WO2023191088A1 - 植物由来有機分子触媒 - Google Patents

植物由来有機分子触媒 Download PDF

Info

Publication number
WO2023191088A1
WO2023191088A1 PCT/JP2023/013678 JP2023013678W WO2023191088A1 WO 2023191088 A1 WO2023191088 A1 WO 2023191088A1 JP 2023013678 W JP2023013678 W JP 2023013678W WO 2023191088 A1 WO2023191088 A1 WO 2023191088A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
optionally substituted
polysaccharide
compound
fraction
Prior art date
Application number
PCT/JP2023/013678
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
浩一 和田
泰久 浅野
康夫 加藤
慎 日比
Original Assignee
協和ファーマケミカル株式会社
公立大学法人富山県立大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 協和ファーマケミカル株式会社, 公立大学法人富山県立大学 filed Critical 協和ファーマケミカル株式会社
Publication of WO2023191088A1 publication Critical patent/WO2023191088A1/ja

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
    • B01J31/02—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing organic compounds or metal hydrides
    • B01J31/06—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing organic compounds or metal hydrides containing polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B61/00—Other general methods
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C213/00—Preparation of compounds containing amino and hydroxy, amino and etherified hydroxy or amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C213/04—Preparation of compounds containing amino and hydroxy, amino and etherified hydroxy or amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton by reaction of ammonia or amines with olefin oxides or halohydrins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C215/00—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C215/42—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having amino groups or hydroxy groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C215/44—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having amino groups or hydroxy groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton bound to carbon atoms of the same ring or condensed ring system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/20—Oxygen atoms
    • C07D215/22—Oxygen atoms attached in position 2 or 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/22—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D321/00—Heterocyclic compounds containing rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D317/00 - C07D319/00
    • C07D321/02—Seven-membered rings
    • C07D321/04—Seven-membered rings not condensed with other rings
    • C07D321/06—1,3-Dioxepines; Hydrogenated 1,3-dioxepines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0045—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Galacturonans, e.g. methyl ester of (alpha-1,4)-linked D-galacturonic acid units, i.e. pectin, or hydrolysis product of methyl ester of alpha-1,4-linked D-galacturonic acid units, i.e. pectinic acid; Derivatives thereof

Definitions

  • the present invention relates to a plant-derived organic molecular catalyst and a method for producing the same.
  • the compound represented by formula (Z) (hereinafter also referred to as “compound (Z)”) is a compound in which an oxygen atom or a nitrogen atom is bonded to two consecutive carbon atoms, and at least one carbon atom is bonded to two consecutive carbon atoms. Since it has two asymmetric carbon atoms, multiple optical isomers exist.
  • the optically active compound (Z) is one of the chemical structures commonly used in the field of pharmaceutical or agricultural chemical development, and can also be used as a ligand for a transition metal catalyst used in an asymmetric reaction.
  • X represents -O- or -NR f -
  • Y represents -O-, -NR g - or -S-
  • R a , R b , R c , R d , R e , R f and R g each independently represent a hydrogen atom or an organic group, and an asterisk indicates that the carbon atom is an asymmetric carbon.
  • Compound (Z) is specifically, for example, 1,2-diol (when X and Y are both -O-), 1,2-amino alcohol (when X is -O- and Y is -NH- or when X is -NH- and Y is -O-), 1,2-diamine (when X and Y are both -NH-), 1,2-mercaptoalcohol (when X is -O- and Y is -S-), 1,2-mercaptoamine (when X is -NH- and Y is -S-).
  • optically active compounds Z
  • the method of obtaining an optically active compound (Z) by reacting an easily available compound having an epoxide structure or an aziridine structure with a nucleophile and stereoselectively opening the ring is highly atomically efficient and useful. be.
  • an optically active compound (Z) by reacting a nucleophile with a compound having an epoxide structure
  • A a method of optically resolving a racemate (for example, Patent Documents 1 to 3, (References 1, 2)
  • B A method of introducing an asymmetric carbon at another position and separating the resulting diastereomers (e.g., Patent Document 4, Non-Patent Document 3),
  • C A method of introducing an asymmetric carbon at another position and separating the resulting diastereomers (for example, Patent Document 4, Non-Patent Document 3),
  • C Method of using an optically active catalyst
  • method (A) includes a method using an optically active acid as a resolving agent, a separation method using column chromatography using an optically active packing material, and a method using an enzyme derived from an animal or microorganism. Methods are known.
  • methods for obtaining compound (Z) by reacting a compound having an aziridine structure with a nucleophile include (D) a method of optically resolving a racemate (for example, Patent Document 6), (E) a method of optically active There is a method of carrying out an asymmetric ring-opening reaction between a compound having an aziridine structure and a nucleophile in the presence of a catalyst (for example, Non-Patent Documents 7 and 8).
  • the desired optically active compound (Z) can be produced in a short process, but in many cases a metal catalyst or a strong acid catalyst is used as the optically active catalyst. use Therefore, in methods (C) and (E), the compounds or nucleophiles having a heterocyclic three-membered ring structure that can be used are limited, and an expensive metal catalyst recovery step is required.
  • Patent No. 4406483 Patent No. 4406482 US Patent No. 5,981,267 Japanese Patent Application Publication No. 9-157258 Japanese Patent Application Publication No. 2003-206266 Japanese Patent Application Publication No. 2011-83934 Patent No. 6630667 Patent No. 6678442
  • Patent Document 7 Non-Patent Documents 10, 11
  • Patent Document 8 the catalytic activity of a processed plant product is improved by treating the processed plant product with an enzyme
  • an object of the present invention is to provide a new catalyst that can promote the asymmetric ring-opening reaction of epoxide or aziridine using a nucleophile.
  • the present inventors removed lipids and soluble polysaccharides from plant products to obtain crude pectic polysaccharides, and then treated the crude pectic polysaccharides with enzymes (e.g., lipase, galactanase), acids, alkalis, or ion exchange resins. By repeating the treatment and purification, the active substance of the catalyst was discovered and the present invention was completed.
  • enzymes e.g., lipase, galactanase
  • the present invention provides the following [1] to [30].
  • [1] A polysaccharide with a degree of polymerization of 16 to 40, consisting only of galactose or only galactose and 1 to 3 molecules of arabinose, in which the sugar units are linked in an unbranched chain. polysaccharides.
  • [2] A polysaccharide that contains the polysaccharide according to [1] as a partial structure, has a sugar composition of 90 to 99.5 mol% galactose and 0.5 to 10 mol% arabinose, and has an average molecular weight of 2500 to 9000.
  • composition according to [5] for use as a catalyst.
  • composition according to [6] which is used as a catalyst for promoting an asymmetric ring-opening reaction of a compound having an oxirane, aziridine or thiirane ring using a nucleophile.
  • an optionally substituted C 2-6 alkenyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, an optionally substituted C 2-6 alkynyl group, or an optionally substituted C 6-10 aryl group can be, R 2 and R 3 may be bonded to each other to form a cyclic structure.
  • R 5 and R 6 each independently represent a hydrogen atom, an optionally substituted C 1-6 alkyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkyl group, an optionally substituted C 2- 6 alkenyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, an optionally substituted C 2-6 alkynyl group, or an optionally substituted C 6-10 aryl group, R 5 and R 6 may be bonded to each other to form a cyclic structure,
  • the compound represented by formula (2) is not water or hydrogen sulfide.
  • a method for producing a compound represented by formula (3) comprising a step of obtaining a compound represented by formula (3).
  • X, Y, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are the same as defined above.
  • [14] The method according to [13], wherein the compound represented by formula (1) is a compound represented by formula (1a).
  • R 1 and R 4 each independently represent a hydrogen atom, an optionally substituted C 1-6 alkyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkyl group, an optionally substituted C 2- 6 alkenyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, an optionally substituted C 2-6 alkynyl group, or an optionally substituted C 6-10 aryl group
  • R 2a and R 3a each independently represent a C 1-6 alkylene group, a C 1-6 oxyalkylene group, a C 3-6 cycloalkylene group, a C 2-6 alkenylene group, a C 3-6 cycloalkenylene group, or a C 2 -6 alkynylene group or C 6-10 arylene group.
  • R 5a and R 6a are each an optionally substituted C 1-6 alkylene group, an optionally substituted C 1-6 oxyalkylene group, an optionally substituted C 3-6 cyclo an alkylene group, an optionally substituted C 2-6 alkenylene group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenylene group, an optionally substituted C 2-6 alkynylene group or a C 6-10 arylene group; be.
  • R 5 and R 6 each independently represent a hydrogen atom, an optionally substituted C 1-6 alkyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkyl group, an optionally substituted C 2- 6 alkenyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, an optionally substituted C 2-6 alkynyl group, or an optionally substituted C 6-10 aryl group, R 5 and R 6 may be bonded to each other to form a cyclic structure,
  • the compound represented by formula (2) is not water or hydrogen sulfide.
  • a method for producing a compound represented by formula (3) comprising a step of obtaining a compound represented by formula (3).
  • Y, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are the same as defined above.
  • [24] Use of galactan in which 16 to 24 galactoses are ⁇ 1,4-linked as a catalyst.
  • R A is an optionally substituted alkylcarbonyl group
  • R B is an optionally substituted aralkyl group
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group
  • R D is an optionally substituted aryl group
  • R E is an optionally substituted aralkyl group
  • n is an integer from 13 to 21.
  • R A is an optionally substituted alkylcarbonyl group
  • R B is an optionally substituted aralkyl group
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group
  • R F is an optionally substituted aryl group.
  • R A is an optionally substituted alkylcarbonyl group
  • R B is an optionally substituted aralkyl group
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group
  • R D is an optionally substituted aryl group
  • R F is an optionally substituted aryl group.
  • R A is an optionally substituted alkylcarbonyl group
  • R B is an optionally substituted aralkyl group
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group
  • R D is an optionally substituted aryl group
  • R F is an optionally substituted aryl group.
  • a new catalyst that can promote the asymmetric ring-opening reaction of epoxide or aziridine using a nucleophile. Furthermore, according to the present invention, by further refining inexpensively available processed plant products, a catalyst having a higher specific activity than the catalysts disclosed in Patent Documents 7 to 8 and Non-Patent Documents 10 to 11 is provided. and can be reused. Furthermore, according to the present invention, products and catalysts are easier to recover than in reactions using processed plant products. Furthermore, it is possible to provide a catalyst containing fewer impurities (for example, allergens) that pose a problem in the production of pharmaceuticals.
  • impurities for example, allergens
  • Example 1 is a photograph of an SDS-PAGE gel of fractions in each purification step of Example A3. This is the amino acid sequence of rhamnogalacturonic acid lyase of Aspergillus luchuensis mut.kawachii NBRC 4308 in Example A3, and the underlined amino acids are the amino acids that overlap with the peptide of LipRGL.
  • 2 is a chromatogram showing changes over time when LP-LMW was digested with enzyme A in Example A6.
  • (a) is a graph showing the catalytic activity of the LP-LMW-derived fraction and the AL-LMW-derived fraction in Example A6 (7).
  • (b) is a graph showing the stereoselectivity of the LP-LMW-derived fraction and AL-LMW-derived fraction in Example A6 (7).
  • (a) is a graph showing the catalytic activity of each NG fraction in Example A9.
  • (b) is a graph showing the stereoselectivity of each NG fraction in Example A9. It is a graph showing the arabinose content of each NG fraction in Example A9.
  • (a) is a chromatogram obtained when "fraction NG3-4 kDa" was fractionated by HILIC-HPLC in Example A10.
  • (b) is a graph showing a chromatogram of each fraction after fractionation.
  • Example A10(3) is a chromatogram obtained when "Fraction NG2-3 kDa” in Example A10(3) was fractionated by HILIC-HPLC.
  • (b) is a chromatogram when "pool a" and “pool b” in Example A10(3) were each purified by preparative HPLC.
  • (c) is a graph in which chromatograms of HILIC-HPLC analysis of each fraction after fractionation are superimposed. It is a graph showing the catalytic activity and stereoselectivity of the fractions corresponding to the major peak and minor peak in Example A10(5). It is a chromatogram of ODS-HPLC fractionation in Example A10(5). Dashed squares indicate fractionated peaks.
  • Example A12 is a chromatogram showing the results of HPLC analysis (RI detection) of NG-ABEE and the sample before modification (NG) in Example A12.
  • (b) is a chromatogram showing the results of HPLC analysis (UV detection) of NG-ABEE and the sample before modification (NG) in Example A12.
  • This is a GC spectrum obtained by detecting m/z118 after derivatizing 19.5mer and 20mer in sugar chain binding position analysis in Example B2. It is a photograph showing the state of each reaction container before collecting a toluene layer in Example C4.
  • galactose is also referred to as “Gal” and arabinose is also referred to as "Ara”.
  • unbranched chain means a state in which each sugar unit (galactose, arabinose) except the terminal sugar unit is bonded to two adjacent sugar molecules.
  • the first embodiment of the present invention is a polysaccharide having a degree of polymerization of 16 to 40, consisting only of galactose, or consisting only of galactose and 1 to 3 molecules of arabinose, in which the sugar unit is unbranched. It is a polysaccharide linked in a chain. For example, sugar units are linked by ⁇ 1,4 bonds.
  • the polysaccharide according to the present embodiment may be a galactan consisting of 16 to 40 molecules of galactose, or may be an arabinogalactan in which 1 to 3 molecules of the 16 to 40 molecules of galactose are replaced with arabinose. .
  • the polysaccharide according to the present embodiment can be prepared from a crude pectic polysaccharide obtained by removing lipids and soluble polysaccharides from a processed plant product, or from a processed plant product.
  • the polysaccharide according to the present embodiment is obtained by treating a crude pectic polysaccharide or a processed plant product with enzymes (e.g., lipase, rhamnogalacturonic acid lyase, galactanase), acid, or alkali, fractionation by adding an organic solvent, and solubility difference by cooling. It can also be obtained by repeating fractionation using column chromatography (for example, anion exchange, gel filtration, HPLC).
  • the polysaccharide according to this embodiment may be one that is artificially synthesized using techniques related to organic chemistry.
  • the second embodiment of the present invention includes the polysaccharide according to the first embodiment as a partial structure, has a sugar composition of 90 to 99.5 mol% galactose and 0.5 to 10 mol% arabinose, and has an average molecular weight of 2500 to 2500. It is a polysaccharide with a molecular weight of 9,000.
  • the polysaccharide according to this embodiment only needs to have a sugar composition containing 90 to 99.5 mol% galactose and 0.5 to 10 mol% arabinose, and may be composed only of galactose and arabinose, rhamnose, It may further contain other monosaccharides such as fructose, xylose, glucose, and galacturonic acid.
  • Galactose, arabinose, and other monosaccharides can each independently be either of the furanose or pyranose type.
  • the polysaccharide according to this embodiment has an average molecular weight of 2,500 to 9,000, preferably 2,700 to 8,000, and more preferably 2,900 to 7,000.
  • a third embodiment of the present invention is a polysaccharide that includes the polysaccharide according to the first embodiment as a partial structure, has a sugar composition of 80 to 98 mol% galactose and 2 to 20 mol% arabinose, and has an average molecular weight of 10,000 to 60,000. It is.
  • the polysaccharide according to this embodiment only needs to have a sugar composition containing 80 to 98 mol% galactose and 2 to 20 mol% arabinose, and may be composed only of galactose and arabinose, including rhamnose, fructose, xylose, It may further contain other monosaccharides such as glucose and galacturonic acid.
  • Galactose, arabinose, and other monosaccharides can each independently be either of the furanose or pyranose type.
  • the polysaccharide according to this embodiment has an average molecular weight of 10,000 to 60,000, preferably 11,000 to 55,000.
  • the polysaccharide according to the first embodiment to the third embodiment can be produced as follows. More specifically, reference may be made to the embodiments of the present application.
  • decantation or filtration naturally filtration, centrifugal filtration, pressure filtration, vacuum filtration
  • the method of purifying using an anion exchange resin column in the method described below may be performed by adding an anion exchange resin to the sample before purification in a batch manner and then filtering the sample.
  • Degreasing step The process of mixing the plant product with an organic solvent and filtering off the solid matter is repeated to remove fat-soluble components from the plant product and obtain a defatted sample. In order to remove fat-soluble components more efficiently, it is preferable to crush the processed plant material to form a powder.
  • the organic solvent include halogenated hydrocarbons such as dichloromethane and chloroform, alcohols such as methanol and ethanol, and mixed solvents thereof.
  • the temperature of the degreasing step may be room temperature (eg, 0°C to 30°C).
  • a processed plant product is a powder or extract obtained by processing a part of a plant.
  • plants refer to plants (including algae) that are generally known as plants whose parts can be eaten by humans.
  • Edible plants include, for example, plants classified as grains, legumes, vegetables, fruits, or tubers, and parts of edible plants include whole fruits, pulp, pericarp, and stems (in the case of algae, stalks). , seeds, germs, roots (appressoria in the case of algae), bulbs, and leaves.
  • the remainder of the edible parts (inedible parts) can also be part of the edible plant.
  • Examples of edible plants include, specifically, the family Elegantaceae (e.g., star anise), the family Malvaceae (e.g., okra, baobab), the family Papayaceae (e.g., papaya), the family Brassicaceae (e.g., broccoli, mustard spinach, radish), and Moringaceae.
  • the family Elegantaceae e.g., star anise
  • the family Malvaceae e.g., okra, baobab
  • Papayaceae e.g., papaya
  • the family Brassicaceae e.g., broccoli, mustard spinach, radish
  • Moringaceae e.g., broccoli, mustard spinach, radish
  • Moringa Cucurbitaceae (e.g., pumpkin), Asteraceae (e.g., Jerusalem artichoke, burdock, stevia, mugwort), Lauraceae (e.g., Blackberry, bay leaf, Ceylon cinnamon), Heminaceae (e.g., Heterinaceae), Lamiaceae (e.g., perilla), Oleaceae (e.g., olive), Apiaceae (e.g., persimmon, carrot), Persimmonaceae (e.g., persimmon), Camellia (e.g., tea), Convolvulaceae (e.g., sweet potato, purple sweet potato) ), Solanaceae (e.g., tobacco, tomatoes, potatoes), Amaranthaceae (sugar sugar beet, spinach), Rosaceae (e.g., almonds, apples), Urticaceae (e.g., nettle leaf), Moraceae (e).
  • Rubiaceae e.g. gardenia
  • Poaceae e.g. wheat
  • Socanaceae e.g. Kidachialoe
  • Amaryllidaceae e.g. onions, garlic, green onions
  • Zingiberaceae e.g., spring turmeric
  • Arocaceae e.g., coconut
  • Cupressaceae e.g., juniper berry
  • Equisetaceae e.g., horsetail
  • Rutaceae e.g., jujube mandarin, yuzu
  • Examples include plants of the Lotus family (e.g., lotus root), Actinaceae (e.g., kiwi), Sargassum family (e.g., Hijiki), Sargassum family (e.g., seaweed), and Funoriaceae (e.g., funori).
  • Edible plants come from the family Elegantaceae, Papayaceae, Moringaceae, Cucurbitaceae, Asteraceae, Heminaceae, Lamiaceae, Umbelliferae, Camelliaceae, Myrtaceae, Fagaceae, Fabaceae, Amaryllidaceae, coconutaceae, and Equisetaceae.
  • it is selected from the group consisting of: Note that green onions are sometimes classified as members of the Allium family.
  • the above-mentioned "plant” may be non-edible, such as tobacco.
  • processing refers to drying, heating, roasting, roasting, frying, fermenting, removing unnecessary parts, etc. as necessary, and then turning it into powder. It means to grind until it becomes pure or to extract its ingredients.
  • the above-mentioned processed plant products also include powders obtained by extracting extracts of edible plants and then pulverizing the dried products. Therefore, the above tea may be green tea or black tea. Further, the soybean may be soybean flour or natto.
  • the processed plant product may be one that is commercially available in a powdered or liquid processed state, or one that is commercially available in a processed state and may be appropriately ground into a powder and used.
  • Commercially available products include soybean flour, defatted soybean flour (for example, Fujipro F (manufactured by Fuji Oil Co., Ltd., trade name), Sunrich F (manufactured by Showa Sangyo Co., Ltd., trade name), Sawyer Flour FT-N (manufactured by Showa Sangyo Co., Ltd., trade name), Nisshin Oilio Co., Ltd., product name), Esun Meat Tokuko (Ajinomoto Co., Inc., product name), Hounen Soipro (J-Oil Mills Co., Ltd., product name), water-soluble soybean polysaccharides (e.g.
  • soybean processed products such as Soya Five S-DN (manufactured by Fuji Oil Co., Ltd., trade name) and okara
  • soybean flour soya flour FT-N, Soya Five S-DN, or okara. More preferred.
  • a defatted sample is mixed with water, centrifuged, and water is removed to obtain a sample from which soluble polysaccharides have been removed.
  • water tap water, purified water, or RO water (water filtered through a reverse osmosis membrane) can be used.
  • the temperature in this step may range from room temperature to a heated state (eg, 0° C. to 50° C.).
  • the centrifugal force during centrifugation may be, for example, 3,000 to 20,000 ⁇ g.
  • crude pectic polysaccharide From the sample from which soluble polysaccharides have been removed, crude pectic polysaccharide Obtain polysaccharide. Specifically, a sample from which soluble polysaccharides have been removed is suspended in water, and after adding acetic acid, hydrochloric acid, EDTA, or ammonium oxalate, the sample is heated to 75 to 100°C and vigorously stirred for 1 to 4 hours, or autoclaved. Heat at 121°C for 30 minutes to 2 hours. Thereafter, the mixture is cooled to room temperature and centrifuged. Ethanol is added to the separated precipitate, stirred, and centrifuged again. The obtained precipitate is dissolved in water, the supernatant is collected, and freeze-dried. The centrifugal force of centrifugation may be, for example, 3,000 to 20,000 ⁇ g.
  • the obtained crude pectic polysaccharide can be used as a catalyst for an asymmetric ring-opening reaction.
  • the catalytic activity (specific activity per unit weight) is improved compared to when the processed plant product is used as a catalyst, making it possible to use plant processing as a catalyst.
  • even processed plant products from the Poaceae, Cucurbitaceae, Solanaceae, Brassicaceae, and Rosaceae families which have had problems in practical use due to low stereoselectivity, can now have a stereoselectivity of 30% ee or more. Some indications were also found.
  • the yield was higher than when a processed plant product was used as a raw material.
  • a plant product or a crude pectic polysaccharide produced from a plant product is heated to 50 to 100°C in the presence of an alkali (e.g., sodium hydroxide, potassium hydroxide) and stirred. or heat to 100-121°C in an autoclave. After neutralizing the obtained reaction solution, centrifugation is performed. An organic solvent (eg, ethanol, acetone) is added to the obtained supernatant, and the resulting precipitate is obtained by centrifugation. Water is added to the resulting precipitate to dissolve it, dialyzed using a dialysis tube with a predetermined membrane pore, and the liquid remaining in the tube is freeze-dried.
  • the obtained polysaccharide (AL-LMW) may correspond to the polysaccharide according to the third embodiment.
  • the alkali may be, for example, an alkali metal hydroxide such as sodium hydroxide or potassium hydroxide.
  • the organic solvent may be, for example, an alcohol such as ethanol, or a ketone such as acetone.
  • the centrifugal force of centrifugation may be 3000 to 20000 ⁇ g.
  • the fraction obtained in (6-1) above is decomposed with endo- ⁇ 1,4-galactanase, followed by dialysis and freeze-drying to obtain a low-molecular-weight polysaccharide (LMW-D1deg).
  • the obtained polysaccharide is purified using an anion exchange resin column (OH type), and the fraction eluted earlier is collected.
  • the obtained polysaccharide (LMW-D1degD1) may correspond to the polysaccharide according to the second embodiment.
  • the polysaccharide (6-2) Lowering the molecular weight of polysaccharide using acid Add acid to the polysaccharide (LP-LMW or AL-LMW) obtained in (4) and (5) above to adjust the pH to 2 to 4.
  • the polysaccharide is hydrolyzed by stirring at ⁇ 100°C or by heating to 100-121°C in an autoclave.
  • the acid may be an organic acid (eg, acetic acid) or a mineral acid (eg, sulfuric acid) as long as it can maintain the pH within the above range.
  • an organic solvent e.g. ethanol
  • a precipitate is obtained by centrifugation, and the precipitate is purified by dialysis.
  • AA-LLMW is obtained.
  • the obtained polysaccharides (AS-LLMW and AA-LLMW) may correspond to the polysaccharide according to the second embodiment.
  • the obtained polysaccharide is purified by anion exchange resin column chromatography to obtain a low-molecular-weight polysaccharide (SFDdegE2D1 fraction). This is further purified by dialysis and gel filtration column chromatography to obtain a low-molecular-weight polysaccharide (NG fraction).
  • the obtained polysaccharides (SFDdegE2, SFDdegE2D1 and NG fraction) may correspond to the polysaccharide according to the second embodiment.
  • the catalyst according to the present invention may be a galactan in which 16 to 24 galactoses are ⁇ 1,4-linked.
  • the galactan is a compound represented by formula (18), where m is 15 to 23.
  • the "compound represented by formula (18)” etc. will also be referred to as “compound (18)” etc. for convenience.
  • Galactan according to the present embodiment can be produced by a method known in the field of organic chemical synthesis.
  • the compound (17) produced by the following method is deprotected (i.e., R A , R B , R C and It may also be produced by (removal of RE ).
  • Compound (17) can be prepared by subjecting compound (14) and compound (16) to a glycosylation reaction.
  • R A is an alkylcarbonyl group which may be substituted, for example, a C 1-6 alkylcarbonyl group which may be substituted with a halogen atom.
  • R A is preferably an acetyl group, a chloroacetyl group, a dichloroacetyl group, a trichloroacetyl group, or a bromoacetyl group, and more preferably a trichloroacetyl group.
  • R A is also a hydroxyl protecting group and can be removed by hydrolysis under acidic or alkaline conditions.
  • R B and R E are optionally substituted aralkyl groups, such as a C 1-6 alkyl group substituted with a C 6-10 aryl group.
  • R B is preferably a benzyl group, a phenylethyl group, a 1-naphthylmethyl group, which may be substituted with at least one selected from a C 1-6 alkyl group, a C 1-6 alkoxy group, and a halogen atom; or 2-naphthylmethyl group.
  • Examples of the C 1-6 alkyl group include methyl group, ethyl group, 1-propyl group, 2-propyl group, 1-butyl group, 2-butyl group, tert-butyl group, 1-pentyl group, and 2-pentyl group. group, 3-pentyl group, neopentyl group, 1-hexyl group, 2-hexyl group, and 3-hexyl group.
  • Examples of the C 1-6 alkoxy group include a methoxy group, an ethoxy group, a 1-propyloxy group, a 2-propyloxy group, a 1-butyloxy group, a 2-butyloxy group, a tert-butyloxy group, a 1-pentyloxy group, and a 2-propyloxy group.
  • Examples of the halogen atom include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
  • R B is also a protecting group for a hydroxyl group, and can be removed by subjecting it to hydrolysis conditions.
  • Hydrolysis conditions are, for example, conditions for reacting with hydrogen in the presence of palladium/carbon.
  • the catalyst for reacting with hydrogen may be any catalyst that can be used in hydrolysis.
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group, such as an optionally substituted C 6-10 arylcarbonyl group.
  • R C is preferably a phenylcarbonyl group optionally substituted with at least one selected from a C 1-6 alkyl group, a C 1-6 alkoxy group, and a halogen atom, more preferably ortho-, It is a meta- or para-toluenecarbonyl group (also called a toluoyl group).
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group
  • the carbonyl oxygen attacks the anomeric carbon to produce an acyloxonium ion intermediate (also referred to as adjacent group involvement), so that a ⁇ bond is selectively formed. obtain.
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group, in addition to selective glycosylation due to the participation of adjacent groups as described above, it becomes easier to monitor the progress of the reaction.
  • R C is also a hydroxyl protecting group and can be removed by hydrolysis under acidic or alkaline conditions. Examples of alkaline conditions include conditions in which lithium hydroxide is added in a mixed solvent of tetrahydrofuran and methanol.
  • R D is an optionally substituted aryl group, such as optionally substituted C 6-10 aryl.
  • R D is preferably a phenyl group optionally substituted with at least one selected from a C 1-6 alkyl group, a C 1-6 alkoxy group, and a halogen atom, more preferably a 5-tert- It is a butyl-2-methylphenyl group.
  • n is an integer of 13 to 21, preferably 15 to 19, or 17.
  • Compound (15) can be obtained by hydrolyzing compound (13).
  • hydrolysis the ester bond represented by R A O is cleaved.
  • This reaction may be carried out under any conditions as long as it can hydrolyze the ester bond represented by R A O.
  • acidic or alkaline conditions can be applied, and alkaline conditions are preferred.
  • alkaline conditions include conditions in which 1,4-diazabicyclo[2.2.2]octane (DABCO) is added to a mixed solvent of ethyl acetate and ethanol.
  • DABCO 1,4-diazabicyclo[2.2.2]octane
  • R A is an optionally substituted alkylcarbonyl group
  • R B is an optionally substituted aralkyl group
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group
  • R F is an optionally substituted arylcarbonyl group. It is an optionally substituted aryl group.
  • R F is an optionally substituted aryl group, such as optionally substituted C 6-10 aryl.
  • R F is preferably a phenyl group optionally substituted with at least one selected from a C 1-6 alkyl group, a C 1-6 alkoxy group, and a halogen atom, more preferably 4-methoxyphenyl It is the basis.
  • R F is also a hydroxyl protecting group and can be removed by hydrolysis under acidic or alkaline conditions.
  • R F is a 4-methoxyphenyl group
  • R E can be removed even under oxidative conditions. Examples of the oxidative conditions include conditions in which cerium ammonium (IV) nitrate (CAN) is added in a mixed solvent of acetonitrile, toluene, and water.
  • Compound (16a) can be obtained by subjecting compound (16) and compound (14) to a glycosylation reaction to obtain compound (17), and then converting OR A to OH.
  • compound (16) By replacing compound (16) with compound (16a) and repeating these steps, a longer galactan structure can be produced by adding two galactoses at a time. That is, compound (18) can be produced by removing the protecting groups (R A , RB , RC , R E ) from compound (17) produced by repeating these steps.
  • an activator is added to activate compound (14).
  • the activator may be one used in glycosylation using a thioglycoside, such as methane triflate (MeOTf), N-iodosuccinimide-trimethylsilyl triflate (NIS/TMSOTf), dimethyl(methylthio)sulfonium triflate ( DMTST), silver triflate (AgOTf), and oxidizing agents.
  • Compound (14) can be obtained by subjecting compound (13) and R D SH to a glucosylation reaction in the presence of a Lewis acid.
  • R A is an optionally substituted alkylcarbonyl group
  • R B is an optionally substituted aralkyl group
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group
  • R D is an optionally substituted arylcarbonyl group. It is an aryl group which may be substituted
  • R F is an aryl group which may be substituted.
  • the Lewis acid may be anything that can activate the anomeric position, for example, boron trifluoride diethyl ether complex.
  • Compound (13) can be obtained by subjecting compound (11) and compound (12) to a glycosylation reaction in the presence of a Lewis acid.
  • R A is an optionally substituted alkylcarbonyl group
  • R B is an optionally substituted aralkyl group
  • R C is an optionally substituted arylcarbonyl group
  • R D is an optionally substituted arylcarbonyl group. It is an aryl group which may be substituted
  • R F is an aryl group which may be substituted.
  • an activator is added to activate compound (11).
  • the activator may be one used in glycosylation using a thioglycoside, such as methane triflate (MeOTf), N-iodosuccinimide-trimethylsilyl triflate (NIS/TMSOTf), dimethyl(methylthio)sulfonium triflate ( DMTST), silver triflate (AgOTf), and oxidizing agents.
  • a fifth embodiment of the present invention provides a compound represented by formula (1) in the presence of a polysaccharide according to any one of the first to third embodiments and a sixth embodiment or a galactan according to the fourth embodiment. (hereinafter also referred to as "compound (1)” etc.) and compound (2) to obtain compound (3).
  • the compound represented by formula (1) is a compound having an oxirane, aziridine or thiirane structure, and the carbon atom marked with an asterisk (*) in formula (1) may be an asymmetric center.
  • X is -O-, -NR- or -S-.
  • R is a hydrogen atom, an optionally substituted C 1-6 alkyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkyl group, an optionally substituted C 2-6 alkenyl group. group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, an optionally substituted C 2-6 alkynyl group, an optionally substituted C 6-10 aryl group, an optionally substituted C 1 -6 alkylcarbonyl group, optionally substituted C 6-10 arylcarbonyl group, optionally substituted C 1-6 alkylsulfonyl group, or optionally substituted C 6-10 arylsulfonyl group.
  • R 1 , R 2 , R 3 and R 4 each independently represent a hydrogen atom, a C 1-6 alkyl group, a C 1-6 alkoxy group, a C 3-6 cycloalkyl group, a C 2 -6 alkenyl group, C 3-6 cycloalkenyl group, C 2-6 alkynyl group or C 6-10 aryl group.
  • the C 1-6 alkyl group means an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the C 1-6 alkyl group include a methyl group, an ethyl group, a propan-1-yl group, a propan-2-yl group (isopropyl group), a butan-1-yl group, a butan-2-yl group, and a pentane group.
  • the C 1-6 alkoxy group is a C 1-6 alkyl group to which an oxygen atom is bonded.
  • Examples of the C 1-6 oxyalkyl group include a methoxy group, an ethoxy group, a propoxy group, a butoxy group, and a pentoxy group.
  • the C 3-6 cycloalkyl group means a cycloalkyl group having 3 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the C 3-6 cycloalkyl group include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, and a cyclohexyl group.
  • the C 2-6 alkenyl group means an alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the C 2-6 alkenyl group include vinyl group, 1-propen-1-yl group, 2-propen-1-yl group, propen-2-yl group, 2-buten-1-yl group, 2- Buten-2-yl group, 3-buten-1-yl group, 2-penten-1-yl group, 3-penten-1-yl group, 2-hexen-1-yl group, 3-hexen-1-yl group 4-hexen-1-yl group and 5-hexen-1-yl group.
  • the C 3-6 cycloalkenyl group means a cycloalkenyl group having 3 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the C 3-6 cycloalkenyl group include a cyclobutenyl group, a cyclopentenyl group, and a cyclohexenyl group.
  • the C 2-6 alkynyl group means an alkynyl group having 2 to 6 carbon atoms.
  • Examples of the C 2-6 alkynyl group include ethynyl group, propargyl group and 3-butyn-1-yl group.
  • a C 6-10 aryl group means an aryl group having 6 to 10 carbon atoms.
  • Examples of the C 6-10 aryl group include phenyl group and naphthyl group.
  • the C 1-6 alkyl group, the C 3-6 cycloalkyl group, the C 2-6 alkenyl group, the C 3-6 cycloalkenyl group, the C 2-6 alkynyl group and the C 6-10 aryl group are each unsubstituted. or may be replaced.
  • substituents include C 1-4 alkyl group, C 2-4 alkenyl group, C 2-4 alkynyl group, C 1-4 alkoxy group, amino group, imino group, nitro group, oxy group, oxo group, and nitrile group. , a mercapto group or a halogen atom.
  • Examples of the compound (1) include cis-2,3-epoxybutane and 3,4-epoxyhexane.
  • R 2 and R 3 may be bonded to each other to form a cyclic structure.
  • compound (1) is represented by formula (1a).
  • X, R 1 and R 4 are the same as defined in formula (1).
  • R 2a and R 3a are divalent groups expressed by replacing the hydrogen atoms in R 2 and R 3 with single bonds, respectively. That is, R 2a and R 3a each independently represent a C 1-6 alkylene group, a C 1-6 oxyalkylene group, a C 3-6 cycloalkylene group, a C 2-6 alkenylene group, a C 3-6 cycloalkenylene group, It is a C 2-6 alkynylene group or a C 6-10 arylene group.
  • the compound represented by formula (1a) include 6-oxabicyclo[3.1.0]hexane and 7-oxabicyclo[4.1.0]heptane (also referred to as 1,2-epoxycyclohexane). ), 8-oxabicyclo[5.1.0]octane, 3,6-dioxabicyclo[3.1.0]hexane (also referred to as 3,4-epoxytetrahydrofuran), and 4,4-dimethyl-3 , 5,8-trioxabicyclo[5.1.0]octane.
  • Y is -O-, -NR 6 - or -S-. That is, compound (2) means alcohol, amine or thiol. However, water (H 2 O) and hydrogen sulfide (H 2 S) are excluded from the scope of compound (2).
  • R 5 is a hydrogen atom, an optionally substituted C 1-6 alkyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkyl group, an optionally substituted C 2-6 An alkenyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, an optionally substituted C 2-6 alkynyl group, or an optionally substituted C 6-10 aryl group.
  • R 6 is a hydrogen atom, an optionally substituted C 1-6 alkyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkyl group, an optionally substituted C 2-6 An alkenyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, an optionally substituted C 2-6 alkynyl group, or an optionally substituted C 6-10 aryl group.
  • Examples of the C 1-6 alkyl group include a methyl group, an ethyl group, a propan-1-yl group, a propan-2-yl group (isopropyl group), a butan-1-yl group, a butan-2-yl group, and a pentane group.
  • the C 1-6 alkoxy group is a C 1-6 alkyl group to which an oxygen atom is bonded.
  • Examples of the C 1-6 oxyalkyl group include a methoxy group, an ethoxy group, a propoxy group, a butoxy group, and a pentoxy group.
  • Examples of the C 3-6 cycloalkyl group include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, and a cyclohexyl group.
  • Examples of the C 2-6 alkenyl group include vinyl group, 1-propen-1-yl group, 2-propen-1-yl group, propen-2-yl group, 2-buten-1-yl group, 2- Buten-2-yl group, 3-buten-1-yl group, 2-penten-1-yl group, 3-penten-1-yl group, 2-hexen-1-yl group, 3-hexen-1-yl group 4-hexen-1-yl group and 5-hexen-1-yl group.
  • Examples of the C 3-6 cycloalkenyl group include a cyclobutenyl group, a cyclopentenyl group, and a cyclohexenyl group.
  • Examples of the C 2-6 alkynyl group include ethynyl group, propargyl group and 3-butyn-1-yl group.
  • Examples of the C 6-10 aryl group include phenyl group and naphthyl group.
  • the C 1-6 alkyl group, C 3-6 cycloalkyl group, C 2-6 alkenyl group, C 3-6 cycloalkenyl group, C 2-6 alkynyl group and C 6-10 aryl group are each unsubstituted. or may be replaced.
  • substituents include a C 1-4 alkyl group, a C 2-4 alkenyl group, a C 2-4 alkynyl group, a C 6-10 aryl group, a C 1-4 alkoxy group, an amino group, an imino group, a nitro group, and an oxy group. group, oxo group, nitrile group, mercapto group or halogen atom.
  • compound (2) has an asymmetric center at R 5 or R 6 .
  • optical isomers enantiomers, diastereomers
  • compound (2) has an asymmetric center
  • optical isomers enantiomers, diastereomers
  • a single optical isomer among these optical isomers may be used, or a mixture (for example, a racemate) of any two or more optical isomers may be used.
  • compound (2) having an asymmetric center a difference in reaction rate may occur between the optical isomers. Therefore, even if racemic compound (2) is used, one of the optical isomers can preferentially proceed in this reaction.
  • stereoselectivity can be further enhanced by performing an asymmetric ring-opening reaction using a compound (2) having an asymmetric center at R 5 or R 6 . Thereafter, by removing R 5 or R 6 , a product with higher optical purity can be obtained than when performing an asymmetric ring-opening reaction using compound (2) that does not have an asymmetric center.
  • compound (2) examples include methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol (isopropanol), 1-butanol, 2-butanol, 1-pentanol, 2-pentanol, phenol, ammonia, methylamine, Ethylamine, propylamine, 2-propylamine (isopropylamine), 2-pentylamine, 3-pentylamine, cyclopropylamine, cyclobutylamine, cyclopentylamine, cyclohexylamine, tert-butylamine, sec-butylamine (R, S 2-amino-3-methylbutane (R form, S form, racemic form), 1-cyclohexylethylamine (R form, S form, racemic form), allylamine, propargylamine, benzylamine, 2-phenyl Examples include ethylamine, aniline, dimethylamine, diethylamine, 4-methoxybenzylamine, 3-
  • R 5 and R 6 may be bonded to each other to form a cyclic structure.
  • compound (2) is represented by formula (2a).
  • Y has the same definition as in formula (2).
  • R 5a and R 6a represent a group formed by bonding with each other.
  • R 5a and R 6a are divalent groups expressed by replacing the hydrogen atoms in R 5 and R 6 with single bonds, respectively. That is, R 5a and R 6a each represent an optionally substituted C 1-6 alkylene group, an optionally substituted C 1-6 oxyalkylene group, and an optionally substituted C 3-6 cycloalkylene group. , an optionally substituted C 2-6 alkenylene group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenylene group, an optionally substituted C 2-6 alkynylene group, or a C 6-10 arylene group.
  • compound (2a) examples include pyrrolidine, piperidine, morpholine, piperazine, homopiperazine, and thiomorpholine.
  • the C 1-6 alkyl group, C 3-6 cycloalkyl group, C 2-6 alkenyl group, C 3-6 cycloalkenyl group, C 2-6 alkynyl group and C 6-10 aryl group are each unsubstituted. or may be replaced.
  • substituents include C 1-4 alkyl group, C 2-4 alkenyl group, C 2-4 alkynyl group, C 1-4 alkoxy group, amino group, imino group, nitro group, hydroxy group, oxo group, and nitrile group. , a mercapto group or a halogen atom.
  • Examples of the C 1-4 alkoxy group include a methoxy group, an ethoxy group, a propyloxy group, and a butoxy group.
  • Any amount of compound (2) can be used in consideration of economic efficiency and recoverability.
  • Such an amount is, for example, 0.01 to 100 equivalents, preferably 0.1 to 10 equivalents, and more preferably 0.5 to 2 equivalents, based on the number of moles of compound (1).
  • Compound (3) is a compound represented by formula (3), and in formula (3), X, Y, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are the same as defined above. It is.
  • compound (3) has a chemical structure corresponding to the structures of compound (1) and compound (2).
  • compound (3) can be represented by the following formula (3a), (3b) or (3c).
  • compound (3) examples include 1,2-diol (when X and Y are both -O-), 1,2-amino alcohol (when X is -O- and Y is -NH-) , or when X is -NH- and Y is -O-), 1,2-diamine (when X and Y are both -NH-), 1,2-mercaptoalcohol (when X is -O- and Y is -S-), 1,2-mercaptoamine (when X is -NH- and Y is -S-).
  • At least one selected from compounds (a), (b), (c), and (d) may be used instead of compound (1).
  • Compounds (a), (b), (c), and (d) can be epoxidized to produce compound (1) in the reaction system.
  • Compound (1) generated in situ produces compound (3) through an asymmetric ring-opening reaction with compound (2).
  • Compounds (a) and (c) produce epoxides with the same stereochemistry as each other
  • compounds (b) and (d) produce epoxides with the same stereochemistry as each other.
  • the epoxide formed from compound (a) or (c) has the opposite stereochemistry to the epoxide formed from compound (b) or (d).
  • R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently a hydrogen atom, an optionally substituted C 1-6 alkyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkyl group, An optionally substituted C 2-6 alkenyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, an optionally substituted C 2-6 alkynyl group, or an optionally substituted C 6-10 It is an aryl group, and R 2 and R 3 may be bonded to each other to form a cyclic structure.
  • trans-2-chlorohexanol can be mixed with cyclopropylamine instead of 7-oxabicyclo[4.1.0]heptane in the presence of the above-mentioned polysaccharides, crude pectic polysaccharides or galactans.
  • 2-chlorohexanol is converted to 7-oxabicyclo[4.1.0]heptane, which is further converted to 2-cyclopropylaminocyclohexanol in a catalytic reaction.
  • the first embodiment can be referred to.
  • any amount can be used in consideration of economical efficiency and recoverability.
  • the amount of such a processed plant product is, for example, 0.01 to 100 times the mass of the compound represented by formula (1), preferably 0.1 to 10 times, and Preferably it is 1 to 5 times the amount.
  • the asymmetric ring-opening reaction according to the embodiment of the present invention may be performed in a solvent.
  • organic solvents and water that are well known in organic synthetic chemistry can generally be used as long as they do not react with compound (1) and compound (2).
  • organic solvents examples include aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene; hydrocarbons such as hexane, cyclohexane, and heptane; diisopropyl ether, tetrahydrofuran, methyl tert-butyl ether, ethyl tert-butyl ether, and cyclopentyl ether; Examples include ethers such as methyl ether; esters such as ethyl acetate and butyl acetate; and halogenated hydrocarbons such as dichloromethane and chloroform. Further, these solvents may be used alone or in combination of two or more.
  • the amount of solvent that can be used in the asymmetric ring-opening reaction can be used in an amount that takes economic efficiency into consideration.
  • the amount of such a solvent is, for example, 0 to 100 times, preferably 0.5 to 50 times, more preferably 2 to 10 times the mass of compound (1) in terms of volume.
  • the content of water that can be used in the asymmetric ring-opening reaction can be in the range of 0.05 to 1 mass ratio of water to the catalyst, and 0.20 to 0.50 mass ratio of water to the catalyst. More preferably, the amount is within the range of double the amount. Within this range, the conversion rate of the reaction and the optical purity of the product are further improved.
  • the reaction temperature is preferably -20°C to 100°C, and particularly preferably 30°C to 70°C or 30°C to 50°C from the viewpoint of improving catalyst activity.
  • the corresponding compound (3) can be obtained by filtering off the catalyst.
  • the catalyst recovered by filtration can be reused.
  • reaction time the reaction can be carried out until a desired conversion rate can be obtained in consideration of economic efficiency.
  • reaction time is, for example, 1 to 500 hours, preferably 1 to 100 hours, and more preferably 1 to 48 hours.
  • compound (3) can be obtained by filtering off the catalyst.
  • the obtained compound (3) can also be easily purified further by conventional methods such as crystallization and distillation.
  • Solvents that can be used for crystallization are not particularly limited as long as they are normally used in organic synthetic chemistry; hydrocarbons such as hexane, heptane, and cyclohexane; aromatic hydrocarbons such as toluene, benzene, and xylene; Ethers such as diisopropyl ether, methyl tert-butyl ether, ethyl tert-butyl ether, and cyclopentyl methyl ether can be used, and these solvents may be used alone or in combination of two or more.
  • the amount of the above-mentioned solvent can be set in consideration of economic efficiency, and is 0.1 to 100 times the mass of compound (3) in terms of volume. , preferably 0.5 to 50 times the amount, more preferably 1 to 10 times the amount.
  • the optical purity of the compound (3) obtained according to the present invention can be increased by forming a salt with an inorganic acid or an organic acid commonly used in organic synthetic chemistry.
  • the above acids include inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, sulfurous acid, nitric acid, perchloric acid, chloric acid, iodic acid, and phosphoric acid; formic acid, acetic acid, lactic acid, oxalic acid, citric acid, maleic acid, fumaric acid, Examples include organic acids such as benzoic acid, phthalic acid, salicylic acid, methanesulfonic acid, and toluenesulfonic acid.
  • a salt with an optically active acid may be formed.
  • the optically active acid include tartaric acid, malic acid, mandelic acid, phenylglycine, and the like, and the acid may be substituted.
  • solvents commonly used in organic synthetic chemistry can be used, taking economic efficiency, recoverability, etc. into consideration.
  • the solvent include aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene; hydrocarbons such as hexane, cyclohexane, and heptane; diisopropyl ether, tetrahydrofuran, methyl tert-butyl ether, ethyl tert-butyl ether, and cyclopentyl methyl ether.
  • esters such as ethyl acetate and butyl acetate; halogenated hydrocarbons such as dichloromethane and chloroform; alcohols such as methanol, ethanol and isopropanol; More than one species may be mixed.
  • the amount of solvent used when forming the salt can be determined in consideration of economic efficiency.
  • the amount of the solvent is, for example, 0 to 100 times the mass of compound (1), preferably 0.5 to 50 times, more preferably 2 to 10 times the mass of compound (1).
  • (1R,2R)-2-cyclopropylamino-1-cyclohexanol (hereinafter also referred to as "Compound A”) obtained in the present invention is 6-(3-aminopropoxy)-2(1H)-quinolinone ( (hereinafter also referred to as “compound B”), (-)-6-[3-[3-cyclopropyl-3-[(1R,2R)-2-hydroxycyclohexyl]ureido]-propoxy] -2(1H)-quinolinone can be produced.
  • (-)-6-[3-[3-cyclopropyl-3-[(1R,2R)-2-hydroxycyclohexyl]ureido]-propoxy]-2(1H)-quinolinone is It is a substance that has two effects: a strong antithrombotic effect and an effect of suppressing vascular endothelial hyperplasia.It also has an effect of suppressing platelet aggregation, dissociating platelet aggregates, and increasing cerebral and peripheral blood vessels.
  • (-)-6-[3-[3-cyclopropyl-3-[(1R,2R)-2-hydroxycyclohexyl]ureido]-propoxy]-2(1H)-quinolinone is useful for thrombotic diseases and arterial diseases. Useful in the treatment and prevention of sclerotic diseases.
  • compound B When compound A and compound B are reacted, compound B can be reacted after compound A and a carbonylation reagent are reacted in advance, as shown in the following formula (Eq.1). After reacting Compound A and the carbonylation reagent, the reaction product may be purified. [In the formula, Z means a residue of a carbonylation reagent. ]
  • Step (i) can be performed without a solvent or in a solvent.
  • the solvent that can be used in step (i) include ethers such as dioxane, tetrahydrofuran, and diethyl ether; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene; halogenated hydrocarbons such as dichloromethane and chloroform; methanol, Examples include alcohols such as ethanol and isopropanol; polar solvents such as N,N-dimethylformamide, acetone, dimethyl sulfoxide, acetonitrile, and water. These solvents may be used alone or in combination of two or more.
  • Examples of the carbonylation reagent include chloroformic acid esters such as phenyl chloroformate, carbonic acid esters such as diethyl carbonate, carbonyldiimidazole, phosgene, and triphosgene.
  • Step (i) is usually carried out at -20 to 150°C, preferably -20 to 100°C.
  • Step (i) can be performed in the presence or absence of a basic compound.
  • Basic compounds that can be used in step (i) include inorganic bases such as potassium carbonate, sodium carbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium bicarbonate, and sodium hydride; triethylamine, N,N-diisopropylethylamine, imidazole, Organic bases such as pyridine can be used.
  • step (i) additional additives may be used in order to make the reaction proceed more efficiently.
  • additives include potassium iodide, sodium iodide, imidazole, 4-dimethylaminopyridine, 4-pyrrolidinopyridine, and the like.
  • Step (ii) can be performed without a solvent or in a solvent.
  • the solvent that can be used in step (ii) the solvents listed in step (i) can be used.
  • Step (ii) is usually carried out at -20 to 150°C, preferably -20 to 100°C.
  • Step (ii) can be performed in the presence or absence of a basic compound.
  • a basic compound that can be used in step (ii)
  • the basic compounds listed in step (i) can be used.
  • compound B and a carbonylation reagent may be reacted in advance, and then compound A may be reacted.
  • each step can be performed by the same method as in formula (Eq.1).
  • Z means a residue of a carbonylation reagent.
  • Compound B used in the present invention may be a protected compound B.
  • a quinolinone in which the 1-position is substituted with a protecting group can be used.
  • protecting groups include alkyl groups such as methoxymethyl and benzyl groups; substituted silyl groups such as triethylsilyl and triphenylsilyl; substituted acyl groups such as acetyl and trifluoroacetyl; Examples include alkoxycarbonyl groups such as butoxycarbonyl groups.
  • 6-(3-aminopropoxy)-quinoline substituted at the 2-position can also be used.
  • the substituent of 6-(3-aminopropoxy)-quinoline substituted at the 2-position is, for example, a halogen atom such as a fluorine atom, a chlorine atom, or a bromine atom; an alkoxy group such as a methoxy group or a methoxymethoxy group; a benzyloxy group
  • Examples include arylalkyloxy groups such as; acyloxy groups such as an acetoxy group and pivaloyloxy group; and silyloxy groups such as a triethylsilyloxy group.
  • protected compound B When protected compound B is used in the reaction, it is deprotected by a known method after the reaction to form (-)-6-[3-[3-cyclopropyl-3-[(1R,2R)-2-hydroxycyclohexyl] It can also be converted to [ureido]-propoxy]-2(1H)-quinolinone.
  • the method described in Protective Groups in Organic Synthesis, published by John Wiley and Sons (1980) can be used, for example, acidic conditions, alkaline conditions , hydrogenation.
  • a sixth embodiment of the present invention is a polysaccharide having a degree of polymerization of 16 to 40 and bonded in an unbranched chain, which is composed only of galactose or only galactose and 1 to 3 molecules of arabinose.
  • This polysaccharide is an amino sugar in which the reducing terminal galactose of the polysaccharide is reductively aminated.
  • the polysaccharide according to the present embodiment is an aminopolysaccharide obtained by reductively aminating the terminal galactose in the polysaccharide according to the first embodiment. That is, the amino sugar according to this embodiment has the following partial structure.
  • R X is an organic group, for example, R X is an optionally substituted C 1-6 alkyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkyl group, C 2-6 alkenyl group, optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, optionally substituted C 2-6 alkynyl group, optionally substituted C 6-10 aryl group, substituted an optionally substituted C 1-6 alkylcarbonyl group, an optionally substituted C 6-10 arylcarbonyl group, an optionally substituted C 1-6 alkylsulfonyl group, or an optionally substituted C 6-10 arylcarbonyl group It is an arylsulfonyl group.
  • R X is an optionally substituted C 1-6 alkyl group, an optionally substituted C 3-6 cycloalkyl group, C 2-6 alkenyl group, optionally substituted C 3-6 cycloalkenyl group, optionally substituted C 2-6 alkynyl group, optionally
  • R X is preferably a p-alkoxycarbonylphenyl group, more preferably a p-ethoxycarbonylphenyl group or a tert-butoxycarbonylphenyl group.
  • R X is derived from the chemical structure of the amine (R X -NH 2 ) used in the reductive amination reaction. do. For example, when R .
  • the amino sugar according to the present embodiment also exhibits catalytic activity and stereoselectivity for the asymmetric ring-opening reaction using a nucleophile, like the polysaccharides according to the first to third embodiments. Furthermore, since the amino sugar according to the fifth embodiment is ABEE- or ABtB-ized, it can also be used as a label.
  • Catalytic activity measurement method I 100mg catalyst amount scale
  • a toluene solution 1.0 mL
  • the substrate 1.0 M 1,2-epoxycyclohexane, 1.5 M cyclopropylamine
  • saturated salt 1.0 M 1,2-epoxycyclohexane, 1.5 M cyclopropylamine
  • Water 60 ⁇ L was added, and the mixture was heated to 37 ⁇ 1° C. with a stirring bar and stirred vigorously to carry out the reaction. 20 ⁇ L of the reaction solution was collected every few hours, diluted 5 to 10 times with toluene, dehydrated by adding anhydrous magnesium sulfate or anhydrous sodium sulfate, and subjected to GC analysis.
  • the stereoselectivity of the catalyst was expressed as the optical purity (%ee) of the product and was calculated as follows.
  • Stereoselectivity (%ee) ⁇ (1R,2R)-2-cyclopropylamino-1-cyclohexanol area-(1S,2S)-2-cyclopropylamino-1-cyclohexanol area ⁇ / ⁇ (1R,2R )-2-cyclopropylamino-1 cyclohexanol area + (1S,2S)-2-cyclopropylamino-1 cyclohexanol area ⁇ 100
  • Catalytic activity measurement method II (when only conversion rate is measured) Weighed 5 mg of a polysaccharide sample into a 2 mL glass container, added 200 ⁇ L of a toluene solution of the substrate (0.4M 1,2-epoxycyclohexane, 0.8M cyclopropylamine) and 1 ⁇ L of saturated saline, and heated at 37°C and 1000 rpm. The reaction was allowed to proceed for 20 hours. After the reaction, the substrate conversion rate (%) and stereoselectivity (%ee) were measured by GC analysis described in "Catalytic Activity Measurement Method I".
  • Catalytic activity measurement method III (5 mg catalyst amount) Weigh out 5 mg of a polysaccharide sample into a 2 mL glass container, add 100 ⁇ L of a toluene solution of the substrate (1.0 M 1,2-epoxycyclohexane, 1.5 M cyclopropylamine) and 6 ⁇ L of saturated saline, and use a stirrer bar. The reaction was carried out at 37°C and 1000 rpm. Catalytic activity (mU/mg) and stereoselectivity (%ee) were measured every few hours by GC analysis as described in "Catalytic Activity Measurement Method I".
  • Catalytic activity measurement method IV (0.1 mg catalyst amount) Weigh out 0.1 mg of the polysaccharide sample into a 2 mL glass container, add 100 ⁇ L of substrate toluene solution (1.0 M 1,2-epoxycyclohexane, 1.5 M cyclopropylamine) and 0.2 ⁇ L of saturated saline, The reaction was carried out using a stirrer bar at 37° C. and 1000 rpm for 20 hours. After the reaction, the catalytic activity (mU/mg) and stereoselectivity (%ee) were measured by GC analysis described in "Catalytic Activity Measurement Method I".
  • Catalytic activity measurement method V (5 to 10 mg catalyst amount) Weigh 5 to 10 mg of the polysaccharide sample into a 2 mL glass container, add 100 ⁇ L of the substrate toluene solution (1.0 M 4,4-dimethyl-3,5,8-trioxabicyclo[5.1.0] octane, 1.5M benzylamine) and 6 ⁇ L of saturated saline were added, stirred at 1000 rpm using a stirrer bar, and reacted at 37°C. Catalytic activity (mU/mg) and stereoselectivity (%ee) were measured every few hours by GC analysis (condition A in Table 45) and HPLC analysis (condition ⁇ in Table 44).
  • the measurement was performed under the following analytical conditions: sample injection volume of 10 ⁇ L, flow rate of 0.6 mL/min, column temperature of 35° C., measurement time of 40 minutes, and detector RID.
  • Monosaccharide composition analysis method 100 ⁇ L of 1 mg/mL polysaccharide sample solution and 100 ⁇ L of 4M trifluoroacetic acid (TFA, final concentration 2M) were mixed in a 2 mL screw cap tube and incubated at 120°C for 2 hours on a heat block. . After cooling to room temperature, the solvent and TFA were removed by lyophilization. The obtained (monosaccharified) lyophilized product was dissolved again in 50 ⁇ L of purified water to obtain a monosaccharide sample.
  • TFA trifluoroacetic acid
  • An ABEE solution was prepared by mixing 165 mg of 4-ethylaminobenzoate (ABEE), 35 mg of sodium cyanoborohydride, 350 ⁇ L of methanol, and 41 ⁇ L of acetic acid and heating the mixture at 60°C. 40 ⁇ L of this solution was mixed with 10 ⁇ L of the monosaccharide sample solution in a 1.5 mL tube, and incubated at 80° C. for 1 hour on a heat block. After cooling to room temperature, 200 ⁇ L of purified water and 200 ⁇ L of chloroform were added, impurities were extracted into the organic layer, and the aqueous layer was analyzed by HPLC.
  • the column was TSKGel ODS120H (manufactured by Tosoh Corporation, trade name), the mobile phase was a mixed solvent of 50mM borate buffer (pH 9.0)/acetonitrile (91:9 by volume), the flow rate was 0.8mL/min, and the column temperature was The analysis was conducted under the conditions of 35° C. and a UV detection wavelength of 310 nm.
  • MALDI-TOFMS analysis method JMS-S3000 Spiral TOF-plus (manufactured by JEOL) was used as an apparatus, and 2,5-dihydroxybenzoic acid was used as a matrix. Measurement was carried out under the conditions of positive ion mode, LaserIntensity 60, and Delay time 350, with Spiral mode when the molecular weight was 3,000 or less, and Linear mode when the molecular weight was over 3,000.
  • Example A1 Preparation of crude pectic polysaccharide from plants (1) Preparation of defatted sample Approximately 50 g of plant powder was weighed into a 500 mL Erlenmeyer flask, and 300 mL of a mixed solution of chloroform and methanol (volume ratio 9:1) was added. The mixture was covered with aluminum foil and stirred vigorously for 1 hour using a stirrer. After suction filtration using a 110 mm diameter suction funnel and a 1000 mL suction bottle, the flask and the filtered plant were washed with the above mixture. The collected plants and 300 mL of the above mixed solution were added to the flask, and after stirring again for 1 hour using a stirrer, the plants were collected by filtration. This process was repeated two more times (total of three times) to obtain a defatted sample.
  • the obtained supernatant was placed in a 1 L beaker, ethanol (twice the amount of the supernatant) was added, and the mixture was strongly stirred using a stirrer. After collecting the precipitate by centrifugation (17,800 x g, 10 minutes, 4°C), it was dissolved in RO water, and the supernatant after centrifugation (17,800 x g, 10 minutes, 4°C) was collected and freeze-dried. A pectic polysaccharide sample was obtained.
  • the catalytic activity and stereoselectivity of the crude pectic polysaccharide of each plant were measured by "Catalytic Activity Measurement Method I” and are listed in Tables 1 and 2 along with the yields.
  • “A” indicates that a defatted sample was used
  • “B” indicates that a crude pectic polysaccharide prepared by the acetic acid method was used.
  • Patent Documents 7, 8 and Non-Patent Document 11 such as Distinctaceae, Malvaceae, Papayaceae, Moringaceae, Asteraceae, Lauraceae, Piperaceae, Heminaceae, and Perilla.
  • Example A2 Preparation of LP-LMW from plants (water-soluble soybean polysaccharide) Weigh out 7.5g of water-soluble soybean polysaccharide (product name: Soyafive S-DN, manufactured by Fuji Oil Co., Ltd.), and add 275mL of purified water. was added and sterilized in an autoclave (121°C, 15 minutes). A solution of 1.5 g of lipase A "Amano" 6 (manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.), 15 mL of 0.5 M sodium phosphate buffer (pH 7) and 15 mL of purified water was added using a 0.45 ⁇ m diameter filter and an autoclave.
  • Catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of major peaks were measured for water-soluble soybean polysaccharide (product name: Soyafive S-DN, manufactured by Fuji Oil Co., Ltd.) and LP-LMW fraction, and sugar composition was analyzed. did. The results are shown in Tables 4 and 5. Catalytic activity and stereoselectivity were measured by "catalytic activity measurement method III", and average molecular weight was measured by "gel filtration HPLC analysis method II".
  • Example A3 Decomposition of polysaccharide by rhamnogalacturonic acid lyase (RGL) (1) Purification of "enzyme that decomposes water-soluble soybean polysaccharides" (Lip-RGL) from a commercially available enzyme Commercially available enzyme (product name: Lipase A 40 g of "Amano" 6, manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd., was suspended in 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7). Ammonium sulfate was added to the resulting suspension to the desired percent saturation. From the ammonium sulfate fraction corresponding to 60% to 90% saturation, a precipitate was centrifuged and desalted by dialysis. The desalted solution was applied to an anion exchange column (trade name: DEAE-Toyopearl, manufactured by Tosoh Corporation), and then eluted with a 0.2M aqueous sodium chloride solution to desalt the obtained fraction.
  • an anion exchange column trade name:
  • the above desalted solution was applied to an FPLC system (AKTA explorer 10S, manufactured by GE Healthcare) equipped with a Mono Q 5-50 GL column (1.0 mL, manufactured by GE Healthcare), and buffer solution A (10 mM potassium phosphate buffer (pH 7)) and Buffer B (10 mM potassium phosphate buffer (pH 7), 0.5 M sodium chloride).
  • buffer solution A 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7)
  • Buffer B 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7), 0.5 M sodium chloride
  • lane 1 contains a molecular weight marker
  • lane 2 contains a solution of a commercially available enzyme (Lipase A "Amano" 6, manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.)
  • lane 3 contains an ammonium sulfate fraction (60-90%
  • lane 4 shows the fraction eluted from the column (product name: DEAE Toyopearl, manufactured by Tosoh Corporation)
  • lane 5 shows the column (product name: Mono Q 10-100 GL, Sigma-Aldrich).
  • the fraction eluted from the column was provided in lane 6.
  • the arrow in FIG. 1 indicates the position of the band corresponding to purified Lip-RGL.
  • the protein concentration of the lipase (Lipase A "Amano" 6, manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.) solution was 2.6 mg/mL, and the protein concentration of the LipRGL solution was 0. It was .026 mg/mL.
  • the enzyme lipase A "Amano" 6 is derived from Aspergillus niger. Therefore, the present inventors compared the obtained amino acid sequence information with the registration from the Aspergillus genus (taxid: 5052) in the NCBI protein database and identified five enzymes (glucoamylase, cellobiohydrolase, rhamnogalacturonic acid lyase).
  • endo-1,3- ⁇ -D-glucanase, ⁇ -mannase was extracted as a candidate, and since this enzyme is an enzyme that digests water-soluble soybean polysaccharides with a rhamnogalacturonan structure, It was presumed to be galacturonic acid lyase.
  • FIG. 2 shows the amino acid sequence of Aspergillus luchuensis mut.
  • kawachii NBRC 4308 Aspergillus kawachii rhamnogalacturonic acid lyase A (AkRGL), and the underlined amino acids are the sequences derived from the LipRGL peptide.
  • AkRGL genetic information (GenBank ID: DF126458.1) was obtained from the NCBI gene database, and a gene (SEQ ID NO: 2) for E. coli expression was artificially synthesized. Based on the obtained gene, forward (SEQ ID NO: 3) and reverse (SEQ ID NO: 4) PCR primers were prepared. The gene was amplified by PCR using the above primers and the artificially synthesized gene of AkRGL. The amplified gene was introduced into pQE-80L vector (manufactured by Qiagen) to obtain an N-terminal His-tag fused AkRGL expression plasmid (pQE80L-RGL).
  • the obtained plasmid pQE80L-RGL was introduced into Escherichia coli BL21(DE3), JM109 and Rosetta2(DE3), respectively, to prepare transformants BL21(DE3)-AkRGL, JM109-AkRGL and Rosetta2(DE3)-AkRGL.
  • the ability of each E. coli to produce AkRGL was confirmed by SDS-PAGE.
  • GPC analysis showed that a catalyst (AkRGL-LMW) could be prepared from Soyafive S-DN using cell-free extracts of each transformant, similar to lipase (Lipase A "Amano" 6, manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.). I confirmed it.
  • the washed bacterial cells were suspended in 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7), crushed with beads of 0.1 mm in diameter using a multi-bead shocker (manufactured by Yasui Kikai Co., Ltd.), and then centrifuged (12,000 x g, Insoluble matter was removed at 4° C. for 15 minutes to obtain an extracellular extract.
  • the above extracellular extract was applied to a Ni Sepharose 6 Fast Flow column (GE Healthcare Life Sciences, 3 x 8.5 cm) and washed with 10 mM potassium phosphate buffer (pH 8.0) containing 0.1 M sodium chloride and 10 mM imidazole. Thereafter, the imidazole concentration of the same buffer was continuously increased to 300 mM for elution. Fractions with enzyme activity were collected, desalted, and applied to an FPLC system (AKTA explorer 10S) equipped with a HisTrap HP column (manufactured by GE Healthcare Life Sciences, 1.6 x 2.5 cm, 5 mL).
  • Example A4 Decomposition with alkali (1) Preparation by sodium hydroxide and ethanol fraction Water-soluble soybean polysaccharide (product 100 g of Soyafive S-DN (manufactured by Fuji Oil Co., Ltd.) was added, placed in a 3L four-necked flask, and heated in an oil bath with stirring for 120 hours so that the internal temperature reached 70°C. After neutralization to pH 7 with acetic acid, insoluble materials were removed by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes) to obtain a neutralized hydrolysis solution, and its volume (X) was measured.
  • Water-soluble soybean polysaccharide product 100 g of Soyafive S-DN (manufactured by Fuji Oil Co., Ltd.) was added, placed in a 3L four-necked flask, and heated in an oil bath with stirring for 120 hours so that the internal temperature reached 70°C. After neutralization to pH 7 with acetic acid, insoluble materials were removed by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes
  • Ethanol (0.3 times the amount of X) was added dropwise to the supernatant obtained in the previous step while stirring. After the dropped liquid was left in the refrigerator for one day, the resulting precipitate was collected by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes). The obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a MWCO3500 dialysis tube, and dialyzed against a 10 mM acetic acid solution as an external solution. The dialysis solution was freeze-dried to obtain 1.4 g of fraction (AL-LMW EtOH 1.1/1.4). Table 7 shows the results of measuring the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”. Furthermore, the results of monosaccharide analysis of each fraction are shown in Table 8.
  • Table 9 shows the results of measuring the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”. Furthermore, the results of monosaccharide analysis of each fraction are shown in Table 10.
  • the obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a MWCO3500 dialysis tube, and dialyzed against a 10 mM acetic acid solution as an external solution.
  • the dialyzed solution was centrifuged (15,000 ⁇ g, 10 minutes), and the supernatant was lyophilized to obtain a polysaccharide fraction (AL-LMW).
  • Table 11 shows the decomposition time, yield, catalytic activity, stereoselectivity, average molecular weight, and color (visual) of the hydrolysis solution at the end of decomposition at each hydrolysis temperature.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III”
  • average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • a hydrolyzate having catalytic activity was obtained by alkali treatment at a temperature range of 50 to 121°C.
  • Table 12 shows the decomposition time, yield, catalytic activity, stereoselectivity, peak molecular weight, and color of the hydrolyzed solution at the end of decomposition at each alkali concentration.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • a hydrolyzate having catalytic activity was obtained by alkali treatment at an alkali concentration range of 0.5 to 3.0M.
  • Table 13 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • Example A5 Preparation of AL-LMW from "okara" 5 g of okara powder (trade name: okara powder, manufactured by Acrosia Co., Ltd.) is added to 250 mL of an aqueous solution of 20 g of sodium hydroxide and 0.38 g of sodium borohydride. was suspended, placed in a 300 mL four-necked flask, and heated in an oil bath while stirring for 100 hours so that the internal temperature reached 70°C. The pH of the reaction solution was adjusted to 6 with acetic acid, the hydrolysis solution was centrifuged (12,000 ⁇ g, 15 minutes), and the volume (X) of the resulting supernatant was measured. Ethanol (0.5 times the volume of Ethanol (0.3 times the volume of
  • Table 14 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • Monosaccharide composition analysis was performed according to the "monosaccharide composition analysis method" and the analysis results are shown in Table 15.
  • Example A6 Degradation of LP-LMW by enzymes (1) Selection of enzymes 50 mg/mL LP-LMW (100 ⁇ L) in a 1.5 mL tube, 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0) and as listed in Table 16 A commercially available enzyme solution (20 ⁇ L) was mixed and reacted at 37° C. and 1000 rpm for 22 hours. Add 20 ⁇ L of Proteinase K (manufactured by Takara Bio Co., Ltd., Code No. 9034) to the reaction solution, react at 37°C and 1000 rpm for an additional 3 hours, centrifuge, and then transfer the supernatant to "gel filtration HPLC analysis method I".
  • Proteinase K manufactured by Takara Bio Co., Ltd., Code No. 9034
  • FIG. 3 shows the results of analysis using 0.46 mU/mL of Enzyme A over time under the conditions of gel filtration HPLC analysis I.
  • FIG. 3 is a chromatogram after untreated (LP-LMW), 0.5, 1, 2, 4, 6, or 24 hours. Treatment with endo- ⁇ 1,4-galactanase derived from a different species resulted in decomposition to a molecular weight of less than 3000, suggesting that the main component of LP-LMW is ⁇ 1,4-linked galactose.
  • Table 17 shows the yield, catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction. Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”. Table 18 shows the results of monosaccharide composition analysis.
  • the purified water elution fraction (LP-LMW-D1degD1) and the 100mM sodium bicarbonate elution fraction (LP-LMW-D1degD2) were concentrated using an evaporator and then transferred to a dialysis tube with a MWCO of 1000 for purification. Dialysis was performed with water. After freeze-drying the dialysate, 199 mg and 37.2 mg of each fraction were obtained, respectively.
  • Table 19 shows the yield, catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction. Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II". Table 20 shows the results of monosaccharide composition analysis.
  • the obtained fractions were analyzed according to "gel filtration HPLC analysis method II", and the molecular weight was determined to be more than 5 ⁇ 10 3 , 4 to 5 ⁇ 10 3 , 3 to 4 ⁇ 10 3 , 2 to 3 ⁇ 10 3 ,
  • the fractions BG1 (23.3 mg), BG2 (24.2 mg), BG3 (20.7 mg), and BG4 (25.6 mg) were collected separately into five fractions of less than 2 ⁇ 10 3 and lyophilized, respectively. , BG5 (33.2 mg) were obtained.
  • Table 21 shows the catalytic activity, stereoselectivity, average molecular weight, and monosaccharide analysis results for each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were determined according to “Catalytic Activity Measurement Method III”
  • average molecular weight was determined according to “Gel Filtration HPLC Analysis Method II”
  • monosaccharide analysis was determined according to “Monosaccharide Composition Analysis Method.”
  • no sugars other than galactose and arabinose were detected in the monosaccharide analysis.
  • AL-LMW-D1degD1 was subjected to gel filtration column chromatography to be fractionated to obtain fractions B1 to B4 in the order of eluting first.
  • Table 23 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction. Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis II".
  • Figure 4 summarizes the relationship between molecular weight, catalytic activity, and stereoselectivity for the fractions obtained by digesting or purifying LP-LMW and AL-LMW. Ta.
  • molecular weight was between 2.5 ⁇ 10 3 and 3 ⁇ 10 3
  • stereoselectivity as a catalyst tended to decrease rapidly.
  • molecular weight was between 2.5 ⁇ 10 3 and 6 ⁇ 10 3
  • Example A7 Hydrolysis of polysaccharide by acid (1) Examination of acidic conditions 5 g of polysaccharide fraction (AL-LMW EtOH0.8/1.1-PPT) was dissolved in purified water, and AL-LMW EtOH0.8/1.1-PPT 500 mL of solution was obtained.
  • Dilute sulfuric acid was added to the AL-LMW EtOH0.8/1.1-PPT solution to adjust the pH to 3, and 30 mL each was placed in a test tube and heated to an internal temperature of 70°C, 80°C, or 90°C while stirring. After hydrolysis proceeded, 0.2 mL of 1M sodium acetate solution (pH 5) and 12 mL of ethanol were sequentially added to 3.8 mL of the sample collected from each test tube, and the mixture was stored in a refrigerator for 1 day. The resulting precipitate was collected by centrifugation (15,000 ⁇ g, 10 minutes) and dried through ventilation. The dried precipitate was suspended in a small amount of purified water and lyophilized to obtain a low molecular weight polysaccharide fraction.
  • Dilute sulfuric acid was added to the AL-LMW EtOH0.8/1.1-PPT solution to adjust the pH to 3, and 7 mL of the solution was transferred to a test tube, fitted with a silicone stopper, and heated to 121°C in an autoclave. After the hydrolysis proceeded, 0.25 mL of 1M sodium acetate solution (pH 5) and 15 mL of ethanol were sequentially added to 4.75 mL of the sample taken from the test group, and the mixture was stored in a refrigerator for one day. The resulting precipitate was collected by centrifugation (15,000 ⁇ g, 10 minutes) and dried through ventilation. The dried precipitate was suspended in a small amount of purified water and lyophilized to obtain a low molecular weight polysaccharide fraction.
  • Table 24 shows the decomposition time under each hydrolysis condition, the yield of the obtained low-molecular-weight polysaccharide fraction, the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of the obtained decomposed product.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis II”.
  • the yield is calculated based on the amount of crude product obtained by ethanol precipitation, so it contains inorganic salts and may exceed 100%. It was confirmed that the decomposition by acid proceeded at a temperature of 70 to 121°C and a pH of 2 to 4.
  • Ethanol (same amount as X) was added dropwise to the neutralized hydrolyzed solution while stirring.
  • the resulting precipitate was collected by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes) (separated supernatant 1 was used in the next step).
  • the obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a dialysis tube of MWCO 1000, and dialyzed using a 10 mM acetic acid solution as an external liquid. The dialyzed solution was freeze-dried to obtain 1.2 g of a low molecular weight polysaccharide fraction (AS-LLMW EtOH 0/1.0).
  • Ethanol (same amount as X) was added dropwise to supernatant 2 and stirred.
  • the resulting precipitate was collected by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes) (separated supernatant 3 was used in the next step).
  • the obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a dialysis tube of MWCO 1000, and dialyzed using a 10 mM acetic acid solution as an external liquid. The dialyzed solution was freeze-dried to obtain 0.96 g of a low molecular weight polysaccharide fraction (AS-LLMW EtOH 2.0/3.0).
  • Table 25 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and peak molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • Monosaccharide composition analysis was carried out according to the "monosaccharide composition analysis method" and the results are shown in Table 26.
  • the obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a dialysis tube of MWCO 1000, and dialyzed using a 10 mM acetic acid solution as an external liquid. The dialyzed solution was freeze-dried to obtain 2.6 g of a low molecular weight polysaccharide fraction (AM-LLMW EtOH 1.0/1.4).
  • Ethanol (0.6 times the amount of X) was added dropwise to the supernatant 2 while cooling it in an ice-water bath and stirring.
  • the resulting precipitate was collected by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes) (separated supernatant 3 was used in the next step).
  • the obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a dialysis tube of MWCO 1000, and dialyzed using a 10 mM acetic acid solution as an external liquid. The dialyzed solution was freeze-dried to obtain 2.0 g of a low molecular weight polysaccharide fraction (AM-LLMW EtOH 1.4/2.0).
  • Ethanol (same amount as X) was added dropwise to supernatant 3 while stirring.
  • the resulting precipitate was collected by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes).
  • the obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a dialysis tube of MWCO 1000, and dialyzed using a 10 mM acetic acid solution as an external liquid. The dialyzed solution was freeze-dried to obtain 0.52 g of a low molecular weight polysaccharide fraction (AM-LLMW EtOH 2.0/3.0).
  • Table 27 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • Table 28 shows the results of "monosaccharide composition analysis" of fractions prepared in the same manner but with different addition ratios of the ethanol fraction after hydrolysis.
  • Ethanol (same amount as X) was added dropwise to the neutralized hydrolyzed solution while stirring.
  • the resulting precipitate was removed by centrifugation (15,000 ⁇ g, 10 minutes), and ethanol (0.4 times the volume of X) was added dropwise to the supernatant while stirring.
  • the resulting precipitate was collected by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes) (separated supernatant 1 was used in the next step).
  • the obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a dialysis tube of MWCO 1000, and dialyzed using a 10 mM acetic acid solution as an external liquid. The dialyzed solution was freeze-dried to obtain 0.17 g of an acid low molecular weight fraction (AA-LLMW EtOH 1.0/1.4).
  • Ethanol (0.6 times the amount of X) was added dropwise to supernatant 1 while stirring.
  • the resulting precipitate was collected by centrifugation (15,000 ⁇ g, 10 minutes) (separated supernatant 2 was used in the next step).
  • the obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a dialysis tube of MWCO 1000, and dialyzed using a 10 mM acetic acid solution as an external liquid. The dialyzed solution was freeze-dried to obtain 0.15 g of an acid-treated low molecular weight fraction (AA-LLMW EtOH 1.4/2.0).
  • Ethanol (same amount as X) was added dropwise to supernatant 2 while stirring.
  • the resulting precipitate was collected by centrifugation (15,000 ⁇ g, 10 minutes).
  • the obtained precipitate was suspended in purified water, placed in a dialysis tube of MWCO 1000, and dialyzed using a 10 mM acetic acid solution as an external liquid.
  • the dialysis solution was freeze-dried to obtain 0.032 g of acid-treated low molecular weight fraction (AA-LLMW EtOH 2.0/3.0).
  • Table 29 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • the catalytic activity and stereoselectivity of the DEAE non-adsorbed fraction were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and the peak molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II". Catalytic activity was 17.2 mU/mg, stereoselectivity was 66.8% ee, and peak molecular weight was 3.9 x 103 .
  • this fraction was composed of 0.1% frucose, 3.1% arabinose, 96.8% galactose, and other sugars. was not detected.
  • the obtained fraction was analyzed by "gel filtration HPLC analysis II" to measure the molecular weight and relative sugar content. After collecting fractions with a molecular weight of more than 4.5 ⁇ 10 3 , 3.5 to 4.5 ⁇ 10 3 , and less than 3.5 ⁇ 10 3 , the fractions were separated using gel filtration chromatography for three column volumes. The fractions were combined and lyophilized to obtain fractions BG1 to BG3.
  • Table 30 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • Example A8 Preparation from carrots (1) Preparation of pectic polysaccharide from carrots Approximately 50 g of powdered carrots (trade name: Carrot Fine Powder, manufactured by Mikasa Sangyo Co., Ltd.) was weighed into a 500 mL Erlenmeyer flask, and mixed with chloroform and methanol. 300 mL of the mixed solution (volume ratio 9:1) was added, the mixture was covered with aluminum foil, and the mixture was vigorously stirred for 1 hour using a stirrer. After suction filtration using a suction funnel and a suction bottle, the flask and filtered plant bodies were washed with the same mixture and collected.
  • powdered carrots (trade name: Carrot Fine Powder, manufactured by Mikasa Sangyo Co., Ltd.) was weighed into a 500 mL Erlenmeyer flask, and mixed with chloroform and methanol. 300 mL of the mixed solution (volume ratio 9:1) was added, the mixture was
  • Pectic polysaccharide (238 mg) was suspended in an aqueous solution (27 mL) of sodium hydroxide (1.08 g) and sodium borohydride (41 mg), and the suspension was placed in a test tube. This was heated with an aluminum block, stirred for 40 hours at an internal temperature of 70°C, and neutralized to pH 6 with acetic acid to obtain a neutralized hydrolysis solution, and its volume (X) was measured. Ethanol (0.5 times the amount of X) was added dropwise while stirring the neutralized hydrolyzed solution.
  • the resulting precipitate was removed by centrifugation (15,000 ⁇ g, 10 minutes), and while stirring the supernatant, ethanol (0.6 times the amount of X) was added dropwise, and the mixture was allowed to stand in the refrigerator for one day.
  • the resulting precipitate was collected by centrifugation (15,000 ⁇ g, 10 minutes), dissolved in purified water (1.3 mL), and applied to a desalting column (trade name: PD-10).
  • the eluate containing sugar was collected and freeze-dried to obtain 87 mg of a fraction (AL-LMW EtOH 0.5/1.1).
  • Table 31 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • the catalytic activity of the crude pectic polysaccharide was improved by 3.9 times, and the catalytic activity of the fraction (AL-LMWEtOH 0.5/1.1) was improved by 6.1 times.
  • the optical purity of the amino alcohol, which is the product of the epoxy ring-opening reaction, was also 53% ee for powdered carrot, 64% ee for the crude pectic polysaccharide, and 66% ee for the fraction (AL-LMW EtOH 0.5/1.1). It was found that the stereoselectivity was also improved.
  • the resulting precipitate was removed by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes), and while stirring the resulting supernatant, ethanol (0.6 times the volume of The resulting precipitate was collected by centrifugation (12,000 ⁇ g, 20 minutes), suspended in purified water, placed in a MWCO3500 dialysis tube, and the external solution was dialyzed against a 10 mM acetic acid solution. The dialyzed solution was freeze-dried to obtain 0.28 g of a polysaccharide fraction (AL-LMW EtOH 0.5/1.1).
  • the resulting precipitate was dissolved in 1 mL of purified water, centrifuged (15,000 ⁇ g, 10 minutes), and the supernatant was applied to a desalting column (trade name: PD-10) to obtain an eluate containing sugar.
  • This eluate was applied to a column (trade name: DEAE-Toyopearl (OH type), manufactured by Tosoh Corporation, column volume: 4 mL), and purified water was passed therethrough.
  • the non-adsorbed fraction containing sugar was collected and freeze-dried to obtain 10.7 mg of an acid-decomposed low molecular weight polysaccharide fraction (AS-LLMW EtOH1.0/2.0 DEAE-FT).
  • Table 32 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and average molecular weight of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III", and average molecular weight was measured according to "Gel Filtration HPLC Analysis Method II”.
  • the catalytic activity of the polysaccharide fraction (AL-LMWEtOH 0.5/1.1) is 2.3 times higher than that of the acid-decomposed low-molecular-weight polysaccharide fraction (AS-LLMW EtOH 1.0/2.0 DEAE-FT).
  • the catalytic activity of was improved by 9.4 times.
  • the optical purity of amino alcohol which is a product of the epoxy ring-opening reaction, was 41% ee for carrot powder, 56% ee for polysaccharide fraction (AL-LMW EtOH 0.5/1.1), and 56% ee for acid-decomposed low-molecular-weight polysaccharide fraction (AS- LLMW EtOH 1.0/2.0 DEAE-FT) was 64% ee, indicating that the stereoselectivity was also improved.
  • Example A9 Direct preparation of low-molecular-weight polysaccharide fraction from water-soluble soybean polysaccharide (1) Fractionation of water-soluble soybean polysaccharide using anion exchange column Soyafive S-DN (manufactured by Fuji Oil Co., Ltd.) , 4 g) was dissolved in purified water (40 mL), autoclaved, and then centrifuged to remove insoluble materials. The supernatant was applied to a column (trade name: DEAE TOYOPERAL 650 (OH type), manufactured by Tosoh Corporation, column volume (CV) 160 mL) equilibrated with a 10 mM aqueous sodium hydrogen carbonate solution.
  • DEAE TOYOPERAL 650 OH type
  • the fractions eluted with 10mM and 100mM sodium bicarbonate aqueous solutions are called SFD1 and SFD2, respectively, and the fractions eluted with 100mM and 300mM sodium carbonate aqueous solutions are called SFD3 and SFD4, respectively.
  • SFD1 and SFD2 fractions eluted with 10mM and 100mM sodium bicarbonate aqueous solutions
  • SFD3 and SFD4 fractions eluted with 100mM and 300mM sodium carbonate aqueous solutions
  • SFD3 and SFD4 The results are shown in Table 33.
  • SFD2/3 Partial decomposition of fraction SFD2/3 by enzymatic treatment
  • the fraction eluted with purified water is SFD2/3degE2D1 (in particular, the first half is called SFD2/3degE2D1-1, and the second half is called SFD2/3degE2D1-2), 100 mM sodium carbonate.
  • the fraction eluted with an aqueous solution is called SFD2/3degE2D2.
  • Table 34 shows the catalytic activity, stereoselectivity, peak molecular weight, and monosaccharide analysis results for each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III”
  • average molecular weight was measured according to “Gel Filtration HPLC Analysis Method II”
  • monosaccharide analysis was measured according to "Monosaccharide Composition Analysis Method.”
  • the catalytic activity of SFD2/3degE2D1 was 15 mU/mg.
  • FIGS. 5(a) and 5(b) are graphs plotting the estimated molecular weight and catalytic activity of the neutral galactan fraction, respectively. When the estimated molecular weight was 3 ⁇ 10 3 or more, there was a tendency that the higher the estimated molecular weight, the higher the catalytic activity.
  • the catalytic activity reached a plateau when the estimated molecular weight was around 6 ⁇ 10 3 . It has been found that when the estimated molecular weight is 3000 or less, the stereoselectivity of the catalyst is significantly reduced. Furthermore, the results of monosaccharide composition analysis are shown in FIG. As shown in FIG. 6, there was a tendency that the larger the estimated molecular weight, the larger the arabinose content. In the fractions with estimated molecular weights around 2.5 ⁇ 10 3 to 7 ⁇ 10 3 , the arabinose content was about 5%.
  • Example A10 Purification of low molecular weight polysaccharide fraction (NG) using HILIC-HPLC (1) Estimation of degree of polymerization in HILIC-HPLC analysis Oligosaccharide with degree of polymerization (DP) of 9 consisting of ⁇ 1,4-linked galactose (Synthetic Gal9) was synthesized according to literature (Chemistry A European Journal, 22, 11543-11548 (2016), European Journal of Organic Chemistry, 3849-3869 (2001)). The catalytic activity of the synthesized Gal9 was approximately 0.4 mU/mg, which was comparable to that of commercially available D-galactose, showing almost no catalytic activity, and no stereoselectivity could be confirmed.
  • Example A9 The fraction prepared in Example A9 (estimated molecular weight: 1 to 2 ⁇ 10 3 ) was analyzed under the following HILIC analysis conditions.
  • the chromatogram showed a sawtooth shape in which peaks detected with high sensitivity (major peaks) and peaks detected with low sensitivity (minor peaks) alternately elute multiple times. Since the peak of synthetic Gal9 overlaps with one of the major peaks, that peak is named "9mer”, and based on this peak, the major peaks are numbered with integers in the order in which they elute. The minor peaks eluted were numbered by adding ".5" to the number of the major peak eluted immediately before. For example, the minor peak that elutes immediately before “9mer” (synthetic Gal9) is "8.5mer”, and the major peak that elutes immediately before "8.5mer” is "8mer".
  • Table 35 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and monosaccharide composition analysis results of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic activity measurement method IV (0.1 mg catalyst amount)", and monosaccharide composition analysis was measured according to "Monosaccharide composition analysis method”.
  • Figure 7(a) is a chromatogram of HILIC-HPLC fractionation of "Fraction NG3-4kDa”
  • Figure 7(b) is a chromatogram obtained by HILIC-HPLC analysis of each fraction after fractionation. This is a graph showing overlapping chromatograms. Each fraction showed a single peak in HPLC analysis.
  • HILIC-HPLC separation of “fraction NG2-3 kDa” The fraction with a molecular weight of 2-3 ⁇ 10 3 obtained in Example A9 (fraction NG2-3 kDa) was subjected to HILIC analysis as described in (2) above. In terms of conditions. HILIC-HPLC fractionation was performed under the conditions that the eluent was changed to acetonitrile/purified water (63/37).
  • the major peak fraction was mixed as “pool a” and the minor peak fraction was mixed as “pool b", acetonitrile was removed using an evaporator, and freeze-drying was performed.
  • the resulting pool a and b fractions were dissolved in purified water to a concentration of 150 mg/mL, centrifuged to obtain a supernatant, filtered through a 0.2 ⁇ m filter, and fractionated again under the above conditions. I did it.
  • Corresponding fractions were mixed, acetonitrile was removed using an evaporator, and freeze-drying was performed.
  • the obtained fractions were analyzed under the HILIC-HPLC analysis conditions described in (1) above, except that the eluent was changed to acetonitrile/purified water (62/38), and each peak was analyzed. were numbered.
  • Table 36 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and monosaccharide composition analysis results of each fraction.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method IV (0.1 mg catalyst amount)", and monosaccharide composition analysis was measured according to "Monosaccharide Composition Analysis”.
  • Figure 8(a) is a chromatogram when "Fraction NG2-3kDa” is purified once by HILIC-HPLC preparative separation
  • Figure 8(b) is a chromatogram of "Pool a” and “Pool b”, respectively. This is a chromatogram obtained when purified by HILIC-HPLC fractionation
  • FIG. 8(c) is a graph in which the chromatograms obtained when each fraction after fractionation was analyzed by HILIC-HPLC are superimposed. Each fraction showed a single peak in HPLC analysis.
  • the molecular ion peak of the obtained fraction was measured according to the "MALDI-TOFMS analysis method". The results are shown in Table 37.
  • the most intense m/z value of the peak was considered to be the molecular ion peak of [M+Na + ] or [M+K + ].
  • the arabinose content contained in the isolated polysaccharide was 6% or less, it was estimated that it was composed only of galactose or contained one or two molecules of arabinose in each molecule. Therefore, the number of galactose and arabinose in one molecule and the degree of polymerization (DP) were estimated based on the molecular ion peak m/z value.
  • Table 37 shows the estimation results of the degree of polymerization of each fraction.
  • the sugar contained in the major peak fraction was mainly composed of only galactose, and the degree of polymerization (DP) and peak number matched.
  • the sugar contained in the fraction of the minor peak mainly contained one molecule of arabinose, and the rest was a polysaccharide consisting of galactose, and the degree of polymerization (DP) coincided with the value obtained by adding 0.5 to the peak number.
  • Catalytic activity tended to be better as the degree of polymerization increased, and stereoselectivity tended to be better as the degree of polymerization increased between DP11 and DP15, and was at the same level in the range of DP15 or higher. From the viewpoint of stereoselectivity, it was considered that a degree of polymerization of 13 or more would be more practical.
  • FIG. 11 is a graph in which the chromatograms of each sample are superimposed.
  • Table 38 shows the catalytic activity, stereoselectivity, and molecular ion peak of each fraction obtained.
  • Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method IV", and molecular ion peaks were measured according to "MALDI-TOFMS analysis”.
  • Catalytic Activity Measurement Method IV Catalytic Activity Measurement Method IV
  • molecular ion peaks were measured according to "MALDI-TOFMS analysis”.
  • 19.5mer there was a polysaccharide (19.5-3) that was composed of 19 galactose molecules and 1 arabinose molecule and showed a single peak on HPLC.
  • Example A11 ODS-HPLC fractionation Fraction BG2 (20 mg) obtained in Example A7 above was dissolved in 400 ⁇ L of purified water, and ODS-HPLC fractionation was performed under the following conditions.
  • FIG. 12 shows chromatograms obtained by ODS-HPLC analysis of each fraction before and after fractionation.
  • the analysis conditions are as follows. Fractions C to I corresponding to peaks C to I were all single peaks.
  • fractions D, E, and F monosaccharide composition analysis was performed according to the "monosaccharide composition analysis method", and molecular ion peak measurement was performed according to the "MALDI-TOFMS analysis method”. The results are shown in Table 39. The analysis results revealed that fractions D, E, and F were polysaccharides composed of only 20, 21, and 22 galactoses, respectively.
  • fraction BG3 obtained in Example A7 above was subjected to ODS-HPLC fractionation to obtain fractions corresponding to DP16 to DP19.
  • FIG. 14(a) is a graph showing the catalytic activity of DP16 to DP25
  • FIG. 14(b) is a graph showing the stereoselectivity of DP16 to DP25.
  • the catalytic activity was high, and there was a tendency that the higher the degree of polymerization, the higher the catalytic activity.
  • the higher the degree of polymerization, the higher the stereoselectivity, and DP20 to DP25 showed the same degree of stereoselectivity.
  • Example A12 Modification of reducing end of low-molecular polysaccharide fraction (1) Conversion of fractions BG1 to BG1 to ethyl 4-aminobenzoate (ABEE) and tert-butyl 4-aminobenzoate (ABtB) Sodium cyanoborohydride ( 35 mg) and ABEE (165 mg) or ABtB (193 mg) in a screw tube, add methanol (350 ⁇ L) and acetic acid (41 ⁇ L), stir by vortexing, and dissolve by heating at approximately 60°C to dissolve the derivatization reagent. Prepared.
  • ABEE ethyl 4-aminobenzoate
  • ABtB tert-butyl 4-aminobenzoate
  • Example A6 Each solution of BG1-5 obtained in Example A6 (10 mg/mL, 10 ⁇ L) was placed in a 1.5 mL mini tube, the derivatization reagent (40 ⁇ L) was added, and the tube was heated at 80° C. for 1 hour. Purified water (500 ⁇ L) was added, extracted with chloroform, and the aqueous layer was analyzed by HPLC under the following conditions.
  • ABEE-converted BGs 1 to 3 each showed a broad single peak, and ABEE-converted BGs 4 to 5 each showed multiple peaks. Furthermore, ABtB-converted BG1 showed a broad single peak, and ABtB-converted BG2 and 3 showed sawtooth peaks. It was found that all of BG1 to BG5 were converted to derivatives having absorption at a wavelength of 310 nm.
  • NG-ABEE and the sample before modification (NG) were analyzed by the method of "Gel Filtration HPLC Analysis II". The results are shown in FIG. Detection was performed using both RID and UV (detection wavelength: 310 nm). NG-ABEE was confirmed to have absorption at a wavelength of 310 nm by UV detection, and RID detection revealed that the retention times of NG and NG-ABEE were almost the same.
  • NG and NG-ABEE The catalytic activity and stereoselectivity of NG and NG-ABEE were evaluated. Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III". The results are shown in Table 40. NG-ABEE showed similar stereoselectivity as NG and 1.3 times higher catalytic activity.
  • Example B1 NMR analysis 1 H-NMR and 13 C-NMR of AL-LMW were measured under the following conditions.
  • Solvent Heavy water ( D2O )
  • NMR measurement device Bruker AVANCE II 400 (manufactured by Bruker) Frequency: 400MHz for 1H -NMR, 100MHz for 13C -NMR
  • the 1 H-NMR spectrum is shown in FIG. 16, and the 13 C-NMR spectrum is shown in FIG. 17.
  • Each chemical shift value ( ⁇ ) was analyzed with reference to the literature (Food Chemistry, 242, 211-216 (2018)).
  • the NMR spectrum of AL-LMW is similar to the value derived from “ ⁇ 4)- ⁇ -D-Galp-(1 ⁇ )” described in the literature, so the main structure of AL-LMW is It was found that galactose is a galactan in which galactose is bonded with ⁇ 1,4 bonds.In addition, no peaks corresponding to olefins or carbonyl groups were confirmed in the NMR spectrum.
  • Example B2 Multi-step derivatization and sugar chain binding position analysis of fraction NG3-4kDa 11mer, 11.5mer, 15mer, 15.5mer, 19.5mer prepared from fraction NG3-4kDa obtained in Example A10, Alternatively, using the 20mer as a sample, multi-step derivatization (methylation, monosaccharification, alditolization, and acetylation) was performed, and the binding position of the sugar chain was analyzed from the difference in molecular weight.
  • multi-step derivatization methylation, monosaccharification, alditolization, and acetylation
  • Step 1 Methylation Weigh the sample (1 mg) into a 2 mL screw cap tube, add dimethyl sulfoxide (500 ⁇ L) and sodium hydroxide (50 mg) ground into powder in a mortar, suspend, and stir at 1000 rpm for 30 minutes at 25°C. Stirred. Methyl iodide (250 ⁇ L) was added, mixed, and stirred at 25° C. for 20 to 25 hours.
  • Step 2 Monosaccharification After adding 100mM sodium thiosulfate aqueous solution (300 ⁇ L) and dichloromethane (300 ⁇ L) to the methylated composition and collecting the organic layer, the organic layer was washed with 100mM sodium thiosulfate aqueous solution and purified water. Desalting was performed, and the organic solvent was distilled off using a centrifugal evaporator. The obtained intermediate mixture was suspended in purified water (150 ⁇ L), and 4M trifluoroacetic acid (final concentration 2M) (150 ⁇ L) was added and stirred, followed by shaking at 120° C. for 2 hours.
  • purified water 150 ⁇ L
  • 4M trifluoroacetic acid final concentration 2M
  • Step 3 Alditolization After cooling the composition after monosaccharification to room temperature, lyophilize it, add and dissolve sodium borohydride (20 mg) and 2M aqueous ammonia (500 ⁇ L), and store at 60°C for 2 hours. Shake.
  • Step 4 Acetylation After the alditolized composition was cooled to room temperature, methanol (500 ⁇ L) was added and the azeotropic operation was repeated to distill off the solvent. Acetic anhydride (400 ⁇ L) and trifluoroacetic acid (100 ⁇ L) were added to the resulting residue, and the mixture was shaken at 60° C. for 2 hours.
  • ⁇ GC-MS conditions Measuring equipment: GC2010/GCMS-QP2010 (manufactured by Shimadzu Corporation)
  • Analytical column DB-225MS (20m x 0.25mm I.D., 0.25 ⁇ m)
  • Carrier gas helium
  • Column temperature After maintaining 140°C for 1 minute, the temperature was raised to 220°C at 20°C/min, and 220°C was maintained for 25 minutes.
  • FIG. 18 is a GC spectrum obtained by detecting m/z 118 after derivatizing 19.5mer and 20mer.
  • the peak detected at m/z 118 is generally a peak that frequently appears in mass spectra, indicating that some hydrogen atoms in partially methylated alditol acetate derived from hexose have been replaced with deuterium ( J.Biol.Chem., 293(30), 11955-11965(2018)).
  • many peaks derived from arabinose are detected at m/z 118.
  • 19.5mer and 20mer are sugar chains in which galactose is linked in a linear manner, and there are no branched chains, and the sugar chains are mainly composed of 1,4-linked galactose. It was assumed that arabinose was inserted in between.
  • Example C Examination of allergen content (1) Analysis of allergen content Okara (product name: Okara powder, manufactured by Acrosia Co., Ltd.), water-soluble soybean polysaccharide (product name: Soyafive S-DN), polysaccharide fraction Prepare solutions or suspensions of AL-LMW and low-molecular-weight polysaccharide fraction AM-LLMW, and use "FASTKIT Slim Soybean” (manufactured by Nippon Ham Co., Ltd.) to remove soybean from the supernatant according to the instruction manual. Allergen content was measured. After adding purified water to the bean curd and extracting it, centrifugation was performed, and the resulting supernatant was subjected to analysis.
  • Okara product name: Okara powder, manufactured by Acrosia Co., Ltd.
  • water-soluble soybean polysaccharide product name: Soyafive S-DN
  • polysaccharide fraction Prepare solutions or suspensions of AL-LMW and low-molecular-weight polysaccharide
  • Example C2 Gel resistance of allergen Water-soluble soybean polysaccharide (Soyafive S-DN, manufactured by Fuji Oil Co., Ltd.), two types of polysaccharide fractions (LP-LMW, AL-LMW-EtOH0.8/1.1PPT ) and low molecular weight polysaccharide fraction (AM-LLMW-EtOH1.0/1.4) were placed in a 1.5 mL glass container and suspended or dissolved in saturated saline to make 100 ⁇ L. After leaving the solution at room temperature for one day, the container was inverted, and if the solution did not flow, it was considered to be gelled.
  • LP-LMW polysaccharide fractions
  • AL-LMW-EtOH0.8/1.1PPT two types of polysaccharide fractions
  • AM-LLMW-EtOH1.0/1.4 low molecular weight polysaccharide fraction
  • polysaccharide samples water-soluble soybean polysaccharide (Soyafive S-DN, manufactured by Fuji Oil Co., Ltd., molecular weight approximately 100,000 to 840,000), LP-LMW (molecular weight 30,000 to 50,000), and AL-LMW (molecular weight 3 to 50,000) were used. 50,000) or AM-LLMW (molecular weight 3,000 to 5,000).
  • a similar experiment was conducted using a saturated aqueous potassium chloride solution instead of the saturated saline solution. A significant difference was determined by a t-test for water-soluble soybean polysaccharide, and when p ⁇ 0.01, it was determined that there was a "significant difference".
  • Example C4 Improving the amount of product recovered by two-phase reaction
  • 20 mg of Soyafive S-DN (manufactured by Fuji Oil Co., Ltd.) or a low molecular weight polysaccharide fraction (AM-LLMW) was added, and 300 ⁇ L of a toluene solution of the substrate (containing 10 v/v% epoxycyclohexane and 10.8 v/v% cyclopropylamine) was added, and the mixture was stirred at 37° C. and 300 rpm for 22 hours.
  • the toluene layer was collected, a new toluene solution (300 ⁇ L) of the substrate was added, and this was repeated two more times. That is, the aqueous phase was reused and the reaction was performed three times in total.
  • FIG. 19 is a photograph showing the state of each reaction vessel before collecting the toluene layer.
  • the left side shows the reaction vessel using water-soluble soybean polysaccharide
  • the right side shows the reaction vessel using AM-LLMW.
  • solid line arrows indicate the position of the liquid level of the toluene layer
  • dashed line arrows indicate the position of the interface between the water layer and the toluene layer.
  • Example C5 High-temperature reactivity Catalytic activity and stereoselectivity were measured using Soyafive S-DN or LP-LMW by changing the reaction temperature to 40°C, 50°C, 60°C, and 70°C according to activity measurement method V. . The results are shown in Table 44. Both LP-LMW and water-soluble soybean polysaccharide reached their maximum at 60°C. Stereoselectivity was hardly affected by temperature. LP-LMW at any temperature. It maintained a specific activity 1.5 to 2 times higher than Soyafive S-DN.
  • Example D Production of amino alcohol Racemic amino alcohol, which is a standard of the synthesized product, was analyzed by GC and HPLC under the following conditions. Each analysis condition is shown in Table 45 and Table 46.
  • Reference Example 1 Synthesis of trans-2-((4-methoxybenzyl)amino)cyclohexanol
  • Reference Example 1 Synthesis of trans-2-((4-methoxybenzyl)amino)cyclohexanol
  • the reaction solution was extracted three times with ethyl ether, and the organic layer was washed successively with purified water and saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated.
  • Reference Example 2 Synthesis of trans-4-((4-methoxybenzyl)amino)tetrahydrofuran-3-ol
  • 137 mg of 4-methoxybenzylamine was dissolved in 533 ⁇ L of methanol and 133 ⁇ L of purified water, and 3.
  • 86 mg of 4-epoxytetrahydrofuran and 8.5 mg of lithium chloride were sequentially added, and the mixture was vigorously stirred in an oil bath at 50°C for 48 hours.
  • the reaction solution was extracted three times with ethyl ether, and the organic layer was washed successively with purified water and saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated.
  • Reference Example 5 Synthesis of trans-2,2-dimethyl-6-(2-propynylamino)-1,3-dioxepan-5-ol 4,4-dimethyl-3,5,8-trioxabicyclo[5.
  • the activity value was calculated from the area of the raw material epoxide and the product amino alcohol using the effective carbon number method.
  • Stereoselectivity optical purity of the produced amino alcohol was calculated by chiral GC (conditions C to G) or chiral HPLC (conditions ⁇ to ⁇ ) analysis.
  • the polysaccharide fraction showed 1.1 to 2.5 times higher catalytic activity than water-soluble soybean polysaccharide.
  • the conversion rate was calculated from the total isomer area of the raw material epoxide and the produced amino alcohol using the effective carbon number method, and the isomer ratio was calculated from the area of the isomer of the amino alcohol.
  • the results are shown in Table 51. Regardless of which of the two types of chiral amines was used as the polysaccharide substrate, one isomer was selectively produced at a ratio of 60% or more among the four isomers that could be produced by reaction with epoxide.
  • Example D2 Amino alcohol production reaction from 2-chlorocyclohexanol and cyclopropylamine 40 mg of AM-LLMW was weighed into a 2 mL glass bottle, and saturated salt containing 11 mM 2-chlorocyclohexanol and 500 mM cyclopropylamine was added. 800 ⁇ L of water was added and stirred at 37 ⁇ 1°C. The reaction solution was collected 20 minutes and 1 hour after the start of stirring, extracted with toluene, and then subjected to chiral GC analysis (H in Table 45). The concentration of each component in the reaction solution was calculated and listed in Table 52.
  • Example E Galactan without catalytic activity
  • the catalytic activity of commercially available polysaccharides containing arabinogalactans was measured.
  • Catalytic activity was measured according to "Catalytic Activity Measuring Method I” or "Catalytic Activity Measuring Method III”.
  • Example F1 Preparation of Gal Donor A galactose donor (S6) was prepared as follows. The abbreviations used are to be understood in the sense well known in the field of organic chemistry, e.g. Bn: Benzyl PhCH (OMe) 2 : Benzaldehyde dimethyl acetal TsOH: para-toluenesulfonic acid DMF: N,N-dimethylformamide MP: 4-methoxyphenyl TFA: trifluoroacetic acid Tol: para-toluoyl CACl: trichloroacetyl chloride CA: Chloroacetyl pyr: Pyridine Mbp: 5-tert-butyl-2-methylphenyl DMTST: Dimethyl(methylthio)sulfonium triflate DTBMP: 2,6-di-tert-butyl-4-methylpyridine HSMbp: 5-tert-butyl-2 -Methylbenzenethiol DABCO
  • reaction solution was extracted with methylene chloride and washed with 2M hydrochloric acid and saturated aqueous sodium bicarbonate.
  • organic layer was dried by adding magnesium sulfate, the desiccant was filtered off, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • 2,6-di-tert-butyl-4-methylpyridine 28 g, 2 equivalents
  • dimethyl(methylthio)sulfonium triflate 50 wt% molecular sieve mixture, 71 g, 2 equivalents
  • the reaction solution was filtered through Celite, and the filtrate was washed with saturated aqueous sodium bicarbonate.
  • the organic layer was dried by adding magnesium sulfate, the desiccant was filtered off, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • reaction solution was cooled to room temperature, diluted with ethyl acetate, and washed with 2M hydrochloric acid and saturated aqueous sodium bicarbonate.
  • the organic layer was dried by adding magnesium sulfate, and after filtering off the desiccant, the solvent was distilled off under reduced pressure to obtain compound S9 (18.9 g, yield quant.).
  • Gal oligomer derivatives (compounds S13, S15, S17, S19, S21, S23, S25, S27, S29) were dissolved in ethyl acetate (7.5 mL/g of receptor) and ethanol (7.5 mL/g of receptor), 1,4-Diazabicyclo[2.2.2]octane (10 equivalents) was added and stirred at 50°C for 2 hours.
  • the reaction solution was cooled to room temperature, diluted with ethyl acetate, and washed with 2M hydrochloric acid and saturated aqueous sodium bicarbonate.
  • the organic layer was dried by adding magnesium sulfate, the desiccant was filtered off, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • Gal oligomer acceptors compounds S14, S16, S18, S20, S22, S24, S26, S28
  • Gal (2mer) donors compound 8, 3 equivalents
  • 2,6-di-tert-butyl-4-methylpyridine 6 equivalents
  • dimethyl(methylthio)sulfonium triflate 50 wt% molecular sieves mixture, 6 equivalents
  • reaction solution was filtered through Celite, and the filtrate was washed with saturated aqueous sodium bicarbonate.
  • the organic layer was dried by adding magnesium sulfate, the desiccant was filtered off, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • Example F6 Catalytic activity of polysaccharide prepared by organic synthesis 2 mg of compound S31 synthesized in Example F-5 was weighed into a 2 mL glass bottle, 200 ⁇ L of a 25 mM sodium chloride aqueous solution was added, and freeze-dried. Catalytic activity and stereoselectivity were measured according to "Catalytic Activity Measurement Method III". The results are shown in Table 54. Comparison of Compound S31 with BG3 fraction, which contains a polysaccharide prepared from water-soluble soybean polysaccharide in the same manner as in Example A7 (6) and has an average molecular weight similar to that of Compound S31, revealed that the catalytic activity and steric The selectivity was at the same level or higher.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本発明は、重合度が１６～４０であり、ガラクトースのみから構成されるか、ガラクトース及び１～３分子のアラビノースのみから構成される多糖であって、糖単位が枝分かれのない鎖状に結合している多糖を提供する。

Description

植物由来有機分子触媒
　本発明は、植物由来有機分子触媒及びその製造法に関する。
　式（Ｚ）で表される化合物（以下、「化合物（Ｚ）」ともいう。）は、連続する２つの炭素原子に、それぞれ酸素原子または窒素原子が結合した化合物であり、１分子中に少なくとも２つの不斉炭素を有するため、複数の光学異性体が存在する。光学活性な化合物（Ｚ）は、医薬品または農薬の開発の分野において汎用される化学構造の１つであり、不斉反応で使用する遷移金属触媒のリガンドとしても使用できる。
　なお、式中、Ｘは－Ｏ－または－ＮＲｆ－を示し、Ｙは－Ｏ－、－ＮＲｇ－または－Ｓ－を示し、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、ＲｆおよびＲｇは、それぞれ独立に水素原子または有機基を示し、アスタリスクはその炭素原子が不斉炭素であることを示す。
　化合物（Ｚ）は、具体的には、例えば、１，２－ジオール（ＸおよびＹがともに－Ｏ－である場合）、１，２－アミノアルコール（Ｘが－Ｏ－かつＹが－ＮＨ－である場合、または、Ｘが－ＮＨ－かつＹが－Ｏ－である場合）、１，２－ジアミン（ＸおよびＹがともに－ＮＨ－である場合）、１，２－メルカプトアルコール（Ｘが－Ｏ－かつＹが－Ｓ－である場合）、１，２－メルカプトアミン（Ｘが－ＮＨ－かつＹが－Ｓ－である場合）である。
　現在までに、光学活性な化合物（Ｚ）の製造方法について、多くの検討が行われている。なかでも、入手が容易なエポキシド構造またはアジリジン構造を有する化合物に求核剤を反応させ、立体選択的に開環することにより光学活性な化合物（Ｚ）を得る方法は、原子効率が高く有用である。
　例えば、エポキシド構造を有する化合物に求核剤を反応させて、光学活性な化合物（Ｚ）を得る方法としては、（Ａ）ラセミ体を光学分割する方法（例えば、特許文献１～３、非特許文献１、２）、（Ｂ）他の位置に不斉炭素を導入し、生じたジアステレオマーを分離する方法（例えば、特許文献４、非特許文献３）、（Ｃ）光学活性な触媒の存在下でエポキシド構造を有する化合物と求核剤の不斉開環反応を行う方法（例えば、特許文献５、非特許文献４～６）等がある。特に、（Ａ）の方法としては、分割剤として光学活性な酸を用いる方法、光学活性な充填剤を利用したカラムクラマトグラフィーを用いて分離する方法、および動物または微生物に由来する酵素を利用する方法などが知られている。
　また、アジリジン構造を有する化合物に求核剤を反応させて、化合物（Ｚ）を得る方法としては、（Ｄ）ラセミ体を光学分割する方法（例えば、特許文献６）、（Ｅ）光学活性な触媒の存在下でアジリジン構造を有する化合物と求核剤の不斉開環反応を行う方法（例えば、非特許文献７，８）等がある。
　しかしながら、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｄ）の方法では、理論上の収率が５０％を超えることはなく、製造物と同じ量の分割剤の使用、または、大容量カラムによる精製が必要となり、工業的に製造する方法としては問題がある。
　一方、（Ｃ）および（Ｅ）の方法では、短工程で目的の光学活性な化合物（Ｚ）を製造することができるが、多くの場合、光学活性な触媒として金属触媒または強力な酸触媒を用いる。そのため、（Ｃ）および（Ｅ）の方法では、使用できる含ヘテロ３員環構造を有する化合物または求核剤が限定され、高価な金属触媒の回収工程が必要となる。
特許第４４０６４８３号公報 特許第４４０６４８２号公報 米国特許第５９８１２６７号明細書 特開平９－１５７２５８号公報 特開２００３－２０６２６６号公報 特開２０１１－８３９３４号公報 特許第６６３０６６７号公報 特許第６６７８４４２号公報
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５６，９７７３－９７７９（２０００） Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２９，１３６９－１３７７（１９９９） Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１，３８－４５（１９９８） Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，９，１７４７－１７５２（１９９８） Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，６１，１２１３－１２２０（１９８８） Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，３６，３４－３５（２００７） Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，９，６２０５－６２０７（２０１１） Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６８，５１６０－５１６７（２００３） Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６５（１０），２２４９－２２５８（２００１） Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．９１，６７８－６８３（２０１８） Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　２５，３１９７（２０２０） Ｃｈｅｍ.Ｅｕｒ.Ｊ.２２,１１５４３－１１５４８（２０１６） Ｅｕｒ.Ｊ.Ｏｒｇ.Ｃｈｅｍ.３８４９－３８６９（２００１）
　本発明者らは、これまでに植物加工物の存在下、求核剤によるエポキシド又はアジリジンの不斉開環反応が進行することを見出した（特許文献７、非特許文献１０、１１）。また、植物加工物を酵素処理することにより、植物加工物の触媒活性が向上することを見出した（特許文献８）。
　しかしながら、触媒の活性本態の化学構造がわからないため、より高活性な触媒を得ることは難しく、植物加工物由来の夾雑物が混入しやすいという問題があることに気がついた。また、植物加工物は、分子量が非常に大きい場合が多く（例えば水溶性大豆多糖類であるソヤファイブＳ―ＤＮの分子量は１０万～８５万（非特許文献９））、触媒として使用時にゲル化しやすい、触媒が容器に付着しやすいなどハンドリング上の問題があることがわかった。また触媒がゲル化あるいは容器に付着することにより、生成物の回収量が減少することがわかった。そこで、本発明の目的は、求核剤によるエポキシド又はアジリジンの不斉開環反応を促進できる新たな触媒を提供することにある。
　本発明者らは、植物加工物から脂質と可溶性多糖を除去して粗ペクチン性多糖を得た後、粗ペクチン性多糖を酵素（例えば、リパーゼ、ガラクタナーゼ）、酸、アルカリ、又はイオン交換樹脂による処理と精製を繰り返すことによって、触媒の活性本体を見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明は、以下の［１］～［３０］を提供する。
［１］　重合度が１６～４０であり、ガラクトースのみから構成されるか、ガラクトース及び１～３分子のアラビノースのみから構成される多糖であって、糖単位が枝分かれのない鎖状に結合している多糖。
［２］　［１］に記載の多糖を部分構造として含み、糖組成が９０～９９．５ｍｏｌ％のガラクトース及び０．５～１０ｍｏｌ％のアラビノースを含み、平均分子量が２５００～９０００である多糖。
［３］　［１］に記載の多糖を部分構造として含み、糖組成が８０～９８ｍｏｌ％のガラクトース及び２～２０ｍｏｌ％のアラビノースを含み、平均分子量が１００００～６００００である多糖。
［４］　重合度が１６～４０であり、枝分かれのない鎖状に結合している多糖であって、ガラクトースのみから構成されるか、ガラクトース及び１～３分子のアラビノースのみから構成される多糖の末端ガラクトースが還元的アミノ化されたアミノ糖である、多糖。
［５］　［１］～［４］のいずれかに記載の多糖を含有する組成物。
［６］　触媒として使用するための、［５］に記載の組成物。
［７］　求核剤によるオキシラン、アジリジンまたはチイラン環を有する化合物の不斉開環反応を促進する触媒として使用するための、［６］に記載の組成物。
［８］　［１］～［４］のいずれかに記載の多糖を含有する組成物の、触媒としての使用。
［９］　触媒が、求核剤によるオキシラン、アジリジンまたはチイラン環を有する化合物の不斉開環反応を促進する、［８］に記載の使用。
［１０］　植物加工物を有機溶媒と混合し、固形物をろ取し、脱脂サンプルを得る工程と、
　脱脂サンプルを水と混合し、可溶性多糖を除去する工程と、
　可溶性多糖を除去したサンプルを酸性条件、エチレンジアミン四酢酸添加条件またはシュウ酸アンモニウム添加条件で加熱し、粗ペクチン性多糖を得る工程と、を含む、粗ペクチン性多糖の製造方法。
［１１］　［１０］に記載の方法で得られる粗ペクチン性多糖の、触媒または触媒の原料としての使用。
［１２］　触媒が、求核剤によるオキシラン、アジリジンまたはチイラン環を有する化合物の不斉開環反応を促進する、［１１］に記載の使用。
［１３］　［１］～［４］のいずれかに記載の多糖、［１０］に記載の方法で得られる粗ペクチン性多糖、または１６～２４個のガラクトースがβ１，４結合したガラクタンの存在下、式（１）で表される化合物と、
［式中、Ｘは、－Ｏ－、－ＮＲ－または－Ｓ－であり、
　Ｒは、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基、置換されていてもよいＣ６－１０アリール基、置換されていてもよいＣ１－６アルキルカルボニル基、置換されていてもよいＣ６－１０アリールカルボニル基、置換されていてもよいＣ１－６アルキルスルホニル基またはＣ６－１０アリールスルホニル基であり、
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基であり、
　Ｒ２およびＲ３が互いに結合して環状構造を形成していてもよい。］
　式（２）で表される化合物と、を反応させ、
［式中、Ｙは、－Ｏ－、－ＮＲ６－または－Ｓ－であり、
　Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基であり、
　Ｒ５およびＲ６が互いに結合して環状構造を形成していてもよく、
　ただし、式（２）で表される化合物は、水または硫化水素ではない。］
式（３）で表される化合物を得る工程を含む、式（３）で表される化合物の製造方法。
［式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、前記定義と同一である。］
［１４］　式（１）で表される化合物が、式（１ａ）で表される化合物である、［１３］に記載の方法。
［式中、Ｘは、－Ｏ－、－ＮＲ－または－Ｓ－であり、
　Ｒ１およびＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基であり、
　Ｒ２ａおよびＲ３ａは、それぞれ独立にＣ１－６アルキレン基、Ｃ１－６オキシアルキレン基、Ｃ３－６シクロアルキレン基、Ｃ２－６アルケニレン基、Ｃ３－６シクロアルケニレン基、Ｃ２－６アルキニレン基またはＣ６－１０アリーレン基である。］
［１５］　式（２）で表される化合物が、式（２ａ）で表される化合物である、［１３］または［１４］に記載の方法。
［式中、Ｒ５ａおよびＲ６ａは、それぞれ置換されていてもよいＣ１－６アルキレン基、置換されていてもよいＣ１－６オキシアルキレン基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキレン基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニレン基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニレン基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニレン基またはＣ６－１０アリーレン基である。］
［１６］　式（２）で表される化合物が不斉中心を有しており、光学異性体の片方または混合物である、［１３］～［１５］のいずれかに記載の方法。
［１７］　［１］～［４］のいずれかに記載の多糖、［１０］に記載の方法で得られる粗ペクチン性多糖、または１６～２４個のガラクトースがβ１，４結合したガラクタンの存在下、式（ａ）～（ｂ）で表される化合物の少なくとも１つと、
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基であり、
　Ｒ２およびＲ３が互いに結合して環状構造を形成していてもよい。］
　式（２）で表される化合物と、を反応させ、
［式中、Ｙは、－Ｏ－、－ＮＲ６－または－Ｓ－であり、
　Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基であり、
　Ｒ５およびＲ６が互いに結合して環状構造を形成していてもよく、
　ただし、式（２）で表される化合物は、水または硫化水素ではない。］
式（３）で表される化合物を得る工程を含む、式（３）で表される化合物の製造方法。
［式中、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、前記定義と同一である。］
［１８］　（１）［１］～［４］に記載の多糖、［１０］に記載の方法で得られる粗ペクチン性多糖、または１６～２４個のガラクトースがβ１，４結合したガラクタンの存在下で７－オキサビシクロ［４．１．０］ヘプタン（１，２－エポキシシクロヘキサンともいう。）およびシクロプロピルアミンを反応させて（１Ｒ，２Ｒ）－２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノールを得る工程と、（２ａ）（１Ｒ，２Ｒ）－２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノールとカルボニル化試薬を反応させた後に、さらに保護された若しくは保護されていない６－（３－アミノプロポキシ）－２（１Ｈ）－キノリノンとを反応させ、または、（２ｂ）保護された若しくは保護されていない６－（３－アミノプロポキシ）－２（１Ｈ）－キノリノンとカルボニル化試薬を反応させた後に、さらに（１Ｒ，２Ｒ）－２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノールを反応させ、保護された６－（３－アミノプロポキシ）－２（１Ｈ）－キノリノンを用いた場合は、さらに脱保護を行うことによって、（－）－６－〔３－〔３－シクロプロピル－３－〔（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル〕ウレイド〕－プロポキシ〕－２（１Ｈ）－キノリノンを得る工程と、を含む、（－）－６－〔３－〔３－シクロプロピル－３－〔（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル〕ウレイド〕－プロポキシ〕－２（１Ｈ）－キノリノンの製造方法。
［１９］　［３］に記載の多糖の製造方法であって、植物加工物または［１０］に記載の方法で得られる粗ペクチン性多糖を、酵素またはアルカリによる処理、有機溶媒添加による分画、あるいは有機溶媒添加による分画と温度による溶解度差を利用した分画の併用により精製することを含む、方法。
［２０］　［２］に記載の多糖の製造方法であって、［３］に記載の多糖を、酵素または酸による処理、あるいは有機溶媒添加による分画することを含む、方法。
［２１］　［２］に記載の多糖の製造方法であって、植物加工物または［１０］に記載の方法で得られる粗ペクチン性多糖を、酵素による処理、有機溶媒添加による分画、陰イオン交換樹脂による処理、ゲルろ過クロマトグラフィー、またはこれらの任意の組合せにより精製することを含む、方法。
［２２］　［１］に記載の多糖の製造方法であって、［２］に記載の多糖を陰イオン交換カラムによるクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、ＨＰＬＣの組合せにより精製することを含む、方法。
［２３］　１６～２４個のガラクトースがβ１，４結合したガラクタン。
［２４］　１６～２４個のガラクトースがβ１，４結合したガラクタンの、触媒としての使用。
［２５］　触媒が、求核剤によるオキシラン、アジリジンまたはチイラン環を有する化合物の不斉開環反応を促進する、［２４］に記載の使用。
［２６］　１６～２４個のガラクトースがβ１，４結合したガラクタンの製造方法であって、
　式（１４）で表される化合物と式（１６）で表される化合物を反応させて、式（１７）で表される化合物を得る工程を含む、方法。
［式中、ＲＡは置換されていてもよいアルキルカルボニル基であり、ＲＢは置換されていてもよいアラルキル基であり、ＲＣは置換されていてもよいアリールカルボニル基であり、ＲＤは置換されていてもよいアリール基であり、ＲＥは置換されていてもよいアラルキル基であり、ｎは１３～２１の整数である。］
［２７］　ＲＣがトルオイル基である、［２６］に記載の方法。
［２８］　式（１３）で表される化合物を加水分解し、式（１５）で表される化合物を得る工程を更に含む、［２６］または［２７］に記載の方法。
［式中、ＲＡは置換されていてもよいアルキルカルボニル基であり、ＲＢは置換されていてもよいアラルキル基であり、ＲＣは置換されていてもよいアリールカルボニル基であり、ＲFは置換されていてもよいアリール基である。］
［２９］　ルイス酸の存在下、式（１３）で表される化合物とＲＤＳＨを反応させて、式（１４）で表される化合物を得る工程を更に含む、［２６］～［２８］のいずれかに記載の方法。
［式中、ＲＡは置換されていてもよいアルキルカルボニル基であり、ＲＢは置換されていてもよいアラルキル基であり、ＲＣは置換されていてもよいアリールカルボニル基であり、ＲＤは置換されていてもよいアリール基であり、ＲＦは置換されていてもよいアリール基である。］
［３０］　ルイス酸の存在下、式（１１）で表される化合物と式（１２）で表される化合物を反応させて、式（１３）で表される化合物を得る工程を更に含む、［２６］～［２９］のいずれかに記載の方法。
［式中、ＲＡは置換されていてもよいアルキルカルボニル基であり、ＲＢは置換されていてもよいアラルキル基であり、ＲＣは置換されていてもよいアリールカルボニル基であり、ＲＤは置換されていてもよいアリール基であり、ＲＦは置換されていてもよいアリール基である。］
　本発明によれば、求核剤によるエポキシド又はアジリジンの不斉開環反応を促進できる新たな触媒を提供することができる。また、本発明によれば、安価に入手可能な植物加工物をさらに精製することにより、特許文献７～８、非特許文献１０～１１に開示された触媒よりも比活性が高い触媒を提供することができ、再利用もできる。また、本発明によれば、植物加工物を用いた反応よりも生成物及び触媒を回収しやすい。さらに、医薬品製造にあたって問題となる不純物（例えばアレルゲン）の量がより少ない触媒を提供できる。
実施例Ａ３の各精製工程における画分のＳＤＳ－ＰＡＧＥのゲルの写真である。 実施例Ａ３におけるAspergillus luchuensis mut.kawachii NBRC 4308のラムノガラクツロン酸リアーゼのアミノ酸配列であり、下線を付したアミノ酸はＬｉｐＲＧＬのペプチドと重複するアミノ酸である。 実施例Ａ６における酵素ＡでＬＰ－ＬＭＷを消化したときの経時変化を示すクロマトグラムである。 （ａ）は、実施例Ａ６（７）におけるＬＰ－ＬＭＷ由来の画分とＡＬ－ＬＭＷ由来の画分の触媒活性を示すグラフである。（ｂ）は、実施例Ａ６（７）におけるＬＰ－ＬＭＷ由来の画分とＡＬ－ＬＭＷ由来の画分の立体選択性を示すグラフである。 （ａ）は、実施例Ａ９における各ＮＧ画分の触媒活性を示すグラフである。（ｂ）は、実施例Ａ９における各ＮＧ画分の立体選択性を示すグラフである。 実施例Ａ９における各ＮＧ画分のアラビノース含有率を示すグラフである。 （ａ）は、実施例Ａ１０において、「画分ＮＧ３～４ｋＤａ」をＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分取したときのクロマトグラムである。（ｂ）は、分取後の各画分のクロマトグラムを示すグラフである。 （ａ）は、実施例Ａ１０（３）における「画分ＮＧ２～３ｋＤａ」をＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分取したときのクロマトグラムである。（ｂ）は、実施例Ａ１０（３）における「プールａ」及び「プールｂ」をそれぞれ分取ＨＰＬＣで精製したときのクロマトグラムである。（ｃ）は、分取後の各画分のＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分析のクロマトグラムを重ねて表示したグラフである。 実施例Ａ１０（５）における、メジャーピークおよびマイナーピークに相当する画分の触媒活性および立体選択性を示すグラフである。 実施例Ａ１０（５）における、ＯＤＳ－ＨＰＬＣ分取のクロマトグラムである。破線の四角は、分取したピークを示す。 実施例Ａ１０（６）における、ＯＤＳ－ＨＰＬＣ分取後の各サンプルのＯＤＳ－ＨＰＬＣ分析のクロマトグラムを重ねて表示したグラフである。 実施例Ａ１１における、ＯＤＳ－ＨＰＬＣ分取のクロマトグラムである。 実施例Ａ１１における、ＯＤＳ―ＨＰＬＣ分取前に実施したＯＤＳ－ＨＰＬＣ分析のクロマトグラムと、各ピークＣ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨおよびＩを分取して得られた各サンプルのＯＤＳ－ＨＰＬＣ分析のクロマトグラムを重ねて表示したグラフである。 （ａ）は、実施例Ａ１１におけるＤＰ１６～２５の触媒活性を示すグラフである。（ｂ）は、実施例Ａ１１におけるＤＰ１６～ＤＰ２５の立体選択性を示すグラフである。 （ａ）は、実施例Ａ１２におけるＮＧ－ＡＢＥＥと修飾前のサンプル（ＮＧ）のＨＰＬＣ分析（ＲＩ検出）の結果を示すクロマトグラムである。（ｂ）は、実施例Ａ１２におけるＮＧ－ＡＢＥＥと修飾前のサンプル（ＮＧ）のＨＰＬＣ分析（ＵＶ検出）の結果を示すクロマトグラムである。 実施例Ｂ１におけるＡＬ－ＬＭＷの１Ｈ－ＮＭＲスペクトルである。 実施例Ｂ１におけるＡＬ－ＬＭＷの１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルである。 実施例Ｂ２における糖鎖結合位置解析で、１９．５ｍｅｒと２０ｍｅｒを誘導体化した後のｍ／ｚ１１８検出によるＧＣスペクトルである。 実施例Ｃ４における、トルエン層を回収する前の各反応容器の様子を示す写真である。
　以下、本発明について詳細に説明する。
　本明細書において、ガラクトースを「Ｇａｌ」、アラビノースを「Ａｒａ」ともいう。
　本明細書において、「枝分かれのない鎖状」とは、末端の糖単位を除く各糖単位（ガラクトース、アラビノース）が隣接する２つの糖分子と結合している状態を意味する。
〔第一実施形態〕
　本発明の第一実施形態は、重合度が１６～４０であり、ガラクトースのみから構成されるか、ガラクトースおよび１～３分子のアラビノースのみから構成される多糖であって、糖単位が枝分かれのない鎖状に結合している多糖である。例えば、糖単位はβ１，４結合で結合されている。
　本実施形態に係る多糖は、１６～４０分子のガラクトースからなるガラクタンであってもよく、１６～４０分子のガラクトースのうちの１～３分子がアラビノースに置き換えられたアラビノガラクタンであってもよい。
　本実施形態に係る多糖は、植物加工物から脂質と可溶性多糖を除去して得られる粗ペクチン性多糖からでも、植物加工物からでも調製できる。本実施形態に係る多糖は、粗ペクチン性多糖あるいは植物加工物を酵素（例えば、リパーゼ、ラムノガラクツロン酸リアーゼ、ガラクタナーゼ）、酸、アルカリによる処理、有機溶媒添加による分画、冷却による溶解度差を利用した分画、カラムクロマトグラフィー（例えば陰イオン交換、ゲルろ過、ＨＰＬＣ）による精製を繰り返すことによっても得ることができる。また、本実施形態に係る多糖は、有機化学に関する技術を利用して、人工的に合成したものであってもよい。
〔第二実施形態〕
　本発明の第二実施形態は、第一実施形態に係る多糖を部分構造として含み、糖組成が９０～９９．５ｍｏｌ％のガラクトースおよび０．５～１０ｍｏｌ％のアラビノースを含み、平均分子量が２５００～９０００である多糖である。
　本実施形態に係る多糖は、その糖組成が９０～９９．５ｍｏｌ％のガラクトースおよび０．５～１０ｍｏｌ％のアラビノースを含んでいればよく、ガラクトースおよびアラビノースのみから構成されていてもよく、ラムノース、フルクトース、キシロース、グルコース、ガラクツロン酸等の他の単糖をさらに含んでいてもよい。ガラクトース、アラビノース、及び他の単糖は、それぞれ独立してフラノース型およびピラノース型のいずれかであり得る。
　本実施形態に係る多糖は、平均分子量が２５００～９０００であり、好ましくは２７００～８０００であり、より好ましくは２９００～７０００である。
〔第三実施形態〕
　本発明の第三実施形態は、第一実施形態に係る多糖を部分構造として含み、糖組成が８０～９８ｍｏｌ％のガラクトースおよび２～２０ｍｏｌ％のアラビノースを含み、平均分子量が１００００～６００００である多糖である。
　本実施形態に係る多糖は、その糖組成が８０～９８ｍｏｌ％のガラクトースおよび２～２０ｍｏｌ％のアラビノースを含んでいればよく、ガラクトース及びアラビノースのみから構成されていてもよく、ラムノース、フルクトース、キシロース、グルコース、ガラクツロン酸等の他の単糖をさらに含んでいてもよい。ガラクトース、アラビノース、および他の単糖は、それぞれ独立してフラノース型およびピラノース型のいずれかであり得る。
　本実施形態に係る多糖は、平均分子量が１００００～６００００であり、好ましくは１１０００～５５０００である。
　第一実施形態から第三実施形態に係る多糖は、以下のように製造することができる。より具体的には、本願の実施例を参照してもよい。なお、以下に記載の操作で、遠心分離によって、不溶物を除く、あるいは沈殿を得る方法としては、デカンテーションでもろ過（自然ろ過、遠心ろ過、加圧ろ過、減圧濾過）に置き換えてもよい。また、以下に記載の方法で陰イオン交換樹脂カラムを用いて精製を行う方法は、精製前サンプルに陰イオン交換樹脂をバッチ式に投入後、ろ過する方式で行ってもよい。
（１）脱脂工程
　植物加工物を有機溶媒と混合し、固形物をろ取する操作を繰り返し、植物加工物から脂溶性成分を取り除き、脱脂サンプルを得る。脂溶性成分をより効率良く取り除くため、植物加工物を粉砕し、粉末状にすることが好ましい。有機溶媒としては、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素、メタノール、エタノール等のアルコール、これらの混合溶媒が挙げられる。脱脂工程の温度は、室温（例えば、０℃～３０℃）であってよい。
＜植物加工物＞
　本明細書において、植物加工物とは、植物の一部を加工して得られる粉末または抽出物である。
　上記「植物」とは、食用の場合は、ヒトがその一部を食べることができる植物として、一般的に知られた植物（藻類を含む）を意味する。食用植物としては、例えば、穀類、豆類、野菜、果物またはいも類に分類される植物であり、食用植物の一部とは、果実全体、果肉、果皮、茎（藻類の場合、茎状部）、種子、胚芽、根（藻類の場合、付着器）、球根および葉から適宜選択することができる。また、食用部分を採取した残り（非可食分）も食用植物の一部となりうる。食用植物としては、具体的には、マツブサ科（例えば、スターアニス）、アオイ科（例えば、オクラ、バオバブ）、パパイア科（例えば、パパイア）、アブラナ科（例えば、ブロッコリー、小松菜、ダイコン）、ワサビノキ科（例えば、モリンガ）、ウリ科（例えば、カボチャ）、キク科（例えば、菊芋、ゴボウ、ステビア、ヨモギ）、クスノキ科（例えば、クロモジ、ローリエ、セイロンシナモン）、ドクダミ科（例えば、ドクダミ）、シソ科（例えば、エゴマ）、モクセイ科（例えば、オリーブ）、セリ科（例えば、トウキ、ニンジン）、カキノキ科（例えば、柿）、ツバキ（例えば、チャノキ）、ヒルガオ科（例えば、サツマイモ、紫芋）、ナス科（例えば、タバコ、トマト、ジャガイモ）、ヒユ科（てんさい、ほうれん草）、バラ科（例えば、アーモンド、リンゴ）、イラクサ科（例えば、ネトルリーフ）、クワ科（例えば、クワ、イチジク）、フトモモ科（例えば、クローブ）、ブナ科（例えば、ウラジロガシ）、クルミ科（例えば、クルミ）、マメ科（例えば、大豆、黒豆、赤インゲンマメ、エンドウマメ、カワラケツメイ、ナタマメ）、センダン科（例えば、ニーム）、ウルシ科（マンゴー、ピスタチオ、カシューナッツ）、モチノキ科（例えば、イェルパ・マテ）、アカネ科（例えば、クチナシ）、イネ科（例えば、小麦）、ススキノキ科（例えば、キダチアロエ）ヒガンバナ科（例えば、タマネギ、ニンニク、ネギ）、ショウガ科（例えば、春ウコン）、ヤシ科（例えば、ココナッツ）、ヒノキ科（例えば、ジュニパーベリー）、トクサ科（例えば、スギナ）、ミカン科（例えば、ナツミカン、柚子、花柚子、ブンタン）、ハス科（例えば、レンコン）、マタタビ科（例えば、キウイ）、ホンダワラ科（例えば、ヒジキ）、ウシノケリ科（例えば、海苔）、フノリ科（例えば、フノリ）の植物が挙げられる。食用植物としては、マツブサ科、パパイア科、ワサビノキ科、ウリ科、キク科、ドクダミ科、シソ科、セリ科、ツバキ科、フトモモ科、ブナ科、マメ科、ヒガンバナ科、ヤシ科、トクサ科からなる群から選択されることが好ましい。なお、ネギは、ネギ科として分類される場合もある。、また、上記「植物」は例えばタバコのような非食用の場合もある。
　上記「加工」とは、必要に応じて、乾燥する、加熱する、火であぶる、焙煎する、油であげる、発酵させる、不要な部位を除去する等の処理を行った後、粉末状になるまで粉砕すること、あるいは成分を抽出することを意味する。また、上記植物加工物には、食用植物のエキスを抽出した後、乾燥したものを粉砕して得られる粉末も包含される。したがって、上記茶は、緑茶であってもよく、紅茶であってもよい。また、上記大豆は、きな粉であってもよく、納豆であってもよい。
　植物加工物は、粉末状または液状に加工された状態で市販されたものを使用してもよく、加工された状態で市販されたものを適宜粉末状に粉砕して使用してもよい。市販されたものとしては、きな粉、脱脂大豆粉（例えば、フジプロＦ（不二製油（株）製、商品名）、サンリッチＦ（昭和産業（株）製、商品名）、ソーヤフラワーＦＴ－Ｎ（日清オイリオ（株）製、商品名）、エスサンミート特等（味の素（株）製、商品名）、豊年ソイプロ（Ｊ－オイルミルズ（株）製、商品名）、水溶性大豆多糖類（例えば、ソヤファイブＳ－ＤＮ（不二製油（株）製、商品名）、おから等の大豆加工物を用いることが好ましく、きな粉、ソーヤフラワーＦＴ－Ｎ、ソヤファイブＳ－ＤＮ、又はおからを用いることがより好ましい。
（２）可溶性多糖の除去
　脱脂サンプルを水と混合し、遠心分離を行い、水を除去することにより、可溶性多糖を除去したサンプルを得る。水は、水道水、精製水またはＲＯ水（逆浸透膜でろ過した水）を使用することができる。本工程の温度は、室温から加温状態（例えば、０℃～５０℃）であってよい。遠心分離を行う際の遠心力は、例えば３０００～２００００×ｇであればよい。
（３）粗ペクチン性多糖の調製
　可溶性多糖を除去したサンプルから、酢酸法、塩酸法、ＥＤＴＡ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－エチレンジアミン四酢酸）法、またはシュウ酸法により、粗ペクチン性多糖を得る。具体的には、可溶性多糖を除去したサンプルを水に懸濁させ、酢酸、塩酸、ＥＤＴＡまたはシュウ酸アンモニウムを添加後、７５～１００℃に加熱して、１～４時間強く撹拌する、あるいはオートクレーブで１２１℃で３０分から２時間加熱する。その後、混合液を室温まで冷やし、遠心分離を行う。分離後の沈殿物にエタノールを加え、攪拌後、再度遠心分離を行う。得られた沈殿物を水に溶解させ、上清を回収し、凍結乾燥を行う。遠心分離の遠心力は、例えば３０００～２００００×ｇであってよい。
　得られた粗ペクチン性多糖は、不斉開環反応の触媒として使用し得る。植物加工物を粗ペクチン性多糖に変換することにより、多くの場合、植物加工物をそのまま触媒に使用した場合よりも触媒活性（単位重量あたりの比活性）が向上し、触媒としてしようできる植物加工品の種類の選択の幅を広げることができた。また、これまで立体選択性が低かったので実使用に問題のあったイネ科、ウリ科、ナス科、アブラナ科およびバラ科の植物加工物であっても、３０％ｅｅ以上の立体選択性を示すものも見出された。加えて、第二および第三実施形態の原料として用いた場合、植物加工物を原料とした場合よりも収率が高くなった。
（４）植物加工物の酵素処理
　植物加工物または植物加工品から製造された粗ペクチン性多糖を、酵素（例えば、リパーゼ、ラムノガラクツロン酸リアーゼ（ＲＧＬ）、ガラクタナーゼ）で処理し、遠心分離で不溶物を除去し、上清に有機溶媒（例えばアセトン）を加えて攪拌後、再度遠心分離を行う。得られた沈澱に水を加えて、遠心分離で不溶物を除去し、得られた上清を所定の膜孔の透析チューブを用いて透析し、チューブ内に残った液を凍結乾燥する。得られた多糖（ＬＰ－ＬＭＷ）は、第三実施形態に係る多糖に相当し得る。
（５）植物加工物のアルカリ処理
　植物加工物または植物加工物から製造された粗ペクチン性多糖に、アルカリ（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム）存在下５０～１００℃に加温して撹拌するか、またはオートクレーブで１００～１２１℃に加温する。得られた反応液を中和した後、遠心分離を行う。得られた上清に有機溶媒（例えばエタノール、アセトン）を加えて、生じた沈殿を遠心分離で取得する。得られた沈澱に水を加えて溶解させ、所定の膜孔の透析チューブを用いて透析し、チューブ内に残った液を凍結乾燥する。得られた多糖（ＡＬ－ＬＭＷ）は、第三実施形態に係る多糖に相当し得る。
　アルカリは、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物であってよい。有機溶媒は、例えば、エタノール等のアルコール、アセトン等のケトンであってよい。遠心分離の遠心力は、３０００～２００００×ｇであってよい。
（６）ＬＰ－ＬＭＷまたはＡＬ－ＬＭＷの低分子化
（６－１）ガラクタナーゼによる多糖の低分子化
　上記（４）および（５）で得られたＬＰ－ＬＭＷまたはＡＬ－ＬＭＷを陰イオン交換樹脂カラム（ＯＨ型）で精製し、より早く溶出した画分を回収する。得られた画分（ＬＭＷ－Ｄ１）は、第三実施形態に係る多糖に相当し得る。
　上記（６－１）で得られた画分をエンド－β１，４－ガラクタナーゼで分解し、透析および凍結乾燥を行うことにより、低分子化した多糖（ＬＭＷ－Ｄ１ｄｅｇ）を得る。得られた多糖を陰イオン交換樹脂カラム（ＯＨ型）で精製し、より早く溶出した画分を回収する。得られた多糖（ＬＭＷ－Ｄ１ｄｅｇＤ１）は、第二実施形態に係る多糖に相当し得る。
（６－２）酸による多糖の低分子化
　上記（４）および（５）で得られた多糖（ＬＰ－ＬＭＷまたはＡＬ－ＬＭＷ）に、酸を加えてｐＨを２～４に調整し、７０～１００℃で撹拌するか、またはオートクレーブで１００～１２１℃に加温することにより、多糖を加水分解させる。酸は、ｐＨを上記範囲内で維持できればよく、有機酸（例えば酢酸）、鉱酸（例えば硫酸）を使用できる。その後、反応液を中和し、有機溶媒（例えばエタノール）を加えて攪拌し、遠心分離で沈殿を得て、透析で精製し、多糖（硫酸使用の場合にはＡＳ－ＬＬＭＷ、酢酸使用の場合にはＡＡ－ＬＬＭＷ）を得る。得られた多糖（ＡＳ－ＬＬＭＷおよびＡＡ－ＬＬＭＷ）は、第二実施形態に係る多糖に相当し得る。
（６－３）陽イオン交換樹脂による多糖の低分子化
　上記（４）および（５）で得られた多糖（ＬＰ－ＬＭＷまたはＡＬ－ＬＭＷ）を水に溶解させ、陽イオン交換樹脂を加えて（ｐＨは２～４程度）、７０～１００℃で撹拌するか、またはオートクレーブで１００～１２１℃に加温することにより、多糖を加水分解させる。陽イオン交換樹脂としては、Ａｍｂｅｒｌｙｓｔを使用してもよい。その後、反応液を中和し、有機溶媒（例えばエタノール）を加えて攪拌し、遠心分離で沈殿を得て、透析で精製し、多糖（ＡＭ－ＬＬＭＷ）を得る。得られた多糖（ＡＭ－ＬＬＭＷ）は、第三実施形態に係る多糖に相当し得る。
（６－４）植物加工物からの直接的低分子化
　植物加工物または植物加工物から製造された粗ペクチン性多糖を水に溶解させ、オートクレーブで加熱した後、遠心分離により不溶物を取り除く。得られた上清を、陰イオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーおよび透析で精製する。得られた画分（ＳＦＤ２／３画分）を、をエンド－β１，４－ガラクタナーゼで分解し、有機溶媒（例えばエタノール）による分画、透析および凍結乾燥を行うことにより、低分子化した多糖（ＳＦＤｄｅｇＥ２画分）を得る。得られた多糖を、陰イオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーで精製し、低分子化した多糖（ＳＦＤｄｅｇＥ２Ｄ１画分）を得る。これをさらに透析およびゲル濾過カラムクロマトグラフィーで精製し、低分子化した多糖（ＮＧ画分）を得る。得られた多糖（ＳＦＤｄｅｇＥ２、ＳＦＤｄｅｇＥ２Ｄ１およびＮＧ画分）は、第二実施形態に係る多糖に相当し得る。
〔第四実施形態〕
　本発明に係る触媒は、１６～２４個のガラクトースがβ１，４結合したガラクタンであってもよい。該ガラクタンは、式（１８）で表される化合物であり、式中、ｍは１５～２３である。以下、「式（１８）で表される化合物」等を便宜上、「化合物（１８）」等ともいう。
　本実施形態に係るガラクタンは、有機化学合成分野で公知の方法により製造することができ、例えば、以下の方法により製造した化合物（１７）を脱保護（すなわち、ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ及びＲＥの除去）することにより製造してもよい。化合物（１７）は、化合物（１４）と化合物（１６）をグリコシル化反応させることで調製できる。
　ＲＡは置換されていてもよいアルキルカルボニル基であり、例えば、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキルカルボニル基である。ＲＡは、好ましくは、アセチル基、クロロアセチル基、ジクロロアセチル基、トリクロロアセチル基、またはブロモアセチル基であり、より好ましくはトリクロロアセチル基である。ＲＡは、水酸基の保護基でもあり、酸性条件またはアルカリ性条件で加水分解することにより除去できる。
　ＲＢおよびＲＥは置換されていてもよいアラルキル基であり、例えば、Ｃ６－１０アリール基で置換されたＣ１－６アルキル基が挙げられる。ＲＢは、好ましくはＣ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、及びハロゲン原子から選択される少なくとも１つで置換されていてもよいベンジル基、フェニルエチル基、１－ナフチルメチル基、または２－ナフチルメチル基である。Ｃ１－６アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、１－プロピル基、２－プロピル基、１－ブチル基、２－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、１－ペンチル基、２－ペンチル基、３－ペンチル基、ネオペンチル基、１－ヘキシル基、２－ヘキシル基、３－ヘキシル基が挙げられる。Ｃ１－６アルコキシ基は、例えば、メトキシ基、エトキシ基、１－プロピルオキシ基、２－プロピルオキシ基、１－ブチルオキシ基、２－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、１－ペンチルオキシ基、２－ペンチルオキシ基、３－ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、１－ヘキシルオキシ基、２－ヘキシルオキシ基、３－ヘキシルオキシ基が挙げられる。ハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ＲＢは、水酸基の保護基でもあり、加水素分解条件に付すことにより除去できる。加水素分解条件は、例えば、パラジウム／炭素の存在下、水素と反応させる条件である。水素と反応させるための触媒は、加水素分解で使用できるものであればよい。
　ＲＣは、置換されていてもよいアリールカルボニル基であり、例えば、置換されていてもよいＣ６－１０アリールカルボニル基が挙げられる。ＲＣは、好ましくは、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、及びハロゲン原子から選択される少なくとも１つで置換されていてもよいフェニルカルボニル基であり、より好ましくはオルト－、メタ－またはパラ－トルエンカルボニル基（トルオイル基ともいう。）である。ＲＣが置換されていてもよいアリールカルボニル基であると、カルボニル酸素がアノマー炭素を攻撃してアシロキソニウムイオン中間体を生じるため（隣接基関与ともいう。）、β結合が選択的に形成され得る。また、８個以上の単糖が結合する多糖を合成する場合、原料と生成物の物性が似ているため、各工程において反応の進行度を追跡することが困難になる傾向がある。ＲＣが置換されていてもよいアリールカルボニル基であると、上述の隣接基関与による選択的グリコシル化に加え、反応の進行度を追跡しやすくなる。ＲＣは、水酸基の保護基でもあり、酸性条件またはアルカリ性条件で加水分解することにより除去できる。アルカリ性条件としては、例えば、テトラヒドロフラン及びメタノールの混合溶媒中で水酸化リチウムを加える条件が挙げられる。
　ＲＤは置換されていてもよいアリール基であり、例えば、置換されていてもよいＣ６－１０アリールが挙げられる。ＲＤは、好ましくは、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、及びハロゲン原子から選択される少なくとも１つで置換されていてもよいフェニル基であり、より好ましくは５－ｔｅｒｔ－ブチル－２－メチルフェニル基である。
　ｎは１３～２１の整数であり、好ましくは１５～１９、または１７である。
　化合物（１５）は、化合物（１３）を加水分解することにより得られる。加水分解により、ＲＡＯで示されるエステル結合が切断される。本反応は、ＲＡＯで示されるエステル結合を加水分解できる条件であればよく、例えば、酸性またはアルカリ性条件を適用でき、好ましくはアルカリ性条件である。アルカリ性条件としては、例えば、酢酸エチルとエタノールの混合溶媒中に１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）を加える条件が挙げられる。
　式中、ＲＡは置換されていてもよいアルキルカルボニル基であり、ＲＢは置換されていてもよいアラルキル基であり、ＲＣは置換されていてもよいアリールカルボニル基であり、ＲＦは置換されていてもよいアリール基である。
　ＲＦは置換されていてもよいアリール基であり、例えば、置換されていてもよいＣ６－１０アリールが挙げられる。ＲＦは、好ましくは、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、及びハロゲン原子から選択される少なくとも１つで置換されていてもよいフェニル基であり、より好ましくは４－メトキシフェニル基である。ＲＦは、水酸基の保護基でもあり、酸性条件またはアルカリ性条件で加水分解することにより除去できる。また、ＲＦが４－メトキシフェニル基である場合には、酸化的条件でもＲＥを除去できる。酸化的条件としては、例えば、アセトニトリル、トルエン、水の混合溶媒中で硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）（ＣＡＮ）を加える条件が挙げられる。
　化合物（１６ａ）は、化合物（１６）と化合物（１４）をグリコシル化反応させて化合物（１７）を得た後、ＯＲＡをＯＨに変換することにより得られる。化合物（１６）を化合物（１６ａ）に置き換え、これらの工程を繰り返すことにより、ガラクトースを２個ずつ付加してより長いガラクタン構造を製造することができる。すなわち、化合物（１８）は、これらの工程を繰り返すことにより製造される化合物（１７）から、保護基（ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＥ）を除去することで製造できる。
　化合物（１４）を用いるグリコシル化反応では、活性化剤を加えて化合物（１４）を活性化させる。活性化剤は、チオグリコシドを用いたグリコシル化で使用されるものであればよく、例えば、メタントリフラート（ＭｅＯＴｆ）、Ｎ－ヨードスクシンイミド－トリメチルシリルトリフラート（ＮＩＳ・ＴＭＳＯＴｆ）、ジメチル（メチルチオ）スルホニウムトリフラート（ＤＭＴＳＴ）、銀トリフラート（ＡｇＯＴｆ）、酸化剤が挙げられる。
　化合物（１４）は、ルイス酸存在下、化合物（１３）とＲＤＳＨをグルコシル化反応させることにより得られる。
　式中、ＲＡは置換されていてもよいアルキルカルボニル基であり、ＲＢは置換されていてもよいアラルキル基であり、ＲＣは置換されていてもよいアリールカルボニル基であり、ＲＤは置換されていてもよいアリール基であり、ＲＦは置換されていてもよいアリール基である。
　ルイス酸は、アノマー位を活性化できるものであればよく、例えば、三フッ化ほう素ジエチルエーテル錯体である。
　化合物（１３）は、ルイス酸の存在下、化合物（１１）と化合物（１２）をグリコシル化反応させることにより、得られる。
　式中、ＲＡは置換されていてもよいアルキルカルボニル基であり、ＲＢは置換されていてもよいアラルキル基であり、ＲＣは置換されていてもよいアリールカルボニル基であり、ＲＤは置換されていてもよいアリール基であり、ＲFは置換されていてもよいアリール基である。
　化合物（１１）を用いるグリコシル化反応では、活性化剤を加えて化合物（１１）を活性化させる。活性化剤は、チオグリコシドを用いたグリコシル化で使用されるものであればよく、例えば、メタントリフラート（ＭｅＯＴｆ）、Ｎ－ヨードスクシンイミド－トリメチルシリルトリフラート（ＮＩＳ・ＴＭＳＯＴｆ）、ジメチル（メチルチオ）スルホニウムトリフラート（ＤＭＴＳＴ）、銀トリフラート（ＡｇＯＴｆ）、酸化剤が挙げられる。
〔第五実施形態〕
　本発明の第五実施形態は、第一実施形態から第三実施形態および第六実施形態のいずれかに係る多糖または第四実施形態に係るガラクタンの存在下、式（１）で表される化合物（以下、「化合物（１）」等ともいう。）と化合物（２）を反応させ、化合物（３）を得るものである。
＜式（１）で表される化合物（化合物（１））＞
　式（１）で表される化合物は、オキシラン、アジリジンまたはチイラン構造を有する化合物であり、式（１）中のアスタリスク（＊）が付された炭素原子は、不斉中心であり得る。
　式（１）において、Ｘは、－Ｏ－、－ＮＲ－または－Ｓ－である。
　式（１）において、Ｒは、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基、置換されていてもよいＣ６－１０アリール基、置換されていてもよいＣ１－６アルキルカルボニル基、置換されていてもよいＣ６－１０アリールカルボニル基、置換されていてもよいＣ１－６アルキルスルホニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリールスルホニル基である。
　式（１）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－６シクロアルケニル基、Ｃ２－６アルキニル基またはＣ６－１０アリール基である。
　Ｃ１－６アルキル基とは、炭素数１～６のアルキル基を意味する。Ｃ１－６アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロパン－１－イル基、プロパン－２－イル基（イソプロピル基）、ブタン－１－イル基、ブタン－２－イル基、ペンタン－１－イル基、ペンタン－２－イル基、ペンタン－３－イル基、ヘキサン－１－イル基、ヘキサン－２－イル基および３－ヘキシル基が挙げられる。
　Ｃ１－６アルコキシ基とは、酸素原子が結合したＣ１－６アルキル基である。Ｃ１－６オキシアルキル基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペントキシ基が挙げられる。
　Ｃ３－６シクロアルキル基とは、炭素数３～６のシクロアルキル基を意味する。Ｃ３－６シクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基が挙げられる。
　Ｃ２－６アルケニル基とは、炭素数２～６のアルケニル基を意味する。Ｃ２－６アルケニル基としては、例えば、ビニル基、１－プロペン－１－イル基、２－プロペン－１－イル基、プロペン－２－イル基、２－ブテン－１－イル基、２－ブテン－２－イル基、３－ブテン－１－イル基、２－ペンテン－１－イル基、３－ペンテン－１－イル基、２－ヘキセン－１－イル基、３－ヘキセン－１－イル基、４－ヘキセン－１－イル基および５－ヘキセン－１－イル基が挙げられる。
　Ｃ３－６シクロアルケニル基とは、炭素数３～６のシクロアルケニル基を意味する。Ｃ３－６シクロアルケニル基としては、例えば、シクロブテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基が挙げられる。
　Ｃ２－６アルキニル基とは、炭素数２～６のアルキニル基を意味する。Ｃ２－６アルキニル基としては、例えば、エチニル基、プロパルギル基および３－ブチン－１－イル基が挙げられる。
　Ｃ６－１０アリール基とは、炭素数６～１０のアリール基を意味する。Ｃ６－１０アリール基としては、例えば、フェニル基およびナフチル基が挙げられる。
　Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－６シクロアルケニル基、Ｃ２－６アルキニル基およびＣ６－１０アリール基は、それぞれ無置換であっても、置換されていてもよい。置換基としては、Ｃ１－４アルキル基、Ｃ２－４アルケニル基、Ｃ２－４アルキニル基、Ｃ１－４アルコキシ基、アミノ基、イミノ基、ニトロ基、オキシ基、オキソ基、ニトリル基、メルカプト基またはハロゲン原子が挙げられる。
　化合物（１）としては、例えば、ｃｉｓ－２，３－エポキシブタン、３，４－エポキシヘキサンが挙げられる。
　式（１）において、Ｒ２およびＲ３が互いに結合して環状構造を形成していてもよい。この場合、化合物（１）は、式（１ａ）で表される。式（１ａ）中、Ｘ、Ｒ１およびＲ４は、式（１）における定義と同一である。
　Ｒ２ａおよびＲ３ａは、それぞれＲ２およびＲ３から水素原子を単結合に置き換えて表現される２価の基である。すなわち、Ｒ２ａおよびＲ３ａは、それぞれ独立にＣ１－６アルキレン基、Ｃ１－６オキシアルキレン基、Ｃ３－６シクロアルキレン基、Ｃ２－６アルケニレン基、Ｃ３－６シクロアルケニレン基、Ｃ２－６アルキニレン基またはＣ６－１０アリーレン基である。
　Ｒ２ａ－Ｒ３ａで表される基は、例えば、２－オキサプロピレン基（－ＣＨ２ＯＣＨ２－）、３－オキサペンチレン基（－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２－）、３－オキソペンチレン基（－ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２－）、アセトニド基（－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（ＣＨ３）２－Ｏ－ＣＨ２－）が挙げられる。
　式（１ａ）で表される化合物の具体例としては、６－オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン、７－オキサビシクロ［４．１．０］ヘプタン（１，２－エポキシシクロヘキサンともいう。）、８－オキサビシクロ［５．１．０］オクタン、３，６－ジオキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン（３，４－エポキシテトラヒドロフランともいう。）、および４，４－ジメチル－３，５，８－トリオキサビシクロ［５．１．０］オクタンが挙げられる。
＜式（２）で表される化合物（化合物（２））＞
　式（２）において、Ｙは、－Ｏ－、－ＮＲ６－または－Ｓ－である。すなわち、化合物（２）は、アルコール、アミンまたはチオールを意味する。ただし、水（Ｈ２Ｏ）および硫化水素（Ｈ２Ｓ）は、化合物（２）の範囲から除かれる。
　式（２）において、Ｒ５は、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基である。
　式（２）において、Ｒ６は、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基である。
　Ｃ１－６アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロパン－１－イル基、プロパン－２－イル基（イソプロピル基）、ブタン－１－イル基、ブタン－２－イル基、ペンタン－１－イル基、ペンタン－２－イル基、ペンタン－３－イル基、ヘキサン－１－イル基、ヘキサン－２－イル基および３－ヘキシル基が挙げられる。
　Ｃ１－６アルコキシ基とは、酸素原子が結合したＣ１－６アルキル基である。Ｃ１－６オキシアルキル基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペントキシ基が挙げられる。
　Ｃ３－６シクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基が挙げられる。
　Ｃ２－６アルケニル基としては、例えば、ビニル基、１－プロペン－１－イル基、２－プロペン－１－イル基、プロペン－２－イル基、２－ブテン－１－イル基、２－ブテン－２－イル基、３－ブテン－１－イル基、２－ペンテン－１－イル基、３－ペンテン－１－イル基、２－ヘキセン－１－イル基、３－ヘキセン－１－イル基、４－ヘキセン－１－イル基および５－ヘキセン－１－イル基が挙げられる。
　Ｃ３－６シクロアルケニル基としては、例えば、シクロブテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基が挙げられる。
　Ｃ２－６アルキニル基としては、例えば、エチニル基、プロパルギル基および３－ブチン－１－イル基が挙げられる。
　Ｃ６－１０アリール基としては、例えば、フェニル基およびナフチル基が挙げられる。
　Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－６シクロアルケニル基、Ｃ２－６アルキニル基およびＣ６－１０アリール基は、それぞれ無置換であっても、置換されていてもよい。置換基としては、Ｃ１－４アルキル基、Ｃ２－４アルケニル基、Ｃ２－４アルキニル基、Ｃ６－１０アリール基、Ｃ１－４アルコキシ基、アミノ基、イミノ基、ニトロ基、オキシ基、オキソ基、ニトリル基、メルカプト基またはハロゲン原子が挙げられる。
　一実施形態において、化合物（２）は、Ｒ５またはＲ６に不斉中心を有する。化合物（２）が不斉中心を有する場合、化合物（２）としては、該不斉中心に由来する光学異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）が存在する。本方法において、これら光学異性体のうち、単一の光学異性体を使用してもよく、任意の２以上の光学異性体の混合物（例えば、ラセミ体）を使用してもよい。不斉中心を有する化合物（２）を使用する場合には、光学異性体間において反応速度の差が生じ得る。そのため、ラセミ体の化合物（２）を使用したとしても、本反応では、片方の光学異性体が優先的に進行し得る。例えば、Ｒ５またはＲ６に不斉中心を有する化合物（２）を用いて不斉開環反応を行うことにより、立体選択性をさらに高められ得る。その後、Ｒ５またはＲ６を除去することにより、不斉中心を有しない化合物（２）を用いて不斉開環反応を行うよりも、光学純度が高い生成物を得ることもできる。
　化合物（２）の具体例としては、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール（イソプロパノール）、１－ブタノール、２－ブタノール、１－ペンタノール、２－ペンタノール、フェノール、アンモニア、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、２－プロピルアミン（イソプロピルアミン）、２－ペンチルアミン、３－ペンチルアミン、シクロプロピルアミン、シクロブチルアミン、シクロペンチルアミン、シクロヘキシルアミン、ｔｅｒｔ－ブチルアミン、、ｓｅｃ－ブチルアミン（Ｒ体、Ｓ体、ラセミ体）、２－アミノ－３－メチルブタン（Ｒ体、Ｓ体、ラセミ体）、１－シクロヘキシルエチルアミン（Ｒ体、Ｓ体、ラセミ体）、アリルアミン、プロパルギルアミン、ベンジルアミン、２－フェニルエチルアミン、アニリン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、４－メトキシベンジルアミン、３－メトキシプロピルアミン、３－エトキシプロピルアミン、メタンチオール、エタンチオール、１－プロパンチオール、２－プロパンチオール、ブタンチオールが挙げられる。
　式（２）において、Ｒ５およびＲ６が互いに結合して環状構造を形成していてもよい。この場合、化合物（２）は、式（２ａ）で表される。式（２ａ）中、Ｙは、式（２）における定義と同一である。式（２ａ）中、Ｒ５ａおよびＲ６ａは互いに結合して形成される基を示す。
　Ｒ５ａおよびＲ６ａは、それぞれＲ５およびＲ６から水素原子を単結合に置き換えて表現される２価の基である。すなわち、Ｒ５ａおよびＲ６ａは、それぞれ置換されていてもよいＣ１－６アルキレン基、置換されていてもよいＣ１－６オキシアルキレン基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキレン基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニレン基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニレン基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニレン基またはＣ６－１０アリーレン基である。
　Ｒ５ａ－Ｒ６ａで表される基は、例えば、２－オキサプロピレン基（－ＣＨ２ＯＣＨ２－）、３－オキサペンチレン基（－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２－）、３－オキソペンチレン基（－ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２－）が挙げられる。
　化合物（２ａ）の具体例としては、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン、ホモピペラジン、チオモルホリンである。
　Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ３－６シクロアルケニル基、Ｃ２－６アルキニル基およびＣ６－１０アリール基は、それぞれ無置換であっても、置換されていてもよい。置換基としては、Ｃ１－４アルキル基、Ｃ２－４アルケニル基、Ｃ２－４アルキニル基、Ｃ１－４アルコキシ基、アミノ基、イミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、オキソ基、ニトリル基、メルカプト基またはハロゲン原子が挙げられる。Ｃ１－４アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基およびブトキシ基が挙げられる。
　化合物（２）の量は、経済性、回収性を考慮した任意の量を用いることができる。このような量としては、例えば、化合物（１）のモル数に対して０．０１～１００当量、好ましくは０．１～１０当量、更に好ましくは０．５～２当量である。
＜式（３）で表される化合物（化合物（３））＞
　化合物（３）とは、式（３）で表される化合物であり、式（３）中、Ｘ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、上記定義と同一である。
　また、化合物（３）が化合物（１）および化合物（２）の構造に応じた化学構造を有する。例えば、化合物（３）は、以下の式（３ａ）、（３ｂ）または（３ｃ）で表され得る。
　化合物（３）の具体例としては、１，２－ジオール（ＸおよびＹがともに－Ｏ－である場合）、１，２－アミノアルコール（Ｘが－Ｏ－かつＹが－ＮＨ－である場合、または、Ｘが－ＮＨ－かつＹが－Ｏ－である場合）、１，２－ジアミン（ＸおよびＹがともに－ＮＨ－である場合）、１，２－メルカプトアルコール（Ｘが－Ｏ－かつＹが－Ｓ－である場合）、１，２－メルカプトアミン（Ｘが－ＮＨ－かつＹが－Ｓ－である場合）が挙げられる。
　本実施形態に係る方法において、化合物（１）に代えて、化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）から選択される少なくとも１つを使用してもよい。化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）は、反応系中において、エポキシ化が進行して化合物（１）を生じ得る。ｉｎ　ｓｉｔｕで生じた化合物（１）は、化合物（２）との不斉開環反応により化合物（３）を生成する。化合物（ａ）および（ｃ）は互いに同一の立体化学を有するエポキシドを生成し、化合物（ｂ）および（ｄ）は互いに同一の立体化学を有するエポキシドを生成する。化合物（ａ）または（ｃ）から生成するエポキシドは、化合物（ｂ）または（ｄ）から生成するエポキシドと逆の立体化学を有する。
　式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基であり、Ｒ２およびＲ３が互いに結合して環状構造を形成していてもよい。例えば、上述の多糖、粗ペクチン性多糖またはガラクタンの存在下、７－オキサビシクロ［４．１．０］ヘプタンに代えて、ｔｒａｎｓ－２－クロロヘキサノールをシクロプロピルアミンと混合することにより、ｔｒａｎｓ－２－クロロヘキサノールは７－オキサビシクロ［４．１．０］ヘプタンに変換され、さらに触媒による反応で２－シクロプロピルアミノシクロヘキサノールに変換される。反応条件については、第一実施形態を参照することができる。
＜不斉開環反応＞
　触媒（第一実施形態から第三実施形態および第五実施形態に係る多糖）の量としては、経済性、回収性を考慮した任意の量を用いることができる。このような植物加工物の量としては、例えば、式（１）で表される化合物の質量に対して、質量比で０．０１～１００倍量、好ましくは０．１～１０倍量、更に好ましくは１～５倍量である。
　本発明の実施形態に係る不斉開環反応は、溶媒中で行ってもよい。溶媒中で行う場合は、化合物（１）および化合物（２）と反応しない溶媒であれば、通常、有機合成化学でよく知られた有機溶媒および水を使用することができる。このような有機溶媒としては、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン等の炭化水素類；ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、エチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル等のエーテル類；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類が挙げられる。また、これらの溶媒は、単独で使用してもよく、２種以上を混合して用いてもよい。２種以上を混合して用いる場合は、有機溶媒と水を混合して用いることが好ましく、回収性、安全性、経済性の面からトルエンまたはヘプタンと水との混合溶媒を用いることが特に好ましい。
　不斉開環反応に使用できる溶媒の量は、単独溶媒、混合溶媒のいずれにおいても経済性を考慮した量で用いることができる。このような溶媒の量は、例えば、化合物（１）の質量に対して、容量比で０～１００倍量、好ましくは０．５～５０倍量、更に好ましくは２～１０倍量である。
　不斉開環反応に使用できる水の含量は、触媒に対して水を質量比で０．０５～１倍量の範囲とすることができ、触媒に対して水を０．２０～０．５０倍量の範囲であることが更に好ましい。このような範囲であれば、反応の変換率および生成物の光学純度がより向上する。
　反応温度は－２０℃～１００℃が好ましく、触媒活性向上の観点から特に３０℃～７０℃又は３０℃～５０℃が好ましい。反応終了後、触媒をろ別することで、対応する化合物（３）を得ることができる。本発明の不斉開環反応を行う際に、ろ別によって回収された触媒を再利用することができる。
　反応時間は、経済性を考慮した任意の変換率が得られる時間まで反応を行うことができる。このような反応時間としては、例えば、１～５００時間、好ましくは１～１００時間、更に好ましくは１～４８時間である。
　反応終了後、触媒をろ別することで化合物（３）を得ることができる。得られた化合物（３）は、更に晶析、蒸留等の定法により、容易に精製することもできる。
　晶析に使用できる溶媒は、通常、有機合成化学で使用される溶媒であれば特に限定されず、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン等の炭化水素類；トルエン、ベンゼン、キシレン等の芳香族炭化水素類；ジイソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、エチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル等のエーテル類などを用いることができ、これらの溶媒を単独または２種以上を混合して用いてもよい。
　上記溶媒の量は、単独溶媒、混合溶媒のいずれの場合においても、経済性を考慮した量とすることができ、化合物（３）の質量に対して、容量比で０．１～１００倍量、好ましくは０．５～５０倍量、さらに好ましくは１～１０倍量である。
＜塩形成反応＞
　本発明により得られた化合物（３）は、有機合成化学で通常使用される無機酸または有機酸と、塩を形成することにより、光学純度を高めることができる。上記酸としては、例えば、塩酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、過塩素酸、塩素酸、ヨウ素酸、リン酸等の無機酸；ギ酸、酢酸、乳酸、シュウ酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、フタル酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸等の有機酸が挙げられる。
　化合物（３）の光学純度を高めるために、光学活性な酸との塩を形成させてもよい。上記光学活性な酸としては、例えば、酒石酸、リンゴ酸、マンデル酸、フェニルグリシン等が挙げられ、上記酸は置換されているものであってもよい。
　塩を形成する際の溶媒としては経済性、回収性等を考慮して、有機合成化学で通常使用される溶媒を用いることができる。上記溶媒としては、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン等の炭化水素類；ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、エチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル等のエーテル類；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類；メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類；水等を挙げることができ、これらの溶媒を単独または２種以上混合してもよい。
　塩を形成する際に使用する溶媒の量は、単独溶媒、混合溶媒のいずれにおいても経済性を考慮した量で用いることができる。上記溶媒の量は、例えば、化合物（１）の質量に対して、容量比で０～１００倍量、好ましくは０．５～５０倍量、更に好ましくは２～１０倍量である。
　塩形成反応において、より高純度の化合物（３）を得るために、当業者によく知られた方法により、精製することができる。
＜医薬候補化合物への応用＞
　本発明で得られる（１Ｒ，２Ｒ）－２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノール（以下、「化合物Ａ」ともいう。）は、６－（３－アミノプロポキシ）－２（１Ｈ）－キノリノン（以下、「化合物Ｂ」ともいう。）と反応させることにより、（－）－６－〔３－〔３－シクロプロピル－３－〔（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル〕ウレイド〕－プロポキシ〕－２（１Ｈ）－キノリノンを製造することができる。
　（－）－６－〔３－〔３－シクロプロピル－３－〔（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル〕ウレイド〕－プロポキシ〕－２（１Ｈ）－キノリノンは、インビボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）での強い抗血栓作用および血管内皮肥厚抑制作用の２つの作用を有する物質であり、血小板凝集抑制作用、血小板塊解離作用、脳および末梢血管増加作用等を有している。したがって、（－）－６－〔３－〔３－シクロプロピル－３－〔（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル〕ウレイド〕－プロポキシ〕－２（１Ｈ）－キノリノンは、血栓性疾患や動脈硬化性疾患の治療および予防に有用である。
　化合物Ａおよび化合物Ｂから（－）－６－〔３－〔３－シクロプロピル－３－〔（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル〕ウレイド〕－プロポキシ〕－２（１Ｈ）－キノリノンを製造する方法としては、公知の方法を用いることができる。公知の方法とは、例えば、特許文献４に記載の方法である。
　化合物Ａおよび化合物Ｂを反応させる際には、下記式（Ｅｑ．１）のように、予め化合物Ａおよびカルボニル化試薬を反応させた後に、化合物Ｂを反応させることができる。化合物Ａおよびカルボニル化試薬を反応させた後に、反応生成物を精製してもよい。
［式中、Ｚはカルボニル化試薬の残基を意味する。］
　工程（ｉ）は、無溶媒または溶媒中で行うことができる。工程（ｉ）で使用できる溶媒としては、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等のエーテル類；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類；メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類；Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、アセトン、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、水等の極性溶媒が挙げられる。これらの溶媒は単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。
　上記カルボニル化試薬には、例えば、クロロぎ酸フェニル等のクロロぎ酸エステル、炭酸ジエチル等の炭酸エステル、カルボニルジイミダゾール、ホスゲン、トリホスゲンが挙げられる。
　工程（ｉ）は、通常、－２０～１５０℃で行われ、好ましくは－２０～１００℃である。
　工程（ｉ）は、塩基性化合物の存在下または非存在下で行うことができる。工程（ｉ）で使用できる塩基性化合物としては、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウム、水素化ナトリウム等の無機塩基；トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、イミダゾール、ピリジン等の有機塩基などを用いることができる。
　工程（ｉ）には、反応をより効率よく進行させるために、さらに添加剤を使用してもよい。このような添加剤の例には、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、イミダゾール、４－ジメチルアミノピリジン、４－ピロリジノピリジン等が挙げられる。
　工程（ｉｉ）は、無溶媒または溶媒中で行うことができる。工程（ｉｉ）で使用できる溶媒には、工程（ｉ）で挙げた溶媒を使用することができる。
　工程（ｉｉ）は、通常、－２０～１５０℃で行われ、好ましくは－２０～１００℃である。
　工程（ｉｉ）は、塩基性化合物の存在下または非存在下で行うことができる。工程（ｉｉ）で使用できる塩基性化合物には、工程（ｉ）で挙げた塩基性化合物を使用することができる。
　また、下記式（Ｅｑ．２）のように、予め化合物Ｂおよびカルボニル化試薬を反応させた後に、化合物Ａを反応させてもよい。この場合、各工程は式（Ｅｑ．１）のときと同様の方法により、行うことができる。
［式中、Ｚはカルボニル化試薬の残基を意味する。］
　本発明に用いる化合物Ｂは、保護された化合物Ｂであってもよい。保護された化合物Ｂは、キノリノンの１位が保護基で置換されているものを用いることができる。このような保護基としては、例えば、メトキシメチル基、ベンジル基等のアルキル基；トリエチルシリル基、トリフェニルシリル基等の置換シリル基、アセチル基、トリフルオロアセチル基等の置換アシル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基等のアルコキシカルボニル基などが挙げられる。
　また、保護された化合物Ｂとして、２位が置換された６－（３－アミノプロポキシ）－キノリンを用いることもできる。２位が置換された６－（３－アミノプロポキシ）－キノリンの置換基は、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子；メトキシ基、メトキシメトキシ基等のアルコキシ基；ベンジルオキシ基等のアリールアルキルオキシ基；アセトキシ基、ピバロイルオキシ基等のアシルオキシ基；トリエチルシリルオキシ基等のシリルオキシ基などが挙げられる。
　保護された化合物Ｂを反応に用いた場合、反応後に公知の方法によって脱保護し、（－）－６－〔３－〔３－シクロプロピル－３－〔（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル〕ウレイド〕－プロポキシ〕－２（１Ｈ）－キノリノンへと変換することもできる。このような脱保護の条件としては、プロテクティブ　グループス　イン　オーガニック　シンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis), John Wiley and Sons刊（1980）に記載の方法を使用することができ、例えば、酸性条件、アルカリ性条件、水素添加が挙げられる。
〔第六実施形態〕
　本発明の第六実施形態は、重合度が１６～４０であり、枝分かれのない鎖状に結合している多糖であって、ガラクトースのみから構成されるか、ガラクトース及び１～３分子のアラビノースのみから構成される多糖の還元末端ガラクトースが還元的アミノ化されているアミノ糖である多糖である。
　本実施形態に係る多糖は、第一実施形態に係る多糖中の末端ガラクトースを還元的アミノ化することにより、得られるアミノ多糖である。すなわち、本実施形態に係るアミノ糖は、以下の部分構造を有する。
　上記式において、ＲＸは有機基であり、例えば、ＲＸは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基、置換されていてもよいＣ６－１０アリール基、置換されていてもよいＣ１－６アルキルカルボニル基、置換されていてもよいＣ６－１０アリールカルボニル基、置換されていてもよいＣ１－６アルキルスルホニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリールスルホニル基である。各基の定義は、上述の記載を参照できる。
　ＲＸは、好ましくはｐ－アルコキシカルボニルフェニル基であり、より好ましくはｐ－エトキシカルボニルフェニル基またはｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルフェニル基である。本実施形態に係るアミノ糖を第一実施形態に係る多糖から還元的アミノ化により製造する場合、ＲＸは、還元的アミノ化反応に使用したアミン（ＲＸ－ＮＨ２）の化学構造に由来する。例えば、ＲＸがｐ－エトキシカルボニルフェニル基またはｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルフェニル基の場合、使用するアミンは、それぞれｐ－アミノ安息香酸エチル（ＡＢＥＥ）、ｐ－アミノ安息香酸ｔｅｒｔ－ブチル（ＡＢｔＢ）である。
　本実施形態に係るアミノ糖も、第一実施形態から第三実施形態に係る多糖と同様、求核剤による不斉開環反応の触媒活性および立体選択性を示す。また、第五実施形態に係るアミノ糖は、ＡＢＥＥ化またはＡＢｔＢ化されているため、標識としての利用もできる。
　以下の実施例及び比較例で使用した分析法について、説明する。
（１）触媒活性測定法I（１００ｍｇ触媒量スケール）
　内径１５ｍｍの平底ネジ口試験管に測定サンプル（２００ｍｇ）を量り取り、基質（１．０Ｍ１，２－エポキシシクロヘキサン、１．５Ｍシクロプロピルアミン）のトルエン溶液（１．０ｍＬ）を加え、更に飽和食塩水（６０μＬ）を添加し、３７±１℃、撹拌子を入れ、激しく撹拌し反応を行った。数時間ごとに反応液２０μＬを採取し、トルエンにて５～１０倍に希釈し、無水硫酸マグネシウムまたは無水硫酸ナトリウム添加で脱水しＧＣ分析に供した。
　ＧＣ分析は次の条件で行った。
装置：　ＧＣ－２０１４（島津製作所）
カラム：　ＢＥＴＡ　ＤＥＸＴＭ３２５（３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）
流速：　９４ｋＰａ（入口圧）
スプリット比：　１：３０
キャリアガス：　ヘリウム
カラム温度：　１２０℃
気化室温度　２３０℃
検出器：　ＦＩＤ（温度３００℃）
　基質（１，２－エポキシシクロヘキサン）および生成物（２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノール）のクロマトグラムのエリア面積から、有効炭素数法を用いて、面積値を補正し、１，２－エポキシシクロヘキサンの変換率を計算した。１，２－エポキシシクロヘキサンから１分間に１μｍｏｌの２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノールを生じさせる触媒活性を１Ｕとし、触媒活性を触媒１ｍｇ当たりの比活性（Ｕ／ｍｇ）で表記した。
　また、触媒の立体選択性を、生成物の光学純度（％ｅｅ）で表記し、次のように計算した。
　立体選択性（％ｅｅ）　＝　｛（１Ｒ，２Ｒ）－２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノール面積－（１Ｓ，２Ｓ）－２－シクロプロピルアミノ－１シクロヘキサノール面積｝／｛（１Ｒ，２Ｒ）－２－シクロプロピルアミノ－１シクロヘキサノール面積＋（１Ｓ，２Ｓ）－２－シクロプロピルアミノ－１シクロヘキサノール面積｝×１００
（２）触媒活性測定法II（変換率のみ測定時）
　２ｍＬ容積のガラス容器に、多糖サンプル５ｍｇを秤取し、基質（０．４Ｍ１，２－エポキシシクロヘキサン、０．８Ｍシクロプロピルアミン）のトルエン溶液２００μＬ及び飽和食塩水１μＬを加え、３７℃、１０００ｒｐｍで２０時間反応させた。反応後、「触媒活性測定法I」で記したＧＣ分析で基質変換率（％）と立体選択性（％ｅｅ）を測定した。
（３）触媒活性測定法III（５ｍｇ触媒量）
　２ｍＬ容積のガラス容器に、多糖サンプル５ｍｇを秤取し、基質（１．０Ｍ１，２－エポキシシクロヘキサン、１．５Ｍシクロプロピルアミン）のトルエン溶液１００μＬと飽和食塩水６μＬを加え、スターラーバーを用いて３７℃、１０００ｒｐｍで反応させた。数時間毎に、「触媒活性測定法I」で記したＧＣ分析で触媒活性（ｍＵ／ｍｇ）と立体選択性（％ｅｅ）を測定した。
（４）触媒活性測定法IV（０．１ｍｇ触媒量）
　２ｍＬ容積のガラス容器に、多糖サンプル０．１ｍｇを秤取し、１００μＬの基質トルエン溶液（１．０Ｍ１，２－エポキシシクロヘキサン、１．５Ｍシクロプロピルアミン）と０．２μＬの飽和食塩水を加え、スターラーバーを用いて３７℃、１０００ｒｐｍで２０時間反応させた。反応後、「触媒活性測定法I」で記したＧＣ分析で触媒活性（ｍＵ／ｍｇ）と立体選択性（％ｅｅ）を測定した。
（５）触媒活性測定法V（５～１０ｍｇ触媒量）
　２ｍＬ容積のガラス容器に、多糖サンプル５～１０ｍｇを秤取し、１００μＬの基質トルエン溶液（１．０Ｍ　４，４－ジメチル－３，５，８－トリオキサビシクロ〔５．１．０〕オクタン、１．５Ｍ　ベンジルアミン）と６μＬの飽和食塩水を加え、スターラーバーを用いて１０００ｒｐｍで攪拌し、３７℃で反応させた。数時間毎に、ＧＣ分析（表４５中の条件Ａ）とＨＰＬＣ分析法（表４４中の条件α）で触媒活性（ｍＵ／ｍｇ）と立体選択性（％ｅｅ）を測定した。
（５）ゲル濾過ＨＰＬＣ分析法I
　遠心分離により不純物を取り除いた１０ｍｇ／ｍＬ多糖サンプル溶液１００μＬをＨＰＬＣバイアルに移し、測定に用いた。１０ｋＤａ以上のサンプル測定時はTOSOH TSKgel G3000PW（7.5mmI.D.×30cm、東ソー社製）、１０ｋＤａ以下のサンプル測定時はTOSOH TSKgelG2500PWXL（7.8mmI.D.×30cm、東ソー社製）を使用した。移動層として５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）を用い、サンプル注入量１０μＬ、流速０．６ｍＬ／分、カラム温度３５℃、測定時間４０分、検出器ＲＩＤの分析条件で測定を行った。
（６）ゲル濾過ＨＰＬＣ分析法II
　遠心分離により不純物を取り除いた１０ｍｇ／ｍＬ多糖サンプル溶液をＨＰＬＣバイアルに１００μＬ移し、測定に用いた。以下に示すカラムを使用し、サンプル注入量１０μＬ、流速０．６ｍＬ／分、カラム温度４０℃、測定時間４０分、検出器ＲＩＤの分析条件で測定を行った。１０ｋＤａ以上のサンプル測定時はカラム（TOSOH TSKgel G3000PWXL、7.8mmI.D.×30cm、東ソー（株）製）とカラム（TOSOH TSKgel G4000PWXL、7.8mmI.D.×30cm、東ソー社製）を連結したカラムを使用し、検量線の作成にはプルラン（６．３～６４２ｋＤａ、Shodex Standard P-82（昭和電工（株）製））を使用した。１０ｋＤａ以下のサンプル測定時はカラム（TOSOH TSKgel G2500PWXLとTOSOH TSKgel G3000PW、7.8mmI.D.×30cm、いずれも東ソー社製）を連結したカラムを使用し、検量線の作成にはＰＥＧ２０００～１００００を使用した。クロマトグラムの各ピークの頂点の保持時間から算出された分子量を平均分子量とした。
（７）単糖組成解析法
　１ｍｇ／ｍＬ多糖サンプル溶液１００μＬと４Ｍトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、終濃度２Ｍ）１００μＬを２ｍＬネジ口チューブ中で混合し、ヒートブロック上にて１２０℃で２時間インキュベートした。室温まで冷却後、凍結乾燥により溶媒とＴＦＡを除去した。得られた（単糖化された）凍結乾燥物を再度精製水水５０μＬに溶解して、単糖化サンプルを得た。４－エチルアミノベンゾエート（ＡＢＥＥ）１６５ｍｇ、ナトリウムシアノボロヒドリド３５ｍｇ、メタノール３５０μＬ及び酢酸４１μＬを混合し、６０℃で加温することによりＡＢＥＥ溶液を調製した。この溶液４０μＬを単糖化サンプル溶液１０μＬと１．５ｍＬチューブ内で混合し、ヒートブロック上にて８０℃で１時間インキュベートした。室温まで冷却後、精製水２００μＬ、クロロホルム２００μＬを加え、不純物を有機層に抽出し、水層をＨＰＬＣにより分析した。カラムはTSKGel ODS120H（東ソー社製、商品名）、移動層は５０ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ９．０）／アセトニトリルの混合溶媒（体積比９１：９）を用い、流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度３５℃、ＵＶ検出波長３１０ｎｍの条件で分析を行った。
（８）MALDI-TOFMS解析法
　装置としてJMS-S3000 Spiral TOF-plus（JEOL社製）、マトリックスとして２，５－ジヒドロキシ安息香酸を用いた。陽イオンモード、LaserIntensity 60、Delay time 350の条件で、分子量３０００以下の場合Spiralモード、分子量が３０００を超える場合Linearモードで測定を行った。
実施例Ａ１：植物体からの粗ペクチン性多糖の調製
（１）脱脂サンプルの調製
　５００ｍＬ三角フラスコに植物粉末約５０ｇを量り取り、クロロホルムとメタノールの混合液（体積比９：１）３００ｍＬを加え、アルミホイルで蓋をして撹拌子を用いて１時間強く撹拌した。１１０ｍｍ径の吸引漏斗と１０００ｍＬ吸引瓶を用いて吸引ろ過後、上記混合液でフラスコおよびろ過された植物体を洗浄した。回収した植物体と上記混合液３００ｍＬをフラスコに加え、撹拌子を用いて再度１時間撹拌後、ろ過にて植物体を回収した。この工程をさらに２回（計３回）繰り返し、脱脂サンプルを得た。
（２）可溶性多糖除去サンプルの調製
　５００ｍＬ三角フラスコに脱脂サンプル約３０ｇを量り取り、ＲＯ水（逆浸透膜でろ過した水）３００ｍＬを加え、アルミホイルで蓋をして撹拌子を用いて４℃で１晩強く撹拌した。その後、上記三角フラスコを５０℃の湯浴で加温し、更に１時間撹拌子を用いて強く撹拌した。５００ｍＬ遠心ボトルに移し、遠心分離（１７８００×ｇ、１０分間、４℃）することで可溶性多糖を除去したサンプルを得た。
（３）希酢酸を用いた粗ペクチン性多糖の調製（酢酸法）
　５００ｍＬ三角フラスコに可溶性多糖除去サンプル３０ｇ、１０ｍＭ酢酸水溶液３００ｍＬを加え、アルミホイルで蓋をし、オートクレーブを用いて加熱処理（１２１℃、３時間）を行った。５００ｍＬ遠心ボトルに移し、遠心分離（１７８００×ｇ、１０分間、４℃）した。得られた上清を１Ｌビーカーに入れ、エタノール（上清の２倍量）を加え、撹拌子を用いて強く撹拌した。遠心（１７８００×ｇ、１０分間、４℃）により沈殿物を回収した後、ＲＯ水で溶解し、遠心（１７８００×ｇ、１０分間、４℃）後の上清を集めて凍結乾燥し、粗ペクチン性多糖サンプルを得た。
（４）塩酸を用いた粗ペクチン性多糖の調製（塩酸法）
　１０００ｍＬ三角フラスコに可溶性多糖除去サンプル３０ｇ、ＲＯ水５００ｍＬを加え、希塩酸を加えてｐＨを１．５に調整した。三角フラスコをアルミホイルで蓋をして９０℃の湯浴で加温し、撹拌子を用いて強く４時間撹拌した。５００ｍＬ遠心ボトルに移し、遠心分離（１７８００×ｇ、１０分間、４℃）した後、上記（３）と同様にして、得られた上清をエタノール沈殿、凍結乾燥を行った。
（５）エチレンジアミン四酢酸を用いた粗ペクチン性多糖の調製（ＥＤＴＡ法）
　１０００ｍＬ三角フラスコに可溶性多糖除去サンプル３０ｇ、０．０１Ｎ塩酸５００ｍＬ、ＥＤＴＡ２ナトリウム２５ｍｇを順次加えた。三角フラスコをアルミホイルで蓋をして９０℃の湯浴で加温し、１時間撹拌子を用いて強く撹拌した。上記（３）と同様にして、遠心、エタノール沈殿、凍結乾燥を行った。
（６）シュウ酸アンモニウムを用いた粗ペクチン性多糖の調製（シュウ酸法）
　２０００ｍＬ三角フラスコに可溶性多糖除去サンプル３０ｇ、ＲＯ水１０００ｍＬ、シュウ酸アンモニウム一水和物２５０ｍｇを加え、希酢酸でｐＨを３．５に調整した。三角フラスコをアルミホイルで蓋をして７５℃の湯浴で加温し、撹拌子を用いて強く１時間撹拌した。上記（３）と同様にして、遠心、エタノール沈殿、凍結乾燥を行った。
　各植物体の粗ペクチン性多糖の触媒活性と立体選択性を「触媒活性測定法I」で測定し、収率とともに表１、表２に記した。表中、「Ａ」は脱脂サンプル、「Ｂ」は酢酸法によって調製された粗ペクチン性多糖を使用したことを示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000038
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000039
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000040
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000041
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000042
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000043
　表中の入手先略語：ＧＡ：（株）ギャバン、ＡＧ：（株）アグリスタイル、ＯＲ：（株）折玉、ＬＥ：（株）リーフ、ＭＫ：三笠産業（株）、ＨＣ：ヘルシーカンパニー（株）、ＨＮ：（株）ひなた、ＹＮ：（有）山年園、ＯＴ：（株）大津屋商店、ＭＩ：ＭＩインターナショナル（株）、ＲＴ：（株）アールティジャパン、ＫＹ：（株）健康・野草茶センター、ＣＨ：（株）美訓物産、ＪＧ：（株）ジャパンゲート、ＰＡ：（株）ピーアットライフ、ＣＢ：（株）中国貿易公司、ＮＴ：三井農林（株）、ＯＩ：（株）大井川茶園、ＹＴ：（株）山竹園、ＯＫ：大塚製薬（株）、ＮＧ：日本ガーリック（株）、ＴＳ：日本甜菜製糖（株）、ＣＰ：（株）Ｃｏｍｍｐｒｏ、ＫＤ：（有）黒田屋、ＫＷ：河田園、ＨＯ：ほのかオーガファーム、ＨＥ：ＨＥＲＢＳ＆ＣＲＯＰＳ、ＳＥ：Ｅｎｏ　Ｂｒｏｓｔｕｐ　Ｓ．Ａ．、ＡＬ：アリサン（有）、ＶＳ：ＶＳＰ（株）、ＡＳ：（株）奄美自然科学研究所、ＥＷ：エヴァウェイ（株）、ＣＣ：シェフズチョイスジャパン合同会社、ＤＨ：（株）ダイホク、ＳＮ：清水海苔（株）、ＨＫ：（株）さいとう、記載なし：自家栽培
　Ａの収量は、植物体５０ｇより調製した脱脂サンプルの量で示し、Ｂの収量は、脱脂サンプル３０ｇ（海藻類は１５ｇ）から調製した粗ペクチン性多糖の重量を示した。
　アロエとアーモンドにつき、４種の方法で調製した粗ペクチン性多糖の触媒活性と立体選択性を「触媒活性測定法I」で測定し、収率とともに表３に記した。表中、「Ａ」は脱脂サンプル、「Ｂ」、「Ｃ」、「Ｄ」、「Ｅ」はそれぞれ酢酸法、塩酸法、ＥＤＴＡ法、シュウ酸法によって調製された粗ペクチン性多糖を使用したことを示す。
　粗ペクチン性多糖を抽出することにより、特許文献７、８および非特許文献１１に記載していないマツブサ科、アオイ科、パパイア科、ワサビノキ科、キク科、クスノキ科、コショウ科、ドクダミ科、シソ科、モクセイ科、カキノキ科、ヒルガオ科、ヒユ科、イラクサ科、クワ科、フトモモ科、ブナ科、クルミ科、センダン科、モチノキ科、アカネ科、ススキノキ科、ヤシ科、ヒノキ科、又はトクサの植物でも、十分な触媒活性と３０％ｅｅ以上の立体選択性を示すことがわかった。また、立体選択性が低かったイネ科、ウリ科、ナス科、バラ科、ツバキ科、又はヒガンバナ科の植物であっても、３０％ｅｅ以上の立体選択性を示した。また、触媒活性（単位重量当たり比活性）も、最大１７倍向上した。
実施例Ａ２：植物体（水溶性大豆多糖）からのＬＰ－ＬＭＷの調製
　水溶性大豆多糖（商品名：ソヤファイブＳ－ＤＮ、不二製油（株）製）７．５ｇを量り取り、精製水２７５ｍＬを加え、オートクレーブ（１２１℃、１５分間）にて滅菌した。リパーゼＡ「アマノ」６（天野エンザイム（株）製）１．５ｇに０．５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７）１５ｍＬと精製水１５ｍＬを加えた溶液を、０．４５μｍ径のフィルター及びオートクレーブにて滅菌した多糖溶液に加え、３７℃、８０ｒｐｍにて２０時間振盪した。振盪した液にProteinase K（タカラバイオ（株）製）４０ｍｇを加え、更に２時間振盪した後、反応液を酢酸にてｐＨを５に調整した。ｐＨ調整後の溶液に、その０．５倍量のアセトンを加え、撹拌子を用いて１０分間撹拌した。遠心分離（１００００×ｇ、１０分間、４℃）で不溶物を除き、得られた上清に、ｐＨ調整後の溶液の０．６倍量のアセトンをさらに加え、撹拌子を用いて１０分間撹拌した。その後、遠心分離（１００００×ｇ、１０分間、４℃）して得られた沈殿を精製水に溶解させた後、オートクレーブ（１２１℃、１５分間）で滅菌した。これを遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間、４℃）して不溶物を除去し、得られた上清を分画分子量（ＭＷＣＯ）12000～14000の透析チューブ（ヴィスキングチューブ、日本メディカルサイエンス（株）製）に入れ、１０ｍＭ酢酸を外液として使用して、透析を行った。透析チューブ内の液を凍結乾燥し、ＬＰ－ＬＭＷ画分２．２ｇを得た。
　水溶性大豆多糖（商品名：ソヤファイブＳ－ＤＮ、不二製油（株）製）とＬＰ－ＬＭＷ画分について、触媒活性、立体選択性、主要なピークの平均分子量を測定し、糖組成を分析した。結果を表４、５に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」で、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」で測定した。
実施例Ａ３：ラムノガラクツロン酸リアーゼ（ＲＧＬ）による多糖の分解
（１）市販の酵素から「水溶性大豆多糖類を分解する酵素」（Ｌｉｐ－ＲＧＬ）の精製
　市販の酵素（商品名：リパーゼＡ「アマノ」６、天野エンザイム（株）製）４０ｇを１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）に懸濁した。得られた懸濁液に、硫酸アンモニウムを所定の飽和パーセントになるまで加えた。６０％飽和から９０％飽和に相当する硫酸アンモニウム画分から、沈殿が生じたものを遠心分離し、透析によって脱塩した。脱塩後の液を陰イオン交換カラム（商品名：DEAE-Toyopearl、東ソー（株）製）に供した後、０．２Ｍ塩化ナトリウム水溶液で溶出して、得られた画分を脱塩した。
　Mono Q 10-100 GLカラム（８．０ｍＬ、GE Healthcare社製）を装着したＦＰＬＣシステム（AKTA explorer10S、GE Healthcare社製）に供し、緩衝液Ａ（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７））と緩衝液Ｂ（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）、０．５Ｍ塩化ナトリウム）との間でグラジエントをかけた溶出を行い、酵素活性を持つ画分を集め、脱塩した。上記脱塩液をMono Q 5-50 GLカラム（１．０ｍＬ、GE Healthcare社製）を装着したＦＰＬＣシステム（AKTA explorer 10S、GE Healthcare社製）に供し、緩衝液Ａ（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７））と緩衝液Ｂ（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）、０．５Ｍ塩化ナトリウム）との間でグランエントをかけた溶出を行い、酵素活性を持ちかつＳＤＳ－ＰＡＧＥで単一バンドである画分を集め、脱塩し、精製水溶性大豆多糖類分解酵素（Ｌｉｐ－ＲＧＬ）とした。
　各精製工程における画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供し、精製度を確認した。結果を図１に示す。図１中、レーン１には分子量マーカーを、レーン２には市販の酵素（リパーゼＡ「アマノ」６、天野エンザイム（株）製）の溶液を、レーン３には硫酸アンモニウム分画（６０～９０％飽和の混合物）を、レーン４にはカラム（商品名：DEAE Toyopearl、東ソー（株）製）から溶出した画分を、レーン５にはカラム（商品名：Mono Q 10-100 GL、Sigma-Aldrich社製）から溶出した画分を、レーン６にはカラム（商品名：Mono Q 5-50、Sigma-Aldrich社製）から溶出した画分を供した。図１中の矢印は、精製されたＬｉｐ－ＲＧＬに対応するバンドの位置を示す。
（２）酵素活性の比較
　水溶性大豆多糖類（商品名：ソヤファイブＳ－ＤＮ、不二製油（株）製）２５ｍｇを２０ｍＭビス－トリス塩酸緩衝液（ｐＨ６．５）１ｍＬに溶解させ、リパーゼ（リパーゼＡ「アマノ」６、天野エンザイム（株）製）溶液またはＬｉｐ－ＲＧＬ溶液５０μＬを添加した。各混合液を３７℃で２時間加温後、０．４５μｍ径のメンブランフィルターでろ過し、濾液を得た。得られた濾液の分子量分布を、カラムTSKgel G5000PWXL（東ソー（株）製）を使用し、「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析I」の条件で評価した。クロマトグラムの比較より、いずれの反応においても同様の分子量を有する分解物を生成したので、Ｌｉｐ－ＲＧＬは水溶性大豆多糖類を分解できることがわかった。
　また、使用した両酵素溶液のタンパク濃度を比較すると、リパーゼ（リパーゼＡ「アマノ」６、天野エンザイム（株）製）溶液のタンパク濃度は２．６ｍｇ／ｍＬであり、ＬｉｐＲＧＬ溶液のタンパク濃度は０．０２６ｍｇ／ｍＬであった。
（３）ＬｉｐＲＧＬ遺伝子の取得および大腸菌への導入
　ＬｉｐＲＧＬから調製されたペプチドをナノＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析装置（装置名：nanoACQUITY UPLC system及びSYNAPT G2-Si High Definition MassSpectrometer（ともにWaters Corp.社製））に供し、ペプチドのアミノ酸配列を推定した。
　Biotechnology and Bioprocess Engineering,7, 57-66 (2002)によれば、酵素リパーゼＡ「アマノ」６は、黒麹菌Aspergillus niger由来である。そこで、本発明者らは、得られたアミノ酸配列情報をＮＣＢＩタンパク質データベースにおけるAspergillus属（taxid: 5052）由来の登録と照合し合わせ５種の酵素（グルコアミラーゼ、セロビオヒドロラーゼ、ラムノガラクツロン酸リアーゼ、エンド－１，３－β－Ｄ－グルカナーゼ、β－マンナーゼ）を候補として抽出し、本酵素がラムノガラクツロナン構造を持つ水溶性大豆多糖類を消化する酵素であることから、ラムノガラクツロン酸リアーゼであると推定した。
（４）ＬｉｐＲＧＬのペプチドマッピング
　Aspergillus luchuensis mut. kawachii NBRC4308のラムノガラクツロン酸リアーゼＡ（ＡｋＲＧＬ）のアミノ酸配列（GeneBank ID: GAA87164.1、配列番号１）は、ＮＣＢＩタンパク質データベースで公開されている。ナノＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析で得られたＬｉｐＲＧＬのアミノ酸シーケンスのデータは、ＡｋＲＧＬのアミノ酸配列とよく一致していた。ＡｋＲＧＬとＬｉｐＲＧＬのペプチドマッピングの結果を図２に示す。図２は、Aspergillus luchuensis mut. kawachii NBRC 4308Aspergillus kawachiiのラムノガラクツロン酸リアーゼＡ（ＡｋＲＧＬ）のアミノ酸配列を示し、下線を付したアミノ酸がＬｉｐＲＧＬのペプチド由来の配列である。
　ＮＣＢＩ遺伝子データベースからＡｋＲＧＬの遺伝子情報（GenBank ID: DF126458.1）を入手し、大腸菌発現用の遺伝子（配列番号２）を人工的に合成した。得られた遺伝子を元にしてforward（配列番号３）及びreverse用（配列番号４）のＰＣＲプライマーを調製した。上記プライマーとＡｋＲＧＬの人工合成遺伝子を用いて、ＰＣＲで遺伝子を増幅した。増幅した遺伝子をｐＱＥ－８０Ｌベクター（Ｑｉａｇｅｎ製）に導入し、Ｎ－末端His-tag融合ＡｋＲＧＬ発現用プラスミド（pQE80L-RGL）を得た。得られたプラスミドpQE80L-RGLを大腸菌BL21(DE3)、ＪＭ１０９及びRosetta2(DE3)にそれぞれ導入し、形質転換体BL21(DE3)-AkRGL、JM109-AkRGL及びRosetta2(DE3)-AkRGLを調製した。各大腸菌がＡｋＲＧＬを生成できることをＳＤＳ－ＰＡＧＥで確認した。また、各形質転換体の無細胞抽出物によって、リパーゼ（リパーゼＡ「アマノ」６、天野エンザイム（株）製）と同様に、ソヤファイブＳ－ＤＮから触媒（ＡｋＲＧＬ－ＬＭＷ）を調製できることをＧＰＣ分析で確認した。
（５）組換えＲＧＬ（Ａｋ－ＲＧＬ）の調製
　大腸菌BL21(DE3)-AkRGLをＬＢ培地（１００μｇ／ｍＬアンピシリン）５ｍＬ中で３７℃で１２時間培養した。得られた培養液をＬＢ培地（１００μｇ／ｍＬアンピシリン）５００ｍＬに移し、１５０ｒｐｍで振盪しながら、３７℃で９時間培養した。１ｍＭＩＰＴＧを添加後、さらに３７℃で１２時間培養した。大腸菌を遠心分離（８０００×ｇ、１０分間、４℃）で集め、０．９％食塩水で洗浄した。洗浄した菌体を１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）に懸濁し、直径０．１ｍｍのビーズと共にマルチビーズショッカー（安井器械（株）製）で菌体を破砕後、遠心分離（１２０００×ｇ、１５分間、４℃）で不溶物を除き、細胞外抽出液を得た。
　上記細胞外抽出物をNi Sepharose 6 Fast Flowカラム（GE Healthcare Life Sciences、３×８．５ｃｍ）に供し、０．１Ｍ塩化ナトリウムと１０ｍＭイミダゾールを含む１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．０）で洗浄後、同緩衝液のイミダゾール濃度を３００ｍＭまで連続的に上げて溶出させた。酵素活性を持つフラクションを集めて、脱塩し、HisTrap HP column（GE Healthcare LifeSciences社製、１．６×２．５ｃｍ、５ｍＬ）を装着したＦＰＬＣシステム（AKTA explorer 10S）に供した。０．１Ｍ塩化ナトリウムと０．１Ｍイミダゾールを含む１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．０）で洗浄後、同緩衝液のイミダゾール濃度を０．１６Ｍまで連続的に上げて溶出させ、酵素活性を有し、かつＳＤＳ－ＰＡＧＥでほぼ単一バンドを示すフラクションのみを集めた。集めたフラクションを１ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で透析し、精製ＡｋＲＧＬとした。
（６）組換えＲＧＬ（ＡｋＲＧＬ）を用いたソヤファイブの消化
　ソヤファイブＳ－ＤＮ（２５ｍｇ）を２０ｍＭビス－トリス塩酸緩衝液（ｐＨ６．５、１ｍＬ）に溶解させ、リパーゼ（リパーゼＡ「アマノ」６、天野エンザイム（株）製）溶液、精製ＬｉｐＲＧＬ溶液及び精製ＡｋＲＧＬ５０μＬのいずれかを添加した。３７℃で２時間加温した後、消化液を凍結乾燥し、消化物を得た。得られた消化物の触媒活性及び立体選択性を「触媒活性測定法II」に従い測定した。
　表６に示すように、精製ＬｉｐＲＧＬによる消化物も、精製ＡｋＲＧＬによる消化物も、ソヤファイブＳ－ＤＮと同等の触媒活性及び立体選択性を有していることがわかった。また、精製ＡｋＲＧＬによる消化物（AkRGL-LMW）の触媒活性は２５．１ｍＵ／ｍｇであった。
実施例Ａ４：アルカリによる分解
（１）水酸化ナトリウムとエタノール分画による調製
　水酸化ナトリウム（２００ｇ）及び水素化ホウ素ナトリウム（７．６ｇ）の水溶液（２．５Ｌ）に水溶性大豆多糖類（商品名：ソヤファイブＳ－ＤＮ、不二製油（株）製）１００ｇを加え、３Ｌ四つ口フラスコに入れ、攪拌しながらオイルバスで内温が７０℃になるようにして１２０時間加温した。酢酸でｐＨ７に中和した後、遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で不溶物を除き、中和済み加水分解溶液を得て、その体積（Ｘ）を測定した。
　エタノール（Ｘの０．５倍量）を攪拌しながら、中和済み加水分解溶液をそこに滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で除き、上清を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．３倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で集めた。上清は次工程で使用した。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO3500の透析チューブ（BioDesign Dialysis Tubing、BioDesign Inc.社製）に入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して６．１ｇの多糖画分（AL-LMW EtOH 0.5/0.8）を得た。
　前工程で得た上清を攪拌しながら、さらにエタノール（Ｘの０．３倍量）をそこに滴下した。滴下済み液を冷蔵庫で３日静置後、生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で集めた（上清は次工程で使用した）。得られた沈殿を精製水に懸濁し、全体積を約２００ｍＬとした。懸濁液を約４０℃に加温し、沈殿を溶解させた後、冷蔵庫で７日保存した。冷蔵中に生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で集めた。得られた沈殿を精製水１２０ｍＬに懸濁した。懸濁液を約４０℃に加温し、沈殿を溶解させた後、MWCO3500の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して２１．３ｇの画分（AL-LMW EtOH 0.8/1.1 PPT）を得た。また、冷蔵中に生じた沈殿を集めた残りの母液をMWCO3500の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として、透析した。透析後の液を凍結乾燥して１．９ｇの多糖画分（AL-LMW EtOH 0.8/1.1 SUP）を得た。
　前工程で得られた上清を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．３倍量）をそこに滴下した。滴下済み液を冷蔵庫で１日静置後、生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で集めた。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO3500の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して１．４ｇの画分（AL-LMW EtOH 1.1/1.4）を得た。各分画の触媒活性、立体選択性及び平均分子量を測定した結果を表７に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。また、各画分の単糖分析結果を表８に記した。
（２）水酸化ナトリウムとアセトン分画による調製
　水酸化ナトリウム２００ｇと水素化ホウ素ナトリウム３．７ｇの水溶液２．５Ｌに水溶性大豆多糖類（商品名：ソヤファイブＳ－ＤＮ）５０ｇを加え、３Ｌ四つ口フラスコに入れ、攪拌しながらオイルバスで内温が７０℃になるようにして１０２時間加温した。酢酸でｐＨ７に中和した後、遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で不溶物を除き、中和済み加水分解溶液の体積（Ｘ）を測定した。
　中和済み加水分解溶液を攪拌しながら、アセトン（Ｘの０．５倍量）をそこに滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で集めた（上清は次工程で使用した）。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO3500の透析チューブに入れ、外液を１０ｍＭ酢酸溶液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して０．７３ｇの多糖画分（AL-LMW Acetone 0/0.5）を得た。
　前工程の上清を攪拌しながら、さらにアセトン（Ｘの０．３倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で集めた（上清は次工程で使用した）。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO3500の透析チューブに入れ、外液を１０ｍＭ酢酸溶液として、透析した。透析後の液を凍結乾燥して１０．７ｇの多糖画分（AL-LMW Acetone 0.5/0.8）を得た。
　前工程で得た上清を攪拌しながら、さらにアセトン（Ｘの０．３倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で集めた。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO3500の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して２．５ｇの多糖画分（AL-LMW Acetone 0.8/1.1）を得た。
　各分画の触媒活性、立体選択性及び平均分子量を測定した結果を表９に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。また、各画分の単糖分析結果を表１０に示す。
（３）温度の検討
　水酸化ナトリウム（１６ｇ）と水素化ホウ素ナトリウム（０．３０ｇ）の水溶液（２００ｍＬ）に、水溶性大豆多糖類（商品名：ソヤファイブＳ－ＤＮ、不二製油（株）製）４ｇを加えた。その水溶性大豆多糖類溶液を３０ｍＬずつ直径３０ｍｍの試験管５本にいれ、３００ｒｐｍで攪拌しながら、それぞれ内温が５０、６０、７０、８０、９０℃になるようヒートブロックで加温した。また同じ水溶性大豆多糖類溶液を、８ｍＬずつ直径１８ｍｍ試験管２本に入れ、シリコン栓を装着して、オートクレーブを用い１２１℃で５時間加温した。加水分解溶液に精製水（加水分解溶液の体積の１／２倍量）を加え、５０％酢酸でｐＨ６～７に調整した。ｐＨ調整後のエタノール（加水分解溶液の体積の３倍量）を滴下し、冷蔵庫に１日静置した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分）で集めた。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO3500の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）し、上清を凍結乾燥して多糖画分（ＡＬ－ＬＭＷ）を得た。
　各加水分解の温度における分解時間、収率、触媒活性、立体選択性、平均分子量、加水分解液の分解終了時の色（目視）を表１１に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。以上のように、５０～１２１℃の温度範囲でアルカリ処理することにより、触媒活性を有する加水分解物を得られた。
（４）アルカリ濃度の検討
　水酸化ナトリウム（０．６ｇ）と水素化ホウ素ナトリウム（４５ｍｇ）の水溶液（３０ｍＬ）に水溶性大豆多糖類（商品名：ソヤファイブＳ－ＤＮ、不二製油（株）製、０．６ｇ）を加えた（水酸化ナトリウムの終濃度は０．５Ｍ）。水酸化ナトリウムの量をそれぞれ１．２ｇ、１．８ｇ、２．４ｇ、３．６ｇに変えた以外は同様にして、水溶性大豆多糖類溶液を調製した（水酸化ナトリウムの終濃度はそれぞれ１．０Ｍ、１．５Ｍ、２．０Ｍ、３．０Ｍ）。それぞれを直径３０ｍｍの試験管に入れ、３００ｒｐｍで攪拌しながら、内温が７０℃になるようヒートブロックで加温した。加水分解溶液のｐＨを５０％酢酸で６～７に調整し、その体積（Ｘ）を測定した。ｐＨ調整後の溶液にエタノール（Ｘの３倍量）を滴下し、冷蔵庫に１日静置した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）で集めた。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO3500の透析チューブに入れ、外液を１０ｍＭ酢酸溶液として透析した。透析後の液を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）し、上清を凍結乾燥して多糖画分（ＡＬ－ＬＭＷ）を得た。
　各アルカリの濃度における分解時間、収率、触媒活性、立体選択性、ピーク分子量を加水分解液の分解終了時の色を表１２に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。以上のように、０．５～３．０Ｍのアルカリ濃度範囲でアルカリ処理することにより、触媒活性を有する加水分解物を得られた。
（５）水酸化カリウムとエタノール分画による調製
　水酸化ナトリウムの代わりに水酸化カリウム２８０．６ｇを使用した以外は上記「(1)水酸化ナトリウムとエタノール分画による調製」と同様にして、４つの多糖画分（KOH-LMW-EtOH 0.5/0.8、KOH-LMW-EtOH0.8/1.1-PPT、KOH-LMW-EtOH 0.8/1.1-SUP、KOH-LMW-EtOH 1.1/1.4）を得た。
　各画分の触媒活性、立体選択性、平均分子量を表１３に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。
実施例Ａ５：「おから」からのＡＬ－ＬＭＷの調製
　水酸化ナトリウム２０ｇと水素化ホウ素ナトリウム０．３８ｇの水溶液２５０ｍＬに、おから粉末（商品名：おからパウダー、アクロシア（株）製）５ｇを懸濁し、３００ｍＬ四つ口フラスコに入れ、攪拌しながらオイルバスで内温が７０℃になるようにして１００時間加温した。反応液のｐＨを酢酸で６に調整し、加水分解溶液を遠心分離（１２０００×ｇ、１５分間）して、得られた上清の体積（Ｘ）を測定した。加水分解溶液の上清を攪拌しながらエタノール（Ｘの０．５倍量）を滴下し、生成した沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、１５分間）で除いた。この遠心分離溶液の上清に、エタノール（Ｘの０．３倍量）を滴下し、生成した沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、１５分間）で除いた。
　遠心分離溶液の上清にエタノール（Ｘの０．３倍量）を滴下し、遠心分離（１２０００×ｇ、１５分間）で生成した沈殿（EtOH0.8/1.1画分）を得た。また、遠心分離溶液の上清にエタノール（Ｘの０．３倍量）を滴下し、遠心分離（１２０００×ｇ、１５分間）で生成した沈殿（EtOH1.1/1.4画分）を得た。遠心分離溶液の上清にエタノール（Ｘの０．６倍量）を滴下し、遠心分離（１２０００×ｇ、１５分間）で生成した沈殿（EtOH1.4/2.0画分）を得た。得られた沈殿をそれぞれ精製水に溶解し、冷蔵庫で１～３日間保存した。冷蔵中に生じた沈殿を遠心分離して、沈殿（ＰＰＴ）と上清（ＳＵＰ）に分けた。ＰＰＴ部分を精製水で再溶解した。ＰＰＴ溶液とＳＵＰをMWCO3500の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液にして透析した。透析後のチューブ内液を凍結乾燥して、３つの画分（EtOH0.8/1.1、EtOH1.1/1.4、EtOH1.4/2.0）それぞれのＰＰＴとＳＵＰを得た。
　各画分の触媒活性、立体選択性、平均分子量を表１４に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。単糖組成分析を「単糖組成解析法」に従い実施し、解析結果を表１５に示す。
実施例Ａ６：酵素によるＬＰ－ＬＭＷの分解
（１）酵素の選択
　１．５ｍＬチューブ中で５０ｍｇ／ｍＬのＬＰ－ＬＭＷ（１００μＬ）、１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）及び表１６に記載の市販酵素溶液（２０μＬ）を混合し、３７℃、１０００ｒｐｍで２２時間反応させた。反応液にProteinase K（タカラバイオ（株）製、Code No. 9034）２０μＬを添加し、３７℃、１０００ｒｐｍでさらに３時間反応させ、遠心分離した後、上清を「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法I」で測定した。酵素Ａ、Ｂ又はＥを使用すると、分子量約４０ｋＤａのＬＰ－ＬＭＷが分解されている様子が確認されたが、酵素Ｃ又はＤを使用すると、ＬＰ－ＬＭＷは分解されなかった。酵素Ａ、Ｂ又はＥの投入量を変更し、同様に反応を行った。
　０．４６ｍＵ／ｍＬの酵素Ａを使用し、経時的にゲルろ過ＨＰＬＣ分析Ｉの条件で分析した結果を図３に示す。図３は、未処理（ＬＰ－ＬＭＷ）、０．５、１、２、４、６、又は２４時間後のクロマトグラムである。異なる種由来のエンド－β１，４－ガラクタナーゼ処理によって、分子量３０００以下になるまで分解されたことから、ＬＰ－ＬＭＷの主成分はβ１，４結合したガラクトースであることが示唆された。
（２）陰イオン交換樹脂カラムによるＬＰ－ＬＭＷの分画
　ＬＰ－ＬＭＷ（８００ｍｇ）を精製水（２０ｍＬ）に加え、遠心分離により不要な酸性糖を含む不溶物を除いた。上清をＯＨ型の陰イオン交換樹脂カラム（商品名：DEAE TOYOPEARL 650、東ソー（株）製、カラム容量（ＣＶ）：４０ｍＬ）に供した。サンプル吸着後、１０ＣＶの精製水、１５ＣＶの５ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液、５ＣＶの１０ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液、５ＣＶの１００ｍＭ水酸化ナトリウム水溶液を順次、流速約３ｍＬ／分で流し、１０ｍＬの画分容量で分画を行った。得られた画分は硫酸－フェノール法により全糖量測定を行い、溶出するピーク毎に分画をし、溶出順にＬＰ－ＬＭＷ－Ｄ１～Ｄ５とした。得られた画分を透析後、凍結乾燥を行った。
　各画分の収率、触媒活性、立体選択性、平均分子量を表１７に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。単糖組成解析結果を表１８に示す。
（３）ＬＭＷのＤ１画分（LP-LMW-D1）の酵素処理による部分分解
　２００ｍＬ三角フラスコにLP-LMW-D1（３４３ｍｇ）を量り取り、精製水（３２ｍＬ）と０．５Ｍ　ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０、８ｍＬ）を加え溶解させた（終濃度：１０ｍｇ／ｍＬ　ＬＭＷ、１００ｍＭ　ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０））。この基質溶液に酵素Ａ（４μＬ、終濃度：１．８ｍＵ／ｍＬ）溶液を加え、４０℃、１４０ｒｐｍの条件で２時間振とうした。Proteinase K（タカラバイオ（株）製、Code No.9034、２０μＬ）を添加し、３７℃、１０００ｒｐｍで３０分間反応し、オートクレーブ処理を施すことで反応を停止させた。室温まで冷却後、MWCO1000の透析チューブに溶液を移し、精製水中にて透析を行った。透析物を凍結乾燥し、酵素処理産物LP-LMW-D1deg（２８０ｍｇ）を得た。得られた画分の触媒活性と立体選択性を「触媒活性測定法III」に従って、ピーク分子量を「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従って測定し、収率とともに表１８に記した。
（４）陰イオン交換カラムによるLP-LMW-D1degの分画
　LP-LMW-D1deg（２８０ｍｇ）を精製水（２ｍＬ）に溶解させた試料を、精製水により平衡化したＯＨ型の陰イオン交換カラム（商品名：DEAE TOYOPERAL 650、東ソー（株）製、カラム容量（ＣＶ）：１０ｍＬ）に供した。サンプルを吸着させた後、ペリスタルティックポンプを用い、１０ＣＶの精製水、１０ＣＶの１００ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液を順次、流速約３ｍＬ／分で流し、５ｍＬの画分容量で分画を行った。糖を含有する画分のうち、精製水溶出画分（LP-LMW-D1degD1）、１００ｍＭ炭酸水素ナトリウム溶出画分（LP-LMW-D1degD2）をエバポレーターにより濃縮後、MWCO1000の透析チューブに移し、精製水で透析を行った。透析物を凍結乾燥後、各画分をそれぞれ１９９ｍｇ、３７．２ｍｇ取得した。
　各画分の収率、触媒活性、立体選択性、平均分子量を表１９に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。単糖組成解析結果を表２０に示す。
（５）ゲル濾過カラムによるLMW-D1degD1の分画
　LMW-D1degD1（１５０ｍｇ）を精製水（０．５ｍＬ）に溶解した試料を、ゲル濾過カラム（商品名：BioGel P10、Bio-Rad Laboratories社製、カラム容量（ＣＶ）３００ｍＬ、内径３ｃｍ×５４ｃｍ）に供した。サンプルを吸着させた後、３ＣＶの５０ｍＭ酢酸溶液を流速約１ｍＬ／分で流し、５ｍＬの画分容量で分画を行った。
　得られた画分を「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従って分析し、分子量を基準にして５×１０３超、４～５×１０３、３～４×１０３、２～３×１０３、２×１０３未満の５つの画分に分けて集め、それぞれ凍結乾燥して、画分ＢＧ１（２３．３ｍｇ）、ＢＧ２（２４．２ｍｇ）、ＢＧ３（２０．７ｍｇ）、ＢＧ４（２５．６ｍｇ）、ＢＧ５（３３．２ｍｇ）をそれぞれ得た。
　各画分の触媒活性、立体選択性、平均分子量、単糖分析結果を表２１に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い、単糖分析は「単糖組成解析法」に従い測定した。なお、単糖分析ではガラクトースとアラビノース以外の糖は検出されなかった。
（６）ガラクタナーゼによるＡＬ－ＬＭＷの分解
　ＬＰ－ＬＭＷと同様にして、ＡＬ－ＬＭＷを陰イオン交換樹脂で精製し、AL-LMW-D1を得た。得られたAL-LMW-D1を酵素Ａ（ガラクタナーゼ）で消化し、再度、陰イオン交換カラムで精製し、ＤＥＡＥ非吸着各画分（AL-LMW-D1degD1）を得た。ソヤファイブＳ－ＤＮ、AL-LMW、AL-MLW-D1、及びAL-LMW-D1degD1の触媒活性（「触媒活性測定法III」で測定）と平均分子量（「ゲルろ過分析法II」で測定）を表２２に示す。AL-LMW-D1degD1の単糖組成を「単糖組成解析法」に従い分析したところ、ラムノース０．２ｍｏｌ％、アラビノース０．３ｍｏｌ％、ガラクトース９６．４％、ガラクツロン酸０．１ｍｏｌ％であり、他の単糖は検出されなかった。
　AL-LMW-D1degD1をゲルろ過カラムクロマトグラフィーに供して分画し、先に溶出した順に画分Ｂ１～Ｂ４を得た。各画分の触媒活性、立体選択性、平均分子量を表２３に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析II」に従い測定した。
（７）分子量と触媒活性、分子量と立体選択性の関係
　LP-LMW及びAL-LMWを消化又は精製して得られた画分について、分子量、触媒活性、立体選択性の関係を図４にまとめた。分子量が２．５×１０３～３×１０３の間で、触媒としての立体選択性が急激に低下する傾向が見られた。分子量が２．５×１０３～６×１０３の間で、分子量に応じて向上する傾向が見られた。
実施例Ａ７：酸による多糖の加水分解
（１）酸性条件の検討
　多糖画分（AL-LMW EtOH0.8/1.1-PPT）５ｇを精製水に溶解し、AL-LMW EtOH0.8/1.1-PPT溶液５００ｍＬを得た。
　AL-LMW EtOH0.8/1.1-PPT溶液を３０ｍＬずつビーカーに分注し、それぞれｐＨ２、２．５、３．５、４となるよう希硫酸で調整し、試験管に移して攪拌しながら内温が９０℃になるようヒートブロックで加温した。加水分解が進行した後、各試験管から採取したサンプル３．８ｍＬに１Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ５）０．２ｍＬ、エタノール１２ｍＬを順次添加し、冷蔵庫で１日保存した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）で集め、通風乾燥した。乾燥後の沈殿を少量の精製水に懸濁し、凍結乾燥し、低分子多糖画分を得た。
　AL-LMW EtOH0.8/1.1-PPT溶液に希硫酸を加えてｐＨ３に調整し、３０ｍＬずつ試験管に入れて攪拌しながら、内温７０℃、８０℃、又は９０℃で加温した。加水分解が進行した後、各試験管から採取したサンプル３．８ｍＬに１Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ５）０．２ｍＬ、エタノール１２ｍＬを順次添加し、冷蔵庫で１日保存した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）で集め、通風乾燥した。乾燥後の沈殿を少量の精製水に懸濁し、凍結乾燥し、低分子多糖画分を得た。
　AL-LMW EtOH0.8/1.1-PPT溶液に希硫酸を加えてｐＨ３に調整し、その液７ｍＬを試験管に移して、シリコン栓を装着しオートクレーブで１２１℃に加温した。加水分解が進行した後、試験会から採取したサンプル４．７５ｍＬに、１Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ５）０．２５ｍＬ、エタノール１５ｍＬを順次添加し、冷蔵庫で１日保存した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）で集め、通風乾燥した。乾燥後の沈殿を少量の精製水に懸濁し、凍結乾燥し、低分子多糖画分を得た。
　各加水分解条件における分解時間、得られた低分子多糖画分の収率、得られた分解物の触媒活性、立体選択性、平均分子量を表２４に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析II」に従い測定した。表２４中、収率は、エタノール沈殿で得られた粗生成物の量を基に算出しているため、無機塩を含んでおり、１００％を超えている場合もある。酸による分解は、温度７０～１２１℃、ｐＨ２～４の範囲で進行したことを確認した。
（２）硫酸による加水分解
　上記で得られた画分AL-LMWEtOH0.8/1.1 PPT（１７ｇ）をビーカーに入れ、精製水（８００ｍＬ）を入れ、攪拌して溶解させた。１Ｍ硫酸を加えて、溶液のｐＨを３．２に調整し、精製水を追加して、全体で８５０ｍＬとした。得られた溶液を１Ｌ四ツ口フラスコに移し、還流冷却管を装着し、オイルバスで内温９０℃、８８時間撹拌した。
　その後、１Ｍ水酸化ナトリウムでｐＨを６～７に調整し、遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）して不溶物を除き、中和済み加水分解溶液を得て、その体積（Ｘ）を測定した。
　攪拌しながら、中和済み加水分解液にエタノール（Ｘと同量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で集めた（分離された上清１は次工程で使用した）。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO1000の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して低分子多糖画分（AS-LLMW EtOH 0/1.0）１．２ｇを得た。
　上清１を氷水浴で冷却し、エタノール（Ｘと同量）を滴下して撹拌した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で集めた（分離された上清２は次工程で使用した）。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO1000の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して酸処理済み低分子多糖画分（AS-LLMW EtOH 1.0/2.0）６．２ｇを得た。
　上清２にエタノール（Ｘと同量）を滴下して、撹拌した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で集めた（分離された上清３は次工程で使用した）。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO1000の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して低分子多糖画分（AS-LLMW EtOH 2.0/3.0）０．９６ｇを得た。
　各画分の触媒活性、立体選択性、ピーク分子量を表２５に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。単糖組成分析を「単糖組成解析法」に従い実施し、結果を表２６に示す。
（３）陽イオン交換樹脂を用いた加水分解
　画分(AL-LMW EtOH0.8/1.1 PPT)（９．０ｇ）をビーカーに入れ、精製水（９００ｍＬ）を入れ、攪拌し溶解させ、５００ｍＬ四つ口フラスコに入れた。フラスコに再生済Amberlyst 15R (Dry 10.8ｇ相当)を入れて還流冷却管を装着し、オイルバスで加温し、内温９０℃で１０３時間撹拌した。この時点の溶液のｐＨは３．４であった。
　その後、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを６～７に調整し、遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）して不溶物を除き、中和済加水分解溶液を得て、その体積（Ｘ）を測定した。中和済み加水分解溶液を攪拌しながら、エタノール（Ｘと同量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分）で除いた。上清１を攪拌しながら、さらにエタノール（Ｘの０．４倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で集めた(分離された上清２は次工程で使用した)。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO1000の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して低分子多糖画分(AM-LLMW EtOH 1.0/1.4)２．６ｇを得た。
　上清２を氷水浴で冷却して攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．６倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で集めた（分離された上清３は次工程で使用した）。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO1000の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して低分子多糖画分（AM-LLMW EtOH 1.4/2.0）２．０ｇを得た。
　上清３を攪拌しながら、エタノール（Ｘと同量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で集めた。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO1000の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して低分子多糖画分（AM-LLMW EtOH 2.0/3.0）０．５２ｇを得た。
　各画分の触媒活性、立体選択性、平均分子量を表２７に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。
　また、同様の方法で調製し、加水分解後のエタノール分画の添加割合を変えた画分「単糖組成解析」の結果を表２８に示す。
（４）酢酸による加水分解
　画分（AL-LMW EtOH0.8/1.1 PPT）（０．９ｇ）をビーカーに入れ、精製水（９０ｍＬ）を入れ、攪拌し溶解させた。１Ｍ酢酸で溶液のｐＨを３．１とした。１００ｍＬ四ツ口フラスコに上記溶液を移し、還流冷却管を装着し、オイルバスで加温し、内温９０℃で８８時間撹拌した。その後、１Ｍ水酸化ナトリウムでｐＨを５に調整して、中和済み加水分解溶液を得て、その体積（Ｘ）を測定した。中和済み加水分解溶液を攪拌しながら、エタノール（Ｘと同量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）で除き、上清を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．４倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で集めた（分離された上清１は次工程で使用した）。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO1000の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して酸低分子画分（AA-LLMW EtOH 1.0/1.4）０．１７ｇを得た。
　上清１を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．６倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）で集めた（分離された上清２は次工程で使用した）。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO1000の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して酸処理済み低分子画分（AA-LLMW EtOH 1.4/2.0）０．１５ｇを得た。
　上清２を攪拌しながら、エタノール（Ｘと同量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）で集めた。得られた沈殿を精製水で懸濁し、MWCO1000の透析チューブに入れ、１０ｍＭ酢酸溶液を外液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して酸処理低分子画分（AA-LLMW EtOH 2.0/3.0）０．０３２ｇを得た
　各画分の触媒活性、立体選択性、平均分子量を表２９に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。
（５）陰イオン交換樹脂による精製
　画分（AM-LLMW EtOH1.4/2.0）（３ｇ）を精製水（１００ｍＬ）に懸濁し、MWCO1000の透析チューブ（Spectra/Por 6 Dialysis Membrane、REPLIGEN社製）に入れて、精製水を外液として透析を行った。透析後の液（触媒２．７ｇ分）を陰イオン交換カラム（商品名：DEAE-Toyopearl（ＯＨ型）、東ソー（株）製、カラム容積２８０ｍＬ）に供し、精製水を流速約８ｍＬ／分で流し、１６ｍＬの画分容量で分画を行った。糖を多く含む画分を集めて、MWCO1000の透析チューブに入れ、外液１０ｍＭ酢酸で透析し、透析後の液を凍結乾燥し、ＤＥＡＥ非吸着画分（AM-LLMW EtOH 1.4/2.0 D1(FT)）（１．８７ｇ、収率７１％）を得た。
　ＤＥＡＥ非吸着画分の触媒活性及び立体選択性を「触媒活性測定法III」に従い、ピーク分子量を「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。触媒活性は１７．２ｍＵ／ｍｇであり、立体選択性は６６．８％ｅｅであり、ピーク分子量は３．９×１０３であった。また、単糖組成分析を「単糖組成解析法」に従い行ったところ、この画分は、フルクース０．１％、アラビノース３．１％、ガラクトース９６．８％で構成されており、他の糖は検出されなかった。
（６）ゲル濾過カラムによる精製
　上記で得られたＤＥＡＥ非吸着画分（３００ｍｇ）を精製水で溶解して水溶液１ｍＬを得た。これをBioGelP10（Bio-Rad Laboratories社製、カラム容量３００ｍＬ、内径３ｃｍ×５４ｃｍ）に供した。サンプルを吸着させた後、５０ｍＭ酢酸溶液を流速約１ｍＬ／分で流し、５ｍＬの画分容量で３ＣＶ分の分画を行った。
　得られた画分を「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析II」で分析し、分子量と相対的な糖含量を測定した。分子量を基準にして４．５×１０３超、３．５～４．５×１０３、３．５×１０３未満の画分をそれぞれ集めた後、ゲルろ過クロマトグラフィーにてカラム容積３回分の画分を合わせ、凍結乾燥することにより、画分ＢＧ１～３を得た。
　各画分の触媒活性、立体選択性、平均分子量を表３０に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。
実施例Ａ８：ニンジンからの調製
（１）ニンジンからペクチン性多糖の調製
　５００ｍＬ三角フラスコに、粉末ニンジン（商品名：にんじんファインパウダー、三笠産業（株）製）約５０ｇを量り取り、クロロホルムとメタノールの混合液（体積比９：１）３００ｍＬを加え、アルミホイルで蓋をして撹拌子を用いて１時間強く撹拌した。吸引漏斗と吸引瓶を用いて吸引ろ過後、同混合液でフラスコおよびろ過された植物体を洗浄し、回収した。回収した植物体と同混合液３００ｍＬをフラスコに入れ、撹拌子を用いて再度１時間撹拌後、ろ過にて植物体を回収した。この工程を２回繰り返し（計３回）、粉末状の脱脂サンプル４５ｇを得た。
　脱脂サンプル４ｇを精製水３０ｍＬに懸濁し、冷蔵室内で１日攪拌し、５０℃で１時間加温後、遠心分離（１５０００×ｇ、１５分間、４℃）し、沈殿を得た。得られた沈殿を１０ｍＭ酢酸４０ｍＬに懸濁させ、オートクレーブを使って１２１℃、１時間加温した後、遠心分離（１５０００×ｇ、１５分間、４℃）し、上清を得て、その体積（Ｘ）を測定した。得られた上清を攪拌しながら、エタノール（Ｘの２倍量）を滴下し、生じた沈殿を遠心分離で取得した。この沈殿をデシケータに入れ、減圧乾燥し、粉末（粗ペクチン性多糖）０．３０３ｇを得た。
（２）ニンジン由来ペクチン性多糖の精製
　水酸化ナトリウム（１．０８ｇ）と水素化ホウ素ナトリウム（４１ｍｇ）の水溶液（２７ｍＬ）にペクチン性多糖（２３８ｍｇ）を懸濁させ、試験管に入れた。これをアルミブロックで加温して、内温７０℃、４０時間撹拌し、酢酸でｐＨ６に中和することにより、中和済み加水分解溶液を得て、その体積（Ｘ）を測定した。中和済み加水分解溶液を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．５倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分）で取り除き、上清を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．６倍量）を滴下し、一日冷蔵庫で静置した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１０分）で集め、精製水（１．３ｍＬ）で溶解し、脱塩カラム（商品名：ＰＤ－１０）に供した。糖を含む溶出液を集めて凍結乾燥し、画分（AL-LMW EtOH 0.5/1.1）８７ｍｇを得た。
　各画分の触媒活性、立体選択性、平均分子量を表３１に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。
　原料の粉末ニンジンに比べると、粗ペクチン性多糖の触媒活性は３．９倍、画分（AL-LMWEtOH 0.5/1.1）の触媒活性は６．１倍向上した。エポキシ開環反応の生成物であるアミノアルコールの光学純度も、粉末ニンジンで５３％ｅｅ、粗ペクチン性多糖で６４％ｅｅ、画分（AL-LMW EtOH 0.5/1.1）で６６％ｅｅであり、立体選択性も向上したことがわかった。
（３）植物加工物（粉末ニンジン）から多糖画分および低分子多糖画分の調製
　水酸化ナトリウム（７２ｇ）と水素化ホウ素ナトリウム（１．３６ｇ）の水溶液（９２５ｍＬ）に粉末にんじん（商品名：人参パウダー、こだま食品（株）製）（１８ｇ）を懸濁させ、１Ｌ四つ口フラスコに入れて、オイルバスで加温し、内温７０℃、１２２時間撹拌した。反応液を酢酸でｐＨ７に中和し、中和済み加水分解溶液を得て、その体積（Ｘ）を測定した。中和済み加水分解溶液を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．５倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で除き、得られた上清を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．６倍量）を滴下し、一日冷蔵庫で静置した。生じた沈殿を遠心分離（１２０００×ｇ、２０分間）で集めて、精製水で懸濁させ、MWCO3500の透析チューブに入れ、外液を１０ｍＭ酢酸溶液として透析した。透析後の液を凍結乾燥して多糖画分（AL-LMW EtOH 0.5/1.1）０．２８ｇを得た。
　ＡＬ－ＬＭＷ（２４０ｍｇ）を精製水（２４ｍＬ）に懸濁させ、１Ｍ硫酸で溶液のｐＨを３に調整した。試験管に入れて、内温が９０℃となるようにアルミブロックで加温しながら９６時間撹拌した。加水分解液の体積を測定し、０．０５３倍に相当する量の１Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５）を添加し攪拌し（終濃度５０ｍＭ）、遠心分離（１５０００×ｇ、１５分合間）し、中和済み加水分解溶液（上清）を得て、その体積（Ｘ）を測定した。
　中和済み加水分解溶液を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．５倍量）を滴下した。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、２０分間）で除き、得られた上清を攪拌しながら、エタノール（Ｘの０．５倍量）を滴下した。この操作を２回繰り返した（計３回）。生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、２０分間）で除き、得られた上清を攪拌しながら、エタノール（Ｘと同量）を滴下し、一日冷蔵庫で静置した後、生じた沈殿を遠心分離（１５０００×ｇ、１５分間）で集めた。得られた沈殿を精製水１ｍＬで溶解し、遠心分離（１５０００×ｇ、１０分間）し、上清を脱塩カラム（商品名：ＰＤ－１０）に供し、糖を含む溶出液を得た。この溶出液をカラム（商品名：DEAE-Toyopearl（ＯＨ型）、東ソー（株）製、カラム容積４ｍＬ）に供し、精製水を流した。糖を含む非吸着画分を集め、凍結乾燥し、酸分解済み低分子多糖画分（AS-LLMW EtOH1.0/2.0 DEAE-FT）１０．７ｍｇを得た。
　各画分の触媒活性、立体選択性、平均分子量を表３２に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い測定した。
　原料の人参パウダーに比べて、多糖画分（AL-LMWEtOH 0.5/1.1）の触媒活性は２．３倍であり、酸分解済み低分子多糖画分（AS-LLMW EtOH 1.0/2.0 DEAE-FT）の触媒活性は９．４倍向上した。エポキシ開環反応の生成物であるアミノアルコールの光学純度も、人参パウダーで４１％ｅｅ、多糖画分（AL-LMW EtOH 0.5/1.1）で５６％ｅｅ、酸分解低分子多糖画分（AS-LLMW EtOH 1.0/2.0 DEAE-FT）で６４％ｅｅであり、立体選択性も向上したことがわかった。
実施例Ａ９：水溶性大豆多糖類類からの直接的な低分子多糖画分の調製
（１）陰イオン交換カラムによる水溶性大豆多糖類の分画
　ソヤファイブＳ－ＤＮ（不二製油（株）製、４ｇ）を精製水（４０ｍＬ）に溶解し、オートクレーブ後、遠心分離により不溶物を取り除いた。上清を１０ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液で平衡化したカラム（商品名：DEAE TOYOPERAL 650（ＯＨ型）、東ソー（株）製、カラム容量（ＣＶ）１６０ｍＬ）に供した。サンプルを吸着させた後、ペリスタルティックポンプを用いて、５ＣＶの１０ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液、５ＣＶの１００ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液、５ＣＶの１００ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液、及び５ＣＶの３００ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液を流速約５ｍＬ／分で順次流し、１６ｍＬの画分容量で分画を行った。得られた画分を１μＬずつＴＬＣ上に供し、ＴＬＣを１０％硫酸溶液に浸した後、加熱することで糖含有画分を同定した。１０ｍＭ、１００ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液で溶出された画分をそれぞれＳＦＤ１、ＳＦＤ２といい、１００ｍＭ、３００ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液で溶出された画分をそれぞれＳＦＤ３、ＳＦＤ４と呼ぶ。エバポレーターにより各画分を濃縮した後、MWCO12000～14000の透析チューブに移し、精製水中で透析を行った。透析後の液を凍結乾燥した後、「触媒活性測定法IV」に従いＳＦＤ１～４の触媒活性を測定した。結果を表３３に示す。
（２）画分ＳＦＤ２／３の酵素処理による部分分解
　上記で得られたＳＦＤ２及びＳＦＤ３の混合物を「ＳＦＤ２／３」という。ＳＦＤ２／３（２０ｍｇ）を含有する５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０））１００ｍＬを調製した。この溶液を５００ｍＬ三角フラスコに入れ、酵素Ａ溶液（８μＬ、終濃度：１４．８ｍＵ／ｍＬ）を加え、３７℃、１４０ｒｐｍの条件で２時間振盪した。その後、１４２℃のオイルバスで加温して１０分間撹拌することにより反応を止め、室温まで冷却した後、精製水を加えて１００ｍＬになるまでメスアップした。溶液を攪拌しながらエタノール（１５０ｍＬ）を滴下し、さらに１０分間攪拌した後、遠心分離（１２０００×ｇ、１０分間、４℃）を行い、沈殿（SFD2/3degE1）及び上清（SFD2/3degE2）を得た。SFD2/3degE1を精製水で溶解した。SFD2/3degE2中のエタノールを、エバポレーターを用いて除去した。それぞれの溶液をMWCO1000の透析チューブに溶液を移し、精製水中にて透析した後、凍結乾燥により、SFD2/3degE1及びSFD2/3degE2を粉末として得た。収率はそれぞれ７９％と１２％であった。
（３）陰イオン交換カラムによるＳＦＤ２／３ｄｅｇＥ２の分画
　１００ｍｇ／ｍＬのSFD2/3degE2水溶液１０ｍＬを、精製水により平衡化したカラム（DEAE TOYOPERAL 650（ＯＨ型）、東ソー（株）製、カラム容量（ＣＶ）：４０ｍＬ）に供した。サンプルを吸着させた後、ペリスタルティックポンプを用いて、１０ＣＶの精製水、１０ＣＶの１００ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液を流速約３ｍＬ／分で順次流し、１０ｍＬの画分容量で分画を行った。糖を含有する画分のうち、精製水で溶出された画分をSFD2/3degE2D1（特に、前半画分をSFD2/3degE2D1-1、後半画分をSFD2/3degE2D1-2という。）、１００ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液で溶出された画分をSFD2/3degE2D2という。各画分をエバポレーターを用いて濃縮した後、MWCO1000の透析チューブに移し、精製水により透析し、凍結乾燥を行った。
　各画分の触媒活性、立体選択性、ピーク分子量、単糖分析結果を表３４に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い、単糖分析は「単糖組成解析法」に従い測定した。SFD2/3degE2D1の触媒活性は、１５ｍＵ／ｍｇであった。
（４）ゲル濾過カラムによるSFD2/3degE2D1の分画
　３００ｍｇ／ｍＬのSFD2/3degE2D1水溶液（１ｍＬ）を、５０ｍＭ酢酸溶液で平衡化したオープンカラム（BioGel P10、Bio-Rad Laboratories社製、カラム容量（ＣＶ）３００ｍＬ）に供した。サンプルを吸着させた後、５０ｍＭ酢酸溶液を流速約１ｍＬ／分で流し、５ｍＬの画分容量で３ＣＶ分の分画を行った。各画分をゲルろ過ＨＰＬＣ分析IIの条件で分析を行い、推定分子量とピークサイズを測定した。分子量約１×１０３幅で画分を集めて回収し、凍結乾燥後、複数の中性ガラクタン画分（画分ＮＧ）を得た。
　各画分ＮＧの触媒活性、立体選択性、平均分子量、アラビノース含有量を図５～６に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法III」に従い、平均分子量は「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析法II」に従い、アラビノース含有量は「単糖組成解析法」に従い測定した。図５（ａ）、（ｂ）は、中性ガラクタン画分の推定分子量及び触媒活性をそれぞれプロットしたグラフである。推定分子量が３×１０３以上であると、推定分子量が高いほど触媒活性が高い傾向が見られた。推定分子量が６×１０３付近で触媒活性はプラトーに達した。推定分子量が３０００以下であると、触媒の立体選択性が顕著に低下することがわかった。また、単糖組成分析の結果を図６に示す。図６に示すように、推定分子量が大きいほど、アラビノース含有量も大きい傾向が見られた。推定分子量が２．５×１０３～７×１０３付近の画分では、アラビノース含有量は５％程度であった。
実施例Ａ１０：ＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣを用いた低分子多糖画分（ＮＧ）の精製
（１）ＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分析における重合度推定
　β１，４結合したガラクトースからなる重合度（ＤＰ）が９であるオリゴ糖（合成Ｇａｌ９）を文献（Chemistry A European Journal, 22, 11543-11548(2016)、European Journal of Organic Chemistry, 3849-3869(2001)）に従い合成した。合成Ｇａｌ９の触媒活性は約０．４ｍＵ／ｍｇであり、市販のＤ－ガラクトースと同程度で、ほとんど触媒活性を示さず、立体選択性も確認できなかった。
　実施例Ａ９で調製した画分（推定分子量：１～２×１０３）を、下記のＨＩＬＩＣ分析条件で分析した。
＜ＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：SugarD（５μｍ、４．６ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ、ナカライテスク社製）
溶離液；アセトニトリル／精製水＝６５／３５
流速：１．０ｍｌ／分
カラム温度：３０℃
サンプル濃度：１ｍｇ／ｍＬ
注入量：１０μＬ
検出器：ＲＩＤ
　クロマトグラムは、高感度で検出されるピーク（メジャーピーク）と低感度で検出されるピーク（マイナーピーク）が複数回交互に溶出する鋸歯状の形状を示した。合成Ｇａｌ９のピークがメジャーピークの１つと重なっていることから、そのピークを「９ｍｅｒ」と名付け、このピークを基準にして、メジャーピークを溶出した順に整数でナンバリングし、メジャーピークの間に挟まれたマイナーピークを、直前に溶出したメジャーピークのナンバーに「．５」を付けてナンバリングした。例えば、「９ｍｅｒ」（合成Ｇａｌ９）の直前に溶出するマイナーピークは「８．５ｍｅｒ」であり、「８．５ｍｅｒ」の直前に溶出したメジャーピークは「８ｍｅｒ」である。
（２）「画分ＮＧ３～４ｋＤａ」のＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分取
　実施例Ａ９で得られた分子量３～４×１０３の画分（画分ＮＧ３～４ｋＤａ）を、下記のＨＩＬＩＣ分取条件で分取した。サンプルを３００ｍｇ／ｍＬの濃度となるよう精製水に溶解し、遠心分離で上清を得て、０．２μｍ径のフィルターで濾過した。対応する画分を混合し、エバポレーターによりアセトニトリルを除去、凍結乾燥を行った。上記（１）記載のＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分析条件において、溶離液をアセトニトリル／精製水＝６２／３８に変更した条件で、得られた画分を分析して、同様に各ピークをナンバリングした。
＜ＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分取条件＞
カラム：SugarD（５μｍ、２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ、ナカライテスク社製）及びガードカラム
溶離液；アセトニトリル／精製水＝６０／４０
流速：１０ｍｌ／分
カラム温度：３０℃
サンプル濃度：１ｍｇ／ｍＬ
注入量：１００μＬ（＝３０ｍｇ）
分画容量：１０ｍＬ
検出器：ＲＩＤ
　各画分の触媒活性、立体選択性、単糖組成分析結果を表３５に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法IV（０．１ｍｇ触媒量）」に従い、単糖組成分析は「単糖組成解析法」に従い測定した。図７（ａ）は、「画分ＮＧ３～４ｋＤａ」のＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分取のクロマトグラムであり、図７（ｂ）は、分取後の各画分をＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分析して得られたクロマトグラムを重ねて表示したグラフである。各画分はＨＰＬＣ分析で単一ピークを示した。
（３）「画分ＮＧ２～３ｋＤａ」のＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分取
　実施例Ａ９で得られた分子量２～３×１０３の画分（画分ＮＧ２～３ｋＤａ）を、上記（２）記載のＨＩＬＩＣ分析条件において。溶離液をアセトニトリル／精製水（６３／３７）に変えた条件で、ＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分取を行った。
　メジャーピークの画分を「プールａ」、マイナーピークの画分を「プールｂ」として混合し、エバポレーターによりアセトニトリルを除去、凍結乾燥を行った。得られたプールａ、ｂ画分を１５０ｍｇ／ｍＬの濃度となるよう精製水に溶解し、遠心分離で上清を得て、０．２μｍのフィルターにより濾過し、再度上記の条件にて分取を行った。対応する画分を混合し、エバポレーターによりアセトニトリルを除去、凍結乾燥を行った。得られた画分を、上記（１）記載のＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分析条件において、溶離液をアセトニトリル／精製水（６２／３８）に変えた条件で、得られた画分を分析して、各ピークをナンバリングした。
　各画分の触媒活性、立体選択性、単糖組成分析結果を表３６に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法IV（０．１ｍｇ触媒量）」に従い、単糖組成分析は「単糖組成解析」に従い測定した。図８（ａ）は、「画分ＮＧ２～３ｋＤａ」をＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分取で１度精製したときのクロマトグラムであり、図８（ｂ）は、「プールａ」及び「プールｂ」をそれぞれＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分取で精製したときのクロマトグラムであり、図８（ｃ）は、分取後の各画分をＨＩＬＩＣ－ＨＰＬＣ分析したときのクロマトグラムを重ねて表示したグラフである。各画分はＨＰＬＣ分析で単一ピークを示した。
（４）ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ分析
　得られた画分の分子イオンピークを「ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ解析法」に従い測定した。結果を表３７に示す。最も強く出ているピークのｍ／ｚ値は、［Ｍ＋Ｎａ＋］又は［Ｍ＋Ｋ＋］の分子イオンピークと考えられた。また、分離された多糖に含まれるアラビノース含有率が６％以下であったことから、ガラクトースのみから構成されるか、又は１分子中にアラビノースを１又は２分子含むと推定された。そこで、分子イオンピークｍ／ｚ値に基づいて、１分子中のガラクトースとアラビノースの数及び重合度（ＤＰ）を推定した。
　各画分の重合度の推定結果を表３７に示す。メジャーピークの画分に含まれる糖は、主にガラクトースのみから構成されており、重合度（ＤＰ）とピークナンバーは一致した。またマイナーピークの画分に含まれる糖は、主に１分子のアラビノースを含み、残りはガラクトースからなる多糖であり、重合度（ＤＰ）はピークナンバーに０．５を加えた値と一致した。
（５）重合度と触媒活性、立体選択性の評価
　表３５～３７に示した分取で得られた各画分中に含まれる多糖の重合度（ＤＰ）、触媒活性、立体選択性を図９に示した。
　触媒活性は、重合度が高いほど優れる傾向が見られ、立体選択性は、ＤＰ１１～ＤＰ１５の間では重合度が高いほど優れる傾向が見られ、ＤＰ１５以上の範囲では同程度であった。立体選択性の観点から、重合度が１３以上であると、実用性がより高いと考えられた。
（６）ＯＤＳ－ＨＰＬＣ分取
　上記で得られた画分「ＮＧ１９．５ｍｅｒ」を１０ｍｇ／ｍＬの濃度となるよう精製水に溶解し、遠心分離、０．２μｍのフィルターにより濾過した。得られた濾液を以下の条件でＯＤＳ－ＨＰＬＣで分取した。対応する分画を混合し、エバポレーターによりＭｅＯＨを除去、凍結乾燥を行った。
＜ＯＤＳ－ＨＰＬＳ分取条件＞
カラム：ガードカラムを装着したオープンカラム（Mightysil RP-18GPAqua、５μｍ、１０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）
溶出液：メタノール／精製水（０．５／９９．５）
注入量：１００μＬ（＝１ｍｇ）
流速：４ｍＬ／分
カラム温度：４０℃
分画容量：４ｍＬ
検出器：ＲＩＤ
　ＯＤＳ－ＨＰＬＣ分取のクロマトグラムを図１０に示す。破線で囲ったピークを分取し、溶出した順に１９．５－１～８と名付けた。分取した画分をそれぞれエバポレータで濃縮し、凍結乾燥させてサンプル「１９．５－１～８」を得た。各サンプルを下記に示したＯＤＳ分析条件により分析したところ、１９．５－１、１９．５－２、１９．５－３は単一ピークであることが確認された。図１１は、各サンプルのクロマトグラムを重ねて表示したグラフである。
＜ＯＤＳ分析＞
カラム：オープンカラム（Mightysil RP-18GP Aqua、５μｍ、４．６ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ）
溶出液：メタノール／精製水（１．０／９９．０）
サンプル濃度：１ｍｇ／ｍＬ
注入量：１０μＬ
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：４０℃
検出器：ＲＩＤ
　得られた各画分の触媒活性、立体選択性、分子イオンピークを表３８に示す。触媒活性及び立体選択性は「触媒活性測定法IV」に従い、分子イオンピークは「ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ解析」に従い測定した。19.5mer中には、にはガラクトース19分子とアラビノース1分子から構成され、ＨＰＬＣで単一ピークを示す多糖（１９．５－３）が存在していた。
実施例Ａ１１：ＯＤＳ―ＨＰＬＣ分取
　上記実施例Ａ７で得られた画分ＢＧ２（２０ｍｇ）を精製水４００μＬに溶解して、以下の条件でＯＤＳ－ＨＰＬＣ分取を行った。
＜ＯＤＳ－ＨＰＬＣ分取条件＞
カラム：YMC-Pack ODS-AQ（６ｍｍＩ．Ｄ．×３００ｍｍ（Ｓ－５μｍ、１２ｎｍ、株式会社ワイエムシィ製）
溶離液：１．５％メタノール
流速：１．７ｍＬ／分
カラム温度：３７℃
検出器：ＲＩＤ
分取装置：ＬＣ－Ｆｏｒｔｅ／Ｒ（（株）ワイエムシィ製）
　分取クロマトグラムを図１２に示す。図１２に示すように、ピークＡ～Ｉに対応する分画を回収し、これを複数回繰り返した後、それぞれ凍結乾燥して、各５～１３ｍｇの粉末を得た。図１３に、分取前と分取後の各分画をＯＤＳ－ＨＰＬＣ分析したときのクロマトグラムを示す。分析条件は以下のとおりである。ピークＣ～Ｉに相当する画分Ｃ～Ｉは、いずれも単一ピークであった。
＜分析条件＞
カラム：YMC-Pack ODS-AQ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍＩ．Ｄ．（Ｓ－５μｍ、１２ｎｍ、（株）ワイエムシィ製）
溶離液：１．５％メタノール
カラム温度：３７℃
流速：１．０ｍＬ／分
検出器：ＲＩＤ（装置名：Shodex RI-101、昭和電工（株）製）
　画分Ｄ、Ｅ、Ｆについて、単糖組成分析を「単糖組成解析法」に従って、分子イオンピーク測定を「ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ解析法」に従って行った。結果を表３９に示す。分析結果より、画分Ｄ、Ｅ、Ｆは、それぞれガラクトース２０、２１、２２個のみで構成される多糖であることがわかった。
　同様に、上記実施例Ａ７で得られた画分ＢＧ３をＯＤＳ－ＨＰＬＣ分取し、ＤＰ１６～ＤＰ１９に相当する画分を得た。
　以上のとおり、ＤＰ１６～２５がそれぞれ得られたので、各画分の触媒活性と立体選択性を「触媒活性測定法III」で測定した。その結果を図１４に示す。図１４（ａ）は、ＤＰ１６～２５の触媒活性を示すグラフであり、図１４（ｂ）は、ＤＰ１６～ＤＰ２５の立体選択性を示すグラフである。ＤＰ２０～ＤＰ２５の範囲では、触媒活性が高く、重合度が高いほど触媒活性が高い傾向が見られた。また、ＤＰ１６～ＤＰ２０の範囲では、重合度が高いほど立体選択性が高い傾向が見られ、ＤＰ２０～ＤＰ２５は同程度の立体選択性を示した。
実施例Ａ１２：低分子多糖画分の還元末端の修飾
（１）画分ＢＧ１～５のエチル４－アミノベンゾエート（ＡＢＥＥ）化及びｔｅｒｔ－ブチル４－アミノベンゾエート（ＡＢｔＢ）化
　シアノ水素化ホウ素ナトリウム（３５ｍｇ）とＡＢＥＥ（１６５ｍｇ）又はＡＢｔＢ（１９３ｍｇ）をスクリュー管に入れ、メタノール（３５０μＬ）、酢酸（４１μＬ）を加え、ボルテックスで攪拌し、約６０℃で加温し溶解させて、誘導化試薬を調製した。
　実施例Ａ６で得たＢＧ１～５の各溶液（１０ｍｇ／ｍＬ、１０μＬ）を１．５ｍＬのミニチューブに入れ、誘導化試薬（４０μＬ）を入れ、８０℃で１時間加温した。精製水（５００μＬ）を加え、クロロホルムで抽出し、水層部を下記条件でＨＰＬＣ分析した。
＜ＨＰＬＣ分析＞
カラム：TSKGel ODS120H（東ソー（株）製）
溶離液：ホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．０）／アセトニトリル（９１／９）
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：３５℃
検出器：ＵＶ（検出波長：３１０ｎｍ）
　ＨＰＬＣ分析の結果、ＡＢＥＥ化したＢＧ１～３は、それぞれ幅広な単一ピークを示し、ＡＢＥＥ化したＢＧ４～５は、それぞれ複数のピークを示した。また、ＡＢｔＢ化したＢＧ１は幅広な単一ピークを示し、ＡＢｔＢ化したＢＧ２～３は鋸歯状のピークを示した。ＢＧ１～５のいずれも、波長３１０ｎｍに吸収を有する誘導体に変換されたことがわかった。
（２）水溶性大豆多糖類由来のSFD2/3 degD1の誘導体化（ＡＢＥＥ）
　１００ｍＬ丸底フラスコに、ＡＢＥＥ（６６０ｍｇ）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１４０ｍｇ）、メタノール（２０ｍＬ）、及び酢酸（１６３μＬ）を入れた。そのフラスコに、実施例Ａ９で得られた２０ｍｇ／ｍＬ　SFD2/3 degD1（５ｍＬ）を加え、攪拌しながら８０℃で１８時間加温した。クロロホルムで過剰なＡＢＥＥを取り除き、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。中和後の液にエタノール（中和後の水層の体積の４倍量）を添加した。沈殿を集めて透析した後、凍結乾燥を行い、粉末（ＮＧ－ＡＢＥＥ）２９．５ｍｇを得た。
　ＮＧ－ＡＢＥＥと修飾前のサンプル（ＮＧ）を「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析II」の方法で分析した。結果を図１５に示す。ＲＩＤ及びＵＶ（検出波長：３１０ｎｍ）の両方で検出した。ＮＧ－ＡＢＥＥは、ＵＶ検出にて波長３１０ｎｍの吸収を有することが確認され、ＲＩＤ検出にてＮＧとＮＧ－ＡＢＥＥの保持時間はほぼ同じであることがわかった。
　ＮＧとＮＧ－ＡＢＥＥの触媒活性と立体選択性を評価した。触媒活性と立体選択性は、「触媒活性測定法III」に従い測定された。結果を表４０に示す。ＮＧ－ＡＢＥＥは、ＮＧと同程度の立体選択性を示し、１．３倍高い触媒活性を示した。
（３）低分子多糖画分のＡＢＥＥ化および触媒活性
　同様の方法により、実施例Ａ７で得られた画分ＡＭ－ＬＬＭＷをＡＢＥＥ化した。
　水層を「ゲルろ過ＨＰＬＣ分析II」の方法で分析したところ、波長３１０ｎｍに吸収を持つピークが検出された。画分AM-LLMWもＡＢＥＥ化できることが確認された。
実施例Ｂ１：ＮＭＲ分析
　以下の条件で、ＡＬ－ＬＭＷの１Ｈ－ＮＭＲ及び１３Ｃ－ＮＭＲを測定した。
溶媒：重水（Ｄ２Ｏ）
ＮＭＲ測定装置：Bruker AVANCE II 400（Bruker社製）
周波数：１Ｈ－ＮＭＲでは４００ＭＨｚ、１３Ｃ－ＮＭＲでは１００ＭＨｚ
　１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１６に、１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルを図１７に示す。文献（Food Chemistry, 242, 211-216(2018)）を参照しながら、それぞれの化学シフト値（δ）を分析した。その結果、ＡＬ－ＬＭＷのＮＭＲスペクトルは、文献に記された「→４）－β－Ｄ－Ｇａｌｐ－（１→）由来の値と類似していることから、ＡＬ－ＬＭＷの主構造は、ガラクトースがβ１，４結合しているガラクタンであることがわかった。また、ＮＭＲスペクトルには、オレフィン及びカルボニル基に対応するピークは確認されなかった。
実施例Ｂ２：画分ＮＧ３～４ｋＤａの多段階誘導体化及び糖鎖結合位置解析
　実施例Ａ１０で得た画分ＮＧ３～４ｋＤａから調製した１１ｍｅｒ、１１．５ｍｅｒ、１５ｍｅｒ、１５．５ｍｅｒ、１９．５ｍｅｒ、又は２０ｍｅｒをサンプルとして使用し、多段階誘導体化（メチル化、単糖化、アルジトール化、及びアセチル化）を行い、分子量の差から糖鎖の結合位置を解析した。
（工程１）メチル化
　２ｍＬスクリューキャップチューブにサンプル（１ｍｇ）を量り取り、ジメチルスルホキシド（５００μＬ）、乳鉢により粉末状にすりつぶした水酸化ナトリウム（５０ｍｇ）を加え懸濁し、１０００ｒｐｍ、２５℃で３０分間攪拌した。ヨウ化メチル（２５０μＬ）を加え、混合後、２５℃で２０～２５時間攪拌した。
（工程２）単糖化
　メチル化後の組成物に１００ｍＭチオ硫酸ナトリウム水溶液（３００μＬ）及びジクロロメタン（３００μＬ）を加え、有機層を回収した後、１００ｍＭチオ硫酸ナトリウム水溶液で有機層を洗浄、精製水で脱塩し、遠心エバポレータにより有機溶媒を留去した。得られた中間体混合物を精製水（１５０μＬ）で懸濁し、４Ｍトリフルオロ酢酸（終濃度２Ｍ）（１５０μＬ）を加えて攪拌した後、１２０℃、２時間振盪した。
（工程３）アルジトール化
　単糖化後の組成物を室温まで冷却した後、凍結乾燥を行い、重水素化ホウ素ナトリウム（２０ｍｇ）及び２Ｍアンモニア水（５００μＬ）を加えて溶解させ、６０℃、２時間振盪した。
（工程４）アセチル化
　アルジトール化後の組成物を室温まで冷却した後、メタノール（５００μＬ）を加え、共沸操作を繰り返して溶媒を留去した。得られた残渣に無水酢酸（４００μＬ）及びトリフルオロ酢酸（１００μＬ）を加え、６０℃、２時間振盪した。得られた組成物を室温まで冷却した後、飽和炭酸水素ナトリウム（４００μＬ）、及びクロロホルム（４００μＬ）を加え、有機層を回収した後、飽和炭酸水素ナトリウムで有機層を中和し、精製水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、アセチル化したサンプルを得た。アセチル化したサンプルをＧＣ－ＭＳにより分析した。
＜ＧＣ－ＭＳ条件＞
測定機器：GC2010/GCMS-QP2010（（株）島津製作所製）
分析カラム：ＤＢ－２２５ＭＳ（２０ｍ×０．２５ｍｍＩ．Ｄ．、０．２５μｍ）
キャリアガス：ヘリウム
カラム温度：１４０℃を１分維持した後、２０℃／分で２２０℃まで昇温させ、２２０℃を２５分維持させた。
　図１８は、１９．５ｍｅｒと２０ｍｅｒを誘導体化した後のｍ／ｚ１１８検出によるＧＣスペクトルである。ｍ／ｚ１１８で検出されるピークは一般的に、ヘキソース由来の部分メチル化アルジトールアセテートの一部の水素原子を重水素で置き換えられたことを示すものとして、質量スペクトルに頻出するピークである（J.Biol.Chem.,293(30), 11955-11965(2018)参照）。また、後述のスペクトルライブラリーによるとアラビノース由来のピークの多くがｍ/z１１８で検出される。
　ＧＣ－ＭＳ分析で、ｍ／ｚ１１８検出により、保持時間９．４５０分（ａ）、９．５８３分（ｂ）、１２．５１７分（ｃ）の３つのピークが観察された。それぞれのピークのマススペクトルをジョージア大学のComplex Carbohydrate Research Centerが提供しているスペクトルライブラリー(https://glygen.ccrc.uga.edu/ccrc/specdb/ms/pmaa/pframe.html）のデータと照合したところ、保持時間が短い順に（ａ）１，４－アラビノピラノース又は１，５－アラビノフラノース、（ｂ）末端ガラクトピラノース、（ｃ）１，４－ガラクトピラノースと一致することが判明した。これらの結果から、１９．５ｍｅｒ及び２０ｍｅｒ（中性ガラクタン）は、ガラクトースが直鎖状に結合した糖鎖であり、分岐鎖がなく、主に１，４結合したガラクトースで構成される糖鎖の間にアラビノースが挿入されていると推定された。
実施例Ｃ：アレルゲン含量の検討
（１）アレルゲン含量の分析
　おから（商品名：おからパウダー、アクロシア（株）製）、水溶性大豆多糖類（商品名：ソヤファイブＳ－ＤＮ）、多糖画分ＡＬ－ＬＭＷ、低分子多糖画分ＡＭ－ＬＬＭＷの溶液あるいは懸濁液をそれぞれ調製し、「ＦＡＳＴＫＩＴスリム大豆」（日本ハム（株）製）を用い、取扱い説明書にしたがって、上清中の大豆アレルゲン含量を測定した。おからに精製水を加えて抽出した後、遠心分離を行い、得られた上清を分析に供した。
　説明書にしたがって調製されたサンプル濃度（通常濃度）では、サンプル中のアレルゲンが５μｇ／ｇを超えると陽性として検出される。水溶性大豆多糖類には、アレルゲンが検出されなかったが、サンプル濃度を５倍に増加して再測定したところ、アレルゲンが検出された。ＡＬ－ＬＭＷ、ＡＭ－ＬＬＭＷでは、サンプル濃度を５倍に増加して測定した。結果を表４１に示す。多糖画分は、水溶性大豆多糖類に比べ、大豆アレルゲンレベルが低く、低分子多糖画分では検出不能なレベルまで低下していることがわかった。
＋＋：陽性を示すバンドが濃く見える。
＋：陽性を示すバンドが薄く見える。
－：陽性を示すバンドが見られない。
実施例Ｃ２：アレルゲンの難ゲル化性
　水溶性大豆多糖類（ソヤファイブＳ－ＤＮ、不二製油（株）製）、多糖画分２種（ＬＰ－ＬＭＷ、AL-LMW-EtOH0.8/1.1PPT）、低分子多糖画分（AM-LLMW-EtOH1.0/1.4）それぞれ２０ｍｇを１．５ｍＬガラス容器に入れ、飽和食塩水に懸濁あるいは溶解させて１００μＬとした。これを１日室温で静置後、容器を倒立させ、溶液が流動しない場合、ゲル化とした。
水溶性大豆多糖類はゲル化したが、多糖画分（ＬＰ－ＬＭＷ、AL-LMW-EtOH0.8/1.1PPT）、低分子多糖画分（AM-LLMW-EtOH1.0/1.4）はゲル化しなかった。
実施例Ｃ３：立体選択性の比較
　「触媒活性測定法III」に従い、多糖サンプル（７ｍｇ）を用いて、立体選択性を評価した（ｎ＝５）。多糖サンプルとして、水溶性大豆多糖類（ソヤファイブＳ－ＤＮ、不二製油（株）製、分子量約１０万～８４万）、ＬＰ－ＬＭＷ（分子量３～５万）、ＡＬ－ＬＭＷ（分子量３～５万）、又はＡＭ－ＬＬＭＷ（分子量３０００～５０００）を用いた。また、飽和食塩水に代えて、飽和塩化カリウム水溶液を用いて、同様に実験を行った。有意差は、水溶性大豆多糖類に対するｔ検定を行い、ｐ＜０．０１の場合に「有意差が有る」と判定した。
　結果を表４２に示す。水溶性大豆多糖類を低分子量化するにつれて、立体選択性が向上した。また、エポキシ開環反応では、飽和食塩水よりも飽和塩化カリウム水溶液を使用したほうが、立体選択性がより高いことがわかった。
実施例Ｃ４：二相反応による生成物の回収量の向上
　１．５ｍＬガラス容器中に、ソヤファイブＳ－ＤＮ（不二製油（株）製）又は低分子多糖画分（ＡＭ－ＬＬＭＷ）２０ｍｇ、及び飽和食塩水３００μＬを入れて、基質のトルエン溶液（１０ｖ／ｖ％エポキシシクロヘキサン及び１０．８ｖ／ｖ％シクロプロピルアミンを含む）３００μＬを加え、３７℃にて、２２時間、３００ｒｐｍで攪拌した。その後、トルエン層を採取し、新しい基質のトルエン溶液（３００μＬ）を投入し、これをさらに２回繰り返した。すなわち、水相を再利用し、計３回の反応を行った。
　回収したトルエン層中の生成物（２－シクロプロピルアミノシクロヘキサノール）の含量を、「触媒活性測定法I」に従ってＧＣ分析で測定した。
　結果を表４３に示す。水溶性大豆多糖類もＡＭ－ＬＬＭＷも、繰り返し使用しても、変換率及び生成物の回収量および光学純度は変化しなかった。一方、水溶性大豆多糖類は、繰り返し使用することにより、反応液の一部がゲル化して、容器の内壁に付着し、トルエン層の回収が困難であり、生成物の回収量が少なかった。図１９は、トルエン層を回収する前の各反応容器の様子を示す写真であり、左は水溶性大豆多糖類を使用した反応容器を示し、右はＡＭ－ＬＬＭＷを使用した反応容器を示す。図１９中、実線矢印はトルエン層の液面の位置を示し、破線矢印は水層とトルエン層の境界面の位置を示す。
実施例Ｃ５：高温反応性
　ソヤファイブＳ－ＤＮもしくはＬＰ－ＬＭＷを用いて、活性測定方法Vで反応温度を４０℃、５０℃、６０℃、７０℃と変え、触媒活性と立体選択性を測定した。結果を表４４に示した。ＬＰ―ＬＭＷ、水溶性大豆多糖類共に６０℃で最大となった。立体選択性は温度の影響をほとんど受けなかった。どの温度においてもＬＰ－ＬＭＷは。ソヤファイブＳ－ＤＮより１．５～２倍高い比活性を維持した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000085
実施例Ｄ：アミノアルコールの生成
　合成された生成物の標品となるラセミ体アミノアルコールは、以下の条件でＧＣとＨＰＬＣで分析した。各分析条件を表４５及び表４６に示す。
＜ＧＣ分析条件＞
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000086
 カラムサイズ：(30m×0.25mm×0.25μm)
＜キラルＨＰＬＣ分析条件＞
検出波長：２５４ｎｍ
使用カラム：CHIRALPAK ID（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ、ＤＡＩＣＥＬ社製）
注入量：１０μＬ
分析のためのラセミ体合成と分析方法を以下の参考例に記した。
参考例１：ｔｒａｎｓ－２－（（４－メトキシベンジル）アミノ）シクロヘキサノールの合成
　５０ｍＬナスフラスコ中に１，２－エポキシシクロヘキサン０．９８ｇと４－メトキシベンジルアミン１．３７ｇを量りとり、メタノール５．３ｍＬと水１．３ｍＬ、塩化リチウム８５ｍｇを加え、５０℃で４８時間撹拌した。反応液をエチルエーテルで３回抽出し、有機層を精製水、飽和食塩水にて順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥、濃縮した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール：トリエチルアミン＝４８０：１２．２：１、ゲル２００ｍＬ）で精製し、標題化合物２．１８ｇを白色粉末として得た（収率９２．９％）。
1H-NMR(CDCl3, 400MHz) δ 0.97(1H, m), 1.25(3H, m), 1.72(2H, m), 2.03(1H, m), 2.17(1H, m),2.27(1H, m), 3.18(1H, dt, J=4.4, 9.8Hz), 3.63(1H, d, J=12.7Hz), 3.79(3H, s),3.88(1H, d, J=12.7 Hz), 6.86(2H, d, J=8.7Hz), 7.23(2H, d, J=8.7Hz)
13C-NMR(CDCl3, 100MHz) δ 24.3, 25.2, 30.6, 33.2, 50.1, 55.3, 63.0, 73.9, 113.8, 129.2, 132.8
分析条件Ａ　２２．９分［エポキシド：４．１分、アミン：１３．３分］
分析条件α　４２．１分：（１Ｓ，２Ｓ）異性体、４５．６分：（１Ｒ，２Ｒ）異性体
参考例２：ｔｒａｎｓ－４－（（４－メトキシベンジル）アミノ）テトラヒドロフラン－３－オールの合成
　１０ｍＬ容ねじ口試験管中、４－メトキシベンジルアミン１３７ｍｇをメタノール５３３μＬ、精製水１３３μＬに溶かし、３，４－エポキシテトラヒドロフラン８６ｍｇ、塩化リチウム８．５ｍｇを順次加え、５０℃の油浴中にて４８時間激しく撹拌した。反応液をエチルエーテルで３回抽出し、有機層を精製水、飽和食塩水にて順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥、濃縮した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール：トリエチルアミン＝５０：１：１、ゲル２５ｍＬ）で精製し、標題化合物１８４．６ｍｇを黄色粉末として得た（収率８２．８％）。
1H-NMR(CDCl3, 400MHz) δ 1.89(2H, br), 3.20(1H, m), 3.55(1H, m), 3.68(1H, m), 3.74(2H, s),3.79(3H, s), 3.98(1H, m), 4.06(1H, m), 4.16(1H, m), 6.86(2H, m), 7.22(2H, m)
13C-NMR(CDCl3, 100MHz) δ 51.7, 55.3, 66.1, 72.5, 74.1, 76.8, 113.9, 129.4, 131.8, 158.8
分析条件Ｂ　２８．３分［エポキシド：６．２分、アミン：８．８分］
分析条件χ　３８．２分：（３Ｓ，４Ｒ）異性体、４１．１分：（３Ｒ，４Ｓ）異性体［アミン：２１．２分］
参考例３：ｔｒａｎｓ－２，２－ジメチル－６－（ベンジルアミノ）－１，３－ジオキセパン－５－オールの合成
　４，４－ジメチル－３，５，８－トリオキサビシクロ［５．１．０］オクタン１４４ｍｇ及びベンジルアミン１０７ｍｇを用い、参考例２と同様にして反応を行い、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミン＝５０：１：１、ゲル３０ｍＬ）で精製し、標題化合物２１０．０ｍｇを褐色粉末として得た（収率８３．７％）。
1H-NMR(CDCl3, 400MHz) δ 1.33(3H, s), 1.34(3H, s), 2.56(1H, m), 3.54(3H, m), 3.80(3H, m),3.93(1H, d, J=13.2Hz), 7.27(5H, m)
13C-NMR(CDCl3, 100MHz) δ 24.6, 24.8, 51.4, 59.2, 61.5, 61.8, 72.1, 101.4, 127.1, 128.1,128.5, 140.4
分析条件Ａ　２１．５分［エポキシド：１０．１分、アミン：８．４分］
分析条件δ　２２．０分：（５Ｓ，６Ｒ）異性体、２８．３分：（５Ｒ，６Ｓ）異性体［アミン：１３．５分］
参考例４：ｔｒａｎｓ－２，２－ジメチル－６－（（４－メトキシベンジルアミノ）－１，３－ジオキセパン－５－オールの合成
　４，４－ジメチル－３，５，８－トリオキサビシクロ［５．１．０］オクタン１４４ｍｇおよび４－メトキシベンジルアミン１３７ｍｇを用い、参考例２と同様にして、標題化合物２３８．９ｍｇを白色粉末として得た（収率８５．０％）。
1H-NMR(CDCl3, 400MHz) δ 1.33(3H, s), 1.34(3H, s), 2.55(1H, m), 3.52(3H, m), 3.73(1H, d,J=12.9Hz), 3.77(1H, m), 3.80(4H, m including singlet), 3.85(1H, d, J=12.9Hz),6.86(2H, m), 7.25(5H, m)
13C-NMR(CDCl3, 100MHz) δ 24.6, 24.8, 50.8, 55.3, 59.2, 61.4, 61.9, 72.1, 101.6, 113.9, 129.3, 132.5, 158.5
分析条件Ａ　２４．１分［エポキシド：１０．１分、アミン：１３．３分］
分析条件ε　２５．４分：（５Ｓ，６Ｒ）異性体、２７．４分：（５Ｒ，６Ｓ）異性体
参考例５：ｔｒａｎｓ－２，２－ジメチル－６－（２－プロピニルアミノ）－１，３－ジオキセパン－５－オールの合成
　４，４－ジメチル－３，５，８－トリオキサビシクロ［５．１．０］オクタン１４４ｍｇおよびプロパルギルアミン１１２ｍｇを用い、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール：トリエチルアミン＝１００：３：３、ゲル２０ｍＬ）で精製した以外は参考例２と同様にして、標題化合物１４４．８ｍｇを褐色粉末として得た（収率８５．７％）。
1H-NMR(CDCl3, 400MHz) δ 1.33(3H, s), 1.35(3H, s), 1.63(1H, br), 2.23(1H, t, J=2.5Hz),2.60(1H, brd, J=6.9Hz), 2.70(1H, m), 3.51(3H, m), 3.55(1H, m), 3.59(1H, m),3.81(1H, m), 3.83(1H, m)
13C-NMR(CDCl3, 100MHz) δ 24.6, 24.7, 36.5, 59.2, 61.3, 61.7, 71.5, 71.9, 82.4, 101.5
分析条件Ｇ　３２．０分、３２．４分［エポキシド：５．５分］
参考例６：ｔｒａｎｓ－２，２－ジメチル－６－（シクロプロピルアミノ）－１，３－ジオキセパン－５－オールの合成
　４，４－ジメチル－３，５，８－トリオキサビシクロ［５．１．０］オクタン１７７．６ｍｇおよびシクロプロピルアミン５７０ｍｇを用い、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミン＝１００：１：１、ゲル２５ｍＬ）で精製した以外は参考例２と同様にして、標題化合物２２６．０ｍｇを白色粉末として得た（収率９１．２％）。
1H-NMR(CDCl3, 400MHz) δ 0.29(1H, m), 0.43(3H, m), 1.33(3H, s), 1.35(3H, s), 2.24(1H, m),2.35(2H, br), 2.66(1H, m), 3.46(1H, m), 3.54(2H, m), 3.74(1H, m), 3.84(1H, m)
13C-NMR(CDCl3, 100MHz) δ 6.8, 7.2, 24.6, 24.8, 28.2, 59.8, 61.8, 62.6, 71.9, 101.3 
分析条件Ｇ　３２．０分、３２．４分［エポキシド：５．５分］
参考例７：（１Ｒ，２Ｒ）－２－（ベンジルアミノ）シクロヘキサン－１－オールの合成
　２５ｍＬナスフラスコ中、ベンズアルデヒド３５．４ｍｇをメタノール７ｍＬに溶かし、激しく撹拌のもと（１Ｒ，２Ｒ）－２－アミノシクロヘキサノール塩酸塩５０．６ｍｇ、酢酸３８μＬ、シアノ水素化ホウ素ナトリウム７８．６ｍｇを順次加え、１９時間激しく撹拌した。反応液を濃縮し、クロロホルムで３回抽出し、合わせた有機層を水、飽和食塩水にて順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濃縮し、濃縮物をＰＴＬＣ（ｎ－ブタノール：酢酸：水＝４：１：１）で精製し、標題化合物１９．２ｍｇを白色粉末として得た（収率２５．６％）。
分析条件α　２２．２分（＞９９％ｅ．ｅ．）
参考例８：（１Ｒ，２Ｒ）－２－（（４－メトキシベンジル）アミノ）シクロヘキサン－１－オールの合成
　４－メトキシベンズアルデヒド４５．４ｍｇおよび（１Ｒ，２Ｒ）－２－アミノシクロヘキサノール塩酸塩５０．６ｍｇを用い、参考例７と同様にして反応を行い、ＰＴＬＣ（ｎ－ブタノール：酢酸：水＝４：１：１）で精製し、標題化合物１０．５ｍｇを白色粉末として得た（収率５２．５％）。
分析条件β　４５．７分（＞９９％ｅ．ｅ．）
参考例９：（３Ｓ，４Ｒ）－４－（ベンジルアミノ）テトラヒドロフラン－３－オールの合成
　１０ｍＬナスフラスコ中、ベンズアルデヒド２３．３ｍｇをメタノール６ｍＬに溶かし、激しく撹拌のもと（３Ｓ，４Ｒ）－４－アミノ－テトラヒドロフラン－３－オール２２．９ｍｇ、酢酸１９．２μＬ、シアノ水素化ホウ素ナトリウム４５．５ｍｇを順次加え、６９時間激しく撹拌した。反応液を濃縮し、クロロホルムで３回抽出し、有機相を水、飽和食塩水にて順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濃縮した。濃縮物をＰＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：トリエチルアミン＝２０：１：１）で精製し、標題化合物３．１ｍｇを褐色油状物として得た（収率１０．０％）。
分析条件β　２７．６分（＞９９％ｅ．ｅ．）
参考例１０：（３Ｓ，４Ｒ）－４－（（４－メトキシベンジル）アミノ）テトラヒドロフラン－３－オール合成
　４－メトキシベンズアルデヒド２７．２ｍｇおよび（３Ｓ，４Ｒ）－４－アミノ－テトラヒドロフラン－３－オール２０．６ｍｇを用い、参考例９と同様に反応を行い、ＰＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：Ｅｔ３Ｎ＝２０：１：１）で精製し、標題化合物５．９ｍｇを黄色粉末として得た（収率１６．５％）。
分析条件χ　３６．６分（＞９９％ｅ．ｅ．）
参考例１１：（５Ｒ，６Ｓ）－２，２－ジメチル－６－（ベンジルアミノ）－１，３－ジオキセパン－５－オールの合成
　窒素雰囲気下、１０ｍＬナスフラスコ中に、（Ｓ）－ＢＩＮＯＬ５．７ｍｇを無水トルエン０．５ｍＬに溶かし、激しく撹拌のもと、０．５Ｍチタニウムテトライソプロポキシドの無水トルエン溶液２０μＬを添加した。１０分撹拌後、ベンジルアミン１１７ｍｇ、精製水２．７μＬ、４，４－ジメチル－３，５，８－トリオキサビシクロ［５．１．０］オクタン１４４ｍｇを順次加え１８．５時間激しく撹拌した。反応液に酢酸エチル２ｍＬ添加後、ろ過助剤としてラヂオライト＃７００を用いて吸引ろ過後、濃縮した。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル：トリエチルアミン＝４０：２０：３、ゲル３０ｍＬ）で精製し、標題化合物１２８．８ｍｇを白色粉末として得た（収率５１．３％）。
分析条件δ　２８．３分（９５．３％ｅ．ｅ．）
参考例１２：（５Ｒ，６Ｓ）－２，２－ジメチル－６－（（４－メトキシベンジル）アミノ）－１，３－ジオキセパン－５－オールの合成
　４，４－ジメチル－３，５，８－トリオキサビシクロ［５．１．０］オクタン１４４ｍｇおよび４－メトキシベンジルアミン１５１ｍｇを用い、参考例１１と同様に反応、抽出し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル：トリエチルアミン＝４０：２０：３、ゲル３０ｍＬ）で精製し、標題化合物９１．６ｍｇを白色粉末として得た（収率３２．６％）。
分析条件δ　２６．６分（６９．７％ｅｅ）
＜多糖画分による各種アミノアルコール生成反応＞
　ＨＰＬＣバイアルにソヤファイブＳ－ＤＮ　１０ｍｇもしくはＬＰ－ＬＭＷまたはＡＬ－ＬＭＷ５ｍｇを量り取り、１Ｍエポキシドおよび１．５Ｍアミンを含むトルエン溶液を１００μＬ加え、飽和食塩水６μＬを添加し、３７±１℃、激しく撹拌し反応を行った。１、３、６、２４、及び４８時間時点に反応液４μＬをサンプリングし、トルエンにて５０倍に希釈し、無水硫酸ナトリウムによる脱水処理及び綿ろ過処理を行った後、ＧＣ分析に供した。原料エポキシドおよび生成物アミノアルコールの面積から有効炭素数法を用いて活性値を算出した。立体選択性（生成アミノアルコールの光学純度）はキラルＧＣ（条件Ｃ～Ｇ）もしくはキラルＨＰＬＣ（条件α～ε）分析にて算出した。多糖画分は水溶性大豆多糖類に比べ１．１倍から２．５倍の触媒活性を示した。
＜水溶性大豆多糖類およびＬＭＷの各種基質に対する触媒活性＞
　結果を表４７～４９に示す。
Bn :ベンジル基、PMB：p-メトキシベンジル基、未：試験せず
Bn :ベンジル基、PMB：p-メトキシベンジル基、未：試験せず
Bn :ベンジル基、PMB：p-メトキシベンジル基、未：試験せず
＜多糖画分による各種アミノアルコール生成反応２＞
　２ｍＬ容のガラス瓶に、ＡＬ－ＬＭＷ１０ｍｇ（３，４－エポキシヘキサンとシクロプロピルアミンの反応は３０ｍｇ）を秤取し、１Ｍエポキシドおよび１．５Ｍアミンを含むトルエン溶液を２００μＬ加え、飽和塩化ナトリウム水溶液又は飽和塩化カリウム水溶液１２μＬを添加し、３７±１℃で、激しく撹拌し３日間反応を行った。反応液を採取しキラルＧＣ分析（表４５の条件Ｈ～Ｌ）に供した。原料エポキシドおよび生成物アミノアルコールの面積から有効炭素数法を用いて変換率を算出し、生成アミノアルコールの鏡像異性体過剰率から立体選択性を算出した。
　結果を表５０に示す。なお、２ｍＬ容のガラス瓶に、２Ｍのエポキシドと２Ｍのアミンを含むエタノール８００μＬを入れ、３７℃で４８時間、１０００ｒｐｍで攪拌することでラセミ体のβ－アミノアルコールを調製し、これを分析することで、生成物の鏡像異性体の保持時間を確認した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000091
＜多糖画分による各種アミノアルコール生成反応３＞
　２ｍＬ容のガラス瓶にＡＬ－ＬＭＷ　１０ｍｇを秤取し、１Ｍエポキシシクロヘキサンと、１．５Ｍ　２－アミノ－３－メチルブタン及びｓｅｃ－ブチルアミンのいずれかとを含むトルエン溶液を２００μＬ加え、飽和食塩水１２μＬを添加し、３７±１℃で、激しく撹拌し２４時間反応を行った。反応液を採取しキラルＧＣ分析（表４５のＨまたはＪ）に供した。原料エポキシドおよび生成アミノアルコールの異性体面積合計から有効炭素数法を用いて変換率を算出し、アミノアルコールの異性体の面積から異性体比率を算出した。結果を表５１に示した。多糖は２種のキラルアミンのどちらを基質にした場合でも、エポキシドとの反応で生成しうる４つ異性体のうち、１つの異性体を比率６０％以上で選択的に生成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000092
実施例Ｄ２：２－クロロシクロヘキサノールとシクロプロピルアミンからのアミノアルコール生成反応
　２ｍＬ容のガラス瓶にＡＭ－ＬＬＭＷ　４０ｍｇを量り取り、１１ｍＭの２－クロロシクロヘキサノールと５００ｍＭのシクロプロピルアミンを含有する飽和食塩水８００μＬを入れ、３７±１℃で撹拌した。撹拌開始から２０分後と１時間後に反応液を採取し、トルエンで抽出後、キラルＧＣ分析（表４５のＨ）に供した。反応液中の各成分の濃度を算出し、表５２に記した。２－クロロシクロヘキサノールは、多糖添加なしでも、一部が１，２－エポキシシクロヘキサンを経て、ほぼラセミ体の２－シクロプロピルアミノシクロヘキサノールに変換されたが、多糖を添加した場合は、立体選択的に２－シクロプロピルアミノシクロヘキサノールに変換された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000093
実施例Ｅ：触媒活性を持たないガラクタン
　市販されているアラビノガラクタン類を含む多糖について触媒活性を測定した。触媒活性は、「触媒活性測定法I」又は「触媒活性測定法III」に従って測定した。
　結果を表５３に示す。市販のアラビノガラクタン類を含む多糖は、本発明の多糖と比べて、触媒活性または立体選択性が顕著に低かった。
実施例Ｆ１：Ｇａｌ供与体の調製
　ガラクトース供与体（Ｓ６）を以下のとおり調製した。
　使用される略語は、有機化学分野で周知の意味で理解されるべきであり、例えば、以下のような意味である。
Ｂｎ：ベンジル
ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）２：ベンズアルデヒドジメチルアセタール
ＴｓＯＨ：パラ－トルエンスルホン酸
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＭＰ：４－メトキシフェニル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ｔｏｌ：パラ－トルオイル
ＣＡＣｌ：トリクロロアセチルクロリド
ＣＡ：クロロアセチル
ｐｙｒ：ピリジン
Ｍｂｐ：５－ｔｅｒｔ－ブチル－２－メチルフェニル
ＤＭＴＳＴ：ジメチル（メチルチオ）スルホニウムトリフラート
ＤＴＢＭＰ：２，６－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－４－メチルピリジン
ＨＳＭｂｐ：５－ｔｅｒｔ－ブチル－２－メチルベンゼンチオール
ＤＡＢＣＯ：１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン
ＣＡＮ：硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）
ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン
ＴＭＳＯＴｆ：トリメチルシリルトリフラート
ＡｃＯＥｔ：酢酸エチル
ＭＳ４Ａ：モレキュラーシーブス４Ａ
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000095
〔１〕　４－メトキシフェニル　３－Ｏ－ベンジル－４，６－Ｏ－ベンジリデン－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ２）の合成
　４－メトキシフェニル　３－Ｏ－ベンジル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ１，東京化成工業製，２００ｇ，０．５３ｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１Ｌ）に溶解し、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（１２０ｍＬ，１．５当量）、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１０ｇ，０．１当量）を加え室温にて１日撹拌した。反応液にトリエチルアミン（７．４ｍＬ）を加え中和し、析出した固形物をろ別後、ろ液を減圧濃縮した。得られた残渣を酢酸エチル－イソプロピルエーテルで再結晶化を行い、化合物Ｓ２（２３７ｇ，収率９６％）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.52 (d, 1 H, J = 2.3 Hz, OH), 3.46 (s, 1 H, H-5), 3.57 (dd, 1 H, J = 3.7 Hz, 9.6 Hz, H-3), 3.77 (s, 3 H, PhOMe), 4.05 (dd, 1 H, J = 1.9 Hz, 12.4 Hz, H-6), 4.19 (d, 1 H, J = 2.8 Hz, H-4), 4.24 (m, 1 H, H-2), 4.34 (dd, 1 H, J = 1.2 Hz, 12.4 Hz, H-6’), 4.77, 4.81 (2 d, J = 11.9 Hz, CH2Ph), 4.70 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, H-1), 5.48 (s, 1 H, CHPh), 6.81, 7.07 (2 m, 4 H, PhOMe), 7.30-7.55 (m, 10 H, 2 Ph).
〔２〕　４－メトキシフェニル　３－Ｏ－ベンジル－４，６－Ｏ－ベンジリデン－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ３）の合成
　化合物Ｓ２（２３７ｇ，０．５１ｍｏｌ）をピリジン（１．２Ｌ）に溶解し、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（３５ｇ，０．５６当量）を加え６０℃に加熱した。ｐ－トルオイルクロリド（２００ｍＬ，３当量）を滴下にて加え、６０℃にて３時間撹拌し、その後室温まで冷却した。メタノール（１００ｍＬ）を加え過剰の試薬を分解後、反応液を減圧濃縮した。残渣を塩化メチレンに溶解し、２Ｍ塩酸、飽和重曹水で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣を塩化メチレン－イソプロピルエーテルで再結晶化を行い、化合物Ｓ３（２８６ｇ，収率９６％）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.44 (s, 3 H, COPhMe), 3.51 (s, 1 H, H-5), 3.72 (s, 3 H, PhOMe), 3.79 (dd, 1H, J = 3.6 Hz, 10.0 Hz, H-3), 4.10 (dd, 1 H, J = 1.4 Hz, 12.4 Hz, H-6), 4.27 (d, 1 H, J = 3.6 Hz, H-4), 4.34 (dd, 1 H, J = 1.4 Hz, 12.4 Hz, H-6’), 4.64, 4.71 (2 d, 2 H, J = 12.8 Hz, CH2Ph), 5.00 (d, 1 H, J = 7.8 Hz, H-1), 5.55 (s, 1 H, CHPh), 5.85 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 10.0 Hz, H-2), 6.72, 6.93 (2 m, 4 H, PhOMe), 7.20-7.41 (m, 10 H, 2 Ph), 7.60 (m, 2 H, meta- of COPhMe), 7.95 (d, 2 H, ortho- of COPhMe).
〔３〕　４－メトキシフェニル　３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ４）の合成
　化合物Ｓ３（１４８ｇ，０．２５ｍｏｌ）を塩化メチレン（１．１Ｌ）に溶解し、トリエチルシラン（３００ｍＬ，７．５当量）を加えた後－４０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（１４５ｍＬ，７．５当量）を滴下にて加え、－４０℃にて１日撹拌した。反応液を塩化メチレンで希釈し、水、飽和重曹水、飽和食塩水の順で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣を塩化メチレン－イソプロピルエーテルで再結晶化を行い、化合物Ｓ４（１３９ｇ，収率９３％）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.43 (s, 3 H, COPhMe), 2.67 (s, 1 H, OH), 3.69 (dd, 1H, J = 3.2 Hz, 9.6 Hz, H-3), 3.71 (s, 3 H, PhOMe), 3.75 (t, 1 H, J = 6.0 Hz, H-5), 3.83 (dd, 1 H, J = 6.4 Hz, 9.7 Hz, H-6), 3.91 (dd, 1 H, J = 5.5 Hz, 9.7 Hz, H-6’), 4.16 (br.s, 1 H, H-4), 4.56, 4.69 (2 d, 2 H, J = 12.4 Hz, CH2Ph), 4.60 (s, 2 H, CH2Ph), 4.91 (d, 1 H, J = 7.8 Hz, H-1), 5.70 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 9.6 Hz, H-2), 6.71, 6.91 (2 m, 4 H, PhOMe), 7.15-7.37 (m, aromatic), 7.92 (d, 2 H, ortho- of COPhMe).
〔４〕　５－ｔｅｒｔ－ブチル－２－メチルフェニル　３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－１－チオ－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ５）の合成
　化合物Ｓ４（６０ｇ，１０３ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（９００ｍＬ）に溶解し、５－ｔｅｒｔ－ブチル－２－メチルベンゼンチオール（９３ｍＬ，５当量）と三フッ化ほう素ジエチルエーテル錯体（６．４ｍＬ，０．５当量）を加え室温にて１５分撹拌後、反応液を飽和重曹水（１Ｌ）に注加した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、化合物Ｓ５（４６．１ｇ，収率７０％）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.29 (s, 9 H, t-Bu), 2.18 (s, 3 H, PhMe), 2.44 (s, 3 H, COPhMe), 2.59 (s, 1 H, OH), 3.62-3.68 (m, 2 H, H-3, H-5), 3.76 (dd, 1 H, J = 5.5 Hz, 9.6 Hz, H-6), 3.85 (dd, 1 H, J = 6.4 Hz, 9.6 Hz, H-6’), 4.17 (br. s, 1 H, H-4), 4.53, 4.65 (2 d, 2 H, J = 12.4 Hz, CH2Ph), 4.58 (s, 2 H, CH2Ph), 4.67 (d, 1 H, J = 10.0 Hz, H-1), 5.53 (t, 1 H, J = 10.0 Hz, H-2), 7.03-7.58 (m, 15 H, aromatic), 7.92 (d, 2 H, ortho- of COPhMe).
〔５〕　５－ｔｅｒｔ－ブチル－２－メチルフェニル　３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－４－Ｏ－クロロアセチル－１－チオ－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ６）の合成
　化合物Ｓ５（４６．１ｇ，７１．９ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（４５０ｍＬ）、ピリジン（９０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。クロロアセチルクロリド（２３ｍＬ，４当量）の塩化メチレン（１２０ｍＬ）溶液を滴下にて加え、０℃にて１時間撹拌した。反応液を塩化メチレンで抽出し、２Ｍ塩酸、飽和重曹水で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で精製し、化合物Ｓ６（４９．４ｇ，収率９６％）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.22 (s, 9 H, t-Bu), 2.18 (s, 3 H, PhMe), 2.45 (s, 3 H, COPhMe), 3.54 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 9.2 Hz, H-6), 3.61 (dd, 1 H, J = 5.5 Hz, 9.2 Hz, H-6’), 3.68 (dd, 1 H, J = 3.2 Hz, 9.6 Hz, H-3), 3.81 (m, 1 H, H-5), 4.04, 4.18 (2 d, 2 H, J = 15.1 Hz, COCH2Cl), 4.44, 4.58, 4.66 (3 d, 4 H, J = 12.4 Hz, 2 CH2Ph), 4.67 (d, 1 H, J = 10.0 Hz, H-1), 5.41 (t, 1 H, J = 10.0 Hz, H-2), 5.75 (d, 1 H, J = 3.2, H-4), 6.89-7.50 (m, aromatic), 7.89 (d, 2 H, ortho- of COPhMe).
実施例Ｆ２：Ｇａｌ（２ｍｅｒ）誘導体の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000096
〔１〕　４－メトキシフェニル　（３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－４－Ｏ－クロロアセチル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１－４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ７）の合成
　化合物Ｓ６（４９．４ｇ，６８．９ｍｍｏｌ）と化合物Ｓ４（６０ｇ，１．５当量）を塩化メチレン（５００ｍＬ）に溶解し、モレキュラーシーブス４Ａ（１００ｇ）を加え室温にて３０分間撹拌した。２，６－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－４－メチルピリジン（２８ｇ，２当量）とジメチル（メチルチオ）スルホニウムトリフラート（５０ｗｔ％モレキュラーシーブス混合品，７１ｇ，２当量）を加え室温にて１日撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を飽和重曹水で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１６：１）に供し、化合物Ｓ７（４９．８ｇ，収率６５％）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.37, 2.42 (2 s, 6 H, 2 COPhMe), 3.49 (d, 2 H, J = 6.4 Hz, H-6a, H-6’a), 3.63-3.71 (m, 4 H, H-3a, H-5a, H-3b, H-5b), 3.68 (s, 3 H, PhOMe), 3.75 (dd, 1 H, J = 5.1 Hz, 10.1 Hz, H-6b), 3.85 (dd, 1 H, J = 5.5 Hz, 10.1 Hz, H-6’b), 3.91 (dd, 1 H, J = 5.5 Hz, 9.7 Hz, H-6’), 4.04, 4.16 (2 d, 2 H, J = 15.1 Hz, COCH2Cl), 4.28 (d, 1 H, J = 2.7 Hz, H-4a), 4.37-4.67 (7 d, 8 H, 4 CH2Ph), 4.83 (d, 1 H, J = 7.7 Hz, H-1a), 5.06 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, H-1b), 5.33 (dd, 1 H, J = 8.2 Hz, 10.1 Hz, H-2b), 5.42 (dd, 1 H, J = 7.7 Hz, 10.1 Hz, H-2a), 5.66 (d, 1 H, J = 3.6 Hz, H-4), 6.63, 6.76 (2 m, 4 H, PhOMe), 7.01-7.39 (m, aromatic), 7.77, 7.95 (2 d, 4 H, 2 ortho- of COPhMe).
〔２〕　５－ｔｅｒｔ－ブチル－２－メチルフェニル　（３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－４－Ｏ－クロロアセチル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１－４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－１－チオ－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ８）の合成
　化合物Ｓ７（２５ｇ，２２．３ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（５００ｍＬ）に溶解し、５－ｔｅｒｔ－ブチル－２－メチルベンゼンチオール（２０ｍＬ，５当量）と三フッ化ほう素ジエチルエーテル錯体（１．４ｍＬ，０．５当量）を加え室温にて１時間撹拌後、反応液を飽和重曹水（１Ｌ）に注加した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン：酢酸エチル＝２０：１）で精製し、化合物Ｓ８（１３．６ｇ，収率５２％）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.17 (s, 9 H, t-Bu), 2.08 (s, 3 H, PhMe), 2.38, 2.43 (2 s, 6 H, 2 COPhMe), 3.46 (d, 2 H, J = 6.9 Hz, H-6a, H-6’a), 3.56-3.70 (m, 5 H, H-3a, H-5a, H-3b, H-5b, H-6b), 3.79 (dd, 1 H, J = 6.4 Hz, 9.6 Hz, H-6’b), 4.04, 4.17 (2 d, 2 H, J = 15.1 Hz, COCH2Cl), 4.31 (d, 1 H, J = 2.3 Hz, H-4a), 4.35-4.67 (m, 8 H, 4 CH2Ph), 4.58 (d, 1 H, J = 10.1 Hz, H-1a), 5.09 (d, 1 H, J = 7.8 Hz, H-1b), 5.32 (m, 2 H, H-2a, H-2b), 5.66 (d, 1 H, J = 3.2 Hz, H-4), 6.95-7.44 (m, aromatic), 7.77, 7.95 (2 d, 4 H, 2 ortho- of COPhMe).
〔３〕　４－メトキシフェニル　（３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１－４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ９）の合成
　化合物Ｓ７（２０ｇ，１７．８ｍｍｏｌ）をエタノール（８００ｍＬ）に溶解し、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（２０ｇ，１０当量）を加え、５０℃にて２時間撹拌した。反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルで希釈し、２Ｍ塩酸、飽和重曹水で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去し、化合物Ｓ９（１８．９ｇ，収率ｑｕａｎｔ．）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.37, 2.42 (2 s, 6 H, 2 COPhMe), 2.63 (s, 1 H, OH), 3.56-3.88 (m, 8 H, H-3a, H-5a, H-6a, H-6’a, H-3b, H-5b, H-6b, H-6’b), 3.68 (s, 3 H, PhOMe), 4.06 (br. s, 1 H, H-4b), 4.38 (d, 1 H, J = 2.7 Hz, H-4a), 4.41-4.66 (m, 8 H, 4 CH2Ph), 4.82 (d, 1 H, J = 7.8 Hz, H-1a), 5.13 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, H-1b), 5.45 (m, 2 H, H-2a, H-2b), 6.62, 6.76 (2 m, 4 H, PhOMe), 7.03-7.39 (m, aromatic), 7.81, 8.00 (2 d, 4 H, 2 ortho- of COPhMe).
実施例Ｆ３：Ｇａｌ（４ｍｅｒ）誘導体の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000097
〔１〕　４－メトキシフェニル　（３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－４－Ｏ－クロロアセチル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１－４）－（３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１－４）－（３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１－４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ１０）の合成
　化合物Ｓ８（１６．４ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）と化合物Ｓ９（１８．９ｇ，１．４当量）を塩化メチレン（２００ｍＬ）に溶解し、モレキュラーシーブス４Ａ（４０ｇ）を加え室温にて３０分間撹拌した。２，６－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－４－メチルピリジン（５．１５ｇ，２当量）とジメチル（メチルチオ）スルホニウムトリフラート（５０ｗｔ％モレキュラーシーブス混合品，１２．９ｇ，２当量）を加え室温にて１日撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を飽和重曹水で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１５：１）に供し、化合物Ｓ１０（２０．０ｇ，収率７８％）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.19, 2.30, 2.37, 2.41 (4 s, 12 H, 4 COPhMe), 3.21-3.77 (m, 16 H), 3.69 (s, 3H, PhOMe), 3.94, 4.05 (2 d, J = 15.1 Hz, COCH2Cl), 4.12 (d, 1 H, J = 2.8 Hz, H-4), 4.21-4.65 (m, 18 H), 4.71, 4.85, 5.10, 5.32 (4 d, 4 H, H-1), 5.20-5.35 (m, 4 H, H-2), 5.66 (d, 1 H, J = 3.2 Hz, H-4), 6.63, 6.75 (2 m, 4 H, PhOMe), 6.96-7.40 (m, aromatic), 7.74, 7.90, 7.97 (3 d, 8 H, 4 ortho- of COPhMe).
〔２〕　ベンジル　（３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－４－Ｏ－クロロアセチル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１－４）－（３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１－４）－（３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシル）－（１－４）－３，６－ジ－Ｏ－ベンジル－２－Ｏ－ｐ－トルオイル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（化合物Ｓ１３）の合成
　化合物Ｓ１０（１１ｇ，５．３９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１１０ｍＬ）とトルエン（８２ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）（２０ｇ，７当量）の水（５５ｍＬ）溶液を加え、０℃にて３時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで抽出し、水、飽和重曹水、飽和食塩水の順に洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン：酢酸エチル＝８：１）に供し、化合物Ｓ１１の粗精製品（１０ｇ）を得た。これを塩化メチレン（１００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。トリクロロアセトニトリル（４．５ｍＬ，１０当量）と１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（０．３４ｍＬ，０．５当量）を加え、０℃にて３時間撹拌した。反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１５：１）に供し、化合物Ｓ１２の粗精製品（９．５ｇ）を得た。これを塩化メチレン（６０ｍＬ）に溶解し、ベンジルアルコール（９．４ｍＬ，１０当量）とモレキュラーシーブス４Ａ（２０ｇ）を加え室温にて３０分間撹拌後、トリメチルシリルトリフラート（１７０μＬ，０．２当量）を加え室温にて４時間撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を飽和重曹水で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）に供し、化合物Ｓ１３（８．２ｇ，収率７５％）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.32, 2.33, 2.43 (3 s, 12 H, 4 COPhMe), 3.25-3.77 (m, 16 H), 3.94, 4.05 (2 d, J = 15.1 Hz, COCH2Cl), 4.16-4.65 (m, 22 H), 4.93, 5.07(2 d, 2 H, H-1), 5.17-5.35 (m, 5 H, H-1, H-2), 5.66 (d, 1 H, J = 3.2 Hz, H-4), 6.95-7.40 (m, aromatic), 7.75, 7.89, 7.91, 7.98 (4 d, 8 H, 4 ortho- of COPhMe).
実施例Ｆ４：糖鎖の伸展
〔１〕Ｇａｌオリゴマー受容体の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000098
　Ｇａｌオリゴマー誘導体（化合物Ｓ１３，Ｓ１５，Ｓ１７，Ｓ１９，Ｓ２１，Ｓ２３，Ｓ２５，Ｓ２７，Ｓ２９）を酢酸エチル（７．５ｍＬ／受容体ｇ）とエタノール（７．５ｍＬ／受容体ｇ）に溶解し、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（１０当量）を加え、５０℃にて２時間撹拌した。反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルで希釈し、２Ｍ塩酸、飽和重曹水で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン：酢酸エチル＝９：１）で精製し、Ｇａｌオリゴマー受容体（化合物Ｓ１４，Ｓ１６，Ｓ１８，Ｓ２０，Ｓ２２，Ｓ２４，Ｓ２６，Ｓ２８，Ｓ３０）を得た。
化合物Ｓ１４：
収量８．０ｇ（収率８９％）．  1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.29-2.43 (4 s, 12 H, 4 COPhMe), 2.62 (br. s, 1 H, OH), 3.25-3.85 (m, 16 H), 4.06-4.65 (m, 23 H), 4.95, 5.15 (2 d, 2 H, H-1), 5.21-5.31 (m, 5 H, H-1, H-2), 5.44 (dd, 1 H, J = 8.2 Hz, 9.6 Hz, H-2), 6.94-7.38 (m, aromatic), 7.73-8.02 (4 d, 8 H, 4 ortho- of COPhMe).
化合物Ｓ１６：
収量７．７ｇ（化合物Ｓ１４からの収率５９％）．  1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.23-2.43 (6 s, 18 H, 6 COPhMe), 2.63 (br. s, 1 H, OH), 3.27-3.85 (m, 24 H), 4.01-4.65 (m, 35 H), 4.96, 5.00 (2 d, 2 H, H-1), 5.08-5.30 (m, 8 H), 5.45 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 9.6 Hz, H-2), 6.90-7.36 (m, aromatic), 7.73-8.02 (6 d, 12 H, 6 ortho- of COPhMe).
化合物Ｓ１８：
収量６．６ｇ（化合物Ｓ１６からの収率６５％）．  1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.22-2.43 (7 s, 24 H, 8 COPhMe), 2.61 (br. s, 1 H, OH), 3.23-3.85 (m, 32 H), 4.05-4.64 (m, 45 H), 4.95, 4.96, 4.99, 5.04, 5.09 (5 d, 5 H, H-1), 5.07-5.30 (m, 9 H, H-1, H-2), 5.46 (dd, 1 H, J = 8.2 Hz, 9.7 Hz, H-2), 6.91-7.35 (m, aromatic), 7.73-8.02 (8 d, 16 H, 8 ortho- of COPhMe).
化合物Ｓ２０：
収量４．９ｇ（化合物Ｓ１８からの収率６０％）．  1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (9 s, 30 H, 10 COPhMe), 2.62 (br. s, 1 H, OH), 3.22-3.85 (m, 40 H), 4.02-4.64 (m, 55 H), 4.94-5.30 (m, 18 H, H-1, H-2), 5.45 (dd, 1 H, J = 8.2 Hz, 9.6 Hz, H-2), 6.91-7.35 (m, aromatic), 7.74-8.02 (m, 20 H, 10 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C287H288O61Na m/z [M+Na]+: 4732.9, Found: 4732.5. 
化合物Ｓ２２： 
収量３．１ｇ（化合物Ｓ２０からの収率５２％）．  1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (8 s, 36 H, 12 COPhMe), 2.63 (br. s, 1 H, OH), 3.22-3.85 (m, 48 H), 4.02-4.64 (m, 65 H), 4.93-5.30 (m, 22 H, H-1, H-2), 5.46 (dd, 1 H, J = 8.2 Hz, 10.1 Hz, H-2), 6.90-7.35 (m, 161 H, Ph), 7.74-8.02 (m, 24 H, 12 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C343H344O73Na m/z [M+Na]+: 5653.3, Found: 5651.4.
化合物Ｓ２４：
収量１．８ｇ（化合物Ｓ２２からの収率５２％）．  1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.42 (9 s, 42 H, 14 COPhMe), 2.62 (br. s, 1 H, OH), 3.23-3.84 (m, 56 H), 4.02-4.64 (m, 75 H), 4.93-5.30 (m, 26 H, H-1, H-2), 5.46 (dd, 1 H, J = 8.2 Hz, 9.6 Hz, H-2), 6.90-7.36 (m, aromatic), 7.73-8.01 (m, 28 H, 14 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C399H400O85Na m/z [M+Na]+: 6572.7, Found: 6571.0.
化合物Ｓ２６：
収量８００ｍｇ（化合物Ｓ２４からの収率４０％）．  1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (7 s, 48 H, 16 COPhMe), 2.62 (br. s, 1 H, OH), 3.25-3.85 (m, 64 H), 4.02-4.65 (m, 85 H), 4.93-5.30 (m, 30 H, H-1, H-2), 5.46 (dd, 1 H, J = 8.3 Hz, 9.6 Hz, H-2), 6.90-7.34 (m, aromatic), 7.73-8.02 (m, 32 H, 16 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C455H456O97Na m/z [M+Na]+: 7499.5, Found: 7498.0.
化合物Ｓ２８：
収量３６０ｍｇ（化合物Ｓ２６からの収率４０％）．  1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (8 s, 54 H, 18 COPhMe), 2.63 (br. s, 1 H, OH), 3.24-3.85 (m, 72 H), 4.02-4.65 (m, 95 H), 4.93-5.30 (m, 34 H, H-1, H-2), 5.46 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 9.6 Hz, H-2), 6.90-7.34 (m, aromatic), 7.73-8.02 (m, 36 H, 18 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C511H512O109Na m/z [M+Na]+: 8420.6, Found: 8421.0.
化合物Ｓ３０：
収量２１０ｍｇ（化合物Ｓ２８からの収率５３％）．  1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (6 s, 60 H, 20 COPhMe), 2.65 (br. s, 1 H, OH), 3.23-3.85 (m, 80 H), 4.02-4.65 (m, 105 H), 4.93-5.29 (m, 38 H, H-1, H-2), 5.46 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 9.6 Hz, H-2), 6.90-7.34 (m, aromatic), 7.73-8.02 (m, 40 H, 20 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C567H568O121Na m/z [M+Na]+: 9341.7, Found: 9342.0.
〔２〕Ｇａｌオリゴマー受容体のグリコシル化
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000099
 　Ｇａｌオリゴマー受容体（化合物Ｓ１４，Ｓ１６，Ｓ１８，Ｓ２０，Ｓ２２，Ｓ２４，Ｓ２６，Ｓ２８）とＧａｌ（２ｍｅｒ）供与体（化合物８，３当量）をジクロロメタン（１０ｍＬ／受容体ｇ）に溶解し、モレキュラーシーブス４Ａ（４ｇ／受容体ｇ）を加え室温にて４時間撹拌した。２，６－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－４－メチルピリジン（６当量）とジメチル（メチルチオ）スルホニウムトリフレート（５０ｗｔ％モレキュラーシーブス混合品，６当量）を加え室温にて１日撹拌した。反応液をセライトろ過し、ろ液を飽和重曹水で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤をろ別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：トルエン：酢酸エチル＝１１：１）に供し、Ｇａｌオリゴマー誘導体（化合物Ｓ１５，Ｓ１７，Ｓ１９，Ｓ２１，Ｓ２３，Ｓ２５，Ｓ２７，Ｓ２９）の粗精製品を得た。
化合物Ｓ１５：
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.23-2.43 (5 s, 18 H, 6 COPhMe), 3.27-3.77 (m, 24 H), 3.93-4.65 (m, 34 H), 3.94, 4.05 (2 d, J = 14.7 Hz, COCH2Cl), 4.95, 4.98, 5.04 (3 d, 3 H, H-1), 5.07-5.36 (m, 7 H, H-1, H-2), 5.34 (dd, 1 H, J = 8.2 Hz, 9.9 Hz, H-2), 5.66 (d, 1 H, J = 3.2 Hz, H-4), 6.90-7.40 (m, aromatic), 7.73-7.97 (6 d, 12H, 6 ortho- of COPhMe).
化合物Ｓ１７：
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.22-2.43 (7 s, 24 H, 8 COPhMe), 3.23-3.77 (m, 32 H), 3.94, 4.05 (2 d, J = 14.6 Hz, COCH2Cl), 4.03-4.64 (m, 42 H), 4.95, 4.96, 4.99 (3 d, 3 H, H-1), 5.03-5.37 (m, 11 H, H-1, H-2), 5.35 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 10.1 Hz, H-2), 5.67 (d, 1 H, J = 3.2 Hz, H-4), 6.91-7.40 (m, aromatic), 7.73-7.97 (8 d, 16 H, 8 ortho- of COPhMe).
化合物Ｓ１９
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (9 s, 30 H, 10 COPhMe), 3.22-3.78 (m, 40 H), 3.95, 4.05 (2 d, J = 15.1 Hz, COCH2Cl), 4.02-4.65 (m, 52 H), 4.93-5.30 (m, 18 H, H-1, H-2), 5.35 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 9.7 Hz, H-2), 5.67 (d, 1 H, J = 3.7 Hz, H-4), 6.90-7.40 (m, aromatic), 7.74-7.97 (m, 20 H, 10 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C289H289ClO62Na m/z [M+Na]+: 4808.9, Found: 4808.8. 
化合物Ｓ２１：
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (8 s, 36 H, 12 COPhMe), 3.22-3.77 (m, 48 H), 3.94, 4.05 (2 d, J = 14.6 Hz, COCH2Cl), 4.02-4.65 (m, 62 H), 4.93-5.30 (m, 22 H, H-1, H-2), 5.35 (dd, 1 H, J = 8.2 Hz, 10.1 Hz, H-2), 5.67 (d, 1 H, J = 3.2 Hz, H-4), 6.90-7.40 (m, aromatic), 7.74-7.97 (m, 24 H, 12 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C345H345ClO74Na m/z [M+Na]+: 5729.3, Found: 5728.9.
化合物Ｓ２３：
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (8 s, 42 H, 14 COPhMe), 3.22-3.78 (m, 56 H), 3.94, 4.05 (2 d, J = 14.7 Hz, COCH2Cl), 4.02-4.65 (m, 72 H), 4.93-5.37 (m, 26 H, H-1, H-2), 5.35 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 9.6 Hz, H-2), 5.67 (d, 1 H, J = 2.7 Hz, H-4), 6.90-7.40 (m, aromatic), 7.74-7.97 (m, 28 H, 14 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C401H401ClO86Na m/z [M+Na]+: 6649.7, Found: 6648.8.
化合物Ｓ２５：
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (8 s, 48 H, 16 COPhMe), 3.23-3.77 (m, 64 H), 3.94, 4.05 (2 d, J = 15.1 Hz, COCH2Cl), 4.02-4.65 (m, 82 H), 4.93-5.30 (m, 30 H, H-1, H-2), 5.35 (dd, 1 H, J = 7.8 Hz, 9.7 Hz, H-2), 5.67 (d, 1 H, J = 2.8 Hz, H-4), 6.90-7.40 (m, aromatic), 7.73-7.97 (m, 32 H, 16 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C457H457ClO98Na m/z [M+Na]+: 7570.0, Found: 7570.5. 
化合物Ｓ２７：
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.21-2.43 (8 s, 54 H, 18 COPhMe), 3.23-3.75 (m, 72 H), 3.97-4.66 (m, 94 H), 4.99-5.25 (m, 34 H, H-1, H-2), 5.35 (dd, 1 H, J = 8.3 Hz, 10.1 Hz, H-2), 5.65 (d, 1 H, J = 3.6 Hz, H-4), 6.92-7.39 (m, aromatic), 7.73-7.97 (m, 36 H, 18 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C513H513ClO110Na m/z [M+Na]+: 8497.1, Found: 8498.7. 
化合物Ｓ２９：
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 2.20-2.42 (7 s, 60 H, 20 COPhMe), 3.25-3.76 (m, 80 H), 3.97-4.65 (m, 104 H), 4.85-5.35 (m, 39 H, H-1, H-2), 5.65 (d, 1 H, J = 3.2 Hz, H-4), 6.91-7.38 (m, aromatic), 7.71-7.97 (m, 40 H, 20 ortho- of COPhMe).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C569H569ClO122Na m/z [M+Na]+: 9418.1, Found: 9418.2. 
実施例Ｆ５：脱保護
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000100
 　化合物Ｓ３０（２００ｍｇ，２１．５μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４ｍＬ）とメタノール（８ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム一水和物（９０ｍｇ，２．１５ｍｍｏｌ）を加え８０℃にて３日間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水で洗浄した。有機層に硫酸マグネシウムを加え乾燥し、乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：トルエン：酢酸エチル＝２：１）に供し、脱アシル体（１１０ｍｇ）を得た。これをテトラヒドロフラン（２ｍＬ）とメタノール（３ｍＬ）に溶解し、パラジウム／炭素（Ｐｄ５％）（約５５％水湿潤品，１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気中、室温にて３日間撹拌した。反応液に水（４ｍＬ）とメタノール（２ｍＬ）、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）を加え、水素雰囲気中さらに４日間撹拌した。反応液中の固形物をろ別し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をゲルろ過クロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ－２５，溶出液：水）に供し、化合物３１の粗精製品を得た。その後粗精製品を逆相カラムクロマトグラフィー（ＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）　Ｃ１８（ＥＣ），溶出液：水，１％アセトニトリル水溶液）に供し、化合物Ｓ３１（３４ｍｇ，収率４９％）を得た。
1H-NMR (400MHz, D2O): δ (ppm) 3.39-3.79 (m, 100 H, 20 H, H-2, 3, 5, 6, 6’), 4.02 (m, 20 H, H-4), 4.63 (d, 19.6 H, J = 7.8 Hz, H-1β), 5.25 (d, 0.4 H, J = 3.4 Hz, H-1α). 13C-NMR(100MHz, D2O): δ (ppm) 104.94 (C-1), 78.22 (C-4), 75.08 (C-5), 73.87 (C-3), 72.38 (C-2), 61.31 (C-6).  MALDI-TOF-MS: Calcd for C120H202O101Na m/z [M+Na]+: 3282.1, Found: 3281.9.
　ＮＭＲの分析データは、文献（Food Chemistry, 242, 211-216(2018)）に記された「→４）－β－Ｄ－Ｇａｌｐ－（１→）由来の値と類似していることから、化合物Ｓ３１は、ガラクトース残基２０個がβ１，４結合していることが支持された。また、MALDI-TOF MS分析では、[M+Na]+ 3281.91, [M+K]+ 3297.87 にピークが現れており、この値はガラクトースの２０糖の分子量に相当する。
実施例Ｆ６：有機合成により調製された多糖の触媒活性
　実施例Ｆ－５で合成された化合物Ｓ３１　２ｍｇを２ｍＬ容ガラスビンに秤取し、２５ｍＭ塩化ナトリウム水溶液２００μＬを添加し凍結乾燥を行った。触媒活性と立体選択性を、「触媒活性測定法III」に従い測定した。結果を表５４に示す。実施例Ａ７の（６）と同様の方法で水溶性大豆多糖類から調製した多糖を含み、平均分子量が化合物Ｓ３１の分子量と同程度のＢＧ３画分と化合物Ｓ３１を比較したところ、触媒活性と立体選択性は同程度以上であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000101

Claims (11)

  1. 　重合度が１６～４０であり、ガラクトースのみから構成されるか、ガラクトース及び１～３分子のアラビノースのみから構成される多糖であって、
    　糖単位が枝分かれのない鎖状に結合している多糖。
  2. 　請求項１に記載の多糖を部分構造として含み、
    　糖組成が９０～９９．５ｍｏｌ％のガラクトース及び０．５～１０ｍｏｌ％のアラビノースを含み、平均分子量が２５００～９０００である多糖。
  3. 　請求項１に記載の多糖を部分構造として含み、
    　糖組成が８０～９８ｍｏｌ％のガラクトース及び２～２０ｍｏｌ％のアラビノースを含み、平均分子量が１００００～６００００である多糖。
  4. 　重合度が１６～４０であり、枝分かれのない鎖状に結合している多糖であって、
    　ガラクトースのみから構成されるか、ガラクトース及び１～３分子のアラビノースのみから構成される多糖の末端ガラクトースが還元的アミノ化されたアミノ糖である、多糖。
  5. 　請求項１～４のいずれか一項に記載の多糖を含有する組成物。
  6. 　触媒として使用するための、請求項５に記載の組成物。
  7. 　植物加工物を有機溶媒と混合し、固形物をろ取し、脱脂サンプルを得る工程と、
    　脱脂サンプルを水と混合し、可溶性多糖を除去する工程と、
    　可溶性多糖を除去したサンプルを、酸性条件、ＥＤＴＡ添加またはシュウ酸アンモニウム添加条件で加熱し、粗ペクチン性多糖を得る工程と、を含む、ペクチン性多糖の製造方法。
  8. 　請求項１～４のいずれか一項に記載の多糖、請求項７に記載の方法で得られるペクチン性多糖、または１６～２４個のガラクトースがβ１，４結合したガラクタンの存在下、式（１）で表される化合物と、
    ［式中、Ｘは、－Ｏ－、－ＮＲ－または－Ｓ－であり、
    　Ｒは、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基、置換されていてもよいＣ６－１０アリール基、置換されていてもよいＣ１－６アルキルカルボニル基、置換されていてもよいＣ６－１０アリールカルボニル基、置換されていてもよいＣ１－６アルキルスルホニル基またはＣ６－１０アリールスルホニル基であり、
    　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基であり、
    　Ｒ２およびＲ３が互いに結合して（１ａ）で示される環状構造を形成していてもよい。］
    ［式中、Ｘは、－Ｏ－、－ＮＲ－または－Ｓ－であり、
    　Ｒ１およびＲ４は、それぞれ独立に、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基であり、
    　Ｒ２ａおよびＲ３ａは、それぞれ独立にＣ１－６アルキレン基、Ｃ１－６オキシアルキレン基、Ｃ３－６シクロアルキレン基、Ｃ２－６アルケニレン基、Ｃ３－６シクロアルケニレン基、Ｃ２－６アルキニレン基またはＣ６－１０アリーレン基である。］
    　式（２）で表される化合物と、を反応させ、
    ［式中、Ｙは、－Ｏ－、－ＮＲ６－または－Ｓ－であり、
    　Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に、水素原子、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニル基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニル基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニル基または置換されていてもよいＣ６－１０アリール基であり、
    　Ｒ５およびＲ６が互いに結合して（２ａ）で示される環状構造を形成していてもよく、
    　ただし、式（２）で表される化合物は、水または硫化水素ではない。］
    ［式中、Ｒ５ａおよびＲ６ａは、それぞれ置換されていてもよいＣ１－６アルキレン基、置換されていてもよいＣ１－６オキシアルキレン基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキレン基、置換されていてもよいＣ２－６アルケニレン基、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルケニレン基、置換されていてもよいＣ２－６アルキニレン基またはＣ６－１０アリーレン基である。］
    式（３）で表される化合物を得る工程を含む、式（３）で表される化合物の製造方法。
    ［式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、式（１）または（２）で定義されるとおりである。］
  9. 　（１）　７－オキサビシクロ［４．１．０］ヘプタンおよびシクロプロピルアミンを、請求項１～４のいずれか一項に多糖の存在下で反応させて（１Ｒ，２Ｒ）－２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノールを得る工程と、
    　（２ａ）　（１Ｒ，２Ｒ）－２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノールとカルボニル化試薬を反応させた後に、さらに保護された若しくは保護されていない６－（３－アミノプロポキシ）－２（１Ｈ）－キノリノンとを反応させ、または、（２ｂ）　保護された若しくは保護されていない６－（３－アミノプロポキシ）－２（１Ｈ）－キノリノンとカルボニル化試薬を反応させた後に、さらに（１Ｒ，２Ｒ）－２－シクロプロピルアミノ－１－シクロヘキサノールを反応させる工程であって、保護された６－（３－アミノプロポキシ）－２（１Ｈ）－キノリノンを使用する場合は、さらに脱保護を行うことによって、（－）－６－〔３－〔３－シクロプロピル－３－〔（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル〕ウレイド〕－プロポキシ〕－２（１Ｈ）－キノリノンを得る工程と、
    を含む、（－）－６－〔３－〔３－シクロプロピル－３－〔（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル〕ウレイド〕－プロポキシ〕－２（１Ｈ）－キノリノンの製造方法。
  10. 　請求項１～４のいずれか一項に記載の多糖の製造方法であって、
    　植物加工物または請求項７に記載の方法で得られるペクチン性多糖を、酵素またはアルカリ、酸による処理、有機溶媒添加による分画、温度による溶解度差を利用した分画、陰イオン交換樹脂による処理、ゲルろ過クロマトグラフィー、ＨＰＬＣまたはこれらの任意の組合せにより精製することを含む、方法。
  11. 　１６～２４個のガラクトースがβ１，４結合したガラクタンの製造方法であって、
    　式（１４）で表される化合物と式（１６）で表される化合物を反応させて、式（１７）で表される化合物を得る工程を含む、方法。
    ［式中、ＲＡは置換されていてもよいアルキルカルボニル基であり、ＲＢは置換されていてもよいアラルキル基であり、ＲＣは置換されていてもよいアリールカルボニル基であり、ＲＤは置換されていてもよいアリール基であり、ＲＥは置換されていてもよいアラルキル基であり、ｎは１３～２１］の整数である。］
PCT/JP2023/013678 2022-03-31 2023-03-31 植物由来有機分子触媒 WO2023191088A1 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2022060237 2022-03-31
JP2022-060237 2022-03-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023191088A1 true WO2023191088A1 (ja) 2023-10-05

Family

ID=88202413

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2023/013678 WO2023191088A1 (ja) 2022-03-31 2023-03-31 植物由来有機分子触媒

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2023191088A1 (ja)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0345601A (ja) * 1989-07-11 1991-02-27 Roussel Uclaf クレブシエラ属から抽出されたガラクタン、その製造方法及び薬剤としての使用
JPH04108801A (ja) * 1989-12-04 1992-04-09 Roussel Uclaf クレブシエラ属から抽出されたガラクタンの新規のサルフェート誘導体、その製造方法、その薬剤としての使用及びそれを含有する製薬組成物
JP2008266515A (ja) * 2007-04-24 2008-11-06 Okinawa Biomics:Kk 低分子化アラビノガラクタンとその製造方法、界面活性剤の製造方法
US20150025036A1 (en) * 2012-02-06 2015-01-22 Societe Industrielle Limousine D'application Biolo Use of an active principle derived from eucheuma cottonii and rich in linear galactans for controlling skin cell aging
WO2015194508A1 (ja) * 2014-06-17 2015-12-23 第一ファインケミカル株式会社 光学活性体の製造方法
JP2017104044A (ja) * 2015-12-09 2017-06-15 協和ファーマケミカル株式会社 触媒活性の向上方法
CN115161361A (zh) * 2022-05-05 2022-10-11 武汉东方天琪生物工程有限公司 酶分子机器技术制备无支链的直链半乳聚糖的方法及应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0345601A (ja) * 1989-07-11 1991-02-27 Roussel Uclaf クレブシエラ属から抽出されたガラクタン、その製造方法及び薬剤としての使用
JPH04108801A (ja) * 1989-12-04 1992-04-09 Roussel Uclaf クレブシエラ属から抽出されたガラクタンの新規のサルフェート誘導体、その製造方法、その薬剤としての使用及びそれを含有する製薬組成物
JP2008266515A (ja) * 2007-04-24 2008-11-06 Okinawa Biomics:Kk 低分子化アラビノガラクタンとその製造方法、界面活性剤の製造方法
US20150025036A1 (en) * 2012-02-06 2015-01-22 Societe Industrielle Limousine D'application Biolo Use of an active principle derived from eucheuma cottonii and rich in linear galactans for controlling skin cell aging
WO2015194508A1 (ja) * 2014-06-17 2015-12-23 第一ファインケミカル株式会社 光学活性体の製造方法
JP2017104044A (ja) * 2015-12-09 2017-06-15 協和ファーマケミカル株式会社 触媒活性の向上方法
CN115161361A (zh) * 2022-05-05 2022-10-11 武汉东方天琪生物工程有限公司 酶分子机器技术制备无支链的直链半乳聚糖的方法及应用

Non-Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"KAGAKU BENRAN OYO KAGAKU HEN I [Chemical Handbook - Applied Chemistry]", 1 January 2003, MARUZEN COMPANY , JP , ISBN: 4-621-07138-6, article ANONYMOUS: "Pectin section on page 846, section on arabinogalactan on page 847", pages: 846 - 847, XP009550112 *
AMORNRUT CHAIDEDGUMJORN, TOIDA TOSHIHIKO, IMANARI TOSHIO, WOO EUN-RHAN, PARK HOKOON, LINHARDT ROBERT, WU SONG JI, KIM YEONG SHIK: "A new sulfated β-galactan from clams with anti-HIV activity", CARBOHYDRATE RESEARCH, PERGAMON, GB, vol. 321, no. 1-2, 1 September 1999 (1999-09-01), GB , pages 121 - 127, XP093095820, ISSN: 0008-6215, DOI: 10.1016/S0008-6215(99)00188-3 *
ANDERSEN MATHIAS C. F., BOOS IRENE, KINNAERT CHRISTINE, AWAN SHAHID I., PEDERSEN HENRIETTE L., KRAČUN STJEPAN K., LANZ GYRITHE, RY: "Synthesis of branched and linear 1,4-linked galactan oligosaccharides", ORGANIC & BIOMOLECULAR CHEMISTRY, ROYAL SOCIETY OF CHEMISTRY, vol. 16, no. 7, 1 January 2018 (2018-01-01), pages 1157 - 1162, XP093095804, ISSN: 1477-0520, DOI: 10.1039/C7OB03035E *
BARTETZKO MAX P., SCHUHMACHER FRANK, HAHM HEUNG SIK, SEEBERGER PETER H., PFRENGLE FABIAN: "Automated Glycan Assembly of Oligosaccharides Related to Arabinogalactan Proteins", ORGANIC LETTERS, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 17, no. 17, 4 September 2015 (2015-09-04), US , pages 4344 - 4347, XP093095810, ISSN: 1523-7060, DOI: 10.1021/acs.orglett.5b02185 *
CHRISTOPHER J. BARTON ; LOUISE E. TAILFORD ; HELEN WELCHMAN ; ZHINONG ZHANG ; HARRY J. GILBERT ; PAUL DUPREE ; FLORENCE GOUBET: "Enzymatic fingerprinting of Arabidopsis pectic polysaccharides using polysaccharide analysis by carbohydrate gel electrophoresis (PACE)", PLANTA ; AN INTERNATIONAL JOURNAL OF PLANT BIOLOGY, SPRINGER, BERLIN, DE, vol. 224, no. 1, 9 December 2005 (2005-12-09), Berlin, DE , pages 163 - 174, XP019427422, ISSN: 1432-2048 *
DIAZ SEGLJRA E A, DUARTE JOSI H: "METHYLATION STUDIES OF THE POLYSACCHARIDES RESULTING FROM SEQUENTIAL SMITH-DEGRADATIONS OF THE GALACTAN FROM THE SNAIL Strophocheilus obZongtrs*", CARBOHYDRATE RESEARCH, vol. 52, 1 January 1976 (1976-01-01), pages 159 - 167, XP093095814 *
EDA SHIGERU, KATÖ KUNIO: "Galactan isolated from the midrib of the leaves of Nicotiana tabacum.", AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL CHEMISTRY, AGRICULTURAL CHEMICAL SOCIETY OF JAPAN, JP, vol. 42, no. 12, 1 January 1978 (1978-01-01), JP , pages 2253 - 2257, XP093095793, ISSN: 0002-1369, DOI: 10.1271/bbb1961.42.2253 *
GIUSEPPE GERALI AND ANNA BRUNO: "The relationship between rotatory power and structurein oligosaccharides and polysaccharides.II*. the galactan of lupinus albus (*)", GAZZETTA CHIMICA ITALIANA, SOCIETà CHIMICA ITALIANA, IT, vol. 115, no. 10, 1 January 1985 (1985-01-01), IT , pages 535 - 537, XP009549111, ISSN: 0016-5603 *
HU, K. ; LIU, Q. ; WANG, S. ; DING, K.: "New oligosaccharides prepared by acid hydrolysis of the polysaccharides from Nerium indicum Mill and their anti-angiogenesis activities", CARBOHYDRATE RESEARCH, PERGAMON, GB, vol. 344, no. 2, 26 January 2009 (2009-01-26), GB , pages 198 - 203, XP025838644, ISSN: 0008-6215, DOI: 10.1016/j.carres.2008.10.019 *
MATHIAS C. F. ANDERSEN; STJEPAN K. KRAČUN; MAJA G. RYDAHL; WILLIAM G. T. WILLATS; MADS H. CLAUSEN: "Synthesis of β‐1,4‐Linked Galactan Side‐Chains of Rhamnogalacturonan I", CHEMISTRY - A EUROPEAN JOURNAL, JOHN WILEY & SONS, INC, DE, vol. 22, no. 33, 12 July 2016 (2016-07-12), DE, pages 11543 - 11548, XP071880862, ISSN: 0947-6539, DOI: 10.1002/chem.201602197 *
RUGGIERO, J. FOSSEY, M.A. SANTOS, J.A. MOURAO, P.A.S.: "Charge distribution and calcium affinity of sulfated @a-l-galactans from ascidians. Comparison between linear and highly branched polymers", CARBOHYDRATE RESEARCH, PERGAMON, GB, vol. 306, no. 4, 1 January 1998 (1998-01-01), GB , pages 545 - 550, XP004127017, ISSN: 0008-6215, DOI: 10.1016/S0008-6215(97)10100-8 *
TAKEUCHI YUKI, ASANO TATSUHIRO, TSUZAKI KAZUYA, WADA KOICHI, KURATA HIROYUKI: "Asymmetric Amination of meso-Epoxide with Vegetable Powder as a Low-Toxicity Catalyst", MOLECULES, vol. 25, no. 14, pages 3197, XP093095795, DOI: 10.3390/molecules25143197 *
YUKI TAKEUCHI, TATSUHIRO ASANO, KAZUYA TSUZAKI, AND KOICHI WADA: "Catalytic Asymmetric Amination of meso-Epoxide Using Soy Polysaccharide (Soyafibe S-DN)", BULLETIN OF THE CHEMICAL SOCIETY OF JAPAN, vol. 91, no. 4, 2018, pages 678 - 683, XP009549153, DOI: 10.1246/bcsj.20170369 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Li et al. Advances in preparation, analysis and biological activities of single chitooligosaccharides
Michihata et al. High-yield total synthesis of (−)-strictinin through intramolecular coupling of gallates
CN102459295A (zh) 2’-o-岩藻糖基乳糖的合成
JP2010241840A (ja) プロアントシアニジンオリゴマーの精製方法
Buffetto et al. The deconstruction of pectic rhamnogalacturonan I unmasks the occurrence of a novel arabinogalactan oligosaccharide epitope
EP1781708B1 (en) Materials and methods for immune system stimulation
Gorbach et al. New glycolipids (chitooligosaccharide derivatives) possessing immunostimulating and antitumor activities
EP1813674A1 (en) Gene encoding methylated catechin synthase
WO2023191088A1 (ja) 植物由来有機分子触媒
JP2019206489A (ja) バガスからのポリフェノール組成物の製造方法
WO2023074843A1 (ja) 新規なオリゴ糖、該オリゴ糖の製造中間体、及びそれらの製造方法
FI107536B (fi) Makrolidien fluorisokerijohdannaiset
Ming-Ping et al. Three cerebrosides from the sea cucumber Cucumaria frondosa
JP5255862B2 (ja) 抗糖尿病剤
JP5140246B2 (ja) Ｎ−アセチルグルコサミンの誘導体を含有するピロリ菌増殖抑制剤
US9133152B2 (en) Process for the purification 10-deacetylbaccatine III from 10-deacetyl-2-debenzoyl-2-pentenoylbaccatine III
WO2011144213A1 (en) Method for crystallization of fucose
Sushytskyi et al. Fractionation of the water insoluble part of the heterotrophic mutant green microalga Parachlorella kessleri HY1 (Chlorellaceae) biomass: Identification and structure of polysaccharides
Li et al. Research progress in the preparation, structural characterization, bioactivities, and potential applications of sulfated agarans from the genus Gracilaria
JPWO2013081046A1 (ja) ブドウ梗由来抽出物
Minh et al. A Pair of Undescribed Alkaloid Enantiomers from Marine Sponge‐Derived Fungus Hamigera avellanea and Their Antimicrobial and Cytotoxic Activities
FR2967164A1 (fr) Procede de preparation de compositions a base de polypentosides
JPH07223964A (ja) ホスホリパーゼａ２阻害剤
EP1446395B1 (en) Method for the production of a phenolic substance from wood
KR101525956B1 (ko) 베타-글루코시데이즈를 이용한 퀘세틴 또는 이소퀘시트린의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 23781096

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1