BG107657A - Млечно кисела бактерия, способна да редуцира склонността на индивида да развие алергични реакции - Google Patents
Млечно кисела бактерия, способна да редуцира склонността на индивида да развие алергични реакции Download PDFInfo
- Publication number
- BG107657A BG107657A BG107657A BG10765703A BG107657A BG 107657 A BG107657 A BG 107657A BG 107657 A BG107657 A BG 107657A BG 10765703 A BG10765703 A BG 10765703A BG 107657 A BG107657 A BG 107657A
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- peptide
- cooh
- bacterial strain
- tolerogenic
- milk
- Prior art date
Links
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 48
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 31
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 24
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 120
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 39
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 10
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 25
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 21
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 13
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 12
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 10
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 10
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 10
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 9
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 8
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 8
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 5
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims description 4
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 claims description 4
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 6
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims 4
- 241000186672 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Species 0.000 claims 3
- 101710180643 Leishmanolysin Proteins 0.000 claims 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims 2
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 claims 2
- 108010032976 Enfuvirtide Proteins 0.000 claims 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 102400000368 Surface protein Human genes 0.000 claims 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 10
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 9
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 9
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 102100034614 Ankyrin repeat domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 7
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 7
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 6
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 6
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 5
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 4
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 4
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 3
- 241001147746 Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000000774 hypoallergenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 101100407629 Aspergillus niger pepA gene Proteins 0.000 description 2
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 101100434212 Listeria monocytogenes serovar 1/2a (strain ATCC BAA-679 / EGD-e) actA gene Proteins 0.000 description 2
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 2
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 2
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000013568 food allergen Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 101150038570 prtB gene Proteins 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000020192 tolerance induction in gut-associated lymphoid tissue Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 2
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 208000012657 Atopic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 101710168515 Cell surface glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 101100298295 Drosophila melanogaster flfl gene Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001596967 Escherichia coli M15 Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 1
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 101100386510 Mus musculus Dazap2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100352028 Mus musculus Phex gene Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 101710099182 S-layer protein Proteins 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 208000006903 Wheat Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004082 barrier epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004890 epithelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 235000011868 grain product Nutrition 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011141 high resolution liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000005027 intestinal barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000037125 natural defense Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 101150064613 pepN gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000036647 reaction Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1236—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using Leuconostoc, Pediococcus or Streptococcus sp. other than Streptococcus Thermophilus; Artificial sour buttermilk in general
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/065—Microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C2220/00—Biochemical treatment
- A23C2220/20—Treatment with microorganisms
- A23C2220/202—Genetic engineering of microorganisms used in dairy technology
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/151—Johnsonii
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/21—Streptococcus, lactococcus
- A23V2400/231—Lactis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/51—Bifidobacterium
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Dairy Products (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до нови щамове млечнокисела бактерия, които са способни да редуцират склонността на индивида да развие алергични реакции. По-специално, изобретението се отнася до поколение щамове на млечнокиселите бактерии, които експресиратпротеини, включително толерогенни пептиди, и до приложението им за редуциране склонността на индивида да развие алергични реакции. Изобретението се отнася също до храни или фармацевтични състави, съдържащи посочените микроорганизми или техни активнифракции.
Description
Настоящето изобретение се отнася до нови щамове млечно кисели бактерии, които са способни да редуцират тенденцията у индивидите да развиват алергични реакции. По- специално, настоящето изобретение се отнася до нови щамове млечно кисела ’’tes · бактерия, която експресира полипептиди, включващи толерогенни пептиди и използването му за редуциране тенденцията на индивидите да развият алергични реакции. Изобретението се отнася също до храна и фармацевтични състави, съдържащи тези микроорганизми или техните активни фракции.
Алергиите са необичайни реакции на имунната система спрямо различни вещества (алергени). Най- общо, индивидите не генерират базисна имунна реакция срещу вещества, обичайно срещани в околната среда, като полен или хранителен материал, чиято нереактивност се предполага че се дължи главно на супресиращ механизъм на имунната система. Обаче, при неблагоприятни условия, имунната система не проявява тази супресираща активност (означена като толеранс), водеща до специфична имунна реакция спрямо алергена- алергичната реакция. Алергичните реакции включват освобождаването на биологично активни вещества, като медиаторите на възпаленията хистамин, левкотриени и ензими, от определени клетки, главно мастни клетки и базофилни гранулоцити, • · в заобикалящите тъканни и васкуларни структури. Мастните клетки са диспергирани в тъканта на индивидите, докато базофилите циркулират в рамките на васкуларната система. При последователност от събития, включващи IgE антитела, съединенията/ медиаторите се освобождават от определени мастни клетки, които довеждат до фармакологични реакции.
В миналото, броя на индивидите, страдащи от алергични реакции се е повишил, което често е съпътствано от винаги повишено замърсяване на атмосферата, причинено например от отработени газове. Така също, повишената консумация на протеинови материали се предполага, че е определяща за това развитие, по- специално за нарастване на хранителни алергии. В допълнение, дефицита на микробни инфекции, установен в развиващите се страни се предполага, че е друга възможна причина за повишаване на атопични заболявяния.
Хранителните алергии и дори хранителнния интолеранс от определен вид са станали твърде обичайни. Повечето поразени
-¼.
индивиди е установено, че проявяват нетолерантност към определени съставки на храните с около 5 процента от популацията дори развивайки реакции към усвоени вещества, което е достатъчно сериозно, за да изисква лекарско внимание.
Напоследък се наблюдава, че главната причина за хранителния интолеранс се корени в абсорбцията на вещества от тялото, които са обикновено изключени, но които се абсорбират от • · ···· ···· • ·· · · · · · · ·· ·· ·· гастроинтестиналния тракт на подозирани индивиди. Тази малабсорбция се предполага че произхожда от нарушения в тъканта, която покрива храносмилателния тракт {Peters et al., (1988) Can. J. of Gastroenterol. 2, 127; Olaison et al., (1990) Scand. J. of Gastroenterol. 25, 321; Hollander et al., (1986) Ann. Of Int. Med. 105, 883). Установения напоследък капацитет на епителните клетки, покриващи гастроинтестиналния тракт да преработват и представят антигени, би могъл да се установи за отключване на фалшиви имунни реакции, водещи до възпаление и алергия {Campbell et al., (1999) Immunol. Rev. 172, 315).
Проявата на хранителна алергия може да включва по същество която и да е тъкан в тялото. Поради своята голяма абсорбтивна площ, гастроинтестиналния тракт е като че основното място за абсорбция за вредните вещества. Много от симптомите за хранителни алергии се проявяват в самия храносмилателен тракт, но могат да поразят също и други тъкани, включително кожата и дихателните пътища.
Предложени са различни подходи за лечение на алергии, поспециално хранителна алергия.
Един такъв подход цели модифициране на източника на алергичен материал сам по себе си, така че техния алергичен потенциал да бъде редуциран. Това може да бъде постигнато чрез ограничаване или елиминиране на храната или нейните компоненти, съответно, които биха причинили такива проблеми. Проблемите • · · · · · ···· ♦ · · · ··· ·· ·· ·· · · често се коренят в това, че специфични антигенни вещества (алергени) в съответния хранителен материал често са неизвестни, така че в повечето случаи не е ясно кой компонент би следвало да бъде избирателно отстранен.
В US- 5,480,660 е докладвано, че началото на алергия в пациенти с алергии спрямо пшеница може да бъде избягнато чрез елиминиране или редуциране на брашно, протеини притежаващи # молекулни тегла от не повече от 30,000 Da и протеини притежаващи молекулно тегло от 50,000 до 70,000 Da.
В JP 11 04 67 21 е описан метод за редуциране способността за предизвикване на алергия на протеин съдържащ материал, където хранителния материал се смесва с пшенично брашно и сместа се пече за повече от 3 минути при 180°С.
В US- 4,293,571 е описано получаването на хипоалергенен състав, при което протеиновия материал се подлага на обработка за хидролиза, останалите, нехидролизирани протеини се подлагат на ‘«ess?' коагулация чрез температурна обработка, последвано от етап на ултрафилтрация за елиминиране на коагулиралия материал и макропептидите, от които може да съставят алергените.
В US- 5,039,532 е описан друг метод за получаване на хипоалергичен хранителен материал, където суроватъчен продукт се подлага на ензимна хидролиза.
• ··· · ···· · • · · · · · ···· ···· · · · ·· ·· ·· ··
Още, всички тези методи на обработка на хранителния материал или дори на изключването му от дневната диета евентуално доказват, че са трудни за изпълнение, доколкото те изискват ревизия на диетата, обикновено включване на строго рестриктивни измервания и може евентуално да повлияят качеството на живота и/или да инхибират очакваното нарастване на индивида.
Различен подход за лечение на хранителна алергия и хранителен интолеранс е насочен към възстановяване и поддържане чревния интегритет така, че хранителните алергени да не могат да преминат. В това отношение US 5,192,750 описва използване на Nацетил гликозамин, което да позволи на мукозата да формира необходимата бариера за трансмисия на хранителни алергени и за поддържане на нормална функция.
Съгласно още един подход за лечение на алергия, се предлага ваксиниране на индивидите срещу молекули на IgE, което инхибира отключването на мастни клетки и базофили. Към това, WO 97/31948 предлага специфични пептиди за ваксиниране, които разделят в тяхната три дименсионална конформация части от IgE молекулата, имуноглобулини, включени в освобождаването на медиаторите, включени в регулацията на алергични и възпалителни реакции. Предполага се, че собствената имунна система на индивида евентуално ще формира антитела, насочени към тези IgE молекули, така че IgE имуноглобулините да бъдат изхвърлени. Обаче, този метод поражда неблагоприятния факт, че формираните антитела • · • · · · • β • · · ·
проявяват кръстосана реактивност с други имуноглобулинови класове, така че природните защитни механизми на индивида може да бъдат неблагоприятно повлияни.
В ЕР 99200130.5, патентна заявка на заявителя на заявка за патент за настоящето изобретение, е описан още един подход. Предложен е хипоалергичен състав, който съдържа не- алергенен, екстензивно хидролизиран протеинов материал и/или свободна амино киселинна база и най- малко един толерогенен пептид от съответния алергенен протеин. Макар този състав да предоставя много преимущества спрямо нивото на техниката, все още е трудно да бъде получен толерогенен пептид, който следва да бъде продуциран за всеки процес наново.
Поради това, налице е необходимост да бъдат предложени подобрени средства за лечение на алергия.
Обект на настоящето изобретение поради това е предлагането на такива средства.
Проблема е решен чрез предлагане на нови щамове на млечно кисела бактерия, които са способни да редуцират тенденцията на индивидите да развият алергични реакции. Новата млечно кисела бактерия експресира полипептид, който поражда толерогенен пептид така, че специфичната последователност и възможна конфигурация на толерогенния пептид да бъде съхранена, стабилността запазена и • · ···· ···· ···· ··· ·· ·· ·· · · да може да бъде получена и разпозната от имунната система на индивида.
На фигурите,
ФИГ. 1 показва първичната последователност на пептиди, съдържащи се в съответните фракции на β- лактоглобулиновия хидролизат; вертикалните ивици представят дисулфидни мостове;
Фиг. 2 показва резултатите, получени с толерогенни пептиди/ пептидни фракции в различни експерименти.
Известно е, че млечно киселата бактерия, по- специално Lactobacilli and Bifidobacteria модулират имунната система без да напускат луменалната си среда чрез продуциране на месенджери (цитокини) включени в регулацията на имунната система. Млечно киселата бактерия не отключва продуцирането на про- възпалителни цитокини, като IL-8, TNF-α, МСР-1 и GM-CSF, но промотират продуцирането на инхибиращи възпалението цитокини, като TGF-β (Blum et al., (1999) Antonie van Leeuwenhoek 76, 199), c важни приложения за поддържане на интестиналния имунен хомеостазис и епителния бариерен интегритет (Planchon et al., (1999) J. Cell Physiol. 181, 55). Същественото е, че орално прилагане на лактобацилни хомогенати е показано че проявяват супресивен ефект върху митоген- индуцираната пролиферация на мононуклеарните клетки (Pessietal., (1999) Appl. Envirom. Microbiol. 65, 4726).
·« · 99 9999 999999
9 9 9 9 9 · 9 99
9 9 9 9 9 9 9 99
99 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
Млечно киселата бактерия (LAB) може да бъде използвана за хетероложна супер- продукция на протеини и пептиди със система, която да позволи експресия на външен ген, основана на хромозомна интеграция или епизомни плазмидни елементи (виж напр. Kuipers et al., (1997) Tibtech 15, 140). Освен това, млечно киселата бактерия има потенциал да колонизира мукозните повърхности и проявява съществена способност да стимулира, свързана с мурамилови пептиди, резултат от пептидогликаново разграждане.
Освен това, че определени щамове Lactobacillus промотират антиген- специфични имунни отговори, по- специално в IgA клас (Majamaa et al., (1995) J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 20, 333). Неспособността на човешкия IgA свързан към антигени да активират комплемента може да бъде от значение за поддържане интегритета на мукозните повърхности. Това ще предотврати локалните възпалителни реакции, включително приток на левкоцити и освобождаване на имунологични ефектори, които повишават пермеабилността на мукозната мембрана, дължащи се на тъканно увреждане. В допълнение, чрез този механизъм на имунно изключване, IgA би могъл да лимитира по- нататъшната абсорбция на съпътстващи антигени и по този начин да отмени анафилактични реакции, медиирани от антитела от IgA и IgG изотип.
Нещо повече, показано е че лактобацилите потенцират продуцирането на IFN-gamma чрез изолирани Т клетки (Halpern et al., (1991) Int. J. Immunother, 7, 205). Наскоро е показано, че IFN-gamma ·· · ·· ···· ·· ···· • · · · ·» · · · · • · · · · · ···· « * · · ··· ·· * · · · · · инхибира освобождаването на TNF-alpha от интестинални мукозни мастни клетки (Bissonette et al., (1995) Int. Arch. Alergy Immunol. 107, 156). Повишена секреция на IFN-gamma може да предотврати вредните ефекти на IFN-alpha (Hernandes- Pablo et al., (1994) Immunology 82, 591), и съответно да повлияе върху нарушението на пермеабилността, свързвано с хранителна алергия. Например, нарушаване на интестиналната бариера срещу включването на антиген при атопична екзема може да бъде ключова детерминанта при дезагрегирани имунни отговори за общо диетични и обкръжаващи алергени. По време на интензивните изследвания, водещи до настоящето изобретение, изобретателите съветват комбиниране на благоприятните свойства на млечно кисела бактерия с потенциала на толерогенни пептиди да генерира силно средство за редуциране или дори минимизиране на тенденцията на индивида към алергичи реакции.
Използваната в настоящето изобретение млечно кисела бактерия за предпочитане принадлежи към групата Lactobacillus или групата Bifidobacterium или групата Lactococcus, и особено се предпочита да е получен от групите L. acidophilus, L. johnsonii, L. gasseri, L. casei, L. paracasei, L. reuteri, всички c човешки или животински произход, съответно.
Толерогенният пептид, който е пептид получен от даден протеин причиняващ алергия в индивид, най- общо има размер от около 200 до 6000 Da и е пептид, способен да индуцира толеранс най- малко спрямо протеина, от който е получен. В допълнение, толеранса ще бъде индуциран спрямо всеки материал, притежаващ същата антигенна детерминанта в сравнение с тази, представена от специфичния толерогенен пептид. Съгласно настоящето изобретение, този пептид е инсертиран с рекомбинантни средства в полипептид, синтезиран в млечно киселата бактерия, който полипептид може да бъде ендогенен или екзогенен за бактерията. Толерогенният пептид е инсертиран по начин, който е представен периферно на получения рекомбинантен полипептид така, че да може да бъде разпознат от имунната система.
Полипептида може да бъде ексресиран в млечно киселата бактерия съгласно методи, добре известни в областта. Например, търговско достъпни вектори pNZ124 (Platteuw et al., (1994) Appl. Env. Microbiol. 60, 587), pGK12 (Walke et al., (1996) FEMS Microbiol. 138, 233), или pG+host9 (Maguin et al., (1996) J. Bacteriol. 178, 931) може да бъдат използвани за епизомна експресия. Освен това, имайки предвид супериорната стабилност на хромозомна интеграция, този начин би бил предпочитан за рекомбинантния ген, кодиращ съответния полипептид. За интеграция в хромозомната хромозомна хомоложна рекомбинация, може да бъде прилаган чрез напр. използване на рекомбинантен ген от Млечно кисела бактерия, съдържаща толерогенния пептид и изместване на ендогенния ген. Освен това, методите за включване на рекомбинантни гени в хромозомата на гостоприемника са добре известни на специалистите в областта.
• · · · · · *·· · · ·· · · ·· · · ···· • · · · · · · · · · • · ········ ···· ··· ·· ·· ·· · ·
Полипептида може да бъде протеин, нормално експресиран да съществува в клетката, но може да бъде полипептид, който е секретиран от млечно киселата бактерия, или който е инсертиран в нейната клетъчна стена, с част съдържаща толерогенният пептид, локализиран в екстрацелуларния сектор. Примери на полипептиди, които могат да бъдат използвани в настоящето изобретение са pepN, рерХ, лактат дехидрогеназа или β-галактозидаза, или член от класа бактериозини или S- слоен протеин или свързана с клетъчната стена протеаза.
Природата на полипептида не е от критично значение с уговорката, че толерогенния пептид може да бъде инсертиран така, че да може да бъде достижим за имунната система. Обаче, след като веднъж толерогенния пептид е идентифициран, в рамките на специалиста в областта е аранжировката на толерогенния пептид в това място. В този смисъл, специалиста в областта би предложил три дименсионални модела на полипептиди, в които да бъде инсертиран толерогенния пептид и на основата на такава информация би конструирал съответен рекомбинантен протеин.
В предпочитан вариант на изпълнение, рекомбинантните пептиди са секретирани или аранжирани в клетъчната стена на бактерията така, че толерогенният пептид да е постоянно представен в околната среда.
Толерогенният пептид е получен от хранителен материал, причиняващ алергична реакция. Освен това, не е съществено че •· ···· 12 • · · · · · · · · · • ··· ··· *« ·· ·· ·· неговата амино киселинна последователност кореспондира на на тази, установена в природния протеин, но която и да е пептидна последователност, притежаваща по същество същата амино киселинна последователност и, вероятно три дименсионална конформация като изходния пептид или получен от него полипептид, който проявява по същество същите резултати, т.е. индуцира редукция на алергичния отговор, ще бъде подходящ за дадената цел.
Като предпочитан източник за толерогенни пиптиди могат да бъдат посочени мляко, соя, фъстък, ракообразни, риба, месо, сусам или пшеница, както и напр. β-лактоглобулин, телешки серумен албумин или казеин.
С идентифициране на толерогенни пептиди, алергенния материал най- напред се подлага на ензимна хидролиза до степен от около 10 до 50% и остатъчната ензимна активност в протеинова смес се инактивира чрез т.н. гореща обработка. Разтвора на протеиновия хидролизат се очиства и по- нататък се пречиства по желание. Така получените пептиди се разделят чрез напр. подлагане на разтвора на преципитация или пропускането му през хроматографска колона.
След това, фракциите съдържащи различни пептиди се тестват за техните толерогенни свойства чрез тестването им на животински модел. За тази цел, животни като напр. мишка се хранят със съответните пептидни фракции, и след това, се имунизират с алергена и отговора им се измерва чрез изменение във външните • · ···· 13 ·· · ···»·· • · »· ·· · ·· · • · · · · ···· · • · ·*·« · « « · • · » · ·>· *· · * ·· *· прояви или чрез специфично измерване нивата на IgE в животните. Като резултат, фракциите на толерогенния пептид ще редуцират тенденцията на животните да реагирас спрямо алергена, така че съответния пептид (фракция) да бъде определен.
След като толерогенния пептид и неговата амино киселинна последователност бъде доказана, за експресия в млечно киселата бактерия, ДНК- последователността на полипептида се инсертира чрез генно инженерство в гена, кодиращ носителя на бактериалния протеин. Метод и техники за манипулиране на ДНК последователности иекспресиране на протеин в микроорганизми са описани в Sambrook et al., A Laboratory Manual Cold Spring Harbor (1992).
Настоящето изобретение се отнася също до храна и фармацевтичен състав, съдържащ най- малко една такава рекомбинантна млечно кисела бактерия.
Бактериалният щам може да бъде включен в състава в количество, граничещо от 105 до 1012 cfu (колоний формираща единица) за грам от материала. Възможно е супернатантата на култура от млечно киселата бактерия или нейна активна фракция може да бъде включена в състава.
Хранителният състав може да бъде мляко, кисело мляко, суроватка, ферментирало мляко, мляко основано на ферментационни продукти, сладолед, ферментационни зърнени продукти, основани на мляко прахове, формули за кърмачета, в случай на животни, храна за животни.
Фармацевтичният състав може да бъде под формата на таблетки, течни бактериални суспенсии или препарати съдържащи части на бактерията, като фракция на клетъчната стена, получени чрез лизис на бактериалните дялове и събиране на компонентите на клетъчната стена, сухи орални форми, течни орални форми, суха форма за хранене през тръба или течни форми за хранене през тръба.
Пътя на прилагане на фармацевтичния препарат е орален, но може да бъде и назален.
Настоящето изобретение визира също ваксини, включващи бактерията от настоящето изобретение или басти от нея. Бактерията може да бъде жива, или може да бъде атенюирана, т.е. отслабена в нейния потенциал за развитие, по желание. Като части на бактерията, за предпочитане може да бъде прилагана клетъчна стена, пораждаща антигена. Клетъчната стена може да бъде получена лесно чрез лизис на клетките и разделяне на нейните различни компоненти.
Следните примери по- нататък илюстрират изобретението без да го ограничават.
• · • · · 1 · · · ··
......... ..· ·..··.
Пример 1
Изолиране на толерогенни пептиди
а) Изолиране на пептиди
220 g β- лактоглобулин (Sygma) се разтварят в би- дестилирана вода при концентрация от 5% (w/w). Към полученият разтвор се добавя обработен с ТРСК трипсин, използвайки ензимно/субстратно (Е/S) съотношение от 1/100 (w/w) и разтвора се инкубира при 40°С, pH 7.6 при постоянно разбъркване. След 1 час се добавя същото количество от ензима за получаване на крайно Е/S съотношение от 2/100. Инкубацията продължава още 4 часа и ензима се инактивира чрез температурна обработка (85°С, 5 мин) за стопиране на реакцията. Пълния трипсинов хидролизат впоследствие се хидролизира и получените пептидни продукти се разделят с препаративна хроматография върху катийонна смола.
Получават се 15 различни пептидни фракции, граничещи от около 2 до 23 амино киселини (от около 240 до 2720 Da). Отделните фракции се подлагат на нанофилтрация, диафилтрация, диализа, отново се лиофилизират и се съхраняват сухи на стайна температура. Фракциите се охарактеризират също за пептидно съдържание с помощта на обратно фазова високо разделителна течна хроматография (HPLC). Събират се общо 15-те фракции (FlFl 5), съдържащи като основен компонент пептидите, означени с (Т).
• · · ·
| Фракции | F1 | F2 | F3 | F4 | F5 | F6 | F7 | F8 | F9 | F10 | F11 | F12 | F13 | F14 | F15 |
| Маси (д) | 52 | 13.9 | 11 | 11.8 | 2.57 | 1.94 | 4.37 | 13.1 | 5.01 | 6.53 | 1,05 | 3.46 | 1.9 | 2.67 | 28.8 |
| Обогатен Пептид | - | Т6 Т17 Т18 | Т23 | Т23 | - | Т7 T9 | Т20 Т21 Т24 | T9 Т12 Т24 | Т12 Т21 | ТЮ Т21 | Т11 | ТЮ | ТЮ Т11 | ТЮ Т11 | - |
Пептидите се изолират и секвенират. Последователностите са означени на Фиг. 1. В различни експерименти, които са описани подробно в Pecquet R, Bovetto L, Maynard F, Fritsche R., Peptides obtaned by triptic hydrolysis of bovine B- lactoglobulin indice specific oral tolerance in mice, J. Allergy Clin Immunol. (2000) 105: 514-21, e доказано е, че много пептиди са толерогенни (източника е включен в приложената литературна справка).
Ь) Синтез на толерогенни пептиди
Т17
Три толерогенни пептида от β-лактоглобулините (BLG) Т6, Т17 Т6/Т17, както са определени в литературния източник по- горе, както и контролния пептид Т13, са химично синтезирани с фланкиращи остатъци от последователноста BLG, както и един допълнителен Cys остатък, както е посочено по-долу:
Т6 CFKIDALNENKVSR
91
С N К VLVLDTDYKК Y S
100
• ·
• ·
Т6/Т17 C F K IDALNENKVLVLDTDYK К Y S
100
T13 LIVTOTMKRSC
c) тестване на животни
За изпитване на толерогенните свойства на различни пептиди, се използват мишки Balb/c, получени от IFFA-Credo (L’Abresle France). Всички животни се хранят и отглеждат със свободна на мляко диета. В началото на експериментите, животните се на възраст 3 седмици. Те получават с храната естествен βлактоглобулин (5 mg/g телесно тегло), различни количества разграден β-лактоглобулин и различни количества от различните пептиди, получени както е описано в а) по- горе. На контролните мишки се дава солена вода. След 5 дни на такава диета, всички мишки се имунизират с β-лактоглобулин и овалбумин (степен V, Sygma) като несвързан антиген за достигане спецификата на имунния отговор. Оценката на отложен тип хиперсенситивност (DTH) се провежда 21 дни след системното провокиране сравнявайки дебелината на лявата лапа, преди и след имунизацията. Дебелината на лапичката на животните се измерва 24 часа след имунизацията (изразено като Δ дебелина (mm)). След това от всички мишки се взима кръв, последвано от взимане на слезките. Изследването на специфичната спленоцитна пролиферация се провежда за всяка група. Съдържанието на интестинума се събира отделно. Серума и интестиналните проби се замразяват отделно при -80°С. Анти- β лактоглобулин IgE и нивата на анти-овалбумина се определят както в серума, така и в интестинални проби.
d) изпитване на антитялото IgE
Серума и интестиналните течности се разреждат и се изпитват в дубликатна проба за анти-р-лактоглобулин и анти- овалбуминови IgE антитела с помощта на ELISA. Събраните проби от 20 неимунизирани мишки се използват като негативни контроли. Титрите се определят чрез изчисляване разреждането на пробата, която дава двойна абсорбция от негативната контрола. Титрите се изразяват като /одЮ от реципрочното разреждане.
e) клетъчни култури
Разтвори на спленоцитни клетки се хомогенизират в PBS и се пречистват. Клетките се култивират повторно в присъствие на βлактоглобулин или фитохемаглутинин А. По време на последните 6 часа от културата се добавя белязан с тритий тимидин ([3H]-Thy (Amersham, Zurich) и паничките се събират и анализират чрез сцинтилационно броене. Индексите на стимулация се изчисляват като съотношение от разликата между нивата на празната и контролна проби, изразено като средната cpm [3H]-Thy, включен от трипликатните култури.
f) толеранс, индуциран от оралното прилагане на синтетични пептиди
15...
Синтетичните пептиди се анализират за тяхния капацитет на толерогенност в парентерален миши модел. Получени са следните резултати:
| IgE титър (log) (тест/контрола) | Сплено лимфоцити SI (тест/контрола) | MLN лимфоцити SI (тест/контрола) | |
| Т-6 | 3.24/3.29 | 0.53 | 0.29 |
| Т-17 | 2.67/3.39 | 0.31 | 0.41 |
| Т-6/Т-17 | 3.40/3.39 | 0.92 | 0.81 |
| Т-13 | 3.20/3.39 | 1.70 | 0.87 |
SI: Стимулационен индекс MLN: Мезентериален лимфен възел
Може да се види, че синтетичният пептид Т- 17 редуцира както продуцирането на IgE, така и Т клетъчната пролиферация, докато Т6 супресират само Т клетъчния отговор. В противоположност на това, пептид Т- 13, контролният пептид не индуцира орален толеранс спрямо BLG.
Пример 2
Конструиране на рекомбинантен полипептид
Пептидите Т6 и Т17 идентифицирани в Пример 1 като проявяващи толерогенни свойства, се сливат с клетъчна повърхностно прикрепена протеаза, за да бъдат показани на повърхността на бактерията. Като негативна контрола се използва пептид Т13, съдържащ част от N- края на β-лактоглобулина.
• · · . ♦«
20...
Клетъчната повърхностно прикрепена протеаза (по- горе) е тази от Lactobacillus bulgaricus, чиято последователност е публикувана в Gilbert et al., (1996) J. Bacteriol., 178, 3059-3065. Този протеин се характеризира като протеин с 2000 амино киселини, съставен от лидерен пептид от 33 амино киселини (пре- регион) отговорен за клетъчния експорт на ензима, последван от серии от 154 амино киселини (про- регион), който е отговорен, при разграждане, за активацията на протеолитичната активност на ензима и 700-800 амино киселини за активния сайт. Последващия участък (около 1000 амино киселини) се предполага, че играе роля в спецификата на разграждане и транспорта в клетката на генерираните пептиди и също да свързва клетъчната стена. Протеазата е клетъчна стена, прикрепена със своя карбоксилен край с последните 200 амино киселини, които са отговорни за специфичното ковалентно свързване към пептидогликановата структура на клетъчната стена.
Протеазният ген най- напред е амплифициран с неговия промотор с помощта на следните два праймера:
5’ - TTTTGTGGATCCTTAACTTCATAGCACG-3’ (възходящо промотора на гена, носещ мястото BamHI)
5’ - ATATTATCTAGAATTGAATAGATTGCC - 3’ (низходящо rho- независимия терминатор на гена, носещ мастото Xbal)
Амплификационния продукт се разцепва с BamHI и Xbal и се клонира в млечно киселия бактериален вектор pNZ124, който е разграден със същите рестрикционни ензими, и евентуално да бъде включен чрез електропорация в свободен на плазмид (бетагалактозидазно и протеазно негативен) Lactobacillus lactis.
Участъка от активното място на клонираната протеаза е заместен с последователността на пептид/полипептида. За да се постигне това, клонираната протеаза се разцепва с Nhel, който е локализиран 50 Ьр низходящо на последователността в мястото на разграждане на лидерния пептид и ΡνιιΙ, 800 bp по-нататък низходящо. ДНК последователност, кодираща желания пептид (до 10 амино киселини), се инсертира между двете места на рестрикция като два олигонуклеотида, които са така конструирани, че да генерират двете места на рестрикция в техните краища след като веднъж са хибридизирани. Дизайна на олигонуклеотидите има предвид факта, че при лигатиране към протеазния ген, четящата рамка на рекомбинантния протеин остава отворена.
Инсерцията на по- големи полипептиди се повлиява от ДНК амплификаци с помощта на праймери, съдържащи двете места на рестрикция. Амплификационния продукт се разгражда с рестрикционни ензими. В двата случая, ДНК фрагментите се лигатират към протеазния ген и се въвеждат чрез електропорация в Lactobacillus lactis и Lactobacillus johnsonii.
• *
Рекомбинантни плазмидни структури, съдържащи пептидите Т6 и Т17, съответно, са депозирани на 22 септември 2000 в Institute
Pasteur и са получили депозитен номер CNCM1-2563 и CNCM1-2564, съответно.
Пример 3
Трансформация на Lactobacillus lactis и Lactobacillus johnsonii.
За целите на трансформацията, щам Lactobacillus lactis (MG1363, свободен на плазмид) и Lactobacillus johnsonii, щам La1 (достъпен от Institute Pasteur под номер CNCM 1-1225) се култивират една нощ в бульон MRS при 37°С в аеробна система GasPak. Еднаква част от тази култура се използва за инокулиране на друг културален бульон (MRS), съдържащ 0.5 М захароза. След допълнителна повторна инокулация при 2% в 200 ml MRS + 0.5 Μ захароза, културата се развива до OD595 от 0.6. Клетките се събират чрез центрофугиране при 5000 rpm при 4°С за 10 min, утайката се промива еднократно с1/2 обем на разтвор, съдържащ 1М захароза и
2.5 mM СаС12, веднъж с 1/4 обем от разтвор, съдържащ 1 М захароза,
2.5 mM СаС12) и утайката, получена след центрофугиране се ресуспендира в 3.5 ml разтвор на 1М захароза, 2.5 mM СаС12 + 0.459 ml 87% глицерол (10% крайна концентрация). Клетките се използват или директно за трансформация, или замразени при -80°С.
....
• « · · · · ···· ···· ··· ·· ·· ·· ··
За електропорация, 40 μΙ клетки се смесват с 10-100 ng ДНК (в обем <5 μΙ) и се прехвърлят в ледено- студена 0.2 см електропорационна кювета. Прилагат се импулси с 200 Ω, 25 pF, 25 kV в ледено студена 0.2 см електропорационна кювета. Към кюветата, съдържаща 1 ml MRS + 20 mM MgCL2, 2 mM CaCI2 , ce добавят 2 mM CaCI2 и суспенсията се инкубира за 2-3 часа при подходяща температура (при 30°С за Lactococcus lactis и 37°C за Lactobacillus jonsonii. Когато се използват плазмиди (pG+ гостоприемник9), инкубацията е при 30°С). 10 μΙ и 100 μΙ равни части, съответно, се поставят върху агарни пластинки, съдържащи подходящия антибиотик при трансформация на плазмидната ДНК и 100 μΙ и 500 μΙ, съответно, при трансформация със смес за лигатиране. Пластинките се инкубират за 24- 48 часа при същата температура както по- горе.
Като селекционна среда се използват MRS с еритромицин (2.5 μρ/ηιΙ) или MRS с канамицин (5 pg/ml).
Пример 4
Генериране на плъши антисерум и моноклонални антитела спрямо толерогенни BLG пептиди
BLG пептидите Т6, Т17, Т6/Т17 и Т13 (подчертани в пример 1) се куплират към активиран с малеимид KLH и се използват заедно с аджувант Titermax за имунизиране на плъхове, хранени със свободна на протеин диета. Кръвни проби, взети в интервали от 2 седмици до
115-тия ден след първата имунизация съдържат антитела, специфични спрямо BLG пептиди, доказано чрез ELISA.
Анти-Тб и анти-Т 13 антисерум взаимодействат както с нативна (ELISA) или денатурирана (SDS- PAGE+ Western blot) форма на BLG. Показано е, че анти-Тб и анти-Т17 специфично разпознават BLG пептиди, експресирани на повърхността на рекомбинантния L. /actis. Резултатите са показани на Таблица I.
Таблица I
Реактивност на антисерум на анти β- лактоглобулинови пептиди
| Антисерум, специфичен за | T6 | T17 | T6/T17 | T13 | ||||||||
| Плъх номер | A1 | A2 | A3 | B4 | B5 | B6 | C7 | C8 | C9 | D10 | D11 | D12 |
| Т6 (ELISA) | +++ | +/- | + | - | NT | NT | - | NT | NT | - | NT | NT |
| Т17 (ELISA) | - | NT | NT | + | - | - | +++ | NT | NT | - | NT | NT |
| Т6/Т17 (ELISA) | +++ | NT | NT | + | NT | NT | +++ | + | - | - | NT | NT |
| Т13 (ELISA) | - | NT | NT | - | NT | NT | - | NT | NT | + | + | +/- |
| Nat. BLG (ELISA) | +++ | +/- | +++ | +/- | - | - | - | - | - | + | + | +/- |
| Den. BLG (SDS- PAGE+ WB) | +++ | NT | ++ | NT | NT | NT | NT | +/- | +++ | ++ | ||
| LI/T6 (ELISA) | +/- | - | +++ | - | NT | NT | - | - | - | - | NT | NT |
| LI/T17 (ELISA) | - | NT | NT | + | - | - | - | - | - | - | NT | NT |
| LI/T13 (ELISA) | - | NT | NT | - | NT | NT | - | NT | NT | - | - | - |
·· · ······ ···· • · ···· ···· ·«·· ··· ·· ·· ·· ··
ELISA/OD490 nm (15737°) +++ >0.3 ++ 0.2- 0.3 + 0.1-0.2 +/-0.05-0.1
- <0.1
NT не е тестван ч»»··
Натурален BLG
Денат. BLG
Ll/T x кристализиран BLG (Sigma) разтворен в PBS x кристализиран BLG (Sigma) разреден и кипнат в SDS буфер
Рекомбинантен L. /actis, носещ протеиназа на L. bulgaricus с инсертиран BLG пептид
За продуциране на хибридоми, секретиращи спленоцитни антиBLG, пептидни моноклонални антитела са възстановени от имунизираните плъхове. Спленоцитните клетки са сляти с миеломни клетки съгласно стандартни техники и първия кръг още позволява идентифицирането на клетъчни популации, продуциращи както антиТ6, така и анти-Т17 антитела. Клонирането на тези клетки се постига с помощта на клетъчно сортиране за гарантиране наличието на 1 единична клетка за една ямка.
Пример 5
Откриване на толерогенни пептиди с антитела
С оглед определяне дали млечно киселата бактерия експресира толерогенните пептиди по начин, че да бъдат достъпни и разпознати от антителата, бактерия съдържаща рекомбинантния ген • · ···· · · · · ···· ··· ·· ·· ·· ·· се култивират в 50 ml култура и клетките се събират чрез центрофугиране. Клетките след това се промиват два пъти с 50 ml TBS и евентуално се суспендират в 6 ml TBS. 75 μΙ от суспенсията се прехвърлят в кладенче (ELISA панички с кладенчета наполовина наводнени) и паничките се оставят за 24 часа при 37°С така че кладенчетата да изсъхнат. Паничките се промиват три пъти с TBS/PBS до отмиване на несвързаните бактерии и кладенчетата след това се подлагат на блокиране с TBS- казеин (1.5 g/l) за 2 часа при 37°С. Към кладенчетата се добавя плъши антисерум, съдържащ антитела, насочени към специфични пептиди. Кладенчетата се инкубират една нощ при стайна температура, при разреждане в TBSказеин, съдържащ 0.2% Tween 20. След това, кладенчетата се промиват три пъти с TBS и развитите антитела (HRP-конюгиран кози анти- плъши IgG) се добавят към кладенчетата, последвано от инкубация при 37°С, разредени в TBS- казеинов разтвор, съдържащ 0.2% Tween 20. Клетките се промиват три пъти с TBS и развиват с OPD/H2O2 и се разчитат при 490 nm.
Може да бъде наблюдавано, че и двата щама Lactococcus lactis and Lactobacillus jonsonii показват позитивна реакция, което означава, че толерогенния пептид е разпознат от антителата.
Пример 6
Изготвяне на плъши антисерум, насочен спрямо амино киселинни остатъци 472- 659 на L. bulgaricus prtB протеиназа · · · · • · · · · · · · • ·· · · · · · • · · ·· ·· · ·
PrtB мишенната последователност (вр 1414- 1877), кодираща амино киселинни остатъци 472- 659 (амино киселина номер 1 е изходния метионин) се амплифицира с PCR с помощта на pMD114 като матрица и възходящия праймер (prtB5’-1414) на последователността
5’- GCGGATCCGGCTTGGGCGGTGCAGATG- 3’ (съдържащ 5’BamHI мястото), и низходящия праймер (prtB5’-1977) на последователността
5’- CGCAAGCTTGTGCGAAGTGTTCATGGC- 3’ (съдържащ 5’Hindlll мястото).
Специфичният PCR продукт е получен с помощта на Taq ДНК полимераза (Perkin- Elmer) с помощта на денатурационен етап при 95°С за 30 секунди, етап на деспирализация на праймера при 56°С за 30 сек., последван от 27 цикъла с етап на деспирализация, проведен при 60°С.
След обезсоляване и отстраняване на праймерите и dNTPs (High Pure PCR Product Purification Kit, Roche), пробата се разгражда c BamHI и Hindlll, след което се подлага на агарозна гел електрофореза и ДНК ивиците се възстановяват от гела (E.Z.N.A. Gel Extraction Kit, Ред lab).
• · · · • ο ···· · · · · •··♦ ··· · · ·· · · ··
Пречистеният амплификационен продукт се лигатира в местата между BamHI nHindlll на експресионния вектор Е. coli (Qiagen), низходящо на последователността, кодираща 6- хистидинова опашка.
Щамът Е. coli М15 [pREP4] се трансформира с този вектор и се осъществява експресия на хетероложния протеин при 1 mM IPTGмедиирана индукция на културата.
Клетките на 1- литрова култура се утаяват и лизират при денатурационни условия (8М уреа). Осветленият лизат се получава чрез центрофугиране и се натоварва върху Ni2+ - NTA агарозни легла (Qiagen), еквилибрира се при pH 8.0, позволявайки свързването на 6хистидиновия протеин. След етап на промиване при pH 6.3, рекомбинантния протеин се елуира при pH 4.5.
Материала се неутрализира със 100 mM Tris- Cl (pH 7.5), определя се количествено с протеинова проба с.... (Pierce) и неговата концентрация се довежда да 1 mg/ml с помощта на същия буфер.
Антигена се емулгира в пълен аджуванд на Фройнд и се прилага чрез многократно вътрекожно инжектиране на два плъха. Инжекциите се осъществяват в дните 0, 14, 28 и 56. Финалното кръвопускане се провежда в ден 80.
• ·
Реактивността на антисерума, която е изненадващо силна, е потвърдена както с ELISA, върху рекомбинантен Lc, експресиращ L.
bulgaricus prtB протеиназа в тяхната клетъчна повърхност, и чрез имунооцветяване на културална супернатанта на Lc, експресиращ секретирана форма на протеиназата.
Claims (13)
1. Бактериален щам от групата на млечно киселите бактерии, характеризиращ се с това, че експресира клетъчно повърхностна протеаза от Lactobacillus bulgaricus, която протеаза съдържа толерогенен пептид, хетероложен на клетъчно повърхностната протеаза от Lactobacillus bulgaricus, така че пептида да е стабилизиран срещу разграждане от стомашно/ дуоденалните ензими, съхранява техните толерогенни свойства и се проявява в периферията на клетъчно повърхностната протеаза от Lactobacillus bulgaricus.
1. Бактериален щам от групата на млечно киселите бактерии, характеризиращ се с това, че включва експресионен полипептид, който съдържа толерогенен пептид, хетероложен на полипептида, така че пептида да е стабилизиран срещу разграждане от стомашно/ дуоденалните ензими, съхранява техните толерогенни свойства и се проявява в периферията на полипептида.
2. Бактериален щам съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че е избран от Lactobacillus или Bifidobacterium.
2. Бактериален щам съгласно претенция 1, избран от Lactobacillus или Bifidobacterium.
3. Бактериален ща^съгласно която и да е от предходните претенции, характеризиращ се с това, че толерогенният пептид е получен от хранителен материал.
Чий-
3. Бактериален щам съгласно претенция 1 или претенция 2, където полипептида е избран от повърхностен протеин, интрацелуларен протеин или протеин, секретиран от бактерията.
4. Хранителен състав, характеризиращ се с това, че съдържа бактериален щам съгласно която и да е от предходните претенции или негова супернатанта.
• · · · ·· · 4 ···· • · ♦ · ·« • · · · · 9· • · · · · * ·· • · ·· · · · ·
13. Ваксина, съдържаща бактериален щам съгласно която и да е от претенции 1 до 4 или тяхна част.
14. Ваксина съгласно претенция 14, при която се използва фракция на клетъчната мембрана на лизирана бактерия.
Пептид TI h2n-A-L-K-cooh Пептид Т2 h2n-H-I-R-cooh Пептид Т2 h2n-F-D-Kсоон (139-141) (146-148) (136-138)
Пептид Т4 h2n-I-I-A-E-K-cooh (71-75)
Пептид Т5 h2n-E-N-G-E-C-A-Q-K-cooh (62-69)
Пептид Т6 h2n-I-D-A-L-N-E-N-K-cooh Пептид T7 h2n-G-L-D-I-Q-K-cooh (84-91) (9-14)
Пептид Т8 h2n-A-L-P-M-cooh Пептид Т9,Т10,Т11 h2n-W-E-N-G-E-C-A,-Q,-Kсоон (142-145) (61-67, -68, -69)
Пептид T12 h2n-T-P-E-V-D-D-E-A-L-E-K-cooh Пептид T13 h2n-L-I-V-T-Q-T-M-Kсоон (125-135) (1-8)
Пептид T15 h2n-I-P-A-V-F-K-cooh (9-14)
Пептид T14 h2n-A-L-P-M-H-I-R-cooh (142-148)= T8(142-145)+T2(146-148)
Пептид T16 h2n-V-A-G-T-W-Y-cooh Пептид T17 h2n-V-L-V-D-T-D-Y-K,-K-cooh (15-20) (92-99,100)
Пептид T18 h2n-T-P-E-V-D-D-E-A-L-E-K-F-D-K-cooh (125-138)= T12 (125-135)+ T3(136-138)
War·
Пептид T19 h2n-A-A-S-D-I-S-L-L-D-A-Q-S-A-P-L-R-cooh (25-40)
Пептид T20,T21 (61,62-69): S- S(149-162) h2n-W,-E-N-G-E-C-A-Q-K-cooh h2n-L-S-F-N-P-T-Q-L-E-E-Q-C-H-I-cooh
Пептид T22 (21-40)
Пептид T23 (41-60)
HjN-S-L-A-M-A-A-S-D-I-S-L-L-D-A-Q-S-A-P-L-R-cooh h2n-V-Y-V-E-E-L-K-P-T-P-E-G-D-L-E-I-L-L-Q-K-cooh
Пептид T24 (149-162) h2n-L-S-F-N-P-T-Q-L-E-E-Q-C-H-I-cooh
Променени претенции
4. Бактериален щам съгласно която и да е от предходните претенции, където толерогенният пептид е получен от хранителен материал.
5. Хранителен състав съгласно претенция 5, характеризиращ се с това, че е избран от групата, състояща се от мляко, кисело мляко, извара, сирене, ферментирало мляко, мляко • · · · • · · · основано на ферментирали продукти, сладолед, ферментирали продукти на основата на зърнени, основани на мляко прахове, формули за кърмачета или храна за животни.
5. Хранителен състав, съдържащ бактериален щам съгласно която и да е от предходните претенции или негова супернатанта.
• · · « · · • I» · · · · « · · · •··· · · · ·· ·· ·· ··
6. Хранителен материал съгласно претенция 4 или 5, характеризиращ се с това, че бактериалният щам е включен в количество от 107 до 1011 cfu/ доза.
6. Хранителен състав съгласно претенция 5, избран от групата, състояща се от мляко, кисело мляко, извара, сирене, ферментирало мляко, мляко основано на ферментирали продукти, сладолед, ферментирали продукти на основата на зърнени, основани на мляко прахове, формули за кърмачета или храна за животни.
7. Фармацевтичен състав, характеризиращ се с това, че включва бактериалният щам съгласно която и да е от претенции 1 до34 или негова супернатанта.
7. Хранителен материал съгласно претенция 5 или 6, характеризиращ се с това, че бактериалния щам е включен в количество от 107 до 1011 cfu/доза.
8. Фармацевтичен състав съгласно претенция 7, характеризиращ се с това, че е бактериалният щам е включен в количество от Ю10 до 1012 cfu/ доза.
8. Фармацевтичен състав, характеризиращ се с това, че включва бактериалният щам съгласно която и да е от претенции 1 до 4 или негова супернатанта.
9. Приложение на бактериален щам съгласно която и да е от претенции от 1 до 3 или негова супернатанта за получаване на неусвояем носител за лечение на алергия.
9. Фармацевтичен състав съгласно претенция 8, характеризиращ се с това, че е включен в количество от 1О10 до 1012 cfu/ доза.
10. Приложение на храна или фармацевтичен състав съгласно която и да е от претенции 1 до 8 за получаване на неусвояем носител за лечение на алергия.
10. Приложение на бактериален щам съгласно която и да е от претенции от 1 до 4 или негова супернатанта за получаване на неусвояем носител за лечение на алергия.
11. Приложение съгласно претенция 10, където състава се прилага по орален или назален път.
11. Приложение на храна или фармацевтичен състав съгласно която и да е от претенции 1 до 9 за получаване на неусвояем носител за лечение на алергия.
12. Ваксина, съдържаща бактериален щам съгласно която и да е от претенции 1 до 3 или тяхна част.
12. Приложение съгласно претенция 11, където състава се прилага по орален или назале път.
13. Ваксина съгласно претенция 12, характеризираща се с това, че се използва клетъчно мембранна фракция на лизирана бактерия.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP00120867 | 2000-09-25 | ||
| PCT/EP2001/010956 WO2002024883A2 (en) | 2000-09-25 | 2001-09-21 | Lactic acid bacteria capable of reducing an individual's tendency to develop allergic reactions |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG107657A true BG107657A (bg) | 2003-12-31 |
Family
ID=8169939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG107657A BG107657A (bg) | 2000-09-25 | 2003-03-21 | Млечно кисела бактерия, способна да редуцира склонността на индивида да развие алергични реакции |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7498162B2 (bg) |
| EP (1) | EP1379635A2 (bg) |
| JP (1) | JP2004514424A (bg) |
| KR (1) | KR20030034178A (bg) |
| CN (1) | CN1246456C (bg) |
| AR (1) | AR033574A1 (bg) |
| AU (2) | AU2002220561B2 (bg) |
| BG (1) | BG107657A (bg) |
| BR (1) | BR0114105A (bg) |
| CA (1) | CA2420160A1 (bg) |
| CZ (1) | CZ2003749A3 (bg) |
| HU (1) | HUP0302585A3 (bg) |
| IL (1) | IL154284A0 (bg) |
| MX (1) | MXPA03001673A (bg) |
| NO (1) | NO20031159L (bg) |
| NZ (1) | NZ524527A (bg) |
| PL (1) | PL365246A1 (bg) |
| RU (1) | RU2294366C2 (bg) |
| SK (1) | SK3642003A3 (bg) |
| WO (1) | WO2002024883A2 (bg) |
| ZA (1) | ZA200301244B (bg) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1239032A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-09-11 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactic acid bacteria as agents for treating and preventing allergy |
| EP1319410A1 (en) * | 2001-12-11 | 2003-06-18 | Société des Produits Nestlé S.A. | Use of micro-organisms for a directed delivery of substances to specific parts of the gut |
| WO2004112773A1 (fr) * | 2003-04-24 | 2004-12-29 | Shin-Jen Shiao | Compositions pharmaceutiques utilisees pour le traitement de maladie immune et amelioration |
| US20050158294A1 (en) | 2003-12-19 | 2005-07-21 | The Procter & Gamble Company | Canine probiotic Bifidobacteria pseudolongum |
| US8877178B2 (en) | 2003-12-19 | 2014-11-04 | The Iams Company | Methods of use of probiotic bifidobacteria for companion animals |
| AU2005316041B2 (en) * | 2004-12-14 | 2010-06-24 | Alk Abello A/S | Pharmaceutical composition comprising a bacterial cell displaying a heterologous proteinaceous compound |
| WO2006097949A1 (en) * | 2005-03-16 | 2006-09-21 | Actial Farmacêutica, Lda. | Mixture of at least 6 species of lactic acid bacteria and/or bifidobacteria in the manufacture of sourdough |
| BRPI0611492B1 (pt) | 2005-05-31 | 2021-10-13 | Mars, Incorporated | Bifidobactéria probiótica felina |
| WO2006130187A1 (en) | 2005-05-31 | 2006-12-07 | The Iams Company | Feline probiotic lactobacilli |
| WO2007113279A1 (en) * | 2006-03-31 | 2007-10-11 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for the hydrolysis of milk proteins |
| CN101711158A (zh) | 2007-02-01 | 2010-05-19 | 爱默思公司 | 使用葡萄糖抗代谢物、鳄梨或鳄梨提取物减轻哺乳动物炎症和应激反应的方法 |
| US9771199B2 (en) * | 2008-07-07 | 2017-09-26 | Mars, Incorporated | Probiotic supplement, process for making, and packaging |
| US9232813B2 (en) * | 2008-07-07 | 2016-01-12 | The Iams Company | Probiotic supplement, process for making, and packaging |
| JP5992686B2 (ja) * | 2009-01-27 | 2016-09-14 | アルラ フーズ アンバ | 長い貯蔵寿命の乳及び乳−関連製品類、及びそれらの製造方法及び乳加工プラント |
| RU2556124C2 (ru) * | 2009-05-11 | 2015-07-10 | Нестек С.А. | Lactobacillus johnsonii La1 NСС533 (CNCM 1-1225) И ИММУННЫЕ НАРУШЕНИЯ |
| US10104903B2 (en) | 2009-07-31 | 2018-10-23 | Mars, Incorporated | Animal food and its appearance |
| EP3097791B1 (en) * | 2010-06-04 | 2018-05-16 | N.V. Nutricia | Non-digestible oligosaccharides for oral induction of tolerance against dietary proteins |
| CN106918709B (zh) * | 2011-09-02 | 2020-03-10 | Dh科技发展私人贸易有限公司 | 检测过敏原的系统和方法 |
| WO2013083140A1 (en) | 2011-12-07 | 2013-06-13 | N.V. Nutricia | Beta-lactoglobulin peptides for treating cow's milk protein allergy |
| WO2016148562A1 (en) * | 2015-03-18 | 2016-09-22 | N.V. Nutricia | Method for inducing oral tolerance via administration of beta-lactoglobulin derived peptide in combination with probiotic |
| CN105362296A (zh) * | 2015-11-27 | 2016-03-02 | 成都吉氧屋科技有限公司 | 乳酸菌洗鼻液 |
| WO2019212330A1 (en) * | 2018-04-30 | 2019-11-07 | N.V. Nutricia | Formula with a specific beta-lactoglobulin peptide |
| WO2019212329A1 (en) * | 2018-04-30 | 2019-11-07 | N.V. Nutricia | Formula with specific beta-lactoglobulin peptides |
| CA3140615A1 (en) * | 2019-05-16 | 2020-11-19 | Trillitye PAULLIN | Method, system and apparatus for substance identification |
| CN114149486B (zh) * | 2021-05-28 | 2023-05-12 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种抗菌肽mamp-01及其应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE9302855D0 (sv) * | 1993-09-06 | 1993-09-06 | Martin Lindberg | Method and means for producing plasmaproteinase inhibitor binding proteins |
| US5817308A (en) * | 1994-02-14 | 1998-10-06 | University Of Rochester | Tolerogenic fusion proteins of immunoglobulins and methods for inducing and maintaining tolerance |
| WO1996032486A1 (en) | 1995-04-11 | 1996-10-17 | Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno | Method for the construction of vectors for lactic acid bacteria like lactobacillus such that the bacteria can efficiently express, secrete and display proteins at the surface |
| FI104465B (fi) | 1995-06-14 | 2000-02-15 | Valio Oy | Proteiinihydrolysaatteja allergioiden hoitamiseksi tai estämiseksi, niiden valmistus ja käyttö |
| GB9518323D0 (en) | 1995-09-07 | 1995-11-08 | Steidler Lothar | Materials and methods relating to the attachment and display of substances on cell surfaces |
| US6100388A (en) * | 1998-03-16 | 2000-08-08 | Biogaia Biologies Ab | Lactobacilli harboring aggregation gene as a vaccine delivery vehicle |
| MY129566A (en) | 1999-01-19 | 2007-04-30 | Nestle Sa | A hypoallergenic composition containing tolerogenic peptides inducing oral tolerance |
-
2001
- 2001-09-21 MX MXPA03001673A patent/MXPA03001673A/es not_active Application Discontinuation
- 2001-09-21 HU HU0302585A patent/HUP0302585A3/hu unknown
- 2001-09-21 AU AU2002220561A patent/AU2002220561B2/en not_active Ceased
- 2001-09-21 RU RU2003112013/13A patent/RU2294366C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-09-21 WO PCT/EP2001/010956 patent/WO2002024883A2/en not_active Application Discontinuation
- 2001-09-21 CA CA002420160A patent/CA2420160A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-21 NZ NZ524527A patent/NZ524527A/en unknown
- 2001-09-21 KR KR10-2003-7003576A patent/KR20030034178A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-09-21 PL PL01365246A patent/PL365246A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2001-09-21 CZ CZ2003749A patent/CZ2003749A3/cs unknown
- 2001-09-21 EP EP01985270A patent/EP1379635A2/en not_active Withdrawn
- 2001-09-21 BR BR0114105-8A patent/BR0114105A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-09-21 AU AU2056102A patent/AU2056102A/xx active Pending
- 2001-09-21 US US10/362,249 patent/US7498162B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-21 IL IL15428401A patent/IL154284A0/xx unknown
- 2001-09-21 CN CNB018162436A patent/CN1246456C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-21 SK SK364-2003A patent/SK3642003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-09-21 JP JP2002529478A patent/JP2004514424A/ja not_active Withdrawn
- 2001-09-24 AR ARP010104483A patent/AR033574A1/es not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-02-14 ZA ZA200301244A patent/ZA200301244B/en unknown
- 2003-03-13 NO NO20031159A patent/NO20031159L/no unknown
- 2003-03-21 BG BG107657A patent/BG107657A/bg unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2002024883A3 (en) | 2003-11-06 |
| AU2002220561C1 (en) | 2002-04-02 |
| SK3642003A3 (en) | 2003-08-05 |
| WO2002024883A2 (en) | 2002-03-28 |
| EP1379635A2 (en) | 2004-01-14 |
| KR20030034178A (ko) | 2003-05-01 |
| PL365246A1 (en) | 2004-12-27 |
| AU2056102A (en) | 2002-04-02 |
| CN1246456C (zh) | 2006-03-22 |
| NZ524527A (en) | 2005-05-27 |
| ZA200301244B (en) | 2004-05-14 |
| BR0114105A (pt) | 2003-07-29 |
| NO20031159L (no) | 2003-05-20 |
| HUP0302585A2 (hu) | 2003-10-28 |
| CZ2003749A3 (cs) | 2003-06-18 |
| IL154284A0 (en) | 2003-09-17 |
| US20040071714A1 (en) | 2004-04-15 |
| AU2002220561B2 (en) | 2007-01-11 |
| RU2294366C2 (ru) | 2007-02-27 |
| CN1479788A (zh) | 2004-03-03 |
| MXPA03001673A (es) | 2003-06-09 |
| US7498162B2 (en) | 2009-03-03 |
| NO20031159D0 (no) | 2003-03-13 |
| JP2004514424A (ja) | 2004-05-20 |
| AR033574A1 (es) | 2003-12-26 |
| CA2420160A1 (en) | 2002-03-28 |
| HUP0302585A3 (en) | 2007-05-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7498162B2 (en) | Lactic acid bacteria capable of reducing an individual's tendency to develop allergic reactions | |
| AU2002220561A1 (en) | Lactic acid bacteria capable of reducing an individual's tendency to develop allergic reactions | |
| Prioult et al. | Stimulation of interleukin-10 production by acidic β-lactoglobulin-derived peptides hydrolyzed with Lactobacillus paracasei NCC2461 peptidases | |
| DK2162143T3 (en) | MAMMALS MILK-MICRO-FORMATIONS incorp-border THEM AND THEIR USE FOR THE TREATMENT OF MASTITIS | |
| CA3154941C (en) | Bifidobacterium breve 207-1 and use thereof | |
| EP1239032A1 (en) | Lactic acid bacteria as agents for treating and preventing allergy | |
| JP2008532513A (ja) | 金属イオンラクトフェリンの高圧処理 | |
| SA08290392B1 (ar) | سلالة جديدة من البكتيريا الشقية وببتيدات فعالة ضد الإصابة بالفيروس العجلي | |
| EA031179B1 (ru) | Молочнокислые бактерии, применяемые при чревной болезни | |
| JP2008099632A (ja) | 免疫賦活作用・抗アレルギー作用を有する乳酸菌 | |
| JP3163171B2 (ja) | ＩｇＡ産生促進剤 | |
| Elfahri | Release of bioactive peptides from milk proteins by Lactobacillus species | |
| De Ambrosini et al. | Immunostimulating activity of cell walls from lactic acid bacteria and related species | |
| JP6376417B2 (ja) | 腸管における物質取り込み促進剤 | |
| US8445426B2 (en) | Peptides and methods for producing them | |
| JP2006014654A (ja) | 抗体含有食品 | |
| Stojanovski et al. | Investigation of the Proteolytic Potential of Isolates of the Genus Lactobacillus Obtained from Homemade Bulgarian Cow, Sheep, Buffalo yoghurt and lactic acid products, for the Hydrolysis of Whey Proteins using Tris-Tricine-SDS Polyacrylic Amide Gel Electrophoresis | |
| Sánchez et al. | Bifidobacteria and their Interaction with the Gastrointestinal Environment | |
| Bernardo | Novel Methods for Proteolytic Removal of Allergenic Proteins in Milk and Whey | |
| Buck | Functional analysis of adhesion factors and signaling mechanisms in Lactobacillus acidophilus NCFM | |
| Peptidases | Stimulation of Interleukin-10 Production by | |
| Ng | Enhancement of macrophage cytokine production by cell-free fractions of fermented milk | |
| Ng | KWOK-YU NG | |
| Stuknyte | BIOACTIVES IN MILK-DERIVED PRODUCTS: BACTERIAL PRODUCTION OF IMMUNOMODULATORY CASEIN HYDROLYSATES AND TOOLS FOR IDENTIFICATION OF IMMUNOGENIC BACTERIAL PROTEIN |