BR112017008344B1

BR112017008344B1 - Extrato, uso de um extrato, e, composição cosmética ou dermofarmacêutica.

Info

Publication number: BR112017008344B1
Application number: BR112017008344-2A
Authority: BR
Inventors: Albert SOLEY ASTALS; Núria Alminana Domènech; Antonio Ferrer Montiel; Marc Esplugas González
Original assignee: Lipotec, S.A.U.
Priority date: 2014-10-31
Filing date: 2015-11-02
Publication date: 2022-04-26
Also published as: AU2015340458B2; AU2015340458A1; ES2814552T3; CN116370397A; JP2018500279A; BR112017008344A2; KR102448943B1; US10265348B2; CN107106617A; WO2016066857A1; JP6714589B2; EP3212206B1; EP3212206A1; US20170333491A1; KR20170072341A

Abstract

Extrato de uma cepa bacteriana para seu uso no tratamento e/ou no cuidado da pele e/ou das membranas mucosas, bem como suas composições cosméticas e/ou dermofarmacêuticas. Em particular, seu uso para redução de sebo e firmeza da pele.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] Esta invenção refere-se a um produto extracelular de origem bacteriana, que promove a redução do sebo. O dito produto é secretado por uma cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica. A presente invenção refere-se também ao uso do dito produto extracelular de origem bacteriana em composições cosméticas ou dermofarmacêuticas para o tratamento e/ou o cuidado da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[002] A pele, as membranas mucosas, os cabelos e/ou as unhas constituem uma barreira física entre o organismo e o seu ambiente. A pele é composta de dois tecidos: a epiderme e a derme. A epiderme é a camada mais externa da pele que é impermeável e, portanto, proporciona proteção contra agentes externos. Trata-se de um epitélio queratinizado pluriestratificado, que se renova continuamente.

[003] A epiderme tem um alto teor de queratina, proveniente do tipo principal de células da epiderme (queratinócitos), melanina e um teor significativo de lipídios, que se encontram no estrato córneo ou no filme hidrolipídico na superfície cutânea. Os lipídios de origem sebácea e queratinócitos são encontrados no filme lipídico que cobre a superfície cutânea, onde a maior parte desses lipídios são de origem sebácea [A. Pappas, “Epidermal Surface Lipids”, Dermato-Endocrinology 2009, 1, 72-76].

[004] A secreção sebácea é produzida nas glândulas sebáceas, que são encontradas em todo o corpo, exceto nas mãos e solas dos pés, e são encontradas em densidades de 400 a 900 glândulas por cm2 no rosto [K. R. Smith and D. M. Thiboutot, “Sebaceous gland lipids: friend or foe?”, Journal of Lipid Research 2008, 49, 271-281], principalmente associadas ao folículo piloso, onde as secreções sebáceas chegam à superfície da pele através de seu canal. A secreção das glândulas sebáceas, o sebo, é uma substância oleosa e cerosa que consiste em uma mistura constituída principalmente por ácidos graxos, diglicerídeos, triglicerídeos, colesterol e esqualeno, que proporciona funções de termorregulação e diminuição da perda de água da superfície da pele.

[005] Em seres humanos, a quantidade de sebo produzido varia de acordo com o grupo populacional, dependendo da idade e dos fatores hormonais de regulação também. Dependendo da quantidade de sebo, distingue-se entre: - Pele oleosa. Pele oleosa é causada por uma função excessiva das glândulas sebáceas. Quando há um excesso de sebo na pele, a pele é caracterizada por uma textura mais espessa, uma aparência gordurosa e brilhante, bem como pela presença de poros expandidos e imperfeições cutâneas. - Pele mista. Caracteriza-se pela presença simultânea de áreas secas e oleosas. Comumente, a área oleosa está localizada na testa, nariz e queixo (conhecido como zona T). A parte do rosto fora da zona T é normalmente a área seca, devido à pele mais fina nesta área, o que aumenta a sua descamação. - Pele seca. A falta de sebo implica uma incapacidade de reter bastante hidratação, o que torna uma pele frágil com uma maior tendência à descamação e rugas finas. Com a característica de mostrar poros imperceptíveis, a reduzida capacidade de função de barreira implica uma maior susceptibilidade a fatores externos nocivos como UV, frio e vento. - Pele normal. Com uma quantidade adequada de sebo que permite um bom equilíbrio hídrico, esse tipo de pele mostra uma boa elasticidade e resistência, com quase nenhum poro visível e tom de pele uniforme.

[006] Embora dependa em grande parte da idade e origem étnica, há uma média importante da população que apresenta pele oleosa, juntamente com a existência adicional da população com pele mista com uma zona T oleosa.

[007] Alguns distúrbios dermatológicos relacionados ao excesso de sebo são: - Seborreia, um distúrbio funcional das glândulas sebáceas que produzem uma hipersecreção de sebo, que provoca pele vermelha, irritada e escamosa. - Acne, uma infecção que ocorre quando há uma obstrução dos poros da pele onde sebo, células mortas e bactérias ficam presos. - Cravos, um acúmulo de sebo endurecido e uma massa de células queratinizadas que causam um bloqueio do caminho para o folículo. - Milium ou manchas lácteas, um acúmulo de células queratinizadas e material sebáceo preso sob a pele.

[008] Dentro das glândulas sebáceas, o sebo é liberado quando os sebócitos maduros rompem dentro da glândula, e o sebo sai para a superfície da pele através do canal do folículo piloso. Até chegar à liberação de sebo, a função da glândula compreende que existe uma população de células não diferenciadas na camada adjacente ao folículo piloso que iniciam a sua proliferação à medida que se deslocam para a camada basal da glândula e se transformam em sebócitos enchidos com lipídios quando chegam à parte central da glândula, onde eventualmente e progressivamente se rompem [C. Nieman and V. Horsley, “Development and Homeostasis of the sebaceous gland”, Seminars in Cell & Developmental Biology 2012, 23, 928- 936].

[009] Um grande número de compostos mostrou os seus efeitos na regulação da função das glândulas sebáceas, tais como androgênios, estrogênios, retinoides, receptores do tipo LXR (receptor de fígado X), receptores ativados por proliferadores de peroxissomas, hormônios de crescimento/fatores de crescimento tipo insulina e a família de melanocortinas [K. R. Smith and D. M. Thiboutot, “Sebaceous gland lipids: friend or foe?”, Journal of Lipid Research 2008, 49, 271-281].

[0010] A família das melanocortinas é composta por um grupo de peptídeos estruturalmente relacionados com propiomelanocortina (POMC), e com os receptores de melanocortina (MCRs) que regulam os efeitos dos peptídeos melanocortínicos. Os MCRs são associados a proteínas G (GPCRs) e transferem a sinalização por diferentes vias: produção de adenosina monofosfato cíclico (cAMP), ativação da proteína quinase A e aumento da concentração de cátion [Ca2+].

[0011] MC5R é um dos diferentes receptores de melanocortina que foram caracterizados em vários tecidos humanos e está envolvido na produção de lipídios [M.A. Bednarek et al, “Potent and Selective Peptide Agonists of α- Melanocite Stimulating Hormonone (αMSH) Action at Human Melanocortin Receptor 5; their Synthesis and Biological Evaluation in vitro”, Chem. Biol. Drug. Des. 2007, 69, 350-355]. Por exemplo, camundongos transgênicos que não tinham expressão do receptor de MC5R mostraram uma redução acentuada na produção de sebo [D.M. Thibotout et al, “The Melanocortin 5 Receptor is Expressed in Human Sebaceous Glands and Rat Preputial Cells”, J. Invest. Dermatol. 2000, 115, 614-619]. Além disso, o MC5R é considerado um marcador de diferenciação de sebócitos, uma vez que o MC5R não é detectado em células sebáceas indiferenciadas enquanto é detectado em células sebáceas nos estágios posteriores de diferenciação, mas não em células sebáceas basais indiferenciadas. Similarmente, o MC5R é apenas detectável em culturas in-vitro no início da diferenciação e em células sebáceas totalmente diferenciadas apresentando grânulos lipídicos proeminentes [L. Zhang et al, “Melanocortin-5 receptor: A marker of human sebocyte differentiation”, Peptides 2006, 27, 413-420]. Uma vez que o MC5R é um marcador que se correlaciona com o processo de diferenciação sebácea que leva à produção de sebo, a inibição desse receptor de MC5R pode ser usada como estratégia para a redução da produção de sebo e consequentemente para o tratamento e/ou prevenção de distúrbios e/ou doenças relacionadas ao excesso de sebo.

[0012] Além disso, demonstrou-se que a inibição do receptor de MC5R é benéfica no tratamento de dermatite seborreica, câncer e doenças inflamatórias (US 2009/221558). Por exemplo, a síndrome de Muir-Torre consiste em adenomas em glândulas sebáceas associadas a um adenocarcinoma interno (geralmente no cólon, próstata, mama ou ovário) e a prevenção da diferenciação de células sebáceas através da inibição do receptor de MC5R pode ser eficaz no tratamento do crescimento tumoral (US 2009/221558). Verificou-se também que a inibição do receptor de MC5R é benéfica para o tratamento de anorexia ou caquexia (US 2003/110518) e para o tratamento de hidrosadenite supurativa e produção excessiva de cerume (WO 03/040118 A1).

[0013] É também conhecido que certos compostos, tais como estrogênios, que inibem glândulas sebáceas têm um efeito estimulador na síntese de colágeno e, por conseguinte, têm um efeito firmador da pele [A. Parchami, R.A. Fatahian Dehkordi, “Effect of ovariectomy and chronic sex steroid administration on rabbit skin”, Global Veterinaria, 2010, 4(6), 610615].

[0014] É descrita na técnica anterior uma substância polimérica extracelular proveniente do mar, MatmarineTM, que atua no receptor de MC5R [Soap, Perfumery & Cosmetics, Product Innovation 2013, page 39]. Diz-se que MatmarineTM diminui a taxa de sebo (8,4%), o número (20,5%) e a área dos poros (18,8%).

[0015] Surpreendentemente, o requerente da presente invenção verificou que extratos de peso molecular inferior a 10 kDa produzidos por cepas de Pseudoalteromonas antarctica inibem oreceptor de MC5R e aumentam a síntese de colágeno na pele.

[0016] Sabe-se da técnica anterior que uma glicoproteína produzida pela espécie Pseudoalteromonas antarctica tem propriedades de cura (EP 1402898 B1), umedecimento e repara distúrbios de queratinização da pele (EP 2337556 A1). A técnica anterior também descreve um perfil de proteínas na vesícula de membrana de Pseudoalteromonas antarctica com pesos moleculares de 109 KDa, 52,5 KDa, 48 KDa, 44 KDa, 42 KDa, 34,5 KDa, 33 KDa, 31 KDa e 24 KDa. O peso molecular médio da proteína principal está entre 98 e 112 KDa [Estudo morfológico e fisiológico de Pseudoalteromonas antarctica NF3 e caracterização de vesículas de membrana presentes no material extracelular produzido, Tese de Doutorado de Maria Nevot, arquivada na Universidade de Barcelona].

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0017] A tecnologia descrita proporciona uma solução para a redução de soro na pele, membranas mucosas e/ou cabelo por um extrato de uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica.

BREVE DESCRIÇÃO DO DESENHO

[0018] Figura 1: Os gráficos de densidade mostram parâmetros morfológicos de tamanho (FSC-A) e granularidade (SSC-A) para sebócitos cultivados em diferentes condições de cultura. Os sebócitos indiferenciados mostram duas populações de células principais com níveis de granularidade similares, mas dois tamanhos diferentes. Os sebócitos diferenciados mostram uma população celular única caracterizada por níveis de granularidade altos e tamanho de célula pequeno. Os sebócitos tratados com 2,5 μg/ml do extrato obtido de acordo com o exemplo 1 mostram uma alteração na morfologia diminuindo a granularidade e aumentando o tamanho das células similares aos sebócitos indiferenciados.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[0019] Esta invenção refere-se ao uso cosmético e/ou dermofarmacêutico dos extratos de peso molecular inferior a 10.000 Da produzidos pela espécie Pseudoalteromonas antarctica. Surpreendentemente, os inventores desta invenção verificaram que os extratos mencionados acima reduzem a quantidade de sebo na pele e/ou no cabelo, aumentam a síntese de colágeno na pele e são fotoprotetores também. Em uma modalidade, a inibição do receptor de MC5R reduz a produção de sebo na pele e/ou no cabelo e diminui a quantidade de sebo.

Definições

[0020] De modo a facilitar a compreensão desta invenção, estão incluídos os significados de alguns termos e expressões tal como usados no contexto da invenção.

[0021] No contexto desta invenção, entende-se por “pele” as camadas que a compreendem, desde a camada mais superior ou estrato córneo até à camada mais inferior ou hipoderme, ambas inclusive. Essas camadas são compostas de diferentes tipos de células tais como queratinócitos, fibroblastos, melanócitos e/ou adipócitos, entre outros. No contexto desta invenção, o termo “pele” inclui o couro cabeludo.

[0022] O termo “tratamento”, tal como usado no contexto deste relatório descritivo quando não é acompanhado pelas qualificações “cosmético, não terapêutico”, significa a administração de um composto de acordo com a invenção para aliviar ou eliminar uma doença ou distúrbio ou reduzir ou eliminar um ou mais sintomas associados à doença ou ao distúrbio. O termo “tratamento” abrange também a capacidade de aliviar ou eliminar as consequências fisiológicas da doença ou do distúrbio.

[0023] Quando o termo “tratamento” é acompanhado das qualificações “cosmético, não terapêutico”, elas referem-se à aplicação do composto à pele, aos cabelos e/ou às membranas mucosas em particular com o objetivo de melhorar as qualidades cosméticas da pele, do cabelo e/ou das membranas mucosas tais como, e não restritas, ao seu nível de hidratação, elasticidade, firmeza, brilho, tom ou textura, entre outros. O termo “cuidado” nesta invenção refere-se à manutenção das qualidades da pele, do cabelo e/ou das membranas mucosas. Essas qualidades estão sujeitas a melhorias e mantidas através de um tratamento e/ou cuidado cosmético da pele, dos cabelos e/ou das membranas mucosas tanto em indivíduos saudáveis como também em doenças e/ou distúrbios da pele e/ou das membranas mucosas, tais como e não restritas a úlceras e lesões na pele, psoríase, dermatite, acne ou rosácea, entre outros.

[0024] O termo “prevenção”, tal como usado nesta invenção, refere-se à capacidade de um composto da invenção de prevenir, retardar ou dificultar o aparecimento ou o desenvolvimento de uma doença ou distúrbio antes do seu aparecimento.

[0025] No contexto desta invenção, o termo “envelhecimento” refere- se às mudanças experimentadas pela pele com a idade (cronoenvelhecimento) ou pela exposição ao sol (fotoenvelhecimento) ou a agentes ambientais como o fumo do tabaco, condições climáticas extremas de frio, calor ou vento, contaminantes químicos ou poluentes e inclui todas as mudanças visíveis e/ou perceptíveis externas através do toque, tais como e não restritas ao desenvolvimento de descontinuidades na pele tais como rugas, linhas finas, sulcos, irregularidades ou rugosidade, aumento do tamanho dos poros, perda de elasticidade, perda de firmeza, perda de lisura, perda da capacidade de recuperação da deformação, flacidez da pele, como bochechas flácidas, o aparecimento de bolsas sob os olhos ou o aparecimento de um queixo duplo, entre outros, mudanças da cor da pele, como marcas, vermelhidão, bolsas sob os olhos ou o aparecimento de áreas hiperpigmentadas, tais como manchas senis ou sardas entre outros, diferenciação anômala, hiperqueratinização, elastose, queratose, perda de cabelo, pele com aparência de casca de laranja, perda de estrutura de colágeno e outras alterações histológicas do estrato córneo, da derme, da epiderme, do sistema vascular (por exemplo o aparecimento de aranhas vasculares ou telangiectasias) ou desses tecidos próximos à pele, entre outros. O termo “fotoenvelhecimento” agrupa o conjunto de processos devido à exposição prolongada da pele à radiação ultravioleta que resulta no envelhecimento prematuro da pele e apresenta as mesmas características físicas que o envelhecimento, tais como, e não restritas a moleza, flacidez, mudanças na cor ou irregularidades na pigmentação, queratinização anormal e/ou excessiva.

[0026] Portanto, um primeiro aspecto da presente invenção refere-se ao extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica para seu uso no tratamento da pele e/ou das membranas mucosas. Em uma modalidade, o tratamento refere-se ao tratamento e/ou prevenção de inflamação, câncer de pele, cravos, mília, acne, seborreia, dermatite seborreica, hidrosadenite supurativa ou fotoproteção da pele. Em uma modalidade, a inflamação é selecionada, por exemplo, e não restrita ao grupo formado por psoríase, pele sensível, dermatite, dermatite atópica, dermatite de contato, dermatite de fralda, dermatite seborreica, eczema, rosácea, acne, doença hiperproliferativa da pele, queimaduras, queimaduras solares, paroníquia, inflamação da pele após cirurgia, após tratamento com terapia de luz pulsada intensa (IPL), após tratamento com terapia de luz pulsada monocromática (laser), após tratamento com agentes descamadores químicos ou após exposição excessiva a agentes externos agressivos, inflamação da membrana mucosa da vagina, inflamação da membrana mucosa oral, gengivite, periodontite, rinite, rinite alérgica, entre outras.

[0027] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se ao extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica para seu uso no tratamento de câncer, anorexia ou caquexia. Em uma modalidade, o tratamento de câncer é um tratamento de inibição do crescimento tumoral ou da síndrome de Muir-Torre.

[0028] Em um outro aspecto, a presente invenção refere-se ao uso de um extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento e/ou cuidado cosmético não terapêutico da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo. Em uma modalidade, o tratamento e/ou cuidado cosmético não terapêutico da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo é um tratamento de redução da quantidade de sebo na pele e/ou cabelo, tratamento e/ou prevenção de envelhecimento da pele, tratamento e/ou prevenção de rugas da pele, tratamento para firmar a pele, prevenção de perda da firmeza da pele e/ou para higiene capilar.

[0029] Em uma outra modalidade, o tratamento da pele e/ou das membranas mucosas e o tratamento e/ou cuidado cosmético não terapêutico da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo inibem o receptor de MC5R.

[0030] Em uma outra modalidade, o tratamento da pele e/ou das membranas mucosas e o tratamento e/ou cuidado cosmético não terapêutico da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo estimulam a síntese de colágeno.

[0031] Em uma outra modalidade, o tratamento da pele e/ou das membranas mucosas e o tratamento e/ou cuidado cosmético não terapêutico da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo são realizados por aplicação tópica ou transdérmica.

[0032] Em uma outra modalidade, o peso molecular do extrato produzido por uma cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica é superior a 50 Da e inferior a 10.000 Da, está entre 100 Da e 8.000 Da, entre 150 Da e 6.000 Da, ou entre 300 Da e 5.000 Da.

[0033] Em uma outra modalidade, a cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica é a cepa com número de depósito CECT 8690. A dita cepa foi depositada em 29 de julho de 2014 na Colección Espanola de Cultivos Tipo (CECT) (Edificio 3 CUE, Parc Científic Universitat de Valencia, Catedrático Agustín Escardino 9, 46980 Paterna, Valencia, Espanha) como instituição legalmente reconhecida para esse fim de acordo com o Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos em 28 de abril de 1977.

[0034] Em uma outra modalidade, o extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da pode ser obtido através de fermentação de uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica em um meio de cultura adequado, convencionalmente agitado e arejado para sintetizar e secretar o dito produto no meio de cultura seguido de isolamento e purificação. A fermentação para produzir o extrato desta invenção pode ser realizada em um meio agitado e arejado a uma temperatura entre 5°C e 37° C, ou entre 8°C e 20°C, o meio tendo pH entre 5,5 e 9, ou entre 6,5 e 7,5, ajustando-o se necessário durante a fermentação. A duração da fermentação é entre 24 a 120 horas, ou entre 36 e 72 horas. Em uma modalidade, o método de isolamento e purificação do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da é realizado pelos métodos conhecidos pelo versado na técnica, tais como centrifugação e filtração. Após as etapas de centrifugação e filtração direcionadas para separar a cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica do sobrenadante em que se encontra o extrato, são efetuadas filtrações para eliminar moléculas de alto peso molecular para purificar esse extrato e são usadas membranas que retêm moléculas de um peso molecular superior a 10.000 Da. Em uma modalidade, a cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica é a cepa com número de depósito CECT 8690.

[0035] Em uma outra modalidade, o extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da da cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica tem um tempo de retenção entre 5 e 20 minutos ou entre 8 e 17 minutos a uma análise cromatográfica de Cromatografia Líquida de Alta Performance (HPLC), com uma coluna cromatográfica TSKGel G2000SWXL, 5m, 125Â 7,8mm x 30mm (TOSOH Bioscience) e água com 0,1 M pH = 6,70 + tampão de fosfato 0,1 M + sulfato de sódio 0,1 M como eluente.

[0036] Em uma modalidade, na fermentação da cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica alguns açúcares exógenos, tais como e não restritos a galactose, glicose, manose, amigdalina, celobiose, maltose, amido, glicogênio, lactose, misturas dos mesmos e/ou extratos contendo misturas desses açúcares podem ser usados como fonte de carbono. Em uma modalidade, é proporcionado um suprimento exógeno de glicose de 2 a 40 g/L, ou 10 a 30 g/L.

[0037] Em uma outra modalidade, o meio de cultura compreende fontes adicionais de nitrogênio ou de carbono, tais como extratos de leveduras, extratos de malte ou peptonas, com concentrações de cada um desses componentes de 0,1 a 20 g/L ou de 0,5 a 10 g/L.

[0038] Em uma outra modalidade, são também proporcionados sais minerais para a cultura de fermentação da cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica e os sais minerais são selecionados entre sais que proporcionam os + + + 2+ 2+ 3- 2- - 2- íons Na , K , NH4 , Ca , Mg , PO4 , SO4 , Cl , CO3 , ou elementos-traço tais como Cu, Mn, Fe e Zn.

[0039] Um outro aspecto desta invenção refere-se a uma composição cosmética ou dermofarmacêutica caracterizada por compreender uma quantidade cosmeticamente ou dermofarmacêuticamente eficaz do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica e pelo menos um excipiente, adjuvante e/ou ingrediente cosmeticamente e/ou dermofarmacêuticamente aceitável. As ditas composições podem ser preparadas pelos métodos convencionais conhecidos pelos versados na técnica [“Harry’s Cosmeticology”, Seventh edition, (1982), Wilkinson J.B., Moore R.J., ed. Longman House, Essex, GB]. Em uma modalidade, a cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica é a cepa com número de depósito CECT 8690.

[0040] A quantidade cosmeticamente ou dermofarmaceuticamente eficaz do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica na composição da invenção a ser administrada, bem como a sua dosagem, dependerá de inúmeros fatores, incluindo a idade, a condição do paciente, a natureza ou a gravidade da condição, distúrbio ou doença a tratar e/ou cuidar, a via e a frequência de administração do extrato.

[0041] Entende-se por “quantidade cosmeticamente ou dermofarmaceuticamente eficaz” uma quantidade não tóxica, mas suficiente do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica para proporcionar o efeito desejado. O extrato da invenção é usado em concentrações cosméticas ou dermofarmacêuticas para se conseguir o efeito desejado; em uma modalidade, em relação ao peso total da composição, entre 0,0000000001% (em peso) e 20% (em peso); ou entre 0,00000001% (em peso) e 10% (em peso), ou entre 0,000001% (em peso) e 5% (em peso), ou entre 0,0001% (em peso) e 5% (em peso).

[0042] Em uma outra modalidade, o extrato da invenção também pode ser incorporado em sistemas de dispensação cosméticos e/ou dermafarmacêuticos e/ou sistemas de liberação prolongada.

[0043] O termo “sistemas de dispensação” refere-se a um diluente, adjuvante, veículo ou aditivos com os quais é administrado o extrato da invenção. Esses carreadores cosméticos ou farmacêuticos podem ser líquidos, tais como água, óleos ou tensoativos, incluindo os de origem petrolífera, animal, vegetal ou sintética, tais como e não restritos a óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim, óleo de rícino, polissorbatos, ésteres de sorbitano, sulfatos de éter, sulfatos, betaínas, glicosídeos, maltósidos, álcoois graxos, nonoxinóis, poloxâmeros, polioxietilenos, polietilenoglicóis, dextrose, glicerol, digitonina e similares. Um versado na técnica conhece os diluentes, adjuvantes ou aditivos que podem ser usados nos diferentes sistemas de dispensação nos quais o extrato da invenção pode ser administrado.

[0044] O termo “liberação prolongada” é usado em um sentido convencional em relação a um sistema de dispensação de um composto que proporciona a liberação gradual desse composto durante um período de tempo e em uma modalidade, embora não necessariamente, com níveis de liberação de composto relativamente constantes durante um período de tempo.

[0045] Exemplos de sistemas de dispensação ou de liberação prolongada incluem, sem sentido de limitação, lipossomas, lipossomas mistos, oleossomas, niossomas, etossomas, milipartículas, micropartículas, nanopartículas e nanopartículas lipídicas sólidas, carreadores lipídicos nanoestruturados, esponjas, ciclodextrinas, vesículas, micelas, micelas misturadas de tensoativos, micelas misturadas com tensoativo e fosfolipídio, miliesferas, microesferas e nanoesferas, lipoesferas, milicápsulas, microcápsulas e nanocápsulas, bem como microemulsões e nanoemulsões, que podem ser adicionadas para se conseguir uma maior penetração do ingrediente ativo da invenção e/ou melhorar suas propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas. Em uma modalidade, os sistemas de liberação prolongada ou de dispensação são lipossomas, micelas misturadas com tensoativo e fosfolipídios e microemulsões, e microemulsões água-em- óleo com uma estrutura micelar inversa interna e nanocápsulas contendo microemulsões.

[0046] Os sistemas de liberação prolongada podem ser preparados por métodos conhecidos na técnica anterior e as composições que os contêm podem ser administradas, por exemplo, por administração tópica ou transdérmica, incluindo emplastros adesivos, emplastros não adesivos, emplastros oclusivos e emplastros microelétricos, ou por administração sistêmica, por exemplo, e não restrita a via oral ou parenteral, incluindo implante ou injeção nasal, retal ou subcutânea, ou implante direto ou injeção em uma parte específica do corpo. Em uma modalidade, o sistema de liberação prolongada deve liberar uma quantidade relativamente constante do extrato da invenção. A quantidade de extrato contida no sistema de liberação prolongada dependerá, por exemplo, de onde a composição deve ser administrada, da cinética e da duração da liberação do extrato da invenção, bem como da natureza da condição, do distúrbio e/ou da doença a ser tratada ou prevenida.

[0047] A composição que contém o extrato desta invenção também pode ser adsorvida em polímeros orgânicos sólidos ou suportes minerais sólidos, tais como, e não restritos a talco, bentonita, sílica, amido ou maltodextrina, entre outros.

[0048] As composições que contêm o extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica podem também ser incorporadas em tecidos, tecidos não tecidos ou dispositivos médicos que estão em contato direto com a pele, liberando assim o extrato da invenção por biodegradação do sistema de ligação ao tecido, tecido não tecido ou dispositivo médico, ou devido ao atrito entre eles e o corpo, devido à umidade do corpo, ao pH da pele ou à temperatura corporal. Além disso, o extrato da presente invenção pode ser incorporado nos tecidos e tecidos não tecidos usados na fabricação de peças de vestuário que ficam em contato direto com o corpo. Em uma modalidade, os tecidos, tecidos não tecidos e dispositivos médicos que contêm o extrato da invenção são usados para o tratamento e/ou prevenção de condições, distúrbios e/ou doenças que melhoram ou são prevenidos pela inibição do receptor de MC5R, ou por estimulação da síntese de colágeno.

[0049] Exemplos de tecidos, tecidos não tecidos, peças de vestuário, dispositivos médicos e meios para imobilizar os compostos a eles, entre os quais estão os sistemas de dispensação e/ou os sistemas de liberação prolongada descritos acima, podem ser encontrados na literatura e são conhecidos na técnica anterior[Schaab C.K. (1986) HAPPI May 1986; Nelson G., “Application of microencapsulation in textiles”, (2002), Int. J. Pharm., 242(1-2), 55-62; “Biofunctional Textiles and the Skin” (2006) Curr. Probl. Dermatol. v.33, Hipler U.C. and Elsner P., eds. S. Karger AG, Basel, Switzerland; Malcolm R.K. et al., “Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial”, (2004), J. Cont. Release, 97(2), 313-320]. Os tecidos preferidos, os tecidos não tecidos, as peças de vestuário e os dispositivos médicos são bandagens, gazes, camisetas, meias, calças, cuecas, cintos, luvas, fraldas, absorventes, curativos, colchas, lenços, emplastros adesivos, emplastros não adesivos, emplastros oclusivos, emplastros microelétricos e/ou máscaras faciais.

[0050] As composições cosméticas ou dermofarmacêuticas contendo o extrato desta invenção podem ser usadas em diferentes tipos de composições de aplicação tópica ou transdérmica, incluindo opcionalmente excipientes cosméticos e/ou dermofarmacêuticos aceitáveis necessários para formular a forma de administração desejada.

[0051] As composições de aplicação tópica ou transdérmica podem ser produzidas em qualquer formulação sólida, líquida ou semissólida, tal como e não restrita a cremes, emulsões múltiplas tais como e não restritas a emulsões de óleo e/ou silicone em água, emulsões de água em óleo e/ou silicone, emulsões do tipo água/óleo/água ou água/silicone/água e emulsões do tipo óleo/água/óleo ou silicone/água/silicone, composições anidras, dispersões aquosas, óleos, leites, bálsamos, espumas, loções, géis, géis de creme, soluções hidroalcoólicas, soluções hidroglicólicas, hidrogéis, linimentos, soros, sabões, xampus, condicionadores, séruns, películas de polissacarídeos, unguentos, mousses, pomadas, pós, barras, lápis e pulverizadores ou aerossóis, incluindo as formulações com e sem enxágue. Essas formulações de aplicação tópica ou transdérmica podem ser incorporadas usando técnicas conhecidas pelos versados na técnica, em diferentes tipos de acessórios sólidos tais como e não restritos a bandagens, gazes, camisetas, meias, calças, cuecas, cintos, luvas, fraldas, absorventes, curativos, colchas, lenços, emplastros adesivos, emplastros não adesivos, emplastros oclusivos, emplastros microelétricos ou máscaras faciais, ou podem ser incorporadas em diferentes produtos de maquiagem tais como base, como bases fluidas e bases compactas, loções de remoção de maquiagem, leites de remoção de maquiagem, corretivos para a região sob os olhos, sombras, batons, protetores labiais, brilho labial e pós, entre outros.

[0052] As composições cosméticas ou dermofarmacêuticas da invenção podem incluir agentes que aumentam a absorção percutânea dos compostos desta invenção, por exemplo e não restritos a dimetilsulfóxido, dimetilacetamida, dimetilformamida, tensoativos, azona (1-dodecilazaciclo- heptano-2-ona), álcool, ureia, etoxidiglicol, acetona, propileno glicol ou polietilenoglicol, entre outros. Além disso, as composições cosméticas ou dermofarmacêuticas desta invenção podem ser aplicadas a áreas locais a serem tratadas por iontoforese, sonoforese, eletroporação, emplastros microelétricos, pressão mecânica, gradiente de pressão osmótica, cura oclusiva, microinjeções ou injeções sem agulha por meio de pressão, tal como injeções por pressão de oxigênio, ou qualquer combinação das mesmas, para conseguir uma maior penetração do extrato da invenção. A área de aplicação será determinada pela natureza da condição, distúrbio e/ou doença a ser tratada e/ou prevenida.

[0053] Dentre os excipientes, adjuvantes e/ou ingredientes cosmeticamente ou dermofarmaceuticamente aceitáveis contidos nas composições cosméticas ou dermofarmacêuticas descritas nesta invenção estão ingredientes adicionais comumente usados em composições cosméticas ou dermofarmacêuticas, tais como e não restritos a outros agentes que diminuem a produção de sebo, agentes antisseborreicos, agentes matificantes, agentes antiacne, agentes que estimulam a síntese de macromoléculas dérmicas ou epidérmicas e/ou que são capazes de inibir ou evitar sua degradação, agentes que estimulam a síntese de colágeno, agentes de estimulação de síntese de elastina, agentes de estimulação de síntese de decorina, agentes de estimulação de síntese de laminina, agentes que estimulam a síntese de defensina, agentes que estimulam a síntese de chaperona, agentes que estimulam a síntese de cAMP, agentes que modulam AQP 3, agentes que modulam síntese de aquaporina, proteínas da família aquaporina, agentes que estimulam a síntese de ácido hialurônico, agentes que estimulam a síntese de glicosaminoglicano, agentes que estimulam a síntese de fibronectina, agentes que estimulam a síntese de sirtuína, proteínas de choque térmico, agentes que estimulam a síntese de proteína de choque térmico, agentes que inibem exocitose neuronal, outros agentes anticolinérgicos, agentes que inibem contração muscular, agentes antienvelhecimento, agentes antirrugas, agentes antitranspirantes, agentes anti-inflamatórios e/ou analgésicos, agentes anticoceira, agentes calmantes, agentes anestésicos, inibidores de agregação de receptores de acetilcolina, agentes que inibem acetilcolinesterase, agentes relaxantes da pele, agentes que inibem ou estimulam síntese de melanina, agentes clareadores ou despigmentantes, agentes de propigmentação, agentes de autobronzeamento, agentes que inibem NO-sintases, agentes que inibem 5α-redutase, agentes que inibem lisila e/ou propila hidroxilase, antioxidantes, removedores de radicais livres e/ou agentes contra poluição atmosférica, removedores de espécie de carbonila reativa, agentes antiglicação, agentes anti-histamínicos, agentes antivirais, agentes antiparasitários, emulsificadores, emolientes, solventes orgânicos, propelentes líquidos, condicionadores de pele, umectantes, substâncias que retêm umectação, ácidos alfa hidróxido, ácidos beta hidróxido, cremes hidratante, enzimas hidrolíticas epidérmicas, vitaminas, aminoácidos, proteínas, pigmentos ou corantes, corantes, biopolímeros, polímeros gelificantes, espessantes, tensoativos, agentes amaciadores, emulsificadores, agentes ligantes, conservantes, agentes capazes de reduzir ou tratar as bolsas sob os olhos, agentes esfoliantes, agentes queratolíticos, agentes descamantes, agentes antimicrobianos, agentes antifúngicos, agentes fungistáticos, agentes bactericidas, agentes bacteriostáticos, agentes que estimulam a síntese de lipídios e componentes do estrato córneo, ceramidas, ácidos graxos, agentes que inibem a degradação de colágeno, agentes que inibem metaloproteínases matriz, agentes que inibem a degradação de elastina, agentes que inibem as serina proteases tais como calicreínas, elastase leucocitária ou catepsina G, agentes que estimulam a proliferação de fibroblasto, agentes que estimulam a proliferação de queratinócitos, agentes que estimulam a proliferação de adipócitos, agentes que estimulam a proliferação de melanócitos, agentes que estimulam a diferenciação de queratinócitos, agentes que estimulam ou retardam a diferenciação de adipócitos, agentes anti-hiperqueratósicos, agentes comedolíticos, agentes antipsoríase, agentes de reparação de DNA, agentes de proteção de DNA, agentes de proteção de células-tronco, estabilizantes, agentes para o tratamento e/ou cuidados de pele sensível, agentes para firmar, agentes antiestrias, agentes ligantes, agentes lipolíticos ou agentes que estimulam lipólise, agentes adipogênicos, agentes que modulam a expressão PGC-1α, agentes que modulam a atividade de PPARY, agentes que aumentam ou reduzem o teor de triglicerídeos de adipócitos, agentes anticelulite, agentes que inibem a atividade de PAR-2, agentes que estimulam a cicatrização, agentes coadjuvantes de cicatrização, agentes que estimulam a reepitelização, agentes coadjuvantes de reepitelização, fatores de crescimento de citocinas, agentes que atuam sobre a circulação capilar e/ou microcirculação, agentes que estimulam a angiogênese, agentes que inibem a permeabilidade vascular, agentes venotônicos, agentes que atuam no metabolismo celular, agentes que melhoram a junção dérmica-epidérmica, agentes que induzem o crescimento capilar, agentes retardantes ou que inibem o crescimento capilar, agentes retardantes de perda capilar, conservantes, perfumes, absorventes de odor e/ou desodorizantes de mascaramento de odor corporal, agentes quelantes, extratos de plantas, óleos essenciais, extratos marinhos, agentes obtidos a partir de processos biotecnológicos, sais minerais, extratos celulares, protetores solares e agentes fotoprotetores orgânicos ou minerais ativos contra raios ultravioleta A e/ou B e/ou raios infravermelhos A ou misturas dos mesmos, desde que sejam fisicamente e quimicamente compatíveis com o resto dos componentes na composição e particulamente com o extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido pela cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica. Do mesmo modo, a natureza desses ingredientes adicionais não deve alterar inaceitavelmente os benefícios do extrato desta invenção. A natureza desses ingredientes adicionais pode ser sintética ou natural, tal como extratos de plantas, ou ser proveniente de um processo biotecnológico, ou de uma combinação de um processo sintético e um processo biotecnológico. Exemplos adicionais podem ser encontrados em CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook, 12th Edition (2008). No contexto desta invenção, entende-se por processo biotecnológico qualquer processo para produzir o ingrediente ativo, ou parte dele, em um organismo, ou em parte dele.

[0054] Em uma modalidade, a composição cosmética e/ou dermofarmacêutica da invenção contém: - entre 0,0000000001% (em peso) e 20% (em peso) do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica; - entre 0,1% (em peso) e 20% (em peso) de um umectante selecionado do grupo de (Nomes INCI) Glicerina, Propileno Glicol, Butileno Glicol, Pentileno Glicol, Caprilil Glicol, Ácido Lático, Ureia, Hialuronato de Sódio; - entre 0,1% (em peso) e 20% (em peso) de um emoliente ou condicionador da pele selecionado do grupo de (Nomes INCI) Dimeticona, Estearato de Glicerila, Triglicerídeo Caprílico/Cáprico, Álcool Cetearílico, Lecitina, Benzoato de Alquila C12-15, Esqualano, Lanolina, Álcool Beenílico, Acetato de Tocoferila, Pantenol, Manteiga de Butyrospermum Parkii, Palmitato de Retinila, Retinol; - entre 0,1% (em peso) e 20% (em peso) de um tensoativo selecionado do grupo de (Nomes INCI) Goma Xantana, Laureth Sulfato de Sódio, Ácido Esteárico, Polissorbato 20, Polissorbato 80, Álcool Estearílico, Álcool Cetílico, 2, Ceteareth-20, Cocamidopropil Betaína.

[0055] Em uma modalidade, o agente que diminui a produção de sebo, agente antisseborreico, agente matificante, agente antiacne é selecionado, por exemplo e não restrito a, do grupo formado por Mat-XS Clinical [INCI: Sarcosina, Goma xantana], Mat-XS Bright [INCI: Extrato de folha de Orthosiphon Stamineus, Maltodextrina, Goma xantana], Betapur [INCI: Extrato de folha de Reumus Boldus, Goma xantana] ou Neurobiox [INCI: Extrato de Achillea Millefolium, Goma xantana] comercializado por BASF, Evermat [INCI: Extrato da casca de Enantia Chlorantha, Ácido oleanólico], Ac.net [INCI: Butileno glicol, Glicerídeos de amêndoa Peg-60, Caprilil glicol, Glicerina, Carbômero, Ácido nordi-hidroguaiarético, Ácido oleanólico] ou Sebuless [INCI: Maltodextrina, Extrato de Syringa Vulgaris (Lilás)] comercializado por Sederma/Croda, Phytessence Purple Ginseng [INCI: Glicerina ou Extrato de raiz de Polygonum Bistorta] comercializado por Crodarom, P-Refinyl [INCI: Extrato de semente de Lens Esculenta (Lentilha)], comercializado por Silab, EPS Seamat [INCI: Exopolissacarídeo- 5 planctônico, Fenoxietanol] ou Epidermist 4.0 [INCI: Extrato de plâncton], comercializado por Codif, Seborami [INCI: Extrato de Sisymbrium Ofiicinale, Extrato de raiza de Arctium Lappa, Ácido cítrico, Ácido glicólico, Zinco PCA, Goma esclerótica] comercializado por Alban Muller, Poreaway [INCI: Goma de Pistacia Lentiscus/Goma de Pistacia Lentiscus (Mástique), Lecitina] comercializado por Mibelle, Citrustem [INCI: Goma xantana, Benzoato de sódio, Gluconolactona, Gliconato de cálcio] ou Affipore [INCI: Extrato de folha de Barosma Betulina, Ácido cítrico], comercializado por Provital, Sweetone [INCI: Hidrolisado de sacarídeo, Maltodextrina], comercializado por Laboratoires Expanscience, Seboxyl [INCI: Extrato de folha de Ribes Nigrum (Cassis), Extrato de folha de Rubus Idaeus (Framboesa)] ou Saniskin [INCI: Extrato de folha de Polygonum Cuspidatum, Álcool miristílico], comercializado por Solabia, Alpaflor Alp-Sebum [INCI: Extrato de Epilobium Fleischeri, Ácido cítrico, Sorbato de potássio] ou Regu- Seb [INCI: Extrato de caroço de Argania Spinosa, Extrato de fruto de Serenoa Serrulata, Extrato de semente de Sesamum Indicum (Gergelim)], comercializado por DSM, Dermaclarine [INCI: Proteína (e) Protease hidrolisada do ovo] comercializado por Aqua Bio Technology, Linumine [INCI: Extrato de semente de Linum Usitatissimum (Linhaça)], comercializado por Lucas Meyer, Granactive Acne [INCI: Extraot de farelo de Oryza Sativa (Arroz), Extrato de Boswellia Serrata, Extrato de mel, Oligopeptídeo-10], comercializado por Evonik, Sepicontrol A5 [INCI: Capriloil Glicina, Sarcosina, Extrato de casca de Cinnamonium Zeylanicum], comercializado por Seppic, Sympeptide 380 [INCI: Miristoil Hexapeptídeo- 23] comercializado por Symrise, ou Sebaryl [INCI: Niacinamida, Extrato de levedura, Extrato de semente de Aesculus Hippocastanum (Castanha de cavalo), Glicirrizinato de amônio, Pantenol, Propileno Glicol, Gliconato de zinco, Cafeía, Biotina], comercializado por Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF, entre outros.

[0056] Em uma modalidade, o agente antirrugas e/ou antienvelhecimento é selecionado, por exemplo e não restrito a, do grupo formado pelos extratos ou extratos hidrolisados de Vitis vinifera, Rosa canina, Curcuma longa, Theobroma cacao, Ginkgo biloba, Leontopodium alpinum ou Dunaliella salina entre outros, Matrixyl® [INCI: Palmitoil pentapeptídeo-4], Matrixyl® 3000® [INCI: Palmitoil tetrapeptídeo-7, Palmitoil oligopeptídeo], Matrixyl® Synthe’6™ [INCI: Glicerina, Água, Hidroxipropil ciclodextrina, Palmitoil tripeptídeo-38], Essenskin™ [INCI: hidroximetionina de cálcio], Renovage [INCI: teprenona], Resistem™ [INCI: Fermento de Globularia Cordifolia], Beautifeye [INCI: Extrato de casca de Albizia Julibrissin, Darutoside], Meiritage [INCI: Extrato de raiz de Astragalus Membranaceus, Extrato de raiz de Atractyloides Macrocephala, Extrato de raiz de Bupleurum Falcatum], Senestem [INCI: Extrato de folha de Plantago Lanceolata], Venuceane [INCI: Fermento de Thermus Thermophillus] ou Dermaxyl® [INCI: Palmitoil oligopeptídeo] comercializado por Sederma/Croda, Vialox® [INCI: Pentapeptídeo-3], Syn®-Ake® [INCI: Dipeptídeo Diaminobutiroil Benzilamida Diacetato], Syn®-Coll [INCI: Palmitoil tripeptídeo-5], Phytaluronate [INCI: Goma de alfarroba (Ceratonia siliqua)], Regu-Scence [INCI: Extrato de caule de Asparagus Officinalis, Benzoato de sódio, Sorbato de potássio, Gluconolactona, Gliconato de cálcio], Syn-TC [INCI: Trifluoroacetato de ureia tetradecil aminobutiroilvalilaminobutirico, Palmitoil tripeptídeo-5, Palmitoil dipeptídeo-5 diaminobutiroil hidroxitreonina] ou Preregen® [INCI: Proteína de Glycine soja (Soja), Oxirredutases] comercializado por Pentapharm/DSM, Myoxinol™ [INCI: Extrato hidrolisado de Hibiscus esculentus], Syniorage™ [INCI: Acetil tetrapeptídeo- 11], Dermican™ [INCI: Acetil tetrapeptídeo-9], Shadownyl [INCI: Extrato de algas, Hexileno glicol, Caprilil glicol, Goma xantana] ou DN AGE™ LS [INCI: Extrato de folha de Cassia alata] comercializado por Laboratoires Sérobiologiques/Cognis/BASF, Algisum C® [INCI: Manuronato de metilsilanol], Exage [INCI: lmidazoliletil Diaminopropanamida] ou Hydroxyprolisilane CN® [INCI: Aspartato de Metilsilanol Hidroxiprolina] comercializado por Exsymol, Argireline® [INCI: Acetil hexapeptídeo-8], SNAP-7 [INCI: Acetil hexapeptídeo-4], SNAP-8 [INCI: Acetil octapeptídeo- 3], Serilesine® [INCI: Hexapeptídeo-10], Leuphasyl® [INCI: Pentapeptídeo- 18], Inyline® [INCI: Acetil hexapeptídeo-30], Aldenine® [INCI: Proteína de trigo hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada, Tripeptídeo-1], Preventhelia® [INCI: Diaminopropionoil Tripeptídeo-33], Decorinyl® [INCI: Tripeptídeo-10 Citrulina], Decorinol® [INCI: Tripeptídeo-9 Citrulina], Trylagen® [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas, Proteína de trigo hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada, Tripeptídeo-10 Citrulina, Tripeptídeo-1], Eyeseryl® [INCI: Acetil tetrapeptídeo-5], Peptídeo AC29 [INCI: Acetil tripeptídeo-30 Citrulina], Relistase® [INCI: Acetilarginiltriptofil Difenilglicina], Thermostressine® [INCI: Acetil tetrapeptídeo-22], Lipochroman™ [INCI: Dimetilmetoxi Cromanol], Chromabright® [INCI: Dimetilmetoxi Cromanil Palmitato], Antarcticine® [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas], dGlyage™ [INCI: HCl de lisina, Lecitina, Tripeptídeo-9 Citrulina], Vilastene™ [INCI: HCl de lisina, Lecitina, Tripeptídeo-10 Citrulina], Hyadisine™ [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas], Hyanify™ [INCI: Isomerato de sacarídeos], Diffuporine™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-37], Silusyne™ [INCI: Óleo de soja (Glycine Soja), Sesquioleato de sorbitano, Iso-hexadecano, Hialuronato de sódio, Hidróxi propil lauril diamônio, Proteína de soja hidrolisada, Acetil hexapeptídeo-39], Adifyline™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-38], Uplevity™ [INCI: Acetil tetrapeptídeo-2], Juveleven™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-51 Amida] ou Telangyn™ [INCI: Acetil tetrapeptídeo-40] comercializado por Lipotec/Lubrizol, Kollaren® [INCI: Tripeptídeo-1, Dextrano] comercializado pelo Institut Europeen de Biologie Cellulaire, Collaxyl® IS [INCI: Hexapeptídeo-9], Laminixyl IS™ [INCI: Hexapeptídeo], Orsirtine™ GL [INCI: Extrato de Oryza sativa (Arroz)], D’Orientine™ IS [INCI: Extrato de semente de Phoenix dactylifera (Tâmara)], Phytoquintescine™ [INCI: Extrato de trigo selvagem (Triticum monococcum)], Peptídeo Q10 [INCI: Pentapeptídeo-34 Trifluoroacetato], Telosense [INCI: Proteína de levedura hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada] ou Quintescine™ IS [INCI: Dipeptídeo-4] comercializado por Vincience/ISP/Ashland, BONT-L-Peptide [INCI: Palmitoil Hexapeptídeo-19] comercializado por Infinitec Activos, Deepaline™ PVB [INCI: Proteína de trigo hidrolisada de palmitoíla] ou Sepilift® DPHP [INCI: Dipalmitoil Hidroxiprolina] comercializado por Seppic, Gatuline® Expression [INCI: Extrato de Acmella oleracea], Gatuline® In-Tense [INCI: Extrato de flor de Spilanthes acmella] ou Gatuline® Age Defense 2 [INCI: Extrato de semente de Juglans regia (Noz)] comercializado por Gattefossé, Thalassine™ [INCI: Extrato de algas] comercializado por Biotechmarine, ChroNOline™ [INCI: Caprooil tetrapeptídeo-3] ou Thymulen-4 [INCI: Acetil tetrapeptídeo-2] comercializado por Atrium/Unipex Innovations, EquiStat [INCI: Extrato de fruto de Pyrus malus, Extrato de semente de Glycine soja] ou Juvenesce [INCI: Etoxidiglicol e Triglicerídeo caprílico, Retinol, Ácido ursólico, Fitonadiona, Ilomastat] comercializado por Coletica/Engelhard/BASF, Ameliox [INCI: Carnosina, Tocoferol, Extrato de fruto de Silybum marianum], Phytocelltec Symphytum [INCI: Isomalte, Cultura celular de raiz de Symphytum Officinale, Lecitina, Benzoato de sódio], Snow Algae Powder [INCI: Extrato de Chlamydocapsa, Maltodextrina, Lecitina], Dermcom [INCI: Goma de Acacia Senegal, Extrato de bulbo de Crocus Chyrsanthus], Anagain [INCI: Extrato de broto de Pisum Sativum (Ervilha)] ou PhytoCellTec Malus Domestica [INCI: Cultura celular de fruto de Malus domestica] comercializado por Mibelle Biochemistry, Bioxilift [INCI: Extrato de Pimpinella anisum], Vitagenyl [INCI: Extrato de folha de Prunus Persica (Pêssego)] ou SMS Anti-Wrinkle® [INCI: Extrato de semente de Annona squamosa] comercializado por Silab, Symvital Agerepair [INCI: Extrato de raiz de Zingiber Officinale (Gengibre)] comercializado por Symrise, Citrustem [INCI: Goma xantana, Benzoato de sódio, Gluconolactona, Gliconato de cálcio], Melavoid [INCI: Extrato de raiz de Boerhavia Diffusa], Darkout [INCI: Extrato de rizoma de Hypoxis Rooperi, Goma de Caesalpinia Spinosa] ou Linefill [INCI: Dimetil Isossorbida, Extrato de semente de Sesamum Indicum (Gergelim)] comercializado por Provital, Adipofill’in [INCI: Ornitina, Fosfolipídios, Glicolipídios], Elix-IR [INCI: Extrato de Polygonum Aviculare] ou Progeline [INCI: Trifluoroacetil tripeptídeo-2] comercializado por Lucas Meyer, Amiperfect [INCI: Extrato de folha de Gaultheria Procumbens (Gaultéria)] ou Repulpami ER [INCI: Extrato de polpa de Adansonia Digitata, Extrato de flor de Hibiscus Sabdariffa] comercializado por Alban Muller, Celloxyl [INCI: Extrato de folha de Uapaca Bojeri] ou Resistress [INCI: Extrato de flor de Sophora Japonica] comercializado por Solabia, Actiporine 8G [INCI: Extrato de Jania Rubens] ou EPS Seafill [INCI: Extrato de plâncton] comercializado por Codif, Novhyal Biotech G [INCI: Fosfato de acetilglucosamina dissódico] ou Rubixyl [INCI: Hexapeptídeo-47] comercializado por Induchem, antagonistas do canal de Ca2+ tais como e não restritos a sais de alverina, manganês ou magnésio, certas aminas secundárias ou terciárias, retinol e seus derivados, idebenona e seus derivados, coenzima Q10 e seus derivados, ácido boswellico e seus derivados, GHK e seus derivados e/ou sais, carnosina e seus derivados, enzimas de reparo do DNA tais como e não restritas a fotoliase ou T4 endonuclease V, ou agonistas do canal de cloreto entre outros, e/ou misturas dos mesmos.

[0057] Em uma outra modalidade, o agente anti-inflamatório e/ou analgésico é selecionado, por exemplo e não restrito a, do grupo formado pelo extrato de madecassoside, extrato de equinácea, óleo de semente de amaranto, óleo de madeira de sândalo, extrato de folha de pessegueiro, extrato de Aloe vera, Arnica montana, Artemisia vulgaris, Asarum maximum, Calendula officinalis, Capsicum, Centipeda cunninghamii, Chamomilla recutita, Crinum asiaticum, Hamamelis virginiana, Harpagophytum procumbens, Hypericum perforatum, Lilium candidum, Malva sylvestris, Melaleuca alternifolia, Origanum majorana, Origanum vulgare, Prunus laurocerasus, Rosmarinus officialis, Salix alba, Silybum marianum, Tanacetum parthenium, Thymus vulgaris, Uncaria guianensis or Vaccinum myrtillus, ácidos graxos ômega -3 e ômega-6, NeutrazenTM [INCI: Água, Butileno glicol, Dextrano, Palmitoil tripeptídeo-8] comercializado por Atrium Innovations/Unipex Group, DelisensTM [INCI proposto: Acetil hexapeptídeo-46] comercializado por Lipotec/Lubrizol, Meliprene® [INCI: Dextrano, Acetil hexapeptídeo-1] comercializado por Institut Européen de Biologie Cellulaire/Unipex Group, SkinasensylTM [INCI: Acetil tetrapeptídeo-15] ou AnasensylTM [INCI: Manitol, Glicirrizinato de amônio, Cafeína, Extrato de Hippocastanum (Castanha de cavalo)] comercializado por Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF, CalmosensineTM [INCI: Acetil dipeptídeo-1] comercializado por Sederma/Croda, coenzima Q10 ou alquil gliceril éteres.

[0058] Em uma outra modalidade, O agente firmador e/ou redensificante e/ou reestruturante é selecionado, por exemplo e não restrito a, do grupo formado por extratos de Malpighia punicitolia, Cynara scolymus, Gossypium herbaceum, Aloe Barbadensis, Panicum miliaceum, Morus nigra, Sesamum indicum, Glycine soja, Triticum vulgare, Pronalen® Refirming HSC [INCI: Triticum Vulgare, Silybum Marianum, Glycine Soy, Equisetum Arvense, Alchemilla Vulgaris, Medicago Sativa, Raphanus Sativus], Lipoout [INCI: Extrato de plâncton] ou Polyplant® Refirming [INCI: equinácea, centella asiática, Fucus, feno-grego] comercializado por Provital, Lanablue® [INCI: Sorbitol, Extrato de algas] comercializado por Atrium Biotechnologies/Unipex Innovations, Pepha®-Nutrix [INCI: Fator de nutrição natural] comercializado por Pentapharm/DSM, extratos vegetais contendo isoflavonas, Biopeptide ELTM [INCI: Palmitoil oligopeptídeo], Biopeptide CLTM [INCI: Palmitoil oligopeptídeo], Vexel® [INCI: Água (Aqua), Propileno Glicol, Lecitina, Cafeína, Palmitoil Carnitina], Matrixyl® [INCI: Palmitoil pentapeptídeo-3], Matrixyl® 3000 [INCI: Palmitoil tetrapeptídeo-3, Palmitoil oligopeptídeo] ou Bio-BustylTM [INCI: Polimetacrilato de glicerila, Fermento de proteína de soja de Rahnella, Água (Aqua), Propileno Glicol, Glicerina, PEG-8, Palmitoil oligopeptídeo] comercializado por Sederma/Croda, Dermosaccharides® HC [INCI: Glicerina, Água (Aqua), Glicosaminoglicanos, Glicogênio], Aglycal® [INCI: Manitol, Ciclodextrina, Glicogênio, Extrato de folha de Aratostaphylos Uva Ursi], Cytokinol® LS [INCI: Caseína hidrolisada, Proteína hidrolisada de levedura, HCl de lisina] ou Firmiderm® LS9120 [INCI: Extrato de folha de Terminalia Catappa, Extrato de flor de Sambucus Negra, PVP, Ácido tânico] comercializado por Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF, Liftline® [INCI: Proteína de trigo hidrolisada], Raffermine® [INCI: Farinha de soja hidrolisada] ou Ridulisse C® [Proteína de soja hidrolisada] comercializado por Silab, Serilesine® [INCI: Hexapeptídeo10], DecorinylTM [INCI: Tripeptídeo10 Citrulina], Trylagen® [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas, Proteína de trigo hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada, Tripeptídeo10 Citrulina, Tripeptídeo1], Silusyne™ [INCI: Óleo de soja (Glycine Soja), Sesquioleato de sorbitano, Iso-hexadecano, Hialuronato de sódio, Hidróxi propil lauril diamônio, Proteína hidrolisada da soja, Acetil hexapeptídeo-39] or Adifyline™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-38] comercializado por Lipotec/Lubrizol, Ursolisome® [INCI: Lecitina, Ácido ursólico, Atelocolágeno, Goma xantana, Sulfato sódico de condroitina], Eperuline [INCI: Maltodextrina, Extrato de casca de Eperua Falcata] ou Collalift® [INCI: Extrato de malte hidrolisado] comercializado por Coletica/Engelhard/BASF, Syn®-Coll [INCI: Palmitoil tripeptídeo-5] comercializado por Pentapharm/DSM, Hydriame® [INCI: Água (Aqua), Glicosaminoglicanos, Goma esclerótica] comercializado por Atrium Biotechnologies/Unipex Innovations, Sphingokine NP [INCI: Caprooil fitosfingosina] comercializado por Evonik, Body3 Complex [INCI: Bentonita, Extrato de noz de Butyrospermum Parkii (Carité), Extrato de fruto de Persea Gratissima (Abacate)] comercializado por Lucas Meyer, Prosynergen DF [INCI: Filtrado de extrato de fermento de Lactobacillus/Ulkenia Amoeboidea] comercializado por Lonza ou IP2000 [INCI: Dextrano, Trifluoroacetol tripeptídeo-2] comercializado por Institut Europeen de Biologie Cellulaire/Unipex Innovations, entre outros.

[0059] Em uma outra modalidade, o agente que estimula a síntese de macromoléculas dérmicas ou epidérmicas é selecionado, por exemplo e não restrito a, do grupo formado por agentes de estimulação de síntese de colágeno, agentes de estimulação de síntese de elastina, agentes de estimulação de síntese de decorina, agentes de estimulação de síntese de laminina, agentes de estimulação de síntese de chaperona, agentes de estimulação de síntese de sirtuína, agentes de ativação de sirtuína, agentes de modulação de aquaporina, agentes de estimulação de síntese de fibronectina, agentes que inibem a degradação de colágeno, agentes que inibem a degradação de elastina, agentes que inibem serina proteases tais como calicreínas, elastase leucocítica ou catepsina G, agentes de estimulação da proliferação de fibroblastos, agentes de estimulação da proliferação de adipócitos, agentes que aceleram ou retardam a diferenciação de adipócitos, e agentes de reparo de DNA e/ou agentes de proteção de DNA , tais como e não restritos a extratos de Centella asiatica, Saccharomyces cerivisiae, Solanum tuberosum, Rosmarinus officinalis, Vaccinium angustifolium, extract of the algae Macrocystis pyrifera, Padina pavonica, extrato de soja, malte, linho, sálvia, trevo vermelho, kakkon, plantas de tremoço branco, extrato de avelã, extrato de milho, extrato de levedura, extratos de faia, extrato de sementes de leguminosas, extrato de hormônio vegetal, como giberelinas, auxinas ou citocininas, entre outros, ou extrato de zooplâncton salino, o produto de fermentação do leite com Lactobacillus Bulgaricus, asiáticosídeos e seus derivados, vitamina C e seus derivados, ácido cinâmico e seus derivados, Matrixyl® [INCI: Palmitoil pentapeptídeo-3], Matrixyl® 3000 [INCI: Palmitoil tetrapeptídeo-3, Palmitoil oligopeptídeo] ou Biopeptide CLTM [INCI: Polimetacrilato de glicerila, Propileno Glicol, Palmitoil oligopeptídeo] comercializado por Sederma/Croda, Antarcticine® [INCI: Extrato de fermento de Pseudoalteromonas], Decorinyl® [INCI: Tripeptídeo10 Citrulina], Serilesine® [INCI: Hexapeptídeo10], Lipeptide [INCI: Proteína vegetal hidrolisada], Aldenine® [INCI: Proteína de trigo hidrolisada, Proteína de soja hidrolisada, Tripeptídeo1], Relistase™ [INCI: Acetilarginiltriptofil Difenilglicina], ThermostressineTM [INCI: Acetil tetrapeptídeo-22], Peptídeo AC29 [INCI: Acetil tripeptídeo-30 citrulina], DiffuporineTM [INCI: Acetil hexapeptídeo-37], Silusyne™ [INCI: Óleo de soja (Glycine Soja), Sesquioleato de sorbitano, Iso-hexadecano, Hialuronato de sódio, Hidróxi propil lauril diamônio, Proteína hidrolisada da soja, Acetil hexapeptídeo-39] or Adifyline™ [INCI: Acetil hexapeptídeo-38] comercializado por Lipotec/Lubrizol, Drieline® PF [INCI:Betaglucano de levedura] comercializado por Alban Muller, Phytovityl C® [INCI: Água, Extrato de Zea Mays] comercializado por Solabia, Collalift® [INCI: Extrato de malte hidrolisado] comercializado por Coletica/Engelhard/BASF, Phytocohesine PSPTM [INCI: Sulfato sódico de beta-sitosterol] comercializado por Vincience/ISP/Ashland, minerais tais como cálcio, entre outros, retinoides e seus derivados, isoflavonoides, carotenoides, em particular licopeno, pseudodipeptídeos, retinoides e seus derivados tais como retinol ou palmitato de retinila, entre outros, ou heparinoides, entre outros.

Aplicações

[0060] Em um outro aspecto, esta invenção refere-se ao uso de um extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica na preparação de uma composição cosmética ou dermofarmacêutica para o tratamento e/ou cuidado da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo. Em uma modalidade, o tratamento e/ou cuidado da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo refere-se ao tratamento e/ou prevenção de inflamação, câncer, cravos, mília, acne, seborreia, dermatite seborreica, hidrosadenite supurativa, fotoproteção da pele, tratamento de redução da quantidade de sebo na pele e/ou cabelo, tratamento e/ou prevenção de envelhecimento da pele, tratamento e/ou prevenção de rugas da pele, tratamento para firmar a pele, prevenção de perda da firmeza da pele e/ou para higiene capilar. Em uma modalidade, a inflamação é selecionada, por exemplo, e não restrita ao grupo formado por psoríase, pele sensível, dermatite, dermatite atópica, dermatite de contato, dermatite de fralda, dermatite seborreica, eczema, rosácea, acne, doença hiperproliferativa da pele, queimaduras, queimaduras solares, paroníquia, inflamação da pele após cirurgia, após tratamento com terapia de luz pulsada intensa (IPL), após tratamento com terapia de luz pulsada monocromática (laser), após tratamento com agentes descamadores químicos ou após exposição excessiva a agentes externos agressivos, inflamação da membrana mucosa da vagina, inflamação da membrana mucosa oral, gengivite, periodontite, rinite, rinite alérgica, entre outras.

[0061] Em um outro aspecto, a presente invenção refere-se ao uso do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica na preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de câncer, anorexia ou caquexia. Em uma modalidade, o tratamento de câncer é um tratamento de câncer de pele, tratamento de inibição do crescimento tumoral ou da síndrome de Muir-Torre.

[0062] Em um outro aspecto, esta invenção refere-se ao uso do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica na preparação de uma composição cosmética ou dermofarmacêutica para a inibição de receptor de MC5R.

[0063] Em um outro aspecto, esta invenção refere-se ao uso do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica na preparação de uma composição cosmética ou dermofarmacêutica para a estimulação de síntese de colágeno.

[0064] Um aspecto adicional desta invenção refere-se a um método de tratamento e/ou cuidado da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo que compreende a administração de uma quantidade cosmeticamente e/ou dermofarmaceuticamente eficaz do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica. Em uma modalidade, o tratamento e/ou cuidado da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo refere-se ao tratamento e/ou prevenção de inflamação, câncer, cravos, mília, acne, seborreia, dermatite seborreica, hidrosadenite supurativa, fotoproteção da pele, tratamento de redução da quantidade de sebo na pele e/ou cabelo, tratamento e/ou prevenção de envelhecimento da pele, tratamento e/ou prevenção de rugas da pele, tratamento para firmar a pele, prevenção de perda da firmeza da pele e/ou para higiene capilar. Em uma modalidade, a inflamação é selecionada, por exemplo, e não restrita ao grupo formado por psoríase, pele sensível, dermatite, dermatite atópica, dermatite de contato, dermatite de fralda, dermatite seborreica, eczema, rosácea, acne, doença hiperproliferativa da pele, queimaduras, queimaduras solares, paroníquia, inflamação da pele após cirurgia, após tratamento com terapia de luz pulsada intensa (IPL), após tratamento com terapia de luz pulsada monocromática (laser), após tratamento com agentes descamadores químicos ou após exposição excessiva a agentes externos agressivos, inflamação da membrana mucosa da vagina, inflamação da membrana mucosa oral, gengivite, periodontite, rinite, rinite alérgica, entre outras.

[0065] Em um outro aspecto, a invenção refere-se a um método de tratamento de câncer, anorexia ou caquexia que compreende a administração de uma quantidade cosmeticamente e/ou dermofarmaceuticamente eficaz do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica. Em uma modalidade, o tratamento de câncer é um tratamento de câncer de pele, tratamento de inibição do crescimento tumoral ou da síndrome de Muir-Torre.

[0066] Em um outro aspecto, esta invenção refere-se a um método de inibição de receptor de MC5R que compreende a administração de uma quantidade cosmeticamente e/ou dermofarmaceuticamente eficaz do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica.

[0067] Em um outro aspecto, esta invenção refere-se a um método de estimulação de síntese de colágeno que compreende a administração de uma quantidade cosmeticamente e/ou dermofarmaceuticamente eficaz do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica.

[0068] Em uma outra modalidade, o peso molecular do extrato produzido por uma cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica é superior a 50 Da e inferior a 10.000 Da, está entre 100 Da e 8.000 Da, entre 150 Da e 6.000 Da, ou entre 300 Da e 5.000 Da.

[0069] Em uma outra modalidade, a cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica é a cepa com número de depósito CECT 8690.

[0070] Em um outro aspecto, o extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica pode ser administrado por qualquer meio que cause o seu contato com o local de ação no corpo de um mamífero, preferivelmente a de um ser humano, e em uma modalidade na forma de uma composição que a contém. A administração do extrato de peso molecular inferior a 10.000 Da produzido por uma cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica é realizada topicamente ou transdermicamente. Em uma modalidade, a aplicação tópica ou transdérmica é realizada por iontoforese, sonoforese, eletroporação, pressão mecânica, gradiente de pressão osmótica, cura oclusiva, microinjeções, injeções sem agulha por meio de pressão, por emplastros microelétricos, máscaras faciais ou qualquer combinação dos mesmos.

[0071] A frequência da aplicação ou administração pode variar amplamente, dependendo das necessidades de cada indivíduo, sugerindo uma gama de aplicação ou administração de uma vez por mês a 10 vezes por dia, de uma vez por semana a 4 vezes por dia, de três vezes por semana a três vezes por dia, ou uma vez por dia.

DEPÓSITO DE MATERIAL BIOLÓGICO

[0072] A cepa da espécie Pseudoalteromonas antarctica foi depositada na Colección Espanola de Cultivos Tipo (CECT) (Edificio 3 CUE, Parc Científic Universitat de Valencia, Catedrático Agustín Escardino 9, 46980 Paterna, Valencia, Espanha) sob as condições do Tratado de Budapeste. O depósito foi feito em 29 de julho de 2014 e o número de depósito foi CECT 8690.

EXEMPLOS

[0073] Cada um dos documentos referidos acima é aqui incorporado por referência, incluindo quaisquer pedidos anteriores, listados acima especificamente ou não, dos quais é reivindicada prioridade. A menção de qualquer documento não é uma admissão de que tal documento qualifica como técnica anterior ou constitui o conhecimento geral do versado em qualquer jurisdição. Exceto nos Exemplos, ou quando explicitamente indicado de outro modo, todas as quantidades numéricas nesta descrição que especificam quantidades de materiais, condições de reação, pesos moleculares, número de átomos de carbono e similares devem ser entendidas como aproximadas, isto é, sujeitas a uma variabilidade de ± 5%, ± 3%, ± 1%, ± 0,1% ou ± 0,01% sobre o valor indicado. Deve ser entendido que os limites de quantidade, faixa e razão superior e inferior aqui estabelecidos podem ser combinados independentemente. De modo similar, as faixas e quantidades para cada elemento da tecnologia aqui descrita podem ser usadas em conjunto com faixas ou quantidades para qualquer dos outros elementos. Exemplo 1: Preparação e isolamento do extrato secretado pela cepa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA com número de depósito CECT 8690. a) Método de cultura para a cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690.

[0074] A cepa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690 é cultivada em um biorreator a 12°C e pH = 7,0, cujo meio de cultura contém 20 g/L de glicose, 7 g/L de cloreto de amônio e uma solução salina contendo 1 g/L de NaCl, 1 g/L heptaidrato de sulfato de magnésio, 5 g/L de fosfato dissódico, 2 g/L de fosfato de potássio, 0,05 g/L de cloreto de cálcio e 0,018 g/L de heptaidrato de sulfato de ferro. O inóculo é realizado usando a quantidade necessária de uma pré-cultura de estado exponencial, para ter uma densidade óptica inicial de 0,2 UA (550 nm). A cultura dura 48 horas, tendo uma concentração de oxigênio controlada a 30% de saturação de ar e agitação com valores em torno de 250 rpm. b) Separação do extrato inferior a 10 KDa

[0075] As bactérias são separadas do caldo de cultura por centrifugação a 6000g durante 1h. A eliminação das bactérias é completada com uma filtração com membranas com um tamanho de poro final de 0,22 μm. Subsequentemente, o extrato não purificado extract é filtrado com uma membrana de polietersulfona com uma peneira de 10 KDa, e o produto de interesse permeia através da membrana.

Exemplo 2: quantificação da concentração de proteína no extrato inferior a 10 KDa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA com número de depósito CECT 8690.

[0076] Os valores de concentração do extrato inferior a 10 KDa purificado de acordo com o exemplo 1, usado nos exemplos 3 a 14, são a concentração total de proteína medida com o método do ácido bicinconínico e as instruções fornecidas pelo fornecedor do kit usado (Pierce® BCA Protein Assay Kit, 23227).

[0077] A concentração de proteína total medida do extrato inferior a 10 KDa obtido de acordo com o exemplo 1, é 361,55 μg/ml.

Exemplo 3: Análise cromatográfica SE-HPLC-UV

[0078] Uma solução do produto obtido de acordo com o exemplo 1 a 250 μg/ml é preparada e analisada por HPLC-UV. 100 μl são injetados em uma Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC) LC20A SHIMADZU. A coluna cromatográfica usada é TSKGel G2000SWXL, 5m, 125 Â, 7,8 mm x 30 mm (TOSOH Bioscience) e água com tampão fosfato 0,1 M a pH = 6,70 + sulfato de sódio 0,1 M como eluente.

[0079] Sob essas condições, o produto apresenta picos entre 10 e 15 minutos, com um pico médio a 10,75 minutos. O peso molecular é calculado usando padrões diferentes: Albumina de soro bovino (66000 Da), Ribonuclease A de pâncreas bovino Tipo I (13700 Da) e Ácido Salicílico (138 Da). O logaritmo do peso molecular está relacionado ao tempo de retenção, a fim de se obter uma correlação linear. Usando essa correlação, o produto apresenta um peso molecular entre 7714 Da e 178 Da. Também de acordo com essa correlação, o tempo de residência do máximo do pico principal (10,75 minutos) corresponde a um peso molecular de 4381 Da.

Exemplo 4: Avaliação da inibição do promotor do receptor de melanocortina 5 (MC5R) humano em uma linhagem celular mamária epitelial indiferenciada estável transfectada (MCF7) usando um ensaio de gene repórter.

[0080] Uma linhagem celular mamária epitelial indiferenciada (MCF7) é transfectada de forma estável com um plasmídeo que contém o gene Firefly Luciferase sobre uma região do promotor de MC5R humano. O clone 16 selecionado dessa linhagem celular, MCF7-MC-16, é tratado com o extrato obtido de acordo com o exemplo 1 para medir a inibição do promotor de MC5R humano.

[0081] Trinta mil células MCF7-MC-16 por poço em meio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) (High Glucose) suplementado com 10% de FBS (soro bovino fetal), 1% de penicilina-estreptomicina e 1 μg/ml de puromicina são semeadas em placas de 96 poços brancos tratadas com solução de poli-L-lisina para as medições de atividade de luciferase. Em paralelo, são semeadas trinta mil células MCF7-MC-16 por poço em placas de 96 poços claros tratadas com solução de poli-L-lisina, como acima mencionado, para a quantificação do número total de células por coloração com cristal violeta. As células são semeadas 24h antes de iniciar com os tratamentos e são incubadas a 37°C e 5% de CO2 em uma incubadora de CO2.

[0082] No dia do tratamento, as células MCF7-MC-16 são lavadas duas vezes com tampão de fosfato de Dulbecco (DPBS) com cloreto de cálcio e cloreto de magnésio e incubadas durante 6 h com DMEM High Glucose sem vermelho de fenol a 37°C, em uma incubadora de CO2. Em seguida, as células são tratadas com o extrato de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, a concentrações de 0,25 μg/mL ou 2,5 μg/mL. Como controle para a ativação basal, as células são incubadas apenas com meio. As células foram incubadas em DMEM High Glucose sem vermelho de fenol e suplementadas com 1% de CS-FBS (soro fetal bovino sem carvão) durante 16 a 24h.

[0083] Após o período de incubação, as unidades de luz relativa por segundo (RLU/s) produzidas pela reação com Firefly Luciferase são medidas nas placas de 96 poços brancos e o número de células/poço total é determinado nas placas de 96 poços claros.

Determinação de atividade de luciferase

[0084] O substrato de Firefly Luciferase (Steady-Glo Luciferase Assay System, Promega) é adicionado a placas de 96 poços brancos seguindo as instruções do fabricante. Resumidamente, em primeiro lugar, as células são lisadas e o substrato de Firefly Luciferase é adicionado. Após 10 a 15 minutos de incubação, é lida a luminescência da atividade de Firefly Luciferase. As unidades de luz relativa por segundo (RLU/s) produzidas pela reação entre Firefly Luciferase e seu substrato são quantificadas usando um luminômetro de multiplacas (Lumistar-BMG). Determinação do número total de células por ensaio de coloração com cristal violeta

[0085] As placas de 96 poços claros contendo células são lavadas com DPBS e são incubadas com solução de Cristal Violeta (0,05% de Cristal Violeta, 4% de Formalina) durante 20 min à temperatura ambiente. O DNA das células é corado pela solução de corante Cristal Violeta. Depois, remove- se a solução de cristal violeta e os poços são lavados com água MilliQ. A quantidade de corante Cristal Violeta absorvida pelas células é diretamente proporcional ao número de células em cada poço. Por fim, quando as células são secas durante 1 a 2 horas à temperatura ambiente, e uma solução de HCl 0,1 M é adicionada e a absorbância é lida a 630 nm em um Leitor de Absorbância de Microplaca (Multiskan-Thermo Electro Corporation). Os resultados da luminescência de Firefly por segundo (RLU/seg) são normalizados com o número total de células para a dose testada e a diminuiição na indução do promotor de MC5R humano é calculada em relação ao controle basal.

Tabela 1

[0086] Os resultados mostram que o extrato inferior a 10 KDa de Pseudoalteromonas antarctica diminui a indução de promotor de MC5R humano.

Exemplo 5: Inibição da acumulação de lipídios sebáceos em sebócitos humanos primários usando um Ensaio de Fluorescência de Gotículas Lipídicas.

[0087] A inibição da acumulação de lipídios é determinada por meio da medição do sinal de fluorescência de Vermelho do Nilo em sebócitos humanos primários em meio de diferenciação condicionado após o tratamento com o extrato inferior a 10 KDa de Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1.

[0088] As células de sebócitos humanos são semeadas em placas de 96 poços revestidas com matriz extracelular a 5.000 células/poço em meio de crescimento de sebócitos (50% de meio de crescimento completo com soro e 50% de meio sem soro) e são incubadas durante 3 dias, em uma incubadora de CO2 (37°C e 5% de CO2).

[0089] Após a incubação, as células de sebócitos humanos são tratadas com meio de diferenciação condicionado (10 nM Hormônio estimulante de [Nle4,D-Phe7]-a-Melanócito, NDP-α-MSH, em meio de crescimento de sebócitos) como controle basal para a acumulação de lipídios ou com o extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, a 0,25 μg/ml e 2,5 μg/ml em meio de diferenciação condicionado. Cada tratamento é realizado em triplicado e em paralelo para ensaio de acumulação de lipídios e para contagem de células. As células são incubadas dentro dos diferentes tratamentos durante 4 dias em uma incubadora de CO2 (37°C e 5% de CO2).

[0090] No controle basal, os sebócitos diferenciados são tratados com meio de diferenciação condicionado, que é a condição de máxima diferenciação e, portanto, a acumulação máxima de lipídios nesse modelo de sebócitos. Quantificação de acumulação de lipídios sebáceos por ensaio com reagente AdipoRedTM

[0091] Seguindo as instruções do fabricante, as células de sebócitos humanos para cada condição são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) com cálcio e magnésio e é adicionado reagente AdipoRed diluído. Após a conclusão da adição de reagente, as células de sebócitos humanos são incubadas à temperatura ambiente durante 15 min. Em seguida, a fluorescência de lipídios neutros é medida usando o leitor FLUOstar Galaxy com comprimentos de onda de excitação e emissão de 485 nm e 530 nm, respectivamente. Quantificação da densidade celular (número de células/ml) por Ensaio de Contagem de Células.

[0092] As células de sebócitos humanos são separadas de placas de 96 poços por tratamento com tripsina. Depois de coletar os volumes de amostras em triplicado, as células separadas foram centrifugadas. Cerca de 80% do sobrenadante foi descartado para concentrar as células para ensaio de contagem de células com contador de células automatizado TC10TM (Biorad).

[0093] Em seguida, o sinal de fluorescência de cada condição é normalizado pela densidade celular (células/mL) para obter valores normalizados de acumulação de lipídios. Por fim, calcula-se a porcentagem de acumulação de lipídios normalizada em comparação com o controle basal.

[0094] O resultado obtido mostra que o extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, diminui a porcentagem de lipídios sebáceos em culturas de sebócitos humanos.

Tabela 3

Exemplo 6: Estudo in vitro de fotoproteção contra uma dose citotóxica de luz solar simulada usando fibroblastos dérmicos humanos adultos.

[0095] A eficácia fotoprotetora é medida como um aumento da captação do corante neutro vermelho neutro quando medido 24 horas após o tratamento com uma dose citotóxica de luz solar simulada.

[0096] Os fibroblastos dérmicos humanos adultos são mantidos em uma cultura durante 24 horas para produzir monocamadas em placas de 96 poços. Em seguida, as células são pré-incubadas com PBS (solução salina tamponada com fosfato) para o controle irradiado ou com o extrato sob 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, a 2,5 μg/mL, por 1 h no escuro a 37°C, 5% de CO2, ar umidificado.

[0097] Em seguida, as células incubadas são expostas à dose de irradiação de ~30 a 60 J/cm2 à temperatura ambiente durante 150/180/210 minutos. A outra placa é mantida no escuro durante o mesmo tempo e é usada como controle não irradiado. Os meios de cultura das placas irradiadas contendo as células incubadas são substituídos por meio de cultura fresco e as placas são deixadas durante 24 h de incubação. A viabilidade celular é determinada pela captação de Vermelho Neutro, isto é, após uma incubação de 2 horas com Solução Vermelha Neutra (Sigma), as células são lisadas e a densidade óptica dos lisados celulares é medida a 540 nm em um espectrofotômetro. O Vermelho Neutro é um corante catiônico fraco que penetra facilmente nas membranas celulares por não difusão. O Vermelho Neutro é acumulado intracelularmente em lisossomas de células não danificadas, e é pouco captado em células danificadas ou não viáveis. Para calcular a porcentagem de viabilidade celular, células não tratadas são usadas como referência. O potencial fotoprotetor do produto testado é calculado como o aumento da viabilidade celular das células tratadas em relação às células irradiadas não tratadas (tratadas com PBS). Os resultados são apresentados na tabela 4.

Tabela 4

Exemplo 7: Estudo in vitro da síntese de colágeno tipo I em fibroblastos dérmicos humanos por Ensaio de Imunoabsorção Enzimática (ELISA).

[0098] Os fibroblastos dérmicos humanos adultos são tratados com tripsina e 5x104 células/poço são semeados em placas de 48 poços. Após 24 h de incubação a 37°C em 5% de CO2 umidificado, são adicionados meios de cultura fresco contendo o extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, a 12,5 μg/mL, 6,25 μg/mL, 2,5 μg/mL e 1,25 μg/mL. Cada concentração é testada em triplicado. Os fibroblastos dérmicos humanos não tratados são semeados como controles em placas de 48 poços em 6 poços. Os fibroblastos dérmicos humanos são incubados por mais 48h a 37°C em 5% de CO2 umidificado. Em seguida, os meios de cultura são coletados para serem analisados por ELISA.

[0099] Uma curva padrão para quantificar colágeno tipo I é preparada com colágeno tipo I de pele de vitelo (Sigma) a partir de uma solução de carga de 1 mg/ml. Estas diluições são transferidas em conjunto com o meio previamente coletado para placas de 96 poços. As diluições de curva padrão e os sobrenadantes coletados a partir dos tratamentos de cultura de células são transferidos para placas de 96 poços. O colágeno nas amostras e nas diluições de curva padrão reveste as paredes das placas de 96 poços a 4°C em uma atmosfera umidificada durante a noite. Em seguida, as placas dos poços são lavadas três vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS) com 0,05% de Tween-20 (Sigma) e bloqueadas durante 1 h com uma solução de albumina sérica bovina a 3% (BSA) (Sigma). Após o bloqueio, as placas dos poços são incubadas com anticorpo anti-colágeno tipo I (Sigma) durante 2 h. Após essa incubação, o anticorpo secundário (IgG-HRP anti-camundongo de cabra, Molecular Probes) é adicionado. Em seguida, as placas dos poços são incubadas com substrato de fosfatase (OPD, Sigma) durante 30 minutos sob agitação. A reação é interrompida por adição de 3M de H2SO4. A absorbância a 490 nm é lida em um leitor de placas de microtitulação e a concentração de colágeno é determinada usando uma regressão linear da curva padrão de colágeno tipo I. Os resultados do aumento da síntese de colágeno em relação às células não tratadas são mostrados na tabela 5.

Tabela 5

Exemplo 8: Estudo da inibição in vitro da peroxidação lipídica por meio de um ensaio TBARS.

[00100] A peroxidação lipídica é medida utilizando lipossomas como um modelo de membrana celular e monitorando a fluorescência devido à formação de adutos entre MDA (malondialdeído) e o TBA (ácido tiobarbitúrico) durante o ensaio TBARS (substâncias reactivas ao ácido tiobarbitúrico). Os lipossomas são tratados com o extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, e comparado com um controle basal para estudar a diminuição da peroxidação lipídica dos lipossomas. Preparação de lipossomas

[00101] Uma solução contendo fosfatidilcolina de soja 30mM (Emulmetik 930) dissolvida em clorofórmio:metanol (1:1) é seca sob uma corrente de N2 livre de oxigênio a fim de obter uma película fina. Os últimos traços de solvente são removidos sob alto vácuo durante 3 h. As vesículas multilamelares (MLVs) são formadas por adição de tampão Tris-NaCl (NaCl 140 mM, Tris 20 mM, pH = 7,4) seguido de agitação durante 5 minutos para assegurar a suspensão completa. A suspensão de vesículas é então sonicada para quebrar as vesículas de fosfolipídios em pequenas vesículas unilamelares (SUVs). Peroxidação de lipossomas

[00102] É adicionado 1 ml de suspensão de SUVs a tubos de ensaio. Em seguida, 40 μl de diferentes concentrações do extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica são adicionados a diferentes tubos. São adicionados 40 μl de tampão Tris-NaCl como controle basal da peroxidação. Os tubos são incubados durante 30 min a 37°C, e cada concentração é testada em duplicado.

[00103] A peroxidação lipídica é iniciada pela adição de 40 μl de AAPH (2,2’-Azobis(2-amidinopropano)dicloridrato recém-preparado (270mM). Em seguida, os tubos são incubados durante 1 h a 37°C e agitados a 100 rpm. A peroxidação é interrompida por adição de 200μl de BHT (hidroxitolueno butilado) (4% p/v em etanol) e congelamento das amostras a - 20°C.

Ensaio TBARS

[00104] Preparação da curva de calibração de MDA: A partir de uma solução de MDA obtida por hidrólise ácida de TEP (1,1,3,3- Tetraetoxipropano) (10mM em H2SO4 a 1%) são preparados cinco tubos com 0, 0,8, 1,6, 2,4 e 3,2 nmol de MDA respectivamente. Por fim, são adicionados 500μl de água destilada e 100μl de BHT (4% p/v em etanol) a cada tubo.

[00105] Para a reação com TBA, as amostras são descongeladas, 600μl são pegos com pipetas e adicionados a 250μl de SDS (dodecil sulfato de sódio) (3% p/v). Após a mistura, são adicionado e misturados 500μl de TBA recém-preparado (1% p/v em água quente). Em seguida, 500 μl de HCl 7 mM, são adicionados, agitados e incubados em um banho de água a 95°C durante 15 min. Por fim, as amostras são levadas à temperatura ambiente e são adicionados 2 ml de 1-butanol. As amostras são agitadas vigorosamente e centrifugadas durante 5 minutos a 1500 rpm.

[00106] 150 μl por poço da fase superior de cada amostra são colocados em placas de 96 poços negros opacos de fundo em duplicado. A fluorescência é medida no comprimento de onda de excitação de 500 nm e um comprimento de onda de emissão de 530 nm em um leitor de fluorescência multiplaca (modelo FluoStar Galaxy, BMG Labtech GmbH, Offenburg, Alemanha). A peroxidação lipídica é medida por medições de fluorescência, em que 100% é o valor da condição de controle basal.

Tabela 6

Exemplo 9: Efeito do extrato inferior a 10 KDa da espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, no nível de proteína de MC5R em sebócitos humanos primários

[00107] Os sebócitos humanos primários são semeados em frascos T25 cm2 revestidos com matriz extracelular (EM) a 150.000 células para condições de meio de crescimento e a 250.000 células para o resto das condições em meio de soro reduzido. As células são incubadas em uma incubadora de CO2 (37°C e 5% de CO2) durante 3 dias em meio de crescimento de sebócitos.

[00108] Após a incubação, são testadas diferentes condições: sebócitos em meio de crescimento como controle negativo de diferenciação, sebócitos em meio de soro reduzido como controle positivo de diferenciação e sebócitos com o extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, a 0,25 e 2,5 μg/ml em meio de soro reduzido.

[00109] Após o tratamento, as células são preparadas para imunocitoquímica por citometria de fluxo indireta. Preparação de amostras para citometria de fluxo indireta Imunocitoquímica

[00110] As células são ressuspensas até aproximadamente 1 a 5x106 células/ml em 1 ml de solução salina tamponada com fosfato (PBS) gelada, soro de bezerro recém-nascido (NCS) a 10%, azida de sódio a 1%. A suspensão contendo as células para cada condição é dividida em dois tubos, um tubo é corado com anticorpo primário (Anticorpo Receptor Anti-MC5R [EPR8386], ABCAM) e anticorpo secundário (anticorpo secundário policlonal de cabra a IgG-H&L de coelho (APC), ABCAM) e o outro tubo é corado apenas com anticorpo secundário (controle de anticorpos secundário).

[00111] As suspensões contendo as células são fixadas com Formaldeído a 0,5% (Sigma) em PBS à temperatura ambiente no escuro. Em seguida, as suspensões são lavadas por centrifugação com PBS gelada.

[00112] Por fim, as células são ressuspensas até aproximadamente 0,5 a 2,5x106 células/ml em 500 μl de PBS gelada contendo BSA a 3% e azida de sódio a 1%. Após a contagem, as suspensões de células são armazenadas a 4°C no escuro, durante a noite. Determinação de nível de proteína de MC5R extracelular por citometria de fluxo

[00113] O ensaio é realizado pelo menos 3 vezes. As suspensões de células para cada tratamento são passadas através de um Citômetro de Fluxo (FACSCanto II, BD Biosciences) e são coletados 100.000 a 200.000 eventos, o número de eventos dependendo de cada ensaio particular. Os dados são analisados usando o software WinMDI 2.9.

[00114] O gráfico de pontos de morfologia de dispersão de luz (SSC versus FSC) de cada amostra é representado e é desenhada uma região de plotagem ou janela (R1) para eliminar detritos celulares.

[00115] O gráfico de pontos de fluorescência de APC (fluorocromo) versus FSC (tamanho celular) de cada janela de amostra (R1) é representado. Comparando cada condição com o seu controle de anticorpo secundário, é desenhada uma janela (R2) para definir células APC positivas (MC5R). Para cada amostra são quantificados os eventos incluídos nas regiões R1+R2. Os eventos de MC5R positivos de cada condição são controle de anticorpos secundários subtraídos.

[00116] O nível de proteína de MC5R é calculado em relação à condição de meio de soro reduzido. Como é mostrado na tabela 7, o extrato inferior a 10 KDa da espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, diminui o nível de proteína de MC5R em sebócitos humanos primários em meio de soro reduzido.

Tabela 7

Exemplo 10: Efeito no processo de diferenciação de sebócitos humanos primários pelo extrato inferior a 10 KDa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA com número de depósito CECT 8690.

[00117] Os sebócitos humanos são semeados em frascos T25 cm2 revestidos com matriz extracelular a 250.000 células/T25 em meio de crescimento de sebócitos (50% de meio de crescimento completo com soro: 50% de meio livre de soro) e são incubadas durante 3 dias em uma incubadora de CO2 (37°C e 5% de CO2).

[00118] Após a incubação, as células de sebócitos humanos são tratadas com meio de crescimento basal como controle negativo de diferenciação, ou meio de diferenciação condicionado (10 nM Hormônio estimulante de [Nle4,D-Phe7]-a-Melanócito, NDP-α-MSH, em meio de crescimento de sebócitos) como controle positivo de diferenciação, ou o extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, a 2,5 μg/ml em meio de diferenciação condicionado. As células são incubadas dentro dos diferentes tratamentos durante 4 dias em uma incubadora de CO2 (37°C e 5% de CO2). Após 4 dias de tratamento, as células são preparadas para serem processadas por citometria de fluxo. Preparação de amostra para citometria de fluxo

[00119] As células de sebócitos humanos são lavadas 3 vezes por centrifugação a 100 g durante 5 min com PBS gelada, fixadas durante 10 min à temperatura ambiente com solução de formaldeído a 0,5% (Sigma) e lavadas novamente uma vez com PBS gelada. Os glóbulos celulares são finalmente ressuspensos em PBS gelada contendo 3% de albumina sérica bovina (BSA) e azida de sódio a 1% e armazenadas a 4°C no escuro durante a noite. Análise de Morfologia Celular: Tamanho (Dispersão frontal, FSC) e Granularidade (Dispersão lateral, SSC) por Citometria de Fluxo

[00120] O ensaio é realizado pelo menos 3 vezes. As suspensões contendo as células para cada tratamento são passadas através de um Citômetro de Fluxo (FACSCanto II, BD Biosciences) e são coletados 100.000 a 200.000 eventos, o número de eventos dependendo de cada ensaio particular. Na tecnologia de Citometria de Fluxo, a FSC (Dispersão frontal) é proporcional à área de superfície celular ou tamanho de célula e a SSC (Dispersão lateral) é proporcional à granularidade celular ou complexidade interna. A FSC versus a SSC permite identificar morfologia específica de diferentes tipos de células. As alterações morfológicas dos sebócitos para cada tratamento são analisadas usando o software WinMDI 2.9 e representam granularidade versus tamanho (SSC vs. FSC). Uma janela é desenhada para descartar detritos celulares e a morfologia celular de células em janelas é representada com uma plotagem de densidade de SSC versus FSC. As alterações morfológicas são avaliadas pela criação de eixos orientativos nos controles de diferenciação negativa e positiva.

[00121] Uma representação por gráfico de pontos de dados de citometria de fluxo é usada para a determinação da distribuição de eventos dentro das plotagens, Tabela 8. O número de eventos em cada quadrante é quantificado.

Tabela 8

[00122] A Tabela 9 mostra um experimento representativo dos três experimentos independentes realizados. Neste ensaio, as suspensões de células correspondentes a cada tratamento são passadas através de um citômetro de fluxo e são coletados 100.000 eventos. A Tabela 9 mostra o número de eventos em cada quadrante dos parâmetros morfológicos de tamanho vs granularidade de sebócitos cultivados em diferentes condições de cultura. Os sebócitos diferenciados comparados com os indiferenciados mostram uma alteração na morfologia caracterizada por altos níveis de granularidade (aumento de Q2) e tamanho pequeno de célula (aumento de Q3 e diminuição de Q4). Os sebócitos tratados com o extrato obtido de acordo com o exemplo 1 mostram uma alteração morfológica de diminuição da granularidade (diminuição de Q2) e aumento do tamanho das células similar aos sebócitos indiferenciados (diminuição de Q3 e aumento de Q4).

Tabela 9

[00123] Os resultados na Tabela 9 mostram que o extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, mantém alguns sebócitos indiferenciados na presença de meio de diferenciação condicionado.

[00124] A Figura 1 mostra gráficos de densidade de parâmetros morfológicos de tamanho (FSC-A) e granularidade (SSC-A) para sebócitos cultivados em diferentes condições de cultura. Os sebócitos indiferenciados mostram duas populações de células principais com níveis de granularidade similares, mas dois tamanhos diferentes. Os sebócitos diferenciados mostram uma população celular única caracterizada por níveis de granularidade altos e tamanho de célula pequeno. Os sebócitos tratados com 2,5 μg/ml do extrato obtido de acordo com o exemplo 1 mostram uma alteração na morfologia diminuindo a granularidade e aumentando o tamanho das células similares aos sebócitos indiferenciados. As imagens pertencem ao mesmo experimento mostrado na Tabela 9.

Exemplo 11. Estudo do perfil da expressão gênica de queratinócitos epidérmicos humanos.

[00125] O número de vezes que conjuntos de genes aumentam/diminuem significativamente é estudado, dentro do perfil genético de queratinócitos epidérmicos humanos, por tratamento com 2,5 μg/ml do extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, em comparação com os níveis basais em células não tratadas (controle negativo).

[00126] Queratinócitos epidérmicos humanos adultos, HEKa, (Cascade Biologics) são semeados em frascos T25 pré-tratados com Coating Matrix (15x104 células/frasco T25). Os queratinócitos epidérmicos humanos adultos são incubados em meio Epilife completo (meio Epilife suplementado com EDGS, Cascade Biologics) por 6 dias a 37°C em atmosfera com 5% de CO2. Após a incubação, as células são tratadas durante 24 horas a 37°C em uma atmosfera com 5% de CO2 com 2,5 μg/ml do extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, em meio Epilife completo ou meio Epilife completo como controle negativo. As incubações e os tratamentos são realizados em pelo menos 4 ensaios biológicos (frascos) para cada condição.

[00127] Após os tratamentos, as células são lisadas e o RNA é extraído e purificado de cada frasco e cada condição por meio do kit RNeasyPlus Mini (Qiagen). As células lisadas são homogeneizadas e as RNases são inativadas. O DNA genômico é removido das amostras usando colunas de rotação gDNA Eliminator. Em seguida, as amostras são passadas através de colunas de ligação de RNA especiais e após várias lavagens por microcentrifugação para eliminar contaminantes e impurezas, o RNA purificado é eluído com 50 μl de água ultrapura.

[00128] A pureza, integridade e concentração do RNA obtido são avaliadas por espectrofotometria (Nanodrop) e com um bioanalisador (Agilent Bioanalyzer).

[00129] Mais tarde, a marcação é realizada e as amostras são hibridizadas em um microarranjo de expressão genética humana (ASurePrint G3, Agilent).

[00130] Os valores normalizados obtidos com o tratamento são comparados com os valores normalizados obtidos com o controle negativo para obtenção de genes com expressão diferencial. Em seguida, realiza-se uma análise paramétrica dos dados por meio do software Bioconductor. Os valores obtidos são então avaliados por meio de análise de enriquecimento de grupos de genes (GSEA, Gene Set Analysis Enrichment) para agrupar os genes com expressão diferencial em termos de Ontologia Genética e Rotas Biológicas.

[00131] Os resultados obtidos são apresentados abaixo nas Tabelas 10 a 13, nos quais os genes são agrupados. % de alteração em

Tabela 10. Genes envolvidos em INFLAMAÇÃO, regulados negativamente pelo extrato obtido de acordo com o exemplo 1.

Tabela 11. Genes envolvidos em ESTRESSE OXIDATIVO e/ou DESINTOXICAÇÃO, regulados positivamente pelo extrato obtido de acordo com o exemplo 1.

Tabela 12. Genes envolvidos em RESPOSTA ANTI-INFLAMATÓRIA, regulados positivamente pelo extrato obtido de acordo com o exemplo 1.

Tabela 13. Genes envolvidos em HIDRATAÇÃO, regulados positivamente pelo extrato obtido de acordo com o exemplo 1.

Exemplo 12: Estudo do perfil da expressão gênica de sebócitos humanos.

[00132] O número de vezes que conjuntos de genes aumentam/diminuem significativamente é estudado, dentro do perfil genético de sebócitos humanos, por tratamento com 2,5 μg/ml do extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, em comparação com os níveis basais em células não tratadas (controle negativo).

[00133] Os sebócitos humanos (CELPROGEN) são semeados em frascos T25 revestidos com matriz extracelular (CELPROGEN) (25x104 células/frasco), e são incubados em meio de crescimento de sebócitos (50% de meio de crescimento completo de sebócitos humanos e 50% de meio livre de soro de sebócitos humanos, CELPROGEN) durante 3 dias a 37°C em uma atmosfera com 5% de CO2. Após 3 dias, o soro é reduzido da cultura e o meio de crescimento de sebócitos é substituído por meio de soro reduzido (5% de meio de crescimento completo de sebócitos humanos e 95% de meio livre de soro de sebócitos humanos, CELPROGEN) e os sebócitos são incubados durante 3 dias. Após a incubação, as células são tratadas durante 24 horas a 37°C em uma atmosfera com 5% de CO2 com 2,5 μg/ml do extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1, em meio de soro reduzido ou meio de soro reduzido como controle negativo. As incubações e os tratamentos são realizados em pelo menos 4 ensaios biológicos (frascos) para cada condição.

[00134] Após os tratamentos, as células são lisadas e o RNA é extraído e purificado de cada frasco e cada condição por meio do kit RNeasyPlus Mini (Qiagen). As células lisadas são homogeneizadas e as RNases são inativadas. O DNA genômico é removido das amostras usando colunas de rotação gDNA Eliminator. Em seguida, as amostras são passadas através de colunas de ligação de RNA especiais e após várias lavagens por microcentrifugação para eliminar contaminantes e impurezas, o RNA purificado é eluído com 50 μl de água ultrapura.

[00135] A pureza, integridade e concentração do RNA obtido são avaliadas por espectrofotometria (Nanodrop) e com um bioanalisador (Agilent Bioanalyzer).

[00136] Mais tarde, a marcação é realizada e as amostras são hibridizadas em um microarranjo de expressão genética humana (ASurePrint G3, Agilent).

[00137] Os valores normalizados obtidos com o tratamento são comparados com os valores normalizados obtidos com o controle negativo para obtenção de genes com expressão diferencial. Em seguida, realiza-se uma análise paramétrica dos dados por meio do software Bioconductor. Os valores obtidos são então avaliados por meio de análise de enriquecimento de grupos de genes (GSEA, Gene Set Analysis Enrichment) para agrupar os genes com expressão diferencial em termos de Ontologia Genética e Rotas Biológicas.

[00138] Os resultados obtidos são apresentados abaixo nas Tabelas 14 a 17, nos quais os genes são agrupados.

Tabela 14. Genes envolvidos em INFLAMAÇÃO, regulados negativamente pelo extrato obtido de acordo com o exemplo 1.

Tabela 15. Genes envolvidos em PROLIFERAÇÃO DE SEBÓCITOS E DIFERENCIAÇÃO, regulados negativamente pelo extrato obtido de acordo com o exemplo 1.

Tabela 16. Genes envolvidos em ESTRESSE OXIDATIVO E REPARO DO DNA, regulados positivamente pelo extrato obtido de acordo com o exemplo 1.

Tabela 17. Genes envolvidos em METABOLISMO RETINOIDE, regulados positivamente pelo extrato obtido de acordo com o exemplo 1. O metabolismo retinoide é relacionado à produção de sebo na pele.

Exemplo 13: Preparação de uma composição cosmética do extrato inferior a 10 KDa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA com número de depósito CECT 8690.

[00139] Em um recipiente adequado, os ingredientes de Fase A são dissolvidos em água sob agitação de turbina, até alcançar uma dispersão total. Subsequentemente, Fase B, Novemer EC2 [INCI: ÁGUA (AQUA), ACRILATOS DE SÓDIO, BEENETO 25 METACRILATO, POLÍMERO CRUZADO, POLIDECENO HIDROGENADO, LAURIL GLICOSÍDEO] é adicionado pouco a pouco, sob agitação de turbina.

[00140] Em seguida, são adicionados uma solução aquosa do extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica obtido de acordo com o exemplo 1 a uma concentração de 62,5 μg/ml e salicilato de sódio (Fase C).

[00141] A lista de ingredientes está na Tabela 18.

Tabela 18

Exemplo 14: Preparação de uma composição cosmética do extrato inferior a 10 KDa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA com número de depósito CECT 8690.

[00142] Em um recipiente adequado, os ingredientes de Fase A são dissolvidos em água sob agitação de turbina, até alcançar uma dispersão total. O extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica obtido de acordo com o exemplo 1 é adicionado à Fase A como uma solução aquosa do extrato a uma concentração de 250 μg/ml.

[00143] Subsequentemente, os componentes da Fase B são adicionados pouco a pouco, sob agitação de turbina, até dispersão total. O pH é ajustado para 6,3 a 6,8.

[00144] A lista de ingredientes está na Tabela 19. INGREDIENTE (nome INCI) % em peso FASE

Tabela 19

Exemplo 15: Estudo IN VIVO para a eficácia do extrato inferior a 10 KDa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA com número de depósito CECT 8690 em pele oleosa de voluntários de tipo de pele asiática.

[00145] O estudo é realizado em 20 voluntárias asiáticas entre 20 e 35 anos. As voluntárias aplicam a composição do exemplo 14, na face e na testa, duas vezes por dia (manhã e noite) por 28 dias. O estudo mede o número e a superfície de folículos ativos que secretam sebo, manchas, no momento inicial antes do uso da composição do exemplo 14 e no dia 28. Os indivíduos serviram como referências próprias comparando o resultado obtido no dia 28 com o resultado obtido no momento inicial. A eficácia é medida com Sebutape®, uma película adesiva sensível ao sebo. Os resultados são mostrados na Tabela 20.

Tabela 20

[00146] Os resultados mostram uma diminuição média de 9,5% dos folículos ativos que secretam sebo e uma diminuição média de 27,2% da superfície de folículos ativos que secretam sebo em 20 voluntárias.

Exemplo 16: Preparação de uma composição de base para imperfeições (BB cream) do extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690.

[00147] Em um recipiente adequado, os ingredientes da Fase A [INCI: ÁGUA, METIL GLUCETH-20, ALANTOÍNA, HIDRÓXIDO DE SÓDIO, EDTA DISSÓDICO, SORBATO DE POTÁSSIO] são dissolvidos sob agitação de turbina e a mistura é aquecida a 50°C até alcançar dispersão total.

[00148] Subsequentemente, a Fase B1 [INCI: CARBOPOL ®ULTREZ 20, POLÍMERO CRUZADO DE ACRILATOS/ACRILATO DE ALQUILA C10-30], deixada umedecer e depois dispersada, e Fase B2 [INCI: GOMA XANTANA] é adicionada, deixada umedecer e, então, também dispersada.

[00149] Em seguida, os ingredientes da Fase C são adicionados [INCI: CI 77891 & ÁGUA & GLICERINA & GOMA XANTANA & CITRATO DE SÓDIO, CI77492 & ÁGUA & GLICERINA & GOMA XANTANA & CITRATO DE SÓDIO, CI 77491 & GLICERINA & GOMA XANTANA & CITRATO DE SÓDIO, CI77499 & GLICERINA & GOMA XANTANA & CITRATO DE SÓDIO] e deixados para homogeneizar a própria cor por agitação. Quando a mistura está homogênea, a temperatura é aumentada para 75°C.

[00150] Em um outro béquer, os ingredientes da Fase D [INCI: ISOESTEARATO DE ISOPROPILA, TRIGLICERÍDEO CÁPRICO CAPRÍLICO, SESQUISTEARATO DE METIL GLICOSE, ÁLCOOL BEENÍLICO, DIMETICONA, SESQUISTEARATO DE METIL GLICOSE PEG-20, FENOXIETANOL, ACETATO DE VITAMINA E] são ponderados e a mistura é aquecida a 80°C.

[00151] Quando as respectivas temperaturas são atingidas, a emulsão é feita adicionando lentamente a mistura de Fase D à mistura das Fases A, B1, B2 e C sob agitação, primeiro a 600 rpm e depois um minuto com um turrax a 10.000 rpm.

[00152] Quando a mistura resfriou até 65°C, a Fase E [INCI: MICA, NITRETO DE BORO, MICA] é adicionada. Em seguida, são adicionados uma solução aquosa do extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica obtido de acordo com o exemplo 1 a uma concentração de 62,5 μg/ml e salicilato de sódio (Fase F) [INCI: ÁGUA, EXTRATO DE FERMENTO DE PSEUDOALTEROMONAS, SALICILATO DE SÓDIO], e Fase G [INCI: FRAGRÂNCIA] à mistura anterior quando o volume está a 30°C.

[00153] A lista de ingredientes está na Tabela 21.

Tabela 21

Exemplo 17: Preparação de composição BB cream placebo

[00154] A composição é preparada de acordo com as instruções do exemplo 16, mas sem o extrato de Pseudoalteromonas antarctica com os seguintes ingredientes incluídos na Tabela 22.

Tabela 22

Exemplo 18: Estudo IN VIVO para a eficácia do extrato inferior a 10 KDa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA com número de depósito CECT 8690 no efeito matificante duradouro de um BB cream.

[00155] O estudo é realizado em 22 voluntárias brancas entre 18 e 42 anos. As voluntárias aplicam a composição do exemplo 16, em metade do rosto e o placebo (exemplo 17) na outra metade. Após uma única aplicação do produto, o brilho da pele é medido, no momento inicial antes do uso da composição, imediatamente após a aplicação do produto e 2 horas e 8 horas após a aplicação do produto. A eficácia é medida com Skin-Glossymeter® GL 200. Os resultados são mostrados na Tabela 23.

Tabela 23

[00156] As medições imediatamente após a aplicação do produto mostram que a diminuição do brilho da pele é maior com creme ativo (a composição do exemplo 16, com o extrato inferior a 10 KDa de espécie Pseudoalteromonas antarctica com número de depósito CECT 8690) do que com o creme placebo. Um resultado similar é encontrado após 2 horas. No entanto, após 8 horas de aplicação do produto o creme ativo é capaz de diminuir o brilho da pele, enquanto com creme placebo o brilho da pele aumenta.

Exemplo 19: Estudo IN VIVO com o produto extracelular bacteriano secretado pela cepa da espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA com número de depósito CECT 8690, obtido de acordo com o exemplo 1; teste de eficácia para o tratamento de pele oleosa em voluntárias de tipo de pele branca.

[00157] O estudo foi realizado durante 28 dias com medidas no momento inicial, após 14 dias e após 28 dias. Foram incluídas 20 voluntárias sendo mulheres brancas entre 20 e 35 anos. Os indivíduos aplicaram o gelcreme do exemplo 13, duas vezes por dia (de manhã e de noite). Os indivíduos serviram como referência própria e os resultados obtidos em momentos diferentes foram comparados com os obtidos no momento inicial.

[00158] A eficácia do produto foi avaliada por: - Medições com Sebumeter® para determinar a taxa de sebo na pele em ambos os lados do nariz; os resultados são mostrados na tabela 24. - Fotografias digitais com Epiflash para análise de imagem de poros em ambos os lados do nariz; os resultados são mostrados na tabela 25. Fotografias digitais com Visia-CR para análise de imagem do brilho da pele na testa; os resultados são mostrados na tabela 26.

* calculadas sobre os valores médios Tabela 24. As variações percentuais respeitam o tempo inicial da quantidade total de sebo aos 14 e 28 dias.

[00159] Os resultados mostram uma diminuição da taxa de sebo de 8,4% após 14 dias de aplicação do produto. Após 28 dias, a redução da taxa de sebo é de até 9,4%.

* calculadas sobre os valores médios Tabela 25. As variações percentuais respeitam o tempo inicial do número e a superfície total das manchas aos 14 e 28 dias.

[00160] Os resultados mostram uma redução do número de poros de 20,5% após 14 dias e 18,0% após 28 dias de aplicação do produto. Em relação à área total dos poros, foram encontradas reduções de 18,8% e 18,7% após 14 e 28 dias de aplicação do produto, respectivamente.

* calculadas sobre os valores médios Tabela 26. As variações percentuais respeitam o tempo inicial do brilho da pele na testa, aos 14 e 28 dias.

[00161] Os resultados mostram uma redução da intensidade de brilho da pele de 17% após 14 dias de tratamento. Após 28 dias de aplicação do produto a redução foi de até 27,3% da intensidade do brilho da pele.

Claims

1. Uso de um extrato extracelular produzido por fermentação de uma cepa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA, para o tratamento e/ou cuidado cosmético não terapêutico da pele, das membranas mucosas e/ou do cabelo caracterizado pelo fato de que o extrato possui um peso molecular inferior a 10.000 Da e é produzido por filtração do sobrenadante obtido a partir da fermentação da cepa de espécies PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA para eliminar moléculas de peso molecular superior a 10.000 Da.

2. Uso de um extrato de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tratamento e/ou cuidado cosmético não terapêutico é um tratamento de redução da quantidade de sebo na pele e/ou cabelo, tratamento e/ou prevenção de envelhecimento da pele, tratamento e/ou prevenção de rugas da pele, tratamento para firmar a pele, prevenção de perda da firmeza da pele e/ou para higiene capilar.

3. Uso de um extrato de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o tratamento e/ou cuidado cosmético não terapêutico é a manutenção ou melhoria da hidratação da pele.

4. Uso de um extrato de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o tratamento e/ou cuidado cosmético não terapêutico inibe o receptor de MC5R e/ou estimula a síntese de colágeno.

5. Uso de um extrato de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o peso molecular do extrato é superior a 50 Da e inferior a 10.000 Da, e está preferivelmente entre 100 Da e 8.000 Da.

6. Uso de um extrato de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a cepa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA é uma cepa com número de depósito CECT 8690.

7. Composição cosmética ou dermofarmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende entre 0,0000000001% em peso e 20% em peso do extrato extracelular produzido por fermentação de uma cepa de espécie PSEUDOALTEROMONAS ANTARCTICA, em que o extrato possui um peso molecular inferior a 10.000 Da, e pelo menos um excipiente, adjuvante e/ou ingrediente cosmeticamente e/ou dermofarmaceuticamente aceitável.

8. Composição cosmética ou dermofarmacêutica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o extrato é incorporado em um sistema de dispensação cosmeticamente ou dermofarmaceuticamente aceitável ou em um sistema de liberação prolongada selecionado a partir do grupo formado por lipossomas, lipossomas mistos, oleossomas, niossomas, etossomas, milipartículas, micropartículas, nanopartículas e nanopartículas lipídicas sólidas, carreadores lipídicos nanoestruturados, esponjas, ciclodextrinas, vesículas, micelas, micelas misturadas de tensoativos, micelas misturadas de fosfolipídeo tensoativo, miliesferas, microesferas e nanoesferas, liposferas, milicápsulas, microcápsulas, nanocápsulas, microemulsões e nanoemulsões ou é adsorvido em um polímero orgânico sólido ou suporte mineral sólido selecionado a partir do grupo formado por talco, bentonita, sílica, amido ou maltodextrina.

9. Composição cosmética ou dermofarmacêutica de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizada pelo fato de que esta composição é apresentada em uma formulação selecionada a partir do grupo formado por múltiplas emulsões, soluções, cristais líquidos, composições anidras, dispersões aquosas, óleos, leites, bálsamos, espumas, loções aquosas ou oleosas, géis aquosos ou oleosos, cremes, soluções, soluções hidroalcoólicas, soluções hidroglicólicas, hidrogéis, linimentos, soros, sabões, xampus, condicionadores, máscaras faciais, pulverizadores para cabelo, séruns, películas de polissacarídeos, unguentos, mousses, pomadas, pastas, pós, barras, lápis, pulverizadores ou aerossóis.

10. Composição cosmética ou dermofarmacêutica de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizada pelo fato de que é incorporada em um tecido, tecido não tecido ou dispositivo médico.