BR112013031685B1

BR112013031685B1 - Formulações de liberação prolongada para entrega de proteínas ao olho e métodos de preparar as mesmas

Info

Publication number: BR112013031685B1
Application number: BR112013031685-3A
Authority: BR
Inventors: Vernon G. Wong; Louis L. Wood; Glenn T. Huang
Original assignee: Icon Bioscience, Inc.; Ramscor, Inc
Priority date: 2011-06-10
Filing date: 2012-06-11
Publication date: 2021-04-06
Also published as: WO2013036309A3; KR20140060274A; US20140140992A1; EP2717914A4; CA2838289A1; AU2012304909A1; MX2013014461A; NZ619707A; US9814773B2; JP6339011B2; BR112013031685A2; IN2013MN02384A; EP2717914B1; PL2717914T3; MX359119B; LT2717914T; JP2014516087A; WO2013036309A2; HUE047737T2; CY1122771T1

Abstract

formulações de liberação prolongada para entrega de proteínas ao olho e métodos de preparar as mesmas a presente invenção fornece formulações de liberação prolongada farmacêuticas injetáveis para entrega de agente ativos, particularmente proteínas terapêuticas, para o olho. as formulações são formulações de liberação prolongada biodegradável e biocompatível que compreendem excipientes líquidos de baixa solubilidade e quantidades relativamente pequenas (menor que aproximadamente 10%) de polímero biocompatível e biodegradável tal como polímeros de pla ou plga. uma dose unitária de 5 mil a 100 mil da formulação fornece liberação prolongada do agente por pelo menos 14 dias.

Description

FORMULAÇÕES DE LIBERAÇÃO PROLONGADA PARA ENTREGA DE PROTEÍNAS AO OLHO E MÉTODOS DE PREPARAR AS MESMAS

PEDIDO RELACIONADO

O presente pedido reivindica o beneficio de prioridade do Pedido de Patente № de série U.S. 61/495.672, depositado em 10 de junho de 2011 e completamente incorporado no presente documento.

CAMPO DA INVENÇÃO

Essa invenção fornece formulações farmacêuticas injetáveis biodegradáveis e biocompatíveis que compreendem proteínas terapêuticas, úteis no tratamento de doenças oculares.

ANTECEDENTES

Os presentes modos de entrega de fármaco, tais como aplicação tópica, entrega oral e injeção subcutânea, intravenosa e intramuscular podem resultar em altas e baixas concentrações sanguíneas e/ou meia-vida encurtada no sangue. Em alguns casos, alcançar a eficácia terapêutica com essas administrações padrão requer grandes doses de medicações que podem resultar em efeitos colaterais tóxicos. As tecnologias que se relacionam à liberação de fármaco controlado têm sido experimentadas em uma tentativa de contornar algumas dentre as armadilhas de terapia convencional. Seus objetivos consistem em entregar medicações de uma maneira prolongada e contínua.

Adicionalmente, aplicações de liberação de fármaco de controle local são em local ou órgão especifico. Permanece uma necessidade por um meio mais econômico, prático e eficiente de produzir e fabricar sistemas de entrega de fármaco que podem ser usados de forma local ou sistematicamente, em formulações sólidas, semissólidas ou liquidas. Em particular, as formulações para liberação prolongada no olho foram desenvolvidas, sendo que ainda há uma necessidade por aprimoramento para aumentar a liberação prolongada de medicamentos com bases biológicas no olho.

SUMÁRIO

A presente invenção fornece formulações de liberação prolongada de liquido nas quais a cinética da liberação de agente ativo pode ser controlada com o uso de formulações relativamente simples que compreendem pelo menos um excipiente liquido não polimérico (por exemplo, um éster de citrato, um benzoato de benzila ou dimetilsulfona) e uma pequena quantidade (por exemplo, menor que 10% ± 1%) de um polímero de poli(D, L- lactídeo) (PLA) ou poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA). Adicionalmente, quando combinado com os excipientes não poliméricos da presente invenção, PLA e PLGA com ou sem grupos de extremidade ácida produzem diferentes cinéticas de liberação. Adicionalmente, o PLGA com diferentes porcentagens de porções químicas de lactídeo e glicolídeo (por exemplo, lactídeo:glicolídeo de 50:50; 65:35; 75:25; ou 85:15) rendem diferentes cinéticas de liberação prolongada. Assim, esses excipientes fornecem para uma variedade de formulações a partir das quais a taxa de liberação de agente ativo pode ser prolongada por um espaço de tempo desejado.

As modalidades da presente invenção fornecem para uma formulação farmacêutica para injeção no olho para a liberação prolongada de um agente ativo que compreende: pelo menos um agente ativo; pelo menos um líquido excipiente, biocompatível e biodegradável, não polimérico selecionado a partir do grupo que consiste em benzoato de benzila (BB); ésteres de ácido benzoico com álcoois alifáticos de cadeia cíclica, ramificada ou reta que têm de um a vinte átomos de carbono em que um dos átomos de hidrogênio na cadeia alifática é substituído por um grupo hidroxila (por exemplo, tais álcoois como o metanol, etanol, n-propanol, i-propanol, n-butanol, i-butanol, s-butanol, t-butanol, n-pentanol, i-pentanol, neo-pentanol, n-hexanol, ciclohexanol, n-heptanol, n-octonol, n-nonanol, n-decanol e similares); dimetilsulfereto; dimetilsulfóxido; dimetilsulfona; dimetil sulfozida; mono, di e tri ésteres de Ácido de O-acetilcitrico ou ácido de O-propionilcitrico ou Ácido de O-butirilcitrico com álcoois alifáticos de cadeia ramificada e reta de C1 a C10; o mono, di e tri ésteres de ácido cítrico com álcoois alifáticos de cadeia ramificada e reta de C1 a C10; citrato de trietila (TEC) ; trietil-O-acetil citrato (TEAC); acetil citrato de trietila (ATEC); tri-n-butil citrato; acetil tri-n-butil citrato; acetil tri-n-hexil citrato; butiril tri-n-hexil citrato; ou ácido cítrico éteres; d-alfa-tocoferol; d,1-alfa-tocoferol; d-beta-tocoferol; d,1-beta-tocoferol; d-eta-tocoferol; e d,1-eta-tocoferol (incluindo acetato, hemissuccinato, nicotinato e formas de succinato-PEG éster de cada um do antecedentes); acetato de tocoferila; isômeros de tocotrienol, ésteres de tocotrienol; e pelo menos um polímero biocompatível e biodegradável poli(D, L- lactídeo) (PLA) ou poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA); em que a proporção de excipiente não polimérico: excipiente polimérico é aproximadamente 90:10 a aproximadamente 99:1, inclusivo; de modo que mediante a injeção inicial a composição mantém sua integridade monolítica em um estado líquido; e em que a composição libera o agente ativo por um período de pelo menos aproximadamente 14 dias.

As formulações das presentes modalidades podem ser incolores ou quase incolores; podem ser injetáveis através de uma agulha pequena; e podem ser usadas no olho. As formulações das presentes modalidades são particularmente vantajosas para a liberação prolongada de proteínas, tais como anticorpos, no olho.

Em uma modalidade específica, a formulação é uma formulação de dosagem de unidade de aproximadamente 5 μl a aproximadamente 100 μl que pode ser injetada na subconjuntival, espaço periocular, atrás do globo ocular na órbita, episclera, intracórnea, intrasclera, câmara anterior, segmento anterior, câmara posterior, segmento posterior, cavidade vítrea, espaço sub-retinal, segmento supracoroidal ou área da intrarretina do olho.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A Figura 1 mostra perfis de liberação in vitro de dexametasona liberada a partir de três diferentes formulações: 6% Dexametasona/95% ATEC (■) ; 6% Dexametasona/94% (5% RG752H/95% ATEC) (□) ; 6% Dexametasona/94% (5% RG502/95% ATEC) (♦) .
A Figura 2 mostra perfis de liberação in vitro de dexametasona liberada a partir de quatro diferentes formulações, em que cada uma consiste em 6% dexametasona no equilíbrio tanto de ATEC (■) ; 5% R202H/95% ATEC (♦); 5% R203H/95% ATEC (●); ou 5% R203S/95% ATEC (▲).
A Figura 3 apresenta perfis de liberação in vitro de dexametasona liberada a partir de quatro diferentes formulações, em que cada uma consiste em 6% dexametasona no equilíbrio tanto de ATEC (■) ; 5% RG502H/ATEC (□) ; 5% RG502/ATEC (♦); ou 5% RG505/ATEC (▲).
A Figura 4 descreve perfis de liberação in vitro de dexametasona liberada a partir de quatro diferentes formulações, em que cada uma consiste em 6% dexametasona no equilíbrio tanto de ATEC (■) ; 1,25% PLGA (85:15 lactídeo:glicolídeo)/ATEC (♦); 5% RG502H (50:50 lactídeo:glicolídeo)/ATEC (□) ; ou 5% RG756S (75:25 lactídeo:glicolídeo)/ATEC (●).
A Figura 5 mostra perfis de liberação in vitro de gamaglobulina bovina (BGG) liberada a partir de uma formulação de 1% BGG em 5% RG502H/ATEC de PLGA em uma ou outra temperatura ambiente (□) ou 37 °C (Δ). Em que N=10.
A Figura 6 mostra perfis de liberação in vitro de BGG liberada a partir de formulações tanto de 1% BGG em 5% RG502H/ATEC de PLGA (Δ) quanto 1% BGG em 5% RG502/ATEC de PLGA (C) , em que ambas as formulações são mantidas a 37°C.
A Figura 7 mostra o perfil de liberação in vitro de 37 °C de BGG liberada a partir de uma formulação de 1% BGG em excipiente que consiste em 5% RG502 de PLGA em ATEC/BB/DMSO (50:38:12).
A Figura 8 compara perfis de liberação in vitro de BGG liberada a partir de uma formulação de 1% BGG em 5% RG502 de PLGA em ATEC colocada em condições de dissipador infinito tanto imediatamente depois da preparação (□) quanto depois do armazenamento por aproximadamente 24 horas a 4 °C (Δ).
A Figura 9 mostra perfis de liberação in vitro de BGG liberada a 37 °C a partir de formulações de 1% BGG e também 5% RG502/TEC (□) ; 5% RG502H/TEC (Δ) ; 5% RG653H/TEC (◊); ou 5% RG752H/TEC (o).
A Figura 10 compara perfis de liberação in vitro de BGG (% média, eixo geométrico y) liberada a partir de uma formulação de 3% BGG em um excipiente que consiste em 1,7% RG502 de PLGA in BB: DMSO 75:25 (♦); ou 5% RG502 de PLGA em BB:DMSO 75:25 (■). O eixo geométrico x, dias; N=4.
A Figura 11 mostra um perfil de liberação in vitro de BGG liberada (% média, eixo geométrico y) a partir de uma formulação de 1,5% BGG em 5% RG502 de PLGA em ATEC/BB/DMSO (50:38:12). O eixo geométrico x, dias.
A Figura 12 compara perfis de liberação in vitro de BGG (% média, eixo geométrico y) liberada a partir de uma alíquota de 10 μl de uma formulação que consiste em 1% BGG em 7,5% RG502 de PLGA em ATEC (♦); 5% RG502 de PLGA em ATEC (■) ; ou 7,1% RG502 de PLGA em 87,5% ATEC e 4,4% DMSO (●). As formulações foram armazenadas em temperatura ambiente por 8 dias antes de ser colocada em condições de liberação de dissipador infinito. O eixo geométrico x, dias.
A Figura 13 apresenta vários perfis de liberação in vitro de BGG (% média, eixo geométrico y) liberada a partir de um alíquota de 10 μl de uma formulação que consiste em 1% BGG em 1,25% PLGA (85:15 lactídeo:glicolídeo) (balance ATEC em cada formulação) (□) ; 5% PLGA RG653H (●); 5% PLGA RG752H (◊); 5% PLGA RG756S (o); 10% RG502H de PLGA (■) ; 5% RG502H de PLGA; ou 5% RG502 de PLGA. O eixo geométrico x, dias.
A Figura 14 compara perfis de liberação de BGG (% média, eixo geométrico y) liberada a partir de duas alíquotas de tamanho diferente de formulações que consistem em 1% BGG ou 3% BGG em um excipiente que consiste em 5% RG502 de PLGA ATEC:EA 98:2. As alíquotas foram 10 μl 1% BGG (♦); 50 μl 1% BGG (■) ; 10 μl 3% BGG (▲); 50 μl 3% BGG (o). N=3; eixo geométrico x, dias.
A Figura 15 mostra liberação in vivo de BGG a partir de formulações que consiste em 1% ou 3% BGG em um excipiente que consiste em 5% PLGA R502 em ATEC. Uma dose unitária de 50 μl foi injetada no segmento posterior de olhos de coelho.

DESCRIÇÃO DETALHADA

Deve ser compreendido que essa invenção não é limitada à metodologia particular, protocolos, reagentes, etc., descritos no presente documento e como tal, podem variar. A terminologia usada no presente documento é para o propósito de descrever modalidades particulares somente e não é destinada a limitar o escopo da presente invenção, o qual é definido somente pelas reivindicações.

Conforme usado no presente documento e nas reivindicações, as formas singulares incluem a referência plural e vice versa a menos que o contexto indique claramente de outra forma. A não ser nos exemplos operacionais ou de outra forma indicados, todos os números que expressam quantidades de ingredientes ou condições de reação usados no presente documento devem ser compreendidos como modificados em todos os exemplos pelo termo ''aproximadamente", o qual a menos que de outra forma indicado, em relação a valores de porcentagem, significa ± 1% .

Todas as patentes e outras publicações identificadas são expressamente incorporadas no presente documento a titulo de referência para o propósito de descrição e revelação, por exemplo, as metodologias descritas em tais publicações que devem ser usadas em conexão com a presente invenção. Essas publicações são fornecidas somente para sua revelação ante da data de depósito do presente pedido. Nada nesse aspecto deve ser interpretado como uma admissão em que os inventores não são intitulados para antecipar tal revelação em virtude da invenção anterior ou por qualquer outra razão. Todas as declarações até a presente data ou representação como até o conteúdo desses documentos tem como base a informação disponível para os depositantes e não constituem qualquer admissão como a correção das datas ou conteúdos desses documentos.

A menos que definido de outra forma, todos os termos científicos e técnicos usados no presente documento têm o mesmo significado que aqueles frequentemente entendidos por uma pessoa de habilidade comum na técnica a qual essa invenção pertence. Ainda que quaisquer métodos, dispositivos e materiais conhecidos podem ser usados na prática ou teste da invenção, os métodos, dispositivos e materiais, nesse aspecto, são descritos no presente documento.

A presente invenção fornece formulações de liberação prolongada nas quais a cinética de liberação de agente ativo pode ser controlada com o uso de formulações relativamente simples que compreendem um excipiente (por exemplo, um éster de citrato, um benzoato de benzila, dimetilsulfona) e uma pequena quantidade (por exemplo, menor que aproximadamente 10%) de um polímero de poli(D, L-lactídeo) (PLA) ou poli(D,L-lactideo-co-glicolídeo) (PLGA). Adicionalmente, PLA e PLGA com e/ou sem grupos de extremidade ácida produzem diferentes cinéticas de liberação. Adicionalmente, PLGA com diferentes porcentagens de porções químicas de lactídeo e glicolídeo (por exemplo, lactídeo:glicolídeo de 50:50; 65:35; 75:25; ou 85:15) rendem diferentes cinéticas de liberação prolongada. Assim, esses excipientes fornecem para o projeto de uma variedade de formulações a partir da qual a taxa de liberação de agente ativo pode ser prolongada pelo espaço de tempo desejado.

Os excipientes não poliméricos das presentes modalidades incluem benzoato de benzila; ésteres de ácido benzoico com álcoois alifáticos de cadeia cíclica, ramificada ou reta que têm de um a vinte átomos de carbono em que um dos átomos de hidrogênio na cadeia alifática é substituído por um grupo hidroxila (por exemplo, tais álcoois como metanol, etanol, n-propanol, i-propanol, n-butanol, i-butanol, s-butanol, t-butanol, n-pentanol, i-pentanol, neo-pentanol, n-hexanol, ciclohexanol, n-heptanol, n-octonol, n-nonanol, n-decanol e similares); dimetilsulfóxido, dimetilsulfona; dimetil sulfozida; mono, di e tri ésteres de ácido de O-acetilcítrico ou ácido de O-propionilcítrico ou ácido de O-butirilcítrico com C1 a C10 álcoois alifáticos de cadeia ramificada e reta; o mono, di e tri ésteres de ácido cítrico com álcoois alifáticos de cadeia ramificada e reta de C1 a C10; citrato de trietila; acetil citrato de trietila; tri-n-butil citrato; acetil tri-n-butil citrato; acetil tri-n-hexil citrato; butiril tri-n-hexil citrato; e/ou ácido cítrico éteres; d-alfa-tocoferol; d, l-alfa-tocoferol; d-beta-tocoferol; d,l-beta-tocoferol; d-eta-tocoferol; e d,l-eta-tocoferol (incluindo formas de acetato, hemissuccinato, nicotinato e succinato-PEG éster de cada um dos antecedentes); acetato de tocoferila; isômeros de tocotrienol e seus ésteres. Vide, por exemplo, patentes n2 U.S. 7.906.136, № U.S. 7.560.120 e № U.S. 6.960.346; publicação de patente U.S. 2011/0111006. Os excipientes não poliméricos das presentes modalidades biocompatíveis pelo fato de que as mesmas são não tóxicas e não irritante, são fisicamente e quimicamente estáveis e não comprometem a estabilidade de um agente ativo com os quais os mesmos são formulados.

Poli(ácido glicólico) (PGA), Poli(ácido láctico) (PLA) e seus copolímeros foram pesquisados por uma grande faixa de aplicações. Esses poliésteres alifáticos biodegradáveis comprovaram propriedades de biocompatibilidade e biodegradação versátil que dependem de seu peso molecular e composições químicas: PLA/PGA são poliésteres biodegradáveis que degradam no corpo através de hidrólise simples da estrutura principal de éster em relação aos compostos não tóxicos e não nocivos. Os produtos de degradação in vivo são excretados pelos rins ou eliminados como dióxido de carbono e água através caminhos bioquímicos bem conhecidos. Tipicamente, o agente ativo foi aprisionado no sólido poli(D,L-lactideo-co-glicolideo)-com base em matrizes (com base em PLGA) na qual a liberação do agente é alcançada por bioerosão do polímero seguida por exposição de previamente agente aprisionado. Vide, por exemplo, patentes № U.S. 6.369.116; № U.S. 6.699.493; № U.S. 6.726.918; № U.S. 7.048.946.

Alguns implantes com base em PLGA foram feitos dissolvendo-se polímero em um solvente aprótico polar biocompatível que é miscível para dispersivo em fluido corporal de modo que, mediante administração, o solvente dissipa para produzir um implante sólido (implantes de formação in situ) . A fim de que isso ocorra, o componente de polímero está presente em ≥30 % em peso e o solvente está presente em ≤70 % em peso. Vide patente № U.S. 6.773.714.

Em contraste a outros sistemas de entrega de fármaco com base em polímero, as presentes modalidades fornecem por formulações nas quais o estado líquido do polímero é mantido e a integridade monolítica da dose unitária é mantida seguindo a injeção. Mais especificamente, quando aplicado com seringa de forma cuidadosa (por exemplo, no olho), as formulações das presentes modalidades mantém integridade monolítica em um estado líquido, no qual os excipientes biocompatível e biodegradável são mantidos e dissolvem gradualmente ao longo do tempo conforme o agente ativo é entregue. As modalidades da presente invenção são formulações líquidas injetáveis nas quais o polímero está presente ≤10 % em peso (± 1%) da formulação. Por exemplo, o polímero: excipiente não-polímero pode ser preparado em uma proporção de excipiente polímero:polímero(s) não-excipiente, isto é, pode ser 1:99 a 10:90 (% em peso), inclusive; por exemplo, 5:95 PLGA:TEC (5 % em peso PLGA e 95 % em peso éster de citrato). A porção excipiente da formulação pode ser preparada e então misturada com o agente ativo. Por exemplo, um 5%PLGA em benzoato de benzila (BB) é preparado (por exemplo, através de agitação) e então misturado com imunoglobulina em 2 % em peso (isto é, 2 mg imunoglobulina e 98 mg PLGA:benzoato de benzila).

As formulações da presente invenção são injetáveis através de uma agulha de seringa de calibre relativamente pequeno, por exemplo, uma agulha de calibre 25, 27, 28, ou 30, ou menor. A dose unitária da formulação para administração no olho é minúscula, geralmente aproximadamente 5 μl a aproximadamente 100 μl, inclusive, ainda um dose unitária simples entrega um concentração terapêutica prolongada de agente ativo por pelo menos 14 dias. As formulações da presente invenção podem ser incolor ou quase incolor, o que pode vantajoso para usar no olho.

As formulações da presente invenção são também vantajosas para usar no olho porque, ainda que liquidas, as mesmas mantém integridade monolítica ao serem colocadas no olho, o que quer dizer que as mesmas formam uma forma contígua e não desintegra ou dispersa em partículas menores ou precipitantes no olho. Uma vez administrado no olho, o médico pode observar a localização e tamanho da formulação no olho, ainda que o sujeito não esteja ciente da sua presença (isto é, a dose de formulação não obstrui a visão). Tipicamente, enquanto a formulação ainda está visível para o médico, a mesma ainda está entregando agente ativo. Essa caracterização física é também útil na preparação de formulações de acordo com as modalidades no presente documento, porque uma mistura particular de excipientes pode facilmente ser preparada e colocada em uma solução salina ou outro ambiente de fluido que imita as condições no olho e observada para manutenção da integridade monolítica.

Com relação à excipiente de polímeros que podem ser usados em conjunto aos excipientes não poliméricos das presentes modalidades, o PLGA é um polímero que, ao ser misturado com excipientes particulares conforme descrito no presente documento, é apropriado para formulações de liberação prolongada. O PLGA pode ter quantidades diferentes de porções químicas de lactídeo e glicolídeo (por exemplo, lactídeo:glicolídeo de 50:50; 65:35; 75:25; ou 85:15), que afeta as cinéticas de liberação prolongada da formulação. Por exemplo, PLGA 50/50 é um polímero com um molar composição de 50:50 de D,L-ácido láctico e glicólico na Cadeia de PLGA. Vide, por exemplo, Patente no U.S. 4.728.721. Existem geralmente três tipos de funções de extremidade de grupos PLGA: (i) grupo de ácido carboxílico livre, (ii) grupo terminado em éster e (iii) grupo de alquil éster. Os polímeros "capeados" com éster e grupos de alquil éster têm polaridade diferente e tipicamente mostram tempo de vida de degradação mais longo que os análogos carboxílicos. Adicionalmente, quando usados como uma matriz sólida (por exemplo, implantes ou nano partículas) polímeros PLGA que têm alto peso molecular tipicamente libram o agente mais lentamente que PLGAs de baixo peso molecular. Vide Gasper et al., 52 J. Control Release 53 (1998).

De acordo com as presentes modalidades, vários polímeros PLA, PGA e PLGA podem ser misturados em excipientes líquidos como uma pequena porcentagem (tipicamente, aproximadamente 10% ou menos) do volume da porção excipiente de uma formulação farmacêutica e estende o perfil de liberação prolongada de agente comparado à liberação a partir do excipiente líquido sozinho. Ainda que o uso de tais polímeros em formulação de liberação prolongada sólida foi relatado (por exemplo, implantes de polímeros sólidos, microesferas ou nanoesferas), que a adição de uma quantidade relativamente pequena de polímero líquido a um excipiente líquido de liberação prolongada não polimérica deve modular o perfil de liberação prolongada do excipiente não polimérico é inesperado. Assim, o polímero pode ser usado nas formulações da presente invenção em aproximadamente 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% ou aproximadamente 10% (p/p), ou qualquer fração do mesmo, inclusive.

Sem estar limitado pela teoria, em contraste às formulações e composições de liberação prolongada de PLGA de conteúdo nas quais o agente ativo é aprisionado nos poros de uma matriz sólida PLGA, nas presentes modalidades o polímero permanece líquido e atua em conjunto com o líquido, excipiente não polimérico, em associação ao excipiente líquido e agente ativo em um manta de flutuação frouxa que desassocia conforme os resíduos de lactídeo deixam o polímero.

As formulações descritas no presente documento fornecem para a liberação prolongada de agentes tais como proteínas terapêuticas por pelo menos 14 dias. É compreendido por aqueles de habilidade na técnica para ser distinguido do efeito terapêutico, que pode continuar por um período maior (ou período mais curto) que o período sobre qual a proteína terapêutica é liberada a partir da formulação particular. A liberação pode ser prolongada por pelo menos 14 dias ou mais, tal como 21 dias, 28 dias, 35 dias, 42 dias, 49 dias, etc., incluindo até 150 dias ou mais. Nesse aspecto, os dias ou semanas de liberação prolongada podem ser interpretadas e extrapoladas a partir da Figuras por uma pessoa de habilidade comum na técnica e são incorporados na presente descrição escrita.

Os agente ativos que podem ser usados nas presentes modalidades incluem, mas não são limitados a, agentes antiglaucoma, analgésicos, anestésicos, narcóticos, esteroides angiostáticos, esteroides anti-inflamatório, inibidores de angiogênese, anti-inflamatórios não esteroidal, agentes anti-infecciosos, fungicidas, antimaláricos, agentes antituberculose, antivirais, agonistas alfa androgenergico, agentes bloqueadores beta-andrenérgico, inibidores de anidrase carbônica, estabilizadores mastócito, mióticos, prostaglandinas, anti-histamínicos, agentes antimicrotúbulo, agentes antineoplástico, antiapoptóticos, inibidores de aldose redutase, anti-hipertensivos, antioxidantes, antagonistas do hormônio do crescimento, agentes de vitrectomia, antagonistas de receptor de adenosina, inibidor de delaminação de adenosina, antagonistas de glicosilação, peptideos antienvelhecimento, inibidores de topoisomerase, antimetabólitos, agentes de alquilação, antiandrogênios, antioestogêneos, inibidores de ativação oncogênia, inibidores de telomerase, anticorpos ou porções dos mesmos, oligonucleotideos antissentido, proteínas de fusão, hormônio luteinizante que liberam agonistas de hormônios, agonistas de hormônio que libera gonadotropina, inibidores de tirosina quinase, inibidores de fator de crescimento epidérmico, inibidores de ribonucleotídeo redutase, citotoxinas, IL2 terapêuticas, antagonistas neurotensina, ligantes de sigma periférica, antagonistas de endotelina ETA/receptor, anti-hiperglicêmicos, enzimas de modificação anticromatina, agentes gerenciamento de obesidade, terapêuticos de anemia, terapêuticos de emese, terapêuticos de neutropenia, terapêuticos induzidos para tumor de hipercalcemia, anticoagulantes sanguíneos, antiproliferativos, agentes imunossupressores, agentes de reparação tecidual, agentes psicoterapêuticos, Aptâmeros (Eyetech), Lucentis (Genentech), inibidores de RNA, insulina, insulina humana, GLP-1 e Byetta (exenatida, Amylin).

As formulações da presente invenção são particularmente vantajosas para a liberação prolongada de proteínas, em particular, ligantes proteicos tais como anticorpos. Os anticorpos, conforme usado no presente documento indica moléculas de imunoglobulina intacta bem como porções, fragmentos, peptídeos, análogas ou derivativas das mesmas tais como, por exemplo, Fab, Fab', E(ab')2, Fv, regiões de CDR, parátopos ou qualquer porção ou sequência de peptídeo de um anticorpo que é capaz de ligar um antígeno ou epítopo e inclui anticorpos monovalentes, anticorpos divalentes, anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, anticorpos quiméricos, anticorpos completamente humanizados, anticorpos recombinantes e anticorpos monoclonais produzidos por animais transgênicos. Um anticorpo é dito "com capacidade de ligar" uma molécula se o mesmo tiver capacidade de reagir especificamente com a molécula para pela mesma ligar a molécula ao anticorpo.

Os distúrbios oculares que podem ser tratados com o uso de formulações de acordo com as presentes modalidades incluem retinopatias diabéticas, retinopatias proliferativas, descolamento de retina, retinopatias tóxicas, doenças vasculares da retina, degenerações da retina, anomalias vasculares, degeneração macular relacionada à idade, doenças infecciosas, doenças inflamatórias, isquemia ocular, distúrbios relacionados à gravidez, tumores da retina, tumores de coroide, distúrbios da coroide, distúrbios vitrios, trauma, complicações de catarata, olho seco, neuropatias ópticas inflamatórias e outros distúrbios adquiridos.

Um "distúrbio" é qualquer condição que pode se beneficiar de tratamento com, por exemplo, um agente de liberação prolongada. Isso inclui distúrbios ou doenças agudos e crônicos incluindo aquelas condições patológicas que predispõe o sujeito ao distúrbio em questão.

Por exemplo, os distúrbios relacionados ao olho nos quais o sistema vascular do olho está danificado ou regulado de forma insuficiente. A neovascularização é associada à degeneração macular relacionada à idade exsudativa, retinopatia diabética, neovascularização da córnea, neovascularização da coroide, glaucoma neovascular, inflamação da íris, Sindrome de Von Hippel-Lindau, retinopatia de prematuridade, pterigio, histoplasmose, neovascularização da íris, edema macular, neovascularização associada ao glaucoma e similares. Os distúrbios associados tanto a componentes atróficos quanto neovascular, tal como degeneração macular relacionada à idade e retinopatia diabética, são particularmente difíceis de tratar devido à emergência de um ampla variedade de complicações. As complicações atróficas incluem, por exemplo, a formação de depósitos laminares basais e drusa, irregularidade de pigmentação da retina e acúmulo de grânulos de lipofuscina.

As formulações da presente invenção podem ser usados para o tratamento profilático e terapêutico do olho(s) de um sujeito. "Terapêutico" se refere à melhoria de o distúrbio relacionado ao olho, em si e a proteção, no todo ou em parte, ainda contra doença relacionada ao olho, tal como neovascularização ocular ou degeneração macular relacionada à idade. "Profilático" se refere à proteção, no todo ou em parte, contra distúrbios relacionados ao olho, tais como neovascularização ocular ou degeneração macular relacionada à idade. Uma pessoa de habilidade comum na técnica irá apreciar que qualquer grau de proteção de, ou melhoria de, um distúrbio relacionado ao olho é beneficiai a um sujeito. A invenção é particularmente vantajosa pelo fato de que um agente terapêutico pode ser diretamente aplicado nas áreas afetadas do olho sem os efeitos colaterais nocivos de terapias sistêmicas.

As proteínas terapêuticas que podem ser formuladas, de acordo com as presentes modalidades, incluem citocinas, inibidores de angiogênese, agentes neurotróficos, esteroides, enzimas (por exemplo, hialuronidase) e anticorpos.

Inibidores de angiogênese exemplificativos incluem aflibercept (uma fusão proteína de chave que liga domínios de VEGFR-1 e -2 humano combinados com um fragmento de IgG Fc humano), fator derivado do epitélio pigmentar (PEDF), anticorpo anti-VEGF ou porção do mesmo (tal como ranibizumabe ou bevacizumabe) angiostatina, vasculostatina, endostatina, fator 4 plaquetário, heparinase, interferons, inibidor de tecido de metalproteinase 3 e inibidores de tirosina quinase e similares. Tais fatores podem impedir o crescimento de novos vasos sanguíneos, promover maturação de vaso, inibir permeabilidade de vasos sanguíneos, inibir a migração de células endoteliais e similares. Vide, por exemplo, WO 02/22176.

Outra classe de proteínas terapêuticas são os fatores neurotróficos, que incluem citocinas neuropoiéticas, neurotrofinas e os fatores de crescimento de fibroblasto. O fator neurotrófico ciliar (CNTF) é um exemplo de citocina neuropoiética, que promove a sobrevivência de neurônios de gânglio ciliares e sustenta certos neurônios que são responsivos a NGF. As neurotrofinas incluem, por exemplo, fator neurotrófico derivado do cérebro e fator de crescimento nervoso, talvez o melhor fator neurotrófico caracterizado. Outros fatores neurotróficos incluem, por exemplo, fator de crescimento de transformação, fator neurotrófico derivado linhagem de células gliais, neurotrofina 3, neurotrofina 4/5 e interleucina l-β. Fatores neuronotroficos alcançam sobrevivência de neurônios e podem reverter a degradação de neurônios. O PEDF é uma proteína exemplificativa que exibe atividades neurotróficas e antiangiogenicas.

Adicionalmente relacionado a anticorpos, terapias imunossupressoras com base em anticorpo incluem anticorpos anti-IL-2R (por exemplo, basiliximabe ou daclizumabe) e anticorpos anti-CD52 (por exemplo, alemtuzumabe), abatacept e o belatacept maturado por afinidade (construções com base em anticorpo que combina a parte extracelular do receptor CTLA4 imunomodulador com uma região IgG Fc humano), globulina antitimócito, muronomab (anti-CD3 anticorpo) ou infliximabe (anti-TNF-a) . Vide Thiel et al., 23 Eye 1962 (2009). Adicionalmente, lerdelimumabe (anti-TGFb2) anticorpo monoclonal humano foi usado em sujeitos que passam por cirurgia por glaucoma e catarata.

Uma pessoa de habilidade comum na técnica irá apreciar que proteína terapêutica particular pode ser modificada ou truncada (por exemplo, através abordagens recombinante ou de fragmentação) e retém atividade biológica. Como tal, as porções ativas de várias proteínas (por exemplo, aquelas porções de proteínas antiangiogenicas que têm atividade biológica suficiente para inibir angiogênese) são também apropriadas para usar nas presentes formulações.

As citocinas também pode ser formuladas de acordo com as modalidades no presente documento. Uma "citocina" se refere a qualquer dentre um grupo diverso de proteínas e peptídeos solúveis que atuam como reguladores humorosos em nano- para concentrações picomolares e que, sob condições patológicas ou normais, modula as atividades funcionais de células individuais e tecidos. Essas proteínas também mediam interações entre as células diretamente e regulam processos que acontecem no ambiente extracelular. Os exemplos de citocinas incluem, mas não são limitados a interleucinas IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18; granulócito-macrófago fator que simula colônia (GM-CSF); fator que simula colônia de granulócito (G-CSF); interferons que inclui interferon-alfa (IFN-a), interferon-beta (IFN-β) e interferon-gama (IFN-γ); fator de necrose tumoral (TNF), fator de crescimento de transformação-beta (TGF- β); ligante FLT-3; e ligante CD40.

Em uma modalidade da presente invenção, o agente ativo é um anticorpo monoclonal. Em uma formulação exemplificativa específica, aproximadamente 2% (em peso) anticorpo foi suspenso em uma solução de aproximadamente 5% PLGA (lactídeo:glicolídeo 50:50, MW faixa de 7.000 a 17.000, grupo de extremidade de alquil éster) (Evonik Rohm GmbH, Darmstadt, Alemanha; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), em acetil citrato de trietila (ATEC). A liberação de anticorpo a partir dessa formulação foi prolongada por pelo menos 14 dias em níveis terapêuticos e bioativos. Em outra modalidade, o agente ativo é um anticorpo monoclonal suspenso em uma formulação que consiste em aproximadamente 5% PLGA (lactídeo:glicolídeo 65:35, MW abrange de 24.000 a 38.000, grupo de extremidade ácido carboxílico livre) em ATEC. A liberação de anticorpo foi prolongada em um baixo nível, que exibe cinéticas perto da ordem de zero, por pelo menos 14 dias e especificidade de ligação de antígeno mantido em anticorpo. Ainda em outra modalidade, o agente ativo é um anticorpo monoclonal suspenso em uma formulação que consiste em aproximadamente 6% PLGA (lactideo:glicolideo 75:25, MW faixa de 4.000 a 15.000, grupo de extremidade ácido carboxilico livre) em ATEC. A liberação de anticorpo foi prolongada em um baixo nível por pelo menos 14 dias e a especificidade de ligação de antígeno mantido em anticorpo por todo esse período de tempo.

Em outra modalidade, anticorpo IgG monoclonal recombinante foi formulado em 5% PLGA em ATEC ou, como controle, PBS. Aos coelhos foram administrados doses de 50 μl que contém 1 mg IgG, por injeção intravitreo bilateral. Os coelhos foram submetidos à eutanásia de forma humana em 1, 7, 14 e 28 dias após a administração e concentrações de teste IgG em humor vítreo (frações de grânulo e sobrenadantes), retina, coroide e plasma foram comparados. Pontos de tempo foram testados em duplicata ou triplicata e medidos. No plasma, a concentração de IgG do formulação PBS subiu rapidamente até que o mesmo apontou em dia 7; considerando que a concentração de IgG a partir da formulação PLGA/ATEC permaneceu baixa e nivelada pelo dia 28. No vítreo, a concentração de IgG da formulação PBS diminuiu ao longo do tempo em todos os tecidos; considerando que a concentração de IgG a partir da formulação PLGA/ATEC permaneceu constante na fração de grânulo e aumentou constantemente na fração sobrenadante; a concentração de IgG a partir da formulação PLGA/ATEC foi maior em ambas as frações de vítreo no dia 28 comparado com a concentração de IgG a partir da formulação PBS. Na retina e na coroide, a concentração de IgG da formulação PBS apontada inicialmente, diminuiu então ao longo do tempo. Em contraste a isso, a concentração de IgG da formulação PLGA/ATEC aumentou constantemente ao longo do tempo e foi mais alta no dia 28 tanto na retina quanto na coroide comparada com a formulação PBS. O IgG foi entregue aos tecidos do olho por pelo menos 14 dias (isto é, 28 dias) .

Os termos "tratar", "tratamento", "que trata" ou "melhoria" se referem a tratamentos terapêuticos, em que o objetivo é reverter, aliviar, melhorar, inibir, diminuir ou parar o avanço ou severidade de uma condição associada a, uma doença ou distúrbio. O termo "que trata" inclui reduzir ou aliviar pelo menos um efeito adverso ou sintoma de uma condição, doença ou distúrbio associado a um distúrbio do olho, tal como, edema ocular. O tratamento é geralmente "efetivo" se um ou mais sintomas ou marcadores clínicos são reduzidos. Alternativamente, o tratamento é "efetivo" se o avanço de uma doença for reduzido ou parado. Isto é, o termo "tratamento" não inclui só a melhora dos de sintomas ou marcadores, mas também uma pausa de pelo menos desaceleração do progresso ou piora de sintomas que pode ser esperado em ausência de tratamento. Os resultados clínicos desejados ou benéficos incluem, mas não são limitados a, alívio de um ou mais sintoma(s), definhamento da extensão de doença, estado estabilizado (isto é, que não piora) da doença, retardamento ou diminuição de avanço da doença, melhoria ou paliação do estado da doença e remissão (se parcial ou total), se detectável ou indetectável. O termo "tratamento" de uma doença também inclui fornecer alívio dos sintomas ou efeitos colaterais da doença (incluindo tratamento paliativo).

Em geral, o objetivo do tratamento é reduzir o tamanho de um tumor ou o nível de um antigeno ou inibir a atividade de um alvo, conforme medido com o uso de um ensaio in vitro, celular ou in vivo apropriado. Em particular, diminuir a atividade biológica de um alvo, antigeno ou tumor, conforme medido com o uso de um ensaio in vitro, celular ou in vivo apropriado (que normalmente irá depender do alvo envolvido), por pelo menos 5%, 10%, 25%, 50%, 60%, 70%, 80%, ou 90% ou 100%, inclusive, conforme comparado a um controle não tratado equivalente. Uma diminuição se refere a uma diminuição estatisticamente significativa. Para que não haja dúvidas, uma diminuição será pelo menos 5% relativa a uma referência, tal como pelo menos 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou mais e incluindo até 100%, inclusive. Reduzir ou inibir pode se referir a, por exemplo, os sintomas do distúrbio que é tratado, tal como a redução na pressão ocular ou diminuição de edema da retina.

Uma "quantidade efetiva" conforme usado no presente documento é qualquer quantidade que seja suficiente para promover a ocorrência de uma condição ou resultado desejados ou para reduzir ou inibir a ocorrência de uma condição ou resultado não desejados. Em alguns exemplos uma condição ou resultado desejados é um ideal que representa um fim de um espectro de resultados ou condições possíveis. Em tais exemplos, uma quantidade efetiva é qualquer quantidade associada a um resultado ou condição que é mais próximo do ideal desejado do que pode ser alcançado ou observado sem a quantidade efetiva. Assim, uma quantidade efetiva promove a ocorrência de uma condição ou resultado desejado, porém o mesmo não precisa alcançar um ponto final máximo.

Adicionalmente os agentes e terapias podem ser combinados à administração das formulações das presentes modalidades. Assim, ainda que as formulações e métodos da invenção em certos exemplos pode ser útil para substituir procedimentos cirúrgicos ou terapias de fármacos existentes, a presente invenção é também útil em aprimorar a eficácia de terapias existentes para tratar tais condições. Consequentemente, a terapia de combinação pode ser usada para tratar os sujeitos que estão experimentando ou que irão experimentar um tratamento para, inter alia, doença ou tumor/câncer de olho. Por exemplo, os agentes da presente invenção podem ser administrados em conjunção a agentes microbicidas ou agentes antiproliferantes. Os agentes da invenção também podem ser administrados em conjunção a outras imunoterapias, tais como com antigenos, adjuvantes, imunomoduladores ou imunoterapia passiva com anticorpos. Em algumas modalidades, o método de acordo com esse aspecto da invenção envolve ainda administrar ao sujeito um medicamento anticâncer. Os agentes da invenção também podem ser administrados em conjunção a tratamentos sem consumo de fármaco, tais como cirurgia, radioterapia ou quimioterapia. Alternativamente, e conforme indicado pela condição médica, o tratamento com agentes terapêuticos de liberação prolongada conforme descrito no presente documento envolve ainda administrar ao sujeito um medicamento antibacteriano, antiviral, microbicida, fungicida, antiparasitário ou outro anti-infecção. A outra terapia pode ser administrada antes, concorrente com, ou depois do tratamento com os agentes da invenção. Também podem ser um retardamento de várias horas, dias e em alguns exemplos semanas entra a administração dos diferentes tratamentos, de modo que os agentes da invenção possam ser administrados antes ou depois do outro tratamento.

Conforme será compreendido por aqueles de habilidade comum na técnica, as doses apropriadas de agentes formuladas conforme descrito no presente documento, com ou sem agentes adicionais, será geralmente em torno daquelas já empregadas em terapias clinicas, por exemplo, em que os quimioterápicos são administrados sozinhos ou em combinação com outros quimioterápicos. A variação na dosagem ocorrerá de forma similar dependendo da condição que é tratada. O médico que administra o tratamento terá a capacidade para determinar a dose apropriada para o sujeito individual.

As formulações farmacêuticas podem ser apresentadas de forma conveniente na forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer um dentre os métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Todos os métodos incluem a etapa de trazer o agente ativo, por exemplo, a proteína terapêutica, em associação ao excipientes da presente invenção. Em geral, as formulações são preparadas trazendo-se uniformemente e imediatamente o agente em associação a um excipiente líquido que contém polímero ≤10%. As formulações para injeção podem ser apresentadas na forma de dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou in recipientes de múltiplas doses

A invenção é descrita ainda nos exemplos não limitativos a seguir.

EXEMPLOS Exemplo 1. As formulações que compreendem dexametasona em ATEC com ou sem PLGA

Em geral, as formulações de dexametasona em acetil citrato de trietila (ATEC) foram preparadas conforme a seguir. Poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA) ou poli(D,L-lactídeo) (PLA) (Evonik Rohm GmbH, Darmstadt, Alemanha; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) e ATEC foram pesados e colocados em um frasco de cintilação de 20 ml. O tamanho de lote típico foi peso total de 10 gramas, por exemplo, para uma formulação de 5% RG502H (lactídeo:glicolídeo 50:50, MW faixa de 7.000 a 17.000, grupo de extremidade ácido carboxílico livre) em ATEC: 500 mg de RG502H e 9500 mg de ATEC foram pesados, misturados e agitados no frasco de cintilação com uma barra de agitação magnética. A mistura foi agitada em temperatura ambiente até total dissolução do polímero. Isso geralmente leva várias horas até durante a noite agitando, dependendo do polímero usado. Uma vez gue o polímero/ATEC tenha sido misturado a um solução incolor e limpa, a guantidade desejada de solução de dexametasona e o polímero/ATEC foram pesados, por exemplo, para fabricar um 6% em peso dexametasona em 5% RG502H/ATEC, 120 mg de dexametasona e 1880 mg de 5% RG502H/ATEC foram pesados, para fazer um total de 2 g da formulação.

Para preparação de amostra, a suspenção de dexametasona/polímero/ATEC foi movimentado em vórtice de forma vigorosa por 5 a 10 seg. Uma alíquota da mistura de formulação foi removida com uma pipeta mecânica e carregada em um seringa de insulina de polipropileno BD com um agulha de calibre 28 (VWR Produto #309300). A seringa que contém a formulação foi pesada (peso antes da injeção). Uma alíquota de 10 μl da formulação foi injetada em um frasco de cintilação de 20 ml que contém 10 ml de 0,9% de solução salina ("meio de liberação"), que forma um formato monolítico (por exemplo, uma esfera ou "bola") da formulação no fundo do frasco. Qualquer solução salina em excesso na seringa foi enxugada e a seringa pesada novamente (peso após a injeção) . A quantidade real de formulação injetada pode ser calculada subtraindo-se o peso após a injeção do peso antes da injeção.

As amostras foram colocadas em uma estufa a 37 °C e em cada dia de amostragem, 5 ml do meio de liberação foi removido para análise e substituído por 5 ml de meio de liberação novo para manter um volume total de 10 ml em todos os momentos (mantendo um "dissipador infinito"). Os dias de amostragem foram tipicamente dia 1, dia 3 (ou dia 4), dia 7, dia 14 e semanalmente dai por diante até que toda dexametasona tenha sido liberada no meio a partir da formulação "bola."

Todas as amostras foram analisadas por cromatografia liquida de alto desempenho (HPLC) com as condições a seguir:
Coluna: Águas Nova-Pak, C18, 4 um, 150 mm x 3.9 mm
Fase móvel: H2O (H3PO4), pH 2.5 - acetonitrila, condição gradiente a partir de (60:40) a (10:90) em 9 min então retornando de volta para (60:40)
Taxa de fluxo: 0,5 ml/min
Detector: 240 nm
Volume de amostra: 10 μl
Concentrações padrões: 30 μg/ml, 60 μg/ml e 120 μg/ml

Três formulações foram comparadas, cada uma tendo 6% dexametasona em ATEC (6% Dexametasona/ATEC) sem ou com 5% de RG752H (Poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo), lactídeo:glicolídeo 75:25, MW faixa de 4.000 a 15.000, grupo de extremidade ácido carboxilico livre) (6% Dexametasona/5% RG752H/ATEC); ou RG502 de PLGA (Poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo), lactídeo:glicolídeo 50:50, MW range 7.000-17.000, grupo de extremidade de alquil éster) (6% Dexametasona/5% RG502/ATEC).

Para analisar os perfis de liberação in vitro, uma alíquota de 10μl de cada formulação foi injetada m 10 ml 0,9% solução salina e incubada a 37°C, então as alíquotas de 5mL foram trocadas semanalmente (isto é, dissipador infinito) e a amostra foi ensaiada para concentração de dexametasona por método de HPLC padrão. O perfil resultante de liberações prolongadas são mostrados na Figura 1. Conforme pode ser visto a partir do gráfico in Figura 1, 10 μl de a formulação de dexametasona em ATEC prolongou a liberação de dexametasona por pelo menos 14 dias; 10 μl da formulação de dexametasona em ATEC/5%RG752 prolongado a liberação de dexametasona por pelo menos 56 dias; e 10 μl da formulação de dexametasona in ATEC/5%RG502 prolongou a liberação de dexametasona por pelo menos 98 dias.

Exemplo 2. Formulações que compreendem dexametasona em ATEC com/sem PLA

As quatro formulações foram comparadas, que compreendem dexametasona em ATEC (6% Dexametasona/ATEC) sem ou com 5% de R202H (Poli(D,L-lactídeo) , MW faixa de 10,000 a 18.000, grupo de extremidade ácido carboxílico livre) (6% Dexametasona/5% R202H/ATEC) ; R203H (Poli(D,L-lactídeo), MW faixa de 18.000a 28.000, grupo de extremidade ácido carboxílico livre) (6% Dexametasona/5% R203H/ATEC); ou R203S (Poli(D,L-lactídeo), MW faixa de 18.000 a 28.000, éster terminado) (6% Dexametasona/5% R203S/ATEC).

Um perfil de liberação foi gerado como no exemplo 1 e o perfil resultante de liberações prolongadas são mostrados na Figura 2. Conforme pode ser visto a partir do gráfico na Figura 2, 10 μl da formulação de dexametasona em ATEC prolongou a liberação de dexametasona por pelo menos 14 dias; 10 μl da formulação de dexametasona em ATEC/5%R202H prolongou a liberação de dexametasona por pelo menos 70 dias; e 10 μl da formulação de dexametasona in ATEC/5%R203H prolongou a liberação de dexametasona por pelo menos 98 dias; e 10 μl de a formulação de dexametasona em ATEC/5%R203S prolongou a liberação de dexametasona por pelo menos 154 dias.

Exemplo 3. Formulações que compreendem dexametasona em ATEC com/sem PLGA

Foram comparadas quatro formulações que compreendem dexametasona em ATEC (6% de Dexametasona/ATEC) com ou sem 5% de PLGA RG502H (6% de Dexametasona/5% de RG502H/ATEC); RG502 de PLGA (6% de Dexametasona/5% de RG502/ATEC); ou PLGA RG505 (Poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo, D,L-lactideo:glicolideo 50:50, MW -80,000, grupo de extremidade de alquil éster) (6% de Dexametasona/5% RG505/ATEC) . Foi gerado um perfil de liberação como no exemplo 1, e os perfis de liberação prolongada resultantes são mostrados na Figura 3.

Conforme pode ser observado a partir do gráfico na Figura 3, 10 μl de uma formulação de dexametasona em ATEC prolongaram a liberação de dexametasona por pelo menos 14 dias; 10 μl de uma formulação de dexametasona em ATEC/5% de RG502H prolongaram a liberação de dexametasona por pelo menos 49 dias; 10 μl de uma formulação de dexametasona em ATEC/RG502H prolongaram a liberação de dexametasona por pelo menos 98 dias; e 10 μl de uma formulação de dexametasona em ATEC/5% de RG505 prolongaram a liberação de dexametasona por pelo menos 98 dias, com liberação mais lenta no inicio do período de análise.

Exemplo 4. Formulações que compreendem dexametasona, ATEC e PLGA com diferentes razões entre lactídeo:glicolideo.

Foram comparadas quatro formulações que compreendem dexametasona em ATEC (6% de Dexametasona/ATEC) e dexametasona em ATEC com PLGAs que têm percentual diferente de lactídeo e glicolídeo (isto é, razões entre lactídeo:glicolídeo de 50:50; 75:25; ou 85:15) (6% de Dexametasona/5% de RG502H (50:50)/ATEC); RG756S (Poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo), 75:25, faixa de MW 76.000 a 116.000, terminado em éster) (6% de Dexametasona/5% de RG756S (75:25)/ATEC); PLGA (85:15) Poli(D, L-lactídeo-co-glicolídeo), lactídeo:glicolídeo (85:15), faixa de MW 50.000 a 75.000 (6% de Dexametasona/1,25% de PLGA(85:15)/ATEC).

Foi gerado um perfil de liberação como no exemplo 1 e os perfis de liberação prolongada resultantes são mostrados na Figura 4. Conforme pode ser observado na Figura 4, 10 μl de uma formulação de dexametasona em ATEC prolongaram a liberação de dexametasona por pelo menos 14 dias; 10 μl de uma formulação de dexametasona em ATEC/PLGA (85:15) prolongaram a liberação de dexametasona por pelo menos 42 dias; 10 μl de uma formulação de dexametasona em ATEC/5% de RG502H (50:50) prolongaram a liberação de dexametasona por pelo menos 56 dias; e 10 μl de uma formulação de dexametasona em ATEC/5% de RG756S (75:25) prolongaram a liberação de dexametasona por pelo menos 84 dias.

Exemplo 5. Formulações de liberação prolongada de gamaglobulina bovina (BGG)

Foi preparada uma formulação de 1% de BGG em 5% de PLGA de RG502H/ATEC. Em suma, 1% ou 1,5% de γ-globulinas em pó fino de sangue bovino (BGG, fração de Cohn II e III, Sigma) foi adicionado a uma solução de 5% de PLGA em ATEC.

As suspensões resultantes foram misturadas por vortexação e sonicação até que fosse observada distribuição uniforme.

Para análise de liberação prolongada in vitro, foram colocadas alíquotas de 10 μl da formulação de BGG em uma matriz de 10 ml de 0,9% de solução salina, 1% de albumina porcina e 0,05% de azida de sódio e incubadas à temperatura ambiente ou a 37°C. Mais especificamente, foi pesado um frasco de liberação de vidro de 20 ml. Então, foi colocada uma gotícula de 10 μl da formulação de teste (suspensão) no frasco de vidro, o peso total do frasco e da formulação foi medido e o peso da formulação adicionada (gotícula) foi calculado. Foram adicionados 10 ml de matriz de liberação ao frasco contendo a gotícula. O frasco resultante contendo a matriz de liberação e a gotícula no fundo do frasco foram incubados à temperatura ambiente ou a 37 C. Em cada ponto no tempo, o frasco foi equilibrado em relação à temperatura ambiente e 5 ml da solução de matriz foram retirados de forma cuidadosa para a determinação de BGG. Então, foram adicionados 5 ml da matriz de liberação novamente ao frasco de vidro de 20 ml a fim de manter as condições de dissipador infinito e o frasco voltou para a incubação a 37°C. A amostragem e a substituição da matriz foram repetidas em cada ponto no tempo.

A determinação de BBG foi realizada com o uso de um conjunto de quantificação por ELISA de IgG Bovina (Betil Laboratories, Inc., Montgomery, TX). Foi preparado o padrão de estoque de BGG (1,00 mg/ml) foi em 0,9% de solução salina contendo 1% de PSA e 0,05% de azida de sódio e armazenado a +4 °C durante um mês. Os padrões operacionais de BGG (em uma faixa de 0 ng/ml a 500 ng/ml) foram preparados recentemente através da diluição do padrão de estoque em um tampão de ensaio (também usado para diluições de amostra). As concentrações de BGG foram determinadas em relação à curva de calibração padrão de acordo com o Protocolo ELISA (Betil Laboratories, Inc) . Foi gerada a Figura 5. Nessa formulação, a liberação de BGG foi prolongada por pelo menos 16 dias a 37 °C e por pelo menos 60 dias à temperatura ambiente.

Exemplo 6. Liberação de BGG que compreende RGA502H de PLGA com RG502 de PLGA

As formulações de 1% de BGG em 5% de RG502H/ATEC de PLGA e 1% de BGG em 5% de RG502/ATEC de PLGA foram preparadas como no exemplo 5. Foi gerada a Figura 6, N=3. Os resultados indicam que a BGG foi liberada por pelo menos 14 dias do excipiente de RG502H/ATEC e pelo menos 49 dias do excipiente de RG502/ATEC.

Exemplo 7. Liberação prolongada de BGG em ATEC/BB/DMSO e 5% de RG502 de PLGA

Fora preparada as formulações de 1% de BGG em 5% de RG502 de PLGA em ATEC/BB/DMSO (50:38:12). Os dados foram gerados como no exemplo 5 e representados por gráfico e são mostrados na Figura 7, N=4. Conforme pode ser observado a partir do gráfico, a liberação de BGG foi prolongada por pelo menos 60 dias a 37°C.

Em uma modalidade similar, foi preparada uma formulação de 1,5% de BGG em 5% de RG502 de PLGA em ATEC/BB/DMSO (50:38:12). Quando colocado em meio de teste, a formulação formou um bolo aproximadamente plano monolítico no fundo do frasco. Um perfil de liberação de BGG in vitro foi gerado conforme mostrado na Figura 11. Conforme pode ser observado a partir dos dados, a BGG ainda era liberada para o meio após 130 dias.

Exemplo 8. Comparação entre formulação de BGG fresco e armazenada.

Foram preparadas formulações de 1% de BGG em 5% de RG502 de PLGA em ATEC e a liberação de BGG estudada como no exemplo 5. Foi armazenada uma formulação por aproximadamente 24 horas a 4 °C (Envelhecida) antes de ser submetida ao estudo de liberação. A Figura 8 foi gerada, N=3. As formulações que foram armazenadas por aproximadamente 24 horas a 4 °C (Envelhecidas) exibiram liberação in vitro mais lenta do que as formulações recentemente (Frescas) produzidas, mas, em ambos os casos, a liberação de BGG foi prolongada por pelo menos 35 dias.

Exemplo 9. Liberação prolongada de BGG de citrato de trietila (TEC) e vários PLGAs

Foram preparadas as formulações de 1% de BGG em TEC e 5% de RG502, RG502H, RG653H de PLGA (Poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo), 65:35, faixa de MW 24.000 a 38.000, grupo de extremidade ácido carboxilico livre), ou RG752H (Poli(D,L-1actídeo-co-glicolideo) 75:25, faixa de MW 24.000 a 38.000, grupo de extremidade ácido carboxilico livre). Figura 9 foi gerada como no exemplo 5, N=3. Em todas as formulações, a liberação de BGG foi prolongada in vitro por pelo menos 15 dias, ainda que a formulação de TEC/RG752H possa ser protegida a fim de prolongar a liberação por pelo menos 23 dias.

Exemplo 10. Liberação prolongada de BGG de PLGA/ATEC ou PLGA/ATEC/DMSO.

Foram preparadas três formulações de BGG misturando-se 1% de BGG a 5% de RG502 de PLGA em ATEC; 7,5% de RG502 de PLGA em ATEC; ou 7,1% de RG502 de PLGA em 87,5% de ATEC e 4,4% de DMSO. Todas as formulações foram armazenadas à temperatura ambiente por 8 dias antes de serem colocados sob condições de liberação de dissipador infinito. Quando uma alíquota de 10 μΐ foi colocada em meio de dissipador infinito, essas formulações mantiveram um monólito ligeiramente redondo no fundo do frasco de teste. Os resultados são mostrados na Figura 12. A BGG ainda era liberada de cada formulação em 51 dias.

Exemplo 11. Liberação prolongada de BGG de formulações de PLGA/BB/DMSA

Foram preparadas as formulações de BGG misturando-se 3% de BGG em misturas de excipiente consistindo em 1,7% de RG502 de PLGA em BB:DMSO a 75:25; ou 5% de RG502 de PLGA em BB: DMSO a 70:25. Os resultados da liberação in vitro são mostrados na Figura 10.

Exemplo 12. Liberação prolongada de BGG de formulações de PLGA/EA/ATEC

Os tocoferóis fornece outro veículo de liberação prolongada com o qual as taxas de liberação podem ser moduladas através da adição de pequenas quantidades de PLGA. Foram preparadas as formulações de BGG misturando-se 1% de BGG ou 3% de BGG em uma mistura de excipiente consistindo em 5% de RG502 de PLGA ATEC: EA a 98:2 (isto é, 98% em peso de ATEC e 2% em peso de acetato de tocoferol). As alíquotas de 10 μl ou 50 μl foram testadas, três vezes, para liberação de BGG in vitro e os resultados são mostrados na Figura 14.

Exemplo 13. Liberação prolongada In vivo de anticorpo em formulações de PLGA/ATEC

Foram preparadas as formulações que consistem em 3% de BGG em solução salina ou 1% ou 3 % de BGG em 5% de RG502 e ATEC. Foi administrada uma dose unitária simples de 50 μl ao segmento posterior de coelhos e a liberação de BGG medida posteriormente. Conforme pode ser observado a partir da Figura 15, a liberação de BGG de 3% de BGG em solução salina foi rápida e relativamente curta em comparação à liberação de BGG das formulações de PLGA/ATEC, que forneceram liberação lenta durante 14 dias. De fato, esses dados apoiam a conclusão que as presentes formulações de liberação prolongada podem liberar doses terapêuticas de proteínas terapêuticas ao longo de períodos de tempo e poderiam permitir que pacientes desfrutassem de diversas semanas ou meses entre as injeções.

As modificações dos modos descritos acima para a execução da invenção que são evidentes para aqueles de habilidade comum na técnica cirúrgica, farmacêutica ou técnicas relacionadas se destinam a estarem dentro do escopo das reivindicações anexas.

Claims

Formulação farmacêutica líquida adequada para injeção no olho para a liberação prolongada de uma proteína terapêutica caracterizada por compreender:
uma proteína terapêutica;
um excipiente não polimérico biocompatível e biodegradável líquido selecionado a partir do grupo que consiste em citrato de trietila e acetil citrato de trietila; e
um polímero de poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA) biocompatível e biodegradável, em que o polímero de PLGA tem uma razão lactídeo:glicolídeo de 50:50, peso molecular na faixa de 7000 a 17000, e um grupo terminal de éster de alquila;
em que a razão de excipiente não polimérico:polímero é de cerca de 90:10 a 99:1 % em peso;
em que, mediante e em seguida à injeção de 5 µL a 100 µL da formulação farmacêutica líquida utilizando-se uma agulha de calibre 25, 27, 28, 30 ou inferior, a formulação mantém sua integridade monolítica e o estado líquido; e
em que a formulação libera a proteína terapêutica proveniente da formulação farmacêutica líquida por um período de pelo menos 14 dias.
Formulação farmacêutica líquida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que proteína terapêutica é um anticorpo.
Uso da formulação farmacêutica líquida conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para tratar uma aflição do olho.
Uso, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o medicamento tem uma dosagem unitária de 5 µL a 100 µL que pode ser injetada na subconjuntiva, espaço periocular, retrobulbar na órbita, episclera, intracórnea, intraesclera, câmara anterior, segmento anterior, câmara posterior, segmento posterior, cavidade vítrea, espaço sub-retinal, segmento supracoroidal ou área intrarretinal do olho.
Uso da formulação farmacêutica líquida conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento, em que o medicamento proporciona a liberação prolongada de uma proteína terapêutica que inibe angiogênese.
Formulação farmacêutica líquida adequada para injeção no olho para a liberação prolongada de uma proteína terapêutica caracterizada por compreender:
uma proteína terapêutica;
um excipiente não polimérico biocompatível e biodegradável líquido, em que o dito excipiente é benzoato de benzila; e um polímero de poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA) biocompatível e biodegradável, em que o polímero de PLGA tem uma razão lactídeo:glicolídeo de 50:50, peso molecular na faixa de 7000 a 17000, e um grupo terminal de éster de alquila;
em que a razão de excipiente não polimérico:polímero varia de 90:10 a 99:1 % em peso; e
em que, mediante e em seguida à injeção de 5 µL a 100 µL da formulação farmacêutica líquida utilizando-se uma agulha de calibre 25, 27, 28, 30 ou inferior, a formulação mantém sua integridade monolítica e o estado líquido; e
em que a formulação libera a proteína terapêutica proveniente da formulação farmacêutica líquida por um período de pelo menos 14 dias.
Formulação farmacêutica líquida, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que a proteína terapêutica é um anticorpo.
Uso da formulação farmacêutica líquida conforme definida em qualquer uma das reivindicações 6 ou 7, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento, em que o medicamento proporciona a liberação prolongada de uma proteína terapêutica que inibe angiogênese.
Uso da formulação farmacêutica líquida conforme definida em qualquer uma das reivindicações 6 ou 7, caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para tratar uma aflição do olho.
Uso, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o medicamento tem uma dosagem unitária de 5 µL a 100 µL que pode ser injetada na subconjuntiva, espaço periocular, retrobulbar na órbita, episclera, intracórnea, intraesclera, câmara anterior, segmento anterior, câmara posterior, segmento posterior, cavidade vítrea, espaço sub-retinal, segmento supracoroidal ou área intrarretinal do olho.