CZ287404B6

CZ287404B6 - Process for preparing doramectin

Info

Publication number: CZ287404B6
Application number: CZ1996963A
Authority: CZ
Inventors: Thomas C Crawford; Neil Demers; Stephen P Gibson; Charles W Murtiashaw; Constantine Sklavounos
Original assignee: Pfizer
Priority date: 1993-10-05
Filing date: 1994-09-19
Publication date: 2000-11-15
Also published as: GR3032042T3; PE20595A1; DE69421190T2; MA23342A1; KR960704906A; PL313781A1; AP499A; ES2138090T3; JPH08510758A; CN1040113C; CN1060483C; EG20802A; CA2173494C; BG100470A; DZ1816A1; AU7545494A; NO961380D0; FI944623L; SI9420059A; EP0722453B1

Description

Způsob výroby doramektinu

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu výroby doramektinu.

Dosavadní stav techniky

Doramektin je sloučenina, která má strukturu, odpovídající vzorci I

Jedná se o širokospektrální antiparazitické a anthelmintické činidlo, které spadá do třídy sekundárních metabolitů, známých jako avermektiny. Doramektin je možno vyrobit fermentací kmene mikroorganismu Streptomyces avermitilis, produkujícího avermektin, jako je ATCC 31267, 31271 nebo 31272, za aerobních podmínek ve vodném živném médiu, obsahujícím anorganické soli, asimilovatelný zdroj uhlíku a asimilovatelný zdroj dusíku, jak je to popsáno v US patentu č. 5 089 480. Jiný kmen mikroorganismu, produkujícího avermektin, je kmen Streptomyces avermitilis ATCC 53568, který je popsán v publikaci Dutton et al., Journal of Antibiotics 44, 357 až 365 (1991). Kmeny Streptomyces avermitilis ATCC 31267, 31271, 31272 a 53568 jsou uloženy za podmínek Budapešťské dohody v Americké sbírce typových kultur (Američan Type Culture Collection, 12301, Parklawn Drive. Rockville. Maryland, 20552 USA).

Z fermentační směsi, obsahující produkovanou sloučeninu vzorce I, je možno izolovat různé vedlejší produkty. Hlavní vedlejší produkt, který lze izolovat z fermentační směsi, produkované výše uvedenými mikroorganismy, má strukturu, odpovídající výše uvedenému vzorci II. Izolace sloučeniny vzorce II z fermentační půdy, zpracované Streptomyces avermitilis ATCC 53568, je popsána ve výše uvedené publikaci Dutton et al. Sloučenina vzorce II je účinnou antiparazitickou a anthelmintickou sloučeninou, která byla publikována a nárokována v US patentu č. 5 089 480. Doramektinu se však dává přednost.

Při způsobu podle vynálezu se vedlejšího produktu vzorce II používá ke konverzi na cennější antiparazitické činidlo, doramektin, vzorce I.

- 1 CZ 287404 B6

Transformace, k níž při způsobu podle vynálezu dochází, spočívá v eliminaci C-23 hydroxyskupiny za vzniku olefinické vazby v poloze C-22 až C-23 molekuly. Bylo oznámeno, že transformace tohoto typu na strukturně mírně odlišných avermektinech probíhá s nízkými výtěžky. Tak například pokud je místo sek. butylskupiny v poloze C-25 přítomna cyklohexylskupina, dosáhlo se při transformaci za použití pětistupňové reakční sekvence přibližně 3,6 % celkového výtěžku. Ve světle takových nízkých výtěžků, kterých se podle dosavadního stavu techniky dosahuje, uvádějí Mrozik et al. v publikaci Tetrahedron Letters, 1982, 23, 2377 až 2378, že by bylo žádoucí vyvinout způsob, kterým by bylo možno výchozí látku převést na doramektin s vyšší účinností.

Úkolem tohoto vynálezu je vyvinout způsob konverze sloučeniny vzorce II na doramektin s vysokým celkovým výtěžkem. Dalším úkolem tohoto vynálezu je vyvinout užitečné meziprodukty pro tento způsob.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je způsob výroby doramektinu vzorce I

jehož podstata spočívá v tom, že se po sobě provedou následující stupně:

-2CZ 287404 B6

a) sloučenina vzorce II

se nechá reagovat s acylačním činidlem obecného vzorce (R^CO^O nebo R^COX, kde r4 představuje aryloxymethylskupinu nebo alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a X představuje atom chloru nebo bromu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce III

(ΙΙΙ)₍ kde R1 představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a r2 představuje atom vodíku;

b) sloučenina obecného vzorce III, kde R1 představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoyl- skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a R^ představuje atom vodíku, se nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce R3OC(=S)X, kde R^ představuje arylskupinu aX představuje atom chloru nebo bromu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce III, kde R1 představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a R2 představuje aryloxythiokarbonylskupinu;

-3CZ 287404 B6

c) sloučenina obecného vzorce III, kde Rl představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a R² představuje aryloxythiokarbonylskupinu, se nechá reagovat za přítomnosti uhličitanu vápenatého v rozpouštědle, které je inertní vůči této reakci, při teplotě v rozmezí od asi 150 do asi 200 °C po dobu v rozmezí od asi 2 do asi 48 hodin za současného kontinuálního probublávání reakční směsi proudem plynu, který je inertní vůči této reakci, za vzniku sloučeniny obecného vzorce IV

(IV), kde Rl představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku; a

d) štěpením diesterové sloučeniny obecného vzorce IV, kde Rl představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoyl-skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, se výměnou zbytků Rl za vodík regenerují hydroxyskupiny za vzniku doramektinu vzorce I, přičemž když ve sloučenině obecného vzorce IV Rl představuje aryloxyacetylskupinu, provádí se štěpení reakcí s bází v alkoholickém rozpouštědle, a když ve sloučenině obecného vzorce IV Rl představuje alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, provádí se štěpení reakcí shydridem, zvoleným ze souboru, sestávajícího z lithiumaluminiumhydridu, natriumkyanborhydridu a lithiumtriethylborhydridu v rozpouštědle, které je inertní vůči této reakci;

přičemž pod pojmem aryl se rozumí fenylskupina nebo fenylskupina, která je popřípadě substituována 1 až 3 alkylskupinami s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinami s 1 až 4 atomy uhlíku nebo atomy halogenu.

Při výhodných provedeních způsobu podle vynálezu se ve stupni c) jako plynu, který je inertní vůči reakci, používá dusíku;

ve stupni d) jako báze používá amoniaku, hydroxidu draselného, kyanidu draselného, uhličitanu sodného, hydrogenuhličitanu sodného nebo octanu sodného;

ve stupni d) jako hydridu používá lithiumtriethylborhydridu.

Ve stupni d) se zvláště výhodně postupuje tak, že se sloučenina obecného vzorce IV, kde Rl představuje alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, smíchá s lithiumtriethylborhydridem při

-4CZ 287404 B6 teplotě -78 až -70 °C, teplota v tomto rozmezí se udržuje po dobu 15 minut až 1 hodiny a potom se teplota upraví na teplotu okolí.

Ze sloučenin podle vynálezu obecného vzorce III s dává přednost zejména sloučeninám, kde R.1 představuje alkanoylskupinu se 2 až 5 atomy uhlíku, fenoxyacetylskupinu nebo alkylfenoxyacetylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové Části a r2 představuje atom vodíku nebo alkylfenoxythiokarbonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části. Z této skupiny sloučenin se dává přednost zejména sloučeninám obecného vzorce III, kde R^ představuje acetylskupinu nebo fenoxyacetylskupinu a R^ představuje atom vodíku nebo p-tolyloxythiokarbonylskupinu.

Ze sloučenin podle vynálezu obecného vzorce IV se dává přednost zejména sloučeninám, kde R1 představuje alkanoylskupinu se 2 až 5 atomy uhlíku, fenoxyacetylskupinu nebo alkylfenoxyacetylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části. Z této skupiny sloučenin se dává přednost zejména sloučeninám obecného vzorce IV, kde R1 představuje acetylskupinu nebo fenoxyacetylskupinu.

Konkrétní provedení způsobu podle vynálezu jsou podrobněji popsána dále.

Sloučeninou vzorce I je doramektin, což je užitečné antiparazitické a anthelmintické činidlo, popsané v US patentu č. 5 089 480. Tato citace, stejně tak jako výše a dále uvedené citace, jsou v tomto popisu uvedeny náhradou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.

V posledním stupni vzniká doramektin ze sloučeniny vzorce IV reakcí s lithiumaluminiumhydridem, natriumkyanborhydridem nebo lithiumtriethylborhydridem, nebo zmýdelněním jeho esteru v závislosti na druhu štěpeného esteru.

V případě, že R1 představuje alkanoylskupinu se 2 až 5 atomy uhlíku, převádí se alkanoyloxyskupina se 2 až 5 atomy uhlíku na hydroxyskupinu reakcí sloučeniny vzorce IV, kde R1 představuje alkanoylskupinu se 2 až 5 atomy uhlíku, s lithiumaluminiumhydridem, natriumkyanborhydridem nebo lithiumtriethylborhydridem v rozpouštědle, které je inertní vůči této reakci, při teplotě v rozmezí od asi -100 do asi 0 °C po dobu v rozmezí od asi 15 minut do asi 24 hodin. Vhodná rozpouštědla, která jsou inertní vůči této reakci, závisí na volbě redukčního činidla a jako jejich neomezující příklady je možno uvést diethylether, dioxan, tetrahydrofuran, 2methoxymethylether a 1,2-dimethoxyethan. Obzvláště vhodným redukčním činidlem pro tuto reakci je lithiumtriethylborhydrid a obzvláště dobrým rozpouštědlem je tetrahydrofuran.

V průběhu míšení reakčního činidla se substrátem a krátkou dobu po něm (obvykle asi 15 minut až 1 hodinu) se reakční směs udržuje obvykle při teplotě v rozmezí od -78 do -70 °C. Krátce poté, co jsou spolu reakční složky smíchány, obvykle po asi 15 minutách až asi 1 hodině, se nechá teplota pomalu vzrůst na teplotu okolí. Potom se reakční směs rozloží a získaná sloučenina vzorce I se izoluje standardními postupy, které jsou známy odborníkům v tomto oboru.

V případě, že R1 představuje aryloxyacetylskupinu, převádí se aryloxyacetyloxyskupina na hydroxyskupinu reakcí sloučeniny vzorce IV, kde R^ představuje aryloxyacetylskupinu, s hydroxidem alkalického kovu v alkoholickém rozpouštědle při teplotě v rozmezí od asi -75 do asi 0 °C, po dobu v rozmezí od asi 15 minut do asi 24 hodin. Přednostním hydroxidem alkalického kovu je hydroxid draselný a přednostním rozpouštědlem je methanol. Reakce se obvykle provádí po dobu asi 1 hodiny při teplotě -35 °C a poté se sloučenina vzorce I izoluje standardními postupy, které jsou známy odborníkům v tomto oboru. Alternativně lze tuto reakci provést za použití amoniaku místo hydroxidu alkalického kovu. Pokud se používá amoniaku, provádí se tato reakce obvykle při teplotě od asi -35 do asi 0 °C po dobu od asi 1 hodiny do asi 16 hodin. Reakce se přednostně provádí v methanolu při -15 °C po dobu od asi 5 do asi 6 hodin. Potom se získaná sloučenina vzorce I izoluje standardními postupy, které jsou známy odborníkům v tomto oboru.

-5CZ 287404 B6

Sloučeniny obecného vzorce IV se snadno připravují způsobem, při němž se sloučenina obecného vzorce III podle vynálezu nechá reagovat ve vysokovroucím rozpouštědle při teplotě v rozmezí od asi 150 do asi 200 °C po dobu v rozmezí od asi 2 do asi 48 hodin. Jako neomezující příklady vysokovroucích rozpouštědel je možno uvést 2-methoxyethylether a 2ethoxyethylether. Pro dosažení maximálního výtěžku se reakční směs kontinuálně probublává plynem, který je inertní vůči této reakci, jako je dusík nebo argon. Obzvláště výhodně se tato reakce provádí při teplotě 156 až 158 °C v 2-methoxyethyletheru za současného kontinuálního probublávání reakční směsi dusíkem po dobu 12 hodin. Potom se získaná sloučenina vzorce IV izoluje standardními postupy, které jsou známy odborníkům v tomto oboru.

Sloučeniny obecného vzorce III, kde představuje aryloxythiokarbonylskupinu, se připravují podle vynálezu reakcí sloučeniny obecného vzorce III, kde R2 představuje atom vodíku, s halogenthionoformiátem obecného vzorce R^OC(=S)X, kde R^ má výše uvedený význam, v rozpouštědle, které je inertní vůči této reakci, za přítomnosti lapače protonů, jako je pyridin nebo 4-dimethylaminopyridin, po dobu od asi 30 minut do asi 12 hodin. Jako vhodná rozpouštědla, inertní vůči této reakci, je možno uvést ethylacetát, 1,2-dimethoxyethan, 2methoxymethylether, 2-methoxyethylether, aromatická rozpouštědla, jako je toluen, xylen a benzen, a chlorovaná rozpouštědla, jako je chloroform a methylenchlorid. Jako přednostní rozpouštědla pro tuto reakci je možno uvést ethylacetát a toluen. Reakce se přednostně provádí po dobu do asi 2 do asi 4 hodin. Reakční směs se zahřívá na teplotu od 40 °C až do asi teploty zpětného toku rozpouštědla, zvoleného ke konkrétnímu provedení reakce. Potom se reakční směs rozloží a získaná sloučenina vzorce III, kde R^ představuje aryloxythiokarbonylskupinu, se izoluje standardními metodami.

Sloučeniny obecného vzorce III, kde R^ představuje atom vodíku a R1 představuje alkanoylskupinu se 2 až 5 atomy uhlíku nebo aiyloxyacetylskupinu, se také snadno připravují způsobem podle vynálezu. Přitom se sloučenina vzorce II nechá reagovat s acylačním činidlem v rozpouštědle, které je inertní vůči této reakci, za přítomnosti lapače protonů při teplotě od asi -75 do asi 0 °C po dobu od asi 5 minut od asi 8 hodin. Jako neomezující příklady lapačů protonů (sloučenin zachycujících protony) je možno uvést pyridin, 4-dimethylaminopyridin, piperidin, pyrrolidin, triethylamin, morfolin nebo diizopropylethylamin. Jako rozpouštědla, která jsou inertní vůči této reakci, je možno uvést aromatická rozpouštědla, jako je toluen, benzen nebo xylen, nebo chlorovaná rozpouštědla, jako je methylenchlorid, chloroform nebo 1,2-dichlorethan. Jako vhodná acylační činidla je možno uvést halogenidy kyselin, obvykle chloridy kyselin nebo anhydridy kyselin. Když se jako acylačního činidla při této reakci používá chloridu kyseliny, je přednostním organickým aminem zejména pyridin. Když se jako acylačního činidla při této reakci používá anhydridů kyseliny, je přednostním organickým aminem zejména triethylamin. Ať již se použije jako acylačního činidla chloridu kyseliny nebo anhydridů kyseliny, dává se jako rozpouštědlům přednost obvykle chlorovaným rozpouštědlům. Obzvláštní přednost se dává methylenchloridu. Po dokončení reakce se reakční směs rozloží a vyrobená sloučenina vzorce III, kde R^ představuje atom vodíku a R^ představuje alkanoylskupinu se 2 až 5 atomy uhlíku nebo aryloxyacetylskupinu, se izoluje standardními postupy organické chemie.

Sloučeninu vzorce II je možno izolovat z fermentační směsi, získané fermentací kmene Streptomyces avermitilis, produkujícího avermektin, jako jsou kmeny ATCC 31267, 31271 a 31272, které jsou popsány v US patentu č. 5 089 480. Dále je možno sloučeninu vzorce II izolovat z fermentační směsi, získané fermentací kmene Streptomyces avermitilis ATCC 53568, jak je to popsáno v publikaci Dutton et al., Joumal of Antibiotics 44, 356 až 365 (1991).

Sloučeniny vzorce III a IV jsou nové a jsou také užitečné jako antiparazitická činidla. Užitečnost sloučenin vzorce III a IV jako antiparazitických činidel lze demonstrovat účinností těchto

-6CZ 287404 B6 sloučenin při modelové zkoušce in vivo na hlodavcích, popsané v Gration et al., Veterinary Parasitology 42,1992,273 až 279.

Pod označením rozpouštědlo, které je inertní vůči reakci se v tomto popisu a připojených nárocích rozumí jakékoliv rozpouštědlo, které nereaguje s výchozími látkami, reakčními činidly, meziprodukty nebo produkty způsobem, který by nepříznivě ovlivnil výtěžek požadovaného produktu. Pod označením plyn, který je inertní vůči reakci se v tomto popisu a připojených nárocích rozumí jakýkoliv plyn, který nereaguje s výchozími látkami, reakčními činidly, meziprodukty nebo produkty způsobem, který by nepříznivě ovlivnil výtěžek požadovaného produktu.

Pod označením aryloxyskupina se v tomto popisu a připojených nárocích rozumí fenoxyskupina nebo fenoxyskupina která je popřípadě substituována 1 až 3 alkylskupinami s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinami s 1 až 4 atomy uhlíku nebo atomy halogenu.

Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Sloučenina obecného vzorce III, kde Rl představuje fenoxyacetylskupinu aR^ představuje vodík

Roztok 20 g sloučeniny vzorce II ve 400 ml methylenchloridu a 10 ml bezvodého pyridinu se pod atmosférou dusíku ochladí na -78 °C, načež se k němu během 10 minut po kapkách přidá 15,1 ml fenoxyacetylchloridu. Reakční směs se 1,5 hodiny udržuje při -70 až -78 °C a poté se rozloží 250 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vzniklá směs se 1,5 hodiny míchá, organická vrstva se oddělí, reextrahuje 250 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Za sníženého tlaku se odstraní rozpouštědlo. Získá se 25,7 g sloučeniny, uvedené v nadpisu, o 97 % čistotě ve formě špinavě bílé pevné látky (výtěžek 96 %). Retenční čas při vysokotlaké kapalinové chromatografíi je 7,9 minuty [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); methanol:acetonitril:voda (559:383:58);

1,5 ml/min; UV 245 nm].

Příklad 2

Sloučenina obecného vzorce III, kde Rl představuje fenoxyacetylskupinu a R^ představuje ptolyloxythiokarbonylskupinu

Roztok 10 g sloučeniny, uvedené v nadpisu příkladu 1, ve 100 ml toluenu a 30 ml bezvodého pyridinu se pod atmosférou dusíku zahřeje na 100 °C a během 5 minut se k němu přidá 7,7 ml O-p-tolylchlorthionoformiátu. Vzniklá směs se 2 hodiny udržuje při 100±5 °C. Po dokončení reakce se směs ochladí na asi 50 °C a za sníženého tlaku se z ní odpaří rozpouštědla. Hnědý zbytek se rozpustí ve 120 ml toluenu a roztok se extrahuje 120 ml vody a dvakrát 100 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Oddělená organická vrstva se zkoncentruje na asi 80 ml, přefiltruje a filtrát se chromatografuje za použití soustavy Prep-500 (Waters Associates), vybavené dvěma silikagelovými patronami. Eluce se provádí směsí hexanů a ethylacetátu v poměru 75 : 25. Frakce, obsahující produkt, se spojí a za sníženého tlaku se

-7CZ 287404 B6 z nich odpaří rozpouštědlo. Získá se 9,8 g produktu o 95,7 % čistotě ve formě světle žlutohnědé pevné látky (výtěžek 83,2 %). Retenční čas při vysokotlaké kapalinové chromatografíí je 15,2 minuty [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); methanol:acetonitril:voda (559:383:58); 1,5 ml/min; UV 245 nm].

Příklad 3

5,4-O-Difenoxyacetyldoramektin (sloučenina obecného vzorce IV, kde R1 představuje fenoxyacetylskupinu)

K roztoku 8,5 g sloučeniny, uvedené v nadpisu příkladu 2, v 90 ml 2-methoxyethyletheru se přidá 4,5 g uhličitanu vápenatého. Vzniklá směs se za důkladného míchání zahřívá na 156 až 158 °C, přičemž se kontinuálně probublává proudem dusíku. Po 24 hodinách při 156 až 158 °C analýza ukáže, že ve směsi je přítomno 6,68 g produktu (výtěžek 90 %). Směs se přefiltruje a za sníženého tlaku se z ní odpaří rozpouštědlo. Získá se produkt ve formě žluté pryskyřice. Retenční čas při vysokotlaké kapalinové chromatografii je 10,4 minuty [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); methanol: acetonitrihvoda (559:383:58); 1,5 ml/min; UV 245 nm].

Příklad 4

5,4-0-Difenoxyacetyldoramektin (sloučenina obecného vzorce IV, kde R1 představuje fenoxyacetylskupinu)

K roztoku 1 g sloučeniny, uvedené v nadpisu příkladu 2, ve 20 ml 2-ethoxyethyletheru se přidá 500 mg uhličitanu vápenatého. Vzniklá směs se za důkladného míchání zahřívá na 185 °C, přičemž se kontinuálně probublává proudem dusíku. Po 5 hodinách při 185 °C se směs nechá zchladnout na teplotu místnosti a přefiltruje. Roztok se podrobí analýze vysokotlakou kapalinovou chromatografíí [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); methanokacetonitrikvoda (559:383:58); 1,5 ml/min; UV 245 nm], která ukáže, že v roztoku je přítomno 796 g produktu (výtěžek 91 %).

Příklad 5

Doramektin (sloučenina vzorce I)

Roztok 500 mg sloučeniny, uvedené v nadpisu příkladu 3, v 1 ml 2-methoxyethyletheru a 3,5 ml methanolu se ochladí na -35 °C, načež se kněmu během 1 minuty přikape 2,1 ml 2M methanolického roztoku hydroxidu draselného. Směs se za důkladného míchání udržuje 1 hodinu při -35 °C do skončení reakce. Poté se k ní přidá 252 mg ledové kyseliny octové, rozpuštěné v 0,5 ml methanolu. Chlazení se přeruší a ke směsi se během 1 hodiny přikape 2,2 ml vody, načež započne krystalizace. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě okolí, krystaly se oddělí filtrací, promyji 2 x 0,5 ml směsi methanolu a vody v poměru 7:3a vysuší za vakua. Překrystalováním ze směsi methanolu a vody se získá 272 mg produktu o 93,8 % čistotě (výtěžek 70,6 %). Retenční čas při vysokotlaké kapalinové chromatografii je 6,5 minuty [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman), methanol:acetonitril:voda (860:51:89);

1,5 ml/min; UV 245 nm].

-8CZ 287404 B6

Příklad 6

Doramektin (sloučenina vzorce I)

K roztoku 6,6 g sloučeniny, uvedené v nadpisu příklad 3, v 75 ml methanolu, ochlazenému na -15 °C, se přidá 75 ml nasyceného roztoku amoniaku v methanolu. Směs se při -15 °C udržuje

5,5 hodiny, aby se dokončila reakce, a poté se 30 minut kontinuálně probublává proudem dusíku. Těkavé látky se odpaří za sníženého tlaku a světle žlutý olejovitý zbytek se rozpustí ve 45 ml methanolu. Methanolický roztok se přečistí filtrací a k filtrátu se přikape 5 ml vody, načež započne krystalizace. Poté se směs míchá 2 hodiny při teplotě okolí, během 2,5 hodiny se k ní přidá 6,3 ml vody a v míchání se pokračuje dále 1,5 hodiny. Pevná látka se shromáždí filtrací, promyje dvakrát vždy 2,5 ml směsi methanolu a vody v poměru 7 : 3 a 24 hodin suší za vakua při teplotě okolí. Získá se 3,75 g produktu o 87,7 % čistotě (výtěžek 64 %).

Příklad 7

Sloučenina obecného vzorce III, kde RJ představuje acetylskupinu aR.2 představuje atom vodíku

K roztoku 20 g sloučeniny vzorce II ve 200 ml methylenchloridu se pod atmosférou dusíku přidá

28.6 g triethylaminu a 1,06 g 4-dimethylaminopyridinu. Vzniklý roztok se ochladí na -5 °C až 0 °C a během 5 minut se k němu přikape 14,5 g acetanhydridu. Získaná směs se 20 minut udržuje při 0 °C, aby se dokončila reakce, a poté rozloží při 0 °C 200 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se reextrahuje dvakrát nasyceným hydrogenuhličitanem sodným, vysuší síranem hořečnatým a za sníženého tlaku se odpaří rozpouštědlo. Získá se 22,2 g produktu o 95 % čistotě ve formě bílé pevné látky (výtěžek 96,7 %). Retenční čas při vysokotlaké kapalinové chromatografii je 6,6 minuty [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x

4.6 mm (Beckman); methanokacetonitrikvoda (902:36:62); 1,0 ml/min; UV 245 nm].

Příklad 8

Sloučenina obecného vzorce III, kde R1 představuje acetylskupinu aR^ představuje atom vodíku

K suspenzi 5 g sloučeniny vzorce II ve 100 ml toluenu se pod atmosférou dusíku přidá 7,24 g triethylaminu a 266 mg 4-dimethylaminopyridinu. Vzniklá směs se ochladí na -15 °C a během 5 minut se k ní přikape 3,58 g acetanhydridu. Získaná směs se 30 minut míchá při -10 až -15 °C, aby se dokončila reakce, poté rozloží 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a míchá 1 hodinu při teplotě okolí. Organická vrstva se reextrahuje dvakrát 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vysuší částečným odděstilováním rozpouštědla za použití Dean-Starkova odlučovače. Vytvořený roztok se analyzuje vysokotlakou kapalinovou chromatografii [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); methanokacetonitrikvoda (902:36:62), 1,0 ml/min; UV 245 nm], která ukáže, že v roztoku je přítomno 5,27 g produktu (výtěžek 96,5 %).

-9CZ 287404 B6

Příklad 9

Sloučenina obecného vzorce III, kde Rl představuje acetylskupinu a R^ představuje p5 tolyloxythiokarbonylskupinu

K roztoku 20 g sloučeniny, uvedené v nadpisu příkladu 7, ve 200 ml ethylacetátu se pod atmosférou dusíku přidá 60 ml bezvodého pyridinu a poté 22,2 g O-p-tolylchlorthionoformiátu, načež se začne tvořit žlutá sraženina. Vzniklá směs se 2 hodiny za důkladného míchání zahřívá ίο ke zpětnému toku, aby se dokončila reakce, a poté ochladí na teplotu místnosti. Za sníženého tlaku se odpaří těkavé látky a zbytek se rozdělí mezi 150 ml ethylacetátu a 150 ml vody. Organická vrstva se extrahuje dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jednou vodou. Ethyl-acetátová vrstva se vysuší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve 25 ml ethylacetátu a 5 ml methylenchloridu. 15 Získaný roztok se přečistí filtrací a filtrát se chromatografuje za použití soustavy Prep-500 (Waters Associates), vybavené dvěma silikagelovými patronami. Eluce se provádí směsí hexanů, ethylacetátu a methylenchloridu v poměru 70 : 25 : 5. Frakce, obsahující produkt, se spojí a za sníženého tlaku se z nich odpaří rozpouštědlo. Získá se 19 g produktu (výtěžek 82,6 %) ve formě světle žluté pevné látky. Retenční čas při vysokotlaké kapalinové chromatografii je 17,1 minuty 20 [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); methanol:acetonitril:voda (902:36:62);

1,0 ml/min; UV 245 nm].

Příklad 10

5,4-0-Diacetyldoramektin (sloučenina obecného vzorce IV, kde Rl představuje acetylskupinu)

Suspenze 9,5 g uhličitanu vápenatého se za současného kontinuálního probublávání proudem dusíku zahřívá na 156 až 158 °C. K vytvořené směsi se přidá 18,7 g sloučeniny, uvedené 30 v nadpisu příkladu 9. V zahřívání, míchání a probublávání dusíkem se pokračuje 25 hodin, načež se směs ochladí na 50 °C, přefiltruje a za sníženého tlaku se odpaří rozpouštědlo. Zbytek se rozpustí v 55 ml methylenchloridu a k roztoku se přidá 25 ml ethylacetátu a 70 ml hexanů. Výsledný roztok se přefiltruje a filtrát se chromatografuje za použití systému Prep-500 (Waters Associates) vybaveného dvěma silikagelovými patronami. Eluce se provádí směsí hexanů, 35 ethylacetátu a methylenchloridu v poměru 70 : 25 : 5. Frakce, obsahující produkt, se spojí a za sníženého tlaku se z nich odpaří rozpouštědlo. Získá se 13,7 g produktu o čistotě 87 % (výtěžek 74,8 %) ve formě světle žluté pevné látky. Retenční čas při vysokotlaké kapalinové chromatografii je 11,1 minuty [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); methanol :acetonitrihvoda (902:36:62); 1,0 ml/min; UV 245 nm],

Příklad 11

5,4-O-Diacetyldoramektin (sloučenina obecného vzorce IV, kde Rl představuje acetylskupinu)

K roztoku 504 mg sloučeniny, uvedené v nadpisu příkladu 9, ve 25 ml 2-ethoxyethyletheru se přidá 250 mg uhličitanu vápenatého. Vzniklá směs se za důkladného míchání zahřívá na 183 až 185 °C, přičemž se kontinuálně probublává proudem dusíku. Po 1,5 hodiny při 183 až 185 °C je ve směsi podle analýzy přítomno 364,4 mg produktu (výtěžek 84,7 %).

- 10CZ 287404 B6

Příklad 12

Doramektin (sloučenina vzorce I)

K roztoku 7,3 g sloučeniny, uvedené v nadpisu příkladu 10, ve 145 ml bezvodého tetrahydrofuranu se pod atmosférou dusíku při -72 °C během 45 minut přikape 59,5 ml l,0M roztoku lithiumtriethylborhydridu v tetrahydrofuranu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při -72 až -70 °C a poté nechá pomalu zahřát na teplotu místnosti, aby se dokončila reakce. Vzniklá směs se rozloží 75 ml vody a 75 ml methylenchloridu a míchá 1 hodinu. Vrstvy se oddělí, vodná vrstva se extrahuje 75 ml methylenchloridu. Spojené organické vrstvy se promyjí dvakrát 75 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Za sníženého tlaku se odpaří rozpouštědla a zbytek se rozpustí v 54 ml methanolu. Methanolický roztok se přečistí filtrací. K filtrátu se přikape během 20 minut 6,9 ml vody, přičemž započne krystalizace. Směs se míchá 15 minut při teplotě okolí a poté se k ní během 30 minut po kapkách přidá 6,2 ml vody. Vodná směs se míchá 18 hodin, pevná látka se oddělí filtrací, promyje dvakrát vždy 2 ml směsi methanolu a vody v poměru 75 : 25 a vysuší za vakua. Získá se 4,27 g produktu o 89,5 % čistotě (výtěžek 57,3 %).

Příklad 13

Účinek probublávání dusíkem na tepelnou eliminační reakci

K roztoku 5,3 g sloučeniny, uvedené v nadpisu příkladu 2, v 55 ml 2-methoxyethyletheru se přidá 2,5 g uhličitanu vápenatého. Vzniklá směs se za důkladného míchání zahřívá na 157 °C, přičemž se kontinuálně probublává proudem dusíku pomocí trubice na rozptylování plynu. Po 30 hodinách při 154 až 157 °C se směs nechá zchladnout na teplotu místnosti a přefiltruje. Filtrát se analyzuje vysokotlakou kapalinovou chromatografii [Ultrasphere ODS 5 pm, 25 cm x 4,6 mm (Beckman); methanol:acetonitril:voda (559:383:58); 1,5 ml/min; UV 245 nm], která ukáže, že v roztoku je přítomno 3,93 g 5,4-O-Difenoxyacetyldoramektinu (výtěžek 84,8 %).

Výše popsaný postup se opakuje za stejných podmínek, včetně použití stejné várky sloučeniny z příkladu 2, ale bez probublávání dusíkem. V tomto případě je výtěžek produktu 47,5 %, což ilustruje prospěšný účinek probublávání dusíkem.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob výroby doramektinu vzorce I

OH

10 vyznačující se tím, že se po sobě provedou následující stupně:

a) sloučenina vzorce II se nechá reagovat s acylačním činidlem obecného vzorce (R4CO)2O nebo R^COX, kde R4 představuje aryloxymethylskupinu nebo alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a X představuje atom chloru nebo bromu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce III

- 12CZ 287404 B6 kde R1 představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a R²představuje atom vodíku;

b) sloučenina obecného vzorce III, kde R1 představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a R² představuje atom vodíku, se nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce R3OC(=S)X, kde R^ představuje arylskupinu aX představuje atom chloru nebo bromu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce III, kde R1 představuje aryloxyacetyl- ío skupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a R² představuje aryloxythiokarbonylskupinu;

c) sloučenina obecného vzorce III, kde R1 představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a R² představuje aryloxythiokarbonylskupinu, se nechá

15 reagovat za přítomnosti uhličitanu vápenatého v rozpouštědle, které je inertní vůči této reakci, při teplotě v rozmezí od 150 do 200 °C po dobu v rozmezí od 2 do 48 hodin za současného kontinuálního probublávání reakční směsi proudem plynu, který je inertní vůči této reakci, za vzniku sloučeniny obecného vzorce IV

- 13CZ 287404 B6 (IV)_Z kde R.1 představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku; a

d) štěpením diesterové sloučeniny obecného vzorce IV, kde RÍ představuje aryloxyacetylskupinu nebo alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, se výměnou zbytků R1 za vodík regenerují hydroxyskupiny za vzniku doramektinu vzorce I, přičemž když ve sloučenině obecného vzorce IV R1 představuje aryloxyacetylskupinu, provádí se štěpení reakcí s bází v alkoholickém rozpouštědle, a když ve sloučenině obecného vzorce IV R1 představuje alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, provádí se štěpení reakcí s hydridem, zvoleným ze souboru, sestávajícího z lithiumaluminiumhydridu, natriumkyanborhydridu a lithiumtriethylborhydridu v rozpouštědle, které je inertní vůči této reakci;

přičemž pod pojmem aryl se rozumí fenylskupina nebo fenylskupina, která je popřípadě substituována 1 až 3 alkylskupinami s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinamí s 1 až 4 atomy uhlíku nebo atomy halogenu.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se ve stupni c) jako plynu, který je inertní vůči reakci, používá dusíku.
3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se ve stupni d) jako báze používá amoniaku, hydroxidu draselného, kyanidu draselného, uhličitanu sodného, hydrogenuhličitanu sodného nebo octanu sodného.
4. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se ve stupni d) jako hydridu používá lithiumtriethylborhydridu.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se ve stupni d) sloučenina obecného vzorce IV, kde R1 představuje alkanoylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, smíchá s lithiumtriethylborhydridem při teplotě -78 až -70 °C, teplota v tomto rozmezí se udržuje po dobu 15 minut až 1 hodiny a potom se teplota upraví na teplotu okolí.