BR112019014924A2

BR112019014924A2 - Composição farmacêutica usada para o tratamento de mielopatia associada ao htlv-1

Info

Publication number: BR112019014924A2
Application number: BR112019014924-4A
Authority: BR
Inventors: Yamano Yoshihisa; Ueda Natsumi; Araki Kazushi
Original assignee: St. Marianna University School Of Medicine; Daiichi Sankyo Company, Limited
Priority date: 2017-01-19
Filing date: 2018-01-18
Publication date: 2020-03-31
Also published as: EP3572095A4; KR20190105602A; CN110191722A; WO2018135556A1; CN110191722B; AU2018210099A1; US20190343816A1; CA3050221C; CA3050221A1; TW201831181A; JP7125353B2; EP3572095A1; US11311524B2; JPWO2018135556A1

Abstract

a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que contém um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de ezh1, um inibidor de ezh2 e um inibidor duplo de ezh1/2 como um ingrediente ativo, para uso no tratamento de mielopatia associada ao htlv-1. a presente invenção fornece uma composição farmacêutica para uso no tratamento de mielopatia associada ao htlv-1, que contém um derivado de 1,3-benzodioxol ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Description

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA USADA PARA O TRATAMENTO DE MIELOPATIA ASSOCIADA AO HTLV-1

Campo técnico [001] A presente invenção está relacionada a uma composição farmacêutica para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

Fundamentos da técnica [002] A mielopatia associada ao HTLV-1 (HAM), que se desenvolve em cerca de 0,25% dos pacientes infectados com o virus linfotrópico T humano tipo 1 (HTLV-1), é uma doença neurológica intratável que não possui terapia estabelecida. A condição patológica da HAM é considerada como um distúrbio do tecido nervoso causado por resposta imune excessiva em consequência de células infectadas pelo HTLV-1. Esteróides e IFNOC, que têm sido usados para tratamento até o momento, possuem um efeito terapêutico limitado e menos efeito sobre a redução de células infectadas, que são consideradas uma causa fundamental para a doença. Além desse problema sério, o nivel de expressão do gene de HTLV-1 é baixo, diferentemente do gene do virus da AIDS, com o resultado de que os efeitos terapêuticos por um transcriptase inibidor reversa e um inibidor de protease eram baixos.

[003] O número de pacientes que sofre de doenças inflamatórias associadas com HTLV-1 é extremamente baixo. Por essa razão, a elucidação da etiologia e o desenvolvimento de fármacos terapêuticos para essas doenças foram raramente estudados. Incidentalmente, foi verificado que um composto especificado na Literatura de patente 1 é útil para tratamento de um tipo de tumor, leucemia-linfoma de célula T do adulto (ATL) (Literatura de patente 2) . No entanto,

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2/47 leucemia-linfoma de célula T do adulto (ATL) e mielopatia associada ao HTLV-1 (HAM) são completamente opostas no mecanismo de surgimento; mais especificamente, ATL é uma doença desenvolvida sob condição imunossupressora; enquanto HAM é uma doença que produz inflamação por intensificação imune. Consequentemente, as terapias e agentes terapêuticos para elas diferem completamente; mais especificamente, leucemia-linfoma de célula T do adulto (ATL) é tratada por um agente anticâncer; enquanto a mielopatia associada ao HTLV-1 (HAM) é tratada por um agente antiinflamatório. Além disso, os tipos de células envolvidos em condições patológicas de ATL e HAM são completamente diferentes, como é evidente a partir do documento (Literatura não-patente 1).

Lista de citações [004] Literaturas de patente

Literatura de patente 1: Publicação Internacional N° WO 2015/141616

Literatura de patente 2: Patente Japonesa N° 6009135 [005] Literatura não-patente

Literatura não-patente 1: Araya N., e cols., Viruses, 3: 1.532-1.548, 2010

Sumário da invenção [006] A presente invenção fornece uma composição farmacêutica para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[007] Os presentes inventores revelaram que uma célula

CD4+CD2 5⁺CCR4⁺ e outras células CD4+ de um paciente com mielopatia associada ao HTLV-1 (HAM) superexpressam EZH2. Os presentes inventores verificaram que, quando a atividade de autoproliferação de PBMCs derivadas da medula espinhal de um

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3/47 paciente com HAM é inibida por um inibidor de EZH2, a habilidade de produção de IL-10 é aumentada e o número de células infectadas pelo HTLV-1 reduz, com o resultado de que apoptose é induzida. Os presentes inventores também verificaram que o efeito do inibidor de EZH2 é ainda mais aumentado em um inibidor duplo de EZH1/2. A partir disso, os presentes inventores estavam cientes de que a supressão de cada uma das atividades enzimáticas de EZH1 e EZH2 possui uma significância terapêutica para HAM. A presente invenção foi realizada com base nesses achados.

[008] Mais especificamente, de acordo com a presente invenção, as seguintes invenções são fornecidas.

(1) Uma composição farmacêutica que compreende um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 como um ingrediente ativo, para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

(2) A composição farmacêutica de acordo com (1), em que o inibidor é um inibidor duplo de EZH1/2.

(3) A composição farmacêutica de acordo com (1), em que o inibidor é um composto selecionado de:

N-[(1,2-diidro-4,6-dimetil-2-oxo-3-piridinil) metil]-3metil-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil)-3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

N-((4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il) metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e

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4/47 (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

(4) A composição farmacêutica de acordo com (1) ou (2), em que o inibidor é (2R)-7-bromo-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida ou (2R)-7-cloro-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(5) A composição farmacêutica de acordo com (1) ou (2), em que o inibidor é (2R)-7-bromo-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(6) A composição farmacêutica de acordo com (1) ou (2), em que o inibidor é (2R)-7-cloro-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(7) A composição farmacêutica de acordo com (1) ou (2), em que o inibidor é (2R)-7-cloro-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida p-tolueno sulfonato.

(8) Uma composição farmacêutica para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1, que compreende um composto selecionado de:

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N-[(1,2-diidro-4,6-dimetil-2-oxo-3-piridinil)metil]-3metil-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil)-3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

N-((4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

(9) A composição farmacêutica de acordo com (8), que compreende (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(10) A composição farmacêutica de acordo com (8), que compreende (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(11) A composição farmacêutica de acordo com (8), que compreende (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida p-tolueno sulfonato.

(12) Um método para o tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1 em um indivíduo necessitado, que compreende a

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6/47 administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 ao paciente.

(13) 0 método de acordo com (12), em que o inibidor é um inibidor duplo de EZH1/2.

(14) 0 método de acordo com (12), em que o inibidor é um composto selecionado de:

(15) 0 método de acordo com (12) ou (13), em que o inibidor é (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida ou (2R)-7cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(16) 0 método de acordo com (12) ou (13), em que o

Petição 870190068544, de 19/07/2019, pág. 16/76 / 47 inibidor é (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(17) 0 método de acordo com (12) ou (13), em que o inibidor é (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(18) 0 método de acordo com (12) ou (13), em que o inibidor é (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida p-tolueno sulfonato.

(19) Um método para o tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1 em um indivíduo necessitado, que inclui a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto selecionado de:

N-((4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida,

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8/47 ou um sal farmaceuticamente aceitável destes, ao indivíduo.

(20) O método de acordo com (19), em que uma quantidade terapeuticamente eficaz de (2R)-7-bromo-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, é administrada ao indivíduo.

(21) O método de acordo com (19), em que uma quantidade terapeuticamente eficaz de (2R)-7-cloro-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, é administrada ao indivíduo.

(22) O método de acordo com (19), em que uma quantidade terapeuticamente eficaz de (2R)-7-cloro-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida p-tolueno sulfonato é administrada ao indivíduo.

(23) Uso de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2, para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

(24) Uso de acordo com (23), em que o inibidor é um inibidor duplo de EZH1/2.

(25) Uso de acordo com (23), em que o inibidor é um composto selecionado de:

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N-((4, 6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

(26) Uso de acordo com (23) ou (24), em que o inibidor é (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida ou (2R)-7-cloro-2[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-

5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(27) Uso de acordo com (23) ou (24), em que o inibidor é (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(28) Uso de acordo com (23) ou (24), em que o inibidor é (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(29) Uso de acordo com (23) ou (24), em que o inibidor é (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4Petição 870190068544, de 19/07/2019, pág. 19/76

10/47 dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida p-tolueno sulfonate.

(30) Uso de um composto selecionado de:

N-((4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il) metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes, para a produção de um medicamento para o tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

(31) Uso de acordo com (30) de (2R)-7-bromo-2-[trans-

4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

(32) Uso de acordo com (30) de (2R)-7-cloro-2-[trans-

(33) Uso de acordo com (30) de (2R)-7-cloro-2-[trans-

4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida p-tolueno sulfonato.

Breve descrição dos desenhos

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11/47 [009] [Figura 1] A Figura 1 mostra que o nivel de expressão do gene de EZH2 é maior em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) retiradas do sangue periférico de um paciente com HAM do que em PBMC de uma pessoa saudável.

[0010] [Figura 2] A Figura 2 mostra que composto A e composto B (definido posteriormente) , que são inibidores duplos de EZH1/2, inibem a atividade de autoproliferação de PBMCs (observada caracteristicamente na HAM) na ausência de qualquer estimulação.

[0011] [Figura 3] A Figura 3 mostra que E7438 e GSK126, que são inibidores de EZH2, inibem a atividade de autoproliferação de PBMCs (observada caracteristicamente na HAM) na ausência de qualquer estimulação.

[0012] [Figura 4] A Figura 4 mostra que os inibidores duplos de EZH1/2, composto A e composto B, aumentam a liberação de uma citocina imunossupressora, IL-10.

[0013] [Figura 5] A Figura 5 mostra que os inibidores duplos de EZH1/2, composto A e composto B, reduzem a carga pró-viral de HTLV-1.

[0014] [Figura 6] A Figura 6 mostra que os inibidores duplos de EZH1/2, composto A e composto B, reduzem a viabilidade de células infectadas pelo HTLV-1 estabelecidas do fluido cerebrospinal de um paciente com HAM.

[0015] [Figura 7] A Figura 7 mostra que os inibidores duplos de EZH1/2, composto A e composto B, reduzem a viabilidade de células infectadas pelo HTLV-1 estabelecidas do fluido cerebrospinal de um paciente com HAM, de uma forma concentração-dependente.

[0016][Figura 8] A Figura 8 mostra que os inibidores duplos de EZH1/2, composto A e composto B, induzem apoptose

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12/47 de células infectadas pelo HTLV-1 estabelecidas do fluido cerebrospinal de um paciente com HAM.

[0017] [Figura 9] A Figura 9 mostra que os inibidores duplos de EZH1/2, composto A e composto B, induzem apoptose de células infectadas pelo HTLV-1 estabelecidas do fluido cerebrospinal de um paciente com HAM, que difere do paciente da Figura 8 .

Descrição detalhada da invenção [0018]No relatório descritivo, o termo indivíduo se refere a um mamifero, particularmente um humano.

[0019]No relatório descritivo, o termo mielopatia associada ao HTLV-1 (a seguir algumas vezes denominada HAM) se refere a uma doença associada com paralisia espinhal espástica progressiva crônica, e diagnosticada por um médico de acordo com as diretrizes da Organização Mundial de Saúde (OMS) (Osame M. Review of WHO Kagoshima Meeting and Diagnostic Guidelines for HAM/TSP. Em: Blattner W, ed., Human Retrovirology: HTLV, Nova York, Nova York, EUA: Raven Press; 1990: 191-197).

[0020]HAM é desenvolvida em parte das pessoas infectadas com virus linfotrópico T humano tipo 1 (HTLV-1). Na HAM, um processo inflamatório crônico ocorre na medula espinhal, particularmente dentro e em torno da região média inferior do tórax. Em uma lesão da medula espinhal da HAM, foi verificado clinicamente que a resposta imune celular ocorre persistentemente.

[0021] A partir da análise por PCR in situ das células infectadas pelo HTLV-1 em uma lesão da medula espinhal da

HAM, células infectadas pelo HTLV-1 só são encontradas em células T infiltrantes e não são encontradas nas células

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13/47 nervosas periféricas ou células gliais. A partir da análise patológica da lesão da medula espinhal da HAM, é demonstrado que as células que constituem principalmente as células inflamatórias infiltrantes são células CD4-positivas que contêm células infectadas pelo HTLV-1, que aparecem no estágio inicial da doença; estas, no entanto, são substituídas com células CD8-positivas à medida que a doença progride. A partir disso, HAM não é considerada como uma simples doença infecciosa do nervo, mas considera-se que a resposta imune mediada principalmente por células T infiltradas infectadas pelo HTLV-1 fica fora de controle, fazendo com que seja formada e/ou mantida uma lesão inflamatória crônica como uma condição patológica principal.

[0022]A leucemia-linfoma de célula T do adulto (ATL) é uma doença desenvolvida em parte das pessoas infectadas pelo HTLV-1. Sabe-se que ATL é um tumor maligno (câncer) derivado de células infectadas pelo HTLV-1 e completamente diferente de HAM. As células infectadas pelo HTLV-1 são consideradas células T CD4+CD25+CCR4+ não apenas em HAM, mas também ATL. Na HAM, em células T CD4+CD25+CCR4 + , a expressão de Foxp3 diminui e a produção de INF-γ está aumentada (a expressão de tax de HTLV-1 também é elevada); por outro lado, células T regulatórias (Treg) estão suprimidas. Em contraste, na ATL, em células T CD4+CD25+CCR4+, a expressão de Foxp3 aumenta (sem expressão de tax de HTLV-1) e as células T têm uma queda em uma condição imunossupressiva. Além disso, a função de Treg aumenta. Deficiência imune celular clinicamente observada na ATL é explicada por esse fenômeno.

[0023]Como descrito acima, na HAM, a resposta imune ocorre excessivamente para formar uma lesão inflamatória

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14/47 crônica, que é uma causa de HAM; por outro lado, na ATL, a resposta imune é, pelo contrário, suprimida.

[0024]Em resumo, os mecanismos de surgimento de HAM e ATL são opostos como descritos acima e os componentes celulares neles envolvidos diferem mutualmente (Araya N., e cols., Viruses, 3: 1.532-1.548, 2010) .

[0025]Os presentes inventores verificaram que a produção de uma citocina imunossupressora, IL-10, é aumentada por tratamento do paciente com PBMCs derivadas de HAM com um inibidor duplo de EZH1/2. Os presentes inventores também verificaram que, se o paciente com PMBCs derivadas de HAM é tratado com um inibidor de EZH2 ou com um inibidor duplo de EZH1/2, a atividade de autoproliferação da PMBC pode ser suprimida. Os presentes inventores ainda verificaram que, se células infectadas pelo HTLV-1 estabelecidas do fluido cerebrospinal de um paciente com HAM são tratadas com um inibidor duplo de EZH1/2, a viabilidade de células é reduzida e a apoptose de células é induzida. A atividade de autoproliferação de pacientes com PBMCs derivadas de HAM foi mais eficazmente suprimida por um inibidor duplo de EZH1/2 do que por um inibidor de EZH2. Como o efeito inibidor contra a atividade enzimática de EZH2 é equivalente, mas o efeito de inibidor duplo de EZH1/2 é elevado, foi verificado que a inibição contra a atividade de EZH1 também é importante para supressão da atividade de autoproliferação de PMBCs derivadas de pacientes com HAM.

[0026]Dessa forma, de acordo com a presente invenção, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de

EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 como

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15/47 um ingrediente ativo, para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0027]De acordo com a presente invenção, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um inibidor de EZH1 como um ingrediente ativo, para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0028]De acordo com a presente invenção, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um inibidor de EZH2 como um ingrediente ativo, para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0029]De acordo com a presente invenção, também é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um inibidor duplo de EZH1/2 como um ingrediente ativo, para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0030]A composição farmacêutica da presente invenção pode ainda compreender um excipiente.

[0031]Exemplos do inibidor de EZH1 que podem ser usados na presente invenção incluem, sem limitação:

(2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

[0032]Exemplos do inibidor de EZH2 que podem ser usados na presente invenção incluem, sem limitação:

N-[(1,2-diidro-4,6-dimeti1-2-oxo-3-piridinil)metil]-3metil-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil)-3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

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16/47

N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

[Ο033]Exemplos do inibidor de EZH2 que podem ser usados na presente invenção incluem (IS,2R,5R)-5-(4aminoimidazo[4,5-c]piridin-l-il)-3-(hidroximetil)ciclopent3-en-l,2-diol e um sal farmaceuticamente aceitável deste. Exemplos do inibidor de EZH2 que podem ser usados na presente invenção ainda incluem N-[(6-metil-2-oxo-4-propil-lHpiridin-3-il)metil]-l-propan-2-il-6-[6-(4-propan-2ilpiperazin-l-il)piridin-3-il]indazol-4-carboxamida e um sal farmaceuticamente aceitável deste. Exemplos do inibidor de EZH2 ainda incluem tazemetostat (EPZ-6438). Exemplos do inibidor de EZH2 que podem ser usados na presente invenção ainda incluem N-[(l,2-diidro-6-metil-2-oxo-4-propil-3piridinil)metil]-1-)1-metiletil)-6-[2-(4-meti1-1piperazinil)-4-piridinil]-lH-indazol-4-carboxamida e um sal farmaceuticamente aceitável deste. Exemplos do inibidor de EZH2 que podem ser usados na presente invenção ainda incluem diversos compostos descritos em Stazi, G. e cols., Expert Opinion on Therapeutic Patents, 27: 7, 797-813, 2017. Os inibidores de EZH2 estão desenvolvidos no mundo; por exemplo, inibidores de EZH2 descritos nos seguintes documentos podem

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17/47 ser usados na presente invenção: WO 2014/100646, WO 2015/057859, WO 2016/081523, WO 2014/144747, WO 2015/010078, WO 2015/010049, WO 2015/200650, WO 2015/132765, WO

2015/004618, WO 2016/066697, WO 2014/124418, WO 2015/023915, WO 2016/130396, WO 2015/077193, WO 2015/077194, WO

2015/193768, WO 2016/073956, WO 2016/073903, WO 2016/102493, WO 2016/089804, WO 2014/151369. Na presente invenção, o inibidor de EZH2 pode ainda ter um efeito inibidor de EZH1 e pode ser, por exemplo, um inibidor duplo de EZH1/2. Por exemplo, a N-[(6-metil-2-oxo-4-propil-lH-piridin-3-il) metil]-l-propan-2-il-6-[6-(4-propan-2-ilpiperazin-l-il) piridin-3-il]indazol-4-carboxamida mencionada anteriormente e um sal farmaceuticamente aceitável deste podem ser um inibidor duplo de EZH1/2. Em uma modalidade da presente invenção, tanto um inibidor de EZH1 quanto um inibidor de EZH2 podem ser administrados para o tratamento de um paciente com mielopatia associada ao HTLV-1.

[0034]Exemplos do inibidor duplo de EZH1/2 que podem ser usados na presente invenção incluem, sem limitação:

(2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

[0035] (2R)-7-Bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida é revelada em WO 2015/141616, Exemplo 15, e um composto que possui a

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18/47 seguinte estrutura.

[Fórmula 1]

[0036] (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3il)metil]-2, 4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida é revelada em WO 2015/141616, Exemplo 35, e um composto que possui a seguinte estrutura.

[Fórmula 2]

[0037] (2R)-7-Cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida p-tolueno sulfonato é revelado em WO 2015/141616, Exemplo 80.

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19/47 [0038]N-[(1,2-Dihydro-4,6-dimetil-2-oxo-3-piridinil) metil]-3-metil-l-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil)3-piridinil]-lH-indol-4-carboxamida também é referida como GSK126, e é revelada em WO 2011/140324, Exemplo 270.

[0039]N-((4,6-Dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il) metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida também é referida como E7438 ou EPZ-6438, e é revelada em WO 2012/142504, Exemplo 44.

[0040] Em uma modalidade da presente invenção, um inibidor de EZH1 possui um efeito inibidor contra a atividade de histona metiltransferase de EZH1 humana, e a IC50 desta pode ser 1 μΜ ou menos, 500 nM ou menos, 400 nM ou menos, 300 nM ou menos, 200 nM ou menos, 150 nM ou menos, 100 nM ou menos, 90 nM ou menos, 80 nM ou menos, 70 nM ou menos, 60 nM ou menos, 50 nM ou menos, 40 nM ou menos, 30 nM ou menos, 20 nM ou menos, 15 nM ou menos, ou 10 nM ou menos. O valor da IC50 pode ser determinado com base no método descrito, por exemplo, em WO 2015/141616, Exemplo de teste 1; por exemplo, por detecção do efeito inibidor contra a atividade de EZH1 para transferir S-adenosil metionina marcada com tritio para um peptideo que possui uma sequência de EZHl-alvo (por exemplo, uma sequência do 12° ao 40° aminoácidos de uma proteina histona H3 humana; quanto à sequência de aminoácidos da proteina histona H3 humana, veja, por exemplo, a sequência registrada sob o número de registro no GenBank: CAB02546.1). A atividade de metiltransferase de EZH1 pode ser medida por utilização de um complexo PRC2-EZH1.

[0041]Em uma modalidade da presente invenção, um inibidor de EZH2 possui um efeito inibidor contra a atividade

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20/47 de histona metiltransferase de EZH2 humana, e a IC50 desta pode ser 1 μΜ ou menos, 500 nM ou menos, 400 nM ou menos, 300 nM ou menos, 200 nM ou menos, 150 nM ou menos, 100 nM ou menos, 90 nM ou menos, 80 nM ou menos, 70 nM ou menos, 60 nM ou menos, 50 nM ou menos, 40 nM ou menos, 30 nM ou menos, 20 nM ou menos, 15 nM ou menos, ou 10 nM ou menos. O valor da IC50 pode ser determinado com base no método descrito, por exemplo, em WO 2015/141616, Exemplo de teste 2; por exemplo, por detecção do efeito inibidor contra a atividade de EZH2 para transferir S-adenosil metionina marcada com tritio para um peptideo que possui uma sequência de EZH2-alvo (por exemplo, uma sequência do 12° ao 40° aminoácidos de uma proteina histona H3 humana; quanto à sequência de aminoácidos da proteina histona H3 humana, veja, por exemplo, a sequência registrada sob o número de registro no GenBank: CAB02546.1). A atividade de metiltransferase de EZH2 pode ser medida por utilização de um complexo PRC2-EZH2.

[0042]Em uma modalidade da presente invenção, um inibidor duplo de EZH1/2 possui um efeito inibidor contra a atividade de histona metiltransferase de EZH1 humana, e a IC50 desta pode ser 1 μΜ ou menos, 500 nM ou menos, 400 nM ou menos, 300 nM ou menos, 200 nM ou menos, 150 nM ou menos, 100 nM ou menos, 90 nM ou menos, 80 nM ou menos, 70 nM ou menos, 60 nM ou menos, 50 nM ou menos, 40 nM ou menos, 30 nM ou menos, 20 nM ou menos, 15 nM ou menos, ou 10 nM ou menos, e possui um efeito inibidor contra a atividade de histona metiltransferase de EZH2 humana, e a IC50 desta pode ser 1 μΜ ou menos, 50 0 nM ou menos, 400 nM ou menos, 300 nM ou menos, 200 nM ou menos, 150 nM ou menos, 100 nM ou menos, 90 nM ou menos, 80 nM ou menos, 70 nM ou menos, 60 nM ou menos,

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21/47 nM ou menos, 4 0 nM ou menos, 30 nM ou menos, 2 0 nM ou menos, 15 nM ou menos, ou 10 nM ou menos. Os valores da IC50 para EZH1 e EZH2 podem ser determinados como mencionado acima.

[0043]Em uma modalidade da presente invenção, a GI50 de um inibidor de EZH1 contra a linhagem de célula HCT-4 estabelecida de um paciente com mielopatia associada ao HTLV1 pode ser 1 μΜ ou menos, 500 nM ou menos, 400 nM ou menos, 300 nM ou menos, 200 nM ou menos, 150 nM ou menos, 100 nM ou menos, 90 nM ou menos, 80 nM ou menos, 70 nM ou menos, 60 nM ou menos, 50 nM ou menos, 40 nM ou menos, 30 nM ou menos, 20 nM ou menos, 15 nM ou menos, ou 10 nM ou menos. No relatório descritivo, GI50 se refere à concentração de fármaco necessária para obter metade de uma atividade inibidora do crescimento máxima do fármaco.

[0044]Em uma modalidade da presente invenção, a GI50 de um inibidor de EZH2 contra a linhagem de célula HCT-4 estabelecida de um paciente com mielopatia associada ao HTLV-

1 pode	ser 1	μΜ	ou menos,	500 nM ou menos, 400 nM	ou menos,
30 0 nM	ou menos,	200 nM ou	menos, 150 nM ou menos,	100 nM ou
menos,	90 nM	ou	menos, 80	nM ou menos, 70 nM ou menos, 60 nM
ou menos, 50	nM	ou menos,	40 nM ou menos, 30 nM ou	menos, 20
nM ou i	menos,	15	nM ou menos, ou 10 nM ou menos.
[0045]Em	uma modalidade da presente invenção,	a GI50 de

um inibidor duplo de EZH1/2 contra uma cepa de célula HCT-4 estabelecida de um paciente com mielopatia associada ao HTLV-

1 pode	ser 1	μΜ	ou menos,	50 0 nM	ou menos, 400	nM	ou menos,
30 0 nM	ou	menos,	200 nM ou	menos,	150 nM ou menos,	10 0 nM	ou
menos,	90	nM	ou	menos, 80	nM ou menos, 70 nM ou	menos, 60	nM
ou menos,	50	nM	ou menos,	40 nM ou menos, 30 nM	ou	menos,	20

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22/47 nM ou menos, 15 nM ou menos, ou 10 nM ou menos.

[0046] Um composto da presente invenção pode ser um sal farmaceuticamente aceitável deste, se desejado. O sal farmaceuticamente aceitável se refere a um sal que não possui toxicidade significante e pode ser usado como um medicamento. O composto da presente invenção possui um grupo básico e, dessa forma, é formado em um sal por sua reação com um ácido.

[0047]Exemplos de um sal baseado em um grupo básico incluem hidrohaletos como, por exemplo, um sal de ácido hidrofluórico, um cloridrato, um hidrobrometo e um hidroiodeto; sais de ácido inorgânico como, por exemplo, nitrato, perclorato, sulfato e fosfato; Ci-Cs alquil sulfonatos como, por exemplo, metanossulfonato, trifluormetanossulfonato e etanossulfonato; aril sulfonatos como, por exemplo, benzeno sulfonato e p-tolueno sulfonato; sais de ácido orgânico como, por exemplo, um acetato, um

malato, um fumarato,	um	succinato, citrato,	ascorbato,
tartrato, borato,	adipato	e	maleato; e sais de	aminoácido
como, por exemplo,	um	sal	de	glicina, um sal de	Usina, um
sal de arginina,	um	sal	de	ornitina, um glutamato e um

aspartato.

[0048]Um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da presente invenção algumas vezes capta uma molécula de água e muda para um hidrato quando é deixado no ar ou reprecipitado. Esse hidrato também está incluido no sal da presente invenção.

[0049]Um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da presente invenção algumas vezes absorve um solvente e muda para um solvato quando é deixado em um solvente ou reprecipitado. Esse solvato também está incluido no sal da

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23/47 presente invenção.

[0050]A presente invenção inclui um composto que é convertido em composto A ou composto B, servindo como um ingrediente ativo da composição farmacêutica da presente invenção, por meio de uma reação com, por exemplo, uma enzima ou ácido gástrico nas condições fisiológicas in vivo; em outras palavras, um composto convertido em composto A ou composto B, por exemplo, por uma oxidação, redução ou hidrólise enzimática, ou um composto pró-fármaco farmaceuticamente aceitável, que deve ser convertido em composto A ou composto B por hidrólise com, por exemplo, ácido gástrico.

[0051]O composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável deste pode ser isolado e purificado por um método conhecido na técnica, por exemplo, extração, precipitação, destilação, cromatografia, separação por precipitação e reprecipitação.

[0052]O composto da presente invenção pode conter um isótopo atômico como pelo menos um átomo que constitui o composto em uma proporção de ocorrência não natural. Como o isótopo atômico, por exemplo, deutério (²H), tritio (³H) , iodo-125 (¹²⁵I) ou carbono-14 (¹⁴C), é mencionado. O composto pode ser marcado com um isótopo radioativo como, por exemplo, tritio (³H) , iodo-125 (¹²⁵I) ou carbono-14 (¹⁴C) . O composto marcado com um isótopo radioativo é útil como um agente terapêutico ou profilático, um reagente de pesquisa como, por exemplo, um reagente de ensaio, e um agente diagnóstico como, por exemplo, um agente de imageamento diagnóstico in vivo. Todas as variantes isotópicas de um composto da presente invenção estão incluídas na faixa da presente

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24/47 invenção, independentemente se são radioativas ou não.

[0053]Um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável deste pode ser administrado por vários métodos de administração. Os métodos de administração incluem, administração oral, por exemplo, administração de comprimidos, cápsulas, grânulos, emulsões, pílulas, pós e xaropes (formulação líquida), ou administração parenteral, por exemplo, administração por injeções (administração intravenosa, intramuscular, subcutânea ou intraperitoneal), agentes de gotejamento e supositórios (administração retal). As várias preparações podem ser preparadas por utilização de um fármaco principal e aditivos que são normalmente usados no campo técnico de preparação medicinal, por exemplo, um excipiente, um aglutinante, um desintegrante, um lubrificante, um agente flavorizante, um solubilizante, um agente de suspensão e um agente de revestimento.

[0054] Caso sejam preparados comprimidos, exemplos de um carreador que pode ser usado incluem um excipiente, por exemplo, lactose, açúcar branco, cloreto de sódio, glicose, uréia, amido, carbonato de cálcio, caulim, celulose cristalina e silica; um aglutinante como, por exemplo, água, etanol, propanol, xarope simples, uma solução de glicose, uma solução de amido, uma solução de gelatina, carboximetilcelulose, goma-laca, metil celulose, fosfato de potássio e polivinil pirrolidona; um desintegrante como, por exemplo, amido seco, alginato de sódio, pó de ágar, pó de laminarana, sódio hidrogenocarbonato, carbonato de cálcio, éster de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, lauril sulfato de sódio, monogliceril estearato, amido e lactose; um supressor de colapso como, por exemplo, açúcar branco,

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25/47 estearina, manteiga de cacau e óleo hidrogenado; um promotor de absorção como, por exemplo, um sal de amônio quaternário e lauril sulfato de sódio; um umidificante como, por exemplo, glicerina e amido; um adsorvente como, por exemplo, amido, lactose, caulim, bentonita e ácido silicico coloidal; e um lubrificante como, por exemplo, talco purificado, estearato, pó de ácido oxálico e polietilenoglicol. Se necessário, comprimidos revestidos com uma pelicula comum como, por exemplo, comprimidos revestidos com açúcar, comprimidos encapsulados com gelatina, comprimidos com revestimento entérico e comprimidos revestidos com pelicula ou comprimidos de camada dupla e comprimidos multicamadas, podem ser usados.

[0055]Caso sejam preparadas pílulas, exemplos de um carreador destas que podem ser usados incluem um excipiente como, por exemplo, glicose, lactose, manteiga de cacau, amido, óleo vegetal hidrogenado, caulim e talco; um aglutinante como, por exemplo, goma arábica, pó de tragacanto, gelatina e etanol; e um desintegrante como, por exemplo, laminarana e ágar.

[0056]Caso seja preparado um supositório, uma ampla variedade de substâncias conhecidas nesse campo pode ser usada como um carreador. Exemplos de carreador incluem polietilenoglicol, manteiga de cacau, um álcool superior, um éster de um álcool superior, gelatina e glicerídeo semisintético.

[0057] Caso seja preparada uma injeção, uma formulação líquida, uma emulsão ou um agente de suspensão pode ser usado. A formulação, emulsão ou agente de suspensão líquido é preferivelmente esterilizado e isotônico para o sangue. Um

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26/47 solvente a ser usado para a produção da formulação, emulsão ou agente de suspensão liquido não é particularmente limitado, desde que ele seja usado como um diluente para uso médico. Exemplos do solvente incluem água, etanol, propilenoglicol, um álcool isoestearilico etoxilado, um álcool isoestearilico polioxilado e um éster de ácido graxo de polioxietileno sorbitano. Observe que, nesse caso, um sal, glicose ou glicerina pode estar contido em uma quantidade suficiente para a preparação de uma solução isotônica e, por exemplo, um solubilizante, um tampão e um agente de suavização, que são comumente usados, podem estar contidos.

[0058]A preparação mencionada anteriormente, se necessário, pode conter, por exemplo, um corante, um conservante, uma substância quimica aromática, um agente flavorizante e um adoçante, e outro fármaco médico podem ainda estar contidos.

[0059]A quantidade de um composto que serve como um ingrediente ativo da preparação mencionada anteriormente não é particularmente limitada e é apropriadamente selecionada de uma ampla faixa. A quantidade é normalmente de 0,5 a 70 % do peso, preferivelmente 1 a 30% do peso da composição inteira (preparação).

[0060]A quantidade de uso (dosagem) do composto varia dependendo do sintoma e da idade do paciente (animal de sangue quente, particularmente humano). No caso de administração oral, o limite superior da dosagem é de 2.000 mg (preferivelmente, 100 mg) e o limite inferior é de 0,1 mg (preferivelmente, 1 mg, mais preferivelmente, 10 mg) por dia por adulto. A administração pode ser feita 1 a 6 vezes por

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27/47 dia, dependendo do sintoma.

[0061]A composição farmacêutica da presente invenção pode ser usada em combinação com outro agente terapêutico para HAM. Exemplos do agente terapêutico para HAM para ser usado em combinação incluem, sem limitação, hormônio adrenocortical, prednisolona, interf eron-OC, azatioprina, salazosulfapiridina, ácido ascórbico, pentoxifilina, Lactobacillus casei Shirota (Yakult 400), eritromicina, mizoribine, fosfomicina, griseall, imunoglobulina humana, danazol e cloridrato de eperisona.

[0062]Consequentemente, na presente invenção, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 como um ingrediente ativo, para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1, e para ser usado em combinação com outro agente terapêutico para HAM como mencionado acima. Na presente invenção, é fornecido um fármaco combinado que compreende um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 e pelo menos um dos agentes terapêuticos para HAM mencionados acima, para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0063]De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2, para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0064]De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um inibidor de EZH1 para a fabricação de um

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28/47 medicamento para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0065]De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um inibidor de EZH2 para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0066]De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um inibidor duplo de EZH1/2 para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0067]De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um composto selecionado de:

(2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e sais farmaceuticamente aceitáveis destes para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0068]De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um composto selecionado de:

N-((4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-NPetição 870190068544, de 19/07/2019, pág. 38/76

29/47 [(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0069]Em uma modalidade preferível da presente invenção, como um sal farmaceuticamente aceitável de inibidor duplo de EZH1/2, ou seja, (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida, (2R)-7cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4, 6-dimetil2-oxo-1,2-díídropírídín-3-í1)metil]-2,4-dimetil-l,3benzodíoxol-5-carboxamída p-tolueno sulfonato, pode ser usado, para o tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1 ou para a fabricação de um medicamento para o tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.

[0070]De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para o tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1 em um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV1, que inclui a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2.

[0071]De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para o tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1 em um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV1, que inclui a administração ao indivíduo de uma quantidade

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30/47 terapeuticamente eficaz de um composto selecionado de:

N-[(1,2-diidro-4,6-dimetil-2-oxo-3-piridinil)metil]-3metil-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil) -3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

[0072]De acordo com a presente invenção, é fornecido um imunossupressor que compreende um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2. De acordo com a presente invenção, é fornecido um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 para uso na supressão da imunidade.

[0073]De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2, para a fabricação de um medicamento para uso na supressão da imunidade. De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para supressão de imunidade em um indivíduo necessitado, que inclui a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de

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EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2.

[0074]Em cada uma das modalidades em relação à supressão de imunidade, um inibidor como mencionado acima pode ser administrado ao um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1. Em cada uma das modalidades, a supressão de imunidade pode ser supressão de inflamação aumentada em um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1. Em cada uma das modalidades, os inibidores mencionados anteriormente são mencionados como o inibidor de EZH1, inibidor de EZH2 e inibidor duplo de EZH1/2 e podem ser usados na presente invenção.

[0075]De acordo com a presente invenção, também é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 para uso no aumento do rendimento de IL-10 em um indivíduo. De acordo com a presente invenção, é fornecido um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 para uso no aumento do rendimento de IL-10. De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2, para a fabricação de um medicamento para uso no aumento do rendimento de IL-10. De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para o aumento do rendimento de IL-10 em um indivíduo necessitado, que inclui a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2.

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32/47 [0076]Em cada uma das modalidades relacionadas ao aumento do rendimento de IL-10, um inibidor como mencionado acima pode ser administrado, por exemplo, a um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1. Em cada uma das modalidades, os inibidores como mencionados acima podem ser usados como o inibidor de EZH1, inibidor de EZH2 e inibidor duplo de EZH1/2 na presente invenção.

[0077]De acordo com a presente invenção, também é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2, para uso na supressão da atividade de proliferação de PBMCs em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1). De acordo com a presente invenção, é fornecido um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 para uso na supressão da atividade de proliferação de PBMCs em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1). De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2, para a fabricação de um medicamento para uso na supressão da atividade de proliferação de PBMCs em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1). De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para supressão da atividade de proliferação de PBMCs em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1) necessitado, que inclui a administração ao indivíduo de uma quantidade

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33/47 terapeuticamente eficaz de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2. Na modalidade, a atividade de proliferação de PBMCs pode ser atividade de autoproliferação indutiva de célula infectada por HTLV-1. Na modalidade, a atividade de proliferação de PBMCs pode ser atividade de autoproliferação na ausência de estimulação da proliferação. Na modalidade, célula T única CD4H—positiva e/ou célula T única CD8h—positiva pode ser incluída em PBMC. Na modalidade, célula T CD4+CD25+CCR4+ pode ser incluída em PBMC.

[0078] Em cada uma dessas modalidades em relação à supressão da atividade de proliferação de PBMCs, um inibidor como mencionado acima pode ser administrado, por exemplo, a um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1. Em cada uma das modalidades, os inibidores como mencionados acima são mencionados como o inibidor de EZH1, inibidor de EZH2 e inibidor duplo de EZH1/2 e podem ser usados na presente invenção.

[0079]De acordo com a presente invenção, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 para uso na indução de apoptose de células infectadas pelo HTLV-1. De acordo com a presente invenção, é fornecido um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 para uso na indução de apoptose de células infectadas pelo HTLV-1. De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2,

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34/47 para a fabricação de um medicamento para uso na indução de apoptose de células infectadas pelo HTLV-1. Na presente invenção, é fornecido um método para a indução de apoptose de células infectadas pelo HTLV-1 em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1) necessitado, que inclui a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2.

[0080]Em cada uma dessas modalidades relacionadas à indução de apoptose de células infectadas pelo HTLV-1, células infectadas pelo HTLV-1 estão presentes no corpo de um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1. Em cada uma dessas modalidades, um inibidor como mencionado acima pode ser administrado, por exemplo, a um indivíduo que sofre de mielopatia associada ao HTLV-1. Em cada uma das modalidades, inibidores como mencionados acima são mencionados como inibidor de EZH1, inibidor de EZH2 e inibidor duplo de EZH1/2 e podem ser usados na presente invenção.

Exemplos [0081] (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida será referida como composto A. Além disso, (2R)-7-cloro-2-[trans4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-l, 3-benzodioxol-5carboxamida será referida como composto B.

[0082]Composto A foi sintetizado de acordo com a descrição de WO 2015/141616, Exemplo 15. Composto B foi

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35/47 sintetizado de acordo com a descrição de WO 2015/141616, Exemplo 35. Nos Exemplos seguintes, foram usados compostos A e B assim sintetizados.

[0083]Observe que, compostos A e B inibem atividades enzimáticas tanto de EZH1 quanto de EZH2 (WO 2015/141616).

[0084]Nos Exemplos seguintes, pacientes com HAM/TSP foram diagnosticados por um médico de acordo com os critérios diagnósticos da OMS (Osame M. Review of WHO Kagoshima Meeting and Diagnostic Guidelines for HAM/TSP Em: Blattner W, ed. Human Retrovirology: HTLV. Nova York, Nova York, EUA: Raven Press; 1990: 191-197).

Exemplo 1: Aumento do nível de expressão de EZH2 em células de HAM [0085]Nesse Exemplo, as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) obtidas de pacientes com HAM e PBMCs obtidas de pessoas saudáveis serão submetidas à análise de expressão gênica para demonstrar que o nível de expressão de EZH2 está elevado nos pacientes com PMBCs derivadas de HAM.

[0086]Das células mononucleares do sangue periférico (Célula Mononuclear do Sangue Periférico: PBMC) separadas do sangue periférico de 5 pacientes com HAM, células CD4+ foram separadas por uso de um kit de isolamento de CD4+ humana (Miltenyi Biotec) e, a seguir, células CD4+CCR4+ foram separadas por uso de Microglóbulos anti-IgGl de camundongo (Miltenyi Biotec) aos quais um anticorpo anti-CCR4 (BD 551121) foi ligado. Na fração de células CD4+CCR4+, estão contidas células infectadas pelo HTLV-1. Células CD4+CCR4+ foram separadas da mesma forma que acima de PBMCs de 5 pessoas saudáveis e usadas como um grupo de controle. Das células CD4+CCR4+ separadas, foi obtido RNA total e o cDNA

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36/47 foi preparado por uso de ReverTra Ace (Toyobo Co., Ltd). Com o uso do cDNA assim preparado, a diferença na expressão gênica entre as células CD4+CCR4+ derivadas de um paciente com HAM e as células CD4+CCR4+ derivadas de uma pessoa saudável foi analisada por análise de microarranjo. Como resultado, foi verificado que o nível de expressão de EZH2 difere. A seguir, a diferença no nível de expressão de EZH2 foi analisada mais especificamente por PCR em temo real. 0 conjunto de iniciadores usado para detecção de EZH2 expressa foi: EZH2#35-F: TGTGGATACTCCTCCAAGGAA e EZH2#35-R: GAGGAGCCGTCCTTTTTCA; a sonda aqui usada foi Universal ProbeLibrary #35 (Roche). UM teste de significância foi realizado de acordo com um teste-t pareado de GraphPad Prism6 (MDF). Os resultados foram como mostrados na Figura 1.

[0087]Como mostrado na Figura 1, a expressão de mRNA de EZH2 nas células CD4+CCR4+ derivadas de um paciente com HAM (HAM-CD4+CCR4+) era significantemente alta, ou seja, 2,6 vezes tão alta quanto em células CD4+CCR4+ derivadas de uma pessoa saudável (HD-CD4+CCR4+). A partir dos resultados, foi demonstrado que a expressão de EZH2 em pacientes com células infectadas derivadas de HAM é maior do que das células derivadas de uma pessoa saudável.

[0088]Curiosamente, o nível de expressão de EZH2 em outras células CD4+ T diferentes de células infectadas pelo HTLV-1 era alto.

Exemplo 2: Efeito do inibidor duplo de EZH1/2 sobre a HAM [0089]PBMCs derivadas de pacientes com HAM possuem uma característica não observada em outras PBMCs pelo fato de que as células proliferam espontaneamente ao serem

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37/47 cultivadas na ausência de qualquer estimulação.

[0090]A seguir, com o uso de PBMCs derivadas de pacientes com HAM, o efeito do inibidor duplo de EZH1/2 foi examinado. Como o inibidor duplo de EZH1/2, composto A e composto B foram usados.

[0091]Os efeitos do composto A e composto B foram avaliados com base: (1) na atividade de autoproliferação;

(2) na alteração no rendimento de supressão da citocina inflamatória IL-10 (Exemplo 3, descrito posteriormente); e (3) na alteração no número de células infectadas pelo HTLV1 (Exemplo 4, descrito posteriormente) em pacientes com PBMCs de HAM. No tempo de avaliação, um grupo tratado com DMSO e um grupo tratado com prednisolona (PSL, 1 pg/ml) foram usados como controles. PSL, que possui uma ação de supressão inflamatória, pode suprimir a atividade de autoproliferação das PBMCs de pacientes com HAM; no entanto, PSL não exibe atividade de remoção de células infectadas nesse sistema experimental ou em ambientes clinicos.

Efeitos supressivos do composto A e composto B sobre resposta imune excessiva de PBMCs derivadas de pacientes com HAM [0092]PBMCs retiradas de 8 pacientes com HAM foram suspensas em meios de cultura (meio de cultura RPMI1640 (Wako) contendo FBS 10% (GIBCO)), semeadas em uma placa fundo redondo de 96 poços em uma proporção de 1 x 10⁵ células por poço (3 poços foram usados para cada concentração), e composto A ou composto B foi adicionado de modo a fornecer uma concentração final de 1, 10, 100 ou 1.000 nM. A cultura foi realizada a 37°C em condições de CO2 5% por 6 dias. O grupo de tratamento com DMSO e o grupo de tratamento com PSL

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38/47 (1 qg/ml) foram usados como controles. No Dia 6 após o inicio da cultura, 1 pCi de ³H-timidina foi adicionado a cada poço e a cultura foi realizada a 37°C, em condições de CO2 5% por 16 horas. A seguir, foi permitido que as células cultivadas fossem adsorvidas a um filtro de vidro (Printed Filtermat A, PerkinElmer) por um coletor de células (Tomtec MH3, PerkinElmer), elas foram secas e impregnadas com cintilador sólido Meltilex-A (PerkinElmer). A quantidade da ³H-timidina incorporada nas células foi medida por uso de MicroBeta (WALLAC MicroBeta TriLux 1450-021) (Yamano e cols., PLoS One. 2009, 4(8): e6517). Com base na contagem média de ³Htimidina no grupo de tratamento com DMSO de pacientes com PBMCs de HAM como 100%, os valores relativos dos grupos tratados com composto A, composto B e PSL (1 qg/ml) foram obtidos por cálculo e, a seguir, um valor médio de 8 casos de pacientes com HAM foi obtido. Um teste de significância foi realizado de acordo com o teste de Friedman de GraphPad Prism6 (MDF). Os resultados foram como mostrados na Figura 2, painel superior.

[0093]Como mostrado na Figura 2, painel superior, tanto o composto A quanto o composto B suprimiram a atividade de autoproliferação de PBMCs em todos os oito casos de pacientes com HAM, de uma forma concentração-dependente. Com base na média de todos os casos usados no experimento, um efeito de supressão estatisticamente significante foi observado em qualquer caso do tratamento com composto A ou composto B (100 nM ou mais). Nesse momento, a GI50 do composto A era de 73,0 nM e GI50 do composto B era de 33,9 nM. Dessa forma, foi sugerido que o inibidor duplo de EZH1/2 possui um efeito de supressão da resposta imune excessiva de PBMCs derivadas de

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39/47 pacientes com HAM.

[0094]0 número de pacientes foi aumentado para 16 e o mesmo experimento que acima foi realizado. Os resultados são mostrados na Figura 2, painel inferior. Com base nos resultados de 16 pacientes com HAM sobre atividade de proliferação espontânea, a GI50 do composto A era de 45, 6 nM e a GI50 do composto B era de 25, 9 nM.

[0095]Em qualquer um dos experimentos, como mostrado no painel superior e painel inferior da Figura 2, até mesmo em uma região de concentração baixa de 100 nM ou menos, as ações inibidoras do composto A e B contra atividade de proliferação espontânea de PMBCs derivadas de pacientes com HAM foram observadas.

Efeito supressivo do inibidor de EZH2 sobre a resposta imune excessiva de PBMCs derivadas de pacientes com HAM [0096]O efeito sobre PBMCs derivadas de pacientes com HAM foi verificado da mesma forma que no Exemplo acima, exceto que um inibidor de EZH2 foi usado no lugar dos compostos A e B.

[0097]Como o inibidor de EZH2, GSK126 (N° CAS: 134657457-9) e E7438 (N° CAS: 1403254-99-8) foram usados. A concentração para o tratamento foi de 1, 10, 100, 1.000 ou 10.000 nM, em termos de concentração final. No experimento, foram usadas amostras de PBMCs retiradas das 8 pessoas antes do aumento do número de casos no experimento acima. Os resultados foram como mostrados na Figura 3.

[0098]Como mostrado na Figura 3, foi confirmado que E7438 (Figura 3, painel superior) e GSK126 (Figura 3, painel inferior) suprimem a atividade de autoproliferação de PBMCs derivadas de pacientes com HAM. A GI50 de E7438 foi de 214,2

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40/47 nM e a GI50 de GSK126 foi de 724,3 nM.

[0099] Como descrito acima, as ações supressivas de E7438 e GSK126 contra a atividade de proliferação espontânea de PBMCs derivadas de pacientes com HAM foram observadas em uma região de baixa concentração de 1 μΜ ou menos.

[00100] A magnitudes dos efeitos inibidores do inibidor duplo de EZH1/2 e do inibidor de EZH2 usados nesse Exemplo sobre a atividade enzimática de EZH2 não são significantemente diferentes. Consequentemente, foi subentendido que, não apenas a inibição de EZH2, mas também a inibição de EZH1 possui um efeito inibidor fortemente influente sobre a atividade de proliferação espontânea de PBMCs derivadas de pacientes com HAM.

Exemplo 3: Produção de citocina inflamatória supressiva IL-10 induzida pelo inibidor duplo de EZH1/2 [00101] A condição patológica de HAM é caracterizada por inflamação induzida por PBMCs. Dessa forma, nesse Exemplo, o efeito de um inibidor duplo de EZH1/2 sobre a liberação de uma citocina por PBMCs foi examinado.

[00102] PBMCs retiradas de 8 pacientes com HAM foram suspensas em um meio de cultura (meio de cultura RPMI1640 contendo FBS 10%), semeadas em uma placa de 48 poços em uma proporção de 5 x 10⁵ células por poço e um composto A ou composto B foi adicionado de modo a fornecer uma concentração final de 1, 10, 100 ou 1.000 nM. A solução de cultura de 0,5 ml no total foi cultivada a 37°C em condições de CO2 5% por 12 dias. Um grupo tratado com DMSO e um grupo tratado com PSL (1 pg/ml) foram usados como controles. No Dia 12 após o inicio da cultura, a solução de cultura foi centrifugada e, a seguir, o sobrenadante da cultura foi recuperado

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41/47 isoladamente. A concentração de IL-10 no sobrenadante da cultura foi determinada por uso do kit Cytokine Beads Array (BD Biosciences) e um citômetro de fluxo FACSCantoII (BD Biosciences) (Yamauchi e cols., J. Infect Dis. 2015, 211 (2): 238-48). Com base na concentração de IL-10 na solução de cultura do grupo de tratamento com DMSO as 100%, foram comparadas as alterações na concentração de IL-10 de soluções de cultura de grupos tratados com composto A e composto B diferentes em concentração ou um grupo tratado com PSL (1 gg/ml). O teste de significância foi realizado por utilização do teste de Friedman de GraphPad Prism6 (MDF). Os resultados foram como mostrados na Figura 4.

[00103] Como mostrado na Figura 4, o rendimento de IL-10 por PBMCs foi dramaticamente aumentado por cada um do composto A e composto B; e, mais especificamente, foi verificado que o rendimento da produção de IL-10 (aceleração) é igual ou até mesmo maior em uma concentração de cerca de 1/10, tão baixa quanto PSL, que é conhecida como um agente de supressão inflamatória.

[00104] A partir do exposto acima, foi sugerido que o composto A e composto B atuam sobre PBMCs derivadas de pacientes com HAM e suprimem a inflamação, que é uma condição patológica principal da HAM.

[00105] Em contraste, não foi observada nenhuma alteração significante nos rendimentos da quantidade de INFCC, TNF-CC e IL-6.

[00106] PBMCs derivadas de pacientes com HAM possuem atividade de autoproliferação na ausência de qualquer estimulação. A atividade de autoproliferação é provavelmente produzida por resposta excessiva do sistema imune causada

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42/47 por células infecciosas da HAM. 0 Exemplo 3 demonstrou que um inibidor duplo de EZH1/2 faz com que as PBMCs derivadas de pacientes com HAM produzam IL-10, tendo uma ação imunossupressiva. A possibilidade de que o inibidor duplo de EZH1/2 possa suprimir a resposta excessiva do sistema imune por meio de uma ação imunossupressiva de IL-10 inibindo, desse modo, a atividade de proliferação espontânea de PBMC, é sugerida.

Exemplo 4: Efeito do inibidor duplo de EZH1/2 sobre a remoção de células infectadas pelo HTLV-1 por PMBCs derivadas de pacientes com HAM [00107] Nesse Exemplo, foi examinado se um inibidor duplo de EZH1/2 possui ou não um efeito sobre a remoção de células infectadas pelo HTLV-1 que causam HAM.

[00108] PBMCs retiradas de 8 pacientes com HAM foram suspensas em um meio de cultura (meio de cultura RPMI1640 contendo FBS 10%) e semeadas em uma placa de 48 poços em uma proporção de 5 x 10⁵ células por poço, e composto A ou composto B foi adicionado de modo a fornecer uma concentração final de 1, 10, 100 ou 1.000 nM. A solução de cultura de 0,5 ml no total foi cultivada a 37°C em condições de CO2 5% por 12 dias. Um grupo tratado com DMSO e um grupo tratado com PSL (1 gg/ml) foram usados como controles. No Dia 12 após o início da cultura, a solução de cultura foi centrifugada e, a seguir, a suspensão de célula foi recuperada de cada uma das culturas realizadas sob condições diferentes e centrifugada. Após o sobrenadante ter sido removido, o pélete de células foi submetido à extração de DNA genômico. O DNA do genoma extraído foi submetido à PCR em tempo real para medir a carga pró-viral de HTLV-1 (taxa de células

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43/47 infectadas) (Yamano e cols., Blood. 2002, 99 (1) : 88-94) . Com base na carga pró-viral de HTLV-1 nas células, que foram obtidas por adição de DMSO a cada uma das PBMCs de pacientes com HAM e cultivo das PBMCs, como 100%, o valor relativo da carga pró-viral de HTLV-1 em um grupo tratado com composto A, composto B ou PSL foi calculado e, a seguir, um valor médio de 8 casos de pacientes com HAM foi obtido. O teste de significância foi realizado por utilização do teste de Friedman de GraphPad Prism6 (MDF). Os resultados foram como mostrados na Figura 5.

[00109] Como mostrado na Figura 5, foi verificado que a carga pró-viral de HTLV-1 nas PBMCs de pacientes com HAM diminui pelo tratamento com composto A ou composto B em 5 dos 8 casos. Com base no valor médio de todos os pacientes com HAM usados no experimento, foi confirmada uma redução significante na carga pró-viral nos casos tratados com 1.000 nM de composto A ou composto B.

Exemplo 5: Efeito do inibidor duplo de EZH1/2 sobre células infectadas pelo HTLV-1 [00110] Nesse Exemplo, foi examinado o efeito de um inibidor duplo de EZH1/2 sobre a proliferação de uma linhagem de célula infectada por HTLV-1, que foi estabelecida a partir do fluido cerebrospinal de um paciente com HAM.

[00111] HCT-4 e HCT-5, que eram linhagens de células infectadas por HTLV-1 estabelecidas a partir do fluido cerebrospinal de pacientes com HAM, foram doadas por um professor, Tatsufumi Nakamura da Nagasaki International University. HCT-4 foi cultivada em meio de cultura RPMI1640 contendo FBS 10% (GIBCO), uma solução de penicilinaestreptomicina 1% (Wako) e 100 U/ml de IL-2 (Cell Science &

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Technology Institute, Inc.); enquanto HCT-5 foi cultivada por utilização de FBS 10%, solução de penicilinaestreptomicina 1%, L-glutamina 1% (SIGMA) e 200 U/ml de IL-

2. HCT-4 (3 x 10⁶ células) ou HCT-5 (2,5 x 10⁶ células) foram semeadas em um meio de cultura (20 ml) em um frasco de cultura de 75 cm². DMSO foi adicionado e composto A ou B foi adicionado de modo a fornecer uma concentração final de 1 μΜ, e a cultura foi realizada a 37°C em condições de CO2 5% por 21 dias, com repetição da subcultura. Na subcultura, uma solução de cultura contendo HCT-4 tratada com DMSO de modo a corresponder a 3 x 10⁶ células, enquanto uma solução de cultura contendo HCT-5 tratada com DMSO de modo a corresponder a 2,5 x 10⁶ células foram retiradas e cada uma adicionada a um novo meio de cultura para um volume final de 20 ml e, a seguir, mais composto A ou B foi adicionado de modo a obter a mesma concentração que acima. Nos Dia 7, 14 e 21 após o início da cultura, as células foram recuperadas da solução de cultura e a densidade das células foi medida. Dessa forma, o efeito de composto A ou B sobre a proliferação celular foi examinado. A densidade de células foi determinada por semeadura de células cultivadas em uma placa de 96 poços em um volume de 100 μΐ por poço, adição de 10 μΐ de kit de contagem de células-8 (CCK-8) (Dojindo Laboratories laboratory) por poço, incubação das células a 37 °C por 3 horas e medição da absorbância a 450 nm por uma leitora de placas (iMark Microplate Reader, Biorad). As taxas de proliferação de grupos de células tratados com composto A ou composto B foram calculadas com base no grupo de células tratado com DMSO como um controle. Os resultados foram como mostrados na Figura 6.

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45/47 [00112] Como mostrado na Figura 6, tanto o composto A quanto o Composto B reduzem com sucesso e significantemente a viabilidade de células infectadas pelo HTLV-1 (que induzem HAM) , que são derivadas do fluido cerebrospinal, comparados com o grupo tratado com DMSO. A partir disso, foi demonstrado que composto A e B são eficazes para tratamento HAM.

[00113] A seguir, em uma placa de 6 poços, HCT-4 (4,5 x 10⁵ células) ou HCT-5 (3,75 x 10⁵ células) foram semeadas. Uma solução de composto A ou B preparada com DMSO foi diluida serialmente (uma diluição de 4 vezes a partir de 10.000 nM foi repetida serialmente 8 vezes) e a ela adicionada. As células foram subcultivadas repetidamente em intervalos de 3 a 4 dias em uma solução de cultura de 3 ml no total a 37°C em condição de CO2 5% por 14 dias. Na subcultura, uma solução de cultura contendo HCT-4 no grupo tratado com DMSO foi adicionada a um novo meio de cultura, de modo que o número de células fosse de 4,5 x 10⁵ células, enquanto uma solução de cultura contendo HCT-5 no grupo tratado com DMSO, de modo que o número de células fosse de 3, 75 x 10⁵ células e, a seguir, mais composto A ou B foi adicionado de modo a obter a mesma concentração que acima para preparar uma solução de cultura de 3 ml no total. As células cultivadas por 14 dias em condições individuais foram recuperadas e a densidade das células foi medida. Dessa forma, o efeito de composto A ou B sobre a proliferação celular foi examinado. A densidade de células foi determinada por semeadura das células cultivadas (100 μί) por poço em uma placa de 96 poços, adição de 10 μί de CCK-8 por poço, incubação das células a 37°C por 3 horas e medição da absorbância a 450 nm por uma leitora de placas. A taxa de proliferação de um grupo tratado com composto A ou

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46/47 composto B foi calculada com base no grupo tratado com DMSO como um controle. Os resultados foram como mostrados na Figura 7.

[00114] Como mostrado na Figura 7, composto A e B reduzem com sucesso a viabilidade de células infectadas pelo HTLV-1 estabelecidas do fluido cerebrospinal de um paciente com HAM de uma forma concentração-dependente. A GI50 do composto A para células HCT-4 foi de 7,63 nM e a GI50 do composto B para células HCT-4 foi de 5,92 nM; enquanto a GI50 do composto A para células HCT-5 foi de 185,4 nM e a GI50 do composto B para células HCT-5 foi de 90,6 nM.

Exemplo 6: Atividade do inibidor duplo de EZH1/2 para induzir apoptose de células infecciosas da HAM [00115] Nesse Exemplo, foram feitos experimentos com o uso das células cultivadas por 21 dias no Exemplo 5. Para detectar células apoptóticas nas células cultivadas por 21 dias por adição de 1 μΜ de composto A ou composto B, as células foram coradas usando o Kit de Detecção de Apoptose de PE Anexina V I (BD) e analisadas por FACS. Nessa análise, as células viáveis foram detectadas com base em gráficos de FSC (dispersão para frente)-SSC (dispersão lateral). As células viáveis foram analisadas por Anexina V-PE (anexina V) e 7-AAD (7-amino actinomicina D) . As células apoptóticas precoces foram detectadas como células Anexina V (+) 7-AAD (-). Os resultados foram como mostrados na Figura 8 (células HCT-4) e na Figura 9 (células HCT-5).

[00116] Como mostrado na Figura 8, era evidente que o número de células viáveis diminui em células HCT-4 tratadas com composto A ou B. Também na Figura 8, era evidente que o número de células apoptóticas precoces aumentou em células

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HCT-4 tratadas com composto A ou B.

[00117] Como mostrado na Figura 9, era evidente que o número de células viáveis diminui em células HCT-5 tratadas com composto A ou B. Também na Figura 9, era evidente que o número de células apoptóticas precoces aumentou em células HCT-5 tratadas com composto A ou B.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição farmacêutica caracterizada por compreender um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 como um ingrediente ativo, para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.
2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o inibidor é um inibidor duplo de EZH1/2.
3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o inibidor é um composto selecionado de:

N-[(1,2-diidro-4,6-dimeti1-2-oxo-3-piridinil)metil]-3metil-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil)-3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

N-((4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.
4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3il)metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida ou

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2/9 (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3il)metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
6. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3il)metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida p-tolueno sulfonato.
8. Composição farmacêutica para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1, caracterizada por compreender um composto selecionado de:

N-[(1,2-diidro-4,6-dimetil-2-oxo-3-piridinil)metil]-3metil-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil)-3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

N-((4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'Petição 870190068544, de 19/07/2019, pág. 59/76

3/9 (morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.
9. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada por compreender (2R)-7-bromo2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
10. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada por compreender (2R)-7-cloro2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste
11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada por compreender (2R)-7-cloro2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida p-tolueno sulfonato.
12. Método para o tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1 em um indivíduo necessitado, caracterizado por compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2 ao paciente.
13. Método, de acordo com a reivindicação 12,

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4/9 caracterizado pelo fato de que o inibidor é um inibidor duplo de EZH1/2.
14. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o inibidor é um composto selecionado de:

N-[(1,2-diidro-4,6-dimetil-2-oxo-3-piridinil) metil] -3metil-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil)-3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.
15. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-bromo-2[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida, ou (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
16. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-bromo-2[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

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1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
17. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-cloro-2[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
18. Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-cloro-2[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida p-tolueno sulfonato.
19. Método para o tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1 em um indivíduo necessitado, caracterizado por compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto selecionado de:

N-[(1,2-diidro-4,6-dimetil-2-oxo-3-piridinil)metil]-3metil-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil)-3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

N-((4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes ao indivíduo.

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20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que uma quantidade terapeuticamente eficaz de (2R)-7-bromo-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, é administrado ao indivíduo.
21. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que uma quantidade terapeuticamente eficaz de (2R)-7-cloro-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, é administrado ao indivíduo.
22. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que uma quantidade terapeuticamente eficaz de (2R)-7-cloro-2-[trans-4(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-5carboxamida p-tolueno sulfonato é administrado ao indivíduo.
23. Uso de um inibidor selecionado do grupo que consiste em um inibidor de EZH1, um inibidor de EZH2 e um inibidor duplo de EZH1/2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.
24. Uso, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o inibidor é um inibidor duplo de EZH1/2.
25. Uso, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o inibidor é um composto selecionado de:

N-[(1,2-diidro-4,6-dimeti1-2-oxo-3-piridinil)metil]-3Petição 870190068544, de 19/07/2019, pág. 63/76

Ί/9 meti1-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil) -3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

N-((4, 6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.
26. Uso, de acordo com a reivindicação 23 ou 24, caracterizado pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-bromo-2[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida, ou (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
27. Uso, de acordo com a reivindicação 23 ou 24, caracterizado pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-bromo-2[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
28. Uso, de acordo com a reivindicação 23 ou 24, caracterizado pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-cloro-2[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol-

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5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
29. Uso, de acordo com a reivindicação 23 ou 24, caracterizado pelo fato de que o inibidor é (2R)-7-cloro-2[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-

1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4-dimetil-1,3-benzodioxol5-carboxamida p-tolueno sulfonato.
30. Uso de um composto selecionado de:

N-[(1,2-diidro-4,6-dimeti1-2-oxo-3-piridinil)metil]-3metil-1-[(IS)-1-metilpropil]-6-[6-(1-piperazinil)-3piridinil]-lH-indol-4-carboxamida,

N-((4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil)-5(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4'(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-carboxamida, (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida e (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino)ciclohexil]-N[(4,6-dimeti1-2-oxo-1,2-diidropiridin-3-il)metil]-2,4dimetil-1,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes, caracterizado por ser para a produção de um medicamento para uso no tratamento de mielopatia associada ao HTLV-1.
31. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de ser do (2R)-7-bromo-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3- il)metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
32. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de ser do (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-

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9/9 il)metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
33. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de ser do (2R)-7-cloro-2-[trans-4-(dimetilamino) ciclohexil]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-diidropiridin-3-il) metil]-2,4-dimetil-l,3-benzodioxol-5-carboxamida p-tolueno sulfonato.