BR112015002285B1 - Uso do composto 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona para tratar ou gerenciar câncer - Google Patents

Abstract

USOS DO COMPOSTO 3-(4-((4-(MORFOLINOMETIL)BENZIL)OXI)-1- OXOISOINDOLINO-2-IL)PIPERIDINA-2,6- DIONA, MÉTODOS PARA PREVER E MONITORAR A RESPOSTA TUMORAL AO TRATAMENTO DE UM PACIENTE COM LINFOMA NÃO- HODGKIN, E PARA MONITORAR A ADESÃO DO PACIENTE A UM PROTOCOLO DE TRATAMENTO DO FÁRMACO DE UM PACIENTE COM LINFOMA NÃO-HODGKIN, KIT PARA PREVER A RESPOSTA TUMORAL AO TRATAMENTO COM 3-(4-((4(MORFOLINOMETIL)BENZIL)OXI) -1- OXOISOINDOLINO-2-IL)PIPERIDINA-2,6-DIONA, MÉTODOS DE SELEÇÃO DE UM GRUPO DE PACIENTES COM CÂNCER, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E , KIT. São aqui fornecidos métodos de tratamento, prevenção e / ou gestão de cânceres, que compreendem administrar a um paciente 3-(4-((4- (morfolinometil) benzil) oxi) -1-oxoisoindolino-2-il) piperidina-2,6 -diona, ou um enanciômero ou uma mistura dos enanciômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

Description

[001] Este pedido reivindica prioridade dos Pedidos Provisórios dos Estados Unidos Nos. 61/681,447, depositado em 9 de agosto de 2012 e 61/722,727, depositado em 5 de novembro de 2012, ambos os quais são aqui incorporados por referência na sua totalidade.

1. CAMPO

[002] São aqui fornecidos métodos de tratamento, prevenção e/ou administração de cânceres, que compreendem a administração a um paciente de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6 - diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

2. FUNDAMENTOS 2.1 PATOBIOLOGIA DO CÂNCER

[003] O câncer é caracterizado principalmente por um aumento no número de células anormais derivadas de um determinado tecido normal, invasão dos tecidos adjacentes por estas células anormais, ou disseminação linfática ou por via sanguínea das células malignas para os nódulos linfáticos regionais e para locais distantes (metástases). Os dados clínicos e estudos de biologia molecular indicam que o câncer é um processo de várias etapas que começa com alterações pré-neoplásicas menores, que podem em determinadas condições progredir para neoplasia. A lesão neoplásica pode evoluir clonalmente e desenvolver uma capacidade crescente de invasão, crescimento, metástase e heterogeneidade, especialmente sob condições em que as células neoplásicas escapam à vigilância imunitária do hospedeiro. Roitt, I., Brostoff, J e Kale, D., Immunology, 17,1-17,12 (3^ ed., Mosby, St. Louis, Mo., 1993).

[004] Há uma enorme variedade de cânceres que são descritas em detalhe na literatura médica. Exemplos incluem o câncer do pulmão, cólon, reto, próstata, mama, cérebro e intestino. A incidência de câncer continua a subir com o envelhecimento da população em geral, como novos tipos de câncer se desenvolver, e como populações suscetíveis (por exemplo, crescimento das pessoas infectadas com AIDS ou excessivamente expostas à luz solar). Por conseguinte, existe uma tremenda procura de novos métodos e composições que podem ser usados para tratar pacientes com câncer.

[005] Muitos tipos de cânceres são associados com a formação de novos vasos sanguíneos, um processo conhecido como angiogênese. Vários dos mecanismos envolvidos na angiogênese induzida por tumores foram elucidados. O mais direto destes mecanismos é a secreção pelas células tumorais de citocinas com propriedades angiogênicas. Exemplos destas citocinas incluem o fator de crescimento de fibroblasto acídico e básico (a, b-FGF), angiogenina, fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), e TNF-α. Alternativamente, as células tumorais podem liberar os peptídeos angiogênicos através da produção de proteases e a subsequente quebra da matriz extracelular, onde algumas citocinas são armazenadas (por exemplo, b FGF). A angiogênese também pode ser induzida indiretamente, através do recrutamento de células inflamatórias (especialmente de macrófagos) e a sua subsequente liberação de citocinas angiogênicos (por exemplo, TNF α, b FGF).

[006] Linfoma se refere a cânceres que se originam no sistema linfático. Linfoma é caracterizado por tumores malignos dos linfócitos - linfócitos-B e linfócitos T (isto é, células B e células T). Linfoma geralmente começa em coleções ou gânglios linfáticos ou do tecido linfático de órgãos incluindo, mas não limitado a, estômago ou intestinos. Linfoma pode envolver a medula óssea e do sangue, em alguns casos. O linfoma pode se espalhar de um local para outras partes do corpo.

[007] O tratamento de várias formas de linfomas é descrito, por exemplo, na patente de invenção U.S. n. 7,468,363, cuja totalidade é aqui incorporada por referência. Tais linfomas incluem, mas não estão limitados a, linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, linfoma cutâneo de células B, ativado linfoma de células B, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), linfoma das células do manto (MCL), linfoma dos centros foliculares, linfoma transformadas, linfoma linfocítico de diferenciação intermédia, linfoma linfocítico de intermediário (Ill), linfoma difuso linfocítica pouco diferenciado (PDL), o linfoma centrocítico, linfoma difuso de pequenas células clivado (DSCCL), linfomas de células T periféricas (LPCT), T cutâneo linfoma e célula da zona do manto e linfoma folicular de baixo grau.

[008] O linfoma não-Hodgkin (NHL) é o quinto tipo de câncer mais comum para homens e mulheres nos Estados Unidos, com uma estimativa de 63.190 novos casos e 18.660 mortes em 2007. Jemal A, et al, CA Cancer J Clin 2007.; 57 (1): 43-66. A probabilidade de desenvolver NHL aumenta com a idade e a incidência de NHL em idosos tem vindo a aumentar na última década, causando preocupação com a tendência de envelhecimento da população dos EUA. Id. Clarke C A, et al, Câncer., 2002; 94 (7): 2015-2023.

[009] O linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) é responsável por aproximadamente um terço de linfomas não-Hodgkin. Embora alguns pacientes de DLBCL sejam curados com quimioterapia tradicional, o restante morre da doença. Fármacos anticancerígenos causam depleção rápida e persistente de linfócitos, possivelmente por indução de apoptose em células maduras direta T e B. Veja K. Stahnke. et al, Blood 2001, 98: 3066-3073. Contagem absoluta de linfócitos (ALC) tem mostrado ser um fator de prognóstico em resultados recentes de linfoma e de um linfoma não-Hodgkin sugeriram que a ALC em diagnóstico é um importante fator de prognóstico no linfoma difuso de células B grandes. Veja D. Kim et al, Journal of Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Parte I. Vol 25, No. 18S (20 de junho Suplemento), 2007: 8082.

[010] A leucemia se refere a neoplasias malignas dos tecidos formadores de sangue. Várias formas de leucemias são descritas, por exemplo, na patente de invenção U.S. n. 7.393.862 e Pedido de Patente Provisório U.S. no. 60/380.842, depositado em 17 de maio de 2002, a totalidade das quais são aqui incorporadas por referência. Embora os vírus causem supostamente várias formas de leucemia em animais, as causas de leucemia nos humanos são em grande parte desconhecida. O Manual Merck, 944-952 (17th ed., 1999). Transformação em malignidade ocorre tipicamente em uma única célula através de dois ou mais passos com proliferação subsequente e expansão clonal. Em algumas leucemias, translocações cromossômicas específicas foram identificadas com a morfologia das células leucêmicas consistente e características clínicas especiais (por exemplo, as translocações de 9 e 22 na leucemia mielóide crônica, e de 15 e 17 em leucemia promielocítica aguda). As leucemias agudas são predominantemente populações de células indiferenciadas e leucemias crônicas formas de células mais maduras.

[011] As leucemias agudas estão divididas em tipos linfoblástica (ALL) e não-linfoblástica (ANLL). O Manual Merck, 946-949 (17th ed., 1999). Elas podem ser subdivididas por sua aparência morfológica e citoquímica de acordo com a classificação Francesa-Americana-Britânica (FAB) ou de acordo com seu tipo e grau de diferenciação. O uso de células B e T específicas e de e anticorpos monoclonais de antígeno de mielóide são mais úteis para a classificação. ALL é predominantemente uma doença da infância que é estabelecida por exames laboratoriais e exame da medula óssea. ANLL, também conhecida como leucemia mielóide aguda ou leucemia mieloblástica aguda (AML), ocorre em todas as idades e é a leucemia aguda mais comum entre adultos; é a forma usualmente associada à radiação como agente causador.

[012] Leucemias crônicas são descritas como sendo linfocítica (CLL) ou mielocítica (CML). O Manual Merck, 949-952 (17th ed., 1999). CLL é caracterizada pelo aparecimento de linfócitos maduros no sangue, medula óssea e órgãos linfóides. A característica principal da CLL é sustentada, linfocitose absoluta (> 5000/μL) e um aumento dos linfócitos na medula óssea. A maior parte dos doentes com CLL têm também expansão clonal dos linfócitos com características de células-B. CLL é uma doença de meia-idade ou idade avançada. Na CML, o aspecto característico é a predominância de células granulocíticas de todos os estágios de diferenciação no sangue, medula óssea, fígado, baço e outros órgãos. No paciente sintomático no momento do diagnóstico, a contagem total de glóbulos brancos (WBC) é geralmente de cerca de 200.000/μl, mas pode chegar a 1.000.000/μL. CML é relativamente fácil de diagnosticar por causa da presença do cromossomo Filadélfia.

[013] Em adição à categorização aguda e crônica, neoplasmas também são classificados com base nas células que dão origem a um tal distúrbio na precursora ou periférica. Ver, por exemplo, publicação da patente EUA n. 2008/0051379, a divulgação da qual é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Neoplasmas precursores incluem ALLs e linfomas linfoblásticos e ocorrem em linfócitos antes de terem diferenciado em qualquer uma das células T ou B. Neoplasmas periféricos são aqueles que ocorrem em linfócitos que se diferenciaram em qualquer tipo de células T ou B. Tais neoplasmas periféricos incluem, mas não estão limitados a, CLL de células B, leucemia prolinfocítica das células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma das células do manto, linfoma folicular, linfoma de zona marginal de células B extranodal de tecido linfóide associado às mucosas, linfoma da zona marginal nodal , linfoma esplênico de zona marginal, leucemia de células pilosas, plasmocitoma, linfoma difuso de células B grandes e linfoma de Burkitt. Em mais de 95 por cento dos casos de CLL, a expansão clonal de uma linhagem é de células B. Veja Câncer: Princípios e Prática de Oncologia (3rd Edition) (1989) (pp 1843-1847.). Em menos de 5 por cento dos casos de CLL, as células de tumor têm um fenótipo de células T. Não obstante a estas classificações, no entanto, o comprometimento patológico da hematopoiese normal é a marca registrada de todas as leucemias.

[014] O mieloma múltiplo (MM) é um câncer de células plasmáticas da medula óssea. Normalmente, as células de plasma produzem anticorpos e desempenham um papel fundamental na função imune. No entanto, o crescimento descontrolado das células destas leva à dor óssea e fraturas, anemia, infecções e outras complicações. O mieloma múltiplo é a segunda neoplasia hematológica mais comum, embora as causas exatas do mieloma múltiplo permanecem desconhecidas. O mieloma múltiplo provoca níveis elevados de proteínas no sangue, urina, e de órgãos, incluindo, mas não se limitando a proteína M e outras imunoglobulinas (anticorpos), albumina, e beta- 2-microglobulina. Proteína H, proteína curta para monoclonal, também conhecida como para proteína, é uma proteína especialmente anormal produzida pelas células plasmáticas mieloma e podem ser encontradas no sangue ou na urina de quase todos os pacientes com mieloma múltiplo.

[015] Sintomas esqueléticos, incluindo dor óssea, estão entre os sintomas mais clinicamente significativos de mieloma múltiplo. Células plasmáticas malignas liberam fatores estimulantes osteoclastos (incluindo IL-1, IL-6 e TNF) que causam cálcio a ser lixiviado a partir de ossos que causam lesão lítica; hipercalcemia é outro sintoma. Os fatores de estimulação de osteoclastos, também referidos como citocinas, podem impedir a apoptose, ou a morte das células do mieloma. Cinqüenta por cento dos pacientes apresentam lesões ósseas radiologicamente detectáveis relacionadas com mieloma no momento do diagnóstico. Outros sintomas clínicos comuns para o mieloma múltiplo incluem polineuropatia, anemia, hiperviscosidade, infecções, e insuficiência renal.

[016] Os tumores sólidos são massas anormais de tecido que pode, mas geralmente não contêm cistos ou áreas líquidas. Os tumores sólidos podem ser benignos (não câncer), ou malignos (câncer). Diferentes tipos de tumores sólidos são indicados para o tipo de células que os formam. Exemplos de tipos de tumores sólidos incluem, mas não estão limitados a melanoma maligno, carcinoma adrenal, carcinoma da mama, câncer de células renais, carcinoma do pâncreas, carcinoma de células não-pequenas do pulmão (NSCLC) e carcinoma primário desconhecido. As drogas normalmente administradas a pacientes com diversos tipos ou fases de tumores sólidos incluem, mas não estão limitados a, celebrex, etoposido, ciclofosfamida, docetaxel, apecitabina, IFN, tamoxifeno, IL- 2, GM-CSF, ou uma combinação dos mesmos.

[017] Enquanto pacientes que conseguem uma remissão completa após a terapia inicial tem uma boa chance de cura, menos de 10 % das pessoas que não respondem ou têm recaída conseguem uma cura ou uma resposta com duração superior a 3 anos. Ver Cerny T, et al, Ann Oncol., 2002; 13 Suppl 4: 211-216.

[018] Rituximab é conhecido por destruir as células normais do host B. Ver M. Aklilu et al, Annals of Oncology. 15: 1109-1114, 2004. Os efeitos imunológicos em longo prazo da depleção de células B com rituximab e as características do conjunto de células B de reconstituição em pacientes com linfoma não são bem definidos, apesar da utilização generalizada desta terapia. Veja Jennifer H. Anolik et al., Imunologia Clínica, vol. 122, número 2, fevereiro de 2007, páginas 139145.

[019] A abordagem para pacientes com doença recorrente ou refratária depende fortemente de tratamentos experimentais seguida de transplante de células-tronco, que podem não ser apropriadas para pacientes com um nível de desempenho baixo ou idade avançada. Portanto, existe uma procura tremenda para novos métodos que podem ser utilizados para tratar pacientes com NHL.

[020] A ligação entre o câncer de um metabolismo celular alterado foi bem estabelecida. Ver Cairns, R. A., et al. Natureza Rev., 2011, 11: 85-95. Compreendendo o metabolismo das células do tumor e as alterações genéticas das mesmas pode conduzir à identificação de métodos melhorados de tratamento de câncer. Id. Por exemplo, a sobrevivência e a proliferação da célula tumorais através de um aumento do metabolismo de glicose têm sido ligadas à via PIK3, em que mutações em genes supressores de tumor, tais como PTEN ativam o metabolismo das células do tumor. Id. AKT1 (aka, PKB) estimula o metabolismo da glicose associada com crescimento de células tumorais por várias interações com PFKFB3, ENTPD5, mTOR e TSC2 (aka, tuberina). Id.

[021] Fatores de transcrição HIF1 e HIF2 são amplamente responsáveis pela resposta celular a condições de baixo oxigênio, muitas vezes associados a tumores. Id. Uma vez ativado, HIF1 promove a capacidade de células tumorais em realizar a glicólise. Id. Assim, a inibição de HIF1 pode retardar ou reverter o metabolismo das células do tumor. Ativação de HIF1 tem sido associada a PI3K, proteínas supressoras de tumor, tais como BVS, desidrogenase de succinato (SDH) e hidratase de fumarato. Id. O fator de transcrição MYC oncogênico também tem sido associado ao metabolismo da célula tumoral, especificamente a glicólise. Id. MYC também promove a proliferação celular por vias metabólicas de glutamina. Id.

[022] Proteína quinase ativada por AMP (AMPK) funciona como um ponto de verificação metabólico que células tumorais devem superar para proliferar. Id. Várias mutações foram identificadas que suprimem a sinalização AMPK em células tumorais. Veja Shackelford, D.B. & Shaw, RJ, Nature Cancer Rev. 2009, 9: 563-575. STK11 foi identificado como um gene supressor de tumor relacionado com o papel de AMPK. Ver Cairns, R. A., et al. Natureza Rev., 2011, 11: 85-95.

[023] O fator de transcrição p53, um supressor de tumor, também tem um papel importante na regulação do metabolismo celular. Id. A perda de p53 em células tumorais pode ser um contribuinte significativo para as alterações no metabolismo das células do tumor para a via glicolítica. Id. O fator de transcrição OCT1, um outro alvo potencial para agentes quimioterapêuticos, pode cooperar com p53 em regular o metabolismo da célula de tumor. Id.

[024] Quinato de piruvato M2 (PKM2) promove alterações no metabolismo celular que conferem vantagens metabólicas nas células cancerígenas, apoiando a proliferação celular. Id. Por exemplo, as células de câncer de pulmão que expressam PKM2 sobre PKM1 foram encontradas como tendo essa vantagem. Id. Na clínica, PKM2 foi identificado como sendo sobre- expresso em um certo número de tipos de câncer. Id. Assim PKM2 pode ser um biomarcador útil para a detecção precoce de tumores.

[025] Mutações em desidrogenases de isocitrato IDH1 e IDH2 têm sido associadas a tumorigênese, especificamente, no glioblastoma e leucemia mielóide aguda. Ver Mardis, E. R. et al., N. Engl. J. Med 2009, 361: 1058-1066; Parsons, D.W. et al, Science, 2008, 321: 1807-1812.

[026] A incidência de câncer continua a subir com o envelhecimento da população em geral, como novos tipos de câncer se desenvolvendo, e como populações suscetíveis (por exemplo, as pessoas infectadas com AIDS, os idosos ou excessivamente expostos à luz solar) crescem. Por conseguinte, existe uma tremenda procura por novos métodos, tratamentos e composições que podem ser usados para tratar pacientes com câncer, incluindo, mas não limitados àqueles com linfoma, NHL, mieloma múltiplo, AML, leucemia, e tumores sólidos.

[027] Por conseguinte, compostos que podem controlar e/ou inibir a angiogênese indesejada ou inibem a produção de certas citocinas, incluindo o TNF α, podem ser úteis no tratamento e prevenção de várias formas de câncer.

2.2 MÉTODOS DE TRATAMENTO DE CÂNCER

[028] Terapia de câncer atual pode envolver cirurgia, quimioterapia, terapia hormonal e/ou tratamento com radiação para erradicar as células neoplásicas em um paciente (ver, por exemplo, Stockdale, 1998, Medicine, vol. 3, Rubenstein e Federman, eds., Capítulo 12, Seção IV). Recentemente, a terapia de câncer também pode envolver terapia biológica ou imunoterapia. Todas estas abordagens podem representar desvantagens significativas para o paciente. A cirurgia, por exemplo, pode ser contraindicada devido à saúde de um paciente ou pode ser inaceitável para o paciente. Além disso, a cirurgia pode não remover completamente o tecido neoplásico. A terapia de radiação só é eficaz quando o tecido neoplásico apresenta uma maior sensibilidade à radiação do que o tecido normal. A terapia de radiação também pode provocar frequentemente efeitos secundários graves. A terapia hormonal é raramente indicada por um único agente. Embora a terapia hormonal possa ser eficaz, é frequentemente usada para prevenir ou retardar a recorrência de câncer após outros tratamentos terem removido a maioria das células cancerosas. Certas terapias biológicas e outras são em número limitado e podem causar efeitos secundários, tais como erupções cutâneas ou inchaços, sintomas semelhantes aos da gripe, incluindo febre, calafrios e fadiga, problemas do aparelho digestivo ou reações alérgicas.

[029] No que se refere à quimioterapia, existe uma variedade de agentes quimioterapêuticos disponíveis para tratamento de câncer. Um certo número de agentes quimioterapêuticos do câncer atuam por inibição da síntese do DNA, quer direta, quer indiretamente através da inibição da biossíntese de precursores de trifosfato de desoxirribonucleotídeo, para impedir a replicação de DNA e divisão celular concomitante. Gilman et al, Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics @, Décima Ed. (McGraw-Hill, Nova Iorque).

[030] Apesar da disponibilidade de uma variedade de agentes quimioterapêuticos, a quimioterapia tem muitos inconvenientes. Stockdale, Medicina, vol. 3, Rubenstein e Federman, eds., Cap. 12, set. 10, 1998. Quase todos os agentes quimioterapêuticos são tóxicos, e a quimioterapia provoca efeitos colaterais significativos e muitas vezes perigosos, incluindo náuseas, depressão da medula óssea, e imunossupressão. Além disso, até mesmo com administração de combinações de agentes quimioterapêuticos, muitas células de tumor são resistentes ou desenvolvem resistência aos agentes quimioterapêuticos. Na verdade, as células resistentes aos agentes quimioterapêuticos particulares usados no protocolo de tratamento, muitas vezes revelam-se resistentes a outras drogas, mesmo que esses agentes atuem por um mecanismo diferente que dos medicamentos utilizados no tratamento específico. Este fenômeno é conhecido como resistência a múltiplos fármacos. Por causa da resistência a drogas, muitos cânceres provar refratário para os protocolos de tratamento padrão de quimioterapia.

[031] Existe uma necessidade significativa para métodos seguros e eficazes para o tratamento, prevenção e gestão de câncer, especialmente para cânceres que são refratários aos tratamentos convencionais, tais como cirurgia, radioterapia, quimioterapia e terapia hormonal, enquanto reduzindo ou evitando as toxicidades e/ou efeitos laterais associados com as terapias convencionais.

2.3 CEREBLON

[032] A proteína cereblon (CRBN) é uma proteína de 442 amino ácidos conservados de planta para humano. Em humanos, o gene CRBN foi identificado como um gene candidato de um retardo mental não sindrômico recessivo autossomal (ARNSMR). Ver Higgins, J. J. et al, Neurology, 2004, 63:. 1927-1931. CRBN foi caracterizada inicialmente como uma nova proteína contendo RGS que interagiu com uma proteína de canal de potássio ativada por cálcio (SLO1) no cérebro de ratos, e depois foi mostrado interagir com um canal de cloreto regulado pela voltagem (CIC-2) na retina com AMPK7 e DDB1. Ver Jo, S. et al, J. Neurochem, 2005, 94:. 1212-1224; Hohberger B. et al, FEBS Lett, 2009, 583:. 633637; Angers S. et al, Nature, 2006, 443:. 590-593. DDB1 foi originalmente identificado como uma proteína de reparação de excisão de nucleotídeos que se associam com a proteína de ligação de DNA danificado 2 (DDB2). Sua atividade defeituosa provoca o defeito de reparação nos pacientes com xeroderma pigmentoso de complementação do grupo E (XPE). DDB1 também parece funcionar como uma componente de numerosos complexos de ligase de ubiquitina-proteína E3 de DCX distintos (DDB1-CUL4-X-box) que medeiam a ubiquitinação e subsequente degradação de proteínas alvo do proteossoma. CRBN também tem sido identificada como um alvo para o desenvolvimento de agentes terapêuticos para doenças do córtex cerebral. Veja-se WO 2010/137547 A1.

[033] Cereblon foi recentemente identificado como um alvo molecular de chave que liga a talidomida a causar defeitos de nascimento. Ver Ito, T. et al, Science, 2010, 327: 1345-1350. DDB1 foi descoberto a interagir com CRBN e, assim, foi indiretamente associado com a talidomida. Além disso, a talidomida foi capaz de inibir a auto-ubiquitinação de CRBN in vitro, sugerindo que a talidomida é um inibidor da ubiquitina-ligase E3. É importante notar que esta atividade foi inibida pela talidomida em células do tipo selvagem, mas não em células com sítios de ligação CRBN mutadas que previnem ligação talidomida. O local de ligação a talidomida foi mapeado para uma região altamente conservada do ácido C-terminal de 104 aminoácidos em CRBN. Mutantes pontuais individuais em CRBN, Y384A e W386A foram ambos com defeito para a ligação talidomida, com o mutante de duplo ponto de ter a menor atividade de ligação de talidomida. A ligação entre CRBN e o efeito teratogênico da talidomida foi confirmada em modelos animais de embriões zebra-peixe e galinha.

[034] Compreender talidomida e outras drogas alvo permitirá a definição dos mecanismos moleculares de eficácia e/ou toxicidade e pode conduzir a melhores drogas com perfis de eficácia e de toxicidade.

[035] Células de plasma humano (PC) e os seus precursores desempenham um papel essencial na resposta imunológica humoral, mas igualmente dão origem a uma variedade de desordens de células B malignas, incluindo o mieloma múltiplo. A diferenciação das células B em células plasmáticas secretoras de anticorpos é um componente essencial da resposta imunitária. Ver Jacob et al., Autoimmunity 2010, 43 (1), 84-97. Um pequeno número de fatores de transcrição foi identificado que guia o programa de desenvolvimento que conduz à diferenciação de células plasmáticas. PAX5 e BCL6 são expressos em células B ativadas e atuam predominantemente através da repressão por diferenciação. PAX5 reprime genes associados com um certo número de genes, incluindo PRDM1 (o gene que codifica a proteína BLIMP-1), XBP1, e IGJ (cadeia J). BCL6 suprime o desenvolvimento de células plasmáticas, em parte, ao reprimir PRDM1. Ver Jourdan et al, Blood 2009, 114 (10), 5.1735.181.; Kallies et al, Immunity 2007, 26 (5), 555-566.; Lenz et al., N. Engl. J. Med. 2010, 362, 1417-1429. A diferenciação e alta de imunoglobulina (Ig) também requerem a secreção de IRF-4, a XBP-1, e BLIMP-1. Expressão de IRF-4 aumenta acentuadamente após diferenciação, o que é essencial para a formação de células de plasma e secreção de Ig. XBP-1 controla diretamente aspectos da via secretora e é fortemente induzido em células de plasma por uma combinação de perda de repressão de genes mediada por PAX5 e controle pós-transcricional. BLIMP-1 é expressa em células de plasma, mas está ausente a partir de fases anteriores da ontogenia das células B. Ver Jourdan et al, Blood 2009, 114 (10), 5.173-5.181.; Kallies et al, Immunity 2007, 26 (5), 555-566.; Lenz et al., N. Engl. J. Med. 2010, 362, 1417-1429. Lenalidomida, um composto imunomodulador, tem sido demonstrado ser eficaz no tratamento de mieloma múltiplo e linfomas ABC. As atividades potenciais de compostos imunomoduladores sobre as células B normais incluem a ativação ou inibição de células CD19 + B virgens (dependendo do estímulo). Nas células tumorais B, compostos imunomodulatórios inibem o mieloma múltiplo e proliferação delinfoma, induzem gene supressor de tumor (inibidores da quinase dependente da ciclina p21, p27 etc.), F-atina polimerização e CD20 agrupamento em MCL e CLL, também inibem a C/EBP, IRF4, BLIMP-1, e XBP-1 na expressão MM, e inibem a ativação do NF-kB em células de linfoma de ABC.

[036] CD44 (Pgp-1, H-CAM; Hermes; RCC III; HUTCH-1) é expressa em leucócitos, eritrócitos e células epiteliais. É o receptor para o hialuronano, um componente principal das matrizes extracelulares e medeia a adesão dos leucócitos, e participa em uma grande variedade de funções celulares, incluindo a ativação de linfócitos (também considerado um marcador de células B ativadas), recirculação e homing, hematopoiese e metástase tumoral. Ver Cichy et al., Journal of Cell Biology 2003, 161 (5), 839-843. CD83 (BL11; HB15; proteína de ativação da célula B) é expresso em células B e células-T após a ativação das células, células dendríticas, células de Langerhans e linfócitos. Ele também expressa por células B sobre ativação e contribui para a regulação da função das células B, e expressa pelas células B imaturas e regula negativamente sua posterior maturação e sobrevivência na periferia. Veja Breloer et al., Trends in Immunology 2008, 29 (4), 186-194. Gene da cadeia Igj (cadeia juntando imunoglobulina) é expresso só após a diferenciação terminal das células B em células de plasma por uma Ag e/ou estimulação de citocinas. A cadeia de Igj expressa é incorporada em um pentâmero de IgM ou um dímero de IgA, e é necessário tanto para a secreção celular e da mucosa dos Abs. Expressão da cadeia alta J em pacientes de artrite reumatóide (AR) prevê falta de resposta ao rituximab. Níveis de mRNA basais elevados de IGJ (um marcador para plasmablastos secretores de anticorpos) mostraram redução nas taxas de resposta clínica ao rituximab. Veja Owczarczyk et al., Science Translational Medicine 2011, 3 (101), 92.

[037] Existe também uma necessidade de compostos potentes que interagem com cereblon e subsequentemente inibem a diferenciação das células B para a linhagem de células de plasmoblasto / plasma. Um tal composto pode inibir o desenvolvimento e/ou sobrevivência de células plasmáticas e plasmablastos, e reduzir a produção de autoanticorpos patogênicos, levando à diminuição da sintomatologia de doenças em que a superprodução de autoanticorpos é inerente a patofisiologia.

3. RESUMO

[038] São aqui proporcionados métodos para o tratamento e prevenção do câncer, incluindo o câncer primário e metastático, bem como o câncer que é refratário ou resistente a quimioterapia convencional, que compreende a administração a um paciente em necessidade de tal tratamento ou prevenção, uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de 3- (4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, que tem a estrutura de Fórmula I:

ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, como um agente único ou como parte de uma terapia de combinação.

[039] Em uma forma de realização, o composto é (S)-3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, que tem a estrutura de Fórmula (I-S):

[040] Em uma forma de realização, o composto é (R)-3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, que tem a estrutura da Fórmula I-R :

[041] Também são fornecidos aqui métodos de gestão do câncer (por exemplo, impedindo a sua recorrência, ou aumentando o tempo de remissão), os quais compreendem a administração a um paciente com necessidade de tal gestão de uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de 3-(4- ((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, farmaceuticamente ou um polimorfo do mesmo.

[042] Além disso, são proporcionados aqui métodos para tratar, prevenir, ou na gestão de câncer, compreendendo a administração a um paciente em necessidade de tal tratamento, prevenção, ou a administração de uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz da 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo do mesmo; em combinação com uma terapia convencionalmente usada para tratar, prevenir ou controlar o câncer. Exemplos de tais terapias convencionais incluem, mas não estão limitados a, cirurgia, quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, terapia biológica, e imunoterapia.

[043] É aqui proporcionado um método para o tratamento, prevenção, ou na gestão de câncer, compreendendo a administração a um paciente em necessidade de tal tratamento, prevenção ou gestão de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, em uma quantidade que é suficiente para proporcionar uma concentração do composto no plasma, no estado estacionário, de cerca de 0,001 a cerca de 100 μM. Em uma outra forma de realização, a quantidade é suficiente para proporcionar uma concentração de pico no plasma do composto, no estado estacionário, de cerca de 0,001 a cerca de 100 μM. Em uma outra forma de realização, a quantidade é suficiente para proporcionar uma concentração plasmática mínima do composto, no estado estacionário, de cerca de 0,01 a cerca de 100 μM. Em uma outra forma de realização, a quantidade é suficiente para proporcionar uma área sob a curva (AUC) do composto, variando de cerca de 100 a cerca de 100.000 ng * hr/mL.

[044] Em certas formas de realização, são proporcionados aqui métodos para o tratamento ou gestão de linfoma, mieloma múltiplo, leucemia, e tumores sólidos.

[045] Em algumas formas de realização, o linfoma é selecionado a partir do grupo que consiste em linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, linfomas relacionados com AIDS, linfoma de células grandes anaplásicas linfoma angioimunoblástico, linfoma de células NK blásticas, linfoma de Burkitt, linfoma de Burkitt-like (pequeno linfoma de células não clivadas, linfoma linfocítico de pequenas, linfoma de célula T cutâneo, difuso de grandes células B do linfoma, linfoma de células T do tipo enteropatia, linfoma linfoblástico, linfoma das células do manto, linfoma de zona marginal, linfoma das células T nasal, linfoma pediátrica , linfomas de células T periféricas, linfoma do sistema nervoso central primário, linfomas transformadas, linfomas de células T relacionadas com o tratamento e macroglobulinemia de Waldenstrom.

[046] Em algumas formas de realização, a leucemia é selecionada dentre o grupo consistindo em leucemia mielóide aguda (LMA), leucemia de células T, leucemia mielóide crônica (LMC), leucemia linfocítica crônica (CLL) e leucemia linfoblástica aguda (ALL).

[047] Em algumas configurações, o tumor sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em melanoma, tumores da cabeça e do pescoço, carcinoma da mama, carcinoma do pulmão de células não pequenas, carcinoma do ovário, carcinoma pancreático, carcinoma da próstata, carcinoma coloretal, e carcinoma hepatocelular.

[048] Em algumas formas de realização, são aqui proporcionados métodos para o tratamento ou gestão de linfomas não-Hodgkin, incluindo, mas não limitados a, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), utilizando fatores de prognóstico.

[049] Em algumas formas de realização, são proporcionados aqui métodos para a utilização de marcadores de genes e de proteínas, como um previsor de sensibilidade clínica para linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, AML, e/ou de tumores sólidos e a resposta do paciente ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato , co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[050] Os métodos aqui proporcionados abrangem métodos para a pesquisa ou identificação de pacientes de câncer, por exemplo, linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, AML, e doentes com tumores sólidos, para o tratamento com cloreto de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em particular, são proporcionados aqui métodos para a seleção de pacientes que têm uma maior taxa de resposta à terapia com cloreto de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[051] Em uma forma de realização, é proporcionado aqui um método para prever a resposta do tumor ao tratamento de um linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, AML ou paciente tumor sólido, o método compreendendo a obtenção de tecido tumoral do paciente, a proteína ou um purificador de RNA a partir de o tumor, e medir a presença ou ausência de um biomarcador por, por exemplo, proteína ou análise de expressão gênica. A expressão pode ser monitorada, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína.

[052] Em certas formas de realização, o biomarcador é um gene associado com um fenótipo de células B ativadas de DLBCL. Os genes são selecionados a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1. Em uma forma de realização, o biomarcador é o NF-kB.

[053] Em uma forma de realização, o mRNA ou proteína é purificado a partir do tumor e a presença ou ausência de um biomarcador é medida por análise da expressão do gene ou proteína. Em certas formas de realização, a presença ou ausência de um biomarcador é medida por PCR quantitativo em tempo real (QRT-PCR), de microgama, citometria de fluxo ou imunofluorescência. Em outras formas de realização, a presença ou ausência de um biomarcador é medida por metodologias de imunossorvente ligado a enzima à base de ensaio (ELISA) ou outros métodos semelhantes conhecidos na técnica.

[054] Em uma outra forma de realização, é proporcionado aqui um método de previsão de resposta ao tratamento do tumor em um doente como linfoma não-Hodgkin, o método compreendendo a obtenção de células de tumor do paciente, a cultura das células na presença ou ausência de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato , ou um polimorfo do mesmo, purificando a proteína ou RNA a partir de células cultivadas, e medir a presença ou ausência de um biomarcador por, por exemplo, proteína ou análise de expressão gênica. A expressão pode ser monitorada, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína.

[055] Em uma outra forma de realização, é proporcionado aqui um método de monitoração da resposta do tumor ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, um linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, AML ou paciente de tumor sólido. O método compreende a obtenção de uma amostra biológica do paciente, a medição da expressão de um biomarcador na amostra biológica, a administração de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um seu sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, para o paciente, obtendo-se em seguida uma segunda amostra biológica do paciente, medição da expressão biomarcador na segunda amostra biológica, e comparando os níveis de expressão, em que um aumento do nível de expressão de biomarcadores após tratamento indica a probabilidade de uma resposta tumoral eficaz. Em uma forma de realização, uma diminuição do nível de expressão de biomarcadores após tratamento indica a probabilidade de resposta do tumor eficaz. A expressão de biomarcadores monitorizada pode ser, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína. A expressão na amostra tratada pode aumentar, por exemplo, por cerca de 1,5X, 2,0X, 3X, 5X ou mais.

[056] Em ainda outra forma de realização, um método para a verificação da conformidade do paciente com um protocolo de tratamento de droga é fornecido. O método compreende a obtenção de uma amostra biológica do paciente, medindo o nível de expressão de pelo menos um biomarcador na amostra, e a determinação se o nível de expressão é aumentado ou diminuído na amostra do paciente em comparação com o nível de expressão de uma amostra não tratada de controle, em que uma expressão aumentada ou diminuída indica a conformidade do paciente com o protocolo de tratamento da droga. Em uma forma de realização, a expressão de um ou mais biomarcadores é aumentada. A expressão de biomarcadores monitorada pode ser, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína. A expressão na amostra tratada pode aumentar, por exemplo, por cerca de 1,5X, 2,0X, 3X, 5X ou mais.

[057] Em uma outra forma de realização, é aqui proporcionado um método de prever a sensibilidade ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, em um linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, AML ou paciente de tumor sólido. Em uma forma de realização, o doente é um doente com linfoma não-Hodgkin, especificamente, um paciente DLBCL. O método compreende a obtenção de uma amostra biológica do paciente, opcionalmente, isolar ou purificar o mRNA a partir da amostra biológica, amplificando os transcritos de mRNA por, por exemplo, RT- PCR, em que um nível de linha de base superior de um biomarcador específico indica uma probabilidade maior de que o câncer será ser sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em certas formas de realização, o biomarcador é um gene associado com um fenótipo de células B ativadas. Os genes são selecionados a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1.

[058] Além disso, são proporcionados aqui métodos para o tratamento ou gestão de câncer com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, usando CRBN como um fator preditivo ou de prognóstico. Em certas formas de realização, são proporcionados aqui métodos para o rastreio ou a identificação de pacientes de câncer para tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, usando níveis CRBN como um fator preditivo ou de prognóstico. Em algumas formas de realização, são proporcionados aqui métodos para a seleção de pacientes que têm uma maior taxa de resposta à terapia com cloreto de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, usando níveis CRBN como um fator preditivo ou de prognóstico.

[059] Em uma forma de realização, é aqui proporcionado um método para prever a resposta do doente ao tratamento do câncer com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, o método compreendendo a obtenção de material biológico a partir do paciente, e medir a presença ou ausência de CRBN. Em uma forma de realização, o método compreende a obtenção de células cancerosas do paciente, a cultura das células na presença ou ausência de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, purificando a proteína ou RNA a partir de células cultivadas, e medir a presença ou ausência de um biomarcador por, por exemplo, proteína ou análise de expressão gênica. A expressão pode ser monitorizada, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína. Em uma forma de realização, o câncer é o linfoma, leucemia, mieloma múltiplo, tumores sólidos, linfoma ou melanoma não-Hodgkin.

[060] Em uma outra forma de realização, é aqui proporcionado um método de monitoração da resposta do tumor ao tratamento farmacológico em um paciente com câncer. O método compreende a obtenção de uma amostra biológica do paciente, a medição da expressão de um biomarcador na amostra biológica, a administração de um ou mais fármacos ao doente, em seguida obtenção de uma segunda amostra biológica do paciente, a expressão de biomarcadores na segunda amostra biológica, e comparando os níveis de expressão, em que um aumento do nível de expressão de biomarcadores após tratamento indica a probabilidade de uma resposta tumoral eficaz. Em uma forma de realização, o paciente de câncer é um linfoma, leucemia, mieloma múltiplo, tumores sólidos, linfoma ou melanoma paciente não-Hodgkin.

[061] Em uma forma de realização, uma diminuição do nível de expressão de biomarcadores após tratamento indica a probabilidade de resposta eficaz do tumor. A expressão de biomarcadores monitorada pode ser, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína. A expressão na amostra tratada pode aumentar, por exemplo, por cerca de 1,5X, 2,0X, 3X, 5X ou mais. Em uma forma de realização, o tumor é um linfoma, leucemia, mieloma múltiplo, tumores sólidos, linfoma ou melanoma não-Hodgkin.

[062] Em uma outra forma de realização, é aqui proporcionado um método de prever a sensibilidade ao tratamento com droga em um paciente com câncer, especificamente, um mieloma múltiplo ou doente com linfoma não- Hodgkin. O método compreende a obtenção de uma amostra biológica do paciente, opcionalmente, isolar ou purificar o mRNA a partir da amostra biológica, amplificando os transcritos de mRNA por, por exemplo, RT-PCR, em que um nível de linha de base superior de um biomarcador específico indica uma probabilidade maior de que o câncer será ser sensível ao tratamento com um medicamento. Em certas formas de realização, o biomarcador é um gene ou proteína associada ao mieloma múltiplo e linfoma não-Hodgkin. Em uma realização, os genes são os que estão associados com CRBN e são selecionados dentre o grupo que consiste em DDB1, DDB2, GSK3B, CUL4A, CUL4B, a XBP-1, FAS1, RANBP6, DUS3L, PHGDH, AMPK, IRF4 e NFkB. Em uma outra forma de realização, os genes são selecionados a partir do grupo que consiste em DDB1, DDB2, IRF4 e NFkB.

[063] Em uma forma de realização, a identificação de um paciente com linfoma, leucemia, mieloma múltiplo, um tumor sólido, linfoma não-Hodgkin, linfoma difuso de grandes células B ou melanoma sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo seu; identificação de um gene ou proteína associada com CRBN em que a presença do gene ou proteína associada com CRBN é indicativo de linfoma, leucemia, mieloma múltiplo, um tumor sólido, linfoma não-Hodgkin, linfoma difuso de grandes células B ou melanoma sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em uma forma de realização, o gene ou proteína associada com CRBN é selecionado a partir do grupo que consiste em DDB1, DDB2, IRF4 e NFkB.

[064] Em uma forma de realização, a identificação de um paciente com linfoma, leucemia, mieloma múltiplo, um tumor sólido, linfoma não-Hodgkin ou melanoma sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, compreende a medição do nível de atividade em CRBN o paciente. Em uma outra forma de realização, a medição do nível de atividade CRBN no paciente compreende a medição DDB1, DDB2, IRF4 e/ou NFkB em células obtidas a partir do paciente.

[065] Em uma forma de realização, é aqui proporcionado um método para o tratamento ou gestão de linfoma não-Hodgkin, compreendendo: (i) identificação de um paciente com linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, AML ou um tumor sólido sensível ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6- diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo do mesmo; e (ii) a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6- diona, ou um enantiômero do mesmo ou um mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo do mesmo.

[066] Em uma forma de realização, o paciente tem o linfoma não- Hodgkin. Em uma forma de realização, o linfoma de não-Hodgkin é o linfoma difuso de células B grandes. Em uma outra forma de realização, o linfoma de não- Hodgkin é do fenótipo de células B ativadas.

[067] Em uma forma de realização, a identificação de um paciente com linfoma não-Hodgkin sensível ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, incluindo a identificação de um gene associado com o fenótipo de células B ativadas. Em uma forma de realização, o gene associado com o fenótipo de células B ativado é selecionado a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1.

[068] Em uma forma de realização, a identificação de um paciente com linfoma não-Hodgkin sensível ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, compreende a medição do nível de atividade de NF-kB, no paciente. Em uma outra forma de realização, a medição do nível de atividade de NF-kB na paciente compreende a medição do nível basal de atividade de NF-kB em células tumorais obtidas a partir do paciente.

[069] Também aqui são proporcionados kits úteis para prever a probabilidade de tratamento eficaz de um linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, tumor sólido ou AML, ou para a monitoração da eficácia de um tratamento com cloreto de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)- 1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo da mesma. O kit compreende um suporte sólido, e um meio para detectar a expressão de proteína de pelo menos um biomarcador em uma amostra biológica. Tal kit pode empregar, por exemplo, uma vareta, uma membrana, um chip, um disco, uma tira de teste, um filtro, uma microesfera, uma corrediça, uma placa de poços múltiplos, ou uma fibra óptica. O suporte sólido do kit pode ser, por exemplo, um plástico, silício, um metal, uma resina, vidro, uma membrana, uma partícula, um precipitado, um gel, um polímero, uma folha, uma esfera, um polissacarídeo, um capilar, um filme, uma placa ou uma lâmina. A amostra biológica pode ser, por exemplo, uma cultura celular, uma linha celular, um tecido, um tecido oral, tecido gastrointestinal, um órgão, uma organela, um fluido biológico, uma amostra de sangue, uma amostra de urina, ou uma amostra de pele. A amostra biológica pode ser, por exemplo, uma biópsia dos nódulos linfáticos, uma biopsia de medula óssea, ou de uma amostra de células tumorais no sangue periférico.

[070] Em uma forma de realização adicional, é aqui proporcionado um kit útil para prever a probabilidade de um tratamento eficaz ou para monitorizar a eficácia de um tratamento com cloreto de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)- 1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. O kit compreende um suporte sólido, os ácidos nucleicos em contato com o suporte, em que os ácidos nucleicos que são complementares a pelo menos 20, 50, 100, 200, 350, ou mais bases de mRNA, e um meio para detetar a expressão do mRNA em uma amostra biológica.

[071] Em uma outra forma de realização, é aqui proporcionado um kit útil para prever a probabilidade de um tratamento eficaz ou para monitorizar a eficácia de um tratamento com cloreto de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)- 1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. O kit compreende um suporte sólido, pelo menos um ácido nucleico para contactar o suporte, em que o ácido nucleico é complementar a pelo menos 20, 50, 100, 200, 350, 500 ou mais bases de mRNA, e um meio para detectar a expressão do mRNA em uma amostra biológica.

[072] Em certas formas de realização, os kits aqui proporcionados empregam meios para detectar a expressão de um biomarcador a-PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR), de microensaio, citometria de fluxo ou imunofluorescência. Em outras formas de realização, a expressão do marcador é medida por metodologias baseadas em ELISA ou outros métodos semelhantes conhecidos na técnica.

[073] Também aqui são fornecidas composições farmacêuticas que compreendem cerca de 1 a 1000 mg de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[074] Ainda são proporcionados aqui composições farmacêuticas que compreendem cerca de 1 a 1000 mg de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo seu; e um ou mais ingrediente ativo adicional. Em certas formas de realização, o um ou mais ingredientes ativos adicionais são selecionados a partir oblimersen, melfalano, G-CSF, GM-CSF, CSF- GC, o BCG, a EPO, interleucinas, anticorpos monoclonais, anticorpos de câncer, inibidor de COX-2, topotecano, pentoxifilina, ciprofloxacina, taxotere, iritotecan, dexametasona, doxorubicina, vincristina, IL 2, IFN, dacarbazina, Ara-C, vinorelbina, isotretinoína, um inibidor de proteassoma, um inibidor de HDAC, taxanos, rituxan e prednisona.

[075] Também são aqui proporcionados kits úteis para prever a probabilidade de um linfoma eficaz, leucemia, mieloma múltiplo, um tumor sólido, linfoma não-Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes ou tratamento de melanoma ou para a monitoração da eficácia de um tratamento com um ou mais drogas, por exemplo, 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin- 2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. O kit compreende um suporte sólido, e um meio para detectar a expressão de proteína de pelo menos um biomarcador em uma amostra biológica. Tal kit pode empregar, por exemplo, uma vareta, uma membrana, um chip, um disco, uma tira de teste, um filtro, uma microesfera, uma corrediça, uma placa de poços múltiplos, ou uma fibra óptica. O suporte sólido do kit pode ser, por exemplo, um plástico, silício, um metal, uma resina, vidro, uma membrana, uma partícula, um precipitado, um gel, um polímero, uma folha, uma esfera, um polissacarídeo, um capilar, um filme, uma placa ou uma lâmina. A amostra biológica pode ser, por exemplo, uma cultura celular, uma linha celular, um tecido, um tecido oral, tecido gastrointestinal, um órgão, uma organela, um fluido biológico, uma amostra de sangue, uma amostra de urina, ou uma amostra de pele. A amostra biológica pode ser, por exemplo, uma biópsia dos nódulos linfáticos, uma biopsia de medula óssea, ou de uma amostra de células tumorais no sangue periférico.

[076] Em uma outra forma de realização, o kit compreende um suporte sólido, ácidos nucleicos em contato com o suporte, onde os ácidos nucleicos são complementares a pelo menos 20, 50, 100, 200, 350, ou mais bases de mRNA, e um meio para detetar a expressão de o mRNA de uma amostra biológica.

[077] Em certas formas de realização, os kits aqui proporcionados empregam meios para detectar a expressão de um biomarcador PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR), de microensaio, citometria de fluxo ou imunofluorescência. Em outras formas de realização, a expressão do marcador é medida por metodologias baseadas em ELISA ou outros métodos semelhantes conhecidos na técnica.

[078] É também aqui proporcionado um kit que compreende (i) uma composição farmacêutica que compreende 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)- 1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero do mesmo ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo seu; e (ii) uma composição farmacêutica compreendendo o fator de crescimento hematopoiético, citoquina, agente anti-câncer, antibióticos, um inibidor de COX- 2, um agente imunomodulador, agente imunossupressor, corticosteróides, ou um mutante farmacologicamente ativo ou seu derivado, ou uma combinação dos mesmos.

[079] Em uma forma de realização, é aqui proporcionado um kit que compreende (i) uma composição farmacêutica que compreende 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo do mesmo; e (ii) uma composição farmacêutica compreendendo oblimersen, melfalano, G-CSF, GM-CSF, EPO, um inibidor de COX-2, topotecano, pentoxifilina, taxotere, iritotecan, ciprofloxacina, dexametasona, doxorubicina, vincristina, IL 2, IFN, dacarbazina , Ara-C, vinorelbina, ou isotretinoína.

[080] Em uma outra forma de realização, é aqui proporcionado um kit que compreende (i) uma composição farmacêutica que compreende 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo do mesmo; e (ii) o sangue do cordão umbilical, o sangue da placenta, com células-tronco de sangue periférico, a preparação de células tronco hematopoiéticas ou de medula óssea.

4. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[081] FIG. 1 descreve o efeito do composto I na produção de citocina e quimiocina em células T humanas estimuladas por anti-CD3 - quantidade absoluta produzida.

[082] FIG. 2 descreve efeito do composto I-Rna produção de citocina e quimiocina em células T humanas estimuladas por anti-CD3 - porcentagem de controle.

[083] FIG. 3 descreve efeito do composto I-R na produção de citocina e quimiocina em células T humanas estimuladas por anti-CD3 - quantidade absoluta produzida.

[084] FIG. 4 descreve efeito de composto I-R na produção de citocina e quimiocina em células T humanas estimuladas por anti-CD3 - porcentagem de controle.

[085] FIG. 5 descreve efeito do composto I-S na produção de citoquinas e de quimioquinas em células T humanas estimuladas por anti-CD3 - quantidade absoluta produzida.

[086] FIG. 6 descreve efeito de composto I-S na produção de citocina e quimiocina em células T humanas estimuladas por anti-CD3 - porcentagem de controle.

[087] FIG. 7 descreve efeito dos compostos fornecidos aqui na produção de célula NK IFN-Gama na resposta ao IgG e ILÇ-2 imobilizados - quantidade absoluta produzida.

[088] FIG. 8 descreve efeito dos compostos aqui proporcionados sobre produção de células NK de IFN-gama em resposta a IgG e IL-2 imobilizados- porcentagem de quantidade de IFN-gama produzida na presença de um pomalidomida micromolar.

[089] FIG. 9 apresenta efeito dos compostos aqui fornecidos em células NK mediadas por ADC contra células de linfoma Rituximab revestidas.

[090] FIG. 10 descreve efeito dos compostos aqui proporcionados sobre o crescimento induzido pelo fator de proliferação de célula endotelial vascular umbilical humana.

[091] FIG. 11 descreve efeito dos compostos aqui proporcionados sobre a formação do tubo celular endotelial vascular umbilical humano induzido pelo fator de crescimento.

[092] FIG. 12 descreve efeito dos compostos aqui proporcionados sobre a invasão de célula endotelial vascular umbilical humana induzida por fator de crescimento.

[093] FIG. 13 representa os resultados de ensaios de proliferação de composto I-S em combinação com Rituxan.

[094] FIG. 14 representa o efeito anti-proliferativo de compostos aqui proporcionados em várias células DLBCL.

[095] FIG. 15 mostra os resultados de composto I em modelo de angiogênese de matrigel de rato.

[096] FIG. 16 mostra resultados de composto I em modelo de xenotransplante WSU-DLCL2 DLBCL.

[097] FIG. 17 mostra os resultados de composto I-S no modelo xenotransplante DoHH2 - monoterapia.

[098] FIG. 18 apresenta resultados de composto I-S no modelo xenoenxerto DoHH2 - terapia de combinação.

[099] FIG. 19 representa CD31 IHC do composto I-S em tumores de xenoenxerto DoHH2.

[100] FIG. 20 mostra os resultados de composto I em modelo de xenotransplante Rec-1 MCL.

[101] FIG. 21 representa os resultados de compostos aqui proporcionados no modelo de xenoenxerto de NCI-H929 MM.

[102] FIG. 22 representa os resultados de compostos aqui proporcionados no modelo de xenoenxerto de glioblastoma U87.

[103] FIG. 23 representa os resultados de compostos aqui proporcionados no modelo de xenoenxerto de HCT116 colorretal.

[104] FIG. 24 representa os resultados de compostos aqui proporcionados no modelo de xenoenxerto de Hep3B hepatocelular.

[105] FIG. 25 representa resultados de composto I-S em ensaio de competição de afinidade a talidomida.

5. DESCRIÇÃO DETALHADA

[106] São aqui fornecidos métodos para tratar, gerir ou prevenir o câncer, que compreendem a administração a um paciente em necessidade de tal tratamento, gestão, ou prevenção, de uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin- 2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, conforme um agente único ou como parte de uma terapia de combinação. Em algumas formas de realização, o composto é (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona. Em algumas formas de realização, o composto é (R)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona.

[107] Em certas formas de realização, 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com um ou mais fármacos adicionais (ou "segundos agentes ativos") para uso no tratamento, controle ou prevenção de câncer. Os segundos agentes ativos incluem pequenas moléculas e moléculas grandes (por exemplo, proteínas e anticorpos), alguns exemplos dos quais são aqui proporcionados, bem como células estaminais. Métodos ou terapias, que podem ser utilizados em combinação com a administração do composto aqui apresentado e incluem, mas não estão limitados a, cirurgia, transfusões de sangue, imunoterapia, terapia biológica, terapia de radiação, e outras terapias com base não-drogas atualmente usadas para tratar, prevenir ou controlar o câncer. Em certas formas de realização, o composto aqui proporcionado pode ser usado como um adjuvante de vacina.

[108] Em algumas formas de realização, os métodos aqui proporcionados são baseados, em parte, na descoberta de que a expressão de certos genes ou proteínas associadas com certas células cancerosas podem ser utilizados como biomarcadores para indicar a eficácia ou o progresso de um tratamento da doença. Tais cânceres incluem, mas não estão limitados a, linfoma, linfoma não- Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, leucemia mielóide aguda (AML), e tumores sólidos. Em certas formas de realização, o câncer é de fenótipo de células B ativadas no linfoma de não-Hodgkin. Em particular, estes marcadores podem ser usados para prever, avaliar e registrar a eficácia do tratamento do doente com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina- 2,6 -diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[109] Em algumas formas de realização, os métodos aqui proporcionados são baseados, em parte, na descoberta de que cereblon (CRBN) está associado com as atividades anti-proliferativas de certas drogas, tais como 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em algumas formas de realização, CRBN pode ser utilizado como um biomarcador para indicar a eficácia ou o progresso de um tratamento de doença com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin- 2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Sem estar ligado a uma teoria em particular, a ligação pode contribuir ou mesmo CRBN ser necessária para atividades antiproliferativos ou outros de certos compostos, tais como 3- (4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[110] Sem estar limitado por uma teoria particular, 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, pode mediar a inibição do crescimento, a apoptose e inibição de fatores angiogênicos, em certos tipos de câncer, como o linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia , AML, e tumores sólidos. Ao examinar a expressão de diversos genes relacionados com o câncer em vários tipos de células antes e após o tratamento com cloreto de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, descobriu-se que os níveis de expressão de vários genes ou proteínas relacionados com o câncer podem ser utilizados como biomarcadores para prever e monitorar tratamentos de câncer.

[111] Descobriu-se também que o nível de atividade de NF-kB é elevado em células do fenótipo de células B ativadas no linfoma não-Hodgkin em relação a outros tipos de células de linfoma, e que estas células podem ser sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co -cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Isto sugere que a atividade de base da atividade de NF-kB em células de linfoma pode ser um biomarcador de previsão para o tratamento com cloreto de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, em pacientes com linfoma não-Hodgkin.

[112] Por isso, em certas formas de realização, são proporcionados aqui métodos para prever a resposta do tumor ao tratamento em um paciente de linfoma não-Hodgkin. Em uma forma de realização, aqui é proporcionado um método para prever a resposta do tumor ao tratamento no paciente de um linfoma não-Hodgkin, o método compreendendo a obtenção de tecido tumoral do paciente, a proteína purificadora ou RNA do tumor, e medir a presença ou ausência de um biomarcador por, por exemplo, análise de proteína ou expressão de gene. A expressão pode ser monitorizada, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína. Em certas formas de realização, o biomarcador é um gene associado com um fenótipo de células B ativadas de DLBCL. Os genes são selecionados a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1. Em uma forma de realização, o biomarcador é o NF- kB.

[113] Em uma outra forma de realização, o método compreende a obtenção de células de tumor do paciente, a cultura das células na presença ou ausência de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina- 2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, RNA ou proteína purificados a partir das células cultivadas, e medir a presença ou ausência de um biomarcador por, por exemplo, análise de expressão do gene ou da proteína.

[114] Em certas formas de realização, a presença ou ausência de um biomarcador é medida por PCR quantitativo em tempo real (QRT-PCR), de micro arranjo, citometria de fluxo ou imunofluorescência. Em outras formas de realização, a presença ou ausência de um biomarcador é medida por metodologias baseadas em ELISA ou outros métodos semelhantes conhecidos na técnica.

[115] Os métodos aqui proporcionados abrangem métodos para a pesquisa ou identificação de pacientes com câncer, por exemplo, pacientes de linfoma não-Hodgkin, para tratamento com cloreto de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-2-il-1-oxoisoindolin)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em particular, são proporcionados aqui métodos para a seleção de pacientes que têm, ou que são susceptíveis de ter, uma taxa de resposta mais elevada para uma terapia com cloreto de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[116] Em uma forma de realização, o método compreende a identificação de pacientes que possam responder a terapia através da obtenção de células de tumor do paciente, a cultura das células na presença ou ausência de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, purificando o RNA ou proteínas a partir das células cultivadas, e medir a presença ou ausência de um biomarcador específico. A expressão monitorada pode ser, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína. A expressão na amostra tratada pode aumentar, por exemplo, por cerca de 1,5X, 2,0X, 3X, 5X ou mais. Em certas formas de realização, o biomarcador é um gene associado com um fenótipo de células B ativadas. Os genes são selecionados a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1. Em uma forma de realização, o biomarcador é o NF-kB.

[117] Em uma outra forma de realização, é aqui proporcionado um método de monitoração da resposta do tumor ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, em um linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, AML ou um paciente de tumores sólidos. O método compreende a obtenção de uma amostra biológica do paciente, a medição da expressão de um ou mais biomarcadores na amostra biológica, a administração de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, para o paciente, obtendo-se em seguida uma segunda amostra biológica do paciente, medindo a expressão de biomarcadores na segunda amostra biológica, e comparando os níveis de expressão de biomarcadores, onde um aumento do nível de expressão de biomarcadores após tratamento indica a probabilidade de uma resposta tumoral eficaz. Em uma forma de realização, uma diminuição do nível de expressão de biomarcadores após tratamento indica a probabilidade de resposta do tumor eficaz. Em certas formas de realização, o biomarcador é um gene associado com um fenótipo de células B ativadas de linfoma não-Hodgkin. Os genes são selecionados a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1. Em uma forma de realização, o biomarcador é o NF-kB.

[118] Em certas formas de realização, o método compreende a medição da expressão de um ou mais genes biomarcadores associados com um fenótipo de células B ativadas. Os genes são selecionados a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1. A expressão pode ser monitorizada, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína. A expressão na amostra tratada pode aumentar, por exemplo, por cerca de 1,5X, 2,0X, 3X, 5X ou mais.

[119] Em ainda outra forma de realização, um método para a verificação da conformidade do paciente com um protocolo de tratamento de droga é fornecida. O método compreende a obtenção de uma amostra biológica do paciente, medindo o nível de expressão de pelo menos um biomarcador na amostra, e a determinação se o nível de expressão é aumentado ou diminuído na amostra do paciente em comparação com o nível de expressão de uma amostra não tratada de controle, em que uma expressão aumentada ou diminuída indica a conformidade do paciente com o protocolo de tratamento da droga. Em uma forma de realização, a expressão de um ou mais biomarcador é aumentada. A expressão pode ser monitorada, por exemplo, a expressão do mRNA ou a expressão da proteína. A expressão na amostra tratada pode aumentar, por exemplo, por cerca de 1,5X, 2,0X, 3X, 5X ou mais. Em certas formas de realização, o biomarcador é um gene associado com um fenótipo de células B ativadas. Os genes são selecionados a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1. Em uma forma de realização, o biomarcador é o NF-kB.

[120] Em uma outra forma de realização, um método para prever a sensibilidade ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, em um linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, AML ou um tumor sólido do paciente é fornecida. Em uma forma de realização, o doente é um doente com linfoma não-Hodgkin, especificamente, um paciente DLBCL. O método compreende a obtenção de uma amostra biológica do paciente, opcionalmente, isolar ou purificar o mRNA a partir da amostra biológica, amplificando os mRNAs transcritos por, por exemplo, RT-PCR, em que um nível de linha de base superior de um ou mais biomarcadores específicos indica uma probabilidade maior de que o câncer serão sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em uma forma de realização, o biomarcador é um gene associado a um fenótipo de células B ativadas selecionado a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1.

[121] Em uma outra forma de realização, o método de prever a sensibilidade ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero do mesmo ou um mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo do mesmo, de uma NHL, por exemplo, um paciente DLBCL, compreende a obtenção de uma amostra de tumor do paciente, a incorporação de uma amostra de tumor em embebidos em parafina, fixados em formalina bloco, e manchando a amostra com os anticorpos para CD20, CD10, bcl-6, IRF4 / MUM1, bcl-2, ciclina D2, e/ou FOXP1, como descrito em Hans et al., Blood, 2004, 103: 275-282, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Em uma forma de realização, CD10, bcl-6, e IRF4 / MUM-1 coloração pode ser usada para dividir em DLBCL GCB e não GCB subgrupos para prever o resultado.

[122] Em uma forma de realização, é aqui proporcionado um método para prever a resposta do tumor ao tratamento no paciente é um linfoma não- Hodgkin, compreendendo: (i) obtenção de uma amostra biológica a partir do paciente; (ii) a atividade da via de NF-kB na amostra biológica de medição; e (iii) comparar o nível de atividade de NF-kB na amostra biológica com a de uma amostra biológica de um subtipo de linfoma não-ativado de células B; em que um aumento do nível de atividade de NF-kB em relação a células de linfoma não-ativado do subtipo de células-B indica a probabilidade de uma resposta tumoral eficaz ao paciente para tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[123] Em uma forma de realização, a atividade da via de NF-kB de medição na amostra biológica compreende a medição do nível de NF-kB na amostra biológica.

[124] Em uma forma de realização, é aqui proporcionado um método para monitorar a resposta do tumor ao tratamento no paciente é um linfoma não- Hodgkin, compreendendo: (i) obtenção de uma amostra biológica a partir do paciente; (ii) medir o nível de atividade de NF-kB na amostra biológica; (iii) a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de 3-(4- ((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, para o paciente; (iv) obtenção de uma segunda amostra biológica a partir do paciente; (v) a medição do nível de atividade de NF-kB na segunda amostra biológica; e (vi) comparar o nível de atividade de NF-kB na primeira amostra biológica à segunda amostra biológica; em que uma diminuição do nível de atividade de NF-kB na segunda amostra biológica em relação à primeira amostra biológica indica uma probabilidade de uma resposta eficaz do tumor do paciente.

[125] Em uma forma de realização, é proporcionado aqui um método para a verificação da conformidade do paciente com um protocolo de tratamento de droga em um doente com linfoma não-Hodgkin, compreendendo: (i) obter uma amostra biológica do paciente; (ii) medir o nível de atividade de NF-kB na amostra biológica; e (iii) comparar o nível de atividade de NF-kB na amostra biológica a uma amostra não tratada de controle; em que uma diminuição do nível de atividade de NF-kB na amostra biológica em relação ao controle indica a conformidade do paciente com o protocolo de tratamento da droga.

[126] Em uma forma de realização, o linfoma não-Hodgkin é o linfoma difuso de células B grandes.

[127] Em uma outra forma de realização, o nível de atividade de NF-kB é medido por um ensaio de imunossorvente ligado a enzima.

[128] Em uma forma de realização, é aqui proporcionado um método para prever a resposta do tumor ao tratamento em um paciente de linfoma não- Hodgkin, compreendendo: (i) obtenção de uma amostra biológica a partir do paciente; (ii) a cultura de células a partir da amostra biológica; (iii) purificação de RNA a partir das células cultivadas; e (iv) identificação de um aumento da expressão de um gene associado com o fenótipo de células B ativadas de linfoma relativamente não-Hodgkin para controlar fenótipo de célula B não-ativada de linfoma não-Hodgkin; em que o aumento da expressão de um gene associado com o fenótipo de células B ativadas de linfoma não-Hodgkin indica uma probabilidade de uma resposta tumoral eficaz ao paciente para tratamento com 3- (4 - ((4- (morfolinometil) benzil) oxi) -1- oxoisoindolina-2-il) piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[129] Em uma forma de realização, o aumento da expressão é um aumento de cerca de 1,5X, 2,0X, 3X, 5X ou mais.

[130] Em uma forma de realização, o gene associado com o fenótipo de células B ativadas é selecionado a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1.

[131] Em uma forma de realização, a identificação da expressão de um gene associado com o fenótipo de células B ativadas de linfoma não-Hodgkin é realizada por PCR quantitativo em tempo real.

[132] É também aqui proporcionado um método para o tratamento ou gestão de linfoma não-Hodgkin, compreendendo: (i) identificação de um paciente com linfoma não-Hodgkin sensível ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo do mesmo; e (ii) a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6- diona, ou um enantiômero do mesmo ou um mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo do mesmo.

[133] Em uma forma de realização, o linfoma não-Hodgkin é o linfoma difuso de células B grandes.

[134] Em uma outra forma de realização, o linfoma não-Hodgkin é do fenótipo de células B ativadas.

[135] Em uma outra forma de realização, o linfoma difuso de células B grandes é caracterizado pela expressão de um ou mais biomarcadores sobre- expressos em RIVA, U2932, TMD8, linhas de células OCI-Ly10 ou OCI-Ly3.

[136] Em uma outra forma de realização, o linfoma de células B difuso de grandes é caracterizado pela expressão de um ou mais biomarcadores sobre- expressas em Riva, U2932, TMD8 ou linhas celulares OCI-Ly10.

[137] Em uma forma de realização, a identificação de um paciente com linfoma sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, compreende caracterização do fenótipo do linfoma do paciente.

[138] Em uma forma de realização, o linfoma é o fenótipo caracterizado como um subtipo de células B ativadas.

[139] Em uma forma de realização, o linfoma é o fenótipo caracterizado como um subtipo de células B ativadas de linfoma difuso de células B grandes.

[140] Em certas formas de realização, a identificação do fenótipo do linfoma compreende a obtenção de uma amostra biológica de um doente com linfoma. Em uma forma de realização, a amostra biológica é uma cultura de células ou amostra de tecido. Em uma forma de realização, a amostra biológica é uma amostra de células tumorais. Em outra forma de realização, a amostra biológica é uma biópsia de linfonodo, uma biopsia de medula óssea, ou uma amostra de células tumorais no sangue periférico. Em uma forma de realização, a amostra biológica é uma amostra de sangue.

[141] Em uma forma de realização, a identificação de um paciente com linfoma não-Hodgkin sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, incluindo a identificação de um gene associado a um fenótipo de células B ativadas. Em uma forma de realização, o gene associado com o fenótipo de células B ativado é selecionado a partir do grupo que consiste de IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1.

[142] Em uma forma de realização, a identificação de um paciente com linfoma não-Hodgkin sensível ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um seu sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, compreende a medição do nível de atividade de NF-kB, no paciente. Em uma outra forma de realização, a medição do nível de atividade de NF-kB em um doente compreende a medição do nível da linha de base a atividade de NF-kB em células tumorais obtidas a partir do paciente.

[143] Em uma outra forma de realização, o linfoma difuso de células B grandes é caracterizado por uma ou mais das seguintes características: (i) sobre-expressão de SPIB, um fator de transcrição da família de Ets específicos-hematopoiéticos necessários para a sobrevivência de células do subtipo de células B ativadas; (ii) maior IRF4 constitutivo/expressão MUM1 do que as células do subtipo GCB; (iii) maior expressão FOXP1 constitutiva regulada além pela trissomia do cromossomo 3; (iv) maior Blimp1 constitutivo, ou seja, PRDM1, expressão; e (v) maior expressão do gene CARD11 constitutivo; e (vi) um aumento do nível de atividade de NF-kB em relação às células DLBCL de subtipo célula B não ativada.

[144] Fatores prognósticos adicionais que podem ser utilizados concomitantemente com aqueles aqui fornecidos são fatores prognósticos do peso da doença (tumor), a contagem absoluta de linfócitos (ALC), o tempo desde a última terapia com rituximab para os linfomas, ou todo o anterior. Também é aqui fornecido um método de seleção de um grupo de pacientes com câncer com base no nível de expressão CRBN, ou os níveis de expressão de DDB1, DDB2, IRF4 ou NFkB dentro do câncer, para efeitos de previsão da resposta clínica, o monitoramento da resposta clínica, ou monitoramento da adesão do paciente a dosagem por 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo do mesmo; em que os pacientes com câncer são selecionados a partir do mieloma múltiplo, linfoma não-Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes, melanoma e doentes com tumores sólidos.

[145] Em uma forma de realização, os pacientes com câncer são doentes com mieloma múltiplo.

[146] Em uma forma de realização, os pacientes com câncer são pacientes com linfoma não-Hodgkin.

[147] Em uma forma de realização, o método de seleção de um grupo de doentes com câncer é baseado no nível de expressão de DDB1 dentro do câncer.

[148] Em uma forma de realização, o método de seleção de um grupo de doentes com câncer é baseado no nível de expressão de DDB2 dentro do câncer.

[149] Em uma forma de realização, o método de seleção de um grupo de doentes com câncer é baseado no nível de expressão de IRF4 dentro do câncer.

[150] Em uma forma de realização, o método de seleção de um grupo de doentes com câncer é baseado no nível de expressão de NFkB no câncer.

[151] Em uma outra forma de realização, o método compreende a seleção de um grupo de pacientes com câncer responde ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo do mesmo; com base no nível de expressão CRBN, ou os níveis de DDB1, DDB2, IRF4 ou expressão de NFkB dentro de células T do paciente, células B ou células do plasma, para efeitos de previsão da resposta clínica, monitoramento da resposta clínica, ou monitoramento da adesão do paciente à dosagem de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina- 2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo , solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[152] Em uma forma de realização, os pacientes com câncer são selecionados a partir de doentes com mieloma múltiplo, linfoma não-Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes, melanoma e tumores sólidos.

[153] Também são fornecidos neste documento métodos de tratamento de câncer, por exemplo, linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, leucemia mielóide aguda (AML), e tumores sólidos, que resultam em uma melhoria na sobrevivência global do paciente. Em algumas formas de realização, a melhoria na sobrevivência global do paciente é observada em uma população de pacientes sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em algumas formas de realização, a população de pacientes sensíveis ao tratamento com mistura de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero do mesmo ou um dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo do mesmo, é caracterizado por um ou mais biomarcadores aqui proporcionados.

[154] Em outras formas de realização, são aqui proporcionados métodos de tratamento de câncer, por exemplo, linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, leucemia mielóide aguda (AML), e tumores sólidos, o que resulta em sobrevivência livre de doença do paciente. Em algumas formas de realização, sobrevida livre de doença do paciente é observado em uma população de pacientes sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6 -diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em algumas formas de realização, a população de pacientes sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero do mesmo ou um dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo do mesmo, é caracterizado por um ou mais biomarcadores aqui proporcionados.

[155] Em outras formas de realização, são proporcionados aqui métodos de tratamento do câncer, por exemplo, linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, leucemia mielóide aguda (AML), e tumores sólidos, o que conduziria a uma melhoria na taxa de resposta objetiva na população de paciente. Em algumas formas de realização, a população de pacientes sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero do mesmo ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo do mesmo. Em algumas formas de realização, a população de pacientes sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero do mesmo ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo do mesmo, é caracterizado por um ou mais biomarcadores aqui proporcionados.

[156] Em outras formas de realização, são proporcionados aqui métodos de tratamento de câncer, por exemplo, linfoma, linfoma não Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, leucemia mielóide aguda (AML), e tumores sólidos, o que resulta em um tempo melhorado de progressão ou progressão livre de sobrevida do paciente. Em algumas formas de realização, o tempo melhorado de progressão ou progressão livre de sobrevida do paciente é observado em uma população de pacientes sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em algumas formas de realização, a população de pacientes sensíveis ao tratamento com 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero do mesmo ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo do mesmo, é caracterizado por um ou mais biomarcadores aqui proporcionados.

[157] Também são aqui proporcionados kits úteis para prever a probabilidade de um tratamento eficaz de linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, tumor sólido ou AML ou para o monitoramento da eficácia de um tratamento com cloreto de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)- 1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo da mesma. O kit compreende um suporte sólido, e um meio para detectar a expressão de um biomarcador em uma amostra biológica. Tal kit pode empregar, por exemplo, uma vareta, uma membrana, um chip, um disco, uma tira de teste, um filtro, uma microesfera, uma corrediça, uma placa de poços múltiplos, ou uma fibra óptica. O suporte sólido do kit pode ser, por exemplo, um plástico, silício, um metal, uma resina, vidro, uma membrana, uma partícula, um precipitado, um gel, um polímero, uma folha, uma esfera, um polissacarídeo, um capilar, um filme, uma placa ou uma lâmina. A amostra biológica pode ser, por exemplo, uma cultura celular, uma linha celular, um tecido, um tecido oral, tecido gastrointestinal, um órgão, uma organela, um fluido biológico, uma amostra de sangue, uma amostra de urina, ou uma amostra de pele. A amostra biológica pode ser, por exemplo, uma biópsia dos nódulos linfáticos, uma biopsia de medula óssea, ou de uma amostra de células tumorais no sangue periférico.

[158] Em uma forma de realização, o kit compreende um suporte sólido, os ácidos nucleicos em contato com o suporte, em que os ácidos nucleicos são complementares a pelo menos 20, 50, 100, 200, 350, ou mais bases de mRNA de um gene associado com um fenótipo da célula B ativada em um NHL, e um meio para detectar a expressão do mRNA em uma amostra biológica. Em uma forma de realização, o gene associado com o fenótipo de células B ativado é selecionado a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1.

[159] Em uma forma de realização, um kit útil para prever a probabilidade de um tratamento eficaz de linfoma, linfoma não-Hodgkin, mieloma múltiplo, leucemia, AML ou de tumores sólidos, ou para monitorar a eficácia de um tratamento com cloreto de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin- 2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é fornecido. O kit compreende um suporte sólido, e um meio para detectar a expressão de NF-kB em uma amostra biológica. Em uma forma de realização, a amostra biológica é uma cultura de células ou amostra de tecido. Em uma forma de realização, a amostra biológica é uma amostra de células tumorais. Em outra forma de realização, a amostra biológica é uma biópsia de linfonodo, uma biopsia de medula óssea, ou de uma amostra de células tumorais no sangue periférico. Em uma forma de realização, a amostra biológica é uma amostra de sangue. Em uma forma de realização, o LNH é DLBCL.

[160] Em certas formas de realização, os kits aqui proporcionados empregam meios para detectar a expressão de um biomarcador de PCR quantitativo em tempo real (QT-PCR), de micro arranjo, citometria de fluxo ou imunofluorescência. Em outras formas de realização, a expressão do marcador é medida por metodologias baseadas em ELISA ou outros métodos semelhantes conhecidos na técnica.

[161] Outras técnicas de mRNA e da expressão da proteína podem ser usadas em conexão com os métodos e kits aqui proporcionados, por exemplo, hibridação de cDNA e métodos de citometria de matriz do grânulo.

[162] Em uma forma de realização, é proporcionado aqui um kit para prever a resposta do tumor ao tratamento com 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, no paciente é um linfoma não-Hodgkin, compreendendo: (i) um suporte sólido; e (ii) um meio para detectar a expressão de um biomarcador de um fenótipo de células B ativadas de linfoma não-Hodgkin em uma amostra biológica.

[163] Em uma forma de realização, o biomarcador é o NF-kB.

[164] Em uma forma de realização, o biomarcador é um gene associado com o fenótipo de células B ativadas e é selecionado a partir do grupo que consiste em IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 e BLIMP/PDRM1.

[165] Em algumas formas de realização, 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com uma terapia convencionalmente utilizada para tratar, prevenir ou controlar o câncer. Exemplos de tais terapias convencionais incluem, mas não estão limitados a, cirurgia, quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, terapia biológica e imunoterapia.

[166] Também são fornecidas aqui composições farmacêuticas, formas de dosagem unitárias, regimes de dosagem e kits que compreendem 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e um segundo, ou adicional, agente ativo. Segundo agentes ativos incluem combinações específicas, ou coquetéis de drogas.

[167] Em algumas formas de realização, os métodos para o tratamento, prevenção e/ou gestão linfomas aqui proporcionados podem ser utilizados em pacientes que não responderam ao tratamento convencional. Em uma forma de realização, o linfoma é reincidente, refratário ou resistente à terapia convencional.

[168] Em outras formas de realização, os métodos para o tratamento, prevenção e/ou gestão de linfomas aqui proporcionados podem ser usados em doentes sem tratamento, isto é, pacientes que ainda não receberam tratamento.

[169] Em certas formas de realização, 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação ou em alternância com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes ativos adicionais. Os segundos agentes ativos incluem pequenas moléculas e moléculas grandes (por exemplo, proteínas e anticorpos), exemplos dos quais são aqui proporcionados, bem como células estaminais. Métodos ou terapias, que podem ser utilizados em combinação com a administração do composto fornecido aqui incluem, mas não estão limitados a, cirurgia, transfusões de sangue, imunoterapia, terapia biológica, terapia de radiação, e outras terapias não a base de drogas atualmente usadas para tratar, prevenir ou controlar doenças e condições associadas com ou caracterizadas por angiogênese indesejável.

[170] Em uma forma de realização, o agente ativo adicional é selecionado a partir do grupo que consiste em um agente alquilante, um análogo de adenosina, um glicocorticóide, um inibidor de quinase, um inibidor de SYK, um inibidor de PDE3, um inibidor da PDE7, doxorrubicina, clorambucil, vincristina, bendamustina, forscolina, rituximab, ou uma combinação dos mesmos.

[171] Em uma forma de realização, o agente ativo adicional é o rituximab. Em outra forma de realização, o agente ativo adicional é prednisona.

[172] Em uma forma de realização, o glicocorticóide é a hidrocortisona ou dexametasona.

[173] Em uma forma de realização, 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co- cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrada em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg por dia, cerca de 0,1 a cerca de 50 mg por dia, cerca de 0,1 a cerca de 25 mg por dia, de 0,1 a cerca de 20 mg por dia, de 0,1 a cerca de 15 mg por dia, cerca de 0,1 a cerca de 10 mg por dia, de 0,1 a cerca de 7,5 mg por dia, cerca de 0,1 a cerca de 5 mg por dia, de 0,1 a cerca de 4 mg por dia, de 0,1 a cerca de 3 mg por dia, de 0,1 a cerca de 2,5 mg por dia, de 0,1 a cerca de 2 mg por dia, de 0,1 a cerca de 1 mg por dia, de 0,1 a cerca de 0,5 mg por dia, ou 0,1 a cerca de 0,2 mg por dia.

[174] Em uma forma de realização, a (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, é administrada em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg por dia, cerca de 0,1 a cerca de 50 mg por dia, cerca de 0,1 a cerca de 25 mg por dia, de 0,1 a cerca de 20 mg por dia, de 0,1 a cerca de 15 mg por dia, cerca de 0,1 a cerca de 10 mg por dia, 0.1 a cerca de 7,5 mg por dia, cerca de 0,1 a cerca de 5 mg por dia, de 0,1 a cerca de 4 mg por dia, de 0,1 a cerca de 3 mg por dia, de 0,1 a cerca de 2,5 mg por dia, de 0,1 a cerca de 2 mg por dia, de 0,1 a cerca de 1 mg por dia, de 0,1 a cerca de 0,5 mg por dia, ou 0,1 a cerca de 0,2 mg por dia.

[175] Em uma forma de realização, a (S)-3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona é administrado em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg por dia.

[176] Em uma forma de realização, a (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona é administrado em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 25 mg por dia.

[177] Em uma forma de realização, a (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona é administrado em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 5 mg por dia.

[178] Em uma forma de realização, a (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona é administrada em uma quantidade de cerca de 0,1, 0,2, 0,5, 1, 2, 2,5, 3, 4, 5, 7,5, 10, 15, 20, 25, 50, ou 100 mg por dia. Em uma forma de realização, a (S) -3-(4- ((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona é administrada em uma quantidade de cerca de 0,1 mg por dia. Em uma outra forma de realização, a (S) -3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin- 2-il)piperidina-2,6-diona é administrada em uma quantidade de cerca de 0,2 mg por dia. Em uma outra forma de realização, a (S)-3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona é administrada em uma quantidade de cerca de 1,0 mg por dia. Em uma outra forma de realização, a (S) -3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin- 2-il)piperidina-2,6-diona é administrada em uma quantidade de cerca de 5,0 mg por dia.

[179] Em uma forma de realização, a (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona é administrada duas vezes por dia.

[180] São aqui fornecidas composições farmacêuticas (por exemplo, formas de dosagem unitária individuais) que podem ser utilizadas em métodos aqui descritos. Em certas formas de realização, as composições farmacêuticas compreendem 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co- cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e um segundo agente ativo.

[181] Em uma forma de realização, 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co- cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado oralmente.

[182] Em uma forma de realização, 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em uma cápsula ou comprimido.

[183] Em uma forma de realização, 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co- cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado durante 21 dias, seguidos de sete dias de descanso em um ciclo de 28 dias.

5.1 DEFINIÇÕES

[184] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "sujeito" ou "paciente" se refere a um animal, incluindo, mas não limitado a, um mamífero, incluindo um primata (por exemplo, humano), vaca, ovelha, cabra, cavalo, cão, gato, coelho, rato, ou camundongo. Os termos "sujeito" e "paciente" são utilizados indiferentemente no presente documento com referência, por exemplo, a um sujeito mamífero, tal como um sujeito humano.

[185] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, os termos "tratar", "tratando" e "tratamento" se referem à erradicação ou melhoria de uma doença ou distúrbio, ou de um ou mais sintomas associados com a doença ou distúrbio. Em certas formas de realização, os termos se referem a minimizar a propagação ou agravamento da doença ou distúrbio que resulta da administração de um ou mais agentes profiláticos ou terapêuticos a um doente com tal doença ou distúrbio. Em algumas formas de realização, os termos se referem a administração de um composto aqui proporcionado, com ou sem outro agente ativo adicional, após o início dos sintomas da doença em particular.

[186] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, os termos "prevenir", "prevenindo" e "prevenção" se referem a prevenção do aparecimento, recorrência ou disseminação de uma doença ou distúrbio, ou de um ou mais dos seus sintomas. Em certas formas de realização, os termos se referem ao tratamento ou com administração de um composto aqui proporcionado, com ou sem outro composto ativo adicional, antes do aparecimento dos sintomas, particularmente para pacientes em risco de doenças ou distúrbios aqui proporcionados. Os termos englobam a inibição ou redução de um sintoma da doença em particular. Pacientes com histórico familiar de uma doença em particular, são candidatos para regimes preventivos em certas formas de realização. Além disso, os pacientes que têm uma história de sintomas recorrentes também são potenciais candidatos para a prevenção. A este respeito, o termo "prevenção" pode ser utilizado intermutavelmente com o termo "tratamento profilático."

[187] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, os termos "administrar", "administrando" e "administração" se referem a prevenir ou retardar a progressão, disseminação ou agravamento de uma doença ou distúrbio, ou de um ou mais dos seus sintomas. Frequentemente, os efeitos benéficos que um paciente obtém de um tratamento profilático e/ou agente terapêutico não resultam na cura da doença ou distúrbio. A este respeito, o termo "gestão" abrange o tratamento de um paciente que sofria de doença particular, na tentativa de prevenir ou minimizar a recorrência da doença, ou aumentando o tempo durante o qual os restos em remissão.

[188] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outro modo, uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto é uma quantidade suficiente para proporcionar um benefício terapêutico no tratamento ou gestão de uma doença ou distúrbio, ou para retardar ou minimizar um ou mais sintomas associados com a doença ou distúrbio. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto significa uma quantidade de agente terapêutico, a sós ou em combinação com outras terapias, que proporciona um benefício terapêutico no tratamento ou gestão da doença ou distúrbio. O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" pode englobar uma quantidade que melhora a terapia global, reduz ou evita sintomas ou causas de uma doença ou distúrbio, ou melhore a eficácia terapêutica de um outro agente terapêutico.

[189] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outro modo, uma "quantidade profilaticamente eficaz" de um composto é uma quantidade suficiente para prevenir uma doença ou distúrbio, ou previne a sua recorrência. Uma quantidade profilaticamente eficaz de um composto significa uma quantidade de agente terapêutico, sós ou em combinação com outros agentes, que proporciona um benefício profilático na prevenção da doença. O termo "quantidade profilaticamente eficaz" pode englobar uma quantidade que melhora a profilaxia em geral ou aumenta a eficácia profilática de um outro agente profilático.

[190] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "veículo farmaceuticamente aceitável", "excipiente farmaceuticamente aceitável", "transportador fisiologicamente aceitável", ou "excipiente fisiologicamente aceitável" se refere a um material farmaceuticamente aceitável, composição ou veículo, tal como um agente de enchimento líquido ou sólido, diluente, excipiente, solvente ou material de encapsulamento. Em uma forma de realização, cada componente é "farmaceuticamente aceitável" no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes de uma formulação farmacêutica, e adequados para utilização em contato com o tecido ou órgão de seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, imunogenicidade, ou outros problemas ou complicações, comensurável com uma relação benefício/risco razoável. Veja, Remington: The Science and Pratice of Pharmacy, 21^ Edição; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5th Edition; Rowe et al, Eds, The Pharmaceutical Press e da American Association Pharmaceuticals: 2005; e Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd Edition; Ash e Ash Eds, Gower Publishing Company.: 2007; Pharmaceutical Preformulation e Formulation, Gibson Ed, CRC Press LLC.: Boca Raton, FL, 2004).

[191] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "tumor" se refere a todo o crescimento e proliferação de células neoplásicas, malignas ou benignas, e a todas as células e tecidos pré-cancerosos e cancerosos. "Neoplásica", tal como aqui utilizado, se refere a qualquer forma de crescimento celular desregulado ou não regulado, malignos ou benignos, resultando em crescimento de tecido anormal. Assim, "células neoplásicas" incluem as células malignas e benignas com o crescimento celular desregulado ou não regulado.

[192] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "recaída" se refere a uma situação em que um sujeito ou um mamífero, que tiveram uma remissão de câncer após a terapia tem um retorno das células cancerosas.

[193] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outro modo, uma "resposta tumoral eficaz ao paciente" se refere a qualquer aumento do benefício terapêutico ao paciente. Uma "resposta do tumor do paciente eficaz" pode ser, por exemplo, a 5 %, 10 %, 25 %, 50 %, ou 100 % de diminuição na taxa de progresso do tumor. Uma "resposta do tumor do paciente eficaz" pode ser, por exemplo, a 5 %, 10 %, 25 %, 50 %, 100 % ou diminuição nos sintomas físicos de um câncer. Uma "resposta do tumor do paciente eficaz" também pode ser, por exemplo, a 5 %, 10 %, 25 %, 50 %, 100 %, 200 %, ou mais aumento da resposta do paciente, tal como medido por qualquer meio adequado, tal como a expressão do gene, as contagens de células, os resultados do ensaio, etc.

[194] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "probabilidade" geralmente se refere a um aumento na probabilidade de um evento. O termo "probabilidade", quando utilizado em referência à eficácia de uma resposta do tumor do paciente geralmente contempla um aumento da probabilidade de que a taxa de progresso do tumor ou crescimento de células tumorais irá diminuir. O termo "probabilidade", quando utilizado em referência à eficácia de uma resposta do tumor do paciente também pode significar geralmente o aumento de indicadores, tais como mRNA ou a expressão da proteína, que pode evidenciar um aumento do progresso no tratamento do tumor.

[195] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "prever" geralmente significa para determinar ou dizer antecipadamente. Quando utilizado para "prever" a eficácia de um tratamento contra o câncer, por exemplo, o termo "prever" pode significar que a probabilidade do resultado do tratamento do câncer pode ser determinado no início, antes do tratamento ter começado, ou antes do tratamento período progrediu substancialmente.

[196] Como aqui utilizado, e salvo disposição em contrário, o termo "monitorar," aqui utilizado, geralmente se refere à fiscalização, supervisão, regulamentação, observando, rastreamento ou vigilância de uma atividade. Por exemplo, o termo "controle da eficácia de um composto" se refere a rastrear a eficácia no tratamento de um câncer em um paciente ou em uma cultura de células do tumor. Da mesma forma, o "monitoramento", quando utilizado em conexão com a adesão do paciente, quer individualmente, quer em um ensaio clínico, se refere à vigilância ou a confirmação de que o paciente está realmente tendo o composto imunomodulador a ser testado, como prescrito. O monitoramento pode ser realizado, por exemplo, seguindo a expressão de mRNA ou biomarcadores de proteína.

[197] Uma melhoria no câncer ou doença relacionada ao câncer pode ser caracterizada como uma resposta completa ou parcial. "Resposta completa" se refere a uma ausência de doença clinicamente detectável com normalização de quaisquer estudos radiográficos previamente anormais, medula óssea, e no líquido cefalorraquidiano (LCR) ou medições anormais de proteínas monoclonais. "Resposta parcial" se refere a pelo menos cerca de 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou diminuição da carga tumoral em todos mensurável (isto é, o número de células malignas presentes no sujeito, ou a maior medida de massas tumorais ou a quantidade de proteína monoclonal anormal) na ausência de novas lesões. O termo "tratamento" contempla tanto uma resposta completa como uma parcial.

[198] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "refratário ou resistente" se refere a uma situação em que um sujeito ou um mamífero, mesmo após o tratamento intensivo, tem células cancerosas residuais no seu corpo.

[199] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "resistência à droga" se refere à condição em que uma doença não responde ao tratamento de uma droga ou drogas. A resistência a drogas pode ser intrínseca, o que significa que a doença nunca foi responsiva à droga ou drogas, ou pode ser adquirida, o que significa que a doença deixa de responder a uma droga ou drogas que a doença tinha respondido anteriormente. Em certas formas de realização, a resistência aos medicamentos é intrínseca. Em certas formas de realização, a resistência à droga é adquirida.

[200] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "sensibilidade" e "sensível", quando feito em referência ao tratamento com o composto é um termo relativo, que se refere ao grau de eficácia do composto de atenuar ou diminuir o progresso de um tumor ou a doença a ser tratada. Por exemplo, o termo "sensibilidade aumentada" quando utilizada em referência a um tratamento de uma célula tumoral ou em conexão com um composto se refere a um aumento de, pelo menos um 5 %, ou mais, na eficácia do tratamento de tumor.

[201] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "expresso" ou "expressão", tal como aqui utilizado se refere à transcrição de um gene para dar uma molécula de ácido nucleico ARN, pelo menos em parte complementar a uma região de um dos dois ácidos nucleicos cadeias do gene. O termo "expresso" ou "expressão", tal como aqui utilizado se refere também a tradução a partir da molécula de RNA para se obter uma proteína, um polipeptídeo ou uma porção do mesmo.

[202] Um mRNA que é "regulado" é geralmente aumentado por um determinado tratamento ou condição. Um mRNA que é "regulado negativamente" geralmente se refere a uma diminuição no nível de expressão de mRNA em resposta a um dado tratamento ou condição. Em algumas situações, o nível de mRNA pode permanecer inalterado durante um determinado tratamento ou condição.

[203] Um mRNA de uma amostra do paciente pode ser "regulado para cima" quando tratados com um composto imunomodulador, em comparação com um controle não-tratado. Esta regulação para cima pode ser, por exemplo, um aumento de cerca de 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 500 %, 1,000 %, 5,000 % ou mais do nível de mRNA de controle comparativo.

[204] Alternativamente, um mRNA pode ser "regulado para baixo", ou expresso a um nível mais baixo, em resposta à administração de certos compostos imunomoduladores ou outros agentes. Um mRNA regulado negativamente pode, por exemplo, estar presente em um nível de cerca de 99 %, 95 %, 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 10 %, 1 % ou menos do nível de mRNA de controle comparativo.

[205] Da mesma forma, o nível de um polipeptídeo ou proteína de biomarcadores a partir de uma amostra do doente pode ser aumentado quando tratados com um composto imunomodulador, em comparação com um controle não-tratado. Este aumento pode ser de cerca de 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 500 %, 1.000 %, 5.000 % ou mais do nível de proteína de controle comparativo.

[206] Alternativamente, o nível de um biomarcador de proteína pode ser diminuído em resposta à administração de certos compostos imunomoduladores ou outros agentes. Esta redução pode, por exemplo, estar presente em um nível de cerca de 99 %, 95 %, 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 10 %, 1 % ou menos do nível de proteína de controle comparativo.

[207] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, os termos "determinação", "medição", "avaliar", "avaliando" e "ensaio", como aqui utilizado, se referem geralmente a qualquer tipo de medição, e incluem a determinação se um elemento está presente ou não. Esses termos incluem determinações quantitativas e/ou qualitativas. Avaliação pode ser relativa ou absoluta. "Avaliação da presença de" pode incluir a determinação da quantidade de algo presente, bem como para determinar se está presente ou ausente.

[208] Tal como aqui utilizado e a menos que especificado de outra forma, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" abrange os sais de ácido e de adição de base não-tóxicas do composto ao qual o termo se refere. Os sais de adição de ácido não tóxicos, aceitáveis incluem aqueles derivados a partir de ácidos ou bases orgânicos e inorgânicos conhecidos na técnica, que incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido metanossulfônico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido málico, ácido maleico, ácido sórbico, ácido aconítico, ácido salicílico, ácido ftálico, ácido embólico, ácido enântico, e semelhantes.

[209] Os compostos que são de natureza ácida são capazes de formar sais com várias bases farmaceuticamente aceitáveis. As bases que podem ser usadas para preparar sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos ácidos que são aqueles que formam sais não tóxicos de adição de bases, isto é, sais que contêm cátions farmaceuticamente aceitáveis, tais como, mas não limitado a, sais de metais alcalinos ou alcalino-terrosos e o cálcio, magnésio, sais de sódio ou potássio, em particular. As bases orgânicas adequadas incluem, mas não estão limitadas a, N,N-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, meglumaína (N- metilglucamina), lisina e procaína.

[210] Tal como aqui utilizado e a menos que indicado de outra forma, o termo "solvato" significa um composto aqui fornecido ou um seu sal, que inclui ainda uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica de solvente ligado por forças intermoleculares não covalentes. Quando o solvente é água, o solvato é um hidrato. Tal como aqui utilizado e a menos que indicado de outra forma, o termo "pró-fármaco" significa um derivado de um composto que pode hidrolisar, oxidar ou reagir de outro modo sob condições biológicas (in vitro ou in vivo) para proporcionar o composto. Exemplos de pró-fármacos incluem, mas não estão limitados a, derivados dos compostos de Fórmula I aqui proporcionado que compreendem porções de bio-hidrolisáveis tais como amidas bio-hidrolisáveis, ésteres bio-hidrolisáveis, carbamatos bio-hidrolisáveis, carbonatos bio-hidrolisáveis, ureídos bio-hidrolisáveis, e análogos de fosfato bio- hidrolisáveis. Outros exemplos de pró-fármacos incluem os derivados do composto de Fórmula I, desde que aqui compreendem NO, NO2, ONO2 ONO, ou porções. Os pró-fármacos podem ser preparados utilizando métodos tais como descrito em Medicinal Chemistry and Drug Discovery, Burger, 172 178, 949 982 (Manfred E. Wolff ed., 5a ed., 1995), e Design of Prodrugs (H. Bundgaard ed., Elselvier, Nova York, 1985).

[211] Tal como aqui utilizado e a menos que indicado de outra forma, os termos "amida bio-hidrolisável", "éster bio-hidrolisável", "carbamato bio- hidrolisável", "carbonato bio-hidrolisável", "ureído bio-hidrolisável", e "fosfato bio-hidrolisável" significa uma amida, éster, carbamato, carbonato, ureído, ou fosfato, respectivamente, de um composto que quer: 1) não interfere com a atividade biológica do composto mas pode conferir a esse composto propriedades vantajosas in vivo, tais como a assimilação, duração de ação, ou início da ação; ou 2) é biologicamente inativo mas é convertido in vivo no composto biologicamente ativo. Exemplos de ésteres bio-hidrolisáveis incluem, mas não estão limitados a, ésteres de alquila inferior, ésteres de aciloxialquila inferior (tais como acetoxilmetila, acetoxietila, aminocarboniloximetila, pivaloiloximetila, e pivaloiloxietila), ésteres de ésteres de lactonila (tais como ésteres de ftalidila e tioftalidila), ésteres inferiores (alcoxiaciloxialcila tal como metoxicarbonila-oximetila, etoxicarbonilaxietila e isopropoxicarbonilaxietila ésteres), ésteres de alcoxialquila, ésteres de colina, e ésteres de acilamina alquila (tais como ésteres de acetamidometila). Exemplos de amidas bio-hidrolisáveis incluem, mas não estão limitados a, amidas de alquila inferior, α amidas de aminoácidos, amidas de alcoxiacila e amidas de alquilaminoalquilcarbonila. Exemplos de carbamatos bio-hidrolisáveis incluem, mas não estão limitados a, alquilaminas inferiores, etilenodiaminas substituídas, aminoácidos, hidroxialquilaminas, heterocíclico e aminas heteroaromáticas, e aminas de poliéter.

[212] Tal como aqui utilizado e a menos que indicado de outra forma, o termo "estereomericamente puro" significa uma composição que compreende um estereoisômero de um composto e é substancialmente livre de outros estereoisômeros desse composto. Por exemplo, uma composição estereomericamente pura de um composto possuindo um centro quiral estará substancialmente livre do enantiômero oposto do composto. Uma composição estereomericamente pura de um composto possuindo dois centros quirais estará substancialmente livre de outros diastereômeros do composto. Em certas formas de realização, um composto estereoisomericamente puro compreende mais do que cerca de 80 % em peso de um estereoisômeo do composto e menos do que cerca de 20 % em peso de outros estereoisômeros do composto, maior do que cerca de 90 % em peso de um estereoisômeo do composto e menos do que cerca de 10 % em peso dos outros estereoisômeros do composto, maior do que cerca de 95 % em peso de um estereoisômeo do composto e menos do que cerca de 5 % em peso dos outros estereoisômeros do composto, ou maior do que cerca de 97 % em peso de um estereoisômero do composto e menos do que cerca de 3 % em peso dos outros estereoisômeros do composto. Tal como aqui utilizado e a menos que indicado de outra forma, o termo "estereomericamente enriquecido" significa uma composição que compreende mais do que cerca de 60 % por peso de um estereoisômeo de um composto, maior do que cerca de 70 % em peso, ou maior do que cerca de 80 % em peso de um estereoisômeo de um composto. Tal como aqui utilizado e a menos que indicado de outra forma, o termo "enanciomericamente puro" significa uma composição estereomericamente pura de um composto possuindo um centro quiral. Da mesma forma, o termo "estereomericamente enriquecido" significa uma composição estereomericamente enriquecida de um composto possuindo um centro quiral.

[213] Tal como aqui usado, e a menos que especificado de outra forma, o termo "cerca de" ou "aproximadamente" significa que um erro aceitável para um determinado valor, tal como determinado por um vulgar perito na arte, que depende em parte da forma como o valor é medido ou determinado. Em certas formas de realização, o termo "cerca de" ou "aproximadamente" significa dentro de um, dois, três, ou quatro desvios padrão. Em certas formas de realização, o termo "cerca de" ou "aproximadamente" significa dentro de 50 %, 20 %, 15 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 %, ou 0,05 % de um dado valor ou faixa.

5.2 PONTOS FINAIS DE ENSAIOS CLÍNICOS PARA APROVAÇÃO DE CÂNCER

[214] "Sobrevida global" é definida como o tempo desde a randomização até a morte por qualquer causa, e é medido na população com intenção de tratar. A sobrevida global deve ser avaliada em estudos controlados e randomizados. Demonstração de uma melhoria estatisticamente significativa na sobrevida global pode ser considerada clinicamente significativa se o perfil de toxicidade é aceitável, e apoiou muitas vezes aprovação de novas drogas.

[215] Vários pontos finais se baseiam em avaliações de tumor. Estes pontos finais incluem sobrevida livre de doença (DFS), taxa de resposta objetiva (ORR), tempo de progressão (TTP), sobrevida livre de progressão (PFS) e insuficiência de tempo para tratamento (TTF). A coleta e análise de dados sobre estes parâmetros dependentes do tempo são baseados em avaliações indiretas, cálculos e estimativas (por exemplo, medidas de tumor).

[216] Geralmente, "sobrevida livre de doença" (DFS) é definido como o tempo desde a randomização até recorrência de tumor ou morte por qualquer causa. Embora a sobrevida global seja um ponto final convencional para a maioria das configurações de adjuvantes, DFS pode ser um ponto final importante em situações em que a sobrevivência pode ser prolongada, fazendo um ponto final de sobrevivência impraticável. DFS pode ser um substituto para o benefício clínico ou ele pode fornecer evidência direta do benefício clínico. Essa determinação é baseada na magnitude do efeito, a sua relação risco- benefício, e a definição da doença. A definição de DFS pode ser complicada, especialmente quando as mortes são anotadas sem documentação de progressão do tumor anterior. Esses eventos podem ser marcados ou como recorrências da doença ou como eventos censurados. Apesar de todos os métodos de análise estatística de mortes têm algumas limitações, considerando- se todos os óbitos (mortes por todas as causas) como reincidências podem minimizar a tendência. DFS pode ser superestimado usando esta definição, especialmente em pacientes que morrem depois de um longo período sem observação. Tendência pode ser introduzida se a freqüência de visitas de acompanhamento em longo prazo for diferente entre os ramos do estudo ou se desistentes não são aleatórios devido à toxicidade.

[217] "Taxa de resposta objetiva" (ORR) é definida como a proporção de doentes com a redução do tamanho do tumor de uma quantidade pré-definida e por um período de tempo mínimo. Duração da resposta é normalmente medida a partir do tempo de resposta inicial até que a progressão do tumor documentada. Geralmente, a FDA tem ORR definido como a soma das respostas parciais mais respostas completas. Quando definido desse modo, ORR é uma medida direta da atividade antitumoral de drogas, que pode ser avaliada em um estudo de ramo único. Se disponíveis, critérios padronizados devem ser usados para determinar a resposta. Uma variedade de critérios de resposta é considerada adequados (por exemplo, critérios RECIST) (Therasse et al, (2000) J. Natl Câncer Inst., 92: 205-16). O significado de TRG é avaliado pela sua magnitude e duração, e a porcentagem de respostas completas (sem evidência de tumor detectável).

[218] "Tempo para progressão" (TTP) e "sobrevida livre de progressão" (PFS) serviram como parâmetros primários para a aprovação da droga. TTP é definido como o tempo desde a randomização até à progressão tumoral objetiva; O TTP não inclui as mortes. PFS é definido como o tempo desde a randomização até a progressão ou morte tumoral objetiva. Comparado com TTP, PFS é o ponto final de regulamentação preferido. PFS inclui mortes e, portanto, pode ser melhor correlacionado com a sobrevivência global. PFS assume mortes de pacientes que estão relacionados ao acaso para a progressão do tumor. No entanto, em situações em que a maioria das mortes não está relacionada ao câncer, TTP pode ser um ponto final aceitável.

[219] Como um ponto final para apoiar a aprovação da droga, PFS pode refletir o crescimento do tumor e ser avaliado antes da determinação de um benefício de sobrevivência. Sua determinação não se confunde com a terapia subseqüente. Para um dado tamanho de amostra, a magnitude do efeito sobre o PFS pode ser maior do que o efeito sobre a sobrevivência global. No entanto, a validação formal de PFS como um substituto para a sobrevivência de muitas doenças malignas diferentes que existem pode ser difícil. Os dados são, por vezes, insuficientes para permitir uma avaliação sólida da correlação entre os efeitos na sobrevivência e PFS. Testes de câncer muitas vezes são pequenos, e benefícios comprovados de sobrevida de medicamentos existentes são geralmente modestos. O papel do PFS como um ponto final para apoiar a aprovação de licenciamento varia em configurações diferentes de câncer. Se uma melhoria no PFS representa um benefício clínico direto ou um substituto para o benefício clínico depende da magnitude do efeito e o risco-benefício do novo tratamento em comparação com terapias disponíveis.

[220] "Fracasso do tempo de tratamento" (TTF) é definido como um ponto final composto medindo o tempo desde a randomização até a interrupção do tratamento por qualquer motivo, incluindo a progressão da doença, a toxicidade do tratamento, e a morte. TTF não é recomendado como um ponto final de regulamentação para aprovação de drogas. TTF não distingue adequadamente eficácia a partir dessas variáveis adicionais. Um ponto final regulamentar deverá distinguir claramente a eficácia da droga da toxicidade, paciente ou a retirada do médico, ou intolerância do paciente.

5.3 O COMPOSTO

[221] O composto adequado para utilização nos métodos aqui proporcionados é o ácido 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona, que tem a estrutura da Fórmula I :

ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[222] Em uma forma de realização, o composto é 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona. Em uma forma de realização, o composto é um sal farmaceuticamente aceitável do composto I. Em uma forma de realização, o composto é cloridrato de 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

[223] Em uma forma de realização, o composto é (S)-3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, que tem a estrutura de Fórmula IS :

[224] Em uma forma farmaceuticamente aceitável do composto IS. Em uma forma de realização, o composto é (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

[225] Em uma forma de realização, o composto é (R)-3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, que tem a estrutura da Fórmula IV :

[226] Em uma forma de farmaceuticamente aceitável do composto IV. Em uma forma de realização, o composto é (R)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

[227] O composto da Fórmula I pode ser preparado de acordo com os métodos descritos nos Exemplos proporcionados aqui ou como descrito na Publicação do Pedido US N ° de US2011-0196150, a divulgação da qual é aqui incorporada por referência na sua totalidade. O composto pode também ser sintetizado de acordo com outros métodos evidentes para os versados na técnica com base nos ensinamentos aqui.

[228] Os compostos aqui proporcionados marcadamente inibem o TNF-α, IL-1β, e outras citocinas inflamatórias estimulada por LPS em hPBMC e sangue humano inteiro. TNF-α é uma citoquina inflamatória produzida por macrófagos e monócitos durante a inflamação aguda. TNF-α é responsável por uma faixa diversa de eventos de sinalização no interior das células. TNF-α pode desempenhar um papel patológico no câncer. Sem estarmos limitados pela teoria, um dos efeitos biológicos exercidos pelos compostos imunomoduladores aqui proporcionados, é a redução da síntese de TNF-α. Os compostos imunomoduladores aqui proporcionados aumentam a degradação do mRNA de TNF-α. Os compostos aqui proporcionados também inibem potencialmente a IL- 1βe estimulam IL-10 nestas condições.

[229] Além disso, sem estar limitado por qualquer teoria particular, os compostos aqui proporcionados são potentes coestimuladores de células T e aumentam a proliferação celular de um modo dependente da dose, nas condições adequadas.

[230] Em certas formas de realização, sem estarmos limitados pela teoria, os efeitos biológicos exercidos pelos compostos imunomoduladores aqui proporcionados incluem, mas não se limitam a, efeitos moduladores anti- angiogênicos e imunológicos.

[231] O composto da Fórmula I fornecido aqui contém um centro quiral e pode existir como uma mistura de enantiômeros, por exemplo, uma mistura racêmica. Esta divulgação engloba a utilização de formas estereomericamente puras de um tal composto, assim como a utilização de misturas dessas formas. Por exemplo, as misturas que compreendem quantidades iguais ou desiguais de enantiômeros do composto da Fórmula I aqui proporcionados podem ser utilizados nos métodos e composições aqui divulgados. Estes isômeros podem ser sintetizados assimetricamente ou resolvidos usando técnicas convencionais, tais como colunas quirais ou agentes de resolução quirais. Ver, por exemplo, Jacques, J., et al, Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, Nova York, 1981).; Wilen, S. H., et al, Tetrahedron 33: 2725 (1977); Eliel, EL, Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw Hill, Nova Iorque, 1962); e Wilen, SH, Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972).

[232] Deve notar-se que, se existe uma discrepância entre uma estrutura representada e um nome dado a essa estrutura, a estrutura descrita é para ser mais pesada. Além disso, se a estereoquímica de uma estrutura ou de uma porção de uma estrutura não é indicada com, por exemplo, linhas em negrito ou tracejadas, a estrutura ou a porção da estrutura deve ser interpretada como englobando todos os estereoisômeros de estrutura.

5.4 SEGUNDO AGENTES ATIVOS

[233] Um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto da Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, pode ser combinado com um ou mais outros compostos farmaceuticamente ativos ("segundo agentes ativos") em métodos e composições aqui proporcionados. Acredita-se que certas combinações funcionam sinergicamente no tratamento de tipos particulares de câncer, e certas doenças e condições associadas com ou caracterizadas por angiogênese indesejável. Os compostos aqui proporcionados também podem funcionar para aliviar os efeitos adversos associados com certos segundos agentes ativos, e alguns segundos agentes ativos podem ser utilizados para aliviar os efeitos adversos associados com os compostos aqui proporcionados.

[234] Um ou mais segundos ingredientes ativos ou agentes podem ser utilizados nos métodos e composições aqui proporcionados com os compostos aqui proporcionados. Os segundos agentes ativos podem ser moléculas de grandes dimensões (por exemplo, proteínas) ou moléculas pequenas (por exemplo, moléculas inorgânicas sintéticas, organometálicas ou orgânicas).

[235] Exemplos de grande molécula agentes ativos incluem, mas não estão limitados a, fatores de crescimento hematopoiéticos, citoquinas e anticorpos monoclonais e policlonais. Em certas formas de realização, os agentes ativos de moléculas grandes são moléculas biológicas, tais como ocorrem naturalmente ou proteínas feitas artificialmente. As proteínas que são particularmente úteis na presente invenção incluem proteínas que estimulam a sobrevivência e/ou a proliferação de células precursoras hematopoiéticas e células poiéticas imunologicamente ativas, in vitro ou in vivo. Outros estimulam a divisão e diferenciação dos progenitores eritróides comprometidos em células in vitro ou in vivo. Proteínas particulares incluem, mas não estão limitadas a: interleucinas, tais como IL 2 (incluindo IL-II recombinante ("rIL2") e canaripox IL 2), IL-10, IL-12 e IL-18; interferons, tais como interferon alfa-2a, interferon alfa 2b, interferon alfa n1, interferon alfa n3, interferon beta Ia e o interferon gama I b; GM-CF e GM-CSF; GC-CSF, BCG, os anticorpos de câncer, e EPO.

[236] Proteínas particulares que podem ser utilizadas nos métodos e composições da invenção incluem, mas não estão limitados a: filgrastim, que é vendido nos Estados Unidos sob o nome comercial Neupogen® (Amgen, Thousand Oaks, CA); sargramostim, que é vendido nos Estados Unidos sob o nome comercial LEUKINE® (Immunex, Seattle, WA); e EPO recombinante, que é vendido nos Estados Unidos sob o nome comercial EPGEN® (Amgen, Thousand Oaks, CA).

[237] Inibidores de receptores ou inibidores de ActRII activina-ActRII podem ser utilizados nos métodos e composições aqui proporcionadas. Inibidores de receptores de ActRII incluem inibidores ActrIIa e inibidores ActRIIB. Inibidores de receptores de ActRII podem ser polipeptídeos que compreendem domínios de ligação a activina de ActRII. Em certas formas de realização, o domínio de ligação a activina compreendendo polipeptídeos estão ligados a uma porção Fc de um anticorpo (ou seja, um conjugado que compreende um domínio de ligação a activina compreendendo polipeptídeo de um receptor de ActRII e uma porção Fc de um anticorpo é gerado). Em certas formas de realização, o domínio de ligação a activina é ligado a uma porção Fc de um anticorpo através de um ligante, por exemplo, um agente de ligação peptídico. Exemplos de tais proteínas que não anticorpos selecionados para ligação a activina ou ActRIIA e métodos para a criação e seleção da mesma encontram-se em WO/2002/088171, WO/2006/055689, WO/2002/032925, WO/2005/037989, US 2003/0133939, e US 2005/0238646, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Em uma forma de realização, o inibidor de receptores ActRII é ACE -11. Em uma outra forma de realização, o inibidor de receptores de ActRII é ACE -536.

[238] As formas recombinantes e mutadas de GM-CSF podem ser preparadas como descrito nas Patentes US Nos 5.391.485.; 5.393.870; e 5.229.496; a divulgação de cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. As formas recombinantes e mutadas de G-CSF podem ser preparadas como descrito nas Patentes US Nos 4810643.; 4.999.291; 5.528.823; e 5.580.755; a divulgação de cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.

[239] Esta divulgação engloba o uso de proteínas nativas de ocorrência natural, e recombinantes. A divulgação abrange ainda mutantes e derivados (por exemplo, formas modificadas) de proteínas de ocorrência natural que exibem, in vivo, pelo menos alguma da atividade farmacológica das proteínas sobre as quais se baseiam. Os exemplos de mutantes incluem, mas não estão limitados a, proteínas que têm um ou mais resíduos de aminoácidos que diferem dos resíduos correspondentes nas formas de ocorrência natural das proteínas. Também englobados pelo termo "mutantes" são proteínas que faltam porções de carboidrato normalmente presentes nas suas formas de ocorrência natural (por exemplo, formas não glicosiladas). Exemplos de derivados incluem, mas não estão limitados a, derivados peguilados e proteínas de fusão, tais como proteínas formadas pela fusão de IgG1 ou IgG3 com a proteína ou porção ativa da proteína de interesse. Ver, por exemplo, Penichet, M.L. e Morrison, S.L., J. Immunol. Métodos 248: 91-101 (2001).

[240] Os anticorpos que podem ser utilizados em combinação com os compostos aqui proporcionados incluem anticorpos monoclonais e policlonais. Exemplos de anticorpos incluem, mas não estão limitados a, trastuzumab (HERCEPTIN®), rituximab (RITUXAN®), bevacizumab (AVASTIN™), pertuzumab (OMNITARG™), tositumomab (BEXXAR®), edrecolomab (PANOREX®), panitumumab e G250. Os compostos aqui proporcionados também podem ser combinados com ou utilizados em combinação com anticorpos anti-TNF-α.

[241] Agentes ativos de moléculas grandes podem ser administrados na forma de vacinas contra o câncer. Por exemplo, vacinas que segregam, ou provocam a secreção de citoquinas, tais como IL-2, SCF, CXCl4 (fator de plaquetas 4), G-CSF e GM-CSF pode ser utilizado nos métodos, composições farmacêuticas e kits da divulgação. Ver, por exemplo, Emens, L. A., et al., Curr. Parecer Mol. Ther. 3 (1): 77-84 (2001).

[242] Os segundos agentes ativos que são moléculas pequenas também podem ser utilizados para aliviar os efeitos adversos associados com a administração dos compostos aqui proporcionados. No entanto, como algumas moléculas grandes, muitas são acreditadas serem capazes de proporcionar um efeito sinérgico quando administrada com (por exemplo, antes, depois ou simultaneamente) os compostos aqui proporcionados. Exemplos de agentes ativos de segunda molécula pequena incluem, mas não estão limitados a, agentes anti-câncer, agentes imunossupressores, antibióticos e esteróides.

[243] Exemplos de agentes anti-câncer incluem, mas não estão limitados a: Abraxane; ACE-11; acivicina; aclarubicina; cloridrato de acodazol; acronina; adozelesina; aldesleucina; altretamina; ambomicina; acetato de ametantrona; amrubicina; amsacrina; anastrozol; antramicina; asparaginase; asperlin; azacitidina; azetepa; azotomicina; batimastat; benzodepa; bicalutamida; cloridrato de bisantreno; dimesilato de bisnafida; bizelesina; sulfato de bleomicina; brequinar de sódio; bropirimina; busulfan; catinomicina; calusterona; caracemide; carbetimer; carboplatina; carmustine; cloridrato de carubicina; carzelesina; cedefingol; celecoxib (inibidor COX-2); clorambucil; cirolemicina; cisplatina; cladribina; mesilato de crisnatol; ciclofosfamida; citarabina; dacarbazina; datinomicina; cloridrato de daunorrubicina; decitabina; dexormaplatin; dezaguanina; mesilato de dezaguanina; diaziquona; docetaxel; doxorrubicina; cloridrato de doxorrubicina; droloxifeno; droloxifene citrato; propionato de dromostanolona; duazomicina; edatrexato; cloridrato de eflornithine; elsamitrucina; enloplatina; enpromato; epipropidina; cloridrato de epirrubicina; erbulozol; cloridrato de esorubicina; estramustine; fosfato de sódio de estramustina; Etanidazole; etoposide; fosfato de etoposido; etoprine; cloridrato de fadrozol; fazarabine; fenretinide; floxuridina; fosfato de fludarabina; fluorouracil; flurocitabina; fosquidona; fostriecina de sódio; gemcitabina; cloridrato de gemcitabina; Herceptin; hidroxiureia; cloridrato de idarubicina; ifosfamida; ilmofosina; iproplatina; irinotecano; cloridrato de irinotecano; lanreotida de etilo; lapatinib; letrozol; acetato de leuprolide; cloridrato de liarozole; lometrexol sódico; lomustine; cloridrato de losoxantrona; masoprocol; maitansina; cloridrato de mecloretamina; acetato de megestrol; acetato de melengestrol; melfalano; menogaril; mercaptopurina; metotrexato; metotrexato de sódio; metoprina; meturedepa; mitindomida; mitocarcin; mitocromin; mitogilina; mitomalcin; mitomicina; mitosper; mitotane; cloridrato de mitoxantrona; ácido micofenólico; nocodazole; nogalamicina; ormaplatina; oxisuran; paclitaxel; pegaspargase; peliomicin; pentamustina; sulfato de peplomicina; perfosfamida; pipobromano; piposulfano; cloridrato de piroxantrona; plicamicina; plomestane; porfímero de sódio; porfiromicina; prednimustina; cloridrato de procarbazina; puromicina; cloridrato de puromicina; pirazofurin; riboprina; Romidapsin; safingol; cloridrato de safingol; semustina; simtrazene; sparfosate de sódio; sparsomicina; cloridrato de spirogermanium; espiromustina; espiroplatina; Tratamentos com células tronco, tais como PDA-001; estreptonigrina; estreptozoeina; sulofenur; talisomicin; tecogalan de sódio; taxotere; tegafur; cloridrato de teloxantrona; temoporfina; tenipósido; teroxirona; testolactona; tiamiprina; tioguanina; tiotepa; tiazofurina; tirapazamina; citrato de toremifeno; acetato de trestolona; fosfato triciribina; trimetrexato; glucuronato de trimetrexato; triptorrelina; cloridrato de tubulozol; mostarda de uracila; uredepa; vapreotido; verteporfin; sulfato de vinblastina; sulfato de vincristina; vindesina; sulfato de vindesina; sulfato de vinapidina; sulfato de vinglicinato; sulfato de vinleurosina; tartarato de vinorelbina; sulfato de vinrosidina; sulfato de vinzolidina; vorozol; zeniplatina; zinostatina; e cloridrato de zorubicina.

[244] Outras drogas anti câncer incluem, mas não estão limitados a: 20- epi 1,25 di-hidroxivitamina D3; 5 etiniluracila; abiraterona; aclarubicina; acilfulveno; adecipenol; adozelesina; aldesleucina; Antagonistas ALL TK; altretamina; ambamustina; amidox; amifostina; ácido aminolvulínico; amrubicin; amsacrina; anagrelídeo; anastrozol; andrografolídeo; inibidores da angiogênese; antagonista D; antagonista G; Antarelix; anti dorsalização de proteína morfogenética 1; antiandrogênio, carcinoma da próstata; antiestrogênio; antinaoplaston; Os oligonucleótidos anti-sentido; glicinato de afidicolina; moduladores do gene da apoptose; reguladores da apoptose; ácido apurínico; ara CDP DL PTBA; arginina-desaminase; asulacrina; atamestano; atrimustina; axinastatina 1; axinastatina 2; axinastatin 3; azasetron; azatoxin; azatirosina; derivados de bacatina III; balanol; batimastat; Antagonistas de BCR/ABL; benzoclorinas; benzoílestaurosporina; derivados de beta lactama; aletina beta; betaclamicina B; ácido betulínico; b inibidor FGF; bicalutamida; bisantreno; bisaziridinilspermina; bisnafida; um bistrateno; bizelesina; breflate; bropirimina; budotitano; butionina sulfoximina; calcipotriol; calfostina C; derivados de camptotecina; capecitabina; triazolamino carboxamida; carboxiamidotriazol; CaRest M3; CARN 700; inibidor derivado da cartilagem; carzelesina; inibidores da caseína-quinase (ICOS); castanospermina; cecropina B; cetrorelix; clorinas; cloroquinoxalina sulfonamida; cicaprost; cis porfirina; cladribina; Análogos de clomifeno; clotrimazol; colismicina A; colismicina B; combretastatina A4; combretastatin analógica; conagenin; crambescidina 816; crisnatol; Criptoficina 8; derivados de criptoficina A; curacina; ciclopentantraquinonas; cicloplatam; cipemicin; ocfosfato de citarabina; fator de citolitico; citostatina; dacliximab; decitabina; desidrodidemnina B; deslorelina; dexametasona; dexifosfamide; dexrazoxana; dexverapamil; diaziquona; didemnina B; didox; dietilnorspermina; di-hidrotestosterona 5 azacitidina; dihidrotaxol, 9; dioxamicin; difenil espiromustina; docetaxel; docosanol; dolasetron; doxifluridina; doxorrubicina; droloxifeno; dronabinol; duocarmicina SA; ebseleno; ecomustina; edelfosina; edrecolomab; eflornithina; elemeno; emitefur; epirubicina; epristeride; estramustina analógica; agonistas de estrogênio; antagonistas de estrogênio; Etanidazol; fosfato de etoposido; exemestano; fadrozol; fazarabina; fenretinide; filgrastim; finasterida; flavopiridol; flezelastina; fluasterona; fludarabina; cloridrato de fluorodaunorunicina; forfenimex; formestane; fostriecina; fotemustina; gadolinio texafirina; nitrato de gálio; galocitabina; ganirelix; inibidores de gelatinase; gemcitabina; inibidores de glutationa; hepsulfam; heregulina; bisacetamida hexametileno; hipericina; ácido ibandrônico; idarubicina; idoxifeno; idramantone; ilmofosina; ilamastat; imatinib (por exemplo, Gleevec), imiquimod; péptidos imunoestimulantes; insulina como fator de crescimento 1 inibidor do receptor; agonistas de interferon; interferons; interleucinas; iobenguane; iododoxorubicin; ipomeanol, 4; iroplact; irsogladina; isobengazol; isohomohalicondrin B; itasetron; jasplakinolide; kahalalide F; lamelarina N triacetato; lanreotide; leinamicin; lenograstim; sulfato lentinano; leptolstatin; letrozol; leucemia fator de inibição; leucócitos interferon alfa; leuprolide + estrogênio + progesterona; leuprorrelina; levamisol; liarozol; análogo de poliamina linaar; peptídeo dissacarídeo lipofílico; compostos de platina lipofílicos; lissoclinamida 7; lobaplatina; lombricina; lometrexol; lonidamina; losoxantrona; loxoribina; lurtotecan; lutécio texafirina; lisofillina; péptidos líticos; maitansina; Um mannostatin; marimastat; masoprocol; maspin; inibidores de matrilisina; inibidores de metaloproteinase de matriz; menogaril; merbarone; meterelin; metioninase; metoclopramida; Inibidor da MIF; mifepristone; miltefosina; mirimostim; mitoguazone; mitolactol; análogos de mitomicina; mitonafide; mitotoxina fator de crescimento de fibroblasto saporina; mitoxantrona; mofarotene; molgramostim; Erbitux, gonadotrofina coriônica humana; monofosforil-lípido A + sk da parede celular de miobactéria; mopidamol; agente anticancerígeno de mostarda; micaperóxido B; extrato de parede celular micobacteriana; miriaporone; N acetildinalina; Benzamidas N- substituídas; nafarelin; nagrestip; naloxona + pentazocina; napavin; naphterpin; nartograstim; nedaplatina; nemorubicina; ácido neridronic; nilutamide; nisamicin; moduladores de óxido nítrico; antioxidante nitróxido; nitrullin; oblimersen (GENASENSE®); O6-benzilguanina; octreotida; oquicenona; oligonucleotídeos; onapristona; ondansetron; ondansetron; oracin; indutor de citocinas orais; ormaplatina; osaterona; oxaliplatina; oxaunomicina; paclitaxel; análogos de paclitaxel; derivados de paclitaxel; palauamina; palmitoilrhizoxin; ácido pamidrónico; panaxitriol; panomifene; parabatina; pazelliptina; pegaspargase; peldesina; polissulfato de pentosano de sódio; pentostatina; pentrozol; perflubron; perfosfamida; álcool perílico; fenazinomicina; fenilacetato; inibidores de fosfatase; picibanil; cloridrato de pilacarpina; pirarubicina; piritrexim; placetina A; placetina B; inibidor do ativador do plasminogênio; complexo de platina; compostos de platina; complexo de platina-triamina; porfímero de sódio; porfiromicina; prednisona; propil-bis acridona; prostaglandina J2; inibidores de proteassoma; uma proteína com base modulador imune; inibidor de proteína-quinase C; inibidores da proteína- quinase C, microalgal; inibidores de tirosina-fosfatase de proteína; inibidores de fosforilase de purina nucleosido; purpurinas; pirazoloacridina; conjugado de hemoglobina piridoxilada polioxietileno; antagonistas de raf; raltitrexed; ramosetron; inibidores de ras farnesil-transferase de proteínas; inibidores de ras; ras inibidor GAP; reteliptina desmetilada; rênio Re 186 etidronate; rizoxina; ribozimas; Retinamida RII; rohituquina; romurtida; roquinimex; rubiginona B1; ruboxil; safingol; saintopin; SarCNU; um sarcophitol; sargramostim; Sdi 1 mimicos; semustina; inibidor 1 derivado de senescência; oligonucleidos de sentido; inibidores de transdução de sinal; sizofirano; sobuzoxano; borocaptato de sódio; fenilacetato de sódio; solverol; proteína somatomedin vinculativo; sonermin; ácido esparfósico; espicamicina D; espiromustina; splenopentin; espongistatina 1; esqualamina; stipiamide; inibidores de estromelisina; sulfinosina; superativo antagonista peptídeo intestinal vasoativo; suradista; suramin; suainsonina; tallimustina; metiodeto de tamoxifeno; tauromustina; tazarotene; tecogalan de sódio; tegafur; tellurapirilium; inibidores de telomerase; temoporfina; tenipósido; tetraclorodecaoxide; tetrazomina; taliblastina; tiocoralina; trombopoietina; mimético trombopoietina; timalfasina; agonista do receptor de timopoietina; thimotrinan; hormônio estimulador da tireóide; etiopurpurina acetato de estanho; tirapazamina; bicloreto de titanoceno; topsentin; toremifeno; inibidores de tradução; tretinoína; triacetiluridina; triciribina; trimetrexato; triptorrelina; tropisetron; turosterida; inibidores de tirosina-cinase; tirfostinas; Inibidores de UBC; ubenimex; fator inibidor de crescimento derivado de seio urogenital; antagonistas do receptor de uroquinase; vapreotido; variolina B; velaresol; veramina; Verdins; verteporfin; vinorelbina; vinxaltina; Vitaxina; vorozol; zanoterone; zeniplatina; zilascorb; e zinostatina stimalamer.

[245] Em uma forma de realização, o segundo agente ativo é inibidor de proteassoma. Em uma forma de realização, o inibidor do proteassoma é bortezomib, o dissulfiram, a epigalocatequina-3-galato, salinosporamide A, carfilzomib, ONX 0912, CEP-18770, ou MLN9708.

[246] Em uma forma de realização, o segundo agente ativo é inibidor de HDAC. Em uma forma de realização, o inibidor de HDAC é vorinostat, Romidepsin, panobinostat, ácido valpróico, belinostat, mocetinostat, abexinostat, entinostat, SB939, resminostat, givinostat, CUDC-101, AR-42, CHR- 2845, CHR-3996, 4SC-202, CG200745, ACY-1215, o sulforafano, quevetrina, ou tricostatina A.

[247] Em uma forma de realização, o segundo agente ativo é inibidor mitótico. Em uma forma de realização, o inibidor da mitose é taxanos, alcalóides de vinca, ou colchicina. Em uma forma de realização, o taxano é paclitaxel (Abraxane) ou docetaxel. Em uma forma de realização, o alcalóide de vinca é vinblastina, vincristina, vindesina ou vinorelbina.

[248] Segundos agentes ativos específicos incluem, mas não estão limitados a, oblimersen (GENASENSE®), remicade, docetaxel, celecoxib, melfalan, dexametasona (DECADRON®), esteróides, gemcitabina, cisplatina, temozolomida, etoposido, ciclofosfamida, Temodar, carboplatina, procarbazina, Gliadel, tamoxifeno, topotecan, metotrexato, ARISA®, taxol, taxotere, fluorouracila, leucovorina, irinotecan, xeloda, CPT-11, interferon alfa, interferon alfa peguilado (por exemplo, PEG INTRON-A), capecitabina, cisplatina, tiotepa, fludarabina, carboplatina, daunorrubicina lipossomal, citarabina, doxetaxol, pacilitaxel, vinblastina, IL-2, GM-CSF, dacarbazina, vinorelbina, ido zoledrico, palmitronate, Biaxin, busulfan, prednisona, bisfosfonato, o trióxido de arsênio, vincristina, doxorrubicina (DOXIL ®), paclitaxel, ganciclovir, adriamicina, fosfato de estramustina de sódio (EMCYT®), sulindac e etoposido.

5.5 BIOMARCADORES

[249] São aqui proporcionados métodos relacionados com a utilização de mRNA ou protepinas como biomarcadores para determinar a eficácia da terapia do câncer. Os níveis de mRNA ou de proteína podem ser utilizados para determinar se um agente em particular é suscetível de ser bem-sucedido no tratamento de um tipo específico de câncer, por exemplo, linfoma não-Hodgkin.

[250] Um marcador biológico ou "biomarcador" é uma substância cuja detecção indica um estado biológico particular, tal como, por exemplo, a presença de câncer. Em algumas formas de realização, os biomarcadores podem ser determinados individualmente, ou vários marcadores biológicos podem ser medidos simultaneamente.

[251] Em algumas formas de realização, um "biomarcador" indica uma mudança no nível de expressão do mRNA que pode ser correlacionado com o risco ou a progressão de uma doença, ou com a suscetibilidade da doença para um dado tratamento. Em algumas formas de realização, o biomarcador é um ácido nucleico, tal como um mRNA ou cDNA.

[252] Em formas de realização adicionais, um "biomarcador" indica uma mudança no nível de polipeptídeo ou expressão de proteínas que podem ser correlacionados com o risco, susceptibilidade ao tratamento, ou progressão de uma doença. Em algumas formas de realização, o biomarcador pode ser um polipeptídeo ou proteína, ou um fragmento do mesmo. O nível relativo de proteínas específicas pode ser determinadas por métodos conhecidos na arte. Por exemplo, métodos de anticorpo com base, tal como uma imunotransferência, ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA), ou outros métodos podem ser utilizados.

5.6 MÉTODOS DE TRATAMENTO E PREVENÇÃO

[253] Em uma forma de realização, é aqui proporcionado um método de tratamento e prevenção do câncer, que compreende administrar a um paciente um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto da Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[254] Em uma outra forma de realização, é aqui proporcionado um método de gestão do câncer, que compreende administrar a um paciente um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo.

[255] São aqui proporcionados métodos para o tratamento ou gestão de linfoma, particularmente não-Hodgkin. Em algumas formas de realização, são aqui fornecidos métodos para o tratamento ou gestão de linfoma não-Hodgkin (NHL), incluindo, mas não limitado a, linfoma difuso de células B grandes (LDGCB), utilizando fatores prognósticos.

[256] Também são aqui proporcionados métodos de tratamento de pacientes que foram previamente tratados para o câncer, mas que são não- responsivos à terapia padrão, bem como aqueles que não tenham sido previamente tratados. A invenção também abrange métodos de tratamento de doentes, independentemente da idade do paciente, embora algumas doenças ou distúrbios sejam mais comuns em determinados grupos etários. A invenção abrange ainda métodos para o tratamento de pacientes que tenham sido submetidos a cirurgia, em uma tentativa de tratar a doença ou condição em causa, bem como aqueles que não têm. Como os pacientes com câncer têm manifestações clínicas heterogêneas e os resultados clínicos diferentes, o tratamento dado a um paciente pode variar, dependendo de seu prognóstico. O médico experiente será capaz de determinar prontamente sem experimentação indevida agentes específicos secundários, tipos de cirurgia, e os tipos de terapia padrão com base em não-droga que pode ser eficazmente utilizada para tratar um paciente individual com câncer.

[257] Tal como aqui utilizado, o termo "câncer" inclui, mas não está limitado a, tumores sólidos e tumores provenientes do sangue. O termo "câncer" se refere a doenças dos tecidos da pele, órgãos, sangue, e vasos, incluindo, mas não se limitando a, cânceres da bexiga, ossos, sangue, cérebro, mama, colo do útero, peito, cólon, endrometrium, esófago, olho, cabeça, rim, fígado, nódulos linfáticos, pulmões, boca, garganta, ovários, pâncreas, próstata, reto, estômago, testículos, garganta, e do útero. Cânceres específicos incluem, mas não estão limitados a, neoplasia avançada, amiloidose, neuroblastoma, meningioma, hemangiopericitoma, múltiplos metástase cerebral, multiformas glioblastoma, glioblastoma, glioma do tronco cerebral, mau prognóstico de tumor cerebral maligno, glioma maligno, glioma maligno recorrente, astrocitoma anaplásico, oligodendroglioma anaplásico, tumor neuroendócrino, adenocarcinoma retal, câncer do colorretal de Dukes C & D, carcinoma de colorretal operável, metástase de carcinoma hepatocelular, o sarcoma de Kaposi, leucemia karotipo mieloblástica aguda, linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, linfoma cutâneo de células T, cutâneo de células B linfoma, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular de baixo grau, o melanoma maligno, mesotelioma maligno, síndrome pleural mesotelioma derrame maligno, carcinoma peritoneal, carcinoma seroso papilífero, sarcoma ginecológico, sarcoma de tecido mole, esclerodermia, vasculite cutânea, células de Langerhans, leiomiossarcoma, ossificante fibrodisplasia progressiva, câncer do hormônio da próstata refratário, sarcoma ressecado de tecido mole de alto risco, carcinoma hepatocelular irresecável, macroglobulinemia de Waldenstrom, latente do mieloma, indolente, câncer de trompas de falópio, câncer de próstata independente andrógeno, câncer de próstata não metastático andrógeno de fase dependente IV, câncer insensível a hormônio de próstata, câncer de próstata insensível a quimioterapia, carcinoma papilífero da tireóide, carcinoma folicular da tiróide, carcinoma medular da tiróide, e leiomioma

[258] Em certas formas de realização, o câncer é um tumor proveniente do sangue. Em certas formas de realização, o tumor metastático é proveniente do sangue. Em certas formas de realização, o tumor proveniente do sangue é resistente à drogas. Em certas formas de realização, o câncer é mieloma ou linfoma.

[259] Em certas formas de realização, o câncer é um tumor sólido. Em certas formas de realização, o tumor sólido é metastático. Em certas formas de realização, o tumor sólido é resistente a medicamentos. Em certas formas de realização, o tumor sólido é o carcinoma hepatocelular, o câncer da próstata, câncer do ovário, ou glioblastoma.

[260] Em certas formas de realização, são aqui proporcionados métodos para o tratamento, prevenção e/ou gestão da doença em pacientes com insuficiência renal. Em certas formas de realização, são aqui proporcionados método de tratamento, prevenção e/ou gestão de câncer em pacientes com insuficiência renal. Em certas formas de realização, são aqui fornecidos métodos para ajuste adequado da dose para pacientes com insuficiência renal devido a, mas não se limitando a, doença, envelhecimento, ou outros fatores do paciente.

[261] Em certas formas de realização, são proporcionados aqui métodos para o tratamento, prevenção e/ou gestão de mieloma múltiplo reincidente/refratário em pacientes com insuficiência renal ou de um sintoma do mesmo, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, estereoisômero, tautômero ou suas misturas racêmicas a um paciente tendo mieloma múltiplo reincidente/refratário com função renal debilitada. Em uma forma de realização, são proporcionados aqui métodos para o tratamento, prevenção e/ou gestão de mieloma múltiplo reincidente/refratário em pacientes com insuficiência renal ou de um sintoma da mesma, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de (S)-3-(4-((4-morflinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um paciente tendo mieloma múltiplo reincidente/refratário com função renal debilitada.

[262] Em uma forma de realização, são proporcionados aqui métodos para prevenir mieloma múltiplo reincidente/refratário em pacientes com insuficiência renal ou de um sintoma da mesma, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, estereoisômero, tautômero ou suas misturas racêmicas a um paciente em risco de ter um mieloma múltiplo reincidente/refratário com função renal debilitada. Em uma forma de realização, são proporcionados aqui métodos para prevenir mieloma múltiplo reincidente/refratário em pacientes com insuficiência renal ou de um seu sintoma, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de (S)-3-(4- ((4-morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um doente em risco de ter mieloma múltiplo reincidente/refratário com função renal debilitada.

[263] Em certas formas de realização, são aqui proporcionados métodos para o tratamento, prevenção e/ou gestão de mieloma múltiplo reincidente/refratário em pacientes com insuficiência renal.

[264] Em certas formas de realização, uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz do composto é de cerca de 0,005 a cerca de 1000 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 500 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 250 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 0,5 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 1 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 0,1 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 1 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 0,02 a cerca de 25 mg por dia, ou de cerca de 0,05 a cerca de 10 mg por dia.

[265] Em certas formas de realização, uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz é desde cerca de 0,005 até cerca de 1.000 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 500 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 250 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg por dia , desde cerca de 0,1 até cerca de 100 mg por dia, de cerca de 0,5 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 1 a cerca de 100 mg por dia, de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 0,1 a cerca de 50 mg por dia , a partir de cerca de 0,5 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 1 a cerca de 50 mg por dia, de cerca de 0,02 a cerca de 25 mg por dia, ou de cerca de 0,05 a cerca de 10 mg em dias alternados.

[266] Em certas formas de realização, a quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz é de cerca de 0,1, cerca de 0,2, cerca de 0,5, cerca de 1, cerca de 2, cerca de 5, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 60, cerca de 70, cerca de 80, cerca de 90, cerca de 100, ou cerca de 150 mg por dia.

[267] Em uma forma de realização, o intervalo da dose diária recomendada de um composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, para as condições descritas aqui se encontram dentro da faixa de desde cerca de 0,5 mg a cerca de 50 mg por dia, preferencialmente dada como uma dose única uma vez por dia, ou em doses divididas ao longo do dia. Em algumas formas de realização, a dosagem varia entre cerca de 1 mg a cerca de 50 mg por dia. Em outras formas de realização, a dosagem varia de cerca de 0,5 a cerca de 5 mg por dia. Doses específicas por dia incluem 0,1, 0,2, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 , 46, 47, 48, 49 ou 50 mg por dia.

[268] Em uma forma de realização específica, a dosagem inicial recomendada pode ser de 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 ou 50 mg por dia. Em uma outra forma de realização, a dose inicial recomendada pode ser de 0,5, 1, 2, 3, 4, ou 5 mg por dia. A dose pode ser aumentada para 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 e 50 mg/dia. Em uma forma de realização específica, o composto pode ser administrado em uma quantidade de cerca de 25 mg/dia para pacientes com LNH (por exemplo, DLBCL). Em uma forma de realização particular, o composto pode ser administrado em uma quantidade de cerca de 10 mg/dia para pacientes com LNH (por exemplo, DLBCL).

[269] Em certas formas de realização, a quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz é de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 9 mg/kg/dia, de 0,01 a cerca de 8 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 7 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 6 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 5 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 4 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 3 mg/kg/dia, de cerca de 0,01 a cerca de 2 mg/kg/dia, ou cerca de 0,01 a cerca de 1 mg/kg/dia.

[270] A dose administrada pode também ser expressa em unidades diferentes de mg/kg/dia. Por exemplo, as doses para administração parentérica podem ser expressas em mg/m2/dia. Um versado na técnica facilmente saberia como converter doses de mg/kg/dia para mg/m2/dia para dada altura ou peso de um paciente, ou ambos (ver, www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm). Por exemplo, uma dose de 1 mg/kg/dia para um humano de 65 kg é aproximadamente igual a 38 mg/m2/dia.

[271] Em certas formas de realização, a quantidade do composto administrada é suficiente para proporcionar uma concentração do composto no plasma, no estado estacionário, que vai desde cerca de 0,001 a cerca de 500 μM, cerca de 0,002 a cerca de 200 μM, cerca de 0,005 a cerca de 100 μM, cerca de 0,01 a cerca de 50 μM, de cerca de 1 a cerca de 50 μM, cerca de 0,02 a cerca de 25 μM, de cerca de 0,05 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,1 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,5 a cerca de 20 μM, ou desde cerca de 1 a cerca de 20 μM.

[272] Em outras formas de realização, a quantidade do composto administrada é suficiente para proporcionar uma concentração do composto no plasma, no estado estacionário, que vão desde cerca de 5 a cerca de 100 nM, cerca de 5 a cerca de 50 nM, cerca de 10 a cerca de 100 nM, cerca de 10 a cerca de 50 nM ou de cerca de 50 a cerca de 100 nM.

[273] Tal como aqui utilizado, o termo "concentração no plasma em estado estacionário" é a concentração atingida após um período de administração de um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Uma vez que o estado estacionário é atingido, existem picos menores e depressões na curva dependente do tempo da concentração no plasma do composto.

[274] Em certas formas de realização, a quantidade do composto administrada é suficiente para proporcionar uma concentração máxima no plasma (concentração de pico) de composto, variando de cerca de 0,001 a cerca de 500 μM, cerca de 0,002 a cerca de 200 μM, cerca de 0,005 a cerca de 100 μM, cerca de 0,01 a cerca de 50 μM, de cerca de 1 a cerca de 50 μM, cerca de 0,02 a cerca de 25 μM, de cerca de 0,05 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,1 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,5 a cerca de 20 μM, ou cerca de 1 a cerca de 20 μM.

[275] Em certas formas de realização, a quantidade do composto administrada é suficiente para proporcionar uma concentração mínima no plasma (concentração mínima) do composto, variando de cerca de 0,001 a cerca de 500 μM, cerca de 0,002 a cerca de 200 μM, cerca de 0,005 a cerca de 100 μM, cerca de 0,01 a cerca de 50 μM, de cerca de 1 a cerca de 50 μM, cerca de 0,01 a cerca de 25 μM, de cerca de 0,01 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,02 a cerca de 20 μM, de cerca de 0,02 a cerca de 20 μM, ou cerca de 0,01 a cerca de 20 μM.

[276] Em certas formas de realização, a quantidade do composto administrada é suficiente para proporcionar uma área sob a curva (AUC) do composto, variando de cerca de 100 a cerca de 100000 ng * h/mL, cerca de 1.000 a cerca de 50.000 ng * h/mL , a partir de cerca de 5000 a cerca de 25000 ng * h/mL, ou desde cerca de 5000 a cerca de 10000 ng * hr/mL.

[277] Em certas formas de realização, o paciente a ser tratado com um dos métodos aqui proporcionados não tenha sido tratado com a terapia anticâncer, antes da administração do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em certas formas de realização, o paciente a ser tratado com um dos métodos aqui proporcionados tem sido tratado com a terapia anticâncer, antes da administração do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em certas formas de realização, o paciente a ser tratado com um dos métodos aqui proporcionados desenvolveu resistência a drogas para a terapia anticâncer.

[278] Os métodos aqui proporcionados abrangem o tratamento de um paciente, independentemente da idade do paciente, embora algumas doenças ou distúrbios sejam mais comuns em determinados grupos etários. É ainda aqui proporcionado um método para o tratamento de um paciente que foi submetido a cirurgia, em uma tentativa de tratar a doença ou condição em causa, bem como em que um não tem. Uma vez que os indivíduos com câncer têm manifestações clínicas heterogêneas e os resultados clínicos diferentes, o tratamento dado a um determinado assunto pode variar, dependendo do seu prognóstico. O médico experiente será capaz de determinar prontamente sem experimentação excessiva, agentes específicos secundários, tipos de cirurgia, e tipos de terapia padrão à base de não-droga que pode ser eficazmente utilizada para tratar um paciente individual com câncer.

[279] Dependendo da doença a ser tratada e da condição do paciente, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, podem ser administrados por via oral, parentérica (por exemplo, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, CIV, injeção ou infusão intracisternal, injeção subcutânea ou implante), inalação, nasal, vaginal, retal, sublingual, ou tópica (por exemplo, transdérmica ou local) vias de administração. O composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, podem ser formulados, isoladamente ou em conjunto, em unidade de dosagem adequada com excipientes farmaceuticamente aceitáveis, transportadores, adjuvantes e veículos, apropriados para cada via de administração.

[280] Em uma forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co- cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado oralmente. Em uma outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co- cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado por via parentérica. Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado por via intravenosa.

[281] O composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, pode ser entregue como uma dose única, tal como, por exemplo, uma injeção única de bolus, ou comprimidos ou pílulas orais; ou ao longo do tempo, tal como, por exemplo, a infusão contínua ao longo do tempo ou em doses divididas ao longo do tempo de bolus. O composto pode ser administrado várias vezes, se necessário, por exemplo, até que o paciente experimenta doença estável ou regressão, ou até que a progressão da doença do paciente ou experiências de toxicidade inaceitável. Por exemplo, a doença estável para tumores sólidos em geral, significa que o diâmetro perpendicular de lesões mensuráveis que não aumentou em 25 % ou mais da última medição. Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST) Guidelines, Journal of the National Cancer Institute 92(3): 205-216 (2000). A doença estável ou a falta dela é determinada por métodos conhecidos na técnica, tais como a avaliação dos sintomas do paciente, exame físico, a visão do tumor que foi fotografada usando raios-X, CAT, PET, ou ressonância magnética e outras formas de realização de avaliação normalmente aceitas.

[282] O composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; diária ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, pode ser administrado uma vez por dia (QD), ou dividido em doses múltiplas diárias, tais como duas vezes (BID), três vezes por dia (TID), e quatro vezes por dia (QID). Além disso, a administração pode ser contínua (isto é, diariamente ou em dias consecutivos a cada dia), intermitente, por exemplo, em ciclos (isto é, incluindo dias, semanas ou meses de repouso, sem fármaco). Tal como aqui utilizado, o termo "diariamente" destina-se ao composto terapêutico, tal como o composto de Fórmula I, que é administrado uma vez ou mais do que uma vez por dia, por exemplo, por um período de tempo. O termo "contínuo" pretende significar que um composto terapêutico, tal como o composto de Fórmula I, é administrado diariamente por um período contínuo de pelo menos 10 dias a 52 semanas. O termo "intermitente" ou "intermitentemente" tal como aqui utilizado pretende significar parar e iniciar a intervalos regulares ou irregulares. Por exemplo, a administração intermitente do composto de Fórmula I é a administração durante um a seis dias por semana, em ciclos de administração (por exemplo, a administração diária de dois a oito semanas consecutivas, em seguida um período de repouso, sem a administração de até uma semana), ou administração em dias alternados. O termo "ciclando", tal como aqui utilizado destina-se a significar que um composto terapêutico, tal como o composto de Fórmula I, é administrado diariamente ou em contínuo, mas com um período de repouso.

[283] Em algumas formas de realização, a frequência de administração está no intervalo de cerca de uma dose por dia a cerca de uma dose mensal. Em certas formas de realização, a administração é de uma vez por dia, duas vezes por dia, três vezes por dia, quatro vezes por dia, uma vez a cada dois dias, duas vezes por semana, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, ou uma vez a cada quatro semanas. Em uma forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado uma vez por dia. Em uma outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado duas vezes por dia. Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado três vezes por dia. Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co- cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado quatro vezes por dia.

[284] Em certas formas de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado uma vez por dia desde o primeiro dia a seis meses, desde uma semana até três meses, a partir de uma a quatro semanas, de uma semana a três semanas ou de uma semana a duas semanas. Em certas formas de realização, o composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou solvato deste, é administrado uma vez por dia durante uma semana, duas semanas, três semanas ou quatro semanas. Em uma forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado uma vez por dia durante uma semana. Em uma outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado uma vez por dia durante duas semanas. Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado uma vez por dia durante três semanas. Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, é administrado uma vez por dia durante quatro semanas.

5.6.1 TERAPIA COMBINADA COM UM SEGUNDO AGENTE ATIVO

[285] O composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo farmaceuticamente aceitável, também pode ser combinado ou utilizado em combinação com outros agentes terapêuticos úteis no tratamento e/ou prevenção do câncer aqui descritos.

[286] Em uma forma de realização, é aqui proporcionado um método de tratamento, prevenção ou gestão de câncer, compreendendo a administração a um paciente de (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo do mesmo; em combinação com um ou mais segundos agentes ativos e, opcionalmente, em combinação com a terapia de radiação, as transfusões de sangue, ou cirurgia. Exemplos de segundos agentes ativos são aqui descritos (ver, por exemplo, a seção 5.4).

[287] Tal como aqui utilizado, o termo "em combinação" inclui o uso de mais de uma terapia (por exemplo, um ou mais agentes profiláticos e/ou terapêuticos). No entanto, o uso do termo "em combinação" não restringe a ordem em que as terapias (por exemplo, agentes profiláticos e/ou terapêuticos) são administrados a um paciente com uma doença ou distúrbio. Uma primeira terapia (por exemplo, um agente profilático ou terapêutico, tal como um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato , co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo) pode ser administrado antes de (por exemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, ou 12 semanas antes), concomitantemente com, ou subsequentemente ao (por exemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, uma semana, duas semanas, três semanas, 4 semanas, cinco semanas, 6 semanas , 8 semanas, ou 12 semanas após a administração) de uma segunda terapia (por exemplo, um agente profilático ou terapêutico) para o paciente. Terapia tripla é também aqui contemplada.

[288] A administração do composto da Fórmula I e um ou mais segundos agentes ativos a um paciente pode ocorrer simultaneamente ou sequencialmente pela mesma ou por diferentes vias de administração. A adequabilidade de uma via particular de administração empregue para um agente ativo particular dependerá do próprio agente ativo (por exemplo, se pode ser administrado oralmente sem se decompor antes de entrar na corrente sanguínea) e o câncer a ser tratado.

[289] A via de administração do composto da Fórmula I é independente da via de administração de uma segunda terapia. Em uma forma de realização, o composto de Fórmula I é administrado por via oral. Em uma outra forma de realização, o composto de Fórmula I é administrado por via intravenosa. Assim, de acordo com estas formas de realização, o composto de Fórmula I é administrado por via oral ou por via intravenosa, e a segunda terapia pode ser administrada por via oral, parentérica, intraperitoneal, intravenosa, intraarterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, retal, transbucal, intranasal, lipossomal, por inalação, vaginal, intraocular, administração local por cateter ou stent, por via subcutânea, intra-adiposa, intra-articular, por via intratecal ou em uma forma de dosagem de liberação lenta. Em uma forma de realização, o composto de Fórmula I e uma segunda terapia são administrados pela mesma via de administração, oralmente ou por via IV. Em uma outra forma de realização, o composto de Fórmula I é administrado por um modo de administração, por exemplo, por via intravenosa, ao passo que o segundo agente (agente anticâncer) é administrado por outro modo de administração, por exemplo, por via oral.

[290] Em uma forma de realização, o segundo agente ativo é administrado por via intravenosa ou por via subcutânea e, uma vez ou duas vezes por dia em uma quantidade de desde cerca de 1 a cerca de 1000 mg, cerca de 5 a cerca de 500 mg, desde cerca de 10 a cerca de 350 mg, ou desde cerca de 50 a cerca de 200 mg. A quantidade específica de segundo agente ativo dependerá do agente específico utilizado, do tipo de doença a ser tratada ou gestão, a severidade e estágio da doença, e a quantidade do composto de Fórmula I aqui proporcionado e quaisquer agentes ativos adicionais opcionais concorrentemente administrados ao paciente. Em certas formas de realização, o segundo agente ativo é oblimersen (GENASENSE®), GM-CSF, G-CSF, SCF, EPO, taxotere, irinotecano, dacarbazina, ácido transretinóico, topotecano, pentoxifilina, ciprofloxacina, dexametasona, vincristina, doxorrubicina, inibidores da COX 2 inibidor, IL2, IL8, IL18, IFN, Ara-C, vinorelbina, ou uma combinação dos mesmos.

[291] Em certas formas de realização, GM-CSF, G-CSF, SCF ou EPO são administrados por via subcutânea durante cerca de cinco dias em um ciclo de quatro ou seis semanas em uma quantidade que varia desde cerca de 1 até cerca de 750 mg/m2/dia, de cerca de 25 a cerca 500 mg/m2/dia, a partir de cerca de 50 a cerca de 250 mg/m2/dia, ou cerca de 50 a cerca de 200 mg/m2/dia. Em certas formas de realização, GM-CSF pode ser administrado em uma quantidade de desde cerca de 60 a cerca de 500 mcg/m2 por via intravenosa durante 2 horas ou de cerca de 5 a cerca de 12 mcg/m2/dia por via subcutânea. Em certas formas de realização, G-CSF pode ser administrado subcutaneamente em uma quantidade de cerca de 1 mcg/kg/dia inicialmente e pode ser ajustado dependendo da subida das contagens totais de granulócitos. A dose de manutenção de G-CSF pode ser administrada em uma quantidade de cerca de 300 (em pacientes mais pequenos) ou 480 mcg por via subcutânea. Em certas formas de realização, EPO pode ser administrada por via subcutânea, em uma quantidade de 10,000 Unidades 3 vezes por semana.

[292] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado tendo melfalano e dexametasona para pacientes com amiloidose. Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e esteróides podem ser administrados a pacientes com amiloidose.

[293] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado tendo gemcitabina e cisplatina em pacientes com câncer de bexiga de células transicionais localmente avançado ou metastático.

[294] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com um segundo ingrediente ativo como se segue: temozolomida para pacientes pediátricos com tumores cerebrais reincidentes ou progressivos ou neuroblastoma recorrente; celecoxib, etoposídeo e ciclofosfamida para o câncer CNS recidiva ou progressiva; Temodar para pacientes com meningioma recorrente ou progressivo, meningioma maligno, hemangiopericitoma, múltiplas metástases cerebrais, tumores cerebrais de recaída, ou multiformas de glioblastoma recém-diagnosticados; irinotecano a pacientes com glioblastoma recorrente; carboplatina para pacientes pediátricos com glioma do tronco cerebral; procarbazina para pacientes pediátricos com gliomas malignos progressiva; ciclofosfamida para pacientes com tumores malignos cerebrais de mau prognóstico, recém-diagnosticados ou multiformas de glioblastoma recorrente; Gliadel® para alto grau gliomas malignos recorrentes; temozolomida e tamoxifeno para astrocitoma anaplásico; ou topotecano para gliomas, glioblastoma, astrocitoma anaplásico ou oligodendroglioma anaplásico.

[295] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado tendo metotrexato, ciclofosfamida, taxano, Abraxane, lapatinib, herceptina, inibidores de aromatase, moduladores seletivos de estrogênio, antagonistas do receptor de estrogênio, e/ou PLX3397 (Plexxikon) para pacientes com câncer da mama metastático.

[296] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado tendo temozolomida para pacientes com tumores neuroendócrinos.

[297] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado tendo gemcitabina a doentes com câncer metastático recorrente da cabeça ou pescoço.

[298] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado tendo gemcitabina para pacientes com câncer de pâncreas.

[299] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com câncer de cólon em combinação com ARISA®, avastatin, taxol, e/ou taxotere.

[300] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado tendo capecitabina e/ou PLX4032 (Plexxikon) para pacientes com câncer colorretal refratário ou doentes que falharam na terapia de primeira linha ou tiveram baixo desempenho no adenocarcinoma retal ou de cólon.

[301] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com fluorouracil, leucovorina e irinotecano em pacientes com câncer colorretal Dukes C & D ou em pacientes que tenham sido previamente tratados de câncer colorretal metastático.

[302] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com câncer colorretal refratário em associação com a capecitabina, Xeloda, e/ou CPT-11.

[303] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado tendo capecitabina e irinotecano em pacientes com câncer colorretal refratário ou em pacientes com carcinoma colorretal inoperável ou metastático.

[304] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado sozinho ou em combinação com interferon alfa ou capecitabina em pacientes com carcinoma hepatocelular inoperável ou metastático; ou com cisplatina e tiotepa em pacientes com câncer de fígado primário ou metastático.

[305] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com interferon alfa peguilado em doentes com sarcoma de Kaposi.

[306] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com fludarabina, carboplatina, e/ou topotecano para pacientes com leucemia mielóide refratário ou recorrente ou agudo de alto risco.

[307] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com daunorrubicina lipossomal, topotecano e/ou citarabina em pacientes com leucemia mieloblástica aguda de karotipo desfavorável.

[308] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em associação com gemcitabina, Abraxane, erlotinib, geftinib, e/ou irinotecano em pacientes com câncer de pulmão de células não-pequenas.

[309] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com carboplatina e irinotecano em pacientes com câncer de pulmão de células não-pequenas.

[310] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado tendo doxetaxol a doentes com câncer do pulmão de células não pequenas que tenham sido previamente tratados com carbo/VP 16 e radioterapia.

[311] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com carboplatina e/ou o taxotere, ou em combinação com carboplatina, pacilitaxel e/ou radioterapia do tórax, em doentes com câncer do pulmão de células não-pequenas.

[312] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com Taxotere em pacientes com câncer de pulmão de células não- pequenas de estágio IIIB ou IV.

[313] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com oblimersen (Genasense ®) em pacientes com câncer de pulmão de células pequenas.

[314] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com ABT-737 (Abbott Laboratories) e/ou obatoclax (GX15-070) em pacientes com linfoma e outros cânceres do sangue.

[315] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado sozinho ou em combinação com um segundo ingrediente ativo, tal como vinblastina ou fludarabina para pacientes com vários tipos de linfomas, incluindo, mas não limitados a, linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, linfoma cutâneo de células T, linfoma cutâneo de célula B, linfoma difuso de células B grandes ou linfoma folicular de baixo grau reincidente ou refratário.

[316] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com taxotere, IL-2, IFN, GM-CSF, PLX4032 (Plexxikon) e/ou dacarbazina em pacientes com vários tipos ou fases de melanoma.

[317] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado sozinho ou em combinação com vinorelbina em pacientes com mesotelioma maligno, ou câncer do pulmão de células não-pequenas em fase IIIB com implantes de células pleurais ou síndrome mesotelioma maligna de derrame pleural.

[318] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com vários tipos ou fases do mieloma múltiplo em combinação com dexametasona, ácido zoledrônico, palmitronato, GM-CSF, Biaxin, vinblastina, melfalano, bussulfano, ciclofosfamida, IFN, palmidronato, prednisona, bisfosfonato, celecoxib, o trióxido de arsênio, PEG INTRON-A , vincristina, ou uma combinação dos mesmos.

[319] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com mieloma múltiplo recorrente ou refratário em associação com doxorrubicina (DOXIL ®), vincristina e/ou dexametasona (Decadron ®).

[320] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com vários tipos ou fases de câncer do ovário, tais como carcinoma peritoneal, carcinoma seroso papilar, câncer do ovário refratário ou recorrência do câncer do ovário, em combinação com o taxol, carboplatina, doxorrubicina, gemcitabina, cisplatina, xeloda, paclitaxel, dexametasona, ou uma combinação dos mesmos.

[321] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com vários tipos ou fases do câncer da próstata, em combinação com xeloda, 5 FU/LV, gemcitabina, irinotecano mais gemcitabina, ciclofosfamida, vincristina, dexametasona, GM-CSF, o celecoxib, o taxotere, o ganciclovir, o paclitaxel, adriamicina, docetaxel, estramustina, Emcyt, denderon ou uma combinação dos mesmos.

[322] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com vários tipos ou fases de câncer das células renais, em combinação com capecitabina, IFN, tamoxifeno, IL-2, GM-CSF, Celebrex, ou uma combinação dos mesmos.

[323] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com vários tipos ou fases de câncer sarcoma ginecológico, do útero ou do tecido mole, em combinação com o IFN, um inibidor de COX-2, tais como Celebrex, e/ou sulindac.

[324] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com vários tipos ou fases de tumores sólidos em combinação com celebrex, etoposido, ciclofosfamida, docetaxel, apecitabina, IFN, tamoxifeno, IL- 2, GM-CSF, ou uma combinação dos mesmos.

[325] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com esclerodermia ou vasculite cutânea em combinação com celebrex, etoposido, ciclofosfamida, docetaxel, apecitabine, IFN, tamoxifeno, IL- 2, GM-CSF, ou uma combinação dos mesmos.

[326] Também é aqui englobado um método de aumento da dosagem de um fármaco anticâncer ou agente que pode ser administrado com segurança e eficazmente a um paciente, que compreende a administração ao paciente (por exemplo, um humano) de um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Os pacientes que podem se beneficiar com este método são aqueles propensos a sofrer de um efeito adverso associado com drogas anticâncer para o tratamento de um câncer específico da pele, tecido subcutâneo, nódulos linfáticos, cérebro, pulmão, fígado, osso, intestino, cólon, coração, pâncreas, suprarrenal, rim, próstata, mama, colorretal, ou suas combinações. A administração de um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, alivia ou reduz efeitos adversos que são de tal gravidade que de modo que limitam a quantidade de fármaco anticâncer.

[327] Em uma forma de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado por via oral e diariamente em uma quantidade que varia de cerca de 0,1 a cerca de 150 mg, desde cerca de 1 a cerca de 50 mg, ou desde cerca de 2 até cerca de 25 mg, antes, durante, ou após a ocorrência do efeito adverso associado com a administração de drogas anti-câncer a um paciente. Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado em combinação com agentes específicos tais como heparina, aspirina, warfarina, ou G-CSF para evitar efeitos adversos que estão associados com drogas anti-cancerosas, tais como, mas não limitados a neutropenia ou trombocitopenia.

[328] Em uma forma de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com doenças e distúrbios associados com, ou caracterizados por, a angiogênese indesejada, em combinação com ingredientes ativos adicionais, incluindo, mas não limitados a, drogas anti-câncer, anti-inflamatórios, anti- histamínicos, antibióticos e esteróides.

[329] Em uma outra forma de realização, é aqui compreendido um método de tratamento, prevenção e/ou gestão de câncer, que compreende administrar o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co- cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, em conjunto com (por exemplo, antes, durante, ou após) a terapia convencional, incluindo, mas não se limitando a, cirurgia, imunoterapia, terapia biológica, a terapia de radiação, ou outro tratamento com base em não-droga utilizado atualmente para tratar , prevenir ou controlar o câncer. A utilização combinada do composto aqui proporcionado e terapia convencional pode proporcionar um regime de tratamento original que é inesperadamente eficaz em alguns pacientes. Sem ser limitado pela teoria, acredita-se que o composto de Fórmula I pode proporcionar efeitos aditivos ou sinérgicos quando administrados concomitantemente com a terapia convencional.

[330] Como discutido aqui noutro local, aqui englobadas é um método de reduzir, tratar e/ou para evitar efeitos adversos ou indesejados, associados com a terapia convencional, incluindo, mas não se limitando a, cirurgia, quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, terapia biológica e imunoterapia. Um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e outro ingrediente ativo pode ser administrado a um doente antes de, durante, ou após a ocorrência do efeito adverso associado com a terapia convencional.

[331] Em uma forma de realização, o composto de Fórmula I pode ser administrado em uma quantidade que varia de cerca de 0,1 a cerca de 150 mg, desde cerca de 1 a cerca de 25 mg, ou desde cerca de 2 até cerca de 10 mg por via oral e por dia administrada isoladamente ou em combinação com um segundo agente ativo aqui descrito (ver, por exemplo, a seção 5.4), antes de, durante, ou após o uso de terapia convencional.

[332] Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e doxetaxol são administrados a pacientes com câncer do pulmão de células não pequenas, que foram tratadas previamente com carbo/VP 16 e radioterapia.

5.6.2 USO COM TERAPIA DE TRANSPLANTE

[333] O composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, aqui fornecido pode ser usado para reduzir o risco da doença de enxerto versus hospedeiro (GVHD). Portanto, é aqui englobado um método de tratamento, prevenção e/ou gestão de câncer, que compreende administrar o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal de clatrato farmaceuticamente aceitável, ou um polimorfo do mesmo, em conjunto com a terapia de transplante.

[334] Como os versados na técnica estão cientes, o tratamento do câncer baseia-se frequentemente nas fases e mecanismo da doença. Por exemplo, como transformação leucêmica inevitável desenvolve em certos estágios do câncer, transplante de células sanguíneas periféricas progenitoras, preparação de células tronco hematopoiéticas ou medula óssea, podem ser necessários. A utilização combinada do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, aqui proporcionados e terapia de transplante proporcionam um único e inesperado sinergismo. Em particular, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, apresentam uma atividade imunomoduladora que pode proporcionar efeitos aditivos ou sinérgicos quando administrados concomitantemente com a terapia de transplante em pacientes com câncer.

[335] O composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, pode trabalhar em combinação com a terapia de transplante de reduzir as complicações associadas com o procedimento invasivo do transplante e o risco de GVHD. É aqui englobado um método de tratamento, prevenção e/ou gestão de câncer que compreende a administração a um paciente (por exemplo, um ser humano) do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, antes de, durante, ou após o transplante de sangue do cordão umbilical, de sangue da placenta, células progenitoras do sangue periférico, a preparação de células progenitoras hematopoéticas, ou de medula óssea. Alguns exemplos de células estaminais adequadas para utilização nos métodos aqui proporcionados são divulgados na patente US no. 7.498.171, a divulgação a qual é aqui incorporada por referência na sua totalidade.

[336] Em uma forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com mieloma múltiplo antes, durante ou após o transplante de células sanguíneas periféricas progenitoras autólogas.

[337] Em uma outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com reincidência de mieloma múltiplo após o transplante de células tronco.

[338] Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e prednisona são administrados como terapia de manutenção para pacientes com mieloma múltiplo após o transplante de células-tronco autólogas.

[339] Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e dexametasona são administrados como terapia de resgate para pós transplante de baixo risco para os pacientes com mieloma múltiplo.

[340] Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e dexametasona são administrados como terapia de manutenção para pacientes com mieloma múltiplo após o transplante de medula óssea autóloga.

[341] Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado após a administração de dose elevada de melfalano e o transplante de células-tronco autólogas para pacientes com mieloma múltiplo responsivo a quimioterapia.

[342] Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e PEG INTRO-A são administrados como manutenção à terapia para pacientes com mieloma múltiplo, após o transplante de células tronco periféricas autólogas CD34-selecionadas.

[343] Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado com quimioterapia de consolidação pós transplante para pacientes com mieloma múltiplo recém-diagnosticado para avaliar anti-angiogênese.

[344] Em ainda outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e dexametasona são administrados como terapia de manutenção após consolidação de DCEP, após o tratamento com uma dose elevada de melfalan e o transplante de células sanguíneas periféricas progenitoras de pacientes de 65 anos de idade ou mais velhos com mieloma múltiplo.

[345] Em uma forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com LNH (por exemplo, DLBCL) antes de, durante, ou após o transplante de células sanguíneas periféricas progenitoras autólogas.

[346] Em uma outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado a pacientes com LNH (por exemplo, DLBCL) após um transplante de células tronco.

5.6.3 TERAPIA DE CICLOS

[347] Em certas formas de realização, os agentes profiláticos ou terapêuticos aqui previstos são ciclicamente administrados a um paciente. Terapia de ciclos envolve a administração de um agente ativo durante um período de tempo, seguido por um repouso durante um período de tempo e repetindo esta administração sequencial. Terapia de ciclos pode reduzir o desenvolvimento de resistência a uma ou mais das terapias, evitar ou reduzir os efeitos secundários de uma das terapias, e/ou melhora a eficácia do tratamento.

[348] Consequentemente, em certas formas de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, aqui proporcionado é administrado diariamente em uma única ou em doses divididas em um ciclo de quatro a seis semanas com um período de repouso de cerca de uma semana ou duas semanas. O método de ciclos permite ainda mais que a frequência, número e comprimento dos ciclos de dosagem sejam aumentados. Assim, englobado aqui em certas formas de realização está a administração de um composto aqui fornecido, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um seu sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, farmaceuticamente ou um polimorfo do mesmo, para mais ciclos do que é típico quando este é administrado sozinho. Em certas formas de realização, um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado durante um maior número de ciclos que normalmente causam toxicidade limitante da dose em um paciente a quem um segundo ingrediente ativo não está também sendo administrado.

[349] Em uma forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado diariamente e continuamente durante três ou quatro semanas a uma dose de cerca de 0,1 a cerca de 150 mg/d, seguido por uma pausa de uma ou duas semanas.

[350] Em uma outra forma de realização, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e um segundo ingrediente ativo, são administrados por via oral, com administração do composto de Fórmula I que ocorre de 30 a 60 minutos antes de um segundo ingrediente ativo, durante um ciclo de quatro a seis semanas. Em certas formas de realização, a combinação do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e um segundo ingrediente ativo é administrado por perfusão intravenosa durante cerca de 90 minutos a cada ciclo. Em certas formas de realização, um ciclo compreende a administração de cerca de 0,1 a cerca de 150 mg/dia do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou um polimorfo do mesmo, e de cerca de 50 a cerca de 200 mg/m2/dia de um segundo ingrediente ativo por dia durante três a quatro semanas e, em seguida, uma ou duas semanas de descanso. Em certas formas de realização, o número de ciclos durante os quais o tratamento combinatório é administrado a um paciente varia desde cerca de um a cerca de 24 ciclos, a partir de cerca de dois a cerca de 16 ciclos, ou a partir de cerca de quatro a cerca de três ciclos.

5.7 COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E FORMAS DE DOSAGEM

[351] Em uma forma de realização, são proporcionados aqui composições farmacêuticas e formas de dosagem, que compreendem o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um seu sal, solvato, hidrato farmaceuticamente, co-cristal, clatrato, ou polimorfo. Em uma outra forma de realização, as composições farmacêuticas e formas de dosagem compreendem ainda um ou mais excipientes.

[352] Em certas formas de realização, as composições farmacêuticas e formas de dosagem aqui proporcionadas também compreendem um ou mais ingredientes ativos adicionais. Consequentemente, as composições farmacêuticas e formas de dosagem aqui proporcionadas compreendem o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um seu sal, solvato, hidrato farmaceuticamente, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, e um segunda agente ativo. Exemplos de segundo ingrediente opcional, ou ativo adicionais são divulgados aqui (ver, por exemplo, seção 4.3).

[353] As formas de unidade de dosagem únicas aqui proporcionadas são adequadas para administração oral, mucosa (por exemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal ou retal), parentérica (por exemplo, subcutânea, intravenosa, injeção em bolus, intramuscular ou intra-arterial), tópica (por exemplo, gotas oculares ou outras preparações oftálmicas), transdérmica, ou administração transcutânea de um paciente. Exemplos de formas de dosagem incluem, mas não estão limitados a: comprimidos; cápsulas; cápsulas, tais como cápsulas de gelatina elásticas moles; cachets; pastilhas; comprimidos; dispersões; supositórios; pós; aerossóis (por exemplo, pulverizadores ou inaladores nasais); géis; formas líquidas de dosagem adequadas para administração oral ou via mucosa a um paciente, incluindo suspensões (por exemplo, suspensões líquidas aquosas ou não aquosas, emulsões de óleo-em-água ou uma emulsão água-em- óleo), emulsões líquidas, soluções e elixires; As formas de dosagem líquidas adequadas para administração parentérica a um paciente; gotas para os olhos ou outras preparações oftálmicas adequadas para administração tópica; e sólidos estéreis (por exemplo, sólidos cristalinos ou amorfos) que podem ser reconstituídos para proporcionar formas de dosagem líquidas adequadas para administração parentérica a um paciente.

[354] A composição, forma, e tipo de formas de dosagem aqui proporcionadas podem variar, dependendo da sua utilização. Por exemplo, uma forma de dosagem utilizada no tratamento agudo de uma doença pode conter maiores quantidades de um ou mais dos ingredientes ativos do que uma forma de dosagem utilizada no tratamento crônico da mesma doença. Do mesmo modo, uma forma de dosagem parentérica pode conter quantidades menores de um ou mais dos ingredientes ativos do que uma forma de dosagem oral utilizada para tratar a mesma doença. Veja-se, por exemplo, Ciências Farmacêuticas de Remington, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

[355] Se um excipiente particular é adequado para incorporação em uma composição farmacêutica ou forma de dosagem aqui fornecida depende de uma variedade de fatores, incluindo, mas não limitado a, a via de administração. Por exemplo, formas de dosagem orais tais como comprimidos podem conter excipientes não adequados para utilização em formas de dosagem parentérica. A adequabilidade de um excipiente particular pode também depender dos ingredientes ativos específicos na forma de dosagem. Por exemplo, a decomposição de alguns ingredientes ativos pode ser acelerada por alguns excipientes tais como lactose, ou quando expostos a água. Ingredientes ativos que compreendem aminas primárias ou secundárias são particularmente susceptíveis a essa decomposição acelerada. Consequentemente, aqui são abrangidas composições farmacêuticas e formas de dosagem que contêm pouca, se alguma, lactose. Tal como aqui utilizado, o termo "sem lactose" significa que a quantidade de lactose presente, se alguma, é insuficiente para aumentar substancialmente a taxa de degradação de um ingrediente ativo.

[356] As composições isentas de lactose aqui proporcionadas podem compreender excipientes que são listados, por exemplo, em US Pharmacopeia (USP) 25 NF20 (2002). Em certas formas de realização, as composições isentas de lactose compreendem ingredientes ativos, um aglutinante/enchimento, e um lubrificante em quantidades farmaceuticamente compatíveis e aceitáveis farmaceuticamente. Em certas formas de realização, formas de dosagem isentas de lactose compreendem ingredientes ativos, celulose microcristalina, amido pré-gelatinizado, e estearato de magnésio.

[357] Além disso são aqui englobadas as composições farmacêuticas anidras e formas de dosagem compreendendo ingredientes ativos, uma vez que a água pode facilitar a degradação de alguns compostos. Por exemplo, a adição de água (por exemplo, 5 %) é amplamente aceita nas técnicas farmacêuticas como um meio de simular a armazenagem em longo prazo de modo a determinar características tais como a vida de prateleira ou a estabilidade de formulações ao longo do tempo. Veja-se, por exemplo, Jens T. Carstensen, Drug Estabilidade: Princípios e Prática, 2d. Ed., Marcel Dekker, Nova Iorque, NY, 1995, pp. 379-80. Com efeito, a água e o calor aceleram a decomposição de alguns compostos. Assim, o efeito da água sobre uma formulação pode ter grande significado uma vez que a umidade e/ou umidade são vulgarmente encontradas durante a fabricação, manuseamento, embalagem, armazenagem, expedição e utilização das formulações.

[358] As composições farmacêuticas anidras e formas de dosagem aqui proporcionados podem ser preparados utilizando umidade anidro ou contendo ingredientes de baixo teor de umidade ou condições de baixa umidade. As composições farmacêuticas e formas de dosagem que compreendem lactose e pelo menos um ingrediente ativo que compreende uma amina primária ou secundária são, de preferência anidro, se for esperado um contato substancial com umidade e/ou umidade durante a fabricação, embalagem e/ou armazenamento.

[359] Uma composição farmacêutica anidra deve ser preparada e armazenada de modo a que a sua natureza anidra seja mantida. Assim, em certas formas de realização, são proporcionadas neste documento composições anidras embaladas utilizando materiais para evitar a exposição a água, tais que possam ser incluídas em kits adequados. Exemplos de embalagens adequadas incluem, mas não estão limitados a, folhas hermeticamente vedadas, plásticos, recipientes de doses unitárias (por exemplo, frascos), embalagens de bolhas, e embalagens de tiras.

[360] Aqui são englobadas composições farmacêuticas e formas de dosagem que compreendem um ou mais compostos que reduzem a taxa em que um ingrediente ativo se decomporá. Tais compostos, que são referidos aqui como "estabilizantes," incluem, mas não estão limitados a, antioxidantes tais como ácido ascórbico, tampões de pH ou tampões de sal.

[361] Tal como as quantidades e tipos de excipientes, as quantidades e tipos específicos de ingredientes ativos em uma forma de dosagem podem diferir dependendo de fatores tais como, mas não limitado a, a via pela qual é para ser administrado aos pacientes. Em certas formas de realização, as formas de dosagem aqui proporcionados compreendem o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um seu sal, solvato, hidrato farmaceuticamente, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, em uma quantidade que varia a partir de cerca de 0,10 a cerca de 1000 mg, de cerca de 0,10 a cerca de 500 mg, desde cerca de 0,10 a cerca de 200 mg, desde cerca de 0,10 a cerca de 150 mg, desde cerca de 0,10 a cerca de 100 mg, ou desde cerca de 0,10 a cerca de 50 mg. Em certas formas de realização, as formas de dosagem aqui proporcionados compreendem o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um seu sal, solvato, hidrato farmaceuticamente, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, em uma quantidade de cerca de 0,1, cerca de 1, cerca de 2, cerca de 5, cerca de 7,5, cerca de 10, cerca de 12,5, cerca de 15, cerca de 17,5, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 50, cerca de 100, cerca de 150, ou cerca de 200 mg.

5.7.1 FORMAS DE DOSAGEM ORAL

[362] Em certas formas de realização, as composições farmacêuticas aqui fornecidas que são adequadas para administração oral, são formuladas como formas de dosagem discretas, exemplos dos quais incluem, mas não estão limitadas a, comprimidos (por exemplo, comprimidos mastigáveis), drágeas, cápsulas, e líquidos (por exemplo, sabor xaropes). Tais formas de dosagem contêm quantidades predeterminadas de ingredientes ativos e podem ser preparados por vários métodos conhecidos em farmácia. Ver em geral, Ciências Farmacêuticas de Remington, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

[363] Em certas formas de realização, as formas de dosagem oral aqui proporcionados são preparadas por combinação dos ingredientes ativos em uma mistura íntima com pelo menos um excipiente de acordo com técnicas de composição farmacêutica convencionais. Os excipientes podem tomar uma ampla variedade de formas dependendo da forma de preparação desejada para administração. Por exemplo, os excipientes adequados para utilização em formas de dosagem líquidas ou em aerossol oral incluem, mas não estão limitados a, água, glicóis, óleos, alcoóis, agentes aromatizantes, conservantes, e agentes corantes. Exemplos de excipientes adequados para uso em formas de dosagem sólidas orais (por exemplo, pós, comprimidos, cápsulas, e cápsulas pequenas) incluem, mas não estão limitados a, amidos, açúcares, celulose microcristalina, diluentes, agentes de granulação, lubrificantes, ligantes, e agentes de desintegração.

[364] Devido à sua facilidade de administração, os comprimidos e as cápsulas representam as formas unitárias de dosagem oral mais vantajosas, caso em que são empregues excipientes sólidos. Se desejado, os comprimidos podem ser revestidos por técnicas aquosas ou não aquosas padrão. Tais formas de dosagem podem ser preparadas por vários métodos conhecidos em farmácia. Em certas formas de realização, as composições farmacêuticas e formas de dosagem são preparadas misturando uniformemente e intimamente os ingredientes ativos com veículos líquidos, veículos sólidos finamente divididos, ou ambos, e então dando forma ao produto na apresentação desejada se necessário.

[365] Em certas formas de realização, um comprimido é preparado por compressão ou moldagem. Em certas formas de realização, os comprimidos são compactados sendo preparados por compressão em uma máquina apropriada, os ingredientes ativos em uma forma de escoamento livre, por exemplo, em pó ou grânulos, opcionalmente misturados com um excipiente. Em certas formas de realização, os comprimidos moldados são feitos por moldagem em uma máquina adequada de uma mistura de um composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte.

[366] Exemplos de excipientes que podem ser utilizados em formas de dosagem oral aqui proporcionados incluem, mas não estão limitados a, ligantes, cargas, desintegrantes e lubrificantes. Aglutinantes adequados para utilização nas composições farmacêuticas e formas de dosagem aqui proporcionados incluem, mas não estão limitados a, amido de milho, amido de batata ou outros amidos, gelatina, gomas naturais e sintéticas tais como acácia, alginato de sódio, ácido algínico, outros alginatos, em pó de tragacanto, goma de guar, celulose e seus derivados (por exemplo, etil celulose, acetato de celulose, carboximetil celulose cálcica, carboximetil celulose de sódio), polivinilpirrolidona, metil celulose, amido pré-gelatinizado, hidroxipropilmetil celulose, (por exemplo, 2208, 2906 Nos. , 2910), celulose microcristalina, e suas misturas.

[367] As formas adequadas de celulose microcristalina incluem, mas não estão limitados a, AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH- 105 (FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA), e suas misturas. Um ligante específico é uma mistura de celulose microcristalina e carboximetil celulose de sódio (por exemplo, AVICEL RC-581). Excipientes anidro umidade ou baixo adequados ou aditivos incluem AVICEL-PH- 103 ™ e Starch 1500 LM.

[368] Exemplos de cargas adequadas para utilização nas composições farmacêuticas e formas de dosagem aqui proporcionadas incluem, mas não estão limitados a, talco, carbonato de cálcio (por exemplo, grânulos ou pó), celulose microcristalina, celulose em pó, dextratos, caulino, manitol, ácido silícico, sorbitol, amido, amido pré-gelatinizado, e suas misturas. Em certas formas de realização, o ligante ou material de enchimento nas composições farmacêuticas aqui fornecidas está presente em cerca de 50 a cerca de 99 por cento em peso da composição farmacêutica ou forma de dosagem.

[369] Os desintegrantes são utilizados nas composições aqui proporcionadas para fornecer a capacidade de comprimidos de se desintegrarem quando expostos a um ambiente aquoso. Os comprimidos que contêm desintegrante demasiado podem desintegrar-se em armazenamento, enquanto que os que contêm muito pouco podem não se desintegrar a uma velocidade desejada ou sob as condições desejadas. Assim, uma quantidade suficiente de desintegrante que não seja nem muito nem pouco para alterar prejudicialmente a liberação dos ingredientes ativos deve ser utilizada para formar formas sólidas de dosagem por via oral aqui proporcionadas. A quantidade de desintegrante utilizado varia com base no tipo de formulação. Em certas formas de realização, as composições farmacêuticas aqui fornecidas compreendem de cerca de 0,5 a cerca de 15 por cento em peso ou cerca de 1 até cerca de 5 por cento em peso de desintegrante.

[370] Os desintegrantes que são adequados para utilização nas composições farmacêuticas e formas de dosagem aqui proporcionadas incluem, mas não estão limitados a, ágar-ágar, ácido algínico, carbonato de cálcio, celulose microcristalina, croscarmelose de sódio, crospovidona, polacrilina de potássio, glicolato de amido sódico, de batata ou de tapioca amido, outros amidos, amido pré-gelatinizado, outros amidos, argilas, outras alginas, outras celuloses, gomas, e suas misturas.

[371] Os lubrificantes que são adequados para utilização em composições e formas de dosagem farmacêutica aqui proporcionados incluem, mas não estão limitados a, estearato de cálcio, estearato de magnésio, óleo mineral, óleo mineral leve, glicerina, sorbitol, manitol, polietileno glicol, outros glicóis, ácido esteárico, lauril sulfato de sódio, talco, óleo vegetal hidrogenado (por exemplo, óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de girassol, óleo de sésamo, óleo de oliva, óleo de milho, e óleo de soja), estearato de zinco, oleato de etila, laureato de etila, ágar, e suas misturas. Lubrificantes adicionais incluem, mas não estão limitados a, um gel de sílica silóide (AEROSIL200, WR Grace Co., Baltimore, MD), um aerossol coagulado de sílica sintética (Degussa Co. de Plano, TX), CAB-O-SIL (um dióxido de silício pirogênico, Cabot Co. de Boston, MA), e suas misturas. Em certas formas de realização, se utilizado de todo, os lubrificantes são usados em uma quantidade de menos do que cerca de 1 por cento em peso das composições farmacêuticas ou formas de dosagem em que estão incorporadas.

[372] Em certas formas de realização, é aqui proporcionada uma forma sólida de dosagem oral, compreendendo o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo seu; e um ou mais excipientes selecionados de lactose anidra, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílica anidra coloidal, e gelatina.

[373] Em certas formas de realização, é aqui proporcionada uma forma sólida de dosagem oral, compreendendo o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo seu; e lactose anidra, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílica anidra coloidal, e gelatina.

[374] Em certas formas de realização, é aqui proporcionada uma forma de dosagem oral sólida, compreendendo um sal de hidrocloreto do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo do mesmo; e um ou mais excipientes selecionados de lactose anidra, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílica anidra coloidal, e gelatina.

[375] Em certas formas de realização, é aqui proporcionada uma forma de dosagem oral sólida, compreendendo um sal de hidrocloreto do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo; e lactose anidra, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílica anidra coloidal, e gelatina.

5.7.2 FORMAS DE DOSAGEM DE LIBERAÇÃO ATRASADA

[376] Em certas formas de realização, os ingredientes ativos aqui fornecidos são administrados por meio de liberação controlada ou por dispositivos de entrega. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, aqueles descritos nas Patentes US Nos.: 3.845.770; 3.916.899; 3.536.809; 3.598.123; 4.008.719, 5.674.533, 5.059.595, 5.591.767, 5.120.548, 5.073.543, 5.639.476, 5.354.556, e 5.733.566, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Em certas formas de realização, formas de dosagem são tal de modo a serem utilizadas para proporcionar liberação lenta ou controlada de um ou mais ingredientes ativos utilizando, por exemplo, hidropropilmetil celulose, outras matrizes poliméricas, géis, membranas permeáveis, sistemas osmóticos, revestimentos multicamadas, micropartículas, lipossomas, microesferas, ou uma combinação destes para proporcionar o perfil de liberação desejado em proporções variáveis. Aqui são englobadas formas de dosagem unitárias individuais adequadas para administração oral, incluindo, mas não limitadas a, comprimidos, cápsulas, cápsulas de gel, e drágeas que sejam adaptadas para liberação-controlada.

[377] Todos os produtos farmacêuticos de liberação controlada têm um objetivo comum de melhorar a terapia medicamentosa em relação à obtida por suas contrapartes não controladas. Idealmente, a utilização de uma preparação ótima de liberação controlada concebida em tratamento médico é caracterizada por um mínimo de substância de fármaco a ser empregue para curar ou controlar a condição em um período mínimo de tempo. As vantagens das formulações de liberação controlada incluem uma atividade do fármaco, reduzindo a frequência de dosagem alargada, e aumento da complacência do paciente. Além disso, as formulações de liberação controlada podem ser utilizadas para afetar o tempo de início da ação ou outras características, tais como os níveis sanguíneos do fármaco, e podem, assim, influenciar a ocorrência de efeitos secundários (por exemplo, adversos).

[378] A maioria das formulações de liberação controlada são concebidas para liberar inicialmente uma quantidade de fármaco (ingrediente ativo) que prontamente produz o efeito terapêutico desejado, e gradual e continuamente liberar outras quantidades de fármaco para manter este nível de efeito terapêutico ou profilático durante um período prolongado de tempo. De forma a manter este nível constante de fármaco no corpo, o fármaco deve ser liberado da forma de dosagem a uma taxa que substitua a quantidade de fármaco a ser metabolizado e excretado do corpo. A liberação controlada de um ingrediente ativo pode ser estimulada por várias condições, incluindo, mas não se limitando a, pH, temperatura, enzimas, água, ou outras condições fisiológicas ou compostos.

5.7.3 FORMAS DE DOSAGEM PARENTERAIS

[379] As formas de dosagem parenterais podem ser administradas a pacientes por várias vias incluindo, mas não limitadas a, subcutânea, intravenosa (incluindo injeção de bolus), intramuscular e intra-arterial. Porque a sua administração ultrapassa tipicamente as defesas naturais dos pacientes contra contaminantes, as formas de dosagem parenterais são preferencialmente estéreis ou capazes de serem esterilizadas antes da administração a um paciente. Exemplos de formas de dosagem parenterais incluem, mas não estão limitados a, soluções prontas para injeção, produtos secos prontos para serem dissolvidos ou suspensos em um veículo farmaceuticamente aceitável para injeção, suspensões prontas para injeção e emulsões.

[380] Alguns veículos adequados que podem ser utilizados para proporcionar formas de dosagem parenterais aqui proporcionados incluem, mas não estão limitados a: Água para Injeção USP; veículos aquosos tais como, mas não limitados a, Cloreto de Sódio, Injeção de Ringer, Injeção de Dextrose, Dextrose e Injeção de Cloreto de Sódio, e Injeção de Ringer Lactada; veículos miscíveis em água, tais como, mas não limitados a, álcool etílico, polietileno glicol, e polipropileno glicol; e veículos não aquosos tais como, mas não limitados a, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, óleo de sésamo, oleato de etila, miristato de isopropila, e benzoato de benzila.

[381] Os compostos que aumentam a solubilidade de um ou mais dos ingredientes ativos aqui descritos podem também ser incorporados nas formas de dosagem parentéricas aqui proporcionados. Por exemplo, ciclodextrina e seus derivados podem ser utilizados para aumentar a solubilidade de um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co- cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Ver, por exemplo, Patente US N ° 5.134.127, a divulgação da qual é aqui incorporada por referência na sua totalidade.

5.7.4 FORMAS DE DOSAGEM TÓPICA E NA MUCOSA

[382] Formas de dosagem tópicas e na mucosa fornecidas aqui incluem, mas não estão limitadas a, sprays, aerossóis, soluções, emulsões, suspensões, gotas para os olhos ou outras preparações oftálmicas, ou outras formas conhecidas de um versado na técnica. Veja-se, por exemplo, Ciências Farmacêuticas de Remington, eds 16 e 18, Mack Publishing, Easton PA (1980 e 1990).; e Introdução às formas farmacêuticas de dosagem, 4- ed., Lea & Febiger, Philadelphia (1985). As formas de dosagem adequadas para tratar os tecidos das mucosas dentro da cavidade oral podem ser formulados como elixires bucais ou geles orais como.

[383] Os excipientes adequados (por exemplo, veículos e diluentes) e outros materiais que podem ser utilizados para proporcionar formas de dosagem tópicas e nas mucosas englobados neste documento dependem do tecido particular a que uma dada composição farmacêutica ou forma de dosagem irá ser aplicada. Com este fato em mente, em certas formas de realização, os excipientes incluem, mas não estão limitados a, água, acetona, etanol, etileno glicol, propileno glicol, butano-1,3-diol, miristato de isopropila, palmitato de isopropila, óleo mineral, e misturas destes, para formar soluções, emulsões ou géis, que são não-tóxicos e farmaceuticamente aceitáveis. Hidratantes ou umectantes também podem ser adicionados a composições farmacêuticas e formas de dosagem se desejado. Exemplos adicionais desses ingredientes podem ser encontrados, por exemplo, em Remington 's Pharmaceutical Sciences, 16 e 18 eds., Mack Publishing, Easton PA (1980 & 1990).

[384] O pH de uma composição farmacêutica ou forma de dosagem pode também ser ajustado para melhorar a entrega de um ou mais ingredientes ativos. Do mesmo modo, a polaridade de um portador solvente, a sua força iônica ou tonicidade podem ser ajustados para melhorar a entrega. Compostos tais como estearatos podem ser também adicionados a composições farmacêuticas ou formas de dosagem para alterar vantajosamente a hidrofilicidade ou lipofilicidade de um ou mais ingredientes ativos de modo a melhorar a entrega. A este respeito, os estearatos podem servir como veículo lipídico para a formulação, como agente emulsionante ou tensoativo, e como intensificador de entrega ou agente intensificador de penetração. Diferentes sais, hidratos ou solvatos dos ingredientes ativos podem ser utilizados para ajustar ainda mais as propriedades da composição resultante.

5.7.5 KITS

[385] Em certas formas de realização, os ingredientes ativos aqui fornecidos não são administrados a um paciente ao mesmo tempo ou pela mesma via de administração. Portanto, são aqui englobados kits que, quando utilizados pelo médico assistente, podem simplificar a administração de quantidades apropriadas de ingredientes ativos a um paciente.

[386] Em certas formas de realização, um kit aqui proporcionado compreende uma forma de dosagem de um composto aqui proporcionado, por exemplo, o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo. Em certas formas de realização, o kit aqui proporcionado compreende ainda ingredientes ativos adicionais, tais como oblimersen (GENASESE®), melfalano, G-CSF, GM-CSF, EPO, topotecano, dacarbazina, irinotecan, taxotere, IFN, inibidor de COX-2, pentoxifilina, ciprofloxacina, dexametasona, IL2, IL8, IL18, Ara-C, vinorelbina, isotretinoína, cis-13 do ácido retinóico, ou um mutante farmacologicamente ativo ou seu derivado, ou uma combinação dos mesmos. Os exemplos dos ingredientes ativos adicionais incluem, mas não estão limitados a, aqueles aqui revelados (ver, por exemplo, a seção 5.4).

[387] Em certas formas de realização, o kit aqui proporcionado compreende ainda um dispositivo que é utilizado para administrar os ingredientes ativos. Exemplos de tais dispositivos incluem, mas não estão limitados a, seringas, sacos de gotejamento, emplastros e inaladores.

[388] Em certas formas de realização, o kit aqui proporcionado compreende ainda células ou sangue para o transplante, bem como veículos farmaceuticamente aceitáveis que podem ser utilizados para administrar um ou mais ingredientes ativos. Por exemplo, se um ingrediente ativo for proporcionado em uma forma sólida que deve ser reconstituída para administração parentérica, o kit pode compreender um recipiente selado de um veículo adequado em que o ingrediente ativo pode ser dissolvido para formar uma solução estéril livre de partículas que seja adequada para administração parentérica. Exemplos de veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a: Água para Injeção USP; veículos aquosos tais como, mas não limitados a, Cloreto de Sódio, Injeção de Ringer, Injeção de Dextrose, Dextrose e Injeção de Cloreto de Sódio, e Injeção de Ringer Lactada; veículos miscíveis em água, tais como, mas não limitados a, álcool etílico, polietileno glicol, e polipropileno glicol; e veículos não aquosos tais como, mas não limitados a, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, óleo de sésamo, oleato de etila, miristato de isopropila, e benzoato de benzila.

6. EXEMPLOS

[389] Certas formas de realização da invenção são ilustradas pelos seguintes exemplos não limitativos. 6.1 Preparação de 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)-piperidina-2,6-diona

6.1.1 Éster metílico do ácido 3-hidroxi-2-metil-benzóico

[390] Ácido 3-hidroxi-2-metilbenzóico (105 g, 690 mmol) foi adicionado a MeOH (800 mL) em um balão de 2L de três pescoços de fundo redondo equipado com condensador, termômetro e barra de agitação, seguido pela adição de MeOH (250 mL). H2SO4 (10 mL, 180 mmol) foi adicionado à solução acima. A mistura de reação foi agitada a 62 ° C durante 17 horas. O solvente foi removido em vácuo. O resíduo (200 mL) foi adicionado a água (600 ml) lentamente à temperatura ambiente e um sólido branco foi formado. A suspensão foi agitada em um banho de gelo durante 30 minutos e filtrou-se. O sólido foi lavado com água (5 x 250 mL) e secou-se para obter o éster metílico do ácido 3-hidroxi-2- metil-benzóico como um sólido branco (100g, 87 % de rendimento). O composto foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional: LCMS MH = 167; 1H RMN (DMSO-d6) δ 2,28 (s, 3H, CH3), 3,80 (s, 3H, CH3), 6,96-7,03 (m, 1H, Ar), 7,09 (t, J = 7,8 Hz, 1H, Ar), 7,14-7,24 (m, 1H, Ar), 9,71 (s, 1H, OH). 6.1.2 Éster metílico do ácido 3-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-2-metil- benzóico

[391] A um frasco RB de três pescoços de 1 L equipado com barra de agitação e um termômetro, foram adicionados DMF (300 mL), 3-hidroxi-2- metilbenzoato (90 g, 542 mmol) e imidazol (92 g, 1,354 mmol). TBDMS-Cl (90 g, 596 mmol) foi adicionado à solução anterior, em porções, para controlar temperatura interna entre 15-19°C durante 20 minutos, e após a adição, temperatura interna caiu abaixo de 1°C. O banho de gelo foi removido e mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. mistura de reação foi adicionada a água gelada (500 mL), e a solução resultante foi dividida em duas porções (700 ml x 2). Cada porção foi extraída com EtOAc (700 mL). Cada camada orgânica foi lavada com água fria (350 ml) e salmoura (350 mL). As camadas orgânicas foram combinadas e secas por MgSO4. A camada orgânica combinada foi concentrada para dar 3- (terc-butil-dimetil-silaniloxi) -2- metil-benzóico, éster metílico como um óleo castanho claro (160 g, 100 % de rendimento bruto). O composto foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional: LCMS MH = 281; 1H RMN (DMSO-d6) δ -0,21 (s, 6H, CH3, CH3), 0,730,84 (m, 9H, CH3, CH3, CH3), 2,10 (s, 3H, CH3), 3,60 (s, 3H, CH3), 6,82 (dd, 1H, Ar), 6,97 (t, J = 7,9 Hz, 1H, Ar), 7,13 (dd, J = 1,1, 7,7 Hz, 1H, Ar).6.1.3 ácido 2-bromometil-3- (terc-butil-dimetil-silaniloxi)-benzóico

[392] NBS (49,8 g, 280 mmol) foi adicionado a 3-(terc-butil-dimetilsililoxi)- 2-metilbenzoato de metila (78,4 g, 280 mmol) em acetato de metila (500 mL) à temperatura ambiente para dar uma suspensão cor de laranja. A mistura de reação resultante foi aquecida em um banho de óleo a 40 ° C e iluminada por luz solar 300 em peso a refluxo durante 4 horas. A mistura de reação foi aquecida e lavada por uma solução de Na2SO3 (2 x 600 mL, 50 % de concentração saturada), água (500 mL) e salmoura (600 mL). A camada orgânica foi seca por meio de MgSO4 e descorou-se por carvão vegetal. A camada orgânica foi concentrada para dar metil éster de ácido 2-bromometil-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)- benzóico como um óleo castanho claro (96 g, 91 % de rendimento bruto). O composto foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional: LCMS M-Br = 279; 1H RMN (DMSO-d6) δ 0,05-0,11 (m, 6H, CH3, CH3), 0,82 (s, 9H, CH3, CH3, CH3), 3,65 (s, 3H, CH3), 4,74 (s, 2H, CH2), 6,94 (dd, J = 1,3, 8,1 Hz, 1H, Ar), 7,107,20 (m, 1H, Ar), 7,21-7,29 (m, 1H, Ar).6.1.4 Éster metílico do ácido 4-carbamoil –butírico

[393] A uma solução agitada de 2- (bromometil) -3- (terc- butildimetilsililoxi) benzoato de metila (137,5 g, 325 mmol) em acetonitrila (1100 mL) em um balão de 2 L de fundo redondo, adicionou-se 4,5-diamino-metil cloridrato de 5-oxopentanoato de etila (70,4 g, 358 mmol). À suspensão foi adicionado DIPEA (119 mL, 683 mmol) através de um funil de adição durante 10 minutos e a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora antes da mistura ser aquecida em um banho de óleo a 40 ° C durante 23 horas. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi agitado em éter (600 mL), e precipitou um sólido branco fora. A mistura foi filtrada e o sólido foi lavado com éter (400 mL). O filtrado foi lavado com HCl (1 N, 200 ml), NaHCO3 (sat. 200 mL) e salmoura (250 mL). A camada aquosa ácida e camada de base foram mantidas separadamente. Em seguida, o sólido foi ainda lavado com éter (250 mL) e lava -se o líquido com uma solução de ácido anterior e solução básica. As duas camadas orgânicas foram combinadas e concentradas sob vácuo para dar éster de metila de ácidO4- [4- (terc-Butil-dimetil-silaniloxi) -1-oxo-1,3-di-hidro- isoindol-2-il-di-hidro] -4-carbamoil-butirico como um óleo castanho (152 g, 115 % de rendimento bruto, 77 % de pureza por RMN de H). O composto foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional: LCMS MH = 407.6.1.5 Éster metílico do ácido 4-carbamoil-4-(1-oxo-1,3-di-2-il-4-hidroxi-di- hidro-isoindol)-butírico

[394] A uma solução fria agitada de metil 5-amino-4-(4-(terc- butildimetilsililoxi)-1-oxoisoindolin-2-il)-5-oxopentanoato de metila (152 g, 288 mmol) em DMF (500 mL) e água (55 mL), foi adicionado por K2CO3 (19,89 g, 144 mmol) em porções ao longo de 5 minutos. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 40 minutos. A mistura de reação foi resfriada em um banho de gelo. Para a mistura, HCl (12 M, 23,99 ml, 288 mmol) foi adicionado lentamente. Após a adição, acetonitrila (280 mL) foi adicionado à mistura e precipitou-se um sólido para fora. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos e filtrou-se. O sólido foi lavado com acetonitrila (50 mL x 4). O filtrado foi concentrado sob alto vácuo para dar um óleo amarelo (168 g). O óleo foi dissolvido em acetonitrila (600 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura foi filtrada e o sólido foi lavado com acetonitrila (25 mL x 2). O filtrado foi concentrado sob alto vácuo para dar um óleo amarelo (169g), que foi adicionado a uma mistura de água (1200 ml) e éter (1000 ml). A mistura foi agitada durante 3 minutos e as camadas foram separadas. A solução aquosa foi concentrada sob alto vácuo e o resíduo foi agitado em acetonitrila (160 mL) e um sólido branco foi formado após agitação durante a noite. A mistura foi filtrada para se obter 4-carbamoíl-4- (4-hidroxi-1- oxo-1,3-di-hidro-isoindol-2-il) -butírico como um sólido branco (46 g, 54 % de rendimento). O filtrado foi concentrado e o resíduo foi ainda cristalizado em acetonitrila (60 mL) para dar mais 4-carbamoil-4- (4-hidroxi-1-oxo-1,3-di-hidro- isoindol-2-il) metil -butírico éster como um sólido branco (11,7 g, 14 % de rendimento). O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia de ISCO para dar mais 4-carbamoil-4- (4-hidroxi-1-oxo-1,3-di- hidro-isoindol -2-il) -butírico como um branco sólido (13,2 g, rendimento de 15 %). O produto total obtido foi de 70,9 g em 83 % de rendimento: LCMS MH = 293; 1H RMN (DMSO-d6) δ 1,95-2,34 (m, 4H, CH2, CH2), 3,51 (s, 3H, CH3), 4,32 (d, J = 17,6 Hz, 1H, CHH), 4,49 (d, J = 17,4 Hz, 1H, CHH), 4,73 (dd, J = 4,7, 10,2 Hz, 1H, CHH), 6,99 (dd, J = 0,8, 7,9 Hz, 1H, Ar), 7,10-7,23 (m, 2H, Ar, NHH), 7,25-7,38 (m, 1H, Ar), 7,58 (s, 1H, NHH), 10,04 (s, 1H, OH).6.1.6 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina- 2,6-diona

[395] Passo 1: A uma solução de 3- (4-hidroxi-1-oxo-1,3-di-hidro-isoindol- 2-il) -piperidina-2,6-diona (2,5 g, 8,56 mmol) em THF (60 mL) foi adicionada trifenilfosfina (suportada em polímero 1,6 mmol/g, 12 g, 18,8 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos. Azodicarboxilato de diisopropila (3,96 mL, 18,8 mmol) foi adicionado a 0 ° C, e a mistura foi agitada a 0 ° C durante 30 minutos. (4-Morfolin-4-ilmetil-fenil) -metanol (2,62 g, 12,4 mmol) foi adicionado a 0 ° C, e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado. O óleo resultante foi purificado em coluna de gel de sílica eluída com cloreto de metileno e metanol (gradiente, produto saiu em 6 % de metanol) para dar 4-carbamoil-4- [4- (4-morfolin-4- ilmetil-benziloxi) -1 oxo-1,3-di-hidro-isoindol-2-il] -butírico (2,2 g, 54 % de rendimento). O produto foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional.

[396] Passo 2: A uma solução THF (50 mL) de 4-carbamoil-4- [4- (4- morfolin-4-ilmetil-benziloxi) -1-oxo-1,3-di-hidro-isoindol-2-il] - éster metílico de ácido butírico (2,2 g, 4,57 mmol) foi adicionado terc-butóxido de potássio (0,51 g, 4,57 mmol) a 0 ° C. A mistura foi agitada a 0 ° C durante 10 minutos e foi extinta com HCl a 1 N (5 mL, 5 mmol) seguido por NaHCO3 saturado (25 mL). A mistura foi extraída com EtOAc (2 x 50 mL). A camada orgânica foi lavada com água (30 mL), salmoura (30 mL), secou-se sobre MgSO4 e concentrou-se. Ao sólido resultante foi adicionado EtOAc (10 mL) seguido por hexano (10 mL) sob agitação. A suspensão foi filtrada para dar 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1- oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona como um sólido branco (1,5 g, 73 % de rendimento). HPLC: coluna Waters Symmetry C18, 5um, 3,9 x 150 mm, 1 mL/min, 240 nm, gradiente de 95/5 acetonitrila/H3PO4 a 0,1 % em 5 min,: tR = 4,78 min (97,5 %); pf: 210-212 ° C; 1H RMN (DMSO-d6) δ 1,86-2,09 (m, 1H, CHH), 2,29-2,38 (m, 4H, CH2, CH2), 2,44 (dd, J = 4,3, 13,0 Hz, 1H, CHH), 2,53 - 2,64 (m, 1H, CHH), 2,82-2,99 (m, 1H, CHH), 3,46 (s, 2H, CH2), 3,52-3,61 (m, 4H, CH2, CH2), 4,18-4,51 (m, 2H, CH2), 5,11 (dd, J = 5,0, 13,3 Hz, 1H, NCH), 5,22 (s, 2H, CH2), 7,277,38 (m, 5H, Ar), 7,40-7,53 (m, 3H, Ar), 10,98 (s, 1H, NH) 13C RMN (DMSO-d6) 0 22,36, 31,21, 45,09, 51,58, 53,14, 62,10, 66,17, 69,41, 114,97, 115,23, 127,64, 128,99, 129,81, 129,95, 133,31, 135,29, 137,68, 153,50, 168,01, 170,98, 172,83; LCMS: 465; Análise Calculada para C25H27N3O5 + 0,86 H2O: C, 64,58; H, 6,23; N, 9,04; Encontrado: C, 64,77; H, 6,24; N, 8,88.

[397] (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona e (R)-3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi) foram preparados -1-oxoisoindolin-2-il) piperidina-2,6-diona a partir da 3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona através de separação quiral.

6.2 ENSAIOS 6.2.1 Produção de citocinas por células T

[398] As células T foram isoladas de creme leucocitário por seleção negativa usando o Coquetel de Enriquecimento de Célula T RosetteSep®. Procedimentos do fabricante foram seguidos de acordo. Todas as placas de 96 poços foram pré-revestidos com 3 μg/ml de anticorpo CD3 anti-humano em 100 l 1X PBS durante 4 horas a 37 ° C. As placas foram lavadas três vezes com RPMI- 1640 Meio Completo antes do ensaio de células T. As células T foram então plaqueadas em placas pré-revestidas de CD3, a uma densidade de 2,5 x 105 células/poço em 180 l RPMI-1640 Meio Completo. As células foram tratadas com 20 l 10X compostos titulados a 10, 1, 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001 e 0,00001 μM. As concentrações finais de DMSO eram 0,25 %. As placas foram incubadas durante 48 horas a 37 ° C, 5 % de CO2. Após 48 horas, os sobrenadantes foram recolhidos e testados por um ensaio de multiplex do grânulo citométrico (CBA) para as seguintes citocinas/quimiocinas, a IL-2, IL-3, IL-5, IL-10, IL-13, IL -15, a IL-17a, GM- CSF, G-SCF, IFN—Y, TNF-α e RANTES. As placas CBA foram analisadas no instrumento Luminex IS100. Os dados de cada doador foram representados graficamente utilizando o software GraphPad Prism 5.0 e expressos como a média pg/ml ± SEM e de controle de DMSO % ± SEM.

[399] As concentrações relativamente baixas (0,01 nM a 1 nM) de composto I aumentaram IL-2, IL-3, IL-5, IL-10, IL-13, GM-CSF, IFN-y, TNF-α e RANTES (10 nM) em células T humanas estimuladas (figura 1 e Fig. 2). Aumento da produção da maioria das citocinas e quimiocinas atingiu um pico de 1 a 10 nM composto I e permaneceu nesse nível ou diminuiu gradualmente à medida que a concentração aumentou. Em 1 nM, o composto I aumentou a produção de IL- 2, IL-13, e GM-CSF a níveis de 7, 5 e 3 vezes superiores aos das células de controle, respectivamente. Em 10 nM, o composto I aumentou a produção de IL- 2, IL-13, e GM-CSF a níveis de 22, 6,5, e 6 vezes maiores do que as células de controle, respectivamente. Composto I aumentou a produção de IL-10 de cerca de 1,5 a 3,5 vezes em concentrações de 0,1 e 1 nM, mas inibiu a produção de IL- 10 na > 10 nM. O composto I aumentou a produção de IL-5 6 vezes ao longo das células de controle, mas apenas a uma concentração de 1 nM; IL-5 foi aumentado < 2 vezes a 10 nM. Composto I aumentou a produção de RANTES de 2 a 3 vezes ao longo das células de controle, em concentrações que variam de 10 nM a 10 μM. Composto I aumentou a produção de TNF-α e IFN-Y de 2 a 3 vezes em concentrações que variam de 1 nM a 10 μM.

[400] Baixas concentrações de composto I-R também aumentaram as citocinas e a produção de quimiocina em células T humanas estimuladas. As concentrações de composto I-R tão baixas como 1 nM aumentaram IL-2, IL-3, IL- 5, IL-10, IL-13, GM-CSF, IFN-Y, RANTES, e TNF-α em células T humanas estimuladas (A Fig. 3 e Fig. 4). A uma concentração de 10 nM, o composto IV aumentou a produção de IL-2, IL-13 e GM-CSF de 15, 7, e 6 vezes ao longo das células de controle, respectivamente. As concentrações de composto IV de 0,01 a 1 nM aumentaram de IL-10 ~ 6 vezes, mas as concentrações> 10 nM inibiram a produção de IL-10. As concentrações de composto I-R variando de 1 a 100 nM aumentaram produção de IL-5 de até 2,5 vezes maior do que as células de controle, mas o composto I-R não demonstrou o aumento de 6 vezes em 1 nM exibido pelo composto IS. Exceto para o padrão de aumento de produção de IL- 5 e, possivelmente, um menor grau de aumento da produção de IFN-y, o perfil de citocina e quimiocina reforçaram o exibido pelo composto I-R semelhante ao do composto I com respeito a magnitude do aumento da produção e o intervalo de concentração no qual ocorreu o aumento.

[401] Baixas concentrações de composto I-S também intensificaram a produção de citoquinas de quimiocina em células T humanas estimuladas e o perfil de citocina e quimiocina melhorados exibidos pelo composto que se assemelha ao composto I com respeito à magnitude do aumento na produção e na faixa de concentrações na qual o aumento ocorreu. As concentrações do composto I-S são tão baixas como 1 nM aumentado de IL-2, IL-3, IL-5, IL-10, IL- 13, GM-CSF, IFN-Y, RANTES, e TNF-α em células T humanas estimuladas (Fig. 5 e Fig. 6). A uma concentração de 10 nM, o composto I-S aumentou produção de IL-2, IL-13 e GM-CSF 18, 7 e 5 vezes ao longo das células de controle, respectivamente. As concentrações de 0,1 e 1 nM do composto I-S aumentaram a produção de IL-10 ~ 2 a 3 vezes, mas as concentrações> 10 nM inibiram a produção de IL-10. Tal como observado para o composto I, o aumento da produção de IL-5 pelo composto I-S atingiu um máximo de 1 nM. Em uma forma de realização, o composto I-S co-estimulou a produção de IL-2 por células T com um EC50 de aproximadamente 0,29 nM, em comparação com 10 nM para pomalidomida.

6.2.2 Perfil de Citocina em células mononucleares Sanguíneas Periféricas Humanas

[402] Cinquenta ml de creme leucocitário humano foram divididos em alíquotas de 25 ml cada em dois tubos cônicos de 50 ml e 25 ml de HBSS estéril foi adicionado a cada tubo cônico. Os tubos foram suavemente misturados por inversão. Quinze ml à temperatura ambiente Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare (localização); cat # 17-1440-02) foram divididos em alíquotas em quatro tubos de 50 ml cônicos. Em seguida, 25 ml da mistura de creme leucocitário/HBSS foi mergulhada lentamente e com cuidado no topo do Ficoll. As amostras foram centrifugadas a 450 rpm durante 35 minutos. A parte superior em camadas contendo o plasma foi pipetada e descartada. A interface contendo as células mononucleares foi transferida para dois tubos cônicos de 50 ml. Ambos os tubos cônicos foram cheios com o volume total de 50 ml com HBSS e centrifugou-se a 1200 rpm durante 10 minutos. As células foram novamente lavadas em HBSS e centrifugou-se a 1000 rpm durante 10 minutos. Sedimento celular foi ressuspenso com 20 ml de meio RPMI completo (RPMI/5 % de soro humano/1x pen/strep/excesso) e contados.

[403] Cem μL (2x106/ml) de hPBMCs foram adicionados a cada poço de uma placa de 96 poços de fundo plano (contagem de células final = 2x105/poço) e incubou-se a 37 ° C durante 1 hora. Vinte μl (10x) do composto foram adicionados a cada poço de teste e vinte μl de meio contendo 2,5 % de DMSO foram adicionados a cada poço de controle ([DMSO] final = 0,25 %) e a placa foi incubada durante 1 hora a 37 ° C. As células foram então estimuladas com 80 μL de LPS de 2,5 ng/ml ([LPS] final = 1 ng/ml) e incubadas durante 18 horas a 37 ° C. Cinquenta μl de sobrenadante de cada poço foram transferidos para três novas placas de 96 cavidades de fundo redondo e armazenado a -20 ° C para análise Luminex. Cavidades duplicadas foram realizadas para cada amostra.

[404] As amostras de sobrenadante foram analisadas quanto a citoquinas no formato multiplex de acordo com as instruções do fabricante (Millipore, Billerica, Ma 01821) utilizando um instrumento Luminex IS100. Análises de IL-12 e GM-CSF foram efetuadas em um formato de dois plex usando sobrenadantes puros, enquanto todas as outras citocinas foram efetuadas em um formato multiplex utilizando sobrenadantes diluídos de 1:20. A análise dos dados foi realizada utilizando software Upstate Beadview. IC50s foram calculados usando regressão não-linear, resposta de dose sigmoidal, restringindo o topo a 100 % e fundo a 0 %, permitindo declive variável. As EC50s foram baseados na restrição superior das curvas sigmoidais igualando 246,9 %, representam a média de IL-10 produzida por polalidomida (controle) a 10 μM e a restrição inferior a 100 %. Os IC50 foram realizados utilizando o GraphPad Prism v5.00. Os valores de dados representam a média + SEM (erro padrão da média) de n (número de experiências em duplicado).

[405] O composto I inibiu a produção de (em ordem de potência) IL-1β (IC50 = 0,00085 μM) > TNF-α (IC50 = 0,0018) > MDC (IC50 = 0,0026 μM) > GM-CSF (IC50 = 0,0092 μM) > IL -6 (CI50 = 0,01 μM) > MIP-1α (IC50 = 0,19 μM) > IL-8 (IC50> 10 μM). Composto I teve pouco efeito sobre a produção de PIM-1β com um valor de IC50 > 10 μM (Fig. 7A e na Tabela 1). Composto I aumentada de IL-10, MCP-1, RANTES e produção com percentual média dos valores de controle de 372 %, 208 % e 153 %, respectivamente, na concentração de 0,1 μM (Figura 7B e na Tabela 2).

[406] Composto I-R inibiu a produção de (em ordem de potência) IL-1β (IC50 = 0,0062 μM)> TNF-α (IC50 = 0,0095 μM)> MDC (IC50 = 0,012μM) > GM-CSF (IC50 = 0,039μM) > IL-6 (IC50 = 0,083μM) > MIP-1α (IC50 = 0,045μM) > MIP-1β (IC50 > 10 μM). Também composto I-R apresentou um efeito inibitório modesto, sobre a produção de IL-8 com um valor de IC50 > 10 μM (Figura 8A e Tabela 1). Composto I-R aumentou produção de IL-10, MCP-1, RANTES com percentual médio de valores de controle de 442 %, 223 %, e 151 %, respectivamente, na concentração de 0,1 μM (Figura 8B e Tabela 2).

[407] Composto I-S inibiu a produção de (em ordem de potência) IL-1β (IC50 = 0,00046 μM) > TNF-α (IC50 = 0,00059 μM) > MDC (IC50 = 0,0021 μM) > GM- CSF (IC50 = 0,0022 μM) > IL-6 (IC50 = 0,0038 μM) > MIP-1α (IC50 = 0,028 μM > MIP- 1β (IC50 > 10 μM). Composto I-S também apresentou um efeito inibidor modesto sobre a produção de IL-8 com um valor de IC50 > 10 μM (a Figura 9A e a Tabela 1). Composto I-S aumentou a produção de IL-10, MCP-1, RANTES com percentual médio de valores de controle de 379 %, 233 %, e 153 %, respectivamente, na concentração de 0,1 μM (Figura 9B e na Tabela 2).Tabela 1. Resumo do perfil de citocinas Inibidora de Compostos de Teste

Tabela 2. Resumo do Perfil de Citocina dos Compostos de Teste

6.2.3 Produção de Células NK IFN-Y e Citotoxicidade Celular Dependente de Anticorpo (ADCC)

[408] Células NK de doadores saudáveis foram isoladas de creme leucocitário do sangue por seleção negativa usando o coquetel de enriquecimento celular RosetteSep NK (Stem Cell Technologies, Vancouver, BC) antes da centrifugação do gradiente de densidade FicollHypaque (Fisher Scientific Co LLC, PA) seguindo as instruções dos fabricantes. As células NK CD56 + foram isoladas a ~ 85 % de pureza, como determinado por citometria de fluxo (BD Biosciences, CA).

[409] Ensaio de Gama Interferon (IFN-Y) induzido por IgG NK: Noventa e seis cavidades, placas de fundo plano foram revestidas com 100 μg/mL de IgG humano (Sigma) durante a noite a 4 ° C. No dia seguinte, IgG não ligado foi lavado com frio 1X PBS. Células NK foram então plaqueadas em placas de 96 poços revestidas com IgG a 2 x 105 células por poço em 180 μl de meio RPMI-1640 e 10 ng/ml de rhIL-2 (R & D Systems, MN) foram adicionados. Os compostos de teste foram adicionados em um volume de 20 μL de DMSO. As concentrações finais dos compostos do teste foram de 0,0001, 0,001, 0,01, 0,1, 1, ou 10 μM. As concentrações finais de DMSO eram 0,25 %. Após 48 horas, os sobrenadantes foram colhidos e analisados por ELISA para a produção de IFN-y.

[410] Os dados utilizados para determinar os compostos de teste para aumentar a produção de células NK IFN-y em resposta a IgG imobilizado e estímulo de rhIL-2 foram calculados para cada doador utilizando o software GraphPad Prism v5.0. Os dados são apresentados em duas formas, (1) como a quantidade absoluta se IFN-Y produzido (pg / ml ± DP) e (2) como a percentagem da quantidade de IFN-Y produzido na presença de 1 μM de pomalidomida. O valor CE50 é a concentração do composto de ensaio, desde a produção de IFN-Y metade do máximo, com produção máxima definida como a quantidade de IFN- Y produzido na presença de 1 μM de pomalidomida. Os valores de EC50 foram calculados usando regressão não-linear, resposta a sigmoidal dose restringindo o topo a 100 % e fundo a 0 %, permitindo declive para uma variável.

[411] Ensaio ADCC: As células purificadas NK (5 x 104) foram semeadas em placas de 96 poços de fundo em U em 100 μL de meio RPMI-1640 sem fenol (Invitrogen) + 2 % humano AB + soro (Gemini Bio Products, CA) e tratada com 10 ng/ml de rhIL-2 e rituximab (5 μg/mL) mais concentrações diferentes de compostos de teste em 0,01 a 10 μM, durante 48 horas. Várias linhas celulares de linfoma (GCB-DLBCL: WSU-DLCL2 e Farage; linfoma folicular: DoHH2; ABC- DLBCL: Riva; linfoma de Burkitt [BL]: Raji) foram tratados com 5 μg/mL de rituximab, durante 30 minutos a 37 ° C. Rituximab não ligado foi lavado, as células alvo (5 x 103/100 μL/poço) foram adicionadas às células efetoras pré- tratadas (células NK) com uma proporção de 10: 1, e os dois foram co-incubadas durante 4 horas a 37°C. As condições de controle consistiram de células NK mais células tumorais tratadas com (1) meio apenas, (2) apenas rituximab, ou (3) a IL- 2 sozinha. Usando uma alíquota de sobrenadante (50 μL), citotoxicidade das células NK contra células de tumor foi analisada utilizando um ensaio de lactato desidrogenease (LDH), liberação padrão para medir ADCC (CytoTox 96 NonRadioactive citotoxicidade Assay, Promega, WI). A liberação espontânea pelas células alvo sozinha foi < 15 % da liberação máxima, tal como determinado com células alvo lisadas em 1 % de Triton X-100. A liberação experimental foi corrigida por subtração da liberação espontânea de células efetoras com a diluição correspondente. A percentagem de lise específica foi calculada de acordo com a fórmula: Percentagem de lise específica = x 100 (experimental - espontânea efetor - alvo espontânea)/(máximo alvo - alvo espontânea).

[412] NK celular mediada por lise específica foi calculada com a seguinte fórmula: Percentagem de lise específica = [(liberação experimental - liberação espontânea)/(liberação máxima - liberação espontânea)] x 100. Os resultados foram analisados usando o software v5.0 GraphPad Prism. Os dados são apresentados como a percentagem de citotoxicidade relativamente a células tratadas com DMSO.

[413] A capacidade dos compostos I, I-R e I-S para aumentar a indução produção de IgG-mediada por células NK IFN-Y foi determinada em paralelo. Um total de 7 doadores de células NK foram incluídos neste ensaio e os resultados são mostrados na FIG. 10 (expressos em pg/ml de IFN-y produzido) e a FIG. 11 (expressa como uma percentagem do aumento de IFN-y produzido em relação ao IFN-Y produzido na presença de pomalidomida a 1 μM). Todos os compostos para aumentar a produção de células NK IFN-y de uma forma dependem da dose em resposta a IgG imobilizada e de IL-2 de estimulação. O composto I induziu produção de IFN-y em um padrão semelhante ao das pomalidomida. Composto I-S e I-R foram ligeiramente mais ativa dos que o composto I.

[414] As atividades imunomoduladoras de compostos I, I-R e I-S estão em melhorar ADCC mediada por rituximab contra várias linhagens de células do linfoma foram determinadas em paralelo em cada linha celular. Um total de 15 doadores de células NK foram incluídos (três doadores de células NK para cada linha de células) e os resultados (Fig. 12) mostraram que todos os compostos NK induzidos ADCC mediados por células, dependem da dose em todas as linhas celulares. Em GCB-DLBCL linhas celulares (WSU-DLCL2 e Farage), a atividade mostrada pelo composto I é comparável ao que é mostrado por pomalidomida. O pico de atividade do composto I estava em 0,1 M em WSU-DLCL2, mas era um M em células Farage. Composto I-R foi menos ativo do que o composto I-S em células WSU-DLCL2. Na linha de células de linfoma folicular (DoHH2), composto eu estava menos ativo do que os compostos I-S e I-R. Na linha celular ABC-DLBCL (Riva), composto I estava menos ativo do que os compostos I-S e I-R. Composto I-R foi menos ativo do que o composto I-S. Na linha celular de BL (Raji), o composto I foi mais ativo do que os compostos I-S e I-R. O pico de atividade do composto I estava em 0,1 M. Composto I-R foi mais ativo do que o composto I-S em células Raji. O pico de atividade do composto I foi de 0,1 μM nas linhas celulares WSU-DLCL2 e Raji, mas em 1 μM em outras linhas de células. Em geral, o composto I foi mais ativo do que os compostos I-S e I-R em todas as linhas celulares testadas, exceto em células Riva. Composto I-R foi menos ativo do que o composto das células WSU-DLCL2 e Riva, mas não em outras linhas de células.

6.2.4 Proliferação endotelial vascular humana, formação do tubo, migração e Ensaio de invasão

[415] Ensaio de Proliferação endotelial vascular umbilical humana: células endoteliais vasculares umbilicais humanas foram descongeladas e cultivadas em meio EGM2 até a passagem de 3 a 6 para todos os ensaios de proliferação. Células endoteliais vasculares umbilicais humanas foram tripsinizadas, lavadas com 20 % de FBS/M199 e revestidas com o mesmo meio a 104 células/100 μL por poço de placas de cultura celular de 96 poços. As placas foram incubadas durante a noite a 37 ° C para permitir que as células a aderirem. As células foram então deixadas com fome em meio com FBS a 1 %/M199 durante 18 horas após a lavagem com o mesmo meio de 3 vezes. Por otimização da concentração dos fatores de crescimento no ensaio de proliferação de HUVEC, 100 μL/poço dos fatores de crescimento 2X diluídas em série, começando a 100 ng/ml, foram adicionados a HUVEC em duplicado durante 72 horas a 37 ° C em uma atmosfera umidificada de cultura celular incubadora com 5 % de CO2. Para a análise dos compostos de ensaio, uma diluição em série dos compostos de teste em 0,4 % de meio de DMSO/1 % FBS/M199 em duplicado, foi feita a partir do estoque de 10 mM. Cinquenta microlitros por poço de compostos de teste diluídas em série (10, 1,0, 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001, 0,00001 μM) foram adicionados às células durante 1 a 2 horas a 37 ° C. A concentração final de DMSO nas células é de 0,1 %. Em seguida, 50 mL de 4X a concentração final dos fatores de crescimento relativo foi adicionado a cada poço em duplicado durante 72 horas a 37 ° C em uma incubadora de cultura de células umidificadas com 5 % de CO2. A incorporação de timidina foi medida por adição de um microcurie de 3H-timidina (Amersham) em 20 μl de meio de cada poço e incubou-se a 37 ° C em uma incubadora de cultura de células umidificadas com 5 % de CO2 durante 5 a 6 horas. As células foram então tripsinizadas e colhidas em UniFilter GF/C placas de filtro (Perkin Elmer), utilizando o coletor de células (Tomtec). Depois as placas foram secas ao ar, 20 μL/poço de Microscint 20 (Packard) foram adicionados, em seguida, as placas foram analisadas em TopCount NXT (Packard). Cada poço foi contado durante um minuto. Os experimentos foram realizados em duplicata em cada um dos três doadores.

[416] Ensaio de Formação do tubo celular Vascular Endotelial Umbilical Humana: Os compostos foram testados no ensaio de formação de tubo HUVEC induzido por fator de crescimento. As placas de formação de tubo foram incubadas a 37 ° C durante 30 minutos para a matrigel a polimerizar. HUVEC foram privados em 0,1 % de BSA basal EBM2 meio durante 5 horas após a lavagem com o mesmo meio de 3 vezes. As células foram tratadas com tripsina e centrifugadas. Em seguida, os compostos 25 mL de 4X diluídos em série (10, 1, 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001, 0,00001 μM) foram adicionados em duplicado com 50 μL de 2 x 104 células/poço em placas de formação de tubos revestidos com matrigel. Cinquenta mL de 4X de VEGF (concentração final = 25 ng/ml) ou bFGF (concentração final = 10 ng/mL) foram adicionados às placas. As células foram então incubadas durante a noite (~ 18 horas) a 37 ° C em uma incubadora umidificada. As teias do túbulo foram coradas com calceína AM a 4 mg/mL em FBS a 2 %/HBSS durante 30 minutos e imagens tiradas por microscopia de fluorescência. Os túbulos foram quantificados pelo programa de software Metamorph formação do tubo para a área do tubo e comprimento do tubo.

[417] Ensaio de invasão celular Endotelial Vascular Umbilical Humana: No ensaio de invasão de HUVEC, a concentração de fibronectina humana é otimizada para fornecer uma estrutura de proteína adequada para células aderentes, para ligar à membrana e permitir a migração livre em resposta a um estímulo angiogênico (por exemplo VEGF, bFGF, ou HGF) na câmara inferior da placa de inserção. HUVEC foram privadas em 0,1 % de meio BSA EBM2 durante 6 horas após a lavagem com o mesmo meio por 3 vezes. As células foram então tratadas com tripsina e centrifugou-se para remover a tripsina restante. Então ~ 0,5 a 1 x 106 células em 125 μl/cavidade e 125 L de 8X compostos diluídos em série (10, 1, 0,1, 0,01, 0,001 μM) foram adicionados à câmara superior do BD Falcon de 24 poços e 96 poços inseridos em placas em duplicado e incubados durante ~ 1 a 2 horas. (As placas contêm um bloqueio de fluorescência, microporosa [3,0 μm de tamanho de poro] membrana PET, que foi uniformemente revestido com fibronectina humana.) Setecentos e cinquenta microlitros de uma solução de estoque de 1,33 X de VEGF (concentração final de 25 ng/mL), bFGF (concentração final de 10 ng/mL), ou HGF (concentração final de 25 ng/ml) foram então adicionados à câmara inferior. As células foram incubadas durante 22 ± 1 horas a 37 ° C. As células migradas foram coradas com calceína AM a 4 μg/mL em HBSS contendo 2 % de FBS, com 500 μL placas/cavidade em 24 cavidades e as placas/cavidade em 96 cavidades de 200 μl. As placas foram incubadas a 37 ° C durante 90 minutos e lidas em um leitor de placas de fluorescência.

[418] A percentagem de inibição da proliferação de células, a formação do tubo, migração e invasão foram calculados subtraindo-se o resultado para o controle de DMSO não estimulado a partir dos resultados da amostra de teste, em média todas as repetições, e normalizando a estimulada por fator de crescimento do controle de DMSO (0 % de inibição). Os valores de IC50 foram calculados utilizando o GraphPad Prism 5.0.

[419] Resultados do Ensaio de Proliferação de Células endoteliais vasculares Umbilicais Humanas: Os resultados do estudo de otimização do fator de crescimento indicam que as concentrações ótimas de VEGF, bFGF, e HGF para indução de proliferação foram 25, 10, e 25 ng/mL, respectivamente. Os compostos de teste foram examinados com concentrações de fator de crescimento otimizado e os resultados indicaram que os compostos I, I-R e I-S não inibem VEGF, bFGF-, ou a proliferação de HUVEC induzida por HGF (Fig. 13). No entanto, houve uma melhoria significativa da proliferação observada nas células HUVEC tratadas com HGF e VEGF pelo composto I-S (tratados com VEGF: 1 - 10 μM; tratados com HGF: 0,1-1 μM). Também houve uma melhoria significativa observada nas células HUVEC tratadas com bFGF por composto I (0,01-1 μM), e composto IV (0,1-1 μM). Os valores de IC50 encontram-se resumidos na Tabela 3.Tabela 3. Resumo dos valores de IC50 a partir dos Estudos de Proliferação de Célula Endotelial Vascular Umbilical Humana induzida por fator de crescimento

[420] Resultados do Ensaio de Formação de Tubo Celular Endotelial Vascular Umbilical Humano: Composto I, I-R e I-S apresentaram uma tendência para inibir a formação de tubos HUVEC induzida por VEGF, em termos de comprimento do tubo e a área de tubo (Fig. 14). Todos os compostos demonstraram um efeito dependente da dose na formação de tubo HUVEC induzida por VEGF. Composto I-R revelou uma inibição significativa (p < 0,05 versus controle de DMSO estimulada) da zona do tubo e comprimento a 10 μM. Também houve uma tendência para os compostos para inibir a formação de tubos HUVEC induzida por bFGF em termos de comprimento do tubo e a área de tubo (fig. 14), embora o efeito foi menos pronunciado do que os efeitos sobre a formação de tubos HUVEC induzida por VEGF.

[421] Resultados do Ensaio de Invasão Celular Endotelial Vascular Umbilical Humano: Os compostos I, I-R e I-S inibiram significativamente VEGF, bFGF-, e invasão de HUVEC induzida por HGF de um modo dependente da dose (Fig. 15). Os compostos foram mais potentes contra VEGF e invasão de HUVEC induzida por bFGF do que contra a invasão HGFinduced HUVEC (Tabela 4). O valor de IC50 foi de <0,3 nM para a inibição da invasão por VEGFinduced HUVEC compostos I, I-R e I-S. IC50 do composto I (0,4 nM) e composto I-S (<0,1 nM) foram mais de dez vezes mais potente que o composto I-R (13 nM) (Tabela 4).Tabela 4. Resumo do Efeito de Compostos de Teste na Invasão Celular Endotelial Vascular Umbilical Humana induzida por fator de Crescimento

6.2.5 Ensaios de ciclo celular, apoptose e Anti-Proliferação

[422] Análise de Ciclo Celular: As células foram tratadas com DMSO ou uma quantidade de um composto aqui proporcionado, durante 48 horas. Coloração com iodeto de propídio para o ciclo celular foi realizada usando CycleTEST PLUS (Becton Dickinson) de acordo com o protocolo do fabricante. Após a coloração, as células foram analisadas por um citômetro de fluxo FACSCalibur utilizando o software ModFit LT (Becton Dickinson).

[423] Análise de Apoptose: As células foram tratadas com DMSO ou uma quantidade de um composto aqui proporcionada em vários pontos de tempo, depois foi lavada com tampão de lavagem de anexina-V (BD Biosciences). As células foram incubadas com a proteína e o iodeto de propídio (BD Biosciences) de ligação da anexina-V durante 10 minutos. As amostras foram analisadas utilizando citometria de fluxo.

[424] O composto I induziu apoptose e concomitantemente diminuiu o número de células na linha celular DoHH2. Composto I foi combinado na forma de aditivo com Rituxan para induzir a apoptose e reduzir o número de células vivas em linha celular DoHH2.

[425] Composto I-S induziu prisão de G1 em DoHH2 e WSU-DLCL2 linhas celulares. Composto I-S e Rituxan foram testados no ensaio de incorporação de 3H-timidina de 3 dias. Composto I-S mostrou atividades antiproliferativas fortes, com um IC50 de 0,027 μM em Rec-1, células de MCL, um IC50 de 0,04 μM em células DOHH2 FL, e um IC50 de 0,28 μM em células Farage DLBCL. Os dados indicaram que o composto é combinado com Rituxan em forma sinérgica em células DoHH2 FL, calculada pelo método de produto fracionado; composto é combinado com Rituxan em aditivo de forma sinérgica em células Farage LDGCB, calculada pelo método do produto fracionado; e o composto é combinado com Rituxan aditivo em forma de Rec-1 células MCL como calculado pelo método fracionado do produto (FIG. 16).

6.2.6 Ensaio de Incorporação de Timidina de Célula DLBCL In Vitro

[426] Um painel de linhas celulares de DLBCL de várias características citogenéticas foi testado quanto à sua sensibilidade para a atividade antiproliferativa dos compostos I e I-S (Fig. 17). As células foram tratadas com o composto ensaiado por 5 dias a 37 °C; proliferação de células foi determinada utilizando o método da incorporação de 3H-timidina. Ambos os compostos a partir de 0,1 -1 μM inibiram significativamente a proliferação de várias linhas de células LDGCB, particularmente células ABC-subtipo como Riva, U2932, TMD8, OCI-Ly3 e células OCI-Ly10. Células do subtipo ABC aparecem mais sensíveis ao efeito antiproliferativo do que outras células, incluindo células do subtipo de GCB-DLBCL e PMBL. Os valores de IC50 de composto IS estão resumidos na Tabela 5.Tabela 5. Atividades Anti-proferativas de composto I-S em ensaios secundários

6.2.7 Resistência das Linhas celulares à Revlimid

[427] Linhas celulares resistentes à Revlimid foram preparadas como se segue: As células NCI-H929 foram mantidas em cultura com 1 μM Revlimid por 2 meses depois aumentada para 10 μM Revlimid (entradas R1-10, R2-10, R3-10 e R4-10) por mais 3,5 meses.

[428] As linhas celulares resistentes ou sensíveis a Revlimid foram tratadas com compostos de teste durante 5 dias, e, em seguida, a proliferação celular e a viabilidade foi avaliada por coloração de 7-aminoactinomicina D (7- AAD). As atividades do composto são contra linhas celulares de Revlimid resistentes e estão resumidas na Tabela 6. Os dados indicaram que o composto é ativo contra linhas de células resistentes Revlimid. Em uma forma de realização, uma diminuição de 50 % no ciclo celular (fase S) foi observada após 24 horas de tratamento das células H929 com o composto I-S. Em uma outra forma de realização, às 48 horas, o composto I-S diminuiu a expressão de survivina e a proteína do retinoblastoma (pRb) e aumentou a expressão do inibidor de quinase dependente de ciclina p27. Tabela 6. Atividades do composto I-S contra linhas de células resistentes a Revlimid

6.2.8 Ensaio de Formação de Colônia de Megacariócito

[429] Ensaio de formação de colônia foi conduzido com medulas ósseas humanas normais tratadas na matriz de colágeno semissólido com o composto /IL-3/IL-6/Tpo durante 14-16 dias, e os resultados estão resumidos na Tabela 7. Os dados indicam que o composto é células progenitoras de megacariócitos inibidos. Tabela 7. Ensaio de Inibição observada na formação da colônia de megacariócitos

6.2.9 Efeito inibidor sobre a atividade em células NF-B DLBCL

[430] DLBCL células foram tratadas com composto de teste ou um IKK1/2 inibidor dual (utilizado como um controle inibidor positivo) durante 2 dias. Atividade NF-B foi examinada com ensaio de fator de transcrição Motif Ativo usando extratos nucleares de células após o tratamento. O composto racêmico de Fórmula I inibe significativamente NF-B p65 e atividade p50nas concentrações de 1 μM e 10 μM. O composto racêmico de Fórmula I foi encontrado para inibir a atividade NF-B em algumas linhas DLBCL do subtipo ABC, tais como células TMD8 e OCI-Ly10. Estes resultados sugerem que um efeito sobre a transdução de sinal NF-B pode estar envolvido na atividade antiproliferativa do composto de Fórmula I, contra células ABC-DLBCL, e que a atividade NF-B na linha de base pode ser um biomarcador preditivo da resposta do tumor à terapia de linfoma com o composto.

6.2.10 Ensaios de Inibição de Angiogênese Adicional

[431] Os compostos I, I-R, e I-S foram testados em vários ensaios de inibição da angiogênese. Composto I-S tinha um IC50 de 52 nM no ensaio da artéria umbilical humana, e foi cerca de 25 vezes mais potente do que o Revlimid e cerca de 6 vezes mais potente do que pomalidomida. Os compostos I, I-R, e IS apresentaram atividade anti-angiogênica modesta no ensaio de aorta de rato.

6.3 Modelo de Angiogênese de Matrigel de Rato

[432] Modelo Angiogênese de Matrigel do rato foi realizado como se segue: com tampões de Matrigel rhVegf, rhbFGF e heparina foram inseridos C57B/6 ratos durante 10 dias com o tratamento da droga. Plugs foram analisadas para ms CD31 por IHC. Composto I, a 3 e 30 mpk, inibe significativamente o crescimento de vasos sanguíneos (FIG. 18).

6.4 Modelos Xenográficos de rato in vivo 6.4.1 Modelos de linfoma

[433] O composto I foi testado no modelo de xenoenxerto de WSU-DLCL2 DLBCL como um agente único ou em combinação com Rituxan (FIG. 19). Composto I, como um agente único em 3 e 30 mg/kg, mostrou inibição do crescimento do tumor semelhante ao de Revlimid 30 mg/kg. Quando o composto I foi administrado em combinação com Rituxan, regressão completa (volume do tumor <25 mm3) foi observada em todos os grupos de tratamento combinação testadas (Fig. 19 e Tabela 8).Tabela 8. Eficácia do composto I em combinação com Rituxan em Modelo de Xenoenxerto WSU-DLCL2 DLBCL

[434] Composto I-S foi testado no modelo de xenoenxerto de Linfoma Folicular DoHH2, e os resultados estão resumidos na Tabela 9. Os dados indicaram que o composto I-Sa 2 e 40 mg/kg, inibe significativamente o crescimento do tumor em estudo em monoterapia (Fig. 20). Os dados também indicam que o composto I-S a 3 mg/kg em combinação com Rituxan inibe crescimento tumoral significativamente contra monoterapia e foi mais eficaz do que o Revlimid 30 mg/kg em combinação com Rituxan em inibir o crescimento do tumor (Fig. 21). Os dados CD31 IHC são representados na FIG. 22. Tabela 9. Atividades do composto I-S em modelo de xenoenxerto de Linfoma Folicular DoHH2

a 91 % de enantiômero S, 9 % de enantiômero R b 84 % de enantiômero S, 16 % de enantiômero R

[435] O composto I foi testado em Rec-1 do envoltório celular modelo de xenoenxerto de linfoma, e os resultados estão representados na FIG. 23.

6.4.2 Modelos Múltiplos de Milenoma

[436] Os compostos I, I-R, e I-S foram testados em NCI-H929 modelo de xenoenxerto de mieloma múltiplo, e os resultados estão representados na FIG. 24. Os dados indicam que os compostos I e IS inibiram significativamente o crescimento do tumor H929 em uma maneira dependente da dose e foram comparáveis entre si. No 19° dia, o composto I-S mostrou 87 % de inibição do crescimento do tumor a 30 mg/kg, 67 % de inibição do crescimento do tumor em 3 mg/kg, e 34 % de inibição do crescimento do tumor de 0,3 mg/kg.

6.4.3 Modelos de Glioblastoma

[437] Os compostos I, I-R, e I-S foram testados no modelo de xenoenxerto de glioblastoma U87, e os resultados estão representados na FIG. 25. Os dados indicam que os compostos I e I-S significativamente inibiramo crescimento do tumor U87 a 30 mg/kg, qd. Em um estudo, o composto I a 30 mg/kg apresentou > 80 % de inibição do crescimento do tumor no 48° dia, e o composto I-S a 30 mg/kg apresentou cerca de 60 % de inibição do crescimento do tumor no 48° dia. Em um outro estudo, o composto I-S em 15 mg/kg apresentou cerca de 47 % de inibição do crescimento do tumor no 43° dia. Não houve alteração significativa no peso corporal observado para qualquer um dos compostos testados.

6.4.4 Modelos colorretais

[438] Os compostos I, I-R, e I-S foram testados no modelo de xenoenxerto de HCT116 colorretal, e os resultados estão representados na FIG. 26.

6.4.5 Modelos hepatocelulares

[439] Os compostos I, I-R, e I-S foram testados no modelo de xenoenxerto de Hep3B hepatocelular, e os resultados estão representados na FIG. 27.

6.5 Farmacocinética

[440] A farmacocinética do composto I-S em rato e macaco estão resumidas na Tabela 10.Tabela 10. A farmacocinética do composto I-S em ratos e macacos

*67 % de enantiômero S, 33 % de enantiômero R ** > 99,5 % de enantiômero S, < 0,5 % de enantiômero R

6.6 Modelos cereblon 6.6.1 Ensaio de Ubiquitinação de CRBN

[441] Ubiquitinação de CRBN foi medida em células HEK293T que foram transfectadas com uma His-marcada com biotina de construto CRBN aminoterminal, em seguida, pré-incubadas com compostos de teste durante uma hora, seguido por tratamento com um inibidor de proteassoma (a deter a degradação de proteínas ubiquitinadas). As células foram lisadas e processadas para medir ubiquitinação de CRBN por SDS-PAGE e análise de imunotransferência utilizando um anticorpo anti-ubiquitina.

[442] Em uma forma de realização, o composto I-S foi testado no ensaio de Ubiquitinação de cereblon (CRBN) usando procedimentos descritos acima e mostraram um valor IC50 de 0,19 μM, enquanto os valores de IC50 são 12,9 μM para lenalidomida e 21,6 μM para pomalidomida. Em uma outra forma de realização, o composto I-S inibiu auto-ubiquitinação de proteínas CRBN (IC50 = 0,5 μM), mas não CRBN-YW/proteína mutante AA.

6.6.2 Ensaio de Competição de Conta de Afinidade de Talidomida

[443] Células de Mieloma humano U266 foram semeadas a 0,5 x 106 células/ml crescidas até à fase logarítmica a 1,5 x 106 células/mL, em frascos de 2 L de Erlenmeyer com tampas das garrafas agitação, as células recolhidas por centrifugação, contadas e lavadas em PBS antes da congelação do sedimento em nitrogênio líquido. Os sedimentos de células U266 foram descongelados à temperatura ambiente em tampão de lise NP-40 (0,5 % de NP40, 50 mM de Tris- HCl (pH 8,0), NaCl 150 mM, DTT 0,5 mM, PMSF 0,25 mM, 1x mistura de inibidores de proteases (Roche, Indianapolis, IN) a cerca de 1-2 x 108 células por ml (10-20 mg de proteína/ml). Os detritos celulares e os ácidos nucleicos foram clarificados por centrifugação (14.000 rpm, 30 min 4 ° C). O sobrenadante resultante foi armazenado em gelo antes da utilização no ensaio de ligação de conta de afinidade análoga da talidomida como o extrato U266 contendo CRBN.

[444] Esferas acopladas a análogos de talidomida foram preparadas utilizando esferas de afinidade FG, de Tamagawa Seiko Co. Japão de acordo com os métodos descritos em Ito et al, "Identificação de um alvo primário de teratogenicidade talidomida," Ciência 327: 1345-1350, 2010, e armazenado a 4 ° C durante até 4 semanas antes da utilização em ensaios.

[445] Em ensaios de competição de 0,5 ml (3-5 mg de proteína) alíquotas de extrato de lisado U266 foram pré-incubadas (15 min temperatura ambiente.) Com 5 μl de DMSO (controle) ou 5 μl de composto a várias concentrações em DMSO. Grânulos acoplados aos análogos de talidomida (0,3-0,5mg) foram adicionados a amostras de extratos de proteína e rodado (2 horas, 4 ° C). As esferas foram lavadas três vezes com 0,5 ml de tampão NP40 e, em seguida, as proteínas ligadas foram eluídas com tampão de amostra de SDS-PAGE. As amostras foram submetidas a SDS-PAGE e análise de imunotransferência realizada utilizando anticorpos anti-CRBN 65-76 (diluição 1: 10.000) e anti-DDB1 (1: 2000 de diluição). Em ensaios de competição de esferas de afinidade de talidomida, um sistema de LI-COR Odessey foi utilizado para quantificar a densidade de banda CRBN e quantidades relativas de CRBN foram determinadas pelo cálculo da média de pelo menos três controles de DMSO e expressando CRBN em cada amostra de competição como percentagem de inibição da proteína CRBN em relação à média de controles como ligação de 100 %.

[446] Reservas de composto sólido (30 mM) foram feitas em DMSO até 1 hora antes de usar e diluições em série em DMSO preparadas imediatamente antes da adição de extratos. A diluição inicial do estoque 30 mM foi de 1: 3 para uma solução a 10 mM (ou 10 μM de solução em ensaio final), seguido por 1:10 de série de diluições.

[447] As células U266 foram cultivadas até a fase logarítmica em frascos de agitação, as células recolhidas por centrifugação, contadas e lavadas em PBS antes da congelação sedimento em nitrogênio líquido.

[448] Os dados de dois experimentos independentes com amostras de cada experimento sujeito a duas immunoblots independentes e cálculo de CRBN de densidade relativa do sinal para controlar a densidade de gráficos usando PrismGraph análise de regressão não linear definido pelo inibidor log vs resposta com uma inclinação variável. Programa PrismGraph calculou SEM para cada ponto de concentração do composto.

[449] Composto I-S foi testado no ensaio de competição de afinidade de esfera de talidomida utilizando procedimentos tal como descrito acima e o resultado está representado na FIG. 28. Os dados indicam que o composto se liga a IS CRBN endógeno humano. Em uma forma de realização, o composto está presente em uma concentração de 0,1 μM resultando em aproximadamente 50 % menos CRBN ligada às esferas de afinidade, enquanto pomalidomida a uma concentração de 3 μM resultou em aproximadamente 50 % menos CRBN ligada às esferas de afinidade.

6.6.3 Alvejando Cereblon para Discrasias de Célula B

[450] O efeito de (S)-3-(4-((4-morflinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona ("Composto IS") em ligação de CRBN, ubiquitinação, e proliferação de células foi perfilado. CRBN é um componente do complexo de ubiquitina-ligase E3 incluindo CUL4A, DDB1, e ROC-1 e verificou-se ser o alvo de ligação molecular da talidomida, lenalidomida e pomalidomida.

[451] Estudos de ligação a CRBN foram conduzidos utilizando esferas de compostos conjugados de teste em um ensaio competitivo. CRBN endógeno a partir de células U266 de mieloma múltiplo (MM) humano foi medido através da incubação de extratos de células com concentrações variáveis de qualquer composto I ou pomalidomida como um controle positivo. Esferas de afinidade acopladas a um análogo de ácido talidomida foram incubadas com os extratos U266 e, após extensa lavagem das esferas, as proteínas ligadas foram eluídas. Ligação de CRBM às esferas de afinidade acopladas a talidomida foi determinada por determinação de imunoblot de CRBN quantitativa.

[452] Ubiquitinação de CRBN foi medida em células HEK293T, que foram transfectadas com um construto de amino-terminal His-tag biotina CRBN, em seguida, pré-incubadas com compostos durante uma hora, seguido de tratamento com o inibidor de proteassoma MG132 (deter a degradação de proteínas ubiquitinadas). As células foram lisadas e processadas para medir ubiquitinação de CRBN por SDS-PAGE e análise de imunotransferência utilizando um anticorpo anti-ubiquitina. Estudos de proliferação celular foram realizados em células de mieloma múltiplo sensíveis a lenalidomida e refratários. Linhas de células H929 MM sensíveis ou resistentes alenalidomida foram tratadas com o Composto I-S, durante 5 dias, e, em seguida, a proliferação celular e a viabilidade foi avaliada por coloração de 7-aminoactinomicina D ("7-ADD"). Co-estimulação de células T foi medida em células T humanas primárias estimuladas purificadas utilizando anticorpo imobilizado anti-CD3 em cultura de células durante 2 dias, e a secreção de citocina foi medida por ELISA.

[453] Produção de Imunoglobulina M e G ("IgG e IgM") foi medida a partir de células mononucleares normais do sangue periférico de doadores por cultura na presença dos fatores de diferenciação de células B recombinante humano IL- 2 (20 U/mL), IL-10 (50ng/ml ), IL-15 (10ng/ml), His-tag CD40 Ligand (50 ng/ml), poli-histidina anticorpo IgG1 de ratinho (5 μg/ml), e ODN 2006-TLR9 ligando humano (10 μg/ml) durante 4 dias, seguido pela IL-2, IL-10, IL-15 e IL-6 (50 ng/mL) durante mais 3 dias. IgM e IgG foram medidos por ELISA.

[454] Nos estudos de ligação de CRBN competitivos, a pré-incubação com a concentração de pomalidomida 3um resultou em aproximadamente 50 % menos CRBN ligado às esferas de afinidade, enquanto o composto está presente em uma concentração de 0,1 μM resultando na ligação de CRBN semelhante. Estudos de ubiquitinação de CRBN nas células HEK293T transfectadas resultaram nas seguintes potências: Composto IC50 = IS 0,19 μM; lenalidomida IC50 = 12,9 μM; e IC50 = pomalidomida 21,6 μM. Os valores de IC50 para a inibição da proliferação pelo composto é deslocado a partir de 0,01 μM na linha celular parental e H929 0,04 μM no subclone tratados com DMSO para 0,51-1,58 μM em subclones resistentes de lenalidomida.

[455] Uma diminuição de 50 % no ciclo celular (fase S) foi evidente após 24 horas de tratamento das células com H929 com Composto I-S. Às 48 horas, composto I-S diminuiu a expressão de survivina e a proteína do retinoblastoma ("pRB") e aumentou a expressão do inibidor de quinase dependente de ciclina p27. Composto é co-estimulado com a produção de IL-2 por células T com um EC50 de aproximadamente 0,29 nM, em comparação com 10 nM para pomalidomida. Composto I-S inibiu a produção de IgM e IgG, com IC50 de 0,35 e 2,1nM, respectivamente, em comparação com 17nM e 63nM para pomalidomida.

[456] Os resultados indicam que o composto I-S se liga a CRBN com aproximadamente 30 vezes maior afinidade do que pomalidomida, e inibe a ubiquitinação de CRBN com cerca de 110 vezes maior do que a potência pomalidomida neste sistema. Composto I-S é aproximadamente 34 vezes mais potente do que pomalidomida para co-estimular a produção de IL-2 por células T, e é de 30 a 48 vezes mais potente do que pomalidomida para inibir a produção de imunoglobulina.

6.7 Protocolo Clínico

[457] Um estudo clínico para determinar a segurança, tolerabilidade, farmacocinética e eficácia do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou polimorfo, quando administrados por via oral a indivíduos com tumores sólidos avançados, linfoma não-Hodking, ou mieloma múltiplo é fornecido. A dose não tolerada (NTD), a dose máxima tolerada (MTD) e a fase 2 da dose recomendada (RP2D) é conduzida. O efeito do composto sobre biomarcadores da angiogênese no tratamento de biópsias de tumor antes e durante também é avaliado.

[458] Desenho do estudo: O estudo consiste em duas partes: o escalonamento da dose (parte A), e expansão da dose (Parte B). Na Parte A, os sujeitos recebem doses crescentes únicas e múltiplas do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, para medir farmacocinética (PK) e identificar a dose máxima tolerada (MTD) e a fase 2 da dose recomendada (RP2D). Uma dose padrão (3 + 3) criação de escalonamento (Simon et al., 1997) é utilizado para identificar a toxicidade inicial. Grupos iniciais de três indivíduos recebem o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal do mesmo, solvato, hidrato farmaceuticamente, co- cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, (0,5 mg uma vez por dia) em aumentos de dose de 100 % até a primeira ocorrência de grau 3 ou toxicidade superior suspeita de ser no primeiro ciclo, altura em que o grupo específico é expandido para um total de seis indivíduos relacionados com a droga. Este esquema de escalonamento padrão é iniciado a fim de determinar a dose não tolerada (NTD) e MTD. Incrementos menores e assuntos adicionais dentro de um grupo de dose também podem ser avaliados para a segurança. Aproximadamente 20 a 40 indivíduos são tratados e avaliados na Parte A; no entanto, o número total de indivíduos na parte A depende do número de grupos de dose necessários para estabelecer a MTD. Uma dose é considerada a NTD quando relacionadas com o fármaco 2 ou mais de 6 indivíduos avaliáveis em uma experiência de coorte toxicidade limitante da dose (DLT) durante o Ciclo 1. Quando o NTD é estabelecido, o aumento da dose pára. A MTD é definida como o último nível de dose abaixo da NTD com 0 ou 1 de 6 indivíduos avaliáveis experimentam DLT durante o Ciclo 1. Uma dose intermediária (isto é, um entre o DTN e o último nível de dose antes da NTD) ou matérias adicionais dentro qualquer grupo de dose podem ser necessários para determinar mais precisamente a MTD e RP2D.

[459] Na parte B, os indivíduos podem começar a dosagem MTD e/ou um nível de dose inferior com base nos dados DP de segurança, farmacocinética e/ou da Parte A. Cerca de 100 indivíduos (até 20 por grupo), estratificados pelo tipo de tumor, são tratados e avaliados quanto à segurança e atividade anti- tumoral após cada dois ciclos de terapia. As doses e esquema de administração são devidamente determinados. Durante a Parte B, os dados de segurança são revisados regularmente sobre a continuação do estudo, conforme o caso.

[460] População de Estudo: Homens e mulheres, 18 anos ou mais, com tumores sólidos (ST) avançados,de Linfoma não-Hodgkin (NHL), mieloma múltiplo (MM), ou tumores sólidos não ressecáveis avançados, incluindo os indivíduos que têm progredido em (ou não terem sido capazes de tolerar) terapia padrão ou para quem não existe nenhuma terapia anticâncer padrão. Tipos de tumores selecionados incluem câncer de mama metastático (MBC), glioblastoma multiforme (GBM), carcinoma hepatocelular (HCC), linfoma difuso de grandes células B (LDGCB), e mieloma múltiplo (MM).

[461] Dosagem e duração dos estudos: Durante o primeiro ciclo, apenas na parte A, cada paciente é administrado uma dose única diária do composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato , co-cristal, clatrato, ou polimorfo, no dia 1, seguido por uma observação de 48 horas e período de amostragem PK, seguido no Dia 1 por dose diária ininterrupta durante 28 dias (ciclo 1 = 30 dias). Em ciclos subsequentes Parte A, os sujeitos são tratados em ciclos de 28 dias com a dosagem contínua a partir do dia 1 a 28. O composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, é administrado uma vez ou duas vezes por dia com uma dose de 0,1, 0,5, 1, 2, 4, 5, 7,5, 10, 20, 25, 50, ou 100 mg em uma dose inicial. A dose pode ser de 0,1, 0,5, 1, 2, 4, 5, 7,5, 10 mg administrada uma vez por dia. A dose pode ser de 50, 25, ou 10 mg administrados duas vezes por dia. A dose pode ser ajustada para cima ou para baixo, a partir da dose inicial durante o tratamento. Como descrito acima, se necessário, o fármaco pode ser administrado de uma forma cíclica.

[462] Na parte B, os indivíduos recebem dosagem contínua durante 28 dias desde o início. Não há nenhuma postagem inicial, dose única do período de coleta de PK de 48 horas.

[463] A terapia é interrompida se houver evidência de progressão da doença, toxicidade inaceitável ou decisão paciente/médico para parar. Os indivíduos podem continuar a receber composto sem interrupção durante o tempo que eles obtiverem benefícios como julgado pelo investigador.

[464] A inscrição ocorre ao longo de aproximadamente 24 meses. Conclusão do tratamento ativo e acompanhamento do paciente pode levar um adicional de 3-6 meses.

[465] O tratamento do estudo: O composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, tal como cápsulas de 0,1 mg, 0,5 mg, 1 mg e 3 mg são fornecidas para administração oral. O composto vai ser embalado em garrafas dentro de caixas contendo droga por 28 dias.

[466] Na parte A (a fase de escalonamento de dose), o nível de dosagem é iniciado a 0,5 mg uma vez por dia após a dose única PK. Após a primeira dose ser administrada ao paciente em último lugar em cada grupo, os pacientes foram observados durante pelo menos 30 dias antes da próxima dose, a dose do grupo especificada no protocolo pode começar. Escalação de fase intra paciente não é permitida a menos que aprovado pelo Comitê de Segurança revisão (SRC), que consiste em o investigador principal e monitor médico do patrocinador.

[467] Na parte B, os indivíduos podem receber o composto de Fórmula I, ou um enantiômero ou uma mistura dos seus enantiômeros, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato, ou um polimorfo do mesmo, no MTD e/ou uma dose mais baixa, com base na segurança, PK e PD avaliações da Parte A. Cerca de 100 indivíduos (tipos de tumor pré-selecionados em grupos de até 20) são avaliados para efeitos de segurança e antitumorais.

[468] Visão geral da eficácia Avaliações: Pacientes são avaliadas quanto à eficácia após cada 2 ciclos. A variável de eficácia primária é a resposta. A resposta do tumor é baseada em critérios de avaliação de resposta em tumores sólidos (RECIST 1.1), Critérios Workshop Internacional (CBI) para NHL, critérios internacionais de resposta uniforme para o mieloma múltiplo (IURC) (Anexo A, Seção 18.1), ou respostas de Avaliação de Neuro-Oncologia (RANO) Grupo de Trabalho para GBM.

[469] Os desfechos secundários/exploratórios incluem medições de biomarcadores no sangue e tumor, a resposta histopatológica e suas correlações com achados farmacogenômicos. Variáveis complementares de eficácia (por exemplo, status de desempenho de ECOG, resultados PET) também são examinadas. Além disso, mudanças hipovascularização são medidas pela constante transferência de volume (Ktrans) e AUC inicial (IAUC) usando DCE- ressonância magnética.

[470] Visão geral das Avaliações de Segurança: As variáveis de segurança para este estudo são eventos adversos, variáveis laboratoriais clínicas, ECG de 12 derivações (revisto centralmente), avaliações de FEVE, exames físicos e sinais vitais.

[471] Visão geral de avaliações farmacocinéticas: Os perfis PK do composto de Fórmula I e os seus metabolitos são determinados a partir de colheitas de sangue e de urina em série, durante o primeiro ciclo de tratamento. Estes são correlacionados com farmacodinâmica (PD) os resultados, quando possível.

[472] Os exemplos apresentados acima são fornecidos para que os técnicos na especialidade com uma divulgação e descrição completas de como preparar e utilizar as formas de realização reivindicadas, e não se destinam a limitar o escopo do que é aqui revelado. As modificações que são óbvias para pessoas versadas na técnica são entendidas como estando dentro do escopo das seguintes reivindicações. Todas as publicações, patentes e pedidos de patente citadas nesta especificação são aqui incorporadas por referência como se cada publicação essa aplicação, patente ou patente fossem especificamente e individualmente indicada para ser aqui incorporada por referência.

6.8 Utilização em doentes com insuficiência renal

[473] (S) -3- (4 - ((4-morfolinometil) benzil) oxi) -1-oxoisoindolin-2-il) piperidina-2,6-diona ("Composto IS") é mais potente sobre compostos imunomoduladores de vartasina anteriores tais como a talidomida. Compostos imunomoduladores têm mostrado atividade clínica significativa em pacientes com doença refratária e/ou reincidente e refratário. A insuficiência renal é uma co-morbidade comum em pacientes com mieloma múltiplo, que ocorrem em mais de 40 % dos pacientes. (Eleftherakis-Papapiakovou et al, Leuk Lymphoma 2011; 52 (12): 2299-2303).

[474] Doentes com mieloma múltiplo com deficiências renais são tratados com composto é de acordo com os esquemas de tratamento fornecidos aqui em outro lugar. Sabe-se que certos compostos imunomoduladores que são metabolizados e eliminados são eliminados pelos rins em níveis tão baixos que o fármaco original. As características dos compostos imunomoduladores relacionados, tais como pomalidomida, sugerem que a exposição ao fármaco não seria substancialmente afetada pelo grau de função renal.

Claims (30)

1. Uso do composto 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2- il)piperidina-2,6-diona, que tem a seguinte estrutura:

ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros do mesmo, ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser na preparação de uma composição farmacêutica para tratar ou gerenciar câncer, em que o câncer é mieloma ou linfoma.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o câncer é linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, linfoma cutâneo de células T, linfoma cutâneo de células B, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular de baixo grau, macroglobulinemia de Waldenstrom, mieloma latente ou mieloma indolente.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o câncer é linfoma não-Hodgkin.

4. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o linfoma não-Hodgkin é linfoma difuso de grandes células B.

5. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o linfoma não-Hodgkin é linfoma folicular, linfoma de Burkitt ou linfoma das células do manto.

6. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o câncer é linfoma de Hodgkin.

7. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o câncer é mieloma múltiplo.

8. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o câncer é recidivo ou refratário ou o câncer é resistente ao fármaco.

9. Uso de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o câncer é resistente a lenalidomida.

10. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o mieloma múltiplo é recidivo ou refratário.

11. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o mieloma múltiplo é resistente a lenalidomida.

12. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o mieloma múltiplo é mieloma múltiplo recidivo ou refratário com função renal debilitada.

13. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é usada a pacientes com mieloma múltiplo antes, durante ou após o transplante de células sanguíneas periféricas progenitoras autólogas; ou a pacientes com reincidência de mieloma múltiplo após o transplante de células tronco.

14. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é usada em combinação com um ou mais agentes ativos adicionais.

15. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o agente ativo adicional é selecionado a partir do grupo que consiste em um agente alquilante, um análogo de adenosina, um glicocorticoide, um inibidor de quinase, um inibidor de SYK, um inibidor de PDE3, um inibidor de PDE7, doxorrubicina, clorambucil, vincristina, bendamustina, forscolina e rituximab.

16. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o agente ativo adicional é rituximab.

17. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o agente ativo adicional é dexametasona.

18. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é usada em combinação com dexametasona a pacientes com mieloma múltiplo recidivo ou refratário.

19. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é usada em combinação com dexametasona como terapia de resgate para pós transplante de baixo risco para pacientes com mieloma múltiplo; ou como terapia de manutenção para pacientes com mieloma múltiplo após o transplante de medula óssea autóloga.

20. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o agente ativo adicional é uma combinação entre dexametasona e bortezomib.

21. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o agente ativo adicional é uma combinação entre dexametasona e carfilzomib.

22. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o agente ativo adicional é uma combinação entre dexametasona e ciclofosfamida.

23. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o agente ativo adicional é salinosporamida A.

24. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que o composto 3-(4-((4-(morfolinometil)benzil)oxi)- 1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou mistura de enantiômeros do mesmo, ou um sal, solvato, hidrato, co-cristal, clatrato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreendido na composição farmacêutica, é usado em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg por dia; ou o composto é usado em uma quantidade de cerca de 0,1; 0,2; 0,5; 1; 2; 2,5; 3; 4; 5; 7,5; 10; 15; 20; 25; 50 ou 100 mg por dia.

25. Uso de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que o composto é usado em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 5 mg por dia.

26. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é administrada oralmente, ou a composição farmacêutica está na forma de uma cápsula ou um comprimido.

27. Uso de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que a cápsula compreende 10 mg ou 25 mg do composto.

28. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 27, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é usada durante 21 dias, seguidos de sete dias de descanso em um ciclo de 28 dias.

29. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que o composto é (S)-3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

30. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que o composto é cloridrato de (S)-3-(4-((4- (morfolinometil)benzil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.

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