BR112014003950B1 - Uso de cepas de bacillus isoladas produtoras de enzima e alimentação de um animal - Google Patents

Abstract

cepas de bacillus produtoras de enzima, seu uso, composição e alimentação de um animal. a presente invenção refere-se às cepas de bacillus produtoras de enzima que proporcionam benefícios aos animais e aos métodos de uso destas cepas. em uma modalidade, a presente invenção refere-se às composições compreendendo as cepas de bacillus produtoras de enzimas. em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma alimentação para um animal que compreende as cepas de bacillus produtoras de enzimas.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS

[001] Este pedido de patente reivindica prioridade a 35 U.S.C. § 119 (e) para o pedido de Patente Provisório U.S. N ° 61 / 526, 881 depositado em 24 de agosto de 201 1 e o pedido de Patente Provisório U.S. N ° 61 / 527, 371 depositado em 25 de agosto de 201 1, a totalidade de ambos os pedidos de Patente está incorporada por meio de referência.

BIBLIOGRAFIA

[002] As citações bibliográficas completas das referências referidas na presente invenção pelo sobrenome do primeiro autor entre parênteses podem ser encontradas na seção Bibliografia, imediatamente antes das reivindicações.

CAMPO

[003] A descrição refere-se às cepas de Bacillus que produzem as enzimas que proporcionam benefícios aos animais e aos métodos de uso destas cepas. Em uma modalidade, a presente invenção refere-se aos métodos para melhorar o desempenho do crescimento de um animal. Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma alimentação direta microbiana, e para a alimentação de um animal suplementado com uma alimentação direta microbiana. Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se aos métodos para melhorar as unidades de armazenamento de esterco. Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere-se aos métodos para aliviar a uma resposta inflamatória.

ANTECEDENTES

[004] A indústria mundial de suínos tem visto um aumento de alimentação de subprodutos (destiladores de grãos secos com solúveis (DDGS), farelo de trigo, etc.), inicialmente, 0 a 10 % para os extremos atuais de 30 a 60 %. Estas economias de custo da dieta têm sido uma grande oportunidade para a indústria no que diz respeito a uma economia em custos de entrada de alimentação, mas vem com um conjunto de desafios também. O processo de fermentação para extrair o etanol a partir de milho remove quase todo o amido, deixando a alimentação de DDGS resultante do sub-produto contendo aproximadamente 40 % de fibra. Este maior teor de fibra em relação ao milho resulta na digestibilidade reduzida da matéria seca e cerca de 10 unidades percentuais a menos de digestibilidade da maioria dos aminoácidos em comparação com DDGS de milho (Stein e Shurson, 2009).

[005] Por conseguinte, a inclusão de DDGS em dietas de gado pode ter impactos negativos sobre o desempenho animal e as características de carcaça. Além dos efeitos negativos sobre o crescimento do animal e a qualidade da carcaça, as alterações na digestibilidade dos nutrientes, como resultado da adição de DDGS com um alto teor de fibras têm implicações para o manuseio, armazenamento e decomposição de esterco de suínos. A indústria suína comercial indicou que a capacidade de retenção de esterco é menor em unidades de armazenamento de esterco de suínos de poço profundo anaeróbico, e que o esterco de suínos alimentados com alto nível de DDGS tem mais acúmulo de sólidos, bem como a amônia, metano e as emissões de gases de sulfeto de hidrogênio.

[006] Em vista do que precede, seria desejável proporcionar as cepas de Bacillus que produzem as enzimas que proporcionam benefícios aos animais e aos métodos de uso destas cepas.

SUMÁRIO

[007] A descrição refere-se a produção da enzima de Bacillus. Em uma modalidade, as cepas são Bacillus subtilis. Em uma outra modalidade, as cepas são Bacillus pumilus.

[008] Em pelo menos algumas modalidades, a cepa de B. subtilis (s) é (são) de Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, Bacillus subtilis AGTP BS918, Bacillus subtilis AGTP BS1013, e Bacillus subtilis AGTP BS 1069, e Bacillus subtilis AGTP 944, e as cepas que têm todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante das mesmas, e as misturas dos mesmos. Em algumas modalidades, a (s) cepa(s) pumilus B. é / são Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus KX1 1-1, e as cepas que têm todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante das mesmas, e as misturas das mesmas.

[009] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se aos métodos que compreendem a administração de uma quantidade eficaz de enzima produtora de cepa (s), uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas a um animal, em que a administração melhora, pelo menos, uma das seguintes opções de peso corporal, ganho médio diário, consumo médio diário de alimento, conversão alimentar, características de carcaça, digestibilidade dos nutrientes e problemas de resíduos de esterco.

[0010] Em uma outra modalidade, a enzima que produz as cepas pode ser administrada a um animal para melhorar pelo menos um dos componentes do complexo de desagregação alimentares, os problemas de resíduos de esterco, a eficiência de produção, características da carcaça, e desempenho durante a alimentação de elevados níveis de DDGS.

[0011] Em uma modalidade, uma ou mais cepa (s) produtora (s) de enzima é (são) administrada (s) como uma alimentação direta microbiana (DFM). A alimentação direta microbiana inclui uma ou mais cepa (s) Bacillus. A (s) cepa (s) que produz a enzima é (são) eficaz (es) em degradar os alimentos indigestos de uma outra forma, como DDGS. Isto permite o aumento da disponibilidade de nutrientes, resultando em uma melhor resposta do crescimento dos animais. Além disso, a produção de enzima a (s) cepa (s) de abate (s) de esterco associada (s) aos odores, melhorando assim a qualidade do ar ambiente operacional. Em pelo menos algumas modalidades, a redução de odores é através da redução de ácidos graxos voláteis, amônia, e / ou metano e a produção de sulfeto de hidrogênio gasoso.

[0012] Em outras modalidades, a presente invenção refere-se a um método compreendendo a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) produtora de enzima, combinação de uma ou mais da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), a alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas a um suíno em uma quantidade eficaz para melhorar a unidade de armazenamento de esterco. Em certas modalidades, a unidade de armazenamento de esterco suíno é um poço de esterco. Em pelo menos algumas modalidades, a administração melhora pelo menos uma das seguintes características: menor incidência de formação de espuma, menor acumulação de sólidos, e menos nitrogênio, enxofre, fósforo, nitrogênio ligado à fibra, proteína total, de gordura, teor de fibra e, quando comparado com um poço de esterco de controle.

[0013] Em certas modalidades, a (s) cepa (s) produtora(s) de enzima é (são) diretamente aplicada (s) a uma unidade de armazenamento de esterco, tal como um poço de esterco. As melhoras resultantes do contato da (S) cepa (S) produtora de enzima diretamente para uma unidade de armazenamento de esterco inclui, pelo menos, uma menor incidência de formação de espuma, menor acumulação de sólidos, e menos nitrogênio, enxofre, fósforo, nitrogênio ligado à fibra, proteína total, gordura, e teor de fibra de poços de esterco de controle.

[0014] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para alterar a composição de ácidos graxos voláteis em um poço de esterco que compreende a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) produtora (s) da enzima, uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas para animais cujo esterco é armazenado no poço de esterco. Em uma outra modalidade, as cepas produtoras de enzima podem ser contactadas diretamente com o poço de esterco.

[0015] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método para alterar as emissões de gases que se acumulam em uma sala de habitação de um animal que compreende a administração da (s) cepa (s) produtora (s) de enzima, combinação de uma ou mais da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas para animais em uma quantidade eficaz para reduzir as emissões de gases.

[0016] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se aos métodos para atenuar uma resposta inflamatória que compreende a administração da (s) cepa (s) produtora (s) de enzima, uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas para animais em uma quantidade eficaz para atenuar a resposta inflamatória. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0017] As modalidades exemplares da presente invenção são ilustradas nos desenhos anexos.

[0018] A Figura 1 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus subtilis AGTP BS3BP5.

[0019] A Figura 2 é uma sequência parcial do rDNA 16S de Bacillus subtilis AGTP BS3BP5.

[0020] A Figura 3 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus subtilis AGTP BS442.

[0021] A Figura 4 é uma sequência parcial do rDNA 16S de Bacillus subtilis AGTP BS442.

[0022] A Figura 5 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus subtilis AGTP BS521.

[0023] A Figura 6 é uma sequência parcial do rDNA 16S de Bacillus subtilis AGTP BS521.

[0024] A Figura 7 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus subtilis AGTP BS918.

[0025] A Figura 8 é uma sequência parcial do rDNA 16S de Bacillus subtilis AGTP BS918.

[0026] A Figura 9 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus subtilis AGTP BS 1013.

[0027] A Figura 10 é uma sequência parcial do rDNA 16S de Bacillus subtilis AGTP BS 1013.

[0028] A Figura 11 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus pumilus AGTP BS 1068.

[0029] A Figura 12 é uma sequência parcial do rDNA 16S de Bacillus pumilus AGTP BS 1068.

[0030] A Figura 13 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus subtilis AGTP BS1069.

[0031] A Figura 14 é uma sequência parcial do rDNA 16S de Bacillus subtilis AGTP BS 1069.

[0032] A Figura 15 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus subtilis AGTP 944.

[0033] A Figura 16 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus subtilis AGTP 944.

[0034] A Figura 17 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus subtilis AGTP 944.

[0035] A Figura 18 é a sequência parcial do gene 16S rDNA de Bacillus subtilis AGTP 944.

[0036] A Figura 19 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus pumilus KX1 1-1.

[0037] A Figura 20 é uma fotografia de um gel que mostra um perfil RAPD PCR de Bacillus pumilus KX1 1-1.

[0038] A Figura 21 é a sequência parcial do gene 16S rDNA de Bacillus pumilus KX1 1-1.

[0039] A Figura 22 é um esquema representativo de uma concepção da placa de cultura de células para o rastreamento de cepas de Bacillus para efeitos anti-inflamatórios. LPS foi usada para induzir a resposta inflamatória mas qualquer agente que induz a resposta inflamatória pode ser usado.

[0040] A Figura 23 é um gráfico de barras que representa os efeitos anti-inflamatórios das cepas de Bacillus, como mostrado em uma linhagem celular de macrófagos representantes (galinha HD11). O agente usado para induzir a resposta inflamatória foi LPS. Os efeitos sobre a expressão do geneIL-1β são mostrados pelas barras brancas (P < 0,01). Os efeitos sobre a expressão do gene IL-8são mostrados pelas barras pretas (P < 0,01). Letras diferentes (a, b, c) indicam o meio que diferiram estatisticamente (P < 0,01).

[0041] A Figura 24 é um esquema representativo de um projeto da placa de cultura de células para a seleção de um candidato de alimentação direta microbiana. LPS foi usada como o agente para induzir a resposta inflamatória.

[0042] A Figura 25 é um gráfico de barras que representa os efeitos anti-inflamatórios de cepas de Bacillus de uma linhagem celular de mamíferos (linhagem celular epitelial intestinal do rato (IEC-6)). LPS foi usada para induzir a resposta inflamatória. Um fator de necrose tumoral (TNF-a) da expressão do gene foi medido. Letras diferentes (a ou b) indicam que o meio diferiram estatisticamente (P < 0,10).

[0043] A Figura 26 é um gráfico de linha mostrando características da espuma em um poço acima de 3 amostragens no período de avaliação 170 dias.

[0044] A Figura 27 é um esquema representativo de uma medida de bioluminescência em cada curral na zona marcada com um "x ".

[0045] Antes de explicar as modalidades da presente invenção em detalhe, é para ser entendido que a presente invenção não está limitada na sua aplicação aos detalhes de construção e na disposição dos componentes apresentados na descrição seguinte ou ilustradas nos desenhos. A presente invenção é capaz de outras modalidades ou a de ser praticada ou realizada de várias maneiras. Também, é para ser entendido que a fraseologia e a terminologia na presente invenção empregue é para a finalidade de descrição e não devem ser consideradas como limitantes.

[0046] A estrutura organizacional desta presente invenção não deve limitar quaisquer modalidades ou elementos da presente invenção. Pretende-se que os elementos e as aplicações citadas dentro de uma modalidade, possam ser aplicadas a outras modalidades no âmbito da presente invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0047] As proporções numéricas nesta presente invenção são aproximadas, e, dessa maneira, podem incluir os valores fora das proporções, a menos que seja indicado de uma outra forma. As proporções numéricas incluem todos os valores de e incluem a parte inferior e os valores mais altos, em incrementos de uma unidade, desde que haja uma separação de, pelo menos, duas unidades entre qualquer valor mais baixo e qualquer valor mais elevado. Como um exemplo, se uma composição, propriedades físicas ou outras, tais como, por exemplo, peso molecular, viscosidade, etc, é de 100 a 1 000, pretende- se que todos os valores individuais, tais como 100, 101, 102, etc, e sub- intervalos, tais como 100 a 144, 155 a 170, 197 a 200, etc, são expressamente enumerados. Para proporções que contêm os valores que são menos que um ou contendo números fracionários maior do que um (por exemplo, 1,1, 1,5, etc), uma unidade é considerada como sendo 0,0001, 0,001, 0,01 ou 0,1, conforme apropriada. Para proporções que contenham os números de um dígito a menos de dez (por exemplo, 1 a 5), uma unidade é normalmente considerada como sendo 0,1. Estes são apenas exemplos do que é especificamente destinado, e todas as combinações possíveis de valores numéricos entre o valor mais baixo e o valor mais elevado enumerado, são para ser consideradas como expressamente relatadas na presente memória descritiva. As proporções numéricas são fornecidas dentro desta presente invenção para, entre outras coisas, as quantidades relativas de componentes de uma mistura, e em vários intervalos de temperatura e outros parâmetros recitados nos métodos.

[0048] Por " administrar " entende-se a ação de introduzir, pelo menos, uma cepa e / ou o sobrenadante de uma cultura de pelo menos uma cepa descrita na presente invenção em trato gastrointestinal do animal. Mais particularmente, esta administração é uma administração por via oral. Esta administração pode ser em particular realizada, completando a alimentação destinada ao animal com, pelo menos, uma cepa, a a alimentação suplementada sendo assim então a ser ingerida pelo animal. A administração também pode ser efetuada usando um tubo estomacal ou de qualquer outra maneira para que seja possível introduzir diretamente a pelo menos uma cepa no trato gastrointestinal do animal.

[0049] Por " pelo menos uma cepa, " entende-se uma única cepa, mas também as misturas de cepas que compreendem, pelo menos, duas cepas de bactérias. Por " uma mistura de pelo menos duas cepas, " entende-se uma mistura de duas, três, quatro, cinco, seis ou mesmo mais cepas. Em algumas modalidades de uma mistura de cepas, as proporções podem variar de 1 % a 99 %. Em certas modalidades, a proporção de uma cepa usada na mistura é de, pelo menos, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, ou 95 %. Outras modalidades de uma mistura de cepas são de 25 % a 75 %. As modalidades adicionais de uma mistura de cepas são de aproximadamente 50 % para cada uma das cepas. Quando uma mistura compreende mais do que duas cepas, as cepas podem estar presentes em proporções substancialmente iguais na mistura, ou em diferentes proporções.

[0050] Por " contato ", significa-se a ação de juntar, pelo menos, uma cepa e / ou o sobrenadante de uma cultura de pelo menos uma cepa descrita na presente invenção em grande proximidade com um substrato, o recipiente ou de uma substância, o qual inclui, mas não está limitado a uma unidade de armazenamento de esterco. Em algumas modalidades, a unidade de armazenamento de esterco é um poço de esterco. Como o contato pode ser através de uma forma direta ou indireta. Tal como usado na presente invenção, inclui a aplicação de contato, pulverização, inoculação, dispersão de distribuição, vazamento, e outros termos semelhantes.

[0051] Por "quantidade eficaz", significa uma quantidade de cepa e / ou do sobrenadante suficiente para permitir a melhora em pelo menos uma das seguintes características: a eficiência da produção animal, características da carcaça, o desempenho do crescimento de um animal, o desempenho do crescimento quando a alimentação é de altos níveis de DDGS a um animal, a digestibilidade dos nutrientes, a quebra de componentes complexos alimentares, o desempenho do crescimento de aves, o desempenho do crescimento de suínos, a eficiência alimentar, o ganho de peso médio diário, o média da ingestão de alimentação diária, o ganho de peso corporal: a alimentação ou alimentação: ingestão de ganho, e a moralidade.

[0052] Em outras modalidades, " quantidade eficaz " significa uma quantidade de cepa e / ou do sobrenadante suficiente para permitir a melhora em pelo menos um dos seguintes: problemas de resíduos de esterco, a quantidade de formação de espuma em uma unidade de armazenamento de esterco, a ecologia microbiana de uma unidade de armazenamento de esterco, a quantidade de ácidos graxos voláteis em uma unidade de armazenamento de esterco, a quantidade de produção de gás em uma sala de habitação de animais ou uma unidade de armazenamento de esterco, incluindo, mas não limitados a metano e sulfeto de hidrogênio.

[0053] Em uma outra modalidade, " quantidade eficaz " entende-se uma quantidade de cepa e / ou do sobrenadante suficiente para permitir a melhora em pelo menos uma das seguintes características: a expressão de um gene envolvido na resposta inflamatória, a expressão de uma proteína envolvida no processo de resposta inflamatória, e a atividade de uma proteína envolvida na resposta inflamatória.

[0054] Tal como usado na presente invenção, " desempenho " refere-se ao crescimento de um animal, tal como um suíno ou aves, medido por um ou mais dos seguintes parâmetros: média de ganho de peso diário (GPD), peso, diarréia neonatal, a mortalidade, a conversão alimentar, que inclui tanto a conversão alimentar quanto o ganho alimentar e o consumo de alimento. " Uma melhora no desempenho " ou " melhora do desempenho " tal como é usado na presente invenção, refere-se a uma melhora de pelo menos um dos parâmetros indicados no âmbito da definição de desempenho.

[0055] Tal como usado na presente invenção, uma " variante " tem pelo menos 80 % de identidade de sequências genéticas com as cepas descritas usando reação em cadeia da polimerase de amplificação aleatória de DNA polimórfico (RAPD-PCR). O grau de identidade de sequências genéticas pode variar. Em algumas modalidades, a variante tem pelo menos 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, ou 99 % da identidade de sequências genéticas com as cepas descritas usando a análise RAPD-PCR. Seis iniciadores que podem ser usados para análise RAPD-PCR incluem o seguinte: Iniciador 1 (5'-GGTGCGGGA A-3 ') (. SEQ ID NO 1); iniciador 2 (5'-GTTTCGCTCC-3 ') (SEQ ID NO. 2); iniciador 3 (5'-GTAGACCCGT-3 ') (SEQ ID NO 3),. PRIMER 4 (5'- AAGAGCCCGT-3 ') (SEQ ID NO 4);. iniciador 5 (5' - AACGCGCAAC-3 ') (SEQ ID NO: 5);. e o iniciador 6 (5'-CCCGTCAGCA-3 '.) (SEQ ID NO 6). A análise de RAPD pode ser realizada usando Ready-to-Go ™ RAPD Analysis Beads (Amersham Biosciences, Suécia), que são concebidos como as reações pré-misturadas, pré-dispensadas para a realização de análise de RAPD.

[0056] Os inventores descobriram que certas cepas de Bacillus têm atividade (s) enzimática (s) que decompõe(m) a (s) fibra (s), lipídio (s), hidrato (s) de carbono , e de proteína (s). Estes cepa (s) é (são) referida (s) na presente invenção como " cepa (s) produtora (s) de enzima ", " cepa (s) Bacillus ", ou " deformação (ões) ". Em algumas modalidades, a (s) atividade (s) enzimática (s) é (são) de celulase, a-amilase, xilanase, esterase, protease de caseína, amido de milho amilase, β-mananase, da lipase e / ou protease, por exemplo, zeinase e protease de soja.

[0057] Os inventores descobriram que certos microrganismos podem ser usados para tratar os componentes desafiadores de grãos destiladores secos com solúveis (DDGS).

[0058] Os inventores também descobriram que as cepas produtoras de enzima podem melhorar pelo menos um dos seguintes: (1) quebra de componentes alimentares complexos, (2) problemas de resíduos de esterco, (3) eficiência da produção animal; (4) as características da carcaça dos animais, (5) o desempenho do crescimento de um animal, e (6) efeitos de uma resposta inflamatória. Cepas produtoras de enzima

[0059] As cepas produtoras de enzimas incluem as cepas de Bacillus, incluindo, mas não limitado, as cepas B. subtilis, B. licheniformis, B. pumilus, B. coagulans, B. amyloliquefaciens, B. stearothermophilus, B. brevis, B. alkalophilus, B. clausii, B. halodurans, B. megaterium, B. circulans, B. lautus, B. thuringiensis e B. lentus, e as cepas tendo todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante, e as misturas das mesmas.

[0060] Em pelo menos algumas modalidades, a (s) cepa (s) de B. subtilis é (são) de Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, Bacillus subtilis AGTP BS918, Bacillus subtilis AGTP BS1013 e Bacillus subtilis AGTP BS1069, e Bacillus subtilis AGTP 944, e cepas tendo todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante das mesmas, e as misturas das mesmas. Em algumas modalidades, a (s) cepa (s) B. pumilus é / são Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus KX1 1-1, e as cepas que têm todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante das mesmas, e as misturas das mesmas.

[0061] Estas cepas foram depositadas por Danisco EUA, Inc. de Waukesha, Wisconsin, no programa de investigação Agrícola Serviço de Cultura (NRRL) de 1815 da Universidade North Street, Peoria, III., 61604. As datas de depósitos originais e números de acesso são as seguintes: Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, 13 de maio de 2011 (NRRL B-50510), Bacillus subtilis AGTP BS442, 04 de agosto de 2011 (NRRL B-50542), Bacillus subtilis AGTP BS521, 4 de agosto de 2011 (NRRL B- 50545), Bacillus subtilis AGTP BS918, 13 de maio de 2011 (NRRL B- 50508), Bacillus subtilis AGTP BS1013, 13 de maio de 2011 (NRRL B- 50509), Bacillus subtilis AGTP BS 1069, 4 de agosto de 2011 (NRRL B- 50544), Bacillus subtilis AGTP 944, 01 de agosto de 2011 (NRRL B- 50548), Bacillus pumilus AGTP BS 1068, 4 de agosto de 2011 (NRRL B-50543), e Bacillus pumilus KX11-1, 5 de agosto de 2011 (NRRL B- 50546). Todos os depósitos foram feitos de acordo com as disposições do Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Micro-organismos para Fins de Procedimento de Patentes,

[0062] Em algumas modalidades, as cepas que produzem a enzima tem atividade (s) enzimática (s), incluindo, mas não limitadas a celulase, a-amilase, xilanase, esterase, protease de caseína, amido de milho amilase, β-mananase, lipase e / ou protease, por exemplo, zeinase e protease de soja.

[0063] Em pelo menos algumas modalidades, mais do que uma da (s) cepa (s) descrita (s) na presente invenção é (são) combinada (s).

[0064] Qualquer derivado ou variante de Bacillus, também está incluída e é útil nos métodos descritos e reivindicados na presente invenção. Em algumas modalidades, as cepas que têm todas as características de Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, Bacillus subtilis AGTP BS918, Bacillus subtilis AGTP BS 1013, Bacillus subtilis AGTP BS1069, Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus KX11-1 também estão incluídas e são úteis nos métodos descritos e reivindicados na presente invenção.

[0065] Em certas modalidades, qualquer derivado ou variante de Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, Bacillus subtilis AGTP BS918, Bacillus subtilis AGTP BS 1013, Bacillus subtilis AGTP BS 1069, Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068, e Bacillus pumilus KX11-1 também estão incluídas e são úteis nos métodos descritos e reivindicados na presente invenção.

[0066] Em pelo menos algumas modalidades, a (s) cepa (s) produtora de enzima é (são) usada (s) em combinação. Em uma modalidade, a cepa produtora de enzima pode ser usada em combinação com as cepas de bactérias do gênero Bacillus, e outras cepas de bactérias a partir de um gênero diferente.

[0067] Em pelo menos algumas modalidades, a (s) cepa (s) produtora (s) de enzima e os métodos proporcionados na presente invenção melhoram uma ou mais das seguintes características: a ruptura dos componentes dietéticos complexos, os problemas de resíduos de esterco, a eficiência de produção, as características da carcaça, e desempenho ao alimentar os níveis elevados de DDGS, quando comparados a um controle.

[0068] Os problemas de resíduos de esterco incluem, mas não estão limitados a, nutrientes indesejáveis de esterco e a composição microbiana, e as emissões de gases indesejáveis provenientes das unidades de armazenamento de esterco, como poços de esterco. Uma melhora em problemas de resíduos de esterco inclui, mas não está limitado a, pelo menos, um de (1) menos nutrientes acumulados no esterco, (2) as comunidades microbianas de deslocamento esterco para as populações favoráveis para a quebra de sólidos, e (3) um decréscimo de amoníaco, metano, e as emissões de gás de sulfeto.

[0069] Uma melhora nas características de carcaça pode ser medida em pelo menos um aumento de rendimento em porcentagem magra e rendimento de carcaça, e uma diminuição dos valores de iodo de gordura. O desempenho pode ser medido pelo ganho médio diário, média da ingestão de alimentação diária e alimentação necessária por unidade de ganho, e outras medidas conhecidas na técnica.

[0070] Quando ingerida, a (s) cepa (s) produtora (s) de enzima produz (em) enzimas. Em algumas modalidades, a (s) cepa (s) produtora de enzima produz (em) enzimas in vivo. Em outras modalidades, a (s) cepa (s) produtora de enzima sobrevive (m) no esterco dos animais aos quais são administrados a cepa e produz (em) enzimas excretadas no esterco. Métodos de cultura de uma cepa

[0071] As cepas de Bacillus são produzidas por meio da fermentação das cepas bacterianas. A fermentação pode ser iniciada por meio do aumento de escala de uma cultura de sementes. Isto envolve repetidamente e de forma asséptica a transferência da cultura para um volume maior e maior para servir como o inóculo para a fermentação, o qual é obtido em grandes fermentadores de aço inoxidável em um meio contendo proteínas, hidratos de carbono e sais minerais necessários para o crescimento óptimo. Um meio exemplar não limitativo é TSB. Depois do inóculo ter sido adicionado ao recipiente de fermentação, a temperatura e a agitação são controladas para permitir um crescimento máximo. Uma vez que a cultura atinja uma densidade máxima da população, a cultura é colhida através da separação das células a partir do meio de fermentação. Isto é comumente feito por meio da centrifugação.

[0072] A contagem da cultura pode então ser determinada. CFU ou Unidade formadora de colônias é a contagem de células viáveis de uma amostra obtida a partir de métodos de galvanização microbiológicos padronizados. O termo é derivado do fato de que uma única célula, quando plaqueada em um meio apropriado vai crescer e tornar-se uma colônia viável no meio de ágar. Uma vez que várias células podem dar origem a uma colônia visível, o termo unidade de formação de colônia é uma unidade de medida mais útil do que o número de células.

[0073] Em uma modalidade, cada cepa de Bacillus é fermentada entre um nível de CFU / mL de 5 x 10 a cerca de um nível de 4 x 109 CFU / ml. Em pelo menos uma modalidade, um nível de 2 x 109 CFU / ml. As bactérias são recolhidas por meio da centrifugação, e o sobrenadante é removido. O sobrenadante pode ser usado nos métodos descritos na presente invenção. Em pelo menos algumas modalidades, as bactérias são sedimentadas. Em pelo menos algumas modalidades, as bactérias são liofilizadas. Em pelo menos algumas modalidades, as bactérias são misturadas com um veículo. No entanto, não é necessário liofilizar o Bacillus antes de utilizá-los. As cepas também podem ser usadas com ou sem conservantes, e, em forma concentrada, não concentradas, ou diluídas. DFMS e métodos de preparação de um DFM

[0074] Uma composição que inclui uma ou mais cepa (s) descrita (s) na presente invenção é fornecida. A composição pode ser transmitida para um animal como uma alimentação direta microbiana (DFM). Um ou mais veículo (s) ou outros ingredientes podem ser adicionados para o DFM. O DFM pode ser apresentado em várias formas físicas, por exemplo, como um topo preparado, como um concentrado solúvel em água para uso como uma poção líquida, ou para ser adicionado a um substituto do leite, cápsulas de gelatina, ou géis. Em uma modalidade da forma de topo preparada, o produto de fermentação das bactérias liofilizadas é adicionado a um veículo, tal como soro de leite, maltodextrina, sacarose, dextrose, calcário (carbonato de cálcio), cascas de arroz, levedura, amido seco, e / ou aluminato de silico de sódio. Em uma modalidade o concentrado solúvel em água para uma poção líquida ou suplemento substituto de leite, o produto de fermentação das bactérias liofilizadas é adicionado a um veículo solúvel em água, tais como soro de leite, maltodextrina, sacarose, dextrose, amido seco, silico de aluminato de sódio, e um líquido é adicionado para formar a poção ou o suplemento é adicionado ao leite ou a um substituto do leite. Em uma modalidade da forma de cápsulas de gelatina, o produto de fermentação das bactérias liofilizadas é adicionado a um veículo, tal como soro de leite, a maltodextrina, o açúcar, calcário (carbonato de cálcio), cascas de arroz, levedura seca de amido, e / ou aluminato de silico de sódio. Em uma modalidade, as bactérias e o veículo são colocados em uma cápsula de gelatina degradável. Em uma modalidade da forma de géis, o produto de fermentação das bactérias liofilizadas é adicionado a um veículo, tal como óleo vegetal, sacarose, dióxido de silício, polissorbato 80, propileno glicol, hidroxianisol butilado, ácido cítrico, etoxiquina, e / ou coloração artificial que forma o gel.

[0075] A (s) cepa (s) pode (m), opcionalmente, ser misturada (s) com uma formulação seca de aditivos, incluindo, mas não se limitando a substratos de crescimento, enzimas, açúcares, hidratos de carbono, extratos e promotores do crescimento de micro-ingredientes. Os açúcares podem incluir o seguinte: lactose; maltose; dextrose; malto-dextrina, glicose, frutose, manose, tagatose, sorbose, rafinose, e galactose. Os açúcares variam entre 50 a 95 %, quer individualmente ou em combinação. Os extratos podem incluir levedura ou solúveis de fermentação de levedura secos que variam de 5 a 50 %. Os substratos de crescimento, podem incluir: tripticase, que varia de 5 a 25 %; lactato de sódio, que varia de 5 a 30 %, e, Tween 80, que varia de 1 a 5 %. Os hidratos de carbono podem incluir manitol, o sorbitol, o adonitol e arabitol. Os hidratos de carbono variam de 5 a 50 % individualmente ou em combinação. Os micro- ingredientes podem incluir os seguintes: carbonato de cálcio, que variam de 0,5 a 5,0 %, cloreto de cálcio, que variam de 0,5 a 5,0 % ; fosfato dipotássico, que varia de 0,5 a 5,0 % o, fosfato de cálcio, que varia de 0,5 a5,0 %; proteinato manganês, que varia de 0,25 a 1.00 % , e, manganês, que varia de 0,25 a 1 0,0 %.

[0076] Para preparar DFMS descrito na presente invenção, a (s) cultura (s) e o (s) veículo (s) (se usados) pode(m) ser adicionado(s) a uma fita ou a um misturador de pás e misturados durante cerca de 15 minutos, embora o período possa ser aumentado ou diminuído. Os componentes são misturados de tal forma que uma mistura uniforme das culturas e dos veículos resultam. O produto final é de preferência um pó seco, escoável. A (s) cepa (s) pode (m) então ser adicionada (s) ao alimento para animais ou uma pré-mistura de alimentação, adicionado a água de um animal, ou administrada (s) de outros modos conhecidos na técnica. Uma alimentação de um animal pode ser complementada com uma ou mais cepa (s) descrita (s) na presente invenção ou com uma composição descrita na presente invenção.

[0077] O DFM proporcionado na presente invenção pode ser administrado, por exemplo, como a solução contendo a cepa de cultura, o sobrenadante de produção de cepa, ou o produto bacteriano de uma solução de cultura.

[0078] A administração de uma DFM fornecida na presente invenção a um animal pode aumentar o desempenho do animal. Em uma modalidade, a administração de uma DFM na presente invenção fornecida a um animal pode aumentar o consumo médio diário de alimento (adfi), ganho médio diário (adg), ou a eficiência alimentar (ganho: alimentação; G: F ou alimentação: ganho; F: G) (coletivamente, os "indicadores de desempenho"). Um ou mais do que um destes desempenhos métricos podem ser melhorados.

[0079] O DFM pode ser administrado ao animal em uma de muitas formas. Por exemplo, a (s) cepa (s) pode (m) ser administrada (s) sob uma forma sólida como um produto farmacêutico veterinário, pode ser distribuída em um excipiente, de preferência água, e introduzida diretamente no animal, pode ser fisicamente misturada com o material de alimentação de uma forma seca, ou a (s) cepa (s) pode (m) ser formada (s) em uma solução e em seguida pulverizada (s) sobre o material de alimentação. O método de administração da (s) cepa (s) para o animal é considerado como estando dentro do conhecimento geral de uma pessoa que é versada na técnica. Métodos de administração a um animal

[0080] Em uma modalidade, as cepas podem ser administradas em uma quantidade eficaz para animais. Em pelo menos algumas modalidades, a presente invenção refere-se a um método que compreende a administração a um animal de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) produtora (s) de enzima, uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) partir de uma cultura da (s) cepa (s), ou de alimentação animal, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas. Em uma modalidade, o animal é um suíno. Em uma outra modalidade, o animal é uma ave. Em ainda uma outra modalidade, o animal é um ruminante.

[0081] A administração de uma ou mais cepa (s) produtora (s) de enzima aos animais é realizada por meio de qualquer método conveniente, incluindo a adição de cepas para a água de beber dos animais, para a sua alimentação, ou para a roupa de cama, ou por meio da inserção oral direta, tal como por meio de um aerossol ou por meio da injeção.

[0082] Em uma outra modalidade, a administração de uma ou mais cepas produtoras de enzimas é pulverizando o animal com as cepas produtoras de enzima. O animal pode limpar ou alisar e ingerir as cepas produtoras de enzimas.

[0083] Em uma modalidade, as cepas de Bacillus são administradas como esporos.

[0084] Tal como usado na presente invenção, o termo "animal " inclui, mas não está limitado a seres humanos, mamíferos, anfíbios, aves, répteis, suínos, suínos, vacas, gado, cabras, cavalos, ovelhas, aves e outros animais mantidos ou que foram criados em fazendas ou rancho, ovelhas, ovelhas de chifre grande, búfalos, antílopes, bois, asno, mula, cervos, alces, renas, búfalo aquático, camelo, lhama, alpaca, coelho, rato, rato, porquinho da índia, hamster, furão, cão, gato e outros animais de estimação, primata, macaco, e gorila.

[0085] Em algumas modalidades, os animais são aves de diferentes idades, tais como de partida, produtores e finalizadores. Em certas modalidades, os animais são aves exóticas e aves, incluindo, mas não limitados a, pintainhos, perus, patos, ganso, keets cocurrais, frangos, galinhas, galos, galetos e capões.

[0086] Em algumas modalidades, os animais são suínos, incluindo, mas não limitados a, suínos recém-nascidos, leitões de criação, leitões em fase de lactação, leitões, , leitões dourados, javali, fêmeas, leitões em fase de lactação, e suínos em fase terminal. A (s) cepa (s) pode (m) ser alimentada (s) a uma leitoa durante o período de lactação, embora a (s) cepa (s) podem ser alimentada (s) por diferentes durações e em momentos diferentes. Em certas modalidades, a (s) cepa (s) é (são) administrada (s) aos leitões, por meio da alimentação da (s) cepa (s) de uma leitoa ou leitão dourado. Acredita-se que a transferência para os leitões a partir do leitão dourado é conseguida através da via fecal-oral e / ou por outras vias.

[0087] As cepas produtoras de enzima podem ser administradas a um animal para melhorar pelo menos um de digestibilidade de nutrientes, desempenhos de crescimento de suínos, as respostas de desempenho de crescimento de aves, a eficiência alimentar (ingestão: alimentação ou alimentação: ingestão), peso corporal, consumo de alimento, ganho médio diário, média diária do consumo de alimento, a quebra de componentes alimentares complexos, a eficiência da produção de aves, a eficiência da produção de suínos, e mortalidade. Esses benefícios podem ser particularmente úteis quando as dietas contendo altos níveis de DDGS são fornecidas. Inicialmente, DDGS foi de 0 % a 10 % da dieta do animal. Atualmente, DGGS é de 30 % para 60 %

[0088] A quantidade de melhoramento pode ser medida tal como descrito na presente invenção, ou por meio de outros métodos conhecidos na técnica. Essas quantidades eficazes podem ser administradas ao animal por fornecer acesso ad libitum ao alimento contendo o DFM. O DFM também pode ser administrado em uma ou mais doses.

[0089] Em certas modalidades, a melhora é de pelo menos 1 a 5 %, 5 a 10 %, 10 a 15 %, 15 a 20 %, 20 a 25 %, 25 a 30 %, 30 a 35 %, 35 a 40 %, 40 a 45 %, 45 a 50 %, 50 a 55 %, 55 a 60 %, 60 a 65 %, 65 a 70 %, 70 a 75 %, 75 a 80 %, 80 a 85 %, 85 a 90 %, 90 a 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, ou maior do que 99 % em comparação com um controle não tratado.

[0090] Em pelo menos algumas modalidades, a melhora nestas medições em um animal ao qual a (s) cepa (s) é / são administrada (s), é de pelo menos, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 1 1 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 %, 30 %, 31 %, 32 %, 33 %, 34 %, 35 %, 36 %, 37 %, 38 %, 39 %, 40 %, 41 %, 42 %, 43 %, 44 %, 45 %, 46 %, 47 %, 48 %, 49 %, 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98, 99 %, e mais de 99 % em comparação com um animal de controle.

[0091] Em outras modalidades, a melhora nestas medições em um animal ao qual a (s) cepa (s) é / são administrada (s) é de 2 a 8 % em comparação com um animal de controle. Em certas outras modalidades, a melhora nestas medições em um animal ao qual a (s) cepa (s) é / são administrada (s) é de pelo menos 8 % em comparação com um animal de controle.

[0092] Em algumas modalidades, um animal de controle é um animal que não foi administrado com as cepas produtoras de enzima.

[0093] Esta quantidade eficaz pode ser administrada ao animal em uma ou mais doses. Em algumas modalidades, uma ou mais cepa de Bacillus (s) é (são) adicionada (s) ao alimento de um animal a uma proporção de pelo menos 1 x 104 CFU / animal / dia.

[0094] Em uma modalidade, a administração melhora, pelo menos, um da digestibilidade de nutrientes, respostas de desempenho de crescimento, por exemplo, eficiência da alimentação, a quebra de componentes alimentares complexos, a eficiência de produção, o ganho de peso corporal, o consumo de alimento, e a mortalidade.

[0095] Em certas modalidades do método, a (s) cepa (s) é (são) administrada (s) a cerca de 1 x 105 CFU / animal / dia a cerca de 1 x 10 " CFU / animal / dia. Em algumas modalidades, o animal é um suíno. Em uma outra modalidade, o animal é uma ave.

[0096] Em pelo menos algumas modalidades, o método é usado quando o animal é alimentado com altos níveis de grãos destiladores secos com os solúveis (DDGS). Os altos níveis de DDGS podem ser uma proporção de mais de 10 % da dieta do animal. Os altos níveis de DDGS podem ser também uma proporção de mais de 30 % da dieta do animal.

[0097] Em pelo menos algumas modalidades, a quantidade eficaz de pelo menos uma cepa de bactéria é administrada a um animal, por meio da suplementação de um alimento destinado para o animal com a quantidade eficaz de pelo menos uma cepa de bactéria. Tal como usado na presente invenção, " suplementação ", designa o ato de incorporar a quantidade eficaz de bactérias proporcionadas na presente invenção diretamente na alimentação destinada ao animal. Dessa maneira, o animal, quando se alimentando, ingere as bactérias proporcionadas na presente invenção.

[0098] As cepas produtoras de enzima podem ser administradas como uma única cepa, ou como várias cepas. O sobrenadante de uma ou mais cepas produtoras de enzimas pode ser administrado a um animal. Quando ingerido, as cepas produtoras de enzima produzem as enzimas.

[0099] Em certas modalidades, uma ou mais cepa (s) produtora (s) de enzima é (são) alimentada (s) para suínos. A produção de uma ou mais cepa (s) produtora (s) de enzima endereça (m) os componentes desafiadores em grãos destiladores secos com solúveis (DDGS).

[00100] Em uma modalidade, a (s) cepa (s) produtora (s) de enzima é (são) adicionada (s) ao alimento animal, a uma proporção de 1 x 103, 1 x 104, 1 x 105, 1 x 106, 1 x 107, 1 x 108, 1 x 109, 1 x 1010, 1 x1011, 1 x 1012, 1 x 1013 e superior a 1 x 1013 CFU por grama de alimento animal.

[00101] Em uma outra modalidade, a (s) cepa (s) produtora (s) de enzima é (são) adicionada (s) ao alimento animal, a uma proporção de 1 x 103, 1 x 104, 1 x 105, 1 x 106, 1 x 107, 1 x 108, 1 x 109, 1 x 1010, 1 x 1011, 1 x 1012, 1 x 1013 e superior a 1 x 1013 CFU por animal por dia.

[00102] Em uma modalidade, uma ou mais cepa de Bacillus (s) é (são) adicionada (s) à alimentação de suíno, a uma proporção de cerca de 3,75 x 105 CFU por grama de alimento. Ele (s) pode (m) também ser alimentado (s) a cerca de 1 x 104 a cerca de 1 x 10 10 CFU / animal / dia. Em algumas modalidades, uma ou mais cepa de Bacillus (s) é (são) alimentada (s) a cerca de 1 x 108 CFU / animal / dia.

[00103] Para os ruminantes, uma ou mais cepa de Bacillus (s) é (são) alimentada (s) a cerca de 5 x 109 CFU / hora / dia.

[00104] Para aves, uma ou mais cepa de Bacillus (s) é (são) adicionada (s) ao alimento a cerca de 1 x 104 CFU / g de alimento a cerca de 1 x 1010 CFU / g de alimento. Em pelo menos algumas modalidades, uma ou mais cepa (s) de Bacillus é (são) alimentada (s) a cerca de 1 x 10 5 CFU / ave / dia a cerca de 1 x 10 8 CFU / ave / dia. Material de alimentação

[00105] Em uma outra modalidade, uma alimentação de um animal compreende pelo menos uma cepa de bactéria descrita na presente invenção. Em pelo menos algumas modalidades, a alimentação é suplementada com uma quantidade eficaz de pelo menos uma cepa de bactéria. Tal como usado na presente invenção, " suplementação ", designa o ato de incorporar a quantidade eficaz de bactérias proporcionadas na presente invenção diretamente na alimentação destinada ao animal. Dessa maneira, o animal, quando diz respeito à alimentação, ingere as bactérias proporcionadas na presente invenção.

[00106] Quando usado em combinação com um material de alimentação, para dietas monogástricos, o material de alimentação pode incluir milho, farelo de soja, subprodutos, como a grãos secos destiladores com solúveis (DDGS), e suplemento de vitamina / mineral. O material de alimentação para ruminantes pode ser grão ou feno ou silagem ou grama, ou as combinações dos mesmos. Incluídos nestes materiais de alimentção estão o milho, grão seco, alfafa, ingredientes alimentares e alimentos ou subprodutos industriais, bem como a indústria de bio combustível dos mesmos subprodutos e farinha de milho e as misturas dos mesmos. Outros materiais de alimentação podem também ser usados.

[00107] O tempo de administração pode variar, desde que uma melhora seja mostrada em um ou mais dos seguintes procedimentos: (1) desagregação dos componentes alimentares complexos, (2) a digestibilidade de nutrientes, (3) os problemas de resíduos de esterco, (4) a eficiência de produção (5), as características da carcaça (6), o desempenho do crescimento (7), o desempenho do crescimento quando se alimentam altos níveis de DDGS (8), as respostas de desempenho de crescimento de aves (9), as respostas de desempenho de crescimento dos suínos, (10) a eficiência da produção de aves, (1 1) a eficiência da produção de suínos (12), o ganho de peso corporal (13), o consumo de alimento (14), a eficiência da alimentação, e (15) a mortalidade. A administração é possível a qualquer momento, com ou sem alimentação. No entanto, a bactéria é preferencialmente administrada com ou imediatamente antes da alimentação. Métodos para melhorar o desempenho do crescimento de um animal

[00108] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para melhorar o desempenho do crescimento de um animal que compreende o uso das cepas produtoras de uma ou mais enzimas ou sobrenadantes a partir dos mesmos para melhorar o desempenho do crescimento do animal em relação a um animal que não foi administrado com as cepas produtoras de enzima. Em uma modalidade, o animal é um suíno. Em uma outra modalidade, o animal é de aves. Em uma outra modalidade, o animal é um ruminante.

[00109] Em uma modalidade, o desempenho do crescimento inclui, mas não se limita a digestibilidade dos nutrientes, as respostas de desempenho de crescimento de aves, as respostas de desempenho de crescimento de suínos, a eficiência alimentar, a repartição dos componentes alimentares complexos, o ganho médio diário, a média de consumo diário de alimento, o ganho de peso, o consumo de alimento, as características de carcaça e da mortalidade. Em ainda uma outra modalidade, os métodos descritos na presente invençãos são usados para melhorar o desempenho do crescimento de um animal alimentado com um alimento para animais que compreende DDGS.

[00110] Em certas modalidades, o melhoramento no desempenho do crescimento é de pelo menos 1 5 %, 5 a 10 %, 10 a 15 %, 15 a 20 %, 20 a 25 %, 25 a 30 %, 30 a 35 %, 35 a 40 %, 40 a 45 %, 45 a 50 %, 50 a 55 %, 55 a 60 %, 60 a 65 %, 65 a 70 %, 70 a 75 %, 75 a 80 %, 80 a 85 %, 85 a 90 %, 90 a 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, ou maior do que 99 % em comparação com um controle não tratado.

[00111] Em pelo menos algumas modalidades, o melhoramento no desempenho do crescimento de um animal ao qual a (s) cepa (s) é / são administrada (s), pelo menos, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 1 1 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 %, 30 %, 31 %, 32 %, 33 %, 34 %, 35 %, 36 %, 37 %, 38 %, 39 %, 40 %, 41 %, 42 %, 43 %, 44 %, 45 %, 46 %, 47 %, 48 %, 49 %, 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98, 99 %, e mais de 99 % em comparação com um animal de controle.

[00112] Em uma modalidade, a cepa produtora de enzima para melhorar o desempenho do crescimento de um animal compreende uma cepa de Bacillus. Em uma modalidade, a cepa de Bacillus é Bacillus subtilis. Em uma outra modalidade, a cepa de Bacillus é o Bacillus pumilus.

[00113] Em uma outra modalidade, a cepa produtora de enzima para melhorar o desempenho do crescimento inclui, mas não estão limitado a Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, Bacillus subtilis AGTP BS918, Bacillus subtilis AGTP BS 1013, e Bacillus subtilis AGTP BS 1069, Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus KXL 1-1, e as cepas tendo todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante das mesmas, e as misturas das mesmas.

[00114] A (s) cepa (s) produtora(s) de enzimas para melhorar o desempenho do crescimento de um animal pode (m) ser administrada (s) na forma de uma única cepa, ou uma combinação de mais da (s) (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas. A. Digestibilidade de Nutrientes

[00115] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método de aumentar a digestibilidade de uma alimento para animais que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima a um animal em uma quantidade eficaz para aumentar a digestibilidade de uma alimento para animais, em comparação com um animal não administrado com a cepa produtora de enzima. Em uma outra modalidade, o método compreende ainda a medição da quantidade de nutrientes acumulada em um poço de esterco de animal administrado com a cepa produtora de enzima e comparando estas quantidade de nutrientes para a quantidade de nutrientes em um poço de esterco de um animal não-administrado a cepa produtora de enzima. Em ainda uma outra modalidade, a alimentação ao animal compreende DDGS.

[00116] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método de aumentar a digestibilidade de uma alimento para animais, compreendendo a administração a um animal de um alimento suplementado com uma cepa produtora de enzima em uma quantidade eficaz para aumentar a digestibilidade dos alimentos para animais, em comparação com um animal não administrado com a cepa produtora de enzima.

[00117] Em uma modalidade, os métodos para melhorar o desempenho do crescimento de um animal, que compreendem a administração de uma cepa produtora de enzima de um animal, e reduzindo a quantidade de nutrientes não digeridos pelo animal em relação a um animal que não foi administrado com a cepa produtora de enzima.

[00118] Em uma outra modalidade, os métodos para melhorar o desempenho do crescimento de um animal compreendem a redução da quantidade de nutrientes não digeridos por um animal por meio da administração de uma cepa produtora de enzima para o animal em comparação com um animal que não foi administrado com a cepa produtora de enzima.

[00119] Em uma outra modalidade, os métodos para melhorar o desempenho do crescimento de um animal que compreendem a administração de uma cepa produtora de enzima de um animal, a medição da quantidade de nutrientes acumulados em um poço de esterco de animal administrado com a cepa produtora de enzima, e comparando a quantidade de nutrientes no poço de esterco de um animal administrado com as cepas produtoras de enzima com a quantidade de nutrientes em um segundo poço de esterco de um animal não administrado com a cepa produtora de enzima.

[00120] Em uma modalidade, a digestibilidade de um alimento para animais pode ser medida por meio da quantidade de nutrientes em um poço de esterco. Qualquer nutriente pode ser medido a partir do poço de esterco, incluindo mas não limitado a matéria seca, cinzas, nitrogênio total, nitrogênio de amônia, fósforo e cálcio.

[00121] A (s) cepa (s) produtora (s) de enzima para melhorar a digestibilidade de nutrientes pode (m) ser administrada (s) como uma única cepa, ou uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), a alimentação incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas. B. Desempenho do Crescimento das Aves

[00122] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método de aumentar o desempenho de crescimento de aves que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de aves em uma quantidade eficaz para aumentar o desempenho de crescimento de aves, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima. Os métodos descritos na presente invenção podem ser usados para melhorar o desempenho de crescimento, independentemente da alimentação ou da dieta das aves.

[00123] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método de aumentar o desempenho do crescimento em aves alimentadas com uma dieta rica em subprodutos de fibras que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de aves, que são alimentadas com uma dieta elevada em subproduto fibroso, em uma quantidade eficaz para aumentar o desempenho de crescimento de aves, em comparação com as aves não administrados com a cepa produtora de enzima.

[00124] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para aumentar o ganho de peso médio diário em aves que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de aves em uma quantidade eficaz para aumentar o ganho de peso médio diário das aves, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima.

[00125] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método de aumentar a média de ingestão diária de alimentos em aves que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de aves em uma quantidade eficaz para aumentar a média de ingestão diária de alimentos, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima.

[00126] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para melhorar a eficiência da alimentação de uma alimento para animais, em aves domésticas, compreendendo a administração às aves de um alimento para animais suplementados com uma cepa produtora de enzima em uma quantidade eficaz para aumentar a eficiência da alimentação de aves, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima.

[00127] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método de melhorar as características da carcaça, compreendendo a administração de uma cepa produtora de enzima de aves em uma quantidade eficaz para melhorar as características de carcaça de aves, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima. As características de carcaça que podem ser melhoradas incluem, mas não se limitam a profundidade de gordura, peso dos órgãos, as características da mama, peso preparado, grau de carcaça, e o valor da carcaça

[00128] Em uma modalidade, o valor de medição das características de carcaça pode ser aumentado ou diminuído.

[00129] Em ainda uma outra modalidade, o valor medido de uma ou mais das seguintes características de carcaça é aumentado: profundidade de gordura, peso dos órgãos, as características da mama, peso preparado, grau de carcaça, e o valor da carcaça.

[00130] Em ainda uma outra modalidade, o valor medido de uma ou mais das seguintes características de carcaça é diminuído: profundidade de gordura, peso dos órgãos, as características da mama, peso preparado, grau de carcaça, e o valor da carcaça.

[00131] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método para reduzir a mortalidade em aves que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de aves em uma quantidade eficaz para reduzir a mortalidade de aves referida, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima.

[00132] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método de melhorar a digestibilidade da lignina que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de aves em uma quantidade eficaz para melhorar a digestibilidade de lignina, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima.

[00133] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para melhorar a digestibilidade de lignina em dietas altamente fibrosas que compreendem a administração de uma cepa produtora de enzima de aves em uma quantidade eficaz para melhorar a digestibilidade de lignina das dietas altamente fibrosas, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima. Em uma outra modalidade, as dietas altamente fibrosas compreendem as dietas à base de subprodutos. Em ainda uma outra modalidade, a dieta compreende DDGS.

[00134] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método de melhorar a digestibilidade aparentemente ileal que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de aves em uma quantidade eficaz para melhorar a digestibilidade ileal aparente em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima.

[00135] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método de melhorar a digestibilidade total compreendendo a administração de uma cepa produtora de enzima de aves em uma quantidade eficaz para melhorar a digestibilidade total, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima.

[00136] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método para baixar o pH da digestão ileal, que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de aves, em uma quantidade eficaz para baixar o pH da digestão ileal, em comparação com as aves não administradas com a cepa produtora de enzima.

[00137] Em ainda uma outra modalidade, os métodos descritos acima compreendem ainda a administração de um alimento suplementado com uma cepa produtora de enzima.

[00138] A (s) cepa (s) produtora (s) de enzima para melhorar o desempenho de crescimento de aves pode (m) ser administrada (s) como uma única cepa, ou uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentos para animais, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas. C. Desempenho de Crescimento do Suíno

[00139] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método de aumentar o desempenho do crescimento de um suíno que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de um suíno em uma quantidade eficaz para aumentar o desempenho do crescimento do suíno, em comparação com um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima. Os métodos descritos na presente invenção podem ser usados para melhorar o desempenho de crescimento, independentemente da alimentação ou da dieta do suíno.

[00140] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método de aumentar o desempenho do crescimento em suínos alimentados com uma dieta rica em subprodutos fibrosos que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima a um suíno, o qual é alimentado com uma dieta de subproduto altamente fibroso, em uma quantidade eficaz para aumentar o desempenho de crescimento do suíno, em comparação com um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima.

[00141] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para aumentar a média de ganho de peso diário de um suíno que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de um suíno em uma quantidade eficaz para aumentar a média de ganho de peso diário do suíno, em comparação com um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima.

[00142] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método de aumentar a média de ingestão diária de alimentos em um suíno que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de um suíno em uma quantidade eficaz para aumentar a média de ingestão diária de alimentos , em comparação com um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima.

[00143] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método de aumentar a eficiência alimentar dos alimentos para animais em um suíno que compreende administração a um suíno de um alimento para animais suplementado com uma cepa produtora de enzima em uma quantidade eficaz para aumentar a eficiência da alimentação em suínos, em comparação com um suíno não administrado com a cepa produtora de enzima.

[00144] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método para melhorar as características da carcaça de um suíno que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de um suíno em uma quantidade eficaz para melhorar as características de carcaça de suíno, em comparação com um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima. As características de carcaça que podem ser melhoradas incluem, mas não estão limitadas a profundidade da gordura, profundidade do lombo; porcentagem da carne magra, peso de carcaça quente, peso de órgãos, grau de carcaça, e valor da carcaça.

[00145] Em uma modalidade, o valor de medição das características de carcaça pode ser aumentado ou diminuído.

[00146] Em ainda uma outra modalidade, o valor medido de uma ou mais das seguintes características de carcaça é aumentado: profundidade de gordura, profundidade do lombo; porcentagem de carne magra, o peso da carcaça quente, peso dos órgãos, o grau de carcaça, e o valor da carcaça.

[00147] Em ainda uma outra modalidade, o valor medido de uma ou mais das seguintes características de carcaça é diminuído: profundidade de gordura, a profundidade do lombo; porcentagem de carne magra, peso de carcaça quente, peso dos órgãos, o grau de carcaça, e o valor da carcaça.

[00148] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método para reduzir a proporção de mortalidade em suínos, compreendendo a administração de uma cepa produtora de enzima de suínos em uma quantidade eficaz para reduzir a mortalidade dos referidos suínos, em comparação com os suínos que não foram administrados com a cepa produtora de enzima.

[00149] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método de melhorar a digestibilidade da lignina compreendendo a administração de uma cepa produtora de enzima de um suíno em uma quantidade eficaz para melhorar a digestibilidade de lignina, em comparação com um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima.

[00150] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para melhorar a digestibilidade de lignina em dietas altamente fibrosas que compreendem a administração de uma cepa produtora de enzima de um suíno em uma quantidade eficaz para melhorar a digestibilidade de lignina das dietas altamente fibrosas, em comparação com um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima. Em uma outra modalidade, as dietas altamente fibrosas compreendem as dietas à base de subproduto. Em ainda uma outra modalidade, a dieta compreende DDGS.

[00151] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método de melhorar a digestibilidade aparentemente ileal que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de um suíno em uma quantidade eficaz para melhorar a digestibilidade aparentemente ileal no suíno, em comparação com um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima.

[00152] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método de melhorar a digestibilidade total compreendendo a administração de uma cepa produtora de enzima de um suíno em uma quantidade eficaz para melhorar a digestibilidade do suíno, em comparação com um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima.

[00153] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método para baixar o pH da digestão ileal, que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de um suíno em uma quantidade eficaz para baixar o pH da digestão ileal, no suíno e de um suíno que não foi administrado com a cepa produtora de enzima.

[00154] Em ainda uma outra modalidade, os métodos descritos acima compreendem ainda a administração de uma alimento suplementado com uma cepa produtora de enzima.

[00155] Em uma outra modalidade, as cepas produtoras de enzima nos métodos descritos acima relacionados com o desempenho do crescimento de suínos é uma composição que compreende as cepas Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508), AGTP BS 1013 (NRRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510).

[00156] A (s) cepa (s) produtora (s) de enzima para melhorar o desempenho do crescimento de suínos pode (m) ser administrada (s) como uma única cepa, ou uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentos para animais, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas. Métodos para melhorar as unidades de armazenamento de esterco

[00157] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para melhorar as unidades de armazenamento de esterco, compreendendo a administração da (s) cepa (s) produtora (s) da (s) enzima (s), uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), de alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas de um animal em uma quantidade eficaz para melhorar a unidade de armazenamento de esterco. Em uma modalidade, o animal é um suíno. Em certas modalidades, a unidade de armazenamento de esterco é um poço de esterco.

[00158] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método para melhorar a qualidade do ar em uma sala de habitação do animal que compreende a administração da (s) cepa (s) produtora (s) da (s) enzima (s), combinação de uma ou mais da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), de alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas a um animal em uma quantidade eficaz para melhorar a qualidade do ar na sala. Em uma modalidade, a melhora da qualidade do ar compreende diminuir os odores no ambiente. Em uma outra modalidade, a melhora da qualidade do ar compreende a redução de produção de um ou mais dos seguintes: ácidos graxos voláteis, amônia, metano, ou sulfeto de hidrogênio.

[00159] Em pelo menos algumas modalidades, a administração melhora pelo menos uma das seguintes características: menor incidência de formação de espuma, menor acumulação de sólidos, e menos nitrogênio, enxofre, fósforo, nitrogênio ligado à fibra, proteína total, gordura, teor de fibra e, quando comparado com um poço de esterco de controle.

[00160] Em uma modalidade, as cepas produtoras de enzimas para melhorar as unidades de armazenamento de esterco compreendem uma cepa de Bacillus. Em uma modalidade, a cepa de Bacillus é Bacillus subtilis. Em uma outra modalidade, a cepa de Bacillus é o Bacillus pumilus.

[00161] Em uma outra modalidade, a cepa produtora de enzima para melhorar uma unidade de armazenamento de esterco inclui, mas não está limitada a Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, Bacillus subtilis AGTP BS918, Bacillus subtilis AGTP BS1013, e Bacillus subtilis AGTP BS 1069, Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus KX11-1, e as cepas tendo todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante, e as as misturas das mesmas.

[00162] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para melhorar uma unidade de armazenamento de esterco que compreende contactar a (s) cepa (s) produtora de enzimas, uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), composições incluindo um ou mais cepa (s), ou as misturas das mesmas diretamente para uma unidade de armazenamento de esterco, tal como um poço de esterco. As melhoras resultantes do contato da (s) cepa (s) produtora (s) de enzima diretamente para uma unidade de armazenamento de esterco incluem, pelo menos, uma de uma menor incidência de formação de espuma, menor acumulação de sólidos, e menos nitrogênio, enxofre, fósforo, nitrogênio ligado à fibra, proteína total, gordura, e teor de fibra de poços de esterco de controle.

[00163] Em uma outra modalidade, os métodos descritos acima podem ser usados para melhorar os problemas de resíduos de esterco, os quais incluem mas não estão limitados a formação de espuma no poço de esterco, a acumulação de sólidos, os aumentos em (a) nitrogênio, (b) enxofre, (c) fósforo, (d) nitrogênio ligado à fibra, (e) a proteína total, (f) gordura, e (g) teor de fibra. A. Métodos para controlar ou reduzir a espuma de uma unidade de armazenamento de esterco

[00164] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para controlar ou reduzir a espuma de uma unidade de armazenamento de esterco que compreende a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) produtora (s) da (s) enzima (s), uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), de alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas a um animal em uma quantidade eficaz para controlar ou reduzir a quantidade de espuma em uma unidade de armazenamento de esterco, em comparação com um unidade de armazenamento de esterco, onde os animais não foram administrados com as cepas produtoras de enzima. Em ainda uma outra modalidade, a espuma: proporção líquida de armazenamento de esterco é reduzida.

[00165] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para controlar ou reduzir a espuma em um poço de armazenamento, compreendendo o contato da (s) cepa (s) produtora (s) da (s) enzima (s), uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), composições incluindo um ou mais cepa (s), ou as misturas das mesmas diretamente para um poço de armazenamento de esterco em uma quantidade eficaz para controlar a reduzir a espuma em um poço de armazenamento de esterco, em comparação com um poço de armazenamento de esterco sem as cepas produtoras de enzima. Em uma outra modalidade, a espuma: proporção líquida de armazenamento de esterco é reduzida.

[00166] A quantidade de espuma em uma unidade de armazenamento de esterco está relacionada com a quantidade de sólidos na unidade de armazenamento de esterco. As unidades de armazenamento de esterco com um maior percentual de sólidos geralmente têm maior espuma: proporção líquida, e, portanto, mais espuma.

[00167] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para controlar ou reduzir a espuma de uma unidade de armazenamento de esterco que compreende a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) produtora (s) da (s) enzima (s), uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas a um animal em uma quantidade eficaz para reduzir a quantidade de sólidos, e, dessa maneira, reduzir a quantidade de espuma, em uma unidade de armazenamento de esterco, em comparação com uma unidade de armazenamento de esterco, onde os animais não foram administrados às cepas produtoras de enzima. Em ainda uma outra modalidade, a espuma: a proporção líquida de armazenamento de esterco é reduzida.

[00168] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para controlar ou reduzir a espuma de uma unidade de armazenamento de esterco que compreende contactar a (s) cepa (s) produtora (s) da (s) enzima (s), uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), as composições incluindo um ou mais cepa (s), ou as misturas das mesmas diretamente para uma unidade de armazenamento de esterco em uma quantidade eficaz para reduzir a quantidade de sólidos na unidade de armazenamento de esterco, em comparação com uma unidade de armazenamento de esterco sem as cepas produtoras de enzima. Em uma outra modalidade, a espuma: proporção líquida de armazenamento de esterco é reduzida. B. Métodos para alterar a ecologia microbiana em uma unidade de armazenamento de esterco

[00169] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para alterar a ecologia microbiana em uma unidade de armazenamento de esterco, compreendendo a administração da (s) cepa (s) produtora (s) da (s) enzima (s), uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentação, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas a um animal em uma quantidade eficaz para modificar a ecologia microbiana na unidade de armazenamento de esterco, em comparação com uma unidade de armazenamento de esterco, onde os animais foram não administrados com as cepas produtoras de enzima.

[00170] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para alterar uma ecologia microbiana em uma unidade de armazenamento de esterco que compreende contactar a (s) cepa (s) produtora (s) da (s) enzima (s), uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), as composições incluindo um ou mais cepa (s), ou as misturas das mesmas diretamente para a unidade de armazenamento de esterco em uma quantidade eficaz para alterar a ecologia microbiana na unidade de armazenamento de esterco, em comparação com uma unidade de armazenamento de esterco, onde as cepas produtoras de enzimas não foram usadas.

[00171] Em uma modalidade, as cepas produtoras de enzima podem ser alteradas, quer direta ou indiretamente, em relação à ecologia microbiana em uma unidade de armazenamento de esterco e causa um aumento na população de certas espécies de bactérias e um decréscimo na população de outras espécies bacterianas. As espécies bacterianas que podem ser alteradas, quer direta ou indiretamente, com as cepas produtoras de enzimas incluem, mas não estão limitadas a metanógenos, Bacteróides, agrupamento de Clostridium I, agrupamento de Clostridium IV, agrupamento de Clostridium XlVa, e as bactérias redutoras de sulfato.

[00172] Em uma modalidade, as cepas que produzem a enzima tem a capacidade de deslocar o uso de nutrientes por meio da população microbiana e subsequentemente altera a ecologia microbiana, de tal forma que os incidentes de formação de espuma agregados são aliviados, quer através da diminuição da produção de gás disponível para ser preso na matriz da espuma, alterando a disponibilidade dos compostos moleculares que constituem a matriz de espuma, ou inibindo diretamente o crescimento das bactérias associadas com os incidentes de formação de espuma. C. Métodos de alteração da composição de ácidos graxos voláteis

[00173] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para alterar a composição de ácidos graxos voláteis no esterco que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima a um animal em uma quantidade eficaz para alterar a composição de ácidos graxos no esterco a partir do referido animal, tal como em relação ao esterco de um segundo animal não administrado a cepa produtora de enzima. Em uma modalidade, a alteração da composição do ácido graxo pode resultar em um aumento de certos ácidos graxos e uma diminuição em outros ácidos graxos. Em uma outra modalidade, a alteração das composições de ácidos graxos pode ocorrer de uma forma direta ou indireta.

[00174] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para alterar a composição de ácidos graxos voláteis em uma unidade de armazenamento de esterco que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima, a um animal em uma quantidade eficaz para alterar a composição de ácidos graxos em que o referido animal que está armazenado na referida unidade de armazenamento de esterco como o esterco em comparação a partir de um segundo animal não administrado com a cepa produtora de enzima. Em uma modalidade, o animal é um suíno. Em uma outra modalidade, a unidade de armazenamento de esterco é um poço de esterco.

[00175] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método para alterar a composição de ácido graxo volátil em uma unidade de armazenamento de esterco que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima de um animal, medindo a quantidade de ácido graxo volátil no esterco de animais alimentados com a cepa produtora de enzima; e o ajustamento da concentração de cepa produtora de enzima alimentada ao animal para se conseguir uma concentração desejada de ácido graxo volátil no esterco armazenado no poço de esterco.

[00176] Em ainda uma outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método para alterar a composição de ácidos graxos voláteis em uma unidade de armazenamento de esterco que compreende o contato de uma cepa produtora de enzima diretamente para a unidade de armazenamento de esterco em uma quantidade eficaz para alterar a composição de ácido graxo na unidade de armazenamento de esterco em comparação a uma unidade de armazenamento de esterco sem uma cepa produtora de enzimas.

[00177] Em uma outra modalidade, os ácidos graxos voláteis que podem ser alterados por meio dos métodos descritos na presente invenção incluem, mas não estão limitadas a acetato, propionato, butirato, I-butirato, 4-metil-valerato. Em uma outra modalidade, os métodos descritos na presente invenção aumentam o butirato de ácido graxo no esterco. Em ainda uma outra modalidade, os métodos descritos na presente invenção diminuem o 4-metil-valerto de ácidos graxos no esterco.

[00178] Em uma outra modalidade, os ácidos graxos voláteis totais podem ser alterados. Em uma outra modalidade, os métodos descritos na presente invenção reduzem os ácidos graxos voláteis totais do esterco. Métodos para alterar as emissões de gases

[00179] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para alterar as emissões de gases que compreendem a administração de uma cepa produtora de enzima a um animal em uma quantidade eficaz para alterar as emissões de gás, em comparação com um animal não administrado com uma cepa produtora de enzima. Em uma modalidade, a alteração das emissões de gases pode resultar em um aumento de determinadas emissões de gases e uma diminuição em outros gases. Em uma outra modalidade, as alterações das emissões de gases podem ocorrer de uma forma direta ou indireta.

[00180] Em uma modalidade, as cepas produtoras de enzimas para alterar as emissões de gás compreendem uma cepa de Bacillus. Em uma modalidade, a cepa de Bacillus é Bacillus subtilis. Em uma outra modalidade, a cepa de Bacillus é Bacillus pumilus.

[00181] Em uma outra modalidade, as cepas produtoras de enzimas para alterar as emissões de gases incluem, mas não estão limitadas as cepas Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, Bacillus subtilis AGTP BS918, Bacillus subtilis AGTP BS 1013, e Bacillus subtilis AGTP BS1069, Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus X11-1, cepas que possuam todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante das mesmas, e as misturas das mesmas.

[00182] A (s) cepa (s) produtora (s) da (s) enzima (s) para alterar as emissões de gases pode ser administrada como uma única cepa, ou uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentar incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas.

[00183] Os gases que podem ser alterados por meio das cepas produtoras de enzimas incluem, mas não estão limitadas a amoníaco, dióxido de carbono, metano e sulfeto de hidrogênio.

[00184] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um a um método para alterar as emissões de gases de uma sala de habitação de um animal que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima a um animal em uma quantidade eficaz para alterar as emissões de gás no ambiente, em comparação com uma sala de habitação de animais que não foram administrados com as cepas produtoras de enzimas. Em uma modalidade, o animal é um suíno. Em uma outra modalidade, a sala está localizada em um celeiro. Em uma modalidade, as emissões de gás metano e sulfeto de hidrogênio são reduzidas nas salas de habitação de um animal que foram administrados com as cepas produtoras de enzima.

[00185] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para alterar as emissões de gás em uma sala de habitação de um animal que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima a um animal em uma quantidade eficaz para alterar as emissões de gás no ambiente de habitação do animal, e a medição da quantidade de gás na sala.

[00186] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para alterar as emissões de gases em uma unidade de armazenamento de esterco que compreende a administração de uma cepa produtora de enzima a um animal em uma quantidade eficaz para alterar as emissões de gás na unidade de armazenamento de esterco, em comparação com uma unidade de armazenamento de esterco com esterco a partir de animais que não foram administrados com as cepas produtoras de enzima. Em uma modalidade, o animal é um suíno. Em uma outra modalidade, a unidade de armazenamento de esterco é um poço de esterco.

[00187] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para alterar as emissões de gases em uma unidade de armazenamento de esterco que compreende o contato de uma cepa produtora de enzima diretamente para a unidade de armazenamento de esterco em uma quantidade eficaz para alterar as emissões de gás, em comparação com uma unidade de armazenamento de esterco sem a cepa produtora de enzimas. Em uma modalidade, o animal é um suíno. Em uma outra modalidade, a unidade de armazenamento de esterco é um poço de esterco.

[00188] Em uma modalidade, as emissões de gás metano e sulfeto de hidrogênio são reduzidas.

Métodos para aliviar uma resposta inflamatória

[00189] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um método para aliviar os efeitos inflamatórios em animais, compreendendo uma administração de uma cepa produtora de enzima para o animal, em uma quantidade eficaz para aliviar ou inibir a resposta inflamatória. Em uma modalidade, o animal é um mamífero. Em uma outra modalidade, o animal é de aves. Em uma outra modalidade, o animal é uma galinha. Em ainda uma outra modalidade, o animal é um suíno.

[00190] As cepas produtoras de enzima podem aliviar ou inibir a resposta inflamatória de 2 a 5 %, 5 a 10 %, 10 a 15 %, 15 a 20 %, 20 a 25 %, 25 a 30 %, 30 a 35 %, 35 a 40 %, 40 a 45 %, 45 a 50 %, 50 a 55 %, 55 a 60 %, 60 a 65 %, 65 a 70 %, 70 a 75 %, 75 a 80 %, 80 a 85 %, 85 a 90 %, 90 a 95 %, e superior a 95 %, em comparação com um controle de referência (por exemplo, um agente sem propriedades anti- inflamatórias, tais como uma solução salina tamponada ou uma cepa sem propriedades anti-inflamatórias).

[00191] Em uma modalidade, a enzima de cepas produtoras para o alívio dos efeitos inflamatórios em um animal compreende uma cepa de Bacillus. Em uma modalidade, a cepa de Bacillus é Bacillus subtilis. Em uma outra modalidade, a cepa de Bacillus é Bacillus pumilus.

[00192] Em uma outra modalidade, as cepas produtoras de enzima para o alívio dos efeitos inflamatórios em um animal, compreendem as cepas Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, Bacillus subtilis AGTP BS918, Bacillus subtilis AGTP BS1013, e Bacillus subtilis AGTP BS1069, Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus KX11-1, as cepas que possuam todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante das mesmas, e as misturas das mesmas.

[00193] Em uma outra modalidade, as cepas produtoras de enzima para aliviar os efeitos inflamatórios em um animal é uma composição que compreende Bacillus subtilis AGTP BS 1013, Bacillus subtilis AGTP BS3BP5, e Bacillus subtilis AGTP 944.

[00194] As cepas produtoras de enzima podem aliviar ou inibir a resposta inflamatória através da redução da expressão de genes envolvidos na resposta inflamatória. Em uma modalidade, as cepas produtoras de enzima podem diminuir a expressão de um gene de 2 a 5 %, 5 a 10 %, 10 a 15 %, 15 a 20 %, 20 a 25 %, 25 a 30 %, 30 a 35 %, 35 a 40 %, 40 a 45 %, 45 a 50 %, 50 a 55 %, 55 a 60 %, 60 a 65 %, 65 a 70 %, 70 a 75 %, 75 a 80 %, 80 a 85 %, 85 a 90 %, 90 a 95 %, e superior a 95 % , em comparação com um controle de referência (por exemplo, um agente sem propriedades anti-inflamatórias, tais como uma solução salina tamponada ou uma cepa sem propriedades anti- inflamatórias).

[00195] Em uma outra modalidade, as cepas produtoras de enzima podem aliviar ou inibir a resposta inflamatória através da redução da expressão de uma proteína envolvida na resposta inflamatória.

[00196] Em ainda uma outra modalidade, as cepas produtoras de enzima podem aliviar ou inibir a resposta inflamatória através da redução da atividade de uma proteína envolvida na resposta inflamatória.

[00197] Em uma outra modalidade, as cepas produtoras de enzima podem reduzir a expressão ou a atividade de uma proteína de 2 a 5 %, 5 a 10 %, 10 a 15 %, 15 a 20 %, 20 a 25 %, 25 a 30 %, 30 a 35 %, 35 a 40 %, 40 a 45 %, 45 a 50 %, 50 a 55 %, 55 a 60 %, 60 a 65 %, 65 a 70 %, 70 a 75 %, 75 a 80 %, 80 a 85 %, 85 a 90 %, 90 a 95 %, e superior a 95 % em comparação com um controle de referência (por exemplo, um agente sem propriedades anti-inflamatórias, tais como uma solução salina tamponada ou uma cepa sem propriedades anti-inflamatórias).

[00198] Em uma outra modalidade, a produção de cepas de enzima pode reduzir a expressão de um gene ou reduzir a atividade de uma proteína envolvida em qualquer via envolvida na resposta inflamatória, incluindo, mas não se limitando a adesão entre o extravasamento da migração; sinalização da apoptose; sinalização de cálcio; cascata do complemento; citocinas, e sinalização de citocinas; síntese e sinalização de eicosanóides, sinalização de glicocorticóide / PPAR; sinalização receptor acoplado à proteína G ; detecção de patógenos inatos; sinalização de leucócitos; sinalização MAPK; sinalização das células natural assassinas; sinalização NK-kappa B; apresentação de antígenos; sinalização PI3K / AKT; grânulos ROS / glutationa / citotóxicos, e superfamília TNF e sinalização.

[00199] Em uma modalidade, as cepas produtoras de enzima podem reduzir a atividade ou a expressão de citoquinas, incluindo mas não se limitando a interleucinas,interferonas, fator de necrose tumoral, eritropoietina, Tpo, Fit-3L, SCF, M-CSF, e DME.

[00200] Em uma modalidade, as interleucinas incluem mas não se limitam a interleucina (IL)-1, IL-la, IL-l como, IL-β, IL-IRA, IL-2, IL-3, IL- 4, IL-5, IL-6, IL-6, como, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-10 como a IL-1 1, IL- 12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, GM- CSF, e OSM.

[00201] Em uma outra modalidade, os interferonas incluem, mas não estão limitados à produção de IFN-a, IFN-β e IFN-gama.

[00202] Em uma outra modalidade, o fator de necrose do tumor inclui, mas não está limitado a CD154, LT-β, TNF-a, TNF-β, TGF-βl, TOP-β2, TOP-β3, 4-1BBL, APRIL, CD70, CD 153, CD 178, GITRL, LIGHT, OX40L, TALL-1, TRAIL, TWEAK, e TRANCE.

[00203] Em uma outra modalidade, a cepa produtora de enzima pode ser usada para reduzir a atividade de ou reduzir a expressão das quimiocinas, incluindo, mas não limitado a quimiocinas C, quimiocinas CC, quimiocinas CXC, e quimiocinas CXC3.

[00204] Em uma modalidade, as quimiocinas C incluem, mas não estão limitadas a XCL1, e XCL2.

[00205] Em uma outra modalidade, as quimiocinas CC incluem, mas não estão limitadas a CCL1, CCL 2, CCL 3, CCL 4, 5 CCL, CCL 6, 7 CCL, CCL 8, 9 CCL, CCL 10, CCL 1 1, CCL 12, CCL 13, CCL 14, CCL 15, CCL 16, CCL 17, CCL 18, CCL 19, CCL 20, CCL 21, CCL 22, CCL 23, CCL 24, CCL 25, CCL 26, CCL 27, e CCL 28.

[00206] Em uma outra modalidade, as quimiocinas CXC incluem, mas não estão limitadas a CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL1 1, CXCL12, CXCL13 e CXCL14.

[00207] A (s) cepa (s) produtora (s) de enzima para aliviar a resposta inflamatória pode (m) ser administrada (s) como uma única cepa, ou uma ou mais combinação (ões) da (s) cepa (s), um ou mais sobrenadante (s) a partir de uma cultura da (s) cepa (s), alimentos para animais, incluindo uma ou mais cepa (s) ou as misturas das mesmas.

[00208] As cepas, os métodos e as composições descritos na presente invenção podem ser ainda descritos nos parágrafos numéricos a seguir. 1. Uma cepa Bacillus isolada com atividade enzimática. 2. A cepa de acordo com o parágrafo 1, em que a atividade enzimática é selecionada a partir do grupo que consiste em atividade de celulase, a atividade de a-amilase, a atividade de xilanase, esterase, β- mananase, a atividade da lipase, a atividade de protease, e as combinações das mesmas. 3. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a atividade enzimática é selecionada de entre o grupo que consiste em atividade zeinase e a atividade de protease de soja e as combinações das mesmas. 4. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que, quando a cepa é administrada a um animal, a cepa apresenta uma melhora em pelo menos um da quebra dos componentes alimentares complexos, os problemas de resíduos de esterco, a eficiência de produção de suínos, características da carcaça, e o desempenho de suínos durante a alimentação com elevados níveis de DDGS, em comparação com um animal de controle. 5. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que, quando a cepa é administrada a um animal, a cepa apresenta uma melhora em pelo menos um da quebra de componentes alimentares complexos, os problemas de resíduos de esterco, a eficiência de produção de suínos, características da carcaça, e desempenho de suínos durante a alimentação com elevados níveis de DDGS em pelo menos 2 % em relação a um animal de controle. 6. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que, quando a cepa é administrada a um animal, a cepa fornece uma melhora em pelo menos um dos seguintes: peso corporal, ganho médio diário, média da ingestão de alimentação diária, a eficiência alimentar, características de carcaça, digestibilidade dos nutrientes e problemas de resíduos de esterco, em comparação com um animal de controle. 7. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que, quando a cepa é administrada a um animal, a cepa fornece uma melhora em pelo menos um dos seguintes: peso corporal, ganho médio diário, média da ingestão de alimentação diária, a eficiência alimentar, características de carcaça, digestibilidade de nutrientes e problemas de resíduos de esterco em pelo menos 2 % em relação a um controle. 8. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a cepa é selecionada a partir do grupo que consiste nas espécies das cepas B. subtilis e B. pumilus, cepas que possuam todas as características das mesmas, qualquer derivado ou variante das mesmas e as misturas das mesmas. 9. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a (s) cepa (s) é (são) selecionada (s) a partir do grupo que consiste nas cepas Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 (NRRL B- 50510), Bacillus subtilis AGTP BS442 (NRRL B-50542), Bacillus subtilis AGTP BS521 (NRRL B-50545), Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B- 50508), Bacillus subtilis AGTP BS1013 (NRRL B-50509), Bacillus subtilis AGTP BS 1069 (NRRL B-50544), Bacillus subtilis AGTP 944 (NRRL B-50548), Bacillus pumilus AGTP BS 1068 (NRRL B-50543) e Bacillus pumilus KX11-1 (NRRL B-50546) e as cepas que têm todas as características das mesmas e qualquer variante ou derivado das mesmas, e as misturas das mesmas. 10. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a (s) cepa (s) é (são) selecionada (s) a partir do grupo que consiste em Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510), Bacillus subtilis AGTP BS442 (NRRL B-50542), Bacillus subtilis AGTP BS521 (NRRL B-50545), Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B- 50508), Bacillus subtilis AGTP BS 1013 (NRRL B-50509), Bacillus subtilis AGTP BS 1069 (NRRL B-50544), Bacillus subtilis AGTP 944 (NRRL B-50548), Bacillus pumilus AGTP BS 1068 (NRRL B-50543) e de Bacillus pumilus KX1 1-1 (NRRL B-50546) qualquer variante ou derivado das mesmas, e as misturas das mesmas. 11. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a cepa Bacillus é Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510). 12. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a cepa Bacillus é Bacillus subtilis AGTP BS442 (NRRL B-50542). 13. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a cepa Bacillus é Bacillus subtilis AGTP BS521 (NRRL B-50545). 14. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a cepa Bacillus é Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508). 15. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a cepa Bacillus é Bacillus subtilis AGTP BS 1013 (NRRL B-50509). 16. A cepa de qualquer dos números anteriores, em que a cepa Bacillus é Bacillus pumilus AGTP BS 1068 (NRRL B-50543). 17. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a cepa Bacillus é Bacillus subtilis cepa s AGTP BS1069 (NRRL B-50544). 18. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a cepa Bacillus é Bacillus subtilis AGTP 944 (NRRL B-50548). 19. A cepa de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a cepa Bacillus é Bacillus pumilus KX1 1-1 (NRRL B-50546). 20. Uma composição compreendendo o sobrenadante uma ou mais cultura (s) da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19 e as misturas das mesmas. 21. Uma composição que compreende um ou mais cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-19 e as misturas das mesmas. 22. A composição dos pontos 20 ou 21, em que as cepas de Bacillus subtilis são AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510), Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508), e Bacillus subtilis AGTP BS1013 (NRRL B-50509). 23. A composição dos pontos 20 ou 21, em que as cepas de Bacillus subtilis são AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510), Bacillus subtilis AGTP BS944 (NRRL B-50509) e de Bacillus subtilis AGTP BS 1013 (NRRL B-50509). 24. Uma alimentação de um animal, em que a alimento é completado com a (s) cepa (s) isolada (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19 ou com a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23 ou as misturas das mesmas. 25. Um método que compreende a etapa de administração a um animal de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19 ou a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo com o parágrafo 24 ou as misturas das mesmas, em que a administração por via enzimática decompõe pelo menos uma das fibras, proteínas, hidratos de carbono e lipídios na dieta alimentar para o animal quando a alimentação está em elevados níveis de DDGS para o animal. 26. Um método que compreende a etapa de administração a um animal de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas, em que a administração melhora, pelo menos, uma da quebra de componentes complexos alimentares, problemas de resíduos de esterco, a eficiência da produção de suínos, características de carcaça e desempenho de suínos. 27. Um método que compreende a etapa de administração a um animal de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas, em que a administração melhora, pelo menos, uma das seguintes opções de peso corporal, ganho médio diário, o consumo médio diário de alimento, conversão alimentar, características de carcaça, digestibilidade de nutrientes e problemas de resíduos de esterco, em comparação com um animal de controle. 28. Um método que compreende a etapa de administração a aves de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas, em que a administração melhora, pelo menos, uma das seguintes opções de peso corporal, ganho médio diário, o consumo médio diário de alimento, conversão alimentar, características de carcaça, digestibilidade de nutrientes e problemas de resíduos de esterco, em comparação com um animal de controle. 29. Um método que compreende a etapa de administração a um suíno de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas, em que a administração melhora, pelo menos, uma das seguintes opções de peso corporal, ganho médio diário, o consumo médio diário de alimento, conversão alimentar, características de carcaça, digestibilidade de nutrientes e problemas de resíduos de esterco, em comparação com um animal de controle. 30. O método dos parágrafos 25 a 29, em que a composição é a composição de acordo com o parágrafo 22 ou 23. 31. O método de acordo com qualquer um dos parágrafos 25 a 30, em que a (s) cepa (s) é ( são) administrada (s) a cerca de 1 x 105 a cerca de 1 x 1011 CFU / animal / dia. 32. O método de acordo com qualquer um dos parágrafos 25 a 27, e 29 a 31, em que o animal é um suíno. 33. O método de acordo com qualquer um dos parágrafos 25 a 32, em que o animal é alimentado com altos níveis de grãos destiladores secos com solúveis (DDGS). 34. O método de acordo com qualquer um dos parágrafos 25 a 33, em que o animal é alimentado com grãos destiladores secos solúveis (DDGS) a uma velocidade de mais de 10 % da dieta do animal. 35. O método de acordo com qualquer um dos parágrafos 25 a 34, em que o animal é alimentado com grãos destiladores secos solúveis (DDGS) a uma velocidade de mais de 30 % da dieta do animal. 36. Um método que compreende a etapa de administrar uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19 ou com a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23 para uma unidade de armazenamento de esterco de suíno. 37. O método de acordo com o parágrafo 36, em que a unidade de armazenamento de resíduos de suínos é um poço de esterco. 38. O método de acordo com o parágrafo 36 ou 37, que compreende ainda a melhora de pelo menos uma das seguintes características: menor incidência de formação de espuma, menor acumulação de sólidos, e menos nitrogênio, enxofre, fósforo, nitrogênio ligado à fibra, proteína total, de gordura, teor de fibra e quando comparado a um poço de esterco de controle. 39. Um método de formação de uma composição, o método compreendendo: (a) crescimento em um caldo líquido, uma cultura incluindo uma da (s) cepa (s) isolada (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, e (b) separação da cepa do caldo líquido. 40. O método de acordo com o parágrafo 39, que compreende ainda a liofilização da cepa isolada e a adição da cepa liofilizada a um veículo. 41. O método de acordo com o parágrafo 39 ou 40, que compreende ainda a retenção do caldo líquido após a cepa ter sido separada dele para gerar um sobrenadante. 42. Um método para melhorar o desempenho do crescimento de um animal que compreende a administração a um animal de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, a alimentação de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas, em comparação com um animal de controle. 43. O método de acordo com o parágrafo 42 em que a administração melhora, pelo menos, uma das seguintes opções de peso corporal, ganho médio diário, o consumo médio diário de alimento, conversão alimentar, características de carcaça, digestibilidade de nutrientes e problemas de resíduos de esterco. 44. Um método para melhorar as unidades de armazenamento de esterco, compreendendo a administração a um animal de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas, em uma quantidade eficaz para melhorar a unidade de armazenamento de esterco, em comparação com o esterco de um animal de controle, que é armazenado em uma segunda unidade de armazenamento de esterco. 45. Um método para melhorar as unidades de armazenamento de esterco, compreendendo o contato de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas diretamente para a unidade de armazenamento de esterco. 46. O método de acordo com o parágrafo 44 ou 45, em que a melhora compreende pelo menos um dos seguintes: uma menor incidência de formação de espuma, menor acumulação de sólidos, e menos nitrogênio, enxofre, fósforo, nitrogênio ligado à fibra, proteína total, de gordura, teor de fibra e de controle dos poços de esterco. 47. Um método de controlar ou reduzir a espuma em um poço de esterco que compreende a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas para os animais cujo esterco é armazenado no poço de esterco. 48. Um método de controlar ou reduzir a espuma em um poço de esterco que compreende o contato de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas diretamente ao poço de esterco. 49. Um método de alteração da ecologia microbiana em um poço de esterco que compreende a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas para animais cujo esterco é armazenado no poço de esterco. 50. Um método de alteração da ecologia microbiana em um poço de esterco que compreende o contato de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas diretamente ao poço de esterco. 51. Um método para alterar a composição de ácidos graxos voláteis em um poço de esterco que compreende a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, a alimentação de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas para animais cuja esterco é armazenado no poço de esterco. 52. Um método para alterar a composição de ácidos graxos voláteis em um poço de esterco que compreende o contato de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, a alimentação de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas diretamente para o poço de esterco. 53. Um método para alterar as emissões de gases de uma sala de habitação de um animal que compreende a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, a alimentação de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas para animais em uma quantidade eficaz para reduzir as emissões de gases. 54. Um método para alterar as emissões de gases em uma unidade de armazenamento de esterco que compreende a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas para animais em uma quantidade eficaz para reduzir as emissões de gases. 55. Um método para alterar as emissões de gases em uma unidade de armazenamento de esterco que compreende o contato de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas diretamente para a unidade de armazenamento de esterco em uma quantidade eficaz para reduzir as emissões de gases. 56. Um método de atenuar a resposta inflamatória que compreende a administração de uma quantidade eficaz da (s) cepa (s) de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 a 19, a (s) composição (ões) de acordo com qualquer um dos parágrafos 20 a 23, o alimento de acordo com o parágrafo 24, ou as misturas das mesmas para animais em uma quantidade eficaz para aliviar a resposta inflamatória. 57. Uma cepa isolada de acordo com os parágrafos 1 a 19 ou composição de acordo com os parágrafos 20 a 23 ou uma alimentação de acordo com o parágrafo 24 para o uso como um medicamento para melhorar, pelo menos um da quebra de componentes alimentares complexos, problemas de resíduos de esterco, a eficiência de suínos produção, características de carcaça e desempenho de suínos quando alimentados com altos níveis de DDGS. 58. Uso de cepa isolada de acordo com os parágrafos 1 a 19 ou composição de acordo com os parágrafos 20 a 23 ou uma alimentação de acordo com o parágrafo 24 na preparação de um medicamento para fornecer uma ou mais enzimas (s). 60. Uma cepa de Bacillus isolada descrita nos parágrafos 1 a 19 para uso na melhora da quebra de componentes alimentares complexos, problemas de resíduos de esterco, a eficiência da produção de suínos, características de carcaça e desempenho de suínos quando alimentados com altos níveis de DDGS. 61. Uso da cepa de Bacillus isolada descrita nos parágrafos 1 a 19 na preparação de um medicamento para proporcionar a atividade enzimática. 62. Uso da cepa de Bacillus isolada descrita nos parágrafos 1 a 19 em preparação de um medicamento para melhorar, pelo menos um da quebra de componentes alimentares complexos, problemas de resíduos de esterco, a eficiência da produção de suínos, características de carcaça e desempenho de suínos quando alimentados com altos níveis de DDGS.

EXEMPLOS

[00209] Os seguintes exemplos são fornecidos apenas para fins ilustrativos. Os Exemplos são incluídos na presente invenção apenas para auxiliar na compreensão mais completa da presente invenção presentemente descrita. Os exemplos não limitam o escopo da presente invenção descrita e reivindicados na presente invenção em qualquer forma.

EXEMPLO 1

[00210] Isolamento de bactérias ambientais e identificação das atividades enzimáticas

[00211] As amostras de resíduos agrícolas e ambientais foram coletadas de diversos locais de origem por um período de vários anos. Após a chegada, as amostras foram diluídas em uma solução de 1 % de peptona, os esporos tratados durante 35 minutos a 65 ° C e diluídos em série em placas de ágar de soja tríptica (Difco BD, Franklin Lakes, NJ). Após incubação a 32 ° C durante 48 horas, o crescimento de diversas colônias ambientais desconhecidas foram cultivadas a partir das placas para caldo tríptico de soja (TSB), de forma semelhante reincubadas e armazenadas congeladas a-85 ° C para análise posterior.

[00212] Aproximadamente 4000 Bacillus presuntivos isolados de origem ambiental foram coletados e selecionados por sua capacidade de degradar uma variedade de substratos de interesse. As culturas ambientais foram escolhidos a partir de estoques de biblioteca congelados e incubadas em 0,5 ml TSB a 32 ° C por 24 horas em uma incubadora de agitação orbital, com o conjunto de velocidade para 130 (Gyromax 737). O rastreamento altamente completo destas cepas de teste foi realizado por meio da réplica do plaqueamento local de 2 microlitros de cultura líquido para 15,0 ml de vários tipos de meio de substrato de interesse em placas de grade 100x100x15mm. As atividades de celulase, a-amilase, zeinase, protease soja, esterase, lipase e xilanase foram determinados com base no uso do substrato específico por meio das cepas individuais. Os componentes dos meios usados para ensaiar as propriedades de uso do substrato a partir de atividade enzimática das cepas derivadas do ambiente são descritos na Tabela 1. As placas de ensaio foram deixadas a secar durante 30 minutos a seguir à aplicação de cultura, e, em seguida, incubadas a 32 ° C durante 24 horas. As atividades enzimáticas para cada cepa foram determinadas através da medição da zona de degradação do substrato, em milímetros, tal como indicado por meio da compensação da borda circundante de crescimento das colônias. Foram registrados valores médios de placas idênticas.

[00213] Nove cepas foram selecionadas entre as cerca de 4000 selecionadas como candidatos de cepas microbianas de alimentação direta demonstrando uma proporção de atividades de substrato que representam os 10 % e a parte superior de 2 % da atividade enzimática de todas as cepas analisadas (Tabela 2). Com base na sua capacidade de utilizar ou degradar uma variedade de substratos relevantes associados com a inclusão de DDGS em alimentos, nove isolados foram escolhidos como candidatos para um ou mais microbiano (s) de alimentação direta (DFM s)). Os perfis RAPD PCR e as sequências parciais de 16S rDNA de cada linhagem foram determinados. O gênero e a determinação de cada espécie presuntiva foram feitos por meio da amplificação do gene 16S rDNA usando um conjunto de iniciadores 8F e 1541R. Os produtos de PCR purificados foram sequenciados a partir de ambos os lados para a frente e para trás, e uma sequência contígua gerada usando um programa de montagem CAP3. As nove linhagens selecionadas são: Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 (Figuras 1 & 2), Bacillus subtilis AGTP BS442 (Figuras 3 e 4), Bacillus subtilis AGTP BS521 (Figuras 5 e 6), Bacillus subtilis AGTP BS918 (Figuras 7 e 8), Bacillus subtilis AGTP BS1013 (Figuras 9 e 10), Bacillus pumilus AGTP BS 1068 (Figuras 1 1 e 12), Bacillus subtilis AGTP BS 1069 (Figuras 13 e 14), Bacillus subtilis AGTP 944 (Figuras 15 a 18), e Bacillus pumilus KXL 1-1 (Figuras 19 a 21). Tabela 1 -Componentes dos meios usados para analisar as atividades enzimáticas ilustradas por meio do uso das propriedades de uso do substrato de cepa ambientalmente derivada de Bacillus

Tabela 2. Sumário da atividade da cepa enzimática do candidato microbiano de alimentação diretaa Númer o isolado b CMCase (celulas e) Estearas e Amílas e de amido de milho Proteas e de soja Proteas e de zeína Xilanas e

a Os valores representam a zona de degradação do substrato, em milímetros (mm), tal como indicado por meio da compensação da borda circundante de crescimento de colônias de cada cepa. b Para as designações de isolado da cepa, BS = Bacillus subtilis; BP = Bacillus pumilus 1 Os valores representam o topo de 2 % da atividade enzimática na classe específica de todas as 4000 cepas selecionadas. 2 Os valores representam os primeiros 10 % da atividade enzimática na classe específica de todas as 4000 cepas selecionadas.

EXEMPLO 2

[00214] Comparação da atividade enzimática das Novas Cepas Bacillus e as Três Cepas Microbianas Comerciais de Bacillus de alimentação direta, Microsource ® S.

[00215] As três cepas Microsource ® S de Bacillus (B. subtilis 27 (BS 27), B. licheniformis (previamente pensadas em serem B. amyloliquefaciens) 842 e B. licheniformis 21 (Bl 21)) foram escolhidas a partir de estoques de biblioteca congelados individuais e incubadas em 0,5 ml TSB a 32 ° C por 24 horas em uma incubadora de agitação orbital, com o conjunto de velocidade para 130 (Gyro max 737R). O rastreamento altamente completo desses produtos das cepas foi realizado por meio da réplica de plaqueamento local de 2 microlitros de cultura líquido para 15,0 ml de vários tipos de meio de substrato de interesse em placas de grade 100x100x15mm. As atividades de celulase, protease de soja, e esterase / lipase foram determinadas com base no uso do substrato específico por meio das cepas individuais. Os componentes dos meios usados para ensaiar as propriedades de uso do substrato a partir de atividade enzimática das cepas derivadas do ambiente são descritos no Tabela 3. As placas de ensaio foram deixadas secar durante 30 minutos a seguir à aplicação de cultura, e, em seguida, incubadas a 32 ° C durante 24 horas. As atividades enzimáticas para cada cepa foram determinadas através da medição da zona de degradação do substrato, em milímetros, como indicado por meio da compensação da borda circundante de crescimento das colônias. Os valores médios de placas replicadas foram registrados e comparados com os valores obtidos a partir das cepas de Bacillus identificadas no Exemplo 1 (Tabela 4). Apenas uma cepa de três cepas de Bacillus MicroSource S ® demonstrou qualquer atividade enzimática substancial quando comparada com as cepas de Bacillus selecionados quanto à sua atividade de degradação de substrato, o que foi exemplificado por meio da atividade de protease de soja da cepa Microsource ®S Bacillus subtilis BS27 . Tabela 3 - Componentes do meio usados para analisar as atividades enzimáticas ilustradas por meio das propriedades de uso do substrato

Tabela 4. A atividade enzimática de cepas de produtos Microsource ® S Bacillus em comparação com cepas de Bacillus selecionadas para a degradação do substrato melhorado.

a Os valores representam a zona de degradação do substrato, em milímetros (mm), como indicado por meio da compensação da borda circundante do crescimento de colônias de cada cepa. 1 Os valores representam o topo de 2 % da atividade enzimática na classe específica de todas as 4000 cepas selecionadas. 2 Os valores representam os primeiros 10 % da atividade enzimática na classe específica de todas as 4000 cepas selecionadas.

EXEMPLO 3 Ensaio de Alimentação animal demonstrando melhor desempenho de crescimento em resposta à cepa Bacillus subtilis 3BP5 Adicionado para dieta de Suínos.

[00216] Um teste de alimentação de suíno foi conduzido para avaliar os efeitos de um aditivo de alimentação de alimentação direta à base de Bacillus microbianos (DFM) sobre o ganho de peso corporal, consumo de alimento e conversão alimentar dos suínos do crescimento ao término. Aproximadamente 180 suínos (Monsanto escolha de Genéticos GPK 35 fêmeas acopladas aos touros Ultra EB) foram bloqueados em três blocos de peso por peso corporal inicial e escritos em grupos de 5 suínos / curral após a conclusão do período de cuidado. Os suínos foram transferidos para uma instalação de desmame e alojados 5 suínos / curral nos currais totalmente ripadas (1,52 mx 3,05 m), equipados com um alimentador de buraco único, e bebedouros com acabamento de copos afastados. Temperatura ambiente inicial mínimo ambiente foi mantida a aproximadamente 78 ° C. Durante a fase de acabamento, a temperatura mínima foi reduzida para 70 ° C. A alimentação e água estavam disponíveis livremente ao longo do estudo.

[00217] Um dos dois tratamentos dietéticos foram atribuídos a cada curral (18 currais / tratamento) dentro de cada bloco, e administrados durante a Fase 1 (50 a 90 libras), fase 2 (90 a 130 libras), fase 3 (130 a 180 libras), Fase 4 (180 a 230 libras) e Fase 5 (230 libras para o mercado em cerca de 270 libras). Os dois tratamentos dietéticos consistiram em uma dieta de controle basal desprovida de DFM 3BP5 e a dieta basal com DFM 3BP5 em um estudo de crescimento-término de suínos de cinco fases. As dietas foram formuladas para atender ou exceder as exigências de NRC (1988) e consistiam predominantemente de milho, farelo de soja, e DDGS em 47 %, 18,6 % e 30 % da dieta, respectivamente. A cepa Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 foi acrescentada à dieta em 7,3 x 10 CFU / lb de alimento e forneceu cerca de 1 x 10 CFU / cabeça / dia com base no consumo médio diário de alimento (adfi). Os dados coletados foram média de ganho diário, média da ingestão de alimentação diária e alimentação necessária por unidade de ganho em cada uma das cinco fases de crescimento e término. Os suínos foram retirados do estudo, quando o peso médio do suíno da totalidade do celeiro atingiu cerca de 270 lbs.

[00218] Os dados de desempenho foram analisados como um delineamento em blocos casualizados, com o curral como unidade experimental e blocos com base no peso corporal inicial. A análise de variância foi realizada usando os procedimentos GLM do SAS (SAS Institute, Inc., Cary, NC).

[00219] As dietas contendo os suínos alimentados com a cepa Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 tiveram maior (P < 0,01) ganho de peso médio diário (adg) e ganho: alimentação durante a Fase 1 do período de crescimento e tendeu (P < 0,08) para ter maior ADG e ganho: alimentação nos períodos combinados da Fase 1 e Fase 2 comparados aos suínos alimentados com a dieta controle (Tabela 5). O aumento em ADG durante o primeiro período de crescimento resultou em suínos alimentados com Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 tendo maior (P < 0,01) do peso corporal, no final do período da fase 1 em comparação com os suínos alimentados com a dieta de controle. Tabela 5. Respostas de desempenho de crescimento de suínos alimentados com Bacillus subtilis AGTP 3BP5 em comparação com os suínos alimentados com as dietas de controle.

1 SE = erro padrão

EXEMPLO 4

[00220] Alimentação do animal e teste do balanço da massa do poço de esterco Demonstrando os efeitos de uma combinação da cepa de Bacillus subtilis Adicionado à dieta de Suínos.

[00221] Um ensaio de alimentação de suíno foi realizado para avaliar os efeitos de uma alimentação direta microbiana à base de Bacillus (DFM), administrado na dieta de suínos no crescimento-término nas respostas de desempenho de crescimento (ganho médio diário (adg), o consumo médio diário de alimento (adfi) e ganho: alimentação), rendimento de carcaça e medições de qualidade, a composição do esterco de nutrientes, composição microbiana do poço de esterco, e as emissões de gases (amônia, metano e sulfeto de hidrogênio) a partir do poço de esterco. Um total de 720 suínos (Landrace x Yorkshire-genótipo Duroc) foram alojados em 12 salas com 12 currais / sala e 5 suínos / curral. Cada sala continha dois poços de esterco com capacidade para armazenar o esterco por todo um período de desmame ao fim. Cada poço de esterco está localizado abaixo dos 6 currais com uma parede sob a passarela central que divide os dois poços em cada sala. Cada uma das doze salas foi equipada para monitorar as emissões de gases a partir de cada sala ventilada de forma independente. Os suínos foram desmamados e colocados em currais antes do início do estudo e começou a receber alimentação teste experimental quando eles tinham chegado a um peso corporal médio de 29,5 Kg. Os suínos foram alimentados por cinco fases de alimentação com duração de três semanas cada, e terminou quando os suínos chegaram a um peso médio de abate de 120 Kg.

[00222] Dois tratamentos dietéticos foram administrados a suínos em julgamento, composto de uma dieta controle e uma dieta suplementada com uma combinação de cepas de Bacillus (cepas BS1013, BS918 e BS3BP5). As dietas foram formuladas para atender ou exceder as exigências de NRC (1988) e consistia predominantemente de milho, farelo de soja, e DDGS em 50 %, 20 %, e 30 % da dieta, respectivamente. As três cepas na combinação de Bacillus DFM foram igualmente representadas no material de teste experimental que continha 1,47 x 10 CFU da DFM por grama de material. A combinação de Bacillus DFM foi adicionada à dieta em 7,3 x 10 CFU / lb de alimento e forneceu cerca de 1 x 10 CFU / cabeça / dia com base no consumo médio diário de alimento.

[00223] As medidas de desempenho de suíno (ganho médio diário (adg), o consumo médio diário de alimento (adfi), ganho: alimentação) foram determinadas no final de cada fase da alimentação. Estes dados foram representados por 72 repetições / tratamento). Os poços de esterco foram amostrados a vácuo na semana 0 (inicialmente e antes de suínos que recebem tratamento), semana 9 e semana 15 e análise centesimal foi realizada em nutrientes contidos nos resíduos de esterco de suínos (12 repetições / tratamento). A subamostra em cada dia também foi obtida para determinar o teor de ácidos graxos voláteis e análise da comunidade microbiana (12 repetições / tratamento). Além disso, na semana de 15 de amostragem no final do julgamento, os poços foram esvaziados em um recipiente de mistura para homogeneizar todo o conteúdo do poço de esterco, determinar o volume poço de esterco e de amostra para análise de nutrientes. As emissões de gases foram medidas em cada sala para determinar amônia, metano e produção de gás sulfeto de hidrogênio (6 repetições / tratamento). No final do estudo, os animais foram enviados para uma unidade de abate comercial e os dados de carcaça, como a porcentagem de rendimento de carne magra, rendimento de carcaça e índice de iodo foram coletados (72 repetições / tratamento).

[00224] Fazendo referência agora à Tabela 6, os dados de desempenho preliminares do estudo indicam que suínos alimentados com a combinação Bacillus DFM tiveram maior (P < 0,05) e ganho: alimentação ADG durante a última fase do julgamento. Além disso, os suínos alimentados com a DFM tenderam (P = 0,15) a pesar 4,4 lb mais no final do julgamento de suínos alimentados com a dieta controle. A análise dos dados sobre as características da carcaça, nutrientes de esterco e composição microbiana, e as emissões de gases das unidades de armazenamento de esterco, incluindo, mas não limitado a, poços de esterco ainda não foram concluídas, mas as expectativas são de que o tratamento DFM vai aumentar a porcentagem de rendimento de carne magra e preparando o percentual, diminuindo os valores de iodo de gordura, resultando em menos nutrientes acumulados no esterco, mudando as comunidades microbianas de esterco para as populações favoráveis para a quebra de sólidos e diminuindo a amônia, metano e as emissões de gás de sulfeto. Tabela 6. Efeito de uma combinação de três cepas Bacillus DFM administradas como um suplemento dietético nas respostas de desempenho de crescimento-término de suíno em comparação com os suínos alimentados com uma dieta de controle. *

Os dados são os meios de 24 currais / tratamento. 1 MSE = significa erro padrão

EXEMPLO 5

[00225] Demonstração da eficácia de um Tratamento Aditivo Suína do poço de esterco suíno à base em Bacillus para o Armazenamento, Gerenciamento e manuseamento dos Resíduos de esterco.

[00226] Um estudo será realizado para avaliar a eficácia de um aditivo do poço de esterco suíno à base de Bacillus na acumulação de sólidos, a composição de nutrientes, e as características de formação de espuma de esterco. Vários locais de produção serão identificados os quais contêm pelo menos três celeiros com unidades de tratamento e armazenamento de esterco separados. Os poços de esterco em cada local vai ser tratado com um aditivo à base de Bacillus em duas doses e um poço de esterco vai ser deixado sem tratamento. O tratamento de baixa dose de poço vai ser adicionado a um poço de esterco em cada local de produção em 500 g de material de teste por 100.000 litros de esterco formulado para conter 4 x 1010 CFU por grama de material de teste. O tratamento de alta dose será adicionado a um poço de esterco diferente da dose baixa de cada unidade de produção em 500 g de material de teste por 100.000 litros de esterco formulados para conter 1 x 10 " CFU por grama de material de teste. O terceiro poço de esterco em cada local vai ser deixado sem tratamento como controle.

[00227] As amostras serão obtidas a partir de cada poço de esterco em cada local de produção em teste, inicialmente, antes de qualquer tratamento e periodicamente (aproximadamente uma vez por mês) durante um período de três a seis meses. Os dados de poços de esterco serão recolhidos para avaliar a incidência de formação de espuma e as amostras de esterco serão analisadas para avaliar o acúmulo de sólidos e composição de nutrientes. As expectativas são de que os poços de suíno tratados terão menos incidência de formação de espuma, menor acúmulo de sólidos e menos nitrogênio, enxofre, fósforo, nitrogênio ligado à fibra, proteína total, gordura e teor de fibra de poços de esterco de controle.

EXEMPLO 6 Demonstração de Teste de Alimentação de Aves para melhorar o desempenho de crescimento em resposta às Combinações da cepa de Bacillus Adicionadas às Dietas das Aves.

[00228] Os ensaios de alimentação das aves serão realizados para avaliar os efeitos de um alimentação direta de aditivo microbiano à base de Bacillus (DFM) sobre o ganho de peso, consumo de alimento, conversão alimentar e mortalidade de perus, frangos, e rebentos. Nestes estudos, cerca de 22 aves por repetição de tratamento serão distribuídas aleatoriamente aos tratamentos dietéticos. Os tratamentos dietéticos podem consistir em várias combinações de cepas de Bacillus administradas como um DFM e tratamentos experimentais de DFM combinados com enzimas, em comparação com um grupo de aves de controle relativo. Os tratamentos de DFM Bacillus serão adicionados à dieta de 1,5 x 105 CFU / g de alimento e forneceram cerca de 1 x 107 5 x 107 CFU / cabeça / dia com base no consumo médio diário de diversos sistemas de produção (perus, frangos, rebentos). As dietas serão compostas de dietas à base de milho-soja-DDGS. Todos os outros níveis de nutrientes e de energia serão formulados para atender ou exceder as exigências das aves de teste. As dietas serão alimentadas por um período aproximado de teste de 42 dias e serão alimentadas em três fases de alimentação: de partida (dl-20) e de crescimento (d 21-38) e de término (d38-42). As dietas serão peletizadas (aproximadamente 75 ° C), e o alimento inicial será desintegrado.

[00229] Os dados dos grupos tratados serão comparados com os do seu grupo de controle relevante usando os testes estatísticos apropriados. O peso corporal, ganho de peso, consumo de alimento, FCR, FCE e mortalidade serão analisados por meio da análise de variância (ANOVA) e os testes menos significativos de diferença. Quando concluído, espera-se que os dados venham a apoiar a eficácia do (s) tratamento (s de DFM). Especificamente, espera-se que o tratamento DFM vai aumentar a porcentagemd e rendimento de carne magra e rendimento de carcaça, mudar as comunidades microbianas gastrointestinais às populações favoráveis para o uso de nutrientes e melhorar a eficiência de crescimento de aves, e melhorar os pesos no caso do ovo. EXEMPLO 7 Efeito do Bacillus microbiano de alimentação direta sobre o desempenho de crescimento de suínos, as medições de carcaça, as características do poço de esterco, e as emissões de gases ambientais.

[00230] Um total de 444 suínos (200 machos castrados e 244 fêmeas) foram usados em um estudo crescimento-término de 15 semanas para investigar o uso de um suplemento de Bacillus microbiano de alimentação direta no desempenho de crescimento, medidas de carcaça, características do poço de esterco e as emissões de gases. Os suínos foram alojados em um celeiro controlado ambientalmente, que continha 12 salas idênticas com 12 currais por sala. Dois poços de esterco foram contidos em cada uma sob cada uma das 12 salas com 6 currais mais de cada poço de esterco. Antes do início da experiência, os poços de esterco foram cuidadosamente limpos. Os poços de esterco foram então carregados com uma pequena quantidade de água (~600 galões).

[00231] Os suínos alocados para o teste foram desmamados, bloqueados por peso e sexo, e distribuídos aleatoriamente aos tratamentos dietéticos (Controle e Bacillus DFM) com 4 a 5 suínos (2 a 3 machos castrados e 2 a 3 leitoas por curral). Antes do início dos tratamentos experimentais, os suínos foram alimentados com uma dieta de ajuste, durante duas semanas para os os poços com esterco. Os suínos foram alimentados com uma dieta controle ou dieta controle com a suplementação de Bacillus DFM. O Bacillus DFM microbiano consistiu em proporções iguais de cepas de Bacillus subiilis AGTP BS918 (NRRL B-50508), AGTP BS1013 (NRRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B- 50510) somando um garantido 3,0 x 108 CFU / g de produto DFM, e incluído a uma proporção de 1 lb / ton, em alimentos para animais, resultando em uma concentração de 1,5 x 105 CFU / g de alimento.

[00232] Os tratamentos dietéticos foram mantidos durante todo o experimento, mas as dietas foram ajustadas a cada três semanas para melhor atender as necessidades nutricionais dos suínos, resultando em 5 fases alimentares (3 fases de crescimento, 2 fases do término) formuladas para atender ou exceder as exigências nutricionais dos suínos em cada fase de produção em cada uma das cinco fases (NRC, 1998). As formulações de dieta foram à base de milho e soja com diferentes níveis de grão de destiladores secos à base de milho com solúveis (DDGS) de mais de cinco fases. Especificamente, as dietas para as fases de crescimento1, 2 e 3 foram formuladas para conter 25 % de DDGS, a dieta de término da Fase 4 continha 20 % de DDGS, e a dieta de término da Fase 5 continha 10 % de DDGS.

[00233] O peso corporal do Suíno e ingestão de alimentos no curral foram registrados de três em três semanas, no fim de cada fase. Os poços de esterco foram amostrados no início e no final de cada uma das fases de crescimento e final usando um amostrador de núcleo a vácuo projetado com uma bomba de vácuo ligada a dois frascos de vácuo com tubo de plástico transparente com um disco final do núcleo do amostrador de plástico. Amostras do núcleo do poço de esterco foram obtidas por amostragem de quatro locais debaixo de cada curral sobre cada poço em teste. Locais de amostragem poço de esterco em relação ao curral incluem: (1) abaixo do centro do curral, (2), sob a água do curral, (3) sob a parte frontal do alimentador de curral, e (4) sob o canto do curral oposto ao alimentador. Conteúdo de esterco foi analisado para o total N, amônio N, matéria seca (MS), teor de cinzas, Ca e P (AOAC 2007). Durante todo o experimento, as concentrações de gás no duto de ventilação do poço e na frente do exaustor foram monitorados em tempo real usando o equipamento de medição contínua. Estes dados foram combinados com as proporções de ventilação para determinar as proporções de emissão por sala por dia para amônia, metano e gás sulfídrico. Estes dados foram expressos em gramas de gás por libra de suíno no ganho de peso corporal. As concentrações de metano e sulfato de hidrogênio, também foram medidas durante 10 dias consecutivos (dias 70 a 80 para o CH4, dias 80 a 90 de H2S) e uma média de uma base de uma sala para análise da produção total de gás (n = 12).

[00234] As amostras de poço foram analisadas para nutrientes (AOAC 2007) e composição de ácidos graxos voláteis (VFA). Por cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) de detecção dos ácidos graxos voláteis, 10 mL de cada amostra foi aliquotado em 15 mL de tubos Falcon e armazenados a-20 ° C até a análise de HPLC. Após descongelação, as amostras foram centrifugadas a 16,1 rad durante 15 minutos. Um mililitro (1 mL) do sobrenadante foi diluído em 9 ml de 16,8 mM de ácido fosfórico em água / acetonitrila (98:2, v / v). O sobrenadante diluído foi agitado em vórtice durante 10 segundos e depois centrifugado a 16,1 rad durante 15 minutos. O sobrenadante foi filtrado (0,22 μπi) e analisado para o ácido acético, ácido propiônico, ácido butírico, ácido I-butírico, I-valérico, ácido valérico, 4-metilvalerato usando um módulo de separação Waters 2695 (Waters Corporation, Milford, MA) equipado com um 300 x 7,8 milímetros de coluna Aminex HPX-87H (Biorad Laboratories, Inc., Hercules, CA). Um método isocrático foi aplicado com um solvente da fase móvel consistindo em 16,8 mM de ácido fosfórico em água / acetonitrila (98: 2, v / v), a proporção de fluxo de 0,85 mL / min e 65 ° C de temperatura de coluna. Todos os analitos foram detectados com um detector PDA 2996 (Waters) em absorção de 211 nm.

[00235] Os dados foram analisados usando-se o procedimento de Modelo geral Linear do SAS para testar o tratamento e replicar as diferenças. O curral foi a unidade experimental para o desempenho do crescimento e os dados de carcaça, o poço foi a unidade experimental para a excreção e os dados de VFA e sala foi a unidade experimental para os dados de emissão de gases. Resultados

[00236] Os suínos tinham em média de 64,5 libras no início da experiência e tinham um peso médio de 257,1 libras após 15 semanas de alimentação. Os suínos alimentados com a dieta contendo o suplemento de DFM ficaram 4 libras mais pesados (P = 0,10) no final da experiência em relação ao controle de suínos alimentados (Tabela 7). Esta resposta resultou de um crescimento mais rápido quando os suínos foram alimentados com o suplemento DFM em comparação com os suínos de controle (2,01 vs 1,93 libras / d, respectivamente, p < 0,03; Tabela 8). A média de consumo diário de alimento (adfi) não foi afetada por meio do tratamento dietético (Tabela 9). Esta falta de diferença de resposta entre os tratamentos para consumo alimentar, juntamente com um maior ganho de peso médio diário nos suínos tratados com o DFM resultou em eficiência melhorada (P < 0,08) da alimentação durante as duas fases do finalizador (Fase 4 e 5) e em geral em um julgamento de 15 semanas quando os suínos foram alimentados com a dieta suplementada DFM em comparação com suínos alimentados com a dieta controle. (Tabela 10). Tabela 7. Efeitos da suplementação da dieta de Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) no peso corporal dos suínos.

Tabela 8. Efeitos da suplementação da dieta de Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) sobre o ganho médio diário (adg).

Tabela 9. Efeitos da suplementação da dieta de Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) sobre o consumo médio diário de alimento (adfi).

Tabela 10. Efeitos da suplementação da dieta de Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) sobre a eficiência alimentar (ganho de peso corporal em libra por libra de alimento consumido).

[00237] Os pesos de carcaça quente foram 4,5 libras mais pesados (P <0,01) para os suínos alimentados com dietas suplementadas com DFM em comparação aos suínos alimentados de controle (Tabela 1) 1. Além disso, as recompensas de qualidade de carcaça tenderam a ser maiores (P = 0,15) quando os suínos foram suplementados com o DFM. O aumento observado no peso de carcaça de suplementação de DFM resultou em $ 0,39 mais o valor da carcaça em relação ao controle de carcaças. Tabela 11. Efeitos da suplementação da dieta de Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) sobre as características da carcaça.

[00238] Os valores medidos de esterco de nutrientes a partir de amostras obtidas ao longo do período de teste são apresentados na Tabela 12. A matéria seca (P = 0,20), a cinza (P = 0,1 1), e nitrogênio de amônio (P = 0,15) tenderam a ser reduzidos em poços de esterco associados com os suínos alimentados com Bacillus DFM em relação aos suínos de controle. A suplementação de Bacillus DFM diminuiu matéria seca a 7 %, 8 % de cinzas, e nitrogênio de amônio em 5 % em esterco de suínos tratados em relação aos de controle. As reduções observadas na matéria seca e excreção de cinzas podem ser atribuídas a melhoras na eficiência alimentar. Tabela 12. Efeitos da suplementação da dieta de Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) no acúmulo de nutrientes no poço de esterco (g / libras de ganho de peso corporal) sobre o julgamento total.

[00239] A ausência de diferença na excreção de nitrogênio total no esterco entre os tratamentos sugere que as reduções observadas em nitrogênio de amônia do tratamento DFM é um resultado de mudanças na ecologia microbiana e atividade em poços de esterco associados ao tratamento com DFM em relação ao controle. Quando expressa em gramas por libra de peso corporal de suínos, as emissões de gases de metano tendem a ser reduzidas (P = 0,16; redução de 17 %) quando os suínos foram alimentados com a DFM de dietas complementada (Tabela 13). As emissões de gás sulfídrico, expressas em gramas por libra de peso corporal suíno, não foram significativamente diferentes do controle, mas foram reduzidas em 10 % quando os suínos foram alimentados com a DFM de dietas complementada. As emissões de amônia foram numericamente inferiores para DFM de suínos alimentados em todos os momentos. O total de emissões de gases de metano e sulfeto de hidrogênio (gramas / dia) foram reduzidos (P = 0,08) em 14 % e 19 %, respectivamente, em salas que abrigam a DFM de suínos complementados em comparação aos suínos de controle (Tabela 14). Tabela 13. Efeitos da suplementação da dieta de Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) sobre as emissões de gases do meio ambiente (g / libra de ganho de peso vivo). Dieta

Tabela 14. Efeitos da suplementação dietética DFM das emissões de gases em meio de metano (CH4) e sulfeto de hidrogênio (H2S).

1 Dados em g / dia SEM = erro padrão da média da média

[00240] O total de ácidos graxos voláteis (VFA) foram reduzidos (P = 0,01) em esterco de suínos alimentados com as dietas suplementadas com Bacillus DFM em relação ao esterco de suínos de controle (Tabela 15). Especificamente, esta diminuição foi o resultado de uma menor produção de 1-butirato (P = 0,04), 4-metilvalerato (P = 0,05), e propionato de etila (P = 0,12) durante a fermentação anaeróbia microbiana no esterco. Por outro lado, a suplementação do DFM resultou em um aumento (P = 0,06) da produção de butirato. Tabela 15. Efeitos da suplementação dietética de DFM em composição de ácidos graxos voláteis de esterco (VFA). 1

1 Dados em matéria seca ppm ponderados por meio do ganho de peso corporal.

[00241] Os dados deste experimento indicam que os suínos alimentados com as dietas suplementadas com este Bacillus DFM durante as fases de crescimento e término de produção resultam em uma melhor proporção de crescimento, eficiência alimentar e peso final de carcaça quente. A suplementação com o DFM também pode reduzir a matéria seca, cinzas, e N de amônio no poço de esterco. Além disso, as reduções na metano e sulfeto de hidrogênio nas emissões dos resíduos de suínos armazenados eram evidentes quando o Bacillus DFM foi completado para a alimentação de suínos.

EXEMPLO 8 Efeito de Bacillus microbiano de alimentação direta sobre a ecologia microbiana em resíduos de suíno armazenados.

[00242] As amostras de esterco de poço foram obtidas a partir do estudo de crescimento- término de 15 semanas descrito no Exemplo 7. As amostras de esterco para análise microbiana foram recolhidas no final do ensaio, tal como descrito anteriormente no Exemplo 7, a partir de cada um dos dois poços individuais por sala e analisados individualmente, resultando em um total de 24 observações. A produção de metano archaea (Spence et al., 2008) e grupos de bactérias de interesse foram enumerados via análise de reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) (Metzler-Zebeli et al, 2010, Yu et al., 2005). Os dados foram analisados por meio de ANOVA através do procedimento PROC MIXED do SAS (v. 9.1.3, SAS Institute, Inc., Cary, NC) com nível de significância a = 0,10. As tendências foram declaradas para 0,20 > P > 0,10.

[00243] A adição do Bacillus DFM para as dietas de suínos resultou em mudanças nas populações microbianas em resíduo de suíno armazenado. O aglomerado Clostridium proteolíticao do grupo I de bactérias foi reduzida (P <0,01) no esterco armazenado resultantes de suínos alimentados com a DFM em relação ao esterco de suínos de controle (Tabela 16). A administração do Bacillus DFM a suínos resultou em um aumento no agrupamento fibrolítico de Clostridium XlVa (P = 0,09) associado com a produção de butirato. Este aumento no agrupamento de Clostridium XlVa suporta o aumento observado na produção de butirato associada com o tratamento de DFM, como relatado na Tabela 15 no Exemplo 7. As espécies Bacteroides e Prevotella, produzindo uma grande variedade de VFA, foram reduzidas significativamente (P = 0,08) em esterco de suínos suplementados com o DFM. Os metanógenos tendem a ser reduzidos (P = 0,13) no esterco armazenado a partir de suínos alimentados com o Bacillus DFM em relação ao esterco de suínos de controle e as bactérias redutoras de sulfato foram numericamente reduzidas. As reduções observadas nestas bactérias redutoras de sulfato e archaea suportam as diminuições observadas na produção de gás metano e sulfeto de hidrogênio, com suplementação DFM documentado na Tabela 13 e na Tabela 14 no Exemplo 7. Tabela 16. Efeitos da suplementação da dieta de Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) sobre as populações microbianas em resíduos de suínos armazenados.

1 Os dados em Δct em relação às bactérias totais e ajustados para matéria seca de esterco (DM) e ponderados pelo ganho de peso corporal; SEM = erro padrão da média.

EXEMPLO 9

[00244] O efeito da suplementação de um Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) para suínos criados em uma instalação comercial do desmame ao fim e alimentados com dietas formuladas com um alto nível de subprodutos e os níveis de energia limitados.

[00245] Para determinar o desempenho do crescimento de suínos alimentados com dietas à base de milho e farelo de soja comerciais com quantidades crescentes de subproduto, um estudo do desmame ao fim foi realizado. Um total de 1.024 porcos foram desmamados as cerca de 3 semanas de idade, separados por sexo e categoria de peso, distribuídos em 32 currais em julgamento e fase de alimentação por 105 dias. Os animais foram pesados a cada duas semanas, durante as três fases iniciais de amamentação. Dietas da fase inicial continha até 20 % dos grãos destiladores de milho e solúveis (cDDGS). Os suínos foram continuados em duas fases de crescimento e uma fase final de 21 dias cada. As duas fases de crescimento, bem como as dietas da fase de acabamento continham 35 % de cDDGS e 15 % farelo de trigo em substituição ao milho na dieta (Tabela 17). Tabela 17. As fases de alimentação e a composição da dieta. 1

1 SBM, farelo de soja; CP, proteína bruta; cDDGS, grãos destiladores secos de milho com solúveis com ~ 10 % de teor de óleo; tratamento incluiu os custos de milho.

[00246] As dietas foram formuladas para simular as dietas comerciais normais com excesso de proteína bruta, mas a energia limitada. Exceto para as primeiras 6 semanas de julgamento, nenhum dos antibióticos promotores de crescimento foram alimentados. O tratamento consistiu em suplementação microbiana de alimentação direta (DFM) em relação ao controle da dieta sem DFM. A alimentação direta microbiana consistiu em proporções iguais de cepas Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508), AGTP BS 1013 (NRRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510) somando a uma garantia de 3,0 x 108 CFU / g de produto DFM, incluído a uma proporção de 1 lb / tonelada na alimentação, resultando em uma concentração de 1,5 x 105 CFU / g de dieta. Desempenho e perdas de Crescimento foram analisados usando o procedimento Proc Mixed do SAS (v. 9.1.3, SAS Institute, Inc., Cary, NC) com nível de significância a = 0,10. As tendências foram declaradas para 0,15 > P > 0,10. Os dados foram bloqueados por sexo e categoria de peso e equilibrados para o peso inicial.

[00247] O ganho médio diário de suínos alimentados com DFM foi maior (P < 0,05) a partir de d 0 a 14 e d 14 a 28 do julgamento em relação aos suínos de controle (Tabela 18), o que resultou em um aumento (P <0,05) de peso corporal de suplementado suínos com DFM em DL4 e d 28 do estudo (Tabela 19). Este aumento no ganho de peso corporal exibido por meio dos suínos complementados com DFM foi resultado de uma maior (P < 0,10) média da ingestão de alimentação diária durante os períodos d 0 a 14 e d 14 a 28 (Tabela 20). A eficiência alimentar também foi melhorada (P = 0,03) durante o primeiro período de duas semanas do julgamento (Tabela 20b). Tabela 18. O ganho médio diário (adg) ao longo da duração do estudo. Controle DFM SEM Valor P

1 SEM = erro padrão da média. Tabela 19. Peso corporal do Suíno (lb) e porcentagem de perda de saúde (mortalidade e abates) em todo o período de duração do estudo.

1 SEM = erro padrão da média. Tabela 20. Média de consumo diário de alimento (adfi) ao longo da duração do estudo.

1 SEM = erro padrão da média. Tabela 20b. A conversão alimentar (alimentação: ganho, fg) ao longo da duração do estudo.

1 SEM = erro padrão da média.

[00248] A suplementação microbiana de alimentação direta resultou em maior (P < 0,10) GPD e CMD durante a fase de crescimento inicial (d 42 a 63 do julgamento). Durante a fase de acabamento do julgamento, ADG foi maior (P = 0,02) a partir dos dias 84 a 105 quando os suínos foram alimentados com dietas suplementadas com o DFM em relação aos suínos de controle, e tendeu a ser maior (P = 0,14) para o período de tempo geral d 0 a 105. A melhor resposta em ADG com tratamento DFM dos dias 84 a 105 e falta de resposta CMD, resultou em melhora (P < 0,01) da conversão alimentar durante este período. As melhoras em ADG de suplementação com DFM durante todo o ensaio resultou em cerca de um suíno 3libras mais pesado no final do estudo (d 105) em relação aos suínos de controle (Tabela 19). Além disso, as perdas de saúde, devido à mortalidade e abates como resultado da gripe, infecção por Streptococcus suis, etc foram reduzidas (P = 0,07; Tabela 19).

EXEMPLO 10

[00249] O efeito da suplementação de um Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) para suínos criados em uma instalação comercial do desmame ao fim e alimentados com dietas formuladas com um alto nível de subprodutos e os níveis de energia limitados na eficiência de conversão alimentar.

[00250] O efeito de um Bacillus microbiano de alimentação direta com a eficiência de uso dos alimentos pelos animais, que são criados em uma instalação de desmame ao fim foi avaliado. Um total de 2.160 animais foram desmamados as cerca de 3 semanas de idade, separados por sexo, equilibrados para o peso inicial, e distribuídos para mais de 68 currais em duas salas no mesmo local em julgamento. Os animais foram alimentados nos 105 dias. Os animais foram pesados a cada duas semanas, durante a fase de amamentação inicial até dia 42, pós-desmame. Dietas fase inicial continham até 20 % dos grãos destiladores de milho e solúveis (cDDGS). Os suínos foram continuados em julgamento por duas fases de crescimento e uma fase de acabamento, a cada 21 dias. A fase de crescimento, bem como as dietas da fase de acabamento continham 35 % de cDDGS e 15 % farelo de trigo em substituição ao milho na dieta (Tabela 21). As dietas foram formuladas para simular as dietas comerciais padrão com proteína e energia bruta limitada. Tabela 21. As fases de alimentação e a composição da dieta.

1 SBM, farelo de soja; CP, proteína bruta; cDDGS, grãos destiladores secos de milho com solúveis com ~ 10 % de teor de óleo; tratamento incluiu os custos de milho.

[00251] Com exceção das primeiras 6 semanas de julgamento, nenhum dos antibióticos promotores de crescimento foram alimentados. Os tratamentos consistiram na suplementação microbiana de alimentação direta (DFM) em comparação com uma dieta controle sem DFM. A alimentação direta microbiana consistiu em proporções iguais das cepas Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508), AGTP BS1013 (NRRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510) somando a uma garantia de 3,0 x 108 CFU / g de produto DFM, incluído a uma proporção de 1 lb / tonelada na alimentação, resultando em uma concentração de 1,5 x 105 CFU / g de dieta. A conversão alimentar foi analisada usando o Procedimento Proc Mixed do SAS (v. 9.1.3, SAS Institute, Inc., Cary, NC) com nível de significância α = 0,10. As tendências foram declaradas para 0,15 > P> 0,10. Os dados foram bloqueados para a sala e os gênero para análise.

[00252] Menos alimentação (P = 0,02) foi exigida por libra de ganho de peso a partir de d 0 a 14 do julgamento quando os suínos foram alimentados com dietas contendo o suplemento de Bacillus DFM, e essa resposta tende a mostrar a eficiência alimentar (P = 0,13) que é evidente ao longo do toda fase de amamentação a partir d 0 a 42 do estudo. (Tabela 22). A suplementação microbiana de alimentação direta também melhorou (P = 0,08) na eficiência alimentar durante a fase de acabamento (d 84 a 105) Tabela 22. A conversão alimentar (alimentação: ganho, fg) ao longo da duração do estudo.

1 SEM = erro padrão da média EXEMPLO 11

[00253] O efeito da suplementação de um Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) em resposta a eficiência alimentar das dietas dos suínos em fase de amamentação formuladas com altos níveis de subprodutos fibrosos.

[00254] Um total de 480 suínos (peso inicial: aproximadamente 6,0 lb) foram desmamados aos 21 dias de idade e separados em 10 suínos / curral em uma instalação de amamentação de suínos de ambiente controlado. Os animais foram colocados em teste a partir de 21 dias de idade para 63 dias de idade e alimentados com um programa de alimentação de duas fases com dietas formuladas à base de milho, farelo de soja e 40 % de DDGS de milho (Tabela 23) e para atender as exigências nutricionais dos suínos em cada uma das duas fases de produção (Tabela 24). Tabela 23. Composição da dieta basal das Fases 1 e 2 das dietas de amamentação de suínos.

Tabela 24. Composição calculada das dietas basais, %. Fase 1 Fase 2

[00255] Todas as dietas continham fitase (500 FTU / lb de alimento). Um dos três tratamentos dietéticos foi distribuído aleatoriamente aos currais de tal forma que cada tratamento foi representado por oito currais idênticos. Os tratamentos consistiram na suplementação microbiana de alimentação direta (DFM) em dois níveis de inclusão (0,5 e 1,0 lb / tonelada de alimento) em comparação com uma dieta controle, sem o suplemento DFM (Tabela 25).

[00256] A alimentação direta microbiana consistiu em proporções iguais das cepas Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508), AGTP BS1013 (NRRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510) somando a uma garantia de 3,0 x 108 CFU / g de produto DFM, incluído a uma proporção de 0,5 ou 1,0 lb / tonelada de alimento resultando em uma concentração de 7,5 x 104 CFU / g ou 1,5 x 105 CFU / g de alimento, respectivamente. O ganho de peso corporal do Suíno e consumo de alimento foram determinados no curral no d 21 e 42 d por meio do julgamento para calcular a eficiência alimentar como ganho: alimentação. A eficiência alimentar também pode ser calculada como a alimentação: ganho. Tabela 25. Tratamentos dietéticos e proporções de inclusão de DFM

1 As dietas foram processadas como uma mistura, alimentação não peletizada 2 Todas as dietas continham alimentação de 500 FTU / Kg de fitase.

[00257] Os suínos alimentados com as dietas tratadas com Bacillus DFM tiveram maior ganho de peso (P = 0,03) por unidade de consumo de alimento em comparação com os suínos alimentados com a dieta controle durante a fase de amamentação precoce (d 0 a 21, após o desmame, Tabela 26). Tabela 26. O peso corporal e a eficiência alimentar dos suínos na fase de amamentação alimentados com dietas à base de elevado teor de fibra suplementadas com Bacillus DFM em dois níveis de inclusão na dieta.

* Suínos por curral= 10

EXEMPLO 12

[00258] Efeito de um Bacillus microbiano de alimentação direta na energia e digestibilidade de nutrientes em dietas na alimentação de suínos em crescimento contendo 40 % de DDGS de milho.

[00259] Um estudo de digestibilidade foi realizado em suínos em crescimento para medir os efeitos de um Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) sobre a digestibilidade ileal e total de energia e de nutrientes em dietas contendo 40 % de grãos destiladores secos milho, incluindo solúveis (DDGS). Vinte e quatro suínos (BW inicial: cerca de 25 lb), provenientes dos acasalamentos de javalis G-Performer para F-25 fêmeas (Genetiporc, Alexandria, MN) foram cirurgicamente equipados com uma T-cânula no íleo distal. Após as cirurgias, os suínos foram autorizados no dia 21 a se recuperarem. Uma refeição com base na dieta de milho e farelo de soja padrão foi fornecida em uma base ad libitum durante este período. Três semanas após a cirurgia, os suínos foram distribuídos em dois tratamentos dietéticos que consistem em uma dieta basal de controle e um Bacillus de DFM. Os animais foram alojados em currais individuais (1,2 x 1,5 m) em uma sala de ambiente controlado. Cada curral foi equipado com um alimentador e uma tetina e tinha os pisos de concreto totalmente ripados

[00260] A dieta basal experimental foi formulada à base de milho, farelo de soja e 40 % de DDGS de milho (Tabela 27). Os tratamentos dietéticos foram: (1) uma dieta basal sem DFM, ou (2) com a dieta basal com 0,05 % de DFM adicionado aos custos de amido de milho. A alimentação direta microbiana consistiu em proporções iguais de cepas de Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508), AGTP BS1013 (NRRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510) somando a uma garantia de 3,0 x 108 CFU / g de produto DFM, incluído a uma proporção de 1 0,0 libras / tonelada de alimento resultando em uma concentração de 1,5 x 105 CFU / g de dieta. Todas as dietas foram formuladas para atender ou exceder as necessidades de nutrientes para suínos em crescimento (NRC, 1998). Tabela 27. Composição da dieta basal experimental

Ingrediente, %1 Tratamento de alimentação direta microbiana foi adicionado a 0,05 % da dieta, aos custos de despesa do amido de milho. 3 A pré-mistura micromineral da vitamina, desde as seguintes quantidades de vitaminas e minerais por quilograma de dieta completa: Vitamina A, 10.990 UI; vitamina D3, 1, 648 UI; vitamina E, 55 UI; vitamina K, 4,4 mg; tiamina, 3,3 mg; riboflavina, 9,9 mg; piridoxina, 3,3 mg; vitamina Bi2, 0,044 mg; ácido D-pantotênico, 33 mg; niacina, 55 mg, ácido fólico, 1,1 mg; biotina, 0,17 mg, Cu, 16 mg como sulfato de cobre; Fe, 165 mg como o sulfato de ferro, I, 0,36 mg como iodato de potássio; Mn, 44 mg como o sulfato de manganês; SE, 0,3 mg de selenito de sódio; Zn, 165 mg como óxido de zinco.

[00261] O dióxido de titânio foi usado como um marcador não digerível em todas as dietas. As dietas foram fornecidas aos 12 suínos, oferecendo seis suínos por dieta por 17 dias. Os suínos foram autorizados ao consumo ad libitum de dietas e água durante todo o experimento. Para minimizar a contaminação cruzada de currais de controle com DFM, os currais alimentados com dietas sem DFM foram alimentados primeiro, seguido pelos currais tratados com DFM. Após a alimentação de cada tratamento, os carros de distribuição de alimentação foram completamente limpos. Os suínos alimentados com dietas sem DFM também foram pesados e recolhidos antes dos suínos alimentados com as dietas contendo DFM.

[00262] As amostras de fezes foram coletadas no dia 12 via a amostragem e as amostras de íleo foram coletadas nos dias 13 e 14 . As amostras de íleo foram coletadas de forma contínua durante 9 h a partir de 0800, em cada dia de coleta. As cânulas foram abertas e 225 mL de sacos de plástico foram ligados ao cano da cânula usando braçadeiras, o que permitiu a digesta a a fluir a partir da cânula para o saco. As bolsas foram alteradas sempre que encheu a digesta ou pelo menos uma vez a cada 30 min. O pH na digesta foi medido no primeiro saco recolhido após 0900, 1100, 1300 e 1500 em cada dia de coleção. Após a recolha do íleo final, os suínos foram alimentados com as suas respectivas dietas experimentais durante 3 dias adicionais. A refeição da manhã (em 0700), que é alimentada no dia seguinte a última coleta ileal continha um marcador verde. Durante os seguintes 36 h, ileal e fezes foram marcados a cada 30 minutos a partir de todos os suínos, e pela primeira vez, o marcador aparece em qualquer destes locais os quais foram registrados e usados como uma medida da proporção de passagem para esta dieta especial.

[00263] Na conclusão do experimento, as amostras foram descongeladas e homogeneizadas dentro de animal e dieta e uma sub- amostra foi coletada para análise química. Todas as amostras foram liofilizadas e fundamentadas antes da análise. Todas as amostras também foram analisadas para matéria seca (MS), fibra em detergente ácido (FDA), fibra em detergente neutro (FDN) e lignina. Os valores para ileal aparente (AID) e trato digestivo total (ATTD) da digestibilidade dos nutrientes foram calculados conforme descrito anteriormente (Stein et al., 2007). A homogeneidade das variâncias foi confirmada e os valores discrepantes foram testados usando o procedimento UNIVARIATE (SAS Institute Inc., Cary, NC). Não foram detectados valores discrepantes. Os dados foram analisados usando o procedimento MIXED. O modelo incluiu o tratamento dietético como efeito fixo enquanto suíno foi o efeito aleatório. Mínimos quadrados foram calculados para cada variável independente. O suíno foi a unidade experimental para todos os cálculos, e um nível usado para determinar a significância e tendências entre as médias foi de 0,05 e < 0,10, respectivamente.

[00264] Ileal de pH foi menor (P = 0,03) em animais alimentados com a dieta contendo o Bacillus DFM em comparação com o pH do íleo de suínos de controle (Tabela 28). A proporção de passagem e pH fecal não foram afetados pelo tratamento dietético. Apesar de FDA e FDN não terem sido afetados, a adição do Bacillus DFM à dieta resultou em melhora (P < 0,03) AID (Tabela 29) e ATTD (Tabela 30) de lignina em comparação com a dieta controle.

[00265] Estes dados indicam que o Bacillus DFM reduz o pH da ileal e melhora a digestibilidade de lignina em dietas à base de subprodutos altamente fibrosos. Tabela 28. Efeito do Bacillus DFM sobre o pH e a proporção de passagem da digesta ileal e fezes em dietas de refeição de soja - milho nos suínos em fase de crescimento contendo 40 % de DDGS1

Tabela 29. Efeito do Bacillus DFM sobre a digestibilidade aparentemente ileal (AID, %) de nutrientes fibrosos em dietas de refeição de soja - milho nos suínos em fase de crescimento contendo 40 % de DDGS1

1 Os dados são médias dos quadrados mínimos de 6 observações para todos os tratamentos. Tabela 30. Efeito do Bacillus DFM na digestibilidade aparente total (ATTD, %) de nutrientes fibrosos em dietas de refeição de soja - milho nos suínos em fase de crescimento contendo 40 % de DDGS1

1 Os dados são médias dos quadrados mínimos de 6 observações para todos os tratamentos.

EXEMPLO 13 Efeitos anti-inflamatórios de cepas de Bacillus em uma linhagem de células de macrófagos de frango HD11.

[00266] A linhagem celular de macrófagos de frango HD1 1 foi usada para determinar a resposta inflamatória ao LPS e determinar o potencial de cepas Bacillus microbianas de alimentação direta para aliviar a inflamação associada com uma infecção bacteriana gram negativa. As cepas de Bacillus foram rastreados em um ensaio de cultura de células para determinar as alterações na expressão de genes de respostas inflamatórias de citocinas aos LPS e de cada uma das cepas de Bacillus (Bacillus subtilis AGTP BS1013 (NRRL B-50509), Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510), e Bacillus subtilis AGTP BS944 (NRRL B- 50548).

[00267] As células HD11 foram incubadas quer: (1) sozinhas (não estimuladas), (2) com LPS, e (3) com cada uma cepa de Bacillus, e (4) com LPS + cepa de Bacillus. O design do modelo da placa está ilustrado na Figura 22.

[00268] As células HD11 foram cultivadas até à confluência e foram plaqueadas em placas de 24 cavidades de cultura de tecidos com o antibiótico livre de Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI) contendo meios de 10 % de soro fetal bovino (FBS; Atlanta Biologicals, Inc., Lawrenceville, GA). Uma vez confluente, o meio foi removido e os tratamentos foram administrados em meio isento de antibiótico e, em seguida, foram incubados durante 1 hora a 41 ° C. Após a incubação, as células foram lavadas duas vezes com PBS e foram incubadas em 380 de TRIzol (Invitrogen, Life Technologies Corp, Carlsbad, CA) durante 5 minutos. As amostras foram removidas a partir das placas, colocadas em dois tubos de microcentrifugação, rapidamente congelados e armazenados a-80 ° C, até o isolamento do RNA. Para separar o RNA a partir da fase orgânica, foram usados tubos de gel de bloqueio 2 ml de fase pesada (Cinco Prime, Inc., Gaithersburg, MD). A limpeza do RNA foi realizada usando o mini kit RNeasy (Qiagen, Inc., Valencia, CA) e a digestão com DNase foi feita usando o kit de RNase livre de DNase (Qiagen). O cDNA foi sintetizado usando o cDNA qScript SuperMix (VWR, Radnor, PA) imediatamente a seguir do isolamento do RNA.

[00269] PCR em Tempo Real foi usado para determinar a expressão de genes das células HD11, usando conjuntos de iniciadores apresentados na tabela 31. β-actina foi usado como um gene de referência. ANOVA de sentido único foi realizada usando o procedimento Proc Mixed do SAS (v. 9.1.3, SAS Institute, Inc., Cary, NC). As médias foram separadas pelo teste de Student-Newman-Keuls, nível de significância a = 0,10. Tabela 31. Conjuntos de iniciadores de frangos específicos usados no ensaio de rastreamento

[00270] O desafio de lipopolissacarídeo na linhagem celular de macrófagos de frango HDL 1 resultou em um aumento (P < 0,01) na expressão de genes das citocinas inflamatórias, interleucina (IL)-l β e IL-8, em comparação com células HDL11 não estimuladas (Figura 23). Quando cepa AGTP BS1013 foi adicionada às células HDL11 com um LPS no estado de esporo, esta cepa de Bacillus diminuiu (P < 0,01) a expressão de genes das citocinas inflamatórias, IL-1 β e IL-8, resultante da administração de LPS sozinho e era mais semelhante ao perfil de células HDL22 não estimuladas da expressão do gene. Além disso, a resposta da célula de frango para LPS na presença de cepa Bacillus vegetativo BS 1013 foi numericamente inferior, assim como cepa Bacillus AGTP BS3BP5 no estado de esporos, e os esporos e células vegetativas da cepa Bacillus AGTP BS944.

[00271] Estes dados demonstram a eficácia das cepas de Bacillus DFM para aliviar a inflamação associada com uma infecção bacteriana, e a sua eficácia em espécies aviárias. As cepas de Bacillus DFM podem ser usadas para aliviar a inflamação de macrófagos. Além disso, as cepas de Bacillus DFM podem ser usadas para aliviar as infecções bacterianas gram-negativas, e os efeitos dessas infecções bacterianas. EXEMPLO 14

[00272] Os efeitos anti-inflamatórios de cepas de Bacillus de uma linhagem de células epiteliais intestinais de rato (IEC-6)

[00273] A linhagem de células epiteliais do intestino de rato IEC-6 foi usada para determinar a resposta inflamatória ao LPS e determinar o potencial de cepas Bacillus microbianas de alimentação direta para aliviar a inflamação associada com uma infecção bacteriana gram negativa. As cepas de Bacillus foram rastreadas em um ensaio de cultura de células para determinar as alterações na expressão de genes de citoquinas respostas inflamatórias aos LPS e de cada uma das cepas de Bacillus (Bacillus subtilis AGTP BS 1013 (NRRL B-50509), Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510), e Bacillus subtilis AGTP BS944 (NRRL B-50548), Bacillus subtilis AGTP BS1069 (NRRL B- 50544), Bacillus subtilis AGTP BS 442 (NRRL B-50542), Bacillus subtilis AGTP BS521 (NRRL B-50545), e Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508)). As cepas adicionais de Bacillus podem ser usadas incluindo, mas não limitadas a Bacillus pumilus AGTP BS 1068, (NRRL B-50543) e de Bacillus pumilus KX1 1-1 (NRRL B-50546).

[00274] As células IEC-6 foram incubadas quer: (1) sozinhas (não estimuladas), (2) com LPS, (3) com cada cepa de Bacillus DFM, e (4) com LPS + cepa de Bacillus. O design do modelo da placa está ilustrado na Figura 24.

[00275] As células IEC-6 foram cultivadas até à confluência e semeadas em placas de 24 cavidades de cultura de tecidos com meio de Dulbecco modificado de Eagle (DMEM) (Invitrogen, Life Technologies Corp, Carlsbad, CA) contendo 10 % de FBS (Atlanta Biologicals, Inc., Lawrenceville, GA) e 1 % de antibiótico-antimicótico (Atlanta Biologicals). Uma vez que as placas estavam confluentes, as células IEC-6 foram lavadas três vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS). Os tratamentos foram administrados em meio isento de antibiótico e, em seguida, foram incubados durante 1 hora a 37 ° C. Após a incubação, as células foram lavadas duas vezes com PBS e foram incubadas em 380 μl de TRIzol (Invitrogen) durante 5 minutos.

[00276] As amostras foram removidas a partir das placas, colocadas em tubos de microcentrifugação de 2 ml, rapidamente congeladas e armazenadas a-80 ° C, até o isolamento do RNA. Para separar o RNA a partir da fase orgânica, foram usados tubos de gel de bloqueio de 2 ml de fase pesada (Cinco Prime, Inc., Gaithersburg, MD). A limpeza do RNA foi realizada usando o mini kit RNeasy (Qiagen, Inc., Valencia, CA) e a digestão com DNase foi feito usando o kit de RNase livre de DNase (Qiagen). O DNAc foi sintetizado usando o cDNA qScript SuperMix (VWR, Radnor, PA) imediatamente a seguir do isolamento do RNA.

[00277] PCR em Tempo Real foi usado para determinar a expressão de genes das células IEC-6, usando conjuntos de iniciadores apresentados na Tabela 32. β-actina foi usado como um gene de referência. ANOVA de sentido único foi realizado usando procedimento Proc Mixed do SAS (v. 9.1.3, SAS Institute, Inc., Cary, NC). As médias foram separadas pelo teste de Student-Newman-Keuls, nível de significância a = 0,10. Tabela 32. Conjuntos de iniciadores específicos de ratos usados no ensaio de rastreamento.

[00278] O desafio de lipopolissacarídeo na linhagem de células epiteliais intestinais de rato IEC-6 resultou em um aumento (P < 0,01) na expressão do gene da citocina inflamatória, o TNF-a, em comparação com as células IEC-6 não estimuladas (Figura 25). As cepas Bacillus BS1013 e BS1069 diminuíram (P < 0,10) a expressão gênica de TNF-a resultante da administração de LPS sozinho quando em ambos os esporos ou estados vegetativos. As cepas de Bacillus BS3BP5, BS442, e BS521 também diminuíram (P < 0,10) a expressão do gene do TNF-a resultante da administração de LPS sozinho, mas apenas quando a forma de esporos. Inversamente, cepa de Bacillus BS918 diminuiu (P < 0,10) a expressão do gene do TNF-a resultante da administração de LPS sozinho, mas apenas na sua forma vegetativa.

[00279] Estes dados demonstram a eficácia das cepas de Bacillus DFM para aliviar a inflamação associada com uma infecção bacteriana, e a sua eficácia em uma espécie de mamíferos. As cepas de Bacillus DFM podem ser usadas para aliviar a inflamação de macrófagos. Além disso, as cepas de Bacillus DFM podem ser usadas para aliviar as infecções bacterianas gram-negativas, e os efeitos dessas infecções bacterianas.

EXEMPLO 15

[00280] Eficácia de um Bacillus DFM para reduzir a formação de espuma em sistemas de armazenamento de esterco de suínos de poços profundos comerciais

[00281] Os sistemas de poço de esterco de suínos profundos são comuns no Centro-Oeste dos EUA e têm alto potencial de formação de espuma. Esta acredita-se ser o resultado do aumento de forma progressiva na inclusão de fibras de subprodutos em alimentos para suínos e os deslocamentos resultantes em ecologia microbiana e as características de fermentação no esterco armazenado. A eficácia de uma de três Bacillus DFM foi avaliada para determinar se a sua aplicação em poços de esterco suínos poderia alterar positivamente o perfil de fermentação microbiana no poço de esterco e proporcionar uma ferramenta para controle de espuma do poço. Cinco unidades de produção, cada uma com três celeiros cresce com acabamento idêntico (1400 cabeça cada) sobre os sistemas individuais de poço profundo que foram selecionados para avaliação. Todos os locais foram tradicionalmente de alto risco para a produção de espumas com base em elevados níveis de inclusão de grãos destiladores secos que contêm produtos solúveis (DDGS) e outros subprodutos fibrosos nas dietas e de incidências de passados históricos de formação de espuma.

[00282] Para cada um dos três poços por local, uma amostra da linhagem de base foi estabelecida antes do julgamento começar a usar um tubo de 1 ' PVC equipado com uma válvula de esfera para prender a amostra. Para cada amostra, a profundidade de líquido e espuma de profundidade foram medidos e a proporção da espuma calculada para acomodar diferentes volumes de poço durante todo o período de duração do estudo uma vez que os volumes de poço variavam enormemente após 21 dias de amostragem. O produto testado consistiu em proporções iguais de cepas AGTP BS918 (NRRL B-50508), AGTP BS1013 (NRRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510) como para os exemplos 9 e 10. Outras cepas de Bacillus podem ser usadas incluindo, mas não limitados a Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, e Bacillus subtilis AGTP BS1069 e Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus KX11-1.

[00283] Duas proporções de inclusão de produtos Bacillus foram aplicadas diretamente ao poço de esterco e testadas contra os poços não tratados. O inoculante do poço de Bacillus foi aplicado a uma proporção de 5,3 x 104 CFU / mL de esterco a ser equivalente à proporção de inoculação, se alimentado no animal a 1,5 x 105 CFU / g de alimento e uma dose de 2,5 vezes maior (2,5 vezes) aplicado para o poço de esterco, a uma proporção de 1,3 x 106 CFU / mL de esterco. O produto Bacillus foi reaplicado a cada 60 dias durante o período de teste completo de 170 dias. Os dados foram analisados por meio de ANOVA através do procedimento PROC MIXED do SAS (v. 9.1.3, SAS Institute, Inc., Cary, NC) com medidas repetidas para a detecção ao longo do tempo. O nível de significância a = 0,10, as médias foram separadas usando teste de menor diferença mínima quadrada (LSD).

[00284] Não houve diferença na profundidade da espuma, a profundidade de líquido ou espuma: proporção líquida entre os poços nos locais identificados para o teste (Tabela 33). No entanto, três semanas após a aplicação dos tratamentos, a profundidade da espuma diminuiu (P = 0,03) em poços tratados com o inoculante Bacillus em cada proporção de aplicação em comparação com os poços não tratados. Profundidade do líquido não diferiu entre os três tratamentos de três semanas após a aplicação do poço do inoculante Bacillus, resultando em uma diminuição (P = 0,01) de espuma: líquido, quando o poço do inoculante Bacillus foi aplicado em cada proporção de aplicação em comparação com poços não tratados. Espuma: a proporção de líquido também foi reduzida (P < 0,10) com o inoculante de Bacillus em cada proporção de aplicação em relação ao controle, quando os valores foram calculados sobre os três pontos de amostragem ao longo do julgamento de 170 dias (Tabela 34). Os dados indicam que a proporção mais elevada de inclusão do Inoculante de Bacillus resultou em redução mais consistente de espuma durante o curso do estudo (Figura 26).

[00285] Estes dados indicam que o uso de um inoculante de Bacillus três cepa aplicada diretamente às instalações de armazenamento de profundidade do poço de esterco suíno controla a acumulação de espuma. Tabela 33. Comparação das características de espuma entre linha de base e 21 dias de amostragem em média de mais de 5 si

a,'b médias com índices superiores diferentes são significativamente diferentes (P < 0,10), médias foram separadas usando o erro padrão da média. Tabela 34. Comparação das características de espuma em média com mais de 3 amostragens dentro de período experimental de 170 dias.

a,b médias com índices superiores diferentes são significativamente diferentes (P < 0,10), médias foram separadas usando o erro padrão da média.

EXEMPLO 16

[00286] A aplicação direta de produto de Bacillus para poços de esterco em locais da fase de crescimento - final comerciais altera as características de esterco.

[00287] Para comparar a eficácia de um produto de poço três cepas Bacillus contendo cepas AGTP BS918 (NRRL B-50508), AGTP BS 1013 (RRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510) em proporções iguais aos resíduos de esterco de suínos comercial do produto atual de tratamento (MicroSource S ®; DSM), o produto de três cepa de Bacillus foi aplicado diretamente sobre os poços de esterco de três unidades de produção comercial no Centro-Oeste dos EUA que estavam usando atualmente a alimentação MicroSource S ®. Outras cepas de Bacillus podem ser usadas incluindo, mas não limitadas a Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, e Bacillus subtilis AGTP BS1069 e Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus KX1 1-1.

[00288] O produto Bacillus foi testado em três locais de produção para um período de 60 dias para determinar se ele poderia melhorar as características de manejo de resíduos acima do efeito de administração de MicroSource S ® na alimentação de suínos. Cada local consistiu em duas salas idênticas com poços de esterco individuais e capacidade para 2250 suínos de mercado. Por local, um celeiro foi usado como controle não tratado enquanto o outro celeiro recebeu o tratamento com o poço Bacillus. Para os poços tratados, a proporção de inclusão do produto de Bacillus foi baseada em volume de resíduos, com uma proporção de aplicação de 5,3 x 104 CFU / mL esterco. O volume inicial dos poços de esterco de suíno no teste foi estimado em 120 mil litros de esterco, portanto, um total de 2,4 x 10 ° CFU de Produto de Bacillus foi aplicado diretamente ao poço.

[00289] O controle e o tratamento de poços foram amostrados antes e 60 dias após a aplicação do Produto de Bacillus. A amostragem ao longo de toda a profundidade do poço foi realizada usando um tubo de 1 " de PVC equipado com uma válvula de esfera para interceptar a amostra. O indicador de teste de características melhoradas de esterco foi determinado para ser reduzido em relação a % de sólidos após 60 dias de tratamento. Uma cauda teste não paramétrica de Jonckheere- Terpstra com estatísticas exatas e nível de significância a = 0,10 foi realizada usando o software estatístico SPSS (v. 17.0, IBM, Armonk, NY), para analisar diferença entre % de sólidos antes e após a aplicação do tratamento testar as diferenças médias.

[00290] Não houve diferença na média de sólidos de esterco entre qualquer um dos locaisde teste, em que MicroSource S ® foi incluída como procedimento operacional padrão em todos (Tabela 35). No entanto, houve uma redução de 24,3 % (P = 0,10) na matéria seca ao longo dos 3 locais monitorados quando o inoculante de Bacillus de três cepas foi adicionado ao poço de esterco. Estes dados indicam que a aplicação do Inoculante de Bacillus de três cepa melhora as características de gestão de esterco tal como indicado por uma redução na porcentagem de sólidos para além do produto comercial MicroSource S ®. Tabela 35. Redução do sólido após 60 dias passados da aplicação do produto do poço Bacillus para tratamento de poços de esterco em relação ao controle poço de esterco no mesmo local de produção.

1 SEM, erro padrão da média.

EXEMPLO 17

[00291] Comparação do efeito de um Bacillus microbiano de alimentação direta de três cepas e MicroSource S ® sobre o desempenho de suínos em crescimento.

[00292] Um estudo foi realizado para comparar a eficácia de um novo Bacillus DFM de três cepas e MicroSource S ® (DSM) para melhorar o desempenho do crescimento de suínos em crescimento. Um total de 144 suínos (peso inicial: cerca de 23 lb) foram colocados em teste e colocados em 36 currais com quatro suínos / curral em uma instalação do ambiente de suíno produtor controlado. Um dos três tratamentos dietéticos foi atribuído a cada curral (12 repetições / tratamento) e alimentado para a duração de 6 semanas do estudo. Os tratamentos consistiram em uma dieta basal de controle, um Bacillus microbiano de alimentação direta de três cepas (DFM) e MicroSource S ® (DSM), que é um tratamento DFM de resíduos de suínos comercial à base Bacillus.

[00293] A dieta basal foi formulada para conter 50 % de subproduto (35 % de DDGS e 15 % de farelo de trigo; Tabela 36). Fitase (500 FTU / lb) foi adicionada a todas as dietas. O novo Bacillus DFM consistiu em proporções iguais de cepas de Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B- 50508), AGTP BS 1013 (NRRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B- 50510) para somar um garantida 3,0 x 10 CFU / g de produto DFM, incluído a uma proporção de 0,25 lb / tonelada de alimento, resultando em uma concentração de 3,75 x 104 CFU / g de dieta. Outras cepas de Bacillus podem ser usadas incluindo, mas não limitados a Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, e Bacillus subtilis AGTP BS 1069, e Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus X11-1. Tabela 36. Composições de Dietas basais

[00294] MicroSource S ® foi incluído na dieta a 1 lb / tonelada de alimento, resultando em 7,5 x 104 CFU / g de dieta. O ganho de peso corporal do suíno e consumo de alimento no curral foram determinados nos dias 21 e 42 do julgamento, e ganho de peso médio diário (adg), o consumo médio diário de alimento (adfi) e ganho: alimentaçãoalimentação (G: F) foram calculados.

[00295] Os suínos alimentados com dietas suplementadas com o novo Bacillus DFM tiveram maior adg de d 0 a 21 do julgamento de suínos alimentados com dietas de controle ou dietas suplementadas com o DFM comercial, Microsource S ® (Tabela 37). Este aumento de ganho de peso diário tende a resultar em maior (P < 0,10) peso corporal em animais alimentados com o novo Bacillus DFM no dia 21 do estudo em comparação com os outros dois tratamentos. Estes dados indicam que o novo Bacillus DFM melhora o ganho de peso do corpo de suínos em crescimento em comparação com DFM à base de Bacillus comercial existente (MicroSource S ®). Tabela 37. O desempenho do crescimento de suínos alimentados com um novo Bacillus DFM em comparação com MicroSource S ®.

a,b Meios sem sobrescritos comuns são diferentes, P < 0,05. c,d meios sem sobrescritos comuns são diferentes, P < 0,10. EXEMPLO 18 Identificação das atividades enzimáticas de cepas de Bacillus.

[00296] Os ensaios in vitro foram realizados para testar a atividade enzimática das novas cepas de Bacillus contra substratos de alimentos fibrosos comumente encontrados em ingredientes de alimentos usados para formular as rações de suínos e aves. O rastreamento altamente completo destas cepas de teste foi realizada por meio da réplica do plaqueamento local de 2 microlitros de cultura líquido para 15,0 ml de vários tipos de meio do substrato de interesse em placas de grade 100x100x15mm. As atividades de Celulase, xilanase e β-mananase foram determinadas com base no uso do substrato específico por meio das cepas individuais.

[00297] Os componentes dos meios usados para ensaiar as propriedades de uso do substrato a partir de atividade enzimática das cepas derivadas do ambiente são descritos na Tabela 38. As placas de ensaio foram deixadas secar durante 30 minutos a seguir à aplicação de cultura, e, em seguida, incubadas a 32 ° C durante 24 horas. As atividades enzimáticas para cada cepa foram determinadas através da medição da zona de degradação do substrato, em milímetros, tal como indicado por meio da compensação da borda circundante de crescimento das colônias. Foram registrados os valores médios de placas idênticas. Tabela 38. Componentes dos meios usados para analisar as atividades enzimáticas ilustradas por propriedades de uso de substrato de Bacillus derivados do ambiente.

[00298] As atividades das enzimas de degradantes fibrolíticos de várias cepas de Bacillus subtilis e Bacillus pumilus são relatadas na Tabela 39. Todas as cepas apresentam atividade degradantes contra, pelo menos, dois dos três substratos fibrosos avaliados. Estes dados indicam que estas cepas de Bacillus têm capacidade degradativa da enzima contra a celulose, a xilana, e β-manose. Tabela 39. Atividades de Celulase, xilanase e β-mananase das cepas do Bacillus.

EXEMPLO 19

[00299] O efeito da suplementação de um Bacillus microbiano de alimentação direta (DFM) na alimentação da carga bacteriana residual após lavagem em instalações de fase de crescimento-término comerciais.

[00300] Para determinar o desempenho do crescimento de suínos alimentados com dietas à base de milho e farelo de soja comerciais com quantidades crescentes de subproduto, um estudo na fase de crescimento-término foi conduzido. Um total de 1.040 animais foram desmamados as cerca de 3 semanas de idade e desmamados com dieta inicial padrão comercial. Os animais foram separados por sexo, distribuídos por mais de 40 currais em julgamento e alimentados. Do dia 42 em diante, um alimentação direta microbiana consiste em proporções iguais das cepas de Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508), AGTP BS 1013 (NRRL B-50509) e AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510) somando a um garantido 3.0 x 108 CFU / g de produto DFM, foi incluído a uma proporção de 1 lb / tonelada na alimentação, resultando em uma concentração de 1,5 x 105 CFU / g na dieta (Tabela 40). Outras cepas de Bacillus podem ser usadas incluindo, mas não limitadas a Bacillus subtilis AGTP BS442, Bacillus subtilis AGTP BS521, e Bacillus subtilis AGTP BS 1069, e Bacillus subtilis AGTP 944, Bacillus pumilus AGTP BS 1068 e Bacillus pumilus KX11-1. Tabela 40. Fases de alimentação e composição da dieta. 1

1 SBM, farelo de soja; CP, proteína bruta; cDDGS, grãos destiladores secos de milho com solúveis com ~ 10 % de teor de óleo; tratamento incluiu os custos de milho.

[00301] Depois dos animais terem sido carregados para fora, lavados e expostos a 24 horas de secagem ao ar da instalação, a carga bacteriana residual foi determinada como indicador para a limpeza do curral. As amostras foram coletadas na área, que na parte de trás de cada curral no canto mais próximo do alimentador, aproximadamente 1 pé de um lado e do painel de extremidade (Figura 27).

[00302] A 16 in2 na área do piso instalação foi esfregada com um cotonete estéril pré-umedecido (PocketSwab Além disso, Ciências Charme, Lawrence, MA). A área da amostra foi passado 10 vezes em cada mecha e analisada em triplicado. Dentro de 15 segundos após o procedimento de raspagem, o cotonete foi colocado em leitor LUMT de bioluminescência (Ciências Charme, Lawrence, MA). Os valores da unidade de luz relativa resultante (RLU) foram registrados e média de curral antes da análise estatística.

[00303] Os dados foram analisados usando o procedimento NPAR1 WAY de SAS (v. 9,1 0,3, SAS Institute, Inc., Cary, NC) com nível de significância a = 0,05. Os dados indicaram uma redução significativa (P < 0,05) da carga bacteriana em currais alimentados com dietas contendo DFM comparado com dietas de controle de carga após o curral ter sido tratado, lavado e seco (Tabela 41). Tabela 41. Comparação da unidade de luz relativa (RLU), indicando a carga bacteriana residual em currais comerciais alimentados com dietas de controle ou dietas com inclusão de alimentação direta microbiana (DFM) após a lavagem e secagem ao ar do celeiro

a, b médias com diferentes sobrescritos foram significativamente diferentes (P < 0,05); 1 SEM, erro padrão da média.

[00304] Embora as modalidades específicas tenham sido ilustradas e descritas na presente invenção, será apreciado por meio daqueles que são versados na técnia que qualquer disposição que seja calculada para alcançar o mesmo objetivo pode ser substituída por meio das modalidades específicas mostradas. Este pedido de patente é destinado a cobrir quaisquer adaptações ou variações que operam de acordo com os princípios da presente invenção como descrito. Portanto, pretende-se que a presente invenção seja limitada apenas pelas reivindicações e os seus equivalentes. As descrições de patentes, as referências e publicações citadas no pedido são incorporadas na presente invenção por referência na sua totalidade neste documento. BIBLIOGRAFIA Association of Analytical Chemists (AOAC) (2007). Official methods of analysis, 18th ed. AOAC, Washington, D.C. Liu K. 201 1. Chemical composition of distillers grains, a review. J. Agric. Food CheM 59: 1508-1526. Metzler-Zebeli, B. U., Hooda, S., Pieper, R., Zijlstra, R. T., Van Kessel, A. G., Mosenthin, R. and G. Ganzle (2010). Polysaccharides Modulate Bacterial Microbiota, Pathways for Butyrate Production, and Abundance of Pathogenic Escherichia coli in the Pig Gastrointestinal Tract; J Appl Env Microbiol 76(1 1), 3692-3701. NRC. 1998. Nutrient Requirements of Swine. 10th rev. ed. Natl. Acad. Press, Washington, DC. Stein, H. H. and G. C. Shurson. 2009. The use and application of distillers dried grains with solubles in swine diets. J. Anim. Sci. 87: 1292-1303. Stein, H. PL, B. Seve, M. F. Fuller, P. J. Moughan, and C. F. M. de Lange. 2007. Invited review: Amino acid bioavailability and digestibility in pig feed ingredients: Terminology and application. J. Anim. Sci. 85: 172-180. Spence, C, Whitehead, T. R. and M. A. Cotta (2008). Development and comparison of SYBR Green quantitative real-time PCR assays for detection and enumeration of sulfate reducing bacteria in stored swine manure. J Appl Microbiol 105, 2143-2152. Yegani M., and D. R. Korver. 2008. Fators affecting intestinal health in poultry. Poult. Sci 87:2052-2063. Yu, Y., Lee, C, Kim, J. and S. Hwang (2005). Group-Specific Primer and Probe Sets to Detect Methanogenic Communities Using Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction. Biotechnol Bioeng 89, 670-679. 1/1

Claims (4)

1. Uso de uma cepa de Bacillus isolada, que tem atividade enzimática selecionada do grupo consistindo em: Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510), Bacillus subtilis AGTP BS442 (NRRL B- 50542), Bacillus subtilis AGTP BS521 (NRRL B-50545), Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508), Bacillus subtilis AGTP BS 1013 (NRRL B-50509), Bacillus subtilis AGTP BS1069 (NRRL B-50544), Bacillus subtilis AGTP 944 (NRRL B-50548) e Bacillus pumilus AGTP BS 1068 (NRRL B-50543), caracterizado pelo fato de que é para administração a um animal, em que, quando a cepa é administrada a um animal, fornece uma melhora não terapêutica em pelo menos uma das seguintes características: peso corporal, ganho médio diário, consumo médio diário de alimento, eficiência da alimentação, características da carcaça, digestibilidade dos nutrientes e problemas de resíduos de esterco.

2. Uso de uma cepa, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é para administração a um animal, em que, quando a cepa é administrada a um animal, fornece uma melhora não terapêutica em pelo menos uma das seguintes características: peso corporal, ganho médio diário, consumo médio diário de alimento, eficiência da alimentação, características da carcaça, digestibilidade dos nutrientes e problemas de resíduos de esterco em pelo menos 2% em comparação com um animal controle.

3. Uso de uma cepa, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o animal é ave ou porco.

4. Alimentação de um animal, caracterizada pelo fato de que a alimentação é suplementada com Bacillus subtilis AGTP BS3BP5 (NRRL B-50510), Bacillus subtilis AGTP BS918 (NRRL B-50508) e Bacillus subtilis AGTP BS1013 (NRRL B-50509).

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