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Publication number: BE551420A
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Description


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  La. présente lnvnfc@n a pour objet la préparât ion de composes en 14 de la séwie du pré saturés? ou non atUll@9 orygên0 @n position 18 ou en position 3.1 e 18, ainsi qu@ dG la 2 s dérives fcnationnais. Ses nouveaux composés en lu If} 1; leurs ëéll":1 vés" par enemplo la 14-hyd1"oJQralQ!o!}tél-;;on, 0 ont %,ne act;1o:. plus :rorte tlue les core, poses non hydroylëë es position 14. 

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  On obtient ces nouveaux composes fâ?3.xQ%$16s n 14 de la série du prégnane on soumettant (Ses 14-.îl-prégnance Saturés ou non saturés, oxygénés on position z,$ ou en positif il et 18, à l'action aérobie d'ensymes clo des genres Mucor, Helicontylum, Pleospopa. ou CMrMlas'ia. 



  Les 14-H-prégnanes oxygénés en position 3.8 ou en position 11 et 18, utilisés cmys: xab t,ss 30 départ, présentent de préférence en position 3 et 20e des hydrosylea ou des groupes oxo libres ou oretionn:âl:m.;z t tnedifia. Ils 
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 peuvent être saturés ou renfermer des doublez liaisons, par 
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 exemple en position 1 et/ou 4, ainsi qu'en position 5 6, 7> 8, 9sll, Ils 12 ou 16, ou comporter der3 sub±ti$u&rrf;8 complé- mentaires, tels que des hydroxyles ou dec groupes oxo libres ou modifiés, ainsi que des groupes épomi ou des atomes d'halogène, par exemple en position 2P ee 53 z, 7  8, 9p 12, 15, 16, 17 ou 21, ou des groupes sethyliques, par exemple 
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 en position 17a.

   Les substances de départ indiquées ci-dessus 
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 sont de n'importe quelle cosiflguratlon stérique et peuvent. aussi être z, l'état de recensâtes. co-..orr;nnent également les composés des séries dites noe et/ou o:o, notamment lea 19-nor- et D-homocomposés. Dca substances de départ parti- owlierement importantes sont par exemple la 1$bdrow et la oRaprogestérone, la 3.7a,1$-dih;dror- et la 17-iârot- -o=progestérone, la 18-hydroxy- et la 18-oxo-cortexone, la 17a,18-dihydroxy- et la Lcc-hdrox-18-oxa-oorteaone, 

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 , do'â oi2 la 8  t f32:

   <i'û:,d'fi9"'c t la .8 i'3iD 11-dadx--cooo oo, la l1-épi-18-hydro- et la ll-ép1 18-oo aor3.eoo, la 17a-hYdroXY-aldostérone la 18- atd^o3-&doc2, la 18-hydoxy- et la l8-axe-cortisone, les 1-ddlledro- et 21cxo-cooa corrospcadants et/ou les 9a-fluopo-, 9s-chlopo- ou .2s-Ramo- et -aRsamo-dà,cr9 par sxempl@ la 9e-flopo-aMostGna et la 9a-flpoF-o-l¯ ddhydro-aldostérone, la 9o-flw3?o-l8-hydroxy-co2*ticosfcéî?on et la '( .C.o  .Cd'mBSid3 S S .- ."ro-cor, f/.ostérone. Dans les substances de dé>art, .e.'E,'gPi''4TâF'.''' fonetionn@ll@ment modifié est 35 ' fia F39 un hydroxyle '''.'9., par Sfifi5tw' pas  un acide cnrboQrl1que al1phat1ueo aromatiquo ou hétéroesllqw, par exemple par les acides acét1G 9 . ca.oiao, ben2oue ou furae-c?boJ11u; ou un hydyosyle éthé1f1é, par exemple le groupe csL 6adx o$r,'RS.,9 be-nsylossy OM PN::,a8''R' méthoxy.

   Il groupe oo tonctinn011emcnt modifié est &vantag- eusement Ma groupe oxo eétallsë ou acétaliaé, ddloluant notamment d'un alcool divalent, par eKSsple 2c groupe éyRnna d1o=yo par groupe crboyl1uc ronctionncl1mcnt modifié, on entend en premier lieu un grcute cabozyl1que atérlf1é ou lactonlsé. 



  Conformément au poedé les substances de départ 
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 indiquées sont amenées à réagir sur des ensymes de' champignons 
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 des genres Mucor, H11cogtylum, Pleospora ou Curvularia, notamment de l'espsee Pleospora. gaeumanni, ainsi que des 

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 espèces Mueor   griseocyamus,   Mucor parasiticus, Helicostylum piriforme   -et     Curvularia   pallescens.

   Pour leur obtention sont   .     appropries   des milieux en eux-mêmes connus,par exemple ceux renfermant des sucres comme le glucose ou le lactose, des peptones, de l'eau de gonflement du   maïs.,   des produits- du soja et analogues, ainsi que des sels minéraux, ou alors des solutions nutritives   synthétiques.     On   travaille notamment dans des conditions aérobies, par exemple en culture d'agi-   tation,   ou par croissance immergée avec agitation et amenée d'air. Les champignons indiqués se différencient d'autres microorganismes, par exemple de bactéries, par leur bonne croissance dans des conditions de culture relativement simples.

   La réaction conforme au présent procédé a lieu dans la culture de champignons décrite ci-dessus ou à   l'aide   des enzymes qu'elle renferme,le cas échéant après enrichissement ou séparation, ainsi donc dans le cas le plus simple, dans une suspension du mycélium du champignon séparé, du mycélium du champignon homogénéisé ou dans des filtrats ou des extraits aqueux du   mycélium.   



     On   peut isoler les produits du procédé par des méthodes connues . Leur séparation peut avoir lieu par exemple en extrayant le mélange réactionnel avec un solvant organique, par exemple avec du chlorure de méthylène ou de l'acétate d'éthyle.Pour purifier davantage l'extrait ainsi obtenu on opérera notamment par chromatographie, par exemple sur 

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 de l'oxyde d'aluminium ou sur du gel de siliceau moyen des méthodes de répartition par exemple par le   procède   à contre-courant ou par séparation à l'aide de réactifs de 
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 Girard, tels que le chlorure de trlméthyl-acéthyâraside- ammonium ou le chlorure daeëthydrazide-pyrMinima.

   Apres la purification ou à sa place, on effectue finalement une   recristallisation,   de préférence dans des solvants organiques ou dans des solvants organiques aqueux. 
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  Par introduction de l'hydrosyle en 14, on par- vient à de précie l4-hydrocy'.prgnaneSj, ogënës en position 18 ou en position 11 et 18, et à leurs dérivés,   qui,     comparés   aux composés thérapeutiquement actifs qui ne sont pas hydroxylés en position 14, se caractérisent par une efficacité accrue. 



  Par composés   oxygénés  on entend alors ceux qui renferment des hydroxyles, des groupes oxo ou des groupes acides libres 
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 ou fonetîonnellemp-rlt modifiés, tels que les esters éthera, lactones thioesterSj, thîodthers, thiol- et thlan-esters, acétals, rnercaptalsj) cétals, les dérives énoliques tels que les esters énol1quesD les éthers énoliques ou les énaaiînesj, les hydrasones, les semi-carbazones et analogues.

   Parmi les produits du présent procédé, il y a lieu de citer notamment la 14a,18-dlhydrox-y- et la 14a-hYdroxY-18oxo-progestéronej) la 14a,17aJ>18-trihydroJ- et la 14a.,17a-dîhydro,-y-18-or.o- progestérone, la 14a;18-dhyàroff- et la l4a-hy<3roxy-â8-oxo- cortexone, la I4a,17a,l8-trihydroxy- et la 14a;17a-dihydroxy- 

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 .8-oxo-cor'ceone la 14a-hyd:r'oz.y .,8 Idos tél"on9 , la lia;) 18- âihydroxy-cort.cotérone et la âa:8-dhyex aâ,-.'-dhdro- cortloostérone, la il-drî-14ael8-dibydroxj- et la l1-épi- 14a-.hydroxy-18-oxo-corticostérone, la Ia,.7a-dihyeroë:y-a.-. dostérone, la la, .8-d.hydroxy-hyirocor;

  isane, la .a.,18- dihydroxy- et la 14a-hydroxy-18-oxo-cortisone, les 1-déhydro- et les 21-oxo-composés correspondants, ainsi que les dérivés fonctionnels correspondants,tels que les esters, les éthers, 
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 les dérivés halogénés, par exemple les 9a- ou 12<x-halogéno- en particulier les fluoro- ou chloro-composés, par exemple la l4a-hydroxy-9a-fluoro-aldostérone et la l4ct-hy<Sroxy-9#- fluora-1-déhdro-a.doetrone9 la l4a,l8-dlhydrosy-9a-fluoro- corticostérone et la la,:l.8-dihrdroxy-9a-fluaro--1-déhydro-   corticostérone.   Pour autant que les produits du procédé ne présentent pas la configuration et les substituants de stéroïdes   thérapeutiquement   utilisables, ils peuvent être utilisés comme produits intermédiaires pour leur préparation, par exemple pour la préparation des composés indiqués ci-dessus. 



   Les produits   réactionncls   obtenus conformément au présent procédé peuvent être transformés, d'une manière en elle-même connue, en leurs dérivés fonctionnels tels que les dérivés oxygénés,soufrés ou azotés, par exemple en esters, 
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 éthers, esters -énoliques, éthers énoliques, cétals, thloethers et thïoeétalzt ainsi qu'en hydrazines, en oximes et en énamines; de plus, les hydroxyles peuvent être   deshydrogénéa   

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 en groupes 0,"0. Bans ces composés . toutes les fonctions hydroxyles et/ou oxo ou les unes seulement être modifiées fônctionnellement. 
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  Dans les esters et les esters énoliques, les restes d'acide sont ceux de n'importe quels acides organiques 
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 ou inorganiques, par exemple les restes d'acides cal00,culîques, thioncarboxyliquesp thîolëc,,4rbo2fyliques ou suif niques aliphatiques, allcyclîques, aral1phatiquesp aromatiques ou htérocycl1quesJl de préférence les restes des acides fornique, acétique, des acides chloracétiques, des acides trifluor- acétique, propîonîque, des acides butyriques,, des acides valérianiques, des acides triméthylacétique d1éthylaoétlque des acides caproigrao, des acides oenanthiques , des acides capryliques, des acides palmitiques, dos acides crotoiilque, unâécaniquà, unaécYléniquep oxalique, succinique, pim61ique, maléïque, lactique, des acides carbamlquesg des acides al- coxycarboxyliquesy des acides p-cyclopeïitylpropioniquej, hexa- hydrobenzoïquej,

   benzoïque, p7àiénylacétique, cyclohazylacétîque, des acides phénylpropioniqueSg des acides triméthylgaln4que, phtalique, furanne-2-carboxylique, isonicotinique., méthane- sulfoniquep toluène-sulfonique, des acides sun.furîques, des 
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 hydracides halogènes ou des acides phosphoriques. 



  Si on le désire, on peut, dans les composés ob- tenus, transformer en groupes libres les hydroxyles ou les groupes oxo fonctionnellement modifiés. De cette manière, on 

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 peut mettre en liberté les groupes fonctionnellement modifiés, aussi partiellement, notamment dans les dérivés polysubstitués. 



   Cela a lieu; par exemple, par hydrolyse chimique ou enzyma- tique, par exemple en utilisant des agents acides ou basiques, par alcoolyse ou par   acétalisation   couplée. A partir des dérivés obtenus de cette manière ou aussi directement, qui ne sont que partiellement modifiés, par exemple estérifiés ou éthérifiés, on peut, par modification subséquente des diverses fonctions présentes, par exemple par estérification ou éthérification, préparer des dérivés polysubstitués, notam- ment aussi des esters ou des éthers mixtes ou des ester-éthers. 



   Si, lors de l'hydrolyse, effectuée notamment avec des agents alcalins, les 9,11- ou les 12,11-halogène-hydrines ont été transformées en les 9,11- ou 11,12-époxy-composés correspondants, ces derniers peuvent être de nouveau transformées en 9,11- ou 12,11-halogène-hydrines désirées, par l'action d'hydracides halogénés, notamment d'acide fluorhydrique ou d'acide chlor- . hydrique. 



   Les produits du procédé peuvent être utilises- comme produits intermédiaires pour la préparation d'autres produits précieux ou, certains d'entre eux,comme médicaments. 



   L'invention concerne également, à titre de produits industriels nouveaux, les composés définis ci-dessus, 

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L'invention est décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent, dans lesquels les températures sont indiquées en degrés centigrades. 



   Exemple 1 
A une culture de Pleospora gaeumanni, bien   dé- .   veloppée par agitation à 28 , âgée de quatre jours,dans 500 cm3 d'une solution aqueuse à 70% de moût de bière, avec 0,5 cm3   d'huile   de baleine, on ajouté, dans des conditions stériles, une solution de 125   mg     d'aldostérone,   dans   10     car   d'acétone. 



    On   continue d'agiter la suspension pendant quatre jours à la même   température.   On sépare alors le mycélium et le lave bien à l'eau et à   l'acétate   d'éthyle.. Après   avoir réuni les     solution   claires, on les extrait à l'acétate   d'éthyle.     On   lave a l'eau les   solutions   d'acétate d'éthyle, les sèche et les évapore sous vide. On dissout le résidu dans du méthanol à 80% et extrait à plusieurs   reprises/avec   de l'éther de pétrole. On évapore ensuite complètement sous vide les so- lutions méthanoliques.

   Un chromatogramme sur papier du résidu   (propylène-glycol-toluène)   montre à côté de peu   d'aldostérone*   la   14[alpha]-hydroxy-aldostérone   qui migre un peu plus lentement. 



  On sépare la totalité du résidu à   l'aide   d'un chromatogramme préparatoire sur papier (propylène-glycol-toluène). Les,-zones correspondant à la   14a-hydroxy-aldostérone   sont découpées et extraites à plusieurs reprises avec du méthanol à 50%. On 

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 élimine ensuite le méthanol soue vide, extrait la solution aqueuse qui reste à plusieurs reprises avec de l'acétate   d'éthyle,   lave à l'eau les solutions d'acétate d'éthyle après les avoir réunies, les sèche et les évapore sous vide; on 
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 obtient comme résidu de la l4a-hydroxy-aldostérone pure. 



   On peut aussi effectuer l'incubation de   l'aldo-   stérone dans 500 cm3   d'une   culture aqueuse, bien développés, de Curvularia   pallescens   qui renferme les adjuvants   suivants:   5   g; de   sucr de canne, 5 g de   triptone   Difco, 1 g de nitrate de sodium, 0,5 g   d'orthophosphate   secondaire de potassium, 0,25 g de sulfate de magnésium, 0,25 g de chlorure de potassium,      5 mg de sulfate de fer heptahydrate, 1,25 g de carbonate de calcium et 0,5 cm3 d'huile de baleine. Le traitement a lieu comme indiqué ci-dessus. 
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 la l4a-hydroxy-aldostrone ainsi obtenue peut être estérifiée comme suit;On recouvre 100 mg de ce produit avec 0,2 cm3 de pyridine et 0,4 cm3 d'anhydride   acétique.   



  On laisse la solution reposer pendant 15 heures à 20  et l'évaporé ensuite, après y avoir ajouté   de l'eau,   sous un vide habituellement utilisé et finalement sous un vide poussé, 
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 à 35 . On obtient comme résidu du 3$, 2i-r,a cébate de-la l4a-   hydroxy-aldostérone.   



   Exemple 2 
A une culture de Pleospora gaeumanni 

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 veloppée par agitation à 28 , âgée de quatre Jours;,dans 500 cm d'une solution aqueuse à 78% de moût de bière, avec 0,5 cm   d'huile-de   baleine, on ajouté., dans des conditions   stériles    une solution de 125 mg de 1-déhydro-aldostérone (préparée de manière   comme,   par exemple suivant les indications de la demande de brevet déposée par la demanderesse le 6 février 1956 et ayant pour titre ; "Procédé de préparation de déhydro- composés de la série des stéroïdes") dans 10   car d'acétone*   On continue d'agiter la suspension pendant quatre jours à la mime température.

   On traite alors le mélange réactionnel comme indiqué à l'exemple 1 et   isole,   également comme indiquée la   1-déhydro-14[alpha]-hydroxy-aldostérone,   à l'aide d'un chromato- gramme préparatoire sur papier (propylèneglycol-toluène), elle migre un peu plus lentement que la   1-déhydro-aldostérone.   



   Pour l'estérification on recouvre la 1-déhydro-   14[alpha]-hydroxy-aldostérone   ainsi obtenue avec 0,2 cm3 de pyridine et 0,4   en,3   d'anhydride   acétique*   laisse reposer la solution pendant 15 heures à 20 , et l'évaporé alors sous un vide habi- tuellement utilisé, puis finalement sous un vide poussé, à 35 . On obtient comme résidu le 18,21-diacétate de la   1-déhydro,,   14a-hydroxy-aldostérone. 



   Exemple 3      
On fait réagir 125 mg de   (18# 11ss)-lactone   du   #4-3,20-dioxo-11ss-hydroxy-prégnène-18-oïque   (qu'on obtient 

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 de manière connue;, par exemple comme Indiqua dans la   demande   de brevet de perfectionnement déposée le 17 mai 1956 par Monsieur   REICHSTEIN,     Tadéus   et ayant pour titre :

   "Procédé de préparation de stéroïdes oxygénés et nouveaux composés ainsi obtenus"), comme il a été indique dans les exemples 1 et 2 ci-dessus, dans une culture de Pleospora   gaeumanni.   On traite également le produit réactionnel comme   indiqué   dans 
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 ces exemples et isole comme indiqué la (18 ----}11)-lactone formée, du A ¯j5,20-dioxo¯ll±, l4a-dihydroxy-prëgnène<-l8- orque.

Claims

Revendications I. Un procède de préparation de nouveaux composés hydroxylés en 14 de la série du prégnane et de leurs dérivés fonctionnels, caractérisé par le fait qu'on soumet des 14-H- prégnanes, saturés ou non saturés, oxygénés en position 18 ou en position 11 et 18, à l'action aérobie d'enzymes de champignons des genres Mucor, Helicostylum, Pleospora ou Curvularia et qu'on transforme, le cas échéant, les produits réactionnels obtenus en leurs dérivés fonctionnels.

Le présent procédé peut encore être caractérisé par les points suivants: 1) On utilise des cultures de Pleospora gaeumanni ou de Curvularia pallescens, ou les enzymes qu'elles ren- ferment .

2) On utilise comme substances de départ des A - 3,20-dioxo-14-H-prégnènes oxygénés en position 18 ou en position 11 et 18.

3) On utilise l'aldostérone comme substance de départ.

4) On utilise la 17a-hydroxy-aldostérone comme substance de départ.

5) On utilise la 18-hydroxy -hydrocortisone comme substance de départ.

6) On utilise la 18-hydroxy-cortexone comme substance <Desc/Clms Page number 14> de départ. EMI14.1 7) On utilise la 17a,.8--d3hydroxy-oortecoâ2e comme substance de départ.

8) On utilise comme substance de départ la (18# 11)- EMI14.2 lactone du 4-3, 20dioco-Iï-hyaroxy-prgnén-18-oicue .

9) On utilise comme. substances-.:de départ les 1- EMI14.3 déhydro-d6rivéà Ses composés indiqués,sous 2) à 8) .

10) On 'utilise comme substances, de départ les 9a- ou' 12a-fZuors:: ou -chloro-dériv6s des composés Indiquée sous 2) à 9).

II. A titre de produits industriels nouveaux: 11) Les composés obtenus par la mise en oeuvre du procédé défini sous I. et 1) à 10).

12) Les composés hydroxylés en 14 de la série du prégnanes satures et non saturés, oxygénés en position 18 ou en position 11 et 18, et leurs dérivés fonctionnels. EMI14.4

13) Les A -3,20-dioxo-l4a-hydroxy-prégnènes oxygénés en position 18 ou en position 11 et 18, et leurs dérivés fonctionnels.

14) La 14a-hydroxy-aldostérone et ses dérivés fonc- tionnels . EMI14.5

15) La ia,17a-dihydroxy-.a iostrone et ses dérives fonctionnels. EMI14.6

16) La I4a,l8-dihydroxy -hydrocortisone et ses dérivés <Desc/Clms Page number 15> EMI15.1 i-:Cj1t1ctior1t1el.B 17) La atrd,?"' .Y.83:Ir' pr'f.te, et ses dérivés fonctionnels 0 13) La l..1.;,'q.&hydroxy-mortexone et ses dérivés ft)(l:lÍ}?iÈllZ?J!J3 19) Ra (18##Hlactone du A4¯3.p;;W-diOXo-llf),,14a- :yan.ozb"-i.=tnel8oïqe et ses dérivés fonctionnels.

20) Las û'maioeo,o,x.préaliêznes o;:.1gdhil{; en vm.dtiOf;1 18 ou en position 11 et 18., et leurs cl0rivés 4.'t3C4:é -'Z).e>i SI) Ls .<ron,4=hydroxy-aldostérone et ses ,']&.:(7! i'}r.1Q.:tO1:1].1t:J SS) 3 -ô o La:-;4ae:-o.agafluoro- et }('-'0:h,?)1'O-;1"';:'0gn'i.19û ô2ygé;;és en position 11 et 18, et leurs dérivée fOtlct!on#l.

23) Lss ." r' ''- uo.-Yroxo:.9a-fluoro et -, :lowe;ë: ¯¯wG.w oxygénés en position 11 et 18, et at,-'3a. déï:'i'{fér.1l fosatiomiels.

. 24) L21âi ç, r:3.eso l4a..,ye.-.c2a-'fluoro- et ç",1s=ahlo];I':)=v:!}(;gi!:1,l1²nG1ËJ oxygénés en position il et 18 et leurs dr-.-:r0:; :eo'1r,,;t;iO!.1kl.J: 25J Z/f8 L, 1 9,9 ;,.oxoa4a-hydroxy-12a-fluoro- et 12o; >Iïïoï o-pî?égna#ièn@s oxygénés en position 11 et 18*. et 1;lir'a <3piv3 .s3Lâ ,i.E.$âam.e. s