BR112013004353A2 - composições imunogênicas - Google Patents
composições imunogênicas Download PDFInfo
- Publication number
- BR112013004353A2 BR112013004353A2 BR112013004353-9A BR112013004353A BR112013004353A2 BR 112013004353 A2 BR112013004353 A2 BR 112013004353A2 BR 112013004353 A BR112013004353 A BR 112013004353A BR 112013004353 A2 BR112013004353 A2 BR 112013004353A2
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- microparticle
- immunogenic
- surfactant
- adjuvant
- antigen
- Prior art date
Links
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 134
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 85
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims abstract description 201
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 151
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 151
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 151
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 142
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 116
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 106
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 44
- 150000001261 hydroxy acids Chemical class 0.000 claims abstract description 41
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 185
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 71
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 50
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 44
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 36
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 36
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 36
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 36
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 36
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 33
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 31
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 31
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 30
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims description 28
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 25
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 21
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims description 19
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 claims description 18
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 18
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 18
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 claims description 17
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 17
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 17
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 claims description 16
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 claims description 16
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 claims description 16
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 15
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 14
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 14
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 13
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 claims description 13
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 claims description 12
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 claims description 12
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims description 12
- 235000019337 sorbitan trioleate Nutrition 0.000 claims description 12
- 229960000391 sorbitan trioleate Drugs 0.000 claims description 12
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 13
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 55
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 52
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 42
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 40
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 40
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 26
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 22
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 16
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 16
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 14
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 14
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 14
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 13
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 12
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- IEJIGPNLZYLLBP-UHFFFAOYSA-N dimethyl carbonate Chemical compound COC(=O)OC IEJIGPNLZYLLBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 11
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 10
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 10
- RFVNOJDQRGSOEL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCO RFVNOJDQRGSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 8
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 8
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 8
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 8
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 7
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 6
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 6
- RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 1-oleoylglycerol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(O)CO RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 5
- FKOKUHFZNIUSLW-UHFFFAOYSA-N 2-Hydroxypropyl stearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(C)O FKOKUHFZNIUSLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MUHFRORXWCGZGE-KTKRTIGZSA-N 2-hydroxyethyl (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCCO MUHFRORXWCGZGE-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 5
- 229920002642 Polysorbate 65 Polymers 0.000 description 5
- IYFATESGLOUGBX-YVNJGZBMSA-N Sorbitan monopalmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O IYFATESGLOUGBX-YVNJGZBMSA-N 0.000 description 5
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 5
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 5
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 5
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 5
- 235000010988 polyoxyethylene sorbitan tristearate Nutrition 0.000 description 5
- 239000001816 polyoxyethylene sorbitan tristearate Substances 0.000 description 5
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 5
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 5
- 229940099511 polysorbate 65 Drugs 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 229940093625 propylene glycol monostearate Drugs 0.000 description 5
- 235000011071 sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 5
- 239000001570 sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 5
- 229940031953 sorbitan monopalmitate Drugs 0.000 description 5
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 2-stearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TVIMZSOUQXNWHO-UHFFFAOYSA-N 2-tetradecanoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO TVIMZSOUQXNWHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 229920002651 Polysorbate 85 Polymers 0.000 description 4
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 229940113171 polysorbate 85 Drugs 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 3
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane Chemical compound C1COCO1 WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 3
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 3
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 3
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 3
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 3
- HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N Sorbitan monostearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N 0.000 description 3
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 3
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 3
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 3
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 3
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 3
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 229960001777 castor oil Drugs 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000010492 gellan gum Nutrition 0.000 description 3
- 239000000216 gellan gum Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 3
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 3
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 3
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 3
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 3
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 3
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 3
- 235000011076 sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 3
- 239000001587 sorbitan monostearate Substances 0.000 description 3
- 229940035048 sorbitan monostearate Drugs 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- LPMBTLLQQJBUOO-KTKRTIGZSA-N (z)-n,n-bis(2-hydroxyethyl)octadec-9-enamide Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)N(CCO)CCO LPMBTLLQQJBUOO-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- ZSZRUEAFVQITHH-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethyl 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ZSZRUEAFVQITHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 2
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- OIFBSDVPJOWBCH-UHFFFAOYSA-N Diethyl carbonate Chemical compound CCOC(=O)OCC OIFBSDVPJOWBCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- AOMUHOFOVNGZAN-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)dodecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(CCO)CCO AOMUHOFOVNGZAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000805 Polyaspartic acid Polymers 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 2
- IJCWFDPJFXGQBN-RYNSOKOISA-N [(2R)-2-[(2R,3R,4S)-4-hydroxy-3-octadecanoyloxyoxolan-2-yl]-2-octadecanoyloxyethyl] octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC IJCWFDPJFXGQBN-RYNSOKOISA-N 0.000 description 2
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N isopropanol acetate Natural products CC(C)OC(C)=O JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940011051 isopropyl acetate Drugs 0.000 description 2
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N isovaleric acid Chemical compound CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940031957 lauric acid diethanolamide Drugs 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N methyl undecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- XGZOMURMPLSSKQ-UHFFFAOYSA-N n,n-bis(2-hydroxyethyl)octadecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N(CCO)CCO XGZOMURMPLSSKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 2
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000011078 sorbitan tristearate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001589 sorbitan tristearate Substances 0.000 description 2
- 229960004129 sorbitan tristearate Drugs 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012974 tin catalyst Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- AFENDNXGAFYKQO-VKHMYHEASA-N (S)-2-hydroxybutyric acid Chemical compound CC[C@H](O)C(O)=O AFENDNXGAFYKQO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,5-dione Chemical compound O=C1COC(=O)CO1 RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOIRDLRUNWIUMX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3,7-dihydropurin-6-one;6-amino-1h-pyrimidin-2-one Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1.O=C1NC(N)=NC2=C1NC=N2 NOIRDLRUNWIUMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHPVDCPCKSNJDR-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxydecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCC(O)C(O)=O GHPVDCPCKSNJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYHNVHGFPZAZGA-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyhexanoic acid Chemical compound CCCCC(O)C(O)=O NYHNVHGFPZAZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JRHWHSJDIILJAT-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypentanoic acid Chemical compound CCCC(O)C(O)=O JRHWHSJDIILJAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- QJRZPVGQQPEKNL-UHFFFAOYSA-N C=ClC(Cl)Cl.Cl Chemical compound C=ClC(Cl)Cl.Cl QJRZPVGQQPEKNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VUQAJHUAVIQPGY-UHFFFAOYSA-N CCO.CCO.CCCCCCCCCCCC(N)=O Chemical compound CCO.CCO.CCCCCCCCCCCC(N)=O VUQAJHUAVIQPGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKPSFGUENCWRJK-UHFFFAOYSA-N CCO.CCO.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(N)=O Chemical compound CCO.CCO.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(N)=O WKPSFGUENCWRJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100454807 Caenorhabditis elegans lgg-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 description 1
- 206010019771 Hepatitis F Diseases 0.000 description 1
- 208000037262 Hepatitis delta Diseases 0.000 description 1
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 241000710843 Japanese encephalitis virus group Species 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 102000011195 Profilin Human genes 0.000 description 1
- 108050001408 Profilin Proteins 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 235000000245 Raphanus raphanistrum subsp raphanistrum Nutrition 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000011380 Raphanus sativus Nutrition 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M Sodium oleate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC([O-])=O BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 208000003217 Tetany Diseases 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000035472 Zoonoses Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- BTBJBAZGXNKLQC-UHFFFAOYSA-N ammonium lauryl sulfate Chemical compound [NH4+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O BTBJBAZGXNKLQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940063953 ammonium lauryl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002844 continuous effect Effects 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 239000002826 coolant Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 description 1
- SZXQTJUDPRGNJN-UHFFFAOYSA-N dipropylene glycol Chemical compound OCCCOCCCO SZXQTJUDPRGNJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGEVMZLRIOFHSG-UHFFFAOYSA-L disodium dodecanoate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCC([O-])=O YGEVMZLRIOFHSG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- CGQIGRHGHSICIG-XXAVUKJNSA-N ethanol (Z)-octadec-9-enamide Chemical compound CCO.CCO.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(N)=O CGQIGRHGHSICIG-XXAVUKJNSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000013265 extended release Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000944 linseed oil Substances 0.000 description 1
- 235000021388 linseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N n-hexadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 description 1
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BTURAGWYSMTVOW-UHFFFAOYSA-M sodium dodecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC([O-])=O BTURAGWYSMTVOW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940082004 sodium laurate Drugs 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- NWZBFJYXRGSRGD-UHFFFAOYSA-M sodium;octadecyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O NWZBFJYXRGSRGD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007143 thioglycolate medium Substances 0.000 description 1
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 125000004417 unsaturated alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1682—Processes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
- A61K9/1623—Sugars or sugar alcohols, e.g. lactose; Derivatives thereof; Homeopathic globules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
- A61K9/1647—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55583—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6087—Polysaccharides; Lipopolysaccharides [LPS]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
COMPOSIÇÕES IMUNOGÊNICAS
Composição imunogênica que compreende, como ingredientes ativos: uma micropartícula imunogênica composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno, em que um ou mais antígenos são encapsulados em uma micropartícula adjuvante composta de um ou mais polímeros anfifílicos cujos segmentos hidrofóbicos são poli(hidroxiácido); e um tensoativo; em que o tensoativo é encapsulado na micropartícula imunogênica, possui alta capacidade de ativação da imunidade em um corpo vivo, mesmo com uma pequena quantidade de antígeno e/ou baixo número de doses.
Description
[001] A presente invenção refere-se a uma composição imunogênica que compreende como ingrediente ativo uma micropartícula imunogênica, em que a micropartícula imunogênica compreende: um complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno em que um ou mais antígenos são encapsulados em uma micropartícula adjuvante composta de um ou mais polímeros anfifílicos; e um tensoativo.
[002] Para aumento da capacidade ativadora da imunidade de um antígeno, é utilizado um adjuvante em conjunto com o antígeno. Embora se saiba que adjuvante de Freund completo (CFA) possui excelente efeito como adjuvante, CFA é composto de bactérias mortas e uma emulsão de óleo e, portanto, apresenta fortes efeitos colaterais, tais como forte reação inflamatória e formação de inchaço ulcerativo (granuloma) no local de administração. O uso de CFA para seres humanos, portanto, não é permitido por questões de segurança. Consequentemente, os adjuvantes cuja administração a seres humanos é permitida são limitados.
[003] Exemplos de adjuvantes cuja administração a seres humanos é permitida incluem adjuvantes de hidróxido de alumínio, mas as suas capacidades ativadoras da imunidade não são necessariamente suficientes e, portanto, eles necessitam ser administrados repetidamente a fim de atingir a obtenção de imunidade. Existe, portanto, a necessidade de desenvolvimento de uma composição imunogênica utilizando um adjuvante forte e eficiente e que possa ser utilizada para seres humanos.
[004] Para o desenvolvimento de um adjuvante inovador com o objetivo de atingir alta capacidade de ativação da imunidade, tentou-se um método no qual um antígeno é encapsulado em uma micropartícula. Relatou-se que a administração de um antígeno microparticulado aumenta as reações imunológicas, tais como a produção de anticorpos, em comparação com o caso de administração de um antígeno isolado, mas o efeito da sua administração não é necessariamente alto e foi relatado apenas um efeito quase no mesmo nível do caso do adjuvante hidróxido de alumínio dito acima. Considera-se que isso se deve à dificuldade de encapsulação eficiente de moléculas de antígenos hidrofílicos tais como proteínas em micropartículas estudadas até aqui, como micropartículas compostas de copolímeros de ácido poliláctico e ácido poliglicólico hidrofóbicos, mantendo ao mesmo tempo as estruturas das moléculas de antígenos (Documento Não de Patente 1).
[005] Nos últimos anos, relatou-se uma tecnologia de micropartículas inovadora (Documentos de Patente 1 e 2), em que essa tecnologia utiliza um polímero anfifílico e permite a encapsulação altamente eficiente de uma proteína com alto peso molecular. Embora essa micropartícula inovadora tenha sido estudada pelo seu desempenho de liberação prolongada para drogas, a sua função adjuvante em casos de encapsulação de antígenos não foi estudada. Além disso, em termos do mecanismo por meio do qual uma micropartícula que contém um antígeno funciona como adjuvante, acredita-se que a função para liberação prolongada da molécula de antígeno, bem como o mecanismo por meio do qual a micropartícula que contém um antígeno é integralmente incorporada em um imunócito e libera o antígeno na célula sejam importantes e que a função da liberação de droga da partícula e o desempenho como adjuvante não estão necessariamente correlacionados entre si. É difícil, portanto, deduzir a função adjuvante com base no desempenho de liberação prolongada da partícula e um adjuvante eficaz que possua desempenho muito melhor que os adjuvantes de alumínio não foi elaborado até aqui pelas tecnologias convencionais utilizando micropartículas, apesar da demanda pelo seu desenvolvimento.
[006] Documentos de Patente:
[007] Documento de Patente 1: WO 2006/095668.
[008] Documento de Patente 2: JP 2008-088158 A.
[009] Documentos Não de Patente: [01 O] Documento Não de Patente 1: Advanced Drug Delivery Reviews, 2005, vol. 57, págs. 391-410.
[011] Problemas a serem solucionados pela presente invenção:
[012] A presente invenção destina-se a fornecer uma composição imunogênica que exibe alta capacidade de ativação da imunidade, mesmo com uma pequena quantidade de antígeno e/ou pequeno número de doses.
[013] A fim de solucionar os problemas descritos acima, os inventores do presente estudaram um método segundo o qual pode-se induzir alto nível de ativação imunológica utilizando uma pequena quantidade de antígeno e com um pequeno número de doses deste e, como resultado, revelaram que uma composição imunogênica que compreende, como ingredientes ativos: uma micropartícula imunogênica composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos em que um ou mais antígenos são encapsulados em uma micropartícula adjuvante e um tensoativo possui alta capacidade ativadora da imunidade in vivo. Isso significa que a presente invenção possui a constituição a seguir.
1. Composição imunogênica que compreende, como ingredientes ativos: uma micropartícula imunogênica composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos, em que um ou mais antígenos são encapsulados em uma micropartícula adjuvante composta de um ou mais polímeros anfifílicos cujos segmentos hidrofóbicos são poli(hidroxiácido); e um tensoativo; em que o tensoativo é encapsulado na micropartícula imunogênica.
2. Composição imunogênica de acordo com 1, em que a micropartícula imunogênica é uma partícula composta do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto.
3. Composição imuongênica de acordo com 1 ou 2, em que o tensoativo compreende uma estrutura de éster de ácido graxo.
4. Composição imunogênica de acordo com qualquer um dentre 1 a 3, em que a micropartícula adjuvante possui, na parte interna da mesma, uma ou mais porções hidrofílicas compostas de um ou mais segmentos hidrofílicos do(s) polímero(s) anfifílico(s) e possui uma camada externa composta de uma ou mais porções hidrofóbicas compostas de um ou mais segmentos hidrofóbicos do(s) polímero(s) anfifílico(s).
5. Composição imunogênica de acordo com qualquer um dentre 1 a 4, em que o segmento hidrofílico do polímero anfifílico é um polissacarídeo.
6. Composição imunogênica de acordo com qualquer um dentre 1 a 5, em que o polímero anfifílico é um polímero anfifílico de enxerto composto de uma cadeia principal de polissacarídeo e uma ou mais cadeias de enxerto de poli(hidroxiácido).
7. Composição imunogênica de acordo com qualquer um dentre 5 ou 6, em que o polissacarídeo é dextrana.
8. Composição imunogênica de acordo com qualquer um dentre 1 a 7, em que o poli(hidroxiácido) é poli(ácido láctico-co-glicólico).
9. Composição imunogênica de acordo com qualquer um dentre 1 a 8, em que o tensoativo compreende adicionalmente uma ou mais estruturas de monossacarídeo e/ou polietileno glicol.
1O. Composição imunogênica de acordo com qualquer um dentre 1 a 9, em que o tensoativo é um ou mais selecionado(s) a partir do grupo que consiste de polissorbato 80, polissorbato 20, monooleato de sorbitano, trioleato de sorbitano e óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno.
11. Composição imunogênica que compreende, como ingrediente ativo, uma micropartícula imunogênica obtida por meio das etapas a seguir: dissolução de um ou mais tensoativos em um solvente aquoso A, em que um ou mais antígenos são dissolvidos ou encontram-se em um solvente orgânico B imiscível em água, em que um ou mais polímeros anfifílicos cujos segmentos hidrofóbicos são poli(hidroxiácido) são dissolvidos, e mistura da mistura resultante para formar uma emulsão de fase reversa; e remoção do solvente da emulsão de fase reversa.
12. Composição imunogênica que compreende, como ingrediente ativo, uma micropartícula imunogênica obtida por meio de um processo de produção de partículas compostas de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto, em que o processo compreende as etapas de: mistura de um solvente aquoso A, em que um ou mais antígenos são dissolvidos, e de um solvente orgânico B imiscível em água, em que um ou mais polímeros anfifílicos cujos segmentos hidrofóbicos são poli(hidroxiácido) são dissolvidos para formar uma emulsão de fase reversa; remoção do solvente da emulsão de fase reversa para obter um complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno; e introdução de uma dispersão C de complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno a uma fase líquida D, em que um modificador de superfície é dissolvido, seguida pela remoção do meio de dispersão;
em que um ou mais tensoativos são dissolvidos no solvente aquoso A, no solvente orgânico B imiscível em água e/ou na dispersão C.
[014] Efeito da invenção:
[015] Por meio da presente invenção, é fornecida uma composição imunogênica com a qual é possível ativação imunológica mais forte que anteriormente in vivo.
[016] A Fig. 1 exibe avaliação imunológica 1 de micropartículas imunogênicas que contêm CEA.
[017] A Fig. 2 exibe avaliação imunológica 2 de micropartículas imunogênicas que contêm CEA.
[018] A Fig. 3 exibe avaliação imunológica 3 de micropartículas imunogênicas que contêm CEA.
[019] A Fig. 4 exibe avaliação imunológica 4 de micropartículas imunogênicas que contêm CEA.
[020] A Fig. 5 exibe avaliação imunológica 5 de micropartículas imunogênicas que contêm CEA.
[021] A Fig. 6 exibe avaliação imunológica 6 de micropartículas imunogênicas que contêm OVA.
[022] A presente invenção refere-se a uma composição imunogênica que compreende como ingredientes ativos: uma micropartícula imunogênica composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos, em que um ou mais antígenos são encapsulados em uma micropartícula adjuvante composta de um ou mais polímeros anfifílicos cujos segmentos hidrofóbicos são poli(hidroxiácido); e um tensoativo.
[023] Em primeiro lugar, é descrito o polímero anfifílico que constitui a micropartícula adjuvante. "Anfifílico" indica que são mantidas as propriedades de hidrofilicidade e hidrofobicidade. Quando a solubilidade de uma certa porção em água for mais alta que a das outras porções, afirma-se que a porção é hidrofílica. A porção hidrofílica é preferencialmente solúvel em água, mas, mesmo em casos em que a porção possua baixa solubilidade em água, é suficiente que a solubilidade em água seja mais alta que a das outras porções. Quando a solubilidade de certa porção em água for mais baixa que a das outras porções, afirma-se que o segmento é hidrofílico. A porção hidrofílica é preferencialmente insolúvel em água, mas, mesmo em casos em que a porção é solúvel em água, é suficiente que a solubilidade em água seja mais baixa que a das outras porções.
[024] O polímero anfifílico indica um polímero que possui a anfifilicidade dita acima como a molécula inteira. O polímero indica que a molécula possui uma estrutura molecular na qual um ou mais segmentos hidrofílicos ou um ou mais segmentos hidrofóbicos do polímero anfifílico, ou ambos, são constituídos por uma ou mais estruturas nas quais as unidades mínimas (monômeros) são repetidas. O polímero anfifílico de acordo com a presente invenção não é restrito, pois ele possui uma estrutura que possui um ou mais segmentos hidrofílicos e um ou mais segmentos hidrofóbicos e pode ser um polímero de bloco linear que possui um ou mais segmentos hidrofílicos e um ou mais segmentos hidrofóbicos ligados entre si; um polímero ramificado que possui um ou mais ramos no(s) qual(is) existem diversos segmentos hidrofílicos ou segmentos hidrofóbicos, ou ambos; ou um polímero de enxerto no qual diversos segmentos hidrofóbicos são enxertados a um segmento hidrofílico ou diversos segmentos hidrofílicos são enxertados a um segmento hidrofóbico. O polímero anfifílico de acordo com a presente invenção é preferencialmente um polímero que possui um segmento hidrofílico, de preferência superior um polímero de bloco linear que possui um segmento hidrofílico e um segmento hidrofóbico cada um, ou um polímero de enxerto que possui uma série de segmentos hidrofóbicos enxertados sobre uma cadeia principal de segmento hidrofílico.
[025] Os polímeros anfifílicos que constituem a composição imunogênica podem ser um conjunto de uma série de tipos de polímeros anfifílicos compostos de polímeros componentes que possuem diferentes porções hidrofílicas e/ou porções hidrofílicas ou um conjunto de polímeros anfifílicos que possuem o mesmo polímero componente, mas que possuem uma série de tipos de padrões de ligação, desde que os polímeros anfifílicos possuam propriedades de micropartícula adjuvante. A fim de atingir desempenho estável e produtividade aprimorada, os polímeros anfifílicos são preferencialmente um conjunto de um pequeno número de tipos de polímeros anfifílicos, de maior preferência um conjunto de principalmente não mais de dois tipos de polímeros anfifílicos e, de preferência ainda maior, constituído principalmente de um único tipo de polímero anfifílico.
[026] Na presente invenção, o segmento hidrofóbico do polímero anfifílico é poli(hidroxiácido). O poli(hidroxiácido) não é restrito e, preferencialmente, é um polímero biocompatível que não possui efeito severamente adverso mediante administração a um corpo vivo. A biocompatibilidade no presente indica que LD50 no caso de administração oral do polímero a ratos é de não menos de 2000 mg/kg. Além disso, o polímero pode ser um copolímero de uma série de tipos de hidroxiácidos e é preferencialmente um polímero de não mais de dois tipos de hidroxiácidos.
Exemplos preferidos específicos do poli(hidroxiácido) incluem ácido poliglicólico, ácido poliláctico, poli(ácido2-hidroxibutírico), poli(ácido 2- hidroxivalérico), poli(ácido 2-hidroxicaproico), poli(ácido 2-hidroxicáprico) e poli(ácido málico); e derivados e copolímeros desses compostos macromoleculares, dentre os quais são de maior preferência ácido poliláctico, ácido poliglicólico e copolímeros de poli(ácido láctico-co-glicólico). Além disso,
em casos em que o poli(hidroxiácido) é poli(ácido láctico-co-glicólico), a razão de composição entre o poli(ácido láctico-co-glicólico) e ácido láctico/ácido glicólico (% mol/mol) não é restrita desde que o propósito da presente invenção seja atingido e a razão seja preferencialmente de 100/0 a 30/70, de maior preferência de 60/40 a 40/60.
[027] O segmento hidrofílico do polímero anfifílico não é restrito e é, preferencialmente, um polímero biocompatível, como no caso do segmento hidrofóbico. Além disso, a fim de fornecer capacidade adjuvante persistente à micropartícula adjuvante composta de um ou mais polímeros anfifílicos, o segmento é preferencialmente um polímero refratário que não é facilmente decomposto em um corpo vivo ou células de mamíferos ou aves. Exemplos específicos do polímero biocompatível e refratário incluem polietileno glicol, polivinil pirrolidona, álcool polivinílico, polietilenoimina, ácido poliacrílico, ácido polimetacrílico, poli-1,3-dioxolano, polímero de 2-metacriloilxietil fosforil colina, poli-1,3,6-trioxano, poliamino ácido e polissacarídeos refratários (tais como celulose, chitina, chitosan, goma gelana, ácido algínico, ácido hialurônico, pululan e dextrana). Em casos em que o segmento hidrofílico é polietileno glicol, polivinil pirrolidona, álcool polivinílico, polietilenoimina, ácido poliacrílico, ácido polimetacrílico, poli-1,3-dioxolano, polímero de 2-metacriloiloxietil fosforil colina, poli-1,3,6-trioxano ou poliamino ácido, o polímero anfifílico é preferencialmente um polímero de bloco linear que contém um dentre um segmento hidrofílico e um segmento hidrofóbico e, em casos em que o segmento hidrofílico é um polissacarídeo, o polímero anfifílico é preferencialmente um polímero de enxerto que contém uma série de segmentos hidrofóbicos enxertados sobre uma cadeia principal de segmento hidrofílico. Além disso, o segmento hidrofílico do polímero anfifílico é preferencialmente polietileno glicol ou um polissacarídeo refratário e o polissacarídeo é, de maior preferência, dextrana.
[028] O polímero anfifílico que contém um ou mais segmentos hidrofóbicos compostos de poli(hidroxiácido) e um ou mais segmentos hidrofílicos possui preferencialmente imiscibilidade em água como o polímero inteiro, em vista da capacidade de encapsulação de antígenos da composição imunogênica e persistência mediante administração a um corpo vivo.
[029] O peso molecular médio do segmento hidrofílico do polímero anfifílico não é restrito e, no caso de um polímero de bloco em que um ou mais segmentos hidrofílicos e um ou mais segmentos hidrofóbicos são ligados linearmente entre si, o peso molecular médio é preferencialmente de 1000 a 50.000, de maior preferência 2000 a 15.000. O termo "bloco" indica no presente uma parte em uma molécula de polímero, em que essa parte é composta de não menos de cinco unidades de monômero e diferente da(s) outra(s) parte(s) adjacente(s) em termos de configuração ou estrutura química.
Um polímero constituído por pelo menos dois blocos ligados linearmente entre si é denominado polímero de bloco. Cada bloco que constitui por si próprio o polímero de bloco pode ser um polímero aleatório, alternado ou de gradiente composto de não menos de dois tipos de unidades de monômeros.
Preferencialmente, na presente invenção, o polímero de bloco é aquele em que uma unidade de polímero que forma um segmento hidrofílico e uma unidade de poli(hidroxiácido) são preferencialmente ligados entre si.
[030] No caso de um polímero de enxerto que possui um ou mais segmentos hidrofóbicos enxertados sobre uma cadeia principal de segmentos hidrofílicos, o peso molecular médio do segmento hidrofílico é preferencialmente de 1.000 a 100.000, de maior preferência 2.000 a 50.000, de preferência ainda maior 10.000 a 40.000. O número das cadeias de enxerto é preferencialmente de 2 a 50. O número das cadeias de enxerto pode ser calculado com base na razão entre a cadeia principal de segmento hidrofílico e a cadeia principal de segmento hidrofóbico e o peso molecular médio do segmento hidrofóbico, conforme obtido por meio de medição de NMR 1H, e o peso molecular médio da cadeia principal de segmento hidrofílico utilizada.
[031] A razão em peso molecular médio preferida entre o segmento hidrofóbico e o segmento hidrofílico varia, dependendo do polímero anfifílico e, no caso de um polímero de bloco no qual um ou mais segmentos hidrofóbicos e um ou mais segmentos hidrofílicos são ligados linearmente entre si, a razão em peso molecular médio entre o segmento hidrofílico e o segmento hidrofóbico é preferencialmente de 1: 1 ou mais, de maior preferência 1:2 ou mais, de preferência ainda maior 1:4 ou mais, de preferência especial 1:4 ou mais a 1:25 ou menos.
[032] Preferencialmente, no caso de um polímero de enxerto que possui uma série de segmentos hidrofóbicos enxertados sobre uma cadeia principal de segmento hidrofílico, a razão em peso molecular médio entre a parte de cadeia principal de segmento hidrofílico e as cadeias de enxerto de segmento hidrofóbico inteiras é de 1:3 ou mais e o peso molecular médio de cada cadeia de enxerto é de 2.500 a 40.000. De maior preferência, a razão em peso molecular médio geral é de 1:5 ou mais e o peso molecular médio de cada cadeia de enxerto é de 5.000 a 40.000.
[033] Dever-se-á observar que o peso molecular médio dito acima é peso molecular numérico médio numérico, a menos que especificado em contrário. O peso molecular numérico médio é o peso molecular médio calculado sem pesagem pelo tamanho molecular e os pesos moleculares numéricos médios do polímero anfifílico e os polímeros que constitui(em) o(s) segmento(s) hidrofílico(s) do polímero anfifílico podem ser calculados como pesos moleculares em termos de poliestireno ou pululan, conforme medido por meio de cromatografia de permeação de gel (GPC). Além disso, o peso molecular médio de poli(hidroxiácido) pode ser calculado por meio de medição por ressonância magnética nuclear (NMR) com base na razão entre o valor de integração de pico para resíduos terminais e o valor de integração de pico para os demais.
[034] O polímero anfifílico utilizado na presente invenção pode ser sintetizado por meio de um método conhecido e exemplos do método incluem um método no qual um polímero de poli(hidroxiácido) é adicionado a um polímero para uso como segmento hidrofílico e é conduzida reação de condensação com a mistura resultante para produzir um polímero anfifílico; um método no qual os monômeros de hidroxiácido ativados são adicionados a um polímero para uso como segmento hidrofílico e a reação de polimerização é conduzida com a mistura resultante para produzir um polímero anfifílico; e um método no qual, por outro lado, monômeros para constituição de um segmento hidrofílico são adicionados a um segmento hidrofóbico que é um polímero de poli(hidroxiácido) e a reação de polimerização é conduzida com a mistura resultante.
[035] Pode ser produzido, por exemplo, um polímero anfifílico constituído por polietileno glicol e poli(hidroxiácido) por meio de um método no qual são adicionados monômeros de hidroxiácido ativados a polietileno glicol na presença de um catalisador de estanho para realizar reação de polimerização para introdução de poli(hidroxiácido), de forma a produzir um polímero de bloco anfifílico (Journal of Controlled Release 71, págs. 203-211 (2001)).
[036] Além disso, por exemplo, pode ser produzido um polímero anfifílico do tipo enxerto constituído por um polissacarídeo e uma ou mais cadeias de enxerto de poli(hidroxiácido) conforme descrito em 1, 2 ou 3 abaixo:
1. método em que, na presença de um catalisador de estanho, são adicionados monômeros de hidroxiácido ativados a um polissacarídeo para realizar reação de polimerização para introdução de poli(hidroxiácido), de forma a produzir um polímero anfifílico do tipo enxerto (Macromolecules, 31, págs.
1032-1039 (1998));
2. método em que grupos hidroxila não protegidos em parte de um polissacarídeo no qual a maior parte dos seus grupos hidroxila é protegida por substituintes são ativados com uma base e monômeros de hidroxiácido ativados são adicionados para introduzir uma ou mais cadeias de enxerto compostas de poli(hidroxiácido), seguidas pela remoção final dos grupos protetores, de forma a produzir um polímero anfifílico do tipo enxerto (Polymer, 44, págs. 3927-3933 (2003)); e
3. método em que a reação de condensação de copolímero de poli(hidroxiácido) com um polissacarídeo é conduzida utilizando um agente desidratante e/ou um agente ativador de grupos funcionais, para produzir um polímero anfifílico do tipo enxerto (Macromolecu/es, 33, págs. 3680-3685 (2000)).
[037] A micropartícula adjuvante é descrita abaixo. A micropartícula adjuvante é uma micropartícula que possui capacidade adjuvante e a capacidade adjuvante indica capacidade com a qual a reação imunológica mediante administração de antígeno a um corpo vivo pode ser causada em nível mais alto que no caso de administração do antígeno isolado.
Além disso, na presente invenção, a micropartícula adjuvante é uma micropartícula composta de um ou mais polímeros anfifílicos e um ou mais antígenos é(são) encapsulado(s) na micropartícula adjuvante para formar um complexo de micropartículas de antígenos/adjuvantes, em que esse complexo constitui a micropartícula como ingrediente ativo da composição imunogênica de acordo com a presente invenção.
[038] A estrutura da micropartícula adjuvante não é restrita e uma estrutura na qual um ou mais segmentos hidrofílicos do(s) polímero(s) anfifílico(s) está(ão) contido(s) no interior da micropartícula adjuvante e um ou mais segmentos hidrofóbicos do(s) polímero(s) anfifílico(s) está(ão) contido(s) na forma de camada externa é preferida em vista da retenção estável do(s) antígeno(s) encapsulado(s).
[039] O tipo do antígeno encapsulado na micropartícula adjuvante não é restrito e pode ser um peptídeo, proteína, glicoproteína, glicolipídio, lipídio, carboidrato, ácido nucleico ou polissacarídeo; ou um vírus, célula bacteriana, substância alergênica, tecido ou célula que os compreende.
Exemplos específicos do antígeno incluem antígenos derivados de pólen, antígenos derivados de vírus da hepatite A, antígenos derivados de vírus da hepatite B, antígenos derivados de vírus da hepatite C, antígenos derivados de vírus da hepatite D, antígenos derivados de vírus da hepatite E, antígenos derivados de vírus da hepatite F, antígenos derivados de vírus HIV, antígenos derivados de vírus influenza, antígenos derivados de vírus da herpes (HSV-1, HSV-2), antígenos derivados de anthrax, antígenos derivados de clamídia, antígenos derivados de pneumococo, antígenos derivados de vírus da encefalite japonesa, antígenos derivados de vírus do sarampo, antígenos derivados de vírus da rubéola, antígenos derivados de C/ostridium tetani, antígenos derivados de vírus da varicela, antígenos derivados de vírus SARS, antígenos derivados de vírus EB, antígenos derivados de vírus papiloma, antígenos derivados de Helicobacter pylori, antígenos derivados do vírus da raiva, antígenos derivados de vírus do Oeste do Nilo, antígenos derivados de hantavírus, antígenos derivados de Streptococcus, antígenos derivados de Staphylococcus, antígenos derivados de Bordetella pertussis, antígenos derivados de Mycobacterium tuberculosis, antígenos derivados de Plasmodium, antígenos derivados de vírus da pálio, antígenos derivados de várias infecções zoonóticas, antígenos de câncer e antígenos derivados de diversas alergias alimentares.
[040] O antígeno encapsulado não necessita ser um antígeno isolado. Em vista da aplicação da presente invenção, reações imunes podem ser induzidas contra células cancerosas, bactérias, vírus ou similares, que são constituídos por uma série de componentes. Nesses casos, o antígeno pode ser uma série de tipos de proteínas ou similares que podem causar reações imunológicas ou uma mistura de substâncias cujos tipos não podem ser especificados. Além disso, a inclusão de uma série de tipos de antígenos para indução positiva de reações imunológicas contra a série de tipos de antígenos é um dos modos de uso da composição imunogênica de acordo com a presente invenção. Preferencialmente, não mais de três tipos, de maior preferência um único tipo de antígeno, é(são) encapsulado(s) na micropartícula adjuvante.
[041] O complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno de acordo com a presente invenção pode alterar a capacidade de retenção do antígeno contido, dependendo do(s) tipo(s) e do(s) método(s) de preparação do(s) polímero(s) que constitui(em) a micropartícula adjuvante. Possíveis exemplos do mecanismo por meio do qual se fornece imunogenicidade pelo complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos de acordo com a presente invenção incluem uma série de processos, tais como um processo no qual o antígeno liberado pela micropartícula adjuvante é reconhecido por células imunocompetentes e um processo no qual a própria micropartícula adjuvante é reconhecida por células imunocompetentes. Pode também ser obtido excelente efeito pelo efeito sinérgico desses processos.
[042] O tipo de reação imunológica induzida pelo processo no qual o complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos faz com que células imunocompetentes reconheçam o antígeno varia dependendo do tipo do processo e um processo preferido pode ser selecionado dependendo do tipo de reação imunológica a ser induzida e do local de administração. Isso significa que, em um modo de uso preferido, o antígeno não precisa, necessariamente, ser liberado do complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno e o modo com o qual a imunogenicidade ideal de interesse é realizada é atingido por meio de otimização, dependendo do antígeno e do tipo de reação imunológica a ser ativada. Em casos em que o antígeno é liberado de forma extremamente rápida do complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno, não pode ser obtida uma ação de ativação imunológica contínua a longo prazo, que é uma propriedade excelente da presente invenção, de tal forma que, preferencialmente, não menos de 10% do antígeno no complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos ainda sejam retidos no corpo vivo na forma de complexo uma semana após a administração e, de maior preferência, não menos de 50% do antígeno ainda estão encapsulados uma semana após a administração. Esses comportamentos de liberação podem ser confirmados por meio de avaliação in vitro imitando o ambiente in vivo.
[043] O complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos atinge bom efeito mesmo em um estado de partícula no qual o complexo é associado em conjunto. O termo "associação" no presente indica que duas ou mais partículas são ligadas entre si por uma força entre partículas ou por meio de outra substância, para formar um agregado. A força entre as partículas não é restrita e seus exemplos incluem a interação hidrofóbica, ligação de hidrogênios e força van der Waals. A associação não é restrita ao estado em que as micropartículas estão em contato entre si e uma substância que possui afinidade para as micropartículas pode existir entre as micropartículas ou as micropartículas podem ser dispersas em uma matriz. Como a substância que possui afinidade para as micropartículas ou a matriz, é preferido um polímero e é com maior preferência um polímero anfifílico cuja parte hidrofóbica é poli(hidroxiácido) e que possui o mesmo componente da micropartícula adjuvante. Seus exemplos específicos incluem polímeros anfifílicos, cada qual composto de uma cadeia principal de polissacarídeos e uma ou mais cadeias de enxerto de poli(hidroxiácido), em que cada polímero de bloco é composto de polietileno glicol e poli(hidroxiácido), e poli(hidroxiácido).
[044] A associação do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos pode estar ainda em um estado no qual ocorre reisolamento mediante o uso ou em um estado no qual o reisolamento não ocorre mediante o uso. Dever-se-á observar que, mesmo em casos em que a forma da partícula composta do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto encontra-se em um estado do qual a associação do complexo não pode ser conhecida, a partícula é considerada como havendo sido formada por meio de associação do complexo, desde que o processo de produção da partícula compreenda a etapa de associação do complexo.
[045] O tamanho médio de partícula do complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno ou da partícula formada por meio de associação do complexo é preferencialmente de O, 1 a 50 µm, de maior preferência de O, 1 a 1O µm. Particularmente, o tamanho médio de partícula do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos é preferencialmente de O, 1 a 1 µm, de maior preferência de O, 1 a 0,5 µm, e o tamanho médio de partícula do complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno é preferencialmente de O, 1 a 50 µm, de maior preferência de O, 1 a 1O µm e, de preferência ainda maior, de 1 a 1O µm. O tamanho médio de partícula do complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno ou da partícula formada por meio de associação do complexo pode ser medido diretamente por meio de análise de imagens, utilizando um microscópio eletrônico de varrimento (SEM, tal como S-4800, fabricado pela Hitachi, Ltd.).
[046] O complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos ou a partícula formada por meio de associação do complexo possui o efeito de aumentar a imunogenicidade do antígeno encapsulado. Os inventores do presente revelaram que a imunogenicidade do antígeno encapsulado pode ser adicionalmente aumentada por meio da encapsulação, como ingrediente ativo, de um ou mais tensoativos na micropartícula imunogênica composta do complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno ou da partícula formada por meio de associação do complexo (denominada a seguir "micropartícula imunogênica"). Isso significa que a micropartícula imunogênica como ingrediente ativo da composição imunogênica de acordo com a presente invenção compreende como componente um tensoativo nela encapsulado.
[04 7] O tensoativo utilizado na presente invenção não é restrito e exemplos específicos do tensoativo incluem polissorbato 20, polissorbato 40, polissorbato 60, polissorbato 65, polissorbato 80, polissorbato 85, monooleato de glicerina, monooleato de sorbitano, monooleato de polietileno glicol, monoestearato de etileno glicol, monoestearato de glicerina, monoestearato de sorbitano, monoestearato de propileno glicol, monoestearato de polietileno glicol, monopalmitato de sorbitano, monomiristato de glicerina, monolaurato de sorbitano, monolaurato de polietileno glicol, trioleato de sorbitano, triestearato de sorbitano, óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno, copolímeros de polioxietileno e propileno glicol, polietileno glicol, álcool polivinílico, alquil éter de polioxietileno, dietanol amida de ácido graxo (tal como dietanol amida de ácido esteárico, dietanol amida de ácido oleico e dietanol amida de ácido láurico), lecitina, ácido graxo de sódio (tal como estearato de sódio, oleato de sódio e laurato de sódio), alquil sulfato de sódio, octil fenil éter de polioxietileno e alquil glicosídeo. O tensoativo utilizado na presente invenção pode ser de um único tipo ou de dois ou mais tipos.
[048] O tensoativo utilizado na presente invenção é preferencialmente comprovado como aditivo farmacêutico. Exemplos específicos de tensoativos comprovados como aditivos farmacêuticos incluem polissorbato 20, polissorbato 40, polissorbato 60, polissorbato 65, polissorbato 80, polissorbato 85, monooleato de glicerina, monooleato de sorbitano, monooleato de polietileno glicol, monoestearato de etileno glicol, monoestearato de glicerina, monoestearato de sorbitano, monoestearato de propileno glicol, monoestearato de polietileno glicol, monopalmitato de sorbitano, monomiristato de glicerina, monolaurato de sorbitano, monolaurato de polietileno glicol, trioleato de sorbitano, triestearato de sorbitano, óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno, copolímeros de polioxietileno e propileno glicol, polietileno glicol, álcool polivinílico, alquil éter de polioxietileno, dietanol amida de ácido graxo (tal como dietanol amida de ácido esteárico, dietanol amida de ácido oleico e dietanol amida de ácido láurico), lecitina, ácido graxo de sódio (tal como estearato de sódio, oleato de sódio e laurato de sódio) e alquil sulfato de sódio.
[049] O tensoativo utilizado na presente invenção é preferencialmente um tensoativo não iônico. Exemplos específicos de tensoativos não iônicos incluem polissorbato 20, polissorbato 40, polissorbato 60, polissorbato 65, polissorbato 80, polissorbato 85, monooleato de glicerina, monooleato de sorbitano, monooleato de polietileno glicol, monoestearato de etileno glicol, monoestearato de glicerina, monoestearato de sorbitano, monoestearato de propileno glicol, monoestearato de polietileno glicol, monopalmitato de sorbitano, monomiristato de glicerina, monolaurato de sorbitano, monolaurato de polietileno glicol, trioleato de sorbitano, triestearato de sorbitano, óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno, copolímeros de polioxietileno e propileno glicol, polietileno glicol, álcool polivinílico, alquil éter de polioxietileno, dietanol amida de ácido graxo (tal como dietanol amida de ácido esteárico, dietanol amida de ácido oleico e dietanol amida de ácido láurico).
[050] Dentre os tensoativos, são preferencialmente utilizados os tensoativos que compreendem uma estrutura de éster de ácido graxo.
Exemplos específicos da estrutura de éster de ácido graxo incluem éster de ácido láurico, éster de ácido palmítico, éster de ácido esteárico, éster de ácido oleico e óleo de mamona hidrogenado e exemplos específicos preferidos da estrutura de éster de ácido graxo incluem éster de ácido láurico, éster de ácido oleico e óleo de mamona hidrogenado. Exemplos específicos de tensoativos que compreendem uma estrutura de éster de ácido graxo incluem polissorbato 20, polissorbato 40, polissorbato 60, polissorbato 65, polissorbato 80, polissorbato 85, monooleato de glicerina, monooleato de sorbitano, monooleato de polietileno glicol, monoestearato de etileno glicol, monoestearato de glicerina, monoestearato de sorbitano, monoestearato de propileno glicol, monoestearato de polietileno glicol, monopalmitato de sorbitano, monomiristato de glicerina, monolaurato de sorbitano, monolaurato de polietileno glicol, trioleato de sorbitano, triestearato de sorbitano e óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno.
[051] Além disso, em termos de estruturas diferentes de ésteres de ácidos graxos, o tensoativo compreende preferencialmente uma molécula biocompatível. Exemplos específicos da molécula biocompatível diferente de ésteres de ácidos graxos no tensoativo incluem aminoácidos, ácidos nucleicos, ácido fosfórico, açúcares (tais como monossacarídeos como sacarose, sorbitol, manose e glicose), polietileno glicol e glicerina. A molécula biocompatível é preferencialmente constituída por um ou mais monossacarídeos e/ou polietileno glicol e, de maior preferência, é sorbitol. Exemplos específicos de tensoativos que compreendem uma molécula biocompatível como estrutura diferente de ésteres de ácidos graxos incluem polissorbato 20, polissorbato 40, polissorbato 60, polissorbato 65, polissorbato 80, polissorbato 85, monooleato de glicerina, monooleato de sorbitano, monooleato de polietileno glicol, monoestearato de etileno glicol, monoestearato de glicerina, monoestearato de sorbitano, monoestearato de propileno glicol, monoestearato de polietileno glicol, monopalmitato de sorbitano, monomiristato de glicerina, monolaurato de sorbitano, monolaurato de polietileno glicol, trioleato de sorbitano, triestearato de sorbitano e óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno, sendo que exemplos específicos do tensoativo incluem polissorbato 80, polissorbato 20, trioleato de sorbitano e óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno.
[052] Na micropartícula imunogênica, o tensoativo é encapsulado em uma micropartícula. A encapsulação do tensoativo do presente indica um estado no qual o tensoativo está presente na parte interna da micropartícula e o tensoativo pode estar presente em toda a parte interna da micropartícula ou pode estar localizado em uma parte da parte interna da micropartícula. Em termos da encapsulação do tensoativo, o tensoativo é considerado como sendo encapsulado na partícula em casos em que o processo de produção da micropartícula compreende a etapa de encapsulação de tensoativo na micropartícula. A quantidade do(s) tensoativo(s) na micropartícula imunogênica não é restrita, desde que o efeito da presente invenção não seja inibido e é preferencialmente de 0,01 a 50% (p/p), de maior preferência de O, 1 a 20% (p/p), de preferência ainda maior de 1 a 10% (p/p) com relação à quantidade do polímero anfifílico alimentado no processo de produção da micropartícula imunogênica. A quantidade do(s) tensoativo(s) na micropartícula imunogênica é medida por meio de extração do(s) tensoativo(s) da micropartícula imunogênica utilizando um solvente no qual o polímero anfifílico pode ser dissolvido e purificação do extrato resultante, seguida por análise do extrato purificado por meio de cromatografia de líquidos utilizando uma coluna de fase reversa, de forma a medir a quantidade do(s) tensoativo(s) contido(s) no extrato. Com base na quantidade do(s) tensoativo(s) contido(s) no extrato, é calculada a quantidade do(s) tensoativo(s) com relação à quantidade do(s) polímero(s) anfifílico(s) alimentado(s) no processo de produção da micropartícula imunogênica.
[053] O método de produção da micropartícula imunogênica não é restrito e, em casos em que a micropartícula imunogênica é constituída por um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos e exemplos do método por meio do qual a micropartícula imunogênica pode ser produzida incluem um método que compreende as etapas de: (a) mistura de um solvente aquoso A em que um ou mais antígenos são dissolvidos e um solvente orgânico imiscível em água B em que um ou mais polímeros anfifílicos são dissolvidos para formar uma emulsão em fase reversa; e (b). remoção do solvente da emulsão em fase reversa para obter uma micropartícula imunogênica. As etapas (a) e (b) são descritas abaixo.
[054] Como o solvente aquoso A na etapa (a), utiliza-se água ou uma solução aquosa que contém um componente hidrossolúvel. Exemplos do componente hidrossolúvel incluem sais inorgânicos, açúcares, sais orgânicos e aminoácidos.
[055] O solvente orgânico B imiscível em água na etapa (a) é preferencialmente um solvente no qual o poli(hidroxiácido) do polímero anfifílico é solúvel e o polímero que constitui o segmento hidrofílico é escassamente solúvel ou insolúvel e, preferencialmente, o solvente pode ser removido por meio de vaporização por secagem por congelamento. A solubilidade do solvente orgânico B, imiscível em água, em água é preferencialmente de não mais de 30 g (solvente orgânico B imiscível em água)/100 ml (água).
Exemplos específicos do solvente orgânico B imiscível em água incluem acetato de etila, acetato de isopropila, acetato de butila, carbonato de dimetila, carbonato de dietila, cloreto de metileno e clorofórmio.
[056] A razão entre o solvente orgânico B imiscível em água e o solvente aquoso A é de 1000: 1 a 1: 1, preferencialmente 100: 1 a 1: 1. A concentração do(s) polímero(s) anfifílico(s) no solvente orgânico imiscível em água B varia dependendo dos tipos de solvente orgânico B imiscível em água e do(s) polímero(s) anfifílico(s) e a concentração é de 0,01 a 90% (p/p), preferencialmente de O, 1 a 50% (p/p), de maior preferência de 1 a 20% (p/p).
[057] Dissolvendo-se um ou mais tensoativos no solvente aquoso A ou no solvente orgânico B imiscível em água utilizado na etapa (a), o(s) tensoativo(s) pode(m) ser encapsulado(s) na micropartícula imunogênica.
A quantidade do(s) tensoativo(s) adicionado(s) na etapa (a) é de preferencialmente 0,01 a 50% (p/p), de maior preferência de O, 1 a 20% (p/p), de preferência ainda maior de 1 a 10% (p/p) com relação à quantidade do(s) polímero(s) anfifílico(s) dissolvido(s) no solvente orgânico imiscível em água B.
[058] Na etapa (a), no processo de formação de uma emulsão em fase reversa com um solvente aquoso A e um solvente orgânico imiscível em água B no qual é(são) dissolvido(s) um ou mais polímero(s) anfifílico(s), a emulsão em fase reversa pode ser formada utilizando, dependendo do propósito farmacêutico, um solvente orgânico imiscível em água B no qual são dissolvidos dois ou mais tipos de polímeros anfifílicos.
[059] Na etapa (a), a fim de auxiliar na formação de uma emulsão de fase reversa e formar uma emulsão de fase reversa fina e uniforme, pode-se adicionar um ou mais aditivos. O aditivo é preferencialmente um composto selecionado a partir de álcoois alquila C3-C 6 , alquilaminas C3-C 6 e ácidos alquil C3-C 6 carboxílicos. A estrutura de cada cadeia alquila nesses aditivos não é restrita e a cadeia alquila pode possuir uma estrutura linear ou uma estrutura ramificada e pode ser um alquila saturado ou alquila insaturado.
Na presente invenção, o aditivo é, de preferência especial, terc-butanol, isopropanol ou pentano!.
[060] Na etapa (b), o método de remoção do solvente da emulsão de fase reversa não é restrito e seus exemplos incluem aquecimento, secagem sob pressão reduzida, diálise, secagem por congelamento, centrifugação, filtragem, reprecipitação e suas combinações. Dentre os métodos de remoção do solvente da emulsão de fase reversa, prefere-se secagem por congelamento, pois causa menos alterações estruturais devido à fusão de partículas na emulsão de fase reversa ou similares. As condições e o aparelho de secagem por congelamento são aqueles que permitem a inclusão de um processo de congelamento e uma etapa de secagem sob pressão reduzida e o processo de secagem por congelamento compreende, de preferência especial, congelamento anterior, secagem primária sob pressão reduzida e baixa temperatura e secagem secundária sob pressão reduzida, que são conduzidas convencionalmente em secagem por congelamento. Em casos em que deve ser obtida uma dispersão de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos em um solvente imiscível em água, a emulsão de fase reversa é resfriada/congelada até não mais que os pontos de fusão do solvente aquoso A e do solvente orgânico imiscível em água B que constituem a emulsão de fase reversa e seca em seguida sob pressão reduzida, para obter micropartículas adjuvantes secas por congelamento. A temperatura do congelamento anterior pode ser determinada experimentalmente conforme apropriado, dependendo da composição do solvente, e preferencialmente é de não mais de -20ºC. O grau de redução da pressão durante o processo de secagem pode também ser determinado conforme apropriado, dependendo da composição de solvente, e preferencialmente é de não mais de 3.000 Pa, de maior preferência não mais de 500 Pa, em vista da redução do tempo de secagem. A secagem por congelamento é preferencialmente conduzida utilizando um secador por congelamento para uso em laboratório que possui um sifão frio e pode ser conectado a uma bomba a vácuo ou um secador por congelamento a vácuo do tipo prateleira utilizado para a elaboração de produtos farmacêuticos ou similares. Após a secagem anterior com nitrogênio líquido, meio de resfriamento ou similar, a secagem sob pressão reduzida pode ser conduzida com resfriamento ou à temperatura ambiente, utilizando um dispositivo a vácuo, tal como uma bomba a vácuo.
[061] Em casos em que a micropartícula imunogênica é constituída por uma micropartícula composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto, exemplos de produção da micropartícula imunogênica incluem um método que compreende as etapas de:
(a). mistura de um solvente aquoso A no qual um ou mais antígenos são dissolvidos e um solvente orgânico imiscível em água B no qual um ou mais polímeros anfifílicos são dissolvidos, para formar uma emulsão de fase reversa; (b). remoção do solvente da emulsão de fase reversa para obter um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos; e (c). introdução de uma dispersão C de complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos em uma fase líquida D que compreende um modificador de superfície, seguida pela remoção do meio de dispersão; em que pode ser obtida a micropartícula imunogênica composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto.
[062] As condições do solvente aquoso A na etapa (a) e do solvente orgânico imiscível em água B na etapa (b) são as mesmas das etapas (a) e (b) ditas acima.
[063] O método empregado para remoção do solvente da emulsão de fase reversa na etapa (b) é a mesma do método dito acima na etapa (b).
[064] Na etapa (c), o meio de dispersão a ser utilizado para dispersar o complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos para preparar a dispersão C de complexo não é restrito e, em casos em que a micropartícula adjuvante possui, na parte interna da mesma, uma parte hidrofílica composta de um ou mais segmentos hidrofílicos do polímero hidrofílico e possui, na camada externa, uma parte hidrofóbica composta de um ou mais segmentos hidrofóbicos do polímero hidrofílico, o meio de dispersão é preferencialmente um solvente no qual o poli(hidroxiácido) do polímero anfifílico é solúvel e o polímero que constitui o segmento hidrofílico é substancialmente insolúvel, para fins de proteção da estrutura da micropartícula adjuvante. Neste caso, o solvente pode ser um solvente orgânico imiscível em água ou um solvente orgânico miscível em água. Exemplos específicos do solvente no qual o poli(hidroxiácido) do polímero anfifílico é solúvel e o polímero que constitui o segmento hidrofílico é substancialmente insolúvel incluem acetato de etila, acetato de isopropila, acetato de butila, carbonato de dimetila, carbonato de dietila, cloreto de metileno, clorofórmio, dioxano, tolueno e xileno.
[065] Preferencialmente, a fase líquida D na etapa (c) é aquela em que um modificador de superfície é solúvel e possui ponto de ebulição mais alto que o meio de dispersão da dispersão C. A fase líquida D pode ser qualquer uma dentre um solvente aquoso, solvente orgânico imiscível em água e solvente orgânico miscível em água. Como solvente aquoso, prefere-se água ou uma solução aquosa que contém um componente hidrossolúvel e exemplos do componente hidrossolúvel incluem sais orgânicos, açúcares, sais orgânicos e aminoácidos. Exemplos do solvente orgânico imiscível em água incluem óleo de silicone, óleo de gergelim, óleo de soja, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de coco, óleo de linhaça, óleo mineral, óleo de mamona, óleo de mamona hidrogenado, parafina líquida, n-hexano, n-heptano, glicerol e ácido oleico. Exemplos do solvente orgânico miscível em água incluem glicerina, acetona, etanol, ácido acético, dipropileno glicol, trietanolamina e trietileno glicol. Dentre estes, na presente invenção, a fase líquida D é preferencialmente um solvente aquoso ou um solvente orgânico miscível em água. Em casos em que a fase líquida D é um solvente aquoso e o meio de dispersão é um solvente orgânico imiscível em água, a suspensão obtida de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos encontra-se na forma da chamada emulsão de sólido em óleo em água (S/0/A) e, em casos em que a fase líquida D é um solvente orgânico imiscível em água ou um solvente orgânico miscível em água e imiscível no meio de dispersão, a suspensão encontra-se na forma de uma emulsão de sólido em óleo em óleo (S/01/02).
[066] Dissolvendo-se um ou mais tensoativos no solvente aquoso A ou no solvente orgânico imiscível em água B utilizado na etapa (a) ou na dispersão C utilizada na etapa (c), o(s) tensoativo(s) pode(m) ser encapsulado(s) na micropartícula imunogênica composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto. Por outro lado, em casos em que um ou mais tensoativos são dissolvidos na fase líquida D utilizada na etapa (c), o(s) tensoativo(s) é(são) ligado(s) à superfície da micropartícula imunogênica composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto, de tal forma que não pode ser obtido o efeito da presente invenção. A quantidade do(s) tensoativo(s) adicionado(s) na etapa (a) ou (c) é de preferencialmente 0,01 a 50% (p/p), de maior preferência de O, 1 a 20% (p/p ), de preferência ainda maior de 1 a 10% (p/p) com relação à quantidade do(s) polímero(s) anfifílico(s) dissolvido(s) no solvente orgânico imiscível em água.
[067] O modificador de superfície a ser adicionado na etapa (c) é preferencialmente um composto que estabiliza a interface entre água e óleo da emulsão S/O/A ou a interface entre óleo e óleo da emulsão S/01/02, em que esse composto possui uma propriedade de aumento da estabilidade coloidal da partícula composta do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto. O aumento da estabilidade coloidal do presente indica a prevenção ou atraso da agregação, no solvente, das partículas compostas do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto. O modificador de superfície pode ser um agente isolado ou uma mistura de uma série de agentes.
[068] O modificador de superfície é preferencialmente um polímero hidrofílico ou um composto anfifílico.
[069] O polímero hidrofílico como modificador de superfície é preferencialmente polietileno glicol, polivinil pirrolidona, álcool polivinílico, polietilenoimina, ácido poliacrílico, ácido polimetacrílico, poli-1,3-dioxolano, polímero de 2-metacriloiloxietil fosforila, poli-1,3,6-trioxano, ácido poliamino,
peptídeo, proteína ou polissacarídeo de açúcar ou um análogo de qualquer um destes. Exemplos do análogo do polímero hidrofílico incluem, mas sem limitações, os preparados a partir de polímeros hidrofílicos, tais como por meio de modificação parcial de grupos hidrofóbicos como alquila de cadeia longa.
[070] O análogo de polietileno glicol como modificador de superfície é preferencialmente "Pluronic" (marca registrada da BASF), disponível comercialmente por meio da BASF, ou seu equivalente.
[071] O ácido poliamínico como modificador de superfície é preferencialmente ácido poliaspártico ou ácido poliglutâmico, ou seu análogo.
Análogos preparados por meio da introdução de alquila de cadeia longa a uma parte de ácido poliaspártico ou ácido poliglutâmico são de maior preferência.
[072] Exemplos do peptídeo como modificador de superfície incluem peptídeos básicos e a proteína como modificador de superfície é preferencialmente gelatina, caseína ou albumina, em vista do aumento da capacidade de dispersão das partículas. Exemplos preferidos da proteína também incluem anticorpos.
[073] O açúcar como modificador de superfície é preferencialmente um monossacarídeo, oligossacarídeo ou polissacarídeo. O polissacarídeo é preferencialmente celulose, chitina, chitosan, goma gelana, ácido algínico, ácido hialurônico, pululan ou dextrana e pululan que contém colesterol é especialmente preferido, em vista do aumento da capacidade de dispersão das partículas. Prefere- se um análogo de qualquer um dentre celulose, chitina, chitosan, goma gelana, ácido algínico, ácido hialurônico, pululan e dextrana.
[074] O peptídeo, proteína ou açúcar como modificador de superfície é, de preferência especial, um análogo preparado, por exemplo, por meio de modificação parcial de grupos hidrofóbicos tais como alquila de cadeia longa ou um análogo preparado por meio de modificação do polímero hidrofílico ou composto anfifílico dito acima.
[075] Exemplos preferidos do composto anfifílico como um modificador de superfície incluem tensoativos não iônicos tais como copolímeros de polioxietileno polipropileno glicol, ésteres de ácido graxo de sacarose, ésteres de ácido graxo de polietileno glicol, ésteres de ácidos monograxos de polioxietileno sorbitano, ésteres de ácidos digraxos de polioxietileno sorbitano, ésteres de ácidos monograxos de polioxietileno glicerol, ésteres de ácidos digraxos de polioxietileno glicerol, ésteres de ácidos graxos de poliglicerol, óleo de mamona de polioxietileno e óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno; sulfatos de alquila tais como lauril sulfato de sódio, lauril sulfato de amônio e estearil sulfato de sódio; e lecitina.
[076] A razão em volume entre o meio de dispersão no qual o complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos é disperso e a fase líquida D é de 1000:1 a 1:1000, preferencialmente 100:1 a 1:100. O número de associação do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos obtido varia dependendo dessa razão em volume e, à medida que aumenta a razão da fase de lipídio D, é obtida uma dispersão em água de partículas compostas de um número maior do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto, enquanto, à medida que cai a razão da fase de lipídio D, o número de associação é reduzido. Em casos em que a razão da fase líquida D é menor que uma razão de solução de 1:4, cada uma dentre a maior parte das partículas na dispersão em água é constituída por um único complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos.
Desta forma, ao controlar a razão em volume da fase de líquido D na série de processos de produção da partícula composta do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto, o complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos e a partícula composta do complexo associado em conjunto podem ser preparados seletivamente.
[077] Quando o meio de dispersão que contém o complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos é misturado com a fase líquida D,
pode ser utilizado um dispositivo de agitação tal como um agitador magnético, agitador de turbina, homogeneizador, aparelho de emulsificação de membrana equipado com uma membrana porosa ou similar conforme o necessário.
[078] A fase líquida D pode conter além do modificador de superfície, diversos aditivos tais como um tampão, antioxidante, sal, polímero e/ou açúcar, dependendo do propósito farmacêutico. Além disso, o meio de dispersão no qual o complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos deve ser disperso pode conter vários aditivos solúveis no meio de dispersão, tais como um composto ácido, composto básico, polímero anfifílico e/ou polímero biodegradável, para fins de controlar a velocidade de liberação do(s) antígeno(s) encapsulado(s) por meio de degradação ou desintegração do complexo.
[079] Adicionalmente, uma operação de emulsificação da emulsão de sólido em óleo em água (S/O/A) ou emulsão de sólido em óleo em óleo (S/01/02) formada pode ser conduzida para fins de produção de partículas mais finas compostas do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto. O método de emulsificação não é restrito, desde que possa ser preparada com ele uma emulsão estável, e seus exemplos incluem métodos de agitação e métodos que utilizam um homogeneizador sob alta pressão, homomisturador em alta velocidade ou similar.
[080] Em casos em que o complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos é disperso uma vez em um meio de dispersão e a dispersão obtida C é adicionada à fase líquida D que contém um modificador de superfície, pode ser obtida uma suspensão da partícula composta de uma micropartícula adjuvante desejada associada em conjunto por meio de remoção do meio de dispersão. O método de remoção do meio de dispersão não é restrito e seus exemplos incluem secagem em líquido ("drying-in-liquid'), diálise, secagem por congelamento, centrifugação, filtragem e reprecipitação,
dentre os quais são especialmente preferidos secagem em líquido ("drying-in- liquid') e secagem por congelamento. Em casos em que um solvente aquoso é utilizado como a fase líquida D, pode ser obtida uma dispersão aquosa da partícula composta do complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto por meio desta etapa.
[081] Em uma realização preferida, o modificador de superfície é ligado à micropartícula imunogênica. A ligação do presente pode ser uma ligação covalente ou uma ligação não covalente. A ligação não covalente é preferencialmente uma interação hidrofóbica e pode também ser uma interação eletrostática, ligação de hidrogênio ou força van der Waals, ou uma combinação dessas ligações. Em casos de ligação não covalente, poli(hidroxiácido) da micropartícula imunogênica que contém o polímero anfifílico é preferencialmente ligado à parte hidrofóbica do modificador de superfície por meio de interação hidrofóbica e, neste caso, o meio de dispersão para o complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos na dispersão de micropartículas é preferencialmente água, tampão, solução salina fisiológica, solução modificadora de superfície aquosa ou solvente hidrofílico.
[082] A composição imunogênica de acordo com a presente invenção é uma composição que pode induzir uma reação imunológica em um corpo vivo e contém a micropartícula imunogênica como ingrediente ativo. O tipo da reação imunológica induzida pela composição imunogênica não é restrito. Exemplos do tipo da reação imunológica induzida incluem a reação imunológica Th1 e a reação imunológica Th2 e sabe-se que uma dessas reações imunológicas é predominantemente induzida dependendo do antígeno, do local de administração e do tipo de método de administração. A presente invenção pode induzir as duas reações imunológicas, Th1 e Th2. A reação imunológica Th1 pode ser efetivamente induzida pelo complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos de acordo com a presente invenção que possui pequeno tamanho de partícula ou pela partícula composta do complexo associado em conjunto, conforme exibido nos Exemplos. Os graus da reação imunológica Th1 e da reação imunológica Th2 podem ser avaliados por meio de diversos métodos conhecidos. No caso de camundongo, por exemplo, sabe-se que a quantidade de produção do anticorpo lgG2a é um índice da reação imunológica Th1. Além disso, como índices da reação imunológica Th2, as quantidades do anticorpo lgG1 e do anticorpo lgG total são conhecidas.
[083] A composição imunogênica de acordo com a presente invenção pode realizar alta capacidade de ativação da imunidade por meio da inclusão adicional de uma substância ativadora da imunidade. A substância ativadora da imunidade pode estar contida no lado externo da micropartícula adjuvante ou nela encapsulada e a substância é preferencialmetne encapsulada na micropartícula adjuvante. A substância ativadora da imunidade não é restrita, desde que possa funcionar como substância ativadora da imunidade, e seus exemplos incluem óleos, sais de alumínio, sais de cálcio, polímeros formadores de gel, citoquinas ativadoras da imunidade e ligantes de receptor TLR, dentre os quais são preferidos citoquinas ativadoras da imunidade e ligantes receptores de TLR.
[084] Exemplos das citoquinas ativadoras da imunidade incluem interleucina 12, interferona a, interleucina 18, TNFa, interleucina 6, NO, interferona y e interferona 13.
[085] Exemplos dos ligantes receptores de TLR incluem lipoproteínas; RNAs de fita dupla tais como póli l:C e póli l:CLC; flagelina; RNAs de fita simples; CpG; profilina; MPL; QS21; e TOM, dentre os quais são preferidos ácidos nucleicos tais como RNAs de fita dupla, RNAs de fita simples e CpG, em que CpG é de maior preferência. O CpG do presente indica DNAs com motivo CpG (citosina guanina) não metilado existentes em vírus, bactérias e similares (vide o Pedido de Patente PCT em Aberto Japonês Traduzido nº 2001-503254). Várias sequências eficazes são relatadas como motivos de CpG e o tipo da sequência não é restrito, desde que possua capacidade ativadora da imunidade, e a sequência pode ser preparada utilizando análogos de bases ou pode ser selecionada a partir de diversos tipos de produtos modificados.
[086] Em casos em que a composição imunogênica de acordo com a presente invenção é utilizada como composição farmacêutica ou vacina, diversos aditivos farmaceuticamente úteis podem estar contidos além do polímero anfifílico, substância ativa hidrofílica, modificador de superfície e meio de dispersão. Exemplos dos aditivos que podem ser agregados incluem tampões, antioxidantes, sais, polímero e açúcares.
[087] O método de indução de uma reação imunológica utilizando a composição imunogênica de acordo com a presente invenção não é restrita e a composição imunogênica pode ser administrada a um corpo vivo ou colocada em contato com células imunocompetentes removidas para o lado externo de um corpo vivo. O método de administração da composição imunogênica a um corpo vivo não é restrito e seus exemplos incluem administração subcutânea, administração intradérmica, administração intramusuclar, administração transnasal, administração pulmonar, administração oral, administração transdérmica, administração sublingual, administração intravaginal, administração intraperitoneal e administração aos nódulos linfáticos, dentre as quais são preferidas administração intradérmica e administração subcutânea.
[088] Em termos da quantidade da composição imunogênica de acordo com a presente invenção a ser utilizada mediante indução da reação imunológica, a quantidade necessária do antígeno exigido para indução da reação imunológica de interesse é definida adequadamente, dependendo do tipo do antígeno, método de administração e número de doses. Em casos em que a composição imunogênica de acordo com a presente invenção é administrada por via subcutânea a seres humanos para induzir reação imunológica, por exemplo, a composição é administrada em dose de 0,01 a 1000 µg de cada vez em termos da quantidade de antígeno contida na composição imunogênica. O número de doses pode também ser adequadamente definido de forma similar à dose e a reação imunológica pode ser induzida por uma a dez vezes de administração, pois a composição imunogênica de acordo com a presente invenção possui ação de indução contínua de reação imunológica.
[089] O corpo vivo ao qual é administrada a composição imunogênica pode ser um ser humano ou animal não humano e o corpo vivo é preferencialmente humano; ou porco, vaca, ave, carneiro, cavalo, burro, cabra, camelo, cão, gato, furão, coelho, macaco, rato, camundongo ou cobaia, que é mantido como criação, animal de estimação ou animal experimental.
[090] São descritos exemplos abaixo, mas a presente invenção não é restrita a esses Exemplos. EXEMPLO 1
[091] Síntese de Dextrana-poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA):
1.1 Síntese de TMS-Dextrana (Composto 1): Dextrana (Nacalai Tesque; grau especial de acordo com os padrões Nacalai; peso molecular numérico médio, 13.000; 5,0 g) foi adicionado a formamida (100 ml) e a mistura resultante foi aquecida a 80ºC. A essa solução, adicionou-se 1, 1, 1,3,3,3-hexcametildissilazano (100 ml) em gotas por vinte minutos. A mistura resultante foi agitada em seguida a 80ºC por duas horas. Após o término da reação, a solução de reação foi mantida em resfriamento à temperatura ambiente e duas camadas foram separadas entre si com um funil separador. A camada superior foi concentrada sob pressão reduzida e adicionou-se metanol (300 ml), seguido por filtragem e secagem dos sólidos obtidos, para a obtenção de TMS-dextrana (Composto 1) (11,4 g) na forma de sólido branco.
1.2 Síntese de Dextrana-PLGA (Composto 2): Composto 1 (0,5 g) e terc-butóxido de potássio (35 mg) foram secos sob aquecimento e pressão reduzida por duas horas e adicionou-se tetra-hidrofurano (1 O ml), seguido por agitação da mistura resultante por uma hora e meia à temperatura ambiente. A esta solução, foi adicionada em gotas uma solução de (DL)-lactídeo (0,56 g) e glicolídeo (0,9 g) em tetra-hidrofurano (15 ml) e a mistura resultante foi agitada por cinco minutos, seguida pela adição de duas gotas de ácido acético para suspender a reação. Após o término da reação, o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, foi conduzida purificação por reprecipitação com o sistema de clorofórmio e metanol e o sistema de clorofórmio e dietil éter para obter sólidos brancos, que foram dissolvidos em seguida em clorofórmio (9 ml). À solução resultante, adicionou-se ácido trifluoroacético (1,0 ml) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por trinta minutos. Após o término da reação, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em clorofórmio (1 O ml), seguido pela adição da solução resultante em gotas a dietil éter que havia sido preliminarmente resfriado a OºC e filtragem do produto obtido, para obter um polímero anfifílico dextrana-PLGA na forma de sólido branco 1 (Composto 2). Determinou-se por meio de medição de NMR H que o peso molecular numérico médio das fitas de enxerto de PLGA do dextrana-PLGA é 5571 e o número de cadeias de enxerto é 30. EXEMPL02
[092] Preparação de micropartículas imunogênicas (Partículas 1 a 1O e Partículas Comparativas 1 e 2):
Em 100 µL de carbonato de dimetila, foram dissolvidos 5 mg do dextrana-poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) no Exemplo 1 (Composto 2) para preparar 50 mg/ml de solução de polímero anfifílico (8). À solução de polímero anfifílico 8, foram adicionados 20 µL de terc-butanol e 50 µL de solução A de CEA (antígeno carcinoembriônico) aquoso a 0,025% (p/v) (COSMO 810 Co., Ltd.) em gotas, seguidos por agitação da mistura resultante com um misturador por turbilhão para produzir uma emulsão de fase reversa.
[093] A emulsão de fase reversa foi submetida a congelamento anterior com nitrogênio líquido e seca por congelamento utilizando um secador por congelamento (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) sob temperatura de resfriamento do sifão de -45ºC e grau de vácuo de 20 Pa por 24 horas. Os sólidos obtidos foram dispersos em 200 µL de carbonato de dimetila para preparar uma dispersão C. A dispersão C foi adicionada em gotas a 2 ml de uma solução aquosa que contém 10% (p/v) de modificador de superfície (álcool polivinílico ou Pluronic F-68) exibido na Tabela 1 e a mistura resultante foi agitada e emulsificada com um misturador de turbilhão, para preparar uma emulsão S/O/A. A partir da emulsão S/O/A, carbonato de dimetila foi removido por meio de secagem em líquido ("drying-in-liquid') para preparar uma suspensão de micropartículas imunogênicas. A suspensão foi transferida para um tubo de 15 ml e submetida a centrifugação a 8.000 rpm por dez minutos para precipitar as partículas. Após a remoção do sobrenadante, as partículas foram novamente suspensas em 1O ml de água destilada e a suspensão resultante foi submetida a centrifugação sob as mesmas condições descritas acima para realizar nova precipitação das partículas. Esta operação de lavagem foi repetida uma vez mais e, após a remoção do sobrenadante, as partículas foram suspensas em 200 µI de uma solução aquosa contendo 5% (p/v) de manitol, 0,5% (p/v) de carboximetilcelulose de sódio e 0, 1% (p/v) de polissorbato 80. A suspensão resultante foi submetida a congelamento anterior com nitrogênio líquido e seca por congelamento utilizando um secador por congelamento (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) sob temperatura de resfriamento do sifão de -45ºC e grau de vácuo de 20 Pa por 24 horas, para obter uma micropartícula imunogênica.
[094] Como tensoativo, polissorbato 80, polissorbato 20, trioleato de sorbitano ou monooleato de sorbitano (estes foram fabricados pela Kanto Chemical Co., lnc.) ou óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno (fabricado pela Nikko Chemicals, Co., Ltd.) foi dissolvido na solução de CEA aquosa A, solução de polímero anfifílico B ou dispersão C conforme exibido na Tabela 1, em quantidade de 500 µg, que correspondeu a 10% (p/p) com relação à quantidade do polímero anfifílico.
TABELA 1 MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE MICROPARTÍCULAS IMUNOGÊNICAS (PARTÍCULAS 1A 10 E PARTÍCULAS COMPARATIVAS 1 E 2) Solução à qual Tipo de Partícula nº foi adicionado Tipo de tensoativo modificador de tensoativo superfície Partícula 1 Dispersão C Polissorbato 80 Álcool polivinílico Partícula 2 Dispersão C Trioleato de sorbitano Álcool polivinílico Partícula 3 Dispersão C Polissorbato 80 Pluronic F68 Partícula 4 Dispersão C Trioleato de sorbitano Pluronic F68 Partícula 5 Dispersão C Polissorbato 20 Pluronic F68 Partícula 6 Dispersão C Monooleato de sorbitano Pluronic F68 Óleo de mamona Partícula 7 Dispersão C hidrogenado com Pluronic F68 polioxietileno Partícula 8 Solução aquosa Polissorbato 80 Pluronic F68
Solução à qual Tipo de Partícula nº foi adicionado Tipo de tensoativo modificador de tensoativo superfície de CEA (A) Solução de Partícula 9 polímero Polissorbato 80 Pluronic F68 anfifílico (8) Partícula 1O Dispersão C Polissorbato 80 Pluronic F68 Partícula Comparativa - - Álcool polivinílico 1 Partícula Comparativa - - Pluronic F68 2 EXEMPLO 3
[095] Medição da velocidade de encapsulação de antígenos em micropartículas imunogênicas:
[096] Método: Cada tipo de micropartículas imunogênicas preparadas por meio do método do Exemplo 2 (Partículas 3 a 7 e Partícula Comparativa 2) foi dissolvido em 200 µL de solução salina fisiológica tamponada com fosfato, para preparar uma suspensão de partículas. Em um tubo Eppendorf, foram colocados 100 µL da suspensão de partículas e adicionou-se 1 ml de água destilada, seguida pela centrifugação da mistura resultante a 13.000 rpm por dez minutos para precipitar as partículas. Após a remoção do sobrenadante, as partículas foram novamente suspensas em 1 ml de água destilada e a suspensão resultante foi submetida a centrifugação sob as mesmas condições descritas acima para realizar nova precipitação das partículas. Após a remoção do sobrenadante, as partículas foram dissolvidas em 0,5 ml de uma solução misturada a 1:3 de cloreto de metileno e acetona. A solução de partículas resultante foi submetida a centrifugação a 13.000 rpm por dez minutos para precipitar CEA. Após a remoção do sobrenadante, o precipitado foi dissolvido em 0,5 ml da solução misturada e a centrifugação foi conduzida sob as condições descritas acima para nova precipitação de CEA. Após a remoção do sobrenadante, conduziu-se secagem centrífuga por trinta minutos para secar o precipitado de CEA. Adicionou-se um tampão de amostragem para eletroforese de gel (fabricado pela TEFCO) ao precipitado de CEA e o precipitado foi nele dissolvido a 95ºC por três minutos, seguido pela realização de eletroforese de gel utilizando gel de poliacrilamida (fabricado pela TEFCO). Em seguida, o gel foi manchado utilizando o kit de manchas CBB coloidal (fabricado pela TEFCO) e foi calculada a velocidade de encapsulação de CEA nas partículas. Os resultados são exibidos na Tabela 2.
[097] Resultados: As velocidades de encapsulação de antígenos (CEA) das micropartículas imunogênicas foram conforme exibido na Tabela 2 e demonstrou-se que a velocidade de encapsulação foi quase idêntica entre qualquer uma das micropartículas imunogênicas contendo um tensoativo (Partículas 3 a 7) e a partícula que não continha tensoativo (Partícula Comparativa 2). Desta forma, demonstrou-se que os tensoativos não prejudicam a velocidade de encapsulação de antígenos da micropartícula imunogênica.
TABELA2
VELOCIDADE DE ENCAPSULAÇÃO DE CEA EM MICROPARTÍCULAS IMUNOGÊNICAS (PARTÍCULAS 3 A 7 E PARTÍCULA COMPARATIVA 2) Velocidade de Partícula nº Tipo de tensoativo encapsulação de
Velocidade de Partícula nº Tipo de tensoativo encapsulação de
CEA Partícula 3 Polissorbato 80 65% Partícula 4 Trioleato de sorbitano 46% Partícula 5 Polissorbato 20 62% Partícula 6 Monooleato de sorbitano 71% Óleo de mamona hidrogenado com Partícula 7 66% polioxietileno Partícula - 55% comparativa 2 EXEMPL04
[098] Administração subcutânea de composição imunogênica contendo CEA a camundongos (1 ):
[099] Método: Cada tipo das micropartículas imunogênicas preparadas no Exemplo 2 contendo polissorbato 80 ou trioleato de sorbitano (Partículas 1 e 2) foi suspenso em 200 µL de solução salina fisiológica tamponada com fosfato, para fornecer uma solução de adminsitração. Esta solução foi administrada por via subcutânea por meio de injeção isolada nas costas de camundongos Balb/C machos com sete semanas de idade (Japan SCL, lnc.) em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo. Como Exemplos Comparativos, partículas que não contêm tensoativo (Partícula Comparativa 1) ou uma solução preparada por meio da mistura de 50 µL da solução de CEA com 50 µL de "lmject Alum" (fabricado pela Thermo Scientific, também denominado a seguir alúmen) como adjuvante foram administradas por via subcutânea por meio de uma única injeção nas costas de camundongos Balb/C machos em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo. Sob cada condição, a administração foi conduzida para cinco camundongos individuais. As alterações do título de anticorpo ao longo do tempo são exibidas na Fig. 1.
[0100] Os camundongos após a administração foram mantidos em um ambiente no qual os camundongos podem ingerir livremente alimentos e água, enquanto o sangue era coletado da veia da cauda ao longo do tempo.
Ao sangue coletado, adicionou-se heparina até concentração final de 3,3 Ul/ml e a centrifugação foi conduzida a 5.000 rpm por cinco minutos para coletar plasma sanguíneo, seguido pela medição do título de anticorpo contra CEA no plasma sanguíneo. O título de anticorpo contra CEA foi medido por meio do método a seguir. Em uma microplaca com 96 cavidades (MaxiSorp, fabricada pela Nunc), foram colocados 100 µL de uma solução de PBS contendo 1 µg/ml de proteína CEA e a placa foi mantida em repouso a 4ºC por uma noite. A solução foi descartada e 400 µL de PBS suplementado com 0,5% de BSA foram colocados na placa, seguidos pela condução de bloqueio à temperatura ambiente por duas horas. A cavidade foi lavada por uma vez com 400 µL de um líquido de lavagem (PBS suplementado com 0,05% de Tween 20) e 100 µL de uma amostra de plasma sanguíneo que havia sido diluída a 1.000 até
100.000 vezes com um líquido de diluição (PBS suplementado com 0,25% de BSA e 0,05% de Tween 20) foram colocados na cavidade, seguidos por permitir o processamento da reação à temperatura ambiente por quarenta minutos mediante agitação. A roda foi lavada por três vezes com o líquido de lavagem e 100 µI de anticorpo anti-lgG de camundongo marcado com HRP (peroxidase de rabanete silvestre) (Zymed) (diluído 10.000 vezes com o líquido de diluição) foram colocados na cavidade, seguidos por manutenção da reação em processamento à temperatura ambiente por vinte minutos mediante agitação. A cavidade foi lavada por três vezes com o líquido de lavagem e 100 µI de um líquido corante (tampão de citrato/acetato de sódio a O, 1 M (pH 4,5)
contendo 0,006% de peróxido de hidrogênio e 0,2 mg/ml de tetrametilbenzidina) foram colocados na cavidade, seguidos por manutenção da reação em processamento à temperatura ambiente por dez minutos mediante agitação. A reação foi suspensa por meio da adição de 100 µL de ácido sulfúrico a 1 N e a absorção a 450 nm foi medida utilizando um leitor de microplacas. Como amostra padrão, um anticorpo monoclonal anti-CEA diluído em série (MA1-5308, fabricado pela Affinity Bioreagents) foi medido ao mesmo tempo para fornecer uma curva de calibragem e a quantidade de anticorpo em cada amostra foi calculada em termos de concentração em peso (ng/ml).
[0101] Resultados: As alterações do valor médio de título de anticorpo anti-CEA em plasma sanguíneo ao longo do tempo são exibidas na Fig. 1. A Partícula 1 que contém polissorbato 80 e a Partícula 2 que contém trioleato de sorbitano exibiram efeito contínuo de aumento do título de anticorpo por oito semanas e o efeito foi muito maior que no caso do Exemplo Comparativo, no qual administrou-se o antígeno + alúmen. O título de anticorpo foi ainda mais alto que no caso da Partícula Comparativa 1 que nãó continha tensoativo e demonstrou-se que a micropartícula imunogênica exibe capacidade adjuvante mais alta por meio da inclusão de um tensoativo.
[0102] Administração subcutânea de composição imunogênica contendo CEA a camundongos (2):
[0103] Método: Cada tipo das micropartículas imunogênicas preparadas no Exemplo 2 (Partículas 3 a 7) foi administrada por via subcutânea por meio de uma única injeção nas costas de camundongos Balb/C machos com sete semanas de idade (Japan SLC, lnc.) em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo por meio do método descrito no Exemplo 4. Como Exemplo
Comparativo, partículas que não contêm tensoativo (Partícula Comparativa 2) foram administradas por via subcutânea por meio de uma única injeção nas costas de camundongos Balb/C machos em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo. Sob cada condição, a administração foi conduzida para cinco camundongos individuais. A Fig. 2 exibe o valor médio do título de anticorpo. A coleta de sangue e a medição do título de anticorpo foram conduzidas por meio dos métodos descritos no Exemplo 4.
[0104] Resultados: O valor médio do título de anticorpo anti-CEA em plasma sanguíneo na quarta semana após a administração é exibido na Fig. 2. De forma similar aos casos de partículas que contêm polissorbato 80 ou trioleato de sorbitano (3, 4) descritos no Exemplo 4, as partículas contendo polissorbato 20, monooleato de sorbitano ou óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno (5 a 7) também exibiram valores mais altos do título de anticorpo em comparação com a Partícula Comparativa 2 que não contém tensoativo.
Demonstrou-se, portanto, que a micropartícula imunogênica exibe capacidade adjuvante mais alta por meio da inclusão de um tensoativo.
[0105] Administração subcutânea de composição imunogênica contendo CEA a camundongos (3):
[0106] Método: Cada tipo das micropartículas imunogênicas preparadas no Exemplo 2 contendo polissorbato 80 (Partículas 8 a 1O) foi administrada por meio de uma única injeção na almofada da pata de camundongos Balb/C machos com sete semanas de idade (Japan SLC, lnc.) em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo por meio do método descrito no Exemplo 4. Como Exemplo Comparativo, foi preparada uma solução por meio da mistura de 50 µL da solução de antígeno e 50 µL de alúmen e a mistura resultante foi administrada por meio de uma única injeção na almofada da pata de camundongos Balb/C machos em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo. Sob cada condição, a administração foi conduzida para três camundongos individuais. A Fig. 3 exibe o valor médio do título de anticorpo. A medição do título de anticorpo foi conduzida por meio do método descrito no Exemplo 4.
[0107] Resultados: O valor médio do título de anticorpo anti-CEA em plasma sanguíneo na segunda semana após a administração é exibido na Fig. 3. Em todos os tipos de partículas (8 a 1O) nos quais foram utilizadas diferentes soluções para dissolver polissorbato 80 no processo de preparação, o título de anticorpo era drasticamente superior ao caso de administração do antígeno + alúmen no Exemplo Comparativo. Isso significa que se demonstrou que a micropartícula imunogênica possui forte capacidade adjuvante também em casos em que o tensoativo foi dissolvido em qualquer uma dentre a solução de CEA aquosa (A), solução de polímero anfifílico (B) e dispersão (C). EXEMPLO 7
[0108] Medição do tensoativo contido em micropartículas imunogênicas:
[0109] Método: As micropartículas imunogênicas (Partícula 1) que contêm polissorbato 80 preparadas no Exemplo 2 foram suspensas em 1 ml de água destilada e precipitadas por meio de centrifugação a 13.000 rpm por dez minutos. Após a remoção do sobrenadante, as partículas foram novamente suspensas em 1 ml de água destilada e submetidas a centrifugação sob as mesmas condições descritas acima para precipitar novamente as partículas.
Após a remoção do sob renadante, as partículas foram dissolvidas em 100 µI de acetato de etila. A essa solução de partículas, foram adicionados 300 µL de etanol e a mistura resultante foi submetida a centrifugação a 13.000 rpm por dez minutos para precipitar o polímero anfifílico. O sobrenadante foi recolhido e o solvente foi removido por meio de evaporação sob pressão reduzida, seguida por dissolução do resíduo em 100 µL de água destilada, para preparar um extrato de partículas. O extrato de partículas foi analisado por meio de cromatografia de líquidos de alto desempenho (fabricada pela Shimadzu Corporation) utilizando uma coluna de fase reversa (YMC-Pack PROTEIN-RP, fabricada pela YMC) para medir o teor de polissorbato 80 contido na micropartícula imunogênica.
[011 O] Resultados: Por meio da análise por cromatografia de líquidos de alto desempenho, concluiu-se que o extrato de partículas continha 0,24% (p/v) de polissorbato 80. Com base neste resultado, revelou-se que a micropartícula imunogênica contém polissorbato 80 em quantidade de 4,8% (p/p) com relação à quantidade alimentada do polímero anfifílico que constitui a micropartícula imunogênica e demonstrou-se que 48% (p/p) do polissorbato 80 adicionado no processo de preparação do Exemplo 2 estavam contidos na micropartícula imunogênica. EXEMPLO 8
[0111] Preparação de micropartículas imunogênicas que contêm CEA (Partículas 11 a 15 e Partículas Comparativas 3 a 5): Em 100 µL de carbonato de dimetila, foram dissolvidos 5 mg de dextrana-poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) (Composto 2) preparado no Exemplo 1, para preparar 50 mg/ml de solução de polímero anfifílico (B). À solução de polímero anfifílico B, foram adicionados 20 µL de terc-butanol e 50 µL de solução A de CEA (antígeno carcinoembriônico) aquoso a 0,025% (p/v) (COSMO BIO Co., Ltd.) em gotas, seguidos por agitação da mistura resultante com um misturador por turbilhão para produzir uma emulsão de fase reversa.
[0112] A emulsão de fase reversa foi submetida a congelamento anterior com nitrogênio líquido e seca por congelamento utilizando um secador por congelamento (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) sob temperatura de resfriamento do sifão de -45ºC e grau de vácuo de 20 Pa por 24 horas. Os sólidos obtidos foram dispersos em 200 µL de carbonato de dimetila para preparar uma dispersão C. A dispersão C foi adicionada em gotas a 2 ml de uma solução aquosa que contém 10% (p/v) de modificador de superfície D (Pluronic F-68) e a mistura resultante foi agitada e emulsificada com um misturador de turbilhão, para preparar uma emulsão S/O/A. A partir da emulsão S/O/A, carbonato de dimetila foi removido por meio de secagem em líquido ("drying-in-liquid') para preparar uma suspensão de micropartículas imunogênicas. A suspensão foi transferida para um tubo de 15 ml e submetida a centrifugação a 8.000 rpm por dez minutos para precipitar as partículas. Após a remoção do sobrenadante, as partículas foram novamente suspensas em 1O ml de água destilada e a suspensão resultante foi submetida a centrifugação sob as mesmas condições descritas acima para realizar nova precipitação das partículas. Esta operação de lavagem foi repetida mais uma vez e, após a remoção do sobrenadante, as partículas foram suspensas em 200 µL de uma solução aquosa (Solução de Injeção E) contendo 5% (p/v) de manitol, 0,5% (p/v) de carboximetilcelulose de sódio e O, 1% (p/v) de polissorbato 80. A suspensão resultante foi submetida a congelamento anterior com nitrogênio líquido e seca por congelamento utilizando um secador por congelamento (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) sob temperatura de resfriamento do sifão de -45ºC e grau de vácuo de 20 Pa por 24 horas, para obter uma micropartícula imunogênica.
[0113] Como tensoativo, polissorbato 80 foi dissolvido na solução aquosa de CEA (A), solução de polímero anfifílico (B) ou dispersão (C), conforme exibido na Tabela 3, em quantidade correspondente a 10% (p/p), 1%
(p/p) ou O, 1% (p/p) com relação à quantidade do polímero anfifílico, para preparação das partículas 11 a 15. Além disso, em termos de Partículas Comparativas, polissorbato 80 foi dissolvido na solução aquosa contendo um modificador de superfície (D) ou solução de injeção (E), na quantidade correspondente a 10% (p/p) com relação à quantidade do polímero anfifílico, para preparar a Partícula Comparativa 3 na qual o tensoativo é ligado às superfícies de micropartículas, a Partícula Comparativa 4 na qual o tensoativo e micropartículas imunogênicas coexistem sem que se liguem entre si e a Partícula Comparativa 5, na qual o tensoativo não foi adicionado no processo de preparação de micropartículas imunogênicas.
TABELA 3
MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE MICROPARTÍCULAS IMUNOGÊNICAS QUE CONTÊM CEA (PARTÍCULAS 11A15 E PARTÍCULAS COMPARATIVAS 3 A 5) Solução à qual foi Quantidade de Partícula nº adicionado tensoativo tensoativo adicionada Partícula 11 Solução aquosa de CEA (A) 10% (p/p) Solução de polímero anfifílico Partícula 12 10% (p/p) (8) Partícula 13 Dispersão c 10% (p/p) Partícula 14 Solução aquosa de CEA (A) 1% (p/p) Partícula 15 Solução aquosa de CEA (A) O, 1% (p/p) Partícula Solução aquosa contendo 10% (p/p) Comparativa 3 modificador de superfície (D) Partícula Solução de injeção E 10% (p/p) Comparativa 4 Partícula - - comparativa 5
EXEMPLO 9
[0114] Administração subcutânea de composição imunogênica contendo CEA a camundongos (4):
[0115] Método: Cada tipo das micropartículas imunogênicas preparadas no Exemplo 8 (Partículas 11 a 13) foi administrada por via subcutânea por meio do método descrito no Exemplo 4 por uma única injeção nas costas de camundongos Balb/C machos com sete semanas de idade (Japan SLC, lnc.) em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo. Como Exemplos Comparativos, partículas às quais o tensoativo foi adicionado de diferentes formas (Partículas Comparativas 3 e 4) foram administradas por via subcutânea por meio de uma única injeção nas costas de camundongos Balb/C machos em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo. Sob cada condição, a administração foi conduzida para cinco camundongos individuais. A Fig. 4 exibe o valor médio do título de anticorpo. A coleta de sangue e a medição do título de anticorpo foram conduzidas por meio dos métodos descritos no Exemplo 4.
[0116] Resultados: O valor médio do título de anticorpo anti-CEA em plasma sanguíneo na quinta semana após a administração é exibido na Fig. 4. Nos casos em que o tensoativo foi adicionado à solução aquosa de CEA (A), solução de polímero B ou dispersão C (Partículas 11 a 13), o tensoativo está presente na emulsão S/O/A, de tal forma que o tensoativo seja encapsulado na micropartícula. Por outro lado, no caso da partícula (Partícula Comparativa 3) adicionada à solução aquosa contendo um modificador de superfície (D), polissorbato 80 está presente fora da emulsão S/O/A, de tal forma que o tensoativo seja ligado à superfície da micropartícula. No caso da partícula (Partícula Comparativa 4) adicionada à solução de injeção (E), o tensoativo e as micropartículas coexistem sem que sejam ligados entre si. Como as micropartículas imunogênicas (Partículas 11 a 13) nas quais o tensoativo é encapsulado exibiram títulos de anticorpo mais altos em comparação com a partícula (Partícula Comparativa 3) na qual o tensoativo é ligado à superfície e a partícula (Partícula Comparativa 4) na qual o tensoativo não é ligado à superfície, demonstrou-se que a encapsulação do tensoativo na micropartícula imunogênica é importante na presente invenção.
EXEMPLO 10
[0117] Administração subcutânea de composição imunogênica contendo CEA a camundongos (5):
[0118] Método: Cada tipo das micropartículas imunogênicas preparadas no Exemplo 8 (Partículas 11, 14 e 15) foi administrada por via subcutânea por meio do método descrito no Exemplo 4 por uma única injeção nas costas de camundongos Balb/C machos com sete semanas de idade (Japan SLC, lnc.) em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo. Como Exemplo Comparativo, partículas que não contêm tensoativo (Partícula Comparativa 5) foram administradas por via subcutânea por meio de uma única injeção nas costas de camundongos Balb/C machos em dose de 5 µg em termos de CEA por indivíduo. Sob cada condição, a administração foi conduzida para cinco camundongos individuais. A Fig. 5 exibe o valor médio do título de anticorpo. A coleta de sangue e a medição do título de anticorpo foram conduzidas por meio dos métodos descritos no Exemplo 4.
Resultados: O valor médio do título de anticorpo anti-CEA em plasma sanguíneo na terceira semana após a administração é exibido na Fig. 5. As partículas nas quais é encapsulado um tensoativo (Partículas 11, 14 e 15) exibiram títulos de anticorpo mais altos em comparação com a partícula que não contém tensoativo (Partícula Comparativa 5). Além disso, dentre as partículas nas quais o tensoativo é encapsulado, quanto maior a quantidade do tensoativo adicionada, mais alto o título do anticorpo. Demonstrou-se, portanto, que o efeito aumenta à medida que aumenta a quantidade do tensoativo encapsulado na partícula.
EXEMPLO 11
[0119] Medição do tensoativo contido em micropartículas imunogênicas (2):
[0120] Método: As micropartículas imunogênicas preparadas no Exemplo 8 (Partículas 11 a 13 e Partícula Comparativa 3) foram utilizadas para medir os teores de polissorbato 80 contidos nas micropartículas imunogênicas, por meio do método descrito no Exemplo 7.
[0121] Resultados: Por meio de cromatografia de líquidos de alto desempenho, foi analisado o teor de polissorbato 80 com relação à quantidade alimentada do polímero anfifílico que constitui a micropartícula imunogênica ou com relação à quantidade do tensoativo alimentado no processo de produção. Os resultados são exibidos na Tabela 4. Nas partículas em que o tensoativo foi adicionado à solução aquosa de CEA (A), solução de polímero anfifílico B ou dispersão C (Partículas 11 a 13), o tensoativo foi encapsulado nas micropartículas no processo de preparação. Consequentemente, demonstrou-se que cerca de 30% (p/p) do tensoativo adicionado no processo de preparação do Exemplo 8 estavam contidos nas partículas. Por outro lado, no caso das partículas (Partícula Comparativa 3) preparadas por meio do processo no qual o tensoativo foi adicionado à solução aquosa contendo um modificador de superfície (D), o tensoativo é ligado às superfícies das micropartículas e demonstrou-se que estavam contidos apenas cerca de 3% do tensoativo adicionado no processo de preparação.
TABELA4
QUANTIDADE DO TENSOATIVO CONTIDO EM MICROPARTÍCULAS IMUNOGÊNICAS (PARTÍCULAS 11A13 E PARTÍCULA COMPARATIVA 3) Teor de tensoativo Teor de tensoativo com Partícula nº com relação a relação à quantidade polímero anfifílico adicionada Partícula 11 3,90% p/p 39,0% p/p Partícula 12 3,03% p/p 30,3% p/p Partícula 13 2,89% p/p 28,9% p/p Partícula comparativa 3 0,23% p/p 2,3% p/p EXEMPLO 12
[0122] Preparação de micropartículas imunogênicas que contêm OVA (Partículas 16 a 18 e Partícula Comparativa 6): Em 100 µI de carbonato de dimetila, foram dissolvidos 5 mg de dextrana-poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) (Composto 2) preparado no Exemplo 1, para preparar 50 mg/ml de solução de polímero anfifílico (B). À solução de polímero anfifílico B, foram adicionados 20 µI de terc-butanol e 50 µI de solução A de OVA (ovalbumina) aquosa a 0,25% (p/v) (SIGMA) em gotas (quantidade de OVA alimentada: 125 µg), seguidos por agitação da mistura resultante com um misturador por turbilhão para produzir uma emulsão de fase reversa.
[0123] A emulsão de fase reversa foi submetida a congelamento anterior com nitrogênio líquido e seca por congelamento utilizando um secador por congelamento (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) sob temperatura de resfriamento do sifão de -45 ºC e grau de vácuo de 20 Pa por 24 horas. Os sólidos obtidos foram dispersos em 200 µI de carbonato de dimetila para preparar uma dispersão. A dispersão foi adicionada em gotas a 2 ml de uma solução aquosa (C) que contém 10% (p/v) de modificador de superfície (Pluronic F-68) e a mistura resultante foi agitada e emulsificada com um misturador de turbilhão, para preparar uma emulsão S/O/A. A partir da emulsão S/O/A, carbonato de dimetila foi removido por meio de secagem em líquido ("drying-in-liquid') para preparar uma suspensão de micropartículas imunogênicas. A suspensão foi transferida para um frasco em forma de berinjela e submetida a congelamento anterior com nitrogênio líquido, seguido por secagem por congelamento utilizando um secador por congelamento (EYELA, FREEZE DRYER FD-1000) sob temperatura de resfriamento do sifão de -45ºC e grau de vácuo de 20 Pa por 24 horas, para obter micropartículas imunogênicas.
[0124] Conforme exibido na Tabela 5, em termos do tensoativo, polissorbato 80 ou monooleato de sorbitano (estes foram fabricados pela Kanto Chemical Co., lnc.) ou óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno (fabricado pela Nikko Chemicals, Co., Ltd.) foi dissolvido na solução aquosa de OVA A ou solução de polímero anfifílico 8, em quantidade de 500 µg, que correspondeu a 10% (p/p) com relação à quantidade do polímero anfifílico.
TABELA 5
MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE MICROPARTÍCULAS IMUNOGÊNICAS CONTENDO OVA (PARTÍCULAS 16A18 E PARTÍCULA COMPARATIVA 6) Solução à qual foi Partícula nº Tipo de tensoativo adicionado tensoativo Partícula 16 Solução aquosa de CEA (A) Polissorbato 80 Solução de polímero Partícula 17 Monooleato de sorbitano anfifílico (8) Partícula 18 Solução aquosa de CEA (A) Óleo de mamona
Solução à qual foi Partícula nº Tipo de tensoativo adicionado tensoativo hidrogenado com polioxietileno Partícula comparativa 6 - - EXEMPLO 13
[0125] Teste de estímulo in vitro de composições imunogênicas que contêm OVA utilizando macrófagos peritoneais de camundongo:
[0126] Método: Foi conduzido um teste de estímulo in vitro utilizando macrófagos peritoneais de camundongo por meio do método a seguir. Utilizando uma agulha de injeção 26-G (Terumo Corporation), 5 ml de meio tioglicolato (GIBCO) como líquido de estímulo foram administrados por via intraperitoneal a um camundongo Balb/c macho com doze semanas de idade e o camundongo foi mantido por 72 horas em um ambiente no qual o camundongo pode ingerir alimento livremente. O camundongo sofreu eutanásia em seguida utilizando gelo seco e 1O ml de solução de PBS (OºC, filtrada) foram injetados por via intraperitoneal no camundongo utilizando uma agulha de injeção 26-G, deixando-se em seguida o camundongo em repouso durante massagem do abdômen do camundongo por cinco minutos. Foi coletada em seguida uma solução contendo células abdominais utilizando uma micropipeta.
[0127] A solução coletada foi centrifugada utilizando uma centrífuga refrigerada (fabricada pela Hitachi, Ltd., himacCF16RX) a 4ºC a 400 g x 5 minutos para precipitar as células abdominais do camundongo e o sobrenadante foi removido, seguido pela adição de 10 ml de meio RPMl1640 (GIBCO) (denominado a seguir solução de lavagem) e nova suspensão das células. A centrifugação foi novamente conduzida a 400 g x 5 minutos a 4 ºC para remover o sobrenadante e as células foram colocadas em uma placa com 24 cavidades (microplaca fabricada pela lwaki, Tratada com Cultivo de Tecido em Fundo Plano, Poliestireno) de tal forma que cada cavidade contivesse 8 x 105 células em conjunto com 1 ml de meio RMPl1640 suplementado com 5% de FBS (SIGMA), 100 U/ml de penicilina (lnvitrogen) e 100 U/ml de estreptomicina (lnvitrogen) (denominado a seguir meio de cultivo). A placa após a colocação em placas foi incubada utilizando um incubador de C02 (NAPCO) sob C02 a 5% a 37ºC e 100% de umidade (condições para cultivo de macrófagos) por três horas e as células foram suspensas vigorosamente utilizando uma micropipeta para remover as células que não se aderiram à placa, para obter apenas macrófagos peritoneais de camundongos que se aderem à placa. O meio de cultivo foi adicionado às células e as células foram incubadas sob as condições de cultivo para macrófagos por cinco dias, para fornecer células a serem utilizadas no experimento.
[0128] Como partículas a serem adicionadas às células, as micropartículas imunogênicas (Partículas 16 a 18) preparadas no Exemplo 12 em que o tensoativo é encapsulado, em que essas micropartículas encontravam- se no estado seco por congelamento, foram utilizadas após o tratamento prévio.
Mais especificamente, partículas na quantidade correspondente a 3 mg em termos da quantidade do polímero anfifílico que constitui as partículas foram pesadas e colocadas em um tubo de 1,5 ml. A solução de lavagem foi adicionada e a mistura resultante foi previamente resfriada a O ºC, seguida por lavagem das partículas por três vezes a 8400 g por dez minutos. Em seguida, as partículas foram adicionadas à placa com 24 cavidades na qual foram colocados os macrófagos peritoneais de camudongo, em conjunto com 500 µ!/cavidade do meio de cultivo. Como Exemplo Comparativo, foram adicionadas de forma similar partículas que não continham tensoativo (Partícula Comparativa 6).
[0129] Além disso, conforme exibido na Tabela 6 como outros Exemplos Comparativos (Exemplos Comparativos 1 a 3), OVA em quantidade de 75 µg (calculado com base na razão em peso entre a quantidade alimentada do polímero anfifílico e a quantidade alimentada de OVA), que foi a mesma quantidade de OVA contida nas Partículas 16 a 18, e 300 µg de polissorbato 80, monooleato de sorbitano ou óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno foram adicionados a cada cavidade da placa com 24 cavidades na qual foram colocados os macrófagos peritoneais de camundongo, em conjunto com 500 µI do meio de cultivo. Adicionalmente, como Exemplo Comparativo 4, foram adicionados 75 µg de OVA em conjunto com 500 µIdo meio de cultivo.
TABELA 6
TIPOS E QUANTIDADES DE TENSOATIVOS ADICIONADOS EM TESTES DE ESTÍMULO IN VJTRO EM EXEMPLOS COMPARATIVOS (EXEMPLOS COMPARATIVOS 1A4) Exemplos Quantidade de Tipo de tensoativo Comparativos tensoativo adicionada Exemplo Comparativo 1 Polissorbato 80 300 µg Exemplo Comparativo 2 Monooleato de sorbitano 300 µg Óleo de mamona Exemplo Comparativo 3 hidrogenado com 300 µg polioxietileno Exemplo Comparativo 4 - -
[0130] As células às quais foram adicionadas as partículas foram cultivadas por 24 horas e o meio foi recuperado, seguido por medição da quantidade de TNFa contida no meio com ELISA. A medição com ELISA foi conduzida utilizando um kit fabricado pela Thermo Scientific.
[0131] Resultados: A concentração de TNFa no meio foi conforme exibido na Fig. 6.
As partículas nas quais é encapsulado um tensoativo (Partículas 16 a 18)
exibiram concentrações mais altas de TNFa em comparação com as partículas (Partícula Comparativa 6) nas quais nenhum tensoativo é encapsulado. TNFa é um tipo de citoquina que induz a imunidade e revelou-se que a indução eficiente de imunidade pode ser atingida por meio de encapsulação de um tensoativo na partícula. Além disso, nos Exemplos Comparativos em que o antígeno não se encontrava na forma de partículas e foi adicionado em conjunto com um tensoativo (Exemplos Comparativos 1 a 4), a concentração de TNFa era mais baixa que nos casos em que o antígeno se encontrava na forma de partículas. Demonstrou-se, portanto, que a formação em partículas é importante para a indução de imunidade.
[0132] Aplicabilidade industrial: A composição imunogênica de acordo com a presente invenção pode ser utilizada como vacina para terapia e/ou profilaxia de doenças infecciosas, cânceres e similares.
Claims (12)
1. COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA, caracterizada pelo fato de que compreende como ingredientes ativos: uma micropartícula imunogênica composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos, em que um ou mais antígenos são encapsulados em uma micropartícula adjuvante composta de um ou mais polímeros anfifílicos cujo(s) segmento(s) hidrofóbico(s) é(são) poli(hidroxiácido); e um tensoativo; em que o dito tensoativo é encapsulado na dita micropartícula imunogênica.
2. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a dita micropartícula imunogênica é uma partícula composta do dito complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos associado em conjunto.
3. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o dito tensoativo compreende uma estrutura de éster de ácido graxo.
4. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a dita micropartícula adjuvante possui, na parte interna da mesma, uma ou mais porções hidrofílicas compostas de um ou mais segmentos hidrofílicos do(s) dito(s) polímero(s) anfifílico(s) e possui uma camada externa composta de uma ou mais porções hidrofóbicas compostas de um ou mais segmentos hidrofóbicos do(s) dito(s) polímero(s) anfifílico(s).
5. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o dito segmento hidrofílico do dito polímero anfifílico é um polissacarídeo.
6. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o dito polímero anfifílico é um polímero anfifílico de enxerto composto de uma cadeia principal de polissacarídeo e uma ou mais cadeias de enxerto de poli(hidroxiácido).
7. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 5 ou 6, caracterizada pelo fato de que o dito polissacarídeo é dextrana.
8. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o dito poli(hidroxiácido) é poli(ácido láctico-co- glicólico).
9. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o dito tensoativo compreende adicionalmente uma ou mais estruturas de monossacarídeo e/ou polietileno glicol.
1O. COMPOSIÇÃO, de acordo com uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que o dito tensoativo é um ou mais selecionados a partir do grupo que consiste em polissorbato 80, polissorbato 20, monooleato de sorbitano, trioleato de sorbitano e óleo de mamona hidrogenado com polioxietileno.
11. COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA, caracterizada pelo fato de que compreende, como ingrediente ativo, uma micropartícula imunogênica obtida por meio das etapas de: dissolução de um ou mais tensoativos em um solvente aquoso A, em que um ou mais antígenos são dissolvidos ou em um solvente orgânico B imiscível em água, em que um ou mais polímeros anfifílicos, cujo(s) segmento(s) hidrofóbico(s) é(são) poli(hidroxiácido), são dissolvidos, e mistura da mistura resultante para formar uma emulsão de fase reversa; e remoção do solvente da dita emulsão de fase reversa.
12. COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA, caracterizada pelo fato de que compreende, como ingrediente ativo, uma micropartícula imunogênica obtida por meio de um processo de produção de uma partícula composta de um complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno associado em conjunto, em que o dito processo compreende as etapas de: mistura de um solvente aquoso A, em que um ou mais antígenos são dissolvidos e de um solvente orgânico B imiscível em água, em que um ou mais polímeros anfifílicos, cujo(s) segmento(s) hidrofóbico(s) é(são)
poli(hidroxiácido), são dissolvidos para formar uma emulsão de fase reversa;
remoção do solvente da dita emulsão de fase reversa para obter um complexo de micropartículas adjuvantes de antígeno; e introdução de uma dispersão e de complexo de micropartículas adjuvantes de antígenos a uma fase líquida D, em que um modificador de superfície é dissolvido, seguida pela remoção do meio de dispersão; em que um ou mais tensoativos são dissolvidos no dito solvente aquoso A, no solvente orgânico B imiscível em água e/ou na dispersão C.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010-189307 | 2010-08-26 | ||
JP2010189307 | 2010-08-26 | ||
PCT/JP2011/069122 WO2012026508A1 (ja) | 2010-08-26 | 2011-08-25 | 免疫原性組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
BR112013004353A2 true BR112013004353A2 (pt) | 2020-10-06 |
BR112013004353B1 BR112013004353B1 (pt) | 2022-04-26 |
Family
ID=45723500
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BR112013004353-9A BR112013004353B1 (pt) | 2010-08-26 | 2011-08-25 | Composições imunogênicas |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20130156859A1 (pt) |
EP (1) | EP2609931B1 (pt) |
JP (1) | JP5895535B2 (pt) |
KR (1) | KR101843385B1 (pt) |
CN (1) | CN103052402B (pt) |
AU (1) | AU2011294244B2 (pt) |
BR (1) | BR112013004353B1 (pt) |
CA (1) | CA2809230C (pt) |
DK (1) | DK2609931T3 (pt) |
ES (1) | ES2829819T3 (pt) |
MX (1) | MX350927B (pt) |
RU (1) | RU2593789C2 (pt) |
WO (1) | WO2012026508A1 (pt) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102196811B (zh) * | 2008-10-24 | 2014-03-19 | 东丽株式会社 | 含有4,5-环氧基吗啡烷衍生物的稳定片剂 |
WO2014046983A1 (en) * | 2012-09-21 | 2014-03-27 | Intensity Therapeutic | Method of treating cancer |
ES2887367T3 (es) | 2013-10-09 | 2021-12-22 | Toray Industries | Inmunopotenciador |
US9775898B2 (en) | 2015-02-26 | 2017-10-03 | Thevax Genetics Vaccine Co., Ltd. | Vaccine composition comprising an immunogenic protein and combination adjuvants for use in eliciting antigen-specific T-cell responses |
US20190390654A1 (en) | 2017-02-09 | 2019-12-26 | Nvb Windmill Energy International Ltd | Wind turbine |
CN117813112A (zh) * | 2021-08-30 | 2024-04-02 | 东丽株式会社 | 免疫原性增强用组合物 |
CA3230661A1 (en) * | 2021-08-30 | 2023-03-09 | Toray Industries, Inc. | Composition for enhancing immunogenicity |
CA3232439A1 (en) * | 2021-09-16 | 2023-03-23 | Toray Industries, Inc. | Medicament for treatment and/or prevention of cancer |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4111403B2 (ja) | 1996-10-11 | 2008-07-02 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ カリフォルニア | 免疫刺激ポリヌクレオチド/免疫調節分子複合体 |
EP1596834B1 (en) * | 2003-01-14 | 2016-11-30 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Microparticles comprising polynucleotides adsorbed on the surface of or entrapped within the microparticles |
WO2005123120A1 (en) | 2004-06-16 | 2005-12-29 | Smart Drug Systems Inc. | Sustained release vaccine composition |
KR101243689B1 (ko) | 2005-03-09 | 2013-03-14 | 도레이 카부시키가이샤 | 미립자 및 의약품 조성물 |
US9393215B2 (en) * | 2005-12-02 | 2016-07-19 | Novartis Ag | Nanoparticles for use in immunogenic compositions |
US8431160B2 (en) * | 2006-02-24 | 2013-04-30 | Novartis Ag | Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions |
JP2008088158A (ja) | 2006-09-05 | 2008-04-17 | Toray Ind Inc | 親水性活性物質含有微粒子の製造方法 |
KR101483715B1 (ko) * | 2008-01-31 | 2015-01-19 | 큐어백 게엠바하 | 면역증강제/애주번트인 화학식(NuGlXmGnNv)a를 포함하는 핵산 및 이의 유도체 |
AU2009216216B2 (en) * | 2008-02-22 | 2013-11-07 | Toray Industries, Inc. | Microparticles and pharmaceutical compositions thereof |
AU2009222105B2 (en) * | 2008-03-03 | 2012-05-17 | Novartis Ag | Compounds and compositions as TLR activity modulators |
DK2402032T3 (da) | 2009-02-27 | 2019-11-04 | Toray Industries | Immunogen sammensætning |
-
2011
- 2011-08-25 CN CN201180038720.1A patent/CN103052402B/zh active Active
- 2011-08-25 WO PCT/JP2011/069122 patent/WO2012026508A1/ja active Application Filing
- 2011-08-25 EP EP11819971.0A patent/EP2609931B1/en active Active
- 2011-08-25 DK DK11819971.0T patent/DK2609931T3/da active
- 2011-08-25 JP JP2011538557A patent/JP5895535B2/ja active Active
- 2011-08-25 KR KR1020127033503A patent/KR101843385B1/ko active IP Right Grant
- 2011-08-25 AU AU2011294244A patent/AU2011294244B2/en active Active
- 2011-08-25 MX MX2013002193A patent/MX350927B/es active IP Right Grant
- 2011-08-25 US US13/819,015 patent/US20130156859A1/en not_active Abandoned
- 2011-08-25 ES ES11819971T patent/ES2829819T3/es active Active
- 2011-08-25 BR BR112013004353-9A patent/BR112013004353B1/pt active IP Right Grant
- 2011-08-25 CA CA2809230A patent/CA2809230C/en active Active
- 2011-08-25 RU RU2013113201/15A patent/RU2593789C2/ru active
-
2015
- 2015-10-20 US US14/887,722 patent/US9980913B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103052402B (zh) | 2015-08-12 |
MX2013002193A (es) | 2013-03-18 |
EP2609931A4 (en) | 2014-06-04 |
BR112013004353B1 (pt) | 2022-04-26 |
RU2013113201A (ru) | 2014-10-10 |
US20130156859A1 (en) | 2013-06-20 |
MX350927B (es) | 2017-09-26 |
WO2012026508A1 (ja) | 2012-03-01 |
KR20130115098A (ko) | 2013-10-21 |
JPWO2012026508A1 (ja) | 2013-10-28 |
US20160038421A1 (en) | 2016-02-11 |
US9980913B2 (en) | 2018-05-29 |
EP2609931B1 (en) | 2020-09-16 |
AU2011294244A1 (en) | 2013-03-21 |
DK2609931T3 (da) | 2020-12-07 |
CA2809230C (en) | 2019-02-05 |
JP5895535B2 (ja) | 2016-03-30 |
ES2829819T3 (es) | 2021-06-02 |
CA2809230A1 (en) | 2012-03-01 |
EP2609931A1 (en) | 2013-07-03 |
KR101843385B1 (ko) | 2018-03-29 |
RU2593789C2 (ru) | 2016-08-10 |
AU2011294244B2 (en) | 2014-06-12 |
CN103052402A (zh) | 2013-04-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
BR112013004353A2 (pt) | composições imunogênicas | |
AU2010218752B2 (en) | Immunogenic composition | |
JP6434995B2 (ja) | 界面活性剤を含まない水中油エマルジョン及びその用途 | |
Dmour et al. | Recent advances on chitosan as an adjuvant for vaccine delivery | |
Ebrahimian et al. | Induction of a balanced Th1/Th2 immune responses by co-delivery of PLGA/ovalbumin nanospheres and CpG ODNs/PEI-SWCNT nanoparticles as TLR9 agonist in BALB/c mice | |
RU2702987C2 (ru) | Иммуностимулятор | |
JP6363509B2 (ja) | イヌリンおよびイヌリンアセテート製剤 | |
WO2023032891A1 (ja) | 免疫原性増強用組成物 | |
CN117813113A (zh) | 免疫原性增强用组合物 | |
Montjoy | Chemically-Modified Inulin as a Polymeric Vaccine Carrier |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
B06F | Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette] | ||
B07D | Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette] |
Free format text: DE ACORDO COM O ARTIGO 229-C DA LEI NO 10196/2001, QUE MODIFICOU A LEI NO 9279/96, A CONCESSAO DA PATENTE ESTA CONDICIONADA A ANUENCIA PREVIA DA ANVISA. CONSIDERANDO A APROVACAO DOS TERMOS DO PARECER NO 337/PGF/EA/2010, BEM COMO A PORTARIA INTERMINISTERIAL NO 1065 DE 24/05/2012, ENCAMINHA-SE O PRESENTE PEDIDO PARA AS PROVIDENCIAS CABIVEIS. |
|
B07E | Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette] | ||
B06U | Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette] | ||
B06A | Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette] | ||
B350 | Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette] | ||
B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 25/08/2011, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. PATENTE CONCEDIDA CONFORME ADI 5.529/DF, QUE DETERMINA A ALTERACAO DO PRAZO DE CONCESSAO. |