aminoPhe(L-hidro-orotil)-D-4aminoPhe(carba-moil)-Leu-isopropilLys-Pro-D-Ala-NH2), e Ganirelix (Ac-D2N al-D-4-cloroPhe-D- 3 - (3 -piridil) Ala-Ser-T yr-D- (N 9 ,N 10-dietil)-homo ArgLeu- (N9,N10-dietil)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2); Receptores de reconhecimento de padrões (PRRs), selecionados a partir do grupo que consiste em ligandos dos receptores do tipo Toll (TLRs), lectinas do tipo C e ligandos dos receptores do tipo NOD (NLRs); Agonistas do receptor de calcitonina; agonistas dos receptores de integrina e seus subtipos de receptor (selecionados a partir do grupo que consiste em οΐανβι, ανβ3, ανβί, ανβό, αόβ4, α?βι, αρβ2. αιη>β3) (selecionados a partir do grupo que consiste em GRGDSPK, ciclo(RGDfV) (Ll) e seus derivados [ciclo(-N(Me)R-GDfV), ciclo(R-SarDfV), ciclo-(RG-N(Me)D-fV), ciclo(RGD-N(Me)f-V), ciclo(RGDf-N(Me)V)(Cilengitida)]; Nanocorpo (um derivado de VHH (Ig de camelídeo)); Anticorpos de domínio (dAb, um derivado do domínio VH ou VL); Engager de células T biespecíficas (BiTE, um diacorpo biespecífico); Redirecionamento de afinidade dupla (DART, um diacorpo biespecífico); Anticorpos tetravalentes em tandem (TandAb, um diacorpo biespecífico dimerizado); Anticalina (um derivado das lipocalinas); Adnectinas (10a FN3 (Fibronectina); proteínas de repetição de anquirina projetadas (DARPins); Avímeros; Agonistas de receptores de EGF e de receptores de VEGF.
  8. (8). Os sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos, derivados,
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    46 / 122 hidrato ou sal hidratado; ou uma estrutura cristalina; ou um isômero óptico, racemato, diastereômero ou enantiômero de qualquer um dos fármacos acima.
    11. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é uma molécula de cromóforo, o conjugado é usado para detectar, monitorar ou estudar as interações e/ou funções da molécula de ligação celular e/ou as interações do conjugado com uma célula alvo.
    12. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é polialquilenoglicóis [compreendendo poli(etilenoglicol) (PEGs), poli(propilenoglicol), um copolímero de óxido de etileno ou óxido de propileno, ou seus análogos], o conjugado é usado para prolongar a meia-vida da molécula de ligação celular quando é administrado a um mamífero.
    13. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um ligando de ligação celular, um agonista do receptor celular ou uma molécula de ligação ao receptor celular, o conjugado é usado como um condutor/diretor de direcionamento para entregar o conjugado a células malignas ou para modular ou coestimular a resposta imune desejada, ou para alterar as vias de sinalização.
    14. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é selecionada do grupo que consiste em tubulisinas, caliqueamicinas, auristatinas, maitansinoides, análogos de CC-1065, compostos de daunorrubicina e doxorrubicina, taxanoides (taxanos), criptoficinas, epotilonas, dímeros de benzodiazepina (compreendendo dímeros de pirrolobenzodiazepina (PBD), dímeros de tomaimicina, dímeros de antramicina, dímeros de indolinobenzodiazepinas, dímeros de imidazobenzotiadiazepinas ou dímeros de oxazolidinobenzodiazepinas e seus derivados); caliqueamicinas e antibióticos
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    47 / 122 de enedina, actinomicinas, amatoxinas, amanitinas, azaserinas, bleomicinas, epirrubicina, tamoxifeno, idarrubicina, dolastatinas/auristatinas (compreendendo monometil auristatina E, MMAE, MMAF, auristatina PYE, auristatina TP, Auristatinas 2-AQ, 6-AQ, EB (AEB), EFP (AEFP) e sens análogos), duocarmicinas, geldanamicinas, metotrexatos, tiotepa, vindesinas, vincristinas, hemiasterinas, nazumamidas, microgininas, radiosuminas, alterobactinas, microsclerodermina, teonelamidas, esperamicinas, siRNA, miRNA, piRNA, enzimas nucleolíticas e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos, e/ou seus análogos, derivados, hidrato ou sal hidratado; ou uma estrutura cristalina; ou um isômero óptico, racemato, diastereômero ou enantiômero de qualquer um dos fármacos acima mencionados.
    15. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1 ou 3, caracterizado pelo fato de que a molécula/agente de ligação celular é selecionada a partir do grupo que consiste em um anticorpo, uma proteína, probody, nanocorpo, uma vitamina (incluindo folato), peptídeos, uma micela polimérica, um lipossoma, um veículo de fármacos à base de lipoproteína, um veículo de fármacos de nanopartículas, um dendrímero e uma molécula ou partícula mencionada acima que reveste com ligandos de ligação celular, ou uma combinação dos referidos acima.
    16. Compostos conjugados de acordo a reivindicação 1, 3 ou 15, caracterizados pelo fato de que a molécula/agente de ligação celular é selecionada a partir de um anticorpo, uma proteína semelhante a um anticorpo, anticorpo de comprimento total (anticorpo policlonal, anticorpo monoclonal, dímero de anticorpo, multímero de anticorpo) ou anticorpo multiespecífico (selecionado a partir de anticorpo biespecífico, anticorpo triespecífico ou anticorpo tetraespecífico); um anticorpo de cadeia única, um fragmento de anticorpo que se liga à célula alvo, um anticorpo monoclonal, um anticorpo monoclonal de cadeia única, ou um fragmento de anticorpo monoclonal que se liga à célula alvo, um anticorpo quimérico, um fragmento
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    48 / 122 de anticorpo quimérico que se liga à célula alvo, um anticorpo de domínio, um fragmento de anticorpo de domínio que se liga à célula alvo; um anticorpo recapeado, um anticorpo recapeado de cadeia única ou um fragmento de anticorpo recapeado que se liga à célula alvo, um anticorpo humanizado ou um anticorpo recapeado, um anticorpo humanizado de cadeia única ou um fragmento de anticorpo humanizado que se liga à célula alvo, antianticorpos idiotípicos (anti-Id), CDRs, diacorpo, triacorpo, tetracorpo, minianticorpo, um probody, um fragmento de probody, pequenas proteínas imunes (SIP), uma linfocina, um hormônio, uma vitamina, um fator de crescimento, um fator estimulador de colônias, uma molécula de transporte de nutrientes, proteínas de grande peso molecular, nanopartículas ou polímeros modificados com anticorpos ou proteínas de grande peso molecular.
    17. Compostos conjugados de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3, 5, 7 ou 10 a 16, caracterizados pelo fato de que o agente/molécula de ligação celular é capaz de se direcionar contra uma célula tumoral, uma célula infectada por vírus, uma célula infectada por microrganismos, uma célula infectada por parasitas, uma célula de doença autoimune, uma célula tumoral ativada, uma célula mieloide, uma célula T ativada, uma célula B afetada ou um melanócito ou qualquer célula que expresse qualquer um dos seguintes antígenos ou receptores: : CD2, CD2R, CD3, CD3gd, CD3e, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD8a, CD8b, CD9, CD10, CDlla, CDllb, CDllc, CD12, CD12w, CD13, CD14, CD15, CD15s, CD15u, CD16, CD16a, CD16b, CD17, CDwl7, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31, CD32, CD33, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD39, CD40, CD41, CD42, CD42a, CD42b, CD42c, CD42d, CD43, CD44, CD44R, CD45, CD45RA, CD45RB, CD45RO, CD46, CD47, CD47R, CD48, CD49a, CD49b, CD49c, CD49e, CD49f, CD50, CD51, CD52, CD53, CD54, CD55,CD56, CD57, CD58, CD59, CD60, CD60a, CD60b, CD60c, CD61,
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    CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD64, CD65, CD65s, CD66, CD66a, CD66b, CD66c, CD66d, CD66e, CD66f, CD67, CD68, CD69, CD70, CD71, CD72, CD73, CD74, CD74, CD75, CD75s, CD76, CD77, CD78, CD79, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CDw84, CD85, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD92, CDw92, CD93, CD94, CD95, CD96, CD97, CD98, CD99, CD99R, CD100, CD101, CD102, CD103, CD104, CD105, CD106, CD107, CD107a, CD107b, CD108, CD109, CD110, CD111, CD112, CD113, CDwll3, CD114, CD115, CD116, CD117, CD118, CD119, CDwll9, CD120a, CD120b, CD121a, CD121b, CDwl21b, CD122, CD123, CDwl23, CD124, CD125, CDwl25, CD126, CD127, CD128, CDwl28, CD129, CD130, CD131, CDwl31, CD132, CD133, CD134, CD135, CD136, CDwl36, CD137, CDwl37, CD138, CD139, CD140a, CD140b, CD141, CD142, CD143, CD144, CD145, CDwl45, CD146, CD147, CD148, CD149, CD150, CD151, CD152, CD153, CD154, CD155, CD156a, CD156b, CDwl56c, CD157, CD158a, CD158b, CD159a, CD159b, CD159c, CD160, CD161, CD162, CD162R, CD163, CD164, CD165, CD166, CD167, CD167a, CD168, CD169, CD170, CD171, CD172a, CD172b, CD172g, CD173, CD174, CD175, CD175s, CD176, CD177, CD178, CD179, CD180, CD181, CD182, CD183, CD184, CD185, CD186, CDwl86, CD187, CD188, CD189, CD190, Cdl91, CD192, CD193, CD194, CD195, CD196, CD197, CD198, CDwl98, CD199, CDwl99, CD200, CD200a, CD200b, CD201, CD202, CD202b, CD203, CD2O3c, CD204, CD205, CD206, CD207, CD208, CD209, CD210, CDw210, CD212, CD213al, CD213a2, CDw217, CDw218a, CDw218b, CD220, CD221, CD222, CD223, CD224, CD225, CD226, CD227, CD228, CD229, CD230, CD231, CD232, CD233, CD234, CD235a, CD235ab, CD235b, CD236, CD236R, CD238, CD239, CD240, CD240CE, CD240D, CD241, CD242, CD243, CD244, CD245, CD246, CD247, CD248, CD249, CD252, CD253, CD254, CD256, CD257, CD258, CD261, CD262, CD263, CD265, CD266, CD267, CD268, CD269, CD271,
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    CD273, CD274, CD275, CD276 (B7-H3), CD277, CD278, CD279, CD280, CD281, CD282, CD283, CD284, CD289, CD292, CDw293, CD294, CD295, CD296, CD297, CD298, CD299, CD300a, CD300c, CD300e, CD301, CD302, CD3O3, CD304, CD305, CD306, CD309, CD312, CD314, CD315, CD316, CD317, CD318, CD319, CD320, CD321, CD322, CD324, CDw325, CD326, CDw327, CDw328, CDw329, CD331, CD332, CD333, CD334, CD335, CD336, CD337, CDw338, CD339, 4-1BB, 5AC, 5T4 (Glicoproteina de trofoblastos, TPBG, 5T4, fator inibidor ativado por Wnt 1 ou WAIF1), antigeno de adenocarcinoma, AGS-5, AGS-22M6, quinase semelhante ao receptor de ativina 1, AFP, AKAP-4, ALK, alfa integrina, alfa v betaó, Amino-peptidase N, beta amiloide, receptor de andrógeno, angiopoietina 2, angiopoietina 3, anexina Al, antigeno protetor da toxina antraz, anti-receptor de transferrina, AOC3 (VAP-1), B7-H3, Bacillus anthracis anthrax, BAFF (fator ativador de célula B), célula de linfoma B, bcr-abl, Bombesin, BORIS, C5, C242, antigeno CA125 (antigeno de carboidrato 125, MUC16), CA-IX (ou CAIX, anidrase carbônica 9), CALLA, CanAg, Canis lupus familiaris IL31, Anidrase carbônica IX, Miosina cardíaca, CCL11 (quimiocina de motivo C-C 11), CCR4 (receptor de quimiocina C-C tipo 4, CD194), CCR5, CD3E (epsilon), CEA (antigeno carcinoembrionário), CEACAM3, CEACAM5 (antigeno carcinoembrionário), CFD (Fator D), Ch4D5, Colecistocinina 2 (CCK2R), CLDN18 (Claudin-18), Fator de agrupamento A, cMet, CRIPTO, FCSF1R (Receptor do fator 1 estimulador de colônias), CSF2 (fator 2 estimulador de colônias, fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF)), CSP4, CTLA4 (proteína associada a linfócitos T citotóxicos 4), antigeno tumoral CTAA16.88, CXCR4, receptor de quimiocina C-X-C tipo 4, ADP ribose hidrolase cíclica, Ciclina Bl, CYP1B1, Citomegalovirus, Glicoproteina B do citomegalovirus, Dabigatran, DLL3 (ligando do tipo delta 3), DLL4 (ligando do tipo delta 4), DPP4 (dipeptidilpeptidase 4), DR5 (receptor da morte 5), toxina do tipo E. coli shiga-1, toxina
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 554/626
    51/122 do tipo E. coli shiga-2, ED-B, EGFL7 (proteína 7 contendo domínio semelhante ao EGF), EGFR, EGFRII, EGFRvIII, Endoglina (CD 105), receptor de endotelina B, endotoxina, EpCAM (molécula de adesão de células epiteliais), EphA2, Episialina, ERBB2 (Receptor do fator de crescimento epidérmico 2), ERBB3, ERG (gene de fusão TMPRSS2 ETS), Escherichia coli, ETV6-AML, FAP (Proteína alfa de ativação de fibroblastos), FCGR1, alfa-fetoproteína, fibrina II, cadeia beta, domínio extra de fibronectina-B, FOLR (receptor de folato), receptor de folato alfa, folato hidrolase, antígeno relacionado ao Fos, proteína F do vírus respiratório sincicial, receptor de Frizzled, Fucosil GM1, gangliosídeo GD2, G-28 (glicolipídio de antígeno da superfície celular), idiotipo GD3, GloboH, glipicano 3, ácido Nglicolilneurâmico, GM3, cadeia α do receptor GMCSF, fator de diferenciação de crescimento 8, GP100, GPNMB (glicoproteína transmembranar NMB), GUCY2C (Guanilato ciclase 2C, guanilil ciclase C (GC-C), guanilato ciclase intestinal, receptor de guanilato ciclase-C, receptor de enterotoxina estável ao calor (hSTAR)), proteínas de choque térmico, hemaglutinina, antígeno da hepatite B, vírus da hepatite B, HER1 (receptor 1 do fator de crescimento epidérmico humano), HER2, HER2/neu, HER3 (ERBB-3), IgG4, HGF/SF (fator de crescimento/fator de dispersão de hepatócitos), HHGFR, HIV-1, complexo de histona, HLA-DR (antígeno leucocitário humano), HLA-DR 10, HLA-DRB, HMWMAA, gonadotrofina coriônica humana, HNGF, receptor quinase do fator de dispersão humano, HPV E6/E7, Hsp90, hTERT, ICAM -1 (molécula de adesão intercelular 1), idiotipo, IGF1R (IGF -1, receptor de fator de crescimento semelhante à insulina 1), IGHE, IFN-D, hemaglutinina da influenza, IgE, região Fc de IgE, IGHE, interleucinas (por exemplo, IL-1, IL2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-6R, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL- 11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-17 A, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27 ou IL28), IL31RA, ILGF2 (fator de crescimento semelhante à insulina 2), Integrinas (α4, αιη,ββ, ανβ3, ο^βγ, α5β1, α6β4, α7β7,α11β3, α5β5, ανβ5),
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    52/122 proteína induzida por interferon gama, ITGA2, ITGB2, KIR2D, Ig Kappa, LCK, Le, Legumaina, antígeno Lewis-Y, LFA-1 (antígeno 1 associado à função linfocitária), CD 11 a), LHRH, LINGO-1, ácido lipoteicoico, LIV1A, LMP2, LTA, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE Al, MAGE A3, MAGE 4, MARTI, MCP-1, MIF (fator inibidor de migração de macrófagos ou fator inibidor de glicosilação (GIF)), MS4A1 (membro 1 da subfamília A de 4 domínios transmembranares), MSLN (mesotelina), MUC1 (mucina 1, célula associada à superfície (MUC1) ou mucina epitelial polimórfica (PEM)), MUC1-KLH, MUC16 (CA125), MCP1 (proteína quimiotática monocítica 1), MelanA/MARTl, ML-IAP, MPG, MS4A1 (subfamília A de 4 domínios transmembranares), MYCN, mielina glicoproteína associada a miostatina, NA17, NARP-1, NCA-90 (antígeno de granulócitos), Nectina-4 (ASG-22ME), NGF, proteinase 1 regulada por apoptose neural, NOGO-A, receptor de Notch, Nucleolina, produto de oncogene Neu, NY-BR-1, NY-ESO-1, OX-40, OxLDL (lipoproteína de baixa densidade oxidada), OY-TES1, P21, p53 não-mutante, P97, Page4, PAP, Paratópio de anti-(ácido N-glicolilneuramínico), PAX3, PAX5, PCSK9, PDCD1 (PD-1, proteína de morte celular programada 1, CD279), PDGF-Ra (receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas do tipo alfa), PDGFR-β, PDL-1, PLAC1, fosfatase alcalina testicular do tipo PLAP, receptor beta do fator de crescimento derivado de plaquetas, co-transportador de fosfato de sódio, PMEL 17, ácido polissiálico, proteinase3 (PR1), carcinoma prostático, PS (fosfatidilserina), células de carcinoma prostático, Pseudomonas aeruginosa, PSMA, PSA, PSCA, glicoproteína do vírus da raiva, RHD (polipeptídeo Rh 1 (RhPI), CD240), fator de Rhesus, RANKL, RhoC, Ras mutante, RGS5, R0B04, vírus sincicial respiratório, RON, R0R1, pontos de ruptura da translocação do sarcoma, SART3, Esclerostina, SLAMF7 (membro da família SLAM 7), Selectina P, SDC1 (Sindecano 1), sLe (a), Somatomedina C, SIP (Esfingosina-1-fosfato), Somatostatina,
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    53 / 122 proteína do esperma 17, SSX2, STEAP1 (antígeno epitelial 6 transmembranar da próstata 1), STEAP2, STn, TAG-72 (glicoproteína associada ao tumor 72), Survivin, receptor de células T, proteína transmembrana de células T, TEMÍ (marcador endotelial tumoral 1), TENB2, Tenascina C (TN-C), TGF-α, TGFβ (fator de crescimento transformador beta), TGF-βΙ, ΤΟΕ-β2 (fator de crescimento transformador-beta 2), Tie (CD202b), Tie2, TIM-1 (CDX-014), Tn, TNF, TNF-α, TNFRSF8, TNFRSF10B (membro da família 10B da superfamília do receptor de fator de necrose tumoral), TNFRSF13B (membro 13B da superfamília do receptor de fator de necrose tumoral 13B ), TPBG (glicoproteína de trofoblastos), TRAIL-R1 (receptor 1 do ligando indutor de apoptose de necrose tumoral), TRAILR2 (receptor de morte 5 (DR5)), transdutor de sinal de cálcio associado a tumor 2, glicosilação específica de tumor de MUC1, receptor de TWEAK, TYRP1 (glicoproteína 75), TRP-2, Tirosinase, VCAM-1 (CD 106), VEGF, VEGF-A, VEGF-2 (CD309), VEGFR-1, VEGFR2 ou vimentina, WT1, XAGE 1 ou células que expressam qualquer receptor de fator de crescimento de insulina ou qualquer receptor de fator de crescimento epidérmico.
    18. Célula tumoral de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo fato de que é selecionada a partir do grupo que consiste em células de linfoma, células de mieloma, células renais, células de câncer de mama, células de câncer de próstata, células de câncer de ovário, células de câncer colorretal, células de câncer gástrico, células de câncer escamoso, células do câncer de pulmão de pequenas células, células de câncer de pulmão de células não pequenas, células de câncer testicular, células malignas ou quaisquer células que crescem e se dividem em um ritmo acelerado e desregulado para causar câncer.
    19. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é uma molécula de cromóforo, o composto conjugado da Fórmula (I) é selecionado a partir do
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    54/122 grupo que consiste em estruturas de AcOl, Ac02, Ac03, Ac04, Ac05, Ac06 e
    Ac07 da seguinte maneira:
    Figure BR112019020049A2_C0129
    Figure BR112019020049A2_C0130
    Ac03
    Figure BR112019020049A2_C0131
    Ac06 (conjugado de IR800CW)
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    55 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0132
    Figure BR112019020049A2_C0133
    Ac07
    Em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou dupla ligação, ou ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; mAb é anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; R12 e R12’ são independentemente OH, NH2, NHRb NHNH2, NHNHCOOH, O-Ri-COOH, NH-Ri-COOH, NH-(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)pCH2CH2OH, O(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH2,
    O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH,
    O(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, RiNHSO3H, NH-Ri-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, Ri-NHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, ORiNHPO3H2, NH-Ri-NHPO3H2, NH-Ar-COOH, NH-Ar-NH2, em que p=0 5000, Aa é aminoácidos; Ri, Li, e L2 são os mesmos definidos na reivindicação 1.
    20. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um análogo da tubulisina, o composto conjugado da Fórmula (I) é selecionado a partir de estruturas de T01, T02, T03, T04, T05, T06, T07, T08, T09, T10 e Tll como segue:
    ¢1 ^mAb n
    TOl
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    56/122 smAb n
    T02 'mAb n
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    57 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0134
    em que é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; mAb é anticorpo; Rí2 é OH, NH2, NHRb NHNH2, NHNHCOOH, O-Ri-COOH, NHRi-COOH, NH-(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)PCH2CH2OH,
    O(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NRiRi’, NHOH, NHORi, O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NHAr-COOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H,
    NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, ORi-NHPO3H2, NH-Ri-NHPO3H2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2NH2,
    NH(CH2CH2S)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2OH,
    NH(CH2CH2S)pCH2CH2OH NH-Ri-NH2, ou
    NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, em que Aa é 1-8 aminoácidos; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Rb Rf, R2, R3, e R4 são independentemente H, alquila Ci-C8 linear ou ramificada, amida, ou aminas; arila C2-C8, alquenila, alquinila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila, éster, éter, heterocicloalquila ou aciloxilaminas; ou peptídeos contendo 1-8 aminoácidos, ou unidade de polietilenoxi com fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))p, em que p é um número inteiro de 1 a cerca de 5000; Os
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    58/122 dois Rs: R1R2, R2R3, R1R3 ou R3R4 pode formar um anel cíclico de 3 a 8 membros do grupo alquila, arila, heteroarila, heteroalquila ou alquilcicloalquila; X3 é H, CH3, CH2CH3, C3H7, ou Xi’Ri’,em que Xf é NH, N(CH3), NHNH, O, ou S; Ri’ é H ou alquila Ci-C8 linear ou ramificada, arila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila ou aciloxilaminas; R3’ é H ou alquila Ci-Cô linear ou ramificada; Z3 é H, COORi, NH2, NHRb ORi, CONHRi,NHCORi, OCORi, OP(O)(OMi)(OM2), OCH2OP(O)(OMi)(OM2), OSO3M1, Ri, O-glicosídeo (glicosídeo, galactosídeo, manosídeo, glucuronosídeo/glucuronídeo, alosídeo, frutosídeo), NH-glicosídeo, Sglicosídeo ou CH2-glicosídeo; Mi e M2 são independentemente H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NRiRoRi; L|, e L2 são definidos da mesma forma na reivindicação 1.
    21. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um análogo de Caliqueamicina, o composto conjugado da Fórmula (I) é selecionado a partir
    Figure BR112019020049A2_C0135
    em que é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou ausente; Xb e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é
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    59/122 anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Rb Lb e L2 são os mesmos definidos na reivindicação 1.
    22. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um análogo de maitansinoide, o composto conjugado é selecionado a partir de estruturas de
    MyOl, My02, My03, My04, My05, e My06 como segue:
    Figure BR112019020049A2_C0136
    Figure BR112019020049A2_C0137
    Figure BR112019020049A2_C0138
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    Figure BR112019020049A2_C0139
    em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Ri, Lb e L2 são os mesmos definidos na reivindicação 1.
    23. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um análogo de Taxano, o composto conjugado é selecionado a partir de estruturas de TxOl, TxOl e Tx03 como segue:
    Figure BR112019020049A2_C0140
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    Figure BR112019020049A2_C0141
    em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S,
    OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; Ri, Lb e L2 são os mesmos definidos na reivindicação 1.
    24. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um análogo de CC1065 e/ou análogo de duocarmicina, o composto conjugado é selecionado a partir de estruturas de CC01, CC02 e CC03 como segue:
    Figure BR112019020049A2_C0142
    Figure BR112019020049A2_C0143
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 565/626
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    Figure BR112019020049A2_C0144
    Em que mAb é um anticorpo; Z3 é H, PO(OMi)(OM2), SO3Mb CH2PO(OM1)(OM2), CH3N(CH2CH2)2NC(O)-, O(CH2CH2)2NC(O)-, Ri, ou glicosídeo; em que é uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou ausente; Xi,Xs, Yi e Y5 são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(0)0, C(O)NH, OC(O)NH, 0C(0)0, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; Rb Lb e L2 são os mesmos definidos na reivindicação 1.
    25. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um análogo de Daunorrubicina ou Doxorrubicina, o composto conjugado é selecionado a partir de estruturas de DaOl, Da02, Da03 Da04, Da05, Da06, Da07 e Da08 como segue:
    Figure BR112019020049A2_C0145
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    Figure BR112019020049A2_C0146
    Figure BR112019020049A2_C0147
    Figure BR112019020049A2_C0148
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 567/626
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    Figure BR112019020049A2_C0149
    em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb Rí2 é OH, NH2, NHRi, NHNH2, NHNHCOOH, O-Ri-COOH, NH-Ri-COOH, NH(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)PCH2CH2OH, O(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH2, NRiRi’, NHOH, NHORi, O(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)pCH2CH2COOH, NH-ArCOOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H,
    NH(CH2CH2O)pCH2CH2NH-SO3H, Ri-NHSO3H, NH-Ri-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2.CH2NHPO3H2, OR1, R1-NHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, ORi-NHPO3H2, NH-Ri-NHPO3H2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2NH2,
    NH(CH2CH2S)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2OH,
    NH(CH2CH2S)pCH2CH2OH, NH-Ri-NH2, ou
    NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, em que Aa é 1-8 aminoácidos; p é 15000; mAb é anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; Ri, Lb e L2 são os mesmos definidos na reivindicação 1.
    26. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1,
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 568/626
    65 / 122 caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um análogo de Auristatina ou dolastatina, o composto conjugado é selecionado a partir de estruturas de AuOl, Au02, Au03, Au04, Au05, Au06, Au07, Au08, Au09,
    AulO, Aull, Aul2 e Aul3 como segue:
    Figure BR112019020049A2_C0150
    Figure BR112019020049A2_C0151
    Figure BR112019020049A2_C0152
    Figure BR112019020049A2_C0153
    Figure BR112019020049A2_C0154
    Figure BR112019020049A2_C0155
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 569/626
    66 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0156
    Figure BR112019020049A2_C0157
    Figure BR112019020049A2_C0158
    Aul2 °^^ri2 1 Au 13 em que “——” é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(0)0, C(O)NH, OC(O)NH, 0C(0)0, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRi; Rí2 é OH, NH2, NHRi, NHNH2, NHNHCOOH, O-Ri-COOH, NH-Ri-COOH, NH(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)PCH2CH2OH, O(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NRiRf, NHOH, NHORb O(CH2CH2O)PCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)PCH2CH2COOH, NH-ArCOOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H,
    NH(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H, R1-NHSO3H, NH-R1-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, ORb Ri-NHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, ORi-NHPO3H2, NH-Ri-NHPO3H2, NH(CH2CH2NH)pCH2CH2NH2,
    NH(CH2CH2S)pCH2CH2NH2, NH(CH2CH2NH)PCH2CH2OH,
    NH(CH2CH2S)PCH2CH2OH NH-Ri-NH2, ou
    NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, em que Aa é 1-8 aminoácidos; p é 15000; mAb é anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Rb
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 570/626
    67 / 122
    Ri, Rs, e R4 são independentemente H; alquila Ci-Cs linear ou ramificada, arila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila, éster, éter, amida, aminas, heterocicloalquila ou aciloxilaminas; ou peptídeos contendo 1-8 aminoácidos, ou unidade de polietilenoxi com fórmula (OCIUCIDp ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 1 a cerca de 5000. Os dois Rs: R1R2, R2R3, R1R3 ou R3R4 pode formar um anel cíclico de 3 a 8 membros do grupo alquila, arila, heteroarila, heteroalquila ou alquilcicloalquila; X3 é H, CH3 ou Xi’Ri’, em que Xf é NH, N(CH3), NHNH, O, ou S, e Rf é H ou alquila CiCs linear ou ramificada, arila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila ou aciloxilaminas; R3’ é H ou alquila Ci-Cô linear ou ramificada; Z3 é H, COORi, NH2, NHRi, ORi, CONHRi,NHCORi, OCORi, 0P(0)(0Mi)(0M2), OCH2OP(O)(OMi)(OM2), OSO3M1, Ri ou Ο-glicosídeo (glicosídeo, galactosídeo, manosídeo, glucuronosideo/glucuronideo, alosideo, frutosideo), NH-glicosídeo, S-glicosídeo ou CH2-glicosídeo; Mi e M2 são independentemente H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1R2R3; Li, e L2 são definidos da mesma forma na reivindicação 1.
    27. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um dímero de análogos de benzodiazepina, o composto conjugado é selecionado a partir de estruturas de PB01, PB02, PB03, PB04, PB05, PB06, PB07, PB08, PB09, PB10, PB11, PB12, PB13, PB14, PB15, PB16, PB17, PB18, PB19, PB20, PB21 e PB22.
    Figure BR112019020049A2_C0159
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 571/626
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    Figure BR112019020049A2_C0160
    Figure BR112019020049A2_C0161
    Figure BR112019020049A2_C0162
    PB05 ,x.'L| z l2' ’ Ύι /' •r3' õ () / Λ)
    II. .X— JI
    L,· nÍ ' l2· õ
    Ã/=N (\Z\z()V^/N=V“\ L'
    O O Xs=s<y^L2 αΟ <L—<
    LL /
    I
    Zi'-S
    I kJ· i2 s ->m,
    I
    I
    42-s'
    I
    I
    -i2—s'
    -> m,
    I *
    I ^l2-sx' η ΡΒ06 ^mÁb
    ΡΒ07 ^niAb η ΡΒ08 ^niAb
    ΡΒ09
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 572/626
    69/122 _______ (\/X| o—-/ M ho3§. y O5=< JO3h z2 s^ ml '^S.
    I
    I .l2-sjiiAb η
    PB 10 ^mAb 11 PB11
    Figure BR112019020049A2_C0163
    I I
    I»!
    SOaH r3
    Figure BR112019020049A2_C0164
    HO3^ z N o ^niAb n
    PB1 >nAb n
    θ PB16 mi.
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 573/626
    70/122
    Figure BR112019020049A2_C0165
    Figure BR112019020049A2_C0166
    Figure BR112019020049A2_C0167
    Figure BR112019020049A2_C0168
    Figure BR112019020049A2_C0169
    em que “-----” é opcionalmente uma ligação simples, ou uma ligação dupla, ou ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH,
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 574/626
    71 / 122
    NR5, S, C(0)0, C(O)NH, OC(O)NH, 0C(0)0, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; Lb L2, Zb e Z2 são os mesmos definidos na reivindicação 1; Rb R2, R3, Ri’, R2’, e R3’ são independentemente H; F; Cl; = O; = S; OH; SH; alquila Ci-Cs, arila, alquenila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila, éster (COOR5 ou OC(O)Rs), éter (OR5), amida (CONR5), carbamato (OCONR5), aminas (NHR5, NR5R5’), heterocicloalquila, ou aciloxilamines (-C(O)NHOH, ONHC(O)Rs); ou peptídeos contendo 1-8 aminoácidos naturais ou não naturais, ou unidade de polietilenoxi de fórmula (OCH2CH2)P ou (OCH2CH(CH3))P, em que p é um número inteiro de 1 a cerca de 5000. Os dois Rs: RiR2, R2R3, RiR3. Ri’R2’, R2’R3’, ou Ri’R3’ podem formar independentemente um anel cíclico de 3 a 8 membros do grupo alquila, arila, heteroarila, heteroalquila ou alquilcicloalquila; X2 e Y2 são independentemente N, CH2 ou CR5, em que R5 é H, OH, NH2, NH(CH3), NHNH2, COOH, SH, OZ3, SZ3, ou alquila Ci-Cs linear ou ramificada, arila, heteroarila, heteroalquila, alquilcicloalquila, aciloxilaminas; Z3 é H, 0P(0)(0Mi)(0M2), OCH2OP(O)(OMi)(OM2), OSO3Mb ou O-glicosídeo (glicosídeo, galactosídeo, manosídeo, glucuronosídeo/glucuronídeo, alosídeo, frutosídeo), NH-glicosídeo, S-glicosídeo ou CH2-glicosídeo; Mi e M2 são independentemente H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NRiR2R3.
    28. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um análogo de amanitina, o composto conjugado é selecionado a partir de estruturas de AmOl, Am02, Am03, e Am04 como segue:
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 575/626
    72/122
    Figure BR112019020049A2_C0170
    Figure BR112019020049A2_C0171
    Figure BR112019020049A2_C0172
    em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou pode opcionalmente estar ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(Ri), N(Ri)C(O)N(Ri), CH,
    C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo, preferencialmente anticorpo
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 576/626
    73 / 122 monoclonal; n e mi são independentemente 1-20; R7, R8, e R9 são independentemente H, OH, ORi, NH2, NHRb alquila Ci-Có ou ausente; Y2 é O, O2, NRi, NH, ou ausente; Rw é CH2, O, NH, NRi, NHC(O), NHC(O)NH, NHC(O)O, 00(0)0, C(0), 0C(0), OC(O)(NRi), (NRi)C(O)(NRi), C(O)Ri ou ausente; Rn é OH, NH2, NHRb NHNH2, NHNHCOOH, O-Ri-COOH,
    NH-Ri-COOH, NH-(Aa)nCOOH, O(CH2CH2O)PCH2CH2OH, O(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NH(CH2CH2O)PCH2CH2NH2, NR1R1’, O(CH2CH2O)PCH2CH2COOH, NH(CH2CH2O)PCH2CH2COOH, NH-ArCOOH, NH-Ar-NH2, O(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H,
    NH(CH2CH2O)PCH2CH2NHSO3H, Ri-NHSO3H, NH-Ri-NHSO3H, O(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, 0Rb Ri-NHPO3H2, Ri-OPO3H2, O(CH2CH2O)pCH2CH2OPO3H2, ORi-NHPO3H2, NH-Ri-NHPO3H2, ou NH(CH2CH2O)pCH2CH2NHPO3H2, em que Aa é 1-8 aminoácidos; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Rb Lb e L2 são os mesmos definidos na Fórmula (I). Lb L2, Rb Zb e Z2, são os mesmos definidos na reivindicação 1.
    29. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1 ou
    12, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um análogo de polialquilenoglicol, o composto conjugado é selecionado a partir de estruturas
    Figure BR112019020049A2_C0173
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 577/626
    74/122 em que ----- é opcionalmente uma ligação simples ou uma ligação dupla, ou ausente; Xb e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; p é 1-5000; Ri e R3 é H, OH, OCH3, CH3, ou OC2H5 independentemente; Lb e L2 são os mesmos definidos na reivindicação 1.
    30. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um ligando de ligação celular ou agonista do receptor celular e seus análogos, o composto conjugado é selecionado a partir de estruturas de: LB01 (conjugado de folato), LB02 (conjugado de ligando de PMSA), LB03 (conjugado de ligando de PMSA), LB04 (conjugado de ligando de PMSA), LB05 (conjugado de somatostatina), LB06 (conjugado de somatostatina), LB06 (conjugado de somatostatina), LB07 (octreotida, um conjugado de somatostatina), L08 (Lanreotida, um conjugado de análogo da somatostatina), LB09 (Vapreotida (Sanvar), um conjugado de análogo de somatostatina), LB10 (conjugado de ligando de CAIX), LB11 (conjugado de ligando de CAIX), LB12 (receptor de peptídeo liberador de gastrina (GRPr), conjugado de MB A), LB13 (ligando de hormônio liberador de hormônio luteinizante (LH-RH) e conjugado de GnRH), LB14 (hormônio liberador de hormônio luteinizante (LH-RH) e conjugado de ligando de GnRH), LB15 (antagonista de GnRH, conjugado de Abarelix), LB16 (cobalamina, conjugado de análogo de vitamina B12), LB17 (cobalamina, conjugado de análogo de vitamina Bl2), LB18 (para receptor de integrina ανβ3, conjugado de pentapeptídeo cíclico de RGD), LB19 (conjugado de ligando peptídico heterobivalente para receptor de VEGF), LB20 (conjugado de Neuromedina B), LB21 (conjugado de bombesina para um receptor de junção à proteína G), LB22 (conjugado de TLR2 para um receptor tipo Toll), LB23 (para um receptor de androgênio), LB24
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 578/626
    75 / 122 (Conjugado Cilengitida/ciclo(-RGDfV-) para um receptor de integrina av, LB23 (conjugado de fludrocortisona), LB25 (conjugado de análogo de rifabutina), LB26 (conjugado de análogo de rifabutina), LB27 (conjugado de análogo de rifabutina), LB28 (conjugado de fludrocortisona), LB29 (conjugado de dexametasona), LB30 (conjugado de propionato de fluticasona), LB31 (conjugado de dipropionato de beclometasona), LB32 (conjugado de acetonida de triancinolona), LB33 (conjugado de prednisona), LB34 (conjugado de prednisolona), LB35 (conjugado de metilprednisolona), LB36 (conjugado de betametasona), LB37 (conjugado de análogo de irinotecano), LB38 (conjugado de análogo de crizotinibe), LB39 (conjugado de análogo de Bortezomibe), LB40 (conjugado de análogo de carfilzomibe), LB41 (conjugado de análogo de carfilzomibe), LB42 (conjugado de análogo de leuprolida), LB43 (conjugado de análogo de triptorelina), LB44 (conjugado de clindamicina), LB45 (conjugado de análogo de liraglutida), LB46 (conjugado de análogo de semaglutida), LB47 (conjugado de análogo da retapamulina), LB48 (conjugado análogo da indibulina), LB49 (conjugado análogo da vinblastina), LB50 (conjugado análogo do lixisenatida), LB51 (conjugado análogo do osimertinibe), LB52 (um conjugado de análogo de neucleosídeo), LB53 (conjugado de análogo de Erlotinibe) e LB54 (conjugado de análogo de Lapatinibe), que são mostrados nas seguintes estruturas:
    Figure BR112019020049A2_C0174
    LB01 (conjugado de folato),
    Figure BR112019020049A2_C0175
    LB02 (conjugado de ligando de PMSA),
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 579/626
    76 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0176
    LB03 (conjugado de ligando de PMSA),
    Figure BR112019020049A2_C0177
    LB04 (conjugado de ligando de PMSA),
    Figure BR112019020049A2_C0178
    LB05 (conjugado de Somatostatina),
    Figure BR112019020049A2_C0179
    LB06 (conjugado de Somatostatina),
    Figure BR112019020049A2_C0180
    LB07 (Octreotida, um conjugado de somatostatina)
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 580/626
    77 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0181
    L08 (Lanreotida, um conjugado de análogo da somatostatina),
    Figure BR112019020049A2_C0182
    LB09 (Vapreotida (Sanvar), um conjugado de análogo de somatostatina),
    Figure BR112019020049A2_C0183
    LB10 (conjugado de ligando de CAIX),
    Figure BR112019020049A2_C0184
    LB11 (conjugado de ligando de CAIX),
    Figure BR112019020049A2_C0185
    LB12 (receptor de peptídeo liberador de gastrina (GRPr), conjugado de
    MBA),
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 581/626
    78 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0186
    LB 13 (ligando de hormônio liberador de hormônio luteinizante (LH-RH) e conjugado de GnRH),
    Figure BR112019020049A2_C0187
    LB14 (hormônio liberador de hormônio luteinizante (LH-RH) e conjugado de ligando de GnRH),
    Figure BR112019020049A2_C0188
    LB15 (antagonista de GnRH, conjugado de Abarelix),
    Figure BR112019020049A2_C0189
    LB16 (cobalamina, conjugado de análogo de vitamina BI2),
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 582/626
    79 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0190
    LB 17 (cobalamina, conjugado de análogo de vitamina B12),
    Figure BR112019020049A2_C0191
    LB 18 (para receptor de integrina ανβ3, conjugado de pentapeptídeo cíclico de
    RGD), / I I Η o [Ac-A-G-P-T-W-C-E-D-D-W-Y-Y-C-W-L-F-G-T-G-G-G'Ny^Xj-Li
    Figure BR112019020049A2_C0192
    Figure BR112019020049A2_C0193
    LB 19 (conjugado de ligando peptidico heterobivalente para receptor de
    VEGF),
    Figure BR112019020049A2_C0194
    LB20 (conjugado de Neuromedina B), < Ο lA-Zi-s
    Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met— N—P—I t HO mi ,mAb
    LB21 (conjugado de bombesina para um receptor de junção à proteína G),
    Figure BR112019020049A2_C0195
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 583/626
    80/122
    LB22 (conjugado de TLR2 para um receptor tipo Toll),
    Figure BR112019020049A2_C0196
    LB23 (um receptor de androgênio),
    Figure BR112019020049A2_C0197
    LB24 (Conjugado Cilengitida/ciclo(-RGDfV-) para um receptor de integrina
    Figure BR112019020049A2_C0198
    LB25 (conjugado de análogo de rifabutina),
    Figure BR112019020049A2_C0199
    LB26 (conjugado de análogo de rifabutina),
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 584/626
    81/122
    Figure BR112019020049A2_C0200
    LB27 (conjugado de análogo de rifabutina),
    Figure BR112019020049A2_C0201
    LB28 (conjugado de fludrocortisona),
    Figure BR112019020049A2_C0202
    Figure BR112019020049A2_C0203
    LB29 (conjugado de dexametasona),
    Figure BR112019020049A2_C0204
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 585/626
    82/122
    LB31 (conjugado de dipropionato de beclometasona),
    Figure BR112019020049A2_C0205
    LB32 (conjugado de acetonida de triancinolona),
    Figure BR112019020049A2_C0206
    LB33 (conjugado de prednisona),
    Figure BR112019020049A2_C0207
    LB34 (conjugado de prednisolona),
    Figure BR112019020049A2_C0208
    LB35 (conjugado de metilprednisolona),
    Figure BR112019020049A2_C0209
    LB36 (conjugado de betametasona)
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 586/626
    83 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0210
    LB37 (conjugado de análogo de irinotecano),
    Figure BR112019020049A2_C0211
    LB38 (conjugado de análogo de crizotinibe),
    Figure BR112019020049A2_C0212
    LB39 (conjugado de análogo de Bortezomibe), em que Y5, é N, CH, C(C1),
    C(CH3), ou C(COORi); Ri é H, alquila Ci-Cô, Ar C3-C8;
    Figure BR112019020049A2_C0213
    LB40 (conjugado de análogo de carfilzomibe),
    Figure BR112019020049A2_C0214
    LB41 (conjugado de análogo de carfilzomibe),
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 587/626
    84/122
    Figure BR112019020049A2_C0215
    LB42 (conjugado de análogo de leuprolida),
    Figure BR112019020049A2_C0216
    LB43 (conjugado de análogo de triptorelina),
    Figure BR112019020049A2_C0217
    HO
    LB44 (conjugado de clindamicina),
    Figure BR112019020049A2_C0218
    S^Z^L|—HN-H-A-Q-G-T-F-T-S-D ( 11 Nyx/^-A-A-Q-G-Q-L-Y-s s-V S-L^2_£2 q-f-i-a-w-l-v-r-g-r-g-cooh
    Figure BR112019020049A2_C0219
    n
    LB45 (conjugado de análogo de liraglutida), mAh
    Figure BR112019020049A2_C0220
    Z|
    HN-H-AIB-Q-G-T-F-T-S-D
    H
    Z zN 212 Q-F-I-A-W-L-V-R-G-R-G-COOH /nq
    LB46 (conjugado de análogo de semaglutida),
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 588/626
    85 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0221
    LB47 (conjugado de análogo da retapamulina),
    Figure BR112019020049A2_C0222
    LB49 (conjugado análogo da vinblastina),
    Figure BR112019020049A2_C0223
    zr-s
    Figure BR112019020049A2_C0224
    mAb ^Z2-S 1111
    HOOC-H-G-E-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-iyi
    G-G-N-K-L-W-E-I-F-L-R-V-A-E-E-E/ Ljέ-S-S-G-A-P-P-S-K-K-K-K-K- T
    N 2
    H /
    LB50 (conjugado análogo do lixisenatida),
    Figure BR112019020049A2_C0225
    LB51 (conjugado análogo do osimertinibe),
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 589/626
    86 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0226
    LB52 (um conjugado de análogo de neucleosídeo),
    Figure BR112019020049A2_C0227
    Figure BR112019020049A2_C0228
    em que “-----” é opcionalmente uma ligação simples, ou uma ligação dupla, ou ausente; Xi e Yi são independentemente O, NH, NHNH, NR5, S, C(O)O, C(O)NH, OC(O)NH, OC(O)O, NHC(O)NH, NHC(O)S, OC(O)N(R1), N(R1)C(O)N(R1), CH, C(O)NHNHC(O) e C(O)NRb mAb é anticorpo; n e mi são independentemente 1-20; X3 é CH2, O, NH, NHC(O), NHC(O)NH, C(O), OC(O), OC(O)(NR3), Rb NHRb NRi, C(O)Ri ou ausente; X4 é H, CH2, OH, O, C(O), C(O)NH, C(O)N(Ri), Rb NHRb NRi, C(O)Ri ou C(O)O; X5 é H, CH3, F, ou Cl; Mi é M2 são independentemente H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NRiR2R3; Ró é 5'-desoxiadenosil, Me, OH, ou CN; Lb L2, Rb Ri’, R2, Zi, e Z2, são definidos como na reivindicação 1;
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 590/626
    87 / 122
    31. Composto conjugado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a molécula citotóxica é um DNA, RNA, mRNA, RNA interferente pequeno (siRNA), microRNA (miRNA) ou RNAs que interagem com PIWI (piRNA), o composto conjugado é selecionado a partir da estrutura de SI-1 abaixo.
    Figure BR112019020049A2_C0229
    em que mAb, mb n, Xb Lb L2, Zb Z2, ” são os mesmos definidos na reivindicação 1; são fitas simples ou duplas de DNA,
    RNA, mRNA, siRNA, miRNA ou piRNA; Y é O, S, NH ou CH2.
    32. Conjugado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3, 5,7 , 10a 17 ou 19a31, caracterizado pelo fato de que a molécula/agente de ligação celular é selecionada a partir de um anticorpo IgG, anticorpo monoclonal ou uma proteína semelhante a um anticorpo IgG, o conjugado, que são conjugados especificamente a um par de tióis gerado pela redução das ligações dissulfeto da molécula/agente de ligação celular entre a cadeia leve e a cadeia pesada, as ligações dissulfeto superiores entre as duas cadeias pesadas e as ligações dissulfeto inferiores entre as duas cadeias pesadas, tendo a seguinte estrutura de STI, ST2, ST3, ST4, ST5 ou ST6:
    Figure BR112019020049A2_C0230
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 591/626
    88 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0231
    ST2,
    Figure BR112019020049A2_C0232
    ST3,
    Figure BR112019020049A2_C0233
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 592/626
    89 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0234
    ST6, em que Zb Z2, X, Y, Lb L2, “—”, mb e molécula citotóxica são definidas da mesma forma que Xi na reivindicação 1.
    33. Conjugado de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que as moléculas citotóxicas e mi em sítio de conjugação diferente da molécula de ligação celular podem ser diferentes quando as moléculas citotóxicas contendo bis-ligantes iguais ou diferentes são conjugadas sequencialmente a uma molécula de ligação celular, ou quando diferentes moléculas citotóxicas contendo bis-ligantes iguais ou diferentes são adicionados passo a passo em uma mistura reacional de conjugação contendo uma molécula de ligação celular.
    34. Conjugado de acordo com a reivindição 32 ou 33, caracterizado pelo fato de que o agente citotóxico é selecionado a partir de tubulisinas, maitansinoides, taxanoides (taxanos), análogos de CC-1065, compostos de daunorrubicina e doxorrubicina, indolcarboxamida, dímeros de benzodiazepina, dímeros de pirrolobenzodiazepina (PBD), dímeros de tomaimicina, dímeros de antramicina, dímeros de indolinobenzodiazepinas, dímeros de imidazobenzotiadiazepinas, dímeros de oxazolidinobenzodiazepinas, caliqueamicinas e os antibióticos de enedina, actinomicinas, amanitinas, amatoxinas, azaserinas, bleomicinas, epirrubicina, eribulina, tamoxifeno, idarrubicina, dolastatinas, auristatinas (compreendendo monometil auristatina E, MMAE, MMAF, auristatina PYE, auristatina TP, Auristatinas 2-AQ, 6-AQ, EB (AEB), EFP (AEFP) e seus análogos),
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 593/626
    90/122 duocarmicinas, geldanamicinas ou outros inibidores de HSP90, centanamicina, metotrexatos, tiotepa, vindesinas, vincristinas, hemiasterinas, nazumamidas, microgininas, radiosuminas, estreptonigtina, SN38 ou outros análogos ou metabólitos de camptotecina, alterobactinas, microsclerodermina, teonelamidas, esperamicinas, PNU-159682, e seus análogos ou derivados, sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos, derivados, hidrato ou sal hidratado, uma estrutura cristalina, um isômero óptico, racemato, diastereômero ou enantiômero de qualquer um dos fármacos dos mesmos acima; ou uma molécula/composto citotóxico descrito na reivindicação 10.
    35. Composto de Fórmula (II) de acordo com a reivindicação
    2, caracterizado pelo fato de ter as seguintes estruturas:
    Figure BR112019020049A2_C0235
    Figure BR112019020049A2_C0236
    Figure BR112019020049A2_C0237
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 594/626
    91 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0238
    Figure BR112019020049A2_C0239
    Figure BR112019020049A2_C0240
    Figure BR112019020049A2_C0241
    Figure BR112019020049A2_C0242
    Figure BR112019020049A2_C0243
    Figure BR112019020049A2_C0244
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 595/626
    92/122
    Figure BR112019020049A2_C0245
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 596/626
    93 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0246
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 597/626
    94/122 ο
    ο
    Figure BR112019020049A2_C0247
    243a, m=0; 243b, m=3; 243c, m=4; 243d, m=6; 243d, m=8; 243e, m=12.
    o
    IIN-U-
    Figure BR112019020049A2_C0248
    NHrT\ ° L·
    V A γ^ν^ν-ττ^ηΧα°n>
    XY Η Ο Η Ο g-MX/V Ο ο ο ^(ΟΟΗ ... . .... . ... , ο <> \ 244a, rn=0; 244b, in =3; 244c, m=4;
    244d, m=6; 244d, m=8; 244e, rn=12.
    Figure BR112019020049A2_C0249
    Figure BR112019020049A2_C0250
    Figure BR112019020049A2_C0251
    Figure BR112019020049A2_C0252
    302a, m=0; 302b, m=3; 302c, m=4; 302d, ni=6; 302d, m=8; 302e, m=l2
    Figure BR112019020049A2_C0253
    311a, oi |=0, m2=4; 311b, ni|=2, m2=6; 311c, m, =4, m2=12
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 598/626
    95 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0254
    315a, m=0; 315b, m=3; 315c, m=4; 315d, in=6: 315d, m=8; 315e, m=12
    Figure BR112019020049A2_C0255
    Figure BR112019020049A2_C0256
    324a, in |=0, m2=4; 324b, in ,=2, m2=6; 324c, in ,=4, m2=12.
    Figure BR112019020049A2_C0257
    332a, m |=0, m2=4; 332b, ni]=2, m2=6; 332c, ni]=4, m2=12.
    .()Ν'
    H ,N.
    H O ___ ____,Ν— θ ° /m2 H |1 Ο Η ° / m, 6
    333a, in|=0, m2=4; 333b, m,=2, m2=6; 333c, m,=4, m2=!2.
    Figure BR112019020049A2_C0258
    338a, m I =2, m2=6; 338b, 01,=2, m2=8; 338c, m,=4, m2=12.
    Figure BR112019020049A2_C0259
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 599/626
    96/122
    Figure BR112019020049A2_C0260
    341a, 111,=2, m2=6; 341b, m,=2, m2=8; 341c, in ,=4, m2=12.
    Figure BR112019020049A2_C0261
    Figure BR112019020049A2_C0262
    Figure BR112019020049A2_C0263
    Figure BR112019020049A2_C0264
    Figure BR112019020049A2_C0265
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 600/626
    97 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0266
    Figure BR112019020049A2_C0267
    Figure BR112019020049A2_C0268
    Figure BR112019020049A2_C0269
    Figure BR112019020049A2_C0270
    Figure BR112019020049A2_C0271
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 601/626
    98 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0272
    398a, in I =2, m2=6; 398b, 111,=2. m2=8; 398c, m,=4, m2=12.
    Figure BR112019020049A2_C0273
    Figure BR112019020049A2_C0274
    Figure BR112019020049A2_C0275
    Figure BR112019020049A2_C0276
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 602/626
    99 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0277
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 603/626
    100 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0278
    Figure BR112019020049A2_C0279
    Figure BR112019020049A2_C0280
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 604/626
    101/122
    Figure BR112019020049A2_C0281
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 605/626
    102/122
    Figure BR112019020049A2_C0282
    Figure BR112019020049A2_C0283
    Figure BR112019020049A2_C0284
    Figure BR112019020049A2_C0285
    Figure BR112019020049A2_C0286
    Figure BR112019020049A2_C0287
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 606/626
    103 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0288
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 607/626
    104 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0289
    Figure BR112019020049A2_C0290
    B-21
    Figure BR112019020049A2_C0291
    Figure BR112019020049A2_C0292
    (B-23),
    Figure BR112019020049A2_C0293
    Figure BR112019020049A2_C0294
    Figure BR112019020049A2_C0295
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 608/626
    105 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0296
    36. Conjugados de Fórmula (I) de acordo com a reivindicação
    1, caracterizados pelo fato de terem a Fórmula 103, 105, 113, 117, 120, 127, 129, 131, 133, 135, 140, 142, 150, 152, 169, 177, 186, 190, 197, 217a, 217b,
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 609/626
    106 / 122
    217c, 217d, 217e, 217f, 223a, 223b, 223c,223d, 223e, 223f, 245a, 245b, 245c, 245d, 245e, 245f, 255, 303a, 303b, 303c, 303d, 3O3e, 3O3f, 312a, 312b, 312c, 316a, 316b, 316c, 316d, 316e, 316f, 320a, 320b, 320c, 325a, 325b, 325c, 340a, 340b, 340c, 342a, 342b, 342c, 356, 384, 386, 393, 395a, 395b, 397, 399a, 399b, 399c, 401, 404, 407, 411, 413, 416, 419, 421, 424, 441, 449, 452, 457, 461, 465, A-3a, A-4a, A-5a, B-3a, B-6a, B-9a, B-12a, B-15a, B-18a, B19a, B-20a, B-21a, B-22a, B-23a, B-24a, B-25a, B-26a, B-28a, C-3a, C-4a, D-la e D-2a como mostrados nas seguintes estruturas:
    Figure BR112019020049A2_C0297
    103
    Figure BR112019020049A2_C0298
    Figure BR112019020049A2_C0299
    Figure BR112019020049A2_C0300
    Figure BR112019020049A2_C0301
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 610/626
    107 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0302
    Figure BR112019020049A2_C0303
    Figure BR112019020049A2_C0304
    Figure BR112019020049A2_C0305
    Figure BR112019020049A2_C0306
    Figure BR112019020049A2_C0307
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 611/626
    108 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0308
    Figure BR112019020049A2_C0309
    Figure BR112019020049A2_C0310
    Figure BR112019020049A2_C0311
    Figure BR112019020049A2_C0312
    190
    Figure BR112019020049A2_C0313
    Figure BR112019020049A2_C0314
    217d, m=6; 217e, m=8; 217f, m=!2.
    Petição 870190095920, de 25/09/2019, pág. 612/626
    109 / 122
    Figure BR112019020049A2_C0315
    223d, m=6; 223e, m=8; 223f, m=12;
    Figure BR112019020049A2_C0316
    245d, m=6; 245e, m=8; 245f, m=12;
    Figure BR112019020049A2_C0317
    Figure BR112019020049A2_C0318
    jiua. m=u; jujd, m=j; .wjc. m=4; 303d, m=6; 303e, m=8; 303f, m=12;
    Figure BR112019020049A2_C0319
    312a, 111,=0, m2=4; 312b, in,=2, in2=6; 312c, m,=4, m2=12
    Figure BR112019020049A2_C0320
    316a, tn=0; 316b, m=3; 316c, tn =4; 316d, m=6; 316e, m=8; 316f, m=12
    Figure BR112019020049A2_C0321
    320a, m,=0, m2=4; 320b, m,=2, m2=6; 320c, in,=4, m2=!2.
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    110/122
    Figure BR112019020049A2_C0322
    325a, 111,=0, m2=4; 325b, m,=2, m2=6; 325c, m,=4, m2=12.
    Figure BR112019020049A2_C0323
    Figure BR112019020049A2_C0324
    342a, 111,=2, m2=6; 342b, m,=2, m2=8; 342c, m,=4, m2=12.
    Figure BR112019020049A2_C0325
    Figure BR112019020049A2_C0326
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    Ill / 122
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    Figure BR112019020049A2_C0330
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    Figure BR112019020049A2_C0332
    399a, m1=2, m2=6; 399b, m1=2, m2=8; 399c, ni|=4, m2=12.
    Figure BR112019020049A2_C0333
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    B-24a,
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    em que m é 0-20 se não for indicado na fórmula; mAb, mi e n são definidos da mesma forma que na reivindicação 1.
    37. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz dos compostos conjugados como definidos em qualquer uma das reivindicações 1,5, 10 a 17, 19 a 34 ou 36, e um sal farmaceuticamente aceitável, veículo, diluente ou excipiente dessa forma, ou uma combinação dos conjugados dos mesmos, para o tratamento ou prevenção de um câncer, ou uma doença autoimune, ou uma doença infecciosa.
    38. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de compreender 0,1 g/L ~ 300 g/L de concentração do conjugado como definido em qualquer uma ou mais das reivindicações 1, 5, 10 a 17, 19 a 34 ou 36; um agente tamponante com pH 4,5 a 7,5 a uma concentração de 10 mM -500 nM; 0% -15% de um ou mais polióis (compreendendo frutose, manose, maltose, lactose, arabinose, xilose, ribose, ramnose, galactose, glicose, sacarose, trealose, sorbose, melezitose, rafinose, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, lactitol, eritritol, treitol, sorbitol, glicerol ou L-gluconato e seus sais metálicos); 0-1,0% de um tensoativo [selecionado a partir de polissorbato (compreendendo polissorbato 20, polissorbato 40, polissorbato 65, polissorbato 80, polissorbato 81 ou polissorbato 85), poloxâmero (compreendendo poloxâmero 188, poli(óxido de etileno)poli(óxido de propileno) ou poloxâmero 407 ou polietilenopolipropilenoglicol e semelhantes); Triton; dodecilsulfato de sódio (SDS); lauril sulfato de sódio; octil glicosídeo de sódio; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sulfobetaína; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sarcosina; linoleil-,
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    119/122 miristil- ou cetil-betaína; lauroamidopropil-, cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopropil- ou isoestearamidopropil-betaina (lauroamidopropil); miristamidopropil-, palmidopropil- ou isoestearamidopropil-dimetilamina; metilcocoil sódico, ou metil oleil-taurato dissódico, dodecil betaína, óxido de dodecil dimetilamina, cocamidopropil betaína e cocoanfoglicinato; e a série MONAQUAT™ (etossulfato de isoestearila etilimidônio); polietilglicol, polipropilglicol e copolímeros de etileno e propileno glicol (Pluronics, PF68)]; 0-5 mg/ml de um antioxidante (selecionado a partir de ácido ascórbico e/ou metionina); 0-2 mM de um agente quelante (selecionado a partir de EDTA ou EGTA); 0-5 % de um conservante (selecionado a partir de álcool benzílico, cloreto de octadecildimetilbenzilamônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, fenol, álcool butílico e benzílico, alquila parabenos como metil ou propil parabeno, catecol, resorcinol, ciclo-hexanol, 3-pentanol ou m-cresol); 0 a 15% de um aminoácido livre; e/ou um agente de tonicidade (selecionado a partir de manitol, sorbitol, acetato de sódio, cloreto de potássio, fosfato de sódio, fosfato de potássio, citrato de trissódio ou NaCl) para controlar a pressão osmótica de cerca de 250 a 350 mOsm da formulação final;
    39. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 37 ou 38, caracterizada pelo fato de que é mantida em um frasco, garrafa, seringa pré-cheia ou seringa autoinjetora pré-cheia, em uma forma de um líquido ou sólido liofilizado.
    40. Conjugado de acordo com a reivindicação 1,5, 10 a 17, 19 a 34, 36 ou na forma da composição farmacêutica como definida na reivindicação 37 ou 38, caracterizado pelo fato de que têm atividade de morte celular in vitro, in vivo ou ex vivo.
    41. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 37 ou 38, caracterizada pelo fato de que é administrada concomitantemente
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    120/122 com um agente quimioterapêutico, uma terapia de radiação, um agente de imunoterapia, um agente de distúrbio autoimune, um agente anti-infeccioso ou os outros conjugados para tratamento sinérgico ou prevenção de um câncer ou uma doença autoimune ou uma doença infecciosa.
    42. Agentes sinérgicos de acordo com a reivindicação 41, caracterizados pelo fato de que são preferencialmente selecionados a partir de um ou vários dos seguintes fármacos: Abatacepte (Orencia), Acetato de abiraterona (Zytiga®), Acetaminofeno/hidrocodona, aducanumabe, Adalimumabe, ADXS31-142 (Advaxis’), ADXS-HER2 (Advaxis’), dimaleato de afatinibe (Gilotrif®), Alemtuzumabe (Campath®), Ali-tretinoína (Panretin®), adotrastuzumabe entansina (Kadcyla™), sais mistos de anfetamina (Anfetamina/dextroanfetamina ou Adderall XR), anastrozol (Arimidex®), Aripiprazol, Atazanavir, Atezolizumabe (MPDL3280A), Atorvastatina, axitinibe (Inlyta®), Avelumabe, belinostato (Beleodaq™), Bevacizumabe (Avastin®), Cabazitaxel (Jevtana®), Cabozantinibe (Cometriq™), bexaroteno (Targretin®), Blinatumomabe (Blincyto™), Bortezomibe (Velcade®), Bosutinibe (Bosulif®), brentuximabe vedotina (Adcetris®), Budesonida, Budesonida/formoterol, Buprenorfina, Capecitabina, carfilzomibe (Kyprolis®), Celecoxibe, ceritinibe (LDK378/Zykadia), Cetuximabe (Erbitux®), Ciclosporina, Cinacalcet, Crizotinibe (Xalkori®), Cosentyx, CTL019, Dabigatrana, dabrafenibe (Tafinlar®), Daratumumabe (Darzalex), Darbepoetina alfa, Darunavir, mesilato de imatinibe (Gleevec®), dasatinibe (Sprycel®), denileucina diftitox (Ontak®), Denosumabe (Xgeva®), Depakote, Dexlansoprazol, Dexmetilfenidato, Dexametasona, Dinutuximabe (Unituxin™), Sistema de Resfriamento Dignitana DigniCap, Dinutuximabe (Unituxin™), Doxiciclina, Duloxetina, Duvelisibe, elotuzumabe, Emtricitabina/Rilpivirina/Tenofovir disoproxil fumarato, Emtricitbina/tenofovir/efavirenz, Enoxaparina, Enzalutamida (Xtandi®), Epoetina alfa, eriotinibe (Tarceva®), Esomeprazol,
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    Eszopiclona, Etanercepte, Everolimus (Afinitor®), exemestano (Aromasin®), everolimus (Afinitor®), Ezetimiba, Ezetimiba/sinvastatina, Fenofibrato, Filgrastim, fingolimode, Propionato de fluticasona, Fluticasona/salmeterol, fulvestrante (Faslodex®), gazyva, gefitinibe (Iressa®), Glatirâmer, acetato de gosserrelina (Zoladex), Icotinibe, Imatinibe (Gleevec), Ibritumomabe tiuxetana (Zevalin®), ibrutinibe (Imbruvica™), idelalisibe (Zydelig®), Infliximabe, iniparibe, Insulina asparte, Insulina detemir, Insulina glargina, Insulina lispro, Interferon beta la, Interferon beta lb, lapatinibe (Tykerb®), Ipilimumabe (Yervoy®), Brometo de ipratrópio/salbutamol, Ixazomi (Ninlaro®), Kanuma, acetato de lanreotida (Somatuline® Depot), lenalidomida, Lenaliomida (Revlimid®), mesilato de lenvatinibe (Lenvima™), letrozol (Femara®), Levotiroxina, Levotiroxina, Lidocaina, Linezolida, Liraglutida, Lisdexamfetamina, LN-144 (Lion Biotech.), MEDI4736 (AstraZeneca, Celgene), Memantina, Metilfenidato, Metoprolol, Mekinist, Modafinil, Mometasona, Nilotinibe (Tasigna®), Niraparibe, Nivolumabe (Opdivo®), Ofatumumabe (Arzerra®), Obinutuzumabe (Gazyva™), Olaparibe (Lynparza™), Olmesartana,
    Olmesartana/hidroclorotiazida, Omalizumabe, ésteres etílicos de ácidos graxos ômega-3, Oseltamivir, Oxicodona, Palbociclibe (Ibrance®), Palivizumabe, panitumumabe (Vectibix®), panobinostate (Farydak®), pazopanibe (Votrient®),Pembrolizumabe (Keytruda®), pemetrexede (Alimta), pertuzumabe (Perjeta™), vacina pneumocócica conjugada, Pomalidomida (Pomalyst®), Pregabalina, ProscaVax, Propranolol, Quetiapina, Rabeprazol, cloreto de rádio 223 (Xofigo®), Raloxifeno, Raltegravir, Ramucirumabe (Cyramza®), Ranibizumabe, regorafenibe (Stivarga®), Rituximabe (Rituxan®), Rivaroxabana, romidepsina (Istodax®), Rosuvastatina, fosfato de ruxolitinibe (Jakafi™), Salbutamol, Sevelâmer, Sildenafil, siltuximabe (Sylvant™), Sitagliptina, Sitagliptina/metformina, Solifenacina, Sonidegibe (LDE225, Odomzo), Sorafenibe (Nexavar®),
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    122/122
    Sunitinibe (Sutent®), Tadalafil, tamoxifeno, Tafinlar, talazoparibe, Telaprevir, temsirolimus (Torisel®), Tenofovir/emtricitabina, Gel de testosterona, Talidomida (Imunoprin, Talidex), Brometo de tiotrópio, toremifeno (Fareston®), trametinibe (Mekinist®), Trastuzumabe, Tretinoina (Vesanoid®), Ustequinumabe, Valsartana, veliparibe, vandetanibe (Caprelsa®), Vemurafenibe (Zelboraf®), Venetoclax (Venclexta), vorinostate (Zolinza®), ziv-aflibercepte (Zaltrap®), Zostavax., e seus análogos, derivados, sais farmaceuticamente aceitáveis, veículos, diluentes ou excipientes dos mesmos, ou uma combinação acima dos mesmos.
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