BR112012028376B1

BR112012028376B1 - derivado inusitado da síntese de ecdisterona, seu método de preparação e uso

Info

Publication number: BR112012028376B1
Application number: BR112012028376A
Authority: BR
Inventors: Xu Lirong; Zhang Min; Wang Xiaolin; Qin Yong; Xia Chinês Yongpeng; Qiu Zongyin
Original assignee: Chongqing Zen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2010-05-07
Filing date: 2011-05-06
Publication date: 2020-06-09
Also published as: KR20130020899A; CN102234303B; DK2567966T3; JP2013525504A; US8822441B2; WO2011137759A1; ES2528045T3; CN102234303A; JP5568176B2; BR112012028376B8; US20130053586A1; BR112012028376A2; KR101487922B1; EP2567966A1; EP2567966B1; EP2567966A4

Abstract

derivado inusitado da síntese de ecdisterona, seu método de preparação e uso. esta invenção refere-se a um composto inusitado com a estrutura da fórmula i, ou um de seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis. adicionalmente, a invenção descreve ainda um método para preparar o composto, uma composição farmacêutica que contém o composto, e seu uso na preparação de um medicamento hipoglicemiante.

Description

DERIVADO INUSITADO DA SÍNTESE DE ECDISTERONA, SEU MÉTODO DE PREPARAÇÃO E USO.

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

[001] A invenção refere-se à química de medicina natural, e particularmente, um derivado inusitado da síntese de ecdisterona, seu método de preparação e uso.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Ecdisterona é um nome genérico de um tipo de produtos naturais que foram primeiramente descobertos em insetos. As ecdisteronas têm atividade de ecdise, bem como o efeito de promover o crescimento celular. Depois da década de 60, descobriu-se que as ecdisteronas estão presentes também em plantas. Sua distribuição em plantas é maior e mais ampla do que em animais. As ecdisteronas estão amplamente presentes em plantas tais como raiz do aquiranto bidentado, folha da amoreira, Rhaponticum uniflorum e similares. As quantidades de ecdisteronas no corpo do inseto são extremamente baixas. Portanto, atualmente, as ecdisteronas vegetais são a principal fonte de ecdisteronas comerciais. As pesquisas indicam que as ecdisteronas possuem uma série de ações farmacológicas, tais como promover a síntese de ácido ribonucleico e proteína, efetuar sacarometabolismo, promover o metabolismo de lipídeos, imunorregulação, efetivar o sistema nervoso central, função antioxidante, ativar a circulação sanguínea para dissipar a estase do sangue e similares.

[003] A patente chinesa n- CN 1280010A, publicada em 17 de janeiro de 2001, expedida para Chongren Yang et al. descreve um medicamento oral para tratar diabetes, compreendendo β-ecdisona e acetato de 2-P-ecdisona como os ingredientes medicinais ativos em uma razão ponderai de 50-95% de βecdisona para 5-50% de acetato de 2^-ecdisona.

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[004] Pablo Kizelsztein Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. Vol296, pp E433E439 (2009) descreve 20-hidroxi-ecdisterona e seus efeitos hipoglicemiantes.

[005] A patente chinesa n- CN 1557324A, publicada em 29 de dezembro de 2004, expedida para Qiu Chen et al. descreve o uso de ecdisterona na preparação de um medicamento para tratar resistência à insulina.

[006] “The effect of ecdysterone on glucose consumption of HepG2 cells” em Chinese Pharmacological Bulletin, volume 11, 2005, Qiu Chen et al., descreve que a ecdisterona em uma faixa de concentração de 1 x10'⁶~10'⁴mol.L'¹aumenta o consumo de glicose de células HepG2 (em 44%~77%); o efeito de ecdisterona em baixar a glicose diminui à medida que aumenta a concentração de glicose na solução de cultura; e a insulina obviamente não efetua a ação de ecdisterona para baixar a glicose. A ecdisterona não tem a ação de estimular a secreção de insulina de células β-TCS, o que sugere que a ecdisterona pode desempenhar uma função não dependente de insulina para baixar a glicose através de hepatócitos, mas não pode estimular a secreção de insulina.

[007] “The effect of ecdysterone on protein expression of insulin receptor in insulin resistant HepG2 cells”, Shandong Medical Journal, volume 04, 2008, Qiu Chen et al. descreve que 1x10'⁵mol/L de ecdisterona aumenta significativamente a expressão da proteína InsR em células IR HepG2, indicando que a sensibilização à insulina por ecdisterona pode estar associada à maior expressão da proteína InsR, uma molécula de transdução de sinal de insulina.

[008] “The effect of ecdysterone on the protein expression of PI3K, Glut-4 in insulin resistant HepG2 cells”, Jiangsu Medical Journal, volume 3, 2009 Chen et al. descreve que 1χ10’⁵Μ de ecdisterona aumenta a expressão das proteínas PI3K e GLUT-4 em células HepG2 resistentes à insulina (P<0,05), indicando que a sensibilização à insulina por ecdisterona pode estar associada à maior expressão das proteínas PI3K e GLUT-4 que são moléculas de transdução de

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3/24 sinal de insulina.

[009] “A proteomic study on the insulin resistant HepG2 cell treated by ecdysterone”, Chinese Pharmacological Bulletin, volume 12, 2009, Min Song et al. descreve o efeito de ecdisterona sobre o consumo de glicose em células do modelo resistente à insulina, indicando que os alvos para a sensibilização à insulina por ecdisterona se relacionam a uma série de proteínas e quinases relacionadas à resistência à insulina.

[010] Além disso, ecdybase.org descreve derivados de fosfato separados de ecdisterona da seguinte forma:

1. 26-hidróxi-ecdisterona-2-fosfato (Thompson, J.A. et a!., (1987) Arch. Insect Biochem. Physiol. 4, 183-190);

2. 26-hidróxi-ecdisterona-26-fosfato (Thompson, M.J. et al., (1985) Arch. Insect Biochem. Physiol. 2, 227-236);

3. 20-hidróxi-ecdisterona-22-fosfato (Tsoupras, G. et al., (1982) Steroids 40, 551-560);

4. 20-hidróxi-ecdisterona-3-acetato 2-fosfato (ISAAC, R.E. et al., (1984) Biochem. J. 231,459-464);

5. 20-hidróxi-ecdisterona-3(2)-fosfato (Tsoupras, G. et al., (1983) C. R. Acad. Sci. Paris, Sér. Ill, 296, 77-80);

6. 20-hidróxi-ecdisterona-3(2)-acetato-22-fosfato (Tsoupras, G. et al., (1983) C. R. Acad. Sci. Paris, Sér. Ill, 296, 77-80);

7. ecdisterona-3-fosfato (Tsoupras, G. et al., (1982) (Thesis, Estrasburgo, França));

8. ecdisterona-2-fosfato (Isaac, R.E. eta!., (1984) Biochem. J. 217, 239-243);

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9. ecdisterona-2,3-diacetato-22-fosfato (Tsoupras, G. et al., (1982) (Thesis, Estrasburgo, França));

10. ecdisterona-2-acetato-3-fosfato (Isaac, R.E. et al., (1984) Biochem. J. 217, 239-243);

11. ecdisterona-3(2)-acetato-22-fosfato (Isaac, R.E. et al., (1984) Biochem. J. 231,459-464).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[011] Os inventores prepararam inesperadamente um composto inusitado com uma estrutura estável, boa solubilidade em água e excelente atividade em baixar a glicose usando 20-hidróxi-P-ecdisterona, um tipo de compostos de ecdisterona, como um material de partida para um grande número de pesquisas de derivados de ecdisterona.

[012] Um objeto desta invenção é fornecer um derivado de ecdisterona.

[013] Outro objeto desta invenção é fornecer um método para preparar o derivado de ecdisterona descrito acima.

[014] Outro objeto desta invenção é fornecer uma composição farmacêutica que compreende o derivado de ecdisterona descrito acima.

[015] Outro objeto desta invenção é fornecer o uso do derivado de ecdisterona descrito acima na preparação de um medicamento hipoglicemiante.

[016] Particularmente, na solução técnica desta invenção, a invenção fornece um composto com a estrutura da seguinte fórmula I:

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ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

[017] Na solução técnica desta invenção, os sais farmaceuticamente aceitáveis são selecionados entre sais de metais, ou sais de aminas orgânicas ou amônio, onde os sais de metais são selecionados entre sais de metais alcalinos, sais de metais alcalinoterrosos; e os sais de metais alcalinos são selecionados entre os sais de lítio, sódio, potássio, ou césio ou similares; os sais de metais alcalinoterrosos são selecionados entre os sais de cálcio, magnésio, ou alumínio ou similares; os sais de aminas orgânicas ou amônio são selecionados entre sais de aminas primárias, aminas secundárias, aminas terciárias, ou amônio quaternário, com alquila de C1-C4.

[018] Na solução técnica desta invenção, a invenção fornece um sal de sódio do composto da fórmula I, cuja estrutura é a seguinte fórmula I’:

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[019] Na solução técnica fornecida por esta invenção, os solvatos são selecionados entre solvatos orgânicos ou hidratos, onde os solvatos orgânicos são selecionados entre alcanol de C1-C4, tal como metanol, etanol, propanol, isopropanol ou butanol ou similares; ou dimetilformamida; ou sulfóxido de dimetila ou similares.

[020] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para preparar o composto da fórmula I descrito acima, ou os seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, compreendendo as seguintes etapas de:

(1) usar 20-hidróxi-P-ecdisterona como um material de partida para reagir com ácido fenil-borônico na presença de um solvente orgânico, para produzir um composto da fórmula II:

(2) reagir o composto da fórmula II com um composto da fórmula III sob condição ácida para produzir um composto da fórmula IV; onde, R·] ed R₂ nos compostos das fórmulas III e IV são, cada um, independentemente, hidrogênio, alquila de C1-C4 ou fenila, R_x e R_Y no composto da fórmula III são, cada um, independentemente, alquila de C1-C4, fenila, ou R_XO- e R_YO-, em conjunto com o carbono ao qual eles estão anexados, formam carbonila, de preferência Ri, R2, Rx e R_Y no composto da fórmula III são simultaneamente metila:

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(3) reagir o composto da fórmula IV com um composto da fórmula V, para produzir um composto da fórmula VI, onde R3, R₄ e R5 na formula V são, cada um, selecionados independentemente entre alquila de C1-C4, de preferência, R₃, R₄ e R5 são simultaneamente metila ou etila; X é halogênio, e de preferência X é cloro; as definições de R-ι, R2, R3, R₄ e R5 na formula VI são iguais àquelas na fórmula IV e fórmula V:

iv V VI (4) desproteger o composto da fórmula VI na presença de uma base e um peróxido, para produzir um composto da fórmula VII; sendo as definições de Ri, R2, R3, R4 θ Rs na fórmula VII iguais àquelas na fórmula IV e fórmula V:

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(5) reagir o composto da fórmula VII com POCI3, para produzir 0 composto da fórmula VIII, sendo as definições de R1, R2, R3, R4 e Rs na fórmula VIII iguais àquelas na fórmula IV e fórmula V:

VII

VIII (6) desproteger o composto da fórmula VIII sob condição ácida, para produzir o composto da fórmula I:

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[021] No método de preparação descrito acima, fornecido por esta invenção, opcionalmente, depois de obter o composto da fórmula I na etapa (6), um método convencional de salificação nessas técnicas é usado para produzir o sal do composto da fórmula I.

[022] No método de preparação descrito acima, fornecido por esta invenção, opcionalmente, a etapa (6) é desproteger o composto de VIII sob condição ácida, e depois um método convencional de salificação é usado para produzir o sal do composto da fórmula I. Por exemplo, o composto de VIII foi desprotegido sob condição ácida, e depois NaHCO₃foi adicionado para reagir, produzindo o sal sódico do composto da fórmula I:

VIII

[023] No método de preparação descrito acima, fornecido por esta invenção,

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10/24 na etapa (1), o solvente orgânico é selecionado entre dimetilacetamida, dimetilformamida, tetraidrofurano ou sulfóxido de dimetila ou similares; a temperatura da reação é 0~50 °C, e mais preferivelmente, a reação é conduzida à temperatura ambiente.

[024] No método de preparação descrito acima, fornecido por esta invenção, na etapa (2), a condição ácida significa na presença de um catalisador ácido. O catalisador ácido é selecionado entre ácido para-toluenossulfônico, paratoluenossulfonato de piridínio, ou cloreto estanoso ou similares.

[025] No método de preparação descrito acima, fornecido por esta invenção, a reação na etapa (3) é conduzida na presença de uma base orgânica e um ativador. A base orgânica é selecionada entre imidazol, N-metil-morfolina, piridina, ou trietilamina ou similares. O ativador é selecionado entre DMAP (4dimetil-aminopiridina), ou dimetilformamida ou similares.

[026] No método de preparação descrito acima, fornecido por esta invenção, na etapa (4), a base é hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, carbonato de potássio, carbonato de sódio ou similares, e o peróxido é peróxido de hidrogênio.

[027] No método de preparação descrito acima, fornecido por esta invenção, a reação na etapa (5) é conduzida na presença de uma base orgânica. A base orgânica é selecionada entre piridina, trietilamina, imidazol ou similares.

[028] No método de preparação descrito acima, fornecido por esta invenção, a condição ácida na etapa (6) refere-se a ácido clorídrico, ácido acético, ácido fluorídrico, ácido sulfúrico, ácido para-toluenossulfônico ou similares.

[029] No terceiro aspecto, a invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende o composto da fórmula I, ou os seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, onde a composição farmacêutica compreende uma quantidade eficaz do composto da fórmula I, ou seus sais ou solvatos

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11/24 farmaceuticamente aceitáveis. A quantidade eficaz é, por exemplo, cerca de 0,01 mg a 1.000 mg. A composição farmacêutica fornecida pela invenção compreende ainda um excipiente farmaceuticamente aceitável. Além disso, a composição farmacêutica fornecida pela invenção pode ser formulada em uma formulação apropriada para administração oral, administração externa ou injeção, tais como comprimidos, grânulos sólidos, cápsulas, injeção ou pó liofilizado.

[030] No quarto aspecto, a invenção fornece o uso do composto da fórmula I descrito acima, ou os seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis na preparação de um medicamento hipoglicemiante. A dose diária é de cerca de 0,01 mg a 1.000 mg dependendo da espécie, idade, sexo, modo de administração e condição.

[031] Os experimentos in vitro do consumo de glicose em células HepG2 conduzidos usando o composto da fórmula I fornecido pela invenção, demonstram que o composto possui atividade significativa em baixar a glicose, e em uma faixa de concentração de 2χ10’⁷~2χ10'⁹ M, pode aumentar o consumo de glicose em células HepG2 em mais de 500%. Enquanto que 20hidróxi-p-ecdisterona na concentração de 2χ10’⁷~2χ10'⁸ M aumenta o consumo de glicose em células HepG2 em menos do que 15%, e quando a concentração é diluída até 2χ10'⁹ M, 20-hidróxi-3-ecdisterona não tem qualquer efeito para baixar a glicose em células HepG2. Portanto, em comparação com a atividade em baixar a glicose do composto parental 20-hidróxi-P-ecdisterona, a atividade em baixar a glicose do composto da fórmula I é significativamente superior àquela de 20-hidróxi-3-ecdisterona. O experimento de dissolução demonstra que a solubilidade em água do composto da fórmula I ou seu sal de sódio é 10 vezes e 50 vezes aquela de 20-hidróxi-3-ecdisterona, respectivamente. Além disso, o experimento farmacológico in vivo demonstra que o composto da fórmula I e seu sal de sódio possui o efeito de baixar a glicose.

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[032] Adicionalmente, nos exemplos, o composto da fórmula I, em vez de ecdisterona 20- ou 22-monofosfato, foi obtido finalmente, o que demonstra ainda mais que o composto da fórmula I forma uma fosfato-lactona de cinco membros com uma estrutura estável.

MODALIDADES PREFERIDAS DA INVENÇÃO

[033] As modalidades da invenção serão ilustradas adicionalmente fazendo referência aos exemplos que se seguem. Os versados nessas técnicas devem reconhecer que as modificações feitas com base nas técnicas anteriores com os ensinamentos da invenção ainda estão dentro do âmbito de proteção reivindicado pela invenção.

Rota de Síntese do Composto da Fórmula I ou seu Sal de Sódio

CH₂CI₂,TESCI,imidazole,DMAP

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CHzCb, TESCI, imidazol, DMAP

Exemplo 1

Preparação do composto da fórmula 1:

[034] Primeiramente, o composto 1 (isto é, o composto da fórmula IV, onde Ri e R2 são metila respectivamente) foi preparado.

[035] 20-hidróxi-p-ecdisterona (1,54 g, 3,21 mmol) e ácido fenil-borônico (412 mg, 3,38 mmol) foram dissolvidos em 20 mL de DMF. A solução foi agitada à temperatura ambiente por 8 h, e depois 40 mL de salmoura saturada foram adicionados. O líquido da reação foi diluído com 150 mL de acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL χ 3), secada com sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada, para produzir um sólido branco. O produto bruto foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional.

[036] O produto bruto acima e ácido para-toluenossulfônico (55 mg, 0,32 mmol) foram dissolvidos em 40 mL de solvente compreendendo acetona e 2,2

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14/24 dimetóxi-propano (isto é, fórmula III, onde Ri, R2, Rx θ Ry são metila respectivamente) em uma razão volumétrica de 50:50. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 12 h, e depois 10 mL de NaHCOs foram adicionados para extinguir a reação. O solvente orgânico foi removido por evaporação. O resíduo foi diluído com 150 mL de EtOAc (acetato de etila), lavado com salmoura saturada (50 mL χ 3), secado com sulfato de sódio anidro, filtrado, e concentrado. O resíduo foi separado por cromatografia de coluna (50% EtOAc/petróleo) em sílica-gel, para obter o composto 1 como uma espuma branca (1,774 g, 91% de rendimento durante duas etapas).

[037] Em segundo lugar, o composto 2 (isto é, 0 composto da fórmula VI, onde Rt e R₂ são metila, respectivamente, e R3, R₄ e R5 são, cada um, independentemente, etila) foi preparado.

[038] O composto 1 (isto é, o composto da fórmula IV, onde R1 e R₂ são metila, respectivamente) preparado acima (1,95 g, 3,21 mmol), imidazol (656 mg, 9,63 mmol) e DMAP (4-dimetil-amino-piridina, 40 mg, 0,33 mmol) foram dissolvidos em 40 mL de CH₂CI₂. Adicionou-se TESCI (isto é, o composto da fórmula V, onde R₃, R₄ e R₅ são, cada um, independentemente, etila; X é cloro) (1,13 mL, 6,43 mmol) à solução na forma de gotas à temperatura ambiente. O líquido da reação foi agitado à temperatura ambiente por 4 h, diluído com EtOAc (150 mL), lavado com salmoura saturada (50 mL χ 3), secado com sulfato de sódio anidro, filtrado, e concentrado. O resíduo foi separado por cromatografia de coluna (17% de EtOAc/petróleo) em sílica-gel, para obter o composto 2 como uma espuma branca (2,11 g, rendimento de 91%). ¹H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7.79 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.46 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 5.82 (s, 1H), 4.26-4.21 (m, 2H), 4.13-4.09 (m, 1H), 2.84 (t, J = 2.84, 1H), 2.38-2.34 (m, 2H), 2.11-2.04 (m, 3H), 2.04-1.81 (m, 7H), 1.78-1.57 (m, 4H), 1.54-1.45 (m, 1H), 1.50 (s, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.27-1.22 (m, 1H), 1.26 (s, 3H), 1.25 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.96 (t , J = 8.0 Hz, 9H), 0.95 (s, 3H), 0.59 (q, J = 8.0 Hz, 6H); ¹³C NMR (50 MHz, CDCI3) δ 202.6, 162.9, 134.8,

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131.3, 127.9, 127.7, 121.5, 108.3, 86.2, 85.4, 85.0, 73.0, 72.1, 71.6, 51.9, 50.8,

47.3, 42.1, 37.8, 37.6, 34.5, 31.6, 30.9, 30.4, 29.7, 28.5, 26.7, 26.4, 23.6, 22.5, 21.2, 20.5, 17.0, 14.2, 7.1, 6.8; HRMS (M+Na⁺) calculado para C₄₂H₆₅BNaO₇Si 743.4490, encontrado 743.4452; IV (KBr)3461, 2959, 1660, 1356, 1242, 1056 cm .

[039] Em terceiro lugar, o composto 3 (isto é, o composto da fórmula VII, onde Rt e R2 são metila, respectivamente, e R₃, R₄ e R₅ são, cada um, independentemente, etila) foi preparado.

[040] Depois de dissolver o composto 2 preparado acima (2,17 g, 3,01 mmol) em 30 mL de CH2CI2, NaOH 1 M (20 mL) e H₂O₂ a 30% (10 mL) foram adicionados à temperatura ambiente. O líquido da reação foi agitado à temperatura ambiente por 30 min, e depois diluído com EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi separada. A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL χ 3), secada com sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada. O resíduo foi separado por cromatografia de coluna (25% de EtOAc/petróleo) em sílica-gel, para obter o composto 3 como uma espuma branca (1,88 g, rendimento de 98%). ¹H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 5.82 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 4.27-4.20 (m, 2H), 3.42 (d, J = 10.4 Hz), 2.81 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.36-2.30 (m, 2H), 2.11-2.03 ( m, 4H), 1.98-1.93 (dd, J = 14.4, 5.6 Hz, 1H), 1.88-1.81 (m, 2H), 1.78- 1.66 (m, 6), 1.62-1.46 (m, 2H), 1.48 (s, 3H), 1.37-1.32 (m, 1H), 1.32 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.95 (t, J = 8.0 Hz, 9H), 0.86 (s, 3H), 0.59 (q, J = 8.0 Hz, 6H); ¹³C NMR (50 MHz, CDCI3) δ 202.7, 163.3, 121.4, 108.3, 84.9,

76.6, 73.9, 72.2, 71.6, 50.8, 49.1, 47.6, 42.1, 37.8, 37.6, 34.5, 31.8, 31.2, 30.2,

29.7, 28.5, 26.7, 26.4, 26.1, 23.6, 20.8, 20.5, 20.4, 17.4, 7.1, 6.6; HRMS (M+Na⁺) calculado para C3₆H₆₂NaO₇Si 657.4163 encontrado 657.4131; IV (KBr) 3450, 2960, 1659, 1378, 1239, 1056 cm'¹.

[041] Finalmente, o composto da fórmula I foi preparado.

[042] O composto 3 preparado acima (1,28 g, 2,02 mmol) e piridina (3,4 mL)

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16/24 foram dissolvidos em THF (tetraidrofurano). POCI3 (0,96 mL, 10,5 mmol) foi adicionado na forma de gotas ao líquido da reação sob resfriamento com banho de gelo/água. O líquido da reação foi agitado à temperatura ambiente por 8 h, e depois H₂O (2 mL) foi adicionada cuidadosamente sob resfriamento com banho de gelo/água para extinguir a reação. O líquido da reação foi diluído com EtOAc (150 mL), secado com sulfato de sódio anidro, filtrado, e concentrado. O produto bruto foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional.

[043] O produto bruto descrito acima foi dissolvido em 30 mL de THF, e depois HCI 1 M (10 mL) foi adicionado. O líquido da reação foi agitado à temperatura ambiente por 12 h, e depois concentrado. O resíduo foi separado por cromatografia de coluna C18 (20% de MeOH/H₂O) em sílica-gel, para obter 0 composto da fórmula I como um pó branco (880 mg, 80%). ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.81 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.94 (s, 1H), 3.84-3.81 (m, 1H), 3.16-3.12 (m, 1H), 2.40-2.36 (m, 2H), 2.17-2.10 (m, 2H), 2.02-1.88 (m, 2H), 1.84-1.62 (m, 10 H), 1.54-1.40 (m, 2H), 1.46 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.19 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); ¹³C NMR (50 MHz, CD3OD) δ 206.3, 166.9, 122.4, 91.8, 86.7, 85.0, 70.8, 68.7, 68.5, 51.8, 51.0, 50.9, 41.5, 39.2, 37.4, 35.1, 32.8, 32.1, 31.6, 29.6, 28.9, 25.9, 25.6, 24.4, 22.3, 21.4, 17.4; ³¹P NMR δ 15.8 ppm referenciado externo H3PO₄; HRMS (M+Na⁺) calculado para C^^sNaOgP 565.2542 encontrado 565.2520; IR (KBr)3412, 2966, 1653, 1384, 1227 cm'¹.

Exemplo 2:

Preparação do sal de sódio do composto da fórmula I (isto é, o composto da fórmula Γ):

[044] O composto 3 preparado no Exemplo 1 (5,00 g, 7,88 mmol) e piridina (12,7 mL) foram dissolvidos em 50 mL deTHF. 5,7 mL de oxicloreto de fósforo foram adicionados lentamente na forma de gotas sob resfriamento com banho de gelo/água. Depois de terminada a adição, 0 líquido da reação foi reagido à

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17/24 temperatura ambiente por 4 h, resfriado até -30 °C, e depois bicarbonato de sódio saturado foi adicionado na forma de gotas lentamente para ajustar o pH para 7. O líquido da reação foi diluído com EtOAc (150 mL), secado com sulfato de sódio anidro, filtrado, e concentrado. O produto bruto foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional.

[045] O produto bruto acima foi dissolvido em 50 mL de solução (metanokácido clorídrico a 5% = 1:9). O líquido da reação foi reagido à temperatura ambiente por 24 h, e depois bicarbonato de sódio saturado foi adicionado para ajustar o pH para 7. A mistura resultante foi agitada por 30 min, e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida a 45 °C Depois da evaporação até secar, 50 mL de etanol foram adicionados para dissolver suficientemente o sólido, e depois filtrou-se. Depois, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida a 45 °C. Depois da evaporação até secar, uma cromatografia de coluna (eluição: diclorometano:metanol = 3:1), deu o sal de sódio do composto da fórmula I como um pó branco (2,5 g, 56%). ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 5.80 (s, 1H), 4.13 (dd, J = 9.2, 2.8, 1H), 3.95 (s, 1H), 3.84-3.81 (m, 1H), 3.17-3.13 (m, 1H), 2.40-2.33 (m, 2H), 2.20-2.11 (m, 2H), 1.99-1.58 (m, 12 H), 1.51-1.40 (m, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.86 (s, 3H);¹³C NMR (50 MHz, CD3OD) δ 206.3, 167.3, 122.2, 88.8, 85.1, 84.6, 70.9, 68.6, 68.4, 51.7, 50.9, 50.8, 42.0, 39.2, 37.3, 35.0, 32.8, 32.1, 31.7, 29.7,

28.8, 25.9, 25.8, 24.5, 22.4, 21.5, 17.5;³¹P NMR δ 14.3 ppm referenciado externo H3PO4; HRMS (M+H⁺) calculado para C27H₄₃NaO₉P 565.2542 encontrado 565.2540;IR (KBr) 3406, 2966, 1651, 1382, 1206 cm'¹.

Exemplo 3:

Preparação de um comprimido da composição farmacêutica que compreende 5 mg do composto da fórmula I:

[046] O comprimido da composição farmacêutica compreende os seguintes componentes:

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18/24 composto da fórmula I

Lactose mg mg celulose microcristalina mg hipromelose mg hidróxi-propil-celulose inferior substituída 10 mg estearato de magnésio mg

[047] O comprimido da composição farmacêutica foi preparado por intermédio das seguintes etapas a partir de cada componente do conteúdo descrito acima:

a hipromelose foi dissolvida com uma quantidade apropriada de água, que está pronta para uso;

o ingrediente ativo (o composto da fórmula I) e lactose, celulose microcristalina, e hidróxi-propil-celulose inferior substituída foram misturados uniformemente; uma quantidade apropriada de solução de hipromelose foi adicionada, e depois a mistura resultante foi agitada para preparar o material brando;

o material brando foi granulado por intermédio de uma peneira com malha de 0,833 mm (20 mesh), para obter grânulos úmidos;

os grânulos úmidos foram secados a 40~50 °C, para obter grânulos secos;

os grânulos secos foram passados através de uma peneira com malha de 0,833 mm (20 mesh) para terminar;

o estearato de magnésio foi adicionado e misturado uniformemente;

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19/24 o teor dos grânulos foi determinado, e o peso do comprimido foi calculado, e depois o material foi para a prensa de comprimidos.

Exemplo 4:

Preparação de um comprimido da formulação farmacêutica que compreende 100 mg do composto da fórmula I:

[048] O comprimido da composição farmacêutica compreende os seguintes componentes:

composto da fórmula 1	100 mg
lactose	150 mg
celulose microcristalina	100 mg
hipromelose	4 mg
hidróxi-propil-celulose inferior substituída	20 mg
estearato de magnésio	4 mg

[049] O comprimido da composição farmacêutica foi preparado por intermédio das seguintes etapas a partir de cada componente do conteúdo descrito acima:

o material brando foi granulado por intermédio de uma peneira

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20/24 com malha de 0,833 mm (20 mesh), para obter grânulos úmidos;

os grânulos úmidos foram secados a 40-50 °C, para obter grânulos secos;

o estearato de magnésio foi adicionado e misturado uniformemente;

o teor dos grânulos foi determinado, e o peso do comprimido foi calculado, e depois o material foi para a prensa de comprimidos.

Exemplo 5:

Preparação de uma cápsula da composição farmacêutica que compreende 50 mg do composto da fórmula I:

[050] A cápsula da composição farmacêutica compreende os seguintes componentes:

composto da fórmula 1	50 mg
lactose	50 mg
sílica-gel em pó micronizada	3 mg
estearato de magnésio	1 mg

[051] A cápsula de composição farmacêutica foi preparada por intermédio das seguintes etapas a partir de cada componente do conteúdo descrito acima:

o ingrediente ativo (o composto da fórmula I), lactose, sílica-gel em pó micronizada, e estearato de magnésio foram misturados uniformemente; o teor do pó foi determinado, a carga foi calculada, e

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21/24 depois a mistura foi carregada dentro de uma cápsula dura com um tamanho apropriado.

Exemplo Experimental 1: Experimento para consumo de glicose in vitro em células HepG2 com do composto da fórmula I:

[052] O experimento para consumo de glicose in vitro em células HepG2 foi realizado com o composto da fórmula I preparado no Exemplo 1, da seguinte maneira:

[053] Células HepG2 com bom estado de crescimento foram selecionadas e digeridas com tripsina e EDTA (ácido etilenodiaminotetracético) do suco gástrico. Depois de completada a digestão, a mistura resultante foi formulada com DMEM (Meio de Eagle Modificado de Dulbecco) tendo 10% de soro fetal bovino (FBS) em suspensão unicelular. As células foram semeadas dentro de placas com 96 poços com 1 x 10⁴ células por poço. Depois que a confluência das células atingiu 50%, o meio foi trocado por DMEM com alto teor de glicose sem soro, e cultivadas sob inanição por 12 h. O sobrenadante das células foi pipetado, e DMEM fresco com alto teor de glicose com ou sem medicações foi adicionado. As células foram divididas em um grupo de controle sem produto ativo, um grupo com 20-hidróxi-P-ecdisterona, e um grupo com um composto da fórmula I. Depois de cultivar por 24h, cada grupo foi testado quanto à mudança de glicose no meio usando o método de glicose oxidase. O resultado do teste está indicado abaixo na Tabela 1.

Tabela 1. Os efeitos do composto da fórmula I e 20-hidróxi-P-ecdisterona sobre o consumo de glicose em células HepG2 (x ±s, n=8)

Grupo	Concentração da medicação (M)	Consumo de Glicose (mM)	Consumo de Glicose Aumentado (mM)
Grupo de controle sem		1.32±0.17	-

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composto
	2x10’⁷	1.45±0.28	0.13
20-hidróxi-P-	2x10’⁸	1.38±0.11	0.06
ecdisterona	2x10’⁹	1.30±0.23	-
	2x10’⁷	6.96±0.23	5.64
composto da fórmula 1	2x10’⁸	6.51±0.12	5.19
	2x10’⁹	6.46±0.19	5.14

[054] Os resultados experimentais estão indicados na tabela 1. O composto da fórmula I possui atividade significativa em baixar glicose, e em uma faixa de concentração de 2χ10'⁷~2χ10'⁹ M pôde aumentar o consumo de glicose em células HepG2 em mais de 500%. Enquanto que 20-hidróxi^-ecdisterona na concentração 2χ10'⁷~2χ10'⁸ M aumenta o consumo de glicose em células HepG2 em menos do que 15%, e quando a concentração é diluída para 2χ10'⁹M, 20-hidróxi-P-ecdisterona não tem qualquer efeito para baixar glicose em células HepG2. Portanto, quando comparada com a atividade em baixar glicose com o composto parental, a 20-hidróxi-P-ecdisterona, a atividade em baixar glicose do composto da fórmula I é significativamente maior do que aquela de 20-hidróxi-P-ecdisterona.

Exemplo Experimental 2: Experimento de dissolução do composto da fórmula 1 e o seu sal de sódio

[055] O composto da fórmula I (preparado de acordo com o método do Exemplo 1) é um pó cristalino branco ou esbranquiçado, sendo o ponto de fusão 164-177 °C, a fórmula molecular sendo C27H43O9P, e o peso molecular, 542,6. A quantidade de água necessária para dissolver completamente este produto (1 g) é 12 mL. A solubilidade deste produto é 10 vezes aquela de 20hidróxi-3-ecdisterona.

[056] O sal de sódio do composto da fórmula I (preparado de acordo com o método do Exemplo 2) é um pó cristalino branco ou esbranquiçado, sendo 0

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23/24 ponto de fusão 173—185 °C, a fórmula molecular sendo C₂7H420gNaP, e o peso molecular, 564,6. A quantidade de água necessária para dissolver completamente este produto (1 g) é 2,5 mL. A solubilidade deste produto é 50 vezes aquela de 20-hidróxi-P-ecdisterona.

Exemplo Experimental 3: Experimento farmacológico para o composto da fórmula 1 e o seu sal de sódio

[057] Os experimentos farmacológicos foram realizados com o composto da fórmula 1 e o seu sal de sódio preparado no Exemplo 1 e Exemplo 2 da seguinte maneira:

[058] 40 camundongos machos com um peso corporal de 21 ± 1,8 g (camundongo Kunming: grau SPF, macho, fornecido pelo centro de cobaias da Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences) foram agrupados em 4 grupos aleatoriamente, que são o grupo de controle, grupo de 5 mg/kg do composto da fórmula I, grupo de 5mg/kg do sal de sódio do composto da fórmula I, e grupo de 25mg/kg de glibenclamida (fabricada por Tianjin Pacific Chemical & Pharmaceutical Co., LTD). No caso do grupo de controle, água destilada foi fornecida, enquanto que nos outros grupos, os medicamentos correspondentes foram fornecidos. O medicamento foi administrado por via intragástrica em um volume de administração de 0,2 mL/10 g duas vezes ao dia. A administração foi continuada por 19 vezes. No 5² tempo e no 19² tempo e depois de jejum rigoroso por 2 h, o valor de glicose sanguínea em cada camundongo foi testado por um Medidor de Glicose do Sangue, e os resultados foram registrados da seguinte maneira:

Tabela 2. Os efeitos do composto da fórmula I e o seu sal de sódio sobre o nível sanguíneo de glicose em camundongos normais (X±S)

Grupo	Dose (mg/kg)	Número de animais	Glicose do sangue, mmol/L
3 dias depois	10 dias depois

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			da dosagem	da dosagem
Controle		10	11.4±2.1	11.511.9
composto da fórmula 1	5	10	10.4±1.7	9.1 ±2.3’
Sal sódico do composto da fórmula 1	5	10	10.211.9	9.811.4*
Glibenclamida	25	10	9.310.9*	9.910.9*

[059] Comparado com grupo de controle: *P < 0,05.

[060] Baseado na Tabela 2, o composto da fórmula I e o seu sal de sódio têm o efeito de baixar a glicose em camundongos normais.

Aplicabilidade Industrial

[061] A invenção prepara um composto inusitado com uma estrutura estável, boa solubilidade em água, e excelente atividade em baixar a glicose.

Claims

(1) usar 20-hidróxi-p-ecdisterona como um material de partida para reagir com ácido fenil-borônico na presença de um solvente orgânico, para produzir um composto da fórmula II:

1. Composto, caracterizado pelo fato de que tem a estrutura da fórmula I:

ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
(2) reagir o composto da fórmula II com um composto da fórmula III sob condição ácido, para produzir um composto da fórmula IV; onde, Ri e R2 nos compostos das fórmulas III e IV são, cada um, independentemente hidrogênio, alquila de C1-C4 ou fenila, R_x e R_Y são, cada um, independentemente alquila de C1-C4, fenila, ou R_XO- e R_YO-, em conjunto com 0 carbono ao qual eles estão anexados, formam carbonila:

2/5 reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os sais farmaceuticamente aceitáveis são selecionados entre sais de metais, ou sais de aminas orgânicas ou amônio.
3/5 r₅ são, cada um, selecionados independentemente entre alquila de C1-C4; X é halogênio; as definições de R_1f R₂, R3, R4 iguais àquelas na fórmula IV e fórmula V:

na fórmula VI são

V

R3

R4-SÍ-X

R5

vi

(3) reagir o composto da fórmula IV com um composto da fórmula V, para produzir um composto da fórmula VI, onde R3, R4 θ Rs na fórmula V

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3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que os sais de metais são sal de sódio, isto é, o composto da fórmula Γ:
4/5

Ο

VII

VIII ?

R₄

(4) desproteger o composto da fórmula VI na presença de uma base e um peróxido, para produzir um composto da fórmula VII; sendo as definições de R1, R₂, R3, R4 e R5 na fórmula VII iguais àquelas na fórmula IV e fórmula V:

4. Método para preparar o composto de acordo com qualquer uma das

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5/5 metila ou etila; X é cloro.

5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que depois de obter o composto da fórmula I na etapa (6), um método convencional de salificação é usado para produzir o sal do composto da fórmula I.

(5) reagir 0 composto da fórmula VII com POCI₃, para produzir um composto da fórmula VIII, sendo as definições de R1, R₂, R3, R4 e Rs na fórmula VIII iguais àquelas na fórmula IV e fórmula V:

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6. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que Ri, R₂, Rx e R_Y no composto da fórmula III na etapa (2) são simultaneamente metila.

6) desproteger o composto da fórmula VIII sob condição ácida, para produzir o composto da fórmula I:

O'

R

Η O

HÒ

VIII
7. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que R3, R₄ e R5 no composto da fórmula V na etapa (3) são simultaneamente

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8. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o solvente orgânico na etapa (1) é selecionado entre dimetil-formamida, dimetilacetamida, tetraidrofurano ou sulfóxido de dimetila; e a temperatura da reação é 0~50°C;

a condição ácida na etapa (2) significa na presença de um catalisador ácido, e o catalisador ácido é selecionado entre ácido paratoluenossulfônico.para-toluenossulfonato de piridínio, ou cloreto estanoso;

a reação na etapa (3) é conduzida na presença de uma base orgânica e um ativador; a base orgânica é selecionada entre imidazol, Nmetil-morfolina, piridina, ou trietilamina, e o ativador é selecionado entre 4-dimetil-aminopiridina, ou dimetilformamida;

a base na etapa (4) é hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, carbonato de potássio, ou carbonato de sódio, e o peróxido é peróxido de hidrogênio;

a reação na etapa (5) é conduzida na presença de uma base orgânica, e a base orgânica é selecionada entre piridina, trietilamina, ou imidazol.
9. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3.
10. Uso do composto de acordo com as reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento hipoglicemiante.