WO2023135827A1 - 神経変性疾患の進行遅延及び防御剤 - Google Patents

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WO2023135827A1
WO2023135827A1 PCT/JP2022/004661 JP2022004661W WO2023135827A1 WO 2023135827 A1 WO2023135827 A1 WO 2023135827A1 JP 2022004661 W JP2022004661 W JP 2022004661W WO 2023135827 A1 WO2023135827 A1 WO 2023135827A1
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febuxostat
hypoxanthine
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PCT/JP2022/004661
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舞 関根
武士 西野
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ＮｅＳＡ合同会社
舞 関根
根津ライフサイエンス株式会社
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    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Definitions

  • the present invention relates to preventive and/or therapeutic agents for various neurodegenerative diseases.
  • Neurodegenerative diseases are diseases in which specific neuronal cell groups (e.g., neuronal cells related to cognitive functions and cells related to motor functions) in the brain and spinal cord are gradually damaged and lost.
  • Alzheimer's disease dementia with Lewy bodies, corticobasal degeneration, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), spinocerebellar degeneration, and the like are known.
  • ALS amyotrophic lateral sclerosis
  • spinocerebellar degeneration and the like are known.
  • Non-Patent Document 1 xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitors increase the concentration of hypoxanthine, a substrate of xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase, in the blood.
  • HPRTase which is called a salvage enzyme, and recovers depleted purine nucleotides as inosinic acid (inosine-5'-monophosphate: IMP) to nerve cells. Elevated IMP results in increased ATP concentration, which delays accumulation of abnormal proteins in cells and cell death.
  • xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor, allopurinol was ineffective because allopurinol is also a substrate for HPRTase and therefore has an inhibitory effect.
  • Alzheimer's model mice double mutant mice of Amyloid protein and tau protein
  • xanthine oxidase / xanthine dehydrogenase inhibitors febuxostat and NC-2500 both It has been shown to remarkably suppress intracellular accumulation of amyloid protein and tau protein, which are characteristic of Alzheimer's disease
  • febuxostat and NC-2500 to progress or prevent dementia is the same as described above, inhibiting xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase, and the concentration of hypoxanthine, which is a substrate of xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase in the blood. , which activates a salvage enzyme, HPRTase, which recovers depleted purine nucleotides as IMP to nerve cells. Elevated IMP results in increased ATP concentration, which delays accumulation of abnormal proteins in cells and cell death.
  • xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase is an enzyme that converts hypoxanthine, which is a purine ring, into xanthine, and xanthine into uric acid.
  • XOR includes xanthine dehydrogenase (XDH) and xanthine oxidase (XO type), which are the same gene product (Non-Patent Document 2).
  • XDH takes electrons from the purine ring, and generates NADH by transferring two electrons to another substrate NAD.
  • Non-Patent Document 2 uses oxygen as a substrate instead of NAD and produces hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) and superoxide (O 2- ) (Non-Patent Document 2).
  • H 2 O 2 hydrogen peroxide
  • O 2- superoxide
  • Non-Patent Document 3 Humidity
  • Febuxostat Non-Patent Document 4
  • NC-2500 Patent Document 3
  • XDH is converted to XO, which releases active oxygen, and the active oxygen causes cytotoxicity, but in recent years, the theory that XOR inhibitors cause cytotoxicity due to active oxygen has been denied for the following reasons.
  • Non-Patent Documents 5 and 6 XO exists as XDH in each tissue (Non-Patent Documents 5 and 6), and there is a textbook for experts that it is converted to XO as an artifact of the extraction process (Non-Patent Document 7). In fact, a very special technique is required to extract as XDH (Non-Patent Document 8).
  • Reason (2) In recent years, transgenic mice in which the mouse XDH gene has been replaced to convert reactive oxygen species (both superoxide and hydrogen peroxide are produced, but the former is particularly increased) into hyper-producing XO have not There are reports that no abnormalities were observed (Non-Patent Documents 9 and 10), denying the theory of active oxygen produced by XO.
  • Reason (3) XOR itself cannot be detected in nerve cells by activity measurement and Western blotting, and mRNA expression is extremely low (Non-Patent Document 11).
  • Reason (4) The XOR inhibitor, allopurinol, is ineffective, and allopurinol is an HPRTase inhibitor as described above.
  • the reason (5) is that inosine is a precursor of hypoxanthine and is in equilibrium in biological tissues including blood (Non-Patent Document 12). If it is caused by active oxygen, it should be exacerbated by an increase in active oxygen that is supposed to be produced by an increase in the substrate of XO, but in fact it does not exacerbate.
  • Patent Document 4 It has been shown that the combined use of febuxostat and inosine increases intracellular ATP in blood (Patent Document 4), but this patent document does not show an effect on nerve cells.
  • An object of the present invention is to provide a novel preventive and/or therapeutic agent for neurodegenerative diseases.
  • the present inventor conducted various studies to find a preventive and/or therapeutic agent for neurodegenerative diseases that is more excellent than febuxostat and NC-2500.
  • a combination of (A) a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor and (B) a 5-carbon sugar remarkably enhances intraneuronal ATP and exhibits excellent neurodegenerative disease preventive and/or therapeutic effects;
  • the inventors have found that these effects are further improved by combining (C) inosine and/or hypoxanthine, and have completed the present invention.
  • a preventive and/or therapeutic agent for neurodegenerative diseases comprising (A) a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor and (B) a five-carbon sugar in combination.
  • a preventive and/or therapeutic agent for neurodegenerative diseases according to [1] which is further combined with (C) inosine and/or hypoxanthine.
  • component (A) is selected from febuxostat, topiroxostat and NC-2500.
  • the agent for preventing and/or treating neurodegenerative diseases according to any one of [1] to [3], wherein component (B) is one or more selected from ribose, xylulose and ribulose.
  • the neurodegenerative disease is a disease selected from Alzheimer's disease, dementia with Lewy bodies, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis, mitochondrial disease and spinocerebellar degeneration [1] to [4] Neurodegenerative disease prophylactic and/or therapeutic agent according to 1.
  • An intraneuronal ATP enhancer comprising (A) a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor and (B) a five-carbon sugar in combination.
  • [7] The intraneuronal ATP-enhancing agent according to [6], which is further combined with (C) inosine and/or hypoxanthine.
  • (C) inosine and/or hypoxanthine [8] The intraneuronal ATP enhancer of [6] or [7], wherein component (A) is selected from febuxostat, topiroxostat and NC-2500.
  • component (B) is one or more selected from ribose, xylulose and ribulose.
  • [10] Use of a combination of (A) a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor and (B) a five-carbon sugar for producing a preventive and/or therapeutic agent for neurodegenerative diseases. [11] The use according to [10], which further combines (C) inosine and/or hypoxanthine. [12] The use according to [10] or [11], wherein component (A) is selected from febuxostat, topiroxostat and NC-2500. [13] The use according to any one of [10] to [12], wherein component (B) is one or more selected from ribose, xylulose and ribulose.
  • the neurodegenerative disease is a disease selected from Alzheimer's disease, dementia with Lewy bodies, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis, mitochondrial disease and spinocerebellar degeneration [10] to [13] use as described in [15] Use of a combination of (A) a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor and (B) a five-carbon sugar for producing an intraneuronal ATP enhancer. [16] The use according to [15], which further combines (C) inosine and/or hypoxanthine.
  • component (A) is selected from febuxostat, topiroxostat and NC-2500.
  • component (B) is one or more selected from ribose, xylulose and ribulose.
  • component (A) is selected from febuxostat, topiroxostat and NC-2500.
  • component (B) is one or more selected from ribose, xylulose and ribulose.
  • the neurodegenerative disease is a disease selected from Alzheimer's disease, dementia with Lewy bodies, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis, mitochondrial disease and spinocerebellar degeneration [19] to [22] Combinations described in Crab.
  • the combination according to [24] further comprising (C) inosine and/or hypoxanthine.
  • component (A) is selected from febuxostat, topiroxostat and NC-2500.
  • component (B) is one or more selected from ribose, xylulose and ribulose.
  • a method for preventing and/or treating a neurodegenerative disease which comprises administering (A) a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor and (B) a five-carbon sugar in combination. [29] The method of [28], further comprising (C) administering inosine and/or hypoxanthine in combination. [30] The method of [28], wherein component (A) is selected from febuxostat, topiroxostat and NC-2500. [31] The method of [28], wherein component (B) is one or more selected from ribose, xylulose and ribulose.
  • a method for enhancing intraneuronal ATP which comprises administering (A) a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor in combination with (B) a five-carbon sugar. [34] The method of [33], further comprising administering (C) inosine and/or hypoxanthine in combination. [35] The method of [33], wherein component (A) is selected from febuxostat, topiroxostat and NC-2500. [36] The method of [33], wherein component (B) is one or more selected from ribose, xylulose and ribulose.
  • ATP production in nerve cells is significantly enhanced, resulting in Alzheimer's disease, Lewy body dementia, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis, mitochondrial disease, spinocerebellar degeneration, and the like. Symptoms of neurodegenerative diseases are improved or progression is suppressed.
  • FIG. 2 shows the action pathways of Febuxostat and purines in cells.
  • FIG. 2 shows nerve cells prepared from iPS cells and expression of nerve cell markers by immunostaining.
  • FIG. 2 is a diagram showing the expression of XOR and HPRTase by Western blotting of nerve cells prepared from iPS cells.
  • FIG. 3 is a diagram showing the relationship between ATP reduction and neuronal destruction by mitochondria-uncoupler (FCCP) without the addition of drugs. Schematic diagrams of experimental systems (A, B, C) using a 6-well container (2 ml of culture medium in each hole) are shown.
  • FIG. 3 shows the effect of adding inosine and Febuxostat to the culture medium of cells under an ATP-reduced stress environment (in the presence of FCCP).
  • FIG. 3 shows the effect of adding hypoxanthine, Febuxostat and xylulose to the culture medium of cells subjected to ATP-reduced stress (in the presence of FCCP).
  • FIG. 4 shows the cell morphology maintenance effect of drugs under ATP-reduced stress environment.
  • the active ingredient of the preventive and/or therapeutic agent for neurodegenerative diseases of the present invention is a combination of (A) a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor and (B) a 5-carbon sugar.
  • the active ingredients of the agent for preventing and/or treating neurodegenerative diseases of the present invention include (A) a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor, (B) a five-carbon sugar, and (C) inosine and/or hypoxanthine. It's a combination.
  • Component (A) is a xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitor. As described above, component (A) increases the concentration of hypoxanthine, which is a substrate for xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase in the blood, thereby activating HPRTase, a salvage enzyme, to convert depleted purine nucleotides into inosinic acid ( IMP) is collected and replenished to nerve cells. Elevated IMP results in an increase in ATP concentration, which has the effect of delaying accumulation of abnormal proteins in cells and cell death.
  • hypoxanthine which is a substrate for xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase in the blood, thereby activating HPRTase, a salvage enzyme, to convert depleted purine nucleotides into inosinic acid ( IMP) is collected and replenished to nerve cells. Elevated IMP results in an increase
  • xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitors preferred is a component that does not act as a substrate for HPRTase, more preferably selected from febuxostat, topiroxostat, NC-2500, febuxostat, NC-2500 (5-(7 -hydroxythiazolo[5,4-d]pyrimidin-2-yl)-2-phenoxy-benzonitrile) is more preferred.
  • inosine and hypoxanthine are both components of the purine salvage cycle, and if the intracellular concentration of these components increases and their metabolism to uric acid is inhibited, the intracellular ATP concentration increases. . Therefore, the combined use of component (A) and inosine should be able to increase the intracellular ATP concentration and delay the accumulation of abnormal proteins in cells and cell death.
  • the present inventor's study revealed that the combined use of these two components does not sufficiently increase the intraneuronal ATP concentration and does not provide a sufficient therapeutic action for neurodegenerative diseases (see FIG. 1).
  • the (B) 5-carbon sugar was found to be effective.
  • Five-carbon sugars include ribose, arabinose, xylulose, lyxose, xylose, ribulose and the like. More specific examples include D-ribose, L-ribose, D-arabinose, L-arabinose, D-xylulose, L-xylulose, D-lyxose, L-lyxose, D-xylose and D-ribulose.
  • ribose, xylulose and ribulose are preferable, and one or more selected from L-ribose, L-xylulose and D-ribulose are more preferable.
  • the intraneuronal ATP concentration is remarkably increased, and as a result, an excellent preventive and therapeutic effect for neurodegenerative diseases can be obtained. Found it.
  • component (C) hypoxanthine and/or inosine is used in combination with component (A) and component (B), the ATP concentration in nerve cells is further increased, resulting in neurodegenerative diseases. can slow the accumulation of abnormal proteins and cell death that cause
  • the combination of component (A) and component (B) or the combination of component (A), component (B) and component (C) is useful as a prophylactic and/or therapeutic agent for neurodegenerative diseases.
  • Neurodegenerative diseases include Alzheimer's disease, dementia with Lewy bodies, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis, mitochondrial disease, spinocerebellar degeneration, and the like.
  • the prevention and/or treatment of neurodegenerative diseases in the present invention includes ameliorating various symptoms of the various neurodegenerative diseases and delaying the progress of symptoms.
  • the prophylactic and/or therapeutic agent for neurodegenerative diseases of the present invention is a drug comprising a combination of component (A) and component (B), or a combination of component (A), component (B) and component (C). It may be in a form in which these ingredients can be used in combination. Specifically, based on the preferred dosage form and administration schedule of each component, each component may be formulated separately in each dosage form, and a formulation containing the above two components and a formulation containing another component It may be a combination, it may be formulated together in one dosage form (that is, formulated as a combination drug), and each formulation may be manufactured and sold together in a single package suitable for combined use. The formulation may be manufactured and sold in separate packages.
  • Kit formulations containing instructions for co-administration can also be provided.
  • the "instructions for use” may be any document that describes dosages. Specifically, an attached document, a pamphlet, and the like are exemplified.
  • a kit formulation including an instruction for use means that even if the instruction for use is printed and attached to the package of the kit formulation, the package of the kit formulation contains the instructions for use together with the cancer preventive or therapeutic agent of the present invention. A letter may be enclosed.
  • each component of the present invention is not particularly limited, and can be administered orally or parenterally.
  • parenteral administration include intrathecal, intravenous, intraarterial, intramuscular, subcutaneous or intradermal injection, inhalation, rectal, intranasal administration, nose drops, ear drops, eye drops, and topical administration. .
  • each of the active ingredients as described above may be administered to a patient as is, but preferably in the form of a pharmaceutical composition containing each of the above components and pharmaceutically acceptable additives.
  • Pharmaceutically acceptable additives include, for example, excipients, disintegrants or disintegration aids, binders, lubricants, coating agents, pigments, diluents, bases, solubilizers or dissolution aids, etc. Tonicity agents, pH adjusters, stabilizers, propellants, adhesives, and the like can be used.
  • formulations suitable for oral administration include tablets, capsules, powders, fine granules, granules, liquid formulations, syrups, etc.
  • formulations suitable for parenteral administration include injections. drugs, drops, suppositories, inhalants, nose drops, ear drops, eye drops, or external preparations (including patches, ointments, creams, gels, lotions, sprays, etc.).
  • Formulations suitable for oral administration may contain additives such as excipients such as glucose, lactose, D-mannitol, starch, or crystalline cellulose; disintegrants or disintegration aids such as carboxymethylcellulose, starch, or carboxymethylcellulose calcium.
  • binders such as hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, or gelatin; lubricants such as magnesium stearate or talc; coating agents such as hydroxypropylmethylcellulose, sucrose, polyethylene glycol, or titanium oxide; vaseline, liquid paraffin , polyethylene glycol, gelatin, kaolin, glycerin, purified water, or hard fat.
  • Formulations suitable for injection, infusion, nose drops, ear drops, or eye drops include dissolving or dissolving agents capable of constituting aqueous or extemporaneous injections, such as distilled water for injection, physiological saline, and propylene glycol.
  • Adjuvants; tonicity agents such as glucose, sodium chloride, D-mannitol and glycerin; formulation additives such as pH adjusters such as inorganic acids, organic acids, inorganic bases or organic bases can be used.
  • Formulations suitable for suppositories can use, for example, bases such as polyethylene glycol, lanolin, cocoa butter, fatty acid triglycerides, and, if necessary, additives such as surfactants such as nonionic surfactants. .
  • Formulations suitable for ointments may optionally contain conventional bases, stabilizers, wetting agents, preservatives and the like.
  • the base include liquid paraffin, white petrolatum, bleached beeswax, octyldodecyl alcohol, paraffin and the like.
  • Preservatives include methyl parahydroxybenzoate, ethyl parahydroxybenzoate, propyl parahydroxybenzoate and the like.
  • Formulations suitable for patches include those obtained by applying the above ointments, creams, gels, pastes, etc. to ordinary supports by conventional methods.
  • a woven fabric or nonwoven fabric made of cotton, staple fiber, or chemical fiber, or a film or foam sheet of soft vinyl chloride, polyethylene, polyurethane, or the like is suitable.
  • each component of the present invention can be appropriately selected according to various conditions such as the progress of the disease or the degree of symptoms, and the patient's age and weight.
  • the timing of administration of each of the components of the present invention may be simultaneous or staggered.
  • component (A) may be administered twice a day, component (B) three times a day, and the like.
  • the dose of component (A) is preferably about 1-100 mg per day, and preferably 10-80 mg in the case of febuquistat.
  • the dose of component (B) is preferably 10 g or less per day depending on the selected substance and administration method.
  • the dose of component (C) is preferably 1000 mg or less per day for inosine, and 500 mg or less for hypoxanthine.
  • Example (1) Generation of human nerve cells ATP elevation differs depending on animal species and organs. In particular, incorporation into purine nucleotides by HPRTase varies greatly depending on animal species. In other words, human purine metabolism is significantly higher than that of mice (Non-Patent Document 13). Therefore, we thought that the analysis of xanthine oxidase/xanthine dehydrogenase inhibitors (also referred to as XOR inhibitors) requires the use of human normal cells and the accompanying new information. Therefore, human iPS cells were introduced and analyzed using nerve cells obtained by induction of differentiation. Immunostaining was performed using NeuN and TUJ1 (green) as neuronal markers and DAPI (blue) for nuclear staining.
  • NeuN and TUJ1 green
  • DAPI blue
  • Human healthy subject-derived iPS cell 201B7 strain (RIKEN BRC Cell Bank) frozen by the vitrification method was feeder-free cultured on a Matrigel (Corning)-coated 35 mm Dish (Corning) using Essential 8 Medium (Thermo Fisher Scientific). rice field. At the time of passage, colonies were detached with PBS containing 0.5% EDTA, and 10 ⁇ M Y-27632 (wako) was added to the medium. It was cultured in an incubator at 37° C. and 5% CO 2 under the atmosphere.
  • Neural stem cells were seeded on a Matrigel-coated 6-well plate and added with Neurobasal medium, B-27 supplement and GlutaMAX (Thermo Fisher Scientific), penicillin/streptomycin/amphotericin B (wako), and 10 ng/ml each of recombinant hum. an BDNF, GDNF and NT- The cells were cultured in a medium containing 3 (peprotech). Half of the medium was replaced every 2-3 days. When the cells proliferated excessively, 2 ⁇ M Ara-C (wako) was added and removed by medium exchange. The culture was maintained for more than 14 days of mature neuronal differentiation. The cells were observed under a microscope and photographed with a smartphone ( Figure 2-left).
  • Fig. 2-left microscopic observation showed that the neurites extended and formed a network with the surrounding cells. Expression was confirmed using neuronal cell markers NeuN and TUJ1.
  • NeuN is a nuclear protein expressed in mature neurons and found in neurons in the central nervous system.
  • TUJ1 (Tubulin beta III) is expressed in neurons of the central nervous system at all stages of development. NeuN and TUJ1 were positively reacted to nuclei and neurites, respectively (Fig. 2-right).
  • no uric acid was detected in nerve cells, and it was confirmed that XOR was not present even when measured by a highly sensitive HPLC analysis method. No XOR corresponding to 150 kDa was detected by Western blot (Fig. 3).
  • This experimental system is a system without XOR, that is, a system in which XOR is completely inhibited and HPRTase is present, that is, a system corresponding to the febuxostat-present system shown in (3) below.
  • Neural stem cells were seeded in each well of a Matrigel-coated 6-well plate (Corning).
  • Neural differentiation medium is Neurobasal plus medium, B-27 plus supplement, GlutaMAX and Culture one supplement (Thermo Fisher Scientific), penicillin/streptomycin/amphotericin B (wako), 10 ng/ml each Recombin ant human BDNF, GDNF and NT-3 ( peprotech), the medium was replaced by half every 2-3 days, and cultured for up to 14 days (37° C., 5% CO 2 in the atmosphere). Neurites, which had been confirmed with FCCP, an uncoupler for suppressing mitochondrial ATP production, disappeared when 0.01 mg/mL was added (Fig. 4).
  • coli (Merck Millipore) was simultaneously added to the medium of each well at a 1/100,000 dilution. After culturing for 18 hours at 37° C. in a 5% CO 2 incubator, 2 ⁇ L of PCA was added to 50 ⁇ L of the medium supernatant and neutralized with 3M K 2 CO 3 . Inosine and UA (uric acid) were measured by the HPLC system shown below. After washing the cells with PBS, they were treated with 200 ⁇ L of 5% PCA, and the intracellular adenylic acid (ATP) was also measured by HPLC.
  • ATP intracellular adenylic acid
  • the mobile phase used was A: 0.1 M KPB and 4 mM tetrabutylammonium hydrogen sulfate (pH 5.5), and B: 70% buffer A and 30% methanol (v/v).
  • the gradient conditions are 0 min (0% B), 2 min (0% B), 4 min (30% B), 12 min (60% B), 15 min (100% B), 19 min (100% B), 20 min (0% B ), and 30 min (0% B). Detection wavelengths of 254 nm, 268 nm and 295 nm were used.
  • inosine is in equilibrium with hypoxanthine and ribose-1p by purine nucleoside phosphorylase (PNPase) in erythrocytes. Therefore, inosine was thought to be the carrier form of hypoxanthine. Hypoxanthine therein is taken up by HPRTase as IMP into erythrocytes or nerve cells (see FIG. 1). In this experiment using human iPS-derived neurons, XOR and PNPase of multiple organs of the whole body were assumed as the solvent and added to the medium.
  • PNPase purine nucleoside phosphorylase
  • D-arabinose, L-arabinose, D-xylose, D-lyxose, L-lyxose, D-ribose and L-ribose from Fuji Film Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • D-xylulose and D-ribulose from Cayman, L-xylulose was purchased from Santa Cruz Biotechnology.
  • hypoxanthine and various pentoses were added to 2 mL of the medium on the 14th day of culture of the cells obtained by differentiating to mature neurons in the same manner as described above.
  • This addition condition is the same as the condition in which XOR is not added in the experimental system (3) above (because Febuxostat completely blocks XOR). Since inosine is decomposed into hypoxanthine by PNP, only hypoxanthine was used as a substrate. After addition, the cells were incubated at 37° C. and 5% CO 2 in the atmosphere. After 12 hours, extraction with PCA was performed in the same manner as in (3) above, and measurement was performed by HPLC.
  • the degree of protection was compared and examined from changes in intracellular ATP concentration and microscopic observation by FCCP.
  • the concentration of ATP in neurons and the concentrations of hypoxanthine and uric acid in the culture medium were measured using a Shimadzu HPLC-diode array/UV system. As a result, the following results were obtained. 1) When Febuxostat was not added, the ATP concentration increased depending on the xylulose concentration (Fig. 7). 2) When Febuxostat was added, 10 ⁇ M of xylulose addition increased the ATP concentration to approximately 5 ⁇ M, the concentration of almost no stress (no FCCP added) (FIG. 7).

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Abstract

本発明の課題は、新たな神経変性疾患予防及び／又は治療剤を提供することにある。　本発明は、Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖とを組み合わせてなる、神経変性疾患予防及び／又は治療剤に関する。

Description

神経変性疾患の進行遅延及び防御剤
　本発明は、種々の神経変性疾患の予防及び／又は治療剤に関する。
　神経変性疾患は、脳や脊髄にある神経細胞のなかで、ある特定の神経細胞群（例えば認知機能に関係する神経細胞や運動機能に関係する細胞）が徐々に障害を受け脱落してしまう疾患であり、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、皮質基底核変性症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（Ａｍｉｏｔｒｏｐｈｉｃ　Ｌａｔｅｒａｌ　Ｓｃｒｅｌｏｓｉｓ：ＡＬＳ）、脊髄小脳変性症などが知られている。
　ＡＬＳのモデルマウスに対し、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害薬の１種であるフェブキソスタットの投与が効果的であるとの報告がなされた（特許文献１）。その効果の機構は次のように示されている(非特許文献1)。すなわち、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害薬は、血中のキサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼの基質であるヒポキサンチンの濃度を高める。それがサルベージ酵素と呼ばれるＨＰＲＴａｓｅを活性化させ、枯渇するプリンヌクレオチドをイノシン酸（イノシン－５´－モノリン酸：ＩＭＰ）として神経細胞に回収補填する。上昇したＩＭＰは結果的にＡＴＰ濃度を増加させ、細胞内への異常蛋白質の蓄積と細胞死を遅らせるというものである。しかし、同じキサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害薬であるアロプリノールは効果がなかったとし、その理由はアロプリノールがＨＰＲＴａｓｅの基質でもあるため阻害作用があるからであるとしている。
　認知症の進行遅延又は予防については、アルツハイマーモデルマウス（Ａｍｙｌｏｉｄ蛋白質及びｔａｕ蛋白質の二重変異マウス）を用いた試験により、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害薬であるフェブキソスタット及びＮＣ－２５００が、共にアルツハイマー疾患の特徴であるａｍｙｌｏｉｄ蛋白質及びｔａｕ蛋白質の細胞内蓄積を顕著に抑制することが示されている（特許文献２及び３）。このフェブキソスタット及びＮＣ－２５００が認知症の進行又は予防する作用機序も前記と同様に、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼを阻害し、血中のキサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼの基質であるヒポキサンチンの濃度を高め、それがサルベージ酵素と呼ばれるＨＰＲＴａｓｅを活性化させ、枯渇するプリンヌクレオチドをＩＭＰとして神経細胞に回収補填する。上昇したＩＭＰは結果的にＡＴＰ濃度を増加させ、細胞内への異常蛋白質の蓄積と細胞死を遅らせるというものである。
　ところで、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ（ＸＯＲ）はプリン環であるヒポキサンチンをキサンチンに、更にキサンチンを尿酸に変換する酵素である。ＸＯＲにはキサンチンデヒドロゲナーゼ（ＸＤＨ）とキサンチンオキシダーゼ（ＸＯ型）があり同じ遺伝子産物である（非特許文献２）。ＸＤＨは上記プリン環から電子を奪い、もう一つ基質ＮＡＤに２電子渡しＮＡＤＨを生成する。一方ＸＯ型はＮＡＤの代わりに酸素を基質とし、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）及びｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ（Ｏ2-）を生成する（非特許文献２）。それぞれ三次構造が異なり反応機構上説明できる（非特許文献３）。フェブキソスタット（非特許文献４）及びＮＣ－２５００（特許文献３）はＸＯＲのいずれの型の酵素反応も強く阻害する。ＸＤＨがＸＯに変換され、それが活性酸素を出し、当該活性酸素のもたらす細胞障害説があったが、近年以下の様々な理由からＸＯＲ阻害剤の活性酸素による細胞傷害説は否定されている。その理由（１）：ＸＯは各組織においてはＸＤＨとして存在し（非特許文献５、６）、抽出過程のアーチファクトとしてＸＯに変換したという専門家向け教科書がある（非特許文献７）。実際ＸＤＨとして抽出するのには極めて特殊技術が必要である（非特許文献８）。その理由（２）：近年マウスのＸＤＨ遺伝子を置換させ活性酸素（スーパーオキシドと過酸化水素の両者が産生されるが前者が特に増加する）を超産生型ＸＯに変換させたトランスジェニックマウスでも何ら異常は観られなかったという報告があり（非特許文献９、１０）、ＸＯが産生する活性酸素説は否定されている。その理由（３）：神経細胞にはＸＯＲそのものが活性測定及びウェスタンブロットにて検出できないこと、及びｍＲＮＡの発現が極めて低いこと（非特許文献１１）。その理由（４）：ＸＯＲ阻害剤であるアロプリノールが効果を示さないこと、アロプリノールが前記の通りＨＰＲＴａｓｅの阻害剤であること。その理由（５）：イノシンはヒポキサンチンの前駆体であり血液を含む生体組織内では平衡関係にあること（非特許文献１２）、による。もし活性酸素が原因であればＸＯの基質増加により作られるとされる活性酸素が増加され悪化するはずであるが、実際は増悪させない。
　フェブキソスタットとイノシンの併用によって、細胞内でＡＴＰを増加させることが血液内のＡＴＰで示されているが（特許文献４）、この特許文献では、神経細胞における作用は示されていない。
国際公開第２００８／０１０３１５号 国際公開第２０１７／１４２０９１号 国際公開第２０１６／１３６７２７号 国際公開第２０１７／０３３９６３号
Ｊ．Ｎｅｕｒｏ－ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｖｏｌ．７５，１２，２０１６　ｐｐ１１２４－１１４４ ＦＡＳＥＢ　Ｊ．１９９５；９：９９５－１００３ ＦＥＢＳ　Ｊ．２００８；２７５：３２７８－３２８９ Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ．２００３；２７８（３）：１８４８－５５． Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｊ．１９７２；１２６（３）：７３９－４５． Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ．１９８９；２６４（１７）：１００１５－２２． Ｔｈｅ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂａｓｅｓ　ｏｆ　Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ　Ｄｉｓｅａｓｅ．７ｔｈ　ｅｄ：ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ；１９９５．ｐ．１７８１－９７． Ａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９８６；２４７（２）：２５４－６０． Ｎａｔ　Ｃｏｍｍｕｎ．　２０１９；１０（１）：４９０４． Ｆｒｏｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ．２０２１；９：６１２４４０． ＧＴＥｘ　Ｐｏｒｔａｌ　［ｃｉｔｅｄ　２０２１　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　９］．Ａｖａｉｌａｂｌｅ　ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐｓ：／／ｇｔｅｘｐｏｒｔａｌ．ｏｒｇ／ｈｏｍｅ／ｇｅｎｅ／ＸＤＨ． Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ．１９５６；３５（６）：６５７－６３． Ｂｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０２０；１７７（１０）：２２７４－８５．
　本発明の課題は、新たな神経変性疾患予防及び／又は治療剤を提供することにある。
　そこで、本発明者は、前記のフェブキソスタットやＮＣ－２５００よりもさらに優れた神経変性疾患予防及び／又は治療剤を見出すべき種々検討したところ、
（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類を組み合わせれば、神経細胞内のＡＴＰを顕著に増強させ、優れた神経変性疾患予防及び／又は治療効果を示すこと、さらにこれに（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせれば、さらにこれらの効果が向上することを見出し、本発明を完成した。
　すなわち、本発明は、次の発明［１］～［３６］を提供するものである。
［１］（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類とを組み合わせてなる、神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
［２］さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである［１］記載の神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
［３］成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである［１］又は［２］記載の神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
［４］成分（Ｂ）が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である［１］～［３］のいずれかに記載の神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
［５］神経変性疾患が、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病及び脊髄小脳変性症から選ばれる疾患である［１］～［４］のいずれかに記載の神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
［６］（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類とを組み合わせてなる、神経細胞内ＡＴＰ増強剤。
［７］さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである［６］記載の神経細胞内ＡＴＰ増強剤。
［８］成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである［６］又は［７］記載の神経細胞内ＡＴＰ増強剤。
［９］成分(Ｂ)が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である［６］～［８］のいずれかに記載の神経細胞内ＡＴＰ増強剤。
［１０］（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類との組み合わせの、神経変性疾患予防及び／又は治療剤製造のための使用。
［１１］さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである［１０］記載の使用。
［１２］成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである［１０］又は［１１］記載の使用。
［１３］成分(Ｂ)が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である［１０］～［１２］のいずれかに記載の使用。
［１４］神経変性疾患が、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病及び脊髄小脳変性症から選ばれる疾患である［１０］～［１３］のいずれかに記載の使用。
［１５］（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類との組み合わせの、神経細胞内ＡＴＰ増強剤製造のための使用。
［１６］さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである［１５］記載の使用。
［１７］成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット、ＮＣ－２５００から選ばれるものである［１５］又は［１６］記載の使用。
［１８］成分(Ｂ)が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である［１５］～［１７］のいずれかに記載の使用。
［１９］神経変性疾患の予防及び／又は治療に使用するための、（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類との組み合わせ。
［２０］さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである［１９］記載の組み合わせ。
［２１］成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである［１９］又は［２０］記載の組み合わせ。
［２２］成分(Ｂ)が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である［１９］～［２１］のいずれかに記載の組み合わせ。
［２３］神経変性疾患が、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病及び脊髄小脳変性症から選ばれる疾患である［１９］～［２２］のいずれかに記載の組み合わせ。
［２４］神経細胞内ＡＴＰ増強に使用するための、（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類との組み合わせ。
［２５］さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである［２４］記載の組み合わせ。
［２６］成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット、ＮＣ－２５００から選ばれるものである［２４］又は［２５］記載の組み合わせ。
［２７］成分(Ｂ)が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である［２４］～［２６］のいずれかに記載の組み合わせ。
［２８］（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類とを組み合わせて投与することを特徴とする、神経変性疾患の予防及び／又は治療方法。
［２９］さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせて投与する、［２８］記載の方法。
［３０］成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである［２８］記載の方法。
［３１］成分（Ｂ）が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である［２８］記載の方法。
［３２］神経変性疾患が、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病及び脊髄小脳変性症から選ばれる疾患である［２８］記載の方法。
［３３］（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類とを組み合わせて投与することを特徴とする、神経細胞内ＡＴＰの増強方法。
［３４］さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせて投与する［３３］記載の方法。
［３５］成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである［３３］記載の方法。
［３６］成分(Ｂ)が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である［３３］記載の方法。
　本発明によれば、神経細胞内のＡＴＰ産生を顕著に増強し、その結果としてアルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病、脊髄小脳変性症などの神経変性疾患の症状が改善又は進行が抑制される。
細胞内におけるフェブキソスタット（Ｆｅｂｕｘｏｓｔａｔ）及びプリン体の作用経路を示す図である。 ｉＰＳ細胞から作成した神経細胞及び免疫染色による神経細胞マーカー発現を示す図である。 ｉＰＳ細胞から作成した神経細胞のウェスタンブロットによるＸＯＲとＨＰＲＴａｓｅの発現を示す図である。 薬剤無添加でミトコンドリア－アンカップラー（ＦＣＣＰ）によるＡＴＰの減少と神経細胞の崩壊の関係を示す図である。 ６穴（各穴２ｍｌ培養液）容器を用いた実験系（Ａ，Ｂ，Ｃ）の模式図を示す。 ＡＴＰ減少ストレス環境下（ＦＣＣＰ存在下）細胞の培地にイノシン及びフェブキソスタット（Ｆｅｂｕｘｏｓｔａｔ）を添加した際の効果を示す図である。 ＡＴＰ減少ストレス環境化（ＦＣＣＰ存在下）細胞の培地にヒポキサンチン、フェブキソスタット（Ｆｅｂｕｘｏｓｔａｔ）及びキシルロースを添加した際の効果を示す図である。 ＡＴＰ減少ストレス環境下における薬剤の細胞形態維持効果を示す図である。
　本発明の神経変性疾患予防及び／又は治療剤の有効成分は、（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類との組み合わせである。また、本発明の神経変性疾患予防及び／又は治療剤の有効成分は、（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類と、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンとの組み合わせである。
　成分（Ａ）は、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤である。成分（Ａ）は、前述のように、血中のキサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼの基質であるヒポキサンチンの濃度を高めることによって、サルベージ酵素と呼ばれるＨＰＲＴａｓｅを活性化させ、枯渇するプリンヌクレオチドをイノシン酸（ＩＭＰ）として神経細胞に回収補填する。上昇したＩＭＰは結果的にＡＴＰ濃度を増加させ、細胞内への異常蛋白質の蓄積と細胞死を遅らせる作用を有する。
　キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤のうち、ＨＰＲＴａｓｅの基質とならない成分が好ましく、フェブキソスタット、トピロキソスタット、ＮＣ－２５００から選ばれるものがより好ましく、フェブキソスタット、ＮＣ－２５００（５－（７－ヒドロキシチアゾロ［５，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－フェノキシ－ベンゾニトリル）がさらに好ましい。
　イノシン及びヒポキサンチンは、前述のように、いずれもプリンサルベージ回路の一成分であり、これらの成分の細胞内濃度が上昇し、尿酸への代謝が阻害されれば、細胞内ＡＴＰ濃度は上昇する。従って、成分（Ａ）とイノシンとを併用すれば、細胞内ＡＴＰ濃度は上昇し、細胞内への異常蛋白質の蓄積と細胞死を遅らせることができるはずである。しかし、本発明者の検討では、これら２成分の併用では、十分に神経細胞内のＡＴＰ濃度は上昇せず、十分な神経変性疾患治療作用は得られないことが判明した（図１参照）。
　成分（Ａ）に加えて効果の見られたのは、（Ｂ）５炭糖類である。５炭糖類としては、リボース、アラビノース、キシルロース、リキソース、キシロース、リブロースなどが挙げられる。より具体的には、Ｄ－リボース、Ｌ－リボース、Ｄ－アラビノース、Ｌ－アラビノース、Ｄ－キシルロース、Ｌ－キシルロース、Ｄ－リキソース、Ｌ－リキソース、Ｄ－キシロース、Ｄ－リブロースが挙げられる。このうち、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上が好ましく、Ｌ－リボース、Ｌ－キシルロース及びＤ－リブロースから選ばれる１種以上がより好ましい。
　本発明者の検討によれば、前記成分（Ａ）と成分（Ｂ）を併用すれば、神経細胞内ＡＴＰ濃度が顕著に上昇し、その結果優れた神経変性疾患予防治療効果が得られることを見出した。
　また、本発明においては、前記成分（Ａ）及び成分（Ｂ）に加えて、成分（Ｃ）ヒポキサンチン及び／又はイノシンを併用すれば、神経細胞内のＡＴＰ濃度がさらに上昇し、神経変性疾患の原因である異常タンパク質の蓄積と細胞死を遅らせることができる。
　成分（Ａ）と成分（Ｂ）の２成分、又は成分（Ａ）と成分（Ｂ）と成分（Ｃ）の３成分を併用すれば、神経細胞内のＡＴＰ濃度が有意に上昇し、神経変性疾患の原因である異常蛋白質の蓄積と細胞死を遅らせることができる。従って、成分（Ａ）と成分（Ｂ）の組み合わせ、又は成分（Ａ）と成分（Ｂ）と成分（Ｃ）との組み合わせは、神経変性疾患の予防及び／又は治療剤として有用である。
　神経変性疾患としては、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病、脊髄小脳変性症などが挙げられる。
　また、本発明における神経変性疾患の予防及び／又は治療には、前記種々の神経変性疾患の各種の症状を改善すること及び症状の進行を遅らせることが含まれる。
　本発明の神経変性疾患の予防及び／又は治療剤は、成分（Ａ）と成分（Ｂ）とを組み合わせてなる医薬、又は成分（Ａ）と成分（Ｂ）と成分（Ｃ）とを組み合わせてなる医薬であり、これらの成分を併用できる形態であればよい。具体的には、各成分の好ましい投与形態や投与スケジュールに基づき、各成分をそれぞれの剤形に分けて製剤化してもよく、前記２成分を含有する製剤と他の１成分を含有する製剤の組み合わせでもよく、一つの剤形にまとめて製剤化（すなわち、配合剤として製剤化）してもよく、さらに各製剤を併用に適した１個のパッケージにまとめて製造販売してもよく、各製剤を別個のパッケージに分けて製造販売してもよい。各製剤を１個のパッケージとするか別個のパッケージとする場合、成分（Ａ）と成分（Ｂ）とを併用投与すること、又は成分（Ａ）と成分（Ｂ）と成分（Ｃ）とを併用投与することを記載した使用説明書を含むキット製剤とすることもできる。ここで「使用説明書」とは、投与量が記載されたものであればよい。具体的には、添付文書、パンフレット等が例示される。また、使用説明書を含むキット製剤とは、キット製剤のパッケージに使用説明書が印刷・添付されているものであっても、キット製剤のパッケージに本発明の癌の予防または治療剤とともに使用説明書が同封されているものであってもよい。
　本発明の前記各成分の投与経路は特に限定されず、経口的又は非経口的に投与することができる。非経口投与としては髄腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下又は皮内等への注射、吸入、直腸内、鼻腔内投与及び点鼻、点耳、点眼、外用投与等が挙げられる。
　本発明の医薬としては、有効成分である前記各成分をそのまま患者に投与してもよいが、好ましくは、前記各成分と薬学的に許容し得る添加物とを含む医薬組成物の形態の製剤として投与すべきである。薬学的に許容し得る添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を用いることができる。
　経口投与に適する製剤の例としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、又はシロップ剤等を挙げることができ、非経口投与に適する製剤としては、例えば、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、点鼻剤、点耳剤、点眼剤、又は外用剤（貼付、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、スプレーなどを含む）などを挙げることができる。
　経口投与に適する製剤には、添加物として、例えば、ブドウ糖、乳糖、Ｄ－マンニトール、デンプン、又は結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、デンプン、又はカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はゼラチン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチレングリコール又は酸化チタン等のコーティング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水、又はハードファット等の基剤を用いることができる。注射、点滴用、点鼻剤、点耳剤又は点眼剤に適する製剤には、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射剤を構成し得る溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナトリウム、Ｄ－マンニトール、グリセリン等の等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のｐＨ調節剤等の製剤用添加物を用いることができる。坐剤に適する製剤には、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセリド等の基剤、及び必要に応じて非イオン界面活性剤のような界面活性剤等の添加物を用いることができる。
　軟膏剤に適する製剤には、通常使用される基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等が必要に応じて用いられる。基剤としては、流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコール、パラフィン等が挙げられる。保存剤としては、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。
　貼付剤に適する製剤としては、通常の支持体に前記軟膏、クリーム、ゲル、ペースト等を常法により塗布したものが挙げられる。支持体としては、綿、スフ、化学繊維からなる織布、不織布や軟質塩化ビニル、ポリエチレン、ポリウレタン等のフィルムあるいは発泡体シートが適当である。
　本発明の前記各成分の投与量は、疾患の進行状況又は症状の程度、患者の年齢や体重などの諸条件に応じて適宜選択可能である。また、本発明の前記各成分の投与時期は、同時でもよいし、時間帯をずらして投与してもよい。例えば、成分（Ａ）は１日２回、成分（Ｂ）は１日３回等のように投与してもよい。なお、成分（Ａ）の投与量は、１日１～１００ｍｇ程度が好ましく、フェブキスタットの場合１０～８０ｍｇが好ましい。成分（Ｂ）の投与量は、選ばれる物質及び投与法により１日１０ｇ以下が好ましい。成分（Ｃ）の投与量は、イノシンであれば１日１０００ｍｇ以下、ヒポキサンチンであれば５００ｍｇ以下が好ましい。
　以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれにより何ら制限されるものではない。
実施例
（１）ヒト神経細胞の作成：
　ＡＴＰ上昇は動物種、臓器により異なる。特に動物種によってＨＰＲＴａｓｅによるプリンヌクレオチドへの取り込みは大きく異なる。すなわちヒトのプリン代謝は、マウス等に比較して著しく高い（非特許文献１３）。そこで、キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤（ＸＯＲ阻害剤ともいう）の解析には、ヒト正常細胞を使うこととそれに伴う新規情報が必要と考えた。
　そこでヒトｉＰＳ細胞を導入し、分化誘導により得た神経細胞を用いて解析を行った。神経細胞マーカーとしてＮｅｕＮ及びＴＵＪ１（緑）、核染色にＤＡＰＩ（青）を用いて免疫染色した。
（未分化維持培養）
　ガラス化法により凍結されたヒト健常者由来ｉＰＳ細胞２０１Ｂ７株（ＲＩＫＥＮ　ＢＲＣ　Ｃｅｌｌ　Ｂａｎｋ）はマトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ）コーティングした３５ｍｍ　Ｄｉｓｈ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）でＥｓｓｅｎｔｉａｌ　８　Ｍｅｄｉｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用しフィーダーフリー培養を行った。継代時は、０．５％ＥＤＴＡを含むＰＢＳでコロニーを剥離し、１０μＭのＹ－２７６３２（ｗａｋｏ）を培地に添加した。大気下、３７℃、５％ＣＯ2インキュベーター内で培養した。
（神経幹細胞への分化誘導）
　Ｎｅｕｒａｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用し企業プロトコルに準じ、７日間培養した（３７℃、大気下５％ＣＯ2）。
（神経細胞への分化誘導）
　マトリゲルコーティングした６ｗｅｌｌ　ｐｌａｔｅに神経幹細胞を播種し、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ　ｍｅｄｉｕｍ、Ｂ－２７　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ及びＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｉｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ），ペニシリン／ストレプトマイシン／アムホテリシンＢ（ｗａｋｏ），各１０ｎｇ／ｍｌのＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　ＢＤＮＦ，ＧＤＮＦ及びＮＴ－３（ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）を含む培地で培養した。２－３日置きに培地を半量ずつ交換した。細胞の増殖が多い場合には２μＭのＡｒａ－Ｃ（ｗａｋｏ）を添加し培地交換により除去した。成熟神経分化１４日間以上培養を持続した。細胞は顕微鏡で観察し、スマホで撮影した（図２―左）。
（免疫染色による神経細胞マーカーの発現確認）
　Ｍｏｕｓｅ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉ－ＮｅｕＮ　ｃｌｏｎｅ　Ａ６０（ＮｅｕＮ），Ｍｏｕｓｅ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉ－Ｔｕｂｕｌｉｎ　ｂｅｔａ　III  ｉｓｏｆｏｒｍ　Ｃ－ｔｅｒｍｉｎｕｓ　ｃｌｏｎｅ　ＴＵ－２０（ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ＴＵＪ１）（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を一次抗体、Ｇｏａｔ　ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ　ＩｇＧ　Ｈ＆Ｌ（Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ４８８）（Ａｂｃａｍ）を二次抗体に用いた。
　細胞は培地を除去後、５％マンニトールで２回洗浄し、メタノールを加え、４℃で３０分間固定した。ＰＢＳで洗浄し、０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００を含むＰＢＳを加え、室温で１５分インキュベートした。２％ＦＢＳを含むＰＢＳ（ｗａｓｈｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒ）で洗浄した。一次抗体についてＴＵＪ１は１：５００、ＮｅｕＮは１：２００にｗａｓｈｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒで希釈した。一次抗体を添加し、４℃で一晩インキュベートした。ｗａｓｈｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒで洗浄し、１：５００希釈した二次抗体を加え、室温で１時間静置した。Ｗａｓｈｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒで洗浄後、ＤＡＰＩ染色し、オールインワン蛍光顕微鏡（キーエンス）で観察した（図２―右）。
　図２―左に示すように顕微鏡観察では神経突起を伸ばして周囲の細胞とネットワークを形成する様子が観察された。神経細胞マーカーであるＮｅｕＮとＴＵＪ１を用いて発現の確認を行った。ＮｅｕＮは成熟神経細胞で発現している核タンパク質で、中枢神経系にある神経細胞で認められる。ＴＵＪ１（Ｔｕｂｕｌｉｎ　ｂｅｔａ　III）は中枢神経系の神経細胞において全発達段階で発現する。ＮｅｕＮとＴＵＪ１はそれぞれ核と神経突起へ陽性反応が認められた（図２―右）。また、神経細胞内には尿酸は検出されず、ＸＯＲは感度の良いＨＰＬＣ分析方法で測定しても存在しないことを確認した。ウェスタンブロットにても１５０ｋＤaに相当するＸＯＲは検出されていない（図３）。神経細胞にはＸＤＨのｍＲＮＡが殆ど発現していないこと、一方でＨＰＲＴａｓｅの存在をウェスタンブロットにて確認している（図３）。この実験系にはＸＯＲは無い系、すなわちＸＯＲは完全阻害され、ＨＰＲＴａｓｅが存在した系、即ち以下の（３）で示すフェブキソスタット存在系に相当する系である。
（２）ミトコンドリアアンカップラーによるＡＴＰ減少と神経細胞の崩壊の観察：
　マトリゲルコーティングした６ｗｅｌｌ　ｐｌａｔｅ　（ｃｏｒｎｉｎｇ）の各ｗｅｌｌに神経幹細胞を播種した。神経分化培地はＮｅｕｒｏｂａｓａｌ　ｐｌｕｓ　ｍｅｄｉｕｍ，Ｂ－２７　ｐｌｕｓ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，ＧｌｕｔａＭＡＸ及びＣｕｌｔｕｒｅ　ｏｎｅ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ），ペニシリン／ストレプトマイシン／アムホテリシンＢ（ｗａｋｏ），各１０ｎｇ／ｍｌのＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　ＢＤＮＦ，ＧＤＮＦ及びＮＴ－３（ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を含み、２－３日に半量ずつ培地を交換し、１４日まで培養した（３７℃、大気下５％ＣＯ2）。
　ミトコンドリアのＡＴＰ産生を抑えるためアンカップラーであるＦＣＣＰでは確認できていた神経突起が、０．０１ｍｇ／ｍＬ添加では消失していた（図４）。
（３）ＡＴＰ減少細胞の培地にイノシン添加による効果観察：
　ＸＯＲは牛乳から精製した。上記結果を踏まえ、ミトコンドリアのＡＴＰ産生を抑えるミトコンドリアのアンカプラーであるＦＣＣＰ存在下で、図５に示す６穴（各穴２ｍｌ培養液）容器に中央模式図に示すＡ，Ｂ，Ｃの実験系（各ｎ＝３）を組み立てた。Ｄａｙ１４に２ｍＬの培地に１μＭ　Ｆｅｂｕｘｏｓｔａｔ（ＴＣＩ）、１０ｎＭ　ＸＯＲ、１００μＭ　Ｉｎｏｓｉｎｅ（ｗａｋｏ）、０．０１ｍｇ／ｍｌ　ＦＣＣＰ（Ｃａｙｍａｎ）、ＰＮＰ，ｈｕｍａｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ，Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）１０１．６４Ｕ／ｍｇを１／１００，０００希釈になるように各ｗｅｌｌの培地中に同時に加えた。３７℃、５％ＣＯ2インキュベーターで１８時間培養後、５０μＬ培地上清に２μＬ　ＰＣＡを加え、３Ｍ　Ｋ2ＣＯ3で中和した。ＩｎｏｓｉｎｅとＵＡ（尿酸）を以下に示すＨＰＬＣシステムで測定した。また、細胞はＰＢＳで洗浄後、５％ＰＣＡ　２００μＬで処理し、細胞中アデニル酸（ＡＴＰ）を同じくＨＰＬＣで測定した。
（ＨＰＬＣ測定法）
　島津ＨＰＬＣを用いて測定した。島津ＨＰＬＣはＣＢＭ－２０Ａコントローラー、ＬＣ－２０ＡＤポンプ、ＳＩＬ－２０ＡＣオートサンプラー（１５℃）、ＣＴＯ－２０Ａカラムオーブン（４０℃）及びＳＰＤ－Ｍ２０Ａダイオードアレイ検出器から構成された。ピーク分析はＬＣ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｓｏｆｔｗａｒｅを使用した。ＳＵＰＥＬＣＯＳＩＬTM　ＬＣ－１８－Ｔ　ｃｏｌｕｍｎ　（２５ｃｍｘ４．６ｍｍ　ｉｄ　５μｍ　ｐａｒｔｉｃｌｅ　ｓｉｚｅ）をＳＵＰＥＬＣＯＳＩＬTM　ＬＣ－１８－Ｔ　ＳｕｐｅｌｇｕａｒｄTM　ｇｕａｒｄ　ｃｏｌｕｍｎと接続し、流速０．８ｍｌ／ｍｉｎで２０μＬサンプルを注入した。移動相はＡ：０．１Ｍ　ＫＰＢと４ｍＭ　ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｓｕｌｆａｔｅ（ｐＨ５．５）、Ｂ：７０％ｂｕｆｆｅｒ　Ａと３０％ｍｅｔｈａｎｏｌ（ｖ／ｖ）を使用した。グラジエント条件は０ｍｉｎ（０％Ｂ）、２ｍｉｎ（０％Ｂ）、４ｍｉｎ（３０％Ｂ）、１２ｍｉｎ（６０％Ｂ）、１５ｍｉｎ（１００％Ｂ）、１９ｍｉｎ（１００％Ｂ）、２０ｍｉｎ（０％Ｂ）、及び３０ｍｉｎ（０％Ｂ）で行った。検出波長は２５４ｎｍ、２６８ｎｍ及び２９５ｎｍを使用した。
　前述のようにイノシンは赤血球ではｐｕｒｉｎｅ　ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ　（ＰＮＰａｓｅ）によりヒポキサンチンとｒｉｂｏｓｅ－１ｐと平衡関係にある。そのためイノシンはヒポキサンチンの運搬型と考えられていた。その中のヒポキサンチンがＨＰＲＴａｓｅによりＩＭＰとして赤血球又は神経細胞に取り込まれる（図１参照）。
　ヒトｉＰＳ由来神経細胞を用いた本実験では溶媒に全身多臓器のＸＯＲ及びＰＮＰａｓｅを想定して、培地に加えた。更にフェブキソスタットのＸＯＲ阻害効果及び基質であるイノシン（ヒポキサンチンと同価）の添加による変化を、培養時間１８時間で観察した。ェブキソスタット添加なしの培地ではイノシンはほとんど検出されず、尿酸が検出された（図６）。すなわちイノシンは上記のようにＰＮＰａｓｅによりヒポキサンチンと平衡系にあり、それがその全て尿酸になったことを示す。一方、フェブキソスタットありの培地では尿酸はほとんど検出されなかった（図６）。
　これはこの系ではフェブキソスタットがほぼ完全にヒポキサンチンから尿酸への変換を阻害していることを示す。
　ＡＴＰはフェブキソスタット存在下で有意にＡＴＰが増加した（ｎ＝３，ｐ＝０．０２８）。
（４）各種５炭糖添加の効果：
　ＸＯを加えた実験系ではフェブキソスタットはイノシンと平衡系にあるヒポキサンチンの減少を抑える為に働き、更にイノシンはヒポキサンチンと平衡にあるためＰＮＰ無添加で代わりに５０μＭのヒポキサンチン（平衡下にほぼ相当する量）を直接使い、またＸＯも添加しない（従ってフェブキソスタット無添加）で５炭糖を培養系にそれぞれ加え検索した。
　Ｄ－アラビノース、Ｌ－アラビノース、Ｄ－キシロース、Ｄ－リキソース、Ｌ－リキソース、Ｄ－リボースおよびＬ－リボースは富士フィルム和光純薬株式会社、Ｄ－キシルロースとＤ－リブロースはＣａｙｍａｎ社、Ｌ－キシルロースはＳａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入した。
　前記と同様に成熟神経分化して得た細胞の培養１４日目に培地２ｍＬ中にヒポキサンチンと各種ペントースを添加した。この添加条件は前記（３）の実験系においてＸＯＲを添加しない条件（ＦｅｂｕｘｏｓｔａｔがＸＯＲを完全にブロックするため）と同様である。なお、ＩｎｏｓｉｎｅがＰＮＰによりヒポキサンチンへ分解されることから、ヒポキサンチンのみを基質に用いて行った。添加後の細胞は３７℃、大気下５％ＣＯ2条件でインキュベートした。１２時間後、前記（３）と同様にＰＣＡによる抽出を行い、ＨＰＬＣで測定した。
　その結果を表１に示す。Ｄ－リボース、Ｌ－リボース、Ｄ－アラビノース、Ｌ－アラビノース、Ｄ－キシルロース、Ｌ－キシルロース、Ｄ－リキソース、Ｌ－リキソース、Ｄ－キシロース、Ｄ－リブロースを用いた。リボース、キシルロース及びリブロースが優れており、特にＬ－リボース、Ｌ－キシルロース及びＤ－リブロースが優れていた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　上記の結果を踏まえ、ミトコンドリアのＡＴＰ産生を抑えるミトコンドリアのアンカプラーであるＦＣＣＰ存在下で、図５に示す６穴（各穴２ｍｌ培養液）容器の実験系（各ｎ＝３）にキシルロース添加を組み込んだ。
　前記の方法で得た１４日目の神経細胞に、表２に示す実験系で培地２ｍＬ中に添加し、３７℃、５％ＣＯ2インキュベータにて１８時間培養した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　ＦＣＣＰによる細胞内ＡＴＰ濃度及び顕微鏡観察の変化から防御の程度を比較検討した。神経細胞内のＡＴＰの濃度、培養液におけるヒポキサンチン及び尿酸の濃度を島津ＨＰＬＣ―ダイオードアレイ／ＵＶシステムを用いて測定した。その結果、以下の結果を得た。
１）Ｆｅｂｕｘｏｓｔａｔ無添加の場合はキシルロース濃度依存的にＡＴＰ濃度が増加した（図７）。
２）Ｆｅｂｕｘｏｓｔａｔを加えた場合は１０μＭのキシルロース添加によりＡＴＰ濃度は、ほぼストレスなし（ＦＣＣＰ無添加）の濃度約５μＭまで達した（図７）。即ちその状態ではＡＴＰ濃度は正常細胞の８０－１００％維持しているため、ほぼ飽和していると思われた。
３）顕微鏡での観察ではＦｅｂｕｘｏｓｔａｔ存在下ではＡＴＰ濃度と共に正常形態が保たれていた（図８）。

Claims (36)

  1. 　（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖とを組み合わせてなる、神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
  2. 　さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである請求項１記載の神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
  3. 　成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである請求項１又は２記載の神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
  4. 　成分（Ｂ）が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である請求項１～３のいずれか１項記載の神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
  5. 　神経変性疾患が、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病及び脊髄小脳変性症から選ばれる疾患である請求項１～４のいずれか１項記載の神経変性疾患予防及び／又は治療剤。
  6. 　（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖とを組み合わせてなる、神経細胞内ＡＴＰ増強剤。
  7. 　さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである請求項６記載の神経細胞内ＡＴＰ増強剤。
  8. 　成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット、ＮＣ－２５００及びから選ばれるものである請求項６又は７記載の神経細胞内ＡＴＰ増強剤。
  9. 　成分（Ｂ）が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である請求項６～８のいずれか１項記載の神経細胞内ＡＴＰ増強剤。
  10. 　（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖との組み合わせの、神経変性疾患予防及び／又は治療剤製造のための使用。
  11. 　さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである請求項１０記載の使用。
  12. 　成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである請求項１０又は１１記載の使用。
  13. 　成分（Ｂ）が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である請求項１０～１２のいずれか１項記載の使用。
  14. 　神経変性疾患が、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病及び脊髄小脳変性症から選ばれる疾患である請求項１０～１３のいずれか１項記載の使用。
  15. 　（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖との組み合わせの、神経細胞内ＡＴＰ増強剤製造のための使用。
  16. 　さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである請求項１５記載の使用。
  17. 　成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである請求項１５又は１６記載の使用。
  18. 　成分（Ｂ）が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である請求項１５～１７のいずれか１項記載の使用。
  19. 　神経変性疾患の予防及び／又は治療に使用するための、（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類との組み合わせ。
  20. 　さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである請求項１９記載の組み合わせ。
  21. 　成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである請求項１９又は２０に記載の組み合わせ。
  22. 　成分(Ｂ)が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である請求項１９～２１のいずれか１項に記載の組み合わせ。
  23. 　神経変性疾患が、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病及び脊髄小脳変性症から選ばれる疾患である請求項１９～２２のいずれか１項に記載の組み合わせ。
  24. 　神経細胞内ＡＴＰ増強に使用するための、（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類との組み合わせ。
  25. 　さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせるものである請求項２４記載の組み合わせ。
  26. 　成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット、ＮＣ－２５００から選ばれるものである請求項２４又は２５記載の組み合わせ。
  27. 　成分(Ｂ)が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である請求項２４～２６のいずれか１項に記載の組み合わせ。
  28. 　（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類とを組み合わせて投与することを特徴とする、神経変性疾患の予防及び／又は治療方法。
  29. 　さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせて投与する、請求項２８記載の方法。
  30. 　成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである請求項２８記載の方法。
  31. 　成分（Ｂ）が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である請求項２８記載の方法。
  32. 　神経変性疾患が、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ミトコンドリア病及び脊髄小脳変性症から選ばれる疾患である請求項２８記載の方法。
  33. 　（Ａ）キサンチンオキシダーゼ／キサンチンデヒドロゲナーゼ阻害剤と、（Ｂ）５炭糖類とを組み合わせて投与することを特徴とする、神経細胞内ＡＴＰの増強方法。
  34. 　さらに、（Ｃ）イノシン及び／又はヒポキサンチンを組み合わせて投与する請求項３３記載の方法。
  35. 　成分（Ａ）が、フェブキソスタット、トピロキソスタット及びＮＣ－２５００から選ばれるものである請求項３３記載の方法。
  36. 　成分(Ｂ)が、リボース、キシルロース及びリブロースから選ばれる１種以上である請求項３３記載の方法。
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