BR112019018753A2

BR112019018753A2 - piridopirimidinonas úteis como inibidores da quinase wee-1

Info

Publication number: BR112019018753A2
Application number: BR112019018753A
Authority: BR
Inventors: Wilkinson Andrew; o'dowd Colin; Burkamp Frank; Miel Hugues; Hewitt Peter
Original assignee: Almac Discovery Ltd
Priority date: 2017-03-10
Filing date: 2018-03-12
Publication date: 2020-04-07
Also published as: PL3592745T3; ES2895365T3; US20210128560A1; IL269063B; PT3592745T; EA201992137A1; KR102605546B1; UA125093C2; CN110603256B; PH12019502049A1; AU2018231671A1; CL2019002557A1; HUE056220T2; MA47736A; CY1124613T1; SG11201908114UA; CN110603256A; JP7244430B2; EP3592745A1; MY195580A

Abstract

a presente invenção se refere a um composto que é útil como um inibidor da atividade da quinase wee-1. a presente invenção também se refere a composições farmacêuticas compreendendo este composto e a métodos de uso deste composto no tratamento de câncer e métodos de tratamento de câncer.

Description

PIRIDOPIRIMIDINONAS ÚTEIS COMO INIBIDORES DA QUINASE WEE-1 [0001] A presente invenção se refere a um composto que é útil como um inibidor da atividade da quinase Wee-1. A presente invenção também se refere a composições farmacêuticas compreendendo este composto e a métodos de uso deste composto no tratamento de câncer e métodos de tratamento de câncer.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [0002] As células são continuamente desafiadas diariamente, resultando em lesões múltiplas na formação do DNA. As lesões, se não reparadas, podem levar a mutações ou morte celular, logo, redes de sinalização complexas existem as quais garantem que lesões são detectadas e reparadas para manter a integridade do DNA.

[0003] A detecção de danos no DNA inicia uma série de eventos os quais são chave na manutenção da integridade do genoma. Os pontos de checagem do ciclo celular são projetados para parar o ciclo celular e permitir o reparo da lesão antes de permitir que a célula continue a mitose.

[0004] Dois pontos de checagem chave foram identificados, um no final da fase G1 e o segundo na G2, trabalhando em conjunto para garantir que todas as lesões sejam identificadas e reparadas. Em cerca de 50 % dos cânceres humanos, o ponto de checagem G1 é não funcional devido a mutações no gene supressor de tumor TP53. No entanto o ponto de checagem G2 é raramente mutado e encontrado com frequência ativado em células cancerosas. As células cancerosas exploram isso para conferir resistência às modalidades de tratamento, incluindo agentes de dano ao DNA

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2/36 e radiação.

[0005] Três quinases foram identificadas como reguladores chave do ponto de checagem G2, a saber, Chkl, Chk2 e Wee-1. Os inibidores para estas quinases estão, atualmente, sendo avaliados em ensaios clínicos.

[0006] A Wee-1 é uma tirosina quinase nuclear a qual regula negativamente a entrada em mitose no ponto de checagem G2/M pela catalisação da fosforilação do complexo quinase cdc2 / ciclina B. A fosforilação ocorre no resíduo tirosina15 e leva à inativação do complexo cdc2 / ciclina B, em última análise, prevenindo a mitose. A função da Wee-1 está intimamente ligada àquela de Chkl e Chk2 devido a sua fosforilação e inativação da cdc25 na serina-216, bem como a ativação de Wee-1 por Chk 1 & 2 reportada (Ashwell, 2012, Reparo do DNA na terapia do câncer, DOI: 10.1016 / B978-012-384999-1.10010-1).

[0007] A Wee-1 está a jusante da família Chk e é um componente crucial da cascata de sinalização do ponto de checagem, uma vez que ela impede que as células entrem na mitose se lesões forem detectadas (Do et al., Ciclo celular 2013 12 (19) 3159 - 3164).

[0008] Comumente, compostos anticâncer administrados induzem danos ao DNA, incluindo antimetabólitos, agentes de platina, inibidores da topoisomerase e agentes alquilantes. No entanto, sua eficácia está limitada devido à toxicidade excessiva, resistência e falta de seletividade tumoral. Os compostos os quais atuam em combinação com estes agentes para impedir o reparo do DNA seletivamente em células tumorais seria extremamente

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3/36 benéfico. Como o gene supressor de tumor TP53 é comumente mutado em linhagens de células tumorais, a administração de um inibidor da quinase Wee-1, revogando o ponto de checagem G2, pode levar a uma sensibilidade aumentada aos agentes de dano ao DNA. 0 potencial para isto foi reportado, uma vez que o silenciamento da atividade Wee-1 foi suficiente para sensibilizar as células HeLa para a doxorrubicina devido a revogação da parada em G2. Por outro lado, no epitélio mamário normal, devido a proteína p53 completamente competente, a remoção da função Wee-1 apresentou pequeno efeito adicional comparado a doxorrubicina isolada (Wang et al., 2004, Biologia e terapia do câncer, 3(3), 305 - 313).

[0009] Foi reportado que linhagens celulares que ancoram mutações no gene supressor de tumor TP53 apresentaram sensibilidade aumentada aos agentes de dano ao DNA quando coadministrados com pequenas moléculas de inibidores Wee-1. Uma eficácia sinérgica in vitro e ín vivo foi reportada quando pequenas moléculas de inibidores foram combinadas com gemcitabina, 5-fluorouracil, carboplatina, cisplatina (Hirai et al. 2010, Biologia e terapia do câncer, 9:7, 514 - 522), citarabina (Tibes et al., 2012, Sangue, 119 (12), 2863 2872), inibidores Chk-1 (Carrasa et al., 2012, Ciclo celular, 1:11 (13): 2507 - 2517, Russell et al., 2013 Câncer Res. 15; 73 (2) 776-784) e inibidores Src (Cozzi et al., 2012, Ciclo celular, 11 (5), 1029 - 1039) . A eficácia de um único agente apoptótico, independente do status TP53, foi reportada em linhagens de células de sarcoma e em amostras de sarcoma proveniente de paciente (Kreahling et al., 2012, Terapia molecular do câncer, 11 (1), 174 - 182) e a eficácia

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4/36 demonstrada em um painel de linhagens de células de câncer in vivo (Guertin et al., 2013 Terapia molecular do câncer, 12 (8) 1442 - 1452).

[0010] A irradiação, por meio da indução do dano ao DNA, é conhecida por aumentar a fosforilação dos resíduos Tyrl5 e Thrl4 da cdc2, o qual prende as células no G2 e permite que o tempo repare o DNA, levando a um fenótipo radio-resistente. A inibição da atividade Wee-1 por pequenas moléculas de inibidores (Wang et al., 2004, Biologia e terapia do câncer 3(3), 305 - 313), (Caretti et al., 2013 Terapia molecular do câncer 12 (2) 141 - 150) leva à redução na revogação da fosforilação CDC2 do ponto de checagem G2 e radio sensibilização, com o efeito sendo mais pronunciado em linhagens de células p53 mutantes.

[0011] Foi reportado no melanoma que a super expressão da Wee-1 está correlacionada com o baixo resultado clínico (Magnussen et al. , 2012 PLoS One 7; (6) e38254), indicando que ele pode apresentar um papel significativo como um biomarcador e como uma terapia direcionada.

[0012] Compostos que apresentam um efeito inibitório da quinase, por exemplo, um efeito inibitório da quinase Wee-1, são descritos no WO 2007/126122, US 2010/0063024, EP 2,213,673, WO 2008/133866, US 2007/0254892, WO 2012/161812, WO 2013/126656, US 2013/0102590, WO 2013/059485 e WO 2013/013031.

[0013] WO 2010/067886, WO 2010/067888, US 2011/0135601, EP 2,168,966, WO 2005/090344, US 2009/0048277 e as Cartas de Química Bioorgânica e Medicinal, 2005, 15, 1931 - 1935 descrevem diversos compostos tais como derivados

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5/36 de dihidro pirimidopirimidina, piridopirimidinona e piridopirimidina apresentando um efeito inibitório de quinase. Em particular, diz-se que os compostos do WO 2005/090344 mostram atividade como inibidores da proteína quinase, em particular, inibidores da tirosina quinase da família Src. Diz-se que os compostos descritos nas Cartas de Química Bioorgânica e Medicinal, 2005, 15, pl931 - 1935 são inibidores de c-Src 10-100 vezes mais potentes do que a Wee1, e a variação dos substituintes no anel 6-fenil não alteram, marcadamente, esta preferência. Diz-se que análogos 5-alquil substituídos são, em geral, seletivos para Wee-1, porém, às custas da potência de ligação.

[0014] O WO 2013/013031 descreve os inibidores da quinase Wee-1 piridazino[4,5-d]pirimidin-(6H)-ona, os quais, dizem-se, são úteis para a inibição de quinases tais como Wee-1 e em métodos de tratamento de doenças tais como o câncer. Os compostos de WO 2013/013031 apresentam um átomo de nitrogênio na 'posição 3' do anel em relação ao grupo carbonila.

[0015] O US 2013/0018045 descreve diversos compostos de sulfonamida tricíclicos os quais são úteis para a inibição de quinases tais como Wee-1 e métodos de tratamento de doenças tais como o câncer. Os compostos do US 2013/0018045 apresentam um grupo sulfonamida na 'posição 1' do anel e os átomos nas 'posições 3 e 4' fazem parte de um anel aril ou heteroaril fundido (A).

[0016] O WO2015/092431 se refere a compostos que são úteis como inibidores da atividade da quinase Wee-1, composições farmacêuticas compreendendo estes compostos e o

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6/36 uso destes compostos no tratamento do câncer.

[0017] É um objeto da presente invenção superar pelo menos algumas das desvantagens do estado da técnica ou fornecer uma alternativa comercialmente útil a elas.

[0018] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto que apresenta um efeito inibitório de quinase melhorado ou similar comparado a compostos ou composições conhecidos.

[0019] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto com uma potência pCDC2 melhorada, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0020] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto com uma solubilidade cinética melhorada ou comparável, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0021] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto com uma permeabilidade melhorada ou comparável, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0022] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto com uma estabilidade metabólica melhorada, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0023] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto que apresenta uma exposição ao plasma e/ou tumor aumentada ou similar após dosagem oral, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0024] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto que apresenta uma biodisponibilidade aumentada ou similar, comparada a compostos ou composições conhecidos.

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7/36 [0025] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto que apresenta uma penetração cerebral aumentada ou similar, comparada a compostos ou composições conhecidos, a fim de atingir tumores e metástases cerebrais.

[0026] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto que apresenta um risco reduzido de metabólitos reativos, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0027] É um objeto adicional da presente invenção fornecer um composto que apresenta um risco reduzido de interação com co-medicações metabolizadas por enzimas da familia CYP3A, comparada a compostos ou composições conhecidos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0028] Em um primeiro aspecto, a presente invenção fornece um composto de Fórmula (I):

(D ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado Nóxido do mesmo.

[0029] Cada aspecto ou concretização, tal como aqui definido, pode ser combinado com qualquer outro aspecto(s) ou concretização (ões), a menos que claramente indicado o contrário. Em particular, qualquer característica indicada como sendo preferida ou vantajosa pode ser combinada com qualquer outra característica ou características indicadas como sendo preferidas ou vantajosas.

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8/36 [0030] Em um segundo aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0031] Em um terceiro aspecto, a presente invenção fornece o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica tal como aqui descrita, para uso na terapia.

[0032] Em um quarto aspecto, a presente invenção fornece o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica tal como aqui descrita, para uso como um medicamento.

[0033] Em um quinto aspecto, a presente invenção fornece o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica tal como aqui descrita, para uso no tratamento ou prevenção do câncer.

[0034] Em um sexto aspecto, a presente invenção fornece o uso do composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica tal como aqui descrita, para a produção de um medicamento para o tratamento ou prevenção do câncer.

[0035] Em um sétimo aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento ou prevenção do câncer em um paciente humano ou animal compreendendo a administração ao

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9/36 paciente na necessidade do mesmo de uma quantidade eficaz do composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica como aqui descrita.

[0036] Outras concretizações preferidas dos compostos de acordo com a invenção aparecem ao longo do relatório descritivo e, em particular, nos exemplos.

[0037] Os presentes inventores descobriram, de forma surpreendente, que os compostos da presente invenção mostram um efeito inibitório de quinase melhorado ou similar, comparado a compostos ou composições conhecidos. Em particular, o composto da presente invenção preferencialmente mostra um efeito inibitório da quinase Wee-1 melhorado ou similar, comparado a compostos ou composições conhecidos.

[0038] Os presentes inventores descobriram, de forma surpreendente, que o composto da presente invenção mostra uma potência pCDC2 melhorada ou similar, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0039] Os presentes inventores descobriram, de forma surpreendente, que o composto da presente invenção mostra uma solubilidade cinética melhorada ou similar, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0040] Os presentes inventores descobriram, de forma surpreendente, que o composto da presente invenção mostra uma permeabilidade melhorada ou similar, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0041] Os presentes inventores descobriram, de forma surpreendente, que o composto da presente invenção mostra

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10/36 uma estabilidade metabólica melhorada ou similar, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0042] Os presentes inventores descobriram, de forma surpreendente, que o composto da presente invenção mostra uma exposição aumentada ou similar após dosagem oral, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0043] Os presentes inventores descobriram, de forma surpreendente, que o composto da presente invenção mostra uma biodisponibilidade aumentada ou similar, comparada a compostos ou composições conhecidos.

[0044] Os presentes inventores descobriram, de forma surpreendente, que o composto tal como aqui descrito pode exibir propriedades fisico-quimicas superiores comparadas com aqueles conhecidos do estado da técnica.

[0045] Sem querer estar ligado à teoria, acreditase que o composto da presente invenção tende a mostrar os efeitos vantajosos discutidos acima devido a sua estrutura química específica.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0046] A menos que aqui definido de outra forma, os termos científicos e técnicos usados em conexão com a presente invenção devem apresentar os significados que são comumente entendidos por aqueles que são técnicos versados no assunto. O significado e escopo dos termos deve ser claro, no entanto, no caso de qualquer ambiguidade latente, definições aqui fornecidas têm precedentes sobre qualquer dicionário ou definição extrínseca.

[0047] O composto da presente invenção pode possuir tautomerismo. Cada forma tautomérica tem a intenção de estar

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11/36 dentro do escopo da invenção.

[0048] Além disso, o composto da presente invenção pode ser fornecido como um pró-fármaco. Pró-fármacos são transformados, em geral, in vivo, a partir de uma forma para as formas ativas dos fármacos aqui descritos. Por exemplo, um pró-fármaco pode ser formado pela proteção do grupo -N-H com um grupo hidrolisável que fornece um -NH na hidrólise.

[0049] Além disso, será entendido que os elementos aqui descritos podem ser o isótopo comum ou um outro isótopo além do isótopo comum. Por exemplo, um ou mais átomos de hidrogênio podem ser ¹H, ²H (deutério) ou ³H (tritio) .

[0050] Embora o composto da presente invenção esteja presente preferencialmente como sua base livre, tanto sob a sua forma anidra ou sua forma de solvato livre, pode também ser fornecido na forma de seu sal farmaceuticamente aceitável ou como um co-cristal ou como um solvato. Por exemplo, o composto pode ser fornecido apresentando grupos amina protonados.

[0051] O termo sal farmaceuticamente aceitável se refere a um composto iônico formado pela adição de um ácido a uma base. O termo se refere a tais sais que são considerados na técnica como sendo adequados para uso em contato com um paciente, por exemplo, in vivo e sais farmaceuticamente aceitáveis são, em geral, escolhidos pelas suas características não tóxicas, não irritantes.

[0052] O termo co-cristal se refere a um cristal molecular multicomponente, o qual pode compreender interações não iônicas.

[0053] Sais farmaceuticamente aceitáveis e co

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12/36 cristais podem ser preparados por cromatografia de troca iônica ou por reação da base livre ou forma ácida de um composto com quantidades estequiométricas ou com um excesso do ácido ou base orgânico ou inorgânico formador do sal desejado em um ou mais solventes adequados, ou pela mistura do composto com outro composto farmaceuticamente aceitável capaz de formar um co-cristal.

[0054] Os sais conhecidos na técnica como geralmente adequados para uso em contato com um paciente incluem sais derivados de ácidos inorgânicos e/ou orgânicos, incluindo o hidrobrometo, cloridrato, sulfato, bissulfato, nitrato, acetato, oxalato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato e tartarato. Estes podem incluir cátions à base de metais alcalinos e alcalino-terrosos, tais como sódio, potássio, cálcio e magnésio, além de amônio, tetrametilamônio, tetraetilamônio. Preferencialmente, o sal adequado é um sal de cloridrato ou um sal de citrato. Referência adicional é feita ao número de fontes na literatura que pesquisam sais farmaceuticamente aceitáveis adequados, por exemplo, o Handbook de sais farmacêuticos publicado pela IUPAC.

[0055] Os presentes inventores descobriram que o composto da presente invenção é útil no tratamento de condições médicas associadas ao crescimento celular desordenado, incluindo, porém não restrito a, câncer, em particular (porém não restrito a) cânceres associados a inativação no gene supressor de tumor TP53. O composto pode apresentar utilidade e atividade como um único agente que

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13/36 explora relações de letalidade sintética ou contextual, bem como em doenças incluindo cânceres com susceptibilidade melhorada para o aumento do estresse replicativo e a diminuição da progressão do ciclo celular. Os inibidores da Wee-1 de acordo com a invenção podem também ser usados em combinação de modalidades, incluindo combinações com agentes genotóxicos, radioterapia, agentes direcionados e imunomoduladores incluindo, porém não restrito a imuno inibidores do ponto de checagem.

[0056] Por exemplo, os cânceres incluem cânceres cardíacos, cânceres de pulmão, cânceres gastrointestinais, cânceres do trato genitourinário, cânceres de fígado, cânceres ósseos, cânceres do sistema nervoso, cânceres ginecológicos, cânceres hematológicos, cânceres de pele e cânceres da glândula adrenal e cânceres tais como tumores adrenal, câncer do duto biliar, bexiga, sangue, ossos e tecido conectivo, cérebro e sistema nervoso central, mama, cervical, cólon e retal (colorretal), endometrial, do esôfago, vesícula biliar, cabeça e pescoço, linfoma de Hodgkin, hipofaringeal, rins, laringeal, leucemias, fígado, pulmão, linfoma, tumores mediastinais, melanoma (melanoma maligno), mesotelioma, mieloma múltiplo, cavidade nasal, nasofaringeal, tumores neuroendócrinos, linfoma não Hodgkin, oral, esôfago, orofaringeal, ovariano, pâncreas, seio paranasal, paratireoide, pênis, tumores pituitários, próstata, glândula salivar, sarcoma, pele, espinha, estômago, testicular, tireoide, uretra, uterino, vaginal e vulvar. Preferencialmente, o câncer é selecionado dentre câncer de cólon e retal (colorretal), câncer de cabeça e

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14/36 pescoço, câncer de pulmão, câncer de esôfago, câncer ovariano e câncer pancreático. Mais preferencialmente, o câncer é câncer de cólon e retal (colorretal). Alternativamente, preferencialmente, o câncer é câncer de pulmão, mais preferencialmente câncer de pulmão de células não pequenas.

[0057] O composto da presente invenção é também útil no preparo de um medicamento que é útil no tratamento das doenças acima descritas, em particular, câncer.

[0058] A presente invenção é ainda direcionada a um método de inibição da atividade Wee-1 a qual compreende a administração a um mamífero, preferencialmente um humano, em necessidade do mesmo, de uma quantidade farmaceuticamente eficaz do composto da presente invenção.

[0059] O composto desta invenção pode ser administrado em mamíferos, incluindo humanos, tanto isolado ou, em combinação com carreadores, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, em uma composição farmacêutica, de acordo com a prática farmacêutica padrão. O composto pode ser administrado oral ou parenteralmente, incluindo as vias de administração intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutânea, retal e tópica.

[0060] A presente invenção também inclui, dentro do seu escopo, o uso do composto da presente invenção em combinação com um segundo fármaco ou fármaco adicional no tratamento de câncer. O segundo fármaco ou fármaco adicional pode ser um fármaco que já é conhecido na técnica no tratamento de câncer.

[0061] A presente invenção também inclui o uso do composto da invenção em um regime que inclui a etapa de

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15/36 radioterapia. A radioterapia pode ser um método de tratamento comum por raios X, raios γ, nêutron, partícula a, próton ou irradiação por feixe eletrônico. A coadministração do composto contido nesta invenção pode levar a potencialização da terapia de radiação, assim, classificando-a como um radiosens ibi li zante .

[0062] Em particular, os cânceres se tornam, com frequência, resistentes à terapia. O desenvolvimento da resistência pode ser retardado ou superado pela administração de uma combinação de fármacos que incluem o composto da presente invenção, por exemplo, em cânceres os quais são conhecidos por serem resistentes aos agentes de dano ao DNA, radioterapia ou qualquer outra forma de agentes e modalidades de tratamento.

[0063] Por exemplo, fármacos que podem ser usados em combinação com o composto da presente invenção podem atingir a mesma via biológica ou uma via biológica similar àquela atingida pelo composto da presente invenção ou pode atuar em uma via diferente ou não relacionada.

[0064] Dependendo da doença a ser tratada, uma variedade de parceiros de combinação pode ser coadministrada com os compostos da presente invenção, por exemplo, agentes genotóxicos, agentes direcionadores e imunomoduladores. O segundo ingrediente ativo pode incluir, porém não é restrito a: agentes alquilantes, incluindo ciclofosfamida, ifosfamida, tiotepa, melfalan, cloroetilnitrosoureia e bendamustina; derivados de platina, incluindo cisplatina, oxaliplatina, carboplatina e satraplatina; agentes antimitóticos, incluindo alcalóides da vinca (vincristina,

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16/36 vinorelbina e vinblastina), taxanos (paclitaxel, docetaxel), epotilonas e inibidores de quinases mitóticas incluindo quinases aurora e tipo polo; inibidores da topoisomerase, incluindo antraciclinas, epipodofilotoxinas, camptotecina e análogos da camptotecina; anti-metabólitos, incluindo 5fluorouracil, capecitabina, citarabina, gemcitabina, 6mercaptopurina, 6-tioguanina, fludarabina, metotrexato e pemetrexede; terapias direcionadas, por exemplo inibidores da proteína quinase, incluindo imatinib, gefitinib, sorafenib, sunitinib, erlotinib, dasatinib e lapatinib; inibidores do proteassoma, incluindo bortezomib; inibidores da histona desacetilase, incluindo valproato e SAHA; inibidores do ciclo celular e ponto de checagem, incluindo CDK4/6, CDC7, CHK1 e CHK2; moduladores do reparo do DNA, incluindo, porém não restrito a, inibidores da PARP, DNA-PK, ATM, ATR; fármacos anti-angiogênicos, incluindo bevacizumab; anticorpos monoclonais, incluindo trastuzumab, rituximab, alemtuzumab, tositumomab, cetuximab, panitumumab; conjugados de anticorpos mioclonais, incluindo Gemtuzumab ozogamicina, Ibritumomab tiuxetano; terapias hormonais, incluindo antiestrogênios (tamoxifeno, raloxifeno, anastrazol, letrozol, exemestano) anti-androgênios (flutamida, bicalutamida), análogos ou antagonistas do hormônio luteinizante, terapias com radionuclídeos de receptores de peptídeos, incluindo luthatera, imunoterapias, incluindo anti-PDl ou anti-PDLl, e inibidores da IDO.

[0065] Com relação à terapia de combinação, o composto da presente invenção pode ser administrado separadamente, sequencialmente, simultaneamente,

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17/36 concomitantemente ou pode ser cronologicamente alternado com uma ou mais terapêuticas padrão, tais como as acima mencionadas.

[0066] A presente invenção fornece um composto de

Fórmula (I):

(D ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado Nóxido do mesmo.

[0067] Preferencialmente, é fornecido o composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0068] Excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados seriam conhecidos por um técnico versado no assunto, por exemplo, gorduras, água, solução salina fisiológica, álcool (por exemplo, etanol), glicerol, poliois, solução aquosa de glicose, agente extensor, agente desintegrante, aglutinante, lubrificante, agente umectante, estabilizante, emulsificante, dispersante, conservante, adoçante, corante, agente de tempero ou aromatizante, agente de concentração, diluente, substância tampão, solvente ou agente solubilizante, produto químico para alcançar efeito de armazenamento, sal para modificar a pressão osmótica, agente de revestimento ou antioxidante, sacarídeos tais como lactose ou glicose; amido de milho, trigo ou arroz; ácidos graxos tais como ácido esteárico; sais inorgânicos tais como

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18/36 aluminato de metassilicato de magnésio ou fosfato de cálcio anidro; polímeros sintéticos tais como polivinil pirrolidona ou polialquileno glicol; álcoois como álcool esteárico ou álcool benzílico; derivados de celulose sintéticos, como metilcelulose, carboximetilcelulose, etilcelulose ou hidroxipropil metilcelulose; e outros aditivos convencionalmente usados, tais como gelatina, talco, óleo vegetal e goma arábica.

[0069] Preferencialmente, é fornecida uma composição farmacêutica compreendendo o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0070] Preferencialmente, é fornecida uma composição farmacêutica compreendendo o composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, compreendendo um ou mais agentes farmaceuticamente ativos adicionais. Preferencialmente, em determinadas concretizações, a composição farmacêutica ainda compreende um agente anticâncer, por exemplo, como uma terapia de combinação tal como aqui descrita. Em tais concretizações, um agente anticâncer adequado pode ser qualquer um ou mais de um agente genotóxico, um agente direcionado e um imunomodulador.

[0071] Preferencialmente, é fornecido o composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica tal como aqui descrita, para uso na terapia.

[0072] Preferencialmente, é fornecido o composto de

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Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica tal como aqui descrita, para uso como um medicamento.

[0073] Preferencialmente, é fornecido o composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica tal como aqui descrita, para uso no tratamento ou prevenção do câncer. Preferencialmente, o câncer é selecionado dentre câncer de cólon e retal (colorretal), câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão, câncer de esôfago, câncer ovariano e câncer de pâncreas. Mais preferencialmente, o câncer é câncer de cólon e retal (colorretal). Alternativamente, preferencialmente, o câncer é câncer de pulmão, mais preferencialmente câncer de pulmão de células não pequenas.

[0074] Preferencialmente, é fornecido o uso do composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica tal como aqui descrita, para o preparo de um medicamento para o tratamento ou prevenção do câncer. Preferencialmente, o câncer é selecionado de câncer de cólon e retal (colorretal), câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão, câncer de esôfago, câncer ovariano e câncer de pâncreas. Mais preferencialmente, o câncer é câncer de cólon e retal (colorretal) . Alternativamente, preferencialmente, o câncer é câncer de pulmão, mais preferencialmente câncer de pulmão de célula não pequenas.

[0075] Preferencialmente, é fornecido um método de tratamento ou prevenção do câncer em um paciente humano ou animal compreendendo a administração a um paciente na

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20/36 necessidade do mesmo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica tal como aqui descrita. Preferencialmente, o câncer é selecionado de câncer de cólon e retal (colorretal), câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão, câncer de esôfago, câncer ovariano e câncer de pâncreas. Mais preferencialmente, o câncer é câncer de cólon e retal (colorretal). Alternativamente, preferencialmente, o câncer é câncer de pulmão, mais preferencialmente câncer de pulmão de células não pequenas.

[0076] Preferencialmente, o composto da presente invenção apresenta um valor de IC50 para a quinase Wee-1 de cerca de 0,1 nM a cerca de 1 nM. O método para a determinação do valor IC50 de um composto para a quinase Wee-1 é descrito no WO 2015/092431 (vide página 350 a 351).

[0077] Quando são introduzidos elementos da presente descrição ou das concretizações preferidas da mesma, os artigos um, uma, o/a e referido(a) tem a intenção de significar que existe um ou mais dos elementos. Os termos compreendendo, incluindo e apresentando tem a intenção de ser inclusivo e significa que podem existir elementos adicionais além dos elementos listados.

[0078] A descrição detalhada acima foi fornecida para fins de explicação e ilustração, e não tem a intenção de limitar o escopo das reivindicações anexas. Muitas variações nas concretizações presentemente preferidas aqui ilustradas serão evidentes para um técnico versado no assunto, e permanecer dentro do escopo das reivindicações

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21/36 anexas e suas equivalentes.

SEÇÃO EXPERIMENTAL

Abreviações [0079] aq: aquoso; dba: dibenzilidenacetona; DCM: diclorometano; DIPEA: diisopropil etilamina (base de Hunig); DMF: N, N-dimetilformamida; DMF: N,N-dimetilformamida dimetil acetal; dppf: 1, 1'-bis(difenilfosfino)ferrocene; EtOAc: etil acetato; ESI: ionização por eletropulverização; h: hora; HPLC: cromatografia liquida de alta pressão; LC: cromatografia liquida; LCMS: espectrometria de massa por cromatografia liquida; M: molar; m/z: proporção massa/carga; mCPBA: ácido 3-cloroperbenzoico; MeOH: metanol; min:

minutos; EM: espectrometria massa; RMN: ressonância magnética nuclear; R_T: tempo de retenção; RB: de fundo redondo; TA: temperatura ambiente; POP: procedimento operacional padrão; SM: material de partida; TEA: ácido trifluoro acético; THE: tetrahidrofurano; CCF: cromatografia de camada fina.

Condições experimentais gerais

Solventes e reagentes [0080] Os solventes orgânicos comuns que foram usados em reações (por exemplo, THE, DMF, DCM, IPA e metanol) foram adquiridos de forma anidra de Sigma-Aldrich® em garrafas Sure/Seal™ e foram manipulados adequadamente sob nitrogênio. A água foi deionizada usando um Elga PURELAB Option-Q. Todos os outros solventes usados (isto é, para procedimentos de tratamento e purificação) foram, em geral, de grau HPLC e foram usados tal como fornecido a partir de várias fontes comerciais. A menos que indicado de outra

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22/36 forma, todos os materiais de partida usados foram adquiridos a partir de fornecedores comerciais e usados tal como fornecidos.

Cromatografía flash [0081] A purificação dos compostos por cromatografía flash foi alcançada usando um sistema Biotage Isolera Four. A menos que indicado de outra maneira, as colunas de cartucho Biotage KP-Sil SNAP (10-340 g) foram usados junto com o sistema de solventes indicado e um gradiente de solvente adequado dependendo da polaridade do composto (determinada por análise de CCF) . No caso de compostos básicos e mais polares, colunas com cartucho Biotage KP-NH SNAP (11 g) foram usadas.

Espectroscopia RMN [0082] Espectros de ¹H RMN foram registrados em temperatura ambiente usando um espectrômetro Bruker Avance (500 MHz) ou um espectrômetro Bruker Avance (400 MHz). Todas as trocas químicas (δ) são expressas em ppm. Sinais de solvente residual foram usados como um padrão interno e os picos característicos dos solventes foram corrigidos para os dados de referência delineado em J. Org. Chem. , 1997, 62, p7512-7515; em outros casos, solventes de RMN continham tetrametilsilano, o qual foi usado como um padrão interno.

Cromatografía líquida de alta pressão [0083] Os experimentos de espectrometria de massa por cromatografía líquida (LCMS) para determinar o tempo de retenção (RT) e ions de massa associados foram realizados usando um dos seguintes métodos:

[0084] Método A: O sistema consiste em um

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23/36 espectrômetro de massa único quadripolar Agilent Technologies 6140 ligado a um sistema de LC Agilent Technologies 1290 Infinity com detector de matriz de diodos UV e amostrador automático. 0 espectrômetro consiste em uma fonte de ionização multimodal (ionizações por eletropulverização e pressão atmosférica química) operando no modo de íon positivo e negativo. Os experimentos LCMS foram realizados em cada amostra submetida usando as seguintes condições: Coluna LC: Zorbax Eclipse Plus C18 RRHD 1,8 micron 50 x 2,1 mm mantida a 40 °C. Fases móveis: A) 0,1% (v/v) de ácido fórmico em água; B) 0,1% (v/v) de ácido fórmico em acetonitrila.

Tempo do gradiente (min)	Fluxo (mL / min)	% de A	% de B
0, 00	1, 0	95	5
1, 80	1, 0	0	100
2,20	1, 0	0	100
2,21	1, 0	95	5
2,50	1, 0	95	5

[0085] Método B: O sistema consiste em um espectrômetro de massa quadripolar Agilent Technologies 6130 ligado a um sistema de LC Agilent Technologies 1290 Infinity com detector de matriz de diodos UV e amostrador automático. O espectrômetro consiste em uma fonte de ionização por eletropulverização operando no modo de íon positivo e negativo. Os experimentos LCMS foram realizados em cada amostra submetida usando as seguintes condições: Coluna LC: Agilent Eclipse Plus C18 RRHD 1,8 micron 50 x 2,1 mm mantida a 40 °C. Fases móveis: A) 0,1 % (v/v) de ácido fórmico em

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24/36 água; B) 0,1 % (v/v) de ácido fórmico em acetonitrila.

Tempo do gradiente (min)	Fluxo (mL/min)	% de A	% de B
0, 00	1, 0	80	20
1, 80	1, 0	0	100
2,20	1, 0	0	100
2,50	1, 0	80	20
3, 00	1, 0	80	20

Intermediário 1: tert-butil 4-(4-amino-2-metilfenil) piperidina-l-carboxilato:

Etapa 1: tert-Butil 4-(2-metil-4-nitrofenil)-5,6díhídropírídína-1 (2H) -carboxilato:

[0086] l-Bromo-2-metil-4-nitrobenzeno (123 g, 0,572 mol) e N-tert-Butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2dioxaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridina-l(2H)-carboxilato (177 g, 0,571 mmol) foram dissolvidos em 1,4-dioxano (2,5 L). Uma solução de carbonato de sódio 3M (570 mL, 1,71 mol) foi adicionada, a mistura foi desgaseifiçada e posicionada sob uma atmosfera de nitrogênio. Um aduto de diclorometano PdCl₂(dppf) (9,3 g, 0,011 mol) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 100°C ao longo da noite. A mistura foi diluída com água e extraída com etil acetato (três vezes 1 L) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secados sob MgSO₄, filtrados e concentrados sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (0 - 50 % de

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EtOAc / hexano) para fornecer 154 g (94,5 %) do composto titulo como cristais amarelados.

Etapa________2:_________tert-butil_________4- (4-amino-2metilfenil)píperídína-1-carboxilato:

[0087] tert-Butil 4-(2-metil-4-nitrofenil)-5,6dihidropiridina-1(2H)-carboxilato (130 g, 0,408 mol) foi dissolvido em metanol (3,5 L) usando um frasco reacional Parr de 5L. Após desgaseificar a mistura, Pd/C (10%) (13 g) foi adicionado e a suspensão foi agitada sob 55 psi de pressão de hidrogênio ao longo da noite em temperatura ambiente. A mistura foi filtrada através de uma pastilha de Celite™ e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer 117 g (98,7 %) do composto título como um sólido bege.

[0088] Os dados analíticos estão de acordo com o Exemplo 37, etapa 4, tal como descrito no US 2007/0254892 Al.

EXEMPLOS [0089] O seguinte exemplo não limitativo ainda ilustra a presente invenção.

Exemplo 1: 3-(2,6-diclorofenil)-l-metil-7-((3-metil-4(l-metilpiperidin-4-il)fenil) amino)-2,3dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-ona:

Etapa : 4-cloro-N-(2, 6-diclorofenil)-2 (metiltio)pirimidina-5-carboxamida:

[0090] A uma solução de 2, 6-dicloroanilina (41,02 g,

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253 mmol) e piridina (25,03 g, 316 mmol) em CH₂C1₂ (400 mL) uma solução de cloreto de 4-cloro-2-(metiltio)pirimidina-5carbonila (56,5 g, 253 mmol) em CH₂C1₂ (400 mL) foi adicionada gota a gota a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente (TA) por 2 dias, o solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo remanescente foi lavado com água duas vezes, seguido por 10% HC1 aquoso e água. O produto bruto foi purificado por recristalização a partir de EtOH para fornecer 67,7 g (76,7 %) do composto título como um sólido branco. LCMS (Método B): TA = 1,53 min, m/z = 348/350 [M+H]⁺.

Etapa 2: N- (2, 6-díclorofeníl) -4- (metílamíno) -2(metíltío)pírímídína-5-carboxamída:

[0091] A uma solução de 4-cloro-N-(2,6diclorofenil)-2-(metiltio)pirimidina-5-carboxamida (70 g, 201 mmol) em THE (1 L) uma solução de MeNH₂ (40% em água, 46, 74 g, 603 mmol) foi adicionada a 0 °C. A mistura reacional resultante foi agitada em temperatura ambiente (TA) ao longo da noite e o solvente foi evaporado sob vácuo. O resíduo remanescente foi lavado com água duas vezes e secado para render 68,35 g (99%) do composto título como um sólido branco. LCMS (Método A): TA = 1,21 min, m/z = 343/345 [M+H]⁺.

Etapa 3: 3-(2_/.6-diclorofenil)-l-metil-7-(metiltio)2,3-díhídropírímído[4,5-d]pírímídín-4 (1H) -ona :

[0092] N- (2,6-Diclorofenil)-4-(metilamino)-2(metiltio) pirimidina-5-carboxamida (131 g, 382 mmol) foi suspendida em acetonitrila anidra (1,5 L), usando um frasco RB de 5L, e carbonato de césio (203, 3 g, 1190 mmol) foi adicionado, seguido por dibromometano (132,7 g, 763 mmol).

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A mistura foi aquecida a 80 °C enquanto agitava por 7 dias e a mistura resultante foi filtrada. Os resíduos foram lavados com duas porções de acetonitrila quente (200 mL) e os filtrados combinados foram concentrados sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cristalização do MeCN para render 59,6 g (44%) do composto título como um sólido amarelo pálido. LCMS (Método A) : TA = 1,26 min, m / z = 355/357 [M+H]⁺.

Etapa 4: tert-butil 4-(4-((6-(2, 6-diclorofenil)-8metil-5-oxo-5, 6,7_r8-tetrahidropirimido[4,5-d]pirimidin-211)amino)-2-metilfenil)plperldlna-1-carboxllato:

[0093] A 6-(2,6-diclorofenil)-8-metil-2metilsulfanil-7H-pirimido[4,5-d]pirimidin-5-ona (10,0 g, 28 mmol) em DCM (440 mL) foi carregada uma solução de ácido 3cloroperoxi benzoico (7,63 g, 31 mmol) em DCM (75 mL) em TA e a reação foi agitada por duas horas. À mistura reacional foi adicionado Na₂S₂O₃ aquosos e as camadas foram separadas usando um separador de fase. A camada orgânica foi concentrada até secagem e tert-butil 4-(4-amino-2metilfenil)piperidina-l-carboxilato (8,17 g, 28 mmol) e 2propanol (625 mL) foram adicionados ao resíduo. A reação foi, então, aquecida a 95 °C ao longo da noite. A reação foi concentrada e o resíduo purificado por cromatografia flash (Biotage 340 g KP-Sil; 10-45% de EtOAc em ciclohexano) para render o composto título (11,13 g, 66 %) como um sólido branco. LCMS (Método A): TA 1,86 min, m/z = 597/599 [M+H]⁺

Etapa 5: Clorldrato de 3- (2, 6-diclorofenil) -l-metil-7((3-metll-4- (piperidin-4-il) fenll) amino) -2,3dihidropirimido[4,5-d ] pirimidin-4 (1H) -ona :

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28/36 [0094] tert-Butil 4-[4-[[6-(2,6-diclorofenil)-8metil-5-oxo-7H-pirimido[4,5-d]pirimidin-2-il]amino]-2metil-fenil]piperidina-l-carboxilato (7,0 g, 11.7 mmol) foi dissolvido em DCM (300 mL) e HC1 4N em dioxano (35 mL, 140 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada ao longo da noite em TA. 0 sólido foi coletado por filtração através de um funil sinterizado e lavado com DCM e secado no sinter para proporcionar o composto título (6,3 g, rendimento quantitativo) . LCMS (Método A) : TA 0,80 min, m/z = 497/499 [M+H]⁺.

Etapa 6: 3-(2, 6-diclorofenil) -l-metil-7- ((3-metil-4(1-metílpíperídín-4-íl)feníl) amino)-2,3díhídropírímído [4,5-d]pírímídín-4 (1H) -ona :

[0095] A uma suspensão de cloridrato de 6-(2,6diclorofenil)-8-metil-2-[3-metil-4-(4-piperidil)anilino]7Jí-pirimido [ 4,5-d] pirimidin-5-ona (6,77 g, 12.7 mmol) em acetonitrila (90 mL) foi adicionado metanol (20 mL) e 37 % de solução de formaldeído aquosa (12,76 mL, 63.4 mmol) . A solução resultante foi resfriada a 0 °C e triacetoxi boroidreto de sódio (13,44 g, 63.4 mmol) foi adicionado porção a porção. A reação foi agitada a 0 °C por Ih e, subsequentemente, o solvente foi concentrado sob vácuo. 0 resíduo foi recolhido em DCM e lavado com Na2COs 2M aquoso, água e salmoura após o qual a mistura bifásica foi passada através de um separador de fase e a fase orgânica resultante foi concentrada para obter um sólido. A recristalização a partir do etil acetato proporcionou o composto título (3,83 g, 59%) como um sólido branco. LCMS (Método A): TA 0,70 min, m/z = 511/513 [M+H] ⁺ . NMR (500 MHz, DMSO-d₆) : δ 9.75 (br

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29/36 s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.65 (d, 2H), 7.52-7.62 (m, 2H), 7.467.51 (m, 1H) , 7.14 (d, 1H) , 4.98 (s, 2H) , 3.12 (s, 3H) , 2.792.91 (m, 2H) , 2.55-2.62 (m, 1H) , 2.28 (s, 3H) , 2.20 (s, 3H) , 1.93-2.03 (m, 2H) , 1.58-1.68 (m, 4H) .

Exemplo comparativo 1: 3-(2-cloro-6-metilfenil)-1metil-7-((3-metil-4-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)amino)2,3-dihidropirimido[ 4,5-d]pirimidin-4(1H) -ona:

Etapa 1: 4-cloro-N- (2-cloro-6-metilfenil) -2- (metiltio) pírímídína-5-carboxamída:

[0096] 2-cloro-6-metilanilina (14 g, 62.8 mmol) foi convertido de acordo com o exemplo 1, etapa 1 para resultar no composto titulo (10 g; 30.5 mmol, 48%) como um sólido branco. LCMS (Método A): ΤΑ = 1,28 min, m/z = 328/330 [M+H]⁺.

Etapa 2: N-(2-cloro-6-metilfenil)-4-(metilamino)-2(metiltio) pírímídína-5-carboxamída :

[0097] 4-Cloro-N- (2-cloro-6-metilfenil)-2(metiltio)pirimidina-5-carboxamida (7 g, 21.33 mmol) foi convertido de acordo com o exemplo 1, etapa 2 para resultar no composto titulo (6 g; 18.59 mmol, 87%) como um sólido esbranquiçado. LCMS (Método A) : ΤΑ = 1,22 min, m/z = 323/325 [M+H]⁺. Os dados analíticos estão de acordo com o Exemplo 92, etapa 1 tal como descrito no WO 2015/092431.

Etapa 3: 3-(2-cloro-6-metilfenil)-l-metil-7(metíltío) -2_r 3-díhídropírímído [4 _r 5-d]pírímídín-4 (1H) -ona :

[0098] N- (2-cloro-6-metilfenil)-4-(metilamino)-2(metiltio)pirimidina-5-carboxamida (6 g, 18.59 mmol) foi

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30/36 convertido de acordo com o exemplo 1, etapa 2 para resultar no composto título (2,9 g; 8.66 mmol, 47%) como um sólido esbranquiçado. LCMS (Método A): TA = 1,25 min, m/z = 335/337 [M+H]⁺. Os dados analíticos estão de acordo com o Exemplo 92, etapa 2 tal como descrito no WO 2015/092431.

Etapa 4: tert-butil 4- (4- ((6- (2-cloro-6-metilfenll)-8metil-5-oxo-5, 6,7_r8-tetrahidropirimido[4,5-d]pirimidin-2il)amino)-2-metilfenil)piperidina-1-carboxilato:

[0099] 3-(2-cloro-6-metilfenil)-l-metil-7(metiltio)-2,3-dihidropirimido[4,5-d]pirimidin-4(1H)-ona (150 mg, 0.45 mmol) foi dissolvido em DCM (6 mL) e mCPBA (121 mg, 0.49 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada por 30 minutos em TA. A mistura reacional foi diluída com DCM a 10 mL e lavada com solução aquosa de tiosulfato. A camada orgânica foi separada, secada (MgSO4 anidro) e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi suspendido em 2-propanol (6 mL) e tert-Butil 4-(4-amino-2metilfenil) piperidina-l-carboxilato (130 mg, 0.45 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada a 90 °C ao longo da noite. Os voláteis foram evaporados e o produto foi purificado por cromatografia flash (20-80% de EtOAc em ciclohexano) rendendo o composto título como um óleo claro (206 mg, 80%) . LCMS (Método B) : TA = 1,80 min, m/z = 577 [M+H]⁺.

Etapa 5: Cloridrato de 3-(2-cloro-6-metilfenil)-lmetil-7- ((3-metil-4- (piperidin-4-il) fenil) amino) -2,3dihidropirimido[4,5-d ] pirimidin-4 (1H) -ona :

[0100] tert-Butil 4-[4-[[6-(2-cloro-6-metil-fenil)8-metil-5-oxo-7H-pirimido[4,5-d]pirimidin-2-il]amino]-2

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31/36 metil-fenil]piperidina-l-carboxilato (206 mg, 0.36 mmol) foi dissolvido em DCM (4 mL) e TEA (2 mL) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada por 30 min em TA. Os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em DCM (2 mL) e carregado em um cartucho SCX-2 (5 g; a coluna eluída com DCM antes do uso) . O cartucho foi lavado com 2 0% de MeOH em DCM e o composto desejado foi eluído com 2 0% de NH₃MeOH 7N em DCM. O produto contendo frações foi evaporado sob pressão reduzida rendendo o composto título como um sólido branco (138 mg, 81 %) . LCMS (Método A): TA = 0,80 min, m/z = 477 [M+H]⁺.

Etapa 6: 3-(2-cloro-6-metilfenil)-l-metil-7-((3-metil-

4- (1 -metílpíperídín-4-íl) feníl) amino) -2_r 3díhídropírímído [4,5-d ] pírímídín-4 (1H) -ona :

[0101] 6-(2-cloro-6-metil-fenil)-8-metil-2-[3metil-4-(4-piperidil)anilino]-7H-pirimido[4,5-d]pirimidin-

5- ona (70 mg, 0.15 mmol) foi dissolvido em uma mistura de MeCN (3 mL)/MeOH (1 mL) e 37 % de solução aquosa de formaldeído (0.11 mL, 1.47 mmol) foi adicionada seguida por triacetoxi boroidreto de sódio (311 mg, 1.47 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente ao longo da noite. Os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em DCM / IM NaOH (5 mL / 5 mL) . A camada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com DCM (2x5 mL). Os extratos orgânicos foram combinados, secados (K2CO3 anidro) e evaporados sob pressão reduzida. O produto foi liofilizado (MeOH / MeCN / água) rendendo o composto título como um sólido branco (58 mg, 80 %) . LCMS (Método B) : TA = 0,79 min, m/z = 491 [M+H] ⁺ . 1H NMR (500 MHz,

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DMS0-Ó6) δ 9.70 (s, 1Η), 8.45 (s, 1H), 7.63 - 7.52 (m, 2H), 7.48 - 7.41 (m, 1H) , 7.38 - 7.28 (m, 2H) , 7.13 (d, 1H) , 4.98 - 4.86 (m, 2H), 3.11 (s, 3H), 2.87 (d, 2H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.03 - 1.92 (m, 2H), 1.70 - 1.56 (m, 4H).

Comparação do composto da presente invenção com compostos do estado da técnica e outros compostos:

[0102] O composto tal como descrito no Exemplo 1 foi testado para o efeito inibitório da quinase Wee-1 (valor do IC50 de Wee-1), a potência Wee-1 em células (valor pCDC2), solubilidade cinética, permeabilidade em células caco-2 (valor Papp em Caco-2), clearance do plasma in vivo (valor CL) e meia-vida de eliminação (valor Ti/₂) em ratos após administração intravenosa, exposição ao plasma em ratos após a administração oral (valor ASC), biodisponibilidade oral em ratos (valor F %), proporção da concentração cérebro:plasma em camundongos saudáveis, proporção da concentração tumor:plasma em camundongos abrigando tumor, inibição CYP3A4/5 dependente do tempo in vivo (valor da mudança no IC₅₀ de CYP3A4/5) e detecção de metabolites reativos em hepatócitos humanos. Compostos comparativos foram também testados usando os mesmos testes. Os métodos de teste empregados para determinar o efeito inibitório da quinase Wee-1, a potência Wee-1 em células e solubilidade cinética foram o mesmo daqueles ensinados em WO 2015/092431 (vide página 350 a 358). Os outros métodos de teste empregados foram como segue:

i. Determinação de permeabilidade em Caco-2 em pH 6.5 (pH 7.4 para o Exemplo comparativo 6) foi realizada

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33/36 em Cyprotex Ltd usando protocolos padrões e POPs.

ii. Determinação de parâmetros farmacocinéticos (CL/T_1/2/AUC/F%) em ratos Sprague-Dawley machos no Exemplo 1 e Exemplos comparativos 6 e 165 foi realizada em Axis BioServices Ltd usando protocolos padrões e POPs. A dosagem foi como segue: dose oral única 5 mg/kg; dose intravenosa única 1 mg/kg.

iii. Determinação de parâmetros farmacocinéticos (CL/Ti/₂/AUC/F%) em ratos Sprague-Dawley machos no Exemplo comparativo 18 foi realizado em BioDuro usando protocolos padrões e POPs. A dosagem foi como segue: dosagem oral 5 mg/kg; dosagem intravenosa 1 mg/kg.

iv. Determinação da proporção da concentração cérebro:plasma em camundongos saudáveis foi realizado em Bioduro Inc. (Exemplo 1) e em Axis Bioservices Ltd (Exemplo comparativo 18) usando protocolos padrões e POPs. A dosagem foi como segue: dose oral repetida de 30 mg/kg, uma vez ao dia por 7 dias. As concentrações foram medidas em 4h após a dosagem no dia 7.

v. Determinação da proporção da concentração tumor:plasma em camundongos abrigando tumor foi realizado em Axis Bioservices Ltd usando protocolos padrões e POPs. A dosagem foi como segue: dose oral única de 30 mg/kg.

vi. Determinação da inibição da CYP3A4/5 dependente do tempo (valor de mudança do IC50 de CYP3A4/5) foi

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34/36 realizado em Cyprotex Ltd usando protocolos padrões e POPs. 0 sistema de teste in vitro foi: microssomas hepáticos humanos agrupados; uma etapa de pré incubação de 30 min com e sem NADPH foi incluída para observar a mudança do IC50· vii. Determinação da formação de metabólitos reativos foi realizada em Admescope Ltd usando protocolos padrões e POPs. O sistema de teste in vitro foi: hepatócitos humanos; a duração da incubação foi de: 2 horas; a técnica para a análise do metabólito foi: LC-MS/MS.

[0103] O composto descrito no Exemplo 1 apresenta uma estabilidade química melhorada em solução (tampão a pH 7.4 e em DMSO). Ele também mostra uma solubilidade melhorada em um fluido gástrico simulado em jejum (FaSSGF).

[0104] Os dados são fornecidos na Tabela la e 1b abaixo:

Estrutura	Número do Exemplo	ic₅₀ de Wee- 1 [nM]	ec₅₀ de pCDC2 [nM]	Solubi 1idade cinéti ca [μΜ]	P_app em caco-2 [10⁶cm / s] A- B pH 6.5	Farmacocinética no rato
CL (mL/ min/ kg)	ASC_inf (h.ng /mL)	F
ΤΙ Λ ΛΪ) [JL λ 1 Π N N N Η 1	1	0.8	188	215	8.9	14	1324	35
Λ*. Η 1	CE 6	2.7	223	170	6.6 (pH 7.4)	26	1363	41

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L I Ji X J ri H 1	CE 18*	3.7	223	200	0.3	48	120	7
XX XX) 1X ÂTH N N N Η I	CE 95*	7.9	378	123	n. d.	n. d	n. d	n. d
'..'X ^OH «Ck ^N 1 Γ ° ro X Ã. XL X, _J Cl N N N Η I	CE 165*	3.1	347	194	0.3	27	397	8
XXa aX) aXW H 1	CE 178*	3.2	371	55	8.1	n. d	n. d	n. d
OMe X JL X X. J Cl '^N N N Η I	CE 183*	3.1	502	60	n. d.	n. d	n. d	n. d
ΧΧλ a'X) til ãIj I N N N H 1	CE 1	2.8	695	189	n. d	n. d	n. d	n. d

Tabela la *Número do Exemplo no WO 2015/092431;

n.d. = não determinado;

CE = Exemplo comparativo.

[0105] Tabela la: Comparação dos Exemplos 6, 18, 95,

165, 178 e 183 do WO 2015/092431 e Exemplo comparativo 1, com o Exemplo 1 da presente invenção

Estrutura	Número do Exemplo	Mudança no IC₅₀da CYP3A4 / 5	Metaból ito reativo detecta do	Farma cocin ética no rato	Distribuição no tecido do camundongo
T1 / 2 (h)	Proporção cérebro / plasma	Proporção tumor / plasma
X 1 °^CIY) nX^XX X JL, λ X j ci N N N Η I	1	1.0 - 1.8	Não	4.5	0.69	4.0 (± 1.04)

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Η I	CE 6*	2.3 - 3.0	Sim	3.7	0.16	5.7 (± 2.81)
'ruq r^OH O^clyq, 1¾. JL jl JL j ci N N N Η I	CE 165*	n. d.	n. d.	2.1	n. d.	n. d.

Tabela lb *Número do exemplo no WO 2015/092431;

n.d. = não determinado;

CE = Exemplo comparativo.

[0106] Tabela lb: Comparação dos Exemplos 6 e 165 do WO 2005 / 092431 com o Exemplo 1 da presente invenção [0107] A Tabela la mostra que o composto da presente invenção mostra um efeito inibitório da quinase Wee-1 aumentado, uma potência da Wee-1 aumentada nas células, uma solubilidade cinética aumentada ou similar, uma permeabilidade aumentada ou similar, uma estabilidade metabólica ín vivo aumentada em ratos, exposição aumentada em ratos e/ou biodisponibilidade aumentada em ratos, comparada aos Exemplos 18, 95, 165, 178 e 183 do WO

2015/092431 e Exemplo comparativo 1.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto caracterizado pelo fato de apresentar a fórmula (I):

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado Nóxido do mesmo.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, caracterizado pelo fato de pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
3. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender o composto conforme definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de compreender um ou mais agentes farmaceuticamente ativos adicionais.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica, de acordo com as reivindicações 3 ou 4, caracterizados pelo fato de ser para uso na terapia.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com a

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2/2 reivindicação 3 ou 4, caracterizados pelo fato de ser para uso como um medicamento.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com as reivindicações 3 ou 4, caracterizados pelo fato de ser para uso no tratamento ou prevenção do câncer.
8. Uso do composto conforme definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica conforme definida nas reivindicações 3 ou 4, caracterizado pelo fato de ser para a produção de um medicamento para o tratamento ou prevenção do câncer.
9. Método de tratamento ou prevenção do câncer em um paciente humano ou animal caracterizado pelo fato de compreender a administração ao paciente em necessidade do mesmo de uma quantidade eficaz de um composto conforme definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou derivado N-óxido do mesmo, ou a composição farmacêutica conforme definida na reivindicação 3 ou 4.