BR112019018562A2 - composições tópicas contendo ésteres sintéticos de ácido sinapínico e métodos para o tratamento de superfícies de queratina - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se a uma composição tópica compreendendo um composto sintético que é um éster de ácido sinapínico, um método de tratamento de pele para prover um ou mais benefícios selecionados de (a) proteção contra radiação uv, (b) inibição de dano de dna em células da pele, (c) inibição de inflamação da pele, e (d) sequestro de radicais livres pela aplicação tópica de uma composição contendo o composto sintético, e um método de síntese do composto.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para COMPOSIÇÕES TÓPICAS CONTENDO ÉSTERES SINTÉTICOS DE ÁCIDO SINAPÍNICO E MÉTODOS PARA O TRATAMENTO DE SUPERFÍCIES DE QUERATINA.

CAMPO TÉCNICO [0001] A invenção refere-se a composições tópicas contendo ésteres sintéticos de ácido sinapínico e métodos para o tratamento de superfícies de queratina para melhoria.

[0002] As plantas precisam de luz solar para sobreviver. Elas têm um protetor solar inerente na forma de ésteres de sinapato que as protegem dos raios UVB nocivos e permitem a passagem dos raios necessários para manter a vida das plantas. As plantas geneticamente modificadas para que sejam incapazes de produzir ésteres de sinapato sofrem danos incapacitantes que levam ao crescimento prejudicado e murchamento. A luz na faixa ultravioleta abrange comprimentos de onda que variam de 280 a 400 com comprimento de onda de luz UVA que varia de 315 a 400 e luz UVB que varia de 280 a 315.

[0003] A extração de material vegetal para obter ésteres de sinapato é complicada e proporciona um rendimento muito baixo. A destruição de um grande número de plantas para obter apenas uma quantidade nominal de extrato simplesmente não é econômica ou prática.

[0004] Um processo sintético eficiente e econômico para a preparação de ésteres de sinapato foi descoberto. Além disso, verificou-se que os ésteres de sinapato preparados de acordo com esse processo sintético têm vários efeitos benéficos para a pele.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0005] A invenção refere-se a composições tópicas contendo um composto sintético que é éster de ácido sinapínico.

[0006] A invenção refere-se também a um método de tratamento de pele para prover um ou mais benefícios selecionados de (a) protePetição 870190099605, de 04/10/2019, pág. 15/43

2/24 ção contra radiação UV, (b) inibição de dano de DNA em células da pele, (c) inibição ou redução de inflamação da pele, e (d) sequestro de radicais livres na pele pela aplicação tópica de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto sintético que é um éster de ácido sinapínico.

[0007] A invenção refere-se também a um método para síntese de sinapoil malato compreendendo as etapas de:

(a) (i) reagir siringaldeído com anidrido de ácido acético e um acetato de metal alcalino; ou (ii) reagir ácido sinapínico com anidrido de ácido acético, (b) clivar o anidrido do produto de reação protegido por acetila de (a) por exposição à água e um álcool alifático para formar ácido sinapínico protegido, (c) esterificar o ácido sinapínico protegido por reação com um éster de ácido carboxílico protegido por alquila para formar sinapoil malato protegido, (d) reagir o sinapoil malato protegido com ácido aquoso para gerar sinapoil malato.

DESCRIÇÃO DETALHADA DOS DESENHOS [0008] Figura 1: Os picos e vales de absorbância medidos para teste de absorbância dentro da faixa de UV para sinapoil malato (SM) e fenetil éster de ácido caftárico (CAPE) em concentrações de 1,4 parte por milhão (ppm) e 14 ppm por tempos que variam de 0, 1 semana, 2 semanas, 4 semanas e a temperaturas de 4^o, 25° 40° e 50°C são apresentados na Tabela. Sinapoil malato e CAPE apresentam diferentes picos e vales de absorbância na faixa de UV, demonstrando assim que a diferença estrutural resulta em uma diferença na absorção de UV.

[0009] Figura 2: demonstra a estabilidade de picos de absorbância de sinapoil malato e CAPE ao longo do tempo e temperatura. SM#1

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3/24 significa pico de sinapoil malato #1, SM#2 número de pico 2. CAPE#1 significa primeiro pico de CAPE. CAPE#2 significa segundo pico de CAPE. O gráfico superior mostra a estabilidade na concentração de

1,4 ppm. O gráfico inferior mostra a estabilidade na concentração de 14 ppm. Nos dois casos, observa-se que o sinapoil malato demonstra estabilidade mais consistente ao longo do tempo. Em contraste, a estabilidade do CAPE oscila para cima e para baixo e os picos de absorbância mudam ou não são mantidos.

[0010] Figura 3: demonstra a viabilidade celular de queratinócitos epidérmicos humanos normais que não são irradiados ou são irradiados com 20, 40 e 60 mJ/cm² de UVB. Os resultados mostram que o sinapoil em concentrações que variam de 0,0025 a 0,25% melhorou a saúde e a viabilidade celular após a exposição a doses variadas de radiação UVB.

[0011] Figura 4: demonstra graficamente a eficácia de sinapoil malato na proteção contra danos por UV tanto em células não irradiadas quanto em células irradiadas com UV a 40 mJ/cm² em concentrações variando de 0,025 a 0,05%.

[0012] Figura 5: demonstra a eficácia de sinapoil malato como um anti-inflamatório em sua capacidade de inibir IL1 -o e ILI-β em células irradiadas e não irradiadas.

[0013] Figura 6: demonstra graficamente a eficácia de sinapoil malato como um antioxidante em faixas de concentração de 0,01 a 0,1%. DESCRIÇÃO DETALHADA

I. O éster de ácido carboxílico sintético de ácido sinapínico [0014] O composto sintético usado nas composições tópicas e métodos da invenção é um éster de ácido sinapínico. O éster pode ser um mono-, di- ou triéster. Em uma modalidade, o éster pode ter de 118 átomos de carbono e pode ser de cadeia linear ou ramificada. É preferido onde o éster de ácido carboxílico é um éster de ácido alfa ou

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4/24 beta hidróxi. Mais preferido é onde o éster é um diéster de alfa hidroxila que é sinapoil malato.

[0015] Sinapoil malato pode ser sintetizado da seguinte forma com as designações S seguidas por um número definido no Exemplo 1.

[0016] O material de partida pode ser ácido sinapínico ou siringaldeído. O ácido sinapínico é oneroso, por isso, pode ser mais desejável iniciar com o siringaldeído.

[0017] O ácido sinapínico protegido por acetila S3 pode ser sintetizado usando uma reação do tipo PERKiN, como descrito mais detalhadamente nos exemplos. O ácido sinapínico, S1, é reagido com anidrido de ácido acétlco na presença de uma base apropriada, para formar um ácido sinapínico protegido por acetiia. Mais preferencialmente, o siringaldeído S2 pode ser reagido com anidrido acético, acetato de sódio, água e um álcool alifático, preferencialmente, metanol, para formar o ácido sinapínico protegido por acetila.

[0018] O ácido sinapínico protegido por acetila S3 resultante pode ser esterlficado com um éster de ácido málico protegido por alquila S4, que é preferencialmente um éster de dimetila ou dietila ou, mais preferencialmente, um éster de di-isopropila usando condições STEGLICH usando um reagente de acoplamento de carbodimida, tal como dlisopropil carbodimida ou, mais preferencialmente, dicicio-hexii carbodiimida para gerar o sinapoil malato totalmente protegido S5. Desproteção completa pode ser alcançada hidrolisando com ácidos aquosos, tais como ácido sulfúrico ou ácido clorídrico, para gerar sinapoil malato S6.

[0019] As composições tópicas da invenção podem conter 0,01 a

10%, preferencialmente, de cerca de 0,05 a 8%, mais preferencialmente, de cerca de 0,1 a 5% em peso do éster sintético de ácido slnapínico, com todas as porcentagens apresentadas neste documento sendo porcentagens em peso, salvo indicação em contrário.

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Π. As Composições Tópicas [0020] A composição tópica pode ser na forma de uma solução, gel, creme, loção, emulsão ou produto anidro. Preferido é onde sinapoil malato é formulado em uma emulsão contendo cerca de 10-90% de água e 10-90% de óleo. A composição pode conter outros ingredientes, incluindo, mas sem limitação, os aqui apresentados.

A. Óleos [0021] No caso de as composições da invenção estarem em forma de emulsão, a composição compreenderá uma fase oleosa. Ingredientes oleosos são desejáveis para as propriedades de hidratação e proteção da pele. Óleos adequados incluem silicones, ésteres, óleos vegetais, óleos sintéticos, incluindo, mas sem limitação, os aqui apresentados. Os óleos podem ser voláteis ou não voláteis, e são preferencialmente na forma de um líquido que pode ser vertido à temperatura ambiente. O termo volátil significa que o óleo tem uma pressão de vapor mensurável ou uma pressão de vapor de pelo menos cerca de 2 mm de mercúrio a 20°C. O termo não volátil significa que o óleo tem uma pressão de vapor inferior a cerca de 2 mm de mercúrio a 20°C. Se presentes, esses óleos podem variar de cerca de 0,01 a 85%, preferencialmente, de cerca de 0,05 a 80%, mais preferencialmente, de cerca de 0,1 a 50%.

[0022] Os óleos voláteis adequados geralmente têm uma viscosidade variando de cerca de 0,5 a 5 centistokes a 25°C e incluem silicones lineares, silicones cíclicos, hidrocarbonetos parafínicos ou misturas dos mesmos.

[0023] Os silicones voláteis cíclicos e lineares estão disponíveis em várias fontes comerciais, incluindo Dow Corning Corporation e General Electric. Os silicones voláteis lineares da Dow Coming são vendidos sob os nomes comerciais Fluidos Dow Coming 244, 245, 344 e

200. Esses fluidos incluem hexametildissiloxano (viscosidade 0,65

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6/24 centistoke (abreviado cst)), octametiitrissiioxano (1,0 cst), decametiitetrassiloxano (1,5 cst), dodecametilpentassiloxano (2 cst) e misturas dos mesmos, com todas as medições de viscosidade sendo feitas a 25°C.

[0024] Os silicones voláteis ramificados adequados incluem alquil trimeticonas, tais como metil trimeticona, com a fórmula geral:

(CHóííSíO ~~ SiO ~~ Si {('th h

OSí(CH03

Metil trimeticona pode ser adquirida da Shin-Etsu Silicones sob o nome comercial TMF-1.5, com uma viscosidade de 1,5 centistoke a 25°C.

[0025] Uma variedade de óleos não voláteis também é adequada para uso nas composições da invenção. Os óleos não voláteis geralmente têm uma viscosidade superior a cerca de 5 a 10 centistokes a 25°C, e podem variar em viscosidade até cerca de 1.000.000 centipoises a 25°C. Exemplos de óleos não voláteis incluem, mas sem limitação, mono-, di- e triésteres.

[0026] Os monoésteres são definidos como ésteres formados pela reação de um ácido monocarboxílico com a fórmula R-COOH, em que R é uma alquila saturada ou insaturada de cadeia linear ou ramificada com 2 a 45 átomos de carbono ou fenila; e um álcool com a fórmula ΡΟΗ, em que R é uma alquila saturada ou insaturada de cadeia linear ou ramificada com 2-30 átomos de carbono, ou fenila. Tanto o álcool como o ácido podem ser substituídos por um ou mais grupos hidroxila. Um ou ambos o ácido ou o álcool podem ser um ácido ou álcool graxo, e podem ter de 6 a 30 átomos de carbono, mais preferencialmente, 12, 14, 16, 18 ou 22 átomos de carbono na cadeia linear ou ramificada, forma saturada ou insaturada. Exemplos de óleos de monoéster

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7/24 que podem ser usados nas composições da invenção incluem laurato de hexíla, isoestearato de butila, isoestearato de hexadecila, palmitato de cetila, neopentanoato de isoestearila, heptanoato de estearila, isononanoato de isoestearila, lactato de estearila, octanoato de estearila, estearato de estearila, isononanoato de isononíla etc.

[0027] Os diésteres adequados são o produto de reação de um ácido dicarboxílico e um álcool alifático ou aromático ou um álcool all· fático ou aromático com pelo menos dois grupos hidroxila substituídos e um ácido monocarboxíiico. O ácido dicarboxílico pode conter de 2 a 30 átomos de carbono, e pode ser na forma saturada ou insaturada, de cadeia linear ou ramificada. O ácido dicarboxílico pode ser substituído por um ou mais grupos hidroxila. O álcool alifático ou aromático também pode conter 2 a 30 átomos de carbono, e pode ser na forma de cadeia linear ou ramificada, saturada ou insaturada. De preferência, um ou mais do ácido ou álcool é um ácido ou álcool graxo, isto é, contém 12-22 átomos de carbono. O ácido dicarboxílico também pode ser um ácido alfa hidróxi. O éster pode ser na forma de dímero ou trímero. Exemplos de óleos de diéster que podem ser utilizados nas composições da invenção incluem malato de di-isotearila, dioctanoato de neopentil glicol, sebacato de dibutila, dilinoleato de dímero de dicetearila, adipato de dicetiia, adipato de di-isocetila, adipato de di-isononila, dilinoleato de dímero de di-isoestearila, fumarato de di-isoestearila, malato de di-isoestearila, malato de dioctila etc.

[0028] Triésteres adequados compreendem o produto de reação de um ácido tricarboxílico e um álcool alifático ou aromático ou, alternativamente, o produto de reação de um álcool alifático ou aromático com três ou mais grupos hidroxila substituídos com um ácido monocarboxílico. Como com os mono- e diésteres mencionados acima, o ácido e o álcool contêm 2 a 30 átomos de carbono, e podem ser saturados ou insaturados, de cadeia linear ou ramificada, e podem ser

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8/24 substituídos por um ou mais grupos hidroxila. De preferência, um ou mais do ácido ou álcool é um ácido ou álcool graxo contendo 12 a 22 átomos de carbono. Exemplos de triésteres incluem ésteres de ácidos araquidônicos, cítricos ou beênicos, tais como triaraquidina, citrato de tributila, citrato de tri-isoestearila, citrato de tri-Ci2-i3 alquila, tricaprilina, citrato de tricaprilila, behenato de tridecila, citrato de trioctildodecila, behenato de tridecila; ou cocoato de tridecila, isononanoato de tridecila etc.

[0029] Ésteres adequados para uso na composição são ainda descritos no C.T.F.A. Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, 11^a Edição, 2006, sob a classificação de Ésteres, cujo texto é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

[0030] Pode ser desejável incorporar um ou mais óleos de hidrocarboneto não voláteis na composição. Óleos de hidrocarboneto não voláteis adequados incluem olefinas e hidrocarbonetos parafínicos, preferencialmente aqueles com mais de cerca de 20 átomos de carbono. Exemplos de tais óleos de hidrocarboneto incluem C24-28 olefinas, C30-45 olefinas, C2040 isoparafinas, poli-isobuteno hidrogenado, poliisobuteno, polideceno, polideceno hidrogenado, óleo mineral, pentahidroesqualeno, esqualeno, esqualano e suas misturas. Em uma modalidade preferida, tais hidrocarbonetos têm um peso molecular que varia de cerca de 300 a 1000 Dáltons.

[0031] Os gliceril ésteres de ácidos graxos sintéticos ou de ocorrência natural, ou triglicerídeos, também são adequados para uso nas composições. Tanto fontes vegetais quanto animais podem ser utilizadas. Exemplos de tais óleos incluem óleo de mamona, óleo de lanolina, C10-18 triglicerídeos, caprílico/cáprico/triglicerídeos, óleo de amêndoa doce, óleo de semente de damasco, óleo de gergelim, óleo de camelina sativa, óleo de semente de tamanu, óleo de coco, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de linhaça, óleo de tinta, azeiPetição 870190099605, de 04/10/2019, pág. 22/43

9/24 te de oliva, óleo de palma, manteiga de ilipê, óleo de colza, óleo de soja, óleo de semente de uva, óleo de semente de girassol, óleo de noz e semelhantes.

[0032] São também adequados os gliceril ésteres sintéticos ou semíssintéticos, tais como mono-, dl· e triglicerideos de ácido graxo, que são gorduras ou óleos naturais que foram modificados, por exemplo, mono-, dl· ou triésteres de polióis, tais como glicerina. Em um exemplo, um ácido (C12-22) carboxílico graxo é reagido com um ou mais grupos gliceríla repetidos, estearato de glicerila, di-isoestearato de glicerila, isoestearato de poliglicerila-3, isoestearato de poliglicerila4, ricinoleato de poliglicerila-6, dioleato de glicerila, di-isotearato de glicerila, tetraisoestearato de gliceríla, trioctanoato de gliceríla, diestearato de diglicerila, linoleato de glicerila, miristato de glicerila, isoestearato de glicerila, óleos de rícino PEG, oleatos de glicerila PEG, estearatos de glicerila PEG, talowatos de glicerila PEG etc.

[0033] Óleos de silicone não voláteis, tanto solúveis em água quanto insolúveis em água, também são adequados para uso na composição. Tais silicones têm preferencialmente uma viscosidade variando de cerca de mais de 5 a 800.000 cst, preferencialmente 20 a 200.000 cst a 25°C. Os silicones adequados incluem silicones funcionais de amina, tais como amodimeticona, dimeticona, fenil dimeticona, difenil dimeticona, fenil trimetícona ou trimetHsiloxifenil dimeticona. Outros exemplos incluem alquil dimeticona, tais como cetil dimeticona, e semelhantes, em que pelo menos um R é uma alquila graxa (C12, Cu, C16, Cis, C20 ou C22), e 0 outro R é metila, e Aé uma unidade terminal de trimetilsilóxi, desde que a alquil-dimeticona seja um líquido que possa ser vertido à temperatura ambiente. A fenil trimeticona pode ser adquirida da Dow Coming Corporation sob 0 nome comercial 556 Fluid. A trimetHsiloxifenil dimeticona pode ser adquirida da WackerChemie sob 0 nome comercial PDM-1000. A cetil dimeticona, também

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10/24 conhecida como cera líquida de silicone, pode ser adquirida da Dow Coming como Fluid 2502 ou da DeGussa Care & Surface Specialities sob os nomes comerciais Abil Wax 9801 ou 9814.

[0034] A composição pode conter um ou mais umectantes. Se presentes, eles podem variar de cerca de 0,01 a 75%, preferencialmente, de cerca de 0,5 a 70%, mais preferencialmente, de cerca de 0,5 a 40%. Exemplos de umectantes adequados incluem glicóis, açúcares e semelhantes. Os glicóis adequados estão na forma monomérica ou polimérica e incluem polietileno e polipropileno glicóis, tais como PEG 4-10, que são polietileno glicóis tendo de 4 a 10 unidades de repetição de óxido de etileno; bem como C1-6 alquileno glicóis, tais como propileno glicol, butileno glicol, pentíleno glicol e semelhantes. Açúcares adequados, alguns dos quais também são álcoois poli-hídricos, também são umectantes adequados. Exemplos de tais açúcares incluem glicose, frutose, mel, mel hidrogenado, inositol, maltose, manitol, maltitol, sorbitol, sacarose, xilitol, xilose e semelhantes. Ureia é também adequada. Preferencialmente, os umectantes utilizados na composição da invenção são C1-6, preferencíalmente, C2 4 alquileno glicóis, mais particularmente, butileno glicol.

B. Tensoativos [0035] Pode ser desejável que a composição contenha um ou mais tensoativos, especialmente se na forma de emulsão. No entanto, esses tensoativos podem ser utilizados se as composições também forem soluções, suspensões ou anidras, e auxiliarão na dispersão de ingredientes com polaridade, por exemplo, pigmentos. Esses tensoativos podem ser à base de silicone ou orgânicos. Os tensoativos também auxiliarão na formação de emulsões estáveis na forma de água em óleo ou óleo em água. Se presente, 0 tensoativo pode variar de cerca de 0,001 a 30%, preferencialmente, de cerca de 0,005 a 25%, mais preferencíalmente, de cerca de 0,1 a 20% em peso da composiPetição 870190099605, de 04/10/2019, pág. 24/43

11/24 ção total.

[0036] A composição pode compreender um ou mais tensoativos orgânicos não iônicos. Tensoativos não iônicos adequados incluem éteres ou álcoois alcoxilados, formados pela reação de um álcool com óxido de alquileno, geralmente óxido de etileno ou propileno. Álcoois adequados incluem álcoois mono-, di- ou poli-hídricos de cadeia curta (Ci-θ); álcoois graxos aromáticos ou alifáticos, saturados ou insaturados (C12-40), de colesterol; e assim por diante.

[0037] Em uma modalidade, 0 álcool é colesterol, ou um álcool graxo aromático ou alifático, saturado ou insaturado que pode ter de 6 a 40, preferencialmente, de cerca de 10 a 30, mais preferencialmente, de cerca de 12 a 22 átomos de carbono. Exemplos incluem álcool oleíHco, álcool cetearílico, álcool cetílico, álcool estearílico, álcool isoestearilico, álcool beenílico, e semelhantes. Exemplos de tais ingredientes incluem Oleth 2-100: Steareth 2-100; Beheneth 5-30; Ceteareth 2-100; Ceteth 2-100; Choleth 2-100, em que a faixa numérica significa 0 número de unidades de repetição de óxido de etileno, por exemplo, Ceteth 2-100 significa Ceteth, em que 0 número de unidades de repetição de óxido de etileno varia de 2 a 100. Derivados de álcoois alcoxilados são também adequados, tais como ésteres de ácido fosfórico dos mesmos.

[0038] Alguns tensoativos não iônicos orgânicos preferidos incluem Oleth-3, Oleth-5, Oleth~3 fosfato, Choleth-24; Ceteth~24; e assim por diante.

[0039] Também são adequados álcoois alcoxilados formados com álcoois mono-, di- ou poli-hídricos de cadeia curta, por exemplo, aqueles com cerca de 1 a 6 átomos de carbono. Exemplos incluem glicose, glicerina ou seus derivados alquilados. Exemplos incluem glicereth 2100; gluceth 2-100; metil gluceth 2-100, e assim por diante. Mais preferidos são metil gluceth-20; glicereth-26 e semelhantes.

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12/24 [0040] Outros tipos de álcoois alcoxilados são tensoativos adequados, incluindo polímeros de óxido de etileno com números variáveis de grupos EO de repetição, geralmente referidos como PEG 12 a 200. Mais preferidos são PEG-75, que pode ser adquirido da Dow Chemical sob a nome comercial Carbowax PEG-3350.

[0041] Outros tensoativos não iônicos adequados incluem sorbitano alcoxilado e derivados de sorbitano alcoxilado. Por exemplo, a alcoxilação, em particular, a etoxilação de sorbitano, fornece derivados de sorbitano polialcoxilados. A esterificação de sorbitano polialcoxilado fornece ésteres de sorbitano, tais como os polissorbatos. Por exemplo, o sorbitano polialcoxilado pode ser esterificado com ácidos graxos Ce-3o, preferencialmente, C12 22. Exemplos de tais ingredientes incluem Poiissorbatos 20-85, oleato de sorbitano, sesquioleato de sorbitano, palmitato de sorbitano, sesqui-isostearato de sorbitano, estearato de sorbitano, e assim por diante.

[0042] Também são adequados vários tipos de tensoativos à base de silicone ou silano. Exemplos incluem organossiloxanos substituídos por grupos de óxido de etileno ou óxido de propileno, tais como dimeticonas PEG, que são dimeticonas substituídas por polietileno glicóis, incluindo aqueles com os nomes INCI de dimeticona PEG-1; dimeticona PEG-4; dimeticona PEG-8; dimeticona PEG-12; dimeticona PEG20; e assim por diante.

[0043] Também são adequados silanos substituídos por grupos etóxi ou grupos propóxi ou ambos, tais como vários tipos de PEG metil éter silanos, tais como bis-PEG-18 metil éter dimetil silano; e assim por diante.

[0044] Outros exemplos de tensoativos à base de silicone incluem aqueles com os nomes genéricos de copoliol de dimeticona; copoliol de cetil dimeticona; e assim por diante.

[0045] A composição tópica também pode conter uma variedade

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13/24 de outros ingredientes, incluindo, mas sem limitação, conservantes, ajustadores de pH e similares.

[0046] Exemplos de composições tópicas incluem:

Uma emulsão de água e óleo contendo:

- 0,01 a 10% do éster de ácido sinapínico, preferencialmente, sinapoil malato,

-0,1 a 90% de água,

- 0,1 a 40% de óleo, preferencialmente, ésteres ou óleos de silicone,

- 0,1 a 10% de tensoativo, preferencialmente, um tensoativo não iônico.

[0047] A composição pode estar na forma de um creme, loção ou sérum. A composição também pode estar na forma de uma composição cosmética colorida, tal como base, corretivo, primer, sombra para os olhos e semelhantes.

III. Os Métodos [0048] A invenção compreende métodos para o tratamento da pele pela aplicação de uma composição tópica compreendendo um éster sintético de ácido sinapínico para inibir os danos UV nas células da pele, como um antioxidante para reduzir ou inibir os radicais livres na pele, para reduzir ou inibir danos de DNA nas células da pele expostas à luz UV, e como anti-inflamatório para reduzir a irritação, inflamação e sensibilidade da pele.

[0049] A invenção refere-se também a um método para melhorar a saúde e a viabilidade celular pela aplicação tópica de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de sinapoil malato.

[0050] A invenção refere-se também a um método para inibir e/ou reparar danos de DNA em células da pele pela aplicação tópica de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de sinapoil malato.

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14/24 [0051] A invenção refere-se também a um método para reduzir a irritação ou inflamação da pele pela aplicação de uma composição tópica que compreende uma quantidade eficaz de sinapoll malato. Mais preferido é onde o sinapoll malato inibe a irritação ou inflamação pela redução ou inibição do produto de IL1 -a e/ou ILI-β nas células da pele. [0052] A Invenção refere-se também a um método para sequestrar radicais livres na pele pela aplicação tópica de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de sinapoll malato.

[0053] Os benefícios desejados podem ser obtidos pela aplicação de composições tópicas contendo o sinapoil malato em quantidades eficazes na pele. Os tipos de composições aplicadas podem ser como aqui estabelecidos. As composições podem ser aplicadas em regimes, ou de manhã ou à noite ou em outros momentos do dia.

IV. O Método Sintético [0054] A invenção refere-se também a um método para síntese de sinapoil malato compreendendo as etapas de:

(a) (i) reagir siringaldeído com anidrido de ácido acético e um acetato de metal alcalino; ou (ii) reagir ácido sinapínico com anidrido de ácido acético, (b) clivar o intermediário obtido na seção (a) por exposição à água e um álcool alifático para formar ácido sinapínico protegido, (c) esterificar o ácido sinapínico protegido por reação com um éster de ácido carboxílico protegido por alquila para formar sinapoil malato protegido, (d) reagir o sinapoil malato protegido com ácido aquoso para gerar sinapoil malato.

[0055] Preferido é onde o material de partida é siringaldeído que é reagido com um acetato de metal alcalino (tal como sódio), alcanol (metanol, propanol, butanol) e anidrido acético. O ácido sinapínico protegido por acetila resultante pode, então, ser esterificado por reação

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15/24 com um éster de ácido málico CO2R-C(OH)-CO2R, em que R pode ser selecionado de metila, etila, propila, isopropila ou butila, para gerar éster de ácido sinapínico, em que todos os grupos hidroxila são protegidos. Os grupos de proteção podem ser hidrolisados por reação com ácidos inorgânicos aquosos, tais como ácido clorídrico ou sulfúrico, e um solvente orgânico apropriado para gerar sinapoil malato.

[0056] A invenção será descrita mais detalhadamente em conexão com os exemplos a seguir, os quais são apresentados apenas para fins de ilustração.

EXEMPLO 1 [0057] Os ésteres de ácido sinapínico da invenção foram preparados da seguinte maneira:

[0058] Etapa 1: Síntese de ácido 4-acetóxi-sinapínico, S3.

[0059] Em um frasco de 1 litro, uma mistura de reação de siringaldeído (150 gramas, 0,82 mol), anidrido de ácido acético (293 gramas, 2,87 moles) e acetato de sódio (59 gramas, 0,72 mol) foi pré-aquecida para 80°C por 5 horas antes do aquecimento para refluxo por mais 8 horas. Em seguida, a atmosfera foi reduzida para 500 mbar e o ácido acético foi removido da mistura. O resíduo foi resfriado para 90°C e metanol (900 gramas) foi adicionado seguido pela adição de água (240 gramas) à temperatura ambiente (25°C). A mistura de reação foi completamente agitada por 3 horas a esta temperatura. Após, o metanol foi removido sob vácuo. Ao resíduo obtido, tolueno (750 gramas) foi adicionado e as camadas orgânica e aquosa foram separadas, produPetição 870190099605, de 04/10/2019, pág. 29/43

16/24 zindo o produto bruto em toluene. O tolueno foi removido sob vácuo até o produto começar a precipitar. A mistura de reação foi resfriada para 0°C e agitada a essa temperatura por mais uma hora. O precipitado foi removido por filtração e lavado com tolueno frio. O rendimento do produto foi de 76 gramas (35%), e os dados espectroscópicos confirmaram o composto correto.

[0060] Etapa 2: Síntese de 4-3θθΐόχί-8ΐη3ροίΙ-όΗ3ορΓορίΙ malato, S5.

riu õV o

S3SS [0061] Em um frasco de 1 litro com ácido 4-acetóxi-sinapínico S3 (40 gramas, 0,15 mol), di-isopropil malato recém-destilado (32,7 gramas, 0,15 mol) e acetona (415 gramas), uma solução de diciclo-hexil carbodiimida (34 gramas, 0,165 mol), 4-dimetil aminopiridina (DMAP,

7,4 gramas, 0,06 mol) em acetona (150 gramas) foi adicionada em gotas à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada durante 5 horas a esta temperatura. O precipitado foi removido por filtração, lavado com acetona, e o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo obtido foi dissolvido em metil-terc-butil éter (200 gramas), removido sob vácuo para gerar o produto bruto desejado S5 (83 gramas), que foi usado diretamente para a próxima etapa de reação sem purificação adicional. Os dados espectroscópicos confirmaram o composto desejado.

[0062] Etapa 3: Síntese de sinapoil malato, S6.

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17/24

[0063] A um frasco de 2 litros contendo 4-acetóxi sinapoil-diisopropil malato S5 (83 gramas) em acetona (750 gramas), foi adicionado ácido sulfúrico aquoso (40%, 290 gramas). A mistura foi aquecida em condições de refluxo durante 8 horas até a desproteçâo estar completa. Sob vácuo parcial (700 mbar), a acetona foi evaporada da mistura produzindo um resíduo aquoso. Acetato de etila (600 gramas) foi adicionado e as camadas foram separadas, a camada orgânica foi lavada com água, e o solvente foi removido sob vácuo para gerar um resíduo marrom. O produto bruto foi dissolvido em metil-terc-butil éter (350 gramas) e extraído com solução saturada de NaHCCh, que foi então acidificada com H2SO4 e extraída com metil-terc-butil éter, produzindo 0 produto bruto após evaporação das camadas orgânicas até secagem. O sinapoil malato foi obtido como um sólido amarelo claro (10 gramas, 20% em duas etapas) após cromatografia em coluna flash (ciclo-hexano: acetato de etila, 1:1); faixa de fusão 55-65°C, ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d6): õ 9,00 (s, 1H), 7,59 (d, J=15,8 Hz, 1H), 7,06 (s, 2H), 6,59 (d, J=15,9 Hz), 5,33 (dd, J=8,8, 3,9 Hz, 1H), 3,86-3,77 (m, 6H), 2,89 (dd, J=16,7, 3,9 Hz, 1H), 2,77 (dd, J=16,7, 8,8 Hz, 1H), 13C RMN (101 MHz, DMSO-d6): 170,61, 170,27, 165,71, 147,90, 146,36, 138,40, 124,12, 113,89, 106,29, 68,28, 55,99, 40,02, 39,81, 39,60, 39,39, 39,18, 38,98, 38,77, 35,81; HR-LCMS (ESI) m/z 339,0717 (ΜΗ*), 4,49 min; HPLC 4,67 min.

[0064] Todos os cromatogramas de HPLC foram registrados em

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18/24 um sistema de HPLC usando uma coluna poroshell 120 SB-C18 (2,7 um, 5O.x2,1 mm) com um gradiente de 5% a 50% (10 min) e 50-100% (2 min) de água (ácido fórmico a 0,1%) e acetonitrila como eluente e um fluxo de 0,40 ml/min a 40°C. Como detector, foi utilizado um DAD UV 220-320 nm. Todos os cromatogramas de LCMS foram registrados em um sistema de HPLC usando uma coluna Kinetex RP-C18 (1,7 um, 100 x 2,1 mm) com um gradiente de 0-95% (22 min) de água (ácido fórmico a 0,1%) e acetonitrila (ácido fórmico a 0,09%) como eluente e um fluxo de 0,55 ml/min a 50°C. Como detector MS, foi utilizado um Broker micrOTOF Q-11.

EXEMPLO 2 [0065] O éster de ácido sinapínico (sinapoil malato) preparado no Exemplo 1 tendo a estrutura:

Sinapeb foi comparativamente testado contra fenetil éster de ácido caftárico (CAPE) tendo a seguinte estrutura:

[0066] O Sinapoil malato e CAPE foram avaliados quanto à absor ção de UV. 50 e 100 ppm de cada composto foram dissolvidos em

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19/24 água e um segundo conjunto de amostras de isopropanol. Amostras adicionais de sinapoil malato e CAPE foram preparadas dissolvendo 0,025% e 0,05% de cada ingrediente em uma mistura 50/50 de água e butileno glicol. Foi realizada diluição adicional para obter uma concentração de 1,4 ppm e 14 ppm.

[0067] As amostras foram testadas para absorção de UV em toda a faixa de UV, medindo com um sistema de espectroscopia UV-visível Agilent 8453 em comprimentos de onda variando de 200 a 450 nm no tempo 0, semana 1, semana 2 e semana 4. O termo NA significa que um pico de absorbância observado anteriormente não estava mais visível. O termo pico significa os dois picos de absorbância mais altos no espectro UV. O termo vale significa os dois pontos mais baixos entre os picos de absorbância. No caso de existir apenas um pico ou vale, significa que o outro pico ou vale observado anteriormente estava deteriorado no momento e temperatura do estudo de estabilidade. No caso de todos os picos e vales serem indicados como NA, isso significa que a amostra se deteriorou completamente e não foi mais absorvida na faixa de UV.

[0068] Os resultados numéricos são apresentados na Figura 1 e graficamente representados na Figura 2. Observa-se que os picos de absorbância de sinapoil malato (S) são diferentes e distintos dos picos de absorbância de CAPE (C). Além disso, o sinapoil malato é mais estável ao longo do tempo e temperatura em concentrações de

1,4 e 14 ppm. Em contraste, o CAPE mostra muito menos estabilidade ao longo do tempo e temperatura. Consequentemente, a diferença na estrutura química entre os dois compostos demonstra diferenças inesperadas em ambos os picos e vales de absorbância UV, bem como estabilidade a longo prazo e mostra que, quando os picos de absorbância na faixa de UV foram medidos em amostras contendo sinapoil malato (SM) e CAPE dissolvidas em uma mistura 50/50 de água e

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20/24 butileno glicol com concentração final de 1,4 e 14 ppm, SM apresentou picos de absorbância diferentes do CAPE e apresentou estabilidade geral significativamente melhor do que CAPE ao longo do tempo e temperatura. Isso é inesperado, dada a similaridade das estruturas entre os dois compostos. O termo NA significa que o pico de absorbância observado anteriormente do par não era mais visível ou mensurável.

EXEMPLO 3 [0069] O sinapoil malato preparado no Exemplo 1 foi testado quanto ao impacto na saúde e viabilidade celular em concentrações variando de 0, 0,0025, 0,005, 0,0075, 0,01, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1 e 0,25% em queratinócitos epidérmicos humanos normais (NHEK) que não foram irradiados, e que foram irradiados com 20, 40 e 80 mJ/cm² de UVB usando o ensaio Almar Blue.

[0070] Mais especificamente, os queratinócitos dérmicos humanos normais foram coletados e analisados quanto à viabilidade celular quando não tratados ou tratados com sinapoil malato nas concentrações acima mencionadas.

[0071] As células foram colocadas em concentrações de 150.000 células por placa para o teste de 48 horas e 300.000 células por placa para o teste de 24 horas em placas de 96 cavidades. As células foram incubadas a 37°C, 5% de CO2 e 95% de umidade por 24 horas. As composições de teste foram preparadas da forma a seguir.

[0072] As células foram tratadas por 48 horas pela aplicação das composições de teste. As células foram mantidas em uma incubadora com as condições estabelecidas acima.

[0073] Após 48 horas, as células foram lavadas com DPBS e cobertas com uma camada fina (cerca de 100 μΙ) de DPBS. O DPBS foi removido e, em seguida, 100 pl das composições de teste foram colocados nas células por 24 horas. As células foram mantidas na incubaPetição 870190099605, de 04/10/2019, pág. 34/43

21/24 dora com as condições aqui estabelecidas.

[0074] Outros lotes de células foram Irradiados com 20, 40 e 80 mJ/cm² de UVB (Dr. Groebel, UV-Electronik, GmbH). O DPBS foi aspirado e as composições de tratamento foram aplicadas novamente por 24 horas. Na manhã seguinte, o meio foi aspirado e 100 μΙ de solução Alamar Blue a 10% foram adicionados. A placa foi incubada a 37°C por 1,5 a 2 horas. A fluorescência foi medida a 530/590 nanômetros usando um leitor Spectra Max Gemini. A viabilidade celular foi calculada e expressa como a porcentagem de sobrevivência de células tratadas com peróxido de hidrogênio. Os resultados são apresentados na Figura 3 e demonstram que o sinapoil malato foi eficaz na promoção da saúde e viabilidade de queratinócitos antes e após a radiação de UV.

EXEMPLO 4 [0075] O sinapoil malato foi testado no estudo de fragmentação de DNA para verificar sua capacidade de reparar ou inibir a fragmentação de DNA após a exposição de células à radiação UV. Os queratinócitos foram plaqueados em discos de 60 mm a 100.000 células por disco e cultivados em meio EpiLife (ThermoFisher, cat#M-EPI-500-CA) suplementado com Suplemento de Cultura de Queratinócitos Humanos (ThermoFisher, cat#S-001-5) até atingir 50% de confluência. As células foram lavadas com DPBS e depois cobertas com uma camada fina (2 ml) de DPBS contendo 0,005% ou 0,025% de sinapoil malato antes de serem irradiadas com 100 mJ/cm² de UVB na câmara de irradiação de Dr. Grõbel. As células foram lavadas novamente com DPBS e incubadas em meio por 6 h. Os NHEK foram tripsinizados, lavados com PBS e suspensos em PBS a 1x10⁵ células/ml. As células foram, então, dispersas em agarose fundida (Trevigen, cat#4250-050-02) a 37°C em uma proporção de 1:10. 75 μΙ da mistura de céluia/agarose foram pipetados uniformemente em cada ponto da lâmina Comet (Trevigen,

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22/24 cat#4250-050-03) e depois incubados a 4°C por 10 minutos. As lâminas foram imersas em solução de lise fria (Trevigen, cat#4250-050-01) em gelo durante a noite. As lâminas foram removidas da solução de lise e colocadas em uma solução alcalina (300 mM de NaOH, 1 mM de EDTA, pH>13) à temperatura ambiente por 30 minutos. Em seguida, as lâminas foram colocadas no sistema de eletroforese Comet Assay ESII. A solução de eletroforese alcalina fria (200 mM de NaOH, 1 mM de EDTA, pH>13) foi vertida no aparelho para cobrir apenas as lâminas. A eletroforese foi executada por 30 minutos a 23V. Após a eletroforese, as lâminas foram enxaguadas com H2O e imersas em 70% de EtOH por 5 min. As lâminas foram removidas da solução de EtOh e colocadas em uma toalha para secar ao ar durante a noite. Ouro SYBR (ThermoFisher, cat#S11494) foi diluído em tampão TE (10 mM de Tris-HCI, 1 mM de EDTA, pH 7,5) 1:30000. 100 μΙ de ouro SYBR diluído foram pípetados em cada ponto. As lâminas foram incubadas à temperatura ambiente por 30 min. Em seguida, as lâminas foram deixadas secar novamente após a remoção do excesso de ouro SYBR das lâminas. As lâminas foram visualizadas sob 0 microscópio EVOS com 0 filtro FITC com a objetiva 20x. Os momentos caudais foram determinados com 0 software Comet Score de Tri Tek.

[0076] Os resultados são apresentados na Figura 4 e demonstram que sinapoil malato foi muito eficaz na inibição ou prevenção de dano de DNA em queratinócitos, tanto em células tratadas com uma concentração de 0,005% e 0,025% de sinapoil malato e sem irradiação (lado esquerdo do gráfico) quanto em células irradiadas com UV e expostas a 0,005% e 0,025% de sinapoil malato.

EXEMPLO 5 [0077] A atividade anti-inflamatória de sinapoil malato foi demonstrada testando sua capacidade de inibir lnterleucina-ΐα (IL1-a) e IL1 -β, ambos indicadores de inflamação. As espécies de IL1 são responsáPetição 870190099605, de 04/10/2019, pág. 36/43

23/24 veis por estimular a inflamação em tecidos danificados.

[0078] Os queratinócitos foram tratados como descrito no Exemplo

4. Os meios em que as células foram incubadas após a irradiação foram coletados após 6 horas e analisados com o Ensaio de Citocinas Humanas MilliplexMAP (Millipore, cat#HCYTMAG-60K-PX29), de acordo com o protocolo do fabricante. Os meios das células foram incubados com esferas magnéticas pré-misturadas durante a noite a 4°C em um agitador a 800 rpm. As esferas foram lavadas e, em seguida, incubadas com os anticorpos de detecção por 1 hora à temperatura ambiente no agitador a 800rpm. Estreptavidina-Ficoeritrina foi adicionada às esferas e incubada por 30 min à temperatura ambiente no agitador a 800 rpm. As esferas foram lavadas, suspensas em fluido de bainha e lidas no Luminex.

[0079] Os resultados são apresentados na Figura 5 com BIO3815 referente a sinapoil malato. Os resultados demonstram que sinapoil malato inibe IL1-o e IL1 -β de maneira dose-dependente, mostrando assim sua eficácia como um ativo anti-inflamatório.

EXEMPLO 6 [0080] A atividade antioxidante de sinapoil malato foi testada determinando primeiramente as concentrações não citotóxicas aceitáveis deste material. Com base nesses resultados, os Queratinócitos Epidérmicos Humanos Normais (NHEK) foram plaqueados em duas placas de microtitulação de 96 cavidades com um título de 2 x 10⁴ células por cavidade. Além das amostras de controle não tratadas, sinapoil malato foi adicionado em concentrações que variavam de 0,01% a 0,1% e foi incubado durante a noite (cerca de 15 h). No dia seguinte, o meio de cultura celular foi aspirado, as células foram enxaguadas com 100 ul de Solução Salina Tamponada com Fosfato de Dulbecco, pH

7,4 (D-PBS), aspiradas novamente e, em seguida, 30 ul de D-PBS foram adicionados. Uma placa foi mantida no exaustor de cultura celular,

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24/24 como uma amostra irradiada por placebo, enquanto a outra placa foi exposta a 50 mJ/cm² de UVB. Após exposição e aspiração adicional, as placas de controle e as irradiadas com UVB foram tratadas com 100 ul de 10 uM de diacetato de 2',7'-diclorodihidrofluoresceína (DCFda) em D-PBS por 6h a 37°C. Além disso, 100 ul de 25 mM de NaNa foram adicionados 20 minutos na incubação. No final da incubação de 6 horas, a fluorescência foi medida com um leitor de placas de fluorescência SpectraMax Gemini EM configurado em excitação de 485 nm e emissão de 538 nm com um comprimento de onda ajustado em 530 nm. Um aumento na fluorescência indica o aumento de espécies reativas de oxigênio (ROS), particularmente peróxido de hidrogênio (H2O2), porque é a ROS de maior duração. Por outro lado, uma redução na fluorescência indica atividade antioxidante. Dessa maneira, tanto as ROS endógenas quanto as induzidas por UVB foram determinadas e a eficácia de sinapoil malato como um antioxidante foi medida.

[0081 ] Os resultados sâo apresentados na Figura 6 e demonstram que sinapoil malato foi um antioxidante muito eficaz para as células não tratadas e para as células irradiadas com UV em concentrações de 0,01%, 0,05% e 0,10%.

[0082] Embora a invenção tenha sido descrita em conexão com a modalidade preferida, esta não se destina a limitar 0 escopo da invenção à forma específica estabelecida, mas, ao contrário, destina-se a cobrir tais alternativas, modificações e equivalentes que podem estar incluídos no espírito e escopo de invenção, conforme definido pelas reivindicações anexas.

Claims (20)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composição tópica, caracterizada pelo fato de que compreende um éster sintético de ácido sinapínico.
2. 2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o éster é um éster de ácido alfa ou beta hidroxílico.
3. 3. Composição, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o éster é um éster de ácido alfa hidroxílico.
4. 4. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o composto sintético é sinapoil malato.
5. 5. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que está na forma de um creme, loção, sérum, gel, solução, suspensão ou composição anidra.
6. 6. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que está na forma de uma emulsão de água e óleo.
7. 7. Uso de um composto sintético, que é um éster de ácido sinapínico, caracterizado pelo fato de que é na preparação de uma composição tópica para tratamento de pele para prover um ou mais benefícios selecionados de (a) proteção contra radiação UV, (b) inibição de dano de DNA em células da pele, (c) inibição ou redução de inflamação da pele, e (d) sequestro de radicais livres.
8. 8. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o composto sintético é sinapoil malato.
9. 9. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a pele é protegida contra radiação UVA e UVB.
10. 10. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que dano de DNA em células da pele é inibido.
11. 11. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a inflamação é inibida por inibição de IL1-a ou ΙΙ_1-β, ou ambos.
12. 12. Uso, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado

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    2/3 pelo fato de que o composto é sinapoil malato.
13. 13. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o sinapoil malato está em uma concentração de 0,001 a 0,05%.
14. 14. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o sinapoil malato sequestra radicais livres quando topicamente aplicado à pele.
15. 15. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o sinapoil malato reduz ou inibe dano de DNA em células da pele quando topicamente aplicado.
16. 16. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o sinapoil malato protege as células da pele contra radiação UV quando topicamente aplicado.
17. 17. Método para síntese de sinapoil malato, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:

    (a) (i) reagir siringaldeído com anidrido de ácido acético e um acetato de metal alcalino; ou (ii) reagir ácido sinapínico com anidrido de ácido acético, (b) clivar o anidrido do produto de reação protegido por acetila de (a) por exposição à água e um álcool alifático para formar ácido sinapínico protegido, (c) esterificar o ácido sinapínico protegido por reação com um éster de ácido carboxílico protegido por alquila para formar sinapoil malato protegido, e (d) reagir o sinapoil malato protegido com ácido aquoso para gerar sinapoil malato.
18. 18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a etapa (a) é (a)(i).
19. 19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado

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    3/3 pelo fato de que o siringaldeído é reagido com acetato de sódio e anidrido acético.
20. 20. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que:

    o álcool alifático em (b) é metanol;

    o éster de ácido carboxílico protegido por alquila em (c) é ácido málico; e o ácido aquoso em (d) é ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ou combinações dos mesmos.