BR112016003194B1

BR112016003194B1 - Método para quantificação de 227ac em composições de 223ra

Info

Publication number: BR112016003194B1
Application number: BR112016003194-6A
Authority: BR
Inventors: Gro Elisabeth Hjellum
Original assignee: Bayer As
Priority date: 2013-08-16
Filing date: 2014-08-13
Publication date: 2021-10-13
Also published as: EP3033156A1; CN105899269B; NZ716837A; KR102307694B1; CA2921268A1; MX2016002076A; AU2014308140B2; JP2016536593A; EA201690402A1; SG11201600904RA; PE20160219A1; WO2015022074A1; CN105899269A; US20160209387A1; IL243950B; AU2014308140A1; JP6605466B2; US9874550B2; US20180180585A1; BR112016003194A2

Abstract

método para quantificação de 227ac em composições de 223ra. um método de quantificação de 227ac em uma composição de 223ra que consiste na passagem da composição através de uma primeira coluna a de extração de fase sólida, caracterizada pela coluna citada consistir em uma resina específica de tório, passagem do eluato da coluna a através de uma segunda coluna b de extração de fase sólida, caracterizada pela coluna citada consistir em uma resina específica de actínio e recuperação do 227ac absorvido na resina na coluna b e determinação de sua quantidade.

Description

Campo da invenção

[001] A presente invenção está relacionada a um novo método de níveis de quantificação de 227Ac em composições 223Ra, em particular a um método que envolve a extração de fase sólida seguida pela quantificação via crescimento do filho 227Th via espectrometria y. A invenção também está relacionada ao uso do método da invenção na determinação do nível de 227Ac em uma composição 223Ra e a um aparelho para uso no método da invenção.

Contexto

[002] Uma porcentagem considerável de pacientes com câncer é afetada pelas metástases no esqueleto. 85% dos pacientes com carcinoma de pulmão, próstata e mama desenvolvem metástases ósseas (Garret 1993, Nielsen et al, 1991). Elas estão associadas a um declínio na saúde e na qualidade de vida, levando por fim à morte, com frequência em alguns anos.

[003] Quando os tumores ou metástases não podem ser removidos por cirurgia, a abordagem convencional é aplicar a radioterapia de feixe externo e a quimioterapia. Ambos sofrem de uma falta de seletividade para células e tecidos tumorais. Como consequência, o tratamento da maioria com frequência não pode ser aplicado em níveis curativos devido à toxicidade no tecido saudável.

[004] Os emissores β de bone-seeking como 89Sr e 153Sm complexados com etileno-diaminetetrametileno-fosfonato (EDTMP) têm sido usados como agentes internos de radioterapia na paliação da dor de metástases ósseas dolorosas, especialmente no câncer de próstata. A atividade metabólica alterada do esqueleto em torno de muitas metástases ósseas resulta em um aumento local na formação óssea e na absorção de cálcio, que é usada para construir o mineral ósseo de hidróxiapatita. Os radionuclídeos bone-seeking têm como alvo esse osso adjacente aos depósitos de tumor. A mimética de cálcio, como estrôncio 89Sr, pertence ao grupo de elementos alcalinos terrosos na tabela periódica. Ele pode ser administrado como um sal radioativo intravenoso que será incorporado à recém formada hidróxiapatita nas metástases ósseas. Outros radionuclídeos, como 153Sm, requerem uma molécula portadora para alcançar a absorção seletiva no osso, por exemplo, EDTMP. Ao definir seletivamente como alvo as áreas de alta atividade metabólica no osso, um índice terapêutico é possível.

[005] Entretanto, as partículas β são caracterizadas por transferência de energia linear baixa (LET) geralmente no intervalo de 0,2-1,0 keV/μm e uma eficácia biológica relativa (RBE) modesta. O uso de partículas β altamente energéticas é restringido pela carga de radiação e dano na célula no tecido saudável ao redor e especialmente pela supressão de células sanguíneas na medula óssea vermelha. Consequentemente, há uma necessidade não atendida de tratamentos mais eficientes voltados para os ossos que melhorem a qualidade de vida e a sobrevivência ao mesmo tempo que mantém um perfil de segurança favorável.

[006] O uso dos radionuclídeos de emissão α tem uma vantagem maior na radioterapia do câncer. Comparado aos valores LET baixos dos emissores β, os emissores α têm um valor LET médio de 80-100 keV/μm. 223Ra tem demonstrado ser uma promessa em particular. Por exemplo, o Alpharadin®(223RaCl2) concluiu um teste clínico global na fase III em pacientes com câncer de próstata resistente à castração (CRPC) e metástases ósseas. Os dados mostram que o Alpharadin prolonga o tempo de sobrevida geral do paciente enquanto oferece um perfil de segurança bem tolerado (Brady et al, Cancer J., 2013, 19, 71-78). 223Ra, como 89Sr, é um imitador de cálcio e também um elemento alcalino terroso e pode ser administrado como um sal radioativo intravenoso. Devido aos valores LET elevados de partículas α e, consequentemente sua duração de caminho curta no tecido humano (< 100 μm), uma dose de radiação altamente citotóxica pode ser direcionada às células de câncer alvo, enquanto o dano ao tecido saudável ao redor é limitado.

[007] O controle de qualidade é uma parte essencial da fabricação farmacêutica para garantir que as drogas enviadas ao mercado sejam seguras e as formulações terapeuticamente ativas tenham um desempenho consistente e previsível. O termo controle de qualidade se refere à soma de todos os procedimentos realizados em cada lote para garantir, por exemplo, a identidade, a atividade e a pureza.

[008] A pureza radionuclídica é definida como porcentagem de um radionuclídeo contaminante relativa ao radionuclídeo desejado, por exemplo, 227Ac relativo a 223Ra referente à atividade em Bq. O motivo principal para buscar a pureza radionuclídica em um radiofarmacêutico é evitar a administração indesejada de radiação no paciente. Portanto, é extremamente importante controlar rigorosamente os níveis de impurezas radionuclídicas em radiofarmacêuticos. As impurezas radionuclídicas podem se originar de vários meios. Por exemplo, quando um sistema gerador de radionuclídeo pai-filho é usado para produzir o radionuclídeo de interesse, os nuclídeos pai são definidos como impurezas no produto. Devem ser tomadas ações durante a produção para garantir que os nuclídeos pais sejam separados dos nuclídeos de interesse e antes de liberar o produto finalizado para uso humano, é preciso confirmar se a radioatividade das impurezas radionuclídicas estão abaixo do limite especificado para o produto.

[009] A produção de 223Ra para uso farmacêutico geralmente é baseada em um gerador radionuclídeo onde o nuclídeo mãe 227Ac (t^, = 21,77 anos) é absorvido em um material de coluna. Os radionuclídeos filhos são 227Th (t^> = 18,68 dias) e 223Ra (t^> = 11,43 dias). 223Ra é separado pela eluição da coluna. 227Ac e seu nuclídeo filho 227Th devem ser retidos fortemente sob condições onde 223Ra pode ser eluído. 227Ac e 227Th não têm as mesmas propriedades bone-seeking que 223Ra e são considerados impurezas. Mesmo quantidades muito baixas desses nuclídeos não podem ser aceitas no produto farmacêutico. Os critérios de aceitação de Alpharadin têm sido definidos para não mais que 0,004% para 227Ac e não mais que 0,5% para 227Th relativo a 223Ra com respeito à atividade em Bq. Critérios semelhantes seriam esperados para outros produtos 223Ra. Antes da liberação formal do produto aos pacientes, cada lote produzido de radiofarmacêutico (por exemplo, Alpharadin), deve ser testado para mostrar que ele atende aos critérios de aceitação (identidade, resistência, qualidade e pureza definidos de maneira adequada). Devido à meia vida inerentemente curta de 223Ra, o radiofarmacêutico pode ser liberado antes da conclusão de todos os testes (por exemplo, teste de esterilidade). Isso naturalmente tem a desvantagem de os pacientes poderem ser expostos a uma formulação que não atende a todos os critérios do controle de qualidade.

[010] Uma determinação quantitativa de 227Ac é difícil pois 227Ac diminui quase totalmente pela emissão de uma partícula β de baixa energia (Eβ,max = 0,0448 MeV), que é virtualmente indetectável na presença de todos os emissores energéticos α e β da cadeia 227Ac (consulte a Figura 1). 227Ac também diminui por uma emissão α em 1,38% de suas desintegrações. Entretanto, uma determinação espectrométrica α direta de 227Ac é complicada pelas interferências das emissões α de seus produtos de decaimento crescente rapidamente. 227Ac recém-purificado não emite radiação y analiticamente útil.

[011] Consequentemente, muitos métodos radiométricos determinam 227Ac indiretamente por medições de radiações α e y de seus filhos, em particular pela espectrometria y de alta resolução de seu filho 227Th. Entretanto, isso não pode ser determinado até 10-12 meses após a liberação do produto, pois a análise deve aguardar até que haja níveis suficientemente mensuráveis de 227Th. Nesse momento, a quantidade em potencial de contaminação de 227Ac está em equilíbrio com seu filho 227Th. Além disso, as quantidades iniciais de 223Ra e qualquer 227Th no produto teria diminuído completamente. Essas desvantagens não levam apenas à inexatidão de resultados e custos elevados mas, de maneira mais significativa, significam que o resultado chega muito tarde para o farmacêutico 223Ra ser retirado da liberação aos pacientes se ele se mostrar contaminado com 227Ac nos níveis que seriam considerados perigosos à eficácia do tratamento ou à segurança do paciente.

[012] Em vista do exposto acima, permanece a necessidade de desenvolver um método radioquímico novo, confiável, preciso e econômico para a determinação precoce da contaminação em potencial de 227Ac em farmacêuticos 223Ra, como Alpharadin (RaCl2). Em particular, seria uma vantagem produzir um método capaz de gerar um resultado em questão de dias, em vez de meses. Por fim, é atraente um método de análise que pode ser concluído antes de liberar o produto e sua administração aos pacientes. Os seguintes critérios estabelecem as características desejadas de um novo método de quantificação: 1. 227Ac deve ser seletivamente separado dos precursores. 2. Recuperação de 227Ac > 70 % e precisão > 30 % 3. A robustez, isto é, o resultado analítico deve permanecer inalterado pelas pequenas variações nos parâmetros do método. 4. Facilidade de operar na produção de rotina (em termos de tempo e custo). 5. A atividade de amostra deve ser a mais baixa possível devido ao custo e à exposição à radiação nos operadores e/ou 6. Separação e quantificação devem ser realizados antes da liberação do produto, isto é, 2 dias após a produção do farmacêutico 223Ra (por exemplo, 223 cloreto de rádio).

[013] Os inventores constataram de maneira surpreendente que um método analítico que emprega um sistema de colunas subsequentes que consiste em duas resinas diferentes de extração de fase sólida pode atender alguns ou todos os requisitos. Em particular, as duas colunas permitem a separação fácil e o isolamento de 227Ac, que pode ser rapidamente quantificado.

Sumário da invenção

[014] Dessa forma, vista sob outro aspecto, a invenção fornece um método para quantificação de 227Ac em uma composição 223Ra cujo método consiste em: (i) passagem da composição 223Ra através de uma primeira coluna A de extração de fase sólida, na qual a coluna citada consiste em uma resina específica de tório (por exemplo, resina de dipentil pentilfosfonato UTEVA); (ii) passagem do eluato da coluna A através de uma segunda coluna B de extração de fase sólida, na qual a coluna citada consiste em uma resina específica de actínio (por exemplo, resina de N, N, N', N'-tetra-n-octildiglicolamida DGA); (iii) recuperação do 227Ac absorvido na resina na coluna B e determinação de sua quantidade.

[015] Vista sob outro aspecto, a invenção oferece um método conforme descrito neste documento; o método consistindo em (i) Colocação de uma primeira coluna A de extração de fase sólida que consiste em uma resina específica de tório (por exemplo, resina de dipentil pentilfosfonato UTEVA) e uma segunda coluna B de extração de fase sólida que consiste em uma resina específica de actínio (por exemplo, resina de N, N, N', N' - tetra-n-octildiglicolamida DGA) em série, preferencialmente em que a saída da coluna A está conectada à entrada da coluna B; (ii) Adição de um volume de uma composição 223Ra correspondente a uma atividade conhecida (por e., 15 MBq) de 223Ra a um volume igual de ácido nítrico, preferencialmente 8 mol/L de ácido nítrico; (iii) Transferência da amostra da etapa(ii) para a entrada da coluna A; (iv) Passagem da amostra citada através das colunas A e B (v) Lavagem das duas colunas com 20-100 vezes o volume combinado das duas colunas (por exemplo, 5-10 ml) de ácido nítrico, preferencialmente 4 mol/L de ácido nítrico; (vi) Desconexão da Coluna A da coluna B; (vii) Lavagem da coluna B com 40-200 vezes seu volume (por exemplo, 5-10 ml) de ácido nítrico, preferencialmente 4 mol/L de ácido nítrico; (viii) Lavagem da coluna B com 40-200 vezes seu volume (por exemplo, 5-10 ml) de ácido nítrico em uma concentração inferior à que é usada na etapa (vii), como 0,05 mol/L de ácido nítrico. (ix) Determinação da quantidade de 227Ac presente no eluato da coluna B obtida na etapa (viii).

[016] Vista sob outro aspecto, a invenção oferece o uso de um método como descrito anteriormente neste documento na quantificação de 227Ac em uma composição 223Ra.

[017] Vista sob outro aspecto, a invenção oferece mecanismo para uso em um método conforme descrito neste documento anteriormente, no qual esse mecanismo consiste em uma primeira coluna A de extração de fase sólida na qual a coluna consiste em uma resina específica de tório (por exemplo, resina de dipentil pentilfosfonato UTEVA) e uma segunda coluna B de extração de fase sólida, na qual a coluna citada compreende uma resina específica de actínio (por exemplo, uma resina de N, N, N', N'- tetra-n-octildiglicolamida DGA).

Definições

[018] A composição 223Ra da invenção será compreendida como qualquer composição que consiste no radionuclídeo 223Ra. A composição geralmente é uma composição farmacêutica ou um precursor de uma solução farmacêutica e, portanto, normalmente contém os componentes adicionais com frequência encontrados nessas composições, por exemplo, diluentes, excipientes e portadores aceitáveis farmaceuticamente. Esses componentes são bem conhecidos na arte. O 223Ra pode estar em qualquer forma, entretanto, a forma mais preferencial é a de um sal de haleto, preferencialmente RaCl2 (Alpharadin®), opcionalmente em combinação com outros sais Ra. Será reconhecido que para ser compatível com o método da invenção a composição 223Ra deve ser em solução, normalmente uma solução aquosa, como uma solução de ácido aquoso.

[019] O método da invenção emprega extração de fase sólida. Esta técnica é bem conhecida na arte, entretanto, um breve resumo é fornecido aqui para integração.

[020] A extração de fase sólida (SPE) é amplamente aceita como um substituto para a extração líquido-líquido (LLE) tradicional em muitos tipos de procedimentos de separação e especialmente para aqueles que envolvem concentrações ultrabaixas de analito. A SPE é baseada nos mesmos princípios da extração de solvente, que muitas vezes envolve a complexação para formar um composto lipofílico do analito seguido pela transferência deste composto em uma fase orgânica. Na SPE a fase não aquosa é sólida em vez de líquida, como na LLE. Geralmente a SPE é mais rápida, mais eficiente e gera menos resíduos que a LLE.

[021] A SPE consiste em três componentes importantes; um suporte inerte, uma fase estacionária e uma fase móvel. O suporte inerte geralmente consiste em sílica ou partículas porosas de um polímero orgânico que varia em tamanho de 50 a 150 μm em diâmetro. A fase estacionária, que está na superfície do suporte inerte, é selecionada de maneira apropriada, dependendo dos analitos envolvidos. A fase móvel é geralmente uma solução ácida aquosa, por ex., ácido nítrico ou clorídrico.

[022] O método da invenção emprega duas fases estacionárias diferentes (resinas).

[023] A primeira resina é uma resina específica de tório, geralmente uma resina UTEVA (Uranium und TEtraValents Actinides), que é usada principalmente para separação de urânio e actinídeos tetravalentes. O extrato revestido no suporte inerte é selecionado para ligar especificamente o tório em uma mistura de solução de rádio, tório e actínio. Essa especificidade pode ocorrer sob todas as condições ou as condições usadas nos métodos da invenção podem ser escolhidas para assegurar a especificidade.

[024] Os extratos adequados para as resinas específicas de tório incluem fosfonatos, particularmente alquil fosfonatos. Dialquil alquil fosfonatos, como aqueles na fórmula a seguir (Fórmula I) são preferenciais:

[025] em que cada um de R1-R3 é independentemente um grupo de alquil de cadeia reta ou ramificada C3-C8. Preferencialmente R1-R3 são grupos de alquil de cadeia reta. Preferencialmente R1 é um grupo de alquil de cadeia reta C4-C6, mais preferencialmente n- pentil. R2 e R3 podem ser idênticos ou diferentes. Preferencialmente R2 e R3 são idênticos. Preferencialmente cada um de R2 e R3 é um grupo de alquil C4-C6 de cadeia reta, mais preferencialmente n-pentil. Um extrato altamente preferencial é o dipentil pentilfosfonato que tem a seguinte estrutura:

[026] A segunda resina é uma resina específica de actínio, geralmente selecionada para ligar especificamente o actínio em uma mistura de solução de rádio e actínio. Essa especificidade pode ocorrer sob todas as condições ou as condições usadas nos métodos da invenção podem ser selecionadas para assegurar a especificidade.

[027] Em algumas representações, as condições podem ser do tipo que a resina específica de actínio tem algum grau de afinidade para rádio, bem como actínio e sob essas condições, tanto o rádio quanto o actínio podem se ligar à segunda resina. Será reconhecido que, sob tais circunstâncias, o método da invenção pode requerer uma etapa adicional na qual as condições são alteradas de modo que qualquer rádio que foi ligado a uma segunda resina possa ser especificamente eluído enquanto o actínio permanece ligado à resina antes de o actínio poder ser eluído a partir da segunda resina.

[028] Preferencialmente, as condições usadas nos métodos da invenção são escolhidas de modo que a segunda resina não tem qualquer afinidade para rádio e somente o actínio se liga à segunda resina. Dessa forma, em uma representação preferencial, as condições usadas no método da invenção são do tipo em que a resina é específica para actínio. Uma resina pode ser considerada "específica"para um elemento sobre outro se essa resina retiver pelo menos 90% do primeiro elemento sob condições que eluiriam pelo menos 90% do segundo elemento. Isso é preferencialmente 95%, mais preferencialmente 99%. Em geral, as condições escolhidas nos métodos da invenção são determinadas concentrações de ácidos minerais (por ex., ácido nítrico) em água.

[029] Os extratos adequados para as resinas específicas de actínio incluem diglicolamidas, particularmente tetra-alquil diglicolamidas da fórmula a seguir (Fórmula II):

[030] em que R1-R4 são independentemente grupos de alquil de cadeia reta ou ramificada C3-C12, preferencialmente grupos de alquil de cadeia reta ou ramificada C5-C10. R1-R4 podem ser idênticos ou diferentes, preferencialmente idênticos. R1-R4 podem ser todos do grupo de C8 alquil. Um exemplo preferencial é N,N,N’,N’-tetra-n-octildiglicolamida (resina DGA, normal), que tem a seguinte estrutura:

[031] em que os grupos R são grupos de C8 alquil de cadeia reta. A resina correspondente em que os grupos R são grupos de C8 alquil ramificados também é de valor.

[032] No contexto da invenção, o termo "eluato" se refere à solução de solvente e matéria dissolvida resultantes da eluição, isto é, a mistura de componentes que elui após a separação usando uma coluna de extração de fase sólida.

[033] O termo "eluente" deve ser compreendido como intercambiável com o termo "fase móvel". Ambos os termos são bem conhecidos na arte e são usados para indicar o solvente que passa através de uma coluna de extração de fase sólida e é usado para efetuar a separação.

Descrição detalhada

[034] O método da invenção consiste nas seguintes etapas (i) passagem da composição 223Ra através (por ex., uma contendo contaminantes de 227Ac e 227) através de uma primeira coluna A de extração de fase sólida, na qual a coluna citada consiste em uma resina específica de tório (por exemplo, uma resina de dipentil pentilfosfonato UTEVA); (ii) passagem do eluato da coluna A através de uma segunda coluna B de extração de fase sólida, na qual a coluna citada consiste em uma resina específica de actínio (por exemplo, uma resina de N, N, N', N'-tetra-n-octildiglicolamida DGA); (iii) recuperação do 227Ac absorvido na resina na coluna B e determinação de sua quantidade.

[035] Em uma representação preferencial, a coluna A e a coluna B são organizadas em série, de modo que o eluato da coluna A passe diretamente para a coluna B, ou seja, em que a saída da coluna A está conectada à entrada da coluna B. A organização mais preferencial para a coluna A a ser posicionada acima da coluna B, de modo que o eluato da coluna A seja drenado diretamente para a coluna B.

[036] O método da invenção depende da constatação surpreendente de que, por escolha de uma configuração de resina e coluna, o contaminante de 227Ac pode ser purificado de uma mistura de 223Ra e 227Th até um grau suficiente para permitir a medição precisa do 227Ac via crescimento de 227Th. Por exemplo, uma resina de UTEVA é capaz de reter seletivamente 227Th de uma mistura de 223Ra, 227Ac e 227Th e além disso uma resina DGA é capaz de reter seletivamente 227Ac de uma mistura de 227Ac e 223Ra. Isso resulta em um método de separação eficiente. Um esboço do processo é fornecido na Figura 2.

[037] A composição de 223Ra usada no método da invenção consiste em 223Ra. Geralmente consistirá nos contaminantes 227Th e 227Ac. Dessa forma, todos os três radionuclídeos geralmente estão presentes na mistura inicial de analitos. Quando a mistura passa através da primeira coluna A, qualquer 227Th presente será absorvido na resina específica de tório (por ex., resina UTEVA), deixando apenas 223Ra e 227Ac presentes no eluato. Quando esse eluato passa através da segunda coluna B,qualquer 227Ac será absorvido na resina específica de actínio (por ex., resina DGA). O 223Ra geralmente permanecerá na fase móvel. Em algumas representações, a resina específica de actínio pode ser lavada com volumes adicionais da fase móvel de modo a garantir que todo o 223Ra seja eluído. Dessa forma, a fração total de 227Ac pode ser obtida e isolada.

[038] É importante ressaltar que a fração de 227Ac, que está ligada à resina específica de actínio (por ex., resina DGA), será consideravelmente livre, preferencialmente completamente livre, de 227Th e 223Ra, com isso possibilitando a determinação mais fácil de sua quantidade via detecção do crescimento de seu nuclídeo filho, 227Th em níveis muito baixos. Em particular, os resultados não serão distorcidos pelos níveis de 227Th inicialmente presente na composição de 223Ra ou mascarados por interferências devido a outras cadeias de declínio, mais energéticas, que começam em 227Th ou 223Ra. Um primeiro isótopo pode ser considerado "substancialmente livre" de um segundo isótopo se o segundo isótopo estiver presente a uma concentração de menos de 1%, preferencialmente menos de 0,01%, relativa à concentração do primeiro isótopo. De modo correspondente, "completamente livre" pode ser considerado para corresponder a uma concentração de menos de 0,001% do segundo isótopo relativo ao primeiro isótopo.

[039] A fase móvel (eluente) geralmente é uma solução que compreende um ácido, como ácido clorídrico ou ácido nítrico. O ácido mais preferencial é o ácido nítrico. Em geral, a concentração de qualquer ácido usado no método da invenção estará no intervalo de 0,01 a 10 mol/L, preferencialmente 0,02 a 8 mol/L, como 0,05 a 4 mol/L.

[040] A coluna A consiste em uma resina específica de tório, como resina UTEVA. Os inventores constataram que a afinidade de uma resina UTEVA para 227Th aumenta com a concentração crescente de ácido nítrico. É considerado que isso ocorre porque a concentração do ácido nítrico aumenta tanto que a propensão com a qual o 227Th formará complexos de nitrato. Acredita-se serem esses complexos com os quais a resina tenha afinidade. A coluna B consiste em uma resina específica de actínio, como uma resina DGA. A resina DGA apresentou afinidade particular com 227Ac.

[041] A composição de 223Ra usada nos métodos da invenção geralmente consiste em 223Ra a uma concentração no intervalo de 2 a 30 MBq/ml (por ex., 2,4 a 30 MBq/ml), como 5 a 20 MBq/ml. A composição geralmente será usada na forma de uma solução ácida aquosa, como ácido nítrico. O ácido normalmente terá uma concentração no intervalo 4-10 mol/L, por exemplo, 8 mol/L.

[042] Na etapa (iii) o 227Ac absorvido na resina da coluna B é removido. Isso pode ser executado por vários métodos, mas geralmente é alcançado lavando-se a coluna com uma solução de ácido aquosa de concentração mais baixa do que aquela que foi usada como eluente na etapa (ii), como 0,05 mol/L de ácido nítrico. O volume da solução de ácido aquosa usado para lavar a coluna pode estar no intervalo de 16 a 400 vezes o volume da coluna (por ex., 2-20 ml), preferencialmente 40-200 vezes (por ex., 5-10 ml). O eluato obtido da coluna B após a etapa (iii) contém 227Ac. Preferencialmente, esse eluato é consideravelmente livre de 227Th. Por exemplo, o eluato pode conter 227Th em uma concentração molar inferior a 5%, preferencialmente inferior a 1% ou inferior a 0,1% e mais preferencialmente inferior a 0,01% em relação à concentração de 227Ac.

[043] Em um método altamente preferencial, o método da invenção consiste nas seguintes etapas: (i) Colocação de uma primeira coluna A de extração de fase sólida que consiste em uma resina específica de tório (por exemplo, uma resina de dipentil pentilfosfonato UTEVA) e uma segunda coluna B de extração de fase sólida que consiste em uma resina específica de actínio (por exemplo, uma resina de N, N, N', N' - tetra-n-octildiglicolamida DGA) em série, preferencialmente em que a saída da coluna A está conectada à entrada da coluna B; (ii) Adição de um volume de uma composição 223Ra correspondente a uma atividade conhecida (por e., 15 MBq) de 223Ra a um volume igual de ácido nítrico, preferencialmente 8 mol/L de ácido nítrico; (iii) Transferência da amostra da etapa(ii) para a entrada da coluna A; (iv) Passagem da amostra citada através das colunas A e B (v) Lavagem das duas colunas com 20-100 vezes o volume combinado das duas colunas (por exemplo, 5-10 ml) de ácido nítrico, preferencialmente 4 mol/L de ácido nítrico; (vi) Desconexão da Coluna A da coluna B; (vii) Lavagem da coluna B com 40-200 vezes seu volume (por exemplo, 5-10 ml) de ácido nítrico, preferencialmente 4 mol/L de ácido nítrico; (viii) Lavagem da coluna B com 40-200 vezes seu volume (por exemplo, 5-10 ml) de ácido nítrico em uma concentração inferior à que é usada na etapa (vii), como 0,05 mol/L de ácido nítrico. (ix) Determinação da quantidade de 227Ac presente no eluato da coluna B obtida na etapa (viii).

[044] Após o isolamento do 227Ac da resina específica de actínio (por ex., resina DGA), sua quantidade pode ser quantificada por qualquer método conhecido na arte. As recuperações percentuais comuns de 227Ac usando o método da invenção estão no intervalo de 70-100%, como 72-98%, preferencialmente 74-97% (por ex., 80 a 97% ou 80 a 90%). Evidentemente, para um método analítico, a capacidade de reprodução na recuperação de 227Ac é tão importante quanto a recuperação absoluta. A distribuição dessas recuperações geralmente terá um desvio de padrão não superior a 20%, preferencialmente não superior a 10%.

[045] Os métodos comuns usados para determinar a quantidade de 227Ac podem envolver espectrometria y, espectrometria a e contagem de cintilação líquida (LSC) com discriminação da forma de pulso. A técnica preferencial é espectrometria y, que permite a quantificação de 227Ac via crescimento e detecção do filho 227Th. Os métodos para executar a espectrometria y são bem conhecidos na arte.

[046] A atividade de 227Ac, que não é diretamente determinável por uma espectrometria de raio y, pode ser calculada com base na medição do filho 227Th. Como o limite da especificação para o farmacêutico 223Ra é 0,004% 227Ac, em relação a 223Ra, uma atividade de 15 MBq 223Ra deve produzir uma atividade de 600 Bq de 227Ac. O crescimento de 227Th de 227Ac é calculado pela Equação 1.

[047] Devido às exigências reguladoras para radiofarmacêuticos, o resultado da pureza radionuclídica de um farmacêutico 223Ra deve estar disponível antes do lançamento do produto. Para atender esses requisitos, o período de crescimento máximo de 227Th de 227Ac preferencialmente não deve ser superior a dois dias para evitar uma perda proibitivamente elevada de 223Ra pelo decaimento antes da administração. A atividade calculada após 24 e 48 horas no crescimento de 227Th de 600 Bq 227Ac é mostrada na Tabela 1. Tabela 1. Crescimento de 227Th de 600 Bq 227Ac

[048] Após a separação de 227Ac de 227Th e 223Ra, vestígios potenciais de 227Th podem ser deixados na amostra (valor detectável mínimo < 1,6 Bq). Com a contagem de apenas um espectro, a atividade de 227Ac pode ser superestimada. Na presente invenção, esse problema foi tratado com utilização de duas medições consecutivas do filho 227: uma contada 24 horas após e outra 48 horas após a separação. A atividade de 227Th obtida a partir das análises após 24 horas é subtraída da atividade 227Th obtida após 48 horas supondo-se que o crescimento de 227Th é quase linear no período. A correção de decaimento de vestígios potenciais de 227Th (t1/2 = 18,68 dias) entre 24 e 48 horas após a separação não foi levada em consideração. É considerada suficientemente precisa e dentro da incerteza da medição.

[049] Com a atividade de 227Th no tempo de medição um (24 h) e atividade de 227Th no tempo de medição dois (48 h), a atividade desconhecida, mas independente de tempo, da mãe 227Ac de longa vida pode ser calculada por:

[050] A atividade de 227Ac na amostra no momento 0 é baseada no crescimento de 227Th. As equações usadas são fornecidas abaixo.

em que: A0(227Ac) = a atividade de 227Ac no farmacêutico 223Ra (Bq) AΔ(227Th) =a atividade de 227Th produzida entre o tempo de medição um e o tempo de medição dois, por ex., 24 e 48 horas após a separação

[051] Conforme observado na Tabela 1, a atividade 24 e 48 horas após o crescimento de 227Th de 600 Bq 227Ac é 21,9 e 42,9 Bq, respectivamente. Com base no cálculo teórico do crescimento de 227Th e no fato de que a separação produz 227Ac altamente purificado supõe-se que um tempo de contagem de 10000 s na posição calibrada mais próxima (posição de 5 cm) da superfície do detector foi suficiente, e as incertezas da contagem satisfatória foram obtidas.

[052] Consequentemente, nos métodos da invenção, a quantidade de 227Ac é preferencialmente determinada pela espectrometria y via crescimento do 227Th do nuclídeo filho, na qual foram feitas duas medições da atividade do 227Th filho. Preferencialmente, essas medições são obtidas nas horas n e 2n, em que n é 12 a 36, preferencialmente a 24 horas e 48 horas após a execução do método de separação da invenção. A atividade geralmente é medida por um período de 10000s em cada ponto no tempo.

[053] Em uma variante, o método da invenção poderia ser executado na presença de 225Ac como um traçador para o produto químico de 227Ac para verificar a exatidão dos resultados. Entretanto, 225Ac não está comercialmente disponível, pois não pode ser usado em análise de rotina atualmente. Em vez disso, a verificação inicial do método pode ser executada pelo reforço da composição de 223Ra com 225Ac, fornecendo dados de controle de qualidade das etapas processuais críticas, como a preparação correta de amostras de ácido, pesagem de resinas corretas e eluição com o ácido e a concentração de ácido corretos. 225Ac pode ser considerado como tendo as mesmas propriedades de absorção de resina como 227Ac, mas é mais fácil de detectar. 225Ac pode ser quantificado pelo crescimento do filho 213Bi por meio de espectrometria y. A cadeia de decaimento para 225Ac é mostrada na Figura 3.

[054] O método da invenção é adequado para a análise de rotina de 227Ac nas composições de 223Ra e pode ser executado rapidamente no mesmo dia da preparação da composição de 223Ra. Preferencialmente, as etapas de separação (i) a (iii) podem ser concluídas em menos de 2 horas, preferencialmente não mais que 1 hora (por ex., 5 minutos a 1 hora). De maneira vantajosa, os resultados do método da invenção normalmente estão disponíveis dois dias após a produção, isto é, antes de o produto ser liberado e administrado ao paciente.

[055] A invenção também está relacionada ao uso dos métodos como descrito anteriormente neste documento em níveis de quantificação de 227Ac nas composições de 223Ra. Deve ser considerado que todas as discussões anteriores relacionadas aos aspectos preferenciais da invenção estão relacionadas igualmente a esta representação.

[056] A invenção também está relacionada ao instrumento para uso em um método como descrito anteriormente neste documento. O mecanismo consiste em uma primeira coluna A de extração de fase sólida na qual a coluna consiste em uma resina específica de tório (por exemplo, resina de dipentil pentilfosfonato UTEVA) e uma segunda coluna B de extração de fase sólida, na qual a coluna citada compreende uma resina específica de actínio (por exemplo, uma resina de N, N, N', N'-tetra-n-octildiglicolamida DGA). Preferencialmente, a coluna A e a coluna B estão organizadas na série, preferencialmente de modo que a saída da coluna A esteja em conexão com a entrada da coluna B. Mais preferencialmente, a coluna A está posicionada acima da coluna B de modo que o eluato da coluna A seja drenado diretamente para a coluna B. Deve ser avaliado que todas as discussões relacionadas anteriormente aos aspectos preferenciais da invenção estão relacionadas igualmente a esta representação.

Figuras

[057] Figura 1 - Esquema de decaimento de 227Ac para 207Pb estável. Ramificações com menos de 2% de probabilidade são omitidas.

[058] Figura 2 - Fluxograma de processo para separação e purificação de actínio, tório e rádio usando um método da invenção - a extração é mostrada com o uso de HNO3 aquoso de concentrações em particular apenas como exemplo.

[059] Figura 3 - O esquema de decaimento de 225Ac e radionuclídeos filhos para 209Bi estável.

[060] Figura 4 - Espectro y de HPGe dos filhos 221Fr e 213Bi de 225Ac

[061] Figura 5 - Espectro de y de crescimento de 227Th de 227Ac 24 horas após a separação da substância de fármaco de cloreto de 223Ra

[062] Figura 6 - Linearidade de quantidade de 227Th medida versus teórica na substância de fármaco de cloreto de 223Ra

Exemplos

[063] A composição de 223Ra utilizada nos exemplos é RaCl2 (Alpharadin), referido neste documento como "substância de fármaco de cloreto de Ra".

[064] Os espectros gamma foram medidos com um detector Germanium de alta pureza (HPGe) de 50% de eficiência (em relação a um detector de NaI de 3 x 3 polegadas para uma fonte de 60Co a uma distância de 25 cm da superfície do detector) acoplado a um Multi Channel Analyser (MCA) de canal 8192. Os espectros foram analisados com o software GammaVision (Software GammaVision-3.2, v 6.01, Ortec, Oak Ridge, USA). A calibração de eficiência dependente de energia do detector HPGe em duas posições físicas foi executada com uma fonte de referência(padrão y misto de Eckert & Ziegler) com uma incerteza geral abaixo de 4%. As posições de calibração fixa eram 5 e 20 cm a partir do detector. O detector HPGe teve a energia calibrada em uma variação energética de 59-1400 keV.

[065] Para avaliar 223Ra no intervalo de MBq, foi usada uma câmara de ionização ("calibrador de dose", Capintec-CRC15-R). As medições precisas de atividade de radionuclídeos usando as câmaras de ionização comercial requerem que a configuração de calibração correta ("configuração pelo disco") seja aplicada. Para muitos nuclídeos, os fabricantes dos calibradores de dose recomendam essas configurações de calibração.

[066] 223Ra é um radionuclídeo relativamente novo na medicina nuclear e uma configuração de calibração para o radionuclídeo não está disponível em fabricantes comerciais de câmaras de ionização. Uma padronização importante de 223Ra é para estabelecer as configurações por disco foi executada pelo National Institute of Standards and Technology (NIST). O motivo é garantir as medições controladas pela qualidade da radioatividade de 223Ra durante a produção, controle de qualidade e preparação de doses do paciente.

[067] As medições com o material de referência padrão (Standard Reference Material, SRM) de 223Ra da NIST foram executadas em calibradores de dose Capintec. A configuração de calibração determinada (configuração por disco) para o calibrador de dose usado na presente invenção é apresentada na Tabela 2. Tabela 2. Configuração de calibração de dose de 223Ra

[068] Os instrumentos foram qualificados, ou seja, a verificação indica que o instrumento está instalado corretamente e é capaz de funcionar conforme pretendido de acordo com as especificações. O controle do instrumento HPGe foi executado diariamente antes do uso pela medição de radionuclídeo 226Ra de vida longa. Os radionuclídeos 57Co e 137Cs são usados para controle diário do calibrador de dose. A finalidade do controle de qualidade dos instrumentos é garantir que o instrumento forneça resultados confiáveis e consistentes.

[069] A detecção de 227Ac é difícil devido ao baixo nível de energia de sua radiação β e sem raios y úteis. Portanto, para obter facilmente a transformação rápida referente à eficiência da separação de 227Ac de 227Th e 223Ra usando o método da invenção, o processo foi executado com uso de 225Ac como um traçador radioativo no lugar de 227Ac. 225Ac pode ser considerado como tendo as mesmas propriedades de absorção de resina como 227Ac, mas é mais fácil de detectar. Os Exemplos 1-3 foram executados com 225Ac e os Exemplos 4 e 5, com 227Ac. 225Ac pode ser quantificado pelo crescimento do filho 213Bi por meio de espectrometria y. As incertezas foram calculadas como segue:

Incerteza na recuperação (Exemplos 1, 2, 3 e 5)

[070] Há uma incerteza oA na atividade das amostras "conhecidas" (reforçadas), A.

[071] Há uma incerteza oB na atividade da amostra "encontrada" (eluato), B. R = Recuperação (%)

Incerteza no desvio (Exemplo 4)

[072] Há uma incerteza oA na atividade calculada, A.

[073] Há uma incerteza oB na atividade calculada, B.

Cálculo da incerteza combinada (Exemplo 5)

[074] Há uma incerteza o A na atividade do crescimento de 227Th após 24 horas, A.

[075] Há uma incerteza oBna atividade do crescimento de 227Th após 48 horas, B. Cálculo da incerteza combinada:

[076] Exemplo 1 - Separação de 225Ac de 227Th e 223Ra usando Colunas de extração de fase sólida

Preparação de amostra, 225Ac

[077] O 225Ac usado foi fornecido pelo Institute for Transuranium Elements, Karlsruhe, Alemanha. A solução tinha uma atividade nominal total de 6 MBq 225Ac no dia do recebimento, e a atividade foi diluída em 4 mol/L HNO3 para uma atividade de 3,1 Bq/μL.

[078] Uma quantidade conhecida de 227Th e 225Ac foi adicionada a 15 MBq de substância de fármaco de cloreto de 223Ra. A atividade correspondeu a aproximadamente os limites de especificação de 227Th e 227Ac em uma substância de fármaco de cloreto de 223Ra. A especificação estabelece que a atividade de 227Th deve ser inferior a 0,5% da atividade de 223Ra e atividade de 227Ac deve ser inferior a 0,004% de 223Ra. A Tabela 3 apresenta as atividades de 225Ac e 227Th usadas nos experimentos. Tabela 3. Atividades (Bq) de 227Th e 225Ac nos experimentos I e II.

1) Incerteza na atividade (2 o)

[079] As atividades foram determinadas com uso dos seguintes métodos:

[080] A substância de fármaco de cloreto de 223Ra foi transferida para frascos de 20 mL (cada um com uma atividade de 15 MBq) e medida em um calibrador de dose em configuração por disco 262. Os raios y das soluções 225Ac e 227Th foram medidos com um detector HPGe nas posições calibradas de 5 cm e 20 cm, respectivamente.

[081] Para determinar as áreas dos picos y no espectro de energia, foi usado o software ORTEC GammaVision. Os dados de produção de energia e fóton são obtidos pelo Evaluated Nuclear Data File (ENSDF - disponibilizado em http://www.nndc.bnl.gov/nudat2/- 21 de junho de 2013). As linhas y mais abundantes apresentadas na Tabela 4 são usadas para o cálculo da atividade. Tabela 4. Probabilidades (porcentagem) de emissão e energias de raio Y usada para a determinação de atividades de radionuclídeo. Os dados foram obtidos no ENSDF.

[082] A produção de 225Ac é baseada em um gerador de 229Th do qual 225Ac é eluído. As linhas y de 229Th usadas para o cálculo de atividade são vistas na Tabela 4. Nenhum vestígio de 229Th foi encontrado na amostra.

Preparação e procedimento de condicionamento das colunas UTEVA e DGA

[083] As resinas cromatográficas de extração, bem como o material de pré-filtragem foram embalados em colunas de alimentação gravitacional de plástico de poliestireno descartável de 2 ml (obtido pela Fisher Scientific). As seguintes etapas foram executadas: • Pese aproximadamente 100 mg de resina UTEVA e 50 mg de resina DGA. • Transfira a resina para dois frascos plásticos de 20 ml e adicione aproximadamente 3 ml de 4 mol/L de HNO3 em cada um. Agite para misturar. • Antes de embalar as duas colunas, transfira um filtro para as colunas. Empurre o filtro para a base das colunas. • Transfira a solução para o reservatório. Coloque um filtro na parte superior das resinas UTEVA e DGA. • Empurre o filtro e a resina para baixo. • Descarte o ácido acima do filtro superior. Adicione 2-3 ml de 4 mol/L HNO3. Descarte o ácido novamente. • Remova o plugue inferior das colunas. • Adiciona 2-3 ml de 4 mol/L de HNO3. Deixe drenar. Procedimento de separação de duas colunas • Coloque uma coluna de resina UTEVA e uma coluna de resina DGA no rack de coluna em série, isto é, soluções da coluna de resina UTEVA (em cima) drenarão na coluna de resina DGA (em baixo) (consulte a Figura 1). • Com base na concentração de radioatividade da substância de fármaco de cloreto de 223Ra, MBq/ml, pipete precisamente um volume correspondente a 15 MBq em um frasco de 20 ml. Adiciona uma quantidade igual de 8 mol/L de HNO3. • As atividades conhecidas de 227Th e 225Ac foram adicionadas à solução de cloreto de 223Ra, de acordo com a Tabela 3. • Use uma pipeta de plástico para transferir a amostra para a parte superior da coluna UTEVA. 225Ac e 223Ra eluirão da coluna UTEVA para a coluna DGA enquanto o 227Th absorverá a coluna UTEVA. • Lave as colunas com 5 ml de 4 mol/L de HNO3. • Desconecte a coluna UTEVA da coluna DGA. • Transfira 5 ml de 4 mol/L de HNO3 para a parte superior da coluna DGA. 223Ra eluirá da coluna enquanto 227Ac permanecerá retido na coluna DGA. • Elua a coluna DGA com 5 ml de 0,05 mol/L de HNO3. Isso removerá 227Ac da coluna.

[084] Será avaliado que na análise de rotina (separação de 227Ac, 227Th e 223Ra) nenhuma adição de 227Th e 225Ac à solução de cloreto de 223Ra foi executada, a solução foi transferida diretamente para a coluna UTEVA.

[085] Dois experimentos de separação com 225Ac foram conduzidos. Após a separação completa, as colunas e os eluatos foram contados no dia após a separação com um detector HPGe. 225Ac não tem raios y adequados e portanto, é quantificado por meio de seu filho 213Bi. 225Ac está em equilíbrio demorado com os filhos após 24 horas. 225Ac foi identificado através da medição dos filhos 221Fr e 213Bi. Um espectro do eluato 225Ac altamente purificado é mostrado na Figura 4. As energias e as intensidades do raio y usadas para identificação e quantificação de 225Ac e 227Th são apresentadas na Tabela 4.

[086] A recuperação percentual de 225Ac obtida com base nos experimentos I e II foi de 97% e 86% respectivamente. Os resultados foram informados na Tabela 5. Esses resultados mostram que as resinas UTEVA e DGA de extração produzem uma separação eficaz, reproduzível, robusta e rápida de 225Ac de 227Th e 223Ra. A resina DGA mostra uma forte retenção de 225Ac em ácido nítrico e retirada eficiente de 225Ac em ácido nítrico diluído. Conforme visto na Tabela 5, o avanço ("recuperação" na Tabela 5) de 227Th e 223Ra no eluato final era inferior a 2*1Q-3e 8 • 10 — 4, respectivamente. Além disso, somente vestígios das quantidades iniciais de 223Ra e 227Th foram detectados nos eluatos. Isso mostra que o procedimento de separação de 225Ac de 227Th e 223Ra com a coluna UTEVA e DGA é altamente eficiente. Dessa forma, o

método demonstra que a separação de 227Ac, 227Th e 223Ra também serão eficientes.

[087] Tabela 5. Atividade (Bq) de 225Ac, 227Th e 223Ra nas colunas UTEVA e DGA após a separação e no eluato obtido por espectrometria de raio Y.Incerteza na atividade (2 u) . As atividades adicionadas no início do experimento são vistas na Tabela 3

Exemplo 2 - Teste de robustez do método

[088] A robustez do método foi testada usando novos lotes (novo número de lote) de resina UTEVA e DGA. A robustez de um procedimento analítico é uma medida de sua capacidade de permanecer não afetada por variações pequenas em parâmetros do método e fornece uma indicação de sua confiabilidade durante o uso normal.

[089] Um total de três experimentos (I, II e III) foi conduzido com 15 MBq de substância de fármaco de cloreto de 223Ra reforçada com atividade conhecida de 225Ac. A atividade de 225Ac é mostrada na Tabela 6. Além disso, aproximadamente 75 kBq de 227Th foram adicionados. A separação foi executada de acordo com o procedimento apresentado no Exemplo 1.

[090] A recuperação percentual de 225Ac obtida após a eluição com 5 ml de 0,05 mol/L de HNO3 foi de 68, 81 e 77%. As recuperações obtidas eram inferiores às dos lotes UTEVA e DGA usados no Exemplo 1. Portanto, foi decidido aumentar o volume de eluição (além dos 5 ml já adicionados) adicionando-se 2 vezes um volume de 2,5 ml de 0,05 mol/L de HNO3. Os resultados são apresentados na Tabela 6. A recuperação percentual de 225Ac é aumentada para 81, 85 e 84% e isso é comparável ao resultado obtido anteriormente. Isso mostra que o método é robusto em relação a novos lotes (lote novo) de resinas. Entretanto, o volume de eluição pode exigir ajuste para obter recuperações suficientes (> 70%).

[091] Tabela 6. Atividade de 225Ac medida (Bq). Teste de robustez do método com o uso do novo lote de resinas UTEVA e DGA. Incerteza na atividade (2 o).

Exemplo 3 - Teste de variação do método

[092] Os métodos analíticos desenvolvidos por uma empresa farmacêutica devem ser validados. O método deve ser validado na variação do limite informado a pelo menos 120% do limite da especificação. Em experimentos anteriores, a quantidade de 225Ac foi adicionada em relação ao limite de especificação. Como o limite de especificação é de aproximadamente 0,004% relativo a 223Ra, aproximadamente 600 Bq de 225Ac foram adicionados a 15 MBq de 223Ra. A finalidade do Exemplo 3 era adicionar atividades inferiores e superiores de 225Ac. O motivo era cobrir a variação de quantidades de 227Ac que seriam usadas durante a validação. Três experimentos foram conduzidos com várias quantidades de 225Ac.

Resultados

[093] A recuperação percentual de 225Ac obtida após a eluição de 10 ml de 0,05 mol/L de HNO3 foi de 91, 74 e 92%. Os resultados são apresentados na Tabela 7. Isso mostra que a recuperação é aceitável (> 70%) de 46 a 172% do limite de especificação.

[094] Tabela 7. Atividade de 225Ac medida (Bq). Três experimentos com uma atividade de 225Ac que varia de 46-172% do limite de especificação de 227Ac. As incertezas são apresentadas como 2 G.

Exemplo 4 - Determinação de condições de contagem

[095] A separação de 227Ac, 227Th e 223Ra foi executada pelas colunas UTEVA e DGA conforme descrito no Exemplo 1, com a diferença de que uma amostra de 534 ± 21 Bq (2o) 227Ac foi adicionada à coluna, e não ao reforço de 225Ac e 227Th complementar. Antes da separação, a amostra foi contada com um detector de HPGe e quantificada por meio de seu filho 227Th pois 227Ac estava em equilíbrio com seu filho para esta amostra.

Resultados

[096] 227Ac foi eluído da coluna DGA com 0,05 mol/L de HNO3 e contado na posição calibrada de 5 cm a partir da superfície do detector durante 10000 s após aproximadamente 1 e 2 dias. Os resultados são informados na Tabela 8.

[097] Tabela 8. Resultados com base na espectrometria de raio y, crescimento de 227Th de 227Ac. As incertezas são apresentadas como 2 o.

[098] Conforme visto na Tabela, as incertezas de contagem satisfatória (< 7%, 2o) eram possíveis para uma amostra contada durante 10000 s na posição de 5 cm a partir do detector. Não houve diferença entre atividade calculada e medida.

Exemplo 5 - Validação do método

[099] Os métodos analíticos desenvolvidos por uma empresa farmacêutica devem ser validados. A validação do método analítico é o processo para confirmar que o procedimento analítico empregado para um teste específico é adequado para seu uso pretendido, isto é, para garantir confiabilidade, consistência e exatidão dos dados analíticos. Para demonstrar a aplicabilidade dos métodos da invenção em aplicações comerciais, ele é validado de acordo com a Diretriz harmonizada de ICH. Antes da validação de um método formal, é obrigatório configurar um protocolo com parâmetros de teste a serem avaliados e critérios de aceitação apropriados.

[100] O método foi validado em termos de seletividade, exatidão, precisão (repetição/precisão intermediária), linearidade, variação, limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ). A robustez do método foi executada no Exemplo 2 em termos de lotes de resinas diferentes e consequentemente não foi repetida neste Exemplo.

[101] A diretriz de ICH não diz nada sobre os critérios de aceitação para os diferentes parâmetros. Entretanto, a exatidão em termos de recuperação entre 80-120% e uma precisão de ± 20% normalmente é considerada aceitável. Isso é aplicável a impurezas > 0,1% do ingrediente ativo. Quando a especificação para a impureza 227Ac na substância do fármaco de cloreto de 223Ra é definida em 0,004% em relação a 223Ra, uma aceitação mais abrangente é exigida.

[102] As amostras da substância do fármaco de cloreto de 223Ra foi reforçada com quantidades conhecidas de 227Ac e 227Th. Os parâmetros de validação e os critérios de aceitação correspondentes para a validação do método são produzidos na Tabela 9.

[103] Tabela 9. Parâmetros de validação e critérios de aceitação

Parâmetros experimentais

[104] De acordo com ICH, a exatidão e a repetição devem ser avaliadas usando no mínimo 9 determinações em, no mínimo, 3 níveis de concentração que abrangem o intervalo especificado (por ex., 3 concentrações/3 replicações). O intervalo recomendado para a validação de um método de impureza é do limite informado a pelo menos 120% da especificação. As amostras de 60-140% do limite de especificação foram preparadas de acordo com a Tabela 10.

[105] Tabela 10. Visão geral das amostras usadas na validação do método. 223Ra é reforçado com 227Ac e 227Th. A atividade de 227Ac é de 60-140% do limite de especificação.

[106] O método estipula um tamanho de amostra de 15 MBq. De acordo com as especificações, a quantidade de 227Ac e a quantidade de 227Th devem ser inferiores a 0,004% e inferiores a 0,5% em relação à atividade de 223Ra, respectivamente. Como o intervalo de validação decidido era de 60 a 140% da especificação, os reforços de 227Ac de 360 a 840 Bq foram preparados. O conteúdo de 227Th foi mantido constante, isto é, 75 kBq (0,5% da especificação). As soluções de estoque de 227Ac e 227Th foram ambas criadas em 4 mol/L de HNO3 e as atividades foram de aproximadamente 5 Bq/μL e 0,5 kBq/μL, respectivamente. Para determinar a atividade exata de soluções de reforço de 227Ac, a contagem com um detector HPGe na posição de 5 cm para 1000 s foi executada. O tempo de contagem foi selecionado para produzir uma incerteza de contagem (1 u) inferior a aproximadamente 3%, que foi considerada adequada. A contagem das soluções de estoque de 227Th foi realizada na posição de 20 cm para 300 segundos.

[107] O 223Ra de três lotes de substância de fármaco de cloreto de 223Ra foi agrupado. A contaminação de 227Ac no lote agrupado foi determinada. Uma alíquota de 15 MBq foi obtida da amostra agrupada e analisada de acordo com o método descrito no Exemplo 1. Isso foi feito para determinar se alguma correção precisava ser feita nos resultados anteriores devido à contaminação secundária das amostras com 227Ac. Nenhum vestígio de 227Ac na substância de fármaco de cloreto de 223Ra agrupada foi encontrado. Consequentemente, nenhuma correção foi executada.

Resultados - Seletividade

[108] A seletividade é a capacidade da medição para avaliar o analito sem qualquer interferência de outros componentes na matriz. No momento da análise, os radionuclídeos presentes na substância de fármaco de cloreto de 223Ra foram separados de 227Ac de acordo com o método apresentado no Exemplo 1. O decaimento β de 227Ac não produz emissões de raios y que são apropriadas para a detecção de y. Os vestígios de 223Ra e seus filhos podem permanecer na amostra após a purificação, e a seletividade do método ser demonstrada por comparação das energias dos raios y de 227Th com as energias de 223Ra e seus filhos de emissão de y, 219Rn, 211Pb e 211Bi e mostrando que eles são claramente separados e identificáveis. O raio y usado para quantificação de 227Th é de 236,0 keV, que é a linha y mais abundante de 227Th (12,9%).

[109] As energias de raio y características de 227Th, 223Ra e filhos são apresentadas na Tabela 11. Um espectro adquirido 24 horas após a separação de 227Ac da substância de fármaco de cloreto de 223Ra é mostrado na Figura 5.

[110] Conforme visto na Figura 5, o radio Y usado para quantificação de 227Th é distintamente e visivelmente separado nas energias de outros nuclídeos. Não há interferências provenientes da matriz. O método foi considerado específico e a exigência de aceitação foi cumprida.

Resultados - Exatidão

[111] A exatidão do método foi determinada por meio de experimentos de recuperação na substância de fármaco de cloreto de 223Ra reforçada com cinco níveis de 227Ac a 60%, 80%, 100%, 120% e 140% do limite de especificação de 227Ac. As soluções foram adicionalmente reforçadas com quantidades de 227Th correspondentes ao limite de especificação de 227Th. Para os níveis de 60%, 100% e 140%, as soluções foram preparadas três vezes. Para os níveis de 80% e 120%, as soluções foram preparadas uma vez.

[112] As soluções foram analisadas conforme descrito no Exemplo 1. Cada solução foi medida duas vezes. A primeira medição foi realizada 24 ± 1 hora após a preparação da amostra, a segunda medição foi executada 48 ± 1 hora após a preparação da amostra.

[113] A exatidão da recuperação usando o conteúdo de 227Ac calculado 4.

[114] Os resultados são apresentados

[115] Tabela 12. Resultados da exatidão (como recuperação) método. Amostras no intervalo de 60-140% do limite especificação para 227Ac relativo a 223Ra.

[116] Conforme visto na Tabela 12, a recuperação percentual única e a média (n=11) estão dentro dos critérios de aceitação (70 a 130%, consulte a Tabela 9). O método é considerado suficientemente preciso para a determinação do conteúdo 227Ac no intervalo de 60% a 140% do limite de especificação que corresponde a 0, 002% - 0, 006% de 227Ac na substância de fármaco de cloreto de 223Ra na liberação. Dessa forma, a exigência é cumprida.

[117] As incertezas na recuperação estavam no intervalo de 4-8,7%, comparável a 2a nas estatísticas de contagem e foi atividade mais baixa que produziu o aumento nas maiores incertezas. Uma contribuição de incertezas é a incerteza no valor reforçado. Isso não é relevante para análises de amostras de substância de fármaco de cloreto de 223Ra "normais" e por isso as incertezas reais são mais baixas.

Resultados - Precisão

[118] A capacidade de repetição do método foi determinada calculando-se o desvio padrão relativo (RSD) para três replicações de 227Ac na substância de fármaco de cloreto de 223Ra em três níveis diferentes a 60% (correspondendo a 0,002% de 227Ac), 100% (0,004% de 227Ac), e 140% (0,006% de 227Ac) do limite de especificação. Para cada nível, as soluções foram preparadas em triplicata e analisadas conforme descrito no Exemplo 1. Os resultados são apresentados na Tabela 13.

[119] Conforme visto na Tabela 13, os desvios padrão relativos médios eram < 30% para todos os três níveis. O método foi considerado suficientemente preciso e a exigência de aceitação foi cumprida (consulte a Tabela 9). Tabela 13. Resultados da precisão do método.

Resultados - Precisão intermediária

[120] A precisão intermediária expressa as variações laboratoriais internas em termos de, por ex., dias diferentes, análises diferentes e equipamento diferente. A precisão intermediária foi determinada neste caso em termos de dias diferentes. A separação foi executada em quatro dias diferentes, e os resultados são informados na Tabela 14. Tabela 14. Precisão intermediária.

[121] Conforme visto na Tabela 14, o desvio padrão relativo médio era < 30% para todos os quatro dias. Os dados mostram que os resultados de dias diferentes são comparáveis e que a exigência de aceitação é, dessa forma, cumprida.

Resultados - Linearidade

[122] A linearidade é a capacidade de gerar uma resposta que é diretamente proporcional à concentração de um analito em uma amostra. Para demonstrar a linearidade do método, uma amostra com uma atividade de 359 ± 23 Bq 227Ac foi usada. A amostra foi separada de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1. O crescimento de 227Th de 227Ac foi medido 6 vezes em um período de 1 a 6 dias após a separação. A atividade teórica correspondente foi calculada por meio da Equação 1. Os resultados são apresentados na Tabela 15 e a representação dos sinais é exibida na Figura 6.

[123] Tabela 15. Resultados para a linearidade do método

[124] A curva de linearidade foi medida com as atividades de 227Th no intervalo de 17-67 Bq. Esse intervalo abrange as atividades de 227Th que são medidas com base no decaimento de 227Ac nos níveis de especificação de 78-156% (100% produz uma atividade de 21,9 Bq após 24 horas e 42,9 Bq após 48 horas, consulte a Tabela 1). A atividade de 227Th medida é representada como uma função da atividade teórica de 227Th. O coeficiente de correlação foi determinado para ser r = 0,98 e está bem acima dos critérios de aceitação (> 0,95) . O método produziu uma resposta linear e a exigência foi cumprida (consulte a Tabela 9).

Resultados - Intervalo

[125] O método é validado no intervalo específico do conteúdo de 227Ac de 0,002% a 0,006% relativo a 223Ra com relação à atividade (Bq). A linearidade, a exatidão e a precisão do método foram demonstradas em um intervalo de quantidades de 227Ac conforme listado na Tabela 16. Tabela 16. Intervalo testado quanto a linearidade, exatidão e precisão do método

[126] Resultados - Limite de quantificação e limite de detecção

[127] Uma parte de uma validação formal do método é determinar o limite de detecção (LOD) e o limite de quantificação (LOQ). Limite em branco (LOB) é a concentração de analito aparente mais elevada que se espera encontrar quando são testadas as réplicas de uma amostra em branco que não contém analito. O LOD é a concentração de analito mais baixa que pode ser confiavelmente distinguida do LOB e na qual a detecção é possível. LOQ é a quantidade mais baixa que pode ser quantificada com exatidão e precisão suficientemente ideal (e pré-selecionada). O pico y, 236 keV, que é o pico de 227Th mais abundante é usado para quantificação do crescimento de 227Th de 227Ac. O LOD e o LOQ foram determinados conforme descrito usando as equações:

Em que: n = Número de canais na região de pico m = Número de canais usados para estimativa secundária B = Correção secundária

[128] O LOD e o LOQ calculados com base nas equações 5 e 6 são produzidos em contagens, e a atividade correspondente (Bq) foi calculada por meio da seguinte equação:

AE : A atividade em Bq de um nuclídeo com base em um pico y com energia E NE: a área de pico líquido para um pico y em energia E (contagens) εE: a eficiência do detector em energia E Y : probabilidade de emissão t: tempo de contagem

[129] O LOD foi calculado para ser 1,8 Bq. Isso corresponde a 8% do limite de especificação, pois o crescimento após 24 horas a partir de 100% de especificação (600 Bq) corresponde a 22 Bq. O método é adequado para detectar um conteúdo 227Ac de 0,0003% (LOD). O LOQ foi calculado a 7 Bq de 227Th, isso corresponde a 32% do limite de especificação. O método é adequado para quantificar um conteúdo de 227Ac de 0,0013% (LOQ).

[130] Um resumo dos resultados de validação é apresentado na Tabela 17. A exatidão e a precisão foram avaliadas nas soluções de amostra da substância de fármaco reforçada com a atividade de 227Ac que varia de 60 a 140% do limite de especificação. 100% dos limites de especificação correspondem a 0,004% de 227Ac relativo a 223Ra. Tabela 17. Resumo dos resultados de validação

[131] Conforme visto na Tabela 17, LOD é 2 Bq e LOQ é 7 Bq. Isso corresponde a aproximadamente 8% e 32% do limite de especificação, respectivamente. A investigação da especificidade mostra que a energia do raio y para a quantificação de 227Th de 227Ac é claramente determinada com base nas energias de raio y de interferência. Não há interferências provenientes da matriz.

[132] Todos os parâmetros atenderam os critérios de aceitação pré-especificados. O método é considerado adequado para seu uso pretendido.

Claims

1. Um método para quantificação de 227Ac em uma composição de 223Ra caracterizado por consistir em: (i) passagem da composição 223Ra através de uma primeira coluna A de extração de fase sólida, na qual a coluna citada consiste em uma resina específica de tório; (ii) passagem do eluato da coluna A através de uma segunda coluna B de extração de fase sólida, na qual a coluna citada consiste em uma resina específica de actínio; (iii) recuperação do 227Ac absorvido na resina na coluna B e determinação de sua quantidade pela espectrometria y via crescimento e detecção do 227Th filho.

2. Um método, conforme a reivindicação 1, caracterizado pela resina específica de tório consistir em um extrato de fosfonato, preferencialmente um extrato de alquil fosfonato.

3. Um método, conforme a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pela resina específica de tório consistir em um extrato de dialquil alquil fosfonato da Fórmula I:

em que cada um de R1-R3 é independentemente um grupo de alquil de cadeia reta ou ramificada C3-C8, preferencialmente um extrato de dipentil pentilfosfonato.

4. Um método, conforme qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pela resina específica de actínio consistir em um extrato de diglicolamida.

5. Um método, conforme qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pela resina específica de actínio consistir em um extrato de tetra-alquil diglicolamida da Fórmula II: em que, R1-R4 são independentemente grupos de alquil de cadeia reta ou ramificada C3-C12, preferencialmente um extrato de N,N,N’,N’-tetra-n-octildiglicolamida (DGA).

em que, R1-R4 são independentemente grupos de alquil de cadeia reta ou ramificada C3-C12, preferencialmente um extrato de N,N,N’,N’-tetra-n-octildiglicolamida (DGA).

6. Um método, conforme reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelas colunas A e B serem organizadas em série.

7. Um método, conforme reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo eluente usado nas colunas A e B consistir em ácido nítrico aquoso.

8. Um método, conforme reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pela recuperação do 227Ac na etapa (iii) ser alcançada pela lavagem da coluna B com ácido aquoso.

9. Um método, conforme reivindicado na reivindicação 8, caracterizado pelo volume de lavagem do ácido aquoso ser 16 a 400 vezes o volume da coluna, preferencialmente 40 a 200 vezes.

10. Um método, conforme reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, cujo método é caracterizado por consistir em: (i) Colocação de uma primeira coluna A de extração de fase sólida que consiste em uma resina específica de tório, por exemplo, resina de dipentil pentilfosfonato UTEVA, e uma segunda coluna B de extração de fase sólida que consiste em uma resina específica de actínio, por exemplo, resina de N, N, N', N' - tetra-n-octildiglicolamida DGA, em série, preferencialmente em que a saída da coluna A está conectada à entrada da coluna B; (ii) Adição de um volume de uma composição 223Ra correspondente a uma atividade conhecida, por exemplo 15 MBq, de 223Ra a um volume igual de ácido nítrico, preferencialmente 8 mol/L de ácido nítrico; (iii) Transferência da amostra da etapa(ii) para a entrada da coluna A; (iv) Passagem da amostra citada através das colunas A e B (v) Lavagem das duas colunas com 20-100 vezes o volume combinado das duas colunas, por exemplo, 5-10 ml, de ácido nítrico, preferencialmente 4 mol/L de ácido nítrico; (vi) Desconexão da Coluna A da coluna B; (vii) Lavagem da coluna B com 40-200 vezes seu volume, por exemplo, 5-10 ml, de ácido nítrico, preferencialmente 4 mol/L de ácido nítrico; (viii) Lavagem da coluna B com 40-200 vezes seu volume, por exemplo, 5-10 ml, de ácido nítrico em uma concentração inferior à que é usada na etapa (vii), como 0,05 mol/L de ácido nítrico. (ix) Determinação da quantidade de 227Ac presente no eluato da coluna B obtida na etapa (viii) pela espectrometria y via crescimento e detecção do 227Th filho.