BR112017024465B1

BR112017024465B1 - Método de modificação do teor de nitrosamina específica de tabaco de um material de tabaco e produto de tabaco

Info

Publication number: BR112017024465B1
Application number: BR112017024465-9A
Authority: BR
Inventors: Jerry Wayne Marshall; Anthony Richard Gerardi; Luis Monsalud; Alton Busbee; Jo Ann Hill Hart; Annett Milling
Original assignee: R. J. Reynolds Tobacco Company
Priority date: 2015-05-14
Filing date: 2016-05-05
Publication date: 2021-10-13
Also published as: MX2017014556A; CN107920582B; US20160331020A1; US9918492B2; EP3294076A1; CN107920582A; US10321708B2; JP6832872B2; US20180177224A1; US20190281884A1; CN112189882B; CA2986019C; WO2016182833A1; CA2986019A1; JP2018518949A; BR112017024465A2; CN112189882A

Abstract

tratamento de tabaco. métodos de modificação do teor de nitrosamina específica de tabaco de um material de tabaco são descritos aqui. um exemplo de método compreende colocar em contato um material de tabaco com uma composição compreendendo sal, açúcar, enzima, bactéria de ácido lático, levedura ou uma combinação dos mesmos para reduzir o teor bacteriano total; curar o material de tabaco; e fermentar o material de tabaco na presença de um ou mais microrganismos. o método pode fornecer um material de tabaco fermentado apresentando um teor de nitrosamina específica de tabaco que é reduzido em relação ao material de tabaco fermentado que não foi submetido às etapas do método descrito. em determinadas modalidades, o teor de nitrosamina específica de tabaco do material de tabaco fermentado não é mais do que o do material de tabaco curado. produtos contendo tabaco incluindo tais materiais de tabaco tratado são também fornecidos.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO:

[001] A presente invenção se refere a modificações nos métodos de crescimento e colheita de plantas (tais como tabaco), para métodos de manuseio e tratamento de plantas colhidas e materiais de planta para uso no preparo de produtos derivados de plantas (tais como produtos de tabaco); e, em particular, a aqueles métodos relacionados aos tabacos processados que são considerados para serem submetidos às chamadas condições de processamento de fermentação. Mais particularmente, a presente invenção se refere a tecnologias associadas à produção de produtos feitos ou derivados do tabaco, ou que, de outra forma, incorporam tabaco ou componentes de tabaco e são intencionados para o consumo humano.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO:

[002] Muitos usos do tabaco foram propostos. Por exemplo, o tabaco tem sido fumado em cachimbos e o tabaco tem sido incorporado em artigos de fumo que queimam tabaco, tais como cigarros e charutos. Vide, por exemplo, Tobacco Production, Chemistry e Technology, Davis et al. (Eds.) (1999), o qual é aqui incorporado por referência. Têm também sido propostas diversas formas de fornecer muitas das sensações do fumo, porém, sem liberar quantidades consideráveis de produtos de combustão incompleta e produtos de pirólise que resultam do tabaco queimado. Vide, por exemplo, o estado da técnica definido nas patentes US nos. 7,753,056 para Borschke et al. e 7,726,320 para Robinson et al.; patentes US publicadas nos. 2014/0060555 para Chang et al. e 2014/0270730 para DePiano et al.; e pedido de patente US de nos. de série 14/098137, depositado em 6 de dezembro de 2013 para Ademe et al.; os quais são aqui incorporados por referência. O tabaco também tem sido aproveitado na forma denominada “sem fumo”. Vide, por exemplo, o estado da técnica definido nas patentes US publicadas nos. 2014/0271952 para Mua et al. e 2012/0272976 para Byrd et al., os quais são aqui incorporados por referência.

[003] Através dos anos, diversos métodos de tratamento e aditivos foram propostos para alterar a característica geral ou natureza dos materiais de tabaco utilizados em produtos de tabaco. Por exemplo, materiais de tabaco têm sido tratados com aditivos e condições de tratamento usadas durante o processamento daqueles materiais de tabaco têm sido controladas, a fim de alterar as propriedades química ou sensória dos produtos de tabaco sem fumo produzidos a partir de tais materiais de tabaco, e, no caso de materiais de tabaco passíveis de fumo, alterar as propriedades química ou sensória da fumaça dominante gerada pelos artigos de fumo que incorporam tais materiais de tabaco. Vide, por exemplo, os tipos de enzimas e microrganismos (por exemplo, bactéria, fungos e leveduras) empregados e / ou controlados durante o processamento do tabaco para fins de alteração da composição química do tabaco definida na patente US publicada no. 2014/0299136 para Moldoveanu et al., a qual é aqui incorporada por referência.

[004] Seria desejável ainda fornecer métodos para alterar as características e natureza dos componentes de uma planta, a fim de fornecer composições a base de plantas e formulações úteis para o consumo humano. Em particular, seria desejável fornecer tabacos processados e, em particular, tabacos processados úteis para a produção de produtos de tabaco sem fumo, que resultam de processos que tem a habilidade de controlar ou alterar a composição química dos tabacos processados.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO:

[005] A presente descrição fornece um método para o tratamento de plantas ou uma parte das mesmas para modificar (por exemplo, aumentar e / ou diminuir) a quantidade de determinadas bactérias presentes nas mesmas. Em particular, os métodos descritos podem ser aplicados às plantas e materiais de tabaco e podem, em algumas modalidades, resultar em uma diminuição no teor bacteriano total associado à planta ou material de tabaco e / ou um aumento no teor bacteriano de Lactobacillus associado com a planta ou material de tabaco.

[006] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece plantas, componentes de planta, e materiais de planta apresentando níveis modificados de determinadas bactérias, bem como métodos de tratamento de plantas não curadas ou parcialmente curadas (por exemplo, verdes), componentes de planta e materiais de planta para fornecer tais níveis de bactéria modificados. Em algumas modalidades, a invenção fornece plantas fermentadas, componentes de planta e materiais de planta apresentando níveis modificados de diversos componentes (por exemplo, nitrosamina específica de tabacos, TSNAs). A invenção também fornece métodos de fermentação de plantas, componentes de planta e materiais de planta para alcançar tais níveis modificados de diversos compostos. Por exemplo, em algumas modalidades, plantas, componentes de planta e materiais de planta são submetidos à fermentação na presença de um ou mais microrganismos em quantidades exógenas para obter tais níveis modificados de diversos componentes no material de tabaco tratado.

[007] Em um aspecto da invenção, é fornecido um método de modificação do teor de nitrosamina específica de tabaco de um material de tabaco, compreendendo: colocar em contato um material de tabaco (por exemplo, incluindo, porém não se limitando a, um material de tabaco não colhido) com uma composição de tratamento, em que a composição de tratamento compreende um sal, um açúcar, uma enzima, uma bactéria de ácido lático, uma levedura, ou uma combinação de dois ou mais destes, em que colocar em contato fornece um material de tabaco tratado apresentando um teor de bactéria total reduzido após a colheita; cura do material de tabaco tratado para fornecer um material de tabaco curado; e fermentar o material de tabaco curado na presença de um ou mais microrganismos, em que o um ou mais microrganismos estão presentes em quantidades exógenas ao material de tabaco curado para fornecer um material de tabaco fermentado apresentando um teor de nitrosamina específica de tabaco que está reduzido em relação ao material de tabaco fermentado que não foi colocado em contato com uma composição de tratamento e que não foi fermentado na presença dos referidos microrganismos.

[008] O material de tabaco submetido a tal tratamento pode variar e, em algumas modalidades, pode ser selecionado do grupo que consiste de uma semente de tabaco, uma muda de tabaco, uma planta viva imatura, uma planta viva madura, ou uma parte das mesmas. O material de tabaco específico pode, em algumas modalidades, compreender tabaco selecionado do grupo que consiste de Black Mammoth, Greenwood, Little Wood, Madole melhorado, TR Madole, Little Crittendon, DF 911, KY 160, KY 171, KY 180, KY 190, KY 309, KY VA 312, VA 355, VA 359, DF 485, TN D94, TN D950, e combinações dos mesmos. A composição de tratamento pode, em algumas modalidades, compreender um sal contendo cloreto (por exemplo, NaCl ou KCl).

[009] Os microrganismos empregados nos métodos aqui descritos podem, em algumas modalidades, ser microrganismos que não facilitam a conversão de nitrato a nitrito. Em determinadas modalidades, os microrganismos são capazes de realizar uma competição de crescimento com um ou mais microrganismos redutores de nitrato que são nativos ao tabaco. Em algumas modalidades, os microrganismos são dissipadores de nitrito. Alguns exemplos de microrganismos compreendem genes da nitrito redutase. Os microrganismos podem ser, por exemplo, bactéria (por exemplo, bactéria de ácido lático) e / ou leveduras tolerantes a sal. Um microrganismo específico que pode ser empregado em algumas modalidades é Tetragenococcus halophilus. Em determinadas modalidades, o um ou mais microrganismos empregados nos métodos aqui descritos podem compreender microrganismos geneticamente modificados (por exemplo, bactéria). Por exemplo, em algumas modalidades, tais microrganismos (incluindo, porém não se limitando a, bactéria Tetragenococcus) podem compreender genes inseridos que codificam para a nitrito redutase.

[010] Em seguida, em determinados métodos aqui descritos, o teor de nitrosamina específica de tabaco (TSNA) no material de tabaco fermentado pode ser reduzido por níveis variados em relação ao material de tabaco fermentado que não foi colocado em contato com uma composição de tratamento e que não foi fermentado na presença dos referidos microrganismos. Por exemplo, o teor de TSNA pode ser reduzido por cerca de 10 % ou mais, cerca de 20 % ou mais, ou cerca de 50 % ou mais. Em algumas modalidades, o teor de TSNA do material de tabaco fermentado é não mais do que o teor de TSNA do material de tabaco curado. Em determinadas modalidades, por exemplo, devido ao uso de um tratamento com sal antes da colheita, o teor de cloreto do material de tabaco fermentado pode ser elevado quando comparado com um material de tabaco não tratado. Por exemplo, em algumas modalidades, o teor de cloreto do material de tabaco fermentado fornecido de acordo com os métodos aqui descritos está entre cerca de 0,5 % em peso seco e cerca de 3 % em peso seco.

[011] Em algumas modalidades, em adição às etapas do método mencionadas acima, o método pode ainda compreender: processar o material de tabaco fermentado para fornecer um material de tabaco processado em uma forma adequada para incorporação em um produto de tabaco; e incorporação do material de tabaco processado dentro de um produto de tabaco sem fumo. O material de tabaco processado pode estar, por exemplo, na forma de uma mistura de tabaco. A presente descrição também fornece, em determinadas modalidades, um produto de tabaco sem fumo preparado de acordo com os métodos aqui descritos.

[012] Em outro aspecto, a invenção fornece um método de modificação do teor de nitrosamina específica de tabaco de um material de tabaco, compreendendo: condicionar um material de tabaco colhido a um nível de umidade desejado; separar o galho do material de tabaco colhido para fornecer um material de tabaco desengalhado; cortar o material de tabaco desengalhado para fornecer um material de tabaco cortado e desengalhado; colocar em contato o material de tabaco cortado e desengalhado com sal e aquecer a mistura resultante; fermentar a mistura na presença de um ou mais microrganismos, em que o um ou mais microrganismos estão presentes em quantidades exógenas à mistura para fornecer um material de tabaco fermentado apresentando um teor de nitrosamina específica de tabaco que é reduzido em relação ao material de tabaco fermentado que não foi colocado em contato com o sal antes da fermentação e que não foi fermentado na presença dos referidos microrganismos. Em determinadas modalidades preferidas, o teor de nitrosamina específica de tabaco do material de tabaco fermentado em tais modalidades não é superior ao teor de nitrosamina específica de tabaco do material de tabaco antes da fermentação (isto é, o material de tabaco cortado e desengalhado).

[013] A etapa de colocar em contato pode, em algumas modalidades, ainda compreender pasteurizar a mistura. Em algumas modalidades, a etapa de condicionamento compreende condicionar o material de tabaco a um nível de umidade de cerca de 20 % a cerca de 25 %. Em determinadas modalidades, as etapas de colocar em contato e fermentar são conduzidas em um recipiente de fermentação em estado sólido. A etapa de fermentar pode, em algumas modalidades, ainda compreender controlar a temperatura, umidade, nível de oxigênio, ou qualquer combinação dos mesmos. O um ou mais microrganismos usados em tais métodos podem, em determinadas modalidades, compreender Tetragenococcus halophilus em quantidades variadas (por exemplo, incluindo, porém não se limitando a, cerca de 106UFC).

[014] Em determinadas modalidades, o método pode ainda compreender submeter o material de tabaco fermentado a uma temperatura elevada. O método pode, em algumas modalidades, ainda compreender adicionar um ou mais componentes ao material de tabaco fermentado, em que o um ou mais componentes compreende componentes selecionados do grupo que consiste de sal, preservantes, misturas de revestimento e umidade. Em determinadas modalidades, o método pode ainda compreender um ajuste do nível de mistura do material de tabaco fermentado.

[015] A invenção inclui, sem limitação, as seguintes modalidades.Modalidade 1: um método de modificação do teor de nitrosamina específica de tabaco de um material de tabaco, compreendendo: colocar em contato um material de tabaco com uma composição de tratamento, em que a composição de tratamento compreende um sal, um açúcar, uma enzima, uma bactéria de ácido lático, uma levedura, ou uma combinação de dois ou mais destes, em que colocar em contato fornece um material de tabaco tratado apresentando um teor de bactéria total reduzido; curar o material de tabaco tratado para fornecer um material de tabaco curado; e fermentar o material de tabaco curado na presença de um ou mais microrganismos, em que o um ou mais microrganismos estão presentes em quantidades exógenas ao material de tabaco curado para fornecer um material de tabaco fermentado apresentando um teor de nitrosamina específica de tabaco que é reduzido em relação a um material de tabaco fermentado que não foi colocado em contato com uma composição de tratamento e que não foi fermentado na presença dos referidos microrganismos.Modalidade 2: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o material de tabaco é selecionado do grupo que consiste de uma semente de tabaco, uma muda de tabaco, uma planta viva imatura, uma planta viva madura ou uma parte das mesmas.Modalidade 3: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que a composição de tratamento compreende um sal contendo cloreto.Modalidade 4: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que a composição de tratamento compreende NaCl ou KCl.Modalidade 5: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o material de tabaco compreende tabaco selecionado do grupo que consiste de Black Mammoth, Greenwood, Little Wood, Madole melhorado, TR Madole, Little Crittendon, DF 911, KY 160, KY 171, KY 180, KY 190, KY 309, KY VA 312, VA 355, VA 359, DF 485, TN D94, TN D950, e combinações dos mesmos.Modalidade 6: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos não facilitam a conversão de nitrato a nitrito.Modalidade 7: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos são capazes de realizar uma competição de crescimento com um ou mais microrganismos redutores de nitrato que são nativos ao tabaco. Modalidade 8: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos são dissipadores de nitrito. Modalidade 9: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos compreendem genes que codificam para a nitrito redutase. Modalidade 10: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos compreendem bactéria. Modalidade 11: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos compreendem Tetragenococcus halophilus. Modalidade 12: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos compreendem bactéria geneticamente modificada. Modalidade 13: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos compreendem bactérias geneticamente modificadas, as quais compreendem genes inseridos que codificam para a nitrito redutase. Modalidade 14: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que a nitrosamina específica de tabaco é reduzida por cerca de 10 % ou mais. Modalidade 15: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que a nitrosamina específica de tabaco é reduzida por cerca de 20 % ou mais. Modalidade 16: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o teor de nitrosamina específica de tabaco é reduzido por cerca de 50 % ou mais. Modalidade 17: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o teor de nitrosamina específica de tabaco do material de tabaco fermentado é não mais do que do teor de nitrosamina específica de tabaco do material de tabaco curado. Modalidade 18: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o teor de cloreto do material de tabaco fermentado está entre cerca de 0,5 % em peso e cerca de 3 % em peso. Modalidade 19: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, ainda compreende: processar o material de tabaco fermentado para fornecer um material de tabaco processado em uma forma adequada para incorporação em produto de tabaco; e incorporar o material de tabaco processado dentro de um produto de tabaco sem fumo. Modalidade 20: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o material de tabaco processado está na forma de uma mistura de tabaco. Modalidade 21: um produto de tabaco sem fumo preparado de acordo com o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente. Modalidade 22: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, ainda compreende: condicionar um material de tabaco colhido para um nível de umidade desejado; separar o galho do material de tabaco colhido para fornecer um material de tabaco desengalhado; e cortar o material de tabaco desengalhado para fornecer o material de tabaco na forma de um material de tabaco cortado e desengalhado; em que a etapa de colocar em contato compreende colocar em contato o material de tabaco cortado e desengalhado com sal e aquecer a mistura resultante. Modalidade 23: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que a etapa de colocar em contato ainda compreende pasteurizar a mistura. Modalidade 24: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que a etapa de condicionamento compreende condicionar o material de tabaco a um nível de umidade de cerca de 20 % a cerca de 25 %. Modalidade 25: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o nível de umidade é de cerca de 22 %. Modalidade 26: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que as etapas de colocar em contato e fermentar são conduzidas em um recipiente de fermentação em estado sólido. Modalidade 27: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que a etapa de fermentar ainda compreende controlar a temperatura, umidade, nível de oxigênio, ou qualquer combinação dos mesmos. Modalidade 28: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos compreendem Tetragenococcus halophilus. Modalidade 29: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos compreendem Tetragenococcus halophilus e em que o Tetragenococcus halophilus está presente em uma quantidade de cerca de 106UFC. Modalidade 30: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o um ou mais microrganismos compreendem bactéria Tetragenococcus halophilus geneticamente modificada, compreendendo genes inseridos que codificam para a nitrito redutase. Modalidade 31: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, ainda compreende submeter o material de tabaco fermentado a uma temperatura elevada. Modalidade 32: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, ainda compreende adicionar um ou mais componentes ao material de tabaco fermentado, em que o um ou mais componentes compreende componentes selecionado do grupo que consiste de sal, preservantes, misturas de revestimento, e umidade. Modalidade 33: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, ainda compreende o ajuste do nível de mistura do material de tabaco fermentado. Modalidade 34: o método de qualquer modalidade precedente ou subsequente, em que o teor de nitrosamina específica de tabaco do material de tabaco fermentado é igual ou inferior ao teor de nitrosamina específica de tabaco no material de tabaco cortado e desengalhado.

[016] Essas e outras características, aspectos e vantagens da descrição serão aparentes a partir da leitura da descrição detalhada que segue, junto com as figuras que a acompanha, as quais são brevemente descritas abaixo. A invenção inclui qualquer combinação de dois, três, quarto ou mais das modalidades mencionadas acima, bem como combinações de quaisquer duas, três, quatro ou mais características ou elementos definidos nesta descrição, independente se tais características ou elementos são expressamente aqui combinados em uma descrição de uma modalidade específica. Esta descrição tem a intenção de ser lida holisticamente, de modo que qualquer característica separável ou elementos da invenção descrita, em qualquer dos seus diversos aspectos e modalidades, deve ser vista com a intenção de ser combinável, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Outros aspectos e vantagens da presente invenção se tornarão aparentes a partir do que segue.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO:

[017] A presente invenção será agora descrita mais completamente a seguir. Esta invenção pode, no entanto, ser incorporada em muitas diferentes formas e não deve ser construída como limitada às modalidades aqui definidas; melhor, estas modalidades são fornecidas de modo que esta descrição será minuciosa e completa, e irá completamente transmitir o escopo da invenção para aqueles habilitados na técnica. Como usado nesse relatório e nas reivindicações, as formas singulares “um”, “uma” e “o / a” incluem plurais referentes a menos que o contexto indique claramente o contrário. Referência a “percentual em peso seco” ou “com base em peso seco” se refere ao peso com base nos ingredientes secos (isto é, todos os ingredientes exceto água).

[018] Exemplos de plantas que são crescidas, colhidas, e / ou processadas de acordo com a presente invenção são selecionados das espécies Nicotiana. A seleção da planta a partir das espécies Nicotiana pode variar, e é mais preferencialmente uma planta que é caracterizada como sendo um tipo de tabaco. Vide, por exemplo, os tipos de plantas definidas na patente US nos. 7.025.066 para Lawson et al. e 8.186.360 para Marshall et al.; e patente US publicada no. 2014/0271951 para Mua et al. e 2015/0034109 para Dube et al., os quais são aqui incorporados por referência. Exemplos de tipos de tabaco preferidos que podem ser processados e usados de acordo com a presente invenção incluem aqueles conhecidos como Black Mammoth, Greenwood, Little Wood, Madole melhorado, TR Madole, Little Crittendon, DF 911, KY 160, KY 171, KY 180, KY 190, KY 309, KY VA 312, VA 355, VA 359, DF 485, TN D94, TN D950. Também são preferidos os exemplos de tipos de tabacos que são crescidos nas regiões de crescimento chamadas Green River e One Sucker.

[019] Em determinadas modalidades, plantas podem ser tratadas com uma composição de tratamento, como será aqui descrita, em que as plantas estão na forma não colhida e / ou durante o estágio de cura amarelado / amarronzado (isto é, antes do tabaco ser completamente curado). Este intervalo de tempo será aqui referido, em geral, como “pré- cura” e o tabaco tratado com tal composição de tratamento será aqui referido, em geral, como tabaco “não curado ou parcialmente curado”. Um primeiro método de tratamento pré cura aqui descrito compreende, em geral, tratar tal tabaco ao colocar o tabaco em contato com um ou mais de: uma composição contendo um sal e / ou açúcar; uma composição contendo uma bactéria de ácido lático; e / ou uma composição contendo uma enzima (coletivamente aqui referida como “composições de tratamento”), por exemplo, usando os tipos de composições de tratamento e métodos definidos na patente US publicada no. 2014/0299136 para Moldoveanu et al., o qual é aqui incorporado por referência.

[020] Em determinada modalidade, a composição de tratamento compreende sal (por exemplo, na forma de uma solução contendo sal). O tratamento com sal de diversos tipos de plantas é conhecido, por exemplo, como descrito na patente US nos. 8.353.300 e 8.905.041 para Li et al. e 6.755.200 para Hempffing et al. e pedidos de patente US publicados nos. 2008/0202538 para Li et al. e 2012/0279510 para Marshall et al., os quais são todos aqui incorporados por referência. Qualquer sal pode ser usado para este propósito, embora sais de qualidade alimentar sejam especialmente preferidos. Exemplos de sais incluem, porém não se limitam a, sais contendo cloretos tais como cloreto de sódio (NaCl), cloreto de cálcio (CaCl2), cloreto de magnésio (MgCl2), cloreto de potássio (KCl), cloreto de amônio e combinações dos mesmos. De acordo, em algumas modalidades, a composição de tratamento compreende cloro ou cloreto. É notado que, tradicionalmente, o tratamento com cloreto (inclui sal contendo cloreto) do tabaco tem sido evitado, uma vez que foi notado o efeito negativo do sabor dos produtos de fumo dentro dos quais o tabaco tratado é incorporado. No entanto, em determinadas modalidades, para diversas aplicações (incluindo, porém não se limitando a, o uso em produtos de tabaco sem fumo e em produtos tipo cigarro eletrônico), a presença de cloreto não é indesejável. De fato, em algumas modalidades, a presença de cloreto pode fornecer efeitos benéficos, incluindo, porém não se limitando a, redução da concentração de TSNA nas plantas tratadas quando comparadas com plantas não tratadas, após a cura e fermentação subsequente. Detalhes adicionais de determinados tipos de composições de sais que podem ser empregadas neste contexto são fornecidas, por exemplo, no pedido de patente US publicado no. 2014/0299136 para Moldoveanu et al., o qual é aqui incorporado por referência.

[021] Em determinadas modalidades, a composição de tratamento compreende açúcar (por exemplo, na forma de uma solução contendo açúcar). Qualquer açúcar, incluindo açúcares de qualidade alimentar, podem ser usados para este propósito, por exemplo, incluindo, porém não se limitando a, sacarose, glicose, frutose, galactose, maltose e lactose, ramnose, xilose e combinações dos mesmos. Ainda, detalhes de determinados tipos de soluções de açúcar que podem ser empregadas neste contexto são fornecidos, por exemplo, no pedido de patente US publicado no. 2014/0299136 para Moldoveanu et al., o qual é aqui incorporado por referência. Em algumas modalidades, uma composição de tratamento pode compreender tanto sal como açúcar.

[022] Em algumas modalidades, a composição de tratamento compreende um ou mais probióticos ou uma ou mais bactérias de ácido lático. Tais composições podem ser preparadas e usadas, por exemplo, como descrito nos pedidos de patente US publicados nos. 2013/0269719 para Marshall et al. e 2014/0299136 para Moldoveanu et al., os quais são aqui incorporados por referência. A identificação dos tipos de bactéria que podem ser usados em tais tratamentos, bactérias específicas usadas, quantidades de bactéria usada e propriedades específicas fornecidas por tais bactérias são ainda definidas nestas referências. Em algumas modalidades, a composição de tratamento compreende uma ou mais enzimas. Tais composições podem ser preparadas e usadas, por exemplo, como descrito nos pedidos de patente US publicados nos. 2014/0020694 e 2014/0299136, ambos para Moldoveanu et al., os quais são aqui incorporados por referência. A identificação dos tipos de enzimas que podem ser úteis em tais tratamentos, enzimas específicas usadas, quantidades de enzimas usadas e propriedades específicas fornecidas por tais enzimas são ainda definidas nestas referências.

[023] Em determinadas modalidades, a composição de tratamento compreende uma ou mais espécies de leveduras. Embora sem a intenção de ser limitativo, um exemplo de levedura é a levedura Debaryomyces hansenii com capacidade de nitrito redutase. Em modalidades preferidas, uma ou mais leveduras tolerantes a sal são empregadas, isoladas ou em combinação com uma das composições de tratamento aqui descritas.

[024] As composições de tratamento pré cura podem estar de várias formas. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição de tratamento pode estar na forma líquida (por exemplo, uma solução, dispersão, emulsão ou similares, aqui referidas como “solução de tratamento”). As concentrações (por exemplo, teores de sólidos) de tais soluções de tratamento podem variar. Em algumas modalidades, a composição de tratamento pode estar na forma sólida (por exemplo, em forma em pó ou granular). As composições podem, em algumas modalidades, compreender diversos outros componentes.

[025] As composições de tratamento pré cura descritas podem ser aplicadas em diversos tipos e em diversos momentos. Em geral, as composições de tratamento podem ser aplicadas topicamente à planta (por exemplo, de modo que um ou mais componentes das composições sejam fornecidos à planta através da folha, galho, flor, etc.) ou podem ser aplicados de modo que um ou mais componentes sejam fornecidos à planta através do sistema de raízes. Formas líquidas podem ser aplicadas, por exemplo, por pulverização, nebulização ou gotejamento da planta ou parte da mesma a ser tratada (por exemplo, aplicação foliar) ou o solo ao redor da planta (aplicação no solo). Formas sólidas das composições de tratamento podem ser aplicadas diretamente a uma planta ou parte da mesma ou podem ser aplicadas ao solo ao redor da planta (por exemplo, polvilhado na superfície do solo e / ou trabalhado dentro do solo, tal como na forma de um “curativo lateral”). Em determinadas modalidades, a composição de tratamento pode ser aplicada na forma de uma composição de fertilizante (por exemplo, uma composição de fertilizante contendo cloreto). As composições de tratamento aqui descritas podem ser aplicadas isoladas ou com outros reagentes, por exemplo, com outros fertilizantes, pesticidas, herbicidas e similares.

[026] Em modalidades particularmente preferidas, o tabaco é tratado com pelo menos duas composições de tratamento diferentes e / ou pelo menos dois estágios diferentes de pré cura. Tratamentos múltiplos podem ser feitos sequencialmente (por exemplo, em sucessão próxima ou em diferentes momentos) ou simultaneamente (por exemplo, por aplicar separadamente duas ou mais composições diferentes do tabaco ou pela mistura de composições para fornecer uma única composição de tratamento compreendendo dois ou mais ingredientes ativos diferentes e aplicar uma única composição de tratamento ao tabaco), em que as composições são aplicadas em pelo menos dois diferentes estágios, elas podem ser aplicadas em diferentes pontos do ciclo de vida da planta de tabaco (por exemplo, com um aplicado às plantas em crescimento no campo e um aplicado após a colheita ou com um aplicado às sementes e outro aplica às plantas em crescimento no campo). Múltiplos tratamentos podem compreender tratar a planta em pelo menos dois estágios diferentes com a mesma composição de tratamento ou diferentes composições de tratamento. Em uma modalidade particular, o tabaco é tratado com pelo menos uma composição pré cura contendo sal e pelo menos uma vez pré cura com uma composição contendo uma bactéria de ácido lático. Detalhes adicionais em relação ao tempo e métodos de aplicação são fornecidos no pedido de patente US publicado no. 2014/0299136 para Moldoveanu et al., o qual é aqui incorporado por referência.

[027] O tratamento com uma composição de tratamento neste estágio pode vantajosamente fornecer diversos benefícios. Em particular, é conhecido que plantas de tabaco naturalmente apresentam diversos níveis de bactérias associada à mesma (vide, por exemplo, Larsson L. et al., Tobacco Induced Diseases, 4:4 (2008) e Huang J. et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 88(2): 553 (2010), os quais são aqui incorporados por referência); e o uso de uma composição de tratamento pré cura tal como aqui descrito pode fornecer plantas de tabaco, componentes de planta e materiais de planta com níveis modificados de determinadas bactérias associadas ao mesmo. Em algumas modalidades, o tratamento de uma planta não curada ou parcialmente curada, componente de planta ou material de planta, tal como aqui descrito, resulta em um material de planta de tabaco tratado apresentando uma contagem de bactéria total modificada, uma contagem de bactéria entérica modifica, uma contagem de bactéria gram-negativa modificada e / ou uma contagem de Lactobacillus modificada. As contagens modificadas alcançáveis e métodos para determinar tais contagens são descritos no pedido de patente US publicado no. 2014/0299136 para Moldoveanu et al., o qual é aqui incorporado por referência.

[028] Diferentes tratamentos podem apresentar diferentes efeitos nos níveis de diversas bactérias presentes no material da planta de tabaco. Como notado acima, o tratamento aqui descrito pode afetar as propriedades do tabaco tratado e pode ser particularmente benéfico para modificar o teor de determinadas bactérias antes da cura (incluindo a fermentação) do tabaco tratado. O tratamento pré cura aqui descrito pode, em algumas modalidades, apresentar implicações adicionais para etapas de processamento posteriores. Por exemplo, os tratamentos podem fornecer diversos benefícios para as etapas posteriores de cura, envelhecimento e / ou fermentação do material de tabaco.

[029] Onde o tratamento pré cura é conduzido enquanto a planta de tabaco ou parte da mesma está na forma viva, o tabaco é, em geral, colhido (caso não tenha sido colhido no tratamento pré cura) e submetido à cura. Técnicas tradicionais de colheita de plantas de tabaco podem ser empregadas tal como definido, por exemplo, no pedido de patente US publicado nos. 2011/0174323 para Coleman, III et al. e 2012/0192880 para Dube et al., os quais são aqui incorporados por referência. É particularmente preferido que tabacos colhidos que estejam crescidos, colhidos e processados de acordo com a presente invenção sejam submetidos aos processos de cura que podem ser caracterizados como aqueles que fornecem os chamados tabacos curados a ar ou escuro defumado. Vide, por exemplo, estes tipos de processos de cura definidos em Tobacco Production, Chemistry e Technology, Davis et al. (Eds.) (1999); Roton et al., Beitrage Tabakforsch Int., 21, 305320 (2005); Staaf et al., Beitrage Tabakforsch Int., 21, 321-330 (2005) e patentes US nos. 1.327.692 para Beinhart; 2.758.603 para Heljo; 5.676.164 para Martin; 6.755.200 para Hempfling et al.; 7.293.564 para Perfetti et al.; 7.650.892 para Groves et al.; 8.353.300 para Li et al.; e pedido de patente US. Publicado nos. 2010/0116281 e 2012/0279510 para Marshall et al., e 2014/0299136 para Moldoveanu et al., os quais são aqui incorporados por referência.

[030] Em algumas modalidades, tabacos curados e / ou envelhecidos tratados pré cura com uma composição de tratamento tal como aqui descrita pode fornecer um material de tabacoapresentando níveis modificados de determinados compostos, por exemplo, nitrosaminas específica de tabaco (TSNAs), quando comparado com materiais de tabaco não tratado curado / envelhecido. Informações adicionais em relação aos tipos de quantidades de reduções de TSNA alcançáveis por meio dos métodos são fornecidas nos pedidos de patente US publicados no. 2014/0299136 para Moldoveanu et al., o qual é aqui incorporado por referência.

[031] Em determinadas modalidades (por exemplo, nas quais o material de tabaco está sendo preparado para uso em determinados produtos de tabaco sem fumo), o material de tabaco curado (opcionalmente tratado por meio do tratamento com uma composição de tratamento pré cura tal como descrito em detalhes acima) é, então, fermentado. A fermentação, em geral, requer submeter o material de tabaco à água (por exemplo, umidade) e calor. O processo de fermentação pode ser conduzido em uma câmara em que a temperatura e o teor de umidade pode ser controlado. Como uma consequência da temperatura elevada e teor de umidade ao qual o tabaco está exposto durante o processo de fermentação, determinados componentes (por exemplo, amônia) pode ser removido de forma eficaz a partir do tabaco. Em algumas modalidades, a fermentação é um processo bacteriano, em que determinadas bactérias produzem enzimas que reagem à produção de precursores de sabor no material de tabaco fermentado. Vide, por exemplo, S. Gilliland, Ed., Bacterial Starter Cultures for Foods, CRC Press, Inc. (Boca Raton, FL), na pg. 97-118, o qual é aqui incorporado por referência.

[032] Exemplos de processos de fermentação para o tabaco são fornecidos nas patentes US nos. 2.927.188 para Brenik et al.; 4.660.577 para Sensabaugh et al.; 4.528.993 para Sensabaugh et al.; e 5.327.149 para Roth et al., os quais são aqui incorporados por referência. A fermentação é entendida como sendo melhorada na presença de, por exemplo, Lactobacillus; consequentemente, modificação da quantidade de bactérias Lactobacillus associadas com uma amostra dada (por exemplo, por meio de uma composição de tratamento de bactéria de ácido lático, tal como descrito acima) pode, em algumas modalidades, impactar a fermentação da amostra. Nos casos em que o tabaco tratado é posteriormente submetido à fermentação, a fermentação pode, em algumas modalidades, ser melhorada pela presença de um número maior de bactérias Lactobacillus. Por “melhorada”, significa que o processo de fermentação procede, por exemplo, mais rapidamente, e / ou mais uniformemente. De acordo, os métodos aqui descritos para o tratamento de plantas de tabaco não curadas ou parcialmente curadas, componentes de planta ou material de planta com uma composição de tratamento pode impactar o processo de fermentação em alguma extensão pela modificação do tipo de bactéria e / ou contagem no tabaco fermentado, se comparado com um tabaco fermentado não tratado.

[033] Em determinadas modalidades da presente descrição, o tipo de bactéria e / ou contagem no tabaco durante a fermentação pode ser ainda modificado pelo tratamento do tabaco com um ou mais microrganismos (por exemplo, bactéria, levedura, fungos, etc.) antes de ou durante a fermentação. O tabaco sendo tratado desta forma logo antes de ou durante a fermentação pode, vantajosamente, ser o tabaco que foi previamente tratado com uma ou mais composições de tratamento, tal como aqui descrito (isto é, compreendendo sal, açúcar, bactéria de ácido lático, levedura e / ou enzimas). No entanto, o tabaco que pode ser tratado logo antes de ou durante a fermentação, como aqui descrito, não está limitado; em outras modalidades, o tabaco sendo tratado durante ou logo antes da fermentação pode ser tabaco que não tenha sido previamente tratado com uma composição de tratamento como descrita acima.

[034] Tratamento com um ou mais microrganismos neste contexto, em geral, compreende aplicar um ou mais microrganismos a um material de tabaco para modificar a quantidade e / ou tipo de microrganismos (por exemplo, bactéria, levedura, fungos, etc.) associados com o tabaco fermentado. Os tipos de microrganismos empregados em tais etapas de tratamento podem variar, porém são, preferencialmente, microrganismos capazes de facilitar a reação de fermentação, porém exibem pouca a nenhuma afinidade para nitratos. É conhecido que determinados microrganismos (por exemplo, cepas particulares de bactéria ou de fungos) são particularmente capazes de facilitar a conversão de nitratos a nitritos (tipicamente pela produção de enzimas redutoras de nitrato, embora não se limitando às mesmas). É ainda reconhecido que a conversão de nitratos a nitritos, facilitada pela referida bactéria durante a fermentação do tabaco, gera precursores que podem levar a formação de determinados TSNAs no material de tabaco fermentado. De acordo com a presente descrição, esta conversão de nitratos a nitritos é vantajosamente minimizada (por exemplo, parcialmente ou completamente eliminado) durante o processo de fermentação.

[035] Como tal, vantajosamente, em algumas modalidades, o tratamento do tabaco com um ou mais microrganismos logo antes ou durante a fermentação pode fornecer tabaco exibindo níveis modificados (por exemplo, diminuído) de TSNAs após a fermentação. Em particular, níveis diminuídos de TSNAs podem ser alcançados pelo tratamento do tabaco logo antes ou durante a fermentação com um ou mais tipos particulares de microrganismos, os quais serão aqui descritos mais completamente.

[036] Vantajosamente, microrganismos (por exemplo, bactéria, levedura e / ou fungos) os quais não facilitam substancialmente a conversão de nitrato a nitrito (isto é, têm pouca ou nenhuma afinidade por nitratos); microrganismos que podem atuar como “dissipadores de nitrito” e / ou microrganismos que apresentam um gene da nitrito redutase são usados de acordo com os métodos aqui descritos. De acordo, em determinadas modalidades, microrganismos particularmente úteis de acordo com a presente descrição durante a etapa de fermentação fornecem uma concentração de nitrito diminuída no material fermentado quando comparado aos típicos (material tratado não fermentado). Tais microrganismos adicionados podem ser nativos ao material de tabaco ou não nativos ao material de tabaco. Tipicamente, os microrganismos adicionados ao material de tabaco, nesta etapa, são adicionados em quantidades exógenas, isto é, eles são adicionados de modo a fornecer níveis modificados, isto é, aumentados de tais microrganismos quando comparado aos níveis tipicamente presentes no tabaco não tratado.

[037] Os tipos de microrganismos contemplados pela presente descrição incluem microrganismos que são capazes de realizar uma competição de crescimento com um ou mais microrganismos redutores de nitrato que estão associados ao tabaco. Vide Fisher et al., Food e Chem. Tox. 50(3-4), 2012, pp. 942-948, o qual é aqui incorporado por referência. A associação dos microrganismos redutores de nitrato com o tabaco pode, em algumas modalidades, ser o resultado de populações residentes de microrganismos no tabaco (isto é, microrganismos nativos), podem ser o resultado das condições de processamento (por exemplo, onde os microrganismos são introduzidos no material de tabaco por contato com o equipamento apresentando tais microrganismos presentes no mesmo) ou pode ser o resultado das etapas de tratamento prévias (por exemplo, nos quais o tabaco foi tratado pré cura com uma composição de tratamento compreendendo bactéria de ácido lático). Exemplos de microrganismos redutores de nitrato que são nativos a determinados tipos de tabaco que são efetivamente minimizados em determinadas modalidades incluem, porém não se limitam a, bactéria dos gêneros Enterobacter e / ou Pantoea.

[038] Exemplos de microrganismos que podem ser adicionados ao tabaco durante a fermentação podem incluir, porém não se limitam a, bactéria pertencente ao gênero Flavimonas (por exemplo, Flavomonas oryzihabitans), tal como descrito na patente US no. 7.549.425 para Koga; Sphingomonas paucimobills ou Pseudomonas fluorescens, tal como descrito no WO 2003/094639 para Koga, bacillus pumilis, levedura (por exemplo, cepas de levedura Debaryomyces hansenii TOB-Y7, tal como descrito em Vigliotta et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 2007, 75:633-645), e microrganismos contendo o gene da nitrito redutase incluindo, porém não se limitando a, microrganismos do gênero bacteriano Pseudomonas, Bordatella, Alcaligenes e Achromobacter. Vide, por exemplo, Yoshie et al., Appl. Environ. Microbiol. 70(5): 3152-3157 (2004), Song et al., FEMS Microbiology Ecology 43: 349-357 (2003), e Takahashi et al., Plant Physiology 126(2): 731741 (2001). Outros exemplos de microrganismo que podem ser adicionados durante a fermentação é Tetragenococcus halophilus. Os documentos acima mencionados descrevendo diversos microrganismos são aqui incorporados por referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, micrófagos (por exemplo, bacteriófagos) podem ser empregados para diminuir a quantidade de bactéria associada ao material de tabaco, tal como definido no pedido de patente US publicado no. 2014/0261478 para Xu et al., o qual é aqui incorporado por referência.

[039] Em determinadas modalidades, os microrganismos podem ser microrganismo geneticamente modificada, por exemplo, incluindo, porém não se limitando a, uma bactéria Tetragenococcus geneticamente modificada. A modificação genética pode, por exemplo, compreender a inserção do gene que codifica a enzima nitrito redutase no DNA do microrganismo. De acordo, em algumas modalidades, microrganismos (por exemplo, bactéria) são usados nos métodos aqui descritos, em que os microrganismos foram geneticamente modificados para torna-los capazes de produzir enzimas nitrito redutase (incluindo, em determinadas modalidades, bactéria Tetragenococcus modificada para incluir o gene nitrito redutase).

[040] É observado que, embora estes microrganismos sejam descritos no contexto da fermentação (isto é, aplicados logo antes ou durante a fermentação), este momento não tem a intenção de ser limitativo. Por exemplo, pode ser, em algumas modalidades, vantajoso aplicar tais microrganismos em outras etapas do tratamento do tabaco (por exemplo, logo antes da colheita, durante as fases iniciais de cura, durante cura, imediatamente após a cura e / ou durante o preparo do material de tabaco para armazenamento).

[041] Em algumas modalidades, o tipo ou tipos de microrganismos vantajosamente selecionados para uso nesta etapa de tratamento é afetada pelo tipo de composição de tratamento pré cura empregado (se empregada). Por exemplo, nos casos em que o tabaco pré tratado pré cura com um sal (por exemplo, um sal de cloreto), pode ser importante selecionar microrganismos que funcionem bem em tais condições de sal.

[042] Em geral, a quantidade de microrganismos adicionada, a cepa particular (ou combinação de cepas) do microrganismo particular pode variar (por exemplo, diversas cepas de Tetragenococcus, isoladas ou em uma mistura de duas ou mais cepas pode ser empregada), os métodos de processamento podem variar e outros ingredientes adicionados a mistura de fermentação pode também variar. Vantajosamente, tais parâmetros podem ser modificados como desejado para diminuir a presença de nitrito, minimizar a produção de nitrosaminas específica de tabaco e influência nas características do sabor do material de tabaco.

[043] Os microrganismos adicionados logo antes ou durante a etapa de fermentação são tipicamente adicionados em uma quantidade suficiente para facilitar o processo de fermentação. Vide, em geral, a discussão da fermentação facilitada por bactéria conforme definida em S. Gilliland, Ed., Bacterial Starter Cultures for Foods, CRC Press, Inc. (Boca Raton, FL), nas pg. 97-118, o qual é aqui incorporado por referência. De acordo com a presente descrição, os microrganismos podem vantajosamente, em algumas modalidades, ser adicionados em uma quantidade suficiente para competir, pelo menos em alguma extensão, com microrganismos nativos presentes em ou no tabaco no qual são aplicados. Quantidades típicas de microrganismos a serem adicionados estão em uma quantidade de pelo menos cerca de 1 x 103 UFC (por exemplo, entre cerca de 1 x 103 UFC e cerca de 1 x 1010UFC, tais como entre cerca de 1 x 103UFC e cerca de 1 x 109UFC ou entre cerca de 1x 103UFC e cerca de 1 x 108UFC. Em algumas modalidades, fornecer o(s) microrganismo(s) em uma concentração mais alta pode aumentar significativamente a taxa de fermentação; no entanto, em algumas modalidades, um pequeno aumento é observado. Em algumas modalidades, o microrganismo é resistente a fago e a rotação de múltiplas espécies pode ser empregada durante o processo de fermentação. Vantajosamente, bactéria, levedura e / ou fungos endógenos associados ao tabaco em determinadas modalidades permanecem relativamente constante e podem ser mortos por calor e / ou competitivamente suprimidos por um fago durante a fermentação. Em determinadas modalidades, tais microrganismos endógenos podem ser selecionados contra o uso adequado das condições de tratamento (por exemplo, pH e / ou níveis de concentração de sal nas quais os microrganismos endógenos não são competitivos).

[044] O método de adição de microrganismos logo antes ou durante a fermentação pode também variar. Por exemplo, em algumas modalidades, o material de tabaco pode ser pulverizado com uma solução ou suspensão de microrganismos (por exemplo, em água) ou o material de tabaco pode ser colocado em contato com um pó contendo o microrganismo.

[045] As condições específicas sob as quais a fermentação é conduzida podem variar e, em algumas modalidades, a seleção de tais condições pode influenciar as propriedades do produto de tabaco fermentado. Por exemplo, em determinadas modalidades, as condições específicas (por exemplo, temperatura, tempo, nível de umidade, nível de oxigênio, pH, tempo de aeração, outros aditivos) podem afetar a quantidade de TSNA produzido. Como tal, estas condições são vantajosamente selecionadas de modo a minimizar a quantidade de TSNA produzido. Condições adequadas para a fermentação são também determinadas, pelo menos em parte, com base no(s) microrganismo(s) específico(s) usado(s). Por exemplo, é conhecido que microrganismos se desempenham de forma diferente em diferentes condições. Por exemplo, alguns microrganismos se desempenham melhor do que outros em determinados valores de pH, concentrações de sal e temperaturas. De acordo, a seleção de um microrganismo particular pode limitar as condições sob as quais a fermentação pode ser conduzida em determinadas modalidades. É notado que as condições podem, em algumas modalidades, ser ajustadas para fornecer as condições adequadas para um determinado microrganismo ou microrganismos. Por exemplo, em que o pH do material de tabaco é baixo e um microrganismo é conhecido por funcionar bem apenas em altos valores de pH, o pH do material de tabaco pode ser ajustado (por exemplo, através da adição de uma base). Métodos para a modificação das condições de fermentação são conhecidas, tal como descrito, por exemplo, na patente US no. 7.946.295 para Brinkley et al., o qual é aqui incorporado por referência. A fermentação pode ser conduzida de modo que a fermentação parcial ou completa do material de tabaco é alcançada. Por exemplo, em determinadas modalidades, o processo de fermentação pode ser monitorado (por exemplo, pelo monitoramento da conversão do ácido málico) e o tabaco pode ser ainda processado em uma determinada porcentagem de conversão de ácido málico.

[046] Em determinadas modalidades, o tabaco é tratado e fermentado de acordo com o processo específico detalhado abaixo. Um material de tabaco é recebido e pode, opcionalmente, ser armazenado em um determinado nível de umidade (por exemplo, a cerca de 13 - 18 % de umidade) por um determinado intervalo de tempo, tal como pelo menos cerca de um ano, por exemplo, entre cerca de 1 e cerca de 3 anos. O material de tabaco é, em geral, tratado com umidade para trazer o nível de umidade do material de tabaco para dentro de uma determinada faixa de umidade (por exemplo, pelo menos de cerca de 15 %, pelo menos de cerca de 20 %, entre cerca de 15 % e cerca de 30 %, ou entre cerca de 20 % e cerca de 25 %, tais como cerca de 22 % de umidade em uma modalidade) em uma determinada temperatura (por exemplo, em uma temperatura de cerca de 100 °F ou maior, uma temperatura de cerca de 110 °F ou maior, uma temperatura de cerca de 120 °F ou maior ou uma temperatura de cerca de 130 °F ou maior, tal como dentro da faixa de cerca de 120 °F a cerca de 150 °F, ou cerca de 130 °F a cerca de 150 °F, tal como cerca de 140 °F em uma modalidade). É observado que valores particularmente benéficos podem depender do tipo de tabaco sendo tratado e então, estes valores podem ser ajustados de acordo.

[047] Embora não tenha a intenção de ser limitativo, em modalidades particulares, o tabaco pode ser condicionado em uma unidade de condicionamento de cilindro direto. Após o condicionamento, o tabaco condicionado é, em geral, separado em partes (por exemplo, galhos são removidos da parte remanescente do material de tabaco). Esta separação pode ser alcançada, por exemplo, usando um moinho de debulha com separação a ar. Exemplos de equipamentos que podem ser empregados com essa finalidade podem ser fornecidos, por exemplo, por Cardwell Machine Company (Richmond, VA) ou MacTavish Machine Manufacturing Company (Chesterfield, VA). O material de tabaco separado, preferencialmente com galhos removidos do mesmo, pode ser diretamente submetido à fermentação ou pode, em algumas modalidades, ser transferido, por exemplo, para silos pré mistura. Tipicamente, diferentes tipos de tabaco são separadamente processados e cada tipo é transportado para um silo pré mistura diferente.

[048] Para algumas aplicações, pode ser desejável combinar dois ou mais tipos de tabaco. De acordo, em algumas modalidades, tabacos podem ser combinados a partir de duas ou mais fontes (por exemplo, dois os mais ou mais silos pré mistura) na proporção desejada. Por exemplo, o tabaco dos silos pré mistura pode, em determinadas modalidades, ser transportado por correias de pesagem dos silos pré mistura para ser combinado (por exemplo, em um graneleiro de mistura). Em algumas modalidades, o material de tabaco (um único tipo de tabaco ou uma forma misturada, tal como aqui descrito) pode ser, então, tirada e cortada para fornecer fios de material de tabaco de tamanho e largura desejados. Tais tamanho e largura podem variar, por exemplo, os tamanhos e larguras tipicamente denominados “corte fino”, “corte longo” e similares.

[049] Este tabaco cortado é submetido à fermentação, por exemplo, como aqui descrito, em geral. Em algumas modalidades, a fermentação pode vantajosamente ser conduzido dentro de um recipiente de fermentação em estado sólido (SSF), tal como um misturador, por exemplo, um misturador Plow (por exemplo, de Littleford Day, Inc.(Florence, KY)). Dentro do recipiente de fermentação, parâmetros que incluem o nível de umidade, salinidade e temperatura podem, beneficamente, ser modificados. Por exemplo, em algumas modalidades, o nível de umidade do tabaco é inicialmente modificado para garantir um nível de umidade de pelo menos cerca de 10 %, pelo menos cerca de 20 %, ou pelo menos cerca de 30 %, tal como entre cerca de 20 % e cerca de 50 % ou entre cerca de 30 % e cerca de 45 %. Em algumas modalidades, a salinidade do tabaco é inicialmente modificada para garantir a salinidade de pelo menos cerca de 1 %, tal como entre cerca de 1 % e cerca de 6 % com base no peso seco.

[050] A temperatura dentro do recipiente é tipicamente aumentada para uma primeira temperatura elevada, para causar a esporulação de pelo menos uma parte de qualquer bactéria formadora de esporos latente (isto é, Bacillus sp.) associada ao material de tabaco. Esta primeira temperatura elevada pode variar, porém é, em geral, pelo menos cerca de 80 °F ou pelo menos cerca de 85 °F, tal como dentro da faixa de cerca de 85 °F a cerca de 105 °F. esta primeira temperatura elevada é mantida por um intervalo de tempo suficiente para permitir que a esporulação aconteça (por exemplo, pelo menos cerca de 5 minutos, pelo menos cerca de 10 minutos, pelo menos cerca de 15 minutos, ou pelo menos cerca de 30 minutos, tal como entre cerca de 5 e cerca de 60 minutos). Em algumas modalidades, a temperatura é, então, ainda aumentada para uma segunda temperatura elevada, para que o calor mate as bactérias vegetativas. Esta segunda temperatura elevada pode variar, porém é, em geral, pelo menos cerca de 150 °F ou pelo menos cerca de 160 °F, tal como dentro da faixa de cerca de 160 °F a cerca de 212 °F. Esta temperatura é mantida por um intervalo de tempo suficiente para fornecer uma redução no número de bactérias vegetativas vivas (por exemplo, pelo menos cerca de 5 minutos, pelo menos cerca de 10 minutos, pelo menos cerca de 15 minutos, ou pelo menos cerca de 30 minutos). No entanto, em determinadas modalidades, este intervalo de tempo é vantajosamente controlado de modo a garantir que nenhuma formação de nitrosamina específica de tabaco substancial ocorra. Por exemplo, este intervalo de tempo pode, em algumas modalidades, ser entre cerca de 5 e cerca de 60 minutos.

[051] O material de tabaco é subsequentemente resfriado, por exemplo, a cerca de 100 °F ou menos, tal como entre cerca de 85 °F e cerca de 100 °F. O knockdown bacteriano alcançado por essas etapas do processo de aquecimento podem variar. Em algumas modalidades, o tratamento de um material de tabaco desta maneira pode fornecer o nível de knockdown bacteriano desejado. Em outras modalidades, um ciclo destas etapas de processo de aquecimento é insuficiente para alcançar o knockdown bacteriano desejado. De acordo, uma ou ambas destas etapas de processo de aquecimento podem ser, em algumas modalidades, repetidas independentemente ou em combinação duas ou mais vezes foi requerida para alcançar o knockdown bacteriano desejado. O knockdown bacteriano desejado é, em geral, a quantidade suficiente para substancialmente evitar a formação de TSNA durante o processo de fermentação. O valor específico requerido para alcançar este objetivo pode depender de uma variedade de fatores, tais como pH, taxa de inoculação, atividade de água, etc. Em algumas modalidades, um knockdown > log 1, > log 2, > log 3, ou > log 5 pode ser desejável. Em algumas modalidades, um nível de bactéria endógena residual < log 1 é requerido.

[052] O material de tabaco, apresentando um reduzido nível bacteriano, é, então, tratado com um ou mais microrganismos como aqui descrito. Em uma modalidade, o material de tabaco é primeiro tratado com uma solução tampão para fornecer um material de tabaco com um pH particular. Em algumas modalidades, o pH é vantajosamente entre cerca de 7 e cerca de 8 (por exemplo, cerca de 7,4). O tampão pode variar, e em algumas modalidades, pode compreende uma solução aquosa de carbonato de potássio, carbonato de sódio, carbonato de amônio ou uma combinação dos mesmos. Em determinadas modalidades, tal como uma solução tampão, pode ser preparada em um tanque de mistura que está acoplado ao recipiente no qual o material de tabaco é mantido. A solução tampão pode, então, ser aplicada ao material de tabaco através de um sistema de bombeamento. Outros métodos para aplicação em uma solução tampão em um material de tabaco são conhecidos e devem ser entendidos como aqui compreendidos também. Preferencialmente, o tampão é completamente misturado com o material de tabaco, por exemplo, pelo emprego de um misturador para garantir a mistura adequada e igual entre o material de tabaco e o tampão.

[053] Um ou mais microrganismos aqui descritos são, então, aplicados ao material tamponado. O microrganismo pode ser aplicado, por exemplo, em uma forma de solução e pode ser aplicado de maneira similar como a solução tampão. Microrganismos relevantes incluem aqueles referenciados acima, incluindo, porém não se limitando a, bactéria não redutora de nitrato e / ou levedura, por exemplo, Tetragenococcus halophilus. A taxa de inoculação pode variar, porém taxas de inoculação representativas estão entre cerca de 103UFC e cerca de 109UFC. Após a introdução dos microrganismos e durante o processo de fermentação seguinte, a umidade do material de tabaco ao longo da fermentação pode, em algumas modalidades, ser ajustada. A umidade do tabaco fermentado é vantajosamente mantida dentro da faixa de cerca de 35 % de umidade a cerca de 50 % de umidade e, idealmente, dentro da faixa de cerca de 40 % a cerca de 45 % ao longo da fermentação.

[054] De forma similar, a temperatura do tabaco fermentado é vantajosamente controlada (por exemplo, mantida) ao longo do processo de fermentação. Exemplos de temperaturas nas quais o material de tabaco é mantido estão na faixa de cerca de 80 °F a cerca de 95 °F. Métodos para o controle da temperatura são, em geral, conhecidos. Em algumas modalidades, a temperatura pode ser controlada por uma camisa de aquecimento / resfriamento associado com um recipiente SSF no qual a fermentação é conduzida. O nível de oxigênio do tabaco fermentado é também beneficamente controlado ao longo da fermentação. Os métodos são conhecidos para o controle do teor de oxigênio dentro do recipiente e incluem, porém não se limitam a, empregar filtros de ar com alta eficiência na separação de partículas (HEPA) onde o ar possa passar dentro do recipiente, e / ou por agitação ou, de outra forma, mover o material de tabaco durante a fermentação (por exemplo, por escovas rotativas em um recipiente de mistura, tais como 1 ou mais vezes por semana, por exemplo, cerca de 1 a cerca de 3 vezes por semana).

[055] O tempo no qual o material de tabaco é mantido sob estas condições podem variar. Tipicamente, o material de tabaco é mantido sob estas condições até que o nível desejável de fermentação é alcançado. Em algumas modalidades, a fermentação pode ser monitorada pela avaliação do nível de, por exemplo, ácido málico e cítrico, os quais são depletados durante a fermentação. Embora não haja a intenção de ser limitativo, exemplos de tempos de fermentação podem ser pelo menos cerca de 2 semanas ou pelo menos cerca de 3 semanas, por exemplo, cerca de 3 a cerca de 4 semanas. Estes valores podem variar, por exemplo, dependendo de tais parâmetros como taxa de inoculação, umidade, temperatura, pH, salinidade e aeração. O pH final após uma fermentação bem-sucedida deve ser de aproximadamente 7,6 - 7,9.

[056] Quando a fermentação é completada na extensão desejada, o material de tabaco fermentado é tipicamente tratado com calor. Este tratamento com calor pode, em algumas modalidades, ser suficiente para parar a fermentação e matar por aquecimento quaisquer micróbios vegetativos ativos. Este tratamento por calor pós fermentação pode ser alcançado, por exemplo, de uma maneira similar àquela descrita acima com relação ao tratamento com calor antes da fermentação. Em algumas modalidades, diversos componentes podem, então, ser adicionados ao material de tabaco fermentado tratado com calor. Por exemplo, preservantes, revestimentos, umidade e salinidade pode ser ajustado através da adição dos componentes adequados ao material de tabaco fermentado tratado com calor (por exemplo, pela adição de tais componentes diretamente ao recipiente de fermentação). Alternativamente, em algumas modalidades, determinados componentes podem ser adicionados antes da fermentação quando é vantajosamente para ajustar o tanque de reagentes antes da fermentação. Em determinadas modalidades, após o método descrito acima, o material de tabaco tratado com calor pode ser seco (por exemplo, para um nível de umidade de entre cerca de 15 % e cerca de 20 %, por exemplo, cerca de 18 % umidade) para armazenamento e transporte. Tal material de tabaco tratado com calor pode ser subsequentemente processado, por exemplo, pelo ajuste dos teores finais de salinidade, preservante, revestimento e umidade.

[057] Os tipos de tratamento aqui descritos podem ser realizados de forma independente ou os tratamentos aqui descritos podem ser realizados em combinação. Por exemplo, os métodos de tratamento pré cura aqui descritos podem ser empregados uma, duas, três vezes ou mais antes do final do processo de cura. Tais tratamentos podem empregar a mesma composição de tratamento ou composições de tratamento diferentes. Em algumas modalidades, os materiais de tabaco são tratados com ambos um sal e uma ou mais bactéria de ácido lático antes do final da cura. De forma similar, o tratamento de fermentação aqui descrito pode ser conduzido uma vez ou múltiplas vezes durante o processo de fermentação (isto é, pela adição de um ou mais tipos de microrganismos ao material de tabaco uma vez ou múltiplas vezes durante fermentação). Nos casos em que os microrganismos são adicionados múltiplas vezes durante a fermentação, o(s) tipo(s) de microrganismos adicionados podem ser o mesmo ou diferentes.

[058] Em uma modalidade particular, uma planta de tabaco é tratada com um sal (por exemplo, NaCl ou KCl) antes da colheita, após o tratamento com uma ou mais bactérias de ácido lático ou levedura tolerante ao sal pré cura (por exemplo, durante os estágios iniciais de cura), após o tratamento com um ou mais microrganismos durante a fermentação. Em determinadas modalidades, o tratamento com sal pré cura pode resultar na presença de cloreto no material de tabaco ao longo da cura e processos de fermentação e, em algumas modalidades, acredita-se que o cloreto diminua a redução indesejada do nitrato durante a fermentação e / ou diminua a formação de TSNAs indesejáveis.

[059] O tratamento do tabaco da maneira aqui descrita pode fornecer um material de tabaco tratado com, em algumas modalidades, níveis comparáveis de TSNA como comparado com o material de tabaco inicial (por exemplo, o material como colhido). Vantajosamente, o tabaco pode ser tratado tal como aqui descrito e fermentado para fornecer um material de tabaco fermentado apresentando um nível de TSNA que não é maior do que o nível de TSNA do material de tabaco submetido à fermentação. Em outras palavras, em determinadas modalidades, o processo de fermentação é controlado como aqui descrito de modo a garantir que pouco TSNA (incluindo substancialmente nenhum TSNA e nenhum TSNA) é formado durante o processo de fermentação. Em algumas modalidades, o tabaco pode ser tratado e fermentado para fornecer um material de tabaco fermentado apresentando um nível de TSNA que não é superior ao nível de TSNA do tabaco tal como colhido.

[060] Em algumas modalidades, uma ou mais etapas como aqui descritas pode levar a níveis diminuídos de TSNAs quando comparado ao tabaco não tratado (incluindo níveis significativamente diminuídos de TSNAs). Por exemplo, em determinadas modalidades, a quantidade de TSNA no tabaco tratado como aqui discreto pode ser de cerca de 75 % ou menos que a quantidade tipicamente contida no tabaco fermentado (não tratado), cerca de 50 % ou menos, cerca de 25 % ou menos, cerca de 10 % ou menos, cerca de 5 % ou menos, cerca de 2 % ou menos, ou cerca de 1 % ou menos. Por exemplo, em determinadas modalidades, a quantidade de TSNA no material de tabaco fermentado pode ser de cerca de 20 μg ou menos, cerca de 15 μg ou menos, cerca de 12 μg ou menos, ou cerca de 10 μg ou menos. De forma desejada, a quantidade de TSNA no tabaco antes da fermentação é mínima (por exemplo, estando dentro das faixas indicadas acima) e a quantidade de TSNA no tabaco após a fermentação não é significativamente mais alta (por exemplo, a quantidade de TSNA no tabaco fermentado é igual ou inferior à quantidade de TSNA no tabaco logo antes da fermentação).

[061] Em algumas modalidades, os métodos de tratamento aqui descritos podem fornecer um material de tabaco tratado com alto teor de sal (incluindo, em algumas modalidades, alto teor de cloreto). Vantajosamente, o teor de cloreto do material de tabaco tratado como aqui descrito está entre 0 % e cerca de 4 %, por exemplo, entre cerca de 0.1 % e cerca de 3 %, ou entre cerca de 0.5 % e cerca de 3 % em peso, com base em peso seco. Em determinadas modalidades preferidas, o teor de cloreto do material de tabaco tratado como aqui descrito é inferior a cerca de 4 %, inferior a cerca de 3 %, ou inferior a cerca de 2 % em peso. Embora o teor de cloreto / sal aumentado possa, em determinadas aplicações, ser prejudicial, em algumas modalidades, a presença do sal / cloreto aumentado pode ser não prejudicial e, em determinadas modalidades, desejável. Por exemplo, tais materiais tratados podem ser menos desejáveis para uso em artigos de fumo, em que a combustão do material de tabaco ocorre. Teores de cloreto / sal aumentados podem, em algumas modalidades, ser mais aceitáveis e / ou desejáveis nas aplicações em que o material de tabaco não é queimado (por exemplo, nos produtos de tabaco sem fumo e / ou em artigos de fumo eletrônicos), como será descrito mais completamente abaixo.

[062] É observado que outros benefícios podem surgir dos tipos de tratamento aqui descritos. Por exemplo, em determinadas modalidades, os perfis de sabor e / ou aroma modificado podem ser obtidos em diversas etapas de fermentação na presença de microrganismos, como comparado com os perfis de tabaco sob fermentação na ausência de tratamento de microrganismo.

[063] Os materiais de tabaco tratado fornecidos de acordo com a presente descrição podem ser ainda processados e usados de diversas formas, em geral, conhecidas no estado da técnica. Vide, por exemplo, pedidos de patente US publicados nos. 2012/0272976 para Byrd et al. e 2014/0299136 para Moldoveanu et al., os quais são aqui incorporados por referência. Em diversas modalidades, o tabaco tratado pode ser empregado em artigos de fumo, produtos de tabaco sem fumo e artigos de fumo eletrônicos. Determinados materiais de tabaco tratado aqui descritos podem encontrar uso, por exemplo, em produtos em que o sal e / ou o teor de cloreto não impacta negativamente nas propriedades do produto, em que o teor de TSNA é vantajosamente minimizado e / ou em que materiais fermentados são beneficamente empregados.

[064] São de particular interesse os produtos de tabaco sem fumo compreendendo materiais de tabaco tratados como aqui descrito, a composição do qual pode variar. Vide, por exemplo, aqueles componentes representativos, combinações de componentes, quantidades relativas destes componentes e ingredientes em relação ao tabaco e formas e métodos para empregar estes componentes, definidos na patente US no. 8.061.362 para Mua et al. e patentes US publicadas nos. 2007/0062549 para Holton, Jr. et al.; 2007/0186941 para Holton, Jr. et al.; e 2008/0029110 para Dube et al., cada um sendo aqui incorporado por referência.

[065] Em determinadas modalidades, produtos snus ou tipo rapé (por exemplo, materiais de tabaco de base incorporados dentro de bolsas lacradas) compreendendo os tipos de materiais de tabaco tratados aqui descritos, por exemplo, incluindo, porém não se limitando a, material de tabaco fermentado tratado (isolado ou em combinação com outros tipos de materiais de tabaco) são fornecidos. Exemplos de modalidades de tais produtos snus são ilustradas e descritas, por exemplo, no pedido de patente US publicado no. 20120279510 para Marshall et al., o qual é aqui incorporado por referência. Descrições de diversos componentes de produtos snus e componentes do mesmo são também definidos na patente US publicada no. 2004/0118422 para Lundin et al., o qual é aqui incorporado por referência. Vide, também, por exemplo, patente US nos. 4.607.479 para Linden; 4.631.899 para Nielsen; 5.346.734 para Wydick et al.; e 6.162.516 para Derr; e patentes US publicadas nos. 2005/0061339 para Hansson et al. e 2010/0018539 para Brinkley et al., cada um o qual é aqui incorporado por referência.

[066] É notado que, embora a discussão aqui fornecida foque em uma grande parte no tratamento do tabaco, uma variedade de outras plantas (incluindo frutas, vegetais, flores e componentes da mesma) podem ser tratados de acordo com os métodos aqui fornecidos para plantas, componentes de planta, e materiais e produtos produzidos a partir das mesmas apresentando níveis modificados de determinados compostos associados ao mesmo.

Experimental:

[067] A presente invenção é mais completamente ilustrada pelos exemplos que seguem, os quais são definidos para ilustrar a presente invenção e não devem ser interpretados como limitativos da mesma. A menos que indicado de outra forma, todas as partes e porcentagens estão em peso, e todas as porcentagens em peso estão expressas em base seca, o que significa a exclusão do teor de água, a menos que indicado o contrário.

Exemplo1:Tratamentodotabacoprécuradocomasoluçãode tratamento

[068] Tabaco escuro curado ao ar é tratado cinco horas antes da colheita com um ou mais de uma solução de bactéria probiótica, uma solução de enzima e / ou uma solução de sal de cloreto de sódio 3 %. A solução é aplicada usando um pulverizador costal. As soluções são baseadas em 100 galões de solução por acre, usando espaçamentos de planta recomendados e a dosagem por planta é fornecida abaixo. O tabaco tratado é colhido e amostras de folhas do meio do caule foram analisadas para contagens de bactéria total, contagens de bactéria entérica e contagens de Lactobacillus. Dez gramas de cada amostra de tabaco tratado é posicionada em tampão de fosfato Butterfields e diluída de 10-2a 10-8vezes com água. As diluições de amostra de tabaco tratado são aplicadas em PCA para contagens de bactéria aeróbica total, em VRBA para contagens de bactéria gram negativa e a MRS para contagens de bactéria anaeróbica (Lactobacillus). O número de colônias de bactérias, como visualizado sob magnitude, são contados para estimar o número total de unidades formadoras de colônia por grama, UFC / g.

[069] O tabaco tratado com uma solução probiótica disponível pela CVS (solução preparada para fornecer 6.00 x 109UFC por planta) exibiu uma redução de bactéria total após o tratamento de 91 %, uma redução de bactéria entérica após o tratamento de 40 % e uma redução de Lactobacillus após o tratamento de 46 % (todas com base na contagem de bactéria total antes e após o tratamento).

[070] O tabaco tratado com uma solução probiótica disponível pela Walgreens (solução preparada para fornecer 6.40 x 109UFC por planta) exibiu uma redução de bactéria total após o tratamento de 96 %, uma redução de bactéria entérica após o tratamento de 58 % e uma redução de Lactobacillus após o tratamento de 42 % (todas com base na contagem de bactéria total antes e após o tratamento).

[071] O tabaco tratado com uma solução probiótica disponível pela CVS (solução preparada para fornecer 6.00 x 109UFC por planta) em combinação com um tensoativo (Surf- Ac® de Drexel Chemical Company) exibiu uma redução de bactéria total após o tratamento de 95 %, uma redução de bactéria entérica após o tratamento de 66 % e um aumento de Lactobacillus após o tratamento de 57 % (todas com base na contagem de bactéria total antes e após o tratamento).

[072] O tabaco tratado com uma solução probiótica de Lactobacillus plantarum (solução preparada para fornecer 6.64 x 1010UFC por planta) exibiu uma redução de bactéria total após o tratamento de 95 %, uma redução de bactéria entérica após o tratamento de 75 % e uma aumento de Lactobacillus após o tratamento de 43 % (todas com base na contagem de bactéria total antes e após o tratamento).

[073] O tabaco tratado com uma solução probiótica de Lactobacillus acidophilus (solução preparada para fornecer 2.72 x 1010UFC por planta) exibiu uma redução de bactéria total após o tratamento de 93 %, uma redução de bactéria entérica após o tratamento de 20 % e uma redução deLactobacillus após o tratamento de 33 % (todas com base na contagem de bactéria total antes e após o tratamento).

[074] O tabaco tratado com uma solução probiótica de Bifidobacterium lactis (solução preparada para fornecer 4.16 x 1010UFC por planta) exibiu uma redução de bactéria total após o tratamento de 82 %, uma redução de bactéria entérica após o tratamento de 25 % e uma reduçãoLactobacillus após o tratamento de 16 % (todas com base na contagem de bactéria total antes e após o tratamento).

[075] O tabaco tratado com uma solução probiótica de Lactobacillus helveticus (solução preparada para fornecer 5.20 x 109UFC por planta) exibiu uma redução de bactéria total após o tratamento de 97 %, uma redução de bactéria entérica após o tratamento de 39 %, e um aumento deLactobacillus após o tratamento superior a 400 % (todas com base na contagem de bactéria total antes e após o tratamento).

[076] O tabaco tratado com uma solução de enzima PreventASe™ (solução preparada para fornecer 3.2 mL de asparaginase por planta) exibiu uma redução de bactéria total após o tratamento de 88 %, uma redução de bactéria entérica após o tratamento de 75 % e uma redução deLactobacillus após o tratamento de 43 % (todas com base na contagem de bactéria total antes eapós o tratamento).

[077] O tabaco tratado com uma solução de NaCl 3 % exibiu uma redução de bactéria total após o tratamento de 94 %, uma redução de bactéria entérica após o tratamento de 76 % e um aumento de Lactobacillus após o tratamento superior a 400 % (todas com base na contagem de bactéria total antes e após o tratamento).

[078] Os dados ilustram que todas as soluções de tratamento forneceram uma diminuição na bactéria total associada ao material de tabaco tratado (como comparado com o material de tabaco antes do tratamento). O material de tabaco tratado com sal (NaCl) exibiu um aumento significativo nas bactérias Lactobacillus desejadas. Esta descoberta pode proporcionar que materiais de tabaco tratados com NaCl (ou outro sal) particularmente adequados para processos de fermentação adicionais e para a incorporação de tais materiais de tabaco fermentado em produtos de tabaco sem fumo. Adicionalmente, o material de tabaco tratado com Lactobacillus helveticus exibiu um aumento substancial na bactéria Lactobacillus após o tratamento. Embora algum aumento possa ser esperado devido à presença de bactéria Lactobacillus na solução de tratamento, o aumento é muito mais alto do que aquele notado para materiais de tabaco tratados com solução probiótica de Lactobacillus (por exemplo, tabaco tratado com Lactobacillus plantarum exibiu apenas um aumento de 43 % e tabaco tratado com Lactobacillus acidophilus exibiu uma diminuição de 33 % na bactéria Lactobacillus). Consequentemente, o material de tabaco tratado com Lactobacillus helveticus pode ser particularmente bem adequado para processos de fermentação adicionais e também na incorporação de tais materiais de tabaco fermentados em produtos de tabaco sem fumo.

Exemplo 2: Tratamento de tabaco com microrganismo

[079] O tabaco (por exemplo, tabaco tratado por quaisquer dos métodos apresentados acima no Exemplo 1) é submetido à fermentação pela umidificação do tabaco (por exemplo, ao submeter o tabaco a condições de umidade). O controle de bactéria, levedura e fungos endógenos é controlado durante o processo de fermentação pela seleção e manutenção da atividade de água e condições de pH, salinidade e temperatura apropriadas para fornecer condições apropriadas para a cultura inicial ou microrganismo(s) endógeno(s) apropriado(s) para fermentar o tabaco e evitar a formação do precursor de TSNA. Uma solução de bactéria (por exemplo, Tetragenococcus halophilus), isolada ou em combinação com levedura, é aplicada ao tabaco em fermentação e o tabaco é fermentado sob tais condições por um período de cerca de 1 a 6 semanas. Um teor de TSNA diminuído no tabaco em relação ao tabaco fermentado tratado como no Exemplo 1 porém sem tratamento com Tetragenococcus halophilus durante a fermentação é observado.

[080] Muitas modificações e outras modalidades da invenção se tornarão aparentes para um técnico no assunto ao qual esta invenção pertence, tendo o benefício dos ensinamentos apresentados na descrição acima. Sendo assim, será entendido que a invenção não deve ser limitada às modalidades específicas descritas e que as modificações e outras modalidades tem a intenção de serem inclusas no escopo das reivindicações anexas. Embora termos específicos sejam aqui empregados, eles são usados de forma genérica e apenas com sentido descritivo, e não para fins de limitação.

Claims

1. Método de modificação do teor de nitrosamina específica de tabaco de um material de tabaco CARAC TERIZADO pelo fato de compreender:colocar em contato um material de tabaco com uma composição de tratamento, em que a composição de tratamento compreende um sal, um açúcar, uma enzima, uma bactéria de ácido lático, uma levedura, ou uma combinação de dois ou mais destes, em que colocar em contato fornece um material de tabaco tratado apresentando um teor de bactéria total reduzido;curar o material de tabaco tratado para fornecer um material de tabaco curado;adicionar um ou mais microrganismos ao material de tabaco curado, em que o um ou mais microrganismos estão presentes em quantidades exógenas ao material de tabaco curado; efermentar o material de tabaco curado para fornecer um material de tabaco fermentado apresentando um teor de nitrosamina específica de tabaco que é reduzido em relação ao material de tabaco fermentado que não foi colocado em contato com uma composição de tratamento e que não foi fermentado na presença dos referidos microrganismos.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERIZADO pelo fato de o material de tabaco ser selecionado do grupo que consiste de uma semente de tabaco, uma muda de tabaco, uma planta viva imatura, uma planta viva madura, ou uma parte das mesmas.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERI ZADO pelo fato de a composição de tratamento compreender um sal contendo cloreto.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, CARAC TERI ZADOpelo fato de a composição de tratamento compreender NaCl ou KCl.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de o material de tabaco compreender tabaco selecionado do grupo que consiste de Black Mammoth, Greenwood, Little Wood, Madole melhorado, TR Madole, Little Crittendon, DF 911, KY 160, KY 171, KY 180, KY 190, KY 309, KY VA 312, VA 355, VA 359, DF 485, TN D94, TN D950, e combinações dos mesmos.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADOpelo fato de que o um ou mais microrganismos não facilitam a conversão de nitrato a nitrito.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERI ZADO pelo fato de o um ou mais microrganismos serem capazes de realizar uma competição de crescimento com um ou mais microrganismos redutores de nitrato que são nativos do tabaco.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERI ZADO pelo fato de o um ou mais microrganismos serem dissipadores de nitrito.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERI ZADO pelo fato de o um ou mais microrganismos compreenderem genes que codificam para a nitrito redutase.

10. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERI ZADO pelo fato de o um ou mais microrganismos compreenderem bactéria.

11. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERI ZADO pelo fato de o um ou mais microrganismos compreenderem Tetragenococcus halophilus.

12. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERI ZADOpelo fato de o um ou mais microrganismos compreenderem bactéria geneticamente modificada.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12, CARAC TERI ZADOpelo fato de a bactéria geneticamente modificada compreender genes inseridos que codificam para a nitrito redutase.

14. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERI ZADO pelo fato de a nitrosamina específica de tabaco estar reduzida de 10% ou mais.

15. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARAC TERI ZADO pelo fato de a nitrosamina específica de tabaco estar reduzida de 20% ou mais.

16. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de o teor de nitrosamina específica de tabaco estar reduzida de 50% ou mais.

17. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de o teor de nitrosamina específica de tabaco do material de tabaco fermentado ser não mais do que do teor de nitrosamina específica de tabaco do material de tabaco curado.

18. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de o teor de cloreto do material de tabaco fermentado estar entre 0,5% em peso e 3% em peso.

19. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ainda compreender:processar o material de tabaco fermentado para fornecer um material de tabaco processado em uma forma adequada para incorporação em um produto de tabaco; e incorporar o material de tabaco processado dentro de um produto de tabaco sem fumo.

20. Método, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de o material de tabaco processado estar na forma de uma mistura de tabaco.

21. Produto de tabaco sem fumo CARACTERIZADO pelo fato de ser preparado de acordo com o método conforme definido na reivindicação 19.

22. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ainda compreender:condicionar um material de tabaco colhido a um nível de umidade desejado;separar o galho do material de tabaco colhido para fornecer um material de tabaco desengalhado; ecortar o material de tabaco desengalhado para fornecer o material de tabaco na forma de um material de tabaco cortado e desengalhado;em que a etapa de colocar em contato compreende colocar em contato o material de tabaco cortado e desengalhado com sal e aquecer a mistura resultante.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADO pelo fato de a etapa de colocar em contato ainda compreender pasteurizar a mistura.

24. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARAC TERI ZADO pelo fato de a etapa de condicionamento compreender condicionar o material de tabaco a um nível de umidade de 20% a 25%.

25. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADO pelo fato de o nível de umidade ser de 22 %.

26. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADO pelo fato de as etapas de colocar em contato e fermentar serem conduzidas em um recipiente de fermentação em estado sólido.

27. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARAC TERI ZADO pelo fato de a etapa de fermentar ainda compreender controlar a temperatura, umidade, nível de oxigênio, ou qualquer combinação dos mesmos.

28. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARAC TERI ZADO pelo fato de o um ou mais microrganismos compreenderem Tetragenococcus halophilus.

29. Método, de acordo com a reivindicação 28, CARAC TERI ZADO pelo fato de a Tetragenococcus halophilus estar presente em uma quantidade de 106UFC.

30. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARAC TERI ZADO pelo fato de o um ou mais microrganismos compreenderem bactéria Tetragenococcus halophilus geneticamente modificada, compreendendo genes inseridos que codificam para a nitrito redutase.

31. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARAC TERIZADO pelo fato de ainda compreender submeter o material de tabaco fermentado à temperatura elevada.

32. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADO pelo fato de ainda compreender adicionar um ou mais componentes ao material de tabaco fermentado, em que o um ou mais componentes compreende componentes selecionados do grupo que consiste de sal, preservantes, misturas de revestimento, e umidade.

33. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADO pelo fato de ainda compreender o ajuste do nível de mistura do material de tabaco fermentado.

34. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADO pelo fato de o teor de nitrosamina específica de tabaco do material de tabaco fermentado ser igual ou inferior ao teor de nitrosamina específica de tabaco no material de tabaco cortado e desengalhado.