BR102016000829A2

BR102016000829A2 - composições e métodos para tratamento de articulações

Info

Publication number: BR102016000829A2
Application number: BR102016000829A
Authority: BR
Inventors: Benjamin A Byers; Brooks J Story; Dongling Su; Donna Torres; Julia Hwang; Scott A Wadsworth; Uri Herzberg; William R Parrish
Original assignee: Depuy Synthes Products Inc
Priority date: 2015-01-20
Filing date: 2016-01-14
Publication date: 2016-08-02
Also published as: JP2022168118A; EP3053604A1; AU2015275237B2; EP3053604B1; JP7443443B2; US20170266221A1; JP2016132669A; US20160206649A1; CA2918048A1; AU2015275237A1; JP2020189870A; US9682099B2; CN105796589A; US10532069B2

Abstract

composições e métodos para tratamento de articulações a presente invenção refere-se a composições e métodos para o tratamento de osteoartrite. as composições compreendendo combinações de ácido hialurônico, glicosamina e sulfato de condroitina podem ser úteis para qualquer articulação sinovial, incluindo o joelho, ombro, quadril, tornozelo, mãos, faceta espinhal ou articulação tempo-romandibular, tanto para o alívio de dores quanto para desacelerar a progressão da doença.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA TRATAMENTO DE ARTICULAÇÕES".

CAMPO

[0001] A presente descrição refere-se, em geral, a composições e métodos para o tratamento de articulações.

ANTECEDENTES

[0002] A osteoartrite ("OA"), a forma mais comum da artrite, é um tipo de artrite que é caracterizada por alterações degenerativas (deterioração gradual da articulação) ou mudanças anormais no osso, cartilagem e sinóvia das articulações. A OA é caracterizada, frequentemente, por um desgaste progressivo das superfícies de articulações opostas acompanhado, às vezes, por inflamação que resulta em dor, inchaço e rigidez para o paciente. A OA pode ocorrer em uma ou mais articulações, após um trauma da articulação, após uma infecção da articulação ou simplesmente como resultado do envelhecimento. Além disso, há evidências emergentes de que a anatomia anormal pode contribuir para o desenvolvimento precoce da OA. Somente nos Estados Unidos, estima-se que mais de 25 milhões de pessoas tenham OA radiográfica do joelho, com 16 milhões dessas pessoas sofrendo de OA sintomática. A prevalência de OA está aumentando com rapidez, em parte devido a uma população senescente que está mais ativa, como também a uma população geral obesa cada vez maior.

[0003] O tratamento da OA envolve, em geral, uma combinação de exercícios ou terapia física, modificação do estilo de vida, e analgésicos. O acetaminofeno é tipicamente a primeira linha de tratamento para a OA. Para sintomas de brandos a moderados, a eficácia é semelhante à dos fármacos anti-inflamatórios não esteroidais ("NSAIDs -non-steroidal anti-inflamatory"), como ibuprofeno. Para sintomas mais severos, os NSAIDs podem ser mais eficazes. Entretanto, embora sejam mais eficazes, os NSAIDs em casos graves são associados a maiores efeitos colaterais, como sangramento gastrointestinal e complicações renais. Outra classe de NSAIDs, inibidores seletivos da COX-2 (como Celecoxibe), é tão eficaz quanto os NSAIDs, porém não são mais seguros em termos de efeitos colaterais. Existem vários NSAIDs disponíveis para uso tópico, incluindo diclofenaco. Tipicamente, eles apresentam menos efeitos colaterais sistêmicos do que a administração oral e pelo menos alguns efeitos terapêuticos. Embora os analgésicos opioides como a morfina e fentanila, melhorem a dor, este benefício é suplantado pelos eventos adversos frequentes e, deste modo, eles não são rotineiramente usados.

[0004] Injeções de esteroides intra-articulares também são usadas no tratamento de OA, e elas são muito eficazes em proporcionar alívio da dor. Entretanto, a duração do alívio de dores é limitada a 4 a 6 semanas e há efeitos adversos, que podem incluir danos colaterais à cartilagem. Se a dor se tornar debilitante, a cirurgia de substituição da articulação pode ser usada para melhorar a mobilidade e a qualidade de vida. Não há tratamento provado para desacelerar ou reverter a doença.

[0005] Para pacientes que não conseguem o alívio de dores adequado usando simples aliviadores de dor, como acetaminofeno ou de terapia de exercícios e física, injeções intra-articulares do ácido hialu-rônico (HA) proporcionam outra opção de tratamento para tratar dor sintomática, e podem retardar a necessidade de uma cirurgia de substituição de articulação total. Sabe-se que a concentração de HA nativo é deficiente em indivíduos que sofrem de OA e, portanto, acredita-se que as injeções na articulação de HA exógeno restaurem essas moléculas e restabeleçam as propriedades viscoelásticas do fluido sinovial. É esta a propriedade que é responsável por lubrificar e amortecer as articulações. Há também evidências de que HA tem atividade biológica através da ligação aos receptores da superfície celular e pode ter um papel na mitigação da inflamação. Independentemente do mecanismo de ação, o alívio de dores é observado durante cerca de seis meses seguindo o curso do tratamento. Um curso de tratamento para produtos HA no mercado norte-americano, pode variar na faixa de um único produto de injeção até outros que requerem de 3 a 5 injeções semanais para atingir esta durabilidade de alívio de dores. No uso de injeções intra-articulares, sabe-se bem que um pH neutro e uma solução isotônica são preferíveis para evitar a dor com a injeção e o dano às articulações e aos tecidos. O desejo por uma solução neutra e isotônica pode limitar o tipo e a concentração de fármacos que podem ser injetados.

[0006] Embora as terapias acima mencionadas possam fornecer pelo menos um alívio parcial de dor de OA, não existe nenhuma terapia aprovada que possa desacelerar ou deter a progressão da doença no ser humano. Consequentemente, continua uma necessidade por métodos e composições melhorados para o tratamento de OA nas articulações e para lidar com a dor e a degeneração estrutural associadas à OA.

SUMÁRIO

[0007] A presente invenção apresenta composições e métodos para o tratamento de condições da articulação, como osteoartrite e/ou a dor associada a ela. Em uma modalidade, é fornecida uma composição para o tratamento das articulações e inclui um primeiro componente, ácido hialurônico (HA), um segundo componente, glicosamina, e um terceiro componente, sulfato de condroitina. A composição pode ter um pH na faixa de cerca de 3 a 5 e uma osmolaridade na faixa de cerca de 330 a 750 mOSM. A composição pode ser injetável. É surpreendente que a solução injetável mais eficaz para o tratamento das articulações seja tanto acídica como hipertônica, sendo que podería ser esperado que ambas as condições causassem dor, irritação e inflamação. Conforme demonstrado neste documento, o ácido hialurôni-co, combinado com glicosamina e sulfato de condroitina, supera a dor, irritação e inflamação tipicamente associadas a uma injeção de pH baixo e osmolaridade alta aqui usada.

[0008] A concentração dos componentes pode variar. Em uma modalidade, a glicosamina está presente em uma concentração de cerca de 0,005 a 54 mg/mL. Em uma modalidade, o sulfato de condroitina está presente em uma concentração de cerca de 0,005 a 54 mg/ml. Em uma modalidade, o ácido hialurônico está presente em uma concentração de cerca de 3,6 a 36 mg/ml. Em uma modalidade, quando os componentes são combinados para formar uma composição, a glicosamina e o sulfato de condroitina estão presentes dentro da composição em uma razão de cerca de 1:1 em peso.

[0009] Em uma modalidade exemplificadora, a composição inclui cerca de 18 a 20 mg/ml de glicosamina, cerca de 18 a 20 mg/ml de sulfato de condroitina, cerca de 12 a 17,5 mg/ml de ácido hialurônico; e a composição tem um valor de pH de 3,5 a 4 e uma osmolaridade de cerca de 600 a 650 mOSM.

[0010] A composição também pode incluir um componente adicional, como um estabilizante. Em outra modalidade, o componente adicional pode ser trealose.

[0011] Em outros aspectos, um método para tratar as articulações é apresentado, e inclui injetar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma formulação em uma articulação de um indivíduo, onde a formulação compreende ácido hialurônico (HA), glicosamina e sulfato de condroitina. A formulação pode ter um pH de cerca de 3 a 5 e uma osmolaridade de cerca de 330 a 750 mOSM. Em uma modalidade exemplificadora, o HA é combinado com uma mistura de glicosamina e sulfato de condroitina não mais que cerca de 60 minutos antes da injeção, e mais tipicamente, não mais que cerca de 30 minutos antes da injeção.

[0012] A concentração dos componentes na formulação usada no método pode variar. Em uma modalidade, a glicosamina está presente em uma concentração de cerca de 0,005 a 54 mg/ml. Em uma modalidade, a condroitina está presente em uma concentração de cerca de 0,005 a 54 mg/ml. Em uma modalidade, o ácido hialurônico está presente em uma concentração de cerca de 3,6 a 36 mg/ml. Em uma modalidade, quando os componentes são combinados para formar uma formulação, a glicosamina e o sulfato de condroitina estão presentes dentro da formulação em uma razão de cerca de 1:1 em peso.

[0013] Em uma modalidade exemplificadora, a formulação inclui cerca de 18 a 20 mg/ml de glicosamina, cerca de 18 a 20 mg/ml de sulfato de condroitina, cerca de 12 a 17,5 mg/ml de ácido hialurônico; e a composição tem um valor de pH de 3,5 a 4 e uma osmolaridade de cerca de 600 a 650 mOSM.

[0014] A formulação também pode incluir um componente adicional, como um estabilizante. Em outra modalidade, o componente adicional pode ser trealose.

[0015] Em uma modalidade, um kit para o tratamento das articulações é apresentado e inclui um primeiro componente compreendendo ácido hialurônico e um segundo componente compreendendo uma mistura de glicosamina e sulfato de condroitina, e uma seringa para injetar uma mistura do primeiro e do segundo componentes. A mistura do primeiro e do segundo componentes pode possuir um pH de cerca de 3 a 5 e uma osmolaridade de cerca de 330 a 750 mOSM. A seringa pode ter várias configurações, e em uma modalidade a seringa possui uma câmera contendo o primeiro componente, um segundo recipiente contendo o segundo componente e um êmbolo configurado para des- locar o segundo componente do segundo recipiente para dentro do primeiro componente, combinar os mesmos e formar a formulação.

[0016] O kit também pode incluir um componente adicional, como um estabilizante. Em algumas modalidades, um ou mais componentes podem ser liofilizados.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0017] As composições, métodos e kits serão melhor compreendidos a partir da descrição detalhada a seguir, tomada em conjunto com os desenhos anexos, nos quais: [0018] A Figura 1 é uma vista esquemática de uma modalidade de um sistema de mistura e aplicação para uso com as composições e métodos da presente invenção;

[0019] A Figura 2 é uma vista em perspectiva de outra modalidade de um sistema de mistura e aplicação para uso com as composições e métodos da presente invenção;

[0020] A Figura 3 mostra os resultados da razão de profundidade da Zona 2 (profundidade da lesão/espessura da cartilagem) após a administração de diferentes composições em um modelo de laceração do menisco médio (MMT - mediai meniscal tear) em rato;

[0021] A Figura 4 mostra os resultados de pontuação da degene-ração da cartilagem após administração de diferentes composições em um modelo de MMT em rato;

[0022] A Figura 5 mostra a largura das lesões quando medidas por depleção de cartilagem, após administração de diferentes composições em um modelo de MMT em rato;

[0023] A Figura 6 mostra uma análise da área de suporte de peso sob a curva (AUC - area under the curve) da porcentagem de suporte de peso após administração de diferentes composições em um modelo de MMT em rato;

[0024] A Figura 7 mostra os resultados de uma análise de AUC da força cumulativa na perna afetada em um modelo de adjuvante completo de Freund (FCA) de artrite inflamatória;

[0025] A Figura 8 mostra os resultados médios da melhoria durante o curso de tratamento em um modelo de FCA de artrite inflamatória;

[0026] A Figura 9 mostra os resultados do déficit de suporte de peso após a primeira reativação em um modelo de polissacarídeo de peptidoglicano (PGPS de artrite inflamatória episódica;

[0027] A Figura 10 mostra os resultados da pontuação da análise da marcha após a segunda reativação em um modelo de PGPS de artrite inflamatória episódica; e [0028] A Figura 11 mostra a melhora cumulativa nos resultados da pontuação da análise da marcha durante os quatro primeiros dias após a segunda reativação em um modelo de PGPS de artrite inflamatória episódica;

[0029] Os desenhos em anexo foram incluídos na presente invenção de modo que as características, vantagens e objetos citados acima se tornarão claros e podem ser compreendidos em detalhes. Esses desenhos formam uma parte do relatório descritivo. Deve ser observado, entretanto, que os desenhos em anexo ilustram modalidades exemplifícadoras e não devem ser considerados limitantes ao escopo. DESCRIÇÃO DETALHADA

[0030] Certas modalidades exemplifícadoras serão agora descritas para proporcionar o entendimento geral dos princípios das composições, formulações e métodos descritos na presente invenção. Um ou mais exemplos dessas modalidades estão ilustrados nos desenhos em anexo. Os versados na técnica entenderão que as composições e os métodos especificamente descritos na presente invenção e ilustrados nos desenhos anexos são modalidades exemplares não limitadoras, e que o escopo da presente invenção é definido somente pelas reivindicações. As características ilustradas ou descritas em relação a uma modalidade exemplificadora podem ser combinadas com as características de outras modalidades. Tais modificações e variações devem estar incluídas no escopo da presente descrição.

[0031] Referência ao longo de todo o relatório descritivo a "várias modalidades", "algumas modalidades", "uma modalidade" ou "a modalidade", ou similares, significa que um recurso, uma estrutura ou uma característica descrita em conjunto com a modalidade está incluído em pelo menos uma modalidade. Dessa forma, o aparecimento das expressões "em várias modalidades", "em algumas modalidades", "em uma modalidade" ou "na modalidade", ou similares, em lugares ao longo de todo o relatório descritivo não está necessariamente se referindo à mesma modalidade. Além disso, os recursos, estruturas ou características específicos podem ser combinados de qualquer maneira adequada em uma ou mais modalidades. Portanto, os recursos, estruturas ou características específicos ilustrados ou descritos em conjunto com uma modalidade podem ser combinados, no todo ou em parte, com as estruturas dos recursos ou das características de uma ou mais outras modalidades, sem limitação. Tais modificações e variações devem estar incluídas no escopo da presente descrição.

[0032] Uma quantidade terapeuticamente eficaz ou quantidade eficaz da composição pode ser administrada para alcançar um efeito farmacológico. O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" inclui, por exemplo, uma quantidade profilaticamente eficaz. Uma "quantidade eficaz" é uma quantidade eficaz para alcançar um efeito farmacológico desejado ou melhoria terapêutica sem efeitos colaterais adversos indevidos. Por exemplo, uma quantidade eficaz refere-se a uma quantidade que aumenta a operatividade, ou aumenta a carga de suportar o peso, ou diminui a dor, ou aumenta o crescimento no osso e na cartilagem de uma ou mais articulações, ou reduz a distorção da articulação, dor, inchaço ou dureza. A quantidade eficaz de um agente será selecionada pelos versados na técnica dependendo do paciente particular e do nível da doença. É entendido que uma "quantidade eficaz" ou "uma quantidade terapeuticamente eficaz" pode variar de indivíduo para indivíduo, devido à variação no metabolismo dos agentes terapêuticos e/ou agentes procinéticos, idade, peso, condição geral do indivíduo, o problema de saúde sendo tratado, a gravidade do problema de saúde sendo tratado e o julgamento do clínico que está prescrevendo.

[0033] "Tratar" ou "tratamento" referem-se a qualquer tratamento de um distúrbio ou doença associada ao distúrbio de osso ou de cartilagem, como prevenção da ocorrência do distúrbio ou doença em um indivíduo que possa estar predisposto ao distúrbio ou doença, mas que não foi ainda diagnosticado como possuindo o distúrbio ou doença; inibição do distúrbio ou doença, por exemplo, interrupção do desenvolvimento do distúrbio ou doença, alívio do distúrbio ou doença, causa da regressão do distúrbio ou doença, alívio de uma condição causada pela doença ou distúrbio ou interrupção dos sintomas da doença ou distúrbio. Deste modo, para uso na presente invenção, o termo "tratar" é usado da mesma maneira que o termo "evitar".

[0034] Por "coadministrado" entende-se a administração simultânea na mesma formulação ou em duas formulações diferentes que são combinadas em uma formulação para administração.

[0035] O termo "indivíduo", para uso na presente invenção, refere-se a um animal, como um mamífero e, particularmente, a um ser humano, que pode se beneficiar das composições e métodos presentes. Não há limitação do tipo de animal que podería se beneficiar dos presentes métodos. Um indivíduo, independentemente se é um ser humano ou animal não humano, pode ser chamado de um indivíduo, sujeito, animal, hospedeiro ou receptor. Os métodos da presente invenção possuem aplicações na medicina humana, medicina veterinária, bem como na criação de animais em geral, domésticos ou selvagens. Em uma modalidade, o indivíduo candidato é um mamífero como um ser humano, animal de teste de laboratório, como um camundongo, rato, coelho, cobaia, hamster ou espécie de ave, como um pássaro doméstico.

[0036] O versado na técnica apreciará que o termo "precipitação", para uso na presente invenção, refere-se à formação de uma proteína insolúvel na solução. Em contrapartida aos exemplos conhecidos de fármacos que são liberados como uma suspensão (devido ao fato de que o veículo, por exemplo, um mineral, cerâmico, metal ou poliméri-co, é insolúvel ao invés de a proteína ativa), um aspecto revelado na presente invenção é a precipitação ativa da proteína imediatamente antes da aplicação da composição a um paciente.

[0037] Em geral, a presente invenção apresenta composições e métodos para o tratamento de condições da articulação, como dor e degeneração associadas à osteoartrite. As composições e métodos utilizam ácido hialurônico ("HA"), em combinação com glicosamina e sulfato de condroitina em uma formulação injetável com um valor de pH baixo e uma osmolaridade alta. Em uma modalidade exemplifica-dora, a glicosamina está sob a forma de um sal de cloridrato de glicosamina, sulfato de glicosamina ou N-acetil- glicosamina. A composição pode, opcionalmente, incluir componentes adicionais incluindo um es-tabilizante, como trealose, sucrose, rafinose, glicoses, manitol, sorbitol, eritritol e qualquer combinação dos mesmos.

[0038] Surpreendentemente, a combinação de HA com glicosamina e sulfato de condroitina supera os efeitos colaterais potenciais associados ao pH baixo e à osmolaridade alta da formulação. É bem conhecido na técnica que as soluções com pH neutro e isotônicas são preferenciais para injeções para evitar dor e degeneração do tecido. Como resultado, a glicosamina é tipicamente usada em injeções em uma concentração baixa para permitir um pH neutro. De modo similar, o sulfato de condroitina é tipicamente também usado em injeções em uma concentração baixa para permitir uma solução isotônica. Inesperadamente, a combinação de ácido hialurônico com glicosamina e sulfato de condroitina possibilita o uso de uma formulação injetável com um pH baixo e osmolaridade alta sem causar qualquer dor ou dano ao tecido.

[0039] A composição pode ser administrada em qualquer articulação sinovial, incluindo o joelho, o ombro, o quadril, o tornozelo, as mãos, a faceta espinhal, ou articulação têmporo-mandibular, tanto para o alívio da dor quanto para desacelerar a progressão da doença. A composição pode incluir qualquer uma dentre as várias combinações de ácido hialurônico, glicosamina e sulfato de condroitina que pode ser aplicada à articulação por meio de uma injeção. A presente invenção adicionalmente apresenta um kit para a administração de uma injeção, e um método para administração da composição com ou sem o uso de um kit. Ácido Hialurônico [0040] Ácido hialurônico (HA) pode possuir várias formulações e pode ser fornecido em várias concentrações e pesos moleculares. Os termos "ácido hialurônico", "hialuronano", "hialuronato" e "HA" são usados de maneira intercambiável na presente invenção para se referir aos ácidos hialurônicos ou sais do ácido hialurônico, como os sais de sódio, potássio, magnésio e cálcio, dentre outros. Esses termos também se destinam a incluir não apenas soluções de ácido hialurônico puras, mas também ácido hialurônico com outros elementos traço ou em várias composições com outros elementos. Os termos "ácido hialurônico," "hialuronano" e "HA" abrangem derivados químicos ou polimé-ricos ou reticulados do HA. Exemplos de modificações químicas que podem ser feitas ao HA incluem qualquer reação de um agente com os quatro grupos reativos de HA, a saber a extremidade acetamido, car-boxila, hidroxila e redutora. O HA revelado na presente invenção tem por objetivo incluir formulações naturais (isoladas de tecido animal) ou formulações sintéticas (derivadas da fermentação bacteriana) ou combinações das mesmas. O HA pode ser fornecido na forma líquida ou em uma formulação sólida que é reconstituída com um diluente para atingir uma concentração adequada.

[0041] HA é um glicosaminoglicano (GAG), e, em particular, HA é um polissacarídeo não ramificado composto por unidades alternadas de ácido glicurônico e N-acetil glicosamina. Na forma líquida, o HA possui propriedades viscoelásticas. HA também é encontrado na matriz extracelular da cartilagem como um importante componente estrutural do agrecano, que compõe o complexo proteoglicano. A função principal do complexo proteoglicano é reter água na matriz da cartilagem, conferindo a sua característica de turgidez e resiliência mecânica.

[0042] HA não apenas ajuda a manter as propriedades mecânicas saudáveis da cartilagem que amortece as articulações, mas também é um componente principal do fluido sinovial.

[0043] HA pode ser usado nas composições e métodos descritos na presente invenção em vários pesos moleculares. Uma vez que HA é uma molécula polimérica, o componente HA pode exibir uma faixa de pesos moleculares, e quase qualquer média de formulação de peso molecular modal de HA pode ser usada nas composições e métodos descritos da presente invenção, incluindo hialuronano de baixo peso molecular ("LWM") (cerca de 500 a 700 quilodaltons (KDa), hialuronano de peso molecular médio ("MMW") (700 a 1000 KDa) e hialuronano de alto peso molecular ("HMW") (1,0 a 6,0 milhões de daltons (MDa)). Em certas modalidades exemplificadoras, o HA tem um peso molecular de pelo menos cerca de 700 KDa, e em certas modalidades, o HA é um HA de alto peso molecular ("HWM") que possui um peso molecular de pelo menos cerca de 1 MDa. O peso molecular pode ser, por exemplo, de 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, 4000, 4100, 4200, 4300, 4400, 4500, 4600, 4700, 4800, 4900, 5000, 5100, 5200, 5300, 5400, 5500, 5600, 5700, 5800, 5900, 6000 KDa ou mais, ou qualquer faixa derivável nisso. Espera-se que o HA quimicamente modificado possa possuir pesos moleculares bastante diferentes dos descritos acima. HA reticulado pode, de modo semelhante, possuir um peso molecular muito mais alto do que o observado acima. Independentemente, estes materiais também são aplicáveis às composições e aos métodos descritos na presente invenção.

[0044] HA pode ser representado na forma sólida, liofilizada ou líquida. Quando na forma líquida, solventes podem ser utilizados para solubilizar HA. Solventes podem incluir, mas não se limitam a, água, solução salina ou outras soluções de sal, soluções tampão como solução salina tamponada com fosfato, histidina, lactato, succinato, glicina e glutamato, dextrose, glicerol, bem como combinações dos mesmos.

[0045] A concentração do HA presente na formulação pode também variar, porém em uma modalidade exemplificadora HA é fornecido em uma quantidade farmaceuticamente eficaz. Em uma modalidade, o HA possui uma concentração de pelo menos cerca de 1 mg/mL. Em uma modalidade exemplar, o HA tem uma concentração de pelo menos cerca de 5 mg/mL, e mais particularmente de pelo menos cerca de 7 mg/mL, e mais particularmente de pelo menos cerca de 10 mg/mL e mais particularmente de pelo menos cerca de 12 mg/mL e, em algumas modalidades, a concentração pode ser de pelo menos cerca de 25 mg/mL. Em outra modalidade, o HA pode possuir uma concentração na faixa de cerca de 3,6 mg/mL a cerca de 36 mg/mL.

Em outra modalidade, o HA pode possuir uma concentração na faixa de cerca de 12 mg/mL a cerca de 25 mg/mL. Concentrações adequadas de HA incluem cerca de 1 mg/mL, 2 mg/mL, 3 mg/mL, 4 mg/mL, 5 mg/mL, 6 mg/mL, 7 mg/mL, 8 mg/mL, 9 mg/mL, 10 mg/mL, 11 mg/mg, 12 mg/mL, 12,5 mg/mL, 13 mg/mL, 14 mg/mL, 15 mg/mL, 16 mg/mL, 17 mg/mL, 18 mg/mL, 19 mg/mL, 20 mg/mL, 21 mg/mL, 22 mg/mL, 23 mg/mL, 24 mg/mL, 25 mg/mL, 26 mg/mL, 27 mg/mL, 28 mg/mL, 29 mg/mL, 30 mg/mL, 31 mg/mL, 32 mg/mL, 33 mg/mL, 34 mg/mL, 35 mg/mL, 36 mg/mL, 37 mg/mL, 38 mg/mL, 39 mg/mL, 40 mg/mL, 41 mg/mL, 42 mg/mL, 43 mg/mL, 44 mg/mL, 45 mg/mL, 46 mg/mL, 47 mg/mL, 48 mg/mL, 49 mg/mL, 50 mg/mL, 51 mg/mL, 52 mg/mL, 53 mg/mL, 54 mg/mL, 55 mg/mL, 56 mg/mL, 57 mg/mL, 58 mg/mL, 59 mg/l, 60 mg/mL ou mais, ou qualquer faixa ali derivável.

[0046] Em uma modalidade, o primeiro componente compreende um HA possuindo um alto peso molecular (1 a 6 MDa) possuindo uma concentração na faixa de cerca de 5 a 40 mg/mL. Um tal produto é Or-thovisc® produzido pela Anika Therapeutics, Inc. de Bedford, MA. Or-thovisc® é uma solução estéril, não pirogênica, límpida e viscoelástica do hialuronano. Orthovisc® consiste em hialuronano natural ultrapuro de alto peso molecular (1,0 a 2,9 MDa) dissolvido em solução salina fisiológica e apresentando concentrações nominais entre 12,5 e 17,5 mg/mL. Orthovisc® é isolado através de fermentação bacteriana. O versado na técnica reconhecerá que há empresas como Shiseido e Lifecore que podem produzir HA de alto peso molecular através de um processo de fermentação bacteriana. Outro exemplo de um produto HA disponível nos Estados Unidos com estas características é Eufle-xxa .

Glicosamina [0047] Glicosamina (C6H13N05) ("GlcN") ou seus derivados também podem ser incluídos na formulação para acentuar a síntese dos componentes chave da cartilagem e do fluido sinovial mediante a alimentação de ambas as reações necessárias para a produção de hialu-ronano, bem como para proteoglicanos. GlcN é um amino açúcar transportando quatro grupos hidroxila e um grupo amina, e ele é um precursor proeminente na síntese bioquímica de proteínas e lipídeos glicosilados. GlcN é uma molécula de ocorrência natural que possui funções nutritivas e atuadoras. Para uso na presente invenção, "glico-samina" inclui sais de glicosamina, como cloridrato de glicosamina e sulfato de glicosamina, bem como formas não salinas como N-acetilglicosamina. Em uma modalidade, o cloridrato de glicosamina é incluído na formulação.

[0048] GlcN é compatível e promove o crescimento de células tronco e a diferenciação das células tronco mesenquimais para formar os condrócitos. GlcN pode possuir um papel no desenvolvimento e reparo teciduais, como o crescimento e desenvolvimento de cartilagem, em geral. Ele é usado como um suplemento nutricional para combater os sintomas de OA, e mostrou desacelerar a taxa de destruição da cartilagem em estudos clínicos.

[0049] GlcN pode ser usado nas composições e métodos revelados na presente invenção como vários diferentes sais, ou nas formas não salinas como N-acetil-glicosamina. GlcN exemplificador usado na presente invenção pode ser cloridrato de glicosamina, sulfato de glicosamina ou N-acetil-glicosamina. A faixa de concentração é debatida abaixo.

[0050] Glicosamina pode ser representada na forma sólida, líquida ou liofilizada. Um versado na técnica irá perceber que, embora a glicosamina liofilizada seja particularmente útil nas modalidades exemplifi-cadoras, a glicosamina líquida pode ser usada na composição. Por exemplo, a glicosamina pode ser obtida na forma de pó e misturada com um solvente, como água, para formar uma solução. A solução pode ser combinada com componentes adicionais para formar uma mistura. Em uma modalidade exemplificadora, a glicosamina é liofili-zada para permitir estabilidade aumentada da composição injetável.

[0051] A concentração do GlcN usado nas composições, formulações e métodos descritos na presente invenção pode variar. Uma concentração local adequada pode ser pelo menos cerca de 180 mg/mL, cerca de 170 mg/mL, cerca de 160 mg/mL, cerca de 150 mg/mL, cerca de 140 mg/mL, cerca de 130 mg/mL, cerca de 120 mg/mL, cerca de 110 mg/mL, cerca de 100 mg/mL, cerca de 90 mg/mL, cerca de 80 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 38 mg/mL, cerca de 36 mg/mL, cerca de 34 mg/mL, cerca de 32 mg/mL, 30 mg/mL, 28 mg/mL, 25 mg/mL, 22 mg/mL, 20 mg/mL, cerca de 19 mg/mL, cerca de 18,5 mg/mL, cerca de 18 mg/mL, cerca de 17,5 mg/mL, cerca de 17 mg/mL, cerca de 16 mg/mL, cerca de 15 mg/mL, cerca de 12 mg/mL, cerca de 10 mg/mL, cerca de 5,0 mg/mL, cerca de 2,5 mg/mL, cerca de 2,0 mg/mL, cerca de 1,8 mg/mL, cerca de 1,5 mg/mL, cerca de 1,0 mg/mL, cerca de 0,5 mg/mL, cerca de 0,018 mg/mL, cerca de 0,0018 mg/mL, cerca de 0,00018 mg/mL, ou assim por diante. Em algumas modalidades, uma dose alta de GlcN (por exemplo, cerca de 180 mg/mL, cerca de 170 mg/mL, cerca de 160 mg/mL, cerca de 150 mg/mL, cerca de 140 mg/mL, cerca de 130 mg/mL, cerca de 120 mg/mL, cerca de 110 mg/mL, cerca de 100 mg/mL, cerca de 90 mg/mL, cerca de 80 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 38 mg/mL, cerca de 36 mg/mL, cerca de 34 mg/mL, cerca de 32 mg/mL, 30 mg/mL, 28 mg/mL, 25 mg/mL, 22 mg/mL, 20 mg/mL, cerca de 19 mg/mL, cerca de 18,5 mg/mL, cerca de 18 mg/mL) é usada. Em algumas modalidades, uma dose baixa de GlcN (por exemplo, cerca de 5,0 mg/mL, cerca de 2,5 mg/mL, cerca de 2,0 mg/mL, cerca de 1,8 mg/mL, cerca de 1,5 mg/mL, cerca de 1,0 mg/mL, cerca de 0,5 mg/mL, cerca de 0,018 mg/ml_, cerca de 0,0018 mg/mL, cerca de 0,00018 mg/mL ou mais baixo) é usada. Um versado na técnica pode determinar uma concentração local adequada de GlcN mediante a prática dos métodos conhecidos na técnica farmacêutica, e que a determinação irá reger a natureza e a composição da composição de GlcN de interesse para obter a concentração desejada de GlcN.

Sulfato de Condroitina [0052] Sulfato de condroitina (CS), que é um componente essencial da cartilagem, é composto de uma sequência alternada de resíduos de ácido D-glicurônico (GlcA) e N-acetil-D-galactosamina (Gal-NAc) sulfatados e/ou não sulfatados ligados através de ligações alternadas β(1,3) e β(1,4). Cada um desses compostos tem uma estrutura polimérica consistindo principalmente em cerca de 40 a 100 vezes a repetição das unidades dissacarídicas. CS pode ser usado na formulação inventiva em vários pesos moleculares e concentrações. CS pode ser isolado de fontes bovinas ou marinhas. Uma cadeia de condroitina pode ter mais de 100 açúcares individuais, cada um dos quais pode ser sulfatado em posições e quantidades variadas. Sulfato de condroitina 4, também carbono 4 do açúcar de N-acetilgalactosamina (Gal-NAc), é encontrado nas cartilagens do nariz e traqueia de bovinos e suínos. Ela também é encontrada nos ossos, carne, sangue, pele, cordão umbilical e urina desses animais. Sulfato de condroitina 6, também o carbono 6 do açúcar GaINAc, foi isolado da pele, cordão umbilical e válvulas cardíacas desses animais. Sulfato de condroitina 6 tem a mesma composição, porém propriedades físicas levemente diferentes do sulfato de condroitina 4. Sulfato de condroitina está envolvido na ligação do colágeno e também está diretamente envolvido na retenção de umidade. Estas duas são propriedades que auxiliam o processo de cura. Um versado na técnica irá perceber que os termos "sulfato de condroitina", "CS", "condroitina", "ácido condroitinossulfúrico" e "chon-surid" são usados de maneira intercambiável na presente invenção e também englobam derivados químicos ou isoméricos ou reticulados ao longo deste pedido.

[0053] CS pode estar presente nas composições e métodos descritos na presente invenção em vários pesos moleculares. Em certas modalidades exemplificadoras, o peso molecular está na faixa de cerca de 5 a 1.000 KDa, na faixa de cerca de 6 a 500 KDa, na faixa de cerca de 7 a 300 KDa, na faixa de cerca de 8 a 200 KDa, na faixa de cerca de 9 a 100 KDa ou tipicamente na faixa de cerca de 10 a 80 KDa.

[0054] CS pode estar presente na forma sólida, líquida ou liofiiiza-da. Um versado na técnica irá perceber que, embora o CS liofilizado seja particularmente útil nas modalidades exemplificadoras, o CS líquido pode ser usado na composição. Por exemplo, o CS pode ser obtido na forma de pó e misturado com um solvente, como água, para formar uma solução. A solução pode ser combinada com componentes adicionais para formar uma mistura. Deste modo, embora as composições de CS líquido, não liofilizado possam ser usadas com a presente invenção, em uma modalidade exemplificadora, o CS é liofilizado para permitir estabilidade aumentada da composição injetável.

[0055] CS pode ser usado nas composições e métodos descritos na presente invenção em várias concentrações. A concentração do CA na composição pode também variar, porém em uma modalidade exemplificadora, o CS é fornecido em uma quantidade farmaceutica-mente eficaz. Uma concentração local adequada pode ser pelo menos cerca de 80 mg/mL, cerca de 75 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 65 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 55 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 45 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 38 mg/mL, cerca de 36 mg/mL, cerca de 34 mg/mL, cerca de 32 mg/mL, cerca de 30 mg/mL, cerca de 28 mg/mL, cerca de 25 mg/mL, cerca de 22 mg/mL, cerca de 20 mg/mL, cerca de 19 mg/mL, cerca de 18,5 mg/mL, cerca de 18 mg/mL, cerca de 17,5 mg/mL, cerca de 17 mg/mL, cerca de 16 mg/mL, cerca de 15 mg/mL, cerca de 12 mg/mL, cerca de 10 mg/mL, cerca de 5,0 mg/mL, cerca de 2,5 mg/mL, cerca de 2,0 mg/mL, cerca de 1,8 mg/mL, cerca de 1,5 mg/mL, cerca de 1,0 mg/mL, cerca de 0,5 mg/mL, cerca de 0,018 mg/mL, cerca de 0,1 mg/mL, cerca de 0,05 mg/mL, cerca de 0,005 mg/mL, ou assim por diante. Em algumas modalidades, uma dose alta de CS (por exemplo, cerca de 80 mg/mL, cerca de 75 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 65 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 55 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 45 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 38 mg/mL, cerca de 36 mg/mL, cerca de 34 mg/mL, cerca de 32 mg/mL, 30 mg/mL, 28 mg/mL, 25 mg/mL, 22 mg/mL, 20 mg/mL, cerca de 19 mg/mL, cerca de 18,5 mg/mL, cerca de 18 mg/mL) é usada. Em algumas modalidades, uma dose baixa de CS (por exemplo, cerca de 5,0 mg/mL, cerca de 2,5 mg/mL, cerca de 2,0 mg/mL, cerca de 1,8 mg/mL, cerca de 1,5 mg/mL, cerca de 1,0 mg/mL, cerca de 0,5 mg/mL, cerca de 0,018 mg/mL, cerca de 0,1 mg/mL, cerca de 0,05 mg/mL, cerca de 0,005 mg/mL ou mais baixo) é usada. Um versado na técnica pode determinar uma concentração local adequada de CS mediante a prática dos métodos conhecidos na técnica farmacêutica, e que a determinação irá reger a natureza e a composição da composição de GlcN de interesse para obter a concentração desejada de GlcN.

Componentes Adicionais [0056] Em uma modalidade exemplificadora, pelo menos um componente adicional pode ser adicionado às composições e métodos revelados na presente invenção. Um versado na técnica irá perceber que as composições e métodos da presente invenção podem incluir vários outros componentes de tratamento de articulação, incluindo, por exemplo, aminoácidos, proteínas, sacarídeos, dissacarídeos, polissa-carídeos, lipídeos, ácidos nucleicos, tampões, tensoativos e misturas dos mesmos. Outros componentes úteis podem incluir esteroides, agentes anti-inflamatórios, agentes anti-inflamatórios não esteroidais, analgésicos, células, antibióticos, agentes microbicidas, agentes anti-inflamatórios, fatores de crescimento, fragmentos de fator de crescimento, estimulantes de cicatrização de feridas de moléculas pequenas, hormônios, citocinas, peptídeos, anticorpos, enzimas, células isoladas, plaquetas, imunossupressores, ácidos nucleicos, tipos de células, vírus, partículas virais, nutrientes ou vitaminas essenciais e combinações dos mesmos.

[0057] Estabilizantes podem ser usados nos métodos e composições da presente invenção. Estabilizantes podem ser açúcares ou derivados, como sacarídeos, dissacarídeos, sacarídeos modificados, ál-coois de açúcar ou polissacarídeos. Em uma modalidade exemplifica-dora, o estabilizante pode ser tocoferol, derivados do tocoferol, glicose, manitol, sacarose e/ou trealose.

[0058] Agentes tampão podem também ser adicionados à formulação para controlar o pH. Exemplos de agentes tampão podem ser qualquer um ou mais dentre os seguintes agentes, e não se limitam ao ácido acético, carbonato de amônio, fosfato de amônio, ácido bórico, ácido cítrico, glicina, ácido láctico, ácido fosfórico, citrato de potássio, metafosfato de potássio, fosfato de potássio monobásico, acetato de sódio, citrato de sódio, solução de lactato de sódio, fosfato de sódio dibásico, fosfato de sódio monobásico, TRIS e carbonato de sódio.

[0059] Adicionalmente, podem ser adicionados agentes isotônicos para controlar a concentração iônica e/ou a pressão osmótica da formulação. Exemplos de agentes isotônicos podem ser qualquer um ou mais dentre os seguintes agentes, e não se limitam à dextrose, sacarose, trealose, glicerina, manitol, cloreto de potássio, cloreto de sódio.

[0060] Estabilizantes ou excipientes estabilizadores comuns usados na indústria farmacêutica são sacarídeos, dissacarídeos, sacarí-deos modificados, álcoois de açúcar e polissacarídeos. Em uma modalidade, a formulação ou composição inclui pelo menos um estabilizante ou excipiente estabilizante, como tocoferol, derivados do tocoferol, manitol, glicose, sacarose e trealose. Os estabilizadores podem estar presentes na faixa de cerca de 0,1 a 70%, em peso; de cerca de 0,1 a 50%, em peso, de cerca de 0,1 a 20%, em peso; ou de cerca de 0,5 a 20%, em peso. Alternativamente, o excipiente pode estar presente em uma concentração em uma faixa de cerca de 1 mg/mL a cerca de 700 mg/mL, em uma faixa de cerca de 1 mg/mL a cerca de 500 mg/mL, em uma faixa de cerca de 1 mg/mL a cerca de 200 mg/mL e mais particularmente em uma faixa de cerca de 5 mg/mL a cerca de 200 mg/mL.

[0061] Tocoferol pertence a uma classe de compostos químicos que abrange mono, di e trimetilcotóis. Muitos dos tocoferóis demonstram atividade de vitamina E. Beta, gama e delta são estereoisômeros do alfa-tocoferol. Esteres do tocoferol são comumente usados em produtos cosméticos e de cuidados pessoais. Esses ésteres incluem acetato de tocoferila, o éster do ácido acético do tocoferol; linoleato de to-coferila, o éster do ácido linoleico do tocoferol; linoleato/oleato de tocoferila, uma mistura de ésteres do ácido linoleico e oleico do tocoferol; nicotinato de tocoferila, o éster do ácido nicotínico do tocoferol; e suc-cinato de tocoferila, o éster do ácido succínico do tocoferol; Fosfato de ascorbil tocoferila potássico, um sal tanto da vitamina E (tocoferol) quanto da vitamina C (ácido ascórbico), pode também ser usado em produtos cosméticos.

[0062] Outros ingredientes derivados do tocoferol que podem ser encontrados em produtos cosméticos incluem dioleil tocoferil metilsila-nol, que é o éter dioleílico do monoéter de acetato de tocoferila com metilsilanotriol, e tocofersolano, que também é chamado de succinato detocoferil polietileno glicol 1000. A adição de ácido succínico e uma média de 22 grupos de óxido de etileno ao tocoferil torna o tocoferso-lano uma forma solúvel em água do tocoferol.

[0063] Manitol também é um estabilizante exemplificador devido à sua baixa capacidade higroscópica, excelente compatibilidade de fár-maco química e física, melhor doçura e cinética de dissolução relativamente mais lenta. Ele também possui solubilidade em água relativamente baixa e boa dispersibilidade e é comumente utilizado para melhorar a estabilidade da formulação onde outros excipientes falharam. Manitol pode ser usado em uma ampla variedade de formas de dosagem, incluindo, mas não se limitando, aos comprimidos, cápsulas, sachês, pastilhas, líquidos, emulsões, suspensões, unguentos, pastas, loções e soluções intravenosas.

[0064] Manitol também serve como um aditivo formador de matriz para a liofilização. Quando usado em concentrações de até 10% em peso por volume, o manitol forma uma matriz amorfa (não cristalina) que suporta proteínas e outras biomoléculas para a secagem por congelamento. Ele é geralmente inerte e, uma vez secado por congelamento, reidrata-se rapidamente. Sua estrutura amorfa quando congelado evita que ele rompa as proteínas enquanto proporciona canais para a sublimação da água durante o processamento.

[0065] Semelhante ao manitol, a sacarose também é amplamente usada na forma de comprimido para distribuição oral devido à sua doçura e palatabilidade. Sacarose é um dissacarídeo não redutor (glicose ligada por seu carbono anomérico à frutose), que é amplamente usada como um lioprotetor.

[0066] Trealose (a-D-glicopiranosil α-D-glicopiranosídeo), um dissacarídeo conhecido por suas propriedades antioxidantes, consiste em glicoses. Trealose existe de forma ampla em micro-organismos, cogumelos, insetos etc., embora em quantidades relativamente baixas.

Trealose é um sacarídeo não redutor de modo que ele nem reage com substâncias contendo grupos amino como aminoácidos e proteínas, induz a reação amino-carbonil e nem deteriora as substâncias contendo os aminoácidos. Deste modo, a trealose pode ser usada sem medo de causar um escurecimento e deterioração insatisfatórios.

[0067] Trealose é também acreditada inibir a cascata inflamatória, suprimindo assim a produção de citocinas. Trealose é um açúcar único capaz de proteger as biomoléculas contra o estresse ambiental e pode inibir a cascata inflamatória que, por sua vez, causa danos oxidativos e a produção de citocinas. Também foi demonstrado que a trealose preserva a viabilidade celular, durante a exposição a uma faixa de estresses ambientais, como choque térmico, desidratação e hipóxia.

[0068] Trealose também é um aditivo alimentar comum porque ela é um forte antioxidante e adoçante, e é comumente utilizada como um agente estabilizante em preparações farmacêuticas. Trealose, como a sacarose, é um dissacarídeo não redutor (duas moléculas de glicose ligadas pelo carbono anomérico) que pode atuar como um lipoprotetor eficaz para a liofilização de proteínas e outras biomoléculas. Durante o processo de liofilização, as proteínas podem desnaturar conforme a água é removida, a menos que uma molécula substituta esteja disponível para suportar a estrutura da proteína. A trealose preenche o espaço vazio deixado pela saída de água e evita esta desnaturação. Quando usada em concentrações tão baixas quanto 2%, ela pode efetivamente proteger proteínas e outras biomoléculas.

[0069] Formas úteis de trealose podem incluir trealose di-hidratada (TD) que é cristalina, trealose amorfa (AT) que é uma forma vítrea, e as formas anidras de trealose, trealose amorfa anidra (AAT) e trealose cristalina anidra (ACT). Trealose anidra em pó pode conter AAT e/ou ACT. O termo "trealose", para uso na presente invenção, refere-se a qualquer forma física da trealose incluindo anidra, parcialmente hidra- tada, completamente hidratada e misturas e soluções das mesmas. A fabricação e uso de trealose anidra de TD pode ser encontrada na publicação internacional n* PCT/GB97/00367, cuja descrição é incorporada neste relatório descritivo por referência.

[0070] A adição de trealose à formulação ou composição pode ajudar a estabilizar os outros componentes da composição bem como inibir as cascatas inflamatórias danosas. A trealose pode estar presente nas formas líquida, sólida, liofiiizada ou cristalina. Quando presente na forma líquida, a trealose pode estar em uma solução tamponada. Solventes que podem ser usados para solubilizar a trealose podem incluir, mas não se limitam a, água, solução salina ou outras soluções de sal, soluções tampão como solução salina tamponada com fosfato, histidina, lactato, succinato, glicina e glutamato, dextrose, glicerol, bem como combinações dos mesmos. Particularmente, a trealose pode estar presente na formulação como uma solução.

[0071] Pelo menos um estabilizante pode estar presente na formulação. Solventes que podem ser usados para solubilizar o estabilizante podem incluir, mas não se limitam a, água, solução salina ou outras soluções de sal, soluções tampão como solução salina tamponada com fosfato, histidina, lactato, succinato, glicina e glutamato, dextrose, glicerol, bem como combinações dos mesmos. Particularmente, o estabilizante pode estar presente na formulação como uma solução.

[0072] A concentração de pelo menos um estabilizante presente na formulação pode variar, porém em uma modalidade exemplificado-ra, pelo menos um excipiente é fornecido em uma quantidade farma-ceuticamente eficaz. Em uma modalidade exemplar, o pelo menos um estabilizante tem uma concentração de pelo menos cerca de 1 mg/mL, pelo menos cerca de 5 mg/mL, pelo menos cerca de 50 mg/mL, pelo menos cerca de 100 mg/mL, ou, em algumas modalidades, a concentração pode ser de pelo menos cerca de 200 mg/mL. Concentrações adequadas de pelo menos um estabilizante pode incluir cerca de 0,1 mg/mL, 0,2 mg/ml_, 0,3 mg/mL, 0,4 mg/mL, 0,5 mg/mL, 0,6 mg/mL, 0,7 mg/mL, 0,8 mg/mL, 0,9 mg/mL, 1 mg/mL, 2 mg/mL, 3 mg/mL, 4 mg/mL, 5 mg/mL, 6 mg/mL, 7 mg/mL, 8 mg/mL, 9 mg/mL, 10 mg/mL, 11 mg/mg, 12 mg/mL, 13 mg/mL, 14 mg/mL, 15 mg/mL, 16 mg/mL, 17 mg/mL, 18 mg/mL, 19 mg/mL, 20 mg/mL, 21 mg/mL, 22 mg/mL, 23 mg/mL, 24 mg/mL, 25 mg/mL, 26 mg/mL, 27 mg/mL, 28 mg/mL, 29 mg/mL, 30 mg/mL, 31 mg/mL, 32 mg/mL, 33 mg/mL, 34 mg/mL, 35 mg/mL, 36 mg/mL, 37 mg/mL, 38 mg/mL, 39 mg/mL, 40 mg/mL, 41 mg/mL, 42 mg/mL, 43 mg/mL, 44 mg/mL, 45 mg/mL, 46 mg/mL, 47 mg/mL, 48 mg/mL, 49 mg/mL, 50 mg/mL, 51 mg/mL, 52 mg/mL, 53 mg/mL, 54 mg/mL, 55 mg/mL, 56 mg/mL, 57 mg/mL, 58 mg/mL, 59 mg/mL, 60 mg/mL, 70 mg/mL, 80 mg/mL, 90 mg/mL, 100 mg/mL, 110 mg/mL, 120 mg/mL, 130 mg/mL, 140 mg/mL, 150 mg/mL, 160 mg/mL, 160 mg/mL, 170 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL, 200 mg/mL, 300 mg/mL, 400 mg/mL, 500 mg/mL, 600 mg/mL ou mais, ou qualquer faixa derivável nisso. Estabilizantes podem também estar em uma concentração em uma faixa de cerca de 0,1 a 60%, em peso; de cerca de 0,1 a 50%, em peso, de cerca de 0,1 a 45%, em peso; ou de cerca de 0,1 a 20%, em peso. Outras concentrações adequadas de pelo menos um excipiente podem incluir cerca de 0,1%, 0,5%, 1%, 2,5%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% ou cerca de 60%, em peso.

Liofilização [0073] Qualquer um ou mais dentre os componentes presentes nas composições e métodos da presente invenção podem ser liofiliza-dos com o uso de várias técnicas conhecidas na arte. A liofilização é um processo de desidratação que é tipicamente usado para preservar um material perecível, e ele funciona pelo congelamento do material e, a seguir, redução da pressão circundante e adição de calor suficiente para permitir que a água congelada no material sublime diretamente da fase sólida para a fase gasosa. Técnicas de liofilização padrões conhecidas na arte podem ser usadas para liofilizar qualquer um ou mais dos componentes. Em uma modalidade exemplificadora, a glicosamina e o sulfato de condroitina são liofilizados, ou juntos em uma mistura ou separadamente. Em outra modalidade, o ácido hialurônico é liofilizado. Em outra modalidade, a glicosamina, o sulfato de condroitina e o ácido hialurônico são liofilizados, ou juntos em uma mistura ou separadamente.

[0074] Antes da liofilização, vários solventes podem ser usados para formar uma mistura aquosa contendo o(s) componente(s) a ser(em) liofilizado(s). Em uma modalidade exemplificadora, a mistura aquosa é preparada pela combinação de água com um ou mais dos componentes. O(s) componente(s) pode(m) estar presente(s) dentro da mistura em várias quantidades, por exemplo, na faixa de cerca de 0,05 mg/ml_ a 10 mg/mL de rhGDF-5. Em uma modalidade exemplificadora, a composição é esterilizada por filtração, como com um filtro de 0,2 pm, antes da liofilização.

[0075] Em uma modalidade, o(s) componente(s) pode(m) ser liofi-lizado(s) com o uso do seguinte ciclo: [0076] Congelamento: a partir de temperatura ambiente até 5Ό em 15 minutos Manter a 5Ό durante 100 minutos Abaixar a temperatura até -45*C em 50 minutos Manter a -45Ό durante 180 minutos [0077] Secagem Primária: ajustar a pressão a 7 Pa (50 mTorr) Elevar a temperatura até -15Ό em 175 minutos Manter a -1513 durante 2300 minutos [0078] Secagem Secundária: ajustar a pressão a 10 Pa (75 mTorr) Elevar a temperatura até 25Ό em 200 minutos Manter a temperatura durante 900 minutos [0079] Término do Ciclo: preencher novamente com nitrogênio até ~97 Pa (-730 Torr) Tampar e realizar crimpagem [0080] Variações para as temperaturas, tempos e ajustes podem ser feitas de acordo com as práticas utilizadas por um versado na técnica. Variações podem incluir, mas não se limitam às temperaturas de ciclização para o ciclo de congelamento, temperaturas de secagem e ciclos finais. Variações também podem incluir diferenças nos tempos de espera para os ciclos de congelar, secar e tampar/frisar. Variações também podem incluir diferenças nas pressões estabelecidas para os ciclos de secar e de tampar/crimpar. Além disso, o número de ciclos de secagem pode ser aumentado ou diminuído dependendo da máquina usada ou do(s) componente(s) a ser(em) liofilizado(s).

[0081] A adição de um agente tampão pode proporcionar solubili-dade e estabilidade aprimoradas dos compostos nas formulações liofi-lizadas. Agentes tampão biocompatíveis conhecidos na técnica podem ser usados, como glicina; sais de acetato de sódio, potássio ou de cálcio; sais de citrato de sódio, potássio ou de cálcio; sais de lactato de sódio, potássio ou de cálcio; sais de fosfato de sódio ou potássio, incluindo fosfato monobásico, fosfato dibásico, fosfato tribásico e misturas dos mesmos. Os agentes tampão podem possuir adicionalmente açúcar adicionado à composição para funcionar como um agente avo-lumador. O pH pode ser tipicamente controlado dentro de cerca de 2,0 a 5,0 unidades de pH e mais tipicamente dentro de cerca de 2,5 a cerca de 3,5 unidades de pH.

Formulações [0082] Embora o HA sozinho possa ser efetivo para tratar condições de articulação, as composições e formulações descritas aqui for- necem uma abordagem aprimorada para o tratamento das condições de articulação.

[0083] É bem conhecido na técnica que a maioria das formulações injetáveis disponíveis no mercado são isotônicas. O pH das formulações disponíveis ou é próximo ao pH do fluido sinovial (isto é, pH 7,4) ou ligeiramente mais baixo, mas não abaixo de pH ~5,5, para permitir estabilidade ótima do ingrediente ativo, ao mesmo tempo minimizando os possíveis efeitos colaterais dos valores de pH não fisiológico, como dor ou dano ao tecido no local da injeção. Entretanto, as composições e formulações acídicas com osmolaridade alta descritas no presente pedido surpreendentemente produziram benefícios inesperados. As composições e formulações reveladas demonstraram eficácia melhorada no alívio de dores e modificação de doenças para o tratamento de condições da articulação. Adicionalmente, as composições e formulações não causaram nenhum efeito colateral (como dor, inflamação ou dano ao tecido no local de injeção) que se esperaria de uma formulação IA de pH baixo e/ou osmolaridade alta com base no atual conhecimento. As composições e formulações acídicas também fornecem uma excelente solução preservada contra a ação contaminante de mi-cro-organismos como bactérias e fungos. Tal solução preservada não apenas fornece um excelente ambiente estéril, mas também torna mais fácil a produção de um kit comercial com vida útil mais longa.

[0084] Além disso, a combinação de HA, glicosamina e sulfato de condroitina também trata do problema de baixa biodisponibilidade na articulação artrítica a partir da administração oral de glicosamina e sulfato de condroitina. Conforme mostrado nos dados e exemplos fornecidos no presente pedido, tanto a dose bem baixa de glicosamina e sulfato de condroitina como a dose alta de glicosamina e sulfato de condroitina podem proporcionar eficácia igual no alívio de dores e modificação da doença durante o tratamento.

[0085] Consequentemente, é fornecida uma composição neste pedido de patente que inclui uma formulação injetável abrangendo HA, glicosamina e/ou sulfato de condroitina.

[0086] A concentração do HA presente nas formulações pode va- riar, porém, em uma modalidade exemplificadora, o HA é fornecido em uma quantidade farmaceuticamente eficaz. Concentrações adequadas de HA incluem cerca de 1 mg/mL, 2 mg/mL, 3 mg/mL, 4 mg/mL, 5 mg/mL, 6 mg/mL, 7 mg/mL, 8 mg/mL, 9 mg/mL, 10 mg/mL, 11 mg/mg, 12 mg/mL, 12,5 mg/mL, 13 mg/mL, 14 mg/mL, 15 mg/mL, 16 mg/mL, 17 mg/mL, 18 mg/mL, 19 mg/mL, 20 mg/mL, 21 mg/mL, 22 mg/mL, 23 mg/mL, 24 mg/mL, 25 mg/mL, 26 mg/mL, 27 mg/mL, 28 mg/mL, 29 mg/mL, 30 mg/mL, 31 mg/mL, 32 mg/mL, 33 mg/mL, 34 mg/mL, 35 mg/mL, 36 mg/mL, 37 mg/mL, 38 mg/mL, 39 mg/mL, 40 mg/mL, 41 mg/mL, 42 mg/mL, 43 mg/mL, 44 mg/mL, 45 mg/mL, 46 mg/mL, 47 mg/mL, 48 mg/mL, 49 mg/mL, 50 mg/mL, 51 mg/mL, 52 mg/mL, 53 mg/mL, 54 mg/mL, 55 mg/mL, 56 mg/mL, 57 mg/mL, 58 mg/mL, 59 mg/l, 60 mg/mL ou mais, ou qualquer faixa derivável nisso. Em outra modalidade, o HA pode possuir uma concentração na faixa de cerca de 3,6 mg/mL a cerca de 36 mg/mL.

[0087] A concentração do GlcN usado nas formulações pode tam- bém variar. Em algumas modalidades, uma dose alta de GlcN (por exemplo, cerca de 180 mg/mL, cerca de 170 mg/mL, cerca de 160 mg/mL, cerca de 150 mg/mL, cerca de 140 mg/mL, cerca de 130 mg/mL, cerca de 120 mg/mL, cerca de 110 mg/mL, cerca de 100 mg/mL, cerca de 90 mg/mL, cerca de 80 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 38 mg/mL, cerca de 36 mg/mL, cerca de 34 mg/mL, cerca de 32 mg/mL, 30 mg/mL, 28 mg/mL, 25 mg/mL, 22 mg/mL, 20 mg/mL, cerca de 19 mg/mL, cerca de 18,5 mg/mL, cerca de 18 mg/mL) por injeção é usada. Em algumas modalidades, uma dose baixa de GlcN (por exemplo, cerca de 5,0 mg/mL, cerca de 2,5 mg/mL, cerca de 2,0 mg/mL, cerca de 1,8 mg/mL, cerca de 1,5 mg/mL, cerca de 1,0 mg/mL, cerca de 0,5 mg/mL, cerca de 0,018 mg/mL, cerca de 0,0018 mg/mL, cerca de 0,00018 mg/mL ou mais baixo) por injeção é usada.

[0088] CS pode ser usado nas formulações descritas na presente invenção em várias concentrações. Em uma modalidade exemplifica-dora, o CS é fornecido em uma quantidade farmaceuticamente eficaz. Em algumas modalidades, uma dose alta de CS (por exemplo, cerca de 80 mg/mL, cerca de 75 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 65 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 55 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 45 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 38 mg/mL, cerca de 36 mg/mL, cerca de 34 mg/mL, cerca de 32 mg/mL, 30 mg/mL, 28 mg/mL, 25 mg/mL, 22 mg/mL, 20 mg/mL, cerca de 19 mg/mL, cerca de 18.5 mg/mL, cerca de 18 mg/mL) por injeção é usada. Em algumas modalidades, uma dose baixa de CS (por exemplo, cerca de 5,0 mg/mL, cerca de 2,5 mg/mL, cerca de 2,0 mg/mL, cerca de 1,8 mg/mL, cerca de 1,5 mg/mL, cerca de 1,0 mg/mL, cerca de 0,5 mg/mL, cerca de 0,018 mg/mL, cerca de 0,1 mg/mL, cerca de 0,05 mg/mL, cerca de 0,005 mg/mL ou mais baixo) por injeção é usada.

[0089] Em algumas modalidades, as formulações reveladas na presente invenção incluem uma quantidade farmaceuticamente eficaz de HA, uma concentração/dose alta de GlcN (por exemplo, cerca de 180 mg/mL, cerca de 170 mg/mL, cerca de 160 mg/mL, cerca de 150 mg/mL, cerca de 140 mg/mL, cerca de 130 mg/mL, cerca de 120 mg/mL, cerca de 110 mg/mL, cerca de 100 mg/mL, cerca de 90 mg/mL, cerca de 80 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 38 mg/mL, cerca de 36 mg/mL, cerca de 34 mg/mL, cerca de 32 mg/mL, 30 mg/mL, 28 mg/mL, 25 mg/mL, 22 mg/mL, 20 mg/mL, cerca de 19 mg/mL, cerca de 18.5 mg/mL, cerca de 18 mg/mL), e uma concentração/dose alta de CS (por exemplo, cerca de 80 mg/mL, cerca de 75 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 65 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 55 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 45 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 38 mg/mL, cerca de 36 mg/mL, cerca de 34 mg/mL, cerca de 32 mg/mL, 30 mg/mL, 28 mg/mL, 25 mg/mL, 22 mg/mL, 20 mg/mL, cerca de 19 mg/mL, cerca de 18,5 mg/mL, cerca de 18 mg/mL).

[0090] Em algumas modalidades, as formulações reveladas na presente invenção incluem uma quantidade farmacêutica mente aceitável de HA e uma concentração/dose alta de CS (por exemplo, cerca de 80 mg/mL, cerca de 75 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 65 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 55 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 45 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 38 mg/mL, cerca de 36 mg/mL, cerca de 34 mg/mL, cerca de 32 mg/mL, 30 mg/mL, 28 mg/mL, 25 mg/mL, 22 mg/mL, 20 mg/mL, cerca de 19 mg/mL, cerca de 18.5 mg/mL, cerca de 18 mg/mL).

[0091] Em algumas modalidades, as formulações reveladas aqui incluem uma quantidade farmaceuticamente aceitável de HA, uma concentração/dose baixa de GlcN (por exemplo, cerca de 5,0 mg/mL, cerca de 2,5 mg/mL, cerca de 2,0 mg/mL, cerca de 1,8 mg/mL, cerca de 1,5 mg/mL, cerca de 1,0 mg/mL, cerca de 0,5 mg/mL, cerca de 0,018 mg/mL, cerca de 0,0018 mg/mL, cerca de 0,00018 mg/mL ou mais baixa) e uma concentração/dose baixa de CS (cerca de 5,0 mg/mL, cerca de 2,5 mg/mL, cerca de 2,0 mg/mL, 1,8 mg/mL, 1.5 mg/mL, 1,0 mg/mL, 0,5 mg/mL, 0,018 mg/mL, cerca de 0,1 mg/mL, cerca de 0,05 mg/mL, cerca de 0,005 mg/mL ou mais baixa).

[0092] Em algumas modalidades, as formulações reveladas na presente invenção incluem uma quantidade farmaceuticamente aceitável de HA e uma concentração/dose baixa de CS (por exemplo, cerca de 5,0 mg/mL, cerca de 2,5 mg/mL, cerca de 2,0 mg/mL, cerca de 1,8 mg/mL, cerca de 1,5 mg/mL, cerca de 1,0 mg/mL, cerca de 0,5 mg/mL, cerca de 0,018 mg/mL, cerca de 0,1 mg/mL, cerca de 0,05 mg/mL, cerca de 0,005 mg/mL ou mais baixo).

[0093] É desejável que as formulações descritas na presente invenção tenham um pH de cerca de 3,0 a cerca de 5,0. Por exemplo, a formulação tem um valor de pH de cerca de 3,0 a cerca de 4,0, cerca de 3,5 a cerca de 4,5 ou cerca de 3,5 a cerca de 5,0. Por exemplo, a formulação tem um valor de pH de cerca de 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9 ou 50. Tipicamente, a formulação tem um valor de pH de cerca de 3,5 a cerca de 4,0.

[0094] As composições e formulações podem ser usadas em um método de tratar uma articulação mediante a administração da composição ou da formulação a um indivíduo, como por injeção no corpo do indivíduo (por exemplo, por injeção em uma articulação) conforme debatido abaixo. Os resultados após a injeção da composição acídica e de osmolaridade alta são surpreendentemente bons sem evidências de dor após a injeção ou degradação do tecido.

[0095] Em um aspecto, uma composição para tratar uma condição da articulação é revelada. A composição inclui uma solução de ácido hialurônico (HA) combinado com glicosamina (GlcN) e sulfato de con-droitina (CS). Na composição, todos ou alguns dos componentes podem ser líquidos, sólidos ou liofilizados. Em uma modalidade exempli-ficadora, uma composição de GlcN/CS é liofilizada e combinada com um HA líquido.

[0096] As composições podem estar sob várias formas. Estas incluem, por exemplo, formas de dosagem líquidas, semissólidas e sólidas, como soluções líquidas (por exemplo, soluções injetáveis e infun-díveis), dispersões ou suspensões, comprimidos, pílulas e pós. Uma forma por fim usada depende do modo de administração tencionado e da aplicação terapêutica. Composições típicas podem estar sob a for- ma soluções injetáveis ou infundíveis, como composições semelhantes àquelas usadas para a injeção in vivo. Um modo de administração útil é a parenteral (por exemplo, intra-articuiar, subcutânea, intraperitoneal, intramuscular). Em outra modalidade, a composição é administrada por infusão ou injeção diretamente dentro da área alvo, como uma articulação. Em outra modalidade, a composição pode ser administrada por injeção intramuscular ou subcutânea.

[0097] Em uma outra modalidade exemplificadora, os componentes são configurados para ser combinados, de modo intraoperativo, isto é, imediatamente antes ou durante uma operação. Em uma modalidade, os componentes são combinados cerca de 60 minutos, ou menos, antes da injeção. Em outra modalidade, os componentes são combinados cerca de 30 minutos, ou menos, antes da injeção. Os componentes, quando combinados, podem formar uma composição resultante possuindo cada componente presente na composição em várias quantidades. A quantidade de cada componente na composição pode variar.

[0098] Em uma modalidade, os solventes podem ser incluídos na composição. Os solventes que podem ser usados para solubilizar um ou mais dos componentes incluem, por exemplo, água, solventes ácidos, ácido clorídrico, ácido acético, ácido benzoico, solução salina tamponada com fosfato, dextrose, glicerol, etanol e similares, bem como suas combinações. Os solventes que podem ser usados para solubilizar o HA podem incluir, mas não se limitam a, água, solução salina ou outras soluções de sal, soluções tampão como solução salina tamponada com fosfato, histidina, lactato, succinato, glicina e glutama-to, dextrose, glicerol, bem como combinações dos mesmos. Os solventes que podem ser usados para solubilizar a/o GlcN/CS podem incluir água, solução salina, solução salina tamponada com fosfato, ácido clorídrico, ácido acético, ácido benzoico, solvente acídico e outros solventes adequados para a solução desta solução. As composições também podem incluir componentes adicionais, como estabilizantes, tampões, agentes isotônicos ou outros componentes para tratamento de articulação.

[0099] A concentração dos componentes pode afetar o pH e as osmolaridade da composição resultante. Por exemplo, em algumas modalidades, concentrações mais baixas de glicosamina e de sulfato de condroitina podem ser usadas para evitar que uma composição fique muito acídica (como um pH menor que 2,0). A Tabela 1 apresenta valores de pH das composições exemplificadoras com várias concentrações de cada componente. Para esta composição, a GlcN está sob a forma de GlcN-sal de HCI.

Tabela 1: pH das composições exemplificadoras variadas por concentração * As amostras usadas na medição do pH foram misturadas, liofilizadas e armazenadas a 4Ό. Os pHs dessas amostras foram determinados usando um medidor de pH Beckman Φ 250. Uma calibração de 3 pontos foi executada a 1,68, 4,0 e 7,0.

[0100] Um versado na técnica compreenderá que as concentrações de cada componente podem ser modificadas para regular o pH e/ou o resultado terapêutico. Em uma modalidade exemplificadora, a concentração de glicosamina pode ser cerca de 0,005 a 54, 1,8, 1,8 a 18, 2,0, 2,0 a 20, 18, 20, 2,0 a 40, 20 a 30, 10 a 40 ou 40 mg/mL. Em uma modalidade, a concentração de sulfato de condroitina pode ser cerca de 0,005 a 54, 1,8, 1,8 a 18, 2,0, 2,0 a 20, 18, 20, 2,0 a 40, 20 a 30, 10 a 40 ou 40 mg/mL. Em outra modalidade, a concentração de HA pode ser cerca de 3,6 a 36, 10 a 20, 12, 15 ou 12 a 17,5 mg/mL. Em ainda outra modalidade, a concentração de glicosamina pode ser uma concentração alta, como na faixa de cerca de 18 a 20 mg/mL, a concentração de sulfato de condroitina pode ser uma concentração alta, como na faixa de cerca de 18 a 20 mg/mL e a concentração de HA pode ser na faixa de cerca de 12 a 17,5 mg/mL. Em ainda outra modalidade, a razão de peso da glicosamina para o sulfato de condroitina é cerca de 1:1, embora outras razões sejam possíveis (como qualquer razão entre cerca de 0,445 a cerca de 444,445).

[0101] Em uma modalidade, a composição pode ter uma concentração tendo quaisquer concentrações de componente dentro das faixas mencionadas acima. Em uma modalidade, a composição resultante pode ter um pH de pelo menos cerca de 3, na faixa de cerca de 3 a 8, na faixa de cerca de 3 a 5 ou tipicamente na faixa de cerca de 3 a 4. Adicionalmente, a composição pode ter uma osmolaridade na faixa de cerca de 300 a 3.000 mOSM (por exemplo, cerca de 300, cerca de 350, cerca de 400, cerca de 450, cerca de 500, cerca de 600, cerca de 650, cerca de 700, cerca de 750, cerca de 800, cerca de 850, cerca de 900, cerca de 950, cerca de 1000, cerca de 1100, cerca de 1200, cerca de 1300, cerca de 1400, cerca de 1500, cerca de 1600, cerca de 1700, cerca de 1800, cerca de 1900, cerca de 2000, cerca de 2100, cerca de 2200, cerca de 2300, cerca de 2400, cerca de 2500, cerca de 2600, cerca de 2700, cerca de 2800, cerca de 2900 ou cerca de 3000 mOSM). Em algumas modalidades, a composição pode ter uma osmolaridade na faixa de cerca de 300 a 700 mOSM, na faixa de cerca de 350 a 600 mOSM ou tipicamente na faixa de 400 a 600 mOSM.

[0102] As composições podem ser incorporadas em composições farmacêuticas adequadas para administração a um indivíduo. Tipicamente, a composição farmacêutica compreende HA e pelo menos um dentre GlcN ou CS e um veículo farmaceuticamente aceitável. Para uso na presente invenção, "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes de retardo de absorção e isotônicos, e similares que sejam fisiologicamente compatíveis. Exemplos de veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem um ou mais de água, ácido clorídrico, ácido acético, ácido benzoico, solvente ácido, solução salina, solução salina tamponada com fosfato, dextrose, glicerol, etanol e similares, bem como suas combinações. Em muitos casos, será preferível incluir na composição, agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois como manitol, sorbitol ou cloreto de sódio. Veículos farmaceuticamente aceitáveis podem compreender, ainda, quantidades menores de substâncias adjuvantes como agentes de molhagem ou emulsificação, conservantes ou tampões, que melhoram a vida útil ou efetividade da composição.

[0103] Os componentes e/ou a composição resultante podem ser esterilizados antes do uso utilizando-se de várias técnicas bem conhecidas na arte. Composições injetáveis estéreis podem ser preparadas pela incorporação do(s) composto(s) ativo(s) em uma quantidade tera-peuticamente eficaz ou benéfica em um solvente adequado com um ou uma combinação de ingredientes, conforme necessário, seguido de esterilização por filtração. Em geral, as dispersões são preparadas pela incorporação de composto(s), como HA, em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e, conforme necessário, outros ingredientes. No caso de pós estéreis para a preparação de composições injetáveis estéreis, alguns métodos podem incluir preparação de componentes secados a vácuo e secados por congelamento que pro- duzem um pó da composição mais qualquer ingrediente adicional desejado de uma composição previamente esterilizada por filtração do mesmo.

[0104] Soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas pela incorporação do composto ativo em uma quantidade terapeuticamente eficaz ou benéfica em um solvente adequado com um ou uma combinação de ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido de esterilização por filtração. Em geral, as dispersões são preparadas pela incorporação do composto ativo em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos preferidos de preparação são secagem a vácuo e liofilização que produzem um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente desejado adicional de uma solução previamente esterilizada por filtração do mesmo.

[0105] O volume para cada injeção pode variar de acordo com o tamanho da articulação onde a injeção ocorrer. Volume apropriado para cada injeção pode ser cerca de 0,5 ml_ a cerca de 10 ml_ (por exemplo, cerca de 0,5 ml_, cerca de 1,0 mL, cerca de 1,5 ml_, cerca de 2 mL, cerca de 2,5 mL, cerca de 3 mL, cerca de 3,5 mL, cerca de 4 mL, cerca de 4,5 mL, cerca de 5 mL, cerca de 5,5 mL, cerca de 6 mL, cerca de 6,5 mL, cerca de 7 mL, cerca de 7,5 mL, cerca de 8 mL, cerca de 8,5 mL, cerca de 9 mL, cerca de 9,5 mL ou cerca de 10 mL). Em algumas modalidades, o volume de uma só injeção para o joelho, ombro e quadril pode estar na faixa de cerca de 1 ml a cerca de 10 ml. Em algumas modalidades, o volume de uma só injeção para a mão pode estar na faixa de cerca de 500 pl a cerca de 1,5 ml. Administração/Método [0106] As composições desta invenção podem ser administradas, para aplicações in vivo, parenteralmente por injeção ou por perfusão gradual ao longo do tempo. A administração pode ser intra-articular, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutânea, intracavidade ou transdérmica.

[0107] Exemplos de sintomas ou doenças, para os quais a composição e os métodos apresentados aqui podem ser úteis, abrangem o tratamento de distúrbios da articulação, como artrite causada por infecções, injúrias, alergias, distúrbios metabólicos etc., reumatoides como artrite reumatoide crônica e lúpus sistêmico eritematoso; distúrbios da articulação acompanhados por gota, artropatia como osteoar-trite, desarranjo interno, hidrartrose, pescoço duro, lumbago etc. Variando os efeitos dependendo do uso da composição ou dos tipos de doenças a serem tratadas, o agente pode exercer efeitos profiláticos e de alívio desejados, ou mesmo efeitos terapêuticos no inchaço, dor, inflamação e destruição das articulações sem afetar seriamente os corpos vivos. A composição para o tratamento de distúrbio articular pode ser usada para prevenir o início dos distúrbios de articulação, bem como para melhorar, aliviar e curar os sintomas e seus inícios.

[0108] Os métodos de tratamento podem incluir a injeção direta das composições na área alvo, como uma articulação. A frequência das injeções pode ser diária, semanal, várias vezes por semana, bimestral, várias vezes ao mês, mensal ou tão frequente quanto necessário para propiciar o alívio dos sintomas. Em modalidades alternativas, as composições da invenção podem ser administradas de modo intermitente por um período de meses. Será compreendido que os regimes de administração podem continuar por período prolongado (por exemplo, na ordem de anos) para manter os efeitos terapêuticos benéficos fornecidos pelos tratamentos iniciais. Em ainda outras modalidades, a terapia de manutenção pode ser realizada seguindo um regime de dosagem severo para reduzir os sintomas imediatos da condição da articulação, como osteoartrite. Na maioria das modalidades, entre- tanto, as composições da invenção são administradas ao paciente de acordo com os métodos descritos na presente invenção pelo menos até os sintomas da condição de articulação, como ao, serem aliviados ou reduzidos. Mais comumente, as composições da invenção e métodos da invenção são usados por um período de tempo após os sintomas serem reduzidos para um nível tolerável ou completamente eliminados para que resulte em uma melhoria na estrutura fisiológica da articulação reduzindo ou eliminando as causas fisiológicas subjacentes da condição de articulação.

[0109] Para uso intra-articular, de cerca de 1 a cerca de 30 mg/mL de HA e cerca de 0,018 a cerca de 30 mg/ml_ de GlcN/CS por articulação, dependendo do tamanho da articulação e da gravidade da condição, podem ser injetados. A frequência das injeções subsequentes em uma determinada articulação é espaçada até o tempo de recorrência dos sintomas na articulação. De forma ilustrativa, os níveis de dosagem em seres humanos da composição podem ser: joelho, cerca de 1 a cerca de 30 mg/ml_ de HA e 0,018 a cerca de 20 mg/ml_ de GlcN/CS por injeção na articulação. Ombro, cerca de 1 a cerca de 30 mg/ml_ de HA e 0,018 a cerca de 20 mg/ml_ de GlcN/CS por injeção na articulação; metacarpo ou intrafalange proximal, cerca de 1 mg/mL a cerca de 30 mg/mL de HA e 0,018 a cerca de 20 mg/mL de GlcN/CS por injeção na articulação; e cotovelo, cerca de 1 a cerca de 30 mg/mL de HA e 0,018 a cerca de 20 mg/mL de GlcN/CS por injeção na articulação; Em algumas modalidades, a quantidade total de injeção pode variar de cerca de 1 mg/mL a cerca de 200 mg/mL de HA, cerca de 0,005 mg/mL a cerca de 150 mg/mL de GlcN e cerca de 0,005 mg/mL a cerca de 150 mg/mL de CS.

[0110] Será compreendido, no entanto, que o nível de dosagem específico para qualquer paciente particular dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico utilizado, a idade, peso corporal, estado de saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração, taxa de excreção, combinação de fármaco e a gravidade da doença particular sendo submetida à terapia. As composições farmacêuticas podem ser preparadas e administradas em unidades de dose. Sob determinadas circunstâncias, entretanto, unidades de dose mais elevadas ou mais baixas podem ser adequadas. A administração da unidade de dose pode ser executada tanto por administração individual da composição ou a administração pode ser realizada em várias unidades de dose menores e também por múltiplas administrações de doses subdivididas em intervalos específicos.

[0111] Em uma modalidade, o HA e a glicosamina e o sulfato de condroitina podem ser configurados para ser combinados e administrados de modo intra-articular como parte de um procedimento cirúrgico envolvendo uma junta articulada, imediatamente antes, durante ou imediatamente após o procedimento cirúrgico. O HA e a GlcN/CS podem ser coadministrados ou simultaneamente administrados na mesma formulação ou em duas formulações diferentes que são combinadas via a mesma rota. A GlcN não é estável em pH baixo e degradar-se-á com o tempo, consequentemente não é desejável ter uma formulação incluindo GlcN em um pH baixo. Em uma modalidade preferencial, os componentes de HA e de GlcN/CS poder ser combinados pouco antes da administração do HA e GlcN/CS. A combinação pode ocorrer dentro de segundos, minutos, horas, dias ou semanas antes da administração da composição. Em outra modalidade, é preferível combinar a GlcN e o sulfato de condroitina, ou em uma mistura ou separadamente, com o HA menos que cerca de 60 minutos (por exemplo, cerca de 59, 58, 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41,40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 minutos) antes da injeção. Em uma modalidade típica, a combinação ocorre cerca de 30 minutos, ou menos, antes da administração. Em algumas modalidades, a combinação ocorre cerca de 15 minutos, ou menos, antes da administração. Em algumas modalidades, a combinação ocorre cerca de 5 minutos, ou menos, antes da administração.

[0112] Em uma modalidade, a condição médica é a osteoartrite (OA) e a composição é administrada em um espaço da articulação, como, por exemplo, um joelho, ombro, articulações têmporo-mandibulares e carpo-metacarpais, cotovelo, quadril, pulso, tornozelo e articulações lombar zigapofisária (faceta) na espinha dorsal. A vis-cossuplementação pode ser realizada através de uma única injeção ou de múltiplas injeções intra-articulares administradas em um período de semanas no joelho ou em outras articulações afligidas. Por exemplo, um indivíduo humano com OA no joelho pode receber uma, duas ou três injeções de cerca de 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ml_, ou mais, por joelho. O versado na técnica compreenderá que para outras articulações, o volume administrado pode ser ajustado com base no tamanho da articulação.

Kit [0113] Os métodos e composições abrangem kits para o tratamento de distúrbios articulares, como as articulações. Em anda outro aspecto, um kit é revelado. O kit pode incluir um primeiro componente sendo uma solução de ácido hialurônico (HA), um segundo componente incluindo uma quantidade de glicosamina e condroitina (GlcN/CS), e uma seringa para injetar uma mistura do primeiro componente e do segundo componente. Além disso, a seringa pode ter uma primeira câmara contendo o primeiro componente, um segundo recipiente contendo o segundo componente e um êmbolo configurado para injetar o segundo componente dentro da primeira câmera para misturar o primeiro e o segundo componentes.

[0114] O kit pode ser armazenado à temperatura ambiente. Adicionalmente, o kit pode incluir uma seringa contendo a solução de HA em uma câmara única e o GlcN/CS em uma segunda câmara. Os componentes podem estar presentes sob a forma líquida, sólida ou liofilizada. O kit pode incluir, ainda, um diluente, como água, solução salina e um tampão, para solubilizar um dos componentes.

[0115] Os componentes podem ser armazenados separadamente para aumentar a vida útil. Os componentes individuais podem ser liofi-lizados ou estar sob a forma sólida em uma seringa/cartucho com diluente ou um segundo componente em uma segunda seringa/cartucho. Em uma modalidade, um dos compostos está sob a forma liofilizada ou sob a forma sólida e o segundo composto é uma solução capaz de combinar com o composto liofilizado/sólido.

[0116] Seringas e/ou cartuchos de câmara dupla preenchidos podem também ser utilizados com os componentes e as composições. Seringas de câmara dupla preenchidas permitem a administração sequencial de duas composições separadas com um único empurrão de seringa, assim substituindo duas seringas por uma. Os benefícios de uma única capacidade de aplicação incluem aumentar a velocidade e facilidade de administração do fármaco; risco reduzido de infecção pela redução do número de conexões; redução do risco de erros de administração do fármaco e de sequência, e distribuição mais rápida das composições que requerem a combinação antes da administração. A seringa de câmara dupla pode acomodar formulações liofilizadas, em pó ou líquidas na câmara frontal combinado com diluentes, solução salina ou tampão na câmara posterior.

[0117] A figura 1 ilustra uma modalidade de um sistema de mistura e de aplicação que está sob a forma de uma seringa de câmara dupla 10. Conforme mostrado, a seringa de câmara dupla 10 em geral inclui um compartimento que possui as câmaras proximal e distai 14, 12 se- paradas por uma válvula 16. Um êmbolo 18 é colocado de maneira deslizante dentro da câmara proximal 14 e é configurado para injetar o fluido presente dentro da câmara proximal 14 na câmara distai 12 para, assim, misturar os componentes. Em uma modalidade, o primeiro componente, por exemplo, HA líquido com pelo menos um estabilizan-te, pode estar presente na câmara proximal 14 e um componente adicional, por exemplo, um ou mais componentes adicionais, podem estar presentes na câmara distai 12. Alternativamente, o primeiro componente, por exemplo, HA líquido, pode estar presente na câmara proximal 14 com pelo menos um estabilizante, como trealose, e pelo menos um componente adicional, por exemplo, sulfato de condroitina, pode estar presente na câmara distai 12. O êmbolo 18 pode avançar através da câmara proximal 14 para injetar o primeiro componente, por exemplo, HA líquido com pelo menos um estabilizante, na câmara distai 12 contendo o segundo componente, por exemplo, um ou mais componentes adicionais. Em outra modalidade, a câmara proximal 14 pode conter um solvente, como água ou solução salina, e a câmara distai 12 pode conter todos os componentes na forma sólida. Por exemplo, a câmara distai 12 pode conter HA liofilizado ou sólido com pelo menos um estabilizante. O êmbolo 18 pode avançar através da câmara proximal 14 para injetar o solvente na câmara distai 12, assim solubilizan-do os componentes na câmara distai 12. Uma vez que todos os componentes estejam combinados na câmara distai 12, a composição pode ser aplicada no tecido, por exemplo, por fixação de uma agulha na extremidade distai da seringa de câmara dupla.

[0118] A figura 2 ilustra outra modalidade de um sistema de mistura e aplicação 20, que é vendido comercialmente sob o nome comercial de MixJect®. Nesta modalidade, o sistema inclui um conjunto controlador de fluido 22 que é acoplado entre uma seringa 24 e um frasco 26. A seringa 24 define uma primeira câmara que pode conter um lí- quido, como HA líquido ou um solvente, e o frasco define uma segunda câmara que pode conter um sólido, como um ou mais componentes adicionais. O posicionamento do êmbolo 28 através da seringa 24 irá injetar o líquido através do sistema de controle e para dentro do frasco 26, onde o sólido será solubilizado pelo líquido. Uma vez que os componentes estejam completamente solubilizados, o frasco 26 pode ser invertido e o êmbolo 28 pode ser retraído para puxar a composição de volta para dentro da primeira câmara na seringa 24. O frasco 26 pode então ser removido do sistema, e a composição pode ser injetada da seringa através de uma agulha 29 e dentro do tecido.

[0119] Um versado na técnica perceberá que quaisquer sistemas de câmara dupla conhecidos na técnica podem ser usados, e que as câmaras podem ser câmaras lado a lado com êmbolos de seringa separados que misturam em uma única câmara ou câmaras lineares com um único êmbolo.

[0120] As seringas preenchidas podem conter a dose exata a ser aplicada dos compostos e diluentes desejados. As seringas preenchidas podem conter volumes de cerca de 0,1 mL, 0,2 ml_, 0,3 ml_, 0,4 ml_, 0,5 mL, 0,6 mL, 0,7 mL, 0,8 mL, 0,9 mL, 1,0 mL, 1,5 mL, 2 mL, 2,5 mL, 3 mL, 3,5 mL, 4 mL, 4,5 mL, 5 mL, 5,5 mL, 6 mL, 6,5 mL, 7 mL, 7,5 mL, 8 mL, 8,5 mL, 9 mL, 9,5 mL, 10 mL ou mais ou qualquer faixa derivável nisso. O volume para injeção pode variar com base no tamanho da articulação para aplicação. O volume da composição usada pode ser variado com base no tipo de administração incluindo a articulação à qual está sendo administrada e a frequência de administração. O versado na técnica perceberá que o volume para injeção pode ser variado e otimizado com base em muitos outros fatores.

[0121] A seringa e/ou cartucho duplo pode compreender câmaras lado a lado com êmbolos de seringa separados que misturam em uma única câmara ou câmaras lineares com um êmbolo. A seringa e/ou cartuchos de câmara dupla podem também possuir um tampão ou conector no meio para servir como uma barreira entre as duas câmaras. O tampão ou conector pode ser removido para permitir a mistura ou combinação dos compostos nas duas câmaras.

[0122] Um versado na técnica perceberá que quaisquer sistemas de câmara dupla conhecidos na técnica podem ser usados, e que as câmaras podem ser câmaras lado a lado com êmbolos de seringa separados que misturam em uma única câmara ou câmaras lineares com um único êmbolo.

Dados Experimentais Exemplo 1: Líauido/Formulacão Líquida [0123] Uma solução de estoque de GlcN/CS foi preparada contendo 8,7 mg/mL de glicosamina (como o sal de cloridrato) e 8,7 mg/mL de sulfato de condroitina. Pouco antes da injeção intra-articular, aproximadamente 103 uL desta solução de estoque foram combinados com 400 uL de Orthovisc® (hialuronano de peso molecular alto) tendo uma concentração de HA de 15 mg/mL. A mistura interseringa das duas soluções foi realizada usando um registro de três passagens. A solução resultante continha 12 mg/mL de HA, 1,8 mg/mL de GlcN e 1,8 mg/mL de CS. A solução foi dividida em seringas menores para injeção intra-articular. Os volumes injetados foram cerca de 50 uL para os estudos em ratos.

Exemplo 2: Líauido/Formulacão Sólida [0124] 4 mg de GlcN e 4 mg de CS foram liofilizados em um frasco estéril. Pouco antes da injeção, 2 mL ou 15 mg/mL de HA foram injetados no frasco de pó liofilizado e submetido a vórtice até mistura total ser alcançada. A solução resultante continha 15 mg/mL de HA, 2 mg/mL de GlcN e 2 mg/mL de GlcN. A solução foi dividida em seringas menores para injeção intra-articular.

Dados de teste: Modelo de Osteoartrite MMT em Rato [0125] Várias formulações de HA/GIcN/CS intra-articulares foram testadas no método de laceração do menisco médio (LMM). Neste modelo, a transecção do menisco médio resulta na deterioração da articulação e reduzida capacidade de suportar o peso que mimetiza a osteoartrite humana. Este processo de degeneração ocorre durante um período de várias semanas, com degeneração significativa evidente em 21 dias.

[0126] A extensão da deterioração da articulação, conforme determinado primariamente pela extensão das lesões na cartilagem formadas, é medida usando um sistema de pontuação histológico semi-quantitativo. A capacidade de suportar o peso é medida usando um aparelho de incapacitância comercialmente disponível. A melhoria na capacidade de suportar o peso foi determinada por análise da área sob a curva (AUC) a partir dos dados de capacidade de suportar o peso, por semana. Isso fornece uma medida do efeito cumulativo do tratamento na dor durante o curso do experimento.

[0127] Iniciando uma semana após a cirurgia de MMT, injeções intra-articulares foram administradas semanalmente durante cinco semanas, seguido de eutanásia na 6a semana. As medições da capacidade de suportar o peso foram feitas semanalmente pouco antes da injeção.

[0128] As formulações de HA/GIcN/CS testadas no modelo de MMT em rato tinham as seguintes concentrações: HA/GIcN/CS = 12 mg/ml_/ 0,18 mg/ml_/ 0,18 mg/ml_ ("o/a grupo/formulação de 0,18 mg/mL de HA/GIcN/CS") HA/GIcN/CS =12 mg/mL/ 1,8 mg/mL/ 1,8 mg/mL ("o/a grupo/formulação de 1,8 mg/mL de HA/GIcN/CS") HA/GIcN/CS = 12 mg/mL/ 18,0 mg/mL/ 18,0 mg/mL ("o/a grupo/formulação de 18,0 mg/mL de HA/GIcN/CS") HA/CS = 12 mg/mL/ 0,18 mg/mL ("o/a grupo/formulação de 0,18 mg/mL de HA/CS") HA/CS = 12 mg/mL/ 1,8 mg/mL ("o/a grupo/formulação de 1,8 mg/mL de HA/CS") HA/CS = 12 mg/mL/ 18,0 mg/mL ("o/a grupo/formulação de 18 mg/mL de HA/CS") HA = 12 mg/mL Controles não tratados [0129] Como tal, a concentração de HA foi mantida constante em um nível que aproxima aos viscossuplementos comercialmente disponíveis, ao passo que a concentração de glicosamina e sulfato de con-droitina foi variada. Para o presente debate, as designações 0,18, 1,8 e 18,0 mg/mL referem-se àquelas concentrações de GlcN e CS em combinação com HA. O HA usado nas formulações tinha uma especificação de faixa de peso molecular de 1,0 a 2,9 milhões Daltons.

[0130] Resultados de histologia, fornecidos na Figura 3, demonstraram que os grupos de 1,8 mg/mL e 18,0 mg/mL de HA/GIcN/CS deram melhora significativa sobre o HA e os controles não tratados na Razão de Profundidade de Zona 2, ou seja, a profundidade das lesões de cartilagem no 1/3 central do compartimento mediano da articulação do joelho. GlcN também é indicado como "GH" nas figuras. "OV" usado nas figuras refere-se a Orthovisc® (hialuronano de peso molecular alto) que contém HA. Dessa forma, "OV" equivale a "HA" nas figuras.

[0131] Em outra medida de preservação da cartilagem, os grupos de 1,8 mg/mL de HA/GIcN/CS ("1,8 GCS") e 18 mg/mL de HA/CS ("18 CS") mostraram melhora na pontuação de degeneração de cartilagem conforme mostrado na Figura 4. Este é um demonstrativo da viabilidade celular da cartilagem restante. "GCS" usado nesta figura significa GlcN + CS. OV foi usado em todos os três grupos de GCS e os três de CS.

[0132] Uma outra medida de preservação de cartilagem é a largura das lesões quando medidas por depleção de cartilagem. A Figura 5 mostra que o grupo de 18 mg/mL de HA/CS mostrou redução significativa na largura da lesão comparada ao HA sozinho; e que o grupo de 18 mg/mL de HA/GIcN/CS também mostrou redução significativa na largura da lesão comparada ao HA sozinho.

[0133] A Figura 6 mostra uma área de capacidade de suportar o peso sob a análise de curva testada no modelo de MMT em rato. A área de capacidade de suportar o peso sob a análise de curva mostra que o grupo de 18,0 mg/mL de HA/GIcN/CS deu alívio de dores significativo comparado ao HA sozinho. Os grupos de 18 e 1,8 mg/mL de HA/CS também deram melhora significativa da capacidade de suportar o peso.

Modelo de artrite inflamatória CFA

[0134] Porque agora sabe-se que a ao tem um componente infla-matório, um modelo animal que mimetiza a artrite inflamatória foi usado para testar as formulações de HA/GIcN/CS. Adjuvante completo de Freund (CFA) compreende uma emulsão de células bacterianas mortas que é injetado sistemicamente ou dentro da articulação de um rato para induzir injetor severa. Dois estudos de CFA foram conduzidos, o primeiro usando uma injeção de 200 uL de CFA para induzir inflamação (CFA #1), o segundo usando um volume de injeção de 100 uL (CFA #2). Os artigos de teste foram preparados usando um método de formulação líquida/líquida descrito acima.

[0135] No CFA #1, uma injeção única de HA/GIcN/CS foi dada no quinto dia após a injeção de CFA intra-articular, que foi tempo suficiente para os animais desenvolverem inflamação substancial e sensibilidade à dor. Os filamentos de Von Frey foram usados para acessar mecanoalodinia (sensação de dor a partir de um estímulo normalmente não doloroso) nos dias 6, 7, 8, 17 e 21 a seguir à injeção de CFA. O diciofenaco NSAID potente foi usado como um controle positivo, usando um regime de dose oral diário. Estre protocolo foi usado para testar as formulações de 8,0 e 1,8 mg/mL de HA/GIcN/CS. Quanto ao modelo de MMT em rato, as melhorias cumulativas no alívio de dores foram calculadas. Conforme mostrado na Figura 7, os resultados da análise de AUC mostraram melhora significativa no alívio de dores nos grupos de HA, diciofenaco e 18 mg/mL de HA/GIcN/CS. Diciofenaco e 18 mg/mL de HA/GIcN/CS foram também estatisticamente superiores ao HA sozinho. Notadamente, vários animais no grupo de diciofenaco morreram prematuramente, indicando que o grupo de 18 mg/mL de HA/GIcN/CS teve um perfil de segurança superior além de sua eficácia equivalente contra dor inflamatória. Nesta figura, o grupo de 1,8 mg/mL de HA/GIcN/CS e o grupo de 18 mg/mL de HA/GIcN/CS são indicados como "G/C 1,8 mg/ml" e "G/C 18 mg/ml", respectivamente. O grupo não tratado é indicado como "Untx" nesta figura.

[0136] No CFA #2, o mesmo protocolo foi seguido exceto a dose mais baixa de CFA, que foi intencionada para induzir uma reação inflamatória menos severa e subsequentemente dor mais branda. Também, ibuprofeno oral diário (indicado como "IBR" na Figura 8) foi usado como um controle positivo ao invés do diciofenaco, em doses de 10 mg/kg e alta, 30 mg/kg. Estas doses foram equivalentes às doses diárias humanas de 2100 e 3600 mg, respectivamente. Ambas são consideradas doses altas de ibuprofeno que são em geral não recomendadas para uso prolongado. Conforme mostrado na Figura 8, descobriu-se que doses baixas e médias de HA/GicN/CS deram redução significativa de dor comparada ao HA sozinho, assim medida pela melhora cumulativa na deficiência da capacidade de suportar o peso, enquanto que a dose alta de HA/GIcN/CS deu um alívio de dores melhorado. A dose alta de ibuprofeno deu melhoria significativa no alívio de dores, enquanto que a dose baixa de ibuprofeno deu um resultado similar ao HA.

Modelo PGPS de Artrite Inflamatória Episódica [0137] O modelo de PGPS de artrite é usado para simular a inflamação episódica da articulação. PGPS (polissacarídeo de peptido-glicano) é uma formulação de parede celular estreptocócica que é injetada diretamente na articulação do indivíduo de teste, resultando em uma resposta inflamatória dolorosa. Ao contrário da resposta de FCA contínua, a dor inflamatória de PGPS é transiente, tipicamente durando apenas alguns dias. A seguir a esta injeção "inicial" na articulação, injeções sistêmicas subsequentes resultam em agudizações inflamatórias na articulação previamente injetada durante um período de vários dias. As agudizações inflamatórias de 'reativação' podem ser repetidas múltiplas vezes, com a dor inflamatória em geral diminuindo com os ciclos de reativação subsequentes. Alternativamente, a articulação pode ser "reprimida" a seguir à reativação inicial, resultando em uma resposta inflamatória mais robusta nas reativações subsequentes.

[0138] Quanto ao modelo de MMT em rato, o efeito das terapias intra-articulares é avaliado pelas medições estáticas da capacidade de suportar o peso. É também útil conduzir uma análise da marcha dos animais tratados para avaliar o efeito dos tratamentos na função normal. A análise da marcha pode revelar as melhorias funcionais que não são detectáveis pelas medições da capacidade de suportar o peso. No modelo de rato, a análise da marcha é feita avaliando o padrão de pegada do animal em uma distância de caminhada definida. No presente estudo, a parte de baixo da pata do rato foi pintada com tinta azul e o lado dorsal da pata foi coberta com tinta preta, pouco antes da medição da análise da marcha. O animal foi induzido a caminhar sobre uma folha de papel branco, e as anomalias de marcha foram medidas mediante avaliação dos padrões de tinta comparados aos animais não tratados. Por exemplo, uma pegada toda azul indica sem dor, uma pe- gada parcialmente azul indica mancar e tinta preta no papel é evidência de arrasto da pata.

[0139] No presente experimento, dois ciclos de reativação foram induzidos em ratos Lewis machos a seguir à injeção intra-articular de GPS inicial. No primeiro ciclo de reativação (iniciando no dia 0), ce-lecoxibe oral e dexametasona intra-articular (um corticosteroide) foram usados como os controles positivos. Pontuações da capacidade de suportar o peso e análise da marcha foram registradas nos dias 1, 4, 7 e 14 a seguir à injeção de reativação. No dia 15, os animais foram reprimidos com uma segunda injeção de PGPA IA e o segundo ciclo de reativação foi iniciado 14 dias após. Para o segundo ciclo de reativação, celecoxibe diário e triancinolona intra-articular foram usados como controles positivos. Pontuações da capacidade de suportar o peso e análise da marcha foram registradas nos dias 1, 2, 3 e 4 a seguir à injeção de reativação. Para ambos os ciclos, uma injeção intra-articular única de uma formulação de HA/GIcN/CS foi administrada duas horas antes da reativação de PGPS. As seguintes formulações foram testadas: HA = 15 mg/mL HA/CS = 15 mg/mL/20 mg/mL ("OV/CS 15/20") HA/CS = 15 mg/mL/2 mg/mL ("OV/CS 15/2") HA/GIcN/CS = 15 mg/mL/2 mg/mL/2 mg/mL ("OV/CS/GIcN 15/2/2") [0140] O método de formulação líquida/sólida descrito acima foi usado para preparar os artigos de teste.

[0141] A seguir à primeira reativação, apenas celecoxibe oral mostrou uma melhora significativa na pontuação tanto de déficit da capacidade de suportar o peso como da análise da marcha no dia 1. Entretanto, conforme mostrado na Figura 9, o grupo de HA/CS 15/20 mostrou melhora significativa no déficit da capacidade de suportar o peso comparado ao HA sozinho, e não foi estatisticamente diferente do que o celecoxibe oral no Dia 1. No próximo ponto de tempo do primeiro ciclo de reativação (dia 4), as pontuações de dor diminuíram significativamente e não houve nenhuma diferença significativa observada entre os grupos.

[0142] A Figura 10 mostra os resultados da pontuação da análise da marcha a seguir à segunda reativação. Provavelmente devido ao nível mais alto de dor que resultou da etapa repressiva, apenas celecoxibe e triancinolona IA deram melhoria significativa no déficit da capacidade de suportar o peso a seguir à segunda reativação. Nos dias 2-3, a seguir à reativação (dias 34 e 35 do experimento), HA/CS 15/2 deu melhorias significativas na pontuação da análise da marcha, enquanto que HA/CS 15/20 deu melhoria significativa no dia 3 após a reativação. Nesta figura, Grp 5 = OV/CS 15/20; Grp 6 = OV/CS 15/2; E Grp 7 = OV/CS/GIcN 15/2/2.

[0143] Durante os quatro primeiros dias a seguir à segunda reativação, o grupo de HA/CS 15/2 deu uma melhoria significativa na pontuação da análise da marcha comparada ao HA sozinho. O gráfico na Figura 11 mostra a melhoria cumulativa na pontuação da análise da marcha para a segunda reativação. O grupo de HA/CS 15/2 mostrou melhoria significativa na pontuação da análise da marcha.

[0144] Em suma, esses dados coletivamente demonstraram que ambas as doses mais baixas de GlcN e CS variando de 0,018 mg/ml a 0,18 mg/ml e as doses mais altas de GlcN e CS variando de 18 mg/ml a 20 mg/ml mostraram ótima eficácia no tratamento das condições de articulação, como OA.

[0145] Aplicabilidade de extrapolação alométrica pode ser usada para extrapolar a dosagem para ser humano da dosagem para animal não humano, com base nas relações estabelecidas entre o metabolismo, tamanho do corpo e peso em espécie diferente. É prática comum extrapolar a dosagem de uma espécie para a outra fazendo uso da razão de pesos dos animais para % força: onde Dose 2 = dose humana e Dose 1 = dose de rato. Os pesos típicos dos ratos e dos seres humanos são 0,3 e 70 kg, respectivamente. Por exemplo, para extrapolar uma dose e 1 mg em uma dosagem de rato para ser humano, a extrapolação alométrica prediría: [0146] Para uma concentração de injeção de glicosamina de 0,018 mg/ml em um rato, a dose é 0,0009 mg com base no volume de injeção de 50 μΙ_ A dose humana correspondente usando o cálculo acima seria 0,054 mg.

[0147] É comum usar volumes variado de 1 a 10 ml e solução para injeção intra-articular em seres humanos. Como tal, as concentrações necessárias de glicosamina para dosagem humana, correspondendo a 0,018 mg/ml em um rato, seriam 0,0054 - 0,054 mg/ml. Usando cálculos similares para uma concentração de injeção em rato de 18 mg/ml, a faixa humana correspondente seria 5,4 - 54 mg/ml.

[0148] Os versados na técnica irão compreender outras características e vantagens da invenção com base nas modalidades descritas acima. Consequentemente, a invenção não deve ser limitada pelo que foi particularmente mostrado e descrito, exceto conforme indicado pelas reivindicações anexas. Todas as publicações e referências citadas estão expressamente aqui incorporadas em sua totalidade a título de referência.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Composição para o tratamento de uma articulação, caracterizada pelo fato de que compreende: uma formulação injetável compreendendo ácido hialurônico (HA), glicosamina, e sulfato de condroitina, a formulação injetável possuindo um pH na faixa de cerca de 3 a 5 e uma osmolaridade na faixa de cerca de 330 a 750 mOSM.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a glicosamina está presente em uma concentração de cerca de 0,005 a 54 mg/mL.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o sulfato de condroitina está presente em uma concentração de cerca de 0,005 a 54 mg/mL.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o HA está presente em uma concentração de cerca de 3,6 a 36 mg/mL.

5. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a glicosamina e o sulfato de condroitina estão presentes em uma razão em peso de cerca de 1:1.

6. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende, ainda, trealose.

7. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a glicosamina está presente em uma concentração de cerca de 18 a 20 mg/mL; o sulfato de condroitina está presente em uma concentração de cerca de 18 a 20 mg/mL; o HA está presente em uma concentração de cerca de 12 a 17,5 mg/mL; o pH está na faixa de cerca de 3,5 a 4; e a osmolaridade está na faixa de cerca de 600 a 650 mOSM.

8. Uso de uma formulação injetável compreendendo ácido hialurônico (HA), glicosamina, e sulfato de condroitina, a formulação injetável possuindo um pH na faixa de cerca de 3 a 5 e uma osmolaridade na faixa de cerca de 330 a 750 mOSM, caracterizado pelo fato de que é na preparação de uma composição para o tratamento de uma articulação.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que compreende, ainda, combinar o HA com uma mistura da glicosamina e sulfato de condroitina para formar a formulação em menos do que cerca de 30 minutos antes da injeção.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a glicosamina está presente na formulação na faixa de cerca de 0,005 a 54 mg/ml_.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o sulfato de condroitina está presente na formulação na faixa de cerca de 0,005 a 54 mg/mL.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o HA está presente na formulação na faixa de cerca de 3,6 a 36 mg/mL.

13. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a glicosamina e o sulfato de condroitina estão presentes na formulação em uma razão de cerca de 1:1.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a formulação compreende, ainda, trealose.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que: a glicosamina está presente na formulação na faixa de cerca de 18 a 20 mg/mL; o sulfato de condroitina está presente na formulação na faixa de cerca de 18 a 20 mg/mL; o HA está presente na formulação na faixa de cerca de 12 a 17,5 mg/ml_; o pH está na faixa de cerca de 3,5 a 4; e a osmolaridade está na faixa de cerca de 600 a 650 mOSM.

16. Kit para o tratamento de uma articulação, caracterizado pelo fato de que compreende: ácido hialurônico (HA), e glicosamina e sulfato de condroi-tina separados do HA, sendo que combinando o HA, a glicosamina, e o sulfato de condroitina forma-se uma formulação possuindo um pH na faixa de cerca de 3 a 5 e uma osmolaridade na faixa de cerca de 330 a 750 mOSM; e uma seringa para injetar a formulação em uma articulação.

17. Kit, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a seringa compreende uma primeira câmara contendo o HA; uma segunda câmara contendo a glicosamina e o sulfato de condroitina, e em comunicação fluida com a primeira câmara; e um êmbolo configurado para deslocar a glicosamina e o sulfato de condroitina do segundo recipiente para o primeiro recipiente, para combinar o HA, glicosamina e sulfato de condroitina e formar a formulação.

18. Kit, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a glicosamina possui uma concentração de cerca de 0,005 a 54 mg/mL.

19. Kit, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o sulfato de condroitina possui uma concentração de cerca de 0,005 a 54 mg/mL.

20. Kit, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o HA possui uma concentração de cerca de 3,6 a 36 mg/mL.

21. Invenção, em quaisquer formas de suas concretizações ou em qualquer categoria aplicável de reivindicação, por exemplo, de produto ou de processo ou uso englobadas pela matéria inicialmente descrita, revelada ou ilustrada no pedido de patente.