JP4115777B2

JP4115777B2 - 新規化合物

Info

Publication number: JP4115777B2
Application number: JP2002244071A
Authority: JP
Inventors: 草野源次郎; 草野昭子; 瀬山義幸
Original assignee: 株式会社武蔵野免疫研究所
Priority date: 2002-08-23
Filing date: 2002-08-23
Publication date: 2008-07-09
Anticipated expiration: 2022-08-23
Also published as: JP2004083442A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は極めて抗酸化・抗過酸化性に優れた保健上有用な化合物に関する。
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
【０００２】
人間は加齢と共に老化が全身的に進行し、加齢と共に各種疾患に罹る機会が多くなる。この老化や各種疾患の原因、また疾患を悪化させる大きな基本的な原因は、生体の過酸化であると言っても過言ではない。例えば、外傷、骨折、各種内臓疾患等において炎症は生体の防御反応の一つであるが、その炎症を悪化させるのは過酸化反応である。過酸化が原因となり、あるいは悪化を進行させる病気としては、肝臓病、糖尿病、胃・十二指腸潰瘍、各種自己免疫疾患、アルコール中毒症、白内障、熱傷、外傷など枚挙に暇がない。
【０００３】
過酸化反応を起こす原因としては、紫外線、放射線、活性酸素、フリーラジカルなどが挙げられ、活性酸素やフリーラジカルを発生させる原因としては、薬物・残留農薬・公害による汚染物質などのほか、ある種の生活習慣、例えば喫煙、過激な運動、細菌、ストレスなどが挙げられる。
【０００４】
一方、生体には過酸化に対する防御反応が備わっており、スーパーオキサイドディスムターゼ、グルタチオンパーオキシダーゼ、カタラーゼ、あるいはセルロプラスミン、尿酸などを生産して生体の過酸化に対応している。さらに食品中から摂取されるビタミン類、中でもビタミンＡやその同族体、ビタミンＣ、ビタミンＥ同族体は、本来のビタミンとしての作用の他に過酸化を起こす各種原因物質のスキャベンジャーとしての役割が大きく、ビタミンとしての所要量に拘らずかなりの大量摂取が望ましいとされている。
【０００５】
食品から摂取される抗酸化物質、抗過酸化物質としては上記ビタミン類の他にも、不飽和脂肪酸、セサミノール、コエンザイムＱ類、カロテノイド類、フラボノイド類、カテキン類、その他各種の化合物が報告され、また実用化されている。結局、健康者が健康を保つためにこれら酸化・過酸化反応抑制物質を摂取するには、よく言われるように、多種類の食品を偏らずまんべんなく摂取する、というのが最も実際的かつ賢明な方法である。
【０００６】
しかし、医療面においてこのような機能を期待するには、食品という天然物そのままではなく作用物質を純粋に調製して医薬品としての要件を満たした上で、特定の疾病に、その特定の局所へ、また特定の経路で投与できること等が求められる。医薬品としての条件とは、安全性、有効性はもちろんのこと、副作用の少ないこと、安定であること、などのほか経済性についても多くのことが求められる。本発明は、古来、世界各地で重用されてきた植物から、文献未載の新規化合物を発見し、構造決定と同時に、ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａｐａｃｉｔｙに優れた化合物であることを確認し得たので、広く生体に拘る安全性に優れた新しい酸化・過酸化防御剤を提供しようとするものである。
【０００７】
また従来ビデンス・ピローサの種類、加工過程、含有組成物等の有効性を評価するのに適切な方法がなく、日数のかかる動物実験あるいは生体実験に頼らざるを得なかった状態であるが、過酸化反応抑制力に優れた請求項１の化合物を指標としてＨＰＬＣ分析することによって、ビデンス・ピローサの評価を各種の局面において可能にすことができる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の化合物は、キク科センダングサ属植物のＢｉｄｅｎｓｐｉｌｏｓａから発見された文献未載の新規化合物である。Ｂｉｄｅｎｓｐｉｌｏｓａで代表されるキク科センダングサ属植物は、特願２０００−１０５５５９に詳述したように、種類も多岐に亘り互いに交配するので変種も多く、植物学上も混乱が見られ、学名、和名、漢名、の対応も交錯していて同定することは極めて困難であるが、本発明で用いられるセンダングサ属植物は以下に掲げるものを包含する。
【０００９】
ＢｉｄｅｎｓｐｉｌｏｓａＬ．（コセンダングサ、コシロノセンダングサ、咸豊草）
ＢｉｄｅｎｓｐｉｌｏｓａＬ．ｖａｒ．ｍｉｎｏｒ（Ｂｌｕｍｅ）Ｓｈｅｒｆｆ（シロバナセンダングサ、シロノセンダングサ、コシロノセンダングサ、コセンダングサ、咸豊草）
ＢｉｄｅｎｓｐｉｌｏｓａＬ．ｖａｒ．ｂｉｓｅｔｏｓａＯｈｔａｎｉｅｔＳｕｚｕｋｉ（アワユキセンダングサ）
ＢｉｄｅｎｓｐｉｌｏｓａＬ．ｆ．ｄｅｃｕｍｂｅｎｓＳｃｈｅｒｆｆ（ハイアワユキセンダングサ）
ＢｉｄｅｎｓｐｉｌｏｓａＬ．ｖａｒ．ｒａｄｉａｔａＳｃｈｅｒｆｆ（タチアワユキセンダングサ、ハイアワユキセンダングサを含むこともある）
ＢｉｄｅｎｓｐｉｌｏｓａＬ．ｖａｒ．ｒａｄｉａｔａＳｃｈｕｌｔｚＢｉｐｏｎｔｉｎｕｓ（シロノセンダングサ、オオバナノセンダングサ）
ＢｉｄｅｎｓｂｉｔｅｒｎａｔａＬｏｕｒ．ＭｅｒｒｉｌｌｅｔＳｃｈｅｒｆｆ（センダングサ）
ＢｉｄｅｎｓｂｉｐｉｎｎａｔａＬ．（コバノセンダングサ、センダングサ）
ＢｉｄｅｎｓｃｅｒｎｕａＬ．（ヤナギタウコギ）
ＢｉｄｅｎｓｆｒｏｎｄｏｓａＬ．（アメリカセンダングサ、セイタカタウコギ）
ＢｉｄｅｎｓｐａｒｖｉｆｌｏｒａＷｉｌｌｄ（ホソバノセンダングサ）
ＢｉｄｅｎｓｒａｄｉａｔａＴｈｕｉｌｌ．ｖａｒ．ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ（Ｔｕｒｃｚ．）Ｋｉｔａｍｕｒａ（エゾノタウコギ）
ＢｉｄｅｎｓｔｒｉｐａｒｔｉｔａＬ．（タウコギ）
【００１０】
この植物は中国・台湾では主に咸豊草と呼ばれるが異名も多く、同治草、鬼針草、三葉鬼針草、三葉刺針草、刺針草、婆婆針草、白花婆婆針、蝦箝草、符因草、符因頭、赤査某、金盞銀盤、含風草、南風草、蝦公鋏、羞査某仔等の名があり、それぞれがどの学名に相当するのかは明らかでない。
【００１１】
花はキク科特有の形で、白色または黄色の丸みのある花弁のような舌状花が数個、中央には黄褐色の管状花が多数集合している。中には舌状花を欠くものもある。茎は四角で薄紫に着色した節がある。３つまたは５つに羽状に分かれた葉には柄があり、縁にはぎざぎざがあって対生しているものが多い。
【００１２】
日本では本州の暖地以南で見られ、台湾、中国ないし世界の亜熱帯ないし熱帯各地に分布し、草丈は２５ｃｍ〜約１ｍにもなり、通常一年草であるが温暖な気候条件に恵まれると越冬し、花は一年中次々と咲く。動物や人の衣服に付いて運ばれる黒褐色の種子の上部に逆棘のある針があり、針の数も交配のため一定しないものが多い。中国では鬼針草属と呼ばれている。
【００１３】
センダングサ属植物とくにＢｉｄｅｎｓｐｉｌｏｓａは古来伝承薬として経験的に、全草が糖尿病や炎症性疾患、各種消化器病、各種感染症、リウマチ、等の治療に、アフリカ、中南米、アジア等世界の熱帯〜温帯地域で広く使われてきた。例えば台湾では急・慢性虫垂炎、腎炎、胃腸炎、下痢、インフルエンザ、咽頭炎、歯痛、肝炎、十二指腸炎に広く用いられ、肝臓の保護作用があるとされている。アフリカでは傷の治療や重症悪阻(おそ)、胃痛、便秘、腸内寄生虫、赤痢、下痢、腹痛等に使われてきた。葉の搾汁は火傷や結膜炎、耳炎、さらに止血剤にも用いるという。磨砕した汁や根の料理はマラリアに効くと言われ、ズールー族では新芽を噛んでリウマチの薬としている。中国では腸炎、桿菌赤痢、咽頭炎に使われ、この植物を砕きあるいは煎じて傷の治療や慢性潰瘍に使用される。中央アメリカの島々では搾汁を目薬に、ベネズエラやブラジルでは潰瘍に、ボリビアのアンデスでは血圧を下げるのに使う。また利尿や胆汁分泌促進、風疹や猩猴熱の解熱にも用いる。
【００１４】
発明者等はこれほど使用経験の豊富な、従って安全性に優れた本植物のエキスにつき、ヒトの糖尿病、高脂血症、アトピー性皮膚炎、肝炎、下肢に生じる難治性夏季潰瘍、等に特に効果を認め、また動物実験によっても繰返しその効果を裏付ける結果を得たことから、本植物に含まれる各種化合物を分画し、その単離精製を試み、それらのａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａｐａｃｉｔｙを測定した所、極めて活性の高いものであることを見いだし、本発明を完成するに至った。ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａｐａｃｉｔｙは「ラジカルを捕捉する総合的な抗酸化能」をよく現すとされ、保護すべき目的物を守る能力を評価するのに実用的である、とされている方法である。
【００１５】
【測定用機器】
紫外部スペクトル：島津分光光度計ＵＶ１２００８
赤外部スペクトル：Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ１７２０Ｘ−ＦＴＩＥ分光計
ＭＳスペクトル：日立Ｍ−８０分光計
ＮＭＲスペクトル：ＶａｒｉａｎＭｅｒｃｕｒｙ３００、及びｕｎｉｔｙＩｎｏｖａ−５００（溶媒：ＣＤＣｌ₃、ＣＤ₃ＯＤ、及びｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｄ₅、内部標準としてテトラメチルシランを用いたδスケール上）
【００１６】
【実験例１】
原料からの分画単離
沖縄県宮古島で自生するBidens pilosa L.var.radiata （和名タチアワユキセンダングサ）を圃場で無農薬栽培し、刈り取った地上部を洗浄、裁断、蒸煮、圧潰、揉解、乾燥工程を経たものを原料とした。原料５００ｇを３．５Ｌの水で３回、還流下に抽出し、６００ｍＬのダイヤイオンＨＰ−２０カラムに通して水で洗浄、吸着されなかった画分と洗液を併せて画分Ｐとした。カラムは５０％メタノール、次いでメタノールで溶出した。溶出液（画分Ａ）の半分を７０ｇのＯＤＳカラムに吸着、１０％及び２０％メタノール（画分Ａ１）、３０％メタノール（画分Ａ２）、４０％メタノール（画分Ａ３）、５０％メタノール（画分Ａ４），及びメタノール（画分Ａ５）で段階的にクロマト溶出してそれぞれ分画した。
【００１７】
【実験例２】
各画分の逆相高速液体クロマトグラフィー
カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ５ｐｈ［５μ、１．０×２５ｃｍ］、カラム温度３０℃
移動相：ＣＨ₃ＣＮ−１％ＡｃＯＨ［１０．５％−６０％］、５０分、ｌｉｎｅａｒｇｒａｄｉｅｎｔ、流速２ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
各画分から得られたＨＰＬＣの各ピークをさらにＨＰＬＣにかけて精製し、単離した成分の各種スペクトルデータや分解反応生成物の解析から化合物を同定、またはその構造を決定した。
【００１８】
実験例２の結果、各画分から表１に示す２０種の化合物が同定または構造決定された。この２０種の化合物の構造式を図１に示す。
【００１９】

【００２０】
【図１】各画分から得られた化合物の構造式

【００２１】
２０種の化合物の内、７、１３、１４は文献未載の新規化合物で、その¹Ｈ−及び¹³Ｃ−ＮＭＲデータは表２−１、表２−２のとおりである。
【００２２】

【００２３】

【００２４】
同じく７、１３、１４の化合物のＮＭＲ以外の特性データは次のとおりである。
【００２５】
7:4-Ο-acetyl-3-Ο-caffeoyl-2-methyl-2,3,4-trihydroxybutyric acid.C₁₆H₁₈O₉.SI-MS m/z:355(M+H)⁺,163(caffeoyl)⁺,HR-SI-MS m/z:355.1024(M+H)⁺,error:-0.4 m.m.u.[α]_D-2.43°(c=0.30,MeOH).IR(KBr)cm^-1:3528,3122(OH),1692(COOH,COOR),1600(aromatic ring),1287(C-O-C).UVλ_max(MeOH)nm(logε):328.5(3.78), 295.5(3.60),204.5(4.14).
【００２６】
7-methyl ester:C₁₇H₂₀O₉.SI-MS m/z:368(M+H)⁺,HR-SI-MS m/z:368.1105(M+H)⁺,error:-0.1 m.m.u.[α]_D+10.27゜(c=0.22,MeOH).IR(KBr)cm^-1:3482(OH),1740(COOR),1657,1605(aromatic ring),1262(C-O-C).UVλ_max(MeOH)nm(logε):331.5(4.10),217.5(4.07).
【００２７】
13:4,5,7-trihydroxy-3,3,8-trimethoxyflavone-7-Ο-β-D-glucopyranoside.C₂₄H₂₆O₁₃.SI-MS m/z:523(M+H)⁺,HR-SI-MS m/z:523.1444(M+H)⁺,error:-0.9 m.m.u.[α]_D-49.7゜(c=0.28,MeOH).IR(KBr)cm^-1:3505(OH),1735(CO),1604(aromatic ring).UVλ_max(MeOH)nm(logε):350.5(4.03),257.5(4.03),209.5(4.45). 化合物13を2％塩酸で加水分解するとD-グルコースを得た。(TLC:Rf0.45,n-PrOH-H₂O[85:15]).
【００２８】
14:3,5,7-trihydroxy-3,4,8-trimethoxyflavone-7-Ο-β-D-glucopyranoside.C₂₄H₂₆O₁₃.SI-MS m/z:523(M+H)⁺,HR-SI-MS m/z:523.1437(M+H)⁺,error:-1.2 m.m.u.[α]_D-43.2゜(c=0.31, MeOH).IR(KBr)cm^-1:34.03(OH),1601(aromatic ring). UVλ_max(MeOH)nm(logε):348.5(3.91),257.5(3.95),242.5(4.02),209.5(4.31). 化合物14を2％塩酸で加水分解するとD-グルコースを得た。(TLC:Rf0.45,n-PrOH-H₂O[85:15]).
【００２９】
【活性評価】
活性評価の方法は、複合系のａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａｐａｃｉｔｙ（適切な訳語が定着していないので以下ａ．ｃ．と略す）の測定のために考案された方法（ＦＲＡＮＣＯＴＵＢＡＲＯ，ｅｔａｌ．：ＦｒｅｅＲａｄｉｃａｌＢｉｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．２４，Ｎｏｓ．７／８，ｐｐ．１２２８−１２３４，１９９８）で、得られたデータは「ラジカルを捕捉する総合的な抗酸化能」をよく現すとされ、保護すべき目的物を守る能力を評価するのに実用的である、とされている。
【００３０】
表１に示した各画分Ｐ、Ａ、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、及び化合物１〜２０につき、ａ．ｃ．を測定するにあたり、ラジカルによる漂白試薬に用いるクロシンは、サフランからエチルエーテルで反復抽出して妨害物質をできるだけ除去した後メタノール抽出で分離した。クロシンの濃度は４４３ｎｍにおける分子吸光係数ε＝１．３３×１０⁵Ｍ^-1cm^-1から算出した。反応液は０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２．０ｍＬ中にクロシン１０μＭと、抗酸化剤またはＴｒｏｌｏｘ^TMＣ（ビタミンＥの水溶性同族体、(±)-6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchromane-2-carboxylic acid,CAS No.=53188-07-1,SIGMA-ALDRICH Product No.56510 ）の５０％メタノール溶液を含むようにした。反応は４０℃で平衡にした反応混液に、その都度０．５Ｍ溶液から調製した２，２´−Ａｚｏｂｉｓ（２−ａｍｉｄｉｎｏｐｒｏｐａｎｅ）ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ１２．５ｍＭを加えてスタートさせた。クロシンの漂白速度はジアゾ化合物を加えて約１分後には直線的となり、通常１０分間は４４３ｎｍの吸収が記録される。通常、抗酸化剤の存在下、または非存在下の５〜１０分間のクロシン漂白速度勾配を用いた。ａ．ｃ．は抗酸化剤の勾配とＴｒｏｌｏｘ^TMＣの勾配を対比して算出した。従ってａ．ｃ．はＴｒｏｌｏｘ^TMＣｅｑｕｉｖ．として表現した。
【００３１】

【００３２】
【実施例１】
実験例１及び２を５０倍のスケールで実施し、調製用液クロ装置を用いて７、１３、及び１４の化合物を単離し、表４に示す組成の日焼け防止剤を調製、以下の方法に従い使用感及び効果について評価を行った。女性10名の専門パネルにより、使用テストを行い、塗布時ののび広がり、べたつきのなさ、保湿の持続性について、次の基準で評価を行い、その平均点で判定した。
［評価基準］５点：非常に良好、４点：良好、３点：普通、
２点：やや不良、１点：不良［判定］
◎：平均点4.5 以上。 ○：平均点3.5 以上4.5 未満。
△：平均点2.5 以上3.5 未満。 ×：平均点2.5 未満。
［製造方法］成分Ａグループを混合溶解し、それに成分Ｂグループの混合溶解したものを加えて、濾過して製品とする。
【００３３】

表４の結果から、本発明の実施例の方が比較例に比べて顕著な日焼け防止効果の改善が見られた。
【００３４】
【実施例２】
化合物７を含む画分すなわち実験例１の画分Ａ１を用いて表５に示す組成のシミ・ソバカス防止クリームを調製し、その効果について以下の方法に従い、評価を行った。
紫外線（ＵＶＢ）の最少紅斑量（ＭＥＤ）の２倍量を、人の背部の10×10mmの面積に照射して皮膚の黒化を作り、その上に試料を毎日塗布して、黒化の消失期間の差により効果の判定をした。
［判定方法］◎：塗布後１週間で黒化が消失した。
○：塗布後２〜３週間で黒化が消失した。
△：塗布後４〜５週間で黒化が消失した。
×：塗布後５週間以上、黒化が残った。
［製造方法］成分Ａグループを加温溶解して80℃に保ち油相とする。
成分Ｂグループを加温溶解して80℃に保ち水相とする。
油相に水相を加えて乳化し、冷却して製品とする。
【００３５】

表５の結果から、本発明の実施例の方が比較例に比べて顕著な日焼けによるシミ等の消失効果の改善が見られた。
【００３６】
【実施例３】
実施例１で得た化合物１３、１４を用い、表６に示す組成の日焼け止めクリームを調製し、効果について以下の方法に従い評価を行った。
人の背部に試料を塗布し、その上に紫外線ＵＶＢを照射し、日焼け防止効果ＳＰＦを算出した。日本化粧品工業会の測定法に準じた。
［製造方法］成分Ａグループを混合加温均一にして80℃に保ち油相とし、成分Ｂグループを混合加温溶解させて80℃に保ち水相とし、油相に水相を加えて乳化し、冷却して製品とした。
【００３７】

表６の結果から比較例に比べて本発明の実施例の方が、顕著な日焼け防止効果の改善が見られた。
【００３８】
【実施例４】
化合物１３、１４を含む画分すなわち実験例１の画分Ａ４を用いて表７に示す組成のシミ・ソバカス防止クリームを調製し、その効果について以下の方法に従い評価を行った。
すなわち表７に示す組成の乳液を次の方法によって調製し、その使用感及び効果について、下記の方法に従い評価を行った。
［製造方法］成分Ａグループを加温溶解して80℃に保ち油相とし、成分Ｂグループを加温溶解して80℃に保ち水相とし、油相に水相を加えて乳化し、冷却して製品とする。
［評価基準］アトピー性皮膚炎者に使用して消炎効果とカユミ止め効果を次のように観察判定した。
炎症カユミ
◎：10名中７名以上が軽減した。 ◎：10名中７名以上が軽減した。
○：10名中４〜６名が軽減した。 ○：10名中４〜６名が軽減した。
△：10名中２〜３名が軽減した。 △：10名中２〜３名が軽減した。
×：10名中１名以下が軽減した。 ×：10名中１名以下が軽減した。
【００３９】

表７の結果から、本発明の実施例の方が比較例に比べて、顕著な消炎効果と、カユミ止め効果の改善が認められた。
【００４０】
【実施例５】
ビデンス・ピローサ熱水抽出物をダイヤイオンＨＰ−２０に通塔し水洗後メタノールで溶出した。この溶出液をＯＤＳカラムを用いメタノール／水系でメタノールの濃度傾斜上昇させて溶出、ＵＶ２５４ｎｍでモニターして７、１３、１４のピークをそれぞれ３２８．５ｎｍ、３５０．５ｎｍ、３４８．５ｎｍで積算し、それぞれのｌｏｇε＝３．７８、ｌｏｇε＝４．０３、ｌｏｇε＝３．９１から含有量を算出した。その結果、ＨＰ−２０からの溶出液中、０．１４、０．１１、０．１０ｍｇ／ｍＬの結果を得た。

Claims

下記構造式７を有する化合物。
請求項１記載の化合物を含有する組成物。
請求項１記載の化合物を含有する抗酸化剤。
請求項１記載の化合物を含有する日焼け防止剤。
請求項１記載の化合物を含むセンダングサ属植物エキス画分を含有する組成物。
請求項１記載の化合物を含むセンダングサ属植物エキス画分を含有する抗酸化剤。
請求項１記載の化合物を含むセンダングサ属植物エキス画分を含有するシミ、ソバカス防止クリーム。
下記構造式１３または１４を有する化合物。
請求項８記載の化合物を含有する組成物。
請求項８記載の化合物を含有する抗酸化剤。
請求項８記載の化合物を含有する日焼け防止剤。
請求項８記載の化合物を含むセンダングサ属植物エキス画分を含有する組成物。
請求項８記載の化合物を含むセンダングサ属植物エキス画分を含有する抗酸化剤。
請求項８記載の化合物を含むセンダングサ属植物エキス画分を含有するシミ、ソバカス防止クリーム。