BR112017005533B1

BR112017005533B1 - Compostos inibidores de fosfodiesterase 1 (pde1), composição farmacêutica que compreende os ditos compostos e usos dos mesmos no tratamento de uma doença, distúrbio, e/ou lesão do snc e no tratamento e/ou na profilaxia de uma doença, distúrbio e/ou lesão do snp

Info

Publication number: BR112017005533B1
Application number: BR112017005533-3A
Authority: BR
Inventors: Peng Li; Hailin Zheng; Jun Zhao; Lawrence Wennogle
Original assignee: Intra-Cellular Therapies, Inc
Priority date: 2014-09-17
Filing date: 2015-09-17
Publication date: 2023-10-10
Also published as: ES2857567T3; CN107106563B; EP3193878B1; US20190144460A1; IL251107A0; JP6596080B2; JP2017527598A; EP3193878A1; US20170291904A1; HK1243342A1; AU2015317527B2; CA2961212C; CN107106563A; US10150774B2; EP3725789B1; BR112017005533A2; EP3193878A4; CA2961212A1; WO2016044667A1; IL251107B

Abstract

compostos e métodos. a presente invenção refere-se, de modo geral, a compostos e métodos de tratamento e/ou profilaxia de doenças, distúrbios e/ou lesões do cns. em um aspecto, o campo se refere a inibidores de fosfodiesterase 1 (pde1) como agentes neuroprotetores e/ou agentes regenerativos neurais. em um outro aspecto, o assunto refere-se a indivíduos que estão em risco de desenvolvimento de doença ou distúrbio do cns.

Description

REFERÊNCIA REMISSIVA AOS PEDIDOS DE DEPÓSITO CORRELATOS

[001]Este Pedido internacional reivindica os pedidos provisórios norte- americanos depositados anteriormente US 62/051.735, depositado em 17 de setembro de 2014, e US 62/052,283, depositado em 18 de setembro de 2014, cada um destes está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002]O campo, em geral, se refere a compostos e métodos de tratamento e/ou profilaxia de doenças do sistema nervoso central (SNC), distúrbios e/ou lesões. Em um aspecto, o campo se refere a inibidores de fosfodiesterase 1 (PDE1) como agentes neuroprotetores e/ou agentes regenerativos neurais. Em um aspecto adicional, o campo se refere à prevenção do desenvolvimento de uma doença ou distúrbio do SNC em um indivíduo em risco de desenvolvimento de uma doença ou distúrbio do SNC.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[003]As fosfodiesterases de nucleotídeo cíclico (PDEs) infrarregulam a sinalização de cAMP e cGMP intracelular hidrolisando-se esses nucleotídeos cíclicos para seus respectivos 5’-monofosfatos (5’AMP e 5’GMP). Onze famílias de fosfodiesterases foram identificadas, mas apenas PDEs na Família I, as fosfodiesterases dependentes de Ca2+/calmodulina (CaM-PDEs), que são ativadas por Ca2+-calmodulina, revelaram mediar as vias de sinalização de cálcio e nucleotídeo cíclico (por exemplo cAMP e cGMP). Os três genes de CaM-PDE conhecidos, PDE1A, PDE1B, e PDE1C, são todo expressados no tecido do sistema nervoso central. PDE1A é expressado em todo o cérebro com níveis de expressão maiores nas camadas de CA1 a CA3 do hipocampo e cerebelo e em um nível menor no estriado. PDE1A também é expressado no pulmão e coração. PDE1B é predominantemente expressado no estriado, giro dentado, trato olfativo e cerebelo, e sua expressão está correlacionada a regiões do cérebro com altos níveis de inervação dopaminérgica. Embora PDE1B seja principalmente expressado no sistema nervoso central, o mesmo também é detectado no coração, está presente em neutrófilos e revelou estar envolvido em respostas inflamatórias dessa célula. PDE1C é expressado no epitélio olfativo, células granulares cerebelares, estriado, coração, e músculo liso vascular.

[004]CaM-PDEs exercem uma função essencial na mediação de transdução de sinal em células cerebrais, particularmente dentro de uma área do cérebro conhecida como os gânglios basais ou estriado. Por exemplo, a ativação de receptor de glutamato tipo NMDA e/ou ativação de receptor de dopamina D2 resultam em concentrações de cálcio intracelular aumentadas, resultando na ativação de efetores como quinase II dependente de calmodulina (CaMKII) e calcineurina e na ativação de CaM-PDEs, resultando em cAMP e cGMP reduzidos. A ativação de receptor de dopamina D1, por outro lado, resulta na ativação de adenilato ciclases, resultando em cAMP aumentado. Esse nucleotídeo cíclico por sua vez ativa a proteína quinase A (PKA; proteína quinase dependente de cAMP). A produção de cGMP é conhecida por ocorrer em tecidos envolvidos na função cognitiva através de várias estimulações como produção de óxido nítrico induzida por altos níveis de cálcio intracelular e para ativar subsequentemente a proteína quinase G (PKG; proteína quinase dependente de cGMP). PKG e PKA fosforilam elementos de via de transdução de sinal a jusante como DARPP-32 (dopamina e fosfoproteína regulada por cAMP) e proteína de ligação de elemento responsivo a cAMP (CREB). Por sua vez, DARPP-32 fosforilado inibe a atividade de fosfatos-1 de proteína (PP-1), dessa forma, aumentando o estado de fosforilação de proteínas de substrato como receptor de progesterona (PR), resultando na indução de respostas fisiológicas. A sinalização de receptor D1 é interrompida em esquizofrenia, contribuindo para o comprometimento cognitivo na doença. A função de cAMP e cGMP na função cognitiva foi bem estabelecida em estudos em animais. Estudos em roedores também sugeriram que a indução de síntese de cAMP e cGMP através de ativação de dopamina D1 ou receptor de progesterona acentua a sinalização de progesterona com várias respostas fisiológicas, incluindo a resposta da lordose associada à receptividade ao acasalamento em alguns roedores. Consulte, Mani, et al., Science (2000) 287: 1053, cujos conteúdos estão incorporados no presente documento a título de referência.

[005]Portanto, CaM-PDEs podem afetar as vias de sinalização reguladas por dopamina e outras nos gânglios basais (estriado), incluindo, mas não se limitando a, óxido nítrico, noradrenérgico, neurotensina, CCK, VIP, serotonina, glutamato (por exemplo, receptor de NMDA, receptor de AMPA), GABA, acetilcolina, adenosina (por exemplo, receptor A2A), receptor canabinoide, peptídeo natriurético (por exemplo, ANP, BNP, CNP), DARPP-32, e vias de sinalização intracelular de endorfina.

[006]A atividade de fosfodiesterase (PDE), em particular, atividade de fosfodiesterase 1 (PDE1), funciona no tecido cerebral como um regulador de atividade locomotora e aprendizado e memória. PDE1 é um alvo terapêutico para a regulação de vias de sinalização intracelular, de preferência, no sistema nervoso, incluindo, mas não se limitando a, um receptor de dopamina D1, receptor de dopamina D2, óxido nítrico, noradrenérgico, neurotensina, CCK, VIP, serotonina, glutamato (por exemplo, receptor NMDA, receptor AMPA), GABA, acetilcolina, adenosina (por exemplo, receptor A2A), receptor canabinoide, peptídeo natriurético (por exemplo, ANP, BNP, CNP), via de sinalização intracelular de endorfina e via de sinalização de progesterona. Por exemplo, a inibição de PDE1B deve atuar para potencializar o efeito de um agonista de dopamina D1 protegendo cGMP e cAMP contra a degradação e deve inibir similarmente as vias de sinalização de receptor de dopamina D2, inibindo a atividade de PDE1 que é uma consequência de aumentos mediados por receptor D2 em cálcio intracelular. A elevação crônica em níveis de cálcio intracelular está associada à morte celular em vários distúrbios, particularmente em doenças neurodegenerativas como Doenças de Alzheimer, Parkinson e Huntington e em distúrbios do sistema circulatório que resultam em acidente vascular cerebral e infarto do miocárdio. Portanto, os inibidores de PDE1 são potencialmente úteis em doenças caracterizadas por atividade de sinalização de receptor de dopamina D1, como doença de Parkinson, síndrome das pernas inquietas, depressão, narcolepsia e comprometimento cognitivo como comprometimento cognitivo associado à esquizofrenia. Os inibidores de PDE1 também são úteis em doenças que podem ser aliviadas pela acentuação de sinalização de progesterona como disfunção sexual feminina.

[007]Adicionalmente, neurogênese é um processo vital nos cérebros de animais e humanos, com isso, novas células nervosas são continuamente geradas ao longo da vida do organismo. As células recém-formadas são capazes de se diferenciar em células funcionais do sistema nervoso central e se integrar em circuitos neurais existentes no cérebro. Neurogênese é conhecida por persistir ao longo da idade adulta em duas regiões do cérebro de mamíferos: a zona subventricular (SVZ) dos ventrículos laterais e o giro dentado do hipocampo. Nessas regiões, as células progenitoras neurais multipotentes (NPCs) continuam a se dividir e originar novos neurônios funcionais e células gliais. Foi revelado que uma variedade de fatores pode estimular a neurogênese de hipocampo adulto, por exemplo, adrenalectomia, exercício voluntário, ambiente enriquecido, aprendizado dependente do hipocampo e antidepressivos. Outros fatores, como hormônios adrenais, estresse, idade e abuso de drogas influenciam negativamente a neurogênese.

[008]Embora a importância de neurogênese não possa ser exagerada, a incapacidade de regeneração de axônios após a lesão da medula espinhal ainda continua um dos maiores desafios enfrentados pela medicina e neurociência. Ao contrário dos axônios mielinados do sistema nervoso periférico, os axônios mielinados do sistema nervoso central não se regeneram após serem divididos. Um importante desenvolvimento, entretanto, é a identificação de proteínas inibitórias nas bainhas de mielina que circundam os axônios do SNC. Certas moléculas bioativas parecem inibir o crescimento de neurito, resultando em incapacidade de regeneração de neurônios do SNC. Mielina contém várias proteínas que revelaram inibir o fluxo de processo de neurito. NogoA, um membro da família de reticulon, foi a primeira proteína identificada como um inibidor de crescimento de neurito. O mesmo é expressado por oligodendrócitos e alguns neurônios, e pode ser encontrado tanto de forma intracelular como sobre a superfície celular (particularmente sobre as bainhas de mielina de axônios). Outras proteínas que podem contribuir para a inibição de regeneração de axônios incluem glicoproteína associada à mielina (MAG), glicoproteína oligodendrócito-mielina (OMgp) e o proteoglicano versicano.

[009]Dessa forma, parece que o ambiente do SNC limita a regeneração axonal após a lesão. De fato, a mielina do SNC foi identificada como um principal fator contribuinte para a incapacidade regenerativa. Há evidências que mostram que as proteínas do SNC presentes na bainha de mielina inibem o crescimento e regeneração axonal.

[010]Várias estratégias foram propostas para superar a inibição de regeneração axonal. Uma estratégia que tem sido eficaz é elevar os níveis de cAMP intracelular. Isso pode ser realizado de várias maneiras, como: uma lesão de condicionamento periférico, administração de análogos de cAMP, preparação com neurotrofinas ou tratamento com inibidor de fosfodiesterase rolipram (inibidor de PDE4). Os efeitos de cAMP podem ser dependentes de transcrição, e a ativação mediada por cAMP de CREB pode resultar em regulação ascendente e expressão de genes como arginase I e interleucina-6. Acredita-se que os produtos desses genes promovam regeneração axonal, isso aumenta a possibilidade de outros genes regulados por cAMP produzirem agentes adicionais que poderiam ser benéficos no tratamento de lesão da medula espinhal. Entretanto, em relação ao aumento da expressão de IL-6, uma desvantagem significativa desse mecanismo de ação pode ser que IL-6 é uma citocina pró-inflamatória potencialmente nociva, ou seja, é possível que altos níveis de IL-6 exacerbem realmente a inflamação que ocorre após a lesão da medula espinhal que poderia, então, resultar no aumento em morte celular. De fato, um fator que sustenta essa preocupação é que observou-se que os camundongos transgênicos de IL-6 têm astrogliose extensa, neurodegeneração e ruptura da barreira hematoencefálica.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[011]A invenção fornece um composto da Fórmula V:

[012]em que

[013](i)R1 é alquila C1-4 (por exemplo, metila);

[014](ii)R4 é H e R2 e R3 são, independentemente, H ou alquila C1-4

[015](por exemplo, R2 e R3 são ambos metila, ou R2 é H e R3é isopropila);

[016](iii)R5 é ligado a um dos nitrogênios na porção pirazolo da Fórmula V e é uma porção da Fórmula A

[017]em que X, Y e Z são C, e R8, R9, R11 e R12 são H, e R10 é halogênio (por exemplo, cloro), ou heteroarila opcionalmente substituído por halogênio, alquila, haloalquila, hidróxi ou carbóxi (por exemplo, piridila ou 2-halopiridila, (por exemplo, pirid-2-ila, 5-fluoropirid-2-ila ou 6-fluoropirid-2-ila)); e

[018](iv) R6 é H, alquila C1-4 (por exemplo, metila, etila ou propila), arilamino opcionalmente substituído por alquila C1-4 ou halogênio (por exemplo, fenilamino ou 4-fluorofenilamino), ou tioalquila C1-4 (por exemplo, tioetila); e

[019](v)n=0;

[020]em forma livre, de sal ou pró-fármaco, incluindo seus enantiômeros, diastereoisômeros e racematos.

[021]Em um outro aspecto, a invenção contempla que os inibidores de PDE1 (por exemplo, Fórmula V) são compostos da Fórmula V de acordo com qualquer uma das seguintes fórmulas:

[022]1.1 O composto de Fórmula V, em que R1 é metila;

[023]1.2 O composto de Fórmula V ou 1.1, em que R2 e R3 são C1-4 alquila;

[024]1.3 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.2, em que R2 e R3 são ambos metila;

[025]1.4 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.3, em que R10 é heteroarila opcionalmente substituído por halogênio;

[026]1.5 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.4, em que R10 é pirid-2-ila;

[027]1.6 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.4, em que R10 é 5-fluoro-pirid-2-ila;

[028]1.7 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.4, em que R10 é 6-fluoro-pirid-2-ila;

[029]1.8 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.7, em que R6 é alquila C1-4;

[030]1.9 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.8, em que R6 é etila;

[031]1.10 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.8, em que R6 é propila;

[032]1.11 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.7, em que R6 é arilamino opcionalmente substituído por alquila C1-4 ou halogênio;

[033]1.12 O composto de Fórmula V ou qualquer um dentre 1.1-1.7, em que R6 é 4-fluorofenilamino;

[034]1.13 Qualquer uma das fórmulas anteriores em que o composto é selecionado do grupo que consiste em

[035]em forma livre, de sal ou pró-fármaco, incluindo seus enantiômeros, diastereoisômeros e racematos.

[036]Qualquer uma das fórmulas anteriores em que o composto é selecionado de um grupo que consiste em:

[037]em forma livre, de sal ou pró-fármaco, incluindo seus enantiômeros, diastereoisômeros e racematos.

[038]Em um aspecto, inibidores de PDE1 seletivos de qualquer uma das fórmulas anteriores (por exemplo, Fórmula V ou 1.1 a 1.14) são compostos que inibem a hidrólise mediada por fosfodiesterase (por exemplo, mediada por PDE1, especialmente mediada por PDE1A ou PDE1C) de cGMP, por exemplo, os compostos preferidos têm uma IC50 menor que 1a, de preferência, menor que 500 nM, e com mais preferência, menor que 50 nM, em um ensaio PDE de reagente de partícula de afinidade com metal imobilizado, em forma livre ou salina.

[039]Uma vantagem da presente invenção é que um inibidor de PDE1 (por exemplo, um composto de qualquer Fórmula V ou 1.1 a 1.14) pode agir como um agente neuroprotetor e/ou agente neurodegenerativo. No caso de uma lesão (por exemplo, lesão da medula espinhal), doença ou distúrbio do SNC, os compostos e métodos revelados no presente documento podem ser empregados para ajudar ou melhorar o crescimento de neurito e a regeneração axonal mesmo na presença de inibidores de regeneração axonal.

[040]Sem se ater à teoria, acredita-se que pelo menos uma vantagem da presente invenção é que a administração de um inibidor de PDE1 (por exemplo, qualquer composto de Fórmula V ou 1.1 a 1.14) pode agir para aumentar os níveis de cAMP intracelular e iniciar a transcrição de genes que são necessários para superar a inibição de regeneração axonal e promover o crescimento de neurito e/ou regeneração axonal no caso de uma doença, distúrbio ou lesão do SNC. Por exemplo, cAMP intracelular aumentado, como poderia resultar da inibição de PDE1, poderia resultar em atividade aumentada de proteínas dependentes de cAMP, como proteína quinase C (PKC).

[041]Além disso, acredita-se que a administração de um inibidor de PDE1 (por exemplo, um composto de qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14) pode elevar os níveis intracelulares tanto de cAMP como de cGMP. Sem se ater à teoria, esse aumento tanto em cAMP como em cGMP pode servir para contrabalançar os efeitos potencialmente prejudiciais que podem estar associados a níveis cronicamente elevados de cálcio intracelular. Foi observado que níveis elevados de cálcio intracelular podem estar associados ao desenvolvimento de várias doenças degenerativas. Por exemplo, uma possível explicação é que os níveis elevados de cálcio intracelular (por exemplo, níveis cronicamente elevados de cálcio intracelular) resultam na ativação de PDE1, que, então, estimula a hidrólise de cAMP. A concentração reduzida de cAMP poderia, então, desativar as proteínas dependentes de cAMP como a proteína quinase C (PKC).

[042]Entretanto, sem se ater à teoria, acredita-se que outro potencial benefício da administração de um inibidor de PDE1 (por exemplo, um composto de qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14) é um aumento em cGMP intracelular. Esse aumento em cGMP intracelular pode resultar em um aumento na atividade de PKG, impedindo uma elevação adicional em níveis de cálcio intracelular. Dessa forma, sem se ater à teoria, a administração de um inibidor de PDE1 (por exemplo, um composto de qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14) poderia ter o duplo benefício de, por exemplo, exercer uma função benéfica em regeneração axonal (e/ou neuroproteção) enquanto diminui simultaneamente os efeitos prejudiciais que podem estar associados a níveis de cálcio intracelular elevados.

[043]Em uma modalidade, a invenção compreende composições e métodos para tratar ou prevenir uma doença, distúrbio ou lesão do SNC (por exemplo, lesão da medula espinhal, por exemplo, atrofia muscular espinhal, por exemplo, lesão do neurônio motor), em que o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de um inibidor de PDE1 (por exemplo, um composto de qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14) para modular níveis intracelulares de cAMP e/ou cGMP. Em uma modalidade, esse aumento em cAMP intracelular é neuroprotetor e/ou ajuda no aumento ou estimulação de neurogênese (por exemplo, o inibidor de PDE1 aumenta o crescimento de neurito e/ou regeneração axonal).

[044]Em ainda uma modalidade adicional, a invenção compreende composições e métodos para tratar ou prevenir lesões no sistema nervoso periférico (SNP) em que o método compreende a administração de um inibidor de PDE1 para aumentar os níveis intracelulares de cAMP e/ou cGMP que, tanto direta como indiretamente, aumenta a regeneração de nervos e/ou protege contra dano nervoso adicional.

[045]Em uma modalidade a invenção compreende composições e métodos para prevenir uma doença ou distúrbio do SNC em um indivíduo que está em risco de desenvolver a dita doença ou distúrbio, em que o método compreende:

[046]1). Obter uma amostra de SNC do indivíduo;

[047]2). Medir os níveis de cálcio intracelular da amostra;

[048]3). Comparar os níveis de cálcio intracelular na amostra biológica

[049]com um padrão de referência;

[050]4). Determinar se um paciente está em risco de desenvolver uma doença ou distúrbio do SNC com base no nível de cálcio intracelular em comparação com o padrão de referência;

[051]5). Administrar um inibidor de PDE1 (por exemplo, um composto de qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14) a um indivíduo com base nos níveis de cálcio intracelular do indivíduo (por exemplo, administração de um inibidor de PDE1 a um indivíduo, pois o mesmo tem níveis de cálcio intracelular elevados em comparação com o padrão de referência).

[052]Se não estiver, de outro modo, especificado ou evidente a partir do contexto, os termos a seguir no presente documento têm os seguintes significados:

[053](a) “Alquila” como usado no presente documento é uma porção de hidrocarboneto saturado ou insaturado, de preferência, saturado, de preferência, tendo um a seis átomos de carbono, essa pode ser linear ou ramificada, e pode ser opcionalmente mono-, di- ou trissubstituída, por exemplo, por halogênio (por exemplo, cloro ou fluoro), hidróxi ou carbóxi.

[054](b) “Cicloalquila” como usado no presente documento é uma porção de hidrocarboneto não aromático saturado ou insaturado, de preferência, saturado, de preferência, compreendendo três a nove átomos de carbono, pelo menos alguns desses formam uma estrutura mono ou bicíclica não aromática, ou cíclica em ponte, e essa pode ser opcionalmente substituída, por exemplo, por halogênio (por exemplo, cloro ou fluoro), hidróxi, ou carbóxi. Quando a cicloalquila contiver opcionalmente um ou mais átomos selecionados dentre N e O e/ou S, a dita cicloalquila também pode ser uma heterocicloalquila.

[055](c) “Heterocicloalquila” é, exceto onde indicado em contrário, uma porção de hidrocarboneto não aromático saturado ou insaturado, de preferência, saturado, de preferência, compreendendo três a nove átomos de carbono, pelo menos alguns desses formam uma estrutura mono ou bicíclica não aromática , ou cíclica em ponte, em que pelo menos um átomo de carbono é substituído por N, O ou S, tal heterocicloalquila pode ser opcionalmente substituída, por exemplo, por halogênio (por exemplo, cloro ou fluoro), hidróxi ou carbóxi.

[056](d) “Arila” como usado no presente documento é um hidrocarboneto aromático mono ou bicíclico, de preferência, fenila, opcionalmente substituído, por exemplo, por alquila (por exemplo, metila), halogênio (por exemplo, cloro ou fluoro), haloalquila (por exemplo, trifluorometila), hidróxi, carbóxi, ou uma arila ou heteroarila adicional (por exemplo, bifenila ou piridilfenila).

[057](e) “Heteroarila” como usado no presente documento é uma porção aromática em que um ou mais átomos que formam o anel aromático consistem em enxofre ou nitrogênio em vez de carbono, por exemplo, piridila ou tiadiazolila, essa pode ser opcionalmente substituída, por exemplo, por alquila, halogênio, haloalquila, hidróxi ou carbóxi.

[058](f) Entende-se que quando os substituintes terminam em “eno”, por exemplo, alquileno, fenileno ou arilalquileno, os ditos substituintes se destinam a fazer uma ponte ou se conectarem a outros dois substituintes. Portanto, por metileno entende-se -CH2- e por fenileno entende-se -C6H4- e por arilalquileno entende-se, por exemplo, -C6H4-CH2- ou - CH2-C6H4-.

[059]Neste relatório descritivo, exceto onde indicado em contrário, uma linguagem como “Compostos da Invenção” será entendido como abrangendo os compostos em qualquer forma, por exemplo, forma livre ou de sal de adição ácido, ou em que os compostos contêm substituintes ácidos, em forma de sal de adição básico. Os Compostos da Invenção se destinam ao uso como produtos farmacêuticos, portanto, sais farmaceuticamente aceitáveis são preferenciais. Portanto, os sais que são inadequados para usos farmacêuticos podem ser úteis, por exemplo, para o isolamento ou purificação de Compostos livres da Invenção ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, também estão incluídos.

[060]Os Compostos da Invenção, que abrangem qualquer um dos compostos revelados no presente documento, podem se apresentar sob a forma livre ou salina, por exemplo, como sais de adição ácidos. Neste relatório descritivo, exceto onde indicado em contrário, uma linguagem como “Compostos da Invenção” será entendido como abrangendo os compostos em qualquer forma, por exemplo, forma livre ou de sal de adição ácido, ou em que os compostos contêm substituintes ácidos, em forma de sal de adição básico. Os Compostos da Invenção se destinam ao uso como produtos farmacêuticos, portanto, sais farmaceuticamente aceitáveis são preferenciais. Portanto, os sais que são inadequados para usos farmacêuticos podem ser úteis, por exemplo, para o isolamento ou purificação de Compostos livres da Invenção ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, também estão incluídos.

[061]Os Compostos da Invenção também podem, em alguns casos, se apresentar sob a forma de pró-fármaco. Uma forma de pró-fármaco é um composto que se converte no corpo em um Composto da Invenção. Por exemplo, quando os Compostos da Invenção contiverem substituintes hidróxi ou carbóxi, esses substituintes podem formar ésteres fisiologicamente hidrolisáveis e aceitáveis. Como usado no presente documento, “éster fisiologicamente hidrolisável e aceitável” significa ésteres de Compostos da Invenção que são hidrolisáveis sob condições fisiológicas para produzir ácidos (no caso de Compostos da Invenção que têm substituintes hidróxi) ou álcoois (no caso de Compostos da Invenção que têm substituintes carbóxi) que os próprios são fisiologicamente toleráveis em doses que serão administradas. Portanto, em que o Composto da Invenção contém um grupo hidróxi, por exemplo, Composto-OH, o pró-fármaco de acil éster de tal composto, ou seja, Composto-O-C(O)-alquila C1-4, pode se hidrolisar no corpo para formar álcool fisiologicamente hidrolisável (Composto-OH) por um lado e ácido carboxílico por outro lado (por exemplo, HOC(O)-alquila C1-4). Alternativamente, em que o Composto da Invenção contém um ácido carboxílico, por exemplo, Composto- C(O)OH, o pró-fármaco de éster ácido de tal composto, Composto-C(O)O-alquila C14 pode se hidrolisar para formar o Composto-C(O)OH e álcool HO-alquila C1-4. Portanto, como será entendido, o termo abrange formas de pró-fármaco farmacêuticas convencionais.

[062]Em outra modalidade, a invenção apresenta uma composição farmacêutica que compreende um Composto da Invenção, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, em mistura com um veículo farmaceuticamente aceitável.

Métodos de Fabricação de Compostos da Invenção

[063]Os compostos da presente invenção e seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser produzidos usando os métodos conforme descrito e exemplificado no presente documento e por métodos similares aos mesmos e por métodos conhecidos na técnica química. Tais métodos incluem, mas não se limitam a, aqueles descritos abaixo. Se não estiverem comercialmente disponíveis, os materiais de partida para esses processos podem ser produzidos por procedimentos, que são selecionados dentre a técnica química que usa técnicas que são similares ou análogas à síntese de compostos conhecidos.

[064]Vários materiais de partida e/ou Compostos da Invenção podem ser preparados usando os métodos descritos no documento US 2008-0188492 A1, US 2010-0173878 A1, US 2010-0273754 A1, US 2010-0273753 A1, WO 2010/065153, WO 2010/065151, WO 2010/065151, WO 2010/065149, WO 2010/065147, WO 2010/065152, WO 2011/153129, WO 2011/133224, WO 2011/153135, WO 2011/153136, WO 2011/153138, US 2014/0194396, PCT/US14/30412, e cada referência está incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade.

[065]Os Compostos da Invenção incluem seus enantiômeros, diastereoisômeros e racematos, bem como seus polimorfos, hidratos, solvatos e complexos. Alguns compostos individuais dentro do escopo desta invenção podem conter ligações duplas. As representações de ligações duplas nesta invenção se destinam a incluir tanto o isômero E como o Z da ligação dupla. Além disso, alguns compostos dentro do escopo desta invenção podem conter um ou mais centros assimétricos. Esta invenção inclui o uso de qualquer um dos estereoisômeros opticamente puros bem como qualquer combinação de estereoisômeros.

[066]Também entende-se que os Compostos da Invenção abrangem seus isótipos estáveis e instáveis. Ou seja, os Compostos da Invenção abrangem a substituição ou enriquecimento de qualquer átomo, ou mais de um átomo, da estrutura por qualquer variante isotópica estável ou instável daquele átomo. Os isótopos são átomos do mesmo elemento que contêm números de nêutrons variados. Uma variante isotópica é qualquer isótopo de qualquer elemento exceto seu isótopo naturalmente mais abundante. Uma variante isotópica irá conter um ou mais adicional, ou um ou mais menos, nêutrons em comparação com o nuclídeo naturalmente mais abundante do mesmo elemento. Os isótopos podem ser estáveis (não radioativos) ou instáveis (radioativos). Por exemplo, o nuclídeo naturalmente mais abundante de carbono é 12C, e um isótopo estável conhecido de carbono é 13C. Os isótopos de um elemento, em geral, compartilham as mesmas características eletrônicas e propriedades químicas. Espera-se que a atividade de compostos que compreendem tais isótopos possa ser mantida, e tal composto também possa ter utilidade para medir a farmacocinética dos análogos não isotópicos. Por exemplo, o átomo de hidrogênio em uma ou mais posições atômicas dos Compostos da Invenção pode ser substituído por (ou enriquecido em) deutério. Exemplos de isótopos estáveis conhecidos incluem, mas não se limitam a, deutério (2H), 13C, 15 N, e 18O. Exemplos de isótopos instáveis conhecidos incluem 3H, 123I, 131I, 125I, 11C, 18F. Os isótopos instáveis podem ser úteis para estudos de radioimageamento e/ou farmacocinéticos dos compostos da invenção. Uma ou mais posições atômicas em um Composto da Invenção podem ser substituídas por ou enriquecidas em qualquer variante isotópica conhecida. As fontes naturais de produtos químicos e reagentes não são em geral isotopicamente puras, de tal modo que os Compostos da Invenção produzidos por métodos químicos tradicionais terão, em geral, alguma variação normal, natural em abundância isotópica. Por exemplo, a abundância natural do elemento carbono consiste aproximadamente em 98,93% de 12C e 1,07% de 13C. Portanto, os Compostos da Invenção produzidos por meio químico tradicional irão consistir tipicamente em cerca de 98,93% de 12C e 1,07% de 13C em cada átomo de carbono da estrutura. O enriquecimento refere-se à presença de mais do que a abundância natural de um isótopo menir em uma estrutura química. Dessa forma, por exemplo, um Composto da Invenção pode ser enriquecido quanto à presença de 13C em uma ou mais posições de átomo de carbono. Como usado no presente documento, “substituição” se refere ao enriquecimento de uma variante isotópica de mais de cerca de 95%.

[067]Os pontos de fusão não são corrigidos e “dec” indica decomposição. As temperaturas são dadas em graus Celsius (°C); exceto onde especificado em contrário, as operações são realizadas à temperatura ambiente ou do meio ambiente, ou seja, a uma temperatura na faixa de 18 a 25 °C. Cromatografia significa cromatografia em modo flash em gel de sílica; a cromatografia em camada delgada (TLC) é realizada em placas de gel de sílica. Os dados de RMN são apresentados usando valores delta dos principais prótons de diagnóstico, fornecidos em partes por milhão (ppm) em relação a tetrametilsilano (TMS) como um padrão interno. Abreviações convencionais para formato de sinal são usadas. Constantes de acoplamento (J) são dadas em Hz. Para espectro de massa (MS), o principal íon de massa mais baixa é relatado para moléculas em que a divisão de isótopo resulta em múltiplos picos espectrais de massa, as composições de mistura de solventes são fornecidas como porcentagens em volume ou razões de volume. Em casos em que os espectros de RMN são complexos, apenas os sinais de diagnóstico são relatados.

[068]Termos e abreviações:

[069]BOC = terc-butóxi carbonila

[070]BOP = Hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-óxi- tris(dimetilamino)fosfônio

[071]BuLi = n-butil lítio

[072]ButOH = álcool terc-butílico,

[073]CAN = nitrato de cério e amônio (IV),

[074]DBU = 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno,

[075]DIPEA = di-isopropiletilamina,

[076]DMF = N,N-dimetilformamida,

[077]DMSO = sulfóxido de dimetila,

[078]Et2O = éter dietílico,

[079]EtOAc = acetato de etila,

[080]equiv. = equivalente(s),

[081]h = hora(s),

[082]HPLC = cromatografia líquida de alta eficiência,

[083]LDA = diisopropilamida de lítio

[084]MeOH = metanol,

[085]NBS = N-bromosuccinimida

[086]NCS = N-clorosuccinimida

[087]NaHCO3 = bicarbonato de sódio,

[088]NH4OH = hidróxido de amônio,

[089]Pd2(dba)3 = tris[dibenzilideno acetona]dipaládio(0)

[090]PMB = p-metóxibenzila,

[091]POCl3 = oxicloreto fosforoso,

[092]SOCl2 = cloreto de tionila,

[093]TFA = ácido trifluoro-acético,

[094]TFMSA = ácido trifluorometano sulfônico

[095]THF = tetraidrofurano.

[096]Os métodos sintéticos úteis nesta invenção são ilustrados abaixo. As definições dos grupos R são conforme apresentado acima para qualquer uma das Fórmulas V ou 1.1 a 1.14, exceto onde indicado em contrário.

[097]Os compostos intermediários da fórmula IIb podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IIa com ácido malônico e anidrido acético em ácido acético, opcionalmente com aquecimento (por exemplo, a cerca de 90°C durante cerca de 3 horas):

[098]em que R1 é alquila C1-4, por exemplo, metila.

[099]Os intermediários da fórmula IIc podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IIb com um composto de cloração como POCl3, opcionalmente com pequenas quantidades de água e/ou aquecimento (por exemplo, aquecimento a cerca de 80°C durante cerca de 4 horas):

[0100]Os intermediários da fórmula IId podem ser preparados reagindo-se os compostos da fórmula IIc com, por exemplo, um reagente P1-L em um solvente como DMF, com uma base como carbonato de potássio, bicarbonato de sódio, carbonato de césio, hidróxido de sódio, trietilamina, di-isopropiletilamina ou similares, à temperatura ambiente ou com aquecimento:

[0101]em que P1 é um grupo protetor (por exemplo, PMB ou BOC); e L é um grupo de saída como halogênio, mesilato ou tosilato. De preferência, P1 é PMB e a base é carbonato de potássio.

[0102]Os intermediários da fórmula IIe podem ser preparados reagindo-se compostos da fórmula IId com hidrazina ou hidrato de hidrazina em um solvente como metanol, de preferência, com aquecimento (por exemplo, refluxo durante cerca de 4 horas):

[0103]Os intermediários da fórmula IVa podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IIe com POCl3 e DMF:

[0104]Os intermediários da fórmula IVb podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IVa com um reagente da fórmula F1-X em um solvente como DMF com uma base como carbonato de potássio à temperatura ambiente:

[0105]em que F1 é um grupo protetor (por exemplo, um grupo benzila substituída, como 4-bromobenzila), e X é um halogênio (por exemplo, Br).

[0106]Os intermediários da fórmula IVc podem ser preparados a partir de compostos da fórmula IVb removendo-se o grupo protetor P1 usando um método adequado. Por exemplo, se P1 for um grupo PMB, então, o mesmo pode ser removido com TFA/TFMSA à temperatura ambiente ou elevada, enquanto que se P1 for BOC, então, o mesmo pode ser removido usando um ácido como TFA ou ácido clorídrico aquoso:

[0107]Os intermediários da fórmula IVd podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IVc com um composto de cloração como POCl3, opcionalmente com aquecimento (por exemplo, refluxo durante 2 dias ou mais, ou irradiação de micro-ondas a 150 a 200°C durante 5 a 10 minutos em um frasco lacrado):

[0108]Os intermediários da fórmula IVe podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IVd com um álcool amino sob condição básica em um solvente como DMF, opcionalmente com aquecimento:

[0109]em que R1, R2, R3 e R4 são conforme anteriormente definido para qualquer uma das Fórmulas V ou 1.1 a 1.14.

[0110]Alternativamente, os intermediários IVe podem ser preparados diretamente a partir de compostos da fórmula IVc reagindo-se um álcool amino e um reagente de acoplamento como BOP na presença de uma base como DBU:

[0111]em que R1, R2, R3 e R4 são conforme anteriormente definido para qualquer uma das Fórmulas V ou 1.1 a 1.14.

[0112]Os intermediários da fórmula IVf podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IVe com um agente de desidratação/halogenação como SOCl2 em um solvente como diclorometano à temperatura ambiente ou com aquecimento a 35 °C:

[0113]Os intermediários da fórmula IVg podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IVf com, catalisadores como um sal de cobre e 2,2,6,6- tetrametil heptano-3,5-diona e uma base como carbonato de césio em um solvente como NMP com aquecimento:

[0114]em que, F2 é um diaril éter.

[0115]Os intermediários da fórmula IVh podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IVg com um sistema ácido, como TFA e TFMSA em um solvente como diclorometano, à temperatura ambiente:

[0116]Os intermediários da fórmula IVi podem ser preparados reagindo-se um composto da fórmula IVh com um reagente da fórmula R5-(CH2)n-L na presença de uma base como carbonato de potássio, em um solvente como DMF à temperatura ambiente:

[0117]em que n é 0, e R5 é uma porção da Fórmula A, conforme anteriormente definido para qualquer uma das Fórmulas V ou 1.1 a 1.14, e L é um grupo de saída como um halogênio (por exemplo, Br).

[0118]Os intermediários da fórmula IVj, em que X é halogênio (por exemplo, Cl), podem ser preparados reagindo-se compostos da fórmula IVi com um agente de halogenação (por exemplo, NCS ou NBS) e uma base como LiHMDS em um solvente como THF à baixa temperatura:

[0119]Os Compostos da Invenção pode, então, ser preparados a partir de compostos da Fórmula IVj por métodos conhecidos pelos versados na técnica. Por exemplo, mediante o deslocamento do halogênio X com uma arilamina ou um alquilmercaptano.

Métodos de Uso de Compostos da Invenção

[0120]A invenção fornece adicionalmente o Método I, em que o Método I compreende a profilaxia e/ou tratamento de doenças, distúrbios e lesões do sistema nervoso central, em que o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de um inibidor de PDE1 (por exemplo, qualquer composto da Fórmula V ou 1.1 a 1.14) para modular o nível de cAMP intracelular.

[0121]Por exemplo, o Método I também inclui:

[0122]1,1. Método I, em que a administração do inibidor de PDE1 aumenta o crescimento ou regeneração axonal, e/ou retarda ou reverte a perda de tais células em uma condição neurodegenerativa.

[0123]1,2. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a doença, distúrbio ou lesão do SNC, refere-se dano que direta ou indiretamente afeta o funcionamento normal do SNC.

[0124] 1,3. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a doença, distúrbio ou lesão do SNC pode ser um comprometimento estrutural, físico ou mecânico e pode ser causado por impacto físico, por exemplo, esmagamento, compressão ou estiramento de fibras nervosas.

[0125] 1,4. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a doença, distúrbio ou lesão do SNC é uma lesão da medula espinhal.

[0126]1,5. Método de 1.4, em que o inibidor de PDE1 retarda ou detém a progressão da lesão da medula espinhal.

[0127] 1,6. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 retarda ou detém a degradação de filamento axonal.

[0128] 1,7. Qualquer Método-I anterior, et seq. em que a doença, distúrbio ou lesão do SNC se refere a trauma de neurônio motor.

[0129] 1,8. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a doença, distúrbio ou lesão é selecionado a partir do grupo que consiste em: traumas e lesões neurológicas, trauma e/ou lesão relacionado a cirurgias, lesão e trauma retinal, lesão relacionada à epilepsia, lesão de medula espinhal, lesão cerebral, cirurgia cerebral, lesão cerebral relacionada a trauma, trauma relacionado à lesão de medula espinhal, lesão cerebral relacionada a tratamento para câncer, lesão da medula espinhal relacionada a tratamento para câncer, lesão cerebral relacionada a infecções, lesão cerebral relacionada a inflamações, lesão da medula espinhal relacionada a infecções, lesão da medula espinhal relacionada a inflamações, lesão cerebral relacionada a toxinas ambientais, e lesão da medula espinhal relacionada a toxinas ambientais.

[0130] 1,9. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a doença, distúrbio ou lesão do SNC inclui fibras neuronais ou nervosas destruídas ou degradadas por uma doença (por exemplo, Doença de Parkinson), um desequilíbrio químico, ou uma disfunção fisiológica como anoxia (por exemplo, acidente vascular cerebral), aneurisma ou lesão por reperfusão.

[0131]1,10. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a doença, distúrbio ou lesão do SNC é um distúrbio neurodegenerativo.

[0132]1,11. Método de 1.10, em que a doença, distúrbio ou lesão neurodegenerativa é selecionada a partir do grupo que consiste em: Doença de Alzheimer, Esclerose Múltipla, Atrofia Muscular Espinhal, Glaucoma, Demência Frontotemporal, Demência com corpos de Lewy, Degeneração corticobasal, Paralisia supranuclear progressiva, Doenças priônicas, Doença de Huntington, Atrofia de múltiplos sistemas, Doença de Parkinson, Esclerose lateral amiotrófica, Parapareia espástica hereditária, Atrofias espinocerebelares , Ataxia de Friedreich, amiloidose, distúrbios relacionados ao metabolismo (diabetes), distúrbios relacionados à Toxina, inflamação crônica do SNC, doença de Charcot Marie Tooth, neuropatia diabética, lesão devido à quimioterapia para câncer (por exemplo, alcaloides de vinca e doxorrubicina), Isquemia associada a acidente vascular cerebral e distúrbios neurológicos incluindo, mas não se limitando a, vários distúrbios neuropáticos e neurológicos periféricos relacionados à neurodegeneração incluindo, mas não se limitando a, neuralgia do trigêmeo, neuralgia glossofaríngea, paralisia de Bell, miastenia grave, distrofia muscular, esclerose lateral amiotrófica, Atrofia muscular progressiva, atrofia muscular hereditária bulbar progressiva, síndromes de disco vertebral com hérnia, ruptura de prolapsado, espondilose cervical, distúrbios do plexo, síndromes de destruição da saída torácica, neuropatias periféricas como aquelas causadas por exemplo, chumbo, acrilamidas, gama dicetonas, dissulfeto de carbono, dapsona, carrapatos, porfiria e síndrome de Gullain-Barre.

[0133]1,12. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a doença, distúrbio ou lesão do SNC é uma lesão do SNC, uma convulsão ou lesão devido a convulsões (por exemplo, convulsões epilépticas), lesão por radiação, lesão devido à quimioterapia e/ou acidente vascular cerebral ou outra lesão isquêmica.

[0134]1,13. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a administração do inibidor de PDE1 é usada para restaurar, substituir e/ou suplementar neurônios e/ou células gliais.

[0135]1,14. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 é administrado a um indivíduo ou um paciente que precisa do mesmo.

[0136]1,15. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 eleva o nível ou expressão de cAMP intracelular.

[0137]1,16. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 diminui o nível ou expressão de cAMP intracelular.

[0138]1,17. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que o PDE1 modula a atividade de PKA ou PKG.

[0139]1,18. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 aumenta a atividade de PKA ou PKG.

[0140]1,19. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a administração do inibidor de PDE1 aumenta o nível tanto de cAMP como de cGMP.

[0141]1,20. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a administração do inibidor de PDE1 eleva o nível de cAMP intracelular, e em que esse nível aumentado de cAMP intracelular tem efeitos neuroprotetores e/ou neurodegenerativos.

[0142]1,21. Qualquer Método-I anterior, et seq., que compreende a administração de uma quantidade eficaz do inibidor de PDE1 a um paciente que sofre de uma doença ou distúrbio relacionado a níveis de cálcio intracelular elevados (por exemplo, cronicamente elevados), e em que o inibidor de PDE1 impede um aumento adicional nos ditos níveis de cálcio.

[0143]1,22. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 é administrado tanto individualmente como em combinação com outro agente ativo.

[0144]1,23. Qualquer Método-I anterior, et seq., em que a doença, distúrbio, ou lesão é relacionada a neurônios motores, e em que a doença, distúrbio, ou lesão de neurônio motor é Esclerose Múltipla.

[0145]1,24. Qualquer Método-II anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 é administrado em combinação com outro agente ativo para tratar Esclerose Múltipla.

[0146]1,25. O método de 2.11, em que o agente ativo é selecionado a partir do grupo que consiste em: Interferon, acetato de Glatiramer, Natalizumab, Gilenya® (fingolimod), Fampyra®, imunosupressores e corticoides.

[0147]Em uma outra modalidade, a invenção fornece o Método II, em que o Método II compreende composições e métodos de tratamento ou profilaxia de uma doença, distúrbio ou lesão do sistema nervoso periférico (SNP), em que o método compreende a administração de uma quantidade eficaz de um inibidor de PDE1 (por exemplo, qualquer composto da Fórmula V ou 1.1 a 1.14) para aumentar os níveis intracelulares de cAMP.

[0148]Por exemplo, o Método II também inclui:

[0149] 2,1. Método II, em que a doença, distúrbio ou lesão do SNP refere-se a dano que afeta direta ou indiretamente o funcionamento normal do SNC.

[0150] 2,2. Qualquer Método-II anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 é administrado a um indivíduo ou um paciente que precisa do mesmo.

[0151] 2,3. Qualquer Método-II anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 eleva o nível ou expressão de cAMP intracelular.

[0152] 2,4. Qualquer Método-II anterior, et seq., em que o PDE1 (por exemplo, direta ou indiretamente) modula a atividade de PKA e/ou PKG.

[0153] 2,5. Qualquer Método-II anterior, et seq., em que o PDE1 (por exemplo, direta ou indiretamente) aumenta a atividade de PKA e/ou PKG.

[0154] 2,6. Qualquer Método-II anterior, et seq., em que a administração do inibidor de PDE1 aumenta o nível de cAMP e/ou cGMP.

[0155] 2,7. Qualquer Método-II anterior, et seq., em que a administração do inibidor de PDE1 eleva o nível de cAMP intracelular, e em que esse nível aumentado de cAMP intracelular protege as fibras nervosas, regenera as fibras nervosas ou promove o crescimento de fibras nervosas (por exemplo, regeneração axonal).

[0156] 2,8. Qualquer Método-II anterior, et seq., que compreende a administração de uma quantidade eficaz do inibidor de PDE1 a um paciente que sofre de uma doença ou distúrbio relacionado a níveis de cálcio intracelular elevados (por exemplo, cronicamente elevados).

[0157] 2,9. Qualquer Método-II anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 é administrado tanto individualmente como em combinação com outro agente ativo.

[0158]2,10. O método de 2.9, em que o agente ativo é selecionado a partir do IGF (por exemplo, IGF-1) ou um esteroide.

[0159]2,11. Qualquer Método-II anterior, et seq. em que a doença, distúrbio, ou lesão do SNP é selecionada a partir do grupo que consiste em: neuropatia (por exemplo, neuropatia periférica, neuropatia autonômica e mononeuropatia), ciática, síndrome do túnel carpal, polineuropatia, neuropatia diabética, neuralgia pós- herpética e síndrome de saída torácica.

[0160]Em uma outra modalidade, a invenção fornece o Método III em que o Método III compreende composições e métodos para prevenir uma doença ou distúrbio do SNC em um indivíduo que está em risco de desenvolver a dita doença ou distúrbio, em que o método compreende:

[0161]1). Obter uma amostra do indivíduo;

[0162]2). Medir os níveis de cálcio intracelular da amostra;

[0163]3). Comparar os níveis de cálcio intracelular na amostra biológica com um padrão de referência;

[0164]4). Determinar se um paciente está em risco de desenvolver uma doença ou distúrbio do SNC com base no nível de cálcio intracelular em comparação com o padrão de referência;

[0165]5). Administrar um inibidor de PDE1 (por exemplo, um composto de qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14) a um indivíduo com base nos níveis de cálcio intracelular do indivíduo (por exemplo, administração de um inibidor de PDE1 a um indivíduo, pois o mesmo tem níveis de cálcio intracelular elevados em comparação com o padrão de referência).

[0166]Por exemplo, o Método III também inclui:

[0167]3,1. Método III, em que a amostra é uma amostra biológica.

[0168] 3,2. Qualquer Método-III anterior, et seq., em que os níveis de cálcio intracelular do paciente são medidos usando uma sonda fluorescente química.

[0169] 3,3. Qualquer Método-III anterior, et seq., em que os níveis de cálcio intracelular do paciente são elevados em comparação com um controle (por exemplo, padrão de referência).

[0170] 3,4. Qualquer Método-III anterior, et seq., em que um inibidor de PDE1 é administrado a um paciente que revela ter níveis de cálcio intracelular elevados em comparação com um controle (por exemplo, padrão de referência).

[0171] 3,5. Qualquer Método-III anterior, et seq., em que a administração de um inibidor de PDE1 retarda ou impede o desenvolvimento de uma doença ou distúrbio do SNC e/ou SNP, em que a doença ou distúrbio do SNC é um que está correlacionado a níveis de cálcio intracelular elevados (por exemplo, cronicamente elevados).

[0172] 3,6. Qualquer Método-III anterior, et seq., em que a administração de um inibidor de PDE1 diminui a probabilidade de um indivíduo desenvolver uma doença ou distúrbio do SNC e/ou SNP, em que a doença ou distúrbio do SNC e/ou SNP é um que está correlacionado a níveis de cálcio intracelular elevados (por exemplo, cronicamente elevados) de cálcio intracelular (por exemplo, qualquer uma das doenças, distúrbios ou lesões mencionadas no Método I, et seq., e Método II, et seq.).

[0173] 3,7. Qualquer Método-III anterior, et seq., em que o método compreende opcionalmente medir os níveis de cAMP ou cGMP intracelular do paciente .

[0174] 3,8. Qualquer Método-III anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 é administrado tanto individualmente como em combinação com outro agente ativo.

[0175] 3,9. Qualquer Método-III anterior, et seq., em que o inibidor de PDE1 é administrado devido ao fato de um paciente ter baixos níveis de cAMP e/ou cGMP em comparação com um indivíduo de controle.

[0176]Os Compostos da Invenção são úteis no tratamento de doenças caracterizadas por ruptura ou dano de vias mediadas por cAMP e cGMP, por exemplo, como resultado de expressão aumentada de PDE1 ou expressão reduzida de cAMP e cGMP devido à inibição ou níveis reduzidos de indutores de síntese de nucleotídeos cíclicos, como dopamina e óxido nítrico (NO). Impedindo-se a degradação de cAMP e cGMP por PDE1, dessa forma, aumentando-se os níveis intracelulares de cAMP e cGMP, os Compostos da Invenção potenciam a atividade de indutores de síntese de nucleotídeo cíclico.

[0177]Em uma outra modalidade, a invenção também fornece métodos de tratamento, em que o método compreende administrar uma quantidade eficaz de um inibidor de PDE1 (por exemplo, qualquer composto da Fórmula V ou 1.1 a 1.14) para tratar qualquer uma ou mais das seguintes condições:

[0178](i) Doenças neurodegenerativas, incluindo doença de Parkinson, perna inquieta, tremores, discinesias, doença de Huntington, doença de Alzheimer e distúrbios de movimento induzido por fármaco;

[0179](ii) Distúrbios mentais, incluindo depressão, distúrbio de déficit de atenção, distúrbio de hiperatividade e déficit de atenção, transtorno bipolar,ansiedade, transtornos do sono, por exemplo, narcolepsia, comprometimento cognitivo, por exemplo, comprometimento cognitivo de esquizofrenia, demência, síndrome de Tourette, autismo, síndrome do X frágil, retirada de psicosetimulantes e dependência de drogas;

[0180](iii) Distúrbios de circulação e cardiovasculares, incluindo doença cerebrovascular, acidente vascular cerebral, doença cardíaca congestiva, hipertensão, hipertensão pulmonar, por exemplo, hipertensão arterial pulmonar e disfunção sexual, incluindo doenças cardiovasculares e distúrbios relacionados como descrito no Pedido internacional n° PCT/US2014/16741, cujos conteúdos estão incorporados no presente documento a título de referência;

[0181](iv) Distúrbios respiratórios e inflamatórios, incluindo asma, doença pulmonar obstrutiva crônica e rinite alérgica, bem como doenças autoimunes e inflamatórias;

[0182](v) As doenças que podem ser aliviadas pelo aumento de sinalização de progesterona como disfunção sexual feminina;

[0183](vi) Uma doença ou distúrbio como psicose, glaucoma, ou pressão intraocular elevada;

[0184](vii) Lesão cerebral traumática;

[0185](viii) Qualquer doença ou condição caracterizada por baixos níveis de cAMP e/ou cGMP (ou inibição de vias de sinalização de cAMP e/ou cGMP) em células que expressam PDE1; e/ou

[0186](ix) Qualquer doença ou condição caracterizada por atividade de sinalização de receptor de dopamina D1 reduzida,

[0187]contendo uma quantidade eficaz de um Composto da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer um dentre (por exemplo, qualquer composto da Fórmula V ou 1.1 a 1.14), em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável ou de pró-fármaco, a um paciente humano ou animal em necessidade do mesmo.

[0188]Em um aspecto, a invenção apresenta métodos de tratamento ou profilaxia de narcolepsia. Nessa modalidade, os inibidores de PDE1 (por exemplo, qualquer composto da Fórmula V ou 1.1 a 1.14) podem ser usados como um único agente terapêutico, mas também podem ser usados em combinação ou para coadministração com outros agentes ativos. Dessa forma, a invenção compreende adicionalmente um método de tratamento de narcolepsia que compreende administrar de forma simultânea, sequencial ou contemporânea quantidades terapeuticamente eficazes de

[0189](i) um inibidor de PDE1, por exemplo, um composto de acordo com qualquer um dentre (por exemplo, qualquer composto da Fórmula V ou 1.1 a 1.14), e

[0190](ii) um composto para promover a vigília ou regular o sono, por exemplo, selecionado dentre (a) estimulantes do sistema nervoso central- anfetaminas e compostos semelhantes à anfetamina, por exemplo, metilfenidato, dextroanfetamina, metanfetamina, e pemolina; (b) modafinila, (c) antidepressivos, por exemplo, tricíclicos (incluindo imipramina, desipramina, clomipramina e protriptilina) e inibidor seletivo da recaptação de serotonina (incluindo fluoxetina e sertralina); e/ou (d) gama hidroxibutirato (GHB),

[0191]em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável ou de pró- fármaco, a um paciente humano ou animal em necessidade do mesmo.

[0192]Em um outro aspecto, a invenção apresenta adicionalmente métodos de tratamento ou profilaxia de uma condição que pode ser aliviada pelo aumento da sinalização de progesterona que compreende administrar uma quantidade eficaz de um Composto da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer Fórmula V ou 1.1 a 1.14, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco, a um paciente humano ou animal em necessidade do mesmo. As doenças e condições que podem ser melhoradas por aumento de sinalização de progesterona incluem, mas não se limitam a, disfunção sexual feminina, amenorreia secundária (por exemplo, amenorreia associada a exercícios, anovulação, menopausa, sintomas da menopausa, hipotireoidismo), síndrome pré-menstrual, parto prematuro, infertilidade, por exemplo, infertilidade por aborto espontâneo repetido, ciclos menstruais irregulares, sangramento uterino anormal, osteoporose, doença autoimune, esclerose múltipla, aumento da próstata, câncer de próstata e hipotireoidismo. Por exemplo, aumentando-se sinalização de progesterona, os inibidores de PDE1 podem ser usados para estimular a implantação de óvulos através de efeitos sobre o revestimento do útero, e para ajudar a manter a gravidez em mulheres que são propensas a aborto espontâneo devido à resposta imunológica à gravidez ou à baixa função da progesterona. Os inibidores de PDE1 inovadores, por exemplo, conforme descrito no presente documento, também podem ser úteis para aumentar a eficácia de terapia de reposição hormonal, por exemplo, administrados em combinação com estrogênio/estradiol/estriol e/ou progesterona/progestinas em mulheres no período pós-menopausa, e hiperplasia endometrial induzida por estrogênio e carcinoma. Os métodos da invenção também são úteis para reprodução animal, por exemplo, para induzir a receptividade sexual e/ou cio em um mamífero do sexo feminino não humano que será reproduzido.

[0193]Nesse aspecto, os inibidores de PDE1 podem ser usados nos métodos anteriores de tratamento ou profilaxia como um único agente terapêutico, mas também podem ser usados em combinação ou para coadministração com outros agentes ativos, por exemplo, em conjunto com terapia de reposição hormonal. Dessa forma, a invenção compreende adicionalmente um método de tratamento de distúrbios que podem ser melhorados por aumento de sinalização de progesterona que compreende administrar de forma simultânea, sequencial ou contemporânea quantidades terapeuticamente eficazes de

[0194](i) um inibidor de PDE1, por exemplo, um composto de acordo com a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, e

[0195](ii) um hormônio, por exemplo, selecionado a partir de estrogênio e análogos de estrogênio (por exemplo, estradiol, estriol, estradiol ésteres) e análogos de progesterona e progesterona (por exemplo, progestinas)

[0196]em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável ou de pró- fármaco, a um paciente humano ou animal em necessidade do mesmo.

[0197]A invenção também apresenta um método para aumentar ou potencializar a atividade de sinalização intracelular de dopamina D1 em uma célula ou tecido que compreende colocar a dita célula ou tecido em contato com uma quantidade de um Composto da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável ou de pró-fármaco, suficiente para inibir a atividade de PDE1.

[0198]A invenção também apresenta um método para tratar um distúrbio relacionado a PDE1, um distúrbio de via de sinalização intracelular de receptor de dopamina D1, ou distúrbios que podem ser aliviados pelo aumento da via de sinalização de progesterona em um paciente em necessidade do mesmo que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um Composto da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável ou pró-fármaco, que inibe PDE1, em que a atividade de PDE1 modula a fosforilação de DARPP-32 e/ou o receptor de GluR1 AMPA.

[0199]Em um outro aspecto, a invenção também apresenta um método para o tratamento de glaucoma ou pressão intraocular elevada que compreende a administração tópica de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de PDE1 da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, em um veículo oftalmicamente compatível ao olho de um paciente em necessidade do mesmo. Entretanto, o tratamento pode incluir alternativamente uma terapia sistêmica. A terapia sistêmica inclui tratamento que pode atingir diretamente a corrente sanguínea, ou métodos de administração oral, por exemplo.

[0200]A invenção apresenta adicionalmente uma composição farmacêutica para uso oftálmico tópico que compreende um inibidor de PDE1; por exemplo, uma solução, suspensão, creme ou pomada oftálmica que compreende um Inibidor de PDE1 da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, em forma de sal livre ou oftalmicamente aceitável, em combinação ou associação a um diluente ou veículo oftalmicamente aceitável.

[0201]Opcionalmente, o inibidor de PDE1 (por exemplo, qualquer um dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14) pode ser administrado sequencial ou simultaneamente com um segundo fármaco útil para o tratamento de glaucoma ou pressão intraocular elevada. Quando dois agentes ativos são administrados, a quantidade terapeuticamente eficaz de cada agente pode estar abaixo da quantidade necessária para atividade como monoterapia. Consequentemente, uma quantidade sublimiar (ou seja, uma quantidade abaixo do nível necessário para eficácia como monoterapia) pode ser considerada terapeuticamente eficaz e também pode ser chamada alternativamente como uma quantidade eficaz. De fato, uma vantagem de administrar agentes diferentes com mecanismos diferentes de ação e perfis de efeito colateral diferentes pode ser reduzir a dosagem e efeitos colaterais de cada ou ambos os agentes, bem como aumentar ou potencializar sua atividade como monoterapia.

[0202]Dessa forma, a invenção apresenta o método de tratamento de uma condição selecionada dentre glaucoma e pressão intraocular elevada que compreende administrar a um paciente em necessidade no mesmo uma quantidade eficaz, por exemplo, uma quantidade sublimiar, de um agente conhecido por reduzir a pressão intraocular de forma concomitante, simultânea ou sequencial com uma quantidade eficaz, por exemplo, uma quantidade sublimiar, de um Inibidor de PDE1 da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, de modo que a quantidade do agente conhecida por reduzir a pressão intraocular e a quantidade do inibidor de PDE1 em combinação seja eficaz para tratar a condição.

[0203]Em um aspecto, um ou ambos os agentes são administrados topicamente ao olho. Dessa forma, a invenção apresenta um método para reduzir os efeitos colaterais de tratamento de glaucoma ou pressão intraocular elevada administrando-se uma dose reduzida de um agente conhecido por reduzir a pressão intraocular de forma concomitante, simultânea ou sequencial com uma quantidade eficaz de um inibidor de PDE1. Entretanto, métodos exceto administração tópica, como administração terapêutica sistêmica, também podem ser usados.

[0204]O agente ou agentes adicionais opcionais para uso em combinação com um inibidor de PDE1 podem, por exemplo, ser selecionados a partir dos fármacos existentes compreendem tipicamente a instilação de uma prostaglandina, pilocarpina, epinefrina, ou tratamento tópico com betabloqueador, por exemplo, com timolol, bem como inibidores sistemicamente administrados de anidrase carbônica, por exemplo, acetazolamida. Inibidores de colinesterase como fisostigmina e ecotiopato podem também ser empregados e ter um efeito similar àquele de pilocarpina. Dessa forma, os fármacos atualmente usados para tratar glaucoma incluem, por exemplo,

[0205]1. Análogos de prostaglandina como latanoprosta (Xalatan), bimatoprosta (Lumigan) e travoprosta (Travatan), que aumentam o fluxo uveoscleral de humor aquoso. Bimatoprosta também aumenta o fluxo trabecular.

[0206]2. Antagonistas de receptor beta-adrenérgico tópicos como timolol, levobunolol (Betagan), e betaxolol, que reduzem a produção de humor aquoso pelo corpo ciliar.

[0207]3. Agonistas alfa2-adrenérgicos como brimonidina (Alphagan), que operam por um mecanismo duplo, reduzindo a produção aquosa e aumentando o fluxo uveoscleral.

[0208]4. Simpatomiméticos menos seletivos como epinefrina e dipivefrina (Propina) aumentam o fluxo de humor aquoso através de malha trabecular e possivelmente através de via de fluxo uveoscleral, provavelmente por uma ação de beta2-agonista.

[0209]5. Agentes mióticos (para-simpatomiméticos) como pilocarpina operam por contração do músculo ciliar, comprimindo a malha trabecular e permitindo o fluxo aumentado do humor aquoso.

[0210]6. Os inibidores de anidrase carbônica como dorzolamida (Trusopt), brinzolamida (Azopt), acetazolamida (Diamox) reduzem a secreção de humor aquoso inibindo a anidrase carbônica no corpo ciliar.

[0211]7. Fisostigmina também é usado para tratar glaucoma e retardo do esvaziamento gástrico.

[0212]Por exemplo, a invenção apresenta composições farmacêuticas que compreendem um Inibidor de PDE1 da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, e um agente selecionado dentre (i) os prostanoides, unoprostona, latanoprosta, travoprosta ou bimatoprosta; (ii) um agonista alfa- adrenérgico como brimonidina, apraclonidina ou dipivefrina e (iii) um agente muscarínico, como pilocarpina, em combinação ou associação a um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Por exemplo, a invenção apresenta formulações oftálmicas que compreendem um Inibidor de PDE-1 da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, juntamente com bimatoprosta, abrimonidina, brimonidina, timolol, ou combinações dos mesmos, em forma de sal livre ou oftalmicamente aceitável, em combinação ou associação a um diluente ou veículo oftalmicamente aceitável. Além de selecionar uma combinação, entretanto, um versado na técnica pode selecionar um agonista ou antagonista de subtipo de receptor seletivo adequado. Por exemplo, para agonista alfa-adrenérgico, pode ser selecionado um agonista seletivo para um receptor alfa 1 adrenérgico, ou um agonista seletivo para um receptor alfa 2 adrenérgico como brimonidina, por exemplo. Para um antagonista de receptor beta- adrenérgico, pode ser selecionado um antagonista seletivo para βi, ou β2, ou ββ, dependendo da aplicação terapêutica adequada. Também pode ser selecionado um agonista muscarínico seletivo para um subtipo de receptor particular como M1-M5.

[0213]O inibidor de PDE1 pode ser administrado sob a forma de uma composição oftálmica, que inclui uma solução, creme ou pomada oftálmica. A composição oftálmica pode incluir adicionalmente um agente de redução de pressão intraocular.

[0214]Em ainda outro exemplo, os inibidores de PDE1 revelados podem ser combinados com uma quantidade sublimiar de um agente de redução de pressão intraocular que pode ser uma solução oftálmica de bimatoprosta, uma solução oftálmica de tartarato de brimonidina, ou solução oftálmica de tartarato de brimonidina/maleato de timolol.

[0215]Além dos métodos mencionados acima, também constatou-se surpreendentemente que os inibidores de PDE1 (por exemplo, qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14) são úteis para tratar psicose, por exemplo, quaisquer condições caracterizadas por sintomas psicóticos como alucinações, delírios paranoicos ou bizarros, ou fala e pensamento desorganizados, por exemplo, esquizofrenia, distúrbio esquizoafetivo, distúrbio esquizofreniforme, distúrbio psicótico, distúrbio delirante, e mania, como em episódios maníacos agudos e distúrbio bipolar. Sem se ater à teoria, acredita-se que fármacos antipsicóticos típicos e atípicos como clozapina principalmente têm sua atividade antagonística no receptor de dopamina D2. Os inibidores de PDE1, entretanto, atuam principalmente para aumentar a sinalização no receptor de dopamina D1. Aumentando-se a sinalização de receptor D1, os inibidores de PDE1 podem acentuar a função de receptor de NMDA em várias regiões do cérebro, por exemplo, em neurônios de núcleo acumbente e no córtex pré-frontal. Essa acentuação de função pode ser observada, por exemplo, em receptores de NMDA contendo a subunidade NR2B, e pode ocorrer, por exemplo, através da ativação da família de Src e proteína quinase A de quinases.

[0216]Portanto, a invenção apresenta um método novo para o tratamento de psicose, por exemplo, esquizofrenia, distúrbio esquizoafetivo, distúrbio esquizofreniforme, distúrbio psicótico, distúrbio delirante e mania, como em episódios maníacos agudos e distúrbio bipolar, que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um Inibidor de fosfodiesterase-1 (PDE1) da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, a um paciente em necessidade do mesmo.

[0217]Os inibidores de PDE1 podem ser usados nos métodos anteriores de tratamento ou profilaxia como um único agente terapêutico, mas também podem ser usados em combinação ou para coadministração com outros agentes ativos. Dessa forma, a invenção compreende adicionalmente um método para tratar psicose, por exemplo, esquizofrenia, distúrbio esquizoafetivo, distúrbio esquizofreniforme, distúrbio psicótico, distúrbio delirante e mania, que compreende administrar de forma simultânea, sequencial ou contemporânea quantidades terapeuticamente eficazes de:

[0218](i) um inibidor de PDE1 da invenção, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável; e

[0219](ii) um antipsicótico, por exemplo,

[0220]Antipsicóticos típicos, por exemplo,

[0221]Butirofenonas, por exemplo, Haloperidol (Haldol, Serenace), Droperidol (Droleptan);

[0222]Fenotiazinas, por exemplo, Clorpromazina (Tohrazine, Largactil), Flufenazina (Prolixin), Perfenazina (Trilafon), Proclorperazina (Compazine), Tioridazina (Mellaril, Melleril), Trifluoperazina (Stelazine), Mesoridazina, Periciazina, Promazina, Triflupromazina (Vesprin), Levomepromazina (Nozinan), Prometazina (Phenergan), Pimozidae (Orap);

[0223]Tioxantenos, por exemplo, Clorprotixeno, Flupentixol (Depixol, Fluanxol), Tiotixeno (Navane), Zuclopentixol (Clopixol, Acuphase);

[0224]Antipsicóticos atípicos, por exemplo,

[0225]Clozapina (Clozaril), Olanzapina (Zyprexa), Risperidona (Risperdal), Quetiapina (Seroquel), Ziprasidona (Geodon), Amisulprida (Solian), Paliperidona (Invega), Aripiprazol (Abilify), Bifeprunox; norclozapina,

[0226]em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, a um paciente em necessidade do mesmo.

[0227]Em uma modalidade particular, os Compostos da Invenção são particularmente úteis para o tratamento ou profilaxia de esquizofrenia.

[0228]Os compostos da Invenção, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, são particularmente úteis para o tratamento de doença de Parkinson, esquizofrenia, narcolepsia, glaucoma e disfunção sexual feminina.

[0229]Em ainda um outro aspecto, a invenção apresenta um método para prolongar ou aumentar o crescimento dos cílios administrando-se uma quantidade eficaz de um análogo de prostaglandina, por exemplo, bimatoprosta, de forma concomitante, simultânea ou sequencial com uma quantidade eficaz de um inibidor de PDE1 da Invenção, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, ao olho de um paciente em necessidade do mesmo.

[0230]Em ainda um outro aspecto, a invenção apresenta um método para o tratamento ou profilaxia de lesão cerebral traumática que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um Inibidor de PDE1 da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, a um paciente em necessidade do mesmo. A lesão traumática cerebral (TBI) abrange lesão primária bem como lesão secundária, incluindo tanto lesões cerebrais focais como difusas. As lesões secundárias são múltiplas cascatas interativas e interdependentes paralelas de reações biológicas que surgem de processos subcelulares diferentes (por exemplo, toxicidade devido a espécies reativas de oxigênio, superestimulação de receptores de glutamato, influxo excessivo de regulação ascendente de cálcio e inflamatória) que são causados ou exacerbados pela resposta e progresso inflamatório após a lesão inicial (primária).

[0231]A presente invenção também fornece

[0232](i) um Composto da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, como descrito anteriormente, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, por exemplo, para uso em qualquer método ou no tratamento de qualquer doença ou condição como anteriormente apresentado,

[0233](ii) o uso de um Composto da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, como descrito anteriormente, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável (na fabricação de um medicamento) para tratar qualquer doença ou condição como anteriormente apresentado,

[0234](iii) uma composição farmacêutica que compreende um Composto da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, como anteriormente descrito, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, em combinação ou associação a um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável, e

[0235](iv) uma composição farmacêutica que compreende um Composto da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, como anteriormente descrito, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, em combinação ou associação a um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de qualquer doença ou condição como anteriormente apresentado.

[0236]Portanto, a invenção apresenta o uso de um Composto da Invenção, por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14, como anteriormente descrito, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, ou um Composto da Invenção em uma forma de composição farmacêutica (na fabricação de um medicamento) para o tratamento ou tratamento profilático de qualquer uma ou mais das seguintes doenças: doença de Parkinson, pernas inquietas, tremores, discinesias, doença de Huntington, doença de Alzheimer, distúrbios do movimento induzido por fármacos; depressão, distúrbio de déficit de atenção, distúrbio de hiperatividade e déficit de atenção, doença bipolar, ansiedade, transtorno do sono, narcolepsia, deficiência cognitiva, por exemplo, deficiência cognitiva de esquizofrenia, demência, síndrome de Tourette, autismo, síndrome de X frágil, retirada de psicoestimulante, e/ou dependência de drogas; doença cerebrovascular, acidente vascular cerebral, doença cardíaca congestiva, hipertensão, hipertensão pulmonar, por exemplo, hipertensão arterial pulmonar, e/ou disfunção sexual; asma, doença pulmonar obstrutiva crônica e/ou rinite alérgica bem como doenças autoimunes e inflamatórias; e/ou disfunção sexual feminina, amenorreia do exercício, anovulação, menopausa, sintomas da menopausa, hipotireoidismo, síndrome pré-menstrual, parto prematuro, infertilidade, ciclos menstruais irregulares, sangramento uterino anormal, osteoporose, esclerose múltipla, aumento da próstata, câncer de próstata, hipotiroidismo e/ou hiperplasia endometrial induzida por estrogênio e/ou carcinoma; e/ou qualquer doença ou condição caracterizada por baixos níveis de vias de sinalização de cAMP e/ou cGMP) em células que expressam PDE1, e/ou por atividade reduzida de sinalização do receptor de dopamina D1; e/ou qualquer doença ou condição que possa ser melhorada pelo aumento da sinalização de progesterona.

[0237]A invenção também apresenta o uso de um Composto da Invenção, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, (a fabricação de um medicamento) para o tratamento ou tratamento profilático de qualquer um ou mais dentre:

[0238]a) glaucoma, pressão intraocular elevada,

[0239]b) psicose, por exemplo, quaisquer condições caracterizadas por sintomas psicóticos como alucinações, delírios paranoicos ou bizarros, ou fala e pensamento desorganizados, por exemplo, esquizofrenia, distúrbio esquizoafetivo, distúrbio esquizofreniforme, distúrbio psicótico, distúrbio delirante, e mania, como em episódios maníacos agudos e distúrbio bipolar,

[0240]c) lesão cerebral traumática, e/ou

[0241]d) distúrbios degenerativos centrais e periféricos particularmente aqueles com componentes inflamatórios.

[0242]A frase “Compostos da Invenção” ou “inibidores de PDE 1 da Invenção” abrangem quaisquer e todos os compostos revelados, por exemplo, um Composto da Fórmula V ou 1.1 a 1.14.

[0243]As palavras "tratamento" e "tratar" serão entendidos consequentemente como abrangendo a profilaxia e tratamento ou melhora de sintomas de doença bem como tratamento da causa da doença.

[0244]Para métodos de tratamento, a palavra “quantidade terapeuticamente eficaz” como usado no presente documento se refere a uma quantidade de um fármaco (por exemplo, um inibidor de PDE1) suficiente para tratar ou melhorar os efeitos patológicos de uma doença, distúrbio, ou lesão do SNC ou SNP. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de PDE1 pode ser uma quantidade suficiente para, por exemplo, aumentar os níveis intracelulares de cAMP ou cGMP, reduzir os níveis intracelulares de cálcio e/ou aumentar a neurodegeneração Quando relevante, uma quantidade terapeuticamente eficaz também pode ser a quantidade de um inibidor de PDE1 necessária para retardar ou prevenir o desenvolvimento de doença ou distúrbio do SNC ou SNP.

[0245]O termo “paciente” ou “indivíduo” se refere a um paciente humano ou não humano (ou seja, animal). Em uma modalidade particular, a invenção abrange tanto pacientes humanos como não humanos. Em uma outra modalidade, a invenção abrange pacientes não humanos. Em outra modalidade, o termo abrange pacientes humanos.

[0246]O termo “indivíduo de controle” como usado no presente documento, se refere a qualquer organismo humano ou não humano que não tem e/ou não suspeita-se que tenha um distúrbio, síndrome, doença, condição e/ou sintoma do SNC ou SNP. O termo “padrão de referência” como usado no presente documento, se refere à medição anterior e obtenção de resultados em um indivíduo ou população de controle de indivíduos de controle. Em um outro aspecto, o termo “padrão de referência” se refere à medição anterior e obtenção de resultados em um paciente antes de o mesmo desenvolver um distúrbio, síndrome, doença, condição e/ou sintoma do SNC ou SNP.

[0247]O termo “amostra biológica” como usado no presente documento, pode incluir qualquer amostra que compreende material biológico obtido a partir de, por exemplo, um organismo, fluido corpóreo, produto residual, célula ou parte de uma célula do mesmo, linhagem de células, biópsia, cultura celular ou outra fonte contendo níveis de cálcio intracelular, cAMP, ou cGMP.

[0248]Um "agente neurogênico" é definido como um agente químico ou reagente que pode promover, estimular, ou de outro modo aumentar a quantidade ou grau ou natureza de neurogênese in vivo ou ex vivo ou in vitro, em relação à quantidade, grau, ou natureza de neurogênese na ausência do agente ou reagente.

[0249]Uma “lesão do SNC” como usado no presente documento pode incluir, por exemplo, dano a células glanglionares retinianas, uma lesão traumática cerebral, uma lesão relacionada a acidente vascular cerebral, uma lesão relacionada a aneurisma cerebral, uma lesão da medula espinhal ou trauma, incluindo monoplegia, diplegia, paraplegia, hemiplegia e quadriplegia, um distúrbio neuroproliferativo, ou síndrome de dor neuropática. Uma “lesão do SNP” como usado no presente documento pode incluir, por exemplo, dano aos nervos espinhais ou cranianos, em que o dano pode incluir uma lesão ou algum trauma agudo ou crônico.

[0250]Os Compostos da Invenção, (por exemplo, qualquer um dentre a Fórmula V ou 1.1 a 1.14) como anteriormente descrito, em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, podem ser usados como um único agente terapêutico, mas também podem ser usados em combinação ou para a coadministração com outros agentes ativos.

[0251]As dosagens empregadas para praticar a presente invenção irão variar, naturalmente, dependendo, por exemplo, da doença ou condição particular que será tratada, do Composto da Invenção particular usado, do modo de administração, e da terapia desejados. Os Compostos da Invenção podem ser administrados por qualquer via, incluindo de forma oral, parenteral, transdérmica, ou por inalação, porém são, de preferência, administrados oralmente. Em geral, resultados satisfatórios, por exemplo, para o tratamento de doenças como anteriormente apresentado são indicados sendo obtidos mediante administração oral em dosagens na ordem de cerca de 0,01 a 2,0 mg/kg. Em mamíferos maiores, por exemplo, seres humanos, uma dosagem diária indicada para administração oral estará consequentemente na faixa de cerca de 0,75 a 150 mg, convenientemente administrada uma vez, ou em doses divididas em 2 a 4 vezes, diariamente ou em forma com liberação sustentada. Dessa forma, as formas de dosagem unitária para administração oral, por exemplo, podem compreender a partir de cerca de 0,2 a 75 ou 150 mg, por exemplo, a partir de cerca de 0,2 ou 2,0 a 50, 75 ou 100 mg de um Composto da Invenção, juntamente com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0252]As composições farmacêuticas que compreendem os Compostos da Invenção podem ser preparadas usando diluentes ou excipientes convencionais e técnicas conhecidas na técnica galênica. As formas de dosagem oral podem incluir comprimidos, cápsulas, soluções, suspensões e similares.

EXEMPLOS EXEMPLO 1

[0253]7,8-Diídro-2-(4-(piridina-2-il)benzil)-3-(4-fluorofenilamino)- 5,7,7- trimetil-[2H]-imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0254](a)7-(4-Metóxibenzil)-5-metil-2-(4-(piridin-2-il)benzil)-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona

[0255]Uma suspensão de 7-(4-metóxibenzil)-5-metil-2H-pirazolo[3,4- d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona (8,43 g, 29,4 mmol), 2-(4-(clorometil)fenil)-piridina (6,0 g, 29,4 mmol) e K2CO3 (4,07 g, 29,4 mmol) em DMF (100 ml) é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O solvente é removido sob pressão reduzida. O resíduo obtido é tratado com água (150 ml) e hexanos (25 ml). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante uma hora e, então, filtrada. A torta do filtro é lavada com água três vezes (3 x 50 ml) e, e, então, seca a vácuo para render 13 g de produto cru (rendimento: 97%), que é usado na etapa seguinte sem purificação adicional. MS (ESI) m/z 454,2 [M+H]+.

[0256](b) 5-Metil-2-(4-(piridin-2-il)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona

[0257]TFA (50 ml) é adicionado em uma suspensão de 7-(4-Metóxibenzil)-5- metil-2-(4-(piridin-2-il)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-4,6(5H,7H)-diona (13 g, 28,7 mmol) em cloreto de metileno (80 ml) para render uma solução castanho- amarelada e, então, TFMSA (4 ml) é adicionado. A mistura de reação é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Os solventes são removidos sob pressão reduzida. O resíduo obtido é tratado com água (150 ml), resfriado até 0 °C e, então, ajustado para pH 8 a 9 com 28% de hidróxido de amônio (aproximadamente 35 ml). Após a filtração, os sólidos obtidos são lavados com água três vezes (3 x 50 ml) e, e, então, seca a vácuo para render 12,8g de produto cru (rendimento cru: 134%), que é usado na etapa seguinte sem purificação adicional. MS (ESI) m/z 334,1 [M+H]+.

[0258](c) 6-Cloro-5-metil-2-(4-(piridin-2-il)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 4(5H)-ona

[0259]5-Metil-2-(4-(piridin-2-il)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidina- 4,6(5H,7H)-diona (8,5 g, 25,5 mmol) é suspenso em POCl3 (300 ml) e, então, lentamente aquecido até o refluxo. Após a mistura ser refluxada durante 30h, POCl3 é removido sob pressão reduzida. O resíduo obtido é tratado com água (300 ml), resfriado até 0 °C e, então, ajustado para pH 8 a 9 com 28% de hidróxido de amônio (aproximadamente 30 ml). Após a filtração, os sólidos obtidos são lavados com água cinco vezes (5 x 50 ml) e, e, então, secos a vácuo para render 8,6 g de produto cru (rendimento cru: 96%), que é usado na etapa seguinte sem purificação adicional. MS (ESI) m/z 352,1 [M+H]+.

[0260](d) 6-(1-Hidróxi-2-metilpropan-2-ilamino)-5-metil-2-(4-(piridin-2- il)benzil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4(5H)-ona

[0261]Uma mistura de 6-Cloro-5-metil-2-(4-(piridin-2-il)benzil)-2H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-4(5H)-ona (4,0 g, 11 mmol), 2-amino-2-metilpropan-1-ol (6,5 ml, 71 mmol) e DIPEA (3,4 ml, 20 mmol) em DMA (20 ml) é aquecida a 130 °C durante uma hora. O solvente é removido sob pressão reduzida. O resíduo obtido é tratado com água (200 ml). Após a filtração, a torta do filtro é lavada com água duas vezes (2 x 50 ml) e, e, então, seca a vácuo para render 3,7 g de produto cru (rendimento cru: 80%), que é usado na etapa seguinte sem purificação adicional. MS (ESI) m/z 405,2 [M+H]+.

[0262](e) 7,8-Diídro-2-(4-(piridin2-il)benzil)-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo-[1,2- a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0263]Cloreto de tionila (756 μL, 10,4 mmol) é adicionado por gotejamento a uma solução de 6-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-ilamino)-5-metil-2-(4-(piridin-2-il)benzil)- 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4(5H)-ona crua (4,2 g, 10,4 mmol) em DMF (84 ml). A mistura de reação é agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Água (5 ml) é adicionada para arrefecer a reação. Os solventes são removidos sob pressão reduzida. O resíduo obtido é tratado com cloreto de metileno e, então, lavado com 5% de solução aquosa de NaHCO3 três vezes. A fase orgânica é evaporada até secar para render 6,1g de produto cru (rendimento cru: 152%), que é usado na etapa seguinte sem purificação adicional. MS (ESI) m/z 387,2 [M+H]+.

[0264](f) 7,8-Diídro-2-(4-(piridin2-il)benzil)-3-cloro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo- [1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0265]1,0M de LiHMDS (55,4 ml, 55,4 mmol) em THF é adicionado por gotejamento a uma solução de 7,8-diídro-2-(4-(piridin2-il)benzil)-5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona crua (4,6 g, 11,9 mmol) e hexacloroetano (2,58 g, 10,9 mmol) em cloreto de metileno (130 ml) a 0 °C. A mistura de reação é agitada a 0 °C durante 30 minutos e, então, arrefecida com água (100 ml) e cloreto de metileno (150 ml). A fase orgânica é lavada com água três vezes (3 x 70 ml) e, então, evaporada até secar. O produto cru obtido é purificado em uma coluna de óxido de alumínio neutro para render 1,5 g de produto puro (pureza HPLC: 96%; rendimento: 30%). MS (ESI) m/z 421,1 [M+H]+.

[0266](g) 7,8-Diídro-2-(4-(piridin2-il)benzil)-3-(4-fluorofenilamino)- 5,7,7- trimetil-[2H]-imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0267]7,8-Diídro-2-(4-(piridin2-il)benzil)-3-cloro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo- [1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona (550 mg, 1,31 mmol), 4-fluorobenzenamina (125 μL, 1,31 mmol) e carbonato de potássio (361 mg, 2,61 mmol) em álcool terc- amil (3 ml) são desgaseificados com argônio e, então, Xantphos (15 mg, 0,026 mmol) e Pd2(dba)3 (12 mg, 0,013 mmol) são adicionados. A suspensão é desgaseificada e, então, lentamente aquecida até 110 °C. A mistura de reação é agitada a 110 °C sob argônio de um dia para o outro. Outro lote de Pd2(dba)3 (12 mg) e Xantphos (15 mg) é adicionado. A reação é aquecida a 110 °C durante mais 24 h até a conversão completa. Após a análise de rotina, o produto cru é purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para render 352 mg de produto final como um sólido bege (pureza HPLC: 97,4%; rendimento: 54%). 1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 8,68 (dt, J = 4,7, 1,3 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,74 (td, J = 7,7, 1,8 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,23 (ddd, J = 7,4, 4,8, 1,2 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,00 - 6,93 (m, 2H), 6,94 a 6,87 (m, 2H), 6,79 (s, 1H), 4,90 (s, 2H), 3,71 (s, 2H), 3,35 (s, 3H), 1,40 (s, 6H). MS (ESI) m/z 496,2 [M+H]+.

[0268]O composto do Exemplo 1 mostra seletividade satisfatória para PDE1 e inibe a atividade de PDE em um valor de IC50 igual ou menor que 5nM.

EXEMPLO 2

[0269]7,8-Diídro-2-(4-(6-Fluoropiridin-2-il)benzil)-3-(4-fluorofenilamino)-5,7,7- trimetil-[2H]-imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0270]O método de síntese é análogo ao exemplo 1 em que 2-(4- (clorometil)fenil)-6-fluoropiridina é adicionado na etapa (a) em vez de 2-(4- (clorometil)fenil)-piridina. O produto final é obtido como um sólido branco-sujo (pureza HPLC: 99%). 1H NMR (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,89 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,83 (q, J = 8,0 Hz, 1H), 7,58 (dd, J = 7,5, 2,3 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,00 a 6,84 (m, 6H), 4,91 (s, 2H), 3,76 (s, 2H), 3,39 (s, 3H), 1,47 (s, 6H). MS (ESI) m/z 514,3 [M+H]+

EXEMPLO 3

[0271]7,8-Diídro-2-(4-(piridina-2-il)benzil)-3-(3,4-difluorofenilamino)-5,7,7- trimetil-[2H]-imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0272](a) 2-(4-Bromobenzil)-7,8-diídro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo-[1,2- a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0273]O composto do título é sintetizazdo usando o procedimento análogo àquele descrito a partir da etapa (a) à etapa (e) do Exemplo 1 em que 1-bromo-4- (bromometil)benzeno foi adicionado na etapa (a) em vez 2-(4-(clorometil)fenil)- piridina. MS (ESI) m/z 388,1 [M+H]+.

[0274](b) 2-(4-Fenóxibenzil)-7,8-diídro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo-[1,2- a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0275]2-(4-Bromobenzil)-7,8-diídro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo-[1,2- a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona (118 g, 304 mmol) é adicionado a uma suspensão de fenol (57 g, 606 mmol) e carbonato de césio (200 g, 614 mmol) em NMP (900 ml), seguido de 2,2,6,6-tetrametileptano-3,5-diona (7 ml, 33,5 mmol) e CuCl (15 g, 152 mmol). A mistura de reação é aquecida a 120 °C sob atmosfera de nitrogênio durante 10 h. Após o término da reação, a mistura é diluída com água (4 L) e, então, extraída com acetato de etila. A fase orgânica combinada é evaporada até secar. O produto cru obtido é purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para render 103 g de produto (rendimento: 84%). MS (ESI) m/z 402,2 [M+H]+.

[0276](c) 7,8-Diídro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin- 4(5H)-ona

[0277]TFA (600 ml) é adicionado a uma suspensão de 2-(4-fenóxibenzil)-7,8- diídro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona (103 g, 257 mmol) em cloreto de metileno (210 ml) para render uma solução castanho- amarelada e, então, TFMSA (168 ml) é adicionado. A mistura de reação é agitada à temperatura ambiente até o material de partida desaparecer. A mistura de reação é vertida em água fria (3 L). Após a filtração, a torta do filtro é lavada com água duas vezes e, então, basificada com solução aquosa de hidróxido de amônio, seguido de adição de acetato de etila com agitação. Os sólidos precipitados são filtrados, lavados sucessivamente com água três vezes, acetato de etila duas vezes e metanol uma vez e, então, secos sob vácuo para render 45 g de produto (rendimento: 80%). MS (ESI) m/z 220,2 [M+H]+.

[0278](d)7,8-Diídro-2-(4-(piridin-2-il)benzil)-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo-[1,2- a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0279]Uma suspensão de 7,8-diídro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo-[1,2- a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona (1,5 g, 6,84 mmol), 2-(4-(bromometil)fenil)piridina (1,7 g, 6,84 mmol) e K2CO3 (2,83 g, 20,5 mmol) em DMF (60 ml) é agitada à temperatura ambiente durante 2 a 3 dias. O solvente é removido sob pressão reduzida. O resíduo obtido é tratado com água (100 ml), sonicado e, então, filtrado. A torta do filtro é seco a vácuo para render 2,19 g de produto cru (rendimento: 83%), que é usado na etapa seguinte sem purificação adicional. MS (ESI) m/z 387,1 [M+H]+.

[0280](e) 7,8-Diídro-2-(4-(piridina-2-il)benzil)-3-cloro-5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0281]1,0M de LiHMDS (3,0 ml, 3,0 mmol) em THF é adicionado por gotejamento a uma solução de 7,8-diídro-2-(4-(piridin2-il)benzil)-5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona crua (1,16 g, 3,0 mmol) e hexacloroetano (2,13 g, 9,0 mmol) em cloreto de metileno (30 ml). A mistura de reação é agitada à temperatura ambiente durante 90 minutos e, então, é arrefecida com água fria (200 ml). A mistura é extraída com cloreto de metileno três vezes (50 ml x 3), e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 ml) e, então, evaporada até secar sob pressão reduzida. O resíduo obtido é purificado em uma coluna de óxido alumina neutro para render 960 mg de produto puro como um sólido branco-sujo (pureza HPLC: 96,8%; rendimento: 76%). MS (ESI) m/z 421,2 [M+H]+.

[0282](f) 7,8-Diídro-2-(4-(piridina-2-il)benzil)-3-( 3,4-difluorofenilamino)- 5,7,7- trimetil-[2H]-imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0283]7,8-Diídro-2-(4-(piridin2-il)benzil)-3-cloro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo- [1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona (230 mg, 0,546 mmol), 3,4- difluorobenzenamina (106 mg, 0,821 mmol) e carbonato de potássio (300 mg, 2,17 mmol) em álcool terc-amil (2,8 ml) são desgaseificados com argônio e, então, Xantphos (26 mg, 0,045 mmol) e Pd2(dba)3 (20 mg, 0,022 mmol) são adicionados. A suspensão é desgaseificada novamente e, então, aquecida até 110 °C. A mistura de reação é agitada a 110 °C sob argônio de um dia para o outro. Após a análise de rotina, o produto cru é purificado em uma coluna de óxido de alumina básico para render 194 mg de produto final como um sólido bege (pureza HPLC: 99%; rendimento: 69%). 1H NMR (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,76 (td, J = 7,8, 1,6 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,26 a 7,17 (m, 2H), 7,15 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,03 (m, 1H), 6,69 (m, 1H), 6,60 (m, 1H), 5,05 (s, 2H), 3,79 (s, 2H), 3,29 (s, 3H), 1,47 (s, 6H). MS (ESI) m/z 514,2 [M+H]+.

EXEMPLO 4

[0284]7,8-Diídro-2-(4-(piridin2-il)benzil)-3-(4-fluoro-3-metilfenilamino)-5,7,7- trimetil-[2H]-imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0285]O métodos de síntese é análogo ao exemplo 3 em que 4-fluoro-3- metilbenzenamina foi adicionada na etapa (f) em vez de 3,4-difluorobenzenamina. O produto final é obtido como um sólido branco-sujo (pureza HPLC: 97%). 1H NMR (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,70 (ddd, J = 4,8, 1,9, 1,0 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,77 (td, J = 7,7, 1,9 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,26 (m, 1H), 7,06 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 6,97 a 6,86 (m, 2H), 6,81 - 6,69 (m, 2H), 4,91 (s, 2H), 3,81 (s, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,13 (d, J = 1,4 Hz, 3H), 1,49 (s, 6H). MS (ESI) m/z 510,2 [M+H]+

EXEMPLO 5

[0286]7,8-Diídro-2-(4-(5-fluoropiridin2-il)benzil)-3-etil-5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0287](a) 7,8-Diídro-2-(4-(5-fluoropiridin2-il)benzil)-3-cloro-5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0288]O composto do título é preparado usando o procedimento análogo àquele descrito nas etapas (a) a (f) do Exemplo 1 em que 2-(4-(clorometil)fenil)-5- fluoropiridina foi adicionada na etapa (a) em vez de 2-(4-(clorometil)fenil)-piridina. MS (ESI) m/z 439,2 [M+H]+.

[0289](b) 7,8-Diídro-2-(4-(5-fluoropiridin2-il)benzil)-3-etil-5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-on

[0290]Brometo de etilmagnésio (3,0 M em éter, 3 ml) é adicionado por gotejamento a um frasco de reação contendo ZnCl2 (1,2 g, 8,8 mmol) a 0 °C sob argônio. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos e, então, resfriada até - 78 °C. 9-Metóxi-9-borabiciclo[3.3.1]nonano (1,0 M em hexanos, 8 ml) é adicionado por gotejamento. Após o término da adição, a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 40 min. 7,8-Diídro-2-(4-(5-fluoropiridin2-il)benzil)-3- cloro-5,7,7-trimetil-[2H]-imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona (352 mg, 0,8 mmol) em DMF anidro (15 ml) é lentamente adicionado à mistura, seguido de 2- dicicloexilfosfino-2‘,6‘-dimetóxibifenil (S-Phos, 38 mg) e acetato de paládio (13 mg). O frasco de reação é vedado e agitado à temperatura ambiente durante 30 minutos e é, então, aquecido a 100 °C durante 4 dias. A mistura é diluída em água (150 ml) e, então, extraída com diclorometano (60 ml x 3). A fase orgânica combinada é evaporada até secar sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por um sistema HPLC semipreparativa equipado com uma coluna C18 em fase reversa usando um gradiente de 0 a 26% de acetonitrila em água contendo 0,1% de ácido fórmico durante 16 minutos para render 177 mg de produto como um sólido amarelo pálido (pureza HPLC: 99,5%; rendimento: 51%). 1H NMR (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,53 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,69 (dd, J = 8,8, 4,2 Hz, 1H), 7,47 (td, J = 8,4, 2,9 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 5,29 (s, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,41 (s, 3H), 2,95 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,42 (s, 6H), 1,18 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS (ESI) m/z 433,3 [M+H] +.

EXEMPLO 6

[0291]7,8-Diídro-2-(4-(6-fluoropiridin2-il)benzil)-3-etil-5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0292]O composto do título é preparado usando o procedimento análogo àquele descrito no Exemplo 5 em que 2-(4-(clorometil)fenil)-6-fluoropiridina foi adicionada na etapa (a) em vez de 2-(4-(clorometil)fenil)-5-fluoropiridina. 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,98 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,84 (m, 1H), 7,59 (dd, J = 7,5, 2,4 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 3H), 6,87 (dd, J = 8,1, 3,0 Hz, 1H), 5,28 (s, 2H), 3,71 (s, 2H), 3,38 (s, 3H), 2,94 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,40 (s, 6H), 1,17 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS (ESI) m/z 433,2 [M+H] +.

[0293]O composto do Exemplo 5 mostra seletividade satisfatória para PDE1 e inibe a atividade de PDE em um valor de IC50 igual ou menor que 30 nM.

EXEMPLO 7

[0294]7,8-Diídro-2-(4-(5-fluoropiridin2-il)benzil)-3-propil-5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0295]O composto do título é preparado usando o procedimento análogo àquele descrito no Exemplo 5 em que brometo de propilmagnésio foi adicionado na etapa (b) em vez de brometo de etilmagnésio. MS (ESI) m/z 447,2 [M+H]+.

[0296]O composto do Exemplo 7 mostra seletividade satisfatória para PDE1 e inibe a atividade de PDE em um valor de IC50 igual ou menor que 15 nM.

EXEMPLO 8

[0297]7,8-Diídro-2-(4-(6-fluoropiridin2-il)benzil)-3-propil-5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0298]O composto do título é preparado usando o procedimento análogo àquele descrito no Exemplo 5 em que brometo de propilmagnésio foi adicionado na etapa (b) em vez de brometo de etilmagnésio, e 2-(4-(clorometil)fenil)-6-fluoropiridina foi adicionada na etapa (a) em vez de 2-(4-(clorometil)fenil)-5-fluoropiridina. MS (ESI) m/z 447,2 [M+H]+.

EXEMPLO 9

[0299]7,8-Diídro-2-(4-clorobenzil)-3-(4-fluorofenilamino)- 5,7,7-trimetil-[2H]- imidazo-[1,2-a]pirazolo[4,3-e]pirimidin-4(5H)-ona

[0300]O composto do título é preparado usando o procedimento análogo àquele descrito no Exemplo 1 em que 1-cloro-4-(clorometil)benzeno foi adicionada na etapa (a) em vez de 2-(4-(clorometil)fenil)-piridina. MS (ESI) m/z 453,2 [M+H]+

[0301]O composto do Exemplo 9 mostra seletividade satisfatória para PDE1 e inibe a atividade de PDE em um valor de IC50 igual ou menor que 5nM.

EXEMPLO 10: Medição de inibição de PDEIB in vitro usando Kit de Ensaio de Fosfodiesterase IMAP

[0302]Fosfodiesterase I B (PDEIB) é uma enzima de fosfodiesterase dependente de cálcio/calmodulina que converte monofosfato de guanosina cíclico (cGMP) em monofosfato de 5'- guanosina (5'-GMP). PDEIB também pode converter um substrato de cGMP modificado, como a molécula fluorescente cGMP- fluoresceína, na GMP-fluoresceína correspondente. A geração de GMP-fluoresceína a partir de cGMP-fluoresceína pode ser quantificada, usando, por exemplo, o reagente de partícula de afinidade com metal imobilizado IMAP (Molecular Devices, Sunnyvale, CA).

[0303]Brevemente, o reagente IMAP se liga com alta afinidade ao 5'-fosfato livre que é encontrado em GMP-fluoresceína e não em cGMP-fluoresceína. O complexo GMP-fluoresceína-IMAP resultante é grande em relação à cGMP-5 fluoresceína. Pequenos fluoróforos que são ligados em um complexo grande que descende lentamente podem ser distinguidos de fluoróforos não ligados, pois os fótons emitidos à medida que fluorescem mantêm a mesma polaridade que os fótons usados para excitar a fluorescência.

[0304]No ensaio de fosfodiesterase, a cGMP-fluoresceína, que não pode ser ligada a IMAP e, portanto, retém pouca polarização de fluorescência, é convertida em GMP-fluoresceína, que, quando ligada a IMAP, produz um grande aumento na polarização de fluorescência ( mp). A inibição de fosfodiesterase, portanto, é detectada como uma redução em mp.

Ensaio enzimático

[0305]Materiais: Todos os produtos químicos estão dsponíveis junto à Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) exceto os reagentes IMAP (tampão de reação, tampão de ligação, microesferas FL-GMP e IMAP), que estão dsponíveis junto à Molecular Devices (Sunnyvale, CA).

[0306]Ensaio: As seguintes enzimas fosfodiesterase podem ser usadas: Fosfodiesterase de cérebro bovino específica para nucleotídeo 3',5'-cíclico (Sigma, St. Louis, MO) (predominantemente PDEIB) e PDE1A e PDE1B humano de comprimento total recombinante e (r-hPDE1A e r-hPDE1B respectivamente) que podem ser produzidos, por exemplo, em células HEK ou SF9 por um versado na técnica. A enzima PDEl é reconstituída com 50% de glicerol a 2,5 U/ml. Uma unidade de enzima irá hidrolisar 1,0 μmol de 3',5'-cAMP a 5'-AMP por minuto em pH 7,5 a 30°C. Uma parte da enzima é adicionada a 1999 partes de tampão de reação (30 μM de CaCl2, 10 U/ml de calmodulina (Sigma P2277), 10 mM de Tris-HCl pH 7,2, 10 mM de MgCl2, 0,1% de BSA, 0,05% de NaN3) para produzir uma concentração final de 1,25 mU/ml. 99 μL de solução enzimática diluída são adicionados em cada poço em uma placa de poliestireno de fundo plano de 96 poços à qual 1 μL de composto de teste dissolvido em 100% de DMSO é adicionado. Os compostos são misturados e pré-incubados com a enzima durante 10 minutos à temperatura ambiente.

[0307]A reação de conversão de FL-GMP é iniciada combinando-se 4 partes de mistura de enzima e inibidor com 1 parte de solução de substrato (0,225 μL) em uma placa de microtitulação de 384 poços. A reação é incubada no escuro à temperatura ambiente durante 15 minutos. A reação é parada pela adição de 60 μL de reagente de ligação (1:400 diluição de microesferas de IMAP em tampão de ligação suplementado com 1:1800 diluição de antiespumante) a cada poço da placa de 384 poços. A placa é incubada à temperatura ambiente durante 1 hora para permitir que a ligação de IMAP prossiga até o término e, então, colocada em um leitor de microplaca multimodal (PerkinElmer, Shelton, CT) para medir a polarização de fluorescência (mp).

[0308]Uma redução na concentração de GMP, medida como mp reduzida, é indicativo de inibição de atividade de PDE. Os valores de IC50 são determinados medindo-se a atividade enzimática na presença de 8 a 16 concentrações de composto que variam a partir de 0,0037 nM a 80.000 nM e, então, plota a concentração de fármaco versus AmP, que permite que os valores de IC50 sejam estimados usando um software de regressão não linear (XLFit; IDBS, Cambridge, MA).

[0309]Vários compostos de Exemplos 1 a 9 demonstram seletividade satisfatória para PDE1, e podem inibir PDE1 em valores de IC50 iguais ou menores que 50nM no presente ensaio.

EXEMPLO 11

[0310]Um inibidor de PDE1 seletivo da presente invenção demonstra estabilidade microssômica em ensaios de estabilidade microssômica humana. O inibidor de PDE1 seletivo supracitado demonstra um valor K menor que 0,01, e demonstra uma meia-vida de T1/2 de cerca de 100 a 1800 minutos.

EXEMPLO 12

[0311]Um inibidor de PDE1 seletivo da presente invenção demonstra a capacidade de cruzar a barreira hematoencefálica. Após uma injeção de 10mg/kg em um modelo de camundongo adequado, o inibidor de PDE1 seletivo supracitado é detectável em cerca de 3 μM menos de cerca de 0,5 hora após a injeção.

Claims

1. Composto CARACTERIZADO pelo fato de que apresenta a Fórmula (V) em que (i) R1 é alquila C1-4; (ii) R4 é H e R2 e R3 são independentemente H ou alquila C1-4; (iii) R5 está ligado a um dos nitrogênios na porção pirazolo da Fórmula V e é uma porção da Fórmula A em que X, Y e Z são C, e R8, R9, R11 e R12 são H, e R10 é halogênio, ou hete- roarila opcionalmente substituída por halogênio, alquila, haloalquila, hidróxi ou car- bóxi; e (iv) R6 é H, alquila C1-4, fenilamino opcionalmente substituído por alquila C1-4 ou halogênio; e (v) n=0; em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável, com a condição de que quando R10 for halogênio ou heteroarila substituída, R6 é fenilamino substituído por alquila C1-4 ou halogênio, em que a heteroarila em R10 é um grupo piridila ou tiadiazolila.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é metila.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 e R3 são alquila C1-4.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 e R3 são ambos metila.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R10 é heteroarila opcionalmente substituída por halogênio.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R10 é pirid-2-ila.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R10 é 5-fluoro-pirid-2-ila.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R10 é 6-fluoro-pirid-2-ila.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 é alquila C1-4.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 é etila.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fa- to de que R6 é propila.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 é fenilamino opcionalmente substituído por alquila C1-4 ou halogênio.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 é 4-fluorofenilamino.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é selecionado dentre: em forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fa- to de que o composto é selecionado dentre: m forma de sal livre ou farmaceuticamente aceitável.

16. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R10 é halogênio e R6 é fenilamino substituído por alquila C1-4 ou halogênio.

17. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R10 é heteroarila não substituída e R6 é fenilamino substituído por alquila C1-4 ou halogênio.

18. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R10 é heteroarila substituída por halogênio, alquila, haloalquila, hidróxi.

19. Composto, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADO pelo fato de que R6 é alquila C1-4.

20. Composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um composto, conforme definido na reivindicação 1, em mistura com pelo menos um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

21. Uso de um composto inibidor de PDE1, conforme definido na reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é para preparar um medicamento para o tratamento de uma doença, distúrbio, e/ou lesão do SNC, em que o inibidor de PDE1 modula o nível de cAMP intracelular do indivíduo.

22. Uso, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença, distúrbio ou lesão do SNC é uma lesão da medula espinhal.

23. Uso, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença, distúrbio ou lesão do SNC se refere a trauma de neurônio motor.

24. Uso, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença, distúrbio ou lesão do SNC é selecionado dentre o grupo que consiste em: traumas e lesões neurológicas, trauma e/ou lesão relacionado a cirurgias, lesão e trauma retinal, lesão relacionada à epilepsia, lesão de medula espinhal, lesão cerebral, cirurgia cerebral, lesão cerebral relacionada a trauma, trauma relacionado à lesão de medula espinhal, lesão cerebral relacionada a tratamento para câncer, le- são da medula espinhal relacionada a tratamento para câncer, lesão cerebral relacionada a infecções, lesão cerebral relacionada a inflamações, lesão da medula espinhal relacionada a infecções, lesão da medula espinhal relacionada a inflamações, lesão cerebral relacionada a toxinas ambientais, e lesão da medula espinhal relacionada a toxinas ambientais.

25. Uso, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença, distúrbio ou lesão do SNC é um distúrbio neurodegenerativo.

26. Uso, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença, distúrbio, ou lesão neurodegenerativa é selecionada dentre o grupo que consiste em: doença de Alzheimer, Esclerose Múltipla, Glaucoma, Demência frontotemporal, Demência com corpos de Lewy, Degeneração corticobasal, Paralisia supranuclear progressiva, Doenças priônicas, doença de Huntington, Atrofia do sistema múltiplo, doença de Parkinson, Esclerose lateral amiotrófica, Paraparesia espástica hereditária, Atrofias espinocerebelares, Ataxia de Friedreich, Amiloidose, distúrbios relacionados ao metabolismo (diabetes), Distúrbios relacionados a toxinas, inflamação crônica do SNC e doença de Charcot Marie Tooth.

27. Uso de um composto inibidor de PDE1, conforme definido na reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é para preparar um medicamento para o tratamento ou profilaxia de uma doença, distúrbio ou lesão do SNP, em que o inibidor de PDE1 aumenta os níveis intracelulares de cAMP do indivíduo.

28. Uso, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o inibidor de PDE1 é formulado para ser administrado a um paciente que revelou ter níveis de cálcio intracelular elevados em comparação com um indivíduo de controle.