BR112015011958B1

BR112015011958B1 - utilização de um complexo enzimático, composição alimentícia para animais de criação, e, processo de fabricação do complexo enzimático

Info

Publication number: BR112015011958B1
Application number: BR112015011958-1A
Authority: BR
Inventors: Dominique HOOREMAN
Original assignee: Denis HOOREMAN; Jean-Noël HOOREMAN; Hervé HOOREMAN; Dominique Hooreman
Priority date: 2012-11-26
Filing date: 2013-11-22
Publication date: 2021-03-16
Also published as: CN104837360A; ZA201308850B; WO2014080094A1; RU2015125250A; CA2834538C; NZ708401A; EP2735235A1; PL2735235T3; DK2735235T3; RS59336B1; SI2735235T1; JP6219966B2; JP2016501019A; MX368690B; HRP20191251T1; AU2013349531A1; IL238762A0; TR201909421T4; FR2998450A1; CA2834538A1

Abstract

UTILIZAÇÃO DE UM COMPLEXO ENZIMÁTICO, COMPOSIÇÃO ALIMENTÍCIA PARA ANIMAIS DE CRIAÇÃO, E, PROCESSO DE FABRICAÇÃO DO COMPLEXO ENZIMÁTICO A invenção refere-se à utilização de um complexo enzimático compreendendo uma mistura de proteases, obtida por cultivo de uma cepa de Streptomyces fradiae, para a suplementação da alimentação dos animais de criação, em que uma das proteases apresenta um ponto isoelétrico da ordem de 7,0 e uma outra das proteases apresenta um ponto isoelétrico da ordem de 8,0. A invenção refere-se, igualmente, ás composições alimentícias para animais de criação compreendendo o referido complexo enzimático, bem como o processo de produção deste complexo.

Description

[001] O setor técnico da presente invenção pertence ao domínio da nutrição animal.

[002] Sabe-se que a cepa de Streptomyces fradiae pode produzir pelo menos cinco tipos de proteases designadas por Ia, Ib, II, III, IV e duas peptidases (Patente GB 1 133 579).

[003] Em seu pedido de patente WO 87/07905, os requerentes descreveram um processo de obtenção de um complexo proleolítico composto exclusivamente das proteases do tipo II, III e IV com preponderância da protease do tipo II. Este complexo é obtido partir de uma cepa de Streptomyces fradiae de tipo WAKSMAN 3535 por fermentação, extração do complexo por filtração, depois ultrafiltração sobre uma membrana tendo um limiar de corte correspondendo a um peso molecular compreendido entre 2000 e 12.000 e, por último, atomização. O complexo assim obtido sob a forma de pó tem o título de, pelo menos, 2.000 de unidades Anson/mg de proteínas.

[004] Neste pedido, a protease do tipo II foi caracterizada por um peso molecular próximo de 18 kDa e um ponto isoelétrico próximo de 9,0.

[005] Este complexo, utilizado na alimentação animal, permite aos animais assimilar eficazmente os alimentos ricos em proteínas brutas e, assim, estimular o seu crescimento. Por outro lado, este complexo, utilizado em porcas gestantes, permite obter um aumento do peso dos filhotes no nascimento acompanhado por uma diminuição do consumo de alimentos e uma melhoria do estado sanitário.

[006] No entanto, este processo não permite eliminar eficazmente os produtos secundários contaminantes.

[007] No pedido de patente WO 97/37681, melhoras são alcançadas permitindo a utilização de um produto de titulação a, pelo menos, 4.000 unidades Anson/mg de proteínas para aplicações terapêuticas. Assim, a proteinase preponderante apresenta uma atividade específica superior a 100.000 unidades Anson/mg de proteínas com um peso molecular compreendido entre 30 e 36 kDa e um ponto isoelétrico próximo de 7,0.

[008] As análises efetuadas posteriormente mostraram que o peso molecular protease era de 18-20 kDa.

[009] As aplicações terapêuticas descritas consistem essencialmente em uma ação positiva de redução dos excessos de secreção de muco caracterizando algumas doenças, em uma melhora de ressorção intestinal e da circulação sanguínea ou ainda na luta contra as doenças infecciosas. Além disso, as composições são descritas como facilitando a regeneração das vilosidades atrofiadas ou destruídas da mucosa intestinal.

[0010] Diante das propriedades terapêuticas significantes do complexo enzimático extraído das culturas de Streptomyces fradiae, é importante utilizar um complexo enzimático livre de um modo mais completo das impurezas biológicas que poderiam afetar a sua atividade.

[0011] A presente invenção visa, portanto, proporcionar uma melhora do complexo enzimático previamente descrito para favorecer notadamente as boas condições de criação e a saúde dos animais no contexto das criações em escala industrial.

[0012] A invenção tem, portanto, por objeto a utilização de um complexo enzimático compreendendo uma mistura de proteases, obtida por cultivo de uma cepa de Streptomyces fradiae, para a suplementação da alimentação dos animais de criação, caracterizada em que, entre estas proteases da mistura, uma das mesmas apresenta um ponto isoelétrico da ordem de 7,0 outra apresenta um ponto isoelétrico da ordem de 8,0.

[0013] O referido complexo contém, de modo muito majoritário, estes dois tipos de proteases, isto é, uma proporção destas duas proteases ultrapassando 80% da atividade da referida mistura.

[0014] De acordo com uma característica da invenção, a protease, cujo ponto isoelétrico é da ordem de 7,0, apresenta uma atividade específica de cerca de 150.000 unidades Anson/mg de proteínas.

[0015] De acordo com uma característica da invenção, a protease, cujo ponto isoelétrico é da ordem de 8,0, apresenta uma atividade específica de cerca de 38.000 unidades Anson/mg de proteínas.

[0016] De acordo com outra característica da invenção, o complexo enzimático é utilizado como complemento alimentício sob a forma de pó, de líquido ou qualquer outra forma adaptada para a mistura em composições alimentícias para melhorar o estado geral dos animais de criações industriais.

[0017] De acordo com uma característica da invenção, o complexo enzimático sob a forma de pó é misturado com uma composição alimentícia a seco até homogeneidade em um tambor giratório.

[0018] De acordo com outra característica da invenção, o complexo enzimático sob forma líquida é pulverizado em leito fluidizado sobre uma composição alimentícia, depois granulado.

[0019] De acordo com uma característica da invenção, o complexo enzimático é utilizado na alimentação de aves domésticas.

[0020] De acordo com outra característica da invenção, o complexo enzimático é utilizado na alimentação dos suínos.

[0021] De acordo com outra característica da invenção, o complexo enzimático é utilizado na alimentação dos peixes.

[0022] A invenção tem igual por objeto uma composição alimentícia para animais de criação compreendendo o complexo enzimático da invenção e, eventualmente, excipientes ou veículos com finalidades nutritivas, ou outros aditivos.

[0023] A invenção tem finalmente por objeto um processo de fabricação do complexo enzimático de acordo com a invenção, caracterizado em que se coloca em cultura uma cepa de Streptomyces fradiae, em que se filtra o mosto de fermentação, em que se procede, em seguida, a uma extração do complexo enzimático por ultrafiltração e cromatografia de troca de íons seguidos por uma isoeletrofocalização e, por último, liofiliza-se o complexo obtido.

[0024] Esta invenção permite fornecer um complemento alimentício cujas características são rigorosamente determinadas.

[0025] A invenção permite, logo a princípio, adaptar as doses a administrar com precisão nas composições alimentícias a fim de obter os efeitos terapêuticos desejados.

[0026] A invenção apresenta, igualmente, a vantagem de melhorar o estado sanitário dos animais nas criações industriais.

[0027] Por outro lado, a invenção proporciona, igualmente, uma melhora do estado geral dos animais nas criações industriais, o que aumenta a rentabilidade da exploração.

[0028] A invenção permite ainda um aumento do crescimento dos animais induzindo, ao mesmo tempo, uma diminuição do consumo de alimentos.

[0029] Outras características, detalhes e vantagens da invenção serão melhor compreendidos com a leitura do complemento de descrição seguinte de modos de realização dados a título de exemplo em relação com as vistas ilustrando vilosidades intestinais.

[0030] Sabe-se que a mistura enzimática comercializada sob a denominação Panstimase® (PANcreatic STIMulating diastASE) é um complexo enzimático proveniente da fermentação de Streptomyces fradiae. Este complexo é descrito como contendo de modo principal três proteases das quais algumas com certeza atuam especificamente sobre proteínas escleróticas (colágeno, elastina, queratina), mas também sobre algumas toxinas de natureza protéica liberadas pelo vibrião da cólera ou de determinadas cepas patogênicas de Escherichia coli.

[0031] No domínio da zootecnia, é importante dispor de um produto tecnicamente definido, perfeitamente constante e cujas propriedades sejam, assim, claramente determinadas.

[0032] A fim de obter o complexo enzimático de acordo com a invenção, coloca-se em cultura uma cepa de Streptomyces fradiae e filtra-se o mosto de fermentação. Depois, procede-se a uma extração e uma caracterização do complexo enzimático por ultrafiltração, por cromatografia de troca de íons e isoeletrofocalização. Por último, procede-se a uma liofilização do complexo obtido.

[0033] Para a cultura da cepa de Streptomyces fradiae, utiliza-se uma cepa por exemplo de tipo WAKSMAN 3535 e podendo ser geneticamente melhorada para obter notadamente um aumento da atividade proteolítica ou a supressão de qualquer secreção de antibióticos.

[0034] A cultura ocorre em um fermentador de produção industrial em um meio de cultura adaptado. Este meio de cultura pode ser, por exemplo, à base de farinha de soja: 15 g/l; glicose: 30 g/l; fosfato bipotássico: 1 g/l; carbonato de cálcio: 10 g/l.

[0035] A reação ocorre a um pH compreendido entre 7,0 e 7,5, a uma temperatura de fermentação de cerca de 28°C com uma aeração a 0,3 volume de ar estéril por volume de meio e por minuto.

[0036] Uma vez a cultura terminada, o micélio é eliminado por filtração do mosto de fermentação na presença de um agente clarificante.

[0037] A extração do complexo enzimático necessita a implementação de várias técnicas incluindo a ultrafiltração, a cromatografia de troca de íons e a isoeletrofocalização.

Ultrafiltração

[0038] A ultrafiltração do filtrado é realizada com a ajuda de uma membrana tendo um limiar de corte de 50kDa.

[0039] Após 3h de filtração, o filtrado coletado (71% do volume de partida) apresenta uma atividade proteolítica revelada pelo teste com filme de gelatina. Este teste consiste na degradação de um filme de gelatina colorido com prata e depositado sobre um suporte sólido.

Cromatografía de troca de íons

[0040] Utiliza-se uma cromatografia de troca de cátions realizada com colunas de carboximetil gel Cellufine C-500 (Amicon) de dimensões adaptadas.

[0041] O tampão de cromatografia é um tampão citrato 10 mm a pH 5,5 e a eluição é realizada por um gradiente de NaCl de 0 a 1,0 M. A taxa de fluxo de eluição é adaptada em função do tamanho das colunas, por exemplo, é de 10 a 15 ml/min para uma coluna de 2,5 cm de diâmetro e de 27 cm de altura.

Isoeletrofocalização

[0042] A isoeletrofocalização analítica é realizado com géis prontos para uso da empresa Pharmacia para pH indo de 3 a 9 sobre Phast-system. A revelação é feita com azul de Coomassie.

[0043] No caso da isoeletrofocalização preparativa em meio sólido, a solução enzimática é dialisada contra água destilada (95 ml) e misturada a 5 ml de anfólitos 3-9 com 4,7 g de gel Ultrodex e 0,5 g de glicina. O gel é drenado durante 6h a 40°C. A migração ocorre durante a noite, ou período equivalente, em potência constante de 3W. A revelação é feita com azul de Coomassie.

[0044] As diferentes bandas de gel são retiradas, enxaguadas com 3 ml de água, filtradas, depois enxaguadas com 3 ml de tampão Tris-HCl.

[0045] As frações assim obtidas são analisadas depois para o seu conteúdo de atividade proteolítica e o seu teor em proteínas. As amostras são dialisadas depois contra o tampão Tris-HCl 0,3 M, pH 8,0.

[0046] No caso da isoeletrofocalização preparativa em meio líquido, a solução enzimática dialisada contra água destilada é misturada aos anfólitos (3,5 ml). A migração é feita em potência constante 8 W durante 4H.

[0047] As frações amostradas são analisadas, depois dialisadas contra tampão Tris-HCl 0,3 M pH 8,0.

[0048] As condições experimentais indicadas acima devem adaptar-se segundo as quantidades de produtos que se deseja obter e a utilização em condições industriais.

[0049] Obtém-se, assim, na mistura uma protease majoritária tendo um ponto isoelétrico (pI) da ordem de 7,0 e em uma menor proporção uma protease de pI da ordem de 8,0.

[0050] A protease majoritária de cerca de pI 7,0 é obtida em um volume de 9 ml com uma concentração protéica de 0,49 mg/ml. Precauções particulares de purificação podem ser necessárias devido à precipitação desta protease em seu ponto isoelétrico. A solução obtida tem um título da ordem de 75.000 U.A/ml.

[0051] Este protease é purificada após homogeneização na escala de 4 mg com uma atividade específica de 150.000 U.A/mg de proteínas.

[0052] Uma unidade Anson (U.A.) é aqui definida como sendo a quantidade de enzima que, incubada durante 10 minutos a 25°C e a pH 7,5 em presença de hemoglobina desnaturada, libera, a partir deste substrato o equivalente de 1 micrograma de tirosina, determinada por absorção espectrofotométrica a 280 nm sobre o filtrado não precipitável ao ácido tricloroacético.

[0053] A protease de cerca de pI 8,0 é recuperada conjuntamente com a precedente mas em um volume maior, de 35 ml por exemplo, e apresenta uma concentração em proteína de 1,48 mg/ml. O título desta solução é da ordem de 56000 U.A/ml.

[0054] Este protease é purificada após homogeneização na escala de 50 mg com uma atividade específica da ordem de 38.000 U.A/mg de proteínas.

[0055] O complexo enzimático purificado previamente descrito continha essencialmente proteases e outras proteínas. As purificações realizadas e a técnica de eletroforese utilizada proporcionam a prova de uma purificação suplementar e a eliminação de substâncias de carga desprovidas de atividade proteolítica.

[0056] As diferentes proteases produzidas podem ser melhor caracterizadas determinando-se suas atividades sobre proteínas, como o colágeno, a queratina, a elastina ou a hemoglobina.

[0057] Estas determinações são infelizmente complexas devido à sua falta de sensibilidade e sua falta de especificidade. É, portanto, necessário recorrer a vários testes de atividade, constituindo métodos de detecção e, principalmente, o método Anson.

Testes de atividades: Teste de Anson:

[0058] Este teste permite dosar uma atividade proteolítica, sem especificidade. Ele consiste em dosar a hidrólise da hemoglobina desnaturada por determinação espectrofotométrica da tirosina contida nos oligopeptídeos liberados.

Teste com azocaseína:

[0059] Este teste consiste em determinar por espectrofotometria a 440 nm, a hidrólise da caseína sobre a qual foi fixado um corante laranja. Este teste não é específico. Após incubação com a enzima, a azocaseína restante é precipitada com ácido tricloroacético. A medição da densidade óptica reflete a presença dos peptídeos liberados, portanto a atividade enzimática.

Teste de atividade elastolítica: VeulgcoO-glcutina/Eongo-TefÓ

[0060] Este teste consiste em dosar espectrofotometricamente a 495 nm, os peptídeos coloridos liberados pela hidrólise da elastina sobre a qual foi fixado um corante vermelho.

[0061] O problema eventual desta dosagem provém da insolubilidade do substrato e, portanto, sua sensibilidade depende da precisão sobre a amostragem do mesmo, da agitação do meio de incubação e da aderência do substrato sobre as paredes do recipiente de incubação.

[0062] Os testes realizados mostram uma falta de linearidade entre a atividade e a quantidade de enzima. Observa-se bem uma linearidade entre a atividade e o tempo de incubação, mas a reta representando isto não passa pela origem.

[0063] Pode-se, portanto, medir uma diferença de absorbância entre fqku Vgorqu fg kpewdc>«q *42 g 62 okp+o Eqo 32 μn fg eqorngzq füwífq 32 vezes, mede-ug woc xctkc>«q fg 2.26; μDQImiPo Q eqorngzq gnzkoávkeq fc invenção apresenta, portanto, de modo efetivo uma atividade proteolítica frente à elastina.

Teste com NBA (N-Boc-L-Alaninato-para-nitrofenil éster)

[0064] Este teste consiste em dosar espectrofotometricamente a 347,5 nm, a atividade esterase presente na elastase pela determinação do para- nitrofenol liberado (Visser L. et al. Biochim, Biophys Acta 268 (1972) 207.260).

[0065] Esta dosagem não é específica de uma atividade elastolítica, mas é muito rápida (cinética de 3 min) e apresenta uma boa sensibilidade.

[0066] Eqm gfekVq, eqm 72 μn fg eqm^gzq füwífq 322 xgzgu, mgfg- se uma variação de 0,235 μDO/min. O complexo enzimático apresenta, portanto, uma atividade permitindo a liberação de para-nitrofenol.

Teste de atividade colagenolítica: Teste com azocoll

[0067] Este teste consiste em dosar espectrofotometricamente a 520 nm, peptídeos liberados pela hidrólise do azocoll (colágeno triturado e sobre o qual é fixado um corante vermelho-bordeaux) (Chavira, Analytical Biochemistry 136 (1984) 446-450).

[0068] Este teste apresenta os mesmos inconvenientes que o da elcuVkpc òEqpiq-Tgfó *uwduVtcVq kpuqnúxgn+. ocu crtgugpVc woc dqc ugpukdknkfcfg< eqo 72 μn fg eqorngzq füwífq 72 xgzgu, ogfg-se uma DO de 0,398 no final de 10 min de incubação. O complexo enzimático da invenção apresenta, portanto, uma atividade proteolítica frente ao azocoll.

[0069] Constata-se assim a atividade proteolítica do complexo enzimático de acordo com a invenção. A purificação do referido complexo não alterou sua atividade.

[0070] O complexo protéico assim obtido e caracterizado encontra um emprego em terapêutica animal, notadamente como agente imunoestimulante e como agente de regeneração das Placas de Peyer, em particular nos indivíduos idosos.

[0071] Por outro lado, o complexo enzimático permite regenerar as vilosidades intestinais nos animais idosos (ratos, frangos, etc.) e portanto melhora muito a absorção intestinal dos nutrientes de interesse.

[0072] O complexo enzimático de acordo com a presente invenção é destinado principal à zootecnia e mais particularmente à melhora da alimentação do gado (bovinos, suínos, ovinos), das aves domésticas, dos coelhos e dos peixes e qualquer outro animal monogástrico.

[0073] Incorporado em doses indo de 0,025 a 1 g/kg em composições alimentícias, este complexo enzimático melhora o metabolismo destes animais e contribui para assegurar aos mesmos um melhor estado sanitário. Preferivelmente, as doses de complexo introduzidas nas composições alimentícias são de 0,05 a 0,2 g/kg.

[0074] No caso de criação em larga escala, a manutenção do estado sanitário desempenha um papel significante porque evita a propagação de doenças devido à promiscuidade ou ao confinamento. Diminui-se sensivelmente assim a morbidade, sobretudo a mortalidade dos animais de criação por contaminação bacteriana.

[0075] As composições alimentícias à base desta mistura enzimática contêm um ou vários excipientes ou veículos com finalidade nutritiva como, por exemplo, farinhas de cereais (trigo, trigo de qualidade mais fina, milho, centeio, arroz, painço, sorgo), soja, glucídeos (lactose, manose), os elementos de carga (caseína, farelo, celulose, derivados da celulose) e/ou elementos minerais (giz, argila, bentonita, sílica) e qualquer outro elemento utilizado em nutrição animal.

[0076] Estas composições são misturadas com o complexo a seco até homogeneidade em um tambor giratório ou então o complexo enzimático, sob forma líquida e, em particular, aquosa, é pulverizado em leito fluidizado sobre uma composição alimentícia, depois granulado. Tais operações podem ser conduzidas em temperaturas variáveis indo de 15°C a 60°C.

[0077] A utilização de um complexo enzimático mais puro e mais ativo permite, assim, dosar mais precisamente a atividade biológica das composições nutritivas de acordo com a invenção e assegurar uma homogeneidade satisfatória dos resultados obtidos.

[0078] Devido a este fato, as composições alimentícias de acordo com a invenção têm um teor em complexo enzimático claramente determinado e bem constante.

[0079] Assim, apresentam-se alguns exemplos não limitativos de composições alimentícias destinadas aos animais de criação contendo o complexo enzimático de acordo com a invenção em mistura com excipientes ou veículos apropriados com finalidade nutritiva.

Composição alimentícia para aves domésticas:

[0080] Prepara-se uma composição para um lote de 10 kg adicionando o complexo enzimático:

[0081] Tal composição é incorporada à razão de 0,5 kg por tonelada de alimento para as aves domésticas.

Composição alimentícia para aves domésticas:

[0082] Prepara-se uma composição para um lote de 20,1 kg ao qual se adiciona o complexo enzimático que se incorpora na ração das avesdomésticas.

Composição alimentícia para suínos:

[0083] Prepara-se uma composição para um lote de 10 kg ao qual se adiciona o complexo enzimático que se incorpora na ração dos suínos.

Composição alimentícia para gado:

[0084] Prepara-se do mesmo modo a composição seguinte:

Complexo enzimático da invenção 0,2 g/kg

[0085] A pré-mistura assim constituída é adicionada em pequenas frações a uma mistura de 6 kg de pó de proteínas de carneiro e 14 kg de caseína. A preparação homogeneizada é destinada a ser incorporada na ração do gado à razão de 0,5 kg por tonelada de alimento.

Composição alimentícia para aves domésticas:

[0086] Prepara-se a composição para um lote de 10 kg à qual seadiciona o complexo enzimático:

Complexo enzimático da invenção 0,2 g/kg

[0087] O complexo enzimático de acordo com a invenção pode igualmente ser adicionado às composições alimentícias encontradas no comércio para aves domésticas a fim de suplementar estas preparações. Composição alimentícia para os peixes:

[0088] Prepara-se a composição seguinte que se incorpora na alimentação de peixes de acordo com as práticas comuns.

Parte experimental:

[0089] Para determinar a ação do complexo da invenção sobre as vilosidades intestinais, realizam-se testes sobre ratos relativamente idosos (mais de sete meses).

[0090] Estes ratos recebem uma alimentação à base de proteínas exclusivamente vegetais do tipo farinha de trigo, de soja, de milho. Adiciona- se nesta alimentação o complexo enzimático de acordo com a invenção, como descrito previamente, à razão de 0,1 ou 0,2 g/kg.

[0091] Os resultados são esclarecidos nas figuras 1 a 4. Estas figuras são vistas em microscopia fotônica, (ampliação x120), das vilosidades do duodeno e do jejuno.

[0092] A figura 1 representa as vilosidades do duodeno dos ratos não tendo recebido, em sua alimentação, o complexo enzimático de acordo com a invenção.

[0093] A figura 2 representa as vilosidades do duodeno dos ratos tendo recebido a alimentação incorporando o complexo enzimático de acordo com a invenção.

[0094] A figura 3 mostra as vilosidades do jejuno dos ratos não tendo recebido, em sua alimentação, o complexo enzimático de acordo com a invenção.

[0095] A figura 4 mostra as vilosidades do jejuno dos ratos tendo recebido a alimentação incorporando o complexo enzimático de acordo com a invenção.

[0096] Constata-se, assim, que a adição do complexo enzimático na alimentação dos animais idosos (ratos, frangos, etc.) aumenta o tamanho e o número das vilosidades no duodeno assim como no jejuno. Foram encontrados aumentos indo até 70%.

[0097] Estes resultados podem ser transpostos para as microvilosidades intestinais. Obtém-se, igualmente, resultados similares nos frangos, nos suínos e nos peixes.

[0098] O aumento de superfície desenvolvido permite uma absorção mais rápida dos nutrimentos ou mesmo dos medicamentos.

[0099] Esta melhora da absorção é observada em trutas recebendo uma alimentação contendo um antibiótico. No teste, a alimentação contém 4g/kg de oxitetraciclina e os resultados são lidos após 48 horas. Encontra-se, então, um aumento da concentração tecidular em antibiótico da ordem de 100% no fígado (5,75 em vez de 2,5 micrograma/g), 400% nos músculos (1,75 em vez de 0,32 micrograma/g) e 1000% nos rins (5,75 em vez de 0,5 micrograma/g).

[00100] Obtém-se resultados similares nos frangos e nos suínos.

[00101] Este aumento da densidade pode igualmente ser a origem de um aumento da produção local em compostos fisiologicamente ativos, como os hormônios intestinais.

Claims

1. Utilização de um complexo enzimático compreendendo uma mistura de proteases, obtida por cultivo de uma cepa de Streptomyces fradiae, para a suplementação da alimentação dos animais de criação, caracterizada pelo fato de que, entre estas proteases da mistura, uma das mesmas apresenta um ponto isoelétrico de 7,0 e outra apresenta um ponto isoelétrico de 8,0.

2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a protease cujo ponto isoelétrico é de 7,0 apresenta uma atividade específica de 150.000 unidades Anson/mg de proteínas.

3. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a protease cujo ponto isoelétrico é de 8,0 apresenta uma atividade específica de 38.000 unidades Anson/mg de proteínas.

4. Utilização de acordo com uma das reivindicações anteriores, caracterizadapelo fato de ser do complexo enzimático como complemento alimentício sob forma de pó, líquido ou qualquer outra forma adaptada para a mistura às composições alimentícias para melhorar o estado geral dos animais de criação industrial.

5. Utilização de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o complexo enzimático sob a forma de pó é misturado com uma composição alimentícia a seco até homogeneidade em um tambor giratório.

6. Utilização de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o complexo enzimático sob forma líquida é pulverizado em leito fluidizado sobre uma composição alimentícia, depois granulado.

7. Utilização de acordo com uma das reivindicações anteriores, caracterizadapelo fato de ser na alimentação de aves domésticas.

8. Utilização de acordo com uma das reivindicações 1 a 6, caracterizadapelo fato de ser na alimentação dos suínos.

9. Utilização de acordo com uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de ser na alimentação dos peixes.

10. Composição alimentícia para animais de criação, caracterizada pelo fato de compreender o complexo enzimático compreendendo uma mistura de proteases, obtida por cultivo de uma cepa de Streptomyces fradiae, para a suplementação da alimentação dos animais de criação, em que entre estas proteases da mistura, uma das mesmas apresenta um ponto isoelétrico de 7,0 e outra apresenta um ponto isoelétrico de 8,0 e eventualmente incluindo excipientes ou veículos com finalidades nutritivas.

11. Processo de fabricação do complexo enzimático de acordo com uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que se coloca em cultura uma cepa de Streptomyces fradiae em um meio de cultura que pode ser à base de 15 g/l de farinha de soja; 30 g/l de glicose; 1 g/l de fosfato bipotássico; 10 g/l de carbonato de cálcio, em que se filtra o mosto de fermentação, em que se procede, em seguida, a uma extração do complexo enzimático por ultrafiltração e cromatografia de troca de íons seguido por uma isoeletrofocalização e, por último, liofiliza-se o complexo obtido.