BG64367B1

BG64367B1 - Метод за получаване на воден фармацевтичен състав

Info

Publication number: BG64367B1
Application number: BG103739A
Authority: BG
Inventors: Giovanni Cavallo; Leonardo Marchitto
Original assignee: Aziende Chimiche Riunite Angelini Francesco A.C.R.A.F. S.P.A.
Priority date: 1997-02-20
Filing date: 1999-09-16
Publication date: 2004-12-30
Also published as: KR20000075480A; UA63939C2; CZ296700B6; CN1255057A; DK0973505T3; CN1135969C; HUP0000910A2; HUP0000910A3; EP0973505A1; DE69821001T2; DE69821001D1; AR011682A1; TR199901987T2; JP2001519775A; HU225594B1; EA002281B1; SK111199A3; ATE257374T1; ITMI970363A1; SK282905B6

Abstract

Изобретението се отнася до метод за получаване на воден фармацевтичен състав, съдържащ активно вещество, което е трудно разтворимо във вода и е диспергирано в липозоми. а

Description

Област на техниката

Изобретението се отнася до метод за получаване на воден фармацевтичен състав, съдържащ активно вещество, което е трудно разтворимо във вода. По-специално, изобретението се отнася до метод за получаване на фармацевтичен състав, в който активното вещество е диспергирано в липозоми.

Предшестващо състояние на техниката

Много проучвания са направени за намиране на нови липозомни състави в областта на фармацевтиката. Обаче възникват много трудности, по-специално по отношение на активните вещества, които са трудно разтворими във вода. По-специално при тези активни вещества, които имат разтворимост във вода <0,01 % (тегло/обем).

Всъщност, технологичните методики, които широко се използват за получаването на липозоми, съдържащи активни вещества с малка водоразтворимост, се характеризират с това, че се състоят в:

a) довеждане в състояние на разтвор на активното вещество и на предварително избраните фосфолипиди в подходящ органичен разтворител, например хлороформ;

b) изпаряване на този разтворител при намалено налягане, до получаването на филм съдържащ активно вещество/фосфолипид;

c) прибавянето на втори органичен разтворител, например тербутилов алкохол;

d) замразяване на получения разтвор при температурата на течен азот;

e) лиофилизиране на замразения разтвор;

f) хидратиране на лиофилизирания разтвор с буферен разтвор до получаването на суспензия от мултиламеларни липозоми (MLV); и

g) подлагане на тази суспензия на действието на ултразвук, за да се получи суспензия от по-малки липозоми (SUV).

Пример за този метод е описан от А. Sharma et al. “Pharmaceutical Research”,2,(6), 889-896 (1994).

Тази технологична методика, обаче, има недостатъка, че е много трудоемка и води до наличие от следи на органичните разтворители в липозомите.

Посочените авторите обаче съобщават, че са изследвали различни технологични методики за получаване на MLV липозоми, такива като хидратиране на сухи липидни филми (разклащане на ръка), замразяване, разтопяване и различни технологични методики, като екструдиране и подлагане на действието на ултразвук, за намаляване след това (постпросесинг) на размера на липозомите (MLV—>SUV), и заключават, че описаният в подробности по-горе метод и съдържащ посочените фази от а) до g), е показал, че е най-приемливият (loc.cit. страница 890, дясна колона, р.-51-57). Посочените автори обаче не показват как посочените първи техники за получаване на MLV липозоми, и посочените втори техники, които могат да намаляват размера на липозомите, се комбинират заедно една с друга.

WO-A-96 40064, ЕР-А-0 578 629, DE-A4 038 075 и DE-A-4 430 593 описват фармацевтични състави, в които активно вещество, което е трудно разтворимо във вода, е диспергирано в липозоми. Такива активни вещества са циклоспорин А, мелатонин и съответно таксол.

Нито един от тези документи не описва метод за получаване на водни липозомни състави, които комбинират заедно методи на замразяване и стопяване с екструдиране.

Сега се установи, че техниките на замразяване и стопяване, комбинирани с екструдиране, дават възможност за получаването на водни липозомни състави с активни вещества, които имат разтворимост във вода < 0,01 % (тегло/обем), без да се използва никакъв органичен разтворител.

Техническа същност на изобретението

В изобретението и в патентните претенции, които следват, активните вещества, които имат разтворимост във вода < 0,01 % (тегло/обем) се дефинират като “трудно разтворими във вода”.

Цел на изобретението е да осигури метод за получаване на фармацевтичен състав съгласно претенция 1.

Следват изложени характерни примери на активни вещества които са трудно разтворими във вода: лонидамин (разтворимост: 3 х IO^-6 g/ml), мелатонин [“практически неразтворим”, G. S. Scida et al. “J.Pinedl Res”16, 198

201, (1994)], циклоспорин -А [“неразтворим във вода”, монография върху циклоспорин А в “Analytical Profiles of Drug Substances”, 16, 163, (1987)] и биндарит (разтворимост: 1 х IO ⁴ g/ml).

Липозомите от съставите съгласно изобретението за предпочитане се получават от съставни части, избрани от групата, състояща се от фосфоглицериди, глицериди, диглицериди, триглицериди, фосфолипиди, галактозил и глюкозил липиди, холестерол и негови производни, сфинголипиди и техни смеси. Повече се предпочита те да се получават от фосфолипиди.

Характерен пример за липозомен състав съгласно изобретението съдържа фосфатидилхолин, лизофо-сфатидилхолин, N-ацилфосфатидилхолин, фосфатидил етаноламин, фосфатидилсерин, сфингомиелин, на-полярнилипиди, триглицериди, свободни мастни киселини, DL-а-токоферол.

Предпочитан липозомен състав съгласно настоящето изобретението съдържа:

Съставна част	% (тегло/тегло)
фосфатидилхолин	85 - 97
лизофосфатидилхолин	0-5
N -ацил-етаноламин	0-4
фосфатидил етаноламин	0-10
триглицериди	0-4
свободни мастни киселини	0-3
D L-а-токоферол	0-1

Особено предпочитан липозомен състав съгласно изобретението съдържа:

Съставна част	% (тегло/тегло)
фосфатидилхолин	94
лизофосфатидилхолин	3
N-ацил-етаноламин	1
фосфатидил етаноламин	0,1
триглицериди	1
свободни мастни киселини	0,75
DL-а-токоферол	0,15

Характерно, размерът на липозомите съгласно изобретението е по-малък от 500 шп. За предпочитане той е от 50-250 nm.

Продължителността на фаза с) зависи от количеството на трудно разтворимото във вода активно вещество, което трябва да се улови от липозомите. По такъв начин специалистите в областта на техниката нямат никакви трудности при определянето, освен някол ко рутинни експеримента, на коректното време за всеки вид активно вещество и всеки вид липозомен състав.

За предпочитане, водната фаза се със5 той от воден разтвор на натриев хлорид 0,05 0,9% (тегло/обем).

Характерно, количеството на използуваните липиди е 0,01 - 0,4 тегл. части на всяка тегловна част воден разтвор. Характерно, ко10 личеството на активното вещество е в границите между 0,01 - 0,3 тегл. части на всяка тегловна част липид.

Характерно, диспергиращото устройство е хомогенизатор от типа Ultraturrax™.

Характерно, екструдирането се осъществява, използвайки като екструдиращ газ сгъстен въздух, или инертен газ, избран от групата, състояща се от азот, хелий и аргон. За предпочитане инертният газ е хелий. Налягането 20 във фазата на екструдирането за предпочитане е от 500 до 5500 KPa, а температурата за о предпочитане е от 20 до 75 С, още по за пред0 почитане е от 40 до 65 С. Типични примери за подходящи екструдери са тези от вида Lipex 25 Biomembranes Thermobarrel Extruder, или от вида

Emulsiflex СС Avestin с поликарбонатна мембрана от вида Costar™ с диаметър на порите между 50 и 600 mn.

Характерно, фаза h) се повтаря най-мал30 ко два пъти, но не повече от 8 пъти. За предпочитане-6 пъти.

Примери за изпълнение на изобретението

Следващите примери служат за илюстриране на изобретението, без да го ограничават.

Пример 1.

100 mg мелатонин се диспергират в 1 g фосфолипиди при 30 С в продължение на 10 min, ка40 то се използва хомогенизатор от типа Ultraturгах™. Непосредствено след това, дисперсна система се суспендира в 10 ml 0,9% (тегло/обем) воден разтвор на натриев хлорид, като се използва посоченият хомогенизатор, и след това 45 се нагрява във водна баня при 55 С в продължение на 20 min.

Получената суспензия се подлага на следващия цикъл на замразяване и на нагряване: замразяване в течен азот в продължение на 1 min, 50 нагряване при 55 С до пълното превръщане на фосфолипидите в състояние на флуид.

Цикълът се повтаря 6 пъти.

Суспензията се прекарва два пъти през филтър 0,6 pm, като се използва устройство от типа Lipex Biomembranes.

Така се получава суспензия “Multilamellar Large Vesicle” (MLV) и се подлага на 6 непрекъснати екструзионни цикъла, като се използват 10-ml екструдер от вида Lipex Biomembranes Thermobarrel с 0,1 pm поликарбонатни филтри от вида Costar™ _пр_и 55°С, използвайки хелий като екструзионен газ, при налягане в от 1000 до 4800 kPa.

Съгласно описаната методика се получават три партиди от продукта (LM/186, LM/ 188 и LM/190).

Върху партидите се извършват следните изследвания: количеството на мелатонин във воден липозомен състав (изследване HPLC); размер на липозома; количеството на мелатонин, уловено в липозомите.

Следващата таблица показва измерените параметри и тяхната значимост:

Параметри	Значимост
Размер на липозома	- стабилност по време на получаването на лекарственото средство;
количество на мелатонина	- концентрация на мелатонин във воден липозомен състав; - стабилност по време на получаването на лекарственото средство;

Получените данни са представени в таблица 1, която показва: получената концентрация на мелатонин във водното лекарствено средство е 8,05 х 10³ g/ml, изразена като средна стойност от трите партиди; средният размер на липозомите за трите партиди е 93 nm; уловеното количество е 80,5 pg/mg, изразено като средна стойност от трите партиди; лекарствените форми не показват явление на слепване 30 ^JU на липозомите.

ТАБЛИЦА 1

	PLC количество (mg/ml)	среден размер (пт)	уловено количество *рц/тц
LM/186	7,8	85	78
LM/188	8,46	97	84,6
LM/190	7,9	98	79

(*) изразено като γ от лекарството за mg използвани фосфолипиди.

Следващата методика е използвана за изследване HPLC : неподвижна фаза: колона с обърната фаза РКВ-100 (250 х 4,6 mm; 5 pm Supelco);

- подвижна фаза: вода : ацетонитрил 80:20 (обем/обем);

- намерено : UV 254 nm.

Две апаратури се използуват за изследване на средния размер на липозоми:

1) DELSA 440 Coulter,

2) NICOMP Submicron particle sizer model

370. Технологичната методика е следната:

a) за изследвания, извършени с апаратура 1), 1 ml липозомна суспензия се разрежда с 10 ml 0,9 % (тегло/обем) воден разтвор на натриев хлорид;

b) за изследвания, извършени с апаратура 2), 0,5 ml от разтвор а) се разрежда до ml c 0,9 % (тегло/обем) воден разтвор на натриев хлорид;

Пример 2. Технологичният метод е съгласно даденото по-горе описание за целите на пример 1, като се използуват 2 g фосфолипид 5 и 50 mg лонитадин, вместо 1 g фосфолипид и 100 mg мелатонин.

По този начин се получават три партиди от продукта (LM/195, GN/1L и CN/2L)).

Получените данни са представени в таб лица 2, която показва: концентрацията на лонитидин във водния състав показва стойности от начална разтворимост 3 х 10'⁶ g/ml, до средна стойност за трите партиди 3,83 х 10^_3 g/ml; средният размер на липозомите за трите партиди е 79,6 nm; уловеното количество е 19,2 pg/mg, изразено като средна стойност от трите партиди; лекарствените средства не показват явление на липозомно слепване.

ТАБЛИЦА 2

Партида	HPLC количество (mg/ml)	среден размер (пт)	уловено количество * pg/mg
LM/195	3,66	103	18,3
GN/1L	3,31	53	16,5
GN/2L	4,54	76	22,7

(*) изразено като pg от лекарството за mg използвани фосфолипиди.

Пример 3. Технологичният метод е съгласно даденото по-горе описание на пример 1, като се използват 2 g фосфолипид и 200 mg мелатонин, вместо 1 g фосфолипид и 100 mg мелатонин.

По този начин се получават три партиди от продукта (GN/1M, GN/2M и GN/3M).

Получените данни са представени в таблица 3, която показва: концентрацията на мелатонин във водния липозомен състав е 13,5 х 10^_3 g/ml, изразена като средна стойност от трите партиди; средният размер на липозомите за трите партиди е 92,6 nm; уловеното количество е 67,6 g/g, изразено като средна стойност от трите партиди; лекарствените средства не показват явление на липозомно слепване.

ТАБЛИЦА 3

Партида	HPLC количество (mg/ml)	среден размер (пт)	уловено количество *M8/mg
GN/1M	10,66	104	53,3
GN/2M	13,90	76	69,5
GN/3M	16,03	98	80,15

Пример 4. Технологичният процес е съгласно даденото по-горе описание на пример 2, с изключение на това, че екструдирането се осъществява през поликарбонатна мембрана 0,2 pm по-често от 0,1 pm.

По този начин се получават три партиди от продукта (GN/3L, GN/4L и GN/5L).

Получените данни са представени в таб45 лица 4, която показва, че като се увеличава количеството на лонитидина от 20 mg до 50 mg, количеството на фосфолипида от 1 до 2 g и като се екструдира през мембрана 0,2 pm вместо през 0,1 pm, се получава значително повишаване на концентрацията на лонитидина във водния разтвор, получен в пример 2. Всъщност, получава се средна стойност 4,47 х 10³ g/ml за концентрацията на лонитидин.

ТАБЛИЦА 4

Партида	HPLC количество (mg/ml)	среден размер (пт)	уловено количество * pg/mg
GN/3L	4,23	134	21,15
GN/4L	4,44	129	22,20
, GN/5L	4,75	109	23,75

Пример 5. 20 mg циклоспорин А се диспергират в 1 g фосфолипиди при 30 С в продължение на 10 min, като се използва хомогенизатор от типа Ultraturrax™. Непосредствено след това, тази дисперсна система се суспендира в 10 ml 0,9% (тегло/обем) воден разтвор на натриев хлорид, като се използва посоченият хомогенизатор. и след това се нагрява във водна баня при 65°С в продължение на 20 min,

Получената суспензия се подлага на следващия цикъл на замразяване и на нагряване: замразяване в течен азот в продължение на 1 min,

- _о нагряване при 65 С до пълното превръщане на фосфолипидите в състояние на флуид .

Цикълът се повтаря 6 пъти.

Суспензията се прекарва два пъти през филтър 0,6 т, като се използва апаратурата от типа Lipex Biomembranes.

Така се получава суспензия “Multilamellar Large Vesicle” която се подлага на 6 15 непрекъснати екструзионни цикъла, като се използват 10-ml екструдер от вида Lipex Biomembranes Thermobarrel с 0,1 pm поликарбонатни филтри от вида Costar™ при 65 С, използвайки хелий като екструзионен газ при налягане 2θ от 1000 до 4800 КРа.

По този начин се получават три партиди от продукта (LM/416A, LM/416B и LM/ 4160.

Получените данни са представени в таб25 лица 5, която показва: концентрацията на циклоспорин-А във водния липзомен състав е 0,96 х 10'³ g/ml, изразено като средна стойност от трите партиди; средният размер на липозомите за трите партиди е 103 шп; уловеното количес30 тво е 9,6 pg/mg, изразено като средна стойност от трите партиди; лекарствените средства не показват явление на липозомно слепване.

ТАБЛИЦА 5

Партида	HPLC количество (mg/ml)	среден размер (пт)	уловено количество *ие/те
LM/416A	0,96	103
LM/416A	0,94	99	9.4
LM/416A	0,98	107	9,8 \|

(♦) изразено като pg от лекарството за mg използвани фосфолипиди.

Пример 6. Технологичният процес е съгласно даденото по-горе описание за пример 1, като се използват 2 g фосфолипиди и 50 mg биндарит, вместо 1 g фосфолипиди и 100 mg мелатонин.

По този начин се получават три партиди от продукта (LM/356, LM/357 и LM/358).

Получените данни са представени в таб лица 6, която показва: концентрацията на биндирит във водния състав показва стойности от начална разтворимост 1 х lO^g/ml, до средна стойност за трите партиди 4 g/ml; средният размер на липозомите за трите партиди е 108,3 пт; уловеното количество е 20,2 pg/mg, изразено като средна стойност от трите партиди; лекарствените средства не показват явление на липозомно слепване.

ТАБЛИЦА 6

Партида	HPLC количество (mg/ml)	среден размер (пт)	уловено количество * pg/mg
LM/356	4,1	109,4	20,5
LM/357	4	109,7	20
LM/358	L 4	106	Г 20

(*) изразено като pg от лекарството за mg използвани фофолипиди.

Пример 7. 30 mg циклоспорин А се диспергират в 2 g фосфолипиди при 30 С в продължение на 10 min, като се използва хомогенизатор от типа Ultraturrax™. Непосредствено след това тази дисперсна система се суспендира в 10 ml 0,9% (тегло/обем) воден разтвор на натриев хлорид, като се използва посоченият хомогенизатор, и след това се оставя при обикновена температура в продължение на 24 h. След това получената суспензия се нагрява на вод0 на баня при 65 С в продължение на 20 min.

Получената по този начин суспензия се подлага на следващия цикъл на замразяване и на нагряване: замразяване в течен азот в продължение на 1 min, нагряване при 65 С до пълното превръщане на фосфолипидите в състояние на флуид.

Цикълът се повтаря 6 пъти.

Суспензията се преварва два пъти през филтър 0,6 pm, като се използва апаратурата от типа Lipex Biomembranes.

Така се получава суспензия “Multilamellar Large Vasicle” (MLV), която се подлага на 6 непрекъснати екструзионни цикъла, като се използват Ι-ml екструдер от вида Lipex Biomembranes Thermobarrel с 0,1 pm поликарбонатни филтри от вида Costar™ при 65°С, използвайки хелиум като екструдивен газ, при налягане от 1000 до 4800 КРа.

По този начин се получават три партиди от продукта (LM/422a, LM/422b и LM/422c).

Получените данни са представени в таблица 7, която показва: концентрацията на циклоспорин-А във водния липозомен състав е 3 g/ml, изразена като средна стойност от трите партиди; средният размер на липозомите за трите партиди е 119,5 nm; уловеното количество е 15 pg/mg, изразено като средна стойност от трите партиди; лекарствените средства не показват явление на липозомно слепване.

ТАБЛИЦА 7

Партида	HPLC количество (mg/ml)	среден размер (пт)	уловено количество * pg/mg
LM/422a	3,2	121,5	16
LM/422b	3	117,9	15
LM/422c	2,8	119	14

Claims

1. Метод за получаване на воден фармацевтичен състав с активно вещество, което има разтворимост във вода не повече от 0,01 % (тегло/обем), диспергирано в липозоми, ха- рактеризиращ се с това, че се състои от следните фази : а) диспергиране на активното вещество в липиди при температура в границите между 20 и 30 С; Ь) суспендиране на тази дисперсна система във водна фаза; с) престояване на тази суспензия при обикновена температура за период от време между 0 и 48 h; нагряване до 30-75 С в продължение на 10-40 min; е) замразяване при -150/-200 С; f) повтаряне на фази

d) и е) най-малко два пъти, но не повече от 8 пъти; g) филтриране през филтрираща мембрана с диаметър на порите 500 -1000 nm; h) екструдиране през мембрана с диаметър на порите 50 - 400 nm; и едновременно с това i) отстраняване на всяко активно вещество, което не е уловено.

2. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че водната фаза се състои от воден разтвор на натриев хлорид с концентрация от 0,05 % - 0,9 % (тегло/обем).

3. Метод съгласно претенция 1 или 2, характеризиращ се с това, че използваното количество липиди е в границите между 0,01 и 0,4 тегл. части на всяка тегловна част вода.

4. Метод съгласно която и да е претенция от 1 до 3, характеризиращ се с това, че използваното количество активно вещество е в границите между 0,01 и 0,3 тегловните части на всяка тегловна част липиди.

5. Метод съгласно която и да е претенция от 1 до 4, характеризиращ се с това, че във фаза h) се използва екструзионен газ, който се избира от групата, състояща се от

5 азот, хелий и аргон.

6. Метод съгласно претенция 5, характеризиращ се с това, че екструзионният газ е с налягане в границите между 500 и 5500 kPa.

7. Метод съгласно която и да е претен-

10 ция от 1 до 6, характеризиращ се с това, че фаза h) се осъществява при температура в границите между 20 и 75 С.

8. Метод съгласно претенция 7, характеризиращ се с това, че температурата е в

15 границите между 40 и 65°С.

9. Метод съгласно която и да е претенция от 1 до 7, характеризиращ се с това, че фаза h) се повтаря най-малко два пъти, но не повече от 8 пъти.