AT515178A2 - Curcumin-er, ein nanocurcumin aus liposomalem plga mit anhaltender freisetzung zur minimierung der qt-verlängerung zur krebstherapie - Google Patents

Abstract

Die vorliegende Erfindung beinhaltet Zusammensetzungen und Verfahren zum Herstellen einer Nanopartikel-Zusammensetzung, welche einen polymeren Kern enthält, der mindestens ein Polymer und mindestens einen Wirkstoff und mindestens eine Schicht mindestens eines Lipids auf der Oberfläche des polymeren Kerns enthält; insbesondere betrifft die Erfindung die Verwendung von Curcumin in einer solchen Lipid-Polymer-Nanopartikel-Formulierung zur Minimierung der QT-Verlängerung in Verbindung mit Curcumin bei der Behandlung von Krebs.

Description

GEBIET DER ERFINDUNG

Die vorliegende Erfindung betrifft allgemein Nanopartikel, dieeinen polymeren Kern enthalten, der mindestens ein Polymer undmindestens einen Wirkstoff und mindestens eine Schicht mindes¬tens eines Lipids auf der Oberfläche des polymeren Kerns ent¬hält. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung dieVerwendung von Curcumin in einer solchen Lipid-Polymer-Nanopar-tikel-Formulierung zur Minimierung der QT-Verlängerung in Ver¬bindung mit Curcumin bei der Behandlung von Krebs.

ALLGEMEINER STAND DER TECHNIK

Der mit der Erfindung verbundene Stand der Technik wird in Ver¬bindung mit der Zuführung pharmazeutischer Wirkstoffe beschrie¬ben, ohne den Geltungsumfang der Erfindung einzuschränken. US-Patent 7,968,115 an Kurzrock (eingereicht am 7. September2005) sieht eine Zusammensetzung und Verfahren zur Behandlungvon Krebs, einschließlich Bauchspeicheldrüsenkrebs, Brustkrebsund Melanom, bei einem menschlichen Patienten vor. Die Verfahrenund Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwenden Cur¬cumin oder ein Curcumin-Analog, das in einem kolloidalen Arznei¬mittelzuführungssystem, vorzugsweise in einem liposomalenArzneimittelzuführungssystem, eingekapselt ist. Geeignete kol¬loidale Arzneimittelzuführungssysteme sind auch Nanopartikel,Nanokapseln, Mikropartikel oder Block-Copolymer-Mizellen. DasCurcumin oder ein Curcumin-Analog einkapselnde kolloidale Arz¬neimittelzuführungssystem wird parenteral in einem pharmazeu¬tisch geeigneten Träger verabreicht. US-Patent 8,202,839 an Sung (eingereicht am 7. Januar 2012)offenbart eine aus Chitosan, Polyglutaminsäure und einem bioak¬tiven Mittel zusammengesetzte pharmazeutische Zusammensetzungbioaktiver Nanopartikel zur oralen Zuführung. Die chitosanba-sierten Nanopartikel sind durch eine positive Oberflächenladungund verstärkte Durchlässigkeit zur oralen Arzneimittelzuführunggekennzeichnet.

Die US-Patentanmeldung mit der Publikationsnummer20120058208 von Jacob (Synergistische Zusammensetzung zur Ver¬stärkung der Bioverfügbarkeit von Curcumin) (eingereicht am 8.März 2012) betrifft eine Zusammensetzung zur Verstärkung der

Bioverfügbarkeit von Curcumin. In einer Ausführungsform ist eineZusammensetzung vorgesehen, welche Pflanzenextrakte von Curcu¬min, Vanille und Ingwer enthält, wobei die Extrakte von Ingwerund Vanille reich an Gingerol bzw. Vanillin sind. In anderenAusführungsformen sind Curcumin und mindestens ein Element, dasaus der Gruppe Vanille, Ingwer und Capsaicin ausgewählt ist,vorgesehen.

Die US-Patentanmeldung mit der Publikationsnummer20120003177 von Shen (Curcumin enthaltende Polymere und wasser¬lösliche Curcuminderivate als Propharmaka von Propharmaka-Trä-gern) (eingereicht am 5. Januar 2012) beschreibt Curcumin, einaus dem Kurkuma-Rhizom extrahiertes Polyphenol, das polymeri¬siert worden ist, um ein Polymermaterial herzustellen, das einGerüst aus mindestens einer sich wiederholenden Struktureinheitaufweist, von denen mindestens eine einen Curcuminmonomerrestenthält. Diese Curcumin enthaltenden Polymere haben ein breitesSpektrum an pharmakologischen Aktivitäten, einschließlich unteranderem tumorhemmende, antioxidative, entzündungshemmende,thrombosehemmende und antibakterielle Aktivitäten. Bestimmte Ar¬ten dieser Polymere wiesen beträchtliche tumorhemmende Aktivitätauf. Es sind auch wasserlösliche Curcuminderivate und deren Ver¬wendung als Propharmaka und Propharmakaträger offenbart.

KURZBESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Niedrige Löslichkeit, niedrige Bioverfügbarkeit, QT-Verlängerungund schnelle Beseitigung in vivo sind Probleme in Verbindung mitCurcumin. Die Vorteile von liposomalem Nanocurcumin sind keineQT-Verlängerung, hohe Bioverfügbarkeit und geringe Beseitigungin vivo, aber der Nachteil ist die rasche Freisetzung. Die Vor¬teile von polymerem Nanocurcumin sind hohe Bioverfügbarkeit, an¬haltende Freisetzung und geringe Beseitigung in vivo, aber derNachteil ist QT-Verlängerung. Die Vorteile von Hybrid-Nanocurcu-min sind hohe Bioverfügbarkeit, anhaltende Freisetzung, keineQT-Verlängerung und geringe Beseitigung in vivo.

Die vorliegende Erfindung beinhaltet Verfahren und Zusammen¬setzungen, umfassend einen polymeren Nanopartikelkern, umfassendmindestens ein Polymer und mindestens einen Wirkstoff; und min¬destens eine Schicht mindestens eines Lipids auf der Oberflächedes polymeren Kerns. Das mindestens eine Polymer kann PLGA um¬ fassen; und/oder mindestens ein Polymer, das aus der Gruppe aus¬gewählt ist, die aus Poly(milchsäure), Polylactid (PLA) undPoly-L-lactid-co-s-caprolacton (PLCL) besteht. In bestimmten Er¬scheinungsformen umfasst der mindestens eine Wirkstoff Curcuminoder ein Curcuminoid. Der Wirkstoff kann mindestens ein krebs¬hemmendes Arzneimittel umfassen; und/oder aus mindestens einemeines krebshemmenden Arzneimittels, einem Antibiotikum, einemVirustatikum, einem Antimykotikum, einem Antihelmintikum, einemNährstoff, einem kleinen Molekül, einer siRNA, einem Antioxidansund einem Antikörper ausgewählt sein. In bestimmten Erschei¬nungsformen verursacht die Nanopartikel-Zusammensetzung keineQT-Verlängerung. In bestimmten Erscheinungsformen hat die Nano-partikel-Zusammensetzung hohe Bioverfügbarkeit. In bestimmtenErscheinungsformen kann der Wirkstoff ein konventionelles Ra¬dioisotop umfassen. Der mindestens eine Wirkstoff umfasst einenwasserunlöslichen Farbstoff; und/oder ein Metall-Nanopartikel,zur Verwendung als Kontrastmittel für die MRT; und/oder zur Aus¬wahl aus der Gruppe, die Nil-Rot, Eisen und Platin enthält. Inbestimmten Erscheinungsformen umfasst das mindestens eine Lipid1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholin (DMPC); und/oder Di-myristoylphosphatidylglycerol (DMPG); 1,2-Dioctadecanoyl-sn-gly-cero-3-phosphoethanolamin (DSPE), 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-[amino(polyethylenglycol) (DSPE-PEG), DMPE-PEG-Maleimid, Lecithin, Cholesterin, 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-(lissaminrhodamin-B-sulfonyl) (Ammonium¬salz) und 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-(7-nitro-2-1,3-benzoxadiazol-4-yl) (Ammoniumsalz). In verschiedenenErscheinungsformen kann die Nanopartikel-Zusammensetzung DMPCund DMPG in einem Molverhältnis von 9:1, 7:3, 8:2 oder 7,5:2,5enthalten. In bestimmten Erscheinungsformen können die Nanopar-tikel mindestens ein Targeting-Mittel umfassen, wobei das Targe¬ting-Mittel den Nanopartikel selektiv und gezielt zu erkranktemGewebe/erkrankten Zellen bringt, wodurch die Ganzkörperdosis mi¬nimiert wird; und/oder wobei das Targeting-Mittel einen Antikör¬per oder ein funktionelles Fragment davon enthält, der bzw. dasin der Lage ist, ein Zielantigen zu erkennen; und/oder ausge¬wählt aus der Gruppe, die aus einem Antikörper, einem kleinenMolekül, einem Peptid, einem Kohlenhydrat, einer siRNA, einemProtein, einer Nukleinsäure, einem Aptamer, einem zweiten Nano¬partikel, einem Zytokin, einem Chemokin, einem Lymphokin, einem

Rezeptor, einem Lipid, einem Lectin, einem eisenhaltigen Metall,einem Magnetpartikel, einem Linker, einem Isotop oder Kombina¬tionen davon besteht. In bestimmten Erscheinungsformen haben dieNanopartikel eine Größe von 90 bis 150 nm. Die Bioverfügbarkeitdes Wirkstoffes kann erhöht werden, eine QT-Verlängerung ist re¬duziert und der Wirkstoff kann anhaltend freigesetzt werden.

Die Erfindung beinhaltet Ausführungsformen von Verfahren zumBilden einer Nanopartikel-Zusammensetzung, welche das Bilden ei¬ner organischen Phase durch Kombinieren mindestens eines Poly¬mers, mindestens eines Lösungsmittels und mindestens einesWirkstoffes; Bilden einer wässrigen Lipidphase durch Mischenmindestens eines Lipids mit Wasser; Mischen der organischen Pha¬se mit der wässrigen Lipidphase, wodurch eine Emulsion gebildetwird; und Inkubieren der Emulsion, wobei eine Selbstorganisationvon Nanopartikeln stattfindet. Das mindestens eine Polymer kannPLGA umfassen; und/oder mindestens ein Polymer, das aus derGruppe ausgewählt ist, die aus Poly(milchsäure), Polylactid(PLA) und Poly-L-lactid-co-s-caprolacton (PLCL) besteht. Die or¬ganische Phase kann PLGA in einer Konzentration von 2-90 mg/ml;und/oder Curcumin in einer Konzentration von 1-15 Gew./Vol.-%enthalten. In verschiedenen Erscheinungsformen kann das mindes¬tens eine Lösungsmittel ein organisches Lösungsmittel; Acetoni¬tril; mindestens ein Lösungsmittel, das aus der Gruppeausgewählt ist, die aus Aceton, tert-Butylalkohol, Dimethylfor¬mamid und Hexafluorisopropanol besteht, umfassen. Der mindestenseine Wirkstoff umfasst Curcumin oder ein Curcuminoid; und/odermindestens ein krebshemmendes Arzneimittel; und/oder ein konven¬tionelles Radioisotop; und/oder mindestens einen Wirkstoff, deraus der Gruppe ausgewählt ist, die Nil-Rot, Eisen und Platinenthält. In bestimmten Erscheinungsformen kann das mindestenseine Lipid DMPC; und/oder DMPG und/oder mindestens ein Lipid um¬fassen, das aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus 1,2-Dioctade-canoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin (DSPE), 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-[amino(polyethylenglycol)(DSPE-PEG), DMPE-PEG-Maleimid, Lecithin, Cholesterol, 1,2-Dimy-ristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-(lissaminrhodamin-B-sulfonyl) (Ammoniumsalz) und 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phos-phoethanolamin-N-(7-nitro-2-l,3-benzoxadiazol-4-yl) (Ammonium¬salz) besteht. In bestimmten Erscheinungsformen umfasst dasmindestens eine Lipid DMPC und DMPG in einem Molverhältnis von 9:1, 7:3, 8:2, 7,5:2,5. In bestimmten Erscheinungsformen bein¬haltet das Mischen der organischen Phase mit der wässrigen Li¬pidphase langsames Einrühren der organischen Phase in diewässrige Lipidphase; und/oder das Mischen der organischen Phasemit der wässrigen Lipidphase beinhaltet Vortexen; und/oder dasMischen der organischen Phase mit der wässrigen Lipidphase bein¬haltet ferner Beschallen. In bestimmten Erscheinungsformen bein¬haltet das Inkubieren der Emulsion das 2-stündige Rühren derEmulsion. In bestimmten Erscheinungsformen kann das Verfahrenferner das Trennen der Nanopartikel nach Inkubieren der Emulsi¬on; und/oder Filtrieren der Nanopartikel nach dem Inkubieren derEmulsion; und/oder Einfrieren der Nanopartikel; und/oder Lyophi-lisieren der Nanopartikel; und/oder Anbringen eines Targeting-Mittels an die Nanopartikel; und/oder Anbringen mindestens einesTargeting-Mittels beinhalten, wobei das Targeting-Mittel den Na¬nopartikel selektiv und gezielt zu erkranktem Gewebe/erkranktenZellen bringt, wodurch eine Ganzkörperdosis minimiert wird;und/oder Anbringen mindestens eines Targeting-Mittels an die Na¬nopartikel, wobei das Targeting-Mittel einen Antikörper oder einfunktionelles Fragment davon enthält, der bzw. das in der Lageist, ein Zielantigen zu erkennen. In bestimmten Erscheinungsfor¬men haben die Nanopartikel eine Größe von 90 bis 150 nm.

Die Erfindung beinhaltet Ausführungsformen pharmazeutischerMittel, die einen Nanopartikel zur Arzneimittelzuführung enthal¬ten, umfassend ein Polymer, einen Wirkstoff und mindestens eineSchicht mindestens eines Lipids, welches das Polymer und denWirkstoff einkapselt.

Die Erfindung beinhaltet Ausführungsformen zum Behandeln ei¬nes Patienten, der vermutlich an einer Krankheit leidet, welchedas Verabreichen von Nanopartikeln beinhalten, wobei die Nano¬partikel einen polymeren Kern enthalten, der mindestens ein Po¬lymer und mindestens einen Wirkstoff und mindestens eine Schichtmindestens eines Lipids auf der Oberfläche des polymeren Kernsenthält. In bestimmten Erscheinungsformen beinhaltet das Verab¬reichen von Nanopartikeln das Verabreichen des Nanopartikelsdurch intramuskuläre, subkutane, intravaskuläre oder intravenöseVerabreichung. Die Krankheit kann aus der Gruppe ausgewähltsein, die aus neurologischen, onkologischen und metabolischenKrankheiten besteht; und/oder aus der Gruppe, die aus Parkinson-Krankheit, Alzheimer-Krankheit, multipler Sklerose, ALS, einer

Folgeerscheinung, Verhaltens- und Kognitionsstörungen, einerKrankheit aus dem autistischen Spektrum, Depression und neo¬plastischer Krankheit besteht; und/oder Krebs. In bestimmten Er¬scheinungsformen wird der Wirkstoff anhaltend freigesetzt.

Die Erfindung beinhaltet Ausführungsformen einer Zusammen¬setzung, welche einen polymeren Nanopartikelkern enthält, ent¬haltend mindestens ein Polymer und Curcumin und mindestens eineSchicht mindestens eines Lipids auf der Oberfläche des polymerenKerns.

Die Erfindung beinhaltet Ausführungsformen des Bildens einerNanopartikel-Zusammensetzung, enthaltend das Bilden einer orga¬nischen Phase durch Kombinieren mindestens eines Polymers, min¬destens eines Lösungsmittels und Curcumin; Bilden einerwässrigen Lipidphase durch Mischen mindestens eines Lipids mitWasser; Mischen der organischen Phase mit der wässrigen Lipid¬phase, wodurch eine Emulsion gebildet wird; und Inkubieren derEmulsion, wobei eine Selbstorganisation von Nanopartikeln statt¬findet .

Die Erfindung beinhaltet Ausführungsformen pharmazeutischerMittel, die einen Nanopartikel zur Arzneimittelzuführung enthal¬ten, umfassend ein Polymer, Curcumin und mindestens eine Schichtmindestens eines Lipids, welches das Polymer und den Wirkstoffeinkapselt.

Die Erfindung beinhaltet Ausführungsformen zum Behandeln ei¬nes Patienten, der vermutlich an einer Krankheit leidet, wobeidas Verfahren das Verabreichen von Nanopartikeln beinhaltet, wo¬bei die Nanopartikel einen polymeren Kern enthalten, der mindes¬tens ein Polymer, Curcumin und mindestens eine Schichtmindestens eines Lipids auf der Oberfläche des polymeren Kernsenthält.

Eine weitere Ausführungsform beinhaltet eine Zusammensetzungzum Behandeln von Krebs, enthaltend: einen polymeren Nanoparti¬kelkern, der mindestens ein Polymer und mindestens eines ausCurcumin oder Curcuminoiden; und mindestens eine Schicht mindes¬tens eines Lipids auf der Oberfläche des polymeren Kerns ent¬hält, wobei die Zusammensetzung keine QT-Verlängerungverursacht, wenn ein Individuum mit ihr versehen wird. In einerErscheinungsform umfasst das mindestens eine Polymer mindestenseines aus Poly(milchsäure-co-glycolsäure) (PLGA), Poly(milchsäu-re), Polylactid (PLA) oder Poly-L-lactid-co-s-caprolacton (PLCL).

Eine weitere Ausführungsform beinhaltet ein Verfahren zumBilden einer Nanopartikel-Zusammensetzung, enthaltend: Bildeneiner organischen Phase durch Kombinieren mindestens eines Poly¬mers, mindestens eines Lösungsmittels und mindestens eines ausCurcumin oder Curcuminoiden; Bilden einer wässrigen Lipidphasedurch Mischen mindestens eines Lipids mit Wasser; Mischen derorganischen Phase mit der wässrigen Lipidphase, wodurch eineEmulsion gebildet wird; und Inkubieren der Emulsion, wobei eineSelbstorganisation von Nanopartikeln stattfindet und wobei dieCurcumin oder Curcuminoid-Nanopartikel keine QT-Verlängerungverursachen, wenn ein Individuum mit ihnen versehen wird.

Eine weitere Ausführungsform beinhaltet ein Verfahren zumBehandeln eines Patienten, der vermutlich an einer Krankheitleidet, wobei das Verfahren das Verabreichen von Nanopartikelnbeinhaltet, wobei die Nanopartikel einen polymeren Kern enthal¬ten, der mindestens ein Polymer und mindestens einen Wirkstoffund mindestens eine Schicht mindestens eines Lipids auf derOberfläche des polymeren Kerns enthält, wobei der Wirkstoff imVerdacht steht, eine QT-Verlängerung zu verursachen, wenn einIndividuum damit versehen wird. In einer Erscheinungsform bein¬haltet das Verfahren auch den Schritt des Verabreichens des Na-nopartikels durch intramuskuläre, subkutane, intravaskuläre oderintravenöse Verabreichung.

Eine weitere Ausführungsform beinhaltet ein Verfahren zumBilden einer Nanopartikel-Zusammensetzung, die verhindert, dassder Wirkstoff eine QT-Verlängerung verursacht, enthaltend: Bil¬den einer organischen Phase durch Kombinieren mindestens einesPolymers, mindestens eines Lösungsmittels und des Wirkstoffs,der eine QT-Verlängerung verursacht; Bilden einer wässrigen Li¬pidphase durch Mischen mindestens eines Lipids mit Wasser; Mi¬schen der organischen Phase mit der wässrigen Lipidphase,wodurch eine Emulsion gebildet wird; und Inkubieren der Emulsi¬on, wobei eine Selbstorganisation von Nanopartikeln stattfindet.

Eine weitere Ausführungsform beinhaltet ein pharmazeutischesMittel, enthaltend: einen Nanopartikel für die Arzneimittelzu¬führung, umfassend ein Polymer, einen Wirkstoff, der QT-Verlän¬gerung verursacht und mindestens eine Schicht mindestens einesdas Polymer und den Wirkstoff einkapselnden Lipids, und das Mit¬tel verursacht keine QT-Verlängerung.

Eine weitere Ausführungsform beinhaltet ein Verfahren zumBehandeln eines Patienten, der vermutlich an einer Krankheitleidet, wobei das Verfahren das Verabreichen von Nanopartikelnbeinhaltet, wobei die Nanopartikel einen polymeren Kern enthal¬ten, der mindestens ein Polymer, Curcumin und mindestens eineSchicht mindestens eines Lipids auf der Oberfläche des polymerenKerns enthält, wobei das Behandeln des Patienten keine QT-Ver-längerung verursacht.

In einer anderen Ausführungsform beinhaltet das Verfahrenzum Behandeln eines Individuums, das vermutlich Krebs hat: Iden¬tifizieren, das ein Patient vermutlich Krebs hat; und Versehendes Individuums mit einer Menge von mindestens einem aus Curcu¬min oder Curcuminoiden in einer zur Reduzierung des Krebses indem Individuum ausreichenden Menge, wobei das mindestens eineaus Curcumin oder Curcuminoiden sich in einem polymeren Nanopar-tikelkern befindet, der mindestens ein Polymer und mindestenseines aus Curcumin oder Curcuminoiden und mindestens eineSchicht mindestens eines Lipids auf der Oberfläche des polymerenKerns enthält, wobei das mindestens eine aus den Curcumin- oderCurcuminoid-Nanopartikeln keine QT-Verlängerung verursacht, wennein Individuum damit versehen wird. In einem Aspekt ist derKrebs ein Bauchspeicheldrüsen-, Prostata- oder Brustkrebs.

KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN Für ein umfassenderes Verständnis der Merkmale und Vorteileder vorliegenden Erfindung wird nun auf die ausführliche Be¬schreibung der Erfindung zusammen mit den begleitenden Figurenverwiesen, in denen Folgendes dargestellt ist:

Figur 1 stellt das Grundkonzept der Bildung von Hybridnano-curcumin (HNC) dar; Lipid-DMPC und DMPG. Probleme in Verbindungmit Curcumin sind geringe Löslichkeit, geringe Bioverfügbarkeit,QT-Verlängerung und schnelle Beseitigung in vivo. Die Vorteilevon liposomalem Nanocurcumin sind keine QT-Verlängerung, hoheBioverfügbarkeit und geringe Beseitigung in vivo, aber der Nach¬teil ist die rasche Freisetzung. Die Vorteile von polymerem Na¬nocurcumin sind hohe Bioverfügbarkeit, anhaltende Freisetzungund geringe Beseitigung in vivo, aber der Nachteil ist QT-Ver¬längerung. Die Vorteile von Hybrid-Nanocurcumin sind hohe Bio¬verfügbarkeit, anhaltende Freisetzung, keine QT-Verlängerung und geringe Beseitigung in vivo.

Figur 2 zeigt die verbesserte Dispergierbarkeit von HNC inWasser.

Figur 3 gibt transmissionselektronenmikroskopische Bildervon HNC wieder. Der TEM-Scan zeigt HNC als aufgekugelte glatteNanopartikel mit einheitlicher Größe.

Figur 4A und 4B: Figur 4A zeigt Formulierungen von Hybridna-nocurcumin (HNC). Es sind vier verschiedene Formulierungen vonHNC gezeigt, bei denen unterschiedliche Verhältnisse von DMPCund DMPG verwendet werden. Figur 4B zeigt die Partikelgrößenver¬teilung in Charge 3.

Figur 5 zeigt die HNC-Charakterisierung, einschließlich derdurchschnittlichen Partikelgröße, der Wirkstoffbeladung und derEinkapselungseffizienz.

Figur 6 zeigt die hERG-Stromdichteanalyse von Curcumin; li¬po somalem Curcumin; und von PLGA-Curcumin.

Figur 7 zeigt die hERG-Stromdichteanalyse von Liposomen +Curcumin; und Liposomen.

Figur 8 zeigt die intrazelluläre Aufnahme von HNC in Mia-PaCa-Zellen.

Figur 9 zeigt eine Western-Blot-Analyse von MiaPaCa-Zellennach Behandlung mit Hybridnanocurcumin (25 μΜ (mikromolar)).

Bahn 1: Unbehandelt; Bahn 2: Leerwert Nanopartikel; Bahn 3: Cur¬cumin (24 Std.); Bahn 4: HNC (24 Std.) und; Bahn 5 HNC (48Std.).

Figur 10 zeigt die Vitalität von MTT-Zellen unter Verwendungvon HNC und einer Bauchspeicheldrüsenkrebszelllinie (MiaPaCa-Zelllinie) nach 48 Stunden.

Figur 11 zeigt das Protokoll der Pulse oder das ursprüngli¬che Datenerfassungsdesign: Erfassungsrate(n): 1,0 kHz

Figur 12 zeigt die Wirkung von Charge A auf die hERG-Strom-dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 13 zeigt die Wirkung von Charge A auf die hERG-Strom-dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 14 zeigt den Zusammenhang (I-V) der hERG-Stromamplitu-de transfizierter HEK293-Zellen, die Charge A ausgesetzt waren.

Figur 15 zeigt die Wirkung von Charge B auf die hERG-Strom-dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 16 zeigt die Wirkung von Charge B auf die hERG-Strom-dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 17 zeigt den Zusammenhang (I-V) der hERG-Stromamplitu-de transfizierter HEK293-Zellen, die Charge B ausgesetzt waren.

Figur 18 zeigt die Wirkung von Charge C auf die hERG-Strom-dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 19 zeigt die Wirkung von Charge C auf die hERG-Strom-dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 20 zeigt den Zusammenhang (I-V) der hERG-Stromamplitu-de transfizierter HEK293-Zellen, die Charge C ausgesetzt waren.

Figur 21 zeigt die Wirkung von Charge D auf die hERG-Strom¬dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 22 zeigt die Wirkung von Charge D auf die hERG-Strom-dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 23 zeigt den Zusammenhang (I-V) der hERG-Stromamplitu-de transfizierter HEK293-Zellen, die Charge D ausgesetzt waren.

Figur 24 zeigt die Wirkung von Charge E auf die hERG-Strom-dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 25 zeigt die Wirkung von Charge E auf die hERG-Strom-dichte transfizierter HEK293-Zellen bei 20 mV.

Figur 26 zeigt den Zusammenhang (I-V) der hERG-Stromamplitu-de transfizierter HEK293-Zellen, die Charge E ausgesetzt waren.

Figur 27 zeigt die Wirkung getesteter Verbindungen auf diehERG-Stromdichte bei +20 mV.

Figur 28 zeigt die Ergebnisse der Behandlung von Brustkrebsin einem Krebs-Xenotransplantat-Mausmodellsystem.

Figur 29 zeigt zusätzliche Ergebnisse der Behandlung einesanderen Brustkrebses in einem Krebs-Xenotransplantat-Mausmodell-system.

BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG Während die Herstellung und Verwendung verschiedener Ausfüh¬rungsformen der vorliegenden Erfindung nachstehend ausführlichdiskutiert sind, sollte berücksichtigt werden, dass die vorlie¬gende Erfindung viele anwendbare erfindungsgemäße Konzepte vor¬sieht, die in ganz unterschiedlichem spezifischem Kontextausgeführt werden können. Die hierin diskutierten, spezifischenAusführungsformen veranschaulichen lediglich spezifische Mög¬lichkeiten zur Herstellung und Verwendung der Erfindung undschränken den Geltungsumfang der Erfindung nicht ein.

Nachstehend sind zahlreiche Begriffe definiert, um die Er- findung besser verstehen zu können. Die Bedeutungen der hierindefinierten Begriffe entsprechen denen, wie sie von einem durch¬schnittlichen Fachmann auf den Gebieten, die für die vorliegendeErfindung relevant sind, üblicherweise verstanden werden. Be¬griffe wie „einer", „eine", „eines" und „der", „die", „das" sol¬len sich nicht nur auf eine singuläre Einheit beziehen, sondernschließen die allgemeine Klasse ein, aus der gegebenenfalls einbestimmtes Beispiel zur Veranschaulichung verwendet wird. Dievorliegende Terminologie wird verwendet, um bestimmte Ausfüh¬rungsformen der Erfindung zu beschreiben, aber ihre Verwendungschränkt die Erfindung nicht ein, außer in dem in den Ansprüchenbeschriebenen Umfang.

Probleme in Verbindung mit Curcumin sind niedrige Löslich¬keit, niedrige Bioverfügbarkeit, QT-Verlängerung und schnelleBeseitigung in vivo. Die Vorteile von liposomalem Nanocurcuminsind keine QT-Verlängerung, hohe Bioverfügbarkeit und geringeBeseitigung in vivo, aber der Nachteil ist die rasche Freiset¬zung. Die Vorteile von polymerem Nanocurcumin sind hohe Biover¬fügbarkeit, anhaltende Freisetzung und geringe Beseitigung invivo, aber der Nachteil ist QT-Verlängerung. Die Vorteile vonHybrid-Nanocurcumin sind hohe Bioverfügbarkeit, anhaltende Frei¬setzung, keine QT-Verlängerung und geringe Beseitigung in vivo.

Ein Erfordernis bei der kommerziellen Arzneimittelentwick¬lung ist die Prüfung von Arzneimittelwirkungen auf hERG (Ikr) inIn-vitro-Assays unter Verwendung transfizierter KEK293-Zellen.Die vorliegenden Erfinder bestimmten die Anti-hERG-Aktivität vonCurcumin (Diferuloylmethan) in DMSO und von drei formuliertenCurcumin-Verbindungen: liposomalem Curcumin, Nanocurcumin undeinem PLGA-Curcumin mit anhaltender Freisetzung. Die vorliegen¬den Erfinder erkennen, dass der K+-Strom-IC50 von Curcumin, dasin DMSO formuliert ist, 3,4 μΜ beträgt. Im Kontext der aktuellenklinischen Phase-la-Pharmakokinetik in normalen Individuen, beidenen der Blutplasmaspiegel nach einer zweistündigen Infusionvon 4,5 mg/kg im Bereich von 5 bis 11 μΜοΙ liegt, ist berück¬sichtigt, dass intravenöse oder subkutane Curcumin-Formulierun-gen für therapeutische Anwendungen IKr hemmen, zu Torsade-de-Points-Arrhythmien und möglicher klinischer Mortalität führenkönnen. Jedoch haben weder die liposomale noch die Nanocurcumin-Formulierung bei 12 μΜοΙ diese Wirkung auf den K+-Kanal. Diegleichzeitige Verabreichung leerer Liposomen mit Curcumin war hinsichtlich der Verhinderung der hERG-Blockade gleich wirksam,die PLGA-Curcumin-Formulierung hatte diesen Effekt jedoch nicht.

Diese Beobachtungen sind eine Basis für (die Konstruktioneiner neuen Curcumin-Formulierung) eine neue Curcumin-Formulie-rung, die aus Liposom und PLGA besteht und eine anhaltende Frei¬setzung von Curcumin ohne die begleitenden Hemmwirkungen vonCurcumin auf den kardialen K+-Kanal ermöglicht.

Die Behandlung von Krebs ist durch die Nebenwirkungen derkrebshemmenden Arzneimittel eingeschränkt. Zur Behandlung fort¬geschrittener Krebserkrankungen ist Chemotherapie die einzigeverfügbare Option. Die zunehmende Zahl von Hinweisen auf Arznei¬mittelresistenz und die unspezifische Toxizität dieser Mittelbegrenzen jedoch ihre therapeutischen Ergebnisse. Um dieses Pro¬blem zu lösen, ist es wichtig, das Arzneimittel in der richtigenMenge der Stelle zuzuführen, an der sich der Krebs im Körper be¬findet. Eine neuartige Möglichkeit, sich diesem Problem zu nä¬hern, ist durch gezielte Arzneimittelzuführungssysteme, die dasArzneimittel vorzugsweise der Krebsstelle zuführen. In bestimm¬ten Ausführungsformen werden gezielt zuführende Moleküle (Targe¬ting-Moleküle; z. B. Antikörper) verwendet, welche dieKrebszellen erkennen und das Arzneimittel, das winzige aufgeku¬gelte Partikel (Nanopartikel) enthält, zu den Krebszellenbringt.

In bestimmten Ausführungsformen ist mindestens ein Targe¬ting-Mittel an den Nanopartikeln befestigt, wobei das Targeting-Mittel einen Antikörper oder ein funktionelles Fragment davonenthält, der bzw. das zum Erkennen eines Zielantigens in derLage ist. Die Targeting-Mittel können durch Insertion eines he-tero-/homobifunktionellen Abstandshalters, der mit Aminen vonLipiden und Targeting-Einheiten reagieren kann, befestigt wer¬den.

Curcumin ist ein starkes krebshemmendes Mittel und wird seiteinigen Jahrzehnten wegen seiner pharmakologischen Wirkung ange¬wendet. Die mit Curcumin assoziierten Hauptprobleme sind jedoch(1) niedrige systemische Bioverfügbarkeit nach jeglicher Art derVerabreichung; (2) QT-Verlängerung, wenn Curcumin alleine verab¬reicht wird; und (3) schnelle In-vivo-Beseitigung von Curcumin.Die vorliegenden Erfinder lösten diese Probleme, indem sie Cur¬cumin (99 % rein) in eine Hybridnanoformulierung formulierten.Siehe Figur 1.

Die vorliegenden Erfinder erkannten, dass eine Nanoformulie-rung die Lösung bietet, um die Bioverfügbarkeit zu erhöhen unddass eine Liposomenformulierung von Curcumin nahezu keine QT-Verlängerung bewirkt. Solchen Formulierungen mangelt es jedochan Stabilität, und sie besitzen in höheren Dosen eine gewisseinhärente Toxizität. Die vorliegenden Erfindung erkennen, dassCurcumin nach Verabreichung an Tiermodelle sehr rasch beseitigwird.

Die vorliegenden Erfinder haben ein Nanoformulierungssystementwickelt, das die Bioverfügbarkeit von Curcumin erhöht, dieQT-Verlängerung minimiert und das Arzneimittel Curcumin anhal¬tend freisetzt.

Das Hybridnanocurcumin(HNC)-System ist ein Hybrid aus Lipi¬den und Polymer, wobei der polymere Kern Curcumin einkapselt.

Das Lipid ist als kontinuierliche Schicht auf der Oberfläche despolymeren Nanopartikels vorhanden. Anders gesagt, umhüllt dasLipid den polymeren Nanopartikel. Die Lipidkomponente des Hy-bridnanocurcumins trägt dazu bei, die QT-Verlängerung zu verrin¬gern, während der polymere Kern des Hybridsystems die anhaltendeFreisetzung von Curcumin ermöglicht. Das

Hybridnanocurcumin(HNC)-System löste alle vorstehend genanntenProbleme, d. h. (1) Bioverfügbarkeit von Curcumin, (2) Curcumin-bedingte QT-Verlängerung und (3) gleichzeitig anhaltende Frei¬setzung von Curcumin.

Das Hybridnanocurcumin(HNC)-System hat folgende Vorteile: (1) die In-vivo-Bioverfügbarkeit von Wirkstoffen (z. B. Curcu¬min) ist verbessert; (2) die Lipidkomponente des Hybridnanocur-cumins verringert die QT-Verlängerung; (3) der polymere Kern desHybridsystems ermöglicht die anhaltende Freisetzung des Wirk¬stoffes (z. B. Curcumin); (4) die Formulierung selbst ist eineinfacher, praktischer Prozess aus einem Schritt; und (5) diesesSystem kann verwendet werden, um einen anderen ähnlichen Typ vonArzneimitteln oder Wirkstoffen, die hydrophobe Moleküle enthal¬ten, zu formulieren. Beispiele würden Curcuminanaloge, Doceta-xel, Paclitaxel etc. beinhalten.

Aufgrund der besseren Bioverfügbarkeit und verringerter Ne¬benwirkungen ist das kommerzielle Potenzial von Hybridnanocurcu-min-Formulierungen enorm.

Eine Ausführungsform ist eine liposomale Curcumin-PLGA-Ver-bindung mit anhaltender Freisetzung zur Verhinderung und Behänd- lung neurologischer, onkologischer oder metabolischer Krankhei¬ten (Hybridnanocurcumin-Formulierung).

Bestimmte Ausführungsformen können als intravenöse und/odersubkutane Verabreichung einer neuartigen Formulierung von syn¬thetisiertem Curcumin (Diferuloylmethan), das PLGA und ein Lipo¬som gebunden ist, beschrieben werden. Eine solche Formulierungist dazu ausgelegt, eine anhaltende Freisetzung von Curcumin alsWirkstoff zu bieten. Es wird auf die Verhinderung kardialer Er¬eignisse aufgrund des Einbaus einer liposomalen Komponente indie Formulierung verwiesen.

In weiteren Ausführungsformen können die Zusammensetzungenfür die Behandlung neurologischer-auto-immunologischer degenera-tiver Krankheiten (Parkinson-Krankheit, Alzheimer-Krankheit,multiple Sklerose, ALS, Folgeerscheinungen, Verhaltens- und Ko¬gnitionsstörungen, Erkrankungen aus dem autistischen Spektrumund Depression), neoplastischen Krankheiten (Krebs) verwendetwerden.

In bestimmten Ausführungsformen werden die Zusammensetzungender vorliegenden Erfindung intramuskulär, subkutan und/oder in¬travaskulär verabreicht.

Bestimmte Ausführungsformen enthalten Curcumin (Diferuloyl¬methan) , das in eine liposomale PLGA-Hülle eingekapselt ist, wasals Hybridnanocurcumin-Formulierung bezeichnet wird.

In einer Ausführungsform ist der Wirkstoff Curcumin, bei demes sich um ein starkes natürliches krebshemmendes Mittel han¬delt, das in einem Nanopartikel-basierten Zuführungssystem ver¬wendet wird. Eine Einschränkung ist die QT-Verlängerungswirkungvon Curcumin, selbst wenn es mit Nanopartikel-basierten Systemenassoziiert ist. Dadurch ist es schwierig, die FDA-Anforderungenan die kommerzielle Anwendung zu erfüllen. Die Hybridnanocurcu-min-Formulierung löst dieses Problem und verringert die QT-Ver¬längerungswirkung von Curcumin, was sie für die kommerzielleAnwendung ideal macht. Darüber hinaus setzt die Hybridnanocurcu-min-Formulierung Curcumin anhaltend frei, was die systemischeVerfügbarkeit verbessert und die schnelle Beseitigung von Curcu¬min in Tiermodellen verringert. Daher kann die Hybridnanocurcu-min-Formulierung direkt verwendet werden, um Nanotechnologie¬basierte Hybrid-Dosierungsformen für Curcumin herzustellen. Inanderen Ausführungsformen kann Curcumin durch verschiedene ähn¬liche Arzneimittel oder Wirkstoffe ersetzt werden. Solche Zusam¬ mensetzungen können direkt in die Herstellung durch pharmazeuti¬sche Unternehmen gehen, um in der Phase I und in der Phase IIgeprüft zu werden.

Beispiel I: Hybridnanocurcumin-Formulierung: PLGA wurde in einemorganischen Lösungsmittel, Acetonitril, gelöst, um eine Konzen¬tration von 10 mg/ml zu erhalten. In dieser Phase aus Polymerund organischem Lösungsmittel wurde Curcumin (5 %) gelöst. Lipi¬de (DMPC und DMPG) wurden in verschiedenen Molverhältnissen ge¬mischt, und das Volumen wurde auf 1 ml aufgefüllt. WeitereDetails:

Hybridnanocurcumin-Formulierung: Polymer-PLGA (10 mg) wurdein 1 ml organischem Lösungsmittel, Acetonitril, gelöst, um eineKonzentration von 10 mg/ml zu erhalten. In diesem Gemisch ausPolymer und organischem Lösungsmittel wurde Curcumin (5 % rela¬tiv zum Polymer) gelöst. Lipide (DMPC und DMPG) wurden in ver¬schiedenen Molverhältnissen gemischt, und es wurde festgestellt,dass ein DMPC/DMPG-Verhältnis = 7,5/2,5 die besten Partikel er¬gab. DMPC (Lipid 1) wurde in 4 % Ethanol in Wasser gelöst. DMPG(Lipid 2) wurde in Wasser gelöst, und das Volumen wurde auf 1 mlaufgefüllt. Diese Lösungen wurden gemischt und erhitzt, umtransparente Lösungen zu erhalten. Der Gesamtlipidgehalt relativzum Polymer variierte von 2 mg bis 8 mg. Die organische Phasewurde langsam in die wässrige Lipidphase gerührt, wobei das Ver¬hältnis von organischem zu wässrigem Volumen von 1:1 beibehaltenwurde. Die Emulsion wurde 30 s auf dem Vortex gemischt und dann5 Min. beschallt. Dann wurde das ganze Emulsionssystem 2-3 Stun¬den gerührt, damit eine Selbstorganisation stattfinden konnte.Dann wurde es dreimal mit einem Amicon-Filter (Cutoff von 10 kD)filtriert. Die so erhaltenen Hybridpartikel wurden mit Flüssig¬stickstoff schockgefroren und über Nacht lyophilisiert. Dannwurden sie bis zur weiteren Verwendung bei -20 °C aufbewahrt.

Die organische Phase wurde langsam in die wässrige Lipidpha¬se gerührt, wobei das Verhältnis von organischem zu wässrigemVolumen von 1:1 beibehalten wurde. Die Emulsion wurde 30 s aufdem Vortex gemischt und dann 5 Min. beschallt. Dann wurde dasganze Emulsionssystem 2 Stunden gerührt, damit eine Selbstorga-nisation stattfinden konnte. Dann wurde es dreimal mit einemAmicon-Filter (Cutoff von 10 kD) filtriert. Die so erhaltenenHybridpartikel wurden mit Flüssigstickstoff schockgefroren und über Nacht lyophilisiert. Dann wurden sie bis zur weiteren Ver¬wendung bei -20 °C aufbewahrt.

Charakterisierung von Hybridnanocurcumin: Die Hybridnanopar-tikel wurden hinsichtlich der Partikelgröße, der Arzneimittella¬dung, der Einkapselungseffizienz und der Oberflächenmorphologiecharakterisiert. Figur 4A zeigt Ergebnisse aus einer Reihe vonStudien, in denen die Gesamtlipidmengen variiert wurden, währenddas Molverhältnis von zwei Lipiden konstant blieb. In anderenStudien wurden Lipide (DMPC und DMPG) in anderen Molverhältnis¬sen gemischt, und wir stellten fest, dass DMPC/DMPG :: 7,5/2,5die besten Partikel ergaben. In bestimmten Ausführungsformenwird das Hybridnanocurcumin hierin als Curcumin ER bezeichnet.

Partikelgrößenverteilung: Die Partikelgrößenverteilung istin Figur 4B gezeigt. Die Partikelgrößen für verschiedene Chargennach der Lyophilisierung sind in Tabelle 1 gelistet. Die Parti¬kelgrößenanalyse der lyophilisierten Nanopartikel wurde mit ei¬nem Nanotrac-System (Microtrac, Inc., Montgomeryville, PA, USA)durchgeführt. Die lyophilisierten Nanopartikel wurden in doppeltdestilliertem Wasser dispergiert und auf hoher Stufe 10 s aufdem Vortex gemischt und dann hinsichtlich der Partikelgröße ge¬messen. Die Ergebnisse wurden als Durchschnitt von drei Durch¬gängen mit Dreifachmessungen pro Durchgang angegeben.

Tabelle 1: Durchschnittliche Partikelgrößenverteilung in allenChargen

Effizienz der Arzneimittelladung und Einkapselung: Das Hy¬bridnanocurcumin wurde in Acetonitril gelöst und die Arzneimit¬telladung und die Einkapselungseffizienz wurdenspektrophotometrisch bestimmt. Die Werte sind in Tabelle 2 ge- listet. Lyophilisierte Hybridnanopartikel (5 mg) wurden in 2 mlAcetonitril gelöst, um zur Bestimmung der EinkapselungseffizienzCurcumin in Acetonitril zu extrahieren. Die Proben in Acetoni¬tril wurden 4 Std. bei Raumtemperatur vorsichtig auf einemSchüttler geschüttelt, um das Curcumin aus den Nanopartikelnvollständig in Acetonitril zu extrahieren. Diese Lösungen wurdenbei 14.000 U/Min. (Zentrifuge 5415D, Eppendorf AG, Hamburg,Deutschland) zentrifugiert, und der Überstand wurde gesammelt.Die Suspension (20 μΐ) wurde in Ethanol (1 ml) gelöst und fürdie Schätzungen verwendet. Die Curcuminkonzentrationen wurdenspektrophotometrisch bei 450 nm gemessen. Unter identischen Be¬dingungen wurde ein Standardplot von Curcumin (0-10 pg/ml) er¬stellt .

Die Einkapselungseffizienz (EE) von PLGA-CÜRC wurde mit derfolgenden Formel berechnet:

Die prozentuale Arzneimittelladung wurde aus der Gesamtmenge anArzneimittel, das aus den Hybridnanopartikeln extrahiert wurde,im Verhältnis zu dem bekannten Gewicht der Nanopartikel berech¬net .

Tabelle 2: Arzneimittelladung und Einkapselungseffizienz füralle Chargen.

Oberflächenmorphologie: Die Oberflächenmorphologie des HNCwurde mittels Transmissionselektronenmikroskopie bestimmt. DerTEM-Scan ist nachstehend in Figur 3 gezeigt. Die Oberflächenmor¬phologie des Hybridnanopartikels wurde mittels Transmissions¬elektronenmikroskopie (TEM) bestimmt. Eine kleine Menge einerwässrigen Lösung der lyophilisierten Hybridnanopartikel (1mg/ml) wurde auf einer TEM-Rasteroberfläche mit einem Filterpa¬pier (Whatman Nr. 1) platziert. Auf die Oberfläche des kohlen-stoffbeschichteten Rasters wurde ein Tropfen 1 % Uranylacetatgegeben. Nach 1-minütiger Inkubation wurde überschüssige Flüs¬sigkeit entfernt, und die Rasteroberfläche wurde bei Raumtempe¬ratur luftgetrocknet. Dann wurde sie in das

Transmissionselektronenmikroskop (LEO EM910, Carl Zeiss SMT Inc,NY, USA) geladen, an das eine Gatan SC 1000 CCD-Kamera ange¬schlossen war. HNC werden charakterisiert, was die Bestimmungder durchschnittlichen Partikelgröße, der Arzneimittelladung undder Einkapselungseffizienz beinhaltete, und die Ergebnisse sindin Figur 5 gezeigt.

Evaluierung von Hybridnanocurcumin: Hybridnanocurcumin wurdemittels intrazellulärer Aufnahme und MTT-Assays evaluiert. Wiein Figur 8 gezeigt, ergab diese Studie eine robuste Aufnahme vonHNC innerhalb 1 Stunde in MiaPaCa-Bauchspeicheldrüsenkrebszel-len. Die intrazelluläre Aufnahme von Nanopartikeln in Bauchspei¬cheldrüsen-, Prostata- und Brustkrebszellen wurde mit einemKonfokal-Laserscanning-Mikroskop (CLSM) bestimmt. Für diese Stu¬dien wurden Zellen auf einem Deckgläschen in einer Gewebekultur¬platte mit 6 Kavitäten platziert und bei 37 °C inkubiert, bissie subkonfluent waren. Dann wurden die Zellen 100-pg/ml-Konzen-trationen von Hybridnanopartikeln, die mit fluoreszierendem Nil-Rot markiert waren, ausgesetzt. Nach 2-stündiger Inkubation wur¬den die Zellen im Mikroskop betrachtet. MTT-Assay: Dieser Assay wurde in der Bauchspeicheldrüsen¬krebszelllinie MiaPaCa durchgeführt. Der IC50-Wert der HNC-For-mulierung erwies sich als einer Konzentration von 22 μΜentsprechend (Figur 10). Zur Bestimmung des Effekts von Hybrid¬nanopartikeln auf das Zellwachstum wurde in Bauchspeicheldrü¬sen-, Prostata- und Brustkrebszelllinien ein Zellvitalitätsassay(MTT-Assay) durchgeführt. Mit dem MTT-Assay wurde die Hemmungdes Zellwachstums gemessen. Bei diesem Assay wurden ~ 200 Zel¬ len/Kavitäten in einer Platte mit 96 Kavitäten ausplattiert undmit freiem Arzneimittel in verschiedenen μΜ-Konzentrationen undäquivalenten Dosen von mit Arzneimittel beladenen Hybridnanopar-tikeln behandelt. Der Assay wurde nach 48 und nach 72 Stundenbeendet, und es wurde die relative Wachstumshemmung im Vergleichzu Kontrollzellen gemessen. Für die statistische Analyse wurdenalle Studien in Dreifachausführung vorbereitet und zweimal wie¬derholt. Die Ergebnisse wurden als Mittelwert ± Standardabwei¬chung (S.D.) ausgedrückt.

In Figur 9 sind die Ergebnisse der Western-Blot-Analyse vonMiaPaCa-Zellen nach Behandlung mit Hybridnanocurcumin (25 μΜ(mikromolar)); unbehandelt; Leerwert Nanopartikel; Curcumin (24Std.); HNC (24 Std.) und; HNC (48 Std.) vorgesehen.

Beispiel II:

Beurteilung der Auswirkungen von liposomalem PLGA-Curcumin aufden Kaliumkanal des Menschen unter Verwendung menschlicher em¬bryonaler Nierenzellen (HEK293-Zellen), die mit einem menschli¬chen hERG-Gen (humanes ,,Ether-a-gogo-related"-Gen) transfiziertworden waren: In dem Beispiel geht es um die Quantifizierung derIn-vitro-Auswirkungen von liposomalem PLGA-Curcumin auf den ka¬liumselektiven IKr-Strom, der unter normoxischen Bedingungen instabil transfizierten HEK293-Zellen erzeugt wird. Der hERG-Assaywird verwendet, um das Potenzial einer Verbindung zur Beeinflus¬sung des sich schnell aktivierenden, verzögert gleichrichtendenKaliumkanals zu beurteilen, und beruht auf den „Harmonized Tri¬partite Guidelines" der Internationalen Konferenz zur Harmoni¬sierung (International Conference on Harmonisation (ICH)) [ICHS7a/b] und allgemein anerkannten Verfahren für die Prüfung phar¬mazeutischer Verbindungen.

Allgemeine Beschreibung der Studie: Prüfgegenstände: ChargeA, Charge B, Charge C, Charge D und Charge E. Prüfsystem: hERG-exprimierende, transfizierte HEK293-Zelllinie. DurchgeführtePrüfung: Patch-Clamp-Stromerfassung und -analyse mit ganzen Zel¬len. Prüftemperatur: 35 +/- 2 °C.

Applikation der Prüfgegenstände, Positivkontrolle und Vehi¬kel: 5-minütige Exposition gegenüber jeder Konzentration beiPerfusion im geschlossenen Kreislauf (2 ml/Min.). 5-minütigeAuswaschphase bei Durchflussperfusion (2 ml/Min.) zusätzlich zueiner Perfusion im geschlossenen Kreislauf (2 ml/Min.). Die Po- sitivkontrolle (100 nM E-4031) wurde für einen Zeitraum von 5Minuten bei Perfusion im geschlossenen Kreislauf (2 ml/Min.) zuunbehandelten Zellen aus derselben Zelllinie und derselben Pas¬sage gegeben.

Die Zellen waren während der Studien unter kontinuierlicherStimulation entsprechend dem Pulsprotokoll, und nach 5-minütigerExposition gegenüber jeder Bedingung wurden die Zellströme auf¬gezeichnet .

In Figur 11 ist das ursprüngliche Datenerfassungsdesign ge¬zeigt .

Erfassungsdesign bei der Prüfung der Prüfgegenstände oderdes Vehikels: 1 Aufzeichnung unter Basisbedingungen 1 Aufzeichnung bei Vorhandensein der Konzentration 1, 2 oder 31 Aufzeichnung nach dem Auswaschen (nur nach Konzentration 3)Erfassungsdesign bei der Prüfung der Positivkontrolle: 1 Aufzeichnung unter Basisbedingungen 1 Aufzeichnung bei Vorhandensein der Positivkontrollen = Anzahl der reaktiven, gepatchten Zellen, auf die das gesamtevorstehende Protokoll anwendbar war.

Statistische Analyse: Für statistische Vergleiche wurden ge¬paarte Student-t-Tests herangezogen. Bei den Prüfgegenständenwurden die Ströme, die nach Exposition gegenüber den verschiede¬nen Konzentrationen der Prüfgegenstände aufgezeichnet wurden,mit den unter Basisbedingungen aufgezeichneten Strömen statis¬tisch verglichen. Die nach dem Auswaschen aufgezeichneten Strömewurden statistisch mit den Strömen verglichen, die nach derhöchsten Konzentration von Prüfgegenständen gemessen wurden. Aufdie gleiche Weise wurden Ströme, die nach der Positivkontrolleaufgezeichnet worden waren, mit den unter Basisbedingungen auf¬gezeichneten Strömen verglichen.

Unterschiede galten bei p ^ 0,05 als signifikant.Ausschlusskriterien: 1. Nichteinhaltung des Zeitrahmens der Arzneimittelexposition 2. Instabilität der Abdichtung 3. Gepatchte Zelle erzeugte keinen Tail-Strom 4. Keine signifikante Auswirkung der Positivkontrolle 5. Mehr als 10 % Variabilität der transienten Kapazitätsampli¬tude über die Dauer der Studie.

Auswirkung der Prüfgegenstände auf die Ganzzell-IKr-hERG-

Ströme:

Es wurden die bei einem Spannungspuls erzeugten Ganzzell-Ströme unter Basisbedingungen und nach Applikation der ausge¬wählten Konzentrationen von Prüfgegenständen aufgezeichnet. Auchnach einem Auswaschzeitraum wurden Ströme aufgezeichnet. DieZellen wurden ab dem Haltepotential (-80 mV) bis zum maximalenWert von +40 mV eine Sekunde depolarisiert, wobei bei -40 mV be¬gonnen und in Schritten von 10 mV fortgefahren wurde. Dann wurdedas Membranpotential eine Sekunde auf -55 mV repolarisiert undschließlich wieder auf -80 mV gebracht.

Die Amplitude des Ganzzell-Tail-Stroms wurde bei einem Hal¬tepotential von -55 mV nach Aktivierung des Stroms von -40 bis+40 mV gemessen. Die Stromamplitude wurde beim Maximum (Peak)dieses Tail-Stroms gemessen. Die Stromdichte wurde erhalten, in¬dem die Stromamplitude durch die vor der vorübergehenden Mini¬mierung der Kapazität gemessene Zellkapazität dividiert wurde.Protokollgemäß wurden von jedem Prüfgegenstand 3 Konzentrationenhinsichtlich der Hemmung des hERG-Stroms analysiert.

Die Ergebnisse der Studien, welche die Analyse der hERG-Stromdichte mit Curcumin, liposomalem Curcumin und PLGA-Curcuminzeigen, sind in Figur 6 und 7 vorgesehen, welche die Analyse derhERG-Stromdichte mit Liposomen + Curcumin und Liposomen zeigen.

Berichtigung hinsichtlich Strom-Rundown und Lösungsmittelef¬fekt. Alle Datenpunkte, die in diesem Ergebnisbericht präsen¬tiert sind, wurden hinsichtlich des Lösungsmitteleffekts und deszeitabhängigen Strom-Rundowns berichtigt. Strom-Rundown und Lö¬sungsmitteleffekte wurden simultan gemessen, indem das Studien¬design unter Bedingungen ohne Prüfgegenstand (hERG-externeLösung oder DMSO) im selben Zeitrahmen wie mit den Prüfgegen¬ständen gemessen wurde. Der bei diesen so genannten Vehikelstu¬dien gemessene Verlust der Stromamplitude (was sowohlLösungsmitteleffekte als auch ein zeitabhängiges Rundown wieder¬gibt) wurde vom bei Vorhandensein der Prüfgegenstände gemessenenAmplitudenverlust subtrahiert, um den Effekt der Prüfgegenständegetrennt vom Effekt des Lösungsmittels und dem unvermeidlichenRundown der Stromamplitude im Zeitverlauf zu isolieren.

Diese Ergebnisse, wie in Figur 11-27 gezeigt, quantifizierendie Auswirkung von liposomalem PLGA-Curcumin (Charge A, ChargeB, Charge C, Charge D und Charge E) auf den unter normoxischenBedingungen in stabil transfizierten menschlichen embryonalen

Nierenzellen (HEK293-Zellen) erzeugten selektiven Strom an demsich schnell aktivierenden, verzögert gleichrichtenden Kaliumka¬nal (IKr).

Die Konzentrationen von Curcumin (6, 12 und 18 μΜ) wurdenausgewählt und geben einen Bereich wieder, der den therapeuti¬schen Bereich überschreiten dürfte.

Zur Bestätigung des Umkehreffekts der Prüfgegenstände wurdenZellen, die der höchsten Konzentration (18 μΜ) ausgesetzt waren,einem Auswaschzeitraum von 5 Minuten unterzogen. Der nach demAuswaschzeitraum gemessene Strom unterschied sich statistischnicht von dem Strom, der nach Aussetzen gegenüber der höchstenKonzentration der Verbindungen verblieben war, was zeigt, dassdie Auswirkung dieser Verbindungen nicht reversibel war. E-4031 ist einer der selektivsten bislang verfügbaren hERG-Inhibitoren. Er wurde gewählt, um die Empfindlichkeit des Prüf¬systems aufzuzeigen. Drei nicht vorbehandelte HEK293-hERG-Zellenwurden 100 nM E-4031 ausgesetzt. E-4031 induzierte eine signifi¬kante Hemmung um 81,8 % der Stromamplitude für 1+20.

Angaben zu den Proben: Bei -20 °C und vor direktem Sonnen¬licht geschützt aufbewahren: 1) Charge A -

Gesamtgewicht der Probe - 215 mgCurcumin-Gehalt - 18 pg/mg Testprobe

Verwendetes Material - Polymer (PLGA), Lipid (DMPC+DMPG), Curcu¬min, Saccharose. 2) Charge B -

Gesamtgewicht der Probe - 200 mgCurcumin-Gehalt - 6,8 pg/mg Testprobe

Verwendetes Material - Polymer (PLGA), Lipid (DMPC+DMPG), Curcu¬min, Saccharose. 3) Charge C -

Gesamtgewicht der Probe - 200 mgCurcumin-Gehalt - 18,2 pg/mg Testprobe

Verwendetes Material - Polymer (PLGA), Chitosan, Polyvinylalko¬hol (PVA), Lipid (DMPC+DMPG), Curcumin, Saccharose. 4) Charge D - Reines CurcuminGesamtgewicht - 50 mg. 5) Charge E - Liposomales CurcuminGesamtvolumen - 5 mlCurcumin-Gehalt - 6,4 mg/ml

Verwendetes Material - Lipid (DMPC+DMPG), CurcuminAngaben zum Molekulargewicht:

Curcumin-Molekulargewicht - 368,38 g/mol PLGA (50:50) - Molekulargewicht- 124 kDa DMPC (PC (14:0/14:0))- Molekulargewicht -677,933 g/mol DMPG- Molekulargewicht- 688,845 g/mol

Saccharose - Molekulargewicht 342.30 g/mol

Chitosan - niedriges Molekulargewicht - 75-85 % deacetyliertPolyvinylalkohol (PVA) - Durchschnittliches Molekulargewicht-30.000- 70.000.

Es wird in Betracht gezogen, dass in Bezug auf jedes Verfah¬ren, jedes Kit, jedes Reagenz oder jede Zusammensetzung der Er¬findung jede in dieser Beschreibung besprochene Ausführungsformimplementiert werden kann, und umgekehrt. Erfindungsgemäße Zu¬sammensetzungen können ferner verwendet werden, um Verfahren derErfindung durchzuführen.

Evaluierung der Auswirkungen von Curcumin ER und liposomalemCurcumin bei den Maus-Lungenkrebs-Xenotransplantatmodellen H-460A-549.

Der Zweck dieser Studie war es, das mittlere Tumorvolumendes Maus-Xenotransplantatmodells während der Dauer der Behand¬lung zu quantifizieren. Insbesondere wurden das eingekapselteund das liposomal beschichtete Curcumin ER und das liposomaleCurcumin bei den Zelllinien H-460 und A-549, einem Lungenkrebs-Xenotransplantatmodell, getestet. Kurz beschrieben, wurden weib¬liche 3-4 Wochen alte „Hsd:athymische Nacktmäuse-Foxnlnu"-Mäusevon Harlan Laboratories, USA, erhalten. Den Mäusen wurden dieKrebszellen injiziert und das Tumorvolumen wurde evaluiert. Dieliposomalen Curcumine, Curcumin ER und liposomales Curcumin wur¬den einmal pro Woche durch subkutane Injektion einer Dosis von20 mg/kg Körpergewicht verabreicht. Figur 28 zeigt die Ergebnis¬se der Behandlung der Brustkrebszelllinie H-460 in den„Hsd:athymische Nacktmäuse-Foxnlnu"-Mäusen. Figur 29 zeigt zu¬sätzliche Ergebnisse der Behandlung der Brustkrebszelllinie A-549 in den „Hsd:athymische Nacktmäuse-Foxnlnu"-Mäusen.

Es versteht sich, dass bestimmte, hierin beschriebene Aus¬führungsformen nur zur Veranschaulichung gezeigt sind und nichtals Einschränkung der Erfindung. Die Hauptmerkmale der vorlie¬genden Erfindung können in verschiedenen Ausführungsformen ange¬ wendet werden, ohne vom Geltungsumfang der Erfindung abzuwei¬chen. Ein Fachmann kennt zahlreiche Äquivalente zu den hierinbeschriebenen spezifischen Verfahren bzw. kann solche alleinmithilfe von Routine-Versuchen feststellen. Solche Äquivalentewerden als im Geltungsumfang der vorliegenden Erfindung liegenderachtet und sind durch die Ansprüche abgedeckt.

Alle Veröffentlichungen und Patentanmeldungen, die in derBeschreibung erwähnt sind, geben den Stand des Fachwissens einesFachmanns auf dem Gebiet wieder, auf das sich die vorliegendeErfindung bezieht. Alle Veröffentlichungen und Patentanmeldungensind hierin durch Bezugnahme enthalten, und zwar im selben Maß,wie wenn jede einzelne angegebene Veröffentlichung oder Paten¬tanmeldung spezifisch und individuell durch Bezugnahme enthaltenwäre.

Die Verwendung des Wortes „einer", „eine" oder „eines" beiVerwendung in Verbindung mit dem Begriff „enthaltend" in den An¬sprüchen und/oder der Beschreibung kann „einen", „eine" bzw.„eines" bedeuten, kann aber auch der Bedeutung „mindestens ei¬ner", „mindestens eine" bzw. „mindestens eines" entsprechen. DieVerwendung des Begriffes „oder" in den Ansprüchen soll„und/oder" bedeuten, sofern nicht ausdrücklich angegeben ist,dass es sich nur auf Alternativen bezieht, oder dass die Alter¬nativen sich gegenseitig ausschließen, obwohl die Offenbarungeine Definition unterstützt, die sich nur auf Alternativen und„und/oder" bezieht. In dieser Anmeldung wird der Begriff „etwa"verwendet um anzugeben, dass ein Wert die inhärente Fehlervaria¬tion für die Vorrichtung, das zur Bestimmung des Werts verwende¬te Verfahren oder die Variation, die unter den Studienindividuenbesteht, beinhaltet.

Wie in der vorliegenden Beschreibung und Ansprüchen verwen¬det, sind die Wörter „umfassend" (und jede Form von „umfassend",wie beispielsweise „umfassen" und „umfasst"), „aufweisen" (undjeder Form von „aufweisen", wie beispielsweise „weisen auf" und„weist auf"), „einschließlich" (und jede Form von „einschlie߬lich", wie beispielsweise „schließen ein" und „schließt ein")oder „enthaltend" (und jede Form von „enthaltend", wie bei¬spielsweise „enthalten" und „enthält") sind inklusiv oder unbe¬grenzt und schließen zusätzliche, nicht genannte Elemente oderVerfahrensschritte nicht aus.

Der Begriff „oder Kombinationen davon" in seiner vorliegen- den Verwendung bezieht sich auf alle Permutationen und Kombina¬tionen der vor dem Begriff gelisteten Elemente. So soll zum Bei¬spiel „A, B, C oder Kombinationen davon" mindestens eines von: A, B, C, AB, AC, BC oder ABC und, wenn die Reihenfolge in einembestimmten Kontext wichtig ist, auch BA, CA, CB, CBA, BCA, ACB,BAC oder CAB einschließen. Um bei diesem Beispiel zu bleiben,sind ausdrücklich auch Kombinationen eingeschlossen, die Wieder¬holungen mindestens eines Elements oder Begriffs enthalten, wiebeispielsweise BB, AAA, AB, BBC, AAABCCCC, CBBAAA, CABABB und soweiter. Der Fachmann versteht, dass die Anzahl der Elemente oderBegriffe in jeglicher Kombination typischerweise nicht begrenztist, sofern aus dem Kontext nichts anderes hervorgeht. In be¬stimmten Ausführungsformen kann die vorliegende Erfindung auchVerfahren und Zusammensetzungen einschließen, in denen der Über¬gangsbegriff „im Wesentlichen bestehend aus" oder „bestehendaus" verwendet sein kann.

Alle hierin offenbarten und beanspruchten Zusammensetzungenund/oder Verfahren können in Anbetracht der vorliegenden Be¬schreibung ohne unangemessene Versuche hergestellt und ausge¬führt werden. Obwohl die Zusammensetzungen und Verfahren dervorliegenden Erfindung als bevorzugte Ausführungsformen be¬schrieben worden sind, ist für einen Fachmann ersichtlich, dasshinsichtlich der Zusammensetzungen und/oder Verfahren und derSchritte bzw. der Reihenfolge von Schritten des hierin beschrie¬benen Verfahrens Variationen angewendet werden können, ohne vomKonzept, Geist und Geltungsumfang der Erfindung abzuweichen.

Alle derlei ähnlichen Substitute und Modifikationen, die einemFachmann ersichtlich sind, sollen im Geist, Geltungsumfang undKonzept der Erfindung, wie sie durch die angehängten Ansprüchedefiniert ist, enthalten sein.

Claims (32)

1. PATENTANSPRÜCHE 1. Zusammensetzung zum Behandeln von Krebs, enthaltend: einen polymeren Nanopartikelkern, der mindestens ein Polymerund mindestens eines aus Curcumin oder Curcuminoiden enthält;und mindestens eine Schicht mindestens eines Lipids auf derOberfläche des polymeren Kerns, wobei die Zusammensetzung keine QT-Verlängerung verursacht,wenn ein Individuum damit versehen wird.
2. 2. Nanopartikel-Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das min¬destens eine Polymer mindestens eines aus Poly(milchsäure-co-glycolsäure) (PLGA), Poly(milchsäure), Polylactid (PLA) oderPoly-L-lactid-co-s-caprolacton (PLCL) enthält.
3. 3. Nanopartikel-Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Zu¬sammensetzung ferner einen Wirkstoff enthält, der aus mindestenseinem krebshemmenden Arzneimittel, einem Antibiotikum, einem Vi-rustatikum, einem Antimykotikum, einem Antihelminthikum, einemNährstoff, einem kleinen Molekül, einer siRNA, einem Antioxidansund einem Antikörper ausgewählt ist.
4. 4. Nanopartikel-Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das min¬destens eine Lipid mindestens eines aus 1,2-Dimyristoyl-sn-gly-cero-3-phosphocholin (DMPC), Dimyristoylphosphatidylglycerol(DMPG), 1,2-Dioctadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin(DSPE), 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N- [amino(polyethylenglycol) (DSPE-PEG), DMPE-PEG-Maleimid, Leci¬thin, Cholesterin, 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanola-min-N-(lissaminrhodamin-B-sulfonyl) (Ammoniumsalz) und 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-(7-nitro-2-l,3-benzoxadiazol-4-yl) (Ammoniumsalz) enthält.
5. 5. Nanopartikel-Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das min¬destens eine Lipid Dimyristoylphosphatidylcholin (DMPC) und Di-myristoylphosphatidylglycerol (DMPG) in einem Molverhältnis von9:1, 7:3, 8:2 oder 7,5:2,5 enthält.
6. 6. Nanopartikel-Zusammensetzung nach Anspruch 1, ferner enthal¬tend mindestens ein gezielt zuführendes Mittel (Targeting-Mit¬tel) , wobei das Targeting-Mittel den Nanopartikel gezielt zuerkrankten Geweben/Zellen bringt, wodurch die Ganzkörperdosisminimiert wird.
7. 7. Nanopartikel-Zusammensetzung nach Anspruch 1, ferner umfas- send mindestens ein Targeting-Mittel, wobei das Targeting-Mitteleinen Antikörper oder ein funktionelles Fragment davon, einkleines Molekül, ein Peptid, ein Kohlenhydrat, eine siRNA, einProtein, eine Nukleinsäure, ein Aptamer, einen zweiten Nanopar-tikel, ein Zytokin, ein Chemokin, ein Lymphokin, einen Rezeptor,ein Lipid, ein Lektin, ein eisenhaltiges Metall, einen Magnet¬partikel, einen Linker, ein Isotop oder Kombinationen davon ent¬hält .
8. 8. Nanopartikel-Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Nano-partikel eine Größe von 90 bis 150 nm haben.
9. 9. Nanopartikel-Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei eine Bio¬verfügbarkeit des Wirkstoffes erhöht, eine QT-Verlängerung redu¬ziert und der Wirkstoff anhaltend freigesetzt wird.
10. 10. Verfahren zum Bilden einer Nanopartikel-Zusammensetzung,enthaltend: Bilden einer organischen Phase durch Kombinieren mindestenseines Polymers, mindestens eines Lösungsmittels und mindestenseines aus Curcumin oder Curcuminoiden; Bilden einer wässrigen Lipidphase durch Mischen mindestenseines Lipids mit Wasser; Mischen der organischen Phase mit der wässrigen Lipidphase,wodurch eine Emulsion gebildet wird; und Inkubieren der Emulsion, wobei eine Selbstorganisation vonNanopartikeln stattfindet und wobei die Curcumin- oder Curcumi-noid-Nanopartikel keine QT-Verlängerung verursachen, wenn einIndividuum damit versehen wird.
11. 11. Verfahren nach Anspruch 10, wobei das mindestens eine Poly¬mer mindestens eines von Poly(milchsäure-co-glycolsäure) (PLGA),Poly(milchsäure) , Polylactid (PLA) und Poly-L-lactid-co-s-capro-lacton (PLCL) enthält. .
12. 12. Verfahren nach Anspruch 10, wobei die organische Phase PLGAin einer Konzentration von 2-90 mg/ml enthält.
13. 13. Verfahren nach Anspruch 10, wobei die organische Phase Cur¬cumin in einer Konzentration von 1-15 Gew.-% zu Volumen enthält.
14. 14. Verfahren nach Anspruch 10, wobei das mindestens eine Lö¬sungsmittel ein organisches Lösungsmittel enthält, das aus min¬destens einem von Acetonitril, Aceton, tert-Butylalkohol,Dimethylformamid und Hexaflurisopropanol ausgewählt ist.
15. 15. Verfahren nach Anspruch 10, wobei das mindestens eine Lipidmindestens eines aus DMPC, DMPG, 1,2-Dioctadecanoyl-sn-glycero- 3-phosphoethanolamin (DSPE), 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phos-phoethanolarain-N-[amino(polyethylenglycol) (DSPE-PEG), DMPE-PEG-Maleimid, Lecithin, Cholesterin, 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-(lissaminrhodamin-B-sulfonyl) (Ammonium-salz) und 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-(7-nitro-2-1,3-benzoxadiazol-4-yl) (Ammoniumsalz) enthält.
16. 16. Verfahren nach Anspruch 10, wobei das mindestens eine LipidDMPC und DMPG in einem Molverhältnis von 9:1, 7:3, 8:2 oder7,5:2,5 enthält.
17. 17. Verfahren nach Anspruch 10, wobei das Mischen der organi¬schen Phase mit der wässrigen Lipidphase mindestens eines auslangsamem Einrühren der organischen Phase in die wässrige Lipid¬phase enthält, Mischen der organischen Phase mit der wässrigenLipidphase auf dem Vortexmischer enthält oder Mischen der orga¬nischen Phase mit der wässrigen Lipidphase ferner Beschallenenthält.
18. 18. Verfahren nach Anspruch 10, wobei das Inkubieren der Emulsi¬on 2-stündiges Rühren der Emulsion enthält.
19. 19. Verfahren nach Anspruch 10, ferner enthaltend mindestens ei¬nes der Folgenden: (1) Trennen der Nanopartikel nach Inkubieren der Emulsion; (2) Filtrieren der Nanopartikel nach Inkubierender Emulsion; (3) Einfrieren der Nanopartikel; (4) Lyophilisie-ren der Nanopartikel; oder (5) Befestigen eines Targeting-Mit¬tels an den Nanopartikeln.
20. 20. Verfahren nach Anspruch 10, ferner enthaltend das Befestigenmindestens eines Targeting-Mittels, wobei das Targeting-Mittelden Nanopartikel gezielt zu erkrankten Geweben/Zellen bringt,wodurch die Ganzkörperdosis minimiert wird.
21. 21. Verfahren nach Anspruch 10, ferner enthaltend das Befestigenmindestens eines Targeting-Mittels an den Nanopartikeln, wobeidas Targeting-Mittel einen Antikörper oder ein funktionellesFragment davon enthält, der bzw. das zum Erkennen eines Zielan¬tigens in der Lage ist.
22. 22. Verfahren nach Anspruch 10, wobei die Nanopartikel eine Grö¬ße von 90 bis 150 nm aufweisen.
23. 23. Verfahren zum Behandeln eines Patienten, der vermutlich aneiner Krankheit leidet, enthaltend das Verabreichen von Nanopar¬tikeln, wobei die Nanopartikel einen polymeren Kern enthalten,der mindestens ein Polymer und mindestens einen Wirkstoff undmindestens eine Schicht mindestens eines Lipids auf der Oberflä- che des polymeren Kerns enthält, wobei der Wirkstoff im Verdachtsteht eine QT-Verlängerung zu verursachen, wenn ein Individuumdamit versehen wird.
24. 24. Verfahren nach Anspruch 23, wobei das Verabreichen von Nano-partikeln das Verabreichen des Nanopartikels durch intramuskulä¬re, subkutane, intravaskuläre oder intravenöse Verabreichungenthält.
25. 25. Verfahren nach Anspruch 23, wobei die Krankheit aus derGruppe ausgewählt ist, die aus neurologischen, onkologischen undmetabolischen Krankheiten besteht.
26. 26. Verfahren nach Anspruch 23, wobei die Krankheit aus derGruppe ausgewählt ist, die aus Parkinson-Krankheit, Alzheimer-Krankheit, multipler Sklerose, ALS, einer Folgeerscheinung, Ver¬haltens- und Kognitionsstörungen, einer Krankheit aus dem autis¬tischen Spektrum, Depression und neoplastischer Krankheitbesteht.
27. 27. Verfahren nach Anspruch 23, wobei der Wirkstoff anhaltendfreigesetzt wird.
28. 28. Verfahren zum Bilden einer Nanopartikel-Zusammensetzung, dieverhindert, dass der Wirkstoff eine QT-Verlängerung verursacht,enthaltend: Bilden einer organischen Phase durch Kombinieren mindestenseines Polymers, mindestens eines Lösungsmittels und des Wirk¬stoffs, der eine QT-Verlängerung verursacht; Bilden einer wässrigen Lipidphase durch Mischen mindestenseines Lipids mit Wasser; Mischen der organischen Phase mit der wässrigen Lipidphase,wodurch eine Emulsion gebildet wird; und Inkubieren der Emulsion, wobei eine Selbstorganisation vonNanopartikeln stattfindet.
29. 29. Pharmazeutisches Mittel, enthaltend: einen Nanopartikel fürdie Arzneimittelzuführung, umfassend ein Polymer, einen Wirk¬stoff, der QT-Verlängerung verursacht und mindestens eineSchicht mindestens eines das Polymer und den Wirkstoff einkap¬selnden Lipids, wobei das Mittel keine QT-Verlängerung verur¬sacht .
30. 30. Verfahren zum Behandeln eines Patienten, der vermutlich aneiner Krankheit leidet, wobei das Verfahren das Verabreichen vonNanopartikeln enthält, wobei die Nanopartikel einen polymerenKern enthalten, der mindestens ein Polymer, Curcumin und mindes- tens eine Schicht mindestens eines Lipids auf der Oberfläche despolymeren Kerns enthält, wobei das Behandeln des Patienten keineQT-Verlängerung verursacht.
31. 31. Verfahren zum Behandeln eines Individuums, das vermutlichKrebs hat, enthaltend: Identifizieren, das ein Patient vermutlich Krebs hat; und Versehen des Individuums mit einer Menge von mindestens ei¬nem aus Curcumin oder Curcuminoiden in einer zur Reduzierung desKrebses in dem Individuum ausreichenden Menge, wobei das mindes¬tens eine aus Curcumin oder Curcuminoiden sich in einem polyme¬ren Nanopartikelkern befindet, der mindestens ein Polymer undmindestens eines aus Curcumin oder Curcuminoiden umfasst; und mindestens eine Schicht mindestens eines Lipids auf derOberfläche des polymeren Kerns enthält, wobei das mindestenseine aus den Curcumin- oder Curcuminoid-Nanopartikeln keine QT-Verlängerung verursacht, wenn ein Individuum damit versehenwird.
32. 32. Verfahren nach Anspruch 31, wobei der Krebs ein Bauchspei¬cheldrüsen-, Prostata- oder Brustkrebs ist.