ES2589955T3 - Pirazolopirimidinas sustituidas como inhibidores de la quinasa Akt - Google Patents

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ES2589955T3 ES13700987.4T ES13700987T ES2589955T3 ES 2589955 T3 ES2589955 T3 ES 2589955T3 ES 13700987 T ES13700987 T ES 13700987T ES 2589955 T3 ES2589955 T3 ES 2589955T3
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Lars BÄRFACKER
William Scott
Andreas HÄGEBARTH
Hartmut Rehwinkel
Oliver Politz
Roland Neuhaus
Ulf Bömer
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I):**Fórmula** en la que R1 es hidrógeno, un grupo alquilo C1-6, en el que dicho grupo está opcionalmente sustituido, una o más veces, de manera idéntica o diferente, con un sustituyente seleccionado de: hidroxi, halógeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, -NR7R8, ciano, (>=O), -C(O)NR7R8, -C(O)OR9, -NHC(O)R10, -NHS(O)2R10, heteroarilo, R2 es hidrógeno o un grupo alquilo C1-6 en el que dicho grupo está opcionalmente sustituido, una o más veces, de manera idéntica o diferente, con un sustituyente seleccionado de: hidroxi, halógeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, -NR7R8, ciano, -C(O)NR7R8, -C(O)OR9, -NHC(O)R10, -NHS(O)2R10, -NH-(alquilen C1-6)-O-(alquilo C1-6), R3 es hidrógeno, alquilo C1-6 que está opcionalmente sustituido una o más veces con halógeno, R4 es fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, halógeno, ciano, R5 es hidrógeno, halógeno, R6 es hidrógeno, alquilo C1-6, X es -CH2-, Y es -CH2-, -CH(OH)-, R7, R8, que pueden ser iguales o diferentes, son hidrógeno, hidroxi, cicloalquilo C3-7 o un grupo seleccionado de alquilo C1-4, alcoxi C1-6, en el que dicho grupo está opcionalmente sustituido, una o más veces, de manera idéntica o diferente, con un sustituyente seleccionado de: halógeno, hidroxi, mono- o di-(alquilamino C1-4), alcoxi C1-4 o cicloalquilo C3-7, o R7 y R8 junto con el nitrógeno al que están unidos también pueden formar un anillo heterocíclico C3-6 saturado o insaturado, que está opcionalmente sustituido con (>=O) R9 es hidrógeno, alquilo C1-6, R10 es alquilo C1-4 (opcionalmente sustituido del mismo modo o de modo diferente una o más veces con halógeno, hidroxi) o cicloalquilo C3-7, o un N-óxido, una sal, un tautómero o un estereoisómero de dicho compuesto, o una sal de dichos N-óxido, tautómero o estereoisómero.

Description

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DESCRIPCION
Pirazolopirimidinas sustituidas como inhibidores de la quinasa Akt Campo de aplicacion de la invencion
La presente invencion se refiere a compuestos de pirazolopirimidinas sustituidas, a un procedimiento para su produccion y al uso de los mismos.
Antecedentes tecnicos conocidos
El cancer es la segunda causa mas frecuente de mortalidad en Estados Unidos, provocando 450.000 muertes anuales. Aunque se han realizado progresos sustanciales en la identificacion de algunas de las probables causas ambientales y hereditarias del cancer, existe la necesidad de modalidades terapeuticas adicionales dirigidas contra el cancer y enfermedades relacionadas. En particular, existe la necesidad de procedimientos terapeuticos para tratar enfermedades asociadas al crecimiento/la proliferacion mal regulados.
El cancer es una enfermedad compleja que surge despues de un procedimiento de seleccion de las celulas con capacidades funcionales adquiridas como supervivencia/resistencia potenciadas hacia a la apoptosis y un potencial de proliferacion ilimitado. Por lo tanto, se prefiere desarrollar farmacos para la terapia contra el cancer dirigidos a distintas caractensticas de los tumores establecidos.
Una ruta que ha demostrado mediar las senales de supervivencia importantes para las celulas de mairnfero comprende tirosina quinasas receptoras como el receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-R), el receptor del factor de crecimiento epidermico humano 2/3 (HER2/3) o el receptor del factor de crecimiento similar a la insulina 1 (IGF-1R). Despues de la activacion de los respectivos por ligandos, estos receptores activan la ruta de la fosfatidilinositol-3-quinasa (Pi3K)/Akt. La ruta de la fosfatidilinositol-3-quinasa (Pi3K)/protema quinasa Akt es central para el control del crecimiento, de la proliferacion y de la supervivencia celulares, conduciendo al avance de los tumores. Por lo tanto dentro de la clase de las quinasas de senalizacion espedficas de serina-treonina, la Akt (protema quinasa B; PKB) con las isoenzimas Akt1 (PKBa), Akt2 (PKBp) y Akt3 (PKBy) es de gran interes para la intervencion terapeutica. La Akt se activa principalmente de un modo dependiente de la Pi3-quinasa y la activacion se regula a traves del supresor tumoral PTEN (homologo de fosfatasa y tensina), que funciona esencialmente como el antagonista funcional de Pi3K.
La ruta de Pi3K/Akt regula funciones celulares fundamentales (por ejemplo, transcripcion, traduccion, crecimiento y supervivencia) y esta implicada en enfermedades humanas que incluyen la diabetes y el cancer. La ruta esta frecuentemente sobreactivada en un amplio intervalo de entidades tumorales como carcinomas de mama y de prostata. La regulacion positiva puede deberse a la sobreexpresion o a la activacion constitutiva de las tirosina quinasas receptoras (por ejemplo, EGFR, HER2/3), que se encuentran corriente arriba de la ruta y que estan implicadas en su activacion directa, o mutantes de ganancia o de perdida de funcion de algunos de los componentes como la perdida de PTEN. La ruta se selecciona como diana por alteraciones genomicas que incluyen la mutacion, la amplificacion y el reordenamiento mas frecuentemente que cualquier otra ruta del cancer humano, con la posible excepcion de las rutas de la p53 y del retinoblastoma. Las alteraciones de la ruta de Pi3K/Akt desencadenan una cascada de sucesos biologicos que conducen al avance, la supervivencia, la angiogenesis y la metastasis tumorales.
La activacion de las quinasas Akt promueve una captacion mayor de nutrientes, convirtiendo a las celulas en un metabolismo dependiente de glucosa que redirige precursores de lfpidos y aminoacidos a procesos anabolicos que apoyan al crecimiento y a la proliferacion celulares. Este fenotipo metabolico con Akt sobreactivada da lugar a tumores malignos que presentan una conversion metabolica en glucolisis aerobica (el efecto Warburg). A ese respecto la ruta de Pi3K/Akt se analiza siendo fundamental para la supervivencia a pesar de condiciones de crecimiento desfavorables tales como el agotamiento de la glucosa o la hipoxia.
Un aspecto adicional de la ruta de PI3K/Akt activada es proteger celulas de la muerte celular programada ("apoptosis") y se considera por lo tanto que transduce una senal de supervivencia. Actuando como un modulador de la senalizacion antiapoptotica en celulas tumorales, la ruta de Pi3K/Akt, la propia Akt en particular es una diana para la terapia contra el cancer. La Akt activada fosforila y regula varias dianas, por ejemplo, BAD, GSK3 o FKHRL1, que afectan a diferentes ruta de senalizacion como la supervivencia celular, la smtesis de protemas o el movimiento celular. Esta ruta de Pi3K/Akt tambien juega una parte importante en la resistencia de las celulas tumorales a las terapias contra el cancer convencionales. El bloqueo de la ruta de Pi3K/Akt podna de esta manera inhibir simultaneamente la proliferacion de celulas tumorales (por ejemplo, mediante la inhibicion del efecto metabolico) y sensibilizarlas frente a agentes pro-apoptoticos.
La inhibicion de Akt sensibilizo selectivamente celulas tumorales a estfmulos apoptoticos como Trail, camptotecina y doxorrubicina. Dependiendo de los antecedentes geneticos/factores moleculares de los tumores, los inhibidores de Akt tambien podnan inducir la muerte celular apoptotica en monoterapia.
A partir del documento WO 2008/070016, se conocen inhibidores de Akt tridclicos que se alegan ser inhibidores inespedficos de la quinasa Akt. No se desvelan datos para ningun compuesto espedfico. Se desvelan diferentes inhibidores de Akt en el documento WO 2009/021990, el documento WO2010088177, el documento WO2010104705, el documento WO2010114780, el documento WO2011033265, el documento WO2011055115. A partir de la publicacion J. of Cellular Biochem, (2011), 112(2), 625-632, se conoce 4-[2-fenil-5,7-
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bis(trifluorometil)pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il]fenol. A partir de la publication Molecular Informatics (2011), 30(6-7), 539-549, se conoce 4-(5,7-dimetil)-3-fenilpirazolo[1,5a]pirimidin-2-il]fenol. En una divulgation reciente, Y. Li y col. (Bioorg. Med. Chem. Lett. 2009, 19, 834-836 y las referencias citadas en la misma) detallan la dificultad para encontrar inhibidores optimos de Akt. La posible aplicacion de los inhibidores de Akt en multiples entornos patologicos tales como, por ejemplo, el cancer, hace la provision de nuevos inhibidores de Akt todavia altamente deseable.
Description de la invention
Una solution al problema anterior es la provision de inhibidores de Akt mejorados, mediante los cuales los compuestos actuales tengan un perfil farmacocinetico mejorado. Se ha descubierto ahora que los nuevos compuestos de Pirazolopirimidina sustituidas, que se describen con mas detalle a continuation, son inhibidores de Akt con un perfil farmacocinetico mejorado.
De acuerdo con un primer aspecto, la presente invencion se refiere a compuestos de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1
imagen1
en la que
R1 es hidrogeno, un grupo alquilo C1-6,
en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces, de manera identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de:
hidroxi, halogeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, -NR7R8, ciano, (=O), -C(O)NR7R8, -C(O)OR9, -NHC(O)R10, -NHS(O)2R10, heteroarilo,
R2 es hidrogeno, o un grupo alquilo C1-6
en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces, de manera identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de: hidroxi, halogeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, -NR7R8, ciano, -C(O)NR7R8, -C(O)OR9, -NHC(O)R10, -NHS(O)2R10, -NH-(alquilen C1-6)-O-(alquilo C1-6),
R3 es hidrogeno, alquilo C1-6 que esta opcionalmente sustituido una o mas veces con halogeno,
R4 es fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, halogeno, ciano,
R5 es hidrogeno, halogeno,
R6 es hidrogeno, alquilo C1-6,
X es -CH2-,
Y es -CH2-, -CH(OH)-,
R7, R8 que pueden ser iguales o diferentes, es hidrogeno, hidroxi, cicloalquilo C3-7 o un grupo seleccionado de alquilo C1-4, alcoxi C1-6, en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces, de manera identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de:
halogeno, hidroxi, mono- o di-(alquilamino C1-4), alcoxi C1-4 o cicloalquilo C3-7 o, R7 y R8 junto con el nitrogeno al que estan unidostambien pueden formar un anillo heterodclico C3-6 saturado o insaturado, que esta opcionalmente sustituido con (=O)
R9 es hidrogeno, alquilo C1-6,
R10 es alquilo C1-4 (opcionalmente sustituido del mismo modo o de forma diferente una o mas veces con
halogeno, hidroxilo o cicloalquilo C3-7,
o un N-oxido, una sal, un tautomero o un estereoisomero de dicho compuesto, o una sal de dicho N-oxido, tautomero o estereoisomero.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1 en los que R1 es hidrogeno, un grupo alquilo C1-6,
en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido una o mas veces con halogeno,
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R2
es hidrogeno
R3
es hidrogeno, un grupo
con halogeno,
R4
es fenilo opcionalmente
R5
es hidrogeno,
R6
es hidrogeno,
X
es -CH2-,
Y
es -CH2-, -CH(OH)-,
alquilo C1-6, en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces sustituido con alquilo C1-6, halogeno, ciano,
o un N-oxido, una sal, un tautomero o un estereoisomero de dicho compuesto, o una sal de dicho N-oxido, tautomero o estereoisomero.
Un aspecto adicional de la presente invencion son compuestos de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1 en los que
R1 es hidrogeno, un grupo alquilo C1-3, en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces
con halogeno,
R2 es hidrogeno,
R3 es hidrogeno, un grupo alquilo C1-3, en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces,
con halogeno,
R4 es fenilo,
R5 es hidrogeno,
R6 es hidrogeno,
X es -CH2-,
Y es -CH2-,
o un N-oxido, una sal, un tautomero o un estereoisomero de dicho compuesto, o una sal de dicho N-oxido, tautomero o estereoisomero.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1 en los que
R1 es hidrogeno, alquilo C1-3 opcionalmente sustituido con fluor,
R2 es hidrogeno,
R3 es hidrogeno o alquilo C1-3 opcionalmente sustituido con fluor,
R4 es fenilo,
R5 es hidrogeno,
R6 es hidrogeno,
X es -CH2-,
Y es -CH2-
o un N-oxido, una sal, un tautomero o un estereoisomero de dicho compuesto, o una sal de dicho N-oxido, tautomero o estereoisomero.
Un aspecto adicional de la presente invencion son compuestos de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1 que se seleccionan del grupo que consiste en:
1-[4-(5,7-Dimetil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil]ciclobutanamina,
1-[4-(5,7-Dietil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil]ciclobutanamina,
1-{4-[3-Fenil-5,7-bis(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il]fenil}ciclo-butanamina.
Un aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I) como se describe en los ejemplos caracterizados por sus nombres en el tftulo como se reivindica en la reivindicacion 5 y sus estructuras asf como las subcombinaciones de todos los residuos desvelados espedficamente en los compuestos de los ejemplos.
Un aspecto de la presente invencion son los compuestos desvelados en los ejemplos asf como los intermedios como se usan para su smtesis.
Un aspecto de la presente invencion es el intermedio (II) como se define a continuacion en la seccion del procedimiento.
Si las realizaciones de la presente invencion como se desvelan en el presente documento se refieren a compuestos de formula (I), se entiende que aquellas realizaciones se refieren a los compuestos de formula (I) como se desvelan en las reivindicaciones y en los ejemplos.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que
R1 es alquilo C1-3 o alquilo C1-3 sustituido con halogeno, preferentemente sustituido con fluor.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que R1 es alquilo C1-3 o CF3.
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Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que R1 es metilo, etilo o CF3.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que
R2 es hidrogeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halogeno, ciano, CO(NR7R8), arilo, heteroarilo,
en el que dicho alquilo C1-6, alcoxi C1-6, arilo, heteroarilo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces, de manera identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de:
hidroxi, halogeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, -NR7R8, ciano, -C(O)NR7R8, -C(O)OR9, - NHC(O)R10, -NHS(O)2R10.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que R2 es hidrogeno.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que
R3 es alquilo C1-3 o alquilo C1-3 sustituido con halogeno, preferentemente sustituido con fluor.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que R3 es alquilo C1-3 o CF3.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que R3 es metilo, etilo o CF3.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que R1 y R3 estan sustituidos identicamente.
Otro aspecto de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que R4 es fenilo.
Un aspecto adicional de la presente invencion son compuestos de formula (I), en la que Y es -CH2-.
En una realizacion adicional de los aspectos anteriormente mencionados, la presente invencion se refiere a compuestos de formula (I), en la que R6 es hidrogeno y R5 es hidrogeno.
En otra realizacion adicional de los aspectos anteriormente mencionados, la presente invencion se refiere a compuestos de formula (I), en la que R2, R5 y R6 son hidrogeno y R4 es un fenilo no sustituido.
En una realizacion adicional de los aspectos anteriormente mencionados, la presente invencion se refiere a compuestos de formula (I), en la que R5 es hidrogeno y R4 es fenilo no sustituido.
Otra realizacion de la presente invencion son los compuestos de las reivindicaciones como se desvela en la seccion de reivindicaciones en la que las definiciones se limitan de acuerdo con las definiciones preferidas o mas preferidas como se desvela a continuacion o los residuos desvelados espedficamente de los compuestos ejemplificados y las subcombinaciones de los mismos.
Definiciones
A menos que se defina lo contrario en las reivindicaciones los constituyentes definidos a continuacion pueden estar opcionalmente sustituidos, una o mas veces, de manera identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de:
hidroxi, halogeno, ciano, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, -NR7R8, ciano, (=O), -C(O)NR7R8, -C(O)OR9, -NHC(O)R10, -NHS(O)2R10 Un constituyente de alquilo estando sustituido mas veces con halogeno tambien incluye un resto alquilo completamente halogenado tal como por ejemplo CF3.
En caso de que un componente se componga de mas de una parte, por ejemplo, -O-(alquil C1-6)-cicloalquilo C3-7, la posicion de un posible sustituyente puede estar en cualquiera de estas partes en cualquier posicion adecuada. Un guion al comienzo del constituyente marca el punto de union con el resto de la molecula. Si un anillo esta sustituido el sustituyente puede estar en cualquier posicion adecuada del anillo, tambien en un atomo de nitrogeno del anillo.
La frase "que comprende" cuando se usa en la memoria descriptiva incluye "que consiste en”.
Si se hace referencia a "como se menciona anteriormente" o " anteriormente mencionado " dentro de la descripcion se refiere a cualquiera de las divulgaciones realizadas dentro de la memoria descriptiva en cualquiera de las paginas anteriores.
"Adecuado/a" en el sentido de la presente invencion significa qmmicamente posible de realizarse mediante procedimientos dentro del conocimiento de un experto en la materia.
"Alquilo C1-6" es un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 atomos de carbono. Los ejemplos
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son metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo y terc-butilo, pentilo, hexilo, preferentemente de 1 a 4 atomos de carbono (alquilo C1-4), mas preferentemente 1-3 atomos de carbono (alquilo C1-3). Otros constituyentes alquilo mencionados en el presente documento que tienen otro numero de atomos de carbono se definiran como se ha mencionado anteriormente teniendo en cuenta la longitud diferente de su cadena. Las partes de los constituyentes que contienen una cadena alquilo como resto puente entre dos partes diferentes del constituyente, lo que normalmente se denomina resto "alquileno", se definen en lmea con la definicion de alquilo anterior, incluyendo la longitud preferida de la cadena, por ejemplo, metileno, etileno, n-propileno, iso-propileno, n- butileno, isobutileno, terc-butileno.
"Halogeno", dentro del significado de la presente invencion es yodo, bromo, cloro o fluor; preferentemente "halogeno" dentro del significado de la presente invencion es cloro o fluor si se necesitara un atomo de halogeno como grupo saliente en la smtesis se prefieren yodo o bromo.
"Haloalquilo C1-4" es un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 4 atomos de carbono en el que al menos un hidrogeno esta sustituido con un atomo halogeno. Los ejemplos son clorometilo o 2-bromoetilo. Para un grupo alquilo C1-C4 parcial o completamente fluorado, se consideran los siguientes grupos parcial o completamente fluorados, por ejemplo: fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, fluoroetilo, 1,1-difluoroetilo, 1,2-difluoroetilo, 1,1,1- trifluoroetilo, tetrafluoroetilo y pentafluoroetilo, por lo cual se prefieren fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, fluoroetilo, 1,1-difluoroetilo o 1,1,1-trifluoroetilo. Se considera que los grupos alquilo C1-C4 parcial o completamente fluorados estan englobados por el termino haloalquilo C1-4.
"Alcoxi C1-6" representa radicales que, ademas del atomo de oxfgeno, contienen un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 atomos de carbono. Los ejemplos que pueden mencionarse son los radicales hexoxi, pentoxi, butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, propoxi, isopropoxi, etoxi y metoxi, los preferidos son metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi.
"Heterociclilo C3-7" o "heterociclilo" representa un radical heterodclico no aromatico, mono- o polidclico, preferentemente mono- o bidclico, mas preferentemente monodclico, que contiene de 4 a 10, preferentemente de 4 a 7, atomos de anillo y hasta 3, preferentemente hasta 2, heteroatomos y/o heterogrupos de la serie que consiste en N, O, S, SO, SO2. Los radicales heterociclilo pueden estar saturados o parcialmente insaturados y, salvo que se indique lo contrario, pueden estar opcionalmente sustituidos, una o mas veces, de forma identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de: alquilo C1-4, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-4, hidroxi, fluor u (=O), en el que el alquilo C1-4 puede estar ademas opcionalmente sustituido con hidroxi y el atomo de oxfgeno del doble enlace da lugar a un grupo carbonilo junto con el atomo de carbono del anillo heterociclilo en cualquier posicion adecuada. Los radicales heterodclicos particularmente preferidos son los radicales heterociclilo saturados monodlicos de 4 a 7 miembros que tienen hasta dos heteroatomos de la serie que consiste en O, N y S. Los siguientes pueden mencionarse a modo de ejemplo y por preferencia: oxetanilo, tetrahidrofuranilo, azetidinilo, 3-hidroxiazetidinilo, 3-fluoroazetidinilo, 3,3-difluoroazetidinilo, pirrolidinilo, 3-hidroxipirrolidinilo, pirrolinilo, piperidinilo, 3-hidroxipiperidinilo, 4- hidroxipiperidinilo, 3-fluoropiperidinilo, 3,3-difluoropiperidinilo, 4-fluoropiperidinilo, 4,4-difluoropiperidinilo, piperazinilo, N-metil-piperazinilo, N-(2-hidroxietil)-piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, azepanilo, homopiperazinilo, N-metil- homopiperazinilo.
En el caso de -NR7R8, cuando R7 y R8 junto con el atomo de nitrogeno al que estan unidos forman un anillo heterodclico C3-6, la frase “anillo heterodclico C3-6” incluye todos los anillos heterodclicos no anlicos saturados o insaturados que contienen de 4 a 7 atomos del anillo y que tienen 1 o 2 atomos de nitrogeno, o 1 atomo de nitrogeno y 1 atomo de oxfgeno. El anillo heterodclico C3-6 puede estar opcionalmente sustituido una o mas veces, de forma identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de: alquilo C1-4, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-4, hidroxi, fluor u (=O) - estando un atomo de oxfgeno conectado a traves de un doble enlace a un atomo de carbono del anillo formando de esta manera un grupo carbonilo que puede colocarse ademas del atomo de nitrogeno resultando en un resto lactamo o en cualquier otro atomo de carbono del anillo, de manera que el alquilo C1-4 puede estar opcionalmente sustituido ademas con hidroxi. Los ejemplos preferidos son azetidina, 3-hidroxiazetidina, 3- fluoroazetidina, 3,3-difluoroazetidina, pirrolidina, pirrolidin-2-ona, 3-hidroxipirrolidina, piperidina, 3-hidroxipiperidina, 4-hidroxipiperidina, 3-fluoropiperidina, 3,3-difluoropiperidina, 4-fluoropiperidina, 4,4-difluoropiperidina, 1H-piridin-2- ona, piperazina, N-metil-piperazina, N-(2-hidroxietil)-piperazina, morfolina.
"Arilo" representa un radical carbodclico aromatico mono- o bidclico que tiene, por regla general, de 6 a 10 atomos de carbono; a modo de ejemplo fenilo o naftilo. Se prefiere fenilo. El resto arilo puede estar sustituido una o mas veces, de manera identica o diferente, con hidroxi, halogeno, ciano, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, - NR7R8, ciano, -C(O)NR7R8, -C(O)OR9, -NHC(O)OR10, -NHS(O)2R10. En una realizacion de la presente invencion si el resto fenilo fuera un sustituyente no estana sustituido o solo estana sustituido una vez.
El termino "heteroarilo" representa un heterociclo aromatico de 5 o 6 miembros monodclico o un resto aromatico bidclico fusionado que comprende sin estar restringido a los mismos, los radicales heteroarilo de 5 miembros furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo (1,2,4-triazolilo, 1,3,4- triazolilo o 1,2,3-triazolilo), tiadiazolilo (1,3,4-tiadiazolilo, 1,2,5-tiadiazolilo, 1,2,3-tiadiazolilo o 1,2,4-tiadiazolilo) y oxadiazolilo (1,3,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo o 1,2,4-oxadiazolilo), asf como los radicales heteroarilo de 6 miembros piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo y piridazinilo asf como los sistemas de anillos fusionados
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tales como, por ejemplo, ftalidil-, tioftalidil-, indolil-, isoindolil-, dihidroindolil-, dihidroisoindolil-, indazolil-, benzotiazolil- , benzofuranil-, bencimidazolil-, benzoxazinonil-, chinolinil-, isochinolinil-, quinazolinil-, quinoxalinil-, cinnolinil-, ftalazinil-, 1,7- o 1,8-naftiridinil-, cumarinil-, isocumarinil-, indolizinil-, isobenzofuranil-, azaindolil-, azaisoindolil-, furanopiridil-, furanopirimidinil-, furanopirazinil-, furanopiidazinil-, el sistema de anillos fusionados preferido es indazolilo. Los radicales heteroarilo de 5 o 6 miembros preferidos son furanilo, tienilo, pirrolilo, tiazolilo, oxazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo o piridazinilo. Los radicales heteroarilo de 5 o 6 miembros mas preferidos son furan-2-ilo, tien-2-ilo, pirrol-2-ilo, tiazolilo, oxazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, piridin-2- ilo, piridin-4-ilo, pirimidin-2-ilo, pirimidin-4-ilo, pirazin-2-ilo o piridazin-3-ilo.
El grupo NR7R8 incluye, por ejemplo, NH2, N(H)CHa, N(CHa)2, N(H)CH2CH3 y N(CH3)CH2CH3. En el caso de -NR7R8, cuando R7 y R8 junto con el atomo de nitrogeno al que estan unidos forman un anillo heterodclico C3-6, la frase “anillo heterodclico C3-6” es como se define anteriormente. Se prefieren especialmente pirrolidin-2-ona, 1H-piridin-2- ona.
El grupo NH(CO)R10 incluye por ejemplo NH(CO)CH3, NH(CO)C2H3, NH(CO)C3H7, NH(CO)CH(CH3)2.
El grupo NHS(O)2R10 incluye por ejemplo NHS(O)2CH3, NHS(O^H5, NHS(O)2C3H7 NHS(O)2CH(CH3)2.
El grupo C(O)NR7R8 incluye, por ejemplo, C(O)NH2, C(O)N(H)CH3, C(O)N(CH3)2, C(O)N(H)CH2CH3, C(O)N(CH3)CH2CH3 o C(O)N(CH2cH3)2. En el caso de -Nr7R8, cuando R7 y R8 junto con el atomo de nitrogeno al que estan unidos forman un anillo heterodclico C3-6, la frase “anillo heterodclico C3-6” se define anteriormente.
El grupo C(O)OR9 incluye, por ejemplo, C(O)OH, C(O)OCH3, C(O)OC2H3, C(O)C3H7, C(O)CH(CH3)2, C(O)OC4Hg, C(O)OC5Hn, C(O)OCaHi3; para C(O)O(alquilo C1-6), la parte alquilo puede ser lineal o ramificada.
En general y a menos que se mencione lo contrario, los radicales heteroanlicos o heteroarilenicos incluyen todas las posibles formas isomericas de los mismos, por ejemplo los isomeros posicionales de los mismos. Por lo tanto, para algun ejemplo ilustrativo no restrictivo, el termino piridinilo o piridinileno incluye piridin-2-ilo, piridin-2-ileno, piridin-3- ilo, piridin-3-ileno, piridin-4-ilo y piridin-4-ileno; o el termino tienilo o tienileno incluye tien-2-ilo, tien-2-ileno, tien-3-ilo y tien-3-ileno.
Los constituyentes que estan opcionalmente sustituidos como se indica en el presente documento, pueden estar sustituidos, a menos que se indique lo contrario, una o mas veces, independientemente entre sf, en cualquier posicion posible. Cuando cualquier variable aparece mas de una vez en cualquier constituyente, cada definicion es independiente.
En caso de R1 o R2, se entiende que los grupos seleccionados de alquilo C1-6, alcoxi C1-6, pueden estar opcionalmente sustituidos, una o varias veces, de manera identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de: hidroxi, halogeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, -NR7R8, ciano, (=O), -C(O)NR7R8, -C(O)OR10, -NHC(O)R10,-NHS(O)2R10, heteroarilo.
Preferentemente, los grupos -(alquil C1-6)-arilo, -(alquil C1-6)-heteroarilo, -O-(alquil C1-6)-heteroarilo, -O-(alquilen C1-6)-(cicloalquilo C3-7), -O-(alquil C1-6)-(heterociclilo C3-7), -O-(alquil C1-6)-arilo, -O-(alquil C1-6)-heteroarilo o bien no estan sustituidos en la parte del alquilo C1-6 o bien la parte del alquilo C1-6 esta opcionalmente sustituida con uno o dos atomos de fluor.
Los grupos heteroanlicos, heteroarilenicos o heterodclicos mencionados en el presente documento pueden estar sustituidos con sus sustituyentes o grupos moleculares precursores dados, a menos que se indique lo contrario, en cualquier posicion posible, tal como, por ejemplo, en cualquier atomo de carbono o de nitrogeno del anillo sustituible. De forma analoga, se entiende que es posible que cualquier grupo heteroarilo o heterociclilo se una al resto de la molecula mediante cualquier atomo adecuado si es qmmicamente adecuado. A menos que se indique lo contrario, se supone que cualquier heteroatomo de un anillo heteroanlico o heteroarilenico con valencias insatisfechas mencionado en el presente documento tiene el atomo o los atomos de hidrogeno para satisfacer las valencias. A menos que se indique lo contrario, los anillos que contienen atomos de nitrogeno anulares de tipo amino o imino (- N=) cuaternizables pueden no estar preferentemente cuaternizados en estos atomos de nitrogeno anulares de tipo amino o imino por los sustituyentes o grupos moleculares precursores mencionados.
En el contexto de las propiedades de los compuestos de la presente invencion la frase "perfil farmacocinetico" significa un unico parametro o una combinacion de los mismos, incluyendo la permeabilidad, la biodisponibilidad, la exposicion y los parametros farmacodinamicos tales como la duracion o la magnitud de efecto farmacologico, medidos en un experimento adecuado. Los compuestos con mejores perfiles farmacocineticos, por ejemplo, pueden usarse a dosis mas bajas para lograr el mismo efecto, pueden alcanzar una mayor duracion de la accion o puede lograrse una combinacion de ambos efectos.
Las sales de los compuestos de acuerdo con la presente invencion incluyen todas las sales de adicion acidas inorganicas y organicas, y las sales con bases, especialmente todas las sales de adicion acidas inorganicas y organicas, y las sales con bases, farmaceuticamente aceptables, particularmente todas las sales de adicion acidas inorganicas y organicas, y las sales con bases farmaceuticamente aceptables usadas habitualmente en farmacia.
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Un aspecto de la presente invencion son sales de los compuestos de acuerdo con la presente invencion incluyendo todas las sales de adicion de acidos inorganicos y organicos, especialmente todas las sales de adicion de acidos inorganicos y organicos farmaceuticamente aceptables, particularmente todas las sales de adicion de acidos inorganicos y organicos farmaceuticamente aceptables usadas habitualmente en farmacia. Otro aspecto de la presente invencion son las sales con acidos di- y tricarboxflicos.
Los ejemplos de sales de adicion acida incluyen, pero no se limitan a, clorhidratos, bromhidratos, fosfatos, nitratos, sulfatos, sales de acido sulfamico, formiatos, acetatos, propionatos, citratos, D-gluconatos, benzoatos, 2-(4- hidroxibenzoil)-benzoatos, butiratos, salicilatos, sulfosalicilatos, lactatos, maleatos, lauratos, malatos, fumaratos, succinatos, oxalatos, malonatos, piruvatos, acetoacetatos, tartaratos, estearatos, bencensulfonatos, toluensulfonatos, metansulfonatos, trifluorometansulfonatos, 3-hidroxi-2-naftoatos, bencensulfonatos, naftalindisulfonatos y trifluoroacetatos.
Los ejemplos de sales con bases incluyen, pero no se limitan a, sales de litio, sodio, potasio, calcio, aluminio, magnesio, titanio, meglumina, amonio, opcionalmente derivadas de NH3 o aminas organicas que tienen de 1 a 16 atomos de C, tales como, por ejemplo, etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, procama, dibencilamina, N-metilmorfolina, arginina, lisina, etilendiamina, N-metilpiperindina y sales de guanidinio.
Las sales incluyen sales insolubles en agua y, particularmente, solubles en agua.
De acuerdo con el experto en la materia los compuestos de formula (I) de acuerdo con la presente invencion asf como sus sales pueden contener, por ejemplo cuando se afslan en forma cristalina, cantidades variables de disolventes. Se incluyen dentro del ambito de la presente invencion por tanto todos los solvatos y en particular todos los hidratos de los compuestos de formula (I) de acuerdo con la presente invencion asf como todos los solvatos y en particular todos los hidratos de las sales de los compuestos de formula (I) de acuerdo con la presente invencion.
El termino "combinacion" en la presente invencion se usa como conocen los expertos en la materia y puede estar presente como una combinacion fija, una combinacion no fija o un kit de partes.
Una "combinacion fija" en la presente invencion se usa como conocen los expertos en la materia y se define como una combinacion en la que el dicho primer principio activo y el dicho segundo principio activo estan presentes juntos en una dosificacion unitaria o en una sola entidad. Un ejemplo de una "combinacion fija" es una composicion farmaceutica en la que el dicho primer principio activo y el dicho segundo principio activo estan presentes en mezcla para la administracion simultanea, tal como en una formulacion. Otro ejemplo de una "combinacion fija" es una combinacion farmaceutica en la que el dicho primer principio activo y el dicho segundo principio activo estan presentes en una unidad sin estar en mezcla.
Una combinacion no fija o un "kit de partes" en la presente invencion se usa como conocen los expertos en la materia y se define como una combinacion en la que el dicho primer principio activo y el dicho segundo principio activo estan presentes en mas de una unidad. Un ejemplo de una combinacion no fija o un kit de partes es una combinacion en la que dicho primer principio activo y dicho segundo principio activo estan presentes por separado. Los componentes de la combinacion no fija o del kit de partes pueden administrarse separada, secuencial, simultaneamente, al mismo tiempo o cronologicamente escalonados.
La frase "agentes contra el cancer (quimioterapeuticos)", incluye pero no se limita a 131I-chTNT, abarelix, abiraterona, aclarrubicina, aldesleucina, alemtuzumab, alitretinoma, altretamina, aminoglutetimida, amrubicina, amsacrina, anastrozol, arglabina, trioxido de arsenico, asparaginasa, azacitidina, basiliximab, BAY 80-6946, BAY 1000394, belotecan, bendamustina, bevacizumab, bexaroteno, bicalutamida, bisantreno, bleomicina, bortezomib, buserelina, busulfan, cabazitaxel, folinato calcico, levofolinato calcico, capecitabina, carboplatino, carmofur, carmustina, catumaxomab, celecoxib, celmoleucina, cetuximab, clorambucilo, clormadinona, clormetina, cisplatino, cladribina, acido clodronico, clofarabina, crisantaspasa, ciclofosfamida, ciproterona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, darbepoetina alfa, dasatinib, daunorrubicina, decitabina, degarelix, denileucina diftitox, denosumab, deslorelina, cloruro de dibrospidio, docetaxel, doxifluridina, doxorrubicina, doxorrubicina + estrona, eculizumab, edrecolomab, acetato de eliptinio, eltrombopag, endostatina, enocitabina, epirrubicina, epitiostanol, epoetina alfa, epoetina beta, eptaplatino, eribulina, erlotinib, estradiol, estramustina, etoposido, everolimo, exemestano, fadrozol, filgrastim, fludarabina, fluorouracilo, flutamida, formestano, fotemustina, fulvestrant, nitrato de galio, ganirelix, gefitinib, gemcitabina, gemtuzumab, glutoxim, goserelina, diclorhidrato de histamina, histrelina, hidroxicarbamida, semillas de I-125, acido ibandronico, tiuxetano de ibritumomab, idarrubicina, ifosfamida, imatinib, imiquimod, improsulfan, interferon alfa, interferon beta, interferon gamma, ipilimumab, irinotecan, ixabepilona, lanreotida, lapatinib, lenalidomida, lenograstim, lentinano, letrozol, leuprorelina, levamisol, lisurida, lobaplatino, lomustina, lonidamina, masoprocol, medroxiprogesterona, megestrol, melfalan, mepitiostano, mercaptopurina, metotrexato, metoxsalen, aminolevulinato de metilo, metiltestosterona, mifamurtida, miltefosina, miriplatino, mitobronitol, mitoguazona, mitolactol, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nedaplatino, nelarabina, nilotinib, nilutamida, nimotuzumab, nimustina, nitracrina, ofatumumab, omeprazol, oprelvekina, oxaliplatino, terapia genica p53, paclitaxel, palifermina, semillas de paladio-103, acido pamidronico, panitumumab, pazopanib, pegaspargasa, PEG-epoetina beta (metoxi PEG-epoetina beta), pegfilgrastim, peginterferon alfa-2b, pemetrexed, pentazocina, pentostatina,
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peplomicina, perfosfamida, picibanilo, pirarrubicina, plerixafor, plicamicina, poliglusam, fosfato de poliestradiol, polisacarido-K, porffmero sodico, pralatrexato, prednimustina, procarbazina, quinagolida, cloruro de radio-223, raloxifeno, raltitrexed, ranimustina, razoxano, regorafenib, acido risedronico, rituximab, romidepsina, romiplostim, sargramostim, sipuleucel-T, sizofiran, sobuzoxano, glicididazol sodico, sorafenib, estreptozocina, sunitinib, talaporfina, tamibaroteno, tamoxifeno, tasonermina, teceleucina, tegafur, tegafur + gimeracilo + oteracilo, temoporfina, temozolomida, temsirolimus, teniposido, testosterona, tetrofosmina, talidomida, tiotepa, timalfasina, tioguanina, tocilizumab, topotecan, toremifeno, tositumomab, trabectedina, trastuzumab, treosulfano, tretinoma, trilostano, triptorrelina, trofosfamida, triptofano, ubenimex, valrubicina, vandetanib, vapreotida, vemurafenib, vinblastina, vincristina, vindesina, vinflunina, vinorrelbina, vorinostat, vorozol, microesferas de vidrio de itrio-90, zinostatina, estimalamero de zinostatina, acido zoledronico, zorrubicina. Los compuestos de acuerdo con la presente invencion y sus sales pueden existir en forma de tautomeros que se incluyen en las realizaciones de la presente invencion.
Los compuestos de la presente invencion pueden, dependiendo de su estructura, existir en diferentes formas estereoisomericas. Estas formas incluyen isomeros configuracionales u opcionalmente isomeros conformacionales (enantiomeros y/o diastereoisomeros, incluyendo los de atropisomeros). La presente invencion por lo tanto incluye enantiomeros, diastereoisomeros asf como mezclas de los mismos. A partir de esas mezclas de enantiomeros y/o diastereoisomeros pueden aislarse formas estereoisomericas puras con procedimientos conocidos en la tecnica, preferentemente procedimientos de cromatograffa, especialmente cromatograffa lfquida de alta presion (HPLC) usando una fase aquiral o quiral. La presente invencion incluye ademas todas las mezclas de los estereoisomeros mencionados anteriormente independientes de la proporcion, incluyendo los racematos.
Algunos de los compuestos y de las sales de acuerdo con la presente invencion pueden existir en diferentes formas cristalinas (polimorfos) que estan dentro del ambito de la presente invencion.
Adicionalmente, los derivados de los compuestos de formula (I) y las sales de los mismos que se convierten en un compuesto de formula (I) o una sal del mismo en un sistema biologico (bioprecursores o pro-farmacos) estan englobados por la presente invencion. Dicho sistema biologico es, por ejemplo, un organismo mairnfero, particularmente un sujeto humano. El bioprecursor se convierte, por ejemplo, en el compuesto de formula (I) o una sal de mismo mediante procesos metabolicos.
Los intermedios usados para la smtesis de los compuestos de las reivindicaciones 1-5 como se describe a continuacion, asf como su uso para la smtesis de los compuestos de las reivindicaciones 1-5, son un aspecto adicional de la presente invencion. Los intermedios preferidos son los Ejemplos Intermedios como se desvela a continuacion.
Los compuestos de acuerdo con la presente invencion pueden prepararse como sigue.
Los compuestos de acuerdo con la presente invencion pueden prepararse de acuerdo con el siguiente esquema 1,
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en el que X, Y, R1, R2, R3, R4, R5 y R6 tienen los significados definidos anteriormente y en las reivindicaciones, por lo que Rx tiene el significado de R6 y tambien puede ser un grupo protector; Ry es H, o un grupo protector, por lo que Rx y Ry juntos, o Rx e Y juntos, pueden formar un grupo protector dclico; Q es halogeno, preferentemente Cl, Br o I o 5 sulfonato, preferentemente sulfonato de trifluorometano, sulfonato de nonafluorobutano o tosilato; RZ es hidrogeno o alquilo inferior o ambos RZ junto con los ox^genos y el boro forman un anillo de 5 miembros o 6 miembros (ester boronico dclico).
Los compuestos de formula general (I) pueden prepararse a partir de compuestos de formula general (II). Ry puede ser opcionalmente R6, o un grupo protector, u otro precursor tal que requiera manipulacion adicional. Por ejemplo, Rx 10 en los compuestos de formula general (II) puede ser un grupo protector tal como el grupo Boc, -CO(OtBu). De esta manera, en una realizacion especial de la presente invencion, el grupo protector es un grupo Boc. La preparacion de compuestos de formula general (I) puede realizarse, por tanto, mediante el uso de una reaccion de desproteccion apropiada, tal como en el caso de un grupo Boc, las condiciones de reaccion acidas, por ejemplo, con una solucion de cloruro de hidrogeno 4 M en dioxano, en un disolvente apropiado, tal como, por ejemplo, DCM y metanol, a 15 temperatura ambiente. Las sales de amonio resultantes se convierten normalmente en las aminas libres usando, por ejemplo, bases conocidas por el experto en la materia, por ejemplo, bicarbonato, bases de amina tales como base de Hunig (diisopropiletilamina), hidroxido sodico, amomaco, o eluyendo los compuestos con metanol/amomaco desde una columna Porapak™. Las condiciones adicionales para desproteger el grupo Boc, o proteger adicionalmente grupos que pueden ser adecuados para usar bloqueando la funcionalidad amino de los compuestos 20 de formula general (II), incluyendo su smtesis y desproteccion, se encuentran, por ejemplo, en T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1999, 3a Ed., o en P. Kocienski, Protecting Groups, Thieme Medical Publishers, 2000. De forma similar cuando Ry no es H, entonces Ry es un grupo protector, tal como
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por ejemplo cuando Rx y Ry forman juntos un grupo protector dclico tal como por ejemplo una ftalamida.
Adicionalmente, los compuestos de formula general (II) pueden contener una funcionalidad que por sf misma puede modificarse adicionalmente, permitiendo as^ la introduccion de la funcionalidad deseada en los grupos R1 o R2 o R3. Tales transformaciones incluyen oxidaciones, reducciones, sustituciones nucleofilas, sustituciones electrofilas, reacciones de radicales o reacciones promovidas por metales tales como reacciones de reticulacion asistidas por metales, tales como, por ejemplo, reacciones de Suzuki, Stille o Heck, o similares. Similarmente, los compuestos de formula general (I) tambien pueden modificarse de esta manera para proporcionar compuestos adicionales de acuerdo con la presente invencion, con la condicion de que las transformaciones no produzcan reacciones secundarias no deseadas en el grupo -NHR6.
Los compuestos de formula general (II) pueden prepararse a partir de un intermedio pirazolo pirimidina de formula general (III) y un acido arilboronico o ester arilboronico de formula general (IV), mediante el uso de una reaccion de acoplamiento catalizada por un metal de transicion apropiado. Por ejemplo, los compuestos de formula general (II) pueden prepararse haciendo reaccionar (III) y (IV) en un disolvente apropiado tal como, por ejemplo DMF, etanol o isopropanol, utilizando un catalizador adecuado tal como tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) [Pd(PPh3)4 opcionalmente en presencia de agua y/o 1,2-dimetoxietano a temperaturas elevadas comprendidas entre 50 °C y 150 °C. El uso de aditivos basicos tales como una amina terciaria, por ejemplo, trietilamina o diisopropilamina puede ser beneficioso.
Los compuestos de formula general (IV) bien se encuentran disponibles en el mercado, pueden prepararse usando los procedimientos descritos en los ejemplos, pueden prepararse usando procedimientos conocidos o bien pueden prepararse mediante procedimientos analogos a los conocidos por el experto en la materia.
Los compuestos de formula general (III) pueden prepararse a partir de una cetona de formula general (V) mediante el uso de una reaccion de halogenacion apropiada o mediante la reaccion con un haluro de perfluoroalquilsulfonilo o anhndrido apropiados. Por ejemplo, en el caso en el que el halogeno es Br o Cl, una reaccion de halogenacion adecuada, tal como por ejemplo haciendo reaccionar un compuesto de formula general (V) con oxibromuro de fosforo (V) u oxicloruro de fosforo (V) en un disolvente adecuado, tal como diclorometano o 1,2-dicloroetano, a temperaturas adecuadas, tales como por ejemplo de 0 °C a temperatura de reflujo, opcionalmente en presencia de cantidades catalfticas de aminas adecuadas, tales como 4-dimetilaminopiridina o N,N-dietilanilina.
Los compuestos de formula general (V) pueden prepararse a partir de un compuesto de formula general (VI), que bien esta disponible en el mercado o bien puede prepararse mediante procedimientos conocidos en la tecnica, mediante la reaccion con 2-ciano-2-fenilacetohidrazida. El ultimo compuesto esta disponible a traves del tratamiento del correspondiente ester etflico con hidrazina hidratada tal como se ha publicado recientemente [Drummond, J.T., Johnson, G., J. Heterocycl. Chem. (1998), 25, 1123-1127] calentando en acido acetico a temperaturas elevadas.
De esta manera un aspecto de la presente invencion es el procedimiento para la fabricacion de compuestos de formula general (I), caracterizado por que un compuesto de formula (III):
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en la que R1, R2 y R3 tienen el significado de acuerdo con la reivindicacion 1 y Q es halogeno, preferentemente Cl, Br o I, o sulfonato, preferentemente sulfonato de trifluorometano, sulfonato de nonafluorobutano o tosilato, se hace reaccionar con un compuesto de formula (IV)
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en la que R5, Y, X, Rx y Ry tienen el significado de acuerdo con la reivindicacion 1 y Rz es hidrogeno o alquilo inferior, o ambos RZ junto con los oxigenos y el boro forman un anillo de 5 miembros o 6 miembros, formando un compuesto de formula (II)
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que opcionalmente se desprotege posteriormente para formar un compuesto de formula general (I). Otro aspecto de la presente invention es el compuesto intermedio de formula general II
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en la que R1, R2, R3, R5, R6, X e Y tienen el significado como se define en la reivindicacion 1 y RX es R6 o un grupo protector; Ry es hidrogeno o un grupo protector, o Rx y Ry juntos, o RX e Y juntos, pueden formar un grupo protector dclico asi como su uso para la production de compuestos de formula general (I).
Para los procedimientos descritos anteriormente se prefiere que Rx sea R6 o un grupo protector y Ry sea hidrogeno o un grupo protector. En una realization de la presente invencion uno de Rx/Ry es un grupo protector y el otro es hidrogeno. Los grupos protectores especialmente preferidos son los unos los desvelados en la section experimental.
El experto en la materia sabe que, si hay una serie de centros reactivos en un compuesto de partida o intermedio, puede ser necesario bloquear uno o mas centros reactivos temporalmente mediante grupos protectores para permitir que tenga lugar una reaction espedficamente en el centro de reaction deseado. Una description detallada para el uso de un gran numero de grupos protectores demostrados se encuentra, por ejemplo, en T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1999, 3a Ed., o en P. Kocienski, Groups Protecting, Thieme Medical Publishers, 2000.
Los compuestos de acuerdo con la presente invencion se aislan y se purifican de una manera conocida en si, por ejemplo, destilando el disolvente al vado y recristalizando el residuo obtenido de un disolvente adecuado o sometiendolo a uno de los procedimientos de purification habituales, tales como cromatografia sobre un material de soporte adecuado. Ademas, la HPLC preparativa de fase inversa de los compuestos de la presente invencion que poseen una funcionalidad suficientemente basica o acida puede generar la formation de una sal, tal como, en el caso de un compuesto de la presente invencion que sea suficientemente basico, una sal de trifluoroacetato o de formiato, por ejemplo, o, en el caso de un compuesto de la presente invencion que sea suficientemente acido, por ejemplo, una sal de amonio. Las sales de este tipo pueden transformarse en su forma basica libre o acida libre, respectivamente, mediante diversos procedimientos conocidos por el experto en la materia, o pueden usarse como sales en ensayos biologicos posteriores. Adicionalmente, el procedimiento de secado durante el aislamiento de los compuestos de la presente invencion puede no eliminar completamente las trazas de los codisolventes, especialmente tales como acido formico o acido trifluoroacetico, dando solvatos o complejos de inclusion. El experto en la materia reconocera que se aceptan solvatos o complejos de inclusion para su uso en ensayos biologicos posteriores. Se ha de entender que la forma espedfica (por ejemplo, sal, base libre, solvato, complejo de inclusion) de un compuesto de la presente invencion aislado como se describe en el presente documento no es necesariamente la unica forma en la que se puede aplicar dicho compuesto a un ensayo biologico para cuantificar la actividad biologica espedfica.
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Las sales de los compuestos de formula (I) de acuerdo con la presente invencion pueden obtenerse disolviendo el compuesto libre en un disolvente adecuado (por ejemplo, una cetona tal como acetona, metiletilcetona o metilisobutilcetona, un eter tal como eter diefflico, tetrahidrofurano o dioxano, un hidrocarburo clorado tal como cloruro de metileno o cloroformo, o un alcohol alifatico de bajo peso molecular tal como metanol, etanol o isopropanol) que contenga el acido o la base deseados, o al que se anada despues el acido o la base deseados. El acido o la base pueden emplearse en la preparacion de la sal, dependiendo de si participa un acido o una base mono- o polibasicos, y dependiendo de que sal se desee, en una proporcion cuantitativa equimolar o una que difiera de la misma. Las sales se obtienen por filtracion, reprecipitacion, precipitacion con un no disolvente para la sal o por evaporacion del disolvente. Las sales obtenidas pueden convertirse en los compuestos libres que, a su vez, pueden convertirse en sales. De esta manera, las sales farmaceuticamente inaceptables, que puedan obtenerse, por ejemplo, como productos del procedimiento en la fabricacion en una escala industrial, pueden convertirse en sales farmaceuticamente aceptables mediante procedimientos conocidos por el experto en la materia.
Los diastereomeros puros y los enantiomeros puros de los compuestos y de las sales de acuerdo con la presente invencion pueden obtenerse por ejemplo mediante smtesis asimetrica, usando compuestos de partida quirales en la smtesis y separando mezclas de enantiomeros y diastereomeros obtenidas en la smtesis.
Las mezclas enantiomericas y diastereomericas pueden separarse en los enantiomeros puros y los diastereomeros puros mediante procedimientos conocidos por el experto en la materia. Preferentemente, las mezclas diastereomericas se separan por cristalizacion, en particular cristalizacion fraccional, o cromatograffa. Las mezclas enantiomericas pueden separarse, por ejemplo, formando diastereomeros con un agente auxiliar quiral, resolviendo los diastereomeros obtenidos y eliminado el agente auxiliar quiral. Como agentes auxiliares quirales, por ejemplo, pueden usarse acidos quirales para separar bases enantiomericas tales como por ejemplo acido mandelico y pueden usarse bases quirales para separar acidos enantiomericos mediante la formacion de sales diastereomericas. Adicionalmente, los derivados diastereomericos tales como los esteres diastereomericos pueden formarse a partir de mezclas enantiomericas de alcoholes o mezclas enantiomericas de acidos, respectivamente, usando acidos quirales o alcoholes quirales, respectivamente, como agentes auxiliares quirales. Adicionalmente, pueden usarse complejos diastereomericos o clatratos diastereomericos para separar mezclas enantiomericas. Alternativamente, las mezclas enantiomericas pueden separarse usando columnas de separacion quirales en cromatograffa. Otro procedimiento adecuado para el aislamiento de los enantiomeros es la separacion enzimatica.
Un aspecto preferido de la presente invencion es el procedimiento de preparacion de los compuestos de las reivindicaciones 1-5 de acuerdo con los ejemplos.
Opcionalmente, los compuestos de formula (I) pueden convertirse en sus sales u, opcionalmente, las sales de los compuestos de formula (I) pueden convertirse en los compuestos libres. Los procedimientos correspondientes son habituales para el experto en la materia.
Opcionalmente, los compuestos de formula (I) pueden convertirse en sus N-oxidos. El N-oxido tambien puede introducirse a modo de un intermedio. Los N-oxidos pueden prepararse tratando un precursor apropiado con un agente oxidante, tal como acido metacloroperbenzoico, en un disolvente apropiado, tal como diclorometano, a temperaturas adecuadas, tales como de 0 °C a 40 °C, por lo cual se prefiere generalmente la temperatura ambiente. Los procedimientos correspondientes adicionales para formar N-oxidos son habituales para el experto en la materia.
Utilidad comercial
Los compuestos de formula (I) y los estereoisomeros de los compuestos de formula (I) de acuerdo con la presente invencion se denominan en lo sucesivo los compuestos de la presente invencion. En particular, los compuestos de la presente invencion son farmaceuticamente aceptables. Los compuestos de acuerdo con la presente invencion tienen propiedades farmaceuticas valiosas, que los hacen comercialmente utilizables. En particular, inhiben la ruta de Pi3K/Akt y exhiben actividad celular. Se espera que sean comercialmente aplicables en la terapia de enfermedades (por ejemplo, enfermedades dependientes de Pi3K/Akt sobreactivada). Se entiende que una activacion anormal de la via de PI3K/AKT es una etapa esencial hacia el inicio y mantenimiento de los tumores humanos, y por tanto, se entiende que su inhibicion, por ejemplo, con inhibidores de AKT, es una aproximacion valida para el tratamiento de los tumores humanos. Para una revision reciente, vease Garcia-Echeverria y col., (Oncogene, 2008, 27, 551-5526).
Actividad celular y los terminos analogos en la presente invencion se usan como se conoce por los expertos en la materia, como un ejemplo, la inhibicion de la fosforilacion, la inhibicion de la proliferacion celular, la induccion de la apoptosis o la quimiosensibilizacion.
Quimiosensibilizacion y los terminos analogos en la presente invencion se usan como se conoce por los expertos en la materia. Estos esffmulos incluyen, por ejemplo, efectores de las rutas del receptor de muerte y de supervivencia, asf como agentes citotoxicos/quimioterapeuticos y agentes dirigidos, y finalmente, terapia de radiacion. Induccion de la apoptosis y los terminos analogos de acuerdo con la presente invencion se usan para identificar un compuesto que ejecute la muerte celular programada en celulas puestas en contacto con ese compuesto o en combinacion con otros compuestos usados habitualmente en terapia.
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Apoptosis en la presente invencion se usa como se conoce por los expertos en la materia. La induccion de la apoptosis en celulas puestas en contacto con el compuesto de la presente invencion puede no acoplarse necesariamente a la inhibicion de la proliferacion celular. Preferentemente, la inhibicion de la proliferacion y/o la induccion de la apoptosis son espedficas de las celulas con crecimiento celular aberrante.
Adicionalmente, los compuestos de acuerdo con la presente invencion inhiben la actividad de las protemas quinasa en celulas y tejidos, provocando un desplazamiento hacia protemas de sustrato desfosforiladas y como consecuencia funcional, por ejemplo, la induccion de la apoptosis, la detencion del ciclo celular y/o la sensibilizacion frente a farmacos contra el cancer quimioterapeuticos y espedficos de la diana. En una realizacion preferida, la inhibicion de la ruta de Pi3K/Akt induce efectos celulares como se ha mencionado en el presente documento, sola o en combinacion con farmacos citotoxicos o contra el cancer dirigidos convencionales.
Ademas se descubrio que la inhibicion de la ruta de senalizacion de AKT inhibe la neovascularizacion retiniana en el modelo de retinopatfa inducida por oxfgeno asf como se demostro un posible uso terapeutico de una inhibicion de AKT en la neovascularizacion coroidea (Wang y col., Acta Histochem. Cytochem. 44(2): 103-111, 2011; Yang y col., Investigative Ophthalmology & Visual Science (IOVS), abril de 2009, vol. 50, n.° 4). Estos resultados dan lugar a la conclusion de que la inhibicion de AKT podna proporcionar tratamiento util de las enfermedades oculares asociadas a la neovascularizacion ocular, como, por ejemplo, AMD, MD y retinopatfa diabetica. Por lo tanto, una realizacion de la presente invencion incluye compuestos para su uso en el tratamiento de enfermedades oculares asociadas a la neovascularizacion ocular, especialmente, AMD, MD y retinopatfa diabetica que comprende administrar un compuesto de formula general (I), asf como el uso de aquellos compuestos para el tratamiento de dichas enfermedades.
Los compuestos de acuerdo con la presente invencion presentan propiedades antiproliferativas y/o proapoptoticas y/o quimiosensibilizantes. En consecuencia, los compuestos de la presente invencion son utiles para el tratamiento de trastornos hiperproliferativos, en particular del cancer. Por lo tanto los compuestos de la presente invencion son utiles para inducir un efecto antiproliferativo y/o proapoptotico y/o quimiosensibilizante en mairnferos, tales como seres humanos, que padecen trastornos hiperproliferativos, como el cancer.
La presente invencion se refiere ademas a un compuesto de acuerdo con la presente invencion o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento y/o la profilaxis, preferentemente el tratamiento de enfermedades y/o trastornos (hiper)proliferativos que responden a la induccion de la apoptosis, que incluyen neoplasia benigna y neoplasia maligna, especialmente neoplasia maligna, incluyendo cancer y los tipos de tumor que se desvelan mas adelante.
Los compuestos de acuerdo con la presente invencion exhiben propiedades antiproliferativas y/o pro-apoptoticas en mamfferos tales como seres humanos debido a la inhibicion de la actividad metabolica de celulas cancerosas que son capaces de sobrevivir a pesar de condiciones de crecimiento desfavorables tales como el agotamiento de la glucosa, la hipoxia u otros estreses qmmicos.
De esta manera, los compuestos de acuerdo con la presente invencion son utiles para tratar, aliviar o prevenir enfermedades de comportamiento benigno o maligno como se describe en el presente documento, tal como por ejemplo para inhibir la neoplasia celular.
Neoplasia en la presente invencion se usa como se conoce por los expertos en la materia. Una neoplasia benigna se describe por hiperproliferacion de celulas, incapaces de formar un tumor metastatizante agresivo in vivo. Por el contrario, una neoplasia maligna se describe por celulas con multiples anomalfas celulares y bioqmmicas, capaces de formar una enfermedad sistemica, por ejemplo, de formar metastasis de tumores en organos distantes.
Los compuestos de acuerdo con la presente invencion pueden usarse preferentemente para el tratamiento de la neoplasia maligna. Los ejemplos de neoplasia maligna que se pueden tratar con los compuestos de acuerdo con la presente invencion incluyen tumores solidos y hematologicos. Los tumores solidos pueden ejemplificarse por tumores de mama, vejiga, huesos, cerebro, sistema nervioso central y periferico, colon, glandulas endocrinas (por ejemplo, tiroides y corteza suprarrenal), esofago, endometrio, celulas germinales, cabeza y cuello, rinon, tugado, pulmon, laringe e hipofaringe, mesotelioma, ovario, pancreas, prostata, recto, renal, intestino delgado, tejido blando, testfculo, estomago, piel, ureter, vagina y vulva. Las neoplasias malignas incluyen canceres heredados ejemplificados por el retinoblastoma y el tumor de Wilms. Ademas, las neoplasias malignas incluyen tumores primarios en dichos organos y tumores secundarios correspondientes en organos distantes ("metastasis tumorales"). Los tumores hematologicos pueden ilustrarse por formas agresivas e indolentes de leucemia y linfoma, concretamente, enfermedad no de Hodgkin, leucemia mieloide cronica y aguda (LMC/LMA), leucemia linfoblastica aguda (LLA), enfermedad de Hodgkin, mieloma multiple y linfoma de linfocitos T. Tambien se incluyen smdrome mielodisplasico, neoplasia de celulas plasmaticas, smdromes paraneoplasicos, y canceres de sitio primario desconocido, asf como tumores malignos relacionados con el SIDA.
La presente invencion incluye ademas como una realizacion preferida, compuestos de formula general (I) para su uso en el tratamiento del melanoma, NSCLC, cancer de cerebro, mama y prostata, mas preferentemente cancer de mama, que comprende administrar un compuesto de formula general (I). Otro aspecto de la presente invencion es el
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uso de los compuestos de la presente invencion para el tratamiento del melanoma para el que los datos a la vista de la publicacion de O'Reilly y col. (Clin. Cancer Research, 15, 2009, 2872) dan una base.
Notese que una neoplasia maligna no requiere necesariamente la formacion de metastasis en organos distantes. Ciertos tumores ejercen efectos devastadores sobre el propio organo primario por sus propiedades agresivas de crecimiento. Estas pueden dar lugar a la destruccion del tejido y la estructura del organo dando como resultado finalmente el fallo de la funcion del organo asignada y la muerte.
La resistencia a los farmacos es de particular importancia para el fallo frecuente de los tratamientos convencionales contra el cancer. Esta resistencia a los farmacos esta provocada por diversos mecanismos celulares y moleculares. Un aspecto de la resistencia a los farmacos esta provocado por la activacion constitutiva de senales de supervivencia antiapoptoticas con PKB/Akt como una quinasa senalizadora clave. La inhibicion de la ruta de Pi3K/Akt da lugar a una resensibilizacion frente a agentes quimioterapeuticos convencionales o agentes terapeuticos contra el cancer espedficos de la diana. Como consecuencia, la aplicabilidad comercial de los compuestos de acuerdo con la presente invencion no se limita al tratamiento de primera lmea de los pacientes con cancer. En una realizacion preferida, los pacientes con cancer con resistencia a farmacos quimioterapeuticos o a farmacos terapeuticos contra el cancer espedficos de la diana tambien son susceptibles del tratamiento con estos compuestos para, por ejemplo, ciclos de tratamiento de segunda o tercera lmea. En particular, los compuestos de acuerdo con la presente invencion pueden usarse en combinacion con farmacos convencionales quimioterapeuticos o dirigidos para resensibilizar los tumores frente a estos agentes.
Los compuestos de acuerdo con la presente invencion son adecuados para el tratamiento, la prevencion o el alivio de las enfermedades de comportamiento benigno y maligno descritas anteriormente, tales como, por ejemplo, neoplasia benigna o maligna, en particular, cancer, especialmente un cancer que sea sensible a la inhibicion de la via de Pi3K/Akt.
La presente invencion incluye ademas los compuestos de la presente invencion para usar en el tratamiento, la prevencion o el alivio de mairnferos, incluyendo seres humanos, preferentemente en el tratamiento de mairnferos, incluyendo seres humanos, que padecen una de las afecciones, dolencias, trastornos o enfermedades mencionadas anteriormente. El uso se caracteriza por que se administra una cantidad farmacologicamente activa y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion al sujeto con necesidad de tal tratamiento.
La presente invencion incluye ademas los compuestos de la presente invencion para usar en el tratamiento, la prevencion o el alivio de enfermedades que respondan a la inhibicion de la ruta de Pi3K/Akt, en un mairnfero, incluyendo un ser humano, preferentemente en el tratamiento de enfermedades que responden a la inhibicion de la ruta de Pi3K/Akt, en un mairnfero, incluyendo un ser humano, que comprende administrar una cantidad farmacologicamente activa y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion a dicho mairnfero.
La presente invencion incluye ademas los compuestos de la presente invencion para usar en la inhibicion de la actividad de las protemas quinasas en celulas que comprende administrar una cantidad farmacologicamente activa, y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion a un paciente con necesidad de tal terapia.
La presente invencion incluye ademas los compuestos de la presente invencion para su uso en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas de comportamiento benigno o maligno y/o trastornos que responden a la induccion de la apoptosis, tales como, por ejemplo, cancer, particularmente cualquiera de aquellas enfermedades cancerosas descritas anteriormente, en un mairnfero, que comprende administrar una cantidad farmacologicamente activa y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion a dicho mairnfero.
La presente invencion incluye ademas los compuestos de la presente invencion para usar en la inhibicion de la hiperproliferacion celular o la detencion del crecimiento celular aberrante en un mairnfero, que comprende administrar una cantidad farmacologicamente activa y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion a dicho mairnfero.
La presente invencion incluye ademas los compuestos de la presente invencion para usar en la induccion de la apoptosis en la terapia de la neoplasia benigna o maligna, particularmente cancer, que comprende administrar una cantidad farmacologicamente activa y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion a un individuo con necesidad de tal terapia.
La presente invencion incluye ademas los compuestos de la presente invencion para usar en la inhibicion de la actividad de las protemas quinasas en celulas, que comprende administrar una cantidad farmacologicamente activa y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion a un individuo con necesidad de tal terapia.
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La presente invencion incluye ademas los compuestos de la presente invencion para usar en la sensibilizacion frente a sustancias quimioterapeuticas o agentes contra el cancer espedficos de la diana en un mamnfero, que comprende administrar una cantidad farmacologicamente activa y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion a dicho mairnfero.
La presente invencion incluye ademas compuestos de la presente invencion para su uso en el tratamiento de la neoplasia benigna y/o maligna, especialmente de la neoplasia maligna, particularmente cancer, en un mamffero, incluyendo un ser humano, que comprende administrar una cantidad farmacologicamente activa y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion a dicho mamnfero.
La presente invencion incluye ademas compuestos de la presente invencion para su uso en el tratamiento de tumores solidos y hematologicos, por lo cual los tumores solidos pueden ejemplificarse por tumores de mama, vejiga, huesos, cerebro, sistema nervioso central y periferico, colon, glandulas endocrinas (por ejemplo, tiroides y corteza adrenal), esofago, endometrio, celulas germinales, cabeza y cuello, rinon, hugado, pulmon, laringe e hipofaringe, mesotelioma, ovario, pancreas, prostata, recto, renal, intestino delgado, tejido blando, testmulo, estomago, piel, ureter, vagina y vulva. Las neoplasias malignas incluyen canceres heredados ilustrados por retinoblastoma y tumor de Wilms. Ademas, las neoplasias malignas incluyen tumores primarios en dichos organos y los correspondientes tumores secundarios en organos distantes ("metastasis tumorales") y los tumores hematologicos pueden ejemplificarse por formas agresivas e indolentes de leucemia y linfoma, concretamente, enfermedad no de Hodgkin, leucemia mieloide cronica y aguda (LMC/LMA), leucemia linfoblastica aguda (LLA), enfermedad de Hodgkin, mieloma multiple y linfoma de linfocitos T. Tambien se incluyen smdrome mielodisplasico, neoplasia de celulas plasmaticas, smdromes paraneoplasicos y canceres de sitio primario desconocido, asf como tumores malignos relacionados con el SIDA.
La presente invencion se refiere ademas al uso de los compuestos para la produccion de composiciones farmaceuticas, que se emplean para el tratamiento, la profilaxis y/o el alivio de una o mas de las enfermedades mencionadas, preferentemente para el tratamiento de una o mas de las enfermedades mencionadas.
La presente invencion se refiere ademas al uso de los compuestos para la fabricacion de composiciones farmaceuticas para tratar, prevenir o aliviar, preferentemente para tratar enfermedades hiperproliferativas y/o trastornos que responden a la induccion de la apoptosis, tales como, por ejemplo, neoplasias benignas o malignas, especialmente neoplasias malignas, en particular cancer, especialmente aquellas enfermedades cancerosas y los tipos de tumores mencionados anteriormente.
La presente invencion se refiere ademas al uso de los compuestos de acuerdo con la presente invencion para la produccion de composiciones farmaceuticas para tratar, prevenir o aliviar, preferentemente para tratar neoplasias benignas o malignas, especialmente neoplasias malignas, particularmente canceres tales como por ejemplo, cualquiera de las enfermedades cancerosas y los tipos de tumores descritos anteriormente.
La presente invencion se refiere ademas a un compuesto de acuerdo con la presente invencion o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento y/o la profilaxis, preferentemente el tratamiento de enfermedades y/o trastornos (hnper)proliferativos que responden a la induccion de la apoptosis, que incluyen neoplasias benignas y neoplasias malignas, incluyendo cancer.
La presente invencion se refiere ademas al uso de un compuesto de acuerdo con la presente invencion o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la produccion de una composicion farmaceutica para el tratamiento, la prevencion o la mejora de una enfermedad mediada por una funcion mal regulada de una sola protema quinasa o multiples protema quinasas y/o trastornos que responden a la induccion de la apoptosis.
La presente invencion se refiere ademas a una composicion farmaceutica, que comprende un compuesto de acuerdo con la presente invencion o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento y/o la profilaxis, preferentemente para el tratamiento de enfermedades y/o trastornos (Idper)proliferativos que responden a la induccion de la apoptosis, que incluyen neoplasias benignas y neoplasias malignas, incluyendo cancer.
La presente invencion se refiere ademas al uso de compuestos y sales farmaceuticamente aceptables de acuerdo con la presente invencion para la fabricacion de composiciones farmaceuticas, que pueden usarse para sensibilizar frente a sustancias quimioterapeuticas y/o agentes contra el cancer espedficos de la diana.
La presente invencion se refiere ademas al uso de compuestos de acuerdo con la presente invencion para la fabricacion de composiciones farmaceuticas, que pueden usarse para sensibilizar frente a la radioterapia de aquellas enfermedades mencionadas en el presente documento, particularmente del cancer.
La presente invencion se refiere ademas al uso de los compuestos de acuerdo con la presente invencion para la fabricacion de composiciones farmaceuticas, que pueden usarse en el tratamiento de enfermedades sensibles a la terapia con inhibidores de las protemas quinasas y diferentes de las neoplasias celulares. Estas enfermedades no malignas incluyen, pero sin limitacion, hiperplasia de prostata benigna, neurofibromatosis, dermatosis y smdromes mielodisplasicos.
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La presente invencion se refiere ademas a composiciones farmaceuticas que comprenden uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion y un vehnculo o diluyente farmaceuticamente aceptable.
La presente invencion se refiere ademas a composiciones farmaceuticas que comprenden uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion y sustancias auxiliares y/o excipientes farmaceuticamente aceptables.
Las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la presente invencion se preparan mediante procedimientos, que se conocen de por sf y son familiares para el experto en la materia. Como composiciones farmaceuticas, los compuestos de la presente invencion (= compuestos activos) bien se emplean como tales, o preferentemente en combinacion con sustancias auxiliares farmaceuticas aceptables y/o excipientes, por ejemplo, en forma de comprimidos, comprimidos recubiertos, grageas, pfldoras, obleas, granulos, capsulas, comprimidos encapsulados, supositorios, parches (por ejemplo, como TTS), emulsiones (tales como por ejemplo microemulsiones o emulsiones de lfpidos), suspensiones (tales como por ejemplo nanosuspensiones), geles, solubilizados o soluciones (por ejemplo soluciones esteriles), o encapsulados en liposomas o como complejos de inclusion de betaciclodextrina o de derivados de betaciclodextrina, estando el contenido de compuesto activo ventajosamente entre el 0,1 y el 95 %, y en los que, mediante la eleccion apropiada de las sustancias auxiliares y/o excipientes, puede lograrse una forma de administracion farmaceutica (por ejemplo, una forma de liberacion retrasada o una forma enterica) perfectamente adecuada para el compuesto activo y/o para el comienzo deseado de la accion.
El experto en la materia esta familiarizado con las sustancias auxiliares, los vehnculos, los excipientes, los diluyentes, los vetnculos o los adyuvantes que son adecuados para las formulaciones, las preparaciones o las composiciones farmaceuticas deseadas, debido a su conocimiento experto. Ademas de disolventes, pueden usarse formadores de gel, bases de pomadas y otros excipientes de compuestos activos, por ejemplo, antioxidantes, dispersantes, emulsionantes, conservantes, solubilizantes (tales como, por ejemplo, polioxietilengliceroltriricinoleato 35, PEG 400, Tween 80, Captisol, Solutol HS15), colorantes, agentes complejantes, potenciadores de la permeacion, estabilizantes, cargas, aglutinantes, espesantes, agentes disgregantes, tampones, reguladores del pH (por ejemplo, para obtener formulaciones neutras, alcalinas o acidas), polfmeros, lubricantes, agentes de recubrimiento, propulsores, agentes de ajuste de la tonicidad, tensioactivos, aromatizantes, edulcorantes o colorantes.
En particular, se usan sustancias auxiliares y/o excipientes de un tipo apropiado para la formulacion deseada y el modo de administracion deseado.
La administracion de los compuestos, de las composiciones farmaceuticas o de las combinaciones de acuerdo con la presente invencion puede realizarse en cualquiera de los modos de administracion generalmente aceptados disponibles en la tecnica. Los ejemplos ilustrativos de modos de administracion adecuados incluyen la administracion intravenosa, oral, nasal, parenteral, topica, transdermica y rectal. Se prefieren las administraciones oral e intravenosa.
Generalmente, las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la presente invencion pueden administrarse de tal manera que la dosis del compuesto activo este en el intervalo habitual para los inhibidores de la via de Pi3K/Akt. En particular, se prefiere una dosis en el intervalo de 0,01 a 4000 mg del compuesto activo al dfa para un paciente adulto medio con un peso corporal de 70 kg. En este sentido, cabe senalar que la dosis depende, por ejemplo, del compuesto espedfico usado, de la especie tratada, de la edad, del peso corporal, del estado de salud general, del genero y de la dieta del sujeto tratado, del modo y de la duracion de la administracion, de la velocidad de excrecion, de la gravedad de la enfermedad a tratarse y de la combinacion de farmacos.
La composicion farmaceutica puede administrarse en una sola dosis al dfa o en multiples subdosis, por ejemplo, de 2 a 4 dosis al dfa. Una sola dosis unitaria de la composicion farmaceutica puede contener por ejemplo de 0,01 mg a 4000 mg, preferentemente de 0,1 mg a 2000 mg, mas preferentemente de 0,5 a 1500 mg, lo mas preferentemente de 1 a 500 mg, del compuesto activo. Adicionalmente, la composicion farmaceutica puede adaptarse a la administracion semanal, mensual o incluso menos frecuente, por ejemplo, usando un implante, por ejemplo, un implante subcutaneo o intramuscular, usando el compuesto activo en forma de una sal escasamente soluble o usando el compuesto activo acoplado a un polfmero.
La presente invencion se refiere ademas a combinaciones que comprenden uno o mas primeros principios activos seleccionados de los compuestos de la presente invencion y uno o mas segundos principios activos seleccionados de agentes contra el cancer quimioterapeuticos y agentes contra el cancer espedficos de la diana, por ejemplo, para tratar, prevenir o aliviar enfermedades que responden o que son sensibles a la inhibicion de la via de Pi3K/Akt, tales como enfermedades hiperproliferativas de comportamiento benigno o maligno y/o trastornos que responden a la induccion de la apoptosis, en particular, del cancer, tales como por ejemplo cualquiera de las enfermedades cancerosas descritas anteriormente.
La presente invencion se refiere ademas al uso de una composicion farmaceutica que comprende uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion como unico principio o principios activos y un vehnculo o diluyente farmaceuticamente aceptable, en la fabricacion de productos farmaceuticos para el tratamiento y/o la profilaxis de las enfermedades mencionadas anteriormente.
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Dependiendo de la enfermedad en particular que vaya a tratarse o prevenirse, pueden coadministrarse opcionalmente con los compuestos de acuerdo con la presente invencion agentes activos terapeuticos adicionales, que normalmente se administran para tratar o prevenir esa enfermedad. Como se usa en el presente documento, los agentes terapeuticos adicionales que se administran normalmente para tratar o prevenir una enfermedad en particular se sabe que son apropiados para la enfermedad que se esta tratando.
Los agentes contra el cancer mencionados anteriormente en el presente documento como parejas de combinacion de los compuestos de acuerdo con la presente invencion incluyen derivados farmaceuticamente aceptables de los mismos, tales como por ejemplo sus sales farmaceuticamente aceptables.
El experto en la materia conoce la dosificacion o dosificaciones diarias totales y la forma o formas de administracion del agente o agentes terapeuticos adicionales coadministrados. Dicha dosificacion o dosificaciones totales diarias pueden variar dentro de un amplio intervalo dependiendo del agente combinado.
En la practica de la presente invencion, los compuestos de acuerdo con la presente invencion pueden administrarse en terapia de combinacion separada, secuencial, simultanea, concurrente o cronologicamente escalonados (tal como por ejemplo como formas de dosificacion unitarias combinadas, como formas de dosificacion unitarias separadas, como formas de dosificacion unitarias diferenciadas adyacentes, como combinaciones fijas o no fijas, como kit de partes o como mezclas) con uno o mas agentes terapeuticos convencionales (agentes quimioterapeuticos y/o agentes contra el cancer espedficos de la diana), en particular, agentes contra el cancer conocidos en la tecnica, tales como cualquiera de por ejemplo aquellos mencionados anteriormente.
En este contexto, la presente invencion se refiere ademas a una combinacion que comprende un primer principio activo, que es al menos un compuesto de acuerdo con la presente invencion, y un segundo principio activo, que es al menos un agente contra el cancer conocido en la tecnica tal como por ejemplo uno o mas de aquellos mencionados anteriormente en el presente documento, para su uso por separado, secuencial, simultaneo, concurrente o cronologicamente escalonado en terapia, tal como, por ejemplo, en terapia de cualquiera de esas enfermedades mencionadas en el presente documento.
La presente invencion se refiere ademas a una composicion farmaceutica que comprende un primer principio activo, que es al menos un compuesto de acuerdo con la presente invencion, y un segundo principio activo, que es al menos un agente contra el cancer conocido en la tecnica, tal como, por ejemplo, uno o mas de los mencionados anteriormente en el presente documento, y, opcionalmente, un vetnculo o diluyente farmaceuticamente aceptables, para su uso por separado, secuencial, simultaneo, concurrente o cronologicamente escalonado en terapia.
La presente invencion se refiere ademas a un producto de combinacion que comprende:
a. ) al menos un compuesto de acuerdo con la presente invencion formulado con un vehnculo o diluyente farmaceuticamente aceptables, y
b. ) al menos un agente contra el cancer conocido en la tecnica tal como por ejemplo uno o mas de los mencionados anteriormente en el presente documento, formulado con un vetnculo o diluyente farmaceuticamente aceptables.
La presente invencion se refiere ademas a un kit de partes que comprende una preparacion de un primer principio activo, que es un compuesto de acuerdo con la presente invencion, y un vetnculo o diluyente farmaceuticamente aceptables; una preparacion de un segundo principio activo, que es un agente contra el cancer conocido en la tecnica, tal como uno de aquellos mencionados anteriormente, y un vetnculo o diluyente farmaceuticamente aceptable; para su uso simultaneo, concurrente, secuencial, separado o cronologicamente escalonado en terapia. Opcionalmente, dicho kit comprende instrucciones para su uso en terapia, por ejemplo, para tratar enfermedades hiperproliferativas y enfermedades que responden o que son sensibles a la inhibicion de la ruta de Pi3K/Akt, tales como, por ejemplo, neoplasia benigna o maligna, particularmente cancer, mas exactamente, cualquiera de aquellas enfermedades cancerosas descritas anteriormente.
La presente invencion se refiere ademas a una preparacion combinada que comprende al menos un compuesto de acuerdo con la presente invencion y al menos un agente contra el cancer conocido en la tecnica para la administracion simultanea, concurrente, secuencial o separada.
La presente invencion se refiere ademas a combinaciones, composiciones, formulaciones, preparados o kits de acuerdo con la presente invencion que tienen actividad inhibidora de la ruta de Pi3K/Akt.
Ademas, la presente descripcion se refiere ademas a los compuestos de la presente invencion para su uso en el tratamiento en terapia de combinacion de enfermedades hiperproliferativas y/o trastornos que responden a la induccion de la apoptosis, tales como por ejemplo, cancer, en un paciente que comprende administrar una combinacion, una composicion, una formulacion, un preparado o un kit como se describe en el presente documento a dicho paciente con necesidad del mismo.
Ademas, la presente invencion se refiere adicionalmente a los compuestos de la presente invencion para su uso en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas de comportamiento benigno o maligno y/o trastornos que
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responden a la induccion de la apoptosis, tales como, por ejemplo, cancer, en un paciente, que comprende administrar en terapia de combinacion separada, simultanea, concurrente, secuencial o cronologicamente escalonada, una cantidad farmaceuticamente activa, y terapeuticamente eficaz y tolerable de una composicion farmaceutica, que comprende un compuesto de acuerdo con la presente invencion y un veldculo o diluyente farmaceuticamente aceptable, y una cantidad farmaceuticamente activa, y terapeuticamente eficaz y tolerable de uno o mas agentes contra el cancer conocidos en la tecnica, tales como, por ejemplo, uno o mas de los mencionados en el presente documento, a dicho paciente en necesidad de los mismos.
Aun mas, la presente invencion se refiere a los compuestos de la presente invencion para usar en el tratamiento, la prevencion o el alivio de enfermedades hiperproliferativas y/o trastornos que responden a la induccion de la apoptosis, tales como, por ejemplo, neoplasias benignas o malignas, por ejemplo, cancer, en particular, cualquiera de las enfermedades cancerosas mencionadas en el presente documento, en un paciente, que comprende administrar separada, simultanea, concurrente, secuencial o cronologicamente escalonada, a dicho paciente en necesidad de los mismos, una cantidad de un primer compuesto activo, que es un compuesto de acuerdo con la presente invencion, y una cantidad de al menos un segundo compuesto activo, siendo al menos dicho segundo compuesto activo un agente terapeutico convencional, en particular, al menos un agente contra el cancer conocido en la tecnica, tal como, por ejemplo, uno o mas de los agentes quimioterapeuticos y agentes contra el cancer espedficos de la diana mencionados en el presente documento, en el que las cantidades del primer compuesto activo y de dicho segundo compuesto activo producen un efecto terapeutico.
Todavfa mas adicionalmente, la presente invencion se refiere a los compuestos de la presente invencion para usar en el tratamiento, la prevencion o la mejora, especialmente el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas y/o trastornos que responden a la induccion de la apoptosis, tales como, por ejemplo, neoplasias benignas o malignas, especialmente neoplasias malignas, por ejemplo, cancer, en particular, cualquiera de las enfermedades cancerosas y tipos de tumores mencionados en el presente documento, en un paciente que comprende administrar una combinacion de acuerdo con la presente invencion.
Ademas, la presente descripcion se refiere ademas al uso de una composicion, una combinacion, una formulacion, una preparacion o un kit de acuerdo con la presente invencion en la fabricacion de un producto farmaceutico tal como, por ejemplo, un envase comercial o un medicamento, para tratar, prevenir o mejorar, especialmente para tratar enfermedades hiperproliferativas y/o trastornos que responden a la induccion de la apoptosis, tales como, por ejemplo, neoplasias malignas o benignas, especialmente neoplasias malignas tales como, por ejemplo, cancer, en particular, las enfermedades y los tipos de tumores mencionados en el presente documento.
La presente invencion se refiere ademas a un envase comercial que comprende uno o mas compuestos de la presente invencion junto con instrucciones para su uso simultaneo, concurrente, secuencial o separado con uno o mas agentes quimioterapeuticos y/o agentes contra el cancer espedficos de la diana, tales como por ejemplo cualquiera de los mencionados en el presente documento.
La presente invencion se refiere ademas a un envase comercial que consiste esencialmente en uno o mas compuestos de la presente invencion como unico principio activo junto con instrucciones para su uso simultaneo, concurrente, secuencial o separado con uno o mas agentes quimioterapeuticos y/o agentes contra el cancer espedficos de la diana, tales como por ejemplo cualquiera de los mencionados en el presente documento.
La presente invencion se refiere ademas a un envase comercial que comprende uno o mas agentes quimioterapeuticos y/o agentes contra el cancer espedficos de la diana tales como, por ejemplo, cualquiera de los mencionados en el presente documento, junto con instrucciones para su uso simultaneo, concurrente, secuencial o separado con uno o mas compuestos de acuerdo con la presente invencion.
Las composiciones, combinaciones, preparaciones, formulaciones, kits o envases mencionados en el contexto de la terapia de combinacion de acuerdo con la presente invencion tambien pueden incluir mas de uno de los compuestos de acuerdo con la presente invencion y/o mas de uno de los agentes contra el cancer conocidos en la tecnica mencionados.
El primer y segundo principios activos de una combinacion o kit de partes de acuerdo con la presente invencion pueden proporcionarse como formulaciones separadas (es decir, independientemente entre sf), que se unen posteriormente para su uso simultaneo, concurrente, secuencial, separado o cronologicamente escalonado en terapia de combinacion; o se envasan y se presentan juntos como componentes separados de un envase de combinacion para su uso simultaneo, concurrente, secuencial, separado o cronologicamente escalonado en terapia de combinacion.
El tipo de formulacion farmaceutica del primer y segundo principios activos de una combinacion o kit de partes de acuerdo con la presente invencion puede ser coincidente, es decir, ambos principios activos se formulan en comprimidos o capsulas separados, o pueden ser diferentes, es decir, adecuados para diferentes formas de administracion, tales como, por ejemplo, un principio activo se formula en forma de comprimido o capsula y el otro se formula, por ejemplo, para la administracion intravenosa.
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La cantidades del primer y segundo principio activo de las combinaciones, composiciones o kits de acuerdo con la presente invencion pueden comprender conjuntamente una cantidad terapeuticamente eficaz para el tratamiento, la profilaxis o el alivio de una enfermedad hiperproliferativa y/o un trastorno que responde a la induccion de la apoptosis, en particular, una de aquellas enfermedades mencionadas en el presente documento, tales como, por ejemplo, neoplasia maligna o benigna, especialmente, neoplasia maligna, por ejemplo, cancer, como cualquiera de las enfermedades cancerosas y tipos de tumores mencionados en el presente documento.
Ademas, los compuestos de acuerdo con la presente invencion pueden usarse en el tratamiento pre- o post- quirurgico del cancer.
Adicionalmente, los compuestos de la presente invencion pueden usarse en combinacion con la radioterapia.
Los siguientes ejemplos ilustran la presente invencion con mayor detalle. Pueden prepararse de manera analoga compuestos adicionales de acuerdo con la presente invencion, cuya preparacion no se describe de manera expffcita.
Los compuestos, que se mencionan en los ejemplos y las sales de los mismos representan realizaciones preferidas de la presente invencion asf como una reivindicacion que cubre todas las subcombinaciones de los restos del compuesto de formula (I) como se desvela mediante los ejemplos espedficos.
La expresion "de acuerdo con", dentro de la seccion experimental, se usa en el sentido de que el procedimiento al que hace referencia tiene que usarse "analogamente a".
Parte experimental
La siguiente tabla enumera las abreviaturas usadas en el presente parrafo y en la seccion de Ejemplos Intermedios y de Ejemplos, siempre que no se expliquen dentro del cuerpo del texto. En el primer numero de cada volumen del Journal of Organic Chemistry se presenta una lista exhaustiva de las abreviaturas utilizadas por los qmmicos organicos expertos en la materia; esta lista normalmente se presenta en una tabla titulada Lista convencional de abreviaturas. Las abreviaturas contenidas en la misma y todas las abreviaturas utilizadas por los qmmicos organicos expertos en la materia se incorporan en el presente documento por referencia. Las formas de los picos de RMN se indican como aparecen en los espectros; no se han considerado los posibles efectos de orden superior.
Abreviatura
Significado
Boc
terc-Butoxicarbonilo
a
ancho
IQ
ionizacion qmmica
d
doblete
dd
doblete de doblete
DAD
detector de diodos en serie
DCM
diclorometano
EtOAc
acetato de etilo
eq
equivalente
IEN
ionizacion por electronebulizacion (EN)
HPLC
cromatograffa de ffquidos de alta resolucion
EMCL
espectrometna de masas - cromatograffa de ffquidos
m
multiplete
EM
espectrometna de masas
RMN
espectroscopfa de resonancia magnetica nuclear
c
cuartete
ta o t.a.
temperatura ambiente
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tiempo de retencion
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singlete
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triplete
THF
tetrahidrofurano
UPLC
cromatograffa de ffquidos de ultra resolucion
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Otras abreviaturas tienen los significados habituales en sf para el experto. Los diversos aspectos de la presente invencion descritos en la presente solicitud se ilustran mediante los siguientes ejemplos.
Ejemplos
Procedimientos convencionales de EM-UPLC
A menos que se indique lo contrario, la EM-UPLC analttica se realizo usando el Procedimiento 1 de EM-UPLC. Las masas (m/z) se informan a partir de la ionizacion de electronebulizacion en modo positivo salvo que se indique el modo negativo (EN-). La pureza se presenta como el % de area del pico del producto en comparacion con el area total medida con el detector UV, a menos que se indique lo contrario.
Procedimiento 1 de EM-UPLC Instrumento: Waters Acquity EM-UPLC SQD 3001; columna: Acquity UPLC BEH 18 C, 1,7; 50 x 2,1 mm; eluyente A: agua + acido formico al 0,1 %; eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-1,6 min. B al 199 %, 1,6-2,0 min. B al 99 %; caudal = 0,8 ml/min.; temperatura: 60 °C; inyeccion: 2 pl; barrido DAD = 210-400 nm; ELSD.
Procedimiento 2 de EM-UPLC
Instrumento: Waters Acquity EM-UPLC SQD 3001; columna: Acquity UPLC BEH 18 C, 1,7; 50 x 2,1 mm; eluyente A: agua + amomaco al 0,2 %; eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-1,6 min. B al 1-99 %, 1,6-2,0 min. B al 99 %; caudal = 0,8 ml/min.; temperatura: 60 °C; inyeccion: 2 pl; barrido DAD = 210-400 nm; ELSD.
Procedimiento 3 de EM-UPLC
Instrumento: Waters Acquity EM-UPLC SQD 3001; columna: Acquity UPLC BEH 18 C, 1,7; 50 x 2,1 mm; eluyente A: agua + amomaco al 0,1 %; eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-1,6 min. B al 1-99 %, 1,6-2,0 min. B al 99 %; caudal = 0,8 ml/min.; temperatura: 60 °C; inyeccion: 2 pl; barrido DAD = 210-400 nm; ELSD.
Procedimiento 4 de EM-UPLC
Instrumento: Waters Acquity EM-UPLC SQD 3001; columna: Acquity UPLC BEH 18 C, 1,7; 50 x 2,1 mm; eluyente A: agua + amomaco al 0,2 %; eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-1,6 min. B al 1-99 %, 1,6-2,0 min. B al 99 %; caudal = 0,8 ml/min.; temperatura: 60 °C; inyeccion: 2 pl; barrido DAD = 210-400 nm; ELSD.
Ejemplos intermedios
Ejemplo intermedio Int-1:
{1-[4-(5,7-dimetil-3-fenilpirazolo[1,5a]pirimidin-2-il)fenil]ciclobutil}carbamato de terc-butilo
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Etapa 1: 2-Ciano-2-fenilacetohidrazida [Int-1A]
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El compuesto del tftulo esta disponible a traves del tratamiento del correspondiente ester etflico con hidrato de hidrazina como se ha publicado recientemente [Drummond, J.T., Johnson, G., J. Heterocycl. Chem. (1998), 25, 1123-1127].
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Se disolvieron 2-ciano-2-fenilacetohidrazida [Int-1A] (3,27 g, 18,3 mmol, 1,0 eq) y pentan-2,4-diona (1,89 ml, 18,3 mmol, 1,0 eq) en 59 ml de acido addico y se agito durante 3 h a 60 °C. La suspension amarilla resultante se enfrio a t.a. y el precipitado se aislo por filtracion. El solido se lavo con hexano y se seco para dar 1,20 g (27 % de rendimiento) del compuesto del tftulo.
UPLC-MS (Procedimiento 3): TR = 1,12 min; m/z = 240 (ES+: M+H)+.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 [ppm] = 2,59 (d, 3H), 6,77 (d, 1H), 7,12 (m, 1H), 7,36 (t, 2H), 8,22 (m, 2H), 11,56 (s a, 1H), (3H cubiertos por la senal del disolvente).
Etapa 3: Trifluorometansulfonato de 5,7-dimetil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ilo
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A una mezcla de 5,7-dimetil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ol (1,20 g, 5,02 mmol, 1,0 eq) en 32 ml de DCM se anadio trietilamina (1,05 ml, 7,52 mmol, 1,5 eq). La mezcla de reaccion se enfrio a 0 °C y se anadio gota a gota anhidrido trifluorometansulfonico (0,93 ml, 5,52 mmol, 1,1 eq). La mezcla se agito durante 10 min a 0 °C y, a continuacion, durante 1 h a t.a. Despues de anadir DCM y agua, la fase organica se lavo con salmuera y se filtro a traves de un filtro de silicona. El producto bruto se seco y dio 1,96 g del compuesto del tftulo con un 97 % de pureza basandose en UPLC-MS (% en area), lo que corresponde a un rendimiento de >95 %.
UPLC-MS (Procedimiento 1): TR = 1,53 min; m/z = 372 (ES+: M+H)+.
Etapa 4: [1-(4-Bromofenil)ciclobutil]carbamato de ferc-butilo
Br
Se disolvio clorhidrato de 1-(4-bromofenil)ciclobutanamina [CAS 1193389-40-0] (8,99 g, 34,24 mmol, 1,0 eq) en DCM y se lavo secuencialmente con bicarbonato sodico acuoso y agua y la porcion organica se seco y se concentro. Se disolvio el material resultante en THF seco (120 ml) y diisopropiletilamina (17,62 ml, 102,7 mmol, 3,0 eq) en nitrogeno y se anadio una solucion de di-ferc-butildicarbonato (8,22 g, 37,6 mmol, 1,1 eq) en THF (20 ml). Se agito la reaccion a t.a. durante una noche. La mezcla se repartio entre EtOAc y agua y la fase organica extraida se lavo con salmuera y se concentro al vado para dar el compuesto del tftulo.
Alternativamente, el compuesto del tftulo puede prepararse mediante procedimientos conocidos (por ejemplo, el documento WO2008/70041).
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Etapa 5: {1-[4-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]ciclobutil}carbamato de ferc-butilo [Int-1B]
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27,75 g (55 mmol) del ester ferc-butflico del acido [1-(4-bromofenil)ciclobutil]carbamico, 23,76 mmol (93.6 mmol) de
bis-(pinacolato)diboro, 25 g (255 mmol) de acetato potasico y 2,08 g (2,55 mmol) de 1,1'- bis(difenilfosfino)ferrocenodicloro-paladio (II) en 500 ml de THF desgasificado se calentaron durante tres horas a reflujo. El color de la mezcla de reaction se volvio desde rojo oscuro hasta negro. Debido a una reaction incompleta se siguio calentando durante otras dos horas. La mezcla de reaccion se vertio sobre agua (400 ml) y se diluyo con 5 acetato de etilo (700 ml). Despues de agitar durante 30' la fase organica se separo y la fase acuosa se reextrajo dos veces con acetato de etilo (400 y 200 ml). Los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (200 ml) y se secaron (sulfato de sodio). Despues de evaporar el disolvente, el residuo se purifico por cromatograffa (Biotage) para proporcionar 28,99 g (91,3 %) del compuesto del tftulo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 7,51-7,67 (m, 3H), 7,38 (d, 2H), 2,22-2,42 (m, 4H), 1,88-2,02 (m, 1 H), 1,63-1,80 10 (m, 1 H), 1,00-1,38 (m, 21 H) ppm.
Etapa 6: Trifluorometansulfonato de 5,7-dimetil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ilo
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Trifluorometanosulfonato 5,7-dimetil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2Hlico (490 mg, 1,25 mmol, 1 eq, vease la etapa 3), {1-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]ciclobutil}carbamato ferc-butflico [Int-1B] (702 mg, 1,88 mmol, 15 1,5 eq), complejo de dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(N) diclorometano (112 mg, 0,14 mmol, 0,11
eq) y carbonato de cesio (1,02 g, 3,13 mmol, 2,5 eq) se disolvieron en 9,7 ml de DMF y se calentaron con radiation microondas hasta una temperatura de 110 °C. Despues de un tiempo de espera de 40 s la mezcla de reaccion se enfrio hasta t.a. La reaccion se repitio cuatro veces de una manera identica y posteriormente, las mezclas de reaccion de los cuatros casos se combinaron. Se elimino el disolvente utilizando un evaporador giratorio y el material 20 crudo resultante se purifico mediante MPLC preparativo [Biotage Isolera: cartucho SNAP KP-NH, hexano ^ hexano / acetato de etilo (4/1)] para obtener 650 mg (26 %) del compuesto del tftulo. UPLC-MS (Procedimiento 1): Tr = 1,60 min; m/z = 469 (ES+: M+H)+.
Ejemplo Intermedio Int-2:
{1-[4-(5,7-Dietil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil]ciclobutil}carbamato de ferc-butilo
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Etapa 1: 5,7-Dietil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ol
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Se disolvieron 2-ciano-2-fenilacetohidrazida [Int-1A] (8,40 g, 43,2 mmol, 1,0 eq) y heptan-3,5-diona (5,85 ml, 43,2 mmol, 1,0 eq) en 140 ml de acido atidico y se agito durante 4,5 h a 60 °C. La suspension resultante se enfrio hasta 30 t. a. y el precipitado se aislo por filtration. El solido se lavo con hexano y se seco para dar 4,17 g (29 % de rendimiento) del compuesto del tftulo.
UPLC-MS (Procedimiento 1): Tr = 1,31 min; m/z = 268 (ES+: M+H)+.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 [ppm] = 1,27 (t, 3H), 1,31 (t, 3H), 2,77 (c, 2H), 2,97 (c, 2H), 6,74 (s, 1H), 7,09 (t, 1 H), 7,34 (t, 2H), 8,22 (m, 2H),11,52 (s a, 1H).
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A una mezcla de 5,7-dietil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ol (4,17 g, 12,5 mmol, 1,0 eq) en 80 ml de DCM se anadio trietilamina (2,61 ml, 18,7 mmol, 1,5 eq). La mezcla de reaccion se enfrio hasta 0 °C y se anadio gota a gota anddrido trifluorometansulfonico (2,32 ml, 13,7 mmol, 1,1 eq). La mezcla se agito durante 10 min a 0 °C y despues durante 1 h a t.a. Despues de anadir DCM y agua, la fase organica se lavo con salmuera y se filtro a traves de un filtro de silicona. El producto bruto se seco y dio 5,67 g del compuesto del tttulo con un 84 % de pureza basandose en UPLC-MS (% en area) que corresponde a un rendimiento de un 96 %.
UPLC-MS (Procedimiento 1): TR = 1,68 min; m/z = 400 (ES+: M+H)+.
Etapa 3: Acido (4-{1-[(terc-butoxicarboml)ammo]ciclobutM}feml)bor6mco [Int-2A]
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A una solucion de {1-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]ciclobutil}carbamato de ferc-butilo [Int-1B] (5,63 g, 20,0 mmol, 1 eq) en 191 ml de acetona se anade acetato de amonio (7,38 g, 95,6 mmol, 4,78 eq). Despues de anadir peryodato sodico (13,6 g, 63,6 mmol, 3,15 eq) la mezcla de reaccion se agito durante toda la noche a t.a. A continuacion, la suspension blanca se trato con agua. El solido restante se aislo por filtracion y se trato con tolueno que se elimino directamente mediante un evaporador rotatorio. Este procedimiento se repitio tres veces. El solido restante se seco al vado a 60 °C durante toda la noche para proporcionar 3,87 g (75 %) del compuesto del tttulo con un 85 % de pureza (UPLC, % en area).
UPLC-MS (Procedimiento 1): TR = 1,03 min; m/z = 292 (ES+: M+H)+.
Etapa 4: Trifluorometansulfonato de 5,7-dietil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ilo
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Se disolvieron trifluorometansulfonato de 5,7-dietil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ilo (500 mg, 1,05 mmol, 84 % de pureza, 1 eq, vease la etapa 2), acido (4-{1-[(ferc-butoxicarbonil)amino]ciclobutil}fenil)boronico [Int-2A, etapa 3] (483 mg, 1,58 mmol, 85 % de pureza, 1,5 eq), complejo de dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(N) diclorometano (94 mg, 0,12 mmol, 0,11 eq) y carbonato de cesio (857 mg, 2,63 mmol, 2,5 eq) en 8,9 ml de DMF y se calento con radiacion microondas hasta una temperatura de 110 °C. Despues de un tiempo de espera de 40 s, la mezcla de reaccion se enfrio hasta t.a. La reaccion se repitio cuatro veces de una manera identica y posteriormente las mezclas de reaccion de los cuatro casos se combinaron. El disolvente se elimino utilizando un evaporador rotatorio y el material bruto resultante se purifico mediante MPLC preparativa [Biotage Isolera: cartucho SNAP de 100 g, hexano ^ hexano / acetato de etilo (4/1)] para proporcionar 406 mg (19 %) del compuesto del tttulo con ~60 % de pureza (UPLC, % en area). El compuesto se utilizo en la siguiente etapa sin una purification adicional. UPLC-MS (Procedimiento 1): Tr = 1,75 min; m/z = 497 (ES+: M+H)+.
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Ejemplo Intermedio Int-3:
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Etapa 1: 3-Fenil-5,7-bis(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ol
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Se disolvieron 2-ciano-2-fenilacetohidrazida [Int-1A] (1,00 g, 5,13 mmol, 1,0 eq) y 1,1,1,5,5,5-hexafluoropentano-2,4- diona (1,07 g, 5,13 mmol, 1,0 eq) en 16,6 ml de acido addico durante 3,5 h a 60 °C. Se permitio que la mezcla de reaccion se agitara a t.a. durante toda la noche. El precipitado se aislo mediante filtracion. El solido se lavo con hexano y se seco para proporcionar 500 mg (27 % de rendimiento) del compuesto del trtulo.
UPLC-MS (Procedimiento 1): Tr = 1,38 min; m/z = 348 (ES+: M+H)+.
Etapa 2: (1-{4-[3-Fenil-5,7-bis(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il]fenil}ciclobutil)carbamato de terc- butilo
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A una mezcla de 3-fenil-5,7-bis(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ol (500 mg, 1,44 mmol, 1,0 eq) en 9,3 ml de DCM se anadio trietilamina (0,30 ml, 2,16 mmol, 1,5 eq). La mezcla de reaccion se enfrio a 0 °C y se anadio gota a gota anddrido trifluorometansulfonico (0,27 ml, 1,58 mmol, 1,1 eq). La mezcla se agito durante 10 min a 0 °C y despues durante 1 ha t. a. Despues de anadir DCM y agua, la fase organica se lavo con agua y los componentes volatiles se eliminaron al vado. El producto bruto se purifico mediante MPLC preparativa [Biotage Isolera: cartucho SNAP de 25 g, hexano ^ hexano / acetato de etilo (4/1)] para proporcionar 660 mg (91 %) de trifluorometanosulfonato de 3-fenil-5,7-bis(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ilo que se utilizo directamente tal como se describe a continuacion:
Se disolvieron trifluorometansulfonato de 3-fenil-5,7-bis(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ilo (230 mg, 0,46 mmol, 1 eq), acido (4-{1-[(fe/'c-butoxicarbonil)amino]cidobutil}fenil)boronico [Int-2A] (210 mg, 0,68 mmol, 85 % de pureza, 1,5 eq), complejo de dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(II) diclorometano (40,8 mg, 0,05 mmol, 0,11 eq) y carbonato de cesio (371 mg, 1,14 mmol, 2,5 eq) en 3,8 ml de DMF y se calento con radiacion microondas hasta una temperatura de 110 °C. Despues de un tiempo de espera de 35 s la mezcla de reaccion se enfrio at. a. y los componentes volatiles se retiraron al vado. El material crudo resultante se purifico mediante MPLC preparativo [Biotage Isolera: cartucho SNAP de 25 g, hexano ^ hexano / acetato de etilo (2/1)] para proporcionar una muestra con una pureza insuficiente. Esta se sometio a otro MPLC preparativo con un gradiente adaptado [Biotage Isolera: cartucho SNAP de 25 g, hexano ^ hexano / acetato de etilo (4/1)] para proporcionar 160 mg (55 %) del compuesto del trtulo con un 90 % de pureza (UPLC, % en area).
UPLC-MS (Procedimiento 1): Tr = 1,75 min; m/z (ES+) = 421 (M-fBu+2H)+, 494 (M+NH)+.
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A una mezcla del carbamato Int-1 (650 mg, 1,39 mmol, 1,0 eq) en DCM (8,9 ml) y metanol (5,6 ml) se anadio una solucion 4 M de cloruro de hidrogeno en dioxano (6,94 ml, 27,7 mmol, 20,0 eq) a 0 °C. La mezcla de reaccion se agito durante toda la noche a t.a. y a continuation se vertio sobre hielo. La mezcla de reaccion se volvio alcalina con hidroxido sodico acuoso (2 N) y se extrajo con acetato de etilo. El disolvente se retiro mediante destilacion y se logro la purification mediante cromatografia en columna utilizando MPLC preparativa [Biotage Isolera: cartucho SNAP de 25 g, hexano -> hexano / acetato de etilo 4/1)]. El producto se cristalizo finalmente en eter diisopropflico para proporcionar 212 mg (41 % de rendimiento) del compuesto del fitulo.
UPLC-MS (Procedimiento 1): Tr = 1,02 min; m/z = 369 (ES+: M+1)+.
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 [ppm] = 0,93 (m, 1H), 1,25 (m, 1H), 1,36-1,50 (m, 2H), 1,67-1,82 (m, 5H), 1,96 (d, 3H), 6,00 (d, 1H), 6,41 - 6,56 (m, 3H), 6,57-6,66 (m, 4H), 6,75 (dt, 2H), (NH no asignado).
Ejemplo 2: 1-[4-(5,7-Dietil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil]-ciclobutanamina
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A una mezcla del carbamato Int-2 (400 mg, 0,48 mmol, 60 % de pureza, 1,0 eq) en DCM (2,4 ml) y metanol (2,0 ml) se anadio una solucion 4 M de cloruro de hidrogeno en dioxano (2,42 ml, 9,67 mmol, 20,0 eq). La mezcla de reaccion se agito durante 3 h a t.a. y a continuacion se vertio sobre hielo. La mezcla de reaccion se volvio alcalina con hidroxido sodico acuoso (2 N) y se extrajo con acetato de etilo. El disolvente se retiro mediante destilacion a presion reducida y se logro la purificacion mediante cromatografia en columna utilizando MPLC preparativa [Biotage Isolera: cartucho SNAP KP-NH de 55 g, hexano -> hexano / acetato de etilo (4/1)]. El producto se cristalizo finalmente en eter diisopropiletflico para proporcionar 134 mg (69 % de rendimiento) del compuesto del fitulo. UPLC- MS (Procedimiento 2): Tr = 1,60 min; m/z = 397 (ES+: M+1)+.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 [ppm] = 1,23 (t, 3H), 1,37 (t, 3H), 1,62 (m, 1H), 1,87-2,14 (m, 3H), 2,29-2,42 (m, 3- 4H), 2,76 (c, 2H), 3,13 (c, 2H), 6,92 (s, 1 H), 7,25 (tt, 1 H), 7,35 (t, 2H), 7,39-7,52 (m, 6H).
Ejemplo 3: 1-{4-[3-Fenil-5,7-bis(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il]fenil}ciclobutanamina
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A una mezcla del carbamato Int-3 (160 mg, 235 ^mol, 1,0 eq) en DCM (1,5 ml) y metanol (1,0 ml) se anadio una solucion 4 M de cloruro de hidrogeno en dioxano (1,18 ml, 27,7 mmol, 20,0 eq) a 0 °C. La mezcla de reaccion se agito durante toda la noche a t.a. y a continuacion se vertio sobre hielo. La mezcla de reaccion se volvio alcalina con hidroxido de sodio acuoso (2N) y se extrajo con acetato de etilo. El disolvente se retiro mediante destilacion a presion reducida y se logro la purificacion mediante cromatografia en columna utilizando MPLC preparativa [Biotage Isolera: cartucho SNAP de 25 g, hexano -> hexano / acetato de etilo 4/1)]. El producto se cristalizo finalmente en eter diisopropflico. La filtration se realizo a 0 °C para proporcionar 40 mg (36 % de rendimiento) del compuesto del fitulo. MS: m/z = 460 (ES+: M-NH2)+.
UPLC-MS (Procedimiento 1): Tr = 1,24 min; m/z = 460 (ES+: M-NH2)+.
Investigaciones biologicas
Los siguientes ensayos pueden usarse para ilustrar la utilidad comercial de los compuestos de acuerdo con la presente invencion.
5 Los ejemplos se ensayaron una o mas veces en los ensayos biologicos seleccionados. Cuando se ensayaron mas de una vez, los datos se indican bien como valores medios o como valores de la mediana, en los que:
• el valor medio, tambien denominado valor de la media aritmetica, representa la suma de los valores obtenidos dividida entre el numero de veces ensayado, y
• el valor de la mediana representa el numero central del grupo de los valores ordenados por orden ascendente o 10 descendente. Si el numero de valores del conjunto de datos es impar, la mediana es el valor central. Si el
numero de valores del conjunto de datos es par, la mediana es la media aritmetica de los dos valores centrales.
Los ejemplos se sintetizaron una o mas veces. Cuando se sintetizaron mas de una vez, los datos de los ensayos biologicos representan los valores medios o los valores de la mediana calculados utilizando los conjuntos de datos obtenidos en el ensayo de uno o mas lotes sinteticos.
15 Ensayo biologico 1.0: Ensayo de la quinasa Akt1
La actividad inhibidora de Akt1 de los compuestos de la presente invencion se cuantifico empleando el ensayo de TR-FRET de Akt1 como se describe en los siguientes parrafos.
La Akt1 de longitud completa de quinasa recombinante humana marcada con His expresada en celulas de insecto se adquirio en Invitrogen (numero de parte PV 3599). Como sustrato para la reaccion de la quinasa, se uso el 20 peptido biotinilado biotina-Ahx-KKLNRTLSFAEPG (extremo C en forma de amida), que puede adquirirse, por ejemplo, en la compama Biosynthan GmbH (Berlin-Buch, Alemania).
Para el ensayo, se pipetearon 50 nl de una solucion concentrada 100 veces del compuesto de ensayo en DMSO en una placa negra de microtitulacion de 384 pocillos de bajo volumen (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Alemania), se afadieron 2 pl de una solucion de Akt1 en tampon de ensayo [TRIS/HCI 50 mM, pH 7,5, MgCl2 5 mM, ditiotreitol 1 25 mM, Triton X-100 al 0,02 % (v/v) (Sigma)], y la mezcla se incubo durante 15 min a 22 °C para permitir la union previa de los compuestos de ensayo a la enzima antes de que comenzara la reaccion de la quinasa. Despues se inicio la reaccion de la quinasa mediante la adicion de 3 pl de una solucion de adenosm trifosfato (ATP, 16,7 pM ^ siendo la conc. final en el volumen de ensayo de 5 pl de 10 pM) y sustrato (1,67 pM ^ siendo la conc. final en el volumen de ensayo de 5 pl de 1 pM) en tampon de ensayo y se incubo la mezcla resultante durante un tiempo de reaccion de 60 30 min a 22 °C. La concentracion de Akt1 en el ensayo se ajusto dependiendo de la actividad del lote enzimatico y se escogio como apropiado tener el ensayo en el intervalo lineal, las concentraciones de enzima tfpicas estaban en el intervalo de aproximadamente 0,05 ng/pl (conc. final en el volumen de ensayo de 5 pl).
Se detuvo la reaccion mediante la adicion de 5 pl de una solucion de reactivos de deteccion de HTRF (estreptavidina-XL665 [Cisbio] 200 nM y anticuerpo anti-fosfo-Serina 1,5 nM [Millipore, n.° de cat. 35-001] y 35 anticuerpo anti-IgG de raton marcado con LANCE Eu-W1024 0,75 nM [Perkin Elmer]) en una solucion acuosa de EDTA (EDTA 100 mM, seroalbumina bovina al 0,1 % (p/v) en HEPES 50 mM/NaOH pH 7,5).
Se incubo la mezcla resultante durante 1 h a 22 °C para permitir la union del peptido fosforilado biotinilado a la estreptavidina-XL665 y los anticuerpos. Posteriormente se evaluo la cantidad de sustrato fosforilado mediante la medicion de la transferencia de energfa de resonancia desde el quelato de anti-lgG de raton-Eu a la estreptavidina- 40 XL665. De este modo, se midieron las emisiones de fluorescencia a 620 nm y 665 nm tras la excitacion a 350 nm en
un lector de HTRF, por ejemplo un Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Alemania) o un Viewlux (Perkin- Elmer). Se tomo la proporcion de las emisiones a 665 nm y a 622 nm como la medida para la cantidad de sustrato fosforilado. Los datos se normalizaron (reaccion enzimatica sin inhibidor = 0 % de inhibicion, todos los demas componentes de ensayo, pero nada de enzima = 100 % de inhibicion). Normalmente el compuesto de ensayo se 45 ensayo en la misma placa de microtitulacion a 10 concentraciones diferentes en el intervalo de 20 pM a 1 nM (20 pM, 6,7 pM, 2,2 pM, 0,74 pM, 0,25 pM, 82 nM, 27 nM, 9,2 nM, 3,1 nM y 1 nM, series de diluciones preparadas antes del ensayo al nivel de las soluciones madre concentradas 100 veces mediante diluciones 1:3 en serie) en valores por duplicado para cada concentracion, y los valores de CI50 se calcularon mediante un ajuste de 4 parametros usando un programa informatico propio.
50 Ensayo biologico 2.0: Ensayo de la quinasa Akt2
La actividad inhibidora de Akt2 de los compuestos de la presente invencion se cuantifico empleando el ensayo de TR-FRET de Akt2 como se describe en los siguientes parrafos.
Se adquirio Akt2 de longitud completa de quinasa recombinante humana marcada con His expresada en celulas de insecto y activada por PDK1 en Invitrogen (numero de parte PV 3975). Como sustrato para la reaccion de la 55 quinasa, se uso la peptido biotinilado biotina-Ahx-KKLNRTLSFAEPG (extremo C en forma de amida), que se puede adquirir, por ejemplo, de la compama Biosynthan GmbH (Berlm-Buch, Alemania).
Para el ensayo, se pipetearon 50 nl de una solucion concentrada 100 veces del compuesto de ensayo en DMSO en
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una placa de microtitulacion negra de 384 pocillos de volumen bajo (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Alemania), se anadieron 2 pl de una solucion de Akt2 en tampon de ensayo [TRIS/HCI 50 mM, pH 7,5, MgCh 5 mM, ditiotreitol 1 mM, Triton X-100 al 0,02% (v/v) (Sigma)], y se incubo la mezcla durante 15 min a 22 °C para permitir la union previa de los compuestos de ensayo a la enzima antes de que comenzara la reaccion de la quinasa. Despues, se inicio la reaccion de la quinasa mediante la adicion de 3 pl de una solucion de trifosfato de adenosina (ATP, 16,7 pM ^ siendo la conc. final en el volumen de ensayo de 5 pl de 10 pM) y sustrato (1,67 pM ^ siendo la conc. final en el volumen de ensayo de 5 pl de 1 pM) en tampon de ensayo, y se incubo la mezcla resultante durante un tiempo de reaccion de 60 min a 22 °C. Se ajusto la concentracion de Akt2 en el ensayo dependiendo de la actividad del lote enzimatico, y se escogio como apropiado tener el ensayo en el intervalo lineal, las concentraciones de enzima tfpicas estaban en el intervalo de aproximadamente 0,2 ng/pl (conc. final en el volumen de ensayo de 5 pl).
Se detuvo la reaccion mediante la adicion de 5 pl de una solucion de reactivos de deteccion de HTRF (estreptavidina-XL665 [Cisbio] 200 nM y anticuerpo anti-fosfo-Serina 1,5 nM [Miliipore, n.° de cat. 35-001] y anticuerpo anti-IgG de raton marcado con LANCE Eu-W1024 0,75 nM [Perkin Elmer]) en una solucion acuosa de EDTA (EDTA 100 mM, seroalbumina bovina al 0,1% (p/v) en HEPES 50 mM/NaOH pH 7,5).
Se incubo la mezcla resultante durante 1 h a 22 °C para permitir la union del peptido fosforilado biotinilado a la estreptavidina-XL665 y los anticuerpos. Posteriormente, se evaluo la cantidad de sustrato fosforilado midiendo la transferencia de energfa de resonancia desde el quelato de anti-lgG de raton-Eu a la estreptavidina-XL665. De este modo, se midieron las emisiones de fluorescencia a 620 nm y 665 nm tras la excitacion a 350 nm en un lector de TR-FRET, por ejemplo, un Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Alemania) o un Viewlux (Perkin-Elmer). Se tomo la proporcion de las emisiones a 665 nm y a 622 nm como la medida para la cantidad de sustrato fosforilado. Se normalizaron los datos (reaccion enzimatica sin inhibidor = 0 % de inhibicion, todos los demas componentes, pero nada de enzima = 100 % de inhibicion). Normalmente, el compuesto de ensayo se ensayo en la misma placa de microtitulacion a 10 concentraciones diferentes en el intervalo de 20 pM a 1 nM (20 pM, 6,7 pM, 2,2 pM, 0,74 pM, 0,25 pM, 82 nM, 27 nM, 9,2 nM, 3,1 nM y 1 nM, series de diluciones preparadas antes del ensayo al nivel de las soluciones madre concentradas 100 veces mediante diluciones 1:3 en serie) en valores por duplicado para cada concentracion, y los valores de CI50 se calcularon mediante un ajuste de 4 parametros usando un programa informatico propio.
Los compuestos preferidos de la presente invencion muestran en el ensayo bien de la quinasa Akt1 o de la quinasa Akt2: CI 50 de la mediana < 5 pM o superior al 50 % de inhibicion a 5 pM; mas preferentemente, CI50 de la mediana < 0,5 pM o superior al 50 % de inhibicion a 0,5 pM; incluso mas preferentemente, CI50 de la mediana < 0,1 pM o superior al 50 % de inhibicion a 0,1 pM.
La siguiente Tabla da datos seleccionados para los Ejemplos seleccionados de la presente invencion.
Ejemplo
Akt1, CI50 de la mediana, M Akt2, CI50 de la mediana, M
1
6,6E-8 4,6E-7
2
4,1E-7 4,1E-7
3
3,2E-7 8,6E-7
Ensayos celulares 3.0: ensayos de p-AKT1/2/3-S473, -T308 y p-4E-BP1-T70
Se investigo el mecanismo molecular de accion en un conjunto de experimentos para evaluar la inhibicion de la ruta de PI3K-AKT-mTOR en lmeas celulares que responden tales como la lmea celular de tumor de mama KPL4 (PIK3CAH1047R, HER2O/E e independiente de hormonas). Los fosfo-sustratos del eje de PI3K-AKT-mTOR se usaron como las lecturas para reflejar la inhibicion de la ruta. Se sembraron celulas al 60-80 % de confluencia por pocillo en placas de cultivo celular de 96 pocillos. Despues de una incubacion durante toda la noche a 37 °C CO2 al 5 %, las celulas se trataron con compuestos y vehfculo a 37 °C durante 2 horas. Despues de eso, las celulas se lisaron en 150 pl de tampon de lisis y se determinaron los niveles de fosfo-AKT en T308 y S473, y p-4E-BP1 en los sitios T70 con los correspondientes kits de ensayo AlfaScreen® SureFire® (Perkin Elmer: kit de ensayo 4E-BP1 n.° de cat TRG4E2S10K; Akt 1/2/3 p-Ser 473 n.° TGRA4S500 y Akt 1/2/3 p-Thr 308 n.° TGRA3S500, asf como el kit de deteccion de IgG n.° 6760617M) como se describe en los manuales. Todas las medidas se realizaron al menos por duplicado y se confirmaron por repeticion independiente. Alternativamente se midio pAKT-S473 usando el "Akt Duplex" del sistema de ensayo MULTI-SPOT® (Fa. Meso Scale Discovery, n.° de cat. N41100B-1) siguiendo las instrucciones del fabricante. Cada ensayo uso 20 pg de extracto de protema, y midio el contenido total de AKT y p- AKT de manera simultanea en un pocillo. Todas las medidas se realizaron al menos por duplicado y se confirmaron por repeticion independiente. Los valores para P- AKT se expresan como el porcentaje del nivel de P-AKT en comparacion con el contenido total de AKT de los extractos.
La siguiente tabla da datos seleccionados para los ejemplos seleccionados de la presente invencion
Ejemplo
CI50 de la mediana de pAKT-S743, M CI50 de la mediana de P4EBP1-T70, M
1
1,3E-7 1,8E-6
5
10
15
20
25
30
35
40
45
(continuacion)
Ejemplo
CI50 de la mediana de pAKT-S743, M CI50 de la mediana de P4EBP1-T70, M
2
1,7E-6 3,7E-6
3
1,8E-6 3,3E-6
Ensayo biologico 4.0: Ensayos de proliferacion de celulas tumorales
Los compuestos se ensayaron en un ensayo a base de celulas que mide la capacidad de los compuestos para inhibir la proliferacion de celulas tumorales tras una exposicion a farmacos de 72 horas. La viabilidad celular se determino usando CellTiter-Glow® (CTG, Promega, n.° de cat. G7571/2/3). El ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo® es un procedimiento homogeneo para determinar el numero de celulas viables en cultivo. La deteccion se basa en el uso de la reaccion de la luciferasa para medir la cantidad de ATP de las celulas viables. La cantidad de ATP de las celulas se correlaciona con la viabilidad celular. En los minutos despues de una perdida de integridad de la membrana, las celulas pierden la capacidad de sintetizar ATP y las ATPasas endogenas destruyen cualquier ATP restante; de este modo, los niveles de ATP caen precipitadamente.
Se sembraron las celulas en placas a 3.000-5.000 celulas/pocillo (dependiendo de las lmeas celulares) en 90 pl de medio de crecimiento en MTP (Corning; n.° 3603, placa negra, fondo liso transparente). Para cada lmea celular ensayada, las celulas se sembraron en una placa separada para la determinacion de la fluorescencia en los puntos temporales de t = 0 horas y t = 72 horas. Tras incubar durante toda la noche a 37 °C, se determinaron los valores de quimioluminiscencia para las muestras a t = 0 despues de anadir 10 pl de medio y 100 pl de solucion de CTG de acuerdo con el protocolo del fabricante. Se trataron las placas para los puntos temporales de t = 72 horas con compuestos diluidos en medio de crecimiento a concentracion final de diez veces anadida en 10 pl a la placa de cultivo celular. Las celulas se incubaron entonces durante 72 horas a 37 °C. Se determinaron los valores de quimioluminiscencia para las muestras a t = 72 horas. Para el analisis de los datos, de resumen, se usaron los datos de placas de 24 h para reflejar la inhibicion del crecimiento del 100 % ("Ci"), y control de DMSO para el crecimiento no inhibido ("C0"), y se analizo usando el paquete informatico de MTS para CI50 y el coeficiente de Hill. Los experimentos se controlaron usando un compuesto de referencia como patron.
Los compuestos preferidos de la presente invencion muestran en este ensayo una inhibicion del crecimiento celular de lmeas celulares tales como la lmea celular de cancer de mama KPL-4 y la lmea celular de tumor de mama MCF-7 (PIK3CAE542K; E545K, dependiente de hormonas) y la lmea celular de tumor de prostata LNCaP, con una CI50 de la mediana de < 10 pM, mas preferentemente, CI50 de la mediana < 1 pM.
La siguiente Tabla da datos seleccionados para ejemplos seleccionados de la presente invencion.
Ejemplo
CI50 de la proliferacion de KPL- 4 , M CI50 de la proliferacion de MCF7, M Inhibicion de la mediana de KPL-4 a 1,67 pM (%) Inhibicion de la mediana de MCF-7 a 1,67 pM (%)
1
1,9E-6 1,8E-6 29,8 47,4
2
2,2E-6 2,0E-6 7,1 24,5
3
2,4E-6 2,0E-6 6,6 25,6
Ejemplo 5.0 - Ensayo de permeabilidad de Caco2
Se sembraron celulas Caco-2 (adquiridas en DSMZ Braunschweig, Alemania) a una densidad de 4,5 x 104 celulas por pocillo en placas de insercion de 24 pocillos, tamano de poros de 0,4 pm, y se cultivaron durante 15 dfas en medio DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10 %, GlutaMAX al 1 % (x100, GIBCO), 100 U/ml de penicilina, 100 pg/ml de estreptomicina (GIBCO) y aminoacidos no esenciales al 1 % (x 100). Se mantuvieron las celulas a 37 °C en una atmosfera humidificada de CO2 al 5 %. Se cambio el medio cada 2-3 dfas. Antes de ejecutar el ensayo de permeacion, se reemplazo el medio de cultivo por tampon de transporte de carbonato-hepes exento de FCS (pH 7,2). Para la evaluacion de la integridad de la monocapa, se midio la resistencia electrica transepitelial (RETE). Los compuestos de ensayo se disolvieron previamente en DMSO y se anadieron al compartimento apical o basolateral a una concentracion final de 2 pM. Antes y despues de 2 h de incubacion a 37 °C, se tomaron muestras de los dos compartimentos. El analisis de contenido de compuesto se realizo tras la precipitacion con metanol mediante analisis de CL/EM/EM. Se calculo la permeabilidad (Pap) en las direcciones apical a basolateral (A ^ B) y basolateral a apical (B ^ A). Se calculo la permeabilidad aparente usando la siguiente ecuacion: Pap = (Vr/Po)(1/S)(P2/t)
En la que Vr es el volumen de medio en la camara receptora; Po es el area del pico medida del farmaco de ensayo en la camara donante a t = 0; S es la superficie de la monocapa; P2 es el area del pico medida del farmaco de ensayo en la camara aceptora despues de 2 h de incubacion, y t es el tiempo de incubacion. Se calculo la proporcion de evacuacion basolateral (B) con respecto a la apical (A) dividiendo la Pap B-A entre la Pap A-B. Ademas, se calculo la recuperacion de compuesto. Como control de ensayo, se analizaron compuestos de referencia en
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paralelo.
Ejemplo 6.0 - Farmacocinetica de rata in vivo
Para los experimented de farmacocinetica in vivo, se administraron compuestos de ensayo a ratas Wistar macho por via intravenosa a dosis de 0,3 a 1 mg/kg, e intragastrica a dosis de 0,6 a 10 mg/kg, formulados en forma de soluciones usando solubilizantes tales como PEG400 en cantidades bien toleradas.
Para la farmacocinetica despues de la administracion intravenosa, los compuestos de ensayo se administraron en forma de bolo intravenoso y se tomaron muestras de sangre a los 2 min, 8 min, 15 min, 30 min, 45 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h y 24 h despues de la dosificacion. Dependiendo de la semivida esperada se tomaron muestras adicionales en puntos temporales posteriores (por ejemplo, 48 h, 72 h). Para la farmacocinetica tras la administracion intragastrica los compuestos de ensayo se administraron intragastricamente a ratas en ayunas, y se tomaron muestras de sangre a los 5 min, 15 min, 30 min, 45 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h y 24 h despues de la dosificacion. Dependiendo de la semivida esperada, se tomaron muestras adicionales en puntos temporales posteriores (por ejemplo, 48 h, 72 h). Se recogio sangre en tubos de heparina con litio (Monovetten®, Sarstedt) y se centrifugaron durante 15 min a 3000 rpm. Se tomo una alteuota de 100 pl del sobrenadante (plasma) y se hizo precipitar mediante la adicion de 400 pl de acetonitrilo frte y se congelo a -20 °C toda la noche. Seguidamente, se descongelaron las muestras y se centrifugaron a 3.000 rpm, 4 °C durante 20 minutos. Se tomaron alteuotas de los sobrenadantes para ensayo analttico usando un sistema de HPLC Agilent 1200 con deteccion de EMCL/EM. Los parametros farmacocineticos se calcularon mediante el analisis no compartimentado usando un software de calculo farmacocinetico.
Parametros farmacocineticos derivados de los perfiles de concentracion-tiempo tras la administracion intravenosa.: CLplasma: aclaramiento del plasma total del compuesto de ensayo (en l/kg/h); CLsangre: aclaramiento de la sangre total del compuesto de ensayo: CLplasma*Cp/Cb (en l/kg/h), siendo Cp/Cb la proporcion entre las concentraciones en plasma y en sangre. Parametros farmacocineticos calculados a partir de los perfiles de concentracion tras la administracion intragastrica: Cmax: concentracion maxima en plasma (en mg/l); Cmaxnorm: Cmax dividido entre la dosis administrada (en kg/l); Tmax: punto temporal en el que se observo la Cmax (en h). Parametros calculados a partir de los dos perfiles de concentracion-tiempo intravenosa e intragastrica: AUCnorm: area bajo la curva de concentracion-tiempo desde t = 0 h al infinito (extrapolado) dividido entre la dosis administrada (en kg*h/l); AUC(0- tultimo)norm: area bajo la curva de concentracion-tiempo desde t = 0 h hasta el ultimo punto temporal para el que se pudieron medir las concentraciones en plasma dividido entre la dosis administrada (en kg*h/l); t1/2: semivida terminal (en h); F: biodisponibilidad oral: AUCnorm tras la administracion intragastrica dividida entre AUCnorm tras la administracion intravenosa (en %).
El experto en la materia conocera los procedimientos para demostrar la eficiencia in vivo de los compuestos contra el cancer. A tttulo ilustrativo, el siguiente ejemplo describe procedimientos de cuantificacion de la eficiencia in vivo en un modelo de xenoinjerto de raton. El experto podra aplicar dichos principios para obtener modelos de material tumoral alternativo.
Ejemplo 7.0 Estudio del mecanismo de accion del xenoinjerto in vivo
Para demostrar que compuestos actuan en los tumores mediante el modo de accion anticipado, se investigo la fosforilacion de la protema AKT en tumores de mama KPL-4 tratados una vez con 50 mg/kg de compuesto.
En este sentido, se realizaron xenoinjertos de tumores de mama humanos KPL-4 en ratones desnudos atfmicos. Se cultivaron celulas de tumores KPL-4 de acuerdo con protocolos ATCC en medios recomendados que conteman FCS al 10 %, y se cosecharon para el trasplante en un estado subconfluente (70 %). Se implantaron por via subcutanea 3 x 106 celulas tumorales suspendidas en Matrigel al 50 % en la region inguinal de ratones hembra. Se dejo que los tumores crecieran hasta el tamano predeterminado de 60-80 mm2. Cuando los tumores tuvieron aproximadamente el tamano, se distribuyeron los animales al azar en grupos de tratamiento y de control (tamano de los grupos: 9 animales), y se inicio el tratamiento. Se trataron los animales una vez con 50 mg/kg de compuesto o vehteulo mediante administracion oral (p.o.) llevada a cabo mediante un tubo gastrico. El tratamiento de cada animal se baso en el peso corporal de cada uno. A las 2, 5 y 24 horas despues del tratamiento, se sacrificaron 3 animales de cada uno, y se extirparon los tumores KPL-4. Se sometieron muestras de tumores de aproximadamente 5 x 5 x 5 mm a lisis en hielo en tampon de lisis MSD en presencia de inhibidores de proteasa y fosfatasa usando Tissue Lyzer (Qiagen, Alemania). Se analizaron los niveles de p-AKT S473 en los extractos de tejido tumoral en un ensayo a base de ELISA. Este ensayo estaba basado en el "Akt Duplex" del sistema de ensayo MULTI-SPOT® (Fa. Meso Scale Discovery, n.° de cat. N41100B-1) siguiendo las instrucciones del fabricante. En cada ensayo, se usaron 20 pg de extracto de protema, y se midio el contenido de AKT y p-AKT total de manera simultanea en un pocillo. Todas las medidas se realizaron al menos por duplicado y se confirmaron por repeticion independiente.
Los valores para P-AKT se expresan como el porcentaje del nivel de P-AKT comparado con el contenido de AKT total de los extractos. Los tumores tratados con vehteulo se analizaron para determinar el nivel basal de P-AKT en este modelo, y se usaron como un control de normalizacion para determinar el % de P-AKT con respecto a los niveles de vehteulo.
Los compuestos preferidos de la presente invencion muestran en este ensayo: con respecto al vehnculo niveles de P-AKT < 30 % a las 2 horas del tratamiento, mas preferentemente a las 5 horas del tratamiento, incluso mas preferentemente a las 24 horas del tratamiento.
Ejemplo 7.1 Estudio de la eficacia del xenoinjerto in vivo
5 Para determinar la eficacia terapeutica y la tolerabilidad de los compuestos, se puede observar el crecimiento tumoral de los tumores de mama KPL-4 xenoinjertados en ratones desnudos. Los ratones se trataron bien con vehnculo o con compuestos. En este sentido, se establecieron xenoinjertos KPL-4 como se ha descrito anteriormente. Se dejo que los tumores crecieran hasta el tamano predeterminado de 25 a 35 mm2. Cuando los tumores tuvieron aproximadamente el tamano, se distribuyeron los animales aleatoriamente al azar en grupos de 10 tratamiento y de control (tamano de los grupos: 8 animales) y se inicio el tratamiento. El tratamiento de cada animal
se baso en el peso corporal de cada uno, y la administracion oral (p.o.) se llevo a cabo mediante un tubo gastrico. Los volumenes de aplicacion oral fueron de 10 mg/kg para los ratones. Los ratones se trataron una vez al dfa con 50 mg/kg de los compuestos.
Se evaluo la respuesta tumoral mediante la determinacion de la superficie del tumor (producto del diametro mas 15 largo y su perpendicular) usando un calibre. Se monitorizo el peso corporal del animal como una medida para la
toxicidad relacionada con el tratamiento. La medicion de la superficie del tumor y del peso corporal se llevo a cabo 23 veces a la semana. Se evaluo el analisis estadfstico usando el software SigmaStat. Se realizo un analisis de la varianza de una via, y se compararon las diferencias con el control mediante un procedimiento de comparacion por parejas (procedimiento de Dunn). Se calcularon las proporciones de T/C (Tratamiento/Control) con los pesos 20 tumorales finales al finalizar el estudio.

Claims (14)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de formula (I):
    Y
    R
    imagen1
    R
    ,3
    (I)
    en la que
    R1 es hidrogeno, un grupo alquilo C1-6,
    en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces, de manera identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de: hidroxi, halogeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, -NR7R8, ciano, (=O), -C(O)NR7R8, -C(O)OR9, -NHC(O)R10, -NHS(O)2R10, heteroarilo,
    R2 es hidrogeno o un grupo alquilo C1-6
    en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces, de manera identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de: hidroxi, halogeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4, alcoxi C1-6, -NR7R8, ciano, -C(O)NR7R8, -C(O)OR9, -NHC(O)R10, -NHS(O)2R10, -NH-(alquilen C1-6)-O-(alquilo C1-6),
    R3 es hidrogeno, alquilo C1-6 que esta opcionalmente sustituido una o mas veces con halogeno,
    R4 es fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, halogeno, ciano,
    R5 es hidrogeno, halogeno,
    R6 es hidrogeno, alquilo C1-6,
    X es -CH2-,
    Y es -CH2-, -CH(OH)-,
    R7, R8, que pueden ser iguales o diferentes, son hidrogeno, hidroxi, cicloalquilo C3-7 o un grupo seleccionado de alquilo C1-4, alcoxi C1-6, en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces, de manera identica o diferente, con un sustituyente seleccionado de:
    halogeno, hidroxi, mono- o di-(alquilamino C1-4), alcoxi C1-4 o cicloalquilo C3-7, o
    R7 y R8 junto con el nitrogeno al que estan unidos tambien pueden formar un anillo heterodclico C3-6 saturado o insaturado,
    que esta opcionalmente sustituido con (=O)
    R9 es hidrogeno, alquilo C1-6,
    R10 es alquilo C1-4 (opcionalmente sustituido del mismo modo o de modo diferente una o mas veces con halogeno, hidroxi) o cicloalquilo C3-7,
    o un N-oxido, una sal, un tautomero o un estereoisomero de dicho compuesto, o una sal de dichos N-oxido, tautomero o estereoisomero.
  2. 2. El compuesto de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1,
    R1 es hidrogeno, un grupo alquilo C1-6,
    en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces con halogeno,
    R2 es hidrogeno,
    R3 es hidrogeno, un grupo alquilo C1-6,
    en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces con halogeno,
    R4 es fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-6, halogeno, ciano,
    R5 es hidrogeno,
    R6 es hidrogeno,
    X es -CH2-,
    Y es -CH2-, -CH(OH)-,
    o un N-oxido, una sal, un tautomero o un estereoisomero de dicho compuesto, o una sal de dichos N-oxido, tautomero o estereoisomero.
  3. 3. El compuesto de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que R1 es hidrogeno, un grupo alquilo C1-3,
    en el que
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces con halogeno, R2 es hidrogeno,
    R3 es hidrogeno, un grupo alquilo C1-3,
    en el que dicho grupo esta opcionalmente sustituido, una o mas veces con halogeno, R4 es fenilo,
    R5 es hidrogeno,
    R6 es hidrogeno,
    X es -CH2-,
    Y es -CH2-,
    o un N-oxido, una sal, un tautomero o un estereoisomero de dicho compuesto, o una sal de dichos N-oxido, tautomero o estereoisomero.
  4. 4. El compuesto de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que
    R1 es hidrogeno, alquilo C1-3 opcionalmente sustituido con fluor,
    R2 es hidrogeno,
    R3 es hidrogeno o alquilo C1-3 opcionalmente sustituido con fluor,
    R4 es fenilo,
    R5 es hidrogeno,
    R6 es hidrogeno,
    X es -CH2-,
    Y es -CH2-
    o un N-oxido, una sal, un tautomero o un estereoisomero de dicho compuesto, o una sal de dichos N-oxido, tautomero o estereoisomero.
  5. 5. Compuestos de formula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, que se seleccionan del grupo que consiste en:
    1-[4-(5,7-dimetil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil]ciclobutanamina,
    1-[4-(5,7-dietil-3-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil]ciclobutanamina,
    1-{4-[3-fenil-5,7-bis(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il]fenil}ciclobutanamina.
  6. 6. Un compuesto de formula general (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en el tratamiento o profilaxis de enfermedades.
  7. 7. Un compuesto de formula general (I) para su uso de acuerdo con la reivindicacion 6, en el que las enfermedades son enfermedades hiperproliferativas y/o trastornos que responden a la induccion de la apoptosis.
  8. 8. Un compuesto de formula general (I) para su uso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que las enfermedades hiperproliferativas y/o los trastornos que responden a la induccion de la apoptosis son neoplasias benignas o malignas.
  9. 9. Un compuesto de formula general (I) para su uso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que las enfermedades hiperproliferativas son cancer.
  10. 10. Un compuesto de formula general (I) para su uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en el que la enfermedad cancerosa es cancer de mama.
  11. 11. Una composicion farmaceutica que comprende al menos un compuesto de formula general (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, junto con al menos un adyuvante farmaceuticamente aceptable.
  12. 12. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 11 para su uso en el tratamiento de neoplasias benignas o malignas.
  13. 13. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 11 para su uso en el tratamiento del cancer.
  14. 14. Una combinacion que comprende uno o mas primeros principios activos seleccionados de un compuesto de formula general (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, y uno o mas segundos principios activos seleccionados de agentes contra el cancer quimioterapeuticos y agentes contra el cancer espedficos de la diana.
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