WO2023238952A1 - 医薬組成物 - Google Patents

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WO2023238952A1
WO2023238952A1 PCT/JP2023/021625 JP2023021625W WO2023238952A1 WO 2023238952 A1 WO2023238952 A1 WO 2023238952A1 JP 2023021625 W JP2023021625 W JP 2023021625W WO 2023238952 A1 WO2023238952 A1 WO 2023238952A1
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adjuster
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basic
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千晶 渕上
舞 森内
大貴 加藤
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日本新薬株式会社
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives

Definitions

  • the present invention is based on the formula: A pharmaceutically acceptable compound of the formula (2-(4-((5,6-diphenylpyrazin-2-yl)(isopropyl)amino)butoxy)acetic acid, hereinafter referred to as "Compound B”)
  • Compound B A pharmaceutically acceptable compound of the formula (2-(4-((5,6-diphenylpyrazin-2-yl)(isopropyl)amino)butoxy)acetic acid, hereinafter referred to as "Compound B”)
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition containing a salt as an active ingredient, and a method for producing the same.
  • Uptravi is sold as a therapeutic drug for pulmonary arterial hypertension
  • selexipag the active ingredient of Uptravi, is a prodrug of Compound B (Non-Patent Document 1).
  • selexipag is difficult to stabilize in solution. Additionally, selexipag cannot be used to treat moderate to severe pulmonary arterial hypertension.
  • Non-Patent Documents 2 and 3 injections of epoprostenol and treprostinil are sold as therapeutic agents for moderate to severe pulmonary arterial hypertension.
  • the administration method for epoprostenol is limited to continuous intravenous infusion, and although treprostinil has a subcutaneous continuous formulation, pain during administration is a problem (Non-Patent Document 4).
  • Compound B has a PGI 2 receptor agonist action, and is known to exhibit platelet aggregation inhibiting action, vasodilating action, bronchial smooth muscle dilating action, lipid deposition inhibiting action, and leukocyte activation inhibiting action (e.g. , see Patent Documents 1 to 6). Furthermore, it is known that bioavailability is improved by converting Compound B into a salt form (see Patent Document 7). Additionally, there are three types of crystals of Compound B: type I crystals, type II crystals, and type III crystals, and type I crystals and type II crystals are known to be thermodynamically stable. (Patent Document 8).
  • Compound B or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used for the treatment of pulmonary arterial hypertension, particularly for the treatment of moderate to severe pulmonary arterial hypertension. Furthermore, no reports have been made on a pharmaceutical composition stably containing a pharmaceutically acceptable salt of Compound B, especially a lyophilized pharmaceutical composition.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a pharmaceutical composition containing a pharmaceutically acceptable salt of compound B (hereinafter also simply referred to as "compound B salt") as an active ingredient, and a method for producing the same.
  • compound B salt a pharmaceutically acceptable salt of compound B
  • an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition containing a compound B salt having good storage stability, and a method for producing the same.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition containing the salt of Compound B as a therapeutic agent for pulmonary arterial hypertension, particularly as a therapeutic agent for moderate to severe pulmonary arterial hypertension. do.
  • a buffer having a buffering capacity in the range of a neutral region to a basic region, and a pharmaceutically acceptable salt of Compound B, and A pharmaceutical composition prepared by adding a pH adjuster to adjust the final pH to a neutral range produces less impurities other than Compound B during the storage period after freeze-drying, and Compound B It was confirmed that it is stable.
  • vasorelaxant effect of the pharmaceutical composition containing the pharmaceutically acceptable salt of Compound B was evaluated using the SuHx model, which is an animal model of severe pulmonary arterial hypertension, it was found that the vasorelaxant effect was moderate to severe. It has been found that this drug exhibits superior vasorelaxant action compared to epoprostenol and treprostinil, which are known as therapeutic agents for pulmonary arterial hypertension.
  • the present invention was completed through further studies based on these findings, and has the following embodiments.
  • composition (I) A pharmaceutical composition containing the following ingredients, (A) a pharmaceutically acceptable salt of (2-(4-((5,6-diphenylpyrazin-2-yl)(isopropyl)amino)butoxy)acetic acid; (B) a buffer having a buffering capacity in a range from a neutral region to a basic region, and (C) a pH adjuster; A pharmaceutical composition, wherein an aqueous solution having a concentration of component A of 1.5% by mass is prepared in water for injection, and the pH of the aqueous solution is in the range of 7.4 to 7.9.
  • Component B is a combination of buffer 1 having a buffering capacity in a neutral region and buffer 2 having a buffering capacity in a basic region, or a buffer having a buffering capacity in a neutral to basic region. is agent 3, The pharmaceutical composition described in (I-1). (I-3) The pharmaceutical composition according to (I-1) or (I-2), further comprising (D) an excipient. (I-4)
  • the component A is potassium salt or tromethamine salt of (2-(4-((5,6-diphenylpyrazin-2-yl)(isopropyl)amino)butoxy)acetic acid, (I-1) ) to (I-3).
  • the buffer 1 is at least one selected from the group consisting of dihydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, citrate, and hydrates thereof;
  • the buffering agent 2 is at least one selected from the group consisting of glycine, arginine, bicarbonate, boric acid, borate, ethanolamine, and hydrates thereof, (I-2) to (I- 4)
  • the pharmaceutical composition according to any one of 4).
  • the pH adjuster is an acidic pH adjuster or a combination of an acidic pH adjuster and a basic pH adjuster
  • the acidic pH adjuster is at least one pH adjuster selected from the group consisting of hydrochloric acid, phosphoric acid, and citric acid
  • the basic pH adjuster is at least one pH adjuster selected from the group consisting of sodium hydroxide and sodium hydrogen carbonate.
  • the pharmaceutical composition according to any one of (I-2) to (I-5).
  • I-7) Any one of (I-1) to (I-6), wherein the content of component A is 1 to 50% by mass in terms of solids based on 100% by mass of the total mass of the pharmaceutical composition.
  • composition of (2-(4-((5,6-diphenylpyrazin-2-yl)(isopropyl)amino)butoxy)acetic acid having the following steps: Method for producing a pharmaceutical composition containing a salt acceptable to as an active ingredient: (1) Prepare an aqueous solution with a pH of 8.8 or higher containing a pharmaceutically acceptable salt of (2-(4-((5,6-diphenylpyrazin-2-yl)(isopropyl)amino)butoxy)acetic acid. and (2) adjusting the pH of the aqueous solution prepared above to 7.4 to 7.9.
  • step 1 is a step of preparing an aqueous solution containing the following components: (A) a pharmaceutically acceptable salt of (2-(4-((5,6-diphenylpyrazin-2-yl)(isopropyl)amino)butoxy)acetic acid; (B) A buffer having a buffering capacity in a range from a neutral region to a basic region, and (C) a pH adjuster.
  • Component B is a combination of buffer 1 having a buffering capacity in a neutral region and buffer 2 having a buffering capacity in a basic region, or a buffer having a buffering capacity in a neutral to basic region.
  • the buffer 1 is at least one selected from the group consisting of dihydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, citrate, and hydrates thereof;
  • the buffering agent 2 is at least one selected from the group consisting of glycine, arginine, bicarbonate, boric acid, borate, ethanolamine, and hydrates thereof,
  • the production according to (II-4), wherein the buffering agent 3 is at least one selected from the group consisting of trishydroxymethylaminomethane and 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid.
  • the pH adjuster is an acidic pH adjuster or a combination of an acidic pH adjuster and a basic pH adjuster
  • the acidic pH adjuster is at least one pH adjuster selected from the group consisting of hydrochloric acid, phosphoric acid, and citric acid
  • the basic pH adjuster is at least one pH adjuster selected from the group consisting of sodium hydroxide and sodium hydrogen carbonate.
  • III Method for treating pulmonary arterial hypertension
  • III-1 The pharmaceutical composition described in any one of (I-1) to (I-10), or (II-1) to (II-6) treating moderate to severe pulmonary arterial hypertension in a patient with moderate to severe pulmonary arterial hypertension, the method comprising the step of administering to the patient a pharmaceutical composition obtained by any of the manufacturing methods described above; Method.
  • III-2) The therapeutic method according to (III-1), wherein the method of administration to the patient is a continuous subcutaneous injection method or a continuous intravenous injection method.
  • step 1 is a step of preparing an aqueous solution containing the following components: (A) Compound B salt, (B) A buffer having a buffering capacity in a range from a neutral region to a basic region, and (C) a pH adjuster.
  • Component B is a combination of buffering agent 1 having a buffering capacity in the neutral region and buffering agent 2 having a buffering capacity in the basic region, or having a buffering ability in the basic region to the neutral region. Buffer 3, the method described in (IV-2).
  • the buffer 1 is at least one selected from the group consisting of dihydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, citrate, and hydrates thereof;
  • the buffering agent 2 is at least one selected from the group consisting of glycine, arginine, bicarbonate, boric acid, borate, ethanolamine, and hydrates thereof,
  • the method described in (IV-3), wherein the buffering agent 3 is at least one selected from the group consisting of trishydroxymethylaminomethane and 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid. .
  • the pH adjuster is an acidic pH adjuster or a combination of an acidic pH adjuster and a basic pH adjuster
  • the acidic pH adjuster is at least one pH adjuster selected from the group consisting of hydrochloric acid, phosphoric acid, and citric acid
  • the basic pH adjuster is at least one pH adjuster selected from the group consisting of sodium hydroxide and sodium hydrogen carbonate. The method described in any one of (IV-2) to (IV-4).
  • the pharmaceutical composition of the present invention has excellent stability, at least in the form of a lyophilizate. Furthermore, the pharmaceutical composition of the present invention has an excellent vasorelaxant effect and can be effectively used for the treatment of moderate to severe pulmonary arterial hypertension.
  • composition of the present invention (hereinafter simply referred to as “the present pharmaceutical composition”) is characterized by containing the following components.
  • a pharmaceutically acceptable salt of 2-(4-((5,6-diphenylpyrazin-2-yl)(isopropyl)amino)butoxy)acetic acid also referred to as “compound B salt” or simply “component A”
  • B component A buffer having a buffering capacity in the range from the neutral region to the basic region
  • C component a pH adjuster
  • the present pharmaceutical composition may further include (D) an excipient (hereinafter also simply referred to as "D component").
  • a component compound B can be synthesized, for example, by the method described in Example 42 of Patent Document 1, or the method described in Reference Example 2 of Patent Document 8.
  • Compound B can be converted into a pharmaceutically acceptable salt form by a known method.
  • Pharmaceutically acceptable salts of Compound B can be prepared, for example, as described in US Pat.
  • the salts of compound B targeted by the present invention are potassium salts and tromethamine salts. Preferably it is a potassium salt.
  • the potassium salt of compound B can be produced by the method described in Example 7 or 10 of Patent Document 7.
  • the tromethamine salt of compound B can be produced by the method described in Example 5 or 12 of Patent Document 7. Note that these salts may have a crystalline form.
  • the content of compound B salt (component A) in 100% by mass of the present pharmaceutical composition is not limited, but can be selected from the range of 1 to 50% by mass in terms of solid matter. It is preferably 7 to 30% by weight, more preferably 15 to 20% by weight.
  • a buffer having a buffering capacity in the range from the neutral region to the basic region is a buffering agent having a buffering capability in the neutral region (this will be referred to as "buffer 1") and a buffering agent in the basic region. It may consist of a combination with a buffering agent having a buffering capacity (this will be referred to as "buffer 2”), or a single buffering agent may have a buffering capacity over a wide range from the neutral region to the basic region. (hereinafter referred to as "buffer 3").
  • the "neutral region” refers to a range of pH 6 or more and less than pH 8.
  • the pH is in the range of 6.5 or more and less than pH 8.
  • the "basic region” refers to a range of pH 8 or higher, preferably a range of pH 8.5 to pH 12, more preferably a range of pH 9 to pH 11.
  • Buffering agent means to mix it into the target object, and when adding a small amount of acidic or basic component to the target object, diluting it to change the concentration, and/or It is a single component or a combination of multiple components that has the function (buffering effect) of alleviating the effects of heating, sterilization, etc. and keeping the pH (hydrogen ion index) almost constant.
  • Buffers that have buffering capacity in the neutral range have the ability to maintain the pH of the target in the neutral range (buffering effect). Therefore, in the present invention, the buffering agent 1 exhibits a buffering effect to keep the pH of the pharmaceutical composition in the neutral range by being blended into the pharmaceutical composition adjusted to a neutral pH.
  • the buffer 1 include, but are not limited to, at least one selected from the group consisting of dihydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, citrate, and hydrates thereof. Preferred are dihydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, and hydrates thereof.
  • suitable examples of the salt include alkali metal salts such as sodium and potassium.
  • the above-mentioned components may be used alone as the buffering agent 1, or two or more kinds may be used in combination. It can also be used in combination with other components.
  • combinations with other components include, but are not limited to, PBS buffer (a combination of disodium hydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, sodium chloride, potassium chloride, and hydrochloric acid), SSPE buffer (a combination of disodium hydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, sodium chloride, potassium chloride, and hydrochloric acid), A combination of sodium dihydrogen monohydrate, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), sodium chloride, and sodium hydroxide), SSC buffer (a combination of trisodium citrate dihydrate, sodium chloride, and sodium hydroxide) ), sodium citrate buffer (a combination of trisodium citrate dihydrate, and citric acid), and the like.
  • PBS buffer a combination of disodium hydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, sodium chloride, potassium chloride, and
  • Buffers that have buffering capacity in the basic range have the ability to maintain the pH of the target in the basic range (buffering effect). Therefore, in the present invention, the buffering agent 2 is blended into a composition (manufacturing intermediate composition) whose pH is adjusted to basic during the manufacturing process of the present pharmaceutical composition, so that the pH of the manufacturing intermediate composition is It exerts a buffering effect that keeps it in the basic range.
  • the buffer 2 include, but are not limited to, at least one selected from the group consisting of glycine, arginine, hydrogen carbonate, borate, boric acid, ethanolamine, and hydrates thereof.
  • suitable examples of the salt include alkali metal salts such as sodium and potassium. Preferred are glycine and arginine.
  • the above-mentioned components may be used alone as the buffering agent 2, or two or more kinds may be used in combination. It can also be used in combination with other components.
  • combinations with other components include, but are not limited to, carbonate-bicarbonate buffers (a combination of disodium bicarbonate and sodium carbonate), sodium borate buffers (sodium borate decahydrate, (combination of boric acid and sodium hydroxide), Na borate buffer (combination of boric acid and sodium hydroxide), K borate buffer (combination of boric acid and potassium hydroxide), Acetate ethanolamine buffer (monoethanol A combination of amine and acetic acid) can be exemplified.
  • the buffering agent 1 and the buffering agent 2 exhibit a buffering effect in the range from the neutral region to the basic region by combining both.
  • buffering agent 2 By incorporating buffering agent 2 into the intermediate composition for manufacturing the pharmaceutical composition of the present invention, which has been adjusted to a basic pH, the pH of the intermediate composition for manufacturing can be maintained in the basic region, and at the same time, the buffering agent By incorporating 1, it functions to maintain the pH of the present pharmaceutical composition, which is ultimately adjusted to a neutral pH, in the neutral range.
  • the blending ratio of buffering agent 1 and buffering agent 2 and the combination ratio of both are such that the above-mentioned effects are exhibited and the pharmaceutical composition can be injected into an aqueous solution having a concentration of at least 1.5% by mass of component A.
  • concentration of the component A is preferably in the range of 1 to 2% by mass. More preferably 0.8 to 3% by mass, still more preferably 0.1 to 5.0% by mass.
  • the present pharmaceutical composition contains at least one buffer 1 selected from the group consisting of dihydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, citrate, and hydrates thereof, but is not limited to,
  • the proportion (total amount) of the buffering agent 1 in 100% by mass of the present pharmaceutical composition can be selected from the range of 0.5 to 10% by mass in terms of solid matter. Preferably it is 1 to 5% by weight, more preferably 3 to 3.5% by weight.
  • the present pharmaceutical composition contains at least one buffer 2 selected from the group consisting of glycine, arginine, bicarbonate, borate, boric acid, ethanolamine, and hydrates thereof, there is no limitation.
  • the proportion (total amount) of the buffering agent 2 in 100% by mass of the present pharmaceutical composition can be selected from the range of 0.5 to 10% by mass in terms of solid matter. Preferably it is 1 to 8% by weight, more preferably 3 to 7% by weight.
  • a buffer having a buffering capacity from the neutral region to the basic region can be blended into a target material whose pH has been adjusted to a pH range from the neutral region to the basic region. It has the function of keeping the pH at a certain level. Therefore, in the present invention, the buffering agent 3 is incorporated into a composition (manufacturing intermediate composition) whose pH is adjusted to basic during the manufacturing process of the present pharmaceutical composition, so that the pH of the manufacturing intermediate composition is It exhibits a buffering effect to keep the pH of the pharmaceutical composition in the basic range, and also exhibits a buffering effect to keep the pH of the pharmaceutical composition adjusted to a neutral pH in the neutral range.
  • the buffering agent 3 include, but are not limited to, at least one selected from the group consisting of trishydroxymethylaminomethane and 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid.
  • the blending ratio of buffering agent 3 is such that it exhibits the above-mentioned effects and that the aqueous solution of the present pharmaceutical composition is prepared using water for injection so that the concentration of component A is at least 1.5% by mass.
  • concentration of the component A is preferably in the range of 1 to 2% by mass. More preferably 0.8 to 3% by mass, still more preferably 0.1 to 5.0% by mass.
  • the proportion (total amount) of the buffering agent 3 in 100% by mass of the present pharmaceutical composition may range from 0.5 to 30% by mass in terms of solid matter, although it is not limited. You can choose. Preferably it is 1 to 20% by weight, more preferably 8 to 15% by weight.
  • the C component pH adjuster includes a basic pH adjuster that has the effect of adjusting the pH of the target object to a basic pH (basic pH), and a basic pH adjuster that has the effect of adjusting the pH of the target object from the basic pH to the neutral range.
  • Examples include acidic pH adjusters that have the effect of adjusting pH (neutral pH).
  • Component C is at least one of a basic pH adjuster and an acidic pH adjuster, and can be selected and used depending on the object to be treated and the pH to be adjusted.
  • the subject matter includes the aforementioned buffer, the present pharmaceutical composition, and intermediate compositions for its production.
  • it is an acidic pH adjuster or a combination of an acidic pH adjuster and a basic pH adjuster.
  • the acidic pH adjuster used in the present invention may be any agent as long as it has the effect of adjusting the basic pH of the target substance to neutral pH, and is preferably selected from the group consisting of hydrochloric acid, phosphoric acid, and citric acid. At least one type can be mentioned.
  • the basic pH adjuster may be any agent as long as it has the effect of adjusting the pH of the target substance to a basic pH, but preferably at least one selected from the group consisting of sodium hydroxide and sodium hydrogen carbonate. can be mentioned.
  • the blending ratio of the pH adjuster in the present pharmaceutical composition can be appropriately set depending on the target substance (buffer, the present pharmaceutical composition, and an intermediate composition for manufacturing the same) and its pH.
  • the pH of the intermediate composition for the production of the present pharmaceutical composition is preferably in the range of pH 8.8 to 12, more preferably in the range of pH 9 to 12. can be mentioned. Therefore, a basic pH adjuster can be added to the intermediate composition in a proportion to adjust the pH to the above level.
  • the pH of the present pharmaceutical composition is preferably within the range of pH 7.4 to 7.9. Therefore, the acidic pH adjuster can be blended into the intermediate composition at basic pH in such a proportion that the pharmaceutical composition has a pH within the above range.
  • the present pharmaceutical composition may further contain an excipient as an optional component.
  • Excipients include, but are not limited to, sucrose, trehalose, mannitol, maltose, ⁇ -cyclodextrin, sucrose, maltose, ⁇ -cyclodextrin, dextran, and hydrates thereof.
  • sucrose, trehalose, mannitol, ⁇ -cyclodextrin, and hydrates thereof and more preferred is trehalose or a hydrate thereof.
  • the proportion (total amount) of component D in 100% by mass of the present pharmaceutical composition may be selected from the range of 45 to 85% by mass in terms of solid matter, although it is not limited. can. It is preferably 60 to 80% by weight, more preferably 70 to 75% by weight.
  • the pharmaceutical composition is a lyophilized product.
  • the pharmaceutical composition in lyophilized form can be reconstituted by dissolving it in water for injection at the time of use and used as a long-acting injection.
  • Continuous injection preparations include continuous injection preparations used for continuous subcutaneous injection methods and continuous injection preparations used for continuous intravenous infusion methods.
  • the concentration of component A in the long-acting injection prepared at the time of use is not limited, for example, 0.0001 to 20 mg/ml, preferably 0.003 to 18 mg/ml, more preferably 0.005 to 15 mg/ml.
  • the concentration of component B in the long-acting injection can be exemplified in the following range depending on the type of component B.
  • Glycine 0.5-15 mg/ml, preferably 1-10 mg/ml, more preferably 2-7 mg/ml.
  • L-arginine 0.5-12 mg/ml, preferably 1-10 mg/ml, more preferably 3-9 mg/ml.
  • Trishydroxymethylaminomethane 0.0004 to 16 mg/ml, preferably 0.004 to 18 mg/ml, more preferably 10 to 15 mg/ml.
  • the present pharmaceutical composition can be suitably used for the treatment of pulmonary arterial hypertension, particularly moderate to severe pulmonary arterial hypertension.
  • moderate to severe pulmonary arterial hypertension is classified as, for example, NYHA/WHO functional class III to This is pulmonary arterial hypertension of grade IV.
  • moderate to severe pulmonary arterial hypertension is defined as a severe disease by the ⁇ Research Group on Intractable Respiratory Diseases and Pulmonary Hypertension'', which was created based on the NYHA cardiac function classification and the WHO pulmonary hypertension functional classification. It can also be classified using a degree classification, in which case it corresponds to, for example, medium-risk to high-risk pulmonary arterial hypertension.
  • the present pharmaceutical composition can be suitably applied to such patients with pulmonary arterial hypertension.
  • the aforementioned pharmaceutical composition in lyophilized form is dissolved in physiological saline (water for injection) at the time of use to prepare a long-acting injection, and depending on the patient's condition, continuous subcutaneous infusion is performed. It can be administered by continuous intravenous infusion or by continuous intravenous infusion.
  • the dosage of this pharmaceutical composition varies depending on the patient's weight, age, severity of symptoms, administration route, etc., but is generally 0.001 mg of Component A per day for adults. -100 mg. Preferably it is in the range of 0.01 mg to 10 mg. Depending on the patient's condition, a lower dose than this may be sufficient, or a higher dose may be required. Furthermore, it can be administered once to several times a day or at intervals of one to several days.
  • the present pharmaceutical composition can be manufactured by the following steps. (1) A step of preparing an aqueous solution containing component A with a pH of 8.8 or higher (hereinafter also referred to as "Step 1"), and (2) a step of adjusting the aqueous solution prepared above to a pH of 7.4 to 7.9. (Hereinafter, also referred to as "Step 2"). When the present pharmaceutical composition has a lyophilized form, it can further include the following steps. (3) A step of preparing a freeze-dried product by freeze-drying the aqueous solution obtained in Step 2 (hereinafter also referred to as "Step 3").
  • Step 1 can be carried out by dissolving component A in an aqueous solution adjusted to pH 8.8 or higher.
  • the aqueous solution for dissolving component A contains the component B described above.
  • a basic pH adjuster may be further added to adjust the pH of the aqueous solution to 8.8 or higher.
  • the pH may be at least 8.8, preferably at least 9, for example from 9 to 12, preferably from 9 to 11.
  • component A and component B can be blended in such a range that the ratio of each component in the pharmaceutical composition to be finally prepared is as described above in (I). It is as follows. Since the pH of the aqueous solution is adjusted to 8.8 or higher, component A, which is basic and more soluble than acidic or neutral, can be dissolved therein. In addition, since it has a buffering effect to keep the pH in the basic range, even if component A is added to it, the pH will be maintained at a basic level, ensuring the solubility of component A, and reducing the solubility during dissolution. However, problems such as not achieving the target concentration are less likely to occur.
  • Step 2 is a step of adjusting the aqueous solution containing component A, which has a pH of 8.8 or higher, prepared in step 1 to pH 7.4 to 7.9. This can be carried out by adding an acidic pH adjuster to the aqueous solution containing component A.
  • Step 3 is a step of subjecting the aqueous solution containing component A with a pH of 7.4 to 7.9 prepared in step 2 to a freeze-drying process to prepare a pharmaceutical composition in a freeze-dried form.
  • the freeze-drying process can be carried out according to a conventional method so that the water content in the freeze-dried product is 5% by mass or less.
  • the aqueous solution containing component A may be subjected to a filtration process using, for example, a filter with a pore size of 0.22 ⁇ m in order to remove foreign substances (including bacteria).
  • the present pharmaceutical composition produced by the above process has good storage stability, especially in a freeze-dried state, as shown in the experimental examples described below. Specifically, even when stored under room temperature conditions in a freeze-dried state, there is little variation in pH, and the production of impurities other than component A is suppressed. Therefore, after storing it in a freeze-dried state for a certain period of time, it can be suitably used as a pharmaceutical composition by dissolving it in water for injection at the time of use.
  • the production method having steps 1 to 3 described above can also be called a method for stabilizing component A in a pharmaceutical composition containing component A as an active ingredient.
  • room temperature means 23 ⁇ 5°C.
  • the sources for obtaining each material are as follows.
  • -(2-(4-((5,6-diphenylpyrazin-2-yl)(isopropyl)amino)butoxy)acetic acid (compound B): Produced according to the method described in Reference Example 2 of Patent Document 8.
  • ⁇ Sugen 5416 Also known as 3-[(3,5-Dimethyl-1H-pyrrol-2-yl)methylene]-1,3-dihydro-2H-indol-2-one.
  • Vascular endothelial growth factor receptor antagonist Synthesized by Nippon Shinyaku Co., Ltd.
  • Test example 1 Evaluation of solubility in various buffer solutions 1. Test Method Each of the potassium salt and tromethamine salt of Compound B prepared above was blended with the various buffers described below and shaken at room temperature for 24 hours to evaluate the solubility of each salt.
  • a phosphate buffer solution with a pH of 7 was prepared by mixing 30.5 mL of solution A, 19.5 mL of solution B, and 50 mL of purified water.
  • a phosphate buffer solution with a pH of 8 was prepared by mixing 47.35 mL of solution A, 2.65 mL of solution B, and 50 mL of purified water.
  • Carbonate-bicarbonate buffer (pH 9.2-10.6) Weigh out 10.60 g of sodium carbonate, dissolve it in 800 ml of purified water, and then make the total amount to 1 L with purified water (liquid A).
  • a carbonate-bicarbonate buffer solution with a pH of 9.2 was prepared by mixing 4.0 mL of solution A, 46.0 mL of solution B, and 150 mL of purified water.
  • a carbonate-bicarbonate buffer solution with a pH of 10.6 was prepared by mixing 42.5 mL of solution A, 7.5 mL of solution B, and 150 mL of purified water.
  • a buffer solution containing the potassium salt or tromethamine salt of Compound B was prepared by the method described below so that the final concentration of Compound B was 5 mg/mL to 15.0 mg/mL.
  • Tris-HCl buffer (pH 10) 1440 mg of trishydroxymethylaminomethane was weighed out and dissolved in 240 ml of purified water to prepare a pH 10 Tris-HCl buffer. 1744 mg of the weighed potassium salt of compound B was dissolved therein. After visual confirmation of dissolution, the pH was adjusted to 7 to 8 using 1M hydrochloric acid. 4200 mg of trishydroxymethylaminomethane was weighed out and dissolved in 540 ml of purified water to prepare a pH 10 Tris-HCl buffer.
  • Arginine buffer pH 11
  • the potassium salt of compound B was dissolved in this. After visual confirmation of dissolution, the pH was adjusted to 7.6 using 1M hydrochloric acid.
  • both the potassium salt and the tromethamine salt of Compound B have poor solubility and/or dissolution stability in aqueous solutions at neutral pH, but have good solubility in aqueous solutions at basic pH. It was confirmed that there is. Furthermore, it was confirmed that the dissolution stability was maintained even after the pH was adjusted to neutral. From this, the potassium salt and tromethamine salt of Compound B should be dissolved in a basic pH buffer that has a buffering effect in the basic region, and then adjusted to neutral pH using an acidic pH adjuster. is preferable, and it is considered that by doing so, the dissolution stability of the salt of compound B under neutral pH conditions can be maintained well.
  • Test Example 2 Preparation of freeze-dried products (Examples 1 to 17) and evaluation of their stability (Part 1) 1. Preparation of Lyophilized Products Freeze-dried products (Examples 1 to 17) were prepared by freeze-drying the drug solutions of formulations 1 to 17 listed in Tables 1 to 3.
  • trishydroxymethylaminomethane (buffer 3) was first dissolved in water for injection to make it weakly basic (pH 10-11). Next, the potassium salt or tromethamine salt of Compound B was added and stirred until a clear solution was obtained (pH approximately 9). Further, an excipient (such as sucrose) was added and dissolved with stirring, and then the pH was adjusted to around 7.5 using hydrochloric acid (pH adjuster). Then, using water for injection (physiological saline), the final concentration of Compound B was increased to 5 mg/mL for formulations 1 to 16 and 15 mg/mL for formulation 17.
  • buffer 3 trishydroxymethylaminomethane
  • the prepared drug solution was filtered through a filter (0.22 ⁇ m, made by PVDF), and 2 to 3 ml of the filtrate was filled into each vial (TopLyo, 10R, made by SCHOTT or IRAS, 6R, made by Iwata Glass Industries). After partially plugging this with a rubber stopper (V10-F8W D21-7S, manufactured by Daikyo Seiko), Table 4 (Formulation 1 to 10), Table 5 (Formulation 11 to 16), and Table 6 (Formulation 17) After freeze-drying according to the program described, the entire tube was capped under nitrogen pressure at room temperature. In this way, freeze-dried products of each drug solution of formulations 1 to 17 (Examples 1 to 17) were obtained.
  • Example 11-16 potassium salts
  • Test Example 3 Preparation of freeze-dried product (Example 18) and evaluation of its stability (Part 2) 1. Preparation of lyophilizate
  • a lyophilized product (Example 18) was prepared by freeze-drying the drug solution of Formulation 18 listed in Table 17.
  • a drug solution containing Compound B was prepared according to Formulation 18. Specifically, 1200 mg of trometamol and 6500 mg of trehalose hydrate were dissolved in 80 mL of water for injection. Potassium salt of compound B (1568 mg) was dissolved in this (pH about 9). Next, the pH was adjusted to 7.63 with a 1M aqueous hydrochloric acid solution, and the final volume was made up to 100 mL using water for injection.
  • the prepared drug solution was filtered through a filter (0.22 ⁇ m, manufactured by PVDF), and the filtrate (2.2 mL) was filled into a vial (IRAS, 6R, manufactured by Iwata Glass Industries). This was partially capped with a rubber stopper (V10-F8W D21-7S, manufactured by Daikyo Seiko), freeze-dried using the same program as in Formulation 17, and fully capped with double pressure of nitrogen at room temperature.
  • a lyophilized product (Example 18) was obtained which was filled in a vial with a stopper.
  • Example 18 The freeze-dried product prepared above (Example 18) was stored at 40° C./75% RH for one month. Before and after storage, the freeze-dried product was dissolved in 2 mL of water for injection, and a sample solution was prepared using a 50% by volume acetonitrile aqueous solution. Next, the amount of impurities in the sample solution (purity of the sample solution) was analyzed by the method described in (1) below, and the storage stability of the lyophilized product was evaluated by comparing the purity before and after storage.
  • Table 18 shows the relative ratio between the area of the peak of Compound B (RRT: 1.00) and the area of each peak of related substances other than Compound B. Note that the relative retention time (RRT) described in Table 18 means the relative retention time of the peak of a related substance with respect to the retention time (minute) of the peak of Compound B of 1.00.
  • Test Example 4 Preparation of freeze-dried product (Example 19) and evaluation of its stability (Part 3) 1. Preparation of lyophilizate
  • a lyophilized product (Example 19) was prepared by freeze-drying the drug solution of Formulation 19 listed in Table 19.
  • a drug solution containing Compound B was prepared according to Formulation 19. Specifically, 300 mg of glycine, 180 mg of sodium dihydrogen phosphate dihydrate, and 3900 mg of trehalose hydrate were dissolved in 45 mL of water for injection. After adding 3 mL of 1M sodium hydroxide aqueous solution to the solution and adjusting the pH to about 10, the potassium salt of compound B (941 mg) was dissolved (pH about 9). Next, the pH was adjusted to 7.41 with 1M hydrochloric acid, and the final volume was increased to 60 mL using water for injection.
  • the prepared drug solution was filtered through a filter (0.22 ⁇ m, manufactured by PVDF), and the filtrate was filled into vials (IRAS, 6R, manufactured by Iwata Glass Industries) at 2 ml per vial. This was partially capped with a rubber stopper (V10-F8W D21-7S, manufactured by Daikyo Seiko), freeze-dried according to the program listed in Table 20, and then fully capped under double pressure of nitrogen at room temperature. A lyophilized product (Example 19) was obtained which was filled in a vial with a stopper.
  • Stability test (1) The freeze-dried product prepared above (Example 19) was stored at 40° C./75% RH for one month. Before and after storage, the freeze-dried product was dissolved in 2 mL of water for injection according to the method described in "2. Stability test" of Test Example 3, and a sample solution was prepared using a 50% by volume acetonitrile aqueous solution. Next, the amount of impurities in the sample solution (purity of the sample solution) was analyzed by the method described in (1) below, and the storage stability of the lyophilized product was evaluated by comparing the purity before and after storage.
  • Table 21 shows the relative ratio between the area of the peak of compound B (RRT: 1.00) and the area of each peak of components (impurities) other than compound B. Note that the relative retention time (RRT) described in Table 21 means the relative retention time of the impurity peak with respect to the retention time (minutes) of the compound B peak of 1.00.
  • Stability test (2) A stability test was conducted on a drug solution containing Compound B of Formulation 19. Specifically, the drug solution was stored at 25°C/60% RH or 50°C (humidity dependent) for 5 or 8 days. . Before and after storage, the pH of each chemical solution and the amount of impurities (purity of the drug solution) were analyzed to evaluate the storage stability of the drug solution. The amount of impurities (purity of the chemical solution) was analyzed in accordance with 2. of Test Example 4. It was conducted in the same manner as stability test (1).
  • Table 22 shows the pH of the chemical solution measured before and after storage. Additionally, Table 23 shows the results of the purity test of the chemical solution. The results of the purity test of the chemical solution are shown as the relative ratio between the area of the peak of compound B (RRT: 1.00) and the area of each peak of substances other than compound B (impurities), as described above.
  • Test Example 5 Preparation of drug solution with formulation 20 (Example 20) 1. Preparation of drug solution
  • a drug solution containing Compound B (Example 20) was prepared according to Formulation 20 listed in Table 24. Specifically, 360 mg of L-arginine and 3900 mg of trehalose hydrate were dissolved in 45 mL of water for injection to prepare an aqueous solution with a pH of about 11. Dissolve the potassium salt of compound B (941 mg) in this aqueous solution (pH approximately 9.5), then adjust the pH to 7.56 with 1M hydrochloric acid, and use water for injection to make the final volume 60 mL. I uploaded it. It was confirmed that it was possible to dissolve the potassium salt of Compound B by formulating L-arginine, which is basic and has a buffering capacity, using Formulation 20.
  • the prepared drug solution was filtered using a filter in the same manner as in Example 19, and the filtrate (2 mL) was filled into a vial, and the vial was semi-stopped with a rubber stopper and freeze-dried. It can be prepared as a product.
  • Test Example 6 Preparation of drug solution of formulation 21 (Example 21) 1. Preparation of drug solution
  • a drug solution containing Compound B (Example 21) was prepared according to Formulation 21 listed in Table 25. Specifically, 60 mg of sodium bicarbonate and 3900 mg of trehalose hydrate were dissolved in 45 mL of water for injection, and 2.25 mL of 1M aqueous sodium hydroxide solution was added to prepare an aqueous solution with a pH of about 10.5. Potassium salt (941 mg) of compound B was dissolved in this aqueous solution (pH approximately 9), then the pH was adjusted to 7.45 with 1M hydrochloric acid, and the final volume was increased to 60 mL using water for injection. .
  • Test Example 7 Evaluation of vasorelaxant effect using Sugen5416/hypoxia-induced pulmonary hypertension model rat isolated blood vessels 1.
  • the Sugen5416/hypoxia-induced pulmonary hypertension model rat prepared above was exsanguinated to death under isoflurane inhalation anesthesia, and the lungs were removed.
  • the excised lung tissue was placed in a Petri dish filled with Krebs' solution and observed under a stereomicroscope to prepare a left pulmonary artery ring specimen.
  • the prepared left intralobar artery ring specimen (hereinafter simply referred to as the "specimen"), changes in blood vessel tension were measured using a DMT wire myograph device (610M, Danish Myo Technology) and PowerLab (PowerLab 8/30, ADInstruments Pty Ltd. ). Specifically, the specimen was attached to a force transducer in a myograph tank filled with Krebs' solution using a tungsten wire (diameter 25 ⁇ m), and the specimen was placed under aeration of a mixed gas (95% O 2 , 5% CO 2 ) to approx. It was kept at 37°C. A static tension of 0.145 to 0.155 g was applied to this specimen, and the specimen was allowed to stand until the tension stabilized. Thereafter, the Krebs solution in the myograph tank was replaced with 30 mmol/L K + Krebs solution. Only the specimens in which a contraction reaction was observed were subjected to the following measurements.
  • a DMT wire myograph device 610M, Danish Myo Technology
  • PowerLab Power
  • the average tension value for 30 seconds before each treatment point was calculated using a PowerLab data pad and was taken as the measured value.
  • the measurement value indicating the height of contraction after PGF 2 ⁇ (vasoconstrictor) treatment is called “measurement value 1”
  • the measurement value indicating complete relaxation after papaverine (relaxant) treatment is called “measurement value 2”
  • each The measured value indicating the change in tension due to treatment with the test substance was designated as “measured value 3.”
  • Measurement value 1 is defined as “relaxation rate 0%” and measurement value 2 is “relaxation rate 100%”. Based on these values, the relaxation rate (% ) was calculated.
  • the potassium salt of Compound B has a strong blood vessel effect comparable to or even greater than that of treprostinil and epoprostenol, which have been used as active ingredients in treatments for moderate to severe pulmonary arterial hypertension.
  • a relaxing effect was observed.
  • the potassium salt of Compound B was found to exhibit a stronger vasorelaxant effect than treprostinil and epoprostenol at a concentration of 3.0 ⁇ 10 ⁇ 6 mol/L or higher. From this, it is considered that the potassium salt of Compound B can be effectively used as an active ingredient of a therapeutic agent for moderate to severe pulmonary arterial hypertension.

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Abstract

本発明は、良好な保存安定性を有する、（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸（化合物Ｂ）の薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物を提供する。　本発明は、下記成分を含有する、医薬組成物である： （Ａ）（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩、 （Ｂ）塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤１及び中性領域に緩衝能を有する緩衝剤２、又は塩基性領域～中性領域に緩衝能を有する緩衝剤３、及び （Ｃ）ｐＨ調整剤。

Description

医薬組成物
　本発明は、式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
 で示される化合物（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸、以下、これを「化合物Ｂ」と称する）の薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物、及びその製造方法に関する。
　ウプトラビは肺動脈性肺高血圧症の治療薬として販売されており、ウプトラビの有効成分であるセレキシパグは、化合物Ｂのプロドラックである（非特許文献１）。しかしながら、セレキシパグは溶液中で安定化させることが難しい。また、セレキシパグは中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療に使用することができない。
　現在、中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療薬として、エポプロステノール及びトレプロスチニルの注射剤が販売されている（非特許文献２及び３）。しかしながら、エポプロステノールは投与方法が持続型静脈内注入法に限定され、また、トレプロスチニルは皮下持続製剤があるものの、投与時の疼痛が問題になっている（非特許文献４）。
　化合物Ｂは、ＰＧＩ２受容体アゴニスト作用を有し、血小板凝集抑制作用、血管拡張作用、気管支平滑筋拡張作用、脂質沈着抑制作用、及び白血球活性化抑制作用を示すことが知られている（例えば、特許文献１～６参照）。また、化合物Ｂを塩の態様にすることで、バイオアベイラビリティが向上することが知られている（特許文献７参照）。また、化合物Ｂの結晶体には、Ｉ型結晶、ＩＩ型結晶、及びＩＩＩ型結晶の３種類が存在し、そのうちＩ型結晶、及びＩＩ型結晶は熱力学的に安定であることが知られている（特許文献８）。
　しかしながら、化合物Ｂ又はその薬学的に許容される塩が肺動脈性肺高血圧症の治療、特に中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療に使用できることは報告されていない。また、化合物Ｂの薬学的に許容される塩を安定して含有する医薬組成物、特に凍結乾燥形態の医薬組成物については報告されていない。
国際公開第２００２／０８８０８４号 国際公開第２００９／１５７３９６号 国際公開第２００９／１０７７３６号 国際公開第２００９／１５４２４６号 国際公開第２００９／１５７３９７号 国際公開第２００９／１５７３９８号 国際公開第２０２１／０３３７０２号 国際公開第２０１９／０６５７９２号
ウプトラビ添付文書 添付文書（有効成分エポプロステノール） 添付文書（有効成分トレプロスチニル） Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，２０１９年，８，４８１；ｄｏｉ：１０．３３９０／ｊｃｍ８０４０４８１
　本発明が解決しようとする課題は、化合物Ｂの薬学的に許容される塩（以下、単に「化合物Ｂ塩」とも称する）を有効成分とする医薬組成物、及びその製造方法を提供することである。好ましくは、本発明は、良好な保存安定性を有する化合物Ｂ塩含有医薬組成物、及びその製造方法を提供することを課題とする。
　また本発明は、前記化合物Ｂ塩含有医薬組成物について、肺動脈性肺高血圧症の治療薬として用途、特に中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療薬としての用途を提供することを課題とする。
　本発明者らは、前記課題を解決すべく、鋭意検討を重ねた結果、化合物Ｂの薬学的に許容される塩に、中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝能を有する緩衝剤、及びｐＨ調整剤を配合して、最終ｐＨが中性領域になるように調整して調製された医薬組成物は、凍結乾燥後の保存期間中、化合物Ｂ以外の不純物の生成が少なく、化合物Ｂが安定であることを確認した。
　また、化合物Ｂの薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物の血管弛緩作用を、重症の肺動脈性肺高血圧症の動物モデルであるＳｕＨｘモデルを使用して評価したところ、中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療薬として公知のエポプロステノール及びトレプロスチニルと比較して、優れた血管弛緩作用を示すことを見出した。
　本発明は、これらの知見に基づいて、さらに検討を重ねて完成したものであり、下記の実施形態を有する。
（Ｉ）医薬組成物
（Ｉ－１）下記成分を含有する、医薬組成物であって、
（Ａ）（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩、
（Ｂ）中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝能を有する緩衝剤、及び
（Ｃ）ｐＨ調整剤；
　注射用水にて、前記Ａ成分濃度が１．５質量％の水溶液を調製した場合の当該水溶液のｐＨが７．４～７．９の範囲である、医薬組成物。
（Ｉ－２）前記成分Ｂが、中性領域に緩衝能を有する緩衝剤１と塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤２との組み合わせ、又は中性～塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤３である、
　（Ｉ－１）に記載する医薬組成物。
（Ｉ－３）さらに（Ｄ）賦形剤を含有する（Ｉ－１）又は（Ｉ－２）に記載する医薬組成物。
（Ｉ－４）前記成分Ａが、（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸のカリウム塩又はトロメタミン塩である、（Ｉ－１）～（Ｉ－３）のいずれかに記載する医薬組成物。
（Ｉ－５）前記緩衝剤１が、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、クエン酸塩、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
　前記緩衝剤２が、グリシン、アルギニン、炭酸水素塩、ホウ酸、ホウ酸塩、エタノールアミン、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
　前記緩衝剤３が、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、及び４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸からなる群より選択される少なくとも１種である、（Ｉ－２）～（Ｉ－４）のいずれかに記載する医薬組成物。
（Ｉ－６）前記ｐＨ調整剤が、酸性ｐＨ調整剤、又は酸性ｐＨ調整剤と塩基性ｐＨ調整剤の組み合わせであり、
　前記酸性ｐＨ調整剤は、塩酸、リン酸、及びクエン酸からなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤であり、
　前記塩基性ｐＨ調整剤は、水酸化ナトリウム、及び炭酸水素ナトリウムからなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤である、
　（Ｉ－２）～（Ｉ－５）のいずれかに記載する医薬組成物。
（Ｉ－７）記成分Ａの含有量が、医薬組成物の総質量１００質量％あたり、固形物換算で１～５０質量％である、（Ｉ－１）～（Ｉ－６）のいずれかに記載する医薬組成物。
（Ｉ－８）凍結乾燥物である、（Ｉ－１）～（Ｉ－７）のいずれかに記載する医薬組成物。
（Ｉ－９）持続皮下注入法又は持続的静脈内注入法に用いられる持続型注射剤である、（Ｉ－１）～（Ｉ－８）のいずれかに記載する医薬組成物。
（Ｉ－１０）中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療用医薬組成物である、（Ｉ－１）～（Ｉ－９）のいずれかに記載する医薬組成物。
（ＩＩ）医薬組成物の製造方法
（ＩＩ－１）下記の工程を有する、（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物の製造方法：
（１）（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩を含有するｐＨ８．８以上の水溶液を調製する工程、及び
（２）前記で調製した水溶液をｐＨ７．４～７．９に調整する工程。
（ＩＩ－２）さらに下記の工程を有する、（ＩＩ－１）に記載する製造方法：
（３）前記工程２で得られた水溶液を凍結乾燥して凍結乾燥物を調製する工程。
（ＩＩ－３）前記工程１が、下記成分を含有する水溶液を調製する工程である、（ＩＩ－１）又は（ＩＩ－２）に記載する製造方法：
（Ａ）（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩、
（Ｂ）中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝能を有する緩衝剤、及び
（Ｃ）ｐＨ調整剤。
（ＩＩ－４）前記成分Ｂが、中性領域に緩衝能を有する緩衝剤１と塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤２との組み合わせ、又は中性～塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤３である、（ＩＩ－３）に記載する製造方法。
（ＩＩ－５）前記緩衝剤１が、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、クエン酸塩、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
　前記緩衝剤２が、グリシン、アルギニン、炭酸水素塩、ホウ酸、ホウ酸塩、エタノールアミン、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
　前記緩衝剤３が、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、及び４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸からなる群より選択される少なくとも１種である、（ＩＩ－４）に記載する製造方法。
（ＩＩ－６）前記ｐＨ調整剤が、酸性ｐＨ調整剤、又は酸性ｐＨ調整剤と塩基性ｐＨ調整剤の組み合わせであり、
　前記酸性ｐＨ調整剤は、塩酸、リン酸、及びクエン酸からなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤であり、
　前記塩基性ｐＨ調整剤は、水酸化ナトリウム、及び炭酸水素ナトリウムからなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤である、
　（ＩＩ－３）～（ＩＩ－５）のいずれかに記載する製造方法。
（ＩＩＩ）肺動脈性肺高血圧症の治療方法
（ＩＩＩ－１）（Ｉ－１）～（Ｉ－１０）のいずれかに記載する医薬組成物、または（ＩＩ－１）～（ＩＩ－６）のいずれかに記載する製造方法で得られる医薬組成物を、中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の患者に投与する工程を含む、当該患者の中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症を治療する方法。
（ＩＩＩ－２）患者への投与方法が持続皮下注入法又は持続的静脈内注入法である、（ＩＩＩ－１）に記載する治療方法。
（ＩＶ）化合物Ｂ塩の安定化方法
（ＩＶ－１）下記の工程を有する、（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩（化合物Ｂ塩）を有効成分とする医薬組成物中における、前記塩の安定化方法：
（１）化合物Ｂ塩を含有するｐＨ８．８以上の水溶液を調製する工程、
（２）前記で調製した水溶液をｐＨ７．４～７．９に調整する工程、及び
（３）前記工程２で得られた水溶液を凍結乾燥して、凍結乾燥形態を有する化合物Ｂ塩を有効成分とする医薬組成物を調製する工程。
（ＩＶ－２）前記工程１が、下記成分を含有する水溶液を調製する工程である、（ＩＶ－１）に記載する方法：
（Ａ）化合物Ｂ塩、
（Ｂ）中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝能を有する緩衝剤、及び
（Ｃ）ｐＨ調整剤。
（ＩＶ－３）前記成分Ｂが、中性領域に緩衝能を有する緩衝剤１と塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤２との組み合わせ、又は塩基性領域～中性領域に緩衝能を有する緩衝剤３である、（ＩＶ－２）に記載する方法。
（ＩＶ－４）前記緩衝剤１が、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、クエン酸塩、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
　前記緩衝剤２が、グリシン、アルギニン、炭酸水素塩、ホウ酸、ホウ酸塩、エタノールアミン、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
　前記緩衝剤３が、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、及び４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸からなる群より選択される少なくとも１種である、（ＩＶ－３）に記載する方法。
（ＩＶ－５）前記ｐＨ調整剤が、酸性ｐＨ調整剤、又は酸性ｐＨ調整剤と塩基性ｐＨ調整剤の組み合わせであり、
　前記酸性ｐＨ調整剤は、塩酸、リン酸、及びクエン酸からなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤であり、
　前記塩基性ｐＨ調整剤は、水酸化ナトリウム、及び炭酸水素ナトリウムからなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤である、
（ＩＶ－２）～（ＩＶ－４）のいずれかに記載する方法。
　本発明の医薬組成物は、少なくとも凍結乾燥物の状態で優れた安定性を有する。
　また本発明の医薬組成物は、優れた血管弛緩作用を有し、中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療に有効に使用することが可能である。
（Ｉ）医薬組成物
　本発明の医薬組成物（以下、単に「本医薬組成物」と称する）は、下記成分を含有することを特徴とする。
（Ａ）２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩（「化合物Ｂ塩」又は単に「Ａ成分」とも称する）、
（Ｂ）中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝能を有する緩衝剤（以下、これを単に「Ｂ成分」とも称する）、及び
（Ｃ）ｐＨ調整剤（以下、これを単に「Ｃ成分」とも称する）。
　本医薬組成物は、さらに（Ｄ）賦形剤（以下、これを単に「Ｄ成分」とも称する）を有することもできる。
　以下、これらの成分について説明する。
（１）Ａ成分
　化合物Ｂは、例えば、前記特許文献１の実施例４２に記載する方法、又は、前記特許文献８の参考例２に記載の方法により合成することができる。
　化合物Ｂは、公知の方法により薬学的に許容される塩の形態にすることができる。化合物Ｂの薬学的に許容される塩は、例えば、前記特許文献７の記載及び当該技術分野において用いられる方法によって調製することができる。
　本発明が対象とする化合物Ｂの塩は、カリウム塩及びトロメタミン塩である。好ましくはカリウム塩である。化合物Ｂのカリウム塩は、特許文献７の実施例７又は１０に記載する方法により製造することができる。また化合物Ｂのトロメタミン塩は、特許文献７の実施例５又は１２に記載する方法により製造することができる。なお、これらの塩は、結晶形を有するものであってもよい。
　本医薬組成物１００質量％中の化合物Ｂ塩（Ａ成分）の含有量は、制限されないものの、固形物換算で１～５０質量％の範囲から選択することができる。好ましくは７～３０質量％、より好ましくは１５～２０質量％である。
（２）Ｂ成分
　中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝能を有する緩衝剤は、中性領域で緩衝能を有する緩衝剤（これを「緩衝剤１」と称する）と塩基性領域で緩衝能を有する緩衝剤（これを「緩衝剤２」と称する）との組み合わせからなるものであってもよいし、また、一つの緩衝剤で中性領域から塩基性領域の広い範囲にわたって緩衝能を有する緩衝剤（これを「緩衝剤３」）であってもよい。
　本発明において「中性領域」とは、ｐＨ６以上ｐＨ８未満の範囲をいう。好ましくはｐＨ６．５以上ｐＨ８未満の範囲である。また本発明において「塩基性領域」とは、ｐＨ８以上の範囲をいい、好ましくはｐＨ８．５以上ｐＨ１２以下、より好ましくはｐＨ９以上ｐＨ１１以下の範囲をいう。
　「緩衝剤」とは、それを被対象物に配合しておくことで、被対象物に少量の酸性成分や塩基性成分を加えた場合、希釈して濃度を変えた場合、及び／又は、加熱や殺菌処理等をした場合でも、その影響を緩和してｐＨ（水素イオン指数）をほぼ一定に保つ働き（緩衝作用）を有する、単一成分又は複数成分の組み合わせ物である。
　中性領域で緩衝能を有する緩衝剤は、中性領域のｐＨ（中性ｐＨ）に調整した被対象物に配合しておくことで、被対象物のｐＨを中性領域に保つ働き（緩衝作用）を有する。このため、本発明において緩衝剤１は、中性ｐＨに調整された本医薬組成物に配合しておくことで、本医薬組成物のｐＨを中性領域に保つ緩衝作用を発揮する。
　かかる緩衝剤１としては、制限されないものの、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、クエン酸塩、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種を挙げることができる。好ましくは、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、及びこれらの水和物である。ここで塩としては、ナトリウム、及びカリウム等のアルカリ金属塩を好適に例示することができる。
　前記の成分は、緩衝剤１として、単独で用いてもよいし、また２種以上を組み合わせて用いてもよい。また他成分を組み合わせて用いることもできる。
　他成分との組み合わせの例としては、制限されないものの、例えば、ＰＢＳ緩衝剤（リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び塩酸の組み合わせ）、ＳＳＰＥ緩衝剤（リン酸二水素ナトリウム・一水和物、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ），塩化ナトリウム、及び水酸化ナトリウムの組み合わせ）、ＳＳＣ緩衝剤（クエン酸三ナトリウム・二水和物、塩化ナトリウム、及び水酸化ナトリウムの組み合わせ）、クエン酸ナトリウム緩衝剤（クエン酸三ナトリウム・二水和物、及びクエン酸の組み合わせ）等を例示することができる。
　塩基性領域で緩衝能を有する緩衝剤は、塩基性領域のｐＨ（塩基性ｐＨ）に調整した被対象物に配合しておくことで、被対象物のｐＨを塩基性領域に保つ働き（緩衝作用）を有する。このため、本発明において緩衝剤２は、本医薬組成物の製造過程で塩基性ｐＨに調整された組成物（製造中間組成物）中に配合しておくことで、当該製造中間組成物のｐＨを塩基性領域に保つ緩衝作用を発揮する。
　かかる緩衝剤２としては、制限されないものの、グリシン、アルギニン、炭酸水素塩、ホウ酸塩、ホウ酸、エタノールアミン、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種を挙げることができる。ここで塩としては、ナトリウム、及びカリウム等のアルカリ金属塩を好適に例示することができる。好ましくは、グリシン、及びアルギニンである。
　前記の成分は、緩衝剤２として、単独で用いてもよいし、また２種以上を組み合わせて用いてもよい。また他成分を組み合わせて用いることもできる。
　他成分との組み合わせの例としては、制限されないものの、例えば、炭酸－重炭酸緩衝剤（炭酸水素二ナトリウム、及び炭酸ナトリウムの組み合わせ）、ホウ酸ナトリウム緩衝剤（ホウ酸ナトリウム・十水和物、及び水酸化ナトリウムの組み合わせ）、ホウ酸Ｎａ緩衝剤（ホウ酸、及び水酸化ナトリウムの組み合わせ）、ホウ酸Ｋ緩衝剤（ホウ酸、及び水酸化カリウムの組み合わせ）、酢酸エタノールアミン緩衝剤（モノエタノールアミン、及び酢酸の組み合わせ）等を例示することができる。
　本発明において、前記緩衝剤１と緩衝剤２は、両者を組み合わせることで、中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝作用を発揮する。塩基性ｐＨに調整された本医薬組成物の製造中間組成物中に緩衝剤２を配合しておくことで、当該製造中間組成物のｐＨを塩基性領域に保つことができ、また同時に緩衝剤１を配合しておくことで、最終的に中性ｐＨに調整される本医薬組成物のｐＨを中性領域に保つ働きを発揮する。
　緩衝剤１及び緩衝剤２の配合割合、並びに両者の組み合わせ比は、前記の効果を発揮し、且つ、本医薬組成物を、少なくともＡ成分濃度が１．５質量％の水溶液になるように注射用水を用いて調製した場合の当該水溶液のｐＨが７．４～７．９の範囲になる割合であればよく、その限りにおいて特に制限されない。前記Ａ成分濃度として、好ましくは１～２質量％の範囲を挙げることができる。より好ましくは０．８～３質量％、さらに好ましくは０．１～５．０質量％である。
　本医薬組成物が、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、クエン酸塩、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種の緩衝剤１を含む場合、制限されないものの、本医薬組成物１００質量％中の当該緩衝剤１の割合（総量）は、固形物換算で０．５～１０質量％の範囲から選択することができる。好ましくは１～５質量％、より好ましくは３～３．５質量％である。
　本医薬組成物が、グリシン、アルギニン、炭酸水素塩、ホウ酸塩、ホウ酸、エタノールアミン、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種の緩衝剤２を含む場合、制限されないものの、本医薬組成物１００質量％中の当該緩衝剤２の割合（総量）は、固形物換算で０．５～１０質量％の範囲から選択することができる。好ましくは１～８質量％、より好ましくは３～７質量％である。
　中性領域から塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤は、中性領域から塩基性領域のいずれかのｐＨに調整された被対象物に配合しておくことで、被対象物を当該調整されたｐＨに保つ働きを有する。このため、本発明において緩衝剤３は、本医薬組成物の製造過程で塩基性ｐＨに調整された組成物（製造中間組成物）中に配合しておくことで、当該製造中間組成物のｐＨを塩基性領域に保つ緩衝作用を発揮し、また中性ｐＨに調整された本医薬組成物のｐＨを中性領域に保つ緩衝作用を発揮する。
　かかる緩衝剤３としては、制限されないものの、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、及び４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸からなる群より選択される少なくとも１種を挙げることができる。
　緩衝剤３の配合割合は、前記の効果を発揮し、且つ、本医薬組成物をＡ成分濃度が少なくとも１．５質量％の水溶液になるように注射用水を用いて調製した場合の当該水溶液のｐＨが７．４～７．９の範囲になる割合であればよく、その限りにおいて特に制限されない。前記Ａ成分濃度として、好ましくは１～２質量％の範囲を挙げることができる。より好ましくは０．８～３質量％、さらに好ましくは０．１～５．０質量％である。
　本医薬組成物が緩衝剤３を含む場合、制限されないものの、本医薬組成物１００質量％中の当該緩衝剤３の割合（総量）は、固形物換算で０．５～３０質量％の範囲から選択することができる。好ましくは１～２０質量％、より好ましくは８～１５質量％である。
（３）Ｃ成分
　ｐＨ調整剤には、被対象物を塩基性領域のｐＨ（塩基性ｐＨ）に調整する作用を有する塩基性ｐＨ調整剤、及び被対象物を塩基性ｐＨから中性領域のｐＨ（中性ｐＨ）に調整する作用を有する酸性ｐＨ調整剤を挙げることができる。
　Ｃ成分は、塩基性ｐＨ調整剤及び酸性ｐＨ調整剤の少なくとも一方であり、被対象物及び調整するｐＨに応じて選択して使用することができる。ここで被対象物には、前述する緩衝剤、本医薬組成物、及びその製造中間組成物が含まれる。好ましくは、酸性ｐＨ調整剤、又は、酸性ｐＨ調整剤と塩基性ｐＨ調整剤との組み合わせである。
　本発明で用いられる酸性ｐＨ調整剤としては、塩基性ｐＨの被対象物を中性ｐＨに調整する作用を有するものであればよく、好ましくは塩酸、リン酸、及びクエン酸からなる群より選択される少なくとも１種を挙げることができる。また、塩基性ｐＨ調整剤としては、被対象物を塩基性ｐＨに調整する作用を有するものであればよいが、好ましくは水酸化ナトリウム、及び炭酸水素ナトリウムからなる群より選択される少なくとも１種を挙げることができる。
　本医薬組成物中のｐＨ調整剤の配合割合は、被対象物（緩衝剤、本医薬組成物、及びその製造中間組成物）及びそのｐＨに応じて適宜設定することができる。
　なお、本医薬組成物の製造中間組成物、特にＡ成分を配合する前及び後の製造中間組成物のｐＨとしては、好ましくはｐＨ８．８～１２の範囲、より好ましくはｐＨ９～１２の範囲を挙げることができる。このため、当該製造中間組成物には、塩基性ｐＨ調整剤を上記ｐＨに調整する割合で配合することができる。本医薬組成物のｐＨとしては、好ましくはｐＨ７．４～７．９の範囲を挙げることができる。このため、本医薬組成物が前記ｐＨ範囲になるような割合で、酸性ｐＨ調整剤を、塩基性ｐＨにある製造中間組成物に配合することができる。
（４）Ｄ成分
　本医薬組成物は、さらに任意成分として賦形剤を含有することができる。
　賦形剤としては、制限されないが、スクロース、トレハロース、マンニトール、マルトース、α－シクロデキストリン、スクロース、マルトース、β－シクロデキストリン、デキストラン、及びそれらの水和物を例示することができる。好ましくはスクロース、トレハロース、マンニトール、α－シクロデキストリン、及びそれらの水和物であり、より好ましくはトレハロース又はその水和物である。これらは１種単独で、又は２種以上を組み合わせて本医薬組成物に配合することができる。
　本医薬組成物が、Ｄ成分を含む場合、制限されないものの、本医薬組成物１００質量％中のＤ成分の割合（総量）は、固形物換算で４５～８５質量％の範囲から選択することができる。好ましくは６０～８０質量％、より好ましくは７０～７５質量％である。
　本発明の一態様において、本医薬組成物は凍結乾燥物である。当該凍結乾燥形態を有する医薬組成物は、用時に注射用水に溶解することで再調製して、持続型注射剤として使用することができる。持続型注射剤には、持続皮下注入法に使用される持続型注射剤、及び持続的静脈内注入法に使用される持続型注射剤が含まれる。
　用時調製される持続型注射剤中のＡ成分の濃度は、制限されないものの、例えば０．０００１～２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．００３～１８ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは０．００５～１５ｍｇ／ｍｌの範囲を挙げることができる。
　特に、持続皮下注入法に使用される持続型注射剤の場合、Ａ成分の濃度が０．００３～１５ｍｇ／ｍＬの範囲になるように調整されることが好ましい。また、持続的静脈内注入法に使用される持続型注射剤の場合、Ａ成分の濃度が０．０００１～０．８４ｍｇ／ｍＬの範囲になるように調整されることが好ましい。
　また、持続型注射剤中のＢ成分の濃度は、Ｂ成分の種類に応じて、下記の範囲を例示することができる。
グリシン：０．５～１５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１～１０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは２～７ｍｇ／ｍｌ。
Ｌ－アルギニン：０．５～１２ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１～１０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは３～９ｍｇ／ｍｌ。トリスヒドロキシメチルアミノメタン：０．０００４～１６ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．００４～１８ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは１０～１５ｍｇ／ｍｌ。
　本医薬組成物は、肺動脈性肺高血圧症、特に中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療に好適に用いることができる。
　肺動脈性肺高血圧症の重症度は、医師の診断、患者の状態、及びその他の要素によって変わり得るが、中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症は、例えば、ＮＹＨＡ／ＷＨＯ機能分類のＩＩＩ度～ＩＶ度に該当する肺動脈性肺高血圧症である。また、中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症は、例えば、ＮＹＨＡ心機能分類と、ＷＨＯ肺高血圧機能分類をもとに作成した「難治性呼吸器疾患・肺高血圧症に関する調査研究班」の重症度分類を用いて分類することもでき、この場合、例えば、中リスク～高リスクの肺動脈性肺高血圧症に該当する。
　本医薬組成物は、こうした肺動脈性肺高血圧症の患者に好適に適用することができる。患者への投与は、例えば、前述する凍結乾燥形態の本医薬組成物を用時に生理食塩水（注射用水）に溶解して持続型注射剤に調製し、患者の状態に応じて、持続皮下注入法または持続的静脈内注入法により投与することができる。
　本医薬組成物の投与量は、患者の体重、年齢、及び症状の程度、並びに投与経路等によっても異なるが、一般的には成人に対して、１日あたりのＡ成分の量として０．００１ｍｇ～１００ｍｇの範囲を挙げることができる。好ましくは０．０１ｍｇ～１０ｍｇの範囲である。患者の状態によっては、これ以下でも足りるし、また逆にこれ以上の用量を必要とする場合もある。また、１日１回から数回の投与又は１日から数日間の間隔で投与することができる。
（ＩＩ）医薬組成物の製造方法
　本医薬組成物は、下記の工程により製造することができる。
（１）Ａ成分を含有するｐＨ８．８以上の水溶液を調製する工程（以下、「工程１」とも称する）、及び
（２）前記で調製した水溶液をｐＨ７．４～７．９に調整する工程（以下、「工程２」とも称する）。
　本医薬組成物が凍結乾燥形態を有する場合、さらに下記の工程を有することができる。
（３）前記工程２で得られた水溶液を凍結乾燥して凍結乾燥物を調製する工程（以下、「工程３」とも称する）。
　工程１は、ｐＨ８．８以上に調整された水溶液にＡ成分を溶解することで実施することができる。Ａ成分を溶解するための水溶液には、前述するＢ成分が配合されている。また、必要に応じて、さらに塩基性ｐＨ調整剤を配合して水溶液のｐＨが８．８以上になるように調整してもよい。ｐＨは８．８以上であればよいが、好ましくはｐＨ９以上、例えばｐＨ９～１２、好ましくはｐＨ９～１１である。
　なお、Ａ成分、及びＢ成分は、最終的に調製される本医薬組成物中の各成分の割合が（Ｉ）で前述する割合となる範囲で配合することができ、その配合割合は、前記の通りである。
　当該水溶液は、ｐＨ８．８以上に調整されていることから、酸性または中性と比較して塩基性でより溶解しやすいＡ成分を溶解することができる。また塩基性領域のｐＨに保つ緩衝作用を有することから、これにＡ成分を配合してもｐＨが塩基性に維持されるため、Ａ成分の溶解性が担保され、溶解途中に溶解性が低下し、目標濃度が達成されない、などといった問題が生じにくい。
　工程２は、前記工程１で調製されたｐＨ８．８以上の成分Ａ含有水溶液をｐＨ７．４～７．９に調整する工程である。Ａ成分含有水溶液に、酸性ｐＨ調整剤を添加することで実施することができる。
　工程３は、前記工程２で調製されたｐＨ７．４～７．９のＡ成分含有水溶液を凍結乾燥処理に供して、凍結乾燥形態を有する医薬組成物を調製する工程である。
　凍結乾燥処理は、凍結乾燥物中の水分含量が５質量％以下になるように、常法に従って実施することができる。凍結乾燥処理に供する前に、異物（菌を含む）を除去するために、Ａ成分含有水溶液を、例えば孔径０．２２μｍのフィルターを用いた濾過処理を行ってもよい。
　前記の工程により製造された本医薬組成物は、後述する実験例に示すように、特に凍結乾燥状態で良好な保存安定を有する。具体的には、凍結乾燥状態で室温条件下に保存された場合であっても、ｐＨの変動が少なく、またＡ成分以外の不純物の生成が抑制されている。このため、凍結乾燥状態で一定期間保管した後に、用時に注射用水で溶解することで、医薬組成物として好適に使用することができる。
　このため、前述する工程１～３を有する製法は、Ａ成分を有効成分とする医薬組成物中における、Ａ成分の安定化方法ということもできる。
　以下に試験例、及び処方例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。なお、下記の試験は、特に言及しない場合、室温及び大気圧条件下で実施した。ここで室温とは、２３±５℃を意味する。
　各材料の入手先は以下の通りである。
・（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸（化合物Ｂ）：特許文献８の参考例２に記載の方法に従って製造した。
・Sugen 5416：別称3-[(3,5-Dimethyl-1H-pyrrol-2-yl)methylene]-1,3-dihydro-2H-indol-2-one。血管内皮成長因子受容体拮抗薬。日本新薬株式会社にて合成した。
・クレブス液の組成：111.0 mmol/L NaCl、5.9 mmol/L KCl、2.5 mmol/L CaCl2・2H2O、1.2 mmol/L MgCl2・6H2O、1.2 mmol/L NaH2PO4・2H2O、25.0 mmol/L NaHCO3、11.5 mmol/L D-(+)-Glucose。
・Ｋ＋クレブス液の組成：86.9 mmol/L NaCl、30.0 mmol/L KCl、2.5 mmol/L CaCl2・2H2O、1.2 mmol/L MgCl2・6H2O、1.2 mmol/L NaH2PO4・2H2O、25.0 mmol/L NaHCO3、11.5 mmol/L D-(+)-Glucose。
１．化合物Ｂの薬学的に許容される塩の調製
（１）化合物Ｂのカリウム塩の調製
　化合物Ｂ（30g、71.51 mmol）とＴＨＦ (300 mL)を仕込み、８ mol/L ＫＯＨ水溶液（4.469 mL、0.50 eq.）を添加し４０℃～５０℃で撹拌して溶解した。４時間撹拌後、徐冷して室温で９時間撹拌した後、析出物をろ過して減圧下５０℃で乾燥し、化合物Ｂのカリウム塩（28.50 g）を取得した。
（２）化合物Ｂのトロメタミン塩の調製
　化合物Ｂ（15g、35.76 mmol) とトリスヒドロキシメチルアミノメタン（4.55g、1.05 mol）を仕込み、ＴＨＦ／水（10：1）混合液（300 mL）を添加した。４０℃～５０℃で撹拌して溶解後、ＴＨＦ／水から濃縮による溶媒置換をしてアセトン（45 mL）にした。４０℃～５０℃で１４時間撹拌後、アセトン（300 mL）滴下し、さらに６時間加熱撹拌を行った。室温まで徐冷後、析出物をろ過して、減圧下５０℃で乾燥し、化合物Ｂのトロメタミン塩（16.19g）を取得した。
試験例１：各種緩衝液への溶解性の評価
１．試験方法
　前記で調製した化合物Ｂのカリウム塩及びトロメタミン塩の各々を、下記に記載する各種緩衝液に配合し、室温条件で２４時間振とうして、各塩の溶解性を評価した。
　下記に記載する方法で調製した各緩衝液中に、化合物Ｂの最終濃度が０．１ｍｇ／ｍＬ～５．０ｍｇ／ｍＬとなるように化合物Ｂのカリウム塩又はトロメタミン塩を添加して、化合物Ｂ塩含有緩衝液を調製した。
（ａ）リン酸緩衝液（ｐＨ７～８）
　リン酸水素二ナトリウム十二水和物を７１．６３ｇ秤量し、８００ｍｌの精製水に溶解させた後、精製水で全量を１Ｌとした（Ａ液）。リン酸二水素ナトリウム二水和物を３１．２０ｇ秤量し、８００ｍｌの精製水に溶解させた後、精製水で全量を１Ｌとした（Ｂ液）。Ａ液３０．５ｍＬ、Ｂ液１９．５ｍＬ、精製水５０ｍＬを混和して、ｐＨ７のリン酸緩衝液を調製した。Ａ液４７．３５ｍＬ、Ｂ液２．６５ｍＬ、精製水５０ｍＬを混和して、ｐＨ８のリン酸緩衝液を調製した。
（ｂ）炭酸－重炭酸緩衝液（ｐＨ９．２～１０．６）
　炭酸ナトリウムを１０．６０ｇ秤量し、８００ｍｌの精製水に溶解させた後、精製水で全量を１Ｌとする（Ａ液）。炭酸水素ナトリウムを８．４０ｇ秤量し、８００ｍＬの精製水に溶解させた後、精製水で全量を１Ｌとした（Ｂ液）。Ａ液４．０ｍＬ、Ｂ液４６．０ｍＬ、精製水１５０ｍＬを混和して、ｐＨ９．２の炭酸－重炭酸緩衝液を調製した。Ａ液４２．５ｍＬ、Ｂ液７．５ｍＬ、精製水１５０ｍＬを混和して、ｐＨ１０．６の炭酸－重炭酸緩衝液を調製した。
　下記に記載する方法で、化合物Ｂの最終濃度が５ｍｇ／ｍＬ～１５．０ｍｇ／ｍＬとなるように化合物Ｂのカリウム塩又はトロメタミン塩を含有する緩衝液を調製した。
（ｃ）Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ１０）
　トリスヒドロキシメチルアミノメタンを１４４０ｍｇ秤量し、２４０ｍｌの精製水に溶解させ、ｐＨ１０のＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液を調製した。そこへ、秤量した化合物Ｂのカリウム塩１７４４ｍｇを溶解させた。目視での溶解確認後、１Ｍ塩酸を用いてｐＨを７～８に調整した。
　トリスヒドロキシメチルアミノメタンを４２００ｍｇ秤量し、５４０ｍｌの精製水に溶解させ、ｐＨ１０のＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液を調製した。そこへ、秤量した化合物Ｂのトロメタミン塩４５０１ｍｇを溶解させた。目視での溶解確認後、１Ｍ塩酸を用いてｐＨを７～８に調整した。
（ｄ）グリシン・リン酸緩衝液（ｐＨ１０）
　グリシン０．５０ｇ及びリン酸二水素ナトリウム二水和物０．３０ｇを量りとり、７５ｍＬの精製水に溶解させた後、５ｍＬの１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ１０のグリシン・リン酸緩衝液を調製した。これに、化合物Ｂのカリウム塩を溶解させた。目視での溶解確認後、１Ｍ塩酸を用いてｐＨを７．４～７．９に調整した。
（ｅ）アルギニン緩衝液（ｐＨ１１）
　Ｌ－アルギニン０．６ｇを量りとり、７５ｍｌの精製水に溶解させて、ｐＨ１１のアルギニン緩衝液を調製した。これに、化合物Ｂのカリウム塩を溶解させた。目視での溶解確認後、１Ｍ塩酸を用いてｐＨを７．６に調整した。
２．試験結果
　前記で調製した各緩衝液の外観を目視で観察することで、各緩衝液に対する化合物Ｂの各塩の溶解性を評価した。
　その結果、リン酸緩衝液（ｐＨ７～８）について、カリウム塩は溶解したものの、ｐＨ７においては静置すると白色の析出物が生じた。トロメタミン塩も溶解したものの、静置すると白濁し、析出物が生じた。炭酸－重炭酸緩衝液（ｐＨ９．２～１０．６）について、カリウム塩は溶解した。Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液について、トリスヒドロキシメチルアミノメタンを溶解させたｐＨ１０付近の液に、カリウム塩及びトロメタミン塩はいずれも良好に溶解し、またその後ｐＨ７～８に調整した後も、析出は認められず、溶解状態が良好に維持されることが確認された。グリシン・リン酸緩衝液（ｐＨ１０）について、カリウム塩は良好に溶解し、その後ｐＨ７．４～７．９に調整した後も、析出は認められず、溶解状態が良好に維持されることが確認された。アルギニン緩衝液（ｐＨ１１）についても、カリウム塩は良好に溶解し、またその後ｐＨ７．６に調整した後も、析出は認められず、溶解状態が良好に維持されることが確認された。
　この結果に示すように、化合物Ｂのカリウム塩及びトロメタミン塩はいずれも中性ｐＨの水溶液に対する溶解性及び／又はその溶解安定性はよくないものの、塩基性ｐＨの水溶液への溶解性は良好であることが確認された。またその後に、中性ｐＨに調整しても溶解安定性が維持されていることが確認された。このことから、化合物Ｂのカリウム塩及びトロメタミン塩は、塩基性領域に緩衝作用を有する塩基性ｐＨの緩衝液に溶解させ、その後に、酸性ｐＨ調整剤を用いて、中性ｐＨに調整することが好ましく、そうすることで、化合物Ｂの塩の中性ｐＨ条件下での溶解安定性を良好に維持することができると考えられる。
試験例２：凍結乾燥物（実施例１～１７）の調製、及びその安定性の評価（その１）
１．凍結乾燥物の調製
　表１～３に記載する処方１～１７の薬液を凍結乾燥して、凍結乾燥物（実施例１～１７）を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　具体的には、表１～３に記載する処方１～１７に従って、まず、注射用水にトリスヒドロキシメチルアミノメタン（緩衝剤３）を溶解して弱塩基性（ｐＨ１０－１１）に調整した。次いで、化合物Ｂのカリウム塩又はトロメタミン塩を添加して、澄明な溶液となるまで撹拌した（ｐＨ９程度）。さらに賦形剤（スクロース等）を添加して撹拌溶解させた後、塩酸（ｐＨ調整剤）を用いてｐＨ７．５付近に調整した。その後、注射用水（生理食塩水）を用いて化合物Ｂの最終濃度が、処方１～１６では５ｍｇ／ｍＬ、処方１７では１５ｍｇ／ｍＬになるようにメスアップした。
　メスアップ後、調製した薬液をフィルター（0.22μm、PVDF製）でろ過し、ろ液をバイアル（TopLyo，10R、SCHOTT製又はIRAS，6R，岩田硝子工業製）1本あたり２～３ｍｌ充填した。これを、ゴム栓（V10-F8W D21-7S、大協精工製）で半打栓した後、表４（処方１～１０）、表５（処方１１～１６）及び表６（処方１７）に記載するプログラムで凍結乾燥を行った後、室温で窒素復圧して全打栓した。斯くして、処方１～１７の各薬液の凍結乾燥物（実施例１～１７）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
２．安定性試験
　前記で調製した凍結乾燥物（実施例１～１７）を、下記（１）の保存条件に置き、２週間及び１か月放置した。保存前及び保存後の各凍結乾燥物について、下記（２）の方法で薬液及び試料溶液を調製し、ｐＨ、化合物Ｂの残存率、及び不純物の総量を測定し、保存前後で比較した。
（１）凍結乾燥物の保存条件
　２５℃／６０％ＲＨ、４０℃／７５％ＲＨ
（２）薬液及び試料溶液の調製方法
　（処方１～１６）上記各条件で保存した凍結乾燥物について、各バイアルに注射用水３ｍＬを注入して凍結乾燥物を溶解し、薬液を再調製した。
　再調製した薬液を正確に１ｍＬとり、７０容量％のメタノール水溶液を用いて正確に５０ｍＬまでメスアップした。その液を２ｍＬ正確にとり、再度７０容量％のメタノール水溶液を用いて正確に２５ｍＬまでメスアップし、これを試料溶液とした。
　（処方１７）上記条件で保存した凍結乾燥物を注射用水２ｍLで溶解し、５０容量％のアセトニトリル水溶液を用いて試料溶液を調製した。
　保存前の各凍結乾燥物（実施例１～１７）についても、前記と同じ方法で、薬液（対照薬液）及び試料溶液（対照試料溶液）を調製し、下記の実験に供した。
（３）薬液のｐＨの測定
　凍結乾燥物１～１７（保存前、保存後）を注射用水で再溶解して調製した薬液のｐＨをｐＨメーターで測定した。
（４）試料溶液中の化合物Ｂの残存率の測定
　前記で調製した各試料溶液（対照試料溶液を含む）を、下記条件のＨＰＬＣに供して、化合物Ｂに相当するピークの面積から各試料溶液中の化合物Ｂの含有量を算出した。対照試料溶液について得られた化合物Ｂの含有量を１００％として、それとの相対比から、試料溶液中の化合物Ｂの残存率（％）を算出した。
［ＨＰＬＣ分析条件（実施例１～１６）］
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：３０２ｎｍ）
カラム；Develosil ODS-HG、5μm、4.6 mm×150 mm（メーカー；Nomura Chemical）
カラム温度：４０℃付近の一定温度（設定値）
移動相：１－オクタンスルホン酸ナトリウム２．１６ｇを、希釈したリン酸水溶液（１→１０００）１０００ｍＬに溶解した液３００ｍＬにメタノール７００ｍＬを加えて調製した溶液を使用。
流量：１．０ｍＬ／分
試料溶液の注入量：１０μＬ。
［ＨＰＬＣ分析条件（実施例１７）］
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２１０ｎｍ）
カラム；ZORBAX Eclipse XDB-C18、3.5μm、4.6mm×75mm（メーカー；Agilent）
カラム温度：４０℃付近の一定温度（設定値）
移動相Ａ：水／アセトニトリル／メタンスルホン酸混液（520：480：1）
移動相Ｂ：アセトニトリル／水／メタンスルホン酸混液（900：100：1）
移動相の送液：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
 流量：１．０ｍＬ／分
ＨＰＬＣに供したサンプル中の化合物Ｂの濃度：０．５ｍｇ／ｍＬ
試料溶液の注入量：５μＬ。
（５）試料溶液中の不純物（総量）の測定（純度試験）
　前記で調製した各試料溶液を、前記条件のＨＰＬＣに供して、試料溶液中に含まれる化合物Ｂ以外の物質（これを「不純物」と称する）（総量）の割合を求めた。なお、不純物（総量）の割合は、ＨＰＬＣクロマトグラムにおいて溶媒ピークの後から化合物Ｂの保持時間の約３．５倍の範囲で検出されたピークの総面積１００％に占める化合物Ｂのピーク以外のピークの総面積の割合（％）として算出した。
３．安定性試験結果
　処方１～４から調製された凍結乾燥物（実施例１～４：カリウム塩）について、凍結乾燥物の保存前後の薬液のｐＨ、化合物Ｂの残存率、及び不純物総量を測定した結果を、それぞれ表８～１０に示す。
凍結乾燥物の保存前後の薬液のｐＨ
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
化合物Ｂの残存率
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
不純物総量
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　処方５～１０から調製された凍結乾燥物（実施例５～１０：トロメタミン塩）について、凍結乾燥物の保存前後の薬液のｐＨ、化合物Ｂの残存率、及び不純物総量を測定した結果を、それぞれ表１１～１３に示す。
凍結乾燥物の保存前後の薬液のｐＨ
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
化合物Ｂの残存率
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
不純物総量
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
　処方１１～１６から調製された凍結乾燥物（実施例１１～１６：カリウム塩）について、凍結乾燥物の保存前後の薬液のｐＨ、化合物Ｂの残存率、及び不純物総量を測定した結果を、それぞれ表１４～１６に示す。
凍結乾燥物の保存前後の薬液のｐＨ
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
化合物Ｂの残存率
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
不純物総量
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
試験例３：凍結乾燥物（実施例１８）の調製、及びその安定性の評価（その２）
１．凍結乾燥物の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
　表１７に記載する処方１８の薬液を凍結乾燥して、凍結乾燥物（実施例１８）を調製した。
　まず、処方１８に従って化合物Ｂを含む薬液を調製した。具体的には、注射用水８０ｍＬに、トロメタモール１２００ｍｇ、トレハロース水和物６５００ｍｇを溶解した。これに化合物Ｂのカリウム塩（１５６８ｍｇ）を溶解した（ｐＨ９程度）。次いで、１Ｍの塩酸水溶液にてｐＨを７．６３に調整し、注射用水を用いて最終容量が１００ｍＬになるようにメスアップした。
　調製した薬液をフィルター（0.22μm、PVDF製）でろ過し、ろ液（2.2 mL）をバイアル（IRAS，6R、岩田硝子工業製）に充填した。これを、ゴム栓（V10-F8W D21-7S、大協精工製）で半打栓して、処方１７と同様のプログラムにより凍結乾燥を行った後、室温で窒素複圧して全打栓をし、バイアルに密栓充填した凍結乾燥物（実施例１８）を得た。
２．安定性試験（１）
　前記で調製した凍結乾燥物（実施例１８）を、４０℃／７５％ＲＨの条件に１か月間保存した。保存前及び保存後に、凍結乾燥物を注射用水２ｍLで溶解し、５０容量％のアセトニトリル水溶液を用いて試料溶液を調製した。次いで、下記（１）に記載する方法で、試料溶液中の不純物の量（試料溶液の純度）を分析し、保存前後で純度を比較することで凍結乾燥物の保存安定性を評価した。
（１）試料溶液中の不純物の測定（純度試験）
　前記で調製した各試料溶液（保存前、保存後）をＨＰＬＣに供した。ＨＰＬＣの条件として、前記試験例２の実施例１７の純度試験に使用した条件を用いた。
　溶媒に相当するピークの後からサンプル注入３０分までの間で検出されたピーク（化合物Ｂに相当するピークを含む）を対象として、それらのピークの総面積（100％）に対する各ピークの面積の割合を算出し、それを保存前後で比較した。
　結果を表１８に示す。表１８には、化合物Ｂのピーク（RRT：1.00）の面積と化合物Ｂ以外の類縁物質の各ピークの面積との相対比を示す。なお、表１８に記載する相対保持時間（RRT）とは、化合物Ｂのピークの保持時間（分）を１.００とし、これに対する類縁物質のピークの相対保持時間を意味する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
　この結果に示すように、凍結乾燥物の保存により不純物の増加はほぼ認められなかった。これにより、凍結乾燥物（実施例１８）は保存安定性が良好であることが確認された。
試験例４：凍結乾燥物（実施例１９）の調製、及びその安定性の評価（その３）
１．凍結乾燥物の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
　表１９に記載する処方１９の薬液を凍結乾燥して、凍結乾燥物（実施例１９）を調製した。
　まず、処方１９に従って化合物Ｂを含む薬液を調製した。具体的には、注射用水４５ｍＬに、グリシン３００ｍｇ、リン酸二水素ナトリウム二水和物１８０ｍｇ、トレハロース水和物３９００ｍｇを溶解した。これに１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液３ｍＬを加えて、ｐＨを１０程度にした後、化合物Ｂのカリウム塩（９４１ｍｇ）を溶解した（ｐＨ９程度）。次いで、１Ｍの塩酸にてｐＨを７．４１に調整し、注射用水を用いて最終容量が６０ｍＬになるようにメスアップした。
　調製した薬液をフィルター（0.22μm、PVDF製）でろ過し、ろ液をバイアル（IRAS，6R、岩田硝子工業製）に1バイアルあたり２ｍｌ充填した。これを、ゴム栓（V10-F8W D21-7S、大協精工製）で半打栓して、表２０に記載するプログラムにより凍結乾燥を行った後、室温で窒素複圧して全打栓をし、バイアルに密栓充填した凍結乾燥物（実施例１９）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
２．安定性試験（１）
　前記で調製した凍結乾燥物（実施例１９）を、４０℃／７５％ＲＨの条件に１か月間保存した。保存前及び保存後に、前記試験例３の「２．安定性試験」に記載する方法に従って、凍結乾燥物を注射用水２ｍLで溶解し、５０容量％のアセトニトリル水溶液を用いて試料溶液を調製した。次いで、下記（１）に記載する方法で、試料溶液中の不純物の量（試料溶液の純度）を分析し、保存前後で純度を比較することで凍結乾燥物の保存安定性を評価した。
（１）試料溶液中の類縁物質の測定（純度試験）
　前記で調製した各試料溶液（保存前、保存後）をＨＰＬＣに供した。ＨＰＬＣの条件として、前記試験例２の実施例１７の純度試験に使用した条件を用いた。
　溶媒に相当するピークの後からサンプル注入３０分までの間で検出されたピーク（化合物Ｂに相当するピークを含む）を対象として、それらのピークの総面積（100％）に対する各ピークの面積の割合を算出し、それを保存前後で比較した。
　結果を表２１に示す。表２１には、化合物Ｂのピーク（RRT：1.00）の面積と化合物Ｂ以外の成分（不純物）の各ピークの面積との相対比を示す。なお、表２１に記載する相対保持時間（RRT）とは、化合物Ｂのピークの保持時間（分）を１.００とし、これに対する不純物のピークの相対保持時間を意味する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
　この結果に示すように、凍結乾燥物の保存により不純物の増加は認められなかった。これにより、凍結乾燥物（実施例１９）は保存安定性が良好であることが確認された。
３．安定性試験（２）
　処方１９の化合物Ｂを含む薬液について安定性試験を実施した、具体的には、当該薬液を、２５℃／６０％ＲＨ、又は５０℃（湿度成り行き）の条件に５日間又は８日間、保存した。保存前及び保存後に、各薬液のｐＨ、及び不純物の量（薬液の純度）を分析し、薬液の保存安定性を評価した。なお、不純物の量（薬液の純度）の分析は、本試験例４の２．安定性試験（１）と同様の方法で実施した。
　保存前及び保存後に測定した薬液のｐＨを表２２に示す。また、薬液の純度試験の結果を表２３に示す。薬液の純度試験の結果は、前記と同様に、化合物Ｂのピーク（RRT：1.00）の面積と化合物Ｂ以外の物質（不純物）の各ピークの面積との相対比で示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
　この結果に示すように、処方１９の薬液の２５℃での保存ではｐＨの変動、及び不純物の増加はほとんど認められなかった。このことから、処方１９の薬液は室温での保存安定性が良好であることが示唆された。
試験例５：処方２０の薬液（実施例２０）の調製
１．薬液の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
　表２４に記載する処方２０に従って化合物Ｂを含む薬液（実施例２０）を調製した。具体的には、注射用水４５ｍＬにＬ－アルギニン３６０ｍｇ、及びトレハロース水和物３９００ｍｇを溶解し、ｐＨ１１程度の水溶液を調製した。この水溶液に化合物Ｂのカリウム塩（９４１ｍｇ）を溶解し（ｐＨ９．５程度）、次いで１Ｍの塩酸にてｐＨを７．５６に調整し、注射用水を用いて最終容量が６０ｍＬになるようにメスアップした。
　処方２０により、塩基性で緩衝能を有するＬ－アルギニンを処方することで、化合物Ｂのカリウム塩を溶解させることが可能であることが確認された。
　調製した薬液は、前記実施例１９と同様に、フィルターでろ過し、ろ液（2 mL）をバイアルに充填した後に、ゴム栓で半打栓して凍結乾燥し、バイアルに密栓充填した凍結乾燥物として調製することができる。
試験例６：処方２１の薬液（実施例２１）の調製
１．薬液の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
　表２５に記載する処方２１に従って化合物Ｂを含む薬液（実施例２１）を調製した。具体的には、注射用水４５ｍＬに炭酸水素ナトリウム６０ｍｇ、及びトレハロース水和物３９００ｍｇを溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２．２５ｍｌを加えて、ｐＨ１０．５程度の水溶液を調製した。この水溶液に化合物Ｂのカリウム塩（９４１ｍｇ）を溶解し（ｐＨ９程度）、次いで１Ｍの塩酸にてｐＨを７．４５に調整し、注射用水を用いて最終容量が６０ｍＬになるようにメスアップした。
　処方２１により、塩基性で緩衝能を有する炭酸水素ナトリウムを処方することで、化合物Ｂのカリウム塩を溶解させ薬液の調整が可能であることが確認された。
　調製した薬液は、前記実施例１９と同様に、フィルターでろ過し、ろ液（2 mL）をバイアルに充填した後に、ゴム栓で半打栓して凍結乾燥し、バイアルに密栓充填した凍結乾燥物として調製することができる。
試験例７　Sugen5416／低酸素誘発肺高血圧症モデルラット摘出血管を用いた血管弛緩作用の評価
１．Sugen5416／低酸素誘発肺高血圧症モデルラットの作製
　Sugen5416を、溶媒（0.5％(w/v)カルボキシメチルセルロースナトリウム、0.9%(w/v)塩化ナトリウム、0.4％(v/v)ポリソルベート８０、0.9％(v/v)ベンジルアルコール）に５ｍｇ／ｍＬになるよう懸濁し、これをＳＤ系ラット（雄性、６週齢）（日本エスエルシー社）に対して、２０ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与した。このラットを、１０％酸素濃度に維持した飼育装置内で３週間飼育し、その後は常酸素環境下でさらに２～５週間飼育して、Sugen5416／低酸素誘発肺高血圧症モデルラットを作製した。
２．摘出血管に対する血管弛緩作用の測定
　前記で作製したSugen5416/低酸素誘発肺高血圧症モデルラットをイソフルラン吸入麻酔下において放血致死させ、肺を摘出した。摘出した肺組織はクレブス液を満たしたシャーレ内に置き、実体顕微鏡下で観察しながら左肺葉内動脈輪状標本を作製した。
　作製した左肺葉内動脈輪状標本（以下、単に「標本」と称する）を用いて、血管の張力変化をＤＭＴワイヤーミオグラフ装置（610M、Danish Myo Technology）及びＰｏｗｅｒＬａｂ（PowerLab 8/30、ADInstruments Pty Ltd.）を用いて測定した。具体的には、前記標本をクレブス液を満たしたミオグラフ槽内のフォーストランスデューサーにタングステンワイヤー（直径２５μｍ）を用いて装着し、混合ガス（95％O2、5％CO2）通気下で約３７℃に保った。この標本に０．１４５～０．１５５ｇの静止張力を負荷し、張力が安定するまで静置した。その後、ミオグラフ槽内のクレブス液を、３０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｋ＋クレブス液に置換した。その際に収縮反応が認められた標本のみを、以下の測定に供した。
　ミオグラフ槽内の標本をクレブス液で洗浄した後、再度ミオグラフ槽をクレブス液で満たし、血管収縮剤（ＰＧＦ２α：最終濃度10-5 mol/L）を添加し、張力（血管収縮反応）が安定するまで静置した。その後、ミオグラフ槽に、被験物質として、化合物Ｂ、トレプロスチニル、又はエポプロステノールを表２６に記載する濃度（mol/L）になるように累積的に添加して、張力を測定した。被験物質の添加が終了した後、弛緩剤であるパパベリン（最終濃度：10-4 mol/L）を添加して、張力を測定した。
　PowerLabデータパッドを用いて各処置ポイントの前３０秒間の張力の平均値を計算し、これを測定値とした。具体的には、ＰＧＦ２α（血管収縮剤）処置後の収縮高を示す測定値を「測定値１」、パパベリン（弛緩剤）処置後の完全弛緩を示す測定値を「測定値２」、各被験物質処置による張力変化を示す測定値を「測定値３」とした。測定値１を「弛緩率０％」、測定値２を「弛緩率１００％」とし、これらを基準として、各被験物質処置による張力変化を示す測定値３から、被験物質処置による弛緩率（％）を算出した。
　結果を以下の表２６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
　この結果から、化合物Ｂのカリウム塩には、従来より中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療薬の有効成分として使用されているトレプロスチニル、及びエポプロステノールに匹敵するか、それ以上強い血管弛緩作用が認められた。特に、化合物Ｂのカリウム塩は、３．０×１０－６ｍｏｌ／Ｌ以上の濃度で、トレプロスチニル、及びエポプロステノールよりも強い血管弛緩作用を発揮することが認められた。このことから、化合物Ｂのカリウム塩は、中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療薬の有効成分として有効に利用できると考えられる。

Claims (21)

  1. 　下記成分を含有する、医薬組成物であって、
    （Ａ）（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩、
    （Ｂ）中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝能を有する緩衝剤、及び
    （Ｃ）ｐＨ調整剤；
    　注射用水にて、前記Ａ成分濃度が１．５質量％の水溶液を調製した場合の当該水溶液のｐＨが７．４～７．９の範囲である、医薬組成物。
  2. 　前記成分Ｂが、中性領域に緩衝能を有する緩衝剤１と塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤２との組み合わせ、又は中性～塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤３である、
    　請求項１に記載する医薬組成物。
  3. 　さらに（Ｄ）賦形剤を含有する請求項１又は２に記載する医薬組成物。
  4. 　前記成分Ａが、（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸のカリウム塩又はトロメタミン塩である、請求項１又は２に記載する医薬組成物。
  5. 　前記緩衝剤１が、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、クエン酸塩、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
    　前記緩衝剤２が、グリシン、アルギニン、炭酸水素塩、ホウ酸、ホウ酸塩、エタノールアミン、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
    　前記緩衝剤３が、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、及び４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項２に記載する医薬組成物。
  6. 　前記ｐＨ調整剤が、酸性ｐＨ調整剤、又は酸性ｐＨ調整剤と塩基性ｐＨ調整剤の組み合わせであり、
    　前記酸性ｐＨ調整剤は、塩酸、リン酸、及びクエン酸からなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤であり、
    　前記塩基性ｐＨ調整剤は、水酸化ナトリウム、及び炭酸水素ナトリウムからなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤である、
    　請求項は２又は５に記載する医薬組成物。
  7. 　前記成分Ａの含有量が、医薬組成物の総質量１００質量％あたり、固形物換算で１～５０質量％である、請求項１又は２に記載する医薬組成物。
  8. 　凍結乾燥物である、請求項１又は２に記載する医薬組成物。
  9. 　持続皮下注入法又は持続的静脈内注入法に用いられる持続型注射剤である、請求項１又は２に記載する医薬組成物。
  10. 　中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の治療用医薬組成物である、請求項１又は２に記載する医薬組成物。
  11. 　下記の工程を有する、（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物の製造方法：
    （１）（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩を含有するｐＨ８．８以上の水溶液を調製する工程、及び
    （２）前記で調製した水溶液をｐＨ７．４～７．９に調整する工程。
  12. 　さらに下記の工程を有する、請求項１１に記載する製造方法：
    （３）前記工程２で得られた水溶液を凍結乾燥して凍結乾燥物を調製する工程。
  13. 　前記工程１が、下記成分を含有する水溶液を調製する工程である、請求項１１又は１２に記載する製造方法：
    （Ａ）（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩、
    （Ｂ）中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝能を有する緩衝剤、及び
    （Ｃ）ｐＨ調整剤。
  14. 　前記成分Ｂが、中性領域に緩衝能を有する緩衝剤１と塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤２との組み合わせ、又は中性～塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤３である、
    　請求項１３に記載する製造方法。
  15. 　前記緩衝剤１が、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、クエン酸塩、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
    　前記緩衝剤２が、グリシン、アルギニン、炭酸水素塩、ホウ酸、ホウ酸塩、エタノールアミン、及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも１種であり、
    　前記緩衝剤３が、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、及び４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１４に記載する製造方法。
  16. 　前記ｐＨ調整剤が、酸性ｐＨ調整剤、又は酸性ｐＨ調整剤と塩基性ｐＨ調整剤の組み合わせであり、
    　前記酸性ｐＨ調整剤は、塩酸、リン酸、及びクエン酸からなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤であり、
    　前記塩基性ｐＨ調整剤は、水酸化ナトリウム、及び炭酸水素ナトリウムからなる群より選択される少なくとも１種のｐＨ調整剤である、
    　請求項１４又は１５に記載する製造方法。
  17. 　請求項１～１０のいずれかに記載する医薬組成物、または請求項１１～１６のいずれかに記載する製造方法で得られる医薬組成物を、中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症の患者に投与する工程を含む、当該患者の中等度～重度の肺動脈性肺高血圧症を治療する方法。
  18. 　患者への投与方法が持続皮下注入法又は持続的静脈内注入法である、請求項１７に記載する治療方法。
  19. 　下記の工程を有する、（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物中における、前記塩の安定化方法：
    （１）（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩を含有するｐＨ８．８以上の水溶液を調製する工程、
    （２）前記で調製した水溶液をｐＨ７．４～７．９に調整する工程、及び
    （３）前記工程２で得られた水溶液を凍結乾燥して、凍結乾燥形態を有する（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物を調製する工程。
  20. 　前記工程１が、下記成分を含有する水溶液を調製する工程である、請求項１９に記載する方法：
    （Ａ）（２－（４－（（５，６－ジフェニルピラジン－２－イル）（イソプロピル）アミノ）ブトキシ）酢酸の薬学的に許容される塩、
    （Ｂ）中性領域から塩基性領域の範囲に緩衝能を有する緩衝剤、及び
    （Ｃ）ｐＨ調整剤。
  21. 　前記成分Ｂが、中性領域に緩衝能を有する緩衝剤１と塩基性領域に緩衝能を有する緩衝剤２との組み合わせ、又は塩基性領域～中性領域に緩衝能を有する緩衝剤３である、
    　請求項２０に記載する方法。
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