BR112016022734B1 - método para redução do estresse oxidativo das células, método para redução da apoptose de células induzida pelo estresse oxidativo e método para redução do fotodano das células - Google Patents

Abstract

COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA REDUZIR O ESTRESSE OXIDATIVO. As composições para reduzir o envelhecimento da pele, resultante de estresse oxidativo e/ou fotodano são divulgadas neste documento. As composições podem ser aplicadas topicamente a uma região da pele para reduzir ou prevenir rugas da pele, linhas finas, afinamento da pele, flacidez da pele, ressecamento da pele e coceira da pele.

Description

FUNDAMENTOS DA DIVULGAÇÃO

[1] A presente divulgação se refere geralmente às composições e aos métodos para melhorar a resposta celular ao estresse oxidativo e ao fotodano, e melhorar, em particular, a resposta celular em fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos, que podem resultar em sinais de envelhecimento da pele do rosto e do corpo. Mais particularmente, presente divulgação se refere às composições incluindo extrato de UNDARIA e/ou extrato de BIDENS e métodos para aplicar topicamente as composições para melhorar a atividade mitocondrial celular e resposta antioxidante celular ao estresse oxidativo e radiação UV, desta forma, reduzindo os sinais de envelhecimento do rosto e do corpo. Os sinais de envelhecimento que afetam a pele do rosto e do corpo incluem, por exemplo, rugas, linhas finas, afinamento da pele, flacidez da pele, ressecamento da pele e coceira na pele.

[2] Com relação ao envelhecimento da pele, é feita uma distinção entre suposto envelhecimento "intrínseco" e "extrínseco", um fator decisivo para o último sendo o efeito exógeno, em particular o efeito da radiação ultravioleta (UV) ("fotoenvelhecimento"). Mecanicamente, o estresse oxidativo desempenha um papel importante no envelhecimento intrínseco e extrínseco da pele, uma vez que espécies reativas de oxigênio (reactive oxygen species - ROS) são geradas no processo de metabolismo celular normal ou por processos fisiológicos e, particularmente, são produzidas pelos componentes UVA e UVB componentes da radiação UV. Se não forem suprimidas mediante a formação, as ROS têm efeitos de longo alcance sobre a integridade de todas as biomoléculas celulares como o DNA, as proteínas e os lipídios com relação ao envelhecimento induzido por UV da pele. Particularmente, a superprodução de ROS pode causar a peroxidação lipídica, dano das biomoléculas e efeitos sobre a viabilidade celular. Uma consequência imediata, com importância particular no fotoenvelhecimento, é a indução de ROS da metaloproteinases de matriz, que aumenta a degradação de proteínas de colágeno, criando um desequilíbrio entre a síntese de colágeno e a degradação, levando ao afinamento de pele. Até então, as estratégias para prevenir o fotoenvelhecimento consistem em uma redução da exposição aos raios UV, proteção física contra a exposição aos raios UV e/ou a aplicação de vitaminas específicas, tais como a vitamina C ou a vitamina E.

[3] Particularmente, uma grande variedade de cremes e loções existem que podem, cosmeticamente, melhorar a aparência e, às vezes, a estrutura da pele do rosto e do corpo. Estas composições muitas vezes empregam retinoides, ácidos hidróxi e/ou esfoliantes para incentivar o rejuvenescimento da pele, aumentar a firmeza, ou melhorar cosmeticamente a pele. Muitos produtos cosméticos fornecem umidade e podem melhorar a aparência da pele, baqueando a pele, usando irritantes que causam inflamação. Outros produtos cosméticos que pretendem rejuvenescer e criar uma aparência mais jovem, direcionando as proteínas de matriz extracelular, como a elastina e colágeno, que são produzidas pelos fibroblastos, para fornecer força e resistência para a pele, estão disponíveis.

[4] Procedimentos médicos, tais como injeções dérmicas e cirurgia reconstrutiva, também estão disponíveis para reduzir os sinais de envelhecimento. A cirurgia plástica recentemente tem crescido em popularidade para melhorar esteticamente a aparência da pele. Esses procedimentos, no entanto, nem sempre são opções desejáveis, pois cirurgia pode ser cara, dolorosa e muito invasiva.

[5] Embora os produtos cosméticos e procedimentos médicos descritos acima sejam apropriados para tratamento da pele envelhecida do rosto e do corpo, composições alternativas e métodos para melhorar a pele são desejáveis. Nesse sentido, existe uma necessidade de desenvolver composições e métodos alternativos para prevenir e/ou reduzir o estresse oxidativo que pode causar o aumento de sinais de envelhecimento da pele do rosto e do corpo. Seria altamente vantajoso se as composições e métodos pudessem ser topicamente aplicados, de modo que procedimentos médicos invasivos, dolorosos e caros poderiam ser evitados.

BREVE DESCRIÇÃO DA DIVULGAÇÃO

[6] A presente divulgação se refere, geralmente, às composições e métodos para melhorar a resposta celular ao fotoenvelhecimento e estresse oxidativo, de forma a reduzir os efeitos da radiação UV, do estresse oxidativo e da apoptose induzida por estresse oxidativo das células da pele e, em particular, fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos. Estes efeitos negativos sobre as células podem resultar no aumento dos sinais de envelhecimento da pele do rosto e do corpo.

[7] Em um aspecto, a presente divulgação é direcionada a um método para reduzir o estresse oxidativo das células em um indivíduo em necessidade deste. O método inclui aplicar topicamente uma composição que compreende, pelo menos, um agente ativo selecionado do grupo que compreende um extrato de Undaria e um extrato de Bidens, e um carreador hidrofílico para uma região alvo da pele do indivíduo.

[8] Em outro aspecto, a presente divulgação é direcionada a um método para reduzir a apoptose das células induzida pelo estresse oxidativo em um indivíduo em necessidade deste. O método inclui aplicar topicamente uma composição que compreende, pelo menos, um agente ativo selecionado do grupo que compreende um extrato de Undaria e um extrato de Bidens, e um carreador hidrofílico para uma região alvo da pele do indivíduo.

[9] Em um outro aspecto, a presente divulgação é direcionada a um método para reduzir o fotodano das células em um indivíduo em necessidade deste. O método inclui aplicar topicamente uma composição que compreende, pelo menos, um agente ativo selecionado do grupo que compreende um extrato de Undaria e um extrato de Bidens, e um carreador hidrofílico para uma região alvo da pele do indivíduo.

[10] Ainda, em um outro aspecto, a presente divulgação é direcionada a um método para manter a concentração de glutationa celular em um indivíduo em necessidade deste. O método inclui aplicar topicamente uma composição que compreende, pelo menos, um agente ativo selecionado do grupo que compreende um extrato de Undaria e um extrato de Bidens, e um carreador hidrofílico para uma região alvo da pele do indivíduo.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[11] A divulgação será melhor compreendida, e as características, aspectos e vantagens que não sejam os referidos anteriormente se tornarão aparentes quando se considera a seguinte descrição detalhada do mesmo. Tal descrição detalhada faz referência aos seguintes desenhos, em que:

[12] A FIG. 1 é uma ilustração gráfica mostrando a viabilidade após o tratamento das células com várias concentrações dos componentes ativos, conforme discutido no Exemplo 1.

[13] A FIG. 2 é um gráfico apresentando a emissão de fluorescência como um indicador de estresse oxidativo, conforme analisado no Exemplo 2.

[14] As FIGS. 3A-3D são leituras da citometria de fluxo de dispersão lateral (Side Scatter - SSC) e de dispersão frontal (Forward Scatter - FSC), conforme medidas no Exemplo 3. A FIG. 3A representa os fibroblastos de controle; A FIG. 3B representa os fibroblastos tratados com H2O2 por 1 hora; A FIG. 3C representa os fibroblastos tratados com UNDARINE™ por 12 horas; e a FIG. 3D representa os fibroblastos tratados com UNDARINE™ por 12 horas, seguido por exposição a H2O2 por 1 hora.

[15] A FIG.4 é um gráfico apresentando a emissão de fluorescência como um indicador de estresse oxidativo, conforme analisado no Exemplo 4.

[16] A FIG. 5 é um gráfico apresentando a emissão de fluorescência como um indicador de fotodano por UV, conforme analisado no Exemplo 4.

[17] As FIGS. 6A-6F são leituras da citometria de fluxo de dispersão lateral (Side Scatter - SSC) e de dispersão frontal (Forward Scatter - FSC), conforme medidas no Exemplo 5. A FIG. 6A representa os fibroblastos de controle; a FIG. 6B representa os fibroblastos tratados com H2O2 por 1 hora; A FIG. 6C representa os fibroblastos tratados com ECOBIDENS™ por 12 horas, seguido por exposição a H2O2 por 1 hora; a FIG. 6D representa os fibroblastos tratados com ECOBIDENS™ por 12 horas; a FIG. 6E representa os fibroblastos expostos à radiação UV; e a FIG. 6F representa fibroblastos tratados com ECOBIDENS™ por 12 horas, seguido por exposição à radiação UV.

[18] A FIG. 7 é um gráfico apresentando a diminuição da concentração de GSH celular devido à radiação UV ou estresse oxidativo induzido por H2O2, conforme analisado no Exemplo 6.

[19] A FIG. 8 é um gráfico mostrando a atividade de ECOBIDENS™ sobre a concentração de H2O2, conforme analisado no Exemplo 7.

[20] A FIG. 9 é um gráfico apresentando a emissão de fluorescência como um indicador de estresse oxidativo induzido por H2O2, conforme analisado no Exemplo 8.

[21] A FIG. 10 é um gráfico apresentando a emissão de fluorescência como um indicador de exposição à UV, conforme analisado no Exemplo 8.

[22] Emborra a divulgação esteja susceptível a várias modificações e formas alternativas, as modalidades específicas desta foram demonstradas a título de exemplo nos desenhos e são descritas abaixo, neste documento, mais detalhadamente. Deve-se entender, no entanto, que a descrição das modalidades específicas não se destina a limitar a divulgação para cobrir todas as modificações, equivalentes e alternativas, dentro do âmbito e do escopo da divulgação, como definido pelas reivindicações anexas.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA DIVULGAÇÃO

[23] A menos que definido o contrário, todos os termos técnicos e científicos aqui têm o mesmo significado que é comumente entendido por aquele versado na técnica a que pertence a divulgação. Embora quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos neste documento possam ser usados na prática ou teste da presente divulgação, os métodos e materiais preferidos estão descritos abaixo.

[24] Em conformidade com a presente divulgação, composições e métodos foram descobertos que surpreendentemente permitem reduzir os sinais de envelhecimento da pele. Os métodos de divulgação da presente divulgação têm um impacto amplo e significativo, uma vez que eles protegem as células contra a exposição aos raios UV e a produção excessiva de ROS, estimulando a resposta antioxidante celular (por exemplo, aumentando a concentração de glutationa reduzida) resultando, desta forma, em uma aparência mais jovem da pele envelhecida do rosto e do corpo. Mais particularmente, na derme, os fibroblastos produzem colágeno e elastina, que dão força e elasticidade para a pele. O fotodano e o estresse oxidativo induzido por ROS estão entre as principais causas de degeneração e morte de fibroblasto; desse modo, acelerando o processo de envelhecimento da pele, e aumentando os sintomas de envelhecimento da pele, como o afinamento, flacidez, fragilidade da pele e perda da elasticidade da pele.

[25] Como usado neste documento, "corpo" se refere ao corpo inteiro do indivíduo e, particularmente, inclui as regiões da face (incluindo testa, bochechas, queixo e pálpebras), pescoço, ombros, mamas, tórax, pernas, mãos, pés e área vulvar, incluindo a pele vulvar, por exemplo, a vulva, os lábios, grandes lábios, lábios menores, mons pubis, vestíbulo vulval e respectivas combinações.

[26] Como usado neste documento, "apoptose" se refere ao processo de morte celular programada que pode ocorrer em organismos multicelulares. Particularmente, uma célula inicia a sinalização apoptótica intracelular, em resposta a um estresse (por exemplo, radiação UV, estresse oxidativo resultante da superprodução de ROS, etc.).

COMPOSIÇÃO Ingredientes/Extratos Ativos

[27] A presente divulgação descobriu inesperadamente que extratos específicos podem ser topicamente aplicados, sozinhos ou em combinação, à pele de um indivíduo como ingredientes ativos em composições para reduzir os sinais de envelhecimento da pele. Particularmente, embora os ingredientes ativos das composições sejam conhecidos anteriormente como estimulantes de colágeno e elastina, se descobriu inesperadamente agora que estes ingredientes ativos são eficazes na proteção da pele contra os fatores que causam o envelhecimento da pele extrínseco e, em particular, na proteção da camada dérmica contra a exposição à radiação UV e danos induzido por ROS. Acredita-se que esse efeito protetor seja devido reforço que os agentes ativos fornecem aos mecanismos de defesa das células e, em particular, à atividade mitocondrial celular e à resposta celular antioxidante. Isto fornece ao usuário uma pele mais grossa, completa, mais resistente e uma aparência da pele mais jovem e suave.

Extrato de Undaria

[28] Em um aspecto, a presente divulgação se refere a composições para reduzir os sinais de envelhecimento da pele do rosto e do corpo; as composições geralmente incluem um extrato de Undaria como ingrediente ativo. Como usado neste documento, "extrair" se refere aos componentes sólidos ativos da planta Undaria.

[29] Um extrato de Undaria é um extrato obtido a partir da Undaria, um gênero de alga marrom que inclui U. crenata, U. peterseniana, U. pinnatifida e U. undarioides. Os extratos de Undaria são conhecidos por estimular o colágeno e a elastina e foram descritos anteriormente na literatura do fabricante como capazes de estimular os 14 genes relacionados com a produção de colágeno e elastina. Conforme divulgado neste documento, descobriu-se ainda que, surpreendentemente, os extratos de Undaria usados nas composições da presente divulgação protegem as células e, em particular, os fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos, contra fotodano e estresse oxidativo.

[30] Como usado neste documento, o extrato de Undaria se refere a um extrato líquido da planta Undaria. Em modalidades particularmente apropriadas, o extrato de Undarianão foi ainda adicionalmente complementado/padronizado para o conteúdo de fucoidan. Particularmente, os extratos de Undaria nestas modalidades adequadas são extratos obtidos por imersão ou atravessamento das plantas Undaria algae pela/por a água sem qualquer outro tratamento químico. A imersão/o atravessamento podem ser realizados com qualquer método conhecido nas técnicas de extração como, por exemplo, lixiviação, infusão por maceramento, percolação, extração e semelhantes, e respectivas combinações. Em algumas modalidades, a planta Undaria poderia ser macerada ainda mais, para obter o extrato. Além disso, a água utilizada nestes processos pode ser aquecida para obter o extrato de Undaria.

[31] Um método particularmente adequado para a obtenção do extrato de Undariaé a lixiviação das bases férteis de plantas Undaria algae liofilizadas. Como usado neste documento, a "lixiviação"se refere a uma técnica onde a água é lentamente passada sobre um sólido (neste documento, a Undaria) em uma camada de profundidade variada para extrair o material solúvel. A técnica geral é descrita em FR 2693917, que é incorporada neste documento, a medida que é consistente com este, e é realizada em temperatura ambiente. Após a remoção do extrato, em algumas modalidades, o extrato é diluído posteriormente com diluentes incluindo água, glicerina, propanediol, glicol butileno, propilenoglicol e respectivas combinações.

[32] Por outro lado, os extratos de Undaria que são completados/padronizados para conteúdo de fucoidan são, normalmente, obtidos através de um procedimento de extração utilizando uma mistura de ácido/água com um pH entre 0 e 2, de preferência entre cerca de 0 e 1, a temperaturas entre cerca de 0 e 30° C, de preferência entre 15 e 25°C.

[33] Extrados de Undaria adequados podem ser obtidos de fontes disponibilizadas comercialmente (por exemplo, Barnet Products Corp., Englewood Cliffs, NJ; Changsha Organic Herb Inc., Hunan, China). Uma formulação comercialmente disponível, particularmente apropriada, que inclui extrato de Undaria pode ser, por exemplo, UNDARINE™, que é uma formulação que inclui glicerina, água e extrato de U. pinnatifid, disponibilizado comercialmente pela Barnet Products Corp., Englewood Cliffs, NJ).

[34] Outro extrato de Undaria adequado e disponibilizado comercialmente pode ser, por exemplo, o extrato de U. pinnatifida WAKAMINE® (INCI: água (e) extrato de Undaria pinnatifida), disponibilizado comercialmente pela SOLIANCE (França), que foi usado anteriormente para clarear a pele e evitar manchas de idade.

[35] Quantidades adequadas de um extrato de Undaria na composição podem ser de cerca de 0,01% (p/p) a cerca de 10% (p/p), de cerca de 0,05% (p/p) a cerca de 7,5% (p/p), de cerca de 0,1% (p/p) a cerca de 5% (p/p) e de cerca de 1% (p/p) a cerca de 5% (p/p). Como usado neste documento, "p/p" se refere à quantidade do componente "em peso da composição".

Extrato de Bidens

[36] Em outro aspecto, a presente divulgação se refere a uma composição que inclui um extrato de Bidens como o agente ativo. Como usado neste documento, "extrair" se refere aos componentes sólidos ativos da planta Bidens. Bidensé um gênero de plantas pertencente à família Asteraceae que inclui muitos membros de espécies. Bidensé conhecida por aumentar a produção de colágeno e elastina.

[37] Extratos de Bidens adequados incluem os extratos de Bidens alba, Bidens amplectens, Bidens amplissima, Bidens aristosa, Bidens asymmetrica, Bidens aurea, Bidens beckii, Bidens bidentoides, Bidens bigelovii, Bidens bipinnata, Bidens biternata, Bidens campylotheca, Bidens cernua, Bidens cervicata, Bidens chippii, Bidens conjuncta, Bidens connata, Bidens coronata, Bidens cosmoides, Bidens cynapiifolia, Bidens discoidea, Bidens eatonii, Bidens ferulifolia, Bidens forbesii, Bidens frondosa, Bidens gardneri, Bidens hawaiensis, Bidens henryi, Bidens heterodoxa, Bidens heterosperma, Bidens hillebrandiana, Bidens hyperborean, Bidens laevis, Bidens lemmonii, Bidens leptocephala, Bidens leptophylla, Bidens macrocarpa, Bidens mannii, Bidens mauiensis, Bidens maximowicziana, Bidens menziesii, Bidens micrantha, Bidens mitis, Bidens molokaiensis, Bidens x multticeps, Bidens parviflora, Bidens pilosa, Bidens polylepis, Bidens populifolia, Bidens radiate, Bidens reptans, Bidens sandvicensis, Bidens schimperi, Bidens simplicifolia, Bidens socorrensis, Bidens squarrosa, Bidens subalternans, Bidens tenuisecta, Bidens torta, Bidens trichosperma, Bidens tripartita, Bidens triplinervia, Bidens valida, Bidens vulgata, Bidens wiebkei, e respectivas combinações.

[38] Extratos de Bidens particularmente adequados podem ser, por exemplo, extrato de Bidens pilosa, extrato de Bidens bipinnata, e extrato de Bidens tripartita. Extratos de Bidens adequados podem ser obtidos de fontes disponibilizadas comercialmente (por exemplo, Chemyunion Quimica Ltd., São Paulo, Brasil; Carrubba Inc., Milford, CT). Extratos de Bidens adequados também podem incluir misturas de extratos de Bidens com carreadores hidrofílicos como, por exemplo, água, glicerina, propanodiol, glicol butileno, propilenoglicol e respectivas combinações, e misturas de extratos de Bidens com carreadores hidrofóbicos como, por exemplo, óleos naturais, óleos sintéticos e respectivas combinações. Um extrato de Bidens particularmente adequado pode ser, por exemplo, ECOBIDENS™ (comercialmente disponibilizada pela Chemyunion Quimica Ltd., São Paulo, Brasil). ECOBIDENS™ é um extrato de glicerina de Bidens pilosa L. Outros extratos de Bidens disponibilizado comercialmente incluem, por exemplo, Water Agrimony Extract H.G., um extrato de B. tripartita da Provital Group (Espanha); Extrato de Bidens M9983-WS, um extrato de B. pilosa, e Extrato de Bidens bipinnata N0061-WS, um extrato de B. bipinnata, ambos disponibilizados pela Carrubba Inc. (Milford, Connecticut).

[39] Quantidades adequadas de um extrato de Bidens nas composições de uso tópico podem ser de cerca de 0,01% (p/p) a cerca de 10% (p/p), de cerca de 0,05% (p/p) a cerca de 7,5% (p/p), de cerca de 0,1% (p/p) a cerca de 5% (p/p) e de cerca de 1% (p/p) a cerca de 5% (p/p).

Extrato de Undaria e Extrato de Bidens

[40] Em alguns aspectos particularmente adequados, a presente divulgação se refere a uma composição, incluindo a combinação dos agentes ativos de um extrato de Undaria e um extrato de Bidens.

[41] Quando utilizado em uma combinação, as quantidades adequadas do extrato de Undaria na composição podem ser de cerca de 0,01% (p/p) a cerca de 20% (p/p), de cerca de 0,05% (p/p) a cerca de 15% (p/p), e de cerca de 0,1% (p/p) a cerca de 10% (p/p). Quantidades adequadas de um extrato de Bidens nas composições podem ser de cerca de 0,01% (p/p) a cerca de 20% (p/p), de cerca de 0,05% (p/p) a cerca de 15% (p/p), e de cerca de 0,1% (p/p) a cerca de 10% (p/p).

Ingredientes Opcionais Adicionais

[42] As composições descritas neste documento podem incluir ainda ingredientes adicionais e ingredientes opcionais.

[43] Geralmente, as composições incluem um carreador com o(s) ingrediente(s) ativo(s).

[44] Em uma modalidade, por exemplo, a composição inclui os ingredientes ativos e um carreador hidrofílico, um espessante hidrofílico e/ou um realçador de penetração. Carreadores hidrofílicos apropriados podem ser, por exemplo, água, álcoois, glicerina, derivados de glicerina, glicóis, emolientes solúveis em água e respectivas combinações. Exemplos adequados de álcoois podem incluir, mas não devem ser limitados a álcool etílico e álcool isopropílico. Exemplos adequados de derivados de glicerina podem incluir, mas não devem ser limitados a, PEG-7 gliceril cocoato. Glicóis adequados podem incluir, mas não devem ser limitados a propilenoglicol, butileno glicol, pentileno glicol, etoxidiglicol, dipropileno glicol, propanediol e PEG-8. Exemplos adequados de emolientes solúveis em água podem incluir, mas não devem ser limitados a Glicerídeos Cápricos Caprílicos PEG-6, Ésteres de Jojoba Hidrolisada e Glicerídeos de Girassol PEG-10.

[45] Em modalidades particularmente adequadas, as composições de uso tópico são composições líquidas, desejavelmente contendo água como o carreador. Quantidades adequadas de água podem ser de cerca de 0,1% em peso da composição a cerca de 99,9% em peso da composição. Mais geralmente, a quantidade de água pode ser de cerca de 40% em peso da composição a cerca de 99,9% em peso da composição. De preferência, a quantidade de água pode ser de cerca de 60% em peso da composição a cerca de 99,9% em peso da composição.

[46] Em outra modalidade, a composição inclui ingrediente(s) ativo(s) e um carreador hidrofóbico. Carreadores hidrofóbicos adequados podem ser, por exemplo, óleos naturais, óleos sintéticos e respectivas combinações.

[47] As composições tópicas descritas neste documento podem incluir ainda um realçador de penetração na pele, ou uma mistura de realçadores de penetração na pele. Exemplos de realçadores de penetração na pele adequados incluem sulfóxidos, álcoois, ácidos graxos, ésteres de ácido graxo, polióis, amidas, surfactantes, terpenos, alcanonas e ácidos orgânicos, entre outros. Exemplos específicos de sulfóxidos adequados incluem dimetilsulfóxido (DMSO) e decilmetilsulfóxido, entre outros. Álcoois adequados incluem alcanois, tais como etanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol, octanol, n-octanol, nonanol, decanol, 2-butanol, 2-pentanol e álcool benzílico; álcoois graxos, tais como álcool caprílico, álcool decílico, álcool laurílico, 2-lauril álcool, álcool miristílico, álcool cetílico, álcool estearílico, álcool oleílico, álcool linoleico e álcool linolenílico; e álcool isopropílico. Exemplos de ácidos graxos adequados incluem ácidos graxos lineares, como o ácido valérico, ácido heptanoico, ácido pelagônico, ácido caproico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido esteárico, ácido oleico e ácido caprílico; e ácidos graxos ramificados, tais como ácido isovalérico, ácido neopentanoico, ácido neoheptanoico, ácido neononanoico, ácido trimetil-hexanoico, ácido neodecanoico e ácido isoesteárico. Exemplos de ésteres de ácidos graxos adequados incluem ésteres de ácidos graxos alifáticos, como isopropil n-butirato, isopropil n- hexanoato, isopropil n-decanoato, isopropil miristato, isopropil palmitato e octildodecil miristato; ésteres de ácidos graxos alquílicos, tais como acetato de etil, acetato de butil, acetato de metil, metilvalerato, metilpropionato, dietil sebacato e etil oleato; e diisopropil adipato e dimetil isossorbida. Exemplos de poliois adequados incluem propileno glicol, butileno glicol, polietileno glicol, etileno glicol, dietileno glicol, trietileno glicol, dipropileno glicol, etoxidiglicol, pentileno glicol, glicerol, propanediol, butanodiol, pentanediol, hexanetriol e glicerina. Exemplos de amidas adequadas incluem ureia, dimetilacetamida, dietiltoluamida, dimetilformamida (DMF), dimetiloctamida, dimetildecamida, ureia cíclica biodegradável (por exemplo, 1-alquil-4-imidazoline-2-ona), derivados de pirrolidona, derivados de pirrolidona biodegradável (por exemplo, ésteres de ácido graxo de N-(2- hidroxietil)-2-pirrolidona), amidas cíclicas, hexametilenelauramida e seus derivados, dietanolamina e trietanolamina. Exemplos de derivados de pirrolidona incluem 1-metil-2-pirrolidona, 2-pirrolidona, 1-lauril-2-pirrolidona, 1-metil-4-carboxi-2-pirrolidona, 1-hexil-4-carboxi-2-pirrolidona, 1-lauril-4- carboxi-2-pirrolidona, 1-metil-4-metoxicarbonil-2-pirrolidona, 1-hexil-4- metoxicarbonil-2-pirrolidona, 1-lauril-4-metoxicarbonil-2-pirrolidona, N- ciclohexilpirrolidona, N-dimetilaminopropilpirrolidona, N- cocoalquipirrolidona, N-tallowalquilpirrolidona, e N-metilpirrolidona. Exemplos de amidas cíclicas incluem 1-dodecilazacicloheptano-2-ona (por exemplo, Azone®), 1-geranilazacicloheptan-2-ona, 1- farnesilazacicloheptan-2-ona, 1-geranilgeranilazacicloheptan-2-ona, 1-(3,7- dimetiloctil)azacicloheptan-2-ona, 1-(3,7,11-trimetildodecil)azaciclohaptano- 2-ona, 1-geranilazaciclohexano-2-ona, 1-geranilazaciclopentan-2,5-diona, e 1-farnesilazaciclopentan-2-ona.

[48] Normalmente, as composições da presente divulgação incluem de cerca de 0,01% (em peso da composição) a cerca de 25% (em peso da composição) de um realçador de penetração na pele, incluindo de cerca de 1% (em peso da composição) a cerca de 15% (em peso da composição) de um realçador de penetração na pele e incluindo de cerca de 2% (em peso da composição) a cerca de 10% (em peso da composição) de um realçador de penetração na pele.

[49] Opcionalmente, as composições de uso tópico contendo Undaria e/ou Bidens podem ser formuladas com um cossolvente polar para aumentar a permeabilidade do Undaria e do Bidens na pele. De preferência, o cossolvente polar é totalmente miscível na composição e tem uma elevada afinidade com os espaços intercelulares no estrato córneo. Sem querer ser vinculado por qualquer teoria particular, acredita-se que cossolventes polares com tais características são conduzidos por osmose para os espaços intercelulares no estrato córneo, fazendo com que o estrato córneo inche. Nesse estado inchado, os espaços intercelulares são mais líquidos e desordenados, o que permite que os extratos de Undaria e/ou Bidens se difundam mais facilmente através do estrato córneo.

[50] Exemplos de cossolventes polares adequados para inclusão nas composições da presente divulgação incluem glicerina, propanediol, etanol, propilenoglicol, butanol, isopropanol, propanol, dimetil isossorbida, butileno glicol, polietileno glicol, dipropileno glicol, etoxidiglicol, pentileno glicol e respectivas combinações.

[51] Normalmente, as composições da presente divulgação incluem de cerca de 1% (em peso da composição) a cerca de 99% (em peso da composição) de um cossolvente polar, incluindo de cerca de 1% (em peso da composição) a cerca de 75% (em peso da composição) de um cossolvente polar, incluindo de cerca de 1% (em peso da composição) a cerca de 50% (em peso da composição) de um cossolvente polar, incluindo de cerca de 1,5% (em peso da composição) a cerca de 25% (em peso da composição) de um cossolvente polar, incluindo de cerca de 2% (em peso da composição) a cerca de 15% (em peso da composição) de um cossolvente polar e incluindo de cerca de 2,5% (em peso da composição) a cerca de 10% (em peso da composição) de um cossolvente polar.

[52] Em algumas modalidades, as composições podem incluir ainda beta-sitosterol. Quantidades adequadas de beta-sitosterol podem ser de cerca de 0,001% em peso da composição a cerca de 10,0% em peso da composição. Mais geralmente, a quantidade de beta-sitosterol pode ser de cerca de 0,005% em peso da composição a cerca de 7,5% em peso da composição. Ainda mais adequada, a quantidade de beta-sitosterol pode ser de cerca de 0,01% em peso da composição a cerca de 5,0% em peso da composição.

[53] A composição pode incluir ainda outros ingredientes estimulantes de colágeno, elastina e matriz extracelular conhecidos. O colágeno é uma proteína encontrada no tecido conector da pele e outros tecidos do corpo. Realçadores de colágeno adequados podem ser, por exemplo, vitaminas, como ácido ascórbico e seus derivados, peptídeos, como palmitoil tripeptídeo-5, extratos botânicos, como romã ou cogumelo e minerais, como a hematita.

[54] A elastina é uma proteína encontrada no tecido conector da pele e outros tecidos do corpo. Realçadores de elastina adequados podem ser, por exemplo, vitaminas, como ácido ascórbico e seus derivados, peptídeos, como palmitoil hexapeptídeo-12, extratos botânicos, como kudzu, cavalinha, arroz, endro e alecrim e minerais, como zinco e cobre.

[55] As composições podem incluir ainda um vasodilatador. Os vasodilatadores podem aumentar o fluxo de sangue dentro da pele. Vasodilatadores adequados podem ser, por exemplo, trinitrato gliceril, resveratrol, cafeína, extrato de gengibre, ginseng e outros extratos botânicos como, por exemplo, espinheiro, hortelã, hera, café e chá.

[56] As composições podem incluir ainda um agente calmante da pele. Como usado aqui, o "agente calmante da pele" refere-se a compostos que reduzem ou evitam a irritação da pele. A irritação da pele pode resultar da perda de umidade, uma mudança no pH, suor, dermatite de contato com perfumes, pós, detergente de roupa e outros compostos. Agentes calmantes da pele podem reduzir a irritação neutralizando um irritante, regulando cascatas inflamatórias na pele e/ou fornecendo uma camada protetora sobre a pele. Agentes calmantes da pele podem ser, por exemplo, extratos botânicos, como calêndula, camomila, aloe, confrei, echinacea; materiais ativos, como alantoína, bisabolol, pantenol, beta-glucano, aveia coloidal e misturas de ingrediente, como SYMCALMIN (INCI: butileno glicol, pentileno glicol, hidroxifenil ácido propamidobenzoico; comercialmente disponíveis por Symrise (Holzmiden, Alemanha) e SEPICALM (INCI: prolina palmitoil de sódio, extrato da flor de nymphaea alba; comercialmente disponíveis por Seppic (Fairfield, NJ).

[57] As composições podem incluir ainda um umectante. Umectantes podem elevar a hidratação da pele, em particular, a epiderme e a derme. Umectantes adequados podem ser, por exemplo, glicerol, glicerina, ácido láctico, ureia, aloe vera, betaína, ácido hialurônico, propanediol, propileno glicol, butileno glicol e suas combinações.

[58] As composições podem incluir ainda um emulsificante e, em particular, um emulsificante que cria redes cristalinas líquidas ou redes de lipossomas. Emulsificantes adequados não limitantes exemplares incluem, por exemplo, OLIVEM® 1000 (INCI: Cetearyl Olivato (e) Sorbitano Olivato; comercialmente disponíveis por HallStar Company (Chicago, IL)), Arlacel™ LC (INCI: Soorbitano Estearato (e) Sorbitil Laurato; comercialmente disponíveis por Croda (Edison, NJ), CRYSTALCAST® MM (INCI: Beta Sitosterol (e) Sacarose Estearato (e) Sacarose Diestearato (e) Álcool Cetílico (e) Álcool Estearílico; comercialmente disponíveis por MMP Inc. (South Plainfield, NJ), UNIOX CRISTAL (INCI: Álcool Cetearílico (e) Polisorbato 60 (e) Cetearil Glucosídeo; comercialmente disponíveis por Chemyunion (São Paulo, Brasil). Outros emulsificantes adequados incluem lecitina, lecitina hidrogenada, lisolecitina, fosfatidilcolina, fosfolipídeos e suas combinações.

[59] As composições podem ainda incluir um conservante para preservar a estabilidade. Conservantes também podem impedir o crescimento de organismos microbianos nas composições. Conservantes adequados são conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, metilparabeno, fenoxietanol, capril glicol, caprilato de glicerina, ácido benzoico, ácido sórbico, ácido gálico, propilparabeno e suas combinações.

[60] As composições podem incluir ainda um regulador de pH para controlar/manter o pH da composição dentro da escala do pH da pele. Uma escala de pH adequada da composição pode ser de cerca de 3,5 a 6.

[61] As composições podem incluir ainda fragrâncias, aromas, corantes, surfactantes, modificadores de reologia, formadores de películas e outros componentes conhecidos por serem úteis em formulações de higiene pessoal.

Métodos de Uso

[62] Em outro aspecto, a presente divulgação é direcionada para métodos de usar as composições para reduzir o envelhecimento da pele do rosto e do corpo do indivíduo.

[63] Assim, em um aspecto, a presente divulgação se refere a um método para reduzir o estresse oxidativo das células e dos fibroblastos dérmicos e, em particular, os queratinócitos epidérmicos, desse modo, reduzindo os sinais de envelhecimento da pele do rosto e do corpo em um indivíduo com esta necessidade. Como usado neste documento, "envelhecimento da pele" se refere ao aumento de rugas na pele, aumento da aparição de linhas finas, afinamento da pele, flacidez da pele, ressecamento da pele e coceira da pele. O estresse oxidativo das células altera o equilíbrio entre a proliferação celular e a morte celular e, ainda mais, pode prejudicar a regeneração dos tecidos. Normalmente, o estresse oxidativo é resultado do excesso de produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), que causam danos às membranas mitocondriais internas e externas e abre os poros de transição de permeabilidade mitocondrial, induzindo, desta forma, a apoptose. O método inclui aplicar topicamente uma composição incluindo um extrato de Undaria a uma região alvo da pele do indivíduo. A região alvo da pele pode ser, por exemplo, pele facial, pele do pescoço, pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés e respectivas combinações. A região da pele alvo também pode ser, por exemplo, pele vulvar, por exemplo, a vulva, lábios, grandes lábios, pequenos lábios, mons pubis, vestíbulo vulval e suas combinações.

[64] Em outro aspecto, a presente divulgação se refere a um método para reduzir a apoptose das células induzida pelo estresse oxidativo, em particular, os fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos, em um indivíduo com esta necessidade. O método inclui aplicar topicamente uma composição incluindo um extrato de Undaria a uma região alvo da pele do indivíduo. A região alvo da pele pode ser, por exemplo, pele facial, pele do pescoço, pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés e respectivas combinações. A região da pele alvo também pode ser, por exemplo, pele vulvar, por exemplo, a vulva, lábios, grandes lábios, pequenos lábios, mons pubis, vestíbulo vulval e suas combinações.

[65] Em um outro aspecto, a presente divulgação se refere a um método para reduzir o fotodano das células e, em particular, os fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos, em um indivíduo com esta necessidade. Como usado neste documento, "fotodano" se refere ao dano causado à pele e, em particulares, fibroblastos dérmicos, como resultado da exposição à radiação UV. O método inclui aplicar topicamente uma composição incluindo um extrato de Undaria a uma região alvo da pele do indivíduo. A região alvo da pele pode ser, por exemplo, pele facial, pele do pescoço, pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés e respectivas combinações. A região da pele alvo também pode ser, por exemplo, pele vulvar, por exemplo, a vulva, lábios, grandes lábios, pequenos lábios, mons pubis, vestíbulo vulval e suas combinações.

[66] Em um outro aspecto, a presente divulgação se refere a um método para manter a concentração de glutationa celular reduzida das células e, em particular, os fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos, em um indivíduo com esta necessidade. Particularmente, os métodos são direcionados para a manutenção da concentração de glutationa reduzida celular dos fibroblastos dérmicos mediante estresse oxidativo e/ou condições de radiação UV. Os métodos incluem aplicar topicamente uma composição que compreende um extrato de Undaria e um carreador hidrofílico a uma região alvo da pele do indivíduo. A região alvo da pele pode ser, por exemplo, pele facial, pele do pescoço, da pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés, pele vulvar, por exemplo, a vulva, lábios, grandes lábios, pequenos lábios, mons pubis e vestíbulo vulval e respectivas combinações.

[67] Ainda, em outras modalidades da presente divulgação, os métodos incluem aplicar topicamente uma composição que inclui um extrato de Bidens a uma região alvo da pele do indivíduo para reduzir o estresse oxidativo das células e, em particular, fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos. A região alvo da pele pode ser, por exemplo, pele facial, pele do pescoço, pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés e respectivas combinações. A região da pele alvo também pode ser, por exemplo, pele vulvar, por exemplo, a vulva, lábios, grandes lábios, pequenos lábios, mons pubis, vestíbulo vulval e suas combinações.

[68] Em outro aspecto, a presente divulgação se refere a um método para reduzir a apoptose das células induzida pelo estresse oxidativo, em particular, os fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos, em um indivíduo com esta necessidade. O método inclui aplicar topicamente uma composição incluindo um extrato de Bidens a uma região alvo da pele do indivíduo. A região alvo da pele pode ser, por exemplo, pele facial, pele do pescoço, pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés e respectivas combinações. A região da pele alvo também pode ser, por exemplo, pele vulvar, por exemplo, a vulva, lábios, grandes lábios, pequenos lábios, mons pubis, vestíbulo vulval e suas combinações.

[69] Em um outro aspecto, a presente divulgação se refere a um método para reduzir o fotodano das células e, em particular, os fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos, em um indivíduo com esta necessidade. O método inclui aplicar topicamente uma composição incluindo um extrato de Bidens a uma região alvo da pele do indivíduo. A região alvo da pele pode ser, por exemplo, pele facial, pele do pescoço, pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés e respectivas combinações. A região da pele alvo também pode ser, por exemplo, pele vulvar, por exemplo, a vulva, lábios, grandes lábios, pequenos lábios, mons pubis, vestíbulo vulval e suas combinações.

[70] Em um outro aspecto, a presente divulgação se refere a um método para manter a concentração de glutationa celular reduzida das células e, em particular, os fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos, em um indivíduo com esta necessidade. Particularmente, os métodos são direcionados para a manutenção da concentração de glutationa reduzida celular dos fibroblastos dérmicos mediante estresse oxidativo e/ou condições de radiação UV. Os métodos incluem aplicar topicamente uma composição que compreende um extrato de Bidens e um carreador hidrofílico a uma região alvo da pele do indivíduo. A região alvo da pele pode ser, por exemplo, pele facial, pele do pescoço, da pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés, pele vulvar, por exemplo, a vulva, lábios, grandes lábios, pequenos lábios, mons pubis e vestíbulo vulval e respectivas combinações.

[71] Como usado neste documento, um "indivíduo em necessidade" se refere a um indivíduo apresentando aumento dos sinais visíveis de envelhecimento da pele, como, por exemplo, rugas, linhas finas, afinamento da pele, flacidez da pele, ressecamento da pele, coceira da pele, fragilidade da pele, lacerações da pele, perda no tom da pele, perda na plenitude da pele, perda do preenchimento da pele e respectivas combinações, devido às condições extrínsecas e, em particular, o estresse oxidativo e/ou fotodano das células e em particular, fibroblastos dérmicos e queratinócitos epidérmicos. Em algumas modalidades, o indivíduo em necessidade é um indivíduo em que a concentração de glutationa celular dos fibroblastos dérmicos diminuiu, como resultado do estresse oxidativo e/ou radiação UV. Como tal, em algumas modalidades, os métodos divulgados aqui destinam- se a um subconjunto da população, de modo que, nessas modalidades, nem toda a população geral pode se beneficiar dos métodos. Com base no que precede, visto que algumas das modalidades do método da presente divulgação são direcionadas para subconjuntos específicos ou subclasses de indivíduos identificados (isto é, o subconjunto ou subclasse de indivíduos "em necessidade" de assistência em abordar uma ou mais condições específicas observadas aqui), nem todos os indivíduos estarão dentro do subconjunto ou subclasse dos indivíduos conforme descrito aqui.

[72] Como usado aqui, o termo "indivíduo"refere-se a um ser humano homem ou mulher. Em determinadas modalidades, o indivíduo é um ser humano mulher na pós-menopausa.

[73] As composições utilizadas nos métodos descritos neste documento podem, ainda, incluir ingredientes adicionais, conforme descrito neste documento, e outros componentes conhecidos por serem úteis em formulações de higiene pessoal.

[74] A composição pode ser aplicada à região da pele alvo por qualquer veículo de entrega adequado. Por exemplo, a composição pode ser aplicada como uma loção, como uma lavagem, como um gel, como um bálsamo, como uma pomada, como um creme, como um bastão sólido e como uma espuma. Além disso, a composição pode ser aplicada com um lenço, com luvas, usando um dispensador de aerossol, usando um pulverizador de bomba, usando um spray de gatilho e usando uma garrafa de apertar.

[75] As composições podem ser aplicadas diariamente, dia sim, dia não, a cada dois dias, semanalmente, mensalmente e anualmente, conforme desejado. As composições podem ser aplicadas várias vezes por dia, várias vezes por semana e/ou várias vezes por mês.

[76] Em algumas modalidades, as composições da presente divulgação podem ser usadas com composições de cuidados de pele adicionais, como parte de um regime de cuidados da pele. Por exemplo, no tratamento facial, os usuários normalmente usam vários produtos para limpeza, tonificação e para tratar a pele do rosto. Nesse sentido, o primeiro produto compreende uma primeira composição tipicamente capaz de fornecer um primeiro benefício a um usuário, e o segundo produto compreende uma segunda composição tipicamente capaz de fornecer um segundo benefício a um usuário. Na presente divulgação, deve ser entendido que, pelo menos, um dos produtos do regime inclui a composição de uso tópico da presente divulgação, desta forma, proporcionando o benefício de melhorar a resposta celular ao estresse oxidativo e/ou fotodano. Em algumas modalidades, deve ser entendido por aquele versado na técnica que embora o primeiro produto e o segundo produto possam fornecer independentemente qualquer benefício conhecido na técnica do regime de cuidados específicos, em cada regime de cuidados especiais com vários produtos, o primeiro produto e o segundo produto podem incluir diferentes composições e assim, fornecer benefícios diferentes ao usuário.

[77] Além disso, tal como acontece com o primeiro produto e o segundo produto do regime de cuidados, se mais de dois produtos são usados no regime de cuidados com vários produtos, tais como terceiro, quarto e/ou quinto produtos (e mais produtos, caso mais de cinco produtos sejam desejados), deve-se reconhecer que os produtos adicionais devem incluir ingredientes ativos, cada um de forma independente, sendo capaz de fornecer benefícios adicionais a um usuário.

[78] Em uma modalidade alternativa, o regime de cuidados com vários produtos pode incluir mais de dois produtos e pode ser configurado de modo a fornecer um regime de múltiplos dias. Sem ser limitante, em um exemplo, o regime de cuidados com vários produtos fornece cuidados com a pele por vários dias e, como tal, um primeiro produto inclui, por exemplo, uma composição de limpeza, um segundo produto inclui a composição anti- envelhecimento da pele da presente divulgação, um terceiro produto inclui a mesma composição de limpeza que o primeiro produto e um quarto produto inclui a mesma composição anti-envelhecimento da pele que o segundo produto.

[79] Sem ser limitante, exemplos de composições adicionais proporcionando benefícios de cuidados com a pele além da composição anti-envelhecimento da pele da presente divulgação podem incluir composições para limpeza, tonificação, tratamento, hidratação, proteção, acabamento e similares.

[80] Quando a composição adicional é uma composição de limpeza, a composição de limpeza pode ser em qualquer forma conhecida na técnica, como por exemplo, sabonetes, sabonetes de corpo, xampus corporais, xampus, limpadores de superfície, detergentes, produtos de limpeza facial, antissépticos de mão e similares. Estes tipos de composições de limpeza normalmente incluem pelo menos um agente formador de espuma, como um surfactante. Embora discutidas aqui principalmente em termos de um surfactante, deve ser entendido que as composições de limpeza podem incluir outros agentes de limpeza e não precisam incluir um surfactante. Por exemplo, em determinadas modalidades, as composições podem incluir um espessante, uma argila inchável, um agente formador de espuma (que pode ou não incluir um surfactante (por exemplo, agentes condicionadores de pele etoxilados, solubilizantes e polímeros de silicone derivados)) e, opcionalmente, um solvente ou outro carreador. Exemplos destas composições incluem, por exemplo, loções, cremes, composições antimicrobianas e similares.

[81] Surfactantes adequados para uso na composição de limpeza incluem surfactantes aniônicos, surfactantes anfotéricos, surfactantes catiônicos, surfactantes zwitteriônicos, surfactantes não-iônicos e suas combinações.

[82] Surfactantes aniônicos apropriados incluem, por exemplo, alquil sulfatos, alquil éter sulfatos, alquil aril perfluorooctanossulfonatos, alfa- olefina perfluorooctanossulfonatos, metal alcalino ou sais de amônio de alquil sulfatos, metais alcalinos ou sais de amônio de alquil éter sulfatos, alquil fosfatos, fosfatos de silicone, alquil gliceril perfluoroctanossulfonatos, alquil sulfosuccinatos, alquil tauratos, acil tauratos, alquil sarcosinatos, acil sarcosinatos, sulfoacetatos, ésteres alquílicos de fosfato, monoalquil succinatos, monoalquil maleatos, sulfoacetatos, acil isetionatos, alquil carboxilatos, ésteres de fosfato, sulfosuccinatos (por exemplo, dioctilsulfosuccinato de sódio) e suas combinações. Exemplos específicos de surfactantes aniônicos incluem lauril sulfato de sódio, lauril éter sulfato de sódio, amônio lauril sulfosuccinato, lauril sulfato de amônio, lauril éter sulfato de amônio, sódio dodecil benzeno sulfonato de sódio, trietanolamina dodecilbenzeno sulfonato, cocoil isetionato de sódio, lauroil isetionato de sódio, sarcosinato N-laurilsulfato de sódio e suas combinações.

[83] Os surfactantes catiônicos adequados incluem, por exemplo, sais de alquil amônio, sais de amônio poliméricos, sais de alquil-piridínio, sais de aril amônio, sais de alquil-aril amônio, compostos de amônio quaternário de silicone, e respectivas combinações. Exemplos específicos de surfactantes catiônicos incluem o cloreto de beheniltrimônio, cloreto estearlcônio, cloreto distearalcônio, diglutamato de clorohexedina, biguanida de polihexametileno (PHMB), cloreto de cetil piridínio, cloreto de benzamônio, cloreto de benzalcônio, e respectivas combinações.

[84] Surfactantes anfotéricos apropriados incluem, por exemplo, betaínas, alquilamido betaínas, sulfobetaínas, N-alquil betaínas, sultaínas, anfoacetatos, amofodiacetatos, carboxilatos de imidazolina, sarcosinatos, acilanfoglicinatos, como cocanfocarboxiglicinatos e acilanfopropionatos e respectivas combinações. Exemplos específicos de surfactantes anfotéricos incluem cocamidopropil betaína, lauramidopropil betaína, meadowfoamamidopropil betaína, cocoil sarcosinato de sódio, cocanfoacetato de sódio, cocoanfodiacetato dissódico, cocoil sarcosinato de amônio, cocoanfopropionato de sódio e respectivas combinações.

[85] Surfactantes zwitteriônicos adequados incluem, por exemplo, óxidos de alquil amina, óxidos de aminas de silicone, e respectivas combinações. Exemplos específicos de surfactantes zwiteriônicos adequados incluem, por exemplo, 4-[N,N-di(2-hidroxietil)-N-octadecilamônio]-butano-1-carboxilato, S-[S-3-hidroxipropil-S-hexadecilsulfonio]-3-hidroxipentano-1-sulfato, 3-[P,P- dietil-P-3,6,9-trioxatotradexopcilfosfonio]-2-hidroxipropano-1-fosfato, 3-[N,N- dipropil-N-3-dodecoxi-2-hidroxipropilamônio]-propano-1-fosfonato, 3-(N,N- dimetil-N-hexadecilamônio)propano-1-sulfonato, 3-(N,N-dimetil-N- hexadecilamônio)-2-hidroxipropano-1-sulfonato, 4-[N,N-di(2-hidroxietil)-N- (2-hidroxidodecil)amônio]-butano-1-carboxilato, 3-[S-etil-S-(3-dodecoxi-2- hidroxipropil)sulfonio]-propano-1-fosfato, 3-[P,P-dimetil-P-dodecilfosfonio]- propano-1-fosfonato, 5-[N,N-di(3-hidroxipropil)-N-hexadecilamônio]-2- hidroxi-pentano-1-sulfato, e respectivas combinações.

[86] Surfactantes não-iônicos apropriados incluem, por exemplo, mono e dialcanolamidas como, por exemplo, cocamida MEA e cocamida DEA, óxidos de amina, alquil poliglucosídeos, silicones etoxilados, álcoois etoxilados, ácidos carboxílicos etoxilados, aminas etoxiladas, amidas etoxiladas, alquilolamidas etoxilados, alquilfenóis etoxilados, ésteres de gliceril etoxilados, ésteres de sorbitano etoxilados, ésteres de fosfato etoxilados, estearato de glicol, estearato de glicerina e suas combinações. Será reconhecido por aquele versado na técnica que muitos dos surfactantes não-iônicos aqui descritos podem agir para melhorar as propriedades de espuma da composição de limpeza do sistema de cuidados com vários produtos e podem fornecer um tamanho de bolha mais compacto, reduzido, ou espuma cremosa.

[87] A composição de limpeza também pode incluir um espessante, que atua para engrossar ou aumentar a viscosidade da formulação de limpeza. Pode ser usada uma variedade de espessantes nas composições de limpeza aqui descritas. Em uma modalidade, o espessante pode ser um espessante celulósico ou goma. Exemplos de espessantes celulósicos ou goma adequados incluem goma xantana, ágar, alginatos, carragenina, furcelaran, guar, guar catiônico, goma arábica, goma de tragacanto, goma karaya, goma do feijão de locustídeo, dextrano, amido, amidos modificados, gelano, carboximetilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxietilcelulose, propileno glicol alginato, hidroxipropil guar, amilopectina, goma de celulose, quitosana, quitosana modificada, hidroxipropil metilcelulose, celulose microcristalina, sílica, sílica pirogênica, sílica coloidal, goma de desidroxantano, carbômeros baseados em não-acrílico e suas combinações.

[88] Alternativamente, ou além disso, o espessante pode ser um polímero baseado em acrílico. Exemplos não limitantes de espessantes de polímero baseados em acrílico adequados incluem acrilatos/C10-C30 alquil acrilato polímeros cruzados, certos carbômeros, copolímeros acrilatos, copolímeros aminoacrilatos e suas combinações. Exemplos de espessantes de polímero baseados em acrílico comercialmente disponíveis incluem Structure® Plus (Akzo Nobel, Pasadena, CA), que é um copolímero itaconato acrilatos/aminoacrilatos/C10-30 alquil PEG-20, Carbopol® Aqua SF-1 polímero (Lubrizol Advanced Materials, Cleveland, OH), que é um copolímero de acrilatos, PEMULEN® TR-1 e TR-2 e Carbopol® ETD 2020 (disponível por Lubrizol Advanced Materials), que são polímeros cruzados de alquil acrilatos C10-30/acrilatos e a série de polímeros Carbopol® Ultrez (disponíveis por Lubrizol Advanced Materials), que são carbômeros.

[89] Agentes adicionais adequados para uso na composição de limpeza podem incluir umectantes, conservantes, fragrâncias, agentes quelantes e suas combinações.

[90] Um regime de cuidados de pele pode incluir ainda uma composição de tonificação. Composições de tonificação fornecem benefícios como fechar os poros da pele do usuário, restaurar o pH natural da pele (normalmente, um pH de cerca de 5,0 a cerca de 5,5), remover as impurezas da pele (por exemplo, sujeira, óleos, sebo, maquiagem, poluentes e similares), hidratar a pele e preparar em geral a pele para o tratamento utilizando uma composição de tratamento, tal como a composição anti-envelhecimento da presente divulgação e/ou uma composição de tratamento adicional, conforme descrito abaixo.

[91] Geralmente, composições de tonificação para cuidar da pele incluem adstringentes, umectantes, carreadores e suas combinações. Adstringentes apropriados incluem, por exemplo, etanol, hamamelis, água de rosas, alume, aveia, milefólio, pimenta racemosa, água fria, álcool, preparações adstringentes, como nitrato de prata, óxido de zinco, sulfato de zinco, solução de Burow, tintura de benjoim e substâncias vegetais, tais como ácidos tânico e gálico e suas combinações. Como usado aqui, o termo "água fria" refere-se a água com uma temperatura abaixo da temperatura ambiente (aproximadamente 25°C (77°F)).

[92] Umectantes apropriados incluem, por exemplo, glicerina, derivados de glicerina, hialuronato de sódio, betaína, aminoácidos, glicosaminoglicanos, mel, sorbitol, glicóis, polióis, açúcares, hidrolisados de amido hidrogenado, sais de PCA, ácido láctico, lactatos e ureia. Um umectante particularmente preferencial é a glicerina.

[93] Os carreadores para uso com as composições tonificantes podem ser qualquer material carreador tipicamente conhecido para uso nas técnicas médicas e cosméticas como base para pomadas, loções, cremes, unguentos, aerossóis, géis, suspensões, sprays, espumas, e similares, e podem ser utilizados nos seus níveis estabelecidos na técnica. Em uma determinada modalidade, o carreador é um carreador aquoso. Em outra modalidade, o carreador é um carreador de álcool. O carreador de álcool pode ser qualquer álcool apropriado. Um álcool particularmente preferido é o etanol.

[94] Outros carreadores adequados também podem ser usados nas composições de tonificação. Em determinadas modalidades, os carreadores por si só podem fornecer o benefício de cuidados da pele. Exemplos não limitantes de carreadores adequados incluam emolientes, esteróis ou derivados de esterois, gorduras naturais e sintéticas ou óleos, polióis, surfactantes, ésteres, silicones e outros materiais carreadores farmaceuticamente aceitáveis.

[95] Em algumas modalidades, o regime de cuidados com a pele inclui uma composição de tratamento para tratar a pele, além dos benefícios fornecidos pela composição da presente divulgação. Ativos exemplares para a composição de tratamento adicional podem incluir ativos que são conhecidos por ter um efeito de tratamento na pele, como melhorar a uniformidade do tônus da pele e reduzir a acne. Mais especificamente, o agente de tratamento pode ser selecionado a partir do grupo consistindo de agentes modificadores de aparência (por exemplo, agentes esfoliantes, agentes de endurecimento da pele, agentes anti-calo, agentes anti-acne, agentes de cuidados de feridas, agentes de enzima, agentes de reparação de cicatriz, agentes umectantes), agentes terapêuticos, produtos farmacêuticos (por exemplo, drogas, antioxidantes, agentes de entrega de droga transdérmicos, extratos botânicos, vitaminas, ímãs, metais magnéticos e alimentos), xenobióticos, agentes de coloração (por exemplo, agentes de bronzeamento, agentes de clareamento da pele e agentes de brilho, agentes de controle de brilho e drogas), agentes de controle de brilho, agentes corantes, agentes de condicionamento de superfície (por exemplo, agentes de ajuste de pH, hidratantes, condicionadores de pele, agentes de esfoliação, lubrificantes de barbear, agentes anti-calo, agentes anti-acne, agentes anti-envelhecimento, agentes de cuidados de feridas, lipídeos da pele, enzimas, agentes para cuidados com cicatriz, umectantes, pós, extratos botânicos e drogas) analgésicos externos, anti-inflamatórios (por exemplo, agentes anti-irritantes, agentes antialérgicos, agentes de cuidados de feridas, liberação transdérmica e drogas), fragrâncias, agentes neutralizantes de odor, agentes tranquilizantes, agentes calmantes, extratos botânicos (por exemplo, óleo de hortelã-pimenta, eucaliptol, óleo de eucalipto, cânfora e óleo de árvore do chá), peptídeos, gorduras naturais e sintéticas ou óleos, absorventes de umidade e suas combinações.

[96] Em uma modalidade, além das composições descritas acima, o regime de cuidados da pele inclui uma composição de acabamento. Tal como acontece com as outras composições, deve ser entendido que os vários ingredientes ativos aqui descritos podem ser usados em qualquer um dos produtos do regime de cuidados com vários produtos sem se afastar do escopo da divulgação.

[97] Quando incluída, uma composição de acabamento é composta por um agente de acabamento que normalmente proporciona hidratação, proteção da pele, ou uma barreira de umidade para selar a umidade para o usuário. Especificamente, o agente de acabamento pode ser qualquer agente hidratante, protetor da pele e/ou agente de reforço da barreira de umidade conhecido na técnica.

[98] Além disso, o agente de acabamento pode ser capaz de fornecer benefícios estéticos, como suavização da pele, ou uma sensação de pó. Exemplos de agentes de acabamento adicionais incluem agentes condicionadores da pele (por exemplo, agentes de regulação do pH, hidratantes, condicionadores de pele, agentes de esfoliação, lubrificantes de barbear, agentes firmadores da pele, agentes anti-calo, agentes antiacne, agentes anti-envelhecimento, agentes anti-rugas, agentes anti-caspa, agentes para cuidados de feridas, lipídeos da pele, enzimas, agentes para cuidados com cicatriz, umectantes, pós, extratos botânicos e drogas), fragrâncias, extratos botânicos, pós e suas combinações.

[99] Deve ser entendido que os vários ingredientes ativos podem ser usados em qualquer um dos produtos do regime de cuidados com vários produtos sem se afastar do escopo da divulgação. Os ingredientes ativos específicos dos vários produtos dependerão do regime diário final desejado.

[100] Deve ser entendido por aquele versado na técnica que, embora sistemas de cuidados da pele sejam discutidos aqui, regimes usando as composições da presente divulgação podem ser usados para vários outros regimes diários compostos por etapas para limpar, tratar, hidratar e proteger a pele. Entende-se que regimes de cuidados da pele podem combinar todas estas etapas, algumas destas etapas, ou ter várias iterações das mesmas etapas, de modo a proporcionar benefícios desejados para a pele.

[101] Esta descrição escrita usa exemplos para divulgar a invenção, incluindo o melhor modo e também permitir a qualquer especialista na técnica praticar a invenção, inclusive fazer e usar quaisquer dispositivos ou sistemas e realizar quaisquer métodos incorporados. O escopo patenteável da divulgação é definido pelas reivindicações, e pode incluir outros exemplos que ocorrerão aos versados na técnica. Esses outros exemplos destinam-se a estar dentro do escopo das reivindicações, se tiverem elementos estruturais que não diferem da linguagem literal das reivindicações, ou se incluírem elementos estruturais equivalentes com diferenças não substanciais das linguagens literais das reivindicações.

[102] A divulgação será mais plenamente compreendida mediante a consideração dos Exemplos não limitantes a seguir.

EXEMPLO 1 Viabilidade Celular

[103] Neste Exemplo, um teste de viabilidade celular foi realizado para testar a citotoxicidade.

[104] Fibroblastos dérmicos humanos primários foram cultivados até à confluência em meio de crescimento (DMEM + 10% FBS) a 37° C, em uma atmosfera de 5% de CO2. Amostras de células (n=3) foram então tratadas com concentrações crescentes de UNDARINE™ ou ECOBIDENS™ em meios de crescimento (DMEM (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) + 2% de Soro Bovino Fetal (FBS) (Life Technologies) + 1X de antibiótico/antimicótico (AA)) por 1 ou 24 horas. Após o tratamento, as células foram lavadas duas vezes em PBS, deixadas se recuperando em meios de crescimento (DMEM + 10% FBS) durante 12 horas a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2 e, então, incubadas com ALAMARBLUE® (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) durante 2 horas, a 37 °C em atmosfera de 5% de CO2. O ensaio ALAMARBLUE® incorpora um indicador de crescimento fluorométrico/colorimétrico baseado na detecção de atividade metabólica. Especificamente, o sistema incorpora um indicador de oxidação-redução (REDOX) que fluoresce e muda de cor em resposta à redução química do meio de crescimento resultante do crescimento celular.

[105] A droga para desacoplamento mitocondrial, Carbonila cianeto 3- clorofenilhidrazona (CCCP) (comercialmente disponibilizada pela Sigma- Aldrich, St. Louis, Missouri), foi utilizada como controle positivo para citotoxicidade. Além disso, amostras não tratadas das células foram utilizadas como controle negativo.

[106] As intensidades da emissão fluorescente foram gravadas usando SpectraMax® M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, California) em 585 nm. A viabilidade foi determinada da seguinte forma:

[107] Viabilidade (%) = ((intensidade de fluorescência em 585 nm da amostra tratada) / (intensidade de fluorescência em 585 nm da amostra não tratada)) X 100.

[108] Conforme demonstrado na FIG. 1, nenhum dos agentes ativos testados reduziu significativamente a viabilidade celular em concentrações de 1% ou 3%.

EXEMPLO 2

[109] Neste exemplo, um extrato de Undaria foi analisado por sua capacidade de proteger os fibroblastos contra o estresse oxidativo.

[110] Os fibroblastos primários de um explante abdominal de uma mulher com 51 anos foram cultivados até à confluência em meio de crescimento (DMEM + 10% FBS + 1X antibiótico/antimicótico (AA)) e são, em seguida, tratados por 20 horas, com 3% v/v de UNDARINE™ no meio de crescimento (DMEM (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) + 2% de Soro Bovino Fetal (FBS) (Life Technologies) + 1X antibiótico/antimicótico (AA)). As células foram lavadas e, em seguida, uma amostra de células (n=4) foi tratada adicionalmente com 200 pM H2O2 por 1 hora a 37°C. Uma segunda amostra das células (n=4) não foi tratada com UNDARINE™, mas foi tratada com H2O2. Depois de retirar o H2O2, as células foram deixadas se recuperando nos meios a 37°C em atmosfera de 5% de CO2. Uma amostra das células não tratadas (n=4) foi usada como um controle. Após 12 horas, as células foram incubadas em PBS + 10% de ALAMARBLUE® (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) por 1 hora a 37°C em 5% de CO2 e emissão de fluorescência foi medido usando SpectraMax® M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, Califórnia) (560EX nm/590 nm). Os resultados são mostrados na FIG. 2.

[111] Como mostrado na FIG. 2, UNDARINE™ protegeu as células da exposição a H2O2.

EXEMPLO 3

[112] Neste exemplo, um extrato de Undaria foi analisado por sua capacidade de proteger os fibroblastos contra a apoptose induzida por H2O2.

[113] Os fibroblastos dérmicos humanos foram cultivados até à confluência em meio de crescimento (DMEM + 10% FBS) e são, em seguida, tratados por 12 horas, com 3% v/v de UNDARINE™ no meio de crescimento (DMEM (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) + 2% de Soro Bovino Fetal (FBS) (Life Technologies) + 1X antibiótico/antimicótico (AA)). As células foram lavadas duas vezes com PBS e, em seguida, uma amostra de células (n=4) foi tratada adicionalmente com 200 pM H2O2 por 1 hora a 37°C. Uma segunda amostra das células (n=4) não foi tratada com UNDARINE™, mas foi tratada com H2O2. Uma amostra das células não tratadas (n=4) foi usada como um controle. Após a lavagem adicional com PBS, as células foram deixadas se recuperando em meio a 37°C em atmosfera de 5% de CO2. Após 12 horas, as células foram coradas com o marcador de apoptose Anexina V - Alexa Fluor 488 (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) (emissão fluorescente relatada como Anexina). A anexina V é usada, conforme os padrões da indústria, como um marcador de apoptose precoce. Particularmente, as composições e/ou compostos que reduzem sua expressão seriam considerados altamente favoráveis/eficazes para a melhorar da aparência e função da pele. Os resultados são mostrados nas FIGS. 3A-3D.

[114] Como mostrado nas FIGS. 3A-3D, UNDARINE™ impediu o aumento no marcador de apoptose precoce causado pelos insultos com H2O2. Além disso, os valores de FSC e HSC (tamanho e granulosidade) indicaram uma diminuição na porcentagem de células apoptóticas em amostras tratadas com UNDARINE™.

EXEMPLO 4

[115] Neste exemplo, o efeito de um extrato de Bidens sobre o fotodano induzido por H2O2 ou por UV nos fibroblastos dérmicos humanos foi analisado.

[116] Os fibroblastos primários foram isolados a partir de um explante de pele abdominal de uma mulher caucasiana com 32 anos de idade. Os fibroblastos foram cultivados a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2 em placas de 24 poços incluindo meio de crescimento (DMEM (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) + 2% soro bovino Fetal (FBS) (Life Technologies) + 1X antibiótico/antimicótico (AA)) até a confluência de 100%.

[117] Após o cultivo até a confluência de 100%, as células foram tratadas por 20 horas, com 3% v/v de ECOBIDENS™ em meios de crescimento. As células foram então lavadas duas vezes com PBS, e também foram tratadas com 200 pM de H2O2 (n=4) em meio de crescimento por uma hora a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2 ou submersas em 0,5 ml de PBS e expostas a 100 mJ UV/cm2 (n=4).

[118] Após lavar duas vezes com PBS, as células foram, então, deixadas se recuperando durante 12 horas em meio a 37°C em atmosfera de 5% de CO2. O meio foi, então, coletado e armazenado a -80°C para uma análise posterior das citocinas e foi substituído por PBS + 10% de ALAMARBLUE® (Life Technologies). Após incubarem durante uma hora a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2, a emissão de fluorescência foi medida usando SpectraMax® M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, Califórnia) (560EX nm/590 nm). Os resultados são mostrados nas FIGS. 4 e 5.

[119] Usando a emissão fluorescente, a alteração da viabilidade das células pode ser calculada comparando a relação da emissão fluorescente das células expostas com as células de controle não tratadas. Como demonstrado pelos resultados, as células tratadas com ECOBIDENS™ apresentaram uma viabilidade notavelmente maior do que as células de controle sem pré-tratamento.

EXEMPLO 5

[120] Neste exemplo, um extrato de Bidens foi analisado por sua capacidade de proteger os fibroblastos contra a apoptose induzida por UV ou H2O2.

[121] Os fibroblastos dérmicos humanos foram cultivados até à confluência em meio de crescimento (DMEM + 10% FBS) e são, em seguida, tratados por 12 horas, com 3% v/v de ECOBIDENS™ no meio de crescimento (DMEM (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) + 2% de Soro Bovino Fetal (FBS) (Life Technologies) + 1X antibiótico/antimicótico (AA)). As células foram lavadas com PBS e, então, amostras de células foram tratadas ainda com 200 pM de H2O2 por 1 hora a 37°C ou irradiadas com 100mJ de UV/cm2. Uma amostra das células não tratadas foi usada como um controle. Outra amostra das células não foi tratada com ECOBIDENS™, mas foi tratada com H2O2 ou UV (n=4). Após a lavagem adicional com PBS, as células foram deixadas se recuperando em meio a 37°C em atmosfera de 5% de CO2. Após 12 horas, as células foram coradas com o marcador de apoptose Anexina V - Alexa Fluor 488 (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) (emissão fluorescente relatada como Anexina). Os resultados são mostrados nas FIGS. 6A-6F. Os resultados representam os dois experimentos independentes analisando 10.000 células/leitura.

[122] Como mostrado nas FIGS. 6A-6F, ECOBIDENS™ impediu o aumento no marcador de apoptose precoce causado pelos insultos com UV e/ou H2O2. Além disso, os valores de FSC e HSC (tamanho e granulosidade) indicaram uma diminuição na porcentagem de células apoptóticas em amostras tratadas com ECOBIDENS™.

EXEMPLO 6

[123] Neste Exemplo, um extrato de Bidens foi analisado por sua capacidade de minimizar a diminuição na concentração de glutationa em células (GSH), devido ao estresse induzido por radiação UV ou H2O2.

[124] Os fibroblastos dérmicos humanos foram cultivados até à confluência em meio de crescimento (DMEM + 10% FBS) e são, em seguida, tratados por 24 horas, com 3% v/v de ECOBIDENS™ no meio de crescimento (DMEM (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) + 2% de Soro Bovino Fetal (FBS) (Life Technologies) + 1X antibiótico/antimicótico (AA)). As células foram lavadas com PBS e, então, amostras de células foram tratadas ainda com 200 pM de H2O2 (n=4) por 1 hora a 37°C ou irradiadas com 100mJ de UV/cm2 (n=4). Uma amostra das células não tratadas (n=4) foi usada como um controle. Outra amostra das células não foi tratada com ECOBIDENS™, mas foi tratada com H2O2 ou UV (n=4/tratamento). Depois de lavar adicionalmente três vezes as células com PBS, as células foram deixadas se recuperando por aproximadamente 20 horas no meio (DMEM + 10% FBS) a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2.

[125] As células foram coletadas por tripsinização e centrifugadas em tubos de 1,5 ml a 1500 rpm durante 5 minutos a 4°C para sedimentar as células. O sobrenadante foi descartado e as células foram ressuspensas em PBS. As células foram então congeladas instantaneamente por imersão em nitrogênio líquido e descongeladas rapidamente em banho de água a 37°C. Foram realizados quatro ciclos de congelamento e descongelamento. Os tubos foram centrifugados por 10.000 X g a 4°C por 15 minutos. O sobrenadante foi transferido para novos tubos de 1,5 ml e armazenado a - 80°C para analisar a glutationa reduzida (GSH), usando o kit de ensaio SENSOLYTE® Glutathione Cellular Assay Kit (AnaSpec, Inc., Fremont, Califórnia). Os resultados da análise de GSH são mostrados na FIG. 7.

[126] Como mostrado na FIG. 7, ambos os insultos de UV e H2O2 causaram uma diminuição nos níveis de GSH das células. O impacto dos insultos de UV e H2O2 nos níveis de GSH, no entanto, foi minimizado nas células da amostra tratada com ECOBIDENS™.

EXEMPLO 7

[127] Neste exemplo, a atividade de um extrato de Bidens na concentração de H2O2 foi analisado.

[128] Os fibroblastos dérmicos humanos primários foram cultivados até à confluência em meio de crescimento (DMEM + 10% FBS) e são, em seguida, tratados por 12 horas, com 3% v/v de ECOBIDENS™ no meio de crescimento (DMEM (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) + 2% de Soro Bovino Fetal (FBS) (Life Technologies) + 1X antibiótico/antimicótico (AA)). Três amostras de controle foram deixadas sem tratamento. N=4 para cada amostra tratada e não tratada. As células de todas as amostras foram, então, lavadas duas vezes com PBS. Uma amostra de controle foi tratada a 37°C com 200 pM de H2O2; uma amostra de controle foi tratada a 37°C com 200 pM de H2O2 e catalase (disponibilizada como kit de ensaio de peróxido de hidrogênio com base celular (Hydrogen Peroxide Cell-Based Assay Kit) cusado conforme as instruções do fabricante (Cayman Chemicals Company, Ann Arbo, Michigan)). A amostra tratada com ECOBIDENS™ também foi tratada a 37°C com 200 pM de H2O2. Após 1 hora de tratamento com H2O2, a concentração de H2O2 na amostra foi medida com um kit de ensaio de peróxido de hidrogênio com base celular (Cayman Chemicals Company, Ann Arbo, Michigan). Mais particularmente, o kit mediu a emissão de fluorescência como sendo proporcional à concentração de H2O2.

[129] Como mostrado na FIG. 8, o pré-tratamento com um extrato de Bidens não reduz a concentração de H2O2 em uma amostra. Ou seja, como o extrato de Bidens é lavado antes do tratamento com H2O2, foi demonstrado agora que os valores residuais do extrato não estão causando a redução de H2O2. Por outro lado, acredita-se que o extrato aumenta os mecanismos de defesa das próprias células, reduzindo a concentração de H2O2.

EXEMPLO 8

[130] Neste exemplo, os extratos foram analisados por sua capacidade de aumentar a resiliência da célula contra a radiação UV e/ou estresse oxidativo.

[131] Os queratinócitos humanos primários foram cultivados até à confluência em meio de crescimento (EpiLife® Medium, Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque, com 60 pM de cálcio (Gibco®, Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque), suplementado com EpiLife® Defined Growth Supplement (EDGS) (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) e 1X antibióticos/antimicóticos) e, em seguida, tratados por 12 horas com 3%, 6% ou 9% v/v de UNDARINE™ ou ECOBIDENS™. N=4 para cada amostra tratada e não tratada. Uma amostra de controle foi tratada e outra amostra de controle foi tratada com 5 pM de rotenona. As células foram lavadas e, então, as amostras de células foram tratadas ainda com 200 pM de H2O2 por 1 hora a 37°C ou irradiadas com 100 mJ/cm2 e UV. As células foram deixadas se recuperando em meio (DMEM + 10% FBS) a 37°C em atmosfera de 5% de CO2. Após 16 horas, as células foram incubadas em PBS + 10% de ALAMARBLUE® (Life Technologies, Grand Island, Nova Iorque) por 1 hora a 37°C em 5% de CO2 e emissão de fluorescência foi medido usando SpectraMax® M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, Califórnia) (560EX nm/590 nm). Os resultados são mostrados nas FIGS. 9 e 10.

[132] Como mostrado nas FIGS. 9 e 10, UNDARINE™ e ECOBIDENS™ protegeram as células contra H2O2 e/ou a exposição aos raios UV. Acredita- se que UNDARINE™ e ECOBIDENS™ melhorou a resiliência do queratinócito ao estresse oxidativo causado por tratamento com H2O2 e/ou radiação UV, aumentando a atividade mitocondrial celular e/ou a resposta celular antioxidante.

[133] Os Exemplos acima mencionados mostram que ambos os extratos de Undaria e Bidenssão eficazes na proteção das células contra fotodanos e estresse oxidativo. Desta forma, as composições incluindo estes extratos podem ser aplicadas topicamente para proteger as células contra a exposição aos raios UV e a produção excessiva de ROS, desse modo, resultando em uma aparência mais jovem da pele envelhecida do rosto e do corpo. Acredita-se que estes efeitos protetores se devem ao fato de Undaria e Bidens serem capazes de melhorar os mecanismos de defesa celulares e, em particular, a atividade mitocondrial celular e a resposta celular antioxidante, desta forma, minimizando a degeneração e a morte celular. Estes efeitos comprovadamente retardam e/ou reduzem o processo de envelhecimento da pele e os sintomas relacionados (por exemplo, afinamento da pele, flacidez, rugas, fragilidade e perda da elasticidade da pele).

Claims (26)

1. Método para redução do estresse oxidativo das células em um indivíduo com a necessidade do mesmo, o método CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: aplicar topicamente uma composição que compreende de 0,1% em peso a 5% em peso de um extrato de Undaria, de 0,1% em peso a 5% em peso de um extrato de Bidens, e um carreador hidrofílico para uma região alvo da pele do indivíduo.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a região alvo da pele é selecionada do grupo que compreende pele facial, pele do pescoço, pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés e respectivas combinações.

3. Método, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o extrato de Undariaé selecionado do grupo que compreende Undaria crenata, Undaria peterseniana, Undaria pinnatifida, Undaria undarioides, e respectivas combinações.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que o extrato de Bidensé selecionado do grupo que compreende Bidens alba, Bidens amplectens, Bidens amplissima, Bidens aristosa, Bidens asymmetrica, Bidens aurea, Bidens beckii, Bidens bidentoides, Bidens bigelovii, Bidens bipinnata, Bidens biternata, Bidens campylotheca, Bidens cernua, Bidens cervicata, Bidens chippii, Bidens conjuncta, Bidens connata, Bidens coronata, Bidens cosmoides, Bidens cynapiifolia, Bidens discoidea, Bidens eatonii, Bidens ferulifolia, Bidens forbesii, Bidens frondosa, Bidens gardneri, Bidens hawaiensis, Bidens henryi, Bidens heterodoxa, Bidens heterosperma, Bidens hillebrandiana, Bidens hyperborean, Bidens laevis, Bidens lemmonii, Bidens leptocephala, Bidens leptophylla, Bidens macrocarpa, Bidens mannii, Bidens mauiensis, Bidens maximowicziana, Bidens menziesii, Bidens micrantha, Bidens mitis, Bidens molokaiensis, Bidens x multticeps, Bidens parviflora, Bidens pilosa, Bidens polylepis, Bidens populifolia, Bidens radiate, Bidens reptans, Bidens sandvicensis, Bidens schimperi, Bidens simplicifolia, Bidens socorrensis, Bidens squarrosa, Bidens subalternans, Bidens tenuisecta, Bidens torta, Bidens trichosperma, Bidens tripartita, Bidens triplinervia, Bidens valida, Bidens vulgata, Bidens wiebkei, e respectivas combinações.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que as células são selecionadas do grupo que compreende fibroblastos dérmicos, queratinócitos epidérmicos e respectivas combinações.

6. Método para redução da apoptose de células induzida pelo estresse oxidativo em um indivíduo com a necessidade do mesmo, CARACTERIZADO pelo fato de ser por meio do método para redução do estresse oxidativo das células conforme definido na reivindicação 1, compreendendo: aplicar topicamente uma composição que compreende de 0,1% em peso a 5% em peso de um extrato de Undaria,de 0,1% em peso a 5% em peso de um extrato de Bidens, e um carreador hidrofílico para uma região alvo da pele do indivíduo.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato de que a região alvo da pele é selecionada do grupo que compreende pele facial, pele do pescoço, pele das mamas, pele dos ombros, pele do tórax, pele das pernas, pele das mãos, pele dos pés e respectivas combinações.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que o extrato de Undariaé selecionado do grupo que compreende Undaria crenata, Undaria peterseniana, Undaria pinnatifida, Undaria undarioides, e respectivas combinações.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o extrato de Bidensé selecionado do grupo que compreende Bidens alba, Bidens amplectens, Bidens amplissima, Bidens aristosa, Bidens asymmetrica, Bidens aurea, Bidens beckii, Bidens bidentoides, Bidens bigelovii, Bidens bipinnata, Bidens biternata, Bidens campylotheca, Bidens cernua, Bidens cervicata, Bidens chippii, Bidens conjuncta, Bidens connata, Bidens coronata, Bidens cosmoides, Bidens cynapiifolia, Bidens discoidea, Bidens eatonii, Bidens ferulifolia, Bidens forbesii, Bidens frondosa, Bidens gardneri, Bidens hawaiensis, Bidens henryi, Bidens heterodoxa, Bidens heterosperma, Bidens hillebrandiana, Bidens hyperborean, Bidens laevis, Bidens lemmonii, Bidens leptocephala, Bidens leptophylla, Bidens macrocarpa, Bidens mannii, Bidens mauiensis, Bidens maximowicziana, Bidens menziesii, Bidens micrantha, Bidens mitis, Bidens molokaiensis, Bidens x multticeps, Bidens parviflora, Bidens pilosa, Bidens polylepis, Bidens populifolia, Bidens radiate, Bidens reptans, Bidens sandvicensis, Bidens schimperi, Bidens simplicifolia, Bidens socorrensis, Bidens squarrosa, Bidens subalternans, Bidens tenuisecta, Bidens torta, Bidens trichosperma, Bidens tripartita, Bidens triplinervia, Bidens valida, Bidens vulgata, Bidens wiebkei, e respectivas combinações.

10. Método, de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato de que as células são selecionadas do grupo que compreende fibroblastos dérmicos, queratinócitos epidérmicos e respectivas combinações.

11. Método para redução do fotodano das células em um indivíduo com a necessidade do mesmo, CARACTERIZADO pelo fato de ser por meio do método para redução do estresse oxidativo das células conforme definido na reivindicação 1, compreendendo: aplicar topicamente uma composição que compreende de 0,1% em peso a 5% em peso de um extrato de Undaria, de 0,1% em peso a 5% em pesode um extrato de Bidens, e um carreador hidrofílico para uma região alvo da pele do indivíduo.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o extrato de Undariaé selecionado do grupo que compreende Undaria crenata, Undaria peterseniana, Undaria pinnatifida, Undaria undarioides, e respectivas combinações.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12, CARACTERIZADO pelo fato de que o extrato de Bidensé selecionado do grupo que compreende Bidens alba, Bidens amplectens, Bidens amplissima, Bidens aristosa, Bidens asymmetrica, Bidens aurea, Bidens beckii, Bidens bidentoides, Bidens bigelovii, Bidens bipinnata, Bidens biternata, Bidens campylotheca, Bidens cernua, Bidens cervicata, Bidens chippii, Bidens conjuncta, Bidens connata, Bidens coronata, Bidens cosmoides, Bidens cynapiifolia, Bidens discoidea, Bidens eatonii, Bidens ferulifolia, Bidens forbesii, Bidens frondosa, Bidens gardneri, Bidens hawaiensis, Bidens henryi, Bidens heterodoxa, Bidens heterosperma, Bidens hillebrandiana, Bidens hyperborean, Bidens laevis, Bidens lemmonii, Bidens leptocephala, Bidens leptophylla, Bidens macrocarpa, Bidens mannii, Bidens mauiensis, Bidens maximowicziana, Bidens menziesii, Bidens micrantha, Bidens mitis, Bidens molokaiensis, Bidens x multticeps, Bidens parviflora, Bidens pilosa, Bidens polylepis, Bidens populifolia, Bidens radiate, Bidens reptans, Bidens sandvicensis, Bidens schimperi, Bidens simplicifolia, Bidens socorrensis, Bidens squarrosa, Bidens subalternans, Bidens tenuisecta, Bidens torta, Bidens trichosperma, Bidens tripartita, Bidens triplinervia, Bidens valida, Bidens vulgata, Bidens wiebkei, e respectivas combinações.

14. Método, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADO pelo fato de que as células são selecionadas do grupo que compreende fibroblastos dérmicos, queratinócitos epidérmicos e respectivas combinações.

15. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição inclui ainda beta-sitosterol.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que o beto-sitosterol está presente na composição em uma quantidade de cerca de 0,001% por peso da composição a cerca de 10,0% por peso da composição.

17. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição inclui ainda um vasodilatador.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADO pelo fato de que o vasodilatador é selecionado do grupo que compreende trinitrato de gliceril, resveratrol, cafeína, extrato de gengibre, ginseng e respectivas combinações.

19. Método, de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição inclui ainda beta-sitosterol.

20. Método, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o beto-sitosterol está presente na composição em uma quantidade de cerca de 0,001% por peso da composição a cerca de 10,0% por peso da composição.

21. Método, de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição inclui ainda um vasodilatador.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o vasodilatador é selecionado do grupo que compreende trinitrato de gliceril, resveratrol, cafeína, extrato de gengibre, ginseng e respectivas combinações.

23. Método, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição inclui ainda beta-sitosterol.

24. Método, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o beto-sitosterol está presente na composição em uma quantidade de cerca de 0,001% por peso da composição a cerca de 10,0% por peso da composição.

25. Método, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição inclui ainda um vasodilatador.

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o vasodilatador é selecionado do grupo que compreende trinitrato de gliceril, resveratrol, cafeína, extrato de gengibre, ginseng e respectivas combinações.

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