WO2023038416A1 - 폐 섬유증의 바이오마커 및 치료 표적으로서 csf3r - Google Patents

폐 섬유증의 바이오마커 및 치료 표적으로서 csf3r Download PDF

Info

Publication number
WO2023038416A1
WO2023038416A1 PCT/KR2022/013410 KR2022013410W WO2023038416A1 WO 2023038416 A1 WO2023038416 A1 WO 2023038416A1 KR 2022013410 W KR2022013410 W KR 2022013410W WO 2023038416 A1 WO2023038416 A1 WO 2023038416A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
csf3r
pulmonary fibrosis
antibody
patient
expression
Prior art date
Application number
PCT/KR2022/013410
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
이수재
강재혁
이다인
임은지
Original Assignee
주식회사 에프엔씨티바이오텍
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 에프엔씨티바이오텍 filed Critical 주식회사 에프엔씨티바이오텍
Publication of WO2023038416A1 publication Critical patent/WO2023038416A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to a novel use of CSF3R (granulocyte colony-stimulating factor receptor or colony-stimulating factor 3 receptor) as a biomarker and therapeutic target for pulmonary fibrosis, and more specifically, CSF3R in samples derived from lung tissue It relates to a kit for diagnosing pulmonary fibrosis and a method for diagnosing pulmonary fibrosis, which includes measuring the expression level of. In addition, the present invention relates to a pharmaceutical composition for treating pulmonary fibrosis containing a substance that inhibits the expression or activity of CSF3R.
  • CSF3R granulocyte colony-stimulating factor receptor or colony-stimulating factor 3 receptor
  • Pulmonary fibrosis is a disease in which chronic inflammatory cells infiltrate the alveoli and cause structural changes and fibrosis of lung tissue. If chronic inflammatory response is induced due to continuous stimulation or severe damage to lung tissue, the original function of lung epithelial cells is lost, and the extracellular matrix (extracellular matrix, As ECM) accumulates, the tissue undergoes fibrosis, which becomes hard. When the lung tissue becomes hard, gas exchange is not performed smoothly, causing symptoms such as shortness of breath, and these symptoms greatly affect the quality of life and prognosis of patients.
  • ECM extracellular matrix
  • pulmonary fibrosis nintedanib (Ofev) and pirfenidone (pirfenidone, Esbriet) only slow the progression of symptoms, but do not have a cure effect and accompany many side effects.
  • the average survival time of pulmonary fibrosis has been reported to be less than 3 years, and there is no effective treatment method other than lung transplantation.
  • a technical task is to discover new therapeutic targets for pulmonary fibrosis.
  • a technical task is to provide a therapeutic drug for pulmonary fibrosis.
  • a technical task is to provide a treatment method and a treatment mechanism for pulmonary fibrosis.
  • a method for treating pulmonary fibrosis comprising: administering a therapeutically effective amount of an anti-CSF3R antibody to a patient in need thereof, wherein the anti-CSF3R antibody accumulates in lung tissue of the patient. Accelerates the degradation of the extracellular matrix.
  • accelerating the degradation of the accumulated extracellular matrix may be reducing the expression level of one or more markers selected from Col1a1, OPN, VER, FN, and Has3.
  • decomposing the accumulated extracellular matrix may be degrading the accumulated collagen.
  • degradation of the accumulated collagen may be promoted by one or more of the following: increased expression of matrix metalloproteinases (MMPs) in lung tissue of the patient; and decreased expression of tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP) in lung tissue of the patient.
  • MMPs matrix metalloproteinases
  • TIMP tissue inhibitor of metalloproteinases
  • the MMP may be one or more selected from MMP2, MMP9, and MMP13.
  • the TIMP may be one or more selected from TIMP-1 and TIMP-2.
  • a method for treating pulmonary fibrosis comprising: administering to a patient in need of treatment a therapeutically effective amount of an anti-CSF3R antibody, wherein the anti-CSF3R antibody is injected into lung tissue of the patient to: performs a function selected from: inhibiting CSF3R-mediated epithelial-mesenchymal transition of cells in the patient's lung tissue; and restoring cells undergoing CSF3R-mediated epithelial-mesenchymal transition in the patient's lung tissue to epithelial cells or fibroblasts.
  • the inhibitor of CSF3R-mediated epithelial-mesenchymal transition or the recovery of cells in which CSF3R-mediated epithelial-mesenchymal transition has occurred may be one or more selected from among: Fibronectin, Vimentin, N-cad, and ZEB1. reducing the expression of markers of the abnormality; and increasing the expression of E-cad.
  • the anti-CSF3R antibody is capable of inhibiting or reducing the binding of STAT3 to CSF3R in cells of lung tissue of the patient.
  • the pulmonary fibrosis may be selected from among idiopathic pulmonary fibrosis, pulmonary inflammatory fibrosis, chronic obstructive pulmonary disease, and fibrotic diseases found in asthma.
  • anti-CSF3R antibodies for use in treating pulmonary fibrosis in a patient.
  • the anti-CSF3R antibody can promote the degradation of the extracellular matrix accumulated in the lung tissue of the patient.
  • accelerating the degradation of the accumulated extracellular matrix may be reducing the expression level of one or more markers selected from Col1a1, OPN, VER, FN, and Has3.
  • decomposing the accumulated extracellular matrix may be degrading the accumulated collagen.
  • degradation of the accumulated collagen may be promoted by one or more of the following: increased expression of matrix metalloproteinases (MMPs) in lung tissue of the patient; and decreased expression of tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP) in lung tissue of the patient.
  • MMPs matrix metalloproteinases
  • TIMP tissue inhibitor of metalloproteinases
  • the MMP may be one or more selected from MMP2, MMP9, and MMP13.
  • the TIMP may be one or more selected from TIMP-1 and TIMP-2.
  • anti-CSF3R antibodies for use in treating pulmonary fibrosis in a patient.
  • the anti-CSF3R antibody is capable of one or more functions selected from among the following: inhibition of CSF3R-mediated epithelial-mesenchymal transition in lung tissue of the patient; and restoring cells undergoing CSF3R-mediated epithelial-mesenchymal transition to epithelial cells or fibroblasts in the patient's lung tissue.
  • inhibiting the CSF3R-mediated epithelial-mesenchymal transition may be one or more selected from the following: reducing the expression of one or more markers selected from Fibronectin, Vimentin, N-cad, and ZEB1; and increasing the expression of E-cad.
  • the anti-CSF3R antibody may be capable of inhibiting or reducing the binding of STAT3 to CSF3R in cells of lung tissue of the patient.
  • the pulmonary fibrosis may be selected from among idiopathic pulmonary fibrosis, pulmonary inflammatory fibrosis, chronic obstructive pulmonary disease, and fibrotic diseases found in asthma.
  • patients with pulmonary fibrosis can be effectively treated.
  • Figure 1 shows the results of confirming the expression of CSF3R in lung tissues and normal tissues of patients with idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) by immunohistochemical staining.
  • Figure 2 shows the results of immunohistochemical staining for CSF3R expression in lung tissue and normal tissue of patients with idiopathic pulmonary fibrosis as an immunohistochemical staining score (IHC Score).
  • Figure 3 shows the results of confirming CSF3R expression in lung tissue and normal tissue of idiopathic pulmonary fibrosis patients with a GEO dataset.
  • FIG. 4 shows the results of immunohistochemical staining for CSF3R expression in lung tissue of a Bleomycin (BLM)-induced idiopathic pulmonary fibrosis mouse model.
  • Figure 5 shows the results of confirming CSF3R expression by Western blot in the lung tissue of the BLM-induced idiopathic pulmonary fibrosis mouse model.
  • Figure 6 shows the results of confirming CSF3R expression by RT-qPCR in the lung tissue of the BLM-induced idiopathic pulmonary fibrosis mouse model.
  • Figure 7 shows the results confirming the increase in the expression of extracellular matrix (ECM) components and epithelial-mesenchymal transition (EMT) markers by RT-qPCR when CSF3R is overexpressed in the lung epithelial cell line Beas-2b.
  • ECM extracellular matrix
  • EMT epithelial-mesenchymal transition
  • FIG. 8 shows the results of Western blotting for the increase in the expression of extracellular matrix (ECM) components and epithelial-mesenchymal transition (EMT) markers when CSF3R is overexpressed in the lung epithelial cell line Beas-2b.
  • ECM extracellular matrix
  • EMT epithelial-mesenchymal transition
  • Figure 9 shows the results of confirming by RT-qPCR that the induction of expression of extracellular matrix (ECM) components and epithelial-mesenchymal transition (EMT) markers by BLM is suppressed when CSF3R expression is inhibited in the lung epithelial cell line Beas-2b.
  • ECM extracellular matrix
  • EMT epithelial-mesenchymal transition
  • Figure 10 shows the result of Western blot confirming that the induction of expression of extracellular matrix (ECM) components and epithelial-mesenchymal transition (EMT) markers by BLM is inhibited when CSF3R expression is inhibited in the lung epithelial cell line Beas-2b.
  • ECM extracellular matrix
  • EMT epithelial-mesenchymal transition
  • Figure 11 shows the experimental plan for injecting CSF3R neutralizing antibody into a BLM-induced pulmonary fibrosis mouse model.
  • Figure 12 shows the results of confirming the treatment effect of pulmonary fibrosis according to CSF3R neutralizing antibody treatment by immunohistochemical staining.
  • 15 is a graph showing that the weight loss of mice caused by BLM is recovered by CSF3R neutralizing antibody.
  • EMT epithelial-mesenchymal transition
  • FIG. 17 shows the result of confirming the reduction of epithelial-mesenchymal transition (EMT) marker protein by RT-qPCR in the mouse group injected with CSF3R neutralizing antibody.
  • EMT epithelial-mesenchymal transition
  • 19 is a graph showing that the expression levels of MMP2, MMP9, and MMP13 decreased by BLM treatment in a mouse model of BLM-induced pulmonary fibrosis and increased again by treatment with CSF3R neutralizing antibody.
  • TIMP-1 and TIMP-2 show immunohistochemical staining results showing that the expression of TIMP-1 and TIMP-2, which were increased by BLM treatment in a BLM-induced pulmonary fibrosis mouse model, was reduced to normal lung tissue levels by CSF3R neutralizing antibody treatment.
  • 21 shows the results of screening for sub-signal pathway factors by treating the lung epithelial cell line Beas-2b with rh-CSF3.
  • FIG. 22 shows Western blot results showing that the activity of STAT3 induced by BLM decreases as the expression of CSF3R is inhibited.
  • 25 shows the results of an in situ PLA assay showing direct binding of CSF3R and STAT3.
  • the present inventors confirmed that CSF3R expression was high in pulmonary fibrosis patients and BLM-induced pulmonary fibrosis mouse models, suggesting that CSF3R can be used as a biomarker for diagnosing pulmonary fibrosis.
  • the present inventors confirmed that when CSF3R, whose expression increased in pulmonary fibrosis, was inhibited with a target antibody, alpha-myofibrogenic protein, collagen, and epithelial to mesenchymal transition (EMT) markers were significantly reduced.
  • EMT epithelial to mesenchymal transition
  • the present inventors observed that the expression of CSF3R is higher in pulmonary fibrosis tissue than in normal lung tissue using a human tissue microarray, a GEO database, and a BLM-induced pulmonary fibrosis mouse model.
  • CSF3R can be a biomarker for the diagnosis of pulmonary fibrosis and a novel target for the treatment of pulmonary fibrosis, and pulmonary fibrosis can be treated by inhibiting the expression or activity of CSF3R.
  • the present invention relates to a kit for diagnosing pulmonary fibrosis comprising a reagent for measuring the expression level of CSF3R in a sample derived from lung tissue.
  • the present invention relates to a method for providing information for diagnosing pulmonary fibrosis, comprising measuring the expression level of CSF3R in a lung tissue-derived sample.
  • the sample derived from lung tissue is determined to be pulmonary fibrosis. can do.
  • pulmonary fibrosis is a respiratory disease in which lung tissue is hardened and causes severe respiratory disorders, and hardening of the lungs means excessive accumulation of fibrous connective tissue, and this process is called fibrosis. As fibrosis progresses, the lung wall thickens and the amount of oxygen supplied to the blood decreases. As a result, the patient continuously feels short of breath, and it is reported that there is no way to recover lung tissue with fibrosis.
  • the pulmonary fibrosis may be idiopathic pulmonary fibrosis, inflammatory pulmonary fibrosis, chronic obstructive pulmonary disease, or fibrotic disease as seen in asthma. Specifically, pulmonary fibrosis may be idiopathic pulmonary fibrosis.
  • diagnosis used in the present invention, in a broad sense, means to judge the actual condition of a patient's disease in all aspects. The content of judgment is the name of the disease, etiology, type of disease, severity, detailed condition of the disease, and presence or absence of complications. Diagnosis in the present invention is to determine the onset of pulmonary fibrosis and the level of progression.
  • the term "information provision method for diagnosing pulmonary fibrosis" is a preliminary step for diagnosis or prediction of prognosis, and provides objective basic information necessary for the diagnosis of pulmonary fibrosis, and is a doctor's clinical judgment or opinion. is excluded.
  • measuring the expression level of CSF3R in a sample derived from lung tissue includes measuring the mRNA level of the CSF3R gene or measuring the level of the CSF3R protein encoded by the gene.
  • the method for measuring the mRNA expression level is reverse transcription polymerase reaction (RT-PCR), competitive reverse transcription polymerase reaction (Competitive RT-PCR), real-time reverse transcription polymerase reaction (Realtime RT-PCR), RNase protection assay (RPA) ; RNase protection assay), Northern blotting, DNA chip, etc., but are not limited thereto.
  • Methods for measuring protein expression levels in the present invention include Western blot, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), radioimmunodiffusion, Ouchterlony immunodiffusion method, rocket (rocket) immunoelectrophoresis, tissue immunostaining, immunoprecipitation assay, complement fixation assay, flow cytometry (Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), protein chip, etc., but are limited thereto It doesn't work.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment of pulmonary fibrosis comprising a substance that inhibits the expression or activity of CSF3R.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can inhibit the expression of alpha-smooth muscle actin ( ⁇ -SMA) in lung cells.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can inhibit the expression of extracellular matrix including collagen in lung tissue.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can inhibit epithelial to mesenchymal transition (EMT) of lung epithelial cells.
  • EMT epithelial to mesenchymal transition
  • the inhibition of epithelial-mesenchymal transition inhibits the expression of one or more proteins selected from the group consisting of Fibronectin (FN), Vimentin (VIM), N-cad, and ZEB1, and/or E- It may be to increase cad expression.
  • FN Fibronectin
  • VIM Vimentin
  • N-cad N-cad
  • ZEB1 ZEB1
  • the pharmaceutical composition of the present invention inhibits the expression of alpha-myofibrogenic protein ( ⁇ -SMA) in lung cells, inhibits the expression of collagen in lung tissue, and/or inhibits epithelial-mesenchymal transition of lung epithelial cells. By inhibiting and/or restoring, ultimately, the accumulation of extracellular matrix constituents can be reduced, thereby effectively treating pulmonary fibrosis.
  • ⁇ -SMA alpha-myofibrogenic protein
  • epithelial mesenchymal transition refers to a process in which epithelial cells lose their cell polarity and cell-to-cell adhesion and gain migration and invasiveness to become mesenchymal stem cells, which are various cell types. It is a multipotent stromal cell that can differentiate into Epithelial-mesenchymal transition is essential for numerous developmental processes, including mesoderm formation and neural tube formation, and is observed during wound healing, organ fibrosis, and cancer metastasis. Therefore, pulmonary fibrosis can be treated by inhibiting and/or restoring the epithelial-mesenchymal transition of lung epithelial cells.
  • the substance that inhibits the expression or activity of CSF3R is CSF3R siRNA, CSF3R shRNA, CSF3R antisense nucleic acid, guide RNA (gRNA), CRISPR/Cas9, anti-CSF3R small molecule compound or an anti-CSF3R antibody.
  • substances that inhibit CSF3R expression include CSF3R siRNA, CSF3R shRNA, CSF3R antisense nucleic acid, guide RNA (gRNA), and CRISPR/Cas9 that can specifically bind to CSF3R mRNA.
  • substances that inhibit the activity of CSF3R include anti-CSF3R small molecule compounds or anti-CSF3R antibodies that specifically bind to and inhibit CSF3R activity.
  • siRNA, shRNA or antisense nucleic acid targeting the CSF3R gene is introduced using various carriers or directly into pulmonary fibrosis tissue to inhibit the expression of CSF3R can be suppressed
  • the CSF3R gene can be deleted or suppressed by introducing guide RNA (gRNA) targeting the CSF3R gene and CRISPR/Cas9 into pulmonary fibrosis tissue.
  • gRNA guide RNA
  • a CRISPR/dCas9-based transcriptional repressor targeting the CSF3R gene may be introduced into pulmonary fibrosis tissue to suppress the expression of the CSF3R gene.
  • the expression of the CSF3R gene may be inhibited by injecting a small molecule compound that inhibits transcription of CSF3R into pulmonary fibrosis tissues.
  • the activity of CSF3R can be inhibited by injecting a small molecule compound that inhibits the activity of CSF3R into pulmonary fibrosis tissue.
  • siRNA small interfering RNA refers to a short double-stranded RNA capable of inducing RNAi (RNA interference) through the cleavage of a specific mRNA. It consists of a sense RNA strand having a sequence homologous to the mRNA of the target gene and an antisense RNA strand having a sequence complementary thereto. Since siRNA can suppress the expression of a target gene, it can be provided as an efficient gene knockdown method or as a method of gene therapy.
  • shRNA short hairpin RNA or small hairpin RNA
  • shRNA short hairpin RNA or small hairpin RNA
  • Dicer or Rnase 2 siRNA processing enzymes
  • Antisense nucleic acid refers to DNA or RNA or derivatives thereof containing a nucleic acid sequence complementary to a specific mRNA sequence, and binds to a complementary sequence in mRNA to translate mRNA into protein, translocation into the cytoplasm, It may inhibit maturation or any other vital activity for overall biological function.
  • Antibodies capable of specifically binding to CSF3R include both monoclonal antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies, and human antibodies, and antibodies already known in the art may also be included in addition to novel antibodies. As long as the antibody specifically binds to CSF3R, it includes functional fragments of antibody molecules as well as full-length full-length forms of two heavy chains and two light chains.
  • a functional fragment of an antibody molecule means a fragment having at least an antigen-binding function, and includes Fab, F(ab'), F(ab')2, and Fv.
  • a method of injecting a substance that inhibits the expression or activity of CSF3R into pulmonary fibrosis cells can be implemented in various forms, such as a method using a liposome or a vector system, which is a genetic engineering technology. Alternatively, a method of preparing a pharmaceutical formulation and administering it to the body in a conventional manner may be used.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutically acceptable carrier is one commonly used in formulation, and includes, but is not limited to, saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, cyclodextrin, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, liposome, etc. It is not, and if necessary, other conventional additives such as antioxidants and buffers may be further included. In addition, diluents, dispersants, surfactants, binders, lubricants, etc.
  • compositions for injections such as aqueous solutions, suspensions, emulsions, etc., pills, capsules, granules, or tablets.
  • a suitable pharmaceutically acceptable carrier and formulation it can be preferably formulated according to each component using the method disclosed in Remington's Pharmaceutical Sciences (19th edition, 1995).
  • the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited in dosage form, but may be formulated as an injection, an inhalant, an external preparation for the skin, or an oral intake.
  • composition of the present invention can be administered orally or parenterally (for example, intravenously, subcutaneously, applied to the skin, nasal cavity, or respiratory tract) according to the desired method, and the dosage is the patient's condition and weight, the degree of disease , Depending on the drug form, administration route and time, it can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • compositions according to the present invention are administered in a therapeutically effective amount.
  • therapeutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is the type of disease of the patient, the severity, the activity of the drug, the drug It may be determined according to factors including sensitivity to , time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, drugs used concurrently, and other factors well known in the medical field.
  • the composition according to the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered single or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with the minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the effective amount of the composition according to the present invention may vary depending on the patient's age, sex, and weight, and is generally 0.001 to 150 mg per 1 kg of body weight, preferably 0.01 to 100 mg per day or every other day, or 1 It can be administered in 1 to 3 divided doses per day. However, since it may increase or decrease depending on the route of administration, severity of pulmonary fibrosis, sex, weight, age, etc., the dosage is not limited to the scope of the present invention in any way.
  • the present inventors investigated the matrix metalloproteinase enzyme associated with extracellular matrix (ECM) degradation.
  • ECM extracellular matrix
  • MMP matrix metalloproteinase
  • TIMP tissue inhibitors of metalloproteinase
  • STAT3 is a major factor in the sub-signal mechanism that induces epithelial-mesenchymal transition (EMT) of lung epithelial cell lines by CSF3R.
  • the present invention relates to a method for screening a drug for treating pulmonary fibrosis, comprising the steps of:
  • the present invention provides a method for preventing or treating pulmonary fibrosis comprising administering the composition to a subject.
  • prevention used in the present invention refers to any action that suppresses or delays the onset of pulmonary fibrosis by administration of the composition according to the present invention.
  • treatment refers to all activities in which symptoms of pulmonary fibrosis are improved or beneficially changed by administration of the composition according to the present invention.
  • subject means a subject in need of a method for preventing or treating a disease, and more specifically, a human or non-human primate, mouse, rat, dog, cat, horse and mammals such as cattle.
  • the present invention presents CSF3R as a biomarker and novel therapeutic target for the diagnosis of pulmonary fibrosis.
  • the present invention provides a pulmonary fibrosis diagnostic kit comprising a reagent for measuring the expression level of CSF3R in a sample derived from lung tissue.
  • the present invention provides an information providing method for diagnosing pulmonary fibrosis, comprising measuring the expression level of CSF3R in a lung tissue-derived sample.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for treating pulmonary fibrosis containing a substance that inhibits the expression or activity of CSF3R.
  • the present invention provides a method for screening a drug for treating pulmonary fibrosis, comprising the following steps:
  • the pulmonary fibrosis is selected from among idiopathic pulmonary fibrosis, pulmonary inflammatory fibrosis, chronic obstructive pulmonary disease, and fibrotic diseases found in asthma.
  • Example 3 causes of pulmonary fibrosis
  • pulmonary fibrosis is bleomycin-induced pulmonary fibrosis or radiation-induced pulmonary fibrosis.
  • the pulmonary fibrosis according to any one of Examples 1 to 3, wherein the expression level of CSF3R in the lung tissue of the pulmonary fibrosis patient is increased compared to CSF3R in the lung tissue of a normal person.
  • pulmonary fibrosis according to any one of Examples 1 to 4, wherein the expression of a marker selected from Col1a1, OPN, VER, FN, and Has3 in the lung tissue of the patient with pulmonary fibrosis is increased compared to normal lung tissue.
  • Example 6 expression of markers related to epithelial-mesenchymal transition
  • Example 7 The method of Example 7, wherein the anti-CSF3R antibody is a neutralizing antibody against CSF3R.
  • Example 10 wherein the anti-CSF3R antibody binds to all or part of a region selected from among the following CSF3R proteins:
  • Example 11 wherein the anti-CSF3R antibody has Arginine at position 190, Leusine at position 194, Leusine at position 195, Tyrosine at position 196, and Histidine at position 261 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1. (Histidine), isoleucine at position 262, asparagine at position 263, and leucine at position 314.
  • a CSF3R inhibitor selected from CSF3R siRNA, CSF3R shRNA, and CSF3R antisense nucleic acid selected from CSF3R siRNA, CSF3R shRNA, and CSF3R antisense nucleic acid.
  • Example 13 The method of Example 13, characterized in that the CSF3R inhibitor is a nucleic acid that specifically binds to the mRNA of the CSF3R gene.
  • a CRISPR/Cas composition targeting the CSF3R gene including:
  • a Cas protein or a nucleic acid encoding the Cas protein A Cas protein or a nucleic acid encoding the Cas protein
  • a guide RNA targeting the CSF3R gene, or a nucleic acid encoding the guide RNA is provided.
  • Example 15 The method of Example 15, wherein the Cas protein is a Cas9 protein or a Cas12a (Cpf1) protein.
  • the Cas protein according to any one of Examples 15 to 16, characterized in that it has a nickase activity or has no nucleic acid cleavage activity (dead-form).
  • a pharmaceutical composition for treating pulmonary fibrosis of any one of Examples 1-6 comprising:
  • a pharmaceutically acceptable carrier and/or adjuvant are provided.
  • the pharmaceutically acceptable carrier is one or more selected from:
  • saline sterile water; Ringer's solution; buffered saline; cyclodextrin; dextrose solution; maltodextrin solution; glycerol; ethanol; liposomes; and additives such as antioxidants and buffers.
  • Example 20 The method of Example 20, wherein the extracellular matrix degradation mechanism is a CSF3R-mediated extracellular matrix degradation mechanism.
  • the extracellular matrix degradation mechanism according to any one of Examples 20 to 21, wherein the extracellular matrix includes collagen.
  • Example 22 The method of Example 22, characterized in that the collagen is collagen accumulated in tissues.
  • MMP matrix metalloproteinase
  • TIMP tissue inhibitors of metalloproteinase
  • the matrix metalloproteinase is at least one selected from MMP2, MMP9, and MMP13.
  • metalloproteinase tissue inhibitor is at least one selected from TIMP-1 and TIMP-2.
  • Treatment mechanism 2 Mechanism of epithelial-mesenchymal transition
  • Example 28 wherein the CSF3R-mediated epithelial-mesenchymal transition mechanism is caused by one or more selected from the following:
  • Example 30 submechanism 1 - CSF3-CSF3R binding
  • Example 32 submechanism 3 - CSF3>CSF3R>STAT3 signaling mechanism
  • Example 33 method for treating pulmonary fibrosis 1 - extracellular matrix degradation
  • the anti-CSF3R antibody of any one of Examples 7 to 12 or the CSF3R expression inhibitor of any one of Examples 13 to 17 is administered to the pulmonary fibrosis patient, or injected, and / or delivering to the patient's lung tissue;
  • the anti-CSF3R antibody promotes, activates, or triggers the extracellular matrix degradation mechanism of any one of Examples 20 to 27 in the lung tissue of the pulmonary fibrosis patient ), induce and/or cause.
  • Example 34 pulmonary fibrosis treatment method 2 - inhibition/restoration of epithelial-mesenchymal transition
  • the anti-CSF3R antibody of any one of Examples 7 to 12 or the CSF3R expression inhibitor of any one of Examples 13 to 17 is administered to the pulmonary fibrosis patient, or injected, and / or delivering to the patient's lung tissue;
  • the anti-CSF3R antibody blocks, inhibits, or interrupts the epithelial-mesenchymal transition mechanism of any one of Examples 28 to 32 in the lung tissue of the pulmonary fibrosis patient , prevent, and/or reverse.
  • the anti-CSF3R antibody of any one of Examples 7 to 12 or the CSF3R expression inhibitor of any one of Examples 13 to 17 is administered to the pulmonary fibrosis patient, or injected, and / or delivering to the patient's lung tissue;
  • the anti-CSF3R antibody blocks, inhibits, or interrupts the epithelial-mesenchymal transition mechanism of any one of Examples 28 to 32 in the lung tissue of the pulmonary fibrosis patient , prevent and/or restore, promote, activate, trigger, induce, or promote the collagen removal mechanism of any one of Examples 20 to 27 (induce) and/or cause (cause).
  • restoring the mechanism of epithelial-mesenchymal transition means that cells undergoing epithelial-mesenchymal transition are restored to epithelial cells or fibroblasts.
  • Example 37 method for promoting extracellular matrix degradation
  • the extracellular matrix degradation mechanism of any one of Examples 20 to 27 is promoted, activated, or triggered ( trigger, induce and/or cause, including:
  • Example 37 The method according to Example 37, wherein the method performs and/or induces by neutralizing the CSF3R.
  • Example 38 wherein the method introduces, delivers, or injects the anti-CSF3R antibody of any one of Examples 7 to 12 into the lung tissue in which pulmonary fibrosis has occurred. , and/or to administer.
  • Example 40 method limitation 2 - inhibition of CSF3R expression
  • Example 37 The method of Example 37, wherein the method blocks, reduces/decreases, inhibits, interrupts, and/or prevents the expression of the CSF3R. .
  • Example 40 the method introduces, delivers, or injects the CSF3R inhibitor of any one of Examples 13 to 17 into the lung tissue in which pulmonary fibrosis has occurred, and / or to administer (administer).
  • Example 42 method for inhibiting epithelial-mesenchymal transition
  • Interrupt, prevent, and/or reversal methods include:
  • Example 42 the restoration of the epithelial-mesenchymal transition mechanism means that the cells in which epithelial-mesenchymal transition occurred are restored to epithelial cells or fibroblasts.
  • Example 42 The method according to Example 42, wherein the method performs and/or induces by neutralizing the CSF3R.
  • Example 44 wherein the method introduces, delivers, or injects the anti-CSF3R antibody of any one of Examples 7 to 12 into the lung tissue in which pulmonary fibrosis has occurred. , and/or to administer.
  • Example 46 method limitation 2 - inhibition of CSF3R expression
  • Example 42 The method according to Example 42, wherein the method blocks, reduces/decreases, inhibits, interrupts, and/or prevents the expression of the CSF3R .
  • Example 46 wherein the method introduces, delivers, or injects the CSF3R inhibitor of any one of Examples 13 to 17 into the lung tissue in which pulmonary fibrosis has occurred, and / or to administer (administer).
  • anti-CSF3R antibody has one or more functions selected from:
  • Example 48 restoring the mechanism of epithelial-mesenchymal transition among the functions of the anti-CSF3R antibody is to restore cells undergoing epithelial-mesenchymal transition to epithelial cells or fibroblasts.
  • CSF3R inhibitor has a function selected from:
  • restoring epithelial-mesenchymal transition among the functions of the CSF3R inhibitor is restoring cells in which epithelial-mesenchymal transition has occurred to epithelial cells or fibroblasts.
  • Example 52 wherein the anti-CSF3R antibody has one or more functions selected from:
  • Example 54 restoration of epithelial-mesenchymal transition
  • Example 53 restoring the mechanism of epithelial-mesenchymal transition among the functions of the anti-CSF3R is restoring cells undergoing epithelial-mesenchymal transition to epithelial cells or fibroblasts.
  • Example 55 wherein the CSF3R inhibitor has one or more functions selected from:
  • Example 56 restoring the mechanism of epithelial-mesenchymal transition among the functions of the CSF3R inhibitor is to restore cells undergoing epithelial-mesenchymal transition to epithelial cells or fibroblasts.
  • Epithelial cell line Beas2B cells were cultured in RPMI Invitrogen medium supplemented with 10% fetal bovin serum (FBS).
  • FBS fetal bovin serum
  • Proteins were separated from the cells using lysis buffer [40 mM Tris-HCl (pH 8.0), 120 mM NaCl, 0.1% Nonidet-P40] with protease inhibitors added, SDS-PAGE and nitrocellulose membrane (Amersham, Arlington Heights , IL) to separate the protein.
  • lysis buffer 40 mM Tris-HCl (pH 8.0), 120 mM NaCl, 0.1% Nonidet-P40] with protease inhibitors added, SDS-PAGE and nitrocellulose membrane (Amersham, Arlington Heights , IL) to separate the protein.
  • Membranes were blocked with 5% non-fat dry milk (in Tris-buffered saline) and then reacted with primary antibodies at 4°C. After the membrane was reacted with a peroxidase-coupled secondary antibody, it was visualized using enhanced chemiluminescence (ECL, Amersham, Arlington, Heights, IL).
  • ECL enhanced chemiluminescence
  • Paraffin-embedded tissue was cut and paraffin was removed using xylene, 100%, 95%, 80%, and 70% ethanol.
  • the cut tissues were subjected to hematoxylin & eosin (H&E) staining, Sirius red staining (abc150681), and DAB staining.
  • H&E hematoxylin & eosin
  • Sirius red staining abc150681
  • DAB staining the primary antibody was reacted overnight at 4° C., and then the biotinylated secondary antibody and the ABC reagent (Vector Laboratories, USA) were reacted for 1 hour each.
  • Human lung interstitial fibrosis tissue microarray samples were purchased from US-Biomax (LC561), and the expression of CSF3R was analyzed by IHC.
  • GEO Gene expression omnibus
  • mice 100 mg/kg of bleomycin sulfate was intraperitoneally injected into male C57BL/6 mice four times (Days 1, 4, 7, and 10). After pulmonary fibrosis occurred, 250 ⁇ g/kg of neutralizing antibody was intraperitoneally injected four times (Day 12, 14, 16, and 18), and on day 21, the mice were sacrificed and lung tissues were extracted.
  • Hydroxyproline levels were assayed in mouse tissue lysates using a hydroxyproline assay kit (ab222941, abcam, UK). The experiment was conducted based on the manufacturer's instructions.
  • Protein A-agarose beads (Santa Cruz Biotechnology, Inc.). Protein A-agarose beads were washed with cold PBS, and precipitated proteins were analyzed by Western blotting.
  • the cells cultured on the coverslip were fixed with 4% paraformaldehyde and then permeabilized with a PBS solution containing 0.1% Triton X-100 and 10% fetal bovine serum. After overnight reaction using CSF3R antibody and STAT3 antibody as primary antibodies, PLA experiment was performed using Duolink Detection Kit (Sigma) product. Visualized via confocal microscopy.
  • a tissue microarray of a patient with idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) was analyzed for the expression of CSF3R through immunohistochemical staining (IHC), and as a result, it was observed that CSF3R was high in the tissue of a patient with pulmonary fibrosis (Fig. See the immunohistochemical staining result of 1 and the IHC score result of FIG. 2).
  • IHC immunohistochemical staining
  • the expression of CSF3R increased in idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) patient tissue than in normal lung tissue using the GEO dataset (see FIG. 3).
  • CSF3R can induce pulmonary fibrosis by regulating epithelial-mesenchymal transition (EMT) of lung epithelial cells.
  • EMT epithelial-mesenchymal transition
  • CSF3R neutralizing antibody was intraperitoneally injected into the BLM-induced pulmonary fibrosis mouse model four times.
  • a detailed CSF3R neutralizing antibody injection experiment plan is shown in FIG. 11 . It was observed through immunohistochemical staining that the symptoms of pulmonary fibrosis induced by BLM were alleviated in the group treated with CSF3R neutralizing antibody (see FIG. 12).
  • FIG. 13 collagen increased in lung tissue by BLM treatment was significantly decreased by treatment with CSF3R neutralizing antibody.
  • mice caused by BLM were recovered by CSF3R neutralizing antibody.
  • hair reduction in mice caused by BLM was restored by CSF3R neutralizing antibody.
  • the weight loss of mice caused by BLM was recovered by CSF3R neutralizing antibody.
  • EMT epithelial-mesenchymal transition
  • MMP matrix metalloproteinase
  • ECM extracellular matrix
  • CSF3R in pulmonary fibrosis
  • the treatment mechanism capable of treating pulmonary fibrosis by inhibiting the function or expression of CSF3R have been clarified in detail, and a therapeutic drug capable of treating the pulmonary fibrosis is further proposed.
  • the present invention is applicable to the industry in various forms, such as a therapeutic drug for pulmonary fibrosis, a pharmaceutical composition containing the same, a use of the therapeutic drug/pharmaceutical composition for treating pulmonary fibrosis, and/or a method for treating pulmonary fibrosis.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 명세서는 폐 섬유증(pulmonary fibrosis)의 바이오마커 및 치료 표적으로서 CSF3R(granulocyte colony-stimulating factor receptor 또는 colony-stimulating factor 3 receptor)의 새로운 용도에 관해 개시한다. 본 명세서에서는 상기 폐 섬유증에 대한 CSF3R이 관여된 치료기전, 치료방법, 치료약물, 및 상기 치료약물의 치료용도를 개시한다.

Description

폐 섬유증의 바이오마커 및 치료 표적으로서 CSF3R
본 발명은 폐섬유화증(pulmonary fibrosis)의 바이오마커 및 치료 표적으로서 CSF3R(granulocyte colony-stimulating factor receptor 또는 colony-stimulating factor 3 receptor)의 새로운 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 폐 조직 유래의 시료 중 CSF3R의 발현 수준을 측정하는 것을 포함하는 폐섬유화증 진단용 키트 및 폐섬유화증의 진단방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 CSF3R의 발현 또는 활성을 억제하는 물질을 포함하는 폐섬유화증 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
폐섬유화증(pulmonary fibrosis)이란 만성염증 세포들이 폐포에 침투하여 폐조직의 구조적 변화 및 섬유화를 유발하는 질환이다. 폐조직에 지속적인 자극이나 극심한 손상이 발생하여 만성염증 반응이 유발될 경우 폐 상피세포의 본래 기능을 잃게 되며, 손상 부위를 중심으로 콜라겐(collagen), 피브로넥틴(fibronectin) 등 세포외기질(extracellular matrix, ECM)이 축적됨에 따라 조직이 단단해지는 섬유화 현상을 겪게 된다. 폐조직이 단단해질 경우 가스교환이 원활히 이루어지지 못하게 되어 호흡곤란과 같은 증상을 유발하고, 이러한 증상은 환자의 삶의 질과 예후에 큰 영향을 미치게 된다.
폐섬유화증의 정확한 발병원인은 아직 규명되지 않았으나, 위험인자로는 흡연, 금속분진, 목재분진, 용매제 등으로 보고되어 있다.
폐섬유화증의 지속적인 유병률 증가로 인해 치료제 시장 규모는 매해 높은 성장률을 기록하고 있으나, 기존 치료제는 증상의 악화를 지연시키기만 할 뿐 완치가 불가능하다. 최근 Rangarajan, S.등은 경구용 당뇨병 치료제인 메트포르민(metformin)이 블레오마이신(Bleomycin, BLM) 유도 폐섬유화증 마우스 모델에서 폐섬유화 증상을 완화할 수 있다고 보고하였다(Rangarajan, S., et al.　Metformin reverses established lung fibrosis in a bleomycin model. Nat Med. 2018. 24, 1121-1127). 그러나 실제 임상시험에서는 유의한 결과를 얻지 못하였다.
또한 폐섬유증에서 항 TGF-β 치료요법을 진행하였을 때 높은 부작용과 낮은 치료효과가 나타났다는 연구 결과가 보고되었다(Varga, J. & Pasche, B. Antitransforming growth factor-beta therapy in fibrosis: recent progress and implications for systemic sclerosis. Current opinion in rheumatology. 2008. 20, 720-728). 다양한 장기의 섬유화 질환에서 공통적으로 발현하는 인자인 TGF-β를 표적으로 하는 다양한 연구가 보고되었으나, 상기 물질은 표적 인자 자체가 인체 내에서 다양한 신호를 조절할 뿐만 아니라 위장 증상 및 광과민성과 같은 부작용을 수반하기 때문에 약물 개발로서의 어려움이 있다.
현재 폐섬유화증 환자에게 사용되는 닌테다닙(nintedanib, Ofev)과 피르페니돈(pirfenidone, Esbriet) 두 가지 약물은 증상의 진행만 늦출 뿐 완치의 효과가 없고 많은 부작용을 수반한다. 특히, 폐섬유화증의 평균 생존기간은 3년 미만으로 보고되어 있고, 폐 이식을 제외한 효과적인 치료방법이 없다.
따라서 폐섬유화증에 대한 치료 표적을 발굴하고 이를 토대로 치료약물을 개발하는 것이 시급하다.
본 명세서에서는 폐 섬유증에 대한 신규 치료 표적을 발굴하는 것을 기술적 과제로 한다.
본 명세서에서는 폐 섬유증에 대한 치료약물을 제공하는 것을 기술적 과제로 한다.
본 명세서에서는 폐 섬유증에 대한 치료방법 및 그 치료기전을 제공하는 것을 기술적 과제로 한다.
본 명세서에서는 폐 섬유증에 대한 치료약물의 용도를 제공하는 것을 기술적 과제로 한다.
본 명세서에서는 다음을 포함하는 폐 섬유증 치료방법을 제공한다: 치료적으로 유효량의 항-CSF3R 항체를 치료가 필요한 환자에 투여하는 것, 여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직 내 축적된 세포외 기질의 분해를 촉진함.
일 실시예로, 상기 축적된 세포외 기질의 분해를 촉진하는 것은 Col1a1, OPN, VER, FN 및 Has3 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현량을 감소시키는 것일 수 있다.
일 실시예로, 상기 축적된 세포외 기질을 분해시키는 것은 축적된 콜라겐을 분해시키는 것일 수 있다.
일 실시예로, 상기 축적된 콜라겐의 분해는 다음 중 선택된 하나 이상으로 촉진될 수 있다: 상기 환자의 폐 조직 내 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)의 발현이 증가함; 및 상기 환자의 폐 조직 내 메탈로프로테이나제의 조직 저해제(TIMP)의 발현이 감소함.
일 실시예로, 상기 MMP는 MMP2, MMP9, 및 MMP13 중 선택된 하나 이상일 수 있다.
일 실시예로, 상기 TIMP는 TIMP-1, 및 TIMP-2 중 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 명세서에서는 다음을 포함하는 폐 섬유증 치료방법을 제공한다: 치료적으로 유효량의 항-CSF3R 항체를 치료가 필요한 환자에게 투여하는 것, 여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직 내에서 다음 중 선택된 기능을 수행함: 상기 환자의 폐 조직 내 세포의 CSF3R-매개 상피간엽이행을 억제하는 것; 및 상기 환자의 폐 조직 내 CSF3R-매개 상피간엽이행이 일어난 세포를 상피세포 또는 섬유아세포로 복구하는 것.
일 실시예로, 상기 CSF3R-매개 상피간엽이행을 억제하거나, CSF3R-매개 상피간엽이행이 일어난 세포를 복구하는 것은 다음 중 선택된 하나 이상일 수 있다: Fibronectin, Vimentin, N-cad, 및 ZEB1 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현을 감소시키는 것; 및 E-cad의 발현을 증가시키는 것.
일 실시예로, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직의 세포 내에서 STAT3가 CSF3R에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킬 수 있는 것이다.
일 실시예로, 상기 폐 섬유증은 특발성(idiopathic) 폐섬유화증, 폐염증성 섬유화 질환, 만성 폐쇄성 폐질환, 및 천식에서 나타나는 섬유화 질환 중 선택된 것일 수 있다.
본 명세서에서는 환자의 폐 섬유증을 치료하는 데 사용하기 위한 항-CSF3R 항체를 제공한다. 여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직 내에서 축적된 세포외 기질의 분해를 촉진할 수 있는 것이다.
일 실시예로, 상기 축적된 세포외 기질의 분해를 촉진하는 것은 Col1a1, OPN, VER, FN 및 Has3 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현량을 감소시키는 것일 수 있다.
일 실시예로, 상기 축적된 세포외 기질을 분해시키는 것은 축적된 콜라겐을 분해시키는 것일 수 있다.
일 실시예로, 상기 축적된 콜라겐의 분해는 다음 중 선택된 하나 이상으로 촉진될 수 있다: 상기 환자의 폐 조직 내 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)의 발현이 증가함; 및 상기 환자의 폐 조직 내 메탈로프로테이나제의 조직 저해제(TIMP)의 발현이 감소함.
일 실시예로, 상기 MMP는 MMP2, MMP9, 및 MMP13 중 선택된 하나 이상일 수 있다.
일 실시예로, 상기 TIMP는 TIMP-1, 및 TIMP-2 중 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 명세서에서는 환자의 폐 섬유증을 치료하는 데 사용하기 위한 위한 항-CSF3R 항체를 제공한다. 여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 다음 중 선택된 하나 이상의 기능을 할 수 있는 것이다: 상기 환자의 폐 조직 내에서 CSF3R-매개 상피간엽이행을 억제; 및 상기 환자의 폐 조직 내에서 CSF3R-매개 상피간엽이행이 일어난 세포를 상피세포 또는 섬유아세포로 복구.
일 실시예로, 상기 CSF3R-매개 상피간엽이행을 억제하는 것은 다음 중 선택된 하나 이상일 수 있다: Fibronectin, Vimentin, N-cad, 및 ZEB1 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현을 감소시키는 것; 및 E-cad의 발현을 증가시키는 것.
일 실시예로, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직의 세포 내에서 STAT3가 CSF3R에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킬 수 있는 것일 수 있다.
일 실시예로, 상기 폐 섬유증은 특발성(idiopathic) 폐섬유화증, 폐염증성 섬유화 질환, 만성 폐쇄성 폐질환, 및 천식에서 나타나는 섬유화 질환 중 선택된 것일 수 있다.
본 발명의 폐 섬유증 치료약물, 치료방법 및 그 기전에 따라, 폐 섬유증 환자를 효과적으로 치료할 수 있다.
도 1은 특발성 폐섬유화증(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF) 환자의 폐조직과 정상조직에서 CSF3R 발현을 면역조직화학염색법으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 특발성 폐섬유화증 환자의 폐조직과 정상조직에서 CSF3R 발현을 면역조직화학염색법으로 확인한 결과를 면역조직화학염색 스코어(IHC Score)로 나타낸 것이다.
도 3은 특발성 폐섬유화증 환자의 폐조직과 정상조직에서 CSF3R 발현을 GEO dataset으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 Bleomycin (BLM)-유도 특발성 폐섬유화증 마우스 모델의 폐조직에서 CSF3R 발현을 면역조직화학염색법으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 BLM-유도 특발성 폐섬유화증 마우스 모델의 폐조직에서 CSF3R 발현을 웨스턴 블롯으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 BLM-유도 특발성 폐섬유화증 마우스 모델의 폐조직에서 CSF3R 발현을 RT-qPCR로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 폐상피세포주 Beas-2b에 CSF3R 과발현시 세포외기질(ECM) 구성성분 및 상피간엽이행(EMT) 마커의 발현 증가를 RT-qPCR로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 폐상피세포주 Beas-2b에 CSF3R 과발현시 세포외기질(ECM) 구성성분 및 상피간엽이행(EMT) 마커의 발현 증가를 웨스턴 블롯으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 폐상피세포주 Beas-2b에 CSF3R 발현 저해시 BLM에 의한 세포외기질(ECM) 구성성분 및 상피간엽이행(EMT) 마커의 발현 유도가 억제되는 것을 RT-qPCR로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 폐상피세포주 Beas-2b에 CSF3R 발현 저해시 BLM에 의한 세포외기질(ECM) 구성성분 및 상피간엽이행(EMT) 마커의 발현 유도가 억제되는 것을 웨스턴 블롯으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 BLM-유도 폐섬유화증 마우스 모델에 CSF3R 중화항체 주입 실험 계획을 나타낸 것이다.
도 12는 CSF3R 중화항체 처리에 따른 폐섬유화증 치료 효과를 면역조직화학염색으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 13은 CSF3R 중화항체 처리에 따른 콜라겐 감소 효과를 하이드록시프롤린 분석(hydroxyproline assay)으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 14는 BLM에 의해 발생한 마우스의 모발 감소가 CSF3R 중화항체에 의해 회복되는 것을 보여주는 사진이다.
도 15는 BLM에 의해 발생한 마우스의 체중 감소가 CSF3R 중화항체에 의해 회복되는 것을 보여주는 그래프이다.
도 16은 CSF3R 중화항체를 주사한 마우스 그룹에서 상피간엽이행(EMT)의 마커 단백질의 감소를 면역조직화학염색법으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 17은 CSF3R 중화항체를 주사한 마우스 그룹에서 상피간엽이행(EMT)의 마커 단백질의 감소를 RT-qPCR로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 18은 BLM-유도 폐섬유화증 마우스 모델에서 BLM 처리에 의해 감소한 MMP2, MMP9, MMP13의 발현이 CSF3R 중화항체 처리에 의해 다시 증가하는 것을 보여주는 면역조직화학염색 결과를 나타낸 것이다.
도 19는 BLM-유도 폐섬유화증 마우스 모델에서 BLM 처리에 의해 감소한 MMP2, MMP9, MMP13의 발현 수준이 CSF3R 중화항체 처리에 의해 다시 증가하는 보여주는 그래프이다.
도 20은 BLM-유도 폐섬유화증 마우스 모델에서 BLM 처리에 의해 증가된 TIMP-1 및 TIMP-2의 발현이 CSF3R 중화항체 처리에 의해 정상 폐 조직 수준으로 감소하는 것을 보여주는 면역조직화학염색 결과를 나타낸 것이다.
도 21는 폐상피세포주 Beas-2b에 rh-CSF3을 처리하여 하위 신호경로 인자를 스크리닝한 결과를 나타낸 것이다.
도 22는 BLM에 의해 유도된 STAT3의 활성이 CSF3R의 발현을 저해함에 따라 함께 감소하는 것을 보여주는 웨스턴 블롯 결과를 나타낸 것이다.
도 23는 CSF3R과 STAT3가 직접적으로 결합하는 것을 보여주는 공동-면역침전(co-IP) 결과를 나타낸 것이다.
도 24는 CSF3R과 STAT3가 직접적으로 결합하는 것을 보여주는 in situ PLA 아세이 결과를 나타낸 것이다.
도 25는 CSF3R과 STAT3가 직접적으로 결합하는 것을 보여주는 in situ PLA 아세이 결과를 나타낸 것이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여, 발명의 내용을 특정한 구현예와 예시들을 통해 더욱 상세하게 설명한다. 상기 첨부된 도면은 발명의 일부 구현예를 포함하지만, 모든 구현예를 포함하고 있지는 않다는 점에 유의해야 한다. 본 명세서에 의해 개시되는 발명의 내용은 다양하게 구현될 수 있으며, 여기에 설명되는 특정 구현예로 제한되지 않는다. 이러한 구현예들은 본 명세서에 적용되는 법적 요건을 만족시키기 위해 제공되는 것으로 보아야 한다. 본 명세서에 개시된 발명이 속한 기술분야에 있어 통상의 기술자라면, 본 명세서에 개시된 발명의 내용에 대한 많은 변형 및 다른 구현예들을 떠올릴 수 있을 것이다. 따라서, 본 명세서에서 개시된 발명의 내용은 여기에 기재된 특정 구현예로 제한되지 않으며, 이에 대한 변형 및 다른 구현예들도 청구범위 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명자들은 폐섬유화증 환자 및 BLM-유도 폐섬유화증 마우스 모델에서 CSF3R의 발현이 높게 나타난다는 것을 확인한바, CSF3R이 폐섬유화증의 진단을 위한 바이오마커로서 사용될 수 있음을 제시한다. 또한, 본 발명자들은 폐섬유화증에서 발현이 증가한 CSF3R을 표적 항체로 저해하였을 때 알파-근섬유화구성단백질, 콜라겐 및 상피간엽이행(epithelial to mesenchymal transition, EMT) 표지 인자가 유의적으로 감소하는 것을 확인한바, CSF3R이 폐섬유화증의 효과적인 치료 표적으로 작용할 수 있음을 제시한다.
구체적으로, 본 발명자들은 인간 조직 마이크로어레이(human tissue microarray), GEO database, 및 BLM 유도 폐섬유화증 마우스 모델을 이용하여 정상 폐조직보다 폐섬유화증 조직에서 CSF3R의 발현이 높게 나타나는 것을 관찰하였다.
또한 H&E 염색으로 폐조직의 변화를 확인하고, 면역조직화학염색으로 폐섬유화증 및 상피간엽이행의 마커 발현을 비교하는 실험을 진행하였으며, BLM 유도 폐섬유화증 마우스 모델에 CSF3R 표적 항체를 복강 내 처리하였을 때 폐섬유화증의 치료효과가 나타나는 것을 검증하였다.
결론적으로, CSF3R은 폐섬유화증의 진단을 위한 바이오마커 및 폐섬유화증의 치료를 위한 신규 표적이 될 수 있으며, CSF3R의 발현 또는 활성을 억제함으로써 폐섬유화증을 치료할 수 있다.
위의 발견들에 기초하여, 일 측면에서, 본 발명은 폐 조직 유래의 시료 중 CSF3R의 발현 수준을 측정하기 위한 시약을 포함하는 폐섬유화증 진단용 키트에 관한 것이다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 폐 조직 유래의 시료 중 CSF3R의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는 폐섬유화증의 진단을 위한 정보제공방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 폐섬유화증 진단용 키트 및 폐섬유화증의 진단을 위한 정보제공방법에 있어서, 폐 조직 유래의 시료 중 CSF3R의 발현 수준이 정상 대조군 보다 높은 경우 폐 조직 유래의 시료는 폐섬유화증인 것으로 판정할 수 있다.
본 발명에 있어서, "폐섬유화증(pulmonary fibrosis)"은 폐 조직이 굳어서 심각한 호흡 장애를 불러일으키는 호흡기 질환이며, 폐가 굳는다고 하는 것은 섬유질 결합 조직의 과다 누적을 의미하며 이 과정을 섬유화라고 한다. 섬유화가 진행되면 폐 벽이 두꺼워져 혈액에 공급되는 산소량이 줄어들어 결과적으로 환자는 지속적으로 숨 가쁨을 느끼게 되며 섬유화가 진행된 폐 조직을 복구할 수 있는 방법은 없는 것으로 보고된다. 일 구현예에서, 폐섬유화증은 특발성(idiopathic) 폐섬유화증, 폐염증성 섬유화 질환, 만성 폐쇄성 폐질환, 또는 천식에서 나타나는 섬유화 질환일 수 있다. 구체적으로, 폐섬유화증은 특발성 폐섬유화증일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "진단(diagnosis)"이란, 넓은 의미로는 환자의 병의 실태를 모든 면에 걸쳐서 판단하는 것을 의미한다. 판단의 내용은 병명, 병인, 병형, 경중, 병상의 상세한 양태 및 합병증의 유무 등이다. 본 발명에서 진단은 폐섬유화증의 발병 여부 및 진행단계 수준 등을 판단하는 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "폐섬유화증의 진단을 위한 정보제공방법"이란 진단 또는 예후 예측을 위한 예비적 단계로써 폐섬유화증 진단을 위하여 필요한 객관적인 기초정보를 제공하는 것이며 의사의 임상학적 판단 또는 소견은 제외된다.
본 발명에 있어서, 폐 조직 유래의 시료 중 CSF3R의 발현 수준을 측정하는 것은 CSF3R 유전자의 mRNA 수준을 측정하거나 또는 상기 유전자가 암호화하는 CSF3R 단백질 수준을 측정하는 것을 포함한다.
본 발명에서 mRNA 발현 수준을 측정하는 방법은 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Realtime RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting), DNA 칩 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 단백질의 발현 수준을 측정하는 방법은 웨스턴 블랏, ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질 칩(protein chip) 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 CSF3R의 발현 또는 활성을 억제하는 물질을 포함하는 폐섬유화증 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다. 일 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 폐세포의 알파-근섬유화구성단백질(α-Smooth Muscle Actin, α-SMA)의 발현을 억제할 수 있다. 다른 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 폐조직 내 콜라겐을 포함하는 세포외 기질의 발현을 억제할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 폐상피세포의 상피간엽이행(epithelial to mesenchymal transition, EMT)을 억제할 수 있다. 구체적으로, 상기 상피간엽이행의 억제는 피브로넥틴(Fibronectin, FN), 비멘틴(Vimentin, VIM), N-cad 및 ZEB1으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 1종 이상의 단백질의 발현을 억제, 및/또는 E-cad 발현을 증가하는 것일 수 있다.
이와 같이, 본 발명의 약제학적 조성물은 폐세포의 알파-근섬유화구성단백질(α-SMA)의 발현을 억제하고, 폐조직 내 콜라겐의 발현을 억제하고/하거나, 폐상피세포의 상피간엽이행을 억제 및/또는 복구함으로써 궁극적으로 세포외기질 구성 물질의 축적을 감소시켜 폐섬유화증을 효과적으로 치료할 수 있다.
본 발명에 있어서, "상피간엽이행(epithelial mesenchymal transition)"은 상피세포가 세포의 극성 및 세포 간 부착성을 잃고, 이동상 및 침습성을 얻음으로써 간엽 줄기세포가 되는 과정을 의미하며, 이들은 다양한 세포 유형으로 분화할 수 있는 다능성 기질세포(stromal cell)이다. 상피 간엽 이행은 중배엽 형성과 신경관 형성을 포함한 수많은 발달 과정에 필수적이며, 상처 치유, 장기 섬유화증 및 암 전이 과정에서 관찰된다. 따라서 폐상피세포의 상피간엽이행을 억제 및/또는 복구함으로써 폐섬유화증을 치료할 수 있다.
본 발명에 따른 폐섬유화증 치료용 약제학적 조성물에 있어서, CSF3R의 발현 또는 활성을 억제하는 물질은 CSF3R siRNA, CSF3R shRNA, CSF3R 안티센스 핵산, 가이드 RNA(gRNA)와 CRISPR/Cas9, 항-CSF3R 소분자 화합물 또는 항-CSF3R 항체일 수 있다.
구체적으로, CSF3R의 발현을 억제하는 물질로는 CSF3R의 mRNA에 특이적으로 결합할 수 있는 CSF3R siRNA, CSF3R shRNA, CSF3R 안티센스 핵산, 가이드 RNA(gRNA)와 CRISPR/Cas9 등이 있다. 또한 CSF3R의 활성을 억제하는 물질로는 CSF3R에 특이적으로 결합하여 활성을 억제하는 항-CSF3R 소분자 화합물 또는 항-CSF3R 항체 등이 있다.
일 구현예에서, 폐섬유화증에서 CSF3R의 발현을 억제하는 유전학적 방법으로서, CSF3R 유전자를 표적으로 하는 siRNA, shRNA 또는 안티센스 핵산을 다양한 운반체를 이용하거나 직접 폐섬유화증 조직에 도입하여 CSF3R의 발현을 억제할 수 있다. 또는 CSF3R 유전자를 표적으로 하는 가이드 RNA(gRNA)와 CRISPR/Cas9을 폐섬유화증 조직에 도입하여 CSF3R 유전자를 결손 또는 억제시킬 수 있다. 또는 CSF3R 유전자를 표적으로 하는 CRISPR/dCas9 기반 전사 억제자를 폐섬유화증 조직에 도입하여 CSF3R 유전자의 발현을 억제시킬 수 있다.
일 구현예에서, 폐섬유화증 세포에서 CSF3R의 발현을 억제하는 약리학적 방법으로서, CSF3R의 전사를 억제하는 소분자 화합물을 폐섬유화증 조직에 주입하여 CSF3R 유전자의 발현을 억제시킬 수 있다.
일 구현예에서, 폐섬유화증 세포에서 CSF3R의 활성을 억제하는 약리학적 방법으로서, CSF3R의 활성을 억제하는 소분자 화합물을 폐섬유화증 조직에 주입하여 CSF3R의 활성을 억제시킬 수 있다.
siRNA(small interfering RNA)는 특정 mRNA의 절단을 통하여 RNAi(RNA 간섭) 현상을 유도할 수 있는 짧은 이중사슬 RNA를 의미한다. 표적 유전자의 mRNA와 상동인 서열을 가지는 센스 RNA 가닥과 이와 상보적인 서열을 가지는 안티센스 RNA 가닥으로 구성된다. siRNA는 표적 유전자의 발현을 억제할 수 있기 때문에 효율적인 유전자 녹다운 방법으로서 또는 유전자 치료의 방법으로 제공될 수 있다.
shRNA(short hairpin RNA 또는 small hairpin RNA)는 siRNA의 고가의 생합성 비용, 낮은 세포 형질감염 효율로 인한 RNA 간섭 효과의 단시간 유지 등의 단점을 극복하기 위한 것으로 RNA 중합효소 ²의 프로모터로부터 아데노 바이러스, 렌티 바이러스 및 플라스미드 발현 벡터 시스템을 이용하여 이를 세포 내로 도입하여 발현시킬 수 있으며, 이러한 shRNA는 세포 내에 존재하는 siRNA 프로세싱 효소(Dicer or Rnase ²에 의해 정확한 구조를 갖는 siRNA로 전환되어 목적 유전자의 사일런싱을 유도함이 널리 알려져 있다.
안티센스 핵산은 특정 mRNA 의 서열에 상보적인 핵산 서열을 함유하고 있는 DNA 또는 RNA 또는 이들의 유도체를 의미하고, mRNA 내의 상보적인 서열에 결합하여 mRNA의 단백질로의 번역, 세포질 내로의 전위(translocation), 성숙(maturation) 또는 다른 모든 전체적인 생물학적 기능에 대한 필수적인 활성을 저해할 수 있다.
CSF3R에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는 단일클론항체 및 이에 대한 키메라 항체, 인간화 항체 및 인간 항체를 모두 포함하는 것이고, 신규한 항체 외에 이미 당해 기술분야에서 공지된 항체들도 포함될 수 있다. 상기 항체는 CSF3R에 특이적으로 결합하는 한, 2개의 중쇄와 2개의 경쇄의 전체 길이를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라, 항체 분자의 기능적인 단편을 포함한다. 항체의 분자의 기능적인 단편은 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab')2 및 Fv 등이 있다.
CSF3R의 발현 또는 활성을 억제하는 물질을 폐섬유화증 세포에 주입하는 방법으로는 리포좀이나 유전공학적 기술인 벡터 시스템을 이용하는 방법 등 다양한 형태로 구현될 수 있다. 또는, 약제의 제제 형태로 제조하여 통상적인 방식으로 체내에 투여하는 방법이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 사이클로덱스트린, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 리포좀 등을 포함하지만 이에 한정되지 않으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액 등 다른 통상의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제, 윤활제 등을 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립, 또는 정제로 제제화할 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제화에 관해서는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th edition, 1995) 에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 제형에 특별한 제한은 없으나 주사제, 흡입제, 피부 외용제, 또는 경구 섭취제 등으로 제제화할 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 피부, 비강, 기도에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 치료적 유효량으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "치료적 유효량"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
구체적으로, 본 발명에 따른 조성물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1 kg 당 0.001 내지 150 mg, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 폐섬유화증의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
한편, 본 발명자들은 BLM 처리에 의해 유도된 폐섬유화증이 CSF3R 중화항체에 의해 정상 폐조직으로 회복되는 기전을 규명하기 위해, 세포외기질(ECM) 분해와 관련된 매트릭스 메탈로프로테이나제(matrix metalloproteinase, MMP) 및 메탈로프로테이나제의 조직 저해제(tissue inhibitors of metalloproteinase, TIMP)의 발현을 분석하였다. 그 결과, 후술하는 실시예에서 확인되는 바와 같이, BLM-유도 폐섬유화증 마우스 모델에서 CSF3R 중화항체가 MMP(MMP2, MMP9, MMP13 등) 및 TIMP(TIMP-1, TIMP-2 등)의 발현 조절을 통해 폐섬유화증의 치료효과를 보임을 규명하였다. 또한, 본 발명자들은 CSF3R에 의한 폐상피세포주의 상피간엽이행(EMT)을 유도하는 하위 신호기전의 주요 인자가 STAT3인 것을 추가로 규명하였다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 폐섬유화증 치료용 약물을 스크리닝하는 방법에 관한 것이다:
(1) 대상체 유래의 폐섬유화증 세포에 후보물질을 처리하는 단계;
(2) 상기 세포에서 CSF3R의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
(3) 후보물질 비처리군에 비해 CSF3R의 발현 수준을 감소시키는 물질을 치료용 약물로 선정하는 단계.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 상기 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 폐섬유화증의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 폐섬유화증을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료"란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 폐섬유화증에 대한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 "대상체"란 질병의 예방 또는 치료방법을 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는, 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 쥐(rat), 개, 고양이, 말 및 소 등의 포유류를 의미한다.
추가적으로, 본 발명은 CSF3R을 폐 섬유증의 진단을 위한 바이오마커 및 신규 치료 표적으로써 제시한다.
구체적으로, 본 발명은 폐 조직 유래의 시료 중 CSF3R의 발현 수준을 측정하기 위한 시약을 포함하는 폐 섬유증 진단 키트를 제공한다.
또한 본 발명은 폐 조직 유래의 시료 중 CSF3R의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는 폐 섬유증의 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.
또한 본 발명은 CSF3R의 발현 또는 활성을 억제하는 물질을 포함하는 폐 섬유증 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 하기 단계를 포함하는 폐 섬유증 치료용 약물을 스크리닝하는 방법을 제공한다:
(1) 대상체 유래의 폐 섬유증 세포에 후보물질을 처리하는 단계;
(2) 상기 세포에서 CSF3R의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
(3) 후보물질 비처리군에 비해 CSF3R의 발현 수준을 감소시키는 물질을 치료용 약물로 선정하는 단계.
발명의 가능한 실시예
이하 본 명세서에서 제공하는 발명의 가능한 실시예들을 나열한다. 본 단락에서 제공하는 이하의 실시예들은 단지 발명의 일 예시에 해당될 뿐이다. 따라서, 본 명세서에서 제공하는 발명을 하기 실시예로 제한하여 해석할 수 없다. 실시예 번호와 함께 기재된 간략한 설명 또한, 각 실시예 간 구분의 편의를 위한 것일 뿐 본 명세서에서 개시하는 발명에 대한 제한으로 해석될 수 없다.
폐 섬유증
실시예 1, 폐 섬유증
폐 섬유증(pulmonary fibrosis).
실시예 2, 폐 섬유증 세분화
실시예 1에 있어서, 상기 폐 섬유증은 특발성(idiopathic) 폐섬유화증, 폐염증성 섬유화 질환, 만성 폐쇄성 폐질환, 및 천식에서 나타나는 섬유화 질환 중 선택된 것임.
실시예 3, 폐 섬유증 원인
실시예 1 내지 실시예 2 중 어느 하나에 있어서, 상기 폐 섬유증은 블레오마이신 유도 폐섬유화증, 또는 방사선 유도 폐 섬유증임.
실시예 4, CSF3R 발현
실시예 1 내지 실시예 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 폐 섬유증 환자의 폐 조직 내 CSF3R이 정상인 사람의 폐 조직 내 CSF3R과 비교하여 발현량이 증가된 것을 특징으로 하는 폐 섬유증.
실시예 5, 세포외 기질 분해 관련 마커 발현
실시예 1 내지 실시예 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 폐 섬유증 환자의 폐 조직에서 Col1a1, OPN, VER, FN 및 Has3 중 선택된 마커의 발현이 정상 폐 조직보다 증가된 것을 특징으로 하는 폐 섬유증.
실시예 6, 상피간엽이행 관련 마커 발현
실시예 1 내지 실시예 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 폐 섬유증 환자의 폐 조직에서 N-cad, FN, VIM, ZEB1, Snail, Slug 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현이 정상 폐 조직보다 증가되고, 및/또는 E-cad의 발현이 정상 폐 조직보다 감소된 것을 특징으로 하는 폐 섬유증.
치료물질 1 - 항-CSF3R 항체
실시예 7, 항-CSF3R 항체
항-CSF3R 항체.
실시예 8, 중화항체
실시예 7에 있어서, 상기 항-CSF3R 항체는 CSF3R에 대한 중화항체임.
실시예 9, CSF3-CSF3R 결합 방해
실시예 7 내지 실시예 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-CSF3R 항체는 CSF3 및 CSF3R의 결합을 차단하거나(block), 방해하거나(interrupt), 억제하거나(inhibit), 및/또는 예방하는(prevent) 것을 특징으로 함.
실시예 10, CSF3R 서열특정
실시예 7 내지 실시예 9 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-CSF3R 항체는 MARLGNCSLTWAALIILLLPGSLEECGHISVSAPIVHLGDPITASCIIKQNCSHLDPEPQILWRLGAELQPGGRQQRLSDGTQESIITLPHLNHTQAFLSCCLNWGNSLQILDQVELRAGYPPAIPHNLSCLMNLTTSSLICQWEPGPETHLPTSFTLKSFKSRGNCQTQGDSILDCVPKDGQSHCCIPRKHLLLYQNMGIWVQAENALGTSMSPQLCLDPMDVVKLEPPMLRTMDPSPEAAPPQAGCLQLCWEPWQPGLHINQKCELRHKPQRGEASWALVGPLPLEALQYELCGLLPATAYTLQIRCIRWPLPGHWSDWSPSLELRTTERAPTVRLDTWWRQRQLDPRTVQLFWKPVPLEEDSGRIQGYVVSWRPSGQAGAILPLCNTTELSCTFHLPSEAQEVALVAYNSAGTSRPTPVVFSESRGPALTRLHAMARDPHSLWVGWEPPNPWPQGYVIEWGLGPPSASNSNKTWRMEQNGRATGFLLKENIRPFQLYEIIVTPLYQDTMGPSQHVYAYSQEMAPSHAPELHLKHIGKTWAQLEWVPEPPELGKSPLTHYTIFWTNAQNQSFSAILNASSRGFVLHGLEPASLYHIHLMAASQAGATNSTVLTLMTLTPEGSELHIILGLFGLLLLLTCLCGTAWLCCSPNRKNPLWPSVPDPAHSSLGSWVPTIMEEDAFQLPGLGTPPITKLTVLEEDEKKPVPWESHNSSETCGLPTLVQTYVLQGDPRAVSTQPQSQSGTSDQVLYGQLLGSPTSPGPGHYLRCDSTQPLLAGLTPSPKSYENLWFQASPLGTLVTPAPSQEDDCVFGPLLNFPLLQGIRVHGMEALGSF(서열번호 1)의 아미노산 서열로 표현되는 CSF3R 단백질에 결합하는 것을 특징으로 함.
실시예 11, CSF3R-CSF3 결합부 특정
실시예 10에 있어서, 상기 항-CSF3R 항체는 CSF3R 단백질 중 다음 중 선택되는 영역의 전부 또는 일부에 결합하는 것을 특징으로 함:
서열번호 1의 아미노산 서열 중 190번째 아르기닌(Arginine) 내지 196번째 타이로신(Tyrosine)을 포함하는 영역; 및
서열번호 1의 아미노산 서열 중 261번째 히스티딘(Histidine) 내지 314번째 류신(Leusine)을 포함하는 영역.
실시예 12, CSF3R-CSF3 결합 아미노산 특정
실시예 11에 있어서, 상기 항-CSF3R 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열 중 190번째 아르기닌(Arginine), 194번째 류신(Leusine), 195번째 류신(Leusine), 196번째 타이로신(Tyrosine), 261번째 히스티딘(Histidine), 262번째 이소류신(Isoleucine), 263번째 아스파라긴(Asparagine), 및 314번째 류신(Leusine) 중 선택된 하나 이상의 아미노산에 결합하는 것을 특징으로 함.
치료물질 2 - CSF3R 억제제
실시예 13, CSF3R 억제 핵산
CSF3R siRNA, CSF3R shRNA, CSF3R 안티센스 핵산 중 선택되는 CSF3R 억제제.
실시예 14, CSF3R의 mRNA에 특이적으로 결합
실시예 13에 있어서, 상기 CSF3R 억제제는 CSF3R 유전자의 mRNA에 특이적으로 결합하는 핵산인 것을 특징으로 함.
실시예 15, CSF3R 억제 CRISPR/Cas
CSF3R 유전자를 표적으로 하는 CRISPR/Cas 조성물로 다음을 포함함:
Cas 단백질, 또는 상기 Cas 단백질을 암호화하는 핵산; 및
CSF3R 유전자를 표적으로 하는 가이드 RNA, 또는 상기 가이드 RNA를 암호화하는 핵산.
실시예 16, Cas 종류 한정
실시예 15에 있어서, 상기 Cas 단백질은 Cas9 단백질, 또는 Cas12a (Cpf1) 단백질임.
실시예 17, Cas 기능 한정
실시예 15 내지 실시예 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 Cas 단백질은 nickase 활성을 가지거나, 핵산 절단 활성이 없는(dead-form) 것을 특징으로 함.
약제학적 조성물
실시예 18, 약제학적 조성물
다음을 포함하는, 실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증을 치료하기 위한 약제학적 조성물:
치료적으로 유효량의, 실시예 7 내지 실시예 12 중 어느 하나의 항-CSF3R 항체 및/또는 실시예 13 내지 실시예 17 중 어느 하나의 CSF3R 억제제; 및
약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 어쥬번트(adjuvant).
실시예 19, 담체 한정
실시예 18에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 다음 중 선택된 하나 이상임:
식염수; 멸균수; 링거액; 완충 식염수; 사이클로덱스트린; 덱스트로즈 용액; 말토덱스트린 용액; 글리세롤; 에탄올; 리포좀; 및 항산화제, 완충액 등의 첨가제.
치료기전 1 - 세포외 기질 분해 기전
실시예 20, 세포외 기질 분해
세포외 기질 분해 기전(mechanism).
실시예 21, 세포외 기질 분해, CSF3R 억제와 관련됨
실시예 20에 있어서, 상기 세포외 기질 분해 기전 CSF3R-매개 세포외 기질 분해 기전임.
실시예 22, 콜라겐 분해
실시예 20 내지 실시예 21 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 기질은 콜라겐을 포함하는 것을 특징으로 하는 세포외 기질 분해 기전.
실시예 23, 축적된 콜라겐 분해
실시예 22에 있어서, 상기 콜라겐은 조직 내 축적된 콜라겐인 것을 특징으로 함.
실시예 24, 세포외 기질 분해 관련 마커
실시예 20 내지 실시예 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 기질 분해 기전은 Col1a1, OPN, VER, FN 및 Has3 중 선택된 마커의 발현이 차단되거나(block), 감소되거나(reduce/decrease), 억제되거나(inhibit), 방해되거나(interrupt), 및/또는 막히는(prevent) 것임.
실시예 25, MMP, TIMP
실시예 20 내지 실시예 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 기질 분해 기전은 다음 중 선택된 하나 이상이 촉진되거나(promoted), 활성화되거나(activated), 촉발되거나(triggered), 유도되거나(induced) 및/또는 원인되어(caused) 작동하는 것을 특징으로 함:
매트릭스 메탈로프로테이나제(matrix metalloproteinase, MMP) 발현량의 증가; 및
메탈로프로테이나제의 조직 저해제(tissue inhibitors of metalloproteinase, TIMP) 발현량의 감소.
실시예 26, MMP 추가한정
실시예 25에 있어서, 상기 매트릭스 메탈로프로테이나제는 MMP2, MMP9, 및 MMP13 중 선택된 하나 이상임.
실시예 27, TIMP 추가한정
실시예 25 내지 실시예 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 메탈로프로테이나제의 조직 저해제는 TIMP-1 및 TIMP-2 중 선택된 하나 이상임.
치료기전 2 - 상피간엽이행 기전
실시예 28, 상피간엽이행 억제
CSF3R-매개 상피간엽이행 기전(mechanism).
실시예 29, 상피간엽이행 관련 마커
실시예 28에 있어서, 상기 CSF3R-매개 상피간엽이행 기전은 다음중 선택된 하나 이상에 의해 발생하는 것임:
N-cad, FN, VIM, ZEB1, Snail, Slug 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현 증가; 및
E-cad의 발현 감소.
실시예 30, 하위기전 1 - CSF3-CSF3R 결합
실시예 28 내지 실시예 29 중 어느 하나에 있어서, 상기 CSF3R-매개 상피간엽이행 기전은 CSF3 및 CSF3R이 결합하여 촉진되거나(promote), 활성화되거나(activate), 촉발되거나(trigger), 유도되거나(induce) 및/또는 원인된(cause) 것임.
실시예 31, 하위기전 2 - CSF3R-STAT3 결합
실시예 28 내지 실시예 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 CSF3R-매개 상피간엽이행 기전은 CSF3R 및 STAT3가 결합하여 촉진되거나(promote), 활성화되거나(activate), 촉발되거나(trigger), 유도되거나(induce) 및/또는 원인된(cause) 것임.
실시예 32, 하위기전 3 - CSF3>CSF3R>STAT3 신호기전
실시예 28 내지 실시예 31 중 어느 하나에 있어서, 상기 CSF3R-매개 상피간엽이행 기전은 다음에 의해 촉진되거나(promote), 활성화되거나(activate), 촉발되거나(trigger), 유도되거나(induce) 및/또는 원인된(cause) 것임: CSF3 및 CSF3R이 결합하여 활성화됨; 및 상기 활성화된 CSF3R 및 STAT3가 결합하여 활성화됨.
폐 섬유증 치료방법
실시예 33, 폐 섬유증 치료방법 1 - 세포외 기질 분해
실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증 치료방법으로, 다음을 포함함:
실시예 7 내지 실시예 12 중 어느 하나의 항-CSF3R 항체, 또는 실시예 13 내지 실시예 17 중 어느 하나의 CSF3R 발현 억제제를 상기 폐 섬유증 환자에게 투여하거나(administer), 주입하거나(inject), 및/또는 상기 환자의 폐 조직에 전달(deliver)하는 것,
여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 폐 섬유증 환자의 폐 조직 내에서 실시예 20 내지 실시예 27 중 어느 하나의 세포외 기질 분해 기전을 촉진하거나(promote), 활성화하거나(activate), 촉발하거나(trigger), 유도하거나(induce) 및/또는 일으킴(cause).
실시예 34, 폐 섬유증 치료방법 2 - 상피간엽이행 억제/복구
실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증 치료방법으로, 다음을 포함함:
실시예 7 내지 실시예 12 중 어느 하나의 항-CSF3R 항체, 또는 실시예 13 내지 실시예 17 중 어느 하나의 CSF3R 발현 억제제를 상기 폐 섬유증 환자에게 투여하거나(administer), 주입하거나(inject), 및/또는 상기 환자의 폐 조직에 전달(deliver)하는 것,
여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 폐 섬유증 환자의 폐 조직 내에서 실시예 28 내지 실시예 32 중 어느 하나의 상피간엽이행 기전을 차단하거나(block), 억제하거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 예방하거나(prevent), 및/또는 복구함(reversal).
실시예 35, 폐 섬유증 치료방법 3 - 치료기전 조합
실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증 치료방법으로, 다음을 포함함:
실시예 7 내지 실시예 12 중 어느 하나의 항-CSF3R 항체, 또는 실시예 13 내지 실시예 17 중 어느 하나의 CSF3R 발현 억제제를 상기 폐 섬유증 환자에게 투여하거나(administer), 주입하거나(inject), 및/또는 상기 환자의 폐 조직에 전달(deliver)하는 것,
여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 폐 섬유증 환자의 폐 조직 내에서 실시예 28 내지 실시예 32 중 어느 하나의 상피간엽이행 기전을 차단하거나(block), 억제하거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 예방하거나(prevent) 및/또는 복구하며(reversal), 실시예 20 내지 실시예 27 중 어느 하나의 콜라겐 제거 기전을 촉진하거나(promote), 활성화하거나(activate), 촉발하거나(trigger), 유도하거나(induce) 및/또는 일으킴(cause).
실시예 36, 상피간엽이행 복구
실시예 34 내지 실시예 35 중 어느 하나에 있어서, 상기 상피간엽이행 기전을 복구하는 것은 상피간엽이행이 발생한 세포가 상피세포 또는 섬유아세포로 복구되는 것을 의미함.
세포외 기질 분해 방법
실시예 37, 세포외 기질 분해 촉진 방법
실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증이 발생한 폐 조직에서 실시예 20 내지 실시예 27 중 어느 하나의 세포외 기질 분해 기전을 촉진하거나(promote), 활성화하거나(activate), 촉발하거나(trigger), 유도하거나(induce) 및/또는 일으키는 방법(cause)으로, 다음을 포함함:
CSF3R의 기능 또는 CSF3R의 발현을 차단하거나(block), 감소시키거나(reduce/decrease), 억제시키거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 및/또는 막는(prevent) 것.
실시예 38, 방법 한정 1 - CSF3R 중화
실시예 37에 있어서, 상기 방법은 상기 CSF3R을 중화시킴으로써 수행되거나(perform) 및/또는 유도되는 것(induce)임.
실시예 39, 항체 사용
실시예 38에 있어서, 상기 방법은 실시예 7 내지 실시예 12 중 어느 하나의 항-CSF3R 항체를 상기 폐 섬유증이 발생한 폐 조직에 도입하거나(introduce), 전달하거나(deliver), 주입하거나(inject), 및/또는 투여하는(administer) 것임.
실시예 40, 방법 한정 2 - CSF3R 발현 저해
실시예 37에 있어서, 상기 방법은 상기 CSF3R의 발현을 차단하거나(block), 감소시키거나(reduce/decrease), 억제시키거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 및/또는 막는(prevent) 것임.
실시예 41, CSF3R 억제제 사용
실시예 40에 있어서, 상기 방법은 실시예 13 내지 실시예 17 중 어느 하나의 CSF3R 억제제를 상기 폐 섬유증이 발생한 폐 조직에 도입하거나(introduce), 전달하거나(deliver), 주입하거나(inject), 및/또는 투여하는(administer) 것임.
상피간엽이행 억제/복구 방법
실시예 42, 상피간엽이행 억제 방법
실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증이 발생한 폐 조직에서, 실시예 28 내지 실시예 32 중 어느 하나의 상피간엽이행 기전을 차단하거나(block), 억제하거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 예방하거나(prevent), 및/또는 복구하는(reversal) 방법으로 다음을 포함함:
CSF3R의 기능 또는 CSF3R의 발현을 차단하거나(block), 감소시키거나(reduce/decrease), 억제시키거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 및/또는 막는(prevent) 것.
실시예 43, 상피간엽이행 복구
실시예 42에 있어서, 상기 상피간엽이행 기전의 복구는 상피간엽이행이 발생한 세포가 상피세포 또는 섬유아세포로 복구되는 것을 의미함.
실시예 44, 방법 한정 1 - CSF3R 중화
실시예 42에 있어서, 상기 방법은 상기 CSF3R을 중화시킴으로써 수행되거나(perform) 및/또는 유도되는 것(induce)임.
실시예 45, 항체 사용
실시예 44에 있어서, 상기 방법은 실시예 7 내지 실시예 12 중 어느 하나의 항-CSF3R 항체를 상기 폐 섬유증이 발생한 폐 조직에 도입하거나(introduce), 전달하거나(deliver), 주입하거나(inject), 및/또는 투여하는(administer) 것임.
실시예 46, 방법 한정 2 - CSF3R 발현 저해
실시예 42에 있어서, 상기 방법은 상기 CSF3R의 발현을 차단하거나(block), 감소시키거나(reduce/decrease), 억제시키거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 및/또는 막는(prevent) 것임.
실시예 47, CSF3R 억제제 사용
실시예 46에 있어서, 상기 방법은 실시예 13 내지 실시예 17 중 어느 하나의 CSF3R 억제제를 상기 폐 섬유증이 발생한 폐 조직에 도입하거나(introduce), 전달하거나(deliver), 주입하거나(inject), 및/또는 투여하는(administer) 것임.
치료물질의 용도 1
실시예 48, 항체의 용도
실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증 치료를 위한 실시예 7 내지 실시예 12 중 어느 하나의 항-CSF3R 항체의 용도,
여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 다음 중 선택된 하나 이상의 기능을 가짐:
실시예 20 내지 실시예 27 중 어느 하나의 세포외 기질 분해 기전을 촉진하거나(promote), 활성화하거나(activate), 촉발하거나(trigger), 유도하거나(induce) 및/또는 일으킴(cause);
실시예 28 내지 실시예 32 중 어느 하나의 상피간엽이행 기전을 차단하거나(block), 억제하거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 예방하거나(prevent), 및/또는 복구함(reversal).
실시예 49, 상피간엽이행 복구
실시예 48에 있어서, 상기 항-CSF3R 항체의 기능 중 상피간엽이행 기전을 복구하는 것은 상피간엽이행이 일어난 세포를 상피세포 또는 섬유아세포로 복구하는 것임.
실시예 50, CSF3R 억제제의 용도
실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증 치료를 위한 실시예 13 내지 실시예 17 중 어느 하나의 CSF3R 억제제의 용도,
여기서, 상기 CSF3R 억제제는 다음 중 선택된 기능을 가짐:
실시예 20 내지 실시예 27 중 어느 하나의 세포외 기질 분해 기전을 촉진하거나(promote), 활성화하거나(activate), 촉발하거나(trigger), 유도하거나(induce) 및/또는 일으킴(cause); 및
실시예 28 내지 실시예 32 중 어느 하나의 상피간엽이행 기전을 차단하거나(block), 억제하거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 예방하거나(prevent), 및/또는 복구함(reversal).
실시예 51, 상피간엽이행 복구
실시예 50에 있어서, 상기 CSF3R 억제제의 기능 중 상피간엽이행을 복구하는 것은 상피간엽이행이 일어난 세포를 상피세포 또는 섬유아세포로 복구하는 것임.
치료물질의 용도 2
실시예 52, 항체의 용도
실시예 7 내지 실시예 12 중 어느 하나의 항-CSF3R 항체의 실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증 치료용 의약 제조 용도.
실시예 53, 치료기전 한정
실시예 52에 있어서, 상기 항-CSF3R 항체는 다음 중 선택된 하나 이상의 기능을 가짐:
실시예 20 내지 실시예 27 중 어느 하나의 세포외 기질 분해 기전을 촉진하거나(promote), 활성화하거나(activate), 촉발하거나(trigger), 유도하거나(induce) 및/또는 일으킴(cause); 및
실시예 28 내지 실시예 32 중 어느 하나의 상피간엽이행 기전을 차단하거나(block), 억제하거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 예방하거나(prevent), 및/또는 복구함(reversal).
실시예 54, 상피간엽이행 복구
실시예 53에 있어서, 상기 항-CSF3R의 기능 중 상피간엽이행 기전을 복구하는 것은 상피간엽이행이 일어난 세포를 상피세포 또는 섬유아세포로 복구하는 것임.
실시예 55, CSF3R 억제제의 용도
실시예 13 내지 실시예 17 중 어느 하나의 CSF3R 억제제의 실시예 1 내지 실시예 6 중 어느 하나의 폐 섬유증 치료용 의약 제조 용도.
실시예 56, 치료기전 한정
실시예 55에 있어서, 상기 CSF3R 억제제는 다음 중 선택된 하나 이상의 기능을 가짐:
실시예 20 내지 실시예 27 중 어느 하나의 세포외 기질 분해 기전을 촉진하거나(promote), 활성화하거나(activate), 촉발하거나(trigger), 유도하거나(induce) 및/또는 일으킴(cause); 및
실시예 28 내지 실시예 32 중 어느 하나의 상피간엽이행 기전을 차단하거나(block), 억제하거나(inhibit), 방해하거나(interrupt), 예방하거나(prevent), 및/또는 복구함(reversal).
실시예 57, 상피간엽이행 복구
실시예 56에 있어서, 상기 CSF3R 억제제의 기능 중 상피간엽이행 기전을 복구하는 것은 상피간엽이행이 일어난 세포를 상피세포 또는 섬유아세포로 복구하는 것임.
이하, 실험예 및 실시예를 통해 본 명세서가 제공하는 발명에 대해 더욱 상세히 설명한다. 이들 실시예는 오로지 본 명세서에 의해 개시되는 내용을 예시하기 위한 것으로, 본 명세서에 의해 개시되는 내용의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실험예 1. 실험준비 및 실험방법
실험예 1.1. 세포 배양
상피세포주 Beas2B 세포는 10%의 소 태아 혈청(fetal bovin serum, FBS)이 보충된 RPMI Invitrogen) 배지에서 배양하였다.
실험예 1.2. 형질감염(transfection)
벡터 및 및 siRNA는 LipofectamineTM 2000 (Invitrogen)을 사용하여 제공된 매뉴얼에 따라 진행하였다.
실험예 1.3. 웨스턴 블롯
프로테아제 억제제가 첨가된 용해 완충액 [40 mM Tris-HCl (pH 8.0), 120 mM NaCl, 0.1% Nonidet-P40]을 사용하여 세포에서 단백질을 분리하였고, SDS-PAGE 및 니트로셀룰로오스 멤브레인(Amersham, Arlington Heights, IL)으로 전달을 통해 단백질을 분리하였다. 멤브레인을 5% 무지방 분유(Tris-완충 식염수 중)로 블로킹한 후 4℃에서 1차 항체와 반응시켰다. 멤브레인을 퍼옥시다제(peroxidase)가 결합된 2차 항체와 반응시킨 후 enhanced chemiluminescence(ECL, Amersham, Arlington, Heights, IL)를 이용하여 시각화하였다.
실험예 1.4. 실시간 정량 PCT(real-time quantitative PCR)
RNA는 trizol(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 이용하여 추출하였다. qRT-PCR은 SensiFAST TM SYBR No-ROX Kit(Bioline Reagents, UK)를 사용하여 진행하였고, Rotor Gene Q (Qiagene, Seoul, Korea)을 통해 반응을 진행하였다. 결과값은 ΔΔCt 방법을 이용하여 계산하였고, β-actin 으로 표준화하였다.
실험예 1.5. 면역조직화학(immunohistochemistry, IHC)
마우스 조직을 포르말린으로 고정한 후 파라핀 블록으로 제작하였다. 파라핀-포매된 조직을 절단하여 자이렌(xylene), 100%, 95%, 80%, 70% 에탄올을 이용하여 파라핀을 제거하였다. 절단된 조직을 헤마톡실린 & 에오신(H&E)염색, 시리우스 레드(Sirius red) 염색(abc150681), 및 DAB 염색으로 진행하였다. DAB 염색과정에서 1차 항체를 4℃에서 밤새 반응시킨 후, 비오틴화된 2차 항체와 ABC 시약(Vector Laboratories, USA)으로 각 1시간 반응시켰다. 색반응에는 3,3-diaminobenzidine (Vector Laboratories)을 사용하였고, 헤마톡실린으로 대조염색하였다. 이후 70%, 80%, 95%, 100% 에탄올 및 자일렌(xylene)에 반응시킨 후 Canada balsam 마운팅 배지로 마운팅하였다. 이미지는 IX71 microscope (Olympus, Seoul, Korea)의 DP71 시스템으로 관찰하였다.
실험예 1.6. 인간 조직 마이크로어레이
인간 폐 간질성(interstitial) 섬유화증 조직 마이크로어레이 샘플은 US-Biomax (LC561) 제품을 구매하였고, IHC를 통해 CSF3R의 발현을 분석하였다.
실험예 1.7. 데이터 분석
폐섬유화증 환자 유전체 분석은 Gene expression omnibus(GEO) dataset (GSE71351)이 사용되었다.
실험예 1.8. 동물 실험
폐섬유화증 모델을 만들기 위하여 100 mg/kg의 블레오마이신 설페이트(Bleomycin sulfate)를 4차례 (Day 1, 4, 7, 10) 수컷 C57BL/6 마우스에 복강내 주사하였다. 폐섬유화증이 발생한 이후 250 μg/kg의 중화항체를 4차례 (Day 12, 14, 16, 18) 복강내 주사하였으며, 21일차에 마우스를 희생시켜 폐조직을 추출하였다.
실험예 1.9. 하이드록시프롤린 분석(hydroxyproline assay)
하이드록시프롤린 분석 키트(ab222941, abcam, UK)를 이용하여 마우스 조직 용해물에서 하이드록시프롤린 수준을 분석하였다. 실험은 제조사 설명을 바탕으로 진행하였다.
실험예 1.10. 공동-면역침전(Co-immunoprecipitation)
용해 완충액으로 추출한 세포 단백질에 1차 항체를 4℃에서 밤새 반응시킨 후, protein A-아가로스 비드(Santa Cruz Biotechnology, Inc.)를 이용하여 침전시켰다. Protein A-아가로스 비드를 차가운 PBS로 세척하였고, 침전된 단백질은 웨스턴 블롯을 통해 분석하였다.
실험예 1.11. in situ proximity ligation assay (PLA)
커버슬립에 배양된 세포를 4% 파라포름알데히드로 고정한 후 0.1% Triton X-100, 10% 소 태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 PBS 용액으로 투과시켰다. 1차 항체로 CSF3R 항체 및 STAT3 항체를 사용하여 밤새 반응시킨 후 Duolink Detection Kit(Sigma) 제품을 이용하여 PLA 실험을 진행하였다. 공초점 현미경을 통해 시각화하였다.
실험예 2. 특발성 폐섬유화증 환자 조직 및 마우스 모델에서 CSF3R의 발현 분석
특발성 폐섬유화증(IPF) 환자의 조직 마이크로어레이(tissue microarray)를 면역조직화학염색법(IHC)을 통해 CSF3R의 발현에 대해 분석하였고, 그 결과 CSF3R이 폐섬유화 환자 조직에서 높게 나타남을 관찰하였다(도 1의 면역조직화학염색 결과 및 도 2의 IHC 스코어 결과 참조). 또한 GEO dataset를 이용하여 정상 폐조직보다 특발성 폐섬유화증(IPF) 환자 조직에서 CSF3R의 발현이 증가하여 있음을 확인하였다(도 3 참조).
뿐만 아니라, Bleomycin (BLM)-유도 마우스 특발성 폐섬유화증 모델을 통해 폐섬유화가 발생한 마우스의 폐조직에서 CSF3R의 발현 수준을 면역조직화학염색법, 웨스턴 블롯, RT-qPCR로 확인하였고, 그 결과를 각각 도 4, 도 5, 및 도 6에 나타내었다. 도 4 내지 도 6에 나타나 바와 같이, BLM-유도 마우스의 폐조직에서 CSF3R의 발현이 증가하였다.
위 실험을 통하여 CSF3R이 폐섬유화증 환자 및 마우스 모델에서 높게 발현되어 있음을 확인하였다.
실험예 3. CSF3R에 의한 폐상피세포의 EMT 및 폐섬유화증 유도
폐상피세포주 Beas-2b에 CSF3R을 과발현하였을 때 세포외기질(ECM) 구성성분 및 상피간엽이행(EMT) 마커에 미치는 영향을 RT-qPCR 및 웨스턴 블롯으로 확인하였고, 그 결과를 각각 도 7 및 도 8에 나타내었다. 도 7 및 도 8에 나타난 바와 같이, 폐상피세포주 Beas-2b에 CSF3R을 과발현하였을 때 세포외기질(ECM) 구성성분(Col1a1, OPN, VER, FN 및 HAS3) 및 상피간엽이행(EMT) 마커(N-cad, FN, VIM, Zeb1, Snail, 및 Slug)의 발현이 증가하였다.
또한, Beas-2b에 CSF3R의 발현을 저해할 경우, BLM에 의한 상피간엽이행(EMT) 마커 및 세포외기질(ECM) 구성성분의 발현 유도가 억제되는지 여부를 RT-qPCR 및 웨스턴 블롯으로 확인하였다. 도 9 및 도 10에 나타난 바와 같이, Beas-2b에 CSF3R의 발현을 저해할 경우, BLM에 의한 상피간엽이행(EMT) 마커 및 세포외기질(ECM) 구성성분의 발현 유도가 억제되었다.
위 실험을 통하여 CSF3R이 폐상피세포의 상피간엽이행(EMT)을 조절하여 폐섬유화증을 유도할 수 있음을 확인하였다.
실험예 4. CSF3R 중화항체 처리에 의한 폐섬유화증의 치료효과
CSF3R을 저해함에 따른 폐섬유화증 치료 효과를 확인하기 위해 BLM 유도 폐섬유화증 마우스 모델에 CSF3R 중화항체를 4 차례 복강 내 주사하였다. 구체적인 CSF3R 중화항체 주입 실험 계획을 도 11에 나타내었다. BLM에 의해 유도된 폐섬유화증이 CSF3R 중화항체를 처리한 그룹에서는 증상이 완화되는 것을 면역조직화학염색을 통해 관찰하였다(도 12 참조). 또한, 하이드록시프롤린 분석(hydroxyproline assay)을 수행하여 BLM 처리에 의해 폐조직에서 증가한 콜라겐이 CSF3R 중화항체에 의해 감소하는지 여부를 확인하였고, 그 결과를 도 13에 나타내었다. 도 13에 나타난 바와 같이, BLM 처리에 의해 폐조직에서 증가한 콜라겐은 CSF3R 중화항체에 처리에 의해 유의적으로 감소하였다.
뿐만 아니라, BLM에 의해 발생한 마우스의 모발 감소 및 체중 감소가 CSF3R 중화항체에 의해 회복되는지 여부를 확인하였다. 그 결과, 도 14에 나타난 바와 같이, BLM에 의해 발생한 마우스의 모발 감소가 CSF3R 중화항체에 의해 회복되었다. 또한 도 15에 나타난 바와 같이, BLM에 의해 발생한 마우스의 체중 감소가 CSF3R 중화항체에 의해 회복되었다.
위 실험을 통하여 CSF3R을 억제하였을 때 폐섬유화증의 치료효과가 나타나는 것을 확인하였다.
실험예 5. CSF3R 중화항체 처리에 의한 BLM-유도 마우스 폐조직의 EMT 저해 검증
앞서 실험예 3에서 CSF3R에 의해 폐상피세포의 상피간엽이행(EMT)이 조절됨을 규명하였다. 이에 따라 마우스 모델에서도 CSF3R을 억제하였을 때 폐섬유화증 폐조직에서 상피간엽이행(EMT)이 저해되는지 여부를 확인하기 위해 면역조직화학염색법 및 RT-qPCR을 진행하였다. 그 결과, 상피간엽이행(EMT)의 마커 단백질이 CSF3R 중화항체를 주사한 마우스 그룹에서 감소하는 것을 검증하였다(도 16의 면역조직화학염색 결과 및 도 17의 RT-qPCR 결과 참조).
위 실험을 통하여 CSF3R을 억제하였을 때 폐섬유화증 폐조직의 EMT가 저해되는 것을 확인하였다.
실험예 6. CSF3R 항체에 의한 폐섬유화증 치료 기전 규명
BLM 처리에 의해 유도된 폐섬유화증이 CSF3R 중화항체에 의해 정상 폐조직으로 회복되는 기전을 규명하기 위해, 세포외기질(ECM) 분해와 관련된 매트릭스 메탈로프로테이나제(matrix metalloproteinase, MMP)의 발현을 분석하였다. 그 결과, 도 18 및 도 19에 나타난 바와 같이, BLM 처리에 의해 감소한 MMP2, MMP9, MMP13의 발현이 CSF3R의 중화항체를 처리한 마우스 그룹에서는 다시 증가하는 것이 관찰되었다. 또한, MMP의 저해제로 작용하는 메탈로프로테이나제의 조직 저해제(tissue inhibitors of metalloproteinase, TIMP)의 발현을 확인한 결과, 폐섬유화증이 유도된 마우스 그룹에서는 TIMP-1과 TIMP-2의 발현이 증가하였으며, CSF3R 중화항체를 처리한 그룹에서는 정상 폐 조직 수준으로 감소하였다.
위 실험을 통하여 CSF3R 중화항체가 MMP 및 TIMP의 발현을 조절하여 폐섬유화증의 치료효과를 보임을 BLM-유도 폐섬유화증 마우스 모델에서 확인하였다.
실험예 7. CSF3R 매개 상피간엽이행(EMT) 조절 하위 신호기전 규명
CSF3R 또는 CSF3에 의한 폐상피세포의 상피간엽이행(EMT)을 유도하는 하위 신호기전을 규명하기 위해, rh-CSF3를 폐상피세포주 Beas-2b에 처리하여 스크리닝을 진행하였고, 그 결과를 도 21에 나타내었다. 도 21에 나타난 바와 같이, 하위 신호경로 인자 중 특히 STAT3의 활성이 크게 증가하는 것이 관찰되었다.
또한, BLM에 의해 유도된 STAT3의 활성이 CSF3R의 발현을 저해함에 따라 함께 감소하는 것을 웨스턴 블롯으로 확인하였으며(도 22 참조), CSF3R과 STAT3가 직접적으로 결합하는 것을 공동-면역침전(co-IP)으로 검증하였다(도 23 참조). 또한 in situ PLA 아세이를 수행하여 CSF3R과 STAT3가 직접적으로 결합하는 것을 추가적으로 검증하였고, 그 결과를 도 24 및 도 25에 나타내었다.
위 실험 결과를 통해 CSF3R의 발현 증가에 의해 활성화된 STAT3가 폐상피세포주의 상피간엽이행(EMT)을 유도하는 것을 알 수 있었다.
본 명세서에서는 폐 섬유증에 있어 CSF3R의 역할 및 CSF3R의 기능 또는 발현을 억제함으로써 폐 섬유증을 치료할 수 있는 치료기전에 대해 상세히 밝혔으며, 나아가 상기 폐 섬유증을 치료할 수 있는 치료약물을 제시하였다. 본 발명은 폐 섬유증의 치료약물, 이를 포함하는 약학적 조성물, 상기 치료약물/약학적 조성물의 폐 섬유증 치료용도 및/또는 폐 섬유증 치료방법 등 다양한 형태로 산업에 이용가능하다.

Claims (20)

  1. 다음을 포함하는 폐 섬유증 치료방법:
    치료적으로 유효량의 항-CSF3R 항체를 치료가 필요한 환자에 투여하는 것,
    여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직 내 축적된 세포외 기질의 분해를 촉진함.
  2. 제1항에 있어서, 상기 축적된 세포외 기질의 분해를 촉진하는 것은 Col1a1, OPN, VER, FN 및 Has3 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현량을 감소시키는 것인 폐 섬유증 치료방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 축적된 세포외 기질은 축적된 콜라겐인 것을 특징으로 하는 폐 섬유증 치료방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 축적된 콜라겐의 분해는 다음 중 선택된 하나 이상으로 촉진되는, 폐 섬유증 치료방법:
    상기 환자의 폐 조직 내 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)의 발현이 증가함; 및
    상기 환자의 폐 조직 내 메탈로프로테이나제의 조직 저해제(TIMP)의 발현이 감소함.
  5. 제4항에 있어서, 상기 MMP는 MMP2, MMP9, 및 MMP13 중 선택된 하나 이상인 폐 섬유증 치료방법.
  6. 제4항에 있어서, 상기 TIMP는 TIMP-1, 및 TIMP-2 중 선택된 하나 이상인 폐 섬유증 치료방법.
  7. 다음을 포함하는 폐 섬유증 치료방법:
    치료적으로 유효량의 항-CSF3R 항체를 치료가 필요한 환자에게 투여하는 것,
    여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직 내에서 다음 중 선택된 기능을 수행함:
    상기 환자의 폐 조직 내 세포의 CSF3R-매개 상피간엽이행을 억제하는 것; 및
    상기 환자의 폐 조직 내 CSF3R-매개 상피간엽이행이 일어난 세포를 상피세포 또는 섬유아세포로 복구하는 것.
  8. 제7항에 있어서, 상기 CSF3R-매개 상피간엽이행을 억제하거나, CSF3R-매개 상피간엽이행이 일어난 세포를 복구하는 것은 다음 중 선택된 하나 이상인 폐 섬유증 치료방법:
    Fibronectin, Vimentin, N-cad, 및 ZEB1 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현을 감소시키는 것; 및
    E-cad의 발현을 증가시키는 것.
  9. 제7항에 있어서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직의 세포 내에서 STAT3가 CSF3R에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킬 수 있는 것인, 폐 섬유증 치료방법.
  10. 제1항 내지 제6항중 어느 하나, 또는 제7항 내지 제9항 중 어느 하나에 있어서, 상기 폐 섬유증은 특발성(idiopathic) 폐섬유화증, 폐염증성 섬유화 질환, 만성 폐쇄성 폐질환, 및 천식에서 나타나는 섬유화 질환 중 선택된 것인, 치료방법.
  11. 환자의 폐 섬유증을 치료하는 데 사용하기 위한 항-CSF3R 항체, 여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직 내에서 축적된 세포외 기질의 분해를 촉진할 수 있는 것임.
  12. 제11항에 있어서, 상기 축적된 세포외 기질의 분해를 촉진하는 것은 Col1a1, OPN, VER, FN 및 Has3 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현량을 감소시키는 것인 폐 섬유증 치료방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 축적된 세포외 기질은 축적된 콜라겐인 것을 특징으로 하는 항-CSF3R 항체.
  14. 제11항에 있어서, 상기 축적된 콜라겐의 분해는 다음 중 선택된 하나 이상으로 촉진되는 항-CSF3R 항체:
    상기 환자의 폐 조직 내 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)의 발현이 증가함; 및
    상기 환자의 폐 조직 내 메탈로프로테이나제의 조직 저해제(TIMP)의 발현이 감소함.
  15. 제12항에 있어서, 상기 MMP는 MMP2, MMP9, 및 MMP13 중 선택된 하나 이상인 항-CSF3R 항체.
  16. 제12항에 있어서, 상기 TIMP는 TIMP-1, 및 TIMP-2 중 선택된 하나 이상인 항-CSF3R 항체.
  17. 환자의 폐 섬유증을 치료하는 데 사용하기 위한 위한 항-CSF3R 항체, 여기서, 상기 항-CSF3R 항체는 다음 중 선택된 하나 이상의 기능을 할 수 있는 것임:
    상기 환자의 폐 조직 내에서 CSF3R-매개 상피간엽이행을 억제; 및
    상기 환자의 폐 조직 내에서 CSF3R-매개 상피간엽이행이 일어난 세포를 상피세포 또는 섬유아세포로 복구.
  18. 제17항에 있어서, 상기 CSF3R-매개 상피간엽이행을 억제하는 것은 다음 중 선택된 하나 이상인, 항-CSF3R 항체:
    Fibronectin, Vimentin, N-cad, 및 ZEB1 중 선택된 하나 이상의 마커의 발현을 감소시키는 것; 및
    E-cad의 발현을 증가시키는 것.
  19. 제17항에 있어서, 상기 항-CSF3R 항체는 상기 환자의 폐 조직의 세포 내에서 STAT3가 CSF3R에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킬 수 있는 것인, 항-CSF3R 항체.
  20. 제11항 내지 제16항중 어느 하나, 또는 제17항 내지 제19항 중 어느 하나에 있어서, 상기 폐 섬유증은 특발성(idiopathic) 폐섬유화증, 폐염증성 섬유화 질환, 만성 폐쇄성 폐질환, 및 천식에서 나타나는 섬유화 질환 중 선택된 것인, 항-CSF3R 항체.
PCT/KR2022/013410 2021-09-07 2022-09-07 폐 섬유증의 바이오마커 및 치료 표적으로서 csf3r WO2023038416A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2021-0118911 2021-09-07
KR20210118911 2021-09-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023038416A1 true WO2023038416A1 (ko) 2023-03-16

Family

ID=85502686

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2022/013410 WO2023038416A1 (ko) 2021-09-07 2022-09-07 폐 섬유증의 바이오마커 및 치료 표적으로서 csf3r

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR20230036541A (ko)
WO (1) WO2023038416A1 (ko)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100004167A1 (en) * 2006-07-06 2010-01-07 Laboratoires Serono Sa Csf3r polypeptides and uses thereof
US20140286929A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Intermune, Inc. Proteomic ipf markers
US10232039B2 (en) * 2011-04-12 2019-03-19 Duke University Compositions and methods for the treatment of tissue fibrosis
KR20200094695A (ko) * 2019-01-30 2020-08-07 한양대학교 산학협력단 폐 섬유화 질환 진단 또는 치료를 위한, m-csf 또는 g-csf의 이용

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100004167A1 (en) * 2006-07-06 2010-01-07 Laboratoires Serono Sa Csf3r polypeptides and uses thereof
US10232039B2 (en) * 2011-04-12 2019-03-19 Duke University Compositions and methods for the treatment of tissue fibrosis
US20140286929A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Intermune, Inc. Proteomic ipf markers
KR20200094695A (ko) * 2019-01-30 2020-08-07 한양대학교 산학협력단 폐 섬유화 질환 진단 또는 치료를 위한, m-csf 또는 g-csf의 이용

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YUN I. Y.: "CSF3 a new therapeutic target for pulmonary fibrosis", MASTER'S THESIS, HANYANG UNIVERSITY GRADUATE SCHOOL, 28 February 2021 (2021-02-28), XP055910015, Retrieved from the Internet <URL:http://hanyang.dcollection.net/public_resource/pdf/200000485417_20220407002338.pdf> [retrieved on 20220406] *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230036541A (ko) 2023-03-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2017078440A1 (ko) 신경세포 손실 예방 및 재생 효능을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
WO2019182370A1 (ko) Cox2 아세틸화제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2020055166A1 (ko) 벤즈히드릴 티오 아세트아미드 화합물을 유효성분으로 포함하는 섬유화 질환의 치료용 조성물
WO2022055334A1 (ko) 폐 섬유화 질환의 예방 또는 치료용 조성물
AU2020203955B2 (en) Composition and method for inhibiting amyloid beta accumulation and/or aggregation
WO2023096126A1 (ko) Mdsc 활성 저해 약물의 선별 방법
WO2023038416A1 (ko) 폐 섬유증의 바이오마커 및 치료 표적으로서 csf3r
WO2018026212A2 (ko) 섬유증 질환 모델의 제조방법 및 섬유증 질환 모델의 용도
WO2020017788A1 (ko) Cd9를 이용한 당뇨병의 예방 또는 치료용 조성물과 당뇨병 치료제 스크리닝 방법
WO2016167605A2 (ko) 고혈압 치료제를 이용한 흡연 및 비흡연자의 폐암 억제 방법
WO2018236194A1 (ko) Gas6 단백질 또는 이의 수용체 활성화제를 포함하는 섬유증의 예방 또는 치료용 조성물
WO2022050778A1 (en) Improved cell-permeable modified parkin recombinant protein for treatment of neurodegenerative diseases and use thereof
WO2022065968A1 (ko) 에보디아민을 유효성분으로 포함하는 비소세포폐암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2015046783A1 (en) Pharmaceutical composition for treatment of radiation- or drug-resistant cancer comprising hrp-3 inhibitor
WO2023014062A1 (ko) Hapln1을 포함하는 섬유성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2013133472A1 (ko) 독성 예측 및 치료 타겟으로서의 ａctivating transcription factor 3(atf 3)
WO2017164486A1 (ko) Tesk1 억제제를 포함하는 항암제 내성 억제용 조성물 및 tesk1 억제제의 스크리닝 방법
WO2011155643A1 (ko) 포그 ２ 다섯 번째 징크 핑거 도메인을 포함하는 포스파티딜이노시톨３키나아제 활성 조절제
WO2022119349A1 (ko) Kras 억제제에 대한 내성 억제용 조성물
WO2020197367A1 (ko) St8sia1를 이용한 당뇨병의 예방 또는 치료용 조성물과 당뇨병 치료제 스크리닝 방법
WO2022102984A1 (ko) 다낭성 신장질환 치료제 및 이의 스크리닝 방법
WO2018012889A1 (ko) Itac의 억제제를 포함하는 조성물
WO2024039196A1 (ko) 암의 진단, 전이가능성 또는 예후 예측용 바이오 마커 및 이의 용도
WO2023167544A1 (ko) Fam167a를 포함하는 bcr-abl 비의존성 타이로신 키나아제 억제제 내성을 진단하기 위한 바이오마커 및 fam167a를 타겟으로 하는 만성 골수성 백혈병 예방 또는 치료용 조성물
WO2022255843A1 (ko) Tm4sf19 억제제 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22867685

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE