BR112016023414B1

BR112016023414B1 - Composto, composição farmacêutica, e, uso do composto

Info

Publication number: BR112016023414B1
Application number: BR112016023414-6A
Authority: BR
Inventors: Sing-Yuen Sit; Yan Chen; Jie Chen; Jacob Swidorski; Brian Lee Venables; Ny Sin; Nicholas A. Meanwell; Alicia Regueiro-Ren; Richard A. Hartz; Li Xu; Zheng Liu
Original assignee: ViiV Healthcare UK (No.4) Limited
Priority date: 2014-04-11
Filing date: 2015-04-09
Publication date: 2022-09-13
Also published as: CR20160472A; IL248053A0; US10245275B2; EA201691760A1; MA39374A1; CA2944778C; US9527882B2; US20190151336A1; BR112016023414A2; US11464790B2; DOP2016000277A; LT3129392T; JP2017510659A; JP6568202B2; US20150291655A1; PH12016501951B1; MX2016013425A; PT3129392T; PE20161391A1; DK3129392T3

Abstract

COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, USO DO COMPOSTO. Compostos tendo propriedades bioativas e de droga, suas composições farmacêuticas e métodos de uso são apresentados. Em particular, triterpenoides que possuem atividade antiviral única são providos como inibidores de maturação de HIV, como representados pelos compostos da Fórmula I: com X selecionado de um anel cicloalquila C4-8, cicloalquenila C4-8, espirocicloalquila C4-9, espirocicloalquenila C4-9, oxacicloalquila C4-8, dioxacicloalquila C4-8, oxacicloalquenila C6-8, dioxacicloalquenila C6-8, ciclodialquenila C6, oxaciclodialquenila C6, oxaespirocicloalquila C6-9 e oxaespirocicloalquenila C6-9, de modo que X é substituído com A, em que A é alquil-halo-C1-6. Esses compostos são úteis para o tratamento de HIV e AIDS. (I)

Description

REFERÊNCIA REMISSIVA AO PEDIDO RELACIONADO

[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. de Número Serial 61/978.306, depositado em 11 de abril de 2014, que é por meio deste aqui incorporado em sua totalidade como referência.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002] A presente invenção refere-se aos novos compostos úteis contra HIV e, mais particularmente, aos compostos derivados de ácido betulínico e outros compostos estruturalmente relacionados que são úteis como inibidores da maturação de HIV, e às composições farmacêuticas contendo os mesmos, e também aos métodos para a preparação deles.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[003] A infecção por HIV-1 (Human Immunodeficiency Virus -1,vírus da imunodeficiência humana-1) permanece um grande problema médico, com uma população estimada em 45-50 milhões de pessoas infectadas em todo o mundo no final de 2010. O número de casos de HIV e AIDS (Acquired ImmunoDeficiency Syndrome, síndrome da imunodeficiência adquirida) tem aumentado rapidamente. Em 2005, aproximadamente 5,0 milhões de novas infecções foram relatadas, e 3,1 milhões de pessoas morreram de AIDS. As drogas atualmente disponíveis para o tratamento de infecção por HIV incluem inibidores nucleosídeos da transcriptase reversa (RT, Reverse Transcriptase) ou combinações em pílula única aprovadas: zidovudina (ou AZT ou RETROVIR®), didanosina (ou VIDEX®), estavudina (ou ZERIT®), lamivudina (ou 3TC ou EPIVIR®), zalcitabina (ou DDC ou HIVID®), succinato de abacavir (ou ZIAGEN®), sal fumarato de Tenofovir desoproxila (ou VIREAD®), entricitabina (ou FTC- EMTRIVA®), COMBIVIR® (contém -3TC mais AZT), TRIZIVIR® (contém abacavir, lamivudina, e zidovudina), EPZICOM® (contém abacavir e lamivudina),TRUVADA® (contém VIREAD® e EMTRIVA®); inibidores não nucleosídeos da transcriptase reversa: nevirapina (ou VIRAMUNE®), delavirdina (ou RESCRIPTOR®) e efavirenz (ou SUSTIVA®), ATRIPLA® (TRUVADA® + SUSTIVA®), e etravirina, e inibidores peptidomiméticos da protease ou formulações aprovadas: saquinavir, indinavir, ritonavir, nelfinavir, amprenavir, lopinavir, KALETRA®(lopinavir e Ritonavir), darunavir, atazanavir (REYATAZ®) e tipranavir (APTIVUS®) e cobicistat, e inibidores de integrase como raltegravir (ISENTRESS®), e inibidores da entrada como enfuvirtida (T-20) (FUZEON®) e maraviroc (SELZENTRY®).

[004] Cada uma destas drogas pode impedir apenas transientemente a replicação viral se usada sozinha. Entretanto, quando utilizadas em combinação, estas drogas têm um profundo efeito sobre viremia e progressão da doença. Na realidade, reduções significativas em taxas de morte dentre os pacientes com AIDS têm sido recentemente documentadas como uma consequência da aplicação disseminada de terapia de combinação. Entretanto, não obstante estes resultados impressionantes, 30% a 50% dos pacientes podem apresentar falhas de tratamento com as terapias de combinação de drogas. Potência de droga insuficiente, não observância do paciente, penetração restringida em tecido e limitações específicas à droga dentro de determinados tipos de células (por exemplo os análogos de nucleosídeo não podem, em sua maioria, ser fosforilados em células quiescentes (células não em mitose)) podem ser a causa da supressão incompleta de vírus sensíveis. Além disso, a alta taxa de replicação e a rápida taxa de renovação de HIV-1 combinadas com a incorporação frequente de mutações, resulta no surgimento de variantes resistentes às drogas e falhas de tratamento quando estão presentes concentrações de droga subideais. Portanto, novos agentes anti-HIV que apresentam padrões de resistência diferentes, e farmacocinética favorável e também perfis de segurança favoráveis são necessários para fornecer mais opções de tratamento. Os inibidores de fusão de HIV e os antagonistas de correceptor da entrada do HIV aprimorados são dois exemplos de novas classes de agentes anti-HIV que estão ainda sendo estudados por numerosos investigadores.

[005] Os inibidores da fixação do HIV são uma outra subclasse de compostos antivirais que se ligam à glicoproteína de superfície gp120 de HIV, e interferem com a interação entre a proteína de superfície gp120 e o receptor CD4 da célula hospedeira. Dessa forma, previnem que o HIV se fixe em célula-T CD4 humana, e bloqueiam a replicação de HIV no primeiro estágio do ciclo de vida do HIV. As propriedades dos inibidores da fixação de HIV têm sido aprimoradas em um esforço para se obterem compostos com utilidade e eficácia maximizadas como agentes antivirais. Em particular, patente US n° 7.354.924 e patente US n° 7.745.625 são patentes que ilustram os inibidores da fixação de HIV.

[006] Outra classe emergente de compostos para o tratamento de infecção por HIV é a classe dos chamados inibidores da maturação de HIV. A maturação é a última etapa de tantas quantas 10 ou mais etapas em replicação de HIV ou no ciclo de vida do HIV, na qual o HIV torna-se infeccioso como uma consequência de vários eventos de clivagem mediada por protease de HIV na proteína gag que finalmente resulta em liberação da proteína de capsídeo (CA). Os inibidores da maturação previnem que o capsídeo de HIV se monte e se mature apropriadamente, que forme uma capa externa protetora, ou que saia das células humanas. Ao contrário, vírus não infecciosos são produzidos, prevenindo os ciclos subsequentes de infecção por HIV.

[007] Tem sido agora mostrado que determinados derivados de ácido betulínico apresentam potente atividade anti-HIV como em inibidores da maturação de HIV. Por exemplo, a patente U.S. n° 7.365.221 descreve derivados monoacilados de di-hidrobetulina e de betulina, e o uso deles como agentes anti-HIV. Conforme discutido na referência patente U.S. n° 7.365.221, a esterificação de ácido betulínico (1) com determinados grupos acila substituídos, como grupos 3’,3’-dimetilglutarila e 3’,3’- dimetilssuccinila, produziu derivados tendo atividade intensificada (Kashiwada, Y., et al., J. Med. Chem. 39:1016-1017 (1996)). Os derivados acilados de ácido betulínico e de ácido di-hidrobetulínico que são potentes agentes anti-HIV são também descritos na patente U.S. n° 5.679.828. A esterificação da hidroxila no carbono 3 de betulina com ácido succínico também produziu um composto capaz de inibir a atividade de HIV-1 (Pokrovskii, A. G., et al., “Synthesis of derivatives of plant triterpenes and study of their antiviral and immunostimulating activity”, Khimiya y Interesakh Ustoichivogo Razvitiya, Vol. 9, n° 3, pp. 485-491 (2001) (Resumo em inglês).

[008] Outras referências ao uso de tratamento de infecção por HIV com compostos derivados de ácido betulínico incluem a patente U.S. n° 2005/0239748 e a patente U.S. n° 2008/0207573, e também WO2006/053255, WO2009/100532 e WO2011/007230.

[009] Um composto inibidor da maturação de HIV que tem estado em desenvolvimento tem sido identificado como Bevirimat ou PA-457, com a fórmula química de C^H^CX, e o nome conforme a IUPAC de ácido 3β-(3- carboxi-3-metil-butanoiloxi)lup-20(29)-en-28-oico.

[0010] É, também, feita aqui referência aos pedidos de Bristol-Myers Squibb intitulados “MCDIFIED C-3 BETULINIC ACID DERIVATIVES AS HIV MATURATICN INHIBITCRS” - USSN 13/151.706 depositado em 2 de junho de 2011 (agora patente U.S. n° 8.754.068) e “C-28 AMIDES OF MCDIFIED C-3 BETULINIC ACID DERIVATIVES AS HIV MATURATION INHIBITORS” - USSN 13/151.722, depositado em 2 de junho de 2011 (agora patente U.S. n° 8.802.661). Referência também é feita ao pedido intitulado “C-28 AMINES OF C-3 MODIFIED BETULINIC ACID DERIVATIVES AS HIV MATURATION INHIBITORS” - USSN 13/359.680, depositado em 27 de janeiro de 2012 (agora patente U.S. n° 8.748.415). Adicionalmente, referência é feita ao pedido intitulado “C-17 AND C-3 MODIFIED TRITERPENOIDS WITH HIV MATURATION INHIBITORY ACTIVITY” - USSN 13/359.727 depositado em 27 de janeiro de 2012 (agora patente U.S. n° 8.846.647). Referência adicional também é feita ao pedido “C-3 CYCLOALKENYL TRITERPENOIDS WITH HIV MATURATION INHIBITORY ACTIVITY” - USSN 13/760.726 depositado em 6 de fevereiro de 2013 (agora patente U.S. n° 8.906.889).

[0011] Agora são necessários na técnica novos compostos que são úteis como inibidores da maturação de HIV, e também novas composições farmacêuticas contendo estes compostos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0012] A presente invenção fornece compostos de Fórmula I abaixo, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, formulações farmacêuticas dos mesmos, e seu uso em pacientes sofrendo de ou suscetíveis a um vírus como HIV. Os compostos de Fórmula I são agentes antivirais efetivos, particularmente como inibidores de HIV. São úteis para o tratamento de infecção por HIV e de AIDS.

[0013] Uma modalidade da presente invenção refere-se a um composto da Fórmula I, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo:

em que R1 é isopropenila ou isopropila; X é selecionado do grupo de um anel cicloalquila C4-8, cicloalquenila C4-8, espirocicloalquila C4-9, espirocicloalquenila C4-9, oxacicloalquila C4-8, dioxacicloalquila C4-8, oxacicloalquenila C6-8, dioxacicloalquenila C6-8, ciclodialquenila C6, oxaciclodialquenila C6, oxaespirocicloalquila C6-9 e oxaespirocicloalquenila C6-9, em que X é substituído com A, e em que A é halo-alquila-C1-6; Y é selecionado do grupo de -COOR2, -C(O)NR2SO2R3, -C(O)NHSO2NR2R2, -NR2SO2R2, -SO2NR2R2, cicloalquila-C3-6-COOR2, alquenila-C2-6-COOR2, alquinila-C2-6-COOR2, alquila-C1-6-COOR2, alquila- C1-6 substituída com alquila, -CF2-COOR2, -NHC(O)(CH2)n-COOR2, - SO2NR2C(O)R2, -tetrazol, e -CONHOH, em que n = 1-6; R2 é -H, -alquila C1-6, -alquila C1-6 substituída com alquila ou - alquila C1-6 substituída com arila; W está ausente, ou é -CH2 ou -CO; R3 é -H, -alquila C1-6 ou -alquila C1-6 substituída com alquila; R4 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, alquila-C1-6- cicloalquila-C3-6, alquila-C1-6 substituída com alquila-C1-6, alquila-C1-6-Q1, alquila-C1-6-cicloalquila-C3-6-Q1, arila, heteroarila, heteroarila substituída, - COR6, -SO2R7, -SO2NR2R2, e

em que G é selecionado do grupo de -O-, -SO2- e -NR12; em que Q1 é selecionado do grupo de alquila-C1-6, fluoroalquila-C1-6, heteroarila, heteroarila substituída, halogênio, -CF3, -OR2, - COOR2, -NR8R9, -CONR8R9e -SO2R7; R5 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, cicloalquila-C3- 6, alquila substituída com alquila-C1-6, alquila-C1-6-NR8R9, -COR3, -SO2R7 e - SO2NR2R2; com a condição de que R4 ou R5 não pode ser -COR6 quando W for -CO; com a condição adicional de que apenas um de R4 ou R5 pode ser selecionado do grupo de --COR6, -COCOR6,-SO2R7 e -SO2NR2R2; ou quando W é ausente ou é -CH2, então R4 e R5 podem ser tomados juntos com o N adjacente para formar R6 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, alquila substituída com alquila-C1-6, cicloalquila-C3-6, cicloalquila-C3-6-substituída- Q2, alquila-C1-6-Q2, alquila-Q2 substituída com alquila-C1-6, cicloalquila-C3-6- Q2, arila-Q2, -NR13R14, e -OR15; em que Q2 é selecionado do grupo de arila, heteroarila, heteroarila substituída, -OR2, -COOR2, -NR8R9, SO2R7, -CONHSO2R3, e - CONHSO2NR2R2; R7 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, alquila-C1-6 substituída, cicloalquila-C3-6, -CF3, arila e heteroarila; R8 e R9 são independentemente selecionados do grupo de -H, - alquila C1-6, alquila-C1-6 substituída, arila, heteroarila, arila substituída, heteroarila substituída, alquila-C1-6-Q2, e -COOR3, ou R8 e R9 são tomados juntos com o N adjacente para formar um ciclo selecionado do grupo de:

M é selecionado do grupo de -R15, -SO2R2, -SO2NR2R2, -OH e -NR2R12; V é selecionado do grupo de -CR10R11-, -SO2-, -O- e -NR12-; com a condição de que apenas um de R8 ou R9 pode ser - COOR3; R10 e R11 são independentemente selecionados do grupo de -H, -alquila C1-6, alquila-C1-6 substituída e cicloalquila-C3-6; R12 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -alquila C1-6 substituída com alquila,-CONR2R2, -SO2R3, -SO2NR2R2; R13 e R14 são independentemente selecionados do grupo de -H, -alquila C1-6, cicloalquila-C3-6, alquila-C1-6 substituída, alquila-C1-6-Q3, alquila-C1-6-cicloalquila-C3-6-Q3, alquila-C1-6-substituída-Q3 e

Q3 é selecionado do grupo de heteroarila, heteroarila substituída, -NR2R12, -CONR2R2, -COOR2, -OR2, e -SO2R3; R15 é selecionado do grupo de alquila-C1-6, cicloalquila-C3-6, alquila-C1-6 substituída, alquila-C1-6-Q3, alquila-C1-6-cicloalquila-C3-6-Q3 e - alquila-C1-6-substituída-Q3; R16 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -NR2R2, e - COOR2; com a condição de que quando V é -NR12-; R16 não pode ser - NR2R2; e R17 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -COOR3, e arila.

[0014] Em uma outra modalidade, é fornecido um método para tratar mamíferos infectados com um vírus, especialmente em que o dito vírus é HIV, compreendendo administrar ao dito mamífero uma quantidade eficaz antiviral de um composto que é selecionado do grupo de compostos da Fórmula I, e um ou mais carreadores, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Opcionalmente, o composto da Fórmula I pode ser administrado em combinação com uma quantidade eficaz antiviral de outro agente para tratamento de AIDS selecionado do grupo consistindo em: (a) um agente antiviral de AIDS; (b) um agente anti-infeccioso; (c) um imunomodulador; e (d) outros inibidores da entrada do HIV.

[0015] Uma outra modalidade da presente invenção é uma composição farmacêutica compreendendo um ou mais compostos da Fórmula I, e um ou mais carreadores, excipientes, e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis; e opcionalmente em combinação com outro agente para tratamento de AIDS selecionado do grupo consistindo em: (a) um agente antiviral de AIDS; (b) uma agente anti-infeccioso; (c) um imunomodulador; e (d) outros inibidores da entrada do HIV.

[0016] Em uma outra modalidade da invenção é fornecido aqui um ou mais métodos para preparar os compostos da Fórmula I.

[0017] Também são fornecidos aqui compostos intermediários úteis na preparação dos compostos da Fórmula I.

[0018] A presente invenção refere-se a estas, e também a outras finalidades importantes, descritas doravante.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES

[0019] Como aqui usadas, as formas no singular “um”, “uma”, “o” e “a” incluem as referências no plural, a não ser que o contexto dite claramente ao contrário.

[0020] Visto que os compostos da presente invenção podem possuir centros assimétricos e, portanto, ocorrer como misturas de diastereômeros, a presente descrição inclui as formas diastereoisoméricas dos compostos da Fórmula I, adicionalmente às suas misturas.

DEFINIÇÕES

[0021] A são ser que sejam especificamente apresentados de outra maneira alhures no pedido, um ou mais dos seguintes termos podem ser aqui usados, e devem ter os seguintes significados:

[0022] “H” refere-se a hidrogênio, incluindo seus isótopos, como deutério.

[0023] O termo “alquila C1-6” como aqui usado e nas reivindicações (a não ser que seja especificado de outra maneira) significa grupos alquila de cadeia linear ou ramificada como metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, t-butila, amila, hexila e semelhantes.

[0024] “Fluoroalquila C1-C4” refere-se à alquila C1-C4 substituída com F em que pelo menos um átomo de H está substituído por átomo de F, e cada átomo de H pode estar independentemente substituído por átomo de F.

[0025] “Halogênio” ou “halo” refere-se a cloro, bromo, iodo ou flúor.

[0026] Um grupo “arila” ou “Ar” refere-se a um grupo completamente de carbonos monocíclico ou policíclico de anéis fundidos (isto é, anéis que compartilham pares adjacentes de átomos de carbono) tendo um sistema de elétrons-pi completamente conjugados. Exemplos, sem limitação, de grupos arila são fenila, naftalenila e antracenila. O grupo arila pode estar substituído ou não substituído. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituinte(s) são preferencialmente um ou mais selecionados dentre alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidroxila, alcoxila, ariloxila, heteroariloxila, heteroalicicloxila, tio-hidroxila, tioariloxila, tio- heteroariloxila, tio-heteroalicicloxila, ciano, halogênio, nitro, carbonila, O- carbamila, N-carbamila, C-amido, N-amido, C-carboxila, O-carboxila, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometila, ureído, amino e -NRxRy, em que Rx e Ry são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alquila, cicloalquila, arila, carbonila, C-carboxila, sulfonila, tri- halometila, e, combinados, um anel heteroalicíclico de cinco ou seis membros.

[0027] Como aqui usado, um grupo “heteroarila” refere-se a um grupo monocíclico ou de anéis fundidos (isto é, anéis que compartilham um par adjacente de átomos) tendo no anel (nos anéis) um ou mais átomos selecionados do grupo consistindo em nitrogênio, oxigênio e enxofre e, adicionalmente, tendo um sistema de elétrons-pi completamente conjugados. A não ser que seja indicado de outra maneira, o grupo heteroarila pode estar ligado a quer um átomo de carbono quer um átomo de nitrogênio dentro do grupo heteroalquila. Deve ser observado que o termo heteroarila é pretendido para incluir um N-óxido da heteroarila parental se um tal N-óxido for quimicamente factível conforme conhecido na técnica. Exemplos, sem limitação, de grupos heteroarila são furila, tienila, benzotienila, tiazolila, imidazolila, oxazolila, oxadiazolila, tiadiazolila, benzotiazolila, triazolila, tetrazolila, isoxazolila, isotiazolila, pirrolila, piranila, tetra-hidropiranila, pirazolila, piridila, pirimidinila, quinolinila, isoquinolinila, purinila, carbazolila, benzoxazolila, benzimidazolila, indolila, isoindolila, pirazinila, diazinila, pirazina, triazinila, tetrazinila e tetrazolila. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituinte(s) é (são) preferencialmente selecionado(s) dentre alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidroxila, alcoxila, ariloxila, heteroariloxila, heteroalicicloxila, tioalcoxila, tio-hidroxila, tioariloxila, tio-heteroariloxila, tio-heteroalicicloxila, ciano, halogênio, nitro, carbonila, O-carbamila, N-carbamila, C-amido, N-amido, C-carboxila, O- carboxila, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometila, ureído, amino, e - NRxRy, em que Rx e Ry são como definidos acima.

[0028] Como aqui usado, um grupo “heteroalicíclico” refere-se a um grupo monocíclico ou de anéis fundidos tendo no anel (nos anéis) um ou mais átomos selecionados do grupo consistindo em nitrogênio, oxigênio e enxofre. Os anéis são selecionados daqueles que fornecem arranjos estáveis de ligações e não são pretendidos para incluir sistemas que não existiriam. Os anéis também podem ter uma ou mais ligações duplas. Entretanto, os anéis não têm um sistema de elétrons-pi completamente conjugados. Exemplos, sem limitação, de grupos heteroalicíclicos são azetidinila, piperidila, piperazinila, imidazolinila, tiazolidinila, 3-pirrolidin-1-ila, morfolinila, tiomorfolinila e seus S-óxidos e tetra-hidropiranila. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituinte(s) é (são) preferencialmente um ou mais selecionados dentre alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidroxila, alcoxila, ariloxila, heteroariloxila, heteroalicicloxila, tio-hidroxila, tioalcoxila, tioariloxila, tio-heteroariloxila, tio-heteroalicicloxila, ciano, halogênio, nitro, carbonila, tiocarbonila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N- tiocarbamila, C-amido, C-tioamido, N-amido, C-carboxila, O-carboxila, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometanossulfonamido, tri- halometanossulfonila, silila, guanila, guanidino, ureído, fosfonila, amino e - NRxRy, em que Rx e Ry são como definidos acima.

[0029] Um grupo “alquila” refere-se a um hidrocarboneto alifático saturado incluindo grupos de cadeia linear e de cadeia ramificada. Preferencialmente, o grupo alquila tem 1 a 20 átomos de carbono (sempre que uma faixa numérica; por exemplo “1 a 20”, for aqui mencionada, significa que o grupo, neste caso o grupo alquila, pode conter 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, etc. até e incluindo 20 átomos de carbono). Mais preferencialmente, é uma alquila de tamanho médio tendo 1 a 10 átomos de carbono. Com a máxima preferência, é uma alquila inferior tendo 1 a 4 átomos de carbono. O grupo alquila pode estar substituído ou não substituído. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituinte(s) é (são) preferencialmente um ou mais individualmente selecionados dentre tri- haloalquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidroxila, alcoxila, ariloxila, heteroariloxila, heteroalicicloxila, tio-hidroxila, tioalcoxila, tioariloxila, tio-heteroariloxila, tio-heteroalicicloxila, ciano, halo, nitro, carbonila, tiocarbonila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N- tiocarbamila, C-amido, C-tioamido, N-amido, C-carboxila, O-carboxila, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometanossulfonamido, tri- halometanossulfonila, e combinados, um anel heteroalicíclico de cinco ou seis membros.

[0030] Um grupo “cicloalquila” refere-se a um grupo completamente de carbonos monocíclico ou de anéis fundidos (isto é, anéis que compartilham par adjacente de átomos de carbono) em que um ou mais anéis não têm um sistema de elétrons-pi completamente conjugados. Exemplos, sem limitação, de grupos cicloalquila são ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclopenteno, ciclo-hexano, ciclo-hexeno, ciclo-heptano, ciclo-hepteno e adamantano. Um grupo cicloalquila pode estar substituído ou não substituído. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituinte(s) é (são) preferencialmente um ou mais individualmente selecionados dentre alquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidroxila, alcoxila, ariloxila, heteroariloxila, heteroalicicloxila, tio-hidroxila, tioalcoxila, tioariloxila, tio-heteroariloxila, tio-heteroalicicloxila, ciano, halo, nitro, carbonila, tiocarbonila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N-tiocarbamila, C-amido, C-tioamido, N- amido, C-carboxila, O-carboxila, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halo- metanossulfonamido, tri-halometanossulfonila, silila, amidino, guanidino, ureído, fosfonila, amino e -NRxRy com Rx e Ry como definidos acima.

[0031] Um grupo “alquenila” refere-se a um grupo alquila, como aqui definido, tendo pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla de carbono-carbono.

[0032] Um grupo “alquinila” refere-se a um grupo alquila, como aqui definido, tendo pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação tripla de carbono-carbono.

[0033] Um grupo “hidroxila” refere-se a um grupo -OH.

[0034] Um grupo “alcoxila” refere-se a ambos um grupo -O-alquila e um grupo -O-cicloalquila como aqui definidos.

[0035] Um grupo “ariloxila” refere-se a ambos um grupo -O-arila e um grupo -O-heteroarila, como aqui definidos.

[0036] Um grupo “heteroariloxila” refere-se a um grupo heteroaril-O- com heteroarila como aqui definido.

[0037] Um grupo “heteroalicicloxila” refere-se a um grupo heteroalicíclico-O- com heteroalicíclico como aqui definido.

[0038] Um grupo “tio-hidroxila” refere-se a um grupo -SH.

[0039] Um grupo “tioalcoxila” refere-se a ambos um grupo S-alquila e um grupo -S-cicloalquila, como aqui definidos.

[0040] Um grupo “tioariloxila” refere-se a ambos um grupo -S-arila e um grupo -S-heteroarila, como aqui definidos.

[0041] Um grupo “tio-heteroariloxila” refere-se a um grupo heteroaril-S- com heteroarila como aqui definido.

[0042] Um grupo “tio-heteroalicicloxila” refere-se a um grupo heteroalicíclico-S- com heteroalicíclico como aqui definido.

[0043] Um grupo “carbonila” refere-se a um grupo -C(=O)-R”, no qual R” é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, heteroarila (ligada mediante um carbono do anel) e heteroalicíclico (ligado mediante um carbono do anel), como cada um(a) é aqui definido (definida).

[0044] Um grupo “aldeído” refere-se a um grupo carbonila no qual R” e hidrogênio.

[0045] Um grupo “tiocarbonila” refere-se a um grupo -C(=S)-R”, com R” como aqui definido.

[0046] Um grupo “ceto” refere-se a um grupo -CC(=O)C- no qual o carbono em qualquer um dos ou em ambos os lados do C=O pode ser um carbono de um grupo alquila, cicloalquila, arila ou um carbono de um grupo heteroarila ou heteroalicíclico.

[0047] Um grupo “tri-halometanocarbonila” refere-se a um grupo Z3CC(=O)- com o dito Z sendo um halogênio.

[0048] Um grupo “C-carboxila” refere-se um grupo -C(=O)O-R”, com R” como aqui definido.

[0049] Um grupo “O-carboxila” refere-se a um grupo R”C(-O)O-, com R” como aqui definido.

[0050] Um grupo “ácido carboxílico” refere-se a um grupo C- carboxila no qual R” é hidrogênio.

[0051] Um grupo “tri-halometila” refere-se a um grupo -CZ3, no qual Z é um grupo halogênio como aqui definido.

[0052] Um grupo “tri-halometanossulfonila” refere-se a um grupo Z3CS(=O)2- com Z como definido acima.

[0053] Um grupo “tri-halometanossulfonamido” refere-se a um grupo Z3CS(=O)2NRx- com Z como definido acima e Rx sendo H ou alquila (C1-6).

[0054] Um grupo “sulfinila” refere-se a um grupo -S(=O)-R”, com R” sendo alquila (C1-6).

[0055] Um grupo “sulfonila” refere-se a um grupo -S(=O)2R” com R” sendo alquila (C1-6).

[0056] Um grupo “S-sulfonamido” refere-se a um grupo - S(=O)2NRXRY, com RX e RY independente sendo H ou alquila (C1-6).

[0057] Um grupo “N-sulfonamido” refere-se a um grupo R”S(=O)2NRX-, com Rx sendo H ou alquila (C1-6).

[0058] Um grupo “O-carbamila” refere-se a um grupo - OC(=O)NRxRy, com RX e RY independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0059] Um grupo “N-carbamila” refere-se a um grupo RxOC(=O)NRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0060] Um grupo “O-tiocarbamila” refere-se a um grupo -OC(=S)NRxRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0061] Um grupo “N-tiocarbamila” refere-se a um grupo RxOC(=S)NRy-, com Rx e Ry independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0062] Um grupo “amino” refere-se a um grupo -NH2.

[0063] Um grupo “C-amido” refere-se a um grupo -C(=O)NRxRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0064] Um grupo “C-tioamido” refere-se a um grupo -C(=S)NRxRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0065] Um grupo “N-amido” refere-se a um grupo RxC(=O)NRy-, com Rx e Ry independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0066] Um grupo “ureído” refere-se a -NRxC(=O)NRyRy2, com Rx, Ry, e Ry2 independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0067] Um grupo “guanidino” refere-se a um grupo - RxNC(=N)NRyRy2, com Rx, Ry, e Ry2 independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0068] Um grupo “amidino” refere-se a um grupo RxRyNC(=N)-, com Rx e Ry independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0069] Um grupo “ciano” refere-se a um grupo -CN.

[0070] Um grupo “silila” refere-se a um grupo -Si(R”)3, com R” sendo alquila (C1-6) ou fenila.

[0071] Um grupo “fosfonila” refere-se a um grupo P(=O)(ORx)2 com Rx sendo alquila (C1-6).

[0072] Um grupo “hidrazino” refere-se a um grupo -NRxNRyRy2, com Rx, Ry, e Ry2 independentemente sendo H ou alquila (C1-6).

[0073] Um grupo “anel cíclico N-lactama de 4, 5, ou 6 membros” refere-se a

[0074] Um grupo “espiro” é um grupo orgânico bicíclico com anéis conectados mediante apenas um átomo. Os anéis podem ser de naturezas diferentes ou idênticos. O átomo conector é também chamado de espiroátomo, mais frequentemente um carbono quaternário (“espirocarbono”).

[0075] Um grupo “oxoespiro” ou “oxaespiro” é um grupo espiro tendo um oxigênio contido dentro da estrutura de anel bicíclico. Um grupo “dioxoespiro” ou “dioxaespiro” tem dois oxigênios dentro da estrutura de anel bicíclico.

[0076] Quaisquer dois grupos adjacentes R podem combinar-se para formarem um anel arila, cicloalquila, heteroarila ou heterocíclico adicional fundido no anel inicialmente possuindo aqueles grupos R.

[0077] É sabido na técnica que átomos de nitrogênio em sistema heteroarila podem estar “participando em uma ligação dupla de anel heteroarila”, e isto refere-se à forma de ligações duplas nas duas estruturas tautoméricas que compreendem os grupos heteroarila de anel de cinco membros. Isto determina se os nitrogênios podem estar substituídos como é bem conhecido pelos químicos na técnica. A descrição e as reivindicações da presente descrição são baseadas nos princípios gerais conhecidos da ligação química. É entendido que as reivindicações não abrangem as estruturas que conhecidamente são instáveis ou incapazes de existir com base na literatura.

[0078] Os sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-drogas dos compostos aqui descritos estão dentro do escopo da invenção. O termo “sal farmaceuticamente aceitável” como aqui usado e nas reivindicações é pretendido para incluir sais de adição de base não tóxicos. Os sais adequados incluem aqueles derivados de ácidos orgânicos e inorgânicos como, sem limitação, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido metanossulfônico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido sulfínico, ácido cítrico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido sórbico, ácido aconítico, ácido salicílico, ácido ftálico, e semelhantes. O termo “sal farmaceuticamente aceitável” como aqui usado também é pretendido para incluir sais de grupos ácidos, como um carboxilato, com tais contra-íons como amônio, sais de metais alcalinos, particularmente de sódio ou de potássio, sais de metais alcalinoterrosos, particularmente de cálcio ou de magnésio, e sais com bases orgânicas adequadas como alquilaminas inferiores (metilamina, etilamina, ciclo-hexilamina, e semelhantes) ou com alquilaminas inferiores substituídas (por exemplo alquilaminas substituídas com hidroxila como dietanolamina, trietanolamina ou tris(hidroximetil)-aminometano), ou com bases como piperidina ou morfolina.

[0079] Como mencionado acima, os compostos da invenção também incluem “pró-drogas”. O termo “pró-droga” como aqui usado abrange ambos o termo “ésteres pró-drogas” e o termo “éteres pró-drogas”.

[0080] Como apresentado acima, a invenção refere-se a um composto da Fórmula I, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo:

em que R1 é isopropenila ou isopropila; X é selecionado do grupo de anel cicloalquila C4-8, cicloalquenila C4-8, espirocicloalquila C4-9, espirocicloalquenila C4-9, oxacicloalquila C4-8, dioxacicloalquila C4-8, oxacicloalquenila C6-8, dioxacicloalquenila C6-8, ciclodialquenila C6, oxaciclodialquenila C6, oxaespirocicloalquila C6-9 e oxaespirocicloalquenila C6-9, em que X está substituído com A, e em que A é -halo-alquila- C1-6; Y é selecionado do grupo de -COOR2, -C(O)NR2SO2R3, - C(O)NHSO2NR2R2, -NR2SO2R2, -SO2NR2R2, -cicloalquila-C3-6-COOR2, - alquenila-C2-6-COOR2, -alquinila-C2-6-COOR2, -alquila-C1-6-COOR2, -alquila C1-6 substituída com alquila, -CF2-COOR2, -NHC(O)(CH2)n-COOR2, - SO2NR2C(O)R2, -tetrazol, e -CONHOH, em que n = 1-6; R2 é -H, -alquila C1-6, -alquila C1-6 substituída com alquila ou - alquila C1-6 substituída com arila; W está ausente, ou é -CH2 ou -CO; R3 é -H, -alquila C1-6 ou -alquila C1-6 substituída com alquila; R4 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -alquila-C1-6- cicloalquila C3-6, -alquila C1-6 substituída com alquila-C1-6, -alquila-C1-6-Q1, - alquila-C1-6-cicloalquila-C3-6-Q1, arila, heteroarila, heteroarila substituída, - COR6, -SO2R7, -SO2NR2R2, e

em que G é selecionado do grupo de -O-, -SO2- e -NR12; em que Q1 é selecionado do grupo de -alquila C1-6, - fluoroalquila C1-6, heteroarila, heteroarila substituída, halogênio, -CF3, -OR2, - COOR2, -NR8R9, -CONR8R9 e -SO2R7; R5 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -cicloalquila C3- 6, -alquila substituída com alquila C1-6, -alquila-C1-6-NR8R9, -COR3, -SO2R7 e - SO2NR2R2; com a condição de que R4 ou R5 não pode ser -COR6 quando W for -CO; com a condição adicional de que apenas um de R4 ou R5 pode ser selecionado do grupo de -COR6, -COCOR6,-SO2R7 e -SO2NR2R2; ou quando W está ausente ou é -CH2, então R4 e R5 podem ser ^N—y tomados juntos com o N adjacente para formar

R6 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -alquila substituída com alquila C1-6, -cicloalquila C3-6, -cicloalquila-C3-6-substituída- Q2, -alquila-C1-6-Q2, -alquila-Q2 substituída com alquila C1-6, -cicloalquila-C3- 6-Q2, arila-Q2, -NR13R14, e -OR15; em que Q2 é selecionado do grupo de arila, heteroarila, heteroarila substituída, -OR2, -COOR2, -NR8R9, SO2R7, -CONHSO2R3, e - CONHSO2NR2R2; R7 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -alquila C1-6 substituída, -cicloalquila C3-6, -CF3, arila e heteroarila; R8 e R9 são independentemente selecionados do grupo -H, - alquila C1-6, -alquila C1-6 substituída, arila, heteroarila, arila substituída, heteroarila substituída, -alquila-C1-6-Q2, e -COOR3, ou R8 e R9 são tomados juntos com o N adjacente para formar um ciclo selecionado do grupo de:

M é selecionado do grupo de -R16, -SO2R2, -SO2NR2R2, -OH e -NR2R12; V é selecionado do grupo de -CR10R11-, -SO2-, -O- e -NR12-; com a condição de que apenas um de R8 ou R9 pode ser - COOR3; R10 e R11 são independentemente selecionados do grupo -H, - alquila C1-6, -alquila C1-6 substituída e -cicloalquila C3-6; R12 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -alquila C1-6 substituída com alquila,-CONR2R2, -SO2R3, -SO2NR2R2; R13 e R14 são independentemente selecionados do grupo de -H, -alquila C1-6, -cicloalquila C3-6, -alquila C1-6 substituída, -alquila-C1-6-Q3, - alquila-C1-6-cicloalquila-C3-6-Q3, alquila-C1-6-substituída-Q3 e

Q3 é selecionado do grupo de heteroarila, heteroarila substituída, -NR2R12, -CONR2R2, -COOR2, -OR2, e -SO2R3; R15 é selecionado do grupo de -alquila C1-6, -cicloalquila C3-6, - alquila C1-6 substituída, -alquila-C1-6-Q3, -alquila-C1-6-cicloalquila-C3-6-Q3 e - alquila-C1-6-substituída-Q3; R16 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -NR2R2, e - COOR2; com a condição de que quando V é -NR12-; R16 não pode ser - NR2R2; e R17 é selecionado do grupo de -H, -alquila C1-6, -COOR3, e arila.

[0081] Os compostos mais preferidos incluem aqueles nos quais R1 é isopropenila.

[0082] Também são preferidos os compostos nos quais W está ausente.

[0083] Outros compostos preferidos incluem aqueles nos quais X é uma cicloalquenila C4-8, e mais preferencialmente, cicloalquenila C6.

[0084] Adicionalmente, são preferidos os compostos da Fórmula I nos quais A é -halo-alquila-C1-C3, e mais preferencialmente metil-halo, e com a máxima preferência metil-fluoro.

[0085] São também preferidos os compostos nos quais A está para- substituído no substituinte X.

[0086] São também preferidos os compostos da Fórmula I nos quais Y é -COOR2, e mais preferencialmente -COOH. Em determinadas modalidades, é também preferido que Y seja -COOH e A seja metil-fluoro.

[0087] São também preferidos os compostos da Fórmula I nos quais Y está na posição-para.

[0088] São adicionalmente preferidos os compostos da Fórmula I nos quais ambos o substituinte A e o substituinte Y compartilham o mesmo ponto de ligação no substituinte X; mais preferencialmente, na posição-para do substituinte X.

[0089] Em muitas modalidades, é também preferido que R4 seja alquila-C1-6-Q1, em que Q1 é -NR8R9.

[0090]

[0091] Em algumas modalidades, é preferido que R4 seja -alquila-C1- 6-cicloalquila C3-6.

[0092] Em determinadas modalidades é também preferido que R5 seja alquila-C1-6-NR8R9.

[0093] Muitas vezes é também preferido que -NR8R9 forme a estrutura de anel conforme apresentada acima.

[0094] Os compostos preferidos, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, como parte da invenção, incluem os seguintes:

[0095] Os compostos preferidos, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, como parte da invenção, também incluem os seguintes:

[0096] Os compostos acima representam a mistura de diastereoisômeros, e os dois diastereômeros individuais. Em determinadas modalidades, um dos diastereômeros específicos pode ser particularmente preferido.

[0097] Os compostos da presente invenção, de acordo com todas as várias modalidades descritas acima, podem ser administrados oralmente, parenteralmente (incluindo injeções subcutâneas, injeção intravenosa, injeção intramuscular, injeção intraesternal ou técnicas de infusão), por inalação de borrifo, ou retalmente, e por outros meios, em formulações de dose unitária contendo carreadores, excipientes e diluentes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos disponíveis para a pessoa versada. Um ou mais adjuvantes podem também ser incluídos.

[0098] Dessa forma, de acordo com a presente invenção, é adicionalmente fornecido um método de tratamento, e é fornecida também uma composição farmacêutica, para tratar infecções virais como infecção por HIV e AIDS. O tratamento envolve administrar a um paciente que necessita da mesma uma composição farmacêutica que contém uma quantidade eficaz antiviral de um ou mais dos compostos da Fórmula I, junto com um ou mais carreadores, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Como aqui usado, o termo “quantidade eficaz antiviral” significa a quantidade total de cada componente ativo da composição e do método que é suficiente para mostrar um benefício significativo para o paciente, isto é, inibição, melhoria, ou cura de condições agudas caracterizadas pela inibição de infecção por HIV. Quando aplicado a um ingrediente ativo individual, administrado sozinho, o termo refere-se apenas àquele ingrediente. Quando aplicado a uma combinação, o termo refere-se às quantidades combinadas dos ingredientes ativos que resultam no efeito terapêutico, administrado em combinação, quer serial quer simultaneamente. Os termos “tratar, tratando, tratamento” como aqui usados e nas reivindicações significam prevenir, inibir, melhorar e/ou curar doenças e condições associadas com a infecção por HIV.

[0099] As composições farmacêuticas da invenção podem estar sob a forma de comprimidos ou suspensões oralmente administráveis; e também borrifos nasais, preparações estéreis injetáveis, por exemplo, como suspensões oleaginosas ou aquosas estéreis injetáveis ou supositórios. Carreadores, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis podem ser utilizados nas composições farmacêuticas, e são aqueles usados na técnica de preparações farmacêuticas.

[00100] Quando administradas oralmente como uma suspensão, estas composições são preparadas de acordo com técnicas tipicamente conhecidas na técnica de formulação farmacêutica e podem conter celulose microcristalina para conceder volume, ácido algínico ou alginato de sódio como um agente suspensor, metilcelulose como um agente intensificador de viscosidade, e agentes adoçantes/flavorizantes conhecidos na técnica. Como comprimidos de liberação imediata, estas composições podem conter celulose microcristalina, fosfato de dicálcio, amido, estearato de magnésio e lactose e/ou outros excipientes, aglutinantes, extensores, desintegrantes, diluentes, e lubrificantes conhecidos na técnica.

[00101] As soluções ou suspensões injetáveis podem ser formuladas de acordo com a técnica, usando diluentes ou solventes adequados parenteralmente aceitáveis, não tóxicos, como manitol, 1,3-butanodiol, água, solução de Ringer ou solução isotônica de cloreto de sódio, ou agentes dispersantes ou umectantes ou suspensores adequados, como óleos estéreis, insípidos, fixos, incluindo monoglicerídeos ou diglicerídeos sintéticos, e ácidos graxos, incluindo ácido oleico.

[00102] Os compostos aqui apresentados podem ser administrados oralmente a humanos em uma faixa de dosagem de cerca de 1 a 100 mg/kg de peso corporal em doses divididas, habitualmente durante um período prolongado, como dias, semanas, meses ou mesmo anos. Uma faixa de dosagem preferida é cerca de 1 a 10 mg/kg de peso corporal oralmente em doses dividas. Outra faixa de dosagem preferida é cerca de 1 a 20 mg/kg de peso corporal em doses divididas. Será entendido, entretanto, que o teor de dose específico e a frequência de dosagem para qualquer paciente específico podem ser variados e dependerão de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico utilizado, a estabilidade metabólica e a duração da ação daquele composto, a idade, o peso corporal, a saúde geral, o sexo, a dieta, o modo e o tempo de administração, a taxa de excreção, a combinação de drogas, a severidade da condição específica, e o hospedeiro submetido à terapia.

[00103] Também são aqui consideradas combinações dos compostos da Fórmula I aqui apresentados, juntas com um ou mais outros agentes úteis no tratamento de AIDS. Por exemplo, os compostos desta descrição podem ser eficazmente administrados, se em períodos de pré-exposição e/ou de pós- exposição, em combinação com quantidades eficazes dos agentes antivirais contra AIDS, imunomoduladores, agentes anti-infecciosos, ou vacinas, como aqueles na seguinte tabela não limitadora:

[00104] Adicionalmente, os compostos da descrição aqui apresentada podem ser usados em combinação com inibidores da entrada do HIV. Exemplos de tais inibidores da entrada do HIV são discutidos em DRUGS OF THE FUTURE 1999, 24(12), pp. 1355-1362; CELL, Vol. 9, pp. 243-246, Oct. 29, 1999; e DRUG DISCOVERY TODAY, Vol. 5, No. 5, May 2000, pp. 183-194 e Inhibitors of the entry of HIV into host cells. Meanwell, Nicholas A.; Kadow, John F., Current Opinion in Drug Discovery & Development (2003), 6(4), 451-461. Especificamente os compostos podem ser utilizados em combinação com inibidores da fixação, inibidores da fusão, e antagonistas de receptor de quimiocina intencionados para correceptor de quer CCR5 quer CXCR4. Os inibidores da fixação de HIV são também apresentados na patente U.S. n° 7.354.924 e na patente U.S. n° 7.745.625.

[00105] Será entendido que o escopo de combinações dos compostos deste pedido com agentes antivirais de AIDS, imunomoduladores, agentes anti-infecciosos, inibidores da entrada do HIV ou vacinas, não é limitado à lista na Tabela acima, mas inclui, em princípio, qualquer combinação com qualquer composição farmacêutica útil para o tratamento de AIDS.

[00106] As combinações preferidas são tratamentos simultâneos ou alternados com um composto da presente descrição e um inibidor da protease de HIV e/ou um inibidor não nucleosídeo da transcriptase reversa de HIV. Um quarto componente opcional na combinação é um inibidor nucleosídeo da transcriptase reversa de HIV, como AZT, 3TC, ddC ou ddI. Um inibidor da protease de HIV preferido é REYATAZ® (ingrediente ativo Atazanavir). Tipicamente uma dose de 300 a 600 mg é administrada uma vez por dia. Este pode ser coadministrado com uma dose baixa de Ritonavir (50 a 500mg). Outro inibidor da protease de HIV preferido é KALETRA®. Outro inibidor da protease de HIV útil é indinavir, que é o sal de sulfato de etanolato de N- (2(R)-hidroxi-1-(S)-indanil)-2(R)-fenilmetil-4-(S)-hidroxi-5-(1-(4-(3-piridil- metil)-2(S)-N’-(t-butilcarboxamido)-piperazinil))-pentanoamida, e é sintetizado de acordo com a patente U.S. n° 5.413.999. Indinavir é, de modo geral, administrado em uma dosagem de 800 mg três vezes por dia. Outros inibidores de protease preferidos são nelfinavir e ritonavir. Outro inibidor da protease de HIV preferido é saquinavir que é administrado em uma dosagem de 600 ou 1.200 mg tid. Os inibidores não nucleosídeos da transcriptase reversa de HIV preferidos incluem efavirenz. Estas combinações podem ter efeitos surpreendentes sobre a limitação da disseminação e do grau de infecção de HIV. As combinações preferidas incluem aquelas com os seguintes: (1) indinavir com efavirenz, e, opcionalmente, AZT e/ou 3TC e/ou ddI e/ou ddC; (2) indinavir, e qualquer um dentre AZT e/ou ddI e/ou ddC e/ou 3TC, em particular, indinavir e AZT e 3TC; (3) estavudina e 3TC e/ou zidovudina; (4) sal fumarato de tenofovir desoproxila e entricitabina.

[00107] Em tais combinações o composto da presente invenção e outros agentes ativos podem ser administrados separadamente ou juntamente. Além disso, a administração de um elemento pode ser antes da, simultânea com a, ou subsequente à, administração do(s) outro(s) agente(s).

QUÍMICA GERAL (MÉTODOS DE SÍNTESE)

[00108] A presente invenção compreende compostos da Fórmula I, suas formulações farmacêuticas, e seu uso em pacientes sofrendo de ou suscetíveis à infecção por HIV. Os compostos da Fórmula I também incluem sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo. Procedimentos gerais para construir os compostos da Fórmula I e os intermediários úteis para a síntese deles são descritos nas Esquemas a seguir (após as Abreviações).

Abreviações

[00109] Uma ou mais das seguintes abreviações, as quais, em sua maioria, referem-se às abreviações convencionais bem conhecidas por aquelas pessoas versadas na técnica, podem ser usadas em toda a descrição da descrição e nos exemplos: RT, rt = temperatura ambiente BHT = 2,6-di-terc-butil-4-hidroxitolueno CSA = ácido canforossulfônico LDA = di-isopropilamida de lítio KHMDS = bis(trimetilsilil)amida de potássio SFC = cromatografia em fluido supercrítico Quant = quantitativo TBDMS = terc-butildimetilsilano PTFE = politetrafluoroetileno NMO = N-óxido de 4-metilmorfolina THF = tetra-hidrofurano TLC = cromatografia em camada fina DCM = diclorometano DCE = dicloroetano TFA = ácido trifluoroacético LCMS = cromatografia líquida-espectrometria de massa Prep = preparativa HPLC = cromatografia líquida de alta eficiência DAST = trifluoreto de (dietilamino)enxofre TEA = trietilamina DIPEA = N,N-di-isopropiletilamina HATU = [hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3- tetrametilurônio] DCC = N,N’-diciclo-hexilcarbodiimida DMAP = dimetilaminopiridina TMS = trimetilsilila RMN = ressonância magnética nuclear DPPA = azidofosfato de difenila AIBN = azobisisobutironitrila TBAF = fluoreto de tetrabutilamônio DMF = dimetilformamida TBTU = tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’- tetrametilurônio Min(s) = minuto(s) h = hora(s) sat. = saturada TEA = trietilamina EtOAc = acetato de etila TFA = ácido trifluoroacético PCC = clorocromato de piridínio TLC = cromatografia em camada fina Tf2NPh = (trifluorometilsulfonil)metanossulfonamida dioxano = 1,4-dioxano PG = grupo protetor atm = atmosfera(s) mol = mol(s) mmol = milimol(s) mg = miligrama(s) μg = micrograma(s) μL = microlitro(s) μm = micrômetro(s) mm = milímetro(s)

[00110] Os termos “C-3” e “C-28” referem-se a determinadas posições de um núcleo de triterpeno conforme numerado de acordo com as regras da IUPAC (posições representadas abaixo com respeito a um triterpeno ilustrativo: betulina):

[00111] A mesma numeração é mantida quando se refere à série de compostos nos esquemas e nas descrições gerais dos métodos.

Preparação de compostos da Fórmula I - Esquemas de química geral:

[00112] Os compostos da Fórmula I podem ser preparados a partir de ácido betulínico comercialmente disponível (Aldrich, outros) pela química descrita nos seguintes esquemas.

[00113] Os esquemas de reações gerais são apresentados como segue:

[00114] Os compostos da Fórmula I podem ser preparados a partir de ácido betulínico conforme descrito no Esquema 1. O rearranjo de Curtis de ácido betulínico pode ser realizado sem a proteção do grupo hidroxila C-3 para dar o isocianato C-17 que sob hidrólise ácida produz a amina C-17. A amina C-17 é então seletivamente protegida com um grupo protetor de amina (isto é, F-moc, Boc) para então realizar a oxidação do grupo hidroxila C-3 para uma cetona sob condições padrão (isto é, PCC, reagente de Dess-Martin, etc.). A conversão da cetona em seu triflato pode ser realizada por métodos bem conhecidos por aquelas pessoas versadas na técnica. O grupo protetor no grupo amino é então removido para produzir a amina não substituída C-17. A instalação da porção C-3 é realizada via acoplamento de Suzuki do triflato com o ácido borônico correspondente como descrito acima. Alternativamente, o acoplamento de triflato com o ácido borônico correspondente pode ser realizado antes da desproteção da amina C-17. Quando desprotegido, o grupo amino C-17 pode ser então adicionalmente derivatizado por métodos bem conhecidos por aquelas pessoas versadas na técnica como alquilação, aminação redutiva, acilação, etc. Vários destes métodos são descritos nos Esquemas abaixo (Esquemas 2 a 7). Em alguns casos, uma etapa adicional é necessária para desproteger qualquer grupo funcional que pode estar funcionalizado com um grupo protetor (isto é, quando Y for COOH, ele sempre estará protegido como o éster correspondente COOR até a última etapa). A amina primária C-17 pode ser adicionalmente modificada com o uso de métodos padrão, conhecidos por aquelas pessoas versadas na técnica. Alguns exemplos são mostrados nos seguintes esquemas.

[00115] As amidas C-17 podem ser preparadas pela reação de um ácido carboxílico com a amina primária C-17 na presença de um reagente de acoplamento como HATU, DCC, e outros conhecidos por aquelas pessoas versadas na técnica, na presença de uma base como uma base de Hünig, TEA, etc., no solvente apropriado (DCM, THF, DMF, etc.). A hidrólise do éster carboxílico produz o ácido benzoico. Alternativamente, algumas amidas podem ser preparadas pelo tratamento da amina primária C-17 com o reagente cloreto de ácido carboxílico correspondente no lugar de um ácido.Similarmente, sulfonaminas e sulfonamidas podem ser preparadas a partir da amina primária C-17 pelo uso de um cloreto de sulfonila como o agente de sulfonilação.

[00116] As ureias C-17 podem ser preparadas pela reação do isocianato ou cloreto de carbamoíla correspondente na presença de uma base como base de Hünig, TEA, etc., no solvente apropriado (DCM, THF, DMF, etc.). Os carbamatos C-17 podem ser preparados em uma maneira similar usando um cloroformiato no lugar do cloreto de carbamoíla.

[00117] A amina primária C-17 pode ser tratada com um aldeído sob condições de aminação redutiva (por exemplo NaBH(OAc)3 na presença de AcOH/NaOAc ou Ti(etc.)4 em um solvente como THF, 1,4-dioxano, DCE ou DCM) para produzir aminas secundárias C-17.

[00118] Algumas aminas C-17 podem ser preparadas por alquilação da amina primária C-17 com um agente alquilante (R-LG), no qual LG é um grupo de saída como, mas não limitado a, Br, Cl, I, mesilato, tosilato ou triflato, na presença de uma base. Aquecimento pode ser necessário em alguns casos. Hidrólise do éster carboxílico produz o produto ácido benzoico.

[00119] Em alguns casos, pelo prolongamento dos tempos de reação e aquecimento da mistura de reação, o produto dialquilado também pode ser formado.

[00120] Alternativamente, algumas aminas C-17 podem ser preparadas pela adição-1,4 aos aceptores de Michael.

[00121] Os substituintes R, R’ e R” podem conter grupos funcionais (isto é, COOH, COOR, OH, NHR) que podem ser adicionalmente modificados por métodos bem conhecidos por aquelas pessoas versadas na técnica. A modificação pode ser realizada antes ou depois de a desproteção final do ácido carboxílico ser realizada dependendo da natureza do grupo funcional. Alternativamente, a amina secundária C-17 pode ser adicionalmente modificada (isto é, alquilada, acilada, sulfonilada, etc.) usando alguns dos métodos descritos acima ou outros métodos padrão conhecidos por aquelas pessoas.

EXEMPLOS

[00122] Os seguintes exemplos ilustram as sínteses típicas dos compostos da Fórmula I conforme descritas de modo geral acima. Estes exemplos são apenas ilustrativos e não são pretendidos para limitarem em nenhuma maneira a descrição. Os reagentes e materiais de partida estão facilmente disponíveis para uma pessoa comumente versada na técnica.

QUÍMICA Procedimentos típicos e caracterização dos exemplos selecionados:

[00123] Salvo indicação em contrário, os solventes e reagentes foram usados diretamente como obtidos dos fornecedores comerciais, e as reações foram realizadas sob uma atmosfera de nitrogênio. Cromatografia flash foi conduzida em gel de sílica 60 (tamanho de partícula de 0,040-0,063 [sic]; fornecedor EM Science). Os espectros de 1H RMN foram registrados em Bruker DRX-500f a 500 MHz (ou Bruker AV 400 MHz, Bruker DPX-300B ou Varian Gemini 300 a 300 MHz conforme mencionado). Os deslocamentos químicos foram relatados em ppm na escala δ em relação a δTMS = 0. As seguintes referências internas foram usadas para os prótons residuais nos seguintes solventes: CDCl3 (δH 7,26), CD3OD (δH 3,30), acético-d4 (Ácido Acético d4) (δH 11,6, 2,07), mistura de DMSO ou DMSO-D6-CDCl3 (δH 2,50 e 8,25) (razão 75%:25%), e DMSO-D6 (δH 2,50). Acrônimos padrão foram utilizados para descrever os padrões de multiplicidade: s (singlete), br. s (singlete largo), d (dublete), t (triplete), q (quarteto), m (multiplete), b (largo), app (aparente). A constante de acoplamento (J) é em Hertz. Todos os dados de Cromatografia Líquida (LC, Liquid Chromatography) foram registrados em um cromatógrafo líquido Shimadzu LC-10AS usando um detector UV-Vis SPD-10AV com dados de Espectrometria de Massa (MS, Mass Spectrometry) determinados usando uma Plataforma de Micromassa para LC no modo eletrospray. Seção 1 Métodos de LC/MS Método 1 Gradiente de % de B Inicial = 0, % de B Final = 100 durante 2 minutos, mantido a 100% de B Vazão = 1 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 90% de água, 10% de metanol, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de metanol, 0,1% de TFA Coluna = Fenomenex Luna C18, 3 μm, 2,0 mm x 30 mm Método 2 Gradiente de % de B Inicial = 0% de B Final = 100 durante 4 minutos, mantido a 100% de B Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 90% de água, 10% de metanol, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de metanol, 0,1% de TFA Coluna = Fenomenex Luna C18, 3 μm, 2,0 mm x 50 mm Método 3 Gradiente de % de B Inicial = 0, % de B Final = 100 durante 2 minutos, mantido a 100% de B Vazão = 1 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Fenomenex Luna C18, 3μm, 2,0 mm x 30 mm Método 4 Gradiente de % de B Inicial = 20, % de B Final = 100 durante 2 minutos, mantido a 100% de B Vazão = 0,8 mL/ min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 90% de água, 10% de metanol, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de metanol, 0,1% de TFA Coluna = Waters Xbridge Phenyl, 2,5 μm, 2,1 mm x 50 mm Método 5 Tempo de Gradiente % de B Inicial = 20, % de B Final = 100, = 1,5 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 Solvente A = 10% de MeOH - 90% de água - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de água - 0,1% de TFA Coluna = Waters Xbridge Phenyl 2,1 mm x 50 mm 2,5μm Método 6 Gradiente de % de B Inicial = 2, % de B Final = 98 durante 1,5 minutos, mantido a 98% de B Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 100% de água, 0,05%TFA Solvente B = 100% de acetonitrila, 0,05% de TFA Coluna = Waters Aquity UPLC BEH C18, 2,1 mm x 50 mm, 1,7 μm Método 7 Tempo de Gradiente de % de B Inicial = 20, % de B Final = 100 = 3 min Vazão = 0,6 mL/min Comprimento de onda = 220 Solvente A = 10% de MeOH - 90% de água - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de água - 0,1% de TFA Coluna = Waters Xbridge Phenyl 2,1 mm x 50 mm 2,5 μm Método 8 Tempo de Gradiente de % de B Inicial = 20, % de B Final = 100, = 2 min Vazão = 0,6 mL/min Comprimento de onda = 220 Solvente A = 10% de MeOH - 90% de água - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de água - 0,1% de TFA Coluna = Waters Xbridge Phenyl 2,1 mm x 50 mm 2,5 μm Método 9 Gradiente de % de B Inicial = 0, % de B Final = 100 durante 2 minutos, mantido a 100% de B Vazão = 0,6 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 90% de água, 10% de metanol, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de metanol, 0,1% de TFA Coluna = Xbridge Phenyl, 2,5 μm, 2,1 mm x 50 mm Método 10 Gradiente de % de B Inicial = 30, % de B Final = 100 durante 4 min, mantido a 100% de B Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes = Água -Metanol-0,1% de TFA Solvente A = 90% de água-10% de metanol-0,1% de TFA Solvente B = 10% de água-90% de metanol-0,1% de TFA Coluna 2 = (2) FENOMENEX-LUNA 2,0 mm X 50 mm 3 μm Método 11 Gradiente de % de B Inicial = 40, % de B Final = 100 durante 4 min, mantido a 100% de B Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes = Acetonitrila:água: Acetato de Amônio 10 mm Solvente A = 5% de acetonitrila:95% de água: Acetato de Amônio 10 mm Solvente B = 95% de acetonitrila:5% de água: Acetato de Amônio 10 mm Coluna 2 = 2.) FENOMENEX-LUNA 2,0 mm x 50 mm 3μm Método 12 Gradiente de % de B Inicial = 20, % de B Final = 100 durante 4 min, mantido a 100% de B Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes = Acetonitrila:água: Acetato de Amônio 10 mm Solvente A = 5% de acetonitrila:95% de água: Acetato de Amônio 10 mm Solvente B = 95% de acetonitrila:5% de água: Acetato de Amônio 10 mm Coluna 2 = 2.) FENOMENEX-LUNA 2,0 mm x 50 mm 3μm Métodos de SFC: Método 1 Instrumento = SFC Thar 350/A5 Vazão = 220 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Fase Móvel = CO2/[heptano/IPA = 4:1 (v:v)] = 80/20 isocrático Coluna = Whelko(rr) 50cm x 5 cm, 10 μm Volume de Injeção = 1,0 mL [concentração de soluto = 100 mg/mL de heptano/IPA 4:1 (v:v)] Programa de Injeção: Injeções Sobrepostas (1,0 mL a cada 2 min) Métodos de HPLC-Prep: Método de HPLC-Prep 1 Gradiente de % de B Inicial = 30, % de B Final = 67 durante 16 minutos, degrau para 100% de B durante 10 minutos Vazão = 100 mL/min Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 50 mm x 250 mm Método de HPLC-Prep 2 Gradiente% de B Inicial = 0, % de B Final = 100 durante 20 minutos, mantido a 100% de B durante 4 minutos Vazão = 50 mL/min Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Waters Xbridge Phenyl, 5 μm, 30 mm x 100 mm Método de HPLC-Prep 3 Gradiente de % de B Inicial = 15, % de B Final = 100 durante 20 minutos, mantido a 100% de B durante 4 minutos Vazão = 50 mL/min Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Waters Xbridge Phenyl, 5 μm, 30 mm x 100 mm Método de HPLC-Prep 4 Gradiente de % de B Inicial = 20, % de B Final = 100 durante 20 minutos, mantido a 100% de B durante 5 minutos Vazão = 50 mL/min Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 150 mm Método de HPLC-Prep 5 Gradiente de % de B Inicial = 30, % de B Final = 100 durante 15 minutos, mantido a 100% de B durante 5 minutos Vazão = 20 mL/min Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Waters Xbridge Phenyl, 5 μm, 19mm x 250 mm Método de HPLC-Prep 6 Gradiente de % de B Inicial = 20, % de B Final = 65 durante 20 minutos, degrau para 100% de B durante 5 minutos Vazão = 50 mL/min Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 150 mm Método de HPLC-Prep 7 Gradiente de % de B Inicial = 20, % de B Final = 100 durante 30 minutos, mantido a 100% de B durante 4 minutos Vazão = 50 mL/min Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 150 mm Método de HPLC-Prep 8 Gradiente de % de B Inicial = 30, % de B Final = 100 durante 18 minutos, mantido a 100% de B for 2 minutos Vazão = 25 mL/min Coleta por ELSD Solvente A = 95% de água, 5% de acetonitrila, acetato de amônio 10 mM Solvente B = 5% de água, 95% de acetonitrila, acetato de amônio 10 mM Coluna = XBridge OBD Prep Shield RP18 19mm x 100 mm 5μm Método de HPLC-Prep 9 Gradiente de % de B Inicial = 10, % de B Final = 100 durante 10 minutos, mantido a 100% de B durante 5 minutos Vazão = 50 mL/min Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 100 mm Método de HPLC-Prep 10 Gradiente de % de B Inicial = 10, % de B Final = 100 durante 10 minutos, mantido a 100% de B durante 5 minutos Vazão = 50 mL/min Solvente A = 95% de água, 5% de acetonitrila, Acetato de Amônio 10 mm Solvente B =5% de água, 95% de acetonitrila, Acetato de Amônio 10 mm Coluna = Xbridge OBD Prep Shield RP, 5μm, 19 x 100 mm Método de HPLC-Prep 11 Gradiente de % de B Inicial = 25, % de B Final = 100 durante 15 minutos, mantido a 100% de B Vazão = 40 mL/min Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 100 mm Método de HPLC-Prep 12 Gradiente de % de B Inicial = 20, % de B Final = 100 durante 15 min, mantido a 100% de B durante 4 min Vazão = 50 mL/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes = Água - acetonitrila-TFA Solvente A = 90% de água -10% de acetonitrila-0,1% de TFA Solvente B = 10% de água -90% de acetonitrila-0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 150 mm Método de HPLC-Prep 13 Gradiente de % de B Inicial = 30, % de B Final = 100 durante 15 min, mantido a 100% de B durante 15 min Vazão = 50 mL/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes = Água - acetonitrila-TFA Solvente A = 90% de água -10% de acetonitrila-0,1% de TFA Solvente B = 10% de água -90% de acetonitrila-0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 150 mm Método de HPLC-Prep 14 Gradiente de % de B Inicial = 30, % de B Final = 100 durante 20 min, mantido a 100% de B durante 6 min Vazão = 50 mL/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes= Água - acetonitrila-TFA Solvente A = 90% de água -10% de acetonitrila-0,1% de TFA Solvente B = 10% de água -90% de acetonitrila-0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 150 mm Método de HPLC-Prep 15 Gradiente de % de B Inicial = 30, % de B Final = 100 durante 15 min, mantido a 100% de B durante 5 min Vazão = 50 mL/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes = Água - acetonitrila-TFA Solvente A = 90% de água -10% de acetonitrila-0,1% de TFA Solvente B = 10% de água -90% de acetonitrila-0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 150 mm Método de HPLC-Prep 16 Gradiente de % de B Inicial = 20, % de B Final = 100 durante 10 min, mantido a 100% de B durante 4 min Vazão = 50 mL/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes = Água - acetonitrila-TFA Solvente A = 90% de água -10% de acetonitrila-0,1% de TFA Solvente B = 10% de água -90% de acetonitrila-0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 mm x 150 mm Método de HPLC-Prep 17 Gradiente de % de B Inicial = 30, % de B Final = 50 durante 30 min, mantido a 50% de B durante 5 min Vazão = 25 mL/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes = Água - acetonitrila-TFA Solvente A = 90% de água -10% de acetonitrila-0,1% de TFA Solvente B = 10% de água -90% de acetonitrila-0,1% de TFA Coluna = YMC-OBD 20 mm X 100 mm S5 Preparação de 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila

Etapa 1. Preparação de 1-(hidroximetil)-4-((trimetilsilil)oxi)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila

[00124] Uma solução de 2-(hidroximetil)acrilato de etila (5,21 g, 40 mmol) e (buta-1,3-dien-2-iloxi)trimetilsilano (8,54 g, 60,0 mmol) em tolueno (100 mL) foi jateada com nitrogênio, vedada e aquecida em um frasco de pressão a 150°C durante 48 h. A mistura de reação amarela clara resultante foi esfriada para a temperatura e concentrada em vácuo para produzir o produto bruto como um óleo que foi usado na etapa seguinte sem purificação. MS: m/e 201,05 (M+H-silila)+, 0,839 min (Método 4).Etapa 2. Preparação de 1-(hidroximetil)-4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila

[00125] A uma solução de 1-(hidroximetil)-4-((trimetilsilil)oxi)ciclo- hex-3-enocarboxilato de etila (10,9 g, 40,0 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado HCl (0,005N) (1 mL, 5,00 μmol). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura de reação foi extraída com EtOAc (2 x 10 mL), lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (5 mL) seguida por salmoura (10 mL). O extrato orgânico foi secado com Na2SO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica usando acetato de etila/hexanos para produzir o composto do título como um óleo incolor (3 g, 37,4%). MS: m/e 200,95 (M+H)+, 0,853 min (Método 4). 1H RMN (400MHz,CLOROFÓRMIO-d) δ 4,28 (q, J=7,3 Hz, 2H), 3,75 (s, 2H), 2,57-2,45 (m, 2H), 2,45-2,33 (m, 4H), 1,86-1,71 (m, 2H), 1,39-1,30 (m, 3H).Etapa 3. Preparação de 4-oxo-1-((((trifluorometil)sulfonil)oxi)metil)ciclo- hexanocarboxilato de etila

[00126] A uma mistura agitada de 1-(hidroximetil)-4-oxociclo- hexanocarboxilato de etila (1,170 mg, 5,84 mmol) e piridina (0,614 mL, 7,60 mmol) em DCM (10 mL) a -10°C foi adicionado anidrido trifluorometanossulfônico (7,60 mL, 7,60 mmol) por gotejamento. A mistura resultante foi agitada a -10°C durante 30 min e lavada com solução gelada de HCl 1N e salmoura. A camada orgânica separada foi secada com sulfato de sódio. O solvente foi removido e o resíduo foi usado como tal sem purificação. MS: m/e 333,05 (M+H)+, 1,969 min (Método 4).Etapa 4. Preparação de 1-(fluorometil)-4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila

[00127] A uma mistura agitada de 4-oxo-1- ((((trifluorometil)sulfonil)oxi)metil)ciclo-hexanocarboxilato de etila (1,941 g, 5,84 mmol) em DCM (10 mL) a 25°C foi adicionado bifluoreto de tetrabutilamônio (3,63 mL, 7,01 mmol) por gotejamento. A mistura resultante foi agitada a 25°C durante 18 horas. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo. Duas camadas foram formadas sob agitação do resíduo obtido em 50 mL de hexanos. A camada superior foi decantada para um frasco e secada sob vácuo para produzir um óleo incolor. Este resíduo foi purificado por cromatografia flash usando uma coluna de 12 g de gel de sílica e um gradiente de 0%-35% de EtOAc em hexanos para produzir o composto do título como um óleo incolor (0,20g, 9,0%). MS: m/e 203,15 (M+H)+, 1,470 min (Método 4). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,49-4,30 (m, 2H), 4,25-4,11 (m, 2H), 2,50-2,35 (m, 4H), 2,33-2,20 (m, 2H), 1,80-1,64 (m, 2H), 1,30-1,20 (m, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -223,02-225,00 (m, 1F).Etapa 5. Preparação de 1-(fluorometil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi) ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila

[00128] KHMDS (1,27 mL, 1,27 mmol) foi adicionada a uma solução amarela pálida de 1-(fluorometil)-4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila (0,20 g, 0,98 mmol) e 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-((trifluorometil)sulfonil) metanossulfonamida (0,38 g, 1,07 mmol) em THF (20 mL) a -78°C. A solução amarela resultante foi agitada a -78°C durante 2 h. A mistura de reação foi inativada com solução aquosa saturada de cloreto de amônio e extraída uma vez com 10 mL de EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura (10 mL), secada com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash usando uma coluna de 12 g de gel de sílica e um gradiente de 0%-10% de EtOAc em hexanos para produzir o composto do título como um óleo incolor (179 mg, 54,7%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,84-5,69 (m, 1H), 4,604,37 (m, 2H), 4,30-4,15 (m, 2H), 2,89-2,70 (m, 1H), 2,56-2,33 (m, 2H), 2,322,14 (m, 2H), 2,07-1,81 (m, 1H), 1,34-1,22 (m, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,18-225,70 (m, 1F)

[00129] Etapa 6. A um frasco contendo 1-(fluorometil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila (0,179 g, 0,53 mmol) foram adicionados bis(pinacolato)diboro (0,143 g, 0,56 mmol), acetato de potássio (0,156 g, 1,59 mmol), e dicloreto de 1,1’- bis(difenilfosfino)ferrocenopaládio(II) (0,013 g, 0,016 mmol). A mistura foi diluída com dioxano (8 mL), jateada com nitrogênio, e aquecida para 70°C durante 5 h. Após esfriamento para rt (temperatura ambiente) a mistura foi diluída com água (25 mL) e extraída com acetato de etila (2 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secadas com sulfato de magnésio. O agente de secagem foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash usando uma coluna Isco de 12 g de gel de sílica e um gradiente de 0%-10% de EtOAc em hexanos. As frações contendo o produto previsto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o composto do título como um óleo incolor, transparente (91 mg, 54%). MS: m/e 313,20 (M+H)+, 2,299 min (Método 4). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,50 (td, J=3,9, 2,0 Hz, 1H), 4,59-4,32 (m, 2H), 4,234,13 (m, 2H), 2,74-2,52 (m, 1H), 2,30-2,08 (m, 3H), 1,98-1,69 (m, 2H), 1,321,20 (m, 15H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,59-226,36 (m, 1F) .Método alternativo de preparação para a preparação de 1-(fluorometil)- 4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila:

Etapa 1. Preparação de 2-(fluorometil)acrilato de etila

[00130] A uma solução de 2-(hidroximetil)acrilato de etila (5 g, 38,4 mmol) em DCM (50 mL) foi adicionado DAST (6,60 mL, 49,9 mmol) a - 78°C. A mistura de reação foi agitada a -78oC durante 1 hora. A mistura foi aquecida para 25°C e continuamente agitada durante mais 3 horas. A mistura de reação foi inativada pela adição de CH2Cl2 (20 mL) e de solução aquosa saturada de NaHCO3 (20 mL). A camada orgânica foi separada, e a camada aquosa foi extraída duas vezes com CH2Cl2 (20 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados com sulfato de sódio e evaporados para produzir um óleo residual que foi usado na etapa seguinte sem purificação. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,49-6,33 (m, 1H), 6,03-5,87 (m, 1H), 6,45-5,84 (m, 2H), 4,27 (q, J=7,1 Hz, 2H), 1,33 (t, J=7,1 Hz, 3H). 19F RMN (470MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -220,33-221,86 (m, 1F).Etapa 2. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((trimetilsilil)oxi)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila

[00131] Uma solução de 2-(fluorometil)acrilato de etila (4,7 g, 35,6 mmol)) e (buta-1,3-dien-2-iloxi)trimetilsilano (10,12 g, 71,1 mmol) em tolueno (100 mL)) foi jateada com nitrogênio, vedada e aquecida a 150°C em um vaso de pressão durante 48 h. A solução amarela pálida resultante foi esfriada para a temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida para produzir o composto do título como um óleo que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,83 (t, J=3,3 Hz, 1H), 4,64-4,38 (m, 2H), 4,25-4,12 (m, 2H), 2,62-2,48 (m, 1H), 2,19-1,99 (m, 4H), 1,93-1,78 (m, 1H), 1,34-1,22 (m, 3H), 0,24-0,15 (m, 9H). 19F RMN (470MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -224,80-225,37 (m, 1F).Etapa 3. Preparação de 1-(fluorometil)-4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila

[00132] A uma solução de 1-(fluorometil)-4-((trimetilsilil)oxi)ciclo- hex-3-enocarboxilato de etila (9,76 g, 35,6 mmol) em THF (5 ml) foi adicionado HCl (0,005N) (1 mL, 5,00 μmol). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro. A mistura de reação foi extraída com EtOAc (2 x 10 mL), lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (5 mL) seguida por salmoura (10 mL), secada com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash usando uma coluna de 80 g de gel de sílica e um gradiente de 0%-25% de EtOAc em hexanos. A fração contendo o produto previsto foi coletada e concentrada sob pressão reduzida para produzir o composto do título como um óleo incolor (6,5g, 90,2%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,59-4,42 (m, 2H), 4,30 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,58-2,34 (m, 6H), 1,88-1,73 (m, 2H), 1,33 (t, J=7,2 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -223,54-223,99 (m, 1F).Preparação de 1-(fluorometil)-4-oxociclo-hexanocarboxilato de benzila Método A.

Etapa 1. Preparação de 1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.

[00133] Para dentro de um frasco de fundo redondo de 3 bocas de 3L foram adicionados 4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila (100 g, 570 mmol), etano-1,2-diol (0,159 L, 2849 mmol), ácido ((1S,4R)-7,7-dimetil-2- oxobiciclo[2.2.1]heptan-1-il)metanossulfônico (1,324 g, 5,70 mmol) e tolueno seco (1,2 L). Uma trapa Dean-Stark para coletar água e um condensador foram instalados e a mistura foi aquecida para refluxar com agitação. O destilado imiscível foi coletado na trapa Dean-Stark e foi periodicamente removido. Após 28 h de tempo de refluxo total, havia sido removido um total de 82 mL de destilado imiscível da trapa Dean-Stark. Após o esfriamento da mistura para aproximadamente 40oC, solução aquosa saturada de NaHCO3 (400 mL) foi adicionada à mistura de reação com agitação rápida. A mistura foi transferida para um funil de separação, agitada e as fases foram separadas.A camada orgânica foi lavada com água (4 x 500 mL), então com NaHCO3 5% (200 mL) e então com salmoura (100 mL). O material orgânico foi secado com MgSO4 anidro, filtrado e concentrado sob pressão reduzida para produzir um óleo viscoso suavemente amarelo (118,50 g, 97% de rendimento). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,15 (q, J=7,3 Hz, 2H), 3,96 (s, 4H), 2,41-2,27 (m, 1H), 1,96 (dt, J=8,7, 4,3 Hz, 2H), 1,89-1,74 (m, 4H), 1,68-1,49 (m, 2H), 1,27 (t, J=7,1 Hz, 3H). 13C RMN (101MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 175,2, 108,1, 64,3, 60,3, 41,6, 33,8, 26,3, 14,3.Etapa 2: Preparação de 8-formil-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila.

[00134] A uma solução a -78°C de 1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila (32,31 g, 151 mmol) em THF (250 mL) foi adicionada uma solução de di-isopropilamida de lítio 2M (98 mL, 196 mmol) em THF via uma cânula durante 5 mins. A solução marrom resultante foi agitada a - 78°C. Após 1h, o banho frio foi substituído por um banho de gelo e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 1h. A mistura de reação foi de novo esfriada para -78°C e tratada com uma solução de formiato de etila (18,65 mL, 226 mmol) em THF (40 mL) adicionado por gotejamento durante 45 min. A mistura de reação marrom clara resultante foi agitada a -78°C durante 1h. O banho frio foi removido e à mistura foi adicionada por gotejamento solução aquosa saturada de NH4Cl (250 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. A mistura amarela resultante foi extraída com EtOAc (3 x 300 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com HCl 0,5N (300 mL), então com salmoura, secada com MgSO4, filtrada e concentrada para um óleo viscoso marrom. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash em gel de sílica (750 g de sílica, eluição em etapas: hexanos/EtOAc 9:1 e hexanos/EtOAc 5:1) para fornecer o material de partida recuperado, 1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila (8,6 g, 40,1 mmol, 26,6% de rendimento) e o produto desejado, 8-formil-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila (20,1 g, 83 mmol, 55,0% de rendimento), ambos como óleos amarelos viscosos. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,50 (s, 1H), 4,17 (q, J=7,2 Hz, 2H), 3,94-3,86 (m, 4H), 2,24-2,09 (m, 2H), 2,01 (ddd, J=13,5, 8,3, 5,1 Hz, 2H), 1,75-1,48 (m, 4H), 1,23 (t, J=7,2 Hz, 3H).Etapa 3: Preparação de 8-(hidroximetil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de. Etila

[00135] A uma solução a 0°C de 8-formil-1,4-dioxaespiro[4.5]decano- 8-carboxilato de etila (28,9 g, 119 mmol) em etanol (300 mL) foi adicionado boro-hidreto de sódio (5,30 g, 137 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 0°C. Após 3h, a mistura de reação foi inativada com solução aquosa saturada de NH4Cl (200 mL) adicionada por gotejamento via um funil de gotejamento. O banho de gelo foi removido e a pasta fluida resultante foi tratada lentamente com H2O (150 mL). A mistura resultante foi filtrada para remover uma quantidade pequena de sólido branco. O filtrado líquido foi concentrado para remover a maior parte do solvente orgânico, e o restante foi extraído com EtOAc (4 x 250 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, secada com MgSO4, filtrada, concentrada e secada sob pressão reduzida para produzir 8-(hidroximetil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila (27,7 g, 113 mmol, 95% de rendimento) como um óleo viscoso transparente. O material deste experimento foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. Em um experimento separado o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (SiO2, eluição hexanos:EtOAc 3:1) para produzir 8-(hidroximetil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila em 91% de rendimento. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,18 (q, J=7,1 Hz, 2H), 3,98-3,87 (m, 4H), 3,61 (d, J=6,1 Hz, 2H), 2,23 (br. s., 1H), 2,17-2,07 (m, 2H), 1,72-1,51 (m, 6H), 1,32-1,20 (m, 3H).Etapa 4. Preparação de 8-(hidroximetil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de benzila.

[00136] A uma solução de 8-(hidroximetil)-1,4-dioxaespiro[4.5] decano-8-carboxilato de etila ( 27,6 g, 113 mmol) em THF (150 mL) e MeOH (50 mL) foi adicionado uma solução aquosa de hidróxido de lítio 3N (45,2 mL, 136 mmol) e a mistura foi aquecida para 60°C com agitação durante 17 h. Mais solução aquosa de hidróxido lítio 3N (30,1 mL, 90 mmol) foi então adicionada e a mistura foi aquecida para 60°C durante mais 14h. A mistura de reação foi concentrada e secada sob pressão reduzida para produzir um resíduo contendo o carboxilato correspondente (24,5 g, 107 mmol) que foi usado sem purificação adicional.

[00137] A este resíduo em DMF (200 mL) foi adicionado brometo de benzila (12,98 mL, 107 mmol) e a mistura resultante foi agitada à rt durante 17h. A mistura de reação foi concentrada para aproximadamente a metade do volume original, diluída com EtOAc (250 mL) e lavada com HCl 1N (200 mL). A fase aquosa foi extraída com 3 x 250 mL EtOAc. A fase orgânica combinada foi lavada com H2O (100 mL), salmoura, secada com MgSO4, filtrada e concentrada para um óleo viscoso amarelo claro. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (SiO2, eluição em gradiente em degraus de hex:EtOAc 70:30 então hex:EtOAc 1:1) e secado sob pressão reduzida para produzir 8-(hidroximetil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de benzila (23,1 g, 71,6 mmol, 63% de rendimento sobre as 3 etapas). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,40-7,28 (m, 5H), 5,16 (s, 2H), 3,91 (s, 4H), 3,64 (s, 2H), 2,34 (br. s., 1H), 2,22-2,12 (m, 2H), 1,701,63 (m, 4H), 1,62-1,54 (m, 2H). 13C RMN (101MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 175,3, 135,8, 128,5 (s, 2C), 128,1, 127,8, 108,3, 68,5, 66,4, 64,2, 64,1, 48,1, 31,3, 27,9.Etapa 5. Preparação de 8-((((trifluorometil)sulfonil)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de benzila.

[00138] Em um frasco de fundo redondo de 500 mL, 8-(hidroximetil)- 1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de benzila (14,9 g, 48,6 mmol) foi combinado com DCM seco (250 mL). A solução foi esfriada em um banho de gelo/acetona para aproximadamente -10oC e à mesma foi adicionada piridina (5,31 mL, 65,7 mmol) seguida pela adição por gotejamento de Tf2O (11,09 mL, 65,7 mmol) durante 30 min. A suspensão suavemente amarela foi agitada a 0°C (banho de gelo/água) durante 1,5 h. A mistura laranja escura resultante com sólidos significantes suspensos foi concentrada sob pressão reduzida para deixar um resíduo que foi posto sob vácuo para remover o excesso de anidrido tríflico, então o resíduo foi redissolvido em DCM (150 mL). A mistura foi filtrada para remover uma quantidade significativa de sólido branco que foi lavado com DCM. O filtrado laranja/avermelhado escuro foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna flash de gel de sílica (330 g de sílica, eluição com DCM 100%). As frações de produto foram combinadas e concentradas para um óleo laranja espesso que foi deixado sob vácuo alto com agitação de um dia para outro. A cor alterou-se para azul/verde. Dessa forma foi obtido o produto desejado (20,94 g, 98% de rendimento) como um óleo viscoso azul/verde. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,48-7,30 (m, 5H), 5,21 (s, 2H), 4,53 (s, 2H), 4,04- 3,87 (m, 4H), 2,30-2,14 (m, 2H), 1,76-1,56 (m, 6H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -74,39 (s, 1F).Etapa 6. Preparação de 8-(fluorometil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de benzila.

[00139] Em um frasco de fundo redondo de 500 mL sob atmosfera de nitrogênio, 8-((((trifluorometil)sulfonil)oxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5] decano-8-carboxilato de benzila (20,76 g, 47,4 mmol) foi combinado com THF anidro (150 mL) que foi introduzido via cânula. À solução azul foi adicionado por gotejamento via funil de adição TBAF, 1,0M em THF (71,0 mL, 71,0 mmol) por gotejamento durante 15 min. A mistura imediatamente alterou-se para amarelo canário quando TBAF foi adicionado. A mistura foi agitada à rt durante 1h. A mistura bruta foi concentrada para deixar um óleo espesso que foi diluído com acetato de etila (700 mL) e lavado com água (2 x 250 mL) e com salmoura (100 mL). A fase orgânica foi secada com MgSO4, filtrada e concentrada para um resíduo amarelo espesso. Purificação por cromatografia em coluna flash de gel de sílica (330 g de sílica, eluição em gradiente de hexanos 100% para hexanos:EtOAc 2:1) produziu o produto desejado como um óleo amarelo (13,73 g, 94% de rendimento). LCMS: m/e 309,2 (M+H)+, 1,27 min (Método 6). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 7,44-7,31 (m, 5H), 5,21 (s, 2H), 4,45 (d, J=47,2 Hz, 2H), 4,01-3,89 (m, 4H), 2,28-2,16 (m, 2H), 1,75-1,55 (m, 6H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -223,25 (t, J=46,8 Hz, 1F).

[00140] Etapa 7. Em um frasco de fundo redondo de 2 L esfriado em um banho de gelo, 8-(fluorometil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de benzila (13,72 g, 44,5 mmol) foi combinado com THF (500 mL) e então solução aquosa de ácido clorídrico 1,5M (534 mL, 801 mmol) foi adicionada lentamente durante 2 min. O banho de gelo foi removido e a mistura foi agitada à rt durante 15 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para remover a fase orgânica e o restante foi extraído com acetato de etila (300 mL). A fase de acetato de etila foi lavada com água (2 x 200 mL) e com salmoura (50 mL). Concentração sob pressão reduzida produziu o produto desejado (12,13 g, quantitativo) como um óleo amarelo. LCMS: m/e 265,3 (M+H)+, 1,19 min (Método 6). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,47-7,32 (m, 5H), 5,27 (s, 2H), 4,52 (d, J=47,2 Hz, 2H), 2,57-2,42 (m, 4H), 2,42-2,31 (m, 2H), 1,87-1,76 (m, 2H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -223,41 (t, J=46,8 Hz, 1F).Método B

Etapa 1. Preparação de 2-(hidroximetil)acrilato de benzila

[00141] A um frasco de 1-L foram adicionados acrilato de benzila (44,6 mL, 292 mmol), dioxano (290 mL), 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (32,7 g, 292 mmol) e água (270 mL). A mistura foi vigorosamente agitada à rt formando uma emulsão. À mistura sob agitação foi adicionada uma solução aquosa de formaldeído (37%, 23,9 mL, 321 mmol) e a agitação foi continuada durante 14 horas à rt. A mistura de reação bruta foi extraída com cloreto de metileno (3 x 150 mL). As camadas orgânicas foram separadas, combinadas e lavadas com uma mistura 50:50 de solução aquosa saturada de cloreto de amônio e HCl (0,2 N). Evaporação e concentração sob pressão reduzida (2 cm de Hg) a 45°C produziu 49,1 g de um xarope de fluxo livre. O produto bruto foi purificado em uma coluna de gel de sílica com uma mistura em gradiente de EtOAc em Hexanos para produzir o composto do título como um xarope incolor transparente (27 g, 141 mmol, 48%). LCMS: m/e 193,05 (M+H)+, 1,78 min (Método 1). 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,50-7,30 (m, 5H), 6,34 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,25 (s, 2H), 4,38 (d, J=6,4 Hz, 2H), 2,20 (t, J=6,6 Hz, 1H); 13C RMN (126MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 166,1, 139,3, 135,7, 128,7, 128,4, 128,2, 126,2, 66,6, 62,7.Etapa 2. Preparação de 2-(fluorometil)acrilato de benzila

[00142] 2-(Hidroximetil)acrilato de benzila (13,7 g, 71,3 mmol) foi dissolvido em cloreto de metileno seco (100 mL) sob nitrogênio e a mistura foi esfriada a -78°C. A esta solução sob agitação e usando uma pipeta de polietileno, foi adicionado trifluoreto de dietilaminoenxofre (DAST, 13,0 mL, 98 mmol) em 4 porções durante um período de 5 minutos. Uma solução laranja pálida foi formada. Quando a adição foi completa, o banho de gelo seco foi removido e a temperatura de reação foi permitida elevar-se para a RT. A agitação foi continuada à rt durante um total de 4 horas. A mistura de reação foi transferida por gotejamento, para dentro de uma mistura 50:50 esfriada (~4°C) de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e água. Quando toda a mistura de reação bruta foi transferida, ela foi extraída com éter estabilizado com BHT (3 x 150 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, e lavadas uma vez com água (50 mL). O solvente da fase orgânica foi removido sob pressão reduzida à temperatura subambiente (~15°C) até peso constante (14,2 g, quant.). O material bruto foi usado imediatamente na etapa seguinte. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,44-7,34 (m, 5H), 6,49-6,43 (m, 1H), 5,99 (dt, J=2,8, 1,5 Hz, 1H), 5,26 (s, 2H), 5,13 (d, J=46,5 Hz, 2H); 19F RMN (470MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ - 220,91 (t, J=46,2 Hz).Etapa 3-Preparação de 1-(fluorometil)-4-((trimetilsilil)oxi)ciclo-hex-3- enocarboxilato de benzila

[00143] A um vaso de pressão de 500 mL revedável foram adicionados o material de partida bruto 2-(fluorometil)acrilato de benzila (14,2 g, 73,1 mmol) e (buta-1,3-dien-2-iloxi)trimetilsilano (Sigma Aldrich, material usado conforme fornecido, 18,73 g, 132 mmol) em tolueno (200 mL). O vaso foi evacuado para 80 micrômetros de Hg a -78°C, seguido por purga com nitrogênio. O processo foi repetido duas vezes. O frasco foi vedado, e aquecido para RT antes que fosse deixado imerso em um banho de óleo a 125°C durante 22 horas. A mistura foi permitida esfriar para a RT. Uma alíquota pequena (25 μL) foi removida da mistura de reação bruta, secada a vácuo à rt para análise por RMN em 1H e 19F. Os resultados de RMN foram consistentes com a formação do composto do título e a quantidade pequena do correspondente regioisômero de Diels-Alder. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,43-7,29 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,80 (d, J=3,0 Hz, 1H), 4,52 (dq, J=46,9, 8,4 Hz, 2H), 2,65-2,49 (m, 1H), 2,21-2,00 (m, 4H), 1,92-1,78 (m, 1H), 0,24-0,12 (m, 9H); 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -224,76 (t, J=47,7 Hz, 1F) e 19F RMN da quantidade pequena do correspondente regioisômero de Diels-Alder (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,20 (t, J=46,8 Hz, 0,06F). O material bruto foi evaporado e secado sob vácuo (20 micrômetros de Hg) a ~35°C até peso constante (24,6 g, quant.). Este material bruto foi usado na etapa seguinte como tal sem purificação adicional.

[00144] Etapa 4. O material bruto da etapa prévia (24,6 g, 73 mmol) foi dissolvido em THF (200 mL) à rt para formar uma solução transparente. HCl aquoso 1N (2 mL, 2 mmol) e água 4 mL foram adicionados. A solução transparente foi agitada à rt durante um total de 16 horas. A mistura de reação bruta foi inativada com 150 mL de uma mistura 50:50 de solução aquosa saturada de bicarbonato de amônio sódio [sic] e água. A camada orgânica foi extraída com EtOAc (3 x 75 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, e evaporadas até a secura para produzir 18,8 g de um xarope espesso. O resíduo bruto foi purificado usando uma coluna de 330 g de gel de sílica eluída com uma mistura em gradiente de 0% a 25% v/v de acetato de etila em hexanos, em ~25 volumes de coluna, para produzir o composto do título (15,6 g, 81,0%). LCMS: m/e 265,15 (M+H)+, 1,60 min (Método 3). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,50-7,30 (m, 5H), 5,26 (s, 2H), 4,43 (d, J=46,9 Hz, 2H), 2,54-2,29 (m, 6H), 1,90-1,71 (m, 2H); 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -223,47 (t, J=46,8 Hz, 1F).Preparação de 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila e 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila.

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-(((trifluorometil)sulfonil) oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de benzila.

[00145] Em um frasco de fundo redondo de 500 mL foram combinados 1-(fluorometil)-4-oxociclo-hexanocarboxilato de benzila (12,65 g, 47,9 mmol) e N,N-bis(trifluorometilsulfonil)anilina (18,81 g, 52,7 mmol) em tetra- hidrofurano anidro (250 mL). A solução foi esfriada para -78oC em um banho de gelo seco/acetona. À solução fria foi adicionada por gotejamento hexametildissilazida de potássio, 0,5M em tolueno (105 mL, 52,7 mmol) durante 30 min. A mistura foi agitada a -78oC durante um total de 2,5 h e foi então removida do banho frio e agitada durante mais 20 min à rt. A mistura foi posicionada de novo no banho a -78oC e à mesma foram adicionados, com agitação, 125 mL de solução aquosa saturada de cloreto de amônio. A suspensão resultante foi removida do banho frio e permitida aquecer para a rt sob agitação. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para remover o solvente orgânico, então à mistura foram adicionados acetato de etila (600 mL) e água (300 mL) e a mistura foi agitada e ambas as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água (2 x 200 mL) e com salmoura (50mL). A camada orgânica foi secada com MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para deixar um óleo amarelo/laranja. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica (800 g de sílica, eluição isocrática com hexanos:DCM 3:2). As frações com produto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto desejado (17,43 g, 92% de rendimento) como um óleo muito suavemente amarelo. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,43-7,31 (m, 5H), 5,78 (br. s., 1H), 5,26-5,15 (m, 2H), 4,52 (dm, J=46,7 Hz, 2H), 2,78 (d, J=16,9 Hz, 1H), 2,52-2,33 (m, 2H), 2,33-2,17 (m, 2H), 1,94 (dt, J=13,8, 6,9 Hz, 1H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -73,88 (s, 1F), - 225,02 (t, J=46,8 Hz, 1F).Etapa 2. Preparação de 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de benzila.

[00146] Em um frasco de fundo redondo de 500 mL foram combinados 1-(fluorometil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de benzila (17,42 g, 44,0 mmol), acetato de potássio (0,030 g, 0,307 mmol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-octametil-2,2’-bi(1,3,2-dioxaborolano) (11,72 g, 46,1 mmol), dicloreto de 1,1’-bis(difenilfosfino)ferrocenopaládio(II) (3,03 mg, 3,69 μmol) e dioxano anidro (200 mL). O frasco foi posto sob uma atmosfera de nitrogênio e aquecido para 70°C. Após 5 h, a mistura foi permitida esfriar para rt e deixada em repouso de um dia para outro. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida o resíduo bruto vermelho escuro foi diluído com acetato de etila (600 mL) e água (300 mL). A mistura foi agitada e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com água (250 mL) e então com salmoura (100 mL). A fase orgânica foi secada com MgSO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para um óleo viscoso vermelho escuro. Purificação da mistura bruta por cromatografia flash em coluna de gel de sílica (800 g de sílica; eluição em etapas com hexanos:DCM 1:3 para 4 L, então DCM 100% para 5 L. 2 g de material das frações misturadas da primeira purificação foram repurificados em 80 g de gel de sílica, eluição em gradiente de 100% de hexanos para 100% de DCM) para produzir o produto desejado como um óleo espesso incolor (13,06 g, 79,4% de rendimento). LCMS: m/e 375,3 (M+H)+, 1,52 min (Método 6). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,44-7,30 (m, 5H), 6,54 (br. s., 1H), 5,25-5,11 (m, 2H), 4,51 (dm, J=47,4 Hz, 2H), 2,67 (d, J=19,3 Hz, 1H), 2,29-2,10 (m, 3H), 2,02-1,89 (m, 1H), 1,86-1,74 (m, 1H), 1,28 (s, 12H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,62 (t, J=45,1 Hz, 1F).

[00147] Etapa 3. 1-(Fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de benzila racêmico (11,15 g, 0,0298 mmol) foi purificado por cromatografia em fluido supercrítico (Método de SFC 1) para obter os seguintes compostos isoméricos do título individuais:

[00148] 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila. Este foi o primeiro isômero a eluir da separação quiral por SFC. O produto foi isolado como um óleo amarelo (5,45 g, 98% de recuperação por SFC, 99,2% de pureza quiral). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,42-7,30 (m, 5H), 6,54 (br. s., 1H), 5,24-5,12 (m, 2H), 4,51 (dm, J=47,2 Hz, 2H), 2,67 (d, J=19,3 Hz, 1H), 2,272,10 (m, 3H), 2,00-1,90 (m, 1H), 1,85-1,75 (m, 1H), 1,28 (s, 12H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,62 (t, J=46,8 Hz, 1F).

[00149] 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila. Este foi o segundo isômero a eluir da separação quiral por SFC. O produto foi isolado como um óleo amarelo (4,94 g, 89% de recuperação por SFC, 99,3% de pureza quiral). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,43-7,31 (m, 5H), 6,54 (br. s., 1H), 5,24-5,13 (m, 2H), 4,52 (dm, J=47,2 Hz, 2H), 2,68 (d, J=19,3 Hz, 1H), 2,272,10 (m, 3H), 2,01-1,90 (m, 1H), 1,85-1,75 (m, 1H), 1,28 (s, 12H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,61 (t, J=48,6 Hz, 1F).Preparação de 1,1-dióxido de 4-(2-bromoetil)tetra-hidro-2H-tiopirano

Etapa 1 Preparação de 2-(di-hidro-2H-tiopiran-4(3H)-ilideno)acetato de etila

[00150] O intermediário do título foi preparado de acordo com o procedimento relatado por Lammek, Derdowska e Rekowski em Polish Journal of Chemistry 64, 351 (1990).Etapa 2: Preparação de 2-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)acetato de etila

[00151] O intermediário do título foi preparado de acordo com o procedimento publicado em PCT WO 00/44713 com rendimento de 64% em duas etapas (1 e 2).Etapa 3: Preparação de 2-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etanol

[00152] A uma solução esfriada (banho de gele, 0°C) de 2-(tetra-hidro- 2H-tiopiran-4-il)acetato de etila (6,4 g, 34,0 mmol) em éter dietílico (100 mL) em um frasco de 500 mL foi adicionada por gotejamento uma solução de estoque de hidreto de alumínio e lítio 1M (34,0 mL, 34,0 mmol) em THF. Uma suspensão túrbida foi formada inicialmente e foi observada liberação de gás hidrogênio. A mistura de reação tornou-se transparente quando cerca de 2/3 do reagente LiAlH4 foi adicionado. O banho de gelo foi removido e a mistura de reação foi permitida aquecer a temperatura ambiente (~19°C- 21°C) durante 4 horas. A reação foi inativada com uma solução semissaturada de NH4Cl em HCl 0,5N por gotejamento até que fosse formada uma suspensão branca, livremente agitada. O sólido foi removido por filtração e lavado com solvente adicional. O filtrado e o solvente de lavagem foram combinados e concentrados sob vácuo para produzir o intermediário do título (4,9 g, 99%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,71 (t, J=6,4 Hz, 2H), 2,78-2,53 (m, 4H), 2,03 (d, J=13,3 Hz, 2H), 1,52 (dd, J=6,8, 3,3 Hz, 3H), 1,46-1,33 (m, 2H).Etapa 4: Preparação de 1,1-dióxido de 4-(2-hidroxietil)tetra-hidro-2H- tiopirano

[00153] A uma solução de 2-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etanol (182 mg, 1,244 mmol) em acetona (3 mL) à temperatura ambiente, foi adicionada uma suspensão de Oxone® (1,53 g, 2,5 mmol) em água (7 mL). Uma exoterma suave foi detectada e agitação foi continuada à temperatura ambiente durante 2 horas. A suspensão de reação bruta foi extraída com acetato de etila (3 x 20 mL). As camadas orgânicas foram combinadas e concentradas sob vácuo para produzir um xarope espesso contendo o composto do título (66 mg 29,8%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,74 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,12-2,92 (m, 4H), 2,15 (dd, J=13,8, 2,5 Hz, 2H), 1,96-1,84 (m, 2H), 1,84-1,73 (m, 1H), 1,61 (q, J=6,4 Hz, 2H) Etapa 5: Preparação de metanossulfonato de 2-(1,1-dioxidotetra-hidro- 2H-tiopiran-4-il)etila

[00154] Uma solução de 1,1-dióxido de 4-(2-hidroxietil)tetra-hidro- 2H-tiopirano (30 mg, 0,168 mmol) em DCM (1 mL) foi esfriada em um banho gelado sob nitrogênio. DIPEA (0,088 mL, 0,505 mmol) foi adicionada, seguida por cloreto de metanossulfonila (0,020 mL, 0,252 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 30 minutos. A mistura de reação foi diluída com água (2 mL) e extraída com DCM (3 x 5 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica eluída com 50%-100% de EtOAc em Hexano usando detector ELS para produzir o produto desejado como um óleo (37 mg, 86%). LCMS m/e 257,10 (M+H)+, 1,086 min (Método 3). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,29 (t, J=5,9 Hz, 2H), 3,03 (s, 3H), 3,11-2,94 (m, 4H), 2,14 (dt, J=14,2, 1,2 Hz, 2H), 1,98-1,73 (m, 5H).Etapa 6: Preparação de 1,1-dióxido de 4-(2-bromoetil)tetra-hidro-2H- tiopirano

[00155] A uma solução de metanossulfonato de 2-(1,1-dioxidotetra- hidro-2H-tiopiran-4-il)etila (37 mg, 0,144 mmol) em THF (2 mL) foi adicionado brometo de lítio (37,6 mg, 0,433 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em DCM (20 mL) e lavado com salmoura (20 mL). A camada aquosa foi extraída com DCM (2 X 20 mL). As camadas de DCM combinadas foram secadas com Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica eluída com 40%-75% de EtOAc em Hexano usando detector ELS para produzir o produto desejado como um sólido (30 mg, 86%). LCMS m/e 241,05 (M+H)+, 1,5 minutos (Método 3). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,46 (t, J=6,4 Hz, 2H), 3,12-2,94 (m, 4H), 2,17-2,07 (m, 2H), 1,96-1,80 (m, 5H).Preparação de 1,1-dióxido de 4-(1-amino-2-metilpropan-2-il)tiomorfolina

Etapa 1: Preparação de N-(2-amino-2-metilpropil)acetamida

[00156] O intermediário do título foi preparado de acordo com os procedimentos publicados em patente U.S. n° 4906661, com rendimento de 82%. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,01 (br. s., 1H), 3,15 (d, J=5,8 Hz, 2H), 2,04 (s, 3H), 1,14 (s, 6H).Etapa 2: Preparação de N-(2-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-metilpropil) acetamida

[00157] A uma solução de N-(2-amino-2-metilpropil)acetamida (2,3 g, 17,67 mmol) em 2-propanol (28 mL) foi adicionado (vinilsulfonil)eteno (2,3 g, 19,47 mmol) em um vaso de pressão revedável. Ela foi jateada com nitrogênio e aquecida a 100°C durante 4 horas. Após esfriamento para a temperatura ambiente, um sólido começou a separar. O sólido foi filtrado, lavado com isopropanol e secado para produzir o produto desejado (2,7 g, 61,5%). 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) d 5,73 (br. s., 1H), 3,28 (d, J=5,2 Hz, 2H), 3,12-3,00 (m, 8H), 2,04 (s, 3H), 1,15-1,10 (m, 6H).Etapa 3: Preparação de 1,1-dióxido de 4-(1-amino-2-metilpropan-2- il)tiomorfolina

[00158] A uma solução de N-(2-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2- metilpropil)acetamida (100 mg, 0,403 mmol) em MeOH (2 mL) foi adicionado NaOH 1N (2,013 mL, 2,013 mmol) e a mistura foi agitada a 70°C durante 18 h. Mais NaOH (2,013 mL, 2,013 mmol) foi adicionado e a solução foi agitada a 90°C durante 24 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover MeOH, e o resíduo foi extraído com EtOAc (2 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica eluída com 5%-10% de MeOH/CH2Cl2 usando detector ELS para produzir o produto desejado como um óleo com rendimento quantitativo. LCMS m/e 207,20 (M+H)+, 0,268 minutos (Método 3). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,07 (s, 8H), 2,71 (s, 2H), 1,11 (s, 6H). Exemplo 1 Preparação de ácidos (1R)- e (1S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílicos diastereoméricos

Etapa ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[A]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila

[00159] Uma mistura de trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-ila (240 mg, 0,321 mmol) (preparado conforme descrito em WO2013123019), 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila racêmico (91 mg, 0,291 mmol), carbonato de sódio hidrato (108 mg, 0,874 mmol) e tetraquis-paládio (20,21 mg, 0,017 mmol) foi dissolvida em dioxano (4 mL) sob nitrogênio. Foi formada uma solução laranja, que após adição de água (1 mL) alterou-se para uma suspensão amarela muito pálida. A mistura foi esfriada para -78°C foram realizados 3 vezes ciclos de evacuação/purga. O frasco foi deixado imerso em um banho de óleo aquecido a 85°C durante um total de duas horas. A suspensão preta resultante foi diluída com acetato de etila (20 mL) e lavada com água (30 mL). A fase orgânica foi coletada e secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash para produzir um sólido branco (180 mg, 79%). MS: m/e 783,47 (M+H)+, 2,36 min (Método 1) 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,32 (d, J=3,5 Hz, 1H), 5,18 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,75 (d, J=1,5 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,58-4,37 (m, 2H), 4,25-4,15 (m, 2H), 3,242,41 (m, 14H), 2,27-1,76 (m, 20H), 1,70 (s, 3H), 1,64-1,31 (m, 13H), 1,101,04 (m, 5H), 1,00-0,88 (m, 8H), 0,85 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,42 (s, 1F)

[00160] Etapa 2. NaOH (1N, 2 mL, 2,0 mmol) foi adicionado a uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila (180 mg, 0,230 mmol) em 1,4-dioxano (4 mL) e MeOH (2 mL). A mistura foi agitada a 66°C durante 2 h, formando uma solução transparente. A mistura de reação bruta foi purificada por HPLC preparativa (Xbridge OBD Prep Shield RP C18 19mm x100 mm) (MeCN / H2O / AcONH4) para produzir ácido 1- (fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um sólido branco (29 mg, 16,7%). MS: m/e 755,50 (M+H)+, 2,548 min (Método 4) 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,34 (br. s., 1H), 5,19 (br. s., 1H), 4,74 (br. s., 1H), 4,61-4,49 (m, 3H), 3,18 (d, J=10,5 Hz, 2H), 2,97-2,40 (m, 12H), 2,351,78 (m, 14H), 1,73-1,60 (m, 6H), 1,58-1,17 (m, 11H), 1,13 (br. s., 3H), 1,08 (m, 4H), 1,01-0,90 (m, 8H), 0,86 (br. s., 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -217,84-231,26 (m, 1F)

[00161] Preparação de Exemplos 1a e 1b: Separação por HPLC de exemplo 1 em ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (Exemplo 1a) e ácido (R)- 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (Exemplo 1b)

[00162] Os dois diastereoisômeros foram separados usando HPLC preparativa (Método 17). O primeiro produto a eluir foi identificado como ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (Exemplo 1a) (sólido branco, 18 mg, 29,6%). MS: m/e 755,55 (M+H)+, 2,620 min (Método 4). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 5,35 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,63-4,39 (m, 2H), 3,51-3,43 (m, 1H), 3,41- 3,37 (m, 3H), 3,28 (d, J=4,0 Hz, 1H), 3,20 (d, J=10,0 Hz, 1H), 3,10 (br. s., 1H), 3,02-2,96 (m, 3H), 2,85-2,68 (m, 2H), 2,63-2,51 (m, 2H), 2,35-1,78 (m, 16H), 1,77 (s, 3H), 1,74-1,28 (m, 15H), 1,21 (s, 3H), 1,11 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,93 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, METANOL-d4) δ - 227,00 (s, 1F).

[00163] O segundo composto isolado foi identificado como: ácido (R)- 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, (Exemplo 1b), (sólido branco, 20 mg, 32,8%) MS: m/e 755,55 (M+H)+, 2,626 min (Método 4) 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 5,35 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,85 (br. s., 1H), 4,75 (s, 1H), 4,61-4,36 (m, 2H), 3,38-3,19 (m, 6H), 3,05 (m, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,89 (d, J=7,8 Hz, 1H), 2,82-2,70 (m, 1H), 2,672,50 (m, 2H), 2,45-1,97 (m, 14H), 1,92-1,80 (m, 3H), 1,78 (s, 3H), 1,73-1,28 (m, 14H), 1,21 (br. s., 3H), 1,14-1,08 (m, 3H), 1,01-0,99 (m, 3H), 0,97-0,94 (m, 3H), 0,93 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, METANOL-d4) δ -227,04 (s, 1F).Método de preparação alternativo do Exemplo 1a: sal de biscloridrato de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1- il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[A]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[A]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila.

[00164] Em um vaso de pressão de vidro de 350 mL com tampa rosqueada foram combinados trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-ila (9,00 g, 12,05 mmol), 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (4,96 g, 13,25 mmol) e cloro(2-diciclo-hexilfosfino-2',4',6'-tri-isopropil-1,1'- bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paládio(n) (pré-catalisador cloreto de aminobifenil-paládio X-Phos, XPhos-Pd-G2, 0,569 g, 0,723 mmol). O vaso foi purgado com nitrogênio, e ao frasco de reação foi adicionado THF anidro (180 mL). Uma solução aquosa recém-preparada de K3PO4 0,5M foi purgada com gás nitrogênio e adicionada ao vaso (60,2 mL, 30,1 mmol). O vaso foi vedado e a solução amarela resultante foi agitada a 80°C. A cor da mistura escureceu para um verde muito escuro durante 30 min. A mistura foi aquecida durante 18 h. A mistura de reação de cor verde oliva foi diluída com EtOAc (700 mL) e lavada com solução aquosa de bicarbonato de sódio 5% (250 mL x 2) e então com salmoura (100 mL). A fase aquosa foi extraída com 2 x 100 mL de clorofórmio e as fases orgânicas foram combinadas, secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para um sólido espumoso amarelo. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (800 g de sílica, eluição em etapas com hexanos:acetona 3:1 em 8 L, então hexanos:acetona 1:1 em 4 L). As frações misturadas da primeira cromatografia (1,0 g de material) foram repurificadas por cromatografia flash em sílica (80 g de sílica, eluição em gradiente de hexanos 100% para hexanos:acetona 3:1 com 8 volumes de coluna, mantido hexanos:acetona 3:1 com 10 volumes de coluna). Dessa forma foi obtido o material desejado (7,18 g, 70,5% de rendimento) como um sólido espumoso amarelo. LCMS: m/e 845,6 (M+H)+, 1,57 min (Método 6). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 7,41-7,31 (m, 5H), 5,32 (s, 2H), 5,23-5,15 (m, 2H), 5,13 (dd, J=6,0, 1,6 Hz, 1H), 4,73 (d, J=2,2 Hz, 1H), 4,64-4,44 (m, 3H), 3,13 (dd, J=15,4, 13,0 Hz, 2H), 2,89-2,78 (m, 4H), 2,68-2,53 (m, 4H), 2,52-2,41 (m, 2H), 2,21-1,16 (m, 31H), 1,13-0,99 (m, 7H), 0,97 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,85 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,07 (t, J=46,8 Hz, 1F).Etapa 2. Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[A]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico.

[00165] Em um frasco de fundo redondo de 500 mL foram combinados 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (7,17 g, 8,48 mmol) com solução aquosa de hidróxido de lítio 1,0 M (42,4 mL, 42,4 mmol) e tetra-hidrofurano (50 mL) e MeOH (50 mL). A mistura foi aquecida para 75oC durante 2,5h. A mistura quase preta foi concentrada sob pressão reduzida para deixar um resíduo sólido. O resíduo foi redissolvido em uma mistura de acetonitrila (50 mL) e clorofórmio (50 mL) e a solução preta foi tratada por gotejamento com ácido trifluoroacético (6,54 mL, 85 mmol). A mistura foi então concentrada sob pressão reduzida para deixar uma mistura de duas fases (óleo preto com líquido transparente flutuando acima). Esta mistura foi diluída com acetonitrila:clorofórmio (150 mL) e concentrada sob pressão reduzida de novo. Esta dissolução/reconcentração foi repetida mais uma vez para produzir um óleo preto que foi deixado sob vácuo alto de um dia para outro. O óleo preto solidificou-se de um dia para outro para uma espuma. O sólido preto bruto foi dissolvido em uma mistura de clorofórmio (20 mL) e acetona (5 mL) e foi carregado em uma coluna curta composta de sílica (aproximadamente 60g) com celite no topo (aproximadamente 25 g). Eluição com acetona:clorofórmio 1:1 (500 mL) seguida por acetona:clorofórmio 3:1 (1.000 mL) removeu a cor preta, e o produto eluiu como uma banda amarela. As frações de produto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para deixar um sólido espumoso amarelo higroscópico (16 g). Uma porção deste sólido (aproximadamente 1,4 g) foi facilmente dissolvida em 5 mL de acetonitrila:água 80:20 e carregada em um cartucho Isco Redisep Rf Gold C18 de 130 g. Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA. Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA. Eluição em gradiente de 30%-100% de B com 8 volumes de coluna, então mantido a 100% de B com 8 volumes de coluna. Concentração sob pressão reduzida das frações contendo o produto produziu um pó branco limpo. Este material puro é reservado como Batelada 1. O restante do material bruto (aproximadamente 14,5 g) foi facilmente dissolvido em 20 mL de uma mistura de acetonitrila:água 80:20. Este material bruto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa em 9 injeções usando o Método de HPLC-Prep 1. O material puro obtido nesta maneira foi combinado com o material puro Batelada 1 previamente obtido para produzir 6,32 g de pó branco limpo (Batelada 2) juntamente com material suavemente impuro (1,40 g) das frações misturadas. O material das frações misturadas (1,40 g) foi carregado em um mínimo de acetonitrila:água 80:20 para um cartucho Isco Redisep Rf Gold C18 de 130 g. Solvente A = 90% de água, 10% de acetonitrila, 0,1% de TFA. Solvente B = 10% de água, 90% de acetonitrila, 0,1% de TFA. Eluição em gradiente de 30%-100% de B com 10 volumes de coluna, então mantido a 100% de B com 4 volumes de coluna. Concentração sob pressão reduzida das frações contendo o produto produziu uma espuma branca limpa (1,17 g). Este material foi combinado com o material limpo Batelada 2 para fornecer o composto do título como o sal de TFA (7,41 g, 89% de rendimento, espuma branca). LCMS: m/e 755,6 (M+H)+, 1,29 min (Método 6). 1H RMN (400MHz, Acético) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,56 (dm, J=47,2 Hz, 2H), 3,93-3,65 (m, 6H), 3,43 (tt, J=11,3, 3,9 Hz, 1H), 3,26 (t, J=12,3 Hz, 2H), 3,02 (s, 3H), 2,86-2,73 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,43 (d, J=13,0 Hz, 2H), 2,35-2,13 (m, 7H), 2,13-2,09 (m, 1H), 2,01-1,78 (m, 4H), 1,78-1,70 (m, 4H), 1,69-1,45 (m, 9H), 1,45-1,27 (m, 3H), 1,24-1,12 (m, 5H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, Acético) δ -76,46 (s, 1F), -225,82 (t, J=46,8 Hz, 1F).

[00166] Etapa 3. Em um frasco de fundo redondo de 500 mL com barra de agitação magnética foram combinados acetonitrila (150 mL) com solução aquosa de ácido clorídrico 6,0M (37,1 mL, 223 mmol). À mistura rapidamente agitada foi adicionada via um funil de adição uma solução de sal de TFA de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (7,30 g, 7,42 mmol) dissolvido em acetonitrila (60 mL). Quase imediatamente formou um precipitado branco que se tornava mais pesado à medida que a adição prosseguia. A adição foi completada durante o total de 20 min. A suspensão branca leitosa foi agitada à rt durante 1,25 h. A suspensão foi esfriada em um banho de gelo e sólido branco muito fino assim produzido foi isolado por filtração, enxaguado com acetonitrila gelada, permitido secar ao ar e então foi secado sob vácuo alto à rt. Dessa forma foi isolado o produto desejado como um pó branco (5,857 g, 95% de rendimento). LCMS: m/e 755,5 (M+H)+, 1,27 min (Método 6). 1H RMN (400MHz, Acético) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,55 (dm, J=47,2 Hz, 2H), 4,133,87 (m, 4H), 3,82 (br. s., 2H), 3,55-3,42 (m, 2H), 3,39 (br. s., 1H), 3,03 (s, 3H), 3,01-2,90 (m, 1H), 2,62 (d, J=17,9 Hz, 1H), 2,55-2,43 (m, 2H), 2,432,14 (m, 8H), 1,95-1,79 (m, 3H), 1,79-1,71 (m, 4H), 1,69-1,47 (m, 9H), 1,471,28 (m, 4H), 1,22 (s, 3H), 1,19-1,12 (m, 2H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,96 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, Acético) δ -225,81 (t, J=45,1 Hz, 1F). Método alternativo de preparação do Exemplo 1b: Preparação de ácido (R)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[A]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila

[00167] A um frasco contendo trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-ila (3,0 g, 5,38 mmol), 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (2,013 g, 5,38 mmol) (preparado conforme descrito em WO2013169578, e fosfato de potássio tribásico (3,43 g, 16,14 mmol) foi adicionado o pré- catalisador XPhos de Buchwald de segunda geração (0,042 g, 0,134 mmol). A mistura foi diluída com THF (20 mL) e água (4 mL), jateada com nitrogênio e aquecida para 50°C. Após o aquecimento da mistura durante 15,5 h, ela foi esfriada para a RT e parcialmente concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi diluída com água (75 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 75 mL). As camadas orgânicas foram secadas com sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash usando um gradiente de 0%-10% de metanol em diclorometano e uma coluna de 220 g de gel de sílica para produzir o produto do título (3,34 g, 95% de rendimento) como uma espuma branca suja. LCMS: m/e: 656,6 (M+H)+, 2,30 min (Método 1). 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 7,39-7,30 (m, 5H), 5,32 (br. s., 1H), 5,21-5,15 (m, 2H), 5,11 (dd, J=6,1, 1,9 Hz, 1H), 4,73 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,61 (dd, J=2,1, 1,3 Hz, 1H), 4,53 (dm, J=47,3 Hz, 2H), 2,64-2,51 (m, 2H), 2,23-1,93 (m, 7H), 1,70 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 1,85-0,83 (m, 22H). Etapa 2. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil) piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila

[00168] A um frasco vedável contendo 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de benzila (3,34 g, 5,09 mmol) foram adicionados sal de potássio de ácido fosfórico (5,40 g, 25,5 mmol), iodeto de potássio (0,930 g, 5,60 mmol), e 1-(2- cloroetil)-4-(metilsulfonil)piperidina.HCl (4,01 g, 15,28 mmol). A mistura foi diluída com acetonitrila (50 mL), jateada com nitrogênio, então o frasco foi vedado e aquecido para 100°C. Após 4 h de aquecimento, a mistura foi esfriada para a rt e agitada de um dia para outro à rt. A mistura foi diluída com 50 mL de acetonitrila e um adicional de 1g de 1-(2-cloroetil)-4- (metilsulfonil)piperidina.HCl foi adicionado. O frasco foi vedado e a mistura foi aquecida para 100°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a rt e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com água (75 mL) e extraído com diclorometano (3 x 75 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash usando um gradiente de 0%-8% de MeOH em diclorometano e uma coluna de 220 g de gel de sílica. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi repurificado por cromatografia em fase reversa (coluna C18 de 150 g, gradiente de 30%-90% de acetonitrila em água com 0,1% de TFA adicionado) para produzir o sal de TFA do produto do título (3,17 g, 3,30 mmol, 64,9% de rendimento) como uma espuma branca. LCMS: m/e: 845,6 (M+H)+, 2,10 min (Método 1). 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 7,39-7,30 (m, 5H), 5,32 (br. s., 1H), 5,21-5,15 (m, 2H), 5,11 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,70 (s, 1H), 4,53 (dm, J=47,1 Hz, 2H), 3,44-3,21 (m, 6H), 3,17-3,08 (m, 1H), 3,05-2,97 (m, 1H), 2,90 (s, 3H), 2,79-2,57 (m, 4H), 1,69 (s, 3H), 1,12 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 2,37-0,83 (m, 31H).

[00169] Etapa 3. A uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (3,17 g, 3,75 mmol) em 1,4-dioxano (30 mL) e metanol (10 mL) foi adicionado NaOH (3N) (7,50 mL, 22,50 mmol) e a mistura foi aquecida para 80°C durante 17 h. A mistura foi esfriada para a rt e parcialmente concentrada sob pressão reduzida. A mistura foi tornada ácida pela adição de HCl 1N, e os sólidos que formaram foram coletados por filtração. Ao material sólido coletado foram adicionados 20 mL de água e solução de NaOH 1N (9,38 mL, 9,38 mmol). A mistura foi agitada durante dez minutos, então concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com água (20 mL) e acetonitrila (30 mL) e tratado com TFA (1,445 mL, 18,75 mmol). A mistura foi então concentrada sob pressão reduzida e foi adsorvida em gel de sílica e purificada usando um gradiente de 20%-30% de clorofórmio em acetona e uma coluna de 220 g de gel de sílica. As frações contendo o produto previsto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto como o sal de TFA. Para converter no sal de HCl, o resíduo foi diluído com 200 mL de acetonitrila e solução de HCl 6N (6,66 mL, 40,0 mmol) foi adicionada. Sólidos foram formados e a mistura foi diluída com 20 mL de clorofórmio. Os sólidos não se dissolveram, de modo que a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído de novo com acetonitrila e clorofórmio e HCl 6N (6,66 mL, 40,0 mmol) foi adicionado. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o procedimento foi repetido uma terceira vez. Os sólidos foram então diluídos com acetonitrila e aquecidos para refluxar, então foram esfriados para a rt e coletados por filtração para produzir o sal de HCl do produto previsto. Devido ao fato de ainda estar presente uma impureza de ~1,5%, a mistura foi reconvertida no sal de TFA para purificação pela adição de 20 mL de água e NaOH 1N (8,26 mL, 8,26 mmol), agitação durante vários minutos, então concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi então diluído com água (20 mL) e acetonitrila (30 mL) e foi tratado com TFA (1,273 mL, 16,52 mmol). A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e foi adsorvida em gel de sílica e purificada usando um gradiente de 20%-30% de clorofórmio em acetona e uma coluna de 220 g de gel de sílica. As frações contendo o composto do título foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto como o sal de TFA. HPLC do resíduo ainda mostrou a presença de impurezas em quantidades muito pequenas. A mistura foi purificada de novo usando uma coluna C18 de 150 g e um gradiente de 30%-90% de acetonitrila em água com 0,1% de TFA adicionado. As frações contendo o produto previsto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto como um sólido branco, o sal de TFA do produto do título. Para converter no sal de HCl, o resíduo foi dissolvido em acetonitrila e foi tratado com solução de HCl 6N (6,66 mL, 40,0 mmol), então a solução foi concentrada sob pressão reduzida. Este processo foi repetido mais duas vezes, então os sólidos foram diluídos com acetonitrila, aquecidos para refluxar, esfriados, e coletados por filtração para produzir o sal de bis- HCl de ácido (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1- il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico (1,6 g, 1,859 mmol, 49,6% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: m/e: 755,5 (M+H)+, 1,69 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, Ácido Acético-d4) δ = 5,37 (br. s., 1H), 5,22 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,86 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,53 (dm, J=47,0 Hz, 2H), 4,09-3,72 (m, 6H), 3,513,27 (m, 3H), 3,01 (s, 3H), 2,98-2,88 (m, 1H), 2,59 (d, J=17,6 Hz, 1H), 2,522,40 (m, 2H), 1,74 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,08 (s, 3H), 2,39-1,04 (m, 29H), 1,00 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,93 (s, 3H). C45H71FN2O4S • 2,0 HCl • 1,530 H2O. Exemplo 2 Preparação de ácidos (1R)- e (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílicos diastereoméricos

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila

[00170] O composto do título foi preparado com rendimento de 82% seguindo o procedimento descrito acima para a preparação de 1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila, usando, como o reagente, trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-ila (preparado conforme descrito em WO2013123019) no lugar de trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-ila. MS: m/e 755,55 (M+H)+, 2,706 min (Método 4). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,32 (d, J=3,5 Hz, 1H), 5,18 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,73 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,66-4,58 (m, 1H), 4,56-4,39 (m, 2H), 4,26-4,15 (m, 2H), 3,17-2,92 (m, 8H), 2,83-2,45 (m, 6H), 2,22-2,05 (m, 3H), 2,03-1,72 (m, 5H), 1,69 (s, 3H), 1,65-1,26 (m, 16H), 1,23 (br. s., 3H), 1,181,02 (m, 7H), 1,01-0,89 (m, 8H), 0,86 (s, 3H), 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,41 (s, 1F).

[00171] Etapa 2. O composto do título foi preparado com rendimento de 11,5% seguindo o procedimento descrito acima na etapa 2 para a preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1- il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila, usando, como o reagente, 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila no lugar de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila. MS: m/e 727,55 (M+H)+, 2,527 min (Método 4) . 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (br. s., 1H), 4,76 (br. s., 1H), 4,64-4,56 (m, 2H), 4,48 (br. s., 1H), 3,26-2,94 (m, 8H), 2,90-2,38 (m, 6H), 2,32-1,77 (m, 10H), 1,70 (m, 6H), 1,61-1,17 (m, 12H), 1,15-1,03 (m, 6H), 1,01-0,91 (m, 8H), 0,87 (br. s., 3H), 19F RMN (470MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ -225,02 (br. s., 1F). Preparação de Exemplos 2a e 2b Separação por HPLC do Exemplo 2 em ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico (Exemplo 2a) e ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxílico (Exemplo 2b)

[00172] Os dois diastereoisômeros foram separados usando HPLC preparativa (Método 17). O primeiro produto a eluir foi identificado como ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, (Exemplo 2a) (sólido branco, 7 mg, 33%). MS: m/e 727,55 (M+H)+, 2,650 min (Método 4) . 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 5,35 (br. s., 1H), 5,27-5,15 (m, 1H), 4,87-4,80 (m, 1H), 4,73 (br. s., 1H), 4,62-4,37 (m, 2H), 3,29-3,17 (m, 8H), 3,16-3,05 (m, 3H), 3,02-2,86 (m, 1H), 2,80 (td, J=11,0, 5,5 Hz, 1H), 2,632,46 (m, 1H), 2,36-1,80 (m, 12H), 1,76 (br. s., 3H), 1,75-1,29 (m, 15H), 1,20 (s, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, METANOL-d4) δ -227,04 (s, 1F).

[00173] O segundo composto a eluir foi identificado como ácido

[00174] (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, (Exemplo 2b) (sólido branco, 7 mg, 33%). MS: m/e 727,55 (M+H)+, 2,644 min (Método 4). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 5,36 (br. s., 1H), 5,22 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,88-4,81 (m, 1H), 4,78-4,68 (m, 1H), 4,64-4,36 (m, 2H), 3,30-3,15 (m, 8H), 3,17-3,03 (m, 3H), 2,99-2,88 (m, 1H), 2,86-2,72 (m, 1H), 2,63-2,50 (m, 1H), 2,37-1,97 (m, 8H), 1,92-1,80 (m, 4H), 1,78 (s, 3H), 1,74-1,28 (m, 15H), 1,22-1,19 (m, 3H), 1,15-1,11 (m, 3H), 0,99 (br. s., 3H), 0,97 (s, 3H), 0,950,92 (m, 3H). 19F RMN (376MHz, METANOL-d4) δ -227,05 (br. s., 1F). Métodos alternativos de preparação do Exemplo 2b Método A: ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxílico via (R)-1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de benzila quiral

Etapa 1: Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-benzila

[00175] Uma mistura de trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-ila (1,75 g, 2,434 mmol), 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (1,00 g, 2,68 mmol), Na2CO3.H2O (0,91 g, 7,30 mmol) e Pd(Ph3P)4 (0,17 g, 0,15 mmol) em dioxano (40 mL) e água (10,00 mL) sob N2 foi esfriada para - 78°C. A solução transformou-se em um sólido. Ciclos de evacuação/purgação com N2 foram realizados três vezes. A mistura foi agitada a 70°C durante 1 h. A cor alterou para acastanhada escura. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com H2O (100 mL) e a solução foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica eluída com 0%-35% de EtOAc em Hexano para produzir o composto do título como um sólido (1,12 g, 56%). 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 7,39-7,30 (m, 5H), 5,32 (s, 1H), 5,22-5,14 (m, 2H), 5,11 (d, J=5,0 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,60-4,45 (m, 2H), 3,13-2,98 (m, 8H), 2,722,54 (m, 5H), 2,51-2,43 (m, 1H), 2,23-1,00 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,85 (s, 3H). 13C RMN (126MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 174,30, 150,72, 147,90, 139,10, 135,94, 128,52, 128,13, 127,97, 121,41, 121,30, 109,41, 87,60, 86,21, 66,62, 62,72, 57,21, 52,91, 51,29, 51,00, 49,71, 49,39, 47,38, 45,84, 45,70, 41,98, 41,64, 40,64, 38,71, 37,46, 36,80, 36,09, 34,14, 33,61, 30,05, 29,74, 29,18, 29,14, 29,06, 28,66, 26,79, 26,43, 26,39, 25,24, 21,52, 21,36, 19,66, 19,56, 16,30, 16,04, 14,34. 19F RMN (470MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,09 (t, J=47,3 Hz, 1F). MS m/e 817,50 (M+H)+, 2,32 min (Método 5).

[00176] Etapa 2: Uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (2,3 g, 2,81 mmol) em 1,4-dioxano (60 mL) e H2O (30 mL) foi esfriada em um banho de gelo, e NaOH 1N (28 mL, 28 mmol) foi adicionado. A mistura turva resultante foi aquecida para a RT então agitada a 70°C durante 2 h. A mistura de reação foi esfriada para a RT e então deixada em um banho de gelo antes de ser neutralizada com HCl 0,5N. A mistura foi agitada de um dia para outro. O sólido precipitado foi coletado por filtração, lavado com MeOH-H2O e secado sob vácuo. O sólido foi dissolvido em MeCN (80 mL) e dioxano (20 mL), e HCl 6N (50 mL) foi adicionado por gotejamento. A mistura foi agitada durante 1 h. O sólido precipitado foi coletado por filtração, lavado com MeCN e secado sob vácuo para produzir 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila como o sal de bis-HCl (1,95 g, 90%). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 5,34 (s, 1H), 5,20 (dd, J=6,1, 1,6 Hz, 1H), 4,87 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,58-4,39 (m, 2H), 3,45-3,11 (m, 12H), 2,87 (td, J=11,0, 5,5 Hz, 1H), 2,55 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,34-1,08 (m, 27H), 1,77 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,11 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,93 (s, 3H). 13C RMN (126MHz, METANOL-d4) δ 178,20, 149,71, 149,37, 140,47, 123,31, 122,51, 112,28, 89,36, 87,98, 73,56, 54,52, 51,90, 50,64, 50,43, 49,82, 47,03, 46,91, 46,76, 43,44, 42,95, 42,13, 40,78, 38,87, 38,77, 37,41, 34,96, 33,19, 30,55, 30,46, 30,42, 30,38, 29,37, 27,91, 27,72, 27,67, 27,54, 26,53, 22,26, 20,82, 19,41, 17,33, 17,09, 14,85. 19F RMN (470MHz, METANOL-d4) δ -227,03 (s, 1F). MS m/e 727,45 (M+H)+, 2,55 min (Método 4). Método B:

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-benzila.

[00177] A um frasco contendo trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-ila (8,9 g, 15,96 mmol), 1- (fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-benzila (6,57 g, 17,55 mmol), e fosfato de potássio tribásico (10,16 g, 47,9 mmol) foi adicionado pré-catalisador XPhos de Buchwald de 2a geração (0,313 g, 0,399 mmol). A mistura foi diluída com THF (50 mL) e água (10 mL), jateada com nitrogênio e então aquecida para 50°C durante 22 h. A mistura foi esfriada para a rt, parcialmente concentrada e diluída com água (150 mL), extraída com acetato de etila (3 x 150 mL) (alguns sólidos foram observados entre as camadas na primeira extração de modo que foi adicionado acetato de etila em excesso para garantir que o produto fosse dissolvido), secada com sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash usando um gradiente de 0%-10% de metanol em diclorometano e uma coluna de 220 g de gel de sílica. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto como um sólido amarelo com impurezas em quantidades muito pequenas presentes que será usado na etapa seguinte.

[00178] Etapa 2. A um frasco vedável contendo 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-benzila (10,5 g, 16,0 mmol) foram adicionados fosfato de potássio tribásico (13,59 g, 64,0 mmol), iodeto de potássio (3,99 g, 24,01 mmol), e 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)tiomorfolina, HCl (9,37 g, 40,0 mmol). A mistura foi diluída com acetonitrila (200 mL), jateada com nitrogênio, vedada, e aquecida para 100°C. Após aquecimento a mistura durante 16 h, ela foi esfriada para a RT, transferida para um frasco de fundo redondo usando diclorometano e então concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com água (200 mL) e extraído com acetato de etila (200 mL então 2 x 150 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secadas com sulfato de sódio, filtrada, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash usando um gradiente de 0%-6% de metanol em diclorometano e uma coluna de 330 g de gel de sílica. As frações contendo o produto previsto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto juntamente com outras impurezas como um óleo vermelho espesso. O resíduo foi dissolvido em acetonitrila e dividido em três frações e foi repurificado usando um gradiente de 25%-100% de A para B (A = 9:1 água:acetonitrila com 0,1% de TFA adicionado, B = 1:9 água:acetonitrila com 0,1% de TFA adicionado) e uma coluna C18 de 275 g. As frações contendo o produto foram combinados e concentradas sob pressão reduzida para produzir o sal de TFA do produto. As frações menos puras foram combinadas e concentradas então foram purificadas de novo usando o mesmo método em fase reversa acima. O sal de TFA do produto foi diluído com solução aq. sat. de NaHCO3 (150 mL) e foi extraído com diclorometano (150 mL então 3x75 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto (7,52g , 9,2 mmol, 57,5% de rendimento sobre duas etapas) como um sólido branco.

[00179] Etapa 3. A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (0,6 g, 0,734 mmol) em 1,4-dioxano (10 mL) e metanol (2 mL) foi adicionado NaOH (1N) (2,94 mL, 2,94 mmol). A mistura foi aquecida para 60°C durante 2,5 h, então foi esfriada para a RT.

[00180] Etapa 4. Solução de HCl 1N (5 mL, 5,00 mmol) foi adicionada à mistura e ela foi parcialmente concentrada sob pressão reduzida até que sólido começassem a formar, então a mistura foi deixada no refrigerador de um dia para outro.

[00181] Os sólidos que formaram foram coletados por filtração e foram lavados com água para produzir o sal de HCl de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila (0,55g, 0,706 mmol, 96% de rendimento) como um sólido branco. Os dados analíticos novos para o composto do título coincidiram com os dados previamente adquiridos para o composto igual preparado usando métodos diferentes.Exemplo 3 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-morfolinoetil)amino)- 1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico.

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen- 9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila.

[00182] Em um vaso de pressão de vidro de 75 mL, foram combinados trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)- 3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-ila (0,850 g, 1,524 mmol), 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,599 g, 1,600 mmol) e XPhos-Pd-G2 (0,036 g, 0,046 mmol). O vaso foi vedado com um septo de borracha. Uma agulha foi inserida no septo e o vaso foi iterativamente evacuado e então purgado com nitrogênio em um forno a vácuo à rt quatro vezes durante um período de 10 min. Ao vaso de reação jateado com nitrogênio foram adicionados THF anidro (20 mL) e solução aquosa de K3PO4 0,5 M (7,62 mL, 3,81 mmol) recentemente preparada, aspergida com nitrogênio. O vaso foi vedado com uma tampa de PTFE e a solução amarela resultante foi agitada a 80°C. A cor escureceu para um verde muito escuro durante 30 min. A mistura foi aquecida durante 20 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (70 mL) e lavada com solução aquosa de bicarbonato de sódio 5% (25 mL x 2) e então com salmoura (10 mL). A camada aquosa foi extraída com 2 x 10 mL de clorofórmio e as fases orgânicas foram combinadas, secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para um sólido espumoso amarelo. O material amarelo bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (40g de sílica, eluição em gradiente de DCM 100% para DCM:MeOH 20:1). As frações de produto foram combinadas e concentradas para um óleo amarelo espesso que se tornou uma espuma quando deixado sob alto vácuo. Recuperação total de uma espuma suavemente amarela = 0,493 g (49% de rendimento). LCMS: m/e 656,5 (M+H)+, 1,59 min (Método 6). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 7,38-7,26 (m, 5H), 5,31 (br. s., 1H), 5,21-5,12 (m, 2H), 5,12-5,06 (m, 1H), 4,77-4,71 (m, 1H), 4,63 (s, 1H), 4,57 (dm, J=47,4 Hz, 2H), 2,59 (d, J=17,6 Hz, 1H), 2,50 (td, J=10,6, 5,3 Hz, 1H), 2,16-1,93 (m, 6H), 1,78-1,65 (m, 7H), 1,60 (dd, J=12,0, 9,0 Hz, 5H), 1,55-1,39 (m, 8H), 1,38-1,22 (m, 4H), 1,11-1,03 (m, 4H), 1,030,93 (m, 4H), 0,89 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,86 (s, 3H).Etapa 2. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2- morfolinoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila.

[00183] Em um vaso de pressão de vidro de 15 mL, 4- (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,091 g, 0,139 mmol) foi combinado com cloridrato de 4-(2-cloroetil)morfolina (0,077 g, 0,416 mmol), fosfato de potássio tribásico (0,147 g, 0,694 mmol) e iodeto de potássio (0,046 g, 0,277 mmol) em acetonitrila seca (5 mL). O vaso foi vedado e aquecido para 120oC em um banho de óleo com agitação durante 19 h. A mistura bruta foi concentrada sob uma corrente de nitrogênio, recolhida em EtOAc (30 mL) e lavada com água (3 x 10 mL) e salmoura (5 mL). As fases aquosas combinadas foram extraídas com clorofórmio (10 mL) e as fases orgânicas foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto assim obtido foi usado diretamente na etapa seguinte. LCMS: m/e 769,6 (M+H)+, 2,47 min (Método 1).

[00184] Etapa 3. Em um frasco de 1,77 gramas com tampa de rosca de PTFE, a mistura bruta da Etapa 2 contendo 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-morfolinoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila foi combinada com solução aquosa de hidróxido de lítio 1,0M (0,973 mL, 0,973 mmol), MeOH (1 mL) e tetra- hidrofurano (1 mL). O frasco foi tampado e aquecido para 75oC durante 45 min. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 2). O material assim obtido foi então repurificado por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 3) para fornecer sal de TFA de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila como um sólido branco (0,0191 g, 17,3% de rendimento sobre 2 etapas). LCMS: m/e 679,5 (M+H)+, 4,26 min (Método 2). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,49 dm, J=47,4 Hz, 2H), 3,843,68 (m, 4H), 3,18-3,09 (m, 2H), 2,98-2,85 (m, 1H), 2,82-2,76 (m, 1H), 2,71 (dd, J=13,7, 3,4 Hz, 3H), 2,63-2,50 (m, 3H), 2,30-2,11 (m, 2H), 2,11-1,91 (m, 7H), 1,83-1,75 (m, 3H), 1,73 (s, 4H), 1,67-1,30 (m, 12H), 1,19 (s, 3H), 1,171,09 (m, 2H), 1,07 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,90 (s, 3H).Exemplo 4 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioxido-2-tia-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5- il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico.

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioxido-2-tia-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila.

[00185] Em um vaso de pressão de vidro de 15 mL foram combinados 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,091 g, 0,139 mmol) com 2,2-dióxido de (1S,4S)-5-(2-cloroetil)-2-tia-5-azabiciclo[2.2.1]heptano (0,075 g, 0,358 mmol) (preparado conforme descrito em WO2013169578), fosfato de potássio tribásico (0,147 g, 0,694 mmol) e iodeto de potássio (0,046 g, 0,277 mmol) em acetonitrila seca (5 mL). O vaso foi vedado e aquecido para 120oC em um banho de óleo com agitação durante 19 h. A mistura bruta foi concentrada sob uma corrente de nitrogênio, recolhida em EtOAc (30 mL) e lavada com água (3 x 10 mL) e então com salmoura (5 mL). As fases aquosas combinadas foram extraídas com clorofórmio (10 mL) e as fases orgânicas foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto assim obtido foi usado diretamente na etapa seguinte. LCMS: m/e 829,6 (M+H)+, 2,44 min (Método 1).

[00186] Etapa 2. Em um frasco de 1,77 gramas com tampa de rosca de PTFE a mistura bruta da Etapa 1 contendo 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioxido-2- tia-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,115 g, 0,139 mmol) foi combinada com solução aquosa de hidróxido de lítio 1,0M (0,695 mL, 0,695 mmol), MeOH (0,7 mL) e tetra- hidrofurano (0,7 mL). O frasco foi tampado e aquecido para 75°C durante 45 min. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 4) e o sólido amarelo assim obtido foi então repurificado por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 5), seguida por uma terceira e última purificação por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 6) para fornecer 47,4 mg (39,2% de rendimento sobre 2 etapas) de sal de TFA de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioxido-2- tia-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila como um pó branco. LCMS: m/e 739,5 (M+H)+, 4,22 min (Método 2). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,48 (dm, J=47,2 Hz, 2H), 4,00 (br. s., 1H), 3,69-3,63 (m, 1H), 3,23-3,13 (m, 2H), 3,13-2,95 (m, 4H), 2,79 (td, J=11,1, 5,0 Hz, 1H), 2,63-2,55 (m, 1H), 2,53 (br. s., 1H), 2,42 (d, J=12,5 Hz, 1H), 2,282,06 (m, 4H), 2,06-1,91 (m, 6H), 1,86-1,74 (m, 3H), 1,73 (s, 4H), 1,69-1,55 (m, 4H), 1,54-1,38 (m, 7H), 1,38-1,23 (m, 3H), 1,20-1,14 (m, 1H), 1,13-1,08 (m, 4H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 5 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxido-1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxílico.

Etapa 1. Preparação de 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)-1,4-tiazepano.

[00187] A uma mistura de 1,1-dióxido de 1,4-tiazepano (200 mg, 1,340 mmol) e 2-cloroacetaldeído, solução a 50% em peso em água (0,234 mL, 1,877 mmol) em metanol (5 mL) e ácido acético (1 mL) foi adicionado complexo de 2-picolina-borano (158 mg, 1,474 mmol). A mistura resultante foi agitada à rt de um dia para outro. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para um resíduo que foi lavado com solução aquosa saturada de Na2CO3 (10mL) e extraído com acetato de etila (3 x 10 mL). A fase aquosa foi extraída com clorofórmio (10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas com MgSO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 334 mg (quant.) do produto desejado como óleo marrom- avermelhado bruto que parcialmente se solidificou em repouso. Este material bruto foi usado como tal diretamente na etapa seguinte. LCMS: m/e 212,0 (M+H)+, 0,18 min (Método 1).Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxido-1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila.

[00188] Em um vaso de pressão de vidro de 15 mL foram combinados o material bruto da Etapa 1 contendo 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)-1,4- tiazepano (0,065 g, 0,305 mmol) com 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (0,100 g, 0,152 mmol), fosfato de potássio tribásico (0,162 g, 0,762 mmol) e iodeto de potássio (0,051 g, 0,305 mmol) em acetonitrila seca (5 mL). O vaso foi vedado e aquecido para 120°C em um banho de óleo com agitação durante 17h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, recolhida em EtOAc (30 mL) e lavada com água (3 x 10 mL) e com salmoura (5 mL). As fases aquosas combinadas foram extraídas com clorofórmio (10 mL) e as fases orgânicas foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto assim obtido foi usado como tal na etapa de saponificação sem purificação adicional. LCMS: m/e 831,6 (M+H)+, 2,39 min (Método 1).

[00189] Etapa 3. Em um frasco de 1,77 gramas com tampa de rosca de PTFE, a mistura bruta da Etapa 2 contendo 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxido-1,4- tiazepan-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (0,126 g, 0,152 mmol) foi combinada com solução aquosa de hidróxido de lítio 1,0M (1,064 mL, 1,064 mmol), MeOH (1 mL) e tetra- hidrofurano (1 mL). O frasco foi tampado e a mistura foi aquecida para 75°C durante 45 min. A mistura foi filtrada e purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 7) para fornecer sal de TFA de ácido (S)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxido-1,4- tiazepan-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um sólido branco (36,7 mg, 28,2% de rendimento sobre 2 etapas). LCMS: m/e 741,5 (M+H)+, 2,26 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,49 (dm, J=47,4 Hz, 1H), 3,47-3,37 (m, 1H), 3,35 (br. s., 1H), 3,28-3,17 (m, 2H), 3,15-3,02 (m, 5H), 3,02-2,93 (m, 1H), 2,79 (td, J=11,0, 4,6 Hz, 1H), 2,55 (d, J=17,1 Hz, 1H), 2,29-2,14 (m, 2H), 2,13-1,91 (m, 9H), 1,86-1,74 (m, 3H), 1,73 (s, 4H), 1,68-1,55 (m, 4H), 1,55-1,42 (m, 6H), 1,41-1,24 (m, 3H), 1,19-1,09 (m, 5H), 1,07 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 6 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil) piperazin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)ciclo- hex-3-enocarboxílico. Etapa 1. Preparação de 1-(2-cloroetil)-4-(metilsulfonil)piperazina.

[00190] A uma mistura de 1-(metilsulfonil)piperazina (0,200 g, 1,218 mmol) e 2-cloroacetaldeído, solução a 50% em peso em água (0,212 mL, 1,705 mmol) em metanol (5 mL) e ácido acético (1 mL) foi adicionado complexo de 2-picolina-borano (0,143 g, 1,340 mmol). A mistura resultante foi agitada à rt de um dia para outro. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para deixar um resíduo que foi lavado com solução saturada de Na2CO3 (10mL) e extraído com acetato de etila (3 x 10mL). A fase aquosa foi extraída com clorofórmio (10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas com MgSO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 394 mg (>100% de rendimento) do produto desejado como óleo incolor que se solidificou em repouso para um sólido ceroso, suavemente amarelo. Este material bruto foi usado como tal diretamente na etapa seguinte. LCMS: m/e 227,0 (M+H)+, 0,19 min (Método 1). Etapa 2. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil) piperazin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[A]crisen-9-il)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila.

[00191] Em um vaso de pressão de vidro de 15 mL, o material bruto da Etapa 1 contendo 1-(2-cloroetil)-4-(metilsulfonil)piperazina (0,069 g, 0,305 mmol) foi combinado com 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,100 g, 0,152 mmol), fosfato de potássio tribásico (0,162 g, 0,762 mmol) e iodeto de potássio (0,051 g, 0,305 mmol) em acetonitrila seca (5 mL). O vaso foi vedado e aquecido para 120°C em um banho de óleo com agitação durante 15h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo recolhido em EtOAc (30 mL) e lavada com água (3 x 10 mL) e com salmoura (5 mL). As fases aquosas combinadas foram extraídas com clorofórmio (10 mL) e as fases orgânicas foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto assim obtido foi usado como tal na etapa de saponificação sem purificação adicional. LCMS: m/e 846,7 (M+H)+, 2,43 min (Método 1).

[00192] Etapa 3. Em um frasco de 1,77 gramas com tampa de rosca de PTFE, a mistura bruta da Etapa 2 contendo 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,129 g, 0,152 mmol) foi combinada com solução aquosa de hidróxido de lítio 1,0M (1,064 mL, 1,064 mmol), MeOH (1 mL) e tetra-hidrofurano (1 mL). O frasco foi tampado e a mistura foi aquecida para 75°C durante 45 min. A mistura foi filtrada e purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 7) para fornecer o sal de TFA de ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um sólido branco (47,4 mg, 35,8% de rendimento sobre 2 etapas). LCMS: m/e 756,5 (M+H)+, 4,21 min (Método 2). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,48 (dm, J=47,2 Hz, 1H), 3,30-3,22 (m, 2H), 3,19-3,09 (m, 2H), 3,00-2,90 (m, 1H), 2,87 (s, 3H), 2,84-2,64 (m, 6H), 2,55 (d, J=17,6 Hz, 1H), 2,29-2,14 (m, 2H), 2,14-1,91 (m, 7H), 1,86-1,75 (m, 3H), 1,73 (s, 4H), 1,65-1,47 (m, 7H), 1,45-1,34 (m, 4H), 1,29 (dd, J=17,7, 5,0 Hz, 1H), 1,17 (s, 3H), 1,16-1,08 (m, 2H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 7 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1: Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00193] Uma suspensão de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (45 mg, 0,069 mmol), 1,1-dióxido de 4-(2-bromoetil)tetra-hidro-2H- tiopirano (17 mg, 0,069 mmol), K3PO4 (44 mg, 0,206 mmol) e NaI (17 mg, 0,103 mmol) em MeCN (1 mL) foi jateada com nitrogênio, vedada, e agitada a 100°C durante 18 h. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica (0%-40% de EtOAc em Hexano) usando detector ELS para produzir o produto do título como um sólido (28 mg, 50%). LCMS m/e 816,45 (M+H)+, 3,864 minutos (Método 7). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,40-7,28 (m, 5H), 5,32 (s., 1H), 5,17 (d, J=1,3 Hz, 2H), 5,15-5,09 (m, 1H), 4,70 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,63-4,55 (m, 2H), 4,50-4,43 (m, 1H), 3,13-2,90 (m, 4H), 2,64-2,41 (m, 4H), 2,21-0,80 (m, 34H), 1,69 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,89 (s, 3H),0,85 (s, 3H).

[00194] Etapa 2. A uma solução de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotetra- hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (28 mg, 0,034 mmol) em 1,4-dioxano (2 mL) e MeOH (1 mL) foi adicionado NaOH 1N (1 mL, 1,0 mmol). A mistura foi agitada a 60°C durante 3 h. A mistura de reação foi purificada por HPLC-Prep (Método 8) para produzir ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxílico como um sólido (16 mg, 64%). LCMS m/e 726,50 (M+H)+, 3,528 minutos (Método 7). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,34 (s, 1H), 5,18 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 2H), 4,48 (s, 1H), 3,102,89 (m, 4H), 2,66-2,48 (m, 4H), 2,27-0,91 (m, 34H), 1,68 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -224,87 (s, 1F). Exemplo 8 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-(2- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)acetamido)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1: Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-(2- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)acetamido)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00195] A uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (50 mg, 0,076 mmol) e ácido 2-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)acético (13 mg, 0,091 mmol) em CH2Cl2 (1 mL) foi adicionada DIPEA (0,05 mL, 0,305 mmol) seguida por HATU (44 mg, 0,114 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica (20%-45% de EtOAc em Hexano) usando detector ELS para produzir o produto desejado como um sólido (rendimento quantitativo). LCMS m/e 782,55 (M+H)+, 4,346 minutos (Método 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,39-7,29 (m, 5H), 5,32 (s, 1H), 5,21-5,14 (m, 2H), 5,12 (d, J=4,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 1H), 4,73 (d, J=1,3 Hz, 1H), 4,63 (s, 1H), 4,61- 4,56 (m, 1H), 4,50-4,44 (m, 1H), 3,96 (dd, J=11,3, 3,5 Hz, 2H), 3,473,38 (m, 2H), 2,73-2,65 (m, 1H), 2,60 (d, J=17,3 Hz, 1H), 2,51 (dd, J=12,4, 8,2 Hz, 1H), 2,42 (td, J=10,5, 5,3 Hz, 1H), 2,19-0,92 (m, 32H), 1,70 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,85 (s, 3H).

[00196] Etapa 2. A uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-3a-(2-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)acetamido)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (60 mg, 0,077 mmol) em 1,4-dioxano (3 mL) e MeOH (1,5 mL) foi adicionado NaOH 1N (1,5 mL, 1,5 mmol). A mistura foi agitada a 60°C durante 3 h. A mistura de reação foi purificada por HPLC-Prep (Método 8) para produzir o ácido (S)- 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-(2-(tetra-hidro-2H-piran-4- il)acetamido)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um sólido (45 mg, 85%). LCMS m/e 692,55 (M+H)+, 3,141 minutos (Método 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,33 (s, 1H), 5,18 (d, J=4,5 Hz, 1H), 5,13 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,63 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,48 (s, 1H), 3,97 (d, J=8,5 Hz, 2H), 3,43 (t, J=11,8 Hz, 2H), 2,70 (d, J=12,8 Hz, 1H), 2,63-2,36 (m, 3H), 2,28-0,95 (m, 32H), 1,70 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ - 225,31 (s, 1F). Exemplo 9 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((2- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1: Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((2- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00197] Uma suspensão de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (50 mg, 0,076 mmol), 4-(2-bromoetil)tetra-hidro-2H-pirano (15 mg, 0,076 mmol), K3PO4 (49 mg, 0,229 mmol) e NaI (19 mg, 0,114 mmol) em MeCN (1 mL) foi jateada com nitrogênio, vedada, e agitada a 90°C durante 18 h. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica (0%-40% de EtOAc em Hexano) usando detector ELS para produzir o produto desejado como um sólido (30 mg, 51%). LCMS m/e 768,55 (M+H)+, 3,033 minutos (Método 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,39-7,29 (m, 5H), 5,32 (s, 1H), 5,22-5,14 (m, 2H), 5,14-5,10 (m, 1H), 4,71 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,62-4,55 (m, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,51-4,43 (m, 1H), 4,01-3,93 (m, 4H), 2,65-2,52 (m, 2H), 2,50-2,36 (m, 2H), 2,18-0,87 (m, 34H), 1,69 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,85 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,06 (s, 1F).

[00198] Etapa 2. A uma solução de1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-3a-((2-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)etil)amino)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (30 mg, 0,039 mmol) em 1,4-dioxano (2 mL) e MeOH (1 mL) foi adicionado NaOH 1N (1 mL, 1,0 mmol). A mistura foi agitada a 60°C durante 2 h. A mistura de reação foi purificada por HPLC-Prep (Método 8) para produzir o ácido (S)-1- (fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((2-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)etil)amino)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um sólido (12 mg, 45%). LCMS m/e 678,50 (M+H)+, 2,968 minutos (Método 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,34 (s, 1H), 5,18 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,72 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,60 (s, 2H), 4,48 (s, 1H), 3,97 (d, J=11,3 Hz, 2H), 3,39 (tdd, J=11,8, 4,5, 2,1 Hz, 2H), 2,67-2,48 (m, 4H), 2,19-0,89 (m, 34H), 1,69 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,04 (s, 1F). Exemplo 10 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-(((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-metilpropil)amino)metil)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1: Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-formil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00199] Uma mistura de trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-formil-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-ila (2,0 g, 3,50 mmol), 1- (fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila (1,44 g, 3,85 mmol), Na2CO3 H2O (1,3 g, 10,5 mmol) e Pd(Ph3P)4 (0,24 g, 0,21 mmol) em dioxano (40 mL) foi jateada com nitrogênio, vedada, e agitada a 70°C durante 1 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com H2O (100 mL) e extraído com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica eluída (0%-15% de EtOAc em Hexano) usando detector ELS para produzir o produto desejado como um sólido (1,85 g, 79%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,69 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,39-7,31 (m, 5H), 5,31 (br. s., 1H), 5,21-5,14 (m, 2H), 5,12 (dd, J=6,3, 1,8 Hz, 1H), 4,77 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,65-4,62 (m, 1H), 4,62-4,55 (m, 1H), 4,50-4,44 (m, 1H), 2,89 (td, J=11,1, 5,9 Hz, 1H), 2,60 (d, J=16,3 Hz, 1H), 2,17-1,72 (m, 11H), 1,71 (s, 3H), 1,53-1,19 (m, 14H), 1,111,01 (m, 2H), 0,98 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,84 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,07 (s, 1F) Etapa 2: Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-(((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-metilpropil)amino)metil)-5a,5b,8,8, 11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00200] Uma suspensão de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-formil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (70 mg, 0,105 mmol) e 1,1-dióxido de 4-(1-amino-2-metilpropan-2-il)tiomorfolina (32 mg, 0,157 mmol) em DCE (1 mL) foi agitada à rt durante 1 h. À solução resultante foram adicionados cianoboro-hidreto de sódio (20 mg, 0,314 mmol) e AcOH (0,012 mL, 0,209 mmol). A mistura foi agitada à rt durante 18 h. A mistura foi diluída com solução saturada de NaHCO3 (5 mL) e extraída com CH2Cl2 (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de gel de sílica (20%-80% de EtOAc em Hexano) usando detector ELS para produzir o produto desejado como um sólido (18 mg, 20%). LCMS m/e 859,55 (M+H)+, 3,113 minutos (Método 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,40-7,29 (m, 5H), 5,32 (s, 1H), 5,21-5,14 (m, 2H), 5,12 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,69 (d, J=1,5 Hz, 1H), 4,63-4,55 (m, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,51-4,44 (m, 1H), 3,07 (m, 8H), 2,732,55 (m, 3H), 2,42 (td, J=11,0, 5,6 Hz, 1H), 2,18-0,92 (m, 29H), 1,69 (s, 3H), 1,16 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,84 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -225,06 (s, 1F).

[00201] Etapa 3: A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-metilpropil) amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (18 mg, 0,021 mmol) em 1,4-dioxano (1 mL) e MeOH (0,5 mL) foi adicionado NaOH 1N (0,5 mL, 0,5 mmol)). A mistura foi agitada a 60°C durante 2 h. A mistura de reação foi purificada por HPLC-Prep (Método 8) para produzir o ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)-2-metilpropil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico como sólido (6 mg, 37%). LCMS m/e 769,55 (M+H)+, 2,816 minutos (Método 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,33 (s, 1H), 5,17 (d, J=4,3 Hz, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,56 (s, 1H), 4,44 (s, 1H), 3,13-3,01 (m, 8H), 3,01-0,89 (m, 33H), 1,68 (s, 3H), 1,15 (s, 6H), 1,03 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,85 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -224,76 (s, 1F). Exemplo 11 Preparação de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)propil)amino)metil)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-formil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila

[00202] Em um vaso de pressão de 25 mL, uma mistura de trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)- 3a-formil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-ila (164 mg, 0,287 mmol), 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (118 mg, 0,316 mmol), Na2CO3^H2O (107 mg, 0,862 mmol) e Pd(Ph3P)4 (19,92 mg, 0,017 mmol) em dioxano (2 mL) e água (0,500 mL) sob N2 foi esfriada para -78°C. A mistura solidificou-se e ciclos de evacuação/purgação com N2 foram realizados três vezes. A mistura foi agitada a 70°C durante 1 h e a cor alterou- se para acastanhada escura. A mistura de reação foi diluída com H2O (100 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado (coluna de 24g de gel de sílica; 0%-25%, 25% de EtOAc em Hexano; detector ELS) para produzir o composto do título como um sólido branco (122 mg, 63,5%). LCMS: m/e 691,45 (M+Na)+, 4,428 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,73 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,47-7,25 (m, 5H), 5,35 (br. s., 1H), 5,20 (d, J=1,8 Hz, 2H), 5,16-5,09 (m, 1H), 4,79 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,714,64 (m, 1H), 4,61-4,53 (m, 1H), 4,51-4,41 (m, 1H), 2,89 (td, J=11,1, 5,9 Hz, 1H), 2,63 (d, J=18,3 Hz, 1H), 2,31-1,85 (m, 8H), 1,85-1,76 (m, 3H), 1,73 (s, 3H), 1,61-1,20 (m, 14H), 1,15-1,05 (m, 2H), 1,04-1,00 (m, 3H), 0,99 (br. s., 3H), 0,96 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,87 (s, 3H).Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-(((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)propil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila

[00203] A uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-formil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (122 mg, 0,182 mmol) em DCE (2 mL) foram adicionados ácido acético (0,021 mL, 0,365 mmol) e 1,1-dióxido de 4-(3-aminopropil)tiomorfolina (70,1 mg, 0,365 mmol). A solução alterou-se primeiro para turva e 10 minutos mais tarde para transparente. A mistura foi agitada à rt durante 2 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (193 mg, 0,912 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada durante 18 h. Ácido acídico [sic] (0,2 mL) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (193 mg, 0,912 mmol) foram adicionados e a mistura foi agitada durante 18 h. A mistura foi então diluída com solução saturada de NaHCO3 (7 mL) e foi extraída com diclorometano (3 x 7 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2SO4. O agente de secagem foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado (gel de sílica). As frações contendo o produto presumido foram coletadas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o composto do título como um sólido branco (130 mg, 84%). LCMS: m/e 845,60 (M+H)+, 3,116 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,41-7,29 (m, 5H), 5,34-5,29 (m, 1H), 5,18 (d, J=2,3 Hz, 2H), 5,11 (s, 1H), 4,70 (s, 1H), 4,63-4,53 (m, 2H), 4,47 (d, J=4,5 Hz, 1H), 3,14-2,97 (m, 12H), 2,95-2,82 (m, 3H), 2,68-2,51 (m, 4H), 2,48-2,33 (m, 2H), 2,24-2,07 (m, 3H), 2,03-1,91 (m, 4H), 1,91-1,73 (m, 6H), 1,71 (br. s., 3H), 1,63-1,30 (m, 11H), 1,08 (br. s., 3H), 0,98 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,84 (s, 3H).

[00204] Etapa 3. A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-(((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)propil)amino)metil)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (130 mg, 0,154 mmol) em 1,4-dioxano (6 mL) e MeOH (3 mL) foi adicionado NaOH 1N (3 mL, 3,00 mmol). A mistura foi agitada a 66°C durante 2 h e foi obtida uma solução transparente. A mistura de reação foi purificada por HPLC-Prep (Método 9) para produzir o ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-(((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)propil)amino)metil)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um sólido branco (55 mg, 45%). LCMS: m/e 755,50 (M+H)+, 2,837 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,29 (br. s., 1H), 5,15 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,50 (q, J=8,8 Hz, 1H), 4,39 (q, J=8,6 Hz, 1H), 3,36 (d, J=6,0 Hz, 4H), 3,33-3,28 (m, 4H), 3,23-3,10 (m, 3H), 2,95 (t, J=7,2 Hz, 2H), 2,82 (d, J=13,1 Hz, 1H), 2,56-2,40 (m, 2H), 2,31-2,17 (m, 1H), 2,14-1,89 (m, 7H), 1,85-1,61 (m, 10H), 1,60-1,13 (m, 13H), 1,12-1,04 (m, 4H), 1,01 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -222,66-223,63 (m, 1F).Exemplo 12 Preparação de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((N-(3-(1,1-dioxidotiomorfolino)propil)acetamido)metil)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

[00205] A uma solução de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-(((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)propil)amino)metil)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico (20 mg, 0,026 mmol) em CH2Cl2 (1 mL) foram adicionados anidrido acético (0,012 mL, 0,132 mmol) e DMAP (0,324 mg, 2,65μmol). A mistura resultante foi aquecida a 50°C durante 24 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi redissolvido em MeOH (4 mL) e purificado por HPLC prep. (Método 10) para produzir o composto do título como um sólido branco (3 mg, 13,5%). LCMS: m/e 797,55 (M+H)+, 3,103 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 5,35 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,76 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,82-4,72 (m, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,60-4,52 (m, 1H), 4,50-4,36 (m, 1H), 3,64 (d, J=13,8 Hz, 1H), 3,49 (t, J=7,4 Hz, 2H), 3,27 (m, 1H), 3,18-3,08 (m, 4H), 3,03 (d, J=5,5 Hz, 4H), 2,68-2,47 (m, 4H), 2,27 (d, J=6,0 Hz, 1H), 2,221,93 (m, 9H), 1,89-1,23 (m, 21H), 1,17 (s, 3H), 1,16-1,07 (m, 3H), 1,05 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, METANOL-d4) δ -226,56-227,82 (m, 1F).Exemplo 13 Preparação de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-(4,4-bis(etoxicarbonil)piperidin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila

[00206] Uma mistura de 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (669 mg, 1,788 mmol), trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR, 11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-ila (950 mg, 1,703 mmol), carbonato de sódio hidrato (634 mg, 5,11 mmol) e tetraquis-paládio (118 mg, 0,102 mmol) foi posta sob atmosfera de nitrogênio. Dioxano (16 mL) foi adicionado e foi formada uma solução laranja. Água (4 mL) foi adicionada e foi formada uma suspensão amarela muito pálida. A mistura inteira foi esfriada para -78°C e ciclos de evacuação/purgação foram realizados três vezes e finalmente foi realizada uma purga com nitrogênio. O frasco foi imerso em um banho de óleo a 65°C- 85°C. A cor da mistura alterou de uma suspensão amarela pálida para castanha escura durante um período de 10 min. Aquecimento foi permitido prosseguir a 85°C durante um total de 5 horas. A mistura de reação foi diluída com H2O (100 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para produzir o composto do título como um sólido branco (0,78 g, 69,8%). LCMS: m/e 656,50 (M+H)+, 3,003 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,46-7,29 (m, 5H), 5,43-5,28 (m, 1H), 5,24-5,16 (m, 2H), 5,13 (dd, J=6,1, 2,0 Hz, 1H), 4,75 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,61-4,56 (m, 1H), 4,52-4,44 (m, 1H), 2,68-2,51 (m, 2H), 2,26-1,94 (m, 6H), 1,84-1,72 (m, 4H), 1,72 (s, 3H), 1,651,28 (m, 12H), 1,27 (s, 3H), 1,14 (d, J=13,9 Hz, 2H), 1,09 (s, 3H), 1,06 (m, 2H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,87 (s, 3H).

[00207] Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-(aziridin-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila

[00208] A um vaso de parede espessa, de 75 mL, revedável, seco por chama, foram adicionados 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila (0,78 g, 1,189 mmol) e fosfato de potássio seco por chama (1,262 g, 5,95 mmol), seguido por 1,2-dicloroetano (20 mL) e acetonitrila (10 mL). A mistura de reação foi jateada com nitrogênio, vedada, e aquecida para 130°C durante 36 h. A mistura de reação bruta foi filtrada através de um bloco curto de gel de sílica e lavada com acetato de etila para obter uma solução laranja muito pálida. A solução foi concentrada sob pressão reduzida para obter o composto do título como um sólido branco sujo. O composto foi usado como tal, sem purificação adicional. LCMS: m/e 682,50 (M+H)+, 700,55 (M+H2O) +, 714,55 (M+MeOH) +, 3,053 min (Método 9).

[00209] Etapa 3. Preparação de 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil) ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)piperidina-4,4-dicarboxilato de dietila

[00210] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(aziridin-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (100 mg, 0,147 mmol) foi adicionado a um tubo de 15 mL e vedado. CH3CN (2 mL) foi adicionado seguido por piperidina-4,4-dicarboxilato de dietila (67,2 mg, 0,293 mmol). A esta suspensão foram adicionados iodeto de sódio (24,18 mg, 0,161 mmol) e fosfato de potássio (93 mg, 0,440 mmol). A mistura resultante foi aquecida até a 125°C durante 15 h. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (50 mL) e lavada com solução de bicarbonato de sódio e salmoura. A camada orgânica foi coletada, secada com sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado em gel de sílica (0%-25% de acetato de etila/hexanos) para produzir o composto do título como um sólido branco (60 mg, 48%). LCMS: m/e 911,65 (M+H)+, 3,213 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,41-7,31 (m, 5H), 5,31 (br. s., 1H), 5,225,14 (m, 2H), 5,10 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,71 (d, J=2,5 Hz, 1H), 4,63-4,53 (m, 2H), 4,50-4,41 (m, 1H), 4,28-4,20 (m, 4H), 3,01-2,79 (m, 2H), 2,69-2,55 (m, 2H), 2,54-2,29 (m, 2H), 2,20-2,10 (m, 6H), 2,00-1,73 (m, 15H), 1,70-1,67 (s, 3H), 1,67-1,49 (m, 10H), 1,26 (t, J=7,2 Hz, 11H), 1,07 (s, 3H), 0,97-0,93 (m, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,84 (s, 3H).Etapa 4. Preparação de 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-9-((R)-4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)carbonil)-4-(fluorometil) ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)piperidina-4,4-dicarboxilato de dietila

[00211] A uma solução de 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1- en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a- il)amino)etil)piperidina-4,4-dicarboxilato de dietila (60 mg, 0,066 mmol) em DCE (3 mL) foram adicionados TEA (0,015 mL, 0,105 mmol), t- butildimetilsilano (0,022 mL, 0,132 mmol), e acetato de paládio(II) (3,70 mg, 0,016 mmol). A mistura foi jateada com N2 e foi aquecida para 60°C. Após 3 h de aquecimento a mistura foi esfriada para a rt e filtrada através de um bloco de celite e gel de sílica (lavada com EtOAc 50% em hexanos, então com diclorometano). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir o composto do título como um sólido (61 mg. 100%). O produto bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS: m/e 935,70 (M+H)+, 3,247 min (Método 9).

[00212] Etapa 5. A uma solução de 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)carbonil)-4- (fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)piperidina-4,4-dicarboxilato de dietila (15 mg, 0,016 mmol) em THF (4 mL) foi adicionado TBAF (1M em THF) (0,024 mL, 0,024 mmol). A mistura foi agitada à rt durante 30 min. A mistura foi purificada por HPLC-Prep (Método 9) para produzir o ácido (R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4,4-bis(etoxicarbonil) piperidin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um sólido branco (7 mg, 53,2%). LCMS: m/e 821,60 (M+H)+, 2,901 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,38-5,32 (m, 1H), 5,17 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,72-4,40 (m, 3H), 4,32-4,21 (m, 4H), 3,54-3,24 (m, 4H), 3,10 (br. s., 3H), 2,90-2,60 (m, 2H), 2,36 (br. s., 4H), 2,281,73 (m, 12H), 1,69 (s, 3H), 1,66-1,50 (m, 6H), 1,44 (br. s., 3H), 1,38-1,33 (m, 3H), 1,32-1,24 (m, 9H), 1,12 (s, 3H), 1,08 (d, J=8,3 Hz, 2H), 1,02 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H).Exemplo 14 e Exemplo 15 Preparação de ácido (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-(3-(etoxicarbonil)-1,1-dioxidotiomorfolino)etil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico (isômero 1) e Preparação de ácido (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3- (etoxicarbonil)-1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxílico (isômero 2) isômera 2,

Etapa 1. Preparação de 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex- 1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 3a-il)amino)etil)tiomorfolina-3-carboxilato de etila

[00213] O composto do título foi preparado com rendimento de 26,3% seguindo o procedimento descrito acima para a preparação de 1-(2- (((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloxi) carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)piperidina-4,4-dicarboxilato de dietila, usando cloridrato de éster etílico de ácido tiomorfolina-3-carboxílico no lugar de piperidina-4,4-dicarboxilato de dietila como material de partida. MS: m/e 857,65. (M+H)+, 3,876 min (Método 9) . 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,38-7,31 (m, 5H), 5,31 (d, J=3,8 Hz, 1H), 5,23-5,13 (m, 2H), 5,10 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,70 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,62-4,54 (m, 2H), 4,51-4,40 (m, 1H), 4,28-4,22 (m, 2H), 3,81-3,67 (m, 1H), 3,63 (ddd, J=12,5, 5,8, 3,5 Hz, 1H), 3,37 (ddd, J=12,4, 9,9, 2,9 Hz, 1H), 3,21 (ddd, J=12,4, 8,5,5,8 Hz, 1H), 3,09 (ddd, J=9,9, 6,0, 3,5 Hz, 1H), 3,03-2,95 (m, 1H), 2,93-2,66 (m, 5H), 2,64-2,32 (m, 5H), 2,17-2,08 (m, 3H), 2,00-1,77 (m, 8H), 1,69 (s, 3H), 1,64-1,48 (m, 8H), 1,18-1,01 (m, 8H), 0,99-0,80 (m, 16H).Etapa 2. Preparação de 1,1-dióxido de 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR, 7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil) ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)tiomorfolina-3-carboxilato de etila

[00214] A uma solução de mistura de 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo- hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a- il)amino)etil)tiomorfolina-3-carboxilato de etila (32 mg, 0,037 mmol) em MeOH (2 mL) foi adicionada uma suspensão de OXONE® (34,4 mg, 0,056 mmol) em água (2,00 mL) a 0°C, seguida por acetona (5 mL). A mistura resultante foi agitada a 0°C durante 12 h. A mistura de reação foi diluída com água (10 mL) e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com hidrossulfito de sódio e então secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para produzir o composto do título como um sólido. Os 30 mg de produto bruto foram usados na etapa seguinte sem purificação adicional. MS: m/e 889,55. (M+H)+, 3,26 min (Método 9) .Etapa 3. Preparação de 1,1-dióxido de 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR, 7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-(((terc-butildimetilsilil)oxi) carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)tiomorfolina-3- carboxilato de etila

[00215] O composto do título foi preparado com rendimento de 97% seguindo o procedimento descrito acima para a preparação de 1-(2- (((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-(((terc- butildimetilsilil)oxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8, 11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)piperidina- 4,4-dicarboxilato de dietila, usando 1,1-dióxido de 4-(2-(((1R,3aS, 5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloxi)carbonil)-4- (fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)tiomorfolina-3-carboxilato de etila no lugar de 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4- ((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)piperidina- 4,4-dicarboxilato de dietila como material de partida. MS: m/e 913,65. (M+H)+, 3,204 min (Método 9) .

[00216] Etapa 4. A uma solução de 1,1-dióxido de 4-(2- (((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-(((terc- butildimetilsilil)oxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil) tiomorfolina-3-carboxilato de etila (20 mg, 0,022 mmol) em THF (4 mL) foi adicionado TBAF (1M em THF) (0,032 mL, 0,032 mmol). A mistura foi agitada à rt durante 30 minutos. A mistura foi purificada por HPLC-Prep (Método 9) para produzir dois produtos: Exemplo 14: ácido (1R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-(etoxicarbonil)-1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico (Isômero 1) como um sólido branco (2 mg, 11,43%). LCMS: m/e 799,50 (M+H)+, 2,866 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,40-5,29 (m, 1H), 5,19 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,64-4,55 (m, 1H), 4,49 (q, J=8,6 Hz, 1H), 4,37-4,25 (m, 2H), 3,74-3,62 (m, 1H), 3,46-2,85 (m, 10H), 2,68-2,53 (m, 2H), 2,26-2,06 (m, 5H), 2,02-1,75 (m, 7H), 1,72 (s, 3H), 1,67-1,50 (m, 7H), 1,37-1,27 (m, 8H), 1,13 (s, 3H), 1,09-1,01 (m, 4H), 1,04 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,94-0,91 (m, 3H), 0,88 (s, 3H) e Exemplo 15: ácido (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3- (etoxicarbonil)-1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxílico (Isômero 2) como um sólido branco (2 mg, 11,43%) como isômero 2. LCMS: m/e 799,55 (M+H)+, 2,778 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,44-5,31 (m, 1H), 5,20 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,75-4,69 (m, 1H), 4,67-4,56 (m, 1H), 4,55-4,43 (m, 1H), 4,374,29 (m, 2H), 4,28-4,22 (m, 1H), 3,67 (br. s., 1H), 3,51-3,42 (m, 2H), 3,343,09 (m, 5H), 3,05-2,86 (m, 3H), 2,61 (d, J=5,8 Hz, 1H), 2,33-2,22 (m, 2H), 2,19-2,15 (m, 2H), 2,14-2,09 (m, 1H), 2,05-1,76 (m, 14H), 1,73 (s, 3H), 1,641,01 (m, 12H), 1,12 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,88 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -224,87-225,57 (m, 1F).Exemplo 16 Preparação de ácido 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-9-((R)-4-carboxi-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil) piperidina-4,4-dicarboxílico

[00217] A uma solução de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4,4-bis(etoxicarbonil)piperidin-1-il)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico (5 mg, 6,09 μmol)) em 1,4-dioxano (2 mL) e MeOH (1 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (1 mL, 1,000 mmol). A mistura foi agitada a 66°C durante 2 h, e então esfriada para a temperatura ambiente. A mistura de reação foi purificada por HPLC-Prep (Método 9) para produzir o composto do título como um filme (0,8 mg, 15,46%). LCMS: m/e 765,60 (M+H)+, 2,928 min (Método 9).Exemplo 17 Preparação de ácido 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-9-((R)-4-carboxi-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b, 8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil) piperidina-4,4-dicarboxílico

[00218] O composto do título foi isolado durante a purificação de ácido 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-carboxi-4- (fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil)piperidina-4,4-dicarboxílico. (sólido branco, 1,2 mg, 22,36%). LCMS: m/e 793,60 (M+H)+, 2,992 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,37 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=6,0 Hz, 1H), 4,77 (s, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,63-4,37 (m, 2H), 4,31-4,18 (m, 2H), 3,80-3,71 (m, 1H), 3,69-3,61 (m, 1H), 3,58-3,53 (m, 1H), 3,52-3,47 (m, 2H), 3,46-3,41 (m, 1H), 3,24-3,09 (m, 2H), 2,65-2,60 (m, 1H), 2,56-1,17 (m, 40H), 1,10 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,9 (s, 3H), 0,87 (s, 3H).Exemplo 18 Preparação de ácido 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-9-((R)-4-carboxi-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)etil) tiomorfolina-3-carboxílico

[00219] A uma solução de 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1- en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a- il)amino)etil)tiomorfolina-3-carboxilato de etila (0,030 g, 0,035 mmol) em 1,4-dioxano (2 mL) e MeOH (1 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (1 mL, 1,000 mmol). A mistura foi agitada a 66°C durante 2 h e foi formada uma solução transparente. A mistura de reação bruta foi purificada por HPLC-Prep (Método 10) para produzir o composto do título como um sólido branco (4,5 mg, 16,53%). LCMS: m/e 739,55 (M+H)+, 2,838 min (Método 9). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 5,35 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,854,80 (m, 1H), 4,75-4,68 (m, 1H), 4,63-4,51 (m, 1H), 4,49-4,37 (m, 1H), 3,443,36 (m, 1H), 3,22-2,90 (m, 4H), 2,89-2,68 (m, 4H), 2,66-2,48 (m, 3H), 2,442,23 (m, 2H), 2,18-1,98 (m, 8H), 1,85 (d, J=12,5 Hz, 2H), 1,77 (d, J=4,0 Hz, 3H), 1,74-1,28 (m, 14H), 1,25-1,17 (m, 3H), 1,14 (d, J=11,3 Hz, 2H), 1,111,08 (m, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,94-0,89 (m, 3H). 19F RMN (376MHz, METANOL-d4) δ -226,92 (m, 1F). Exemplo 19 Preparação de ácido (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-benzila

[00220] Ao 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- (aziridin-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (230 mg, 0,337 mmol) em CH3CN (6 mL) foram adicionados tiomorfolina-3,5-diildimetanol (77 mg, 0,472 mmol), iodeto de sódio (55,6 mg, 0,371 mmol) e fosfato de potássio (215 mg, 1,012 mmol). A suspensão resultante foi aquecida até a 125°C durante 15 h. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila, lavada com uma solução aquosa de bicarbonato de sódio e salmoura. A camada orgânica foi secada com sulfato de sódio e concentrada até a secura. O material bruto foi purificado usando gel de sílica para obter um sólido branco sujo (6 mg, 2,5%). LCMS: m/e 700,55 (M+H)+, 2,925 min (Método 9).

[00221] Etapa 2. 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (6 mg, 8,57 μmol) foi dissolvido em uma mistura de MeOH (2 mL) e dioxano (2 mL). Hidróxido de sódio (1 mL, 1,000 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada a 25°C durante 15 h e purificada por HPLC-Prep (Método 9) para produzir o ácido (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um sólido branco (2,0 mg, 36,3%). LCMS: m/e 610,55 (M+H)+, 2,928 min (Método 9).Esquema geral para a preparação de Exemplos 20 e 21

Exemplo 20 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oxopirrolidin-1- il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oxopirrolidin- 1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00222] A um frasco vedável contendo 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila (0,1 g, 0,152 mmol) e 1-(2-cloroetil)pirrolidin- 2-ona (0,056 g, 0,381 mmol) foram adicionados sal de potássio de ácido fosfórico (0,129 g, 0,610 mmol) e iodeto de potássio (0,038 g, 0,229 mmol). A mistura foi diluída com acetonitrila (2 mL), jateada com nitrogênio, então o frasco foi vedado e aquecido para 100°C durante 21 h. A mistura foi esfriada para a rt, diluída com água (10 mL) e extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas foram secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash usando um gradiente de 0%-5% de metanol em diclorometano e uma coluna de 12 g de gel de sílica para produzir o composto do título (0,104 g, 0,136 mmol, 89% de rendimento) como um filme transparente. LCMS: m/e 767,6 (M+H)+, 2,20 min (Método 3).

[00223] Etapa 2. A uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(2-oxopirrolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,104 g, 0,136 mmol) em 1,4- dioxano (2 mL) e MeOH (0,5 mL) foi adicionado NaOH (1N) (0,542 mL, 0,542 mmol). A mistura foi aquecida para 60°C. Após 4,5 h de aquecimento, a mistura foi esfriada para a rt e foi purificada por cromatografia em fase reversa usando um gradiente de 25%-100% de A para B (A = água:acetonitrila 9:1com 0,1% de TFA adicionado, B = água:acetonitrila 1:9 com 0,1% de TFA adicionado) e uma coluna C18 de 50 g. As frações contendo o produto foram combinados e concentradas sob pressão reduzida para produzir o sal de TFA do composto do título (0,076 g, 0,096 mmol, 71% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: m/e 677,4 (M+H)+, 1,73 min (Método 3). 1H RMN (500MHz, Ácido Acético d4) δ 5,37 (br. s., 1H), 5,22 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,87 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,63-4,45 (m, 2H), 3,81-3,68 (m, 2H), 3,66-3,54 (m, 3H), 3,51-3,44 (m, 1H), 2,83-2,74 (m, 1H), 2,63-2,48 (m, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 2,34-1,04 (m, 29H), 0,98 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,93 (s, 3H). Exemplo 21 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((3-(2-oxopirrolidin-1- il)propil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((3-(2-oxopirrolidin-1- il)propil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00224] A um frasco vedável contendo 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (0,1 g, 0,152 mmol) e 1-(3-cloropropil)pirrolidin-2-ona (0,074 g, 0,457 mmol) foram adicionados sal de potássio de ácido fosfórico (0,129 g, 0,610 mmol) e iodeto de potássio (0,038 g, 0,229 mmol). A mistura foi diluída com acetonitrila (2 mL), jateada com nitrogênio, então o frasco foi vedado e aquecido para 100°C durante 16h. A mistura foi esfriada para a rt, diluída com água (10 mL) e extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas foram secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash usando um gradiente de 0%-5% de MeOH em DCM e uma coluna de 12 g de gel de sílica. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o composto do título (0,074g, 0,095 mmol, 62% de rendimento) como um filme transparente. LCMS: m/e 781 (M+H)+, 2,20 min (Método 3).

[00225] Etapa 2. A uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((3-(2-oxopirrolidin-1-il)propil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,074 g, 0,095 mmol) em 1,4- dioxano (2 mL) e metanol (0,4 mL) foi adicionado NaOH 1N (0,379 mL, 0,379 mmol) e a mistura foi aquecida para 60°C. Após 4h de aquecimento, a mistura foi esfriada para a rt e foi purificada por HPLC-Prep (Método 11). As frações contendo o produto foram combinados e concentradas sob pressão reduzida para produzir o sal de TFA do produto do título (0,042g, 0,052 mmol, 55% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: m/e 691,5 (M+H)+, 1,73 min (Método 3). 1H RMN (500MHz, Ácido Acético d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,65-4,47 (m, 2H), 3,56-3,41 (m, 4H), 3,28-3,16 (m, 2H), 2,90-2,81 (m, 1H), 2,65-2,58 (m, 1H), 2,52 (t, J=8,1 Hz, 2H), 1,75 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 2,36-1,06 (m, 31H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). Exemplo 22 Preparação de ácido (R)-4- ((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-1-isopropil-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-2-(trimetilsilil)etila

[00226] Uma mistura de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxílico (180 mg, 0,248 mmol) e N,N’-di-isopropilcarbamimidato de 2-(trimetilsilil)etila (91 mg, 0,371 mmol) em tetra-hidrofurano (10 mL) foi refluxada a 80°C durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com metanol (3 mL) e tetra- hidrofurano (4 mL). A mistura resultante foi deixada à temperatura ambiente durante 14 h. Um sólido branco foi formado e removido por filtração. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Este resíduo foi tratado com metanol (2 mL) e água (5 mL) para produzir um precipitado branco. O sólido foi coletado por filtração e lavado com éter dietílico (4 mL) para fornecer o composto do título como um sólido branco (130 mg, 60%). LCMS: m/e 827,8 (M+H)+, 2,39 min (Método 3).Etapa 2. Preparação de 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-1-isopropil-5a,5b,8,8,11a- pentametil-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-2-(trimetilsilil)etila

[00227] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-2-(trimetilsilil)etila (50 mg, 0,060 mmol) e Pd-C (6,43 mg, 6,04 μmol) em tetra-hidrofurano (2 mL) e metanol (1 mL) foi agitada sob hidrogênio atmosfera a 20°C durante 31 horas. A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celite para remover o catalisador de paládio e lavada com tetra-hidrofurano (10 mL). Os filtrados foram concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto do título como um sólido branco (40 mg, 64%, 80% puro). LCMS: m/e 829,8 (M+H)+, 2,43 min (Método 3).

[00228] Etapa 3. Uma mistura de 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-1-isopropil- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-2-(trimetilsilil)etila (15 mg, 0,014 mmol) e fluoreto de tetra-N-butilamônio (101 mg, 0,289 mmol) em dioxano (1mL) foi agitada a 20°C durante 5 horas. A mistura de reação foi filtrada e purificada por HPLC- Prep com 0%-70% de acetonitrila/água/TFA para fornecer o produto desejado como um óleo incolor (6 mg, 54%). LCMS: m/e 729,7 (M+H)+, 1,90 min (Método 3). 1H RMN (500MHz, Acético) δ 5,40 (br. s., 1H), 5,31-5,17 (m, 1H), 4,73-4,56 (m, 1H), 4,55-4,40 (m, 1H), 3,58-3,02 (m, 12H), 2,62 (d, J=16,9 Hz, 1H), 2,35-2,30 (m, 1H), 2,25-1,13 (m, 28H), 1,26 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,93 (d, J=6,8 Hz, 3H), 0,85 (d, J=6,8 Hz, 3H).Exemplo 23 Preparação de ácido 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-1-isopropil-5a,5b,8,8,11a- pentametil-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hexanocarboxílico

[00229] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-2-(trimetilsilil)etila (18 mg, 0,022 mmol) e Pd-C (4,63 mg, 4,35μmol) em tetra-hidrofurano (2 mL) e metanol (2 mL) foi agitada a 20°C durante 3 dias. A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celite e então lavada com tetra-hidrofurano (2 mL), os filtrados foram concentrados sob pressão reduzida para fornecer um sólido. O sólido foi dissolvido em tetra-hidrofurano (2 mL) e fluoreto de tetra-N-butilamônio (152 mg, 0,435 mmol) foi adicionado e a reação [sic]. A mistura foi agitada a 20°C durante 2 dias. A mistura de reação foi filtrada e purificada por HPLC-Prep com 0%-70% e acetonitrila/água/TFA para fornecer o composto do título como um sólido branco (4 mg, 24%). LCMS: m/e 731,8 (M+H)+, 1,87 min (Método 3). 1H RMN (500MHz, ACETONITRILA-d3) δ 5,28 (dd, J=6,5, 1,6 Hz, 1H), 4,41 (s, 1H), 4,31 (s, 1H), 3,27-2,97 (m, 11H), 2,94-2,83 (m, 1H), 2,20-1,24 (m, 32H), 1,16 (s, 3H), 1,13-1,11 (m, 1H), 1,05 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,92 (d, J=6,9 Hz, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,84 (d, J=6,6 Hz, 3H).Exemplo 24 Preparação de ácido (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(2,6-dimetil-1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)-2,6- dimetiltiomorfolina

[00230] Uma mistura de 1,1-dióxido de 2,6-dimetiltiomorfolina (100 mg, 0,613 mmol), 2-cloroacetaldeído (135 mg, 0,858 mmol ) e complexo de borano-2-picolina (72,1 mg, 0,674 mmol) em metanol (2 mL) e ácido acético (1 mL) foi agitada à rt durante 17 horas. A mistura de reação foi lavada com solução saturada de carbonato de sódio (10 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o composto do título como um óleo incolor (90 mg, 65%). LCMS: m/e 226,2 (M+H)+, 0,54 min (Método 3).

[00231] Etapa 2. Uma mistura de 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)-2,6- dimetiltiomorfolina (20,65 mg, 0,091 mmol), 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila (30 mg, 0,046 mmol), iodeto de potássio (8,35 mg, 0,050 mmol) e fosfato de potássio (48,5 mg, 0,229 mmol) em acetonitrila (1 mL) foi aquecida até a 120°C durante 16 horas. A mistura de reação foi esfriada para a RT, inativada com água destilada (3 mL) e extraída com diclorometano (3 x 3 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3 mL), secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um sólido branco. Este sólido foi dissolvido em acetonitrila (1 mL) e hidróxido de sódio (0,457 mL, 0,457 mmol) foi adicionado. A mistura foi aquecida a 80oC durante 3 h e então ela foi filtrada e purificada por HPLC- Prep com acetonitrila/água/TFA para fornecer o ácido (1R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(2,6-dimetil-1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um sólido branco (12 mg, 33%). LCMS: m/e 755,8 (M+H)+, 1,96 min (Método 3). 1H RMN (500MHz, METANOL-d4) δ 5,36 (br. s., 1H), 5,22 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,86 (br. s., 1H), 4,76 (s, 1H), 4,62-4,51 (m, 1H), 4,50-4,39 (m, 1H), 3,39-3,11 (m, 7H), 3,01-2,73 (m, 4H), 2,57 (d, J=17,7 Hz, 1H), 2,381,15 (m, 27H), 1,79 (s, 3H), 1,30 (dd, J=6,8, 3,3 Hz, 6H), 1,17 (s, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H).Exemplo 25 Preparação de ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(2,6-dimetil-1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

[00232] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (30 mg, 0,046 mmol), 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)-2,6-dimetiltiomorfolina (20,65 mg, 0,091 mmol), iodeto de potássio (8,35 mg, 0,050 mmol) e fosfato de potássio (48,5 mg, 0,229 mmol) em acetonitrila (1 mL) foi aquecida a 120°C durante 16 h. A mistura de reação foi esfriada para a RT, inativada com água destilada (3 mL) e extraída com diclorometano (3 x 3 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3 mL), secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer the um sólido branco. Este sólido branco foi dissolvido em acetonitrila (1 mL) e hidróxido de sódio (0,457 mL, 0,457 mmol) foi adicionado. A mistura foi aquecida a 80oC durante 3 h, filtrada e purificada por HPLC-Prep com acetonitrila/água/TFA para fornecer o composto do título como um sólido branco (12 mg, 33%). LCMS: m/e 755,8 (M+H)+, 1,92 min (Método 3). 1H RMN (500MHz, METANOL-d4) δ 5,35 (br. s., 1H), 5,22 (dd, J=6,1, 1,6 Hz, 1H), 4,86 (s, 1H), 4,76 (d, J=1,3 Hz, 1H), 4,61-4,51 (m, 1H), 4,50-4,38 (m, 1H), 3,39- 3,07 (m, 7H), 3,01-2,73 (m, 4H), 2,57 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,371,20 (m, 27H), 1,78 (s, 3H), 1,30 (dd, J=6,7, 3,1 Hz, 6H), 1,17 (s, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H).

[00233] Exemplo 26 Preparação de ácido (1R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(6-metil-1,1-dioxido- 1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)-6-metil-1,4- tiazepano

[00234] Uma mistura de 6-metil-1,4-tiazepano (100 mg, 0,613 mmol), 2-cloroacetaldeído (0,107 mL, 0,858 mmol) e complexo de borano-2-picolina (72,1 mg, 0,674 mmol) em metanol (1 mL) e ácido acético (0,5 mL) foi agitada à rt durante 17 horas. A mistura de reação foi lavada com solução saturada de carbonato de sódio (3 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 2 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o composto do título como um óleo incolor (105 mg, 76%). LCMS: m/e 226,2 (M+H)+, 0,33 min (Método 3).

[00235] Etapa 2. Uma mistura de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila (20 mg, 0,030 mmol), 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)-6-metil-1,4- tiazepano (27,5 mg, 0,122 mmol), iodeto de potássio (5,57 mg, 0,034 mmol) e fosfato de potássio (32,4 mg, 0,152 mmol) em acetonitrila (1 mL) foi aquecida a 120°C durante 16 h. A mistura de reação foi esfriada para a RT, inativada com água destilada (3 mL) e extraída com diclorometano (3 x 2 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3 mL), secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o intermediário desejado como um sólido branco. Este sólido foi dissolvido em dioxano (1 mL) e hidróxido de sódio (0,305 mL, 0,305 mmol) foi adicionado. A mistura foi aquecida a 80oC durante 3 h. A mistura de reação foi filtrada e purificada por HPLC-Prep com 0%-70% de acetonitrila/água/TFA para fornecer o ácido (1R)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(6-metil-1,1-dioxido-1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico como um óleo incolor (9,8 mg, 40%). LCMS: m/e 755,9 (M+H)+, 1,93 min (Método 3). 1H RMN (500MHz, METANOL-d4) δ 5,36 (br. s., 1H), 5,22 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,86 (br. s., 1H), 4,76 (s, 1H), 4,61-4,51 (m, 1H), 4,50-4,40 (m, 1H), 3,69-3,14 (m, 9H), 3,11-2,75 (m, 4H), 2,57 (d, J=17,2 Hz, 1H), 2,49-2,24 (m, 2H), 2,22-1,15 (m, 26H), 1,78 (s, 3H), 1,19 (d, J=3,0 Hz, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,09 (dd, J=7,0, 4,8 Hz, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,95 (d, J=2,0 Hz, 3H).Exemplo 27 Preparação de ácido (1S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(6-metil-1,1-dioxido- 1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

[00236] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (20 mg, 0,030 mmol), 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)-6-metil-1,4-tiazepano (34,4 mg, 0,152 mmol), iodeto de potássio (5,57 mg, 0,034 mmol) e fosfato de potássio (32,4 mg, 0,152 mmol) em acetonitrila (1 mL) foi aquecida a 120°C durante 16 h. A mistura de reação foi esfriada para a RT, inativada com água destilada (3 mL) e extraída com diclorometano (3 x 2 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3 mL), secadas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um sólido branco. Este sólido foi dissolvido em dioxano (1 mL) e hidróxido de sódio (0,305 mL, 0,305 mmol) foi adicionado. A mistura foi aquecida a 80oC durante 3 h. A mistura de reação foi filtrada e purificada por HPLC-Prep com 0%-70% de acetonitrila/água/TFA para fornecer o composto do título como um óleo incolor (6 mg, 25%). LCMS: m/e 755,9 (M+H)+, 1,90 min (Método 3). 1H RMN (500MHz, METANOL-d4) δ 5,35 (br. s., 1H), 5,22 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,86 (br. s., 1H), 4,76 (s, 1H), 4,62-4,51 (m, 1H), 4,51-4,40 (m, 1H), 3,67-3,15 (m, 9H), 3,10-2,75 (m, 4H), 2,57 (d, J=18,1 Hz, 1H), 2,49-2,23 (m, 2H), 2,21-1,14 (m, 26H), 1,78 (s, 3H), 1,22-1,17 (m, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,101,06 (m, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,96 (s, 3H). Exemplo 28 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((carboximetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico.

Etapa 1. Preparação de ácido 2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-9-((S)-4-((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en- 1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a- il)amino)acético. Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,250 g, 0,381 mmol) e ácido 2-oxoacético mono-hidrato (0,053 g, 0,572 mmol) em metanol (1 mL), THF (1 mL) e ácido acético (0,5 mL) foi tratada com complexo de borano 2-picolina (0,061 g, 0,572 mmol). A mistura imediatamente efervesceu sob adição e foi agitada à rt. Após agitação durante 2,5h, a mistura foi tratada com mais complexo de borano 2-picolina (0,061 g, 0,572 mmol) e ácido 2-oxoacético mono-hidrato (0,053 g, 0,572 mmol) e a solução resultante foi agitada à rt durante mais 96 h. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 14) para fornecer o material desejado (0,213 g, 78% de rendimento) como um sal de TFA sólido vítreo incolor. LCMS: m/z 714,4 (M+H)+, 2,63 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 7,59 (s, 2H), 7,38-7,26 (m, 3H), 5,31 (br. s., 1H), 5,21-5,12 (m, 2H), 5,10 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,81 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,61-4,38 (dm, J=47,2 Hz, 2H), 3,50 (s, 2H), 2,70-2,54 (m, 2H), 2,12 (d, J=7,8 Hz, 3H), 2,08-1,87 (m, 6H), 1,84-1,67 (m, 8H), 1,67-1,57 (m, 3H), 1,56-1,40 (m, 6H), 1,40-1,28 (m, 3H), 1,28-1,21 (m, 1H), 1,17 (s, 3H), 1,11-1,00 (m, 4H), 0,93-0,82 (m, 9H).

[00237] Etapa 2. Sal de TFA de ácido 2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((S)-4-((benziloxi) carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)acético (0,050 g, 0,060 mmol) foi combinado com solução aquosa de LiOH 1M (0,483 mL, 0,483 mmol) e uma mistura de THF (0,5 mL) e MeOH (0,5 mL). A mistura resultante foi agitada a 80°C durante 30 min. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 15) para fornecer o composto do título (0,0318 g, 71% de rendimento) como um sal de TFA sólido branco. LCMS: m/z 624,4 (M+H)+, 2,43 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,81 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,60-4,39 (dm, J=47,2 Hz, 2H), 3,43 (s, 2H), 2,65 (td, J=11,0, 5,1 Hz, 1H), 2,55 (d, J=17,9 Hz, 1H), 2,29-2,11 (m, 2H), 2,11-1,86 (m, 7H), 1,85-1,66 (m, 8H), 1,66-1,43 (m, 8H), 1,43-1,24 (m, 4H), 1,18 (s, 4H), 1,14-1,01 (m, 4H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 29 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxílico.

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila.

[00238] Em um frasco de 1,77 gramas com tampa rosqueada revestida com PTFE foram combinados ácido 2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-9-((S)-4-((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1- en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a- il)amino)acético, TFA (0,025 g, 0,030 mmol) com 1,1-dióxido de tiomorfolina (10,20 mg, 0,075 mmol) e HATU (0,029 g, 0,075 mmol) em THF (1 mL). À mistura foi adicionada DIPEA (0,026 mL, 0,151 mmol), e a solução resultante foi agitada de um dia para outro à rt. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 16) para produzir o produto (0,0269 g, 94% de rendimento) como um sal de TFA pó branco. LCMS: m/z 831,5 (M+H)+, 2,50 min (Método 1).

[00239] Etapa 2. Em um frasco de 1,77 gramas com tampa rosqueada revestida com PTFE foram combinados 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-oxoetil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila, TFA (0,0269 g, 0,028 mmol) com solução aquosa de LiOH 1M (0,063 mL, 0,063 mmol) e uma mistura de THF (0,5 mL) e MeOH (0,5 mL). A mistura resultante foi agitada a 70°C durante 30 min e então para 80°C durante 1h. Mais solução aquosa de LiOH 1M (0,080 mL, 0,080 mmol) foi adicionada e a mistura foi aquecida para 70°C durante 20 min e então para 80°C durante 30 min. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 4) para produzir o composto do título (0,0178 g, 66% de rendimento) como um sal de TFA sólido vítreo branco. LCMS: m/z 741,5 (M+H)+, 2,34 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,59-4,40 (dm, J=47,2 Hz, 2H), 4,33-4,21 (m, 2H), 4,13-3,86 (m, 4H), 3,25 (t, J=4,9 Hz, 2H), 3,18 (t, J=4,9 Hz, 2H), 2,76- 2,65 (m, 1H), 2,55 (d, J=16,4 Hz, 1H), 2,29-2,13 (m, 2H), 2,13-2,07 (m, 2H), 2,07-1,91 (m, 5H), 1,91-1,71 (m, 7H), 1,71-1,20 (m, 14H), 1,18 (s, 3H), 1,151,02 (m, 4H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 30 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oxoetil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico.

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR, 7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4-metilpiperidin-1-il)-2- oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila.

[00240] Em um frasco de 1,77 gramas com tampa rosqueada revestida com PTFE foram combinados ácido 2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-9-((S)-4-((benziloxi)carbonil)-4-(fluorometil)ciclo-hex-1-en-1- il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino) acético, TFA (0,025 g, 0,030 mmol) com 4-metilpiperidin-4-ol (8,69 mg, 0,075 mmol) e HATU (0,029 g, 0,075 mmol) em THF (1 mL). À mistura foi adicionada DIPEA (0,026 mL, 0,151 mmol), e a solução resultante foi agitada de um dia para outro à rt. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 16) para produzir o produto (0,0280 g, 100% de rendimento) como um sal de TFA sólido vítreo. LCMS: m/z 811,6 (M+H)+, 2,54 min (Método 1).

[00241] Etapa 2. Sal de TFA de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (0,028 g, 0,030 mmol) foi dissolvido em 1,2-dicloroetano (1 mL) e à solução resultante foram adicionados trietilamina (10,97 μL, 0,079 mmol), terc- butildimetilsilano (0,015 mL, 0,091 mmol) e acetato de paládio(II) (1,699 mg, 7,57 μmol). A mistura foi jateada com nitrogênio e aquecida para 60°C durante 1h. A mistura foi então concentrada via corrente de nitrogênio para um resíduo e então o resíduo foi redissolvido em THF (0,8 mL). À mistura foi adicionado TBAF, 1,0M em THF (0,106 mL, 0,106 mmol) e a mistura resultante foi agitada à rt durante 30 min. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 16) para produzir o composto do título (0,0204 g, 79% de rendimento) como um sal de TFA sólido branco. LCMS: m/z 721,5 (M+H)+, 2,16 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,44 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,25-4,13 (m, 1H), 4,13-3,96 (m, 1H), 3,96-3,80 (m, 1H), 3,53-3,45 (m, 2H), 2,73-2,60 (m, 1H), 2,60-2,49 (m, 1H), 2,28-2,13 (m, 2H), 2,13-1,92 (m, 7H), 1,90-1,71 (m, 7H), 1,71-1,45 (m, 13H), 1,45-1,30 (m, 4H), 1,28 (d, J=4,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,10 (d, J=6,8 Hz, 1H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 31 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil) piperidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico.

[00242] O composto do título foi preparado pelo procedimento igual usado para a preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que 4- (metilsulfonil)piperidina (0,012 g, 0,075 mmol) foi usada no lugar de 4- metilpiperidin-4-ol na Etapa 1. A purificação da mistura bruta da Etapa 2 por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 12) produziu o composto do título (0,0205 g, 70% de rendimento sobre 2 etapas) como um sal de TFA sólido branco. LCMS: m/z 769,4 (M+H)+, 2,33 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,22-5,16 (m, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,72-4,61 (m, 2H), 4,48-4,40 (m, 1H), 4,22-4,06 (m, 1H), 4,02- 3,87 (m, 2H), 3,29-3,13 (m, 1H), 3,00-2,87 (m, 4H), 2,73-2,62 (m, 1H), 2,55 (d, J=17,4 Hz, 1H), 2,28-2,19 (m, 3H), 2,19-2,11 (m, 1H), 2,11-1,92 (m, 7H), 1,89-1,75 (m, 5H), 1,74 (s, 3H), 1,71-1,60 (m, 4H), 1,58 (br. s., 1H), 1,55- 1,41 (m, 5H), 1,40-1,25 (m, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,13-1,08 (m, 1H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 32 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-morfolino-2-oxoetil) amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico.

[00243] O composto do título foi preparado pelo procedimento igual usado para a preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que morfolina (6,58 μL, 0,075 mmol) foi usada no lugar de 4-metilpiperidin-4-ol na Etapa 1. A purificação da mistura bruta da Etapa 2 por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 12) produziu o composto do título (0,0185 g, 74% de rendimento sobre 2 etapas) como um sal de TFA sólido branco. LCMS: m/z 693,4 (M+H)+, 2,35 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) d 5,33 (br. s., 1H), 5,22-5,16 (m, 1H), 4,81 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,48-4,39 (m, 1H), 4,05 (d, J=15,2 Hz, 1H), 3,88 (d, J=15,9 Hz, 1H), 3,78-3,71 (m, 4H), 3,713,64 (m, 2H), 3,53-3,45 (m, 2H), 2,72-2,61 (m, 1H), 2,55 (d, J=16,4 Hz, 1H), 2,19 (d, J=19,3 Hz, 2H), 2,13-2,07 (m, 1H), 2,07-1,90 (m, 6H), 1,88-1,75 (m, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,72-1,56 (m, 5H), 1,56-1,42 (m, 5H), 1,42-1,25 (m, 4H), 1,19 (s, 4H), 1,15-1,08 (m, 1H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 33 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil) piperazin-1-il)-2-oxoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico.

[00244] O composto do título foi preparado pelo procedimento igual usado para a preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que 1- (metilsulfonil)piperazina (0,012 g, 0,075 mmol) foi usada no lugar de 4- metilpiperidin-4-ol na Etapa 1. A purificação da mistura bruta da Etapa 2 por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 12) produziu o composto do título (0,0210 g, 77% de rendimento sobre 2 etapas) como um sal de TFA sólido branco. LCMS: m/z 770,5 (M+H)+, 2,33 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,22-5,16 (m, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,48-4,40 (m, 1H), 4,21 (d, J=16,1 Hz, 1H), 3,96 (d, J=15,9 Hz, 1H), 3,92-3,83 (m, 1H), 3,73 (ddd, J=13,6, 7,3, 3,3 Hz, 1H), 3,67-3,52 (m, 2H), 3,31-3,20 (m, 2H), 2,88 (s, 3H), 2,71 (td, J=11,1, 4,9 Hz, 1H), 2,55 (d, J=15,9 Hz, 1H), 2,29-2,13 (m, 2H), 2,13-1,91 (m, 7H), 1,89-1,71 (m, 7H), 1,71-1,60 (m, 4H), 1,60-1,41 (m, 6H), 1,41-1,21 (m, 4H), 1,19 (s, 4H), 1,131,08 (m, 1H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 34 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-(1,1-dioxido-1,4-tiazepan-4-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8, 11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil) ciclo-hex-3-enocarboxílico

[00245] O composto do título foi preparado pelo procedimento igual usado para a preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que 1,1-dióxido de 1,4-tiazepano (0,011 g, 0,075 mmol) foi usado no lugar de 4-metilpiperidin-4- ol na Etapa 1. A purificação da mistura bruta da Etapa 2 por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 12) produziu o composto do título (0,0188 g, 70% de rendimento sobre 2 etapas) como um sal de TFA sólido branco. LCMS: m/z 755,4 (M+H)+, 2,32 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,49-4,39 (m, 1H), 4,25-4,10 (m, 1H), 4,04-3,91 (m, 2H), 3,91-3,81 (m, 1H), 3,81-3,66 (m, 3H), 3,66-3,48 (m, 1H), 3,41 (t, J=5,9 Hz, 1H), 3,30-3,23 (m, 1H), 2,77-2,64 (m, 1H), 2,55 (d, J=17,9 Hz, 1H), 2,32-2,13 (m, 3H), 2,131,91 (m, 8H), 1,90-1,75 (m, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,71-1,60 (m, 4H), 1,59-1,44 (m, 5H), 1,44-1,29 (m, 4H), 1,19 (d, J=2,2 Hz, 4H), 1,10 (d, J=7,1 Hz, 1H), 1,07 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 35 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiazolidin-3-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxílico.

[00246] O composto do título foi preparado pelo procedimento igual usado para a preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que 1,1-dióxido de tiazolidina (9,15 mg, 0,075 mmol) foi usado no lugar de 4-metilpiperidin-4-ol na Etapa 1. A purificação da mistura bruta da Etapa 2 por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 12) produziu o composto do título (0,0117 g, 45% de rendimento sobre 2 etapas) como um sal de TFA sólido branco. LCMS: m/z 727,4 (M+H)+, 2,31 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=6,1 Hz, 1H), 4,81 (s, 1H), 4,72 (br. s., 1H), 4,64 (br. s., 1H), 4,47-4,40 (m, 1H), 4,19-4,08 (m, 2H), 4,01-3,84 (m, 1H), 3,49 (t, J=6,1 Hz, 1H), 3,41 (t, J=7,2 Hz, 1H), 2,74-2,63 (m, 1H), 2,55 (d, J=17,1 Hz, 1H), 2,30-2,12 (m, 2H), 2,09 (br. s., 1H), 2,07-1,92 (m, 5H), 1,92-1,75 (m, 4H), 1,73 (s, 3H), 1,69-1,44 (m, 9H), 1,44-1,36 (m, 2H), 1,36-1,24 (m, 2H), 1,17 (d, J=4,6 Hz, 3H), 1,14-1,01 (m, 4H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 36 Preparação de ácido (1S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(3-(metilsulfonil) pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico.

[00247] O composto do título foi preparado pelo procedimento igual usado para a preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que 3- (metilsulfonil)pirrolidina (0,011 g, 0,075 mmol) foi usada no lugar de 4- metilpiperidin-4-ol na Etapa 1. A purificação da mistura bruta da Etapa 2 por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 12) produziu o composto do título (0,0117 g, 57% de rendimento sobre 2 etapas) como um sal de TFA sólido branco. LCMS: m/z 755,4 (M+H)+, 2,31 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=5,4 Hz, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,74 (br. s., 1H), 4,47-4,39 (m, 1H), 4,19-3,97 (m, 2H), 3,97-3,81 (m, 3H), 3,81-3,61 (m, 2H), 3,09-3,01 (m, 3H), 2,75-2,46 (m, 4H), 2,30-2,12 (m, 2H), 2,12-1,91 (m, 7H), 1,88-1,75 (m, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,71-1,61 (m, 4H), 1,591,42 (m, 6H), 1,41-1,29 (m, 3H), 1,26 (br. s., 1H), 1,19 (s, 4H), 1,10 (d, J=8,6 Hz, 1H), 1,07 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 37 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioxido-2-tia-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il)-2- oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico.

[00248] O composto do título foi preparado pelo procedimento igual usado para a preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que bromidrato de 2,2-dióxido de (1S,4S)-2-tia-5-azabiciclo[2.2.1]heptano (0,017 g, 0,075 mmol) foi usado no lugar de 4-metilpiperidin-4-ol na Etapa 1. A purificação da mistura bruta da Etapa 2 por HPLC preparativa em fase reversa (Método de HPLC-Prep 12) produziu o composto do título (0,0154 g, 57% de rendimento sobre 2 etapas) como um sal de TFA sólido branco. LCMS: m/z 753,4 (M+H)+, 2,31 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock [sinal de trava para o deutério]) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,22-5,16 (m, 1H), 5,11 (d, J=3,4 Hz, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,76-4,70 (m, 1H), 4,48-4,39 (m, 1H), 4,17-4,07 (m, 1H), 3,99-3,84 (m, 2H), 3,84-3,69 (m, 1H), 3,30-3,13 (m, 2H), 2,75-2,60 (m, 2H), 2,60-2,42 (m, 2H), 2,29-2,12 (m, 2H), 2,12-1,90 (m, 7H), 1,87-1,75 (m, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,72-1,59 (m, 4H), 1,59-1,41 (m, 6H), 1,41-1,21 (m, 4H), 1,21-1,15 (m, 4H), 1,10 (d, J=7,6 Hz, 1H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 38 Preparação de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)carbamoil)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil) ciclo-hex-3-enocarboxílico.

Etapa 1. Preparação de ácido (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-9- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]criseno-3a-carboxílico.

[00249] A uma solução de 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 9-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]criseno-3a-carboxilato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-benzila (1,500 g, 2,216 mmol) em DCE (20 mL) e ácido acético (5 mL) sob uma atmosfera de N2(g) foi adicionado negro de paládio (0,047 g, 0,443 mmol). O vaso de reação foi purgado com H2(g) e a mistura de reação foi agitada sob uma atmosfera de H2(g) durante 5h, filtrada, lavada com DCM (50 mL) e concentrada para um sólido branco. O material bruto foi triturado com o mínimo de DCM e hexanos, concentrado para uma pasta fluida branca, filtrado e lavado com hexanos para produzir a 1a colheita de produto desejado. O filtrado líquido foi adicionalmente concentrado para pasta fluida branca, filtrado e lavado com hexanos para produzir uma segunda colheita. Ambas as colheitas foram combinadas e secadas sob vácuo para produzir ácido (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-9-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]criseno-3a- carboxílico (1,1 g, 1,875 mmol, 85% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: m/e 587,2 (M+H)+, 3,23 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,57 (d, J=3,9 Hz, 1H), 4,76 (br. s., 1H), 4,63 (br. s., 1H), 3,03 (br. s., 1H), 2,46-2,10 (m, 3H), 2,00 (d, J=6,8 Hz, 2H), 1,81-1,63 (m, 6H), 1,59-1,32 (m, 12H), 1,25 (br. s., 3H), 1,13 (br. s., 3H), 1,02 (br. s., 3H), 1,00 (br. s., 6H), 0,93 (br. s., 3H). 13C RMN (101MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 182,0, 155,4, 150,3, 113,7, 109,8, 56,4, 53,3, 49,2, 48,9, 46,9, 42,5, 40,6, 40,3, 38,5, 37,9, 37,1, 36,4, 33,3, 32,1, 30,6, 29,7, 27,5, 25,5, 21,4, 19,4, 19,39-19,33, 18,9, 16,2, 15,7, 14,6. 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -74,82 (br. s., 3F).Etapa 2. Preparação de trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)carbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-ila.

[00250] A uma solução de ácido (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-9- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]criseno-3a-carboxílico (0,500 g, 0,852 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (0,520 mL, 2,98 mmol) em DCM (10 mL) foram adicionados HATU (0,389 g, 1,023 mmol) e 1,1-dióxido de 4- (2-aminoetil)tiomorfolina (0,182 g, 1,023 mmol). A reação foi agitada à rt (10:25 am). Após 2h, a reação foi diluída com DCM e lavada com 20 mL de solução aquosa de ácido cítrico 5%. A camada aquosa foi extraída com DCM (25 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com Na2CO310%, salmoura, secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para um óleo viscoso transparente. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, cartucho Isco de 24 g, eluído com DCM:MeOH 97:3) e secado sob vácuo para produzir trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)carbamoil)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-ila (394 mg, 0,527 mmol, 61,9% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: m/e 747,5 (M+H)+, 2,75 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 5,87 (t, J=5,4 Hz, 1H), 5,56 (dd, J=6,6, 1,7 Hz, 1H), 4,74 (d, J=1,5 Hz, 1H), 4,61 (s, 1H), 3,37 (q, J=6,0 Hz, 2H), 3,15-3,07 (m, 1H), 3,05 (s, 7H), 2,66 (t, J=6,2 Hz, 2H), 2,56-2,46 (m, 1H), 2,16 (dd, J=17,1, 6,8 Hz, 1H), 1,97-1,88 (m, 2H), 1,79-1,71 (m, 3H), 1,69 (s, 3H), 1,66-1,54 (m, 3H), 1,521,30 (m, 10H), 1,25-1,16 (m, 2H), 1,12 (s, 3H), 1,10-1,06 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,91 (s, 3H). 13C RMN (101MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 176,3, 155,3, 150,6, 113,7, 109,6, 55,7, 55,6, 53,3, 51,3, 50,7, 50,0, 49,0, 46,8, 42,5, 40,6, 40,2, 38,6, 38,4, 37,9, 37,8, 36,3, 36,3, 33,8, 33,5, 30,8, 29,4, 27,4, 25,5, 21,5, 19,5, 19,4, 19,0, 16,2, 15,9, 14,6. 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -74,83 (s, 3F).Etapa 3. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)carbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-benzila, TFA.

[00251] Trifluorometanossulfonato de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)carbamoil)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-ila (250 mg, 0,335 mmol), 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (150 mg, 0,402 mmol) e pré- catalisador de Buchwald 13 (92371-003-01) (10,53 mg, 0,013 mmol) foram combinados. O vaso de reação foi evacuado durante 15 mins em um forno a vácuo então cheio de novo com uma atmosfera de N2(g). O frasco de reação foi carregado com THF (4 mL) pré-aspergido com N2(g) e solução aquosa de K3PO4 0,5 M (1,673 mL, 0,837 mmol). A mistura de reação foi aspergida com N2(g) e agitada a 72°C durante 15h e deixada esfriar para a RT de um dia para outro. A reação foi diluída com EtOAc (50 mL) e lavada com K3PO4 1,5N. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (50 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura, secada com MgSO4, filtrada e concentrada para um óleo viscoso marrom. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (gel de sílica, 12g, eluído com DCM:MeOH 97:3) e secado para produzir o produto mas ainda contaminado com algumas impurezas. Este material foi adicionalmente purificado por HPLC-Prep em fase reversa (Método de HPLC-Prep 8) e secado sob vácuo para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)carbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila, TFA (161 mg, 0,166 mmol, 49,6% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: m/e 845,7 (M+H)+, 3,25 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,39-7,30 (m, 5H), 6,78 (br. s., 1H), 5,32 (br. s., 1H), 5,24-5,14 (m, 2H), 5,11 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,604,54 (m, 1H), 4,50-4,40 (m, 1H), 3,82-3,57 (m, 6H), 3,46 (br. s., 4H), 3,25 (t, J=5,6 Hz, 2H), 3,05 (td, J=11,0, 3,9 Hz, 1H), 2,60 (d, J=17,1 Hz, 1H), 2,412,31 (m, 1H), 2,24-2,03 (m, 4H), 2,02-1,90 (m, 3H), 1,88-1,72 (m, 3H), 1,69 (s, 3H), 1,66-1,61 (m, 1H), 1,60-1,46 (m, 4H), 1,46-1,18 (m, 10H), 1,05 (d, J=8,8 Hz, 2H), 0,97 (s, 3H), 0,92 (s, 6H), 0,87 (s, 3H), 0,84 (s, 3H).

[00252] Etapa 4. A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)carbamoil)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila, TFA (96 mg, 0,100 mmol) em THF (1,0 mL) e MeOH (0,5 mL) foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio 1N (0,500 mL, 0,500 mmol) e agitada a 60°C (11:25 AM). Após 2h, LC/MS mostrou que a reação estava completa e ela foi deixada esfriar para a RT. A mistura de reação foi purificada por HPLC-Prep em fase reversa (Método de HPLC-Prep 12) e secada sob vácuo para produzir o ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)carbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (66,1 mg, 0,075 mmol, 75% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: m/e 755,5 (M+H)+, 2,69 min (Método 1). 1H RMN (400MHz, CDCl3:METANOL-d4 1:1) δ 5,30 (br. s., 1H), 5,16 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,69 (d, J=1,7 Hz, 1H), 4,45-4,36 (m, 1H), 3,09 (s, 6H), 3,06-3,01 (m, 1H), 2,67 (t, J=6,4 Hz, 2H), 2,57-2,45 (m, 2H), 2,30-2,19 (m, 1H), 2,12 (br. s., 1H), 2,082,04 (m, 1H), 2,02 (br. s., 1H), 2,00-1,92 (m, 2H), 1,91-1,81 (m, 1H), 1,801,69 (m, 3H), 1,67 (s, 3H), 1,63-1,52 (m, 3H), 1,50-1,30 (m, 10H), 1,29-1,14 (m, 5H), 1,09-0,99 (m, 2H), 0,97 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,94 (br. s., 3H), 0,89 (s, 3H), 0,84 (s, 3H). ). 13C RMN (101MHz, CDCl3:METANOL-d4 1:1) δ 178,7, 178,0, 151,6, 148,9, 140,0, 122,3, 122,2, 110,0, 78,6, 56,6, 56,2, 53,9, 51,7, 51,5, 50,9, 50,4, 47,6, 46,2, 46,1, 43,2, 42,6, 41,4, 39,0, 38,7, 38,3, 37,1, 36,9, 34,57-34,44, 33,9, 31,6, 30,3, 30,2, 29,9, 29,8, 27,1, 26,6, 22,2, 22,1, 20,45-20,36 (m, 1C), 19,8, 16,9, 16,5, 15,1. 19F RMN (376MHz, CDCl3:METANOL-d4 1:1) δ -76,79 (s, 3F), -226,23 (t, J=47,7 Hz, 1F). Exemplo 39 e Exemplo 40: Preparação de ácido (1S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1- trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (isômero A) e de ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil) ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (isômero B).

Etapa 1. 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((1,1,1- trifluoro-3-nitropropan-2-il)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (1S)-benzila.

[00253] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (190 mg, 0,290 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado (1E)-3,3,3- trifluoro-1-nitropro-1-eno (64,5 mg, 0,434 mmol) e agitada à rt. Após 16h, a reação foi concentrada para um óleo viscoso marrom e que foi purificado por cromatografia em coluna flash (SiO2, cartucho Isco de 24 g, eluído com Hex:EtOAc 9:1) e secado sob vácuo para produzir 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-3a-((1,1,1-trifluoro-3-nitropropan-2-il)amino)-2,3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (1S)-benzila (171,2 mg, 0,215 mmol, 74,2% de rendimento) como um sólido branco. LCMS: m/e 797,5 (M+H)+, 4,55 min (Método 10).Etapa 2. 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino- 1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (1S)-benzila.

[00254] A uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR, 7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a- ((1,1,1-trifluoro-3-nitropropan-2-il)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (1S)-benzila (26 mg, 0,033 mmol) em THF (1 mL) foi adicionado HCl 1N (0,489 mL, 0,489 mmol). À pasta fluida resultante foi adicionada solução de zinco de Rieze 1,5N em THF (0,217 mL, 0,326 mmol). À pasta fluida cinza resultante foi adicionado MeOH (1 mL). A reação tornou-se uma solução homogênea e foi agitada à rt de um dia para outro. Após 15h, a reação foi concentrada. O resíduo resultante foi dissolvido com THF (5 mL), neutralizado com K3PO4 1,5 [sic] (5 mL) e a mistura foi extraída com 2 x 25 mL EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura, secada com MgSO4, filtrada e concentrada para espuma branca. O material foi usado como um material bruto na etapa seguinte. LCMS: m/e 767,6 (M+H)+, 4,96 min (Método 10).Etapa 3. Ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxílico, TFA (isômero A) e ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR, 7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2- il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (isômero B).

[00255] A uma solução de material bruto, 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1- trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (1S)- benzila (25 mg, 0,033 mmol), dos experimentos 99699-178 em THF (1 mL) e MeOH (0,5 mL) foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio 1N (0,114 mL, 0,114 mmol). A reação foi agitada a 65°C. Após 4h, a reação foi deixada esfriar para a RT e foi purificada por HPLC-Prep em fase reversa (Método de HPLC-Prep 13) e secada sob vácuo para produzir o isômero A, ácido (1S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1- trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA e o isômero B, ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA; ambos como um sólido branco.

[00256] Exemplo 39: Isômero A: LCMS: m/e 675,8 (M+H)+, 4,29 min (Método 11). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d :METANOL-d4 1:1) δ 5,31 (br. s., 1H), 5,16 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,72 (br. s., 1H), 4,67 (br. s., 1H), 4,54-4,49 (m, 2H), 4,45-4,38 (m, 2H), 4,25 (br. s., 2H), 3,73 (t, J=6,5 Hz, 2H), 3,59 (br. s., 1H), 3,15-3,05 (m, 1H), 3,03-2,96 (m, 1H), 2,69 (td, J=11,0, 5,6 Hz, 1H), 2,53 (d, J=18,3 Hz, 1H), 2,17 (d, J=18,6 Hz, 2H), 2,05 (d, J=18,1 Hz, 1H), 2,01-1,90 (m, 2H), 1,89-1,84 (m, 2H), 1,82-1,71 (m, 4H), 1,68 (s, 3H), 1,66-1,61 (m, 1H), 1,56 (d, J=16,4 Hz, 1H), 1,44 (d, J=6,4 Hz, 6H), 1,38-1,22 (m, 5H), 1,20 (s, 1H), 1,07 (br. s., 2H), 1,04 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,91 (s, 2H), 0,85 (s, 3H). 19F RMN-1H Desacoplado (376MHz, CLOROFÓRMIO-d :METANOL-d4 1:1) δ -73,36 (s, 3F), -76,38 (s, 3F), -226,33 (s, 1F). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d :METANOL-d4 1:1) δ -73,37 (d, J=6,9 Hz, 3F), -76,39 (s, 3F), -226,14-226,54 (m, 1F).

[00257] Exemplo 40: Isômero B: . LCMS: m/e 675,7 (M+H)+, 4,63 min (Método 11). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d :METANOL-d4 1:1) δ 5,30 (br. s., 1H), 5,16 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,70 (s, 1H), 4,46-4,36 (m, 2H), 3,72 (t, J=6,6 Hz, 1H), 3,64 (dd, J=7,2, 3,5 Hz, 1H), 3,24-3,15 (m, 1H), 3,14-3,04 (m, 1H), 2,62-2,46 (m, 2H), 2,30-2,11 (m, 2H), 2,10-2,00 (m, 2H), 1,99-1,89 (m, 4H), 1,86 (dt, J=6,7, 3,2 Hz, 1H), 1,80-1,70 (m, 3H), 1,68 (s, 3H), 1,66 (br. s., 1H), 1,64-1,57 (m, 1H), 1,55-1,48 (m, 3H), 1,47-1,38 (m, 5H), 1,38-1,29 (m, 2H), 1,28-1,18 (m, 2H), 1,12 (br. s., 2H), 1,07 (s, 3H), 1,04 (br. s., 1H), 0,97 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d :METANOL-d4 1:1) δ -73,84 (s, 3F), - 76,35 (s, 5F), -226,26 (s, 1F). Exemplo 41 e Exemplo 42 Preparação de ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2- il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (Isômero A) e de ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1- dioxidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (Isômero B).

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (1S)-benzila.

[00258] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (1S)-benzila (107 mg, 0,139 mmol) em 2-Propanol (3 mL) foi adicionada divinilsulfona (0,020 mL, 0,167 mmol) e agitada a 85°C. Após 22h, a reação foi esfriada para a RT e concentrada para produzir 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (1S)-benzila como um óleo marrom viscoso e ele foi usado diretamente na etapa seguinte. Etapa 2. Preparação de ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan- 2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (Isômero A) e de ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1- dioxidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxílico, TFA (Isômero B).

[00259] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (1S)-benzila foi dissolvido em THF (1 mL) e MeOH (1 mL) e tratado com uma solução de hidróxido de lítio 1N (0,697 mL, 0,697 mmol), aquecido para 65°C durante 4h e deixado esfriar para a RT. O conteúdo da reação foi submetido à purificação por HPLC em fase reversa usando o Método de HPLC-Prep abaixo e secado sob vácuo para produzir o isômero A como ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (32 mg, 0,035 mmol, 24,98% de rendimento) e o isômero B como ácido (1S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1- dioxidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxílico, TFA (24,3 mg, 0,026 mmol, 18,97% de rendimento), ambos como um sólido branco.

[00260] Exemplo 41: Isômero A: LCMS: m/e 795,6 (M+H)+, 4,11 min (Método 11). 1H RMN (400MHz, CDCk:METANOL-d4 1:1) δ 5,30 (br. s., 1H), 5,16 (t, J=4,0 Hz, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,70 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,46-4,36 (m, 2H), 4,21-4,06 (m, 1H), 3,23-2,94 (m, 10H), 2,88-2,76 (m, 1H), 2,70-2,46 (m, 3H), 2,44-2,27 (m, 1H), 2,26-2,12 (m, 3H), 2,11-2,01 (m, 2H), 2,00-1,85 (m, 4H), 1,81-1,69 (m, 3H), 1,68 (s, 1H), 1,66 (s, 2H), 1,61 (d, J=11,7 Hz, 1H), 1,58-1,51 (m, 1H), 1,51-1,34 (m, 7H), 1,34-1,18 (m, 4H), 1,11-1,05 (m, 1H), 1,04 (s, 2H), 0,98 (s, 1,5H), 0,96 (s, 1,5H), 0,94 (s, 6H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 1,5H), 0,85 (br. s., 1,5H).

[00261] Exemplo 42: Isômero B: LCMS: m/e 795,6 (M+H)+, 4,19 min (Método 11). 1H RMN (400MHz, CDCl3:METANOL-d4 1:1) δ 5,30 (br. s., 1H), 5,20-5,14 (m, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,77-4,67 (m, 1H), 4,60-4,48 (m, 3H), 3,86 (d, J=3,4 Hz, 1H), 3,21-2,99 (m, 9H), 2,96-2,71 (m, 2H), 2,70-2,57 (m, 2H), 2,52 (d, J=17,4 Hz, 1H), 2,34-2,12 (m, 3H), 2,05 (d, J=19,1 Hz, 2H), 2,01-1,89 (m, 3H), 1,81-1,67 (m, 4H), 1,66 (s, 3H), 1,62-1,54 (m, 2H), 1,541,36 (m, 7H), 1,35-1,12 (m, 5H), 1,07 (br. s., 1H), 1,05 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,95 (s, 1H), 0,93 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,84 (s, 3H). Exemplo 43 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, 2 TFA.

Etapa 1. 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila.

[00262] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (0,100 g, 0,152 mmol) em DCE (1 mL) foi adicionada divinilsulfona (0,037 mL, 0,305 mmol) e agitada a 65°C durante 15h e esfriada para a RT. LCMS: m/e 774,5 (M+H)+, 4,53 min (Método 10).

[00263] À mistura de reação acima foi adicionado 1,1-dióxido de tiomorfolina (0,041 g, 0,305 mmol), a mistura foi agitada a 85°C durante 8h e deixada esfriar de volta para a rt. A mistura de reação foi concentrada e secada sob vácuo para produzir 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila bruto como um óleo marrom escuro viscoso que foi usado como produto bruto na etapa seguinte. LCMS: m/e 909,8 (M+H)+, 4,79 min (Método 10).Etapa 2. Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, 2 TFA.

[00264] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)sulfonil) etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila bruto (139 mg, 0,153 mmol) em THF (1 mL) e MeOH (0,5 mL) foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio 1N (0,535 mL, 0,535 mmol). A reação foi agitada a 65°C durante 3h e esfriada para a RT. O conteúdo da reação foi purificado por HPLC-Prep em fase reversa (Método de HPLC-Prep 12) e secado sob vácuo para produzir o ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxílico, 2 TFA (66,7 mg, 0,061 mmol, 39,6% de rendimento em relação às três etapas de reação) como um sólido branco. LCMS: m/e 819,7 (M+H)+, 3,90 min (Método 12). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 5,34 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,48 (s, 1H), 4,35-4,24 (m, 1H), 4,07 (br. s., 3H), 3,78 (t, J=6,6 Hz, 1H), 3,67-3,47 (m, 4H), 3,32 (dt, J=14,7, 5,6 Hz, 1H), 3,20-3,00 (m, 10H), 2,86-2,76 (m, 1H), 2,56 (d, J=17,4 Hz, 1H), 2,26-2,16 (m, 3H), 2,15-2,05 (m, 3H), 2,03-1,92 (m, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,69 (br. s., 1H), 1,63-1,49 (m, 4H), 1,44 (br. s., 4H), 1,37 (d, J=11,0 Hz, 1H), 1,30 (br. s., 2H), 1,10 (s, 3H), 1,06 (d, J=7,6 Hz, 2H), 1,03 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,88 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -75,76 (s, 6F), -224,87 (s, 1F). Seção 2 Métodos de LC/MS Método de LC/MS 2-1 Condições: gradiente de 0% de B 100% de B durante 2 minutos; mantido a 100% de B durante 1 min Solvente A: 90% de água, 10% de metanol, 0,1% de TFA Solvente B: 10% de água, 90% de metanol, 0,1% de TFA Coluna: Fenomenex Luna C18, 2,0 mm x 50 mm, 3 μm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de LC/MS 2-2 Condições: gradiente de 0% de B 100% de B durante 4 minutos; mantido a 100% de B durante 1 min Solvente A: 90% de água, 10% de metanol, 0,1% de TFA Solvente B: 10% de água, 90% de metanol, 0,1% de TFA Coluna: Fenomenex Luna C18, 3 mm, 2,0 mm x 50 mm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de LC/MS 2-3 Condições: gradiente de 0% de B 100% de B durante 4 minutos; mantido a 100% de B for 2 min Solvente A: 90% de água, 10% de metanol, 0,1% de TFA Solvente B: 10% de água, 90% de metanol, 0,1% de TFA Coluna: Fenomenex Luna C18, 3 mm, 2,0 mm x 50 mm Vazão: 0,8 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Métodos de HPLC-Prep Método de HPLC-Prep 2-1 Condições: gradiente de 30% de B 100% de B durante 20 minutos; mantido a 100% de B durante 4 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Xbridge 30 mm x 100 mm, 5 μm Vazão: 40 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC-Prep 2-2 Condições: veja a seção experimental Solvente A: acetonitrila: água 5:95 com acetato de amônio 10 mm Solvente B: acetonitrila: água 95:5 com acetato de amônio 10 mm Coluna: Waters Xbridge C18, 19mm x 200 mm, 5μm Vazão: 20 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC-Prep 2-3 Condições: gradiente de 50% B 100% de B durante 20 minutos; mantido a 100% de B durante 5 min Solvente A: acetonitrila: água 5:95 com 0,1% ácido trifluoroacético Solvente B: acetonitrila: água 95:5 com 0,1% ácido trifluoroacético Coluna: Xbridge C18, 19mm x 200 mm, partículas de 5μm Vazão: 20 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC-Prep 2-4 Condições: gradiente de 10% de B 100% de B durante 20 minutos; mantido a 100% de B durante 5 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire 30 mm x 150 mm, 5μm Vazão: 40 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC-Prep 2-5 Condições: gradiente de 30% de B 100% de B durante 20 minutos; mantido a 100% de B durante 5 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire 30 mm x 150 mm, 5μm Vazão: 40 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC-Prep 2-6 Condições: gradiente de 10% de B 100% de B durante 20 minutos; mantido a 100% de B for 2 min Solvente A: 10% de metanol, 90% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 90% de metanol, 10% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire 30 mm x 100 mm, 5μm Vazão: 40 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Métodos de HPLC Analítica Método de HPLC Analítica 2-1 Condições: gradiente de10% de B 100% de B durante 15 min; mantido a 100% de B durante 10 min Solvente A: 10% de metanol, 90% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 90% de metanol, 10% de água, 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire C18, 4,6mm x 150 mm, 3,5mm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Analítica 2-2 Condições: gradiente de 10% de B 100% de B durante 15 min; mantido a 100% de B durante 10 min Solvente A: 10% de metanol, 90% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 90% de metanol, 10% de água, 0,1% de TFA Coluna: Waters Xbridge Phenyl, 4,6mm x 150 mm, 3,5mm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Analítica 2-3 Gradiente: 0 100% de B durante 3 minutos, então a 0,5 minuto mantido a 100% de B Solvente A: acetonitrila:água 5:95 com acetato de amônio 10 mm Solvente B: acetonitrila:água 95:5 com acetato de amônio 10 mm Coluna: Waters BEH C18, 2,0 mm x 50 mm, partículas de 1,7μm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Temperatura: 50°C Método de HPLC Analítica 2-4 Gradiente: 0 100% de B durante 3 minutos, então a 0,5 minuto mantido a 100% de B Solvente A: acetonitrila:água 5:95 com acetato de amônio 10 mm Solvente B: acetonitrila:água 95:5 com acetato de amônio 10 mm Coluna: Waters BEH C18, 2,0 mm x 50 mm, partículas de 1,7μm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Temperatura: 50°C Método de HPLC Analítica 2-5 Condições: gradiente de 10% de B 100% de B durante 15 min; mantido a 100% de B durante 10 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água, 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire C18, 3,0 mm x 150 mm, 3,5μm Vazão: 0,5 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Analítica 2-6 Condições: gradiente de 10% de B 100% de B durante 15 min; mantido a 100% de B durante 10 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água, 0,1% de TFA Coluna: Waters Xbridge Phenyl, 3,0 mm x 150 mm, 3,5μm Vazão: 0,5 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Exemplo 2-1 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((3-hidroxi-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-metilbenzenossulfonato de 3-hidroxi-3-metilbutila

[00265] A uma solução de 3-metilbutano-1,3-diol (1,00 g, 9,60 mmol) em piridina (10 mL) a 0°C foi adicionado cloreto de p-toluenossulfonila (2,014 g, 10,56 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 16 h enquanto se permitia que a mistura de reação se aquecesse lentamente para a temperatura ambiente por dissipação do banho de gelo-água. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo acetato de etila (100 mL). A camada orgânica foi lavada com HCl 1N (3 x 50 mL). A camada orgânica foi então lavada com solução saturada de NaHCO3 (50 mL), salmoura (50 mL), secada com MgSO4, filtrada, e concentrada. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% 50% de acetato de etila em hexanos; coluna de 220g) para produzir 4-metilbenzenossulfonato de 3- hidroxi-3-metilbutila (2,03 g, 7,86 mmol, 82% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,85-7,78 (m, 2H), 7,37 (dd, J=8,5, 0,8 Hz, 2H), 4,23 (t, J=6,9 Hz, 2H), 2,47 (s, 3H), 1,88 (t, J=6,9 Hz, 2H), 1,24 (s, 6H); LC/MS: O produto não ionizou, tR = 1,78 min (Método 2-1).Etapa 2. Preparação de 4-bromo-2-metilbutan-2-ol

[00266] A uma solução de 4-metilbenzenossulfonato de 3-hidroxi-3- metilbutila (400 mg, 1,548 mmol) em THF (15 mL) à temperatura ambiente foi adicionado brometo de lítio (403 mg, 4,65 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL) e água (10 mL). A camada aquosa foi extraída com éter (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (20% 40% de acetato de etila em hexanos; coluna de 80 g) para produzir 4-bromo-2- metilbutan-2-ol (231 mg, 1,383 mmol, 89% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,55-3,49 (m, 2H), 2,152,09 (m, 2H), 1,28 (s, 6H). Etapa 3. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((3-hidroxi-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00267] A uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (70 mg, 0,107 mmol), 4-bromo-2-metilbutan-2-ol (24,96 mg, 0,149 mmol), fosfato de potássio tribásico (68,0 mg, 0,320 mmol), e iodeto de potássio (24,80 mg, 0,149 mmol) em um frasco secado em forno foi adicionada acetonitrila (0,8 mL). A tampa foi vedada e a mistura de reação foi aquecida a 120°C durante 2 h. Durante este tempo o solvente foi evaporado. Mais acetonitrila (0,8 mL) foi adicionada e a mistura de reação foi aquecida durante 1 h a 120°C. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (5 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1 / 90% hexanos 30% de acetona:metanol 9:1 / 70% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((3-hidroxi-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (56,6 mg, 0,076 mmol, 72% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,42-7,31 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,235,16 (m, 2H), 5,13 (dd, J=6,2, 1,8 Hz, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,63-4,55 (m, 2H), 4,52-4,45 (m, 1H), 2,86-2,78 (m, 1H), 2,77-2,68 (m, 1H), 2,65-2,53 (m, 2H), 2,18-0,86 (m, 29H), 1,69 (s, 3H), 1,27 (s, 6H), 1,07 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 742,6 [(M+H)+, calculada para C49H73FNO3 742,6], tR = 4,86 min (Método 2-3).

[00268] Etapa 4. Uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-hidroxi-3- metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (72 mg, 0,097 mmol) em 1,4-dioxano (1,4 mL) e EtOH (0,7 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,243 mL, 0,485 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir o ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((3-hidroxi-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (55,4 mg, 74% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,27-5,21 (m, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,61 (dt, J=10,8, 9,0 Hz, 1H), 4,51 (dt, J=10,8, 9,2 Hz, 1H), 3,46-3,38 (m, 1H), 3,38-3,30 (m, 1H), 2,91-2,83 (m, 1H), 2,61 (d, J=17,1 Hz, 1H), 2,321,09 (m, 29H), 1,75 (s, 3H), 1,36 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,94 (s, 3H); LC/MS m/e 652,5 [(M+H)+, calculada para C42H67FNO3 652,5], tR = 4,40 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,97 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,16 min.Exemplo 2-2 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroxi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-metilbenzenossulfonato de 2-hidroxi-2-metilpropila

[00269] A uma solução de 2-metilpropano-1,2-diol (415 mg, 4,60 mmol) em piridina (5 mL) a 0°C foi adicionado cloreto de p-toluenossulfonila (966 mg, 5,07 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 16 h enquanto se permitia que a mistura de reação se aquecesse lentamente para a temperatura ambiente por dissipação do banho de gelo-água. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo acetato de etila (50 mL). A camada orgânica foi lavada com HCl 1N (3 x 25 mL). A camada orgânica foi então lavada com solução saturada de NaHCO3 (25 mL), salmoura (25 mL), secada com MgSO4, filtrada, e concentrada. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% 50% de acetato de etila emhexanos; coluna de 120 g) para produzir 4-metilbenzenossulfonato de 2- hidroxi-2-metilpropila (1,01 g, 4,13 mmol, 90% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,86-7,78 (m, 2H), 7,38 (d, J=8,0 Hz, 2H), 3,86 (s, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,24 (s, 6H); LC/MS: O produto não ionizou, tR = 1,70 min (Método 2-1).Etapa 2. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroxi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8, 8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00270] A uma solução de 4-metilbenzenossulfonato de 2-hidroxi-2- metilpropila (22,35 mg, 0,091 mmol) em acetonitrila (0,7 mL) foi adicionado 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (50 mg, 0,076 mmol), fosfato de potássio tribásico (32,4 mg, 0,152 mmol, 2 eq), e iodeto de potássio (63,27 mg, 0,381 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 100°C durante 6 h. Mais 4- metilbenzenossulfonato de 2-hidroxi-2-metilpropila (56 mg, 0,229 mmol, 3 eq) e fosfato de potássio tribásico (16 mg, 0,076 mmol, 1 eq) foi então adicionada e a mistura de reação foi aquecida a 120°C durante 22 h. Mais 4- metilbenzenossulfonato de 2-hidroxi-2-metilpropila (37 mg, 0,153 mmol, 2 eq), fosfato de potássio tribásico (32 mg, 0,152 mmol, 2 eq), e iodeto de potássio (28 mg, 0,168 mmol, 2,2 eq) foram então adicionados e a mistura de reação foi aquecida a 120°C durante mais 18 h. A mistura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (10 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secada com MgSO4, filtrada, e concentrada. O produto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional: LC/MS m/e 728,6 [(M+H)+, calculada para C48H71FNO3 728,5], tR = 4,72 min (Método 2-2).

[00271] Etapa 3. Uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroxi-2- metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (55 mg, 0,076 mmol) em 1,4-dioxano (0,5 mL) e EtOH (0,25 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (0,189 mL, 0,378 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-1- (fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- hidroxi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (2,7 mg, 5% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,65-4,57 (m, 1H), 4,55-4,46 (m, 1H), 3,51 (d, J=12,7 Hz, 1H), 3,06 (d, J=12,4 Hz, 1H), 3,03-2,95 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,9 Hz, 1H), 2,32-1,07 (m, 27H), 1,75 (s, 3H), 1,43 (s, 3H), 1,41 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 738,6 [(M+H)+, calculada para C41H65FNO3 738,5], tR = 4,29 min (Método 2-2). HPLC (Método 2-1): tR = 18,88 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,24 min.Exemplo 2-3 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((4-hidroxi-4-metilpentil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 5,5-dimetiltetra-hidrofuran-2-ol

[00272] DIBAL (1,314 mL, 1,314 mmol) foi adicionado a uma solução de 5,5-dimetildi-hidrofuran-2(3H)-ona (100 mg, 0,876 mmol) em THF (10 mL) sob nitrogênio a -78°C. A mistura de reação foi agitada a -78°C durante 3 h. Uma solução de sal de Rochelle foi adicionado à mistura de reação, que foi agitada à rt durante 30 min. A mistura de reação foi particionada entre EtOAc and água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada com sulfato de magnésio e concentrada sob vácuo para produzir o produto bruto (35 mg, 0,301 mmol, 34% de rendimento). 1H-RMN do produto mostrou que ele estava em equilíbrio entre 4-hidroxi-4-metilpentanal e 5,5-dimetiltetra- hidrofuran-2-ol, com 5,5-dimetiltetra-hidrofuran-2-ol (35 mg, 0,301 mmol, 34% de rendimento) sendo a forma predominante. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,51 (d, J=4,8 Hz, 1H), 2,90 (br. s., 1H), 2,03-1,94 (m, 2H), 1,82-1,64 (m, 2H), 1,43 (s, 3H), 1,22 (s, 3H).Etapa 2. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((4-hidroxi-4-metilpentil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00273] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (25 mg, 0,038 mmol) e 5,5-dimetiltetra-hidrofuran-2-ol (13,28 mg, 0,114 mmol) em DCE (0,6 mL) foi adicionado isopropóxido de titânio(IV) (0,018 mL, 0,061 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (16,15 mg, 0,076 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à rt durante 16 h. A mistura de reação foi particionada entre DCM and solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada com sulfato de magnésio e concentrada sob vácuo para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR, 7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((4-hidroxi-4-metilpentil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila (28,8 mg, 0,038 mmol, 100% de rendimento). O produto bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LC/MS m/e 756,7 [(M+H)+, calculada para C50H74FNO3 756,6] tR = 2,66 min (Método 2-1).

[00274] Etapa 3. Hidróxido de sódio (0,048 mL, 0,190 mmol, 4 N aq) foi adicionado a uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((4-hidroxi-4-metilpentil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila bruto (28,7 mg, .038 mmol) em dioxano (1 mL) e etanol (0,500 mL). A mistura de reação foi agitada a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e o material bruto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-2, gradiente: 60%-100% de B durante 10 minutos, então a 15 minutos mantido a 100%) para produzir ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((4-hidroxi-4-metilpentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (2,8 mg, 4,08 μmol, 11% de rendimento); LC/MS m/e 666,6 [(M+H)+, calculada para C43H68FNO3 666,5] tR = 2,40 min (Método 2-1); HPLC (Método 2-3): tR = 2,76 min; HPLC (Método 2-4): tR = 2,11 min.Exemplo 2-4 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((3-etil-3-hidroxipentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 3-etil-hex-5-en-3-ol

[00275] A uma solução de brometo de alilmagnésio (13,93 mL, 13,93 mmol) em THF (10 mL) a 0°C foi adicionada pentan-3-ona (400 mg, 4,64 mmol). O banho de esfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi esfriada em um banho de gelo-água e foi inativada pela adição de solução aquosa saturada de NH4Cl (20 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (4 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (25 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir 3-etil-hex-5-en-3-ol (595 mg, 4,64 mmol, 100% de rendimento) como um óleo incolor. O produto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,86 (ddt, J=16,7, 10,6, 7,5 Hz, 1H), 5,21-5,07 (m, 2H), 2,23 (dt, J=7,4, 1,2 Hz, 2H), 1,57-1,43 (m, 4H), 0,90 (t, J=7,5 Hz, 6H)Etapa 2. Preparação de 3-etil-3-hidroxipentanal

[00276] A uma solução de 3-etil-hex-5-en-3-ol (595 mg, 4,64 mmol) em dioxano (30 mL) e água (7,50 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (1,081 mL, 9,28 mmol), tetróxido de ósmio (2,5% em t-BuOH) (1,165 mL, 0,093 mmol), e periodato de sódio (3970 mg, 18,56 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente à medida que o banho de gelo-água fundia-se sob agitação durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (20 mL) e solução aquosa saturada de NaHCO3 (30 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (0% 8% de metanol em CH2Cl2; coluna de 40 g) para produzir 3-etil-3- hidroxipentanal (217 mg, 1,667 mmol, 36% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,85 (t, J=2,4 Hz, 1H), 3,66 (s, 2H), 1,65-1,41 (m, 4H), 0,86 (t, J=7,5 Hz, 6H).Etapa 3. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((3-etil-3-hidroxipentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00277] Isopropóxido de titânio(IV) (0,036 mL, 0,122 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (50 mg, 0,076 mmol) e 3-etil-3-hidroxipentanal (15,88 mg, 0,122 mmol) em DCE (0,6 mL). A mistura de reação foi agitada à rt durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (32,3 mg, 0,152 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 3 dias. A mistura de reação foi particionada entre solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e CH2Cl2. A camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com sulfato de magnésio e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (0% de acetona/metanol 9:1/100% de hexanos 40% de acetona/metanol 9:1 /60% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-etil-3- hidroxipentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (14 mg, 0,018 mmol, 24% de rendimento) como um óleo incolor: LC/MS (ESI) m/e 770,6 [(M+H)+, calculada para C51H76FNO3 770,6] tR = 2,61 min (Método 2-1).

[00278] Etapa 4. Hidróxido de sódio (0,023 mL, 0,091 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((3-etil-3-hidroxipentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (14 mg, 0,018 mmol) em dioxano (1 mL) e etanol (0,500 mL). A mistura de reação foi agitada a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente. O material bruto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-2, gradiente de 60%-100% de B durante 15 minutos, então a 6 minutos mantido a 100% de B) para produzir ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-etil-3-hidroxipentil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico (5,9 mg, 8,5μmol, 47% de rendimento); 1H RMN (500MHz, DMSO-D6) δ 5,25 (br. s., 1H), 5,12 (d, J=5,1 Hz, 1H), 4,67 (br. s., 1H), 4,55 (br. s., 1H), 4,48 (s, 1H), 4,38 (s, 1H), 2,61-2,53 (m, 1H), 2,48-2,38 (m, 3H), 2,23-2,08 (m, 1H), 2,07-0,93 (m, 32H), 1,65 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,82 (s, 3H), 0,80-0,77 (m, 6H); LC/MS (ESI) m/e 680,5 [(M+H)+, calculada para C44H70FNO3 680,5] tR = 2,38 min (Método 2-1); HPLC (Método 2-3): tR = 2,29 min; HPLC (Método 2-4): tR = 2,40 min. Exemplo 2-5 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((3,3-diciclopropil-3-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1,1-diciclopropilbut-3-en-1-ol

[00279] A uma solução de brometo de alilmagnésio (10,89 mL, 10,89 mmol) em THF (10 mL) a 0°C foi adicionada diciclopropilmetanona (400 mg, 3,63 mmol). O banho de esfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi esfriada em um banho de gelo-água e foi inativada pela adição de solução aquosa saturada de NH4Cl (20 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (4 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (25 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir 1,1-diciclopropilbut-3-en-1-ol (553 mg, 3,63 mmol, 100% de rendimento) como um óleo incolor. O produto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,16-5,98 (m, 1H), 5,21-5,08 (m, 2H), 2,37 (dt, J=7,5, 1,1 Hz, 2H), 0,94-0,79 (m, 2H), 0,49-0,25 (m, 8H).Etapa 2. Preparação de 3,3-diciclopropil-3-hidroxipropanal

[00280] A uma solução de 1,1-diciclopropilbut-3-en-1-ol (553 mg, 3,63 mmol) em dioxano (12 mL) e água (3 mL) a 0°C foram adicionados 2,6- lutidina (0,846 mL, 7,26 mmol), tetróxido de ósmio (4% in água) (0,444 mL, 0,073 mmol), e periodato de sódio (3,106 mg, 14,52 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente à medida que o banho de gelo-água se fundia sob agitação durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (20 mL) e solução aquosa saturada de NaHCO3 (30 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (0% 8% de metanol em CH2Cl2; coluna de 40 g) para produzir 3,3-diciclopropil-3- hidroxipropanal (152 mg, 0,986 mmol, 27% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,96 (t, J=2,8 Hz, 1H), 2,63 (d, J=2,8 Hz, 2H), 0,94 (tt, J=8,2, 5,8 Hz, 2H), 0,51-0,38 (m, 8H). Etapa 3. 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciclopropil-3-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00281] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (40 mg, 0,061 mmol) e 3,3-diciclopropil-3-hidroxipropanal (14,10 mg, 0,091 mmol) em MeOH (0,5 mL) e ácido acético (0,1 mL) foi adicionado complexo de borano- 2-picolina (9,78 mg, 0,091 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 16 h à rt. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (0% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 40% de acetona:metanol 9:1/60% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciclopropil-3-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (11 mg, 0,014 mmol, 23% de rendimento) como um óleo incolor: LC/MS (ESI) m/e 794,6 [(M+H)+, calculada para C53H76FNO3 794,6] tR = 2,66 min (Método 2-1).

[00282] Etapa 4. Hidróxido de sódio (0,017 mL, 0,069 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((3,3-diciclopropil-3-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (11 mg, 0,014 mmol) em dioxano (1 mL) e etanol (0,500 mL). A mistura de reação foi agitada a 70°C durante 2 h. A mistura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente. O material bruto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-2, 70%-100% de B durante 10 minutos, então a 15 minutos mantido a 100% de B) para produzir ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3- diciclopropil-3-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico (1,0 mg, 1,37 μmol, 10% de rendimento); 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,654,57 (m, 1H), 4,56-4,47 (m, 1H), 3,53-3,41 (m, 2H), 2,97-2,87 (m, 1H), 2,62 (d, J=16,7 Hz, 1H), 2,31-2,32 (m, 28H), 1,14 - 1,10 (m, 1H), 1,75 (s, 3H), 1,11 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,87-0,76 (m, 2H), 0,65-0,35 (m, 8H); LC/MS (ESI) m/e 704,6 [(M+H)+, calculada para C46H70FNO3 704,5] tR = 2,44 min (Método 2-1); HPLC (Método 2-3): tR = 2,43 min; HPLC (Método 2-4): tR = 2,46 min. Exemplo 2-6 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((3,3-diciclopropilalil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3- diciclopropilalil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00283] Isopropóxido de titânio(IV) (0,036 mL, 0,122 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (50 mg, 0,076 mmol) e 3,3-diciclopropil-3-hidroxipropanal (18,81 mg, 0,122 mmol) em DCE (0,6 mL). A mistura de reação foi agitada à rt durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (32,3 mg, 0,152 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 3 dias. A mistura de reação foi particionada entre solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e CH2Cl2 (10 mL). A camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com sulfato de magnésio e concentradas. O produto bruto, 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciclopropilalil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (32 mg, 0,041 mmol, 54% de rendimento), foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LC/MS (ESI) m/e 776,6 [(M+H)+, calculada para C53H74FNO2 776,6], tR = 2,67 min (Método 2-1).

[00284] Etapa 2. Hidróxido de sódio (0,052 mL, 0,206 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((3,3-diciclopropilalil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (32 mg, 0,041 mmol) em dioxano (1 mL) e etanol (0,500 mL). A mistura de reação foi agitada a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente. O material bruto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-2, 90%-100% de B durante 20 minutos, então a 25 minutos mantido a 100% de B) para produzir ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciclopropilalil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico (1,0 mg, 1,34 μmol, 3,3% de rendimento); 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 2H), 5,275,22 (m, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,65-4,57 (m, 1H), 4,56-4,48 (m, 1H), 4,01 (t, J=6,9 Hz, 2H), 2,89 (br. s., 1H), 2,62 (d, J=16,7 Hz, 1H), 2,300,85 (m, 31H), 1,75 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,80 (d, J=8,4 Hz, 2H), 0,66-0,60 (m, 2H), 0,47-0,36 (m, 2H); LC/MS (ESI) m/e 686,6 [(M+H)+, calculada para C46H68FNO2 686,5] tR = 2,44 min (Método 2-1); HPLC (Método 2-3): tR = 2,62 min; HPLC (Método 2-4): tR = 1,96 min. Exemplo 2-7 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(isopentilamino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-(isopentilamino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00285] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4, 5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (35 mg, 0,053 mmol) e 3-metilbutanal (7,35 mg, 0,085 mmol) em DCE (0,6 mL) foi adicionado isopropóxido de titânio(IV) (0,025 mL, 0,085 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (22,62 mg, 0,107 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 30% de acetona:metanol 9:1/70% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(isopentilamino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (20 mg, 0,028 mmol, 52% de rendimento) como uma espuma incolor: LC/MS m/e 726,6 [(M+H)+, calculada para C49H73FNO2 726,6], tR = 5,10 min (Método 2-3).

[00286] Etapa 2. Uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(isopentilamino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex- 3-enocarboxilato de (S)-benzila (20 mg, 0,028 mmol) em 1,4-dioxano (0,5 mL) e EtOH (0,25 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,069 mL, 0,138 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 23) para produzir ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-(isopentilamino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (9,9 mg, 48% de rendimento): 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,28-5,22 (m, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,61 (dt, J=10,9, 8,8 Hz, 1H), 4,52 (dt, J=11,0, 8,8 Hz, 1H), 3,29-3,15 (m, 2H), 2,92-2,84 (m, 1H), 2,62 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,30-1,10 (m, 30H), 1,75 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,95 (s, 6H); LC/MS m/e 636,3 [(M+H)+, calculada para C42H67FNO2 636,5], tR = 4,49 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-3): tR = 2,54 min; HPLC (Método 2-4): tR = 2,59 min. Exemplo 2-8 Preparação de ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-hidroxipropil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1,1-dióxido de 4-(3-cloro-2-hidroxipropil) tiomorfolina

[00287] A uma solução de 1,1-dióxido de tiomorfolina (2,40 g, 17,75 mmol) em DCE (4,4 mL) foi adicionado lentamente via seringa 2- (clorometil)oxirano (1,392 mL, 17,75 mmol). A mistura de reação foi agitada a 50°C durante 48 h. O sólido branco (1,1-dióxido de 4,4’-(2-hidroxipropano- 1,3-diil)bis(tiomorfolina) que formou foi removido por filtração. O filtrado foi concentrado e foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (3% 5% de metanol em CH2CI2; coluna de 120 g) para produzir 1,1-dióxido de 4-(3-cloro-2-hidroxipropil)tiomorfolina (2,57 g, 11,29 mmol, 64% de rendimento) como um óleo incolor que se solidificou em repouso: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,95 (dq, J=8,9, 4,6 Hz, 1H), 3,69-3,55 (m, 2H), 3,26-3,15 (m, 2H), 3,14-3,03 (m, 6H), 2,75 (dd, J=13,1, 4,3 Hz, 1H), 2,65 (dd, J=13,1, 8,5 Hz, 1H); LC/MS m/e 228,1 [(M+H)+, calculada para C7H15ClNO3S 228,0], tR = 0,26 min, (pico de ionização, sem UV) (Método 21). Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil) ciclo-hex-3-enocarboxilato de (1S)-benzila

[00288] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (120 mg, 0,183 mmol), 1,1-dióxido de 4-(3-cloro-2-hidroxipropil)tiomorfolina (146 mg, 0,640 mmol), fosfato de potássio tribásico (175 mg, 0,823 mmol), e iodeto de potássio (137 mg, 0,823 mmol) foram combinados em um frasco secado em forno. Acetonitrila (2 mL) foi adicionada, o frasco foi vedado, e a mistura de reação foi aquecida a 120°C durante 20 h. Mais 1,1-dióxido de 4-(3-cloro-2- hidroxipropil)tiomorfolina (83 mg, 0,366 mmol, 2 eq), fosfato de potássio tribásico (78 mg, 0,366 mmol, 2 eq), e iodeto de potássio (60,7 mg, 0,366 mmol, 2 eq) foram adicionados e a mistura de reação foi aquecida durante mais16 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (10 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 30% de acetona:metanol 9:1/70% de hexanos; coluna de 40 g, X = 220 nm) para produzir 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1- dioxidotiomorfolino)-2-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (1S)-benzila (71,4 mg, 0,084 mmol, 46% de rendimento) como uma espuma azul pálida: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,39-7,31 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,23-5,15 (m, 2H), 5,15-5,10 (m, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,61 (d, J=1,4 Hz, 1H), 4,60-4,54 (m, 1H), 4,52-4,45 (m, 1H), 3,80-3,67 (m, 1H), 3,23-3,03 (m, 8H), 2,73-2,53 (m, 5H), 2,37 (dd, J=11,7, 7,2 Hz, 1H, diastereoisômero A), 2,29 (dd, J=11,7, 8,1 Hz, 1H, diastereoisômero B), 2,190,83 (m, 47H) (Mistura de diastereoisômeros); LC/MS m/e 847,6 [(M+H)+, calculada para C51H76FN2O5S 847,5], tR = 4,58 min (Método 2-2).

[00289] Etapa 3. Uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioxidotiomorfolino)-2-hidroxipropil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (1S)-benzila (30 mg, 0,035 mmol) em 1,4-dioxano (0,5 mL) e EtOH (0,2 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (0,089 mL, 0,177 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1- dioxidotiomorfolino)-2-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (13,6 mg, 43% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,85 (d, J=5,3 Hz, 1H), 4,75 (br. s., 1H), 4,73-4,67 (m, 1H), 4,64-4,56 (m, 1H), 4,54-4,47 (m, 1H), 3,98-3,89 (m, 3H), 3,65-3,51 (m, 6H), 3,49-3,43 (m, 2H), 3,23 (dd, J=12,4, 8,5 Hz, 1H, diastereoisômero A), 3,07 (t, J=11,4 Hz, 1H, diastereoisômero B), 2,94-2,79 (m, 1H), 2,61 (d, J=17,1 Hz, 1H), 2,321,09 (m, 27H), 1,76 (s, 3H, diastereoisômero A), 1,76 (s, 3H, diastereoisômero B), 1,15 (s, 3H), 1,11 (s, 3H, diastereoisômero A), 1,10 (s, 3H, diastereoisômero B), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H) (Mistura de diastereoisômeros; LC/MS m/e 757,6 [(M+H)+, calculada para C44H70FN2O5S 757,5], tR = 4,24 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,72 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,02 min. Exemplo 2-9 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxiciclobutil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-alilciclobutanol

[00290] A uma solução de brometo de alilmagnésio (12,8 mL, 12,8 mmol) em THF (10 mL) a 0°C foi adicionada uma solução de ciclobutanona (300 mg, 4,28 mmol) em THF (5 mL). O banho de esfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A reação foi esfriada em um banho de gelo-água e foi inativada pela adição de solução saturada de NH4Cl (20 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (4 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (25 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir 1-alilciclobutanol (377 mg, 3,36 mmol, 79% de rendimento) como um óleo incolor. O produto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,90 (ddt, J=16,4, 10,7, 7,3 Hz, 1H), 5,275,16 (m, 2H), 2,41 (d, J=7,3 Hz, 2H), 2,13-2,05 (m, 4H), 1,93 (s, 1H), 1,831,71 (m, 1H), 1,65-1,51 (m, 1H). Etapa 2. Preparação de 2-(1-hidroxiciclobutil)acetaldeído

[00291] A uma solução de 1-alilciclobutanol (350 mg, 3,12 mmol) em dioxano (30 mL) e água (7,50 mL) foram adicionados 2,6-lutidina (0,727 mL, 6,24 mmol), tetróxido de ósmio (4% em água) (0,490 mL, 0,062 mmol), e periodato de sódio (2670 mg, 12,48 mmol) a 0°C. A mistura de reação foi permitida aquecer para a rt e foi agitada durante 16 h. A mistura de reação foi particionada entre EtOAc (25 mL) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (25 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com sulfato de magnésio e concentradas sob vácuo. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (0% ^8% de metanol em CH2Cl2; coluna de 40g) para produzir 2-(1- hidroxiciclobutil)acetaldeído (187 mg, 1,638 mmol, 53% de rendimento) como um óleo: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,86 (t, J=1,8 Hz, 1H), 2,32-1,95 (m, 4H), 1,92-1,73 (m, 2H), 1,69-1,43 (m, 2H).Etapa 3. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxiciclobutil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00292] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)2,3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (50 mg, 0,076 mmol) e 2-(1-hidroxiciclobutil)acetaldeído (13,92 mg, 0,122 mmol) em dicloroetano (0,6 mL) em um frasco foi adicionado isopropóxido de titânio(IV) (0,036 mL, 0,122 mmol). A mistura de reação foi agitada à rt durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (32,3 mg, 0,152 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 4 dias. A mistura de reação foi particionada entre solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e CH2Cl2 (10 mL). A camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com sulfato de magnésio e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (100% de hexanos 40% de acetona contendo 10% de metanol/60% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxiciclobutil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (51 mg, 0,068 mmol, 89% de rendimento) como um óleo: LC/MS (ESI) m/e 754,6 [(M+H)+, calculada para C50H72FNO3 754,6], tR = 2,74 min (Método 2-1).

[00293] Etapa 4. Uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxiciclobutil) etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (51 mg, 0,068 mmol) em dioxano (1 mL) e etanol (0,500 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (0,085 mL, 0,338 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir, ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxiciclobutil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (12,9 mg, 0,016 mmol, 24% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,29-5,21 (m, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,65-4,57 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 3,44-3,36 (m, 1H), 3,28 (t, J=9,9 Hz, 1H), 2,94-2,84 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,8 Hz, 1H), 2,31-0,83 (m, 35H), 1,75 (s, 3H), 1,14 (s, 3H), 1,08 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,94 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 664,6 [(M+H)+, calculada para C43H66FNO3 664,5], tR = 2,43 min (Método 2-1). HPLC (Método 2-1): tR = 19,00 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,57 min. Exemplo 2-10 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroxioxetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 3-aliloxetan-3-ol

[00294] A uma solução de brometo de alilmagnésio (7,29 mL, 7,29 mmol) em THF (40 mL) a -78°C foi adicionada uma solução de oxetan-3-ona (500 mg, 6,94 mmol) em THF (10 mL). A mistura de reação foi agitada a - 78°C durante 30 min. A reação foi inativada pela adição de solução saturada de NH4Cl (40 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com éter (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir 3- aliloxetan-3-ol (735 mg, 6,44 mmol, 93% de rendimento) como um óleo incolor. O produto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,97-5,78 (m, 1H), 5,28 (t, J=1,0 Hz, 1H), 5,27-5,22 (m, 1H), 4,64 (d, J=7,3 Hz, 2H), 4,55-4,50 (m, 2H), 2,65 (d, J=7,0 Hz, 2H); 13C RMN (101MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 131,8, 120,1, 83,2, 73,3, 42,4.Etapa 2. Preparação de 2-(3-hidroxioxetan-3-il)acetaldeído

[00295] 3-Aliloxetan-3-ol (508 mg, 4,45 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (35 mL) e MeOH (3,5 mL) em um frasco de fundo redondo de 100 mL. N-óxido de N-metilmorfolina (NMO) (626 mg, 5,34 mmol) foi adicionado e a mistura foi esfriada para -78°C [Schwartz, C., Raible, J., Mott, K., Dussault, P. H. Org. Lett. 2006, 8, 3199 - 3201]. Ozônio foi borbulhado através da mistura de reação até que a solução se tornasse saturada com ozônio (alterou-se para uma cor azul) e durante vários minutos depois (tempo total 10 min). Nitrogênio foi então borbulhado através da mistura de reação até o desaparecimento da cor azul. Sulfeto de dimetila (3,29 mL, 44,5 mmol) foi então adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 14 h. A mistura foi concentrada sob vácuo. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (50% de acetato de etila com 1% de metanol/50% de hexanos 100% de acetato de etila com 1% de metanol; coluna de 80 g) para produzir 2-(3-hidroxioxetan-3-il)acetaldeído (287 mg, 2,472 mmol, 56% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,85 (s, 1H), 4,71 (d, J=7,5 Hz, 2H), 4,52-4,47 (m, 2H), 3,14 (d, J=0,5 Hz, 2H); 13C RMN (100MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 201,1, 83,0, 71,4, 50,7.Etapa 3. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroxioxetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00296] Em um frasco, uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (500 mg, 0,762 mmol), complexo de borano-2-picolina (163 mg, 1,524 mmol) e 2-(3-hidroxioxetan-3-il)acetaldeído (177 mg, 1,524 mmol) em MeOH (8 mL) e ácido acético (1,6 mL) foi agitada à rt durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 40% de acetona:metanol 9:1/60% de hexanos; coluna de 80 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroxioxetan-3- il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (320 mg, 0,423 mmol, 56% de rendimento) como um óleo incolor: LC/MS (ESI) m/e 756,6 [(M+H)+, calculada para C49H70FNO4 756,5], tR = 2,59 min (Método 21).

[00297] Etapa 4. Uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroxioxetan-3- il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (320 mg, 0,423 mmol) em dioxano (4 mL) e etanol (2 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (0,529 mL, 2,116 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2,5 h. LC/MS mostrou a formação do produto desejado. A mistura foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-5). O solvente orgânico foi removido no rotovapor e a mistura aquosa foi congelada e deixada no liofilizador para produzir ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (3-hidroxioxetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (220 mg, 0,282 mmol, 67% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,81-4,77 (m, 2H), 4,75-4,68 (m, 2H), 4,67-4,57 (m, 2H), 4,55-4,46 (m, 1H), 3,52-3,42 (m, 1H), 3,33-3,23 (m, 1H), 2,92-2,81 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,8 Hz, 1H), 2,57-2,42 (m, 2H), 2,31-1,32 (m, 25H), 1,14-1,12 (m, 2H), 1,75 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 666,5 [(M+H)+, calculada para C42H67FNO4 666,5], tR = 2,44 min (Método 2-1); HPLC (Método 2-1): tR = 18,63 min; HPLC (Método 2-2): tR = 19,94 min. Exemplo 2-11 Preparação de ácido (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroxioxetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroxioxetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-benzila

[00298] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (100 mg, 0,152 mmol) e 2-(3-hidroxioxetan-3-il)acetaldeído (31,9 mg, 0,274 mmol) foram suspensos em MeOH (1,2 mL). Complexo de borano-2-picolina (29,4 mg, 0,274 mmol) foi adicionado seguido por ácido acético (0,24 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e solução aquosa saturada de carbonato de sódio (1 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 5 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (20% de acetato de etila com 5% de metanol/80% de hexanos 90% de acetato de etila com 5% de metanol/10% de hexanos; coluna de 24 g) para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(3-hidroxioxetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (110 mg, 0,145 mmol, 95% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,42-7,31 (m, 5H), 5,34 (br. s., 1H), 5,245,16 (m, 2H), 5,12 (d, J=5,7 Hz, 1H), 4,73 (br. s., 1H), 4,69 (t, J=5,3 Hz, 2H), 4,64-4,55 (m, 2H), 4,53-4,46 (m, 2H), 4,43 (d, J=6,0 Hz, 1H), 2,90-2,83 (m, 1H), 2,72-2,48 (m, 3H), 2,26-1,87 (m, 8H), 1,82-0,91 (m, 21H), 1,69 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 756,6 [(M+H)+, calculada para C49H71FNO4 756,6], tR = 4,59 min (Método 23).

[00299] Etapa 2. Uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroxioxetan-3- il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (105 mg, 0,139 mmol) em 1,4-dioxano (1,5 mL) e MeOH (0,5 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,347 mL, 0,694 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 4 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e foi parcialmente neutralizada pela adição de HCl 6N (70 μL). A mistura foi então filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-5). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (3-hidroxioxetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (38,0 mg, 0,048 mmol, 35% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,80 (d, J=7,3 Hz, 2H), 4,74-4,69 (m, 2H), 4,66-4,57 (m, 2H), 4,554,46 (m, 1H), 3,47 (ddd, J=12,7, 6,1, 3,2 Hz, 1H), 3,28 (ddd, J=12,5, 9,2, 2,9 Hz, 1H), 2,90-2,83 (m, 1H), 2,61 (d, J=17,2 Hz, 1H), 2,56-2,44 (m, 2H), 2,372,28 (m, 1H), 2,22-1,32 (m, 24H), 1,75 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,14-1,12 (m, 2H), 1,09 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 666,5 [(M+H)+, calculada para C42H65FNO4 666,5], tR = 4,31 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-5): tR = 10,94 min; HPLC (Método 2-6): tR = 10,82 min. Exemplo 2-12 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxitetra- hidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-aliltetra-hidro-2H-piran-4-ol

[00300] A uma solução de brometo de alilmagnésio (20,98 mL, 20,98 mmol) em THF (40 mL) a 0°C foi adicionada via cânula uma solução de di- hidro-2H-piran-4(3H)-ona (700 mg, 6,99 mmol) em THF (10 mL). O banho de esfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A reação foi esfriada em um banho de gelo-água e foi inativada pela adição de solução saturada de NH4Cl (40 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (20% 60% de acetato de etila em hexanos; coluna de 80 g) para produzir 4-aliltetra-hidro-2H-piran-4-ol (818 mg, 5,75 mmol, 82% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,90 (ddt, J=17,2, 9,9, 7,5 Hz, 1H), 5,28-5,14 (m, 2H), 3,85-3,74 (m, 4H), 2,28 (d, J=7,5 Hz, 2H), 1,80-1,68 (m, 2H), 1,51 (dq, J=14,0, 2,5 Hz, 3H).Etapa 2. Preparação de 2-(4-hidroxitetra-hidro-2H-piran-4-il)acetaldeído

[00301] A uma solução de 4-aliltetra-hidro-2H-piran-4-ol (150 mg, 1,055 mmol) em dioxano (12 mL) e água (3 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (0,246 mL, 2,110 mmol), tetróxido de ósmio (0,265 mL, 0,021 mmol), e periodato de sódio (903 mg, 4,22 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente sob agitação durante 14 h à medida que o banho de gelo-água fundia-se. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (10 mL) e solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (3% 6% de metanol emCH2Cl2; coluna de 40 g) para produzir 2-(4-hidroxitetra-hidro-2H-piran-4- il)acetaldeído (67 mg, 0,465 mmol, 44% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,89 (t, J=1,3 Hz, 1H), 3,90-3,80 (m, 2H), 3,78-3,69 (m, 2H), 3,50 (s, 1H), 2,70 (d, J=1,3 Hz, 2H), 1,75-1,66 (m, 4H).Etapa 3. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxitetra-hidro-2H-piran-4-il)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00302] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (40 mg, 0,061 mmol) e 2-(4-hidroxitetra-hidro-2H-piran-4- il)acetaldeído (13,19 mg, 0,091 mmol) em DCE (0,5 mL) foi adicionado isopropóxido de titânio(IV) (0,027 mL, 0,091 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (25,8 mg, 0,122 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 40% de acetona:metanol 9:1/60% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(4-hidroxitetra-hidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila (33,2 mg, 0,042 mmol, 69% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,437,32 (m, 5H), 5,36-5,31 (m, 1H), 5,23-5,16 (m, 2H), 5,14 (dd, J=6,0, 1,8 Hz, 1H), 4,75 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,64-4,57 (m, 2H), 4,53-4,45 (m, 1H), 3,94-3,82 (m, 2H), 3,80-3,70 (m, 2H), 2,86-2,69 (m, 2H), 2,67-2,51 (m, 2H), 2,19-0,86 (m, 33H), 1,70 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 784,6 [(M+H)+, calculada para C51H75FNO4 784,6], tR = 4,69 min (Método 2-2).

[00303] Etapa 4. Uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxitetra-hidro- 2H-piran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (56 mg, 0,071 mmol) em 1,4-dioxano (0,7 mL) e EtOH (0,35 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,179 mL, 0,357 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-1- (fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4- hidroxitetra-hidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1 H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (37,1 mg, 64% de rendimento) como um sólido amorfo branco:

[00304] 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H),5,28-5,21 (m, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,65-4,57 (m, 1H), 4,55-4,46 (m, 1H), 3,97-3,79 (m, 4H), 3,46-3,31 (m, 2H), 2,92-2,83 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,8 Hz, 1H), 2,34-1,09 (m, 33H), 1,75 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,96 (s, 3H); LC/MS m/e 694,6 [(M+H)+, calculada para C44H69FNO4 694,5], tR = 4,27 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,95 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,14 min. Exemplo 2-13 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H- tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1,1-dióxido de 4-alil-4-hidroxitetra-hidro-2H- tiopirano

[00305] A uma solução de brometo de alilmagnésio (10,83 mL, 10,83 mmol) em THF (15 mL) a 0°C foi adicionada via cânula uma solução de 1,1- dióxido de di-hidro-2H-tiopiran-4(3H)-ona (1,07 g, 7,22 mmol) em THF (50 mL) (dissolvida por aquecimento em um banho de óleo para 70°C). O banho de esfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. A reação foi esfriada em um banho de gelo-água e foi inativada pela adição de solução saturada de NH4Cl (50 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (4 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir 1,1-dióxido de 4-alil-4-hidroxitetra-hidro-2H-tiopirano (1,42 g, 7,46 mmol, 103% de rendimento) como um sólido incolor. O produto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,85 (ddt, J=17,2, 9,9, 7,6 Hz, 1H), 5,34-5,28 (m, 1H), 5,23 (dq, J=17,1, 1,4 Hz, 1H), 3,43 (td, J=13,6, 3,8 Hz, 2H), 2,92-2,84 (m, 2H), 2,32 (d, J=7,5 Hz, 2H), 2,23 (td, J=13,8, 3,3 Hz, 2H), 2,05-1,97 (m, 2H). Etapa 2. Preparação de 2-(4-hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran- 4-il)acetaldeído

[00306] A uma solução de 1,1-dióxido de 4-alil-4-hidroxitetra-hidro- 2H-tiopirano (1,52 g, 7,99 mmol) em dioxano (80 mL) e água (20 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (1,861 mL, 15,98 mmol), tetróxido de ósmio (4% em água) (1,254 mL, 0,160 mmol), e periodato de sódio (6,84 g, 32,0 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente sob agitação durante 14 h à medida que o banho de gelo-água fundia-se. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução de HCl 1N (50 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (12 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de HCl 1N (10 mL), solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL), salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (3% 10% de metanol em CH2Cl2; coluna de 80 g) para produzir 2-(4-hidroxi-1,1- dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)acetaldeído (821 mg, 4,27 mmol, 54% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,86 (s, 1H), 3,54-3,43 (m, 3H), 2,91-2,83 (m, 2H), 2,80 (s, 2H), 2,28-2,14 (m, 4H).Etapa 3. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran- 4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00307] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (632 mg, 0,963 mmol) e 2-(4-hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)acetaldeído (296 mg, 1,542 mmol) em DCE (7,5 mL) foi adicionado isopropóxido de titânio(IV) (0,452 mL, 1,542 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (408 mg, 1,927 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (25 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (25 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 40% de acetona:metanol 9:1/60% de hexanos; coluna de 80 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(4-hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8, 8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila (591 mg, 0,710 mmol, 74% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,407,32 (m, 5H), 5,34 (br. s., 1H), 5,23-5,16 (m, 2H), 5,14 (dd, J=6,2, 1,8 Hz, 1H), 4,75 (d, J=1,5 Hz, 1H), 4,63 (s, 1H), 4,61-4,55 (m, 1H), 4,53-4,46 (m, 1H), 3,58-3,46 (m, 2H), 2,91-2,81 (m, 3H), 2,78-2,70 (m, 1H), 2,62 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,53 (td, J=10,8, 5,6 Hz, 1H), 2,17-1,06 (m, 33H), 1,70 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,87 (s, 3H); LC/MS m/e 832,6 [(M+H)+, calculada para C51H75FNO5S 832,5], tR = 4,64 min (Método 2-2).

[00308] Etapa 4. Uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-1,1- dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (500 mg, 0,601 mmol) em 1,4-dioxano (6 mL) e EtOH (3 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (1,502 mL, 3,00 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2,5 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e HCl 6N (0,20 mL, 2 eq) foi adicionado para parcialmente neutralizar a mistura de reação. A mistura foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran- 4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (435 mg, 84% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,65-4,56 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 3,59-3,33 (m, 4H), 3,10-2,97 (m, 2H), 2,88-2,78 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,42-1,12 (m, 33H), 1,75 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 742,6 [(M+H)+, calculada para C44H69FNO5S 742,5], tR = 4,19 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,71 min; HPLC (Método 2-2): tR = 19,66 min. Exemplo 2-14 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-1-(metilsulfonil)piperidin-4- il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-alil-1-(metilsulfonil)piperidin-4-ol

[00309] A uma solução de brometo de alilmagnésio (5,08 mL, 5,08 mmol) em THF (15 mL) a 0°C foi adicionada via cânula uma solução de 1- (metilsulfonil)piperidin-4-ona (300 mg, 1,693 mmol) em THF (5 mL). O banho de esfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. A reação foi esfriada em um banho de gelo-água e foi inativada pela adição de solução saturada de NH4Cl (20 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (4 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (25 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir 4-alil-1-(metilsulfonil)piperidin-4-ol (423 mg, 1,929 mmol, 114% de rendimento (impuro)) como um sólido incolor, que foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,87 (ddt, J=17,2, 10,0, 7,6 Hz, 1H), 5,285,24 (m, 1H), 5,23-5,17 (m, 1H), 3,61 (dt, J=11,4, 2,4 Hz, 2H), 3,05 (td, J=11,9, 3,0 Hz, 2H), 2,80 (s, 3H), 2,27 (d, J=7,5 Hz, 2H), 1,80-1,71 (m, 2H), 1,70-1,61 (m, 2H).Etapa 2. Preparação de 2-(4-hidroxi-1-(metilsulfonil)piperidin-4- il)acetaldeído

[00310] A uma solução de 4-alil-1-(metilsulfonil)piperidin-4-ol (210 mg, 0,958 mmol) em dioxano (12 mL) e água (3 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (0,223 mL, 1,915 mmol), tetróxido de ósmio (4% em água) (0,150 mL, 0,019 mmol), e periodato de sódio (819 mg, 3,83 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente sob agitação durante 14 h à medida que o banho de gelo-água fundia-se. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (10 mL) e solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (5 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (3% 8% de metanol em CH2CI2; coluna de 40 g) para produzir 2-(4- hidroxi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)acetaldeído (101 mg, 0,456 mmol, 48% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,87 (s, 1H), 3,64-3,55 (m, 2H), 3,15-3,05 (m, 3H), 2,81 (s, 3H), 2,73 (d, J=0,8 Hz, 2H), 1,93-1,85 (m, 2H), 1,73 (dd, J=12,8, 4,5 Hz, 2H).Etapa 3. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)etil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00311] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (50 mg, 0,076 mmol) e 2-(4-hidroxi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)acetaldeído (25,3 mg, 0,114 mmol) em DCE (0,6 mL) foi adicionado isopropóxido de titânio(IV) (0,034 mL, 0,114 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (32,3 mg, 0,152 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 30% de acetona:metanol 9:1/70% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(4-hidroxi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila (49 mg, 0,057 mmol, 75% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,41-7,31 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,22-5,16 (m, 2H), 5,13 (dd, J=6,2, 1,8 Hz, 1H), 4,75 (d, J=1,5 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,61-4,55 (m, 1H), 4,49 (td, J=8,9, 5,5 Hz, 1H), 3,67-3,58 (m, 2H), 3,16-3,05 (m, 2H), 2,86-2,79 (m, 1H), 2,82 (s, 3H), 2,77-2,69 (m, 1H), 2,62 (d, J=16,8 Hz, 1H), 2,55 (td, J=10,9, 5,6 Hz, 1H), 2,18-0,86 (m, 33H), 1,70 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 861,6 [(M+H)+, calculada para C52H78FN2O5S 861,6], tR = 4,63 min (Método 2-2).

[00312] Etapa 4. Uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-1-(metilsulfonil)piperidin-4- il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (48 mg, 0,056 mmol) em 1,4- dioxano (0,7 mL) e EtOH (0,35 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,139 mL, 0,279 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-1- (metilsulfonil)piperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico TFA (38,6 mg, 77% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,66-4,57 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 3,65-3,50 (m, 2H), 3,47-3,34 (m, 2H), 3,25-3,12 (m, 2H), 2,88 (s, 3H), 2,87-2,79 (m, 1H), 2,61 (d, J=17,5 Hz, 1H), 2,33-1,09 (m, 33H), 1,75 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 771,6 [(M+H)+, calculada para C45H72FN2O5S 771,5], tR = 4,43 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,97 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,11 min. Exemplo 2-15 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-(1-acetil-4-hidroxipiperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8, 8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil) ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(4-alil-4-hidroxipiperidin-1-il)etanona

[00313] A uma solução de 1-acetilpiperidin-4-ona (1,00 g, 7,08 mmol) em THF (50 mL) a -10°C (banho de acetona/gelo) foi adicionado brometo de alilmagnésio (1 M em éter dietílico) (7,44 mL, 7,44 mmol). A mistura de reação foi agitada a -10°C durante 30 min. A reação foi inativada pela adição de solução saturada de NH4Cl (50 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir 1-(4-alil-4- hidroxipiperidin-1-il)etanona (836 mg, 4,56 mmol, 64% de rendimento) como um óleo marrom. O produto foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,88 (ddt, J=17,2, 10,1, 7,6 Hz, 1H), 5,28-5,22 (m, 1H), 5,19 (ddt, J=17,1, 2,1, 1,2 Hz, 1H), 4,41-4,33 (m, 1H), 3,65-3,56 (m, 1H), 3,52-3,43 (m, 1H), 3,04 (ddd, J=13,4, 9,3, 6,1 Hz, 1H), 2,26 (d, J=7,8 Hz, 2H), 2,12 (s, 3H), 1,63-1,55 (m,4H).Etapa 2. Preparação de 2-(1-acetil-4-hidroxipiperidin-4-il)acetaldeído

[00314] A uma solução de 1-(4-alil-4-hidroxipiperidin-1-il)etanona (280 mg, 1,528 mmol) em dioxano (12 mL) e água (3 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (0,356 mL, 3,06 mmol), tetróxido de ósmio (2,5% em t-BuOH) (0,384 mL, 0,031 mmol), e periodato de sódio (1.307 mg, 6,11 mmol). O banho de esfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2,5 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (10 mL) e solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL). A camada aquosa foi extraída com 5% de metanol em clorofórmio (8 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (4% 10% demetanol em CH2Cl2; coluna de 24 g) para produzir 2-(1-acetil-4- hidroxipiperidin-4-il)acetaldeído (48,6 mg, 0,262 mmol, 17% de rendimento) como um óleo incolor. 1H RMN mostrou que o produto não estava completamente puro. O produto foi usado diretamente na etapa seguinte. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,88 (t, J=1,0 Hz, 1H), 4,41-4,33 (m, 1H), 3,61-3,56 (m, 1H), 3,56-3,45 (m, 3H), 3,12-3,00 (m, 1H), 2,11 (s, 3H), 1,87-1,76 (m, 2H), 1,54 (tdd, J=12,8, 8,0, 4,9 Hz, 2H).Etapa 3. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1-acetil-4-hidroxipiperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil) ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00315] A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il) 2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (50 mg, 0,076 mmol) e 2-(1-acetil-4-hidroxipiperidin-4-il)acetaldeído (42,4 mg, 0,229 mmol) em DCE (0,6 mL) foi adicionado isopropóxido de titânio(IV) (0,067 mL, 0,229 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (48,5 mg, 0,229 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 40% de acetona:metanol 9:1/60% de hexanos; coluna de 24 g, À = 220 nm) para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-acetil-4-hidroxipiperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (46 mg, 0,056 mmol, 73% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,40-7,31 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,22-5,16 (m, 2H), 5,15-5,10 (m, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,62 (d, J=1,2 Hz, 1H), 4,60-4,55 (m, 1H), 4,52-4,46 (m, 1H), 4,38 (d, J=13,1 Hz, 1H), 3,64-3,49 (m, 2H), 3,15-3,05 (m, 1H), 2,87-2,70 (m, 2H), 2,64-2,52 (m, 2H), 2,190,87 (m, 33H), 2,11 (s, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 825,6 [(M+H)+, calculada para C53H78FN2O4 825,6], tR = 4,74 min (Método 2-3).

[00316] Etapa 4. Uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-acetil-4-hidroxipiperidin-4-il)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (45 mg, 0,055 mmol) em 1,4-dioxano (0,7 mL) e EtOH (0,35 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,136 mL, 0,273 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 50°C durante 2 h então a 65°C durante 1 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1-acetil-4-hidroxipiperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (34 mg, 73% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=5,0 Hz, 1H), 4,83 (br. s., 1H), 4,73 (s, 1H), 4,64-4,57 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 4,43-4,28 (m, 1H), 3,78-3,67 (m, 1H), 3,66-3,52 (m, 1H), 3,47-3,35 (m, 2H), 3,26-3,10 (m, 1H), 2,92-2,77 (m, 1H), 2,61 (d, J=17,2 Hz, 1H), 2,39-1,10 (m, 33H), 2,18 (s, 3H), 1,75 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 735,6 [(M+H)+, calculada para C46H76FN2O4 739,6], tR = 4,27 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,86 min; HPLC (Método 2-2): tR = 19,90 min.Preparação de 2-((TRANS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)acetaldeído e 2-((CIS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)acetaldeído

Etapa 1. Preparação de 8-metil-1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ol

[00317] Ao THF (100 mL) em um frasco de fundo redondo a -78°C sob N2 foram adicionados metil-lítio (48,0 mL, 77 mmol) e brometo de metilmagnésio (12,81 mL, 38,4 mmol) via seringa. Após agitação a -78°C durante 1 h, 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ona (5,00 g, 32,0 mmol) em THF (50 mL) foi adicionada via cânula. A mistura de reação foi agitada a -78°C durante 1,5 h. A reação foi inativada pela adição de solução aquosa saturada de NH4Cl (100 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (50 mL) e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir 8- metil-1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ol (5,47 g, 99% de rendimento). O produto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,03-3,91 (m, 4H), 1,97-1,84 (m, 2H), 1,79-1,56 (m, 6H), 1,28 (s, 3H), 1,17 (s, 1H); 13C RMN (100MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 108,27, 68,52, 63,87, 63,81, 36,33, 30,47, 29,39.Etapa 2. Preparação de 4-hidroxi-4-metilciclo-hexanona

[00318] A uma solução de 8-metil-1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ol (5,26 g, 30,5 mmol) em acetona (40 mL) e água (60 mL) à temperatura ambiente foi adicionado HCl 4M (22,91 mL, 92 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 40°C durante 14 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e foi neutralizada pela adição de carbonato de sódio sólido. A acetona foi removida no rotovapor e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (7 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (70% de acetato de etila em hexanos) para produzir 4-hidroxi-4-metilciclo-hexanona (3,27 g, 25,5 mmol, 84% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 2,80-2,68 (m, 2H), 2,30-2,20 (m, 2H), 2,04-1,94 (m, 2H), 1,92-1,80 (m, 2H), 1,56 (s, 1H), 1,39 (s, 3H); 13C RMN (100MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 211,55, 68,14, 38,40, 36,80, 29,51.Etapa 3. Preparação de (TRANS)-1-alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol e (CIS)- 1-alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol

[00319] A uma solução de 4-hidroxi-4-metilciclo-hexanona (3,20 g, 24,97 mmol) em THF (200 mL) a 0°C foi adicionado brometo de alilmagnésio (1 M em éter dietílico) (62,4 mL, 62,4 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 30 min. A reação foi inativada pela adição de solução saturada de NH4Cl (70 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% 90% de acetato de etila em hexanos; coluna de 330 g, gradiente de 35 min) para produzir (trans)-1- alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol (1,90 g, 11,16 mmol, 45% de rendimento) como um sólido branco e (cis)-1-alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol (2,35 g, 13,80 mmol, 55% de rendimento) como um óleo incolor, que se solidificou em repouso.(trans)-1-alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol:1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,92 (ddt, J=17,3, 10,1, 7,5 Hz, 1H), 5,23-5,12 (m, 2H), 2,26 (d, J=7,5 Hz, 2H), 1,85-1,71 (m, 4H), 1,55-1,43 (m, 4H), 1,28 (s, 3H); 13C RMN (100MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 133,08, 118,72, 69,66, 68,77, 47,59, 33,87, 32,29, 30,80.A estrutura de (trans)-1-alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol foi confirmada por cristalografia de raios-X. (cis)-1-alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,90 (ddt, J=17,2, 10,0, 7,5 Hz, 1H), 5,21-5,10 (m, 2H), 2,25 (dt, J=7,5, 1,0 Hz, 2H), 1,81-1,66 (m, 4H), 1,571,47 (m, 4H), 1,24 (s, 3H); 13C RMN (100MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 133,12, 118,59, 70,01, 69,34, 44,54, 35,55, 33,99, 26,76.Etapa 4a. Preparação de 2-((TRANS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)acetaldeído (Método A)

[00320] A uma solução de (trans)-1-alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol (0,98 g, 5,76 mmol) em dioxano (40 mL) e água (10 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (1,341 mL, 11,51 mmol), tetróxido de ósmio (4% em água) (0,704 mL, 0,115 mmol), e periodato de sódio (4,92 g, 23,03 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente sob agitação durante 14 h à medida que o banho de gelo-água fundia-se. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo HCl 1N (aq) (25mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (20 x 50 mL). (Foi difícil extrair o produto da camada aquosa.) As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de NaHCO3 (8 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. TLC da solução de lavagem de bicarbonato mostrou que um pouco de produto entrou na camada aquosa. Esta camada foi concentrada. O resíduo foi suspenso em diclorometano e, juntamente com o resíduo do extrato orgânico, foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (70% de acetato de etila com 3% de metanol/30% de hexanos 100% de acetato de etila com 3% de metanol; coluna de 120 g) para produzir 2-((trans)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo- hexil)acetaldeído (0,78 g, 4,53 mmol, 79% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,91 (t, J=1,6 Hz, 1H), 2,65 (d, J=1,8 Hz, 2H), 1,91-1,73 (m, 4H), 1,69-1,62 (m, 2H), 1,53-1,46 (m, 2H), 1,28 (s, 3H).Etapa 4a. Método alternativo para a preparação de 2-((TRANS)-1,4-di- hidroxi-4-metilciclo-hexil)acetaldeído (Método B)

[00321] (trans)-1-Alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol (1,00 g, 5,87 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (50 mL) e MeOH (10 mL) em um frasco de fundo redondo de 250 mL. N-óxido de N-metilmorfolina (NMO) (0,826 g, 7,05 mmol) foi adicionado e a mistura foi esfriada para -78°C [Schwartz, C., Raible, J., Mott, K., Dussault, P. H. Org. Lett. 2006, 8, 3199-3201]. Ozônio foi borbulhado através da mistura de reação até que a solução se tornasse saturada com ozônio (alterou-se para uma cor azul) e durante vários minutos depois (tempo total 10 min). Nitrogênio foi então borbulhado através da mistura de reação até o desaparecimento da cor azul. Sulfeto de dimetila (4,34 mL, 58,7 mmol) foi então adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 2,5 h. A mistura foi concentrada sob vácuo. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (50% de acetato de etila com 1% de metanol/50% de hexanos 95% de acetato de etila com 1% de metanol/5% de hexanos; coluna de 80 g) para produzir 2-((trans)-1,4-di- hidroxi-4-metilciclo-hexil)acetaldeído (937 mg, 5,44 mmol, 93% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 9,90 (s, 1H), 2,65 (s, 2H), 1,89-1,74 (m, 4H), 1,69-1,62 (m, 2H), 1,521,46 (m, 2H), 1,28 (s, 3H); 13C RMN (100MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 203,02, 69,65, 68,45, 55,15, 33,34, 32,46, 30,90.Etapa 4b. Preparação de 2-((CIS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo- hexil)acetaldeído

[00322] A uma solução de (cis)-1-alil-4-metilciclo-hexano-1,4-diol (185 mg, 1,087 mmol) em dioxano (8 mL) e água (2 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (0,253 mL, 2,173 mmol), tetróxido de ósmio (4% em água) (0,133 mL, 0,022 mmol), e periodato de sódio (930 mg, 4,35 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente sob agitação durante 14 h à medida que o banho de gelo-água fundia-se. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo HCl 1N (aq) (15 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (10 mL). Após a primeira extração, a camada aquosa foi saturada com cloreto de sódio e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (17 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de NaHCO3 (2 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (8% 12% de metanol em CH2Cl2; coluna de 40 g) para produzir 2-((cis)-1,4-di-hidroxi-4- metilciclo-hexil)acetaldeído (146 mg, 0,848 mmol, 78% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,91 (t, J=1,8 Hz, 1H), 2,65 (d, J=2,0 Hz, 2H), 1,91-1,76 (m, 4H), 1,63-1,46 (m, 4H), 1,26 (s, 3H).Exemplo 2-16 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-((TRANS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-((TRANS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00323] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (1,00 g, 1,524 mmol) e 2-((trans)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)acetaldeído (0,420 g, 2,439 mmol) foram dissolvidos em MeOH (12,5 mL) e ácido acético (2,5 mL). Complexo de borano-2-picolina (0,261 g, 2,439 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. Mais 2-((trans)-1,4- di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)acetaldeído (0,131 g, 0,762 mmol, 0,5 eq) e complexo de borano-2-picolina (0,082 g, 0,762 mmol, 0,5 eq) foram adicionados à mistura de reação e a agitação foi continuada durante 1 h. A mistura de reação foi neutralizada pela adição de água (5 mL) e carbonato de sódio sólido. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (7 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (15 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (20% de acetato de etila com 5% de metanol/80% de hexanos 90% de acetato de etila com 5% de metanol/10% de hexanos; coluna de 120 g, gradiente de 25 min) para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-di- hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (856 mg, 1,054 mmol, 69% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,40-7,31 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,23-5,16 (m, 2H), 5,13 (dd, J=6,2, 1,8 Hz, 1H), 4,74 (d, J=1,5 Hz, 1H), 4,62-4,56 (m, 2H), 4,53-4,46 (m, 1H), 2,85-2,78 (m, 1H), 2,77-2,70 (m, 1H), 2,66-2,55 (m, 2H), 2,18-1,02 (m, 37H), 1,69 (s, 3H), 1,30 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 812,6 [(M+H)+, calculada para C53H79FNO4 812,6], tR = 4,89 min (Método 23).

[00324] Etapa 2. Uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (401 mg, 0,494 mmol) em 1,4-dioxano (7,5 mL) e EtOH (2,5 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (1,234 mL, 2,469 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2,5 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi diluída com metanol (4 mL) (para dissolver o precipitado), foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-4). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (267 mg, 0,316 mmol, 64% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,27-5,22 (m, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,66-4,57 (m, 1H), 4,55-4,44 (m, 1H), 3,42-3,35 (m, 2H), 2,89-2,81 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,9 Hz, 1H), 2,31-1,34 (m, 35H), 1,75 (s, 3H), 1,30 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,15-1,11 (m, 2H), 1,09 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 722,6 [(M+H)+, calculada para C46H73FNO4 722,6], tR = 4,36 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 19,03 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,26 min. Exemplo 2-17 Preparação de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-((TRANS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-((TRANS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila

[00325] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (120 mg, 0,183 mmol) e 2-((trans)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)acetaldeído (56,7 mg, 0,329 mmol) foram dissolvidos em MeOH (1,5 mL) e ácido acético (0,3 mL). Complexo de borano-2-picolina (35,2 mg, 0,329 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e solução aquosa saturada de carbonato de sódio (2 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (15 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (20% de acetato de etila com 5% de metanol/80% de hexanos 90% de acetato de etila com 5% de metanol/10% de hexanos; coluna de 80 g, gradiente de 20 min) para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-di- hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila (96,7 mg, 0,119 mmol, 65% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,39-7,31 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,22-5,15 (m, 2H), 5,11 (dd, J=6,1, 1,5 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,62-4,55 (m, 2H), 4,52-4,45 (m, 1H), 2,83-2,69 (m, 2H), 2,65-2,53 (m, 2H), 2,21-0,87 (m, 37H), 1,69 (s, 3H), 1,29 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 812,6 [(M+H)+, calculada para C53H79FNO4 812,6], tR = 4,58 min (Método 2-3).

[00326] Etapa 2. Uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (95 mg, 0,117 mmol) em 1,4-dioxano (1,5 mL) e MeOH (0,5 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,292 mL, 0,585 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 4 h. A reação foi completa. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-4). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- ((trans)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxílico • TFA (40,8 mg, 0,049 mmol, 42% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=5,4 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,66-4,57 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 3,43-3,36 (m, 2H), 2,90-2,82 (m, 1H), 2,62 (d, J=16,9 Hz, 1H), 2,38-2,28 (m, 1H), 2,26-1,35 (m, 34H), 1,75 (s, 3H), 1,31 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,14 (d, J=9,5 Hz, 2H), 1,10 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 722,6 [(M+H)+, calculada para C46H73FNO4 722,6], tR = 4,34 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-5): tR = 11,74 min; HPLC (Método 2-6): tR = 11,29 min. Exemplo 2-18 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-((CIS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8, 11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil) ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-((CIS)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13, 13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00327] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (100 mg, 0,152 mmol), 2-((cis) 1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)acetaldeído (52,5 mg, 0,305 mmol), e complexo de borano-2-picolina (32,6 mg, 0,305 mmol) em MeOH (1,4 mL) e ácido acético (0,35 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 30% de acetona:metanol 9:1/70% de hexanos; coluna de 40 g, X = 220 nm) para produzir 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1,4- di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (72,5 mg, 0,089 mmol, 59% de rendimento) como uma espuma branca: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,38-7,34 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,23-5,16 (m, 2H), 5,13 (dd, J=6,1, 1,5 Hz, 1H), 4,73 (d, J=1,7 Hz, 1H), 4,62-4,56 (m, 2H), 4,53-4,46 (m, 1H), 2,83-2,75 (m, 1H), 2,73-2,66 (m, 1H), 2,64-2,52 (m, 2H), 2,18-1,00 (m, 37H), 1,69 (s, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 812,7 [(M+H)+, calculada para C53H79FNO4 812,6], tR = 4,78 min (Método 23).

[00328] Etapa 2. Uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1,4-di-hidroxi-4-metilciclo-hexil)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (65 mg, 0,080 mmol) em 1,4-dioxano (1,0 mL) e EtOH (0,5 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,200 mL, 0,400 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O produto (37 mg) continha uma quantidade significativa de uma impureza (ca. 10%). O produto foi então repurificado por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-5) para produzir ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1,4-di-hidroxi-4- metilciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico TFA (22,1 mg, 33% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,64-4,56 (m, 1H), 4,55-4,46 (m, 1H), 3,44-3,37 (m, 1H), 3,363,28 (m, 1H), 2,91-2,82 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,31-1,11 (m, 37H), 1,75 (s, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 722,6 [(M+H)+, calculada para C46H73FNO4 722,6], tR = 4,34 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,87 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,20 min.Preparação de 4-(metilsulfonil)ciclo-hexanona (Rota 1)

Etapa 1. Preparação de 4-metilbenzenossulfonato 1,4- dioxaespiro[4.5]decan-8-ila

[00329] A uma solução a 0°C de 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ol (10 g, 63,2 mmol), trietilamina (13,22 mL, 95,0 mmol), e N,N-dimetilpiridin-4- amina (0,772 g, 6,32 mmol) em CH2Cl2 (400 mL) foi adicionado, em porções, cloreto de 4-metilbenzeno-1-sulfonila (13,26 g, 69,5 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente sob agitação durante 16 horas. A mistura de reação foi diluída com CH2Cl2 (400 mL) e foi lavada com água (2 x 400 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (0% 30% de acetato de etila emhexanos; o produto bruto foi dividido na metade e purificado em duas colunas de 330 g) para produzir 4-metilbenzenossulfonato de 1,4- dioxaespiro[4.5]decan-8-ila (19,6 g, 62,7 mmol, 99% de rendimento): 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 7,82 (d, J=8,3 Hz, 2H), 7,35 (d, J=8,0 Hz, 2H), 4,66 (tt, J=6,0, 3,0 Hz, 1H), 3,98-3,88 (m, 4H), 2,47 (s, 3H), 1,95-1,74 (m, 5H), 1,63-1,51 (m, 3H); LC/MS (ESI) m/e 335,2 [(M+Na)+, calculada para C15H20O5SNa 335,1], tR = 2,06 min (Método 2-1).Etapa 2. Preparação de 8-(metiltio)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano

[00330] 4-Metilbenzenossulfonato de 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ila (19,6 g, 62,7 mmol) em etanol (26,7 mL) foi adicionado a uma solução de trimetóxido de sódio (13,19 g, 188 mmol) em MeOH (80 mL). A mistura de reação foi aquecida a 80°C durante 16 h em um vaso de pressão vedado. LC- MS mostrou a formação do produto desejado. A mistura de reação foi particionada entre acetato de etila e água. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 250 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob vácuo. O resíduo foi particionado entre CH2Cl2 e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com mais CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de sódio, concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia em coluna de gel de sílica (100% de hexanos 25% de acetato de etila com 5% de metanol/75% de hexanos; coluna de 330 g) para produzir 8-(metiltio)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano (9,6 g, 51,0 mmol, 81% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 3,93 (s, 4H), 2,62 (tt, J=9,9, 3,8 Hz, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,02-1,93 (m, 2H), 1,87-1,78 (m, 2H), 1,72-1,52 (m, 4H); LC/MS (ESI) m/e 189,2 [(M+H)+, calculada para C9H16O2S 189,1], tR = 1,91 min (Método 2-1).Etapa 3. Preparação de 8-(metilsulfonil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano

[00331] A uma solução de 8-(metiltio)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano (9,6 g, 51,0 mmol) em CH2Cl2 (400 mL) foi adicionado mCPBA (22,85 g, 102 mmol) a 0°C. A solução foi aquecida para a temperatura ambiente e foi agitada durante 15 h. A mistura de reação foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa de hidróxido de sódio 1N (200 mL) e foi extraída com acetato de etila (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas para produzir 8-(metilsulfonil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano (9,42 g, 42,8 mmol, 84% de rendimento). O produto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 3,99-3,95 (m, 4H), 2,90-2,80 (m, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,29-2,19 (m, 2H), 1,98-1,83 (m, 4H), 1,671,56 (m, 2H).Etapa 4. Preparação de 4-(metilsulfonil)ciclo-hexanona

[00332] A um frasco de fundo redondo, HCl (71,1 mL, 427 mmol) foi adicionado a uma solução de 8-(metilsulfonil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano (9,4 g, 42,7 mmol). A mistura de reação foi agitada de um dia para outro à rt durante 16 h. A mistura de reação foi parcialmente concentrada em vácuo e foi particionada entre EtOAc (200 mL) e água (200 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, salmoura, secadas com MgSO4, filtradas e concentradas sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (70% de acetato de etila com 1% de metanol/30% de hexanos 100% de acetato de etila com 1% de metanol; coluna de 330 g) para produzir 4- (metilsulfonil)ciclo-hexanona (4,7 g, 26,7 mmol, 63% de rendimento): 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 3,35-3,21 (m, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,65-2,56 (m, 2H), 2,54-2,35 (m, 4H), 2,16-2,01 (m, 2H).Método alternativo para a preparação de 4-(metilsulfonil)ciclo-hexanona (Rota 2)

[00333] A uma solução de (metilsulfonil)eteno (10,0 g, 94 mmol) em benzeno (50 mL) foi adicionado (buta-1,3-dien-2-iloxi)trimetilsilano (14,07 g, 99 mmol) e hidroquinona (20 mg, 0,182 mmol). A mistura foi desgaseificada várias vezes a -78°C antes do aquecimento. Os conteúdos foram vedados e aquecidos a 105°C durante 48 horas. A reação foi analisada por RMN em CDCl3 que mostrou cerca de 10% do resíduo de vinilsulfona. Mais (buta-1,3- dien-2-iloxi)trimetilsilano (4 mL) foi adicionado e o aquecimento foi continuado durante mais 48 horas. A mistura de reação foi evaporada para uma goma espessa sob vácuo à temperatura ambiente (~19°C). A mistura foi rediluída com acetona (250 mL) resultando na formação de uma solução transparente. A mistura foi esfriada em um banho de gelo até se tornar fria. 4 mL de HCl 0,25 N (pré-esfriados no mesmo banho de gelo) foram adicionados resultando na formação de uma mistura turva, que se tornou transparente após 15 minutos de agitação a 0°C, e então retornou para um estado turvo durante 10 minutos adicionais, ela permaneceu turva durante o restante do período de agitação. A solução de acetona foi filtrada através de um leito curto de gel de sílica de tipo-H após um tempo de reação total de cerca de uma hora, e o leito foi então lavado com mais acetona. O filtrado foi concentrado no rotovapor à temperatura do banho de 19°C. O produto bruto foi subdividido em duas partes, 7,75 g cada, para purificação. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% de acetato de etila 100% de acetato de etila em hexanos; duas colunas de 330 g) para produzir 4-(metilsulfonil)ciclo-hexanona (16,7 g, 100% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,29 (tt, J=11,0, 3,9 Hz, 1H), 2,94 (s, 3H), 2,73-2,62 (m, 2H), 2,58-2,37 (m, 4H), 2,15 (qd, J=11,9, 4,5 Hz, 2H).Preparação de 2-(CIS-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído and 2-(TRANS-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído

Etapa 1. Preparação de (CIS)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol e (TRANS)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol

[00334] A uma solução de 4-(metilsulfonil)ciclo-hexanona (1,03 g, 5,84 mmol) em THF (40 mL) a 0°C foi adicionado via cânula brometo de alilmagnésio (7,60 mL, 7,60 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 30 min. A reação foi inativada pela adição de solução saturada de NH4Cl (25 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (5 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (70% de acetato de etila com 1% de metanol/30% de hexanos 100% de acetato de etila com 1% de metanol; coluna de 40 g) para produzir (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol (374 mg, 1,713 mmol, 29% de rendimento) como um sólido branco e (trans)-1-alil-4- (metilsulfonil)ciclo-hexanol (551 mg, 2,52 mmol, 43% de rendimento) como um óleo incolor.(cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol:1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 5,96-5,79 (m, 1H), 5,26-5,21 (m, 1H), 5,18 (ddt, J=17,1, 2,1, 1,2 Hz, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,80 (tt, J=12,5, 3,6 Hz, 1H), 2,25 (d, J=7,5 Hz, 2H), 2,15-2,07 (m, 2H), 1,97 (qd, J=13,0, 3,8 Hz, 2H), 1,881,81 (m, 2H), 1,52-1,42 (m, 2H); 13C RMN (100MHz, CDCl3) δ 132,50, 120,02, 69,06, 62,26, 47,86, 36,85, 35,67, 21,13. A estrutura de (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol foi confirmada por cristalografia de raios-X. (trans)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol: 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 5,88 (ddt, J=17,2, 10,1, 7,4 Hz, 1H), 5,28-5,16 (m, 2H), 2,98-2,91 (m, 1H), 2,90 (s, 3H), 2,35 (d, J=7,5 Hz, 2H), 2,23-2,14 (m, 2H), 2,02-1,93 (m, 2H), 1,90-1,78 (m, 2H), 1,57-1,46 (m, 2H); 13C RMN (100MHz, CDCl3) δ 132,62, 120,19, 69,20, 62,41, 48,00, 36,98, 35,83, 21,29.Etapa 2a. Preparação de 2-((CIS)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído (Método A)

[00335] A uma solução de (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol (125 mg, 0,573 mmol) em dioxano (4,4 mL) e água (1,1 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (0,133 mL, 1,145 mmol), tetróxido de ósmio (4% em água) (0,070 mL, 0,011 mmol), e periodato de sódio (490 mg, 2,290 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente sob agitação durante 14 h à medida que o banho de gelo-água fundia-se. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo HCl 1N (aq) (10 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (20 x 15 mL). (Foi difícil extrair o produto da camada aquosa.) As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de NaHCO3 (8 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. TLC da solução de lavagem de bicarbonato mostrou que um pouco de produto entrou na camada aquosa. Esta camada foi concentrada. O resíduo foi suspenso em diclorometano e, juntamente com o resíduo do extrato orgânico, foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (80% de acetato de etila com 3% de metanol/20% de hexanos 100% de acetato de etila com 3% de metanol; coluna de 40 g) para produzir 2-((cis)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído (94,4 mg, 0,429 mmol, 75% de rendimento) como um óleo incolor que se solidificou em repouso: 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 9,87 (t, J=1,3 Hz, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,82-2,75 (m, 1H), 2,68 (d, J=1,0 Hz, 2H), 2,131,98 (m, 6H), 1,50-1,39 (m, 2H). Etapa 2a. Preparação de 2-((CIS)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (Método B)

[00336] (trans)-1-Alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol (3,4 g, 15,57 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (160 mL) e MeOH (32,0 mL) em um frasco de fundo redondo de 500 mL. N-óxido de N-metilmorfolina (NMO) (2,189 g, 18,69 mmol) foi adicionado e a mistura foi esfriada para -78°C [Schwartz, C., Raible, J., Mott, K., Dussault, P. H. Org. Lett. 2006, 8, 3199-3201]. Ozônio foi borbulhado através da mistura de reação até que a solução se tornasse saturada com ozônio (alterou-se para uma cor azul) e durante vários minutos depois (tempo total 25 min). Nitrogênio foi então borbulhado através da mistura de reação até o desaparecimento da cor azul. Sulfeto de dimetila (11,52 mL, 156 mmol) foi então adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 16 h. A mistura foi concentrada sob vácuo. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (50% de acetato de etila com 1% de metanol/50% de hexanos 95% de acetato de etila com 1% de metanol/5% de hexanos; coluna de 330 g) para produzir 2-((1s,4s)-1- hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (3,31 g, 15,03 mmol, 96% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 9,87 (t, J=1,1 Hz, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,82-2,76 (m, 1H), 2,67 (d, J=1,3 Hz, 2H), 2,13-1,98 (m, 6H), 1,50-1,38 (m, 2H); 13C RMN (101MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 202,5, 68,9, 61,9, 54,9, 36,8, 35,9, 20,8.Etapa 2b. Preparação de 2-((TRANS)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído

[00337] A uma solução de (trans)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol (242 mg, 1,108 mmol) em dioxano (10 mL) e água (2,5 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (0,258 mL, 2,217 mmol), tetróxido de ósmio (4% em água) (0,135 mL, 0,022 mmol), e periodato de sódio (948 mg, 4,43 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperatura ambiente sob agitação durante 14 h à medida que o banho de gelo-água fundia-se. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo HCl 1N (aq) (10 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (20 x 20 mL). (Foi difícil extrair o produto da camada aquosa.) As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de NaHCO3 (8 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. TLC da solução de lavagem de bicarbonato mostrou que um pouco de produto entrou na camada aquosa. Esta camada foi concentrada. O resíduo foi suspenso em diclorometano e, juntamente com o resíduo do extrato orgânico, foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (80% de acetato de etila com 3% de metanol/20% de hexanos 100% de acetato de etila com 3% de metanol; coluna de 40 g) para produzir 2-((trans)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído (191 mg, 0,867 mmol, 78% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 9,89 (t, J=1,3 Hz, 1H), 3,13 (br. s., 1H), 3,02-2,93 (m, 1H), 2,91 (s, 3H), 2,79 (d, J=1,3 Hz, 2H), 2,29-2,17 (m, 2H), 2,13-2,04 (m, 2H), 1,92-1,78 (m, 2H), 1,68-1,57 (m, 2H). Exemplo 2-19 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((CIS)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((CIS)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00338] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (550 mg, 0,838 mmol), 2-((cis)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (406 mg, 1,845 mmol), e complexo de borano-2-picolina (197 mg, 1,845 mmol) em MeOH (8 mL) e ácido acético (1,6 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. LC/MS mostrou um pico com a massa desejada juntamente com um pouco do material de partida restante. Mais 2-((cis)-1- hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (56 mg, 0,254 mmol, 0,3 eq) e complexo de borano-2-picolina (27 mg, 0,252 mmol, 0,3 eq) foram adicionados e a agitação foi continuada durante 3 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e solução aquosa saturada de carbonato de sódio (2 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (25 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 70% de acetona:metanol 9:1/30% de hexanos, gradiente de 20 min; coluna de 80 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil) etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (566 mg, 0,658 mmol, 78% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO- d δ 7,41-7,31 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,23-5,16 (m, 2H), 5,13 (dd, J=6,2, 1,8 Hz, 1H), 4,75 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,64-4,55 (m, 2H), 4,53-4,46 (m, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,83-2,69 (m, 3H), 2,64-2,51 (m, 2H), 2,19-1,02 (m, 36H), 1,70 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 860,6 [(M+H)+, calculada para C53H79FNO5S 860,6], tR = 4,63 min (Método 2-3).

[00339] Etapa 2. Uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (537 mg, 0,624 mmol) em 1,4-dioxano (9 mL) e EtOH (3 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (1,561 mL, 3,12 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2,5 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi diluída com metanol (4 mL) (para dissolver o precipitado), foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-1- (fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)- 1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (438 mg, 0,495 mmol, 79% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,27-5,21 (m, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,65-4,56 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 3,47-3,33 (m, 2H), 3,08-2,99 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 2,89-2,80 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,8 Hz, 1H), 2,31-1,11 (m, 37H), 1,75 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 770,5 [(M+H)+, calculada para C46H73FNO5S 770,5], tR = 4,22 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,75 min; HPLC (Método 2-2): tR = 19,89 min. Exemplo 2-20 Preparação de ácido (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((CIS)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil) etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((CIS)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil) etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila

[00340] A uma suspensão de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3, 3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- benzila (100 mg, 0,152 mmol) e 2-((cis)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído (60,4 mg, 0,274 mmol) em MeOH (1,2 mL) foi adicionado complexo de borano-2-picolina (29,4 mg, 0,274 mmol) seguido por ácido acético (0,24 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e solução aquosa saturada de carbonato de sódio (1 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 5 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (20% de acetato de etila com 5% de metanol/80% de hexanos 90% de acetato de etila com 5% de metanol/10% de hexanos; coluna de 24 g) para produzir 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (120 mg, 0,139 mmol, 92% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,41-7,30 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,235,15 (m, 2H), 5,11 (d, J=5,7 Hz, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,64-4,55 (m, 2H), 4,514,45 (m, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,83-2,69 (m, 4H), 2,64-2,49 (m, 2H), 2,21-0,90 (m, 36H), 1,70 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,85 (s, 3H); LC/MS m/e 860,6 [(M+H)+, calculada para C53H79FNO4 812,6], tR = 4,62 min (Método 2-3).

[00341] Etapa 2. Uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-benzila (115 mg, 0,134 mmol) em 1,4-dioxano (1,5 mL) e MeOH (0,5 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,334 mL, 0,668 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 4 h. A reação foi completa. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e foi parcialmente neutralizada pela adição de HCl 6N (70 μL). A mistura foi então filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-5). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- ((cis)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico TFA (72,6 mg, 0,082 mmol, 61% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,65-4,57 (m, 1H), 4,54-4,46 (m, 1H), 3,47-3,34 (m, 2H), 3,09-2,99 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 2,902,81 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,8 Hz, 1H), 2,35-1,71 (m, 21H), 1,75 (s, 3H), 1,651,32 (m, 14H), 1,17 (s, 3H), 1,13 (d, J=6,0 Hz, 2H), 1,09 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 770,5 [(M+H)+, calculada para C46H73FNO5S 770,5], tR = 4,33 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-5): tR = 11,55 min; HPLC (Método 2-6): tR = 11,20 min. Exemplo 2-21 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((TRANS)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil) etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((TRANS)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil) etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00342] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (150 mg, 0,229 mmol), 2-((trans)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído (126 mg, 0,572 mmol), e complexo de borano-2-picolina (61,1 mg, 0,572 mmol) em metanol (2,5 mL) e ácido acético (0,5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e solução aquosa saturada de carbonato de sódio (2 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 50% de acetona:metanol 9:1/50% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo- hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (143 mg, 0,166 mmol, 73% de rendimento) como um filme incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 7,40-7,32 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,23-5,16 (m, 2H), 5,13 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,73 (d, J=1,7 Hz, 1H), 4,63-4,56 (m, 2H), 4,52-4,46 (m, 1H), 2,99-2,91 (m, 1H), 2,89 (s, 3H), 2,83-2,76 (m, 1H), 2,71-2,50 (m, 3H), 2,191,04 (m, 36H), 1,69 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 860,6 [(M+H)+, calculada para C53H79FNO5S 860,6], tR = 4,61 min (Método 2-3).

[00343] Etapa 2. Uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (80 mg, 0,093 mmol) em 1,4-dioxano (1 mL) e EtOH (0,5 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,232 mL, 0,465 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1). O produto (59 mg) continha uma quantidade significativa de uma impureza (ca. 5%-10%). O produto foi então repurificado por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-6). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (27,2 mg, 33% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,66-4,57 (m, 1H), 4,54-4,47 (m, 1H), 3,42 (dd, J=8,2, 4,7 Hz, 1H), 3,36-3,28 (m, 1H), 3,18-3,10 (m, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,91-2,83 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,31-1,11 (m, 37H), 1,75 (s, 3H), 1,14 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,94 (s, 3H); LC/MS m/e 770,5 [(M+H)+, calculada para C46H73FNO5S 770,5], tR = 4,20 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,74 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,05 min. Exemplo 2-22 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxi-4-((metilsulfonil)oxi)ciclo-hexil)etil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de metanossulfonato de 4-oxociclo-hexila

[00344] Cloreto de metanossulfonila (0,746 mL, 9,64 mmol) e trietilamina (1,343 mL, 9,64 mmol) foram adicionados a uma solução de 4- hidroxiciclo-hexanona (1 g, 8,76 mmol) em diclorometano (10 mL). A mistura de reação foi agitada à rt durante 16 h. A mistura foi concentrada e o produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (0% de hexanos 60% de acetona:metanol 9:1/40% de hexanos, coluna de 80 g, X = 220 nm) para produzir metanossulfonato de 4-oxociclo-hexila (1,65 g, 8,58 mmol, 98% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,14 (tt, J=5,5, 2,8 Hz, 1H), 3,11 (s, 3H), 2,75-2,59 (m, 2H), 2,49-2,28 (m, 4H), 2,24-2,06 (m, 2H).Etapa 2. Preparação de metanossulfonato de 4-alil-4-hidroxiciclo-hexila

[00345] A uma solução de brometo de alilmagnésio (9,83 mL, 9,83 mmol) em THF (75 mL) a -78°C foi adicionado metanossulfonato de 4- oxociclo-hexila (1,8 g, 9,36 mmol). A mistura foi agitada a -78°C durante 2 h. A reação foi inativada pela adição de solução saturada de NH4Cl (60 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com éter (5 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir metanossulfonato de 4-alil-4- hidroxiciclo-hexila (1,15 g, 4,91 mmol, 52% de rendimento) como um óleo incolor. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de hexanos:acetato de etila:MeOH (4:4:1)/90% de hexanos 50% de hexanos:acetato de etila:MeOH (4:4:1)/50% de hexanos; coluna de 120g) para produzir metanossulfonato de 4-alil-4-hidroxiciclo-hexila (1,15 g, 4,91 mmol, 52% de rendimento): 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,83 (ddt, J=17,2, 9,9, 7,5 Hz, 1H), 5,20-5,04 (m, 2H), 4,68-4,53 (m, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,18 (d, J=7,3 Hz, 2H), 1,99-1,87 (m, 4H), 1,71 (s, 2H), 1,53-1,37 (m, 2H).Etapa 3. Preparação de metanossulfonato de 4-hidroxi-4-(2-oxoetil)ciclo- hexila

[00346] A uma solução de metanossulfonato de 4-alil-4-hidroxiciclo- hexila (182 mg, 0,777 mmol) em dioxano (12 mL) e água (3,00 mL) a 0°C foram adicionados 2,6-lutidina (0,181 mL, 1,553 mmol), tetróxido de ósmio (2,5% em t-BuOH) (0,195 mL, 0,016 mmol), e periodato de sódio (665 mg, 3,11 mmol). A mistura de reação foi permitida aquecer para a temperature ambiente sob agitação durante 14 h à medida que o banho de gelo-água fundia-se. A mistura de reação foi transferida para um funil de separação contendo água (50 mL) e solução aquosa saturada de NaHCO3 (50 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (0% 8% de metanol em CH2CI2; coluna de 40 g) para produzir metanossulfonato de 4-hidroxi-4-(2-oxoetil)ciclo-hexila (91 mg, 0,385 mmol, 50% de rendimento) como um óleo incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,86 (t, J=1,3 Hz, 1H), 4,66 (tt, J=10,5, 4,2 Hz, 1H), 3,03 (s, 3H), 2,65 (d, J=1,3 Hz, 2H), 2,12-2,00 (m, 2H), 2,00-1,89 (m, 4H), 1,54-1,43 (m, 2H). Etapa 4. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxi-4-((metilsulfonil)oxi)ciclo- hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00347] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4, 5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (60 mg, 0,091 mmol), metanossulfonato de 4-hidroxi-4-(2-oxoetil)ciclo-hexila (32,4 mg, 0,137 mmol), e complexo de borano-2-picolina (14,68 mg, 0,137 mmol) em MeOH (1 mL) e ácido acético (0,200 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR, 5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxi-4-((metilsulfonil)oxi) ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (15 mg, 17% de rendimento). O produto bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LC/MS m/e 876,6 [(M+H)+, calculada para C53H78FNO6S 876,6], tR = 2,66 min (Método 2-1).

[00348] Etapa 5. Hidróxido de sódio (0,038 mL, 0,150 mmol) foi adicionado a uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxi-4-((metilsulfonil)oxi)ciclo-hexil)etil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (13,14 mg, 0,015 mmol) em dioxano (0,5 mL) e etanol (0,125 mL). A mistura de reação foi agitada a 70°C durante 16 h. O material bruto foi filtrado através de um filtro de seringa, e foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-2, gradiente de 50%-100% de B durante 10 minutos, então a 15 minutos mantido a 100% de B) para produzir o produto purificado, ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroxi-4- ((metilsulfonil)oxi)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (3,2 mg, 3,87 μmol, 26% de rendimento): 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=5,2 Hz, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,76-4,67 (m, 2H), 4,65-4,57 (m, 1H), 4,56-4,47 (m, 1H), 3,79 (s, 1H), 3,40 (d, J=12,0 Hz, 1H), 3,35-3,25 (m, 1H), 3,15 (q, J=7,1 Hz, 1H), 3,10 (s, 3H), 2,90 (br. s., 1H), 2,62 (d, J=17,2 Hz, 1H), 2,35-0,91 (m, 35H), 1,75 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,97 (s, 3H); LC/MS m/e 786,8 [(M+H)+, calculada para C46H72FNO6S 786,5], tR = 2,46 min (Método 2,1); HPLC (Método 2-3): tR = 2,54 min; HPLC (Método 2-4): tR = 2,29 min. Exemplo 2-23 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4-metilpiperidin-1-il)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo- hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-cloroetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila

[00349] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (100 mg, 0,152 mmol), 2-cloroacetaldeído (0,028 mL, 0,229 mmol), e complexo de borano-2-picolina (24,46 mg, 0,229 mmol) em MeOH (1 mL) e ácido acético (0,2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (10 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 15 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 50% de acetona:metanol 9:1/50% de hexanos; coluna de 40 g, À = 220 nm) para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-cloroetil)amino)-5a,5b, 8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil) ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (57 mg, 0,079 mmol, 52% de rendimento) como uma espuma branca: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,40-7,31 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,23-5,16 (m, 2H), 5,14 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,73 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,63-4,56 (m, 2H), 4,53-4,46 (m, 1H), 3,72-3,65 (m, 2H), 2,85-2,72 (m, 2H), 2,67-2,57 (m, 2H), 2,17-1,02 (m, 27H), 1,71 (s, 3H), 1,08 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 718,6 [(M+H)+, calculada para C46H66ClFNO2 718,5], tR = 4,82 min (Método 2-3).

[00350] Etapa 2. Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-((2-cloroetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (15 mg, 0,021 mmol), 4-metilpiperidin-4-ol (7,21 mg, 0,063 mmol), base de Hünig (0,018 mL, 0,104 mmol), e iodeto de potássio (4,16 mg, 0,025 mmol) em DMSO (0,4 mL) foi aquecida a 80°C durante 14 horas. A mistura de reação foi então esfriada para a RT e NaOH (0,052 mL, 0,104 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura de reação foi filtrada e purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1) para produzir ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • 2 TFA (9,5 mg, 48% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,65-4,56 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 3,85-3,70 (m, 4H), 3,56 (br. s., 2H), 3,43 (br. s., 2H), 2,85-2,76 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,9 Hz, 1H), 2,31-1,11 (m, 32H), 1,75 (s, 3H), 1,35 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 707,6 [(M+H)+, calculada para C45H72FN2O3 707,6], tR = 4,31 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,63 min; HPLC (Método 2-2): tR = 19,58 min. Exemplo 2-24 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oxooxazolidin-3- il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12, 13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 3-(2-bromoetil)oxazolidin-2-ona

[00351] A uma solução de 3-(2-hidroxietil)oxazolidin-2-ona (1,0 g, 7,63 mmol) em CH2Cl2 (30 mL) foi adicionado tetrabrometo de carbono (3,03 g, 9,15 mmol). Após esfriar a solução para 0°C, trifenilfosfina (2,80 g, 10,68 mmol) foi adicionada em porções. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi concentrada. O resíduo foi suspenso em éter (75 mL), e a suspensão foi agitada durante 30 min. O sólido foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (1% 4% de metanol em diclorometano; coluna de 220g). O primeiro composto isolado da cromatografia foi principalmente o produto (1,01 g) como um óleo incolor, que se solidificou em repouso (devido à presença de óxido de trifenilfosfina). O produto foi repurificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (0,5% 3% de metanol em CH2Q2; coluna de 120 g) para produzir 3-(2- bromoetil)oxazolidin-2-ona (785 mg, 4,05 mmol, 53% de rendimento) como um óleo incolor. 1H RMN indicou que o produto estava contaminado com óxido de trifenilfosfina. O óxido de trifenilfosfina estava presente como uma razão molar de 7:1 entre o produto e o óxido de trifenilfosfina. O produto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,46-4,35 (m, 2H), 3,82-3,67 (m, 4H), 3,58-3,52 (m, 2H).Etapa 2. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oxooxazolidin-3- il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00352] A uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (70 mg, 0,107 mmol), 3-(2-bromoetil)oxazolidin-2-ona (72,5 mg, 0,373 mmol), fosfato de potássio tribásico (91 mg, 0,427 mmol), e iodeto de potássio (62,0 mg, 0,373 mmol) em um vaso de pressão secado em forno foi adicionada acetonitrila (1,0 mL). A tampa foi vedada e a mistura de reação foi aquecida a 120°C durante 14 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (10 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 15 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 30% de acetona:metanol 9:1/70% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(2-oxooxazolidin-3-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il) ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (54,5 mg, 0,071 mmol, 66% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz,CLOROFÓRMIO-d) δ 7,41-7,32 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,23-5,16 (m, 2H), 5,13 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,72 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,63-4,55 (m, 2H), 4,53-4,44 (m, 1H), 4,38-4,32 (m, 2H), 3,77-3,62 (m, 2H), 3,49-3,41 (m, 1H), 3,33 (dt, J=14,1, 5,5 Hz, 1H), 2,70 (ddd, J=12,0, 7,3, 5,0 Hz, 1H), 2,65-2,52 (m, 3H), 2,19-1,10 (m, 27H), 1,70 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 769,6 [(M+H)+, calculada para C49H70FN2O4 769,5], tR = 4,65 min (Método 2-2).

[00353] Etapa 3. Uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(2-oxooxazolidin-3-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il) ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (53 mg, 0,069 mmol) em 1,4- dioxano (0,7 mL) e EtOH (0,35 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,172 mL, 0,345 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1) para produzir ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(2-oxooxazolidin-3-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6, 7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (31,4 mg, 62% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,86 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,64-4,57 (m, 1H), 4,55-4,43 (m, 3H), 3,84 (q, J=8,2 Hz, 1H), 3,80-3,72 (m, 3H), 3,65-3,58 (m, 1H), 3,57-3,51 (m, 1H), 2,85-2,77 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,321,11 (m, 27H), 1,76 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 679,5 [(M+H)+, calculada para C42H64FN2O4 679,5], tR = 4,18 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,68 min; HPLC (Método 2-2): tR = 19,92 min. Exemplo 2-25 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oxoimidazolidin-1- il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-metilbenzenossulfonato 2-(2-oxoimidazolidin-1- il)etila

[00354] A uma solução de 1-(2-hidroxietil)imidazolidin-2-ona (500 mg, 3,84 mmol) em piridina (5 mL) a 0°C foi adicionado cloreto de p- toluenossulfonila (806 mg, 4,23 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 16 h enquanto se permitia que a mistura de reação se aquecesse lentamente para a temperatura ambiente por dissipação do banho de gelo- água. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo acetato de etila (50 mL). A camada aquosa foi lavada com HCl 1N (2 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de NaHCO3 (25 mL), salmoura (25 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (3% 7% de metanol em diclorometano; coluna de 120 g) para produzir 4-metilbenzenossulfonato 2-(2-oxoimidazolidin-1-il)etila (356 mg, 1,252 mmol, 33% de rendimento) como um sólido amarelo: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,86-7,77 (m, 2H), 7,38 (d, J=8,0 Hz, 2H), 4,51 (br. s., 1H), 4,17 (t, J=5,0 Hz, 2H), 3,59-3,52 (m, 2H), 3,47 (t, J=5,0 Hz, 2H), 3,43-3,35 (m, 2H), 2,48 (s, 3H); LC/MS m/e 285,1 [(M+H)+, calculada para C12H17N2O4S 285,1], tR = 1,58 min (Método 2-1).Etapa 2. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oxoimidazolidin-1- il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b, 12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-benzila

[00355] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (40 mg, 0,061 mmol), 4-metilbenzenossulfonato 2-(2-oxoimidazolidin-1-il)etila (69,4 mg, 0,244 mmol), fosfato de potássio tribásico (64,7 mg, 0,305 mmol), e iodeto de potássio (50,6 mg, 0,305 mmol) foram combinados em um frasco. Acetonitrila (1 mL) foi adicionada, o frasco foi vedado, e a mistura de reação foi aquecida a 120°C durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (10 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 40% de acetona:metanol 9:1/60% de hexanos; coluna de 40 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(2-oxoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen- 9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (31 mg, 0,040 mmol, 66% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,38-7,33 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=2,4 Hz, 2H), 5,13 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,72 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,63-4,55 (m, 2H), 4,53-4,45 (m, 1H), 4,32 (s, 1H), 3,61-3,47 (m, 3H), 3,46-3,35 (m, 4H), 3,24 (dt, J=13,8, 5,3 Hz, 1H), 2,70-2,52 (m, 4H), 2,20-0,85 (m, 26H), 1,70 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,85 (s, 3H); LC/MS m/e 768,6 [(M+H)+, calculada para C49H71FN3O3 768,5], tR = 4,61 min (Método 22).

[00356] Etapa 3. Uma solução de 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(2-oxoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (31 mg, 0,040 mmol) em 1,4- dioxano (0,5 mL) e EtOH (0,25 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (0,101 mL, 0,202 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1) para produzir ácido (S)-1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(2-oxoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (19,0 mg, 58% de rendimento) como um sólido amorfo branco. 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,65-4,56 (m, 1H), 4,55-4,46 (m, 1H), 3,733,66 (m, 1H), 3,65-3,51 (m, 6H), 3,47-3,43 (m, 2H), 2,84-2,75 (m, 1H), 2,61 (d, J=17,5 Hz, 1H), 2,32-1,08 (m, 26H), 1,76 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,94 (s, 3H); LC/MS m/e 678,5 [(M+H)+, calculada para C42H65FN3O3 678,5], tR = 4,30 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,88 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,30 min. Exemplo 2-26 Preparação de ácido (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(3-metil-2- oxoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-metilbenzenossulfonato de 2-(3-metil-2- oxoimidazolidin-1-il)etila

[00357] A uma solução de 4-metilbenzenossulfonato 2-(2- oxoimidazolidin-1-il)etila (135 mg, 0,475 mmol) em THF (4 mL) a 0°C foi adicionada bis(trimetilsilil)amida de sódio (0,522 mL, 0,522 mmol). Após agitação durante 5 min, iodometano (0,119 mL, 1,899 mmol) foi adicionado via seringa. O banho de esfriamento foi removido e a mistura foi permitida aquecer para a temperatura ambiente e foi agitada durante 2 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (4 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (1% 5% de metanol em CH2Cl2; coluna de 40 g) para produzir 4-metilbenzenossulfonato de 2-(3- metil-2-oxoimidazolidin-1-il)etila (91,3 mg, 0,306 mmol, 65% de rendimento) como um óleo verde pálido: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,83-7,77 (m, 2H), 7,37 (d, J=8,0 Hz, 2H), 4,15 (t, J=5,1 Hz, 2H), 3,45 (t, J=5,0 Hz, 2H), 3,43-3,37 (m, 2H), 3,29-3,23 (m, 2H), 2,77 (s, 3H), 2,47 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 299,2 [(M+H)+, calculada para C13H19N2O4S 299,1], tR = 1,61 min (Método 2-1).Etapa 2. Preparação de 1-(2-bromoetil)-3-metilimidazolidin-2-ona

[00358] A uma solução de 4-metilbenzenossulfonato de 2-(3-metil-2- oxoimidazolidin-1-il)etila (158 mg, 0,530 mmol) em THF (5 mL) à temperatura ambiente foi adicionado brometo de lítio (138 mg, 1,589 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro. A mistura de reação foi então aquecida a 60°C durante 3 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de NaHCO3 (5 mL) e água (5 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (4 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (2% 5% de metanol em CH2Cl2; coluna de 40 g) para produzir 1-(2-bromoetil)-3- metilimidazolidin-2-ona (92,3 mg, 0,446 mmol, 84% de rendimento) como um óleo amarelo: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,65-3,60 (m, 2H), 3,52-3,44 (m, 4H), 3,38-3,32 (m, 2H), 2,82 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 207,2 [(M+H)+, calculada para C6H12BrN2O 207,0], tR = 1,70 min (Método 21).Etapa 3. Preparação de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(3-metil-2- oxoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7, 7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila

[00359] A uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS, 11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila (60 mg, 0,091 mmol), 1-(2-bromoetil)-3-metilimidazolidin-2-ona (56,8 mg, 0,274 mmol), fosfato de potássio tribásico (78 mg, 0,366 mmol), e iodeto de potássio (45,6 mg, 0,274 mmol) em um vaso de pressão secado em forno foi adicionada acetonitrila (1,0 mL). A tampa foi vedada e a mistura de reação foi aquecida a 120°C durante 14 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo água (5 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 50% de acetona:metanol 9:1/50% de hexanos; coluna de 24 g, X = 220 nm) para produzir 1-(fluorometil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(3-metil-2-oxoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (47,7 mg, 0,061 mmol, 66% de rendimento) como uma espuma branca: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,40-7,33 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,235,16 (m, 2H), 5,14 (dd, J=6,2, 1,6 Hz, 1H), 4,72 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,63-4,56 (m, 2H), 4,53-4,47 (m, 1H), 3,45-3,20 (m, 6H), 2,82 (s, 3H), 2,68-2,51 (m, 4H), 2,19-0,87 (m 27H), 1,70 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,85 (s, 3H); LC/MS m/e 782,6 [(M+H)+, calculada para C50H73FN3O3 782,6], tR = 4,56 min (Método 2-3).

[00360] Etapa 4. Uma solução de 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a- ((2-(3-metil-2-oxoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (46 mg, 0,059 mmol) em 1,4-dioxano (0,7 mL) e EtOH (0,35 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (2M aq) (0,147 mL, 0,294 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, foi filtrada através de um filtro de seringa, e foi purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1) para produzir ácido (S)-1- (fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-3a-((2-(3-metil-2-oxoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (35,6 mg, 74% de rendimento) como um sólido amorfo branco:

[00361] 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,64-4,57 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 3,63-3,40 (m, 8H), 2,84 (s, 3H), 2,85-2,81 (m, 1H), 2,61 (d, J=16,5 Hz, 1H), 2,31-1,12 (m, 27H), 1,76 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 692,6 [(M+H)+, calculada para C43H67FN3O3 692,5], tR = 4,19 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 18,80 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,44 min. Exemplo 2-27 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-(4-acetil-3,3-dimetil-2-oxopiperazin-1-il)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11, 11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1- (fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico

Etapa 1. Preparação de 4-acetil-3,3-dimetilpiperazin-2-ona

[00362] A uma solução de 3,3-dimetilpiperazin-2-ona (50 mg, 0,390 mmol) em CH2Cl2 (1,2 mL) a 0°C foi adicionada N,N-di-isopropiletilamina (0,204 mL, 1,170 mmol) seguida por adição lenta de cloreto de acetila (0,031 mL, 0,429 mmol) . A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 4 h. A mistura foi então concentrada. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (25% de CH2Cl2:MeOH 4:1 com 0,2% de NH4OH/75% de CH2CI2 100% de CHAMeOH 4:1 com 0,2% NH4OH; coluna de 40 g, X = 220 nm) para produzir 4-acetil-3,3-dimetilpiperazin-2-ona (59,6 mg, 0,350 mmol, 90% de rendimento) como um sólido incolor: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,64-3,57 (m, 2H), 3,46-3,39 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,77 (s, 6H); LC/MS (ESI) m/e 171,3 [(M+H)+, calculada para C8H15N2O2 171,2], tR = 0,43 min (Método 2-1).Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-cloroetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- benzila

[00363] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a] crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (100 mg, 0,152 mmol), 2-cloroacetaldeído (0,028 mL, 0,229 mmol), e complexo de borano-2-picolina (24,46 mg, 0,229 mmol) em MeOH (1 mL) e ácido acético (0,2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (10 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 15 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% de acetona:metanol 9:1/90% de hexanos 50% de acetona:metanol 9:1/50% de hexanos; coluna de 40 g, À = 220 nm) para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-cloroetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a, 11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (57 mg, 0,079 mmol, 52% de rendimento) como uma espuma incolor: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,40-7,31 (m, 5H), 5,33 (br. s., 1H), 5,23-5,16 (m, 2H), 5,14 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,73 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,63-4,56 (m, 2H), 4,53-4,46 (m, 1H), 3,72-3,65 (m, 2H), 2,85-2,72 (m, 2H), 2,67-2,57 (m, 2H), 2,17-1,02 (m, 27H), 1,71 (s, 3H), 1,08 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS m/e 718,6 [(M+H)+, calculada para C46H66ClFNO2 718,5], tR = 4,82 min (Método 2-3).

[00364] Etapa 3. A uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-cloroetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-benzila (22 mg, 0,031 mmol), 4-acetil-3,3-dimetilpiperazin-2-ona (15,64 mg, 0,092 mmol), e brometo de tetrabutilamônio (9,87 mg, 0,031 mmol) em THF (0,6 mL) a 0°C sob nitrogênio foi adicionado bis(trimetilsilil)amida de sódio (0,092 mL, 0,092 mmol). A mistura foi agitada a 0°C durante 5 min. O banho de esfriamento foi removido e a mistura de reação foi então aquecida a 75°C durante 14 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em dioxano/metanol/água e a solução foi neutralizada pela adição de HCl 2 N (0,10 mL). A solução foi filtrada e purificada por HPLC preparativa em fase reversa (Método 2-1) para produzir ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-acetil- 3,3-dimetil-2-oxopiperazin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico • TFA (9,6 mg, 34% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 5,39 (br. s., 1H), 5,25 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,65-4,57 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 3,96-3,76 (m, 3H), 3,73-3,64 (m, 3H), 3,53 (t, J=4,1 Hz, 2H), 2,82 (t, J=11,1 Hz, 1H), 2,61 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,31-1,12 (s, 27H), 2,22 (s, 3H), 1,79 (s, 3H), 1,77 (s, 6H), 1,22 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,96 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 762,6 [(M+H)+, calculada para C47H73FN3O4 762,6], tR = 4,29 min (Método 2-2); HPLC (Método 2-1): tR = 19,04 min; HPLC (Método 2-2): tR = 20,23 min.

[00365] ENSAIO DE CULTURA DE CÉLULAS COM HIV - Células MT-2 e células 293T foram obtidas do “NIH AIDS Research and Reference Reagent Program”. As células MT-2 foram propagadas em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino termoinativado, 100 μg/mL de penicilina G e até 100 unidades/mL de estreptomicina. As células 293T foram propagadas em meio DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS, Fetal Bovine Serum) termoinativado, 100 unidades/mL de penicilina G e 100 μg/mL de estreptomicina. O clone de DNA pró-viral de NL4-3 foi obtido junto ao “NIH AIDS Research and Reference Reagent Program”. Um vírus NL4-3 recombinante, no qual uma seção do gene nef de NL4-3 foi substituída pelo gene luciferase de Renilla, foi usado como o vírus de referência. Adicionalmente, o resíduo Gag P373 foi convertido em P373S. Resumidamente, o vírus recombinante foi preparado por transfecção do clone pró-viral alterado de NL4-3. As transfecções foram realizadas em células 293T usando Lipofectamine Plus® da Invitrogen (Carlsbad, CA), de acordo com a instrução do fabricante. O vírus foi titulado em células MT-2 usando atividade de enzima luciferase como um marcador. Luciferase foi quantificada utilizando o kit Dual Luciferase® da Promega (Madison, WI), com modificações no protocolo do fabricante. A solução diluída de Lise Passiva foi pré-misturada com o Reagente de Ensaio de Luciferase ressuspenso e o Substrato Stop & Glo® ressuspenso (razão de 2:1:1). Cinquenta (50) μL da mistura foram adicionados a cada poço aspirado em placas de ensaio e a atividade de luciferase foi medida imediatamente em Wallac TriLux (Perkin- Elmer). Atividades antivirais de inibidores do vírus recombinante foram quantificadas pela medição da atividade de luciferase em células infectadas durante 4-5 dias com NLRluc recombinantes nas presentes diluições seriais do inibidor. Os dados de EC50 para os compostos são mostrados na Tabela 1 abaixo.

Determinação de EC50 para vírus WT, EC50 para vírus A364V, e EC50 para vírus 92UG029:

[00366] WT refere-se a vírus HIV de tipo selvagem.

[00367] HIV-1 NL4-3 expressando o gene luciferase de Renilla foi convertido no vírus gag A364V por mutagênese sítio-direcionada. A364V é um mutante sítio-direcionado.

[00368] HIV-1 92UG029 foi obtido do NIH (Número de Catálogo: 1650). Este é um vírus X4 (SI), Gag subtipo A e Env subtipo A, de Uganda. Referência: “WHO Network for HIV Isolation and Characterization”. AIDS Res Hum Retroviruses 10:1359, 1994. A região Gag/Pr do 92UG029 foi usada para substituir aquela em um vírus HIV-1 NL4-3 que expressa gene luciferase de Renilla.

[00369] Ambos os vírus recombinantes foram usados como descrito acima no ensaio de culturas de células com HIV para o vírus NL4-3. Os dados de EC50 WT, EC50 A364V e EC50 92UG029 para os compostos são mostrados na Tabela 1 e na Tabela 2.

[00370] Os dados da Tabela 2 foram gerados com uma entrada viral 3x maior que os dados gerados para os dados de seleção regular relatados na Tabela 1.Dados Biológicos Principais para EC50s

Dados Comparativos

[00371] Sob este aspecto, os Compostos Comparativos A e B (que são apresentados e descritos em US 20130210787 - WO 2013/123019), e também o Composto 2 como parte da presente invenção, foram preparados como uma mistura de 1-(R) e 1-(S)-diastereômeros e avaliados para a potência em relação aos vírus WT, vírus resistente A364V, e vírus clado A 92UG029. O composto A apresentou boa potência em relação ao vírus WT, mas foi cerca de 7 vezes e >100 vezes menos potente que o Composto 2 em relação aos vírus A364V e 92UC029, respectivamente. O Composto B teve potência comparável em relação ao vírus WT quando comparado com o Composto 2. Entretanto, o Composto B foi 6 vezes menos potente que o Composto 2 em relação aos outros dois vírus (A364V e 92UC029). Os compostos selecionados foram também avaliados para as suas propriedades farmacocinéticas no rato (onde mostrado). Os resultados são apresentados na Tabela 2 abaixo. O Composto 2 teve um melhor perfil combinado (EC50 WT + EC50 A364V+ EC5092UC029) em comparação com os Compostos A e B. Portanto, os diastereômeros individuais Composto 2a e Composto 2b foram separados e/ou sintetizados separadamente para avaliação adicional. A potência / a farmacocinética (PK) dos diastereômeros individuais (Compostos 2a e 2b) foram também comparáveis com aquelas observadas com a mistura de diastereoisômeros (composto 2). Portanto os Compostos 2a e 2b foram também compostos viáveis. Devido ao fato de que o desenvolvimento de resistência viral contra qualquer droga antirretroviral pode ser um problema significativo no tratamento de infecção por HIV-1, aqueles compostos com o melhor perfil de potência contra ambas as formas de tipo selvagem e mutante do vírus HIV-1 são com frequência candidatos excelentes para o desenvolvimento de droga.

TABELA 2

Estudos farmacocinéticos em ratos:

[00372] Para os estudos farmacocinéticos PO dos compostos em ratos, cada um dos compostos foi dissolvido em PEG-400/etanol (90/10) como uma solução.

[00373] Rato. Foram usados ratos machos Sprague-Dawley (300-350 g, Hilltop Lab Animals, Inc., Scottsdale, PA) com cânulas implantadas na veia jugular. Os ratos foram jejuados de um dia para outro nos estudos farmacocinéticos PO. Amostras de sangue de 0,3 mL foram coletadas da veia jugular em tubos microtainer contendo EDTA (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), e centrifugadas para separar o plasma.

[00374] No estudo PO dos compostos testados, os ratos (n = 3) receberam uma dose oral de 5 mg/kg do composto indicado. Amostras de sangue seriais foram coletadas antes da dosagem e 15, 30, 45, 60, 120, 240, 360, 480, e 1440 min após a dosagem.

[00375] Quantificação de compostos em plasma. Alíquotas de amostras de plasma de rato, para estudos, foram preparadas para análise por precipitação de proteínas de plasma com dois volumes de acetonitrila contendo um padrão interno de um composto similar. Os sobrenadantes resultantes foram separados das proteínas precipitadas por centrifugação durante 10 minutos e transferidos para os frascos do autoamostrador. As amostras foram preparadas quer manualmente, quer com o uso do manuseador de líquido automático Tomtec. Uma alíquota de 5 μL foi injetada para análise.

[00376] O sistema de HPLC consistiu em duas bombas Shimadzu LC10AD (Columbia, MD), um autoamostrador Shimadzu SIL-HTC (Columbia, MD), e um compartimento de coluna Hewlett Packard Series 1100 (Palo Alto, CA). A coluna foi uma YMC Pro C18 (2,0 mm x 50 mm, partículas de 3 μm, Waters Co., Milford, MA), mantida a 60°C e uma vazão de 0,3 mL/min. A fase móvel consistiu em formiato de amônio 10 mM e ácido fórmico 0,1% em água (A) e 100% de formiato de amônio 10 mM e ácido fórmico 0,1% em metanol (B). A composição da fase móvel inicial foi 95% de A. Após a injeção de amostra, a fase móvel foi alterada para 15% de A/85% de B durante 2 minutos e mantida naquela composição durante mais 1 minuto. A fase móvel foi então retornada para as condições iniciais e a coluna foi reequilibrada durante 1 minuto. O tempo total de análise foi 4 minutos.

[00377] O HPLC foi interfaceado com um Micromass Quattro LC. Nitrogênio de pureza ultra-alta foi usado como o gás de nebulização e de dessolvatação nas vazões de 100 L/h para nebulização e de 1.100 L/h para dessolvatação. A temperatura de dessolvatação foi 300°C e a temperatura da fonte foi 150°C. A aquisição de dados utilizou monitoração de reação selecionada (SEM, Selected Reaction Monitoring). Íons representando a espécie (M+H)+ para o composto e o padrão interno foram selecionados em MS1 e dissociados por colisão com argônio a uma pressão de 2,7 x 10-1 Pa para formar íons de produto específicos que foram subsequentemente monitorados por MS2.

[00378] A descrição precedente é meramente ilustrativa e não deve ser entendida, em nenhuma maneira, como limitadora do escopo ou dos princípios subjacentes da invenção. De fato, várias modificações da invenção, além daquelas aqui mostradas e descritas, tornar-se-ão evidentes para aquelas pessoas versadas na técnica a partir dos exemplos acompanhantes e da descrição precedente. Tais modificações são também pretendidas para caírem dentro do escopo das reivindicações em anexo.

Claims

1. Composto, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo de:

2. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um ou mais dos compostos como definidos na reivindicação 1, junto com um ou mais carreadores, excipientes e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

3. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o compost

junto com um ou mais carreadores, excipientes e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

4. Uso de um composto como definido na reivindicação 1 e de um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em dolutegravir, GSK1265744, 3TC, caracterizado pelo fato de que é para manufatura de um medicamento para tratar um humano infectado com o vírus do HIV.

5. Uso de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato que o referido agente adicional é dolutegravir.

6. Uso de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato que o referido agente adicional é GSK1265744.

7. Uso de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato que o referido agente adicional é 3TC.