KR20170072341A - 슈도알테로모나스 앤타륵티카로부터의 박테리아 세포외 생성물을 함유하는 미용적 및/또는 약학적 조성물, 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
피부 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리에서 사용하기 위한 박테리아 균주의 추출물은 물론 이의 미용적 및/또는 피부약학적 조성물. 특히, 피지 감소 및 피부 탄력을 위한 이의 용도.
Description
본 발명은 피지 감소를 촉진시키는 박테리아 기원의 세포외 생성물에 관한 것이다. 상기 생성물은 슈도알테로모나스 앤타륵티카(Pseudoalteromonas antarctica) 종의 균주에 의해 분비된다. 또한, 본 발명은 피부, 점막 및/또는 모발의 치료 및/또는 관리를 위한 미용적 또는 피부약학적 조성물에서 박테리아 기원의 상기 세포외 생성물의 용도에 관한 것이다.
피부, 점막, 모발 및/또는 손발톱은 유기체와 이의 환경간의 물리적 장벽을 구성한다. 피부는 두 개의 조직으로 구성된다: 표피(epidermis) 및 진피(dermis). 표 피는 피부의 최상층이며 투과성이 없어 외부 물질로부터의 보호를 제공한다. 이는 각질화된 중층 상피(keratinized pluristratified epithelium)로서 연속적으로 자체 재생된다.
표피는 표피 (각질세포)에서 주요 세포 유형들로부터 비롯되는 고함량의 각질, 멜라닌, 및 현저한 함량의 지질을 가지며, 이들은 피부 표면의 하이드로리피드 필름 또는 각질층 중 어느 하나에서 발견된다. 피지와 각질세포 기원의 지질은 피부 표면을 덮고 있는 지질막에서 발견되며, 여기에서 이들 지질의 주요 부분은 피지의 기원이다 [A. Pappas , “Epidermal Surface Lipids”, Dermato-Endocrinology 2009, 1, 72-76].
피지 분비는 피지샘에서 생성되며, 이는 손발바닥을 제외한 신체 전체에서 발견되며, 이들은 얼굴에서 cm2 당 400-900개의 샘 밀도로 발견되며, [K. R. Smith and D. M. Thiboutot , “Sebaceous gland lipids: friend or foe?”, Journal of Lipid Research 2008, 49, 271-281], 주로 모낭과 관련이 있으며, 여기에서 피지 분비는 이의 채널을 통해 피부 표면에 도달한다. 피지샘의 분비물인 피지는 지방산, 디글리세리드, 트리글리세리드, 콜레스테롤 및 스쿠알렌으로 주로 구성된 혼합물로 구성된 유성의 왁스형 물질이며, 이는 체온 조절 기능과 피부 표면으로부터의 수분 손실 감소를 제공한다.
인간에서 생성된 피지의 양은 또한, 개체군에 따라 다양하며, 이는 또한 연령과 호르몬 조절 인자에 의존적이다. 피지의 양에 따라, 하기와 같이 구별된다:
- 지성 피부. 지성 피부는 피지샘의 과도한 기능으로 인해 초래된다. 피지가 피부에 과도하게 존재하는 경우, 피부는 두꺼운 질감, 기름기 있고 번들거리는 외관뿐만 아니라 확장된 모공 및 피부 결함의 존재를 특징으로 한다.
- 복합성 피부. 이는 건성 영역 및 지성 영역이 동시에 존재하는 것을 특징으로 한다. 일반적으로, 지성 영역은 이마, 코, 및 턱 (T-존으로 알려짐)에 위치한다. T-존 바깥 쪽의 얼굴 부분은 일반적으로 건성 영역이며, 이 영역에서의 더 얇은 피부로 인해, 이의 박리가 증가한다.
- 건성 피부. 피지의 부족은 충분한 수화작용을 유지할 수 없는 능력을 내포하며, 이는 박리되기 쉽고 잔주름이 생기기 쉬운 연약한 피부가 되게 한다. 감지할 수 없는 모공을 나타내는 특성과 함께, 장벽 기능의 감소된 능력은 UV, 냉기 및 바람과 같은 외부 유해 요인에 대한 더 높은 민감성을 내포한다.
- 보통 피부. 수분 밸런스를 좋게 하는 적당량의 피지를 갖는, 이러한 종류의 피부는 탄력과 저항성이 우수하고 모공이 거의 안보이며 피부 톤이 균일하다.
연령과 인종 기원에 크게 의존적이지만, 지성 T-존을 갖는 복합성 피부를 갖는 인구의 추가적인 존재와 함께 지성 피부를 나타내는 상당한 평균의 인구가 존재한다.
과다 피지와 관련된 일부 피부병은 다음과 같다:
- 피지의 과분비를 유도하는 피지샘의 기능 장애인 지루로서, 적색의 자극받은 비늘모양의 피부를 초래하는 지루.
- 피지, 죽은 세포 및 박테리아가 갇혀있는 피부의 모공에서 멈출때 발생하는 감염인 여드름.
- 딱딱한 피지의 축적과 소포로의 길이 막혀 발생하는 각질화된 세포 덩어리인 면포.
- 피부 아래에 갇힌 각질화된 세포 및 피지 물질인 좁쌀종 또는 밀크 스폿.
피지샘 내부에, 피지는 성숙한 피지선세포가 피지샘의 내부에서 파괴될 경우 방출되며, 피지는 모낭의 채널을 통해 피부 표면으로 나온다. 피지 방출에 도달 할 때까지, 샘 기능은 모낭에 인접한 층에 분화되지 않은 세포 집단이 있으며, 이들이 샘의 기저층으로 이동함에 따라 증식을 시작하고, 이들이 샘의 중앙 부분에 도달할 때는 지질-충전된 피지선세포가 되며, 여기에서 이들은 결국은 점진적으로 파괴되는 것으로 이해된다 [C. Nieman and V. Horsley , "Development and Homeostasis of the sebaceous gland", Seminars in Cell & Developmental Biology 2012, 23, 928- 936].
다수의 화합물 예컨대, 안드로겐, 에스트로겐, 레티노이드, LXR 타입 수용체 (간 X 수용체), 퍼옥시좀 증식인자에 의해 활성화된 수용체, 성장 호르몬/인슐린-유사 성장 인자, 및 멜라노코르틴 패밀리는 피지샘의 기능을 조절하는데 효과를 나타냈다 [K. R. Smith and D. M. Thiboutot , “Sebaceous lipids: friend or foe?”, Journal of Lipid Research 2008, 49, 271-281].
멜라노코르틴 패밀리는 프로피오멜라노코르틴 (POMC), 및 멜라노코르틴 펩티드의 효과를 조절하는 멜라노코르틴 수용체 (MCR)와 구소적으로 관련된 펩티드의 군으로 구성된다. MCR은 G 단백질 (GPCR)과 연관되어 있으며, 다양한 경로에 의해 시그널링을 전달한다: 사이클릭 아데노신 모노포스페이트 (cAMP)의 생성, 단백질 키나제 A의 활성화, 및 [Ca2+] 양이온의 농도 증가.
MC5R은 다양한 인간 조직에서 특성결정된 다양한 멜라노코르틴 수용체 중 하나이며, 이는 지질 생성에 관여한다 [M.A . Bednarek et al, “Potent and Selective Peptide Agonists of α- Melanocite Stimulating Hormonone ( αMSH ) Action at Human Melanocortin Receptor 5; their Synthesis and Biological Evaluation in vitro”, Chem . Biol . Drug. Des. 2007, 69, 350-355]. 예를 들어, MC5R 수용체의 발현이 결여된 트랜스제닉 마우스는 피지 생성에서 현저한 감소를 보였다 [D.M . Thibotout et al, “The Melanocortin 5 Receptor is Expressed in Human Sebaceous Glands and Rat Preputial Cells”, J. Invest. Dermatol . 2000, 115, 614-619]. 게다가, MC5R은 미분화된 피지 세포에서는 검출되지 않으면서, 분화의 후기 단계의 피지 세포에서는 검출되지만, 기초적이고 미분화된 피지 세포에서는 검출되지 않기 때문에 MC5R은 피지선 세포 분화의 마커로 간주된다. 유사하게는, MC5R은 분화가 시작될 때 시험관내 배양에서 그리고, 현저한 지질 과립을 나타내는 완전히 분화된 피지 세포에서만 검출 가능하다 [L. Zhang et al, “ Melanocortin -5 receptor: A marker of human sebocyte differentiation”, Peptides 2006, 27, 413-420]. MC5R은 피지 생성을 유도하는 피지 분화 과정과 상관관계가 있는 마커이기 때문에, 이러한 수용체 MC5R의 억제는 피지 생성의 감소 및 결과적으로, 피지 과다와 관련된 장애 및/또는 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 전략으로 이용될 수 있다
또한, MC5R 수용체의 억제는 지루성 피부염, 암 및 염증성 질환의 치료에 유리한 것으로 나타났다 (US 2009/221558). 예를 들어, 뮤어-토레 증후군은 (일반적으로 대장, 전립선, 유방 또는 난소에서의) 내부 선암종과 연관된 피지샘의 선종으로 이루어져 있으며, MC5R 수용체의 저해를 통한 피지 세포 분화 방지는 종양 성장의 치료에 효과적일 수 있다 (US 2009/221558). 수용체 MC5R의 억제는 식욕 부진 또는 악액질 (US 2003/110518)의 치료 및 화농땀샘염과 귀지의 과다 생성 (WO 03/040118 A1)을 치료하는데 유익한 것으로 또한 나타났다.
피지샘을 억제하는 특정 화합물 예컨대, 에스트로겐은 콜라겐 합성에 대한 자극 효과를 가지며, 따라서 피부 탄력 효과를 갖는 것으로 또한 공지되어 있다 [A. Parchami , R.A . Fatahian Dehkordi , “Effect of ovariectomy and chronic sex steroid administration on rabbit skin”, Global Veterinaria , 2010, 4(6), 610-615].
종래 기술에는 바다로부터 유래되는 세포외 폴리머 물질인 MatmarineTM으로서, MC5R 수용체에 작용하는 MatmarineTM이 기술되어 있다 [Soap, Perfumery & Cosmetics, Product Innovation 2013, page 39]. MatmarineTM은 피지 비율 (8.4%), 수 (20.5%) 및 모공 면적 (18.8%)을 감소시킨다고 한다.
놀랍게도, 본 발명의 출원인은 슈도알테로모나스 앤타륵티카 균주에 의해 생성된 10k Da 미만 분자량의 추출물이 MC5R 수용체를 억제하고 피부에서 콜라겐 합성을 증가시킴을 발견하였다.
종래 기술로부터 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종에 의해 생성된 당단백질이 힐링 (EP 1402898 B1), 보습 특성을 가지며, 피부 각질화 장애 (EP 2337556 A1)를 치료하는 것으로 공지되어있다. 또한, 종래 기술은 분자량이 109 KDa, 52.5 KDa, 48 KDa, 44 KDa, 42 KDa, 34.5 KDa, 33 KDa, 31 KDa 및 24 KDa인 슈도알테로모나스 앤타륵티카의 막 소포에서의 단백질 프로파일을 기재한다. 주요 단백질의 평균 분자량은 98 내지 112 KDa이다 [Morphological and physiological study of 슈도알테로모나스 앤타륵티카 NF3 and characterization of membrane vesicles present in the produced extracellular material, Doctoral Thesis of Maria Nevot, filed at the University of Barcelona].
발명의 개요
기재된 기술은 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주의 추출물에 의해 피부, 점막 및/또는 모발에서 피지를 감소시키기 위한 해결책을 제공한다.
도면의 간단한 설명
도 1: 밀도 플롯은 다양한 배양 조건에서 성장한 피지선세포에 대한 크기 (FSC-A) 및 입도 (SSC-A)의 형태학적 파라미터를 보여준다. 미분화된 피지선세포는 유사한 입도 수준을 가지나 2개의 상이한 크기를 갖는 2개의 주요 세포 군집을 보여준다. 분화된 피지선세포는 높은 입도 수준과 작은 세포 크기를 특징으로 하는 독특한 세포 집단을 보여준다. 실시예 1에 따라 수득된 추출물 2.5 μg/ml로 처리한 피지선세포는 미분화된 피지선세포와 유사한 세포 크기 증가 및 입도 감소의 형태학적 변화를 보여준다.
도 1: 밀도 플롯은 다양한 배양 조건에서 성장한 피지선세포에 대한 크기 (FSC-A) 및 입도 (SSC-A)의 형태학적 파라미터를 보여준다. 미분화된 피지선세포는 유사한 입도 수준을 가지나 2개의 상이한 크기를 갖는 2개의 주요 세포 군집을 보여준다. 분화된 피지선세포는 높은 입도 수준과 작은 세포 크기를 특징으로 하는 독특한 세포 집단을 보여준다. 실시예 1에 따라 수득된 추출물 2.5 μg/ml로 처리한 피지선세포는 미분화된 피지선세포와 유사한 세포 크기 증가 및 입도 감소의 형태학적 변화를 보여준다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 미용적 및/또는 피부약학적 용도에 관한 것이다. 놀랍게도, 본 발명의 발명자들은 상기 언급된 추출물이 피부 및/또는 모발에서 피지의 양을 감소시키고, 피부에서의 콜라겐 합성을 증가시키며, 이들이 또한 광보호제임을 발견하였다. 한 구체예에서, MC5R 수용체의 억제는 피부 및/또는 모발에서의 피지 생성을 감소시키고 피지의 양을 감소시킨다.
정의
본 발명의 이해를 촉진하기 위해, 본 발명의 상황에서 사용되는 바와 같은 일부 용어 및 표현의 의미가 포함된다.
본 발명의 상황에서, "피부"는 가장 최상층 또는 각질층으로부터 가장 최하층 또는 피하조직까지 이들을 포함하여 상기 피부를 포함하는 층인 것으로 이해된다. 이들 층은 다양한 유형의 세포, 특히 예를 들어, 특히 각질세포, 섬유아세포, 멜라닌세포 및/또는 지방세포로 구성된다. 본 발명의 상황에서, 용어 "피부"는 두피를 포함한다.
조건 "미용적, 비-치료학적"이 수반되지 않는 경우 본 명세서의 상황에서 사용되는 용어 "치료"는 질병 또는 장애를 완화시키거나 제거하거나, 상기 질병 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 감소시키거나 제거하기 위한 본 발명에 따른 화합물의 투여를 의미한다. 용어 "치료"는 또한 질병 또는 장애의 생리학적 결과를 완화시키거나 제거하는 능력을 포함한다.
용어 "치료"가 조건 "미용의 비-치료학적"을 수반하는 경우, 이는 특히 피부, 모발 및/또는 점막의 미용적 특성, 비제한적인 예로, 특히 수화의 수준, 탄성, 탄력성성, 광택, 색조 또는 질감을 개선시키기 위한 목적으로 피부, 모발 및/또는 점막으로의 화합물의 적용을 나타낸다. 본 발명에서 용어 "관리"는 피부, 모발 및/또는 점막의 특성의 유지를 나타낸다. 이들 특성은 건강한 대상체 뿐만 아니라 피부 및/또는 점막의 질병 및/또는 장애, 비제한적인 예로, 특히 피부 상의 궤양 및 병변, 건선, 피부염, 여드름 또는 장미증이 존재하는 대상체 둘 모두에서 피부, 모발 및/또는 점막의 미용적 치료 및/또는 관리를 통해 개선되고 유지된다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 질병 또는 장애의 출현 또는 이의 출현 전의 질병 또는 장애의 발달을 예방하거나, 지연시키거나, 방해하는 본 발명의 화합물의 능력을 나타낸다.
본 발명의 상황에서, 용어 "노화"는 나이가 듦에 따라(시간-노화(chronoaging)) 또는 태양(광노화) 또는 환경적 물질, 예를 들어, 담배 연기, 추위, 열, 또는 바람의 극한 기후 조건, 화학적 오염체 또는 오염물질에 대한 노출을 통해 피부가 겪는 변화를 나타내며, 이는 특히 접촉을 통한 모든 외부의 가시적 및/또는 인지가능한 변화, 비제한적인 예로, 피부 상의 불연속성의 발생, 예를 들어, 주름, 미세 주름, 고랑, 불규칙 또는 거침, 모공 크기의 증가, 탄성의 손실, 탄력성의 손실, 매끈함의 손실, 변형으로부터 회복하는 능력의 손실, 피부의 늘어짐, 예를 들어, 늘어진 뺨, 눈밑 지방의 외관 또는 이중턱의 외관, 특히, 피부 색의 변화, 예를 들어, 반점, 발적, 눈밑 지방 또는 과다색소침착된 부위의 출현, 예를 들어, 특히 검버섯 또는 주근깨, 이상 분화, 과각화현상, 탄력섬유증, 각화증, 모발 상실, 오렌지-껍질 피부, 콜라겐 구조의 손실 및 각질층, 진피, 표피, 혈관 계통 또는 특히 피부에 가까운 조직의 다른 조직학적 변화(예를 들어, 거미양 정맥류 또는 모세혈관확장의 출현)를 포함한다. 용어 "광노화" 그룹은 피부의 미숙 노화를 발생시키는 자외선 방사선에의 피부의 장기간 노출로 인한 일련의 과정과 함께 그룹을 이루며, 이는 노화와 동일한 신체적 특징, 비제한적인 예로, 피부늘어짐, 처짐, 색의 변화 또는 색소침착에서의 얼룩, 비정상적 및/또는 과도한 각질화를 나타낸다.
따라서, 본 발명의 제 1 양태는 피부 및/또는 점막의 치료에서의 사용을 위한 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물에 관한 것이다. 한 구체예에서, 치료는 염증, 피부암, 면포, 미립종, 여드름, 지루, 지성루 피부염, 땀샘염, 화농땀샘염의 치료 및/또는 예방 또는 광보호에 관한 것이다. 한 구체예에서, 염증은, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 건선, 민감한 피부, 피부염, 아토피 피부염, 접촉 피부염, 기저귀 피부염, 지루성 피부염, 습진, 주사, 여드름, 과증식성 피부병, 화상, 일광화상, 손발톱주위염, 수술 후, 강한 펄스화 광 요법(intense pulsed light therapy)(IPL)을 이용한 치료 후, 단색 펄스화 광 요법(monochromatic pulsed light therapy)(레이저)을 이용한 치료 후, 화학 박피제를 이용한 치료 후 또는 공격적 외부 작용제에 대한 과노출 후의 피부 염증, 질의 점막 염증, 경구 점막 염증, 잇몸염, 치주염, 비염, 알레르기 비염에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 암, 식욕부진 또는 악액질의 치료에서 사용하기 위한 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물에 관한 것이다. 한 구체예에서, 암의 치료는 뮤어-토레 증후군 또는 종양 성장의 억제의 치료이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 피부, 점막 및/또는 모발의 미용의 비치료학적 치료 및/또는 관리를 위한 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 용도에 관한 것이다. 한 구체예에서, 피부, 점막 및/또는 모발의 미용의 비치료학적 치료 및/또는 관리는 피부 및/또는 모발에서 피지 양의 감소의 치료, 피부 노화의 치료 및/또는 예방, 피부 주름의 치료 및/또는 예방, 피부 탄력의 치료, 피부 탄력 저하의 예방 및/또는 모발 위생이다.
또 다른 구체예에서, 피부 및/또는 점막의 치료, 및 피부, 점막 및/또는 모발의 미용의 비치료학적 치료 및/또는 관리는 MC5R 수용체를 억제한다.
또 다른 구체예에서, 피부 및/또는 점막의 치료, 및 피부, 점막 및/또는 모발의 미용의 비치료학적 치료 및/또는 관리는 콜라겐 합성을 자극한다.
또 다른 구체예에서, 피부 및/또는 점막의 치료, 및 피부, 점막 및/또는 모발의 미용의 비치료학적 치료 및/또는 관리는 국소 또는 경피 도포에 의해 수행된다.
또 다른 구체예에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 추출물의 분자량은 50 Da 초과 및 10,000 Da 미만이며, 100 Da 내지 8,000 Da, 150 Da 내지 6,000 Da 또는 300 Da 내지 5,000 Da이다.
또 다른 구체예에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주는 기탁 번호 CECT 8690을 갖는 균주이다. 상기 균주는 1977년 4월 28일 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약에 따라 상기 목적을 위해 법적으로 승인된 기관으로서 에 2014년 7월 29일 기탁되었다
또 다른 구체예에서, 10,000 Da 미만 분자량의 추출물은 적합한 배양 배지에서 슈도알테로모나스 앤타륵티카 균주의 종을 발효시키고, 통상적으로 합성을 위해 교반 및 폭기시키고, 배양 배지로 상기 생성물을 분비시킨 후 분리 및 정제함으로써 수득될 수 있다. 본 발명의 추출물을 생성하기 위한 발효는 교반된 배지에서 수행될 수 있으며, 5℃ 내지 37℃ 또는 8℃ 내지 20℃의 온도에서 폭기되며, 배지는 5.5 내지 9의 pH 또는 6.5 내지 7.5의 pH를 갖거나, 필요에 따라 발효 동안 조정된다. 발효 기간은 24 내지 120시간 또는 36 내지 72시간이다. 한 구체예에서, 10,000 Da 미만의 분자량 추출물의 분리 및 정제 방법은 원심 분리 및 여과와 같은 당업자에게 공지된 방법에 의해 수행된다. 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주를 추출물이 발견되는 상청액으로부터 분리하도록 유도된 원심분리 및 여과 단계 후, 고분자량의 분자를 제거하기 위한 여과가 이러한 추출물을 정제하기 위해 수행되며, 10,000 Da 초과의 분자량의 분자를 보유ㅎ는 막이 사용된다. 한 구체예에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주는 기탁 번호 CECT 8690을 갖는 균주이다.
또 다른 구체예에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주의 10,000 Da 미만 분자량의 추출물은 크로마토그래피 칼럼 TSKGel G2000SWXL, 5m, 125Å 7.8mm x 30mm (TOSOH Bioscience) 및 용리액으로서 물과 0.1M pH = 6.70 + 0.1M 포스페이트 완충제 + 0.1M 소듐 설페이트를 갖춘 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)의 크로마토그래피 분석에서 5 내지 20 분 또는 8 내지 17 분의 체류 시간을 갖는다.
한 구체예에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주의 발효에서, 일부 외인성 당, 예를 들어, 비제한적인 예로, 갈락토스, 글루코스, 만노스, 아미그달린, 셀로비오스, 말토스, 전분, 글리코겐, 락토스, 이들의 혼합물 및/또는 이들 당의 혼합물을 함유하는 추출물이 탄소원으로서 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 2 내지 40 g/L, 또는 10 내지 30 g/L의 글루코스의 외인성 공급이 제공된다.
또 다른 구체예에서, 배양 배지는 추가 질소원 또는 탄소원, 예를 들어, 효모 추출물, 맥아 추출물 또는 펩톤을 포함하며, 이들 성분의 각각의 하나의 농도는 0.1 내지 20 g/L, 또는 0.5 내지 10 g/L이다.
또 다른 구체예에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주의 발효 배양을 위해 무기염이 또한 제공되며, 무기염은 이온 Na+, K+, NH4 +, Ca2 +, Mg2 +, PO4 3-, SO4 2-, Cl-, CO3 2-, 또는 미량 원소, 예를 들어, Cu, Mn, Fe 및 Zn을 제공하는 염 중에서 선택된다.
본 발명의 또 다른 양태는 미용적 또는 피부약학적 조성물에 관한 것으로, 이는 미용적 또는 피부약학적 유효량의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물 및 적어도 하나의 미용적 및/또는 피부약학적으로 허용되는 부형제, 애주번트 및/또는 성분을 포함함을 특징으로 한다. 상기 조성물은 당업자에게 공지된 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다["Harry's Cosmeticology ", Seventh edition, (1982), Wilkinson J.B ., Moore R.J., ed. Longman House, Essex , GB]. 한 구체예에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주는 기탁 번호 CECT 8690을 갖는 균주이다.
투여될 본 발명의 조성물 중의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 미용적으로 또는 피부약학적으로 유효한 양뿐 아니라 이의 투여량은 연령, 환자의 상태, 치료하고/거나 관리하려는 질환, 장애 또는 질병의 특성 또는 중증도, 추출물의 투여 경로 및 빈도를 포함하는 다수의 인자에 좌우될 것이다.
"미용적으로 또는 피부약학적으로 유효한 양"은 비독성이나, 요망되는 효과를 제공하기에 충분한 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 양인 것으로 이해된다. 본 발명의 추출물은 요망되는 효과를 달성하기 위해 미용적 또는 피부약학적 농도; 한 구체예에서는, 조성물의 전체 중량과 관련하여 0.0000000001%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준); 또는 0.00000001%(중량 기준) 내지 10%(중량 기준), 또는 0.000001%(중량 기준) 내지 5%(중량 기준), 또는 0.0001%(중량 기준) 내지 5%(중량 기준)로 사용된다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 추출물은 또한 미용적 또는 피부약학적 전달 시스템 및/또는 지속 방출 시스템으로 혼입될 수 있다.
용어 "전달 시스템"은 본 발명의 추출물과 함께 투여되는 희석제, 애주번트, 비히클 또는 첨가제에 관한 것이다. 이들 미용적 또는 약학적 담체는 액체, 예를 들어, 물, 오일 또는 계면활성제, 예를 들어, 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것, 예를 들어, 비제한적인 예로, 땅콩유, 대두유, 광유, 참기름, 피마자유, 폴리소르베이트, 소르비탄 에스테르, 에테르 설페이트, 설페이트, 베타인, 글리코시드, 말토시드, 지방 알코올, 노녹시놀, 폴록사머, 폴리옥시에틸렌, 폴리에틸렌 글리콜, 덱스트로스, 글리세롤, 디지토닌 및 이와 유사한 것일 수 있다. 당업자는 본 발명의 추출물이 투여되는 다양한 전달 시스템에서 사용될 수 있는 희석제, 애주번트 또는 첨가제를 인지한다.
용어 "지속 방출"은 일정 기간 동안 상기 화합물의 점진적 방출을 제공하고, 한 구체예에서, 반드시 그러한 것은 아니지만, 일정 기간에 걸쳐 비교적 일정한 화합물 방출 수준을 갖는 화합물의 전달 시스템과 관련된 통상적 의미로 사용된다.
전달 또는 지속 방출 시스템의 예는, 비제한적인 예로, 본 발명의 활성 성분의 더 큰 침투를 달성하고/하거나, 활성 성분의 약동학 및 약역학 특성을 개선시키기 위해 첨가될 수 있는 리포솜, 혼합된 리포솜, 올레오솜(oleosome), 니오솜(niosome), 에토솜(ethosome), 밀리입자, 마이크로입자, 나노입자 및 고체 지질 나노입자, 나노구조화된 지질 담체, 스폰지, 사이클로덱스트린, 소포, 마이셀, 계면활성제의 혼합된 마이셀, 계면활성제-인지질 혼합 마이셀, 밀리스피어(millisphere), 마이크로스피어 및 나노스피어, 리포스피어(liposphere), 밀리캡슐(millicapsule), 마이크로캡슐 및 나노캡슐, 뿐만 아니라 마이크로에멀젼 및 나노에멀젼을 포함한다. 한 구체예에서, 전달 또는 지속 방출 시스템은 리포솜, 계면활성제-인지질 혼합 마이셀 및 마이크로에멀젼, 및 내부 역 마이셀의 구조를 갖는 유중수 마이크로에멀젼 및 마이크로에멀젼을 함유하는 나노캡슐이다.
지속 방출 시스템은 종래 분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고, 이들을 함유하는 조성물은, 예를 들어, 접착 패치, 비-접착 패치, 밀폐 패치 및 미세전자 패치를 포함하는 국소 또는 경피 투여, 또는 전신 투여, 예를 들어, 비제한적인 예로, 경구 또는 비경구 경로, 예를 들어, 비내, 직장 또는 피하 이식 또는 주사, 또는 특정 신체 부분으로의 직접 이식 또는 주사에 의해 투여될 수 있다. 한 구체예에서, 지속 방출 시스템은 본 발명의 추출물의 비교적 일정한 양을 방출해야 한다. 지속 방출 시스템에 함유된 추출물의 양은, 예를 들어, 조성물이 투여되어야 하는 부위, 본 발명의 추출물의 동역학 및 방출 지속기간, 뿐만 아니라 치료되거나 예방될 질환, 장애 및/또는 질병의 특성에 좌우될 것이다.
본 발명의 추출물을 함유하는 조성물은 또한 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 탤크(talc), 벤토나이트, 실리카, 전분 또는 말토덱스트린에 흡착될 수 있다.
슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물을 함유하는 조성물은 또한 피부와 직접 접촉되는 직물, 부직포 직물 및 의료 장치로 혼입될 수 있고, 이에 따라 직물, 부직포 직물 또는 의료 장치에 대한 결합 시스템의 생분해에 의하거나, 신체와 이들 사이의 마찰로 인한, 체내 수분, 피부의 pH 또는 체온으로 인한 것이든지 간에 본 발명의 추출물이 방출될 수 있다. 또한, 본 발명의 추출물은 신체와 직접 접촉하는 의복을 제작하기 위해 사용되는 직물 및 부직포 직물로 혼입될 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명의 추출물을 함유하는 직물, 부직포 직물 및 의료 장치는 MC5R 수용체의 억제 또는 콜라겐 합성의 자극에 의해 개선되거나 예방되는 질환, 장애 및/또는 질병의 치료 및/또는 예방에 사용된다.
상기 기재된 전달 시스템 및/또는 지속 방출 시스템인 직물, 부직포 직물, 의복, 의료 장치 및 이들에 화합물을 고정시키기 위한 수단의 예는 문헌에서 발견될 수 있고, 이는 종래 분야에서 공지되어 있다[Schaab C.K . (1986) HAPPI May 1986; Nelson G., "Application of microencapsulation in textiles", (2002), Int. J. Pharm., 242(1-2), 55-62; " Biofunctional Textiles and the Skin" (2006) Curr. Probl . Dermatol . v.33, Hipler U.C . and Elsner P., eds. S. Karger AG, Basel, Switzerland; Malcolm R.K . et al., "Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial ", (2004), J. Cont . Release, 97(2), 313- 320]. 바람직한 직물, 부직포 직물, 의복 및 의료 장치는 붕대, 거즈, t-셔츠, 양말, 타이츠, 속옷, 거들, 장갑, 기저귀, 생리대, 드레싱, 침대보, 손수건, 접착 패치, 비-접착 패치, 밀폐 패치, 미세전자 패치 및/또는 안면 마스크이다.
본 발명의 추출물을 함유하는 미용적 또는 피부약학적 조성물은 요망되는 투여 형태를 제형화시키는데 필요한 미용적으로 및/또는 피부약학적으로 허용되는 부형제를 임의로 포함하는 국소 또는 경피 적용의 다양한 유형의 조성물에서 사용될 수 있다.
국소 또는 경피 적용의 조성물은, 임의의 고체, 액체 또는 반고체 포뮬레이션, 예를 들어, 비제한적인 예로, 크림, 다중 에멀젼, 예를 들어, 비제한적인 예로, 물 에멀젼 중 오일 및/또는 실리콘, 유중수 및/또는 실리콘 에멀젼, 물/오일/물 또는 물/실리콘/물 유형 에멀젼, 및 오일/물/오일 또는 실리콘/물/실리콘 유형 에멀젼, 무수 조성물, 수성 분산액, 오일, 밀크, 발삼, 포움, 로션, 젤, 크림 젤, 하이드로알코올 용액, 하이드로글리콜 용액, 하이드로젤, 리니멘트(liniment), 세라(sera), 비누, 샴푸, 컨디셔너(conditioner), 세럼(serum), 다당류 필름, 연고, 무스(mousse), 포마드(pomade), 파우더, 바(bar), 펜슬(pencil) 및 스프레이 또는 에어로졸(스프레이), 예를 들어, 리브-온(leave-on) 및 린스-오프(rinse-off) 포뮬레이션으로 생성될 수 있다. 이들 국소 또는 경피 적용 포뮬레이션은 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 다양한 유형의 고체 부속물, 예를 들어, 비제한적인 예로, 붕대, 거즈, t-셔츠, 양말, 타이츠, 속옷, 거들, 장갑, 기저귀, 생리대, 드레싱, 침대보, 손수건, 접착 패치, 비-접착 패치, 밀폐 패치, 미세전자 패치 또는 안면 마스크로 혼입될 수 있거나, 이들은 특히 다양한 메이크-업 제품, 예를 들어, 메이크-업 파운데이션, 예를 들어, 유체 파운데이션 및 컴팩트 파운데이션, 메이크-업 리무버 로션, 메이크-업 리무버 밀크, 눈밑 컨실러(under-eye concealer), 아이 섀도우, 립스틱, 립 프로텍터(lip protector), 립 글로스 및 파우더에 혼입될 수 있다.
본 발명의 미용적 또는 피부약학적 조성물은 본 발명의 화합물의 경피 흡수를 증가시키는 작용제, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 디메틸설폭시드, 디메틸아세트아미드, 디메틸포름아미드, 계면활성제, 아존(1-도데실아자사이클로헵탄-2-온), 알코올, 우레아, 에톡시디글리콜, 아세톤, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 미용적 또는 피부약학적 조성물은 본 발명의 추출물의 더 큰 침투를 달성하기 위해 이온삼투요법, 소노포레시스, 전기천공, 미세전자 패치, 기계적 압력, 삼투압 구배, 폐쇄 치료, 미세주사 또는 압력에 의한 바늘이 없는 주사, 예를 들어, 산소 압력에 의한 주사, 또는 이들의 임의의 조합에 의해 치료되는 국소 부위에 적용될 수 있다. 적용 부위는 치료되고/되거나 예방되는 질환, 장애 및/또는 질병의 특성에 의해 결정될 것이다.
본 발명에 기재된 미용적 또는 피부약학적 조성물 내에 함유된 미용적으로 또는 피부약학적으로 허용되는 부형제, 애주번트 및/또는 성분으로는 미용적 또는 피부약학적 조성물에서 일반적으로 사용되는 추가 성분, 예를 들어, 비제한적인 예로, 피지 생성을 약화시키는 기타 작용제, 지루제, 매티파잉제, 항여드름제, 피부 또는 표피 거대분자의 합성을 자극하고/하거나 이들의 분해를 억제하거나 예방할 수 있는 작용제, 콜라겐 합성-자극제, 탄력소 합성-자극제, 데코린 합성-자극제, 라미닌 합성-자극제, 디펜신 합성-자극제, 샤페론 합성-자극제, cAMP 합성-자극제, AQP-3을 조정하는 작용제, 아쿠아포린 합성을 조정하는 작용제, 아쿠아포린 패밀리로부터의 단백질, 히알루론산 합성-자극제, 글리코사미노글리칸 합성-자극제, 섬유결합소 합성-자극제, 시르투인 합성-자극제, 열쇼크 단백질, 열쇼크 단백질 합성-자극제, 신경세포 세포외배출을 억제하는 작용제, 기타 항콜린제, 근수축을 억제하는 작용제, 안티에이징 작용제, 항-주름 작용제, 땀억제제, 항염증제 및/또는 진통제, 항-소양증 작용제, 진정제, 마취제, 아세틸콜린-수용체 집락화 억제제, 아세틸콜린에스테라제를 억제하는 작용제, 피부이완제, 멜라닌 합성 자극제 또는 억제제, 화이트닝 또는 탈색 작용제, 전색소침착제, 자가-태닝 작용제, NO-신타제 억제제, 5α-환원효소 억제제, 리실- 및/또는 프롤릴 하이드록실라제 억제제, 항산화제, 자유 라디칼 제거제 및/또는 대기오염에 대한 작용제, 반응성 카르보닐 종 제거제, 항-당화작용 작용제, 항히스타민제, 항바이러스제, 항기생충제, 유화제, 연화제, 유기 용매, 액체 분사제, 피부 컨디셔너, 습윤제, 수분을 보유하는 물질, 알파 하이드록시산, 베타 하이드록시산, 보습제, 표피 가수분해 효소, 비타민, 아미노산, 단백질, 색소 또는 착색제, 염료, 생체중합체, 젤화 중합체, 증점제, 계면활성제, 연화 작용제, 유화제, 결합제, 보존제, 눈밑 지방을 감소시키거나 치료할 수 있는 작용제, 엑스폴리에이팅 작용제(exfoliating agent), 각질용해제, 박리제(desquamating agent), 항미생물제, 항진균제, 정진균제, 살균제, 정균제, 각질층 성분 및 지질의 합성을 자극하는 작용제, 세라미드, 지방산, 콜라겐 분해를 억제하는 작용제, 기질 금속단백분해효소를 억제하는 작용제, 탄력소 분해를 억제하는 작용제, 세린 프로테아제, 예를 들어, 칼리크레인, 백혈구 엘라스타제 또는 카텝신 G를 억제하는 작용제, 섬유아세포 증식을 자극하는 작용제, 각질세포 증식을 자극하는 작용제, 지방세포 증식을 자극하는 작용제, 멜라닌세포 증식을 자극하는 작용제, 각질세포 분화를 자극하는 작용제, 지방세포 분화를 자극하거나 지연시키는 작용제, 항과다각화증 작용제, 면포용해제, 항-건선 작용제, DNA 복구제, DNA 보호제, 줄기세포 보호제, 안정제, 민감한 피부의 치료 및/또는 관리를 위한 작용제, 탄력제(firming agent), 항-스트레치 마크 작용제, 결합제, 지질분해제 또는 지질분해를 자극하는 작용제, 지방생성 작용제, PGC-1α 발현을 조절하는 작용제, PPARγ의 활성을 조절하는 작용제, 지방세포의 트리글리세리드 함량을 증가시키거나 감소시키는 작용제, 항-셀룰라이트 작용제, PAR-2 활성을 억제하는 작용제, 치유를 자극하는 작용제, 공동애주번트 치유 작용제, 재상피화를 자극하는 작용제, 공동애주번트 재상피화 작용제, 사이토카인 성장인자, 모세관 순환 및/또는 미세순환에 작용하는 작용제, 혈관신생을 자극하는 작용제, 혈관 침투성을 억제하는 작용제, 베노토닉 작용제, 세포 대사에 작용하는 작용제, 진피-표피 접합부를 개선시키는 작용제, 모발 성장을 유도하는 작용제, 모발 성장 억제제 또는 지연제, 모발 상실 지연제, 보존제, 향수, 체취 흡수제 및/또는 체취 차폐제, 킬레이트제, 식물 추출물, 정유, 해양 추출물, 생명공학 공정으로부터 획득된 작용제, 무기염, 세포 추출물, 일광차단제 및 자외선 A 및/또는 B 선 및/또는 적외선 A 선에 대해 활성인 유기 또는 무기 광보호제, 또는 이들의 혼합물이 있으며, 단, 이들은 조성물의 나머지 성분, 특히 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물과 물리적 및 화학적으로 양립된다. 마찬가지로, 이들 추가 성분의 특성은 본 발명의 추출물의 이점이 허용되지 않게 변경되어서는 안된다. 이들 추가 성분의 특성은 합성 또는 천연 성분, 예를 들어, 식물 추출물일 수 있거나, 생명공학적 공정, 또는 합성 공정과 생명공학적 공정의 조합으로부터 유래될 수 있다. 추가 예는 문헌[CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook, 12th Edition (2008)]에서 발견될 수 있다. 본 발명의 상황에서, 생명공학적 공정은 유기체 또는 이의 일부 내에서 활성 성분 또는 이의 일부를 생성시키는 임의의 절차인 것으로 이해된다.
한 구체예에서, 본 발명의 미용적 및/또는 피부약학적 조성물은 하기를 함유한다:
- 0.0000000001%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준)의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물;
- 0.1%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준)의 (INCI 명칭) 글리세린, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 펜틸렌 글리콜, 카프릴릴 글리콜, 락트산, 우레아, 소듐 히알루로네이트의 군으로부터 선택된 보습제;
- 0.1%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준)의 (INCI 명칭) 디메티콘, 글리세릴 스테아레이트, 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 세테아릴 알코올, 레시틴, C12-15 알킬 벤조에이트, 스쿠알란, 라놀린, 베헤닐 알코올, 토코페릴 아세테이트, 판테놀, 부티로스페르뭄 파르키이(Butyrospermum Parkii) 버터, 레티닐 팔미테이트, 레티놀의 군으로부터 선택된 연화제 또는 피부 컨디셔닝;
- 0.1%(중량 기준) 내지 20%(중량 기준)의 (INCI 명칭) 잔탄 검, 소듐 라우레스 설페이트, 스테아르산, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 스테아릴 알코올, 세틸 알코올, 스테아레스-2, 세테아레스-20, 코카미도프로필 베타인의 군으로부터 선택된 계면활성제.
한 구체예에서, 피지 생성을 약화시키는 작용제, 지루제, 매티파잉제, 항여드름제는 예를 들어, 비제한적으로, 특히, BASF에 의해 시판되는 Mat-XS Clinical [INCI: 사르코신, 잔탄 검], Mat-XS Bright [INCI: 묘수초 (Orthosiphon Stamineus) 잎 추출물, 말토덱스트린, 잔탄 검], Betapur [INCI: 레우무스 볼두스(Reumus Boldus) 잎 추출물, 잔탄 검] 또는 Neurobiox [INCI: 서양톱풀 (Achillea Millefolium) 추출물, 잔탄 검], Sederma/Croda에 의해 시판되는 Evermat [INCI: 에난티아 클로란타 (Enantia Chlorantha) 껍질 추출물, 올레아놀산], Ac.net [INCI: 부틸렌 글리콜, Peg-60 알몬드 글리세리드, 카프릴릴 글리콜, 글리세린, 카르보머, 노르디하이드로구아야레트산, 올레아놀산] 또는 Sebuless [INCI: 말토덱스트린, 사양수수꽃다리 (Syringa Vulgaris) (라일락) 추출물], Crodarom에 의해 시판되는 Phytessence Purple Ginseng [INCI: 글리세린 또는 범꼬리 (Polygonum Bistorta) 뿌리 추출물], Silab으에 의해 시판되는 P-Refinyl (P-Refinyl) [INCI: 렌즈콩 (Lens Esculenta) (렌틸) 씨 추출물], Codif에 의해 시판되는 EPS Seamat [INCI: 플랑크톤 엑소폴리사카라이드-5, 페녹시에탄올] 또는 Epidermist 4.0 [INCI: 플랑크톤 추출물], Alban Muller에 의해 시판되는 Seborami [INCI: 민유럽장대 (Sisymbrium Ofiicinale) 추출물, 우엉 (Arctium Lappa) 뿌리 추출물, 시트르산, 글리콜산, 아연 PCA, 스클레로튬 검], Mibelle에 의해 시판되는 Poreaway [INCI: 피스타치아 렌티스커스 검 (Pistacia Lentiscus Gum)/피스타치아 렌티스커스 (매스틱 (Mastic)) 검, 레시틴], Provital에 의해 시판되는 Citrustem [INCI: 잔탄 검, 소듐 벤조에이트, 글루코노락톤, 칼슘 글루코네이트] 또는 Affipore [INCI: 부츄 (Barosma Betulina) 잎 추출물, 시트르산], Laboratories Expanscience에 의해 시판되는 Sweetone [INCI: 사카라이드 하이드롤리세이트, 말토덱스트린], Solabia에 의해 시판되는 Seboxyl [INCI: 리베스 니그룸 (Ribes Nigrum) (블랙 커랜트 (Black Currant)) 잎 추출물, 루부스 아이대우스 (Rubus Idaeus) (라즈베리(Raspberry)) 잎 추출물] 또는 Saniskin [INCI: 폴리고늄 쿠스피다툼 (Polygonum Cuspidatum) 뿌리 추출물, 미리스틸 알코올], DSM에 의해 시판되는 Alpaflor Alp-Sebum [INCI: 에필로비움 플레이스케리 (Epilobium Fleischeri) 추출물, 시트르산, 포타슘 소르베이트] 또는 Regu-Seb [INCI: 아르간트리커넬 (Argania Spinosa Kernel) 추출물, 사발 팜 (Serenoa Serrulata) 열매 추출물, 시새뭄 인디쿰 (Sesamum Indicum) (참깨) 씨앗 추출물], Aqua Bio Technology에 의해 시판되는 Dermaclarine [INCI: 가수분해된 난 단백질 (및) 프로테아제], Lucas Meyer에 의해 시판되는 Linumine [INCI: 아마 (Linum Usitatissimum) (린시드(Linseed)) 씨앗 추출물], Evonik에 의해 시판되는 Granactive Acne [INCI: 쌀겨 (Oryza Sativa) (쌀) 브란 추출물, 보스웰리아 세라타 (Boswellia Serrata) 추출물, 꿀 추출물, 올리고펩티드-10], Seppic으에 의해 시판되는 Sepicontrol A5 [INCI: 카프릴로일 글리신, 사르코신, 신나모늄 제일아니쿰 (Cinnamonium Zeylanicum) 껍질 추출물], Symrise에 의해 시판되는 Sympeptide 380 [INCI: 미리스토일 헥사펩티드-23], 또는 Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Sebaryl [INCI: 니아신아미드, 효모 추출물, 가시칠엽수 (Aesculus Hippocastanum) (호스 체스넛) 씨앗 추출물, 암모늄 글리시리제이트, 판테놀, 프로필렌 글리콜, 아연 글루코네이트, 카페인, 바이오틴]로 형성된 군으로부터 선택된다.
한 구체예에서, 항-주름 및/또는 노화방지제는, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 비티스 비니페라(Vitis vinifera), 로사 카니나(Rosa canina), 쿠르쿠마 롱가(Curcuma longa), 테오브로마 카카오(Theobroma cacao), 징코 빌로바(Ginkgo biloba), 레온토포듐 알피눔(Leontopodium alpinum) 또는 두날리엘라 살리나(Dunaliella salina)의 추출물 또는 가수분해된 추출물, Sederma/Croda에 의해 시판되는 Matrixyl®[INCI:팔미토일 펜타펩티드-4], Matrixyl® 3000®[INCI:팔미토일 테트라펩티드-7, 팔미토일 올리고펩티드], Matrixyl® Synthe'6™ [INCI: 글리세린, 물, 하이드록시프로필 사이클로덱스트린, 팔미토일 트리펩티드-38], Essenskin™[INCI:칼슘 하이드록시메티오닌], Renovage[INCI:테프레논], Resistem™ [INCI: 글로불라리아 코르디폴리아(Globularia Cordifolia) 발효소], Beautifeye [INCI: 자귀나무 (Albizia Julibrissin) 껍질 추출물, 다루토사이드], Meiritage [INCI: 황기 (Astragalus Membranaceus) 뿌리 추출물, 큰꽃삽주 (Atractyloides Macrocephala) 뿌리 추출물, 시호 (Bupleurum Falcatum) 뿌리 추출물], Senestem [INCI: 창질경이 (Plantago Lanceolata) 잎 추출물], Venuceane [INCI: 테르무스 테르모필루스 (Thermus Thermophillus) 발효소] 또는 Dermaxyl®[INCI:팔미토일 올리고펩티드], Pentapharm/DSM으에 의해 시판되는 Vialox®[INCI:펜타펩티드-3], Syn® Ake®[INCI:디펩티드 디아미노부티로일 벤질아미드 디아세테이트], Syn®-Coll[INCI:팔미토일 트리펩티드-5], Phytaluronate[INCI:로커스트 빈(Locust Bean)(세라토니아 실리쿠아(Ceratonia siliqua)) 검], Regu-Scence [INCI: 아스파라거스 오피시날리스 (Asparagus Officinalis) 줄기 추출물, 소듐 벤조에이트, 포타슘 소르베이트, 글루코노락톤, 칼슘 글루코네이트], Syn-TC [INCI: 테트라데실 아미노부티로일발릴아미노부티르산 우레아 트리플루오로아세테이트, 팔미토일 트리펩티드-5, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부티로일 하이드록시트레오닌], 또는 Preregen®[INCI:글리신 소야(대두) 단백질, 산화환원효소], Laboratoires Srobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Myoxinol™[INCI:가수분해된 히비스쿠스 에스쿨렌투스(Hibiscus Esculentus) 추출물], Syniorage™[INCI:아세틸 테트라펩티드-11], Dermican™[INCI:아세틸 테트라펩티드-9], Shadownyl [INCI: 조류 추출물, 헥실렌 글리콜, 카프릴릴 글리콜, 잔탄 검] 또는 DN AGE™ LS[INCI:카시아 알라타(Cassia Alata) 잎 추출물], Exsymol에 의해 시판되는 Algisum C®[INCI:메틸실라놀 만누로네이트], Exage [INCI: 이미다졸릴에틸 디아미노프로판아미드] 또는 Hydroxyprolisilane CN®[INCI:메틸실라놀 하이드록시프롤린 아스파르테이트], Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Argireline®[INCI:아세틸 헥사펩티드-8], SNAP-7[INCI:아세틸 헵타펩티드-4], SNAP-8[INCI:아세틸 옥타펩티드-3], Serilesine®[INCI: 헥사펩티드-10], Leuphasyl®[INCI:펜타펩티드-18], Inyline™[INCI:아세틸 헥사펩티드-30], Aldenine®[INCI:가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 대두 단백질, 트리펩티드-1], Preventhelia®[INCI:디아미노프로피오노일 트리펩티드-33], Decorinyl®[INCI:트리펩티드-10 시트룰린], Decorinol® [INCI: 트리펩티드-9 시트룰린], Trylagen®[INCI:슈도알테로모나스 발효 추출물, 가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 대두 단백질, 트리펩티드-10 시트룰린, 트리펩티드-1], Eyeseryl®[INCI:아세틸 테트라펩티드-5], Peptide AC29[INCI:아세틸 트리펩티드-30 시트룰린], Relistase®[INCI:아세틸아르기닐트립토필 디페닐글리신], Thermostressine®[INCI:아세틸 테트라펩티드-22], Lipochroman™ [INCI:디메틸메톡시 크로마놀], Chromabright®[INCI:디메틸메톡시 크로마닐 팔미테이트], Antarcticine®[INCI:슈도알테로모나스 발효 추출물], dGlyage™[INCI:리신 HCl, 레시틴, 트리펩티드-9 시트룰린], Vilastene™[INCI:리신 HCl, 레시틴, 트리펩티드-10 시트룰린], Hyadisine™ [INCI: 슈도알테로모나스 발효 추출물], Hyanify™ [INCI: 사카라이드 이소머레이트], Diffuporine™[INCI:아세틸 헥사펩티드-37], Silusyne™[INCI:대두(글리신 소야) 오일, 소르비탄 세스퀴올레에이트, 이소헥사데칸, 소듐 히알루로네이트, 라우릴디모늄 하이드록시프로필 가수분해된 대두 단백질, 아세틸 헥사펩티드-39], Adifyline™[INCI:아세틸 헥사펩티드-38], UplevityTM [INCI: 아세틸 테트라펩티드-2], Juveleven™[INCI: 아세틸 헥사펩티드-51 아미드] 또는 Telangyn™[INCI: 아세틸 테트라펩티드-40], Institut Europeen de Biologie Cellulaire에 의해 시판되는 Kollaren®[INCI:트리펩티드-1, 덱스트란], Vincience/ISP/Ashland에 의해 시판되는 Collaxyl® IS[INCI:헥사펩티드-9], Laminixyl IS™[INCI:헵타펩티드], Orsirtine™ GL[INCI:오리자 사티바(Oryza Sativa)(벼) 추출물], D'Orientine™ IS[INCI:피닉스 닥틸리페라(Phoenix Dactylifera)(대추야자) 씨앗 추출물], Phytoquintescine™[INCI:아인코른(Einkorn)(트리티쿰 모노코쿰(Triticum Monococcum)) 추출물], Peptide Q10[INCI: 펜타펩티드-34 트리플루오로아세테이트], Telosense[INCI: 가수분해된 효모 단백질, 가수분해된 대두 단백질] 또는 Quintescine™ IS[INCI:디펩티드-4], Infinitec Activos에 의해 시판되는 BONT-L-Peptide[INCI:팔미토일 헥사펩티드-19], Seppic에 의해 시판되는 Deepaline™ PVB[INCI:팔미토일 가수분해된 밀 단백질] 또는 Sepilift® DPHP[INCI:디팔미토일 하이드록시프롤린], Gattefoss에 의해 시판되는 Gatuline® Expression[INCI:아크멜라 올레라세아(Acmella Oleracea) 추출물], Gatuline® In-Tense[INCI:스필란테스 아크멜라(Spilanthes Acmella) 꽃 추출물] 또는 Gatuline® Age Defense 2[INCI:저글란스 레지아(Juglans Regia)(호두) 씨앗 추출물], Biotechmarine에 의해 시판되는 Thalassine™[INCI:조류 추출물], Atrium/Unipex Innovations에 의해 시판되는 ChroNOline™[INCI:카프로오일 테트라펩티드-3] 또는 Thymulen-4[INCI:아세틸 테트라펩티드-2], Coletica/Engelhard/BASF에 의해 시판되는 EquiStat[INCI:피루스 말루스(Pyrus Malus) 열매 추출물, 글리신 소야 씨앗 추출물] 또는 Juvenesce[INCI:에톡시디글리콜 및 카프릴산 트리글리세리드, 레티놀, 우르솔산, 피토나디온, 일로마스타트(Ilomastat)], Mibelle Biochemistry에 의해 시판되는 Ameliox[INCI:카르노신, 토코페롤, 실리붐 마리아눔(Silybum Marianum) 열매 추출물], Phytocelltec Symphytum [INCI: 아이소말트, 컴프리 (Symphytum Officinale) 뿌리 세포 배양물, 레시틴, 소듐 벤조에이트], Snow Algae Powder [INCI: 클라미도카프사 (Chlamydocapsa) 추출물, 말토덱스트린, 레시틴], Dermcom [INCI: 아카시아 세네갈 검, 골든크로쿠스비늘줄기추출물 (Crocus Chyrsanthus Bulb Extract)], Anagain [INCI: 피섬 사티붐 (Pisum Sativum) (완두콩), 새싹 추출물] 또는 PhytoCellTec Malus Domestica [INCI: 말루스 도메스티카 (malus domestica) 열매 세포 배양물], Silab에 의해 시판되는 Bioxilift[INCI:핌피넬라 아니숨(Pimpinella Anisum) 추출물] Vitagenyl [INCI:프루누스 페르시카 (Prunus Persica) (복숭아) 잎 추출물] 또는 SMS Anti-Wrinkle®[INCI:안노나 스쿠아모사(Annona Squamosa) 씨앗 추출물], Symrise에 의해 시판되는 Symvital Agerepair [INCI: 징버 오피시낼 (Zingiber Officinale) (생강) 뿌리 추출물], Provital에 의해 시판되는 Citrustem [INCI: 잔탄 검, 소듐 벤조에이트, 글루코놀락톤, 칼슘 글루코네이트], Melavoid [INCI: 레드호그위드 (Boerhavia Diffusa) 뿌리 추출물], Darkout [INCI: 하이포시스 루페리 뿌리줄기 (Hypoxis Rooperi Rhizome) 추출물, 카이살피아 스피노사 검 (Caesalpinia Spinosa Gum)] 또는 Linefill [INCI: 디메틸 아이소소르비드, 세사뭄 인디쿰 (Sesamum Indicum) (참깨) 씨앗 추출물], Lucas Meyer에 의해 시판되는 Adipofill'in [INCI: 오르니틴, 포스포리피드, 글리코리피드], Elix-IR [INCI: 마디풀 (Polygonum Aviculare) 추출물] 또는 Progeline [INCI: 트리플루오로아세틸 트리펩티드-2], Alban Muller에 의해 시판되는 Amiperfect [INCI: 가울테리아 프로쿰벤스 (Gaultheria Procumbens) (윈터그린) 잎 추출물] 또는 Repulpami ER [INCI: 아단소니아 디지타타 펄프 (Adansonia Digitata Pulp) 추출물, 히비스쿠스 사브다리파 (Hibiscus Sabdariffa) 꽃 추출물], Solabia에 의해 시판되는 Celloxyl [INCI: 우아파카 보제리 (Uapaca Bojeri) 잎 추출물] 또는 Resistress [INCI: 소포라 자포니카 (Sophora Japonica) 꽃 추출물], Codif에 의해 시판되는 Actiporine 8G [INCI: 자니아 루벤스 (Jania Rubens) 추출물] 또는 EPS Seafill [INCI: 플랑크톤 추출물], Induchem에 의해 시판되는 Novhyal Biotech G [INCI: 디소듐 아세틸 글루코사민 포스페이트] 또는 Rubixyl [INCI: 헥사펩티드-47], Ca2 + 채널의 길항제, 예를 들어, 비제한적인 예로, 알베린(alverine), 망간 또는 마그네슘 염, 특정 이차 또는 삼차 아민, 레티놀 및 이의 유도체, 이데베논(idebenone) 및 이의 유도체, 보조효소 Q10 및 이의 유도체, 보스웰산(boswellic acid) 및 이의 유도체, GHK 및 이의 유도체 및/또는 염, 카르노신 및 이의 유도체, DNA 복구 효소, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 포톨리아제(photolyase) 또는 T4 엔도누클레아제 V, 또는 클로라이드 채널 효능제, 및/또는 이들의 혼합물에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 구체예에서, 항염증제 및/또는 진통제는, 예를 들어, 비제한적인 예로, 마데카소사이드(madecassoside)의 추출물, 에키네시아(echinacea)의 추출물, 아마란스(amaranth) 씨앗 오일, 백단향 나무 오일, 복숭아 나무 잎의 추출물, 알로에 베라(Aloe vera), 아르니카 몬타나(Arnica montana), 아르테미시아 불가리스(Artemisia vulgaris), 아사룸 막시뭄(Asarum maximum), 칼렌둘라 오피시날리스(Calendula officinalis), 캅시쿰(Capsicum), 센티페다 쿤닝가미이(Centipeda cunninghamii), 카모밀라 레쿠티타(Chamomilla recutita), 크리눔 아시아티쿰(Crinum asiaticum), 하마멜리스 비르기니아나(Hamamelis virginiana), 하르파고파이툼 프로쿰벤스(Harpagophytum procumbens), 하이페리쿰 퍼포라툼(Hypericum perforatum), 릴리움 칸디둠(Lilium candidum), 말바 실베스트리스(Malva sylvestris), 멜라레우카 알테르니콜리아(Melaleuca alternifolia), 오리가눔 마요라나(Origanum majorana), 오리가눔 불가레(Origanum vulgare), 프루누스 라우로세라수스(Prunus laurocerasus), 로스마리누스 오피시알리스(Rosmarinus officialis), 살릭스 알바(Salix alba), 실리붐 마리아눔(Silybum marianum), 타나세툼 파르테니움(Tanacetum parthenium), 티무스 불가리스(Thymus vulgaris), 운카리아 귀아넨시스(Uncaria guianensis) 또는 바시눔 미르틸루스(Vaccinum myrtillus)의 추출물, 오메가-3 및 오메가-6 지방산, Atrium Innovations/Unipex Group에 의해 시판되는 Neutrazen™ [INCI: 물, 부틸렌 글리콜, 덱스트란, 팔미토일 트리펩티드-8], Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Delisens™ [제안된 INCI: 아세틸 헥사펩티드-46], Institut Europeen de Biologie Cellulaire/Unipex Group에 의해 시판되는 Meliprene® [INCI: 덱스트란, 아세틸 헵타펩티드-1], Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Skinasensyl™ [INCI: 아세틸 테트라펩티드-15] 또는 Anasensyl™ [INCI: 만니톨, 암모늄 글리시리제이트, 카페인, 힙포카스타눔(Hippocastanum)(마로니에(Horse Chestnut)) 추출물], Sederma/Croda에 의해 시판되는 Calmosensine™ [INCI: 아세틸 디펩티드-1], 보조효소 Q10 또는 알킬 글리세릴 에테르에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 구체예에서, 탄력제 및/또는 리덴시파잉(redensifying) 및/또는 리스트럭처링(restructuring) 작용제는, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히, 말피기아 푸니시톨리아(Malpighia punicitolia), 시나라 스콜리무스(Cynara scolymus), 고시피움 헤르바세움(Gossypium herbaceum), 알로에 바르바덴시스(Aloe Barbadensis), 파니쿰 밀리아세움(Panicum miliaceum), 모루스 니그라(Morus nigra), 세사뭄 인디쿰(Sesamum indicum), 글리신 소야(Glycine soja), 트리티쿰 불가레(Triticum vulgare)의 추출물, Provital에 의해 시판되는 Pronalen® Refirming HSC [INCI: 트리티쿰 불가레(Triticum Vulgare), 실리붐 마리아눔(Silybum Marianum), 글리신 소이(Glycine Soy), 에퀴세툼 아르벤세(Equisetum Arvense), 알케밀라 불가리스(Alchemilla Vulgaris), 메디카고 사티바(Medicago Sativa), 라파누스 사티부스(Raphanus Sativus)], Lipoout[INCI: 플랑크톤 추출물] 또는 Polyplant® Refirming [INCI: 콘플라워(Coneflower), 아시아틱 센텔라(Asiatic Centella), 푸쿠스(Fucus), 페누그릭(Fenugreek)], Atrium Biotechnologies/Unipex Innovations에 의해 시판되는 Lanablue® [INCI: 소르비톨, 조류 추출물], Pentapharm/DSM에 의해 시판되는 Pepha®-Nutrix [INCI: 천연 영양 인자], 이소플라본을 함유하는 식물 추출물, Sederma/Croda에 의해 시판되는 Biopeptide EL™ [INCI: 팔미토일 올리고펩티드], Biopeptide CL™ [INCI: 팔미토일 올리고펩티드], Vexel® [INCI: 물(아쿠아), 프로필렌 글리콜, 레시틴, 카페인, 팔미토일 카르니틴], Matrixyl® [INCI: 팔미토일 펜타펩티드-3], Matrixyl® 3000 [INCI: 팔미토일 테트라펩티드-3, 팔미토일 올리고펩티드] 또는 Bio-Bustyl™ [INCI: 글리세릴 폴리메타크릴레이트, 라넬라 소이(Rahnella Soy) 단백질 발효소, 물(아쿠아), 프로필렌 글리콜, 글리세린, PEG-8, 팔미토일 올리고펩티드], Laboratoires Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Dermosaccharides® HC [INCI: 글리세린, 물(아쿠아), 글리코사미노글리칸, 글리코겐], Aglycal® [INCI: 만니톨, 사이클로덱스트린, 글리코겐, 아라토스타필로스 우바 우르시(Aratostaphylos Uva Ursi) 잎 추출물], Cytokinol® LS [INCI: 가수분해된 카세인, 가수분해된 효모 단백질, 리신 HCl] 또는 Firmiderm® LS9120 [INCI: 터미날리아 카타파(Terminalia Catappa) 잎 추출물, 삼부쿠스 네그라(Sambucus Negra) 꽃 추출물, PVP, 탄닌산], Silab에 의해 시판되는 Liftline® [INCI: 가수분해된 밀 단백질], Raffermine® [INCI: 가수분해된 콩 분말] 또는 Ridulisse C® [가수분해된 콩 단백질], Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Serilesine® [INCI: 헥사펩티드-10], Decorinyl™ [INCI: 트리펩티드-10 시트룰린], Trylagen® [INCI: 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 콩 단백질, 트리펩티드-10 시트룰린, 트리펩티드-1], Silusyne™ [INCI: 대두(글리신 소야) 오일, 소르비탄 세스퀴올레에이트, 이소헥사데칸, 소듐 히알루로네이트, 라우릴디모늄 하이드록시프로필 가수분해 콩 단백질, 아세틸 헥사펩티드-39] 또는 Adifyline™[INCI: 아세틸 헥사펩티드-38], Coletica/Engelhard/BASF에 의해 시판되는 Ursolisome® [INCI: 레시틴, 우르솔산, 아텔로콜라겐(Atelocollagen), 잔탄 검(Xanthan Gum), 소듐 콘드로이틴 설페이트], Eperuline[INCI: 말토덱스트린, 부트라세트리(Eperua Falcata) 껍질 추출물] 또는 Collalift® [INCI: 가수분해된 맥아 추출물], Pentapharm/DSM에 의해 시판되는 Syn®-Coll [INCI: 팔미토일 트리펩티드-5], Atrium Biotechnologies/Unipex Innovations에 의해 시판되는 Hydriame® [INCI: 물(아쿠아), 글리코사미노글리칸, 스클레로티움 검(Sclerotium Gum)], Evonik에 의해 시판되는 Sphingokine NP [INCI: 카프로일 파이토스핑고신(Caprooyl Phytosphingosine)], Lucas Meyer에 의해 시판되는 Body3 Complex [INCI: 벤토나이트, 부티로스페르멈 파키 (Butyrospermum Parkii) (쉐어(Shea)) 넛 추출물, 퍼시 그라티시마 (Persea Gratissima) (아보카도) 열매 추출물], Lonza에 의해 시판되는 Prosynergen DF [INCI: 락토바실러스/울케니아 아모에보이데아 (Ulkenia Amoeboidea) 발효소 추출물 여과물] 또는 Institut Europeen de Biologie Cellulaire/Unipex Innovations에 의해 시판되는 IP2000 [INCI: 덱스트란, 트리플루오로아세틸 트리펩티드-2]에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 구체예에서, 피부 또는 표피 거대분자의 합성을 자극하는 작용제는 예를 들어, 비제한적인 예로, 콜라겐 합성-자극제, 탄력소 합성-자극제, 데코린 합성-자극제, 라미닌 합성-자극제, 샤페론 합성-자극제, 시르투인 합성-자극제, 시르투인 활성화제, 아쿠아포린 합성-조절제, 섬유결합소 합성-자극제, 콜라겐 분해를 억제하는 작용제, 탄력소 분해를 억제하는 작용제, 세린 프로테아제 예를 들어, 칼리크레인, 백혈구 엘라스타제 또는 카텝신 G를 억제하는 작용제, 섬유아세포 증식을 자극하는 작용제, 지방세포 증식을 자극하는 작용제, 지방세포 분화를 촉진하거나 지연시키는 작용제, 및 DNA 복구제 및/또는 DNA 보호제, 예를 들어, 비제한적인 예로, 센텔라 아시아티카(Centella asiatica), 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerivisiae), 솔라눔 튜베로숨(Solanum tuberosum), 로스마리누스 오피시날리스(Rosmarinus officinalis), 백시늄 앙구스티폴리움(Vaccinium angustifolium)의 추출물, 조류 마크로시스티스 피리페라(Macrocystis pyrifera), 파디나 파보니카(Padina pavonica)의 추출물, 콩, 맥아, 아마, 세이지, 레드 클로버(red clover), 카콘(kakkon), 화이트 루핀(white lupin) 식물의 추출물, 개암 추출물, 옥수수 추출물, 효모 추출물, 비취 슈트(beech shoot) 추출물, 콩과 씨앗 추출물, 식물 호르몬 추출물, 예를 들어, 특히 지베렐린(gibberellins), 옥신(auxin) 또는 사이토카인, 또는 살린 주플란크톤(saline zooplankton)의 추출물, 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus Bulgaricus)를 이용한 밀크의 발효 제품, 아시아티코시드(asiaticoside) 및 이들의 유도체, 비타민 C 및 이의 유도체, 신남산 및 이의 유도체, Sederma/Croda에 의해 시판되는 Matrixyl® [INCI: 팔미토일 펜타펩티드-3], Matrixyl® 3000 [INCI: 팔미토일 테트라펩티드-3, 팔미토일 올리고펩티드] 또는 Biopeptide CL™ [INCI: 글리세릴 폴리메타크릴레이트, 프로필렌 글리콜, 팔미토일 올리고펩티드], Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Antarcticine® [INCI: 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물], Decorinyl® [INCI: 트리펩티드-10 시트룰린], Serilesine® [INCI: 헥사펩티드-10], Lipeptide [INCI: 가수분해된 식물성 단백질], Aldenine® [INCI: 가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 콩 단백질, 트리펩티드-1], Relistase™ [INCI: 아세틸아르기닐트립토필 디페닐글리신], Thermostressine™ [INCI: 아세틸 테트라펩티드-22], Peptide AC29 [INCI: 아세틸 트리펩티드-30 시트룰린], Diffuporine™ [INCI: 아세틸 헥사펩티드-37], Silusyne™ [INCI: 대두(글리신 소야) 오일, 소르비탄 세스퀴올레에이트, 이소헥사데칸, 소듐 히알루로네이트, 라우릴디모늄 하이드록시프로필 가수분해 콩 단백질, 아세틸 헥사펩티드-39] 또는 Adifyline™[INCI: 아세틸 헥사펩티드-38], Alban Muller에 의해 시판되는 Drieline® PF [INCI: 효모 베타글루칸], Coletica/Engelhard/BASF에 의해 시판되는 Phytovityl C® [INCI: 아쿠아, 제아 마이스(Zea Mays) 추출물] comercializado por Solabia, Coletica/Engelhard/BASF에 의해 시판되는 Collalift® [INCI: 가수분해된 맥아 추출물], Vincience/ISP/Ashland에 의해 시판되는 Phytocohesine PSP™ [INCI: 소듐 베타-시토스테롤 설페이트], 무기질, 예를 들어, 칼슘, 특히, 레티노이드 및 이들의 유도체, 이소플라보노이드, 카로테노이드, 특히 리코펜, 슈도디펩티드, 레티노이드 및 이들의 유도체, 예를 들어, 특히 레티놀 또는 레티닐 팔미테이트, 또는 특히 헤파리노이드에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.
적용
또 다른 양태에서, 본 발명은 피부, 점막 및/또는 모발의 치료 및/또는 관리를 위한 미용적 또는 피부약학적 조성물의 제조에서의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 용도에 관한 것이다. 일 구체예에서, 피부, 점막 및/또는 모발의 치료 및/또는 관리는 피부 및/또는 모발에서의 염증, 암, 면포, 미립종, 여드름, 지루, 지루성 피부염, 화농땀샘염의 치료 및/또는 예방, 피부의 광보호, 피부 및/또는 모발에서 피지 양 감소의 치료, 피부 노화의 치료 및/또는 예방, 피부 주름의 치료 및/또는 예방, 피부 탄력을 위한 치료, 피부 탄력 손실의 예방 및/또는 모발 위생을 나타낸다. 한 구체예에서, 염증은, 예를 들어, 비제한적인 예로, 특히 건선, 민감한 피부, 피부염, 아토피 피부염, 접촉 피부염, 기저귀 피부염, 지루성 피부염, 습진, 장미증, 여드름, 과증식성 피부병, 화상, 일광화상, 손발톱주위염, 수술 후, 강한 펄스화 광 요법(IPL)을 이용한 치료 후, 단색 펄스화 광 요법(레이저)을 이용한 치료 후, 화학 박피제를 이용한 치료 후 또는 공격적 외부 작용제에 대한 과노출 후의 피부 염증, 질 점막의 염증, 경구 점막의 염증, 잇몸염, 치주염, 비염, 알레르기 비염에 의해 형성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 암, 식욕부진 또는 악액질의 치료를 위한 약학적 조성물의 제조에서 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 용도에 관한 것이다. 한 구체예에서, 암의 치료는 피부 암의 치료, 뮤어-토레 증후군 또는 종양 성장의 억제의 치료이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 MC5R 수용체의 억제를 위한 미용적 또는 피부약학적 조성물의 제조에서 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 콜라겐 합성의 자극을 위한 미용적 또는 피부약학적 조성물의 제조에서 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 추가의 양태는 미용적으로 및/또는 피부약제학 적으로 유효한 양의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 투여를 포함하는 피부, 점막 및/또는 모발의 치료 및/또는 관리 방법에 관한 것이다. 한 구체예에서, 피부, 점막 및/또는 모발의 치료 및/또는 관리는 염증, 암, 면포, 미립종, 여드름, 지루, 지루성 피부염, 화농땀샘염의 치료 및/또는 예방, 피부의 광보호, 피부 및/또는 모발에서 피지 양의 감소의 치료, 피부 노화의 치료 및/또는 예방, 피부 주름의 치료 및/또는 예방, 피부 탄력의 치료, 피부 탄력 저하의 예방 및/또는 모발 위생에 관한 것이다. 한 구체예에서, 염증은 예를 들어, 비제한적으로, 특히, 건선, 민감한 피부, 피부염, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 기저귀 피부염, 지루성 피부염, 습진, 장미증, 여드름, 과증식 피부병, 화상, 햇볕으로 인한 화상, 손발톱주위염, 수술 후, 강한 펄스화 광 요법 (IPL)을 이용한 치료 후, 단색 펄스화 광 요법 (레이저)을 이용한 치료 후, 화학 필링제를 이용한 치료 후 또는 침습성 외부 약제에 과다 노출 후 피부 염증, 질 점막의 염증, 구강 점막의 염증, 잇몸염, 치주염, 비염, 알레르기 비염으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 미용적으로 및/또는 피부약학적으로 유효한 양의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 투여를 포함하는 암, 식욕부진 또는 악액질의 치료 방법에 관한 것이다. 한 구체예에서, 암의 치료는 피부 암의 치료, 뮤어-토레 증후군 또는 종양 성장의 억제의 치료이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 미용적으로 및/또는 피부약학적으로 유효한 양의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 투여를 포함하는 MC5R 수용체의 억제 방법에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 미용적으로 및/또는 피부약학적으로 유효한 양의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 투여를 포함하는 콜라겐 합성의 자극 방법에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 추출물의 분자량은 50 Da 초과 및 10,000 Da 미만이며, 100 Da 내지 8,000 Da, 150 Da 내지 6,000 Da 또는 300 Da 내지 5,000 Da이다.
다른 구체예에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주는 기탁 번호 CECT 8690을 갖는 균주이다.
또 다른 양태에서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물은 포유동물 신체, 바람직하게는 인간의 신체 내의 작용 부위와 이의 접촉을 야기시키는 임의의 수단에 의해, 한 구체예에서는, 이를 함유하는 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 투여는 국소적 또는 경피적으로 수행된다. 한 구체예에서, 국소적 또는 경피적 적용은 이온삼투요법, 소노포레시스, 전기천공, 기계적 압력, 삼투압 구배, 폐쇄 치료, 미세주사, 압력에 의한 바늘이 없는 주사, 미세전자 패치, 안면 마스크 또는 이들의 임의의 조합에 의해 수행된다.
적용 또는 투여의 빈도는 각각의 대상체의 요구에 따라 매우 다양할 수 있고, 1개월에 1회 내지 하루에 10회, 1주일에 1회 내지 하루에 4회, 1주일에 3회 내지 하루에 3회, 또는 하루에 1회의 적용 또는 투여 범위가 권장된다.
생물학적 물질의 기탁
실시예
상기에 특별히 나열되었거나 아니건 간에 우선권이 주장되는 임의의 종래 출원을 포함하는 상기 언급된 문헌 각각은 참조로서 본원에 포함된다. 임의의 문헌의 언급은 상기 문헌이 종래 기술로서 자격이 있거나, 임의의 권한으로 당업자의 일반 지식을 구성하는 것을 인정하는 것이 아니다. 실시예, 또는 달리 명백히 표시된 것을 제외하고는, 물질의 양, 반응 조건, 분자량, 탄소 원자의 수 등을 명기하는 본 발명의 설명에서의 모든 수치적 양은 근사치인 것으로 이해되어야 하며, 즉, 표시된 값에 비해 ± 5%, ± 3%, ± 1%, ± 0.1%, 또는 ± 0.01%의 변동성에 적용된다. 본 명세서에서 제시된 상한 및 하한 용량, 범위 및 비율 제한은 독립적으로 조합될 수 있음을 이해해야 한다. 유사하게는, 본원에 기재된 기술의 각 요소에 대한 범위 및 양은 임의의 다른 요소에 대한 범위 또는 양과 함께 이용될 수 있다.
실시예
1: 기탁 번호
CECT
8690의 슈도
알테로모나스
앤타륵티카
종의 균주에 의해 분비된 추출물의 제조 및 분리.
a) 기탁 번호
CECT
8690의 슈도
알테로모나스
앤타륵티카
종의 균주의 배양 방법.
기탁 번호 CECT 8690인 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주를 12℃ 및 pH=7.0의 생물반응기에서 배양하였으며, 이의 배양 배지는 20g/L의 글루코스, 7g/L의 암모늄 클로라이드 및 1 g/L NaCl을 함유하는 염수, 1 g/L 마그네슘 설페이트 헵타하이드레이트, 5 g/L 디소듐 포스페이트, 2 g/L 포타슘 포스페이트, 0.05 g/L 칼슘 클로라이드, 및 0.018 g/L 철 설페이트 헵타하이드레이트를 함유한다. 0.2 AU (550nm)의 초기 광밀도가 되기에 필요한 양의 지수 상태의 사전배양물을 사용하여 접종하였다. 산소 농도는 공기 포화도 30%로 조절되고 약 250 rpm의 값으로 교반하면서 배양을 48시간 동안 지속시켰다.
b) 10
KDa
미만의 추출물의 분리
박테리아를 1시간 동안 6000g에서 원심분리하여 배양액으로부터 분리하였다. 박테리아의 제거는 0.22 ㎛의 최종 기공 크기를 갖는 막으로 여과하여 완료하였다. 이어서, 정제되지 않은 추출물을 10 KDa의 체를 갖는 폴리에테르설폰 막으로 여과하고, 목적 생성물을 막을 통해 침투시켰다.
실시예
2: 기탁 번호
CECT
8690의 슈도
알테로모나스
앤타륵티카
종의 10
KDa
미만의 추출물 중의 단백질 농도의 정량화.
실시예 3 내지 14에서 사용된 실시예 1에 따라 정제된 10 kDa 미만의 추출물의 농도 값은 비신코닌산 방법으로 측정한 총 단백질 농도이며, 설명서는 사용된 키트의 공급업체 (Pierce® BCA Protein Assay Kit, 23227)에 의해 제공된다.
실시예 1에 따라 수득된 10 KDa 미만의 추출물의 측정된 총 단백질 농도는 361.55 μg/ml이다.
실시예
3: 크로마토그래피 분석 SE-
HPLC
-UV
250 μg/ml의 실시예 1에 따라 수득된 생성물의 용액을 제조하고 HPLC-UV에 의해 분석하였다. 100 μl를 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) LC20A SHIMADZU에 주입하였다. 사용된 크로마토그래피 칼럼은 TSKGel G2000SWXL, 5m, 125Å, 7.8mm x 30mm (TOSOH Bioscience) 및 용리액으로서 물과 pH = 6.70의 0.1M 포스페이트 완충제 + 0.1M 소듐 설페이트가 사용된다.
이러한 조건에서 생성물은 10 내지 15분 사이에서 피크를 보여주며, 평균 피크는 10.75분이다. 분자량은 다양한 기준을 사용하여 계산하였다: 소 혈청으로부터의 알부민 (66000 Da), 소 췌장 타입 I로부터의 리보뉴클레아제 A (13700 Da) 및 살리실산 (138 Da). 분자량의 대수는 선형 상관관계를 얻기 위해 잔류 시간과 연관시켰다. 이러한 상관 관계를 이용하여, 생성물은 7714 Da 내지 178 Da의 분자량을 나타낸다. 또한, 이러한 상관 관계에 따르면, 주요 최대 피크 (10.75 분)의 체류 시간은 4381 Da의 분자량에 상응한다.
실시예
4: 리포터-유전자 검정법을 이용하여 형질감염된 안정한 미분화 상피 유방 세포주 (
MCF7
) 상의 인간
멜라노코르틴
수용체 5 (
MC5R
) 프로모터의 억제 평가.
미분화된 상피 유방 세포주 (MCF7)는 인간 MC5R 프로모터의 영역 상에서 반딧불이 루시퍼라제 유전자를 함유하는 플라스미드로 안정적으로 형질감염시켰다. 이러한 세포주의 선택된 클론 16인 MCF7-MC-16을, 인간 MC5R 프로모터의 억제를 측정하기 위해 실시예 1에 따라 수득된 추출물로 처리하였다.
10% FBS (우태 혈청), 1% 페니실린-스트렙토마이신 및 1 μg/ ml 푸로마이신이 보충된 둘베코 변형된 이글 배지 (DMEM) (고 글루코스)에서 웰 당 3만개의 MCF7-MC-16 세포를 루시퍼라제 활성 측정을 위해 폴리-L-리신 용액으로 처리된 96-화이트 웰 플레이트에서 시딩하였다. 동시에, 크리스탈 바이올렛 염색에 의한 총 세포 수 정량을 위해 상기에서 언급된 바와 같이 폴리-L-리신 용액으로 처리된 96-투명 웰 플레이트에 웰 당 3만개의 MCF7-MC-16 세포를 시딩하였다. 세포를 처리 시작하기 24시간 전에 시딩하고 CO2 인큐베이터에서 37℃ 및 5% CO2에서 인큐베이션하였다.
치료 당일에 MCF7-MC-16 세포를 칼슘 클로라이드 및 마그네슘 클로라이드를 갖는 둘베코 포스페이트 완충액 (DPBS)으로 2회 세척하고, CO2 인큐베이터에서 37℃에서 페놀 레드 없이 DMEM 고 글루코스와 6시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 0.25 μg/mL 또는 2.5 μg/mL 농도의 실시예 1에 따라 수득한 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 추출물로 세포를 처리하였다. 기저 활성화를 위한 대조군으로서, 세포를 배지 단독으로 인큐베이션하였다. 세포를 페놀 레드가 부재하고 1% CS-FBS (목탄-스트립핑된 우태 혈청)가 보충된 DMEM 고 글루코스에서 16 내지 24시간 동안 인큐베이션하였다.
인큐베이션 기간 후, 반딧불이 루시퍼라제와의 반응에 의해 생성된 초당 상대적 광 유닛 (RLU/sec)을 96-화이트 웰 플레이트에서 측정하고, 96-투명 웰 플레이트에서 총 세포의 수/웰을 측정하였다.
루시퍼라제
활성 측정
반딧불이 루시퍼라제 기질 (Steady-Glo Luciferase Assay System, Promega)을 제조업자의 지시에 따라 96-화이트 웰 플레이트에 첨가하였다. 간단히 말해, 먼저 세포를 용해시키고 반딧불이 루시퍼라제 기질을 첨가하였다. 인큐베이션 10-15분 후, 반딧불이 루시퍼라제 활성으로부터의 발광을 판독하였다. 반딧불이 루시퍼라제와 이의 기질 사이의 반응에 의해 생성된 초당 상대적 광 유닛 (RLU/sec)은 멀티플레이트 루미노미터 (Lumistar-BMG)를 사용하여 정량화시켰다.
크리스탈
바이올렛 염색 검정에 의한 총 세포 수의 측정
세포를 함유하는 96-투명 웰 플레이트를 DPBS로 세척하고, 실온에서 20분 동안 크리스탈 바이올렛 용액 (0.05% 크리스탈 바이올렛, 4% 포르말린)으로 인큐베이션하였다. 크리스탈 바이올렛 염료 용액으로 세포의 DNA를 염색하였다. 그 후, 크리스탈 바이올렛 용액을 제거하고 웰을 Milli-Q 물로 세척하였다. 세포에 의해 흡수되는 크리스탈 바이올렛 염료의 양은 각 웰의 세포 수에 정비례한다. 마지막으로, 세포를 실온에서 1-2 시간 동안 건조시키고, 0.1M HCl 용액을 첨가하고, Microplate Absorbance Reader (Multiskan-Thermo Electro Corporation)에서 630nm에서 흡광도를 판독하였다. 초당 반딧불이 루미네슨스 (RLU/sec) 결과를 시험한 용량에 대한 전체 세포 수로 표준화하고, 인간 MC5R 프로모터의 유도 감소를 기본 대조군에 대해 계산하였다.
표 1
결과는 슈도알테로모나스 앤타륵티카의 10 KDa 미만의 추출물이 인간 MC5R 프로모터의 유도를 감소시킴을 보여준다.
실시예 5: 지질 소적 형광 검정을 이용하여 일차 인간 피지선세포에서 피지 지질의 축적의 억제.
지질 축적의 억제는 실시예 1에 따라 수득된, 기탁 번호 CECT 8690인 슈도알테로모나스 앤타륵티카의 10 KDa 미만의 추출물로 처리한 후 조건화된 분화 배지에서 일차 인간 피지선세포에서 나일 레드의 형광 신호를 측정함으로써 측정된다.
인간 피지선 세포를 피지선세포 성장 배지 (혈청을 갖는 50% 완전 성장 배지와 50% 무혈청 배지)에서 5,000개 세포/웰로 세포외 매트릭스로 코팅된 96-웰 플레이트에 시딩하고, 3일 동안 CO2 인큐베이터 (37℃ 및 5% CO2)에서 인큐베이션하였다.
인큐베이션 후, 인간 피지선 세포를 지질 축적을 위한 기본 대조군으로서 조건화된 분화 배지 (피지선세포 성장 배지 중 10nM [Nle4, D-Phe7]-α-멜라닌세포 자극 호르몬, NDP-α-MSH)로 또는 조건화된 분화 배지중 0.25 ㎍/ml 및 2.5 μg/ml의 실시예 1에 따라 수득한 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물로 처리하였다. 각 처리는 지질 축적 검정 및 세포 계수를 위해 삼중으로 동시에 수행하였다. 세포를 CO2 인큐베이터 (37℃ 및 5% CO2)에서 4일 동안 상이한 처리체 내에서 인큐베이션하였다.
기본 대조군에서, 다양한 피지선세포를 조건화된 분화 배지로 처리하였으며, 이는 최대 분화 조건 및 따라서, 이러한 피지선세포 모델에서 최대 지질 축적의 조건이다.
AdipoRed
™ 시약 검정에 의한 피지 지질 축적의 정량화
제조업자의 지시에 따라, 각 조건에 대한 인간 피지선 세포를 칼슘과 마그네슘을 갖는 포스페이트 완충된 염수(PBS)로 세척하고 희석된 AdipoRed 시약을 첨가하였다. 시약 첨가가 완료되면, 인간 피지선 세포를 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 중성 지질의 형광을 각각 485nm 및 530nm의 여기 파장 및 방출 파장으로 FLUOstar Galaxy 판독기를 사용하여 측정하였다.
세포 계수 검정에 의한 세포 밀도 (
세포수
/ml)의 정량화.
인간 피지선 세포를 트립신으로의 처리에 의해 96-웰 플레이트로부터 분리하였다. 삼중 샘플로부터 용적을 수집한 후, 분리된 세포를 원심분리하였다. 상청액의 약 80%를 따라 버려 TC10TM 자동화 세포 계수기 (Biorad)로 세포 계수 검정을 위해 세포를 농축시켰다.
이어서, 각 조건의 형광 신호를 세포 밀도 (세포/ml)로 표준화하여 표준화된 지질 축적 값을 얻었다. 마지막으로, 기본 대조군과 비교하여 표준화된 지질 축적의 백분율을 계산하였다.
수득된 결과는 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물이 인간 피지선세포 배양에서 피지 지질의 백분율을 감소시킴을 보여준다.
표 3
실시예
6: 성인 인간 피부 섬유아세포를 사용하여
모조된
태양광의 세포독성 용량에 대한 광보호의 시험관내 연구.
광보호 효능은 세포독성 용량의 모의 태양광으로의 처리 후 24-시간에 측정할 경우, 바이탈 염료 Neutral Red의 흡수 증가로서 측정하였다.
성인 인간 피부 섬유아세포를 96-웰 플레이트에서 단층을 생성시키기 위해 24시간 동안 배양물에서 유지시켰다. 이어서, 세포를 조사된 대조군을 위한 PBS (포스페이트 완충된 염수)와 또는 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물 2.5 μg/mL과 37℃, 5% CO2, 가습 공기의 어둠하에서 1시간 동안 사전-인큐베이션하였다.
그 후, 인큐베이션된 세포를 150/180/210분 동안 실온에서 ~ 30 내지 60 J/cm2의 조사량에 노출시켰다. 다른 플레이트를 같은 시간 동안 어둠에서 유지시키고 비-조사된 대조군으로서 사용하였다. 인큐베이션된 세포를 함유하는 조사된 플레이트의 배양 배지를 새로운 배양 배지로 대체시키고, 플레이트를 24시간의 인큐베이션 동안 방치하였다. 세포 생존력은 Neutral Red의 흡수에 의해 측정하였으며, 즉, Neutral Red 용액 (Sigma)과 2시간 인큐베이션 한 후 세포를 용해시키고, 세포 용해물의 광밀도는 분광광도계로 540nm에서 측정하였다. Neutral Red는 비-확산에 의해 세포 막을 쉽게 통과하는 약한 양이온성 염료이다. Neutral Red는 비손상된 세포의 리소좀에서 세포내 축적되며, 손상되거나 또는 비-생존 세포에서는 거의 흡수되지 않는다. 세포 생존력의 백분율을 계산하기 위해, 비처리된 세포는 참조로 사용하였다. 시험된 생성물의 광보호 능력은 비-처리된 조사된 세포 (PBS로 처리됨)에 관한 처리된 세포의 세포 생존력의 증가로서 계산하였다. 결과를 표 4에 나타내었다.
표 4
실시예
7: 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의한 인간 피부 섬유아세포 상의 타입 I 콜라겐 합성의 시험관내 연구.
성인 인간 피부 섬유아세포를 트립신으로 처리하고 5x104 세포/웰을 48-웰 플레이트에 시딩하였다. 5% CO2 가습 공기 중에서 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션한 후, 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종 10 KDa 미만의 추출물 12.5 μg/mL, 6.25 μg/mL, 2.5 μg/mL 및 1.25 μg/mL를 함유하는 새로운 배양 배지를 첨가하였다. 각 농도는 삼중으로 시험하였다. 처리되지 않은 인간의 피부 섬유아세포를 48-웰 플레이트의 대조군으로 6개 웰에 시딩하였다. 인간 피부 섬유아세포를 5% CO2 가습 공기 중에서 37℃에서 추가 48시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 배양 배지를 수집하여 ELISA로 분석하였다.
타입 I 콜라겐을 정량하기 위한 표준 곡선은 1 mg/ml의 원액으로부터 시작하여 종아리 피부 (Sigma)의 타입 I 콜라겐으로 준비하였다. 이러한 희석액을 미리 수집된 배지와 함께 96-웰 플레이트에 전달하였다. 세포 배양 처리로부터 수집된 상청액 및 표준 곡선 희석액을 96-웰 플레이트로 옮겼다. 샘플 및 표준 곡선 희석액 중의 콜라겐은 밤새 가습 대기에서 4℃에서 96-웰 플레이트의 벽을 코팅하였다. 그 후, 웰 플레이트를 0.05% Tween-20 (Sigma)을 갖는 포스페이트 완충된 염수 (PBS)로 3회 세척하고, 3% 소 혈청 알부민 (BSA) (Sigma)의 용액으로 1시간 동안 차단하였다. 차단 후, 웰 플레이트를 항-콜라겐 타입 I 항체 (Sigma)와 2시간 동안 인큐베이션하였다. 이러한 인큐베이션 후, 2차 항체 (염소 항-마우스 IgG-HRP, Molecular Probes)를 첨가하였다. 그 후, 웰 플레이트를 포스파타제 기질 (OPD, Sigma)과 함께 30분 동안 교반하에 인큐베이션하였다. 3M H2SO4를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 미세적정 플레이트 판독기에서 490 nm의 흡광도를 판독하고, 타입 I 콜라겐 표준 곡선의 선형 회귀를 이용하여 콜라겐 농도를 측정하였다. 콜라겐 합성 증가 대 비처리된 세포의 결과는 표 5에 나타냈다.
표 5
실시예
8:
TBARS
검정에 의해 지질 과산화의
시험관내
억제의 연구
지질 과산화는 세포막 모델로서 리포좀을 사용하고 TBARS 분석 (티오바르비투르산 반응성 물질) 동안 MDA (말론디알데하이드)와 TBA (티오바르비투르산) 사이의 부가물의 형성으로 인해 형광을 모니터링함으로써 측정하였다. 리포좀을 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물로 처리하고, 리포좀에서 지질 리포좀의 감소를 연구하기 위해 기본 대조군과 비교하였다.
리포좀의
제조
클로로포름:메탄올 (1:1)에 용해된 30mM 대두 포스파티딜콜린 (Emulmetik 930)을 함유하는 용액을 박막을 수득하기 위해 산소-비함유 N2의 스트림 하에서 건조시켰다. 용매의 마지막 흔적을 고 진공 하에서 3시간 동안 제거하였다. Tris-NaCl 완충액 (140mM NaCl, 20mM Tris pH = 7.4)을 첨가 한 후 5 분 동안 교반하여 완전한 현탁액이 되게 함으로써 다층 소포 (MLV)를 형성하였다. 이어서, 소포 현탁액을 초음파 처리하여 인지질 소포를 작은 다층 소포 (SUV)로 분해하였다.
리포좀
과산화
1ml의 SUV 현탁액을 시험관에 첨가하였다. 그런 다음, 40 μl의 상이한 농도의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물을 상이한 튜브에 첨가하였다. 40μl의 Tris-NaCl 완충액을 과산화의 기본 대조군으로서 첨가하였다. 튜브를 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하고 각 농도를 이중으로 시험하였다.
지질 과산화는 새로 제조된 AAPH (2,2'-아조비스(2-아미디노프로판)디하이드로클로라이드 (270mM) 40μl를 첨가함으로써 시작되었다. 그런 다음, 튜브를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하고 100rpm으로 교반하였다. 과산화는 200μl의 BHT (부틸화된 하이드록시톨루엔) (에탄올 중 4% w/v)를 첨가하고 샘플을 -20℃에서 냉동시킴으로써 중단시켰다.
TBARS
검정
MDA의 보정 곡선의 준비: TEP (1,1,3,3-테트라에톡시프로판) (1% H2SO4 중 10mM)의 산 가수분해에 의해 얻어진 MDA의 용액으로부터 5개의 튜브를 각각 0, 0.8, 1.6, 2.4 및 3.2 nmol의 MDA로 준비하였다. 최종적으로, 500μl의 증류수와 100μl의 BHT (에탄올 중 4% w/v)를 각 튜브에 첨가하였다.
TBA와의 반응을 위해, 샘플을 해동시키고, 600μl을 피펫으로 취하고 250μl의 SDS (소듐 도데실 설페이트) (3% w/v)에 첨가하였다. 혼합 후, 새로 준비한 TBA (뜨거운 물에서 1% w/v) 500μl를 첨가하고 혼합하였다. 그런 다음, 500μl의 HCl 7mM를 첨가하고, 교반하고 95℃에서 15분 동안 수조에서 인큐베이션하였다. 마지막으로, 샘플을 실온이 되게하고 2ml의 1-부탄올을 첨가하였다. 샘플을 격렬히 교반하고 1500rpm에서 5분간 원심분리하였다.
각 샘플의 상부 상의 웰 당 150μl를 불투명한 바닥 블랙 96-웰 플레이트에 이중으로 넣었다. 형광은 멀티플레이트 형광 판독기 (모델 FluoStar Galaxy, BMG Labtech GmbH, Offenburg, Germany)에서 500nm의 여기 파장 및 530nm의 방출 파장에서 측정하였다. 지질 과산화는 형광 측정에 의해 측정되며, 여기서 100%는 기본 대조군 조건의 값이다.
표 6
실시예
9: 일차 인간
피지선세포에서
MC5R
단백질 수준에 대한,
실시예
1에 따라
수득된
기탁 번호
CECT
8690의
슈도알테로모나스
앤타륵티카
종의 10
KDa
미만의 추출물의 영향.
성장 배지 조건에 있어서는 150,000개 세포 및 감소된-혈청 배지의 나머지 조건에 있어서는 250,000개 세포의 주요 인간 피지선세포를 세포외 매트릭스 (EM)로 코팅된 T25 cm2 플라스크에 시딩하였다. 세포를 CO2 인큐베이터 (37℃ 및 5% CO2)에서 3일 동안 피지선세포 성장 배지에서 인큐베이션하였다.
인큐베이션 후, 다양한 조건을 검정하였다: 분화의 음성 대조군으로서의 성장 배지에서의 피지선세포, 분화의 양성 대조군으로서의 감소된-혈청 배지에서의 피지선세포, 및 감소된-혈청 배지에서 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물 0.25 및 2.5 μg/ml을 갖는 피지선세포.
처리 후, 세포를 간접 유동 세포계측에 의해 면역세포화학을 위해 준비하였다.
간접 유동 세포계측을 위한 샘플 제조. 면역세포화학
세포를 1ml의 빙냉 포스페이트 완충된 염수 (PBS), 10% 신생 송아지 혈청 (NCS), 1% 소듐 아지드 중에 대략 1-5x106 세포/ml로 재현탁시켰다. 각 조건에 대해 세포를 함유하는 현탁액을 2개의 튜브로 나누고, 하나의 튜브는 1차 항체 (항-MC5R 수용체 항체 [EPR8386], ABCAM) 및 2차 항체 (토끼 IgG-H&L(APC)에 대한 염소 폴리클로날 2차 항체, ABCAM)로 염색하고, 다른 하나의 튜브는 단지 2차 항체 (2차 항체 대조군)로만 염색시켰다.
세포를 함유하는 현탁액을 어둠하에 실온하에 PBS 중의 0.5% 포름알데하이드 (Sigma)로 고정시켰다. 이어서, 현탁액을 빙냉 PBS와의 원심분리에 의해 세척하였다.
최종적으로, 세포를 3% BSA 및 1% 소듐 아지드를 함유하는 500 μl의 빙냉 PBS 중에 대략 0.5-2.5x106 세포/ml로 재현탁시켰다. 계수 후, 세포의 현탁액을 어둠하에 4℃에서 밤새 보관하였다.
유동 세포계측에 의한
세포외
MC5R
단백질 수준의 측정
검정을 적어도 3회 수행하였다. 각 처리에 대한 세포의 현탁액을 유동 세포계측기(FACSCanto II, BD Biosciences)을 통해 진행시키고, 100,000-200,000개의 사건을 수집하였으며, 사건의 수는 각 특정 검정에 좌우된다. 데이터는 WinMDI 2.9 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
각 샘플의 형태의 광-산란된 도트 플롯 (SSC 대 FSC)을 표시하고, 플롯 영역 또는 게이트 (R1)를 세포 찌꺼기가 제거되도록 그렸다.
각 샘플 게이트 (R1)의 APC (형광색) 대 FSC (세포 크기)의 형광 도트 플롯을 표시하였다. 각 조건을 이의 2차 항체 대조군과 비교하여, 양성 APC 세포 (MC5R)을 규정하도록 게이트 (R2)를 그렸다. 각 샘플에 있어서, 영역 R1+R2 내부에 포함된 사건을 정량화시켰다. 각 조건의 양성 MC5R 사건은 2차 항체 대조군을 뺀 것이다.
MC5R 단백질 수준은 감소된-혈청 배지 조건과 관련하여 계산하였다. 표 7에 도시된 바와 같이, 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물은 혈청-감소된 배지에서 일차 인간 피지선세포의 MC5R 단백질 수준을 감소시켰다.
표 7
실시예
10: 기탁 번호
CECT
8690의 슈도
알테로모나스
앤타륵티카
종의 10 KDa 미만의 추출물에 의한 일차 인간 피지선세포의 분화 과정에 대한 효과.
인간 피지선 세포를 250,000개 세포/T25로 피지선세포 성장 배지 (혈청을 갖는 50% 완전 성장 배지: 50% 무혈청 배지)에서 세포외 매트릭스로 코팅된 T25 cm2 플라스크에 시딩하고, 3일 동안 CO2 인큐베이터 (37℃ 및 5% CO2)에서 인큐베이션하였다.
인큐베이션 후, 인간 피지선세포를, 분화의 음성 대조군으로서의 기본 성장 배지, 또는 분화의 양성 대조군으로서의 조건화된 분화 배지 (피지선 세포 성장 배지 중 10nM [Nle4, D-Phe7]-α-멜라닌세포 자극 호르몬, NDP-α-MSH), 또는 조건화된 분화 배지에서 2.5 μg/ml의 실시예 1에 따라 수득한 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물로 처리하였다. 세포를 CO2 인큐베이터 (37℃ 및 5% CO2)에서 4일 동안 상이한 처리 내에서 인큐베이션하였다. 처리 4일 후, 세포를 유동 세포계측에 의해 처리되도록 준비하였다.
유동 세포계측을 위한 샘플 제조
인간 피지선 세포를 빙냉 PBS와 100g에서 5분간 원심 분리하여 3회 세척하고, 0.5% 포름알데하이드 용액 (Sigma)으로 실온에서 10분간 고정하고 빙냉 PBS로 다시 한번 세척하였다. 마지막으로 3% 소 혈청 알부민 (BSA)과 1% 소듐 아지드를 함유하는 빙냉 PBS에 세포 펠렛을 재현탁시키고 어둠하에 밤새 4℃에서 보관하였다.
세포 형태의 분석: 유동 세포계측에 의한 크기 (전방 산란;
FSC
) 및 입상 (측방 산란; SSC).
검정을 적어도 3회 수행하였다. 각 처리에 대한 세포를 함유하는 현탁액을 유동 세포계측(FACSCanto II, BD Biosciences)을 통해 진행시키고, 100,000-200,000개의 사건을 수집하였으며, 사건의 수는 각 특정 검정에 좌우된다. 유동 세포계측 기술에서, FSC (전방 산란)는 세포 표면적 또는 세포 크기에 비례하며, SSC (측방 산란)는 세포 입도 또는 내부 복잡성에 비례한다. FSC 대 SSC는 다양한 세포 유형의 특정 형태를 식별할 수 있게 한다. 각 처리에 대한 피지선세포의 형태학적 변화는 WinMDI 2.9 소프트웨어를 사용하여 분석하고, 이들은 입도 대 크기 (SSC vs. FSC)를 나타낸다. 게이트를 세포 찌꺼기를 버리도록 그리고, 게이팅된 세포의 세포 형태는 SSC 대 FSC의 밀도 플롯으로 표시하였다. 형태학적인 변화는 음성 및 양성 차동 조종에 대해 방향 축(orientative axes)을 설정함으로써 평가하였다.
유동 세포계측 데이터의 도트 플롯 표시는 플롯 내의 사건의 분포의 측정에 사용된다 (표 8). 각 사분면에서 사건의 수를 정량화하였다.
표 8
표 9는 수행된 세 가지 독립적인 실험 중 하나의 대표 실험을 보여준다. 이러한 검정에서, 각 처리에 해당하는 세포 현탁액을 유동 세포계측기를 통해 진행시키고, 100,000개 사건을 수집하였다. 표 9는 상이한 배양 조건에서 성장한 피지선세포의 크기 vs 입도의 플롯 형태학적 파라미터의 각 사분면에서의 사건 수를 보여준다. 분화되지 않은 피지선세포와 비교하여 분화된 피지선세포는 높은 입도 수준 (Q2의 증가) 및 작은 세포 크기 (Q3 증가 및 Q4 감소)를 특징으로 하는 형태학적 변화를 보여준다. 실시예 1에 따라 수득된 추출물로 처리된 피지선세포는 분화되지 않은 피지선세포 (Q3 감소 및 Q4 증가)와 유사한 세포 크기 증가 및 입도 감소 (Q2 감소)의 형태학적 변화를 보여준다.
표 9
표 9의 결과는 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물이 분화 조건화된 매질의 존재하에 분화되지 않은 일부 피지선세포를 분화되지 않은채 유지함을 보여준다.
도 1은 다양한 배양 조건에서 성장한 피지선세포에 대한 크기 (FSC-A) 및 입도 (SSC-A)의 형태학적 파라미터의 밀도 플롯을 보여준다. 분화되지 않은 피지선세포는 유사한 입도 수준을 가지나 2개의 상이한 크기를 갖는 2개의 주요 세포 군집을 보여준다. 분화된 피지선세포는 높은 입도 수준과 작은 세포 크기를 특징으로 하는 독특한 세포 집단을 보여준다. 실시예 1에 따라 수득된 추출물 2.5 μg/ml로 처리한 피지선세포는 분화되지 않은 피지선세포와 유사한 세포 크기 증가 및 입도 감소의 형태학적 변화를 보여준다. 동일한 실험에 속하는 이미지는 표 9에 나타냈다.
실시예
11. 인간 표피 각질세포의 유전자 발현 프로파일의 연구
인간 표피 각질세포의 유전자 프로파일 내에서, 비처리된 세포의 기본 수준 (음성 대조군)과 비교하여 실시예 1에 따라 수득된 수탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물 2.5 μg/ml로 처리하여 유전자 세트가 유의하게 증가/감소하는 횟수를 연구하였다.
성숙한 인간 표피 각질세포인 HEKa (Cascade Biologics)를 코팅 매트릭스 (15x104 세포/플라스크 T25)로 전처리한 T25 플라스크 상에 시딩하였다. 성인 인간 표피 케리티노사이트를 5% CO2 대기에서 37℃에서 6일 동안 완전한 Epilife 배지 (EDGS가 보충된 Epilife 배지, Cascade Biologics)에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 5% CO2를 갖는 대기에서 37℃에서 24시간 동안 음성 대조군으로서 완전 Epilife 배지로 또는 완전 Epilife 배지 중의 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10KDa 미만의 추출물 2.5 μg/ml로 처리하였다. 인큐베이션 및 처리는 각 조건에 대해 적어도 4개의 생물학적 검정 (플라스크)으로 수행하였다.
처리 후, 세포를 용해시키고 RNA를 추출하고 RNeasyPlus 미니 키트 (Qiagen)에 의해 각 조건 및 각 플라스크로부터 정제하였다. 용해된 세포를 균질화시키고 RNase를 불활성화시켰다. 게놈 DNA는 gDNA Eliminator 스핀 컬럼을 사용함으로써 샘플에서 제거하였다. 그런 다음, 샘플을 특이적 RNA 결합 칼럼을 통해 통과시키고, 오염 물질과 불순물을 제거하기 위해 수차례 미세원심분리로 세척한 후, 정제된 RNA를 초순수 50 μl로 용리시켰다.
수득된 RNA의 순도, 완전성 및 농도는 분광광도법 (Nanodrop) 및 생물분석기 (Agilent Bioanalyzer)에 의해 평가하였다.
나중에, 라벨링을 수행하고, 샘플을 인간 유전자 발현 마이크로어레이 (ASurePrint G3, Agilent)에서 하이브리드화시켰다.
처리하여 수득된 표준화된 값을 음성 대조군으로 수득된 표준화된 값과 비교하여 상이한 발현을 갖는 유전자를 수득하였다. 그런 다음, 데이터의 파라미터 분석을 Bioconductor 소프트웨어에 의해 수행하였다. 이어서, 획득한 값을 GSEA (Gene Set Analysis Enrichment)에 의해 평가하여 유전자 온톨로지(Gene Ontology) 및 생물학적 경로(Biological Route)에 있어서 상이한 발현을 갖는 유전자들을 그룹화시켰다.
획득된 결과를 하기 표 10 내지 13에 나타내었고, 여기에서 유전자들을 함께 그룹화시켰다.
표 10.
실시예
1에 따라
수득된
추출물에 의해 하향조절된 염증 관련 유전자.
표 11.
실시예
1에 따라
수득된
추출물에 의해 상향조절된 산화 스트레스 및/또는 해독 관련 유전자.
표 12.
실시예
1에 따라
수득된
추출물에 의해 상향조절된 항-염증 반응 관련된 유전자.
표 13.
실시예
1에 따라
수득된
추출물에 의해 상향조절된 수화 관련 유전자.
실시예
12: 인간
피지선세포의
유전자 발현 프로파일의 연구.
인간 피지선세포의 유전자 프로파일 내에서, 비처리된 세포의 기본 수준 (음성 대조군)과 비교하여 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물 2.5 μg/ml로의 처리에 의해 유전자 세트가 유의하게 증가/감소하는 횟수를 연구하였다.
인간 피지선 세포 (CELPROGEN)를 세포외 매트릭스 (CELPROGEN) (25x104 세포/플라스크)로 코팅한 T25 플라스크에 시딩하고, 피지선 세포 성장 배지 (50% 인간 피지선 세포 완전 성장 배지 및 50% 인간 피지선세포 무혈청 배지, CELPROGEN)에서 37℃, 5% CO2의 대기하에 3일간 인큐베이션하였다. 3일 후, 혈청을 배양액에서 감소시키고 피지선 세포 배양 배지를 저-혈청 배지 (5% 인간 피지선 세포 완전 성장 배지 및 95% 인간 피지선 세포 무 혈청 배지, CELPROGEN)로 대체하고 피지선 세포를 3일 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 5% CO2를 갖는 대기에서 37℃에서 24시간 동안 음성 대조군으로서 감소된-혈청 배지로 또는 감소된-혈청 배지 중의 실시예 1에 따라 수득된 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타르틱가 종의 10 KDa 미만의 추출물 2.5 μg/ml로 처리하였다. 인큐베이션 및 처리는 각 조건에 대해 적어도 4개의 생물학적 검정 (플라스크)으로 수행하였다.
처리 후, 세포를 용해시키고 RNA를 추출하고 RNeasyPlus 미니 키트 (Qiagen)에 의해 각 조건 및 각 플라스크로부터 정제하였다. 용해된 세포를 균질화시키고 RNase를 불활성화시켰다. 게놈 DNA는 gDNA Eliminator 스핀 컬럼을 사용함으로써 샘플에서 제거하였다. 그런 다음, 샘플을 특이적 RNA 결합 칼럼을 통해 통과시키고, 오염 물질과 불순물을 제거하기 위해 수차례 미세원심분리로 세척한 후, 정제된 RNA를 초순수 50 μl로 용리시켰다.
수득된 RNA의 순도, 완전성 및 농도는 분광광도법 (Nanodrop) 및 생물분석기 (Agilent Bioanalyzer)에 의해 평가하였다.
나중에, 라벨링을 수행하고, 샘플을 인간 유전자 발현 마이크로어레이 (ASurePrint G3, Agilent)에서 하이브리드화하였다.
처리하여 획득한 표준화된 값을 음성 대조군으로 획득한 표준화된 값과 비교하여 상이한 발현을 갖는 유전자를 수득하였다. 그런 다음, 데이터의 파라미터 분석을 Bioconductor 소프트웨어에 의해 수행하였다. 이어서, 획득한 값을 GSEA (Gene Set Analysis Enrichment)에 의해 평가하여 유전자 온톨로지 및 생물학적 경로에 있어서 상이한 발현을 갖는 유전자들을 함께 그룹화시켰다.
수득된 결과를 하기 표 14 내지 17에 나타내었고, 여기에서 유전자들을 함께 그룹화시켰다.
표 14.
실시예
1에 따라
수득된
추출물에 의해 하향조절된 염증 관련 유전자.
표 15.
실시예
1에 따라
수득된
추출물에 의해 하향조절된
피지선세포
증식 및 분화 관련 유전자.
표 16.
실시예
1에 따라
수득된
추출물에 의해 상향조절된 산화 스트레스 및/또는 DNA-복구 관련 유전자.
표 17.
실시예
1에 따라
수득된
추출물에 의해 상향조절된
레티노이드
대사 관련 유전자. 레티노이드 대사는 피부의 피지 생성과 관련이 있다.
실시예
13: 기탁 번호
CECT
8690의
슈도알테로모나스
앤타륵티카
종의 10 KDa 미만의 추출물의 미용적 조성물의 제조.
적합한 용기에서, 전체 분산이 달성될 때까지 상 A의 성분을 터빈 교반하에 물에 용해시켰다. 그 후, Phase B, Novemer EC2 [INCI : 물 (아쿠아), 소듐 아크릴레이트, 베헤네스 25(BEHENETH 25) 메타크릴레이트, 크로스폴리머, 수소화된 폴리데센, 라우릴 글루코시드]를 터빈 교반 하에서 조금씩 첨가하였다.
이어서, 62.5 μg/ml의 농도의 실시예 1에 따라 수득된 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물의 수용액 및 소듐 살리실레이트를 첨가하였다 (상 C).
성분 목록은 표 18에 있다.
표 18
실시예
14: 기탁 번호
CECT
8690의 슈도
알테로모나스
앤타륵티카
종의 10 KDa 미만의 추출물의 미용적 조성물의 제조.
적합한 용기에서, 전체 분산이 달성될 때까지 상 A의 성분을 터빈 교반하에 물에 용해시켰다. 실시예 1에 따라 수득된 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물을 250 μg/ml의 농도의 추출물의 수용액으로서 상 A에 첨가하였다.
그 후, 전체 분산될 때까지 터빈 교반 하에 상 B의 성분들을 조금씩 첨가하였다. pH는 6.3-6.8로 조정하였다.
성분 목록은 표 19에 있다.
표 19
실시예
15: 지성 피부의 아시아 피부 타입 지원자에서 기탁 번호
CECT
8690의
슈도알테로모나스
앤타륵티카
종의 10
KDa
미만의 추출물의 효능에 대한
생체내
연구.
이 연구는 20세 내지 35세 연령의 아시아 여성 지원자 20명을 대상으로 실시하였다. 자원자는 28일 동안 1일 2회 (아침 및 저녁) 얼굴과 이마에 실시예 14의 조성물을 도포하였다. 이러한 연구는 실시예 14의 조성물의 사용 전의 초기에 및 28일째에 피지를 분비하는 활성 모낭 즉, 스폿의 수 및 표면을 측정하였다. 대상체는 이들 자신을 기준으로 삼고, 초기에 얻은 결과와 28일째에 얻은 결과를 비교하였다. 효능은 피지 민감성 접착 필름인 Sebutape®을 사용하여 측정하였다. 결과를 표 20에 나타내었다.
표 20
결과는 20명의 지원자에서 피지를 분비하는 활성 모낭의 9.5%의 평균 감소 및 피지를 분비하는 활성 모낭의 표면의 27.2%의 평균 감소를 보여준다.
실시예
16: 기탁 번호
CECT
8690의 슈도
알테로모나스
앤타륵티카
종의 10 KDa 미만의 추출물의 BB 크림 조성물의 제조.
적절한 용기에서, 상 A [INCI : 물, 메틸 글루세스-20, 알란토인, 소듐 하이드록사이드, 디소듐 EDTA, 포타슘 소르베이트]의 성분을 터빈 교반하에 용해시키고 혼합물을 총 분산이 이루어질 때까지 50℃에서 가열하였다.
그 후, 상 B1 [INCI: CARBOPOL®ULTREZ 20 아크릴레이트/C10-30 알킬 아크릴레이트 크로스폴리머]를 젖은 상태로 두고 이어서 분산시키고, 상 B2 [INCI: 잔탄 검]을 첨가하고 젖은 상태로 두고 이어서, 또한 분산시켰다.
다음에, 상 C의 성분 [INCI: CI 77891 & 아쿠아 & 글리세린 & 잔탄 검 및 소듐 시트레이트, CI77492 & 아쿠아 & 글리세린 & 잔탄 검 & 소듐 시트레이트, CI 77491 & 아쿠아 & 글리세린 & 잔탄 검 & 소듐 시트레이트, CI77499 & 아쿠아 & 글리세린 & 잔탄 검 & 소듐 시트레이트]을 첨가하고 교반하여 이의 색상이 균일하게 되게 하였다. 혼합물이 균질한 경우, 온도를 75℃로 상승시켰다.
또 다른 비이커에 상 D 성분 [INCI: 이소프로필 이소스테아레이트, 카프릴 카프릭 트리글리세리드, 메틸 글루코스 세스퀴스테아레이트, 베헤닐 알코올, 디메티콘, PEG-20 메틸 글루코스 세스퀴스테아레이트, 페녹시에탄올, 비타민 E 아세테이트]를 칭량하고 혼합물을 80℃에서 가열하였다.
각각의 온도에 도달하면 에멀젼은, 상 D 혼합물을 먼저 600 rpm으로 이어서 1분 동안 투락스(turax)로 10000 rpm으로 교반하면서 상 A, B1, B2 및 C의 혼합물에천천히 첨가함으로써 제조하였다.
혼합물이 65℃로 냉각되면, 상 E [INCI: 운모, 보론 니트라이드, MICA]를 첨가하였다. 이어서, 62.5 μg/ml 농도의 실시예 1에 따라 수득된 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물의 수용액 및 소듐 살리실레이트 (상 F) [INCI: 물, 슈도알테로모나스 발효 추출물, 소듐 살리실레이트], 및 상 G [INCI: 향미제]를 벌크가 30℃일 때 이전 혼합물에 첨가하였다.
성분 목록은 표 21에 있다.
표 21
실시예
17: BB 크림 플라세보 조성물의 제조.
조성물은 실시예 16의 지시에 따라 제조하지만, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 추출물을 사용하지 않았으며, 하기 표 22에 포함된 성분들로 제조하였다.
표 22
실시예
18: BB 크림의 오래
지속되는
매티파잉
효과에 대한 기탁 번호
CECT
8690의
슈도알테로모나스
앤타륵티카
종의 10
KDa
미만의 추출물의 효능에 대한 생체내 연구.
이 연구는 18세 내지 42세 연령의 22명 코카시안 여성 지원자를 대상으로 실시하였다. 지원자는 얼굴의 한쪽 절반에 실시예 16의 조성물을 도포하고 다른 절반에는 플라세보 (실시예 17)를 도포하였다. 단일 생성물 도포 후, 피부 번들거림을 조성물 사용 전 초기 시간, 생성물 도포 직후 및 생성물 도포 후 2 시간 및 8 시간째에 측정하였다. 효능은 Skin-Glossymeter® GL 200으로 측정하였다. 결과를 표 23에 나타내었다.
표 23
생성물 적용 직후의 측정은, 플라세보 크림보다 활성 크림(실시예 16의 조성물, 기탁 번호 CECT 8690의 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 10 KDa 미만의 추출물을 가짐)을 사용하면 피부 번들거림의 감소가 더 큼을 보여준다. 유사한 결과가 2시간 후에도 발견되었다. 그러나, 생성물 도포 8시간 후, 활성 크림은 피부의 번들거림을 감소시킬 수 있는 반면, 플라세포 크림은 피부 번들거림을 증가시켰다.
실시예
19:
실시예
1에 따라
수득된
기탁 번호
CECT
8690의 슈도
알테로모나
스
앤타륵티카
종의 균주에 의해 분비된 박테리아
세포외
생성물을 사용한
생체내
연구; 지성 피부의 코카시안 피부 타입 지원자의 치료 효능 시험.
이 연구는 28일 동안 초기 시간, 14일 후 및 28일 후의 측정으로 수행하였다. 20세 내지 35세 연령의 코카시안 여성 지원자 20명이 포함된다. 대상체는 실시예 13의 겔 크림을 하루 2회 (아침 및 저녁) 도포하였다. 대상체는 이들 자신을 기준으로 삼고, 상이한 시간에서 획득된 결과는 초기 시간에 획득된 것과 비교하였다.
생성물의 효능은 하기에 의해 평가하였다:
- 코 양쪽의 피부에서 피지 비율을 측정하기 위해 Subumeter®을 사용하여 측정; 결과는 표 24에 나타냈다.
- 코의 양쪽에 있는 모공의 이미지 분석을 위한 Epiflash를 사용한 디지털 사진; 결과를 표 25에 나타냈다.
- 이마에서 피부 번들거림의 이미지 분석을 위한 Visia-CR을 사용한 디지털 사진; 결과를 표 26에 나타냈다.
*
평균 값에
대해 계산됨
표 24. 14일째 및 28일째에서 총 피지량의 초기 시간 관련 백분율 변화.
결과는 생성물 도포 14일 후 8.4%의 피지 비율 감소를 보여줬다. 28일 후, 피지 비율 감소는 최대 9.4%이다.
*
평균 값에
대해 계산됨
표 25. 14일째 및 28일째에서 스팟의 총 표면 및 개수의 초기 시간 관련 백분율 변화.
결과는 생성물 도포 14일 후 모공 수의 20.5%의 감소 및 28일 후 18.0%의 감소를 보여준다. 전체 모공 영역과 관련하여, 생성물 도포의 14일 및 28일 후에 각각 18.8% 및 18.7%의 감소가 발견되었다.
*
평균 값에
대해 계산됨
표 26. 14일째 및 28일째에서 이마에서 피부 번들거림의 초기 시간 관련 백분율 변화.
결과는 치료 14일 후에 17%의 피부 번들거림 강도의 감소를 보여준다. 생성물 도포 28일 후, 피부 번들거림 강도의 감소는 최대 27.3%였다.
Claims (16)
- 피부 및/또는 점막의 치료에 사용하기 위한 슈도알테로모나스 앤타륵티카(Pseudoalteromonas antarctica) 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물.
- 제 1항에 있어서, 치료가 염증, 피부암, 면포, 미립종, 여드름, 지루, 지루성 피부염, 화농땀샘염의 치료 및/또는 예방 또는 피부의 광보호인 추출물.
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 치료가 수용체 MC5R을 억제하고/거나 콜라겐 합성을 자극하는 추출물.
- 피부, 점막 및/또는 모발의 미용의 비치료학적 치료 및/또는 관리를 위한 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주에 의해 생성된 10,000 Da 미만 분자량의 추출물의 용도.
- 제 4항에 있어서, 미용의 비치료학적 치료 및/또는 관리가 피부 및/또는 모발의 피지 양의 감소의 치료, 피부 노화의 치료 및/또는 예방, 피부 주름의 치료 및/또는 예방, 피부 탄력의 치료, 피부 탄력 손실의 예방 및/또는 모발 위생을 위한 것인, 추출물의 용도.
- 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 미용의 비치료학적 치료 및/또는 관리가 피부의 수화 유지 또는 개선인, 추출물의 용도.
- 제 4항 내지 제 6항 중의 어느 한 항에 있어서, 미용의 비치료학적 치료 및/또는 관리가 수용체 MC5R을 억제하고/거나 콜라겝 합성을 자극하는, 추출물의 용도.
- 제 4항 내지 제 6항 중의 어느 한 항에 있어서, 추출물의 분자량이 50 Da 초과 및 10,000 Da 미만이고, 바람직하게는 100 Da 내지 8,000 Da인, 추출물의 용도.
- 제 4항 내지 제 6항 중의 어느 한 항에 있어서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주가 기탁 번호 CECT 8690을 갖는 균주인, 추출물의 용도.
- 제 1항 내지 제 3항 중의 어느 한 항에 있어서, 분자량이 50 Da 초과 및 10,000 Da 미만이고, 바람직하게는 100 Da 내지 8,000 Da인 추출물.
- 제 1항 내지 제 3항 중의 어느 한 항에 있어서, 슈도알테로모나스 앤타륵티카 종의 균주가 기탁 번호 CECT 8690을 갖는 균주인 추출물.
- 제 1항 내지 제 3항 중의 어느 한 항에 따른 미용적으로 또는 피부약학적으로 유효한 양의 추출물, 및 하나 이상의 미용적으로 및/또는 피부약학적으로 허용되는 부형제, 애주번트 및/또는 성분을 포함하는 미용적 또는 피부약학적 조성물.
- 제 12항에 있어서, 추출물이 리포솜, 혼합된 리포솜, 올레오솜(oleosome), 니오솜(niosome), 에토솜(ethosome), 밀리입자, 마이크로입자, 나노입자 및 고체 지질 나노입자, 나노구조화된 지질 담체, 스폰지, 사이클로덱스트린, 소포, 마이셀, 계면활성제의 혼합된 마이셀, 계면활성제-인지질 혼합 마이셀, 밀리스피어(millisphere), 마이크로스피어 및 나노스피어, 리포스피어(liposphere), 밀리캡슐(millicapsule), 마이크로캡슐, 나노캡슐, 마이크로에멀젼 및 나노에멀젼으로 형성된 군으로부터 선택된 미용적으로 또는 피부약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템으로 혼입되거나, 탤크(talc), 벤토나이트, 실리카, 전분 또는 말토덱스트린으로 형성된 군으로부터 선택되는 고체 유기 폴리머 또는 고체 미네랄 지지체 상에 흡착된, 미용적 또는 피부약학적 조성물.
- 제 12항 또는 제 13항에 있어서, 조성물이 다중 에멀젼, 용액, 액체 결정, 무수성 조성물, 수성 분산액, 오일, 밀크, 발삼(balsam), 포움(foam), 수성 또는 유성 로션, 수성 또는 유성 젤, 크림, 용액, 하이드로알코올 용액, 하이드로글리콜 용액, 하이드로젤, 리니멘트(liniment), 세라(sera), 비누, 샴푸, 컨디셔너(conditioner), 페이스 마스크, 헤어스프레이, 세럼(serum), 다당류 필름, 연고, 무스(mousse), 포마드(pomade), 페이스트, 파우더, 바(bar), 펜슬 및 스프레이 또는 에어로졸로 형성된 군으로부터 선택된 포뮬레이션으로 존재하는, 미용적 또는 피부약학적 조성물.
- 제 12항 또는 제 13항에 있어서, 직물, 부직포 직물 또는 의료 장치(device)에 혼입된 미용적 또는 피부약학적 조성물.
- 제 12항 내지 제 15항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 부형제, 애주번트 및/또는 성분이 피지 생성을 약화시키는 작용제, 지루제, 매티파잉제(mattifying agent), 항여드름제, 피부 또는 표피 거대분자의 합성을 자극하고/하거나 이들의 분해를 억제하거나 예방할 수 있는 작용제, 콜라겐 합성-자극제, 탄력소 합성-자극제, 데코린 합성-자극제, 라미닌 합성-자극제, 디펜신 합성-자극제, 샤페론 합성-자극제, cAMP 합성-자극제, AQP-3을 조정하는 작용제, 아쿠아포린 합성을 조정하는 작용제, 아쿠아포린 패밀리로부터의 단백질, 히알루론산 합성-자극제, 글리코사미노글리칸 합성-자극제, 섬유결합소 합성-자극제, 시르투인 합성-자극제, 열쇼크 단백질, 열쇼크 단백질 합성-자극제, 신경세포 세포외배출을 억제하는 작용제, 기타 항콜린제, 근수축을 억제하는 작용제, 안티에이징 작용제, 항-주름 작용제, 땀억제제, 항염증제 및/또는 진통제, 항-소양증 작용제, 진정제, 마취제, 아세틸콜린-수용체 집락화 억제제, 아세틸콜린에스테라제를 억제하는 작용제, 피부이완제, 멜라닌 합성 자극제 또는 억제제, 화이트닝 또는 탈색 작용제, 전색소침착제, 자가-태닝 작용제, NO-신타제 억제제, 5α-환원효소 억제제, 리실- 및/또는 프롤릴 하이드록실라제 억제제, 항산화제, 자유 라디칼 제거제 및/또는 대기오염에 대한 작용제, 반응성 카르보닐 종 제거제, 항-당화작용 작용제, 항히스타민제, 항바이러스제, 항기생충제, 유화제, 연화제, 유기 용매, 액체 분사제, 피부 컨디셔너, 습윤제, 수분을 보유하는 물질, 알파 하이드록시산, 베타 하이드록시산, 보습제, 표피 가수분해 효소, 비타민, 아미노산, 단백질, 색소 또는 착색제, 염료, 생체중합체, 젤화 중합체, 증점제, 계면활성제, 연화 작용제, 유화제, 결합제, 보존제, 눈밑 지방을 감소시키거나 치료할 수 있는 작용제, 엑스폴리에이팅 작용제(exfoliating agent), 각질용해제, 박리제(desquamating agent), 항미생물제, 항진균제, 정진균제, 살균제, 정균제, 각질층 성분 및 지질의 합성을 자극하는 작용제, 세라미드, 지방산, 콜라겐 분해를 억제하는 작용제, 기질 금속단백분해효소를 억제하는 작용제, 탄력소 분해를 억제하는 작용제, 세린 프로테아제를 억제하는 작용제, 섬유아세포 증식을 자극하는 작용제, 각질세포 증식을 자극하는 작용제, 지방세포 증식을 자극하는 작용제, 멜라닌세포 증식을 자극하는 작용제, 각질세포 분화를 자극하는 작용제, 지방세포 분화를 자극하거나 지연시키는 작용제, 항과다각화증 작용제, 면포용해제, 항-건선 작용제, DNA 복구제, DNA 보호제, 줄기세포 보호제, 안정제, 민감한 피부의 치료 및/또는 관리를 위한 작용제, 탄력제(firming agent), 항-스트레치 마크 작용제, 결합제, 지질분해제 또는 지질분해를 자극하는 작용제, 지방생성 작용제, PGC-1α 발현을 조절하는 작용제, PPARγ의 활성을 조절하는 작용제, 지방세포의 트리글리세리드 함량을 증가시키거나 감소시키는 작용제, 항-셀룰라이트 작용제, PAR-2 활성을 억제하는 작용제, 치유를 자극하는 작용제, 공동애주번트 치유 작용제, 재상피화를 자극하는 작용제, 공동애주번트 재상피화 작용제, 사이토카인 성장인자, 모세관 순환 및/또는 미세순환에 대해 작용하는 작용제, 혈관신생을 자극하는 작용제, 혈관 침투성을 억제하는 작용제, 베노토닉 작용제(venotonic agent), 세포 대사에 대해 작용하는 작용제, 진피-표피 접합부를 개선시키는 작용제, 모발 성장을 유도하는 작용제, 모발 성장 억제제 또는 지연제, 모발 손실 지연제, 보존제, 향수, 체취 흡수제 및/또는 체취 차폐제, 킬레이트제, 식물 추출물, 정유, 해양 추출물, 생명공학 공정으로부터 획득된 작용제, 무기염, 세포 추출물, 일광차단제 및 자외선 A 및/또는 B 선 및/또는 적외선 A 선에 대해 활성인 유기 또는 무기 광보호제, 또는 이들의 혼합물로 형성된 군으로부터 선택되는, 미용적 또는 피부약학적 조성물.
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