BR112019012788A2 - composição contendo ácido n-acetildiaminobutírico - Google Patents

Abstract

a invenção refere-se a uma composição que contém o ácido n- acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido n- acetildiaminobutírico para uso em um método para o tratamento do corpo humano ou animal.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para COyPOS^ÇÃO CONTENDO AO DO NÁCEULDÍAMÍNOBÜTÍRÍCO.

[0001] A presente invenção refere-se a uma composição que contem ácido N-acetíldíamínobutínco, um sal ou um éster deste composto.

[0002] Ectoína (ácido 2-metil-1,4,5,6-tetra-hidropirimidina-4carboxílico) e hidróxi-ectoína (ácido 5-hidróxi-2-metil-1,4,5,6-tetrahidropirimidina-4-carboxílico) são solutos compatíveis, que são sintetizados sob condições de estresse em microrganismos extremofílicos, em particular halofílicos. Várias aplicações ou usos foram descritos até agora para ectoína e hidroxiectoína, por exemplo, como hidratantes, para o tratamento da síndrome de vazamento vascular (vascular leak syndrome - VLS) (DE 10 2006 056 766 A1) ou para o tratamento de neurodermatite (DE 103 30 243 A1).

[0003] A ectoína pode ser sintetizada quimicamente (cf. WO 2010/006792 A1), mas a maior parte da ectoína é obtida por fermentação contínua da bactéria halofílica Halomonas elongata seguida de ordenha bacteriana. Nesse processo, as condições ambientais para a bactéria são alteradas abruptamente, com o que elas liberam a ectoína produzida no meio ambiente.

[0004] A biossíntese começa a partir do aspartato β-semialdeído. Inicialmente, catalisada por uma transaminase, é produzido ácido L2,4-diaminobutírico. Este ácido é acetilado por uma acetiltransferase para formar ácido N-y-acetil-L-2,4-diaminobutírico (NADA). Finalmente, segue-se uma reação de condensação intramolecular, catalisada pela ectoína sintase, para formar a ectoína.

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[0005] Como fase intermediária, o ácido N-Y-acetil-2,4diaminobutírico ou o N-Y-acetil-2,4-diaminobutirato é assim passado inter alia. Até agora, esta molécula não tinha sido considerada de particular importância, mas surpreendentemente foi descoberto que o ácido N-acetildiaminobutírico é capaz de produzir efeitos fisiológicos e ser utilmente aplicado para tratamento terapêutico, profilático e cosmético do corpo humano ou animal. Esses efeitos do ácido Nacetildiaminobutírico eram desconhecidos até agora. Embora Canovas et al., Appl. Environ Microbiol. 1999; 65 (9): 3774-3779 descrevam o papel do ácido N-Y-acetil-2, 4-diaminobutirico em relação à estabilização de enzimas, eles não fornecem elucidação em aplicações terapêuticas. O ácido N-acetildiaminobutírico pode, portanto, ser usado como medicamento, fármaco, produto médico e como cosmético.

[0006] Como mencionado, o ácido N-acetildiaminobutírico é um estágio intermediário na produção de ectoína, mas também pode ser facilmente obtido a partir de ectoína comercialmente disponível por

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3/46 hidrólise alcalina. Por exemplo, ectoína pode ser reagida com uma solução de KOH 2 M para obter aprox. 80% de ácido N-Y-acetil-L-2,4diaminobutírico (ácido (2S) -4-acetamido-2-aminobutanoico) e aprox. 20 % de ácido N-a-acetil-L-2,4-diaminobutírico (ácido (2S) -2acetamido-4-aminobutanoico). Ambos os isômeros, isto é, o isômero γ e ο α, provaram ser fisiologicamente eficazes.

[0007] O uso dos estereoisômeros indicados, isto é, os enantiômeros L ou S, é preferido, mas não obrigatório, o que significa que os enantiômeros D ou R ou o racemato também podem ser empregados.

[0008] De um modo geral, além do ácido N-acetildiaminobutírico, podem também ser usados derivados relevantes, em particular sais ou ésteres. No que diz respeito a derivados de éster relevantes, o grupo COOH do ácido N-acetildiaminobutírico é substituído por uma função COOR de éster de ácido carboxílico, em que R representa grupos alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, alquilarila, arilalquila, alcoxialquila, alquiltioalquila, ariloxialquila ou ariltioalquila saturados ou insaturados, de cadeia linear ou ramificada. Em particular, pode ser um grupo alquila Ci, C2, C3, C4, C5, Ce, C7, Cs, C9, C10, Cn, C12, C13, C14, C15, C16, C17 ou Cis. Os respectivos ésteres podem também estar presentes na forma iônica ou zwiteriônica, isto é, a invenção abrange 0 uso de sais dos referidos ésteres. Sais farmacologicamente aceitáveis incluem, por exemplo, sais de metal alcalino, metal alcalinoterroso e amônio, especialmente sais de potássio, sódio, magnésio e cálcio.

[0009] No contexto deste pedido de patente, é feita referência a ácido N-acetildiaminobutírico ou NADA, independentemente de quais funções da molécula são protonadas ou carregam uma carga. De fato, devido à presença simultânea de uma função carboxila e amino, a molécula freqüentemente estará presente na forma de um zwitterion.

[0010] Descobriu-se que 0 ácido N-acetildiaminobutírico é capaz

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4/46 de melhorar significativamente a função de barreira do epitélio. Além do tecido conjuntivo, tecido muscular e tecido nervoso, o epitélio é um dos quatro tipos principais de tecido existentes no organismo humano. É composto de células epiteliais que, em grande medida, são unidas sem lacunas e dispostas em uma ou mais camadas. Em particular, o tecido epitelial serve para proteger e limitar a superfície do corpo (pele) e o revestimento de órgãos, vasos sanguíneos, etc. Além de sua função protetora, o epitélio também desempenha funções como reabsorção e secreção. O epitélio é separado do tecido conjuntivo subjacente por uma membrana basal.

[0011] Várias doenças estão associadas a um distúrbio da função de barreira do epitélio, de modo que o fortalecimento da função de barreira pode proteger contra influências externas indesejáveis. Uma vez que estas tenham superado a barreira epitelial, elas freqüentemente têm uma função desencadeante resultando em uma cascata inflamatória. A estabilização da barreira pelo ácido Nacetildiaminobutírico ou seus derivados é, portanto, utilmente aplicada em vários procedimentos para o tratamento do corpo humano ou animal.

[0012] A estabilização da barreira pelo ácido Nacetildiaminobutírico é aparentemente baseada no fato de que a molécula tem um efeito cosmotrópico, isto é promove a formação de pontes de hidrogênio. Em resultado disso, a forma nativa de biomoléculas, como proteínas, também é promovida. Por outro lado, o ácido N-acetildiaminobutírico é excluído da casca de hidratação de biomoléculas; membranas lipídicas tornam-se mais fluidas. Assim, ambas, membranas e proteínas, são estabilizadas contra as influências mais diversas. Uma integridade perturbada de estruturas de ligação tecidual e estruturas membranares é restaurada.

[0013] Outro efeito do ácido N-acetildiaminobutírico é a regulação

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5/46 positiva das claudinas. Estas são proteínas de membrana como parte de junções apertadas, bandas estreitas que envolvem as células epiteliais e estão ligadas às bandas de células vizinhas. A perda dos espaços entre as células do epitélio cria uma barreira que controla o ingresso de moléculas através do epitélio. A regulação positiva de claudinas oclusivas de poros, que além das ocludinas desempenham o papel mais importante como proteínas de membrana, leva a uma maior densidade da membrana epitelial e resulta em uma redução da permeabilidade.

[0014] Em geral, a invenção se refere tanto à aplicação terapêutica como cosmética de ácido N-acetildiaminobutírico e seus derivados.

Tratamento de pele e membranas mucosas secas [0015] De acordo com uma modalidade preferida, uma composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico serve para ser aplicada em um método para o tratamento e/ou prevenção de pele ou membrana mucosa secas. As propriedades hidratantes foram demonstradas usando um ensaio baseado na linhagem celular SIRC. O ácido Nacetildiaminobutírico, em particular, tem um efeito de cuidado no tratamento da pele seca, muito seca, irritada e escamosa. Além disso, ácido N-acetildiaminobutírico pode também ser utilizado para tratar pele seca e inflamada, e no caso de dermatite atópica (neurodermatite).

[0016] A composição proposta pela presente invenção é adequada para manter e restabelecer o teor de umidade normal da pele. O referido teor é geralmente regulado pela própria pele, mas esta função auto-reguladora pode ser perturbada por influências intrínsecas ou externas, como o ar ambiente seco. Como resultado, a descamação da pele e pequenas rachaduras na pele aumenta, tornando-a mais sensível a outras influências. O ácido N-acetildiaminobutírico é capaz de ligar água à pele e, assim, aumentar o teor de umidade da pele.

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Pele, no contexto da invenção também inclui pele peluda, em particular o couro cabeludo. Além disso, os fenômenos de envelhecimento intrínseco da pele podem ser tratados ou prevenidos com a ajuda da composição oferecida pela invenção. Estes devem ser entendidos como sinais de envelhecimento da pele que não são resultado de influências externas, como radiação UV ou radiação solar geral.

[0017] Como já mencionado, a composição proposta pela invenção também pode ser aplicada para o tratamento da dermatite atópica (neurodermatite). Esta é uma doença crônica da pele que não pode ser completamente curada e caracteriza-se, inter alia, por prurido grave. As pessoas afetadas freqüentemente reagem a isso coçando, o que, por sua vez, causa irritações adicionais na pele. A pele é caracterizada por secura particular e uma forte tendência à inflamação, que dá origem à formação de eczema vermelho e escamoso na pele. A base da dermatite atópica ainda não está total mente entendida; provavelmente, fatores genéticos e imunológicos, bem como influências ambientais, desempenham um papel. A doença ocorre frequentemente na infância e em cerca de 1 a 3% dos adultos.

[0018] O tratamento da dermatite atópica é principalmente sintomático até agora. Em particular, podem ser utilizadas substâncias ativas que cumprem uma função hidratante, como pantenol ou dexpantenol, que além disso possui propriedades anti-inflamatórias e antipruríticas. Afora isso, são freqüentemente aplicados glicocorticoides, que também têm um efeito anti-inflamatório, mas que também estão associados a efeitos colaterais, como atrofia (afinamento da pele).

[0019] Em comparação, o uso de ácido N-acetildiaminobutírico dificilmente causa efeitos colaterais ou tem efeitos colaterais significativamente menores. É também possível combinar a

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7/46 composição do ácido N-acetildiaminobutírico com outros ingredientes ativos, como os ingredientes ativos acima mencionados (dex)pantenol ou glicocorticoides. Também de uso geral, neste contexto, são agentes anti-inflamatórios e agentes antibacterianos, fungistáticos ou fungicidas, antibióticos ou substâncias que aliviam a coceira e analgésicos.

[0020] Além disso, o ácido N-acetildiaminobutírico também pode ser usado para tratar membranas mucosas secas. De particular importância é o tratamento de membranas mucosas nasais, membranas mucosas orais, membranas mucosas oculares e membranas mucosas vaginais (epitélio vaginal) secas. Além da percepção do olfato, o nariz, por exemplo, cumpre outras funções importantes: limpa o ar respirável removendo pequenas partículas, aquece o ar inalado até a temperatura corporal e o umidifica. Deste modo, fatores patogênicos são eliminados e a troca de gás nos pulmões é preparada mais favoravelmente. No entanto, isso só pode funcionar adequadamente se a mucosa nasal for capaz de umedecer suficientemente o ar respirável. No caso de o ar estar particularmente seco, como no inverno ou em ambientes com ar condicionado, onde a umidade do ar pode ser inferior a 5 g de água por metro cúbico de ar, a capacidade da mucosa nasal logo se mostra insuficiente. Neste caso, sintomas como rinite seca (nariz seco) podem ser experimentados, acompanhados de coceira, sensação de ardor, eczema e formação de crostas. Algumas vezes pode ocorrer sangramento do nariz e a passagem nasal pode estar freqüentemente entupida mesmo sem ter pegado um resfriado comum. Além disso, o ar excessivamente seco, frio demais e não filtrado, mais cedo ou mais tarde, transportará organismos causadores de doenças para o trato respiratório.

[0021] A síndrome do nariz seco, da qual uma manifestação é

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8/46 ri nite seca e outra é rinite atrófica, pode também ser um efeito colateral de um certo tratamento medicinal do nariz e uma permanência prolongada ou repetida em salas com ar condicionado. Além disso, muitos pacientes que sofrem de membrana mucosa seca do nariz são fumantes inveterados.

[0022] Mais frequentemente do que não, uma solução salina comum isotônica aquosa é o agente de escolha a ser aplicado quando se trata nariz seco. No entanto, um tratamento que aplique um agente em forma de spray nem sempre produz efeitos satisfatórios e deve ser repetido com bastante frequência. Em comparação com outras preparações nasais, preparações de maior viscosidade oferecem vantagens características: em comparação com gotas ou sprays nasais contendo água, elas permanecem mais tempo na mucosa nasal. Assim, o efeito de cuidado é mais intensivo. Contudo, a administração de preparações viscosas aquosas também tem um inconveniente em que uma crosta desagradável se acumula depois de a água no agente de aumento de viscosidade ter evaporado. Além disso, um efeito colateral ou problema mais sério está ligado à impressão subjetiva de um “nariz seco” e dificilmente qualquer tratamento significativamente satisfatório está atualmente disponível para remediar esta situação. A utilização de preparações viscosas está associada à desvantagem de atingir usualmente apentas o vestíbulo nasal resultando em um tratamento inadequado das áreas mais altas da membrana mucosa nasal. A aplicação repetida de aditivos vasoconstritores ou descongestionantes da mucosa nasal (substâncias simpatomiméticas) frequentemente resulta nos revestimentos da mucosa nasal ficarem ressecados, o que pode levar a irritações inflamatórias. Esses efeitos colaterais podem acarretar grandes riscos de infecção, uma vez que as membranas mucosas nas condições ressecadas e inflamadas não serão mais capazes de desempenhar

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9/46 suas funções protetoras e de filtragem de forma satisfatória, de modo que organismos causadores de doenças podem entrar nas vias aéreas anatômicas sem impedimentos.

[0023] No entanto, a composição proposta pela invenção é bem adequada para a prevenção, terapia e / ou cuidado de membranas mucosas nasais secas e evita as desvantagens do estado da técnica como aqui descrito anteriormente. Além disso, a composição pode conter cloreto de sódio ou outros hidratantes, como escleroglucanos. Especialmente com composições contendo sal, é significativo selecionar o método de espessamento de I forma que a preparação seja impedida, na medida do possível, de entrar na faringe.

[0024] Além disso, efeitos sinérgicos também podem ser alcançados pela administração conjunta de ácido Nacetildiaminobutírico e outras substâncias ativas. Por exemplo, os efeitos descongestionantes da oximetazolina, xilometazolina ou tramazolina podem ser combinados com os efeitos do ácido Nacetildiaminobutírico. Em particular, os efeitos podem ser combinados com os efeitos anti-inflamatórios de outras substâncias, como, por exemplo, dexpantenol ou pantenol. Outra combinação concebível pode ser alcançada com medicamentos anti-histamínicos, como azelastina ou ácido cromoglícico. Ainda outra combinação pode ser conseguida com substâncias que aumentam a viscosidade, como hidroxipropilmetilcelulose, hietelose, hipromelose ou ácido hialurônico ou com substâncias umectantes, como óleo de gergelim.

[0025] No entanto, o tratamento de membranas mucosas por meio da composição que constitui o objeto da invenção não se limita ao tratamento de membranas mucosas nasais secas; outras membranas mucosas também podem ser efetivamente umedecidas com ácido Nacetildiaminobutírico. Sua aplicação é particularmente importante nas membranas mucosas da boca e dos olhos. Secura da boca

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10/46 (xerostomia) pode ter diferentes causas; em particular, é um efeito colateral frequente dos tratamentos com medicamentos. Um ressecamento da mucosa oral leva à dificuldade de engolir e problemas de fala. Além disso, a cárie dentária é uma conseqüência freqüente, pois o fluxo de saliva protegendo os dentes é significativamente impedido.

[0026] Secura da mucosa oral é encontrada com particular frequência como resultado de um tratamento contra o câncer, seja como resultado de citostáticos ou de uma terapia de radiação. O fundamento aqui é que um tratamento contra o câncer ataca especificamente as células que têm uma alta taxa de divisão, que além das células cancerosas também inclui as células da mucosa.

[0027] A membrana mucosa dos olhos (conjuntiva) também pode ser afetada pela secura, que também é conhecida como síndrome do olho seco ou ceratoconjuntivite seca. Sintomas associados a ela são uma sensação de corpo estranho, queimação e vermelhidão dos olhos. Em casos graves, podem ocorrer danos na córnea ou mesmo cegueira. A ceratoconjuntivite seca é uma doença comum da qual sofrem aproximadamente 10 a 20% da população adulta. O tratamento frequentemente é feito com ácido hialurônico, fluido lacrimal artificial ou derivados de celulose. No entanto, esse tratamento é muitas vezes insatisfatório devido ao sucesso insuficiente ou efeitos colaterais encontrados. Outra forma de olho seco é a xeroftalmia, que freqüentemente afeta crianças, principalmente em países em desenvolvimento. Um tratamento da membrana mucosa seca dos olhos pode ser realizado usando ácido N-acetildiaminobutírico ou derivativos relevantes ou usando uma composição contendo ácido Nacetildiaminobutírico. Além disso, a composição pode conter outros ingredientes ativos, como o ácido hialurônico, que também é empregado para tratar a ceratoconjuntivite seca.

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11/46 [0028] Outro campo de aplicação é a umidificação vaginal, que é a umidificação da membrana mucosa vaginal. Mais frequentemente que não, as mulheres na pós-menopausa são afetadas pela secura vaginal, que está ligada à deficiência de estrogênio e à regressão do epitélio vaginal. No entanto, mulheres mais jovens também podem ser afetadas.

Proteção da pele ou da membrana mucosa contra influências externas [0029] De acordo com outra modalidade preferida, uma composição que contém ácido N-acetildiaminobutírico ou um respectivo derivado serve para ser aplicada em um método destinado à proteção da pele humana ou da membrana mucosa contra influências físicas, químicas e/ou biológicas. Em particular, isso pode envolver radiação, especialmente UV (ultravioleta) ou IR (infravermelho), mas também a luz visível, por exemplo.

[0030] O efeito prejudicial à pele da radiação UV é geralmente conhecido. Além do efeito de eritema de curto prazo, ou seja, o desenvolvimento de queimaduras solares, o dano ao DNA, que a longo prazo pode levar ao desenvolvimento de carcinomas, em particular melanomas, também deve ser mencionado aqui. Além disso, a radiação UV também danifica o colágeno e causa envelhecimento prematuro da pele. Protetores solares costumeiros funcionam fisicamente como o dióxido de titânio e refletem a luz que brilha na pele, ou quimicamente com o auxílio de moléculas orgânicas contidas no protetor solar que absorvem a luz ultravioleta na faixa de comprimento de onda danosa.

[0031] No entanto, a radiação IR, que está menos no foco da percepção pública, também pode causar danos permanentes à pele. Isto é devido a efeitos térmicos que podem resultar na desnaturação de proteínas celulares.

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12/46 [0032] Proteção contra influências externas adicionais também é possível com a ajuda do ácido N-acetildiaminobutírico. Em particular, influências químicas e biológicas incluem alérgenos, calor, substâncias irritantes ou oxidantes ou desnaturantes, partículas em suspensão e radicais livres. Radicais livres são criados, por exemplo, através da exposição à radiação UV, radiação ionizante, fumaça de cigarro ou ozônio. A formação de radicais livres também pode ser promovida como resultado de reações com certas substâncias que ocorrem no ambiente, como pesticidas, herbicidas ou ingredientes alimentares. O mesmo se aplica ao estresse ao qual um grande número de pessoas está exposto. Radicais livres podem danificar o tecido membranoso do corpo e, assim, contribuir para o desenvolvimento de doenças. Radicais livres também aceleram o processo de envelhecimento e o aparecimento de sinais de idade, como o envelhecimento da pele. Em particular, a proteção contra radicais livres serve como uma proteção contra a desidratação da pele, dermatoses e manchas da idade.

[0033] Foi agora estabelecido que o ácido N-acetildiaminobutírico é capaz de estabilizar membranas celulares de queratinócitos contra a radiação UV. Também foi demonstrado que o ácido Nacetildiaminobutírico é capaz de proteger células contra radiação IR, luz visível e calor. Do mesmo modo, é proporcionada protecção contra outras influências físicas, químicas ou biológicas, em particular no que se refere a alérgenos, substâncias com efeitos irritantes ou oxidantes ou desnaturantes e radicais livres. Além disso, os efeitos que as partículas suspensas exercem sobre a pele são o resultado de influências físicas. Em particular, o material particulado em suspensão (também chamado pó fino) com tamanho médio de partícula de < 15 pm, em particular < 10 pm, pode causar sintomas de envelhecimento da pele. Tais partículas suspensas são frequentemente produzidas pela combustão de combustíveis fósseis, mas também ocorrem na

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13/46 forma de areia, esporos, pólen, poeira de rocha, na agricultura, mineração, através do consumo de tabaco, abrasão de pneus, abrasão de freio ou como resultado de incêndios florestais.

[0034] Outras doenças de pele também podem ser prevenidas ou tratadas com ácido N-acetildiaminobutírico ou derivados relevantes. Além das doenças mencionadas, essas doenças incluem psoríase, eczema seborreico, rosácea, urticária, queratose actínica, dermatoses (por exemplo, dermatoses leves), eczema de contato (por exemplo, eczema de contato alérgico), várias formas de líquen, ictiose, dermatite de fralda, candidíase de fralda. Tratamentos podem ser administrados, por exemplo para combater a vermelhidão da pele, inchaço, bolhas, pápulas, descamação da pele e placas. Uma composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico ou derivados correspondentes pode também ser empregada para o tratamento de doenças, em particular inflamações da membrana mucosa da boca ou garganta.

[0035] Um tratamento do couro cabeludo também pode lidar ou se relacionar com aspectos intrínsecos, de modo que podem ser tratados problemas de couro cabeludo, que não são diretamente resultado de influências externas. Com bastante frequência, o couro cabeludo é afetado pelo crescimento reduzido dos cabelos, assim como agrisalhamento dos cabelos. No caso de redução do crescimento capilar, o equilíbrio perturbado entre o crescimento do cabelo e a perda de cabelo causa perda de cabelo e calvície a longo prazo, e esse fenômeno ocorre na forma de alopecia androgenética significativamente mais frequente em homens do que em mulheres. A causa da perda de cabelo hereditária é uma hipersensibilidade dos folículos pilosos à di-hidrotestosterona, o que resulta em a fase de crescimento do cabelo ser encurtada consideravelmente. Além disso, no entanto, existem também doenças inflamatórias de perda de

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14/46 cabelo. Por outro lado, o embranquecimento do cabelo afeta homens e mulheres de maneira aproximadamente igual.

[0036] A falta de produção de melanina nos folículos pilosos leva à hipopigmentação do cabelo. O cabelo livre de pigmento aparece então opticamente como branco ou, misturado com cabelo ainda pigmentado, como cabelo grisalho. O tratamento com ácido Nacetildiaminobutírico previne o impedimento da produção de melanina e é, portanto, propício à manutenção da cor natural do cabelo.

O tratamento de doenças respiratórias [0037] Outro aspecto da invenção refere-se a uma composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico ou um derivado correspondente que serve para ser aplicado em um método para tratamento e/ou prevenção de doenças respiratórias. Estas incluem doenças respiratórias causadas pelos efeitos de partículas suspensas, especialmente doenças dos pulmões.

[0038] Particularmente em conurbações, as pessoas estão expostas a uma quantidade considerável de material particulado suspenso no ar resultante de várias fontes, como gases de escape de veículos a diesel, consumo de tabaco, pólen, esporos de fungos, agricultura, sistemas de aquecimento à óleo e à madeira, centrais elétricas, etc. Especial mente perigosas são matérias particuladas inaláveis, com diâmetros de partícula <10 pm e, em particular, material particulado respirável com diâmetros de partícula <2,5 pm. Essas partículas particularmente finas não são suficientemente retidas pelas membranas mucosas e cabelos na nasofaringe. Em geral, quanto menores as partículas, mais profundamente elas podem penetrar nos pulmões. Por exemplo, partículas <2,5 pm podem penetrar nos alvéolos pulmonares e são de lá eliminadas apenas muito lentamente.

[0039] Doenças causadas através dos efeitos de partículas suspensas podem, por exemplo, incluir alergias, asma brônquica,

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15/46 câncer de pulmão, bronquite crônica, COPD (chronic obstructive pulmonary disease doença pulmonar obstrutiva crônica), silicose ou fibrose pulmonar. COPD, em particular, inclui enfisema pulmonar e bronquite obstrutiva crônica.

[0040] Doenças respiratórias que não são devidas aos efeitos de partículas suspensas, mas causadas por alergias ou infecções virais, também podem ser tratadas com ácido N-acetildiaminobutírico e derivados relevantes. As doenças incluem, em particular, rinite alérgica, asma, resfriado comum, rinite aguda (resfriado), bronquite aguda ou crônica, gripe e pneumonia.

[0041] Doenças respiratórias geralmente têm causas virais. Muitas vezes, elas são causados por rinovírus e adenovirus. Os rinovírus infectam as membranas mucosas do nariz e da garganta e levam à rinite aguda (um resfriado comum) e, mais raramente, à bronquite aguda. O corpo humano responde aos ataques do vírus com uma reação inflamatória da mucosa nasal. Os vasos da membrana mucosa se tornam mais permeáveis e ocorre maior secreção. A mucosa nasal incha e dificulta / impede a respiração pelo nariz. Além disso, podem ocorrer desconforto e dores de cabeça. Além da infecção viral, uma infecção secundária por bactérias frequentemente ocorre na garganta e na faringe.

[0042] Doenças respiratórias devidas a adenovirus variam de um simples resfriado a bronquite e até pneumonia. Pacientes com um sistema imune enfraquecido são particularmente suscetíveis a complicações graves causadas por infecções por adenovirus, como ARDS (acute respiratory distress syndrome - sindrome do desconforto respiratório agudo).

[0043] Doenças respiratórias alérgicas aumentaram acentuadamente nas últimas décadas, particularmente nos países industrializados. Uma rinite alérgica pode surgir como resultado de

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16/46 diferentes alérgenos, como pólen ou poeira doméstica. A doença é baseada na inflamação, que é, em última injstância, uma reação defensiva do organismo contra os estímulos causados pelos alérgenos. Através dos efeitos dos alérgenos, mediadores inflamatórios são liberados no corpo com o auxílio de células T auxiliares, em particular histamina juntamente com interleucina-8, leucotrienos e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-alfa), que ativa a cascata a jusante do controle de inflamação no corpo. Durante a progressão da exposição alergênica, há também uma influência nas moléculas de adesão dos epitélios afetadas pela influência externa, com as referidas moléculas sendo produzidas mais ou menos fortemente. Por exemplo, o estresse de exposição faz com que a molécula ICAM-1 seja expressa mais fortemente nas células afetadas. [0044] Alérgenos no ar respirável desencadeiam reações no trato respiratório, tipicamente com edema de membrana mucosa e hipersecreção (rinite alérgica, febre do feno), bem como asma brônquica. No caso de exposição alérgica particularmente alta, pode ocorrer uma reação sistêmica imediata, que pode, em algumas circunstâncias, resultar em choque anafilático.

[0045] Além disso, o ácido N-acetildiaminobutírico também pode curar, aliviar ou prevenir outras doenças causadas por alérgenos. Isto inclui, em particular, conjuntivite alérgica. Alérgenos no ar ambiente causam regularmente queixas, não só no trato respiratório, especialmente no nariz, mas também em relação ao olho. Neste contexto, uma reação de hipersensibilidade alérgica leva a coceira, vermelhidão e aumento do lacrimejamento. Outra inflamação da conjuntiva, comumente referida como conjuntivite, também pode ser prevenida e tratada com ácido N-acetildiaminobutírico, independentemente de a conjuntivite ter causas bacterianas, virais, mecânicas ou ter sido causada por fungos, parasitas ou tratamento

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17/46 com laser . A conjuntiva é uma membrana mucosa; o ácido Nacetildiaminobutirico protege o epitélio da conjuntiva contra influências externas.

[0046] De um modo geral, uma composição contendo ácido Nacetildiaminobutírico ou um dos derivados descritos pode servir para o tratamento de doenças respiratórias, independentemente de estas serem de natureza alérgica ou viral, serem devidas à ação de partículas suspensas ou terem outras causas. Além disso, sintomas de envelhecimento dos pulmões, como enfisema pulmonar senil, também podem ser tratados. As doenças podem afetar diferentes partes do trato respiratório, como pulmões, nariz e garganta. Doenças respiratórias que podem ser tratadas com ajuda do ácido Nacetildiaminobutírico incluem rinite alérgica, asma brônquica alérgica ou não alérgica, hiper-reatividade brônquica, resfriados comuns, rinite aguda, bronquite aguda ou crônica, gripe, pneumonia, COPD, bronquite obstrutiva crônica, enfisema pulmonar, câncer de pulmão, ARDS (síndrome do desconforto respiratório agudo), fibrose cística, fibrose pulmonar, silicose e sarcoidose.

[0047] Em particular, a composição pode ser fornecida na forma inalável. Assim, pode estar presente na forma líquida ou sólida, sendo a composição atomizada em um aerossol por meio de um dispositivo de inalação fornecido para este fim e inalada pelo paciente. Aditivos usuais vulgarmente utilizados na produção de uma composição inalável podem ser empregados. Em particular, o ácido Nacetildiaminobutírico pode estar presente em água. Também concebível é a adição de antiasmáticos, bronquiolíticos ou expectorantes à composição.

[0048] Tipicamente, uma composição de acordo com a invenção é administrada através do trato respiratório, especialmente nasalmente, para combater doenças respiratórias induzidas por alergia ou virais.

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Administração na forma de um spray nasal ou gotas nasais é particularmente preferida. O efeito do ácido N-acetildiaminobutírico contra rinite alérgica é atribuído ao fato de que a interação das células epiteliais com o alérgeno relevante (por exemplo, pólen) nas células epiteliais nasais no curso da reação inflamatória típica da rinite alérgica (febre do feno) leva a uma sobrerregulação de moléculas de adesão, como ICAM-1, nessas células, que é o pré-requisito para o desenvolvimento dos sintomas clínicos do resfriado. Os inventores observaram que a sobrerregulação de ICAM-1 pode ser inibida por estímulos pró-inflamatórios através do ácido N-acetildiaminobutírico. [0049] A molécula de ICAM-1 não atua apenas como uma molécula de adesão para outras células, mas também como um receptor para os rinovírus descritos anteriormente. Além disso, a infecção por rinovírus causa um aumento da expressão de ICAM-1 a ser desencadeada nos epitélios respiratórios. Neste aspecto, o tratamento com osmólito pode prevenir ou atenuar a regulação positiva de moléculas de ICAM-1 no epitélio nasal e, assim, a expressão desse receptor de rinovírus, com o resultado de que o desenvolvimento e a ocorrência de uma infecção por rinovírus em humanos podem ser prevenidos ou atenuados. Dentro do complexo de adesão das células existe o receptor CAR, que é usado como um local de ancoragem para os adenovirus. Os diferentes serotipos dos adenovirídeos utilizam, então, outros diferentes receptores (integrinas, CD46, glicosaminoglicanos de heparam sulfato, CD80, CD86 e membros do MHC-1) para invadir as células. A modificação na expressão de moléculas de adesão através do tratamento com osmólitos pode, portanto, enfraquecer ou possivelmente impedir a capacidade dos adenovirus para atracar ou penetrar na célula.

[0050] O ácido N-acetildiaminobutírico pode ser administrado em conjunto com outras substâncias ativas, por exemplo, juntamente com

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19/46 anti-histamínicos ou corticosteroides, em particular glicocorticoides. Foi demonstrado neste contexto que seus efeitos colaterais podem ser reduzidos. Uma administração conjunta também é considerada quando as substâncias ativas não são administradas em uma única composição, mas são administradas em estreita coordenação temporal entre si, permitindo que as substâncias ativas interajam funcionalmente. Neste aspecto, a invenção também se refere a um kit de componentes em que uma composição contém ácido Nacetildiaminobutírico e a outra composição contém pelo menos um anti-histamínico e / ou pelo menos um corticosteroide.

[0051] Como corticosteroides, podem ser usados, em particular, glicocorticoides, como dexametasona, budesonida, betametasona, triancinolona, fluocortolona, metilpred-nisolona, deflazacorte, prednisolona, prednisona, cloprednol, cortisona, hidro-cortisona, fluocortina, clocortolona, clobetasona, alclometasona, flumetasona, fluoprednideno, fluorandrenolona, prednicarbato, mometasona, metilpredniso-lona, fluticasona, halometasona, fluocinolona, diflorasona, desoximetasona, fluocinonida, fludrocortisona, deflazacorte, rimexolona, cloprednol, ancinonida, halcinonida, diflucortolona, clobetasol ou sais, ésteres, amidas, solvatos ou hidratos destes composto [0052] Combinações vantajosas alternativas são ácido Nacetildiaminobutírico com GM-CSF, leucotrienos como LTB4, teofilina (1,3-dimetil-xantina), antagonistas de leucotrieno, inibidores de fosfodiesterase (inibidores de PDE, especialmente inibidores de PDE4), antagonistas de receptores muscarínicos, anticolinérgicos como brometo de ipratrópio ou brometo de tiotrópio ou outros ingredientes farmacêuticos ativos.

Tratamento de Doenças Inflamatórias Crônicas do Trato Gastrointestinal

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20/46 [0053] Outro campo de aplicação da composição proposta pela invenção que contém ácido N-acetildiaminobutírico ou um derivado relevante é o tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias crônicas do trato gastrointestinal, em particular a doença de Crohn, gastrite e colite ulcerativa. A doença de Crohn e a colite ulcerativa são inflamações crônicas da mucosa intestinal. Aqui, o ácido Nacetildiaminobutírico mostra seu potencial anti-inflamatório, com a substância atuando particularmente no epitélio intestinal. Ácido Nacetildiaminobutírico também pode ser usado para tratar outras doenças do trato gastrointestinal, por exemplo, inflamação da mucosa gástrica (gastrite) ou síndrome do cólon irritável (irritable bowel syndrome - IBS).

[0054] Entre outras coisas, a doença de Crohn é devida a um distúrbio na função barreira do epitélio intestinal. O muco na mucosa intestinal mostra uma deficiência de defensinas anti-infecciosas. Como resultado da perturbação da função barreira, bactérias intestinais penetram na parede intestinal e causam inflamações, que por sua vez causam mais danos à barreira. O fortalecimento da função barreira anteriormente mencionado através do ácido N-acetildiaminobutírico é, portanto, propício à prevenção da doença de Crohn ou ao tratamento da doença. Da mesma forma, o fortalecimento da função barreira também traz uma melhoria significativa em relação à colite ulcerativa, uma doença inflamatória crônica do intestino que afeta o intestino grosso.

Tratamento de Doenças de Refluxo Gastroesofáqico [0055] A composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou éster de ácido N-acetildiaminobutírico pode também ser aplicada em um método de tratamento e/ou prevenção de doenças de refluxo gastroesofágico, inflamação e dano à mucosa gástrica ou duodenal e/ou de úlceras gástricas ou duodenais. A doença de refluxo

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21/46 gastroesofágico pode ser uma esofagite de refluxo, uma doença de refluxo não erosiva ou esôfago de Barrett. Doenças de refluxo gastroesofágico (Gastroesophageal reflux diseases GERD), também conhecidas como azia (pirose), são fenômenos frequentes. Nos países industrializados ocidentais, o problema ocorre pelo menos uma vez por semana entre os adultos em cerca de 10 a 20% da população. Na Ásia Oriental, a prevalência varia entre 2,5 e 7,8%, e nos EUA 20% da população adulta é afetada semanal mente, 7% até diariamente. A doença é principalmente devida ao fato de que o ácido gástrico do estômago entra no esôfago. Além do ácido gástrico, o ingresso de outros conteúdos do estômago no esôfago também desempenha um papel, por exemplo, a enzima digestiva pepsina, uma peptidase que serve para digerir proteínas nos alimentos. O efeito prejudicial do ácido gástrico é intensificado pela pepsina. Para os afetados, a doença é um grande fardo, por um lado, porque causa uma ardente sensação de queimação no esôfago e, por outro lado, porque é desagradável no contato diário com as pessoas, já que a eructação ácida dificilmente pode ser controlada. Mais frequentemente do que não, os pacientes sentem uma sensação de ardor que chega até a garganta. A opção de tratamento mais comumente adotada é o uso de inibidores da bomba de prótons (proton pump inhibitors PPI), como o omeprazol e antagonistas do receptor H2 de histamina (H2 receptor antagonists H2Ra). Ambas as classes de substâncias são destinadas a suprimir a produção de ácido gástrico. Outra opção de tratamento é a administração de antiácidos, isto é, substâncias neutralizadoras de ácido gástrico. Alginatos propiciam a formação de uma espuma viscosa no estômago, o que impede o refluxo de ácido gástrico para o esôfago.

[0056] Doenças de refluxo gastroesofágico são frequentemente associadas à insuficiência cardíaca. Este é um mau funcionamento do

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22/46 músculo esfíncter (esfíncter do esôfago) que separa o esôfago do estômago, fazendo com que o conteúdo do estômago retorne ao esôfago. Outras causas podem incluir uma produção excessiva de ácido gástrico ou um peristaltismo defeituoso do esôfago. Com particular frequência, o problema ocorre à noite, isto é, quando as pessoas afectadas estão em uma posição deitada. Também sobremesas doces ou o consumo de tabaco e álcool podem promover a ocorrência dos sintomas de refluxo.

[0057] Doenças de refluxo gastroesofágico podem se manifestar como doenças de refluxo não erosivo (non-erosive reflux diseases NERD), nas quais não há dano à membrana mucosa do esôfago, mas também como doenças de refluxo erosivo (esofagite de refluxo; esofagite erosiva (erosive esophagitis - EE); doença de refluxo erosivo (erosive reflux disease - ERD)). Neste último, a membrana mucosa do esôfago se altera e danos na membrana mucosa podem ser detectados. Sangramento e úlceras podem ocorrer na área de transição entre o estômago e o esôfago. Outra complicação das doenças de refluxo gastroesofágico pode ser um estreitamento do esôfago, que por sua vez leva a dificuldades na deglutição.

[0058] Um estágio adicional pode ser um esôfago de Barrett (endobraquiesôfago), no qual uma transformação metaplásica do epitélio do esôfago pode ser observada, com um epitélio escamoso de múltiplas camadas do esôfago transformando-se em um epitélio cilíndrico prismático de camada única na região distai. Esta transformação pode ser completamente circular, especialmente na área da transição gastroesofágica, isto é, a transição do estômago para o esôfago. Embora o epitélio do cilindro seja mais resistente ao ácido gástrico e à enzima pepsina gástrica, existe, mesmo assim, risco de displasia. Um esôfago de Barrett pode, portanto, ser um estágio preliminar no desenvolvimento de carcinoma esofágico (carcinoma de

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Barrett) e deve, portanto, ser examinado e monitorado. Além disso, o esôfago de Barrett pode levar à formação de úlceras.

[0059] Descobriu-se que o ácido N-acetildiaminobutírico e seus respectivos sais e ésteres são capazes de proporcionar melhorias significativas nas doenças de refluxo gastroesofágico e pirose. Pôde ser demonstrado que o ácido N-acetildiaminobutírico é capaz de remediar os efeitos negativos de ácido e pepsina em células epiteliais escamosas.

[0060] Verificou-se também que, com o ácido Nacetildiaminobutírico, danos no epitélio gástrico ou intestinal podem ser prevenidos e tratados. Isto aplica-se em particular ao tratamento e profilaxia da gastrite. O ácido gástrico agressivo pode atacar a mucosa do estômago, por exemplo, se a produção da camada protetora de muco é perturbada por fatores externos. A eficácia do ácido Nacetildiaminobutírico é assim devido à melhoria da função barreira do epitélio, neste caso o estômago, o esôfago e o intestino. Descobriu-se que o ácido N-acetildiaminobutírico e seus derivados são capazes de prevenir e tratar a gastrite. A gastrite pode se desenvolver como resultado da esofagite de refluxo.

[0061] A gastrite pode levar à formação de úlceras estomacais (ulcus ventriculi), que, em última instância, também são devidas ao ácido gástrico agressivo, caso a parede do estômago e a mucosa gástrica não estejam suficientemente protegidas contra o ácido gástrico. Um dos fatores prejudiciais, por exemplo, é uma superprodução de ácido gástrico. Como regra geral, a formação de úlceras gástricas é, entre outras coisas, atribuível a danos na membrana mucosa do estômago; a este respeito, a proteção da membrana mucosa do estômago também fornece proteção contra úlceras gástricas.

[0062] Danos ao epitélio do duodeno também podem ser

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24/46 prevenidos pelo ácido N-acetildiaminobutírico, razão pela qual as substâncias são adequadas para a profilaxia, bem como para o tratamento de inflamações da membrana mucosa do duodeno. Semelhante a mucosa gástrica, trata-se de um epitélio cilíndrico de camada única. O duodeno é a primeira parte do intestino delgado que se liga ao estômago. Como está exposto ao conteúdo altamente cáustico do estômago, que é misturado com enzimas digestivas, como a pepsina, pode ocorrer inflamação e dano à mucosa duodenal. Além disso, bílis do fígado e da vesícula biliar, assim como enzimas pancreáticas, são fornecidas aos alimentos no duodeno. Dano à mucosa duodenal pode levar a uma úlcera duodenal (ulcus duodeni), que afeta aprox. 2 a 10% das pessoas no decorrer de suas vidas. O desenvolvimento de uma úlcera duodenal também é baseado em um desequilíbrio entre substâncias que atacam a membrana mucosa, como ácido gástrico e certas proteases, bem como a fatores que protegem a membrana mucosa, como uma formação adequada de muco. A proteção da membrana mucosa do duodeno é, portanto, importante para a prevenção e tratamento de úlceras duodenais. Verificou-se que o ácido N-acetildiaminobutírico, bem como seus derivados aqui referidos anteriormente, são efetivamente utilizados para fins profiláticos para prevenir o desenvolvimento de ambas as úlceras gástricas e duodenais e são também eficazmente utilizados no tratamento de úlceras gástricas / duodenais, úlceras duodenais. Mesmo que o dano à membrana mucosa do estômago/duodeno seja menos avançado e ainda não tenha resultado no desenvolvimento de uma úlcera, qualquer dano (erosão) que ocorra nessa área pode ser tratado e prevenido.

[0063] A composição proposta pela presente invenção pode ser usada para o tratamento e/ou profilaxia de doenças de refluxo gastroesofágico ou pirose de gravidade variável, i.e. tanto para

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25/46 doenças de refluxo não erosivas como para esofagite de refluxo em que danos nas membranas mucosas do esôfago já foram detectados. Opções de tratamento incluem o esôfago de Barrett, que é uma doença grave associada a um risco aumentado de câncer.

[0064] Tipicamente, a composição é uma solução aquosa, na maior parte dos casos destinada a administração oral.

Restauração do Tecido Corporal Lesionado [0065] Outro aspecto da invenção refere-se a uma composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou éster de ácido Nacetildiaminobutírico que serve para ser aplicado em um método para tratamento e/ou restabelecimento de tecido corporal lesionado. Isto pode ser, em particular, uma ferida ou uma úlcera.

[0066] Tecido corporal pode sofrer lesões de várias maneiras. Lesões teciduais podem, em particular, ocorrer através de influências externas, ou seja, como resultado de eventos traumáticos. Em geral, essas lesões teciduais, especialmente na área da pele ou membrana mucosa, também são referidas como feridas. Além das lesões teciduais causadas por influências externas, também lesões não traumáticas são conhecidas como úlceras.

[0067] Lesões ao tecido corporal também podem ocorrer durante procedimentos e intervenções cirúrgicas e endoscópicas. Em conjunto com intervenções cirúrgicas, o estresse inflamatório pós-operatório e a dor são frequentemente experimentados, o que pode dar origem a grandes problemas que o paciente tem que enfrentar. Esse estresse inflamatório é frequentemente uma consequência do estresse mecânico causado pela intervenção e não necessariamente tem que estar relacionado ao objetivo da intervenção como tal. O estresse inflamatório pós-operatório geralmente ocorre durante a cirurgia abdominal, especial mente no trato gastrointestinal, mas também durante intervenções no fígado e nos rins, bem como em exames

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26/46 endoscópicos. Na cavidade abdominal, por exemplo, o estresse mecânico resulta da necessidade de deslocar alças intestinais durante a operação, de expandir a cavidade abdominal ou, especialmente quando são realizados exames, para aplicar pressão ao próprio intestino ou à cavidade abdominal. Os fenômenos de inflamação resultantes dessas atividades e as tensões inflamatórias e a dor que os acompanham podem ocasionalmente continuar por muito tempo após a cirurgia. Isso se aplica de acordo com as operações realizadas em outras regiões do corpo, por exemplo, durante extrações dentárias, cirurgia de mandíbula ou intervenções necessárias para tratar fraturas. Inter alia, isso se aplica também a extrações dentárias, cirurgias de mandíbula e implantes, também de dentes e articulações artificiais, bem como operações oculares.

[0068] Como regra, a regeneração do tecido corporal prejudicado de maneira natural já ocorre logo após a ocorrência da lesão. No caso de uma ferida ter sido infligida, a coagulação do sangue começa muito rapidamente, fazendo com que o vaso sanguíneo debilitado seja obstruído por um coágulo sanguíneo. Na fase de exsudação subsequente, é expelido um líquido com sangue (ichor), resultando na liberação de corpos estranhos e germes da ferida. O sistema imunológico ataca e mata as bactérias.

[0069] Em uma fase de proliferação subsequente, novo tecido conjuntivo é criado para que o defeito causado pela ferida seja preenchido. Finalmente, em uma fase de regeneração, a ferida é fechada por supercrescimento com células epiteliais que emanam do tecido epitelial intacto na área das bordas da ferida.

[0070] Embora a cicatrização natural de feridas geral mente ocorra de maneira relativamente não problemática no caso de feridas que não são muito grandes, complicações podem ser encontradas no caso de feridas graves e grandes, inter alia como resultado de uma formação

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27/46 excessiva de exsudato. O mesmo se aplica a vários tipos de úlceras. Além disso, feridas crônicas causadas por pressão permanente (decúbito) ou atraso na cicatrização de feridas devido a diabetes mellitus devem ser consideradas particularmente problemáticas. Pacientes que sofrem deste último podem até desenvolver a chamada síndrome do pé diabético, responsável por dois terços de todas as amputações na Alemanha.

[0071] Dentro do escopo da presente invenção, o tecido do corpo cuja restauração pode ser promovida por composições contendo ácido N-acetildiaminobutírico pode, em particular, ser pele ou membranas mucosas. A lesão pode ser de natureza traumática. Isso significa que a lesão é causada por influências externas, como impactos, cortes, picadas, mordidas ou similares. Tais feridas mecanicamente infligidas podem ter sido causadas, por acidentes ou ser o resultado de operações cirúrgicas.

[0072] No caso de membranas mucosas danificadas, fala-se também de mucosite, cujo tratamento também se enquadra no escopo desta invenção, relacionado com a promoção da restauração de tecido corporal lesionado. Mucosite pode ter diferentes causas. Como a taxa de regeneração de células da membrana mucosa é alta, a mucosite frequentemente ocorre, por exemplo, como um efeito adverso do tratamento do câncer durante a quimioterapia ou radioterapia. Além disso, um sistema imunológico enfraquecido, por exemplo, em pacientes imunocomprometidos, leva a um aumento das infecções, que, por sua vez, podem resultar em inflamação da membrana mucosa. Especialmente as membranas mucosas da boca, bem como as do trato gastrointestinal, podem ser afetadas.

[0073] Além das feridas infligidas mecanicamente, existem outras lesões teciduais de outra natureza que também podem ser tratadas com a composição proposta pela presente invenção. Estes incluem,

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28/46 por exemplo, feridas térmicas devido ao calor, fogo, escaldamento ou congelamento de feridas, queimaduras, queimaduras químicas ou feridas causadas por radiação ionizante.

[0074] Além de feridas, também contusões podem ser tratadas com o auxílio da composição inventiva. Nas contusões, órgãos ou partes do corpo são danificados pela força mecânica sem que a própria pele seja ferida. O vazamento de sangue dos capilares danificados para o tecido circundante é particularmente perceptível na forma de hematoma.

[0075] Além de promover a restauração do tecido corporal lesionado no caso de tal lesão ser causada por influências externas, a composição tal como proposta pela invenção é também adequada para o tratamento de úlceras. Estas podem ter causas diferentes, por exemplo, distúrbios circulatórios, tumores ou infecções. Exemplos de úlceras que podem ser tratadas com a ajuda da composição proposta pela invenção estão ulcus cruris (“ulceração da perna”), decúbito (úlcera de pressão), malum perforans (úlcera de pressão no pé), ulcus durum, ulcus molle, ulcus rodens, ulcus corneae e outros.

[0076] A composição tem um significado especial para o tratamento de lesões crônicas, em particular feridas crônicas ou ulcerações crônicas. Um exemplo neste contexto é a síndrome do pé diabético (diabetic foot syndrome - DFS), coloquialmente referida como pé diabético. Com relação a isso, ocorrem ferimentos leves, especialmente no pé ou na parte inferior da perna, que normalmente curariam sem complicações, mas que são frequentemente de longo prazo, devido à baixa capacidade de cura dos pacientes com diabetes. A má cicatrização de feridas deve-se, entre outras coisas, a distúrbios circulatórios que ocorrem em pacientes com diabetes. Característica da síndrome do pé diabético são úlceras que podem se espalhar profundamente na região do corpo, com o risco adicional de que

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29/46 infecções induzidas por germes possam ocorrer. O número de amputações requeridas anualmente devido à síndrome do pé diabético é considerável, o que torna necessário e desejável fornecer uma opção de tratamento eficaz.

[0077] Outro comprometimento do tecido que ocorre com frequência é conhecido pelo termo decúbito (úlcera decubital, úlcera por pressão). Especial mente pessoas com necessidade de cuidados de enfermagem e confinadas ao leito sofrem de decúbito devido ao fato de que é exercida pressão permanentemente em certas partes do corpo. No caso da pressão que atua nos vasos exceder a pressão capilar dos vasos, quantidades insuficientes de oxigênio e nutrientes são transportadas para as células, resultando, em última instância, em danos ao tecido. Embora úlceras de pressão geral mente não ocorram em pessoas saudáveis, porque elas se reposicionam regularmente e, assim, aliviam as áreas de pele ameaçadas, os reflexos necessários em pessoas que precisam de cuidados são restritos ou existem somente até certo ponto. Decúbito pode ocorrer particularmente em áreas da pele onde os ossos estão particularmente próximos da superfície da pele. Existe também o perigo de uma úlcera decubital aberta permitir a penetração de microrganismos. Tendo em vista o grande número de pessoas necessitadas de cuidados de enfermagem e as graves consequências que a ocorrência de decúbito ocasiona, é especial mente essa indicação que requer opções benéficas de tratamento.

[0078] Outro exemplo de úlceras tratáveis são as aftas. Estas ocorrem sob a forma de danos dolorosos na membrana mucosa da boca e garganta. As causas que levam a aftas ainda são amplamente inexplicadas. Em particular, as aftas recorrentes podem ser muito estressantes para o paciente se, por exemplo, ocorrerem em áreas altamente estressadas.

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30/46 [0079] Outras lesões do tecido corporal para as quais a composição proposta pela invenção pode ser usada são lesões por hemorroidas ou fissuras anais que na maioria dos casos são causadas por estresse mecânico. Em geral, as doenças hemorroidárias podem ser tratadas com a ajuda da composição da invenção, aliviando a coceira, a inflamação e a dor.

[0080] Promover a restauração do tecido corporal lesado é também benéfico, na medida em que a formação de cicatrizes pode ser evitada desta maneira. Verificou-se que aplicando a composição da invenção a cicatrização de feridas, especial mente de feridas da pele, é melhorada de modo a evitar a formação de cicatrizes indesejadas por razões ópticas.

Uso como componente de uma solução de preservação de órgãos [0081] De acordo com outra variante, a invenção refere-se ao uso de uma composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou éster de ácido N-acetildiaminobutírico como componente de uma solução de conservação para armazenar órgãos de transplante, sistemas de órgãos de transplante ou tecidos de transplante.

[0082] O transplante de órgãos, em particular rim, coração, fígado, pâncreas e pulmão, desempenha um papel significativo na medicina moderna. O transplante de um órgão pode ser necessário, por exemplo, em casos de insuficiência renal crônica, certas doenças cardíacas coronárias ou cirrose hepática. A maioria dos transplantes é realizada utilizando órgãos de dadores com morte cerebral, de modo que após a remoção do órgão um certo tempo decorrerá durante o qual um receptor adequado necessita de ser encontrado e preparado, o que torna necessária a preservação do respectivo órgão. O respectivo órgão fica, assim, sem receber oxigênio durante um certo tempo, isto é, passa através por uma fase isquêmica associada a um prejuízo reversível relevante. Normal mente, o órgão é preservado ou

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31/46 transportado a uma temperatura tão baixa quanto aprox. 4 ° C. Além do dano causado pela própria isquemia, o chamado dano de reperfusão também pode ocorrer quando o órgão hipotérmico é aquecido e reperfundido com sangue.

[0083] Quando um órgão é removido, é normalmente lavado e armazenado em uma solução de perfusão. Uma solução frequentemente usada é a chamada solução UW (University of Wisconsin), que faz com que a concentração de íons corresponda à concentração nas células. Outra solução de conservação de órgãos que é frequentemente empregada é a solução HTK, inter alia, colocada no mercado pelo Dr. Franz Kõhler Chemie GmbH, Bensheim, Alemanha, sob o nome comercial de Custodiol. A abreviatura HTK refere-se aos constituintes da solução: histidina, triptofano e acetoglutarato. Além disso, outra solução de preservação de órgãos bem conhecida é distribuída com o nome comercial de Celsior pela Genzyme, Cambridge, EUA.

[0084] Verificou-se que danos nos órgãos, tecidos e sistemas de órgãos armazenados em uma solução de conservação e perfundidos com a solução de conservação podem ser reduzidos adicionando ácido N-acetildiaminobutírico à solução de conservação. Preferido neste contexto é a utilização de uma solução de HTK como base, isto é, uma solução de conservação contendo histidina, triptofano e occetoglutarato ou seus respectivos sais.

[0085] A concentração de ácido N-acetildiaminobutírico deve variar entre 0,1 e 100 mM. Preferidas são concentrações que variam entre 1 e 10 mM, particularmente preferidas entre 4 e 7 mM, e no máximo da preferência estão concentrações de aprox. 5 mM. Nas respectivas concentrações, percebeu-se que as lesões/danos nos órgãos tinham diminuído significativamente.

[0086] Uma solução aquosa típica de HTK contém:

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Cloreto de sódio 15,0 mM

Cloreto de potássio 9,0 mM

Cloreto de magnésio hexaidratado 4,0 mM

Cloridrato de histidina mono-hidratado 18,0 mM

Histidina 180, mM

Tritofano 2,0 mM

Manitol 30,0 mM

Cloreto de cálcio di-hidratado 0,015 mM

Hidrogênio-2-cetoglutarato de potássio 1,0 mM [0087] O princípio da solução de HTK baseia-se na inativação da função do órgão através da retirada de sódio e cálcio extracelular, juntamente com o tamponamento do ambiente extracelular por meio de histidina/cloridrato de histidina. Desta forma, é ampliado o período de tempo para que os órgãos sejam capazes de tolerar quando o suprimento de sangue oxigenado é interrompido. A composição eletrolítica da solução de HTK inibe o desencadeamento de processos de ativação que consomem energia, de modo que a exigência de energia do órgão é reduzida. O tampão cloridrato de histidina / histidina retarda a diminuição do pH durante a isquemia, o que resulta na melhoria da eficiência da recuperação de energia anaeróbica. Hidrogênio 2-cetoglutarato de potássio serve como substrato para recuperação de energia aeróbica, o triptofano deve ter um efeito protetor da membrana e o manitol é destinado a prevenir o desenvolvimento de um edema celular. As propriedades de tal solução podem ser otimizadas adicionando a quantidade de ácido Nacetildiaminobutírico indicada.

[0088] Isto também se aplica de forma semelhante quando este é adicionado a uma solução UW, também conhecida pelo nome comercial de Viaspan. A composição é semelhante à do citosol dentro das células. Entre outras coisas, a solução baseia-se no princípio de

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33/46 que substâncias metabolicamente inertes, como ácido lactobiônico ou sais relevantes ou rafinose, mantêm a concentração osmótica. O hidroxietilamido serve para prevenir edema. Além disso, podem ser adicionadas substâncias que fazem com que os radicais livres sejam eliminados.

[0089] Uma solução UW aquosa típica contém:

Lactobionato de potássio 100 mM

KH2PO425 mM

MgSCU5 mM

Rafinose30 mM

Adenosina5 mM

Glutationa3 mM

Alopurinol1 mM

Hidroxietil amido 50 g/l [0090] Finalmente, as propriedades de uma solução Celsior também podem ser melhoradas pela adição de ácido Nacetildiaminobutírico. A solução contém, inter alia, manitol, ácido lactobiônico, ácido glutâmico, histidina, cloreto de cálcio, cloreto de potássio, cloreto de magnésio, hidróxido de sódio e glutationa.

[0091] Uma Composição aquosa típica contém:

Manitol60 mM

Ácido lactobiônico80 mM

Ácido glutâmico20 mM

Histidina30 mM

Cloreto de cálcio 0,25 mM

Cloreto de potássio15 mM

Cloreto de magnésio13 mM

Hidróxido de sódio 100 mM

Glutationa reduzida3 mM

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34/46 [0092] A invenção é particularmente útil para o transplante de rim, coração, pulmão, fígado ou pâncreas. No entanto, também é possível preservar tecidos a serem transplantados, por exemplo, a córnea ou sistemas de órgãos, como um dedo ou uma mão.

[0093] A solução de conservação, especialmente quando é baseada em uma solução HTK, pode conter componentes adicionais conhecidos do estado da arte. Neste contexto, faz-se referência às patentes europeias EP 1 362 511 B1 e 1 859 679 B1. Especificamente, a solução de conservação pode conter ácido hidroxâmico ou um derivado de ácido hidroxâmico que, conforme o caso, é substituído por alquila ou arila. Especialmente adequada é a deferoxamina, que é um quelante de ferro forte e possui até três funções de ácido hidroxâmico. Desta forma, dano induzido por frio relacionado a ferro é impedido. Basicamente, outros quelantes de ferro também podem ser empregados. Pode ser utilizado um tampão com base em N-acil histidina, em particular N-acetil histidina, bem como a base relevante.

[0094] Lisina, arginina ou glicina ou derivados relevantes podem estar presentes, por exemplo, dipeptídeos contendo lisina, arginina ou glicina. O mesmo se aplica a outros aminoácidos naturais, alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, prolina, fenilalanina, triptofano, serina, treonina, asparagina, ácido aspártico, glutamina, ácido glutâmico, tirosina, cisteína e histidina. Os aminoácidos básicos lisina e arginina ou derivados podem ser utilizados como equivalentes de base.

[0095] Também benéfica é a adição de aspartato, que suporta a troca de substâncias nas membranas e acelera a restauração da homeostase e, em combinação com α-cetoglutarato, influencia favoravelmente o metabolismo da energia aeróbica na fase de reperfusão.

[0096] Para atender aos requisitos de energia do órgão durante

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35/46 isquemia, glicose pode ser adicionada à solução de armazenamento. A concentração de glicose neste caso deve ser adequadamente escolhida de modo que seja evitada uma absorção excessiva de glicose por outras células. Outros açúcares, álcoois de açúcar ou outros polióis (por exemplo, manitol, rafinose, sacarose, xilitol, sorbitol) ou substâncias de elevado peso molecular, tais como HES ou dextrana, podem também ser usados para atingir a pressão fisiológica osmótica necessária de aprox. 300 mosm/l.

[0097] A concentração de glicose neste caso deve ser adequadamente escolhida de modo que uma absorção excessiva de glicose por outras células seja evitada. Outros açúcares, álcoois de açúcar ou outros polióis (por exemplo, manitol, rafinose, sacarose, xilitol, sorbitol) ou substâncias de elevado peso molecular, tais como HES ou dextrano, podem também ser usados para atingir a pressão osmótica fisiológica necessária de aprox. 300 mosm /1.

[0098] Dimetilsulfóxido (DMSO) pode ser usado como crioprotetor. Agentes de limpeza de radicais, como Trolox (ácido 6-hidróxi-2,5,7,8tetrametilcromano-2-carboxílico), podem ser empregados para interceptar radicais intracelulares.

[0099] A solução de conservação proposta pela presente invenção pode, evidentemente, não ser apenas utilizada para o armazenamento de órgãos, tecidos ou sistemas de órgãos, mas também para fins de perfusão durante o processo de coleta de órgãos dos dadores. Tipicamente, o órgão é perfundido com a solução de preservação e subsequentemente armazenado e transportado na solução de preservação até ser implantado no corpo do recipiente.

[00100] Tratamento de Processos de Envelhecimento Celular [00101] Em geral, a composição contendo ácido Nacetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido Nacetildiaminobutírico pode também ser utilizada para o tratamento e/ou

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36/46 prevenção de sintomas de envelhecimento celular. A este respeito, NADA pode ser um componente útil de produtos antienvelhecimento. [00102] Tratamento de queixas auditivas [00103] Queixas auditivas, isto é, as deficiências na área do ouvido, podem também ser tratadas com uma composição contendo ácido Nacetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido Nacetildiaminobutírico. Isto inclui em particular a otite externa, isto é, a inflamação do ouvido externo. Isso é caracterizado por dor, coceira, vermelhidão, formação de escamas e crostas e secreção. As causas são muitas vezes inicialmente de natureza mecânica, em que lesões menores podem estar associadas a uma infecção bacteriana subsequente. Infecções bacterianas, por exemplo, com pseudomonas, também podem ocorrer após natação ou mergulho. Outros patógenos bacterianos são os estafilococos. Uma base viral, alérgica ou relacionada à imunidade também é possível na otite externa.

[00104] Outra sensação desagradável que pode ocorrer na área do ouvido é prurido, isto é, coceira. Isso geralmente é desencadeado pela liberação de histamina ou outras substâncias mensageiras, inter alia, pelos mastócitos. Outras formas de prurido fora do ouvido também podem ser tratadas de acordo com a invenção.

[00105] Geral [00106] Independentemente de sua aplicação, a composição pode, por exemplo, ser usada na forma de uma solução, enxágue, suspensão, pomada, creme, loção, pasta, emulsão, microemulsão, spray, geleia ou aerossol. No caso de emulsões e microemulsões, estas podem ser emulsões/microemulsões óleo-em-água (O/W) ou água-em-óleo (A/O).

[00107] Sistemas aquosos com ou sem tampão são particularmente adequados como transportadores para formas de dosagem líquidas. Substâncias transportadoras adequadas para preparações viscosas ou

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37/46 semissólidas, tais como pomadas, cremes ou géis, são hidrocarbonetos parafínicos, vaselina, produtos de cera de lã e outros materiais de base para aumentar a viscosidade farmaceuticamente utilizáveis e para géis hidrofílicos, por exemplo, água, glicerina ou sorbitol, que são gelificados com agentes de inchamento adequados, como ácido poliacrílico, derivados de celulose, amido ou goma de tragacanto.

[00108] Pomadas, pastas, cremes e géis podem conter substancias transportadoras habituais, por exemplo, gorduras animais e vegetais, ceras, parafinas, amido, goma de tragacanto, derivados de celulose, polietilenoglicóis, silicones, bentonitas, ácido silícico, talco e óxido de zinco ou misturas/blendas destas substâncias.

[00109] Para melhorar a aplicação e o prazo de validade da composição fornecida de acordo com a invenção, a composição contendo o ingrediente ativo pode também ser administrada encapsulada em nanoestruturas ou na forma de lipossomas. Isto é particularmente vantajoso se a composição não contém agentes conservantes. Métodos adequados para o encapsulamento são geralmente conhecidos no estado da técnica.

[00110] Além das substâncias ativas e substâncias transportadoras e de quaisquer emulsionantes que possam estar presentes, a preparação de acordo com a invenção pode também conter outros excipientes e/ou aditivos farmacêuticos aceitos, que sejam compatíveis com as substâncias ativas, por exemplo substâncias de carga, diluentes, aglutinantes, umectantes, estabilizantes, de tingimento, de tamponamento, odoríferas e/ou conservantes, bactericidas, solubilizantes, vitaminas, estabilizantes, substâncias para evitar a formação de espuma, espessantes, colantes, tensoativos, substâncias hidratantes, emulsionantes, agentes de aumento de viscosidade, etc.

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38/46 [00111] Por exemplo, os agentes de preservação incluem tiomersal, compostos orgânicos de mercúrio, como fenilmercúrio, cloreto de benzalcônio, clorexidina, álcool benzílico, glicose, etanol e sais de amônio quaternário.

[00112] Exemplos de agentes de aumento de viscosidade são éteres de celulose, como hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, metilpropilcelulose, metilcelulose, metiletilcelulose, etilcelulose, hidroxietilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose, etil-hidroxietilcelulose. Outros exemplos incluem polietilenoglicol, álcoois polivinílicos, polivinilpirrolidona, glicosaminoglicanos, proteoglicanos, álcool cetílico e álcool estearílico, ou combinações dos mesmos (álcool cetilestearílico), ácido poliacrílico, ácido polimetacrílico, poliacrilamida, poliéter, poli-iminas, poliamidas, alginatos, goma xantana., poliuronidos, ácido algínico, carragena, sulfato de condroitina, goma guar, hidroxi-propilguarano e acetato de amido.

[00113] A concentração dos agentes de aumento de viscosidade na composição preferivelmente varia entre 0,05 e 10% em peso, preferivelmente entre 0,1 e 3% em peso. Por exemplo, concentrações para éteres de celulose na faixa de 0,2 a 2,5% em peso, para polietilenoglicol na faixa de 0,2 a 1% em peso, para álcool polivinílico na faixa de 0,1 a 4% em peso e para ácido poliacrílico na faixa de 0,1 a 0,3% em peso foi considerada apropriada.

[00114] Agentes hidratantes ou substâncias humectantes são, por exemplo, glicerina, sorbitol, trealose, betaína, dexpantenol, 1,2propilenoglicol, xilitol ou outros poliálcoois.

[00115] As composições podem conter outros ingredientes ativos. Por exemplo, o ácido N-acetildiaminobutírico ou, respectivamente, os derivados relevantes aqui referidos anteriormente podem ser combinados com uma substância ou várias substâncias a serem

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39/46 selecionadas entre dexpantenol ou seus derivados, extrato de arnica montana (arnica), capsaicina, extrato de capsicum(cápsico), extrato de hypericum perforatum (erva de são João), cardiospermum halicacabum (balãozinho), extrato de hamamelis virginiana (hamamélis), tocoferol, alantoína, bisabolol, extrato de cacau, prata, nanooartículas de prata (nanosilver), micropartículas de prata (microsilver), prata amorfa, sais de prata, zinco, óxido de zinco, extrato de calendula officinalis (calêndula), mel e extratos de mel, própolis, extrato de melilotus officinalis (meliloto), extrato de symphytum(confrei), extrato de echium vulgare (erva viperina), cominho, extrato de angelica sinensis, ácido ferúlico, ácido hialurônico, extrato de aloe vera, extrato de matricaria recutita (camomila), extrato de bulbo de allium cepa (cebola), extrato de achillea millefolium (milefólio), extrato de glycyrrhiza inflata (alcaçuz chinês), licochalcona A, silicone, ureia, extrato de echinacea purpurea (flor de cone roxa), ácido chicórico.

[00116] Outros ingredientes ativos podem ser outros solutos compatíveis, por exemplo. Estes são, em particular, fosfato de di-mioinositol (di-myo-inositol phosphate DIP), 2,3-di-fosfoglicerato cíclico (cDPG), 1,1-di-glicerol fosfato (DGP), β-manosilglicerato (Firoin), βmanosilgliceramida (Firoin A), di-manosil-di-inositol fosfato (DMIP), glicosilglicerol, taurina, betaína, citrulina, ácido 4,5-di-hidro-2-metilimidazol-4-carboxílico (DHMICA) e ácido 4,5,6,7-tetra-hidro-2-metil-IH[1,3]-diazepin-4-S-carboxílico (homoectoina) e derivados relevantes, em particular sais, ésteres ou amidas. Outros ingredientes ativos adequados são fármacos anti-inflamatórios locais, por exemplo, esteroides, ciclosporina A, bloqueadores dos receptores beta. Também apropriados para uso são as combinações com substâncias antipruriginosas, antimicóticos, fungistáticos, fungicidas, antivirais e peptídeos terapêuticos.

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40/46 [00117] A composição pode também conter antibióticos. Isto inclui gentamicina, canamicina, neomicina, tobramicina, ciprofloxacina, ofloxacina, clortetraciclina, ciprofloxacina, eritromicina, ácido fusídico, lomefloxacina, levofloxacina e oxitetraciclina.

[00118] Adicionalmente, as composições podem ser fornecidas com um sistema de tamponamento de pH para permitir que um certo valor de pH seja ajustado. Sistemas tampão adequados são citrato, fosfato, TRIS, glicina, borato, acetato. Estes sistemas tampão podem ser produzidos a partir de substâncias como ácido cítrico, fosfato monossódico, fosfato dissódico, glicina, ácido bórico, tetraborato de sódio, ácido acético ou acetato de sódio.

[00119] Tipicamente, o ácido N-acetildiaminobutírico tem uma concentração variando entre 0,001 e 50% em peso, preferivelmente entre 0,05 e 20% em peso, em particular entre 0,1 e 10% em peso com base no peso total da composição.

Experimento 1: Efeito de umidificacão [00120] O efeito hidratante da pele / mucosa do ácido Nacetildiaminobutírico foi investigado usando um ensaio de hidratação de Matsuo (Matsuo, Br J. Opthalmol. 85: 610-612). Uma linha de células SIRC isolada de olhos de coelho foi usada para este propósito. Para os experimentos, 30.000 células foram colocadas em cada poço de uma placa de microtitulação de 96 poços. Após aprox. 24 h, uma monocamada completa foi formada em cada caso. O sobrenadante foi então removido e 100 ul das substâncias de teste diluídas em PBS (solução salina tamponada com fosfato) foram aplicados às células durante 15 min. O sobrenadante foi, então, removido novamente. Nesta fase, as células não foram lavadas com PBS. Em condições estéreis, as células foram secas ao ar ao longo de um período de 45 min. Em seguida, as células foram lavadas três vezes com PBS. Para determinar a viabilidade das células, utilizou-se coloração com

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41/46 calceina AM (éster de calceina-acetoximetila). Calceína é um corante fluorescente. Após o transporte da calceina AM para a célula viva, os grupos ésteres foram clivados por esterases da célula resultando na formação de calceína fazendo com que um complexo fluorescente fortemente verde fosse formado com íons de cálcio presentes na célula. Portanto, alta fluorescência representa uma alta viabilidade das células, porque as células mortas não têm esterases ativas que podem liberar a calceína necessária para a complexação. Por sua vez, uma viabilidade celular elevada atesta boas propriedades de molhabilidade das substâncias de teste.

[00121] O resultado é mostrado na Figura 1 em comparação com o efeito de ectoína e ácido hialurônico. O teste em que 25 mM de NADA foi utilizado mostrou resultados comparáveis à ectoína como substância de referência. No gráfico, a viabilidade das células e, portanto, a umidificação após a secagem das células podem ser vistas em comparação com o grupo controle que não foi tratado para secagem (IF = 100%). Além disso, foi feita uma comparação com relação ao ácido hialurônico (hyaluronic acid - HA). Os melhores resultados de umidificação foram obtidos usando 10 a 50 mM de NADA.

Experimento 2: Proteção contra UV e IR

A: Teste de proteção contra UV através do ensaio TEER [00122] Uma característica das camadas de células epiteliais e endoteliais é a formação de conexões intercelulares levando a uma densa barreira celular separando o lado basolateral (abluminal) do lado apical (luminal). As camadas de células formam interfaces seletivamente permeáveis entre diferentes compartimentos, controlando assim a difusão no espaço intercelular, bem como os processos de transporte intracelular. Isto é assegurado por junções apertadas (barreiras paracelulares no espaço intercelular). A

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42/46 integridade dessas barreiras é determinada pelo chamado método TEER (transepithelial/transendothelial electrical resistance - resistência elétrica transepitelial / transendotelial). Uma tensão de corrente contínua ( DC voltage)definida é aplicada a dois eletrodos em ambos os lados da camada de células. A corrente de fluxo é medida, o que produz os respectivos resultados de resistência de acordo com a lei de Ohm.

[00123] Utilizaram-se células HaCaT, uma linhagem de células de queratinócitos humanos. Estas foram aplicadas a membranas PET (ThinCerts®). Esperou-se até que as células tivessem formado uma monocamada completa e intacta. A integridade da monocamada pode ser verificada por meio de uma determinação do valor de TEER. Se este valor não aumentar dentro de 2 dias, pode-se assumir que as células formaram uma monocamada estável e estão prontas para as experiências.

[00124] Para realizar uma investigação mais detalhada do efeito protetor das membranas estabilizadas pelo ácido Nacetildiaminobutírico contra a radiação UV, queratinócitos foram incubados de um dia para o outro em um meio de cultura de células com PBS, NADA (50 mM e 100 mM) e outros compostos. Depois disso, as células foram expostas à radiação UV-B por 45 min. As células foram incubadas por mais 24 horas e os valores de TEER foram determinados. Os resultados são mostrados na Figura 2. No eixo das ordenadas, a alteração do valor TEER após a radiação UV-B foi indicada em %.

[00125] Uma queda acentuada no valor de TEER indica uma membrana perturbada. Como pode ser visto, células não tratadas (controle não tratado) experimentam uma redução significativa do valor de TEER de aprox. 15% após a exposição à radiação UV-B. Na presença de 100 mM de NADA, no entanto, uma proteção significativa

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43/46 da membrana celular pôde ser observada.

B: Teste de proteção UV usando ensaio LDH [00126] Para avaliar melhor o efeito de proteção UV do NADA, foi usado um modelo de pele de espessura completa (Full Thickness) da Henkel (modelo de pele Phenion). Este é baseado em uma estrutura de colágeno bovino, que é morfologicamente equivalente à pele humana e, assim, permite que os exames sejam facilmente realizados. O modelo de pele Phenion foi incubado com as substâncias de teste por 4 horas. Estas foram aplicadas diretamente na superfície superior. Posteriormente, o modelo de pele Phenion foi exposto à radiação UVB por 2 horas. O intervalo de tempo escolhido foi mais longo do que para camadas de células simples, porque a resistência do modelo de pele Phenion é significativamente maior. O modelo de pele foi então incubado por mais 24 horas e foi determinado o valor de LDH (lactato desidrogenase), que é uma medida do grau de dano causado às células. Como pode ser visto na figura 3, o valor de LDH antes da exposição a UV é aproximadamente o mesmo para PBS e NADA, enquanto o valor de LDH para o controle PBS após exposição a UV é significativamente maior. No geral, o NADA mostra assim propriedades de proteção contra raios UV similares àquelas verificadas com o modelo de camada celular baseado no ensaio TEER.

C: Teste de proteção contra IR usando ensaio LDH [00127] Radiação infravermelha (IR) provoca um aumento na temperatura da pele, que está associado ao aumento do número de radicais livres e ao aumento da expressão de metaloproteases indutoras de choque térmico (MMP). Uma exposição permanente à radiação IR pode resultar em um aumento na taxa de morte celular por meio da apoptose. Para determinar o potencial de NADA e, para fins comparativos, ectoína em células eucarióticas em relação à proteção contra o calor e radiação IR, células Ha-CaT (linhagem celular de

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44/46 queratinócitos humanos) foram aplicadas a 96 poços de uma placa de microtitulação. Após a formação de uma camada de células uniforme, as substâncias de teste foram aplicadas ao meio e as células foram incubadas por 5 horas a uma temperatura de 37° C. Após préincubação, as células foram expostas a uma temperatura de 44°C por 30 min. As células foram então incubadas a 37°C por mais 60 horas. A liberação de LDH foi então examinada com base no sobrenadante: O resultado é mostrado na Figura 4. Pode-se observar que tanto NADA quanto ectoína oferecem proteção contra radiação IR intensa em comparação com células não tratadas e o NADA demonstrou ser mais eficaz que a ectoína.

Experimento 3: Estabilização da membrana [00128] O efeito de estabilização da membrana e, portanto, fortalecimento da função de barreira das células epiteliais através do NADA foi examinado usando uma linhagem de células TR146. Esta é uma linhagem de células humanas bucais de células da mucosa oral. As células foram colocadas em uma placa de microtitulação com 96 poços. Assim que a confluência foi alcançada, as células foram lavadas com PBS e fornecidas com diferentes concentrações de ácido N-acetildiaminobutírico. O controle negativo continha apenas PBS, o controle positivo cDPG (2,3-difosfoglicerato cíclico). Após incubação, as células foram novamente lavadas com PBS e incubadas com 5 μΜ de calceína AM por um periodo de 45 min. A hidrólise da calceína AM, que por si só não é fluorescente, pelas esterases intracelulares, produz calceína, um composto hidrofílico altamente fluorescente que é retido no citoplasma das células. Assim, a alta fluorescência é indicativa de alta viabilidade celular. O pré-tratamento com NADA leva a uma estabilização significativa e dependente da concentração das células epiteliais, em comparação com as células tratadas exclusivamente com PBS. Os resultados são mostrados na figura 5.

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45/46 [00129] A Figura 6 mostra um experimento respectivo com uma linhagem de células LLC-PK1, o referido experimento correspondendo, por coincidência, com a linha celular TR146 descrita acima, sendo a ectoina neste caso adicionalmente utilizada como substância de referência. Aqui também, um efeito de estabilização de membrana de NADA poderia ser demonstrado de forma conclusiva.

Experimento 4: Efeito do NADA no metabolismo celular [00130] Um ensaio de ATP foi usado para demonstrar o efeito de ácido N-acetildiaminobutírico no metabolismo celular e, portanto, sua utilidade para contrariar o fenômeno do envelhecimento celular. Células HaCaT (uma linhagem celular de queratinócitos) foram colocadas em uma placa de microtitulação de 96 poços e deixou-se uma cultura de células formar durante um período de pelo menos uma semana até que o crescimento celular foi interrompido por inibição de contato. Em seguida, as células foram cultivadas por mais uma semana para simular o processo de envelhecimento. O meio de cultura de células foi mudado para PBS com a adição de NADA e substâncias de referência tais como glicosilglicerol, ectoina (28Extremoin) e Myramaze®, um produto anti-envelhecimento comercialmente disponível. As células foram incubadas durante um período de 5 horas. Finalmente, um ensaio de ATP foi preparado, pelo qual uma síntese elevada de ATP indica um alto grau de metabolismo e, portanto, atesta a vitalidade celular. Os resultados podem ser vistos na Figura 7. O tratamento com NADA resultou na reativação de queratinócitos envelhecidos, o que se reflete na atividade mensurável do ATP em comparação com células tratadas exclusivamente com PBS (0%).

Experimento 5: Influência do NADA em junções oclusivas [00131] O exame concentrou-se na regulação positiva das claudinas, proteínas de membrana como constituintes das junções

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46/46 oclusivas, que fecham os espaços entre as células do epitélio de modo a formar uma barreira. Esta barreira controla a penetração de moléculas através do epitélio. Especificamente, foi examinada claudina-1, ocidente de poros. Uma expressão aumentada de claudina-1 leva a maior impermeabilidade da membrana epitelial e aumento da resistência elétrica transepitelial (TEER). A permeabilidade é, assim, reduzida.

[00132] A linhagem de células epiteliais (HaCaT) utilizada para a experiência foi cultivada em poços em uma placa de microtitulação até ser desenvolvida uma monocamada de células fechadas. Posteriormente, as células foram pré-tratadas com NADA por 6 horas no meio de cultura celular (10, 25, 50, 75, 100 e 175 mM). As células foram, então, subitamente expostas a uma temperatura de 44° C por um período de 30 min. antes de serem mantidos a 37°C por mais 24 e 48 horas, respectivamente. As células foram coletadas e o lisado foi analisado utilizando um ELISA específico de claudina-1 (ensaio imunossorvente ligado a enzima). Os resultados podem ser vistos na Figura 8. Após 24 e, respectivamente, 48 horas, pode ser observado um aumento distinto na expressão de claudina-1, o que leva a um epitélio mais denso e, portanto, a um efeito de barreira aumentado.

Experimento 6: Produção de ácido N-acetildiaminobutírico (NADA) [00133] 207 g de ectoína foram dissolvidos em 2 I de solução de

KOH (2 M) e agitados durante 19 horas à temperatura ambiente. A solução assim obtida foi neutralizada com HC1 a 25%; KCI foi removido por eletrodiálise. A concentração e secagem seguintes produziram o produto sob a forma de um pó incolor. O produto da reacção continha menos de 1% em peso de ectoína e consistia em 80% em peso de ácido (2S) -4-acetamido-2-aminobutanoico e 20% em peso de ácido (2S) -2-acetamido-4-aminobutanoico.

Claims (26)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Ácido N-acetildiaminobutírico, sal de ácido Nacetildiaminobutírico ou éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para tratamento do corpo humano ou animal.
2. 2. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para tratamento do corpo humano ou animal.
3. 3. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para tratamento e/ou prevenção de pele ou membrana mucosa secas.
4. 4. Composição para uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato que a membrana mucosa é uma membrana mucosa nasal, membrana mucosa oral, membrana mucosa dos olhos ou membrana mucosa vaginal.
5. 5. Composição para aplicação de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato que é aplicada em um método para tratamento de eczema atópico.
6. 6. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para uso em um método para proteção de pele ou mucosa humana contra influências físicas, químicas e/ou biológicas ou para o tratamento de mucosites.
7. 7. Composição para uso de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato que é para proteção de pele ou membrana mucosa humana contra radiação de luz visível, UV e/ou IR.
8. 8. Composição para aplicação de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato que é para proteção de pele ou

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   2/4 membrana mucosa humana contra alérgenos, calor, substâncias irritantes ou oxidantes, substâncias desnaturantes, matéria particulada e/ou radicais livres.
9. 9. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para uso em um método para tratamento e/ou prevenção de psoríase, eczema seborreico, rosácea, urticária, queratose actínica, dermatoses, eczema de contato, líquen, ictlose, dermatite de fralda, candidíase de fralda, vermelhidão da pele, inchaço, bolhas, pápulas, descamação da pele, placas, perda de cabelo ou agrísalhamento do cabelo.
10. 10. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para uso em um método para fortalecer a capacidade regenerativa de células em estruturas de tecido e/ou para reduzir os processos de envelhecimento de células.
11. 11. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de Ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para tratamento e/ou prevenção de doenças respiratórias.
12. 12. Composição para uso de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato que a doença do trato respiratório é causada por efeitos de matéria particulada suspensa, em particular uma doença dos pulmões.
13. 13. Composição para uso de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato que a doença respiratória é uma doença respiratória alérgica ou viralmente induzida.
14. 14. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizada pelo fato que a doença do trato respiratório é rinite alérgica, asma brônquíca alérgica ou não alérgica,

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    3/4 hiper-reatividade brônquica, resfriados comuns, rinite aguda, bronquite aguda ou crônica, gripe, pneumonia, COPD, bronquite obstrutiva crônica, enfisema pulmonar, câncer de pulmão, ARDS (síndrome do desconforto respiratório agudo), fibrose cística, fibrose pulmonar, silicose e sarcoidose
15. 15. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para tratamento e/ou prevenção de conjuntivite, em particular uma conjuntivite relacionada à alergia.
16. 16. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para tratamento e/ou prevenção de doenças inflamatórias crônicas do trato gastrointestinal, em particular doença de Crohn, colite ou gastrite ulcerativa, ou síndrome do intestino irritável.
17. 17. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para tratamento e/ou prevenção de doenças de refluxo gastroesofágico, inflamação e dano à mucosa gástrica ou duodenal e/ou de úlceras gástricas ou duodenais.
18. 18. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para restauração de tecido corporal lesionado.
19. 19. Composição para uso de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato que a lesão do tecido corporal é uma ferida ou uma úlcera ou é o resultado de uma síndrome do pé diabético.
20. 20. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um

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    4/4 sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para tratamento de hemorroidas.
21. 21. Composição contendo ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido N-acetildiaminobutírico caracterizada pelo fato que é para aplicação em um método para tratamento de queixas auditivas, em particular otite externa e prurido.
22. 22. Composição para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 21, caracterizada pelo fato que a composição contém ácido N-Y-acetil-2,4-diaminobutírico e/ou ácido N-a-acetil-2,4diaminobutírico.
23. 23. Composição para uso de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato que a composição contém ácido Ν-γ-acetilL-2,4-diaminobutírico e/ou ácido N-a-acetil-L-2,4-diaminobutírico.
24. 24. Uso de uma composição contendo ácido Nacetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido Nacetildiaminobutírico como componente de uma solução de conservação caracterizado pelo fato que é para o armazenamento de órgãos de transplante, sistemas de órgãos de transplante ou tecidos de transplante
25. 25. Composição cosmética caracterizada pelo fato que é contém ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido Nacetildiaminobutírico.
26. 26. Tratamento cosmético de pele ou membrana mucosa por meio de uma composição caracterizado pelo fato que contém ácido N-acetildiaminobutírico, um sal ou um éster de ácido Nacetildiaminobutírico.