BR112018009313B1

BR112018009313B1 - Composição hemostática que compreende fibras à base de celulose, gel, método de produção destes e agregados hemostáticos

Info

Publication number: BR112018009313B1
Application number: BR112018009313-0A
Authority: BR
Inventors: Erez Ilan; Omri Faingold; Nataly Freizus; Ronen EAVRI; Dwayne Looney; Sridevi Dhanaraj; James Galloway; Walter Danker
Original assignee: Ethicon, Inc.; Omrix Biopharmaceuticals Ltd
Priority date: 2015-11-08
Filing date: 2016-11-08
Publication date: 2021-10-13
Also published as: CO2018005753A2; IL259203B; KR20180084854A; ES2886040T3; CN108430526B; IL259206B; IL259203A; US20170128616A1; EP3370785A1; CA3004521A1; BR112018009306A8; IL259206A; EP3868414A1; EP3370786A1; BR112018009313A2; US20190060514A1; AU2016350050B2; AU2016350050A1; CN108472404A; MX2018005784A

Abstract

composição hemostática. a presente invenção refere-se a composições hemostáticas aprimoradas que compreendem fibras à base de celulose suplementadas com compostos, à preparação e ao uso das mesmas.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção se refere a composições hemostáticasaprimoradas que compreendem fibras à base de celulose suplementadas com compostos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Em uma ampla variedade de circunstâncias, os animais,incluindo os seres humanos, podem sofrer sangramento devido a ferimentos ou durante procedimentos cirúrgicos. Em algumas circunstâncias, o sangramento é relativamente menor, e não é necessário mais que a coagulação sanguínea normal, além da administração de primeiros socorros simples. Em outras circunstâncias, pode ocorrer sangra- mento significativo. Tais situações geralmente necessitam de equipamentos e materiais especializados, bem como de pessoas treinadas para administrar o auxílio adequado. O sangramento durante procedimentos cirúrgicos pode se manifestar de muitas formas. Ele pode ser isolado ou difuso a partir de uma área superficial grande. Pode ser de vasos grandes ou pequenos, arteriais (alta pressão) ou venosos (pressão baixa) de volume alto ou baixo. Ele pode ser facilmente acessível ou pode se originar de locais difíceis de acessar.

[003] Métodos convencionais para alcançar a hemostasia incluem o uso de técnicas cirúrgicas, suturas, ligaduras ou grampos, e coagulação ou cauterização baseada em energia. Quando essas medidas convencionais são ineficazes ou impraticáveis, técnicas e produtos de hemostasia auxiliar são tipicamente utilizados.

[004] A seleção de métodos ou produtos adequados para o controle do sangramento depende de muitos fatores, que incluem, mas não se limitam a, gravidade do sangramento, localização anatômica da fonte, a proximidade da fonte a estruturas críticas adjacentes, se o sangramento é de uma fonte isolada ou de uma área superficial mais ampla, visibilidade e identificação precisa da fonte e do acesso à fonte.

[005] Muitos produtos foram desenvolvidos como compostos auxiliares para hemostasia. Esses produtos incluem hemostáticos absorvíveis tópicos (TAH) como celulose regenerada oxidada, gelatina em várias formas com ou sem uma solução de trombina, colágeno em pó, produtos hemostáticos tópicos biologicamente ativos (soluções de trombina tópica, selantes de fibrina, etc.) e uma variedade de selantes tópicos sintéticos.

[006] Hemostáticos absorvíveis tópicos (TAHs - Topical Absorbable Hemostats) são amplamente usados em aplicações cirúrgicas. Os TAHs abrangem produtos à base de celulose oxidada (OC), celulose regenerada oxidada (OCR), gelatina, colágeno, quitina, quitosano, etc. Para melhorar o desempenho hemostático, estruturas baseadas nos materiais acima podem ser combinadas com fatores de coagulação derivados biologicamente, como a trombina e o fibrinogênio.

[007] Um dos agentes hemostáticos tópicos mais comumenteusados é o hemostático absorvível SURGICEL® Original, produzido a partir de celulose regenerada oxidada (ORC). A ORC foi introduzida em 1960 como um agente hemostático seguro e eficaz para muitos procedimentos cirúrgicos. SURGICEL® Original é uma malha solta de tecido de ORC que se adapta rapidamente aos seus arredores imediatos e é mais fácil de gerenciar do que outros agentes absorvíveis porquenão gruda em instrumentos cirúrgicos e seu tamanho pode ser facilmente aparado. Isto permite que o cirurgião segure firmemente a celulose no lugar até que todas as hemorragias parem.

[008] O controle do sangramento é essencial e crítico em procedimentoscirúrgicos para minimizar a perda de sangue, reduzir compli- cações pós-cirúrgicas e encurtar a duração da cirurgia na sala de operação. Devido à sua biodegradabilidade e às suas propriedades bacte- ricidas e hemostáticas, uma celulose oxidada, assim como uma celulose regenerada oxidada, tem sido usadas como um curativo para ferimentoshemostáticos tópicos em uma variedade de procedimentos cirúrgicos, incluindo neurocirurgia, cirurgia abdominal, cirurgia cardiovascular, cirurgia torácica, cirurgia de cabeça e pescoço, cirurgia pélvica, e procedimentos de tecido de pele e subcutâneo. São conhecidos inúmeros métodos para formação de diversos tipos de agentes hemos- táticos com base em materiais de celulose oxidada, sejam estes produzidos sob a forma de pós, tecidos, não tecidos, de malha e outras formas. Bandagens para ferimentos hemostáticos atualmente utilizadas incluem panos de malha, tecidos ou não tecidos que compreendem celulose regenerada oxidada (ORC), cuja é celulose oxidada com maior homogeneidade da fibra de celulose.

[009] Os hemostáticos absorvíveis SURGICEL® são usados deforma auxiliar em procedimentos cirúrgicos para auxiliar no controle de hemorragia de capilares, venosa e arterial pequena quando a ligação ou outros métodos convencionais de controle são impraticáveis ou ineficazes. A família SURGICEL® de hemostáticos absorvíveis consiste em quatro grupos de produtos principais, com todos os curativos he- mostáticos para ferimentos disponíveis comercialmente junto à Ethi- con, Inc., Somerville, N.J., uma empresa Johnson & Johnson: O he- mostático SURGICEL® Original é um tecido branco com um matiz amarela pálido e um aroma semelhante a caramelo. Esse material é forte e pode ser suturado ou cortado sem desgaste;

[0010] O hemostático absorvível SURGICEL® NU-KNIT® é similarao SURGICEL® Original, mas tem uma malha mais densa e, dessa forma, uma resistência à tração mais alta, esse material é particularmente recomendado para uso em trauma e cirurgia de transplante, uma vez que ele pode ser envolvido ou suturado no lugar para controlar o sangramento;

[0011] A forma do produto hemostático absorvível SURGICEL®FIBRILLAR™ tem uma estrutura em camadas que permite ao cirurgião descolar e segurar com fórceps qualquer quantidade de material necessária para alcançar a hemostasia em um local de sangramento específico, e portanto, pode ser mais conveniente que a forma de malha para locais com sangramento de difícil acesso ou de formato irregular. É particularmente recomendado para utilização em cirurgia ortopédi- ca/coluna e neurológica;

[0012] a forma do produto hemostático absorvível SURGICEL®SNoW™ é um tecido não tecido estruturado que pode ser mais conveniente que outras formas para uso endoscópico devido ao tecido não tecido estruturado. e é altamente adaptável e recomendado em procedimentos tanto abertos quanto minimamente invasivos.

[0013] Um outro exemplo de agente hemostático absorvível comercialmentedisponível contendo celulose oxidada é a bandagem cirúrgica de celulose absorvível GELITA-CEL®, disponível junto à Gelita Medical BV, Amsterdam, Países Baixos. Os hemostáticos de celulose oxidada disponíveis comercialmente, observados acima, estão disponíveis em tecidos não tecidos, de malha ou sob a forma de pó. Produtoshemostáticos adicionais, como pós que consistem em partículas de polissacarídeo microporoso e partículas à base de amido vegetal, também estão disponíveis comercialmente como PERCLOT® e ARISTA™.

[0014] Outras referências relacionadas a antecedentes incluem: US8.815.832; US3.364.200; US2008/0027365; US2004/0005350; WO2007/076415; US6.627.749; US6.309.454; US5.696.191; US6.627.749; US6.225.461; WO2001/024841A1; EP1.323.436; US2006/0233869. US5645849A; US5643596A; WO1996040033A1; US5484913A; US9131929B2; US8722081B2; US7923031B2; US6056970A; US4749689A; US4637815A; US20150017225A1; US20130310873A1;US20120253298A1 US20090062233A1; US20080138387A1; US20020192271A1; EP1641399B1; EP1731175B1; EP2233157A1; EP2203053A1; WO1990013320A1; CA2688196C; AU2013218367B2; CN104013991A; CN1850111A; RU2235539C1; US5403278A; PH32014A; WO2002024239A1. Howsmon, J. A., & Marchessault, R. H. (1959). The ballmilling of cellulose fibers and recrystallization effects. Journal of Applied Polymer Science J. Appl. Polym. Sci., 1(3), 313-322. doi:10.1002/app.1959.070010308. Cullen, B., Watt, P. W., Lundqvist, C., Silcock, D., Schmidt, R. J., Bogan, D., & Light, N. D. (2002). The role of oxidised regenerated cellulose/collagen in chronic wound repair and its potential mechanism of action. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 34(12), 1544-1556. doi:10.1016/s1357-2725(02)00054-7. Rajkhowa, R., Wang, L., & Wang, X. (2008). Ultra-fine silk powder preparation through rotary and ball milling. Powder Technology, 185(1), 87-95. doi:10.1016/j.powtec.2008.01.005. Yasnitskii, B. G., Dol'berg, E. B., Oridoroga, V. A., Shuteeva, L. N., Sukhinina, T. V., & Bogun, T. A. (1984). Oxycelodex, a new hemostatic preparation. Pharmaceutical Chemistry Journal, 18(4), 279-281. doi:10.1007/bf00760712.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0015] A presente invenção se refere a composições hemostáticasaprimoradas que compreendem fibras, originadas de um material de fonte celulósica, suplementadas com compostos.

[0016] Em um aspecto, a invenção apresenta uma composiçãohemostática compreendendo: fibras à base de celulose que têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 350 μm e de D50 menor que 167 μm, as fibras estão em uma faixa de concentração de 83,5% a 90,0%, em peso, de toda a composição; um ácido ômega amino car- boxílico em uma faixa de concentração de 2,5% a 5,0%, em peso de toda a composição; sal de protamina a uma concentração de 2,5% a 5,0%, em peso de toda a composição; um cátion divalente, sendo que a concentração de cátion é 1,3% a 1,8%, em peso de toda a composição, sendo que a composição está sob a forma de um pó e/ou agregados.

[0017] Em algumas modalidades, a composição da presente invenção compreende também fibras de tamanho 350 μm.

[0018] A distribuição de tamanho D50 também é conhecida comoo diâmetro mediano ou o valor médio das unidades na distribuição de tamanho no pó/agregados, é o valor do diâmetro da unidade a 50% na distribuição cumulativa. Por exemplo, se D50 for X μm, então 50% das unidades na amostra são maiores que X μm, e 50% são menores que X μm. A distribuição de tamanho é o número de unidades que se enquadram em cada uma das várias faixas de tamanho dadas como uma porcentagem do número total de todos os tamanhos de unidades na amostra de interesse. Consequentemente, o valor D90 refere-se a 90% das unidades tendo um tamanho que é menor que o valor D90. Todas as faixas reveladas na presente invenção incluem o limite superior e inferior, onde aplicável.

[0019] Em uma modalidade, as fibras à base de celulose têm umadistribuição de tamanho de D90 menor que 177 μm e de D50 menor que 95 μm.

[0020] Em uma outra modalidade, as fibras à base de celulose sãofibras de celulose regenerada oxidada (ORC).

[0021] Em uma outra modalidade adicional, o ácido ômega aminocarboxílico é o ácido épsilon amino caproico (εACA).

[0022] Em algumas modalidades, o sal de protamina é sulfato deprotamina.

[0023] Em algumas modalidades, o sal de cátion divalente é fornecido por cloreto de cálcio.

[0024] Em algumas modalidades, as faixas de concentração deεACA, de sulfato de protamina e de cloreto de cálcio são 2,5% a 5,0%, 2,5% a 5,0%, 5,0 % a 6,5%, em peso, respectivamente, sendo que o peso restante é composto pelas fibras à base de celulose em quantidade suficiente para 100% do peso total.

[0025] Em algumas modalidades, um gel formado a partir da composição em pó após o contato com sangue tem uma resistência igual ou maior que 10 vezes a de um gel formado pelo contato de uma composição em pó comparativa que consiste em celulose regenerada oxidada (ORC) com sangue; e/ou um gel formado a partir da composição de agregados tem uma capacidade hemostática igual a ou maior que 1,5 vez a de um gel formado pelo contato de uma composição de agregados comparativa que consiste em ORC com sangue.

[0026] Em algumas modalidades, a composição está sob a formade agregados tendo um tamanho na faixa de 75 μm a 420 μm.

[0027] Em um outro aspecto, a invenção fornece um método paraa fabricação de uma composição hemostática compreendendo as etapas de: mistura de fibras de celulose que têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 350 μm e de D50 menor que 167 μm, estando as fibras em uma faixa de concentração de 83,5% a 90%, em peso, de toda a composição, com os seguintes compostos em pó: i - um ácido ômega amino carboxílico em uma faixa de con-centraçãode 2,5% a 5,0%, em peso de toda a composição; ii - um sal de protamina em uma concentração de 2,5% a 5,0%, em peso de toda a composição; e iii - um cátion divalente, sendo que a concentração de cá- tion é 1,3% a 1,8%, em peso de toda a composição.

[0028] Em algumas modalidades, as fibras têm uma distribuiçãode tamanho de D90 menor que 177 μm e de D50 menor que 95 μm.

[0029] Em um outro aspecto, a invenção fornece uma composiçãohemostática obtenível de acordo com o método da invenção.

[0030] Em algumas modalidades, o método compreende, adicionalmente, as etapas de: compactar a composição hemostática; e, op-cionalmente, submeter a composição compactada à secagem, e reduçãode tamanho, obtendo, assim, agregados hemostáticos.

[0031] Em um outro aspecto, a invenção fornece uma composiçãode agregados hemostáticos obtenível de acordo com o método da invenção.

[0032] Em um outro aspecto, a invenção fornece um método paraa formação de um gel compreendendo a etapa de:colocar um pó hemostático e/ou a composição de agregados, de acordo com a invenção, em contato com sangue, formando, assim, um gel.

[0033] Em uma modalidade, quando o contato é realizado com acomposição em pó, o gel formado tem uma resistência igual ou maior que 10 vezes a de um gel formado pelo contato de uma composição em pó comparativa que consiste em celulose regenerada oxidada (ORC) com sangue;

[0034] e/ou sendo que, quando a colocação em contato é feitacom a composição de agregados, o gel formado tem uma capacidade hemostática igual a ou maior que 1,5 vez a de um gel formado pelo contato de uma composição de agregados comparativa que consiste em ORC com sangue.

[0035] Em um outro aspecto, a invenção fornece um gel obtenívelpelo método de acordo com a invenção.

[0036] Em um outro aspecto, a invenção fornece um kit que com- preende um recipiente que inclui uma composição hemostática de acordo com a invenção e, opcionalmente, um aplicador, veículo e/ou instruções para uso.

[0037] Em um outro aspecto, a invenção fornece um método detratamento de um ferimento com sangramento; uma infecção bacteria- na no local de uma ferida, minimizar ou evitar o vazamento de um sítio anastomótico, vedar um vazamento em um sítio e/ou prevenir a adesão no sítio cirúrgico em um indivíduo em necessidade, o método compreendendo aplicar uma quantidade eficaz da composição hemos- tática de acordo com a invenção, sobre e/ou dentro da ferida e/ou no local do corpo do indivíduo.

[0038] O indivíduo pode ser um paciente humano ou um animal.

[0039] Em um outro aspecto, a invenção fornece o uso de umacomposição hemostática, de acordo com a invenção, para o tratamento de um ferimento com sangramento; a uma infecção bacteriana no local de um ferimento, à minimização ou prevenção de um vazamento em um sítio anastomótico, à vedação de um vazamento em um sítio e/ou à prevenção de adesão.

[0040] Em uma modalidade, o uso é para minimizar ou prevenirum vazamento em uma cirurgia de revascularização miocárdica (CABG).

[0041] Em uma modalidade, a aplicação é feita sem aplicar pressão sobre a composição em direção ao ferimento e/ou sítio. Por exemplo, a compressão manual com o uso de gaze não é necessária. Em vários produtos, o produto exige compressão manual durante a aplicação por ao menos um minuto. A vantagem de usar a composição hemostática sem compressão é que a composição hemostática pode ser aplicada em/sobre áreas de difícil acesso.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0042] As Figuras 1 e 2 são gráficos de barras mostrando a força de resistência/força coesiva obtida a partir das diferentes composições em pó com o uso de um teste de Bloom modificado. A força de resistência obtida a partir de fibras de ORC finas não suplementadas serviu como uma linha de base para todo o experimento.

[0043] A Figura 3 é um diagrama de barras mostrando a eficáciahemostática de uma composição em pó não compactada e compactada (isto é, composição sob a forma de agregados) e o efeito de íons de cálcio na composição compactada por um modelo de sutura ex vivo.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0044] A invenção se refere a composição(ões) hemostática(s)aprimorada(s), sob a forma de pó e/ou agregados, que compreen- de(m) fibras à base de celulose, suplementadas com compostos.

[0045] A invenção se refere a composição(ões) em pó e/ou agregados tendo propriedades físicas surpreendentes e efeito(s) altamente benéfico(s) para a hemostasia na formação de gel ou coágulo; à sua preparação e uso das mesmas. Por exemplo, a composição em pó e/ou agregados induz a formação de gel ou de coágulo com propriedades físicas benéficas, como força coesiva aumentada, e capacidade hemostática benéfica.

[0046] A composição hemostática compreende fibras originadasde um material à base de celulose e suplementado com compostos; a composição está sob a forma de pó e/ou agregados.

[0047] O termo "fibras à base de celulose" se refere a fibras quecompreendem uma cadeia principal de celulose. A cadeia principal de celulose pode ser modificada, por exemplo, pode incluir alterações nos níveis de carboxilação ou oxidação. Exemplos não limitadores de materiais à base de celulose incluem celulose oxidada ou celulose regenerada oxidada, carbóxi metil celulose, hidróxi etil celulose, hidróxi propil celulose e metilcelulose.

[0048] Exemplos não limitadores de fibras à base de celulose sãofibras de ORC, fibras de algodão, fibras de raiom e fibras de viscose.

[0049] As fibras à base de celulose podem ser produzidas a partirde materiais à base de celulose. Alguns exemplos não limitadores de materiais à base de celulose são tecidos, não tecidos, pano de malha e/ou outras formas de tecidos.

[0050] O termo "fibras" se refere a estruturas que têm forma filamentar alongada.

[0051] O termo "pó"se refere a partículas sólidas secas dispersas.

[0052] Em uma modalidade, uma composição em pó, de acordocom a invenção, inclui fibras e compostos suplementares sob a forma de particulado.

[0053] O termo "agregados" se refere ao material à base de celulose compactado, por exemplo, pó e/ou fibras, tendo uma faixa de tamanho alvo, por exemplo, o material compactado é submetido à redução de tamanho como moagem e, opcionalmente, peneiragem. Em uma modalidade, os agregados são a composição em pó compactada submetida à redução de tamanho, por exemplo, moagem.

[0054] Exemplos não limitadores de redução de tamanho são moagem,trituração, retalhamento e/ou rasgamento.

[0055] O termo "hemostático"se refere à capacidade de reduzir aintensidade do sangramento ou conter o sangramento.

[0056] A composição hemostática pode ser preparada mediante amistura de fibras à base de celulose com ácido ômega amino carboxí- lico, sal de protamina e um cátion divalente nas faixas de acordo com a invenção.

[0057] O ácido ômega amino carboxílico pode ser como ácido wcarboxílico com comprimentos de cadeia variáveis incluindo, mas não se limitando a ácido 2-aminoacético (glicina), ácido 3- aminopropanoico, ácido 4-aminobutanoico, ácido 5-aminopentanoico, ácido 6-amino-hexanoico, ácido 7-amino-heptanoico, ácido 8-amino- octanoico, ácido 9-aminononanoico, ácido 10-aminodecanoico e ácido ε aminocaproico.

[0058] Em uma modalidade da invenção, o sal de protamina nacomposição é sulfato de protamina. Outros exemplos de sais de pro- tamina incluem, mas não se limitam à amina protamina.

[0059] Em uma modalidade da invenção, o cátion divalente nacomposição é fornecido por cloreto de cálcio. Outros exemplos de sais de cátion divalente incluem, mas não se limitam a, cloreto de magnésio, acetato de cálcio e cloreto de ferro(II).

[0060] Em uma modalidade da invenção, as faixas de concentração de εACA, de sulfato de protamina e de cloreto de cálcio são 2,5% a 5,0%, 2,5% a 5,0%, 5,0% a 6,5%, em peso, respectivamente, e o peso restante da composição é composto pelas fibras à base de celulose para um peso total de 100%.

[0061] A composição hemostática pode compreender, adicionalmente, um aditivo selecionado do grupo que consiste em carbóxi metil celulose, um agente anti-infeccioso, um outro agente promotor de he- mostase, gelatina, colágeno ou combinações dos mesmos.

[0062] Em algumas modalidades da invenção, as composiçõeshemostáticas incluem, adicionalmente, carbóxi metil celulose (CMC) ou outros polissacarídeos, agentes anti-infecciosos, agentes promotores de hemostasia, gelatina, colágeno ou combinações dos mesmos.

[0063] Alguns exemplos não limitadores de material de fonte defibras ou material à base de celulose a serem usados como material de partida para produzir as fibras para a composição incluem: produtos têxteis celulósicos regenerados oxidados, celulose regenerada oxidada (ORC), tecido, pano de malha, produtos têxteis não tecidos, material celulósico regenerado oxidado ou combinações dos mesmos.

[0064] De acordo com a invenção, descobriu-se que a força coesi- va de um gel induzida por fibras de ORC é afetada pela suplementa- ção com compostos conforme medido por um teste de Bloom modificado.

[0065] Os resultados do teste de Bloom modificado demonstram aforça necessária por uma haste metálica para passar através do gel na extensão de 7 mm enquanto se move a uma velocidade de 5 mm/min. Essa força reflete o nível de resistência do gel (quanto maior a força, maior a resistência do gel) e, por sua vez, indica qual é o nível de força coesiva de um gel. A força coesiva representa a resistência através da qual as moléculas de uma composição são ligadas umas às outras. Quanto mais força for necessária para que a haste prossiga com seu movimento constante, maior a resistência do gel.

[0066] Descobriu-se também que a suplementação de fibras deORC com 3% ou 6% de cloreto de cálcio (CaCl2) aumentou a força de resistência de forma dose-dependente.

[0067] As descobertas, de acordo com a invenção, mostraram quea suplementação de fibras de ORC com 3% de cloreto férrico (FeCl3) teve um efeito positivo significativo sobre a resistência dos coágulos formados.

[0068] Ao comparar a eficácia da suplementação com 3% deCaCl2 com composições tendo cargas positivas que foram suplementadas adicionalmente com 3% de PS; ou 3% PS e 3% de εACA; ou 3% de PS e 3% de quitosano, os resultados indicaram que houve um aprimoramento na força de resistência das composições suplementadas adicionais. Entretanto, descobriu-se que incluir 3% de lisina (Lys), que é um outro composto que tem cargas positivas na composição, teve um efeito negativo e diminuiu a força de resistência obtida.

[0069] Sem se ater ao mecanismo, a suplementação de fibras deORC com compostos positivamente carregados específicos (por exemplo, cátions diferentes, por exemplo, cátions divalentes forneci- dos por CaCl2, sal de protamina, por exemplo, sulfato de protamina ou polissacarídeos positivamente carregados, por exemplo, quitosano e um ácido ômega amino carboxílico, por exemplo, εACA) pode aumentar a força coesiva de um gel formado pela composição em pó hemos- tática.

[0070] Descobriu-se também que a suplementação de fibras deORC com 3% de quitosano ou 3% de PS, adicionalmente à suplemen- tação com 6% de CaCl2, mostrou um aumento na força de resistência dos coágulos.

[0071] Além disso, a suplementação adicional da composição deORC 6% de CaCl2 com 3% de εACA diminuiu a resistência dos coágulos.

[0072] Além disso, descobriu-se que a força de resistência aprimorada demonstrada em coágulos formados pela suplementação de 6% de CaCl2, foi abolida em coágulos formados pela suplementação de mistura de 6% de CaCl2 com lisina (Lys). Além disso, a suplementação de 6% de CaCl2-ORC com arginina (Arg) teve o mesmo efeito negativo.

[0073] Descobriu-se que resultados superiores na força coesivaforam obtidos com ORC suplementada com 5,0% de CaCl2, 2,5% de PS e 2,5% de εACA.

[0074] Essas descobertas surpreendentes mostram que a suple-mentação de fibras de ORC com compostos positivos específicos e combinações e concentrações específicas dos mesmos aprimora as propriedades de força coesiva de um gel.

[0075] Além disso, descobriu-se que fibras de ORC suplementadas (com 5,0% de CaCl2, 2,5% de PS e 2,5% de εACA, uma combinação que exibiu força coesiva superior) sob a forma de agregados tinham capacidades hemostáticas superiores. Foi observada uma contribuição positiva do cloreto de cálcio para a eficácia hemostática dos agregados de ORC suplementados.

[0076] Agregados das fibras de ORC, com ou sem a suplementa-ção com diferentes concentrações de compostos, foram explorados in vivo quanto a seu efeito hemostático. Os agregados suplementados com composto testados incluíram combinações de fibras de 10,0% (peso/peso do peso da mistura final) de fibras de ORC longa e 77,580,0% de fibras finas de ORC. Em cada experimento, agregados de ORC fina (sem qualquer suplementação) serviram como uma composição comparativa a fim de examinar a eficácia hemostática da suple- mentação dos compostos às fibras de ORC. As taxas de sucesso de parada completa de sangramento/hemostasia completa foram medidas. Os resultados in vivo reafirmaram que todos os três compostos (cloreto de cálcio, PS e εACA) são necessários para melhorar a eficá-ciahemostática das fibras de ORC, e que tanto para PS quanto εACA uma faixa de suplementação superior é de 2,5% a 5,0% e para o cloreto de cálcio, de 5,0% a 6,5% (uma faixa de concentração de cátion de 1,363% a 1,636%, em peso).

[0077] Os resultados mostraram que a ORC suplementada podeser ao menos 1,5 vezes mais eficiente que uma composição comparativa de ORC (37,5% de taxa de hemostasia completa para ORC suplementada em comparação com 25% de taxa de hemostasia completa para ORC sozinha). Em um aspecto da invenção, a composição compreende fibras à base de celulose que têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 350 μm, e, de preferência, de D50 menor que 167 μm, as fibras estão em uma faixa de concentração de 83,5% a 90,0%, em peso de toda a composição e são suplementadas com os seguintes compostos: um ácido ômega amino carboxílico em uma faixa de concentração de 2,5% a 5,0%, em peso, de toda a composição; sal de protamina a uma concentração de 2,5% a 5,0%, em peso de toda a composição; um sal de cátion divalente, a concentração de cá- tion no sal sendo de 1,3% a 1,8%, em peso, de toda a composição. A composição pode estar sob a forma de um pó e/ou agregados.

[0078] Exemplos não limitadores de ácido ômega amino carboxí-lico incluem ácido w-carboxílico com comprimentos de cadeia variáveis incluindo, mas não se limitando a ácido 2-aminoacético (glicina), ácido 3-aminopropanoico, ácido 4-aminobutanoico, ácido 5- aminopentanoico, ácido 6-amino-hexanoico, ácido 7-amino- heptanoico, ácido 8-amino-octanoico, ácido 9-aminononanoico, ácido 10-aminodecanoico e ácido ε aminocaproico.

[0079] Em uma modalidade da invenção, o ácido ômega aminocarboxílico é o ácido épsilon amino caproico (εACA).

[0080] Em uma modalidade da invenção, o sal de protamina é sulfato de protamina.

[0081] Em uma modalidade da invenção, o cátion divalente nacomposição é fornecido por cloreto de cálcio.

[0082] Em uma modalidade da invenção, as faixas de concentração de εACA, de sulfato de protamina e de cloreto de cálcio são 2,5% a 5,0%, 2,5% a 5,0%, 5,0% a 6,5%, em peso, respectivamente, e o peso restante da composição é composto pelas fibras à base de celulose para um peso total de 100%.

[0083] A composição hemostática pode compreender, adicionalmente, um aditivo selecionado do grupo que consiste em carbóxi metil celulose, um agente anti-infeccioso, um outro agente promotor de he- mostase, gelatina, colágeno ou combinações dos mesmos.

[0084] Em alguns aspectos da invenção, as composições hemos-táticas incluem adicionalmente carbóxi metil celulose (CMC) ou outros polissacarídeos, agentes anti-infecciosos, agentes promotores de hemostasia, gelatina, colágeno ou combinações dos mesmos.

[0085] Em uma modalidade da invenção, o composto compreendesulfato de protamina, íons de cálcio, e ácido ε-aminocaproico [5% de CaCl2, 2,5% de PS e 2,5% de ácido épsilon-aminocaproico (εACA)].

[0086] Exemplos não limitadores de fibras à base de celulose sãofibras de ORC, fibras de algodão, fibras de raiom e fibras de viscose.

[0087] Em um aspecto, a invenção fornece métodos de fabricaçãodas composições da invenção. As composições têm propriedades he- mostáticas benéficas e podem ter propriedades cicatrizantes de feridas e outras propriedades terapêuticas.

[0088] Em uma modalidade, o método compreende as etapas de:misturar fibras à base de celulose que têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 350 μm e de D50 menor que 167 μm ou de uma distribuição de D90 menor que 177 μm, e D50 menor que 95 μm, estando as fibras em uma faixa de concentração de 83,5% a 90%, em peso, de toda a composição, com os seguintes compostos em pó:i - um ácido ômega amino carboxílico em uma faixa de con-centração de 2,5% a 5,0%, em peso de toda a composição;ii - um sal de protamina em uma concentração de 2,5% a 5,0%, em peso de toda a composição; eiii - um cátion divalente, sendo que a concentração do cá- tion sendo de 1,3% a 1,8%, em peso, de toda a composição.

[0089] Em uma modalidade, as fibras nas composições hemostáti-cas, de acordo com a presente invenção, são produzidas a partir de materiais de fibra à base de celulose oxidada e/ou de materiais à base de celulose oxidada pré-triturada. Em uma outra modalidade, as fibras nas composições hemostáticas, de acordo com a presente invenção, são produzidas a partir de materiais de fibra à base de celulose regenerada oxidada e/ou a partir de materiais à base de celulose regenerada oxidada pré-triturada.

[0090] O material de partida da fibra à base de celulose para produzir a composição hemostática pode incluir tecido absorvível ou pano de malha ou materiais não tecidos que compreendem material à base de celulose, em particular, celulose oxidada e os derivados neutralizados dos mesmos. Por exemplo, o material à base de celulose pode ser celulose oxidada por composto carboxílico ou oxidada por aldeído. Os polissacarídeos regenerados oxidados incluindo, mas não se limitando à celulose regenerada oxidada (ORC), podem ser usados. A celulose regenerada oxidada é vantajosa devido a seu grau mais alto de uniformidade, em comparação a celulose que não foi regenerada. A celulose regenerada e uma descrição detalhada de como produzir celulose regenerada oxidada são apresentados nas patentes US n° 3.364.200, 5.180.398 e 4.626.253, cujos teores estão aqui incorporados a título de referência como se apresentados em sua totalidade.

[0091] Exemplos de materiais celulósicos que podem ser utilizadospara preparar fibras da composição incluem, mas não se limitam à barreira de adesão absorvível INTERCEED®, hemostático absorvível SURGICEL® Original, hemostático absorvível SURGICEL® NU- KNIT®, hemostático absorvível SURGICEL® FIBRILLAR™, hemostá- tico absorvível SURGICEL® SNoW™.

[0092] O material à base de celulose, por exemplo, produtos têxteisà base de celulose, pode ser triturado para se obter fibras que têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 350 μm e de D50 menor que 167 μm. Se for desejado, a etapa de moagem pode ser repetida para se obter uma distribuição de tamanho de D90 menor que 177 μm, e D50 menor que 95 μm.

[0093] Em uma modalidade, as fibras para produzir a composiçãohemostática são preparadas pela moagem de um material de fonte celulósica; a etapa de moagem é precedida pela formação de pedaços de material por corte de fendas e corte do material de fonte celulósica. Nessa modalidade, a etapa de moagem é um processo de duas partes, com a segunda parte realizada em um classificador a ar, sendo que a segunda parte pode ser repetida três vezes. Após uma primeira passagem (1 vez) no classificador a ar, as "fibras longas" resultantes têm uma distribuição detamanho de D90 menor que 350 μm e de D50 menor que 167 μm. Após 3 passagens (3 vezes) no classificador a ar, as fibras de ORC finas resultantes têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 177 μm e de D50 menor que 95 μm.

[0094] Em uma modalidade da invenção, as fibras à base de celulose "finas ou curtas" na composição têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 177 μm, e de D50 menor que 95 μm.

[0095] O material à base de celulose pode ser misturado ou suplementado com os compostos antes, durante e/ou após as etapas de moagem.

[0096] Em uma modalidade, as composições em pó hemostáticas,de acordo com a invenção, que compreendem as fibras e os compostos são adicionalmente submetidas a etapas de compactação, para formar agregados, opcionalmente compreendendo adicionalmente as etapas de secagem, moagem/trituração e peneiragem.

[0097] A presente invenção refere-se também a composições he-mostáticas sob a forma de agregados, por exemplo, incluindo compostos e material à base de celulose que foram moídos, opcionalmente umidificados, compactados e secos.

[0098] Em uma modalidade, a invenção se refere à composiçãohemostática sob a forma de agregados compostos de uma pluralidade de fibras e compostos à base de celulose individuais interconectados de acordo com a invenção que estão sob a forma agregada e, por exemplo, têm um diâmetro ao longo de seu eixo mais longo que é menor que cerca de 420 μm e maior que cerca de 75 μm.

[0099] Em um outro aspecto, a invenção se refere a um métodopara fabricação de uma pluralidade de composições de agregados hemostáticos compreendendo as etapas de: compactar a composição em pó hemostática e formar agregados.

[00100] Em uma modalidade da invenção, o método compreende, adicionalmente, as etapas de: compactar a composição hemostática; submeter a composição compactada à secagem, moagem e peneira- ção, obtendo, assim, agregados hemostáticos.

[00101] Os agregados podem ser produzidos por: incluir opcionalmente uma etapa de umidificação da composição em pó hemostática; compactação, por exemplo, por rolo e/ou moldagem, do pó para formar agregados hemostáticos; desumidificação; moagem; peneirar os agregados hemostáticos; e opcionalmente, opcionalmente dosar os agregados hemostáticos resultantes em recipientes de armazenamento ou em dispositivos de aplicação.

[00102] Antes da compactação, o pó pode ser umidificado até o teor de água entre 11,0% e 16,0%, em peso. O pó pode ser compactado por rolos ou moldagem e, então, submetido à pré-ruptura, desumidifi- cação e, subsequentemente, seguido de uma etapa de moagem final e possivelmente peneiração.

[00103] Em uma modalidade, o pó é compactado a uma pressão de rolo de ao menos 130 bar. O pó pode ser compactado a uma força de rolo de ao menos 26 kN/cm.

[00104] Os agregados resultantes são selecionados para uma fração agregada hemostática direcionada, por exemplo, através de penei- ração. Os agregados direcionados podem ter dimensões ao longo de seu eixo mais longo de 75 a 500 μm como 75 a 420 μm. Os agregados hemostáticos, concebidos para dosagem, podem ter um teor de umidade, por exemplo, quando medido pelo método de "perda na secagem" menor que cerca de 5%, com mais preferência, menor que 2%.

[00105] A compactação de pó pode ser executada com o uso do pó, de acordo com a invenção, e uma prensa hidráulica manual (Specac Ltd. Atlas 13608 quilogramas (15 toneladas) modelo GS15011) e uma matriz de pélete evacuável adequada. A matriz de pélete pode ter um diâmetro de 10 mm (Specac Ltd. GS03100) para se obter uma cápsula. A cápsula pode ser liberada da matriz do pélete e rompida para aumentar a área superficial para a próxima etapa de secagem. A cápsula rompida pode ser seca em um forno a vácuo (modelos de forno a vácuo Cole-Parmer 05017-05) a 37 °C durante aproximadamente 16 horas para remover qualquer excesso de umidade (e atingir uma umidade menor que 5%, em peso). A cápsula rompida seca pode ser tritu- rada/moída, por exemplo, a 20.000 rpm durante 30 segundos usando o controle de moinho de tubo IKA® 9737790. Em uma etapa seguinte, as cápsulas moídas podem ser vigorosamente peneiradas com o uso de um agitador de peneira MRC (fabricante) (modelo LS 200 em um nível de intensidade 2) durante 1 minuto através de um conjunto de 2 peneiras; por exemplo, uma com um tamanho de poro de 420 μm e uma outra com um tamanho de poro de 75 μm. As cápsulas moídas que permanecem entre as duas peneiras podem ser coletadas. Nos grânulos/agregados coletados, as fibras e os compostos são homogeneamente distribuídos.

[00106] Em uma modalidade de acordo com a invenção, as composições sob a forma de agregados são produzidas diretamente a partir de tecidos à base de celulose, sem uma etapa de moagem antes da compactação ou sem o uso de pós, de acordo com a invenção, como um material de partida. Por exemplo, produtos têxteis à base de celulose são submetidos à compactação e, então, à secagem, moa- gem/trituração e peneiração, conforme descrito acima. A suplementa- ção com os compostos pode ser realizada antes, durante e/ou após a compactação.

[00107] Em uma modalidade, a produção de uma composição he- mostática agregada compreende as etapas de misturar 83,5% a 90,0% em peso das fibras à base de celulose; um ácido ômega amino carbo- xílico em uma faixa de concentração de 2,5% a 5,0%, em peso de toda a composição; sal de protamina a uma concentração de 2,5% a 5,0%, em peso de toda a composição; e um cátion divalente, sendo que a concentração de cátion é 1,3% a 1,8%, em peso; e submeter a mistura à compactação; e, opcionalmente, secar, moer e peneirar a mistura; obtendo-se assim os ditos agregados.

[00108] Um ou mais peptídeos que têm cargas positivas podem ser adicionalmente adicionados às composições, de acordo com a invenção. Exemplos não limitadores desses peptídeos são: abaecina, api- daecinas, profenina, indoicidina, melitina, magaininas, LL-37, lactofer- ricina bovina, lactoferricina humana, cecropina A1, buforina II, tanatina, polifemusina 1, magainina 2, β-defensina humana 2, defensina de rim de coelho. Penetratina/antenapedia, TAT, SynB1, SynB3, PTD-4, PTD- 5,FHV Coat-(35-49), BMV Gag-(7-25), HTLV-II Rex-(4-16), D-Tat, R9- Tat Transportana, MAP, SBP, FBP, MPG, MPG(ΔNLS), Pep-1, Pep-2.

[00109] Um ou mais polissacarídeos com cargas positivas podem ser adicionalmente adicionados às composições, de acordo com a invenção. Alguns exemplos não limitadores de polissacarídeos com cargas positivas são o quitosano e a goma guar catiônica.

[00110] Cátions positivos podem ser adicionados, por exemplo, os cátions de FeCl3.

[00111] Em uma modalidade, o processo de fabricação começa com material de ORC, como o hemostático absorvível SURGICEL® Original, o qual é cortado em seções largas de 2,54 a 5,08 cm (1 a 2 polegadas) antes que o material seja alimentado em uma lâmina que corta o tecido em pedaços menores. Os pedaços de tecido de ORC cortados são em seguida triturados em fibras finas de ORC por dois processos de moagem consecutivos (moagem por martelos e moagem por classificador a ar). Em uma modalidade alternativa, os pedaços de tecido de ORC cortados são convertidos diretamente em fibras finas em um moinho de bolas.

[00112] As fibras finas de ORC resultantes são em seguida umidifi- cadas até entre cerca de 11% em peso a cerca de 16% em peso, conforme medido pelo analisador de umidade de halogênio Ohaus e, em seguida, compactadas em agregados maiores. Antes da compactação, seja antes ou depois da moagem, as fibras são suplementadas com os compostos da invenção sob a forma de partículas e em uma concentração adequada.

[00113] O termo "partículas"se refere a uma substância que é composta de materiais sólidos dispersos.

[00114] A etapa de umidificação poderia ser omitida se uma quantidade suficiente de composto higroscópico, como cloreto de cálcio, for misturada com as fibras de ORC. A quantidade suficiente de composto higroscópico é, por exemplo, uma quantidade que permite a umidifica- ção em um nível entre cerca de 11% e cerca de 16%, conforme medido pelo analisador de umidade de halogênio Ohaus.

[00115] O termo "material higroscópico"se refere a uma substância que é capaz de atrair e reter moléculas de água do ambiente circundante, geralmente em contexto de temperatura normal ou ambiente. Exemplos não limitadores incluem cloreto de zinco, cloreto de cálcio, hidróxido de potássio e hidróxido de sódio.

[00116] O analisador de umidade funciona em um princípio termo- gravimétrico, sendo que o analisador de umidade determina o peso da amostra; a amostra é, em seguida, rapidamente aquecida pela unidade de secador de halogênio integral e por vaporizadores de umidade. Durante a operação de secagem, o instrumento determina continuamente o peso da amostra e exibe o resultado. Após a conclusão da secagem, um resultado tabulado é mostrado como teor de umidade percentual, porcentagem de sólidos, peso ou porcentagem de recuperação, em particular, o analisador testa entre 0,5 a 1 grama de agregados com uma rampa de 4 minutos, temperatura máxima de 90°C e as seguintes configurações: Teste ID - LOD; Perfil - padrão; Temperatura de secagem - 90°C; Desativar - A60; Resultado - % de umidade; Personalizada - desligado; Peso alvo - nenhum.

[00117] Tipicamente, a peneiração é realizada para separar agre- gados/grânulos alvo entre o tamanho de 75 μm e 420 μm conforme determinado pela tela de peneiração.

[00118] Em uma modalidade, o excesso de umidade introduzido para propósitos de compactação é removido por um processo de de- sumidificação ou secagem. Após as etapas de compactação, moagem e peneiração, a composição é dosada em dispositivos aplicadores. Então, a composição no dispositivo é submetida à embalagem e à esterilização.

[00119] Em uma modalidade, a umidade de armazenamento antes da dosagem em um aplicador é menor que cerca de 2% na conclusão da secagem para obter, de preferência, menos que 6% de teor de umidade em ambiente controlado (0,3 a 0,6%/h por 500 gramas de ganho de umidade da amostra, dependendo da umidade relativa, co- mumente 25 a 55% de umidade relativa) para dosagem em aplicado- res.

[00120] Um processo para a fabricação dos agregados hemostáti- cos compreende, por exemplo, as etapas de:

[00121] (a) fornecer um material à base de celulose (fonte de celulose) e

[00122] opcionalmente, rasgar e cortar o material à base de celulose;

[00123] Opcionalmente, (b) reduzir o tamanho (por exemplo, por moagem em um classificador a ar) do material da etapa a) para se obter fibras longas;

[00124] (c) reduzir o tamanho (por exemplo, por moagem em umclassificador a ar) do material da etapa a) ou b) para se obter fibras finas;

[00125] opcionalmente, (d) misturar fibras longas e finas para se obter fibras misturadas;

[00126] (e) suplementar as fibras da etapa c) ou d) com os compostos para se obter as fibras suplementadas com o composto;

[00127] opcionalmente, (f) umidificar as fibras suplementadas com o composto obtidas na etapa e) para se obter as fibras umidificadas suplementadas com o composto;

[00128] (g) compactar fibras suplementadas com o composto daetapa f) (por exemplo, por moldagem ou rolagem) incluindo desumidifi- cação/secagem e, opcionalmente, reduzir o tamanho;

[00129] (h) peneirar;

[00130] opcionalmente, (i) dosar em recipientes de armazenamentoou em dispositivos de aplicação, embalagem primária e embalagem secundária; e

[00131] opcionalmente, (j) esterilizar.

[00132] Em uma modalidade, a etapa de umidificação pode ser omitida se uma quantidade suficiente de um composto higroscópico, como cloreto de cálcio, for adicionada às fibras.

[00133] Os processos de rasgar e cortar podem, de preferência, ser feitos para rasgar e cortar o produto têxtil em pedaços de tamanho adequados que têm entre aproximadamente 2,54 cm por 7,62 cm ou 5,08 cm por 7,62 cm (1 polegada por 3 polegadas ou 2 polegadas por 3 polegadas), embora pedaços menores também possam ser usados. As principais operações realizadas para fender e cortar são desenrolar um rolo de tecido, cortar o tecido em tiras, cortar as tiras para dimensionar e liberar os pedaços cortados na primeira etapa de moagem. Inúmeras máquinas de fenda e corte são conhecidas e comercialmentedisponíveis, como AZCO Modelo FTW-1000, disponível junto à AZCO.

[00134] A suplementação com os componentes pode ser executada antes ou depois de rasgar e cortar o tecido.

[00135] Em uma modalidade, na primeira etapa de moagem, pedaços processados de produtos têxteis de celulose são convertidos a partir de uma fibra grossa produzida na etapa de rasgar e cortar a um material que tem um valor de D90 menor que 452 μm e um valor de D50 menor que 218 μm, enquanto tem impacto mínimo sobre o índice de cor e o teor solúvel em água do material. Inúmeras máquinas para moagem estão comercialmente disponíveis, como as máquinas de moagem de tipo DASO6 e WJ-RS-D6A fabricadas pela Fitzpatrick, que são máquinas de moagem tipo moinho de martelo, equipadas com uma tela redonda de 497 μm e um conjunto de lâminas que cortam o tecido até que ele passe através da tela para produzir fibra de celulose grossa. Em uma passagem de exemplos de processo, a velocidade de moagem pode ser de cerca de 7.000 RPM; temperatura de processamento menor que 80°C; número de lâminas como 8 (2 hélices cada); tipo de lâmina como uma faca de 225, lâminas do tipo impactado; orientação da lâmina definida como "impacto".

[00136] Nesse estágio, o tamanho da fibra mais grossa produzida na primeira etapa de moagem pode ser reduzida ainda mais para um valor de D90 menor que 177 μm e um valor de D50 menor que 95 μm, enquanto mantém impacto mínimo sobre o índice de cor e o teor solúvel em água do material. Inúmeras máquinas estão disponíveis para a segunda etapa de moagem, como um classificador a ar/moedor F10 Quadro Fine disponível junto à Quadro.

[00137] A fibra mais grossa da primeira etapa de moagem pode ser alimentada a uma taxa controlada no segundo moinho e passada através de duas câmaras de moagem que são separadas por uma tela de moagem. O material pode ser puxado através da câmara de moagem por um soprador de ar. A fibra mais grossa pode ser processada atra- vés do equipamento classificador a ar três vezes para se obter um tamanho de fibra fina. Ao final da segunda etapa de moagem, as fibras finas podem ser coletadas.

[00138] Em uma passagem de processo exemplificadora, um classificador a ar Quadro F10 pode ser usado na segunda etapa de moagem com uma velocidade de moagem de 8400 rpm, velocidade do so- prador de 1800 rpm e 3 passagens. A fibra fina de ORC também pode ser produzida em uma etapa por moagem com bolas em vez de duas etapas de moagem conforme descrito acima. Em uma modalidade alternativa de moagem com bolas, 50 g de tecido de ORC, peças de cerca de 5,08 cm por 5,08 cm (2 polegadas x 2 polegadas), são moídos por moinho de bolas com 12 bolas de zircônia de alta densidade (dióxido de zircônio ZrO2, 20 mm de diâmetro; Glen Mills Inc., Clifton, N.J., EUA) colocando-se as bolas e as amostras em um recipiente de trituração de 500 mL. O recipiente é preso aos suportes de fixação e, então, contrabalançado no moinho de bolas planetário PM100; Retsch, Inc., Newtown, Pa., USA). A moagem é, em seguida, realizada bidirecionalmente a 450 rpm durante 20 minutos.

[00139] Seguindo o processo de moagem, as fibras finas à base de celulose resultantes podem ser umidificadas para o teor de umidade na faixa de cerca de 11% a cerca de 18%, ou entre cerca de 11% e cerca de 16%, ou cerca de 12 a 16% para o processamento subsequente, incluindo, por exemplo, um processo de compactação por cilindro.Câmaras de umidade adequadas para a etapa de umidificação estão disponíveis comercialmente, por exemplo, o Modelo CEO-916-4- B-WF4-QS, fornecido pela Thermal Product Solutions. A umidificação do ar da câmara é obtida por injeção de vapor d'água. A temperatura de estado de equilíbrio típico de 25°C pode ser utilizada, enquanto o nível de umidade pode ser ciclizado entre 75% e 85%, com um alvo de preferência de 85% de umidade do ar. O tempo de umidificação ou o tempo de residência do material dentro da câmara de umidade podem situar-se na faixa de várias horas a vários dias, dependendo da quantidade do material e da recirculação de ar. Em um ciclo típico, o material terá 12 a 13 horas de tempo de residência para cerca de 3.000 gramas de fibras finas à base de celulose dispostas em várias bandejas e expostas a 85% de umidade relativa e um alvo de 12% de teor de umidade do pó após a umidificação.

[00140] O compactador de cilindro compacta a alimentação das fibras de ORC finas umidificadas, que são, em seguida, submetidas à pré-ruptura, desumidificação, moagem final e peneiragem em um pe- neirador para se obter os tamanhos de agregados hemostáticos desejados.

[00141] Tipicamente, a suplementação com compostos, de acordo com a invenção, é realizada antes da compactação e/ou antes da produção de agregados.

[00142] O equipamento de compactação é conhecido e disponível para comercialização. As fibras poderiam ser compactadas por máquinas de moldagem ou qualquer outra técnica de compactação conhecida na técnica. Unidades de compactação exemplificadoras são o Fitzpatrick Chilsonator IRR220-L1A com peneira manual Retsch durante a noite de 220 a tingido, com Retsch AS200 Screener e Fitzpatrick Chilsonator CCS220/M3B & RV-M5A com unidade de peneira Scree- ner Sweco Vibro-energy integrada a M5A. O processamento de compactação pode ser realizado com o uso de dois subsistemas separados que são ligados por um sistema elétrico comum. Por exemplo, um primeiro subsistema (compactador por rolo: unidade principal) pode ser o compactador por rolo Fitzpatrick Chilsonator CCS220 e moinho M3B para pré-ruptura do material compactado, enquanto o segundo subsistema (compactador por rolo: unidade de moagem secundária) é o moinho M5A para a moagem final com um Sweco ou peneira Retch para a separação para obter os agregados de tamanho desejados.

[00143] As fibras à base de celulose finas umidificadas podem ser alimentadas na tremonha da unidade de compactador de cilindro, primeiro passadas através de uma unidade de moagem principal e, em seguida, prosseguem através de uma segunda unidade de moagem. Um recipiente que captura o material à base de celulose pré-rompido resultante da unidade de moagem principal pode ser fornecido. Os pedaços pré-rompidos de material à base de celulose podem, então, ser alimentados na unidade de moagem secundária, que realiza a moagem e o peneiramento final usando uma tela de malha. O material celulósico moído resultante é, de preferência, separado em sólidos "fi-nos" (<75 μm), "alvos"(75 a 420 μm), e "superiores"(>420 μm) com o uso de uma tela de malha, como a peneira Sweco ou Retch descritas acima.

[00144] A umidade é removida dos agregados hemostáticos que são obtidos após a compactação e peneiramento em uma etapa de desumidificação ou secagem. A etapa de desumidificação ou secagem, de preferência, não afeta significativamente quaisquer outros atributos de qualidade do produto, como cor, densidade aparente e tamanho. Tipicamente, as fibras podem ser secas como uma batelada com o uso de um leito fluidizado convencional. Os agregados secos resultantes podem ser embalados e armazenados em bolsas de folha metálica seladas. O equipamento de desumidificação é conhecido e disponível para comercialização. Um leito de ar fluidizado de bancada exemplificador está disponível comercialmente junto à Retsch (TG- 200) com capacidade de 6L. Alternativamente, um modelo de leito flui- dizado n° 0002, disponível junto à Fluid Air (Aurora, IL) também pode ser usado.

[00145] Em aspectos adicionais da presente invenção, as composições hemostáticas sob a forma de pó e/ou agregados podem ser com- binados com vários aditivos para melhorar ainda mais as propriedades hemostáticas, propriedades de cicatrização de ferimentos e propriedades de manuseio incluindo: aditivos hemostáticos, como gelatina, co- lágeno, celulose, quitosano, polissacarídeos, amido, CMC; agentes hemostáticos à base de substâncias biológicas, por exemplo, trombi- na, fibrinogênio e fibrina, agentes hemostáticos baseados em substânciasbiológicas adicionais incluindo, mas não se limitando a, enzimas, proteínas e peptídeos pró-coagulantes, sendo que cada um desses agentes pode ser de ocorrência natural, recombinante ou sintético, e pode ser adicionalmente selecionado do grupo consistindo em fibro- nectina, heparinase, fator X/Xa, fator VII/VIIa, fator IX/IXa, fator XI/XIa, fator XII/XIIa, fator tecidual, batroxobina, ancrode, ecarina, fator de von Willebrand, albumina, glicoproteínas da superfície da plaqueta, vaso- pressina e análogos da vasopressina, epinefrina, selectina, veneno pró-coagulante, inibidor de ativador do plasminogênio, agentes ativa- dores de plaqueta, peptídeos sintéticos com atividade hemostática; agentes anti-infecciosos, como gluconato de clorexidina (CHG), triclo- san, prata e agentes bactericidas/microbicidas similares que são conhecidos na técnica; aditivos que aumentam a pegajosidade do he- mostático; diluentes, soluções salinas, aditivos similares conhecidos na técnica; derivados dos acima mencionados e qualquer combinação dos mesmos.

[00146] Em uma modalidade, a composição hemostática em pó e/ou agregados, de acordo com a presente invenção, é produzida a partir de materiais de fibra à base de celulose oxidada como ORC ou de materiais à base de celulose oxidada pré-triturada.

[00147] Em uma modalidade da invenção, a composição em pó tem a propriedade de formar um gel ao entrar em contato com o sangue. O gel formado tem uma resistência igual a ou maior que 10 vezes a de um gel formado mediante o contato de uma composição comparativa com sangue.

[00148] Em uma modalidade, uma composição em pó comparativa consiste em celulose regenerada oxidada (ORC) sozinha.

[00149] O termo "gel" se refere a um material viscoso e/ou similar a sólido que pode ter propriedades na faixa de macio e fraco a duro e resistente. O gel pode ser um hidrogel.

[00150] Tipicamente, um hidrogel é uma rede de cadeias poliméri- cas que são hidrofílicas. Os hidrogéis podem conter mais de 90% de água e incluir redes poliméricas.

[00151] O gel pode ser um coágulo que é uma massa espessa de líquido coagulado, especialmente sangue.

[00152] O termo "entrar em contato/contato"é utilizado em seu sentido mais amplo e se refere, por exemplo, a qualquer tipo de ação de combinação que coloca a composição hemostática em proximidade suficiente com o sangue, de modo que um coágulo ou gel seja formado.

[00153] O termo "sangue" inclui frações sanguíneas como o plasma.

[00154] Em uma modalidade, a composição em pó comparativa é composta de fibras de ORC que têm um valor de D90 menor que 350 μm e um valor de D50 menor que 167 μm.

[00155] Em uma modalidade da invenção, a composição em agregados e/ou em pó, de acordo com a invenção, tem a propriedade de formar um gel ao entrar em contato com o sangue. O gel formado tem uma capacidade hemostática igual a ou maior que 1,5 vezes a de um gel formado mediante o contato de uma composição de agregados comparativa com sangue.

[00156] Em uma modalidade, a composição de agregados comparativaé composta, por exemplo, por fibras de ORC que têm um valor de D90 menor que 350 μm e um valor de D50 menor que 167 μm.

[00157] Em uma modalidade, os agregados comparativos são compostos, por exemplo, de fibras de ORC com um valor de D90 menor que 177 μm e um valor de D50 menor que 95 μm.

[00158] O termo "resistência de um gel" se refere aos resultados do teste de Bloom modificado (conforme exemplificado abaixo) que demonstram a força necessária para que a haste metálica passe através do gel na extensão de 7 mm enquanto se move a uma velocidade de 5 mm/min. Essa força reflete o nível de resistência do gel (quanto maior a força, maior a resistência do gel) e, por sua vez, indica qual é o nível de força coesiva de um gel. Quanto maior a força necessária para que a haste prossiga com seu movimento constante, maior a resistência do gel.

[00159] Em um outro aspecto, a invenção apresenta um método para formação de um gel que compreende a etapa de: colocar uma composição hemostática, de acordo com a invenção, em contato com sangue, formando assim um gel.

[00160] Em uma modalidade, o método forma um gel que tem uma resistência igual ou maior que 10 vezes ou maior que 12 vezes maior que aquela de um gel formado mediante o contato de uma composição comparativa com sangue, e/ou forma um gel que tem uma capacidade hemostática igual a ou maior que 1,5 vezes maior que aquela de um gel formado mediante o contato de uma composição comparativa com sangue.

[00161] Em uma modalidade, a composição comparativa compreende fibras à base de celulose e não tem ácido ômega amino carboxí- lico em uma faixa de concentração de 2,5% a 5,0% em peso de toda a composição; não tem o sal de protamina em uma faixa de concentração de 2,5% a 5,0%, em peso, de toda a composição; e não tem um cátion divalente, sendo que a concentração de cátion é 1,36 a 1,77%, em peso, de toda a composição.

[00162] Em um outro aspecto, a invenção fornece um kit que compreende um recipiente que inclui uma composição hemostática da invenção e, opcionalmente, um aplicador, um veículo e/ou instruções para uso. O termo "veículo"se refere a uma matriz física que compreende e/ou retém a composição hemostática. Exemplos de veículos incluem, mas não se limitam a, blocos para uso interno e/ou externo, como blocos à base de celulose, blocos à base de colágeno; implantes como o implantes ortodôntico e ortopédico; selantes fluxíveis e/ou he- mostáticos como SURGIFOAM®, EVICEL®.

[00163] Em algumas modalidades, o recipiente é um aplicador.

[00164] Em uma modalidade, a composição em pó ou agregado com CaCl2 5,0%, PS 2,5% e εACA 2,5% é equivalente a: 40 mg/cm2 de CaCl2, 20 mg/cm2 de PS, 20 mg/cm2 de εACA.

[00165] Por exemplo, se uma quantidade total de 100 mg da composição final for aplicada sobre uma punção circular tendo um diâmetro de 0,4 cm. Os 100 mg da composição foram aplicados sobre a área de superfície de punção que é π* (0,2 cm)2 = 0,126 cm2. Significando que 793,65 mg/cm2 (resultantes do cálculo: 100 mg/0,126 cm2) da composição final foram utilizados.

[00166] Se CaCl2 for usado a uma concentração de 5% da composição final, portanto, 793,65 * 0,05 é igual a cerca de 40 mg/cm2.

[00167] Se PS for usado a uma concentração de 2,5 % da composição final, portanto, 793,65 * 0,025 é igual a cerca de 20 mg/cm2.

[00168] Se εACA for usado a uma concentração de 2,5 % da composição final, portanto, 793,65 * 0,025 é igual a cerca de 20 mg/cm2.

[00169] A composição hemostática pode ter uma ou mais das vantagens apresentadas a seguir em relação a vários produtos conhecidos:1 - pode interromper sangramentos, por exemplo, na linhas de sutura de grandes vasos sanguíneos e, portanto, pode reduzir sig- nificativamente e interromper o sangramento nas linhas de sutura dos vasos sanguíneos ao contrário de vários produtos conhecidos que têm eficácia limitada na obtenção da hemostasia em vasos sanguíneos;2 - pode alcançar a hemostasia sem a necessidade de aplicação de pressão. Vários produtos conhecidos requerem a aplicação de pressão para alcançar a hemostasia (por exemplo, comprimir manualmente com uma gaze);3 - é ativada no sangue. Quando ativados pela umidade, as fibras e/ou agregados hemostáticos ganham estrutura (por exemplo, sob a forma de um coágulo/gel) e podem alcançar a hemostasia. Vários produtos conhecidos têm integridade estrutural pré-formada;4 - pode se deformar no sangue, não flutua facilmente e consegue alcançar a hemostasia. Vários produtos conhecidos têm eficácia limitada em um ambiente molhado;5 - pode aderir ao sítio de sangramento, ainda que ainda de forma reversível, isto é, adere ao sítio de sangramento e resiste à lavagem, mas pode ser raspada para ser removida e dar acesso se correção cirúrgica for necessária. Vários produtos conhecidos têm aderência limitada em um campo molhado ou não podem ser facilmente removidos uma vez aplicados.

[00170] As composições hemostáticas podem ser utilizadas para várias aplicações tópicas cirúrgicas e de cicatrização de ferimentos, como barreiras antiadesão, hemostáticos, selantes de tecido, etc. As composições hemostáticas da presente invenção podem atuar como um hemostático, como uma composição seca ou como uma composição em uma forma de pasta com propriedades hemostáticas superiores e boa conformabilidade ao tecido.

[00171] As composição de fibras e/ou agregados hemostáticos podem ser utilizadas para várias aplicações tópicas cirúrgicas e/ou de cicatrização de ferimentos, como para tratamento bactericida, hemos- tase, antiadesão, selante e/ou para minimizar ou evitar vazamentos, por exemplo, vazamentos de sítios anastomóticos, como vazamentos criados durante o procedimento de revascularização miocárdica (CABG).

[00172] A composição pode ser utilizada para interromper o san- gramento em áreas de difícil acesso, por exemplo, durante a cirurgia laparoscópica, em sítios anastomóticos como CABG e/ou anastomose arteriovenosa, procedimentos onde a aplicação de pressão é indese- jada, como cirurgia espinhal ou neurocirurgia.

[00173] Os pacientes que sofrem cirurgia de revascularização mio- cárdica (CABG) podem ter vazamentos a partir dos sítios anastomóti- cos criados durante o procedimento. Muitos desses vazamentos são tratados durante a cirurgia com o uso de suturas adicionais ou vários hemostáticos. Interromper esses vazamentos durante a cirurgia e evitar que eles se desenvolvam durante o pós-operatório, ajudará os cirurgiões a estarem mais confiantes de que seus pacientes não terão vazamentos anastomóticos pós-operatórios. O sangramento após procedimentos de CABG que requerem transfusão ou re-operação está associado a um aumento significativo na morbidade e na mortalidade. Em até 20% dos casos, um sítio específico de sangramento pode ser identificado, durante a re-operação. As fontes típicas de sangramento cirúrgico incluem sítios de canulação, o sítio anastomótico proximal e distal e as ramificações dos enxertos das ITAs (artéria torácica interna) e veias. De acordo com a literatura, 2 a 3% dos pacientes com CABG necessitarão de re-exploração devido à sangramento, e até 20% terão sangramento pós-operatório excessivo exigindo transfusão sanguínea.

[00174] Os conteúdos de todas as publicações citadas estão aqui incorporados a título de referência, em sua totalidade. ExemplosMateriais e métodos.Tabela 1A: Fibras de celulose regenerada oxidada (ORC).

* Consulte abaixo a elaboração da preparação.Tabela 1B: Compostos usados para suplementar as fibras de ORC.

Tabela 2: % (em peso) de concentração equivalente de cátions CaCl2 e FeCh.

Preparação das fibras d e celulose regenerada oxidada (ORC):

[00175] O processo de fabricação das fibras de ORC começou com o material de ORC hemostático absorvível SURGICEL® Original. O material de ORC foi cortado em seções de 2,54 a 5,08 cm (1 a 2 polegadas) de largura antes do material ser alimentado em uma lâmina que corta o produto têxtil em pedaços menores. Os pedaços de produto têxtil de ORC cortados foram em seguida triturados em fibras finas de ORC por dois processos de moagem consecutivos (moagem por martelos e moagem por classificador a ar). As fibras de diferentes etapas de moagem foram tomadas para uso futuro, de modo a incorporar diferentes tamanhos de fibra nos agregados finais.

[00176] Mais especificamente, o processo para fabricação das fibras compreendeu as etapas de: rasgar e cortar o produto têxtil SUR- GICEL Original®; moer o material resultante com o uso de moagem por martelos; etapa(s) de moagem em um classificador a ar para obter fibras longas e finas; e, opcionalmente, misturar fibras dos diferentes tamanhos. Diferentes tamanhos de fibra são fibras com diferentes distribuições de tamanhos.

[00177] Rasgamento e corte foram executados para rasgar e cortar o produto têxtil em peças de tamanho adequado que são de aproxi- madamente 2,54 cm por 7,62 cm (1 polegada por 3 polegadas). As principais operações executadas para rasgar e cortar foram desenrolar um rolo de tecido, cortar o tecido em tiras, cortar as tiras para dimensionar e liberar os pedaços cortados na primeira etapa de moagem.

[00178] Em uma primeira etapa de moagem, pedaços processados de material de tecido à base de celulose foram convertidos a partir de uma fibra grossa intermediária produzida na etapa de rasgar e cortar a um material que tem um valor de D90 menor que 452 μm e um valor de D50 menor que 218 μm, enquanto tem impacto mínimo sobre o índice de cor e o teor solúvel em água do material. A máquina usada para moer nesta etapa foi um moinho de martelos tipo modelo WJ-RS- D6A produzido pela Fitzpatrick. O moinho de martelos foi equipado com uma tela redonda de 497 μm e um conjunto de lâminas que corta o tecido até que passe através da tela para produzir fibras intermediárias à base de celulose grossas. Os parâmetros da moagem foram: velocidade de moagem de cerca de 7.000 rpm; temperatura de processamento de menos de 80°C; número de lâminas de 8 (2 hélices cada); tipo de lâmina como uma faca 225, lâminas do tipo impacto; orientação da lâmina configurada como "impacto".

[00179] As fibras grossas intermediárias da primeira etapa de moagem foram alimentadas a uma taxa controlada no segundo moinho. As fibras grossas intermediárias foram processadas através do equipamento classificador a ar três vezes para se obter o tamanho desejado. Além disso, em certos experimentos, as fibras retiradas da primeira passagem através do classificador a ar foram extraídas para incorporar diferentes tamanhos de fibra nos agregados finais.

[00180] Nessa(s) etapa(s), um Classificador a Ar Quadro F10 foi usado com uma velocidade de moagem de 8400 rpm, velocidade do soprador de 1.800 rpm e 3 passagens. Após uma passagem, as fibras de ORC longas resultantes tinham um valor de D90 menor que 350 μm e um valor de D50 menor que 167 μm. Após 3 passagens, as fibras de ORC finas resultantes tinham um valor de D90 menor que 177 μm e um valor de D50 menor que 95 μm.

Preparação da composição em pó.

[00181] Todos os pós foram pesados com o uso de uma balança analítica em condições controladas por umidade. A umidade relativa não excedeu 20% durante todo o processo de preparação do pó. Todos os pós eram compostos por fibras de ORC com D90 menor que 350 μm e de D50 menor que 167 μm, preparados conforme descrito acima, e suplementados com diferentes composto(s) positivamente carregado(s). Um composto positivamente carregado é um material contendo um grupo/elemento positivamente carregado nele. Nos exemplos de 1 a 3, as fibras de ORC do pó ou da composição de agregados incluíam fibras de ORC finas; Por exemplo, se o composto era FeCl3 3% (p/p a partir de todo o peso da composição), as fibras finas de ORC constituiriam 97% p/p. (consulte a distribuição de tamanho na Tabela 1A); no exemplo 4, as fibras de ORC dos agregados suplementados eram uma combinação de 10,0% (p/p do peso da mistura final) de fibras de ORC longas (consulte a distribuição de tamanho na tabela 1A) e 77,5 a 80,0% (p/p do peso da mistura final) de fibras de ORC finas. A suplementação de composto(s) para fibras de ORC foi de até 10,0% (p/p) em testes in vitro e até 12,5% (p/p) no teste in vivo.

[00182] Todos os compostos, elaborados na Tabela 1B, foram fornecidos sob a forma de pó.

[00183] Cada combinação de mistura de composto(s) de fibras foi transferida para um pilão e almofariz e misturada completamente até que as partículas em pó estivessem uniformemente/homogeneamente distribuídas dentro da composição. Para minimizar a adsorção de umidade, as composições em pó foram armazenadas em frascos e veda- das com um filme de parafina plástica (PARAFILM®).

[00184] As composições nos Exemplos 1 a 2 estavam sob a forma de pó. No Exemplo 3, a composição não compactada estava sob a forma de pó enquanto as composições compactadas estavam sob a forma agregada. No Exemplo 4, todas as composições estavam sob a forma agregada (consulte a elaboração na preparação de agregado abaixo).

Preparação do agregado.

[00185] Para obter agregados/grânulos que contêm uma maior razão em massa por volume, duas etapas foram realizadas:I- Compactação do pó (capsulação); eII- Secagem, moagem/trituração e peneiramento das cápsulas.Consulte a elaboração das etapas I e II abaixo.

Compactação do Pó.

[00186] A compactação foi realizada com o uso de uma prensa hidráulica manual (Specac Atlas 13608 quilogramas (15 toneladas) modelo GS15011) e uma matriz de pélete evacuável adequada, a matriz de pélete tem um diâmetro de 10 mm (Specac) 03100). Cerca de 300 mg da composição em pó (preparada conforme descrito acima) foram carregados na matriz de pélete até uma altura de aproximadamente 1,5 cm a 2,0 cm. Na etapa seguinte, uma haste metálica (que faz parte do equipamento da prensa hidráulica manual) foi ajustada em cima do pó e usada para alcançar uma pressão de 3629 quilogramas (cerca de 1179 toneladas por cm2) (4 toneladas (cerca de 1,3 toneladas por cm2)) pela prensa hidráulica manual. Seguinte a essa etapa, uma cápsula (pó compactado) em um diâmetro de 10 mm e uma altura de aproximadamente 0,3 cm a 0,5 cm foi formada. A cápsula foi liberada da matriz do pélete e rompida em partes menores com um pilão e almofariz para aumentar a área superficial para a próxima etapa de se- cagem.

Secagem, Moagem/Trituração e peneiramento das cápsulas.

[00187] As metades da cápsula foram secas em um forno a vácuo (modelo de forno a vácuo Cole-Parmer 05017-05) a 37°C durante aproximadamente 16 horas para remover qualquer excesso de umidade (e atingir uma umidade menor que 5% em peso). As partes da cápsula secas foram trituradas/moídas a 20.000 rpm durante 30 segundos com o uso de controle de moinho de tubo IKA® Works, Inc 9737790. Na etapa seguinte, os agregados foram vigorosamente peneirados com o uso de um agitador de peneira (modelo LS 200 em nível de intensidade 2) MRC (fabricante da peneira) durante 1 minuto através de um conjunto de 2 peneiras; uma com um tamanho de poro de 420 μm e uma outra com um tamanho de poro de 75 μm. Os agregados restantes entre as duas peneiras foram coletados e armazenados à temperatura ambiente (20°C a 27°C) em um frasco fechado firmemente, vedado com filme plástico de parafina até o uso. Ao final deste estágio, todos os componentes presentes em cada composição final de grânu- lo/agregado foram homogeneamente distribuídos no interior do mesmo.

Preparação de sangue.

[00188] O sangue usado nos Exemplos 1 a 2 foi coletado a partir de porcinos exterminados pela organização de pesquisa contratual Lahav (C.R.O.) e entregue em recipientes resfriados (4°C). Após a coleta de sangue, 5000 UI de heparina foram adicionados por litro de sangue [heparina sódica Fresenius 5000 UI/ 1 mL de solução para injeção; fabricante: BODENE (PTY) LTD comercializado como Intramed; Cat. Número 9207910LAB].

[00189] Para evitar a coagulação, após a chegada, heparina adicional foi adicionada (5000 UI por 1 litro de sangue). O sangue heparini- zado foi misturado suavemente invertendo a garrafa várias vezes. Na etapa seguinte, para remover os resíduos de coágulos, o sangue he- parinizado foi filtrado através de um filtro de seringa de polipropileno de 20 μm (SVL25D20HQSA25 feito pela Entegris) e coletado em um recipiente de polipropileno (para evitar a coagulação sanguínea induzida por vidro). O sangue heparinizado filtrado foi armazenado a 4°C até o uso.

Teste de bloom.

[00190] O Bloom é um teste usado para medir a força coesiva de um gel ou gelatina. A força coesiva representa a ligação entre as moléculas de um material/composição testados. Geralmente, o teste de Bloom refere-se à determinação da força (em gramas) que tem de ser aplicada em uma superfície livre de 6,67% de gel de gelatina (preparado dissolvendo 7,5 g de gelatina em 105 g de água) por meio de um pistão cilíndrico de 12,7 mm) para produzir uma depressão de 4 mm. Para o teste, o gel é tipicamente formado em um material de vidro com as seguintes dimensões: uma capacidade de 150 ml, um diâmetro interno de 59 mm e uma altura de 85 mm. A velocidade do pistão descendenteé ajustada para 30 mm/minuto (consulte o teste de Bloom descrito em US1540979).

[00191] Nos Exemplos abaixo, um teste de Bloom modificado foi executado para testar a força coesiva de coágulos formados quando diferentes composições em pó testadas foram misturadas com sangue. Este parâmetro foi avaliado como uma indicação da eficácia he- mostática potencial de cada composição testada. Em geral, uma força de resistência mais alta (um alto valor no teste de Bloom) se correlaciona com uma força coesiva mais alta e sugere que a composição tem uma alta eficácia hemostática; baixa força de resistência se correlaciona com baixa força coesiva e sugere que a composição tem baixa eficácia hemostática. A força coesiva induzida por cada composição em pó testada foi avaliada em uma base comparativa com as fibras de ORC não suplementadas. Os resultados são apresentados como aumento de vezes na força de resistência em relação às fibras de ORC não suplementadas.

[00192] O teste de Bloom modificado foi realizado da seguinte forma:1) 300 mg de cada composição em pó testada foram pesados em um tubo de 7 ml (diâmetro interno: 15 mm, altura: 50 mm).2) 2,5 ml de sangue (preparado conforme descrito acima sob "Preparação do sangue") foram adicionados a cada composição em pó.3) O tubo foi submetido a vórtice vigorosamente a 3200 rpm até que nenhum pó seco fossevisualmente aparente e a mistura de composição em pó-sangue foi incubada durante 3 minutos para permitir a formação de coágulo.4) Para medir a força coesiva, o frasco foi colocado em um instrumento ‘Lloyd LF plus’ e uma hastemetálica [1,27 cm (0,5 polegada)] foi inserida no frasco a uma velocidade pré-ajustada constante: 5 mm/minuto. A força de resistência do coágulo ao movimento da haste metálica no ponto de extensão de 7 mm no coágulo foi medida em unidades de megapascal (MPa). O teste foi realizado à temperatura ambiente.

Modelo Pré-Clínico de Sutura.

[00193] Um modelo de desvio pulsátil ex vivo cardiopulmonar (CPB) foi usado para simular condições fisiológicas. O modelo é descrito em:Sergeant, P., Kocharian, R., Patel, B., Pfefferkorn, M., & Matonick, J. (2016). Needle-to-suture ratio, as well as suture material, impacts needle-hole bleeding in vascular anastomoses. Interactive CardioVascular and Thoracic Surgery, 22(6), 813-816.doi:10.1093/icvts/ivw042.

[00194] Resumidamente, o modelo de desvio cardiopulmonar pulsá- til ex vivo usou uma série de bombas e câmaras para criar, controlar e manter a pressão arterial por todo o sistema. O modelo consiste em um reservatório para filtrar sangue que entra e retorna de uma artéria carótida porcina, um sistema de captura de dados integrado por computador, oxigenador e trocador de calor. Os ajustes da impedância do fluxo e do particionamento de volume estão presentes para permitir o ajuste fino do fluxo de volume sanguíneo e do controle de pressão.

[00195] A perda de sangue da sutura colocada na artéria carótida porcina foi coletada e pesada para estabelecer uma taxa de vazamento. A taxa de vazamento foi calculada e registrada como o volume de sangue coletado ao longo de um período de tempo.

[00196] Para simular as condições fisiológicas, os seguintes parâmetros foram usados:Pressão de 120/80 mmHgTaxa de pulsação de 72/minuto Temperatura do sangue de 33-35°C

[00197] 10.000 UI de heparina foram adicionados a 1 L de sangueporcino doador e titulados com 10 mg/ml de sulfato de protamina para ajustar o tempo de coagulação ativado (ACT) em aproximadamente 369 segundos. O ACT foi medido com uma unidade manual portátil VetScan i-STAT (Abbott Point of Care) e um cartucho de Celite I-STAT ACT (Abbott Point of Care, Parte#:600-9006-10).

[00198] Uma artéria carótida porcina foi isolada do tecido circundante e montada no sistema. Garras de tubulação foram usadas para prender o tecido aos encaixes. O fluxo sanguíneo em ambos os lados da carótida foi restringido e a carótida foi suturada em um padrão contínuo simples com uma sutura PROLENE 6-0 (8806H) e uma agulha BV-1. A massa de perda de sangue durante 2 minutos foi medida como uma linha de base.

[00199] O pó/agregados foi aplicado sobre os sítios suturados e deixados curar durante 4 minutos após a aplicação completa. A restrição foi removida e a massa de perda de sangue ao longo de 2 minutos foi medida.

Modelo In Vivo de punção de biópsia de fígado.

[00200] Uma porcina adulta, com cerca de 60 kg, foi colocada em um jejum durante 24 horas antes do procedimento cirúrgico. O animal foi anestesiado com 1150 mg a 1400 mg de cetamina, 115 mg a 140 mg de xilazina, 7,5 mg de midazolam. A anestesia foi mantida com iso- flurano e o abdômen foi aberto para revelar o fígado. A pressão arterial média, a temperatura corporal e a frequência cardíaca foram monitoradas continuamente durante o procedimento cirúrgico. O experimento foi interrompido quando a pressão arterial média caiu abaixo de 60 mmHg.

[00201] Uma punção de biópsia com 4 mm de diâmetro x 2 mm de profundidade foi realizada no lobo do fígado e a amostra foi excisada com tesouras cirúrgicas. O sítio de punção foi deixado sangrar durante 30 segundos e a intensidade de sangramento foi visualmente avaliada em uma escala de 0 a 5; de modo que nenhuma hemorragia foi dada uma pontuação de 0 e hemorragia intensa foi dada uma pontuação de 5. Então, o sítio de punção foi limpo com gaze limpa para remover o excesso de sangue e 100 mg da composição agregada testada foram vertidos na cavidade da punção (por exemplo, uma composição agregada com 5,0% de CaCl2, 2,5% de PS e 2,5% de εACA é equivalente a: 40 mg/cm2 de CaCl2, 20 mg/cm2 de PS, 20 mg/cm2 de εACA).

[00202] Uma quantidade total de 100 mg da composição final é aplicada sobre uma punção circular tendo um diâmetro de 0,4 cm. Portanto, 100 mg da composição foram aplicados sobre a área de superfície de punção que é π* (0,2 cm)2 cerca de 0,126 cm2. O que significa que 793,65 mg/cm2 (resultante do cálculo: 100 mg/0,126 cm2) de composição final foram usados.

[00203] CaCl2 é usado em uma concentração de 5% da composição final, portanto, 793,65 * 0,05 é igual a cerca de 40 mg/cm2.

[00204] PS é usado a uma concentração de 2,5% da composição final, portanto, 793,65 * 0,025 é igual a cerca de 20 mg/cm2.

[00205] εACA é usado em uma concentração de 2,5% da composição final, portanto 793,65 * 0,025 é igual a cerca de 20 mg/cm2.

[00206] Pressão moderada foi aplicada manualmente sobre a composição usando gaze limpa durante 1 minuto. O sangramento foi monitorado ao longo de um período de 4 minutos, após o qual a intensidade de sangramento foi classificada novamente em uma escala de 0 a 5. Os resultados são apresentados como porcentagem da taxa de hemostasia completa obtida a partir de todas as replicatas.

Exemplo 1: O Efeito de diferentes compostos sobre a força coesiva de um coágulo formado com fibras de ORC finas.

[00207] O propósito deste Exemplo foi examinar a força coesiva induzida por fibras de ORC suplementadas com compostos diferentes. Para este propósito, um teste de Bloom modificado foi realizado conforme descrito acima.

[00208] As composições em pó testadas compreendiam fibras de ORC finas suplementadas com compostos diferentes, conforme mostrado na Figura 1. Os pós foram preparados conforme descrito na seção Materiais e Métodos sob "Preparação de pó". A Tabela 2 acima mostra a porcentagem (p/p com base no peso total da composição) de cátions em CaCl2 e FeCl3 usados em todos os experimentos abaixo. A Figura 1 é um gráfico de barras mostrando o aumento da força de re- sistência/força coesiva obtido para as diferentes composições em pó testadas em comparação com as fibras de ORC finas não suplementadas.

[00209] Os resultados do teste de Bloom modificado demonstram a força necessária pela haste metálica para passar através do gel, for- mado com a composição testada ao entrar em contato com sangue, na extensão de 7 mm enquanto se move a uma velocidade de 5 mm/min. Essa força reflete o nível de resistência do gel (quanto maior a força, maior a resistência do gel) e, por sua vez, indica qual é o nível de força coesiva de um gel. A força coesiva representa a resistência através da qual as moléculas de uma composição são ligadas umas às outras. Quanto mais força for necessária para que a haste prossiga com seu movimento constante, maior a resistência do gel.

[00210] Os resultados mostram que a suplementação de fibras de ORC finas com 3% de cloreto férrico (FeCl3) teve um efeito positivo significativo sobre a resistência dos coágulos formados.

[00211] Foi mostrado também que a suplementação de fibras de ORC com 3% ou 6% de cloreto de cálcio (CaCl2) aumentou a força de resistência de forma dose-dependente.

[00212] Ao comparar a eficácia da suplementação com 3% de CaCl2 com composições que foram suplementadas adicionalmente com 3% de PS; ou 3% de PS e 3% de εACA; ou 3% de PS e 3% de quitosano, os resultados indicaram que houve um aprimoramento na força de resistência das composições que foram suplementadas adicionalmente. A inclusão de 3% de lisina (Lys) na composição teve um efeito negativo e diminuiu a força de resistência obtida (comparar fibras de ORC finas suplementadas com 3% de CaCl2 e 3% de PS versus fibras de ORC finas suplementadas com 3% de CaCl2, 3% de PS e 3% de Lys na Figura 1).

[00213] Pode-se concluir que a adição de composto(s) positivamente carregado(s) específico(s) como cloreto de cálcio, sulfato de prota- mina (PS) e/ou quitosano a fibras de ORC melhora a força coesiva induzida pelas fibras, sugerindo que essas composições suplementadas possam ter um efeito hemostático benéfico in vivo.

[00214] Sem se ater ao mecanismo, a suplementação de fibras de ORC com compostos positivamente carregados específicos (por exemplo, cátions diferentes, por exemplo, cátions divalentes fornecidos por CaCl2, sal de protamina, por exemplo, sulfato de protamina ou polissacarídeos positivamente carregados, por exemplo, quitosano e um ácido ômega amino carboxílico, por exemplo, εACA) aumenta a força coesiva de um gel formado pela composição em pó hemostática.

Exemplo 2: O efeito das combinações de suplementação na força coesiva induzida por uma composição em Pó.

[00215] O Exemplo anterior indicou que a suplementação de fibras de ORC finas com 6% de CaCl2 resultou em uma força de resistên- cia/força coesiva mais elevada em comparação com 3% de CaCl2. O Exemplo anterior mostrou que suplementação adicional de 3% de CaCl2 - composição de fibras de ORC finas com compostos positivamente carregados adicionais aumentou a força coesiva da composição. Portanto, neste Exemplo, a contribuição da suplementação adicional de uma composição de fibras de ORC finas com altas concentrações de CaCl2 (5% ou 6%) com compostos positivamente carregados adicionais, para a força coesiva, foi testada. Os resultados são mostrados na Figura 2.

[00216] Similar aos resultados mostrados no Exemplo anterior, a suplementação da mistura de 6% de CaCl2-ORC resultou em um aumento na força de resistência/força coesiva em comparação com ORC sozinha. Foi verificado que a força de resistência aprimorada demonstrada em coágulos formados pela suplementação de 6% de CaCl2, foi abolida em coágulos formados pela suplementação de mistura de 6% de CaCl2 6% com lisina (Lys). A suplementação adicional de 6% de CaCl2 -ORC com Arginina (Arg) teve o mesmo efeito negativo.

[00217] A suplementação de fibras de ORC com 3% de quitosano ou 3% de sulfato de protamina(PS), além de CaCl2 6%, demonstrou um aumento na força de resistência dos coágulos.

[00218] Além disso, a suplementação adicional da composição de ORC-6% de CaCl2 com ácido 3% de εACA 3% sozinho diminuiu a resistência dos coágulos (comparar fibras de ORC finas suplementadas com 6% de CaCl2 versus fibras de ORC finas suplementadas com 6% de CaCl2 e ácido 3% de εACA na Figura 2).

[00219] Foram obtidos resultados superiores com ORC suplementada com 5,0% de CaCl2, 2,5% de PS e ácido 2,5% de ε- aminocapróico (εACA).

[00220] Esses resultados sugerem que apenas compostos específicos e combinações e concentrações específicas dos mesmos aprimoram as propriedades de força coesiva induzidas por fibras de ORC.

Exemplo 3: O efeito hemostático de diferentes composições em um modelo Ex Vivo.

[00221] Neste exemplo, uma composição exemplificadora com alta força coesiva de acordo com os testes in vitro foi examinada quanto à sua capacidade hemostática em uma sutura (pré-clínica) modelo ex vivo (conforme descrito na seção Materiais e Métodos). A eficácia da composição foi testada sob a forma de um pó ou como agregados. Além disso, o efeito da ausência de cálcio da composição sobre a eficácia hemostática foi avaliado.

[00222] A compactação do pó foi realizada conforme detalhado sob "Compactação do pó" (seção Material e Métodos); o pó compactado foi, então, submetido a uma etapa de secagem e uma etapa de moa- gem/trituramento conforme detalhado sob "Secagem e moa- gem/trituramento da cápsula", criando assim grânulos/agregados de pó.

[00223] Os volumes de perda de sangue antes e após a aplicação da composição sobre um sítio de sutura foram comparados da maneira descrita acima ("modelo pré-clínico de sutura ex-vivo").

[00224] Para esses propósitos, uma composição em pó de fibras de ORC finas suplementadas com 5,0% de CaCl2, 2,5% de PS e 2,5% de εACA 2,5% foi testada em uma forma compactada e não compactada; e uma composição compactada de fibras de ORC finas suplementadas com 5,0% de PS e 5,0% de εACA 5,0% (sem cálcio) também foi avaliada.

[00225] Conforme demonstrado na Figura 3, há uma tendência geral de eficácia hemostática aprimorada quando o pó é compactado, moído e peneirado em forma agregada (um aumento na % de redução de perda de sangue foi observado). Os resultados mostram também a contribuição positiva do cloreto de cálcio para a eficácia do pó de ORC.

Exemplo 4: O efeito da faixa de concentração de composto na composição de agregados na eficácia hemostática, determinado por testes In Vivo.

[00226] O exemplo a seguir examina o efeito hemostático in vivo da alteração das concentrações de cada um dos compostos escolhidos de acordo com os Exemplos acima. Os resultados foram coletados a partir de diferentes experimentos pré-clínicos realizados em uma porcina com o uso de um modelo in vivo de punção de biópsia de fígado, conforme descrito acima. Os resultados de cada experimento são apresentados em uma tabela diferente - Tabelas 3, 4 e 5. Neste experimento, foram testadas várias composições de agregados. As composições de agregados testadas eram fibras de ORC com ou sem su- plementação com compostos, as concentrações dos compostos são especificadas nas tabelas abaixo. Os agregados suplementados com composto incluíam combinações de fibras de ORC de 10,0% (p/p do peso da mistura final) de fibras de ORC longas (ver distribuição de tamanho na tabela 1A) e 77,5 a 85,0% de fibras de ORC finas.

[00227] A tabela lista as taxas de sucesso da interrupção completa do sangramento/hemostasia completa. Em cada experimento, agrega- dos de ORC fina (sem qualquer suplementação) serviram como um controle de referência a fim de examinar a eficácia hemostática da su- plementação dos compostos às fibras de ORC. Tabelas 3, 4 e 5: Taxa de hemostasia completa obtida após a aplicação de composições de agregados em um modelo de biópsia de punção do fígado In Vivo (número de replicatas em cada composição testada >3).

[00228] Os resultados apresentados nas Tabelas 3 a 5 reafirmam que cada composto é necessário para melhorar a eficácia hemostática das fibras de ORC, uma vez que uma composição que continha todos os três compostos (cloreto de cálcio, PS e εACA) foi notavelmente superior em comparação com as outras composições de agregados. Os resultados mostraram que, tanto para PS como para εACA, uma faixa de suplementação superior é de 2,5% a 5,0%. O intervalo em que o cloreto de cálcio serve como composto benéfico situa-se entre 5,0% e 6,5% (uma faixa de concentrações de cátions de 1,363% -1,636% p/p).

[00229] Os resultados mostram que a ORC suplementada é ao menos 1,5 vezes mais eficiente que ORC sozinha (37,5% de taxa de he-mostasia completa para ORC suplementada em comparação a 25% de taxa de hemostasia completa para ORC sozinha).

[00230] Diante da apresentação e da descrição de várias versões na presente divulgação, podem ser realizadas adaptações adicionais dos métodos e sistemas descritos no presente documento por meio de modificações adequadas feitas por um versado na técnica, sem que se afaste do escopo da presente invenção. Várias dessas possíveis modificações foram mencionadas, e outras ficarão evidentes aos versados na técnica. Por exemplo, os exemplos, as versões, a geometria, os materiais, as dimensões, as proporções, as etapas, e similares, discutidos acima são apenas ilustrativos e não são obrigatórios. Consequentemente, o escopo da presente invenção deve ser considerado de acordo com os termos das reivindicações a seguir e entende-se que o mesmo não está limitado aos detalhes da estrutura e operação mostrados e descritos no relatório descritivo e nos desenhos.

Claims

1. Composição hemostática, caracterizada pelo fato de que compreende: fibras à base de celulose que têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 350 μm e de D50 menor que 167 μm, asfibras estão em uma faixa de concentração de 83,5% a 90,0% p/p de toda a composição; um ácido ômega-amino carboxílico em uma faixa de concentração de 2,5% a 5,0%, em peso, de toda a composição; sal de protamina a uma concentração de 2,5% a 5,0%, em peso, de toda a composição; um cátion divalente, sendo que a concentração de cá- tion é 1,3% a 1,8%, em peso de toda a composição, sendo que a composição está sob a forma de um pó e/ou agregados.

2. Composição hemostática, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que as fibras à base de celulose têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 177 μm e de D50 menor que 95 μm.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ca-racterizada pelo fato de que as fibras à base de celulose são fibras de celulose regenerada oxidada (ORC).

4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o ácido ômega amino carboxílico é ácido épsilon amino caproico (εACA).

5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o sal de protamina é sulfato de protamina.

6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o sal de cátion divalente é fornecido por cloreto de cálcio.

7. Composição, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que as faixas de concentração de εACA, de sulfato de protamina e de cloreto de cálcio são 2,5% a 5,0%, 2,5% a 5,0%, 5,0 % a 6,5% em peso, respectivamente, sendo que o peso restante é composto pelas fibras à base de celulose em quantidade suficiente para 100% do peso total.

8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que um gel formado a partir da composição em pó após o contato com sangue tem uma resistência igual a ou maior que 10 vezes a de um gel formado pelo contato de uma composição em pó comparativa que consiste em celulose regenerada oxidada (ORC) com sangue; e/ou um gel formado a partir da composição de agregados tem uma capacidade hemostática igual a ou maior que 1,5 vez a de um gel formado pelo contato de uma composição de agregados comparativa que consiste em ORC com sangue.

9. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que está sob a forma de agregados tendo um tamanho na faixa de 75 μm a 420 μm.

10. Método para produzir uma composição hemostática, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: misturar fibrasà base de celulose que têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 350 μm e de D50 menor que 167 μm, estando as fibras em uma faixa de concentração de 83,5% a 90%, em peso, de toda a composição,com os seguintes compostos em pó:i - um ácido ômega amino carboxílico em uma faixa de con-centraçãode 2,5% a 5,0%, em peso, de toda a composição;ii - um sal de protamina em uma concentração de 2,5% a 5,0%, em peso, de toda a composição; eiii - um cátion divalente, sendo que a concentração de cá- tion é 1,3% a 1,8%, em peso de toda a composição.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que as fibras têm uma distribuição de tamanho de D90 menor que 177 μm e de D50 menor que 95 μm.

12. Composição hemostática, caracterizada pelo fato de ser obtida pelo método como definido na reivindicação 11.

13. Método, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado por compreender adicionalmente as etapas de: compactar a composição hemostática, opcionalmente, submeter a composição compactada a secagem e redução de tamanho, obtendo-se assim agregados hemostáticos.

14. Agregados hemostáticos, caracterizados por serem obtidos pelo método como definido na reivindicação 13.

15. Método para formar um gel, caracterizado por compreender as etapas de:colocar um pó hemostático e/ou a composição de agregados como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, 12 e 14 em contato com sangue, formando assim um gel.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que quando o contato é realizado com a composição em pó, e o gel formado tem uma resistência igual ou maior que 10 vezes a de um gel formado pelo contato de uma composição em pó comparativa que consiste em celulose regenerada oxidada (ORC) com sangue;e/ou em que, quando o contato é realizado com a composição de agregados, o gel formado tem uma capacidade hemostática igual ou maior que 1,5 vez a de um gel formado pelo contato de uma composição de agregados comparativa que consiste em ORC com sangue.

17. Gel, caracterizado por ser obtido pelo método como definido na reivindicação 15 ou 16.