BR112012029913B1

BR112012029913B1 - levoisovalerilspiramicina i, ii, iii e preparações, métodos de preparação e uso dos mesmos

Info

Publication number: BR112012029913B1
Application number: BR112012029913-1A
Authority: BR
Inventors: Yang Jiang; Yuyou Hao
Original assignee: Shenyang Fuyang Pharmaceutical Technology Co., Ltd.
Priority date: 2010-05-25
Filing date: 2011-05-25
Publication date: 2021-02-02
Also published as: EP3210991B1; CA2800021C; CA2915236C; KR20160017124A; PL3210991T3; EP2578595A4; RU2012156420A; RU2647236C1; US20130065848A1; ES2754614T3; MX340626B; JP5945868B2; CA2915222C; EP3210990B1; PT3210990T; BR112012029913A8; RU2593498C2; BR112012029913A2; WO2011147313A1; RU2647237C1

Abstract

LEVOISOVALERILSPIRAMICINA I, II, III E PREPARAÇÕES, MÉTODOS DE PREPARAÇÃO E USO DOS MESMOS. A presente invenção refere-se a levoisovalerilspiramicina I, II ou III, preparações, os métodos de preparação e o uso dos mesmos. As preparações compreendem levoisovalerilspiramicina I, II, ou III e veículo e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável, em que a pureza de levoisovalerilspiramicina I, II ou III é superior a 90% em peso. O composto levoisovalerilspiramicina I, II ou III tem uma boa atividade anti-bacteriana, e as preparações incluem solução para injeção, pó para injeção ou pó liofilizado para injeção.

Description

Campo da Presente Invenção

[0001] A presente invenção refere-se a um novo antibiótico macrolídeo de engenharia genética, em particular, para levoisovalerilspiramicina I, II ou III, e os cristais, a preparação farmacêutica e os métodos de preparação dos mesmos, bem como o uso de fármacos anti-infecciosos.

Antecedentes da Presente Invenção

[0002] Os antibióticos macrolídeo têm um papel clinicamente importante uma vez que eles têm uma boa atividade contra bactérias gram-positivas e algumas bactérias gram-negativas, bem como têm boa atividade anti-bacteriana e de permeabilidade do tecido para incontroláveis agentes causadores tais como alguns toxoplasm e Legionella cada vez mais epidêmicos. Caracterizado por meio de uma rápida absorção por meio da administração oral, poucas reações adversas, antibióticos macrolídeo, basicamente, não têm qualquer efeito sobre o fígado e sobre o rim, mas tem uma função de imunorregulação potencial. Na década de noventa, os antibióticos macrolídeos foram pensados para serem um concorrente de fármacos fore-lactâmicos no tratamento da infecção do trato respiratório de adultos.

[0003] Quiralidade é um atributo básico de três dimensões do corpo e um dos atributos essenciais da natureza. As macromoléculas biológicas, incluindo a proteína, polissacarídeo, ácido nucleico e a enzima como base importante do movimento vital frequentemente têm funções fisiológicas importantes. O fármaco quiral é um par de enantiômeros do material objeto e a imagem no espelho obtida após a estrutura molecular do fármaco ter sido introduzida no centro de quiralidade. Estes enantiômeros são essencialmente os mesmos, às propriedades físico- químicas, mas diferente na atividade ótica. Os enantiômeros são, respectivamente, denominados tipo R (dextrogiratório) ou do tipo S (sinistral) e racêmicos. Nos últimos 20 anos, a investigação farmacêutica é mais intensiva, a mesma tem provado que a diferença de afinidade do enantiômero do fármaco com o receptor causada por meio da diferença de estereosseletividade do enantiômero do fármaco leva a grande diferença na atividade farmacológica. O enantiômero com atividade elevada entre fármacos quirais é chamado eutômero; enquanto que o com baixa ou nenhuma atividade é chamado distômero. Em muitos casos, o distômero não só não tem ação farmacológica, mas também a de compensar o eutômero. Às vezes, graves reações colaterais tóxicas ocorrerão, mostrando a complexidade da diferença em função farmacológica e determinando a grande diferença no índice terapêutico do enantiômero simples e o racemato do mesmo. Por exemplo, o efeito curativo da bem conhecida DL-(+ -) sintomicina é metade de D (-) cloranfenicol, a atividade farmacêutica do L-isômero propranolol é 100 vezes maior do que o de D-isômero, (-)adanon é um analgésico forte enquanto (+) é não eficaz. Há também a diferença na toxicidade. Por exemplo, os dois enantiômeros da talidomida tem sedação semelhante para camundongos, mas só isômero S (-) e metabolina dos mesmos têm embriotoxina e teratogênese; cetamina é um anestésico e analgésico amplamente utilizado, mas tem efeitos colaterais, tais como alucinações. Estudos mostram que o S (+) é de 3 ~ 4 vezes mais eficaz que o R (-) e os efeitos colaterais tóxicos têm algo a ver com o último. A grande diferença de efeito curativo do fármaco quiral tem promovido a pesquisa e desenvolvimento de fármacos quirais e o desenvolvimento da análise de separação. Ao utilizar a tecnologia "quiral", pode-se remover os que tem nenhum efeito ou efeitos secundários tóxicos de fármacos de forma eficaz e produzem os fármacos quirais puros com estrutura simples e orientada, tornando, dessa maneira, os ingredientes farmacêuticos mais puros, efeito curativo ainda mais acelerado e encurtam o curso do tratamento. Portanto, a pesquisa sobre fármacos quirais tornou-se um dos novos métodos de pesquisa de novos fármacos em todo o mundo. Os governos nacionais e as empresas farmacêuticas têm investido de forma pesada em áreas como a preparação do fármaco quiral, materiais quirais e intermediário quiral no que diz respeito à pesquisa e ao desenvolvimento, com o objetivo de apreender domínio do mercado farmacêutico quiral. Além disso, com a melhoria contínua da tecnologia quiral, especialmente o uso rápido e a variedade de cromatografia líquida, a análise da separação e a determinação de enantiômeros de fármacos quirais são promovidos. Os fármacos quirais de enantiômero simples têm sido amplamente utilizados.

[0004] Carrimicina é um novo derivado de espiramicina desenvolvido por meio da adoção da tecnologia de engenharia genética, que é originalmente chamado biotechspiramicina e anteriormente chamado biotechmicina [Patente: ZL97104440,6]. De acordo com as "Regras para Nomes chineses de fármaco aprovados", e sobre a análise técnica e a confirmação da Comissão da Farmacopeia Chinesa, o nome genérico de biotechspiramicina é alterado para carrimicina. A estrutura química do carrimicina compreende principalmente 4"- isovalerilspiramicina, incluindo 4"-isovalerilspiramicina I, II, III, e cerca de 6 4 "-hidróxi acilado espiramicina, de modo que o nome químico é 4"-acilspiramicina.

[0005] A fórmula química estrutural do carrimicina é como mostrado na fórmula (1):

em que: R é em isovalerilspiramicina I a partir de H;

[0006] R em isovalerilspiramicina II é a partir de COCH3, R em isovalerilspiramicina III é a partir de COCH2CH3.

[0007] Carrimicina é um antibiótico macrolídeo de 16 membros do anel, que inibe a síntese de proteínas por meio da combinação com a bactéria do ribossoma.

[0008] O estudo farmacocinético mostra que os componentes eficazes de carrimicina com atividade são principalmente isovalerilspiramicina I, II e III. Carrimicina rapidamente metaboliza a espiramicina in vivo. De acordo com o AUC0-t do fármaco parente de isovalerilspiramicina I, II e II e do metabolito ativo de espiramicina I, II e III, a biodisponibilidade absoluta por meio da administração oral é de 91,6% medianamente. Relata-se que a biodisponibilidade absoluta da espiramicina por meio da administração oral é de 30 ~ 40% (Fridman AM et al J Antimicrob Chemother,1988, 22 (suppl B): 93 a 103). Ela mostra que a isovalerilspiramicina aparentemente melhora a biodisponibilidade do componente de espiramicina ativo. Uma única dose de carrimicina é eliminada de uma maneira lenta. T1/2 está entre 23 ~ 27 horas.

[0009] Os resultados dos testes in vitro mostram que carrimicina é eficaz contra bactérias gram-positivas, especialmente algumas bactérias resistente aos fármacos, tais como resistência de e-lactâmico à Staphylococcus aureus e resistência de eritrocina à Staphylococcus aureus, e não tem qualquer resistência cruzada aparente com fármacos similares. Enquanto isso, carrimicina possui atividade antibacteriana por meio do micoplasma e clamídia, bem como algumas bactérias gram- negativas, tem atividade anti-bacteriana e boa permeabilidade do tecido para toxoplasm e Legionella epidêmica, e ainda tem uma função potencial de imunorregulação. A atividade antibacteriana in vivo é muito melhor do que in vitro (ZL200310122420,9). A pesquisa clínica mostra que, ao tomar comprimidos de 200 mg ~ 400 mg de carrimicina diariamente para 5 a 7 dias, ele é adequado para o tratamento de faringite bacteriana aguda e amigdalite supurativa aguda causada por meio do estreptococo piogênico; nasosinusitis bacteriana e bronquite aguda, causada por meio das bactérias sensíveis; pneumonia leve causada por meio da pneumonia por streptococci, haemophilus influenza e pneumonia por micoplasma; uretrite nongonoccal causada por meio do micoplasma e clamídia, doenças infecciosas, tal como a infecção da pele e a infecção de tecidos moles, periodontite e otite média causada por meio das bactérias sensíveis. A taxa eficaz total é de 92,68%.

[00010] Uma investigação clínica prova que carrimicina é um antibiótico seguro e eficaz por meio da administração oral. No entanto, como carrimicina é um produto obtido através da fermentação e é um fármaco multicomponente, é muito difícil para adicionalmente separar e purificar os fármacos de componentes múltiplos. A HPLC atual pode separar os acilspirmicinas múltiplos em amostra carrimicina, por exemplo, o grau de separação de isovalerilspiramicina II e isobutirilspiramicina III, isobutirilspiramicina II e propionilspiramicina III, propionilspiramicina III e do referido componente, propionilspiramicina II e acetil espiramicina III é superior a 1,5, tal como estipulado na Farmacopéia Chinesa, enquanto que a de acetil espiramicina III e o referido componente é de 1,2.

[00011] Através de muitas pesquisas e de ajuste e da otimização de cultura e condições de fermentação, a presente invençãor toma uma levocarrimicina, que tem melhor atividade anti-infecção.

[00012] Presentemente, HPLC é empregue e é determinado que carrimicina compreende 9 componentes acilspiramicina, incluindo isovalerilspiramicina (I + II + III), o qual não deverá ser inferior a 60%, no total, e acilspiramicina, que não deve ser inferior a 80%, em totalidade. É muito difícil para cumprir a norma de controle de qualidade da injeção por meio dos antibióticos multicomponentes produzidos através da fermentação, mas a injeção tem efeito rapidamente para pacientes críticos e aqueles que não devem tomar fármacos por via oral, assim como, uma preparação de um único componente de isovalerilspiramicina é de profundo significado. Na presente invenção, por meio de mais pesquisas sobre levocarrimicina, o único componente de levoisovalerilspiramicina I com uma pureza tão elevada como 98% em peso é obtido.

Sumário da presente invenção

[00013] Um primeiro objetivo da presente invenção é o de proporcionar levoisovalerilspiramicina I, II e levoisovalerilspiramicina levoisovalerilspiramicina III. É um segundo objetivo da presente invenção proporcionar uma preparação contendo levoisovalerilspiramicina I, levoisovalerilspiramicina II e levoisovalerilspiramicina III respectivamente.

[00014] É um terceiro objetivo da presente invenção proporcionar um método para a preparação de levoisovalerilspiramicina I, levoisovalerilspiramicina II e levoisovalerilspiramicina III.

[00015] É um quarto objetivo da presente invenção proporcionar as utilizações de levoisovalerilspiramicina I, levoisovalerilspiramicina II e levoisovalerilspiramicina III.

[00016] É ainda um quinto objetivo da presente invenção proporcionar os cristais de levoisovalerilspiramicina I, levoisovalerilspiramicina II e levoisovalerilspiramicina III, bem como a preparação que contém os cristais, respectivamente.

[00017] A fim de realizar os objectivos da presente invenção, o seguinte esquema técnica é utilizado:

[00018] A presente invenção refere-se a um composto de levoisovalerilspiramicina I, a fórmula química estrutural a qual é mostrada como na fórmula (I):

(I) A rotação ótica específica [α] D é -49 ° ~ -62 °, de preferência, -51 ° a -60 °, -60 ° a -62 °, mais preferivelmente -51 ° ~ -58 °, -53 ° ~ - 58 °, mais preferivelmente de -55 ° -58 ° ~, - ~ 55 ° -57 °, -58 ° ~ -60 °, - 51 ° a -55 °, mais preferivelmente -53 ° ~ -55 °, mais preferivelmente - ~ 49 ° -51 ° (C = 0,02g/ml, CHCI3, 25 °C, À = 589,3nm), e o ponto de fusão é de 116 ~ 122 °C, de preferência, 118 ~ 120 °C;

[00019] A presente invenção refere-se a um composto de levoisovalerilspiramicina II, a fórmula química estrutural a qual é mostrada como na fórmula (II):

(II) A rotação ótica específica [α] D é ~ 55 ° -61 °, de preferência, -57 ° a -59 ° (C = 0,02g/ml, CHCI3, 25 °C, À = 589,3nm), e o ponto de fusão é de 120 ~ 128 °C, de preferência, 123 ~ 125 °C;

[00020] A presente invenção relaciona-se com um composto Levoisovalerilspiramicina III, a fórmula química estrutural a qual é mostrada como na fórmula (III):

A rotação ótica específica [α] D é (-) -49 ° ~ -51 ° (C = 0,02g/ml, CHCI3, 25 °C, À = 589,3nm), e o ponto de fusão é de 116 ~ 118 °C °C;

[00021] A presente invenção refere-se a uma preparação de levoisovalerilspiramicina I, em que: a preparação compreende levoisovalerilspiramicina I, sal farmacêutico de isovalerilspiramicina I, isovalerilspiramicina I e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, ou um sal farmacêutico de isovalerilspiramicina I e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, em que a pureza da isovalerilspiramicina I é superior a 90% em peso, de preferência, mais de 95% em peso, e ainda mais preferivelmente, mais de 98% em peso;

[00022] A presente invenção refere-se a uma preparação de Levoisovalerilspiramicina II, em que: a preparação compreende isovalerilspiramicina II, sal farmacêutico de isovalerilspiramicina II, Isovalerilspiramicina II e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, ou um sal farmacêutico dos isovalerilspiramicina II e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, em que a pureza da isovalerilspiramicina II é superior a 90% em peso, de preferência, mais de 95% em peso, e ainda mais preferivelmente, mais de 98% em peso;

[00023] A presente invenção refere-se a uma preparação de Levoisovalerilspiramicina III, em que: a preparação compreende isovalerilspiramicina III, sal farmacêutico de isovalerilspiramicina III, Isovalerilspiramicina II e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, ou um sal farmacêutico dos isovalerilspiramicina III e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, em que a pureza da isovalerilspiramicina III é superior a 90% em peso, de preferência, mais de 95% em peso, e ainda mais preferivelmente, mais de 98% em peso.

[00024] Um primeiro esquema da técnica preferido da presente invenção: a preparação da presente invenção é líquida, sólida, semi- sólida, ou de gás, em que, a preparação líquida compreende as injeções, uma solução de infusão, solução, mistura, xarope, tintura, coloide, água aromática , glicerite, coloide solução, mucilagem, suspensão ou emulsão, a preparação sólida compreende a injeção de potência, a injeção de pó liofilizado, comprimido, cápsula, pó, granula, pílula, preparação sublimada, ou membrana, a preparação semi-sólida compreende pomada, emplastro, supositório, extrato, ou gel, e a preparação de gás compreende aerosol ou spray, de preferência solução para a injeção, pó para a injeção ou pó liofilizado para a injeção.

[00025] Um segundo esquema da técnica preferido da presente invenção: a preparação da presente invenção, contendo levoisovalerilspiramicina I (dose unitária) de 10 ~ 1500mg, de preferência, 50 ~ 1000 mg, ainda mais preferivelmente, 100 a 500 mg, a preparação da presente invenção, contendo levoisovalerilspiramicina II ( dose unitária) 10 ~ 1500mg, de preferência, 50 ~ 1000 mg, ainda mais preferivelmente, 100 a 500 mg, a preparação da presente invenção, contendo levoisovalerilspiramicina III (dose unitária) de 10 ~ 1500mg, de preferência, 50 ~ 1000 mg, ainda mais preferivelmente, 100 a 500 mg.

[00026] Um terceiro esquema da técnica preferido da presente invenção: a percentagem em peso de levoisovalerilspiramicina I na preparação é de 10 ~ 95%, de preferência, 50 a 95%, e ainda mais preferivelmente, 75 a 95%, a percentagem em peso de levoisovalerilspiramicina II na preparação é de 10 ~ 95%, de preferência, 50 a 95%, e ainda mais preferivelmente, 75 a 95%, a percentagem em peso de levoisovalerilspiramicina III na preparação é de 10 ~ 95%, de preferência, 50 a 95%, e ainda mais preferencialmente, de 75 ~ 95%.

[00027] A presente invenção também diz respeito a uma preparação contendo levoisovalerilspiramicina I, Levoisovalerilspiramicina II ou levoisovalerilspiramicina III respectivamente:

[00028] A preparação compreende uma solução para injeção, pó para injeção ou pó liofilizado para injeção preparada por meio da isovalerilspiramicina I e pelo menos um ácido cítrico, ácido adípico e ácido maleico, a preparação compreende uma solução para injeção, pó para injeção ou pó liofilizado para injeção preparada por meio de isovalerilspiramicina II e, pelo menos, um ácido cítrico, ácido adípico e ácido maleico, a preparação compreende uma solução para injeção, pó para injeção ou pó liofilizado para injeção preparada por meio de isovalerilspiramicina III e pelo menos um de ácido cítrico, ácido adípico e ácido maleico.

[00029] Em que, a proporção molar de Levoisovalerilspiramicina I para o ácido cítrico é 1: 0,8 ~ 1,2, a razão molar de levoisovalerilspiramicina I para o ácido adípico é 1: 0,8 ~ 1,2 e a razão molar de levoisovalerilspiramicina I para o ácido maleico é 1: 0,8 ~ 1,2; a razão molar de levoisovalerilspiramicina II para o ácido cítrico é 1: 0,8 ~ 1,2, a razão molar de levoisovalerilspiramicina II para o ácido adípico é 1: 0,8 ~ 1,2 e a razão molar de levoisovalerilspiramicina II para o ácido maleico é 1: 0,8 ~ 1,2, o molar proporção de levoisovalerilspiramicina III para o ácido cítrico é 1: 0,8 ~ 1,2, a razão molar de Levoisovalerilspiramicina III de ácido adípico é 1: 0,8 ~ 1,2 e a proporção molar de III para levoisovalerilspiramicina ácido maleico é de 1: 0,8 ~ 1,2.

[00030] A presente invenção diz respeito a um método para a preparação de levoisovalerilspiramicina I, II ou III, incluindo: a preparação e a purificação de levocarrimicina levoisovalerilspiramicina I, II ou III.

[00031] Em que, o processo de preparação de levocarrimicina inclui: a cultura de fermentação e cepas fungais clonadas biologicamente fermentadas WSP-195 produzida por meio da espiramicina contendo gene transferase de 4 "-isovalerila, e extraindo o licor de fermentação, processo de fermentação com a condição de pH 6,0 ~ 9,0, de preferência, 6,0 . ~ 8,0, e ainda mais preferencialmente, 6,0 ~ 7,5 As curvas de variação do pH ao longo do tempo mostra as três fases contínuas, em que, a primeira fase satisfaz a fórmula y1 = klxl 6,0, em que 0,0227 0,1364 < < k1,0 < x1 < 22; a segunda fase satisfaz a fórmula y2 = k2x2 + b2, em que -0,0735 < k2 < 0, 6,5 < b2 < 10,62, 22 < x2 < 56, e a terceira fase satisfaz a fórmula y3 = k3x3 + b3, em que 0 < k3 < 0,0078 , 6,06 < b3 < 6,5, 56 < x3 < 120. Na presente invenção, através do ajuste e da optimização das condições de cultura e de fermentação, em especial por meio do controle do pH durante a fermentação com o regulador de pH, as curvas de variação do pH ao longo do tempo mostra três fases contínuas e cada fase satisfaz uma determinada fórmula, respectivamente, dessa maneira levocarrimicina com atividade ótica é obtido. Além dissom levoisovalerilspiramicina I, II ou III, respectivamente, é obtido por meio da separação.

[00032] De preferência, as condições de fermentação biológicas da presente invenção são as seguintes: a cultura das cepas fúngicas clonadas WSJ-195 produzida por meio da espiramicina contendo gene transferase de 4 "-isovalerila em um meio de cultura de agarslant contendo 2% de farinha de bagaço de soja, 1% de glicose, 3% de amido, 0,5% de CaCO3, 0,4% de NaCl e agar a 2% durante 8 ~ 15 dias, sob pH 6,5 ~ 7,5 e temperatura de 28 ~ 38 °C, seguido da inoculação de um meio de sementeira, contendo 1,5% de farinha de bagaço de soja, 3,0% de amido, 0,4% de NaCl, 0,5% de CaCO3, 0,3% de peptona de peixe e 0,05% de KH2PO4 e cultura para 40 ~ 80 horas sob pH 6,5 ~ 7,5 e temperatura de 25 ~ 30 °C, implantação de um meio de fermentação contendo 0,5% de glicose, 6,0% de amido, 0,5% de pó de levedura, 2,0% de farinha de peixe, 0,6% de NH4NO3, 1,0% de NaCl, 0,5% de CaCO3, 0,05% de KH2PO4, 0,1% de MgSO4, 0,5% de óleo de soja a e 0,02% de anti-espumante e a cultura durante 72 ~ 120 horas, sob pH 6,5 ~ 7,5, temperatura 26 ~ 30 °C e 0,1 ~ quantidade de inoculação de 20%, para a obtenção de licor de fermentação.

[00033] O regulador de pH é de pelo menos um selecionado a partir de glicose, ácido cítrico, ácido clorídrico, ácido acético, amônia, hidróxido de sódio e hidróxido de potássio.

[00034] De preferência, o processo de extração de licor de fermentação biológico na presente invenção é: procedendo-se ao licor de fermentação com sulfato de alumínio com a finalidade de se obter filtrado, regulando o pH do filtrado para 8,5 ~ 9,0, utilizando acetato de butila para a extração, a limpeza do extrato de acetato de butila com solução não-salina e 1% de NaH2PO4, em seguida, usando pH2,0 ~ 2,5 de água para a extração com a finalidade de se obter o extrato aquoso, regulando o pH do extrato aquoso a 4,5 ~ 5,5, volatilizando e eliminando o acetato de butila residual com a finalidade de obter o extrato de água, filtrar o extrato de água, regulando o pH do filtrado até pH 8,5 ~ 9,0, precipitando-se o filtrado e a lavagem com água purificada com a finalidade de se obter o produto úmido, e secando-a com a finalidade de obter levocarrimicina.

[00035] Em que, pelo menos, um de ácido clorídrico, ácido acético, ácido cítrico, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, bicarbonato de sódio e carbonato de sódio é o adotado para regular o valor do pH.

[00036] No qual, o processo de purificação de levoisovalerilspiramicina I, II ou III inclui: purificar a amostra com o método de cromatografia levocarrimicina, executando um gradiente de eluição e separar o pico do componente alvo levoisovalerilspiramicina I, II ou III, por meio de coluna cromatográfica ODS em acetonitrila e a solução tampão de acetato de amônio.

[00037] De preferência, durante a purificação de levoisovalerilspiramicina I, II ou III, a gravação do diagrama de espectro de UV de levoisovalerilspiramicina I, II ou III, por meio da cromatografia preparativa líquida de alta eficiência e detecção por UV, e recolhendo levoisovalerilspiramicina I da amostra com base no tempo de retenção de 44,759 min, amostra de levoisovalerilspiramicina II com base no tempo de retenção de 43,34 min e amostra de levoisovalerilspiramicina III com base no tempo de retenção de 48,009min.

[00038] Além disso, de preferência, durante a purificação de levoisovalerilspiramicina I, II ou III, eliminando a acetonitrila na levoisovalerilspiramicina I, II ou III, recolhida respectivamente, com o método de evaporação rotativa, em seguida, utilizando acetato de etila para extração, e eliminando o acetato de etila no extrato por meio da evaporação com a finalidade de se obter amostra da pasta; re- dissolvendo a amostra obtida com éter de petróleo, eliminando o éter de petróleo por meio da evaporação com a finalidade de se obter, respectivamente, um pó branco de levoisovalerilspiramicina I, II ou III.

[00039] Em que, a fase móvel é um solvente misto de acetonitrila e uma solução de acetato de amônio a 150 mM com pH 8,5.

[00040] As condições necessárias para a purificação de levoisovalerilspiramicina I, II ou III: gradiente linear: 0 ~ 60 minutos, A sendo 25% ~ 65%, e 61 ~ 90 minutos, A sendo 65% a 90%; Velocidade de fluxo: 260 mL/min; Tamanho da amostra: 10 ml; Concentração da amostra: 0,5 g/mL; Medição de comprimento de onda: 231 nm; Forma de coleta: coleta através do disparo UV.

[00041] A presente invenção também se relaciona com o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I, a difração de raio X em pó do qual medido por Cu-Ka de raios tem picos característicos em 2θ = 7,6 °, 8,0 °, 10,0 °, 11,4 °, 16,4 °, 17,0 °, 17,5 °, 17,9 °, 19,5 °, 22,7 °, 23,7 ° e 24,4 °. O diagrama de difração de raios X em pó está representado na figura 5.

[00042] O método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I é o seguinte: dissolve composto de levoisovalerilspiramicina I sólido em uma mistura de solventes de acetato de etila, álcool de etila absoluto e acetona anidra, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, resfriando a 5 °C ~ 15 °C depois de adicionar água pura, continuando mexendo durante a refrigeração, então a obtenção de composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I.

[00043] Em que, um primeiro esquema da técnica preferido do método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I é o seguinte: o volume de água adicionado puro sendo 2 ~ 9 vezes do volume total de acetato de etila, álcool de etila absoluto e acetona, de preferência anidro, 2,5 ~ de 7,5 vezes, e a velocidade de adição de água é de 4 ~ 10ml/minuto, de preferência, de 6 ~ 8ml/minuto.

[00044] Um segundo esquema da técnica preferido do método para a preparação do dito composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I é o seguinte: a proporção em volume de acetato de etila, álcool de etila absoluto e acetona anidra no solvente misto sendo 1: 0,1 ~ 10: 0,5 ~ 1, de preferência, 1: 2 ~ ~ 8: 0,8 1.

[00045] Um terceiro esquema da técnica preferido do método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I é o seguinte: a velocidade de agitação de água adicionada pura sendo de 30 ~ 60 r/min, de preferência, de 45 ~ 60 r/min, a velocidade de agitação após adição de água pura sendo de 10 ~ 30 r/min, de preferência, de 10 ~ 20 r/min.

[00046] Um quarto esquema da técnica preferido do método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I é o seguinte: a velocidade de resfriamento após a adição de água pura, sendo 1 ~ 3 °C/hora, de preferência, 1 ~ 1,5 °C/hora.

[00047] A presente invenção também se relaciona com o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II, a difração de raio X em pó do qual medido por Cu-Ka de raios tem picos característicos em 2θ = 10,0 °, 11,6 °, 16,4 °, 17,3 °, 19,1 °, 21,2 °, 22,1 °, 22,7 °, 26,4 °, 26,9 °, 27,5 ° e 31,5 °. O diagrama de difração de raios X em pó está representado na figura 6.

[00048] O método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II é a seguinte: dissolver sólidos levoisovalerilspiramicina composto II em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, resfriando a 5 °C ~ 15 °C depois de adicionar água pura, continuando a agitação durante a refrigeração, em seguida, a obtenção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II.

[00049] Em que, uma primeira técnica do sistema preferível do método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II é a seguinte: o volume de água pura adicional sendo de 2 a 9 vezes o volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona, de preferência anidro, 2,5 ~ de 7,5 vezes, e a velocidade de adição de água, sendo 4 ~ 10ml/minuto, de preferência, de 6 ~ 8ml/minuto.

[00050] Uma segunda solução técnica preferida do método de preparação do referido composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II é a seguinte: a proporção em volume de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra no ser misturado solvente 1: 0,1 ~ 10: 0,5 ~ 1, preferencialmente, 1: 2 ~ ~ 8: 0,8 1.

[00051] Um terceiro esquema da técnica preferido do método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II é o seguinte: a velocidade de agitação de adição de água pura, sendo de 30 ~ 60 r/min, de preferência, de 45 ~ 60 r/min, a velocidade de agitação após adição de água pura sendo de 10 ~ 30 r/min, de preferência, de 10 ~ 20 r/min.

[00052] Um quarto esquema da técnica preferido do método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II sendo: a taxa de resfriamento após a adição de água pura, sendo de 1 ~ 3 °C/hora, de preferência, de 1 ~ 1,5 °C/hora.

[00053] A presente invenção também se relaciona com o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III, a difração de raio X em pó do qual medido por Cu-Ka de raios tem picos característicos em 2θ = ° 8,0, 10,0 °, 11,2 °, 11,7 °, 16,4 °, 19,1 °, 19,6 °, 20,0 °, 21,4 °, 22,9 °, 23,6 ° e 29,4 °. O diagrama de difração de raios X em pó está representado na figura 7.

[00054] O método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III é: dissolver o composto de levoisovalerilspiramicina sólido III em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, resfriando a 5 °C ~ 15 °C depois de adicionar água pura, continuando a agitação durante a refrigeração, em seguida, a obtenção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III.

[00055] Em que, uma primeira técnica do sistema preferível do método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III é: o volume de água pura adicional sendo de 2 a 9 vezes o volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona, de preferência anidro de , 2,5 ~ 7,5 vezes, com a velocidade de adição de água, sendo de 4 ~ 10ml/minuto, de preferência, de 6 ~ 8ml/minuto.

[00056] Um segundo esquema da técnica preferido do método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III é: a proporção em volume de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra no solvente misto sendo de 1: 0,1 ~ 10: 0,5 ~ 1, de preferência, de 1: 2 ~ 8: 0,8 ~ 1.

[00057] Um terceiro esquema da técnica preferido do método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III é: a velocidade de agitação de adição de água pura, sendo de 30 ~ 60 r/min, de preferência, de 45 ~ 60 r/min, a velocidade de agitação após adição de água pura sendo de 10 ~ 30 r/min, de preferência, de 10 ~ 20 r/min.

[00058] Um quarto esquema da técnica preferido do método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III é: a taxa de resfriamento após a adição de água pura, sendo de 1 ~ 3 °C/hora, de preferência, de 1 ~ 1,5 °C/hora.

[00059] As moléculas em diferentes tipos de células de cristal são diferentes na configuração estérica, conformação e arranjo, portanto, a solubilidade é, obviamente, diferentes, o que resulta em uma situação em que as preparações apresentam taxas de digestão diferentes no corpo humano, o que afeta de uma maneira direta a absorção, distribuição, excreção e metabolismo das preparações no corpo humano e, finalmente, conduz à diferença no efeito farmacêutico clínico, devido a disponibilidade biológica diferente. Através da comparação entre o referido efeito de cristal de levoisovalerilspiramicina I, II ou III preparado na presente invenção e levoisovalerilspiramicina I, II ou III, verificou-se que o efeito de cristal de levoisovalerilspiramicina I, II ou III preparado na presente invenção é superior ao de levoisovalerilspiramicina I, II ou III, respectivamente.

[00060] A presente invenção também diz respeito a uma preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I, que inclui o composto cristalino de isovalerilspiramicina I, sal farmacêutico do composto cristalino de isovalerilspiramicina I, o composto cristalino de isovalerilspiramicina I e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, ou sal farmaceuticamente do mesmo do composto cristalino de isovalerilspiramicina I e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, em que, a pureza do composto cristalino de isovalerilspiramicina I é superior a 99% em peso;

[00061] A presente invenção também diz respeito a uma preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II, a qual inclui o composto cristalino de isovalerilspiramicina II, sal farmacêutico do composto cristalino de isovalerilspiramicina II, o composto cristalino de isovalerilspiramicina II e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, ou sal farmaceuticamente do mesmo do composto cristalino de isovalerilspiramicina II e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, em que, a pureza do composto cristalino de isovalerilspiramicina II é acima de 99% em peso;

[00062] A presente invenção também diz respeito a uma preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III, a qual inclui o composto cristalino de isovalerilspiramicina III, sal farmacêutico do composto cristalino de isovalerilspiramicina III, o composto cristalino de isovalerilspiramicina III e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, ou sal farmaceuticamente do mesmo do composto cristalino de isovalerilspiramicina III e o adjuvante farmaceuticamente aceitável, em que, a pureza do composto cristalino de isovalerilspiramicina III é superior a 99% em peso.

[00063] A presente invenção também se relaciona com um uso de isovalerilspiramicina I, o composto cristalino e a sua preparação na preparação de um fármaco para o tratamento e/ou para a prevenção de doenças anti-infecciosas, a presente invenção também se relaciona com um uso de isovalerilspiramicina II, o composto cristalino e a preparação mesmo na preparação de um fármaco para o tratamento e/ou para a prevenção de doenças anti-infecciosas, a presente invenção também se relaciona com um uso de isovalerilspiramicina III, o composto cristalino e a sua preparação na preparação de um fármaco para o tratamento e/ou para a prevenção de doenças anti-infecciosas. As doenças infecciosas incluem as doenças causadas pela bactéria gram-positivas, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis, piogênico streptococci, Micrococcus catarrhalis, gonococo, influenzae bacila, legionela ou anaeróbio.

[00064] A presente invenção também se relaciona com um uso de isovalerilspiramicina I, o composto cristalino e a sua preparação para a preparação de um antibiótico, a presente invenção também se relaciona com um uso de isovalerilspiramicina II, o composto cristalino e a sua preparação para a preparação de um antibiótico, a presente invenção refere-se também ao uso de isovalerilspiramicina III, o composto cristalino e a sua preparação na preparação de um fármaco antibiótico. As bactérias aqui incluem Streptococcus pneumoniae, Streptococcus do grupo A, piogênico streptococci, enterococos, Staphylococcus aureus, Aureus, cocos catarral, gonococo, bacila bacila influenzae, Escherichia coli, Escherichia coli enterotoxigênica, Escherichia coli enteropatogênica, Escherichia coli enteroinvasivos, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, vulgaris bacila proteus, bacila tifoide, Acinetobacter, Citrobacter, Serratia marcescens, S.Sonnei, Sh.flexneri, álbum Tritirachium; legionella como legionella pneumophila, gormanii legionella, bozemanii legionella, dumoffii legionella, jordanis legionella, e micdadei legionella; anaeróbio como Bacteroides fragilis, B.thetaiotaomicron, B.vulgatus, B.distasonis, B. Prevotella, asaccharolyticus Prevotella, Prevotella oralis, Fusobacteriumnu cleatum, Fusobacterium russll, lactobacilas, bifidobactérias, Peptostreptococcus, Propionibacterium acnes, Clostridium perfringens, e fungo do tipo levedura.

[00065] O que se segue é uma descrição mais pormenorizada da presente invenção.

[00066] A presente invenção refere-se a levoisovalerilspiramicina I, o qual é obtido por meio do ajuste e por meio da optimização da cultura e das condições de fermentação e um controle rigoroso do valor do pH da solução.

[00067] A presente invenção refere-se a levoisovalerilspiramicina II, o qual é obtido por meio do ajuste e da optimização da cultura e das condições de fermentação e um controle rigoroso do valor do pH da solução.

[00068] A presente invenção refere-se a levoisovalerilspiramicina III, o qual é obtido por meio do ajuste e da optimização da cultura e das condições de fermentação e um controle rigoroso do valor do pH da solução.

[00069] Levoisovalerilspiramicina I, II ou III da presente invenção tem uma boa atividade anti-bacteriana, o que acrescenta uma nova variedade aplicável para a injeção de fármacos antibióticas e apresenta uma nova solução para o problema técnico da presente resistência aos antibióticos.

[00070] Em que, o método de medição de rotação específico de levoisovalerilspiramicina I, II ou III na presente invenção é: precisamente a ponderação deste produto, adicionando clorofórmio para dissolução, diluindo-o em uma solução com 20mg/ml, adotando a linha D do espectro de sódio (589,3nm ) com a finalidade de medir a atividade ótica a um comprimento de medição de 1 dm e uma temperatura de 25 °C, e utilizando um polarímetro, que tem uma leitura de 0,0001 ° e tem sido previamente calibrado.

[00071] O método de medição de ponto de fusão de levoisovalerilspiramicina I, II ou III na presente invenção é o seguinte: colocar levoisovalerilspiramicina I, II ou III seco com uma quantidade adequada de um tubo capilar de ponto de fusão utilizado para a medição, a medição do ponto de fusão, repetir a medição para 3 vezes com a finalidade de obter um valor médio.

[00072] A presente invenção também se relaciona com a preparação contendo levoisovalerilspiramicina I, II ou III, a qual inclui levoisovalerilspiramicina I e veículo e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável, em que a pureza da levoisovalerilspiramicina I, II ou III é superior a 90% em peso, de preferência, mais de 95% em peso, e ainda mais preferivelmente, mais de 98% em peso.

[00073] A preparação contendo levoisovalerilspiramicina I, II ou III, ou o seu composto cristalino prefere a solução para a injeção, pó para a injeção e pó liofilizado para a injeção. A preparação de um único componente, contendo levoisovalerilspiramicina I, II ou III é efetuada em uma solução para a injeção ou pó para a injeção, de modo que a preparação de levoisovalerilspiramicina I, II ou III na presente invenção pode ser melhor absorvida pelo corpo humano, para ter efeito em anti - infecção.

[00074] A preparação contendo levoisovalerilspiramicina I na presente invenção inclui a unidade de dosagem seguinte: levoisovalerilspiramicina I a 10 ~ 1500mg, de preferência, 50 ~ 1000 mg, e ainda mais preferivelmente, 100 a 500 mg;

[00075] A preparação contendo levoisovalerilspiramicina II na presente invenção inclui a unidade de dosagem seguinte: levoisovalerilspiramicina II a 10 ~ 1500mg, de preferência, 50 ~ 1000 mg, e ainda mais preferivelmente, 100 a 500 mg;

[00076] A preparação contendo levoisovalerilspiramicina III na presente invenção inclui a unidade de dosagem seguinte: levoisovalerilspiramicina III a 10 ~ 1500mg, de preferência, 50 ~ 1000 mg, e ainda mais preferivelmente, 100 a 500 mg.

[00077] A preparação contendo o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I na presente invenção inclui a unidade de dosagem seguinte: composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I a 10 ~ 1500mg, de preferência, 50 ~ 1000 mg, e ainda mais preferivelmente, 100 a 500 mg;

[00078] A preparação contendo o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II na presente invenção inclui a unidade de dosagem seguinte: composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II a 10 ~ 1500mg, de preferência, 50 ~ 1000 mg, e ainda mais preferivelmente, 100 a 500 mg;

[00079] A preparação contendo o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III na presente invenção inclui a unidade de dosagem seguinte: composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III a 10 ~ 1500mg, de preferência, 50 ~ 1000 mg, e ainda mais preferivelmente, 100 a 500 mg.

[00080] A percentagem em peso de levoisovalerilspiramicina I na preparação contendo levoisovalerilspiramicina I na presente invenção é de 10 ~ 90%, de preferência, 50 a 90%, e ainda mais preferivelmente, 75% a 90%;

[00081] A percentagem em peso de levoisovalerilspiramicina II na preparação contendo levoisovalerilspiramicina II na presente invenção é de 10 ~ 90%, de preferência, 50 a 90%, e ainda mais preferivelmente, 75% a 90%;

[00082] A percentagem em peso de levoisovalerilspiramicina III na preparação contendo levoisovalerilspiramicina III na presente invenção é de 10 ~ 90%, de preferência, 50 a 90%, e ainda mais preferivelmente, 75% a 90%.

[00083] A percentagem em peso do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I na preparação de composto levoisovalerilspiramicina I contendo o composto cristalino da presente invenção é de 10 ~ 90%, de preferência de 50 ~ 90%, ainda mais preferencialmente de 75% a 90%;

[00084] A percentagem em peso do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II na preparação contendo o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II na presente invenção é de 10 ~ 90%, de preferência, de 50 a 90%, e ainda mais preferivelmente, de 75% a 90%;

[00085] A percentagem em peso do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III na preparação contendo levoisovalerilspiramicina cristal do composto III na presente invenção é de 10 ~ 90%, de preferência, de 50 a 90%, e ainda mais preferivelmente, de 75% a 90%.

[00086] A preparação oral na presente invenção pode conter excipientes comuns, tais como adesivo, material de enchimento, diluentes, agentes de prensagem de comprimido, agente lubrificante, desintegrante, corante, condimento ou umectante, e o comprimido pode ser revestido se necessário. Em que, o material de enchimento aplicável inclui celulose, manitol, lactos e outros materiais de enchimento semelhantes, agente de desintegração aplicável inclui amido, polivinilpirrolidona e derivados de amido como o glicolato de amido sódico; o desintegrante aplicável inclui, por exemplo, estearato de magnésio, e umectante farmaceuticamente aceitável aplicável inclui lauril sulfato de sódio.

[00087] A preparação oral sólida da presente invenção pode ser preparada através de métodos comuns, tais como mistura, material de enchimento e compressão.

[00088] A preparação oral líquida da presente invenção pode estar na forma de, por exemplo, à base de água ou à base de óleo de suspensão, solução, emulsão, xarope ou elixir, ou pode ser um produto de secagem, que pode ser repetido por meio da água ou por meio de outros veículo aplicável antes do uso. Esta preparação líquida pode conter os aditivos convencionais, tais como agente de suspensão como xarope de sorbitol, metilcelulose, gelatina, hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio ou gorduras hidrogenadas comestíveis e emulsionante, como a lecitina, o oleato de sorbitano ou goma arábica; veículos não- aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), tais como óleo de amêndoa, óleo de coco fraccionado e éster de óleo tal como glicerol, propilenoglicol ou etanol; conservantes, tais como parabenos ou ácido 4-hidroxibenzoato de propila ou ácido sórbico, além disso, podem conter os agentes aromatizantes convencionais ou corante, se necessário.

[00089] A injeção da presente invenção pode conter quaisquer veículos e/ou excipiente comuns medicinais, agente estabilizador, antioxidante, agente complexante, ou conservantes medicinais, agentes tampão ou anestésicos locais e similares. A injeção é preparada com o método de preparação convencional.

[00090] Os veículos farmaceuticamente aceitáveis para a preparação da presente invenção são seleccionados de entre: manitol, sorbitol pirossulfito de sódio, bissulfito de sódio, tiossulfato de sódio, cloridrato de cristeína, ácido mercaptoacético, metionina, vitamina C, EDTA dissódico, EDTA de cálcio e sódio, carbonato monossódico, acetato , fosfato ou a sua solução aquosa, ácido muriático, ácido acético, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido amino, cloreto de sódio, cloreto de potássio, lactato de sódio, xilitol, maltose, glicose, frutose, dextrano, glicina, amido, açúcar, lactose, manitol, derivados de silício, celulose e os derivados dos mesmos, alginato, gelatina, polivinilpirrolidona, glicerina, tween-80, agar, carbonato de cálcio, bicarbonato de cálcio, o agente tensioativo, polietilenoglicol, ciclodextrina, β-ciclodextrina, materiais de fosfolípidos, o caulino, o talco, cálcio estearato, estearato de magnésio, etc

[00091] A utilização e a dosagem da preparação da presente invenção baseiam-se nas situações práticas dos pacientes. Pode ser tomado por via oral ou injetada por 1 a 3 vezes com 1 ~ 20 doses de cada vez ao dia.

[00092] Os efeitos benéficos da presente invenção são os seguintes:

[00093] (1) levoisovalerilspiramicina I, II ou III da presente invenção, tem um bom desempenho anti-bacteriana. De acordo com estudos farmacológicos modernos, devido a uma diferença na estereosselectividade de enantiômeros de fármacos, a afinidade de um fármaco para cada receptor também é diferente, o que resulta em grandes diferenças na acção farmacológica. Portanto, levoisovalerilspiramicina I, II ou III da presente invenção tem uma forte atividade farmacológica;

[00094] (2) as moléculas em diferentes tipos de células de cristal são diferentes de configuração estérica em conformação, e arranjo, portanto, a solubilidade é, obviamente, diferente, o que resulta em uma situação em que as preparações têm diferentes taxas de digestão no corpo humano, o que afeta de uma maneira direta a absorção, excreção, distribuição e metabolismo das preparações no corpo humano e, finalmente, conduz à diferença no efeito farmacêutico clínico, devido a disponibilidade biológica diferente. Através da comparação entre o efeito composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I, II ou III preparado na invenção e Levoisovalerilspiramicina I, II ou III, verificou- se que o efeito de cristal de levoisovalerilspiramicina I, II ou III preparado na presente invenção é superior ao de levoisovalerilspiramicina I, II ou III, respectivamente.

[00095] (3) a injeção contendo único componente de levoisovalerilspiramicina I, II ou III, ou a injeção contendo componente individual do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I, II ou III proporciona uma possibilidade de uma forma de dosagem, que pode ter efeito rapidamente e facilmente ser aceito para os pacientes criticamente doentes ou aqueles que não podem tomar fármacos por via oral;

[00096] (4) A preparação contendo único componente de levoisovalerilspiramicina I, II ou III, ou a preparação que contém o componente único do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I, II ou III da presente invenção, dispor de um processo de produção estável, e um padrão de qualidade controlado facilmente, aplicando a grande escala de produção industrial.

Breve Descrição dos Desenhos:

[00097] Figura 1 mostra o cromatograma recolhido por meio do desencadeamento ultravioleta de levoisovalerilspiramicina I, II ou III, na modalidade 1;

[00098] Figura 2 mostra a curva de variação do valor de pH ao longo do tempo do processo de fermentação em uma modalidade da presente invenção;

[00099] Figura 3 mostra a curva de variação do valor de pH ao longo do tempo do processo de fermentação, na modalidade 2 de da presente invenção;

[000100] Figura 4 mostra a curva de variação do valor de pH ao longo do tempo do processo de fermentação na modalidade 3 da presente invenção;

[000101] Figura 5 mostra o diagrama de raios X de difração de pó de levoisovalerilspiramicina I da presente invenção;

[000102] Figura 6 mostra o diagrama de raios X de difração de pó de levoisovalerilspiramicina II da presente invenção;

[000103] Figura 7 mostra o diagrama de raios X de difração de pó de levoisovalerilspiramicina III da presente invenção.

[000104] As seguintes modalidades apenas explicam e interpretam a presente invenção, mas não têm qualquer limite para o teor da presente invenção.

Modalidades Modalidade 1 - Separação e preparação de levoisovalerilspiramicina I, II e III

[000105] (1) fermentação biológica: a cultura das cepas fúngicas clonadas WSJ-195 produzidas por meio da espiramicina contendo gene transferase de 4 "-isovalerila em um meio de cultura de agarslant contendo 2% farinha de bagaço de soja, 1% de glicose, 3%de amido, 0,5% de CaCO3, 0,4% de NaCl e 2% de agar durante 8 ~ 15 dias sob pH 6,5 ~ 7,5 e temperatura de 28 ~ 38 °C, seguida da inoculação de um meio de sementeira, contendo 1,5% de farinha de bagaço de soja, 3,0% deamido, 0,4% de NaCl, 0,5% de CaCO3, 0,3% de peptona de peixe e 0,05% de KH2PO4 a serem cultivadas durante 40 ~ 80 horas sob pH 6,5 ~ 7,5 e temperatura de 25 ~ 30 °C, implantação de um meio de fermentação contendo 0,5% de glicose, 6,0% de amido, 0,5% de pó de levedura, 2,0% de farinha de peixe , 0,6% de NH4NO3, 1,0% de NaCl, 0,5% de CaCO3, 0,05% de KH2PO4, 0,1% de MgSO4, 0,5% de óleo de soja a e 0,02% de agente anti-espuma a serem cultivadas durante 72 ~ 120 horas, sob pH 6,5 ~ 7,5, temperatura 26 ~ 30 °C, e ~20% de 0,1 quantidade de inoculação de, então a obtenção de licor de fermentação.

[000106] Em que, estritamente controlar o valor de pH da solução por meio do ajuste e optimização de cultura e condições de fermentação; produto de fermentação de 120h, na condição de ~ 9,0, pH 6,0, e as curvas de variação do pH ao longo do tempo mostra três fases contínuas, em que, na primeira fase satisfaz fórmula y1 = 0,1364x1 6,0, em que 0 < x1 < 22; satisfaz os de segunda fase fórmula y2 =-0,0735x2 10,64, em que 22 < x2 < 56, e os preenche terceira fase fórmula y3 = 6,06 0,0078x3 , em que 56 < x3 < 120. A figura 2 mostra as curvas. O licor de fermentação é obtido.

[000107] (2) extração do licor de fermentação biológica: procedendo- se ao licor de fermentação obtido na etapa (1) com sulfato de alumínio com a finalidade de se obter filtrado, regulando o pH para 8,5, utilizando- se o acetato de butila para a extração, a limpeza extrato de acetato de butila, respectivamente, com uma solução não-salina e 1% de NaH2PO4, em seguida, usando pH2,0 água para a extração com a finalidade de se obter extrato aquoso, regulando o pH para 4,5, volatilizando e eliminando o acetato de butila residual com a finalidade de obter o extrato de água, filtrando, e regulando o pH para pH 8,5, precipitando-se o filtrado e a lavagem com água purificada com a finalidade de se obter o produto úmido, e secando-a com a finalidade de obter levocarrimicina.

[000108] (3) purificação de levoisovalerilspiramicina I, II e III: purificar a amostra previamente separada por meio da cromatografia líquida preparativa, eluindo-se gradualmente através de coluna cromatográfica ODS em acetonitrila e solução tampão de acetato de amônio, e a gravação do separação do diagrama do espectro ultravioleta através de detecção por UV, e recolhendo o pico do componente alvo de levoisovalerilspiramicina I, II ou III. Coluna cromatográfica: coluna cromatográfica preparada de ODS; Fase móvel: acetonitrila (A), acetato de amônio a 100 mM de uma solução aquosa (B); Condição Gradiente: gradiente linear de 0 ~ 60 minutos, um sendo de 25% ~ 65%, e 61 ~ 90 minutos, um sendo de 65% ~ 90%; Velocidade de fluxo: 260 mL/min; Tamanho da amostra: 10 ml; Concentração da amostra: 0,5 g/mL; Medição de comprimento de onda: 231nm; Forma de coleta: coleta através de disparo UV.

[000109] Recolhendo a amostra de levoisovalerilspiramicina I com base no tempo de retenção de 44,759 min, amostra de levoisovalerilspiramicina com base no tempo de retenção de 43,34 min, e a amostra de levoisovalerilspiramicina III com base no tempo de retenção de 48,009 min.

[000110] Eliminando acetonitrila na levoisovalerilspiramicina I, II ou III recolhida, respectivamente, com o método de evaporação rotativa, em seguida, utilizando acetato de etila dobrado para a extração, a eliminação do acetato de etila no extrato com evaporar rotativo, e a obtenção de amostra de pasta; re-dissolução da amostra obtida em éter de petróleo , eliminando-se o éter de petróleo com evaporação rotativa com a finalidade de se obter, respectivamente, o pó branco de levoisovalerilspiramicina I, II ou III. Modalidade 2 - Separação e preparação de levoisovalerilspiramicina I, II e III

[000111] (1) fermentação biológica: a cultura das cepas fúngicas clonadas WSJ-195 produzidas por meio da espiramicina contendo gene transferase de 4 "-isovalerila em um meio de cultura de agarslant contendo 2% de farinha de bagaço de soja, 1% de glicose, 3% de amido, 0,5% de CaCO3, 0,4% de NaCl e 2% de agar, durante 12 dias, sob pH 7,2 e temperatura de 32 °C, seguida da inoculação de um meio de sementeira, contendo 1,5% de farinha de bagaço de soja, 3,0% de amido, 0,4% de NaCl, 0,5% de CaCO3, 0,3% de peptona de peixe e 0,05% de KH2PO4 e a cultura durante 70 horas, sob pH 7,2 e temperatura de 27 °C, implantação de um meio de fermentação contendo 0,5% de glicose, 6,0% de amido, 0,5% de pó de levedura, 2,0%, farinha de peixe, 0,6% de NH4NO3, 1,0% de NaCl, 0,5% de CaCO3, 0,05% de KH2PO4, 0,1% de MgSO4, 0,5% de óleo de soja e 0,02% de anti-espumante, e a cultura durante 100 horas, sob pH 6,0 ~ 9,0, temperatura 26 °C e quantidade de inoculação de 12%, então a obtenção de licor de fermentação. produto de fermentação para pH 6,0 sob 110H ~ 8,0, e as curvas de variação do pH ao longo do tempo mostra três fases contínuas, em que, de primeira fase os satisfaz a fórmula = y1 0,0909x1 6,4, em que 0 < x1 < 22; satisfaz os de segunda fase fórmula y2 = 7,8-0,0441x2 , em que 22 < x2 < 56, e a terceira fase satisfaz fórmula y3 = 0,0078x3 6,06, no qual 56 < x3 < 110 Figura 3 mostra as curvas de licor de fermentação que são obtidas. Vide Figura 3, para as curvas de controle específicas.

[000112] (2) extração do licor de fermentação biológica: procedendo- se ao licor de fermentação na etapa (1) com sulfato de alumínio com a finalidade de se obter filtrado, regulando o pH para 8,6, utilizando-se acetato de butila para a extração, a limpeza extrato de acetato de butila, respectivamente, com uma solução não-salina e 1% de NaH2PO4 , em seguida, com água com pH 2,3, para a extração com a finalidade de se obter o extrato aquoso, regulando o pH para 5,0, volatilizar e eliminando o acetato de butila residual com a finalidade de obter extrato de água, filtrar, e regulando o pH para pH8,6, precipitando-se o filtrado e lavagem com água purificada com a finalidade de se obter o produto úmido, e secando-a com a finalidade de obter levocarrimicina.

[000113] (3) purificação de levoisovalerilspiramicina I, II ou III: purificar a amostra separada preliminarmente através de cromatografia líquida preparativa, eluindo-se gradualmente através de coluna de cromatografia preparativa de ODS em acetonitrila e tampão de acetato de amônia, a gravação do separação do diagrama do espectro ultravioleta através de detecção por UV, e recolhendo o pico alvo do componente de levoisovalerilspiramicina I, II ou III. Coluna cromatográfica: coluna cromatográfica preparativa ODS; Fase móvel: acetonitrila (A), acetato de amônio a 100 mM em uma solução aquosa (B); Condição Gradiente: gradiente linear de 0 ~ 60 minutos, um sendo de 25% ~ 65%, e 61 ~ 90 minutos, um sendo de 65% ~ 90%; Velocidade de fluxo: 260 mL/min; Tamanho da amostra: 10 ml; Concentração da amostra: 0,5 g/mL; Medição de comprimento de onda: 231nm; Forma de coleta: coleta através de disparo UV.

[000114] Recolhendo levoisovalerilspiramicina I da amostra com base no tempo de retenção de 44,759 min, amostra de levoisovalerilspiramicina II com base no tempo de retenção de 43,34 min e amostra de levoisovalerilspiramicina III, com base no tempo de retenção de 48,009 minutos;

[000115] Eliminando a acetonitrila em levoisovalerilspiramicina I, II ou III recolhidos, respectivamente, com o método de evaporação rotativa, em seguida, utilizando acetato de etila dobrado para a extração, a eliminação do acetato de etila no extrato com evaporação rotativa, e a obtenção de amostra de pasta; re-dissolução da amostra obtida em éter de petróleo , eliminando-se o éter de petróleo com evaporação rotativa com a finalidade de se obter, respectivamente, o pó branco de levoisovalerilspiramicina I, II ou III. Modalidade 3 - Separação e preparação de levoisovalerilspiramicina I, II e III

[000116] (1) A cultura e fermentação: a cultura das cepas fúngicas clonadas WSJ-195 produzidas por meio da espiramicina contendo gene transferase de 4 "-isovalerila em um meio de cultura agarslant, de inoculação de um meio de semente a ser cultivada e, em seguida para inocular o meio de fermentação, e os processo de fermentação para pH 6,0 com menos de 115h ~ 7,5, que é controlado por meio da glicose e de ácido cítrico, durante o processo de fermentação. As curvas de variação do pH ao longo do tempo mostra as três fases contínuas, em que, a primeira fase satisfaz a fórmula y1 = 0,0682x1 6,0, em que 0 < x1 < 22; a segunda fase satisfaz a fórmula y2 =-0,0294x2 8,147, em que 22 < x2 < 56, e a terceira fase satisfaz fórmula y3 = 0,0078x3 6,06, em que 56 < x3 < 115 A figura 4 mostra as curvas. O licor de fermentação é obtido.

[000117] (2) extração do licor de fermentação biológica: procedendo- se ao licor de fermentação na etapa (1) com sulfato de alumínio com a finalidade de se obter o filtrado, regulando o pH para 8,6, utilizando-se acetato de butila para a extração, usando acetato de butila limpeza para extração, respectivamente, com uma solução não-salina e 1% de NaH2PO4 , em seguida, com água com pH 2,3, para a extração com a finalidade de se obter o extrato aquoso, regulando o pH para 5,0, volatilizando e eliminando o acetato de butila residual com a finalidade de obter extrato de água, filtrar, e regular o pH para um pH de 8,6, precipitando-se o filtrado e lavagem com purificado água com a finalidade de obter o produto úmido, e secando-a com a finalidade de obter levocarrimicina.

[000118] (3) purificação de levoisovalerilspiramicina I, II ou III: purificar a amostra previamente separada por meio da cromatografia líquida preparativa, eluindo-se gradualmente através de Coluna de cromatografia preparativa de ODS em acetonitrila e tampão de acetato de amônia, a gravação da separação do diagrama do espectro ultravioleta através de detecção por UV, e recolhendo o pico componente alvo de levoisovalerilspiramicina I, II ou III. Coluna cromatográfica: adotar Coluna cromatográfica preparativa de ODS; Fase móvel: acetonitrila (A), acetato de amônio a 100 mM de uma solução aquosa (B); Condição Gradiente: gradiente linear de 0 ~ 60 minutos, um sendo de 25% ~ 65%, e 61 ~ 90 minutos, um sendo de 65% ~ 90%; Velocidade de fluxo: 260 mL/min; Tamanho da amostra: 10 ml; Concentração da amostra: 0,5g/mL; Comprimento de onda de detecção: 231nm; Método de coleta: coleta através do gatilho UV;

[000119] Coleta da amostra de levoisovalerilspiramicina I com base no tempo de retenção de 44,759 min, amostra de levoisovalerilspiramicina II com base no tempo de retenção de 43,34 min e amostra de levoisovalerilspiramicina III com base no tempo de retenção de 48,009 min;

[000120] Eliminando acetonitrila em levoisovalerilspiramicina I, II ou III recolhidos, respectivamente, com o método de evaporação rotativa, em seguida, utilizando acetato de etila dobrado para a extração, a eliminação do acetato de etila no extrato com evaporador rotativo com a finalidade de obter a amostra da pasta; re-dissolução da amostra obtida em éter de petróleo, eliminando o éter de petróleo com evaporação rotativa com a finalidade de se obter, respectivamente, o pó branco de levoisovalerilspiramicina I, II ou III. Modalidade 4 - Preparação da solução para a injeção de Levoisovalerilspiramicina I

[000121] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de isovalerilspiramicina I e de ácido adípico com molar igual, e dissolvendo- se em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000122] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume na solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000123] (3) enchimento, selagem, esterilização, inspeção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 5 - Preparação de solução para a injeção de isovalerilspiramicina I

[000124] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de isovalerilspiramicina I e do ácido cítrico com molar igual, e dissolvendo- se em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000125] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume na solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000126] (3) enchimento, selagem, esterilização, inspeção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 6 - Preparação de solução para a injeção de isovalerilspiramicina I

[000127] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de isovalerilspiramicina I e ácido maleico com molar igual, e dissolvendo- se em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000128] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução do volume de solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000129] (3) enchimento, selagem, esterilização, inspeção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 7 - Preparação de pó de injeção de levoisovalerilspiramicina I

[000130] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de levoisovalerilspiramicina I e do ácido cítrico com molar igual, e dissolvendo-se em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000131] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume na solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000132] (3) adição de 30 ~ 150 mg de manitol como propante de liofilização; congelação rápida para 9h sob uma baixa temperatura, e a secagem com a finalidade de se obter caroço solto amarelo claro, depois de nivelamento, inspeção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 8 - Preparação 8 de pó de injeção de levoisovalerilspiramicina I

[000133] (1) misturar de maneira uniforme 100mg levoisovalerilspiramicina I e ácido maleico com molar igual, e dissolvendo-se em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000134] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume, da solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000135] (3) adição de 30 ~ 150 mg de manitol como propante de liofilização; congelação rápida para 9h sob uma baixa temperatura, e a secagem com a finalidade de se obter caroço solto amarelo claro, depois de nivelamento, inspecção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 9 - Preparação de pó de injeção de levoisovalerilspiramicina I

[000136] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de levoisovalerilspiramicina I e do ácido cítrico com molar igual, e dissolvendo-se em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000137] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume na solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000138] (3) adição de 30 ~ 150 mg de manitol como propante de liofilização; congelação rápida para 9h sob uma baixa temperatura, e a secagem com a finalidade de se obter caroço solto amarelo claro, depois de nivelamento, inspeção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 10 - Comprimidos de Levoisovalerilspiramicina I (calculado em 1000 comprimidos) Fórmula: Levoisovalerilspiramicina I 100g Baixa substituição de hidroxipropilcelulose (5%) 9,25g Carboximetilamido de sódio (3%) Estearato de magnésio (1%) Amido 5,55 g 1,85 g Total de Peso - peso de outros adjuvantes Peso total 185g

[000139] Processo de Preparação: pesagem de amido apropriado e diluindo a 15% da concentração, aquecendo-a até uma pasta para a preparação de adesivo; peneiração de carrimicina como componente ativo, os adjuvantes contendo amido, hidroxipropil-celulose de baixa substituição, amido de carboximetila de sódio e estearato de magnésio respectivamente, com uma peneira de malha 100 , e pesando o componente ativo e o adjuvantes necessários de acordo com a fórmula; totalmente mistura de levoisovalerilspiramicina I, de amido e de hidroxipropil-celulose de baixo grau de substituição, utilizando pasta de amido de 15% para preparar um material macio, fazendo o material macio em grânulos com malha 14, secagem sob 50 a 60 °C até que o conteúdo de água seja controlado a 3 a 5%; triagem dos grânulos com malha 14, adicionando amido de carboximetila de sódio e estearato de magnésio por meio da mistura, a determinação do teor de grânulos; calcular o peso de cada comprimido de acordo com o conteúdo de grânulos, pressionando os comprimidos (Φ9mm dimple punch), detectando a diferença de peso comprimido, e depois embalar os comprimidos qualificados após a detecção. Modalidade 11 - Cápsulas de Levoisovalerilspiramicina (calculada em 1,000 cápsulas) Fórmula: pó bruto de Levoisovalerilspiramicina I 100g Amido (para uso farmacêutico) 108 - pó bruto de levoisovalerilspiramici na em peso cápsula farmacêutica No. 3 100 grânulos parafina líquida 5ml

[000140] Processo de Preparação: pesagem de levoisovalerilspiramicina I como ingrediente ativo, o amido do adjuvante (para utilização farmacêutica), respectivamente, de acordo com a fórmula e, em seguida, colocá-lo em um misturador para misturar completamente para 1,5 a 2 horas, e os dados do conteúdo da amostra devem ser detectados, basicamente, de acordo com os dados teóricos (cerca de 0,105 g para cada cápsula). Enchendo a cápsula farmacêutica No,3 e o material misturado a ser preenchido no material de enchimento de acordo com os requisitos de operação da máquina automática de enchimento da cápsula; detectar a diferença das cápsulas cheias (dentro de ± 10%, < 0,3 g) e taxa de dissolução, colocar as cápsulas em conformidade para a máquina de vidro e adicionando parafina líquida para vidros por 15 a 20 minutos, e depois tirar para a detecção de caixa de embalagem do produto acabado Modalidade 12 - Comprimidos revestidos de açúcar de Levoisovalerilspiramicina I (calculados em 1000 comprimidos) Fórmula: a mesma que da Modalidade 10

[000141] Processo de Preparação: De acordo com o método de operação dado na Modalidade 12, colocando os núcleos de comprimidos em conformidade em uma panela para revestimento de açúcar e o xarope preparada (concentração de 65% a 70%) sendo lentamente colocado na panela, em seguida, aumentando a temperatura para cerca de 40 °C, adicionando pó de talco apropriado, soprando repetidamente com a finalidade de secar durante 25 a 30 minutos, até que o sub-revestimento venha a ser simples, em seguida, para o revestimento de camada de 15 a 20 minutos até que o açúcar venha a ser simples, de camada de revestimento do revestimento com a cor requerida; colocando a pasta de cor preparada no xarope para a mistura uniforme e em seguida vertendo a mistura na panela; agitando a mistura de maneira uniforme por diversas vezes, 15 a 20 de cada vez. Modalidade 13 - Xarope de Levoisovalerilspiramicina I (calculado em 1000 sacos) Fórmula: Pó bruto de Levoisovalerilspiramicina I 125g Ácido cítrico (0,5%) 1,5 g cana de açúcar Peso total - outros adjuvantes Peso total cerca de 50g Pigmento (curcumina) cerca de 0,1 g

[000142] Processo de Preparação: esmagamento de pó bruto de levoisovalerilspiramicina I, o ácido cítrico e de cana de açúcar em grânulos, respectivamente, com misturador pneumático de alta velocidade, com 85% grânulos através de peneira de malha 300 e 15% de grânulos através de malha 180, e, em seguida, pesando o pó fino esmagado de acordo com à fórmula e totalmente misturado durante 1 a 1,5 horas, a medição do teor e calculando a quantidade de enchimento (500 mg por saco teoricamente), em seguida, enchendo-se a mistura para o ensacador, enchendo o papel aluminizado, e dispensa-se a mistura de acordo com os requisitos de operação do distribuidor, com diferença de enchimento dentro de ± 5%, e examinando para a qualificação, após o enchimento, e, finalmente, empacotamento. Modalidade 14 - Comprimidos revestidos entéricos de Levoisovalerilspiramicina I (calculado em 1000 comprimidos) Fórmula: referente à modalidade 10.

[000143] Processo de Preparação: preparação de núcleos de comprimidos de acordo com a modalidade 5; colocando os núcleos de comprimidos em conformidade na panela de revestimento de açúcar, xarope utilizando 60 a 70% de pó de talco e de três camadas de revestimento como camada de revestimento de base e, em seguida, a camada de revestimento de isolamento, adicionando solução de álcool a 10% de zeína, secagem durante 10 a 15 minutos com o método de sobreposição, em seguida, deixando cair orto-ftalato de dictila, acetona, acetato ftalato de celulose, e solução de álcool, ou seja, a solução intestinal na panela, e secagem por 2 a 3 vezes com método de capotamento, efetuar cobertura de açúcar de acordo com a Modalidade 13 após conforme a qualificação no exame. Modalidade 15 - Comprimidos revestidos gástricos de Levoisovalerilspiramicina I (calculados em 1000 comprimidos) Fórmula: referem-se à Modalidade 10.

[000144] Processo de Preparação: preparação de núcleos de comprimidos de acordo com a modalidade 11, colocando os núcleos de comprimidos em conformidade para uma máquina de revestimento de alta eficiência, e, em seguida, fazendo com que o revestimento em pó seja qualificado (incluindo solúvel em gordura e solúvel em água) em solução de revestimento de acordo com os requisitos, e colocando a solução de revestimento para o moinho coloidal para trituração, e filtragem para utilização. O pré-aquecimento da panela de revestimento de alta eficiência preenchido com núcleos de comprimido, com uma velocidade de rotação dentro de 5 a 10 rpm e a temperatura a 45 ~ 60 °C, pulverizando a solução de revestimento na panela com pulverizador de aerossol (> malha 300), e, em seguida, secagem por 25 a 35 minutos, levando a cabo o processo repetidamente para 8 a 12 vezes, até que o revestimento seja uniforme, e, finalmente, após secagem e embalagem em conformidade por meio de inspecção. Modalidade 16 - Grânulos de Levoisovalerilspiramicina I (calculado em 1000 sacos) Fórmula: Pó bruto de Levoisovalerilspiramicina I 125g Açúcar em pó 2000g Dextrina 900g 5% de PVP-K30 Apropriada

[000145] Processo de Preparação: a triagem de pó bruto de levoisovalerilspiramicina I, açúcar em pó, e dextrina, com peneira de malha 120, pesando levoisovalerilspiramicina I, açúcar em pó e dextrina de acordo com a fórmula, e misturando-os de maneira uniforme, o que faz com que o material seja de maneira uniforme misturado como mencionado acima em um material macio com 5% de mucilagem de PVP -K30; preparação do material em grânulos com granulador oscilante, a secagem dos grânulos em 70 °C, triagem dos grânulos, e, em seguida, a embalagem depois dos mesmos serem inspecionados como que qualificados. Modalidade 17 - Preparação da solução para a injeção de levoisovalerilspiramicina II

[000146] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de isovalerilspiramicina II e ácido adípico com molar igual, e dissolvendo em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000147] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume, da solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000148] (3) vedação, esterilização, inspeção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 18 - Preparação da solução para a injeção de levoisovalerilspiramicina II

[000149] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de isovalerilspiramicina II e ácido cítrico com molar igual, e dissolvendo em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000150] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume, da solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000151] (3) vedação, esterilização, inspeção e embalagem a solução sob condições assépticas. Modalidade 19 - Preparação de pó para a injeção de levoisovalerilspiramicina II

[000152] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de isovalerilspiramicina II e ácido cítrico com molar igual, e dissolvendo em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000153] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume, da solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000154] (3) adição de 30 ~ 150 mg de manitol como propante de liofilização; congelação rápida para 9h sob uma baixa temperatura, e a secagem com a finalidade de se obter solto amarelo claro, e depois capeamento, inspeção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 20 - Preparação de comprimidos de levoisovalerilspiramicina II (calculado em 1000 comprimidos) Fórmula: Levoisovalerilspiramicina II 100g Hidroxipropilcelulose de Baixa substituição (5%) 9,25g Carboximetilamido de sódio (3%) 5,55 g estearato de magnésio (1%) 1,85 g Amido Total de peso-peso de outros adjuvantes Peso total 185g

[000155] Processo de Preparação: peso de amido apropriado e diluindo a concentração de 15%, aquecimento até a pasta para preparar o adesivoo; peneiração do ingrediente ativo da carrimicina, os adjuvantes que contêm amido, hidroxipropil-celulose de sódio de baixo grau de substituição, carboximetilamido de celulose e estearato de magnésio respectivamente, com uma peneira de malha 100, e pesagem do ingrediente ativo e o adjuvantes necessários de acordo com a fórmula; mistura totalmente de levoisovalerilspiramicina II, amido e hidroxipropil celulose de baixo grau de substituição, usando 15% de amido da pasta para preparar o material macio, fazendo com que o material macio se torne em grânulos com malha 14, secagem sob 50 a 60 °C até que o conteúdo de água esteja entre 3 a 5%; triagem dos grânulos com malha 14, e adicionando e misturando o amido de carboximetila de sódio e estearato de magnésio, a determinação do teor de grânulos; calcular o peso de cada comprimido de acordo com o teor de grânulos, pressionando os comprimidos (Φ9mm dimple punch), detectando a diferença de peso do comprimido, e depois embalar os comprimidos qualificados após a detecção. Modalidade 21 - Preparação de cápsulas de levoisovalerilspiramicina II (calculado em 1000 cápsulas) Fórmula: pó cru de Levoisovalerilspiramicina II 100g Amido (para fins farmacêuticos) 108g- pó bruto em peso de levoisovalerilspiramici na II cápsulas farmacêuticas No,3 parafina líquida

[000156] Processo de Preparação: peso do ingrediente ativo de levoisovalerilspiramicina II, amido do adjuvante (para utilização farmacêutica), respectivamente, de acordo com a fórmula e, em seguida, colocá-los em um misturador para misturar completamente para 1,5 a 2 horas, e os dados do conteúdo da amostra devem ser detectados, basicamente, de acordo com a dados teóricos (cerca de 0,105 g para cada cápsula). Enchendo a cápsula farmacêutica No,3 em conformidade e o material misturado no material de enchimento para o enchimento de acordo com os requisitos de operação da máquina automática de enchimento da cápsula; detectar a diferença de as cápsulas cheias (dentro de ± 10%, < 0,3 g) e taxa de dissolução, colocar as cápsulas em conformidade na máquina de vidros e adicionar parafina líquida para vidros por 15 a 20 minutos, e depois tirar para a detecção de caixa de embalagem do produto acabado. Modalidade 22 - Preparação da solução para a injeção de isovalerilspiramicina III

[000157] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de isovalerilspiramicina III e ácido maleico com molar igual, e dissolvendo em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000158] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume, da solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000159] (3) vedação, esterilização, inspeção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 23 - Preparação de pó para a injeção de levoisovalerilspiramicina III

[000160] (1) misturar de maneira uniforme 100mg de isovalerilspiramicina III e ácido maleico com molar igual, e dissolvendo em 1 ~ 5 mL de água destilada com a finalidade de obter uma solução amarela clara e transparente, com um pH 4,6 ~ 5,6.

[000161] (2) adição de carvão ativado, que é de 0,1% da solução, em volume, da solução preparada na etapa (1), e filtrando a solução;

[000162] (3) adicionar 30 ~ 150 mg de manitol como propante de liofilização; congelação rápida para 9h sob uma baixa temperatura, e a secagem com a finalidade de se obter caroço solto amarelo claro, depois de nivelamento, inspecção e embalagem sob condições assépticas. Modalidade 24 - Cápsulas de Levoisovalerilspiramicina III (calculado em 1000 cápsulas) Fórmula: Pó bruto de Levoisovalerilspiramicina III 100g Amido (para uso farmacêutico) 108g - pó bruto em peso de Levoisovalerilspiramic ina III Cápsulas farmacêuticas No,3 100 cápsulas Parafina líquida 5ml

[000163] Processo de Preparação: pesagem do ingrediente ativo de levoisovalerilspiramicina III, amido do adjuvante (para utilização farmacêutica), respectivamente, de acordo com a fórmula e, em seguida, colocá-los em um misturador para misturar completamente para 1,5 a 2 horas, e os dados do conteúdo da amostra devem ser detectados, basicamente, de acordo com os dados teóricos (cerca de 0,105 g para cada cápsula). Enchendo a cápsulas farmacêuticas No,3 em conformidade e o material misturado no material de enchimento para o enchimento de acordo com os requisitos de operação da máquina automática de enchimento da cápsula; detectar a diferença das cápsulas cheias (dentro de ± 10%, < 0,3 g) e a taxa de dissolução, colocando as cápsulas em conformidade na máquina de vidro e adicionando parafina líquida para vidros por 15 a 20 minutos, e depois tirar para a detecção de caixa de embalagem do produto acabado Modalidade 25 - Xarope de Levoisovalerilspiramicina III (calculado em 1000 sacos) Fórmula: Pó bruto de Levoisovalerilspiramicina I 125g Ácido cítrico (0,5%) 1,5 g Cana de Açúcar Peso total - outros materiais adjuvante e bruto 50g cerca de 0,1 g

[000164] Processo de Preparação: esmagamento de pó bruto de levoisovalerilspiramicina III, o ácido cítrico e de cana de açúcar em grânulos, respectivamente, com agitador pneumático de alta velocidade, com 85% de grânulos de através de peneira de malha 300 e 15% de grânulos através de malha 180, e, em seguida, pesando o pó fino moído de acordo com a fórmula e totalmente misturado durante 1 a 1,5 horas, a medição do teor e calculando a quantidade de enchimento (500 mg por saco teoricamente), em seguida, enchendo a mistura para o ensacador e encher o papel aluminizado, e distribuir a mistura de acordo com os requisitos de operação da distribuidora, com diferença de enchimento de ± 5%, examinando para a qualificação após o enchimento, e, finalmente, a embalagem. Modalidade 26 - Grânulos de Levoisovalerilspiramicina III (calculado em 1000 sacos) Fórmula: Pó bruto de Levoisovalerilspiramicina III 125g Açúcar em pó 2000g Dextrina 900g 5% de PVP-K30 Apropriada

[000165] Processo de preparação: A triagem de levoisovalerilspiramicina III em pó bruto, em pó e açúcar de dextrina com malha 120, pesando levoisovalerilspiramicina III, açúcar em pó e dextrina de acordo com a fórmula e misturando de maneira uniforme, o que faz com que o material de maneira uniforme seja misturado acima em material macio com 5% de PVP- K30 mucilagem; preparação do material em grânulos com granulador oscilante, a secagem dos grânulos em 70 °C, triagem dos grânulos, e, em seguida, embalando os mesmos depois dos mesmos terem sido inspecionados como qualificado. Modalidade 27

[000166] Além disso tornar o pó branco sólido de levoisovalerilspiramicina I na Modalidade 1 em cristal. Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I: 1. dissolvendo o primeiro levoisovalerilspiramicina I sólido obtido na modalidade 1, em uma mistura de solventes de acetato de etila, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 10: 1; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é de 2,5 vezes o volume total de acetato de etila, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é 4ml/min, e a taxa de agitação de adição de água pura é de 30 r/min; 3. resfriamento a 5 °C com uma velocidade de 1 °C/h após a adição de água pura, continuando a agitação durante o resfriamento, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I.

[000167] A difração de raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I medida pelo Cu-Ka de raio tem picos característicos em 2θ sendo 7,6 °, 8,0 °, 10,0 °, 11,4 °, 16,4 °, 17,0 °, 17,5 °, 17,9 °, 19,5 ° , 22,7 °, 23,7 ° C e 24,4 ° C, e o espectro de difração de raios X é como se mostra na figura 5.

Modalidade 28

[000168] Além disso tornar o pó branco sólido de levoisovalerilspiramicina I na Modalidade 1 em cristal.

[000169] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I: 1. dissolvendo primeiro o levoisovalerilspiramicina I sólido em um solvente misto de acetato de etila, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 10: 1; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é 9 vezes do volume total de acetato de etila, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é de 10ml/min, e a velocidade de agitação de adição água pura é de 60 r/min; 3. resfriamento a 15 °C com uma velocidade de 3 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com uma taxa de 10 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I.

[000170] A difração de pó por raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I medidos por Cu-Ka de raios é semelhante à da figura 5. Modalidade 29 - Método de preparação de solução para a injeção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I

[000171] Preparar o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I na Modalidade 27 em uma solução para a injeção, com uma preparação do método idem. Modalidade 30 - Método de preparação de pó para a injeção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I

[000172] Preparar o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I na modalidade 28 em pó para a injeção, com uma preparação do método idem. Modalidade 31 - Método de Preparação de comprimidos do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I

[000173] Preparar o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I da Modalidade 27 para formar comprimidos, com uma preparação do método idem. Modalidade 32

[000174] Além disso tornar o sólido branco em pó de levoisovalerilspiramicina II na Modalidade 1 em cristal.

[000175] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II: 1. dissolvendo o primeiro sólido de levoisovalerilspiramicina II na Modalidade 1, em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 10: 01; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é de 2,5 vezes o volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é 4ml/min, e a taxa de agitação de adição água pura é de 30 r/min; 3. resfriamento a 5 °C com uma velocidade de 1 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com uma taxa de 10 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II.

[000176] A difração de raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II medido pelo Cu-Ka de raios tem os picos característicos quando 2θ sendo 10,0 °, 11,6 °, 16,4 °, 17,3 °, 19,1 °, 21,2 °, 22,1 °, 22,7 °, 26,4 °, 26,9 °, 27,5 ° C e 31,5 ° C, e o espectro de difração de raios X é como se mostra na figura 6. Modalidade 33

[000177] Além disso tornar o sólido branco em pó de levoisovalerilspiramicina II na Modalidade 1 em cristal.

[000178] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II: 1. dissolvendo o primeiro sólido de levoisovalerilspiramicina II na Modalidade 1, em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 10: 0,8; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é 9 vezes do volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é de 10ml/min, e a taxa de agitação de água pura adicionada é de 60 r/min; 3. resfriamento a 15 °C com uma velocidade de 3 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com uma taxa de 10 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II.

[000179] A difração de pó por raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II medida por Cu-Ka de raios é semelhante à da figura 6. Modalidade 34

[000180] Além de fazer o pó branco sólido de levoisovalerilspiramicina II na Modalidade 2 em cristal.

[000181] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II: 1. primeiro dissolvendo o sólido de levoisovalerilspiramicina II em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 5: 1; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é de 7,5 vezes do volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é 6ml/min, e a taxa de agitação de adição água pura é de 40 r/min; 3. resfriamento a 10 °C com uma velocidade de 2 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com taxa de 15 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II.

[000182] A difração de pó por raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II medida por Cu-Ka de raios é semelhante à da figura 6. Modalidade 35

[000183] Além de fazer o pó branco sólido de levoisovalerilspiramicina II na Modalidade 3 em cristal.

[000184] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II: 1. primeiro dissolvendo o sólido de levoisovalerilspiramicina II em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 3: 1; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é de 7,5 vezes do volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é 8ml/min e a velocidade de agitação de adição água pura é de 45 r/min; 3. resfriamento a 12 °C com uma velocidade de 2,5 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com velocidade de 20 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II.

[000185] A difração de pó por raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II medida por Cu-Ka de raios é semelhante à da figura 6. Modalidade 36

[000186] Além de fazer o pó branco sólido de levoisovalerilspiramicina II na Modalidade 3 em cristal.

[000187] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II: 1. primeiro dissolvendo o sólido de levoisovalerilspiramicina II em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 6: 0,8; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é 5 vezes o volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é 7ml/min, e a taxa de agitação de adição água pura é de 60 r/min; 3. resfriamento a 12 °C com uma velocidade de 1,2 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com taxa de 15 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II.

[000188] A difração de pó por raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II medida por Cu-Ka de raios é semelhante à da figura 5. Modalidade 37 - Método de preparação de solução para a injeção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II

[000189] Preparar o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II da Modalidade 34 para a solução para a injeção, com o dito método de preparação. Modalidade 38 - Método de preparação de solução para a injeção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II

[000190] Preparar o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II da Modalidade 33 para a solução para a injeção, com o dito método de preparação. Modalidade 39 - Método de preparação de pó para a injeção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II

[000191] Preparar o composto cristalino da levoisovalerilspiramicina II da Modalidade 36 em pó para a injeção, com o dito método de preparação. Modalidade 40 - Método de preparação de pó para a injeção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II

[000192] Preparar o composto cristalino da levoisovalerilspiramicina II da Modalidade 35 em pó para a injeção, com o dito método de preparação. Modalidade 41 - Método da Preparação dos comprimidos do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II

[000193] Preparar o composto cristalino da levoisovalerilspiramicina II da Modalidade 36 para formar comprimidos, com o dito método de preparação. Modalidade 42 Método de preparação de cápsulas do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II

[000194] Preparar o composto cristalino da levoisovalerilspiramicina II da Modalidade 32 para dentro de cápsulas, com o dito método de preparação. Modalidade 43 - Método de preparação de grânulos do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina II

[000195] Preparar o composto cristalino da levoisovalerilspiramicina II da Modalidade 33 em grânulos, com o dito método de preparação. Modalidade 44

[000196] Além disso tornar o sólido branco em pó levoisovalerilspiramicina III na Modalidade 1 em cristal.

[000197] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III: 1. primeiro dissolvendo o sólido de levoisovalerilspiramicina III na Modalidade 1, em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 10: 1; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é de 2,5 vezes o volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição de água é 4ml/min, e da velocidade de agitação de adição água pura é de 30 r/min; 3. resfriamento a 5 °C com uma velocidade de 1 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com uma taxa de 10 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III.

[000198] A difração de raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III, medidos em Cu-Ka de raios tem picos característicos em 2θ sendo 8,0 °, 10,0 °, 11,2 °, 11,7 °, 16,4 °, 19,1 °, 19,6 °, 20,0 °, 21,4 ° , 22,9 °, 23,6 °, 29,4 °, e o espectro de difração de raios X é como se mostra na figura 7. Modalidade 45

[000199] Além disso fazer o pó branco sólido de levoisovalerilspiramicina III na Modalidade 2 em cristal.

[000200] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III: 1. primeiro dissolvendo o sólido de levoisovalerilspiramicina III em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 10: 1; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é 9 vezes do volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é de 10ml/min, e a taxa de agitação de adição água pura é de 60 r/min; 3. resfriamento a 15 °C com uma velocidade de 3 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com uma taxa de 10 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III.

[000201] A difração de pó por raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III medido por Cu-Ka de raios é semelhante à da figura 7. Modalidade 46

[000202] Além disso fazer o pó branco sólido de levoisovalerilspiramicina III em Modalidade 2 em cristal.

[000203] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III: 1. primeiro dissolvendo o sólido de levoisovalerilspiramicina III em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 5: 0,8; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é de 7,5 vezes do volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é 6ml/min, e a taxa de agitação de adição água pura é de 40 r/min; 3. resfriamento a 10 °C com uma velocidade de 2 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com taxa de 15 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III.

[000204] A difração de pó por raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III medido por Cu-Ka de raios é semelhante à da figura 7. Modalidade 47

[000205] Além disso tornar o levoisovalerilspiramicina III pó branco sólido preparado em Modalidade 3 em cristal.

[000206] Método de preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III: 1. primeiro dissolvendo o sólido de levoisovalerilspiramicina III em um solvente misto de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, com uma proporção de volume de 1: 2: 1; 2. em seguida, adicionando água pura e agitando a mistura ao mesmo tempo, e o volume de água adicionado puro é de 7,5 vezes do volume total de metanol absoluto, álcool de etila absoluto e acetona anidra, a velocidade de adição da água é 8ml/min e a velocidade de agitação de adição água pura é de 45 r/min; 3. resfriamento a 12 °C com uma velocidade de 2,5 °C/h após a adição de água pura, sob agitação contínua, com velocidade de 20 r/min durante a refrigeração, com a finalidade de se obter o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III.

[000207] A difração de pó por raios X do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III medido por Cu-Ka de raios é semelhante à da figura 7. Método 48 - Preparação de modalidade solução para a injeção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III

[000208] Preparar o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III da Modalidade 44 na solução para a injeção, com o dito método de preparação. Método 49 - Preparação de modalidade pó para a injeção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III

[000209] Preparar o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III da Modalidade 45 em pó para a injeção, com o dito método de preparação. Modalidade 50 - Método de preparação de comprimidos de do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III

[000210] Preparar o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III da Modalidade 46 para formar comprimidos, com o dito método de preparação. Modalidade 51 - Método de Preparação cápsulas do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III

[000211] Preparar o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III da Modalidade 47 em cápsulas, com o dito método de preparação. Teste 1 Teste de toxicidade aguda de levoisovalerilspiramicina I, II e III 1. Método de ensaio:

[000212] Ambos os ratos e camundongos tomaram os fármacos por via oral (levoisovalerilspiramicina I, II e III, preparado na modalidade 1)

[000213] Depois de observar os ratos e camundongos, por dois dias antes do teste, e aqueles sem condições anormais de teste são realizados. Não foi dado nada de comer para os ratos e camundongos durante a noite antes do teste. De acordo com o resultado de previsão, respectivamente, os fármacos experimentais de alimentação de 4000mg/kg de ratos e camundongos através da administração intragástrica, sem nenhuma morte. Neste teste, as fármacos de alimentação para ratos e camundongos, respectivamente, como por 4000mg/kg, em que, os camundongos 100mg/ml em seguida, com capacidade de administração intragástrica de 0,6 mL por 0,8 mL, enquanto os camundongos a 173mg/ml, com capacidade de administração intragástrica de 0,8 ~ 1,0ml/50g. Observe aqueles que tomam os fármacos para uma semana para reação tóxica e morte. II. Vide as Tabelas 1 e 2 para os resultados dos testes Tabela 1 - Toxicidade aguda de fármacos experimentais em

Tabela 2 - Toxicid ade aguda de fármacos experimentais em ratos por meio de administração oral (LD50)

[000214] O mesmo teste foi também realizado para levoisovalerilspiramicina I, II e III, ou para as preparações de Levoisovalerilspiramicina I, II, III preparadas de acordo com outras variantes da presente invenção, e os resultados obtidos são semelhantes.

Teste do Exemplo 2: Efeito in vivo de levoisovalerilspiramicina I e seu cristal

[000215] Método de teste: a preparação do líquido de infecção bacteriana: retirar o líquido de teste bacteriano, que é mantido no frigorífico a -80 °C à temperatura ambiente durante cerca de 1 h, depois da inoculação de Streptococcus pneumoniae, streptococci piogênico e enterococos absorção bacteriana líquida a 0,1 ml, respectivamente, caldo de MH a 2 ml (adicionar soro de cavalo inativado a 10%), e inoculação de 0,1 ml de líquido de bactérias Staphylococcus aureus a caldo de MH a 2 ml de acordo com o mesmo método acima; colocando- o em uma incubadora a 37 °C a ser cultivadas, durante 18 h, com a finalidade de se obter o líquido bacteriano original; diluir o líquido original de bactérias com 5% de mucina gástrica de fazer os animais infectados com 100% de bactérias letais, com a finalidade de se obter o líquido de infecção bacteriana.

[000216] O percurso clínico da administração de carrimicina é proposto para ser administrado por via oral, a administração intragástrica, dessa maneira é adotada no teste carrimichina. Levoisovalerilspiramicina I (obtido na modalidade 1) e do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I (preparado na modalidade 27) são administrados aos animais por meio de injeção intramuscular.

[000217] Após alimentados com uma dose de 0,5 ml letal aos camundongos através de injeção intraperitoneal, desenvolvem-se os sintomas de atividade significativamente reduzidos, repouso e afrouxamento do pêlo etc. Após os camundongos terem sido infectados, respectivamente, 0,2 mL de alimentação para cada camundongo, por meio da administração via intra-gástrica com 0,5 a 6 horas, e que eles têm nenhuma reação adversa. Observar o número de mortes em 7 dias, e calcular a dose de 50% de eficácia (ED50) de cada fármaco para o camundongo infectado e comparar o efeito protetor de fármacos pelo programa Bliss. Resultado do ensaio in vivo:

Resultados de teste in vivo:

[000218] Consulte a Tabela 3 e Tabela 4, para o efeito curativo da isovalerilspiramicina I no camundongo infectado com 12 cepas de bactérias, o que demonstra um bom efeito protetor, e o composto cristalino de isovalerilspiramicina I mostra um melhor efeito protetor no camundongo infectado com 12 cepas de bactérias .

[000219] O mesmo teste é conduzido para levoisovalerilspiramicina I e cristal de levoisovalerilspiramicina I preparados de acordo com outras variantes da presente invenção ou as preparações que contêm levoisovalerilspiramicina I ou o cristal do mesmo, os resultados são semelhantes. Teste do Exemplo 3: Efeito in vivo de levoisovalerilspiramicina II e do seu composto cristalino

[000220] Adotar a Levoisovalerilspiramicina II preparado na Modalidade 1 e composto de levoisovalerilspiramicina II cristalino preparado na modalidade 36, e o método de ensaio é o mesmo do que no exemplo de teste 2.

[000221] Consulte a Tabela 5 e na Tabela 6 para os resultados do teste in vivo:

Resultados de teste in vivo:

[000222] Consulte a Tabela 13 e na Tabela 14 para o efeito de cura do composto cristalino de isovalerilspiramicina II no camundongo infectado com 12 cepas de bactérias, o que mostra um efeito protetor bom, um efeito melhor do que o composto de isovalerilspiramicina II.

[000223] O mesmo teste é conduzido para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I e II destes preparados de acordo com outras variantes da presente invenção, os resultados são semelhantes.

[000224] Teste do Exemplo 4: Efeito in vivo de levoisovalerilspiramicina III e seu composto cristalino

[000225] Adotar a Levoisovalerilspiramicina III na Modalidade 1 e o cristalino composto de levoisovalerilspiramicina III na modalidade 45, e o método de ensaio é o mesmo do que no exemplo de teste 2.

[000226] Consulte a Tabela 7 e na Tabela 8, para os resultados de ensaio in vivo:

Resultados de teste in vivo:

[000227] Consulte a Tabela 7 e na Tabela 8, para os efeitos curativos do composto cristalino de isovalerilspiramicina III no camundongo infectado com 12 cepas de bactérias, o que mostra um efeito protetor bom, um efeito melhor do que isovalerilspiramicina III.

[000228] O mesmo teste é conduzido para o composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III ou preparações de composto cristalino de levoisovalerilspiramicina III preparadas em outras modalidades da presente invenção, os resultados são semelhantes. Teste do exemplo 5 - Ensaio in vitro de farmacodinâmica:

I. Determinação de isolados clínicos:

[000229] Método de ensaio: método de diluição de ágar duplo: quantitativamente despeje o meio de fusão de ágar em uma placa contendo uma série de concentração de fármaco para se misturar com o líquido de fármacos (adicionar 5% de sangue de carneiro defidrinado a streptococci e enterococos com a finalidade de obter um meio de sangue, adicionar 7% de sangue de carneiro defidrinado de hemophilus influenza e adicionar 7% de sangue de carneiro defidrinado ao meio gonococo com a finalidade de obter um meio de chocolate), depois a mistura é solidificada, diluída com o líquido fresco a 106CFU/mL de bactérias da cultura e, em seguida inoculadas por meio de um instrumento com vários pontos de inoculação para a placa de ágar contendo os agentes anti-bacterianos a serem cultivados, durante 18 h, a 37 °C; colocando o gonococo para uma incubadora de 5% de CO2 para a cultura de 24 horas; colocando a legionella para uma uma incubadora de 5% de CO2 para a cultura de 48h; colocando as bactérias anaeróbicas a uma caixa anaeróbica a serem cultivadas durante 48 horas a 37 °C. Observar a concentração mínima dos fármacos anti- bacterianos com a finalidade de inibir o crescimento de bactérias, a concentração inibidora ou seja mínima (MIC), e calcular os fármacos CIM50 e CIM90 e compará-los com os fármacos de controle.

[000230] Nota: CIM50 representa uma concentração inibitória mínima para a habitação de 50% do crescimento bacteriano;

[000231] MIC90 representa uma concentração inibitória mínima para a habitação de 90% do crescimento bacteriano.

[000232] Consulte a Tabela 9 para os resultados do teste:

II. Determinação de Chlamydia trachomatis e Chlamydia Pneumoniae in Vitro Métodos de ensaio: 1. A implantação de células HEp-2 e as linhas de células McCoy, respectivamente, em 96 poros da placa de cultura (Costar Companhia) sob ambiente a 37 °C e 5% de CO2 para a cultura de 48 horas, com a finalidade de se obter células em monocamadas. 2. As cepas de diluição a serem inoculadas a 10000 ~ 20000 ifu (unidades formadoras de inclusão)/ml, 0,1 ml/poro para inoculação. A inoculação do serotipo Chlamydia trachomatis B/TW-5/OT e D/UW- 3/Cx McCoy em placas de cultura de células e Chlamydia Pneumoniae CWL-029 em células HEp-2 daplaca de cultura de células. Em primeiro lugar, absorver o líquido de cultura de células em placas de 96 poros da placa de cultura, e inocular de acordo com o padrão de poro/0,1 ml. Em que, 4 poros A11-D11 e dois poros C12 e D12 não vão ser inoculados. 3. Após a inoculação, utilizar a máquina centrífuga J-6MC da Companhia Beckman-Coulter centrifugando 96 poro da placa de cultura de células com 1500 g de uma força centrífuga a uma temperatura de 35 °C da centrífuga e um tempo de centrifugação de 60 minutos. 4. Após a centrifugação, absorver os inoculados Chlamydia trachomatis ou Chlamydia pneumoniae, e, respectivamente, a adição de 4 tipos de antibióticos de diluição em série, 0,1 ml/poro. 5. A cultura em placa de teste de fármaco sensível de Chlamydia trachomatis por 48 horas e as placas de fármaco de teste sensíveis da Chlamydia Pneumoniae durante 72 horas, sob o ambiente de 37 °C e 5% de CO2. Após a cultura, a absorção de solução de antibióticos, a lavagem por 2 vezes com PBS (0,01 M, pH 7,4), e mantendo a 100% de álcool de metila, durante 15 minutos sob temperatura ambiente. 6. Identificação de coloração de imunofluorescência indireta: respectivamente a adição de anticorpo purificado por Chlamydia trachomatis monoclonal (clone N54) e anticorpo monoclonal Chlamydia Pneumoniae (clone P33) para as placas de teste de fármacos sensíveis de Chlamydia trachomatis e Chlamydia pneumoniae, 50 ml/poro; incubação durante 30 minutos em uma plaa molhada em 37 °C, em seguida, utilizando o lavador de placas para lavar as placas quatro vezes, e depois a adição de anticorpos de fluorescência de coelho de anti-camundongo (Empresa Sigma), 50 ml/poro; incubação e lavagem da mesma maneira sob as mesmas condições. Adicionar glicerol de montagem, de 100 ml/poro e, finalmente, observar os resultados sob o microscópio de fluorescência Nikon invertido (Diaphot-200). 7. Definição de MIC: Refere-se à concentração mínima de antibiótico diluído que faz com que o crescimento das Chlamdia trachomatis ou corpos de incursão de Chlamdia pneumoniae em placas de 96 poros de teste completamente suprimidas (nenhuma incursão de coloração de fluorescência é encontrada nos poros). Levoisoval erilspiramicina I (Modalidade 1 ) Levoisovalerilspi ramicina II (Modalidade 1 ) Levoisovalerilspi ramicina III (Modalidade 1 ) Carrimicina Acetil Spiramicina (AT-SPM) Eritrocina (EM) Azitromicin a (AM) Chlamydia Trachomatis B/TW-5/OT 0,25μg/ml 0,25μg/ml 0,25μg/ml 0,25μg/ml 4μg/ml 0,5μg/ml 0,5μg/ml Chlamydia Trachomatis D/UW-3/Cx 0,25μg/ml 0,25μg/ml 0,25μg/ml 0,25μg/ml 2μg/ml 0,5μg/ml 0,25μg/ml Chlamydia Pneumoniae CWL-029 0,016μg/ml 0,016μg/ml 0,016μg/ml 0,016μg/ml 0,5μg/ml <0,016μg/ml 0,032μg/ml

1. Para serotipo Chlamydia trachomatis B/TW-5/OT, Levoisovalerilspiramicina I, II e III são superiores a Carrimicina, Eritrocina e azitromicina no efeito in vitro, e Acetil espiramicina (MIC é 4mg/ml) é relativamente pobre. 2. Para serotipo Chlamydia trachomatis D/UW-3/Cx, Levoisovalerilspiramicina I, II e III são semelhantes aos Carrimicina e azitromicina no efeito in vitro, com MIC 0,25 mg, sendo sensível; Eritrocina (0,5mg/ml) segue, e acetil Espiramicina (MIC é 2mg/ml) é relativamente pobre; 3. Para Chlamydia pneumoniae CWL-029, II e Levoisovalerilspiramicina Eritrocina são mais sensíveis no efeito in vitro, com MIC 0,016mg/ml; Azitromicina, Carrimicina, Levoisovalerilspiramicina I e III são relativamente sensíveis; Acetil Espiramicina (MIC 0,5mg/ml) é relativamente pobre. 4. Em geral, o efeito de Levoisovalerilspiramicina em Chlamydia é superior a outros fármacos de teste. 111. Micoplasma Urealyticum e Micoplasma pneumoniae in Vitro 1. Métodos de ensaio: a adição de U-PPLO 0,8 ml a cada poro de placa de cultura asséptica de 12 poros celulares (adicionando 0,9 ml de inóculo dos poros e controle de 1,0 ml a poros do meio de controle). 2. Adicionar inóculo sw 104CCU/ml de Uu de 0,1 ml a cada um dos poros experimentais. A dose final no poro é 103CCU/ml (poro médio de controle não serão adicionados com inóculo). 3. Dividir em 3 grupos (100 ug, solução de estoque de 10μg/ml e antibiótico de 1μg/ml), Usar Tip assética para adicionar os antibióticos para teste de cada poro: 100 ul, 50 ul, 25 ul, 12,5μl acordo com o gradiente de concentração dupla de degradação. (O inóculo e meios de controle de poros não serão adicionados com o antibiótico, e, entretanto, o controle do poro com antibióticos é organizado.) 4. Misturar todos os poros de maneira uniforme. Selar a placa de cultura por meio das fitas e colocá-la em uma caixa de 37 °C para a cultura. 5. Em 17 a 24 horas após o teste, observar e registar a situação de crescimento Uu. Quando o poro de controle Uu inoculante apresenta um crescimento positivo, a concentração mínima de antibiótico, o qual pode suprimir o crescimento de Uu, é a MIC de amostra. O MIC depois do teste é a MIC final (24 horas).

[000233] Determinar CIM de cepas Micoplasma urealyticum e Micoplasma pneumoniae por 4 vezes e os resultados são: O MIC de Levoisovalerilspiramicina I é de 0,025 ~ 0,125μg/ml. O MIC de Levoisovalerilspiramicina II é de 0,025 ~ 0,125μg/ml. O MIC de Levoisovalerilspiramicina III é de 0,025 ~ 0,125μg/ml. O MIC de Carrimicina é de 0,025 ~ 0,125μg/ml. O MIC de espiramicina é Acetil 0,5μg/ml. O MIC é de Eritrocina 5μg/ml. O MIC de Azitromicina é de 0,025 ~ 0,125μg/ml.

[000234] Os resultados acima indicam que Levoisovalerilspiramicina I, II, III e Carrimicina tem um efeito favorável Uu resistente, que é semelhante ao efeito da azitromicina, superior a acetil espiramicina, e o efeito de Eritrocina mais pobre está entre todas as amostras.

[000235] O mesmo resultado é conduzido para Levoisovalerilspiramicina I, II, III, em outras modalidades da presente invenção ou as preparações que contêm Levoisovalerilspiramicina I, II, III, os resultados são semelhantes.

Exemplo de Teste 4 - Teste Clínico de Levoisovalerilspiramicina I, II e III

[000236] A eficácia e a segurança de Levoisovalerilspiramicina I, II e III (a partir de Modalidade 1) e azitromicina no tratamento de infecções respiratórias agudas em adultos causadas por meio das bactérias sensíveis, incluindo faringite bacteriana aguda, tonsilite supurativa, traqueobronquite aguda e pneumonia leve, etc

[000237] Adotar uma simulação de teste de controle duplo multicentro, aleatório, dois cego, o qual é realizado em 5 hospitais simultaneamente de acordo com o programa de teste clínico unificado. 1. padrões de seleção dos indivíduos 2. Pacientes de 18 a 65 anos de idade (homens e mulheres); 3. Sensíveis a infecções respiratórias agudas causadas por bactérias sensíveis incluem faringite bacteriana aguda, amigdalite supurativa aguda, traqueobronquite aguda, pneumonia leve nasosinusite aguda e etc; 4. Qualquer indivíduo deve assinar um consentimento informado antes de ser selecionado. 5. Todos os indivíduos passarão por uma contracepção durante o período de investigação e dentro de pelo menos 3 meses, mediante a ser dosado. II. padrões de seleção dos indivíduos 1. Aqueles com insuficiência hepática ou renal (limite normal superior de Sangue Cr> 1,5mg/dl e ALT>) 2. As mulheres na gravidez ou lactação 3. Aqueles com doenças do trato gastrointestinal, que não podem tomar fármacos por via oral. 4. Aqueles que tomam anti-bacterianos dentro de uma semana antes da seleção. 5. Alcoólicos de longo prazo.

[000238] De acordo com estatísticas nos resultados dos testes por meio das estatísticas especialistas, a eficácia clínica (FAS) é:

[000239] O efeito da Levoisovalerilspiramicina I, II, III e azitromicina são, respectivamente, 92,30%, 92,30%, 92,30% e 89,61%.

Depuração de patógenos:

[000240] A depuração de agentes patogênicos de Levoisovalerilspiramicina I, II, III e azitromicina são, respectivamente, 97,56%, 97,56%, 97,56% e 92,86%.

Reação adversa:

[000241] A reação adversa de Levoisovalerilspiramicina I, II, III e azitromicina são, respectivamente, 2,5%, 2,5%, 2,5% e 7,6%.

[000242] O teste clínico indica que Levoisovalerilspiramicina I, II, III são novos seguros e eficazes anti-infecciosos fármacos.

[000243] O teste é realizado por alguns Levoisovalerilspiramicina I, II, III, em outras modalidades da presente invenção ou por meio das preparações que contêm Levoisovalerilspiramicina I, II, III, os resultados são semelhantes.

Claims

1. Levoisovalerilspiramicina, caracterizada pelo fato de que é um composto levoisovalerilspiramicina I, em que a fórmula química estrutural do composto I de levoisovalerilspiramicina é apresentada como fórmula (I), com a condição de clorofórmio como solvente, temperatura de 25°C e concentração de 0,02 g/ml, a rotação óptica medida especifica [α]D é - 49°~ a 62°, e o ponto de fusão é de 116 ~ 122;

a levoisovalerilspiramicina difração de raios X em pó medida característicos em 2θ = 7,6 °, 8,0 °, 10,0 °, 11,4 °, 16,4 °, 17,0 °, 17,5 °, 17,9 °, 19,5 °, 22,7 °, 23,7 ° e 24,4 °.

2. Composto de levoisovalerilspiramicina I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que, na condição de clorofórmio como solvente, temperatura 25°C e concentração de 0,02 g / ml, a rotação óptica específica medida [α]D é de -51° a -58°.

3. Preparação contendo a levoisovalerilspiramicina como definida na reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que: a preparação contém levoisovalerilspiramicina I, sal farmacêutico de levoisovalerilspiramicina I, levoisovalerilspiramicina I e adjuvante farmaceuticamente aceitável, ou um sal farmacêutico de levoisovalerilspiramicina I e adjuvante farmaceuticamente aceitável, a pureza do levoisovalerilspiramicina I é superior a 90% em peso.

4. Preparação, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a preparação compreende a seguinte dose unitária: o teor de levoisovalerilspiramicina I, respectivamente, é de 10 a 1500mg.

5. Preparação, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a percentagem em peso de levoisovalerilspiramicina I, respectivamente, é de 10 a 95%.

6. Preparação de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a preparação inclui solução para a injeção, pó para a injeção ou pó liofilizado preparado por meio de levoisovalerilspiramicina I e pelo menos um de ácido cítrico, ácido adípico, ácido maleico.

7. Preparação, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a percentagem em peso de levoisovalerilspiramicina I, respectivamente, é de 75 a 95%.

8. Método para a preparação de levoisovalerilspiramicina, como definida na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o método compreende: preparar a levocarrimicina, e purificar a levoisovalerilspiramicina I, em que o processo para a preparação levocarrimicina inclui: a cultura e fermentação biológica de cepas fúngicas clonadas WSP- 195 produzidas por meio da espiramicina contendo o gene 4"- isovalerila transferase , e extração de um licor de fermentação; a fermentação acontece com a condição de pH 6,0 a 9,0, as curvas de variação do pH ao longo do tempo mostram as três fases contínuas, em que, a primeira fase satisfaz a fórmula y1 = k1x1 + 6,0, em que 0,0227 < Ki < 0,1364,0 <xi < 22, a segunda fase satisfaz a fórmula y2 = k2X2 + b2, em que -0,0735 < k2 <0, 6,5 <b2 < 10,62, 22 < X2 < 56, e a terceira fase satisfaz a fórmula y3 = k3x3 + b3, em que 0 <k3 < 0,0078, 6,06 < b3 <6,5, 56 < x3 < 120; a etapa de purificação de levoisovalerilspiramicina I inclui: purificar a amostra de levocarrimicina com o método de cromatografia, fazer a eluição de gradiente e separar o pico do componente alvo de levoisovalerilspiramicina I, por meio de coluna cromatográfica ODS em acetonitrila e solução tampão de acetato de amônia; na purificação de levoisovalerilspiramicina I, eliminar acetonitrila na levoisovalerilspiramicina I recolhida com o método de evaporação rotativa, em seguida, utilizando acetato de etila para a extração, eliminando acetato de etila no extrato por meio da evaporação com a finalidade de se obter a amostra da pasta; re-dissolver a amostra com éter de petróleo, eliminar o éter de petróleo por meio da evaporação com a finalidade de se obter um pó branco de levoisovalerilspiramicina I; um método para a preparação do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I compreende: dissolver o composto levoisovalerilspiramicina I sólido em uma mistura de solventes de acetato de etila, álcool etílico absoluto e acetona anidra, adicionar água pura e agitar a mistura ao mesmo tempo, resfriando a 5°C a 15°C após adição de água pura, continuar a agitação durante a refrigeração, em seguida, a obtenção do composto cristalino de levoisovalerilspiramicina I, em que, a relação de volume de acetato de etila, álcool etílico absoluto e acetona anidra no solvente misto é de 1: 0,1 a 10: 0,5 a 1.

9. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que um processo de cultura do método para a preparação do levocarrimicina é: cultivar as cepas fúngicas clonadas WSP-195 produzidas pela espiramicina contendo o gene 4"- isovalerila transferase em um meio de cultura agarslant contendo 2% de farinha de bagaço de soja, 1% de glicose, 3% de amido, 0,5% de CaCO3, 0,4% de NaCl e 2% de àgar durante 8 a 15 dias sob pH 6,5 a 7,5 e temperatura de 28 a 38 °C, então inocular em um meio de sementeira, contendo 1,5% de farinha de bagaço de soja , 3,0% de amido, 0,4% de NaCl, 0,5% de CaCO3, 0,3% de peptona de peixe e 0,05% de KH2PO4 e cultivar durante 40 a 80 horas, sob pH 6,5 a 7,5 e temperatura de 25 a 30 °C, implantar em um meio de fermentação contendo 0,5% de glicose, 6,0% de amido, 0,5% do pó de levedura, 2,0% de farinha de peixe, 0,6% de NH4NO3, 1,0% de NaCl, 0,5% de CaCO3, 0,05% de KH2PO4, 0,1% de MgSO4, 0,5% de óleo de soja e 0,02% de anti-espumante e cultivar por 72 a 120 horas sob 26 a 30 °C, uma quantidade de inoculação de 0,1 a 20%, com a finalidade de se obter o licor de fermentação.

10. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a etapa de extração de licor de fermentação biológica inclui: processar o licor de fermentação com sulfato de alumínio com a finalidade de se obter um filtrado, regular o pH do filtrado para 8,5 a 9,0, utilizando acetato de butila para a extração, limpar o extrato de acetato de butila com uma solução não-salina e 1% de NaH2PO4, em seguida, usando água com pH 2,0 a 2,5 para a extração com a finalidade de se obter extrato aquoso, regular o pH para 4,5 a 5,5 pH, volatilizar e eliminar o acetato de butila residual com a finalidade de obter o extrato de água, filtrar e regular o pH para pH 8,5 a 9,0, precipitar o filtrado e a lavar com água purificada com a finalidade se obter o produto úmido, e secar com a finalidade de obter levocarrimicina.

11. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que na purificação de levoisovalerilspiramicina I, a gravar o diagrama de espectro UV de levoisovalerilspiramicina I, por meio da cromatografia preparativa líquida de alta eficiência e detecção por UV, e recolher a amostra de levoisovalerilspiramicina I com base no tempo de retenção de 44,759 min.

12. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a fase móvel é um solvente misto de acetonitrila A e uma solução de acetato de amônio a 150 mM com pH 8,5, as condições requeridas para a purificação de levoisovalerilspiramicina I são: gradiente linear de 0 a 60 minutos, A sendo 25% a 65%, e 61 a 90 minutos, A sendo de 65% a 90%; velocidade de fluxo: 260 mL/min; dimensão da amostra: 10 ml; concentração da amostra: 0,5g/mL; medição de comprimento de onda: 231nm; forma de coleta: coleta através de disparo UV.

13. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o pó branco de levoisovalerilspiramicina I é feito de cristal, em que a relação de volume de acetato de etila, álcool etílico absoluto e acetona anidra no solvente misto é de 1:2 a 8:0,8 a 1.

14. Uso de levoisovalerilspiramicina, como definida na reivindicação 1 ou 2, ou preparação, como definida em qualquer uma das reivindicações 3 a 7, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de fármacos para o tratamento e/ou para a prevenção de doenças infecciosas.

15. Uso de levoisovalerilspiramicina, como definida na reivindicação 1 ou 2, ou preparação como definida em com qualquer uma das reivindicações 3 a 7, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de fármacos para antibiótico, as bactérias incluem Streptococcus pneumoniae, Streptococcus do grupo A, streptococci piogênico, Enterococcus, Staphylococcus aureus, S. epidermids, Catarrhal coccus, gonococcus, Bacillus influenzae, escherichia coli, Escherichia coli enterotoxigênica, Escherichia coli enteropatogênica, Escherichia coli enteroinvasiva, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, bacillus proteus vulgaris, bacillus tifóide, acinetobacter, citrobacter, Serratia marcescens, S.Sonnei, Sh.flexneri, Tritirachium album; legionella como legionella pneumophila, legionella gormanii, legionella bozemanii, legionella dumoffii, legionella jordanis, e legionella micdadei; anaeróbio como bacteroides fragilis, B. thetaiotaomicron, B. vulgatus, B. distasonis, B. prevotella, Prevotella asaccharolyticus, Prevotella oralis, Fusobacteriumnu cleatum, Fusobacterium russll, bifidobacteria, lactobacillus, peptostreptococcus, propionibacterium acnes, clostridium perfringens e fungo do tipo levedura.