BR112019011493A2 - efeito de saúde de planta de purpureocillium lilacinum - Google Patents

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Abstract

a presente invenção se refere a um método para promover ou aprimorar saúde e planta e/ou crescimento vegetal de plantas agrícolas em que as plantas, os propágulos de planta, a semente das plantas e/ou o locus em que as plantas estão crescendo ou são destinadas a crescer são tratados com uma quantidade eficaz de uma composição que compreende o fungo purpureocillium lilacinum ou esporos do mesmo. aspectos adicionais da invenção se referem aos usos de uma composição que compreende o fungo purpureocillium lilacinum ou esporos do mesmo para promover ou aprimorar a saúde de planta e/ou crescimento de planta.

Description

EFEITO DE SAÚDE DE PLANTA DE PURPUREOCILLIUM LILACINUM [0001] 0 uso de formulações de proteção de planta que compreendem agentes de controle biológico (BCAs) se tornou uma alternativa valiosa no campo de proteção de planta. Os agentes de controle biológico direcionados contra fungos ou insetos bem como aqueles que promovem saúde de planta foram disponibilizados no mercado em diferentes formulações.
[0002] Várias cepas Purpureocillium lilacinum (anteriormente conhecidas como Paecilomyces lilacinus) foram descritas para uso como um agente de controle biológico. Tais cepas incluem a cepa 251 nos produtos BIOACT®, MELOCON® e NEMOUT® produzidos por Bayer CropScience Biologies GmbH, uma cepa 580 no produto BIOSTAT® WP (ATCC ηΩ 38740) produzida por Laverlam, uma cepa no produto BIONEMATON® produzida pela empresa T.Stanes and Company Ltd., uma cepa no produto MYSIS® produzida pela empresa Varsha Bioscience and Technology India Pvt Ltd., uma no produto BIOICONEMA® disponível junto a Nico Orgo Maures, índia, uma no produto NEMAT®, disponível junto a Ballagro Agro Tecnologia Ltda, Brasil e uma no produto SPECTRUM PAE L® disponível junto a Promotora Técnica Industrial, S.A. DE C.V., México. Aquelas cepas das espécies são conhecidas por terem um efeito nematicida.
[0003] Um efeito promotor de saúde de planta ou crescimento vegetal foi relatado por vários agentes de controle biológico, como, por exemplo, Penicillium bilaii o que melhora a eficiência de absorção de fósforo. Para P. lilacinum, nenhum tal efeito promotor de crescimento vegetal (PGP) ou efeito de saúde de planta foi relatado até
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[0004] Consequentemente, em um primeiro aspecto, a presente invenção se refere a um método para promover ou aprimorar saúde de planta e/ou crescimento vegetal de plantas agrícolas em que as plantas, os propágulos de planta, a semente das plantas e/ou o locus em que as plantas estão crescendo ou são destinadas a crescer são tratados com uma quantidade eficaz de uma composição que compreende o fungo Purpureocillium lilacinum ou esporos do mesmo.
[0005] Como mencionado acima, várias cepas de P. lilacinum são conhecidas. Tais cepas incluem a cepa 251 nos produtos BIOACT®, MELOCON® e NEMOUT® produzidos por Bayer CropScience Biologies GmbH, uma cepa 580 no produto BIOSTAT® WP (ATCC n2 38740) produzida por Laverlam, uma cepa no produto BIO-NEMATON® produzida pela empresa T.Stanes and Company Ltd., uma cepa no produto MYSIS® produzida pela empresa Varsha Bioscience and Technology India Pvt Ltd., uma no produto BIOICONEMA® disponível junto a Nico Orgo Maures, índia, uma no produto NEMAT®, disponível junto a Ballagro Agro Tecnologia Ltda, Brasil e uma no produto SPECTRUM PAE L® disponível junto a Promotora Técnica Industrial, S.A. DE C.V., México. Aquelas cepas das espécies são conhecidas por terem um efeito nematicida.
[0006] Em uma modalidade preferida, a promoção ou o aprimoramento de saúde de planta compreende alcançar e/ou se manifesta em tolerância aprimorada ao estresse, menos folhas basais mortas, cor de folha mais verde, maior teor de pigmento, atividade fotossintética aprimorada e vigor de planta melhorado. Todas essas propriedades bem como aquelas
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3/78 listadas adicionalmente abaixo são medidas em comparação com plantas que não foram tratadas com P. lilacinum, mas foram, de outro modo, cultivadas sob as mesmas condições. [0007] Em uma outra modalidade preferida, a promoção ou o aprimoramento do crescimento vegetal compreende ou se manifesta em aumento de perfilhamento, aumento na altura de planta, maior lâmina de folha, maior superfície de folha, perfilhos mais fortes, tempo, por exemplo, mais precoce, de floração, queda de flor reduzida, maturidade de grão precoce, frutificação prolongada ou precoce, menos verso de planta (acamamento) , crescimento de broto aumentado, estande de planta aumentado, germinação melhor e/ou precoce, emergência mais precoce e/ou aumentada, rendimento de cultura aumentada, peso vegetative total aprimorado ou biomassa de planta total, teor de proteína aprimorado, teor de óleo aprimorado, teor de amido aprimorado, crescimento de raiz aprimorado (incluindo comprimento de raiz), tamanho de raiz aprimorado (incluindo superfície de raiz), peso de raiz aprimorado e/ou eficácia de raiz aprimorada, peso de broto aprimorado, peso de raiz aumentado, biomassa de planta aumentada e peso de fruta aprimorado. A pessoa versada está ciente de que, em alguns casos, o escopo dos termos aqui listados como compreendido por saúde de planta também pode se estender ao crescimento vegetal e viceversa .
[0008] Em uma outra modalidade mais preferida, a tolerância de estresse aprimorada compreende tolerância aprimorada a aridez, calor, salinidade, UV, geada e/ou condições xenobióticas.
[0009] Em uma modalidade mais preferida, o crescimento
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4/78 vegetal se refere à superfície de folha, crescimento de raiz, tamanho de raiz, peso de raiz, peso de fruta, peso de broto, biomassa de planta e/ou rendimento de cultura.
[0010] Qu alquer característica listada acima para promover ou aprimorar a saúde de planta e/ou crescimento vegetal pode ser aprimorada por pelo menos 3 %, de preferência, pelo menos 5 %, com mais preferência, pelo menos 10 %, pelo menos 15 % ou, ainda pelo menos 20 % ou pelo menos 25 % ou, em alguns casos, ainda mais que 30 % ou 35 % em comparação com aquela de plantas não tratadas com a dita composição ou tratadas com uma formulação virgem. Com máxima preferência, para essas e as seguintes modalidades, as plantas são de outro modo tratadas da mesma maneira.
[0011] Por exemplo, a composição de acordo com a invenção pode resultar em um peso de broto aumentado de pelo menos 3 %, de preferência, pelo menos 5 %, com mais preferência, pelo menos 10 %, pelo menos 13 %, pelo menos 15 % ou pelo menos 20 % em comparação com aquela de plantas não tratadas com a dita composição ou tratadas com uma formulação que não compreende P. lilacinum (nos exemplos também chamada de virgem) . Em alguns casos, o peso de broto ainda pode ser aumentado por pelo menos 25 % ou mais. [0012] Um aumento na biomassa de planta em plantas tratadas com a composição de acordo com a invenção é, de preferência, pelo menos 3 %, de preferência, pelo menos 5 %, com mais preferência, pelo menos 10 %, pelo menos 15 % ou ainda pelo menos 20 % ou pelo menos 25 % ou pelo menos 30 % ou ainda mais em comparação com aquele de plantas não tratadas com a dita composição ou tratadas com uma formulação virgem.
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5/78 [0013] O peso de raiz de plantas tratadas de acordo com a invenção pode ser aumentado por pelo menos 3 %, de preferência, pelo menos 5 %, com mais preferência, pelo menos 10 %, pelo menos 15 %, pelo menos 20 % ou ainda pelo menos 25 % em comparação com aquele de plantas não tratadas com a dita composição ou tratadas com uma formulação virgem. De modo similar, o tratamento de acordo com a invenção pode aumentar a superfície de raiz de uma planta por pelo menos 3 %, pelo menos 5 %, pelo menos 10 % ou pelo menos 15 %. Dessa maneira, o comprimento de raiz de plantas pode ser aumentado por 3 %, de preferência, pelo menos 5 %, com mais preferência, pelo menos 10 %, pelo menos 20 % ou ainda pelo menos 25 % em comparação com aquele de plantas não tratadas com a dita composição ou tratadas com uma formulação virgem.
[0014] Um aumento na biomassa de área de superfície de folha em plantas tratadas com a composição de acordo com a invenção pode ser pelo menos 3 %, de preferência, pelo menos 5 %, com mais preferência, pelo menos 8 %, pelo menos 10 %, pelo menos 14 % ou ainda pelo menos 20 % ou pelo menos 22 % em comparação com aquele de plantas não tratadas com a dita composição ou tratadas com uma formulação virgem.
[0015] O peso de fruta de plantas tratadas de acordo com a invenção pode ser aumentado por pelo menos 3 %, de preferência, pelo menos 5 %, com mais preferência, pelo menos 10 %, pelo menos 15 %, pelo menos 20 % ou ainda pelo menos 25 % ou pelo menos 30 % em comparação com aquele de plantas não tratadas com a dita composição ou tratadas com uma formulação virgem.
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6/78 [0016] Como pode ser visto nos exemplos, a aplicação de uma composição que compreende P. lilacinum ou esporos do mesmo resultou em crescimento vegetal aprimorado, em particular, em crescimento de raiz aprimorado, tamanho de raiz, peso de fruta aprimorado, peso de broto aprimorado e, então, em rendimento de cultura aprimorado, tanto sob pressão quanto, mais notavelmente, também com pressão de nematódeo ausente ou reduzida.
[0017] No curso da presente invenção, foi surpreendentemente constatado que o aprimoramento em crescimento de raiz, tamanho de raiz, crescimento de broto, biomassa de planta, área de superfície de folha e rendimento de cultura (na forma de peso de fruta) supera as expectativas com base na proteção de planta, isto é, efeito nematicida, de P. lilacinum. Isso significa que a aplicação de P. lilacinum sob infecção com nematódeos não tem apenas um efeito para reduzir os danos feitos pelos ditos nematódeos, mas fornece um efeito de saúde de planta adicional ou efeito de promoção de crescimento vegetal na forma de um rendimento desproporcionalmente alto e características de planta aprimoradas. Isso é demonstrado no exemplo 1 anexo a essa aplicação que mostra claramente que a eficácia de nematódeo de P.lilacinum não é correlacionada com os efeitos de crescimento vegetal e saúde de planta observados sob tratamento. Foi adicionalmente confirmado pelas diferentes condições usadas
que os ditos efeitos não são correlacionados com certos
fatores ambientais, como matéria orgânica (OM), pH, textura
do solo [0018] e temperatura Em uma do solo. modalidade preferida, o dito
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Purpureocillium lilacinum é cepa 251 como descrito no documento WO 1991/002051 ou um mutante do mesmo que tem todas as características de identificação da respectiva cepa. A cepa 251 foi isolada de uma massa de ovos de Meloidogyne em Los Banos, Filipinas, EUA, e foi depositada com Australian Government Analytical Laboratories (AGAL) em 1989 sob a Concessão ηΩ 89/030550. Nesse sentido, as características de identificação da cepa se referem àquelas que definem a atividade nematicida e atividade promotora de saúde de planta ou PGP. Consequentemente, uma cepa mutante de P. lilacinum 251 ainda possui os efeitos de PGP/saúde de planta e, de preferência, também os efeitos nematicidas descritos adicionalmente acima, mas pode diferir em outras propriedades, como, por exemplo, estabilidade de armazenamento dos esporos produzidos pelo fungo.
[0019] Produtos comerciais exemplificativos que contêm cepa 251 Purpureocillium lilacinum são BIOACT® WG e MELOCON® WG. As formulações líquidas que compreendem esporos da dita cepa 251 são reveladas nos documentos WO2012/163322 e W02016/050726, ambas as quais são incorporadas ao presente documento a título de referência. A atividade da cepa 251 de Purpureocillium lilacinum é descrita, entre outros, em A. Khan et al., FEMS Microbiology Letters, 227, 107-111, 2003 e S. Kiewnick et al., Biological Control 38, 179-187, 2006. Suas propriedades características e isolamento são revelados no documento WO 91/02051, que é incorporado ao presente documento a título de referência.
[0020] Em uma outra modalidade preferida, a dita promoção ou o dito aprimoramento de saúde de planta e/ou
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crescimento vegetal são independentes de pressão de
nematódeo patogênico.
[0021] Visto que foi constatado que o efeito de saúde de planta ou PGP de aplicação de P. lilacinum ocorre em plantas infestadas com nematódeos, também foi confirmado que esse efeito é atualmente independente de tais infestações de nematódeo. No exemplo 1, pode ser visto que o efeito no rendimento está presente enquanto a eficácia nematicida não está, algumas vezes, em seu máximo. Isso confirma que os efeitos observados não são correlacionados com a atividade nematicida do fungo.
[0022] Em uma modalidade mais preferida, a dita promoção
ou o dito aprimo ramento de saúde de planta e/ou crescimento
vegetal está patogênico. na ausência de pressão de nematódeo
[0023] Esse efeito em PGP ou saúde de planta é
demonstrado no exemplificativas exemplo de tomate 6 e mostrado e pepino. em culturas
[0024] Purpureocillium lilacinum é cultivado de acordo com os métodos conhecidos na técnica em um substrato apropriado, por exemplo, por fermentação submergida ou fermentação de estado sólido, por exemplo, usando um dispositivo revelado no documento WO 2005/012478 ou WO 1999/057239. Subsequentemente, o fungo ou seus órgãos, como os esporos ou conidias é/são separados do substrato. O substrato ocupado com o microrganismo ou as conidias é seco, de preferência, antes da etapa de separação. Após a separação do substrato, o microrganismo ou seus órgãos podem ser secos por meio de, por exemplo, secagem por congelamento, secagem a vácuo ou secagem por aspersão após
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9/78 a separação.
[0025] 0 termo esporos inclui normalmente esporos formados sexual (por exemplo, oósporos, zigósporos ou ascósporos) e assexualmente (por exemplo, conidias e clamidósporos, mas também uredósporos, teleutósporos e ustósporos).
[0026] 0 único tipo de esporos formados por P. lilacinum consiste em conidias de modo que essa forma de esporos seja preferencial no presente documento.
[0027] Em uma modalidade mais preferida, os ditos esporos são esporos secos. Foram mostradas formulações que compreendem esporos secos para ter uma vida de prateleira mais longa de modo que tais formulações sejam aplicáveis por um tempo mais longo em comparação com formulações aquosas ou àquelas que compreendem esporos que não foram secos.
[0028] Os métodos para preparar esporos secos são bem conhecidos na técnica e incluem secagem de leito fluidizado, secagem por aspersão, secagem a vácuo e liofilização. As conidias podem ser secas em 2 etapas: Para conidias produzidas por fermentação de estado sólido, em primeiro lugar, o substrato de cultura coberto por conidias é seco antes de cultivar as conidias do substrato de cultura seco obtendo, através disso, um pó de conidias puro. Então, o pó de conidias é seco adicionalmente usando liofilização ou secagem a vácuo antes de formular o mesmo de acordo com a invenção. Em formulações liquidas que compreendem esporos P. lilacinum como descrito no documento W02016/050726, de preferência, o trisiloxano modificado por poliéter e a silica fumada ou silica fumada são combinados
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10/78 na razão desejada de acordo com métodos bem conhecidos na técnica e fornecidos, por exemplo, nas instruções do fabricante, para formar um carreador de acordo com a invenção. Por exemplo, tal método de preparação de um carreador inclui aplicar alto cisalhamento para dispersar a silica fumada ou silica fumada no trisiloxano modificado por poliéter para resultar em uma mistura homogênea antes de se misturar com o agente de controle biológico e opcionalmente ingredientes adicionais na razão desejada. De preferência, o trisiloxano modificado por poliéter é circulado a partir de um vaso de recebimento através de uma máquina de rotor/estator, e o pó de silica é introduzido, usando um dispositivo de alimentação, na zona de cisalhamento entre as fendas nos dentes de rotor e nas fendas de estator, continua ou descontinuamente, e com a máquina de rotor/estator em funcionamento, o dispositivo de alimentação fecha e o cisalhamento continua de modo que a taxa de cisalhamento esteja na faixa entre 1000 e 10000 s_ [0029] Em uma modalidade preferida, a semente é tratada. [0030] Em outras modalidades, o tratamento pode ser executado na forma de qualquer tipo de aplicação no solo, como em sulco, por aplicação de gotejamento, incorporação no solo, aplicação por encharcamento, irrigação por aspersor, micro-injeção ou aplicação de grânulo.
[0031] A presente composição pode ser aplicada a culturas usando qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica. Pode ser vantajoso aplicar a composição inventiva ao ambiente das raízes. Isso pode ser alcançado pelo revestimento das sementes com uma composição que compreende
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P. lilacinum, de preferência, esporos (conidias) de P. lilacinum, de modo que a emergência de raizes resulte em um inóculo de fungos em seu ambiente; pela imersão ou aspersão de regiões de raiz de mudas ou bandejas de semente em uma situação de viveiro, ou pela aplicação da composição no local de plantio, em suspensão aquosa ou na forma sólida. É particularmente preferencial que a composição inventiva seja especificamente aplicada às regiões da rizosfera de planta, de preferência, aquela afetada por nematódeos. Vegetais e outros transplantes podem ser tratados logo antes do transplante, por exemplo, com um encharcamento de solo.
[0032] É preferencial que a aplicação seja feita através de irrigação por gotejamento.
[0033] Em uma modalidade preferida, o dito tratamento é executado no solo, antes da germinação de uma semente e/ou no solo em contato com uma raiz da dita planta ou onde uma planta é destinada a crescer.
[0034] Para o desenvolvimento de raiz, é mais útil aplicar o fungo antes do transplante também devido a sua característica como parasita de ovo e, posteriormente, ao longo de toda a duração da cultura após o desenvolvimento de nematódeo. Alternativa ou adicionalmente, o fungo pode ser aplicado no final da estação, de preferência, após um tratamento com um agente químico de proteção de planta.
[0035] A fim de alcançar efeitos de rendimento benéficos, uma ou mais aplicações do fungo, como aplicações sequenciais, por exemplo, como mostrado nos exemplos, podem ser executadas em qualquer momento antes da semeadura/plantio ou durante o crescimento da planta.
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12/78 [0036]
Em algumas modalidades o tratamento é executado uma vez. Em outras modalidades, o tratamento é executado repetidamente.
[0037]
Em conexão com essa modalidade da presente invenção, o termo repetidamente se refere a mais que uma vez. Consequentemente, repetidamente pode se referir a pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro ou ainda pelo menos cinco aplicações do fungo ou esporos do mesmo antes da semeadura/plantio e/ou durante a germinação e/ou crescimento da planta.
[0038] Tempos de aplicação usual podem ser derivados dos exemplos anexos bem como as instruções de produtos comercialmente disponíveis, no entanto, podem ser derivados com base na cultura específica, pressão de pragas, tipo de aplicação e projeto pela pessoa versada.
[0039] Em uma modalidade preferida, o método da invenção compreende adicionalmente aplicar, simultânea ou sequencialmente, pelo menos um agente de proteção de planta adicional.
[0040] 0 dito agente de proteção de planta pode ser um nematicida, um inseticida, um bactericida, um miticida, um fungicida ou um outro agente que promove ou que aprimora a saúde de planta.
[0041] Os seguintes agentes de proteção de planta podem, se seus grupos funcionais permitirem, formar opcionalmente sais com bases ou ácidos adequados.
[0042] Fungicidas das seguintes classes (1) a (15) compreendem:
1) Inibidores da biossíntese de ergosterol, por exemplo, (1.001) ciproconazol, (1.002) difenoconazol,
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13/78 (1.003) epoxiconazol, (1.004) fenehexamida, (1.005) fenpropidina, (1.006) fenpropimorfe, (1.007) fenpirazamina, (1.008) fluquinconazol, (1.009) flutriafol, (1.010) imazalil, (1.011) sulfato de imazalila, (1.012) ipconazol, (1.013) metconazol, (1.014) miclobutanila, (1.015) paclobutrazol, (1.016) prohloraz, (1.017) propiconazol, (1.019) Pirisoxazol, (1.020) espiroxamina, (1.021) tebuconazol, (1.022) tetraconazol, (1.023) triadimenol, (1.024) tridemorfe, (1.025) triticonazol, (1.026) (1R,23,53)-5-(4-clorobenzil)-2-(clorometil)-2-metil-l-(1H-
1.2.4- triazol-l-ilmetil) ciclopentanol, (1.027) (1S,2R,5R)-
5- (4-clorobenzil)-2-(clorometil)-2-metil-l-(1H-1,2,4triazol-l-ilmetil) ciclopentanol, (1.028) (2R)-2-(lclorociclopropil)-4-[(1R)-2,2-diclorociclopropil]-1-(1H-
1.2.4- triazol-l-il)butan-2-ol, (1.029) (2R)-2-(l- clorociclopropil)-4-[ (IS)-2,2-diclorociclopropil]-1-(1H-
1,2,4-triazol-l-il)butan-2-ol, (1.030) (2R)-2-[4-(4- clorofenoxi)-2-(trifluorometil)fenil]-1-(1H-1,2,4-triazol- l-il) propan-2-ol, (1.031) (23)-2-(1-clorociclopropil)-4- [(lR)-2,2-diclorociclopropil]-l-(lH-l,2,4-triazol-lil ) butan-2-ol , (1.032) (2S)-2-(1-clorociclopropil)-4-[ (IS)-
2.2- diclorociclopropil]-l-(lH-l,2,4-triazol-l-il)butan-2- ol, (1.033) (2S)-2-[4-(4-clorofenoxi)-2(trifluorometil)fenil]-l-(lH-l,2,4-triazol-l-il)propan-2ol, (1.034) (R)-[3-(4-cloro-2-fluorofenil)-5- (2,4difluorofenil)-l,2-oxazol-4-il](piridin-3-il)metanol, (1.035) (S) - [3- (4-cloro-2-fluorofenil)-5-(2,4difluorofenil)-l,2-oxazol-4-il](piridin-3-il)metanol, (1.036) [3-(4-cloro-2-fluorofenil)-5-(2,4-difluorofenil)-
1.2- oxazol-4-il] (piridin-3-il) metanol, (1.037) 1—({ (2R,4S)-
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14/78
2- [2-cloro-4-(4-clorofenoxi)fenil]-4-metil-l, 3-dioxolan-2- il}metil)-1H-1,2,4-triazol, (1.038) 1-({ (2S,4S)-2-[2-cloro4-(4-clorofenoxi)fenil]-4-metil-l,3-dioxolan-2-il}metil)1H-1,2,4-triazol, (1.039) tiocianato de 1—{ [3— (2 — clorofenil)-2-(2,4-difluorofenil)oxiran-2-il]metil}-lH-
1.2.4- triazol-5-ila, (1.040) tiocianato de 1-{[rel(2R,3R)-
3- (2-clorofenil)-2-(2,4-difluorofenil)oxiran-2-il]metil}-
1H-1,2,4-triazol-5-ila, (1.041) tiocianato de 1{[rel(2R,3S)-3-(2-clorofenil)-2-(2,4-difluorofenil)oxiran2-il]metil}-1H-1,2,4-triazol-5-ila, (1.042) 2-[(2R,4R,5R)-
1- (2,4-diclorofenil)-5-hidroxi-2,6,6-trimetil-heptan-4-il]-
2.4- di-hidro-3H-l,2,4-triazol-3-tiona, (1.043) 2- [(2R,4R,5S)-1-(2,4-diclorofenil)-5-hidroxi-2,6,6-trimetilheptan-4-il]-2,4-di-hidro-3H-l,2,4-triazol-3-tiona, (1.044)
2- [ (2R,4S,5R)-1-(2,4-diclorofenil)-5-hidroxi-2, 6, 6- trimetil-heptan-4-il]-2,4-di-hidro-3H-l,2,4-triazol-3tiona, (1.045) 2-[ (2R,4S,5S)-1-(2,4-diclorofenil)-5hidroxi-2,6,6-trimetil-heptan-4-il]-2,4-di-hidro-3H-l, 2,4triazol-3-tiona, (1.046) 2-[(2S,4R,5R)-1-(2,4diclorofenil)-5-hidroxi-2,6,6-trimetil-heptan-4-il]-2,4-dihidro-3H-l,2,4-triazol-3-tiona, (1.047) 2-[(2S,4R,5S)-1(2,4-diclorofenil)-5-hidroxi-2,6,6-trimetil-heptan-4-il]-
2,4-di-hidro-3H-l,2,4-triazol-3-tiona, (1.048) 2- [(2S,4S,5R)-1-(2,4-diclorofenil)-5-hidroxi-2,6,6-trimetilheptan-4-il]-2,4-di-hidro-3H-l,2,4-triazol-3-tiona, (1.049) 2 - [ (2S,4S,5S)-1- (2,4-diclorofenil)-5-hidroxi-2, 6, 6trimetil-heptan-4-il]-2,4-di-hidro-3H-l,2,4-triazol-3tiona, (1.050) 2-[1-(2,4-diclorofenil)-5-hidroxi-2, 6,6trimetil-heptan-4-il]-2,4-di-hidro-3H-l,2,4-triazol-3tiona, (1.051) 2-[2-cloro-4-(2,4-diclorofenoxi)fenil]-1Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 34/121
15/78 (1H-1,2,4-triazol-l-il)propan-2-ol, (1.052) 2-[ 2-cloro-4(4-clorofenoxi)fenil]-1-(1H-1,2,4-triazol-l-il)butan-2-ol, (1.053) 2-[4-(4-clorofenoxi)-2-(trifluorometil) fenil] -1(1H-1,2,4-triazol-l-il)butan-2-ol, (1.054) 2-[4-(4clorofenoxi)-2-(trifluorometil)fenil]-1-(1H-1,2,4-triazol-
1- il) pentan-2-ol, (1.055) 2-[ 4-(4-clorofenoxi)-2- (trifluorometil)fenil]-l-(lH-l,2,4-triazol-l-il)propan-2ol, (1.056) 2-{ [3-(2-clorofenil)-2-(2,4difluorofenil)oxiran-2-il]metil}-2,4-di-hidro-3H-l, 2,4triazol-3-tiona, (1.057) 2-{[rel(2R,3R)-3-(2-clorofenil)-2(2,4-difluorofenil)oxiran-2-il]metil}-2,4-di-hidro-3H-
1.2.4- triazol-3-tiona, (1.058) 2-{[rel(2R,3S)-3-(2- clorofenil)-2-(2,4-difluorofenil)oxiran-2-il]metil}-2,4-dihidro-3H-l,2,4-triazol-3-tiona, (1.059) 5-(4-clorobenzil)-
2- (clorometil)-2-meti1-1-(lH-l,2,4-triazol-l- ilmetil) ciclopentanol, (1.060) 5-(alilsulfanil)-1-{[3-(2clorofenil)-2-(2,4-difluorofenil)oxiran-2-il]metil} -1H-
1.2.4- triazol, (1.061) 5-(alilsulfanil)-1-{ [rel(2R,3R)-3- (2-clorofenil)-2-(2,4-difluorofenil)oxiran-2-il]metil} -1H-
1,2,4-triazol, (1.062) 5-(alilsulfanil)-1-{ [rel(2R,3S)-3- (2-clorofenil)-2-(2,4-difluorofenil)oxiran-2-il]metil} -1H-
1,2,4-triazol, (1.063) N'-(2,5-dimetil-4-{ [3-(1,1,2,2- tetrafluoroetoxi)fenil]sulfanil}fenil)-N-etil-Nmetilimidoformamida, (1.064) N'-(2,5-dimetil-4-{ [3- (2,2,2trifluoroetoxi)fenil]sulfanil}fenil)-N-etil-Nmetilimidoformamida, (1.065) N'-(2,5-dimetil-4-{[3(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)fenil]sulfanil}fenil)-N-etil-Nmetilimidoformamida, (1.066) N'-(2,5-dimetil-4-{ [3(pentafluoroetoxi)fenil]sulfanil}fenil)-N-etil-Nmetilimidoformamida, (1.067) N'-(2,5-dimetil-4-{3
Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 35/121
16/78 [ (1,1,2,2-tetrafluoroetil)sulfanil]fenoxi]fenil)-N-etil-Nmetilimidoformamida, (1.068) N'-(2,5-dimetil-4-{3-[ (2,2,2trifluoroetil)sulfanil]fenoxi]fenil)-N-etil-Nmetilimidoformamida, (1.069) N'-(2,5-dimetil-4-{3[ (2,2,3,3-tetrafluoropropil)sulfanil]fenoxi]fenil)-N-etilN-metilimidoformamida, (1.070) N'-(2,5-dimetil-4-{3[ (pentafluoroetil)sulfanil]fenoxi]fenil)-N-etil-Nmetilimidoformamida, (1.071) N'-(2,5-dimetil-4fenoxifenil)-N-etil-N-metilimidoformamida, (1.072) Ν'-(4{[3-(difluorometoxi)fenil]sulfanil}-2,5-dimetilfenil)-Netil-N-metilimidoformamida, (1.073) N'-(4-{3[(difluorometil) sulfanil]fenoxi}-2,5-dimetilfenil)-N-etilN-met ilimidof ormamida, (1.074) N'-[5-bromo-6-(2,3-di-hidrolH-inden-2-iloxi)-2-metilpiridin-3-il]-N-etil-Nmetilimidoformamida, (1.075) N'-{4-[ (4,5-dicloro-l,3tiazol-2-il)oxi]-2,5-dimetilfenil}-N-etil-Nmet ilimidof ormamida, (1.076) N'-{5-bromo-6-[(1R)-1-(3,5difluorofenil)etoxi]-2-metilpiridin-3-il}-N-etil-Nmet ilimidof ormamida, (1.077) N'-{5-bromo-6-[ (IS)-1-(3,5difluorofenil)etoxi]-2-metilpiridin-3-il}-N-etil-Nmet ilimidof ormamida, (1.078) N'-{5-bromo-6-[(cis-4isopropilciclo-hexil) oxi]-2-metilpiridin-3-il}-N-etil-Nmet ilimidof ormamida, (1.079) N'-{ 5-bromo-6-[ (transais opr opi lei cl o-hexil) oxi]-2-metilpiridin-3-il}-N-etil-Nmet ilimidof ormamida, (1.080) N'-{5-bromo-6-[1-(3,5difluorofenil)etoxi]-2-metilpiridin-3-il}-N-etil-Nmet ilimidof ormamida, (1.081) Mefentrifluconazol, (1.082)
Ipfentrifluconazol.
[0043] De preferência, um fungicida dessa classe é triadimenol que pode ser usado tanto ao mesmo tempo quanto
Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 36/121
17/78 sequencialmente com P. lilacinum 251.
2) Inibidores da cadeia respiratória no complexo I ou II, por exemplo, (2.001) benzovindiflupir, (2.002) bixafeno, (2.003) boscalid, (2.004) carboxina, (2.005) fluopiram, (2.006) flutolanil, (2.007) fluxapiroxad, (2.008) furametpir, (2.009) Isofetamid, (2.010) isopirazam (enantiômero antiepimérico 1R,4S,9S), (2.011) isopirazam (enantiômero antiepimérico 1S,4R, 9R), (2.012) isopirazam (racemato antiepimérico IRS,4SR,9SR), (2.013) isopirazam (mistura de racemato sinepimérico 1RS,4SR,9RS e racemato antiepimérico IRS,4SR,9SR), (2.014) isopirazam (enantiômero sinepimérico 1R,4S,9R), (2.015) isopirazam (enantiômero sinepimérico 1S,4R,9S), (2.016) isopirazam (racemato sinepimérico IRS,4SR,9RS), (2.017) penflufeno, (2.018) pentiopirad, (2.019) pidiflumetofeno, (2.020) Piraziflumid, (2.021) sedaxano, (2.022) 1,3-dimetil-N-(1,1,3-trimetil-
2,3-di-hidro-lH-inden-4-il)-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.023) 1,3-dimetil-N-[ (3R)-1,1,3-trimetil-2,3-di-hidro-lHinden-4-il]-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.024) 1,3-dimetilN-[ (3S)-1,1,3-trimetil-2,3-di-hidro-lH-inden-4-il] -1Hpirazol-4-carboxamida, (2.025) 1-metil-3-(trifluorometil)N-[2'-(trifluorometil)bifenil-2-il]-lH-pirazol-4carboxamida, (2.026) 2-fluoro-6-(trifluorometil)-N-(l,l,3trimetil-2,3-di-hidro-lH-inden-4-il)benzamida, (2.027) 3- (difluorometil)-1-metil-N-(1,1,3-trimetil-2,3-di-hidro-lHinden-4-il)-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.028) 3(difluorometil)-1-metil-N-[(3R)-1,1,3-trimetil-2,3-dihidro-lH-inden-4-il]-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.029) 3(difluorometil)-1-metil-N-[(3S)-1,1,3-trimetil-2,3-dihidro-lH-inden-4-il]-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.030) 3Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 37/121
18/78 (difluorometil)-N-(7-fluoro-l,1,3-trimetil-2,3-di-hidro-lHinden-4-il)-1-metil-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.031) 3(difluorometil)-N-[(3R)-7-fluoro-l,1,3-trimetil-2,3-dihidro-lH-inden-4-il]-1-metil-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.032) 3-(difluorometil)-N-[(3S)-7-fluoro-l,1,3-trimetil-
2,3-di-hidro-lH-inden-4-il]-1-metil-lH-pirazol-4carboxamida, (2.033) 5,8-difluoro-N-[2-(2-fluoro-4-{[4- (trifluorometil)piridin-2-il]oxi}fenil)etil]quinazolin-4amina, (2.034) N-(2-ciclopentil-5-fluorobenzil)-Nciclopropil-3-(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-lH-pirazol-
4-carboxamida, (2.035) N-(2-terc-butil-5-metilbenzil)-Nciclopropil-3-(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-lH-pirazol4-carboxamida, (2.036) N-(2-terc-butilbenzil)-N- ciclopropil-3-(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-lH-pirazol4-carboxamida, (2.037) N-(5-cloro-2-etilbenzil)-Nciclopropil-3-(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-lH-pirazol4-carboxamida, (2.038) N-(5-cloro-2-isopropilbenzil)-Nciclopropil-3-(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-lH-pirazol4-carboxamida, (2.039) N-[(IR,4S)-9-(diclorometileno)-
1,2,3,4-tetra-hidro-l,4-metanonaftalen-5-il] -3- (difluorometil)-1-metil-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.040)
N-[(IS,4R)-9-(diclorometileno)-l,2,3,4-tetra-hidro-l,4metanonaftalen-5-il]-3-(difluorometil)-1-metil-lH-pirazol4-carboxamida, (2.041) N-[1-(2,4-diclorofenil)-1metoxipropan-2-il]-3-(difluorometil)-1-metil-lH-pirazol-4carboxamida, (2.042) N-[2-cloro-6-(trifluorometil) benzil]N-ciclopropil-3-(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-lHpirazol-4-carboxamida, (2.043) N-[3-cloro-2-fluoro-6(trifluorometil) benzil]-N-ciclopropil-3-(difluorometil)-5fluoro-l-metil-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.044) N-[5
Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 38/121
19/78 cloro-2-(trifluorometil) benzil]-N-ciclopropil-3(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.045) N-ciclopropil-3-(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-N[5-meti1-2-(trifluorometil) benzil]-lH-pirazol-4carboxamida, (2.046) N-ciclopropil-3-(difluorometil)-5fluoro-N-(2-fluoro-6-isopropilbenzil)-1-metil-lH-pirazol-4carboxamida, (2.047) N-ciclopropil-3-(difluorometil)-5fluoro-N-(2-isopropil-5-metilbenzil)-1-metil-lH-pirazol-4carboxamida, (2.048) N-ciclopropil-3-(difluorometil)-5fluoro-N-(2-isopropilbenzil)-1-metil-lH-pirazol-4carbotioamida, (2.049) N-ciclopropil-3-(difluorometil)-5fluoro-N-(2-isopropilbenzil)-1-metil-lH-pirazol-4carboxamida, (2.050) N-ciclopropil-3-(difluorometil)-5fluoro-N-(5-fluoro-2-isopropilbenzil)-1-metil-lH-pirazol-4carboxamida, (2.051) N-ciclopropil-3-(difluorometil)-N-(2etil-4,5-dimetilbenzil)-5-fluoro-l-metil-lH-pirazol-4carboxamida, (2.052) N-ciclopropil-3-(difluorometil)-N-(2etil-5-fluorobenzil)-5-fluoro-l-metil-lH-pirazol-4carboxamida, (2.053) N-ciclopropil-3-(difluorometil)-N-(2etil-5-metilbenzil)-5-fluoro-l-metil-lH-pirazol-4carboxamida, (2.054) N-ciclopropil-N-(2-ciclopropil-5fluorobenzil)-3-(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-lHpirazol-4-carboxamida, (2.055) N-ciclopropil-N-(2ciclopropil-5-metilbenzil)-3-(difluorometil)-5-fluoro-lmetil-lH-pirazol-4-carboxamida, (2.056) N-ciclopropil-N-(2ciclopropilbenzil)-3-(difluorometil)-5-fluoro-l-metil-lHpirazol-4-carboxamida.
[0044] De preferência, um fungicida dessa classe é selecionado a partir de fluopiram e fluxapiroxad que podem ser usados tanto ao mesmo tempo quanto sequencialmente com
Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 39/121
20/78
P. lilacinum 251.
3) Inibidores da cadeia respiratória no complexo III, por exemplo, (3.001) ametoctradina, (3.002) amisulbrom, (3.004) coumetoxiestrobina, (3.005) coumoxiestrobina, (3.006) ciazofamid, (3.007) dimoxiestrobina, (3.008) enoxastrobina, (3.009) famoxadona, (3.010) fenamidona, (3.011) flufenoxiestrobina, (3.012) fluoxastrobina, (3.013) cresoxim-metílico, (3.014) metominoestrobina, (3.015) orisastrobina, (3.016) picoxiestrobina, (3.017) piracloestrobina, (3.018) pirametoestrobina, (3.019) piraoxiestrobina, (3.020) trifloxiestrobina, (3.021) (2E)-
2-{2-[ ( { [ (IE)-1- (3-{ [ (E)-l-fluoro-2fenilvinil]oxi}fenil)etilideno]amino} oxi) metil]fenil}-2(metoxi-imino)-N-metilacetamida, (3.022) (2 E, 3 Z) — 5 — { [ 1 — (4 — clorofenil)-lH-pirazol-3-il]oxi}-2-(metoxi-imino)-N,3dimetilpent-3-enamida, (3.023) (2R)-2-{2-[(2,5dimetilfenoxi) metil]fenil}-2-metoxi-N-metilacetamida, (3.024) (2S)-2-{2-[(2,5-dimetilfenoxi) metil]fenil}-2metoxi-N-metilacetamida, (3.025) 2-metilpropanoato de (3S,6S,7R,8R)-8-benzi1-3-[ ({3 - [ (isobutiriloxi) metoxi]-4metoxipiridin-2-il}carbonil) amino]-6-metil-4,9-dioxo-l, 5dioxonan-7-ila, (3.026) 2—{2—[(2,5— dimetilfenoxi) metil]fenil}-2-metoxi-N-metilacetamida, (3.027) N-(3-etil-3,5,5-trimetilciclo-hexil)-3-formamido-2hidroxibenzamida, (3.028) (2E,3Z)-5-{ [1-(4-cloro-2fluorofenil)-lH-pirazol-3-il]oxi]-2-(metoxi-imino)-N,3dimetilpent-3-enamida, (3.029) {5-[3-(2,4-dimetilfenil)-1Hpirazol-l-il]-2-metilbenzil}carbamato de metila.
[0045] De preferência, um fungicida dessa classe é trifloxistrobina a qual pode ser usada tanto ao mesmo tempo
Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 40/121
21/78 quanto sequencialmente com P. lilacinum 251.
4) Inibidores da mitose e divisão de célula, por exemplo, (4.001) carbendazim, (4.002) dietofencarb, (4.003) etaboxam, (4.004) fluopicolida, (4.005) pencicuron, (4.006) tiabendazol, (4.007) tiofanato-metilico, (4.008) zoxamida, (4.009) 3-cloro-4-(2,6-difluorofenil)-6-metil-5- fenilpiridazina, (4.010) 3-cloro-5- (4-clorofenil)-4-(2,6difluorofenil)-6-metilpiridazina, (4.011) 3-cloro-5-( 6cloropiridin-3-il)-6-metil-4-(2,4,6trifluorofenil)piridazina, (4.012) 4-(2-bromo-4fluorofenil)-N-(2,6-difluorofenil)-1,3-dimetil-lH-pirazol-
5-amina, (4.013) 4-(2-bromo-4-fluorofenil)-N-(2-bromo-6- fluorofenil)-1,3-dimetil-lH-pirazol-5-amina, (4.014) 4-(2bromo-4-fluorofenil)-N-(2-bromofenil)-1,3-dimetil-lHpirazol-5-amina, (4.015) 4-(2-bromo-4-fluorofenil)-N-(2cloro-6-fluorofenil)-1,3-dimetil-lH-pirazol-5-amina, (4.016) 4-(2-bromo-4-fluorofenil)-N-(2-clorofenil)-1,3dimetil-lH-pirazol-5-amina, (4.017) 4-(2-bromo-4fluorofenil)-N-(2-fluorofenil)-1,3-dimetil-lH-pirazol-5amina, (4.018) 4-(2-cloro-4-fluorofenil)-N-(2,6difluorofenil)-1,3-dimetil-lH-pirazol-5-amina, (4.019) 4(2-cloro-4-fluorofenil)-N-(2-cloro-6-fluorofenil) -1,3dimetil-lH-pirazol-5-amina, (4.020) 4-(2-cloro-4fluorofenil)-N-(2-clorofenil)-1,3-dimetil-lH-pirazol-5amina, (4.021) 4-(2-cloro-4-fluorofenil)-N-(2-fluorofenil)-
1,3-dimetil-lH-pirazol-5-amina, (4.022) 4-(4-clorofenil)-5(2,6-difluorofenil)-3,6-dimetilpiridazina, (4.023) N-(2bromo-6-fluorofenil)-4-(2-cloro-4-fluorofenil)-1,3-dimetillH-pirazol-5-amina, (4.024) N-(2-bromofenil)-4-(2-cloro-4fluorofenil)-1,3-dimetil-lH-pirazol-5-amina, (4.025) N-(4
Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 41/121
22/78 cloro-2,6-difluorofenil)-4-(2-cloro-4-fluorofenil)-l,3dimetil-lH-pirazol-5-amina.
5) Compostos com capacidade para terem uma ação multissitio, por exemplo, (5.001) mistura de bordeaux, (5.002) captafol, (5.003) captan, (5.004) clorotalonil, (5.005) hidróxido de cobre, (5.006) naftenato de cobre, (5.007) óxido de cobre, (5.008) oxicloreto de cobre, (5.009) sulfato de cobre(2+), (5.010) ditianon, (5.011) dodina, (5.012) folpet, (5.014) maneb, (5.015) metiram, (5.016) metiram-zinco, (5.017) oxina-cobre, (5.018) propineb, (5.019) enxofre e preparações de enxofre incluindo polissulfeto de cálcio, (5.020) tiram, (5.021) zineb, (5.022) ziram, (5.023) 6-etil-5,7-dioxo-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3',4':5,6][l,4]diti-ino[2,3-c][l,2]tiazol-
3-carbonitrila.
6) Compostos com capacidade para induzir uma defesa do hospedeiro, por exemplo, (6.001) acibenzolar-S-metila, (6.002) isotianila, (6.003) probenazol, (6.004) tiadinila.
7) Inibidores da biossintese de aminoácido e/ou proteína, por exemplo, (7.001) ciprodinila, (7.002) casugamicina, (7.003) hidreto de cloridrato de casugamicina, (7.004) oxitetraciclina, (7.005) pirimetanila, (7.006) 3-(5-fluoro-3,3,4,4-tetrametil-3,4di-hidroisoquinolin-l-il)quinolina.
8) Inibidores da produção de ATP, por exemplo, (8.001) siltiofam.
9) Inibidores da síntese de parede celular, por exemplo, (9.001) bentiavalicarb, (9.002) dimetomorfe, (9.003) flumorfe, (9.004) iprovalicarb, (9.005) mandipropamid, (9.006) pirimorfe, (9.007) valifenalato,
Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 42/121
23/78 (9.008) (2E)-3-(4-terc-butilfenil)-3-(2-cloropiridin-4-il) -
1- (morfolin-4-il)prop-2-en-l-ona, (9.009) (2Z)-3-(4-tercbutilfenil)-3-(2-cloropiridin-4-il)-1-(morfolin-4-il)prop-
2- en-l-ona.
10) Inibidores da síntese de lipideo e membrana, por exemplo, (10.001) propamocarb, (10.002) cloridrato de propamocarb, (10.003) tolclofós-metila.
[0046] De preferência, um fungicida dessa classe é selecionado a partir de propamocarb e cloridrato de propamocarb que podem ser usados tanto ao mesmo tempo quanto sequencialmente com P. lilacinum 251.
11) Inibidores da biossintese de melanina, por exemplo, (11.001) triciclazol, (11.002) {3-metil-l-[(4metilbenzoil) amino]butan-2-il}carbamato de 2,2,2trifluoroetila.
12) Inibidores da síntese de ácido nucleico, por exemplo, (12.001) benalaxila, (12.002) benalaxil-M (quiralaxila), (12.003) metalaxila, (12.004) metalaxil-M (mefenoxam).
[0047] De preferência, um fungicida dessa classe é selecionado a partir de metalaxila e metalaxil-M que podem ser usados tanto ao mesmo tempo quanto sequencialmente com P. lilacinum 251.
13) Inibidores da transdução de sinal, por exemplo, (13.001) fludioxonila, (13.002) iprodiona, (13.003) procimidona, (13.004) proquinazid, (13.005) quinoxifeno, (13.006) vinclozolina.
14) Compostos capazes de agir como um desacoplador, por exemplo, (14.001) fluazinam, (14.002) meptildinocap.
15) Compostos adicionais, por exemplo, (15.001) Ácido
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abscisico, (15.002) bentiazol, (15.003) betoxazina,
(15.004) capsimicina, (15.005) carvona, (15.006)
cinometionat (15.007) cufraneb, (15.008) ciflufenamid,
(15.009) cimoxanil, (15.010) ciprossulfamida, (15.011) flutianila, (15.012) fosetil-aluminio, (15.013) fosetilcálcio, (15.014) fosetil-sódio, (15.015) isotiocianato de metila, (15.016) metrafenona, (15.017) mildiomicina, (15.018) natamicina, (15.019) dimetilditiocarbamato de níquel, (15.020) nitrotal-isopropila, (15.021) oxamocarb, (15.022) Oxatiapiprolina, (15.023) oxifentiina, (15.024) pentaclorofenol e sais, (15.025) ácido fosforoso e seus sais, (15.026) propamocarb-fosetilato, (15.027) piriofenona (clazafenona) , (15.028) tebufloquina, (15.029) tecloftalam, (15.030) tolnifanida, (15.031) 1-(4-{4-[ (5R)-5- (2,6difluorofenil)-4,5-di-hidro-l,2-oxazol-3-il]-1,3-tiazol-2il}piperidin-l-il)-2-[5-metil-3-(trifluorometil)-1Hpirazol-l-il]etanona, (15.032) 1 — (4 — { 4 — [ (5 S) — 5 — (2, 6 — difluorofenil)-4,5-di-hidro-l,2-oxazol-3-il]-1,3-tiazol-2il}piperidin-l-il)-2-[5-metil-3-(trifluorometil)-1Hpirazol-l-il]etanona, (15.033) 2-( 6-benzilpiridin-2il)quinazolina, (15.034) 2,6-dimetil-lH,5H-[1,4]ditiino[2,3-c:5,6-c']dipirrol-1,3,5,7(2H,6H)-tetrona, (15.035)
2-[3,5-bis(difluorometil)-IH-pirazol-l-il]-1-[4-(4 —{5 —[2(prop-2-in-l-iloxi)fenil]-4,5-di-hidro-l,2-oxazol-3-il}-
1,3-tiazol-2-il)piperidin-l-il]etanona, (15.036) 2— [3,5 — bis(difluorometil)-IH-pirazol-l-il]-1-[4-(4 —{5 —[2-cloro-6(prop-2-in-l-iloxi)fenil]-4,5-di-hidro-l,2-oxazol-3-il}-
1,3-tiazol-2-il)piperidin-l-il]etanona, (15.037) 2— [3,5 — bis(difluorometil)-IH-pirazol-l-il]-1-[4-(4 —{5 —[2-fluoro-6(prop-2-in-l-iloxi)fenil]-4,5-di-hidro-l, 2-oxazol-3-il}Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 44/121
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1.3- tiazol-2-il)piperidin-l-il]etanona, (15.038) 2—[6—(3— fluoro-4-metoxifenil)-5-metilpiridin-2-il]quinazolina, (15.039) metanossulfonato de 2—{ (5R) —3—[2— (1—{ [3,5— bis(difluorometil)-IH-pirazol-l-il]acetil}piperidin-4-il)-
1.3- tiazol-4-il]-4,5-di-hidro-l,2-oxazol-5-il} - 3- clorofenila, (15.040) metanossulfonato de 2-{ (5S)-3-[2-(1{[3,5-bis(difluorometil)-IH-pirazol-l-il]acetil}piperidin-
4-il)-1,3-tiazol-4-il]-4,5-di-hidro-l,2-oxazol-5-il} - 3clorofenila, (15.041) 2-{2-[ (7,8-difluoro-2-metilquinolin-
3-il)oxi]-6-fluorofenil}propan-2-ol, (15.042) 2-{2-fluoro-
6-[ (8-fluoro-2-metilquinolin-3-il) oxi]fenil}propan-2-ol, (15.043) metanossulfonato de 2-{3-[ 2-(1-{ [3,5- bis(difluorometil)-IH-pirazol-l-il]acetil}piperidin-4-il)-
1.3- tiazol-4-il]-4,5-di-hidro-l,2-oxazol-5-il} - 3clorofenila, (15.044) metanossulfonato de 2-{3-[2-(1-{ [3,5bis(difluorometil)-IH-pirazol-l-il]acetil}piperidin-4-il)-
1.3- tiazol-4-il]-4,5-di-hidro-l,2-oxazol-5-il}fenila, (15.045) 2-fenilfenol e sais, (15.046) 3-(4,4,5-trifluoro-
3.3- dimetil-3,4-di-hidroisoquinolin-l-il)quinolina, (15.047) 3-(4,4-difluoro-3,3-dimetil-3,4-dihidroisoquinolin-l-il ) quinolina, (15.048) 4-amino-5fluoropirimidin-2-ol (forma tautomérica: 4-amino-5fluoropirimidin-2(1H)-ona), (15.049) ácido 4-oxo-4-[(2feniletil)amino]butanoico, (15.050) 5-amino-l,3,4tiadiazol-2-tiol, (15.051) 5-cloro-N'-fenil-N'-(prop-2-in1-il)tiofeno-2-sulfono-hidrazida, (15.052) 5-fluoro-2-[ (4fluorobenzil)oxi]pirimidin-4-amina, (15.053) 5-fluoro-2[(4-metilbenzil)oxi]pirimidin-4-amina, (15.054) 9-fluoro2,2-dimetil-5-(quinolin-3-il)-2,3-di-hidro-l, 4benzoxazepina, (15.055) {6-[ ({ [ (Z) - (1-metil-lH-tetrazol-5Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 45/121
26/78 il) (fenil) metileno]amino} oxi) metil]piridin-2-il}carbamato de but-3-in-l-ila, (15.056) (2Z)-3-amino-2-ciano-3fenilacrilato de etila, (15.057) ácido fenazina-1carboxilico, (15.058) 3,4,5-tri-hidroxibenzoato de propila, (15.059) quinolin-8-ol, (15.060) sulfato de quinolin-8-ol (2:1), (15.061) { 6-[ ({ [ (1-metil-lH-tetrazol-5il) (fenil) metileno]amino}oxi) metil]piridin-2-il}carbamato de terc-butila, (15.062) 5-fluoro-4-imino-3-metil-1-[(4metilfenil)sulfonil]-3,4-di-hidropirimidin-2(1H)-ona.
[0048] De preferência, um fungicida dessa classe é fosetil-aluminio que pode ser usado tanto ao mesmo tempo quanto sequencialmente com P. lilacinum 251.
[0049] Os inseticidas podem ser das seguintes classes:
(1) Inibidores de acetilcolinesterase (AChE), por exemplo, carbamatos, por exemplo, Alanicarb, Aldicarb, Bendiocarb, Benfuracarb, Butocarboxim, Butoxicarboxim, Carbarila, Carbofurano, Carbosulfano, Etiofencarb, Fenobucarb, Formetanato, Furatiocarb, Isoprocarb, Metiocarb, metomila, Metolcarb, Oxamila, Pirimicarb, Propoxur, tiodicarb, tiofanox, Triazamato, Trimetacarb, XMC e Xililcarb ou organofosfatos, por exemplo, Acefato, Azametifós, Azinfós-etilco, Azinfós-metilico, Cadusafos, Cloretoxifos, Clorfenvinfos, Clormefos, Clorpirifós, Clorpirifós-metilico, Coumafós, Cianofós, Demeton-S-metila, Diazinon, Diclorvos/DDVP, Dicrotofos, Dimetoato, Dimetilvinfós, Disulfoton, EPN, Etion, Etoprofós, Famfur, Fenamifós, Fenitrotion, Fention, Fostiazato, Heptenofós, Imiciafós, Isofenfós, O-(Metoxiaminotio-fosforil)salicilato de isopropila, Isoxationa, Malationa, Mecarbam, Metamidofós, metidationa, Mevinfós, Monocrotofós, Naled,
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Ometoato, oxidemetona-metilica, Parationa, Parationametilica, Fentoato, Forato, fosalona, fosmet, fosfamidona, Foxim, Pirimifós-metilico, Profenofós, Propetamfds, Protiofós, Piraclofds, piridafentiona, Quinalfds, Sulfotep, Tebupirimfds, Temefós, Terbufós, Tetraclorvinfós, tiometona, Triazofós, Triclorfona e Vamidotiona.
(2) Antagonistas de canal de cloreto controlado por GABA, por exemplo, organoclorinas de ciclodieno, por exemplo, Giordano e Endosulfano, ou fenilpirazóis (fipróis), por exemplo, Etiprol e Fipronila.
(3) Moduladores de canal de sódio/bloqueadores de canal de sódio dependente de tensão, por exemplo, piretroides, por exemplo, Acrinatrina, Aletrina, d-cistrans-aletrina, d-trans-aletrina, Bifentrina, Bioaletrina, isômero de Bioaletrina S-ciclopentenila, Bioresmetrina, Cicloprotrina, Ciflutrina, beta-Ciflutrina, Cialotrina, lambda-Cialotrina, gama-Cialotrina, Cipermetrina, alfaCipermetrina, beta-Cipermetrina, teta-Cipermetrina, zetaCipermetrina, Cifenotrina [isômeros (IR)-trans], Deltametrina, Empentrina [isômeros (EZ)-(IR)), Esfenvalerato, Etofenprox, Fenpropatrina, Fenvalerato, Flucitrinato, Flumetrina, tau-Fluvalinato, Halfenprox, Imiprotrina, Kadetrina, Momfluorotrina, Permetrina, Fenotrina [isômero (IR)-trans), Praletrina, Piretrina (piretro), Resmetrina, Silafluofeno, Teflutrina, Tetrametrina, Tetrametrina [isômeros (IR))], Tralometrina e Transílutrina ou DDT ou Metoxiclor.
(4) Agonista de receptor de acetilcolina nicotinico (nAChR), por exemplo, neonicotinoides, por exemplo, Acetamiprid, Clotianidina, Dinotefurano, Imidacloprid,
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Nitenpiram, Tiacloprid e Tiametoxam ou Nicotina ou Sulfoxaflor ou Flupiridafurona.
(5) Ativadores alostéricos de receptor de acetilcolina
nicotínico (nAChR), por exemplo, espinosinas, por exemplo,
Espinetoram e Espinosad. (6) Ativadores de canal de cloreto, por exemplo,
avermectinas/milbemicinas, por exemplo, Abamectina, Benzoato de emamectina, Lepimectina e Milbemectina.
(7) Miméticos de hormônio juvenil, por exemplo, análogos de hormônio juvenil, por exemplo, Hidropreno, Cinopreno e Metopreno ou Fenoxicarb ou Piriproxifeno.
(8) Inibidores não específicos diversos (multissítio), por exemplo, haletos de alquila, por exemplo, brometo de metila e outros haletos de alquila; ou Cloropicrina ou Fluoreto de sulfurila ou Emético de Boráx ou Tartar.
(9) Bloqueadores de alimentação de homoptera seletivo, por exemplo, Pimetrozina ou Flonicamid.
(10) Inibidores de crescimento de ácaro, por exemplo, Clofentezina, Hexitiazox e Diflovidazina ou Etoxazol.
(11) Disruptores microbianos de membranas do intestino médio de inseto, por exemplo, Bacillus thuringiensis subespécie israelensis, Bacillus sphaericus, Bacillus thuringiensis subespécie aizawai, Bacillus thuringiensis subespécie kurstaki, Bacillus thuringiensis subespécie tenebrionis e proteínas de cultura de BT: CrylAb, CrylAc, CrylFa, Cry2Ab, mCry3A, Cry3Ab, Cry3Bb, Cry34/35Abl.
(12) Inibidores de ATP sintase mitocondrial, por exemplo, Miticidas de Diafentiurona ou organotina, por exemplo, Azociclotina, Ciexatina e Óxido de fenbutatina ou Propargita ou Tetradifona.
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29/78 (13) Desacopladores de fosforilação oxidativa através de disrupção do gradiente de proton, por exemplo, Clorfenapir, DNOC e Sulfluramida.
(14) Bloqueadores de canal de receptor de acetilcolina nicotinico (nAChR), por exemplo, Bensultap, Cloridrato de Cartap, tiociclam e tiosultap-sddico.
(15) Inibidores de biossintese de quitina, tipo 0, por exemplo, Bistriflurona, Clorfluazurona, Diflubenzurona, Flucicloxurona, Flufenoxurona, Hexaflumurona, Lufenurona, Novalurona, Noviflumurona, Teflubenzurona e Triflumurona.
(16) Inibidores de biossintese de quitina, tipo 1, por exemplo, Buprofezina.
(17) Disruptores de muda, por exemplo, Ciromazina.
(18) Agonistas de receptor de ecdisona, por exemplo, Cromafenozida, Halofenozida, metoxifenozida e Tebufenozida.
(19) Agonistas de receptor de octopamina, por exemplo, Amitraz.
(20) Inibidores de transporte de elétron de complexo III mitocondrial, por exemplo, Hidrametilnona ou Acequinocila ou Fluacripirim.
(21) Inibidores de transporte de elétron de complexo I mitocondrial, por exemplo, acaricidas METI, por exemplo, Fenazaquina, Fenpiroximato, Pirimidifeno, Piridabeno, Tebufenpirad e Tolfenpirad ou Rotenona (Derris).
(22) Bloqueadores de canal de sódio dependente de tensão, por exemplo, Indoxacarb ou Metaflumizona.
(23) Inibidores de acetil CoA carboxilase, por exemplo, derivados de ácido tetrônico e tetrâmico, por exemplo, Espirobudiclofeno, Espirodiclofeno, Espiromesifeno e Espirotetramato.
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30/78 (24) Inibidores de transporte de elétron de complexo IV mitocondrial, por exemplo, fosfinas, por exemplo, Fosfeto de alumínio, Fosfeto de cálcio, Fosfeto e Fosfeto de zinco ou Cianida.
(25) Inibidores de transporte de elétron de complexo
II mitocondrial, por exemplo, Cienopirafeno e
Ciflumetofeno.
(26) Moduladores de receptor de rianodina, por exemplo, diamidas, por exemplo, Clorantraniliprol,
Ciantraniliprol, Flubendiamida e Tetracloroantraniliprol. [0050] Os ingredientes ativos adicionais com modo desconhecido ou incerto de ação, por exemplo, Afidopiropeno, Afoxolaner, Azadiractina, Benclotiaz, Benzoximato, Bifenazato, Broflanilida, Bromopropilato, Cinometionat, Criolita, Ciclaniliprol, cicloxaprid,
Cialodiamida Dicloromezotiaz, Dicofol, Diflovidazina, Flometoquina, Fluazaindolizina, Fluensulfona, Flufenerim, Flufenoxistrobina, Flufiprol, Fluhexafon, Fluopiram, Fluralaner, Fluxametamida, Fufenozida, Guadipir,
Heptaflutrina, Imidaclotiz, Iprodiona, Lotilaner,
Meperflutrina, Paichongding, Piflubumida, Piridalila,
Pirifluquinazona, Piriminostrobina, Sarolaner,
Tetrametilflutrina, Tetraniliprol, Tetraclorantraniliprol, Tioxazafeno, tiofluoximato, Triflumezopirim e lodometano; ademais, os produtos com base em Bacillus firmus (incluindo, porém sem limitação, cepa CNCM 1-1582, como, por exemplo, VOTIVO®, BIONEM®) ou um dos compostos ativos desconhecidos a seguir: 1-{2-fluoro-4-metil-5-[ (2,2,2trifluoretil)sulfinil]fenil}-3-(trifluorometil)-1H-1,2,4triazol-5-amina (conhecida a partir do documento
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W02006/043635), {1[ (2E)-3- (4-clorofenil)prop-2-en-l-il]5-fluorospiro[indol-3,4'-piperidin]-l(2H)-il}(2cloropiridin-4-il) metanona (conhecida a partir do documento WO 2003/106457), 2-cloro-N-[2-{1-[ (2E)-3-(4clorofenil)prop-2-en-l-il]piperidin-4-il} - 4(trifluorometil)fenil]isonicotinamida (conhecida a partir do documento W02006/003494), 3-(2,5-dimetilfenil)-4hidroxi-8-metoxi-l,8-diazaspiro[4.5]dec-3-en-2-ona (conhecida a partir do documento WO 2009/049851), etil carbonato de 3-(2,5-dimetilfenil)-8-metoxi-2-oxo-l, 8diazaspiro[4.5]dec-3-en-4-ila (conhecida a partir do documento WO 2009/049851), 4-(but-2-in-l-iloxi)-6-(3,5dimetilpiperidin-l-il)-5-fluoropirimidina (conhecida a partir do documento W02004/099160), 4-(but-2-in-l-iloxi)-6(3-clorofenil)pirimidina (conhecida a partir do documento WO 2003/076415), PF1364 (N^ de Reg. CAS 1204776-60-2), 2[2- ({ [3-bromo-l-(3-cloropiridin-2-il)-lH-pirazol-5il] carbonil} amino) -5-cloro-3-met ilbenzoil ] -2metilhydrazinecarboxilato de metila (conhecido a partir do documento WO 2005/085216), 2-[2-({ [3-bromo-l-(3cloropiridin-2-il)-lH-pirazol-5-il]carbonil}amino)-5-ciano3-metilbenzoil]-2-etil-hidrazinacarboxilato de metila (conhecido a partir do documento WO 2005/085216), 2-[2({[3-bromo-l-(3-cloropiridin-2-il)-lH-pirazol-5il]carbonil}amino)-5-ciano-3-metilbenzoil]-2-metilhidrazinacarboxilato de metila (conhecido a partir do documento WO 2005/085216), 2-[3,5-dibromo-2-({[3-bromo-l(3-cloropiridin-2-il)-lH-pirazol-5il]carbonil}amino)benzoil]-2-etil-hidrazinacarboxilato de metila (conhecido a partir do documento WO 2005/085216), N
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32/78 [2-(5-amino-l,3,4-tiadiazol-2-il)-4-cloro-6-metilfenil]-3bromo-1-(3-cloropiridin-2-il)-lH-pirazol-5-carboxamida (conhecida a partir do documento CN 102057925), 8-cloro-N[ (2-cloro-5-metoxifenil)sulfonil]-6(trifluorometil)imidazo[1,2-a]piridina-2-carboxamida (conhecida a partir do documento WO 2009/080250), N-[(2E)1-[(6-cloropiridin-3-il)metil]piridin-2(lH)-ilideno]-2,2,2trifluoroacetamida (conhecida a partir do documento WO 2012/029672), l-[ (2-cloro-l,3-tiazol-5-il)metil]-4-oxo-3fenil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-l-io-2-olato (conhecido a partir do documento WO 2009/099929 ), 1-[(6-cloropiridin-3il)metil]-4-oxo-3-fenil-4H-pirido[l,2-a]pirimidin-l-io-2olato (conhecido a partir do documento WO 2009/099929 ), 4(3—{2,6-dicloro-4-[ (3,3-dicloroprop-2-en-lil)oxi]fenoxi}propoxi)-2-metoxi-6(trifluorometil)pirimidina (conhecida a partir do documento CN 101337940), N-[2-(terc-butilcarbamoil)-4-cloro-6metilfenil]-1-(3-cloropiridin-2-il)-3-(fluorometoxi)-1Hpirazol-5-carboxamida (conhecida a partir do documento WO 2008/134969), [2-(2,4-diclorofenil)-3-oxo-4oxaspiro[4.5]dec-l-en-l-il]carbonato de butila (conhecido a partir do documento CN 102060818), 3E)-3-[1-[ ( 6-cloro-3piridil)metil]-2-piridilideno]-1,1,1-trifluoro-propan-2-ona (conhecida a partir do documento WO 2013/144213), N(metilsulfonil)-6-[2-(piridin-3-il)-1,3-tiazol-5il]piridina-2-carboxamida (conhecida a partir do documento WO 2012/000896), N- [3- (benzilcarbamoil)-4-clorofeni1]-1metil-3- (pentafluoroetil)-4-(trifluorometil)-lH-pirazol-5carboxamida (conhecida a partir do documento WO 2010/051926), 5-bromo-4-cloro-N-[4-cloro-2-metil-6Petição 870190052241, de 04/06/2019, pág. 52/121
33/78 (metilcarbamoil)fenil]-2-(3-cloro-2-piridil)pirazol-3carboxamido (conhecido a partir do documento CN 103232431), Tioxazafeno, 4-[5-(3,5-diclorofenil)-4,5-di-hidro-5(trifluorometil)-3-isoxazolil]-2-metil-N-(cis-l-oxido-3tietanil)-benzamida, 4-[5-(3,5-diclorofenil)-4,5-di-hidro5-(trifluorometil)-3-isoxazolil]-2-metil-N-(trans-l-oxido-
3- tietanil)-benzamida e 4-[ (5S)-5-(3,5-diclorofenil)-4,5di-hidro-5-(trifluorometil)-3-isoxazolil]-2-metil-N-(cis-1oxido-3-tietanil)benzamida (conhecida a partir do documento WO 2013/050317 Al), N-[3-cloro-l-(3-piridinil)-IH-pirazol-
4- il]-N-etil-3-[ (3,3,3-trifluoropropil)sulfinil]propanamida, (+)-N-[3-cloro-l-(3-piridinil)-lH-pirazol-4il]-N-etil-3-[ (3,3,3-trifluoropropil)sulfinil]-propanamida e (-)-N-[3-cloro-l-(3-piridinil)-lH-pirazol-4-il]-N-etil-3[(3,3,3-trifluoropropil) sulfinil]-propanamida (conhecida a partir dos documentos WO 2013/162715A2, WO 2013/162716 A2, US 2014/0213448 Al), 5-[[(2E)-3-cloro-2-propen-l-il]amino]1-[2,6-dicloro-4-(trifluorometil)fenil]-4- [(trifluorometil)sulfinil]-lH-pirazol-3-carbonitrila (conhecida a partir do documento CN 101337937 A), 3-bromoN-[4-cloro-2-metil-6-[(metilamino)tioxometil]fenil]-1-(3cloro-2-piridinil)-lH-pirazol-5-carboxamida, (Liudaibenjiaxuanan, conhecida a partir do documento CN 103109816 A); N-[4-cloro-2-[ [ (1, 1dimetiletil)amino]carbonil]-6-metilfenil]-1-(3-cloro-2piridinil)-3-(fluorometoxi)-lH-pirazol-5-carboxamida (conhecida a partir do documento WO 2012034403 Al), N-[2(5-amino-l,3,4-tiadiazol-2-il)-4-cloro-6-metilfenil]-3bromo-1-(3-cloro-2-piridinil)-lH-pirazol-5-carboxamida (conhecida a partir do documento WO 2011/085575 Al), 4—[3 —
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34/78 [2,6-dicloro-4-[(3,3-dicloro-2-propen-lil)oxi]fenoxi]propoxi]-2-metoxi-6-(trifluorometil) pirimidina (conhecida a partir do documento CN 101337940 A); (2E)- e 2 (Z)-2-[2-(4-cianofenil)-1-[3(trifluorometil)fenil]etilideno]-N-[4(difluorometoxi)fenil]-hidrazinacarboxamida (conhecida a partir do documento CN 101715774 A); éster de ácido 3-(2,2dicloroetenil)-2,2-dimetil-4-(lH-benzimidazol-2-il)fenilciclopropanocarboxílico (conhecido a partir do documento CN 103524422 A); éster metílico de ácido (4aS)-7-cloro-2,5-dihidro-2-[[(metoxicarbonil)[4[(trifluorometil)tio]fenil]amino] carbonil]-indeno[1,2-e] [1,3,4]oxadiazina-4a(3H)-carboxílico (conhecido a partir do documento CN 102391261 A).
[0051] Os nematicidas compreendem diclorpropeno, metam sódico, metam potássico, cloropicrina, oxamila, carbofurano, cleotocarb, fostiazato, aldicarb, aldoxicarb, fenamifós, cadusafós, abamectina, cianamida, dazomet, metil-bromídico, terbufós, etoprofós, etileno-dibromídico, forato, isotiocianato de metila, tiodicarb, tetratiocarbonato sódico, tioxazafeno, iprodiona, fluensulfona, imiciafós, mimetil-disulfídico, espirotetramato, fluazaindolizina, ebufós, isazafós, fensulfotiona, tionazina e fluopiram. Os fumigantes são apenas geralmente adequados para aplicação sequencial em conexão com P. lilacinum.
[0052] Os agentes de proteção de planta também podem compreender agentes de controle biológico. De preferência, o agente de controle biológico tem propriedades nematicidas, fungicidas ou inseticidas ou um efeito
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35/78 benéfico na saúde de planta.
[0053]
Além disso, os agentes de controle biológico ativo de modo fungicida, inseticida, nematicida bem como aqueles que têm um efeito na promoção de saúde de planta podem ser usados.
[0054] termo pelo menos um indica que em qualquer caso um agente de proteção de planta adicional é aplicado além de Purpureocillium lilacinum ou seus esporos. No entanto, mais que um, como (pelo menos) dois, (pelo menos) três, (pelo menos) quatro, (pelo menos) 5 ou ainda mais agentes de proteção de planta adicionais podem ser aplicados de acordo com a presente modalidade.
[0055] Em uma modalidade mais preferida, o dito pelo menos um agente de proteção de planta adicional é selecionado a partir do grupo que consiste em fluopiram, cepa CNCM 1-1582 de B. firmus (também conhecida como VOTIVO®) , B. subtilis, em particular, cepa QST713 (revelada, por exemplo, Patentes ΝΩ US 6.060.051; 6.103.228; 6.291.426; 6.417.163; e 6.638.910), abamectina, aldicarb, aldoxicarb, carbofurano, cleotocarb, fenamifós, fluensulfona, fluazaindolizina, oxamila, fostiazato, tioxazafeno, iprodiona, etoprofós, flupiradifurona, tetraniliprol, rinaxipir, ciazipir, tiometoxam, clotianidina, imidacloprid, tiacloprid, acetamiprid, sulfoxaflor e tiodicarb. Os agentes de proteção de planta a serem combinados com P. lilacinum que são agentes de controle biológico compreendem microrganismos ou esporos dos mesmos de, por exemplo, Trichoderma harzianum cepa T22, mas também nematódeos benéficos, como Steinernema feltia e Heterorhabditis bacteriophora e Steinernema
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36/78 carpocapsae. Em uma modalidade, P. lilacinum ou esporos do mesmo são aplicados simultânea ou sequencialmente com cepa CNCM 1-1582 de B. firmus e clotianidina (disponível como Poncho/VoTiVO junto a Bayer CropScience).
[0056] Consequentemente, a fim de alcançar um melhor efeito de saúde de planta ou PGP, é particularmente vantajoso aplicar sequencialmente P. lilacinum e fluopiram. Aqui, é mais útil ter P. lilacinum aplicado como último agente promotor de saúde de planta ou PGP, também a fim de reduzir resíduos na cultura cultivada. No entanto, isso não exclui que P. lilacinum pode também e adicionalmente ser aplicado antes da aplicação de fluopiram.
[0057] Se necessário, P. lilacinus também pode ser aplicado juntamente com certos outros fungicidas em que a compatibilidade foi mostrada, como fosetil-Al, trifloxistrobina, metalaxila, pentacloronitrobenzeno, fluxapiroxad, propamocarb e triadimenol. Os inseticidas e/ou nematicidas compatíveis compreendem carbofurano, cadusafós, fenamifós, furfural, terbufós, tioxazafeno, fluazaindolizina, fostiazato, flupiradifurona, imidacloprid, bifentrina.
[0058] Além dos agentes de proteção de planta biológicos e químicos, métodos técnicos são comumente aplicados por agricultores para controlar de modo eficaz patógenos presentes no solo bem como nematódeos. A solarização pelo uso de calor radiante do sol aprisionado por cobertura vegetal ou lona alcatroada de polietileno limpa ao longo de várias semanas aumenta a temperatura do solo, assim, atua como o agente letal, respectivamente. Todos tais métodos também podem ser aplicados em conjunto com a presente
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37/78 invenção .
[0059] A presente invenção pode ser aplicada a qualquer planta agrícola. Entende-se aqui que plantas significam todas as plantas e populações de planta, como plantas selvagens desejadas ou plantas de cultura (incluindo plantas de cultura de ocorrência natural) . As plantas de cultura podem ser plantas que podem ser obtidas por métodos de otimização e criação convencionais que podem ser auxiliados ou suplementados por um ou mais métodos biotecnológicos, como pelo de haploides duplos, fusão de protoplasto, mutagênese aleatória e dirigida, marcadores moleculares ou genéticos ou por métodos de engenharia genética e bioengenharia ou combinações desses métodos, incluindo plantas trangênicas, plantas modificadas por engenharia de genoma dirigido, como pelo uso de nucleases de dedo de zinco, meganucleases, TALE nucleases ou CRISPR/Cas9 e incluindo os cultivares de planta que podem ou não ser protegidos por certificados de criadores de plantas.
[0060] As culturas a serem tratadas, que foram apenas descritas de uma maneira geral, são diferenciadas e específicas abaixo e incluem vegetais, culturas perenes, ornamentais, condimentos e cereais. Desse modo, em relação ao uso, entende-se que legumes significam, por exemplo, frutas, vegetais e cabeças de flor como vegetais, por exemplo, cenouras, pimentões, pimentas malaguetas, tomates, berinjelas, pepinos, cucurbitáceas, abobrinhas, favas, feijões-verdes, vagens, ervilhas, alcachofras, milho; mas também verduras folhosas, por exemplo, alface, chicória, endívias, agrião, salada de rúcula, alface-da-terra, alface
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38/78 americana, alho-poro, espinafre, acelga; adicionalmente, tubérculos, vegetais de raízes e vegetais de caule, por exemplo, aipo, beterraba, cenouras, rabanete, rábano, salsifis, aspargos, beterraba, brotos de palma, brotos de bamboo e também vegetais de bulbos, por exemplo, cebolas, alho-poro, funcho, alho; adicionalmente, hortaliças brássicas, como couve-flor, brócolis, couve-rábano, repolho roxo, repolho, couve verde, couve-lombarda, couves-debruxelas, couve chinesa.
[0061] Nesse sentido, entende-se que culturas perenes significam frutas cítricas, por exemplo, laranjas, toranja, tangerinas, limões, limas, laranjas-azeda, quincã, mikan; mas também frutas da terra, por exemplo, maçãs, peras e marmelo e, frutas de caroço, por exemplo, pêssegos, nectarinas, cerejas, ameixas, ameixas comuns, damascos; adicionalmente, videira, lúpulos, olivas, chá, soja, colza oleaginosa, algodão, cana-de-açúcar, beterraba, batatas, tabaco e culturas tropicais, por exemplo, mangas, mamãopapaia, figos, abacaxis, tâmaras, bananas, dorião, caquis, coco, cacau, café, avocados, lichias, maracujás, goiabas e também amendoeiras e frutos de casca dura, por exemplo, avelãs, nozes, pistache, castanhas de caju, castanha do pará, noz pecã, abóbora-cheirosa, castanhas, nogueira-peça, macadamia, amendoins e adicionalmente também frutas moles, por exemplo, cassis, groselhas, framboesas, amoras, mirtilo, morango, mirtilos vermelhos, kiwis e oxicocos.
[0062] Entende-se que as plantas ornamentais significam plantas perenes e anuais, por exemplo, flores a serem cortadas das plantas, por exemplo, rosas, cravos, gerbera, lírio, margaridas, crisântemo, tulipas, narcisos, anêmonas,
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39/78 papoulas, amarílis, dálias, azaléia, malvas, mas também, por exemplo, plantas rasteiras, plantas em vasos e arbustos, por exemplo, rosas, tagetes, amor-perfeito, gerânios, fúcsias, hibiscos, crisântemos, maria-semvergonha, ciclame, violetas africanas, girassóis, begônias, em gramados ornamentais, em gramados de golfe, mas também em cereais, como cevada, trigo, centeio, triticale, aveias, em arroz, em painço, em milho, adicionalmente, por exemplo, arbustos e coníferas, por exemplo, figueiras-comum, rododendro, piceas, abetos, pinheiro, teixos, junípero comum, pinheiro-manso, espirradeiras.
[0063] Entende-se que as espécies significam plantas anuais e perenes, por exemplo, anis, pimenta malagueta, pimentão, pimenta, baunilha, manjerona, tomilho, cravos, bagas de zimbro, canela, estragão, coentro, açafrão, gengibre.
[0064] As plantas preferidas são selecionadas a partir do grupo que consiste em soja, milho, trigo, triticale, cevada, aveia, centeio, colza, painço, arroz, girassol, algodão, beterraba sacarina, maça, drupa, frutas cítricas, banana, morango, mirtilo, amêndoa, uva, mango, mamãopapaia, amendoim, batata, tomate, pimenta, cucucurbitácea, pepino, melão, melancia, alho, cebola, brócolis, cenoura, repolho, feijão, feijão seco, canola, ervilha, lentilha, alfalfa, trifólio, trevo, linho, capim-elefante, grama, alface, cana-de-açúcar, chá, tabaco e café, nozes; cada um em sua forma natural ou geneticamente modificada.
[0065] Em uma modalidade preferida adicional, as plantas trangênicas e cultivares de planta que foram obtidos por métodos de engenharia genética, se apropriado em combinação
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40/78 com métodos convencionais (Organismos Geneticamente Modificados), e partes das mesmas são tratadas.
[0066] O método de acordo com a invenção pode ser usado no tratamento de organismos geneticamente modificados (GMOs), por exemplo, plantas ou sementes. As plantas geneticamente modificadas (ou plantas transgênicas) são plantas das quais um gene heterólogo foi integrado de modo estável no genoma. A expressão gene heterólogo significa essencialmente um gene que é fornecido ou montado fora da planta e quando introduzido no genoma nuclear, cloroplástico ou mitocondrial gera a planta transformada novas propriedades ou propriedades aprimoradas ou outras propriedades pela expressão de uma proteína ou polipeptídeo de interesse ou por regulação descendente ou silenciamento de outro gene (ou genes) que estão presentes na planta (usando, por exemplo, tecnologia antissenso, tecnologia de cossupressão ou tecnologia de RNAi de interferência de RNA) . Um gene heterólogo que está localizado no genoma também é denominado como um transgene. Um transgene que é definido por sua localização particular no genoma de planta é chamado de um evento de transformação ou evento transgênico. As plantas modificadas geneticamente exemplificativas são reveladas, por exemplo, no documento US 2014/005047 em um modelo não limitativo.
[0067] É mais preferencial que a planta agrícola é tomate, pepino, milho, soja, plantas ornamentais, café, cenouras, batata ou videira. É ainda mais preferencial que a planta agrícola seja selecionada a partir de tomate, pepino e milho.
[0068] Os exemplos de formulações tópicas incluem
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41/78 líquido solúvel em água (SL), concentrados emulsificantes (EC), emulsões em água (EW), concentrados de suspensão (SC, SE, FS, OD) , grânulos dispensáveis em água (WG), grânulos (GR) e concentrados de cápsula (CS); esses e outros tipos possíveis de formulação são descritos, por exemplo, por Crop Life International e em Pesticide Specifications, Manual on Development and Use of FAO and WHO Specifications for Pesticides, FAO Plant Production and Protection Papers - 173, preparado pelo FAO/WHO Joint Meeting on Pesticide Specifications, 2004, ISBN: 9251048576. As formulações podem compreender compostos agroquímicos ativos diferentes de um ou mais compostos ativos da invenção.
[0069] As formas de formulações ou aplicação em questão, de preferência, compreendem auxiliares, como extensores, solventes, promotores de espontaneidade, carreadores, emulsificantes, dispersantes, protetores de geada, biocidas, espessantes e/ou outros auxiliares, como adjuvantes, por exemplo. Um adjuvante nesse contexto é um componente que melhora o efeito biológico da formulação, sem o próprio composto que tem um efeito biológico. Os exemplos de adjuvantes são agentes que promovem a retenção, difusão, fixação à superfície de folha, ou penetração.
[0070] Essas formulações são produzidas de uma maneira desconhecida, por exemplo, pela mistura de compostos ativos com auxiliares como, por exemplo, extensores, solventes e/ou carreadores sólidos e/ou auxiliares adicionais, como, por exemplo, tensoativos. As formulações são preparadas em plantas adequadas ou, então, antes ou durante a aplicação. [0071] As substâncias são adequadas para uso como auxiliares que são adequadas para transmitir à formulação
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42/78 do composto ativo ou às formas de aplicação preparadas a partir dessas formulações (como, por exemplo, agentes de proteção de cultura úteis, como licores de aspersão ou tratamentos de semente) propriedades particulares, como certas propriedades físicas, técnicas e/ou biológicas.
[0072] Os extensores adequados são, por exemplo, água, líquidos químicos orgânicos polares e não polares, por exemplo, das classes dos hidrocarbonetos aromáticos e não aromáticos (como parafinas, alquilbenzenos, alquilnaftalenos, clorobenzenos), o álcoois e polióis (que, se apropriado, também podem ser substituídos, eterificados e/ou esterificados), as cetonas (como acetona, cicloexanona), ésteres (incluindo gorduras e óleos) e (poli)éteres, as aminas, amidas, lactamas (como Nalquilpirrolidonas) e lactonas não substituídas e
substituí das, as sulfonas e sulfóxidos (como sulf óxic lo de
dimetila) [0073] Se o extensor usado for água, também será
possível empregar, por exemplo, solventes orgânicos como
solventes auxiliares. Essencialmente, os solventes líquidos adequados são: aromatizantes como xileno, tolueno ou alquilnaftalenos, aromatizantes dorados e hidrocarbonetos alifáticos dorados, como clorobenzenos, cloroetilenos ou cloreto de metileno, hidrocarboneto alifático, como ciclohexano ou parafinas, por exemplo, frações de petróleo, óleos minerais e vegetais, álcoois, como butanol ou glicol e também seus éteres e ésteres, cetonas, como acetona, metil etil cetona, metil isobutil cetona ou ciclo-hexanona, solventes fortemente polares, como dimetilformamida, dimetilacetamida e sulfóxido de dimetila e também água. Os
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43/78 solventes auxiliares preferidos são selecionados a partir do grupo que consiste em acetona e N,Ν'-dimetilacetamida.
[0074] Em princípio, é possível usar quaisquer solventes compatíveis e adequados. Os solventes adequados são, por exemplo, hidrocarbonetos aromáticos, como xileno, tolueno ou alquilnaftalenos, por exemplo, hidrocarbonetos alifáticos ou aromáticos dorados, como clorobenzeno, cloroetileno ou cloreto de metileno, por exemplo, hidrocarbonetos alifáticos, como ciclo-hexano, por exemplo, parafinas, frações de petróleo, óleos minerais e vegetais, álcoois, como metanol, etanol, isopropanol, butanol ou glicol, por exemplo, e também seus éteres e ésteres, cetonas, como acetona, metil etil cetona, metil isobutil cetona ou ciclo-hexanona, por exemplo, solventes fortemente polares, como sulfóxido de dimetila, trisiloxano modificado por poliéteres e água.
[0075] Todos os carreadores compatíveis e adequados podem, em princípio, ser usados. Os carreadores adequados são em particular: por exemplo, sais de amônio e minerais naturais triturados, como caulins, argilas, talco, giz, quartzo, atapulgita, montmorilonita ou terra de diatomáceas e minerais sintéticos triturados, como silica finamente dividida, alumina e silicatos naturais ou sintéticos, resinas, graxas e/ou fertilizantes sólidos. As misturas de tais carreadores podem, do mesmo modo, ser usadas. Os carreadores adequados para grânulos incluem os seguintes: Por exemplo, minerais naturais triturados e fracionados, como calcita, mármore, pedra-pomes, sepiolita, dolomita e também grânulos sintéticos de matérias inorgânicas e orgânicas, e também grânulos de material orgânico, como
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44/78 serragem, papel, cascas de coco, espigas de milho e talos de tabaco; ou também compostos similares a açúcar.
[0076] Extensores ou solventes gasosos liquefeitos também podem ser usados. São particularmente adequados aqueles extensores ou carreadores que, a temperatura padrão e sob pressão padrão, são gasosos, em que os exemplos são propelentes de aerossol, como hidrocarbonetos halogenados e, também, butano, propano, nitrogênio e dióxido de carbono.
[0077] Os exemplos de emulsificantes e/ou formadores de espuma, dispersantes ou agentes de molhagem que têm propriedades iônicas ou não iônicas, ou misturas dessas substâncias de superfície ativa, são sais de ácido poliacrílico, sais de ácido lignossulfônico, sais de ácido fenolsulfônico ou ácido naftalenossulfônico, policondensados de óxido de etileno com álcoois graxos ou com ácidos graxos ou com aminas graxas, com fenóis substituídos (de preferência, alquilfenóis ou arilfenóis), sais de ésteres sulfossuccínicos, derivados de taurina (de preferência, alquiltauratos) , ésteres fosfóricos de fenóis ou álcoois polietoxilados, ésteres de ácido graxo de polióis, e derivados dos compostos que contêm sulfatos, sulfonatos e fosfatos, em que os exemplos são alquilaril poliglicol éteres, alquilsulfonatos, alquilsulfatos, arilsulfonatos, hidrolisados proteicos, licores residuais de lignina-sulfito e metilcelulose. A presença de uma substância de superfície ativa é vantajosa se um dos compostos ativos e/ou um dos carreadores inertes não for solúvel em água e se a aplicação ocorrer em água. Os emulsificantes preferidos são alquilaril poliglicol éteres.
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45/78 [0078] Os auxiliares adicionais que podem estar presentes nas formulações e nas formas de aplicação derivadas dos mesmos incluem corantes, como pigmentos inorgânicos, em que os exemplos são óxido de ferro, óxido de titânio, azul da Prússia e corantes orgânicos, como corantes de alizarina, corantes azo e corantes de ftalocianina metálica e nutrientes e nutrientes-traço, como sais de ferro, manganês, boro, cobre, cobalto, molibdênio e zinco.
[0079] Estabilizantes, como estabilizantes de baixa temperatura, conservantes, antioxidantes, estabilizantes de luz ou outros agentes que aprimoram a estabilidade química e/ou física, também podem estar presentes. Adicionalmente, formadores de espuma ou antiespumantes podem estar presentes.
[0080] Além disso, as formulações e formas de aplicação derivadas das mesmas também podem compreender, como auxiliares adicionais, agentes adesivos, como carboximetilcelulose, polímeros sintéticos e naturais em pó, forma de látex ou grânulo, como goma-arábica, polivinil álcool, polivinil acetato, e também fosfolipídeos naturais, como cefalinas e lecitinas e fosfolipídeos sintéticos. Adicionalmente, os auxiliares possíveis incluem óleos minerais e vegetais.
[0081] Adicionalmente, pode haver possivelmente auxiliares presentes nas formulações e nas formas de aplicação derivadas das mesmas. Os exemplos de tais aditivos incluem fragrâncias, coloides de proteção, agentes de ligação, adesivos, espessantes, substâncias tixotrópicas, penetrantes, promotores de retenção,
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46/78 estabilizadores, sequestrantes, agentes complexantes, umectantes e espalhadores. Geralmente falando, os compostos ativos podem ser combinados com qualquer aditivo sólido ou líquido comumente usado para propósitos de formulação. [0082] Os promotores de retenção adequados incluem todas aquelas substâncias que reduzem a tensão de superfície dinâmica, como sulfossuccinato de dioctila, ou aumento da viscoelasticidade, como polímeros de hidroxipropilguar, por exemplo.
[0083] Os penetrantes adequados no presente contexto incluem todas aquelas substâncias que são tipicamente usadas a fim de melhorar a penetração de compostos agroquímicos ativos em plantas. Nesse contexto, são definidos penetrantes em que, a partir do licor de aplicação (geralmente aquoso) e/ou a partir do revestimento de aspersão, têm capacidade para penetrar a cutícula da planta e, através disso, aumentar a mobilidade dos compostos ativos na cutícula. Essa propriedade pode ser determinada usando o método descrito na literatura (Baur et al., 1997, Pesticide Science 51, 131-152). Os exemplos incluem alcoxilatos alcoólicos, como etoxilado graxo de coco (10) ou etoxilato de isotridecila (12), ésteres de ácido graxo, como ésteres metílicos de colza ou de óleo de soja, alcóxidos de amina graxa, como etoxilato etoxilado de seboamina (15) ou sais de amônio e/ou fosfônio, como sulfato de amônio ou hidrogenofosfato de diamônio, por exemplo.
[0084] A composição que compreende P. lilacinum ou esporos do mesmo compreende, de preferência, entre 0, 00000001 % e 98 % em peso de composto ativo ou, com
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47/78 preferência particular, entre 0,01 % e 95 % em peso de composto ativo, com mais preferência, entre 0,5 % e 90 % em peso de composto ativo, com base no peso da formulação.
[0085] A composição a ser aplicada em conexão com a presente invenção pode compreender adjuvantes compatíveis como IMBIREX®, BU EXP® 1136, AFINITY®, LI 700 PCP® 230026, IRRIG AID GOLD®, PENECAL®, NEOWETT®, QUADRA TECK®, RESPOND® 3, TRIFOLIO S FORTE®, SILWET COPOLYMER® 480, SILWET GOLD®,
TWEEN® 20, BREAK-THRU® 24 0 (0,05 %) , BREAK-THRU® 240 (0,2 %), SILWET® L-77 COPOLYMER e BIOLINK®.
[0086] Em uma modalidade preferida, a dita composição é uma composição líquida e compreende adicionalmente pelo menos 75 % de trisiloxano modificado por poliéter. Tais formulações são reveladas, por exemplo, no documento WO 2012/163322. No curso da presente invenção, foi surpreendentemente verificado que uma formulação que compreende pelo menos 75 % de trisiloxano modificado por poliéter tem um efeito ainda maior em certas propriedades de crescimento vegetal ou saúde de planta, consulte os Exemplos 3 e 4.
[0087] Em uma modalidade mais preferida, o dito trisiloxano modificado por poliéter é de fórmula I
Fórmula (I) em que ri representa, independente entre si, outros radicais de hidrocarbila diferentes ou idênticos que têm 1-8 átomos de carbono, radicais metila, etila, propila e fenila
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48/78 preferidos em que os radicais metila são particularmente preferenciais.
preferencial 0 a 0,5 em particular preferencial 0
0, 8 a 2 preferencial 1 a 1,2 particularmente preferencial 1 em que: a e b>a preferencial em particular, preferencial a + b <2.
R2 representa, independente entre outros radicais de poliéter diferentes ou idênticos de fórmula geral (II)
-R30 [CH2CH2O] c [CH2CH (CH3) 0] d [CHR4CHR4O] eR5
Fórmula (II)
R3 independente entre outros radicais hidrocarbila bivalentes, diferentes ou idênticos que têm 2 átomos de carbono, que são opcionalmente interrompidos por átomos de oxigênio o restante preferido é a fórmula geral (III) em que particularmente preferido -CH2-CH2-CH2—ch2—
Fórmula (III)
R4 independente entre radicais de hidrocarbila idênticos ou diferentes que têm 1-12 átomos de carbono ou radical de hidrogênio de preferência, um radical metila, etila, fenila ou de hidrogênio.
R5 independente entre radicais de hidrocarbila diferentes ou idênticos que têm 1-16 átomos de carbono que contêm opcionalmente funções de uretano, funções de carbonila ou funções de éster de ácido carboxilico, ou radical de hidrogênio metila ou H preferido
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49/78 particularmente, H preferido.
C = 0 a 40, preferencial, 1 a 15, particularmente
preferencial d = 0 a 2 a 40, 10 preferencial 0 a 10, particularmente
preferencial e = 0 a 1 a 10, 5 preferencial 0 a 5, particularmente
preferencial em que c + d [0088] Os 0, + e > 3 trisiloxanos modificados por poliéter
descritos acima podem ser preparados por métodos bem conhecidos ao praticante por reação de hidrossililação de um siloxano contendo Si-H e derivados de polioxialquileno insaturados, como um derivado de alila, na presença de um catalisador de platina. A reação e os catalisadores empregados foram descritos, por exemplo, por W. Noll em Chemie und Technology der Silicone, 2a ed., Verlag Chemie, Weinheim (1968), por B. Marciniec in Appl. Homogeneous Catai. Organomet. Compd. 1996, 1, 487) . É de conhecimento comum que os produtos de hidrossililação de siloxanos contento SiH com derivados de polioxialquileno insaturados podem conter derivado de polioxialquileno insaturado em excesso.
[0089] Os exemplos de trisiloxanos solúveis em água ou modificados por poliéter autoemulsificável (PE/PP ou PEPP de CoPo de bloco) incluem, porém sem limitação, àqueles descritos por ηΩ de CAS 27306-78-1 (por exemplo, SILWET® L77 de MOMENTIVE) , ηΩ de CAS 134180-76-0 (por exemplo, BREAK-THRU® S233 ou BREAK-THRU® S240 de Evonik) , ηΩ de CAS67674-67-3 (por exemplo, SILWET® 408 de WACKER), outros tipos de BREAK-THRU® e outros tipos de SILWET®.
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50/78 [0090] Os trisiloxanos modificados por poliéter preferidos incluem aqueles descritos por ηΩ de CAS 13418076-0, em particular, BREAK-THRU® S240.
[0091] Uma formulação de acordo com a invenção que compreende um trisiloxano modificado por poliéter, além das vantagens descritas acima, reduz a tensão de superfície mesmo em altas diluições, por exemplo, para aplicações no solo, visto que tal formulação contém uma alta concentração de trisiloxano modificado por poliéter que um tensoativo. Isso pode promover propriedades de saúde de planta ou PGP vantajosas de P. lilacinum.
[0092] Em uma modalidade mais preferida, o dito trisiloxano modificado por poliéter é BREAK-THRU® S240.
[0093] Em uma outra modalidade preferida, a dita composição compreende adicionalmente até 9 % de silica fumada. As porcentagens exemplificativas de faixa de silica fumada entre 1 % em peso e 9 % em peso, como 2 % em peso, 3 % em peso, 4 % em peso, 5 % em peso, 6 % em peso, 7 % em peso e 8 % em peso e qualquer valor entre os mesmos.
[0094] A silica fumada, também conhecida como silica pirogênica, tanto hidrofílica quanto hidrofóbica, é usualmente composta por silica amorfa fundida em partículas ramificadas, similar à cadeia, secundárias tridimensionais que, então, se aglomeram em partículas terciárias. 0 pó resultando tem uma densidade em massa extremamente baixa e área de superfície alta. A silica fumada tanto hidrofílica quanto hidrofóbica pode ser usada na presente invenção.
[0095] A silica fumada tem usualmente um efeito de espessamento muito forte. 0 tamanho de partícula primário é de cerca de 5-50 nm. As partículas são não porosas e têm
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51/78 uma área de superfície de cerca de 50-600 m2/g.
[0096] A silica fumada hidrofílica é feita de pirólise de chamas de tetracloreto de silicone ou da areia de quartzo vaporizada em um arco elétrico de 3000 °C. Produtores globais principais são Evonik Industries, nome comercial AEROSIL®) ; Cabot Corporation, nome comercial CABO-SIL®; Wacker Chemie, faixa de produto de HDK; e OCI, nome comercial KONASIL®.
[0097] A silica fumada hidrofílica pode ser hidrofobizada por tratamento adicional com agentes contendo cálcio reativos a fim de modificar as propriedades fisicoquímicas da silica. Tipicamente, a hidrofobização ocorre pelo tratamento de uma silica fumada hidrofílica com agentes similares a hexa-alquildisilanos (por exemplo, ((CH3) 3S1)2) , trialquilsililcloretos (por exemplo, (CHsHSiCl) ou dialquildiclorsilanos (por exemplo, (CH3) 2SÍCI2) · A silica fumada hidrofobizada é disponível, por exemplo, junto a Evonik Industries (tipos R de AEROSIL®) , e Cabot (CAB-O-SIL®) .
[0098] Melhores resultados são obtidos usando uma silica fumada hidrofílica que tem uma área de superfície de BET de 150 a 350 m2/g, por exemplo, 150, 200, 250, 300 ou 350.
[0099] Em uma modalidade mais preferida, a dita silica fumada é AEROSIL®.
[0100] Em conexão com a presente invenção, a composição descrita acima que compreende esporos de P. lilacinum, trisiloxano modificado por poliéter e silica fumada e apenas traços de outros ingredientes apresenta uma formulação ainda melhor que a formulação de WG. Tais composições são reveladas no documento W02016/050726 que é
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52/78 incorporado ao presente documento a titulo de referência.
[0101] Para evitar dúvidas, todas as composições usadas na presente invenção e que compreendem P. lilacinum foram mostradas para ter o efeito reivindicado. No entanto, a formulação líquida acima mostrou um efeito ainda maior.
[0102] A dosagem final de propágulos infecciosos de cepa 251 de Purpureocillium lilacinum está normalmente na ordem entre cerca de 1 x 104 e cerca de 1 x 108, de preferência, entre cerca de 1 x 105 e cerca de 2 x 107, com mais preferência, entre 1 x 105 e 5 x 106, como 2 x 105, 5 x 105, 1 x 106 ou 2 x 106 esporos por grama de solo para aplicações de viveiro e para aplicações de campo.
[0103] Adicionalmente, a presente invenção se refere ao uso de uma composição que compreende o fungo Purpureocillium lilacinum ou esporos do mesmo para promover ou aprimorar a saúde de planta ou promoção de crescimento vegetal.
[0104] Todas as modalidades como descrito para o método da invenção também podem ser aplicadas no uso da presente invenção.
[0105] As figuras mostram:
[0106] FIG. IA: Atividade nematicida de cepa 251 de Purpureocillium lilacinum e fluopiram contra Meloidogine javanica. Média de 3 repetições + erro padrão (SE).
[0107] FIG. 1B: Atividade de saúde de planta de cepa 251 de Purpureocillium lilacinum e fluopiram na presença de Meloidogine incongita. Média de 3 repetições + erro padrão (SE). Diferenças significativas (pdQ,05) são indicadas por asterisco.
[0108] FIG. 2A: Área de superfície de raiz total de
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53/78 tomate tratado com uma formulação líquida de cepa 251 de P. lilacinum (BIOACT® líquido); 4 elementos por tratamento. Executar Test T não pareado, nível de confidência de 95 %, examinando o limite de significância, pd0,05.
[0109] FIG. 2B: Biomassa de planta inteira de tomate tratado com uma formulação líquida de cepa 251 de P. lilacinum (BIOACT® líquido); Estatisticamente significante com um valor p de 0,0249, valor t de 2,973 e df=6 graus de liberdade).
[0110] FIG. 2C: Eficácia de nematódeo que mostra número médio de massas de ovo. Estatisticamente significante com um P<0,0001, valor t de 13,36, df=6.
[0111] FIG. 3A: Biomassa de planta inteira de tomate tratado com diferentes formulações de elementos de cepa 2514 de P. lilacinum por tratamento; Análise de uma via de variância (ANOVA).
[0112] FIGS. 3B, 3C, 3D: Peso de raiz médio, área de superfície de raiz total (cm2) (valor p de 0,0270) e massas de ovo de M. javanica (valor p de 0,0007) para os tratamentos mostrados em 3A.
[0113] FIG. 4: Área de superfície de folha de tomates tratados com formulações de cepa 251 de P. lilacinum em comparação com outras cepas de fungos.
[0114] FIG. 5A: Biomassa de planta total fresca de plantas de milho tratadas com uma formulação líquida de cepa 251 de P. lilacinum; *p=0,05 ou menos; **p=0,01 ou menos.
[0115] FIG. 5B e 5C: Comprimento de raiz (%B) e número total de extremidade, forquilhas e cruzamentos (TFC) dos ensaios mostrados na FIG. 5A.
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54/78 [0116] FIG. 6: Tratamento de tomate de ensaio com uma formulação liquida de cepa 251 de P. lilacinum em 80 % de areia e 20 % de sol ηΩ 3. A: Classificação de galha; B: Contagem de ovo; C: peso de broto seco; D: peso de raiz seca; E: peso vegetative total.
[0117] FIG. 7: Tratamento de tomate de ensaio com uma formulação liquida de cepa 251 de P. lilacinum em 80 % de perfil e 20 % de sol ηΩ 3. A: Classificação de galha; B: total peso de fruta; C: peso de broto seco; D: peso vegetative total.
[0118] FIG. 8: Tratamento de pepino de ensaio com uma formulação liquida de cepa 251 de P. lilacinum em 80 % de areia e 20 % de Sol ηΩ 3. A: Classificação de galha; B: Contagem de ovo; C: peso de raiz seca.
[0119] FIG. 9: Total peso de fruta do tratamento de tomate de ensaio com uma formulação liquida de cepa 251 de P. lilacinum em 80 % de Perfil e 20 % de Sol ηΩ 3.
[0120] FIG. 10: Eficácia (barras) e rendimento (pontos) de ensaios com PL251 em pepino (10A) e tomate (10B).
[0121] FIG.11: Comprimento de raiz total (cm, Fig. 11A) e área de superfície de raiz (cm2, Fig. 11B) de plântulas de tomate tratadas com esporos de três cepas de P. lilacinum em comparação com plântulas de controle não tratado.
[0122] Os exemplos ilustram adicionalmente a invenção em um modo não limitativo.
Exemplo 1: Aplicação de encharcamento de cepa 251 de PurpureociIlium lilacinum (PL 251) em tomate [0123] Para preparar uma forma de dosagem adequada, o produto formulado PL251 (formulação líquida de P. lilacinum
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55/78 que compreende BREAK-THRU® S240 e AEROSIL®) é diluído com água para a concentração desejada.
[0124] Uma quantidade de 5.000 cm3 de solo francoarenoso, pH 6,8 por vaso é misturada com 150.000 unidades infecciosas (população misturada de ovos e jovens) do Nemátodo de Nó na Raiz do Sul (Meloidogine incognita} . A concentração desejada de cepa 251 de Purpureocillium lilacinum é encharcada em 400 ml de solução (aplicação A) para obter 80 % de capacidade de campo. Os vasos são incubados a 25 °C até o transplante de mudas de tomate (Lycopersicon lycopersicum} em 7 dias após a aplicação por encharcamento A. No dia do transplante, uma segunda aplicação por encharcamento (aplicação B) é executada com 400 ml de solução.
[0125] Após o transplante de mudas de tomate, vários padrões de aplicação de pós-planta são testados usando 400 ml de solução por aplicação (Tabela A).
[0126] Além disso, 10 mg do nematicida fluopiram (VELUM®
PRIME, concentrado de suspensão SC 400) são aplicados no transplante e usados como uma referência química. O controle não tratado (UTC) é encharcado com 400 ml de água em cada aplicação. O experimento é mantido por 7 semanas após o transplante a 25 °C.
Tabela A: Teste de encharcamento de cepa 251 de Purpureocillium lilacinum em tomate
Aplicação A B c D
Tempo de aplicação 7 d antes do transplante no transplante 4 semanas após o transplante 6 semanas após o transplante
Tratamento
UTC água água água água
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Aplicação A B C D
1 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato água
2 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato água 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato
3 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato
4 água 10 mg de fluopiram/planta água água
[0127] Após o período especificado, a atividade nematicida é determinada com base no percentual de redução de galhas. 100 % significa que nenhuma galha foi encontrada; 0 % significa que o número de galhas verificadas nas raízes de plantas tratadas foi igual àquele em plantas de controla não tratadas. Ademais, a biomassa de broto também é determinada para avaliar a situação de saúde de planta geral.
[0128] A configuração experimental é completamente aleatorizada e compreende três repetições por tratamento. A análise de uma via de variância (ANOVA) é executada para biomassa de broto usando um limite para significância de pdQ,05 e um pós-teste Bonferroni para comparar todos os tratamentos contra o UTC.
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57/78 [0129] O bionematicida PL251 não mostra apenas atividade nematicida fraca em uma taxa de 5,5 x 105 esporos por cm3 de substrato e na pressão de nematódeo usada de 3.000 Meloidogine incognita por 100 cm3 de solo. Essa constatação é independente dos padrões de aplicação testados nesse experimento (FIG. IA) . O fluopiram de nematicida química mostra atividade de controle excelente em 10 mg por planta. [0130] O desempenho ausente de PL251 se deve provavelmente à alta pressão de nematódeo usada no presente estudo. Kiewnick et al. 2011 (Kiewnick, S. ; Neumann, S. ; Sikora, R.A.; Frey, J.E. 2011: Effect of Meloidogyne incognita Inoculum Density and Application Rate of Paecilomyces lilacinus Strain 251 on Biocontrol Efficacy and Colonization of Egg Masses Analyzed by Real-Time Quantitative PCR. Phytopathology, Vol. 101, n2 1, 2011) relatou aproximadamente 50 % de eficácia de biocontrole em 400 unidades infecciosas de Meloidogine incognita por 100 cm3 de solo. Em uma maior densidade de nematódeo de 1.600 unidades infecciosas, apenas 22 % de biocontrole foram relatados. No entanto, a pressão de nematódeo usada no presente estudo (3.000 unidades infecciosas por 100 cm3 de solo) foi consideravelmente maior em comparação àquela de Kiewnick et al. 2011.
[0131] Ape sar de seu desempenho nematicida fraco, PL251 aprimora o peso fresco de broto de tomate por 12-26 % dependendo do padrão de aplicação pós-planta.
[0132] A análise estatística revela um aprimoramento significativo de peso fresco de broto após o tratamento de nematicida e um aumento de peso fresco de broto altamente significativo após a aplicação de PL251 em ABC (ANOVA,
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58/78 p=0,0222, df=14; Teste de comparação múltipla de
Bonferroni, t=4,191 para UTC vs. PL251 em ABC). Os resultados mostram claramente que PL251 exibe um efeito de saúde de planta adicional independente de seu potencial nematicida que leva ao peso de broto aprimorado em tomate.
Exemplo 2: Ensaio de Jarro Em Planta de Tomate de Câmara de Crescimento para avaliar a eficácia de BIOACT® contra nematódeos de nó na raiz bem como seu efeito de promoção de crescimento vegetal (PGP) [0133] Tratamentos
1. UTC-75 mis de água
2. BIOACT® aplicado no plantio 1 μΐ (1,08 mg) por 100 ml de solo, 5,5 x 105 esporos viáveis por cm3 de substrato *Combinação de solo adicionou 225 ml ao jarro de plástico [0134] Procedimento: Oito jarros de flip-top de polipropileno de 300 ml (lOoz) para esse ensaio foram preparados para examinar colonização de fungos de uma formulação líquida de cepa 251 de P. lilacinum, efeitos de PGP e para determinar redução de nematódeo. Cada jarro foi preenchido com combinação de solo (tipo de solo para imitar as condições de solo em campo). Sementes de tomate plantadas, Variedade de Tomate ACE 55, Mountain Valley Seed Co. Esse ensaio deve examinar crescimento de fungos de Purpureocillium lilacinum em planta, determinando um tipo de solo que fornecería uma fonte de carbono para o fungo crescer, colonizar o solo e proteger as raízes da infecção de nematódeo de nó na raiz.
[0135] Os jarros de tratamento receberam 75 ml de
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59/78 solução de encharcamento. Cada jarro de UTC foi molhado com 75 ml de água corrente no momento do plantio. Cada tratamento foi colocado em partes planas de estufas estéreis para eliminar contaminação cruzada. Todos os tratamentos foram colocados em uma câmara de crescimento vegetal. A duração de experimento foi 7 semanas em ensaio, as configurações para a câmara de crescimento foram definidas para fotoperiodo de 12 hrs de luz e 12 hrs no escuro, a intensidade de luz 320 μΜοΙ, temperatura de 25 °C para periodo com luz, 20 °C para periodo no escuro.
[0136] Retirada de ensaio de jarro em planta de tomate: Cada sistema de raiz foi lavado a partir de 225 mis de solo em um medidos de plástico de 3 quartos. Visto que as raizes foram limpas, as mesmas foram colocas em toalhas de papel para secar o excesso de água que escorre.
[0137] Análise de Raízes de Tomate: As raízes de tomate foram analisadas usando o programa WinRhizo, Regent Instruments, Inc. (Arsenault et al, 1995). Esse programa fornece uma análise e medição de raiz de planta completa. WinRhizo permite considerar o comprimento, área, volume, topologia e arquitetura da raízes de planta. Cada UTC e Tratamento foram varridos para examinar a área de superfície de raiz total (cm2) .
[0138] Massas de ovo de RKN de coloração: Uma vez que as raízes tenham sido varridas usando WinRhizo, as raízes foram coradas com solução de 1 mg/1 de Erioglaucina por 15 mins. Cada sistema de raiz foi submergido na solução. A Solução Azul de Erioglaucina cora as massas de ovo com azul claro (facilitando a visualização e contagem das fêmeas completamente desenvolvidas). A coloração se adere à matriz
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60/78 gelatinosa que circunda as massas de ovo de RKN da extremidade posterior do nematódeo fêmea.
Resultados:
[0139] Área de Superfície de Raiz Total: Comparando o não tratado com encharcamento de DC de BIOACT®, em média, um aumento na área de superfície de raiz é visível no tratamento. A medição média de tratamento foi 19,916 cm2, média não tratada foi 18,669 cm2. (Consulte a FIG. 2A) [0140] Biomassa de Planta Inteira: 0 broto fresco total (biomassa de planta total) de Não Tratado comparado ao Tratamento de BIOACT® foi avaliado. 0 tratamento de BIOACT® apresentou uma biomassa de planta total fresca significativamente maior que UTC. As raízes de tomate maiores tratadas com encharcamento de BIOACT® mostraram um aumento no crescimento de raiz lateral em comparação com o UTC (consulte a FIG. 2B).
[0141] Eficácia de nematódeo que mostra número médio de massas de ovo: Atividade nematicida de cepa 251 de Purpureocillium lilacinum contra Meloidogine javanica. Em geral, houve uma diminuição no número de massas de ovo desenvolvidas no tratamento de BIOACT® em comparação ao UTC. Os efeitos de tratamento de BIOACT® foram significativamente diferentes do UTC. Uma aplicação de tratamento de BIOACT® mostrou uma redução significativa de massas de ovo de M. javanica. O número médio de massas de ovo no UTC foi 161 em comparação àquele no tratamento de BIOACT® de 65,25 (consulte a FIG. 2C) . A avaliação do número de massas de ovo ilustra definitivamente um número menor de J2s que penetra e se desenvolve completamente em um adulto do sexo feminino, diminuindo o número de produção
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61/78 de massa de ovo.
Exemplo 3: Ensaio de Jarro Em Planta de Tomate de Câmara de Crescimento para avaliar a eficácia de duas formulações diferentes de BIOACT® (liquido e WG) contra nematódeos de nó na raiz e para comparar seu desempenho de PGP [0142] Tratamentos
1. UTC-75 mis de água
2. BIOACT® aplicado no plantio de 5,5 x 105 esporos viáveis por cm3 substrato
3. WG de BIOACT® aplicado no plantio 5,0 mg por 100 ml de solo (que corresponde a 1,75x10® esporos viáveis por 100 ml de solo
4. Formulação virgem aplicada no plantio 1,08 mg por 100 ml de solo *Combinação de solo adicionou 225 ml ao jarro de plástico [0143] Procedimento: Vinte jarros de flip-top de polipropileno de 300 ml (lOoz) foram preparados para examinar a colonização de fungos de BIOACT®, efeitos de PGP e para determinar a redução de nematódeo. Cada jarro foi preenchido com combinação de solo (tipo de solo para imitar as condições de solo em campo) . As sementes de tomate plantadas foram da variedade ACE 55, Mountain Valley Seed Co.
[0144] Os jarros de tratamento receberam 75 mis de solução de encharcamento. Cada jarro de UTC foi molhado com 75 mis de água corrente no momento do plantio. A formulação virgem compreendeu os formulantes da formulação liquida, isto é, BREAK-THRU® S240 e AEROSIL®, cada jarro recebeu a mesma quantidade daquela tratada com a formulação liquida de BIOACT®, 2,7 mg em 75 mis de água. Os vasos tratados com
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WG de BIOACT® (grânulo molhável recebeu 125 mg em 75 mis de água por tratamento. Cada tratamento foi colocado em partes planas de estufas estéreis para eliminar contaminação cruzada. Todos os tratamentos foram colocados em uma câmara de crescimento vegetal. A duração de experimento levou 7 semanas, as configurações para a câmara de crescimento foram definidas para fotoperiodo de 12 hrs de luz e 12 hrs no escuro, a intensidade de luz 320 μΜοΙ, temperatura de 25 °C para periodo com luz, 20 °C para periodo no escuro.
[0145] Duas semanas após o plantio das sementes de tomate, cada jarro inoculado com 300 juvenis ativos de estágio infeccioso de Meloidogine javanica (J2s recémeclodidos de sua s próprias culturas de tomate de nó na rai z) .
[0146] Retirada de ensaio de jarro em planta de tomate: Cada sistema de raiz foi lavado a partir de 225 mis de solo em um medidos de plástico de 3 quartos. Visto que as raizes foram limpas, as mesmas foram colocas em toalhas de papel para secar o excesso de água que escorre. Cada planta de tomate foi pesada para determinar a biomassa de planta total. Posteriormente, as mudas foram cortadas e descartadas. Cada sistema de raiz foi pesado por tratamento para determinar o peso de tratamento.
[0147] Massas de ovo de RKN de coloração: As raizes foram coradas com solução de 1 mg/1 de Erioglaucina por 15 mins. Cada sistema de raiz foi submergido na solução.
[0148] Análise Estatística: A configuração de experimento é aleatorizada e compreende 4 elementos por tratamento, Análise de Uma Via de variância (ANOVA) foi realizada.
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Resultados :
[0149] Há um aumento significativo em biomassa de planta total em tratamento de liquido de BIOACT® comparado a UTC e formulação virgem. WG de BIOACT® também apresentou melhor desempenho que o virgem e não tratado (consulte a FIG. 3A). [0150] 0 peso de massa de raiz foi examinado para cada tratamento. Há um aumento significativo em peso de raiz de BIOACT® liquido comparado ao UTC e Virgem. É evidente que PGP se apresenta com BIOACT® em comparação ao Virgem e UTC (consulte a FIG. 3B).
[0151] A área de superfície de raiz total (cm2) de cada tratamento foi examinada usando o programa de análise de raiz de WhinRhizo. 0 tratamento de BIOACT® resulta em peso de raiz médio significativamente maior em comparação com UTC e Virgem (consulte a FIG. 3C).
[0152] 0 número de massas de ovo de RKN foi contado para cada tratamento (4 elementos por tratamento). Há significância na redução do número de massas de ovo em tratamento de BIOACT® liquido em comparação aos tratamentos de UTC e Virgem.
Exemplo 4: Ensaio de Encharcamento de Tomate para avaliar propriedades de PGP de cepa 251 de P. lilacinum em comparação com outras cepas de fungos [0153] Ensaio: A avaliação do dia 30 para permitir que os tomates cresçam e examinem a canopla foliar, determinação do aumento em área de superfície de folha.
[0154] Lista de Tratamento:
N2 TRATAMENTO TAXAS
1 Controle Não Tratado Água de Dl Estéril
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N2 TRATAMENTO TAXAS
2 Formulação Virgem (formulantes de formulação líquida) 1,08 mg/100 ml de solo
3 Cepa 251 de Purpureocillium lilacinum 1,7 x 108 esporos por ml
4 BIOACT® líquido Ix 1,08 mg/100 ml de solo 5,5 x 105 de esporos viáveis por cm3 de substrato
5 BIOACT® líquido lOx 10,8 mg/100 ml de solo 5,5 x 106 esporos viáveis por cm3
6 Penicillium bilaii 1,11 x 109 esporos por ml
7 Trichoderma virens 1,27 x 108 esporos por ml
[0155] Protocolo: 6x7 bandejas de tampão foram cortadas em uma bandeja de tampão de célula de 10 x 20 (200) (Hummert, Int.) . Cada bandeja de célula foi preenchida com solo preparado para plantio e cada outra célula foi semeada com uma semente de tomate (Washington Cherry Tomato Variety). Cada célula semeada na bandeja foi tratada com 2 ml de material usando uma pipeta sorológica. As bandejas de tampão foram molhadas a partir do fundo por inundação de uma bandeja de válvula dobradiça. As partes planas foram, então, colocadas sob alta intensidade de
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65/78 luzes (-300 Einsteins, definido para o programa de 16 horas com luz/8 horas no escuro) e molhadas uma vez ao dia. As amostras foram comparadas com base no volume. Cada 2-3 dias, as válvulas dobradiças foram aleatorizadas. As plantas foram classificadas 30 dias após o plantio. Três repetições por tratamento foram preparadas.
[0156] Preparação de Solução de Encharcamento: As cepas de fungos (Penicillium, Trichoderma e P. lilacinum) foram retiradas das placas de Dextrose Ágar de batata para permitir que os esporos de fungos cresçam.
1. Configurar dia: 10 ml de água de Dl estéril foram vertidos na placa de fungo.
2. Esporos de fungos foram eliminados com uma haste em formato de L para romper os esporos do ágar, preparar a suspensão de esporo.
3. A suspensão de esporo foi coletada em um tubo falcon e, então, passada através de uma peça estéril de morim para permitir que apenas os esporos (nenhum ágar) estejam presentes.
4. Suspensão de esporo foi quantificada usando um hemocitômetro e, então, diluída para as concentrações desejadas.
5. 2 ml de suspensão de esporo foram adicionados a cada célula semeada em uma bandeja.
[0157] Medições: A área de superfície de folha foi examinada usando software de Imagem J e documentada tirando imagens de vista superior de cada bloco representante de tratamento usando uma Câmera Nikon e tripé. Em cada figuração, uma régua é colocada próximo de cada tratamento de bandeja de tomate que é usado como referência para
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66/78 calibrar a escala de software.
Resultados [0158] Área de Superfície de Folha (consulte a FIG. 4) :
A seguintes cepas e taxas tiveram aumentos significativos na área de superfície de folha em comparação às bandejas de Controle de Água Não Tratada: Trichoderma virens, Purpuroecillium lilacinum e ambas as taxas de BIOACT® líquido (Padrão e lOx) . Em geral, BIOACT® líquido Ix e lOx bem como a cepa 251 de P. lilacinum não formulada tiveram um aumento maior na canopla foliar de superfície de folha em comparação ao UTC e P. bilaii.
[0159] BIOACT® líquido Ix e BIOACT® líquido lOx têm uma área de superfície de folha maior em comparação a todos os outros tratamentos. Examinando os tratamentos de BIOACT® líquido, o tensoativo na formulação pode estar auxiliando no movimento de esporos de cepa 251 de Purpuroecillium lilacinum na mistura de solo.
Exemplo 5: Ensaio de Encharcamento de Milho com uma formulação liquida de esporos de cepa 251 de P. lilacinum (BIOACT® líquido) [0160] Diferentes doses de uma formulação líquida de cepa 251 de Purpureocillium lilacinum (BIOACT® líquida) foram testadas em um ensaio de encharcamento de vaso pequeno em milho para avaliar a promoção de crescimento vegetal.
[0161] Data de Partida: 8/19/15: Configurar experimento, 9/02/15: Retirar experimento (14 dias de experimento).
[0162] Método: Vasos pequenos de 7,62 x 7,62 x 7,62 cm3 (3x3x3 polegada cúbica) foram preenchidos com mistura de 3:1 de Solo:Areia com autoclave. Houve 4 vasos por
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67/78 repetição de tratamento (total de 12 vasos por tratamento). 2 sementes de milho GP7169 GT esterilizadas foram plantadas com profundidade de 2,54 cm (1 polegada) em cada vaso, 5,08 cm (2 polegadas) separadas. 50 milímetros de solução de encharcamento foram aplicados por vaso na taxa especificada para cada tratamento (consulte a seção de Cálculos para Encharcamento).
[0163] Ambiente: Suportes de Luz
- Faixa de Temperatura de Luz = 20 °C baixo a 30 °C alto
- Umidade Relativa: 21 % baixo a 62 % alto [0164] Tratamentos:
1 . UTC
2 . VOTIVO® de 5 % (Controle Positivo de Ensaio)
3. BIOACT® de 2,13 x 108 esporos/vaso
4 . BIOACT® de 2,13 x 109 esporos/vaso
[0165] Cálculos para Encharcamento: Todas as soluções de encharcamento de BIOACT® foram feitas em 600 ml por tratamento.
[0166] Para DC de BIOACT®
1. Taxa padrão: 1,08 mg/100 ml de solo x 4,25 = 4,59 mg/vaso 2,13 x 108 esporos/vaso
2 . lOx taxa: 10,8 mg/100 ml de solo x 4,25 = 45,9 mg/vaso 2,13xl09 esporos/vaso
3. [0167] Para VOTIVO® a 5 %, 35 ml de VOTIVO® foram adicionados em 665 ml de água de Dl, equivalente a 9,15 x 107 CFU/vaso. Medições e Notas de Observações:
1. 2 . Germinação (insatisfatória, normal), Fitotoxicidade (se houver) Biomassa de Planta Inteira (fresca)
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3. Análise de Raiz de WinRhizo
Resultados :
Germinação: normal. Fitotoxicidade: Nenhuma observada [0168] Biomassa de Planta Inteira Fresca (FWPB) (FIG. 5A): Até 24 plantas foram medidas. As plantas que não foram medidas incluem mudas não germinadas e plantas incompletas (plantas incompletas são aquelas sem raízes ou mudas). Uma resposta de dose foi observada com os tratamentos de BIOACT® com a taxa mais alta (BIOACT® lOx) que tem a melhor PGE (melhoria de crescimento vegetal) (de acordo com análise de teste t, se p<0,l, então, há uma diferença significativa). A diferença entre a taxa mais alta e a taxa padrão foi 15 % embora a taxa padrão de BIOACT® também fosse UTC significativamente melhor.
[0169] Análise de WinRHIZO de 6 raízes por tratamento (subamostra de até 24 raízes possíveis). Os resultados são mostrados na FIG. 5B e na FIG. 5C. Em geral, os tratamentos de BIOACT® líquido Ix e BIOACT® líquidos lOx tiveram valores mais altos de RL e número total de TFC.
[0170] As taxas de dose de BIOACT® foram testadas no ensaio de encharcamento de vasos pequenos para melhoria de crescimento vegetal. As doses de BIOACT® foram testadas em taxa padrão (4,59 mg ou 2,13 x 108 esporos/vaso) e 10 vezes a taxa padrão (45,9 mg ou 2,13 x 109 esporos /vaso) junto a UTC (controle negativo), e VOTIVO® a 5 % (controle positivo). A biomassa de planta total fresca (FWPB) foi tomada 14 dias após o plantio. Uma resposta de dose com BIOACT® foi observada no ensaio. A taxa padrão de BIOACT® e taxa lOx mostraram FWPB significativamente maior que UTC. 6 raízes de cada tratamento foram analisadas usando o
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WinRHIZO. Uma taxa de dose foi observada e de modo similar aos resultados de FWPB, padrão de BIOACT® e taxa lOx tinham o melhor comprimento de raiz (RL), e número total de extremidades (TFC), forquilhas e cruzamentos. As raizes de VOTIVO® a 5 % não mostram geralmente uma arquitetura de raiz melhor que UTC. Em conclusão, a melhoria de crescimento vegetal com BIOACT® foi mostrada em um bioensaio de encharcamento de milho do dia 14.
Exemplo 6: Ensaios de nematódeo e estufa para identificar diferenças em PGP (promoção de crescimento vegetal) e descamação de nematódeo em plantas tratadas com uma formulação liquida de cepa 251 de P. lilacinus (BIOACT®) em comparação com o UTC em dois substratos diferentes Métodos e Materiais Gerais:
[0171] Tomates:
Variedade: Ace 55
Os tomates foram plantados em 200 ensaios de tampão celular. As sementes foram distribuídas em um padrão de tabuleiro de xadrez para permitir o espaçamento suficiente para as plantas para se expandir antes do transplante. Os tomates foram transplantados em vasos de 13,97 cm (5,5) após duas semanas.
[0172] Pepinos:
Variedade: Sultão
Os pepinos foram semeados de modo direto em copos de 0,9071 kg (32 oz.) [0173] Misturas de Terras Preparadas para Plantio: Areia: Areia Grossa
Solo Preparado para Plantio
Argila de caulim
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70/78 [0174] As plantas foram cultivadas em duas misturas preparadas para plantio diferentes que compreendem areia e solo ou um aditivo à base de argila e solo.
Projeto Experimental: [0175] Tratamentos:
1. UTUI Não tratado não infestado
2. Controle Não Tratado de UTC, infestado com RKN (nematódeos de nó na raiz)
3. BIOACT® Ix - Uma aplicação de BIOACT®, infestado com nematódeos de RKN
4. BIOACT® 2x - Duas aplicações de BIOACT®, infestado com nematódeos de RKN [0176] Número de Réplica: 10 [0177] Apl icações de Encharcamento de BIOACT®: Soluções de encharcamento de BIOACT® preparado para cada 4 ensaios, cada planta recebeu 30 mis de solução de encharcamento. A carga de esporo por aplicação foi 5,5 x 105 de esporos viáveis por substrato de cm3.
[0178] Apl icações de Pesticida: Pepinos receberam tratamento de fungicida adicionalmente Ensaio de tomate em solo arenoso
Data de Planta: 11/07/2016
Data de Transplante: 25/07/2016
Data de Infestação: 09/08/2016
Ia Data de Tratamento: 29/07/2016 2a Data de Tratamento: 16/08/2016 Retirada: 03/10/2016 [0179] Resultados: Houve uma diferença significativa em peso de broto seco, peso de raiz seca e peso vegetative total entre o UTC e os tratamentos de BIOACT® (FIGS. 6C, 6D
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71/78 e 6E). Além disso, a classificação de galha e a contagem de ovo foram significativamente diferentes (FIGS. 6A e 6B).
Ensaio de tomate em solo misturado com solo argiloso
Data de Planta: 18/07/2016
Data de Transplante: 01/08/2016
Data de Infestação: 17/08/2016
Ia Data de Tratamento: 09/08/2016
2a Data de Tratamento: 23/08/2016
Retirada: 30/09/2016 [0180] Resultados: Redução significativa em desenvolvimento de galha visível em tratamentos de BIOACT® comparados ao controle (UTC) (FIG. 7A) , houve infecção de nematódeo satisfatória (descamação) vista em UTC. Diferenças em peso de fruta total (FIG. 7B) também foram observadas entre UTUI e plantas tratadas. Houve uma diferença significativa em peso de broto seco entre o UTC e o BIOACT® 2x (FIG. 7C) e peso vegetative total (FIG. 7D).
Ensaio de Pepino em solo arenoso
Data de Planta: 18/07/2016
Data de Infestação: 09/08/2016
Ia Data de Tratamento: 29/07/2016
2a Data de Tratamento: 16/08/2016
Retirada: 03/10/2016 [0181] Resultados: Diferenças significativas foram observadas entre tratamentos de BIOACT® e UTC (com nematódeos) em classificação de galha e contagem de ovo (FIGS. 8A e B) . A redução no número de ovos em comparação ao UTC foi visível. Diferenças também foram observadas em peso de raiz seca (FIG. 8C).
Ensaio de pepino em solo misturado com argila
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Data de Planta: 25/07/2016
Data de Infestação: 17/08/2016
Ia Data de Tratamento: 09/08/2016
2a Data de Tratamento: 23/08/2016
Retirada: 03/10/2016 [0182] Resultados: BIOACT® liquido lx apresentou melhor desempenho que os outros três tratamentos. Houve aumento significativo em rendimento de fruta com uma aplicação de DC de BIOACT® em comparação a UTUI e UTC. Diferenças Significativas no peso de fruta total foram observadas/FIG. 9A) .
Exemplo 7: Ensaios para avaliar eficácia nematicida e aumento de rendimento pela cepa 251 de P. lilacinum em pepino e tomate em área de estufa Métodos e Materiais Gerais:
[0183] Esse estudo de rendimento foi executado em estufas comerciais altas representativas para as áreas de pepino e tomate mais importantes na Espanha e Itália, respectivamente. No total, 6 ensaios foram conduzidos nas seguintes províncias e locais de ensaio:
[0184] Programa de rendimento para pepino:
1. Espanha:
• Granada / Carchuna . Itália:
• Lazio / Sabaudia • Sicily / Vittoria [0185] Programa de rendimento para tomates:
1. Espanha:
• Granada / Salobrena • Cadiz / Zahora
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73/78 . Itália :
• Puglia / Palagiano [0186] O programa de rendimento indicou a divisão de ensaios em cada cultura ao longo de todo o ciclo de cultura curto (mola) bem como ciclo de cultura a longo prazo para cada país e local experimental. A seleção para variedade seguiu as exigências do mercado e prática agronômica.
Projeto experimental:
[0187] Os locais de ensaio foram selecionados com um histórico de população de nematódeo de nó na raiz; de preferência, população de nematódeo médio. Para avaliar a população de nematódeo inicial e sua distribuição antes do começo do ensaio, as amostras de solo das 4 áreas no campo experimental foram selecionadas. Em cada área, 10 subamostras principais verticais, descartando os 10 cm de topo de solo, foram amostradas dentro da zona de raiz alimentadora de 10 a 30 cm de planta, respectivamente.
[0188] A configuração experimental foi completamente aleatorizada e compreendeu 6 tratamentos com 5 repetições para cada ensaio. A aplicação do produto PL251 formulado (formulação líquida de P. liliacinum que compreende BREAKTHRU® S240 e AEROSIL®) foi aplicada sequencialmente com 0,75 1/ha (com 5,4 x 1010 esporos viáveis/ml ao longo de todo o período de cultura.
[0189] Segu indo a prática agronômica, um gotejador por planta em duas linhas ou um sistema de irrigação de linha foi configurado para garantir melhor quimigação e irrigação por gotejamento diária. Durante a estação, a quantidade de água de irrigação por gotejamento diária foi ajustada de acordo com condições ambientais (temperatura de ar °C) e
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74/78 estágio de desenvolvimento de plantas (BBCH).
[0190] Para manter a umidade suficiente para crescimento de fungos, o solo foi mantido úmido após a primeira aplicação de PL 251 líquido em 14 dias (d) antes do transplante. Para cada aplicação adicional através do sistema de gotejamento (consulte a Tabela 10A e 10B), o
ciclo de quimigaçãc > a seguir foi usado:
1/3 do volume de água total (água apenas)
1/3 do volume de água total (água + PL 251)
1/3 do volume de água total (água apenas)
[0191] Gerenciamento de fertilizador seguiu recomendação local e prática do cultivador. Para garantir melhor polinização para rendimento, então, colônias de abelhas foram usadas em cada ensaio e estufa.
Tabela A: Tratamentos para configuração de ensaio de pepino:
Tratamento Aplicação A B C D E F
Tempo de aplicação 14 d antes do transplante no transplante 2 d após o transplante 4 semanas após o transplante 8 semanas após o transplante 20 d após o transplante
1 UTC
2 PL251 0,75 1/ha 0,75 1/ha 0,75 1/ha 0,75 1/ha
3 SC de VELUM® 250 G A/ha
4 PL251 0,75 1/ha 0,75 1/ha 0,75 1/ha 0,75 1/ha
4 SC de VELUM® 250 G A/ha
5 PL251 0,75 1/ha 0,75 1/ha
5 SC de VELUM® 250 G A/ha
Tabela B: Tratamentos para configuração de ensaio de tomate:
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Tratamento Aplicação A B C D E F G
Tempo de aplicação 14 d antes do transplante no transplante 2 d após o transplante 12 dias após o transplante 22 dias após o transplante 4 semanas após o transplante 8 semanas após o transplante
1 UTC
2 PL251 0,75 Lha 0,75 Lha 0,75 Lha 0,75 Lha
3 SC de VELUM® 250 G A/ha
4 PL251 0,75 Lha 0,75 Lha 0,75 Lha 0,75 Lha
4 SC de VELUM® 250 G A/ha
5 PL251 0,75 Lha 0,75 Lha
5 SC de VELUM® 250 G A/ha
Avaliação de eficácia:
[0192] Para investigar o desenvolvimento de galhas de raiz e a eficácia de produto, 15 plantas foram aleatoriamente selecionadas na colheita em cada lote, respectivamente. Para isso, as raizes foram escavadas com sistema de raiz inteira e lavadas cuidadosamente para expor a infestação de nó na raiz, respectivamente. Com base nas galhas de raiz, a atividade nematicida foi determinada com base no percentual (%) de redução de galhas e/ou danos de ataque em cada planta. Após a avaliação, 100 % indica que nenhuma galha foi verificada; 0 % significa que o número de galhas verificadas nas raizes de plantas tratadas foi igual àquele em plantas de controla não tratadas. Adicionalmente, a segurança de cultura foi avaliada estimando-se o percentual de fitotoxicidade em todo o lote.
Avaliação de rendimento:
[0193] Para a avaliação de rendimento, cada colheita e/ou coleta de frutas foram registradas ao longo do periodo de periodo de cultura. As coletas foram executadas quantas
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76/78 vezes forem necessárias seguindo cada característica dependente de variedade. A colheita prevê, em primeiro lugar, 2 semanas de coletas após a última aplicação de PL 251, respectivamente. Em cada data de coleta, o peso fresco de frutas em quilograma por lote foi registrado. Além disso, as frutas foram avaliadas por tamanho e peso seguindo as características de variedade.
Resultados
Eficácia:
[0194] Tratamento de solo com PL251 indicou redução no desenvolvimento de galhas em comparação a UTC. Para o programa de ensaio de pepino (FIG. 10A), a eficácia para o programa de solo biológico mostrou eficácia mais alta no pepino com aproximadamente 30 % em comparação a 24 % em tomate (FIG. 10B), respectivamente, VELUM® SC (fluopiram) como programa de solo químico indicou, no entanto, níveis
de eficácia similares no pepino e tomate. A aplicação
sequencial de VELUM® SC e PL251 ao longo de todo o período
de cultura indicou claramente valores de eficácia
aumentados em ambas as culturas.
Rendimento:
[0195] Para diferenças significativas de aumento de rendimento em peso de fruta e quantidade entre UTC e BIOACT®, as plantas tratadas com DC foram observadas. A análise sintética revela um aprimoramento significativo de peso de fruta (kg) em pepino e tomate após a aplicação de PL251, respectivamente. Os resultados em ambas as culturas indicam claramente que PL 251 exibe um efeito de saúde de planta adicional independente de seu potencial nematicida que leva ao peso de broto aprimorado em vegetais
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77/78 frutíferos .
Exemplo 8: Comparação de efeito de PGP de diferentes cepas de P. lilacinum [0196] Para comparar o efeito de PGP, em particular, um efeito no crescimento de raiz, diferentes suspensões de
esporo de cepas de P. lilacinum (em que cada um contém
IxlO7 esporos por testadas em mudas de 1. Água estéril ml) de três cepas diferentes tomate. Suspensões contêm: foram
2 . Esporos de cepa 251 de Purpureocillium lilacinum
extraída do produto BioAct DC
3. Esporos de cepa de Purpureocillium lilacinum
extraída do produto Lila-Sin WG
4 . Esporos de cepa de Purpureocillium lilacinum
extraída do produto Hocusia
[0197] As sementes de tomate foram colocadas em placas de ágar a 1 % e as placas foram incubadas em uma posição vertical em uma câmara de crescimento Conviron durante um período de 12 horas sob luz e 12 horas no escuro, a intensidade de luz de 320 μΜοΙ, temperatura de 25 °C durante o período de luz, 20 °C durante o período de escuridão por 7 dias. No dia 7, os comprimentos de raiz foram medidos e os tratamentos foram efetuados posteriormente (4 plântulas por tratamento) por imersão das raízes das mudas na respectiva solução/suspensão 1 a 4 por 15 segundos. As plântulas tratadas foram colocadas em placas de ágar a 1 % e as raízes de cada plântula foram colocadas na superfície das placas de ágar. As placas foram colocadas na coifa por 5 min para permitir que o tratamento seque as raízes. As placas foram incubadas novamente em uma
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78/78 posição vertical na câmara de crescimento Conviron por mais 7 dias.
[0198] As raizes de tomate foram analisadas usando o programa WinRhizo que fornece uma análise e medição de raiz de planta completas, como comprimento, área, volume, topologia e arquitetura das raízes de planta. Cada raiz de tomate foi varrida para determinar uma área de superfície de raiz total (em cm2) e comprimento de raiz (cm) . Os resultados são exibidos nas Figuras 11A e 11B.
[0199] 0 comprimento de raiz total de cada cepa de Purpureocillium lilacinum foi avaliado. Como pode ser visto na Figura 11A, um aumento de comprimento de raiz (valor P 0,0007) foi observado com uma suspensão de esporo com base nos esporos de cepa 251 de P. lilacinum em comparação com uma suspensão com base em cepas de P. lilacinum isoladas dos produtos Lila-Sin e Hocusia.
[0200] A área de superfície de raiz total de cada cepa de Purpureocillium lilacinum foi avaliada. Como mostrado na Figura 11B, um aumento significativo no crescimento de raiz lateral foi apenas observado após o tratamento com cepa 251 de P. lilacinum (valor P 0,0410) .

Claims (4)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Método caracterizado por promover ou aprimorar a saúde de planta e/ou crescimento vegetal de plantas agrícolas em que as plantas, os propágulos de planta, a semente das plantas e/ou o locus em que as plantas estão crescendo ou são destinadas a crescer são tratados com uma quantidade eficaz de uma composição que compreende o fungo Purpureocillium lilacinum ou esporos do mesmo.
  2. 2. Método, de acordo com a reivindicação 1,
    caracterizado pelo fato de que a promoção ou o aprimoramento de saúde de planta compreende < e/ou se manifesta em tolerância de estresse aprimorada , menos folhas basais mortas, cor de folha mais verde, teor de pigmento, atividade fotossintética e vigor de planta melhorado. 3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a promoção ou o aprimoramento de crescimento vegetal compreende ou se
    manifesta em aumento de perfilhamento, aumento na altura de planta, lâmina de folha maior, maior superfície de folha, perfilhos mais fortes, floração mais precoce, maturidade de grão precoce, menos verso de planta (acamamento), crescimento de broto aumentado, estande de planta aumentado e germinação melhor e precoce, emergência mais precoce, rendimento de cultura aprimorado, peso vegetative total aprimorado ou biomassa de planta total, teor de proteína aprimorado, teor de óleo aprimorado, teor de amido aprimorado, crescimento de raiz aprimorado, tamanho de raiz aprimorado, peso de raiz aprimorado, peso de raiz
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    2/4 aumentado, biomassa de planta aumentada e/ou eficácia de raiz aprimorada, peso de broto aprimorado e peso de fruta aprimorado.
    4. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a tolerância de estresse aprimorada compreende tolerância aprimorada a aridez, calor, salinidade, UV, geada e/ou condições xenobióticas.
    5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a cepa
    de P. lilacinum é a cepa 251. 6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o crescimento vegetal se refere ao cre scimento de raiz, ao
    tamanho de raiz, ao peso de raiz, ao peso de fruta, ao peso de broto, à superfície de folha, à biomassa de planta e/ou ao rendimento de cultura.
    7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a dita promoção ou o dito aprimoramento de saúde de planta e/ou crescimento vegetal é independente da pressão de nematódeo patogênico.
    8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dita promoção ou aprimoramento de saúde de planta e/ou crescimento vegetal está na ausência de pressão de nematódeo patogênico.
    9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que os esporos são conídias • 10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a
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  3. 3/4 semente é tratada.
    11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o
    tratamento é executado em sulco, por aplicação de gotejamento, incorporação no solo, , aplicação por encharcamento, irrigação por a spersor ou micro-injeção. 12. Método, de acordo com a reivindicação 11,
    caracterizado pelo fato de que o dito tratamento é executado no solo antes da germinação de uma semente e/ou no solo em contato com uma semente ou raiz da dita planta
    ou em que 13. uma planta Método, é de destinada acordo a crescer. com qualquer uma das reivindicações 1 a 12 , caracterizado pelo fato de que o tratamento 14 . é executado Método, de pelo menos acordo duas com vezes. qualquer uma das
    reivindicações 1 a 12, caracterizado por compreender adicionalmente aplicar, simultânea ou sequencialmente, pelo menos um agente de proteção de planta adicional.
    15. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o dito pelo menos um agente de proteção de planta adicional é selecionado a partir do grupo que consiste em fluopiram, cepa CNCM 1-1582 de B. firmus, B. subtilis, em particular, cepa QST713, abamectina, aldicarb, fenamifós, fluensulfona, fluazaindolizina, oxamil e um fumigante.
    16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que a planta agrícola é selecionada a partir de soja, milho, trigo, triticale, cevada, aveia, centeio, colza, painço, arroz, girassol, algodão, beterraba sacarina, maça, drupa,
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  4. 4/4 frutas cítricas, banana, morango, mirtilo, amêndoa, uva/videira, mango, mamão papaia, amendoim, batata, tomate, pimenta, cucurbitácea, pepino, melão, melancia, alho, cebola, brócolis, cenoura, repolho, feijão, feijão seco, canola, ervilha, lentilha, alfalfa, trifólio, trevo, linho, capim-elefante, grama, alface, cana-de-açúcar, chá, tabaco e café; cada um em sua forma natural ou geneticamente modificada.
    17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 planta agrícola é a 16, tomate caracterizado pelo fato , pepino ou milho. de que a 18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que a dita composição compreende adicionalmente pelo menos 75 %
    de trisiloxano modificado por poliéter.
    19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o dito trisiloxano modificado por poliéter é BREAK-THRU® S240.
    20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que a dita composição compreende adicionalmente até 8 % de silica fumada.
    21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a dita silica fumada é AEROSIL®.
    22. Uso caracterizado por ser de uma composição que compreende o fungo Purpureocillium lilacinum ou esporos do mesmo para a promoção ou o aprimoramento de saúde de planta e/ou crescimento vegetal.
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