BR112013019335A2 - nova composição, método para aumentar o nível de camp em um célula e combinação terapêutica, para o tratamento da fibrose cística - Google Patents

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Abstract

  NOVA COMPOSIÇÃO, MÉTODO PARA AUMENTAR O NÍVEL DE cAMP EM UM CÉLU-LA E COMBINAÇÃO TERAPÊUTICA, PARA O TRATAMENTO DA FIBROSE CÍSTICA. A presente invenção fornece uma composição compreendendo pelo menos uma prostaci-clina ou um análogo da prostaciclina ou um sal farmaceuticamente aceitável derivado, e pelo menos uma inibidor da fosfodiesterase (PDE) 4 e ainda, opcionalmente, um inibidor da PDE para o uso na prevenção ou tratamento da fibrose cística, aumentando seletiva-mente os níveis de cAMP nas células broncoepiteliais.

Description

e Sm mn» ..s e2aômj .“ééÚóT: EL E!º;» iTXLÉ IC. ,)ÍÊóÉITO.SA”oºOº :Z“ O)! 2 “OO as 1137 | Relatório descritivo do pedido de invenção “NOVA COMPOSIÇÃO, MÉTODO | | PARA AUMENTAR O NÍVEL DE cAMP EM UM CÉLULA E COMBINAÇÃO TERAPÊUTICA, PARA O TRATAMENTO DA FIBROSE CÍSTICA” A presente invenção fornece composições compreendendo uma prostaciclina ou um análogo da prostaciclina em combinação com um inibidor da fosfodiesterase | 4 para uso na prevenção ou tratamento de fibrose cística, bem como composições específicas. Prostaglandina 12 (prostaciclina, epoprostenol, PGl2) é um metabólito | oxigenado do ácido araquidônico formado enzimaticamente pelas atividades sequenciais das enzimas ciclooxigenase e PGl sintetase. É constitutivamente | . produzido pelas células vasculares endoteliais e do músculo liso e é fiduzida em condições inflamátórias nas células vasculares e macrófagos. :? o | PGla é um potente agente vasodilatador e antitrombético cujos efeitos resultam da ligação a um único redaptor heptahelical i ebbládo à proteina G
15. denominado de receptor prostanóide | (IP) 4. Este receptor é acoplado a G;- e ativa a adenilato ciclase, resultando em uma explosão aguda de CAMP intracelular. Como a expródsão de CFTR e CFTR mutante são CAMP dependentes, as substâncias que aumentam os níveis “intracelúlares 'de cAMP são de ; interesse para oO desenvolvimento de medicamentos para o tratamento de CF E Fibrose Cística). A maioria dbssas substâncias, ais como a forskolina, entretanto, induzem uma ' elevação bastante inespecífica de CAMP, que também pode ter efeitos muito prejudiciais, tal como inflamação. Assim, há uma necessidade não atendida de potenciadores específicos de CAMP em células epiteliais do pulmão. Treprostinila é um potente agonista do receptor IP, embora sua Sepstiiciaade 25º para este receptor seja desconhecida. Bprágira R.S. et ar Microcirculation 2008 .
v 7 21/37 - | Jul; 5:461-71, mostrou que os análogos da prostacíclina (UT-15, Remodulin) estimulam a síntese de cAMP mediada por receptor e a liberação de ATP de eritrócitos de coelho e humanos. : Fosfodiesterase nucleica (PDE) é uma enzima que catalisa a hidrólise de cAMP e monofosfato de 3',5-guanosina cíclico (CGMP) para inativar produtos de 5'-nucleotídeo. cCAMP e cGMP apresentam muitos efeitos intracelulares, mediados amplamente através de seu efeito estimulante sobre as proteína quinases de muit substrato.
Através da inibição de PDE, o nível de CAMP e cGMP é aumentado, : resultando em relaxamento do músculo liso-de vias aéreas respiratórias e inibição da ativação de células inflamatórias.
PDE4, PDE7 e PDES8 são específicas para CAMP. | Inibidores da fosfodiesterase bloqueiam um ou mais dos subtipos da Shtima fosfodiesterase (PDE) impedindo, portanto, a inativação dos segundos mensageiros | tassadaias mionolusiato de adenosina cíclico (CAMP) e monofosfato de guanosina . cíclico (CGMP) pelos iuspadíívos subtipo(s) de PDE.
As isoenzimas PDE de 3,5" : . 15 nucleotídeo cíclico são um componente muito importante da via de sinalização do cAMP / proteina quinase A (PKA). Foram identificadas onze famílias de PDE.
A superfamília das isoenzimas PDE consiste em pelo menos Nove famílias dê genes (tipos). PDE1 à PDE11. Algumas famílias PDE são muito diversas e consistem em — vários subtipos e numerosas variátitas de disformas de prótassamento (do : — inglês splicing): | ue = São exemplos de inibidores inespecíficos da PDÊ, téchilita e compostos . relácionados a xantina, cafeina, aminofilina, etc.
A Vinpocetina é um inibidor seletivo da PDE1. Inibidores seletivos da PDE2 conhecidos são EHNA ou Anagrelida, inibidores seletivos da PDE3 são Enoximona ou Milrinona. .
oo | 3/37 | PDE4 é a principal enzima de metabolização de CAMP encontrada em células inflamatórias e imunes.
Inibidores da PDE4 revelaram-se como potentes drogas anti- inflamatórias, especialmente em doenças inflamatórias pulmonares, tais como asma, DPOC (doença pulmonar obstrutiva crônica) e rinite.
Eles suprimem a liberação de | citocinas e outros sinais inflamatórios, e inibem a produção de espécies reativas a oxigénio.
Inibidores da PDE4 conhecidos são, por exemplo, Mesembrina, Rolipram, Ibudilast, etc. . Inibidores da PDES são primariamente metabolizados pela enzima CYP3A4 . : do citocromo P450. Existe o potencial: pará interações medicamentosas adversas com outras drogas que inibem ou induzem CYP3AA, incluindo inibidores da protease do HIV, cotódonsizal, ikdconazal, e outras drogas antithipertensivas tais como Nitro- spray.
Exemplos de inibidores da PDES5 são Sildenafila, Tadaitafi, Vardenafil ou - Uderafl. | | | a | A Fibrose Cística (CF) é uma doença genética resultante de inutações em um gene de 230 kb no cromossomo 7 codificando um polipeptídio de 1480 aminoácidos | conhecido como regulador da condutância transmambíaria na fibrose cística (CFTR), que serve como um canal de cloreto nas membranas epiteliais.
Mais de 1000 alelos mutantes foram identificados até à data.
À mutação mais - comum, ] ' AF508, é a deleção de um resíduo de fenilalanina no códon 508 no reguládor da condutância transmembrana na fibrose cística (CFTR). Essa mutação resulta em uma redução severa na função do CFTR, e leva ao fenótipo Glássico na fibrose cística caracterizado com anomalia nas funções da glândula êxôcrina tais como i cloretos no suor elevados, infecções respiratórias recorrentes com bronquiectasia, e * insuficiência pancreática precoce.
SS SS SS Po 4137 Clinicamente, geralmente se suspeita de CF quando um ou mais . características fenotípicas típicas de CF estão presentes em um indivíduo. Poderia .
, ser uma doença pulmonar crônica apenas ou associada muito frequentemente a anormalidades *gastrointestinaiso e nutricionais (por exemplo, insuficiência pancreática e pancreatite recorrente), síndrome de perda de sal e anormalidades urogenitais masculinos (ou seja, azoospermia obstrutiva). No pulmão humano, . secreções espessas tenazes oObstruem as vias aéreas respiratórias distais e glândulas submucosas, que expressam CFTR. Dilatação dos ductos dessas glândulas (associada com obstrução por muco) e o revestimento das superfícies das | vias aéreas respiratórias por resíduos . mucopurulentos, espessos, VÍSCOSOS, dorinados por neutrófilos estão entre as características patológicas da doshça: ' Inflamação pulmonar é outra das principais causas do declínio na função respiratória ' ' em indivíduos com fibrose cística e pode preceder ô aparecimento de infecção crônica. Impéctação imnucinosa e cShcreções espessas dentro dos ductos paricreáticos levam a fibrose crônica, substituição gordurosa da glândula, ou ambos, em um grande subgrupo de indivíduos com diagnóstico prévio de pancreatite * idiopática ou alcoólica. | neo a : é A fibrose cística é a doença hereditária fatal mais comum s População GSubudiand, afetando cerca de 4 em 10.000 crianças. Nos Estados Unidos; à média - de idade na morte aumentou de 8,4 anos de idade em 1969 para 14,3 anos de idade em 1998. A média de idade de inorle aumentou de 14 anos em 1969 para 32,4 anos | de idade em 2003 (Cystic Fibrosis Foundation): Pára oilanças riabcidas nos anos 90, | a sobrevida média é prevista rs ser mais de 40 anos. Os principais contribuintes para o aumento significativo da esperança de vida é a melhora no tratamento de e SÀ!ibPAÊA TE & ç , . ia ' . infecções crônicas do trato respiratório e da eliminação de muco nos indivíduos com CF, bem como nutrição melhorada e diagnóstico precoce. | Perdas na condutância dos ânions do regulador da condutância | transmembrana na fibrose cística (CFTR) das membranas apicais do epitélio das vias aéreas respiratórias interrompe a regulação da camada líquida superficial das . vias aéreas respiratórias.
Isto leva a uma depuração mucociliar prejudicada, infecção : . das vias aéreas respiratórias e inflamação característica da fibrose cística (CF). A mutação AF508 comum do CFTR está presente pelo menos um alelo em > 90% dos pacientes com CF, e > 50% dos pacientes são homozigotos para AF508, sendo o resto compostos heterozigotos.
Uma questão central na doença CF é a í incapacidade desta variante do CFTR comum em alcançar seu “Estado nativo, dobrado que sairá do retículo endoplasmático (ER) é trafegar para a membrana apical das células epiteliais. o . Se a aquisição da conformação nativa for retardada, considera:se que o CFTR mantém interações excessivas ou prolongadas com cliabórinas moleculares, ' que, em seguida, visam a degradação da proteina através de "inecanismos que ' controlam 3 ER (Retículo Endoplasmático) para prótelhis | complexadas mal Ú dobradas ou incompletas.
O sistema de degradação associado ao RE (ERAD) envolve a ubiquitinação de proteínas aberrantes e Sa entrega “ao pioteassoma para degradação.
Se o ERAD está us da taxa de Síntese proteica, ou durante o * tratamento com inibidores do proteassoma, acumulam-se agregados da proteiriá ' mutante.
CFTR foi a primeira proteína integral de membrana de mamíferos a ser identificada como substrato para a degradação mediada de ubiquitina-proteassoma, —- e tem servido cómo um modelo para a lista crescente de doenças de conformação de proteínas, que representam um conjunto diversificado de etiólogias patológicas.
7 7 "a 6/37 o . Essencialmente todas as proteinas CFTR AF508 produzidas pela célula são destruídas pelo ERAD.
Também, devido ao seu complexo padrão de dobramento, 60-70% da proteína tipo selvagem (wt) pode ser degradada do mesmo modo, | embora isto possa variar entre os tipos de células.
Os padrões de clivagem 5: —proteolítica das formas imaturas wt e CFTR AF508 são semelhantes, considerando que o padrão de digestão de CFTR madura wt é diferente.
Esta descoberta apoia a | ideia de que pelo menos uma porção de CFTR mutante retida no ER está presente em uma conformação intermediária que é formada ao longo da via dobramento normal de CFTR, em oposição à formação de uma estrutura de proteína variante.
Para CFTR AF508, esta conformação intermediária não pode prosseguir além de uma etapa crítica o processo de dobramento, mas isto implica que CFTR AF508 poderia ser résyatada, se fosse Possível facilitar esta etapa. vário ds ALIADO, Uma variedade de condições “experimentais, tais como temperatura reduzida, incubação com chaperonas químicas, ou corretoras” farmacológicos, podem promover a saída de CFTR AF508 do ER, rendendo um canal de ânion funcionais ' na superfície da célula.
Além disso, investigadores relataram Testauração da função : CFTR AF508 por co-expressão de várias construções parciais it Súbdominios S CFTR de CFTR wt.
No entanto, um consenso sobre quais subdomínios CFTR são ' eficazes no resgate de proteina mutante não é aparente, e o mecanismo deste efeito pêrmanece obscuro.
Além disso, o FT sGals induzido do fragmento CFTR fem sido | observado principalmente nas células exogenamente Superexpressárido tanto o fragmento CFTR e CFTR AF508 de comprimento total. wo 08/098196 descreve o tratamento de fibrose pulmonar, usando Treprostinila.
Fibrose pulmonar, no entanto, é uma doença intersticial de pulmão que é causada pelo acúmalo de fibras de colágeno no pulmão; isso imita a capacidade |
Do 7137 | | : do pulmão para inalar o ar: o pulmão perde sua conformidade e a resistência das , vias aéreas respiratórias aumenta (conformidade = 1/resistência). A medida que a doença progride há também um aumento na resistência vascular.
O local de ação da ' Treprostinila na fibrose pulmonar é a vascularização e o espaço intersticial no : ' 5 alvéolo. i Tissieres et al. descrevem estudos utilizando lIloprosta para o tratamento de um paciente com fibrose cística e hipertensão pulmonar secundária.
É divulgado que Iloprosta foi eficaz na redução da pressão da artéria pulmonar (The annals of * thoracic surgery, vol, 78, no.3, E48-E50). : US2001/006979 A1 descreve o uso de derivados da prostaciclina como lloprosta ou Cicaprosta para o tratamento de doenças fibróticas. i - A fibrose ólstica está relacionada com a fibrose Pulmonár, porque é uma doença que se origina no epitélio brônquico.
Devido à ausência de CFTR, Fá múito | pouca água no muco que cobre o epitélio brônquico; assim, os cílios não podem | | 15 mover o muco espesso e à depuração mucociliar se interrompe (a depuração mucociliar funciona como uma esteira rolante, onde os cílios vibram ritmicamente de forma concentrada para mover o muco de volta à traqueia e à faringe, de onde pode ser depurado por deglutição ou tosse etc.). Se a iriucocliáridads é interrompida, as bactérias não podem . removidas dos brônquios, s brônquios são colonizados por i bactérias e há crisês repetidas de infecções pulmonares que destroem o pulmão.
A situação pode ser remediada restaurando fluxos CI para o epitélio brônquico.
Assim, na fibrose cística, o local de ação é o epitélio das vias aéreas respiratórias dos . brônquios.
O local de áção é anatomicamente distinto (interstício pilrichar vs vias . aéreas “tpliatórics brônquicas), envolve um conjunto diferente de câlulas (fibroblastos, células de músculo liso vascular, endotélio versao absorção e secreção
CNN : 8/37 das células epiteliais brônquicas) e presumivelmente também envolve diferentes receptores (receptor prostaciclina vs possivelmente receptor EP2). DE102005016345A1 e US2005101608A1 descrevem o uso de inibidores da - PDES5, para o tratamento da hipertensão pulmonar.
US2009325976A1 divulga novos derivados da prostaciclina que podem ser - usados também em combinação com um inibidor da PDE 5 para uso no tratamento da hipertensão arterial pulmonar.
| Clinicamente usados inibidores da PDE foram testados para ativar a secreção | | de cloreto no cstabalacimento de baixos níveis de CAMP, conforme descrito por Cobb B.R. et al., (Am J Respir Cell Mol Biol. 2003 Sep;29(3 Pt 1):410-418). Inibidores da PDE 5, Sildenafila e Vardenafil e seu papel no transporte de cloreto na fibrose cística são descritos por Lubamba B. Et al. (Am J Respir Crit Care — Med 2008 Már1;177(5):506:515). || Doo ' Inibidores da PDE-5 e seu papel na função do canal CFTR AF508 são 15º — descritos por Clarke Lane L. (J Respir Crit Care Med. 2008 Mar 1;177(5):469-70). Em WO2010106494A1 é divulgado o uso de HCI iesembrina, um conhecido . inibidor fraco da PDE4 no tratamento de desordens . | ! US20070249668 descreve uma composição que contém um inibidor da PDE e um análogo da prostaciclina para aumentar o teor de ATP nas células vermelhas do sangue. — | | es Atualmente, nenhum tratamento da fibrose Cística está disponível que . — melhore significativamente a qualidade de vida dos pációiids durante um período mais longo. Portanto, é um objeto da invenção fornecer composições para o tratamento que pode aumentar a expressão da função do canal CFTR AF508 e / ou cloreto nas células epitéliais do Pulmão. OVINOS e e AA — QNô d dy e ço og 9/37 NAN | Breve descrição da invenção: O objeto da invenção é atingido fornecendo uma composição compreendendo ' í pelo menos uma prostaciclina ou um análogo, um derivado ou um sal farmaceuticamente aceitável em combinação com pelo menos um inibidor da PDE 4 para uso na prevenção ou tratamento da fibrose cística.
Como uma incorporação alternativa, dita composição ainda pode compreender pelo menos um inibidor da PDE5, e /ou PD7 e / ou PDE8. ' Especificamente, o análogo da prostaciclina é selecionado do grupo de Treprostinila, lloprosta, Cicaprosta ou “Beraprosta ou derivados. ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
Em uma incorporação da presente invenção o derivado da Treprostinila é um derivado ácido, um pró-fármaco, um polimorfo ou um Someio da Treprostinila.
É | oO | | * De ácordo com a iveíção, o inibidor da PDEA4 pode ser Gspecificamente selecionado do grupo de Ro 20-1724, Ibudilast, Roflumilast e ssh Nióxdo: — Cilomilast BAY 19-8004, CC3, AWD 12-281, SCH-351591, Ciclamílast, Piclamilast, cGH2466, Mesembrina, Rolipram, Luteolina e Drotaverina. ' "De âcordo com à invenção, o inibidor da PDES pode ser selecionado - especificamente de Avânafila, Lodenafita, Mirodenaáfila, citrato de Sildenafila, Tadaláfi, Vardenafil e Udenafil; os inibidores da PDE7 e PDES podem seér 50 — selecionados à partir de Dipiridamol, BRL-50481 e PF-04957325. | P De acordo com uma incorporação dsbacifica dá invenção, S composição . especificamente consiste em um tipo de análogo da prostaciclina e um tipo de inibidor da PDEA. - Na eus rs Como uma incorporação específica, a composição compreende Treprostínita e um inibidor da PDÊE4 selecionado do grupo de RO 20-1724, Roflumilast e Ibudilast.
2d | 10/37 " i | ' Uma outra incorporação da invenção, a composição compreende inibidores - da PDE adicionais, selecionados a partir de inibidores da PDE5, PDE7 ou PDEB8. Em outra incorporação, a invenção fornece uma composição livre de - interferon. Especificamente, a composição inventiva é formulada como uma composição | farmacêutica. | S Qualquer forma de administração conhecida pode ser usada para administrar a combinação inventiva, por exemplo, pode ser administração intravenosa: ou subcutânea ou administração por inalação, ou disponível de forma oral selecionada do grupo de formas de liberação sustentada, comprimidos e cápsulas. | De acordo com uma incorporação específica, a quantidade efetiva de Treprostinila ou um sal farmaceuticamente aceitável do nôsino é de preferência de cerca de 1,0 ng/kg de peso corpral, Ibudilast é preferencialimente até 5 x 30 mg, pieferencialmente até 2 x 30 mg a quantidade efetiva do inibidor da PDE4 é aprox. 0,5 mg. “Além disso, um ou mais inibidores do grupo dos inibidores da PDES “e PDET | À podem estar contidos em uma quantidade efetiva de cerca de 0,5 mg de cada um dos inibidores. i A presente lwshgão também fornéce um rhetodo in Vitro para aumentar o nível dé CAMP em uma célula bm que dita a célula é cóntatada com Palo menos
20. uma prostaciclina ou análogo da prostaciclina e pelo menos um inibidor da PDE4 ou um sal farmaceuticamente aceitável derivado. Além disso, um inibidor da PDES5, PDE7 e / ou PDE8 pode ainda ser utilizado de acordo com o dito método. E. i Especificamente, a célula é uma célula epitelial, Máis Sspacificaâmente pode ser uma célula broncoepitelial. | | i
Doc Fm. 11/37 ' Também é fornecida uma combinação terapêutica, compreendendo pelo menos uma prostaciclina ou análogo da prostaciclina e pelo menos um inibidor da PDE4 ou um sal farmaceuticamente aceitável derivado, onde o análogo da prostaciclina e o inibidor da PDE4 são providos em quantidades que juntos são suficientes para tratar e / ou prevenir pelo menos um sintoma associado à fibrose '* cística.
Mais especificamente, o análogo da prostaciclina e o inibidor da PDE4 são formulados para administração por inalação.
Dita composição terapêutica pode, de acordo com uma incorporação alternativa, conter peló menos mais um inibidor selecionado do grupo dos inibidores —daPDES,PDETePDES. | | Fita a ; o nsmesontamen subs Fig. 1: Acúmulo do CAMP em células IB3-1 após incubação com Treprostinila tpents ou em “combinação com “os inibidores da PDE+4 Ilbudilast (100uN) e i | Cilostazol (1o0uN. 7 i AEE o “ Fig. 2: Acúmulo de cAMP em células 1B3-1 após incubação com Tiebrostínila | em combinação com os inibidores da PDE:4 RO-20-1724 (1001M) é Roflumilast (10uM). | | Fig. 3: Ativação de uma corrente de CI pela Treprostinila na linhágem de . células epiteliais Eróhdálcas “humanas 1B3-1 os CDIBSSam WICFTR : : 20 arnisienteínanto, ; Fig. 4: Acúmulo de CAMP em células IB3-1 estimuladas por 10 UM de Treprostinila na ausência e na presença das concentrações indicadas de Dipiridâmol, Ibudilast, RO20:1724 ou Roflumilast.
Células foram metabolicamente « —.pré-marcadas com [ºHJadenina por 4h e posteriormente incubadas com os.
NS SO Do 12/37 | o compostos indicados por 30 Min.
A formação de [PHJ]cAMP foi determinada conforme + descrito em materiais e métodos.
Dados são médias + s.e.m (n=3). Fig. 5: Curva de concentração-resposta para acúmulo de cAMP induzido pela Treprostinila em células IB3-1. As células foram incubadas com concentrações | | 5 crescentes de Treprostinila na ausência e presença das concentrações indicadas de Ibudilast, RO20-1724 ou Roflumilast.
As células foram metabolicamente pré- marcadas com [*H]adenina por 4 h, e posteriormente incubadas com os compostos indicados por 30 min.
A formação de [?H]JcAMP foi determinada conforme descrito em materiais e métodos.
Dados são médias + s.e.m. (n=3). | Fig. 6: Efeito dos inibidores da fosfodiesterase selecionados no acúmulo de cAMP basal em células 1B3-1. As células foram metabólicamente pió-máicadis com [H]adenina por 4he posteriormente incubadas na aussncia (basal) e na presença . das contúritidçãos indicadas de Dipiridamol, Ro-20-1724 ou Roflumilast por 30 min. . Os níveis de [ºH] cAMP foram determinados conforme descrito em materiais e métodos.
Dados são médias ts.e.m(n=3). | | . Descric: ão detalhada da invenção | | | Foi surpreendentemente encontrado pelos inventores “que prostaciclina Si . — análogos ou um sal farmaceuticamente aceitável derivado em combinação com um . inibidor da PDE4 pode ser usado para O tratamento da fibrose cística.
Foi demonstrado que uma combinação de prostaciclina ou análogos da prostaciclina e. inibidores da PDE4 têm efeito sinérgico no aumento do CAMP; especificamente nas células epiteliais das vias aéreas respiratórias humanas afetadas, em comparação ! com o sb de substâncias únicas.
Dito efeito ata pode ser melhorado pela ' presença de outros inibidores da PDE selecionados de inibidores da PDES, PDE7 e PDE8.
o . 13/37 Análogos sintéticos da prostaciclina podem ser, por exemplo, mas não estão limitados a, Treprostinila, Iloprosta, Cicaprosta ou Beraprosta. | Treprostinila é comercializada como Remodulin'Y, Treprostinila é um sal ' monossódico de ácido (1R,2R,3aS,9aS)-[[2,3,3a,4,9,9a-hexahidro-2-hidroxi-1-[(3S)- 3-hidroxioctil] [f]|-1H-benz[flinden-S-ilJoxilacético. ' Iloprosta é comercializada como “Ilomedin” e é ácido 5Á(E)-(18,5S,6R,7R)-7- : hidroxi-6[(E)-(3S,4RS)-3-hidroxi-4-metil-1-octen-6-inil]-bi-ciclo[3.3.0]Joctan-3- ilidenolpentanóico. : | Beraprosta é ácido 2,3,3a,8b-tetrahidro-2-hidroxi-1-(3-hidroxi-4-metil-1-octen- 6-inil)- 1H-ciclopenta(b)benzofuran-S5-butanoico.
Cicaprosta é ácido 2-[(2E) -2-[(8aS, 48, SR, 6aS)-5-hidroxi-4[(38,4S)-3- hidróxi-4-metilnona-1,6-dinil]-3,3a,4,5,6,68-hexahidro-1H-pêntalen-2- ilideno]etoxifácético,” | | eo 1 ogia É cm ss Em referência à prostaciclina, inibidores da PDE4 e PDES, PDE7 ou PDE8, de acordo com a Tresánito invenção, o termo "análogos da prostaciclina”, "análogos do inibidor" ou “análogos do inibidor da PDE4, PDES, PDÊ 7 óu PDES” significa . derivados ou diálogos das altas substâncias. Os térnos "análogo" ou “derivado” : . iclerenm-se a uma molécula química que é similar a outra substância química em estrutura e função, muitas vezes diferindo Ssttuturaiannte por E único elemento ou grupo, que pode diferir pela modificação de mais de um grupo (por exemplo, 2, 3 ou 4 grupos) se rianhvar a mesma função que a substância química mãe. Tais * — modificações são fóthna para pessoas versadas na arte e incluem, por exemplo, .
partes químicas adicionais ou substituídas, tais como ésteres ou amidas de um ácido, grupos de prófação tais como um grupo benzil para álcool ou tiol, e grupos tsio-butoxilcarioni para uma amina. Também estão incluídas modificações de vo 14/37 | cadeias laterais de alquila, tais como substituições alquil (por exemplo, metil, dimetil, | etil, etc.), as modificações a nível de saturação ou insaturação de cadeias laterais, e | | a adição de grupos modificados tais como fenil e fenóxi substituídos.
Derivados também podem incluir conjugados, tais como biotina ou partes avidina, enzimas tais como a peroxidase de rábano e similares, e partes rádio-rotuladas, bioluminescentes quimioluminescentes, ou fluorescentes.
Além disso, podem ser adicionadas partes aos agentes descritos neste documento para alterar suas propriedades | farmacocinéticas, tais como aumentar o a meia vida in vivo ou ex vivo, ou para | aumentar suas propriedades de penetração celular, entre outras propriedades desejáveis.
Também estão incluídos os pró-fármacos, que são conhecidas para . melhorar inúmeras qualidades desejáveis dos fármacos (por exemplo, solubilidade, : biodisponibilidade:; fabricação, etc): O termo "derivado" inclui, iambém. dentro do Escopa de suas alterações que foram feitas a uma dbquácia mãe ineluíndo adições, exclusões e/ou substituições que fornecem moléculas funcionalmente equivalentes ou funcionalmente melhoradas. | | ' Prostaciclinas adequadas ou análogos da prostaciclina derivados incluem, | mas não estão limitados, derivados de ácido, pró-fármacos, formas de liberação sustentada, formas para inalação e fóimas orais de Treprostínila, ltoprosta, Cicaprosta ou Beraprosta. i De acordo com uma incóiporação específica da invenção, o derivado da ' Treprostinila é selecionado do grupo dos derivados * de ácido, DISSINSOSS: . : polimorfos ou isômeros da Treprostínila. | | Da mesma forma, derivados de Iloprosta, Cicaprosta ou Beraprosta podem ser derivados de ácido, pró-fármacos, polimorfos ou isómeros destes: o termo derivado da prostaciclina também abrange seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
o 5A5 2% a“ ÁAÊeAºÂO Om, a a a MAs Doo 15/37 | | Um sal farmaceuticamente aceitável de uma prostaciclina ou um análogo de ' prostaciclina desta invenção pode ser formado entre um grupo ácido e um básico do composto, tal como um grupo funcional amino, ou um grupo base e um ácido do composto, tal como um grupo funcional carboxila. 3 Especificamente, os sais fisiologicamente aceitáveis de análogos da | prostaciclina incluem sais derivados de bases.
Sais de bases incluem sais de amônia (tais como sais de amônia quaternária), sais de metais alcalinos, tais como os de sódio e potássio, sais de metais alcalino terrosos tais como os de cálcio e magnésio, sais de bases orgânicas, tais como diciclohexilamina e N-metil-D- — glucamina e sais com aminoácidos tais como a arginina e lisina.
Especificamente, de ácordo “com a invenção o uso de Treprostínila é vantajoso.
Treprostinila pode aumentar com sucesso a expressão de CFTR AF508 e/ou a função do canal de cloreto nas células epiteliais do pulmão dos pacientes com fibrose cística.
VC Surpreendentemente foi mostrado que um análogo da prostáciclina em combinação com um inibidor da PDE4 e, opcionalmente, em combinação com um inibidor da PDES5, PDEZ7 ou PDE8 leva à estimulação sinérgica da produção de CAMP e/ou úmiehto do conteúdo de cAMP nas células troNodepialais. = " Curiosamente inibidores da PDE3, tais como Anagrelída e Cilostazo], não induzem a qualquer acúmulo de CAMP em experimentos. : Dada à essa capacidade de estimular a produção de CAMP através do receptor IP, e a presença limitada de receptores IP em um pequeno número de tipos de células (tal como células epiteliais do pulmão), a prostaciclina ou análogo | derivado, por exemplo. a Treprostinila, pode induzir a expressão e abertura de CFTR | e mutCFTR de maneira específica, quê podem ser úsiidãs pâra o tratamento da CF; | o 7 | 16/87 o | | em especial, quando combinado com ditos inibidores da PDE4 para induzir um aumento duradouro nos níveis de CAMP no epitélio das vias aéreas respiratórias.
De acordo com outra incorporação, dito aumento de cAMP ainda pode ser induzido pela combinação de um inibidor da PDE4 com outros inibidores da PDE selecionados do grupo dos inibidores da PDE5, PDE7 e/ou PDE8. | Inibidores da PDE4 são aprovados para o tratamento da DPOC e asma; o alvo principal na DPOC e na asma é reduzir a hiper-reatividade das células do músculo liso que revestem as vias aéreas respiratórias.
Níveis elevados de CAMP : nas células do músculo liso são muito conhecidos por causarem o relaxamento do : . 10 músculo liso, através da ação da quinase de cadeia leve de miosina.
Além disso, inibidotes da PDE4 são considerados por réduzir a resposta Ímune que desencadeia a asma alérgica com alvo nos Granulócitos eosinófilos e basófilos, rúnôditos, células B e T, por demplo: das células inflamatórias.
Nenhum desses dois : mecanisntos é relevante como um modo de ação na fibrose cística. a fibrose : Cística, os níveis de cAMP Havia Sbt levados em um Gompbaninento celular muito diferente, ou seja, no epitélio das vias aéreas respiratórias.
Na verdade, no melhor de hdsso conhecimento; não existem relatos científicos que mostram que PDE4 é a Sotnas relevante que aumenta o acúmulo de cAMP mediada por receptor no : epitélio das vias úsiõas Tastiaíóias. | oO Fa me gue : ' 20 De acordo com a presente invenção, qualquer inibidor da PDE4 ou seu : análogo pode ser usado com atividade inibitória para a ariziia PDEA4. “Assim, não | está RINTTA Que 6 inibidor da PDE4 possa ainda inibir também outras enzimas | PDE. , ' kd vd et Especificamente, o inibidor da PDE4 pode ser um inibidor específico da - — PDE4 | | '
CS EN———————————n=ssD=smssssssmsssssssssssssss DO TE AN | O inibidor da PDE4 da invenção pode ser, mas não está limitado a, Ro 20- 1724, lbudilast Roflumilast (3-(ciclopropyImetoxi)-N-(3,5-dicloropiridin-4-i)-4- . (difluorometoxi)benzamida) e seu N-óxido, Cilomilast, BAY 19-8004, CC3, AWD 12- : : 281 (N-(3,5-dicloro-4-piridinil)-2-[1-(4-fluorobenzil)-S-hidroxi-1H-indol-3-i1]-2- oxoacetamida), SCcH 351591 (N-(3,5-dicloro-1-oxido-4-piridinil)-8-metoxi-2- (trifluorometil)-5-quinolina — carboxamida), — Ciclamilast, —Piclamilast, = CGH2466, Mesembrina, Rolipram, Luteolina e Drotaverina ou análogos funcionais derivados.
PS Mais especificamente, a composição para uso na prevenção ou tratamento de : CF, especificamente através da elevação dos níveis de CAMP nas células broncoepiteliais de indivíduos que sofrem de CF pode especificamente incluir Treprostinila e Roflumilast ou Treprostinila e Ibudilast ou Treprostinila e Ro-20-1724. Inibidores da PDES são apontados por aumentar os nivéis do segundo mensageiro ' nucleotídeo cíclico nas células do músculo liso. oo ' f *— De acordo com a presente invenção, qualquer inibidor à PDES ou seu análogo pode ser usado tendo atividadê inibitória para a enzima PDES.
Ássim, não está excluído que 6 inibidor da PDES pode ainda inibir Otras Gnizinas da PDE . também. | | | EANES l oo Dê acordo com a invenção, o inibidor da PDES pode ser selecionado - Sapadificánsnis de Avanafila (4I8-cloro-4-metoxiberizil) âmiio] “2:12 (hidroximetil) 2 — 1Lpirrolidinil] - N-(2-pirimidinilmetil) -5 - pirimidinocarboxamíida), Lodenafila (bis-(244" [4-etoxi-3-(1-metil-7-0x0-3-propil-6,7-dihidro-1H-pirazolo([4,3-d]pirimidin-5-il)- benzenosuilfónillpiperazin-1-il)-etil)darbonato), Mirodenafila (6-6til-3,5-dihidro:2-[5-([4" | (2-hidroXyetil)-1-piperazinillsulfonil)-2-propoxifenill-7-propil-4H-pirrolo[3,2-dipirimidin- | | 4-ona), Sildenafila citrato de (1-[4-etoxi-3-(6,7-dihidro-1-métil:7-o0x0-3-propil-1H- pirazolo[4,3-d]pirimidin-S-il) fenilsulfonil] 4-metilpiperazina), Tadalafil (GR-trans)-6-
O MO A O o MNA ONO eeeee— Do 18/37 o | (1,3-benzodioxol-5-i1)-2,3,6,7,12, 12a-hexahidro-2-metil-pirazino [1',2":1,6] pirido [3,4- b] indol-1,4-diona), Vardenafil (4-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazin-1-il)sulfonil-fenil]-9-metil-7- propil-3.568-tetrazabiciclo[4.3.0]nona-3,7,9-trien-2-one) ou Udenafil (3-(1-metil-7- ox0-3-propil-4,7-dihidro-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-N-[2-(1-metilpirrolidin-2- iN)etil)--4-propoxibenzenesulfonamida) ou quaisquer análogos funcionais.
Em uma incorporação específica da invenção, a composição pode incluir ' Treprostinila, Roflumilast e, opcionalmente, um inibidor da PDES5, PDE7 ou PDE8 ou . . Treprostínila, Ibudilast e, opcionalmente, inibidor da PDES, PDE7 ou PDE8 ou Treprostinila, Ro-20-1724 e opcionalmente inibidor da PDES5, PDE7 ou PDE8. Em uma outra incorporação da invenção, a composição pode incluir Beraprosta, Roflumilast e, opcionalmente, um inibidor da PDES5, PDÊ7 ou PDEB8 ou ' Berapiosta, Ibudilast ã opcionalmente, um inibidor da PDES, PDEZ7 ou PDE8 ou . Beraprosta, Ro-20-1724 e opcionalmente um inibidor da PDES5, PDE7 ou PDE8. Em uma outra incorporação da invenção, a composição pode incluir lloprosta, Roflumilast e opcionalmente um inibidor dá PDES5, PDE7 ou PDE8 ou lloprosta, Ibudilast e, opcionalmente, um inibidor da PDES5, PDE7 ou PDES ou llóprosta, Ro- | 20-1724 e opcionalmente um inibidor da PDES5, PDE7 ou PDESB. o i i Em uma outra incorporação da invenção, a conipbsição pode incluir Cicaprosta, Roflumílast e, opcionalmente, um inibidor da PDES5, PDE? ou PDE8 ou Cicaprosta, Ibudilast e, opcionalmente, um inibidor da PDES5, PDE7 ou PDE8 sá Cicaprosta, Ro-20-1724 e opcionalmente um inibidor da PDES, PDE?7 ou PDEB. | De acordo com presente invenção, qualquer inibidor da PDE7 ou PDE8 ou * seú análogo pode ser utilizado tendo atividade inibitória para a enzima PDE7 ou PDE8. Assim, não está excluído que o inibidor da PDE7 ou PDE8 pode ainda inibir outras enzimas PDE também.
CCC Na | 19/37 ' De acordo com a invenção, o inibidor da PDE7 pode ser selecionado . ' especificamente de Dipiridamo! e BRL 50481. De acordo com a invenção, o inibidor da PDE8 pode ser selecionado especificamente de amidas 1,5-substituídas do ácido nipecótico e PF-4957325. Em uma incorporação alternativa da invenção, a composição pode incluir especificamente Treprostinila, Roflumilast e Dipiridamol ou Treprostinila, Ibudilast e . Dipiridamo!l ou Treprostinila, Ro-20-1724 e Dipiridamol . Em uma outra incorporação alternativa da invenção, a composição pode incluir especificamente Beraprosta, Roflumilást e Dipiridamol ou Beraprosta, Ibudilast e Dipiridamo! ou Beraprosta, Ro-20-1724 e Dipiridamol. | Ainda em uma outra incorporação alternativa da invenção, a composição i S pode SSGRSTICAMENnTo ESMBISGNda: Iloprosta, Roflumilast e Dipiridamol ou Iloprosta, Ibudilast e Dipiridamo! ou lloprosta, Ro-20-1724 e Dipiridaítiol. = | Em uma outra incorporação da invenção, a composição pode incluir especificamente Cicaprosta, Roflumilast e Dipiridamol — ou Cicaprosta, Ibudilast e | Dipiridamol ou Cicaprosta, Ro-20-1724 e DipiridamoL. O | O Alternativamente, a composição pode incluir Treprostinila, Roflumilast e BRL 50481 ou TFrepiostinita, Ibudilast e BRL 50481 ou Treprostínila, Ro20-1724 e BRL
50481. NA | Veibcaso Alternativamente, a composição pode incluir especificamente Treprostinila, | Roflumilast e PF-4957325 ou Treprostínila, Ibudilast é PF-4957325 ou Treprostinila, Ro-20-1724 e PF-4957325. : | | De acordo com a invenção o termo "pelo menos um" ou "um" significa que um tipo de prostaciclina ou análogo da prostaciclina e um tipo de inibidor da PDE4 e opcionalmente um ou mais dos inibidores da PDES5, PDE7 ou PDES estão presente
CC———————————.—.— DO 20/37 o para uso no tratamento ou prevenção da fibrose cística, especificamente para o uso no aumento do nível de CAMP em células broncoepiteliais.
No entanto, como alternativa, a composição também pode incluir mais de um tipo de prostaciclina ou análogo da prostaciclina e mais de um tipo de inibidor daPDE4 e, opcionalmente, um s ou mais inibidores da PDE5, PDE7 ou PDE8, especificamente, dois, três, quatro ou | mais de quatro tipos ou quaisquer combinações das prostaciclinas ou análogos da prostaciclina e inibidores da PDE4 e, opcionalmente, da PDES5, PDE7 e/ou PDE8. A invenção ainda fornece uma composição específica, compreendendo Treprostinila e um ou mais inibidores da PDEA4 selecionados do grupo de RO 20- 1724, Roflumilast e Ibudilast. ] A composição inventiva pode ser forínutada como uma composição farmacêutica. ! | i no” A Gomnposição da Mivaiigão pôde estar presente “Sob atiaiquer forma que : possa ser usada para administração. | | ' A dose específica de um composto administrado de acordo com esta invenção para obter efeitos terapêuticos ou profiláticos será, naturalmente, | detenminada pelas circunstâncias particulares do caso, incluíndo, por exemplo, a via de administração, a idade, peso e resposta individual do BACiSO, a condição a ser | i tratado e a gravidade dos sintomas do pátisnta. | o Em geral, os compostos da invenção são administrados, de modo mais | desejável, Si uma concentração que geralmente irá permitir resultados icizs sem causar efeitos colaterais graves e podem ser administrados como uma dose de | unidade única, ou se desejado, a dosagem pode ser dividida em subunidades . convenientes administradas nos momentos apropriados durante todo o dia. : .
A SS SSL, SS RN 21/37 ' | A composição pode ser provida em uma variedade de formulações tópicas e sistêmicas.
As formulações tópicas ou sistêmicas da invenção são selecionadas a partir do grupo de oral, intrabucal, intrapulmonar, retal, intrauterina, intradérmica, i tópica, dérmica, parenteral, intra-tumor, intracraniana, intrapulmonar, bucal, '
sublingual, nasal, subcutânea, intravascular, intratecal, inalável, respirável, intra- articular, intracavitária, implantável, transdérmica, iontoforética, intraocular, oftálmica, vaginal, óptica, endovenosa, intramuscular, intraglandular, intra-orgão, intralinfática, formulações de liberação lenta e revestimento entérico.
A preparação e composição vigentes destas diferentes formulações são conhecidas na arte e não necessitam ser | detalhadas aqui.
A composição pode ser administrada uma vez ou várias vezes ao dia. | ! | | Fórmulações adequadas ; para administração via respiratória, | nasal, | tiGbúlMáNar, “e inaláção são preferidas, bém como são as Tómiulações Tapicas: orais e parenterais.
Em geral, as formulações são preparadas uniformemente e | | 15 intimamente trazendo o composto ativo em associação com um veiculo líquido, um veículo sólido Hhaments dividido, ou ambos, e, então, se necessário, formulando o próduto nas formulações desejadas. &, raias ão, RIMAS, . : Composições adequadas para administração oral podem ser apresentadas : . em unidades discretas, tais como cápsulas, pílulas, pastilhas ou comprimidos, cada um contendo a composição como um pó ou granulado; como uma solução ou suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso; ou como uma emulsão de óleo em água ou água em óleo. : maneio
“. | Composições adequadas para administração parenteral compreendem soluções esterilizadas para injeção aquosas e não aquosas do composto ativo, cujas preparações são de preferência isótônicas com o sangue do indivíduo receptor. .
Ri AAA (1P.))) )))))))))VUNARNNUISOO, . mma ea RE —————————————-----=m——smmrp=m-.s-=>-sss-nsnma DO | 22/37 o " Estas preparações podem conter antioxidantes, tampões, agentes bacteriostáticos e solutos que tornam as composições isotônicas com o sangue do destinatário.
Suspensões estéreis aquosas e não aquosas podem incluir agentes de suspensão e | agentes de espessamento.
As composições podem ser apresentadas em recipientes com dose unitária ou com multidoses, por exemplo, ampolas e frascos selados, e podem ser armazenadas em uma condição seca e desidratada ou liofilizada, exigindo apenas a adição de veículo líquido estéril, por exemplo, solução salina ou água para injeção imediatamente antes da utilização. ; Formulações nasais e por instilação compreendem soluções aquosas purificadas do composto ativo com agentes conservantes e agentes isotônicos.
Tais formulações são preferêncialmente ajustadas a um pH | e estado isotônico . compatíveis com as mucosas nasais. ! o | A composição divulgada de acordo com a invênção pode ser administrada ao sistema respiratório tanto por inalação, espliação; admiriistração nasal ou instilação intrapulmonar (nos pulmões), em um indivíduo através de qualquer meio apropriado, e são administradas preferencialmente Bela geração de um aerossol ou spray . composto do pó ou líquido nasal, intrapulmonar, partículas respitáveis ou inaláveis.
Às pártidilas rásbiiáidis ou inaláveis, compreendendo o composto ativo são inaladas pelo indivíduo, por exemplo, por inalação ou por administração nasal ou por instilação no trato respiratório ou no próprio pulmão.
A formulação pode incluir um líquido TEspirável ou inalável ou partículas sólidas do composto ativo que, de acordo ' com a presente invenção, incluem partículas respiráveis ou inaláveis de um tamanho , suficientemente pequeno para passar através da boca e laringe após inalação e continuar pelos brófiquios e alvéolos dos pulmões.
Em geral, partículas variando cercã de 0,05, cerca d 0,1, cerca de 0,5, cerca de 1, cerca de 2 a Sica de 4, cerca
ESCCCCCCCCOOOEOLOOOêtteeetegectcaecucetei ci AS JÔ SS A A 2 !UD.!. SAS“ “ss É A“: A AÇO a QÇ">"""o Dos 23/37 | ! o de 6, cerca de 8, cerca de 10 mícron de diâmetro.
Mais particularmente, cerca de 0,5 — amenos de cercade 5 um de diâmetro, são respiráveis ou inaláveis.
Partículas de ' tamanho não respirável que estão incluídas em um aerossol ou spray tendem a depositar-se na garganta e ser engolidas.
A quantidade de partículas não-respiráveis * no aerossol é, assim, de preferência minimizada.
Para administração nasal ou : instilação intrapulmonar, um tamanho de partícula na faixa de cerca de 8, cerca de : 10, cerca de 20, cerca de 25 a cerca de 35, cerca de 50, cerca de 100, cerca de 150, cerca de 250, cerca de 500 um de diâmetro é preferencial para garantir a retenção na cavidade nasal ou por instilação e deposição direta no pulmão.
Formulações líquidas podem ser esguichadas no trato respiratório ou nariz e pulmão, ' particularmente quando administradas em recém-nascidos e lactentes. o | Aerossóis de partículas líquidas, Gonipreendendo o corónsto São odsA dei | produzidos através de qualquer meio apropriado, tal como com um nebulizador. | Nebulizadores são dispositivos comercialmente dispôniveis que transformam | soluções ou suspensões do ingrediente ativo em uma névoa Sbrbsso! terapêutica . tanto por meio da aceleração de um gás comprimido, geralmente ar ou oxigênio. : . Composições adequadas para utilização em nebulização Conststam do princípio ativo di Vétculs líquido, o ingrediente ativo compreendendo até 40% p/p ua composição, mas de pieferência inferior a 20% p/p do veícúlo Sófido Góralnénio água ou uma solução alcoólica aquosa diluída, proferencialmente tornado isolônica « —.com os fluidos corporais através da adição de, por exemplo, de cloreto de sódio. . Aditivos opcionais incluem conservantes se a composição não é preparada estéril, por exemplo, hidroxibenzoato de metilo, antioxidantes, agentes aroriatizantes, óleos ' voláteis, agentes de tampão e surfactantes.
Aerossóis às partículas sólidas, compreendendo o composto ativo podem ser produzidos da mesma forma com
Si iv vv AAA AO OU O O Po 24/37 o | | qualquer gerador de aerosso! de medicamento com partículas sólidas.
Geradores de aerossol para administração de medicamento com partículas sólidas produzem partículas que são respiráveis, tal como explicado acima, e geram um volume de aerossol contendo uma dose calibrada pré-determinada de um medicamento a uma : — taxa adequada para a administração humana.
Exemplos de tais geradores de aerossóis incluem inaladores e insufladores de dose calibrada. | Em uma incorporação, o dispositivo de fornecimento compreende um inalador de pó seco (DPI) que dispensa doses únicas ou múltiplas da composição.
O inalador | de dose única pode ser fornecido como kit descartável que é pré-carregado esterilmente com formulação suficiente para ma aplicação.
O inalador pode ser fornecido como um inátádor pressurizado; ea formulação em CASS OU cartucho perfurável ou que "abre, o kit opcionalmente pode também compreender, em um recipiente separado, um agente tais como outros compostos terapêuticos, excipientes, surfactantes (concebidos como agentes terapêuticos, bem como 15º ingredientes de formulação), ágantes “antioxidantes, afoiralizantos e corantes, . preenchedores, óleos voláteis, agentes de tampão, dispersantes, tensoativos (surfactantes), antioxidantes, agentes aromatizantes, agentes de volume, propulsores e conservantes, entre outros aditivos adequados para as diferentes formulações: | oo | Na VET IEL Devido à alta estabilidade metábólica de alguns análogos dá próstabliólina tal como “Treprostinila, ou se fornecido como formas baseadas em lipídios ou peguiladas das piostaciolinas ou análogos da prostaciclina, as substâncias também podem ser administradas como medicamentos de depósito.
ESTA FILME Inibidores da PDE4, PDE5, PDE7 e PDES também são metabolicamente estáveis, portanto, a combinação entre a prostaciclina ou análogo da prostaciíclina e '
O A A A O SA. U— OO E O.
O O O ÓAÇO A | DT 25/37 | | o inibidor da PDEA, opcionalmente em conjunto com um ou mais dos inibidores da PDES5, PDE7 ou PDE8 também pode ser formulada como medicamento de depósito. | A entrega da composição via aerossol pode resultar em uma distribuição mais . homogênea do agente em um pulmão, de modo que seja obtida uma administração . 5 profunda no pulmão.
Assim, a dosagem de aplicação pode ser reduzida devido à presença constante do agente no local de ação no pulmão.
A composição pode, por exemplo, ser administrada através de um nebulizador.
A vantagem do método de entrega através de nebulização é que menos « — substância atinge a circulação sistêmica.
A composição pode ser administrada várias vezes ao dia, por exemplo, cinco a 10 vezes por dia, no entanto, devido ao efeito sinérgico da prostaciclina ou análogo da prostaciclina e PDEA, opcionalmente, . SS combinação com um ou mais inibidores da PDES5, 'PDE7 elou PDES, a frequência de dosagem geralmente pode ser reduzida. | o A composição pode ser administtada com quaisquer substâncias ' | 15 fánicidaidcaaeda áceitáveis ou veículos ou excipientes conforme conhecido rã arte.
Estes podem ser, por exemplo, mas não são restritos a água, agentes de neutralização como NaOH, KOH, estabilizadores, DMSO, salina, bpetaína, taurina, eto. í “o | i O termo “farmaceuticamente aceitável” significa aprovado por uma agência ' reguladora do Governo Federal ou Estadual ou listado nos EUA. | O O termo "veículo" refere-se a um diluente, adjuvante, excipiente ou transportador com o qual a composição farmacêutica é administrada.
Soluções : salinas e dextrose aquosa e soluções de glicerol também podem ser empregadas como veículos líquidos, particulârmente para soluções injetáveis.
Excipisntes | adequados incluem amido, glicose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz, farinha,
od ! 26/37 giz, sílica gel, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite em pó desnatado, glicerol, propileno, glicol, água, etanol e similares.
Exemplos de veículos farmacêuticos adequados são descritss em "Remington's Pharmaceutical Sciences" por EW.
Martin.
A formulação deve ser selecionada de acordo com o modo de administração. : A quantidade de composição inventiva pode ser selecionada por qualquer pessoa versada, especificamente, a quantidade das prostaciclinas ou análogos da ' prostaciclina ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, especificamente a ' f quantidade de Treprostinila é pelo menos de 1,0 ng/kg de peso corporal.
À quantidade de inibidor da PDE4 ou PDES5 pode também ser facilmente selecionada por pessoas versadas.
Especificamente, « quantidade de inibidor da PDE4 ou PDES ou PDE 7 ou PDES é cerca de 0,5 mg para Roflumilast óu cerca de 30 mg de * —Ibudilast, pelo menos imã vez por dia, especificamente pelo menos duas Vezes oi . Além disso, a presente invenção fornece um método para aumentar o nível de - cAMP em uma célula em que dita célula está em contato oi pelo menos uma prostaciclina ou análogo da prostáciclina e pelo menos um PDE4 e, “opcionalmente, pelo ménos um dos inibidores da PDES, PD7 ou PDES.
O áumento do CAMP em | S ditas células boué ser pelo insdos 10%, de preferência pelo menos 25%, de DRSTSNSREIA pelo SOS 50%, mais preferivelmente pelo ÁShos 100% em relação ao tratamento apenas om a: prostaciclina ou um inibidor da PDE4 e/ou PDES ou PDE7 ou PDESB. " | o oo | Uma combinação terapêutica, compreendendo pelo menos um análogo da prostaciclina e pelo menos um PDE4 e, opcionalmente, pelo menos um inibidor da PDES e/ou PDE7 e/ou inibidor da PDES, onde o análogo da prostaciclina e um | é 1 ai i inibidor da PDE4 e/ou PDES5 e/ou inibidor da PDE7 e/ou inibidor da PDE8 são , fornecidos em quantidades que juntos são suficientes para tratar e/ou prevenir pelo ; . menos um sintoma associado com a fibrose cística também é fornecido.
Especificamente, um aumento do nível de cCAMP nas células epiteliais do pulmão de pacientes com CF pode ser alcançado através da administração da preparação da combinação terapêutica inventiva.
Pelo menos um análogo da prostaciclina e PDE4 e, opcionalmente, um ou mais inibidores da PDE5, PDE7 ou PDE8 são formulados . especificamente para administração por inalação.
Em uma incorporação específica da presente invenção, é divulgada uma combinação terapêutica para o tratamento da fibrose cística.
De acordo com uma incorporação específica, os sintomas associados om níveis reduzidos de CAMP em i células broncoepiteliais de pacientes som CF podem ser tratados ou prevenidos | usando a combinação terapêutica Kivêniiva; Possivelinênte, E ou rmais ágentes adicionais também podem ser administrados. | Ea A prostaciclina ou análogo da prostaciclina e PDE4 e, opcionalmente, o inibidor da PDES5, PDE7 ãi PDE8 podem ser administrados juntos, pôr exemplo, em um único comprimido ou cápsula ou formulação para inalação ou PDE4 e; opcionalmente, outros inibidores da PDE da invenção bem como agentes opcionais adicionais podem ser administrados separadamente da prostaciêlina ou análogo da | prostaciclina. | | - : | A invenção mais Tórndos um kit e sua utilização no tratamento ou "prevenção | de uma condição asstoiáda à fibrose cística em um indivíduo, que compreende (O) | uma quantidade efetiva de uma prostaciclina ou análogo da prostaciclina, (ii) um inibidor da PDE4, especificamente Roflumilast, Ro-20-1724 ou lbudilast e, 23 opcionalmisnta, um ou mais compostos Selecionados do grupo dos inibidores da
MANN 28/37 « — .PDES, PDE7 e PDE8, (iii) uma ou mais veículos e/ou aditivos farmaceuticamente . aceitáveis, e (iv) instruções para o uso no tratamento ou prevenção da fibrose cística em um indivíduo, de preferência um ser humano.
Ditos componentes (i) e (ii) e (iii) podem ser em uma forma adequada para administração intravenosa, por inalação ou para administração oral.
Os exemplos aqui descritos são ilustrativos da presente invenção e não se ' Í destinam a serem limitações desta.
Diferentes incorporações da presente invenção foram descritas de acordo com a presente invenção.
Muitas modificações e variações podem ser introduzidas às técnicas descritas e ilustradas aqui sem se apartar do espírito e do escopo da invenção.
Por conseguinte, deve ser entendido | * que os exemplos são apenas ilustrativos e não estão limitando o escopo da invenção. o Exemplos : | Co Exemplo 1: | oo SANA SANA Células 1831 foram incubadas em placas de 6 poços (0,2 * 10º células/poço na Fig. 1; 0,4 * 10º células na Fig. 2) em meio de cultura completo (LHC-8 + 5% | | FCS). No dia seguinte, o pool de nucleotídeos de adénina foi metabolicamente árcado por Moubação com [3H]adenina (1pCi/poço) no mais Dilbécco's Modified Eagle Medium (DMEM) contendo adenosina deaminase (1 unidade/ml) por 4 horas.
Depois disso, o meio foi substituído por meio fresco; as cálulais foram estimuladas por adição exclusiva de Treprostinila (em cOhóentiaaões logaritimicâmente | espaçadas variando de 0,1 a 30 uM) ou de Treprostinila em combinação com as concentrações indicadas dos inibidores da PDE.
Após uma incubação de 30 min, as i células foram lizadas pela adição de ácido perclórico.
Do : 29/37 ' A formação de [3H] cAMP foi determinada por cromatografia sequencial em Dowex 50WX+ e colunas de alumina neutra, seguida pela contagem por cintilação líquida do eluído.
O ensaio foi realizado em triplicata.
Os resultados são mostrados nas figuras 1 e 2. A diferença entre a resposta 5º máxima na Fig 1 e fig 2 é principalmente devido ao fato de que o número de . células/poço na Fig. 2 é cerca de duas vezes tão alta quanto o empregado na fig.1. Exemplo 2: Células IB3-1 expressam endogenamente apenas uma mutação CFTR AF508, que é mantida dentro das células.
Usando manipulações apropriadas (e.g. 10 fármaco-chaperonas ou baixa temperatura de incubação), é possível trarislocar o i S mutante CFTR AF5OB do retículo endoplasmático para o ER; quando inssndo na superfície da célula, uma condutância de Cl pode ser estimulada pela elevação de CAMP.
A condutância de CI resultante, no entanto, é pequena.
A fim de provar insquivóSámente dus 6 acúmulo de CAMP induzido por Traprosiria, traduzida para uma ativação de CFTR, expressamos transiêntemente “uma Versão expressando GFP de CFTR tipo selvagem (a expressão GFP permitiu a identificação de células que expressam a proteína na superfície da célula). Conforme pode ser visto na fig. 3,a Trepiostinila causou uma toite “ativação "da 'corrênte iduúzida por uma : despolarização de 40 mv mantendo potencial a +60 mv.
O "efeito ináximo foi , 20 retardado, ou seja, observou-se apenas alguns segundos pos Fagam do composto.
Da mesma forma, houve também uma histerese na Teação de desligamento; a corrente decaki à baia apenas - 160 : após a lavagem: Estas respostas atrasadas refletem () intervenção na cascata de sinálização (isto é, a ativação de receptor dependente de G., Gas-dependente da ativação da formação de cCAMP e a fosforilação dependente da proteína quinase A de CFTR que se seguiu | go 30/37 | | " RS e (ii) a desativação atrasada de CAMP aumentado por fosfodiesterases.
Atrasos semelhantes também foram vistos, se as células foram estimuladas com forskolina, um ativador direto uma adenilato ciclase, que foi usado como controle positivo. | i Essas observações provam que a Treprostinila pode ativar CFTR nas células | 5 epiteliais brônquicas. ' Métodos: | Eletrofisiologia A técnica whole cell patch clamp (técnica de patch clamp na configuração de célula inteira) foi usada para registros atuais, realizadas a 22 + 1,5º C, usando um ' amplificador de patch clamp Axoclamp 200B (Axon Instruments). Pipetas tinham resistências entre 1 e 2 MO quando preenchidas com a solução de registro da pipeta (composição: 110 mM CsCI, 5 mM EGTA, 2 mM MgChk, 1 mM K2ZATP, 10 mM . Hepes, pH ajustado a72 com CsOH). Protocolos de voltáge-clamp e aquisição de dados foram realizados com o software pclamp 6.0 (Axon Instruments). Dados foram | filtrados por filtros de passagem baixa a 2 kHz (-3 dB) e digitalizado a 10-20 kHz.
As células foram continuamente superfusionadas com solução externa (composição: NaCl 145 MM, KCl 4,5 mM, CaCl; 2 mM, MgCl2 1 mM, glicose 5 mM, Hepes 10 mM, : pH ajustado a 7,4 com NaOH). Quando indicado, a ' solução externa continha Trepiostinita (10 UM) ou forskolina 6 UM), a alternância Site Soluções foi atingida | por válvulas de pressão controlada eletronicamente. o Com base nos resultados do exemplo 1, é esperada uma resposta sustentada, se Treprostinila é combinada com inibidorés da PDÊ 4 ou 5, por . exemplo, 10 uM de Roflumilast ou 100 UM de Ibudilast ou 10-100 UM de Tadalafil ou : . Sildenafila ou Vardenafil. ' | Cultura de células: | |
DN | 31/37 Células IB3-1 foram cultivadas em placas (Nunc, 3,5 cm de diâmetro) cobertas com fibronectina (10 py g/mL), colágeno de rato | (30 py g/mL) e BSA 10 pg/mL) em meio LHC-8 (Gibco) contendo 5% de soro fetal de vitela (FCS). As - células foram transfectadas transientemente com um plasmídeo conduzindo a expressão de CFTR tipo selvagem humana marcado com GFP utilizando Lipofectamine plus€& (Invitrogen) de acordo com as instruções do fabricante.
Amplitudes atuais representativas registradas na configuração patch clamp de | célula inteira a +60 mV.
Uma célula IB3-1 transfectada transientemente expressando | S CFTR tipo selvagem marcado com GFP foi selecionada sob luz fluorescente e mantida a um potencial inicial (holding potential) de -40 MV.
Foi induzida a despolárização por uma etapa de tensão de +66 mV por 50 mt e amplitude atual foi registrada.
Iribraginsão de Treprostinila (coricêntração final de 10 UM, TP) foi | iniciada no ponto de tempo de 50 s e finalizada a 125 s.
Forskolina foi impregnada | em 275s e foi removida em 375 s.
Os resultados são mostrados na Figura 3. Exemplo 3 * oo oo Introdução i | oe R Observações anteriores indicaram que, nas células Spiteliais das vias aéreas | . respiratórias humanas, o acúmulo de cAMP induzido por Treprostínila foi especificamente melhorado através das isoformas dos inibidores da fosfodiesterase- à FP So : : IR 2 EA iai a Materiais e métodos ros . Linhagens celulares e cultura de células: * | ' : As Seguintes linhagens de célula epiteliais brônquicas humanas foram obtidas através de ATCC: BEAS-2B (ATCC CRL-9609), Nuli-f (ATCÉ CRL-4011), I1B3-1 (ATCC CRL-2777), CuFi-1 (ATCC CRLA4013). As células foram propagadas
RT ""É.,:2)50)+)"WECAE]I VR O ANNAN NINO ON, NS CRCCRCCRCRC”R”“COC£CZ PAR o 32/37 ' os utilizando as condições de cultura descritas nas recomendações ATCC, por exemplo, as células 13B-1 foram mantidas em placas revestidas com fibronectina (10 up g/ml), colágeno de rato | (30 up g/ml) e BSA 10 pu g/umL) em meio LHC-8 (Gibco) contendo 5% de soro fetal de vitela (FCS) a 37º C em uma atmosfera umidificada de CO, 5%. Células BEAS-2B foram mantidas a 37º C em uma atmosfera umidificada de CO, 5% em placas revestidos com colágeno IV (60 ug/ml em ácido acético a | 0,25%) em meio BEGM (Lonza); GA-1000 (mix de gentamicina-anfotericina B) * fornecido com o kit BEGM não foi adicionado ao meio.
O nível de expressão endógena de CFTR foi demasiado baixo para obter um sinal de confiança.
Assim, células BEAS-2B foram transfectadas transientemente com um plasmídeo : conduzindo a expressão de CFTR tipo selvagem humano marcado com GFP utilizando Lipofectamine plus& (Invitrogen) de acordo com às instruções “do | fabricante.
Células expressando este CFTR marcado com GFP foram identificadas por microscopia de fluorescência e submetidas a registros patch clamp conforme descrito abaixo.
É i | | : “Ensálo de acúmulo de cAMP: STE TA fds nes too Células IB3-1 foram semeadas em poços revestidos com PDL de placas de 6- | poços (2 a 2,5 * 10º células/poço) sm meio de cultura completo (LHC-8 + FCS 5%). No dia seguinte, o pool de nucleotídeos de adenina celular foi metabolicamente rotulado por incubação com [“H]adenina (1 pCi/ poço) no meio de cultura DMEM . (Dulbecco's Modified Eagle Medium) na presença de adenosina deaminase 6 pgimb . | por 4 horas.
Posteriormente, o meio foi substituído por DMEM fresco e a formação de cAMP foi estimulada pela adição de 5 uM de forskolina, um ativador direto da - adenilato ciclase ou 10 UM de Treprostinila na ausência e na presença de diferentes concentrações dos seguintes inibidores da fosfodiesterase (PDE): Ibudilast (0,3 - | eo 33/37 | | | 1000 UM), Ro-20-1724 (0,03 - 300 uM), Roflumilast (1 nM - 10 uM), Dipiridamo! (0,01 i - 100 uM), Amrinona (1, 10, 100 uM), Anagrelida (1, 10, 100 uM), Enoximona (1, 10, 100 UM), Milrinona (1, 10, 100 UM) e Cilostazol (0,1 a 100 uM) por 20 min a 37º C. | Em alguns casos, o efeito destes inibidores no acúmulo de cAMP basal foi -) examinado por incubação das células na ausência de qualquer estímulo adicional À com concentrações crescentes dos inibidores da PDE (i.e., Dipiridamol, Ibudilast e Ro-20-1724 em 1, 10 e 100 uM; Roflumilast em 0,1, 1 e 10 uM de Roflumilast). Curvas de resposta a concentração para Treprostinila foram obtidas pela adição de Treprostinila (0,1 a 30 UM) apenas ou em combinação com 100 uM de Ro-20-1724, | 100 UM de Ibudilast ou 5 uM de Roflumilast.
A reação realizada em triplicado foi interrompida pela adição de ácido perclórico 2,5% em confudto com o mM (não rotulado) de cAMP.
FHICAMP foi isolado por cromatografia sequencial em Dowex 5O0W - X4 e colunas de alumina neutra.
A formação de THICAMP foi úshitificada pela contagem de cintilação líquida. | | Eletrofisiologia — registros “patch clamp: a : , f | À técnica de patch clamp na configuração de célula inteira foi usáda para registros atuais realizados à 22 z 1,5º C, usando um amplificador de patch clamp Axoclamp 200B (Axon Instruments). Pipetas tinham resistências entre 1 e 2 MO quando preenchidas com a solução de registro da pipeta tóoiripisidão: Csc! 110 30º raM, EGTA 5 mM, MgCle 2 mM, K2.ATP 1 mM, Hepes 10 mM, pH ajustádo-a 7,2 com - CsOH). Protocolos de voitage-clamp (fixação de voltagem) e dados de aquisição foram realizados com o Soltwiais pelamp 6.0 (Axon Instruments). Dados foram filtrados por filtros de passagem baixa de 2 kHz (-3 dB) e digitalizados em 10-20 kHz.
As células foram continuamente superfusionadas com solução externa (composição: — NaCI145 MM, KCI4,5 mM, CaCh 2 fnM, Mg 1 mM, glicose 5 mM, Hepes 10 mM, |
|. z | 34/37 | : : | pH ajustado a 7,4 com NaOH). Quando indicado, a solução externa continha | Treprostinila (10 UM) ou forskolina (5 UM), a alternância entre as soluções foi atingida através de válvulas de pressão controlada eletronicamente. . Acúmulo de CAMP na linhagem de células IB3 na ausência e na presença de | inibidores das fosfodiesterases:
O levantamento das isoformas de PDE prevê que inibidores da PDE devem ter um efeito pronunciado no acúmulo de cAMP nas células epiteliais brônquicas humanas.
Além disso, esta análise forneceu evidências da presença de isoformas
' adicionais das fosfodiesterases.
Nesse “sentido, foram testados os inibidores '
| 10 seletivos da PDE-4, Roflumilást de e Ibudilast, e seu efeito foi comparado ao de vários inibidores da PDE adicionais: RO20-1724, um inibidor não-seletivo da PDE com PDEA4-preferência: Dipiridamol, que bloqueia o transportador-1 e-2 equilibrativo (ENT1 - e ENT2) de nucleosídeo e, além dissó, inibe à PDES, PDE7ZA, PDESA,
' “PDE10A é PDÉ11 (Soderling et al, 1998; Hetman et al, 20004 &b; Ómori & Koteia, 2007). Amrinona, Milrinona e Cilostazol, que são inibidores seletivos das isoformas da PDE3; Anagrelida, que inibe a PDE2 e PDE3. Ibudilast é Shas selétivo do que Roflumilast e também inibe as isóformas dá PDE1O é PDE11. À abordagem focou na regulamentação dos níveis de CAMP: otario, as Srdimas Específicas para | cGMP: PDES5, PDE6 e PDES9 não foram mais consideradas (Bender & Bavo, 2006:
Omóri & Kotera, 2007). ei
Às células geralmente expressam muitas SSfITaS da adenilato ciclase.
Em muitos Casos, os receptores que são Adoblagôs a Gs não têm acesso a todos os pools de células de adenilato ciclases.
Em contraste, a forskolina estimula todas as isoformas de adenilato ciclase.
Na ausêricia da inibição da fostodiesteráse, CAMP é rapidirente hidrolisado de tal modo quê acumula apenas para níveis Baixos no eos 35/37 ' estado estacionário.
Inibição da fosfodiesterase resulta no acúmulo de cAMP.
Roflumilast, Ibudilast, Dipiridamo! e RO20-1724 substancialmente melhoram o . acúmulo de CAMP desencadeado por forskolina 5 uM.
Roflumilast foi o inibidor mais . ! potente e Dipiridamol foi o menos inibidor potente.
Ibudilast e RO20-1724 foram mais eficazes do que Roflumilast.
Tomados em conjunto esses dados sugeriam que isoformas da PDEA4 contribuíram em grande extensão para a hidrólise do cAMP.
Se o acúmulo do CAMP foi provocado por Treprostinila, a curva de concentração- resposta para todos os inibidores foi deslocado para a esquerda.
Essa deslocamento . para a esquerda indica que o CAMP gerado por meio da estimulação do receptor é mais prontamente acessível à degradação por fosfodiesterases.
Uma explicação possível é a ancoragem das fosfodiesterases nas proximidades dos isteptoras (Francis et al., 2011). A maior eficácia de Dipiridamo! também sugere uma possível contribuição para PDE8 ou PDE1O0. A principal ação dos inibidores da fosfodiesterase & aumentar o acúmulo de CAMP: ERQUENtO Esso Usto é 6 efeito máximo aumenta), a afinidade aparente do agonista (isto é, sua ECso) não é deslocada. | Na ausência de um agonista adicionado exogenamente (ou de forskolina), os * inibidores da PDE não causam por se qualquer aumento apreciável no acúmulo 'de ' CAMP.
É de se esperar; a atividade basal da adenilato ciclase é muito baixa e requer entrada através da ativação de receptores dependentes de G; para catalisar a formação de CAMP.
No entanto, . Sontidõds de cultura celular Z ou seja, em Ínelos definidos - não ná quaisquer sigóhistis presentes. aliaiad Inibição da PDE melhora correntes de Cl induzidas “por Trepiostinila pelo | CFTR: | | ! : & mma : |
Dl 36/37 Devido a inibição das isoformas da PDE4 melhoraram o acúmulo de cAMP induzido por Treprostinila, esta manipulação foi prevista para melhorar o efeito de : Treprostinila nas correntes de cloreto através do canal do regulador da condutância transmembrana na fibrose cística /Cl (CFTR). Este foi o caso: Treprostinila causou conforme sustentado a ativação do CFTR; a corrente externa resultante pode ser detectada pelos sáltos de voltagem de -20 para -80 mV.
A adição de Roflumilast (e ' outros inibidores da PDEA4 tais como Ibudilast e RO20-1724) causou um aumento ' adicional da corrente.
A corrente é conduzida pelo CFTR, porque é bloqueado de modo reversível pelo inibidor específico. ç Conclusões 1) Células abitáfiais das vias aéreas respiratórias humanas Axbregbdm fários * — Teceptores que podem ser alvo da Treprostinila para elevar 6 CAMP e assim tias o: CFTR nas Células epiteliais das vias aéreas respiratórias humanas. : Ç = 2) Isoformas da PDE4 estão presentes nas cêlulas epiteliais das vias aéreas respiratórias humanas e inibidores da PDE4 efetivamente aumentam a Tesposta a Treprostinila. ' Õ : | Referências SANA | CAronoff DM, Fores CM, Serezani CH, Ballinger MN, Carstens JK, Coleman N Moore BB, Peebles RS, Faccioli LH, Peters-Golden M (2007) Synthetic prostacyclin analogs differentially regulate macrophage function via distinct analog-receptor binding Specifícities.
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Claims (15)

* ooo“. “mA DF | 113 REIVINDICAÇÕES
1. NOVA COMPOSIÇÃO PARA O TRATAMENTO DA FIBROSE CÍSTICA *— caracterizada por compreender pelo menos uma prostaciclina ou análogo da - prostaciclina ou um sal farmaceuticamente aceitável derivado e pelo menos um inibidor da fosfodiesterase (PDE) 4 para o uso na prevenção ou tratamento da - fibrose cística.
2. COMPOSIÇÃO de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo dito | análogo da prostaciclina ser selecionado do grupo Treprostinila, Íloprosta, | | Cicaprosta ou Beraprosta ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
3. COMPOSIÇÃO de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo dito análogo da prostaciclina ser selecionado do grupo dos ácidos derivados de Treprostinila, pró-drogas da Treprostinila, polimorfos da | Treprostinila ou isômeros da Treprostinila. - | ” '
4. COMPOSIÇÃO de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a3, caracterizada por dito inibidor da PDE4 ser selecionado a partir do grupó de Ro 20- | 1724, Ibudilast Roflumilast e seu N-óxido, Cilomilast, BAY 19-8004, CC3, AWD 12- . — 281, SCH-351591, Ciclamilast, Piclamilast, CGH2466, Mesembiina, Rolipram, : Luteolina e Drotaverina. ; | i
5. COMPOSIÇÃO caracterizada por compreender Treprostinila e um inibidor da PDEA4 selecionado do grupo de RO 20-1724, Roflumilast e Ibudilast. 6 COMPOSIÇÃO de acordo com qualquer uma das reivindicações 1as, . —Caracterizada por estar contido um outo inibidor da PDE selecionado do grupo de : inibidores da PDE5, PDE7 ou PDE8.
FS .Z E “ sl CM NORA o AO O RO Nam AS A e PN Oi NS ca ANO R——>— MF PFMFRRRIINTNTÓÍÓMEAIRRÓÚÓE AA RARA DO 2/3 ; .
7. COMPOSIÇÃO de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por dito inibidor da PDES ser selecionado de Avanafila, Lodenafila, Mirodenafila, citrato de | Sildenafila, Tadalafil, Vardenafil ou Udenafil.
8. COMPOSIÇÃO de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por ditos inibidores da PDE7 e PDE8 serem selecionados de Dipiridamol, BRL50481 e PF-
4957325. i 9. COMPOSIÇÃO de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ' caracterizada por ser uma composição farmacêutica.
10. COMPOSIÇÃO de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada para administração por inalação.
' 11. COMPOSIÇÃO de acordo com qualquer uma das reivindicações 1aso, caracterizada para administração por via intravenosa ou súbculânea, ou disponível | na forma por via oral selecionada do grupo de formas de liberação sustentada, comprimidos e câpsulas. o | Does |
12. COMPOSIÇÃO de acordo com qualquer ama das Teivindicações 1a11, i caracterizada pela quantidade efetiva de Treprostinila ou um sal farmaceuticamente aceitável desta ser de pelo menos 1,0 ng/kg de peso corporal. ' |
13. MÉTODO PARA AUMENTAR O NÍVEL DE CAMP EM UMA CÉLULA caracterizado por dita célula ser contatada com pelo menos ia prostaciclina ou análogo da prostaciclina e pelo menos um inibidor da PDE4 e, opcionalmente, por . pelo menos um inibidor selecionado do grupo dos inibidores da PDÊES, inibidores da . PDE7 ob inibidores da PDE8 ou um sal farmaceuticamente aceitável destes. ||
14. COMBINAÇÃO TERAPÊUTICA PARA O TRATAMENTO DA FIBROSE CÍSTICA, caracterizada por compreender pelo menos uma prostaciclina ou análogo | da prostaciclina e pelo menos um inibidor da PDEA4, e Gpcionalmente, pelo menos pr e e re 1 nm a" MANMMPM e - MonulGEIPE PoE 3/3 . um inibidor selecionado do grupo ou inibidores da PDES, inibidores da PDE7 ou | inibidores da PDES8, em que a prostacíclina ou análogo da prostaciclina e inibidor da PDE4 e, opcionalmente, pelo menos um inibidor selecionado do grupo dos inibidores | da PDES5, inibidores das PDE7 e inibidores da PDE8 são providos em quantidades que em conjunto são suficientes para tratar e/ou prevenir pelo menos um sintoma ' associada com a fibrose cística. . ' '
15. COMBINAÇÃO TERAPÊUTICA de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pela prostaciclina ou análogo da prostaciclina e inibidor da PDE4 e, opcionalmente, pelo menos um inibidor 'selecionado do grupo dos inibidores da PDES5, inibidores da PDE7 e inibidores da PDE8 serem formulados para “administração por inalação. | Ô | EAN
Sd -)- P--> 2.. a >) 225“ | 1/6 Fig. 1 É O Treprostinila 8 12001 O ifooumRo201724 Y 2 W +100 uM Ibudilast O 1000 A +100uM Cilostazo! E S o > Pá | & 800 KB | 600 S e E 400 e o - auto ie E eee Elio. Õõ ua ale T 200/68: == É TS e
D S o NS RS : ' | ; Treprostinila (UM)
. “ a i 2/6 Fig. 2 í a É i E 2000 o O + 100 /M Ro-20-1724 i o O: +10 uM Roflumilast — | = | S > : . 1500 ó o :
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: CS o Re o Sud Treprostinila (uM) é GRE v 316 & Fig. 3 ; 10uM TP: lavagem SuM FForskolina lavagem 140! EXIST 1301 1200:
É so é 27 e 6 i Es ; o 400 O 300 14 O 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 tempo (s)
is SÓ A A2.eº9º Qi ” Rs RAM OO OO O O ARCA INSS SiS NTTTOOMMMÓAnaa ie or A — . .—.—. 416 Fig: 4 ; o : : E ú * Ibudilast . e 200 = Ro20-1724 : * à Roflumilast , 7 150 ó * * “Dipiridamol E 1 fa s s 2 100 A eia É 2) :
E RES So = é : — o É É S so o Ss RS Se S PDE Inibidor: [iv] :
i 5716 : ' Fig. 5 É : eo ã : » Treprostinila apenas e. Gigi 1 = + 100 uM Ro-20-1724 1900 ; 4 +100 LM Ibudilast ko att 5:uM Roflumilast”* E 1000: a é : 1 Ss : * õ a Fi z so S à
E A ' Da IEA ERA AR = : S : : Treprostinila [uM] Ê a A 2,)22525 >ÂÔ MºPeMBc Ô, AÚRâÂ!P”Qº PºPOPOó.PAa Â⓺P.oºaR2Á 2 Na e A, 6/6 Fig.6 : 250
E 8 SS 200 o” = iso57 = mm E E 150 E ki ãS E EE mo & FS E So E vo 100 1 tm EO EM Em 04 mm E E í 3 1 A pm a E o o A SO O T EA E A o A E a A E E E E O, o E ) E pa ES ba 2a bm EM 3 so7 EM EIA ES e El ia e E o E e 1/0 8 E em 6) O 0 A e A pa BR
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