BE554649A

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Publication number: BE554649A
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Description


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   L'invention concerne la production d;amino-acides, et plus spécialement un procédé pour la production d'acide 1-glutamique et sel de celui-ci, par fermentation. En particulier, la présente invention concerne un procédé comprenant les phases qui consistent à cultiver une race de microorganismes mentionnée ci-après, dans un milieu de culture contenant de-la saccharine, des matières azotées et inorganiques, dans des conditions déterminées d'avance, pour accumuler une grande quantité d'un amino-acide dans ce milieu, et à récupérer cet amino-acide. Il est bien connu que lors- 

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 que des microorganismes sont cultivés dans un milieu approprié, diverses espèces d'amino-acides sont produites dans ce milieu. 



  La quantité produite était toutefois extrêmement faible et il n'a jamais été signalé qu'une espèce particulière quelconque d'aminoacide s'accumule en grande quantité dans le milieu par un processus de fermentation. La raison de l'extrême difficulté d'accumulation   d'amino-acides   quelconques dans un système biologique est apparue sur la base du fait que les amino-acides sont les composantes de protéines et que tout amino-acide une fois produit dans un milieu est apte à être aisément resynthétisé en protéines, polypeptides ou analogues, ou est apte à être converti ou décomposé en d'autres substances par diverse.s réactions biochimiques. En d'autres termes, un amino-acide peut difficilement être accumulé dans un milieu de culture sous la forme   d'amino-acide   à l'état monomère.

   L'expression '"état   monomère"   est utilisée dans la présente description pour désigner l'état monomoléculaire, qu'il s'agisse d'un acide libre ou d'un sel. 



   C'est la raison pour laquelle un processus de fermentation, une utilisation directe d'activités biochimiques d'une population vivante de microorganismes n'a jamais été proposée jusqu'à présent pour la biosynthèse et l'accumulation d'acide 1-glutaminique. La biosynthèse connue est effectuée dans quelque système enzymique, c'est-à-dire qu'une espèce particulière   d'enzyme   est extraite demicroorganismes ou de certains tissus animaux ou végétaux, et que, l'on fait réagir l'enzyme avec des substrats appropriés, par exemple de l'acids alpha-cétoglutarique et des composés   d'ammonium   dans des conditions de   réaction   très   limitées .   



   Un objet de   la.   présente invention est de prévoir un procédé pour produire directement une quantité substantielle d'un aminoacide par la culture d'un certain microorganisme dans un milieu liquide.. 



     Un -   .tire objet de l'invention est de prévoir un   procédé   

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   pour     produire   directement une quantité substantielle d'acide 
 EMI3.1 
 lClt1-0':JX::.iq1..1e en cultivant un certain microorganisme dans un milieu liquide. 



  Encore un autre objet de l'invention est de prévoir un procédé pour accumuler une grande quantité d'drnlk't0"L;ICt' spécialement d'acide 1-glutamique sous la forme d'acide à l'état nonon3r3$ en cultivait L: certain micro organisme dans un milieu li- quide Un autre objet de ¯' 33î.'vsliiG1 est de prévoir un procédé pour minimiser les rÓ,,-,:;tinl:2 accessoires, telles que la polymérisation. ou la décomposition d'acide l-glutamiquej qui auraient lieu pendant la culture   d'un   certain   microorganisme   dans un milieu liquide,
Encore   un autre   objet de l'invention est de prévoir   un   procédé pour accumuler de l'acide   1-glutamique   dans un milieu 
 EMI3.2 
 liquide sous une forme iixxxxx à l'état monosiè-re, c'est-à-dire sous une forme facilement récupérable. 



   Selon la présente invention, une race de microorganismes ayant certains caractères biochimiques particuliers est inoculée 
 EMI3.3 
 à un milieu liquide, et une grande quantité d'un amino-acicb est produite dans la milieu en ajustant et en   maintenant   la -la leur du pli du milieu dans les limites de 6 à 9   pendant la   fermentation. 



   La présents invention est spécialement applicable à la production d'acide 1-glutamique et sera décrite d'une façon dé- 
 EMI3.4 
 taillée en relation avec la production d'acide lMglut@aiu2. Il est toutefois bien entendu que l'invention est également applicable à la production des autres 8Jno-acides. 



   Il a été découvert que les races de micro organismes   conve-   nant à l'utilisation dans la présente invention doivent satisfaire à deux exigences biochimiques spécifiques,  à   savoir,   (1)     le micro- -   
 EMI3.5 
 organisme doit produire de l'acide alphaHcétoglutarique à partir de matières saccharinées et (2), il doit posséder une forte 

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 activité de déhydrogénase d'acide 1-glutamique et doit, en particulier, être fortement actif pour la réaction inverse de la susdite réaction enzymique réversible, c'est-à-dire l'aminatini réductive d'acide alpha-cétoglutarique. 



   Selon l'invention, des microorganismes ont été sélectionnés qui satisfont aux deux exigences   biochimiquement   spécifiques mentionnées ci-dessus, et il a été constaté qu'il existe beaucoup d'espèces de ces microorganismes dans des habitats naturels. 



  Ils sont trouvés fréquemment dans divers champs microbiens, comprenant les groupes des bactéries, des levures et des champignons ou moisissures, sans être limités à des groupes taxonomiques quelconques. On les trouve, par exemple, dans divers genres de   microorganismes,   tel que montré par la liste ci-après. Les microorganismes mentionnés dans la liste ne le sont qu'à titre illustrab tif et il n'est aucunement question de limiter les microorganismes convenant à la mise en oeuvre de la présente invention à ceux portés dans   #tte   liste. 



  Bactéries :
Bacillus
Xanthomonas
Rhizobium
Escharichia
Proteus
Streptomyces
Pseudomonas
Azotobacter
Micrococcus
Aerobacter
Salmonella lactobacillus 

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 Levures: . 



   Saccharomyces
Pichia
Schizosacharomyces
Torulopsis
Rhodotorula
Endomyces   Zygo saccharomyce s   
Willia
Mycoderma
Monillia   Champignons :   
Mucor
Rhizopus
Aspergillus   Neurospora  
Pénicillium
Ces groupes comprennent des   micro organismes   qui répondent aux deux conditions biochimiques mentionnées   ci-dessus    et   peuvent être utilisés pour la production d'acide 1-glutamiuqe selon la présente invention, bien que les rendemeents puissent être différents.

   L'examen de leur pouvoir de prodaction d'acide alphacétoglutarique à partir de matières   @@     ressort   des   exemples   qui seront décrits ci-après* La   puissance   de l'activité de déhydrogénase d'acide 1-glutamique, spécialement l'activité pour l'animation réductive d'acide alpha-cétoglutairuqe, d'une race particulière, se trouva en   corrélation   avec sa capacité de production d'acide 1-glutamique.

   Ces proporiétés biochimiques spécifiques d'un microorganisme sont   '; importance   primordiale pour l'accumulation d'acide Une des particularitésde la présente invention réside   dans :' emploi.-   pour la fermenta... 

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 tion d'acide 1-glutamique, de tous microorganismes particuliers possédant de telles propriétés biochimiques spécifiques etchoisis parmi divers groupes taxonomiques connus, de genres ou espèces différentes. 



   Une autre particularité de la présente invention réside dans le contrôle des conditions -de fermentation. La composition d'un milieu de culture peut être n'importe quelle composition   connue   convenant au développement du microorganisme particulier   considéré.   En vue d'accomplir un vigoureux métabolisme d'hydrates de carbone par le microorganisme particulier, il va de soique diverses sortes de matières azotées, matières inorganiques ou autres matières connues requises par   1* organisme   sont ajoutées au milieu de culture.

   En général, par le métabolisme d'hydrates de carbone d'un microorganisme, les acides ont tendance à s'accumuler, rendant le milieu acide.  Il   a été constaté que la production d'acide 1-glutamique est sensiblement affectée par la valeur du pH du milieu au cours de la fermentation. La production se fait favorablement lorsque le pH est réglé entre 6,0 et 9,0, et la valeur optimum du pH s'avère être d'environ   7,0   à environ   8,5.   



  Selon la présente invention, la valeur du pH est ajustée et maintenue dans les Imites de 6,5 à 8,5, par l'ajoute d'un composé contenant un radical azoté basique. Ainsi, l'acide alpha-cétoglutarique produit est combiné avec des ions   d'ammonium     tires   du radical azoté basique ajouté, par la forte action   d'amination   réductive de la déhydrogénase d'acide   1-glutamique,   contenue dans le microorganisme, et   donne   lieu   àla   fondation d'acide   1-glutami-   que.

   Grâce à la forte activité d'aminatino   réductive   de   la   dénydrogénase d'acide glutamique du   nier D'organisme   et en maintenant la valeur du pH dans les limites optima, les diverses réactions secondaires sont minimisées-, de sorte que la réaction de   formation   d'acide   1-glutamique   maîtrise les réactions secondaires et se 

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 traduit par l'accumulation d'une grande quantité d'acide 1-   glutamique  
Divers procédés peuvent être utilisés pour neutraliser le milieu de culture. En tout cas, une quantité requise d'ions d'ammonium doit être fournie au milieu. L'emploi combiné de sels d'ammonium et d'alcalis tombe aussi dans le cadre de la présente invention. 



   L'acide glutamique ou son sel accumulé dans le milieu est récupéré par un procédé approprié connu quelconque, tel que la méthode à la résine échangeuse d'ions, un tel procédé n'étant pas en soi une partie importante de la présente invention*. 



   La présente inventicn est aussi applicable   .our   la productino d'amino-acides autres que l'acide 1-glutamique.   On   peut, par exemple, choisir des organismes qui produisent des alphacéto-acides, par exemple l'acide pyruvique, l'acide oxalacétique, etc.., à partir de matières saccharinées, et qui ont aussi une forte activité pour l'amination réductive desdits alpha-cétoacides, et les amino-acides correspondants, tels que l'alanine, l'acide aspartique, etc.., pourront être produits et accumulés dans le milieu par un réglage convenable du pH du milieu de fermentation. 



   Afin de mieux faire comprendre l'objet de l'invention quelques exemples seront décrits ci-après en relation avec la .Production d'acide 1-glutamique.   exemple   1. 



   Divers microorganismes ont été examinés au point de que des deux   capacités     biochimiques   spécifiques   requises   dont qres-   tion     ci-dessus,   et des   organismes   appropries   or/;-     été   sélectrionmés. 



  Les deux conditions biochimiques spécifiques ont été exeminées comme exposé ci-après. La méthode d'essai de la   capacité  de production- de l'acide   alpha-cétoglutarique   à partir de matières 

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 EMI8.1 
 8,(;C.L -,rinée" est bien connue des spécialistes: ainsi, par   exemple,   une race a été cultivée par culture agitée dans un milieu liquide contenant des matières saccharinées et d'autres éléments nutritifs. L'acide désiré a été examiné par la   chromât-   graphie au papier et, si nécessaire, il a aussi été fait usage 
 EMI8.2 
 de l'analyse quantitative colorimétrique de Friedemann-Hangen. 



  Par cet essai, on a sélectionné des microorganismes qui étaient capables de produire une quantité appréciable d'acide alpha-   cétoglutarique . @  
On a ensuite examiné l'activité de déhydrogénase d'acide 1-glstamique, spécialement quant à la puissance de la capacité d'amination réductive ' d'acide   alpha-cétoglutarique..   L'essai a été effectué par la voie de l'absorption d'ammoniaque dans un mélange de réaction tel que décrit ci-après, en utilisant les cellules ou le mycélium intact. L'essai quantitatif d'absorption   d'ammo-   niaque a été opéré selon la méthode décrite dans   "Microdiffusion   Analysis and Volume trie error" (E.J.   Conuay,   London Crosby Lockwood and Son   Ltd..     1950).   



   Un microorganisme à essayer a été soumis à culture agitée dans le milieu, par exemple bouillon de glucose, extrait de Koji, ou solution de Czapek, et après culture pendant   20   à 40 heures, les cellules ou le mycélium se trouvant dans le milieu a été séparé par centrifugation et lavé à l'eau. Les cellules ou le mycélium a ensuite été mis en suspension dans une solution tampon de phosphate, ayant un pli de 8. Le mélange de réaction employé pour examiner ladite activité enzymique est donné ci-après. 

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   TABLEAU . 1 Composition du mélange de réaction 
 EMI9.1 
 
<tb> 
<tb> Concentration <SEP> Quantité <SEP> .employée <SEP> 
<tb> solution <SEP> de <SEP> glucose <SEP> 100 <SEP> mM <SEP> 1 <SEP> ml
<tb> solution <SEP> diacide <SEP> alphacetoglutarique <SEP> 200 <SEP> mM <SEP> 1 <SEP> ml
<tb> solution <SEP> de <SEP> phosphate <SEP> diammonique <SEP> 100 <SEP> Dit <SEP> 1 <SEP> ml
<tb> suspension <SEP> de <SEP> cellules <SEP> (ou
<tb> mycélium) <SEP> (cellules <SEP> ou
<tb> mycélium <SEP> humide) <SEP> . <SEP> 30-50 <SEP> mg/ml <SEP> 1 <SEP> ml
<tb> solution <SEP> tampon <SEP> de <SEP> phosphate
<tb> (pH <SEP> 8) <SEP> 1/15 <SEP> M <SEP> 5 <SEP> ml <SEP> 
<tb> 9 <SEP> ml
<tb> 
 
Le pH du mélange de réaction a été ajusté à 8. 0 et on a complété à 10 ml. 



   Deux expériences de contrôle ont été effectuées en même temps. L'une avec une solution dont le glucose a été enlevé et l'autre avec une solution dont le glucose et l'acide   alpha-céto-   glutarique ont été enlevés, en partant du susdit mélange de réaction. Cette dernière solution de contrôle donnait la quantité de base de l'absorption d'ammoniaque dans cette réaction. On a laissé la réaction se poursuivre pendant 1 heure à   37    C. Les quantités d'ammoniaque consommées ont été mesurées pour déterminer lesdites activités enzymiques. 



   Les résultats sont donnés dans le tableau 2. 

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   TABLEAU   2 
 EMI10.1 
 - -- ---^--------- ^¯3 S ÇW c, t 1 Otl C. !r.r,o1112 e ("6' /ml) * f.:élanS3 de Mélange de réac- Puissance de O::c !1isne réaction (a) tien (b) (pas l'action 
 EMI10.2 
 
<tb> 
<tb> (contenant <SEP> de <SEP> glucose') <SEP> enzymique
<tb> glucose)
<tb> 
 
 EMI10.3 
 1 :'c.cilh-;s subtilis 23 5 + aci1luJ natto 16 7 + 2 Bacillus r#c:atheriU!:J 15 4 + 4 Ps eu dosons & ae 'L"" U -;

  '1' Dosa 25 5 ++ 5 Aerobacter aarog8Des 42 6 
 EMI10.4 
 
<tb> 
<tb> 6 <SEP> Escherichia <SEP> coli
<tb> N . <SEP> 116 <SEP> 18 <SEP> 5
<tb> 7 <SEP> " <SEP> N  <SEP> 128 <SEP> 52 <SEP> 12 <SEP> +++
<tb> 8 <SEP> " <SEP> No. <SEP> 165 <SEP> 32 <SEP> 8 <SEP> ++
<tb> 
 
 EMI10.5 
 9 Micrococcus N . 534 98 16 +++++ 
 EMI10.6 
 
<tb> 
<tb> 10 <SEP> " <SEP> No. <SEP> 416 <SEP> 82 <SEP> 14 <SEP> ++++
<tb> 11 <SEP> Streptomyces <SEP> No.1056 <SEP> 42 <SEP> 5 <SEP> +++
<tb> 
 
 EMI10.7 
 12 " iT  .21r3 17 4 + 
 EMI10.8 
 
<tb> 
<tb> 13 <SEP> Saccharomyces <SEP> No.618 <SEP> 18 <SEP> 4 <SEP> +
<tb> 14 <SEP> Torulopsis <SEP> No.

   <SEP> 812 <SEP> 62 <SEP> 16 <SEP> ++++
<tb> 15 <SEP> Zygosaccharomyces
<tb> major <SEP> 42 <SEP> 8 <SEP> +++
<tb> 16 <SEP> Aspergillus <SEP> N .3181 <SEP> .26 <SEP> 12 <SEP> +
<tb> 17 <SEP> " <SEP> NO.3216 <SEP> 46 <SEP> 16 <SEP> +++
<tb> 18 <SEP> Mucor <SEP> No <SEP> .3423 <SEP> 48 <SEP> 14 <SEP> +++
<tb> 
 
 EMI10.9 
 19 Pénicillium N  .4235 32 12 ++ 
 EMI10.10 
 
<tb> 
<tb> 20 <SEP> " <SEP> N .4261 <SEP> 16 <SEP> 8 <SEP> +
<tb> 
      La quantité   d'ammoniaque   absorbée a été calculée par l'équation suivante: 
 EMI10.11 
 Absorption d'arononique = (Trouvée) - (Quantité de base). 



  La quantité de ,base de 1' = :.btio d'ammoniaque est donnée lorsque l'acide alpta-cétoglutarique et le glucose sont enlevés du mélange de réaction complet. Les chiffres individuels de la quantité de base de l' 8.!Jnoniave absorbée sont omis dans ce tableau. 



  * * + représente 1 - 20 Ó d'absorption d'ammoniaque dans   un'   mélange de réaction (a) 

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Les résultats donnés dans le tableau 2 indiquent que la puissance de l'amination réductive d'acide alpha-cétoglutarique varie largement pour chaque race, même dans la même espèce, et d'autre part ils indiquent qu'il n'existe pas de corrélation entre les positions taxonomiques et la puissance de ladite action' enzymique. Ainsi, la puissance de l'activité enzymique doit être supposée appartenir au caractère spécifique de chaque race individuelle dans les diverses espèces ou groupes taxonomiques. 



   En outre, si l'on compare la quantité d'absorption   d'ammonia-   que dans les mélanges de réaction (a) et (b), les chiffres sont beaucoup plus élevés pour le premier que pour le dernier. Cela signifie que le glucose peut fournir l'énergie requise pour la réaction. 



   Ce résultat indique.que la réaction exige des matières saccharinées fermentables pour obtenir une forte absorption d'ammoniaque. En d'autres termes, la réaction'se fera de façon satisfaisante en présence- de sucre fermentable.:
Dans le Tableau 3, on a indiqué la quantité d'acide 1-glutamique formée par des microorganismes ayant une forte activité d'amination réductive, ainsi que celle formée par ceux qui ne possèdent pas une telle activité. La quantité d'acide 1-glutamique accumulée a été analysée après 3 jours de culture agitée. 

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  TABLEAU 3. 
 EMI12.1 
 
<tb> 
<tb> 



  Puis <SEP> sance <SEP> Production <SEP> d'acide
<tb> Organisme <SEP> d'amination <SEP> 1-glutamique
<tb> 
 
 EMI12.2 
 enzymique (mg/10D ma) 
 EMI12.3 
 
<tb> 
<tb> Milieu <SEP> A <SEP> * <SEP> Milieu <SEP> B <SEP> * <SEP> *
<tb> 1 <SEP> Bacillus <SEP> subtilis <SEP> ++ <SEP> 420
<tb> 2 <SEP> Eacillus <SEP> natto <SEP> + <SEP> 40
<tb> 3 <SEP> Escherichia <SEP> coli
<tb> N  <SEP> 116 <SEP> 60
<tb> " <SEP> N  <SEP> 128 <SEP> +++ <SEP> 410
<tb> 5 <SEP> Micrococcus <SEP> N  <SEP> 534 <SEP> +++++ <SEP> 980
<tb> 6 <SEP> " <SEP> .

   <SEP> NI! <SEP> 416 <SEP> ++++ <SEP> 420
<tb> 7 <SEP> Streptomyces <SEP> N  <SEP> 1056 <SEP> +++ <SEP> 360
<tb> 8 <SEP> " <SEP> Ni <SEP> 0 <SEP> 2143 <SEP> + <SEP> 40
<tb> 9 <SEP> Torulopsis <SEP> N  <SEP> 812 <SEP> ++++ <SEP> 670
<tb> 10 <SEP> Aspergillus <SEP> N  <SEP> 3181 <SEP> + <SEP> 30
<tb> 11 <SEP> " <SEP> N  <SEP> 3216 <SEP> +++ <SEP> - <SEP> 520
<tb> 12 <SEP> Mucor <SEP> N  <SEP> 3423 <SEP> +++ <SEP> - <SEP> 340
<tb> 13 <SEP> Penicillium <SEP> N  <SEP> 4261 <SEP> + <SEP> - <SEP> 60
<tb> 
 * Le milieu A contient : 50 g de glucose, 5 g de peptone, 
 EMI12.4 
 5 g d'urée, 1,0 g de HiT'0 , 0,1 g de IKSO 4.7H20 et est complété   à 1   L avec de   l'eau.   



  * * Le milieu B contient 50 g de glucose, 10 g de liqueur de céréale macérée (corn steep), 15 g de sulfate d'ammonium, 1,0 g de 
 EMI12.5 
 KZW04 ' 0,1 g de: Tn.ag0o1H0 , et est complété à 1 L are c de l'eau; pendant la culture, on ajoute de l'ammonique ou de la soude caustique de façon que le pH du milieu soit dans les limites   6,5 -     8,5.   



   Selon les résultats exposés dans le Tableau 3, il existe une corrélation évidente entre la puissance de la capacité d'amination ènzymique des ce llules ou du mycélium intact et l'accumula- 

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 EMI13.1 
 tion effective d'acide 1-glutamiclue dans la fermentation à cul- ture agitée. Il ressort clairement des faits ci-dessus que les deux activités biochimiques spécifiques d'un microorganisme ont une corrélation directe avec la production et l'accumulation d'acide 1-glutamique. exemple 2. 



   Le contrôle du   pH   d'un milieu de fermentation. 



   Les milieux nutritifs employés étaient les mêmes que ceux auxquels se rapporte le Tableau 3. Pour le réglage de la valeur du pH du milieu dans les limites 6,5- 8,5 pendant la fermentation, on peut utiliser toutes sortes de substances qui contiennent de l'azote basique et peuvent fournir des ions d'ammonium 
 EMI13.2 
 et rendre le pH alcalin, par exemple NE? , hH4 OH, (lmZ) 2 CO, (Nh4) 2 0 3 etc.. Divers sels d'ammonium:, tels que (NB)2S04' NH4C1 et NH4NO3 peuvent être utilisés ensemble avec des alcalis caustiques. Les buts essentiels du contrôle du pH consistent à fournir la quantité   requise\d'ions   NH4 au milieu et à favoriser en même temps la réaction enzymique pour accumuler le   1-glutamate.   



  Les résultats ont été donnés dans le Tableau 4. 



   Tableau 4. 
 EMI13.3 
 



  11 OL1 rélé 5 w Pcogt-rlé PH règle 6,5 - 8,5 contrôlé <:) 
 EMI13.4 
 
<tb> 
<tb> ilieu <SEP> Organisme <SEP> Quantités <SEP> Quantités <SEP> Glucose <SEP> Rendements
<tb> d'acide <SEP> d'acide <SEP> consommé <SEP> (%)basés <SEP> sur
<tb> 
 
 EMI13.5 
 1-glutsunique 1-. gl uta!!li que (g/100 ml) glucose (nW100 MI) (/lOfl m1 consonne. 
 EMI13.6 
 
<tb> 
<tb> 



  A <SEP> Bacillus
<tb> subtilis <SEP> 22 <SEP> 420 <SEP> 2.4 <SEP> 17.5
<tb> Micrococcus
<tb> 
 
 EMI13.7 
 '  55-= 240 980 3.2 OQ6 Torulo'Osis "0 812 s., z 3.0 ....i a ,3 Aspergillus i:  û215 8 enz 0 3.4 1 :J'- : .u4l.lA C V Ko 311:2.3 34.) 3.2 10.6 
 EMI13.8 
 (Les compositions des milieux A et B sont les mëes c'Le ;-Cour le Tableau 3). 

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   Le Tableau 4 montre que la fermentation sous un contrôle rationnel du pH est essentielle pour l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide 1-glutamique dans le milieu de culture, tandis qu'en cas d'absence de contrôle du pH, même l'organisme qui accumulerait cet acide autrement, ne parvient pas à l'accumuler. 



    REVENDICATIONS.   



   1 -   Procédé   pour la production d'acide 1-glutamique, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui satisfait à deux conditions biochimiques, dont l'une est la capacité de produire de l'acide   alpha-cétoglutarique   à partir de matières saccharinées et dont l'autre est la possession d'une forte activité de déhydrogénase d'acide   1-glutamique,   spécialement une forte activité pour   l'ami.   nation réductive dudit acide alpha-cétoglutarique, et à régler la valeur du pH du milieu de culture à une valeur de 6 - 9 par   .l'addition   d'agents neutralisants, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide 1-glutamique et ses sels dans le milieu de culture.

Claims

2 - Procédé suivant la revendication 1, dans lequel l'agent neutralisant est l'ammoniaque.

3 - Procédé suivant la revendication 1, dans lequel l'agent neutralisant est l'urée.

4 - Procédé suivant la revendication 1, dans lequel l'agent neutralisant est constitué par au moins un des composés sélectionés parmi les composés contenant un radical azoté basique.

5 - Procédé suivant la revendication 1, dans lequel les agents neutralisants sont les alcalis caustiques.

6 - Procédé pour la production d'acide 1-glutamique, compre- nant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, EMI14.1 un microoru-,.úisi# qui est sélectionné dans le genre .'C11 1 Uâ et <Desc/Clms Page number 15> possède les deux propriétés biochimiques décrites dans la reven dication 1, et à maintenir le pH du milieu de culture à une valeur de 6-9 par l'ajoute d'un composé choisi dans le groupe comprenant 1'ammoniaque, l'urée, l'ammonium et les composés azotés basiques, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide 1-glutamique et sel de celui-ci dans le milieu de culture.

7 - Procédé pour la production d'acide 1-glutamique, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui est sélectionné dans le genre Micrococcus et possède les deux propriétés biochimiques décrites dans la revendication 1, et à maintenir le pH du milieu de culture à une valeur de 6-9 par l'ajoute d'un composé choisi dans le groupe comprenant l'ammoniaque, l'urée, l'ammonium et les composés azotés basiques, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide 1-glutamique et sel de celui-ci dans le milieu de culture.

8 Procédé pour la production d'acide 1-glutamique, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui est sélectionné dans le genre Pseudomonas et possède les deux propriétés biochimiques décrites dans la revendication 1, et à maintenir le pH du milieu de culture à une valeur de 6-9 par l'ajoute d'un composé choisi dans le groupe comprenant l'ammoniaque, l'urée, l'ammonium, et les composés azotés basiques, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide l-gultamique et sel de celui-ci dans le milieu de culture.

9 - Procédé pour la production d'acide 1-glutamique, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui est sélectionné dans le genre Torulopsis et possède les deux propriétés biochimiques décrites dans la revendication 1, et à maintenir le pH du milieu de culture <Desc/Clms Page number 16> à une valeur de 6 - 9 par l'ajoute d'un composé choisi dans le groupe comprenant l'ammoniaque, l'urée, l'ammonium et les composés azotés basiques, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide 1-glutamique et sel de celui-ci dans le milieu de culture.

10 - Procédé pour la production d'acide 1-glutamique, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui est sélectionné dans le genre Bhodotorula et possède les deux propriétés biochimiques décrites dans la revendication 1, et à maintenir le pH du milieu de culture à une valeur de 6 - 9 par l'ajoute d'un composé choisi dans le groupe comprenant l'ammoniaque, l'urée, l'ammonium et les composés azotés basiques, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide 1-glutamique et sel de celui-ci dans le milieu de culture.

11 - Procédé pour la production d'acide 1-glutamique, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui est sélectionné dans le genre Aspergillus et possède les deux propriétés biochimiques décrites dans la revendication 1, et à maintenir le ph du milieu de culture à une valeur de 6 -9 par l'ajoute d'un composé choisi dans le groupe comprenant l'ammoniaque, l'urée, l'ammonium et les composés azotés basiques, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide 1-glutamique et sel de celui-ci dans le milieu de culture.

@ 12 - Procédé pour la production -d'acide 1-glutamique, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui est sélectionné dans le genre Mucor et possède les deux propriétés biochimiques décrites dans la revendication 1, et à maintenir le ph du milieu de culture à une valeur de 6 -9 par l'ajoute d'un composé choisi dans le groupe comprenant l'ammoniaque, l'urée, l'ammonium et les composés <Desc/Clms Page number 17> azotés basiques, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide 1-glutamique et sel de celui-ci dans le milieu de culture.

13 - Procédé pour la production d'acide 1-glutamique, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui est sélectionné dans le genre Streptomyces et possède les deux propriétés biochimiques décrites dans la revendication 1, et à maintenir le pH du milieu de culture à une valeur de 6 - 9 par l'ajoute d'un composé choisi dans le groupe comprenant l'ammoniaque, l'urée, l'ammonium et les composés azotés basiques, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide 1-glutamique et sel de celui-ci dans le milieu de culture.

14 - Procédé pour la production d'un amino-acide, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui satisfait à deux conditions biochimiques,. dont l'une est la capacité de produire des alpha-céto-acides à partir de matières saccharinées et dont l'autre est la possession d'une forte activité pour l'amination réductive desdits alphacéto-acides, et à ajuster et maintenir la valeur du pH du milieu de culture sensiblement dans la zone neutre par l'ajoute d'agents neutralisants, de façon à obtenir l'accumulation d'amino-acides correspondant auxdits alpha-céto-acides dans le milieu de culture.

15 - Procédé pour la production d'alanine, comprenant les phases consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui satisfait à deux conditions biochimiques, dont l'une est la capacité de produire de l'acide pyruvique à partir de matières saccharinées, et dont l'autre est la possession d'une forte activité pour l'amination réductive dudit acide pyruvique, et à ajuster et maintenir la valeur du pH du milieu -le <Desc/Clms Page number 18> culture sensiblement dans la zone neutre par l'ajoute d'agents neutralisants, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'alanine dans le milieu de culture.

16- Procédé pour la production d'acide aspartique comprenant les phases. consistant à cultiver, dans un milieu de culture, un microorganisme qui satisfait à deux conditions biochimiques, dont l'une est la capacité de-produire'de l'acide oxalacétique à partir de matières saccharinées et dont l'autre est la possession d'une forte activité pour l'amination réductive dudit acide oxalacétique, et à ajuster et maintenir la valeur du pH du milieu de culture sensiblement dans la zone neutre par l'ajoute d'agents neutralisants, de façon à obtenir l'accumulation d'une quantité appréciable d'acide aspartique dans le milieu de culture.