CN112057478A - 一种用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，包括如下成分：EM因子1%~15%；丁二醇1~5%；甘油1~5%；D‑泛醇0.1~2%；透明质酸钠0.01~0.1%；抑菌剂：0.5~3%；纯化水补至100%。本发明提供的用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂通过添加EM因子，实现抑制过度的免疫，实现调节免疫，缓解过敏的症状，同时通过提高表皮屏障，可以降低表皮对过敏原的免疫应答，降低敏感度。而配方中添加的透明质酸钠、泛醇、多元醇等保湿剂，提高了表皮的物理屏障，进一步降低表皮敏感度，降低过敏性鼻炎的复发率。

Description

一种用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂。

背景技术

过敏性鼻炎（allergic rhinitis，简称AR），又称为变应性鼻炎，是鼻腔粘膜的应变性疾病，并可引起多种并发症。鼻炎是鼻腔粘膜和粘膜下组织的炎症表现--充血或水肿，患者经常会出现鼻塞、流清水涕、鼻痒、喉部不适以及咳嗽等症状。变应性鼻炎属非严重致命性疾病，易被忽视和低估，然而其病情反复，并可致变应性鼻窦炎、鼻息肉、哮喘和慢性支气管炎等一系列呼吸道并发症。流行病学调查显示10％～40％的AR患者合并有哮喘，还可引起许多其他重要疾病，如中耳炎和睡眠障碍等，给患者及社会造成沉重经济负担的同时，其鼻部、眼部及相关受累器官症状严重影响患者的睡眠、日常生活、体育、娱乐、工作和学习等，导致患者生活质量下降。

过敏性鼻炎的患病率在西方约为40％，据专家估计我国也接近30％，且呈逐年上升的趋势。世界卫生组织认为“全球性呼吸道变应性疾病流行呈增长状态”。目前世界上有超过10亿的变应性鼻炎患者，我国变应性鼻炎患者已超过3亿，鼻咽癌患者90%因久治不愈致癌，每年鼻咽癌癌变致死20万人以上。据有关报告显示，中国最大的500个城市中，只有不到1％的城市达到世界卫生组织推荐的空气质量标准，与此同时，世界上污染最严重的10个城市有7个在中国。全国多地频现严重雾霾天气，城市工业化进程加剧着环境的恶化，我国的鼻炎发病率已高达37%，并且每年以3%的速度递增，青少年儿童鼻炎患者占鼻炎群体的2/3，同时鼻炎每年以3%（2000万-3000万）的人数在逐渐增加。

IgE是确诊过敏的唯一临床指标，人体的免疫细胞目前区分为三类，分别是TH1、TH2和Treg。在健康状态下，TH1和TH2会互相平衡，且共同受到Treg调控。当Treg调控能力不足时或接触到某些蛋白质或细小分子（尘螨花粉或海鲜等食物后，使TH2过度活化，导致TH2细胞激素分泌量过高，就会帮助B细胞制造较多的过敏抗体IgE，因而出现过敏症状，调控因过敏而反应过高的TH2型细胞激素分泌量，进而调节免疫细胞活性平衡，可通过增进TH1型免疫反应来调控因过敏而反应过度的TH2型免疫反应的方法。

目前特异性IgE免疫疗法是惟一可能通过免疫调节机制改变过敏性鼻炎（季节性过敏性鼻炎）免疫自然进程的方式，过敏其实是人体对环境中无害的物质产生的异常免疫反应，而非一般的细菌或病毒，尤其这些过敏都属于黏膜发炎的反应。因此通过增强抗过敏的能力，增进TH1型免疫反应来调控因过敏而反应过度的TH2型免疫反应从而减少过敏性鼻炎患者血清中过高的IgE特异性抗体，缓解过敏症状，调整过敏体质，相比单纯药物抗过敏性鼻炎哮喘或皮肤荨麻疹湿疹等过敏性疾病可产生良好的整体疗效，有效的改善过敏患者的生活质量。

早在17世纪末，18世纪初，最早的显微镜被发明时，人们就已经知道人体内寄生着许许多的微生物，但是，那时的人们还没有意识到这些微生物在各种疾病的发生中扮演着怎样的角色。直到19世纪末，一些科学家们提出了微生物致病学说，他们认为许多疾病是体内微生物造成的。这个革命性的理论提出后，医学家们开始努力识别那些能引起致死性疾病的微生物，如引起细菌性肺炎和结核病的微生物。医学家们还发明了许多药物试图杀灭这些可怕的致病微生物。在这场人类与微生物进行的持久战争中，抗生素的发明可以说是人类取得伟大胜利的标志。从第二次世界大战末期开始，抗生素逐渐在世界范围内得到了广泛的应用，然而，从20世纪60年代开始，许多并非由病原微生物引发的慢性病或其它疾病的发病率急剧升高。过敏性哮喘就是一个典型的例子：没有任何证据证明感染某种病原微生物会引发哮喘，它也不具有传染性，但是在过去的40年间，其发病率却直线上升，成为儿童除呼吸道感染性疾病之后的发病率最高的常见病慢性病。

科学家们早在上世纪80年代末就开始注意这种奇怪的现象，有许多文献都提到了哮喘和过敏发病率上升的情况，但是直到最近，新的发现和新的理论才让人们意识到抗生素的滥用与这些疾病之间有着密切的关系，而且不是所有的微生物都会致病，许多事实表明，有些微生物有助于增强免疫力，可以预防或控制传统微生物致病学说无法解释的疾病。

益生菌对维持我们的健康至关重要。我们甚至认为可以把肠道内的一些微生物看做人体不可或缺的“器官”之一，无论它们所起的作用还是重要性，这些微生物完全可以和心脏、肺、肾脏等相提并论。这种器官最重要的功能 是使我们与日常生活中接触到的潜在有害微生物和平共处。如果这些微生物不能有效地发挥作用，人类也就无法保持健康，甚至无法生存。对于儿童过敏性鼻炎、过敏性哮喘、儿童湿疹、儿童荨麻疹这些常见慢性过敏性疾病，非常困扰孩子的成长，值得我们提出的是，对于儿童过敏性疾病，除了药物治疗外，益生菌抗过敏免疫疗法，强调人体微生态平衡，认为过敏时应当将身体作为一个有机的整体看待，而不仅仅关注出现症状的那一部分，对于儿童过敏性哮喘发病率增高的病因中，医生们已经意识到，婴儿出生后过早使用抗生素，成为诱发过敏性哮喘发病的重要原因之一。近十年，激素吸入剂已成为儿童过敏性咳嗽、过敏性哮喘的主要治疗手段，虽然吸入激素的治疗方法比起全身激素抗过敏副作用小，起效快，但是，我们仍然发现吸入激素的弊端，长期吸入激素的副作用以及过敏儿童治疗只局限于局部，得不到全面整个过敏反应系统的治疗，许多科学家不仅坚定地认同益生菌可以促进健康的观点，而且还发现了抗过敏的益生菌能有效平衡过敏免疫反应从而影响整个过敏性疾病的治疗进程。

目前对于过敏性鼻炎的治疗方法有以下几种：

（1）如中国发明专利ZL201210095257.0，ZL201510506962、ZL201810008829.4等通过含氯化钠等渗溶液，配合透明质酸钠等保湿剂实现，但其缓解鼻炎有限；

（2）通过施用激素以及抗组胺药物，例如服用扑尔敏、息斯敏以及强的松等口服药物，或者1%麻黄素滴鼻剂等。上述药物可以缓解症状，但有激素类药物过度使用会带来抗药性，并且会破坏屏障，从而使后续鼻炎易发；如中国发明专利ZL201710598138.X，则是通过保湿剂配合药物实现；

（3）如中国发明专利ZL201710150082.1，是通过植物提取物或者中药配方实现；

（4）如中国发明专利ZL201710536486.4、ZL201510082517.4、ZL201910005150.4，采用口服益生菌方式，通过改善肠道菌群结构方式，从而调节人体免疫的免疫系统。其主要的缺点是：益生菌存活率低、定殖困难、最终效果具有较高的不确定性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种含有益生菌提取物、具有免疫调节功能和修复屏障功能的鼻炎药物制剂。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，包括如下成分：

EM因子：1%~15%；

丁二醇 1~5%；

甘油 1~5%；

D-泛醇 0.1~2%；

透明质酸钠 0.01~0.1%；

抑菌剂：0.5~3%；

纯化水：补至100%。

优选的，用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，包括如下成分：

EM因子：5%~15%；

丁二醇 2~4%；

甘油 2~4%；

D-泛醇 0.5~2%；

透明质酸钠 0.01~0.1%；

抑菌剂：1~3%；

纯化水：补至100%。

优选的，所述用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂还含有0.5~2.5%氯化钠；进一步的，所述用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂含有1~2%氯化钠。上述药物制剂作为喷剂使用。

优选的，所述用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂还含有0.1~0.8%的卡波姆；进一步的，述用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂含有0.2~0.6%的卡波姆；所述药物制剂作为凝胶剂使用。

上述百分数均为质量百分数。

优选的，上述用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂pH为5~7。

本发明的第二方面提供了EM因子在制备治疗或预防过敏性鼻炎的药物中的应用。

本发明提供的。

附图说明

图1为EM因子对TNF-α的调节作用柱状图；

图2为不同来源的EM因子对NF-κB的调节作用；

图3为不同来源的EM因子对TEER的影响折线图。

具体实施方式

以下结合实例说明本发明，但不限制本发明。在本领域内，技术人员对本发明所做的简单替换或改进均属于本发明所保护的技术方案内。

实施例1：

将发酵乳杆菌干菌粉与无菌水混合得混合液，混合液中菌的重量为8%（w/w）。将上述混合液用超声波裂解仪进行裂解。将该裂解过的菌液用离心机以10,000g，30分钟的速度离心并收集上清液，将不溶性细菌裂解碎片和未裂解细菌再次使用超声波裂解仪进行裂解，然后离心，收集上清液。将两次收集获得的上清液合并。

将上述收集的上清液用等体积的20 mMpH8.0 Tris-HCl溶液稀释。将该稀释的上清液通过阴离子交换柱。在上样之前，阴离子交换住用10mM pH 8.0的Tris-HCl平衡液调节。当平衡液调节交换柱以后，将样品加入，用平衡液洗脱不与交换柱结合的组分，然后用10mMTris-HCl/1M 氯化钠溶液的洗脱液进行线性梯度洗脱，分别收集每一个组分（采用紫外检测器，由UV260 和UV280显示为峰）。

收集的每一个组分，用苯酚-硫酸方法测总糖含量，用BCA蛋白试剂盒测总蛋白。去除无多糖或有蛋白的组分，将其他的只含多糖的组分收集并合并作为多糖组分。

将该收集的多糖组分通过分子排阻层析，平衡液选自10mM pH 8.5的Tris-HCl溶液，并通过0.22μm滤膜过滤除不溶性杂质得到EM因子。

实施例2

将罗伊氏乳杆菌干菌粉与20mM pH 8.5的磷酸钠水溶液混合得混合液，并使混合液中菌的重量15%（w/w）。将上述菌液用组织破碎仪进行裂解。将该裂解过的菌液用离心机以13,000g的速度离心25分钟，分别收集上清液。去除不溶性细菌裂解碎片和未裂解细菌。

将上清液通过阴离子交换柱。在上样之前，阴离子交换住用20mM pH8.5的磷酸钠溶液调节，加入样品，用20 mM 磷酸钠/1M 氯化钠溶液pH 8.5的洗脱液进行线性梯度洗脱，分别收集每一个组分（用紫外检测器，由UV260 和UV280显示为峰）。

收集的每一个组分用苯酚-硫酸方法测总糖和用BCA蛋白试剂盒测总蛋白。去除无多糖或有蛋白的峰/组分，将其他的峰收集并合并作为多糖组分。

该收集的多糖组分通过分子排阻层析脱盐，平衡液和洗脱液均选自100mM pH6.5Tris-HCl溶液并通过0.22μm滤膜过滤除不溶性杂质得到EM因子。

实施例3

将植物乳球菌植物乳球菌干菌粉与无菌水混合得混合液，并使混合液中菌的重量12%（w/w）。将上述菌液用高压均质机进行裂解。将该裂解过的菌液用离心机以20,000g的速度离心10分钟，并收集上清液，去处除不溶性细菌裂解碎片和未裂解细菌。

将上述收集的上清液用等体积的20 mM pH8.2磷酸钠溶液稀释。将该稀释的上清液通过一个阴离子交换柱。在上样之前，阴离子交换住用10mM pH8.2的磷酸钠溶液，当样品附着以后，用10 mM 磷酸钠/1M 氯化钠溶液pH 8.2的洗脱液进行线性梯度洗脱，分别收集每一个组分或峰（用紫外检测器，由UV260 和UV280显示为峰）。

收集的每一个组分，用苯酚-硫酸方法测总糖和用BCA蛋白试剂盒测总蛋白。去除无糖或有蛋白的峰/组分，将其他的峰收集并合并作为多糖组分。

将该多糖组分加入到体积为多糖组分1/4的5M氯化钠溶液中，使最后的氯化钠浓度大于等于1M。并将该含多糖的组分通过疏水层析进行进一步分离。平衡液为用10 mM pH8.2磷酸钠/1M 氯化钠溶液，并收集不附着疏水层析柱的组分。当样品其他组分附着以后，用10 mM pH 8.2的磷酸钠溶液进行线性梯度洗脱，根据导电率，收集先于600mM氯化钠（按照分离设备上显示的导电性曲线来确定）洗脱的多糖组分，并与未附着组分进行合并作为有效总糖组分。

将以上多糖组分通过分子排阻层析脱盐，平衡液选自50mM pH 8的Tris-HCl溶液，并通过0.22μm滤膜过滤除菌和其他不溶性杂质得到EM因子。

实施例4

将长双歧杆菌 (Bifidobacterium longum) 干菌粉与20mM pH 8.5的磷酸钠水溶液混合得混合液，并使混合液中菌的重量10%（w/w）。将上述菌液用组织破碎仪进行裂解。将该裂解过的菌液用离心机以13,000g的速度离心25分钟，分别收集上清液。去除不溶性细菌裂解碎片和未裂解细菌。

将上清液通过阴离子交换柱。在上样之前，阴离子交换住用20mM pH8.5的磷酸钠溶液调节，加入样品，用20 mM 磷酸钠/1M 氯化钠溶液pH 8.5的洗脱液进行线性梯度洗脱，分别收集每一个组分（用紫外检测器，由UV260 和UV280显示为峰）。

收集的每一个组分用苯酚-硫酸方法测总糖和用BCA蛋白试剂盒测总蛋白。去除无多糖或有蛋白的峰/组分，将其他的峰收集并合并作为多糖组分。

该收集的多糖组分通过分子排阻层析脱盐，平衡液和洗脱液均选自100mM pH6.5Tris-HCl溶液并通过0.22μm滤膜过滤除不溶性杂质得到EM因子。

实施例5

氯化钠1%；

EM因子15%；

丁二醇 2%；

甘油 2%；

D-泛醇 0.5%；

透明质酸钠0.1%；

抑菌剂： 3%；

纯化水：补至100%；

本实施例中使用的EM因子是由实施例2制备得到。

实施例6

氯化钠2%；

EM因子8%；

丁二醇 4%；

甘油 2%；

D-泛醇1%；

透明质酸钠 0.02%；

抑菌剂：2%；

纯化水：补至100%；

本实施例中使用的EM因子是由实施例1制备得到的。

实施例7

卡波姆0.2%；

EM因子10%；

丁二醇3%；

甘油4%；

D-泛醇 0.5%；

透明质酸钠 0.05%；

抑菌剂：1.5%；

纯化水：补至100%；

本实施例中使用的EM因子是由实施例3制备得到的。

实施例8

卡波姆0.8%；

EM因子12%；

丁二醇2%；

甘油3%；

D-泛醇 0.5%；

透明质酸钠 0.08%；

抑菌剂：2%；

纯化水：补至100%；

本实施例中使用的EM因子是由实施例4制备得到的。

实施例9：EM因子能够抑制TNF-α的产生

TNF-α是炎症反应过程中出现最早、最重要的炎性介质，能激活中性粒细胞和淋巴细胞，使血管内皮细胞通透性增加，调节其他组织代谢活性并促使其他细胞因子的合成和释放。TNF-α是一种单核因子，主要由单核细胞和巨噬细胞产生，LPS是较强的刺激剂。我们利用巨噬细胞作为研究对象，研究了EM因子对TNF-α的抑制作用，据此来考量其免疫调节能力。通过在巨噬细胞内加入LPS刺激6小时后产生TNF-α，并考量加入EM因子预处理24h的细胞对LPS刺激产生TNF-α的抑制作用（通过Elisa测试TNF-α的含量）。加入100ng/ml LPS,培养6h，然后用Elisa方法测试TNF-α。结果表明：经过10%EM因子预处理的细胞组，相比单独加入LPS刺激的对照组，其TNF-α含量降低了38%，说明EM因子可以明显抑制LPS诱导的TNF-α释放（图1）。图1中NC为空白对照组，未加入任何试剂；LPS组为仅加入LPS的对照组；EM 1:20组为加入LPS及通过实施例1方法制备得到的EM因子；EM 1:10组为加入LPS及通过实施例4方法制备得到的EM因子。

实施例10：

在正常的肠上皮细胞里，NF-κB的表达处于非常低的水平，而当受到内毒素脂多糖（LPS）的刺激时，NF-κB的表达水平会急剧增高。而当使用不同的益生菌处理肠上皮细胞后，NF-κB的表达水平呈现菌种特异性地降低，且表现出剂量效应特征(图2）。其中，NCC362为B.lactis菌株，NCC2705为B. longum菌株，NCC251为B. adolescentis菌株，NCC189为B.bifidum菌株，neg为空白对照组，pos为仅加入LPS的对照组。moi=10为菌株（提取成EM因子）：细胞=10；moi=100为菌株（提取成EM因子）：细胞=100。上述菌株均按实施例4的方法制备得到EM因子。

实施例11：

图3 为不同益生菌提取物对人角质细胞跨膜电阻（TEER）的影响折线图。其中图3A为实施例1方法制备得到的EM因子，图3B为实施例2方法制备得到的EM因子，图3C为实施例3方法制备得到的EM因子，图3D为实施例4方法制备得到的EM因子。实心圆：未经过益生菌裂解液处理的角化细胞单细胞层跨膜电阻，空心圆：经益生菌提取物处理的角化细胞单细胞层跨膜电阻。

因此通过添加EM因子，实现抑制过度的免疫，实现调节免疫，缓解过敏的症状，同时通过提高表皮屏障，可以降低表皮对过敏原的免疫应答，降低敏感度。而通过产品配方优化了表皮的微生态环境，可以促进表皮益生菌或者共生菌的繁殖，抑制有害菌的定殖和生长，提升表皮免疫的自身调节能力。而配方中添加的透明质酸钠、泛醇、多元醇等保湿剂，提高了表皮的物理屏障，进一步降低表皮敏感度，降低过敏性鼻炎的复发率。

以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，其特征在于，包括如下成分：

EM因子1%~15%；

丁二醇 1~5%；

甘油 1~5%；

D-泛醇 0.1~2%；

透明质酸钠 0.01~0.1%；

抑菌剂：0.5~3%；

纯化水：补至100%。

2.如权利要求1所述的用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，其特征在于，包括如下成分：

EM因子5%~15%；

丁二醇 2~4%；

甘油 2~4%；

D-泛醇 0.5~2%；

透明质酸钠 0.01~0.1%；

抑菌剂：1~3%；

纯化水：补至100%。

3.如权利要求1或2所述的用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂中还含有0.5~2.5%的氯化钠。

4.如权利要求3所述的用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂中含有1~2%氯化钠。

5.如权利要求1或2所述的用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂还含有0.1~0.8%的卡波姆。

6.如权利要求5所述的用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂还含有0.2~0.6%的卡波姆。

7.如权利要求1或2所述的用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂，其特征在于，所述用于舒缓和预防过敏性鼻炎的药物制剂pH为5~7。

8.EM因子在制备治疗或预防过敏性鼻炎的药物中的应用。

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