CZ2003749A3 - Kmen bakterií mléčného kvašení, potravinářský výrobek, farmaceutický prostředek a vakcína - Google Patents
Kmen bakterií mléčného kvašení, potravinářský výrobek, farmaceutický prostředek a vakcína Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2003749A3 CZ2003749A3 CZ2003749A CZ2003749A CZ2003749A3 CZ 2003749 A3 CZ2003749 A3 CZ 2003749A3 CZ 2003749 A CZ2003749 A CZ 2003749A CZ 2003749 A CZ2003749 A CZ 2003749A CZ 2003749 A3 CZ2003749 A3 CZ 2003749A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- peptide
- cooh
- bacterial strain
- lactic acid
- tolerogenic
- Prior art date
Links
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 46
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 23
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims description 15
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 119
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 36
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 31
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 10
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 10
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 7
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 claims description 6
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 claims description 6
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000020192 tolerance induction in gut-associated lymphoid tissue Effects 0.000 claims description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000186672 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Species 0.000 claims 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims 2
- OPEPUCYIGFEGSW-WDSKDSINSA-N Asn-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OPEPUCYIGFEGSW-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 108010032976 Enfuvirtide Proteins 0.000 claims 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims 1
- 108010044538 lactostatin Proteins 0.000 claims 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 57
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 18
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 20
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 12
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 9
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 7
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 7
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 7
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 7
- 102100034614 Ankyrin repeat domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 5
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 4
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 3
- 101100407629 Aspergillus niger pepA gene Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 101100434212 Listeria monocytogenes serovar 1/2a (strain ATCC BAA-679 / EGD-e) actA gene Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000000774 hypoallergenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 3
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 3
- 101150038570 prtB gene Proteins 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 206010061958 Food Intolerance Diseases 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 2
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 208000012657 Atopic disease Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 101710168515 Cell surface glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001596967 Escherichia coli M15 Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 1
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 1
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100323420 Mycobacterium leprae (strain TN) apeB gene Proteins 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 101710099182 S-layer protein Proteins 0.000 description 1
- 239000012722 SDS sample buffer Substances 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000006903 Wheat Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004082 barrier epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004890 epithelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000005027 intestinal barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000000350 mc(t) Anatomy 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 101150064613 pepN gene Proteins 0.000 description 1
- 101150095025 pepX gene Proteins 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000036647 reaction Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1236—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using Leuconostoc, Pediococcus or Streptococcus sp. other than Streptococcus Thermophilus; Artificial sour buttermilk in general
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/065—Microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C2220/00—Biochemical treatment
- A23C2220/20—Treatment with microorganisms
- A23C2220/202—Genetic engineering of microorganisms used in dairy technology
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/151—Johnsonii
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/21—Streptococcus, lactococcus
- A23V2400/231—Lactis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/51—Bifidobacterium
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Dairy Products (AREA)
Description
Předkládaný vynález se týká nových kmenů bakterií mléčného kvašení, které jsou schopné snižovat sklon jedinců k vyvinutí alergických reakcí. Předkládaný vynález se týká zvláště nových kmenů bakterií mléčného kvašení, které exprimují polypeptidy včetně tolerogenních peptidů a jejich použití při snížení sklonu jedince vytvářet alergické reakce. Vynález se také týká potravinářských výrobků nebo farmaceutických prostředků s obsahem uvedených mikroorganismů nebo jejich aktivních frakcí.
Dosavadní stav techniky
Alergie jsou nepřiměřené reakce imunitního systému na řadu různých látek (alergeny). Obecně se u jedinců nevytváří významná imunitní reakce proti látkám, které se pravidelně vyskytují v životním prostředí, jako je pyl nebo potraviny, přičemž tato nereaktivita se považuje zejména za důsledek supresivního (potlačovacího) mechanismu samotného imunitního systému. Nesprávný stav imunitního systému však neplní tuto supresivní aktivitu (označovanou jako tolerance), což vede ke specifické imunitní reakci proti alergenu alergické reakci. K alergickým reakcím patří uvolňování biologicky aktivních sloučenin, jako jsou zánětlivé mediátory histamin, leukotrieny a'enzymy, z určitých typů buněk, hlavně žírných buněk a bazofilních granulocytů, do okolní tkáně a cévních struktur. Žírné buňky jsou rozptýleny ve všech tkáních organismu, zatímco bazofily cirkulují v cévním systému. Po řadě za sebou následujících dějů s účastí • · · · • · · · protilátek IgE se z cílových žírných buněk uvolňují sloučeniny/mediátory, což nakonec vede k farmakologickým reakcím,
V minulosti se počet jedinců trpících alergií zvyšoval, což se často připisuje stále stoupajícímu znečištění atmosféry způsobenému například výfukovými plyny. K tomuto vývoji patrně také přispívá zvýšená spotřeba látek proteinové povahy projevující se zvláště ve stoupajícím výskytu alergií na potraviny. Navíc se předpokládá, že další možnou příčinou atopických onemocnění je omezení mikrobiálních infekcí, ke kterému v rozvinutých zemích dochází.
Alergie na potraviny a dokonce nesnášenlivost některých potravin se nyní stala docela běžným jevem. U většiny postižených jedinců se projevuje netolerance na některé složky potravin, přičemž u pěti procent populace se dokonce vyvíjejí natolik vážné reakce na požité látky, že vyžadují lékařskou péči.
V posledních letech byly získány důkazy, že hlavní příčinou netolerance k potravinám je absorpce normálně vylučovaných látek tělem, přičemž tyto látky jsou u vnímavých jedinců absorbovány v gastrointestinálním traktu. Tato nesprávná absorpce je patrně způsobena defekty ve tkáni, kterou je vyložen trávicí trakt (Peters a další (1988) Can. J. of Gastroenterol. 2, 127; Olaison a další, (1990) Scand. J. of Gastroenterol. 25, 321; Hollander a další, (1986) Ann. of Int. Med. 105, 883). Nedávno byla identifikována schopnost epiteliálních buněk, kterými je vyložen Gl trakt, zpracovávat a předkládat antigeny, což by mohlo také odpovídat za spouštění nepřiměřených imunitních reakcí vedoucích k zánětu a alergickému projevu (Campbell a další (1999) Immunol. Rev. 172, 315).
Projevy alergie na potraviny se mohou týkat v podstatě kterékoli tělesné tkáně. Z důvodů velké absorpční plochy je gastrointestinální trakt pravděpodobně hlavním místem, kde dochází k absorpci látek vyvolávajících obtíže. Mnoho příznaků alergií na potraviny se projevuje • · · · • · · · v samotném trávicím traktu, ale mohou také postihovat jiné tkáně včetně kůže a dýchacích cest.
V oboru se pro léčení alergií, zvláště alergií na potraviny, navrhuje mnoho různých způsobů.
Jeden takový přístup se pokouší modifikovat samotný zdroj alergenního materiálu tak, že dojde ke snížení jeho alergického potenciálu. To může být dosaženo snížením množství nebo zákazem potraviny nebo jejích složek, které by byly příčinou uvedených potíží. Častým problémem je však skutečnost, že specifická antigenní látka (alergen) v určitém potravinářském materiálu není často známá, takže ve většině případů není jasné, která složka by měla být selektivně odstraňována.
V US 5,480,660 se uvádí, že nástup alergické reakce u pacientů s alergiemi na pšenici může být zmírněn odstraněním nebo snížením množství proteinů s molekulovou hmotností nepřevyšující 30 000 Da a proteinů s molekulovou hmotností mezi 50 000 a 70 000 Da z mouky.
V JP 11 04 67 21 se popisuje způsob snížení alergenicity potravinářského materiálu s obsahem proteinů, při kterém se potravinářský materiál smíchá s pšeničnou moukou a směs se zahřívá po dobu více než 3 min při 180 °C.
V US 4,293,571 se popisuje příprava hypoalergenního materiálu, při které se proteinový materiál vystaví hydrolytickému působení, zbylé nehydrolyzované proteiny se koagulují působením tepla a koagulovaný materiál a makropeptidy, které by mohly obsahovat alergeny, se odstraní v následném kroku ultrafiltrace.
V US 5,039,532 se popisuje další způsob přípravy hypoalergenního potravinářského materiálu, při kterém se pšeničný výrobek zpracuje enzymatickou hydrolýzou.
Všechny tyto způsoby zpracování potravinářského materiálu nebo dokonce jeho vyloučení z denní diety se však v praxi obtížně • · · 1 • · · · provádějí, protože vyžadují revizi diety, často se zavedením přísných omezujících opatření, a mohou popřípadě ovlivnit kvalitu života a/nebo zastavit očekávaný růst jedince.
Rozdílný přístup k léčení alergie na potraviny a potravinové netolerance je zaměřen na obnovení a udržení integrity střeva, takže jím alergeny přítomné v potravinách v podstatě nemohou procházet. V této souvislosti popisuje dokument US 5,192,750 použití Nacetylglukosaminu, který umožní vytvoření nezbytné bariéry ve sliznici proti průchodu alergenů přítomných v potravinách a pro udržení její normální funkce.
Podle dalšího přístupu léčení alergií se navrhuje vakcinace jedinců proti molekulám IgE, která inhibujé spouštění žírných buněk a bazofilů. Z tohoto hlediska navrhuje WO 97/31948 specifické peptidy pro vakcinaci, které napodobují svou trojrozměrnou konformací části molekuly IgE, tedy imunoglobulinů účastnících se uvolňování mediátorů působících při regulaci alergických a zánětlivých reakcí. Předpokládá se, že vlastní imunitní systém jedince popřípadě vytvoří protilátky proti uvedeným molekulám IgE, takže dojde k vychytání těchto imunoglobulinů IgE. Tento způsob má však nevýhodu v tom, že vytvořené protilátky mohou mít zkříženou reaktivitu s jinými třídami imunoglobulinů, takže může být nepříznivě ovlivněn přirozený obranný mechanismus jedince.
V přihlášce EP 99200130,5 přihlašovatel předkládaného vynálezu, která dosud nebyla zveřejněna, se popisuje další přístup. Navrhuje se hypoalergenní prostředek, který obsahuje jako základ nealergenní, významně hydrolyzovaný proteinový materiál a/nebo volné aminokyseliny, a alespoň jeden tolerogenní peptid příslušného alergenního proteinu. I když tento prostředek má mnoho výhod proti dosavadnímu stavu techniky, stále je obtížné získat tolerogenní peptid, který se musí vyrábět pro každou šarži de novo.
♦ · · · ς ... ; · .....
υ - ··· · ·· ·· ,,
V oboru tedy stále existuje potřeba poskytnout zlepšené prostředky pro léčení alergií. Tyto prostředky jsou předmětem předkládaného vynálezu.
Podstata vynálezu
Řešením výše uvedených problémů jsou nové kmeny bakterií mléčného kvašení, které jsou schopné snižovat sklon jedince k vyvinutí alergických reakcí. Tyto nové bakterie mléčného kvašení exprimují polypeptid, který nese tolerogenní peptid tak, že specifická sekvence a eventuálně i konfigurace tolerogenního peptidu je zachována, je udržena jeho stabilita a může tak být zpracován a rozpoznán imunitním systémem jedince.
Bylo ukázáno, že bakterie mléčného kvašení, zvláště laktobacily a bifidobakterie modulují imunitní systém, aniž by opustily své přirozené lumenální prostředí, produkcí informačních látek (messengers) (cytokinů), které se účastní při řízení imunitního systému. Bakterie mléčného kvašení nespouštějí produkci prozánětlivých cytokinů, jako je IL-8, TNF-α, MCP-1 a GM-CSF, ale spíše podporují produkci cytokinů inhibujících záněty, jako je TGF-β (Blum a další (1999) Antonie van Leeuwenhoek 76, 199), s důležitými důsledky co se týče udržování jak imunitní rovnováhy ve střevě, tak i integrity epiteliální bariéry (Planchon a další (1999) J. Cell Physiol. 181, 55). Bylo ukázáno, že podávání homogenátů laktobacilů spolehlivě vyvolává supresivní účinek na proliferaci mononukleárních buněk indukovanou mitogeny (Pessi a další (1999) Appl. Environ. MTicrobiol. 65, 4725).
Bakterie mléčného kvašení (lactic acid bacteria, LAB) se mohou používat pro heterologní (nadměrnou) produkci proteinů a peptidů se systémy umožňujícími expresi cizího genu na základě integrace do chromosomu nebo episomálních plasmidových elementů (viz např.
• · • · ♦ · • ·
Kuipers a další (1997) Tibtech 15, 140). Bakterie mléčného kvašení mají dále schopnost kolonizovat povrchy sliznic a vyvolávat vlastní adjuvantní účinek spojený s muramylpeptidy, což vede k degradaci peptidoglykanů.
Dále bylo ukázáno, že některé kmeny rodu Lactobacillus podporují imunitní odpovědi specifické pro antigen, zvláště ve třídě IgA (Majamaa a další (1995) J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 20, 333). Neschopnost lidského IgA v komplexu s antigeny aktivovat komplement může být důležitá při udržování integrity povrchů sliznic. To by zabránilo místním zánětlivým reakcím včetně přílivu leukocytů a uvolňování imunologických efektorů, zvyšujícím permeabilitu membrány sliznic v důsledku poškození tkáně. Navíc by mohl IgA prostřednictvím tohoto imunitního vylučovacího mechanismu omezit další absorpci okolních přítomných antigenů a tím odstranit anafylaktické reakce zprostředkované protilátkami isotypů IgE a IgG.
Dále bylo ukázáno, že laktobacily zvyšují produkci IFN-gama izolovanými T-buňkami (Halpern a další (1991) Int. J. Immunother. 7, 205). V nedávné době bylo ukázáno, že IFN-gama inhibuje uvolňování TNF-alfa z žírných buněk střevní sliznice (Bissonnette a další (1995) Int. Arch. Allergy Immunol. 107, 156). Zvýšená sekrece IFN-gama by mohla zabránit škodlivým účinkům TNF-alfa (Hernandez-Pando a další (1994) Immunology 82, 591) a tím působit proti poruchám permeability v souvislosti s alergií na potraviny. Například narušení střevní bariéry ve smyslu neschopnosti zabránit příjmu antigenu u atopického ekzému může být klíčovým prvkem určujícím nadměrné imunitní odpovědi na běžné alergeny potravin a životního prostředí.
V průběhu intenzivních studií v rámci předkládaného vynálezu objevili autoři způsob jak kombinovat výhodné vlastnosti bakterií mléčného kvašení se schopností tolerogenních peptidů, pro vytvoření účinného prostředku pro omezení nebo dokonce minimalizaci sklonu jedinců k alergickým reakcím.
• · · ·
Bakterie mléčného kvašení použitá v rámci předkládaného vynálezu s výhodou patří do skupiny Lactobacillus nebo skupiny Bifidobacterium nebo skupiny Lactococcus, a výhodněji je odvozená z druhů L. acidophilus, L. johnsonii, L. gasseri, L. casei, L. paracasei nebo L. reuteri, kde všechny tyto bakterie jsou lidského, popřípadě živočišného původu.
Tolerogenní peptid, tedy peptid odvozený z daného proteinu způsobujícího alergii u jedince, má obecně velikost přibližně 200 až 6000 Da, a jde o peptid schopný indukovat toleranci vůči alespoň tomu proteinu, ze kterého je odvozen. Navíc bude indukována tolerance vůči jakémukoli materiálu, který obsahuje stejnou antigenní determinantu jako je determinanta představovaná specifickým tolerogenním peptidem. Podle předkládaného vynálezu je tento peptid vložen rekombinantními prostředky do polypeptidů syntetizovaného v bakterii mléčného kvašení, přičemž polypeptid může být vzhledem k bakterii endogenní nebo exogenní. Tolerogenní peptid je vložen takovým způsobem, že je předkládán (prezentován) na vnější části výsledného rekombinantního polypeptidů, takže může být rozpoznán imunitním systémem.
Polypeptid může být exprimován v bakterii mléčného kvašení některým ze způsobů známých v oboru. Například pro episomální expresi mohou být použity některé z komerčně dostupných vektorů pNZ124 (Platteuw a další (1994) Appl. Env. Microbiol. 60, 587), pGK12 (Walke a další (1996) FEMS Microbiol. 138, 233) nebo pG+host9 (Maguin a další (1996) J. Bacteriol. 178, 931). Pokud se vezme v úvahu značná stabilita integrace do chromosomu, tento způsob by mohl být pro rekombinantní gen kódující příslušný polypeptid výhodný. Pro integraci do chromosomu se může použít homologní rekombinace, například použitím rekombinantního genu bakterie mléčného kvašení obsahujícího tolerogenní peptid a náhradou endogenního genu. Způsoby zavádění rekombinantních • · · · φ φ • * · ·
genů do chromosomu hostitele jsou rovněž známé odborníkům v oboru.
Polypeptid může být protein normálně éxprimovaný do vnitřního prostředí buňky, ale může také jít o polypeptid sekrenovaný bakterií mléčného kvašení, nebo polypeptid vkládaný do její buněčné stěny, přičemž část obsahující tolerogenní peptid je umístěna v extracelulární části. Příklady polypeptidů použitelných v rámci předkládaného vynálezu jsou pepN, pepX, laktát dehydrogenáza nebo βgalaktosidáza, nebo polypeptid ze skupiny bakteriosinů nebo protein S-vrstvy nebo proteáza ukotvená na buněčné stěně.
Povaha tohoto polypeptidu není rozhodující za podmínky, že tolerogenní peptid může být vložen takovým způsobem, aby byl přístupný imunitnímu systému. Jakmile již byl jednou identifikován vhodný tolerogenní peptid, odborník v oboru bude schopen uspořádat tolerogenní peptid do takového umístění. Z tohoto hlediska bude odborník v oboru brát v úvahu trojrozměrné modely polypeptidů, do kterých má být tolerogenní peptid vložen, a na základě takových informací budou schopni navrhnout odpovídající rekombinantní protein.
Ve výhodném provedení jsou rekombinantní polypeptidy sekrenovány nebo jsou zařazeny v buněčné stěně bakterie tak, že tolerogenní peptid je trvale předkládán do vnějšího prostředí.
Tolerogenní peptid je odvozen z potravinářského materiálu, který způsobuje alergickou reakci. Není však nezbytné, aby jeho aminokyselinová sekvence odpovídala sekvenci zjištěné u nativního proteinu, ale pro daný účel bude vhodná jakákoli peptidová sekvence, která bude mít v podstatě stejnou aminokyselinovou sekvenci a v případě možnosti i trojrozměrnou konformaci jako výchozí peptid nebo z něj odvozený polypeptid, vykazující stejné výsledky, tj. indukci a snížení alergické odpovědi.
• · · · * ·»· ·
Jako výhodné zdroje tolerogenních peptidů je možné uvést mléko, sóju, burské oříšky, korýše, ryby, maso, sezam nebo pšenici. Těmito peptidy mohou být například β-laktoglobulin, bovinní sérový albumin nebo kasein.
Pro identifikaci tolerogenních peptidů se sledovaný alergenní materiál nejprve vystaví enzymatické hydrolýze až do přibližně 10 až 50 % a zbytková enzymatická aktivita v proteinové směsi se inaktivuje např. působením tepla. Roztok proteinového hydrolyzátu se vyčeří a dále zpracuje podle potřeby. Takto získané peptidy se oddělí např. vysrážením roztoku nebo dělením na chromatografické koloně.
Frakce obsahující různé peptidy se potom testují na tolerogenní vlastnosti na zvířecím modelu. Pro tento účel se zvířata jako jsou myši krmí příslušnými peptidovými frakcemi a potom se imunizují alergenem a měří se reakce na něj, např. pozorováním změny vnějšího vzhledu nebo specifickým měřením hladin IgE u zvířat. Jako důsledek budou tolerogenní peptidové frakce snižovat sklon zvířete reagovat na alergen, takže je možno určit příslušný peptid (frakci).
Jakmile byl ověřen tolerogenní peptid a jeho aminokyselinová sekvence, vloží se metodami genetického inženýrství do genu kódujícího proteinový nosič bakterie, sekvence DNA tohoto polypeptidu, jejíž exprese se požaduje. Způsoby a techniky pro manipulaci se sekvencemi DNA a expresi proteinů v mikroorganismech se popisují v Sambrook a další, A Laboratory Manual Cold Spring Harbor (1992).
Předkládaný vynález se také týká potravinářského výrobku a farmaceutického prostředku s obsahem alespoň jedné z těchto rekombinantních bakterií mléčného kvašení.
Bakteriální kmen může být do výrobku nebo prostředku přidán v množství v rozmezí od 105 do 1012 cfu (jednotky schopné vytvořit kolonie, colony forming unit) na gram materiálu. Podobně může být do
Φ · » · výrobku přidán supernatant kultury bakterií mléčného kvašení nebo jeho aktivní frakce.
Potravinářský výrobek může být mléko, jogurt, tvaroh, sýr, fermentované mléčné výrobky, fermentované výrobky na bázi mléka, zmrzlina, fermentované výrobky na bázi cereálií, práškové mléčné výrobky, výrobky pro děti a v případě zvířat krmivá pro domácí zvířata.
Farmaceutický prostředek může být ve formě tablet, kapalných suspenzí bakterií nebo prostředků obsahujících části bakterií, jako např. pouze frakci buněčné stěny získanou lyží bakteriálních buněk a oddělením složky buněčné stěny, sušených potravinových doplňků, potravinových doplňků s obsahem vody, sušeného stravy nebo stravy s obsahem vody pro výživu žaludeční sondou.
Farmaceutický prostředek se podává ústy, ale může se také podávat nosem.
Předkládaný vynález také zahrnuje vakciny s obsahem bakterie podle předkládaného vynálezu nebo její části. Bakterie může být živá nebo může být oslabená, např. může být v případě potřeby oslabena její schopnost růstu. Jako části bakterie se bude používat především buněčná stěna nesoucí potřebný antigen. Buněčnou stěnu je možno snadno získat lyží buněk a oddělením jednotlivých složek.
Následující příklady budou ilustrovat vynález, aniž by jej však měly omezovat.
Přehled obrázků na výkresech
Na obr. 1 jsou ukázány primární sekvence peptidů obsažených v příslušných frakcích hydrolyzátu β-laktog lobu lín u; svislé čáry znamenají disulfidické vazby.
Na obr. 2 jsou ukázány výsledky získané pro frakce tolerogenních peptidů/peptidu při různých experimentech.
··· * · ··< ·
- 11 Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Izolace tolerogenních peptidů
a) Izolace peptidů
220 g β-laktoglobulinu (Sigma) bylo rozpuštěno v bidestilované vodě na koncentraci 5 % (hmotn./hmotn.). K získanému roztoku byl přidán trypsin zpracovaný TPCK při poměru enzym/substrát (E/S) 1/100 (hmotn./hmotn.) a roztok byl inkubován při 40 °C, pH 7,6 za stálého míchání. Po 1 hod bylo přidáno stejné množství enzymu za získání konečného (E/S) poměru 2/100. Inkubace pokračovala další 4 hod a enzym byl inaktivován teplem (85 °C, 5 min) pro ukončení reakce. Úplný tryptický hydrolyzát byl potom lyofilizován a získané peptidové produkty byly děleny preparativní chromatografii na kationtové pryskyřici.
Bylo získáno 15 různých peptidových frakcí v rozmezí od 2 do 23 aminokyselin (od přibližně 240 do 2720 Da). Jednotlivé frakce byly nanofiltrovány, diafiltrovány, dialyzovány, znovu lyofilizovány a uchovávány v suchém stavu při teplotě laboratoře až do použití. Frakce byly také charakterizovány na obsah peptidů použitím kapalinové chromatografie s vysokou účinností (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) s reverzními fázemi. Celkem bylo odděleno 15 frakcí (F1 - F15) obsahujících jako hlavní složku peptidy (označené T).
| Frak- ce | F1 | F2 | F3 | F4 | F5 | F6 | F7 | F8 | F9 | F19 | F11 | F12 | F13 | F14 | F15 |
| Hmot. (9) | 52 | 13,9 | 11 | 11,8 | 2,57 | 1,94 | 4,37 | 13,1 | 5,01 | 6,53 | 1,05 | 3,46 | 1,9 | 2,67 | 28,8 |
| OP* | - | T6 T17 T18 | T23 | T23 | - | T7 T9 | T20 T21 T24 | T9 T12 T24 | T12 T21 | T10 T21 | T11 | T10 | T10 T11 | T10 T11 | - |
* obohacený peptid • ·
- 12 • · · · · • · » · · · • ······ · • · · · ♦ ··· · ·· ··
Peptidy byly izolovány a sekvenovány. Jejich sekvence jsou uvedeny na obr. 1. Jako tolerogenní se ukázaly při různých experimentech různé peptidy (experimenty se podrobně popisují v článku Pecquet R., Bovetto L., Maynard F., Frisché R., Peptides obtained by tryptic hydrolysis of bovine B-lactoglobulin induce specific oral tolerance in mice, J. Allergy Clin. Immunol. (2000) 105: 514 - 21, který se zahrnuje odkazem).
b) Syntéza tolerogenních peptidů
Byla provedena chemická syntéza tří tolerogenních peptidů βlaktoglobulinu (BLG) T6, T17 a T6/T17 identifikovaných ve výše uvedeném odkazu a kontrolního peptidu T13, s obklopujícími zbytky ze sekvence BLG a jedním zbytkem Cys navíc, jak je ukázáno níže:
T6 CFKIDALNENKVSR
91
TI7 CNKVLVLDTDYKKYS
100
T6/T17
C F ΚIDALNENKVLVLD TD Y KK Y S
100
TI3 LIVTOTMKSRC
8
c) Testování na zvířatech
Pro hodnocení tolerogenních vlastností různých peptidů byly použity samice myší Balb/c získaných od firmy IFFA-Crédo (L’Abresle, Francie). Zvířata byla množena a chována na nemléčné dietě. Na počátku experimentů byly myši staré 3 týdny. Žaludeční sondou dostávaly nativní β-laktoglobulin (5 mg/g tělesné hmotnosti), různá množství štěpeného β-laktoglobulinu a různá množství různých peptidů • 0 · 0 ·
získaných v odstavci a) výše. Kontrolní myši dostávaly fyziologický roztok. Po 5 dnech na této dietě byly všechny myši imunizovány βlaktoglobulinem a ovalbuminem (jakost V, Sigma) jako nepříbuzným antigenem pro hodnocení specificity imunitní odpovědi. Hodnocení hypersenzitivity opožděného typu (DTH) bylo provedeno 21 dnů po systémovém podání porovnáním tloušťky levé zadní tlapky před a po imunizaci. 24 hod po imunizaci byla měřena tloušťka tlapky zvířat (vyjádřená jako Δ tloušťky (mm)). Potom byla všem myším odebrána krev a potom sleziny, které byly spojeny podle příslušnosti k jednotlivým skupinám. Pro každou skupinu byly provedeny testy proliferace specifické pro splenocyty. Individuálně byl odebírán střevní obsah. Sérum a střevní vzorky byly jednotlivě zamraženy při -80 °C až do provedení testů. Ve vzorcích séra i střevního obsahu byly zjišťovány hladiny IgE proti β-laktoglobulinu a IgE proti ovalbuminu.
d) Stanovení protilátek IgE
Sérum a střevní tekutiny byly zředěny a testovány v duplikátech na protilátky IgE proti β-laktoglobulinu a ovalbuminu testem ELISA. Jako negativní kontroly byly použity spojené vzorky z 20 neimunizovaných myší. Titry byly zjišťovány výpočtem zředění vzorku, který poskytl dvojnásobek absorbance negativní kontroly. Titry byly vyjádřeny jako log 10 převrácené hodnoty zředění.
e) Buněčné kultury
Roztoky slezinných buněk byly homogenizovány v PBS a vyčištěny. Buňky byly společně pěstovány v přítomnosti βlaktoglobulinu nebo fytohemaglutininu A. V průběhu posledních šesti hodin kultivace byl přidán tritiovaný thymidin ([3H]-Thy (Amersham, Zurich) a destičky byly sklizeny a analyzovány scintilačním čítáním. Projevy stimulace byly počítány jako poměr exprimovaných hladin • · · ·
- 14 • · ·►···· • · · · · · • ····»· · · • · · · · · ··· · ·· ·· testovacího vzorku a kontroly s odečtenou hladinou blanku vyjádřený jako střední cpm inkorporovaného [3H]-Thy, přičemž kultivace se prováděly v triplikátech.
f) Tolerance indukovaná orálním podáváním syntetických peptidů
Syntetické peptidy byly analyzovány na svou tolerogenní kapacitu v parenterálním myším modelu. Byly získány následující výsledky;
| Titr IgE (log) (test/kontrola) | SI slezinných lymfocytů (test/kontrola) | SI MLN lymfocytů (test/kontrola) | |
| T-6 | 3,24/3,39 | 0,53 | 0,29 |
| T-17 | 2,67/3,39 | 0,31 | 0,41 |
| T-6/T-17 | 3,40/3,39 | 0,92 | 0,81 |
| T-13 | 3,20/3,39 | 1,70 | 0,87 |
SI; Index stimulace
MLN: Mezenterická lymfatická uzlina
Je zřejmé, že syntetický peptid T-17 snížil jak produkci IgE, tak i proliferaci T-buněk, zatímco peptid T-6 potlačil pouze odpověď Tbuněk. Naopak peptid T-13, což je kontrolní peptid, neindukoval orální toleranci na BLG.
Příklad 2
Konstrukce rekombinantního polypeptidů
Peptidy T6 a T17 identifikované v příkladu 1 jako peptidy 2o s tolerogenními vlastnostmi byly fúzovány s proteázou zakotvenou v buněčném povrchu, aby mohly být předloženy na povrchu bakterie.
Jako negativní kontrola byl použit peptid T13 tvořící část N-konce βlaktoglobulinu.
Proteáza ukotvená na buněčném povrchu (výše) pocházela z Lactobacillus bulgaricus, jehož sekvence byla publikována autory
Gilbert a další (1996) J. Bacteriol., 178, 3059 - 3065. Tento protein byl charakterizován jako protein o délce 2000 aminokyselin, složený z úvodního peptidu o délce 33 aminokyselin (oblast pre), odpovědný za export enzymu buňkou, a následné řady 154 aminokyselin (oblast pro), která je odpovědná po rozštěpení za aktivaci proteolytické io aktivity enzymu, a 700 až 800 aminokyselin aktivního místa. Následná oblast (přibližně 1000 aminokyselin) má pravděpodobně úlohu ve specificitě štěpení a transportu vytvořených peptidů v buňce, a také zasahuje do buněčné stěny. Proteáza je k buněčné stěně ukotvená karboxylovým koncem, přičemž za specifickou kovalentní vazbu ke struktuře peptidoglykanu buněčné stěny je odpovědných alespoň 200 aminokyselin.
Proteázový gen byl nejprve amplifikován se svým promotorem použitím následujících dvou primerů:
5'-TTTTGTGGATCCTTAACTTCATAGCACG-3' (proti směru transkripce vzhledem k promotoru genu, nese místo BamHl)
5'-ATATTATCTAGAATTGAATAGATTGCC-3' (ve směru transkripce vzhledem k ro-independentnímu terminátoru genu, nese místo Xbal)
Produkt amplifikace byl štěpen BamHl a Xbal a byl klonován do věktoru bakterie mléčného kvašení pNZ124, který byl štěpen stejnými restrikčními enzymy, a konstrukt byl případně zaveden elektroporaci do bezplasmidového (beta-galaktosidáza a proteáza - negativního) Lactococcus lactis.
• · • · · ·
- 16 • · · « · · · • · * · · *
Oblast aktivního místa klonované proteázy byla nahrazena sekvencí sledovaného peptidu/polypeptidu. K tomu účelu byla klonovaná proteáza štěpena enzymem Nhel, kde štěpicí místo je umístěno 50 bp ve směru transkripce vzhledem k sekvenci štěpícího místa úvodního peptidu, a Pvul, 800 bp dále ve směru transkripce. Sekvence DNA kódující sledované peptidy (až do 10 aminokyselin) byla vložena mezi dvě restrikční místa jako dva oligonukleotidy, které byly navrženy tak, aby vytvořily na svých koncích dvě restrikční místa, jakmile dojde k hybridizaci. Návrh oligonukleotidu bere v úvahu, že po navázání na proteázový gen zůstane čtecí rámec rekombinantního proteinu otevřený.
Vložení většího z polypeptidů bylo provedeno amplifikací DNA s použitím primerů obsahujících dvě restrikční místa. Amplifikační produkt byl štěpen restrikčními enzymy. V obou případech byly fragmenty DNA ligovány do proteázového genu a elektroporací zavedeny do Lactococcus lactis a Lactobacillus johnsonii.
Rekombinantní plasmidové konstrukty obsahující peptidy T6, popř. T17, byly uloženy 22. září 2000 podle Budapešťské úmluvy v Institute Pasteur, pod depozitními čísly CNCM I-2563 a CNCM I-2564.
Příklad 3
Transformace Lactococcus lactis a Lactobacillus johnsonii
Pro účely transformace byly pěstovány kmeny Lactococcus lactis (MG1363, bezplasmidový) a Lactobacillus johnsonii kmen Lal (dostupný u Institute Pasteur pod depozitním číslem CNCM 1-1225) přes noc v médiu MRS při 37 °C v anaerobním systému GasPak. Alikvot této kultury byl použit pro zaočkování další kultivační půdy (MRS) s obsahem 0,5 M sacharózy. Po dalším novém zaočkování na poměr 2 % do 200 ml MRS + 0,5M sacharózy byla kultura pěstována na OD595 0,6. Buňky byly odděleny centrifugací při 5000 ot/min při
- 17 • · °C 10 min, centrifugát byl jednou promyt 1/2 objemu roztoku obsahujícího 1M sacharózu a 2,5 mM Cal2, jednou 1/4 objemu roztoku obsahujícího 1M sacharózu, 2,5 mM CaCI2) a získaný centrifugát byl resuspendován v 3,5 ml roztoku 1M sacharózy, 2,5 mM CaCI2 + 0,459 ml 87 % glycerolu (10 % konečná koncentrace). Buňky byly buď přímo použity pro transformaci nebo zamraženy při -80 °C.
Pro elektroporaci bylo 40 pl buněk smícháno s 10 až 100 ng DNA (v objemu <5 μΙ) a převedeny do ledové elektroporační kyvety 0,2 cm. Byly použity pulsy při impedanci 200 Ω, 25 pF, 2,5 kV v ledově chladné 0,2 cm elektroporační kyvetě. Do kyvety byl přidán 1 ml roztoku MRS + 20 mM MgCI2, 2 mM CaCI2 a suspenze byla inkubována 2 až 3 hod při vhodné teplotě (při 30 °C pro Lactococcus lactis a 37 °C pro Lactobacillus johnsoniř, jestliže se používají plasmidy ts (pG+host9), inkubuje se při 30 °C). Po transformaci plasmidovou DNA byly alikvoty 10 μΙ a 100 μΙ vysety na agarové plotny MRS obsahující vhodné antibiotikum; po transformaci ligační směsí byly použity alikvoty 100 μΙ a 500 μΙ. Plotny byly inkubovány anaerobně 24 až 48 hod při stejné teplotě jako výše.
Jako selekční médium bylo použito MRS s erythromycinem (2,5 pg/ml) nebo MRS s kanamycinem (5 pg/ml).
Příklad 4
Vytvoření krysího antiséra a monoklonálních protilátek proti tolerogenním peptidům BLG
Peptidy BLG T6, T17, T6/T17 a T13 (ukázané v příkladu 1) byly navázány na KLH aktivovanou maleimidem a byly použity společně s adjuvans Titermax pro imunizaci krys krmených dietou prostou mléčných proteinů. Metodou ELISA bylo ukázáno, že vzorky krve odebírané v intervalech 2 týdnů až 115 dnů po první imunizaci obsahují protilátky specifické pro peptidy BLG.
- 18 • « · · ···· • · · · · » ···»·· * ··· · . • · · · · ···· • ·· ·· · « · ·
Antiséra ani-T6 a anti-T13 rovněž reagovala jak s nativní (ELISA) nebo denaturovanou (SDS PAGE + westernový přenos) formou BLG. Bylo ukázáno, že anti-T6 a anti-T17 specificky rozpoznávají peptidy BLG exprimováné na povrchu rekombinantního L.
lactís. Výsledky jsou ukázány v tabulce I.
Tabulka I
Reaktivita antisér proti β-laktoglobulinovým peptidům
| Antisérum specifické pro | T6 | T17 | T6/17 | T13 | ||||||||
| Číslo krysy | A1 | A2 | A3 | B4 | B5 | B6 | C7 | C8 | C9 | D10 | D11 | D12 |
| T6 (ELISA) | +++ | ± | + | - | NT | NT | - | NT | NT | - | NT | NT |
| T17(ELISA) | - | NT | NT | + | - | - | +++ | NT | NT | - | NT | NT |
| T6/17 (ELISA) | +++ | NT | NT | NT | NT | +++ | + | - | - | NT | NT | |
| T13 (ELISA) | - | NT | NT | - | NT | NT | - | NT | NT | + | ± | |
| Nat. BLG (ELISA) | +++ | ± | +++ | + | - | - | - | - | - | + | + | + |
| Den. BLG (SDS- PAGE+WB) | +++ | NT | ++ | - | NT | NT | - | NT | NT | ± | +++ | ++ |
| LI/T6 (ELISA) | + | +++ | - | NT | NT | - | - | - | - | NT | NT | |
| LI/T17 (ELISA) | - | NT | NT | + | - | - | - | - | - | - | NT | NT |
| LI/T13 (ELISA) | - | NT | NT | - | NT | NT | - | NT | NT | - | - | - |
ELISA/OD 490 nm (15 min/37 °C) +++ >0,3 ++ 0,2 - 0,3
0,1 - 0,2 ± 0,05-0,1
- <0,1
NT nebylo testováno nat. BLG 3 x krystalizovaný BLG (Sigma) rozpuštěný v PBS
- 19 den. BLG 3 x krystalizovaný BLG (Sigma) rozpuštěný a povařený ve vzorkovacím pufru SDS
Ll/T rekombinantní Lactococcus lactis nesoucí proteinázu
Lactobacillus bulgaricus s peptidovým inzertem BLG
Pro produkci hybridomů sekrenujících monoklonální protilátky proti peptidu BLG byly z imunizovaných krys izolovány sleziny. Slezinné buňky byly fúzovány s myelomovými buňkami standardními způsoby a již první cyklus screeningu umožnil identifikaci populací buněk produkující protilátky buď anti-T6 nebo anti-T17. Klonování těchto buněk bylo provedeno použitím sorteru buněk, aby byla zajištěna přítomnost pouze jediné buňky v jamce.
Příklad 5
Detekce tolerogenních peptidů protilátkami
Pro zjištění, zda bakterie mléčného kvašení exprimuje tolerogenní peptidy takovým způsobem, aby byly dostupné a rozpoznatelné protilátkami, byly bakterie obsahující rekombinantní gen pěstovány v 50 ml kultuře a buňky byly odděleny centrifugací. Buňky byly potom dvakrát promyty 50 ml TBS a popřípadě suspendovány v 6 ml TBS. 75 pl suspenze bylo převedeno do jamky (typu half well flat-bottom ELISA) a destičky byly ponechány bez víčka 24 hod při 37 °C tak, že jamky vyschly. Destičky byly promyty třikrát směsí TBS/PBS až do odmytí nenavázaných bakterií a jamky byly potom blokovány směsí TBS-kasein (1,5 g/l) 2 hod při 37 °C. Do jamek bylo přidáno krysí antisérum obsahující protilátky proti specifickým peptidům. Jamky byly inkubovány přes noc při laboratorní teplotě s použitím ředění TBS-kasein s obsahem 0,2 % Tween 20. Potom byly jamky třikrát promyty TBS a byly přidány vyvíjecí protilátky (kozí protilátka proti krysímu IgG konjugovaná s HRP) a jamky byly
inkubovány při 37 °C při zředění roztokem TBS-kasein s obsahem 0,2% Tween 20. Jamky byly třikrát promyty TBS a vyvíjeny OPD/H2O2 a odečítány při 490 nm.
Bylo možno pozorovat, že oba kmeny Lactococcus lactis a Lactobacillus johnsonii měly pozitivní reakci, což ukazuje, že tolerogenní peptid je rozpoznáván protilátkami.
Příklad 6
Příprava králičího antiséra proti aminokyselinovým zbytkům 472-659 proteinázy prtB L. bulgaricus
Cílová sekvence prtB (bp 1414-1977) kódující aminokyselinové zbytky 472-659 (první aminokyselina je iniciační methionin) byla amplifikována PCR použitím pMD114jako templátu a primeru proti směru exprese (prtB5’-1414) sekvence
5'-GCGGATCCGGCTTGGGCGGTGCAGATG-3' (obsahující štěpící místo 5’-BamHI), a primeru po směru exprese (prtB3’-1977) sekvence
5'-CGCAAGCTTGTGCGAAGTGTTCATGGC-3' (obsahující místo 5’-HindlII).
Specifický produkt PCR byl získán použitím Taq DNA polymerázy (Perkin-Elmer) s použitím tří cyklů obsahujících krok denaturace při 95 °C 30 s, krok teplotní hybridizace primeru při 56 °C 30 s a krok prodlužování při 72 °C 45 s, a následujících 27 cyklů s krokem teplotní hybridizace prováděných při 60 °C.
Po odsolení a odstranění primerů a dNTPs (High Pure PCR Product Purification Kit, Roche) byl vzorek štěpen BamHI a HindlII, potom byla provedena elektroforéza na agarózovém gelu a požadované pruhy DNA byly z gelu vyříznuty (E. Z. N. A. Gel Extraction Kit, Peqlab).
• · · ·
Vyčištěný produkt amplifikace byl vložen mezi místa BamHI a Hindlll expresního vektoru pQE-9 E. coli (Qiagen) ve směru exprese vzhledem k sekvenci kódující šestihistidinovou značku.
Tímto vektorem byl transformován kmen E. coli M15 [pREP4] a 5 indukcí kultury použitím 1 mM IPTG bylo dosaženo exprese heterologního proteinu.
Buňky z jednolitrové kultury byly zcentrifugovány a lyžovány za denaturujících podmínek (8M močovina). Vyčeřený lyzát byl získán centrifugací a byl nanesen na agarózové kuličky Ni2+-NTA (Qiagen), ekvilibrované při pH 8,0, což umožnilo vazbu proteinu s šestihistidinovou značkou. Po kroku promytí při pH 6,3 byl rekombinantní protein eluován při pH 4,5.
Materiál byl neutralizován 100 mM Tris-CI (pH 7,5), množství bylo zjištěno testem na proteiny s kyselinou bicinchoninovou (Pierce) a koncentrace byla nastavena na 1 mg/ml s použitím stejného pufru.
Antigen byl emulgován v kompletním Freundovu adjuvans a podán vícenásobnou intradermální injekcí dvěma králíkům. Injekce byly prováděny ve dnech 0, 14, 28 a 56. Krev byla nakonec odebrána v den 80.
Reaktivita antiséra, která byla překvapivě vysoká, byla potvrzena metodou ELISA, na rekombinantním Lc exprimujícím na buněčném povrchu proteinázu prtB L. bulgaricus a imunologickým přenosem, u supernatantu z kultury rekombinantního Lc exprimujícího sekrenovanou formu proteinázy.
- 22 Doklad o uložení rekombinantních plasmidovych konstruktů podle
Budapešťské dohody
Originál (for SUBMISSION) - printed on 21.092001 03:55:36 PM
| 0-1- | Form - PCT/RO/134 (EASY) Indications Relating to Deposited Microorganism(s) or Other Biological | ||
| Materiál (PCT Rule 13bis) | |||
| 0-1-1 | Prepared using | PCT-EASY Version 2.92 (updated 01.03.2001) | - |
| 0-2 | International Application No. | ||
| 0-3 | Applicanťs or agenťs filé reference | 80263 WO |
| 1 1-1 1-2 | The indications made below relate to the deposited mícroorganism(s) or other biological materiál referred to in tiie description on: page line | 13 15 |
| 1-3 1-3-1 1-3-2 1-3-3 1-3-4 | Identification of Deposit Name of depositary institution Address of depositary institution Dáte of deposit Accession Number | Collection nationale de cultures de micro-organisměs Institut Pasteur, 28, rue du Dr Roux, 75724 Paris Cedex 15, France 22 September 2000 (22.09.2000) CNCM 1-2564 |
| 1-4 | Additional Indications | ΝΟΝΕ |
| 1-5 | Designated States for Which Indications are Made | all designated States |
| 1-6 | Separate Fumishing of Indications These indications will be submitted to the International Bureau láteř | ΝΟΝΕ |
| 2 2-1 2-2 | The indications made below relate to the deposited microorganism(s) oř other biological materiál referred to in the description on: page line | 13 15 |
| 2-3 2-3-1 2-3-2 2-3-3 2-3-4 | Identification of Deposit Name of depositary institution Address of depositary institution Dáte of deposit Accession Number | Collection nationale de cultures de micro-organisne s Institut Pasteur, 28, rue du Dr Roux, 75724 Paris Cedex 15, France 22 September 2000 (22.09.2000) CNCM 1-2563 |
| 2-4 | Additional Indications | ΝΟΝΕ |
| 2-5 | Designated States for Which Indications are Made | all designated States |
| 2-6 | Separate Fumishing of Indications These Indications wlil be submitted to the International Bureau láteř | ΝΟΝΕ |
-23 • *
Originál (for SUBMISSION) - prinled on 21.09.2001 03:55:36 PM
FOR RECEMNG OFFICE USE ONLY
| 0-5 | This form was received by the intemational Bureau on: | |
| 0-5-1 | Authorized ořficer |
Zastupuje:
• · · · · • · · · · ·
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (12)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Kmen bakterií mléčného kvašení exprimující na buněčném povrchu zakotvenou proteázu Lactobacillus bulgaricus, kde tato proteáza Lactobacillus bulgaricus zakotvená na povrchu obsahuje tolerogenní peptid, který je heterologní vzhledem k této proteáze Lactobacillus bulgaricus zakotvené na povrchu tak, že peptid je stabilizován proti degradaci žaludečními/dvanáctníkovými enzymy, zachovává si své tolerogenní vlastnosti a je předkládán na periferní části proteázy Lactobacillus bulgaricus zakotvené na povrchu.
- 2. Kmen bakterií podle nároku 1, který je zvolený z rodu Lactobacillus nebo Bifidobacterium.
- 3. Kmen bakterií podle některého z předcházejících nároků, kde tolerogenní peptid je odvozený z potravinářského materiálu.
- 4. Potravinářský výrobek, vyznačující se tím, ž e obsahuje kmen bakterií podle některého z předcházejících nároků, nebo jeho supernatant.
- 5. Potravinářský výrobek podle nároku 4, vyznačující se tím, že je zvolený ze skupiny mléka, jogurtu, tvarohu, sýra, kvašených mlék, kvašených produktů na bázi mléka, zmrzliny, výrobků na bázi kvašených cereálií, práškových mléčných výrobků, výrobků pro děti nebo krmiv pro domácí zvířata.
- 6. Potravinářský výrobek podle některého z nároků 4 nebo 5, vyznačující se tím, že kmen bakterií je obsažený v tomto výrobku v množství od 107 do 10115 cfu/dávkovou formu.
- 7. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, ž e obsahuje kmen bakterií podle některého z nároků 1 nebo 3, nebo jeho supernatant.
- 8. Farmaceutický prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že kmen bakterií je v něm obsažen v množství od 101° do 1012 cfu/dávkovou formu.15
- 9. Použití kmene bakterií podle některého z nároků 1 až 3, nebo jeho supernatantu, pro výrobu poživatelného nosiče pro léčení alergie.
- 10. Použití potravinářského výrobku nebo farmaceutického20 prostředku podle některého z nároků 1 až 8 pro výrobu poživatelného nosiče pro léčení alergie.
- 11. Použití podle nároku 10, kde prostředek je podáván orální nebo nazální cestou.
- 12. Vakcina, vyznačující se tím, že obsahuje kmen bakterií podle některého z nároků 1 až 3, nebo jeho části.- 26 13. Vakcina podle nároku 12, vyznačující se tím, že se použije frakce buněčné membrány lyžované bakterie.Zastupuje:U2HiJHN-A-L-K-COCHΗ,Ν-1-I-A'E-K-COOHPeptid T2 h,n-H-I-R-cooh Peptid T3 η,ν-Έ-D-K-cooh (146-148) (136-138)Peptid T5 k^E-N-G-E-C-A-Q-K-cock (62-69) η,ν-1-D-A-L-N-E-N-K-cochH,N-A-L -P-M-COCHPeptid T7 β,ν-G-L-D-I-Q-K-coch (9-14)Peptid T9.T1O,T11 h,n-W-E-N-G-E-C-A,-Q,-K,-cooh (61-67,-68,-69)Peptid TI (139-141)Peptid. T4 5 (71-75)Peptid T6 (84-91)10 Peptid. T8 (142-145)Peptid T12 η,η-T-P-E-V-D-D-E-A-L-E-K-cooh (125-135)Peptid T14 η,ν-A-L-P-M-H-TR-cooh (142-148) = T8 (142-145) + 72 (146-148)Peptid TI6 k^-V-A-G-T-W-Y-cooh 20 (15-20)Peptid TI3 - k^-L-I-V-T-Q-T-M-K-cooh (1-8)Peptid Τ15 η,ν-1-P-A-V-F-K-cooh (78-82)Peptid T17 h,h-V-L-V-L-D-T-D-Y-K,-K-cooh (92-99,100)Peptid TI 8 iw-T-P-E-V-D-D-E-A-L-E-K-F-D-K-cOoa (125-138) = 712 (125-135)+73 (136-138)25 Peptid TI9 h.n-A-A-S-D-1-S-L-L-D-A-Q-S-A-P-L-R-cooh (25-40)Peptid T20, T21 h^-W,-E-N-G-E-C-A-Q-K-«ch (61,62-69):S-S:(149-162) I30 h^-L-S-F-N-P-T-Q-L-E-E-Q-C-H-I-coohPeptid T22 η,ν-S-L-A-M-A-A-S-D-I-S-L-L-D-A-Q-S-A-P-L-R-cooh (21-40)35 Peptid T23 η,ν-V-Y-V-E-E-L-K-P-T-P-E-G-D-L-E-í-L-L-Q-K-cock (41-60)Peptid T24 ^-L-S-F-N-P-T-Q-L-E-E-Q-C-H-I-cooh (149-162)Obr. 1Skupiny indukce orální toleranceObr. 2-<• · · · · » · · « ······ · • · · ♦ « «·Výpis sekvencí <110>·Société Des Produits Nestlé S. A.<120> Lactic acid bacteria capable of reducing an individual's tendency to develop allergic reactions <130> 80263 <140> PCT/EP01/10956 <141> 2001-09-21 <150> EP 00120867.7 <151> 2000-09-25 <160> 29 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> bovine <400> 1Ile Ile Ala Glu Lys 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> bovine <400> 2Giu Asn Gly Glu Cys Ala Gin Lys 1 5 <2I0> 3 <211> 8
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP00120867 | 2000-09-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2003749A3 true CZ2003749A3 (cs) | 2003-06-18 |
Family
ID=8169939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2003749A CZ2003749A3 (cs) | 2000-09-25 | 2001-09-21 | Kmen bakterií mléčného kvašení, potravinářský výrobek, farmaceutický prostředek a vakcína |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7498162B2 (cs) |
| EP (1) | EP1379635A2 (cs) |
| JP (1) | JP2004514424A (cs) |
| KR (1) | KR20030034178A (cs) |
| CN (1) | CN1246456C (cs) |
| AR (1) | AR033574A1 (cs) |
| AU (2) | AU2056102A (cs) |
| BG (1) | BG107657A (cs) |
| BR (1) | BR0114105A (cs) |
| CA (1) | CA2420160A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ2003749A3 (cs) |
| HU (1) | HUP0302585A3 (cs) |
| IL (1) | IL154284A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA03001673A (cs) |
| NO (1) | NO20031159L (cs) |
| NZ (1) | NZ524527A (cs) |
| PL (1) | PL365246A1 (cs) |
| RU (1) | RU2294366C2 (cs) |
| SK (1) | SK3642003A3 (cs) |
| WO (1) | WO2002024883A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200301244B (cs) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1239032A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-09-11 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactic acid bacteria as agents for treating and preventing allergy |
| EP1319410A1 (en) * | 2001-12-11 | 2003-06-18 | Société des Produits Nestlé S.A. | Use of micro-organisms for a directed delivery of substances to specific parts of the gut |
| AU2003236156A1 (en) * | 2003-04-24 | 2005-01-04 | Shin-Jen Shiao | Pharmaceutical compositions used for immune disease treatment and improvement |
| US8877178B2 (en) | 2003-12-19 | 2014-11-04 | The Iams Company | Methods of use of probiotic bifidobacteria for companion animals |
| US20050158294A1 (en) | 2003-12-19 | 2005-07-21 | The Procter & Gamble Company | Canine probiotic Bifidobacteria pseudolongum |
| JP2008523116A (ja) * | 2004-12-14 | 2008-07-03 | アルカベロ アクチェセルスカプ | 異種タンパク質化合物をディスプレイするバクテリア細胞を含んでなる医薬組成物 |
| WO2006097949A1 (en) * | 2005-03-16 | 2006-09-21 | Actial Farmacêutica, Lda. | Mixture of at least 6 species of lactic acid bacteria and/or bifidobacteria in the manufacture of sourdough |
| EP2261323A1 (en) | 2005-05-31 | 2010-12-15 | The Iams Company | Feline probiotic lactobacilli |
| PL1885383T3 (pl) | 2005-05-31 | 2017-06-30 | Iams Europe B.V. | Kocie probiotyczne bifidobakterie |
| EP2003989A1 (en) * | 2006-03-31 | 2008-12-24 | DSMIP Assets B.V. | Process for the hydrolysis of milk proteins |
| WO2008093303A2 (en) | 2007-02-01 | 2008-08-07 | The Iams Company | Method for decreasing inflammation and stress in a mammal using glucose antimetaboltes, avocado or avocado extracts |
| US9771199B2 (en) | 2008-07-07 | 2017-09-26 | Mars, Incorporated | Probiotic supplement, process for making, and packaging |
| US9232813B2 (en) * | 2008-07-07 | 2016-01-12 | The Iams Company | Probiotic supplement, process for making, and packaging |
| MX2011007912A (es) * | 2009-01-27 | 2011-09-06 | Arla Foods Amba | Leche y productos relacionados con la leche con vida de anaquel prolongada y un proceso y una planta de procesamiento de leche para su manufactura. |
| CN102802648A (zh) * | 2009-05-11 | 2012-11-28 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 约氏乳杆菌La1 NCC533(CNCM I-1225)和免疫病症 |
| US10104903B2 (en) | 2009-07-31 | 2018-10-23 | Mars, Incorporated | Animal food and its appearance |
| EP3338565A1 (en) * | 2010-06-04 | 2018-06-27 | N.V. Nutricia | Non-digestible oligosaccharides for oral induction of tolerance against dietary proteins |
| EP2751573B1 (en) * | 2011-09-02 | 2017-11-08 | DH Technologies Development Pte. Ltd. | System and method for the detection of ovalbumin |
| WO2013083140A1 (en) * | 2011-12-07 | 2013-06-13 | N.V. Nutricia | Beta-lactoglobulin peptides for treating cow's milk protein allergy |
| WO2016148562A1 (en) * | 2015-03-18 | 2016-09-22 | N.V. Nutricia | Method for inducing oral tolerance via administration of beta-lactoglobulin derived peptide in combination with probiotic |
| CN105362296A (zh) * | 2015-11-27 | 2016-03-02 | 成都吉氧屋科技有限公司 | 乳酸菌洗鼻液 |
| WO2019212330A1 (en) * | 2018-04-30 | 2019-11-07 | N.V. Nutricia | Formula with a specific beta-lactoglobulin peptide |
| WO2019212329A1 (en) * | 2018-04-30 | 2019-11-07 | N.V. Nutricia | Formula with specific beta-lactoglobulin peptides |
| CN114149486B (zh) * | 2021-05-28 | 2023-05-12 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种抗菌肽mamp-01及其应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE9302855D0 (sv) * | 1993-09-06 | 1993-09-06 | Martin Lindberg | Method and means for producing plasmaproteinase inhibitor binding proteins |
| US5817308A (en) * | 1994-02-14 | 1998-10-06 | University Of Rochester | Tolerogenic fusion proteins of immunoglobulins and methods for inducing and maintaining tolerance |
| AU2149495A (en) * | 1995-04-11 | 1996-10-30 | Nederlandse Organisatie Voor Toegepast- Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno | Method for the construction of vectors for lactic acid bacte ria like lactobacillus such that the bacteria can efficientl y express, secrete and display proteins at the surface |
| FI104465B (fi) | 1995-06-14 | 2000-02-15 | Valio Oy | Proteiinihydrolysaatteja allergioiden hoitamiseksi tai estämiseksi, niiden valmistus ja käyttö |
| GB9518323D0 (en) | 1995-09-07 | 1995-11-08 | Steidler Lothar | Materials and methods relating to the attachment and display of substances on cell surfaces |
| US6100388A (en) * | 1998-03-16 | 2000-08-08 | Biogaia Biologies Ab | Lactobacilli harboring aggregation gene as a vaccine delivery vehicle |
| MY129566A (en) * | 1999-01-19 | 2007-04-30 | Nestle Sa | A hypoallergenic composition containing tolerogenic peptides inducing oral tolerance |
-
2001
- 2001-09-21 JP JP2002529478A patent/JP2004514424A/ja not_active Withdrawn
- 2001-09-21 CZ CZ2003749A patent/CZ2003749A3/cs unknown
- 2001-09-21 SK SK364-2003A patent/SK3642003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-09-21 KR KR10-2003-7003576A patent/KR20030034178A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-09-21 AU AU2056102A patent/AU2056102A/xx active Pending
- 2001-09-21 MX MXPA03001673A patent/MXPA03001673A/es not_active Application Discontinuation
- 2001-09-21 IL IL15428401A patent/IL154284A0/xx unknown
- 2001-09-21 WO PCT/EP2001/010956 patent/WO2002024883A2/en not_active Application Discontinuation
- 2001-09-21 CA CA002420160A patent/CA2420160A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-21 US US10/362,249 patent/US7498162B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-21 RU RU2003112013/13A patent/RU2294366C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-09-21 BR BR0114105-8A patent/BR0114105A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-09-21 EP EP01985270A patent/EP1379635A2/en not_active Withdrawn
- 2001-09-21 CN CNB018162436A patent/CN1246456C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-21 AU AU2002220561A patent/AU2002220561B2/en not_active Ceased
- 2001-09-21 HU HU0302585A patent/HUP0302585A3/hu unknown
- 2001-09-21 NZ NZ524527A patent/NZ524527A/en unknown
- 2001-09-21 PL PL01365246A patent/PL365246A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2001-09-24 AR ARP010104483A patent/AR033574A1/es not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-02-14 ZA ZA200301244A patent/ZA200301244B/en unknown
- 2003-03-13 NO NO20031159A patent/NO20031159L/no unknown
- 2003-03-21 BG BG107657A patent/BG107657A/bg unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20030034178A (ko) | 2003-05-01 |
| RU2294366C2 (ru) | 2007-02-27 |
| NZ524527A (en) | 2005-05-27 |
| SK3642003A3 (en) | 2003-08-05 |
| HUP0302585A3 (en) | 2007-05-02 |
| AU2002220561B2 (en) | 2007-01-11 |
| CA2420160A1 (en) | 2002-03-28 |
| AR033574A1 (es) | 2003-12-26 |
| AU2056102A (en) | 2002-04-02 |
| AU2002220561C1 (en) | 2002-04-02 |
| BG107657A (bg) | 2003-12-31 |
| NO20031159L (no) | 2003-05-20 |
| JP2004514424A (ja) | 2004-05-20 |
| CN1479788A (zh) | 2004-03-03 |
| EP1379635A2 (en) | 2004-01-14 |
| BR0114105A (pt) | 2003-07-29 |
| IL154284A0 (en) | 2003-09-17 |
| HUP0302585A2 (hu) | 2003-10-28 |
| MXPA03001673A (es) | 2003-06-09 |
| NO20031159D0 (no) | 2003-03-13 |
| PL365246A1 (en) | 2004-12-27 |
| WO2002024883A2 (en) | 2002-03-28 |
| US20040071714A1 (en) | 2004-04-15 |
| US7498162B2 (en) | 2009-03-03 |
| CN1246456C (zh) | 2006-03-22 |
| WO2002024883A3 (en) | 2003-11-06 |
| ZA200301244B (en) | 2004-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ2003749A3 (cs) | Kmen bakterií mléčného kvašení, potravinářský výrobek, farmaceutický prostředek a vakcína | |
| AU2002220561A1 (en) | Lactic acid bacteria capable of reducing an individual's tendency to develop allergic reactions | |
| Ouwehand et al. | Probiotics: an overview of beneficial effects | |
| Prioult et al. | Stimulation of interleukin-10 production by acidic β-lactoglobulin-derived peptides hydrolyzed with Lactobacillus paracasei NCC2461 peptidases | |
| AU2002256639B2 (en) | Lactic acid bacteria as agents for treating and preventing allergy | |
| SA08290392B1 (ar) | سلالة جديدة من البكتيريا الشقية وببتيدات فعالة ضد الإصابة بالفيروس العجلي | |
| EP2391641B1 (en) | Lactobacillus rhamnosus pili and pilus polypeptides | |
| AU2002256639A1 (en) | Lactic acid bacteria as agents for treating and preventing allergy | |
| Collins et al. | A randomised controlled trial of a probiotic Lactobacillus strain in healthy adults: assessment of its delivery, transit and influence on microbial flora and enteric immunity | |
| De Ambrosini et al. | Immunostimulating activity of cell walls from lactic acid bacteria and related species | |
| US8445426B2 (en) | Peptides and methods for producing them | |
| JP6376417B2 (ja) | 腸管における物質取り込み促進剤 | |
| Deng et al. | Construction and expression of a recombinant plasmid containing the porcine epidemic diarrhea virus S1 gene delivered by Lactobacillus | |
| Kiseleva et al. | Methodological apoproach exemplified by lactococci: optimization of biotechnological processes by means of ELISA via localization of the target biopolymer and selection of duration of culture growth and media composition providing maximum yeald. | |
| Kaya | Molecular cloning, expression and characterization of bile salt hydrolase enzymes from Lactobacillus rhamnosus KPB7 and E9 | |
| Peptidases | Stimulation of Interleukin-10 Production by |