BG100470A

BG100470A - Метод за получаване на дорамектин и противопаразитни междинни съединения

Info

Publication number: BG100470A
Application number: BG100470A
Authority: BG
Inventors: Thomas CRAWFORD; Neil Demers; Stephen GIBSON; Charles Murtiashaw; Constantine Sklavounos
Original assignee: Pfizer Inc.
Priority date: 1993-10-05
Filing date: 1996-04-02
Publication date: 1996-12-31
Also published as: SI9420059A; AP9400678A0; JP2761296B2; ATE185571T1; HU9600875D0; PL177039B1; RU2120943C1; DE69421190D1; CN1202493A; PE20595A1; PL313781A1; UA45957C2; RO115884B1; TW282472B; HUT75344A; CZ96396A3; IL111075A0; CA2173494A1; EP0722453A1; SK45396A3

Abstract

Дорамектинът има формула. По метода съединението се получава от странични продукти при ферментационен процес, като непрекъснато се продухва реакционната среда с инертен газ по време на етапа пиролиза, с което значително се повишава общият добив от превръщането. Междинните съединения, получени по метода, намират приложение и като противопаразитни агенти.

Description

Изобретението се отнася до нови междинни съединения при получаване на съединението с формула (1), дадена по-долу:

• л · · · ··· * ···· • Z · · ·· ······ ···· · • · · · · · ··· ······ · · · · · · · означавано по-нататък като дорамектин и до подобрени методи за получаване на споменатите междинни съединения. Изобретението се отнася също така и до приложението на самите споменати междинни съединения като противо-паразитни такива. Освен това, изобретението се отнася и до подобрен метод за получаване на дорамектин от съединения с формула (II), дадена по-долу:

Z*'

W'

(II)

ПРЕДШЕСТВУВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА

Дорамектинът е противопаразитен и противоглистен агент с широк спектър на действие, принадлежащ към класа на вторичните метаболити, известни като

5,089,480, който е даден тук като ползувана литература. Друг щам на авермектин продуциращи микроорганизми е Streptomyces avermitilis ATСС 53568, който е описан от Dutton et al., Journal of Antibiotics, 44, 357 - 65 (1991). Щамовете Streptomyces avermitilis ATCC 31267,31271,31272 и 53568 са депозирани в American Type Culture Collection, 12301 авермектини. Дорамектин може да се получи чрез ферментация на авермектин продуциращи щамове на микроорганизмите Streptomyces avermitilis като ATCC 31267,

31271 или 31272 в аеробни условия, във водна хранителна среда, съдържаща неорганични соли и усвоими източници на въглерод и азот, както е описано в Патент на САЩ No.

·· ··· · · · · • · · · · · ··· • · · ··· · · · · · • · · · ······ ·· · · • « · · · ··· ······ ·· · ·· ··

Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, U.S.A, съгласно термините на Будапещенското споразумение. (Budapest Тreaty)

По време на ферментационния процес, при който се получава съединението с формула (I), дадена по-горе, могат да се изолират различни съпътствуващи продукти. Основният съпътствуващ продукт, който може да се изолира по време на ферментацията на идентифицираните по-горе микроорганизми, притежава структурната формула (II), дадено по-горе. Изолирането на съединението с формула (II) от ферментационната среда на Streptomyces avermitiUs АТСС 53568 е описано от Dutton et al., ibid. Съединението c обща формула (II) е активно противопаразитно и противоглистно съединение, което е

описано и заявено в Патент на САЩ No. 5,089,480. Обаче, дорамектинът е за предпочитане. Методът от представеното изобретение използува съпътствуващият продукт с формула (II), като го превръща в по-ценния противопаразитен агент дорамектин с формула (I).

Основното превръщане при този метод е елиминирането на хидроксилната група при С-23, при което на местата С-22, С-23 в молекулата остава олефин. Докладвани са методи с ниски добиви, при които се извършва същото превръщане при слабо различаващи се авермектини. Например, когато на 25-то място се намира циклохексилна група вместо вторичен бутил, превръщането се постига като се

използуват пет последователни етапа, при общ добив от около 3.6%. Mrozik et al.,

TetrahedmnJ_etiers, 1582, 23, 2377-78. В светлината на тези споменати методи с нисък добив е желателно да се отдели метод, при който да се получи по-ефективно превръщане на изходния материал в дорамектин.

Следователно, цел на представеното изобретение е да даде метод за превръщане на съединение с формула (II) в дорамектин с висок краен добив.

Друга цел на представеното изобретение е да даде полезни междинни съединения

Представеното изобретение дава нови междинни съединения с формула (III):

за този метод.

ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО

•· ·· ··· ·· ·· • · · · · · · ···

в която Fh е (С₂

С₅)алканоил или арилоксиацетил и R₂ е водород или арилокситиокарбонил.

в която R, е (С₂ - Сб)алканоил или арилоксиацетил.

Особено предпочетени съединения от това изобретение са тези съединения с формула (III), в които е (С₂ - С₅)алканоил, феноксиацетил или (С! - С₄)алкил феноксиацетил и R₂ е водород или (С: - С₄)алкилфенокситиокарбонил. Специално предпочетени съединения от тази група са съединенията с формула (III), в която Ri е ацетил или феноксиацетил и R₂ е водород или р-толилокси-тиокарбонил.

Също така, особено предпочетени съединения от представеното изобретение са съединенията с формула (IV), в която Rt е (С₂ - С₅)алканоил, феноксиацетил или С₄)алкилфеноксиацетил. Специално предпочетени съединения от тази група са съединенията с формула (IV), в която Rt е ацетил или феноксиацетил.

По-нататък, изобретението дава метод за получаване на съединение с формула (I):

включващ следните етапи:

(а) взаимодействие на съединение с формула (II):

·· · · ··· ft ·· ···· ··· « · «

c ацилиращ агент c формула (R₄CO)₂O или R₄COX, в която R₄ е арилоксиметил и X е Cl или Вг, за да се получи съединение съгласно формула (III), в която R! е арилоксиацетил и R₂eH;

(б) взаимодействие на споменатото съединение с формула (III), в която R! е арилоксиацетил и R₂ е Н, със съединение с формула R₃OC(=S)X, в която R₃ е арил и X е CI или Вг за получаване на съединение съгласно формула (III), в която R, е арилоксиацетил

и R₂ е арилокситиокарбонил;

(в) взаимодействие на споменатото съединение с формула (III), в която Ri е арилоксиацетил и R₂ е арилокситиокарбонил в среда на инертен разтворител при температура от около 150°С до около 200°С в границите от 2 до около 48 часа, в присъствието на калциев карбонат и при непрекъснато продухване на инертен газ, за да се получи съединението съгласно формула (IV) в която Ri е арилоксиацетил и (д) взаимодействие на споменатото съединение с формула (IV), в която R, е арилоксиацетил с основа в алкохолна среда за получаване на съединението с формула (I).

Особено предпочетен метод при изпълнение на представеното изобретение е методът, при който споменатият инертен газ е азот. Особено предпочетен метод, съгласно представеното изобретение е методът, при който основата е NH₃, КОН, Na₂CO₃,

NaHCO₃ или NaOAc. Още по-предпочетени изпълнения в рамките на предпочетения метод са тези, при които се използуват особено предпочетените съединения от представеното изобретение.

По-нататък, представеното изобретение се отнася до метод за получаване на съединение с формула (I), включващ следните последователни етапи:

(а) взаимодействие на съединение с формула (II) с ацилиращ агент с формула (R₄CO)₂ или R₄COX, в която R₄ е (C_d - С₄)алкил и X е CI или Вг, за да се получи съединението с формула (III), в която Ri е (Ст -С₄)алканоил и R₂ е Н;

(б) взаимодействие на споменатото съединение, в което Rt е (С^ -С₄)алканоил и R₂е Н със съединение с формула R₃OC(=S)X, в която R₃ е арил и X е CI или Вг за получаване на съединение съгласно формула (III), в която R₄ е (С, -С₄)алканоил и R₂ е арилокситиокарбонил;

(в) взаимодействие на споменатото съединение с формвула (III), в която Rt е (Ст С₄)алканоил и R₂ е арилокситиокарбонил в среда на инертен разтворител при температура от около 150°С до около 200°С в границите от около 2 до около 48 часа в присъствието на калциев карбонат при непрекъснато продухване с инертен спрямо реакционната среда газ, за да се получи съединението с формула (IV), в която R! е (С^

С₄)алканоил и (г) взаимодействие на споменатото съединение с формула (IV), в която Ri е (СХ С₄)алканоил с литиево-алуминиев хидрид, натриев цианоборхидрид или литиев триетилборхидрид в среда на инертен разтворител за получаване на съединението с формула (I).

Особено предпочетено изпълнение в рамките на представения метод, е това, при което инертния газ е азот. Още по-предпочетени изпълнения в рамките на предпочетения метод са тези, при които се използуват особено предпочетените съединения от представеното изобретение.

• · • ·

Освен това, изобретението дава метод за лечение на млекопитаещи, страдащи от болести причинени от паразити, включващ приемане от споменатите млекопитаещи на противопаразитно ефективно количество от съединенията с формула (III) или (IV).

Съединенията от представеното изобретение се получават лесно съгласно метода от това изобретение, който е описан подробно по-долу.

Съединението с формула (I) от представеното изобретение е дорамектин, полезен противопаразитен и противоглистен агент, който е описан в Патент на САЩ No.

5,089,480, включен като литературна справка. Дорамектинът се получава от съединението с формула (IV), дадена по-горе в представеното изобретение, при

взаимодействието на споменатото съединение с формула (IV) с литиево-алуминиев хидрид, натриев цианоборхидрид или литиев триетилборхидрид или чрез осапунване на естера, в зависимост от природата на естера, който трябва да се отцепи.

В случая, когато е (С₂ - С₅)алканоил, (С₂ - С₅)алканоилокси групата се превръща в хидроксилна група при реакция на споменатото съединение с формула (IV) в която е (С₂ - С₅)алканоил, с литиево-алуминиев хидрид, натриев цианоборхидрид или литиев триетилборхидрид в среда на инертен разтворител, при температура от около -100°С до 0°С, в границите от 15 минути до около 24 часа. Подходящите реакционни инертни разтворители за тази реакция ще зависят от избора на редуциращ агент и ще бъдат

подбрани, но без това да бъде ограничение, измежду такива разтворители като диетилов етер, диоксан, тетрахидрофуран, 2-метоксиметилов етер и 1,2-диметоксиетан. Особено предпочетен редуктор при тази реакция е литиевият триетилборхидрид, а особено предпочетен разтворител е тетрахидрофуранът. Обикновено по време на смесването на реагента със субстрата температурата се поддържа между -78°С и -70°С и то за кратко време, обикновено в границите от 15 минути до около 1 час след това. Малко след като смесването е приключило, обикновено 15 минути до 1 час, температурата се оставя да се повиши до стайна. Реакционната смес се закалява и продуктът с формула (I) се изолира съгласно традиционните известни процедури.

В случай, че е арилоксиацетил, арилоксиацетилокси групата се превръща в хидроксилна група при взаимодействието на споменатото съединение с формула (IV), в която Rt е арилоксиацетил, с хидрооксис на алкален метал в алкохолен разтворител при температура от около -75°С до около 0°С в границите от около 15 минути до около 24 часа. Особено предпочетен хидроокис на алкален метал е калиевият хидроокис и особено предпочетен разтворител е метанолът. Обикновено реакцията се провежда при температура -35°С в продължение на около 1 час, след което съединението с формула (I) се изолира съгласно известните стандартни процедури. Респективно, тази реакция може да се извърши като алкалният хидроокис се замени с амоняк. В случаите, когато се

използува амоняк, реакцията се провежда при температури от около -35°С до около 0°С в границите от около 1 до около 16 часа. За предпочитане е реакцията да се извършва в метанол при -15°С за около пет до шест часа. Полученото съединение с формула (I) се изолира съгласно добре познатите в органичната химия стандартни процедури.

Съединенията с формула (IV) от представеното изобретение се получават лесно съгласно метода от това изобретение, като се осъществи взаимодействие на съединение с формула (III) от изобретението във висококипящи разтворители, каквито са, без ограничение, 2-метоксиетилов етер или 2-етоксиетилов етер при температура в границите от около 150°С до около 200°С, в продължение на 2 до около 48 часа. За да се

получи максимален добив, реакционната смес се продухва непрекъснато с инертен газ, като например азот или аргон. Особено препоръчително е провеждането на реакцията при температура 156°С-158°С в 2-метоксиетилов етер при непрекъснато продухване с азот в продължение на 12 часа. Когато реакцията приключи, продуктът - съединението с формула (IV) се изолира съгласно известните стандартни методи.

Съединенията с формула (III) от представеното изобретение, в което R₂ е арилокситиокарбонил, се получават съгласно метода от това изобретение при взаимодействие на съединение с формула (III) от представеното изобретение, в която R₂ е водород, с халогентионоформиат с формула R₃OC(=S)X, където R₃ е както дефинираното по-горе, в среда на инертен разтворител, в присъствието на протонен

акцептор, като пиридин или 4-диметиламинопиридин за време в границите от около 30 минути до около 12 часа. Подходящите инертни разтворители за тази реакция включват етилацетат, 1,2-диметоксиетан, 2-метоксиметилов етер, 2-метоксиетилов етер, ароматни разтворители като толуол, ксилол и бензол и хлор-съдържащи разтворители като хлороформ и метиленхлорид. Предпочетени разтворители за тази реакция са етилацетат или толуол. За препоръчване е времето на реакцията да бъде от 2 до 4 часа. Реакционната смес се нагрява от около 40°С до температурата на кипене на избрания разтворител под обратен хладник. Реакционната смес се закалява и продуктът съединението с формула (III), в която R₂ е арилокситиокарбонил се изолира съгласно

стандартните методи.

Съединенията с формула (III) от представеното изобретение, в която R₂ е водород и е (С₂ - С₅)алканоил или арилоксиацетил се получават лесно съгласно метода от това изобретение. Съединението с формула (II) от изобретението взаимодействува с ацилиращ агент в среда на инертен разтворител в присъствието на протонен акцептор, като пиридин, 4-диметил-аминопиридин, пиперидин, пиролидин, триетиламин, морфолин или диизопропилетиламин, без това да ги ограничава, при температура от около -75°С до около 0°С в границите от 5 минути до около 8 часа. Подходящите инертни разтворители за тази реакция включват ароматни разтворители като толуол, бензол или ксилол или

хлор-съдържащи разтворители като метиленхлорид, хлороформ или 1,2-дихлоретан. Подходящи ацилиращи агенти са или киселинни халиди, обикновено киселинни хлориди или киселинни анхидриди. Когато е използуван киселинен хлорид като ацилиращ агент при тази реакция, особено предпочетен органичен амин е пиридинът. Когато като ацилиращ агент се използува киселинен анхидрид, особено предпочетен органичен амин е триетиламинът. Общо взето, предпочетени разтворители за тези реакции, независимо дали е използуван киселинан хлорид или киселинен анхидрид като ацилиращи агенти, са хлор-съдържащите разтворители. Особено предпочетен е метиленхлоридът. Когато реакцията приключи, реакционната смес се закалява и продуктът - съединението с формула (III) в която R₂

е водород и Ft! е (С₂ - С₅)алканоил или арилоксиацетил, се изолира съгласно стандартните познати методи в органичната химия.

Съединенията с формула (II) могат да бъдат изолирани чрез ферментация на авермектин проциращ щам на Streptomyces avermitilis, като АТСС 31267,31271 или 31272, както е описано в Патент на САЩ No. 5,089,480. Други методи за получаване на съединенията с формула (II) включват изолирането от ферментационната среда на Streptomyces avermitilis АТСС 53568, както е описано от Dutton et al., Journal of Antibiotics, 44, 357-65 (1991).

Новите съединения (III) - (IV) от представеното изобретение са полезни като

междинни съединения при синтеза на съединението с формула (I) - дорамектин, излизайки от съединението с формула (II).

Новите съединения (III) - (IV) от представеното съединение са също така полезни като противопаразитни агенти. Ползата от споменатите съединения (III) - (IV) като противопаразитни агенти е демонстрирана чрез активността им in vivo в модел, описан от Gration et al., Veterinary Parasitology, 42,1992,273 - 279.

Съединенията c формули (III) и (IV) са силно активни противопаразитни агенти, притежаващи подчертано действие като противоглистни, против ектопаразити, като инсектициди и акарициди.

Съединенията с формули (III) и (IV) са ефективни при лечението и профилактиката на голям брой състояния, предизвикани от ендопаразити, включващи, по-точно, хелминтиаза, която най-често се предизвиква от група паразитни червеи, означени като нематоди и които могат да предизвикат тежки икономически загуби при свине, овце, коне и едър рогат добитък, както и да засегнат домашните животни и птиците. Дорамектинът е също така ефикасен спрямо други нематоди, които засягат различни животни, включително, например Dirofilaria при кучета и спрямо различни паразити като Ancylostoma, Necator, Ascaris, Strongyloides, Trichinella, Capillaria, Trichuris, Enterobius и спрямо паразити, които са открити в кръвта или в други тъкани и органи, например филариоални глисти и екстратестинални стадии на Strongyloides и Trichinella.

·· ·· ··· · · ·· ···· · · · ··· •· · ··· · ···· • 12· · ·· ·····♦ ♦·· · · ··· · · · ··· ·· · · · · ·· · ·· ··

Съединенията с формули (III) и (IV) са също така от значение при лечението и профилактиката на ектопаразитни инфекции, включително артроподни ектопаразити при животните и птиците като кърлежи, червейчета, въшки, бълхи, мухи-месарки, хапещи насекоми, движещи се двукрили ларви, които могат да засегнат говедата и конете.

Съединенията с формули (III) и (IV) са също така активни инсектициди спрямо домашни вредни насекоми като хлебарки, молци и домашни мухи, както и спрямо насекоми, развъждащи се в складирани зърнени продукти и селскостопански вредители като гъсеници, паяци, листни въшки, както и спрямо мигриращи правокрили като скакалци.

Съединенията с формули (III) и (IV) се приемат като лекарствено средство подходящо приготвено във връзка със специфичното приложение и в зависимост от вида на животното-гостопиемник, което ще се лекува и вида на самия паразит. За използуване като противоглистно средство, съединението може да се приема орално под формата на капсула, болус, таблета или, за предпочитане в течна форма, но може да се приема и чрез инжектиране, обливане или като имплантат. Тези лекарствени средства се приготвят по традиционните техники, съгласно стандартната ветеринарна практика. Така например, капсулите, болусите или таблетите могат да се приготвят чрез смесване на активната съставка с подходящ финораздробен разредител или носител, като могат да съдържат допълнително и дезинтегриращ агент и/или свързващо вещество, като нишесте, лактоза, талк, магнезиев стеарат и др. Течната лекарствена форма може да бъде приготвена чрез диспергиране на активната съставка във воден разтвор заедно с диспергиращи, омокрящи агенти и др., а разтворите за инжектиране могат да бъдат приготвени под формата на стерилен разтвор, който да съдържа и други субстанции, например достатъчно соли или глюкоза, за да бъде разтворът изотоничен с кръвта. Тези лекарствени форми ще се различават по отношение теглото на активната съставка, в зависимост от вида на животното-гостоприемник, което ще се обработва, сериозността и типа на инфекцията и живото тегло на самото животно. Обикновено за орално приемане или приемане с инжекции, количество от около 0,001 до 10 мг/кг живо тегло, ·, · · · · · · • 13· · ·· ······ • · · · * · • · ···· ·· · дадено като единична доза или разделено на дози за време от 1 до 5 дни ще бъде задоволително, но разбира се може да има случаи, когато се налагат по-високи или по малки дозировки, които случаи също така влизат в обсега на действие на представеното изобретение. За орално приемане или приемане чрез инжекции по-предпочетеното количество е от около 0,02 до 2 мг/кг живо тегло, дадено като единична доза или разделено на дози за време от 1 до 5 дни.

Като алтернатива, съединенията могат да бъдат приети заедно с фуража и за тази цел може да се направи концентрирана добавка или предварителна смес, която след това да се смеси с нормалното количество фураж.

При използуването като инсектицид или за борба срещу селскостопанските вредители, съединенията се нанасят под формата на спрейове, прахове, емулсии и др.

съгласно стандартната селскостопанска практика.

Така, както е използуван по-горе и в приложените патентни претенции, терминът „среда на инертен разтворител,, означава всеки разтворител, който не влиза във взаимодействие с изходните материали, реагенти, междинни съединения или продукти така, че да повлияе отрицателно върху добива от желания продукт. Терминът „реакционен инертен газ,, означава всеки газ, който не влиза във взаимодействие с изходните материали, реагенти, междинни съединения или продукти така, че да повлияе

отрицателно върху добива от желания продукт.

Така, както е използуван по-горе и в приложените патентни претенции, терминът „арил„ означава фенил или фенил, евентуално заместен с един до три заместителя (С^ С₄)алкил, (С-| - С₄)алкокси или халоген.

Така, както е използуван по-горе и в приложените патентни претенции, терминът „арилокси,, означава фенокси или фенокси, евентуално заместен с един до три заместителя (С₄ - С₄)алкил, (Ci - С₄)алкокси или халоген.

Представеното изобретение е илюстрирано с дадените поОдолу примери. Но трябва да се разбира, че изобретението не е ограничено до специфичните детайли на тези примери.

• · ·· · • · · · · ·· • · · · · ·· • 14· · ······· • · · · ·· •· ···· ·· ·

ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО

ПРИМЕР 1

Съединението с формула (III), в която

R₁ е феноксиаиетил и R₂ е водород

Разтвор на 20 г от съединението с формула (II) в 400 мл метиленхлорид и 10 мл безводен пиридин под азот се охлажда до -78°С и в продължение на 10 минути се прибавят на капки 15,1 мл феноксиацетилхлорид. Реакционната смес се задържа при 70°С до -78°С в продължение на 1,5 часа и след това се закалява с 250 мл наситен разтвор на натриев бикарбонат. Сместа се разбърква в продължение на 1,5 часа,

органичният слой се отделя, реекстрахира сес 250 мл наситен разтвор на натриев бикарбонат и се суши върху безводен MgSO₄. След това разтворителят се отстранява под вакуум, за да се получат 25,7 г от продукта от заглавието с 97% чистота под формата на белезникаво твърдо вещество (96% добив). Времето на задържане при HPLC е 7,9 минути (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода

559:383:58; 1,5 мл/мин; УВ 245 нм).

ПРИМЕР 2

Съединението с формула (III), в която

Ri е феноксиаиетил и R₂ е р-толилокситиокарбонил

Разтвор на 10 г от съединението от Пример 1 в 100 мл толуол и 30 мл безводен пиридин под азот се нагрява до 100°С и в продължение на 5 минути се прибавят 7,7 мл О р-толилхлоротионоформиат. Сместа се задържа при температура 100 ± 5°С в продължение на 2 часа за приключване на реакцията, охлажда се до около 50°С и разтворителите се отстраняват под вакуум за получаването на кафяв остатък. Той се разтваря в 120 мл толуол, разтворът се екстрахира с 120 мл вода и двукратно с 100 мл наситен разтвор на натриев бикарбонат. Отделеният органичен слой се кондензира до около 80 мл, филтрува се и се хроматографира, като се използува система Ргер-500 (Waters Associates), снабдена с две касети силикагел. Елюентът е хексан:етилацетат

75:25. Фракциите, съдържащи продукта се събират и разтворителят се отстранява под • · · · · · • , · · · ··· · ···· • 15· · ·· ······ · · · · · • · · ··· ··· ······ ·· е ·· ·· вакуум за получаването на 9,8 г продукт с чистота 95,7% във вид на жълтокафяво твърдо вещество (83,2% добив). Време на задържане при HPLC е 15,2 минути (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 559:383:58; 1,5 мл/мин; УВ 245 нм).

ПРИМЕР 3

5,4“-О-дифеноксиацетил-дорамектин (съединение с формула IV, в която R₄ е феноксиацетил)

Към разтвор на 8,5 г от съединението от заглавието на Пример 2 в 90 мл 2 метоксиетилетер се прибавят 4,5 г калциев карбонат. След това сместа се нагрява до 156

- 158°С при интензивно разбъркване и непрекъснато продухване с поток азот. След 24 часа при 156 - 158°С анализът на сместа показва присъствието на 6,68 г продукт (90% добив). След филтруване на сместа, разтворителят се изпарява под вакуум за получаването на продукта във вид на жълта смолеста маса. Времето на задържане при HPLC е 10,4 минути (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 559:383:58; 1,5 мл/мин; У В 245 нм).

ПРИМЕР 4

5,4“-О-дифеноксиацетил-дорамектин

(съединение с формула IV, в която R₁ е феноксиацетил)

Към разтвор на 1 г от съединението от заглавието на Пример 2 в 20 мл 2етоксиетилетер се прибавят 500 мг калциев карбонат. След това сместа се нагрява до

185°С при интензивно разбъркване и непрекъснато продухване с поток азот. След 5 часа при 185°С сместа се темперира до стайна температура и се филтрува. HPLC-анализът на разтвора (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода

559:383:58; 1,5 мл/мин; У В 245 нм) показва присъствието на 796 мг продукт (91%).

ПРИМЕР 5

Дорамектин (съединение с формула (I))

Разтвор на 500 мг от съединението от заглавието на Пример 3 в 1 мл 2метоксиетилетер и 3,5 мл метанол се охлажда до -35°С и се прибавят на капки, в продължение на 1 минута, 2,1 мл 2М метанолов разтвор на КОН. Сместа се поддържа при -35°С при интензивно разбъркване в продължение на 1 час за завършване на реакцията и след това се прибавят 252 мг ледена оцетна киселина, разтворена в 0,5 мл метанол. Охлаждането се прекъсва и се прибавят 2,2 мл вода, на капки, в продължение на 1 час, при което започва кристализация. След разбъркване при стайна температура в продължение на 1 час, кристалите се събират с филтруване, промиват се с две порции по 0,5 мл метанол:вода 7:3 и се сушат във вакуумна сушилна. Прекристализацията из метанол/вода дава 272 мг продукт с чистота 93,8% (70,6% добив). Времето на задържане при HPLC е 6,5 минути (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 860:51:89; 1,5 мл/мин; УВ 245 нм).

ПРИМЕР 6

Дорамектин (съединение с формула (I))

Към разтвор на 6,6 г(?) от съединението от Пример 3 в 75 мл метанол, охладен до -

15°С се прибавят 75 мл наситен разтвор на амоняк в метанол. Сместа се задържа при 15°С в продължение на 5,5 часа за завършване на реакцията и след това се продухва с азот в продължение на 30 минути. Летливите съставки се отделят под вакуум, полученото светложълто масло се разтваря в 45 мл метанол и разтворът се избистря с филтруване.

Към този разтвор се прибавят на капки, 5 мл вода, при което започва кристализация.

Сместа се разбърква при стайна температура в продължение на 2 часа, след което, в продължение на 2,5 часа се прибавят 6,3 мл вода. След допълнително разбъркване в продължение на 1,5 часа, твърдата фаза се събира с филтруване и се промива двукратно с по 2,5 мл метанол:вода (7:3). След сушене във вакуумна сушилна при стайна температура в продължение на 24 часа, се получават 3,75 г продукт с чистота 87,7% (добив 64%).

ПРИМЕР 7

Съединението с формула (III)

Към разтвор на 20 г от съединението с формула (II) в 200 мл метиленхлорид се прибавят под азот 28,6 г триетиламин и 1,06 г 4-диметиламинопиридин. Разтворът се охлажда от -5°С до 0°С и в продължение на 5 минути се прибавят, на малки порции, 14,5 г ацетанхидрид. Сместа се подържа при 0°С в продължение на 20 минути за завършване на реакцията и след това се закалява при 0°С с 200 мл наситен разтвор на натриев бикарбонат. Органичният слой се реекстрахира двукратно с наситен разтвор на натриев бикарбонат, суши се (MgSO₄) и разтворителят се отстранява под вакуум за получаването на 22,2 г продукт с чистота 95% във вид на бяла твърда маса (96,7% добив). Времето на задържане при HPLC е 6,6 минути (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 902:36:62; 1,0 мл/мин; УВ 245 нм).

ПРИМЕР 8

Съединението с формула (III)

Към суспензия на 5 г от съединението с формула (II) в 100 мл толуол се прибавят под азот 7,24 г триетиламин и 266 мг 4-диметиламинопиридин. Сместа се охлажда до

15°С и се прибавя, на порции 3,58 г ацетанхидрид, в продължение на 5 минути. Сместа се разбърква при -10°С до -15°С в продължение на 30 минути до завършване на реакцията, закалява се с 50 мл наситен воден разтвор на натриев бикарбонат и се разбърква при стайна температура в продължение на 1 час. Органичният слой се реекстрахира двукратно с по 50 мл наситен воден разтвор на натриев бикарбонат и се суши чрез частично дестилиране на разтворителя с апарат на Dean-Stark. Разтворът се анализира с

HPLC (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода

902:36:62; 1,0 мл/мин; УВ 245 нм), при което се установява наличието на 5,27 г продукт (96,5% добив).

ПРИМЕР 9

Съединението с формула (III),в която

Ri е аиетил и R₂ е Р-толилокситиокарбонил

Към разтвор на 20 г от съединението от заглавието на Пример 7 в 200 мл етилацетат се прибавят под азот 60 мл безводен пиридин, последвано от 22,2 г О-ртолилхлоротионоформиат, при което се получава жълта утайка. Сместа се нагрява под обратен хладник с интензивно разбъркване в продължение на 2 часа до завършване на

реакцията и след това се охлажда до стайна температура. Летливите съставки се отстраняват под вакуум, остатъкът се разпределя между 150 мл етилацетат и 150 мл вода и органичният слой се екстрахира двукратно с наситен воден разтвор на натриев бикарбонат и веднъж с вода. Етилацетатният слой се суши (MgSO₄) и разтворителят се остранява под вакуум. Остатъкът се разтваря в 25 мл етилацетат и 5 мл метиленхлорид, разтворът се избистря чрез филтруване и се хроматографира, като се използува система Prep-500 (Waters Associates), снабдена с две силикагелови касети. Фракциите, съдържащи продукта се събират и разтворителят се отстранява под вакуум за получаването на 19 г (82,6% добив) продукт като светложълта твърда маса. Времето на

задържане при HPLC е 17,1 минути (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 902:36:62; 1,0 мл/мин; УВ 245 нм).

ПРИМЕР 10

5,4“-О-диацетил-дорамектин (съединение с формула IV, в която R₄ е ацетил)

Суспензия на 9,5 г калциев карбонат се нагрява до 156-158°С при непрекъснато продухване с поток азот. Към тази смес се прибавят 18,7 г от съединението от Пример 9;

нагряване, разбъркване и продухване с азот се извършва в продължение на 25 часа.

След охлаждане до 50°С, сместа се филтрува и разтворителят се отстранява под вакуум.

Остатъкът се разтваря в 55 мл метиленхлорид, прибавят се 25 мл етилацетат и 70 мл

хексан, разтворът се филтрува и хроматографира, като се използува система Ргер-500 (Waters Associates), снабдена с две силикагелови касети. Елюентът е хексан:етилацетат:метиленхлорид (70:25:5). фракциите, съдържащи продукта се събират и разтворителят се отстранява под вакуум за получаването на 13,7 г продукт с чистота 87% като жълто твърдо вещество. (74,8% добив). Времето на задържане при HPLC е 11,1 минути (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 902:36:62; 1,0 мл/мин; УВ 245 нм).

ПРИМЕРИ

5,4“-О-диацетил-дорамектин (съединение с формула (IV), в която Rj е ацетил)

Към разтвор на съединението от заглавието от Пример 9 в 25 мл 2-етоксиетилов етер се прибавят 250 мг калциев карбонат. След това сместа се нагрява до 183 - 185°С при интензивно разбъркване и непрекъснато продухване с поток азот. След 1,5 часа при 183 -185°С анализът на сместа показва наличието на 364,4 мг продукт (84,7% добив).

ПРИМЕР 12

Дорамектин (съединение с формула (I)

Към разтвор на 7,3 г от съединението от Пример 10 в 145 мл безводен тетрахидрофуран, охладен до -72°С, се прибавят под азотна атмосфера, на капки, 59,5 мл 1,0М разтвор на литиев триетилборхидрид в тетрахидрофуран, в продължение на 45 минути. Реакционната смес се разбърква при -72°С до -70°С в продължение на 1 час и след това се темперира бавно до стайна температура за завършване на реакцията. След това сместа се закалява с 75 мл вода и 75 метиленхлорид и се разбърква още 1 час. Слоевете се разделят, водният слой се екстрахира с 75 мл метиленхлорид и събраните органични слоеве се промиват двукратно с 75 мл наситен воден разтвор на натриев бикарбонат. Разтворителите се изпаряват под вакуум, остатъкът се разтваря в 54 мл метанол и разтворът се избистря чрез филтруване. Към този разтвор се прибавят, в продължение на 20 минути и на капки 6,9 мл вода, при което започва кристализация. Сместа се разбърква при стайна температура в продължение на 15 минути, след което се прибавят 6,2 мл вода в продължение на 30 минути и на капки. Сместа се разбърква 18 часа, твърдата фаза се събира с филтруване, промива се двукратно с по 2 мл смес метанол:вода (75:25) и се суши във вакуумна сушилна за получаването на 4,27 г от продукта с чистота 89,5% (57,3% добив).

ПРИМЕР 13

Влияние на продухването с азот върху реакцията на термично елиминиране

Към разтвор на 5,3 г от съединението от Пример 2 в 55 мл 2-метоксиетилов етер се прибавят 2,5 г калциев карбонат. След това сместа се нагрява до 157°С при интензивно

разбъркване, като се продухва непрекъснато азот през газова тръбичка. След 30 часа при температура 154-157°С сместа се оставя да се темперира до стайна температура, филтрува се и се анализира с HPLC (Ultrasphere ODS 5 мкм, 25 см х 4,6 мм (Beckman); метанол:ацетонитрил:вода 559:383:58; 1,5 мл/мин; УВ 245 нм). Анализът показва наличието на 3,93 г 5,4“-О-дифеноксиацетил-дорамектин (84,8% добив).

Примерът се повтаря при същите условия, включително използуването на същото количество от съединението от Пример 2, но без продухване с азот. Добивът от продукта в този случай е 47,5%, което показва благоприятният ефект от продухването с азот.

Claims

1. Съединение съгласно формула (III):

в която:

FT е (С₂ - С₅)алканоил или арилоксиацетил и

R₂ е водород или арилокситиокарбонил.

2. Съединение, съгласно претенция 1, в което R, е (С₂ - С₅)алканоил, феноксиацетил или (Ci - С₄)алкилфеноксиацетил и R₂ е водород или (С₁ - С₄)алкил фенокситиокарбонил.

3, Съединение, съгласно претенция 2, в което R! е С₆Н₅ОСН₂С(=О)-.

4. Съединението, съгласно претенция 3, в което R₂e водород.

5. Съединението, съгласно претенция 3, в което R₂ е p-CH₃-C₆H₅OC(=S)-.

6. Съединение, съгласно претенция 2, в което R! е СН₃С(=О)-.

7. Съединението, съгласно претенция 6, в което R₂ е водород.

8. Съединението, съгласно претенция 6, в което R₂ е p-CH₃-C_eH₅OC(=S)-.

• ·

9. Съединение, съгласно формула (IV):

в която Rf е (С₂ - С₅)алканоил или арилоксиацетил.

10. Съединениие, съгласно претенция 9, в което Rf е (С₂ - С₅)алканоил, феноксиацетил или (Cf - С₄)алкилфеноксиацетил.

11. Съединението, съгласно претенция 10, в което Rj е СН₃С(=О)-.

12. Съединението, съгласно претенция 10, в което Rf е С₆Н₅ОСН₂С(=О)-.

13. Метод за получаване на съединение с формула (I):

характеризиращ се с това, че включва следните последователни етапи:

(II)

......... ,,·· · с ацилиращ агент с формула (R₄CO)₂O или R₄COX, в която R₄ е арилоксиметил и X е CI или Вг, за да се получи съединение съгласно формула (III):

в която R, е арилоксиацетил и R₂ е водород;

(б) взаимодействие на споменатото съединение с формула (III), в която Ri е арилоксиацетил и R₂ е водород, със съединение с формула R₃OC(=S)X, в която R₃е арил и X е CI или Вг, за да се получи съединение съгласно обща формула (III), в която R! е арилоксиацетил и R₂ е арилокситиокарбонил;

(в) взаимодействие на споменатото съединение с формула (III), в която Ri е арилоксиацетил и R₂ е арилокситиокарбонил в среда на инертен разтворител при температура от около 150°С до около 200°С в границите от 2 до около 48 часа в присъствието на калциев карбонат, при непрекъснато продухване с инертен спрямо реакцията газ, за да се получи съединение с формула (IV):

в което R, е арилоксиацетил и (г) взаимодействие на съединението с формула (IV), в която Ri е арилоксиацетил с основа в алкохолна реакционна среда, за да се получи съединението съгласно формула (I).

14. Метод, съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че реакционният инертен газ е азот.

15. Метод, съгласно претенция 14, характеризиращ се с това, че основата е NH₃, КОН, KCN, Na₂CO₃, NaHCO₃ или NaOAc.

16. Метод за получаване на съединение с формула (I):

• · характеризиращ се с това, че включва следните последователни етапи:

(П) • · • ·

7:

с ацилиращ агент с формула (R₄CO)₂O или R₄COX, в която Ff₄*e (Ci - С₄)алкил и X е

CI или Вг, за да се получи съединение съгласно формула (III):

в която Ri е (Ci - С₄)алканоил и R₂ е водород;

(б) взаимодействие на споменатото съединение с формула (III), в която Ri е (Ci - С₄)алканоил и R₂ е водород, със съединение с формула R₃OC(=S)X, в която R₃е арил и X е CI или Вг, за да се получи съединение, съгласно формула (III), в която

Ri е (Ci - С₄)алканоил и R₂ е арилокситиокарбонил;

(в) взаимодействие на споменатото съединение с формула (III), в която Ri е (Ci - С₄)алканоил и R₂ е арилокситиокарбонил в среда на инертен разтворител при температура от около 150°С до около 200°С в продължение на около 2 до около 48 часа, в присъствието на калциев карбонат при непрекъснато продухване на инертен газ за получаване на съединение, съгласно формула (IV):

в която е (Ci - С₄)алканоил и (г) взаимодействие на споменатото съединение с формула (IV), в която R, е (Ст - С₄)алканоил с литиево-алуминиев хидрид, натриев цианоборхидрид или литиев триетилборхидрид в среда на инертен разтворител, за да се получи съединението, съгласно формула (I).

17. Метод, съгласно претенция 16, характеризиращ се с това, че инертния газ е азот.

18. Метод, съгласно претенция 17, характеризиращ се с това, че включва взаимодействие на споменатото съединение с формула (IV), в която Ri е (Ci С₄)алканоил с литиев триетилборхидрид.

19. Метод, съгласно претенция 18, характеризиращ се с това, че включва смесване на споменатото съединение с формула (IV), в която Ri е (Ci С₄)алканоил със споменатия литиев триетилборхидрид при температура от -78°С до -70°С, като споменатата температура се поддържа при -78°С до -70°С в продължение на 15 минути до 1 час, след което споменатата температура се довежда до стайна.

20. Метод за получаване на съединение с формула (IV):

в която Rt е (С₂ - С₅)-алканоил или арилоксиацетил, характеризиращ се с това, че включва взаимодействие на съединение с формула (III):

в която R, е (С₂ - С₅)алканоил или арилоксиацетил и R₂ е арилокситиокарбонил в среда на инертен разтворител при температура от около 150°С до около 200°С в продължение на 2 до около 48 часа в присъствието на калциев карбонат, при непрекъснато продухване с инертен спрямо реакцията газ.

21. Метод, съгласно претенция 20, характеризиращ се с това, че инертният газ е азот.

22. Метод за лечение на млекопитаещи, страдащи от паразитно заболяване или заболявания, характеризиращ се с това, че включва приемането от споменатите млекопитаещи на противопаразитно ефективно количество от съединение, съгласно претенция 1.

23. Метод за лечение на млекопитаещи, страдащи от паразитно заболяване или заболявания, характеризиращ се с това, че включва приемането от споменатото млекопитаещо на антипаразитно ефективно количество от съединение, съгласно претенция 9.