BR112016027053B1 - Composto e usos de um composto - Google Patents

Abstract

COMPOSTO. A presente invenção trata dos compostos químicos e de seu uso terapêutico, em particular para melhorar a qualidade muscular nos mamíferos. Mais particularmente a presente invenção permite melhorar a qualidade muscular dos mamíferos sarcopênicos e tratar e/ou prevenir a sarcopenia e em particular a obesidade sarcopênica, suas complicações e/ou patologias associadas tais como a perda de força, de massa muscular, de performances e capacidade físicas e de mobilidade. A presente invenção permite igualmente melhorar a qualidade muscular nos mamíferos obesos e tratar e/ou prevenir a obesidade e suas complicações e/ou patologias associadas, vantajosamente o diabete de tipo 2 e o síndrome metabólica.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção trata dos compostos químicos e de seu uso terapêutico, em particular para melhorar a qualidade muscular nos mamíferos.

[002] Mais particularmente, a presente invenção permite melhorar a qualidade muscular nos mamíferos obesos.

[003] A presente invenção permite igualmente melhorar a qualidade muscular dos mamíferos sarcopênicos.

[004] A presente invenção trata ainda do uso desses compostos químicos no tratamento e/ou na prevenção da obesidade no mamífero.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[005] A atrofia muscular pode resultar de várias causas diferentes: desnutrição, falta de uso dos músculos (ex. imobilização consecutiva a uma fratura), câncer ou outra doença grave (insuficiência cardíaca ou renal) induzindo a caquexia, ou ser a consequência natural do envelhecimento dos indivíduos (sarcopenia). Essa atrofia pode resultar de uma redução da proteossíntese ou/e de um aumento da proteólise e, dependendo dos casos, ser acompanhada de uma fibrose ou/e de uma infiltração por tecido adiposo. A identificação dos fatores e mecanismos que controlam a proteossíntese e a proteólise musculares representa, portanto, um pré-requisito para conceber tratamentos apropriados dessas patologias.

[006] A Figura 1, que faz parte do estado da técnica, mostra as principais vias da proteossíntese e da proteólise nos músculos (recomposto segundo Zhao et al., 2008 e Little et al., 2009).

[007] A proteossíntese muscular é indispensável, e é essencialmente controlada no nível traducional. Ela requer evidentemente um aporte nutricional adequado de ácidos aminados. Ela é estimulada pela atividade física e regulada por numerosos fatores, dos quais os mais importantes são o IGF-1 e os andrógenos (Little et al., 2009). TABELA 1:FATORES E MOLÉCULAS QUE AGEM SOBRE A PROTEOSSÍNTESE E A PROTEÓLISE NOS MÚSCULOS

[008] A proteólise das miofibrilas é efetuada através do proteassoma, enquanto as mitocôndrias são destruídas por autofagia (Zhao et al., 2008). Mecanismos de apoptose das células satélites estão igualmente descritos (Murphy et al., 2010).

[009] A miostatina, produzida de forma autócrina pelos próprios músculos, representa um fator particularmente importante, pois ela atua ao mesmo tempo estimulando a proteólise e inibindo a proteossíntese. Ela estimula igualmente a fibrose (Li et al., 2008).

[010] O envelhecimento é acompanhado de uma modificação dos diversos fatores reguladores (Walston et al., 2012): a atividade física é frequentemente reduzida, a nutrição proteica/vitamínica pode ser insuficiente e, após as refeições, os teores de ácidos aminados circulantes, cujo aumento é necessário para estimular a proteossíntese, apresentam um aumento reduzido que pode ser devido a uma sequestração esplâncnica (Boirie et al., 1997). Além disso, o envelhecimento é acompanhado de modificações hormonais consideráveis: deve-se notar, em particular, um aumento da miostatina (Léger et al., 2008), uma redução dos androgênios (Seidman, 2007), do hormônio de crescimento (Macell et al., 2001; Sattler, 2013), bem ccomo um aumento dos marcadores da inflamação (IL-6, TNF-a ... Schaap et al., 2009; Verghese et al., 2011). Essas diversas modificações são desfavoráveis para a proteossíntese, ao passo que favorecem a proteólise, daí a redução progressiva do tamanho dos músculos (sarcopenia). Elas provocam igualmente uma modificação na distribuição dos tipos de musculares em detrimento das fibras rápidas, o que se traduz por uma diminuição da força dos músculos (dinapenia). Ocorre finalmente o desenvolvimento de tecido conjuntivo no interior dos músculos (fibrose).

[011] Em um contexto de obesidade, a situação é agravada por vários motivos complementares: a infiltração gordurosa dos músculos agrava o contexto inflamatória, insulino-dependente reduz o efeito do IGF-1 sobre a proteossíntese, sem contar que a mobilidade fica reduzida pelo sobrepeso (Stenholm et al., 2009).

[012] A Figura 2, que faz parte do estado da técnica, ilustra o agravamento da sarcopenia em um contexto de obesidade (segundo Quillot et al., 2013).

[013] Em todos os casos, na falta de tratamento, a sarcopenia é um processo que só pode se agravar, até a perda total de mobilidade. A sarcopenia não é, todavia, o único processo que conduz a uma atrofia dos músculos esqueléticos. Uma atrofia ocorre igualmente durante uma imobilização (ex. em consequência de uma fratura), durante um jejum prolongado (ou de um regime emagrecedor), ou durante patologias graves (ex. cânceres, SIDA) que provocam uma caquexia. Podem igualmente ser citadas diversas distrofias musculares de origine genética. Essas diferentes situações apresentam um certo número de características comuns com a sarcopenia, mas com um peso respectivo diferente dos fatores desencadeadores (Tisdale, 2007; Saini et al., 2009).

OS TRATAMENTOS POSSÍVEIS CONHECIDOS

[014] Diferentes métodos de prevenção/tratamento da sarcopenia foram, portanto, considerados e testados. Trata-se em primeiro lugar do exercício físico, cuja eficácia é comprovada (Bonnefoy et al, 2000; Bonnefoy, 2008; Ryan et al., 2013). Assim, após exercícios realizados por um período de 8 semanas, foram observados aumentos da força muscular de 180% e da massa muscular de 11% (Fiatarone et al. 1990). Todavia, uma eficácia ótima exigiria várias horas de exercícios físicos por dia, o que é difícil de considerar por longos períodos.

[015] Um aporte aumento dos substratos da síntese proteica, seja dando proteínas de digestão rápida, e de acordo com uma cronologia otimizada (Coêffier et al., 2009; Aussel et al., 2013), seja como um complemento de certos ácidos aminados ou seus metabólitos (leucina, HMB [ß-hidroxi-ß-metilbutirato], citrulina, ornitina) podem aumentar a proteossíntese muscular (Li & Heber, 2011).

[016] Diversos tratamentos farmacêuticos visam corrigir as modificações do contexto hormonal ligadas ao envelhecimento (Crenn, 2013). Eles compreendem: - hormônios sexuais como a testosterona (White et al., 2013) ou suas variantes, os SARM (Selective Androgen Receptor Modulators), ou hormônios não sexuais como o hormônio de crescimento (Liu et al., 2003) e o IGF-1, a grelina ou a progranulina, e mesmo a vitamina D; - inibidores da miostatina (anticorpos dirigidos contra a molécula ou seu receptor, ou peptídeo precursor da miostatina) (Murphy et al., 2010; Han & Mitch, 2011); - moléculas que têm como alvo o sistema renina-angiotensina como os inibidores de aCE ou a angiotensina 1-7 (Dalla Libera et al., 2001; Shiuchi et al., 2004; Kalupahana & Moustaid-Moussa, 2012; Allen et al., 2013); - agonistas dos receptores e—adrenérgicos (Ryall et al., 2004, 2007); - substâncias naturais variadas, e mesmo extratos mais complexos de origem vegetal (ex. isoflavonas: Aubertin-Leheudre et al., 2007; extrato de óleo de oliva: Pierno et al., 2014; resveratol: Shadfar et al., 20011; Bennett et al., 2013).

[017] A grande diversidade desses tratamentos mostra a dificuldade de tratar uma patologia multifatorial, cujos fatores desencadeadores não são totalmente identificados. Além disso, várias moléculas candidatas apresentam efeitos secundários (caso dos hormônios sexuais, dos SARM ou dos ß-agonistas, por exemplo), ou não foram ainda estudadas a não ser em modelos animais. Todos esses elementos explicam a ausência de medicamentos disponíveis no mercado.

[018] Atualmente, as pesquisas têm como alvo mais particularmente a miostatina, inibindo sua ação com, por exemplo, anticorpos anti-miostatina ou anticorpos anti-receptores (Dumonceaux et al., 2010; Greenberg, 2012; Sakuma & Yamaguchi, 2012; Arounleut et al., 2013; Buehring & Binkley, 2013; Collins-Hooper et al., 2014; White & O Brasseur, 2014).

[019] As fitoectisonas, e mais particularmente a 20-hidroxiectisona (20E), foram objeto de numerosos estudos farmacológicos, que que começaram no Japão e foram continuadas no Uzbequistão, e foram em seguida desenvolvidas em diversos outros países.

[020] Esses estudos apresentaram as propriedades antidiabéticas e anabolizantes dessa molécula. Seus efeitos estimulantes sobre as sínteses proteicas nos músculos são observados no rato in vivo (Syrov, 2000; Tóth et al., 2008; Lawrence, 2012) e em miotubos murinos C2C12 in vitro (Gorelick-Feldman et al., 2008). Trata-se de um efeito ao nível da tradução, que implica a fosforilação da proteína ribossomal p70S6K, no fim de uma cascata em que intervém a proteína quinase Akt/PkB, uma via igualmente utilizada pelo IGF-1 para estimular a proteossíntese.

[021] Por meio dessas células C2C12, Zubeldia et al. (2012) mostraram, por outro lado, que um extrato de ajuga turkestanica enriquecido de fitoectisonas (20-hidroxiectisona e turkesterona) inibe a transcrição da miostatina e da caspase 3 (uma proteína envolvida nos processos de apoptose).

[022] Além disso, a 20-hidroxiectisona possui propriedades antifibróticas, que não foram demonstradas sobre os músculos, mas nos rins, em que os mecanismos de fibrose procedem de forma muito similar (Hung et al., 2012). Eles se opõem assim aos efeitos do TGFß, uma proteína próxima da miostatina, e em particular à estimulação de Smad 2,3 essa substância provoca. Pode-se, portanto, pensar que a 20-hidroxiectisona poderia ter efeitos similares sobre os músculos (ou o coração).

[023] A 20-hidroxiectisona reduz o acúmulo de massa gordurosa nos camundongos nutridos com um regime rico em gorduras (Kizelsztein et al., 2009; Foucault et al., 2012) ou nas ratazanas ovariectomizadas, um modelo de menopausa (Seidlova-Wuttke et al., 2010).

[024] Alguns dos efeitos descritos acima em modelos animais foram encontrados em estudos clínicos, ainda pouco numerosos. Assim, a 20- hidroxiectisona aumenta a capacidade física (Azizov et al., 1995; Gadhzieva et al., 1995) e a massa muscular (Simakin et al., 1988) e provoca uma perda de massa gordurosa abdominal em voluntários obesos e com sobrepeso (Wuttke et al., 2013; Foucault et al., 2014; pedido de patente PCT WO 2013/068704).

[025] Entretanto, a 20E bem como seus metabólitos estão pouco biodisponíveis no camundongo (Dzhukharova et al., 1987; Hikino et al., 1972), no rato, (Kapur et al., 2010 e Seidlova-Wuttke et al., 2010) e no homem (Brandt 2003; Bolduc, 2006). Seu desempenho global não é, entre outras coisas, inteiramente satisfatório em relação com aplicações de melhoramento da qualidade muscular.

[026] Vários estudos mostraram que a turkesterona (11,20- dihidroxiectisona), metabólito derivado da 20E, mostra uma atividade superior à da 20E in vivo (Syrov et al., 2001: Bathori et al., 2008). Existe ainda hoje, para aplicações terapêuticas que visam um melhoramento da qualidade muscular tanto nos mamíferos obesos quanto nos mamíferos sarcopênicos, uma necessidade de novos compostos que possuam uma boa biodisponibilidade, que se expresse mais particularmente em termos de coeficiente de exposição plasmática elevado apresentando ao mesmo tempo uma atividade globalmente superior à da 20E em relação ao melhoramento da qualidade muscular, e essa atividade global se expressa em termos de performance de inibição da expressão gênica da miostatina combinada com o aumento da síntese proteica no mamífero.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[027] Os inventores descobriram agora que, de modo totalmente inesperado, certos compostos da família dos esteroides que correspondem a uma fórmula geral particular, cuja estrutura difere daquela da 20E e de seus metabólitos, apresentam um coeficiente de exposição plasmática superior ao desta última e efeitos iguais ou superiores aos da 20 hidroxiectisona (20E) para a inibição da miostatina e a estimulação da proteossíntese por fosforilação da proteína S6K1. Esses efeitos permitem melhorar a qualidade e/ou a força muscular nos mamíferos sarcopênicos e nos obesos sarcopênicos.

[028] Os compostos da presente invenção não interagem com os receptores nucleares esteroides da esfera sexual (receptores dos androgênios e dos estrogênios). Eles mostram uma boa estabilidade química no plasma e em microssomas. Diversos dentre eles apresentam finalmente um perfil farmacocinético nitidamente melhorado em relação à 20-hidroxiectisona. Eles induzem ainda uma melhor inibição da expressão gênica da miostatina e uma melhora mais pronunciada da síntese proteica.

[029] A presente invenção propõe assim um composto de fórmula geral (I) a seguir: na qual: V-U é uma ligação simples carbono-carbono e Y é um grupo hidroxila ou um hidrogênio, ou V-U é uma ligação etilênica C=C; X é escolhido entre: um oxigênio; um grupo N-OR5, E R5é então escolhido entre: um hidrogênio; um grupo alquila com C1-C6 que possui ou não insaturações na cadeia; um grupo (C1-C6)CO2R6com R6podendo ser um hidrogênio ou um grupo em C1-C6; um grupo (C1-C6)OR7, e R7é um ciclo aromático ou heteroaromático mono ou polissubstituído ou não por um grupo alquila ou alcoxila, CF3, Cl;um grupo (C1-C6)NR8R9, e R8e R9são grupos com C1-C6, ou grupos com (C1-C6)N(C1-C6) ou grupos com (C1-C6)N(C1- C6)OR6com R6definido como acima, NR8R9pode também ser um heterociclo; e na qual: Q é um grupo carbonila; com R1sendo escolhido entre: um grupo (C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6); um grupo (C1-C6)A, sendo que A representa um heterociclo eventualmente substituído por um grupo de tipo OH, OMe, (C1-C6), N(C1-C6), CO2(C1-C6); um grupo CH2Br; e W é um heteroátomo escolhido entre N, O e S; ou, • Q é um grupo CHOH; com R1sendo escolhido entre: um grupo (C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6); e W é um heteroátomo escolhido entre N e S; ou Q é escolhido entre: um grupo C=NOR5, e R5é definido como anteriormente; um grupo CHNR2R3, com R1sendo um grupo alquila com (C1-C6); com R2e R3idênticos ou diferentes sendo escolhidos cada um entre: um átomo de hidrogênio; um grupo alquila com (C1-C6); um grupo (C1- C6)W(C1-C6); um grupo cicloalquila; um grupo (C1-C6)CHF2; um grupo (C1-C6)A com A representando um heterociclo definido como anteriormente; um grupo de tipo COR4, sendo que R4é escolhido entre: um grupo alquila ou cicloalquila com (C1-C6) eventualmente insaturado; um grupo heterocíclico de tipo A como definido anteriormente, um grupo aromático ou heteroaromático substituído ou não por um grupo de tipo OH, OMe, (C1-C6), N(C1-C6), CO2(C1-C6), CF3, OCF3, CN, Cl, F; um grupo (C1-C6)W(C1-C6); e W é um heteroátomo escolhido entre N, O e S; sendo que o composto está em forma de um enantiômero, de um diastereoisômero, de um hidrato, de um solvato, de um tautômero, de uma mistura racêmica ou de um sal farmaceuticamente aceitável.

[030] Outra forma particular da presente invenção utiliza o composto de fórmula geral (I) citado anteriormente no qual Q representa um grupo carbonila.

[031] Uma forma particular da presente invenção utiliza o composto de fórmula geral (I), no qual: X é um oxigênio; V-U é uma ligação simples carbono-carbono; Y é um grupo hidroxila; Q é um grupo carbonila; R1é escolhido entre: um grupo (C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1- C6)W(C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6); um grupo (C1- C6)A, e A representa um heterociclo eventualmente substituído por um grupo de tipo OH, OMe, (C1-C6), N(C1-C6), CO2(C1-C6); W é um heteroátomo escolhido entre N, O e S.

[032] Outra forma particular da presente invenção utiliza o composto de fórmula geral (I) no qual Q representa um grupo CHNR2R3, com R2 e R3sendo escolhidos entre: um átomo de hidrogênio; um grupo alquila com (C1C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6); um grupo cicloalquila; um grupo (C1-C6)CHF2; um grupo (C1-C6)A, com A representando um heterociclo definido como anteriormente; um grupo de tipo COR4.

[033] sendo que R4é escolhido entre: um grupo alquila ou cicloalquila com (C1-C6) eventualmente insaturado; um grupo heterocíclico de tipo A como definido anteriormente, um grupo aromático ou heteroaromático substituído ou não por um grupo de tipo OH, OMe, (C1-C6), N(C1-C6), CO2(C1- C6), CF3, OCF3, CN, Cl, F; um grupo (C1-C6)W(C1-C6).

[034] Outra forma particular da presente invenção utiliza o composto de fórmula geral (I), no qual: X é um oxigênio; V-U é uma ligação simples carbono-carbono; Y é um grupo hidroxila; R1é um grupo metila; Q é um grupo CHNR2R3, com R2e R3sendo escolhidos entre: um átomo de hidrogênio; um grupo alquila com (C1-C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6); um grupo cicloalquila; um grupo (C1-C6)CHF2; um grupo (C1-C6)A, com A representando um heterociclo definido como anteriormente; um grupo de tipo COR4, sendo que R4é escolhido entre: um grupo alquila ou cicloalquila com (C1-C6) eventualmente insaturado; um grupo heterocíclico de tipo A como definido anteriormente, um grupo aromático ou heteroaromático substituído ou não por um grupo de tipo OH, OMe, (C1-C6), N(C1-C6), CO2(C1-C6), CF3, OCF3, CN, Cl, F; um grupo (C1-C6)W(C1-C6); e W é um heteroátomo escolhido entre N, O e S.

[035] Outra forma particular da presente invenção met utiliza o composto de fórmula geral (I) no qual Q representa um grupo C=NOR5, e R5é definido como anteriormente.

[036] Outra forma particular da presente invenção met em reuvre o composto de fórmula geral (I), no qual: X é um oxigênio; V-U é uma ligação simples carbono-carbono; Y é um grupo hidroxila; R1é um grupo metila; Q é um grupo C=NOR5, R5e é definido como anteriormente.

[037] Outra forma particular da presente invenção utiliza o composto de fórmula geral (I) no qual V-U é uma ligação etilênica C=C.

[038] Outra forma particular da presente invenção utiliza o composto de fórmula geral (I) no qual X é um grupo N-OR5, e R5é definido como anteriormente.

[039] Outra forma particular da presente invenção utiliza o composto de fórmula geral (I) escolhido entre os seguintes compostos: n°28: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C-metil- carbonimidoil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°32: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-dietilaminoetoxi)-C- metil-carbonimidoil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°41: 2-metoxi-N-(2-metoxietil)-N- [1- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17- il]etil]acetamida; n°42: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [1-(2- metoxietilamino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°43: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13- dimetil-17- [1-(3-piridilmetilamino)etil]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°46: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13- dimetil-17- [1-(tetrahidrofuran-2-ilmetilamino)etil]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°51: 2-etil-N-(2-metoxietil)-N- [1- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)- 2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-17-il]etil]butanamida; n°62: 2-metoxi-N-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-N- [1- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17- il]etil]acetamida; n°63: N-(tetratetrahidrofuran-2-ilmetil)-N- [1- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17-il]etil]furan-2- carboxamida; n°67: N-(2,2-difluoroetil)-N- [1- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)- 2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-17-il]etil]furan-2-carboxamida; n°76: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [1-(2- metoxietil(metil)amino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro- 1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°81: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13- dimetil-17-(2-morpholinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°86: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [2-(3- hidroxipyrrolidin-1-il)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro- 1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°88: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [2-(4- hidroxi-1-piperidil)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°89: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [2- [4-(2- hidroxietil)-1-piperidil]acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro- 1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°91: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17- [2-(3- dimetilaminopropil(metil)amino)acetil]-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°92: 2- [2-oxo-2- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi- 10,13-dimetil-6-oxo-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-17-il]etil]sulfanilacetato de etila; n°93: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-etilsulfanilacetil)- 2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°94: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [2-(2- hidroxietilsulfanil)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona.

[040] Outro objeto da presente invenção trata do uso de um composto de fórmula geral (I) como medicamento, em particular, em um veículo farmaceuticamente aceitável.

[041] Outro objeto da presente invenção utiliza o composto de fórmula geral (I) para seu uso no tratamento e/ou a prevenção da sarcopenia e da obesidade sarcopênica, de suas complicações e/ou patologias associadas tais como a perda de força, de massa muscular, de performances e capacidade físicas e de mobilidade no mamífero. As performances e capacidade físicas podem ser caracterizadas por testes de marcha e de esforço físico.

[042] Outro objeto da presente invenção utiliza o composto de fórmula geral (I) para seu uso no tratamento e/ou a prevenção da obesidade e de suas complicações e/ou das patologias associadas, vantajosamente do diabete de tipo 2 ou da síndrome metabólica no mamífero.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[043] A Figura 1 que faz parte do estado da técnica, ilustra as principais vias da proteossíntese e da proteólise nos músculos (composto segundo Zhao et al., 2008 e Little et al., 2009).

[044] A Figura 2 que faz parte do estado da técnica, ilustra o agravamento da sarcopenia em um contexto de obesidade (segundo Quillot et al., 2013).

[045] A Figura 3A ilustra os efeitos da 20E (composto comparativo) e de compostos de acordo com a presente invenção n° 51 e 93 sobre o peso de camundongos C57BL/6 submetidos a um regime hiperlipídico durante 6 semanas.

[046] A Figura 3B ilustra os efeitos da 20E (composto comparativo) e de compostos de acordo com a presente invenção n° 51 e 93 sobre a quantidade de proteínas do músculo Soleus de camundongos C57BL/6 submetidos a um regime hiperlipídico durante 6 semanas.

[047] A Figura 4 ilustra os efeitos da 20E (composto comparativo) e de compostos de acordo com a presente invenção n° 51 e 93 sobre o transcrito da miostatina do músculo Soleus de camundongos C57BL/6 submetidos a um regime hiperlipídico durante 6 semanas.

[048] A Figura 5A ilustra os efeitos da 20E (composto comparativo) e de compostos de acordo com a presente invenção n° 51 e 93 sobre os transcritos de MyoD de camundongos C57BL/6 submetidos a um regime hiperlipídico durante 6 semanas.

[049] A Figura 5B ilustra os efeitos da 20E (composto comparativo) e de compostos de acordo com a presente invenção n° 51 e 93 sobre os transcritos da Miogenina de camundongos C57BL/6 submetidos a um regime hiperlipídico durante 6 semanas.

[050] A Figura 6 ilustra em forma de tabela os resultados obtidos para compostos da presente invenção durante experiências de análise da expressão gênica da miostatina e da síntese proteica.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[051] O objeto da presente invenção consiste em desenvolver novos compostos químicos que correspondem em particular aos objetivos estabelecidos acima, em relação com aplicações terapêuticas para o tratamento e/ou a prevenção da obesidade e/ou da sarcopenia no mamífero. Esses últimos compostos são novos pois não existem nas bases de dados químicos. Eles podem vantajosamente ser sintetizados de acordo com processos industrializáveis, isto é, com um mínimo de etapas de síntese e um rendimento ótimo. Eles possuem efeitos superiores aos da 20E para a inibição da miostatina, a estimulação da proteossíntese pela fosforilação da proteína S6K1. Eles mostram uma boa estabilidade química no plasma e em microssomas. Eles possuem um perfil farmacocinético melhorado e uma posologia definida. Eles estimulam o anabolismo muscular nas células C2C12 e mostram um efeito anti- hiperglicêmico.

[052] No contexto da presente invenção entende-se por "grupo arila", um ciclo aromático que possui 5 a 8 átomos de carbonos ou vários ciclos aromáticos fundidos que possuem 5 a 14 átomos de carbonos. Em particular, os grupos arilas podem ser grupos monocíclicos ou bicíclicos, de preferência fenila ou naftila. Vantajosamente trata-se de um grupo fenila (Ph).

[053] No contexto da presente invenção entende-se por "grupo heteroarila", qualquer grupo aromático hidrocarbono de 3 a 9 átomos que contenha um ou mais heteroátomos, tais como, por exemplo, átomos de enxofre, nitrogênio ou oxigênio. A heteroarila de acordo com a presente invenção pode ser constituída por um ou mais ciclos fundidos. Exemplos de grupo heteroarila são os grupos furfurila, isoxazila, piridila, tiazolila, pirimidila, benzimidazol, benzoxazol, benzotiazol. Vantajosamente o grupo heteroarila é escolhido entre os grupos furfurila, piridila e tiazolila. De forma vantajosa trata-se do grupo furfurila.

[054] No contexto da presente invenção entende-se por "átomo de halogênio"qualquer átomo de halogênio, vantajosamente escolhido entre Cl, Br, I ou F, em particular escolhido entre F, Cl ou Br, em particular F ou Cl.

[055] No contexto da presente invenção entende-se por "grupo alquila com C1-C6", qualquer grupo alquila de 1 a 6 átomos de carbonos, linear ou ramificado, em particular, os grupos metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, iso-butila, sec-butila, t-butila, n-pentila, n-hexila. Vantajosamente trata-se de um grupo metila, etila, iso-propila ou t-butila, em particular de um grupo metila ou etila, mais particularmente de um grupo metila.

[056] No contexto da presente invenção entende-se por "grupo cicloalquila com C3-C6", qualquer ciclo saturado e hidrocarbonado que compreenda de 3 a 6 átomos de carbonos, em particular, o grupo ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila. Vantajosamente trata-se de um grupo ciclopropila ou ciclohexila.

[057] No contexto da presente invenção entende-se por "grupo alquila com C1-C6)arila", qualquer grupo arila tal como definido acima, ligado por meio de um grupo alquila com C1-C6 tal como definido acima. Em particular um exemplo de (grupo alquila com C1-C6)arila é um grupo benzila ou -(CH2)2fenila.

[058] No contexto da presente invenção entende-se por "farmaceuticamente aceitável"o que é útil na preparação de uma composição farmacêutica que é geralmente seguro, não tóxico e nem biologicamente nem de outra forma indesejável e que é aceitável para um uso veterinário bem como farmacêutico humano.

[059] No contexto da presente invenção entende-se por "sais farmaceuticamente aceitáveis de um composto" os sais que são farmaceuticamente aceitáveis, como definido aqui, e que possuem a atividade farmacológica desejada do composto parente. Tais sais compreendem: (1) os sais de adição de ácido formados com ácidos minerais tais como o ácido clorídrico, o ácido bromídrico, o ácido sulfúrico, o ácido nítrico, o ácido fosfórico e similares; ou formados com ácidos orgânicos tais como o ácido acético, o ácido benzenossulfônico, o ácido benzoico, o ácido canforossulfônico, o ácido cítrico, o ácido etanossulfônico, o ácido fumárico, o ácido glicoheptônico, o ácido glucônico, o ácido glutâmico, o ácido glicólico, o ácido hidroxinaphtoico, o ácido 2-hidroxietanossulfônico, o ácido láctico, o ácido maleico, o ácido málico, o ácido mandélico, o ácido metanossulfônico, o ácido mucônico, o ácido 2- naftalenossulfônico, o ácido propiônico, o ácido salicílico, o ácido succínico, o ácido dibenzoil-L-tartárico, o ácido tartárico, o ácido p-toluenossulfônico, o ácido trimetilacético o ácido trifluoroacético e similares; ou (2) os sais formados quando um próton ácido presente no composto parente é substituído por um íon metálico, por exemplo um íon de metal alcalino, um íon de metal alcalino-terroso ou um íon de alumínio; ou então é coordenado com uma base orgânica ou inorgânica. As bases orgânicas aceitáveis compreendem a dietanolamina, a etanolamina, a N-metilglucamina, a trietanolamina, a trometamina e similares. As bases inorgânicas aceitáveis compreendem o hidróxido de alumínio, o hidróxido de cálcio, o hidróxido de potássio, o carbonato de sódio e o hidróxido de sódio.

[060] No contexto da presente invenção, entende-se por "solvato de um composto", qualquer composto obtido por adição de uma molécula de solvente inerte ao composto de acordo com a presente invenção, e o solvato se forma em virtude de sua força de atração mútua. Os solvatos são, por exemplo, alcoolatos do composto. Um hidrato é um solvato no qual o solvente inerte utilizado é a água. Ele pode ser mono-, di- ou tri-hidratado.

[061] No contexto da presente invenção, entende-se por "tautômero"qualquer isômero de constituição dos compostos de acordo com a presente invenção que são interconversíveis pela reação química reversível denominada tautomerização. Na maior parte dos casos, a reação ocorre por migração de um átomo de hidrogênio acompanhada de uma mudança de localização de uma ligação dupla. Em uma solução de um composto capaz de tautomerização é criado um equilíbrio entre os 2 tautômeros. A relação entre tautômeros é então função do solvente, da temperatura e do pH. A tautomeria é, portanto, a transformação de um grupo funcional em outro objeto, na maior parte das vezes por deslocamento concomitante de um átomo de hidrogênio e de uma ligação p (ligação dupla ou tripla). Tautômeros usuais são por exemplo os pares aldeídos / cetonas - álcoois ou mais precisamente enol; amidas - ácidos imídicos; lactamas - lactimas; iminas - enaminas; enaminas - enaminas. Em particular, ele pode incluir uma tautomeria ciclo - cadeia que ocorre quando o movimento do próton é acompanhado pela transformação de uma estrutura aberta a um ciclo.

DESCRIÇÃO DAS SÍNTESES E ESQUEMAS GERAIS

[062] Os compostos de fórmula geral (I) podem ser preparados por aplicação ou adaptação de qualquer método conhecido em si do técnico no assunto e/ou ao alcance deste último, em particular os descritos por Larock (1989), ou por aplicação ou adaptação dos processos descritos nos procedimentos a seguir.

[063] Os diferentes grupos fazem referência às definições dadas anteriormente.

ESQUEMAA

[064] A 20-hidroxiectisona A1 pode ser reduzida em composto A2 por ação do zinco no ácido acético como descrito em Zhu et al. (2002). Esse composto A2 pode sofrer uma corte oxidante com C20-C22 da cadeia por reação do PCC na piridina para dar o composto A3. As alquiloximas de tipo R5ONH2 reagem com a carbonila em C20 para dar as iminas A4 correspondentes bem como o composto A5 de reação dupla com C20 e C6.

[065] As alquiloximas de tipo R5ONH2 reagem com a carbonila em C6 do composto A1 para dar a oxima B1 bem como, eventualmente os compostos B2 (confôrmero Z) e B’2 (confôrmero E) de eliminação da hidroxila em C14-C15. Esses 3 compostos podem sofrer independentemente uma quebra de cadeia como descrita no esquema A para dar os compostos B3 e B4, com como subproduto o composto (Z)-oxima B’3. Alquiloximas de tipo R5ONH2 reagem com a carbonila em C6 dos compostos B3 ou B4 para dar os compostos B5 e B6.

[066] O composto A1 pode sofrer uma corte oxidante como descrito no esquema A para dar o composto C1. Esse composto denominado Pós-esterona na literatura pode sofrer a ação de uma alcoxima de tipo R5ONH2 sobre a carbonila em C20, o que permite obter o composto C2, o composto C3 de reação dupla em C6 e C20 e o composto C4 de eliminação da hidroxila em C14-C15.

[067] A mistura de confôrmeros (E) e (Z); B3 e B’3 provenientes do esquema B levado a reagir com cloreto de titânio, que tem por ação a desidratação do composto (Z); B’3 para obter o D1. A carbonila em C17 do composto B3 isolado na etapa anterior sofre uma aminação redutora com R3NH2 em presença de cianoborohidreto de sódio para dar o composto D2 que pode ser acilado por um cloreto de ácido R4COCl, que permite a obtenção do composto D3.

[068] A Pós-esterona C1 sofre uma aminação redutora e depois uma acilação do mesmo tipo que as descritas no esquema D e permite a obtenção dos compostos E1, e depois E2.

[069] A amina secundária do composto E1 proveniente do esquema F é alquilada por um composto bromoalquila para dar a amina terciária F2.

[070] A Pós-esterona C1 pode ser bromada em C21 por meio de bromo para dar o composto bromado G1 que pode ser alquilado por um nucleófilo WR, W que pode ser uma amina ou um tiol e dar o composto G2.

[071] O composto bromado G1 obtido no esquema G pode reagir com compostos alcoolatos de tipo OR a fim de obter os compostos eterados H1.

[072] Os compostos G2 provenientes do esquema G podem sofrer uma redução da carbonila em C20 por meio do borohidreto de sódio para dar os álcoois I2.

[073] Os compostos G2 provenientes do esquema G podem sofrer a reação em C20 de uma alcoxamina de tipo R5ONH2 como descrito no esquema C e permite obter o composto J1.

EXEMPLOS EQUIPAMENTOS E MÉTODOS

[074] Os espectros de ressonância magnética nuclear (RMN) do próton (1H) são efetuados em um aparelho Bruker Avance DPX300 (300,16 MHz). Les deslocamentos químicos (d) são medidos em parte por milhão (ppm). Os espectros são calibrados a partir do deslocamento químico do solvente deuterado utilizado. As constantes de acoplamento (J) são expressas em Hertz (Hz) e a multiplicidade é representada da seguinte maneira, singuleto (s), dupleto (d), dupleto de dupleto (dd), tripleto (t), tripleto de dupleto (td), quadrupleto (q), multipleto (m). Os espectros de massa (sM) são realizados por um espectrômetro Agilent Technologies MSD, tipo G1946A, as amostras sãoionizadas por uma fonte "Atmospheric pressure chemical ionization" (APCI). ABREVIAÇÕES

[075] A título de exemplos ilustrativos da presente invenção, os compostos representados na tabela 2 foram sintetizadas. TABELA2 LISTA DOS COMPOSTOS CUJA SÍNTESE É EXEMPLIFICADA

EXEMPLO 1: ESQUEMA A PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS N°1 E N°2

[076] (2S,3R,5R,10R,13S,14S,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C-metilcarbonimidoil)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17- dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona e (2S,3R,5R,10R,13S,14R,17S)-17- (N-but-3-enoxi-C-metil-carbonimidoil)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil- 1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona ETAPA 1: PREPARAÇÃO DO (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-2,3-DIHIDROXI-10,13- DIMETIL-17- [(1R,2R)-1,2,5-TRIHIDROXI-1,5-DIMETIL-HEXIL]- 1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-DODECAHIDROCICLOPENTA [A]FENANTREN-6-ONA

[077] 20 g (41.6 mmol) de 20-hidroxiectisona (comercialmente disponível) são solubilizados em 280 mL de ácido acético e a solução é aquecida a 67 C. 27,2 g (416 mmol) de pó de zinco são adicionados por porções e o meio reacional é aquecido a 67°C durante 18h. Em seguida, a solução é filtrada a 20°C através de um bolo de Celite que é lavado com 50 mL de metanol. O filtrado é evaporado para dar 33,7 g de óleo marrom que é purificado por cromatografia flash sobre cartucho de gel de sílica (Diclorometano/Metanol, 90/10) para dar 9,52 g de pó amarelo (Rdt: 49%) de (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-2,3-dihidroxi- 10,13-dimetil-17- [(1R,2R)-1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetil-hexil]- 1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta [a]fenantren-6-ona.

[078] LC-MS: m/z = 465,3 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%, RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 5,72-5,43 (m, 1H(C7)), 4,42-4,32 (m, 2H), 4,13 (s, 1H), 3,76-2,62 (m, 2H), 3,2-3,1 (m, 2H), 2,21-2,14 (m, 2H), 1,90-1,02 (m, 28H), 1,03-0,77 (m, 6H). ETAPA 2: PREPARAÇÃO DO (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-17-ACETIL-2,3-DIHIDROXI- 10,13-DIMETIL-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17- DODECAHIDROCICLOPENTA [A]FENANTREN-6-ONA

[079] 9,52 g (20,28 mmol) de (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-2,3- dihidroxi-10,13-dimetil-17- [(1R,2R)-1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetil-hexil]- 1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta [a]fenantren-6-ona são solubilizados em 46 mL de piridina e 276 mL de diclorometano. 6,69 g (30,4 mmol) de Clorocromato de Piridínio são adicionados por porções em 10 min e o meio reacional é agitado a 20 C durante 2h30. A piridina e o diclorometano são depois evaporados sob vácuo e o resíduo é purificado por cromatografia flash sobre cartucho de gel de sílica (Diclorometano/Metanol, 95/5) para dar 4 g de pó bege (Rdt: 56%) de (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-17-acetil-2,3-dihidroxi-10,13- dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta [a]fenantren-6-ona.

[080] LC-MS: m/z = 347,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%, RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) d 5,68-5,46 (m, 1H(C7)), 4,41-4,37 (m, 2H), 3,76-3,55 (m, 2H), 2,83-2,54 (m, 2H), 2,33-1,95 (m, 6H), 1,90-1,30 (m, 10H), 1,28-1,18 (m, 1H), 0,88-0,42 (m, 6H). ETAPA 3: PREPARAÇÃO DOS EPÍMEROS (2S,3R,5R,10R,13S,14S,17S)-17-(N-BUT- 3-ENOXI-C-METIL-CARBONIMIDOIL)-2,3-DIHIDROXI-10,13-DIMETIL- 1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-DODECAHIDROCICLOPENTA [A]FENANTREN-6-ONA E (2S,3R,5R,10R,13S,14R,17S)-17-(N-BUT-3-ENOXI-C-METIL-CARBONIMIDOIL)-2,3- DIHIDROXI-10,13-DIMETIL-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17- DODECAHIDROCICLOPENTA [A]FENANTREN-6-ONA

[081] 328 mg (0,947 mmol) de (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-17- acetil-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17- dodecahidrociclopenta [a]fenantren-6-ona (14-desoxi-Pós-esterona) preparados na etapa 2 são solubilizados em 1,2 mL de etanol e 200 mg (0,994 mmol) de 2,2,2-trifluoroacetato de but-3-enoxiamônio são adicionados por porção. O meio reacional é levado ao refluxo 20 h. O solvente é evaporado e o resíduo é purificado por cromatografia preparativa em coluna C18 (Acetonitrila/água, 60/40) para dar 24 mg de pó bege (Rdt: 6%) de composto n°1 (2S,3R,5R,10R,13S,14S,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C- metil-carbonimidoil)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil- 1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta [a]fenantren-6-ona e 57 mg de pó bege (Rdt: 14%) de composto n°2 (2S,3R,5R,10R,13S,14R,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C-metil-carbonimidoil)-2,3- dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17- dodecahidrociclopenta [a]fenantren-6-ona.

COMPOSTO N°1

[082] LC-MS: m/z = 416.2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.

[083] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) - epímero beta em C14 - d 5,83-5,72 (m, 1H), 5,70 (s, 1H(C7)), 5,1-5 (m, 2H), 4,40-4,36 (m, 2H), 4 (t, 2H), 3,77-3,71 (m, 2H), 2,80-2,60 (m, 1H), 2,40-1,20 (m, 20H), 0,82-0,74 (m, 6H).

COMPOSTO N°2

[084] LC-MS: m/z = 416.2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.

[085] RMN 1H (300 MHz, DMSO-D6) - epímero alfa em C14 - d 5,87-5,72 (m, 1H), 5,48 (s, 1H(C7)), 5,1-4,9 (m, 2H), 4,40-4,36 (m, 2H), 4 (t, 2H), 3,77-3,71 (m, 2H), 2,80-2,60 (m, 1H), 2,44-1,23 (m, 20H), 0,83 (s, 3H), 0,47 (s, 3H).

[086] Os compostos n°3 a 6 foram preparados de acordo com o mesmo esquema, em forma de mistura de epímeros C14 alfa e C14 beta. 1Pureza LCMS, UV a 254 nm EXEMPLO 2: ESQUEMA B; PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°7: [1- [(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-DIHIDROXI- 6-METOXIIMINO-10,13-DIMETIL-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17- DECAHIDROCICLOPENTA [A]FENANTREN-17-IL]ETANONA OXIMA] E DO COMPOSTO N°19: [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-METOXIETOXI)-C-METIL- CARBONIMIDOIL)-6-METOXIIMINO-1 0,13-DIMETIL-2,3,4,5,9,11 ,12,15,16,17- DECAHIDRO-1H-CICLOPENTA [A]FENANTRENO-2,3,14 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°7 ETAPA 1: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO (A) [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6- METOXIIMINO-10,13-DIMETIL-17- [(1R,2R)-1,2,5-TRIHIDROXI-1,5-DIMETIL-HEXIL]- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-DECAHIDRO-1H-CICLOPENTA [A]FENANTRENO-2,3,14- TRIOL] E DO COMPOSTO (B) [(2R,3R)-2- [(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3- DIHIDROXI-6-METOXIIMINO-10,13-DIMETIL-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17- DECAHIDROCICLOPENTA [A]FENANTREN-17-IL|-6-METIL-HEPTANO-2,3,6-TRIOL|

[087] De acordo com o mesmo modo operatório que o descrito na etapa 3 do esquema A, 788 mg de pó branco (Rdt: 37%) do composto (a) [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-10,13-dimetil-17- [(1R,2R)- 1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetil-hexil]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantreno-2,3,14-triol] foram preparados a partir de 20- hidroxiectisona e de cloridrato de O-metilhidroxilamina. 667 mg (Rdt: 32%) do composto de eliminação (b) [(2R,3R)-2- [(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3- dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17- decahidrociclopenta [a]fenantren-17-il]-6-metil-heptano-2,3,6-triol] puderam igualmente ser isolados bem como 34 mg (Rdt: 2%) do composto de eliminação (c) [(2R,3R)-2- [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13- dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta [a]fenantren-17-il]-6-metil- heptano-2,3,6-triol] puderam igualmente ser isolados.

COMPOSTO (A)

[088] LC-MS: m/z = 510.2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.

[089] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 6,25 (s, 1H(C7)), 4,45-4,35 (m, 3H), 4,31-4,29 (m, 1H), 4,14 (s, 1H), 3,74-3,69 (m, 4H), 3,6-3,5 (m, 1H), 3,173,08 (m, 1H), 2,87-2,75 (m, 1H), 2,26-2,20 (m, 2H), 2,05-1,1 (m, 15H), 1,1-0,98 (m, 11H), 0,73 (s, 6H).

COMPOSTO (B)

[090] LC-MS: m/z = 492,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%, RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 6,04 (s, 1H), 5,77 (s, 1H), 4,45-4,30 (m, 2H), 4,25 (s, 1H), 4,11 (s, 1H), 3,75-3,65 (m, 5H), 3,63-3,55 (m, 1H), 3,20-3,08 (m, 2H), 2,171,90 (m, 3H), 1,70-1,20 (m, 11H), 1,15-0,93 (m, 14H), 0,74 (s, 3H).

COMPOSTO (C)

[091] LC-MS: m/z = 492,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%, RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 6,55 (s, 1H), 5,81 (s, 1H), 4,44-4,26 (m, 3H), 4,09 (s, 1H), 3,79-3,67 (m, 5H), 3,62-3,54 (m, 1H), 3,16-3,08 (m, 1H), 2,30-1,90 (m, 4H), 1,70-1,20 (m, 11H), 1,15-0,92 (m, 14H), 0,73 (s, 3H).

[092] Partindo do composto (b) isolado: ETAPA 2A: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO (D): [1- [(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3- DIHIDROXI-6-METOXIIMINO-10,13-DIMETIL-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17- DECAHIDROCICLOPENTA [A]FENANTREN-17-IL]ETANONA].

[093] De acordo com o mesmo modo operatório que o descrito na etapa 2 do esquema A, 267 mg de pó branco (Rdt: 55%) de composto (d) [1- [(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil- 1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta [a]fenantren-17-il]etanona] foram preparados a partir do composto (b).

COMPOSTO (D)

[094] LC-MS: m/z = 374.2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.

[095] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 6,09 (s, 1H), 5,81-5,75 (m, 1H), 4,39-4,37 (m, 1H), 4,30-4,26 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,72-3,68 (m, 1H), 3,653,55 (m, 1H), 3,2-3 (m, 2H), 2,75-2,60 (m, 1H), 2,29-2,10 (m, 5H), 1,74-1,23 (m, 8H), 0,74-0,70 (m, 6H). ETAPA 3A: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°7: [1- [(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3- DIHIDROXI-6-METOXIIMINO-10,13-DIMETIL-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17- DECAHIDROCICLOPENTA [A]FENANTREN-17-IL]ETANONA OXIMA]

[096] De acordo com o mesmo modo operatório que o descrito na etapa 3 do esquema A, 81 mg de pó branco (Rdt: 71%) de - [(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil- 1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta [a]fenantren-17-il]etanona oxima foram preparados a partir do composto (d).

COMPOSTO N°7

[097] LC-MS: m/z = 389.2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.

[098] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 10,53 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,04 (s, 1H), 4,37 (d, 1H), 4,30-4,26 (m, 1H), 3,77-3,67 (m, 4H), 3,65-3,55 (m, 1H), 3,15-3,03 (m, 1H), 2,80-2,65 (m, 2H), 2,25-2,12 (m, 1H), 2,05-1,99 (m, 1H), 1,79 (s, 3H), 1,74-1,20 (m, 8H), 0,76-0,66 (m, 6H). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°19 PARTINDO DO COMPOSTO (A) (2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-METOXIIMINO-10,13-DIMETIL-17- [(1R,2R)- 1,2,5-TRIHIDROXI-1,5-DIMETIL-HEXIL]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-DECAHIDRO-1H- CICLOPENTA [A]FENANTRENO-2,3,14-TRIOL ISOLADO ETAPA 2B: PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS (E): [1- [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-TRIHIDROXI-6-METOXIIMINO-10,13- DIMETIL-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-DECAHIDRO-1H-CICLOPENTA [A]FENANTREN-17- IL]ETANONA] E (F): [1- [(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-TRIHIDROXI-6- METOXIIMINO-10,13-DIMETIL-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-DECAHIDRO-1H- CICLOPENTA [A]FENANTREN-17-IL]ETANONA].

[099] De acordo com o mesmo modo operatório que o descrito na etapa 2 do esquema A, 891 mg de pó branco (Rdt: 36%) de composto (e) [1- [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17-il]etanona] foram isolados bem como 23 mg (Rendimento: 0.9%) do composto (f): [1- [(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17-il]etanona] a partir de 3.5 g de composto (a) [2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-10,13- dimetil-17- [(1R,2R)-1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetil-hexil]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantreno-2,3,14-triol] isolado .

COMPOSTO (E)

[100] LC-MS: m/z = 392.2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.

[101] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 6,28 (s, 1H(C7)), 4,74 (s, 1H), 4,42-4,36 (m, 1H), 4,32-4,28 (m, 1H), 3,76-3,70 (m, 4H), 3,68-3,52 (m, 1H), 3,20-3,12 (m, 1H), 2,90-2,76 (m, 1H), 2,30-2,00 (m, 5H), 1,90-1,50 (m, 8H), 1,49-1,24 (m, 3H), 0,72 (s, 3H), 0,45 (s, 3H).

COMPOSTO (F)

[102] LC-MS: m/z = 392.2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.

[103] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 5,71 (s, 1H(C7)), 4,45 (s, 1H), 4,45-4,41 (m, 1H), 4,26-4,23 (m, 1H), 3,76-3,70 (m, 4H), 3,65-3,55 (m, 1H), 3,18-3,09 (m, 1H), 2,90-2,80 (m, 1H), 2,22-2,00 (m, 5H), 1,88-1,22 (m, 11H), 0,73 (s, 3H), 0,47 (s, 3H). ETAPA 3B: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°19: [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)- 17-(N-(2-METOXIETOXI)-C-METIL-CARBONIMIDOIL)-6-METOXIIMINO-10,13-DIMETIL- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-DECAHIDRO-1H-CICLOPENTA [A]FENANTRENO-2,3,14-

[104] De acordo com o mesmo modo operatório que o descrito na etapa 3 do esquema A, 46 mg de pó branco (Rendimento: 48%) de composto n°19 [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-metoxietoxi)-C-metil-carbonimidoil)-6- metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a] fenantreno-2,3,14-triol] foram preparados a partir de 233 mg do composto (e).

COMPOSTO N°19

[105] LC-MS: m/z = 465.2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.

[106] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 6,28 (s, 1H(C7)), 4,66 (s, 1H), 4,44-4,38 (m, 1H), 4,34-4,28 (m, 1H), 4,10-4,01 (m, 2H), 3,75-3,70 (m, 4H), 3,65-3,45 (m, 3H), 3,24 (s, 3H), 2,98-2,76 (m, 2H), 2,30-1,90 (m, 4H), 1,80-1,24 (m, 12H), 0,73 (s, 3H), 0,49 (s, 3H).

[107] O composto n°21 foi preparado de acordo com o mesmo esquema. 1Pureza LCMS, UV a 254 nm

EXEMPLO 3:ESQUEMA C PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°23

[108] (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-etoxi-C-metil- carbonimidoil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona

[109] De acordo com o mesmo modo operatório que o descrito na etapa 3 do esquema A, 64 mg de pó branco (Rendimento: 22%) de (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-etoxi-C-metil-carbonimidoil)-2,3,14- trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona foram preparados a partir da post-esterona (obtida por corte oxidante da cadeia da 20-hidroxiectisona de acordo com o mesmo modo operatório que o descrito na etapa 2 do esquema B).

COMPOSTO N°23

[110] LC-MS: m/z = 406,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 93%,

[111] RMN 1H (300 MHz, CD3OD) d 5,82 (s, 1H(C7)), 4,04 (q, 2H), 3,97-3,92 (m, 1H), 3,89-3,80 (m, 1H), 3,22-3,10 (m, 1H), 3,04 (t, 1H), 2,43-1,55 (m, 15H), 1,45-1,37 (m, 1H), 1,21 (t, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,64 (s, 3H).

[112] Os compostos n°24 a 36 foram preparados de acordo com o mesmo esquema 1Pureza LCMS, UV a 254 nm EXEMPLO 4:ESQUEMA D PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°37

[113] N-(2,2-difluoroetil)-N- [1- [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)- 2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17-il]etil]furan-2-carboxamida.

ETAPA 1: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°39

[114] [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17- [1-(2,2- difluoroetilamino)etil]-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantreno-2,3,14-triol].

[115]180 mg (0,46 mmol) de composto (e) [1- [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17-il]etanona] obtido na etapa 2b de a método B são solubilizados em 5 mL de metanol e 0,21 mL (2,76 mmol) de 2,2-difluoroetanamina são adicionados ao meio reacional. O pH da solução é ajustado a 6 por meio da quantidade suficiente de ácido acético concentrado. Em seguida 31,8 mg (0,506 mmol) de cianoborohidreto de sódio são adicionados por porções e a suspensão obtida é aquecida ao refluxo 20 h. O solvente é evaporado e o resíduo obtido é redissolvido em 20 mL de água e o pH é ajustado a 8 por meio de uma solução saturada de bicarbonato de sódio. Essa fase aquosa é extraída com duas vezes 15 mL de butanol e a fase butanólica é secada em sulfato, filtrada e evaporada para dar um sólido amarelo, que, redissolvido em 30 mL de éter isopropílico e filtrado dá após secagem 134 mg (Rendimento: 62%) do composto n°39 (2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17- [1-(2,2-difluoroetilamino)etil]-6-metoxiimino-10,13-dimetil- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantreno-2,3,14-triol em forma de pó amarelo.

COMPOSTO N°39

[116] LC-MS: m/z = 457,4 (MH+) pureza UV a 254 nm = 97%.

[117] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 6,30-6,23 (m, 1H), 5,955,70 (m, 1H), 4,43-4,25 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,65-3,55 (m, 1H), 3,42-3,32 (m, 1H), 2,88-2,76 (m, 2H), 2,29-2,23 (m, 1H), 1,99-1,15 (m, 16H), 1,05-0,82 (m, 3H), 0,73 (s, 3H), 0,61-0,53 (m, 3H).

ETAPA 2: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°37

[118] N-(2,2-difluoroetil)-N- [1- [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)- 2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17-il]etil]furan-2-carboxamida

[119] 134 mg,(0,285 mmol) de composto n°39 [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17- [1-(2,2-difluoroetilamino)etil]-6- metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantreno-2,3,14-triol] são solubilizados em 2 mL de THF e 52 mg (0,854 mmol) de bicarbonato de soda são adicionados ao meio reacional sob atmosfera de argônio. 30 µL (0,299mmol) de cloreto de furoíla são adicionados e o meio reacional é agitado 20 h a 20°C. A solução é depois vertida sobre 5 mL de água e extratoe duas vezes com 10 mL de butanol. A fase butanólica é evaporada para dar 118 mg de sólido purificado por cromatografia flash sobre cartucho de gel de sílica (Diclorometano/MeOH, 95/5) para dar 100 mg de pó branco (Rendimento: 60%) do composto n°37:N-(2,2-difluoroetil)-N- [1- [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17-il]etil]furano- 2-carboxamida.

COMPOSTO N°37

[120] LC-MS: m/z = 551,3 (MH+) pureza UV a 254 nm = 93%.

[121] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) d 7,87 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,58 (d, 1H), 4,43-4,27 (m, 3H), 3,95-3,83 (m, 1H), 3,75-3,65 (m, 4H), 3,63-3,49 (m, 2H), 2,85-2,68 (m, 1H), 2,31-2,18 (m, 1H), 2,011 (m, 17H), 0,73-0,15 (m, 6H).

[122] Os compostos n°38 e 40 foram preparados de acordo com o mesmo esquema. 1Pureza LCMS, UV a 254 nm

EXEMPLO 5:ESQUEMA E PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°41

[123] 2-metoxi-N-(2-metoxietil)-N- [1- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17- il]etil]acetamida

ETAPA 1: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°42

[124] (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [1-(2- metoxietilamino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona

[125] 5 g (13,8 mmol) de Pós-esterona (obtida por corte oxidante da cadeia da 20-hidroxiectisona de acordo com o mesmo modo operatório que o descrito na etapa 2 do esquema B) são solubilizados em 250 mL de metanol e 7,2 mL (83 mmol) de 2-metoxietilamina são adicionados gota a gota. O pH da solução é levado em seguida a pH 6 por adição de ácido acético concentrado e 250 mL de THF são adicionados. 0,954 g de cianoborohidreto de sódio são adicionados por porções e o meio reacional é levado ao refluxo por 20 h. Os solventes são evaporados e o bruto obtido é redissolvido em 100 mL de água e o pH é ajustado a 8 por adição de uma solução saturada de bicarbonato de soda. O meio é extraído três vezes com 80 mL de butanol e a fase butanólica é evaporada para dar uma mousse(espuma) marrom que, redissolvida com 5 mL de acetato de etila dá após filtração e secagem 3,32 g (Rendimento: 57%) do composto n°42: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [1-(2- metoxietilamino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona em forma de pó cinza.

COMPOSTO N°42

[126] LC-MS: m/z = 422,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 95%,

[127] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 5,70-5,60 (m, 1H(C7)), 4,804,62 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 4,43-4,35 (m, 1H), 3,78-3,70 (m, 2H), 3,68-3,50 (m, 3H), 3,30-3,18 (m, 5H), 3,10-2,91 (m, 1H), 2,30-0,9 (m, 18H), 0,82 (s, 3H), 0,59 (s, 3H).

[128] RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)d 202,9 (C6), 120,5, 82,9, 66,7, 128.1, 46,2, 37,8, 30,5, 23,9, 6,2.

ETAPA 2: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°41

[129] 2-metoxi-N-(2-metoxietil)-N- [1- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17- il]etil]acetamida

[130] De acordo com o mesmo modo operatório que a etapa 2 do exemplo 5, 89 mg (Rendimento: 58%) de composto n°41 [2-metoxi-N-(2- metoxietil)-N- [1- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6- oxo-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-17- il]etil]acetamida] foram obtidos em forma de pó laranja a partir do composto n°42.

COMPOSTO N°41

[131] LC-MS: m/z = 494,4 (MH+) pureza UV a 254 nm = 94%, RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 5,63 (s, 1H(C7)), 4,88-4,7 (m, 1H), 4,5-4,35 (m, 2H), 4,2-3,9 (m, 2H), 3,76 (s, 1H), 3,68-3,52 (m, 1H), 3,5-3,3 (m, 4H), 3,28-3,18 (m, 6H), 3,08-2,9 (m, 1H), 2,3-0,95 (m, 18H), 0,88-0,75 (m, 3H), 0,7-0,42 (m, 3H).

[132] Os compostos n°43 a 75 foram preparados de acordo com o mesmo esquema: 1Pureza LCMS, UV a 254 nm

EXEMPLO 6: ESQUEMA F; PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°76

[133] (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [1-(2- metoxietil(metil)amino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro- 1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona

[134] 155 mg (0,368 mmol) de composto n°42 [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [1-(2-metoxietilamino) etil]-10,13- dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona] preparados de acordo com a técnica descrita na etapa 1 do exemplo 5 são solubilizados em 2,5 mL de DMF e 61,8 mg (0,735 mmol) de bicarbonato de soda são adicionados ao meio reacional bem como 0,034 mL (0,552 mmol) de iodometano. A suspensão obtida é agitada a 20°C por 20h.A solução é depois vertida sobre 15 mL de água e extraída três vezes com 15 mL de butanol. A fase butanólica é evaporada para dar 220 mg de pó purificado por cromatografia flash sobre cartucho de gel de sílica (Diclorometano/MeOH, 95/5) para dar 40 mg de pó branco (Rendimento: 25%) do composto n°76: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [1-(2- metoxietil(metil)amino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona em forma de pó branco.

COMPOSTO N°76

[135] LC-MS: m/z = 436,3 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%, RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 5,61 (s, 1H(C7)), 4,64 (s, 1H), 4,47-4,34 (m, 2H), 3,75 (s, 1H), 3,67-3,50 (m, 1H), 3,25-3,16 (m, 5H), 3,05-2,85 (m, 1H), 2,27-1,15 (m, 20H), 0,90-0,70 (m, 6H), 0,59 (s, 3H).

[136] Os compostos n°77 a 80 foram preparados de acordo com o mesmo esquema. 1Pureza LCMS, UV a 254 nm

EXEMPLO 7: ESQUEMA G PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°81

[137] (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13- dimetil-17-(2-morpholinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona ETAPA 1: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°102: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17- (2-BRCOMOACETIL)-2,3,14-TRIHIDROXI-10,13-DIMETIL-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- DECAHIDRO-1H-CICLOPENTA [A]FENANTREN-6-ONA

[138] 1 g (2,76 mmol) de Pós-esterona (obtida por corte oxidante da cadeia da 20-hidroxiectisona de acordo com o mesmo modo operatório que o descrito na etapa 2 do esquema B) são solubilizados em 20 mL de metanol. A solução e resfriada a 0°C e 0,284 mL (5,52 mmol) de bromo são adicionados gota a gota e o meio reacional é agitado 1 h a essa temperatura, e depois deixada à temperatura ambiente 16 h. O meio reacional é vertido sobre 50 mL de uma solução saturada de bicarbonato de soda e extraída três vezes com 100 mL de acetato de etila. As fases orgânicas são lavadas com 50 mL de solução saturada de bicarbonato de soda, e depois de água salgada, secadas em sulfato de sódio, filtradas e o solvente evaporado para dar 833 mg de pó, que, redissolvido em 30 mL de diclorometano, dá após filtração e dessecação 412 mg (Rendimento: 31%) de composto n°102: 2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-brcomoacetil)-2,3,14- trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona em forma de pó amarelo.

COMPOSTO N°102

[139] LC-MS: m/z = 443,1 (MH+) pureza UV a 254 nm = 91%.

[140] RMN 1H (300 MHz,DMSO-d6)d 5,69-5,63 (m,1H(C7)), 5,08 (s, 1H), 4,42-4,35 (m, 3H), 4,33-4,22 (m, 1H), 3,77 (s, 1H), 3,66-3,58 (m, 1H), 3,39 (t, 1H), 3,10-2,95 (m, 1H), 2,25-1,20 (m, 13H), 0,83 (s, 3H), 0,51 (s, 3H). ETAPA 2: PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°81:(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)- 2,3,14-TRIHIDROXI-10,13-DIMETIL-17-(2-MORFOLINOACETIL)- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-DECAHIDRO-1H-CICLOPENTA [A]FENANTREN-6-ONA

[141] 50 mg (0,103 mmol) de composto n°102 [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-brcomoacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13- dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona] são solubilizados em 1 mL de DMF e 42,7 mg de carbonato de potássio são adicionados bem como 10,78 µl (0,124 mmol) de morfolina. Após 18 h de agitação a 20°C, o meio reacional é vertido sobre 10 mL de água e essa fase aquosa é extraída duas vezes com 15 mL de butanol. A fase orgânica é evaporada para dar 71 mg de pó purificado por cromatografia flash sobre cartucho de gel de sílica (Diclorometano/MeOH, 90/10) para dar 28 mg (Rendimento: 60%) do composto n°81:(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14- trihidroxi-10,13-dimetil-17-(2-morfolinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona em forma de pó branco.

COMPOSTO N°81

[142] LC-MS: m/z = 448,4 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%,

[143] RMN 1H (300 MHz,DMSO-d6)d 5,65 (s, 1H(C7)), 5,02 (s, 1H), 4,45 (d, 1H), 4,40-4,37 (m, 1H), 3,77 (s, 1H), 3,68-3,53 (m, 5H), 3,34-3,24 (m, 4H), 3,08-2,95 (m, 1H), 2,45-1,17 (m, 16H), 0,82 (s, 3H), 0,48 (s, 3H).

[144] Os compostos n°82 a 94 foram preparados de acordo com o mesmo esquema.

EXEMPLO 8: ESQUEMA H PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°95

[145] (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-etoxiacetil)-2,3,14- trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona

[146] 100 mg (0,227 mmol) de composto n°102 [2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-brcomoacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13- dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6- ona] preparados na etapa 1 do exemplo 7 são solubilizados em 2 mL de etanol e 0,102 mL (0,272 mmol) de uma solução de etóxido de sódio a 21% no etanol diluídos em 1 mL de etanol são adicionados gota a gota e a solução obtida é levada ao refluxo 30 min. O meio reacional resfriado a 20°C é vertido sobre 25 mL de água e extrato com duas vezes 20 mL de butanol. A fase orgânica é evaporada para dar 30 mg de um óleo purificado por cromatografia flash sobre cartucho de gel de sílica (Diclorometano/MeOH, 95/5) para dar 13,5 mg (Rendimento: 14%) do composto n°95: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-etoxiacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13- dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona em forma de óleo amarelo.

COMPOSTO N°95

[147] LC-MS: m/z = 407,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 93%, RMN 1H (300 MHz,DMSO-d6)d 5,65-5,59 (m, 1H(C7)), 4,96 (s, 1H), 4,46 (d, 1H), 4,414,36 (m, 1H), 4,03 (q, 2H), 3,77 (s, 1H), 3,68-3,55 (m, 1H), 3,08-2,90 (m, 1H), 2,75-2,62 (m, 1H), 2,3-2,15 (m, 2H), 1,92-1,42 (m, 13H), 1,18 (t, 3H), 0,83 (s, 3H), 0,58-0,49 (m, 3H).

[148] O composto n°96 foi preparado de acordo com o mesmo esquema. 1Pureza LCMS, UV a 254 nm

EXEMPLO 9:ESQUEMA I PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°97

[149] (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [1- hidroxi-2-(2-hidroxietil(metil)amino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona

[150] 157 mg (0,360 mmol) de [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [2-(2- hidroxietil(metil)amino)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro- 1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona] obtidos de acordo com o método da etapa 2 do exemplo 7 são solubilizados em 7,5 mL de etanol e 21,14 mg (0,559 mmol) de borohidreto de sódio são adicionados por porções. Após 16 h de agitação a 20 °C, o meio reacional é vertido sobre 20 mL de água e extraído com três vezes 15 mL de butanol. A fase orgânica é evaporada para dar uma pó purificado por cromatografia flash sobre cartucho de gel de sílica (Diclorometano/MeOH/NH4OH, 85/14/1) para dar 96 mg (Rendimento: 60%) do composto n°97: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [1-hidroxi-2- (2-hidroxietil(metil)amino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro- 1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona em forma de pó branco.

COMPOSTO N°97

[151] LC-MS: m/z = 438,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%, RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)d 5,6 (s, 1H(C7)), 5,32-5,2 (m, 2H), 4,77 (s, 1H), 4,47 (d, 1H), 4,42-4,38 (m, 1H), 3,92-3,57 (m, 4H), 3,3-2,95 (m, 4H), 2,82 (s, 3H), 2,311,18 (m, 16H), 0,85 (s, 3H), 0,69 (s, 3H).

[152] RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)d 203,2, 164,9, 121,0, 82,8, 66,9, 59,0, 55,6, 50,6, 46,9, 40,7, 37, 34, 31,9, 31,1, 30,3, 24,5, 23,2, 20,4, 16,3.

[153] Os compostos n°98 a 100 foram preparados de acordo com o mesmo esquema. 1Pureza LCMS, UV a 254 nm

EXEMPLO 10:ESQUEMAJ PREPARAÇÃO DO COMPOSTO N°101

[154] (2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-17-(N- metoxi-C-(morfolinometil)carbonimidoil)-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17- decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantreno-2,3,14-triol

[155] 30 µl (0,301 mmol) de cloridrato de metoxilamina são solubilizados em 0,6 mL de piridina e 136 mg (0,301 mmol) de composto n°81 [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-17-(2- morfolinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren- 6-ona] preparados dans a etapa 2 do exemplo 7 são adicionados por porções. Após 36 h de agitação a 20°C, o meio reacional é redissolvido em 10 mL de diclorometano e essa solução é lavada duas vezes com água salgada, secada com sulfato de sódio, filtrada e evaporada para dar uma pó purificado por cromatografia flash sobre cartucho de gel de sílica (Diclorometano/MeOH, 90/10) para dar 81 mg (Rendimento: 53%) do composto n°101: (2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-17-(N-metoxi-C- (morfolinometil)carbonimidoil)-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro- 1H-ciclopenta [a]fenantreno-2,3,14-triol em forma de pó amarelo.

COMPOSTO N°101

[156] LC-MS: m/z = 506,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.

[157] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) d Mistura de confôrmeros (Z) e (E) em C6: 6,28 (s,0,45H (C7-confôrmero E), 5,72 (s,0,55H (C7-confôrmero Z), 4,62 (s,0,45H-confôrmero E), 4,53 (s,0,55H-confôrmero Z), 4,47-4,35 (m,1H), 4,33-4,21(m,1H), 3,77-3,70 (m,7H), 3,60-3,48 (m,5H), 3,16-3,06 (m,1H), 2,902,70 (m,2H), 2,45-1,20 (m,18H), 0,72 (s,3H), 0,64-0,57 (m,3H).

RASTREAMENTO EM CASCATA E CARACTERIZAÇÃO DOS EFEITOS BIOLÓGICOS DOS DERIVADOS DA 20-HIDROXIECTISONA

[158] O desenvolvimento do teste de rastreamento foi iniciado a partir dos trabalhos da literatura e baseado sobre as características da patologia da sarcopenia. No nível fisiopatológico, essa doença se caracteriza por uma diminuição da síntese proteica e um aumento da proteólise. O desenvolvimento de futuros medicamentos deve, portanto, ser baseado em fatores moleculares em ligação com esses dois fenômenos.

[159] No nível celular, em culturas de células musculares provenientes da linhagem murina C2C12, Gorelick-Feldman et al. (2008) mostraram que um tratamento pelas fitoectisonas aumenta a síntese proteica em +20% em média. Os primeiros estudos de desenvolvimento apoiaram-se nas condições de cultura e de tratamento descritas por Gorelick-Feldman em presença de produtos de referências (IGF-1 e a 20-hidroxiectisona ou 20E). Medidas da incorporação de leucina tritiada nessas células foram realizadas para avaliar a síntese de novo de proteínas. Esses primeiros resultados permitiram determinar que a sequência ótima para observar os efeitos das fitoectisonas sobre a síntese proteica era diferenciar as células durante 5 dias, e depois colocar a leucina tritiada durante 2h30 em presença de iGF-1 ou de 20E.

[160] A análise bibliográfica mostrou que moléculas tais como IGF-1 só aumentavam a síntese proteica em 20%, ativando ao mesmo tempo alvos dessa via de sinalização de modo mais pronunciado e que pode atingir estimulações da ordem de 200% [Kazi et al., 2010]. Esses alvos compreendem as fosforilações ativadoras de proteínas tais como Akt ou a S6 quinase. De outro lado, no mesmo sistema celular C2C12, Zubeldia et al. (2012) analisaram os fenômenos de apoptose e de proteólise. Em seu estudo, eles relataram em particular que extratos de plantas que contêm as fitoectisonas como a turkesterona ou a 20E eram capazes, após 24 h de tratamento de células C2C12 diferenciadas, de inibir a expressão dos genes da miostatina e da caspase 3 de um fator 4 e 2, respectivamente [Zubeldia et al., 2012].

[161] Após várias experiências nas quais as células C2C12 diferenciadas em miotubos foram incubadas em presença de iGF-1 ou de 20E durante 2h30 ou 6 h, dois testes de rastreamento foram desenvolvidos. Assim, a fosforilação da proteína S6 quinase e a expressão do gene da miostatina foram estudadas a fim de determinar sua modulação por um hormônio de crescimento ou uma ectisona e de caracterizar essas modulaçãos de um ponto de vista estatístico.

PROTOCOLOS INIBIÇÃO DA EXPRESSÃO DA MIOSTATINA EM CÉLULAS C2C12

[162] As células mioblásticas C2C12 (ATCC CRL-1772) são semeadas em placas 24 poços na densidade de 30 000 células por poço e cultivadas em um meio DMEM que contém glicose à razão de 4,5 g/L e suplementado com soro de bezerro fetal (10%) e com antibióticos (penicilina e estreptomicina). Quarenta e oito horas mais tarde, os mioblastos são induzidos em diferenciação por privação parcial de soro (2% em vez de 10%) durante 5 dias. As células são depois colocadas em um meio empobrecido em glicose (DMEM que contém 1 g/L de glicose) e desprovido de soro em presença das moléculas a ser testadas ou das referências (IGF-1 100 ng/mL ou 20E 10 µM) durante 6 h. No fim da experiência, os RNA mensageiros (RNAm) são extraídos utilizando a metodologia clássica à base de fenol e clorofórmio. De forma breve, as células são lisadas em uma solução de trizol (Sigma T9424) que contém um ácido forte e fenol. Os RNAm são separados das proteínas por adição de clorofórmio seguida de centrifugação. Eles são depois precipitados no isopropanol para ser em seguida suspensos à concentração de 1µg/µL em uma água ultrapura desprovida de RNases e DNAses. 1 µg de RNAm é então convertido por retro transcrição em DNA complementar pela enzima AMV em presença de um iniciador e de uma mistura de nucleotídeos de acordo com o protocolo dado pelo fornecedor (Applied Biosystems 4368814). A expressão gênica é estudada por reação em cadeia iniciada por uma enzima polimerase e usualmente denominada PCR em condições quantitativas, daí o nome preciso de qPCR. As qPCR são realizadas em um 7900HT Fast real-Time PCR detection system (Applied Biosystems). As condições de programação são padrão e consistem em 1 ciclo a 95°C durante 15 min, seguido de 40 ciclos a 95°C durante 15 s e a 60°C durante 1 min e o processo é terminado por um etapa de curva de fusão entre 60°C e 95°C. Todas as amostras analisadas contêm 100 ng de aDNc, um tampão de qPCR que inclui a enzima, a mistura de oligonucleotíceos e o intercalante (o sybergreen ou SYBRgreen), e o par de iniciadores específicos do gene estudado, estrategicamente escolhido entre duas sequências exônicas e à concentração final de 200 nM. Sondas fluorescentes se fixam sobre o DNA de filamento duplo e só fluorescem depois de fixadas no DNA. Um limiar de fluorescência é estabelecido pelo programa da máquina. Quando a quantidade de DNA permite que sonde fluorescente ultrapasse esse limiar, obém-se um número de ciclo PCR denominado "Ct" para "Ciclo Threshold" ou ciclo limiar. É esse valor que está na base dos cálculos para quantificar o DNA de forma relativa. Uma relação R é estabelecida entre a quantidade de DNA de partida de uma amostra e a de um controle, que não foi submetido a um tratamento (soit R=2-(Ct amostra —Ct controle)) e essa medida será relacionada com a de um gene de manutenção conhecido por não ser modulado pelo tratamento (ou seja, R = 2- ??Ct)

[163] Os iniciadores utilizados estão relacionados na tabela a seguir: TABELA3: INICIADORES UTILIZADOS PARA AVALIAR AS MODIFICAÇÕES DE EXPRESSÃO GÊNICA

FOSFORILAÇÃO DA S6 QUINASE

[164] As células mioblásticas C2C12 (ATCC CRL-1772) são semeadas em placas 6 poços à densidade de 170 000 células por poço e cultivadas em um meio DMEM que contém glicose à razão de 4.5 g/L e suplementado com soro de bezerro fetal (10%) e com antibióticos (penicilina e estreptomicina). Quarenta e oito horas mais tarde, os mioblastos são induzidos em diferenciação por privação parcial de soro (2% em vez de 10%) durante 5 dias. As células são depois colocadas em um meio empobrecido em glicose (DMEM que contém 1g/L de glicose) e desprovido de soro em presença das moléculas a ser testadas ou das referências (IGF-1 100 ng/mL ou 20E 10 µM) durante 2 h. No fim da experiência, as células são lisadas em um tampão de lise comercial (Invitrogen FNN0011) completado com uma mistura comercial de antiproteases (Roche 05056489001). Após centrifugação, a fração citoplásmica que contém as proteínas solúveis é guardada e a concentração de proteínas é determinada utilizando um kit comercial (Biorad 500-0114) cujo princípio é composto da dosagem pela méthodologie de Lowry. A dosagem da fosforilação de S6 quinase é realizada utilizando um kit ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) comercial (Cell signaling 7063). De modo breve, 50 µg de lisado proteico são depositados no poço de uma microplaca de 96 poços e incubados toda a noite a 4°C com a solução de antígeno específico do anticorpo pS6 quinase treonina 389. A fixação do antígeno sobre o fundo dos poços é feita eletrostaticamente. A solução de anticorpos a ser dosada (pS6K T389) é incubada em seguida a 37°C nos poços, durante 2 horas. Os anticorpos se fixam especificamente no antígeno. Os poços são depois lavados para eliminar com tampão de lavagem os anticorpos primários específicos do antígeno a ser dosado que estão em excesso. A terceira etapa consiste em fixar o anticorpo de detecção. A solução de anticorpos de detecção é incubada a 37°C nos poços, durante 1 hora. Os poços são depois lavados para eliminar os anticorpos de detecção em excesso. Devemos notar que os anticorpos de detecção são acoplados a uma enzima que, em presença de seu substrato, o transforma em produto de reação detectável e mensurável graças ao aparecimento de uma coloração. A última etapa consiste em revelar os anticorpos fixados. Uma solução reveladora que contém o substrato para a enzima, em nosso caso a TMB (3,3‘,5,5‘-tetrametilbenzidina) é incubada a 37°C e na obscuridade durante 30 min. O aparecimento de uma coloração azul no substrato indica a presença do anticorpo a ser dosado. Para evitar qualquer fenômeno de saturação, uma solução stop (que contém em geral soda) é adicionada e provoca uma mudança de coloração, que de azul se torna amarela. A intensidade dessa mudança é proporcional à quantidade de enzima presente e portanto, à concentração de anticorpos desejada. A intensidade do sinal é medida por uma espectrofotometria no comprimento de onda de 450 nm.

AVALIAÇÃO DO EFEITO DAS MOLÉCULAS EM UM MODELO DE CAMUNDONGOS SUBMETIDOS A UM REGIME HIPERLIPÍDICO

[165] A 20E como composto comparativo e os compostos de acordo com a presente invenção (N°51 e 93) foram administrados por via oral, à dose de 5 mg/kg de peso corporal, em camundongos C57BL/6J de 12 semanas submetidos a um regime hiperlipídico durante 6 semanas. O efeito dos compostos sobre o peso e a quantidade de proteínas do músculo Soleus bem como os transcritos de genes envolvidos na miogênese foram avaliados.

[166] A miogênese, processo de formação dos tecidos musculares, é controlada por vários fatores de transcrição miogênicos que agem como efetores terminais da cascata de sinalização e produzem dos transcritos envolvidos nos diferentes estágios de desenvolvimento. Os papéis dos fatores de transcrição foram bem descritos nas diferentes revistas (Sabourin e Rudnicki 2000) e (O Grand e Rudnicki 2007). A proteína Pax7 (Paired-box protein 7) mantém uma população de células satélites em quiescência e, com Myf5 (Myogenic factor 5), desempenha um papel na expansão de mioblastos ativados. A proteína MyoD (Myoblast Determination protein) parece determinar o potencial de diferenciação de mioblastos ativados, e coopera com a miogenina e a proteína MEF2 (Myocyte Enhancer Factor 2) para controlar e provocar a diferenciação. Finalmente, MRF4, (Muscle-specific Regulatory Factor 4) é requerido para a hipertrofia, mesmo que ela desempenhe provavelmente outros papéis. Evidentemente, esses fatores de transcrição não agem sozinhos, mas existem no contexto de cascatas de sinalização complexes que controlam cada etapa da miogênese (Knight and Kothary, 2011).

[167] A determinação da quantidade de proteínas é feita lisando primeiramente os músculos retirados em uma solução de NaOH 0,1N com a tecnologia FastPrep. A quantificação das proteínas é feita por uma dosagem colorimétrica derivada do método de Lowry.

[168] Para realizar a análise da expressão dos genes, os tecidosmusculares foram homogeneizados em uma solução de Trizol (500 µl), e os RNA extraídos e purificados utilizando um método com fenol / clorofórmio. Uma quantidade de 1 pg de RNA foi utilizada como matriz para a síntese do primeiro filamento de aDNc utilizando oligo (dT) como iniciadores e a enzima AMV transcriptase reversa como descrito pelo fabricante (Applied Biosystems 4368814). As Q-PCR foram efetuadas em seguida utilizando um aparelho 7900HT dotado de um sistema rápido de detecção em tempo real por PCR (Applied Biosystems) e o programa qPCR padrão (1 ciclo de 95°C 15min, 40 ciclos 95°C 15s e 60°C 1min, uma curva de fusão 60-95°C para as sondas de Sybergreen). As experiências são realizadas em um master mix Sybergreen SYBR (Applied Biosystems) que contém as amostras de aDNc 100 ng e um conjunto de iniciadores estão fixados ao nível de 2 exons diferentes e a uma concentração final de 200 nM.

[169] As diferenças relativas da expressão dos genes entre tratamentos são expressas em aumento ou diminuição dos números dos tempos de ciclo [Ct] comparado ao grupo de controle. O valor [Ct] de cada gene foi normalizado com o gene da beta actina.

ESTUDO DE FARMACOCINÉTICA POR VIA ORAL DAS MOLÉCULAS NO RATO

[170] A farmacocinética dos compostos foi avaliada por via oral utilizando ratos Wistar machos (Charles River). A 20E como composto comparativo foi administrada a uma dose de 50 mg/kg de peso corporal. Os novos compostos de acordo com a presente invenção foram administrados a uma dose de 10mg/kg de peso corporal na forma de uma mistura de 4 a 6 produtos. Após administração, o sangue foi coletado no rabo a t = 0,25 h; 0,5 h; 1h; 3h; 6h e 8h. As amostras de sangue foram centrifugadas e os plasmas coletados. A dosagem das amostras de plasma permitiu a determinação dos parâmetros farmacocinéticos, ou seja, o Cmax, que corresponde à concentração máxima observada após a administração da molécula, o Tmax que é o tempo necessário para atingir a concentração máxima após a administração da molécula e a’AUC: a área sob a curva composta das diferentes concentrações de compostos nos diferentes tempos de coletas.

RESULTADOS OS EFEITOS SOBRE A EXPRESSÃO DA MIOSTATINA

[171] Tabela 4: Efeitos sobre a expressão da miostatina. Os resultados estão expressos em porcentagem de expressão gênica da miostatina nas células em contato com os compostos relacionada com a expressão nas células de controle. A representa uma porcentagem inferior a 70%, B representa uma porcentagem entre 71% e 85%. Os compostos são testados à concentração de 10 µM.

[172] Os 38 compostos a seguir: 4, 5, 7, 21, 25, 27 a 29, 31 a 33, 38, 41, 43, 46, 47, 51 a 54, 62 a 65, 67, 68, 71, 75, 76, 79, 81, 86, 89, 92 a 94, 99 e 101 inibem de forma muito significativa a expressão da miostatina nas células musculares.

[173] Os 15 compostos a seguir: 19, 23, 30, 35 a 37, 48, 56, 57, 60, 73, 83, 85, 88 e 91 inibem de forma significativa a expressão da miostatina dans as células musculares.

OS EFEITOS SOBRE A SÍNTESE PROTEICA VIA A FOSFORILAÇÃO DE S6K1.

[174] Tabela 5: Efeitos sobre a síntese proteica. Os resultados estão expressos em porcentagem de aumento da fosforilação de S6K nas células musculares. A representa valores superiores a 130%, B valores compreendidos entre 110 e 129%. Os compostos são testados à concentração de 10 µM.

[175] Os 8 compostos a seguir: 28, 42, 62, 67, 86, 89, 93 e 94 estimulam a fosforilação de S6K1 de forma muito significativa em níveis equivalentes ao IGF-1 (130-140%).

[176] Os 12 compostos a seguir: 32, 41, 43, 46, 51, 52, 63, 76, 81, 88, 91 e 92 estimulam a fosforilação de S6K1 de forma significativa em níveis equivalentes ao da 20E (120%).

ESTUDO DAS MOLÉCULAS EM UM MODELO DE CAMUNDONGOS SUBMETIDAS A UM REGIME HIPERLIPÍDICO

[177] O estudo in vivo é realizado avaliando o efeito da 20E como composto comparativo e das moléculas de acordo com a presente invenção (N°51 e 93) administradas por via oral, a uma dose de 5 mg/kg de peso corporal, em camundongos C57BL/6 submetidos a um regime hiperlipídico durante 6 semanas. O efeito das moléculas sobre o peso e a quantidade de proteínas do músculo Soleus bem como os transcritos de genes envolvidos na miogênese foram avaliados.

[178] Os efeitos da 20E como composto comparativo e dos compostos de acordo com a presente invenção n° 51 e 93 sobre o peso do músculo estão ilustrados na figura 3A e os efeitos da 20E e dos compostos n° 51 e 93 sobre a quantidade de proteínas do músculo Soleusestão ilustrados na figura 3B.

[179] A 20E e os compostos administrados a 5 mg/kg induzem todos os 3 aumentos do peso e da quantidade de proteínas do músculo Soleus em comparação com o grupo de controle. Os compostos de acordo com a presente invenção mostram uma eficácia tão grande quanto a da 20E. E mesmo, é observado um aumento significativo do teor de proteínas com o composto n°93.

[180] Os efeitos da 20E como composto comparativo e os compostos de acordo com a presente invenção administrados n° 51 e n° 93, sobre o transcrito da miostatina do músculo Soleus, estão ilustrados na figura 4.

[181] A 20E e os compostos n°51 e 93 inibem de modo comparável a expressão da miostatina no músculo Soleus. Essas moléculas inibiam igualmente o transcrito da miostatina nos estudos in vitro das linhagens celulares C2C12 como apresentado na tabela 4 acima.

[182] Os efeitos da 20E como composto comparativo e dos compostos de acordo com a presente invenção n° 51 e 93 sobre os transcritos de MyoD e da Miogenina, genes envolvidos na miogênese do músculo Soleus, estão respectivamente ilustrados na figura 5A e 5B.

[183] A 20E e os compostos N°51 e 93 induzem o aumento dos transcritos dos genes MyoD que determina o potencial de diferenciação e Myf5 envolvido na proliferação dos miócitos. Eles induzem igualmente o aumento do transcrito do gene da Miogenina envolvida na diferenciação precoce dos miócitos.

ESTUDO FARMACOCINÉTICO DAS MOLÉCULAS NO RATO

[184] A farmacocinética da 20E e de compostos de acordo com a presente invenção foi avaliada no rato por administração oral à dose de 10 mg/kg no caso dos compostos e 50mg/kg no caso da 20E. TABELA 6: PRINCIPAIS PARÂMETROS DE FARMACOCINÉTICA (TMAX; CMAX E AUC) DA 20E E COMPOSTOS TESTADOS NO RATO WISTAR

[185] Levando em conta a dose 5 vezes mais elevada de 20E (50 mg/kg) em relação à dos compostos de acordo com a presente invenção (10 mg/kg), o coeficiente de exposição Cexp [Cexp= (Dose20E x AUCcomposto): (Dosecomposto x AUC20E)] mostra a melhora do perfil farmacocinético de quaisquer compostos testados em relação à 20E. Assim, esse estudo no rato mostra que os compostos n° 31; 46; 51 e 93 apresentam uma melhor exposição plasmática em relação à 20E.

RESUMO

[186] A tabela ilustrada na figura 6 expõe os resultados obtidos para compostos da presente invenção durante experiências de análise da expressão gênica da miostatina e da síntese proteica.

[187] No que diz respeito à expressão gênica da miostatina, os resultados estão expressos em porcentagem de expressão gênica da miostatina nas células em contato com os compostos relacionada com a expressão nas células controle. A representa uma porcentagem inferior a 70%, B representa uma porcentagem entre 71% e 85%.

[188] No que diz respeito à análise da síntese proteica os resultados estão expressos em porcentagem de aumento da fosforilação de S6K nas células musculares. A representa valores superiores a 130%, B valores compreendidos entre 110 e 129%. TABELA 7:RESUMO DOS RESULTADOS ILUSTRADOS NA FIGURA 6

[189] Os produtos mais atraentes são de categoria AA ou AB, ou seja, de categoria A para sua expressão gênica na miostatina associada a uma categoria A ou B em síntese proteica. BIBLIOGRAFIA Arounleut P, Bialek P, Liang LF, et al. 2013. A myostatin inhibitor (propeptide-Fc) increases muscle mass and muscle fiber size in aged mice but does not increase bone density or bone strength. Exper Gerontol 48:898-904. Aubertin-Leheudre M, Lord C, Khalil A, Dionne IJ. 2007. Six months of isoflavone supplement increases fat-free mass in obese-sarcopenic postmenopausal women: a randomized double-blind controlled trial. Eur J Clin Nutr 61:1442-1444. Aussel C, Woelffle E, Lemoigne P, Depailler L, Bouillanne O. 2013. Une nouvelle stratégie nutritionnelle pour lutter contre la dénutrition et la sarcopénie: le régime protéique pulsé. Cahiers Nutrition Diététique 48:33-40. Azizov AP, Seifulla RD, Ankudinova IA, Kondrat'eva II, Borisova IG. 1998. 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Claims (10)

1. COMPOSTO, caracterizado por ser de fórmula geral (I) abaixo: em que: V-U é uma ligação simples carbono-carbono e Y é um grupo hidroxila ou um hidrogênio, ou V-U é uma ligação etilênica C=C; X é selecionado entre: um oxigênio; um grupo N-OR5, R5 então sendo selecionado entre: um hidrogênio; um grupo alquila C1-C6 que possui ou não insaturações na cadeia; um grupo (C1-C6)CO2R6 com R6 podendo ser um hidrogênio ou um grupo C1-C6; um grupo (C1-C6)OR7, R7 sendo um anel aromático ou heteroaromático mono ou polissubstituído ou não por um grupo alquila ou alcoxila, CF3, Cl; um grupo (C1-C6)NR8R9, R8 e R9 sendo grupos C1-C6, ou grupos (C1-C6)N(C1-C6) ou grupos (C1-C6)N(C1-C6)OR6 com R6 conforme definido acima, NR8R9 pode também ser um heterociclo; e em que: Q é um grupo carbonila; com R1 sendo selecionado entre: um grupo (C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6); um grupo (C1-C6)A, A representando um heterociclo eventualmente substituído por um grupo de tipo OH, OMe, (C1-C6), N(C1-C6), CO2(C1-C6); um grupo CH2Br; e W é um heteroátomo selecionado entre N, O e S; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

2. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por na fórmula (I): X ser um oxigênio; V-U ser uma ligação simples carbono-carbono; Y ser um grupo hidroxila; R1 ser selecionado entre: um grupo (C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1- C6)W(C1-C6)W(C1-C6); um grupo (C1-C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6); um grupo (C1- C6)A, A representando um heterociclo eventualmente substituído por um grupo do tipo OH, OMe, (C1-C6), N(C1-C6), CO2(C1-C6); W ser um heteroátomo selecionado entre N, O e S.

3. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por na fórmula (I), V-U ser uma ligação etilênica C=C.

4. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por na fórmula (I), X ser um grupo N-OR

5. 5. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por ser selecionado entre os seguintes compostos: n°81: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13- dimetil-17-(2-morfolinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°86: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [2-(3- hidroxipirrolidin-1-il)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°88: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [2-(4- hidroxi-1-piperidil)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°89: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [2- [4-(2- hidroxietil)-1-piperidil]acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro- 1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°91: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17- [2-(3- dimetilaminopropil(metil)amino)acetil]-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil- 2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°92: 2- [2-oxo-2- [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi- 10,13-dimetil-6-oxo-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-17-il]etil]sulfanilacetato de etila; n°93: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-etilsulfanilacetil)-2,3,14- trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona; n°94: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17- [2-(2- hidroxietilsulfanil)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H- ciclopenta [a]fenantren-6-ona.

6. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por ser como medicamento.

7. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado por ser para seu uso no tratamento e/ou na prevenção da sarcopenia e em particular da obesidade sarcopênica, de suas complicações e/ou patologias associadas tais como a perda de força, de massa muscular, de performances e capacidade físicas e de mobilidade no mamífero.

8. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por ser para seu uso no tratamento e/ou na prevenção da obesidade e de suas complicações e/ou das patologias associadas, vantajosamente da diabete de tipo 2 ou da síndrome metabólica no mamífero.

9. USO DE UM COMPOSTO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento e/ou na prevenção da sarcopenia e em particular da obesidade sarcopênica, de suas complicações e/ou patologias associadas tais como a perda de força, de massa muscular, de performances e capacidade físicas e de mobilidade no mamífero.

10. USO DE UM COMPOSTO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento e/ou na prevenção da obesidade e de suas complicações e/ou das patologias associadas, vantajosamente da diabete de tipo 2 ou da síndrome metabólica no mamífero.