WO2023219152A1 - リチウム塩の析出工程を含む、アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物の製造方法 - Google Patents

リチウム塩の析出工程を含む、アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物の製造方法 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to a method for producing an amino acid salt, a peptide compound salt, or a solvate thereof, which includes a step of precipitating a lithium salt.
  • Amino acid salts, peptide compound salts, and solvates thereof are important compounds that can serve as drug candidate molecules or synthetic intermediates thereof.
  • Known methods for purifying amino acid salts, peptide compound salts, or solvates thereof include protecting or modifying their terminals and then purifying them.
  • Patent Document 1 describes optically active aziridine-2-carboxylic acid in which an amino group is protected with a benzenesulfonyl group substituted with a nitro group at the 2- and/or 4-position using an optically active 3-chloroalanine derivative. It is disclosed that a derivative or an optically active 3-haloalanine derivative in which an amino group is protected with a benzenesulfonyl group substituted with a nitro group at the 2- and/or 4-positions is used.
  • Patent Document 2 discloses that ⁇ -hydroxy- ⁇ -aminocarboxylic acid (however, the basicity of the amino group at the ⁇ -position is not blocked by the presence of a substituent on the amino group) or a salt with that acid is A method for producing ⁇ -halogeno- ⁇ -aminocarboxylic acid or a salt thereof is disclosed, which is characterized by halogenating a hydroxyl group by treatment with a halogenating agent.
  • Non-Patent Document 1 states that when a peptide compound is protected with the Fmoc group, Fmoc- ⁇ - It has been shown that alanine is produced and that Fmoc- ⁇ -alanine is derived from Fmoc-OSu (Fmoc N-hydroxysuccinimide ester). Fmoc-OSu is one of the raw materials commonly used when protecting amino acids or peptide compounds with an Fmoc group.
  • an object of the present invention is to provide a method for obtaining highly pure amino acid salts, peptide compound salts, or solvates thereof.
  • a method for producing an amino acid salt, a peptide compound salt, or a solvate thereof including the following steps (A) and (B): Step (A); a step of bringing a lithium-containing substance into contact with the object to be purified, which is a mixture of the object (i) below, which is the object to be purified, and the object (ii) below, which is an impurity; (i) the above-mentioned amino acid having a protecting group at the N-terminus or the above-mentioned peptide compound having a protecting group at the N-terminus; (ii) a compound other than the above-mentioned purification target; Step (B): A step of precipitating the lithium salt of the object to be purified.
  • a method for removing impurities from a substance to be purified including the following steps (A) and (B): Step (A); a step of bringing a lithium-containing substance into contact with the object to be purified, which is a mixture of the object (i) below, which is the object to be purified, and the object (ii) below, which is an impurity; (i) the above-mentioned amino acid having a protecting group at the N-terminus or the above-mentioned peptide compound having a protecting group at the N-terminus; (ii) a compound other than the above-mentioned purification target; Step (B): A step of precipitating the lithium salt of the object to be purified.
  • the above impurities contain a fluorenylmethoxycarbonyl group, a tert-butoxycarbonyl group, a benzyloxycarbonyl group, an allyloxycarbonyl group, a 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl group, or a 2-(trimethylsilyl)ethoxycarbonyl group as a protecting group.
  • the method according to any one of [1] to [9], wherein the purification target product and the impurity have the same protecting group.
  • the first organic solvent comprises nitriles, ethers, ketones, amides, ureas, sulfoxides, sulfones, alkanes, aromatic compounds, esters, and alkyl halides.
  • the first organic solvent is a nitrile or an ether.
  • the first organic solvent is acetonitrile, methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, 2-butanol, 2-methyl-2-propanol, ethylene glycol, tetrahydrofuran, 1,4- Dioxane, 2-methyltetrahydrofuran, methyl tert-butyl ether, diisopropyl ether, diethyl ether, 1,2-dimethoxyethane, acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, dimethylformamide, dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, 1,3 -dimethyl-2-imidazolidinone, dimethyl sulfoxide, sulfolane, heptane, methylcyclohexane, hexane, cyclohexane, pentane, benzene, toluene, 1,2-dimethyl
  • the second organic solvent may include nitriles, alcohols, ethers, ketones, amides, ureas, sulfoxides, sulfones, alkanes, aromatic compounds, esters, and alkyl halides.
  • the method according to [27] or [28], wherein the method is at least one selected from the group consisting of: [30] The method according to any one of [27] to [29], wherein the second organic solvent is a nitrile or an ether.
  • the second organic solvent is acetonitrile, methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, 2-butanol, 2-methyl-2-propanol, ethylene glycol, tetrahydrofuran, 1,4- Dioxane, 2-methyltetrahydrofuran, methyl tert-butyl ether, diisopropyl ether, diethyl ether, 1,2-dimethoxyethane, acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, dimethylformamide, dimethylacetamide, N-methyl-2-pyrrolidone, 1,3 -dimethyl-2-imidazolidinone, dimethyl sulfoxide, sulfolane, heptane, methylcyclohexane, hexane, cyclohexane, pentane, benzene, toluene, 1,2-dimethyl
  • the above steps (A) and (B) are performed in the presence of a first organic solvent,
  • the volume of the first organic solvent per 1 g of the object to be purified is 1 ml or more and 40 ml or less throughout the step (A) and the step (B).
  • Method. [42]
  • the volume of the first organic solvent per 1 g of the object to be purified at the end of the step (A) is 1 ml or more when the proportion of the second organic solvent is increased in the step (B).
  • the volume of the first organic solvent per 1 g of the object to be purified at the end of the step (A) is 1 ml or more if the proportion of the second organic solvent is not increased in the step (B).
  • the above steps (A) and (B) are performed in the presence of a second organic solvent, and the volume of the second organic solvent per 1 g of the object to be purified is the same as that of the above step (A) and the above step (B).
  • the amount of the lithium-containing substance in the total liquid component at the end of the step (A) is 0.5 equivalent or more and 2.0 equivalent or less, based on the amount of the purification target. , the method according to any one of [1] to [50].
  • the lithium-containing substance includes lithium hydroxide, lithium carbonate, lithium hydride, trilithium phosphate, lithium methoxide, lithium ethoxide, lithium isopropoxide, lithium tert-butoxide methyllithium, n-butyllithium, At least one member selected from the group consisting of sec-butyllithium, tert-butyllithium, lithium amide, lithium diisopropylamide, lithium hexamethyldisilazide, and lithium tetramethylpiperidide, [1] to [51] The method described in any of the above.
  • n represents a number from 1 to 3
  • R 1 and R 2 are a hydrogen atom, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, a heterocyclyl group, a heteroaryl group, or a substituent in which two or more of these substituents are bonded.
  • R 1 and R 2 may combine with N and A to form a ring, in which case R 1 and R 2 have one hydrogen atom subtracted from the structure of the substituent when not involved in ring formation.
  • the N-terminal amino acid constituting the above amino acid or the above peptide compound is (S)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid, 3-(tert-butoxycarbonylamino)propanoic acid, 3 -(benzyloxycarbonylamino)propanoic acid, (S)-2-(benzyloxycarbonyl(methyl)amino)-2-cyclopentyl-acetic acid, (S)-2-(benzyloxycarbonyl(methyl)amino)-3- Phenylpropanoic acid, 3-(9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid, (R)-3-(9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenyl-propanoic
  • the polypeptide has 90% or more sequence identity in either or both of the N-terminus and C-terminus with a sequence in which one amino acid residue in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 has been modified.
  • the above polypeptide contains one or more selected from the group consisting of a streptavidin-binding peptide tag sequence and a His tag sequence at either or both of the N-terminus and C-terminus, [58] to [62] The method described in any of the above. [64] The method according to any one of [58] to [63], wherein the polypeptide has 300 or more and 400 or less amino acid residues. [65] The method according to any one of [1] to [64], wherein the purity of the precipitate obtained in the step (B) is 95 mol% or more. [66] The method according to any one of [1] to [65], wherein the precipitate obtained in the step (B) has an apparent purity of 95% or more.
  • [74] A method for producing a peptide compound, a salt thereof, or a solvate thereof, comprising the step according to any one of [1] to [73].
  • [75] A cyclic peptide compound comprising the method according to any one of [1] to [74], and comprising a step of binding the amino acid or the peptide compound, or a solvate thereof, to the amino acid or the peptide compound. manufacturing method.
  • the method according to any one of [73] to [75] comprising the step of cyclizing the peptide compound or the peptide compound obtained by bonding.
  • a lithium salt of an amino acid, a lithium salt of a peptide compound, or a solvate thereof contains a lithium salt of an amino acid represented by the above general formula (1) with a purity of 99 mol% or more or an apparent purity of 99% or more
  • the above lithium salt of a peptide compound is a lithium salt of an amino acid or a peptide containing a lithium salt of a peptide compound having a residue of an amino acid represented by the above general formula (1) with a purity of 99 mol% or more or an apparent purity of 99%.
  • Lithium salts of compounds or solvates thereof [78] The lithium salt of an amino acid or the lithium salt of a peptide compound or a solvate thereof according to [77], which is a crystal.
  • one or more means a number of one or more.
  • substituents of a group the term means one up to the maximum number of substituents allowed by the group.
  • one or more includes, for example, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, and/or a larger number.
  • ⁇ indicating a range includes the values at both ends thereof; for example, “A to B” means a range that is greater than or equal to A and less than or equal to B.
  • the term "about" when used in conjunction with a numerical value means a value range of +10% and 10% of that numerical value.
  • the meaning of the term “and/or” includes any combination of “and” and “or” as appropriate.
  • “A, B, and/or C” includes the following seven variations; (i) A, (ii) B, (iii) C, (iv) A and B, (v) A and C, (vi) B and C, (vii) A, B, and C.
  • One embodiment of the present invention is a method for producing an amino acid salt, a peptide compound salt, or a solvate thereof, which includes the following steps (A) and (B).
  • Step (A) a step of bringing a lithium-containing substance into contact with the object to be purified, which is a mixture of the object (i) below, which is the object to be purified, and the object (ii) below, which is an impurity;
  • Step (B) Step of precipitating the lithium salt of the purification target product
  • Another embodiment of the present invention is a method for removing impurities from a substance to be purified, which includes the above steps (A) and (B).
  • Yet another embodiment of the present invention is a lithium salt of an amino acid, a lithium salt of a peptide compound, or a solvate thereof, wherein the lithium salt of an amino acid is a lithium salt of an amino acid represented by the general formula (1).
  • the lithium salt of the peptide compound contains a salt with a purity of 99 mol% or more or an apparent purity of 99% or more, and the lithium salt of the peptide compound having a residue of an amino acid represented by the general formula (1) is 99 mol % or more in purity. % or more or with an apparent purity of 99%, a lithium salt of an amino acid, a lithium salt of a peptide compound, or a solvate thereof.
  • the object of purification is used as a raw material for peptide compound, protein synthesis, and the like.
  • Obtaining highly pure peptide compounds and proteins is important in order to suppress side effects caused by impurities when they are used as pharmaceuticals. That is, it is important to refine the raw materials constituting them to a high degree of purity.
  • the present inventors surprisingly discovered that it is possible to purify the target product to a high degree of purity by converting it into a lithium salt. This improves the usefulness of peptide compounds and protein synthesis.
  • the salt of an amino acid or the salt of a peptidic compound or a solvate thereof is the object of purification. It is obtained by treating the following steps (A) and (B).
  • the object to be purified in the present invention is a mixture of the object to be purified and the impurity.
  • the purification target refers to the amino acid having a protecting group at the N-terminus or the peptide compound having a protecting group at the N-terminus.
  • An example of the object of purification is the amino acid represented by the above general formula (1).
  • impurity refers to a compound other than the object to be purified, which is contained in the object to be purified.
  • the impurities include quasi-specific impurities (amino acids having a protecting group at the N-terminus or peptide compounds having a protecting group at the N-terminus, other than the object of purification). More specifically, ⁇ -alanine or a derivative thereof is exemplified.
  • a derivative is a compound that has been modified, such as introduction of a functional group, oxidation, reduction, or substitution of atoms, to an extent that does not significantly change the structure or properties of the base, when considering an organic compound as a base.
  • amino acid as used herein includes natural amino acids and unnatural amino acids (sometimes referred to as amino acid derivatives).
  • amino acid residue includes natural amino acid residues and unnatural amino acid (amino acid derivative) residues.
  • Natural amino acids include glycine (Gly), alanine (Ala), serine (Ser), threonine (Thr), valine (Val), leucine (Leu), isoleucine (Ile), phenylalanine (Phe), tyrosine (Tyr), Tryptophan (Trp), histidine (His), glutamic acid (Glu), aspartic acid (Asp), glutamine (Gln), asparagine (Asn), cysteine (Cys), methionine (Met), lysine (Lys), arginine (Arg) , and proline (Pro).
  • Unnatural amino acids are not particularly limited, but include ⁇ -amino acids, D-type amino acids, N-substituted amino acids (excluding Pro), ⁇ , ⁇ -disubstituted amino acids, amino acids whose side chains differ from natural amino acids, and hydroxycarbons. Examples include acids.
  • non-natural N-substituted amino acids refer to N-substituted amino acids other than Pro.
  • any steric configuration is acceptable for the amino acids herein.
  • side chains of amino acids include alkyl groups, alkenyl groups, alkynyl groups, aryl groups, heteroaryl groups, aralkyl groups, heteroaralkyl groups, cycloalkyl groups, and spiro bonds.
  • cycloalkyl groups Each may be provided with a substituent, and these substituents are not limited, for example, any substituent containing a halogen atom, an O atom, an S atom, a N atom, a B atom, a Si atom, or a P atom.
  • One or more may be independently selected from the following.
  • examples thereof include optionally substituted alkyl groups, alkoxy groups, alkenyl groups, alkynyl groups, aryl groups, heteroaryl groups, aralkyl groups, cycloalkyl groups, and oxo, aminocarbonyl, and halogen atoms.
  • the amino acid according to one embodiment may be a compound having a carboxy group and an amino group in the same molecule (even in this case, imino acids such as proline and hydroxyproline are also included in the amino acid).
  • Step (A) is a step of bringing a lithium-containing substance into contact with the object to be purified. Further, in step (A), a lithium salt of the purification target may be formed, and a lithium salt of the impurity may be formed. Step (B) is a step of precipitating the lithium salt of the purification target. Further, a part of step (A) and a part of step (B) may be performed temporally overlappingly. Note that, before step (A), the object to be purified may be purified by a method other than the present invention. For example, purification can also be achieved by precipitating the purification target in a free form without forming a lithium salt of the purification target. At least one of step (A) and step (B) can be performed in the presence of a solvent, and in this specification, the formation of a solid from the solvent is referred to as "precipitation.”
  • the protecting group for the purification target may be a carbamate group.
  • the carbamate group refers to a fluorenylmethoxycarbonyl group, a tert-butoxycarbonyl group, a benzyloxycarbonyl group, an allyloxycarbonyl group, a 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl group, or a 2-(trimethylsilyl)ethoxycarbonyl group; It may be a nylmethoxycarbonyl group, a tert-butoxycarbonyl group or a benzyloxycarbonyl group, it may be a fluorenylmethoxycarbonyl group or a benzyloxycarbonyl group, it may be a fluorenylmethoxycarbonyl group, a benzyloxycarbonyl group It may be a base.
  • the protecting group for impurities may be a carbamate group.
  • the carbamate group refers to a fluorenylmethoxycarbonyl group, a tert-butoxycarbonyl group, a benzyloxycarbonyl group, an allyloxycarbonyl group, a 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl group, or a 2-(trimethylsilyl)ethoxycarbonyl group; It may be a nylmethoxycarbonyl group, a tert-butoxycarbonyl group or a benzyloxycarbonyl group, it may be a fluorenylmethoxycarbonyl group or a benzyloxycarbonyl group, it may be a fluorenylmethoxycarbonyl group, a benzyloxycarbonyl group It may be a base.
  • These protecting groups may be those that protect the N-terminus of impurities.
  • the protecting group for the purification target and the protecting group for the impurity may be different or the same. It is preferable that the protecting group of the purification target product and the protecting group of the impurity are the same.
  • Step (A) may be performed in the presence of the first organic solvent.
  • the first organic solvent is a solvent that can dissolve the purification target. It is preferable that the solubility of the purification target substance in the first organic solvent is 20 g/L or more. It is preferable that the solubility of the lithium salt of the purification target in the first organic solvent is 20 g/L or less. It is preferable that the solubility of the impurity in the first organic solvent is 20 g/L or more.
  • the first organic solvent examples include nitriles such as acetonitrile, alcohols such as methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, 2-butanol, 2-methyl-2-propanol, ethylene glycol, and tetrahydrofuran.
  • nitriles such as acetonitrile
  • alcohols such as methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, 2-butanol, 2-methyl-2-propanol, ethylene glycol, and tetrahydrofuran.
  • 1,4-dioxane 2-methyltetrahydrofuran, methyl tert-butyl ether, diisopropyl ether, diethyl ether, ethers such as 1,2-dimethoxyethane, ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, dimethyl formamide, dimethyl Acetamide, amides such as N-methyl-2-pyrrolidone, ureas such as 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, sulfones such as sulfolane, heptane, methylcyclohexane, hexane, Alkanes such as cyclohexane and pentane, aromatic compounds such as benzene, toluene, 1,2-dimethylbenzene, 1,3-dimethylbenzene, and 1,4-dimethylbenzane
  • Step (A) may be performed in the presence of water.
  • Step (B) may be performed in the presence of the second organic solvent.
  • the second organic solvent is a solvent in which the lithium salt of the purification target has a low solubility, that is, a solvent that functions as a poor solvent for the lithium salt of the purification target.
  • the solubility of the lithium salt of the object to be purified in the second organic solvent is preferably 10 g/L or less.
  • Examples of the second organic solvent include nitriles such as acetonitrile, alcohols such as methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, 2-butanol, 2-methyl-2-propanol, ethylene glycol, and tetrahydrofuran.
  • nitriles such as acetonitrile
  • alcohols such as methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, 2-butanol, 2-methyl-2-propanol, ethylene glycol, and tetrahydrofuran.
  • 1,4-dioxane 2-methyltetrahydrofuran, methyl tert-butyl ether, diisopropyl ether, diethyl ether, ethers such as 1,2-dimethoxyethane, ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, dimethyl formamide, dimethyl Acetamide, amides such as N-methyl-2-pyrrolidone, ureas such as 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, sulfones such as sulfolane, heptane, methylcyclohexane, hexane, Alkanes such as cyclohexane and pentane, aromatic compounds such as benzene, toluene, 1,2-dimethylbenzene, 1,3-dimethylbenzene, and 1,4-dimethylbenzane
  • Step (B) may be carried out in the presence of water, and is preferably carried out in the presence of water from the viewpoint of dissolving the impurity lithium salt.
  • the solubility of the impurity lithium salt in water is preferably 10 g/L or more.
  • the second organic solvent may be used together with the first organic solvent in step (A).
  • step (B) the lithium salt of the purification target is precipitated.
  • the second organic solvent may be added to the first organic solvent used in step (A).
  • the ratio of the first organic solvent or the ratio of the second organic solvent is the volume calculated by dividing the volume of the first organic solvent or the second organic solvent by the mass of the purification target. / mass ratio (ml/g, hereinafter also referred to as v/w).
  • the first organic solvent and the second organic solvent may be the same solvent. Also good. In this case, there is no need to add the second organic solvent in step (B). In this case, when the lithium-containing substance is brought into contact with the object to be purified in step (A), step (B) is immediately started, and the lithium salt of the object to be purified is precipitated.
  • the lithium salt to be purified is preferably precipitated as a solid.
  • the solid here includes crystal or amorphous. Moreover, it is more preferable to precipitate (crystallize) as crystals.
  • step (B) can also be called a step of crystallizing the lithium salt of the purification target.
  • the volume of the first organic solvent per 1 g of the object to be purified may be 1 ml or more, 2 ml or more, or 3 ml or more, and 100 ml or less, 80 ml or less, 60 ml or more throughout step (A) and step (B). It may be 40 ml or less.
  • the capacity of the first organic solvent per 1 g of the object to be purified is 1 ml or more and 100 ml or less, 1 ml or more and 80 ml or less, 2 ml or more and 60 ml or less, or 3 ml or more and 40 ml or less throughout step (A) and step (B). It's fine.
  • the capacity of the first organic solvent (initial concentration of the first organic solvent) with respect to 1 g of the object to be purified at the end of step (A) increases the proportion of the second organic solvent in step (B).
  • the amount may be 1 ml or more, 2 ml or more, or 3 ml or more, and may be 50 ml or less, 40 ml or less, 30 ml or less, or 20 ml or less.
  • the initial concentration of the first organic solvent may be from 1 ml to 50 ml, from 1 ml to 40 ml, from 2 ml to 30 ml, or from 3 ml to 20 ml.
  • the capacity of the first organic solvent (initial concentration of the first organic solvent) with respect to 1 g of the object to be purified at the end of step (A) does not increase the proportion of the second organic solvent in step (B).
  • the volume may be 1 ml or more, 10 ml or more, 20 ml or more, 30 ml or more, or 35 ml or more, and may be 100 ml or less, 75 ml or less, 50 ml or less, or 37 ml or less.
  • the initial concentration of the first organic solvent may be from 1 ml to 100 ml, from 10 ml to 75 ml, from 20 ml to 50 ml, from 30 ml to 37 ml, or from 35 ml to 37 ml.
  • the volume of the second organic solvent per 1 g of the object to be purified may be 0 ml or more, 40 ml or less, 60 ml or less, 80 ml or less, or 100 ml or less throughout steps (A) and (B).
  • the volume of the second organic solvent per 1 g of the object to be purified may be 0 ml or more and 100 ml or less, 0 ml or more and 80 ml or less, 1 ml or more and 60 ml or less, or 1 ml or more and 40 ml or less throughout steps (A) and (B).
  • the volume of the second organic solvent per 1 g of the object to be purified at the end of step (B) may be 0 ml or more, 40 ml or less, 60 ml or less, 80 ml or less, or 100 ml or less.
  • the volume of the second organic solvent per 1 g of the object to be purified at the end of step (B) may be 0 ml or more and 100 ml or less, 0 ml or more and 80 ml or less, 0 ml or more and 60 ml or less, or 0 ml or more and 40 ml or less.
  • the volume of the water per 1 g of the purification target may be 0.1 ml or more, 0.3 ml or more, or 0.5 ml or more, and 50 ml or less, 30 ml or less, or 10 ml throughout steps (A) and (B). It may be less than or equal to 5 ml.
  • the volume of water in the solvent is 0.1 ml to 50 ml, 0.1 ml to 30 ml, 0.3 ml to 10 ml, or 0.5 ml to 5 ml throughout steps (A) and (B). good.
  • the volume of the water (initial concentration of water) per 1 g of the object to be purified may be 0.1 ml or more, 0.3 ml or more, or 0.5 ml or more, and 50 ml or less, 30 ml. Below, it may be 10 ml or less or 4 ml or less.
  • the initial concentration of water may be 0.1 ml or more and 50 ml or less, 0.1 ml or more and 30 ml or less, 0.3 ml or more and 10 ml or less, or 0.5 ml or more and 4 ml or less.
  • the volume of the water (initial concentration of water) per 1 g of the object to be purified may be 0.1 ml or more, 0.3 ml or more, or 0.5 ml or more, and 50 ml or less, 30 ml. Below, it may be 10 ml or less or 4 ml or less.
  • the initial concentration of water may be 0.1 ml or more and 50 ml or less, 0.1 ml or more and 30 ml or less, 0.3 ml or more and 10 ml or less, or 0.5 ml or more and 4 ml or less.
  • Step (A) and step (B) may be performed in the presence of a solvent other than the first organic solvent and the second organic solvent.
  • solvents include phosphate buffer, CHES (N-cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid), Tris (trishydroxymethylaminomethane), bicine (N,N-di(2-hydroxyethyl)glycine), etc.
  • An example is a buffer solution of
  • the temperature at which step (A) is performed may be -20°C or higher, 0°C or higher, 10°C or higher, or 20°C or higher.
  • the temperature at which step (A) is carried out may be 100°C or lower, 80°C or lower, 60°C or lower, 40°C or lower, or 30°C or lower.
  • the temperature at which step (A) is carried out may be -20 to 100°C, may be 0 to 80°C, may be 10 to 60°C, may be 10 to 40°C, may be 20 to 30°C. It may be °C.
  • the temperature at which step (B) is carried out may be -20°C or higher, 0°C or higher, 10°C or higher, 20°C or higher, 30°C or higher. The temperature may be 35°C or higher.
  • the temperature at which step (A) is carried out may be 100°C or lower, 80°C or lower, 60°C or lower, 40°C or lower, or 30°C or lower. .
  • the temperature at which step (A) is carried out may be -20 to 100°C, may be 0 to 80°C, may be 10 to 60°C, may be 10 to 40°C, may be 20 to 30°C. It may be °C.
  • Conditions such as temperature and concentration of substances contained in various solutions in step (A) and step (B) may be the same or different. If these conditions are different between the two, conditions selected from the various conditions of step (A) described above may be combined. Further, the amount of the lithium-containing substance at the end of the step (A) is 0.5 equivalent or more, 0.8 equivalent or more, or 1.0 equivalent or more based on the amount of the substance to be purified. Often, it may be 2.0 equivalents or less, 1.5 equivalents or less, or 1.1 equivalents or less. The content of the lithium-containing substance based on the mass of the reactant is 0.5 equivalent or more and 2.0 equivalent or less, 0.8 equivalent or more and 1.5 equivalent or less, or 1.0 equivalent or more and 1.1 equivalent or less. It's good.
  • the lithium-containing substance in this specification refers to a lithium-containing substance to be brought into contact with the purification target in step (A).
  • the lithium-containing substance used in step (A) include lithium hydroxide, lithium tert-butoxide, lithium hydroxide, lithium carbonate, lithium hydride, trilithium phosphate, lithium methoxide, lithium ethoxide, and lithium isopropoxy.
  • lithium tert-butoxide methyllithium, n-butyllithium, sec-butyllithium, tert-butyllithium, lithium amide, lithium diisopropylamide, lithium hexamethyldisilazide, and lithium tetramethylpiperidide. At least one type is mentioned.
  • the object to be purified and the lithium-containing substance can be brought into contact in the presence of the first organic solvent.
  • the object to be purified, the lithium-containing substance, and the first organic solvent may be mixed in the same container from the beginning, or the object to be purified and the first organic solvent are mixed, and the resulting mixture is mixed with lithium.
  • the lithium-containing substance may be added, or the lithium-containing substance and the first organic solvent may be mixed, and the object to be purified may be added to the resulting mixed liquid.
  • the content of the purification target in the purification target which is the standard for determining the amounts of the first organic solvent, the second organic solvent, and the lithium-containing substance, may be an actual value, an estimated value, or a calculated value. It may be an actual value or a calculated value, and is most preferably an actual value.
  • the amino acids having a protecting group at the N-terminus or the amino acids constituting the peptide compound having a protecting group at the N-terminus that are contained in the purification target include the amino acids represented by the above general formula (1) (also referred to as amino acids (1)). ), hydrophobic amino acids, aliphatic amino acids, aromatic amino acids, etc.
  • n represents a number of 1 or more and 3 or less, and may be an integer of 1 or more and 3 or less. n may be 1, 2 or 3.
  • n 2 or 3
  • R 2 and the two R 1s is not a hydrogen atom, and even if R 2 and two or more of the two R 1s are not hydrogen atoms. Often, R 2 and all three of the two R 1s may not be hydrogen atoms.
  • R 1 and R 2 are a hydrogen atom, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, a heterocyclyl group, a heteroaryl group, or a substituent in which two or more of these substituents are bonded. (for example, a benzyl group), and these groups may have a substituent, and these groups may be saturated or unsaturated.
  • A represents a carbon atom
  • B represents a hydrogen atom or a bonding point with an amino acid or a peptide compound.
  • Z represents a fluorenylmethoxycarbonyl group, a tert-butoxycarbonyl group, a benzyloxycarbonyl group, an allyloxycarbonyl group, a 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl group, or a 2-(trimethylsilyl)ethoxycarbonyl group.
  • R 1 and R 2 may be combined with N and A to form a ring.
  • R 1 and R 2 are substituents having a structure in which one hydrogen atom has been extracted from the structure of the substituent when it is not involved in ring formation.
  • alkyl is a monovalent group derived from an aliphatic hydrocarbon by removing one arbitrary hydrogen atom, and has a heteroatom (atom other than carbon and hydrogen atoms) in the skeleton. ) or have a subset of hydrocarbyl or hydrocarbon group structures that do not contain unsaturated carbon-carbon bonds and contain hydrogen and carbon atoms.
  • Alkyl includes not only linear ones but also branched ones. Specifically, the alkyl is an alkyl having 1 to 20 carbon atoms (C 1 to C 20 , hereinafter "C p to C q " means the number of carbon atoms is p to q), Preferably C 1 -C 10 alkyl, more preferably C 1 -C 6 alkyl.
  • alkyl examples include methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, s-butyl, t-butyl, isobutyl (2-methylpropyl), n-pentyl, s-pentyl (1- methylbutyl), t-pentyl (1,1-dimethylpropyl), neopentyl (2,2-dimethylpropyl), isopentyl (3-methylbutyl), 3-pentyl (1-ethylpropyl), 1,2-dimethylpropyl, 2 -Methylbutyl, n-hexyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,2,2-trimethylpropyl, 1,1,2,2-tetramethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl , 1,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 3,
  • alkylene refers to a divalent group derived from the above “alkyl” by further removing one hydrogen atom, and C 4 -C 8 alkylene is preferred.
  • alkylene includes -CH 2 -, -(CH 2 ) 2 -, -(CH 2 ) 3 -, -CH(CH 3 )CH 2 -, -C(CH 3 ) 2 -, -(CH 2 ) 4 -, -CH(CH 3 )CH 2 CH 2 -, -C(CH 3 ) 2 CH 2 -, -CH 2 CH(CH 3 )CH 2 -, -CH 2 C(CH 3 ) 2 - , -CH 2 CH 2 CH (CH 3 )-, -(CH 2 ) 5 -, -(CH 2 ) 6 -, -(CH 2 ) 7 -, -(CH 2 ) 8 -, and the like.
  • alkenyl is a monovalent group having at least one double bond (two adjacent SP 2 carbon atoms). Depending on the configuration of the double bond and substituents (if present), the geometry of the double bond can be Entadel (E) or Caribbean (Z), cis or trans configuration.
  • Alkenyl includes not only straight-chained alkenyl but also branched alkenyl.
  • the alkenyl includes C 2 -C 10 alkenyl, more preferably C 2 -C 6 alkenyl, and specifically, for example, vinyl, allyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl. (including cis and trans), 3-butenyl, pentenyl, 3-methyl-2-butenyl, hexenyl, and the like.
  • alkynyl is a monovalent group having at least one triple bond (two adjacent SP carbon atoms).
  • Alkynyl includes not only straight chain but also branched chain.
  • Alkynyl preferably includes C 2 -C 10 alkynyl, more preferably C 2 -C 6 alkynyl, and specifically includes, for example, ethynyl, 1-propynyl, propargyl, 3-butynyl, pentynyl, hexynyl, 3-phenyl.
  • cycloalkyl means a saturated or partially saturated cyclic monovalent aliphatic hydrocarbon group, and includes a monocyclic ring, a bicyclo ring, and a spiro ring.
  • cycloalkyl include C 3 -C 8 cycloalkyl, specifically, for example, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, bicyclo[2.2.1]heptyl, spiro[ 3.3] heptyl and the like.
  • aryl means a monovalent aromatic hydrocarbon ring, and preferably includes C 6 to C 10 aryl.
  • aryl include phenyl, naphthyl (eg, 1-naphthyl, 2-naphthyl), and the like.
  • heterocyclyl means a non-aromatic cyclic monovalent group containing 1 to 5 heteroatoms in addition to carbon atoms. Heterocyclyl may have double and/or triple bonds in the ring, carbon atoms in the ring may be oxidized to form carbonyl, and may be a single ring or a fused ring.
  • the number of atoms constituting the ring is preferably 4 to 10 (4 to 10 membered heterocyclyl), more preferably 4 to 7 (4 to 7 membered heterocyclyl).
  • heterocyclyl examples include azetidinyl, oxiranyl, oxetanyl, azetidinyl, dihydrofuryl, tetrahydrofuryl, dihydropyranyl, tetrahydropyranyl, tetrahydropyridyl, tetrahydropyrimidyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, Pyrazolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, isoxazolidinyl, thiazolidinyl, isothiazolidinyl, 1,2-thiazinane, thiadiazolidinyl, azetidinyl, oxazolidone, benzodioxanyl, benzoxazolyl, dioxolanyl, dioxanyl, Tetrahydro
  • heteroaryl means an aromatic cyclic monovalent group containing 1 to 5 heteroatoms in addition to carbon atoms.
  • the ring may be a monocyclic ring, a fused ring with another ring, or a partially saturated ring.
  • the number of atoms constituting the ring may be 5 to 12 (5- to 12-membered heteroaryl), 6 to 10 (5- to 12-membered heteroaryl), and 6 to 7 (6- to 7-membered heteroaryl). ).
  • heteroaryl examples include furyl, thienyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, triazolyl, tetrazolyl, pyridyl, pyrimidyl, pyridazinyl, pyrazinyl, triazinyl, benzofuranyl, benzothienyl.
  • benzothiadiazolyl benzothiazolyl
  • benzoxazolyl benzoxadiazolyl
  • benzimidazolyl indolyl, isoindolyl, indazolyl, quinolyl, isoquinolyl, cinnolinyl, quinazolinyl, quinoxalinyl, benzodioxolyl, indolizinyl, imidazopyridyl, and the like.
  • “may be substituted” means “may have a substituent", and means that a certain group may be substituted with any substituent. do.
  • the substituent includes an alkyl group, an alkoxy group, a fluoroalkyl group, a fluoroalkoxy group, an oxo group, an aminocarbonyl group, an alkylsulfonyl group, an alkylsulfonylamino group, a cycloalkyl group, an aryl group, and a heteroaryl group.
  • Examples include a group, a heterocyclyl group, an arylalkyl group, a heteroarylalkyl group, a halogen group, a nitro group, an amino group, a monoalkylamino group, a dialkylamino group, a cyano group, a carboxyl group, an alkoxycarbonyl group, and a formyl group.
  • the N-terminal amino acid constituting the amino acid or peptide compound can be obtained by a reductive amination reaction catalyzed by a polypeptide containing an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. .
  • Identity with the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is 90% or more, 91% or more, 92% or more, 93% or more, 94% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more , 99% or more, or 100%.
  • BLAST Basic Local Alignment Search Tool
  • NCBI National Center for Biotechnology Information
  • the polypeptide according to this embodiment may be a polypeptide in which one or more amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 have been modified, such as 1 to 20, 1 to 15, or 1 to 10. 1 to 7 or 1 to 5 amino acid residues may be modified.
  • the number of amino acid residues that have been modified may be up to 3, up to 2, or up to 1.
  • the modification may be one or more selected from the group consisting of substitution, deletion, and insertion, and may be a substitution. Modifications may be conservative modifications.
  • a conservative modification means a modification of an amino acid residue that does not reduce the desired catalytic activity compared to the polypeptide before modification.
  • the modification may be a substitution with a natural amino acid that is different from the amino acid residue before modification.
  • the natural amino acids used for the substitution include glycine, alanine, serine, threonine, valine, leucine, isoleucine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, histidine, glutamine, asparagine, glutamic acid, aspartic acid, cysteine, methionine, lysine, arginine, and It may be one or more selected from the group consisting of proline.
  • the polypeptide according to this embodiment includes a histidine residue at position 44, a phenylalanine residue at position 117, a methionine residue at position 141, a threonine residue at position 156, and a threonine residue at position 182 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • Amino acid residues located at positions corresponding to one or more amino acid residues selected from the group consisting of histidine residue, glutamine residue at position 186, tryptophan residue at position 253, and lysine residue at position 260 are modified.
  • the polypeptide may include a sequence in which an amino acid residue located at a site corresponding to one or more amino acid residues selected from the group consisting of lysine residue at position 260 has been modified, and further, a methionine residue at position 141.
  • a polypeptide containing a sequence in which an amino acid residue located at a position corresponding to one or more amino acid residues selected from the group consisting of a tryptophan residue at position 253, and a lysine residue at position 260 is modified. It's fine.
  • the polypeptide according to this embodiment has a sequence in which the amino acid residue located at the position corresponding to the histidine residue at position 44 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is substituted with an amino acid residue other than histidine residue. It may be a polypeptide containing.
  • the polypeptide may be a polypeptide containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:2.
  • the amino acid residues represented by X in SEQ ID NO: 2 are alanine residue, aspartic acid residue, glutamic acid residue, phenylalanine residue, glycine residue, isoleucine residue, lysine residue, leucine residue, and methionine residue.
  • an asparagine residue a proline residue, a glutamine residue, an arginine residue, a serine residue, a threonine residue, a valine residue, a tryptophan residue, or a tyrosine residue.
  • the amino acid residue located at the position corresponding to the histidine residue at position 44 may include a sequence substituted with a methionine residue. That is, the polypeptide according to this embodiment has an amino acid sequence (H44M) in which the amino acid residue located at the site corresponding to the histidine residue at position 44 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is replaced with a methionine residue. It may be included.
  • the polypeptide according to this embodiment has a sequence in which the amino acid residue located at the site corresponding to the phenylalanine residue at position 117 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is substituted with an amino acid residue other than the phenylalanine residue. It may be a polypeptide containing.
  • the polypeptide may be a polypeptide containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:3.
  • the amino acid residues represented by X in SEQ ID NO: 3 are alanine residue, aspartic acid residue, glutamic acid residue, glycine residue, histidine residue, isoleucine residue, lysine residue, leucine residue, and methionine residue.
  • an asparagine residue a proline residue, a glutamine residue, an arginine residue, a serine residue, a threonine residue, a valine residue, a tryptophan residue, or a tyrosine residue.
  • the amino acid residue located at the site corresponding to the phenylalanine residue at position 117 may be substituted with a leucine residue. That is, the polypeptide according to this embodiment has an amino acid sequence (F117L) in which the amino acid residue located at the site corresponding to the phenylalanine residue at position 117 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is replaced with a leucine residue. It may be included.
  • the polypeptide according to this embodiment has a sequence in which the amino acid residue located at the site corresponding to the methionine residue at position 141 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is substituted with an amino acid residue other than the methionine residue. It may be a polypeptide containing.
  • the polypeptide may be a polypeptide containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:4.
  • the amino acid residues represented by X in SEQ ID NO: 4 are alanine residue, aspartic acid residue, glutamic acid residue, phenylalanine residue, glycine residue, histidine residue, isoleucine residue, lysine residue, and leucine residue.
  • an asparagine residue a proline residue, a glutamine residue, an arginine residue, a serine residue, a threonine residue, a valine residue, a tryptophan residue, or a tyrosine residue.
  • the amino acid residues located at the site corresponding to the methionine residue at position 141 are tyrosine residues, tryptophan residues, valine residues, threonine residues, A sequence substituted with one or more amino acid residues selected from the group consisting of serine residue, arginine residue, leucine residue, lysine residue, isoleucine residue, histidine residue, phenylalanine residue, and alanine residue. It may be included.
  • the amino acid residue located at the site corresponding to the methionine residue at position 141 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is a tyrosine residue, a tryptophan residue, a valine residue, Amino acid sequences substituted with threonine, serine, arginine, leucine, lysine, isoleucine, histidine, phenylalanine, or alanine residues (M141Y, M141W, M141V, M141T, M141S, M141R, M141L, M141K, M141I, M141H, M141F or M141A).
  • amino acid residue located at the site corresponding to the methionine residue at position 141 is a group consisting of tyrosine residue, tryptophan residue, valine residue, lysine residue, isoleucine residue, phenylalanine residue, and alanine residue.
  • the sequence may include a sequence substituted with one or more amino acid residues selected from the following.
  • the amino acid residue located at the site corresponding to the methionine residue at position 141 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is a tyrosine residue, a tryptophan residue, a valine residue, It may contain an amino acid sequence (M141Y, M141W, M141V, M141K, M141I, M141H, M141F, or M141A) substituted with a lysine residue, isoleucine residue, histidine residue, phenylalanine residue, or alanine residue.
  • the polypeptide according to this embodiment has a sequence in which the amino acid residue located at the site corresponding to the threonine residue at position 156 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is substituted with an amino acid residue other than the threonine residue. It may be a polypeptide containing.
  • the polypeptide may be a polypeptide containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:5.
  • the amino acid residues represented by X in SEQ ID NO: 5 are alanine residue, aspartic acid residue, glutamic acid residue, phenylalanine residue, glycine residue, histidine residue, isoleucine residue, lysine residue, and leucine residue.
  • an asparagine residue a proline residue, a glutamine residue, an arginine residue, a serine residue, a threonine residue, a valine residue, a tryptophan residue, or a tyrosine residue.
  • the amino acid residue located at the site corresponding to the threonine residue at position 156 may include a sequence substituted with a serine residue. That is, the polypeptide according to this embodiment has an amino acid sequence (T156S) in which the amino acid residue located at the site corresponding to the threonine residue at position 156 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is replaced with a serine residue. It may be included.
  • the polypeptide according to this embodiment has a sequence in which the amino acid residue located at the position corresponding to the histidine residue at position 182 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is substituted with an amino acid residue other than histidine residue. It may be a polypeptide containing.
  • the polypeptide may be a polypeptide containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6.
  • the amino acid residues represented by X in SEQ ID NO: 6 are alanine residue, aspartic acid residue, glutamic acid residue, phenylalanine residue, glycine residue, isoleucine residue, lysine residue, leucine residue, and methionine residue.
  • an asparagine residue a proline residue, a glutamine residue, an arginine residue, a serine residue, a threonine residue, a valine residue, a tryptophan residue, or a tyrosine residue.
  • the amino acid residue located at the position corresponding to the histidine residue at position 182 is a tyrosine residue, a glutamine residue, a methionine residue, a leucine residue, It may include a sequence substituted with one or more amino acid residues selected from the group consisting of glycine residues, phenylalanine residues, and alanine residues. That is, in the polypeptide according to the present embodiment, the amino acid residue located at the site corresponding to the histidine residue at position 182 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is a tyrosine residue, a glutamine residue, or a methionine residue.
  • a leucine residue, a glycine residue, a phenylalanine residue, or an alanine residue H182Y, H182Q, H182M, H182L, H182G, H182F, or H182A.
  • a sequence in which the amino acid residue located at the position corresponding to the histidine residue at position 182 is replaced with one or more amino acid residues selected from the group consisting of methionine residue, leucine residue, and phenylalanine residue. may contain.
  • the amino acid residue located at the position corresponding to the histidine residue at position 182 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is a methionine residue, a leucine residue, or a phenylalanine residue.
  • the amino acid sequence may include a substituted amino acid sequence (H182M, H182L, or H182F).
  • the polypeptide according to this embodiment has a sequence in which the amino acid residue located at the site corresponding to the glutamine residue at position 186 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is substituted with an amino acid residue other than the glutamine residue. It may be a polypeptide containing.
  • the polypeptide may be a polypeptide containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:7.
  • the amino acid residues represented by X in SEQ ID NO: 7 are alanine residue, aspartic acid residue, glutamic acid residue, phenylalanine residue, glycine residue, histidine residue, isoleucine residue, lysine residue, and leucine residue. , methionine residue, asparagine residue, proline residue, arginine residue, serine residue, threonine residue, valine residue, tryptophan residue, or tyrosine residue.
  • the amino acid residue located at the position corresponding to the glutamine residue at position 186 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is combined with a methionine residue and a glutamic acid residue.
  • the amino acid residue may contain a sequence substituted with one or more amino acid residues selected from the group consisting of: That is, the polypeptide according to this embodiment is an amino acid in which the amino acid residue located at the site corresponding to the glutamine residue at position 186 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is substituted with a methionine residue or a glutamic acid residue. (Q186M or Q186E).
  • the polypeptide according to this embodiment has a sequence in which the amino acid residue located at the site corresponding to the tryptophan residue at position 253 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is substituted with an amino acid residue other than the tryptophan residue. It may be a polypeptide containing.
  • the polypeptide may be a polypeptide containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:8.
  • the amino acid residues represented by X in SEQ ID NO: 8 are alanine residue, aspartic acid residue, glutamic acid residue, phenylalanine residue, glycine residue, histidine residue, isoleucine residue, lysine residue, and leucine residue. , methionine residue, asparagine residue, proline residue, glutamine residue, arginine residue, serine residue, threonine residue, valine residue, or tyrosine residue.
  • the amino acid residue located at the site corresponding to the tryptophan residue at position 253 is a tyrosine residue, a valine residue, a threonine residue, a serine residue,
  • the amino acid residue located at the site corresponding to the tryptophan residue at position 253 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is a tyrosine residue, a valine residue, or a threonine residue.
  • amino acid residue located at the site corresponding to the tryptophan residue at position 253 is substituted with one or more amino acid residues selected from the group consisting of leucine residue, isoleucine residue, and histidine residue. It may be included. That is, in the polypeptide according to the present embodiment, the amino acid residue located at the site corresponding to the tryptophan residue at position 253 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is a leucine residue, an isoleucine residue, or a histidine residue. may contain an amino acid sequence substituted with (W253L, W253I, or W253H).
  • the polypeptide according to this embodiment has a sequence in which the amino acid residue located at the site corresponding to the lysine residue at position 260 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is substituted with an amino acid residue other than the lysine residue. It may be a polypeptide containing.
  • the polypeptide may be a polypeptide containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:9.
  • the amino acid residues represented by X in SEQ ID NO: 9 are alanine residue, aspartic acid residue, glutamic acid residue, phenylalanine residue, glycine residue, histidine residue, isoleucine residue, leucine residue, and methionine residue.
  • an asparagine residue a proline residue, a glutamine residue, an arginine residue, a serine residue, a threonine residue, a valine residue, a tryptophan residue, or a tyrosine residue.
  • the amino acid residue located at the site corresponding to the lysine residue at position 260 is a tyrosine residue, a tryptophan residue, a threonine residue, a serine residue, and an arginine residue.
  • the amino acid residue located at the site corresponding to the lysine residue at position 260 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is a tyrosine residue, a tryptophan residue, or a threonine residue.
  • an amino acid sequence substituted with a serine residue, arginine residue, glutamine residue, asparagine residue, methionine residue, leucine residue, histidine residue, glycine residue, phenylalanine residue, glutamic acid residue or alanine residue K260Y, K260W, K260T, K260S, K260R, K260Q, K260N, K260M, K260L, K260H, K260G, K260F, K260E, or K260A).
  • the amino acid residue located at the site corresponding to the lysine residue at position 260 is substituted with one or more amino acid residues selected from the group consisting of glutamine residue, methionine residue, glutamic acid residue, and asparagine residue.
  • the polypeptide according to this embodiment has an amino acid sequence a1 (mutation: M141V), which is represented by SEQ ID NO: 4, and the amino acid residue represented by X is a valine residue; Amino acid sequence a2 (mutation: M141Y) in which the amino acid residue represented by Amino acid sequence a4 (mutation: W253H) represented by number 8 and the amino acid residue represented by X is a histidine residue, or represented by SEQ ID NO: 9 and the amino acid residue represented by X is a glutamic acid residue It can contain a certain amino acid sequence a5 (mutation: K260E).
  • the polypeptide according to this embodiment can include a sequence having 90% or more sequence identity with the amino acid sequence a1, a2, a3, a4, or a5.
  • the sequence identity may be 91% or more, 92% or more, 93% or more, 94% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, or 99% or more, and 100% or more. It's good.
  • the polypeptide according to this embodiment may be a polypeptide comprising a sequence in which one or more amino acid residues in the amino acid sequence a1, a2, a3, a4, or a5 are modified, and 1 to 20, 1 to 15 1-10, 1-7 or 1-5 amino acid residues may be modified.
  • the number of amino acid residues that have been modified may be up to 3, up to 2, or up to 1.
  • the polypeptide according to this embodiment may be fused with other polypeptides or proteins. That is, the polypeptide according to this embodiment has a sequence in which one amino acid residue in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 has been modified at either or both of the N-terminus and C-terminus, and 90% or more of the sequence. It may have an amino acid sequence (another amino acid sequence) other than the sequence having identity.
  • the other amino acid sequence may be, for example, a tag sequence.
  • polypeptides or proteins having other amino acid sequences include His tags (6XHis, 10XHis, etc.), which are tags consisting of several (for example, 6, 10, etc.) His (histidine) residues, streptavidin, etc.
  • Streptavidin-binding peptide tag SBP tag containing an amino acid sequence capable of binding to the biotin-binding site of MBP (maltose binding protein), FLAG (Hopp, T.P.
  • influenza agglutinin HA
  • human c-myc fragment VSV-GP fragment
  • examples include p18HIV fragment, T7-tag, HSV-tag, E-tag, SV40T antigen fragment, Ick tag, ⁇ -tubulin fragment, B-tag, Protein C fragment, Stag, StrepTag, HaloTag, and the like.
  • the His tag may be, for example, the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11.
  • the SBP tag may be, for example, the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12.
  • the polypeptide according to this embodiment may include one or more selected from the group consisting of a streptavidin-binding peptide tag sequence and a His tag sequence at either or both of the N-terminus and C-terminus, and the C-terminus It may include a streptavidin-binding peptide tag sequence (SBP tag) and a His tag sequence.
  • SBP tag streptavidin-binding peptide tag sequence
  • the polypeptide according to this embodiment has an amino acid sequence a1 (mutation: M141V), which is represented by SEQ ID NO: 4, and the amino acid residue represented by X is a valine residue; Amino acid sequence a2 (mutation: M141Y) in which the amino acid residue represented by Amino acid sequence a4 (mutation: W253H) represented by number 8 and the amino acid residue represented by X is a histidine residue, or represented by SEQ ID NO: 9 and the amino acid residue represented by X is a glutamic acid residue It can have a certain amino acid sequence a5 (mutation: K260E) and a tag sequence.
  • the polypeptide according to this embodiment connects the amino acid sequence a1, a2, a3, a4, or a5 and the tag sequence in addition to the amino acid sequence a1, a2, a3, a4, or a5 and the tag sequence. It may have a linker sequence.
  • the linker sequence may have, for example, an amino acid sequence represented by GGSS or GGS.
  • the polypeptide has an amino acid sequence a1, a2, a3, a4, or a5, and a linker sequence that is bonded to the C-terminus of the amino acid sequence a1, a2, a3, a4, or a5, and is represented by the amino acid sequence: GGSS. and a His tag bound to the linker sequence and represented by SEQ ID NO: 11.
  • One or more amino acid residues in polypeptide X1 may be modified, with 1-20, 1-15, 1-10, 1-7 or 1-5 amino acid residues modified. It's fine. In polypeptide X1, the number of modified amino acid residues may be up to 3, up to 2, or up to 1.
  • the polypeptide according to one embodiment has an amino acid sequence a1, a2, a3, a4 or a5, and an SBP tag represented by SEQ ID NO: 12 bonded to the C-terminus of the amino acid sequence a1, a2, a3, a4 or a5,
  • the polypeptide X2 may be composed of a His tag represented by SEQ ID NO: 11 and a linker sequence connecting the His tag and SBP tag and represented by the amino acid sequence GGS.
  • One or more amino acid residues in polypeptide It's fine.
  • the number of modified amino acid residues may be up to 3, up to 2, or up to 1.
  • polypeptide according to this embodiment may be used as a mixture with other polypeptides, or may be used in an isolated/produced state.
  • the desired amino acid can be obtained through a step of isolating and producing the desired product.
  • the number of amino acid residues may be 300 or more, 310 or more, 320 or more, or 325 or more, and may be 330. Moreover, it may be 400 or less, 390 or less, 380 or less, or 375 or less. The number of amino acid residues in the polypeptide may be 300 or more and 400 or less.
  • the number of amino acid residues of the polypeptide according to this embodiment is 300 or more, 310 or more, 320 or more, or 325 or more. It may be 330. Moreover, it may be 360 or less, 350 or less, 340 or less, or 335 or less.
  • the number of amino acid residues of the polypeptide according to this embodiment is 340 or more, 350 or more, 360 or more, or It may be 370 or more, and may be 374. Moreover, it may be 400 or less, 390 or less, 380 or less, or 375 or less.
  • polypeptide according to this embodiment may be used as a monomer, or may be used in a form in which two or more monomers are associated with each other. Furthermore, the polypeptide according to this embodiment may be a homodimer.
  • the number of amino acid residues is twice that when it exists as a monomer.
  • Peptide compounds having a protecting group at the N-terminus are 30 residues or less, 25 residues or less, 20 residues or less, 15 residues or less, 14 residues or less, 13 residues or less, 12 residues or less, 11 residues or less , up to 10 residues, up to 9 residues, up to 8 residues, up to 7 residues, up to 6 residues, up to 5 residues, up to 4 residues, up to 3 residues, or up to 2 residues, and up to 2 residues Groups or more, 3 or more residues, 4 or more residues, 5 or more residues, 6 or more residues, 7 or more residues, 8 or more residues, 9 or more residues, 10 or more residues, 11 or more residues, 12 residues It may be a peptide compound consisting of at least 13 amino acid residues, 13 or more residues, 14 or more residues, or 15 or more amino acid residues.
  • the peptide compound having a protecting group at the N-terminus may be a peptide compound consisting of 2 to 10 amino acid residues, 2 to 8 residues, 2 to 6 residues, or 2 to 4 amino acid residues.
  • peptide compounds having a protecting group at the N-terminus can be made from amino acids of 5 to 30 residues, 7 to 25 residues, 8 to 15 residues, 9 to 14 residues, 10 to 13 residues, or 11 residues. It may be a peptide compound, etc. Also included are peptide compounds containing the residue of amino acid (1) at the N-terminus.
  • the purified product may be precipitated such that the content of quasi-specific impurities contained in the precipitate (refined product) obtained in step (B) is reduced.
  • the purified product may be precipitated such that the purity of the purified product is 95 mol% or more.
  • the purity is more preferably 96 mol% or more, even more preferably 97 mol% or more, even more preferably 98 mol% or more, particularly preferably 99 mol% or more, and 100 mol% or more. Most preferably it is mole %.
  • purity means, in a broad sense, the proportion of the target substance contained in the substance whose purity is to be measured, and in a narrow sense, it means the proportion of the target substance contained in the purified product. It means the ratio of the amount of lithium salt in the purification target based on the total amount of lithium salt and lithium salt as a specific impurity.
  • the purified product may be precipitated such that the impurity content in the purified product is 5 mol% or less.
  • the impurity content is preferably 4 mol% or less, more preferably 3% mol or less, even more preferably 2 mol% or less, particularly preferably 1 mol% or less, Most preferably, it is 0 mol%.
  • impurity content refers to the amount of the lithium salt as a specific impurity, based on the total amount of the lithium salt as the purification target and the lithium salt as the specific impurity, contained in the purified product. means.
  • Purity or impurity content can be measured, for example, by nuclear magnetic resonance, gas chromatography, or high performance liquid chromatography. When using high performance liquid chromatography, it can be calculated from the area ratio of UV absorption peaks. Equation 1a below shows a formula for determining purity, and Equation 2a below shows a formula for determining impurity content.
  • the amount of substance per unit UV absorption peak area is the value obtained by dividing the UV absorption peak area of the object of purification or specific impurity by the amount of substance.
  • the purified product may be precipitated such that the apparent purity of the purified product is 95% or more.
  • the apparent purity is more preferably 96% or more, even more preferably 97% or more, even more preferably 98% or more, particularly preferably 99% or more, and 100%. is most preferred.
  • "apparent purity” refers to purification based on the sum of the UV absorption peak areas at specific wavelengths of the purified product and specific impurities, which are measured after separating the purified product by high-performance liquid chromatography. It means the ratio of the UV absorption peak area of the target object at the specific wavelength.
  • the purified product may be precipitated such that the apparent impurity content of the purified product is 5% or less.
  • the apparent impurity content is preferably 4% or less, more preferably 3% or less, even more preferably 2% or less, particularly preferably 1% or less, and 0%. is most preferable.
  • "apparent impurity content” is based on the sum of the UV absorption peak areas at specific wavelengths of the purified product and specific impurities, which are measured after separating the purified product into the purified target product and specific impurities using high performance liquid chromatography. , means the ratio of the UV absorption peak area of a specific impurity at a specific wavelength.
  • the following formula 1b shows a formula for determining the apparent purity
  • the following formula 2b shows a formula for determining the apparent impurity content.
  • the specific wavelength is a wavelength within 10% of the maximum absorption wavelength exhibited by the protecting group of the object of purification.
  • any maximum absorption wavelength may be selected as the maximum absorption wavelength as long as it exhibits an absorption intensity of 30% or more based on the absorption intensity at the maximum absorption wavelength among them. .
  • the influence of noise can be reduced by selecting the long wavelength side among the plurality of maximum absorption wavelengths.
  • the sample concentration can be adjusted depending on the absorption intensity of the selected maximum absorption wavelength. At the time of measurement, the maximum absorption wavelength that is considered to be the most preferable from the viewpoint of ease of adjusting sample concentration and noise reduction can be selected.
  • UV light of a specific wavelength can be 254 nm for Fmoc group, 197 nm for Boc group, and 210 nm for Cbz group.
  • the content of ⁇ -alanine or its derivatives in the object to be purified can be reduced by obtaining the lithium salt.
  • the production method according to the present embodiment may include a step of reducing the content of ⁇ -alanine or its derivative.
  • the manufacturing method according to the present embodiment may further include a step of forming a salt other than a lithium salt.
  • a free amino acid or a free peptide compound can be obtained by desalting the lithium salt obtained by the production method according to one embodiment. Desalting can be performed by known methods. Furthermore, salts other than lithium salts can be produced from the obtained free amino acid or peptide compound.
  • Salts other than lithium salts include salts with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, and phosphoric acid; acetic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, tartaric acid, citric acid, lactic acid, stearic acid, Salts with organic acids such as benzoic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid; salts with alkali metals (sodium or potassium); salts with alkaline earth metals such as calcium and magnesium; ammonium salts etc. can be exemplified.
  • the obtained free amino acid or peptide compound is linked with an amino acid or peptide compound by a conventional method to produce a peptide compound having the desired number of amino acid residues, for example, a cyclic portion.
  • Peptide compounds cyclic peptide compounds
  • the number of amino acid residues of the cyclic peptide compound according to the present embodiment is 30 or less, 25 or less, 20 or less, 15 or less, 14 or less, 13 or less, 12 or less, 11 or less, 10 or less, 9 or less, 8 or less, 7 Below, it may be 6 or less, 5 or less, 4 or less, 3 or less, or 2 or less.
  • the cyclic peptide compound according to the present embodiment includes 2 or more, 3 or more, 4 or more, 5 or more, 6 or more, 7 or more, 8 or more, 9 or more, 10 or more, 11 or more, 12 or more, 13 or more, 14 or more , or a peptide compound consisting of 15 or more amino acids.
  • the number of amino acid residues of the cyclic peptide compound according to the present embodiment may be 2 or more and 10 or less, 2 or more and 8 or less, 2 or more and 6 or less, or 2 or more and 4 or less. Further, the number of amino acid residues of the cyclic peptide compound according to the present embodiment may be 5 or more and 30 or less, 7 or more and 25 or less, 8 or more and 15 or less, 9 or more and 14 or less, 10 or more and 13 or less, or 11.
  • the "cyclic part" of a cyclic peptide compound means a cyclic part formed by connecting two or more amino acid residues.
  • the number of amino acid residues constituting the cyclic part of the cyclic peptide compound is 5 or more and 14 or less, 6 or more and 14 or less, 7 or more and 14 or less, 8 or more and 14 or less, 9 or more and 14 or less, 10 or more and 14 or less, 5 or more and 13 or less, 6 to 13, 7 to 13, 8 to 13, 9 to 13, 10 to 13, 5 to 12, 6 to 12, 7 to 12, 8 to 12, 9 to 12, It may be 10 or more and 12 or less, 5 or more and 11 or less, 6 or more and 11 or less, 7 or more and 11 or less, 8 or more and 11 or less, 9 or more and 11 or less, 10 or more and 11 or less, or 11.
  • the cyclic portion is preferably formed through a covalent bond such as an amide bond, a carbon-carbon bond forming reaction, an SS bond, a thioether bond, or a triazole bond, and is a linear peptide compound in which amino acid residues are linked. It can be formed by bonding a group on the N-terminal side and a group on the C-terminal side. Specifically, for example, it can be formed by bonding the amino group at the N-terminus and the carboxyl group at the C-terminus of a linear peptide compound in which amino acid residues are linked.
  • Cyclization includes cyclization by carbon-nitrogen bonds such as amide bonds, cyclization by carbon-oxygen bonds such as ester bonds and ether bonds, cyclization by carbon-sulfur bonds such as thioether bonds, and carbon-carbon bonds. Any form may be used, such as cyclization by , cyclization by a sulfur-sulfur bond, or cyclization by constructing a heterocyclic ring. Among these, cyclization via a covalent bond such as an amide bond or a carbon-carbon bond is preferred, and cyclization via an amide bond between a carboxy group in a side chain and an amino group in the main chain is more preferred.
  • the positions of the carboxy group, amino group, etc. used for cyclization may be on the main chain or on the side chain, and are not particularly limited as long as they are at positions that allow cyclization.
  • the cyclic peptide compound according to this embodiment may have a ring atom number of 15 or more and 46 or less.
  • number of ring atoms means the number of atoms (ring atoms) of a cyclic compound including the innermost part of the ring, and if the compound has multiple rings, the number of atoms is the largest. Defined as the number of atoms in the ring. In addition, when two rings share some atoms, the number of ring atoms of each ring is calculated using the one with the smaller number of atoms in common.
  • the number of ring atoms of tetrahydrofuran (THF) is 5
  • the number of ring atoms of tacrolimus (FK506) is 21.
  • the number of ring atoms of the cyclic peptide compound according to the present embodiment may be, for example, 34 or more and 46 or less, 34 or more and 43 or less, 34 or more and 40 or less, 34 or more and 37 or less, 34 or more and 36 or less, or 34.
  • the ring atoms used to calculate the number of ring atoms may be selected from the group consisting of carbon atoms, hydrogen atoms, nitrogen atoms, oxygen atoms, sulfur atoms, phosphorus atoms, and silicon atoms; It may be selected from the group consisting of nitrogen atoms and oxygen atoms.
  • the cyclic peptide compound according to this embodiment may have a linear part in addition to the cyclic part.
  • the specific embodiment of the number of amino acid residues of the cyclic peptide compound is the same as the specific embodiment of the number of amino acid residues of the peptide compound described above.
  • the cyclic peptide compound has a linear portion, it is preferable that the total number of amino acid residues in the cyclic portion and the linear portion fall within the same range.
  • the number of amino acid residues constituting the cyclic part is 5 to 15, 6 to 15, 6 to 14, 7 to 14, 8 to 14, or
  • the number of amino acid residues constituting the linear part is preferably 7 or more and 13 or less, more preferably 7 or more and 12 or less, or 8 or more and 11 or less, even more preferably 9 or more and 11 or less, particularly preferably 10 or 11, and the number of amino acid residues forming the linear part is 1 or more. It is preferably 8 or less, 1 or more and 7 or less, 1 or more and 6 or less, 1 or more and 5 or less, or 1 or more and 4 or less, and more preferably 1 or more and 3 or less.
  • the molecular weight of the cyclic peptide compound according to this embodiment is not particularly limited, and includes, for example, 500 or more, 550 or more, 600 or more, 650 or more, 700 or more, 750 or more, 800 or more, 850 or more, 900 or more, or 950 or more, preferably 1000 or more, 1100 or more, 1200 or more, 1300 or more, or 1400 or more.
  • the upper limit of the molecular weight of the peptide compound according to this embodiment is not particularly limited, but preferably 5000 or less, 4000 or less, 3000 or less, 2500 or less, or 2000 or less.
  • Molecular weight in this specification means the sum of the atomic weights of atoms constituting a compound molecule (unit: "g/mol"), and is obtained by calculating the sum of the atomic weights of atoms included in the molecular structural formula (unit: g/mol). "g/mol”). In this specification, the unit of molecular weight may be omitted. Note that the molecular weight of the peptide compound can be measured by liquid chromatography mass spectrometry (LC/MS) as described in Examples.
  • LC/MS liquid chromatography mass spectrometry
  • the peptide compound containing one or more N-substituted amino acid residues is a peptide compound containing one or more N-substituted amino acid residues, as long as it is a peptide compound containing one or more N-substituted amino acid residues.
  • Specific embodiments can be applied without restriction.
  • the cyclic peptide compound according to this embodiment may contain one or more N-substituted amino acid residues, preferably contains at least three N-substituted amino acid residues, and preferably contains at least four N-substituted amino acid residues. More preferably, it contains at least 5 N-substituted amino acid residues.
  • the N-substituted amino acid residues may be present continuously or discontinuously in the N-substituted cyclic peptide compound.
  • Raw materials were obtained from commercial suppliers and used without purification unless otherwise noted.
  • the abbreviations listed in Tables 1 and 2 were used in the examples.
  • Preparation Example 1 W253H -SBP -HIS preparation Semorable Semorable, represented by amino acid sequence, which X is HIS, and at the C -termin, STREPTTAVIDIN -BINDINDING PEPTIDE tag array Q), linker sequence (GGS) and HIS tag sequences ( HHHHHH) was synthesized and cloned into an E. coli expression vector.
  • This expression vector was introduced into BL21 (DE3) E. coli strain (Novagen) and cultured at 18°C for 2 days using Overnight Express Instant TB Medium (Novagen) to express the final preparation of the target protein (sequence No. 10, W253H).
  • 2-cyclopentyl-2-oxo-acetic acid sodium salt (3.9 g, 24 mmol), methylamine hydrochloride (8.1 g, 120 mmol), D-glucose (8.7 g, 48 mmol) and N,N-di(2- Hydroxyethyl)glycine (7.8 g, 48 mmol) was dissolved in distilled water (50 mL), and the external temperature of the reaction vessel was set at 25°C. A 5M aqueous sodium hydroxide solution (6.0 mL) was added to adjust the pH to 8.8.
  • a 50 w/v% aqueous sodium hydroxide solution (1.5 mL) was added and stirred for 3 hours.
  • N-carbobenzoxyoxysuccinimide (1.2 g, 4.8 mmol) was added and stirred for 90 minutes.
  • a 50 w/v% aqueous sodium hydroxide solution (0.5 mL) was added and stirred for 18 hours.
  • Concentrated hydrochloric acid (8.0 mL) was added, the target product was extracted into the organic layer, and the obtained organic layer was concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of the reaction vessel of 40°C.
  • Methyl tert-butyl ether (15 mL) was added, and the organic layer was washed twice with a 5% aqueous disodium hydrogen phosphate solution (10 mL x 2) and once with a 2M aqueous sodium hydroxide solution (10 mL), and the target product was added to the aqueous layer. Extracted. The resulting aqueous layers were combined and methyl tert-butyl ether (20 mL) and concentrated hydrochloric acid (1.5 mL) were added to re-extract the target product into the organic layer. The obtained organic layer was concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of the reaction vessel of 40°C.
  • 2-cyclopentyl-2-oxo-acetic acid sodium salt (5.3 g, 33 mmol), methylamine hydrochloride (11 g, 160 mmol), D-glucose (12 g, 65 mmol), N,N-di(2-hydroxyethyl)glycine (11 g, 65 mmol) was dissolved in distilled water (69 mL), and the external temperature of the reaction vessel was set at 25°C. A 50 w/v% aqueous sodium hydroxide solution (4.8 mL) was added to adjust the pH to 9.2.
  • NADP+ (0.25g, 0.33mmol
  • D-glucose dehydrogenase 26mg, 1300U, 50U/mg
  • NMAADH modified enzyme solution final preparation, 2.0mL, equivalent to 53mg as enzyme, 1.0% by mass
  • Concentrated hydrochloric acid (7.5 mL) was added to adjust the pH to 1.9, and the mixture was stirred for 1 hour.
  • Insoluble matter was filtered through a Celite pad, and the Celite pad was washed with distilled water (11 mL) to obtain a (S)-2-cyclopentyl-2-(methylamino)acetic acid solution (130 g).
  • Methyl tert-butyl ether (5.3 mL), acetonitrile (2.7 mL), and N-carbobenzoxyoxysuccinimide (1.8 g, 7.2 mmol) were added and stirred for 105 minutes.
  • Acetonitrile (1.6 mL) was added and the mixture was further stirred for 30 minutes.
  • a 50 w/v% aqueous sodium hydroxide solution (0.8 mL) was added to adjust the pH to 9.3, and the mixture was stirred for 105 minutes.
  • N-carbobenzoxyoxysuccinimide (1.0 g, 3.9 mmol) was added and stirred for 105 minutes.
  • Synthesis Example 3 Synthesis method of (S)-2-(benzyloxycarbonyl(methyl)amino)-2-cyclopentyl-lithium acetate salt seed crystals (S)-2-(benzyloxycarbonyl(methyl)amino)-2- Cyclopentyl-acetic acid (1.0 g, 3.4 mmol, commercially available) was dissolved in tetrahydrofuran (5.0 ml, 5.0 v/w) and stirred at an external temperature of the reaction vessel of 25°C. Lithium tert-butoxide (0.30 g, 3.8 mmol) was added, and precipitation of crystals was confirmed.
  • Comparative Example 1 and Example 1 Purification of amino acid derivative in free form and purification with lithium salt Purification of amino acid derivative in free form (carboxylic acid) and purification with lithium salt were compared. Amino acid derivatives containing impurities were isolated as free forms or lithium salts, and their apparent purity was compared. The apparent purity or apparent impurity content was calculated from the UV absorption peak area ratio of high performance liquid chromatography. The apparent purity was calculated using Formula 1b, and the apparent impurity content was calculated using Formula 2b.
  • Heptane (1.0 mL, 0.6 v/w), seed crystals ((S)-2-(benzyloxycarbonyl(methyl)amino)-2-cyclopentyl-acetic acid (free form) crystals, commercially available product, 5.0 mg ) was added and stirred for 15 minutes, and precipitation of crystals was confirmed.
  • Example 1-1 Purification of (S)-2-(benzyloxycarbonyl(methyl)amino)-2-cyclopentyl-acetic acid with lithium salt
  • Acetonitrile (5.0 ml, 10 v/w) was added over 10 minutes, seed crystals (synthesized according to Synthesis Example 3, 5.0 mg) were added and stirred for 40 minutes, and precipitation of crystals was confirmed.
  • the external temperature of the reaction vessel was set at 25°C, and the mixture was stirred for 3 hours.
  • the external temperature of the reaction vessel was set to 0° C., and the mixture was stirred for 30 minutes.
  • Acetonitrile (2.5 ml, 5.0 v/w) was added over 5 minutes, and the mixture was further stirred for 30 minutes.
  • Acetonitrile (5.0 ml, 10 v/w) was added over 5 minutes and stirred for 30 minutes.
  • Example 2 Purification of amino acid derivatives by lithium chloride The effect of purifying amino acid derivatives by lithium chloride was evaluated. 3-aminopropanoic acid ( ⁇ -alanine) having the same protecting group was added as an impurity to an amino acid derivative having a specific protecting group to form a mixture. The mixture was isolated and purified by lithium chloride, and the purification effect was verified by comparing the apparent purity of the mixture and the isolated compound. The apparent impurity content was calculated using the same method as described in Example 1.

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Abstract

本発明の一側面は、以下の工程（Ａ）及び（Ｂ）を含む、アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物の製造方法に関する。　工程（Ａ）；精製目的物である以下（ｉ）と不純物である以下（ｉｉ）との混合物である精製対象物にリチウム含有物質を接触させる工程、　（ｉ）Ｎ末端に保護基を有する上記アミノ酸又はＮ末端に保護基を有する上記ペプチド化合物　（ｉｉ）上記精製目的物以外の化合物、　工程（Ｂ）；上記精製目的物のリチウム塩を析出させる工程。

Description

リチウム塩の析出工程を含む、アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物の製造方法
　本発明は、リチウム塩の析出工程を含む、アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物の製造方法に関する。
　アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物は、医薬品の候補分子又はその合成中間体になり得る重要な化合物である。アミノ酸の塩又はペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物の精製方法としては、それらの末端を保護又は修飾した上で精製する方法が知られている。
　例えば特許文献１には、光学活性３－クロロアラニン誘導体を用いて、２位及び／又は４位がニトロ基で置換されたベンゼンスルホニル基でアミノ基が保護された光学活性アジリジン－２－カルボン酸誘導体、又は、２位及び／又は４位がニトロ基で置換されたベンゼンスルホニル基でアミノ基が保護された光学活性３－ハロアラニン誘導体を経由することが開示されている。
　また、特許文献２には、β－ヒドロキシ－α－アミノカルボン酸（但し、α位のアミノ基の塩基性はアミノ基の置換基の存在により遮蔽されていない）又はその酸との塩をハロゲン化剤で処理することにより、水酸基をハロゲン化することを特徴とする、β－ハロゲノ－α－アミノカルボン酸又はその塩の製造方法が開示されている。
　ここで、保護基として広く用いられているＦｍｏｃ基（９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基）について、非特許文献１には、Ｆｍｏｃ基でペプチド化合物を保護すると、副生成物としてＦｍｏｃ－β－アラニンが生成すること、Ｆｍｏｃ－β－アラニンがＦｍｏｃ－ＯＳｕ（Ｆｍｏｃ　Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）に由来することが示されている。Ｆｍｏｃ－ＯＳｕは、アミノ酸又はペプチド化合物をＦｍｏｃ基で保護する際に一般的に使用される原料の一つである。Ｆｍｏｃ基以外の汎用的な保護基（例えばｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ基）等）が用いられる場合でも、その保護基を有するβ－アラニンが不純物として生成することがあり、これらの不純物を高精度に除去することで、創薬の候補分子又はその合成中間体の純度を向上することが求められていた。
国際公開第２００１／０６０７９５号 国際公開第１９９９／０３３７８５号
M. Obkircher et al., "Formationof Fmoc-β-alanine during Fmoc-protections with Fmoc-OSu", Journal ofPeptide Science, Volume14, Issue6, June 2008, Pages 763-766
　しかし、β－アラニン又はその誘導体を始めとした不純物の含有率を低減し、目的とするアミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物を高純度で精製することは困難であった。そこで、本発明の課題は、高純度なアミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物を得るための方法を提供することにある。
［１］以下の工程（Ａ）及び（Ｂ）を含む、アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物の製造方法：
　工程（Ａ）；精製目的物である以下（ｉ）と不純物である以下（ｉｉ）との混合物である精製対象物にリチウム含有物質を接触させる工程、
　　（ｉ）Ｎ末端に保護基を有する上記アミノ酸又はＮ末端に保護基を有する上記ペプチド化合物
　　（ｉｉ）上記精製目的物以外の化合物、
　工程（Ｂ）；上記精製目的物のリチウム塩を析出させる工程。
［２］以下の工程（Ａ）及び（Ｂ）を含む、精製対象物から不純物を除去する方法：
　工程（Ａ）；精製目的物である以下（ｉ）と不純物である以下（ｉｉ）との混合物である精製対象物にリチウム含有物質を接触させる工程、
　　（ｉ）Ｎ末端に保護基を有する上記アミノ酸又はＮ末端に保護基を有する上記ペプチド化合物
　　（ｉｉ）上記精製目的物以外の化合物、
　工程（Ｂ）；上記精製目的物のリチウム塩を析出させる工程。
［３］上記精製目的物が、アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物である、［１］又は［２］に記載の方法。
［４］上記精製目的物のＮ末端の保護基がカルバメート系保護基である、［１］から［３］のいずれかに記載の方法。
［５］上記精製目的物が保護基としてフルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル基又は２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル基を有する、［１］から［４］のいずれかに記載の方法。
［６］上記不純物が、精製目的物以外の、Ｎ末端に保護基を有するアミノ酸又はＮ末端に保護基を有するペプチド化合物である、［１］から［５］のいずれかに記載の方法。
［７］上記不純物がＮ末端に保護基を有するβ－アラニンである、［１］から［６］のいずれかに記載の方法。
［８］上記不純物が保護基としてカルバメート基を有する、［１］から［７］のいずれかに記載の方法。
［９］上記不純物が保護基としてフルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル基又は２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル基を有する、［１］から［８］のいずれかに記載の方法。
［１０］上記精製目的物及び上記不純物が同一の保護基を有する、［１］から［９］のいずれかに記載の方法。
［１１］上記精製目的物及び上記不純物がＮ末端に同一の保護基を有する、［１］から［１０］のいずれかに記載の方法。
［１２］上記工程（Ａ）で上記精製目的物のリチウム塩を形成する、［１］から［１１］のいずれかに記載の方法。
［１３］上記工程（Ａ）で上記不純物のリチウム塩を形成する、［１］から［１２］のいずれかに記載の方法。
［１４］上記工程（Ｂ）において、上記精製目的物のリチウム塩又はその溶媒和物を固体として析出させる、［１］から［１３］のいずれかに記載の方法。
［１５］上記工程（Ｂ）において、上記精製目的物のリチウム塩又はその溶媒和物を結晶として析出させる、［１］から［１４］のいずれかに記載の方法。
［１６］上記工程（Ａ）が第一の有機溶媒存在下において行われる、［１］から［１５］のいずれかに記載の方法。
［１７］上記第一の有機溶媒に対する上記精製目的物の溶解度が２０ｇ／Ｌ以上である、［１６］に記載の方法。
［１８］上記第一の有機溶媒に対する上記精製目的物のリチウム塩の溶解度が２０ｇ／Ｌ以下である、［１６］又は［１７］のいずれかに記載の方法。
［１９］上記第一の溶媒に対する上記不純物の溶解度が２０ｇ／Ｌ以上である、［１６］から［１８］のいずれかに記載の方法。
［２０］上記第一の有機溶媒が、ニトリル類、エーテル類、ケトン類、アミド類、ウレア類、スルホキシド類、スルホン類、アルカン類、芳香族化合物類、エステル類、及びハロゲン化アルキル類からなる群より選ばれる少なくとも１種である、［１６］から［１９］のいずれかに記載の方法。
［２１］上記第一の有機溶媒が、ニトリル類又はエーテル類である、［１６］から［２０］のいずれかに記載の方法。
［２２］上記第一の有機溶媒が、アセトニトリル、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、２－メチル－２－プロパノール、エチレングリコール、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジエチルエーテル、１，２－ジメトキシエタン、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン、ジメチルスルホキシド、スルホラン、ヘプタン、メチルシクロヘキサン、ヘキサン、シクロヘキサン、ペンタン、ベンゼン、トルエン、１，２－ジメチルベンゼン、１，３－ジメチルベンゼン、１，４－ジメチルベンゼン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ジクロロエタン、ジクロロメタン、クロロホルム、及び四塩化炭素からなる群より選ばれる少なくとも１種である、［１６］から［２１］のいずれかに記載の方法。
［２３］上記第一の有機溶媒が、アセトニトリル又はテトラヒドロフランである、［１６］から［２２］のいずれかに記載の方法。
［２４］上記第一の有機溶媒が１種類のみからなる、［１６］から［２３］のいずれかに記載の方法。
［２５］上記工程（Ａ）が水の存在下において行われる、［１］から［２４］のいずれかに記載の方法。
［２６］上記工程（Ａ）において上記第一の有機溶媒以外の有機溶媒を用いない、［１６］から［２５］のいずれかに記載の方法。
［２７］上記工程（Ｂ）が第二の有機溶媒存在下において行われる、［１］から［２６］のいずれかに記載の方法。
［２８］上記第二の有機溶媒に対する上記精製目的物のリチウム塩の溶解度が１０ｇ／Ｌ以下である、［２７］に記載の方法。
［２９］上記第二の有機溶媒が、ニトリル類、アルコール類、エーテル類、ケトン類、アミド類、ウレア類、スルホキシド類、スルホン類、アルカン類、芳香族化合物類、エステル類、及びハロゲン化アルキル類からなる群より選ばれる少なくとも１種である、［２７］又は［２８］に記載の方法。
［３０］上記第二の有機溶媒が、ニトリル類又はエーテル類である、［２７］から［２９］のいずれかに記載の方法。
［３１］上記第二の有機溶媒が、アセトニトリル、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、２－メチル－２－プロパノール、エチレングリコール、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジエチルエーテル、１，２－ジメトキシエタン、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン、ジメチルスルホキシド、スルホラン、ヘプタン、メチルシクロヘキサン、ヘキサン、シクロヘキサン、ペンタン、ベンゼン、トルエン、１，２－ジメチルベンゼン、１，３－ジメチルベンゼン、１，４－ジメチルベンゼン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ジクロロエタン、ジクロロメタン、クロロホルム、及び四塩化炭素からなる群より選ばれる少なくとも１種である、［２７］から［３０］のいずれかに記載の方法。
［３２］上記第二の有機溶媒が、アセトニトリル又はテトラヒドロフランである、［２７］から［３１］のいずれかに記載の方法。
［３３］上記第二の有機溶媒が１種類のみからなる、［２７］から［３２］のいずれかに記載の方法。
［３４］上記工程（Ｂ）が水の存在下において行われる、［１］から［３３］のいずれかに記載の方法。
［３５］水に対する上記不純物のリチウム塩の溶解度が１０ｇ／Ｌ以上である、［１３］から［３４］のいずれかに記載の方法。
［３６］上記工程（Ｂ）において上記第二の有機溶媒以外の有機溶媒を用いない、［２７］から［３５］のいずれかに記載の方法。
［３７］上記工程（Ｂ）において、上記工程（Ａ）で得られた試料と上記第二の溶媒とを混合する［２７］から［３６］のいずれかに記載の方法。
［３８］上記工程（Ｂ）において、上記第二の有機溶媒を更に添加する、［２７］から［３７］のいずれかに記載の方法。
［３９］上記［３７］又は［３８］に記載の工程により、精製目的物のリチウム塩を析出させる、［３７］又は［３８］に記載の方法。
［４０］上記第二の有機溶媒が上記第一の有機溶媒と同一の溶媒である、［２７］から［３９］のいずれかに記載の方法。
［４１］上記工程（Ａ）及び（Ｂ）が第一の有機溶媒存在下において行われ、
　上記精製対象物１ｇに対する上記第一の有機溶媒の容量が、上記工程（Ａ）及び上記工程（Ｂ）をとおして１ｍｌ以上４０ｍｌ以下である、［１］から［４０］のいずれかに記載の方法。
［４２］上記工程（Ａ）の終了時における、上記精製対象物１ｇに対する上記第一の有機溶媒の容量が、上記工程（Ｂ）において上記第二の有機溶媒の割合を増加させる場合、１ｍｌ以上５０ｍｌ以下である、［２７］から［４１］のいずれかに記載の方法。
［４３］上記工程（Ａ）の終了時における、上記精製対象物１ｇに対する上記第一の有機溶媒の容量が、上記工程（Ｂ）において上記第二の有機溶媒の割合を増加させない場合、１ｍｌ以上１００ｍｌ以下である、［２７］から［４２］のいずれかに記載の方法。
［４４］上記工程（Ａ）及び（Ｂ）が第二の有機溶媒存在下において行われ、上記精製対象物１ｇに対する上記第二の有機溶媒の容量が、上記工程（Ａ）及び上記工程（Ｂ）をとおして０ｍｌ以上１００ｍｌ以下である、［１］から［４３］のいずれかに記載の方法。
［４５］上記工程（Ｂ）の終了時における、上記精製対象物１ｇに対する上記第二の有機溶媒の容量が、０ｍｌ以上１００ｍｌ以下である、［２７］から［４４］のいずれかに記載の方法。
［４６］上記精製対象物１ｇに対する上記水の容量が、上記工程（Ａ）及び上記工程（Ｂ）をとおして０．１ｍｌ以上５０ｍｌ以下である、［３４］から［４５］のいずれかに記載の方法。
［４７］上記工程（Ａ）の終了時における、上記精製対象物１ｇに対する上記水の容量が、０．１ｍｌ以上５０ｍｌ以下である、［２５］から［４６］のいずれかに記載の方法。
［４８］上記工程（Ｂ）の終了時における、上記精製対象物１ｇに対する上記水の容量が、０．１ｍｌ以上５０ｍｌ以下である、［３４］から［４７］のいずれかに記載の方法。
［４９］上記工程（Ａ）が、－２０℃以上１００℃以下の温度範囲で行われる、［１］から［４８］のいずれかに記載の方法。
［５０］上記工程（Ｂ）が、－２０℃以上１００℃以下の温度範囲で行われる、［１］から［４９］のいずれかに記載の方法。
［５１］上記工程（Ａ）の終了時点における、全液体成分中の上記リチウム含有物質の物質量が、上記精製目的物の物質量を基準として、０．５当量以上２．０当量以下である、［１］から［５０］のいずれかに記載の方法。
［５２］上記リチウム含有物質は、水酸化リチウム、炭酸リチウム、水素化リチウム、リン酸３リチウム、リチウムメトキシド、リチウムエトキシド、リチウムイソプロポキシド、リチウムｔｅｒｔ－ブトキシドメチルリチウム、ｎ－ブチルリチウム、ｓｅｃ－ブチルリチウム、ｔｅｒｔ－ブチルリチウム、リチウムアミド、リチウムジイソプロピルアミド、リチウムヘキサメチルジシラジド、及びリチウムテトラメチルピペリジドからなる群より選ばれる少なくとも１種である、［１］から［５１］のいずれかに記載の方法。
［５３］上記工程（Ａ）において、上記リチウム含有物質、上記精製目的物及び上記第一の有機溶媒とを同時に混合する、［２７］から［５２］のいずれかに記載の方法。
［５４］上記工程（Ａ）において、上記精製目的物及び上記第一の有機溶媒との混合液と上記リチウム含有物質とを混合する、［２７］から［５３］のいずれかに記載の方法。
［５５］上記工程（Ａ）において、上記リチウム含有物質及び上記第一の有機溶媒との混合液と上記精製対象物とを混合する、［２７］から［５４］のいずれかに記載の方法。
［５６］上記アミノ酸又は上記ペプチド化合物を構成するＮ末端アミノ酸が、下記一般式（１）で表される、［１］から［５５］のいずれかに記載の方法。
［上記一般式（１）において、
　ｎは１以上３以下の数を表し、
　Ｒ１が複数存在するときは、Ｒ１は互いに同一であっても異なっていてもよく、
　Ｒ１及びＲ２は水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロシクリル基若しくはヘテロアリール基又はこれらの置換基からなる群より選ばれる２つ以上が結合した置換基を表し、これらの基は、置換基を有していてよく、これらの基は飽和炭化水素基又は不飽和炭化水素基であってよく、
　Ａは炭素原子を表し、
　Ｂは水素原子又はアミノ酸若しくはペプチド化合物との結合点を示し、
　Ｚはフルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル基又は２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル基を表し、
　Ｒ１及びＲ２はＮ及びＡと共に結合して環を形成していてもよく、その場合、Ｒ１及びＲ２は、環形成に関わらない場合の置換基の構造から水素原子が１つ引き抜かれた構造の置換基であり、
　ｎが２である場合、Ｒ２及び２つ存在するＲ１の内いずれか１つ以上は水素原子ではない。］
［５７］上記アミノ酸又は上記ペプチド化合物を構成するＮ末端アミノ酸が、（Ｓ）－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－フェニルプロパン酸、３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸、３－（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロパン酸、（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸、（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－３－フェニルプロパン酸、３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパン酸、（Ｒ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－フェニル－プロパン酸及び（Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボン酸からなる群より選ばれる少なくとも１種である、［１］から［５６］のいずれかに記載の方法。
［５８］上記アミノ酸又は上記ペプチド化合物を構成するＮ末端アミノ酸が、配列番号１で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを触媒とした還元的アミノ化反応によって得られたものである、［１］から［５７］のいずれかに記載の方法。
［５９］上記ポリペプチドが、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１つ以上のアミノ酸残基が改変されたアミノ酸配列を含む、［５８］に記載の方法。
［６０］上記ポリペプチドが、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む、［５８］又は［５９］に記載の方法。
［６１］上記ポリペプチドが、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか一方又は両方に、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１つのアミノ酸残基が改変された配列と９０％以上の配列同一性を有する配列以外のアミノ酸配列を含む、［５８］から［６０］のいずれかに記載の方法。
［６２］上記ポリペプチドが、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか一方又は両方に、タグ配列を含む、［５８］から［６１］のいずれかに記載の方法。
［６３］上記ポリペプチドが、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか一方又は両方に、ストレプトアビジン結合ペプチドタグ配列及びＨｉｓタグ配列からなる群より選ばれる１つ以上を含む、［５８］から［６２］のいずれかに記載の方法。
［６４］上記ポリペプチドのアミノ酸残基数が３００以上４００以下である、［５８］から［６３］のいずれかに記載の方法。
［６５］上記工程（Ｂ）において得られる析出物の純度が９５モル％以上である、［１］から［６４］のいずれかに記載の方法。
［６６］上記工程（Ｂ）において得られる析出物の見掛け純度が９５％以上である、［１］から［６５］のいずれかに記載の方法。
［６７］上記工程（Ｂ）において得られる析出物の不純物含有率が５モル％以下である、［１］から［６６］のいずれかに記載の方法。
［６８］上記工程（Ｂ）において得られる析出物の見掛け不純物含有率が５％以下である、［１］から［６７］のいずれかに記載の方法。
［６９］上記精製対象物中の上記不純物含有率を低減する、［１］から［６８］のいずれかに記載の方法。
［７０］上記精製対象物中の上記見掛け不純物含有率を低減する、［１］から［６９］のいずれかに記載の方法。
［７１］アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物が、アミノ酸のリチウム塩若しくはペプチド化合物のリチウム塩又はこれらの溶媒和物である、［１］から［７０］のいずれかに記載の方法。
［７２］上記リチウム塩を、リチウム塩以外の塩にする工程を更に備える、［１］から［７１］のいずれかに記載の方法。
［７３］［１］から［７２］のいずれかに記載の工程を含む、アミノ酸若しくはペプチド化合物、又はこれらの塩、又はこれらの溶媒和物の製造方法。
［７４］［１］から［７３］のいずれかに記載の工程を含む、ペプチド化合物若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の製造方法。
［７５］［１］から［７４］のいずれかに記載の方法を含み、上記アミノ酸若しくは上記ペプチド化合物、又はこれらの溶媒和物と、アミノ酸又はペプチド化合物とを結合させる工程を備える、環状ペプチド化合物の製造方法。
［７６］上記ペプチド化合物又は結合により得られたペプチド化合物を環化させる工程を備える、［７３］から［７５］のいずれかに記載の方法。
［７７］アミノ酸のリチウム塩若しくはペプチド化合物のリチウム塩又はこれらの溶媒和物であって、
　上記アミノ酸のリチウム塩は、上記一般式（１）で表されるアミノ酸のリチウム塩を純度９９モル％以上又は見掛け純度９９％以上で含有し、
　上記ペプチド化合物のリチウム塩は、上記一般式（１）で表されるアミノ酸の残基を有するペプチド化合物のリチウム塩を純度９９モル％以上又は見掛け純度９９％で含有する、アミノ酸のリチウム塩若しくはペプチド化合物のリチウム塩又はこれらの溶媒和物。
［７８］結晶である、［７７］に記載のアミノ酸のリチウム塩若しくはペプチド化合物のリチウム塩又はこれらの溶媒和物。
　本発明によれば、高純度なアミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物を得るための方法を提供することができる。
　本明細書において「１つ又は複数の」とは、１つ又は２つ以上の数を意味する。「１つ又は複数の」が、ある基の置換基に関連する文脈で用いられる場合、この用語は、１つからその基が許容する置換基の最大数までの数を意味する。「１つ又は複数の」として具体的には、たとえば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、及び／又はそれより大きい数が挙げられる。
　本明細書において、範囲を示す「～」とはその両端の値を含み、例えば、「Ａ～Ｂ」は、Ａ以上であり、かつＢ以下である範囲を意味する。
　本明細書において、「約」という用語は、数値と組み合わせて使用される場合、その数値の＋１０％及び１０％の値範囲を意味する。
　本発明において、「及び／又は」との用語の意義は、「及び」と「又は」が適宜組み合わされたあらゆる組合せを含む。具体的には、例えば、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」には、以下の７通りのバリエーションが含まれる；（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、（ｉｉｉ）Ｃ、（ｉｖ）Ａ及びＢ、（ｖ）Ａ及びＣ、（ｖｉ）Ｂ及びＣ、（ｖｉｉ）Ａ、Ｂ、及びＣ。
　本発明の実施形態について説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
　本発明の一実施形態は、以下の工程（Ａ）及び（Ｂ）を含む、アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物の製造方法である。
　工程（Ａ）；精製目的物である以下（ｉ）と不純物である以下（ｉｉ）との混合物である精製対象物にリチウム含有物質を接触させる工程、
　　（ｉ）Ｎ末端に保護基を有する上記アミノ酸又はＮ末端に保護基を有する上記ペプチド化合物
　　（ｉｉ）上記精製目的物以外の化合物、
　工程（Ｂ）；上記精製目的物のリチウム塩を析出させる工程
　本発明の別の実施形態は、上記工程（Ａ）及び（Ｂ）を含む、精製対象物から不純物を除去する方法である。
　本発明の更に別の実施形態は、アミノ酸のリチウム塩若しくはペプチド化合物のリチウム塩又はこれらの溶媒和物であって、上記アミノ酸のリチウム塩は、上記一般式（１）で表されるアミノ酸のリチウム塩を純度９９モル％以上又は見掛け純度９９％以上で含有し、上記ペプチド化合物のリチウム塩は、上記一般式（１）で表されるアミノ酸の残基を有するペプチド化合物のリチウム塩を純度９９モル％以上又は見掛け純度９９％で含有する、アミノ酸のリチウム塩若しくはペプチド化合物のリチウム塩又はこれらの溶媒和物である。
　従来、上述した精製目的物を精製する場合、それらを高純度で精製することは困難であった。一般に、精製目的物は、ペプチド化合物及びタンパク質合成等の原料として用いられる。高純度のペプチド化合物及びタンパク質を得ることは、それらが医薬品である場合に、不純物による副作用を抑制する為に重要である。すなわち、それらを構成する原料を高純度で精製することは重要である。本発明者らが鋭意検討した結果、驚くべきことに、精製目的物をリチウム塩に変換することで、高純度に精製することができることを新規に見出し、精製目的物の有用性、それらを用いたペプチド化合物及びタンパク質合成における有用性を向上させたものである。
　本発明におけるアミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物、より好ましくは、アミノ酸の塩又はペプチド化合物の塩、よりさらに好ましくはアミノ酸のリチウム塩又はペプチド化合物のリチウム塩は、精製対象物を工程（Ａ）及び工程（Ｂ）により処理することで得られる。本発明における精製対象物は、前記精製目的物と前記不純物の混合物である。本明細書における精製目的物とは、Ｎ末端に保護基を有する前記アミノ酸又はＮ末端に保護基を有する前記ペプチド化合物をいう。前記精製目的物としては、上記一般式（１）で表されるアミノ酸が例示される。また、本明細書における前記不純物とは、前記精製対象物中に含まれる、前記精製目的物以外の化合物をいう。前記不純物としては、準特定不純物（精製目的物以外の、Ｎ末端に保護基を有するアミノ酸又はＮ末端に保護基を有するペプチド化合物）が挙げられる。より具体的には、β－アラニン又はその誘導体が例示される。本明細書における誘導体とは、ある有機化合物を母体として考えたとき、官能基の導入、酸化、還元、原子の置き換えなど、母体の構造や性質を大幅に変えない程度の改変がなされた化合物のことを指し、β－アラニンの誘導体としては、特定不純物（Ｎ末端に保護基を有するβ－アラニン）が例示される。
　本明細書における「アミノ酸」には、天然アミノ酸、及び非天然アミノ酸（アミノ酸誘導体ということがある。）が含まれる。また、本明細書において、「アミノ酸残基」には、天然アミノ酸残基、及び非天然アミノ酸（アミノ酸誘導体）残基が含まれる。
　天然アミノ酸とは、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、チロシン（Ｔｙｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、システイン（Ｃｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、リシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、及びプロリン（Ｐｒｏ）を指す。
　非天然アミノ酸（アミノ酸誘導体）は特に限定されないが、β－アミノ酸、Ｄ型アミノ酸、Ｎ置換アミノ酸（Ｐｒｏを除く。）、α，α－ジ置換アミノ酸、側鎖が天然アミノ酸と異なるアミノ酸、ヒドロキシカルボン酸等が例示される。本明細書において、非天然のＮ置換アミノ酸は、Ｐｒｏ以外のＮ置換アミノ酸を意味する。
　本明細書におけるアミノ酸としては、任意の立体配置が許容される。アミノ酸の側鎖の選択は特に制限を設けないが、水素原子の他にも例えばアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、ヘテロアラルキル基、シクロアルキル基、スピロ結合したシクロアルキル基から自由に選択される。それぞれには置換基が付与されていてもよく、それら置換基も制限されず、例えば、ハロゲン原子、Ｏ原子、Ｓ原子、Ｎ原子、Ｂ原子、Ｓｉ原子、又はＰ原子を含む任意の置換基の中から独立して１つ又は２つ以上自由に選択されてよい。すなわち、置換されていてもよいアルキル基、アルコキシ基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、シクロアルキル基等、又はオキソ、アミノカルボニル、ハロゲン原子等が例示される。一実施形態に係るアミノ酸は、同一分子内にカルボキシ基とアミノ基を有する化合物であってよい（この場合であっても、プロリン、ヒドロキシプロリンのようなイミノ酸もアミノ酸に含まれる。）。
　工程（Ａ）は、精製対象物にリチウム含有物質を接触させる工程である。また、工程（Ａ）により前記精製目的物のリチウム塩が形成されてよく、前記不純物のリチウム塩が形成されてよい。工程（Ｂ）は、精製目的物のリチウム塩を析出させる工程である。また、工程（Ａ）の一部及び工程（Ｂ）の一部は時間的に重複して行われてもよい。なお、工程（Ａ）の前に、前記精製対象物を本発明以外の方法で精製してもよい。例えば、精製目的物のリチウム塩を形成せず、精製目的物をフリー体の状態で析出することで精製することもできる。工程（Ａ）及び工程（Ｂ）の少なくとも一方は溶媒存在下で行うことができ、本明細書では溶媒中から固体が生じることを「析出」という。
　精製目的物の保護基は、カルバメート基であってよい。カルバメート基はフルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル基又は２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル基を指し、フルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基又はベンジルオキシカルボニル基であってよく、フルオレニルメトキシカルボニル基又はベンジルオキシカルボニル基であってよく、フルオレニルメトキシカルボニル基であってよく、ベンジルオキシカルボニル基であってよい。
　不純物の保護基は、カルバメート基であってよい。カルバメート基はフルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル基又は２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル基を指し、フルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基又はベンジルオキシカルボニル基であってよく、フルオレニルメトキシカルボニル基又はベンジルオキシカルボニル基であってよく、フルオレニルメトキシカルボニル基であってよく、ベンジルオキシカルボニル基であってよい。これらの保護基は、不純物のＮ末端を保護する保護基であってよい。
　精製目的物の保護基と不純物の保護基は異なっていてもよく、同一であってよい。精製目的物の保護基と前記不純物の保護基は同一であることが好ましい。
　工程（Ａ）は第一の有機溶媒存在下において行われてもよい。精製目的物とリチウム含有物質の接触を効率的に進行させる観点から、第一の有機溶媒は精製目的物を溶解できる溶媒である。第一の有機溶媒に対する前記精製目的物の溶解度は２０ｇ／Ｌ以上であることが好ましい。第一の有機溶媒に対する前記精製目的物のリチウム塩の溶解度が２０ｇ／Ｌ以下であることが好ましい。第一の有機溶媒に対する前記不純物の溶解度が２０ｇ／Ｌ以上であることが好ましい。
　第一の有機溶媒としては、アセトニトリル等のニトリル類、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、２－メチル－２－プロパノール、エチレングリコール等のアルコール類、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジエチルエーテル、１，２－ジメトキシエタン等のエーテル類、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン類、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドン等のアミド類、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン等のウレア類、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド類、スルホラン等のスルホン類、ヘプタン、メチルシクロヘキサン、ヘキサン、シクロヘキサン、ペンタン等のアルカン類、ベンゼン、トルエン、１，２－ジメチルベンゼン、１，３－ジメチルベンゼン、１，４－ジメチルベンゼン等の芳香族化合物類、酢酸エチル、酢酸イソプロピル等のエステル類、ジクロロエタン、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化アルキル類からなる群より選ばれる少なくとも１種が例示される。第一溶媒の種類は複数であってもよいが、工程（Ａ）の簡素化の観点から１種類であることが好ましい。
　工程（Ａ）は水の存在下において行われてもよい。
　工程（Ｂ）は第二の有機溶媒存在下において行われてもよい。第二の有機溶媒とは、精製目的物のリチウム塩の溶解度が小さい溶媒、すなわち精製目的物のリチウム塩にとっての貧溶媒として機能する溶媒である。第二の有機溶媒に対する前記精製目的物のリチウム塩の溶解度は１０ｇ／Ｌ以下であることが好ましい。
　第二の有機溶媒としては、アセトニトリル等のニトリル類、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、２－メチル－２－プロパノール、エチレングリコール等のアルコール類、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジエチルエーテル、１，２－ジメトキシエタン等のエーテル類、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン類、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドン等のアミド類、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン等のウレア類、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド類、スルホラン等のスルホン類、ヘプタン、メチルシクロヘキサン、ヘキサン、シクロヘキサン、ペンタン等のアルカン類、ベンゼン、トルエン、１，２－ジメチルベンゼン、１，３－ジメチルベンゼン、１，４－ジメチルベンゼン等の芳香族化合物類、酢酸エチル、酢酸イソプロピル等のエステル類、ジクロロエタン、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化アルキル類からなる群より選ばれる少なくとも１種が例示される。第二溶媒の種類は複数であってもよいが、工程（Ｂ）の簡素化の観点から１種類であることが好ましい。
　工程（Ｂ）は水の存在下において行われてもよく、不純物のリチウム塩を溶解させる観点から、水の存在下において行われることが好ましい。水に対する不純物のリチウム塩の溶解度は１０ｇ／Ｌ以上であることが好ましい。
　第二の有機溶媒は工程（Ａ）において第一の有機溶媒と共に用いられてもよい。
　工程（Ｂ）においては、前記精製目的物のリチウム塩を析出させる。析出の際、前記第二の有機溶媒を添加し、その割合を増加させることで、前記精製目的物のリチウム塩の析出を促すことができる。前記第二の有機溶媒の割合を増やす場合、工程（Ａ）で用いた前記第一の有機溶媒に前記第二の有機溶媒を添加すればよい。
　また、前記第一の有機溶媒の割合又は第二の有機溶媒の割合とは、前記第一の有機溶媒又は第二の有機溶媒の体積を精製目的物の質量で除することで算出される体積／質量比（ｍｌ／ｇ、以降ｖ／ｗともいう）を意味する。
　また、工程（Ａ）において用いた前記第一の有機溶媒に対する前記精製目的物のリチウム塩の溶解度が十分小さい場合、前記第一の有機溶媒および前記第二の有機溶媒は同一の溶媒であっても良い。この場合、工程（Ｂ）において前記第二の有機溶媒を添加する必要はない。この場合、工程（Ａ）において前記精製目的物に前記リチウム含有物質を接触させると速やかに工程（Ｂ）が開始され、精製目的物のリチウム塩が析出する。
　精製目的物のリチウム塩は、固体として析出させることが好ましい。ここでいう固体には、結晶又は非晶が含まれる。また、結晶として析出させる（晶出させる）ことがより好ましい。この場合、工程（Ｂ）は、精製目的物のリチウム塩を晶出させる工程ということもできる。
　前記精製対象物１ｇに対する前記第一の有機溶媒の容量は、工程（Ａ）及び工程（Ｂ）をとおして、１ｍｌ以上、２ｍｌ以上又は３ｍｌ以上であってよく、１００ｍｌ以下、８０ｍｌ以下、６０ｍｌ又は４０ｍｌ以下であってよい。前記第一の有機溶媒の前記精製対象物１ｇに対する容量は、工程（Ａ）及び工程（Ｂ）をとおして、１ｍｌ以上１００ｍｌ以下、１ｍｌ以上８０ｍｌ以下、２ｍｌ以上６０ｍｌ以下又は３ｍｌ以上４０ｍｌ以下であってよい。
　工程（Ａ）の終了時における、前記精製対象物１ｇに対する前記第一の有機溶媒の容量（第一の有機溶媒の初期濃度）は、工程（Ｂ）において第二の有機溶媒の割合を増加させる場合、１ｍｌ以上、２ｍｌ以上又は３ｍｌ以上であってよく、５０ｍｌ以下、４０ｍｌ以下、３０ｍｌ以下又は２０ｍｌ以下であってよい。第一の有機溶媒の初期濃度は、１ｍｌ以上５０ｍｌ以下、１ｍｌ以上４０ｍｌ以下、２ｍｌ以上３０ｍｌ以下又は３ｍｌ以上２０ｍｌ以下であってよい。
　工程（Ａ）の終了時における、前記精製対象物１ｇに対する前記第一の有機溶媒の容量（第一の有機溶媒の初期濃度）は、工程（Ｂ）において第二の有機溶媒の割合を増加させない場合、１ｍｌ以上、１０ｍｌ以上、２０ｍｌ以上、３０ｍｌ以上又は３５ｍｌ以上であってよく、１００ｍｌ以下、７５ｍｌ以下、５０ｍｌ以下又は３７ｍｌ以下であってよい。第一の有機溶媒の初期濃度は、１ｍｌ以上１００ｍｌ以下、１０ｍｌ以上７５ｍｌ以下、２０ｍｌ以上５０ｍｌ以下、３０ｍｌ以上３７ｍｌ以下又は３５ｍｌ以上３７ｍｌ以下であってよい。
　精製対象物１ｇに対する第二の有機溶媒の容量は、工程（Ａ）及び（Ｂ）をとおして、０ｍｌ以上であってよく、４０ｍｌ以下、６０ｍｌ以下、８０ｍｌ以下又は１００ｍｌ以下であってよい。精製対象物１ｇに対する第二の有機溶媒の容量は、工程（Ａ）及び（Ｂ）をとおして、０ｍｌ以上１００ｍｌ以下、０ｍｌ以上８０ｍｌ以下、１ｍｌ以上６０ｍｌ以下又は１ｍｌ以上４０ｍｌ以下であってよい。
　工程（Ｂ）の終了時における、精製対象物１ｇに対する第二の有機溶媒の容量は、０ｍｌ以上であってよく、４０ｍｌ以下、６０ｍｌ以下、８０ｍｌ以下、又は１００ｍｌ以下であってよい。工程（Ｂ）の終了時における、精製対象物１ｇに対する第二の有機溶媒の容量は、０ｍｌ以上１００ｍｌ以下、０ｍｌ以上８０ｍｌ以下、０ｍｌ以上６０ｍｌ以下又は０ｍｌ以上４０ｍｌ以下であってよい。
　前記精製対象物１ｇに対する前記水の容量は、工程（Ａ）及び（Ｂ）をとおして、０．１ｍｌ以上、０．３ｍｌ以上又は０．５ｍｌ以上であってよく、５０ｍｌ以下、３０ｍｌ以下、１０ｍｌ以下又は５ｍｌ以下であってよい。溶媒中の水の容量は、工程（Ａ）及び（Ｂ）をとおして、０．１ｍｌ以上５０ｍｌ以下、０．１ｍｌ以上３０ｍｌ以下、０．３ｍｌ以上１０ｍｌ以下又は０．５ｍｌ以上５ｍｌ以下であってよい。
　工程（Ａ）の終了時における、前記精製対象物１ｇに対する前記水の容量（水の初期濃度）は、０．１ｍｌ以上、０．３ｍｌ以上又は０．５ｍｌ以上であってよく、５０ｍｌ以下、３０ｍｌ以下、１０ｍｌ以下又は４ｍｌ以下であってよい。水の初期濃度は、０．１ｍｌ以上５０ｍｌ以下、０．１ｍｌ以上３０ｍｌ以下、０．３ｍｌ以上１０ｍｌ以下又は０．５ｍｌ以上４ｍｌ以下であってよい。
　工程（Ｂ）の終了時における、前記精製対象物１ｇに対する前記水の容量（水の初期濃度）は、０．１ｍｌ以上、０．３ｍｌ以上又は０．５ｍｌ以上であってよく、５０ｍｌ以下、３０ｍｌ以下、１０ｍｌ以下又は４ｍｌ以下であってよい。水の初期濃度は、０．１ｍｌ以上５０ｍｌ以下、０．１ｍｌ以上３０ｍｌ以下、０．３ｍｌ以上１０ｍｌ以下又は０．５ｍｌ以上４ｍｌ以下であってよい。
　工程（Ａ）及び工程（Ｂ）は第一の有機溶媒及び第二の有機溶媒以外のその他の溶媒の存在下において行われても良い。その他の溶媒としては、リン酸緩衝液、ＣＨＥＳ（Ｎ－シクロヘキシル－２－アミノエタンスルホン酸）、Ｔｒｉｓ（トリスヒドロキシメチルアミノメタン）、ビシン（Ｎ,Ｎ－ジ（２－ヒドロキシエチル）グリシン）等の緩衝液が例示される。
　工程（Ａ）が行われる温度は、－２０℃以上であってよく、０℃以上であってよく、１０℃以上であってよく、２０℃以上であってもよい。工程（Ａ）が行われる温度は、１００℃以下であってよく、８０℃以下であってよく、６０℃以下であってよく、４０℃以下であってよく、３０℃以下であってもよい。工程（Ａ）が行われる温度は、－２０～１００℃であってよく、０～８０℃であってよく、１０～６０℃であってよく、１０～４０℃であってよく、２０～３０℃であってもよい。
　工程（Ｂ）が行われる温度は、－２０℃以上であってよく、０℃以上であってよく、１０℃以上であってよく、２０℃以上であってもよく、３０℃以上であってもよく、３５℃以上であってもよい。工程（Ａ）が行われる温度は、１００℃以下であってよく、８０℃以下であってよく、６０℃以下であってよく、４０℃以下であってよく、３０℃以下であってもよい。工程（Ａ）が行われる温度は、－２０～１００℃であってよく、０～８０℃であってよく、１０～６０℃であってよく、１０～４０℃であってよく、２０～３０℃であってもよい。
　工程（Ａ）及び工程（Ｂ）における、温度、各種溶液に含まれる物質の濃度等の諸条件は同じであってもよく、異なっていてもよい。両者においてこれらの諸条件が異なる場合、上述した工程（Ａ）の各種条件の中から選択された条件が組み合わされてよい。
　また、前記工程（Ａ）の終了時点における前記リチウム含有物質の物質量は、精製目的物の物質量を基準として、０．５当量以上、０．８当量以上又は１．０当量以上であってよく、２．０当量以下、１．５当量以下又は１.１当量以下であってよい。前記反応物の質量を基準としたリチウム含有物質の含有量は、０．５当量以上２．０当量以下、０．８当量以上１．５当量以下又は１．０当量以上１．１当量以下であってよい。
　なお、本明細書における前記リチウム含有物質とは、工程（Ａ）において前記精製目的物と接触させるための、リチウムを含有する物質をいう。工程（Ａ）において用いるリチウム含有物質としては、例えば、水酸化リチウム、リチウムｔｅｒｔ－ブトキシド、水酸化リチウム、炭酸リチウム、水素化リチウム、リン酸３リチウム、リチウムメトキシド、リチウムエトキシド、リチウムイソプロポキシド、リチウムｔｅｒｔ－ブトキシドメチルリチウム、ｎ－ブチルリチウム、ｓｅｃ－ブチルリチウム、ｔｅｒｔ－ブチルリチウム、リチウムアミド、リチウムジイソプロピルアミド、リチウムヘキサメチルジシラジド、及びリチウムテトラメチルピペリジドからなる群より選ばれる少なくとも１種が挙げられる。
　精製対象物にリチウム含有物質を接触させる方法に制限はないが、精製対象物及びリチウム含有物質を第一の有機溶媒存在下において接触させることができる。この場合、精製対象物、リチウム含有物質及び第一の有機溶媒は、はじめから同じ容器で混合してもよく、精製対象物と第一の有機溶媒とを混合し、得られた混合液にリチウム含有物質を添加してもよく、リチウム含有物質と第一の有機溶媒とを混合し、得られた混合液に精製対象物を添加してもよい。
　なお、第一の有機溶媒、第二の有機溶媒及びリチウム含有物質の量を決める際の基準となる、精製対象物中の精製目的物の含有量は、実測値、推定値又は計算値であってよく、実測値又は計算値であることが好ましく、実測値であることが最も好ましい。
　精製目的物に含まれる、Ｎ末端に保護基を有するアミノ酸又はＮ末端に保護基を有するペプチド化合物を構成するアミノ酸としては、上記一般式（１）で表されるアミノ酸（アミノ酸（１）ともいう。）、疎水性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、芳香族アミノ酸等が挙げられる。
　ｎは１以上３以下の数を示し、１以上３以下の整数であってよい。ｎは１，２又は３であってよい。ｎが２である場合、Ｒ２及び２つ存在するＲ１の内いずれか１つ以上は水素原子でなく、Ｒ２及び２つ存在するＲ１の内２つ以上が水素原子でなくてもよく、Ｒ２及び２つ存在するＲ１の３つともが水素原子でなくてもよい。
　Ｒ１及びＲ２は水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロシクリル基若しくはヘテロアリール基又はこれらの置換基からなる群より選ばれる２つ以上が結合した置換基（例えばベンジル基等）を表し、これらの基は、置換基を有していてよく、これらの基は飽和又は不飽和であってよい。
　Ａは炭素原子を表し、Ｂは水素原子又はアミノ酸若しくはペプチド化合物との結合点を示す。
　Ｚはフルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル基又は２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル基を表す。
　Ｒ１及びＲ２はＮ及びＡと共に結合して環を形成していてよい。その場合、Ｒ１及びＲ２は、環形成に関わらない場合の置換基の構造から水素原子が１つ引き抜かれた構造の置換基である。
　本明細書において「アルキル」とは、脂肪族炭化水素から任意の水素原子を１個除いて誘導される１価の基であり、骨格中にヘテロ原子（炭素及び水素原子以外の原子をいう。）又は不飽和の炭素－炭素結合を含有せず、水素及び炭素原子を含有するヒドロカルビル又は炭化水素基構造の部分集合を有する。アルキルは直鎖状のものだけでなく、分枝鎖状のものも含む。アルキルとして具体的には、炭素原子数１～２０（Ｃ１～Ｃ２０、以下「Ｃｐ～Ｃｑ」とは炭素原子数がｐ～ｑ個であることを意味する）のアルキルであり、好ましくはＣ１～Ｃ１０アルキル、より好ましくはＣ１～Ｃ６アルキルが挙げられる。アルキルとして、具体的には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル（２－メチルプロピル）、ｎ－ペンチル、ｓ－ペンチル（１－メチルブチル）、ｔ－ペンチル（１，１－ジメチルプロピル）、ネオペンチル（２，２－ジメチルプロピル）、イソペンチル（３－メチルブチル）、３－ペンチル（１－エチルプロピル）、１，２－ジメチルプロピル、２－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，２，２－トリメチルプロピル、１，１，２，２－テトラメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、２，３－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチル、１－エチルブチル、２－エチルブチル等が挙げられる。
　本明細書において「アルキレン」とは、上記「アルキル」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、Ｃ４～Ｃ８アルキレンが好ましい。アルキレンとして具体的には、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－（ＣＨ２）３－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－Ｃ（ＣＨ３）２－、－（ＣＨ２）４－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２－、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）－、－（ＣＨ２）５－、－（ＣＨ２）６－、－（ＣＨ２）７－、－（ＣＨ２）８－などが挙げられる。
　本明細書において「アルケニル」とは、少なくとも１個の二重結合（２個の隣接ＳＰ２炭素原子）を有する１価の基である。二重結合及び置換分（存在する場合）の配置によって、二重結合の幾何学的形態は、エントゲーゲン（Ｅ）又はツザンメン（Ｚ）、シス又はトランス配置をとることができる。アルケニルは、直鎖状のものだけでなく、分枝鎖状ものも含む。アルケニルとして好ましくはＣ２～Ｃ１０アルケニル、より好ましくはＣ２～Ｃ６アルケニルが挙げられ、具体的には、たとえば、ビニル、アリル、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル（シス、トランスを含む）、３－ブテニル、ペンテニル、３－メチル－２－ブテニル、ヘキセニルなどが挙げられる。
　本明細書において「アルキニル」とは、少なくとも１個の三重結合（２個の隣接ＳＰ炭素原子）を有する、１価の基である。アルキニルは、直鎖状のものだけでなく、分枝鎖状のものも含む。アルキニルとして好ましくはＣ２～Ｃ１０アルキニル、より好ましくはＣ２～Ｃ６アルキニルが挙げられ、具体的には、たとえば、エチニル、１－プロピニル、プロパルギル、３－ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、３－フェニル－２－プロピニル、３－（２'－フルオロフェニル）－２－プロピニル、２－ヒドロキシ－２－プロピニル、３－（３－フルオロフェニル）－２－プロピニル、３－メチル－（５－フェニル）－４－ペンチニルなどが挙げられる。
　本明細書において「シクロアルキル」とは、飽和又は部分的に飽和した環状の１価の脂肪族炭化水素基を意味し、単環、ビシクロ環、スピロ環を含む。シクロアルキルとして好ましくはＣ３～Ｃ８シクロアルキルが挙げられ、具体的には、たとえば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、スピロ［３．３］ヘプチルなどが挙げられる。
　本明細書において「アリール」とは１価の芳香族炭化水素環を意味し、好ましくはＣ６～Ｃ１０アリールが挙げられる。アリールとして具体的には、たとえば、フェニル、ナフチル（たとえば、１－ナフチル、２－ナフチル）などが挙げられる。
　本明細書において「ヘテロシクリル」とは、炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を含有する、非芳香族の環状の１価の基を意味する。ヘテロシクリルは、環中に二重及び又は三重結合を有していてもよく、環中の炭素原子は酸化されてカルボニルを形成してもよく、単環でも縮合環でもよい。環を構成する原子の数は好ましくは４～１０であり（４～１０員ヘテロシクリル）、より好ましくは４～７である（４～７員ヘテロシクリル）。ヘテロシクリルとしては具体的には、たとえば、アゼチジニル、オキシラニル、オキセタニル、アゼチジニル、ジヒドロフリル、テトラヒドロフリル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジル、テトラヒドロピリミジル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、１，２－チアジナン、チアジアゾリジニル、アゼチジニル、オキサゾリドン、ベンゾジオキサニル、ベンゾオキサゾリル、ジオキソラニル、ジオキサニル、テトラヒドロピロロ[１,２－ｃ]イミダゾール、チエタニル、３，６－ジアザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、３－オキサ－８－アザビシクロ[３．２．１]オクタニル、スルタム、２－オキサスピロ[３．３]ヘプチルなどが挙げられる。
　本明細書において「ヘテロアリール」とは、炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を含有する、芳香族性の環状の１価の基を意味する。環は単環でも、他の環との縮合環でもよく、部分的に飽和されていてもよい。環を構成する原子の数は５～１２（５～１２員ヘテロアリール）であってよく、６～１０（５～１２員ヘテロアリール）であってよく、６～７（６～７員ヘテロアリール）であってよい。ヘテロアリールとして具体的には、たとえば、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ベンゾジオキソリル、インドリジニル、イミダゾピリジルなどが挙げられる。
　本明細書において、「置換していてもよい」とは、「置換基を有していてもよい」ということであって、ある基が任意の置換基によって置換されていてもよいことを意味する。置換基としては、例えば、ハロゲン原子、酸素原子、硫黄原子、窒素原子、ホウ素原子、ケイ素原子、リン原子等を含む置換基が挙げられる。より具体的には、置換基としては、アルキル基、アルコキシ基、フルオロアルキル基、フルオロアルコキシ基、オキソ基、アミノカルボニル基、アルキルスルホニル基、アルキルスルホニルアミノ基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、ヘテロシクリル基、アリールアルキル基、ヘテロアリールアルキル基、ハロゲン基、ニトロ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、シアノ基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、ホルミル基等が例示される。
　アミノ酸又はペプチド化合物を構成するＮ末端アミノ酸は、配列番号１で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを触媒とした還元的アミノ化反応によって得ることができる。
　配列番号１で表されるアミノ酸配列との同一性は、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上又は１００％であってよい。
　配列番号１で表されるアミノ酸配列との同一性は、Ｋａｒｌｉｎ　ａｎｄ　ＡｌｔｓｃｈｕｌによるアルゴリズムＢＬＡＳＴ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９３）９０：５８７３－７）によって決定することができる。このアルゴリズムに基づいて、ＢＬＡＳＴＮ又はＢＬＡＳＴＸと呼ばれるプログラムが開発されている（Ａｌｔｓｃｈｕｌ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９０）２１５：４０３－１０）。ＢＬＡＳＴに基づくＢＬＡＳＴＸによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメーターは例えばｓｃｏｒｅ＝５０、Ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３とする。ＢＬＡＳＴとＧａｐｐｅｄ　ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法は公知であるＮＣＢＩ（Ｎａｔｉａｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ）のウェブサイトの情報を参照することができる。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１つ以上のアミノ酸残基が改変されたポリペプチドであってよく、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～７個又は１～５個のアミノ酸残基が改変されていてよい。改変されているアミノ酸残基は３個以内であってよく、２個以内であってよく、１個であってよい。
　改変は、置換、欠失及び挿入からなる群より選ばれる１つ以上であってよく、置換であってよい。改変は保存的改変であってよい。保存的改変であるとは、改変前のポリペプチドと比較して目的とする触媒活性を減じないようなアミノ酸残基の改変であることを意味する。
　また、前記改変は、改変前のアミノ酸残基とは異なる天然アミノ酸への置換であってよい。さらに、前記置換に用いられる天然アミノ酸は、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、メチオニン、リシン、アルギニン及びプロリンからなる群より選ばれる１つ以上であってよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における４４位のヒスチジン残基、１１７位のフェニルアラニン残基、１４１位のメチオニン残基、１５６位のスレオニン残基、１８２位のヒスチジン残基、１８６位のグルタミン残基、２５３位のトリプトファン残基、及び２６０位のリシン残基からなる群より選ばれる１つ以上のアミノ酸残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が改変された配列を含むポリペプチドであってよく、還元的アミノ化反応に対する触媒活性がより一層向上することから、１４１位のメチオニン残基、１８２位のヒスチジン残基、２５３位のトリプトファン残基、及び２６０位のリシン残基からなる群より選ばれる１つ以上のアミノ酸残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が改変された配列を含むポリペプチドであってよく、さらに、１４１位のメチオニン残基、２５３位のトリプトファン残基、及び２６０位のリシン残基からなる群より選ばれる１つ以上のアミノ酸残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が改変された配列を含むポリペプチドであってよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における４４位のヒスチジン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がヒスチジン残基以外のアミノ酸残基に置換された配列を含むポリペプチドであってよい。当該ポリペプチドは、配列番号２で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであってよい。配列番号２においてＸで表されるアミノ酸残基は、アラニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、グリシン残基、イソロイシン残基、リシン残基、ロイシン残基、メチオニン残基、アスパラギン残基、プロリン残基、グルタミン残基、アルギニン残基、セリン残基、スレオニン残基、バリン残基、トリプトファン残基又はチロシン残基である。
　還元的アミノ化反応に対する触媒活性がより一層向上することから、４４位のヒスチジン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基は、メチオニン残基に置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における４４位のヒスチジン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がメチオニン残基に置換したアミノ酸配列（Ｈ４４Ｍ）を含んでいてよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１１７位のフェニルアラニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がフェニルアラニン残基以外のアミノ酸残基に置換された配列を含むポリペプチドであってよい。当該ポリペプチドは、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであってよい。配列番号３においてＸで表されるアミノ酸残基は、アラニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、グリシン残基、ヒスチジン残基、イソロイシン残基、リシン残基、ロイシン残基、メチオニン残基、アスパラギン残基、プロリン残基、グルタミン残基、アルギニン残基、セリン残基、スレオニン残基、バリン残基、トリプトファン残基又はチロシン残基である。
　還元的アミノ化反応に対する触媒活性がより一層向上することから、１１７位のフェニルアラニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、ロイシン残基に置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１１７位のフェニルアラニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がロイシン残基に置換したアミノ酸配列（Ｆ１１７Ｌ）を含んでいてよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１４１位のメチオニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、メチオニン残基以外のアミノ酸残基に置換された配列を含むポリペプチドであってよい。当該ポリペプチドは、配列番号４で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであってよい。配列番号４においてＸで表されるアミノ酸残基は、アラニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、グリシン残基、ヒスチジン残基、イソロイシン残基、リシン残基、ロイシン残基、アスパラギン残基、プロリン残基、グルタミン残基、アルギニン残基、セリン残基、スレオニン残基、バリン残基、トリプトファン残基又はチロシン残基である。
　還元的アミノ化反応に対する触媒活性がより一層向上することから、１４１位のメチオニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基は、チロシン残基、トリプトファン残基、バリン残基、スレオニン残基、セリン残基、アルギニン残基、ロイシン残基、リシン残基、イソロイシン残基、ヒスチジン残基、フェニルアラニン残基及びアラニン残基からなる群より選ばれる一つ以上のアミノ酸残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１４１位のメチオニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がチロシン残基、トリプトファン残基、バリン残基、スレオニン残基、セリン残基、アルギニン残基、ロイシン残基、リシン残基、イソロイシン残基、ヒスチジン残基、フェニルアラニン残基、又はアラニン残基に置換したアミノ酸配列（Ｍ１４１Ｙ、Ｍ１４１Ｗ、Ｍ１４１Ｖ、Ｍ１４１Ｔ、Ｍ１４１Ｓ、Ｍ１４１Ｒ、Ｍ１４１Ｌ、Ｍ１４１Ｋ、Ｍ１４１Ｉ、Ｍ１４１Ｈ、Ｍ１４１Ｆ又はＭ１４１Ａ）を含んでいてよい。さらに、１４１位のメチオニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基は、チロシン残基、トリプトファン残基、バリン残基、リシン残基、イソロイシン残基、フェニルアラニン残基及びアラニン残基からなる群より選ばれる一つ以上のアミノ酸残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１４１位のメチオニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がチロシン残基、トリプトファン残基、バリン残基、リシン残基、イソロイシン残基、ヒスチジン残基、フェニルアラニン残基、又はアラニン残基に置換したアミノ酸配列（Ｍ１４１Ｙ、Ｍ１４１Ｗ、Ｍ１４１Ｖ、Ｍ１４１Ｋ、Ｍ１４１Ｉ、Ｍ１４１Ｈ、Ｍ１４１Ｆ、又はＭ１４１Ａ）を含んでいてよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１５６位のスレオニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がスレオニン残基以外のアミノ酸残基に置換された配列を含むポリペプチドであってよい。当該ポリペプチドは、配列番号５で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであってよい。配列番号５においてＸで表されるアミノ酸残基は、アラニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、グリシン残基、ヒスチジン残基、イソロイシン残基、リシン残基、ロイシン残基、アスパラギン残基、プロリン残基、グルタミン残基、アルギニン残基、セリン残基、スレオニン残基、バリン残基、トリプトファン残基又はチロシン残基である。
　還元的アミノ化反応に対する触媒活性がより一層向上することから、１５６位のスレオニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、セリン残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１５６位のスレオニン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がセリン残基に置換したアミノ酸配列（Ｔ１５６Ｓ）を含んでいてよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１８２位のヒスチジン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がヒスチジン残基以外のアミノ酸残基に置換された配列を含むポリペプチドであってよい。当該ポリペプチドは、配列番号６で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであってよい。配列番号６においてＸで表されるアミノ酸残基は、アラニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、グリシン残基、イソロイシン残基、リシン残基、ロイシン残基、メチオニン残基、アスパラギン残基、プロリン残基、グルタミン残基、アルギニン残基、セリン残基、スレオニン残基、バリン残基、トリプトファン残基又はチロシン残基である。
　還元的アミノ化反応に対する触媒活性がより一層向上することから、１８２位のヒスチジン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、チロシン残基、グルタミン残基、メチオニン残基、ロイシン残基、グリシン残基、フェニルアラニン残基及びアラニン残基からなる群より選ばれる一つ以上のアミノ酸残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１８２位のヒスチジン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、チロシン残基、グルタミン残基、メチオニン残基、ロイシン残基、グリシン残基、フェニルアラニン残基、又はアラニン残基に置換したアミノ酸配列（Ｈ１８２Ｙ、Ｈ１８２Ｑ、Ｈ１８２Ｍ、Ｈ１８２Ｌ、Ｈ１８２Ｇ、Ｈ１８２Ｆ、又はＨ１８２Ａ）を含んでいてよい。さらに、１８２位のヒスチジン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、メチオニン残基、ロイシン残基、及びフェニルアラニン残基からなる群より選ばれる一つ以上のアミノ酸残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１８２位のヒスチジン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、メチオニン残基、ロイシン残基、又はフェニルアラニン残基に置換したアミノ酸配列（Ｈ１８２Ｍ、Ｈ１８２Ｌ、又はＨ１８２Ｆ）を含んでいてよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１８６位のグルタミン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がグルタミン残基以外のアミノ酸残基に置換された配列を含むポリペプチドであってよい。当該ポリペプチドは、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであってよい。配列番号７においてＸで表されるアミノ酸残基は、アラニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、グリシン残基、ヒスチジン残基、イソロイシン残基、リシン残基、ロイシン残基、メチオニン残基、アスパラギン残基、プロリン残基、アルギニン残基、セリン残基、スレオニン残基、バリン残基、トリプトファン残基又はチロシン残基である。
　還元的アミノ化反応に対する触媒活性がより一層向上することから、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１８６位のグルタミン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、メチオニン残基及びグルタミン酸残基からなる群より選ばれる一つ以上のアミノ酸残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１８６位のグルタミン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、メチオニン残基又はグルタミン酸残基に置換したアミノ酸配列（Ｑ１８６Ｍ、又はＱ１８６Ｅ）を含んでいてよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における２５３位のトリプトファン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がトリプトファン残基以外のアミノ酸残基に置換された配列を含むポリペプチドであってよい。当該ポリペプチドは、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであってよい。配列番号８においてＸで表されるアミノ酸残基は、アラニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、グリシン残基、ヒスチジン残基、イソロイシン残基、リシン残基、ロイシン残基、メチオニン残基、アスパラギン残基、プロリン残基、グルタミン残基、アルギニン残基、セリン残基、スレオニン残基、バリン残基、又はチロシン残基である。
　還元的アミノ化反応に対する触媒活性がより一層向上することから、２５３位のトリプトファン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、チロシン残基、バリン残基、スレオニン残基、セリン残基、アルギニン残基、グルタミン残基、プロリン残基、アスパラギン残基、メチオニン残基、ロイシン残基、リシン残基、イソロイシン残基、ヒスチジン残基、フェニルアラニン残基及びアラニン残基からなる群より選ばれる一つ以上のアミノ酸残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における２５３位のトリプトファン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、チロシン残基、バリン残基、スレオニン残基、セリン残基、アルギニン残基、グルタミン残基、プロリン残基、アスパラギン残基、メチオニン残基、ロイシン残基、リシン残基、イソロイシン残基、ヒスチジン残基、フェニルアラニン残基、又はアラニン残基に置換したアミノ酸配列（Ｗ２５３Ｙ、Ｗ２５３Ｖ、Ｗ２５３Ｔ、Ｗ２５３Ｓ、Ｗ２５３Ｒ、Ｗ２５３Ｑ、Ｗ２５３Ｐ、Ｗ２５３Ｎ、Ｗ２５３Ｍ、Ｗ２５３Ｌ、Ｗ２５３Ｋ、Ｗ２５３Ｉ、Ｗ２５３Ｈ、Ｗ２５３Ｆ、又はＷ２５３Ａ）を含んでいてよい。さらに、２５３位のトリプトファン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、ロイシン残基、イソロイシン残基及びヒスチジン残基からなる群より選ばれる一つ以上のアミノ酸残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における２５３位のトリプトファン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、ロイシン残基、イソロイシン残基又はヒスチジン残基に置換したアミノ酸配列（Ｗ２５３Ｌ、Ｗ２５３Ｉ、又はＷ２５３Ｈ）を含んでいてよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における２６０位のリシン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基がリシン残基以外のアミノ酸残基に置換された配列を含むポリペプチドであってよい。当該ポリペプチドは、配列番号９で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであってよい。配列番号９においてＸで表されるアミノ酸残基は、アラニン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、フェニルアラニン残基、グリシン残基、ヒスチジン残基、イソロイシン残基、ロイシン残基、メチオニン残基、アスパラギン残基、プロリン残基、グルタミン残基、アルギニン残基、セリン残基、スレオニン残基、バリン残基、トリプトファン残基又はチロシン残基である。
　還元的アミノ反応に対する触媒活性がより一層向上することから、２６０位のリシン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、チロシン残基、トリプトファン残基、スレオニン残基、セリン残基、アルギニン残基、グルタミン残基、アスパラギン残基、メチオニン残基、ロイシン残基、ヒスチジン残基、グリシン残基、フェニルアラニン残基、グルタミン酸残基及びアラニン残基からなる群より選ばれる一つ以上のアミノ酸残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における２６０位のリシン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、チロシン残基、トリプトファン残基、スレオニン残基、セリン残基、アルギニン残基、グルタミン残基、アスパラギン残基、メチオニン残基、ロイシン残基、ヒスチジン残基、グリシン残基、フェニルアラニン残基、グルタミン酸残基又はアラニン残基に置換したアミノ酸配列（Ｋ２６０Ｙ、Ｋ２６０Ｗ、Ｋ２６０Ｔ、Ｋ２６０Ｓ、Ｋ２６０Ｒ、Ｋ２６０Ｑ、Ｋ２６０Ｎ、Ｋ２６０Ｍ、Ｋ２６０Ｌ、Ｋ２６０Ｈ、Ｋ２６０Ｇ、Ｋ２６０Ｆ、Ｋ２６０Ｅ、又はＫ２６０Ａ）を有していてよい。さらに、２６０位のリシン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、グルタミン残基、メチオニン残基、グルタミン酸残基及びアスパラギン残基からなる群より選ばれる一つ以上のアミノ酸残基により置換された配列を含んでいてよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号１で表されるアミノ酸配列における２６０位のリシン残基に相当する部位に位置するアミノ酸残基が、グルタミン残基、メチオニン残基、グルタミン酸残基又はアスパラギン残基に置換したアミノ酸配列（Ｋ２６０Ｑ、Ｋ２６０Ｍ、Ｋ２６０Ｅ、又はＫ２６０Ｎ）を有していてよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号４で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がバリン残基であるアミノ酸配列ａ１（変異：Ｍ１４１Ｖ）、配列番号４で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がチロシン残基であるアミノ酸配列ａ２（変異：Ｍ１４１Ｙ）、配列番号６で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がロイシン残基であるアミノ酸配列ａ３（変異：Ｈ１８２Ｌ）、配列番号８で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がヒスチジン残基であるアミノ酸配列ａ４（変異：Ｗ２５３Ｈ）、又は配列番号９で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がグルタミン酸残基であるアミノ酸配列ａ５（変異：Ｋ２６０Ｅ）を含むことができる。
　本実施形態に係るポリペプチドは、アミノ酸配列ａ１、ａ２、ａ３、ａ４又はａ５と９０％以上の配列同一性を有する配列を含むことができる。前記配列同一性は、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上であってよく、１００％であってよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、アミノ酸配列ａ１、ａ２、ａ３、ａ４又はａ５における１つ以上のアミノ酸残基が改変された配列を含むポリペプチドであってよく、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～７個又は１～５個のアミノ酸残基が改変されていてよい。改変されているアミノ酸残基は３個以内であってよく、２個以内であってよく、１個であってよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、その他のポリペプチド又はタンパク質と融合していてもよい。すなわち、本実施形態に係るポリペプチドは、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか一方又は両方に、配列番号１で表されるアミノ酸配列における１つのアミノ酸残基が改変された配列と９０％以上の配列同一性を有する配列以外のアミノ酸配列（他のアミノ酸配列）を有していてよい。当該他のアミノ酸配列は、例えば、タグ配列であってよい。
　当該他のアミノ酸配列を有するポリペプチド又はタンパク質としては、例えば、数個（例えば６個、１０個等）のＨｉｓ（ヒスチジン）残基からなるタグであるＨｉｓタグ（６ＸＨｉｓ、１０ＸＨｉｓ等）、ストレプトアビジンのビオチンへの結合部位への結合能を有するアミノ酸配列を含むストレプトアビジン結合ペプチドタグ（ＳＢＰタグ）、ＧＳＴ（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　Ｓ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）、ＨＡ（インフルエンザ凝集素）、イムノグロプリン定常領域、Ｂ－ガラクトシダーゼ、ＭＢＰ（マルトース結合タンパク質）、ＦＬＡＧ（Ｈｏｐｐ，Ｔ．Ｐ．ｅｔ　ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８８）６，１２０４－１２１０）、インフルエンザ凝集素（ＨＡ）、ヒトｃ－ｍｙｃの断片、ＶＳＶ－ＧＰの断片、ｐ１８ＨＩＶの断片、Ｔ７－ｔａｇ、ＨＳＶ－ｔａｇ、Ｅ－ｔａｇ、ＳＶ４０Ｔ抗原の断片、Ｉｃｋ　ｔａｇ、α－ｔｕｂｕｌｉｎの断片、Ｂ－ｔａｇ、ＰｒｏｔｅｉｎＣの断片、Ｓｔａｇ、ＳｔｒｅｐＴａｇ、ＨａｌｏＴａｇ等が挙げられる。Ｈｉｓタグは、例えば、配列番号１１で表されるアミノ酸配列であってよい。ＳＢＰタグは、例えば、配列番号１２で表されるアミノ酸配列であってよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか一方又は両方に、ストレプトアビジン結合ペプチドタグ配列及びＨｉｓタグ配列からなる群より選ばれる１つ以上を含んでいてよく、Ｃ末端にストレプトアビジン結合ペプチドタグ配列（ＳＢＰタグ）及びＨｉｓタグ配列を含んでいてよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、配列番号４で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がバリン残基であるアミノ酸配列ａ１（変異：Ｍ１４１Ｖ）、配列番号４で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がチロシン残基であるアミノ酸配列ａ２（変異：Ｍ１４１Ｙ）、配列番号６で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がロイシン残基であるアミノ酸配列ａ３（変異：Ｈ１８２Ｌ）、配列番号８で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がヒスチジン残基であるアミノ酸配列ａ４（変異：Ｗ２５３Ｈ）、又は配列番号９で表され、Ｘで表されるアミノ酸残基がグルタミン酸残基であるアミノ酸配列ａ５（変異：Ｋ２６０Ｅ）と、タグ配列とを有することができる。本実施形態に係るポリペプチドは、アミノ酸配列ａ１、ａ２、ａ３、ａ４又はａ５と、タグ配列と、に加えて、アミノ酸配列ａ１、ａ２、ａ３、ａ４又はａ５と、タグ配列と、を連結するリンカー配列を有していてよい。リンカー配列は、例えば、ＧＧＳＳ又はＧＧＳで表されるアミノ酸配列を有していてよい。
　一実施形態に係るポリペプチドは、アミノ酸配列ａ１、ａ２、ａ３、ａ４又はａ５と、アミノ酸配列ａ１、ａ２、ａ３、ａ４又はａ５のＣ末端に結合し、アミノ酸配列：ＧＧＳＳで表されるリンカー配列と、当該リンカー配列に結合し、配列番号１１で表されるＨｉｓタグとから構成されるポリペプチドＸ１であってよい。ポリペプチドＸ１における１つ以上のアミノ酸残基は改変されていてよく、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～７個又は１～５個のアミノ酸残基が改変されていてよい。ポリペプチドＸ１において、改変されているアミノ酸残基は３個以内であってよく、２個以内であってよく、１個であってよい。
　一実施形態に係るポリペプチドは、アミノ酸配列ａ１、ａ２、ａ３、ａ４又はａ５と、アミノ酸配列ａ１、ａ２、ａ３、ａ４又はａ５のＣ末端に結合した配列番号１２で表されるＳＢＰタグと、配列番号１１で表されるＨｉｓタグと、Ｈｉｓタグ及びＳＢＰタグを連結し、アミノ酸配列ＧＧＳで表されるリンカー配列とから構成されるポリペプチドＸ２であってよい。ポリペプチドＸ２における１つ以上のアミノ酸残基は改変されていてよく、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～７個又は１～５個のアミノ酸残基が改変されていてよい。ポリペプチドＸ２において、改変されているアミノ酸残基は３個以内であってよく、２個以内であってよく、１個であってよい。
　本実施形態に係るポリペプチドは、他のポリペプチドとの混合物として用いられても良く、単離・生成された状態で用いられてもよい。他のポリペプチドとの混合物として用いられた場合、目的生成物を単離・生成する工程を経て目的とするアミノ酸を得ることができる。
　本実施形態に係るポリペプチドが単量体として存在する場合におけるアミノ酸残基数は、３００以上、３１０以上、３２０以上、又は３２５以上であってよく、３３０であってよい。また、４００以下、３９０以下、３８０以下、又は３７５以下であってよい。ポリペプチドのアミノ酸残基数は、３００以上４００以下であってよい。
　また、前記他のアミノ酸配列がＮ末端及びＣ末端のいずれにも付加されていない場合、本実施形態に係るポリペプチドのアミノ酸残基数は、３００以上、３１０以上、３２０以上、又は３２５以上であってよく、３３０であってよい。また、３６０以下、３５０以下、３４０以下、又は３３５以下であってよい。
　さらに、前記他のアミノ酸配列がＮ末端及びＣ末端のいずれか一方又は両方に付加されている場合、本実施形態に係るポリペプチドのアミノ酸残基数は、３４０以上、３５０以上、３６０以上、又は３７０以上であってよく、３７４であってよい。また、４００以下、３９０以下、３８０以下、又は３７５以下であってよい。
　なお、本実施形態に係るポリペプチドは単量体として用いてもよく、２つ以上の単量体同士が会合した形態で用いてもよい。さらに本実施形態に係るポリペプチドはホモダイマーであってよい。
　本実施形態に係るポリペプチドがホモダイマーである場合、アミノ酸残基数は単量体として存在する場合の２倍となる。
　Ｎ末端に保護基を有するペプチド化合物は、３０残基以下、２５残基以下、２０残基以下、１５残基以下、１４残基以下、１３残基以下、１２残基以下、１１残基以下、１０残基以下、９残基以下、８残基以下、７残基以下、６残基以下、５残基以下、４残基以下、３残基以下又は２残基以下、また、２残基以上、３残基以上、４残基以上、５残基以上、６残基以上、７残基以上、８残基以上、９残基以上、１０残基以上、１１残基以上、１２残基以上、１３残基以上、１４残基以上、又は１５残基以上のアミノ酸からなるペプチド化合物であってよい。また、Ｎ末端に保護基を有するペプチド化合物は、２～１０残基、２～８残基、２～６残基、又は２～４残基のアミノ酸からなるペプチド化合物等であってよい。また、Ｎ末端に保護基を有するペプチド化合物は、５～３０残基、７～２５残基、８～１５残基、９～１４残基、１０～１３残基、又は１１残基のアミノ酸からなるペプチド化合物等であってよい。また、アミノ酸（１）の残基をＮ末端に含むペプチド化合物が挙げられる。
　工程（Ｂ）においては、工程（Ｂ）において得られる析出物（精製結果物）中に含まれる準特定不純物の含有量が低減されるように精製結果物が析出されてよい。工程（Ｂ）においては、精製結果物の純度が９５モル％以上となるように精製結果物が析出されてよい。前記純度は、９６モル％以上であることがより好ましく、９７モル％以上であることがさらに好ましく、９８モル％以上であることがよりさらに好ましく、９９モル％以上であることが特に好ましく、１００モル％であることが最も好ましい。本明細書における「純度」は、広義には、純度を測定する対象となる物質中に含まれる、目的物質の存在割合を意味し、狭義には、精製結果物中に含まれる、精製目的物のリチウム塩及び特定不純物のリチウム塩の物質量の合計を基準とした、精製目的物のリチウム塩の物質量の割合を意味する。
　工程（Ｂ）においては、精製結果物中の不純物含有率が５モル％以下となるように精製結果物が析出されてよい。前記不純物含有率は４モル％以下であることが好ましく、３％モル以内であることがより好ましく、２モル％以内であることがさらにこのましく、１モル％以内であることが特に好ましく、０モル％であることが最も好ましい。本明細書における「不純物含有率」とは、精製結果物中に含まれる、精製目的物のリチウム塩及び特定不純物のリチウム塩の物質量の合計を基準とした、特定不純物のリチウム塩の物質量を意味する。
　純度又は不純物含有率は、例えば、核磁気共鳴装置、ガスクロマトグラフィー、又は高速液体クロマトグラフィーにより測定することができる。高速液体クロマトグラフィーを用いる場合、ＵＶ吸収ピークの面積比により算出できる。下記式１ａに純度を求める式を、下記式２ａに不純物含有率を求める式を示す。
　ここで、単位ＵＶ吸収ピーク面積当たりの物質量とは、精製目的物又は特定不純物のＵＶ吸収ピーク面積を物質量で除した値である。
　工程（Ｂ）においては、精製結果物の見掛け純度が９５％以上となるように精製結果物が析出されてよい。見掛け純度は、９６％以上であることがより好ましく、９７％以上であることがさらに好ましく、９８％以上であることがよりさらに好ましく、９９％以上であることが特に好ましく、１００％であることが最も好ましい。本明細書における「見掛け純度」とは、精製結果物を高速液体クロマトグラフィーで精製目的物と特定不純物に分離した後に測定される両者の特定波長におけるＵＶ吸収ピーク面積の合計を基準とした、精製目的物の前記特定波長におけるＵＶ吸収ピーク面積の割合を意味する。
　工程（Ｂ）においては、精製結果物の見掛け不純物含有率が５％以下となるように精製結果物が析出されてよい。見掛け不純物含有率は４％以下であることが好ましく、３％以内であることがより好ましく、２％以内であることがさらにこのましく、１％以内であることが特に好ましく、０％であることが最も好ましい。本明細書における「見掛け不純物含有率」とは、精製結果物を高速液体クロマトグラフィーで精製目的物と特定不純物に分離した後に測定される両者の特定波長におけるＵＶ吸収ピーク面積の合計を基準とした、特定不純物特定波長におけるＵＶ吸収ピーク面積の割合を意味する。
　下記式１ｂに見掛け純度を求める式を、下記式２ｂに見掛け不純物含有率を求める式を示す。
　本明細書における特定波長とは、精製目的物が有する保護基が示す極大吸収波長から前後１０％以内の波長である。また、極大吸収波長が複数存在する場合、その中の最大吸収波長における吸収強度を基準として、３０％以上の吸収強度を示す極大吸収波長であれば、極大吸収波長としていずれを選択してもよい。また、複数存在する極大吸収波長の内、長波長側を選択することでノイズの影響を軽減することができる。また、選択した極大吸収波長の吸収強度に応じて試料濃度を調整することができる。測定の際には、試料濃度の調整の容易さやノイズ軽減の観点から最も好ましいと思われる極大吸収波長を選択することができる。
　例えば、Ｆｍｏｃ基であれば２５４ｎｍ、Ｂｏｃ基であれば１９７ｎｍ、Ｃｂｚ基であれば２１０ｎｍのＵＶ光を特定波長のＵＶ光とすることができる。
　一実施形態に係る製造方法においては、リチウム塩を得ることで、精製対象物におけるβ－アラニン又はその誘導体の含有率を低減することができる。言い換えれば、本実施形態に係る製造方法は、β－アラニン又はその誘導体の含有率を低減する工程を備えていてもよい。
　本実施形態に係る製造方法は、リチウム塩以外の塩にする工程を更に備えていてよい。具体的には、例えば、一実施形態に係る製造方法により得られたリチウム塩を脱塩して、フリー体のアミノ酸又はフリー体のペプチド化合物を得ることができる。脱塩は、既知の方法によって行うことができる。さらに、得られたフリー体のアミノ酸又はペプチド化合物から、リチウム塩以外の塩を製造することができる。リチウム塩以外の塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸との塩；酢酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、ステアリン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸等の有機酸との塩；アルカリ金属（ナトリウム又はカリウム）との塩；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩；アンモニウム塩等を例示することができる。
　また一実施形態に係る製造方法は、得られたフリー体のアミノ酸又はペプチド化合物をアミノ酸又はペプチド化合物と常法により連結することで、目的とするアミノ酸残基数のペプチド化合物、例えば環状部を有するペプチド化合物（環状ペプチド化合物）を生成することができる。
　本実施形態に係る環状ペプチド化合物のアミノ数残基数は、３０以下、２５以下、２０以下、１５以下、１４以下、１３以下、１２以下、１１以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下であってよい。また、本実施形態に係る環状ペプチド化合物は、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、又は１５以上のアミノ酸からなるペプチド化合物であってよい。また、本実施形態に係る環状ペプチド化合物のアミノ数残基数は、２以上１０以下、２以上８以下、２以上６以下、又は２以上４以下であってよい。また、本実施形態に係る環状ペプチド化合物のアミノ数残基数は、５以上３０以下、７以上２５以下、８以上１５以下、９以上１４以下、１０以上１３以下、又は１１であってよい。
　環状ペプチド化合物の「環状部」とは、２以上のアミノ酸残基が連結され、形成されている環状の部分を意味する。環状ペプチド化合物の環状部を構成するアミノ酸残基数は、５以上１４以下、６以上１４以下、７以上１４以下、８以上１４以下、９以上１４以下、１０以上１４以下、５以上１３以下、６以上１３以下、７以上１３以下、８以上１３以下、９以上１３以下、１０以上１３以下、５以上１２以下、６以上１２以下、７以上１２以下、８以上１２以下、９以上１２以下、１０以上１２以下、５以上１１以下、６以上１１以下、７以上１１以下、８以上１１以下、９以上１１以下、１０以上１１以下、又は１１であってよい。環状部は、アミド結合、炭素－炭素結合形成反応、Ｓ－Ｓ結合、チオエーテル結合、トリアゾール結合等の共有結合を介して形成されることが好ましく、アミノ酸残基が連結した直鎖状のペプチド化合物のＮ末端側の基とＣ末端側の基とを結合させて形成させることができる。具体的には、例えば、アミノ酸残基が連結した直鎖状のペプチド化合物のＮ末端側のアミノ基とＣ末端側のカルボキシル基とを結合させて形成させることができる。環化は、アミド結合のような炭素－窒素結合による環化、エステル結合及びエーテル結合のような炭素－酸素結合による環化、チオエーテル結合のような炭素－硫黄結合による環化、炭素－炭素結合による環化、硫黄－硫黄結合による環化、又は複素環構築による環化など、どのような形態であってもよい。これらのうちでは、アミド結合及び炭素－炭素結合などの共有結合を介した環化が好ましく、側鎖のカルボキシ基と主鎖のアミノ基によるアミド結合を介した環化がより好ましい。環化に用いられるカルボキシ基及びアミノ基等の位置は、主鎖上のものでも、側鎖上のものでもよく、環化可能な位置にあれば、特に制限されない。
　本実施形態に係る環状ペプチド化合物は、環原子数が１５以上４６以下であってよい。本明細書において「環原子数」とは、環の最も内側の部分を含む環式化合物の原子（環原子）の数を意味し、化合物が複数の環を有する場合は当該原子の数が最も多い環の当該原子の数として定義する。なお、２つの環が一部の原子を共有して存在している場合、共有する原子の数が小さい方を使用して、それぞれの環の環原子数を算出する。「環原子数」について具体例で更に説明すると、例えば、この方法を用いると、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）の環原子数は５であり、タクロリムス（ＦＫ５０６）の環原子数は２１である。
　本実施形態に係る環状ペプチド化合物の環原子数は、例えば、３４以上４６以下、３４以上４３以下、３４以上４０以下、３４以上３７以下、３４以上３６以下、又は３４であってよい。環原子数の算出に使用される環原子は、炭素原子、水素原子、窒素原子、酸素原子、硫黄原子、リン原子、及びケイ素原子からなる群から選択されてもよく、炭素原子、水素原子、窒素原子、及び酸素原子からなる群から選択されてもよい。
　本実施形態に係る環状ペプチド化合物は、環状部に加えて、直鎖部を有していてもよい。環状ペプチド化合物のアミノ酸残基数の具体的態様は、上述したペプチド化合物のアミノ酸残基数の具体的態様と同様である。環状ペプチド化合物が直鎖部を有する場合、環状部と直鎖部を合わせたアミノ酸残基数が同範囲に入ることが好ましい。また、環状ペプチド化合物が直鎖部を有する場合、環状部を構成するアミノ酸残基数は、５以上１５以下、６以上１５以下、６以上１４以下、７以上１４以下、８以上１４以下、又は７以上１３以下が好ましく、７以上１２以下、又は８以上１１以下がより好ましく、９以上１１以下が更に好ましく、１０又は１１が特に好ましく、直鎖部を構成するアミノ酸残基数は、１以上８以下、１以上７以下、１以上６以下、１以上５以下、又は１以上４以下であることが好ましく、１以上３以下であることがより好ましい。
　本実施形態に係る環状ペプチド化合物の分子量は、特に限定されるものではないが、例えば、５００以上、５５０以上、６００以上、６５０以上、７００以上、７５０以上、８００以上、８５０以上、９００以上、又は９５０以上であってよく、１０００以上、１１００以上、１２００以上、１３００以上、又は１４００以上が好ましい。本実施形態に係るペプチド化合物の分子量の上限としては、特に限定されるものではないが、５０００以下、４０００以下、３０００以下、２５００以下、又は２０００以下が好ましい。本明細書における分子量は、化合物分子を構成する原子の原子量の総和（単位：「ｇ／ｍｏｌ」）を意味し、分子構造式に含まれる原子の原子量の総和を算出することで得られる（単位「ｇ／ｍｏｌ」）。本明細書においては分子量の単位を省略することがある。なお、ペプチド化合物の分子量は、実施例に記載の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）により測定することができる。本実施形態に係る（ｉ）１つ又は複数のＮ置換アミノ酸残基を含有するペプチド化合物は、１つ又は複数のＮ置換アミノ酸残基を含有するペプチド化合物である限りにおいて、上述したペプチド化合物の具体的態様を制限なく適用できる。
　本実施形態に係る環状ペプチド化合物は、１つ又は複数のＮ置換アミノ酸残基を含有していてよく、少なくとも３つのＮ置換アミノ酸残基を含むことが好ましく、少なくとも４つのＮ置換アミノ酸残基を含むことがより好ましく、少なくとも５つのＮ置換アミノ酸残基を含むことが更に好ましい。Ｎ置換アミノ酸残基は、Ｎ置換環状ペプチド化合物中に連続して存在していても、不連続に存在していてもよい。
　本発明は、以下の実施例によってさらに例示されるが、これに限定されるものではない。本発明の実施に用いたテトラヒドロフラン、アセトニトリル、水酸化リチウム水溶液、リチウムｔｅｒｔ－ブトキシドテトラヒドロフラン溶液、及び、（Ｓ）－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－フェニルプロパン酸に代表されるアミノ酸誘導体の原料類は、特に記載したもの以外、商業的供給業者から入手し、精製せずに用いた。なお、実施例中では表１，２に記載の略号を使用した。
高速液体クロマトグラフィーの条件１
装置：Ｗａｔｅｒｓ　ＡＱＵＩＴＹ　Ｈ－ｃｌａｓｓ／ＱＤａ
カラム：（Ｉ．Ｄ．ｘ長さ（ｍｍ）、粒子径（μｍ））：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３（２．１ｘ５０、１．８）
移動相：Ａ）　０．０５％　ＴＦＡ　Ｈ２Ｏ、Ｂ）　０．０５％　ＴＦＡ　ＭｅＣＮ
勾配（Ａ／Ｂ）：１００／０～２／９８（５．０分間）⇒２／９８（１．０分間）⇒１００／０（０．０１分間）⇒１００／０（２．０分間）
流速（ｍｌ／分）：０．５
カラム温度：３０℃
高速液体クロマトグラフィーの条件２
装置：Ｗａｔｅｒｓ　ＡＱＵＩＴＹ　Ｈ－ｃｌａｓｓ
カラム：（Ｉ．Ｄ．ｘ長さ（ｍｍ）、粒子径（μｍ））：Ａｓｃｅｎｔｉｓ　Ｅｘｐｒｅｓｓ　ＲＰ－Ａｍｉｄｅ（２．１ｘ５０、２．７）
移動相：Ａ）　０．０５％　ＴＦＡ　Ｈ２Ｏ、Ｂ）　０．０５％　ＴＦＡ　ＭｅＣＮ
勾配（Ａ／Ｂ）：９５／５～０／１００（４．０分間）⇒０／１００（０．５分間）⇒９５／５（０．１分間）⇒９５／５（１．４分間）
流速（ｍｌ／分）：０．５
カラム温度：３５℃
高速液体クロマトグラフィーの条件３
装置：Ｗａｔｅｒｓ　ＡＱＵＩＴＹ　Ｈ－ｃｌａｓｓ／ＱＤａ
カラム：（Ｉ．Ｄ．ｘ長さ（ｍｍ）、粒子径（μｍ））：Ａｓｃｅｎｔｉｓ　Ｅｘｐｒｅｓｓ　Ｃ１８（３．０ｘ５０、２．７）
移動相：Ａ）　０．０５％　ＴＦＡ　Ｈ２Ｏ、Ｂ）　０．０５％　ＴＦＡ　ＭｅＣＮ
勾配（Ａ／Ｂ）：９５／５～０／１００（５．０分間）⇒０／１００（１．０分間）⇒９５／５（０．０１分間）⇒９５／５（２．０分間）
流速（ｍｌ／分）：０．５
カラム温度：３０℃
高速液体クロマトグラフィーの条件４
装置：Ｗａｔｅｒｓ　ＡＱＵＩＴＹ　Ｈ－ｃｌａｓｓ／ＱＤａ
カラム（Ｉ．Ｄ．ｘ長さ（ｍｍ）、粒子径（μｍ））：ＤＡＩＣＥＬ　ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＣ－３（４．６ｘ１５０、３）
移動相：Ａ）　０．０５％　ＴＦＡ　Ｈ２Ｏ、Ｂ）　０．０５％　ＴＦＡ　ＭｅＣＮ
勾配（Ａ／Ｂ）：９５／５～４０／６０（２０．０分間）⇒９５／５（０．１分間）⇒９５／５（４．９分間）
流速（ｍｌ／分）：１．０
カラム温度：３０℃
調製例１：Ｗ２５３Ｈ－ＳＢＰ－Ｈｉｓ調製
　配列番号８で表され、ＸがＨｉｓであるアミノ酸配列に対し、Ｃ末端にＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅタグ配列（ＧＴＤＥＫＴＴＧＷＲＧＧＨＶＶＥＧＬＡＧＥＬＥＱＬＲＡＲＬＥＨＨＰＱ）、リンカー配列（ＧＧＳ）及びＨｉｓタグ配列（ＨＨＨＨＨＨ）を付加した遺伝子を合成し、大腸菌発現用ベクターにクローニングした。この発現ベクターをＢＬ２１（ＤＥ３）大腸菌株（Ｎｏｖａｇｅｎ）に導入し、Ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ　Ｅｘｐｒｅｓｓ　Ｉｎｓｔａｎｔ　ＴＢ　Ｍｅｄｉｕｍ　（Ｎｏｖａｇｅｎ）を用いて１８℃で２日間培養することで最終調製品である目的タンパク質を発現させた（配列番号１０、Ｗ２５３Ｈ）。
合成例１：（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸粗精製物の合成
　２－シクロペンチル－２－オキソ－酢酸ナトリウム塩（３．９ｇ、２４ｍｍｏｌ）、メチルアミン塩酸塩（８．１ｇ、１２０ｍｍｏｌ）、Ｄ－グルコース（８．７ｇ、４８ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジ（２－ヒドロキシエチル）グリシン（７．８ｇ、４８ｍｍｏｌ）を蒸留水（５０ｍＬ）に溶解させ、反応容器の外温を２５℃に設定した。５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（６．０ｍＬ）を加え、ｐＨ８．８に調整した。ＮＡＤＰ＋（０．１８ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、Ｄ－グルコース脱水素酵素（３．８ｍｇ、９６０Ｕ、２５０Ｕ／ｍｇ）及びＮＭＡＡＤＨ改変酵素溶液（最終調製品、１．６ｍＬ、酵素として４３ｍｇ相当、１．１質量％）を加え、反応容器の外温２５℃で２４時間撹拌した。濃塩酸（３．０ｍＬ）を加えてｐＨ１．９に調整し、１時間撹拌した。不溶物をセライトパッドでろ過し、セライトパッドを蒸留水（２０ｍＬ）で洗浄し、（Ｓ）－２－シクロペンチル－２－（メチルアミノ）酢酸溶液（１２０ｇ）を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件１を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））を行った。保持時間１．５分で、ｍ／ｚ＝１５８．１（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認され、目的とする（Ｓ）－２－シクロペンチル－２－（メチルアミノ）酢酸溶液が得られていることを確認した。
　（Ｓ）－２－シクロペンチル－２－（メチルアミノ）酢酸溶液（６０ｇ、１２ｍｍｏｌ相当）に１０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、ｐＨを１２．０に調整した。得られた溶液を反応容器の外温４０℃で減圧下濃縮乾固した。蒸留水（３０ｍＬ）を加え、濃塩酸（０．７５ｍＬ）を加えてｐＨ９．７に調整した。アセトニトリル（１０ｍＬ）、Ｎ－カルボベンゾキシオキシスクシンイミド（４．２ｇ、１７ｍｍｏｌ）、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１０ｍＬ）を加え１時間撹拌した。５０ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（１．５ｍＬ）を加え３時間撹拌した。Ｎ－カルボベンゾキシオキシスクシンイミド（１．２ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を加え９０分撹拌した。５０ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍＬ）を加え１８時間撹拌した。濃塩酸（８．０ｍＬ）を加え、有機層に目的物を抽出し、得られた有機層を反応容器の外温４０℃で減圧下濃縮乾固した。メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１５ｍＬ）を加え、有機層を５％リン酸水素二ナトリウム水溶液で２回（１０ｍＬ×２）、２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で１回（１０ｍＬ）洗浄し、目的物を水層に抽出した。得られた水層を合わせメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２０ｍＬ）、濃塩酸（１．５ｍＬ）を加えることで目的物を有機層へ再抽出した。得られた有機層を反応容器の外温４０℃で減圧下濃縮乾固した。メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（３０ｍＬ）、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）を加え目的物を水層に抽出した。得られた水層をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（３０ｍＬ）で洗浄した。トルエン（３０ｍＬ）、濃塩酸（３．０ｍＬ）を加えて目的物を有機層に再抽出した。得られた有機層を反応容器の外温４０℃で減圧下濃縮乾固し、（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸粗精製物（２．８ｇ）を得た。
合成例２：（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸粗精製物の合成
　２－シクロペンチル－２－オキソ－酢酸ナトリウム塩（５．３ｇ、３３ｍｍｏｌ），メチルアミン塩酸塩（１１ｇ、１６０ｍｍｏｌ）、Ｄ－グルコース（１２ｇ、６５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジ（２－ヒドロキシエチル）グリシン（１１ｇ、６５ｍｍｏｌ）を蒸留水（６９ｍＬ）に溶解させ、反応容器の外温を２５℃に設定した。５０ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（４．８ｍＬ）を加え、ｐＨ９．２に調整した。ＮＡＤＰ＋（０．２５ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、Ｄ－グルコース脱水素酵素（２６ｍｇ、１３００Ｕ、５０Ｕ／ｍｇ）、ＮＭＡＡＤＨ改変酵素溶液（最終調製品、２．０ｍＬ、酵素として５３ｍｇ相当、１．０質量％）を加え、反応容器の外温２５℃で２１時間撹拌した（反応転化率９９％以上）。濃塩酸（７．５ｍＬ）を加えてｐＨ１．９に調整し、１時間撹拌した。不溶物をセライトパッドでろ過し、セライトパッドを蒸留水（１１ｍＬ）で洗浄し、（Ｓ）－２－シクロペンチル－２－（メチルアミノ）酢酸溶液（１３０ｇ）を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件１を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））を行った。保持時間１．４分で、ｍ／ｚ＝１５８．１（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認され、目的とする（Ｓ）－２－シクロペンチル－２－（メチルアミノ）酢酸溶液が得られていることを確認した。
　（Ｓ）－２－シクロペンチル－２－（メチルアミノ）酢酸溶液（２７ｇ、６．５ｍｍｏｌ相当）に５０ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（３．２ｍＬ）を加え、ｐＨを１２．３に調整した。得られた溶液を反応容器の外温４０℃で濃縮乾固した。反応容器の外温２５℃で蒸留水（２４ｍＬ）、濃塩酸（０．５３ｍＬ）を加えてｐＨを９．２に調製した。メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（５．３ｍＬ）、アセトニトリル（２．７ｍＬ）、Ｎ－カルボベンゾキシオキシスクシンイミド（１．８ｇ、７．２ｍｍｏｌ）を加えて１０５分撹拌した。アセトニトリル（１．６ｍＬ）を加えて更に３０分撹拌した。５０ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（０．８ｍＬ）を加えてｐＨ９．３に調整し、１０５分撹拌した。Ｎ－カルボベンゾキシオキシスクシンイミド（１．０ｇ、３．９ｍｍｏｌ）を加えて１０５分撹拌した。５０ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍＬ）を加えてｐＨ９．２に調整した後、Ｎ－カルボベンゾキシオキシスクシンイミド（１．１ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を加えて１３時間撹拌した。濃塩酸（４．３ｍＬ）を加えてｐＨ０．４に調整した後、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（３．０ｍＬ）を加え、目的物を有機層へ抽出した。得られた水層にメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（５．３ｍＬ）を加えて、目的物を有機層へ抽出した。得られた有機層を合わせ２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１１ｍＬ）を加えることで塩基性にし、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（５．３ｍＬ）を加えて目的物を水層へ抽出した。水層にメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１１ｍＬ）を加えて洗浄した。水層にメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１１ｍＬ）、濃塩酸（２．１ｍＬ）を加えて、ｐＨ０．０に調整し、目的物を有機層に抽出し、（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸粗精製物溶液（１４ｇ）を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件１を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））を行った。保持時間３．９分で、ｍ／ｚ＝２９２．１（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認され、目的とする（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸粗精製物が得られていることを確認した。
合成例３：（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸リチウム塩種晶の合成法
　（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸（１．０ｇ、３．４ｍｍｏｌ、市販品）をテトラヒドロフラン（５．０ｍｌ、５．０ｖ／ｗ）に溶解し、反応容器の外温２５℃で撹拌した。リチウムｔｅｒｔ－ブトキシド（０．３０ｇ、３．８ｍｍｏｌ）を加え、結晶の析出を確認した。テトラヒドロフラン（２０ｍｌ、２０ｖ／ｗ）を加え１時間撹拌した。結晶をろ過し、得られた結晶をテトラヒドロフラン（５．０ｍｌ、５．０ｖ／ｗ）で洗浄した。反応容器の外温４０℃で減圧下３時間乾燥することで（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸リチウム塩（０．９０ｇ、収率８８％）を得た。
比較例１及び実施例１：アミノ酸誘導体の、フリー体での精製及びリチウム塩での精製
　アミノ酸誘導体の、フリー体（カルボン酸）での精製とリチウム塩での精製とを比較した。不純物を含むアミノ酸誘導体をフリー体又はリチウム塩としてそれぞれ単離し、見掛け純度を比較した。見掛け純度又は見掛け不純物含有率は高速液体クロマトグラフィーのＵＶ吸収ピーク面積比により算出した。見掛け純度は式１ｂ、見かけ不純物含有率は式２ｂより算出した。
比較例１：（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸（フリー体）の精製
　合成例１で得た（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸粗精製物（１．４ｇ、（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸として理論収量１．８ｇ、６．０ｍｍｏｌ相当）をトルエン（３．０ｍＬ、１．７ｖ／ｗ）に溶解し、反応容器の外温２５℃で撹拌翼を用いて撹拌した。ヘプタン（１．０ｍＬ、０．６ｖ／ｗ）、種晶（（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸（フリー体）の結晶、市販品、５．０ｍｇ）を加えて１５分撹拌し、結晶の析出を確認した。ヘプタン（５．５ｍＬ、３．１ｖ／ｗ）を１時間かけて滴下し、更に３０分撹拌した。反応容器の外温０℃で更に１時間撹拌した。結晶をろ過し、得られた結晶をヘプタン／トルエン（ｖ／ｖ）＝４／１（４．０ｍＬ、２．３ｖ／ｗ）で洗浄した。反応容器の外温４０℃で減圧下１時間乾燥することで（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸（１．３ｇ、収率７３％（合成例１の２－シクロペンチル－２－オキソ－酢酸ナトリウム塩を基準に算出））を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件３を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））による構造確認を行った。保持時間２．６分で、不純物の一つであるＣｂｚ－β－Ａｌａ－ＯＨが有するｍ／ｚ＝２２４．１（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認された。保持時間３．９分で、Ｃｂｚ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨが有するｍ／ｚ＝２９２．１（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認された。２１０ｎｍの測定波長で、Ｃｂｚ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ及びＣｂｚ－β－Ａｌａ－ＯＨのＵＶ吸収ピーク面積を測定し、前記式１ｂ及び２ｂを用いて見掛け純度及び見掛け不純物含有率を計算した。見掛け純度及び見掛け不純物含有率の計算は、合成例１で得た（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸粗精製物（精製前）、及び、比較例１により得られた（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸（精製後）の両方に対して行った。結果を表３に示す。
実施例１－１：（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸のリチウム塩での精製
　比較例１で得た（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸（５００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２．５ｍｌ、５．０ｖ／ｗ）に溶解し、反応容器の外温２５℃で撹拌翼を用いて撹拌した。４Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．４７ｍｌ、１．９ｍｍｏｌ）、蒸留水（０．５０ｍｌ、１．０ｖ／ｗ）を加え反応容器の外温４０℃で２０分撹拌した。アセトニトリル（５．０ｍｌ、１０ｖ／ｗ）を１０分間かけて加え、種晶（合成例３により合成、５．０ｍｇ）を加えて４０分撹拌し、結晶の析出を確認した。反応容器の外温を２５℃に設定し、３時間撹拌した。反応容器の外温を０℃に設定し３０分撹拌し、アセトニトリル（２．５ｍｌ、５．０ｖ／ｗ）を５分間かけて加え、更に３０分撹拌した。アセトニトリル（５．０ｍｌ、１０ｖ／ｗ）を５分間かけて加え、３０分撹拌した。結晶をろ過し、得られた結晶を蒸留水／アセトニトリル（ｖ／ｖ）＝５／９５（２．０ｍＬ、４．０ｖ／ｗ）で洗浄した。反応容器の外温４０℃で減圧下３時間乾燥することで（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸リチウム塩（３６０ｍｇ、収率７１％、比較例１で得た（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸を基準に算出）を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件３を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））及びそれに基づく見掛け純度分析を行った。保持時間２．６分で、不純物の一つであるＣｂｚ－β－Ａｌａ－ＯＨのピークが確認された。保持時間３．９分で、Ｃｂｚ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨが有するｍ／ｚ＝２９２．１（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認された。２１０ｎｍの測定波長で、Ｃｂｚ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ及びＣｂｚ－β－Ａｌａ－ＯＨのＵＶ吸収ピーク面積を測定し、前記式１ｂ及び式２ｂを用いて見掛け純度及び見掛け不純物含有率を計算した。見掛け純度及び見掛け不純物含有率の計算は、比較例１により得られた（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸（精製前）、及び、実施例１－１により得られた（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸リチウム塩（精製後）の両方に対して行った。結果を表４に示す。
実施例１－２：（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸リチウム塩での精製
　合成例２で得た（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸粗生成物溶液（７．０ｇ、（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸として理論収量０．９５ｇ、３．３ｍｍｏｌ相当）を反応容器の外温４０℃で濃縮乾固した。アセトニトリル（３．２ｍＬ、３．４ｖ／ｗ）を加え、反応容器の外温２５℃で撹拌翼を用いて撹拌した。蒸留水（０．５３ｍＬ、０．６ｖ／ｗ）、４Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．９０ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を添加して２０分撹拌した。アセトニトリル（２．７ｍＬ、２．８ｖ／ｗ）を１０分間かけて加え、種晶（合成例３により合成、５．０ｍｇ）を加えて１５分撹拌した。アセトニトリル（５．３ｍＬ、５．６ｖ／ｗ）を２０分間かけて加え１７時間撹拌した。アセトニトリル（５．３ｍＬ、５．６ｖ／ｗ）を３０分間かけて加え、１時間撹拌した。アセトニトリル（５．３ｍＬ、５．６ｖ／ｗ）を３０分間かけて加え、１時間撹拌した。結晶をろ過し、得られた結晶を蒸留水／アセトニトリル（ｖ／ｖ）＝５／９５（３．２ｍＬ、３．４ｖ／ｗ）で洗浄し、反応容器の外温４０℃で減圧下２．５時間乾燥することで（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸リチウム塩（収量：６２０ｍｇ、収率：６４％、合成例２の２－シクロペンチル－２－オキソ－酢酸ナトリウム塩を基準に算出）を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件１を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））及びそれに基づく見掛け純度分析を行った。保持時間２．８分で、不純物の一つであるＣｂｚ－β－Ａｌａ－ＯＨのピークが確認された。保持時間３．９分で、Ｃｂｚ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨが有するｍ／ｚ＝２９２．１（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認された。２１０ｎｍの測定波長で、Ｃｂｚ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ及びＣｂｚ－β－Ａｌａ－ＯＨのＵＶ吸収ピーク面積を測定し、前記式１ｂ及び式２ｂを用いて見掛け純度及び見掛け不純物含有率を計算した。見掛け純度及び見掛け不純物含有率の計算は、合成例２で得た（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸粗精製物溶液（精製前）、及び、実施例１－２により得られた（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸リチウム塩（精製後）の両方に対して行った。結果を表５に示す。
　高速液体クロマトグラフィー４の条件を用いて、キラル分析を実施した。測定波長は２１０ｎｍを使用した。（Ｓ）体および（Ｒ）体の保持時間は標品（Ａｍａｔｅｋ社より購買）の分析により、（Ｓ）体が１６．７分、（Ｒ）体が１７．３分と確認した。キラル分析の結果、実施例１－２により得られた（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－２－シクロペンチル－酢酸リチウム塩（精製後）中に（Ｒ）体は検出されず９９．９％ｅｅ以上の光学純度であることを確認した。
実施例２：アミノ酸誘導体のリチウム塩化による精製
　リチウム塩化によるアミノ酸誘導体の精製効果を評価した。特定の保護基を有するアミノ酸誘導体に同じ保護基を有する３－アミノプロパン酸（β－アラニン）を不純物として加え、混合物とした。混合物をリチウム塩化により単離精製し、混合物と単離化合物の見掛け純度を比較することで精製効果を検証した。見掛け不純物含有率は実施例１に記載の方法を同じ手法を用いて算出した。
実施例２－１：（Ｒ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－フェニル－プロパン酸リチウム塩の合成
　（Ｒ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－フェニル－プロパン酸（５００ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）、３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（２０ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（１８ｍｌ、３６ｖ／ｗ）、蒸留水（２．０ｍｌ、４．０ｖ／ｗ）を加え反応容器の外温２５℃で撹拌翼を用いて撹拌した。４Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．０８１ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ）を３分間かけて加え、１０分撹拌した。４Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．０８１ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ）を３分間かけて加え、１時間撹拌し、結晶の析出を確認した。更に、４Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．０８１ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ）を３分間かけて加え、１時間撹拌する操作を２回繰り返した。結晶をろ過し、得られた結晶を蒸留水／テトラヒドロフラン（ｖ／ｖ）＝１０／９０（５．０ｍＬ、１０ｖ／ｗ）で洗浄した。反応容器の外温４０℃で減圧下２時間乾燥することで（Ｒ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－フェニル－プロパン酸リチウム塩（４３０ｍｇ、収率８４％）を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件１を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））を行った。保持時間４．２分に、Ｆｍｏｃ－β－Ｐｈｇ－ＯＨが有するｍ／ｚ＝３８８．２（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認された。高速液体クロマトグラフィーの条件２を用いて、見掛け純度分析を行った。保持時間２．４分で、不純物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨのピークが確認された。保持時間２．８分で、Ｆｍｏｃ－β－Ｐｈｇ－ＯＨのピークが確認された。２５４ｎｍの測定波長で、Ｆｍｏｃ－β－Ｐｈｇ－ＯＨ及びＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨのＵＶ吸収ピーク面積を測定し、前記式１ｂ及び式２ｂを用いて見掛け純度及び見掛け不純物含有率を計算した。見掛け純度及び見掛け不純物含有率の計算は、実施例２－１を行う前後（精製前後）において行った。結果を表６に示す。
実施例２－２：（Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボン酸リチウム塩の合成
　（Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボン酸（５００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（２３ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（６．８ｍｌ、１４ｖ／ｗ）、蒸留水（０．７５ｍｌ、１．５ｖ／ｗ）を加え反応容器の外温２５℃で撹拌翼を用いて撹拌した。４Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．３７ｍｌ、１．５ｍｍｏｌ）を２分間かけて加え、１時間撹拌した。テトラヒドロフラン（５．０ｍｌ、１０ｖ／ｗ）を１０分間かけて加え２０分撹拌し、結晶の析出を確認した。テトラヒドロフラン（７．５ｍｌ、１５ｖ／ｗ）を１５分間かけて加え２０分撹拌した。テトラヒドロフラン（５．０ｍｌ、１０ｖ／ｗ）を１０分間かけて加え４０分撹拌した。結晶をろ過し、得られた結晶を蒸留水／テトラヒドロフラン（ｖ／ｖ）＝５／９５（７．５ｍＬ、１５ｖ／ｗ）で洗浄した。反応容器の外温４０℃で減圧下２時間乾燥することで（Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボン酸リチウム塩（４００ｍｇ、収率７９％）を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件１を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））を行った。保持時間３．９分で、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨが有するｍ／ｚ＝３３８．１（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認された。高速液体クロマトグラフィーの条件２を用いて、見掛け純度分析を行った。保持時間２．４分で、不純物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨのピークが確認された。保持時間２．６分で、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨのピークが確認された。２５４ｎｍの測定波長で、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ及びＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨのＵＶ吸収ピーク面積を測定し、前記式１ｂ及び式２ｂを用いて見掛け純度及び見掛け不純物含有率を計算した。見掛け純度及び見掛け不純物含有率の計算は、実施例２－２を行う前後（精製前後）において行った。結果を表７に示す。
実施例２－３：（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－３－フェニルプロパン酸リチウム塩の合成
　（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－３－フェニルプロパン酸（５００ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）、３－（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロパン酸（１８ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）にアセトニトリル（６．８ｍｌ、１４ｖ／ｗ）、蒸留水（０．７５ｍｌ、１．５ｖ／ｗ）を加え反応容器の外温２５℃で撹拌翼を用いて撹拌した。４Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．４４ｍｌ、１．８ｍｍｏｌ）を２分間かけて加え、１０分撹拌し、結晶の析出を確認した。アセトニトリル（１３ｍｌ、２５ｖ／ｗ）を３０分間かけて加え９０分撹拌した。結晶をろ過し、得られた結晶を蒸留水／アセトニトリル（ｖ／ｖ）＝５／９５（５．０ｍＬ、１０．０ｖ／ｗ）で洗浄した。反応容器の外温４０℃で減圧下３時間乾燥することで（Ｓ）－２－（ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ）－３－フェニルプロパン酸リチウム塩（４６０ｍｇ、収率９０％）を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件１を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））を行った。保持時間３．９分で、Ｃｂｚ－ＭｅＰｈｅ－ＯＨが有するｍ／ｚ＝３１４．１（Ｍ＋Ｈ）＋のピークが確認された。高速液体クロマトグラフィーの条件２を用いて、見掛け純度分析を行った。保持時間１．６分で、不純物であるＣｂｚ－β－Ａｌａ－ＯＨのピークが確認された。保持時間２．５分で、Ｃｂｚ－ＭｅＰｈｅ－ＯＨのピークが確認された。２１０ｎｍの測定波長で、Ｃｂｚ－ＭｅＰｈｅ－ＯＨ及びＣｂｚ－β－Ａｌａ－ＯＨのＵＶ吸収ピーク面積を測定し、前記式１ｂ及び式２ｂを用いて見掛け純度及び見掛け不純物含有率を計算した。見掛け純度及び見掛け不純物含有率の計算は、実施例２－３を行う前後（精製前後）において行った。結果を表８に示す。
実施例２－４：（Ｓ）－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－フェニルプロパン酸リチウム塩の合成
　（Ｓ）－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－フェニルプロパン酸（５００ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）、３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（１８ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）にアセトニトリル（９．８ｍｌ、２０ｖ／ｗ）、蒸留水（０．２５ｍｌ、０．５ｖ／ｗ）を加え反応容器の外温２５℃で撹拌翼を用いて撹拌した。１Ｍリチウムｔｅｒｔ－ブトキシドテトラヒドロフラン溶液（１．０ｍｌ、１．０ｍｍｏｌ）を５分間かけて加え３０分撹拌した。更に、１Ｍリチウムｔｅｒｔ－ブトキシドテトラヒドロフラン溶液（１．０ｍｌ、１．０ｍｍｏｌ）を５分間かけて加え３０分撹拌した。アセトニトリル（１０ｍｌ、２０ｖ／ｗ）を１時間かけて加え、２時間撹拌した。結晶をろ過し、得られた結晶を蒸留水／アセトニトリル（ｖ／ｖ）＝１／９９（５．０ｍＬ、１０ｖ／ｗ）で洗浄した。反応容器の外温４０℃で減圧下２時間乾燥することで（Ｓ）－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－フェニルプロパン酸リチウム塩（３６０ｍｇ、収率７１％）を得た。
　高速液体クロマトグラフィーの条件１を用いて、質量分析（ＭＳ（ＥＳＩ））を行った。保持時間３．５分で、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨが有するｍ／ｚ＝１６６．０（Ｍ－Ｂｏｃ）＋のピークが確認された。高速液体クロマトグラフィーの条件１を用いて、見掛け純度分析を行った。保持時間２．５分で、不純物であるＢｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨのピークが確認された。保持時間３．５分で、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨのピークが確認された。１９７ｎｍの測定波長で、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ及びＢｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨのＵＶ吸収ピーク面積を測定し、前記式１ｂ及び式２ｂを用いて見掛け純度及び見掛け不純物含有率を計算した。見掛け純度及び見掛け不純物含有率の計算は、実施例２－４を行う前後（精製前後）において行った。結果を表９に示す。

Claims (15)

  1. 　以下の工程（Ａ）及び（Ｂ）を含む、アミノ酸の塩若しくはペプチド化合物の塩又はこれらの溶媒和物の製造方法：
    　工程（Ａ）；精製目的物である以下（ｉ）と不純物である以下（ｉｉ）との混合物である精製対象物にリチウム含有物質を接触させる工程、
    　　（ｉ）Ｎ末端に保護基を有する前記アミノ酸又はＮ末端に保護基を有する前記ペプチド化合物
    　　（ｉｉ）前記精製目的物以外の化合物、
    　工程（Ｂ）；前記精製目的物のリチウム塩を析出させる工程。
  2. 　以下の工程（Ａ）及び（Ｂ）を含む、精製対象物から不純物を除去する方法：
    　工程（Ａ）；精製目的物である以下（ｉ）と不純物である以下（ｉｉ）との混合物である精製対象物にリチウム含有物質を接触させる工程、
    　　（ｉ）Ｎ末端に保護基を有するアミノ酸又はＮ末端に保護基を有するペプチド化合物
    　　（ｉｉ）前記精製目的物以外の化合物、
    　工程（Ｂ）；前記精製目的物のリチウム塩を析出させる工程。
  3. 　前記精製目的物のＮ末端の保護基がカルバメート系保護基である、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 　前記精製目的物が保護基としてフルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル基又は２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル基を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 　前記不純物が、精製目的物以外の、Ｎ末端に保護基を有するアミノ酸又はＮ末端に保護基を有するペプチド化合物である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 　前記不純物がＮ末端に保護基を有するβ－アラニンである、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 　前記工程（Ａ）で前記精製目的物のリチウム塩を形成する、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 　前記工程（Ｂ）において、前記精製目的物のリチウム塩又はその溶媒和物を固体として析出させる、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 　前記工程（Ｂ）において、前記精製目的物のリチウム塩又はその溶媒和物を結晶として析出させる、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 　前記工程（Ａ）が第一の有機溶媒存在下において行われる、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 　前記工程（Ｂ）が第二の有機溶媒存在下において行われる、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 　前記工程（Ｂ）が水の存在下において行われる、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 　前記アミノ酸又は前記ペプチド化合物を構成するＮ末端アミノ酸が、下記一般式（１）で表される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
    ［前記一般式（１）において、
    　ｎは１以上３以下の数を表し、
    　Ｒ１が複数存在するときは、Ｒ１は互いに同一であっても異なっていてもよく、
    　Ｒ１及びＲ２は水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロシクリル基若しくはヘテロアリール基又はこれらの置換基からなる群より選ばれる２つ以上が結合した置換基を表し、これらの基は、置換基を有していてよく、これらの基は飽和炭化水素基又は不飽和炭化水素基であってよく、
    　Ａは炭素原子を表し、
    　Ｂは水素原子又はアミノ酸若しくはペプチド化合物との結合点を示し、
    　Ｚはフルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル基又は２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル基を表し、
    　Ｒ１及びＲ２はＮ及びＡと共に結合して環を形成していてもよく、その場合、Ｒ１及びＲ２は、環形成に関わらない場合の置換基の構造から水素原子が１つ引き抜かれた構造の置換基であり、
    　ｎが２である場合、Ｒ２及び２つ存在するＲ１の内いずれか１つ以上は水素原子ではない。］
  14. 　前記工程（Ｂ）において得られる析出物の純度が９５モル％以上である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 　アミノ酸のリチウム塩若しくはペプチド化合物のリチウム塩又はこれらの溶媒和物であって、
    　前記アミノ酸のリチウム塩は、下記一般式（１）で表されるアミノ酸のリチウム塩を純度９９モル％以上又は見掛け純度９９％以上で含有し、
    　前記ペプチド化合物のリチウム塩は、下記一般式（１）で表されるアミノ酸の残基を有するペプチド化合物のリチウム塩を純度９９モル％以上又は見掛け純度９９％で含有する、アミノ酸のリチウム塩若しくはペプチド化合物のリチウム塩又はこれらの溶媒和物。
    ［前記一般式（１）において、
    　ｎは１以上３以下の数を表し、
    　Ｒ１が複数存在するときは、Ｒ１は互いに同一であっても異なっていてもよく、
    　Ｒ１及びＲ２は水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロシクリル基若しくはヘテロアリール基又はこれらの置換基からなる群より選ばれる２つ以上が結合した置換基を表し、これらの基は、置換基を有していてよく、これらの基は飽和炭化水素基又は不飽和炭化水素基であってよく、
    　Ａは炭素原子を表し、
    　Ｂは水素原子又はアミノ酸若しくはペプチド化合物との結合点を示し、
    　Ｚはフルオレニルメトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル基又は２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル基を表し、
    　Ｒ１及びＲ２はＮ及びＡと共に結合して環を形成していてもよく、その場合、Ｒ１及びＲ２は、環形成に関わらない場合の置換基の構造から水素原子が１つ引き抜かれた構造の置換基であり、
    　ｎが２である場合、Ｒ２及び２つ存在するＲ１の内いずれか１つ以上は水素原子ではない。］

     
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