BR112012033344B1

BR112012033344B1 - Composto de quinazolina, composição farmacêutica, método in vitro para inibir a superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fator de crescimento epidérmico e uso do composto

Info

Publication number: BR112012033344B1
Application number: BR112012033344-5A
Authority: BR
Inventors: Weihan Zhang; Wei-guo Su; Haibin Yang; Yumin Cui; Yongxin Ren; Xiaoqiang Yan
Original assignee: Hutchison Medipharma Limited
Priority date: 2010-06-30
Filing date: 2011-05-25
Publication date: 2020-12-15
Also published as: HK1179954A1; JP2013529653A; CA2801814C; RU2530887C2; SI2590966T1; LT2590966T; US20130172373A1; RS55470B1; WO2012000356A1; HRP20161490T1; BR112012033344A2; KR101480481B1; EP2590966A1; SG186410A1; CA2801814A1; EP2590966A4; MX2012015047A; KR20130031358A; RU2012153174A; AU2011274183B2

Abstract

compostos de quinazolina. a presente invenção refere-se a certos compostos de quinazolina, suas composições, e métodos para seu uso. estes compostos de quinazolina podem inibir eficazmente a superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fato de crescimento epidérmico (egfr).

Description

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

[0001]A presente invenção refere-se ao campo farmacêutico e,particularmente, certos compostos de quinazolina, uma composição que contém os ditos compostos e seu uso. Estes compostos de quinazolina podem inibir eficazmente a superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fato de crescimento epidérmico (EGFR).

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002]A ligação do fator de crescimento epidérmico (EGF) ao receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) pode ativar a atividade de tirosina quinase e desta forma pode disparar reações que levam à proliferação celular. A superexpressão e/ou hiperatividade de EGFR pode resultar em divisão celular descontrolada que pode ser uma predisposição para câncer..Os compostos que podem inibir a superexpressão e/ou hiperatividade de EGFR são, portanto, candidatos potenciais para tratar câncer.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0003]Fornece-se pelo menos um composto escolhido entre (3aR,6aR)-N-(4-(1-(3-flúor-benzil)-1H-indazol-5-il-amino)-7-metóxi- quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida; (3aS,6aS)-N-(4-(1-(3-flúor-benzil)-1H-indazol-5-il-amino)-7-metóxi- quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida; (3aR,6aR)-N-(4-(3-etinil-fenil-amino)-7-metóxi-quinazolin-6-il)-1-metil- hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida; (3aS,6aS)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenil-amino)-7-metóxi- quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida; (3aR,6aR)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenilamino)-7-metóxi- quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida; (3aS,6aS)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenilamino)-quinazolin-6-il)- 1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida; e (3aR,6aR)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenil-amino)quinazolin-6- il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida, e/ou pelo menos um seu sal farmaceuticamente aceitável.

[0004]Fornece-se também uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável e pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo aqui descrito.

[0005]Fornece-se também um método para tratar cancer responsivo à inibição da superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fator de crescimento epidérmico, compreendendo administrar a um indivíduo necessitado uma quantidade eficaz de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo aqui descrito.

[0006]Fornece-se também o uso do composto da invenção e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável na preparação de um medicamento para tratar câncer. Em uma modalidade preferida, o câncer é escolhido entre câncer pulmonar, câncer de cabeça e pescoço, câncer colorretal, câncer de faringe, câncer epidermoide, e câncer pancreático.

[0007]Fornece-se ainda um método para inibir a superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fator de crescimento epidérmico, compreendendo colocar o receptor do fator de crescimento epidérmico em contato com uma quantidade eficaz de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0008]Como utilizadas no presente relatório descritivo, as seguintes palavras, frases, e símbolos são intencionados genericamente para ter os significados enunciados abaixo, exceto até o grau em que o contexto no qual elas são utilizadas indique o contrário. As seguintes abreviaturas e termos têm os significados indicados neste relatório descritivo inteiro:

[0009]Os compostos aqui descritos incluem, porém sem limitações, seus isômeros óticos, racematos, e outras misturas deles. Nessas situações, os enantiômeros ou diastereoisômeros individuais, isto é, formas oticamente ativas, podem ser obtidos por síntese assimétrica ou por resolução dos racematos ou misturas de diastereoisômeros. A resolução dos racematos ou misturas de diastereoisômeros pode ser realizada, por exemplo, por métodos convencionais tais como cristalização na presença de um agente resolvente, ou cromatografia, usando, por exemplo, uma coluna de cromatografia líquida em alta pressão (HPLC).

[00010] Quando os compostos aqui descritos existem em várias formas tautoméricas, o termo "composto" pretende incluir todas as formas tautoméricas do composto.Tais compostos incluem também formas cristalinas incluindo polimorfos e clatratos. Similarmente, o termo "sal" pretende incluir todos isômeros, racematos, outras misturas, formas Z e E, formas tautoméricas e formas cristalinas do sal do composto.

[00011] O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" inclui, porém sem limitações, sais com ácidos inorgânicos, tais como cloridrato, fosfato, difosfato, bromidrato, sulfato, sulfinato, nitrato, e sais similares; bem como sais com ácidos orgânicos, tais como malato, maleato, fumarato, tartarato, succinato, citrato, acetato, lactato, metanossulfonato,p-toluenossulfonato,2-hidróxi-etil-sulfonato, benzoato, salicilato, estearato, e alcanoatos tais como acetato, HOOC- (CH2)n-COOH onde n é 0-4, e sais similares. Similarmente, os cátions farmaceuticamente aceitáveis incluem, porém sem limitações, sódio, potássio, cálcio, alumínio, lítio, e amônio.

[00012] Além disso, caso um composto aqui descrito seja obtido como um sal de adição de ácido, a base livre pode ser obtida basificando uma solução do sal de ácido. Inversamente, caso o produto seja uma base livre, um sal de adição de ácido, particularmente um sal de adição farmaceuticamente aceitável pode ser produzido dissolvendo a base livre em um solvente orgânico apropriado e tratando a solução com um ácido, de acordo com procedimentos convencionais para preparar sais de adição ácidos a partir dos compostos base. Os versados nessas técnicas devem conhecer várias metodologias sintéticas que podem ser usadas para preparar sais de adição farmaceuticamente aceitáveis atóxicos.

[00013] Um "solvato", tal como um "hidrato", é formado pela interaçãode umsolventee um composto. Otermo"composto"pretendeincluirsolvatos, incluindo hidratos, doscompostos. Similarmente, o termo "sais" inclui solvatos, tais como hidratos de sais. Os solvatos apropriados são solvatos farmaceuticamente aceitáveis, tais como hidratos, incluindo mono-hidratos e hemi-hidratos.

[00014] Um "quelato" é formado pela coordenação de um composto e um íon metálico em dois (ou mais) pontos. O termo "composto" pretende incluir quelatos de compostos. Similarmente, o termo "sais" inclui quelatos de sais.

[00015] Um "complexo não-covalente" é formado pela interação de um composto e outra molécula, onde uma ligação covalente não é formada entre o composto e a molécula. Por exemplo, a complexação pode ocorrer através de interações van der Waals, ligação hidrogênio, e interações eletrostáticas (denominadas também ligação iônica). Tais complexos não-covalentes estão incluídos no termo "composto’.

[00016] O termo "agente ativo" é utilizado para indicar uma substância química que tem atividade biológica.Em algumas modalidades, um "agente ativo" é uma substância química que tem utilidade farmacêutica.

[00017] "Tratar" ou "tratamento" ou "alívio" refere-se à administração de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito a um indivíduo que tem uma doença ou distúrbio, ou tem um sintoma de uma doença ou distúrbio, ou tem uma predisposição para contrair uma doença ou distúrbio, com o propósito de curar, recuperar, aliviar, mitigar, alterar, remediar, melhorar, recuperar, ou afetar a doença ou distúrbio, os sintomas da doença ou distúrbio, ou a predisposição para a doença ou distúrbio. A doença ou distúrbio pode ser, por exemplo, câncer.

[00018] O termo "inibição" indica um decréscimo na atividade basal de uma atividade ou processo biológico. "Inibição da superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fator de crescimento epidérmico" refere-se a um decréscimo na expressão e/ou atividade de EGFR como uma resposta direta ou indireta à presença de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito, em relação à atividade de EGFR na ausência de pelo menos um composto e/ou o pelo menos um sal farmaceuticamente aceitáveldo mesmo. O decréscimo na atividade pode se dever à interação direta de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito com EGFR, ou devido à interação de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito com um ou mais outros fatores que por sua vez afetam a atividade de EGFR. Por exemplo, a presença de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito pode diminuir a atividade de EGFR ligando-se diretamente ao EGFR, fazendo com que (direta ou indiretamente) outro fator diminua a atividade de EGFR, ou diminuindo (direta ou indiretamente) a quantidade de EGFR presente na célula ou organismo.

[00019] O termo "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito, que é eficaz para "tratar" uma doença ou distúrbio em um indivíduo. No caso de câncer, a quantidade eficaz pode causar qualquer uma das mudanças observáveis ou mensuráveis em um indivíduo como descrito na definição de "tratar", "tratamento" e "alívio" acima. Por exemplo, a quantidade eficaz pode reduzir o número de células cancerosas ou tumorosas; reduzir o tamanho do tumor; inibir ou deter a infiltração de células tumorosas para dentro de órgãos periféricos, incluindo, por exemplo, a disseminação de tumor para dentro do tecido mole e osso; inibir e deter a metástase tumoral; inibir e deter o crescimento de tumores; aliviar até algum grau de um ou mais dos sintomas associados com o câncer, reduzir a morbidez e mortalidade; melhorar a qualidade de vida; ou uma combinação destes efeitos. Uma quantidade eficaz pode ser uma quantidade suficiente para diminuir os sintomas de uma doença responsiva à inibição da superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fator de crescimento epidérmico. Para terapia de câncer, a eficácia in vivo pode ser, por exemplo, medido pela avaliação da duração de sobrevida, tempo para a progressão da doença (TTP), as taxas de resposta (RR), duração da resposta e/ou qualidade de vida. As quantidades eficazes podem variar, como reconhecido pelos versados nessas técnicas, dependendo da via de administração, uso de excipientes, e coadministração com outrosagentes.

[00020] O termo "quantidade eficaz" pode se referir também a uma quantidade de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito, eficaz para inibir a superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fator de crescimento epidérmico.

[00021] Os detalhes de uma ou mais modalidades da invenção são enunciados abaixo.

[00022] Fornece-se pelo menos um composto escolhido entre (3aR,6aR)-N-(4-(1-(3-flúor-benzil)-1H-indazol-5-il-amino)-7-metóxi- quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida; (3aS,6aS)-N-(4-(1-(3-flúor-benzil)-1H-indazol-5-il-amino)-7-metóxi- quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida; (3aR,6aR)-N-(4-(3-etinil-fenil-amino)-7-metóxi-quinazolin-6-il)-1-metil- hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida; (3aS,6aS)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenil-amino)-7-metóxi- quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida; (3aR,6aR)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenilamino)-7-metóxi- quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida; (3aS,6aS)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenilamino)-quinazolin-6-il)- 1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida; e (3aR,6aR)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenil-amino)quinazolin-6- il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida, e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável.

[00023] Os compostos de quinazolina e/ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis aqui descritos podem ser sintetizados a partir de matérias-primas disponíveis no mercado por métodos bem conhecidos nessas técnicas. Os processos detalhados estão ilustrados na seção de exemplos deste pedido de patente.

[00024] As transformações químicas sintéticas úteis para sintetizar os compostos de quinazolina desejáveis são descritos, por exemplo, em R. Larock, "Comprehensive Organic Transformations", VCH Publishers (1989); T.W. Greene e P.G.M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a Edição, John Wiley and Sons (1999); L. Fieser e M. Fieser, "Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis", John Wiley and Sons (1994); e L. Paquette, editor, "Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis", John Wiley and Sons (1995) e suas edições subsequentes.

[00025] Pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito, pode ser purificado por cromatografia de coluna, cromatografia líquida de alta eficiência, cristalização, ou outros métodos apropriados.

[00026] Pelo menos um composto de quinazolina e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito pode interagir com EGFR quinase e/ou inibir a atividade de EGFR.

[00027] Fornece-se também uma composição que compreende pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável e pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito.

[00028] A composição que compreende pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito pode ser administrada de várias maneiras conhecidas, tal como administração oral, parenteral, por spray para inalação, ou por intermédio de um reservatório implantado. O termo "parenteral", como aqui utilizado, inclui via subcutânea, intracutânea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intra-arterial, intrassinovial, intraesternal, intratecal, intralesional e injeção intracraniana ou técnicas de infusão.

[00029] Uma composição oral pode ser qualquer forma de dosagem aceitável para administração oral, incluindo, porém sem limitações, comprimidos, cápsulas, emulsões e suspensões aquosas, emulsões e suspensões aquosas, dispersões e soluções. Os veículos comumente usados para comprimidos incluem lactose e amido de milho. Agentes lubrificantes, tais comoestearato demagnésio,tambémsão tipicamente adicionados a comprimidos. Para administração oral na forma de uma cápsula, osdiluentes incluem lactose eamido demilho desidratado. Quando suspensõesouemulsõesaquosassão administradas por via oral, o ingrediente ativo pode ser colocado em suspensão ou dissolvidoem umafaseoleosa, combinadocom agentes emulsificantes ou auxiliares de suspensão. Caso desejado, certos agentes edulcorantes, saporíferos ou colorantes podem ser adicionados.

[00030] Uma composição injetável estéril (por exemplo, suspensão aquosa ou oleosa) pode ser formulada de acordo com técnicas conhecidas na área farmacêutica, usando agentes dispersantes ou umectantes apropriados (tais como, por exemplo, Tween 80) e agentes auxiliares de suspensão. A preparação injetável estéril pode ser também uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente atóxico aceitável para administração parenteral, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Dentre os veículos e solventes farmaceuticamente aceitáveis que podem ser empregados estão manitol, água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixos estéreis são empregados convencionalmente como um solvente ou meio de suspensão (por exemplo, monoglicerídeos ou diglicerídeos sintéticos). Ácidos graxos, tais como ácido oleico e seus derivados glicerídeos são úteis na preparação de formas injetáveis, como o são os óleos farmaceuticamente aceitáveis naturais, tais como óleo de oliva ou óleo de mamona, tais como suas versões polioxietilenadas. Estas soluções ou suspensões oleosas podem conter também um álcool de cadeia longa diluente ou dispersante, ou carbóxi-metil-celulose ou agentes dispersantes similares.

[00031] Uma composição para inalação pode ser preparada de acordo com técnicas bem conhecidas na área de formulação farmacêutica e pode ser preparada como soluções em solução salina, empregando álcool benzílico ou outros conservantes apropriados, promotores de absorção para intensificar a biodisponibilidade, fluorocarbonetos, e/ou outros agentes auxiliares de solubilização ou dispersantes conhecidos nessas técnicas.

[00032] Uma composição tópica pode ser formulada na forma de óleo, creme, loção, pomada e similares. Os veículos apropriados para a composição incluem óleos vegetais ou minerais, vaselina branca (parafina mole branca), gorduras ou óleos com cadeia ramificada e alcoóis de alto peso molecular (maior do que C12). Em algumas modalidades, o veículo farmaceuticamente aceitável é um no qual o ingrediente ativo é solúvel. Emulsificantes, estabilizadores, umectantes e antioxidantes também podem ser incluídos, bem como agentes que conferem cor ou fragrância, caso desejado. Adicionalmente, intensificadores de penetração transdérmica podem ser empregados nestas formulações tópicas.Os exemplos desses intensificadores podem ser encontrados nas patentes nos US 3.989.816 e 4.444.762.

[00033] Os cremes podem ser formulados a partir de uma mistura de óleo mineral, cera de abelhas autoemulsificante e água, e nesta mistura o ingrediente ativo, dissolvido em uma pequena quantidade de um óleo, tal como óleo de amêndoa, é misturado. Um exemplo desse creme é um que inclui cerca de 40 partes de água, cerca de 20 partes de cera de abelhas, cerca de 40 partes de óleo mineral e cerca de 1 parte de óleo de amêndoa. As pomadas podem ser formuladas misturando uma solução do ingrediente ativo em um óleo vegetal, tal como óleo de amêndoa, com parafina mole morna e deixando a mistura resfriar. Um exemplo dessa pomada é uma que inclui cerca de 30% em peso de óleo de amêndoa e cerca de 70% em peso de para fina mole branca.

[00034] Um veículo farmaceuticamente aceitável refere-se a um veículo que é compatível com ingredientes ativos da composição (e, em algumas modalidades, capaz de estabilizar o ingrediente ou ingredientes ativos) e não é prejudicial para o indivíduo a ser tratado. Por exemplo, agentes auxiliares de solubilização, tais como ciclodextrinas (que formam complexos específicos mais solúveis com pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito), podem ser utilizados como excipientes farmacêuticos para distribuição dos ingredientes ativos. Os exemplos de outros veículos incluem dióxido de silício coloidal, estearato de magnésio, celulose, lauril-sulfato de sódio, e D&C Yellow #10. Excipientes hidrofílicos tais como polímeros sintéticos e naturais (por exemplo, albumina e seus derivados), também são exemplos de veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[00035] Ensaios in vitro apropriados podem ser usados para avaliar preliminarmente a eficácia de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito, em inibir a atividade de EGFR.Pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito pode ser ainda examinado quanto à suaeficácia emtratarcânceres por ensaiosin vivo. Por exemplo, oscompostos aqui descritos e/ou osseussais farmaceuticamente aceitáveis podem ser administrados a um animal (por exemplo, um modelo de camundongo) que tem câncer e seus efeitos terapêuticos podem ser avaliados. Baseado nos resultados, uma faixa de dose apropriada e via de administração para animais, tais como seres humanos, também podem ser determinadas.

[00036] Fornece-se também um método para tratar câncer responsivo à inibição da superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fator de crescimento epidérmico, compreendendo administrar a um indivíduo necessidade deste tratamento de uma quantidade eficaz de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito.

[00037] Pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito pode ser usado para atingir um efeito terapêutico ou profilático benéfico, por exemplo, em indivíduos com câncer. Como aqui utilizado, o termo "câncer" refere-se a um distúrbio celular distinguido por proliferação celular descontrolada ou desregulada, diferenciação celular diminuída, capacidade inadequada para invadir tecido circundante e/ou capacidade para estabelecer novo crescimento de sítios ectópicos. O termo "câncer" inclui, porém sem limitações, tumores sólidos e tumores veiculados pelo sangue. O termo "câncer" engloba doenças da pele, tecidos, órgãos, ossos, cartilagens, sangue, e vasos. O termo "câncer" engloba ainda cânceres primários e metastáticos.

[00038] Os exemplos não limitativos de tumores sólidos incluem câncer pancreático, câncer da bexiga; câncer colorretal; câncer mamário, incluindo câncer mamário metastático; câncer prostático, incluindo câncer prostático dependente de androgênio e independente de androgênio; câncer renal, incluindo, por exemplo, carcinoma de células renais metastático; câncer hepatocelular; câncer pulmonar, incluindo, por exemplo, câncer pulmonar de células não-pequenas (NSCLC), carcinoma bronquioalveolar (BAC), e adenocarcinoma do pulmão; câncer ovariano, incluindo, por exemplo, câncer peritoneal epitelial ou primário progressivo; câncer cervical; câncer gástrico; câncer esofágico; câncer de cabeça e pescoço, incluindo, por exemplo, carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço; câncer de pele, incluindo, por exemplo, melanoma maligno; câncer neuroendócrino, incluindo tumores neuroendócrinos metastáticos; tumores cerebrais, incluindo, por exemplo, glioma, oligodendroglioma anaplásico, glioblastoma do adulto multiforme, e astrocitoma anaplásico do adulto; câncer ósseo; sarcoma do tecido mole; e carcinoma tireoideo.

[00039] Os exemplos não limitativos de malignidades hematológicas incluem leucemia mieloide aguda (AML); leucemia mieloide crônica (CML), incluindo CML acelerada e fase blástica de CML (CML-BP); leucemia linfoblástica aguda (ALL); leucemia linfocítica crônica (CLL); doença de Hodgkin (HD); linfoma não- Hodgkin (NHL), incluindo linfoma folicular e linfoma de células do manto; linfoma de células B; linfoma de células T; mieloma múltiplo (MM);macroglobulinemiadeWaldenstrom;syndromes mielodisplásicas (MDS), incluindo anemia refratária (RA), anemia refratária com sideroblastos em anel (RARS), (anemia refratária com excesso de blastos (RAEB), e RAEB em transformação (RAEB-T)); e síndromes mieloproliferativas.

[00040] Em algumas modalidades, os exemplos do câncer a ser tratado incluem, porém sem limitações, câncer pulmonar, câncer de cabeça e pescoço, câncer colorretal, câncer pancreático, câncer de cólon, câncer mamário, câncer ovariano, câncer prostático, câncer estomacal, câncer renal, câncer de fígado, câncer cerebral, câncer ósseo, e leucemia. Em algumas modalidades, os exemplos de câncer a ser tratado são escolhidos entre câncer pulmonar, câncer de cabeça e pescoço, câncer colorretal, câncer de faringe, câncer epidermoide, e câncer pancreático.

[00041] Em algumas modalidades, pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito, é administrado em conjunto com uma quantidade eficaz de outro agente terapêutico que é diferente todo dito pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito.Em algumas modalidades, o outro agente terapêutico é um agente anticâncer.Em algumas modalidades, o outro agente terapêutico é um que é normalmente administrado adãos pacientes com a doença ou condição que está sendo tratada. Pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito pode ser administrado com outro agente terapêutico em uma forma dosagem única ou como uma forma de dosagem separada. Quando administrado como uma forma de dosagem separada, o outro agente terapêutico pode ser administrado antes, na mesma hora, ou depois da administração de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito.

[00042] Em algumas modalidades, pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito é administrado em conjunto com um agente anticâncer. Como aqui utilizado, o termo "agente anticâncer" refere-se a qualquer agente que é administrado a um indivíduo com câncer com o propósito de tratar o câncer. Os exemplos não limitativos de agentes anticâncer incluem: radioterapia; imunoterapia; agentes quimioterápicos danificadores do DNA; e agentes quimioterápicos que interrompem a replicação celular.

[00043] Os exemplos não limitativos de agentes quimioterápicos danificadores do DNA incluem inibidores de topoisomerase I (por exemplo, irinotecano, topotecano, camptotecina e seus análogos ou metabólitos, e doxorrubicina); inibidores de topoisomerase II (por exemplo, etoposida, teniposida, ed daunorrubicina); agentes alquilantes (por exemplo, melfalano, clorambucil, bussulfano, tiotepa, ifosfamida, carmustina, lomustina, semustina, estreptozocina, decarbazina, metotrexato, mitomicina C, e ciclofosfamida); intercaladores de DNA (por exemplo, cisplatina, oxaliplatina, e carboplatina); intercaladores de DNA e geradores de radicais livres tais como bleomicina; e miméticos de nucleosídeos (por exemplo, 5- fluorouracil, capecitibina, gencitabina, fludarabina, citarabina, mercaptopurina, tioguanina, pentostatina, e hidroxiureia).

[00044] Os agentes quimioterápicos que interrompem a replicação celular incluem: paclitaxel, docetaxel, e análogos relacionados; vincristina, vinblastina, e análogos relacionados; talidomida e análogos relacionados (por exemplo, CC-5013 e CC-4047); inibidores de proeteína quinase (por exemplo, imatinib mesilato and gefitinib); inibidores de proteassomas (por exemplo, bortezomib); inibidores de NF-kapa B, incluindo inibidores de quinase I kapa B; anticorpos que se ligam a proteínas superexpressadas em cânceres e desta forma desregulam a replicação celular (por exemplo, trastuzumab, rituximab, cetuximab, e bevacizumab); e outros inibidores de proteínas ou enzimas que reconhecidamente são reguladas de forma ascendente, superexpressadas ou ativadas em cânceres, cuja inibição regula de forma descendente a replicação celular.

[00045] Fornece-se também um método para inibir a superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fator de crescimento epidérmico, compreendendo colocar o receptor do fator de crescimento epidérmico em contato com uma quantidade eficaz de pelo menos um composto e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável aqui descrito.

EXEMPLOS

[00046] Os exemplos que se seguem são intencionados para ilustrar a invenção sem, entretanto, limitar o seu âmbito.

[00047] Nos exemplos que se seguem, as seguintes abreviaturas são utilizadas: AcOHácido acético CMC-Nacarbóxi-metil- celulose sódica DELFIAImunoensaio Fluorescente de Lantanídeo Intensificado em Dissociação DMEMMeio de Eagle Modificado de Dulbecco DMFN,N-Dimetilformamida DMSOSulfóxido de dimetila DTTDitiotreitol EDTAácido etilenodiaminotetracético EtOAcacetate de etila FBSsoro fetal bovino h hora(s) mL mililitro(s) min minuto(s) PBSsolução salina tamponada com fosfato PEéter de petróleo PMSFfluoreto de fenilmetanossulfonila Pypiridina THF tetra-hidrofurano Tris-Clcloridrato de hidróxi-metil-amino-metano

Exemplo 1: (3aR,6aR)-N-(4-(1-(3-flúor-benzil)-1H-indazol-5-il-amino)-7- metóxi-quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida

[00048] O Composto 1 foi preparado de acordo com o seguinte esquema:

[00049] Uma mistura de 5-nitro-1H-indazol (1-a, 5 g, 30,65 mmol), 1-(bromometil)-3-flúor-benzeno (3,76 mL, 30,65 mmol) e carbonato de potássio em pó (4,66 g, 30,65 mmol) em DMF (3 mL) foi agitada a 80°C por 3 h e depois vertida sobre (100 mL). Os precipitados foram obtidos por filtração e purificados ainda mais por cromatografia em sílica-gel (PE/EtOAc=3:1) para dar 1-b (5,3 g, 19,7 mmol).

[00050] Sob N2, níquel Raney (0,53 g, peso úmido) foi adicionado a uma solução de 1-b (5,3 g, 19,7 mmol) em metanol (20 mL) e a mistura foi desgaseificada e agitada sob a atmosfera de hidrogênio à temperatura ambiente durante a noite inteira. O catalisador foi filtrado cuidadosamente e o filtrado foi concentrado a vácuo para dar 1-c (4,65 g, 19,3 mmol).

[00051] Uma mistura de ácido 2-amino-4-flúor-benzoico (1-d, 7,75 g, 50 mmol) e acetato de metanimidamina (15,6 g, 150 mmol) em etanol foi agitada na temperatura de refluxo de um dia para o outro, e depois resfriada até a temperatura ambiente. Os precipitados foram filtrados e secados a vácuo para dar 1- e (8,0 g, 48 mmol)^7-Flúor- quinazolin-4(3H)-ona (1-e, 8,0 g, 48 mmol) foi dissolvida em H2SO4 concentrado (24 mL) e a solução foi resfriada até 0°C em um banho de gelo. HNO3 (24 mL) foi então adicionado à solução acima na forma de gotas para manter a temperatura da reação abaixo de 0°C. A mistura foi então aquecida lentamente até 100°C e agitada por 3 dias. A mistura resultante foi resfriada até a temperatura ambiente e vertida sobre água gelada. Os precipitados foram obtidos por filtração e depois recristalizados em AcOH para dar 1-f (3.25 g, 15.53 mmol).

[00052] Sob N2, sódio metálico (0,71g, 31 mmol) foi adicionado cuidadosamente a metanol (anidro, 100 mL) e agitado por 10 minutos para preparar uma solução de metóxido de sódio. À solução acima, 7- flúor--6-nitroquinazolin-4(3H)-ona (1-f, 3,25 g, 15,53 mmol) foi então adicionada e a mistura foi aquecida até o refluxo por 3 h. A mistura resultante foi resfriada até a temperatura ambiente e acidificada com HCl (2 N) até pH = 3~4. Os materiais voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi colocado em suspensão em água, e o sólido foi coletado por filtração e secado a vácuo para dar 1-g (3,17 g, 14,4 mmol).

[00053] DMF (0,5 mL) foi adicionado a uma solução de 7-metóxi-6- nitroquinazolin-4(3H)-ona (1-g, 1,23 g, 5,56 mmol) em SOCl2 (8 mL) e a mistura foi aquecida até o refluxo por 4 h. Os materiais voláteis foram removidos sob pressão reduzida, para dar (1-h, 1,2 g, 5,0mmol).

[00054] Uma mistura de 4-cloro-7-metóxi-6-nitroquinazolina (1-h, 1,2 g, 5,02 mmol) e 1-(3-flúor-benzil)-1H-indazol-5-amina (1-c, 1,2 g, 4,98 mmol) em dioxano (40 mL) foi aquecida até o refluxo por 3 h. Ela foi então resfriada até a temperatura ambiente. Os precipitados foram obtidos por filtração e purificados por cromatografia em sílica-gel para dar 1-i (1,7 g, 3,88 mmol) como um sólido amarelo.

[00055] Sob N2, níquel Raney (0,13 g, peso úmido) foi adicionado a uma solução de 1-i(1,5 g, 3,7 mmol) em metanol (20 mL). A suspensão foi desgaseificada e purgada com H2 três vezes, e depois agitada sob atmosfera de hidrogênio à temperatura ambiente por 4 h. O catalisador foi removido por filtração cuidadosamente. O filtrado foi concentrado a vácuo para dar 1-j (1,36 g, 3,29 mmol) como um sólido amarelo.

[00056] Adicionou-se carbonocloridato de fenila (1,53 g, 9,86 mmol) a uma solução de 1-j (1,36 g, 3,29 mmol) e piridina (0,78 g, 9,86 mmol) em DMF (3 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1 h. Os precipitados foram obtidos por filtração e secados para dar 1-k (1,40 g, 2,63 mmol).

[00057] Uma solução de 1-k (1,1 g, 2,2 mmol), piridina (0,2 g, 2,6 mmol) e (3aR, 6aR)-1-metilocta-hidropirrolo[3,4-b]pirrol (0,33 g, 2,6 mmol) em DMF (3 mL) foi agitada a 80°C por 1 h, e depois vertida sobre água gelada, extraída com EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos combinados foram lavados com salmoura, secados com Na2SO4 (anidro), filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica-gel (EtOAc/metanol =2:1) para dar o composto 1 (0,79 g, 1,4 mmol). MS (m/e): 567,1 (M+1)+. Exemplo 2: (3aS,6aS)-N-(4-(1-(3-flúor-benzil)-1H-indazol-5-il-amino)-7- metóxi-quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida

[00058] O composto 2 foi preparado de acordo com os procedimentos do exemplo 1 sob condições similares usando (3aS, 6aS)-1-metil-octa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol. MS (m/e): 566,8 (M+1)+. Exemplo 3:(3aR,6aR)-N-(4-(3-etinil-fenil-amino)-7-metóxi-quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida

[00059] Adicionou-se sob a forma de gotas a -10°Ccarbonocloridato de fenila 3-b (22 mL, 0,175 mol) a uma solução do composto 3-a(40 g, 0,138 mol, preparado de acordo com osprocedimentos descritos no documento no WO 2010002845), piridina (40 mL, 0,495 mol) e DMF (anidro, 22 mL) em THF anidro (500 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas.Os precipitados foram filtrados e depois colocados em suspensão em solução saturada de NaHCO3 (500 mL). O sólido foi filtrado, lavado com H2O e EtOAc, e secado a vácuo para dar o composto 3-c (46 g). Uma mistura do composto 3-c (1 g, 2,44 mmol) e composto 3-d (369 mg, 2,92 mmol) em dioxano (30mL) foi agitada a 70°C por 5 horas, e depois resfriada até a temperatura ambiente. Os precipitados foram filtrados, lavados com EtOAc, e secados a vácuo para dar o composto 3 (0,8 g). MS (m/e): 443,4 (M+1)+. Exemplo 4: (3aS,6aS)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenil-amino)-7- metóxi-quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida

[00060] O Composto 4 foi preparado de acordo com os procedimentos do Exemplo 2. MS (m/e): 576,9 (M+1)+ Exemplo 5: (3aR,6aR)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenil-amino)-7-metóxi-quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)- carboxamida

[00061] O Composto 5 foi preparado de acordo com os procedimentos do Exemplo 1. MS (m/e): 576,7 (M+1)+ Exemplo 6:(3aS,6aS)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenil-amino)quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida

[00062] O Composto 6 foi preparado de acordo com os procedimentos do Exemplo 2. MS (m/e): 546,8 (M+1)+ Exemplo 7:(3aR,6aR)-N-(4-(3-cloro-4-(3-flúor-benzilóxi)fenil-amino)quinazolin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida

[00063] O Composto 7 foi preparado de acordo com os procedimentos do Exemplo 1. MS (m/e): 546,8 (M+1) +

Testes Farmacológicos Teste de inibição da ativação de EGFR

[00064] Semeadura e inanição de células: células A431 (carcinoma epidermoide humano) diluídas em 10% de FBS contendo DMEM são semeadas a 1,3 x 104 células/poço em placas com 96 poços, e incubadas durante a noite inteira. Depois, o meio de cultura de células é substituído por meio DMEM isento de soro a 90 μL/poço.As placas são incubadas de um dia para o outro para inanição.

[00065] Diluição do composto e tratamento: os compostos o teste são diluídos em uma série de 3 vezes em meio isento de FBS, contendo 5% de DMSO. 10 μL/poço do composto diluído são adicionados às células, 10 μL/poço de 5% de DMSO sem composto do teste são adicionados aos poços de controle. Um estudo de duplicação é realizado para cada ponto do teste. Depois, as placas são incubadas a 37°C por 60 minutos em uma incubadora com 5% de CO2.10 μL/poço de EGF a 200 ng/mL (Biosource, PHG0064) são adicionados e as placas são incubadas a 37°C por 45 minutos na incubadora com 5% de CO2.

[00066] Preparação do lisado: o meio é removido, e 100 μL/poço de tampão de lise celular Tris-HCl 50 mM, pH 8,0 (contendo NaCl 0,5 M, EDTA 0,2 mM, 0,1% de Triton X-100, 1 μg/mL de aprotinina, 0,75 μg/mL de leupeptina, 1 μg/mL de pepstatina, DTT 1 mM, vanadato de sódio 500 μM, e PMSF 1 mM) é adicionado a cada poço para lisar as células. Os inibidores de protease são adicionados momentos antes do uso. O lisado celular é congelado a -80°C durante a noite inteira.

[00067] Revestimento de placas e bloqueio: 100 μL/poço de 0.5 μg/mL de anticorpo anti-EGFR (Perkin Elmer, AF231) diluído em PBS são adicionados a uma placa com 96 poços DELFIA (Perkin Elmer, AAAND-0001) e incubados a 25°C de um dia para o outro sob agitação suave. A solução é descartada. A placa é lavada 3 vezes com 200 μL/poço de tampão de lavagem DELFIA (tampão de PBS contendo 0,05% de Tween-20). 200 μL/poço de tampão de bloqueio (PBS contendo NaCl 0,137 M, KCl 0,0027 M, Na2PO4.12H2O 0,01 M, KH2PO4 0,0015 M, pH 7,4, e 1% de BSA) são adicionados a cada poço e a placa é incubada a 25°C por 2 h sob agitação suave.

[00068] Ligação: o tampão de bloqueio é descartado e a placa é lavada 3 vezes com 200 μL/poço de tampão de lavagem DELFIA. 80 μL/poço do diluente de amostra (Tris-HCl 20 mM/pH 7,3, NaCl 150 mM, 0,1% de BSA, e 0,05% de Tween-20) e 20 μL/poço de lisado celular são então adicionados a cada poço e a placa foi incubada a 25°C por mais 1 h sob agitação suave.

[00069] Detecção: a placa é lavada novamente 3 vezes com 200 μL/poço de tampão de lavagem DELFIA. 100 μL/poço de anticorpo Eu- PT66 a 0,5 μg/mL (Perkin Elmer, AD0040) diluído em tampão de ensaio DELFIA (Perkin Elmer, 1244-106) são adicionados e a placa é incubada a 25°C por 1 h sob agitação suave. Depois de lavar 3 vezes com 200 μL/poço de tampão de lavagem DELFIA, 100 μL/poço de tampão de intensificação DELFIA (Perkin Elmer, 4001-0010) são adicionados. A placa é incubada a 25°C por 30 min sob agitação suave.

[00070] Leitura: o sinal de fluorescência é medido a 340 nm de excitação e 620 nm de emissão em um Victor3 (PerkinElmer).

[00071] As taxas de inibição são calculadas como indicado abaixo:

onde,

[00072] [Leitura da Fluorescência]Tratado é a leitura dos poços tratados com composto do teste depois da estimulação com EGF

[00073] [Leitura da Fluorescência]Não-tratado é a leitura dos poços sem tratamento pelo composto e sem estimulação com EGF, que é usada como sinal de fundo das células

[00074] [Leitura da Fluorescência]EGF é a leitura dos poços com estimulação por EGF, mas nenhum tratamento com composto, que é usada como sinal máximo

[00075] A CI50 é calculada usando o software XL-Fit 2.0.

[00076] Os valores de CI50 dos compostos 1-7 são 0,185, 0,439, 0,006, 0,016, 0,044, 0,210, e 0,241 uM, respectivamente.

Testes antitumorais in vivo em modelos de xenoenxertos humanos 1.Materiais e métodos:

[00077] Linhagens de células tumorosas humanas: linhagens de células Fadu (carcinoma de cabeça e pescoço, faringe humano, HTB- 43), HCC827 (câncer pulmonar de células não pequenas humanas, NSCLC; CRL-2868), A431 (carcinoma epidermoide humano, CRL- 2592) forma adquiridas na ATCC; as células Fadu, HCC827 e A431 foram desenvolvidas em meio EMEM, RPMI 1640 e DMEM mais 10% de FBS respectivamente. Estas células foram incubadas em uma incubadora umidificada a 37°C e sob 5% de CO2.

[00078] Animais: camundongos atímicos (6-8 semanas) foram adquiridos no Shanghai SLAC Laboratory Animal CO. LTD. Os animais foram alojados no ambiente SPF, 4 animais/gaiola sob condições- padrão (12:12 h iluminação/escuridão, 40-50% de umidade relativa a 20-25°C) e tiveram acesso livre a uma dieta estéril irradiada com Co60 e água esterilizada.

[00079] Agentes: os compostos do teste foram formulados em 0,5% de CMC-Na estéril em diferentes concentrações (0,05~1,0 mg/mL), e depois estocados a 4°C.

[00080] Estudo de implantação subcutânea de células tumorosas e eficácia antitumoral: as células tumorosas foram incubadas a 37°C em uma incubadora com 5% de CO2 até atingirem aproximadamente 80% de confluência. As células foram destacadas por 0,05% de Tripsina- EDTA, centrifugadas a 800 rpm, e as células foram colocadas em suspensão em meio isento de soro. A concentração foi ajustada para implantação em camundongos nus. Os camundongos nus foram mantidos em quarentena por vários dias antes da implantação, e 3 x 106 células FaDu ou A431 em 0,1 mL de meio, ou 5 x 106 células HCC827 em 0,2 mL do meio foram injetadas por via subcutânea no flanco lateral direito dos camundongos nus.

[00081] Uma a três semanas depois da inoculação, quando o volume médio do tumor volume atingiu 100~300 mm3, os animais foram agrupados aleatoriamente em grupos tratados com veículo e composto. Os camundongos receberam administração oral de veículo, 0,5% de CMC-Na, ou compostos do teste em níveis de doses diferentes uma vez ao dia. O volume da dosagem foi de 10 mL/kg de peso corporal (o esquema de dosagem está indicado na Tabela 1 e Tabela 2.). O volume dos tumores foi medido 2~3 vezes por semana com um paquímetro medindo o comprimento e largura, e foi calculado usando a fórmula: volume do tumor (TV, mm3) = largura2xcompri- mento/2. O peso corporal dos animais e o comportamento foram observados durante o experimento. A inibição do crescimento de tumores foi calculada da seguinte maneira: TGI (%) =100-(T-T0)/ (C- Co)x1QQ%, onde T representa o volume médio do tumor de um grupo tratado em um dia específico durante o experimento, T0 representa o volume médio do tumor do mesmo grupo tratado no primeiro dia do tratamento, C representa o volume médio do tumor de um grupo de controle no dia específico durante o experimento, e CQ representa o volume médio do tumor volume do mesmo grupo de controle no primeiro dia de tratamento.Tabela 1. Esquema de dosagem do composto do teste em xenoenxertos de Fadu e A431

Tabela 2. Esquema de dosagem do composto em teste emxenoenxerto de HCC827

2.Análise Estatística:

[00082] Os dados dos volumes dos tumores foram expressos como Média±SD. ANOVA unidirecional foi usada para múltiplas comparações e o teste t de Student foi usado para comparação com controle de veículo. As diferenças foram consideradas estatisticamente significantes em P < 0,05.

3.Resultados:

[00083] O composto do teste apresentou inibição significativa do crescimento do tumor nos três modelos de tumores de uma maneira dependente da dosagem. Além disso, nenhum dos camundongos tratados com o composto do teste apresentou perda de peso corporal significativa durante os experimentos.

[00084] As TGIs (%) produzidas pelo composto do teste, representativo no Exemplo 3 estão indicadas na tabela abaixo.Tabela 3. TGI (%) do composto 3 em modelos de xenoenxerto subcutâneo humano

Ensaio de hERG 1.Cultura de células

[00085]Uma linhagem de células CHO transfectadas de forma estável com o DNAc de hERG cDNA e que expressam canais de ERG foi usada para o estudo. As células foram cultivadas em meio que contém: •Meio de Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM/F12) •10% (v/v) soro fetal bovino (FBS) inativado com calor •1% (v/v) penicilina/estreptomicina •500 μg/ml do reagente Geneticin® (G418)

[00086] Antes de testar, as células foram colhidas usando um Accumax (Innovative Cell Technologies).

2.Soluções

[00087] Para os registros eletrofisiológicos, as seguintes soluções foram usadas: Tabela 4. Composição de soluções interna e externa usadas em estudos de grampo de placa de hERG

3. Sistema de registro

[00088] Os registros de células integrais foram realizados usando um EPC10 USB (HEKA).As células foram grampeadas com voltagem em um potencial de retenção de -80 mV. A corrente de hERG foi ativada despolarizando a +20 mV por 2 segundos, após o que a corrente foi levada de volta para -50 mV por 2 segundos para remover a inativação e observar a corrente de cauda desativadora. A primeira etapa a -50 mV foi usada como linha basal para medir a amplitude do pico da corrente de cauda.

4.Manuseio de compostos e diluições

[00089] Os compostos foram preparados como um insumo a 10 mM DMSO em um frasco de vidro. A solução de insumo foi misturada intensamente por 10 minutos à temperatura ambiente. Para testar, o composto foi diluído em um frasco de vidro usando a solução; a diluição foi preparada não mais do que 30 minutos antes do uso. Quantidades iguais de DMSO (0,1%) estavam presentes na diluição final.

5.Procedimentos de eletrofisiologia

[00090] Depois de atingir a configuração de células integrais, as células foram monitoradas por 90 segundos para avaliar a estabilidade e lavadas com solução externa por 66 segundos. O protocolo de voltagem descrito acima foi então aplicado às células a cada 20 segundos durante o procedimento inteiro. Apenas células estáveis com os parâmetros de registro acima do limite foram deixadas entrar no procedimento de adição de fármaco.

[00091] A solução externa que contém 0,1% de DMSO (veículo) foi aplicada às células para estabelecer a linha basal. Depois de deixar a corrente estabilizar por 3 minutos, o composto foi aplicado. A solução do composto foi adicionada em 4 etapas e as células foram mantidas na solução do teste até que o efeito do composto atingisse um estado de equilíbrio por no máximo 6 min. Subsequentemente, o controle positivo (Cisaprida 100 nM) foi adicionado. A lavagem com a solução externa foi realizada até que a recuperação da corrente atingisse um estado de equilíbrio.

6.Análise de Dados

[00092] Os dados foram analisados usando Pulsefit and Origin 7 (Originlab Corporation).

7.Resultado

[00093] O composto 3 inibiu as correntes de cauda de hERG com uma CI50 de 9,3 ± 1,2 μM (cinco concentrações, 5 x 2) usando o ensaio manual de grampo de placa de células integrais.

Claims

1.Composto, caracterizado pelo fato de que é: (3aR,6aR)-N-(4-(3-etinil-fenil-amino)-7-metóxi-quinazolin-6-il)-1-metil- hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida; e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2.Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e o composto (3aR,6aR)-N-(4-(3-etinil-fenil-amino)-7-metóxi-quinazolin-6-il)-1-me- til-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida; e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

3.Composto e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento de câncer.

4.Composto e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o câncer é escolhido entre câncer pulmonar, câncer de cabeça e pescoço, câncer colorretal, câncer de faringe, câncer epidermoide, e câncer pancreático.

5.Composto e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o câncer pulmonar é câncer pulmonar de células não-pequenas.

6.Composto e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar um agente anticâncer diferente do 3aR,6aR)-N-(4-(3-etinil-fenil-amino)-7-metóxi-quinazo- lin-6-il)-1-metil-hexa-hidropirrolo[3,4-b]pirrol-5(1H)-carboxamida, e/ou pelo menos um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que dito agente anticâncer é selecionado de radioterapia; imunoterapia; agentes quimioterápicos danificadores do DNA; e agentes quimioterápicos que interrompem a replicação celular.

7.Método in vitro para inibir a superexpressão e/ou hiperatividade do receptor do fator de crescimento epidérmico, caracterizado pelo fato de que compreende contatar o composto como definido na reivindicação 1, e/ou um sal farmaceuticamente aceitável com o receptor do fator de crescimento epidérmico.

8.Uso do composto como definido na reivindicação 1, e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para tratar câncer.

9.Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o câncer é escolhido entre câncer pulmonar, câncer de cabeça e pescoço, câncer colorretal, câncer de faringe, câncer epidermoide, e câncer pancreático.

10.Uso, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o câncer pulmonar é câncer pulmonar de células não- pequenas.