CN117263865A - 以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂及其制备方法、药物组合物和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化药技术领域,具体涉及一种以6,6‑二甲基双环[3.1.1]‑2‑甲胺为疏水基团的蛋白降解剂及其制备方法、药物组合物和应用。该以6,6‑二甲基双环[3.1.1]‑2‑甲胺为疏水基团的蛋白降解剂结构式如式I所示,Linker为任一化学上可行的连接结构。本发明提供的蛋白降解剂可以有效诱导癌细胞系中AR和AR‑V7的降解,相较于前人报道的基于金刚烷为疏水标签的AR蛋白降解剂,具有显著提升的蛋白降解效果和体内药效,能够在低给药剂量中表现出优异的体内抗前列腺癌效果,且具有较高安全性,可应用于制备AR降解剂中,适合用于治疗前列腺癌等癌症药物的开发。式I。
Description
技术领域
本发明属于化药技术领域,具体涉及一种以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂及其制备方法、药物组合物和应用。
背景技术
疏水标签(Hydrophobic Tag, Hyt)双功能分子由靶蛋白配体、连接子、疏水基团三部分构成。通过在可与靶标结合的小分子上连接一个大而疏水基团,这样的双头分子结合到靶标后,会被细胞内蛋白修复机制错误的认为是目标蛋白中错误折叠的部分,随后可通过伴侣蛋白对其进行折叠,进而被蛋白酶体降解。Hyt分子中的疏水基团往往分子量较小,因而可能具有更高的溶解性和成药性。目前基于疏水标签的降解剂的研发仍处于探索阶段,一方面是报道的疏水标签片段较少,在降解活性,理化性质上依然存在较大的优化空间。另一方面是确切降解机制尚未明确。因此探索更多的具有高活性、优良理化性质的疏水片段以及明确其对应的降解机制,对于基于疏水标签片段向临床应用发展是十分关键的。
雄激素受体(AR)是经过临床验证的治疗人类前列腺癌的靶点。雄激素受体拮抗剂对转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)的治疗有效,可以显著提高前列腺癌患者的生存期,且耐受性良好。但当前临床雄激素受体拮抗剂(恩杂鲁胺等)通常在病人用药18个月内容易产生耐药性。在大多数对恩杂鲁胺产生耐药性的患者中,雄激素受体的信号通路仍在发挥作用,而传统的AR抑制剂和拮抗剂不能影响AR蛋白和AR-V7等剪切体蛋白的表达水平。因此,靶向雄激素受体蛋白降解或许是一种非常有潜力的治疗策略,可能比雄激素受体拮抗剂更有效果。某团队此前基于疏水标签技术开发得到了可降解AR的蛋白降解剂SARD279和SARD033。
式1 SARD279、SARD033、RU59063结构
这两种降解剂是以金刚烷为疏水标签,通过不同长度的聚乙二醇连接AR配体RU59063得到的(图1),其中SARD279能够在LNCaP细胞中以1 μM浓度降解50%的AR蛋白(DC50),然而无论是常规的PROTAC降解剂还是此类疏水标签降解剂,都对AR-V7蛋白水平无明显影响。并且,常规AR降解剂的降解效果相对较低、肝微粒体及血浆代谢稳定性较差、溶解度差难以口服,难以用于临床上进一步的治疗和开发,因此,需要降解效果更好的新型AR蛋白降解剂的开发以满足临床需求。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术的不足,提供以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂及其制备方法、药物组合物和应用,具体采用以下的技术方案:
根据本发明的第一方面,提供了一种以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂,其结构式如式I所示:
式I;其中,Linker为任一化学上可行的连接结构。
本发明提供一种以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂,在双功能分子中,以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团,恩杂鲁胺母核为靶蛋白配体,本发明通过替换不同的Linker,筛选能够有效降解AR的蛋白降解剂。在此基础上,本发明制得的AR的蛋白降解剂可以以剂量依赖性的方式高效的诱导人前列腺癌细胞系(22Rv1细胞系)中AR和AR-V7的降解,并且表现出极其优异的体内抗前列腺癌效果。
优选地,Linker为饱和脂肪链或不饱和脂肪链。通过选择不同类型、不同长度的理想的连接子,从而达到在空间上既不影响两个蛋白结合又能维持它们的结合的目的。
优选地,以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂的分子结构为式II、式III、式IV中的任意一种:
式II;
式III;
式IV;
其中,式II中,m为1-8中的任一正整数;式III中,n为1-10中的任一正整数;式IV中,o为1-8中的任一正整数。
更为优选地,以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂的分子结构为式V所示:
式V。
实验结果数据显示,上述式V所示化合物可以以剂量依赖性的方式高效的诱导人前列腺癌细胞系22Rv1中AR和AR-V7的降解,并且表现出最为优异的体内抗前列腺癌效果,肿瘤抑制率为94.2%。
根据本发明的第二方面,还提供了一种上述以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂的制备方法,其制备路线为路线一、路线二或路线三:
路线一:
;
路线二:
;
路线三:
。
上述路线简便,所用原料廉价易得,反应总体收率较高,在路线一中,使用恩杂鲁胺母核A与不同长度的二溴代聚乙二醇(B1-B4)在K2CO3, DMF作用下发生取代反应获得中间体(C1-C4),随后与化合物D在TEA作用反应获得终产物E1-E4;路线二中,使用6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺(D)与不同长度的二溴代烷(F1-F3)在TEA作用反应获得中间体G1-G3,随后与恩杂鲁胺母核A在K2CO3, DMF作用下发生取代获得终产物H1-H3;路线三中,使用6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺(D)与不同长度的炔酸(I1-I5)在HATU作用下酰胺缩合获得中间体J1-J5,随后恩杂鲁胺母核A与2-叠氮乙基-4-甲基苯磺酸酯(化合物K)在K2CO3, DMF作用下发生取代获得中间体L,随后与J1-J5发生Click反应获得终产物M1-M5。
根据本发明的第三方面,上述以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂或其药学上可接受的盐还能够应用在制备雄激素受体蛋白(AR)降解剂中。
优选地,上述雄激素受体蛋白(AR)降解剂可用于制备治疗和/或预防具有AR异常或对传统AR抑制剂耐药相关癌症的药物。相关癌症包括:前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌。优选用于前列腺癌的治疗。
根据本发明的第四方面,还提供了一种药物组合物,以上述的以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂或其药学上可接受的盐为主要活性成分。上述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。上述赋形剂包括阿拉伯胶、糖浆、羊毛脂、淀粉中的至少一种。该赋形剂性质稳定,与主药无配伍禁忌,不产生副作用,不影响疗效,在常温下不易变形、干裂、霉变、虫蛀、对人体无害、无生理作用,不与主药产生化学或物理作用,不影响主药的含量测定。溶剂包括水、甘油或乙醇。
本发明的有益效果为:本发明获得了一种以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂,该制备过程简单易行,通过不同路径得到多种蛋白降解剂,可应用于制备AR降解剂中,所得蛋白降解剂相较于阳性对照SARD279具有更高的蛋白降解活性效果,能够有效提高药物效力。此外,该蛋白降解剂还可组成药物组合物,对多种肿瘤细胞增殖均有一定抑制作用,适合用于治疗前列腺癌等癌症药物的开发。
附图说明
图1所示为为化合物E2、M3、M4、M5、M6在22Rv1细胞系中浓度依赖性的降解AR和AR-V7蛋白作用的筛选图;
图2所示为化合物M4在(A)0、1、10、100、1000 nM五个浓度梯度下浓度依赖性降解AR和AR-V7蛋白图;(B)0、12.5、25、50、100、200 nM六个浓度梯度下浓度依赖性降解AR和AR-V7蛋白图;(C)0、2、4、8、16、24、48 h七个时间梯度下时间依赖性降解AR和AR-V7蛋白图。
具体实施方式
以下将结合实施例和附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整的描述,以充分地理解本发明的目的、方案和效果。需要说明的是,在不冲突的情况下,本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
实施例1
一种以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂
(1)化合物E1的制备
化合物E1的结构如下:
化合物E1;其制备过程如下:
步骤1:化合物C1的制备
将化合物A(405 mg, 1.00 mmol)和化合物B1(2,2'-二溴二乙醚,232 mg, 1.00mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3 mL)中,加入碳酸钾(277 mg, 2.00 mmol),室温反应过夜,反应完成后用水(12 mL)稀释,并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取,随后合并有机相并用饱和NaCl 溶液(12 mL)洗反应液,有机相使用无水硫酸钠进行干燥,浓缩,将得到的粗品用硅胶柱层析进行纯化(石油醚:乙酸乙酯 = 6: 1)得到化合物C1。
上述制备过程中化合物A、化合物B1、化合物C1,其结构如下所示:
化合物A、/>化合物B1、
化合物C1;
对化合物C1进行检测,其检测结果如下:HRMS (ESI) calculated forC23H22BrF3N3O3S+[M+H]+: 556.0512, found. 556.0513。
步骤2:化合物E1的制备
将化合物C1(278 mg, 0.50 mmol)和化合物D(76.2 mg, 0.500 mmol)溶于四氢呋喃(5 mL)中,加入三乙胺(139 μL, 1.00 mmol),室温反应1 h,反应完成后旋干四氢呋喃,用水(8 mL)稀释,并用乙酸乙酯(3×8 mL)萃取,随后合并有机相并用无水硫酸钠进行干燥,浓缩,将得到的粗品用硅胶柱层析进行纯化(二氯甲烷:甲醇 = 22: 1)得化合物E1。
上述制备过程中化合物D的结构如下所示:
化合物D;
对化合物E1进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.13 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 7.69 (dd,J= 7.5, 2.1 Hz, 1H),7.13 (s, 1H), 7.12 (q,J= 4.0 Hz, 1H), 6.89 – 6.81 (m, 2H), 4.13 (s, 2H), 3.67(d,J= 0.7 Hz, 2H), 3.63 – 3.49 (m, 2H), 2.90 – 2.74 (m, 3H), 2.53 (d,J= 0.6Hz, 2H), 1.75 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.62 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.58 – 1.46 (m,10H), 1.31 (d,J= 1.3 Hz, 1H), 1.30 – 1.22 (m, 2H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s,3H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ 172.88, 171.30, 158.47, 136.87, 135.57,133.83, 133.64, 125.66, 125.33, 124.79, 124.48, 119.43, 117.44, 106.85,70.64, 70.49, 69.05, 66.95, 54.49, 50.80, 48.47, 45.22, 41.41, 39.07, 33.95,30.50, 27.59, 23.78, 23.75. HRMS (ESI) calculated for C33H40F3N4O3S+[M+H]+:629.2768, found. 629.2766。
(2)化合物E2的制备
化合物E2的结构如下:
化合物E2;其制备过程如下:
具体制备方法为:按照化合物E1的合成步骤获得化合物E2,相比于化合物E1,仅将2,2'-二溴二乙醚改为了1,2-二(2-溴乙氧基)乙烷,得到化合物化合物C2,然后将化合物C2和化合物D反应,得到化合物E2。
上述制备过程中化合物C2的结构如下所示:
化合物C2;
对化合物E2进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.13 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 7.69 (dd,J= 7.5, 2.1 Hz, 1H),7.13 (s, 1H), 7.12 (q,J= 4.0 Hz, 1H), 6.89 – 6.81 (m, 2H), 4.13 (s, 2H), 3.69– 3.49 (m, 9H), 2.89 – 2.74 (m, 3H), 2.53 (d,J= 0.6 Hz, 2H), 1.75 (d,J= 13.0Hz, 1H), 1.62 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.58 – 1.46 (m, 9H), 1.34 – 1.22 (m, 3H),0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ 172.88, 171.30,158.47, 136.87, 135.57, 133.83, 133.64, 125.66, 125.33, 124.79, 124.48,119.43, 117.44, 106.85, 71.81, 71.45, 71.29, 70.72, 68.98, 66.95, 54.49,50.80, 48.08, 45.22, 41.41, 39.07, 33.95, 30.50, 27.59, 23.78, 23.75. HRMS(ESI): m/z calcd for C35H44F3N4O4S+[M+H]+: 673.3030; found 673.3033。
(3)化合物E3的制备
化合物E3的结构如下:
化合物E3;其制备过程如下:
具体制备方法为:按照化合物E1的合成步骤获得化合物E3,相比于化合物E1,仅将2,2'-二溴二乙醚改为了1,11-二溴-3,6,9-三氧杂十一烷,得到化合物化合物C3,然后将化合物C3和化合物D反应,得到化合物E3。
上述制备过程中化合物C3的结构如下所示:
化合物C3;
对化合物E3进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.13 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 7.69 (dd,J= 7.5, 2.1 Hz, 1H),7.12 (q,J= 4.0 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.89 – 6.81 (m, 2H), 4.13 (s, 2H), 3.69– 3.49 (m, 13H), 2.89 – 2.74 (m, 3H), 2.53 (d,J= 0.6 Hz, 2H), 1.75 (d,J= 13.0Hz, 1H), 1.62 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.58 – 1.46 (m, 9H), 1.34 – 1.22 (m, 3H),0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ 172.88, 171.30,158.47, 136.87, 135.57, 133.83, 133.64, 125.66, 125.33, 124.79, 124.48,119.43, 117.44, 106.85, 71.81, 71.54, 71.44, 71.37, 71.29, 70.72, 68.98,66.95, 54.49, 50.80, 48.08, 45.22, 41.41, 39.07, 33.95, 30.50, 27.59, 23.78,23.75. HRMS (ESI): m/z calcd for C37H48F3N4O5S+[M+H]+: 717.3292; found 717.3289。
(4)化合物E4的制备
化合物E4的结构如下:
化合物E4;其制备过程如下:
具体制备方法为:按照化合物E1的合成步骤获得化合物E4,相比于化合物E1,仅将2,2'-二溴二乙醚改为了1,14-二溴-3,6,9,12-四噁十四烷,得到化合物化合物C4,然后将化合物C4和化合物D反应,得到化合物E4。
上述制备过程中化合物C4的结构如下所示:
化合物C4;
对化合物E4进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.13 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 7.4 Hz, 1H), 7.69 (dd,J= 7.5, 2.0 Hz, 1H),7.16 – 7.08 (m, 2H), 6.89 – 6.81 (m, 2H), 4.13 (s, 2H), 3.64 (d,J= 3.5 Hz,2H), 3.65 – 3.49 (m, 14H), 2.84 (s, 1H), 2.82 (d,J= 0.8 Hz, 1H), 2.80 – 2.74(m, 1H), 2.53 (s, 2H), 1.75 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.62 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.56(d,J= 1.5 Hz, 4H), 1.54 – 1.46 (m, 6H), 1.31 (d,J= 1.3 Hz, 1H), 1.30 – 1.22(m, 2H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ 172.88,171.30, 158.47, 136.87, 135.57, 133.83, 133.64, 125.66, 125.33, 124.79,124.48, 119.43, 117.44, 106.85, 71.81, 71.53, 71.44, 71.37, 71.29, 70.72,68.98, 66.95, 54.49, 50.80, 48.08, 45.22, 41.41, 39.07, 33.95, 31.32, 30.50,27.66, 27.59, 23.78, 23.75. HRMS (ESI): m/z calcd for C39H52F3N4O6S+[M+H]+:761.3554; found 761.3552。
(5)化合物H1的制备
化合物H1的结构如下:
化合物H1;其制备过程如下:
步骤1:化合物G1的制备
将化合物D(152 mg, 1.00 mmol)和化合物F1(1,4-二溴丁烷,216 mg, 1.00mmol)溶于四氢呋喃(8 mL)中,加入三乙胺(278 μL, 2.00 mmol),室温反应1 h,反应完成后旋干四氢呋喃,用水(12 mL)稀释,并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取,随后合并有机相并用无水硫酸钠进行干燥,浓缩,将得到的粗品用硅胶柱层析进行纯化(二氯甲烷:甲醇 = 20:1)得化合物G1。
上述制备过程中化合物D、化合物F1、化合物G1,其结构如下所示:
化合物D、/>化合物F1、/>化合物G1;
对化合物G1进行检测,其检测结果如下:HRMS (ESI) calculated for C14H27BrN+ [M+H]+: 288.1321, found. 288.1323。
步骤2:化合物H1的制备
将化合物A(203 mg, 0.500 mmol)和化合物G1(144 mg, 0.500 mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6 mL)中,加入碳酸钾(139 mg, 1.00 mmol),室温反应过夜,反应完成后用水(12 mL)稀释,并用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取,随后合并有机相并用饱和 NaCl 溶液(12mL)洗反应液,有机相使用无水硫酸钠进行干燥,浓缩,将得到的粗品用硅胶柱层析进行纯化(二氯甲烷:甲醇 = 15: 1)得到化合物H1。
上述制备过程中化合物A的结构式如下:
;
对化合物H1进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.13 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 7.69 (dd,J= 7.5, 2.1 Hz, 1H),7.13 – 7.06 (m, 2H), 6.86 – 6.78 (m, 2H), 4.00 (s, 2H), 2.96 (s, 1H), 2.74(d,J= 0.5 Hz, 2H), 2.60 (s, 1H), 2.54 – 2.46 (m, 1H), 1.86 – 1.78 (m, 2H),1.75 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.69 – 1.46 (m, 13H), 1.31 (d,J= 1.3 Hz, 1H), 1.30 –1.22 (m, 2H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ172.88, 171.30, 159.04, 136.87, 135.57, 133.83, 133.64, 125.66, 125.33,124.79, 124.42, 119.43, 117.54, 106.85, 78.03, 66.95, 53.83, 53.82, 50.80,50.43, 45.22, 41.41, 39.15, 33.95, 30.88, 30.53, 28.47, 27.59, 23.78. HRMS(ESI): m/z calcd for C33H40F3N4O2S+[M+H]+: 613.2819; found 613.2817。
(6)化合物H2的制备
化合物H2的结构如下:
化合物H2;其制备过程如下:
具体制备方法为:按照化合物H1的合成步骤获得化合物H2,相比于化合物H1,仅将1,4-二溴丁烷改为了1,5-二溴戊烷,得到化合物化合物G2,然后将化合物G2和化合物D反应,得到化合物H2。
上述制备过程中化合物G2的结构如下所示:
化合物G2;
对化合物H2进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.13 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 7.4 Hz, 1H), 7.69 (dd,J= 7.5, 2.1 Hz, 1H),7.13 – 7.06 (m, 2H), 6.86 – 6.78 (m, 2H), 4.01 (s, 2H), 2.96 (s, 1H), 2.67(d,J= 0.6 Hz, 2H), 2.60 (s, 1H), 2.54 – 2.46 (m, 1H), 1.80 – 1.71 (m, 3H),1.67 (s, 1H), 1.61 (t,J= 12.9 Hz, 1H), 1.58 – 1.46 (m, 13H), 1.31 (d,J= 1.3Hz, 1H), 1.30 – 1.22 (m, 2H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).13C NMR (100 MHz,Chloroform-d) δ 172.88, 171.30, 159.05, 159.04, 136.87, 135.57, 133.83,133.64, 125.66, 125.33, 124.79, 124.42, 119.43, 117.54, 106.85, 78.29, 66.95,52.46, 50.80, 49.25, 45.22, 41.41, 39.15, 33.95, 30.57, 30.53, 30.44, 27.59,26.28, 23.78. HRMS (ESI): m/z calcd for C34H42F3N4O2S+[M+H]+: 627.2975; found627.2977。
(7)化合物H3的制备
化合物H3的结构如下:
化合物H3;其制备过程如下:
具体制备方法为:按照实化合物H1的合成步骤获得化合物H3,相比于化合物H1,仅将1,4-二溴丁烷改为了1,6-二溴己烷,得到化合物化合物G3,然后将化合物G3和化合物D反应,得到化合物H3。
上述制备过程中化合物G3的结构如下所示:
化合物G3;
对化合物H3进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.13 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 7.4 Hz, 1H), 7.69 (dd,J= 7.5, 2.1 Hz, 1H),7.13 – 7.06 (m, 2H), 6.86 – 6.78 (m, 2H), 4.01 (s, 2H), 2.96 (s, 1H), 2.69 –2.62 (m, 2H), 2.60 (s, 1H), 2.54 – 2.46 (m, 1H), 1.78 (s, 2H), 1.75 (d,J=13.0 Hz, 1H), 1.66 (s, 1H), 1.62 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.58 – 1.44 (m, 11H),1.45 (s, 2H), 1.36 (d,J= 0.6 Hz, 2H), 1.31 (d,J= 1.3 Hz, 1H), 1.30 – 1.22 (m,2H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ 172.88,171.30, 159.04, 136.87, 135.57, 133.83, 133.64, 125.66, 125.33, 124.79,124.42, 119.43, 117.54, 106.85, 78.29, 66.95, 52.46, 50.80, 49.16, 45.22,41.41, 39.15, 33.95, 31.01, 30.91, 30.53, 29.01, 27.59, 26.99, 23.78, 23.75.HRMS (ESI): m/z calcd for C35H44F3N4O2S+[M+H]+: 641.3132; found 641.3136。
(8)化合物M1的制备
化合物M1的结构如下:
化合物M1;其制备过程如下:
步骤1:化合物J1的制备
在冰浴下,将化合物D(307 mg,2.00 mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(6 mL)中,分别加入N,N,N`,N`-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(912 mg, 2.40 mmol)、二异丙基乙胺(388 mg, 3.00 mmol)和化合物I1(丙炔酸,140 mg, 2.00 mmol),5分钟后撤去冰浴,室温搅拌过夜后,将瓶内的液体用乙酸乙酯稀释(20 mL),随后分别用1 N HCl溶液(20 mL)、饱和碳酸氢钠溶液(20 mL)和饱和食盐水(20 mL)洗,合并有机相使用无水硫酸钠进行干燥,浓缩后通过硅胶快速柱色谱(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1)得到化合物J1。
上述制备过程中化合物D、化合物I1、化合物J1,其结构如下所示:
化合物D、/>化合物I1、/>化合物J1;
对化合物J1进行检测,其检测结果如下:HRMS (ESI) calculated for C13H20NO+[M+H]+: 206.3085, found. 206.3083。
步骤2:化合物L的制备
将化合物A(811 mg, 2.00 mmol)和化合物K(483 mg, 2.00 mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6 mL)中,加入碳酸钾(553 mg, 4.00 mmol),室温反应过夜,反应完成后用水(30mL)稀释,并用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取,随后合并有机相并用饱和 NaCl 溶液(30 mL)洗反应液,有机相使用无水硫酸钠进行干燥,浓缩,将得到的粗品用硅胶柱层析进行纯化(二氯甲烷:甲醇 = 25: 1)得化合物L。
上述制备过程中化合物A、化合物K、化合物L,其结构如下所示:
化合物A、/>化合物K、/>化合物L;
对化合物L进行检测,其检测结果如下:HRMS (ESI) calculated forC21H18F3N6O2S+[M+H]+: 475.1159, found. 475.1161。
步骤3:化合物M1的制备
将L(237 mg, 0.500 mmol)和化合物J1(103 mg, 0.500 mmol)溶于t-BuOH/H2O(67 mL, 1:1)混合溶剂中,加入CuSO4•5H2O(62.5 mg, 0.250 mmol)、L-抗坏血酸钠(89.1mg, 0.450 mmol),室温反应过夜,反应完成后过滤除去CuSO4•5H2O,滤液真空浓缩后通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷: 甲醇=18:1)分离得化合物M1。
对化合物M1进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.25 (s, 1H), 7.98 – 7.94 (m, 2H), 7.83 (dd,J= 8.3, 2.1 Hz, 1H), 7.21 (d,J=8.8 Hz, 2H), 7.17 (d,J= 6.1 Hz, 1H), 7.01 (d,J= 8.9 Hz, 2H), 4.84 (t,J= 4.8Hz, 2H), 4.42 (t,J= 4.9 Hz, 2H), 3.45 (dt,J= 7.9, 6.3 Hz, 2H), 2.38 – 2.29(m, 2H), 2.03 – 1.87 (m, 5H), 1.70 (d,J= 14.2 Hz, 1H), 1.56 (s, 6H), 1.25 (s,1H), 1.19 (s, 3H), 1.07 (s, 3H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ 180.2,175.0, 159.9, 158.3, 143.5, 137.1, 135.2, 133.8(q,J (CF)= 33.1 Hz), 132.2,130.9, 128.5(q,J (CF)= 221.1 Hz), 127.2(q,J (CF)= 5.1 Hz), 126.3, 123.2, 115.6,114.8, 110.2, 66.3, 66.3, 49.9, 44.7, 43.7, 41.4, 41.3, 33.2, 27.9, 25.9,23.6, 23.2, 19.8.19F NMR (376 MHz, Chloroform-d) δ -61.9. HRMS (ESI): m/zcalcd for C34H37F3N7O3S+[M+H]+: 680.2625; found 680.2629。
(9)化合物M2的制备
化合物M2的结构如下:
化合物M2;其制备过程如下:
具体制备方法为:按照化合物M1的合成步骤获得化合物M2,相比于化合物M1,仅将丙炔酸改为了1-丁炔酸,得到化合物化合物J2,然后将化合物J2和化合物L反应,得到化合物M2。
上述制备过程中化合物J2的结构如下所示:
化合物J2;
对化合物M2进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.13 (d,J= 2.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 7.69 (dd,J= 7.5, 2.1 Hz, 1H),7.57 (s, 1H), 7.15 – 7.06 (m, 3H), 6.89 – 6.81 (m, 2H), 4.48 – 4.40 (m, 2H),4.38 (s, 2H), 3.79 – 3.68 (m, 2H), 3.12 (d,J= 12.5 Hz, 1H), 3.07 – 2.99 (m,1H), 1.75 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.62 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.58 – 1.49 (m, 8H),1.46 (d,J= 2.5 Hz, 2H), 1.33 – 1.22 (m, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).13CNMR (100 MHz, Chloroform-d) δ 172.88, 171.54, 171.30, 158.13, 136.87, 135.57,134.14, 133.83, 133.64, 126.63, 125.66, 125.33, 124.79, 124.48, 119.43,117.70, 106.85, 71.91, 66.95, 57.23, 49.17, 47.93, 45.22, 41.42, 41.02,37.84, 34.60, 29.64, 27.59, 23.78, 23.75. HRMS (ESI): m/z calcd forC35H39F3N7O3S+[M+H]+: 694.2782; found 694.2783。
(10)化合物M3的制备
化合物M3的结构如下:
化合物M3;其制备过程如下:
具体制备方法为:按照化合物M1的合成步骤获得化合物M3,相比于化合物M1,仅将丙炔酸改为了1-戊炔酸,得到化合物化合物J3,然后将化合物J3和化合物L反应,得到化合物M3。
上述制备过程中化合物J3的结构如下所示:
化合物J3;/>
对化合物M3进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.03 – 7.92 (m, 2H), 7.83 (dd,J= 8.2, 1.9 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.20 (d,J=8.9 Hz, 2H), 6.99 (d,J= 8.9 Hz, 2H), 4.74 (t,J= 5.0 Hz, 2H), 4.39 (t,J= 5.0Hz, 2H), 3.27 – 3.11(m, 2H), 3.04 (t,J= 7.1 Hz, 2H), 2.59 (t,J= 7.1 Hz, 2H),1.97 – 1.75 (m, 6H), 1.53 (s, 6H), 1.15 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.84 (q,J=10.0, 9.0 Hz, 4H). HRMS (ESI): m/z calcd for C36H41F3N7O3S+[M+H]+: 708.2938;found 708.2939。
(11)化合物M4的制备
化合物M4的结构如下:
化合物M4;其制备过程如下:
具体制备方法为:按照化合物M1的合成步骤获得化合物M4,相比于化合物M1,仅将丙炔酸改为了1-己炔酸,得到化合物化合物J4,然后将化合物J4和化合物L反应,得到化合物M4。
上述制备过程中化合物J4的结构如下所示:
化合物J4;
对化合物M4进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ7.96 (d,J= 9.6 Hz, 2H), 7.83 (d,J= 8.3 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.21 (d,J= 8.0Hz, 2H), 7.01 (d,J= 8.2 Hz, 2H), 5.93 (s, 1H), 4.76 (s, 2H), 4.40 (s, 2H),3.25 (tt,J= 13.6, 6.5 Hz, 2H), 2.76 (t,J= 7.0 Hz, 2H), 2.34 (d,J= 7.7 Hz,1H), 2.23 (d,J= 6.4 Hz, 2H), 2.19 – 2.12 (m, 1H), 2.03 – 1.97 (m, 2H), 1.89(d,J= 6.0 Hz, 4H), 1.25 (s, 6H), 1.17 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.87 (d,J= 4.3Hz, 2H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ 180.20, 175.00, 172.56, 158.60,137.16, 135.33, 133.71 (q,J F-C= 303.8 Hz),133.36 (q,J F-C= 30.5 Hz), 130.92,130.66, 128.39, 128.13, 127.17(q,J F-C= 2.0 Hz), 122.26, 115.65, 114.80,110.20, 66.73, 66.32, 53.43, 49.53, 45.21, 43.89, 41.40, 35.66, 33.19, 29.69,27.97, 26.00, 24.58, 23.64, 19.85, 14.10. HRMS (ESI): m/z calcd forC37H43F3N7O3S+[M+H]+: 722.3095; found 722.3097。
(12)化合物M5的制备
化合物M5的结构如下:
化合物M5;其制备过程如下:
具体制备方法为:按照化合物M1的合成步骤获得化合物M5,相比于化合物M1,仅将丙炔酸改为了1-庚炔酸,得到化合物化合物J5,然后将化合物J5和化合物L反应,得到化合物M5。
上述制备过程中化合物J5的结构如下所示:
化合物J5;
对化合物M5进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ8.08 – 7.90 (m, 2H), 7.83 (dd,J= 8.2, 2.0 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.21 (d,J=8.7 Hz, 2H), 7.08 – 6.95 (m, 2H), 5.60 (s, 1H), 4.75 (t,J= 5.0 Hz, 2H), 4.40(t,J= 4.9 Hz, 2H), 3.33 – 3.16 (m, 2H), 2.74 (t,J= 6.5 Hz, 2H), 2.35 (ddd,J=11.6, 5.2, 2.4 Hz, 1H), 2.20 (q,J= 6.1, 4.4 Hz, 2H), 1.88 (dq,J= 14.8, 8.7,6.2 Hz, 4H), 1.60 (d,J= 9.8 Hz, 1H), 1.53 (s, 6H), 1.26 (d,J= 11.6 Hz, 2H),1.17 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.91 – 0.81 (m, 4H), 0.81 – 0.70 (m, 1H). HRMS(ESI): m/z calcd for C38H45F3N7O3S+[M+H]+: 736.3251; found 736.3253。
(13)化合物M6的制备
化合物M6的结构如下:
化合物M6;其制备方法如下:
具体制备方法为:按照化合物M1的合成步骤获得化合物M5,相比于化合物M1,仅将丙炔酸改为了1-辛炔酸,,得到化合物化合物J6,然后将化合物J6和化合物L反应,得到化合物M6。
上述制备过程中化合物J6的结构如下所示:
化合物J6;
对化合物M6进行检测,其检测结果如下:1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ7.98 – 7.94 (m, 2H), 7.83 (dd,J= 8.2, 2.1 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.21 (d,J=8.9 Hz, 2H), 7.00 (d,J= 8.9 Hz, 2H), 5.55 (t,J= 5.8 Hz, 1H), 4.75 (t,J= 5.0Hz, 2H), 4.39 (t,J= 4.9 Hz, 2H), 3.23 (ddd,J= 13.5, 9.6, 5.5 Hz, 2H), 2.71(t,J= 7.6 Hz, 2H), 2.33 (td,J= 6.2, 3.1 Hz, 1H), 2.15 (t,J= 7.5 Hz, 3H), 1.89(ddt,J= 6.8, 4.8, 2.7 Hz, 4H), 1.71 – 1.64 (m, 4H), 1.56 (s, 6H), 1.53 (s,1H), 1.49 – 1.30 (m, 4H), 1.17 (s, 3H), 1.01 (s, 3H).13C NMR (100 MHz,Chloroform-d) δ 180.2, 175.0, 172.9, 158.6, 137.1, 135.3, 135.2, 133.4(q,J (CF)= 32.5 Hz), 132.2, 130.9, 130.7(q,J (CF)= 274.7 Hz), 128.3, 127.2(q,J (CF)= 4.6Hz), 121.9, 115.6, 114.8, 110.2, 66.8, 66.4, 49.5, 45.1, 43.8, 41.4, 41.3,38.7, 36.7, 33.2, 28.7, 27.9, 25.9, 25.4, 25.4, 23.6, 23.2, 19.8.19F NMR (376MHz, Chloroform-d) δ -61.9. HRMS (ESI): m/z calcd for C39H47F3N7O3S+[M+H]+:750.3408; found 750.3412。
实施例2
本实施例对上述以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂(实施例1制得的蛋白降解剂,E1-E4,H1-H3,M1-M6)应用蛋白质免疫印迹法在人前列腺癌细胞系22Rv1中进行降解AR和AR-V7能力的评估,以文献报道AR蛋白降解剂SARD279为阳性对照,所用化合物浓度均为1 μM,其降解效率结果如表1所示。
表1 人前列腺癌细胞系22Rv1中化合物对AR和AR-V7降解效率
由表中可以看出各个化合物都有一定降解AR和AR-V7的能力,其中化合物E2、M3、M4、M5、M6表现出与阳性药SARD279相当或相对更高的降解AR和AR-V7的效率。选取E2、M3、M4、M5、M6进行进一步的降解效果评价,其中,对10 μM浓度下降解效果表现中等的化合物E2、M6分别设置0、0.1、1 μM三个浓度梯度,对10 μM浓度下降解效果表现优异的化合物M3、M4、M5分别设置0、10、50 nM三个浓度梯度,以判断这些优选化合物是否能够浓度依赖性的降解AR和AR-V7。结果见图1。结果表明,化合物E2、M3、M4、M5、M6均能够浓度依赖性的降解AR和AR-V7,其中降解效率最高的是化合物M4。因此选取化合物M4作为后续评价的优选化合物。
对化合物M4分别设置更细致的浓度梯度筛选,组一设置0、1、10、100、1000 nM五个浓度梯度,24小时判断降解效果,结果见图2A,组二设置0、12.5、25、50、100、200 nM六个浓度梯度,24小时判断降解效果,结果见图2B,结果表明,化合物M4在高低浓度下均能够浓度依赖性的降解AR和AR-V7。
随后,对化合物M4进行实践梯度筛选,在500 nM浓度下,设置0、2、4、8、16、24、48 h七个时间梯度判断降解效果,结果见图2C,结果表明,化合物M4能够时间依赖性的降解AR和AR-V7。
综上,相较于阳性药SARD279,化合物M4表现出了远超其降解效果的活性,降解活性提升了约20倍。
实施例3
本实施例对上述以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂(实施例1-13中合成得到的化合物)进行抗肿瘤细胞增殖实验的评价,在人前列腺癌细胞22Rv1细胞系中进行实验,以文献报道AR蛋白降解剂SARD279为阳性对照,分别加药100 nM孵育6天后计数,结果见表2,发现细胞数量都有不同程度的减少,且其中化合物M4细胞数量降低最为明显,与实施例2中降解效率结果相符。
为了较为直观比较化合物活性差异,将细胞数量剩余比例分为四类:80%<比例<100% (*),50%<比例<80% (**),50%>比例 (***)。具体测试结果如下表2所示:
表2人前列腺癌细胞系22Rv1中化合物对AR和AR-V7降解效率
化合物编号 | 细胞数量剩余比例 |
E4 | ** |
E5 | ** |
E6 | * |
E7 | * |
H1 | * |
H2 | * |
H3 | * |
M1 | ** |
M2 | * |
M3 | *** |
M4 | *** |
M5 | *** |
M6 | ** |
SARD279 | * |
实施例4
本实施例对化合物M4hERG心脏毒性进行评价实验。
使用稳定转染并表达人源心肌HERG离子通道的HEK293细胞,将培养好的细胞放置在倒置显微镜下,通过微操作仪使记录电极接触细胞表面,随后进行膜电容补偿和串联电阻补偿,使电流线平滑,用于后续测试。采用磁阀控制8道灌流给药系统,通过给药电极灌流给药,将配好的化合物M4母液分别按照比例稀释至30 μM、10 μM、3 μM、1 μM、0.3 μM,加入灌流给药系统中,通过重力作用控制流速对细胞进行持续灌流,连接给药电极,调节位置于细胞左上,当细胞进行电流记录后卖给与对照组(不含化合物M4)灌流,待电流稳定后,换成化合物M4灌流,观察其作用。通过Clampfit软件分析,化合物M4心脏毒IC50>25 μM,显示出较高安全性。
实施例5
本实施例对化合物M4体内药效评价,选用22Rv1细胞进行异种移植模型的建立,并以文献报道的SARD279为阳性对照。
具体方法为:将22Rv1注射到nu/nu免疫缺陷小鼠体内。当肿瘤平均直径达到3毫米时,将其随机分为对照组(5只)、化合物M4静脉给药低剂量组(1 mpk,5只)、化合物M4静脉给药高剂量组(3 mpk,5只)和SARD279静脉给药组(10 mpk,5只),18天后,给药组小鼠体重和对照组小鼠体重均无明显波动且小鼠状态无明显异常,表明化合物M4安全性良好,给药组小鼠肿瘤重量和肿瘤体积均明显低于对照组,肿瘤抑制率((1-给药组肿瘤重量/对照组肿瘤重量)*100%)见表3。结果表明,相较于SARD279,化合物,M4具有较强的活性,在更低的给药剂量组中具有优于阳性药高剂量组的效果。
表3 22Rv1细胞异种移植模型TGI
组别 | TGI |
M4低剂量组(1 mpk) | 84.1% |
M4高剂量组(3 mpk) | 94.2% |
SARD279 组(10 mpk) | 62.1% |
尽管本发明的描述已经相当详尽且特别对几个所述实施例进行了描述,但其并非旨在局限于任何这些细节或实施例或任何特殊实施例,而是应当将其视作是通过参考所附权利要求考虑到现有技术为这些权利要求提供广义的可能性解释,从而有效地涵盖本发明的预定范围。此外,上文以发明人可预见的实施例对本发明进行描述,其目的是为了提供有用的描述,而那些目前尚未预见的对本发明的非实质性改动仍可代表本发明的等效改动。
Claims (10)
1.一种以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂,其特征在于,其结构式如式I所示:
式I;其中,Linker为任一化学上可行的连接结构。
2.根据权利要求1所述的以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂,其特征在于,所述Linker为饱和脂肪链或不饱和脂肪链。
3.根据权利要求1或2所述的以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂,其特征在于,所述以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂的分子结构为式II、式III、式IV中的任意一种:
式II;
式III;
式IV;
其中,式II中,m为1-8中的任一正整数;式III中,n为1-10中的任一正整数;式IV中,o为1-8中的任一正整数。
4.根据权利要求3所述的以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂,其特征在于,所述以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂的分子结构为式V所示:
式V。
5.一种权利要求1-4任一项所述的以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂的制备方法,其特征在于,其制备路线为路线一、路线二或路线三:
路线一:
;
路线二:
;
路线三:
。
6.权利要求1-4任一项所述的以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂或其药学上可接受的盐在制备雄激素受体蛋白(AR)降解剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述雄激素受体蛋白(AR)降解剂可用于制备治疗和/或预防具有AR异常或对传统AR抑制剂耐药相关癌症的药物。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述相关癌症为前列腺癌。
9.一种药物组合物,其特征在于,包括权利要求1-4任一项所述的以6,6-二甲基双环[3.1.1]-2-甲胺为疏水基团的蛋白降解剂或其药学上可接受的盐。
10.根据权利要求9所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。
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